TWI483722B - Contains benzoates An anti-obesity agent of a compound of the benzophenolone ring - Google Patents

Contains benzoates An anti-obesity agent of a compound of the benzophenolone ring Download PDF

Info

Publication number
TWI483722B
TWI483722B TW099116299A TW99116299A TWI483722B TW I483722 B TWI483722 B TW I483722B TW 099116299 A TW099116299 A TW 099116299A TW 99116299 A TW99116299 A TW 99116299A TW I483722 B TWI483722 B TW I483722B
Authority
TW
Taiwan
Prior art keywords
compound
lipase
tea
obesity agent
gallate
Prior art date
Application number
TW099116299A
Other languages
English (en)
Other versions
TW201109018A (en
Inventor
Yuko Fukui
Sumio Asami
Mitsuru Maeda
Original Assignee
Suntory Holdings Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Suntory Holdings Ltd filed Critical Suntory Holdings Ltd
Publication of TW201109018A publication Critical patent/TW201109018A/zh
Application granted granted Critical
Publication of TWI483722B publication Critical patent/TWI483722B/zh

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D311/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only hetero atom, condensed with other rings
    • C07D311/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only hetero atom, condensed with other rings ortho- or peri-condensed with carbocyclic rings or ring systems
    • C07D311/04—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring
    • C07D311/58—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring other than with oxygen or sulphur atoms in position 2 or 4
    • C07D311/64—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring other than with oxygen or sulphur atoms in position 2 or 4 with oxygen atoms directly attached in position 8
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23F—COFFEE; TEA; THEIR SUBSTITUTES; MANUFACTURE, PREPARATION, OR INFUSION THEREOF
    • A23F3/00—Tea; Tea substitutes; Preparations thereof
    • A23F3/16—Tea extraction; Tea extracts; Treating tea extract; Making instant tea
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L2/00—Non-alcoholic beverages; Dry compositions or concentrates therefor; Their preparation
    • A23L2/52—Adding ingredients
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/105—Plant extracts, their artificial duplicates or their derivatives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/12—Ketones
    • A61K31/122—Ketones having the oxygen directly attached to a ring, e.g. quinones, vitamin K1, anthralin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
    • A61K31/35—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having six-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom
    • A61K31/352—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having six-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom condensed with carbocyclic rings, e.g. methantheline 
    • A61K31/353—3,4-Dihydrobenzopyrans, e.g. chroman, catechin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/04—Anorexiants; Antiobesity agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/06—Antihyperlipidemics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C62/00—Compounds having carboxyl groups bound to carbon atoms of rings other than six—membered aromatic rings and containing any of the groups OH, O—metal, —CHO, keto, ether, groups, groups, or groups
    • C07C62/30—Unsaturated compounds
    • C07C62/38—Unsaturated compounds containing keto groups
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D311/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only hetero atom, condensed with other rings
    • C07D311/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only hetero atom, condensed with other rings ortho- or peri-condensed with carbocyclic rings or ring systems
    • C07D311/04—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D311/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only hetero atom, condensed with other rings
    • C07D311/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only hetero atom, condensed with other rings ortho- or peri-condensed with carbocyclic rings or ring systems
    • C07D311/04—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring
    • C07D311/58—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring other than with oxygen or sulphur atoms in position 2 or 4
    • C07D311/60—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring other than with oxygen or sulphur atoms in position 2 or 4 with aryl radicals attached in position 2
    • C07D311/62—Benzo[b]pyrans, not hydrogenated in the carbocyclic ring other than with oxygen or sulphur atoms in position 2 or 4 with aryl radicals attached in position 2 with oxygen atoms directly attached in position 3, e.g. anthocyanidins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Child & Adolescent Psychology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)

