TWI531574B

TWI531574B - A lithium reagent composition, a lithium ion measurement method and a measuring device using the same

Info

Publication number: TWI531574B
Application number: TW102110198A
Authority: TW
Inventors: Takuya IWABUCHI; Tsugikatsu ODASHIMA
Original assignee: Metallogenics Co Ltd
Priority date: 2012-04-06
Filing date: 2013-03-22
Publication date: 2016-05-01
Also published as: CA2869125C; WO2013150663A1; EP2835637B1; RU2571073C1; JP5100903B1; US10690648B2; ES2737417T3; KR20140114902A; KR101499603B1; CN104520705B; JP2013217746A; CN104520705A; EP3179246B1; SG11201406329XA; US9562886B2; US20150079687A1; ES2628313T3; EP2835637A4; AU2012376362B2; EP3179246A1

Description

鋰試劑組成物、使用其之鋰離子測量方法及測量裝置

本發明係關於一種用於定量測量生物試料或環境試料等之水溶液中之鋰的鋰試劑組成物、使用其之鋰離子測量方法及測量裝置。

先前由於含有鋰之情緒穩定藥、抗憂鬱藥效果好，故被經常使用，但是必須控制好投藥時血清中之鋰濃度到合適範圍。

作為用於液體中之鋰之定量測量的鋰試劑組成物，一般而言，與雙極性障害(躁憂鬱病)之治療藥，或者抗憂鬱藥一起作為情緒穩定藥，而廣泛將碳酸鋰錠(經口投藥)作為處理方法。碳酸鋰(Li₂CO₃)具有若非鋰中毒之血中濃度附近處理方法，則無法顯現投藥效果之特徵，治療域與中毒域非常近，藥物血中濃度監測指定為必要項目(TDM)。

進而詳細而言，經常投藥患者之試料血漿內之鋰濃度必須調節為0.6~1.2 mEq/L，但是若血清中之鋰濃度為0.6mEq/L以下並且過少，則沒有抗憂鬱效果，相反，一般而言若血漿濃度超過1.5 mEq/L，過剩投藥，則濃度變大，有時會引起鋰中毒過量服用會引起致命性傷害，出現包括發抖、咬合障害、眼球震顫、腎障害、痙攣之中毒症狀。若看見潛在的危險預兆時，中止治療，必須再測量血漿濃度，進行緩解鋰之中毒之措置。

如此，即使鋰鹽之抗憂鬱藥對治療憂鬱病患者等有效果，亦由於過剩投藥之情形時會產生重大障害，故投藥含有鋰之抗憂鬱藥之情形時，必修將血清中之鋰濃度經常監控在0.6~1.2 mEq/L。

因此，先前必須定量測量血清中之鋰，並且可對鋰之比色進行測量的臨床檢查用之液狀試劑組成物之開發得到了推進。

作為該先行技術，專利文獻1中揭示有使用原色體穴狀配體離子載體(cryptandionophore)之測量生物學的分析物中之鋰濃度的試劑組成物。

此外，專利文獻2中，具有吡咯環(pyrrole ring)之大環狀(big ring form)化合物，於吡咯環之β位(β site of pyrrole ring)結合有8個之溴(Br)原子，與鋰離子反應之分析試劑。

此外，作為非專利文獻1，揭示有一種與四苯基卟啉(tetraphenylporphyrin)之碳原子結合之氫原子全部取代為氟原子之化合物，可對鋰離子進行檢測與分離。

[先行技術文獻]

[專利文獻]

[專利文獻1]日本專利特開平7-113807號公報

[專利文獻2]歐州專利1283986號公報(B1)

[非專利文獻1]分析化學Vol.51,No.9,PP.803-807(2002)[F28四苯基卟啉(F28 tetraphenylporphyrin)之合成鋰離子之分離與檢測之應用]小柳健治與田端正明。

已知有幾種先前之鋰試劑組成物，但是其組成係有毒物質(toxic matter)，原藥供給不穩定且高價，幾乎所有之原藥不溶於水，或者一旦溶解於水則失活不發色，且發色反應慢。

克服該些的專利文獻2中所揭示之技術可採用發色法，但是由於發色感度過大，則必須進行分析物之稀釋處理，試劑組成物之樣品pH值為11以上，故藉由空氣中之CO₂易變質或，測量數據不穩定，進而，若pH值為11以上，則由於已經使用氫氧化鈉或氫氧化鉀之強鹼性氫氧化物溶液(strong alkali solution of the hydroxide)，故不能將pH值維持於固定值，此外，由於該些係有害物質，故對於使用者而言係規避之物，使用麻煩或實際之保存不能用通用容器而應用專用容器，為了彌補該些之欠陥，機械的設備必須為大型且專用的機器，因而缺乏通用性的問題。因此，存在難以適用即時監測(online moniter)，POCT(Point Of Care Testing)的問題。

因此，前述之專利文獻1之將鋰之定量作為目的之試劑組成物，雖使用與本發明完全不同之化合物，但只能於pH值為12之情形下使用，如前所述，若pH值為11以上，則存在如下問題，即已經只能使用氫氧化鈉或氫氧化鉀之強鹼性氫氧化物溶液(strong alkali solution of the hydroxide)，該些係有害物質(harmful matter)，故對於使用者而言使用麻煩，為了彌補該些，必須使用大型之專用機器，因而缺乏通用性。

此外，非專利文獻1中小柳等人之論文揭示了使用F28四苯基卟啉(F28 tetraphenylporphyrin)可對鋰離子進行分離與檢測，若不適用油性且有毒物質(toxic matter)氯仿(trichloromethane)進行溶劑抽出，則不能進行鋰之檢測與分離。存在如下問題，即首先，若不對水溶液中之鋰進行繁雜之前處理，則不能進行直接定量，尤其是，不能對血清中之鋰離子進行迅速且定量的測量。如此，使用F28四苯基卟啉(F28 tetraphenylporphyrin)難以檢測出水溶液中之鋰離子，定量地測量濃度比較困難，至今未實現。

本發明係解決上述問題而成者，係提供一種可測量生物試料或環境試料等水溶液中之鋰濃度(定量)之鋰試劑組成物、使用其之鋰離子測量方法及測量裝置，還提供一種藉由簡便之比色計立刻測量鋰濃度，且，藉由目視即可篩選判定(screening and judge)之鋰試劑組成物、使用其之鋰離子測量方法及測量裝置。

為了解決上述問題，本發明係提供一種鋰試劑組成物，其特徵在於，包含：以將与四苯基卟啉之碳原子(carbon atom of tetraphenylporphyrin)結合之氫原子全部取代為氟原子之結構式

所表示之化合物，與水混合而成之有機溶劑，pH值調節劑。

生物試料或環境試料等的水溶液中之鋰係與上述鋰試劑組成物，尤其是四苯基卟啉之與碳原子結合之氫原子全部取代為氟原子之化合物成為螯合劑(發色劑)進行反應，從而發色。

本發明亦發現F28四苯基卟啉(F28 tetraphenylporphyrin)化合物與鋰離子之發色反應之自黃色至紅色之呈色變化難以獲得，但是由於血清之鋰濃度於0.6 mg/dL~2.0 mg/dL(0.9 mM~3 mM)之範圍內可準確獲得定量值，因此本發明之實施例中，於上述鋰濃度範圍中，若將F28四苯基卟啉(F28 tetraphenylporphyrin)之化合物之濃度設為0.1~1.0 g/L，較佳的是0.5 g/L，則可正確地進行測量。

關於本發明之pH值調節劑，pH值未滿5.0之酸性側時，本發明之發色劑(螯合劑(chelate))之F28四苯基卟啉化合物(F28 tetraphenylporphyrin compound)未與鋰離子結合，故不起呈色變化，難以進行鋰之定量。此外，pH值為5~7之間時，上述發色劑與鋰離子進行特異性反應，但是發色速度緩慢。另一方面，pH值為8~11時，上述發色劑與鋰離子迅速反應，且可獲得穩定之發色錯合物。pH值超過11之鹼性側時，上述螯合劑(chelate)、所生成之發色錯合物之色調之經時的穩定性較差。其原因係吸收空氣中之二氧化碳導致pH值容易變動。因此，作為鋰試劑組成物之pH值調節劑，必須有pH值為自7至12之範圍之pH值調節劑，或者作為pH值調節劑之pH值緩衝劑，有必要使用較佳的是pH值為8~11之pH值調節劑、pH值緩衝劑。

