TWI419702B - 經熱處理之菌苗及由此經熱處理之菌苗製備之乳劑疫苗 - Google Patents
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Description
本發明一般係關於疫苗領域及穩定乳劑疫苗之方法。特定而言，本發明係關於一種經熱處理之菌苗、製造經熱處理之菌苗之方法且係關於由此經熱處理之菌苗製備之豬乳劑疫苗。
疫苗接種法已逐漸增加用於控制動物之傳染性疾病。疫苗中常使用佐劑，因爲其等能增強對抗原的體液性及/或細胞性免疫反應。常將疫苗製成乳劑，因爲乳劑可作為佐劑且具有在注射部位以儲積物方式保留抗原之性質。乳劑疫苗中常使用乳化劑。除了使用乳化劑外，亦可藉由機械方式降低乳劑之液滴大小來達成乳劑疫苗之穩定性。
美國專利第5,084,269號係關於包含併用礦物油之卵磷脂之佐劑調配物，其在宿主動物内產生較少刺激，同時增強全身免疫性。根據美國專利5,084,269之組合物係Pfizer公司以商標名稱上市之組合物。
一般而言，當加熱時，細菌抗原不穩定且甚至短暫曝露在高溫下亦可降低抗原活性。例如，目前的炭疽疫苗在37℃ 48小時即會喪失所有生物活性(S. Sing,N. Ahuja,V. Chauhan,E. Rajasekaran,W. S. Mohsin,R. Bhat,and R. Bhatnagar; Bioche. Biophys. Res. Commun. 2002 Sep. 6;295(5):1058-62)。
本發明係有關經熱處理之菌苗、製造經熱處理之菌苗之方法及由此經熱處理之菌苗製備之豬乳劑疫苗。該方法包括將菌苗加熱至約35至約80℃之溫度以形成經熱處理之菌苗。
可接受之抗原活性-該術語「可接受之抗原活性」意指經疫苗接種之動物在被同種活生物體感染後或進行已認可之效力試驗時引起保護性免疫反應之能力。
菌苗-該術語「菌苗」意指可用作疫苗組份之死細菌之懸浮液。
乳化劑-該術語「乳化劑」意指用於使乳劑更穩定之物質。
乳劑-該術語「乳劑」意指兩種不互溶液體之組合物，其中一種小液滴液體懸浮於另一種液體之連續相中。
經熱處理之菌苗-該術語「經熱處理之菌苗」意指已經熱過處理且其脂酶活性為熱處理前脂酶活性之50%或以下且具有可接受之抗原活性之菌苗。
反乳劑-該術語「反乳劑」意指油包水型之乳劑。
脂酶-該術語「脂酶」意指酵素、酯酶、脂酶及磷脂酶，其可引起乳劑疫苗中乳化劑分解。
正常乳劑-該術語「正常乳劑」意指水包油型之乳劑。
水包油型之乳劑-該術語「水包油型之乳劑」意指小液滴油懸浮於連續水相中之乳劑。
室溫-該術語「室溫」意指18至25℃之溫度。
油包水型之乳劑-該術語「油包水型之乳劑」意指水液滴懸浮於連續油相中之乳劑。
本發明係關於經降低脂酶活性之菌苗、由此菌苗製備之豬乳劑疫苗及降低菌苗脂酶活性之方法。除抗原組份外，有些菌苗具有脂酶活性。當將具有脂酶活性之菌苗併入乳劑中時，脂酶可能分解用於製造乳劑之乳化劑。包含具有高脂酶活性之菌苗之乳劑疫苗容易成為不穩定乳劑，而彼等包含具有低含量脂酶之菌苗則傾於穩定。可在消滅後製成具有脂酶活性之菌苗之細菌之實例包括紅斑丹毒絲菌(Erysipelothrix rhusiopathieae
)、單核細胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes
)、大腸桿菌(Escherichia coli
)、豬肺炎支原體(Mycoplasma hyopneumoniae
)及鈎端螺旋體(Leptospira
)，諸如已知病原體：犬鈎端螺旋體(Leptospira canicola
