TWI444199B - 新穎之聚胺螢光衍生物、其製備方法及其在癌腫瘤治療方面作為診斷工具之應用 - Google Patents

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Description

新穎之聚胺螢光衍生物、其製備方法及其在癌腫瘤治療方面作為診斷工具之應用
本發明係為一種新穎之聚胺螢光衍生物、其製備方法及其在癌腫瘤治療方面作為診斷工具之應用。
生化的標記以及生物現象的追蹤需要螢光探針的設計，該等螢光探針對生物媒介的結構性以及功能性研究已經成為不可缺少的工具。
一螢光探針為一由一螢光團或螢光染料基團組成的共軛分子，該螢光團或螢光染料基團係共價地被鍵合至一與一適當的生物環境具有特定的相互作用之基團。
此螢光探針具有吸收在一清晰的波長所接收到的光能量的性質，藉此形成激化相位，然後恢復此被稱為發射相位之呈螢光狀態的能量。因此，在激化之後，一旦光子的能量已經被吸收，分子處在一電子激態且藉由發射一光子而回到基礎的能量狀態。此一螢光現象的光子發射在一比激化波長稍微較大的波長發生。然後，一對分子特定的螢光光譜可被記錄。
然後，使用螢光顯微鏡或一藉由在一合適的波長激化該製備之流式細胞儀在一生物媒介中定位一螢光探針為可能的。
具有一廣泛的螢光染料(諸如，螢光黃或若丹明的衍生物)之選擇。非所有適合於生物追蹤。基本的特徵為：用於研究可行性之激化以及發射波長的值、一適合於用於研究 之探針濃度的消光係數、允許一顯著的信號具無能量損失以被獲得且隨時間為穩定，即，在激態中具有一相當長的半衰期，的量子產率。
此外，最理想的是選擇螢光團在其環境內在測量的期間以在化學反應中可能的最小方式參與，否則此將導致其螢光性質的損失，例如，信號損失。
具有一苯并氧雜噁二唑骨架，亦稱苯唑呋喃，的衍生物具有需要的螢光性質。用於激化與發射波長的值以及在強度與穩定性中現象的品質與化合物以及其等之取代基的結構有關。
這些衍生物為已知，關於其等之取代基以及製備的螢光研究係被描述(J.Chem.Soc.Perkin Trans 2,1998,2165,J.Chem.Soc,Perkin Trans 2,1999,569)。
用於生物性用途之苯并氧雜噁二唑螢光的衍生物已經被研究(Anal.Chim.Acta,2005,550,173,Bioorg.Med.Chem.Lett.2003,13,1717,Luminscence,2002,17,J.Med.Chem.1999,42,3101)。
癌症仍為在西方社會中死亡的主因之一。克服癌症的方式，即，預防、手術、放射線治療、免疫治療以及化學治療，在許多的情況下仍不允許該疾病待被根除。
對於此失敗的原因部分地在於難以辨識腫瘤細胞且難以選擇性地將其治療而不對健康的組織造成太大的的損傷。
苯并氧雜噁二唑－聚胺共軛混合分子可對此問題產 生一答案。
為其之增殖，癌細胞需要許多的基本的生物元素，該等元素包括聚胺(精胺、亞精胺、腐胺)。聚胺對任何在增殖中的細胞為不可缺少的。在正常情況下，聚胺的內源性合成足以滿足細胞，但是以癌症細胞，一外源性聚胺成份很常必須借助於一活性傳遞。此活性傳遞的偵測允許癌症細胞的偵測以及根據生長與分解作用之其等之惡化的追蹤。然而，目前，在人類細胞中聚胺的轉運蛋白在分子級尚未被辨識。因此，唯一用以證實其之存在的方法為使用一藉由此轉運蛋白所識別的探針，其藉由在細胞內堆積而在轉運蛋白的活性上產生訊息。
聚胺轉運蛋白為一蛋白質複合物，其詳細地結構為未知。
此轉運蛋白在天然胺基，即，腐胺、亞精胺以及精胺，之細胞內的輸入中扮演一重要的角色。
這些聚胺對細胞生長以及發育來說是必需的。通常，細胞內代謝作用提供一健康細胞的需要。此代謝作用從細胞的胺基形成這些聚胺。精胺酸轉變成鳥胺酸，鳥胺酸經歷脫羧[反應]以形成腐胺。此腐胺(C4)可藉由一C3鏈借助於一腺苷甲硫酸胺而被加長，再加上脫羧[反應]，以形成亞精胺。後者可再度藉由一C3鏈亦借助於另一甲硫酸胺殘基而被加長以形成精胺。
這些聚胺亦可藉由與聚胺氧化酶的氧化而被分解且藉此轉變回到亞精胺以及腐胺。
若細胞內機制係被干擾(例如，癌細胞)，細胞內代謝作用不能再滿足細胞的需要且因此其將從細胞外取得聚胺。
此為聚胺轉運蛋白被涉及的所在。其相當於餵養以及調節劑。
例如，在於專利申請案WO 2005/100363的實施例27中的化合物之情況下：被接枝在精胺上之表鬼臼毒結構上的部分並非看來似乎改善使化合物能夠被內部化在腫瘤細胞中之聚胺轉運蛋白的辨別，其將接著扮演其作為細胞毒劑的部分。類似地，具有一聚胺部分的螢光探針將由聚胺轉運蛋白而被識別。
在癌症學中所研究的細胞株組之中，在聚胺轉運蛋白的表現中具有變化性。使用診斷探針預先(在抗腫瘤治療之前)決定何種細胞對治療將為敏感的以及那些將為不敏感的是可能的。