上述pH值調節劑係選自包含氫氧化鈉(sodium hydroxide)、氫氧化鉀(Potassium hydroxide)、氨(ammonia)之鹼性試劑(alkaline reagents)；包含醋酸(acetic acid)、磷酸(phosphoric acid)、鹽酸(hydrochloric acid)、碳酸(carbonic acid)、重碳酸(bicarbonic acid)、乙二酸(ethane diacid)、鹽酸(hydrochloric acid)、硝酸(nitric acid)之酸劑(acidulant)、以及該些之鹽類，上述pH值調節劑既可為pH值緩衝劑，作為檸檬酸(citric acid)、碳酸(carbonic acid)、重碳酸(bicarbonic acid)、磷酸(phosphoric acid)、琥珀酸(succinic acid)、苯二甲酸(orthobenzene dicarboxylic acid)、氯化氨(ammonia Chloride)、氫氧化鈉(sodium hydroxide)、氫氧化鉀(Potassium hydroxide)、良好之緩衝劑(buffer)，使用選自脂肪酸甲酯磺酸鹽(MES)、雙-三異丙基乙磺醯(Bis-Tris)、己二酸(ADA)、呱嗪-1,4-二乙磺酸(PIPES)、ACES、3-(N-嗎啉基)-2-羥基丙磺酸(MOPSO)、BES、MOPS、TES、HEPES、3-[N-N-雙(2-羥乙基)氨基]-2-羥基丙磺酸(DIPSO)、3-三羥甲基甲胺-2-羥基丙磺酸(TAPSO)、呱嗪-1,4-二羥基丙磺酸(POPSO)、4-(2-羥乙基)呱嗪-1-2- 羥基丙磺酸(HEPPSO)、EPPS、Tricine、N-二(羥乙基)甘氨酸Bicine、TAPS、N-2-環已胺基乙磺酸(CHES)、3-(環己胺)-2-羥基-1-丙磺酸(CAPSO)、CAPS、以及該些之鹽類。

藉由該些之含有，上述鋰試劑組成物於pH值5之pH值12之範圍內鋰可進行特異性發色反應。

本發明之溶劑(solvent)(極性溶劑(polar solvent))必須是與水混合而成之有機溶劑，但若能與被分析物之血清、血漿、溶出液等之水溶液均勻混合，則即使是將有機溶劑作為主要之溶液，或者添加有有機溶劑之水溶液。其係於藉由通用型之自動分析裝置、紫外可見分光光度測量定分析物中之鋰濃度之情形時，其被分析物係水溶液，故其試劑組成物亦可同樣為水溶液。

上述有機溶劑係選自二甲基亞碸(dimethyl sulfoxide，DMSO)、二甲基甲醯胺(dimethylfomamide，DMF)、二甲基乙醯胺(dimethylacetamide，DMA)。

本發明之試劑組成物中，實際之產品中混入有穩定劑，但是本發明中使用界面活性劑作為穩定劑。該界面活性劑提高F28四苯基卟啉(F28 tetraphenylporphyrin)之分散性，進而有可防止發色反應時之由於試料導致之懸濁，為了獲得該些之作用，有必要混入穩定劑。

該些之穩定劑係非離子性界面活性劑或者陰離子性界面活性劑，非離子性界面活性劑係選自山梨糖醇酐脂肪酸酯(sorbitan fatty acid ester)、五紅蘚醇脂肪酸部分酯(pentaerythritol partial fatty acid ester)、丙二醇單丁基醚脂肪酸酯(propylene glycol mono butyl ether fatty acid ester)、甘油脂肪酸單酯(glycerine fatty acid monoester)、聚氧乙烯烷基醚(polyoxyethylene alkyl ether)、聚氧乙烯烷基苯醚(polyoxyethylene alkyl phenyl ether)、聚氧乙烯聚丙二醇(polyoxyethylene polyoxypropylene glycol)、聚氧乙烯脂肪酸部分酯(polyoxyethylene partial fatty acid ester)、聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸部分酯(polyoxyethylene sorbitan partial fatty acid ester)、聚氧乙烯脂肪酸酯(poly oxyethylene fatty acid ester)、脂肪酸二乙醇醯胺(fatty acid diethanol Amide)、脂肪酸單乙醇醯胺(fatty acid monoethanol Amide)、聚氧乙烯脂肪酸醯胺(polyoxyethylene fatty acid amide)、聚氧乙烯辛基苯基醚(polyoxyethylene octyl phenyl ether)(登錄商標：TritonX-100)、p-壬基苯氧基聚縮水甘油醚 (p-nonyl phenoxy polyglycidyl ether)以及該些之鹽類。

作為較佳的非離子性界面活性劑，係聚氧乙烯辛基苯基醚(polyoxyethylene octyl phenyl ether)(Triton X-100(注冊商標)等)、p-壬基苯氧基聚縮水甘油醚(p-nonyl phenoxy polyglycidyl ether)等。

此外，作為穩定劑之陰離子性界面活性劑存在有烷基硫酸酯鹽(alkyl sulfate)，聚氧乙烯烷基醚硫酸酯鹽(polyoxyethylene alkyl ether sulfuric ester)，聚氧乙烯苯醚硫酸酯鹽(polyoxyethylene phenylene oxide sulfuric ester)，烷基苯磺酸鹽(alkyl benzene sulfonate)，烷烴磺酸鹽(alkane sulfonate)等。作為代表性者，可使用選自十二烷基硫酸鈉(Sodium dodecyl sulfate)，十二烷基苯磺酸鈉(sodium dodecyl benzene sulfonate)，聚氧乙烯烷基苯醚硫酸酯鈉(Polyoxyethylene alkyl biphenylene oxidesodium sulfovinate)以及該些之鹽類。

本發明之鋰試劑組成物係藉由於試料中共存之鋰以外之離子回避妨礙鋰濃度之測量，或者抑制試劑組成物之氧化，為了賦予其保存穩定性，亦可含有1種或者多數種掩蔽劑(masking agent)。然而，若鋰以外之離子較少，則無必須包含之必要。

作為該些鋰試劑組成物中所添加至掩蔽劑(masking agent)，可使用選自三乙醇胺(Triethanolamine)(titanium triethanolaminato)、乙二胺(Ethylenediamine)、N,N,N',N'-四(2-吡啶基甲基)乙二胺(N,N,N′,N′-tetrakis-(2-Pyridylmethyl)ethylenediamine,TPEN)、吡啶(pyridine)、2,2-聯吡啶(2,2-Bipyridyl)、丙烯二胺(Diallylamine)、二乙烯三胺(triethylene diamine)、二乙烯三胺-N,N,N',N",N"-五醋酸(Diethylene triamine penlaacetic acid，DTPA)、三乙烯四胺(triethylene tetramine)、三乙烯乙基四胺-N,N,N',N",N''',N'''-六醋酸(Triethylene tetraminehexaacetic acid，TTHA)、1,10-菲繞啉(1,10-phenanthroline)、乙二胺四醋酸(Ethylenediaminetetraacetic acid，EDTA)、O,O'-雙(2-氨基苯基)乙烯二醇-N,N,N',N'-四醋酸(O,O'-bis(2-aminophenoxy)-ethane-N,N,N'N'-tetraacetic acid，BAPTA)、N,N-雙(2-羥基乙基)甘氨酸(N,N-Bis(2-hydroxyethyl)glycine，Bicine)、反式-1,2-二氨基環己烷-N,N,N',N'-四醋酸(trans-1,2-Diaminocyclohexane-N,N,N',N'-tetraacetic acid，CyDTA)、O,O'-雙(2- 氨基乙基)乙烯二醇-N,N,N',N'-四醋酸(Ethylenebis(oxyethylenenitrilo)tetraacetic acid，EGTA)、N-(2-羥丙基)亞胺基二醋酸(Hepatobiliary Iminodiacetic Acid，HIDA)、亞胺基二醋酸(iminodiacetic acid，IDA)、氮川基三醋酸(nitrilotriacetic acid，NTA)、氮川基三甲基磷酸(Nitrilotris(methylenephosphonic acid，NTPO)以及該些之鹽類者。較佳的是三乙醇胺(Triethanolamine)。