)、感冒傷寒性鈎端螺旋體(Leptospira grippotyposa
)、腎臟鈎端螺旋體(Leptospira hardjo
)、出血性黃膽型鈎端螺旋體(Leptospira icterohaemorrhagiae
)、佈拉迪斯拉發鈎端螺旋體(Leptospira bratislava
)及波摩拿鈎端螺旋體(Leptospira pomona
)。該等細菌在豬中可導致疾病且需要對抗該等疾病之疫苗接種。鈎端螺旋體(Leptospira
)菌苗更可能具有高脂酶活性而紅斑丹毒絲菌(Erysipelothrix rhusiopathieae
)菌苗可能具有較低、更易控制之脂酶活性。
可使用於形成乳劑之乳化劑分解且因此導致乳劑不穩定及分解之脂酶包括一種或多種乳劑分解酶，諸如酯酶、脂酶及磷脂酶。該等酵素、酯酶、脂酶及磷脂酶統稱為脂酶。菌苗之脂酶活性可利用稱為O-特戊醯氧基甲基繖形酮(C-POM)之合成受質測量。脂酶引起之水解速率即為脂酶活性之量度。此反應中脂酶引起之水解反應速率係藉由脂酶活性產物之螢光強度增加來監測。反應速率取決於所選之準確水解測試條件，以致可利用相同測試條件產生之數據對由水解速率量度之脂酶活性程度進行比較。若干文章(包括Kurioka S. and Matsuda M.(1976)Ana. Biochem. 75:281-289,De Silva N.S. and Quinn P.A.(1987)J. Clin. Microbiol. 25:729-731,and Grau A. and Ortiz A.(1998)Chem. Phys. of Lipids. 91:109-118)中揭示文獻方法。
乳劑疫苗中，乳劑之分解導致組份相分離。此點不合要求，因為當出現相分離時，從容器中分離出之單獨劑量可能不含有相同含量之疫苗組份。此外，乳劑損失可導致乳化劑喪失佐劑活性且導致疫苗之抗原效力下降。
減毒活病毒與菌苗一樣常包含在疫苗中。此等疫苗適用，因為可使用單一疫苗對不同的疾病產生免疫性。若菌苗中出現脂酶活性，將導致乳化劑從乳劑中釋放。此游離之乳化劑會破壞活疫苗病毒並使其失活，因此喪失病毒感染力。
適用於疫苗之菌苗形成法為培養所需細菌，然後將該細菌殺滅，產生包含各種細菌組份(包括細胞壁組份)之菌苗而形成。細菌可由各種方法殺滅，包括將其等曝露於諸如硫柳汞(merthiolate)、福馬林、甲醛、二乙胺、二元伸乙胺(BEI)、β丙酸內酯(BPL)及戊二醛之化合物中。可使用該等化合物之組合。此外，可藉由輻射滅菌法殺滅細菌。
已發現具有此脂酶活性之菌苗之脂酶活性可經熱處理而降低。特別地，菌苗之脂酶活性可藉由將菌苗加熱至約35至約80℃之溫度形成經熱處理之菌苗(其具有可接受之抗原活性)而降低。熱處理係在足夠時間內進行，以使經熱處理之菌苗之脂酶活性為熱處理前之菌苗中所發現脂酶活性之50%或以下。為獲得良好的乳劑疫苗穩定性，並無必要將脂酶活性降低至零。吾人發現具有良好儲存命之疫苗可由脂酶活性程度為熱處理前脂酶活性程度之50%或以下之經熱處理之菌苗製得。
當使用試驗受質之水解速率用作菌苗脂酶活性之量度時，隨後可比較熱處理前試驗受質之水解速率與熱處理後之水解速率。進行熱處理法，使水解速率降低至新鮮菌苗中所觀察到水解速率之50%或以下。
準確測量脂酶活性程度之方法並非關鍵，只要熱處理前之活性及熱處理後之活性使用相同方法測量即可。例如，若使用一種受質測量試驗受質之水解速率，則不同受質可產生不同速率。然而，若初始活性測定與處理後之活性測定係使用相同受質，則相對速率仍將顯示熱處理效應。
波摩拿鉤端螺旋體(Leptospira Pomona