細胞內螢光愈大，研究中的細胞對具一經作為目標的抗癌劑(例如，在專利申請案WO 2005/100363的實施例27中的化合物)的治療將愈敏感。
因此本發明論及由一聚胺部分組成的化合物，該聚胺部分係被鍵結到一帶有可被用作該等探針的螢光之經取代的苯并氧雜噁二唑部分。在這些分子的聚胺部分將有效地為聚胺傳遞系統所識別且分子將被內部化在癌症細胞內的同時，帶有螢光的部分將由慣用分析系統所檢測出，藉此允許以選擇表現聚胺傳遞系統的腫瘤。
因此，此聚胺傳遞系統在細胞上的偵測允許以選擇能 夠為一抗腫瘤化合物所治療之帶有腫瘤患者，該抗腫瘤化合物係藉由與其作用機制無關的聚胺傳遞系統而被引導。
因此，從住院患者藉由活體檢視所取的腫瘤中或藉由穿刺所取的白血病細胞中，檢測與聚胺轉運蛋白的表現成正比的螢光將為可能的。然後，具這些腫瘤的患者可被選擇，以便他們可較佳地以朝著聚胺傳遞系統而被引導之抗癌化合物而被治療，而確信一更好的治療反應機會。
美國專利第6,172,261號以及Anal.Chim.Acta,1983,149,305描述被鍵結到螢光團基團的聚胺。更詳細地，B.R.Ware在Langmuir(1988,4,458)中描述一具一苯并氧雜噁二唑基團的精胺衍生物，其化學式係被給予於下，以及其在研究中在其與寡核苷酸的相互作用上作為螢光聚胺衍生物的用途。
類似地，Ohba在Tetrahedron(2007,63,37－54)中描述一具一苯并氧雜噁二唑基團的腐胺衍生物，其化學式係被給予於下：
然而，在這些發表之中沒有一個提到聚胺－苯并氧雜噁二唑之衍生物以證明表現聚胺傳遞系統腫瘤細胞的用途。
本發明涉及新穎之由一聚胺部分組成的螢光衍生物，一帶有螢光部分係被鍵結在該聚胺部分上，即，經取代的苯并氧雜噁二唑、其製備方法及其在偵測在細胞內聚胺傳遞系統的用途。亦涉及其等在選擇表現聚胺傳遞系統的腫瘤上之用途以及在選擇帶有該等腫瘤的患者上之用途。
這些衍生物對應於下列的化學式1：
或其之一藥學上可接受的鹽類，其中：R1 代表在位置4及/或6的一或兩個NO2 基團、或一SO2 Ph、SO2 NMe2 、SO2 NH2 、SO3 H基團；聚胺鏈可在位置5、6或7；R2 為一氫、一C1－6 烷基、一苄基、一全氟烴基基團；a、b、c的值與彼此無關可為2至5且代表分開該等胺基基團的亞烷基鏈；d和e的值可獨立地為0或1，但不能同時代表0的值；如果當e＝0之時，那麼R2 不能為一氫；以及除了R1 ＝4－NO2 、R2 ＝H、a＝3、b＝4、c＝3以及d＝e＝1之化合物以外。
本發明的化合物可取無機或有機加成鹽形態。
在本發明中，按<<藥學上可接受的>>係被意指其可用 來製備一藥學組成物，該藥學組成物通常為安全、無毒且非生物學上或不然非所欲的且為適用於獸醫用途以及於人類藥學用途。
按，在本發明之中，一化合物之<<藥學上可接受的鹽類>>係被意指為鹽類，該等的鹽類為藥學上可接受的(諸如，在此所界定者)且具有母化合物之所欲藥學活性的。
按<<加成鹽>>，在本發明的含意中，係特別被意指為一無機的或有機酸的加成鹽。
可被提及和下列所形成的酸加成鹽類作為實施例：無機酸(諸如，氫氯酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、磷酸以及類似物)；或有機酸(諸如，乙酸、苯磺酸、苯甲酸、樟腦磺酸、檸檬酸、乙烷－磺酸、反式丁烯二酸、葡庚糖酸、葡糖酸、穀胺酸、乙醇酸、羥基萘甲酸、2－羥乙基磺酸、乳酸、順式丁烯二酸、蘋果酸、扁桃酸、甲磺酸、黏康酸、2－萘磺酸、丙酸、水楊酸、丁二酸、二苯甲醯－L－酒石酸、酒石酸、對甲苯磺酸、三甲基乙酸、三氟乙酸以及類似物)。
按<<4－NO2 >>，在本發明的含意中，係被意指為一在位置4的NO2 (硝基)基團。
按<<烷基>>，在本發明的含意中，係被意指為一包含1至6個碳原子的飽和、直或分枝烴鏈。尤其是，其可為一甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、第三丁基、異丁基、戊基或己基基團。
按<<全氟烴基>>，在本發明的含意中，係被意指為一基基團(諸如，以上所定義的)，其中所有氫原子已經用氟來 代替。
有益地，R1 代表在位置4及/或6的一或兩個NO2 基團且更詳細地為一在位置4的NO2 基團。
更詳細地，本發明涉及化合物，其中：－R1 ＝4－NO2 、R2 ＝C1－6 烷基、a＝3、b＝4、c＝3、d＝e＝1，－R1 ＝4－NO2 、R2 ＝H或C1－6 烷基、a＝0、b＝4、c＝3、d＝0、e＝1，－R1 ＝4－NO2 、R2 ＝H或C1－6 烷基、a＝0、b＝3、c＝4、d＝0、e＝1，或－R1 ＝4－NO2 、R2 ＝C1－6 烷基、a＝4、b＝0、c＝0、d＝1、e＝0。