本發明之鋰試劑組成物係為了防止由於微生物導致之劣化，可以包含防腐劑。防腐劑無特殊限定，例如可使用疊氮化鈉(Sodium azide)、Procline(注冊商標)等。防腐劑之濃度亦無特別限定，於使用疊氮化鈉(Sodium azide)之情形時，一般而言作為防腐劑而使用之濃度，例如對於反應溶液0.1質量%左右亦可。然而，作為以長期保存為目的之產品之情形時，通常使用防腐劑作為處理方法。

此外，為了使鋰試劑組成物之功能可長期保存，本發明之鋰試劑組成物之組成中，將包含穩定劑、pH值調節劑以及pH值緩衝劑之第一試劑，與將包含四苯基卟啉(tetraphenylporphyrin)之化合物(compound)、與水混合而成之有機溶劑、穩定劑、pH值調節劑以及pH值緩衝劑之第二試劑保存於分隔板(demarcation strip)，並於測量前立即將兩試劑混合，可作為用作如請求項1所記載之鋰試劑組成物之鋰測量試劑套組。

本發明之鋰試劑組成物，其特徵在於，於使用其時，與如前所述之血清以及血漿試驗試料之鋰試劑組成物接解，測量鋰錯合物之發色、吸光度以及其光譜(spectrum)，同樣地將濃度既知之鋰標準試料作為基準濃度算出未知試料之定量值。

較佳的是，鋰錯合物之發色以及其光譜中，將自波長550 nm或者其附近之波長530 nm至560 nm之波長帶作為測量波長測量其感度，或者，測量將波長570 nm，或者其附近之波長自565 nm之650 nm之波長帶之感度來算出鋰濃度。所謂該情形下之感度，與紫外可見分光光度計中之吸光度或吸光度差不同。

較佳的是，作為測量裝置，與前述血清以及血漿試驗試料之鋰試劑組成物接解，測量鋰錯合物之發色以及其吸光度或者其光譜，將其光譜中波長為550 nm，或者其附近之波長自530 nm至560 nm之波長帶作為測量波長測量其感度，或者，測量波長570 nm或者其附近之波長自565 nm 至650 nm之波長帶之感度算出鋰之定量值。

根據本發明之鋰試劑組成物、使用其之鋰離子測量方法以及測量裝置，可測量生物試料或環境試料等之水溶液中之鋰濃度，由如請求項1至13之鋰試劑組成物而成之校正曲線於鋰濃度0.6~1.2 mEq/L之實用區域中為直線，可使用比色計或紫外可見分光光度計之數值藉由簡單演算求得濃度。為此，可藉由普及型之分光光度計迅速定量測量生物試料之血清分析物之鋰濃度，其情報例如亦可作為TDM治療之管理指標。此外，亦可用於臨床化學自動分析裝置對多分析物短時間內進行定量分析。

此外，藉由將鋰試劑組成物之pH值調節至pH5至pH12之範圍內，可進行分光測量，但是pH值未滿5之酸性側，本發明之螯合劑(chelate)(F28四苯基卟啉(F28 tetraphenylporphyrin))不與鋰離子結合，不會產生依存於其鋰濃度的呈色變化。於超過pH值12之鹼性側，上述螯合劑(chelate)、所生成之發色錯合物之色調之穩定性較差。此外，因吸收空氣中之二氧化碳而導致pH值易於變動，此亦對色調之穩定性產生較差影響。pH值為5~7之間上述螯合劑與鋰離子結合，作為鋰錯合物可特異性地發色，但發色速度緩慢，pH值為8~11時，上述螯合劑與鋰離子迅速結合，特異性地且穩定地發色。因此，較佳的是pH值為8~11。

進而，四苯基卟啉金屬錯合物(tetraphenylporphyrin metel complex)具有於可獲得稱為索雷譜帶(Soret band)最大感度之自380 nm至460 nm附近之典型的光譜區域，亦可將此作為測光波長，但是對於具有臨床意義的血清分析物中之鋰濃度範圍，感度過大，因此必須進行試料之稀釋操作，伴隨而來的操作會繁雜化，由於增設稀釋裝置等導致測量裝置之大型化。

另一方面，本發明可藉由將低於上述索雷譜帶(Soret band)波長數倍之感度之波長550 nm，或者其附近之自530 nm之560 nm之波長帶作為測光波長，對分析物中所含之濃度獲得最適感度，藉此，無須稀釋操作，或者稀釋裝置等之繁雜操作，以及隨之而來的附帶設備。進而，由於本發明之該波長帶比將索雷譜帶(Soret band)作為測光波長之情形時校正曲線之直線性更好，因此由簡單比色計、紫外可見分光光度計獲得之測量值易於進行濃度之演算，亦由於色調自黃色變為紅色係變為鮮豔顏色，目視即可對濃度水平進行判定。

此外，於將索雷譜帶(Soret band)作為測光波長之情形時，其波長帶之色調與混合在一起之其他有機物或著色成分，例如硝酸根離子(nitrate)，肌酸酐(creatinine)，膽紅素(bilirubin)，膽綠素(biliverdin)，溶血之血色素(Hemoglobin)等起因之鋰定量值之影響未知，將本發明中之波長帶作為測光波長之情形時，其影響較小，可更加正確地求得鋰濃度。

因此，先前之鋰濃度之測量必須大型之專用機器，但藉由本發明之攜帶型比色計可對鋰濃度進行測量，並且亦可構成POCT套組。

圖1係表示本發明之F28四卟啉(F28 tetraphenylporphyrin)之適量濃度之參考計算表的圖。

圖2係藉由本發明實施例1之紫外-可見分光光度計測量之實驗結果之圖表。

圖3係表示本發明實施例1中不同測光波長之鋰濃度校正曲線之圖表的圖。

圖4係本發明實施例1之F28四苯基卟啉-鋰錯合物(F28 tetraphenylporphyrin-Li complex)生成之光譜變化(發色反應)之圖表。

圖5係本發明實施例1之血清試料測量值與原子吸光法(先前法)測量值之相關試驗結果之圖表。

圖6係本發明中藉由將管理血清作為試料之自動分析裝置而獲得之測量值之比較[表1]。

圖7係本發明之藉由目視之鋰檢測之[表2]。

圖8係表示本發明實施例1之吸光度之光譜圖表的圖。

圖9係本發明之不同有機溶劑之測量值之比較之[表3]。

圖10係本發明之不同穩定劑之測量值之比較之[表4]。

圖11係表示本發明中不同掩蔽劑(masking agent)之測量值之比較之[表5]的圖。

本案發明者們，對可簡單定量測量血清以及血漿中之鋰濃度之鋰試劑組成物進行精心，著眼於如上所述之非專利文獻1中所揭示之制法，使用具有吡咯環之大環狀化合物，將與四苯基卟啉之碳原子結合之氫原子全部取代為氟原子使氟原子成為28個之下述結構式(以下稱為F28四苯基卟啉(F28 tetraphenylporphyrin))，從而完成本發明。

作為利用具有吡咯環之大環狀化合物之鋰試劑組成物，於如上所述之專利文獻2、3中開發有一種具有吡咯環之大環狀化合物之吡咯環之β位上結合有8個溴(Br)原子，與鋰離子進行反應之分析試劑，但是若pH值不為11以上之鹼性，則難以與鋰離子進行反應，然而若為F28四苯基卟啉(F28 tetraphenylporphyrin)，則由於自pH值5至pH值12亦會反應，故本發明將F28四苯基卟啉(F28 tetraphenylporphyrin)作為螯合劑(chelate)，用於定量測量水溶液類之鋰離子，作為鋰定量測量試劑，於以下說明本發明之鋰試劑組成物之實施例。

【實施例1】

實施例1(試料1)

實施例1中製備作為pH值緩衝液之第1試劑，製備作為發色試液之第2試劑，於測量前立即將兩液混合，製備鋰試劑組成物。其係由於雖亦可先將兩液製備好放置備用，但為了避免由於長時間之保存而導致之試劑劣化。

此處，說明試劑組成物之製作方法。

首先，主要製備作為pH值緩衝液之第1試劑，其組成如下。

[實施例1]

(1)第一試劑(作為穩定劑與緩衝液)

