TWI392680B - 二醯甘油醯基轉移酶抑制劑 - Google Patents

二醯甘油醯基轉移酶抑制劑 Download PDF

Info

Publication number
TWI392680B
TWI392680B TW099141941A TW99141941A TWI392680B TW I392680 B TWI392680 B TW I392680B TW 099141941 A TW099141941 A TW 099141941A TW 99141941 A TW99141941 A TW 99141941A TW I392680 B TWI392680 B TW I392680B
Authority
TW
Taiwan
Prior art keywords
dihydro
mmol
etoac
imidazo
compound
Prior art date
Application number
TW099141941A
Other languages
English (en)
Other versions
TW201130844A (en
Inventor
Macklin Brian Arnold
Thomas James Beauchamp
Emily Jane Canada
Erik James Hembre
Jianliang Lu
John Robert Rizzo
John Mehnert Schaus
Qing Shi
Original Assignee
Lilly Co Eli
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Lilly Co Eli filed Critical Lilly Co Eli
Publication of TW201130844A publication Critical patent/TW201130844A/zh
Application granted granted Critical
Publication of TWI392680B publication Critical patent/TWI392680B/zh

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D487/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00
    • C07D487/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D487/04—Ortho-condensed systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A61K31/4164—1,3-Diazoles
    • A61K31/4188—1,3-Diazoles condensed with other heterocyclic ring systems, e.g. biotin, sorbinil
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/55—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having seven-membered rings, e.g. azelastine, pentylenetetrazole
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/04—Anorexiants; Antiobesity agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Child & Adolescent Psychology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)