更加詳細地，本發明涉及下列化合物：．N－(3－胺丙基)－N’－{3－[甲基－(7－硝基苯[1,2,5]噁二唑－4－基)－胺基]－丙基}－丁烷－1,4－二胺，相對應於化學式1的化合物，其中R1 ＝4－NO2 、R2 ＝甲基、a＝3、b＝4、c＝3、d＝e＝1，．N－(3－胺丙基)－N’－甲基－N’－(7－硝基苯[1,2,5]噁二唑－4－基)－丁烷－1,4－二胺，相對應於化學式1的化合物，其中R1 ＝4－NO2 、R2 ＝甲基、a＝0、b＝4、c＝3、d＝0、e＝1，．N－(3－胺丙基)－N’－(7－硝基苯[1,2,5]噁二唑－4－基)－丁烷－1,4－二胺，相對應於化學式1的化合物，其中R1 ＝4－NO2 、R2 ＝H、a＝0、b＝4、c＝3、d＝0、e＝1，．N＊ 1＊ －{3－[甲基－(7－硝基苯[1,2,5]噁二唑－4－基)－胺基]－ 丙基}－丁烷－1,4－二胺，相對應於化學式1的化合物，其中R1 ＝4－NO2 、R2 ＝甲基、a＝0、b＝3、c＝4、d＝0、e＝1，．N＊ 1＊ －[3－(7－硝基苯[1,2,5]噁二唑－4－基－胺基)－丙基]－丁烷－1,4－二胺，相對應於化學式1的化合物，其中R1 ＝4－NO2 、R2 ＝H、a＝0、b＝3、c＝4、d＝0、e＝1，以及．N＊ 1＊ －甲基－N＊ 1＊ －(7－硝基苯[1,2,5]噁二唑－4－基)－丁烷－1,4－二胺，相對應於化學式1的化合物，其中R1 ＝4－NO2 、R2 ＝甲基、a＝4、b＝0、c＝0、d＝1、e＝0。
本發明亦涉及一種以合成化學式的化合物之方法，其特徵在於，該方法包含下列步驟a)、b)以及c)：a)將一化學式2的苯并氧雜噁二唑之衍生物與化學式6的一聚胺偶合，
其中，R1 代表在位置4及/或6的一或兩個NO2 基團、或一SO2 Ph、SO2 NMe2 、SO2 NH2 、SO3 H基團；以及，有益地，為一在位置4的NO2 基團；R3 為一鹵素取代基，在基團R1 的鄰位或對位移動，該化學式6的聚胺在位置5、6或7，即，在基團R1 的鄰位或對位，其中，P為胺官能的一保護基且，其中，a、b、c、d以及e具有同那些在前所給定者一樣的相同含意。
保護基P可為在酸性介質(HCl或三氟乙酸(TFA))中可切除的BOC基團(叔丁氧羰基)，若R1 基團＝NO2 。若苯并氧雜噁二唑具有磺醯基或磺醯胺基基團，那麼P可為可藉由氫解切除的苄氧羰基類型之一保護基。
在此偶合反應的期間，聚胺與苯并氧雜噁二唑藉由經與在一惰性溶劑中的一鹼處理之鹵素的取代起反應。
更詳細地，化學式2的化合物為4－硝基－7－氯代苯并氧雜噁二唑。
更加詳細地，惰性溶劑為乙腈且鹼為碳酸銫。
不同的苯并氧雜噁二唑係被描述於下列刊物中：J.Chem.Soc.Perkin Trans 2,1998,2165,J.Chem.Soc,Perkin Trans 2,1999,569。
聚胺衍生物(由3苄氧羰基或叔丁氧羰基基團所保護的精胺衍生物)的實施例係被描述於下列刊物中：(Tet.Let.1998,39,439)。
b)由偶合反應a)而來的化合物係由一烷基鹵化物在有在一惰性溶劑中的一鹼之情況下被烷基化。較佳地，THF(四氫呋喃)係作為溶劑而被使用。
較佳地，氫化鈉或一鹼金屬碳酸鹽係作為鹼而被使用。
亦較佳地，THF係作為溶劑而被使用。
c)然後，由步驟b)而來的化合物係在酸性介質中在周圍 溫度被去保護以獲得化學式1的化合物。
較佳地，此去保護步驟係在氫氯酸中或在三氟乙酸中被進行。
本發明亦涉及下列化學式1之化合物或其之一藥學上可接受的鹽類作為螢光診斷探針以偵測表現聚胺傳遞系統的腫瘤的用途： ，其中：R1 代表在位置4及/或6的一或兩個NO2 基團、或一SO2 Ph、SO2 NMe2 、SO2 NH2 、SO3 H基團；聚胺鏈可在位置5、6或7；R2 為一氫、一C1－6 烷基、一苄基、一全氟烴基基團；a、b、c的值與彼此無關可為2至5且代表分開該等胺基基團的亞烷基鏈；d和e的值可獨立地為0或1，但不能同時代表0的值。
本發明的化合物可取無機或有機加成鹽形態。
當e＝0之時，有益地，R2 不為一氫。
有益地，R1 代表在位置4及/或6的一或兩個NO2 基團且更詳細地為一在位置4的NO2 基團。
更詳細地，可被用作螢光診斷探針之化學式1的化合物涉及下列化合物，其中： －R1 ＝4－NO2 、R2 ＝C1－6 烷基、a＝3、b＝4、c＝3、d＝e＝1，－R1 ＝4－NO2 、R2 ＝H或C1－6 烷基、a＝0、b＝4、c＝3、d＝0、e＝1，－R1 ＝4－NO2 、R2 ＝H或C1－6 烷基、a＝0、b＝3、c＝4、d＝0、e＝1，或－R1 ＝4－NO2 、R2 ＝C1－6 烷基、a＝4、b＝0、c＝0、d＝1、e＝0。