螯合劑：無

有機溶劑：無

穩定劑(分散劑：非離子性界面活性劑)：TritonX-100(注冊商標) (聚氧乙烯辛基苯基醚(Polyoxyethylene octyl phenyl ether)) 1.0重量%

掩蔽劑(masking agent)：三乙醇胺(Triethanolamine) 10 mM

於以上中添加7重量%之氯化氨(Ammonium chloride)，將pH值調節為10並以純淨水製成1L，保管於通用之保存容器。

此外，將TritonX-100(注冊商標)(聚氧乙烯辛基苯基醚(Polyoxyethylene octyl phenyl ether))作為1.0重量%，但若過少，則測量時偶爾會產生渾濁，若過多，則反應容器內會產生泡，由於兩個因素均有可能影響再現性，故較佳的是0.1~5.0重量%之範圍，更佳的是1.0重量%。

此外，掩蔽劑係將三乙醇胺(Triethanolamine)制為10mM，但若過少，則於過剩含有鋰離子以外之夾雜離子之試料中其掩蔽效果下降，若過多，則會掩蔽鋰離子自身，成為測量誤差之原因，因此較佳的是1.0~100mM之範圍，更佳的是10mM。

接著，主要製備作為發色試液之第2試劑，其組成如下。

(2)第二試劑(作為發色試液)

螯合劑：F28四苯基卟啉(F28 tetraphenylporphyrin) 0.5 g/L

有機溶劑：二甲基亞碸(dimethyl sulfoxide，DMSO) 20重量%

穩定劑(分散劑：非離子性界面活性劑)：TritonX-100(注冊商標)(聚氧乙烯辛基苯基醚(Polyoxyethylene octyl phenyl ether)) 1.0重量%

掩蔽劑(masking agent)：三乙醇胺(Triethanolamine) 10 mM

於其中添加MOPS(良好緩衝劑)使濃度為0.05 M(mol/L)，將pH值調節為7.0，以純淨水製成1L，保管於通用之保存容器中。

然而，本實施例1中，獲得F28四苯基卟啉化合物(F28 tetraphenylporphyrin compound)之發色反應較難，但是臨床檢查之血清中之鋰定量中，其濃度較廣，可於0.6 mM~3 mM之範圍中求得正確度。本發明之實施例中，可發現，上述鋰濃度範圍中，若將F28四苯基卟啉之化合物(F28 tetraphenylporphyrin compound)之濃度設為0.1~1.0 g/L，較佳的是設為0.5 g/L，可正確地測量。

鋰濃度為0.6 mM~3 mM之範圍中，於最終的試劑組成物之濃度為每升0.1~1.0 g/L之範圍內可測量F28四苯基卟啉(F28 tetraphenylporphyrin)，較佳的是0.5 g/L。若過少，則不會與F28四苯基卟啉(F28 tetraphenylporphyrin)鋰離子充分反應，若過多，則會產生F28四苯基卟啉(F28 tetraphenylporphyrin)由來之空白之吸光度増加之不良，較佳的是0.5 g/L。

若對該點進行更詳細地說明，則F28四苯基卟啉與鋰離子之反應係可形成莫耳比為1：1之螯合物錯合物之反應。此處，分析物中之鋰濃度為含有3 mM之分析物，以使用本試劑組成物之實施例1之條件進行反應之情形時，其反應系之鋰濃度為約0.02 mM。因此，以1：1進行反應之F28四卟啉(F28 tetraphenylporphyrin)濃度(concentration)亦於反應系內不超過0.02 mM以上，則分析物中之鋰過分不足，不能進行反應。

一般地，螯合劑(chelate)與金屬離子之錯合物形成反應(發色反應)必須對於被反應物質(鋰)有等倍~10倍之莫耳濃度(Molar concentration)之螯合劑(chelate)(F28四卟啉(F28 tetraphenylporphyrin))，如圖1之F28四卟啉(F28 tetraphenylporphyrin)之適量濃度之參考計算表之圖中所示，將反應時之F28四卟啉(F28 tetraphenylporphyrin)之濃度以自等倍至10倍之方式構成試劑組成物，但是現實性試劑組成物之添加量、分析物量之所謂測量反應時之用量之參數，藉由其測光機種或目的之閾值而存在有若干之差，因此其試劑組成物之螯合劑(chelate)濃度與等倍之0.1 g/L相比，5倍量之0.5 g/L時更能耐受廣泛的測量條件。例如，以分析物量之微量化技術較低之機種測量之情形時，可預測相對於實施例1之分析物量增加2倍~5倍左右，因此若預先準備5倍量之試劑組成物製成0.5 g/L，則不存在不足之情形。另一方面，即使加入莫耳比10倍以上之螯合劑(chelate)，對於影響發色反應之速度論性方面無意義，試劑空白值之増大之虞，故採用其並無優點。

如以上所述，只要螯合劑(chelate)與鋰之反應莫耳比之條件可達成，例如，將第二試劑之螯合劑(chelate)(F28四卟啉(F28 tetraphenylporphyrin))之濃度設為1.0 g/L之情形時，可將反應時之第二試劑之添加量減半。或者，使其分析物量減半之情形時，可同樣地將螯合劑(chelate)濃度減半。

如此，本實施例1中，考慮到將F28四苯基卟啉(F28 tetraphenylporphyrin)設為0.5 g/L，但是滿足反應莫耳量，且將試劑空白值設為最小限，其結果是0.1~1.0 g/L之範圍最適。

此外，將二甲基亞碸(dimethyl sulfoxide，DMSO)設為5~30重量%，但若過少，則F28四苯基卟啉(F28 tetraphenylporphyrin)於溶液中之分散性下降，若過多，則試劑組成物中之有機溶劑之比例増加，故較佳的是20重量%。

因此，本實施例之F28四苯基卟啉(F28 tetraphenylporphyrin)係將四苯基卟啉(tetraphenylporphyrin)之碳原子結合之氫原子全部取代為氟原子之下述結構式。

(3)對使用將上述第一試劑與第二試劑進行混合之鋰試劑之鋰濃度既知試料之校正曲線之作成進行說明。

實施例1中，於6μL試料中添加720μL第一試劑(緩衝液)、240μL第二試劑(發色試液)。該情形下，第一試劑於pH值10時具有緩衝能，試驗時將第一試劑、第二試劑、試料進行混合時之試驗液之pH值大約為10。

如此，作為螯合劑(chelate)使用F28四苯基卟啉(F28 tetraphenylporphyrin)，藉此，於pH值5~10之範圍內達成發色反應，構成pH值10以下之具有較強之pH緩衝作用之鋰測量試劑，因此可藉由空氣中之CO₂之吸收減低pH值變動，作為結果，可避免對測量值產生較差影響。此外，藉此可保存於通用之容器中。

此外，第一試劑與第二試劑於使用前立即以相同之比例進行混合，並且將混合液同樣之容量添加至試料中，該情形下，亦可於6μL試料中添加940μL混合液作為測量對象之試驗液。

於該混合試劑中添加有試料之pH值10之試驗液，於常溫下反應10分鐘反應後，使用紫外-可見分光光度計(日立U-3900型)對照試劑空白，測量550 nm之吸光度。將其結果表示於圖2之Li濃度mg/dL與吸光度之圖表，以及，圖4中生成F28四苯基卟啉(F28 tetraphenylporphyrin)-鋰錯合物之可見部之光譜變化之圖表。

並非將四苯基卟啉(tetraphenylporphyrin)金屬錯合物中稱為典型的索雷譜帶(自380 nm至460 nm附近)之最大感度之波長，而是將對於血清分析物中鋰濃度範圍最適感度之波長550 nm，或者，其附近之波長自530 nm至560 nm之波長帶作為測光波長，藉此，不需要稀釋操作，或者稀釋裝置等之繁雜操作，伴隨而來之附帶設備。

進而，如圖3之Li濃度mg/dL與吸光度之圖表(光波長*405 nm，×415 nm，●550 nm)所示，上述波長550 nm，或者，其附近之波長530 nm560 nm之波長帶比將索雷譜帶(Sauvy band)作為測光波長之情形時，校正曲線之直線性良好，因此簡單比色計或分光光度計之濃度之演算容易，色調自黃色至紅色為變為鮮豔顏色，藉由目視，亦可能判定濃度水平。因此，先前之鋰濃度之測量中必須使用大型之專用機器，然而藉由本發明，可使用攜帶型比色計或通用紫外可見分光光度計對鋰濃度進行測量，亦可構成POCT套組。