Description

包含有含苯并 酚酮(benzotropolone)環之化合物的抗肥胖劑
本發明關於一種抗肥胖劑，係含有含苯并酚酮環之化合物。
肥胖在現代社會之中最重大的疾患之一，而其主要原因為脂肪的過剩攝取。另外已知脂肪的過剩攝取，不僅造成肥胖，也會使起因於肥胖的糖尿病、高血脂症、高血壓、動脈硬化等發病。內臟脂肪型肥胖再加上高血糖、高血壓、脂質異常，其中的任兩個以上組合在一起的狀態，被稱為代謝症候群(metabolic syndrome內臟脂肪症候群)，由於心臟病或腦中風發病的危險性高，因此近年來逐漸被視為問題。就對於肥胖的治療藥而言，例如脂肪酶阻礙活性而具有抑制脂肪從腸管吸收之作用的羅氏鮮(Xenical，註冊商標)作為肥胖改善藥而在市面販售，然而有文獻報告出脂肪便、排使數之增加、軟便、下痢、腹痛等副作用，而未必能斷定其為安全的(非專利文獻1)。
為了預防肥胖，藉由限制進食使攝取的卡路里減少雖然是有效的手段，然而必須確實接受營養指導，在日常生活中難以實行的情況很多。於是認為，安全且健康地抑制來自於進食的脂肪在體內被吸收，以治療肥胖及其所關連的疾患或增進健康之目的而言，是實際有效的方法對策。
在如此的背景之下，被証明為安全且對人體有效的特定保健用食品之開發正受到矚目。至目前為止，就抑制餐後血清中性脂肪值上昇的食品材料而言，藉由胰脂肪酶阻礙而抑制脂肪吸收的血球蛋白分解物，具有與三醯基甘油相異的消化吸收特性的二醯基甘油、由魚油精製而得的二十碳五烯酸(EPA)、二十二碳六烯酸((DHA)等，正以特定保健用食品的形式在市面販售。
另外，來自植物的脂肪酶阻礙活性物質最近也逐漸受到矚目，特別是關於具有脂肪酶阻礙活性的多酚類，文獻報告出以來自植物樹皮的單寧、豆科植物豆茶決明(Chamaecrista nomame)所含的單寧類或類黃酮類及其配糖體、摻合了綠茶中主要的成分表棓兒茶素沒食子酸酯及表兒茶素沒食子酸酯的脂質吸收抑制食品；由青椒、占地菇、南瓜、舞菇、羊栖菜、綠茶、烏龍茶等的水萃取物所構成的脂肪酶阻礙劑；黃酮及黃酮醇類、羥安息香酸類(沒食子酸)、三萜類化合物及其衍生物；羅望子(tamarind)的原矢車菊素作為有效成分的抗肥胖劑等，另外還已知葡萄種子萃取物之脂肪酶阻礙作用(非專利文獻2)、來自莎拉木(Salacia)的多酚所產生的脂肪酶阻礙作用與大鼠之抗肥胖作用(非專利文獻3)、烏龍茶萃取物所產生的小鼠之抗肥胖作用(非專利文獻4)等。另外，在茶中富含兒茶素類，其成分大多已被分離‧鑑定(非專利文獻5)，有文獻報告出關於含來自茶的成分的脂肪酶阻礙劑(專利文獻1、專利文獻2)。其中，已知為紅茶或烏龍茶之色素的茶黃素，與其分子內沒食子酸酯基數成比例地表現出強的脂肪酶阻礙活性(專利文獻2、非專利文獻6)。但是，該等茶黃素類之含量或比率會依照茶的品種而改變。
另外，α-葡萄糖苷酶阻礙物質，會阻礙局部存在於小腸上皮上的α-葡萄糖苷酶，藉由抑制、遲延糖質的分解吸收而具有血糖值上昇抑制作用。因此，α-葡萄糖苷酶阻礙物質對於高血糖症狀的慢性化所引起的糖尿病或肥胖症等各種疾患為有效的。
1933年在麥芽成分觀察到α-葡萄糖苷酶阻礙活性以來，已發現許多來自小麥或豆類等植物的α-葡萄糖苷酶阻礙物質。在1966年，由微生物代謝產物分離出具有α-葡萄糖苷酶阻礙活性的野尻霉素(nojirimycin)，並鑑定了其構造。已知其類緣化合物的1-脫氧野尻霉素(1-Deoxynojirimycin)可由桑葉的萃取物得到，並具有α-葡萄糖苷酶阻礙活性，文獻中揭示了不使其活性降低所用的萃取方法(專利文獻3)。
另外文獻還報告出，由網狀五層龍(Salacia reticulata，又名Kothala himbutu)之根的萃取物所分離出來，具有亞碸並具有13員環環多醇構造之物質，會具有麥芽糖酶阻礙活性(專利文獻4)。另外文獻還報告出，在由牽牛花或紫甘藷之根所分離出來的花青素化合物當中，經二酶基化的天竺葵色素、矢車菊素、芍藥素的3-槐糖苷-5-葡萄糖苷，會具有麥芽糖酶阻礙活性(非專利文獻7)。另外認為在茶葉中所含的某種紅茶多酚類(Theasinensin A)、具有棓醯基的茶黃素衍生物、具有表阿夫兒茶精沒食子酸酯作為構成單元的原花青素等，會有麥芽糖酶阻礙活性。但是，具有棓醯基的茶黃素衍生物雖然具有麥芽糖酶阻礙活性，然而在茶葉中的含量非常少，而為0.1～0.2%(專利文獻5、非專利文獻8)。
有文獻報告出紅茶的茶黃素及綠茶的兒茶素類具有α-葡萄糖苷酶阻礙活性(非專利文獻8)，認為在兒茶素類之中，第3位置的碳具有棓醯基的表棓兒茶素-3-O-沒食子酸酯(以下稱為「EGCG」)或表兒茶素-3-O-沒食子酸酯；及在茶黃素類之中為茶黃素-3-O-沒食子酸酯、茶黃素-3,3'-二-O-沒食子酸酯會具有活性。關於紅茶的α-葡萄糖苷酶阻礙活性，亦針對該區分物等進行了調查，而發現了因為發酵而發生聚合的高分子的區分部分亦具有活性(非專利文獻9)。
另一方面，已知在製造紅茶或烏龍茶時的發酵之中，藉由茶葉的多酚氧化酶等酵素的功能，兒茶素或沒食子酸等多酚類縮合，會形成具有苯并酚酮環的化合物(非專利文獻10)。
文獻報告出在茶當中，除了茶黃素以外，還存在有許多含苯并酚酮環之化合物。例如有文獻報告出紅棓酚衍生物誘導細胞凋亡(專利文獻6)、將茶棓靈類適用於食品方面之製造方法(專利文獻7)、或茶黃素3量體的茶二苯并酚酮A(Theadibenzotropolone A)之酵素的製法與在紅茶中的存在(非專利文獻11)等。另外還已知關於各種含苯并酚酮環之化合物的抗發炎作用(非專利文獻12)。然而，關於茶黃素類、茶棓靈類以外之含苯并酚酮環之化合物，脂肪吸收所關連的脂肪酶阻礙作用或血糖值上昇抑制作用所關連的α-葡萄糖苷酶阻礙作用仍然未知。
[先前技術文獻]
[專利文獻]
[專利文獻1] WO2005/077384
[專利文獻2] WO2006/004110
[專利文獻3]　日本特開2007-60908
[專利文獻4]　日本特開2008-137925
[專利文獻5]　日本特開2007-231009
[專利文獻6]　日本特開2004-359576
[專利文獻7] WO2007-141945
[非專利文獻]
[非專利文獻1] Lancet 1998；352：167-172
[非專利文獻2] Nutrition 2003；19(10)：876-879
[非專利文獻3] J. Nutr. 2002；132：1819-1824
[非專利文獻4] Int. J. Obes,1999；23：98-105
[非專利文獻5]　日本食品科學工業會誌第46卷、第3號、138～147頁、1999年3月
[非專利文獻6] Chem. Pharm. Bull. 2008；56：266-272
[非專利文獻7] J. Agric. Food Chem. 2001,49,1952-1956
[非專利文獻8] J. Agric. Food. Chem.,55,99-105,2007
[非專利文獻9] Chem. Pharm. Bull. 56(3),266-272,2008
[非專利文獻10] Tetrahedron 1973；29：125-142
[非專利文獻11] Tetrahedron Letters 2002；43：7129-7133
[非專利文獻12] Bioorganic ＆ Medicinal Chemistry2004；12：459-467
即使某種植物的萃取物具有效果，由於是源自於天然物，在其中所含的活性成分量不明確的條件下，則難以安定地維持抗肥胖活性。另外，上述所揭示已經被報告的脂肪酶阻礙劑或α-葡萄糖苷酶阻礙劑的效果也有不足的情形。
另外，若將來自受喜好度低的植物之抗肥胖劑利用於飲食物，則預測會對香味造成不良影響。另一方面，源於受喜好度高的茶的抗肥胖劑，能夠成為有效材料的候補，然而即使飲用例如受喜好度高的紅茶或烏龍茶以謀求脂質降低，也必須大量飲用才可得到效果，在日常生活中進行並不切實際。即使提供單純濃縮過的紅茶或烏龍茶，由於苦味、澀味強，咖啡因量亦增加，所以此方法仍然不適合為實際的方法對策。
因此，本發明之目的係提供一種源自於天然物，效果高的抗肥胖劑。