Description

二醯甘油醯基轉移酶抑制劑
本發明提供一種抑制二醯甘油醯基轉移酶1(DGAT-1)之化合物。
已提出抑制DGAT-1(甘油三酯合成中之重要酶)可提供一種治療肥胖及/或改善胰島素敏感性之新穎方法。雖然指出DGAT係一種小分子抑制劑之極佳目標，但是僅指出少數化合物可抑制DGAT-1之活性。未批准已知DGAT-1抑制劑用於醫藥用途。因此，需要更多抑制DGAT-1之小分子。尤其需要具有所需藥理特徵之DGAT-1抑制劑化合物。
據報告為DGAT調節劑之化合物係揭示於US 2008/0090876(Cheng等人)中。由Cheng所揭示之化合物係硫雜環己烷甲醯胺類。在WO98/28268(We等人)中指出環烷基、內醯胺、內酯、及相關化合物係作為用於治療阿茲海默氏病(Alzheimer's disease)之β-類澱粉肽釋放抑制劑。在美国專利5,696,111(Balwin等人)中揭示醯基苯并氮呯係作為可用於治療心律不整之化合物。相反地，本發明之咪唑并-苯并氮呯結構上係不同於彼等Cheng、We、及Balwin所揭示者。此外，未教示或建議該等We或Balwin之化合物可用作DGAT-1抑制劑。在2010年5月20日公開之WO 2010/056496中，指出氮呯酮化合物係DGAT調節劑。在WO 2010/056496中所指出之氮呯酮化合物結構上係不同於本發明之咪唑并-苯并氮呯。
本發明化合物係DGAT-1之強效抑制劑。本發明提供一種所需之新穎治療選項，其經由相比於市售治療劑係獨特之藥理機制起作用。此外，相比於DGAT-2，本發明之某些化合物選擇性抑制DGAT-1。作為選擇性DGAT-1抑制劑之本發明化合物之藥理特徵可尤其適用於治療肥胖及/或改善胰島素敏感性。
本發明提供一種式I化合物：
或其醫藥上可接受的鹽；其中R1 係選自由以下組成之群：H、F、Cl、-CF3 、-CH3 、-OH、-O(C1 -C4 烷基)、-O-環丙基、-O-CH2 -苯基、-OC(H)F2 、及-OCF3 ；R2 係選自由H及-CH3 組成之群；R3 係選自由H及-CH3 組成之群；限制條件為由R2 及R3 組成之群中之至少一者係H；且n係1、2、或3。
較佳地，本發明提供一種式I化合物：其中R1 係選自由以下組成之群：H、F、Cl、-CF3 、-CH3 、-OH、-OCH3 、-OCH2 CH3 、-OCH2 CH2 CH3 、-OCH2 CH(CH3 )2 、-O-環丙基、-O-CH2 -苯基、-OC(H)F2 、及-OCF3 ；n係1或3；且R2 及R3 各係H。
較佳地，本發明提供一種式I化合物或其醫藥上可接受的鹽，其中R1 係選自由以下組成之群：H、F、Cl、-CF3 、-CH3 、-OH、-OCH3 、-OCH2 CH3 、-OCH2 CH2 CH3 、-OCH2 CH(CH3 )2 、-O-環丙基、-O-CH2 -苯基、-OC(H)F2 、及-OCF3 ；且n係1。
較佳地，本發明提供一種式I化合物或其醫藥上可接受的鹽；其中R1 係選自由以下組成之群：H、F、Cl、-CF3 、-CH3 、-OH、-O(C1 -C4 烷基)、-O-環丙基、-O-CH2 -苯基、-OC(H)F2 、及-OCF3 ；且n係3。
較佳地，本發明提供一種式I化合物或其醫藥上可接受的鹽；其中R1 係選自由以下組成之群：H、F、Cl、-CF3 、-CH3 、-OH、-O(C1 -C4 烷基)、-O-環丙基、-O-CH2 -苯基、-OC(H)F2 、及-OCF3 ；n係3；且R3 係H。
較佳地，本發明提供一種式I化合物或其醫藥上可接受的鹽；其中R1 係選自由以下組成之群：H、F、Cl、-CF3 、-CH3 、-OH、-O(C1 -C4 烷基)、-O-環丙基、-O-CH2 -苯基、-OC(H)F2 、及-OCF3 ；n係1；且R3 係H。
以下各者可為較佳：
以其中R3 係H之式I化合物或其鹽較佳。
以其中n係1或3之式I化合物或其鹽較佳。
以其中n係1之式I化合物或其鹽較佳。
亦以其中R2 係H且R3 亦係H之式I化合物或其鹽較佳。
以其中化合物係R型異構體之式I化合物或其鹽較佳。
以其中R1 係選自由以下組成之群之式I化合物或其鹽較佳：F、Cl、-CF3 、-CH3 、-OH、-OCH3 、-OCH2 CH3 、-OCH2 CH2 CH3 、-OCH2 CH(CH3 )2 、-O-環丙基、-O-CH2 -苯基、-OC(H)F2 、及-OCF3 。
以其中R1 係選自由F、Cl、及-O(C1 -C4 烷基)組成之群之式I化合物或其鹽較佳。
以其中R1 係選自由Cl及-O(C1 -C4 烷基)組成之群之式I化合物或其鹽較佳。
以其中R1 係-OCH2 CH3 之式I化合物或其鹽較佳。
以其中R1 係Cl之式I化合物或其鹽較佳。
亦以其中R2 係CH3 且R3 係H之式I化合物或其鹽較佳。
以其中n係3之化合物較佳。
一較佳實施例係一種下式化合物：
或其醫藥上可接受的鹽。
一較佳實施例係一種下式化合物：
或其醫藥上可接受的鹽。
該等式I化合物可呈外消旋混合物之形式。較佳的異構體係「R」立體型，其在下文中如式II所示。
較佳地，本發明提供一種具有以下如式II所示之異構體構形之式I化合物，
或其醫藥上可接受的鹽。
可合成式I化合物，且隨後可藉由對掌性層析分離R型及S型異構體。可使用對掌性合成法合成式I化合物，以特定地合成較佳的R型異構體。
本發明之另一實施例提供一種本發明所主張之化合物或其醫藥上可接受的鹽於製造用於治療糖尿病及/或肥胖之藥物之用途。本發明之另一實施例係一種用於治療肥胖之本發明所主張之化合物或其鹽。本發明之另一實施例係一種用於治療之本發明所主張之化合物或其醫藥上可接受的鹽。本發明之又一實施例係一種用於治療糖尿病之本發明所主張之化合物或其醫藥上可接受的鹽。此外，本發明係關於一種用於改善哺乳動物之胰島素敏感性之本發明所主張之化合物。
本發明提供一種用於治療哺乳動物之肥胖之方法，其包括投與本發明所主張之化合物或其醫藥上可接受的鹽給該哺乳動物之步驟。本發明提供一種用於治療哺乳動物之糖尿病及/或改善胰島素敏感性之方法，其包括投與本發明所主張之化合物或其醫藥上可接受的鹽給該哺乳動物之步驟。本發明之另一實施例係一種用於治療哺乳動物之血脂異常之方法，其包括投與本發明所主張之化合物或其醫藥上可接受的鹽給該哺乳動物之步驟。本發明之另一實施例係一種用於治療哺乳動物之痤瘡之方法，其包括投與本發明所主張之化合物或其醫藥上可接受的鹽給該哺乳動物之步驟。本發明之另一實施例一種用於治療C型肝炎病毒(HCV)感染之方法，其包括投與本發明所主張之化合物或其醫藥上可接受的鹽給該哺乳動物之步驟。
在另一實施例中，本發明亦關於一種包含本發明所主張之化合物或其醫藥上可接受的鹽、及醫藥上可接受的載劑之醫藥組合物。另一實施例係一種另外包含第二藥劑之本發明醫藥組合物。
在另一實施例中，本發明係關於一種包含本發明所主張之化合物或其醫藥上可接受的鹽、醫藥上可接受的載劑、及羥丙基甲基纖維素之調配物。另一實施例係一種醫藥調配物，其中該羥丙基甲基纖維素係乙酸琥珀酸羥丙基甲基纖維素(HPMC-AS-L)。另一實施例係一種製備調配物之方法，其包括使本發明所主張之化合物或其醫藥上可接受的鹽與羥丙基甲基纖維素接觸。另一實施例係一種製備醫藥調配物(其中該羥丙基甲基纖維素係乙酸琥珀酸羥丙基甲基纖維素(HPMC-AS-L))之方法。
「醫藥上可接受的鹽」係指被認為可用於臨床及/或獸醫用途之本發明化合物之鹽。可藉由熟習此項技術者已知之方法製備此等鹽。醫藥上可接受的鹽及其常見之製備方法係相關技藝中已知。參見(例如)P. Stahl等人，HANDBOOK OF PHARMACEUTICAL SALTS: PROPERTIES,SELECTION AND USE,(VCHA/Wiley-VCH,2002)；S.M. Berge等人，「Pharmaceutical Salts」，Journal of Pharmaceutical Sciences,第66卷，第1號，1977年1月。較佳地，本發明化合物係製備成經由各種途徑投與之醫藥組合物。術語「醫藥上可接受的載劑」意指該載劑、稀釋劑、賦形劑及鹽與該組合物之其他成分係醫藥上可相容。最佳地，該等組合物係用於經口投藥。醫藥上可接受的組合物及其製備方法係相關技藝中已知。參見(例如)REMINGTON: THE SCIENCE AND PRACTICE OF PHARMACY(A. Gennaro等人編輯，第19版，Mack Publishing Co.，1995)。
可使用流程圖A、B、C、D、E、F、G、H、I、及J中所示且如製劑及實例中所述之方法來製備本發明化合物。使用SymyxDraw版本3.1命名該等製劑及實例。
除非另外指定，否則本文之流程圖、製劑、實例及步驟中所用之術語及縮寫具有其標準定義。
除非另外指定，否則在本發明流程圖、製劑、實例及步驟中所用之術語及縮寫具有其標準定義。例如，本文所使用之以下術語具有所指示之定義：N,N-二甲基甲醯胺(DMF)；甲基第三丁基醚(MTBE)；四氫呋喃(THF)；模擬移動床(SMB)層析；甲醇(MeOH)；氫氧化鋰(LiOH)；N-甲基-2-吡咯啶酮(NMP)；碘化銅(CuI)；[1,3-雙(2,6-二異丙苯基)亞咪唑-2-基](3-氯吡啶基)二氯化鈀(II)：碘化銅(I)(PEPPSITM )；N,N-二甲基乙胺(DMEA)；及1,3,5,2,4,6-三氧雜三磷雜環己烷、2,4,6-三丙基-2,4,6-三氧化物(T3P)。
在以上流程圖中，較佳地，R1 係選自由以下組成之群：H、F、Cl、-CF3 、-CH3 、-OH、-O(C1 -C4 烷基)、-O-環丙基、-O-CH2 -苯基、-OC(H)F2 、及-OCF3 。更佳地，R1 係-O(C1 -C4 烷基)或Cl。最佳地，R1 係-OCH2 CH3 或Cl。
製劑1
1-[(4-乙氧基苯甲醯基)胺基]環丙烷羧酸乙酯
將草醯氯(189 mL，2.17 mol)添加至含於二氯甲烷(3L)中之4-乙氧基苯甲酸(334.5 g，1.99 mol)及N,N-二甲基甲醯胺(1 mL)中。在25至26℃下歷時1小時後，於減壓下濃縮該混合物直至達到恆重。在冰水浴中，攪拌1-胺基環丙烷羧酸乙酯鹽酸鹽(300 g，1.81 mol)及二氯甲烷(2.5 L)。添加三乙胺(631 mL，4.53 mol)，且隨後添加含於二氯甲烷(500 mL)中之該醯基氯(約380 g)之溶液。在環境溫度下，攪拌該反應混合物約16小時。用1 N鹽酸水溶液(1 L)稀釋該反應。用二氯甲烷(1 L)萃取水層。用水(2 L)及鹽水(2 L)清洗有機層。在硫酸鈉上乾燥該溶液，過濾，並減壓濃縮。將該殘留物於己烷中調成漿液並過濾，以獲得呈象牙色粉末之標題化合物(478 g，95%)：MS(質譜分析)(m/z)：278(M+1)。
製劑2
1-[(4-乙氧基苯甲醯基)胺基]環丙烷羧酸
將1-[(4-乙氧基苯甲醯基)胺基]環丙烷羧酸乙酯(478 g，1.72 mol)添加至四氫呋喃(2 L)及甲醇(1 L)中。將氫氧化鋰(LiOH)(144.7 g，3.45 mol)溶於水(1 L)中，並將其添加至該混合物中。攪拌該反應混合物，同時加熱至55℃。將該反應冷卻至環境溫度並減壓濃縮。在移除2.5 L溶劑後，用水(2 L)稀釋該混合物，並將其浸入冰水浴中。用5 N鹽酸水溶液(750 mL)將pH調整至2。過濾該沉澱物，用水(2×2 L)清洗該濾餅並乾燥，以獲得呈白色粉末之標題化合物(425 g，99%)；MS(m/z)：250(M+1)。
製劑3
1-[(4-氯苯甲醯基)胺基]環丙烷羧酸乙酯
將1-胺基環丙烷羧酸乙酯(89.2 g，0.54 mol)添加至含於二氯甲烷(900 mL)中之二異丙基乙胺(187.86 mL，1.08 mol)中。將該燒瓶浸入冷水浴中，並緩慢添加4-氯苯甲醯氯(75.46 mL，0.59 mol)。添加完成後，移除該浴，使該反應平衡至20℃，並攪拌約2小時。依次用1 N鹽酸(HCl)、飽和碳酸氫鈉(NaHCO3 )、水、及鹽水清洗。在硫酸鈉(Na2 SO4 )上乾燥該有機層，過濾，並減壓濃縮。用庚烷將該殘留物調成漿液，過濾，並用庚烷沖洗，以獲得呈白色粉末之標題化合物(142 g，98%)；MS(m/z)：268(M+1)。
製劑4
1-[(4-氯苯甲醯基)胺基]環丙烷羧酸
將含於水(1.2 L)中之氫氧化鋰(123.05 g，2.93 mol)之溶液添加至含於1,4-二噁烷(2.4 L)中之1-[(4-氯苯甲醯基)胺基]環丙烷羧酸乙酯(157 g，0.58 mol)中。在環境溫度下，攪拌該反應混合物4小時，且隨後在減壓下濃縮。用水(1 L)稀釋該混合物，並將其浸入冰水浴中。用5 N HCl水溶液將pH調整至約2。過濾該沉澱物，用水(3×1 L)清洗該濾餅，並乾燥(50℃，真空烘箱)，以獲得呈白色粉末之標題化合物(132 g，94%)；MS(m/z)：240(M+1)。
製劑5
N-[(3R)-2-側氧基-1,3,4,5-四氫-1-苯并氮呯-3-基]胺基甲酸苄酯
合併甲醇(5000 mL)及5 N鹽酸水溶液(1393 mL，5.57 mol)，並歷時15分鐘加熱至35℃。歷時1小時滴加N-[(3R)-2-側氧基-1,3,4,5-四氫-1-苯并氮呯-3-基]胺基甲酸第三丁酯(Armstrong III、Joseph D等人，Tetrahedron Let. 35(20)第3239至3242頁(1994)(770 g，mmol，且可購得)。在減壓下將該混合物濃縮成白色固體。合併此固體與另外的(3R)-3-胺基-1,3,4,5-四氫-1-苯并氮呯-2-酮(不同批次，相同方法；660 g，3.78 mol)，並將其溶於水(2.5 L)中。將碳酸鈉(3.17 kg，3.18 mol)及乙腈(7.5 L)添加至所得之溶液中。歷時2小時滴加氯甲酸苄酯(7.14 moL，1.21 Kg)。在環境溫度下，2小時之後，添加乙酸乙酯(8 L)並過濾。用水(4.0 L)、乙腈(2.0 L)、及乙酸乙酯(3.0 L)清洗該濕濾餅。在減壓下乾燥該固體48小時，以獲得標題化合物(2.14 kg，105%)；MS(m/z)：310.8(M+1)。
製劑6
N-(2-硫代-1,3,4,5-四氫-1-苯并氮呯-3-基)胺基甲酸苄酯
將五硫化二磷(1.68 kg，7.57 mol)歷時30分鐘添加至含於2-甲基-四氫呋喃(15 L)中之N-[(3R)-2-側氧基-1,3,4,5-四氫-1-苯并氮呯-3-基]胺基甲酸苄酯(2.13 kg，6.88 mol)中。並歷時24小時加熱至50℃。冷卻至29℃，添加矽膠(2.0 Kg)，過濾，並減壓濃縮。將所得殘留物溶於氯仿(4.0 L)中，並經由層析(1:1之乙酸乙酯：己烷)純化，以獲得呈紅色固體之標題化合物(1.65 kg，73%)；MS(m/z)：327(M+1)。
製劑7
N-[2-(2,2-二甲氧基乙胺基)-4,5-二氫-3H-1-苯并氮呯-3-基]胺基甲酸苄酯
將N-(2-硫代-1,3,4,5-四氫-1-苯并氮呯-3-基)胺基甲酸苄酯(1.78 Kg，5.13 mol)及對甲苯磺酸單水合物(48.8 g，256 mmol)溶於二氯甲烷(12 L)中。在環境溫度下，歷時1小時滴加胺基乙醛縮二甲醇(2.70 Kg，25 mol)，並攪拌36小時。在環境溫度下，添加額外的胺基乙醛縮二甲醇(1.40 Kg，13 mol)並攪拌12小時。添加水(5.0 L)，分離該有機層，並用二氯甲烷(2.0 L)萃取該水層。合併該等有機層，並用水、飽和氯化銨(6.0 L)、及鹽水(4.0 L)清洗。通過矽藻土過濾該有機層，並減壓濃縮，以獲得呈黃色油之標題化合物(2.30 kg，118%)；MS(m/z)：398(M+1)。
製劑8
N-[(4R)-5,6-二氫-4H-咪唑并[1,2-a][1]苯并氮呯-4-基]胺基甲酸苄酯
在95℃下，將N-[2-(2,2-二甲氧基乙胺基)-4,5-二氫-3H-1-苯并氮呯-3-基]胺基甲酸苄酯(1.80 kg，4.1 mol)及甲酸(6.4 L)之混合物加熱80分鐘。在減壓下濃縮該混合物，以獲得黑色油，並將其分配於二氯甲烷(7.0 L)與水(5 L)之間。添加碳酸鈉直至該水層之pH為7。移除該有機層並用水(3X)清洗。用二氯甲烷萃取該等水層。合併該等有機層並減壓濃縮，以獲得黑色油。將2.297 kg該黑色油分成約250 g/份，並將各部份溶於二氯甲烷(250 mL)中。添加至3.5 kg Merck 9385，60 A，230至400篩目矽石中。以六管柱體積開始，利用75:25乙酸乙酯/庚烷洗脫目標化合物(較快洗脫的雜質首先洗脫)。接著，用5:95甲醇/乙酸乙酯洗脫，以移除殘留產物(回收1082 g)。使用以下對掌性HPLC條件分析產物混合物：4.6×150 mm Chiralpak AD-H管柱，15:85:0.2乙腈/3A級乙醇/二甲基乙胺流動相，0.6 mL/min流速，250 nmUV檢測。在此等條件下，觀測到異構體比例為3:2所需物/非所需物。將異構體混合物依30 mg/mL溶於20:80之乙腈/3A乙醇中。使用以下製備級對掌性HPLC條件純化異構體：8×40.5 cm Chiralpak AD(20微米)管柱，20:80:0.2乙腈/3A乙醇/N,N-二甲基乙胺(DMEA)流動相，490 mL/min流速，250 nm UV檢測，1.5 g(50 mL)注射液，4.6分鐘循環時間/使用穩態再循環(SSR)技術進行注射(J.H. Kennedy、M.D. Belvo、V.S. Sharp、J.D. Williams，Comparison of separation efficiency of early phase active pharmaceutical intermediates by steady state recycle and batch chromatographic techniques,Journal of Chromatography A,1046第55至60頁，(2004))。自0.4至0.9 min收集異構體1，且自2.4至4.2 min收集異構體2。所需異構體(異構體2；R型異構體)係第二洗出物：N-[(4R)-5,6-二氫-4H-咪唑并[1,2-a][1]苯并氮呯-4-基]胺基甲酸苄酯。在減壓下濃縮該含有溶離份之產物，以獲得呈白色固體之標題化合物(615 g，73%)；MS(m/z)：334(M+1)。