)菌苗(9 CFR §113.101)、出血性黃膽型鉤端螺旋體(Leptospira Icterohaemorrhagiae
)菌苗(9 CFR §113.102)、犬鉤端螺旋體(Leptospira Canicola
)菌苗(9 CFR §113.103)、感冒傷寒性鉤端螺旋體(Leptospira Grippotyphosa
)菌苗(9 CFR §113.104)及腎臟鉤端螺旋體(Leptospira Hardjo
)菌苗(9 CFR §113.105)(9 CFR §113.101、§113.102、§113.103、§113.104及§113.105)之抗原活性已有認可之測試法。針對該等菌種，可接受之抗原活性可定義為在經疫苗接種之倉鼠中產生保護性免疫反應之能力，以致當倉鼠感染同種活細菌時，此模式中經疫苗接種之倉鼠至少75%可存活，而未經疫苗接種之倉鼠至少80%不能存活。就抗原腎臟鉤端螺旋體(Leptospira Hardjo
)而言，可接受之抗原活性可定義為經包含細菌抗原(腎臟鉤端螺旋體(Leptospira Hardjo
))之疫苗接種之小牛中，該疫苗對抗腎臟鉤端螺旋體(Leptospira Hardjo
)誘發血清凝集幾何平均效價之能力。對於其它菌苗，可接受之抗原活性係定義為經疫苗接種之動物在感染後或進行同種活生物體之效力試驗時產生保護性免疫反應之能力。
熱處理係在一段溫度範圍及可變之時間長度內進行。一般而言，係在約35℃至約80℃之溫度下加熱約20分鐘至約24小時。當菌苗加熱至較高溫度，諸如約75℃至80℃時，加熱時間係在時間範圍之短端。當在較低溫度下進行加熱時，則進行更長時間加熱。另一溫度與時間之組合係在約60℃至約70℃之溫度下加熱約9至約10小時。另一溫度與時間之組合係在約65℃至約70℃之溫度下加熱約5至約8小時。另一溫度與時間之組合係在約65℃至約70℃之溫度下加熱約1小時。另一溫度與時間之組合係在約55℃至約65℃之溫度下加熱約5至約8小時。
熱處理後之菌苗具有比新鮮製備之菌苗低之脂酶活性，否則可依新鮮製備之菌苗之相同方法製造。因此，可藉由製備疫苗之常用方法將經熱處理之菌苗併入疫苗中。
乳劑疫苗可藉由將所需之菌苗與油相及一種乳化劑或多種乳化劑組合而形成。然後強烈攪拌該組合物形成乳劑。適宜攪拌方法包括均質化及隨後微流體化。防腐劑與賦形劑亦可先乳化後再包含在組合物中。
疫苗可包含菌苗與病毒性抗原兩者。在製備包含菌苗與病毒性抗原之疫苗中，將菌苗、任何待包含之病毒性抗原、乳化劑或多種乳化劑及視需要之防腐劑及賦形劑與油相組合且乳化。接著形成乳劑，可利用NaOH或HCl溶液將該調配物之pH調整為適宜之pH。使用疫苗時，一般要求pH接近中性以防止刺激注射部位。常用pH為約7.0至約7.3。
用於形成乳劑疫苗之適宜油相包括不可代謝油及可代謝油。不可代謝油包括礦物油，諸如白礦物油及輕礦物油。可代謝油包括植物油、魚油及合成脂肪酸甘油酯。
可用於製備本發明之乳劑疫苗之乳化劑之實例係磷脂醯基、山梨糖醇酐酯(Sorbitan ester)、聚乙氧化山梨糖醇酐酯及常用為疫苗乳化劑之甘露糖醇衍生物。磷脂醯基乳化劑包括卵磷脂、磷脂醯基乙醇胺、磷脂醯基肌醇、磷脂醯基絲胺酸及卵磷脂(例如，諸如AMPHIGEN®
)。山梨糖醇酐酯(Sorbitan easter)乳化劑包括山梨糖醇酐單月桂酸酯(例如，Span®
20及Arlacel®
20)、山梨糖醇酐單油酸酯(例如，Span®
80及Arlacel®
80)、山梨糖醇酐單棕櫚酸酯(例如，Span®
40及Arlacel®
40)及山梨糖醇酐單硬脂酸酯(例如，Span®
60及Arlacel®
60)。聚乙氧化山梨糖醇酐酯包括聚乙氧山梨糖醇酐單月桂酸酯(例如Tween®