另外，本發明之目的為提供一種脂肪酶活性阻礙劑，係來自茶而受喜好度高、對胰脂肪酶表現出高阻礙活性，抑制來自於進食的脂肪吸收，及/或有助於肥胖之抑制或預防。另外，來自於進食的糖分之吸收抑制，進一步而言提供一種α-葡萄糖苷酶阻礙劑，係有助於長期預防及/或治療高血糖症狀的慢性化所引起的糖尿病。
另外，本發明之目的為提供一種飲食物、係受喜好度高，且以降低血中之中性脂肪、增進健康為目的。
本發明之目的進一步為提供一種醫藥組成物，係抑制來自於進食的脂肪之吸收，並抑制血中中性脂肪之上昇。
為了解決上述課題潛心研究研究的結果，由茶葉發現了強力阻礙脂肪吸收所必須的胰脂肪酶的成分，且具有高α-葡萄糖苷酶阻礙活性的成分。具體而言，對於茶葉中所存在的各種多酚之脂肪酶阻礙活性及α-葡萄糖苷酶阻礙活性作評估，查明了式(1)所表示之含苯并酚酮環之化合物，具有強脂肪酶阻礙活性以及強α-葡萄糖苷酶阻礙活性。該等化合物係紅茶所含的兒茶素或多酚之氧化物，因此香味、安全性優異，而可長期攝取。由該等見解發現，藉著將脂肪酶阻礙劑或α-葡萄糖苷酶阻礙劑添加至飲食品等，可提供以抑制來自於進食的脂肪或糖分之吸收，抑制血中中性脂肪之上昇，進一步以長期預防及/或治療高血糖症狀慢性化所引起的糖尿病為目的之飲食品，而完成了本發明。
亦即本發明係以下之[1]～[9]。
[1]一種抗肥胖劑，係含有式(1)所表示之化合物一種以上：
[化1]
(R1 為H或OH；R2 為H、或式(2)所表示之基，
[化2]
此處R4 為OH或式(3)所表示之基、或式(4)所表示之基，
[化3]
[化4]
R3 為H、COOH、式(5)所表示之基、或式(6)所表示之基，
[化5]
[化6]
此處R5 為OH、式(7)所表示之基，或式(8)所表示之基，
[化7]
[化8]
R6 為式(9)所表示之基、或式(10)所表示之基，
[化9]
[化10]
此處R1 '為與上述定義相同之基，R2 '為式(11)所表示之基，
[化11]
此處R4 '為與上述R4 相同之基)
(但是茶棓靈、茶棓靈-3-O-沒食子酸酯、茶黃素、茶黃素-3-O-沒食子酸酯、茶黃素-3'-O-沒食子酸酯及茶黃素-3,3'-O-雙沒食子酸酯除外)。
[2]如[1]所記載之抗肥胖劑，其中含有R1 為H之化合物一種以上。
[3]如[1]所記載之抗肥胖劑，其中前述化合物係以下之式(12)、式(13)、式(14)、式(15)、式(16)、式(17)、式(18)、式(19)、式(20)、式(21)、式(22)或式(23)所表示之化合物，
[化12]
[化13]
[化14]
[化15]
[化16]
[化17]
[化18]
[化19]
[化20]
[化21]
[化22]
[化23]
[4]如[1]～[3]之任一者所記載之抗肥胖劑，其中脂肪酶阻礙劑及/或α-葡萄糖苷酶阻礙劑。
[5]如[1]～[4]之任一者所記載之抗肥胖劑，其係用於抑制來自於進食的脂肪及糖之吸收。
[6]如[1]～[5]之任一者所記載之抗肥胖劑，其係飲食物之形態。
[7]如[6]所記載之抗肥胖劑，其中飲食物係選自茶飲料、清涼飲料及健康食品所構成之群。
[8]如[1]～[5]之任一者所記載之抗肥胖劑，其係醫藥組成物之形態。
[9]一種化合物，係由式(24)所表示：
[化24]
作為本發明之抗肥胖劑之脂肪酶阻礙劑，由於含有來自茶葉的含苯并酚酮環之化合物，因而表現出優異的脂肪酶阻礙活性。本發明之脂肪酶阻礙劑不會減損香味，而可利用於各種用途，包含受喜好度高且以降低中性脂肪、增進健康為目的之飲食物。為了抑制進食性脂肪之吸收，會希望在進食的時候同時攝取，使來自茶的有效成分強化的飲料在這方面的意義重大。特別是藉由使該等成分增強，即可提供以抗肥胖作用、增進健康為目的飲料。
作為本發明之抗肥胖劑的α-葡萄糖苷酶阻礙劑，相較於來自以往已知的天然物的α-葡萄糖苷酶，能夠以更少量抑制來自進食的澱粉及來自多糖的糖分之分解、吸收。另外，由於任一種化合物皆為茶類所含的兒茶素或多酚之氧化物，因此香味、安全性優異、可長期攝取。
另外，本發明之抗肥胖劑由於含有含苯并酚酮環之化合物，其係來自經常被飲用的茶的成分，因此安全性高，亦可利用作為副作用降低的醫藥組成物。
以下針對本發明之實施形態作詳細說明。
抗肥胖劑
本發明係一種抗肥胖劑，含式(1)所表示之含苯并酚酮環之化合物作為有效成分，
[化25]
就有效成分而言，特別以下之式(12)所表示之紅棓酚(purprogallin)、式(13)所表示之紅棓酚羧酸(purprogallin carboxylic acid)、式(14)所表示之茶黃寧3-O-沒食子酸酯(theaflavanin-3-O-gallate)、式(15)所表示之EGCG-兒茶酚(EGCG-carechol)、式(16)所表示之茶典烷酸酯A(theaflavate A)、式(17)所表示之茶二苯并酚酮A(theadibenzotropolone A)、式(18)所表示之茶黃素雙沒食子酸酯-三聚物1(TFdiGA-tril)、式(19)所表示之茶黃素雙沒食子酸酯-三聚物2(TFdiGA-tri2)、式(20)所表示之表茶黃素酸(epitheaflavic acid)、式(21)所表示之3,4,6-三羥基-1-((2R,3R)-3,5,7-三羥基色原烷-2-基)-5H-苯并[7]輪烯-5-酮、式(22)所表示之表茶黃素酸-3-O-沒食子酸酯(epitheaflavic acid-3-O-gallate)、或式(23)所表示之(2R,3R)-2-(3,4-二羥苯基)-5,7-二羥基色原烷-3-基-2,3,4,6-四羥基-5-氧基-5H-苯并[7]輪烯-8-羧酸酯為佳，
[化26]
[化27]
[化28]
[化29]
[化30]
[化31]
[化32]
[化33]
[化34]
[化35]
[化36]
[化37]
本發明之抗肥胖劑之有效成分的上述含苯并酚酮環之化合物，可藉由對綠茶、紅茶、烏龍茶等天然材料進行溶劑萃取，或可藉由化學合成或酵素合成而得到。
萃取原料之天然材料可將茶葉直接使用，或可將其粉碎而使用。萃取所使用的溶劑，可使用水、有機溶劑、或該等混合物等，而以熱水為佳。所得到之萃取液可使用適當的分離用擔體而分離、精製。就分離用擔體而言，只要可吸附上述含苯并酚酮環之化合物，藉由適當的分離用溶劑而分離，則任一者皆可使用。例如可使用苯乙烯系或聚葡萄醣系之合成吸附劑而分離、精製。將如此的分離用擔體導入上述萃取液之後，使用適當的溶劑，而將上述含苯并酚酮環之化合物分離。較具體而言，依照本說明書之實施例1所記載，可得到本發明之抗肥胖劑所使用之上述含苯并酚酮環之化合物。以如此的方式所得到之上述含苯并酚酮環之化合物亦可濃縮而使用，另外還可藉由冷凍乾燥等方法以粉末的形式使用。
上述含苯并酚酮環之化合物之合成，可藉由多酚氧化酶(PPO)、過氧化酶(POD)等酵素，或以鐵氰化鉀(K3 [Fe(CN)6 ])等氧化劑作為觸媒，以兒茶素類(epigallocatechin-3-O-gallate、epicatechin-3-O-gallate、epicatechin、epigallocatechin等)與沒食子酸為原料而進行。具體而言，例如可依照本說明書之實施例2及7所記載而進行。
本發明之抗肥胖劑對於脂肪酶、特別是對於胰脂肪酶具有強阻礙作用。脂肪酶阻礙活性之測定，可依照先前技術所揭示的先前申請所記載任一種脂肪酶活性評估法進行。例如可藉由使用螢光性之4-甲基繖形酮的油酸酯作為基質，對脂肪酶所參與的反應所產生的4-甲基繖形酮之螢光作測定而評估。舉例而言，以實施例6所記載之方法，可測定脂肪酶阻礙活性。脂肪酶阻礙活性，可表示為例如造成50%阻礙的試樣量IC50 。
本發明之抗肥胖劑具有強α-葡萄糖苷酶阻礙作用。α-葡萄糖苷酶阻礙活性之測定，亦可依照先前技術所揭示的先前申請所記載任一種活性評估法而進行。舉例而言，以實施例11所記載之方法可測定α-葡萄糖苷酶阻礙活性。α-葡萄糖苷酶阻礙活性，可表示為例如造成50%阻礙的試樣量IC50 。
上述含苯并酚酮環之化合物之精製品或粗製品，可單獨作為抗肥胖劑使用，或者可與溶劑或擔體一起作為抗肥胖劑使用。溶劑或擔體，考慮採下述飲食物及/或醫藥品的形式使用，可安全地作為食品或醫藥品使用者為佳。本發明之抗肥胖劑具有各種用途，可例示如測試研究用、預防中性脂肪累積所用的飲食物、作為醫藥組成物之使用。