製劑9
(4R)-5,6-二氫-4H-咪唑并[1,2-a][1]苯并氮呯-4-胺二氫碘酸鹽
將碘三甲基矽烷(783 mL，5.49 mol)添加至二氯甲烷(800 mL)中，並在冰水浴中冷卻。將N-[(4R)-5,6-二氫-4H-咪唑并[1,2-a][1]苯并氮呯-4-基]胺基甲酸苄酯(610 g，1.83 mol)溶於二氯甲烷(1 L)中，並添加至該碘三甲基矽烷溶液中。在添加完成之後，移除該冰水浴且在環境溫度下攪拌該反應約16小時。在冰水浴中，攪拌己烷(6 L)與乙醇(1 L)之混合物。將該反應混合物小心添加至該攪拌中之己烷/乙醇混合物中，以避免起泡沫。在環境溫度下，攪拌其10分鐘。藉由過濾移除所得之固體，並用己烷(3×2L)清洗該濾餅，以獲得呈橘色自由流動之固體之標題化合物(817.1 g，98%)；MS(m/z)：200(M+1)。
製劑10
(4R)-5,6-二氫-4H-咪唑并[1,2-a][1]苯并氮呯-4-胺
在布氏(Bchi)氫化器中，合併N-[(4R)-5,6-二氫-4H-咪唑并[1,2-a][1]苯并氮呯-4-基]胺基甲酸苄酯(120.0 g，359.9 mmol)與乙醇(2.0 L)，並添加在甲苯(200 ml)中漿液化之10%碳載鈀(Pd/C)(10.0 g，9.4 mmol)。使該混合物氫化(60 psi，環境溫度)約64小時。通過矽藻土過濾該混合物，並用THF(300 ml)清洗該濾餅。在減壓下濃縮該濾出液，以獲得呈白色泡沫之標題化合物(60 g，84%)；MS(m/z)：200(M+1)。
實例1
N-[1-[[(4R)-5,6-二氫-4H-咪唑并[1,2-a][1]苯并氮呯-4-基]胺甲醯基]環丙基]-4-乙氧基苯甲醯胺
將(4R)-5,6-二氫-4H-咪唑并[1,2-a][1]苯并氮呯-4-胺二氫碘酸鹽(650 g，1.43 mol)、1-[(4-乙氧基苯甲醯基)胺基]環丙烷羧酸(427 g，1.71 mol)、及1-羥基苯并三唑水合物(262.5 g，1.71 mol)添加至二氯甲烷(3L)中。在冰水浴中攪拌該混合物，並緩慢添加二異丙基乙胺(797 mL，4.57 mol)。歷時10分鐘添加1-(3-二甲胺基丙基)-3-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽(333.6 g，1.71 mol)。移除該冰水浴，並在環境溫度下攪拌該混合物約16小時。用水(3×4 L)清洗該反應混合物。在硫酸鈉上乾燥該有機相。過濾並在減壓下濃縮該混合物至約1 L體積。用乙酸乙酯(4 L)稀釋該殘留物。在減壓下移除2 L溶劑。在環境溫度下，使該混合物靜置1小時。藉由過濾單離所得之沉澱物，並用己烷(2×2 L)清洗該濾餅，以獲得呈淡棕黃色固體之標題化合物(569.9 g，93%)；MS(m/z)：431(M+1)。H1 NMR(399.81 MHz,DMSO)：8.91(s,1H),7.95-7.93(d,J=7.5 Hz,1H),7.87-7.83(d,J=8.7 Hz,2H),7.49(d,J=1.4 Hz,1H),7.44-7.43(d,J=7.6 Hz,1H),7.38(m,2H),7.34-7.29(m,1H),7.00-6.96(d,J=8.7 Hz,2H),6.95(d,J=1.3 Hz,1H),4.65-4.60(m,1H),4.08(q,J=7.0 Hz,2H),2.70-2.65(m,1H),2.59-2.56(m,1H),2.33-2.28(m,1H),2.04-2.00(m,1H),1.34-1.31(m,4H),1.27-1.25(m,1H),1.03-0.98(m,1H),0.96-0.90(m,1H)。
實例2
4-氯-N-[1-[[(4R)-5,6-二氫-4H-咪唑并[1,2-a][1]苯并氮呯-4-基]胺甲醯基]環丙基]苯甲醯胺
將1-(3-二甲胺基丙基)-3-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽(29 g，151 mmol)添加至含於THF(300 mL)中之(4R)-5,6-二氫-4H-咪唑并[1,2-a][1]苯并氮呯-4-胺(30 g，151 mmol)、1-羥基苯并三唑(20 g，151 mmol)、三乙胺(41.97 mL，301 mmol)、及1-[(4-氯苯甲醯基)胺基]環丙烷羧酸(40 g，166 mmol)之10℃漿液中。移除該冰浴，使該混合物升溫至環境溫度，並攪拌其4小時。將該混合物倒入水(1.0 L)中，並用乙酸乙酯(1.0 L)萃取。用飽和碳酸氫鈉(500 mL)清洗該有機相，在硫酸鎂上乾燥，過濾，並減壓濃縮。使該殘留物於乙酸乙酯(300 mL)中成為漿液，並加熱至71℃。冷卻至環境溫度，過濾該沉澱物，並用乙酸乙酯(100 mL)清洗，以獲得標題化合物(38.8 g，61%)；MS(m/z)：421(M+1)。
在流程圖B中，該對掌性合成步驟產生「R型」異構體。
製劑11
(3R)-3-胺基-1,3,4,5-四氫-1-苯并氮呯-2-酮鹽酸鹽
使N-[(3R)-2-側氧基-1,3,4,5-四氫-1-苯并氮呯-3-基]胺基甲酸第三丁酯(基本上藉由Armstrong III、Joseph D等人，Tetrahedron Let. 35(20)第3239至3242頁(1994)中所述之方法製得，15 g，54.28 mmol)於1,4-二噁烷(100 mL，1.17 mol)中成為漿液，並於冰浴中使其冷卻。快速添加HCl的二噁烷溶液(100 mL，4.0 M)，並添加之後，移除該浴。3小時後，添加更多HCl的二噁烷溶液(100 mL，4.0 M)。攪拌該反應約16小時。藉由過濾收集該固體，用小體積之乙醚清洗其，並在烘箱中乾燥，以獲得呈白色固體之標題化合物(11.2 g，99%)；MS(m/z)：177(M+1)。
製劑12
N-[(3R)-2-側氧基-1,3,4,5-四氫-1-苯并氮呯-3-基]胺基甲酸苄酯
將碳酸鉀(K2 CO3 )(19.50 g，141.06 mmol))溶於水(36 mL)中，並將其添加至含於二氯甲烷(CH2 Cl2 )(270 mL)中之1-胺基-1,3,4,5-四氫-2H-苯并氮呯-2-酮HCl鹽(6 g，28.21 mmol)之溶液中。添加氯甲酸苄酯(6.24 mL，42.32 mmol)，並在環境溫度下充分攪拌該反應混合物約16小時。藉由過濾收集該沉澱物，用水及乙醚清洗，並在真空烘箱中乾燥，以獲得呈白色固體之標題化合物(7.2 g，82%)；MS(m/z)：311(M+1)。
製劑13
N-[(3R)-2-硫代-1,3,4,5-四氫-1-苯并氮呯-3-基]胺基甲酸苄酯
在環境溫度下，將勞森(Lawesson's)試劑(12.25 g，30.29 mmol)添加至含於四氫呋喃(470 mL)中之N-[(3R)-2-側氧基-1,3,4,5-四氫-1-苯并氮呯-3-基]胺基甲酸苄酯(9.4 g，30.29 mmol)之溶液中，並在氮氣下攪拌該反應約16小時。藉由過濾移除該沉澱物，並將其捨棄。在減壓下濃縮該濾出液，並將該殘留物溶於乙酸乙酯中。用水及鹽水清洗，在硫酸鈉上乾燥，並在減壓下濃縮該有機層，以獲得黏稠黃色油。將乙醚添加至該黏稠油中，並研磨以形成固體。藉由過濾收集該固體，並用乙醚清洗。用乙醚研磨該固體並藉由過濾收集，以獲得呈白色固體之標題化合物(7.28 g，74%)；MS(m/z)：349(M+23)。
製劑14
N-[(3R)-2-(2,2-二甲氧基乙胺基)-4,5-二氫-3H-1-苯并氮呯-3-基]胺基甲酸苄酯
於四氫呋喃(250 mL)中，合併N-[(3R)-2-硫代-1,3,4,5-四氫-1-苯并氮呯-3-基]胺基甲酸苄酯(8.71 g，26.68 mmol)、二氯化汞(HgCl2 )(9.42 g，34.69 mmol)、及胺基乙醛縮二甲醇(11.65 mL，106.73 mmol)，並歷時20分鐘加熱至55℃。使該混合物冷卻至環境溫度，並通過矽藻土過濾。用THF及乙酸乙酯清洗該濾餅，並在減壓下濃縮該濾出液。將所得油溶於二氯甲烷中，用溫水(4X)及鹽水清洗，在硫酸鈉上乾燥，並在減壓下濃縮該有機層，以獲得標題化合物(9.78 g，92%)之固體；MS(m/z)：398(M+1)。
製劑15
N-[(4R)-5,6-二氫-4H-咪唑并[1,2-a][1]苯并氮呯-4-基]胺基甲酸苄酯
將N-[(3R)-2-(2,2-二甲氧基乙胺基)-4,5-二氫-3H-1-苯并氮呯-3-基]胺基甲酸苄酯(9.78 g，24.61 mmol)溶於甲酸(60 mL，96%)中，並在100℃下加熱1.5小時。使該混合物冷卻，並藉由濾過玻璃棉塞來移除黑色沉積物。在減壓下濃縮該濾出液，將其倒入水中，並用1 M NaOH鹼化。添加乙酸乙酯至所得之沉澱物中，並分離該有機層。用乙酸乙酯萃取該水層。將該等有機層合併，清洗(鹽水)，在硫酸鈉上乾燥，並在減壓下濃縮，以獲得標題化合物(6.95 g，85%)；MS(m/z)：334(M+1)，97.8% ee，滯留時間：異構體1(R型異構體)為4.58 min；異構體2(S型異構體)為3.20 min。(Chiralpak AD-H管柱；含有0.2%二甲基乙胺之100%EtOH；流速1.0 mL/min；225 nm)。
製劑16
(4R)-5,6-二氫-4H-咪唑并[1,2-a][1]苯并氮呯-4-胺
將N-[(4R)-5,6-二氫-4H-咪唑并[1,2-a][1]苯并氮呯-4-基]胺基甲酸苄酯(6.95 g，20.85 mmol)溶於無水乙醇(375 mL，6.44 mol)中，並添加10%碳載鈀(Pd/C)(0.70 g，6.57 mmol)。將該混合物置於氫氣下(H2 )之帕爾(Parr)振盪器上達7小時(60 psi，環境溫度)。藉由過濾移除該觸媒，並在減壓下濃縮該濾出液，以獲得呈黃色固體之標題化合物(4.17 g，100%)；MS(m/z)：200(M+1)。
在流程圖C中，該合成步驟產生外消旋混合物。
製劑17
N-(2-硫代-1,3,4,5-四氫-1-苯并氮呯-3-基)胺基甲酸苄酯
將勞森(Lawesson's)試劑(6.52 g，16.11 mmol)添加至含於甲苯(120 mL)中之N-[(3R)-2-側氧基-1,3,4,5-四氫-1-苯并氮呯-3-基]胺基甲酸苄酯(10.0 g，32.22 mmol)之溶液中，並在100℃氮氣下加熱該反應2.5小時。使該反應冷卻並藉由過濾收集該沉澱物。清洗(乙醚)該濾餅並在真空烘箱中乾燥，以獲得標題化合物(5.5 g，16.8 mmol)。在減壓下濃縮該濾出液，並藉由急驟層析(30%己烷/CH2 Cl2 至100% CH2 Cl2 )使其純化，以獲得標題化合物(3.48 g，10.7 mmol)。該化合物係部份外消旋化。該標題化合物之總產率為85%；MS(m/z)：327(M+1)。
製劑18
N-[2-(2,2-二甲氧基乙胺基)-4,5-二氫-3H-1-苯并氮呯-3-基]胺基甲酸苄酯
以N-(2-硫代-1,3,4,5-四氫-1-苯并氮呯-3-基)胺基甲酸苄酯(4.2 g，12.87 mmol)作為起始物質，利用製劑14之方法獲得呈棕黃色固體之標題化合物(4.68 g，92%)；MS(m/z)：398(M+1)。
製劑19
N-(5,6-二氫-4H-咪唑并[1,2-a][1]苯并氮呯-4-基)胺基甲酸苄酯
以N-[2-(2,2-二甲氧基乙胺基)-4,5-二氫-3H-1-苯并氮呯-3-基]胺基甲酸苄酯(4.6 g，11.57 mmol)作為起始物質，利用製劑15之方法獲得標題化合物(3.8 g，88%)；MS(m/z)：334(M+1)。
製劑20
5,6-二氫-4H-咪唑并[1,2-a][1]苯并氮呯-4-胺
以N-(5,6-二氫-4H-咪唑并[1,2-a][1]苯并氮呯-4-基)胺基甲酸苄酯(3.36g，10.08 mmol)作為起始物質，利用製劑16之方法獲得呈黃色油之標題化合物(2.2 g，100%)；MS(m/z)：200(M+1)。
製劑21
N-[(3R)-1-丙酮基-2-側氧基-4,5-二氫-3H-1-苯并氮呯-3-基]胺基甲酸苄酯
將粉末狀氫氧化鉀(KOH)(0.72 g，12.89 mmol)添加至含於四氫呋喃(65 mL)中之N-[(3R)-2-側氧基-1,3,4,5-四氫-1-苯并氮呯-3-基]胺基甲酸苄酯(2.0 g，6.44 mmol)、氯丙酮(1.19 g，12.89 mmol)、及氟化四丁基銨(1.29 mL，1.29 mmol，1 M THF溶液)之溶液中。在環境溫度下，攪拌該混合物約16小時。在環境溫度下，將額外的氫氧化鉀(0.361 g，6.44 mmol)、氯丙酮(0.59 g，6.44 mmol)、氟化四丁基銨(0.65 mL，0.65 mmol，1 M THF溶液)及THF(20 mL)添加至該反應中，並攪拌約48小時。通過矽藻土過濾該反應混合物，並在減壓下濃縮該濾出液。藉由急驟層析(10%乙酸乙酯/己烷至100%乙酸乙酯)純化該殘留物，以獲得標題化合物(1.64 g，65%)；MS(m/z)：389(M+23)。
製劑22
N-(2-甲基-5,6-二氫-4H-咪唑并[1,2-a][1]苯并氮呯-4-基)胺基甲酸苄酯
於乙酸(20.0 mL)中合併N-[(3R)-1-丙酮基-2-側氧基-4,5-二氫-3H-1-苯并氮呯-3-基]胺基甲酸苄酯(0.7 g，1.91 mmol)與乙酸銨(2.94 g，38.2 mmol)，並在115℃下加熱24小時，且隨後在環境溫度下攪拌該混合物約16小時。將該反應混合物倒入冰水中，用氫氧化銨(28至30%)使其鹼化，並用二氯甲烷萃取。用水及鹽水清洗，在硫酸鈉上乾燥，並在減壓下濃縮該有機層。依次藉由急驟層析(10%乙酸乙酯/己烷至50%乙酸乙酯/己烷)、SCX管柱(甲醇，之後為10% 2N氨/甲醇/CH2 Cl2 )純化該殘留物，以獲得呈白色固體之標題化合物(0.21 g，32%)；MS(m/z)：348(M+1)。(基於由此中間體製得之最終化合物，該標題化合物係經部份外消旋化。)
製劑23
2-甲基-5,6-二氫-4H-咪唑并[1,2-a][1]苯并氮呯-4-胺
以N-(2-甲基-5,6-二氫-4H-咪唑并[1,2-a][1]苯并氮呯-4-基)胺基甲酸苄酯(0.19 g，0.55 mmol)作為起始物質，使用製劑16中之方法獲得標題化合物(0.082 g，69%)；MS(m/z)：214(M+1)。
製劑24
N-[(3R)-2-甲硫基-4,5-二氫-3H-1-苯并氮呯-3-基]胺基甲酸苄酯
將N-[(3R)-2-硫代-1,3,4,5-四氫-1-苯并氮呯-3-基]胺基甲酸苄酯(1.5 g，4.60 mmol)溶於THF(40 mL)中，冷卻至0℃，並一次性添加氫化鈉(NaH)(192.9 mg，4.83 mmol，60%礦物油溶液)。移除該浴，並在氮氣下攪拌該反應約1小時。在環境溫度下，添加碘甲烷(300 μL，4.83 mmol)並攪拌約1小時。在減壓下濃縮該反應，以移除大部份THF，用乙酸乙酯稀釋該殘留物，並用飽和碳酸氫鈉及鹽水清洗，在硫酸鈉上乾燥，並在減壓下濃縮該等有機層，以獲得呈白色固體之標題化合物(1.5 g，96%)；MS(m/z)：341(M+1)。
製劑25
N-(1-甲基-5,6-二氫-4H-咪唑并[1,2-a][1]苯并氮呯-4-基)胺基甲酸苄酯
於苯基醚-聯苯混合物(2 mL，6.53 mmol)(Dowtherm A)中，合併N-[(3R)-2-甲硫基-4,5-二氫-3H-1-苯并氮呯-3-基]胺基甲酸苄酯(500 mg，1.47 mmol)、炔丙胺(197.28 μL，2.94 mmol)、及對甲苯磺酸單水合物(30 mg，157.71 μmol)，並在180℃下攪拌該混合物約45分鐘。冷卻該反應，並依次添加乙醚(20 mL)及2 M HCl(20 mL)。攪拌幾分鐘，移除水層，並用2 N HCl(2X)萃取有機層。合併該等水層，並用氫氧化銨(28%)鹼化至鹼性。藉由過濾收集該沉澱物，用水清洗，並在真空烘箱中乾燥。藉由急驟層析(50%含於二氯甲烷中之5%氨/甲醇(2M)溶液至90%該5%溶液)純化該沉澱物，以獲得呈灰白色固體之標題化合物(358 mg，70%)；MS(m/z)：348(M+1)。滯留時間，異構體1(S型異構體)=3.3 min；異構體2(R型異構體)=3.7 min。(Chiralpak AD-H管柱；含0.2%二甲基乙胺之100% EtOH；流速1.0 mL/min；225 nm)。對掌性分析顯示約20%外消旋化。
製劑26
1-甲基-5,6-二氫-4H-咪唑并[1,2-a][1]苯并氮呯-4-胺
於無水乙醇(50 mL)中，合併N-(1-甲基-5,6-二氫-4H-咪唑并[1,2-a][1]苯并氮呯-4-基)胺基甲酸苄酯(0.99 g，2.85 mmol)與10% Pd/C(200 mg，1.88 mmol)。將該混合物置於帕爾振盪器上達7小時(氫氣(H2 )60 psi，環境溫度)。藉由過濾移除該觸媒，添加10% Pd/C(200 mg，1.88 mmol)至該濾出液，並再將該混合物置於帕爾振盪器上達7小時(60 psi，環境溫度)。7小時後，再添加10% Pd/C(189 mg，1.78 mmol)並再振盪7小時。藉由過濾移除該觸媒，並在減壓下濃縮該濾出液，以獲得標題化合物(0.53 g，87%)；MS(m/z)：214(M+1)。
在流程圖F中，R1 係選自由以下組成之群：H、F、Cl、-CF3 、-CH3 、-OH、-O(C1 -C4 烷基)、-O-環丙基、-O-CH2 -苯基、-OC(H)F2 、及-OCF3 ；R2 係選自由H及CH3 組成之群；R3 係選自由H及CH3 組成之群，限制條件為由R2 及R3 組成之群中至少一者係H；n=1、2、或3；且R4 可係CH3 或CH2 CH3 。R4 較佳為CH2 CH3 。