但是，圖3之圖表中，波長●550 nm係實施例1之波長，索雷譜帶(Sauvy band)之測光波長*405 nm×415 nm，與實施例1同樣地添加第1試劑、第2試劑，但是由於感度過高，則將試料稀釋5倍，實施測量反應，使用405 nm與415 nm之波長。如自圖3之圖表可判斷，405 nm與415 nm之波長之校正曲線係直線，但本實施例之550 nm作為測光波長之情形時，可獲得直線性良好之校正曲線。

此外，如圖4所示之F28四苯基卟啉-鋰錯合物(F28 tetraphenylporphyrin-Li complex)生成之光譜變化之圖表，鋰濃度為0.6 mg/dL、1.2 mg/dL、1.8 mg/dL、2.4 mg/dL、3.0 mg/dL與吸光度為直線性増加已經相當明確。將鋰濃度作為比例，卟啉-金屬錯合物中典型的415 nm(索雷譜帶)之峰與圖中所示之550 nm之吸收峰増大，570 nm之吸收峰減少，因此作為測光波長，可求得吸光度差，但是如上所述，為了獲得直線性良好之校正曲線，較佳的是將550 nm作為測光波長。

然而，本實施例1中將吸光度設為550 nm，但波長自540 nm至560 nm之波長帶亦可作為測光範圍。其係因為根據測量機器不同，有時會無550 nm之測光濾光片之情形，該情形下亦可將其附近產生感度之540 nm或者560 nm設定為測光波長。如圖4之實施例1之鋰濃度吸光度之圖表所示，570 nm之感度之減少對於鋰濃度亦係定量，故將試劑空白作為對照求得吸光度差(△Abs)，故可用作測光波長。

進而，偶爾根據患者分析物之試料，於波長550 nm產生干涉的夾雜物質，550 nm波長中數據會產生誤差之情形時，為了回避該現象，亦可自波長570 nm，或者其附近之自565 nm至650 nm之範圍選擇測光波長，將感度之減少用作吸光度差而算出鋰濃度。

由以下之實驗結果對本發明之實施例1之鋰試劑中幾乎可正確測量鋰濃度進行說明。

[以紫外-可見分光光度計(日立U-3900型)測量之實驗結果]

圖2之圖表係紫外-可見分光光度計(日立U-3900型)之測量試驗結果。其係將橫軸X為預先調劑之既知之鋰離子濃度(Li濃度mg/dL)，縱軸Y為紫外可見分光光度計550 nm之吸光度差，製成曲線、直線回歸之結果。

自該圖2之圖表可判斷，所獲得之吸光度與鋰濃度成比例，畫出直線性良好之校正曲線。

[將血清作為試料之情形時之原子吸光法(先前法)與藉由本發明之方法之相關試驗結果]

圖5之圖表係圖2中所說明之實施例1之測量法，將相同血清作為試料之先前之原子吸光法(先前法)之鋰濃度測量值之相關試驗結果。縱軸Y係本發明之鋰濃度測量值，橫軸X係原子吸光法(先前法)之鋰濃度測量值，如圖2所示之回歸線所獲得之兩測量值係表示95%以上之良好相關。因此結果表明，對於相同血清試料，本發明之試劑組成物之紫外-可見吸光光度定量法，亦可對血清試料中之鋰正確進行定量。

[藉由將管理血清作為試料之自動分析之測量值之比較]

作為標注有鋰濃度之管理血清，將質控血清U(PrecinormU)(洛什製)，血脂病理值質控(PrecipathU)(洛什製)，質控定值H(PathonormH)(SERO AS製)，Auto norm(SERO AS製)作為試料，藉由生化學自動分析裝置(日立H-7700形)，將546 nm(550 nm近波長本機所封裝之波長)作為測光波長，藉由1終點法(point end method)法進行測量。

(裝置參數)

試劑：0.24 mL

試料：0.005 mL

測光波長(主/副)：546 nm/700 nm

測光時間：10分鐘

溫度：37℃

1終點法與増加法

將上述設定條件之實驗結果表示於圖6之[表1]，本發明之實施例之測量值相對於保證值良好且一致，即使以臨床檢查用自動分析裝置，亦可充分測量血清中之鋰。

[藉由目視檢測鋰之方法」

將藉由測量對象之試驗液之目視觀察之結果表示於圖7之[表2]。

於8μL試料中添加920μL將第一試劑與第二試劑混合而成之發色試液，於常溫反應10分鐘後，藉由目視觀測其呈色。試料色調樣本所定濃度之鋰標準液，使用不同濃度水平之管理血清用進行比較。

確認有各濃度域中自黃色至紅之呈色變化，管理血清之呈色表明與色調樣本一致。可知即使不使用特別裝置，亦可用亦迅速且簡便地判定血清中之鋰濃度。

如上所述，可知以本發明之實施例1之鋰試劑可測量鋰濃度。

【實施例2】

其次，與實施例1組成相同，調製方法亦基本相同，但是使用於鋰試劑組成中，添加MOPS以使第一試劑濃度成為0.1M(mol/L)，將pH值調製至8.0，以純淨水製成1L。即，將試驗時之第一試劑、第二試劑、試劑進行混合之試驗液之pH值調節為8左右。

[實施例2]

(1)第一試劑(作為穩定劑與緩衝液)

螯合劑(chelate)：無

有機溶劑：無

穩定劑(分散劑：非離子性界面活性劑)：TritonX-100(登錄商標)(聚氧乙烯辛基苯基醚(Polyoxyethylene octyl phenyl ether)) 1.0重量%

掩蔽劑(masking agent)：三乙醇胺(Triethanolamine) 10 mM

如上所述，以成為0.1M之方式添加MOPS pH值8調節以純淨水製成1L保管於通用之保存容器。

(2)第二試劑(作為發色試液)

螯合劑(chelate)：F28四苯基卟啉(F28 tetraphenylporphyrin) 0.5 g/L

有機溶劑：二甲基亞碸(dimethyl sulfoxide，DMSO) 20重量%

穩定劑(分散劑：非離子性界面活性劑)：TritonX-100 (注冊商標)(聚氧乙烯辛基苯基醚(Polyoxyethylene octyl phenyl ether)) 1.0重量%

掩蔽劑(masking agent)：三乙醇胺(Triethanolamine) 10 mM

於其中，以成為0.05M之方式添加MOPS(緩衝劑)，調節至pH值7.0，以純淨水製成1L，保管於通用之保存容器中。

鋰濃度之測量中，與實施例1同樣，於6μL試料中添加720μL第一試劑(緩衝液)、240μL第二試劑(發色試液)，常溫10分鐘反應後，使用紫外可見分光光度計(日立U-3900型)，將試劑空白作為對照測量波長550 nm之吸光度。

[藉由紫外-可見分光光度計(日立U-3900型)測量之實驗結果]

圖8之圖表係藉由紫外-可見分光光度計(日立U-3900型)測量之實驗結果，橫軸X係預先調劑既知之鋰離子濃度(Li濃度mg/dL)，縱軸Y係紫外可見分光光度計之550 nm之吸光度差製成曲線進行直線回歸之結果。

自該圖8之圖表中可知，以pH值8所構成之試劑組成物，即以pH值8之測量條件獲得之吸光度差係與鋰濃度依賴性成比例，形成了直線性良好之校正曲線。

但是，pH值8之測量條件下，反應速度稍遲，定量時10分~20分左右進行穩定化。另一方面，設為pH值10之情形時，10分鐘以內反應完結。因此，若將本發明之鋰試劑組成物之緩衝系之pH值設為5~10之範圍，則無必要如pH值為11以上之情形時，使用類似氫氧化鈉或氫氧化鉀之強鹼性氫氧化物溶液為主之緩衝系，且操作亦簡便。pH值之設定根據使用者之需要而定，若為pH值10，則反應速度亦快，可使用能充分維持緩衝力之良好緩衝劑、氯化氨類、碳酸類。若考慮實用性，則較佳的是以快速且正確反應之實施例1之pH值10之緩衝系進行實施。