飲食物
本發明之抗肥胖劑，可製成飲食物之形態，以抑制伴隨著攝取來自於進食的脂肪成分所發生的血中中性脂肪的不理想上昇。飲食物合適的例子，只要是日常所攝取的飲食物即可，例如綠茶、麥茶、烏龍茶、紅茶、咖啡、運動飲料、飲用水、調味料、佐料。然而飲食物為通常所食用者即可，亦可為清涼飲料、雞尾酒、啤酒、威士忌、燒酎、葡萄酒、清酒、調味料、佐料、調味米、加工食品、即時食品、殺菌食品、巧克力、鮮奶油、西點、乳製品、健康食品、補給品等。
在飲食物形態的本發明之抗肥胖劑之中，式(1)所表示的含苯并酚酮環之化合物之攝取量每1餐含0.1mg～10g，而以在0.5mg～5g之範圍為佳。但是，本發明之抗肥胖劑所使用式(1)所表示之含苯并酚酮環之化合物由於來自食品，因此安全性非常高，對飲食物的添加量沒有實質的上限。
醫藥組成物
本發明之抗肥胖劑可作為脂肪酶阻礙劑，而抑制來自於進食的脂肪之吸收，亦可使用作為防止血中中性脂肪的不理想上昇及/或使其降低所用的醫藥組成物。另外，本發明之抗肥胖劑，可作為α-葡萄糖苷酶阻礙劑，而抑制來自於進食的脂肪之吸收，亦可使用作為防止血中中性脂肪的不理想上昇及/或使其降低所用的醫藥組成物。適合的藥劑係口服投予的藥劑，就其例而言，可列舉飲劑、錠劑、膠囊劑、顆粒劑、藥粉、糖果、糖錠劑等。在藥劑中，式(1)所表示之含苯并酚酮環之化合物含苯并酚酮環之化合物，其含量為每次服用量0.1mg～10g(宜為0.5mg～5g)。
本發明之醫藥組成物，由於脂肪酶活性阻礙成分及α-葡萄糖苷酶阻礙劑成分之安全性高，即使長期服用也很安全。因此，為了防止或消除屬於生活習慣病(life-style related disease)的肥胖，亦可日常服用。
新型化合物
進一步而言，本發明提供以下所揭示的化合物，係紅茶之中所存在的新型化合物。
[化38]
本化合物為有效的抗肥胖材料。
藉由以下的實施例，對於本發明作進一步具體說明，而本發明不受到該等限定。
[實施例1]
藉由LH-20進行的分離
將以90℃熱水對印度阿薩姆種之紅茶葉萃取並冷凍乾燥後之物體，加入蒸餾水以成為10mg/ml，加熱使其溶解。在熱水浴中加熱至60～70℃，同時取15ml導入60ml的Sephadex LH-20(GE Healthcare Bio-Sciences股份有限公司製)。以20%丙酮(丙酮：蒸餾水=2：8、v/v)45ml洗淨，然後以60ml(1根管柱的體積)洗淨，其後，以30%丙酮(丙酮：蒸餾水=3：7、v/v)、50%丙酮(丙酮；蒸餾水=1：1、v/v)、60%丙酮(丙酮：蒸餾水=6：4、v/v)，分別以4根管柱體積份量的溶劑溶出，將每1根管柱的體積加以區分。合計14個區分部分，各為60ml，由其中各採取2ml，藉由減壓濃縮處理而調製成0.1ml的50%二甲亞碸水溶液(二甲亞碸：蒸餾水=1：1、v/v)，將其供至脂肪酶阻礙活性測定。另外，將各區分部分減壓濃縮、冷凍乾燥，由所得到的固體成分算出回收量，使用於實施例5之成分分析。重量及脂肪酶阻礙活性的回收率揭示於表1。
表1 LH20區分物的活性局部存在
以實施例6之方法測定脂肪酶阻礙活性的結果，可知收量較多的20%丙酮的第1區分部分及20%丙酮的第2區分部分，分別含有多糖類、咖啡因類，而幾乎沒有活性。另一方面，收量次多而含有重量比11.2%的50%丙酮的第2區分部分，有33.6%之活性溶出，在其後的50%丙酮的第3區分部分，有17.1%之活性溶出。可知在含有該等區分部分的50%丙酮溶出部分，活性之70.9%溶出。在實施例5之分析中，活性高的含苯并酚酮環之化合物，多半是在50%丙酮溶出，與高活性相當一致。
[實施例2]
測試化合物之合成
1.紅棓酚(purprogallin)
2.紅棓酚羧酸(purprogallin carboxylic acid)
3.茶棓靈(epitheaflagallin)
4.茶棓靈-3-O-沒食子酸酯(epitheaflagallin-3-O-gallate)
5.茶典烷酸酯A(theaflavate A)
6.茶二苯并酚酮A(theadibenzotropolone A)
7.茶黃素雙沒食子酸酯-三聚物1(TFdiGA-tri1)
8.茶黃素雙沒食子酸酯-三聚物2(TFdiGA-tri2)
9.表茶黃素酸(epitheaflavic acid)
10.茶黃寧(theaflavanin)
11.表茶黃素酸-3-O-沒食子酸酯(epitheaflavic acid-3-O-gallate)
12.(2R,3R)-2-(3,4-二羥苯基)-5,7-二羥基色原烷-3-基-2,3,4,6-四羥基-5-氧基-5H-苯并[7]輪烯-8-羧酸酯
茶棓靈(3)及茶棓靈-3-O-沒食子酸酯(4)之合成
在表棓兒茶素(EGC；和光純藥股份有限公司製)或、表棓兒茶素-3-O-沒食子酸酯(EGCG；和光純藥股份有限公司製)0.2mmol加入鐵氰化鉀、0.8mmol及NaHCO3 、0.8mmol的水溶液150ml並以冰冷卻，滴入0.2mmol的五倍子酚水溶液50ml，持續攪拌1小時。將反應液導入體積20ml的Sep-pak C18(Waters股份有限公司製)，以60ml水洗之後，以5%乙腈/水洗淨，以含0.1%蟻酸的50%乙腈/水使反應產物溶出。將溶出物冷凍乾燥，藉以下的分液HPLC精製。
將EGC與五倍子酚之反應物導入YMC-Pak Polymer C-18(20×300mm、YMC股份有限公司製)，在0.1%蟻酸存在下，以30～50%乙腈之直線梯度(6ml/min、60分鐘)使其溶出，將在48～50分鐘溶出的成分冷凍乾燥，得到4mg之茶色固體(茶棓靈(3))。另外，將此層析圖譜之中在68～70分鐘溶出的成分冷凍乾燥，得到2mg之茶色固體(紅棓酚(1))。
將EGCG與五倍子酚之反應物導入Develosil C30-UG-5(20mm×250mm、野村化學股份有限公司製)，在0.1%蟻酸存在下，以15～50%乙腈之直線梯度(6ml/min、60分鐘)使其溶出，將在44～46分鐘溶出的成分冷凍乾燥，得到6mg之茶色固體(茶棓靈-3-O-沒食子酸酯(4))。另外，將在此層析圖譜中48～50分鐘溶出的成分冷凍乾燥，得到3mg之茶色固體(紅棓酚(1))。
與上述反應相同地，使沒食子酸800mg反應，得到沒食子酸2分子聚合所生成的紅棓酚羧酸(purprogallin carboxylic acid(2))65mg。另外，使表兒茶素-3-O-沒食子酸酯(epicatechin-3-O-gallate(ECG))100mg反應，得到ECG2分子聚合所生成的茶典烷酸酯A(theaflavate A(5))3mg。進一步使表兒茶素(epicatechin(EC))與EGCG各400mg進行反應，得到主產物之茶黃素-3-O-沒食子酸酯，同時得到副產物之茶二苯并酚酮A(theadibenzotropolone A(6))2mg。另外，與上述反應相同地，使表兒茶素-3-O-沒食子酸酯(epicatechin-3-O-gallate(ECG))與EGCG各200mg進行反應，並使所得到的12mg之茶黃素-3,3'-雙沒食子酸酯與20mg之ECG反應，分別得到茶黃素雙沒食子酸酯-三聚物1(TFdiGA-tri1(7))及茶黃素雙沒食子酸酯-三聚物2(TFdiGA-tri2(8))1.7mg及0.6mg。另外，相同地由330mg之沒食子酸與101mg之EC，得到表茶黃素酸(epitheaflavic acid(9))48mg，由869mg之五倍子酚(Pyrogallol)與400mg之EC，得到茶黃寧(theaflavanin)(10)12mg，由470mg之沒食子酸與221mg之ECG，同時得到表茶黃素酸-3-O-沒食子酸酯(epitheaflavic acid-3-O-gallate(11))37mg及(2R,3R)-2-(3,4-二羥苯基)-5,7-二羥基色原烷-3-基-2,3,4,6-四羥基-5-氧基-5H-苯并[7]輪烯-8-羧酸酯(12))3.3mg。
[實施例3]