製劑27
1-溴-4-乙烯氧基苯
將二-μ-氯雙((1,2,5,6-η)-1,5-環辛二烯)二銥(2.9 g，4.34 mmol)添加至含於甲苯(430 mL)中之4-溴苯酚(75 g，433.5 mmol)、乙酸乙烯酯(80.5 mL，867.0 mmol)及碳酸鈉(27.6 g，260.10 mmol)之混合物中，並在100℃下加熱該混合物2.5小時。使該混合物冷卻至環境溫度，用乙酸乙酯(EtOAc)(300 mL)稀釋，並用水(400 mL)清洗一次。分離有機部份，並用鹽水(250 mL)清洗一次。在硫酸鈉上乾燥該物質，過濾，並減壓濃縮。藉由急驟層析(0%至5%EtOAc/Hex)純化該粗製混合物，以獲得標題化合物(63.5 g，74%)：GCMS：198。
製劑28
1-溴-4-(環丙氧基)苯
將二乙基鋅(1 M庚烷溶液，380 mL)歷時1小時緩慢添加至含於1,2-二氯乙烷(410 mL)中之1-溴-4-乙烯氧基苯(31.75 g，159.51 mmol)及氯碘代甲烷(101.3 g，574.2 mmol)之0℃溶液中，同時保持溫度低於5℃。在0至5℃下，攪拌該白色混合物2小時。在5℃下，用飽和氯化銨水溶液(400 mL，放熱)緩慢中止該反應，並分離該等層。用乙醚(2×200 mL)萃取該水層。合併該等有機層，用飽和氯化銨(400 ml)清洗，在硫酸鈉上乾燥，過濾，並減壓濃縮，以獲得呈油之標題化合物(33 g，97%)：GCMS：212。
製劑29
4-(環丙氧基)苯甲酸
將含於己烷(96.8 mL，154.9 mmol)中之1.6 M丁基鋰添加至含於四氫呋喃(500 mL)中之1-溴-4-(環丙氧基)苯(33 g，154.9 mmol)之-78℃溶液中，同時保持溫度低於-70℃。添加之後，在-78℃下攪拌該混合物20分鐘。分3份添加乾冰(464.6 mmol)，每隔5分鐘一份。在-78℃下，攪拌該混合物30分鐘。移除該冷卻浴，並用10%硫酸氫鈉(NaHSO4 )(200 mL)中止該混合物。使該混合物升溫至環境溫度，並用EtOAc(300 mL)萃取3次。合併該等有機物，並用鹽水清洗一次，在硫酸鈉上乾燥，過濾，並減壓濃縮。將該殘留物懸浮於乙醚中並過濾。在真空烘箱中乾燥該固體，以獲得標題化合物(12.9 g，47%)；MS(m/z)：179(M+1)。
製劑3 0
1-[[4-(環丙氧基)苯甲醯基]胺基]環丙烷羧酸乙酯
將草醯氯(23.8 mL，274.7 mmol)緩慢添加至含2滴DMF之含於二氯甲烷(350 mL)中之4-環丙氧基苯甲酸(24.5 g，137.3 mmol)之0℃懸浮液中。在添加之後，移除該冷卻浴，並攪拌2小時。在減壓下將該物質濃縮至乾。將該殘留物溶於二氯甲烷(500 mL)中，且隨後添加1-胺基環丙烷羧酸乙酯鹽酸鹽(Indofine #04-265，24.9 g，150.5 mmol)及三乙胺(57.2 mL，410.4 mmol)。在環境溫度下，攪拌該混合物約16小時。用10% NaHSO4 (250 mL)清洗該混合物一次。分離該有機部份並用二氯甲烷(200 mL)萃取該水性部份2次。合併該有機物，在硫酸鈉上乾燥，過濾，並減壓濃縮。藉由急驟層析(0%至45% EtOAc/Hex)純化該粗製混合物，以獲得標題化合物(33.7 g，85%)；MS(m/z)：290(M+1)。
製劑31
1-[(4-乙氧基苯甲醯基)胺基]環丙烷羧酸乙酯
於四氫呋喃(500 mL)中，合併4-乙氧基苯甲酸(10.0 g，60.18 mmol)、1-胺基環丙烷羧酸乙酯鹽酸鹽(市售，10.96 g，66.19 mmol)、1-(3-二甲胺基丙基)-3-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽(EDC)(13.84 g，72.21 mmol)、及1-羥基苯并三唑(HOBT)(9.76 g，72.21 mmol)。歷時3至5分鐘添加二異丙基乙胺(DIEA)(23.09 mL，132.39 mmol)，並在環境溫度及氮氣下攪拌該反應約16小時。用乙酸乙酯稀釋該混合物，依次用稀HCl、稀NaHCO3 、及鹽水清洗，在硫酸鈉上乾燥，並在減壓下濃縮該有機層。藉由自乙醇再結晶來純化該殘留物，以獲得呈白色固體之標題化合物(13.93 g，84%)；MS(m/z)：278(M+1)。
可基本上如製劑31之方法所述(使用第3欄中之試劑代替4-乙氧基苯甲酸)來製備表1中之製劑，且隨後可無需純化而使用或可經由再結晶(乙醇或甲醇)或急驟層析(梯度範圍為10至50% EtOAc/己烷)而純化。對於製劑36及37而言，使用1-胺基環戊烷羧酸甲酯鹽酸鹽(可購得)代替1-胺基環丙烷羧酸乙酯鹽酸鹽。藉由自乙醇再結晶來純化製劑32及35。藉由急驟層析純化製劑33及34。製劑36可無需純化而使用。藉由自甲醇再結晶來純化製劑37。
製劑38
1-[[4-(環丙氧基)苯甲醯基]胺基]環丙烷羧酸
將氫氧化鈉(174.7 mL，174.7 mmol)添加至含於乙醇(380 mL)中之1-(4-環丙氧基苯甲醯胺基)環丙烷羧酸乙酯(33.7 g，6.48 mmol)之溶液中，並在65℃下攪拌該混合物3小時。將該物質冷卻至環境溫度並減壓濃縮，以移除該乙醇。用10% NaHSO4 酸化該殘留物。過濾所得之固體，並用水(3X)及乙醚(2X)清洗。在真空烘箱中乾燥該物質，以獲得呈白色固體之標題化合物(29.9 g，98%)；MS(m/z)：262(M+1)。
製劑39
1-[(4-乙氧基苯甲醯基)胺基]環丙烷羧酸
將1-[(4-乙氧基苯甲醯基)胺基]環丙烷羧酸乙酯(4.25 g，15.33 mmol)溶於1,4-二噁烷(60 mL)中，並添加溶於水(30 mL)中之氫氧化鋰(LiOH)(3.22 g，76.63 mmol)。在環境溫度下，攪拌該反應約16小時。在減壓下濃縮該混合物，添加水，用5 N HCl酸化，並過濾收集沉澱物，以獲得呈白色固體之標題化合物(2.8 g，73%)；MS(m/z)：248(M+1)。
可基本上如製劑39之去保護方法所述來製備表2中之製劑。
實例3
N-[1-[[(4R)-5,6-二氫-4H-咪唑并[1,2-a][1]苯并氮呯-4-基]胺甲醯基]環丙基]-4-乙氧基苯甲醯胺
於四氫呋喃(40 mL)中，合併(4R)-5,6-二氫-4H-咪唑并[1,2-a][1]苯并氮呯-4-胺(0.50 g，2.51 mmol)、1-[(4-乙氧基苯甲醯基)胺基]環丙烷羧酸(0.75 mg，3.01 mmol)、1-羥基苯并三唑(407 mg，3.01 mmol)、及1-(3-二甲胺基丙基)-3-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽(577 mg，3.01 mmol)。添加二異丙基乙胺(0.53 mL，3.01 mmol)，並在環境溫度及氮氣下攪拌該反應約16小時。用乙酸乙酯稀釋該反應，用飽和碳酸氫鈉及鹽水清洗，在硫酸鈉上乾燥，並在減壓下濃縮該有機層。藉由急驟層析(25% EtOAc/己烷至100% EtOAc)純化該殘留物，以獲得標題化合物(860 mg，80%)；MS(m/z)：431(M+1)。
可基本上如實例3之方法所述來製備表3中之實例。
製劑46
4-(環丙氧基)-N-[1-(5,6-二氫-4H-咪唑并[1,2-a][1]苯并氮呯-4-基胺甲醯基)環丙基]苯甲醯胺
將三乙胺(1.26 mL，9.03 mmol)添加至含於二氯甲烷(8 mL)中之5,6-二氫-4H-咪唑并[1,2-a][1]苯并氮呯-4-胺(400 mg，2.01 mmol)、1-(4-環丙氧基苯甲醯胺基)環丙烷羧酸(577 mg，2.21 mmol)、1-(3-二甲胺基丙基)-3-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽(462 mg，2.41 mmol)及1-羥基苯并三唑水合物(369 mg，2.41 mmol)之混合物中，並在環境溫度下攪拌該混合物約16小時。藉由急驟層析(0%至5% MeOH/二氯甲烷)純化該粗製混合物，以獲得呈棕黃色泡沫之標題化合物(791 mg，89%)；MS(m/z)：443(M+1)。
實例16
N-[1-[[(4R)-5,6-二氫-4H-咪唑并[1,2-a][1]苯并氮呯-4-基]胺甲醯基]環丙基]-4-氟-苯甲醯胺
於N，N-二甲基甲醯胺(4 mL)中，合併(4R)-5,6-二氫-4H-咪唑并[1,2-a][1]苯并氮呯-4-胺(95.0 mg，0.48 mmol)、1-[(4-氟苯甲醯基)胺基]環丙烷羧酸(128.0 mg，0.57 mmol)、及六氟磷酸O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲鎓(HATU)(218.0 mg，0.57 mmol)。添加二異丙基乙胺(0.21 mL，1.19 mmol)並在環境溫度及氮氣下攪拌該反應約16小時。用乙酸乙酯稀釋該反應，用飽和碳酸氫鈉及鹽水清洗，在硫酸鈉上乾燥，並在減壓下濃縮該有機層。藉由急驟層析(3%氨(2M)溶液/甲醇/二氯甲烷)純化該殘留物，以獲得標題化合物(131.0 mg，68%)；MS(m/z)：405(M+1)。
實例17
N-[1-[[(4R)-5,6-二氫-4H-咪唑并[1,2-a][1]苯并氮呯-4-基]胺甲醯基]環丙基]苯甲醯胺
可基本上如實例16中之方法所述來製備實例17。MS(m/z)：387(M+1)。產率63%。
在流程圖G中，R1 係選自由以下組成之群：H、F、Cl、-CF3 、-CH3 、-OH、-O(C1 -C4 烷基)、-O-環丙基、-O-CH2 -苯基、-OC(H)F2 、及-OCF3 ；R2 係選自由H及CH3 組成之群；R3 係選自由H及CH3 組成之群，限制條件為由R2 及R3 組成之群中之至少一者係H；且n=1、2、或3。
製劑47
N-[1-[[(4R)-5,6-二氫-4H-咪唑并[1,2-a][1]苯并氮呯-4-基]胺甲醯基]環丙基]胺基甲酸第三丁酯
於四氫呋喃(10 mL)中，合併(4R)-5,6-二氫-4H-咪唑并[1,2-a][1]苯并氮呯-4-胺(570 mg，2.86 mmol)、1-(第三丁氧基羰基胺基)環丙烷羧酸(市售，633.19 mg，3.15 mmol)、1-羥基苯并三唑(464 mg，3.43 mmol)、及1-(3-二甲胺基丙基)-3-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽(658 mg；3.43 mmol)。添加二異丙基乙胺(599 μL，3.43 mmol)，並在環境溫度及氮氣下攪拌該反應約16小時。用乙酸乙酯稀釋該反應，用稀釋的碳酸氫鈉及鹽水清洗，在硫酸鈉上乾燥，並在減壓下濃縮該有機層。藉由急驟層析(25% EtOAc/己烷至85% EtOAc/己烷)純化該殘留物，以獲得呈白色固體之標題化合物(860 mg，79%)；MS(m/z)：383(M+1)。
製劑48
N-[1-(5,6-二氫-4H-咪唑并[1,2-a][1]苯并氮呯-4-基胺甲醯基)環丙基]胺基甲酸第三丁酯
可基本上如製劑47之方法所述來製備製劑48，但是使用5,6-二氫-4H-咪唑并[1,2-a][1]苯并氮呯-4-胺。藉由急驟層析(使用30至95%乙酸乙酯/己烷之梯度)進行純化。MS(m/z)：383(M+1)。
製劑49
N-[1-(5,6-二氫-4H-咪唑并[1,2-a][1]苯并氮呯-4-基胺甲醯基)環戊基]胺基甲酸第三丁酯
可基本上如製劑47之方法所述來製備製劑49，但是使用1-(第三丁氧基羰基胺基)環戊烷羧酸(可購得)。藉由急驟層析(使用20至90%乙酸乙酯/己烷之梯度)進行純化。MS(m/z)：411(M+1)。
製劑50
1-胺基-N-[(4R)-5,6-二氫-4H-咪唑并[1,2-a][1]苯并氮呯-4-基]環丙烷甲醯胺
將N-[1-[[(4R)-5,6-二氫-4H-咪唑并[1,2-a][1]苯并氮呯-4-基]胺甲醯基]環丙基]胺基甲酸第三丁酯(856 mg，2.24 mmol)溶於二氯甲烷(20 mL)中，並在冰浴中冷卻。添加三氟乙酸(10 mL，132.25 mmol)。移除該浴，並攪拌該反應1小時。在減壓下濃縮該混合物並添加乙酸乙酯。用1 N NaOH及鹽水清洗，在硫酸鈉上乾燥，並在減壓下濃縮該有機層，以獲得呈白色固體之標題化合物(470 mg，74%)；MS(m/z)：283(M+1)。
製劑51
1-胺基-N-(5,6-二氫-4H-咪唑并[1,2-a][1]苯并氮呯-4-基)環戊烷甲醯胺
可基本上如製劑50之方法所述來製備製劑51，但是使用N-[1-(5,6-二氫-4H-咪唑并[1,2-a][1]苯并氮呯-4-基胺甲醯基)環戊基]胺基甲酸第三丁酯。MS(m/z)：311(M-1)。
製劑52
1-胺基-N-(5,6-二氫-4H-咪唑并[1,2-a][1]苯并氮呯-4-基)環丙烷甲醯胺
可基本上如製劑50之方法所述來製備製劑52，但是使用N-[1-(5,6-二氫-4H-咪唑并[1,2-a][1]苯并氮呯-4-基胺甲醯基)環丙基]胺基甲酸第三丁酯。MS(m/z)：283(M+1)。
實例18
4-氯-N-[1-(5,6-二氫-4H-咪唑并[1,2-a][1]苯并氮呯-4-基胺甲醯基)環戊基]苯甲醯胺
於四氫呋喃(12 mL)中，合併1-胺基-N-(5,6-二氫-4H-咪唑并[1,2-a][1]苯并氮呯-4-基)環戊烷甲醯胺(158 mg，509.02 μmol)、4-氯苯甲酸(95.64 mg，610.83 μmol)、1-(3-二甲胺基丙基)-3-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽(117.10 mg，610.83 μmol)、及1-羥基苯并三唑(82.54 mg，610.83 μmol)。添加二異丙基乙胺(106.53 μL，610.83 μmol)並在環境溫度下攪拌該反應約16小時。用EtOAc稀釋該反應，用稀釋的碳酸氫鈉及鹽水清洗，在硫酸鈉上乾燥，並在減壓下濃縮該有機層。藉由急驟層析(0至40%之5%氨溶液/甲醇/二氯甲烷(2N)/二氯甲烷)純化該殘留物，以獲得標題化合物(101.0 mg，44%)；MS(m/z)：449(M+1)。
可基本上如實例18之方法所述來製備表4中之實例，但是使用第3欄中所列之試劑。利用急驟層析(其使用0至80%之5%氨(2M)溶液/甲醇/二氯甲烷/二氯甲烷之梯度)進行純化。
實例21
4-氯-N-[1-[[(4R)-5,6-二氫-4H-咪唑并[1,2-a][1]苯并氮呯-4-基]胺甲醯基]環丙基]苯甲醯胺
於N,N-二甲基甲醯胺(4 mL)中，合併1-胺基-N-[(4R)-5,6-二氫-4H-咪唑并[1,2-a][1]苯并氮呯-4-基]環丙烷甲醯胺(160 mg，0.57 mmol)、4-氯苯甲酸(106 mg，0.68 mmol)及六氟磷酸O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲鎓(HATU)(259.0 mg，0.68 mmol)。添加二異丙基乙胺(DIEA)(0.25 mL，1.42 mmol)，並在環境溫度及氮氣下攪拌該反應約5小時。用乙酸乙酯稀釋該反應，用碳酸氫鈉、水(2X)、及鹽水清洗，在硫酸鈉上乾燥，並在減壓下濃縮該有機層。藉由急驟層析(40% EtOAc/己烷至100% EtOAc)純化該殘留物，以獲得標題化合物(190.0 mg，80%)；MS(m/z)：421(M+1)。
可基本上如實例21之方法所述來製備表5中之實例，但是使用第3欄中之試劑代替4-氯苯甲酸，且使用約16小時之反應時間，並使用對掌性及外消旋胺類。藉由急驟層析進行純化，其使用(方法1；實例22、23、24、25、27、28、29、30、31及32)：0至100%之3%至5%氨(2M)溶液/甲醇/二氯甲烷/二氯甲烷之梯度，或(方法2；實例26)：25至90%之乙酸乙酯/己烷之梯度。
可藉由以下方法A、B、C、D、E及F中所列之層析條件來分離該外消旋混合物及單離該等異構體。
可將外消旋混合物分離成R型及S型異構體。對掌性層析之條件：
方法A
SFC-對掌性管柱：Chiralpak AD-H
洗脫劑：等濃度條件，其範圍為含0.2%異丙胺改質劑及CO2 之20至30%乙醇。
在225 nm波長下檢測信號
方法B
SFC-對掌性管柱：Chiralpak AD-H
洗脫劑：等濃度條件，其範圍為含0.2%異丙胺改質劑及CO2 之25至40%異丙醇。
在225 nm波長下檢測信號
方法C
SFC-對掌性管柱：Chiralpak OD-H
洗脫劑：含0.2%異丙胺改質劑及CO2 之20%乙醇之等濃度條件。
在225 nm波長下檢測信號
方法D
SFC-對掌性管柱：Chiralpak OD-H
洗脫劑：等濃度條件，其範圍為含0.2%異丙胺改質劑及CO2 之15至20%甲醇。
在225 nm波長下檢測信號
方法E
LC-對掌性管柱：Chiralpak AD-H
洗脫劑：含0.2%異丙胺改質劑之100%甲醇之等濃度條件。
在225 nm波長下檢測信號
方法F
SFC-對掌性管柱：Chiralcel OJ-H
洗脫劑：含0.2%異丙胺改質劑及CO2 之10%異丙醇之等濃度條件。
在225 nm波長下檢測信號
在表6中，使用該等層析方法A、B、C、D、E及F，將實例(第二欄)分離成異構體1(R型異構體)及2(S型異構體)。使用方法A分離實例29、30、20、8及6；使用方法B分離實例10、13、18、19及15；使用方法C分離實例14、12及11；使用方法D分離實例7；使用方法E分離實例9；使用方法F分離製劑47。異構體1(R型異構體)及2(S型異構體)、該異構體之實例號、及該等異構體之滯留時間係示於第1欄中。
實例49
4-氯-N-[1-[[(4R)-5,6-二氫-4H-咪唑并[1,2-a][1]苯并氮呯-4-基]胺甲醯基]環丙基]苯甲醯胺；4-甲基苯磺酸