更加詳細地，化學式1的化合物涉及下列化合物：．N－(3－胺丙基)－N’－{3－[甲基－(7－硝基苯[1,2,5]噁二唑－4－基)－胺基]－丙基}－丁烷－1,4－二胺，相對應於化學式1的化合物，其中R1 ＝4－NO2 、R2 ＝甲基、a＝3、b＝4、c＝3、d＝e＝1，．N－(3－胺丙基)－N’－甲基－N’－(7－硝基苯[1,2,5]噁二唑－4－基)－丁烷－1,4－二胺，相對應於化學式1的化合物，其中R1 ＝4－NO2 、R2 ＝甲基、a＝0、b＝4、c＝3、d＝0、e＝1，．N－(3－胺丙基)－N’－(7－硝基苯[1,2,5]噁二唑－4－基)－丁烷－1,4－二胺，相對應於化學式1的化合物，其中R1 ＝4－NO2 、R2 ＝H、a＝0、b＝4、c＝3、d＝0、e＝1，．N＊ 1＊ －{3－[甲基－(7－硝基苯[1,2,5]噁二唑－4－基)－胺基]－丙基}－丁烷－1,4－二胺，相對應於化學式1的化合物，其中R1 ＝4－NO2 、R2 ＝甲基、a＝0、b＝3、c＝4、d＝0、e＝1，．N＊ 1＊ －[3－(7－硝基苯[1,2,5]噁二唑－4－基－胺基)－丙基]－丁烷－1,4－二胺，相對應於化學式1的化合物，其中R1 ＝4－ NO2 、R2 ＝H、a＝0、b＝3、c＝4、d＝0、e＝1，以及．N＊ 1＊ －甲基－N＊ 1＊ －(7－硝基苯[1,2,5]噁二唑－4－基)－丁烷－1,4－二胺，相對應於化學式1的化合物，其中R1 ＝4－NO2 、R2 ＝甲基、a＝4、b＝0、c＝0、d＝1、e＝0。
下列實施例描述以製備本發明化合物的不同步驟且沒有限制。
實施例1：N－(3－胺丙基)－N’－{3－[甲基－(7－硝基苯[1,2,5]噁二唑－4－基)－胺基]－丙基}－丁烷－1,4－二胺的合成。
化學式1化合物的合成係採用在下面所給定的流程圖而被實施：
階段1 ：化學式3之三BOC精胺的製備(Bioorg.Med.Chem.2002,10,2397)。
40g精胺係被置於在300mL CH2 Cl2 的溶液中且被冷卻至0℃。於在50mL CH2 Cl2 的溶液中的23.8 mL的三氟乙酸乙酯係被滴狀添加。溶液係在室溫攪拌歷經1小時之下而離開。所獲得的殘留物係被溶入600mL THF中且140.48 g三乙胺係被添加。接下來，在200mL THF中，174.48g BOC2 O的溶液係被添加，將溫度維持在20℃。在室溫攪拌係被持續歷經三個小時且然後反應介質係被倒入水中且用異丙醚萃取。在傾析之後，放在硫酸鈉上面乾燥、過濾以及蒸發，有機溶液係被蒸發。然後，所獲得的殘留物係被溶入一900 mL的MeOH/H2 O 8/2混合物中。192.6 g碳酸銫係被添加且整個係被留下在回流下歷經三個小時。在甲醇的真空蒸發之後，水係被添加且萃取係以異丙醚而被進行。有機相係被傾析且0.5 N氫氯酸係被加到此有機相中。其係被充許沈澱。三種相係被留心形成。取油形態的中間相含有取氫氯化物形態的預期產物。此相係被傾析、被溶入CH2 Cl2 且放在硫酸鈉上面被乾燥。在過濾以及蒸發之後，54 g三BOC精胺氫氯化物係取無色油形式而被獲得，該無色油係直接地被用於下列步驟中(產率＝50%)。TLC SiO2 ：CH2 Cl2 －MeOH－NH4 OH(90－10－10)Rf＝0.5。
階段2 ：以螢光團的縮合[反應]。
在階段1所獲得的5.39 g油在攪拌下係被置於在100 mL乙腈、6.42 g碳酸銫以及2 g 4－氯－7－硝基苯[1,2,5]噁二唑的溶液中。混合物係被回流歷經一個小時。反應介質係被固定在二氧化矽上且溶劑係被蒸發。固態殘留物係被置於一急驟層析柱的頂部且以一從純庚烷至庚烷－AcOEt混合物(50－50)的梯度而被洗析。此產生4.4g(66%)紅油。TLC：SiO2 庚烷－AcOEt(50－50)Rf＝0.3。APCI－MS m/z＝666.3 (MH＋)；1 H NMR(CDCl3 )：8.47(d,1H,J＝8 Hz,H5 )、7.96(m,1H,NH)、6.17(d,1H,J＝8Hz,H6 )、3.53(m,2H,NHCH2 )、3.38(m,2H,CH2 NH)、3.10－3.21(m,8H,NCH2 )、1.92(m,2H,CH2 )、1.66(m,2H,CH2 )、1.43－1.51(m,31H,CH2 ,t－Bu)。
階段3 ：R2 烷化[反應]。化學式5之(3－{叔丁氧羰基－[4－(叔丁氧羰基－{3－[甲基－(7－硝基苯[1,2,5]噁二唑－4－基)－胺基]－丙基}－胺基)－丁基]－胺基}－丙基)－胺基甲酸的叔丁酯之製備。