如此，作為本發明之鋰試劑組成物之pH值調節劑，必須有pH值自7至12之範圍之pH值調節劑，或者作為pH值調節劑之pH值緩衝劑，更佳的是，使用pH值為8~11之pH值調節劑、pH值緩衝劑，進而更較佳的是使用pH值為10前後之pH值調節劑、pH值緩衝劑。

【實施例3】

其次，關於與水混合而成之有機溶劑之選擇進行說明，本發明之溶劑重要的是與水混合而成之有機溶劑，其由於測量時之反應溶液為血清等通常水溶液，若試劑組成物中之成分係作為水溶液而穩定化之液狀，亦可為以有機溶劑為主之液體，或者可為添加有機溶劑之水溶液。尤其是，藉由通用型之自動分析裝置、紫外可見分光光度計測量分析物中之鋰濃度之情形時，較佳的是基本上添加有機溶劑之水溶液。

因此，與實施例1、3不同之與水混合而成之有機溶劑於實施例3進行說明。實施例3基本上與實施例1之調製方法相同，如下所述，鋰試劑中不同的是第二試劑之有機溶劑不是二甲基亞碸(dimethyl sulfoxide，DMSO)(20重量%)，而是二甲基甲醯胺(Dimethylformamide，DMF)(20重量%)。

[實施例3]

(1)第一試劑(作為緩衝液)

螯合劑(chelate)：無

有機溶劑：無

掩蔽劑(masking agent)：三乙醇胺(Triethanolamine) 10 mM

如上所述，添加7重量%之氯化氨，調節至pH值10以純淨水製成1L保管於通用之保存容器。

(2)第二試劑(作為發色試液)

螯合劑(chelate)：F28四苯基卟啉(F28 tetraphenylporphyrin) 0.5 g/L

有機溶劑：二甲基甲醯胺(Dimethylformamide，DMF) 20重量%

掩蔽劑(masking agent)：三乙醇胺(Triethanolamine) 10 mM

於其中，以成為0.05M之方式添加MOPS(緩衝劑)，將pH值調整為7.0，以純淨水製成1L，保管於通用之保存容器。

【實施例4】

此外，於實施例1之與水混合而成之有機溶劑二甲基亞碸(dimethyl sulfoxide，DMSO)(20重量%)中，實施例3中為二甲基甲醯胺(Dimethylformamide，DMF)(20重量%)，實施例4中作為與水混合而成之有機溶劑係混入二甲基乙醯胺(Dimethylacetal，DMA)(20重量%)之鋰試劑組成物，測量鋰離子濃度。

[實施例4]

(1)第一試劑(作為緩衝液)

螯合劑(chelate)：無

有機溶劑：無

掩蔽劑(masking agent)：三乙醇胺(Triethanolamine) 10 mM

於以上中，添加7重量%之氯化氨調整至pH值10並以純淨水製成1L，保管於通用之保存容器。

(2)第二試劑(作為發色試液)

螯合劑(chelate)：F28四苯基卟啉(F28 tetraphenylporphyrin) 0.5 g/L

有機溶劑：二甲基乙醯胺(Dimethylacetal，DMA) 20重量%

掩蔽劑(masking agent)：三乙醇胺(Triethanolamine) 10mM

於其中，以成為0.05M之方式添加MOPS(緩衝劑)，將pH值調整至7.0，以純淨水製成1L保管於通用之保存容器。

如上所述，於實施例1之鋰試劑中，將二甲基亞碸(dimethyl sulfoxide)於實施例3中變更為二甲基甲醯胺(Dimethylformamide，DMF)，於實施例4中變更為二甲基乙醯胺(Dimethylacetal，DMA)之試劑組成物，其餘以與實施例1同樣之手續，如圖9所示，對管理血清試料中之鋰進行定量，如圖9之[表3]所示，對本測量方法與先前之測量方法獲得之測量值進行比較。

自圖9之[本發明之不同有機溶劑之測量值之比較]之[表3]結果可知，本實施例1之與水混合而成之有機溶劑之二甲基亞碸(dimethyl sulfoxide，DMSO)20重量%組成獲得之測量值為0.83 mM(mmol/L)，本實施例3之與水混合而成之有機溶劑之二甲基甲醯胺(Dimethylformamide，DMF)20重量%組成獲得之測量值為0.81 mM，藉由實施例4之二甲基甲醯胺(Dimethylformamide，DMF)20重量%組成獲得之測量值為0.82 mM，與藉由原子吸光光度法獲得之測量值之0.82 mM具有95%以上之一致。因此，藉由該些有機溶劑使F28四苯基卟啉(F28 tetraphenylporphyrin)均勻分散，構成液狀試劑組成物，如血清之水溶液試料中之鋰可正確地定量。

【實施例5】

其次，關於鋰試劑組成物之穩定劑之選擇基於實驗結果基進行說明。自實施例5至實施例7中鋰試劑組之穩定劑係基本上與實施例1調製方法相同，如下所述，對穩定劑分別於僅有非離子性界面活性劑(實施例5)，僅有陰離子性界面活性劑(實施例6)，或者並用兩者之情形(實施例7)進行實驗。

首先，實施例5之僅有非離子性界面活性劑(TritonX-100(注冊商標)(聚氧乙烯辛基苯基醚(Polyoxyethylene octyl phenyl ether))之情形時(實施例5、組成自身與實施例1相同)之組成進行說明。

[實施例5]

(1)第一試劑(緩衝液)

螯合劑(chelate)：無

有機溶劑：無

穩定劑(分散劑：非離子界面活性劑)：TritonX-100(注冊商標)(聚氧乙烯辛基苯基醚(Polyoxyethylene octyl phenyl ether)) 1.0重量%

掩蔽劑(masking agent)：三乙醇胺(Triethanolamine) 10 mM

於其中，添加7重量%之氯化氨，將pH值調整為10並以純淨水製成1L保管於通用之保存容器。

(2)第二試劑(作為發色試液)

螯合劑(chelate)：F28四苯基卟啉(F28 tetraphenylporphyrin) 0.5 g/L

有機溶劑：二甲基亞碸(dimethyl sulfoxide，DMSO) 20重量%

掩蔽劑(masking agent)：三乙醇胺(Triethanolamine) 10 mM

於其中，以成為0.05M之方式添加MOPS(緩衝劑)，將pH值調整為7.0，以純淨水製成1L保管於通用之保存容器。

【實施例6】

實施例6係僅陰離子性界面活性劑(十二烷基硫酸鈉(和光純藥制))之情形時(實施例6)之組成進行說明。

[實施例6]

(1)第一試劑(作為緩衝液)

螯合劑(chelate)：無

有機溶劑：無

穩定劑(分散劑：僅陰離子界面活性劑)：十二烷基硫酸鈉(sodiumlaurylsulfate)(sodiumlaurylsulfate)(和光純藥制) 1.0重量%

掩蔽劑(masking agent)：三乙醇胺(Triethanolamine) 10 mM

於其中，添加7重量%之氯化氨，將pH值調整至10，以純淨水製成1L保管於通用之保存容器。

(2)第二試劑(作為發色試液)

螯合劑(chelate)：F28四苯基卟啉(F28 tetraphenylporphyrin) 0.5 g/L

有機溶劑：二甲基亞碸(dimethyl sulfoxide，DMSO) 20重量%

穩定劑(分散劑：陰離子性界面活性劑)十二烷基硫酸鈉(sodiumlaurylsulfate)(和光純藥制) 1.0重量%

掩蔽劑(masking agent)：三乙醇胺(Triethanolamine) 10 mM

【實施例7】

實施例7係對將鋰試劑組成物之穩定劑並用非離子性界面活性劑與陰離子性界面活性劑之兩者之情形時(實施例7)之組成進行說明。

[實施例7]

(1)第一試劑(作為緩衝液)

螯合劑(chelate)：無

有機溶劑：無

穩定劑(分散劑：非離子性界面活性劑與陰離子性界面活性劑)：

(a)非離子性界面活性劑：Triton-X100(注冊商標)(聚氧乙烯辛基苯基醚(Polyoxyethylene octyl phenyl ether)) 1.0重量%

(b)陰離子性界面活性劑：十二烷基硫酸鈉(sodiumlaurylsulfate)(和光純藥制) 1.0重量%

掩蔽劑(masking agent)：三乙醇胺(Triethanolamine) 10 mM

(2)第二試劑(作為發色試液)