在環境溫度下，將4-氯-N-[1-[[(4R)-(5,6-二氫-4H-咪唑并[1,2-a][1]苯并氮呯-4-基胺甲醯基]環丙基]苯甲醯胺(439 mg，1.04 mmol)溶於異丙醇(13.9 mL)中，並緩慢添加含於異丙醇(1.60 mL)中之4-甲基苯磺酸單水合物(198.40 mg，1.04 mmol)。攪拌該混合物約2小時並藉由過濾收集該固體。在真空烘箱中乾燥，以獲得呈白色固體之標題化合物(487 mg，79%)；MS(m/z)：421(M+23)。
可基本上如實例49中之方法所述來製備表7中之實例。
實例54
4-氯-N-[1-[[(4R)-5,6-二氫-4H-咪唑并[1,2-a][1]苯并氮呯-4-基]胺甲醯基]環丙基]苯甲醯胺鹽酸鹽
將4-氯-N-[1-[[(4R)-(5,6-二氫-4H-咪唑并[1,2-a][1]苯并氮呯-4-基胺甲醯基]環丙基]苯甲醯胺(350.0 mg，0.83 mmol)溶於甲醇(12.0 mL)中，並在冰浴中冷卻該溶液。滴加含於乙醚(3.33 mL，3.33 mmol)中之鹽酸(1 N)。移除該浴，攪拌該混合物30分鐘，並在減壓下濃縮，以獲得呈白色固體之標題化合物(323 mg，85%)；MS(m/z)：421(M+1)。
實例55
4-氯-N-[1-(5,6-二氫-4H-咪唑并[1,2-a][1]苯并氮呯-4-基胺甲醯基)環丙基]苯甲醯胺鹽酸鹽
可基本上如實例54之方法所述來製備實例55。MS(m/z)：421(M+1)。
實例56
N-[1-[[(4R)-5,6-二氫-4H-咪唑并[1,2-a][1]苯并氮呯-4-基]胺甲醯基]環丙基]-4-羥基苯甲醯胺
將4-苄氧基-N-[1-[[(4R)-5,6-二氫-4H-咪唑并[1,2-a][1]苯并氮呯-4-基]胺甲醯基]環丙基]苯甲醯胺(145 mg，294.37 μmol)溶於乙醇(20 mL)中，並在帕爾振盪器中利用10% Pd/C(22.8 mg，10.71 μmol)氫化18小時(60 psi，環境溫度)。過濾掉該觸媒，並在減壓下濃縮該濾出液，以獲得呈白色固體之標題化合物(107 mg，90%)；MS(m/z)：403(M+1)。
流程圖J描述N-[1-[[(4R)-5,6-二氫-4H-咪唑并[1,2-a][1]苯并氮呯-4-基]胺甲醯基]環丙基]-4-乙氧基-苯甲醯胺之另一合成法。
製劑53
5,6-二氫咪唑并[1,2-a][1]苯并氮呯-4-酮
在一反應器中注入630 kg DMF，並在氮氣流下攪拌1至2小時。注入171 kg碳酸銫及45.0 kg 3-(2-溴苯基)丙酸，在80至85℃下攪拌該混合物1至2小時，且隨後冷卻降至20至25℃。向反應器中注入27.0 kg咪唑及4.4 kg碘化銅，並在氮氣流下，於20至25℃下，攪拌該混合物1至2小時。將溫度調整為115至125℃，並充分攪拌20至24小時，[HPLC<3%，3-(2-溴苯基)丙酸]。將該反應冷卻至60℃，並緩慢注入181 kg乙醇。將反應冷卻至0至15℃，並攪拌該混合物8至10小時。藉由離心單離該固體雙產物。將該濕濾餅、184 kg乙醇及36 kg DMF注入該反應器中，並在0至15℃下攪拌0.5至1小時。藉由離心單離該固體雙產物。經由管狀過濾器移除顆粒，合併該等濾出液並轉移至反應器中。在減壓下將該混合物濃縮至675至720 L，且保持內部溫度低於65℃。冷卻至25至35℃，並將174 kg乙醇注入反應器中。攪拌10至15分鐘，並檢測溶液之水含量(KF值<0.5%)。
將95 kg亞硫醯氯緩慢注入上述溶液中，並將內部溫度保持在25至40℃下。歷時7至10小時將該混合物加熱至回流[HPLC<3% 3-(2-咪唑-1-基-苯基)-丙酸]。冷卻至20至35℃。過濾該混合物並用189 kg乙醇清洗該濾餅。
將合併的濾出液注入反應器中，並在減壓下攪拌濃縮至675至720 L，同時保持內部溫度為65℃。將該溫度調整至20至30℃。緩慢注入450 kg水，同時將內部溫度保持在20至30℃下，並攪拌10至15分鐘。
用庚烷(3×153 kg)清洗所得之混合物，並使用25% Na2 CO3 水溶液(45 kg)將該水層之pH調整為pH 8.0，同時保持內部溫度低於30℃。用MTBE(3×450 kg)萃取所得之混合物，清洗該等合併的MTBE層(1×369 kg 2% NH4 OH；2×362 kg H2 O)。在減壓下將該有機層濃縮至90至180 L，同時保持內部溫度低於40℃。經由管狀過濾器注入220 kg 2-MeTHF以移除顆粒)，在減壓下濃縮至90至180 L，同時保持內部溫度低於40℃。經由管狀過濾器注入214 kg 2-MeTHF以移除顆粒)(製程中之KF值<0.2%)，並將該溶液轉移至清潔塑料罐中，以獲得195.8 kg含於2-MeTHF中之3-(2-(1H-咪唑-1-基)苯基)丙酸乙酯之溶液。
將281 kg之2-MeTHF及31 kg二異丙胺注入一反應器中。冷卻至-80至-70℃，並緩慢注入86 kg含於正己烷中之正丁基鋰，同時將該溫度保持在-80至-70℃，並攪拌1至3小時。在-80至-70℃下，將195.8 kg含於2-MeTHF中之3-(2-(1H-咪唑-1-基)苯基)丙酸乙酯之溶液緩慢注入該反應器中，並在-80至-70℃下攪拌2至4小時(製程中之HPLC<3%，3-(2-(1H-咪唑-1-基)苯基)丙酸乙酯)。在-80至-70℃下，將47.8 kg乙醇緩慢注入該反應器中，並在-80至-70℃下攪拌0.5至2小時。將310 kg MTBE緩慢注入該反應器中，同時保持內部溫度低於-25℃。用292 kg之10%檸檬酸水溶液將pH調整為7.5。將該溫度調整為約0℃。分離出水層，並用202 kg之25% NaCl水溶液清洗有機層。分離該等層，在減壓下將該有機層濃縮至41至82 L，同時保持內部溫度低於40℃。用200 kg二氯甲烷萃取該水層。合併該等有機層，並在15至25℃下攪拌0.5至1小時。通過二氧化矽墊(20 kg)過濾，並用60 kg二氯甲烷清洗該墊。在減壓下將該濾出液濃縮至82至123 L，同時保持內部溫度低於40℃。將170 kg MTBE注入該殘留物中，並減壓濃縮至82至123 L，同時保持內部溫度低於50℃。注入208 kg MTBE，並攪拌10至15分鐘(製程中控制顯示10.8% 2-MeTHF及4.6%DCM)。注入279 kg MTBE，並減壓濃縮至82至123 L，同時保持內部溫度低於50℃(殘留2-MeTHF%=1.6%，殘留DCM%=2.7%)。將14.5 kg乙酸甲酯注入該殘留物中，並歷時30至60分鐘將該混合物加熱至回流。將該混合物冷卻至0至15℃，並在0至15℃下攪拌6至8小時。藉由離心單離該固體，並用35 kg MTBE清洗該濾餅。乾燥所得之固體，以獲得15.8 kg之5,6-二氫咪唑并[1,2-a][1]苯并氮呯-4-酮。LC/MS=199(M+1),419(2M+23)。
製劑54
5,6-二氫-4H-苯并[f]咪唑并[1,2-a]氮呯-4-酮肟
在氮氣氛下，將42 kg(5,6-二氫咪唑并[1,2-a][1]苯并氮呯-4-酮)、15.5 kg羥胺鹽酸鹽、21.5 kg無水乙酸鈉、及171 kg甲醇注入一反應器中。歷時20小時將所得之褐色懸浮液加熱至60至70℃(製程中之HPLC<3% 5,6-二氫咪唑并[1,2-a][1]苯并氮呯-4-酮)。冷卻該反應至23至25℃，並攪拌8小時。藉由離心單離該固體，用33 kg冷甲醇沖洗。將所得固體轉移至一反應器中，並在85至90℃下用210 kg水調漿2小時。藉由離心單離該固體，用85 kg水沖洗該固體。乾燥所得之固體，以獲得39.65 kg 5,6-二氫-4H-苯并[f]咪唑并[1,2-a]氮呯-4-酮肟。MS=214(M+1)。
製劑55
5,6-二氫-4H-咪唑并[1,2-a][1]苯并氮呯-4-胺二鹽酸鹽
將153 kg甲醇、9.6 kg 5,6-二氫-4H-苯并[f]咪唑并[1,2-a]氮呯-4-酮肟、1.9 kg氫氧化鈉固體、10 kg水及10 kg阮內鎳(Suzhou Tailida Sci-tech Co.,Ltd.)注入一具有惰性氣氛之反應器中。用氫氣將該反應器加壓至58至65 psi，並加熱至60至65℃。40小時之後，冷卻至10至20℃，並通過8 kg矽藻土墊過濾移除該鎳觸媒，且用33 kg甲醇沖洗。在真空下將該濾出液濃縮至1至2體積，同時保持該反應器溫度低於50℃。注入130 kg二氯甲烷，並濃縮至1至2體積，再注入130 kg二氯甲烷及104 kg水。在10至20℃下攪拌10至15 min，並在不攪拌下靜置30至35 min。分離該等層，並將該等有機層及水層轉移至分離槽中。用104 kg純化水及104 kg 25%氯化鈉溶液清洗該有機層。自水層分離有機層。用於相分離之初始反應器應經最少量之乙醇(20 kg)沖洗，並將該乙醇沖洗液添加至該有機層中。在真空下將該有機層濃縮至1至2體積，同時保持內部溫度低於40℃。注入57至58 kg乙醇並濃縮至1至2體積，同時保持內部溫度低於40℃，且重複該操作直至藉由殘留溶劑分析(GC)檢測不到二氯甲烷。注入3體積乙醇，並分析殘留二氯甲烷(GC)。如果未檢測到二氯甲烷，則冷卻至10至15℃，並緩慢注入100 kg含於乙酸乙酯中之4 N HCl。在10至20℃下攪拌3至8小時，過濾，並用25 kg乙醇沖洗濾餅。在50至55℃下乾燥該濾餅12至16小時，以獲得11.1 kg外消旋胺雙HCl鹽(5,6-二氫-4H-苯并[f]咪唑并[1,2-a]氮呯-4-胺1.5至2.0 HCl鹽)，MS=200(M+1)。
製劑56
(4R)-5,6-二氫-4H-咪唑并[1,2-a][1]苯并氮呯-4-胺
將35.9 kg 5,6-二氫-4H-咪唑并[1,2-a][1]苯并氮呯-4-胺二鹽酸鹽及453 ml水注入一反應器中。歷時30分鐘緩慢添加29.7 L 25% NH4 OH，同時保持溫度低於25℃。添加之後，pH為9且獲得透明褐色溶液。在22℃下，藉由添加31.5克晶種誘導結晶。攪拌該懸浮液8小時並冷卻至5℃。過濾，並用54 L冷水清洗該濾餅，並利用N2 /真空乾燥該過濾器中所得之濾餅31小時，此獲得5,6-二氫-4H-咪唑并[1,2-a][1]苯并氮呯-4-胺。將29 kg該粗製濾餅分批溶於145 L乙醇中。藉由真空蒸餾移除73 L溶劑。添加108 L乙醇並移除，並蒸餾133 L溶劑，直至最終濃度為2 L/kg。進行製程中之卡爾費休(Karl Fischer)分析，其測得最終的水含量係0.1重量%。
在Chiralpak AS-V(20 Qm，作為對掌性固定相(CSP))上進行5,6-二氫-4H-咪唑并[1,2-a][1]苯并氮呯-4-胺之SMB分離。流動相係乙醇/甲醇/N,N-二乙基甲胺=70:30:0.1 v:v:v。目標對映體(4R)-5,6-二氫-4H-咪唑并[1,2-a][1]苯并氮呯-4-胺係第二洗脫對映體。混合該萃取流之合於規格之溶離份，並在To65℃及p=300至79 mbar下濃縮至~20%殘留體積。用於濃縮之混合液係經由具有下游管線內過濾器polycap HD(5.0 μm)之木炭萃取柱ZetaCarbon R55SP來遞送。[Chiralpak AS-V，20 μm；流動相：乙醇/甲醇/N,N-二乙基甲胺=70:30:0.1 v:v:v；進料：~173 g粗製物/L洗脫劑(流動相)；萃取物：220.60 mL/min；萃餘液：46.22 mL/min；洗脫劑：245.03 mL/min；進料：21.80 mL/min；回收：382.38 mL/min；週期：1.00分鐘；溫度：室溫；壓力：~42 bar]。
製劑57
1-[(4-乙氧基苯甲醯基)胺基]環丙烷羧酸乙酯
將4-乙氧基苯甲酸(11.0 kg)及二氯甲烷(132.6 kg)注入800 L反應器中。歷時約45分鐘依次添加二甲基甲醯胺(34 mL)及草醯氯(9.2 kg)，同時將溫度保持在27±2℃下。在27±2℃下，攪拌反應器之內容物4.5小時。HPLC分析顯示2.5%的4-乙氧基苯甲酸。藉由真空蒸餾，移除過量的草醯氯。將該油質殘留物溶於二氯甲烷(55 kg)中。將1-胺基環丙烷-1-羧酸乙酯鹽酸鹽(10 kg)及二氯甲烷(110 kg)注入800 L反應器中。注入三乙胺(15.3 kg)，且在添加期間保持溫度低於10℃。歷時至少45分鐘添加該醯基氯溶液，同時保持溫度低於15℃。在23℃下，攪拌所得之混合物過夜(12小時)。HPLC分析顯示約85%純度。用1N HCl(33.4 L)萃取該產物漿液，並用二氯甲烷(44.3 kg)萃取該水層。用8% NaHCO3 水溶液(50.4 kg)清洗合併的有機層。用水(33.4 kg)及鹽水(33.4 kg)清洗該有機層。蒸餾出該二氯甲烷，直至餾出物體積達到約70 L，且隨後添加庚烷(164 kg)並形成良好的漿液。繼續蒸餾，直至該餾出物體積再達到70 L二氯甲烷。此真空蒸餾期間之批次溫度係低至0℃。在20±5℃下，攪拌該產物漿液1小時。過濾該產物，用庚烷(2×20 kg)清洗，在真空下乾燥，以獲得1-[(4-乙氧基苯甲醯基)胺基]環丙烷羧酸乙酯(14.6 kg，86%產率，藉由HPLC測得純度為93.5%)。
1-[(4-乙氧基苯甲醯基)胺基]環丙烷羧酸乙酯之再結晶：將粗製的1-[(4-乙氧基苯甲醯基)胺基]環丙烷羧酸乙酯(14.19 kg)及二氯甲烷(144 kg)注入800 L反應器中。在25±2℃下攪拌該混合物30分鐘，以獲得澄清溶液。歷時30分鐘將己烷(191 kg)添加至上述溶液中。在25±2℃下攪拌所得之產物漿液20分鐘，隨後在20±5℃下真空蒸餾移除二氯甲烷。再添加己烷(29 kg)以進行良好的漿液攪拌，並在25±2℃下攪拌1小時。過濾該等固體，並用己烷(19 kg，38 kg，29 kg及19 kg)清洗。如藉由HPLC分析所檢測，該1-[(4-乙氧基苯甲醯基)胺基]環丙烷羧酸乙酯之濕濾餅顯示無雜質(4-乙氧基苯甲酸酐)。在40℃及真空下乾燥23小時，以獲得呈白色鬆軟粉末之1-[(4-乙氧基苯甲醯基)胺基]環丙烷羧酸乙酯(12.21 kg，86%回收產率，藉由HPLC測得純度為99.9%)。質子NMR結果與該結構一致。
製劑58
1-[(4-乙氧基苯甲醯基)胺基]環丙烷羧酸
將1-[(4-乙氧基苯甲醯基)胺基]環丙烷羧酸乙酯(12.19 kg)、THF(45.5 kg)及MeOH(20.2 kg)注入一800 L反應器中。將含於水(25.6 kg)中之LiOH單水合物(2.49 kg)之溶液添加至該反應器中，在轉移期間保持溫度低於23℃。在20±3℃下，攪拌所得溶液過夜(19小時)。藉由真空蒸餾移除THF及MeOH，且隨後將水(67 kg)添加至反應器中。在17±2℃下，用5N HCl(約12 L)將該反應之pH調整至約pH 2.0。在17±2℃下，攪拌所得之產物漿液50分鐘。藉由過濾收集該等固體，並用水(3×40 Kg)清洗。在47℃及真空下乾燥該濕濾餅，以獲得呈白色粉末固體之1-[(4-乙氧基苯甲醯基)胺基]環丙烷羧酸(10.74 kg，98%產率，藉由HPLC測得純度係>99%，0.03% KF)。LC-MS(M+1=250)。
實例57
N-[1-[[(4R)-5,6-二氫-4H-咪唑并[1,2-a][1]苯并氮呯-4-基]胺甲醯基]環丙基]-4-乙氧基苯甲醯胺
經由具有下游管線內過濾器Polycap HD(5.0 μm)之Zeta-Carbon R55SP木炭萃取柱，將46.36 kg(4R)-5,6-二氫-4H-咪唑并[1,2-a][1]苯并氮呯-4-胺之乙醇溶液分幾批轉移至一20 L旋轉蒸發器中，並在55至58℃及p=130至079 mbar下濃縮，最後獲得固化殘留物。將該物質分成兩部份(4.524 kg及4.468 kg)。
將該第一部份溶於11 kg二氯甲烷中，並在55℃及600至200 mbar下再次濃縮。在蒸發至乾之後，將所得固體溶於11 kg二氯甲烷中，並對所得之溶液進行取樣以用於殘留乙醇之NMR測定。在55℃及p=600至200 mbar下蒸發至乾。再溶於11 kg二氯甲烷中。將有機溶液轉移至新罐中，用5.5 kg二氯甲烷沖洗該旋轉蒸發器，且合併該沖洗溶液與該第一濃縮物。
將該第二部份溶於11 kg二氯甲烷中，在55℃及p=600至200 mbar下蒸發並再溶於11 kg二氯甲烷中。蒸發至乾。再溶於11 kg二氯甲烷中，並取樣分析乙醇。在55℃及p=600至200 mbar下蒸發，且隨後再溶於11 kg二氯甲烷中。取樣分析殘留乙醇。與第一濃縮物合併。用5.5 kg二氯甲烷沖洗旋轉蒸發器；且隨後與其他濃縮物溶液合併。使160 L反應器惰性化並將合併液轉移至該反應器中。在20℃下，將34 L二氯甲烷、10.4 kg之1-[(4-乙氧基苯甲醯基)胺基]環丙烷羧酸及17.5 L三乙胺注入反應器中。歷時50分鐘將所得溶液冷卻至-20℃。在-20℃下，經由添加罐將27 L T3P歷時3小時緩慢添加至該反應混合物中。在-18℃下，攪拌該反應9小時。使該反應歷時40分鐘升溫至-3℃。歷時45分鐘添加42 L水，同時使溫度升至6℃，以形成鮮黃色懸浮液。在20℃下，45分鐘之後，該反應混合物仍係懸浮液。添加17 L二氯甲烷，以使固體在20分鐘後完全溶解。相分離之後(25分鐘)，移除該水層(pH 8)並用43 L水清洗該有機二氯甲烷相。相分離之後，移除該水層(pH 9)。用42 L水再次清洗該有機二氯甲烷層。相分離之後(15分鐘)，將該有機層轉移至新罐中。清洗該等水層，並轉移至該反應器中，並用21 L二氯甲烷清洗兩次。合併該反應器中之所有有機萃取相，並使用或在-10℃下儲存~5天。用甲醇沖洗該反應器，並經由管線內過濾器轉移至該反應器中。在65℃及p=1 bar至700 mbar下，濃縮該溶液至7.0 L/kg(4R)-5,6-二氫-4H-咪唑并[1,2-a][1]苯并氮呯-4-胺，移除73 L溶劑。在20℃下，攪拌所得濃縮物過夜，以形成懸浮液。用66.5 L經管線內過濾之乙酸異丙酯稀釋該懸浮液。在65℃及p=1 bar至300 mbar下，濃縮該懸浮液，以移除58 L溶劑。在65℃下，用67 L經管線內過濾之乙酸異丙酯稀釋該懸浮液，並在65℃及p=300至140 mbar下再次濃縮，以移除67 L溶劑。在所有蒸餾步驟期間之最高溫度係50℃。歷時45分鐘，將該經濃縮之懸浮液加熱至65℃。在65至62℃下，歷時35分鐘添加55 L經管線內過濾之正庚烷。歷時12小時中速攪拌該懸浮液，以冷卻至20℃。經由吸濾器過濾該懸浮液(快速過濾：16分鐘)。用25 L經管線內過濾之正庚烷沖洗該反應器，並使清洗懸浮液在濾餅上流過。吹乾該濾餅並在真空(p=200至100 mbar)下乾燥，以獲得16.8 kg之N-[1-[[(4R)-5,6-二氫-4H-咪唑并[1,2-a][1]苯并氮呯-4-基]胺甲醯基]環丙基]-4-乙氧基苯甲醯胺。實例57之物質之NMR係與實例1之物質一致。