在上述的階段所獲得的化合物(4.4 g)係被溶入在有4 g碳酸銫以及2.05 mL甲基碘的情況下的150 mL乙腈中。反應介質係在常溫被攪拌歷經四個小時。介質係藉由溶劑的蒸發而被固定在二氧化矽上，然後，在一直徑50 mm的急驟柱上被層析。以從純庚烷至庚烷－AcOEt混合物(50－50)的梯度洗析，一4.2 g的紅油係被獲得(產率＝93%)。TLC：庚烷－AcOEt(30－70)Rf＝0.4。ESI－MS m/z＝680.4(MH＋)；1 H NMR(DMSO)：8.48(d,1H,J＝8 Hz,H5 )、6.40(d,1H,J＝ 8Hz,H6 )、3.47(m,2H,NHCH2 )、3.33(s,3H,NCH2 )、3.24(m,2H,CH2 HN)、3.15(m,2H,NCH2 )、3.08(m,4H,NCH2 )、2.88(m,2H,NCH2 )、1.91(m,2H,CH2 )、1.54(m,2H,CH2 )、1.36(m,31H,CH2 ,t－Bu)。
階段4 ：4.2 g來自上述階段的化合物係被溶入在20 mL之一在二噁烷中的4M HCl溶液中且被留下在常溫在攪拌之下歷經三個小時。然後，氫氯化物的橘色沈澱物係被過濾、以甲醇然後以乙基醚漂洗。在真空乾燥之後，化學式1之2.8 g(92%)N－(3－胺丙基)－N’－{3－[甲基－(7－硝基苯[1,2,5]噁二唑－4－基)－胺基]－丙基}－丁烷－1,4－二胺的鹽類係被獲得。F＝260℃。ESI－MS m/z＝308.2(MH＋)；1 H NMR(D2 O)：8.50(d,1H,J＝8 Hz,H5 )、6.41(d,1H,J＝8Hz,H6 )、4.27(m,2H,NHCH2 )、3.54(s,3H,NCH3 )、3.11－3.27(m,10H,CH2 HN)、2.26(m,2H,CH2 )、2.11(m,2H,CH2 )、1.82(m,4H,CH2 )。
同樣地，化學式1的化合物可採用使用被雙保護的精胺之相同的操作法而被製備，其中d＝0、e＝1以及b＝3、c＝4要不然就b＝4、c＝3。用來製備這些化學式6(P＝苄氧羰基或叔丁氧羰基)之被保護的聚胺的不同方法係或被描述專利申請案WO 2005/100363中或是被指出於所舉的發表中。
實施例2：N－1－(7－硝基苯[1,2,5]噁二唑－4－基)丁烷－1,4－二胺的合成。
此化合物係被描述於Ohba等人的發表中：(Tet.2007,63,3754)。
此係根據本發明藉由下列方法而被合成：
階段1 ：一由200 mg4－氯－7－硝基苯[1,2,5]噁二唑、190 mg(4－胺基丁基)－胺基甲酸的叔丁酯以及320 mg碳酸銫組成的混合物在5 mL乙腈中回流歷經30分鐘。在冷卻之後，介質係被倒入水中且用乙酸乙酯而被萃取。其係被傾析且有機相係放在硫酸鈉上面被乾燥。過濾且在真空中蒸發。在以一從純庚烷至純乙酸乙酯的梯度被洗析30分鐘之二氧化矽上的急驟層析法允許280 mg(產率80%)呈油狀之[4－(7－硝基苯[1,2,5]噁二唑－4－基胺基)－丁基]－胺基甲酸的叔丁酯的分離。TLC：SiO2 庚烷－AcOEt(30－70),Rf＝0.5。ESI－MS m/z＝352.1(MH＋)；1 H NMR(DMSO)9.55(s,1H,NH),8.50(d,1H,J＝8 Hz,H5 )、6.83(m,1H,NH)、6.42(d,1H,J＝8Hz,H6 )、3.47(m,2H,NHCH2 )、2.96(m,2H,CH2 NH)、1.66(m,2H,CH2 )、1.48(m,2H,CH2 )、1.36(s,9H,t－Bu)。
階段2 ：在上述階段所獲得的280 mg胺基甲酸酯係被置於在15 mL二氯甲烷與2 mL三氟乙酸的溶液中，然後，在室溫被攪拌歷經15分鐘。在蒸發之後，所獲得的油狀殘留物係在異丙醚中被結晶。150 mg(產率51%)的N－1－(7－硝基苯[1,2,5]噁二唑－4－基)丁烷－1,4－二胺三氟乙酸酯係被分 離。TLC SiO2 ：CH2 Cl2 －MeOH－NH4 OH(90－10－1)，Rf＝0.7。ESI－MS m/z＝252.1(MH＋)；1 H NMR(DMSO)：9.54(s,1H,NH)、8.53(d,1H,J＝8Hz,H5 )、7.70(s,2H,NH2 )、6.44(d,1H,J＝8Hz,H6 )、3.50(m,2H,NHCH2 )、2.84(m,2H,NHCH2 )、2.84(m,2H,CH2 NH)、1.59－1.76(m,4H,CH2 CH2 )。
實施例3：N－(3－胺丙基)－N’－[3－(7－甲基苯并[1,2,5]噁二唑－4－基胺基)－丙基]－丁烷－1,4－二胺的合成。