對於實施例2所得到之化合物，進行MS及NMR測定。質譜係採用Q-TOF Premier(Micromass公司製、UK)，離子源使用附有Z噴霧離子源的ESI，以負離子、V模式作測定。Cone voltage：45V、Capillary voltage：3KV、Source Temp.：80℃、Desolvation Temp：180℃，採用Lockspray的方式進行質量修正，參考物係使用白胺酸腦啡(m/z 554.2615[M-H]- )。
將各化合物之精密質量與分子式、質量之理論值揭示於表2。
表2　各化合物之質量分析結果
[實施例4]
(茶葉萃取物中的定量)
LC-MS/MS之測定係以4000 Q TRAP(Applied公司製)，使用渦流離子噴霧(turbo-ionspray)，在負離子模式，藉由以下條件作測定；Collision energy：46eV(nega.)、Ionspray voltage：4500V、溫度：450℃。
在MRM(multiple reaction monitoring)中各化合物之溶出時間與測定頻道如表3所述。
表3 LC-MSMS定量參數
管柱：YMC-Polymer C18、S-6μm(YMC股份有限公司、2mmΦ ×150mm)
流速：0.2mL/分鐘
管柱溫度：40℃
移動相A：0.1V/V%HCOOH/H2 O
移動相B：0.1V/V%HCOOH/CH3 CN
梯度程式：A/B=91/9(0分鐘)→A/B=40/60(17分鐘)→A/B=15/85(17.1分鐘)→A/B=15/85(17.1～19分鐘)
使用上述條件，進行印度阿薩姆CTC之熱水萃取物之測定。確認了化合物2～8存在於茶葉中。將定量值揭示於表4。
表4　紅茶中之成分定量值
[實施例5]
(各化合物在茶葉區分物中的分布)
LC-MS/MS之測定採用Q-TOF Premier(Micromass公司製、英國)，離子源使用附有Z噴霧離子源的ESI，以負離子、V模式作測定。Cone voltage：33V、Capillary voltage：3KV、Source Temp：150 ℃、Desolvation Temp：250℃，採用Lockspray的方式進行質量修正，參考物係使用白胺酸腦啡(m/z 554.2615[M-H]- )。
管柱：YMC-Polymer C18、S-6μm(YMC股份有限公司、2mmΦ×150mm)流速：0.2mL/分鐘
管柱溫度：40℃
移動相A：0.1V/V%HCOOH/H2 O
移動相B：0.1V/V%HCOOH/CH3 CN
梯度程式：A/B=70/30→A/B=50/50(20分鐘)→A/B=50/50(25分鐘)
使用上述條件，對實施例2所區分出的印度阿薩姆茶葉之各區分部分進行測定。化合物2(m/z 263.02、R.T.=9.29分鐘)係被偵測到在30%丙酮的第1區分部分，而化合物3(m/z 399.07、R.T.=9.83分鐘)係在50%丙酮的第2、3區分部分、化合物4(m/z 551.08、R.T.=13.48分鐘)係在50%丙酮的第3、4區分部分、化合物5(m/z 851.15、R.T.=17.50分鐘)係在50%丙酮的第4區分部分、化合物9(m/z 427.07、R.T.=8.60分鐘)係在50%丙酮的第3區分部分、化合物10(m/z 383.08、R.T.=9.65分鐘)係在30%丙酮的第3及4區分部分、化合物11(m/z 579.08、R.T.=13.86分鐘)係在50%丙酮的第2區分部分、化合物12(m/z 535.09、R.T.=13.90分鐘)係在50%丙酮的第2區分部分。
[實施例6]
脂肪酶阻礙活性之測定
測定試樣係依照實施例2之方法合成、精製。
1.紅棓酚(purprogallin)
2.紅棓酚羧酸(purprogallin carboxylic acid)
5.茶典烷酸酯A(theaflavate A)
6.茶二苯并酚酮A(theadibenzotropolone A)
7.茶黃素雙沒食子酸酯-三聚物1(TFdiGA-tri1)
8.茶黃素雙沒食子酸酯-三聚物2(TFdiGA-tri2)
9.表茶黃素酸(epitheaflavic acid)
10.茶黃寧(theaflavanin)
11.表茶黃素酸-3-O-沒食子酸酯(epitheaflavic acid-3-O-gallate)
12.(2R,3R)-2-(3,4-二羥苯基)-5,7-二羥基色原烷-3-基-2,3,4,6-四羥基-5-氧基-5H-苯并[7]輪烯-8-羧酸酯
13.表棓兒茶素沒食子酸酯(EGCG)(和光純藥股份有限公司製)
測定方法
脂肪酶活性之測定，藉由係使用螢光性之4-甲基繖形酮之油酸酯(4-MUO；SIGMA公司製)當作基質，對反應所產生的4-甲基繖形酮之螢光作測定而實施。在測定時，緩衝液係使用含有150mM NaCl、1.36mM CaCl2 的13mM Tris-HCl(pH8.0)。基質4-MUO在製成0.1M之DMSO溶液之後，以上述緩衝液稀釋4000倍，另外，脂肪酶係相同地使用上述緩衝液，將豬胰脂肪酶(SIGMA公司製)調製成400U/ml溶液，而供酵素測定。
酵素反應係在25℃條件下，於96孔微量盤添加50μl之4-MUO緩衝液溶液、25μl之蒸餾水(或試樣水溶液)並混合之後，添加25μl之脂肪酶緩衝液溶液而使其開始。在進行反應30分鐘之後，添加100μl之0.1M檸檬酸緩衝液(pH4.2)使反應停止，使用螢光微量盤讀取儀(Labsystem公司製Fluoroskan Asent CF)對反應所產生的4-甲基繖形酮之螢光(激發波長355nm、螢光波長460nm)作測定。
受測試樣之阻礙活性，係以相對於對照組(蒸餾水)之活性，造成50%阻礙的試樣量IC50 (μM)的形式求得。
將化合物1～2及5～14之脂肪酶阻礙活性揭示於表5。
表5　每莫耳之脂肪酶阻礙活性
含苯并酚酮環之化合物任一者皆表現出脂肪酶阻礙活性。另外可知，表現出強脂肪酶阻礙的(－)-表棓兒茶素-3-O-沒食子酸酯(EGCG；化合物13)，為IC50 =0.349μM。除了具有自由羧酸殘基的紅棓酚羧酸(purprogallin carboxylic acid(2))、表茶黃素酸(epitheaflavic acid(9))以外，皆表現出與EGCG同等或其以上的強活性，顯示苯并酚酮環有助於脂肪酶阻礙活性。已知羧酸殘基具有使活性減弱的功能。因此，在式(1)之中，R3 係以COOH以外為佳。
[實施例7]
(1)化合物之調製
使用過氧化酶的化合物12及化合物14(茶黃寧3-O-沒食子酸酯)之合成
過氧化酶係使用Zymed Laboratories製Horseradish Peroxidase，epicatechin3-O-gallate(ECG)係由茶萃取物以逆相HPLC精製，純度90%以上之物，五倍子酚係使用Nacalai Tesque股份有限公司製(純度99.0%)。
(2)反應
使4.3mg之Horseradish Peroxidase溶於10ml之0.058M醋酸緩衝液，加入溶於丙酮500μl的ECG250mg(0.566mmol)與溶於丙酮500μl的Pyrogallol 192.8mg(1.53mmol)並攪拌，在30℃之條件下，加入3%(w/v)過氧化氫水溶液450μl而開始反應。為了使反應之效率提高，分別在反應開始10分鐘後以及20分鐘後的，追加兩次3%過氧化氫水溶液450μl。自反應開始30分鐘後，追加192.8mg(1.53mmol)之Pyrogallol與3%過氧化氫水溶液450μl，進一步反應30分鐘。
自反應開始60分鐘後，將反應液導入逆相系統之固相(Waters製、Sep-Pak、C18-Vac20cc(5g))，以蒸餾水40ml洗淨後，以20%(v/v)乙腈水溶液20ml、70%(v/v)乙腈水溶液40ml繼續溶出，將70%乙腈溶出液濃縮、冷凍乾燥，得到含68.0mg之化合物12及化合物14(茶黃寧-3-O-沒食子酸酯)的區分部分。
藉由下述條件之HPLC，將含化合物12及化合物14(茶黃寧3-O-沒食子酸酯)的混合物精製。