製劑59
5,6-二氫-4H-咪唑并[1,2-a][1]苯并氮呯-4-胺
將(4S)-5,6-二氫-4H-咪唑并[1,2-a][1]苯并氮呯-4-胺(1.0 g，5.02 mmol)、第三丁醇鈉(492 mg，5.12 mmol)、PEPPSITM (37 mg，0.054 mmol)及攪拌棒添加至在空氣下之25 mL圓底燒瓶。用隔膜密封該燒瓶，並經由針使其附接至雙歧管。抽空該燒瓶，並用氮氣回填三次。經由注射器添加乙醇(12 mL)，並在60℃油浴中加熱24小時。自該油浴移除該燒瓶。添加1 g矽膠及400 mg矽-硫醇金屬清除劑並攪拌140分鐘。通過濾紙過濾該混合物，並經由旋轉蒸發濃縮該濾出液。在75℃真空下，乾燥該殘留物，以獲得1.0 g棕黃色固體。對掌性LC(在Chiralcel OD-H管柱上，含0.2% DMEA之10%乙醇/90%庚烷)-0.2% ee。ES/MS m/z 200.2[m+H]。
實例58
4-氯-N-[1-[[(4R)-5,6-二氫-4H-咪唑并[1,2-a][1]苯并氮呯-4-基]胺甲醯基]環丙基]苯甲醯胺
將(4R)-5,6-二氫-4H-咪唑并[1,2-a][1]苯并氮呯-4-胺之乙醇溶液濃縮至乾，再用於偶合反應。將15.0 g(4R)-5,6-二氫-4H-咪唑并[1,2-a][1]苯并氮呯-4-胺及18.03 g 1-[(4-氯苯甲醯基)胺基]環丙烷羧酸溶於120 ml二氯甲烷及32 ml三乙胺中。在冷卻至-20℃之後，歷時40分鐘添加53.0 ml(1.2當量)T3P，同時保持溫度為-19℃。使該反應過夜升溫至室溫。藉由HPLC測試確認起始物質完全耗盡。在於0至6℃下用水中止(75 ml水)且另外用二氯甲烷稀釋(在另外添加180 ml二氯甲烷之後，沉澱固體溶解)之後，分離該等相。用75 ml水清洗該有機層兩次，且隨後用75 ml二氯甲烷反萃取合併的水層一次。濃縮該等有機萃取相(420 ml)，以移除290 ml溶劑(開始沉澱出固體)。添加240 ml乙酸異丙酯，且隨後再移除250 ml溶劑。將所得之黏稠懸浮液升溫至70℃，添加30 ml正庚烷，並將該懸浮液歷時整晚緩慢冷卻至室溫。經由玻璃吸濾器過濾該懸浮液，並用正庚烷清洗該濾餅。在用旋轉蒸發器乾燥之後，獲得淡褐色固體，29.65 g(93.58%產率，HPLC(非對掌性)。LC-MS(質譜分析)(m/z)：421。
生物分析
DGAT-1酶試驗：利用活體外酶試驗(其使用在sf9昆蟲細胞中表現之重組人類DGAT-1作為酶來源)確認DGAT-1之抑制劑。DGAT-1酶係藉由利用含有DGAT-1表現載體之重組桿狀病毒感染細胞而產生。48小時後，藉由離心收集感染細胞，並再懸浮於20 mM冷NaCl中，並用杜恩斯(Dounce)勻漿器使其破裂。針對每公升感染細胞懸浮液，添加15毫升20 mM NaCl至細胞小球。藉由將該細胞提取物抽吸通過25號針頭來剪切該勻漿中之DNA。將經桿狀病毒感染之細胞勻漿中之DGAT-1活性與來自未感染細胞之勻漿相比較，以評估與sf9細胞相關之背景酶活性。
利用由Coleman所描述之改良試驗(Methods in Enzymology 209，第98至102頁(1992))，在96孔板中進行分析。簡言之，以自100 μM至1.7 nM最終濃度之1:3系列稀釋方案測試化合物。該酶反應混合物含有以下基質：250 μM 1,2-sn-二醯甘油(Avanti Polar Lipids)、5 μM14 C油醯CoA、及45 μM油醯CoA，其等係含於水性緩衝液(其含有150 mM Hepes緩衝液pH 7.4，0.7體積% TritonX-100及CompleteTM 蛋白酶抑制劑)中。每個反應孔使用2微克sf9勻漿。總反應體積為50 μl。在室溫下，培養反應25分鐘，且隨後藉由添加50 μl含58.8%異丙醇、14.7%正庚烷、11.5%水、12.5%乙醇、及2.5% 1 N氫氧化鈉之溶液來中止。隨後，添加100微升閃爍計數混合液，且8小時之後對板進行計數。化合物之濃度反應曲線及IC50 值係使用ActivityBase(IDBS)數據分析軟體自原始數據獲得。
本文所揭示之所有實例化合物在實質上如本文所述之DGAT-1酶試驗中顯示活性，且具有低於600 nM之IC50 測定值。針對化合物N-[1-[[(4R)-5,6-二氫-4H-咪唑并[1,2-a][1]苯并氮呯-4-基]胺甲醯基]環丙基]-4-乙氧基苯甲醯胺(實例1、3、57)，所測得之IC50 係134±8.0 nM(n=2；幾何平均值±標準誤差)，且針對化合物4-氯-N-[1-[[(4R)-5,6-二氫-4H-咪唑并[1,2-a][1]苯并氮呯-4-基]胺甲醯基]環丙基]苯甲醯胺(實例2、21、58)，所測得之IC50 係89.0±0.98 nM(n=3；幾何平均值±標準誤差)。
該DGAT-1酶試驗之結果顯示本文所揭示之實例係DGAT-1酶之強效抑制劑。
脂肪細胞甘油三酯合成試驗：此試驗測定化合物抑制完整小鼠3T3-L1脂肪細胞中之甘油三酯合成之能力。使用標準組織培養條件，在96孔板上，依25,000個細胞/孔之密度培養未分化的3T3-L1細胞。培養兩天後，藉由將該等細胞置於補充有0.5 mM 1-甲基-3-異丁基黃嘌呤(IBMX)、10 μg/mL胰島素及1 μM地塞米松(dexamethasone)之培養基中，使其分化成脂肪細胞。培養五天後，在僅補充有10 μg/mL胰島素之培養基中生長細胞。在已培養細胞12天後進行試驗。為開始該試驗，將培養基自該等細胞移除，並用50 μl含0.375 μCi/孔14 C乙酸鹽之OptiMEM培養基代替。隨後，在37℃下，於7.5% CO2 中培養細胞4小時。在此培養之最後，移除培養基，用Hank's平衡鹽清洗細胞一次，並將25 μl 0.7% TritonX-100至添加各孔中，並使其萃取該等細胞5分鐘。在此階段之最後，將75 μl含58.8%異丙醇、14.7%正庚烷、11.5%水、12.5%乙醇、及2.5% 1 N氫氧化鈉之溶液添加至各孔中，並在軌道式振盪器上搖晃孔板2分鐘。隨後，添加100 μl庚烷，且再搖晃孔板2分鐘。隨後，在低速離心機中旋轉孔板，以促進相分離，且移除50 μl疏水相以進行閃爍計數。化合物之濃度反應曲線及EC50 值係使用ActivityBase(IDBS)數據分析軟體自原始數據獲得。實質上藉由本文所述之脂肪細胞甘油三酯合成試驗方法來測試化合物。
針對化合物N-[1-[[(4R)-5,6-二氫-4H-咪唑并[1,2-a][1]苯并氮呯-4-基]胺甲醯基]環丙基]-4-乙氧基苯甲醯胺(實例1、3、57)，所測得之EC50 係175 nM±94.0(n=2；幾何平均值±標準誤差)。針對化合物4-氯-N-[1-[[(4R)-5,6-二氫-4H-咪唑并[1,2-a][1]苯并氮呯-4-基]胺甲醯基]環丙基]苯甲醯胺(實例2、21、58)，EC50 係213 nM±78.2(n=4；幾何平均值±標準誤差)。
該脂肪細胞甘油三酯合成試驗之結果顯示，該等化合物N-[1-[[(4R)-5,6-二氫-4H-咪唑并[1,2-a][1]苯并氮呯-4-基]胺甲醯基]環丙基]-4-乙氧基苯甲醯胺及4-氯-N-[1-[[(4R)-5,6-二氫-4H-咪唑并[1,2-a][1]苯并氮呯-4-基]胺甲醯基]環丙基]苯甲醯胺係完整小鼠3T3-L1脂肪細胞中之甘油三酯合成之強效抑制劑。
油團吸收模型：基於Buhman等人之實驗(Journal of Biological Chemistry 277第25474至25479頁(2002))(其顯示DGAT-1涉及自小腸之脂質吸收)，開發DGAT-1抑制之活體內模型，其測量在對大鼠經口投與橄欖油團後之血漿甘油三酯濃度。在評估化合物之前，使定期進食之雄性Sprague-Dawley大鼠(280至320 g，n=6/測試組)適應測試環境達至少一週。在化合物測試之前，使大鼠禁食16小時。經由經口管飼法在10%乙醇/90%玉米油之介質中依1 ml/kg之體積投與化合物。在投與化合物4小時之後，經由尾部靜脈收集0.5 ml血液樣本。在該4小時血液收集之後，即刻藉由經口管飼法投與3.0 ml橄欖油團。在投與化合物6小時之後，自尾部靜脈收集最終血液樣本。藉由離心自血液樣本製備血漿，並分析其甘油三酯含量(使用Hitachi 912臨床化學分析儀)及測試化合物濃度。測定減少血漿甘油三酯之增加達50%(ED50 )及80%(ED80 )之有效劑量。DGAT-1抑制顯示測試化合物在經介質處理之(對照)動物中抑制在該研究之4至6小時之間(在改良模型中為14至16小時之間)出現的血漿甘油三酯增加之能力。在改良模型中，在投與化合物14小時之後，收集第一血液樣本並投與油團。在投藥16小時之後，收集最終血液樣本。在此較長持續時間之模型中，於投與化合物10小時之後投與不含化合物之10%乙醇/90%玉米油介質，以與該較短持續時間之模型一致。實質上藉由本文所述之油團吸收大鼠模型方法來測試化合物。
針對化合物N-[1-[[(4R)-5,6-二氫-4H-咪唑并[1,2-a][1]苯并氮呯-4-基]胺甲醯基]環丙基]-4-乙氧基苯甲醯胺(實例1、3、57)，該三次實驗使用1、3、10及30 mg/kg之劑量。針對化合物4-氯-N-[1-[[(4R)-5,6-二氫-4H-咪唑并[1,2-a][1]苯并氮呯-4-基]胺甲醯基]環丙基]苯甲醯胺(實例2、21、58)，實驗1使用0.3、1、3、10及30 mg/kg之劑量，且針對實驗2及3，所使用之劑量係0.1、0.3、1、3及10 mg/kg。該等結果係示於表8及9中。
ND：未測得
使用統合分析法分析該數據。整體ED50 (ED80 )係以個別研究之ED50 (ED80 )之加權平均值來評估，且該等權重係ED50 (ED80 )評估值之方差之倒數。進行均一性Q-檢驗。如果該檢驗在0.10水準下係顯著，則使用混合效果模型，以包括研究間及研究內可變性。將該等權重調整為個別研究之ED50 (ED80 )之研究間方差及研究內方差之總和的倒數。藉由Paule-Mandel評估儀評估研究間方差。(參考文獻：Sutton A.J.、Jones D.R.、Abrams K.R.、Sheldon T.A.、及Song F.，Methods for Meta-analysis in Medical Research London,John Wiley,ISBN 0-471-49066-0(2000)；Dersimonian R.、及Kacker,R.，Random-effects model for meta-analysis of clinical trials: An update,Contemporary Clinical Trials 28第105至114頁(2007))。
表11：4-氯-N-[1-[[(4R)-5,6-二氫-4H-咪唑并[1,2-a][1]苯并氮呯-4-基]胺甲醯基]環丙基]苯甲醯胺(實例2、21、58)在該6小時油團研究中之統合分析。
該等結果顯示：在該油團吸收大鼠模型中，N-[1-[[(4R)-5,6-二氫-4H-咪唑并[1,2-a][1]苯并氮呯-4-基]胺甲醯基]環丙基]-4-乙氧基苯甲醯胺(實例1、3、57)及4-氯-N-[1-[[(4R)-5,6-二氫-4H-咪唑并[1,2-a][1]苯并氮呯-4-基]胺甲醯基]環丙基]苯甲醯胺(實例2、21、58)抑制血漿甘油三酯之增加。該等結果顯示對DGAT-1之抑制。
飲食誘導型肥胖小鼠模型：為測量對體重及食物攝入量之影響，在投餵高脂肪飲食(研究飲食D12492)之C57 B16小鼠中測試化合物。使經D12492餵養之十四週大的小鼠適應測試環境達2週(12小時光/暗週期)。在化合物測試前7天，藉由經口管飼法將適宜的介質依每天一次或兩次投與動物，以使該等小鼠適應操作。在投與介質的第6天，藉由定量核磁共振(QNMR)測量身體組成。在投與介質的第7天，根據體重隨機選擇動物，且歸入測試組(n=8)。在投與介質7天後，開始每天投與化合物兩次。在該暗/光週期之暗階段前的30分鐘，對動物投與化合物，且如果需要，則進入該暗階段5.5小時後再投與化合物。持續投與化合物15至22天，在此期間，每天測量食物攝入量及體重。在該實驗之第14天，藉由QNMR第二次測量身體組成。在第15天，於最後給藥後的0、2、4、及6小時，自各測試組之兩隻動物獲取末端血液，以用於測量血漿中之測試化合物濃度。
使用統合分析法分析該數據。對於體重增加(減少)百分比及脂肪量增加(減少)百分比而言，該統合分析中之治療效果之度量值係治療組與對照組之間的組平均差異。對於累積食物攝入量自對照之變化百分比(%CFICFC)而言，治療效果之度量值係%CFICFC本身。整體治療效果係以個別研究之治療效果之加權平均值來評估，且該等權重係個別研究之治療效果評估值之方差之倒數。進行均一性Q-檢驗。如果該檢驗在0.10水準下係顯著，則使用混合作用模型，以包括研究間及研究內可變性。將該等權重調整為個別研究之治療效果評估值之研究間方差及研究內方差之總和的倒數。藉由Paule-Mandel評估儀評估研究間方差。(參考文獻：Sutton A.J.、Jones D.R.、Abrams K.R.、Sheldon T.A.、及Song F.，Methods for Meta-analysis in Medical Research London,John Wiley,ISBN 0-471-49066-0(2000)；Dersimonian R.、及Kacker R.，Random-effects model for meta-analysis of clinical trials: An update,Contemporary Clinical Trials 28，第105至114頁(2007))。實質上藉由本文所述之飲食誘導型肥胖小鼠模型方法來測試化合物。
針對N-[1-[[(4R)-5,6-二氫-4H-咪唑并[1,2-a][1]苯并氮呯-4-基]胺甲醯基]環丙基]-4-乙氧基苯甲醯胺(實例1、3、57)，依1、3、10及30 mg/kg(兩次該等實驗)及3及30 mg/kg(一次該等實驗)之劑量進行三次實驗。因為該3及30 mg/kg劑量係該等實驗所共有，所以該等劑量係用於比較結果。
針對4-氯-N-[1-[[(4R)-5,6-二氫-4H-咪唑并[1,2-a][1]苯并氮呯-4-基]胺甲醯基]環丙基]苯甲醯胺(實例2、21、58)，依3、10、30及60 mg/kg及0.3、1、3及10 mg/kg之劑量進行兩次實驗。針對各實驗，每天投與該等劑量兩次。因為該3及10 mg/kg劑量係該等實驗所共有，所以該等劑量係用於比較結果。
表12、13及14顯示針對N-[1-[[(4R)-5,6-二氫-4H-咪唑并[1,2-a][1]苯并氮呯-4-基]胺甲醯基]環丙基]-4-乙氧基苯甲醯胺(實例1、3、57)之體重、脂肪量、及食物攝入量平均增加(正)或減少(負)百分比之結果。
表15、16及17顯示針對4-氯-N-[1-[[(4R)-5,6-二氫-4H-咪唑并[1,2-a][1]苯并氮呯-4-基]胺甲醯基]環丙基]苯甲醯胺(實例2、21、58)之體重、脂肪量、及食物攝入量平均增加(正)或減少(負)百分比之結果。
該等結果顯示N-[1-[[(4R)-5,6-二氫-4H-咪唑并[1,2-a][1]苯并氮呯-4-基]胺甲醯基]環丙基]-4-乙氧基苯甲醯胺(實例1、3、57)及4-氯-N-[1-[[(4R)-5,6-二氫-4H-咪唑并[1,2-a][1]苯并氮呯-4-基]胺甲醯基]環丙基]苯甲醯胺(實例2、21、58)在飲食誘導型肥胖小鼠模型中減少體重、脂肪量、及食物攝入量。
調配物
使用乙酸琥珀酸羥丙基甲基纖維素(HPMC-AS-L)(在pH 5.5下溶解之品級)製備調配物，且獲得30% N-[1-[[(4R)-5,6-二氫-4H-咪唑并[1,2-a][1]苯并氮呯-4-基]胺甲醯基]環丙基]-4-乙氧基苯甲醯胺/70% HPMC-AS-L固體分散液。
薄膜澆鑄：使用350.12 mg HPMC-AS-L、150 mg N-[1-[[(4R)-5,6-二氫-4H-咪唑并[1,2-a][1]苯并氮呯-4-基]胺甲醯基]環丙基]-4-乙氧基苯甲醯胺及5 mL 50/50 MeOH/丙酮溶液(作為溶劑)來製備樣品。將該溶液之部份分佈於已預熱至約60℃之平底皮氏(Petri)培養皿中。在55℃真空烘箱中保存該等薄膜3.5小時，以移除所有殘留溶劑。
將該等樣品自該培養皿刮下，並使用研缽及研杵減小粒度。該等HPMC聚合物形成彈性薄膜，其雖然容易移除，但並不形成可操作粉末，此使得難以另外減小粒度。用研缽及研杵研磨樣品，以形成均勻的聚結物尺寸。
使用GEA NERO SDMICROTM 噴霧乾燥器進行噴霧乾燥：HPMC-AS-L(25.7 g)；N-[1-[[(4R)-5,6-二氫-4H-咪唑并[1,2-a][1]苯并氮呯-4-基]胺甲醯基]環丙基]-4-乙氧基苯甲醯胺(11.0 g)；霧化氣體流量(~2.0 kg/h)；溶劑流動期間之出口溫度(52℃)；及溶液流速(~8至10 mL/min)。使用丙酮：甲醇之70:30混合物作為該溶劑。針對每次操作而言，該系統之氮氣質量流量係32.5 kg/h。每次操作使用約4重量%固體之溶液。可使用更高重量百分比之固體。