螯合劑(chelate)：F28四苯基卟啉(F28 tetraphenylporphyrin) 0.5 g/L

有機溶劑：二甲基亞碸(dimethyl sulfoxide，DMSO) 20重量%

穩定劑(分散劑：非離子性界面活性劑陰離子性界面活性劑)：

掩蔽劑(masking agent)：三乙醇胺(Triethanolamine) 10 mM

使用上述實施例5、實施例6、實施例7，以與實施例1同樣之手續，對管理血清試料中之鋰濃度進行定量。將其實驗結果表示於圖10之[本發明中不同穩定劑之測量值之比較]之[表4]進行說明。

由圖10之[表4]之實驗結果可知，僅非離子性界面活性劑之測量值(0.82 mM)，僅陰離子性界面活性劑之測量值(0.83 mM)，並用兩穩定劑之情形時之測量值(0.82 mM)為95%以上一致，故於界面活性劑之種類、並用之方法無關，其測量值幾乎一致，因此於擔憂懸濁之試料之情形時，亦可並用該些之界面活性劑。

其次，關於鋰試劑組成物之掩蔽劑(masking agent)之選擇進行說明。

作為鋰試劑組成物之掩蔽劑(masking agent)，前述之實施例僅對三乙醇胺(Triethanolamine)之情形進行說明，但亦可使用乙二胺四醋酸(Ethylenediaminetetraacetic acid，EDTA)。

作為比較對象，於僅三乙醇胺(Triethanolamine)之情形時，作為實施例5之鋰試劑組成物，僅乙二胺四醋酸(Ethylenediaminetetraacetic acid，EDTA)之情形(實施例8)與並用兩掩蔽劑(masking agent)之情形(實施例9)之組成進行說明。

【實施例8】

[實施例8]

作為掩蔽劑(masking agent)，僅乙二胺四醋酸二鉀(Ethylenediaminetetraacetic acid dipotassium，EDTA．2K(鉀))之情形時。

(1)第一試劑(作為緩衝液)

螯合劑(chelate)：無

有機溶劑：無

穩定劑：Triton-X100(注冊商標)(聚氧乙烯辛基苯基醚(Polyoxyethylene octyl phenyl ether)) 1.0重量%

掩蔽劑(masking agent)：乙二胺四醋酸二鉀(Ethylenediaminetetraacetic acid dipotassium，EDTA‧2K同仁化學制) 10 mM

於其中，添加7重量%之氯化氨，將pH值調整至10，以純淨水製成1L，保管於通用之保存容器。

(2)第二試劑(作為發色試液)

螯合劑(chelate)：F28四苯基卟啉(F28 tetraphenylporphyrin) 0.5 g/L

有機溶劑：二甲基亞碸(dimethyl sulfoxide，DMSO) 20重量%

掩蔽劑(masking agent)：乙二胺四醋酸二鉀(Ethylenediaminetetraacetic acid dipotassium，EDTA‧2K同仁化學制)10 mM

【實施例9】

[實施例9]

作為掩蔽劑(masking agent)，並用三乙醇胺(Triethanolamine)乙二胺(Ethylenediamine)與四醋酸二鉀(Ethylenediaminetetraacetic acid dipotassium，EDTA‧2K(鉀)之情形。

(1)第一試劑(緩衝液)

螯合劑(chelate)：無

有機溶劑：無

穩定劑：Triton-X100(注冊商標) (聚氧乙烯辛基苯基醚(Polyoxyethylene octyl phenyl ether)) 1.0重量%

掩蔽劑(masking agent)：三乙醇胺(Triethanolamine) 10 mM

乙二胺四醋酸二鉀(Ethylenediaminetetraacetic acid dipotassium，EDTA‧2K同仁化學制) 0.1 mM

(2)第二試劑(作為發色試液)

螯合劑(chelate)：F28四苯基卟啉(F28 tetraphenylporphyrin) 0.5 g/L

有機溶劑：二甲基亞碸(dimethyl sulfoxide，DMSO) 20重量%

掩蔽劑(masking agent)：三乙醇胺(Triethanolamine) 10 mM

於其中，0.05M之方式添加MOPS(緩衝劑)，將pH值調整為7.0，以純淨水製成1L保管於通用之保存容器。

使用上述實施例8、實施例9，以與實施例1同樣之手續，對管理血清試料中之鋰濃度進行定量。將其實驗結果表示於圖11之[本發明不同掩蔽劑(masking agent)之測量值之比較]之[表5]進行說明。

由圖11之[表5]之實驗結果可知，僅三乙醇胺(Triethanolamine)之測量值(0.83 mM)、僅乙二胺四醋酸二鉀(Ethylenediaminetetraacetic acid dipotassium，EDTA.2K同仁化學制)之測量值(0.83 mM)、並用兩掩蔽劑(masking agent)之情形時之測量值(0.82 mM)為95%以上一致，因此，與主要之掩蔽劑(masking agent)之種類或並用之仕方無關，其測量值幾乎一致，故於保存試劑中少量混入之微量金屬離子為原因而發生之試劑之劣化防止、或試料中之夾雜離子種過剩之情形相對應，亦可適宜使用該些掩蔽劑(masking agent)。

如以上所說明，根據本發明之各實施例，生物試料或環境試料等水溶液中之鋰之定量，藉由簡便比色計立刻測量鋰濃度，且藉由目視進行判定。

此外，若非損害本發明之特徵者，並非限定於上述各實施例。例如，自實施例1至實施例9中，將用於鋰濃度測量之試劑組成物作為第一試劑、將第二試劑作為分隔板(demarcation strip)，長期保存，但若短期間進行測量，則自最初混合第一試劑、第二試劑之單一之試劑用事調製使用。