將其導入YMC-Pak Polymer C-18(20×300mm、YMC股份有限公司製)，在0.1%蟻酸存在下、30%乙腈之等位沖提30分鐘之後，以30～45%乙腈之直線梯度(6ml/min、150分鐘)使其溶出，將144～148分鐘溶出的成分及158～162分鐘溶出的成分冷凍乾燥，得到與實施例2中之化合物12相同之化合物3.9mg、化合物14(茶黃寧3-O-沒食子酸酯)3.0mg。另外，將在此層析圖譜之中108～113分鐘溶出的成分冷凍乾燥，得到36mg之茶色固體(在實施例2中之化合物1：purprogallin)。
[實施例8]
對於實施例7所得到之化合物12及14，進行MS及NMR測定。
質譜採用Q-TOF Premier(Micromass公司製、UK)，離子源使用附有Z噴霧離子源的ESI，以負離子、V模式作測定。Cone volt.：33V、Capillary voltage：2.7kV、Source Temp：80℃、Desolvation Temp：180℃、採用Lockspray的方式進行質量修正，參考物係使用白胺酸腦啡(m/z 554.2615[M-H]- )。MS測定時碰撞能量為4eV，MS/MS測定時設定於22eV。
化合物12及14分別產生m/z 535.0883、535.0871[M-H]- 之分子離子峰，所算出的分子式為C27 H20 O12 (理論值：535.0877)。將碰撞能量定為22eV的MS/MS之結果，化合物12係偵測263.07及219.07的片段離子，化合物14係偵測383.08及169.01之片段離子。判明了化合物14為已知化合物的茶黃寧-3-O-沒食子酸酯(theaflavanin-3-O-gallate)。
為了確認化合物12之構造而測定NMR。將化合物12的13 C NMR及1 H NMR圖譜分別揭示於圖1及圖2。NMR係藉以下條件進行測定。使實施例7所得到之3mg之化合物12溶於CD3 OH，以CD3 OH之質子與13 C的殘存峰的δ3.30及δ48.97作為內標準。以DMX-750 spectrometer(BRUKER BIOSPIN,Germany)對1 H NMR、13 C NMR、1 H{13 C}-HSQC、1 H{13 C}-HMBC、TOCSY、DQF-COSY、NOESY及ROESY這些項目作測定。其結果確認了實施例7所得到之化合物12，係以下所揭示的構造。
[化39]
在上述構造式揭示了各原子之編號。
將NMR之測定結果與訊號之歸屬揭示於以下。
另外，在以下揭示化合物14之構造。
[化40]
[實施例9]
化合物15之合成
在epigallocatechin-3-O-gallate(EGCG；和光純藥股份有限公司製)229.2mg(0.5mmol)加入鐵氰化鉀(Nacalai Tesque製)、3.293g(10mmol)及NaHCO3 、0.84g(10mmol)的水溶液400ml並以冰冷卻，花費1小時滴入275.3mg(2.5mml)之catechol之水溶液100ml並持續攪拌。將反應液導入300mL之Sephadex LH-20(GE Healthcare Bio-Sciences股份有限公司製)，以40%丙酮/水1L、45%丙酮/水1.2L、50%丙酮/水900mL依序溶出，冷凍乾燥，在45%區分部分可得到含77mg之EGCG-catechol的區分部分。藉著以下的分液HPLC而精製。
將含EGCG-catechol的區分部分導入YMC-PakPolymer C-18(20×300mm、YMC股份有限公司製)，以6ml/min之流速，在0.1%蟻酸存在下，25～45%乙腈之直線梯度(75分鐘)之後，保持45%乙腈的等位沖提30分鐘。將在92～95分鐘溶出的成分冷凍乾燥，得到24mg之茶色固體(化合物15：EGCG-catechol)。在以下揭示化合物15之構造。
[化41]
[實施例10]脂肪酶活性測定
測定方法
脂肪酶活性之測定，藉由使用螢光性之4-甲基繖形酮的油酸酯(4-MUO：SIGMA公司製)當作基質，對反應所產生的4-甲基繖形酮之螢光作測定而實施。在測定時，緩衝液係使用含150mM NaCl、1.36mM CaCl2 的13mMTris-HCl(pH8.0)。將當作基質的4-MUO在製成0.01M之DMSO溶液之後以上述緩衝液稀釋667倍，另外脂肪酶係豬胰脂肪酶(SIGMA公司製：Type VI-S)，相同地使用上述緩衝液調製成400U/ml溶液，而供酵素測定。
酵素反應，係在25℃之條件下，於96孔微量盤添加50μl之4-MUO緩衝液溶液、25μl之蒸餾水(或試樣水溶液)並混合之後，添加25μl之脂肪酶緩衝液溶液而使反應開始。由於反應時之基質濃度為7.5μM，比實施例6的12.5μM更為稀釋，且DMSO濃度較高，因此設法使基質的溶解性提升以能夠更正確地測定阻礙活性。在進行反應30分鐘之後，添加100μl之0.1M檸檬酸緩衝液(pH4.2)使反應停止，使用螢光微量盤讀取儀(Labsystem公司製Fluoroskan Asent CF)對反應所產生的4-甲基繖形酮之螢光(激發波長355nm、螢光波長460nm)作測定。
受測試樣之阻礙活性，係以相對於對照組(蒸餾水)之活性，造成50%阻礙的試樣量IC50 (μM)的形式求得。
測定化合物3、4、12、13、14、15之脂肪酶阻礙活性。將結果揭示於表7。
表7　每莫耳之脂肪酶阻礙活性
化合物12、14、15皆具有相較於作為陽性對象的EGCG更強的活性，另外，與周知的脂肪酶阻礙劑4(日本特開2009-114079)相比，亦表現出同等或其以上的強活性。
另外，化合物14及15作為抗氧化劑、抗發炎劑，在日本特表2007-504168揭示了其構造，然而關於脂肪酶阻礙、α葡萄糖苷酶阻礙仍然為未知。
化合物12、14除了實施例所揭示的酵素之外，亦可使用多酚氧化酶(PPO)、或鐵氰化鉀等氧化劑進行合成。另外，不僅是ECG與pyrogallol之組合，還可藉由與gallic acid反應而合成。
[實施例11]各種含苯并酚酮環之化合物之α-葡萄糖苷酶阻礙活性之測定
1M磷酸鈉緩衝液，係混合0.1M NaH2 PO4 ‧2H2 O與0.1M Na2 HPO4 ‧12H2 O，調整成pH7.0，添加2g/L之牛血清蛋白(Nacalai Tesque股份有限公司製、F-V、pH5.2、純度96%)及0.2g/L之NaN3 (Nacalai Tesque股份有限公司製、試藥特級)。酵素溶液如上述般，使α-葡萄糖苷酶(和光純藥工業股份有限公司製、來自酵母、100units/mg)溶解於緩衝液而成為0.5units/mgprotein/ml(100μg/20ml)。基質溶液如上述般，使對硝基苯基-α-D-吡喃葡萄糖苷(Nacalai Tesque股份有限公司製、試藥特級)溶解緩衝液而成為5mM(7.525mg/5ml)。
在評估所使用的試樣之中，作為陽性對象的表棓兒茶素-3-O-沒食子酸酯(13：EGCG)係和光純藥工業製、化合物1、3、4、5、11、12、14、15係使用實施例1～2或7所合成、精製之物。
將該等試樣調製成10mg/ml DMSO，以6階段進行2倍稀釋。使用96孔微量盤，於試樣溶液10μL加入酵素液45μL，在37℃預保溫5分鐘之後，加入基質溶液45μL，測定在405nm的吸光度(A405nm)，在37℃保溫5分鐘之後，測定A405nm之吸光度。阻礙率係將添加試樣改變為僅添加DMSO以作為控制組，並算出在A405nm之吸光度差，各活性測定係連續進行2次。
其結果，若將各化合物之α-葡萄糖苷酶阻礙活性以IC50 值表示，則如表8所示般，化合物12、14表現出特別強的活性。
【表8】
與脂肪酶阻礙活性之結果合併起來，可發現該等含苯并酚酮環之化合物具有強的消化酵素阻礙活性，其中也確認了對兩酵素皆表現出強的阻礙活性的化合物12，亦存在於紅茶之中，然而為至今仍然未知的化合物，為有效的抗肥胖材料。
[產業上之可利用性]
本發明之抗肥胖劑由於含有來自茶葉的含苯并酚酮環之化合物，因而表現出優異的脂肪酶阻礙活性及α-葡萄糖苷酶阻礙活性。本發明之抗肥胖劑不會減損香味，而可利用於各種用途，包含受喜好度高，且以降低中性脂肪等、增進健康為目的飲食物。
圖1表示化合物12之13 C NMR圖譜。
圖2表示化合物12之1 H NMR圖譜。