Claims (14)

  1. 一種下式化合物， 或其醫藥上可接受的鹽；其中R1 係選自由以下組成之群：H、F、Cl、-CF3 、-CH3 、-OH、-O(C1 -C4 烷基)、-O-環丙基、-O-CH2 -苯基、-OC(H)F2 、及-OCF3 ；R2 係選自由H及-CH3 組成之群；R3 係選自由H及-CH3 組成之群；限制條件為由R2 及R3 組成之群中之至少一者係H；且n係1、2、或3。
  2. 如請求項1之化合物或其鹽，其中n係1或3。
  3. 如請求項1或2之化合物或其鹽，其中n係1。
  4. 如請求項1之化合物或其鹽，其中R3 係H。
  5. 如請求項4之化合物或其鹽，其中R2 係H。
  6. 如請求項2之化合物或其鹽，其中R1 係選自由以下組成之群：H、F、Cl、-CF3 、-CH3 、-OH、-OCH3 、-OCH2 CH3 、-OCH2 CH2 CH3 、-OCH2 CH(CH3 )2 、-O-環丙基、-O-CH2 -苯基、-OC(H)F2 、及-OCF3 。
  7. 如請求項2之化合物或其鹽，其中R1 係選自由Cl 及-O-(C1 -C4 烷基)組成之群。
  8. 如請求項7之化合物或其鹽，其中R1 係Cl。
  9. 如請求項7之化合物或其鹽，其中R1 係-OCH2 CH3 。
  10. 如請求項1之化合物或其鹽，其中該化合物係R型異構體。
  11. 一種下式結構， 或其醫藥上可接受的鹽。
  12. 一種下式結構， 或其醫藥上可接受的鹽。
  13. 一種醫藥組合物，其包含醫藥上可接受的載劑及如請求項1至12中任一項之化合物或其醫藥上可接受的鹽。
  14. 如請求項13之醫藥組合物，其另外包含第二藥劑。
TW099141941A 2009-12-10 2010-12-02 二醯甘油醯基轉移酶抑制劑 TWI392680B (zh)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US28531709P 2009-12-10 2009-12-10