20及Tween®
21)、聚乙氧山梨糖醇酐單油酸酯(例如Tween®
80)、聚乙氧山梨糖醇酐單棕櫚酸酯(例如Tween®
40)及聚乙氧山梨糖醇酐單硬脂酸酯(例如Tween®
60)。甘露糖醇衍生物乳化劑包括甘露糖醇十八烷醚。Span®
、Arace®
l及Tween®
係美國ICI之商標。AMPHIGEN®
係Pfizer,Inc.之商標。雖然可製備油包水型之反乳劑，但通常將疫苗製成水包油型之正常乳劑。
疫苗中可使用各種佐劑(諸如Quil A、膽固醇、磷酸鋁及氫氧化鋁)及防腐劑(諸如硫柳汞(merthiolate))。Quil A係從南美皂皮樹(South American tree Quillaja Saponaria Molina)之樹皮中提取之天然皂角甘(quillaja saponins)之純化混合物。Quil A直接作用在免疫系統上活化全身敏感性。此作法可同時誘發體液及細胞所媒介之反應。親脂鏈使抗原與佐劑之相互作用得以經內源性途徑傳遞至細胞溶質中進行處理。Quil A常與膽固醇使用，因為當添加適量膽固醇時，可消除較不需要之副作用。膽固醇與Quil A形成不溶性錯合物且由於膽固醇與Quil A黏結形成螺旋狀結
構，因此曝露出有助於促進免疫反應之分子糖單元。
常向包含菌苗之疫苗中添加豬病毒性抗原。此方法之優勢係可使用一種疫苗對若干種疾病產生免疫性，不需要若干不同種劑量疫苗即可達成相同結果。疫苗中可使用死病毒及減毒活病毒。可使用之引起豬疾病病毒係豬腺病毒(Porcine Adenovirus)、豬圓環病毒(Porcine Circovirus)、豬泡疹病毒(Porcine herpes virus)、偽狂犬病病毒(Pesudroabies virus)、豬瘟病毒(Classical swine fever virus)、豬流行性腹瀉病毒(Porcine epidemic diarrhea virus)、豬血凝性腦脊髓炎病毒(Porcine hemaglutinating encephalomyletitis virus)、豬細小病毒(Porcine parvovirus)、豬呼吸道冠狀病毒(Porcine Respiratory Corona virus)、豬繁殖與呼吸病毒(Porcine Reproductive and Respiratory Virus)、豬流感病毒(Swine influenza)、傳染性胃腸炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus)及水疱性口炎病毒(Vesicular stomatitis virus)。
若菌苗中存在脂酶活性，則其可引起乳化劑從乳劑中釋放。此游離乳化劑可破壞活病毒被膜且使活疫苗病毒失活，導致喪失病毒感染力。因此，菌苗之熱處理可穩定乳劑、保留其佐劑作用及保留病毒之病毒感染力。
下列實例係供進一步說明，並未限制本發明之範圍。
藉由光散射法，以濁度計單位(NU)測定濁度。在指定條件下，由樣品光散射之強度與標準參考懸浮液光散射之強度進行比較。散射光強度越高，樣品濁度越高。將光源對準樣品且在光源之90°方位下測量光散射。儀器係藉由測量穿過福爾馬肼(formazin)懸浮液之光散射而校準。
超濾水係藉由孔徑為0.2μm之膜濾器過濾蒸餾水而製得。第一溶液係藉由在容量瓶中將1.00g硫酸肼(NH2
)H2
SO4
