KR101395428B1

KR101395428B1 - 디아실글리세롤 아실트랜스퍼라제의 억제제

Info

Publication number: KR101395428B1
Application number: KR1020127014795A
Authority: KR
Inventors: 매클린 브라이언 아놀드; 토마스 제임스 뷰챔프; 에밀리 제인 캐나다; 에릭 제임스 헴브레; 지안리앙 루; 존 로버트 리조; 존 메너트 스카우스; 큉 쉬
Original assignee: 일라이 릴리 앤드 캄파니
Priority date: 2009-12-10
Filing date: 2010-12-07
Publication date: 2014-05-14
Also published as: CN102666543B; US8299061B2; BR112012013918A2; US20110144091A1; CA2783684C; TWI392680B; AU2010328410A1; EP2509981A1; WO2011071840A1; TW201130844A; CA2783684A1; JP5631411B2; KR20120099457A; CN102666543A; MX2012006646A; ES2509922T3; AU2010328410B2; EA201200868A1; EA020128B1; EP2509981B1

Abstract

본 발명은 디아실글리세롤 아실트랜스퍼라제 1 (DGAT-1)의 억제제로서의 하기 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염뿐 아니라, 비만의 치료 방법, 당뇨병의 치료 방법 및 제약 조성물을 제공한다.
<화학식 I>

Description

디아실글리세롤 아실트랜스퍼라제의 억제제{INHIBITORS OF DIACYLGLYCEROL ACYLTRANSFERASE}

본 발명은 디아실글리세롤 아실트랜스퍼라제 1 (DGAT-1)을 억제하는 화합물을 제공한다.

트리글리세리드 합성에서의 핵심 효소인 DGAT-1의 억제는 비만의 치료 및/또는 인슐린 감수성의 개선에 대한 신규한 접근법을 제공할 수 있는 것으로 제안되어 왔다. DGAT는 소분자 억제제에 대한 탁월한 표적이 되는 것으로 보고되어 있기는 하나, 제한된 수의 화합물만이 DGAT-1 활성을 억제하는 것으로 보고되었다. 공지된 DGAT-1 억제제는 제약상 용도에 대하여 승인되지 않았다. 따라서, DGAT-1을 억제하는 더 많은 소분자에 대한 수요가 존재한다. 바람직한 약리학상 프로파일을 갖는 DGAT-1 억제제 화합물에 대한 특정한 수요가 존재한다.

DGAT의 조절제인 것으로 보고된 화합물은 US 2008/0090876 (Cheng et.al.)에 개시되어 있다. 쳉(Cheng)의 출원에 개시된 화합물은 티안카르복스아미드이다. 시클로알킬, 락탐, 락톤 및 관련 화합물은 WO98/28268 (We et.al.)에서 알츠하이머 질환의 치료에 사용하기 위한 β-아밀로이드 펩티드 방출의 억제제로서 보고되어 있다. 아실벤즈아제핀은 미국 특허 5,696,111 (Balwin et.al.)에서 부정맥을 치료하는데 사용될 수 있는 화합물로서 개시되어 있다. 반대로, 본원에서 청구된 이미다조-벤즈아제핀은 쳉, 위(We) 및 발윈(Balwin)의 화합물과는 구조적으로 상이하다. 추가로, 위 또는 발윈의 화합물이 DGAT-1 억제제로서 사용될 수 있다고 교시 또는 시사되어 있지도 않다. 아제피논 화합물은 2010년 5월 20일자로 공개된 WO 2010/056496에서 DGAT의 조절제인 것으로 보고되어 있다. WO 2010/056496에 보고된 아제피논 화합물은 본원에서 청구되는 이미다조-벤즈아제핀과는 구조적으로 상이하다.

본 발명의 화합물은 DGAT-1의 유효한 억제제이다. 본 발명은 시판 치료제에 비하여 독특한 약리학상 기전을 통하여 작용하게 되는 목적하는 신규한 치료 옵션을 제공한다. 추가로, 본 발명의 특정 화합물은 DGAT-2에 비하여 DGAT-1을 선택적으로 억제한다. 본 발명의 화합물의 약리학상 프로파일은 선택적 DGAT-1 억제제로서 비만의 치료 및/또는 인슐린 감수성의 개선에 사용하기에 특히 바람직할 수 있다.

본 발명은 하기 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다:

<화학식 I>

상기 식에서,

R¹은 H, F, Cl, -CF₃, -CH₃, -OH, -O(C₁-C₄ 알킬), -O-시클로프로필, -O-CH₂-페닐, -OC(H)F₂ 및 -OCF₃으로 이루어진 군으로부터 선택되며;

R²는 H 및 -CH₃으로 이루어진 군으로부터 선택되며;

R³은 H 및 -CH₃으로 이루어진 군으로부터 선택되며;

단, R² 및 R³으로 이루어진 군 중 적어도 하나는 H이고;

n은 1, 2, 또는 3이다.

바람직하게는, 본 발명은 R¹이 H, F, Cl, -CF₃, -CH₃, -OH, -OCH₃, -OCH₂CH₃, -OCH₂CH₂CH₃, -OCH₂CH(CH₃)₂, -O-시클로프로필, -O-CH₂-페닐, -OC(H)F₂ 및 -OCF₃으로 이루어진 군으로부터 선택되며; n은 1 또는 3이고; R² 및 R³은 각각 H인 화학식 I의 화합물을 제공한다.

바람직하게는, 본 발명은 R¹이 H, F, Cl, -CF₃, -CH₃, -OH, -OCH₃, -OCH₂CH₃, -OCH₂CH₂CH₃, -OCH₂CH(CH₃)₂, -O-시클로프로필, -O-CH₂-페닐, -OC(H)F₂ 및 -OCF₃으로 이루어진 군으로부터 선택되며, n은 1인 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다.