Publications (2)

Publication Number Publication Date
TW201130844A TW201130844A (en) 2011-09-16
TWI392680B true TWI392680B (zh) 2013-04-11

Family

ID=43569741

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
TW099141941A TWI392680B (zh) 2009-12-10 2010-12-02 二醯甘油醯基轉移酶抑制劑

Country Status (14)

Country Link
US (1) US8299061B2 (zh)
EP (1) EP2509981B1 (zh)
JP (1) JP5631411B2 (zh)
KR (1) KR101395428B1 (zh)
CN (1) CN102666543B (zh)
AR (1) AR079170A1 (zh)
AU (1) AU2010328410B2 (zh)
BR (1) BR112012013918A2 (zh)
CA (1) CA2783684C (zh)
EA (1) EA020128B1 (zh)
ES (1) ES2509922T3 (zh)
MX (1) MX2012006646A (zh)
TW (1) TWI392680B (zh)
WO (1) WO2011071840A1 (zh)

Families Citing this family (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2012009698A1 (en) 2010-07-16 2012-01-19 Abbott Laboratories Phosphine ligands for catalytic reactions
BR112013001132A2 (pt) 2010-07-16 2016-05-17 Abbvie Inc processo para preparação de compostos antivirais
US8975443B2 (en) 2010-07-16 2015-03-10 Abbvie Inc. Phosphine ligands for catalytic reactions
US9255074B2 (en) 2010-07-16 2016-02-09 Abbvie Inc. Process for preparing antiviral compounds
WO2015120610A1 (en) * 2014-02-14 2015-08-20 Eli Lilly And Company Gpr142 agonist compound
CN105153195B (zh) * 2015-09-01 2017-09-26 汤文建 一种三环吡唑[1,5‑d][1,4]苯并氧氮杂卓酮衍生物及其制备方法与用途
SG11202113330VA (en) * 2019-05-31 2021-12-30 Medshine Discovery Inc Bicyclic compound as rip-1 kinase inhibitor and application thereof

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1995014671A1 (en) * 1993-11-22 1995-06-01 Merck & Co., Inc. 3-acylaminobenzazepines
US5468743A (en) * 1991-06-13 1995-11-21 Janssen Pharmaceutica N.V. Imidazo[2,1-b]benzazepine derivatives, compositions and method of use

Family Cites Families (18)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4847248A (en) * 1986-12-23 1989-07-11 Merck & Co., Inc. 1,4-Benzodiazepines with 5- and 6-membered heterocyclic rings and their use as cholecystokinins and gastrin antagonists
US4735941A (en) * 1986-12-23 1988-04-05 Merck & Co., Inc. 1,4-benzodiazepines with 5- and 6-membered heterocyclic rings, useful as gastrointestinal and CNS agents
EP0272866A1 (en) 1986-12-23 1988-06-29 Merck & Co. Inc. 1,4-Benzodiazepines with 5-membered heterocyclic rings
CA2071092A1 (en) 1991-06-14 1992-12-15 Roger M. Freidinger 1,4-benzodiazepines with 5-membered heterocyclic rings
JP2840454B2 (ja) * 1993-11-22 1998-12-24 メルク エンド カンパニー インコーポレーテッド ベンゾジアゼピン類
US5439906A (en) * 1993-11-22 1995-08-08 Merck & Co., Inc. Antiarrhythmic benzodiazepines
US5834464A (en) * 1994-11-18 1998-11-10 Merck & Co., Inc. Imidazolinobenzodiazepines
NZ335583A (en) 1996-12-23 2001-03-30 Lilly Co Eli Cycloalkyl, lactam, lactone and analogs, and pharmaceutical compositions
GB0012671D0 (en) * 2000-05-24 2000-07-19 Merck Sharp & Dohme Therapeutic agents
US7572783B2 (en) * 2004-08-13 2009-08-11 Amgen Inc. Substituted benzofused heterocycles
JP2008540485A (ja) * 2005-05-10 2008-11-20 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲー ジアシルグリセロールアシルトランスフェラーゼ阻害剤
WO2007016087A2 (en) 2005-07-29 2007-02-08 Merck & Co., Inc. Heterocyclic benzodiazepine cgrp receptor antagonists
US7569590B2 (en) * 2006-09-19 2009-08-04 Bristol-Myers Squibb Company Use of thianecarboxamides as dgat inhibitors
US8324241B2 (en) 2008-04-11 2012-12-04 Bristol-Myers Squibb Company Triazolo compounds useful as DGAT1 inhibitors
WO2009126861A2 (en) 2008-04-11 2009-10-15 Bristol-Myers Squibb Company Triazolopyridine compounds useful as dgat1 inhibitors
JP2010116364A (ja) 2008-11-14 2010-05-27 Banyu Pharmaceut Co Ltd アゼピノン誘導体
AU2010207190A1 (en) 2009-01-23 2011-08-04 Msd K.K. Benzodiazepin-2-on derivatives
CA2752739A1 (en) 2009-02-17 2010-08-26 Msd K.K. 1,4-benzodiazepin-2-on derivatives

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5468743A (en) * 1991-06-13 1995-11-21 Janssen Pharmaceutica N.V. Imidazo[2,1-b]benzazepine derivatives, compositions and method of use
WO1995014671A1 (en) * 1993-11-22 1995-06-01 Merck & Co., Inc. 3-acylaminobenzazepines

Also Published As

Publication number Publication date
CA2783684C (en) 2014-02-25
WO2011071840A1 (en) 2011-06-16
EP2509981B1 (en) 2014-08-06
US20110144091A1 (en) 2011-06-16
CA2783684A1 (en) 2011-06-16
ES2509922T3 (es) 2014-10-20
CN102666543A (zh) 2012-09-12
JP2013513607A (ja) 2013-04-22
MX2012006646A (es) 2012-06-25
AU2010328410A1 (en) 2012-07-26
JP5631411B2 (ja) 2014-11-26
TW201130844A (en) 2011-09-16
AU2010328410B2 (en) 2014-02-06
US8299061B2 (en) 2012-10-30
EA020128B1 (ru) 2014-08-29
AR079170A1 (es) 2011-12-28
EA201200868A1 (ru) 2012-12-28
BR112012013918A2 (pt) 2016-04-26
CN102666543B (zh) 2014-12-24
EP2509981A1 (en) 2012-10-17
KR101395428B1 (ko) 2014-05-14
KR20120099457A (ko) 2012-09-10

Similar Documents

Publication Publication Date Title
TWI392680B (zh) 二醯甘油醯基轉移酶抑制劑
JP6313416B2 (ja) Ｉｄｏ阻害剤
US20220073516A1 (en) Crystalline spirocyclic compound, a dosage form containing, a method for using in treatment of disease, and a method for recrystallizing
JP2006523219A (ja) プロテインキナーゼインヒビター
CA2220407A1 (fr) Diazepino-indoles inhibiteurs de phosphodiesterases 4
TWI531573B (zh) 新穎反轉模擬物之化合物及其用途
CA3095451A1 (en) Ox2r compounds
JP2024517678A (ja) ソルチリン活性の修飾物質
EP0785789B1 (fr) Diazepino-indoles inhibiteurs de phosphodiesterases iv
EP3458061B1 (en) Potent and selective mu opioid receptor modulators
CN115803029A (zh) 作为trpa1抑制剂的四唑衍生物
WO2016124129A1 (zh) 二氮杂-苯并荧蒽类化合物
CN114555601B (zh) 新颖的四唑类
TW202216729A (zh) 作為trpa1抑制劑之四唑衍生物
CA2995188A1 (en) Piperazine derivative
WO2014062204A1 (en) Matrix metalloproteinase inhibitors and methods for the treatment of pain and other diseases
CN114929712B (zh) 作为trpa1抑制剂的噻吩并嘧啶酮
IL301706A (en) Tetrazole history as TRPA1 inhibitors
CN117430561A (zh) 一种gpr139受体激动剂及其制备方法

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Annulment or lapse of patent due to non-payment of fees