Claims (10)

  1. 一種下述化合物的使用，其特徵使用下述化合物製造抗肥胖劑，其係將下述化合物的一種以上作為有效成分者；
  2. 如申請專利範圍第1項之使用，其中該抗肥滿劑係脂肪酶阻礙劑及/或α-葡萄糖苷酶阻礙劑。
  3. 如申請專利範圍第1項或第2項之使用，其中該抗肥胖劑係用於抑制來自於進食的脂肪及糖之吸收。
  4. 如申請專利範圍第1項或第2項之使用，其中該抗肥胖劑係飲食物之形態。
  5. 如申請專利範圍第4項之使用，其中該飲食物係選自茶飲料、清涼飲料及健康食品所構成之群。
  6. 如申請專利範圍第1項或第2項之使用，其中該抗肥胖劑係醫藥組成物之形態。
  7. 一種化合物，其特徵為由式(24)所表示
  8. 一種下述化合物的使用，其特徵使用下述化合物製造抗肥胖劑，其係將下述化合物作為有效成分者；
  9. 如請求項8之使用，其中該抗肥満剤係脂肪酶阻礙劑及/或α-葡萄糖苷酶阻礙劑。
  10. 如申請專利範圍第8項或第9項之使用，其中該抗肥胖劑係用於抑制來自於進食的脂肪及糖之吸收。
TW099116299A 2009-05-21 2010-05-21 Contains benzoates An anti-obesity agent of a compound of the benzophenolone ring TWI483722B (zh)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2009123585 2009-05-21