溶解於超濾水中且經超濾水稀釋至100ml而製得。第二溶液係藉由在容量瓶中將10.00g六次甲基四胺溶解於超濾水中且經超濾水稀釋至100ml而製得。福爾馬肼(formazin)懸浮液係藉由混合5.0ml第一溶液與5.0ml第二溶液製得。將混合物在約24℃下靜置24小時。該混合物經超濾水稀釋至100ml形成具有400NU濁度之備用濁度懸浮液。40NU福爾馬肼(formazin)濁度懸浮液係藉由將10.00ml備用濁度懸浮液經超濾水稀釋至100ml而製得。進一步校準溶液係藉由稀釋備用溶液而製得。
將待測樣品經超濾水稀釋，使濁度落在濁度計之校準範圍內。測量濁度且利用下列公式計算原濁度：
原濁度單位NU=M×(D+O)
其中：M係經稀釋樣品之濁度，單位NU
D係稀釋水之體積，單位mL
O係原樣品體積，單位mL
脂酶活性係利用作為螢光受質之O-特戊醯氧基甲基繖形酮測定。此非螢光受質之脂酶催化水解反應產生在水性條件下不穩定之羥甲基醚。該不穩定之羥甲基醚分解產生甲醛及螢光產物繖形酮。以時間為函數監測產物繖形酮之螢光強度，得到脂酶酵素活性之敏感性動力量度。
在純DMSO中，製備5mM備用濃度之O-特戊醯氧基甲基繖形酮(Molecular Probes公司產品編號P35901)溶液。未使用之溶液儲存在-20℃，避光保存。利用58mM TRIS-HCl緩衝液(pH 8.0)將5mMO-新戊醯氧基甲基繖形酮溶液稀釋至750μm，所得溶液預熱至37℃。在室溫及6500X重力下，將菌苗樣品或對照組緩衝液/介質離心10分鐘，形成集結塊及上層液。進行反應時，在低容積96孔板(Corning 3393黑色聚苯乙烯非結合性表面，半邊區域)之分析孔中，於室溫下組合15μL之100mM TRIS-HCl緩衝液(pH 8.0)與15μL菌苗樣品或對照組緩衝液/介質之上層液；於37℃下預培養10分鐘；然後添加20μL750μm O-新戊醯氧基甲基繖形酮或對照組緩衝液/介質開始反應。所得反應混合物包含53mM TRIS-HCl緩衝液(pH 8.0)及0或300μmO-新戊醯氧基甲基繖形酮。在1小時內，每隔30-45秒測量螢光強度(Spectramax Gemini XS,37℃，λex
=360nm,λem
=460nm,PMT靈敏度設為「中」，每孔讀數6次)。由所得反應進行曲線之斜率決定反應速率。
紅斑丹菌絲菌(Erysipelothrix rhusiopathieae
)製劑之濁度係在600nm之波長下由光譜儀測量。結果係以光學單位(OU)記錄。
由各菌苗製備一批包含下列菌種之經硫柳汞殺滅之鉤端螺旋體：犬鉤端螺旋體(Leptospira Canicola
)、出血性黃膽型鉤端螺旋體(Leptospira Icterohaemorrhagiae
)、感冒傷寒性鉤端螺旋體(Leptospira Grippotyphosa
)、腎臟鉤端螺旋體(Leptospira Hardjo
)及波摩拿鉤端螺旋體(Leptospira Pomona
)。將六種組合菌苗樣品(約12小時)儲存在4℃、37℃、45℃、56℃、65℃及80℃下過夜。以儲存在4℃下之樣品充當未處理對照組。以儲存在37℃、45℃、56℃、65℃及80℃下12小時之樣品為經熱處理之樣品。儲存後，在各菌苗存在下，根據製程2之方法測量試驗受質水解速率。以樣品水解速率除以儲存在4℃下之樣品之水解速率，再乘以100，即為各菌苗之原始脂酶在儲存後之殘餘活性百分比。下列圖表顯示儲存溫度及原始脂酶在儲存後之殘餘活性百分比。
製備兩系列佈拉迪斯拉發鉤端螺旋體(Leptospira Bratislava
)。兩系列經硫柳汞失活，然後在65℃下經熱處理8小時。在預處理時及處理期間每兩小時取樣分析。根據製程2之方法，在各時間點上測量脂酶活性。當取出樣品時，測量在各樣品存在下之試驗受質水解速率。樣品水解速率除以初始水解速率，再乘以100即為各菌苗之原始脂酶熱處理後之殘餘活性百分比。下列圖表顯示取樣時間及在此時間點下原始脂酶之殘餘活性平均百分比。