階段1 ：在實施例1中階段1所獲得的250 mg的三BOC精胺係被留下與100 mg 4－氟苯并[1,2,5]噁二唑－4－磺酸的二甲基醯胺在有於10 mL乙腈中0.17 mL三乙胺的情況下於常溫在攪拌下歷經30分鐘而起反應。反應介質係被倒入以HCl被酸化的水中且用乙酸乙酯而被萃取。在傾析且以NaCl飽和的水清洗有機相之後，溶液係放在Na2 SO4 上面被乾燥、被過濾以及被蒸發。250 mg之一黃色油係被獲得(產率＝84%)。ESI－MS m/z＝728.5(MH＋)；1 H NMR(DMSO)：7.83(d,1H,J＝8 Hz,H5 )、6.30(d,1H,J＝8Hz,H6 )、3.35(m,2H,NHCH2 )、2.68(s,6H,NMe2 )、3.23(m,2H,CH2 N)、3.14(m,6H,CH2 N)、2.87(m,2H,NCH2 )、1.86(m,2H,CH2 )、1.55(m,2H,CH2 )、1.36(m,31H,CH2 ,t－Bu)。
階段2 ：在前所獲得的250 mg被保護的化合物係在2 mL三氟乙酸與10 mLCH2 Cl2 中於室溫被攪拌歷經30分鐘。在 蒸發之後，結晶係以一260 mg在具微量丙酮的異丙醚中之N－(3－胺丙基)－N’－[3－(7－甲基苯并[1,2,5]噁二唑－4－基胺基)－丙基)－丁烷－1,4－二胺的三氟乙酸酯之定量性產量而被進行。ESI－MS m/z＝428.3(MH＋)；1 H NMR(DMSO)：7.84(d,1H,J＝8Hz,H5 )、6.37(d,1H,J＝8Hz,H6 )、2.85－3.05(m,12H,NHCH2 )、2.70(s,6H,NMe2 )、2.00(m,2H,CH2 )、1.90(m,2H,CH2 )、1.62(s,4H,CH2 )。
實施例4：藥理研究
1.和腫瘤細胞相對之探針的選擇性
從活體檢視所取的細胞係視在研究中組織的構造而定有或沒有胰蛋白腖而被機械性分離。造血細胞係採用用於血球細胞的慣用製備方法而被分開且分離。一旦被分離，在一相當短時間之後，以確保正被試驗的細胞之生命力，在有探針(諸如，例如，在實施例1至3所合成的)的情況下，細胞係被裝入(placed)且被留下以在所推薦用於在有胺基胍的情況下研究中組織的培養基中培養。胺基胍用來避免聚胺的在體外的變性。無血清被使用(聚胺濃度太高且因此為一測量誤差的來源)。一至四個小時的培養時間為足夠的且藉由選擇與螢光探針之取代基相容的激化以及發射波長而允許藉由免疫化學或流式細胞儀之螢光的偵測。此分析係採用在以下所描述的研究中之標準操作法藉由流式細胞儀或組織化學而被進行，該標準操作法係藉由用一488 nm源激發在實施例1中所獲得的探針(N－(3－胺丙基)－N’－{3－[甲基－(7－硝基苯[1,2,5]噁二唑－4－基)－胺基]－丙基}－丁烷－1,4－二 胺)且測量在525 nm的螢光發射。在此相同的實施例中，從一人類肺臟癌症腫瘤產生的A549細胞(非小細胞)係與從一健康的肺臟以及自細胞株庫於市面上可從細胞株庫買得到者產生的MRC－5細胞相比而被測定。
結果 ：
隨文簡附的第1圖產生以玻片培養的細胞之標準螢光顯微鏡所獲得的一影像。其顯示在腫瘤細胞中實施例1的探針之結合(第1A圖)比在來自健康的組織之細胞(第1B圖)中者多得多。此差別亦藉由流式細胞儀所證實。
這結果證實用本發明化合物作為螢光診斷探針的優點，等探針使合格以一藉聚胺轉運蛋白而被引導之抗癌化合物治療的腫瘤之選擇成為可能。
2.對朝著聚胺傳遞系統而被引導之抗癌劑的反應之可預測性
細胞毒性係使用一標準方法而被測量(在此，使用來自珀金埃爾默(Perkin－Elmer)的ATPlite組之剩餘ATP的測量)以比較探針(諸如以上所描述)的結合以及藉此以證實對朝著聚胺傳遞系統而被引導之試劑的反應之預測性質。一抗癌化合物，表鬼臼毒的一衍生物(諸如，在專利申請案WO 2005/100363的實施例27中所描述的化合物)，係被使用，該衍生物之細胞內穿透視聚胺轉運蛋白而定，且作為參考化合物之滅必治(etoposide)為一非被引導之表鬼臼毒。這兩種化合物在癌細胞上具有相同作用機制：他們兩者為拓樸異構酶2的抑制劑。
關於對一被引導之試劑(諸如，在專利申請案WO 2005/100363的實施例27中的化合物)的敏感性且與非被引導之滅必治相比，一組白血病株係被被測定以確定探針結合，在此，在實施例1中所描述之一者。在與在專利申請案WO 2005/100363的實施列27中的化合物或與滅必治之72小時的培養時間之後，細胞毒性係使用ATPlite組而被評估。來自相同株的細胞亦在有在實施例1中所描述之探針的情況下被培養且係藉由流式細胞儀而被分析。在525 nm所測量的螢光強度係是從0至1小時30分鐘而被得出的且強度變化的斜率係被計算出。
結果 ：