Publications (2)

Publication Number Publication Date
TW201109018A TW201109018A (en) 2011-03-16
TWI483722B true TWI483722B (zh) 2015-05-11

Family

ID=43126272

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
TW099116299A TWI483722B (zh) 2009-05-21 2010-05-21 Contains benzoates An anti-obesity agent of a compound of the benzophenolone ring

Country Status (10)

Country Link
US (3) US8658237B2 (zh)
EP (1) EP2433625B1 (zh)
JP (2) JP5694149B2 (zh)
KR (1) KR101624006B1 (zh)
CN (1) CN102427807B (zh)
AU (1) AU2010250330B2 (zh)
ES (1) ES2643463T3 (zh)
NZ (1) NZ596387A (zh)
TW (1) TWI483722B (zh)
WO (1) WO2010134595A1 (zh)

Families Citing this family (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP5744507B2 (ja) * 2010-12-24 2015-07-08 三井農林株式会社 α−アミラーゼ阻害剤
JP2012184208A (ja) * 2011-03-08 2012-09-27 Mitsui Norin Co Ltd シュクラーゼ阻害剤
CN105646510A (zh) * 2014-12-02 2016-06-08 重庆宁牧生态农业有限公司 一种用作抗肥胖剂的化合物
CN105712997A (zh) * 2014-12-02 2016-06-29 重庆宁牧生态农业有限公司 一种用作抗肥胖剂的化合物
CN105713000A (zh) * 2014-12-02 2016-06-29 重庆宁牧生态农业有限公司 一种用作抗肥胖剂的化合物
JP6628970B2 (ja) * 2015-03-09 2020-01-15 サントリーホールディングス株式会社 ベンゾトロポロン環含有化合物を定量する方法
CA3026850A1 (en) 2015-11-04 2017-05-11 The Penn State Research Foundation Compounds, compositions and methods for coloring edible materials
CN109422786A (zh) * 2017-08-22 2019-03-05 苏州凯祥生物科技有限公司 苯并卓酚酮衍生物及其制备方法与用途
CN109422787A (zh) * 2017-08-22 2019-03-05 苏州凯祥生物科技有限公司 苯并卓酚酮类似物及其制备方法与用途
CN109422785A (zh) * 2017-08-22 2019-03-05 苏州凯祥生物科技有限公司 苯并卓酚酮类及其制备方法与用途
CN109422714A (zh) * 2017-08-22 2019-03-05 苏州禾研生物技术有限公司 苯并卓酚酮类化合物及其制备方法与用途
CA3106267A1 (en) 2018-07-16 2020-01-23 Gregory Ray Ziegler Compounds, compositions, and methods for coloring edible materials

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1999022728A1 (en) * 1997-10-31 1999-05-14 Arch Development Corporation Methods and compositions for regulation of 5-alpha reductase activity
US20050049284A1 (en) * 2003-08-29 2005-03-03 Chi-Tang Ho Benzotropolone derivatives and modulation of inflammatory response
US20080317821A1 (en) * 2004-07-05 2008-12-25 Masaaki Nakai Lipase Inhibitors
JP2009028010A (ja) * 2007-07-30 2009-02-12 Nippon Supplement Kk 発酵茶の製造方法

Family Cites Families (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20040097432A1 (en) * 2002-11-04 2004-05-20 Access Business Group International Llc. Method of reducing cholesterol
JP2004359576A (ja) 2003-06-03 2004-12-24 Fumio Hashimoto アポトーシス誘導剤
JP4903436B2 (ja) 2004-02-17 2012-03-28 サントリーホールディングス株式会社 高分子ポリフェノール画分を含有するリパーゼ活性阻害剤、茶エキス、およびその製造方法
CN1980655B (zh) 2004-07-05 2011-02-02 三得利控股株式会社 脂肪酶抑制剂
JP2006052191A (ja) * 2004-08-16 2006-02-23 Taiyo Kagaku Co Ltd 糖尿病予防、改善、または治療用組成物
JP2007060908A (ja) 2005-08-29 2007-03-15 Hoshizaki Electric Co Ltd 桑葉抽出成分の粉末化方法
US8367121B2 (en) * 2005-11-23 2013-02-05 Florida A & M University Nutraceutical agent for attenuating the neurodegenerative process associated with Parkinson's disease
JP2007231009A (ja) 2006-02-02 2007-09-13 Nagasaki Prefecture 血糖値上昇抑制用組成物およびこれを含有する飲食品
JP4026723B2 (ja) * 2006-06-05 2007-12-26 クラシエ製薬株式会社 エピテアフラガリン類の製造方法及びエピテアフラガリン類を含有する飲料の製造方法
JP4125768B2 (ja) 2006-11-30 2008-07-30 富士産業株式会社 α−グルコシダーゼ阻害剤
JP4815421B2 (ja) * 2007-11-02 2011-11-16 富山県 食後血中中性脂肪濃度上昇抑制剤及び飲食品
JP2009221158A (ja) * 2008-03-17 2009-10-01 Nagasaki Prefecture 中性脂肪低減剤および体脂肪増加抑制剤
JP2009268420A (ja) * 2008-05-09 2009-11-19 Kataoka & Co Ltd 機能性食品組成物
JP2010095477A (ja) * 2008-10-17 2010-04-30 Ito En Ltd リパーゼ阻害剤
JP2010095478A (ja) * 2008-10-17 2010-04-30 Ito En Ltd 体脂肪蓄積抑制剤及び飲食品

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1999022728A1 (en) * 1997-10-31 1999-05-14 Arch Development Corporation Methods and compositions for regulation of 5-alpha reductase activity
US20050049284A1 (en) * 2003-08-29 2005-03-03 Chi-Tang Ho Benzotropolone derivatives and modulation of inflammatory response
US20080317821A1 (en) * 2004-07-05 2008-12-25 Masaaki Nakai Lipase Inhibitors
JP2009028010A (ja) * 2007-07-30 2009-02-12 Nippon Supplement Kk 発酵茶の製造方法

Also Published As

Publication number Publication date
ES2643463T3 (es) 2017-11-23
TW201109018A (en) 2011-03-16
CN102427807A (zh) 2012-04-25
EP2433625A4 (en) 2012-10-31
KR20120023814A (ko) 2012-03-13
NZ596387A (en) 2013-07-26
US9169231B2 (en) 2015-10-27
US20120065410A1 (en) 2012-03-15
EP2433625B1 (en) 2017-09-27
JP2014237649A (ja) 2014-12-18
AU2010250330A1 (en) 2011-12-22
KR101624006B1 (ko) 2016-05-24
US20150038573A1 (en) 2015-02-05
JP5881780B2 (ja) 2016-03-09
US8658237B2 (en) 2014-02-25
EP2433625A1 (en) 2012-03-28
WO2010134595A1 (ja) 2010-11-25
US20140121388A1 (en) 2014-05-01
AU2010250330B2 (en) 2014-03-06
JPWO2010134595A1 (ja) 2012-11-12
CN102427807B (zh) 2013-12-04
JP5694149B2 (ja) 2015-04-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
TWI483722B (zh) Contains benzoates An anti-obesity agent of a compound of the benzophenolone ring
Zhang et al. Chemistry and biological activities of processed Camellia sinensis teas: A comprehensive review
Neilson et al. Tea catechin auto-oxidation dimers are accumulated and retained by Caco-2 human intestinal cells
JP5498471B2 (ja) リパーゼ阻害剤
JP5009619B2 (ja) リパーゼ阻害剤
KR101342288B1 (ko) 리파아제 저해 활성을 갖는 신규 화합물
WO2010092941A1 (ja) 血管拡張作用を有する組成物、製造法および用途
KR20070053762A (ko) 리파아제 저해제
JP2006016367A (ja) リパーゼ阻害剤
KR20170076587A (ko) 모노테르페닐 마그놀올을 유효성분으로 하는 지방간, 고지혈증 또는 비만의 예방 또는 치료용 조성물 및 후박 분획물의 제조방법
JP2010143832A (ja) リパーゼ阻害剤