犬鉤端螺旋體(Leptospira Canicola
)、出血性黃膽型鉤端螺旋體(Leptospira Icterohaemorrhagiae
)、感冒傷寒性鉤端螺旋體(Leptospira Grippotyphosa
)、腎臟鉤端螺旋體(Leptospira Hardjo
)、波摩拿鉤端螺旋體(Leptospira Pomona
)、佈拉迪斯拉發鉤端螺旋體(Leptospira Bratislava
)、紅斑丹菌絲菌(Erysipelothrix rhusiopathieae
)及豬細小病毒(Porcine parvovirus
)。各鉤端螺旋體(Leptospira
)培養物之濁度係以濁度計單位(NU)測量。紅斑丹菌絲菌(Erysipelothrix rhusiopathieae
)培養物之濁度係以光學單位(OU)測量。細菌經硫柳汞殺滅形成菌苗。各鉤端螺旋體(Leptospira
)菌苗在65℃下熱處理8小時以降低脂酶活性。紅斑丹菌絲菌(Erysipelothrix rhusiopathieae
)菌苗未經熱處理。將鉤端螺旋體(Leptospira
)菌苗與已殺死之豬細小病毒(Porcine parvovirus)及已殺死之紅斑丹菌絲菌
(Erysipelothrix rhusiopathieae
)組合，然後與AMPHIGEN®
、佐劑、防腐劑及稀釋緩衝液混合以致各2ml劑量之疫苗包含下圖表中列舉之組份。
給倉鼠及兔子服下實例2之疫苗以利用標準實驗動物模式測試效力。然後使試驗倉鼠感染一劑犬鉤端螺旋體(Leptospira Canicola
)、出血性黃膽型鉤端螺旋體(Leptospira Icterohaemorrhagiae
)、感冒傷寒性鉤端螺旋體(Leptospira Grippotyphosa
)、佈拉迪斯拉發鉤端螺旋體(Leptospira Bratislava
)或波摩拿鉤端螺旋體(Leptospira Pomona
)，以測試疫苗效力。以存活數量作為說明效力之量度。測量兔子對抗腎臟鉤端螺旋體(Leptospira Hardjo
)之顯微凝集效
價，以說明疫苗部分之效力。下表顯示由經熱處理之鉤端螺旋體(Leptospira
)菌苗製備之疫苗能產生符合效力標準之抗原反應。
在兔子中試驗紅斑丹菌絲菌(Erysipelothrix rhusiopathieae)，藉此比較疫苗血清效價與參考疫苗效價。疫苗具有3.0之RP(相對效力)。PPV係在血凝試驗中測試且具有1024HA/.05ml之HA效價。對於疫苗而言，320HA/.05ml係可接受之效價。
由經熱處理之鉤端螺旋體(Leptospira
)菌苗及其它根據實例2中所列調配物之組份製得疫苗。根據實例2之方法，由未經熱處理之鉤端螺旋體(Leptospira
)菌苗製得類似疫苗。此兩者疫苗調配物皆儲存在4℃下0、6、12、15及18個月。利用雷射繞射儀在各時間點上分析各疫苗粒徑。
圖1中所示之圖表顯示各疫苗在幾個月(0、6、12、15及18個月)內監測之粒徑分佈。由未經熱處理之鉤端螺旋體(Leptospira
)菌苗製備之疫苗(圖1之上圖)顯示粒徑增加，說明乳劑分解。由經熱處理之鉤端螺旋體(Leptospira
)菌苗
製備之疫苗(圖1之下圖)顯示18個月時間內粒徑穩定，說明乳劑穩定。
起初測試實例2(實例2中所列之疫苗包含所有列出之抗原-所有操作均使用相同疫苗)中所列由未經熱處理之鉤端螺旋體(Leptospira
)菌苗及經熱處理之鉤端螺旋體(Leptospira