一開始，在專利申請案WO 2005/100363的實施例27中的化合物之細胞毒性與具有一類似作用模式之滅必治的比較，藉由決定一IC50 比例，而使白血病的辨識成為可能，對白血病，定向(vectoring)在化合物的效能中持有一主要角色。
對所有經測定的株，併入螢光探針的能力亦被測量，螢光探針的特點在於螢光係藉由流式細胞儀而被測量。
這些結果係在以下表1中被指出：
無疑地顯然的，螢光強度在定向(vectoring)亦為重要之細胞中為較大的。
結論，藉由測量探針結合，預期一抗癌化合物(諸如，在專利申請案WO 2005/100363的實施例27中的化合物)之更好的效能以及更好的抗腫瘤選擇性為可能的。這些結果顯示探針的追蹤允許具有高度活性聚胺傳遞之白血病細胞的辨識且因此能夠用藉由由聚胺轉運蛋白所引導的抗癌化合物有效處理。
藉由流式細胞儀所獲得的差別係可與在組織化學所見的相比較。在一給定的時間只藉由測量螢光實施一較簡單的測定是可能的。此係藉由在一僅1小時又30分鐘的培養時間之後進行此螢光測量而被驗證。此在一醫院環境中可具有優勢以提供一用於反應細胞之選擇的快速結果。
按延伸，該等測量可適用於在例行分析的期間由血採樣術或腰椎穿刺所取的患者血液母細胞。螢光強度的測量可使用在所有裝備有一細胞學及/或解剖病理學單位的醫院中之例行流式細胞儀或組織細胞化學而被作出。

Claims (13)

  1. 一種化學通式1之一化合物或其之一藥學上可接受的鹽類作為螢光診斷探針以偵測表現聚胺傳遞系統的腫瘤之用途： 其中：R1代表在位置4及/或6的一或兩個NO2 基團；聚胺鏈可在位置5、6或7；R2 代表一氫、一C1-6 烷基、一苄基、一全氟烴基基團；a、b、c的值與彼此無關可為2至5且代表分開該等胺基基團的亞烷基鏈；d和e的值可獨立地為0或1，但不能同時代表0的值。
  2. 一種化學通式1之化合物或其之一藥學上可接受的鹽類： 其中： R1 代表在位置4及/或6的一或兩個NO2 基團；聚胺鏈可在位置5、6或7；R2 代表一氫、一C1-6 烷基、一苄基、一全氟烴基基團；a、b、c的值與彼此無關可為2至5且代表分開該等胺基基團的亞烷基鏈；d和e的值可獨立地為0或1，但不能同時代表0的值；只要當e=0之時，那麼R2 不能為一氫；以及除了其中R1 =4-NO2 、R2 =H、a=3、b=4、c=3以及d=e=1之化合物以外。
  3. 如申請專利範圍第2項之化合物，其中R1 =4-NO2 、R2 =C1-6 烷基、a=3、b=4、c=3、d=e=1。
  4. 如申請專利範圍第2項之化合物，其中R1 =4-NO2 、R2 =H或C1-6 烷基、a=0、b=4、c=3、d=0、e=1。
  5. 如申請專利範圍第2項之化合物，其中R1 =4-NO2 、R2 =H或C1-6 烷基、a=0、b=3、c=4、d=0、e=1。
  6. 如申請專利範圍第2項之化合物，其中R1 =4-NO2 、R2 =C1-6 烷基、a=4、b=0、c=0、d=1、e=0。
  7. 如申請專利範圍第2項之化合物，N-(3-胺丙基)-N’-{3-[甲基-(7-硝基苯[1,2,5]噁二唑-4-基)-胺基]-丙基}-丁烷-1,4-二胺，其中：R1 =4-NO2 、R2 =甲基、a=3、b=4、c=3、d=e=1。
  8. 如申請專利範圍第2項之化合物，N-(3-胺丙基)-N’-甲基-N’-(7-硝基苯[1,2,5]噁二唑-4-基)-丁烷-1,4-二胺，其 中：R1 =4-NO2 、R2 =甲基、a=0、b=4、c=3、d=0、e=1。
  9. 如申請專利範圍第2項之化合物，N-(3-胺丙基)-N’-(7-硝基苯[1,2,5]噁二唑-4-基)-丁烷-1,4-二胺，其中：R1 =4-NO2 、R2 =H、a=0、b=4、c=3、d=0、e=1。
  10. 如申請專利範圍第2項之化合物，其中：R1 =4-NO2 、R2 =甲基、a=0、b=3、c=4、d=0、e=1。
  11. 如申請專利範圍第2項之化合物，其中：R1 =4-NO2 、R2 =H、a=0、b=3、c=4、d=0、e=1。
  12. 如申請專利範圍第2項之化合物，其中：R1 =4-NO2 、R2 =甲基、a=4、b=0、c=0、d=1、e=0。
  13. 一種用以合成一如申請專利範圍第1項中所界定之化學式1之化合物的方法，其特徵在於該方法包含下列步驟：a)將一化學式2的苯并氧雜噁二唑(benzoxadiazole)之衍生物與化學式6的一聚胺偶合 其中R1 代表在位置4及/或6的一或兩個NO2 基團；R3 為一在位置7移動的鹵素取代基，該化學式6的聚胺，其中P為胺官能的一保護基且，其中，a、b、c與彼此無關位在2與5之間且其中d和e可獨立地為0或1； b)在一配於一惰性溶劑中之鹼的存在下，以一烷基鹵化物來烷基化由偶合反應a)而來的化合物；以及c)由步驟b)而來的化合物係在一酸性介質中於室溫下被去保護以獲得化學式1的化合物。