Claims

一種鋰試劑組成物，其特徵在於，形成水溶液，包含：以將與四苯基卟啉(tetraphenylporphyrin)之碳原子結合之氫原子全部取代為氟原子之結構式所表示之化合物、選自二甲基亞碸(dimethyl sulfoxide，DMSO)、二甲基甲醯胺(Dimethylformamide，DMF)、二甲基乙醯胺(Dimethylacetal，DMA)之與水混合而成之有機溶劑、pH值調節為pH值5至pH值12之範圍之pH值調節劑。
根據申請專利範圍第1項所述之鋰試劑組成物，其中上述pH值調節劑係選自包含鹽酸(hydrochloric acid)、硝酸(nitric acid)、氫氧化鈉(sodium hydroxide)、氫氧化鉀(Potassium hydroxide)、氨(ammonia)之鹼性試劑(alkaline reagents)；包含醋酸(acetic acid)、磷酸(phosphoric acid)、鹽酸(hydrochloric acid)、碳酸(carbonic acid)、重碳酸(bicarbonic acid)、乙二酸(ethane diacid)，鹽酸(hydrochloric acid)之酸性試劑(acidulant)以及該些之鹽類。
根據申請專利範圍第1項所述之鋰試劑組成物，其中上述pH值調節劑係pH值緩衝劑。
根據申請專利範圍第3項所述之鋰試劑組成物，其中上述pH值緩衝劑作為檸檬酸(citric acid)、碳酸(carbonic acid)、重碳酸(bicarbonic acid)、磷酸(phosphoric acid)、琥珀酸(succinic acid)、苯二甲酸(orthobenzene dicarboxylic acid)、氯化氨(ammonia Chloride)、氫氧化鈉(sodium hydroxide)、氫氧化鉀(Potassium hydroxide)、良好之緩衝劑(buffer)，選自脂肪酸甲酯磺酸鹽(MES)、雙-三異丙基乙磺醯(Bis-Tris)、己二酸(ADA)、呱嗪-1,4-二乙磺酸(PIPES)、ACES、3-(N-嗎啉基)-2-羥基丙磺酸(MOPSO)、2-(二乙醇胺基)乙磺酸(2-(bis(2-hydroxyethyl)amino)-ethanesulfonicacid，BES)、3-(N-嗎啡啉)丙磺酸(3-(N-Morpholino)propa，MOPS)、N-三(羥甲基)甲基-2-氨基乙磺酸(2-[Tris(hydroxymethyl)methylamino]-1-ethanesulfonic acid，TES)、N-2-羥乙基哌嗪-N-2-乙基磺酸(4-(2-Hydroxyethyl)piperazine-1-ethanesulfonic acid，HEPES)、3-[N-N-雙(2-羥乙基)氨基]-2-羥基丙磺酸(DIPSO)、3-三羥甲基甲胺-2-羥基丙磺酸(TAPSO)、呱嗪-1,4-二羥基丙磺酸(POPSO)、4-(2-羥乙基)呱嗪-1-2-羥基丙磺酸(HEPPSO)、4-(2-羥乙基)-1-呱嗪丙磺酸(EPPS)、N-[三(羥甲基)甲基]甘氨酸(Tricine)、N-二(羥乙基)甘氨酸(Bicine)、N-三(羥甲基)甲基-3-氨基丙磺酸(TAPS)、N-2-環已胺基乙磺酸(CHES)、3-(環己胺)-2-羥基-1-丙磺酸(CAPSO)、3-(環己胺)-1-丙磺酸(CAPS)、以及該些之鹽類。
根據申請專利範圍第1至4項中任一項所述之鋰試劑組成物，其中上述鋰試劑組成物對於pH值5至pH值12之範圍之鋰可發色。
根據申請專利範圍第1項所述之鋰試劑組成物，其中上述鋰試劑組成物包含穩定劑。
根據申請專利範圍第6項所述之鋰試劑組成物，其中上述穩定劑係非離子性界面活性劑以及/或者陰離子性界面活性劑。
根據申請專利範圍第7項所述之鋰試劑組成物，其中上述非離子性界面活性劑係選自山梨糖醇酐脂肪酸酯(sorbitan fatty acid ester)、五紅蘚醇脂肪酸部分酯(pentaerythritol partial fatty acid ester)、丙二醇單丁基醚脂肪酸酯(propylene glycol mono butyl ether fatty acid ester)、甘油脂肪酸單酯(glycerine fatty acid monoester)、聚氧乙烯烷基醚(polyoxyethylene alkyl ether)、聚氧乙烯烷基苯醚(polyoxyethylene alkyl phenyl ether)、聚氧乙烯聚丙二醇(polyoxyethylene polyoxypropylene glycol)、聚氧乙烯脂肪酸部分酯(polyoxyethylene partial fatty acid ester)、聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸部分酯(polyoxyethylene sorbitan partial fatty acid ester)、聚氧乙烯脂肪酸酯(poly oxyethylene fatty acid ester)、脂肪酸二乙醇醯胺(fatty acid diethanol Amide)、脂肪酸單乙醇醯胺(fatty acid monoethanol Amide)、聚氧乙烯脂肪酸醯胺(polyoxyethylene fatty acid amide)、聚氧乙烯辛基苯基醚(polyoxyethylene octyl phenyl ether)、p-壬基苯氧基聚縮水甘油醚(p-nonyl phenoxy polyglycidyl ether)以及該些之鹽類。
根據申請專利範圍第7所記載之鋰試劑組成物，其中上述陰離子性界面活性劑係選自烷基硫酸酯鹽(alkyl sulfate)、聚氧乙烯烷基醚硫酸酯鹽(polyoxyethylene alkyl ether sulfuric ester)、聚氧乙烯苯醚硫酸酯鹽(polyoxyethylene phenylene oxide sulfuric ester)、烷基苯磺酸鹽(alkyl benzene sulfonate)、烷烴磺酸鹽(alkane sulfonate)。
根據申請專利範圍第1項所述之鋰試劑組成物，其中上述鋰試劑組成物包含掩蔽劑(masking agent)。
根據申請專利範圍第10項所述之鋰試劑組成物，其中上述掩蔽劑係選自三乙醇胺(Triethanolamine)、乙二胺(Ethylenediamine)、N,N,N',N'-四(2-吡啶基甲基)乙二胺(N,N,N′,N′-tetrakis-(2-Pyridylmethyl)ethylenediamine, TPEN)、吡啶(pyridine)、2,2-聯吡啶(2,2-Bipyridyl)、丙烯二胺(Diallylamine)、二乙烯三胺(triethylene diamine)、二乙烯三胺-N,N,N',N",N"-五醋酸(Diethylene triamine penlaacetic acid，DTPA)、三乙烯四胺(triethylene tetramine)、三乙烯乙基四胺-N,N,N',N",N''',N'''-六醋酸(triethylene tetramine)、1,10-菲繞啉(1,10-phenanthroline)、乙二胺四醋酸(Ethylenediaminetetraacetic acid，EDTA)、O,O'-雙(2-氨基苯基)乙烯二醇-N,N,N',N'-四醋酸(O,O'-bis(2-aminophenoxy)-ethane-N,N,N'N'-tetraacetic acid，BAPTA)、N,N-雙(2-羥基乙基)甘氨酸(N,N-Bis(2-hydroxyethyl)glycine，Bicine)、反式-1,2-二氨基環己烷-N,N,N',N'-四醋酸(trans-1,2-Diaminocyclohexane-N,N,N',N'-tetraacetic acid，CyDTA)、O,O'-雙(2-氨基乙基)乙烯二醇-N,N,N',N'-四醋酸(Ethylenebis(oxyethylenenitrilo)tetraacetic acid，EGTA)、N-(2-羥丙基)亞胺基二醋酸(Hepatobiliary Iminodiacetic Acid，HIDA)、亞胺基二醋酸(iminodiacetic acid，IDA)、氮川基三醋酸(nitrilotriacetic acid，NTA)、氮川基三甲基磷酸(Nitrilotris(methylenephosphonic acid，NTPO)以及該些之鹽類。
一種鋰試劑套組，其特徵在於，如請求項1所記載之鋰試劑組成物之組成之中，第一試劑包含穩定劑與上述pH值調節劑，第二試劑包含以將上述四苯基卟啉(tetraphenylporphyrin)之碳原子結合之氫原子全部取代為氟原子之結構式[化1] 所表示之化合物、上述與水混合而成之有機溶劑、穩定劑及上述pH值調節劑，將該些兩種試劑保存於分隔板(demarcation strip)，測量前立即將兩種試劑進行混合用作如請求項1所記載之鋰試劑組成物。
一種鋰離子測量方法，其特徵在於，其係測量血清試驗試料中之鋰離子，其中將血清以及血漿試驗試料，與形成水溶液且包含：以將與四苯基卟啉(tetraphenylporphyrin)之碳原子結合之氫原子全部取代為氟原子之結構式所表示之化合物、選自二甲基亞碸(dimethyl sulfoxide，DMSO)、二甲基甲醯胺(Dimethylformamide，DMF)、二甲基乙醯胺(Dimethylacetal，DMA)之與水混合而成之有機溶劑、pH值調節為pH值5至pH值12之範圍之pH值調節劑之鋰試劑組成物接觸，測量上述水溶液中之鋰錯合物之發色以及其光譜，算出鋰之定量值。
根據申請專利範圍第13項所述之鋰離子測量方法，其中於上述鋰錯合物之發色以及其光譜中，將波長550nm，或者其附近之波長自530nm至560 nm之波長帶作為測量波長，測量其感度。
根據申請專利範圍第13項所述之鋰離子測量方法，其中於上述鋰錯合物之發色以及其光譜中，將波長570nm，或者其附近之波長自565nm至650nm之波長帶作為測量波長，測量其感度。
一種鋰離子測量裝置，其特徵在於，其係測量血清以及血漿試驗試料中之鋰離子，具有接觸裝置，將血清以及血漿試驗試料，與形成水溶液且包含：以將與四苯基卟啉(tetraphenylporphyrin)之碳原子結合之氫原子全部取代為氟原子之結構式所表示之化合物、選自二甲基亞碸(dimethyl sulfoxide，DMSO)、二甲基甲醯胺(Dimethylformamide，DMF)、二甲基乙醯胺(Dimethylacetal，DMA)之與水混合而成之有機溶劑、pH值調節為pH值5至pH值12之範圍之pH值調節劑之鋰試劑組成物接觸，測量上述水溶液中之鋰錯合物之發色以及其光譜，以測量裝置，測量鋰錯合物之發色以及其光譜，其光譜中，將波長550nm，或者其附近之波長自530nm至560nm之波長帶作為測量波長，測量其感度，或者，對波長570nm，或者其附近之波長自565nm至650nm之波長帶之感度進行測量，以算出裝置算出鋰之定量值。