)菌苗製備之疫苗調配物之HA效價及溶血效價。在各個時間點上HA效價之穩定性。進行HA試驗時，將樣品pH調整至11-11.2，以從氫氧化鋁凝膠中提取PPV(豬細小病毒(Porcine parvovirus))病毒。然後將樣品離心且收集上層液用於試驗。將天竺鼠(Guinea pig)紅血球加入96孔板中充當凝集指示劑。將樣品上層液依起始稀釋度為1：5連續稀釋2倍且進行2行重覆。該板在5±3℃下培養16-24小時。對各孔以0-4之評分記錄血凝集度。記錄包含得分2或以上時之最後稀釋度作為效價。在試驗未經熱處理之疫苗期間，觀察到該疫苗引起溶血。溶血效價係觀察到溶血時之最高稀釋度。經熱處理之疫苗未產生溶血。
下圖表顯示該時間內HA效價及溶血效價之平均值。CTC係經熱處理之鉤端螺旋體(Leptospira
)菌苗之疫苗。OOP係未經熱處理之鉤端螺旋體(Leptospira
)菌苗之疫苗。
圖1描述由未經熱處理(上圖)及經熱處理(下圖)之菌苗製備之疫苗之粒徑分析。
Claims (6)
- 一種疫苗，其包含a)乳劑，其包含油及一或多種乳化劑；b)包含死細菌懸浮液之經熱處理之菌苗，其中該死細菌係鉤端螺旋體(Leptospira )菌種，其中該菌苗經加熱至攝氏約60至約80度之溫度並歷時約6至約10小時，且進一步其中該菌苗具可接受抗原活性，且具有熱處理前菌苗脂酶活性之50%或以下之脂酶活性；及c)1至13種引起豬疾病病毒，其係選自包括豬腺病毒(Porcine Adenovirus)、豬圓環病毒(Porcine Circovirus)、豬泡疹病毒(Porcine herpes virus)、偽狂犬病病毒(Pesudroabies virus)、豬瘟病毒(Classical swine fever virus)、豬流行性腹瀉病毒(Porcine epidemic diarrhea virus)、豬血凝性腦脊髓炎病毒(Porcine hemaglutinating encephalomyletitis virus)、豬細小病毒(Porcine parvovirus)、豬呼吸道冠狀病毒(Porcine Respiratory Corona virus)、豬繁殖與呼吸病毒(Porcine Reproductive and Respiratory Virus)、豬流感病毒(Swine influenza)、傳染性胃腸炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus)及水疱性口炎病毒(Vesicular stomatitis virus)之群組；其中當與包含非熱處理菌苗之疫苗相比時，該疫苗具增進之穩定性。
- 如請求項1之疫苗，其進一步包含卵磷脂製劑及以礬土為主之佐劑。
- 如請求項2之疫苗，其進一步於油製劑中包含卵磷脂。
- 如請求項1之疫苗，其進一步包括含有死細菌懸浮液之 經熱處理之菌苗，其中該死細菌係1至6種選自包括犬鉤端螺旋體(Leptospira Canicola )、出血性黃膽型鉤端螺旋體(Leptospira Icterohaemorrhagiae )、感冒傷寒性鉤端螺旋體(Leptospira Grippotyphosa )、腎臟鉤端螺旋體(Leptospira Hardjo )、波摩拿鉤端螺旋體(Leptospira Pomona )及紅斑丹菌絲菌(Erysipelothrix rhusiopathieae )之群組之細菌。
- 如請求項4之疫苗，其進一步包含卵磷脂製劑及以礬土為主之佐劑。
- 如請求項5之疫苗，其進一步於油製劑中包含卵磷脂。
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