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Families Citing this family (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2967671A1 (fr) 2010-11-24 2012-05-25 Pf Medicament Complexe de technetium 99m en tant qu'outil de diagnostic in vivo des tumeurs cancereuses
FR2967675B1 (fr) 2010-11-24 2015-02-27 Pf Medicament Derives fluorescents de cyanines polyamines en tant que sonde de diagnostic
WO2012080423A1 (en) * 2010-12-15 2012-06-21 Nec Europe Ltd. Method and system for identifying at least one electrically powered device by a power supply device via a powerline connection
CN108299485B (zh) * 2018-02-09 2020-05-12 湖北大学 一种用于检测活细胞内过氧化氢的荧光探针及其制备方法和应用
CN113929639B (zh) * 2020-06-29 2023-03-21 东南大学 一类以gstp1为靶点的抗肿瘤化合物及其制备方法与应用

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1993003382A2 (en) * 1991-08-01 1993-02-18 Pharmaceutical Discovery Corporation Characterization of specific drug receptors with fluorescent ligands
JPH10218871A (ja) * 1997-02-10 1998-08-18 Tokyo Kasei Kogyo Kk 新規蛍光ラベル化剤４−〔（ω−アミノアルキル）ア ミノ〕−７−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノスルホニル−２， １，３−ベンゾオキサジアゾール
WO1999003823A2 (en) * 1997-07-15 1999-01-28 Oridigm Corporation Novel polyamine analogues as therapeutic and diagnostic agents
JP2001081082A (ja) * 1999-09-13 2001-03-27 Tokyo Kasei Kogyo Kk 新規蛍光標識試薬４−アシルアミノ−７−メルカプト−２，１，３−ベンゾオキサジアゾール
JP2004061476A (ja) * 2002-07-29 2004-02-26 Tokyo Kasei Kogyo Kk 新規蛍光キレート試薬と金属イオンの測定法
GB0307855D0 (en) * 2003-04-04 2003-05-14 Novartis Ag Organic compounds
ITRM20030194A1 (it) * 2003-04-24 2004-10-25 Univ Roma Uso di derivati del 7-nitro-2, 1, 3-benzossadiazolo per
FR2869035B1 (fr) * 2004-04-16 2006-07-14 Pierre Fabre Medicament Sa Derives (poly)aminoalkylaminoacetamide d'epipodophyllotoxine leur procede de preparation et leurs applications en therapeutique comme agent anticancereux

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