바람직하게는, 본 발명은 R¹이 H, F, Cl, -CF₃, -CH₃, -OH, -O(C₁-C₄ 알킬), -O-시클로프로필, -O-CH₂-페닐, -OC(H)F₂ 및 -OCF₃으로 이루어진 군으로부터 선택되며, n이 3인 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다.

바람직하게는, 본 발명은 R¹이 H, F, Cl, -CF₃, -CH₃, -OH, -O(C₁-C₄ 알킬), -O-시클로프로필, -O-CH₂-페닐, -OC(H)F₂ 및 -OCF₃으로 이루어진 군으로부터 선택되며, n이 3이고, R³은 H인 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다.

바람직하게는, 본 발명은 R¹이 H, F, Cl, -CF₃, -CH₃, -OH, -O(C₁-C₄ 알킬), -O-시클로프로필, -O-CH₂-페닐, -OC(H)F₂ 및 -OCF₃으로 이루어진 군으로부터 선택되며, n은 1이고, R³은 H인 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다.

하기의 화합물이 바람직할 수 있다:

R³이 H인 화학식 I의 화합물 또는 그의 염이 바람직하다.

n이 1 또는 3인 화학식 I의 화합물 또는 그의 염이 바람직하다.

n이 1인 화학식 I의 화합물 또는 그의 염이 바람직하다.

R²가 H이고, R³이 H인 화학식 I의 화합물 또는 그의 염도 또한 바람직하다.

화합물이 R 이성질체인 화학식 I의 화합물 또는 그의 염이 바람직하다.

R¹이 F, Cl, -CF₃, -CH₃, -OH, -OCH₃, -OCH₂CH₃, -OCH₂CH₂CH₃, -OCH₂CH(CH₃)₂, -O-시클로프로필, -O-CH₂-페닐, -OC(H)F₂ 및 -OCF₃으로 이루어진 군으로부터 선택된 화학식 I의 화합물 또는 그의 염이 바람직하다.

R¹이 F, Cl 및 -O(C₁-C₄ 알킬)로 이루어진 군으로부터 선택된 화학식 I의 화합물 또는 그의 염이 바람직하다.

R¹이 Cl 및 -O(C₁-C₄ 알킬)로 이루어진 군으로부터 선택된 화학식 I의 화합물 또는 그의 염이 바람직하다.

R¹이 -OCH₂CH₃인 화학식 I의 화합물 또는 그의 염이 바람직하다.

R¹이 Cl인 화학식 I의 화합물 또는 그의 염이 바람직하다.

R²는 CH₃이고, R³이 H인 화학식 I의 화합물 또는 그의 염이 또한 바람직하다.

n이 3인 화합물이 바람직하다.

바람직한 실시양태는 하기 화학식의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염이다.

화학식 I의 화합물은 라세미 혼합물의 형태로 존재할 수 있다. 바람직한 이성질체는 본원에서 하기 화학식 II로 예시한 "R" 입체 형태이다:

바람직하게는, 본 발명은 하기 화학식 II로 예시한 이성질체형 형태를 갖는 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 제공한다.

<화학식 II>

화학식 I의 화합물이 합성될 수 있으며, 그후, R 및 S 이성질체는 키랄 크로마토그래피로 분리될 수 있다. 화학식 I의 화합물은 바람직한 R 이성질체를 특이적으로 합성하기 위하여 키랄 합성을 사용하여 합성될 수 있다.

본 발명의 추가의 실시양태는 당뇨병 및/또는 비만의 치료를 위한 약제의 제조에서 본 발명이 청구하는 바의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 용도를 제공한다. 본 발명의 또다른 실시양태는 비만을 치료하는데 사용하기 위한 본 발명이 청구하는 바의 화합물 또는 그의 염이다. 본 발명의 추가의 실시양태는 치료에 사용하기 위한 본원에서 청구하는 바의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염이다. 본 발명의 추가의 실시양태는 당뇨병의 치료에 사용하기 위한 본 발명이 청구하는 바의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염이다. 추가로, 본 발명은 포유동물에서 인슐린 감수성을 개선시키는데 사용하기 위한 본 발명이 청구하는 바의 화합물에 관한 것이다.

본 발명은 본 발명이 청구하는 바의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 포유동물에게 투여하는 단계를 포함하는, 포유동물에서의 비만을 치료하는 방법을 제공한다. 본 발명은 본 발명이 청구하는 바의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 포유동물에게 투여하는 단계를 포함하는, 포유동물에서의 당뇨병의 치료 및/또는 인슐린 감수성의 개선을 위한 방법이 제공된다. 본 발명의 추가의 실시양태는 본 발명이 청구하는 바의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 포유동물에게 투여하는 단계를 포함하는, 포유동물에서 이상지질혈증의 치료 방법이다. 본 발명의 추가의 실시양태는 본 발명이 청구하는 바의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 포유동물에게 투여하는 단계를 포함하는, 포유동물에서의 여드름의 치료 방법이다. 본 발명의 추가의 실시양태는 본 발명이 청구하는 바의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 포유동물에게 투여하는 단계를 포함하는, C형 간염 바이러스 (HCV)의 치료 방법이다.

또다른 실시양태에서, 본 발명은 또한 본 발명이 청구하는 바의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 및 제약상 허용되는 담체를 포함하는 제약 조성물에 관한 것이다. 추가의 실시양태는 제2의 제약 작용제를 더 포함하는 본 발명의 제약 조성물이다.

또다른 실시양태에서, 본 발명은 본 발명이 청구하는 바의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염, 제약상 허용되는 담체 및 히드록시프로필 메틸셀룰로스를 포함하는 제제에 관한 것이다. 추가의 실시양태는 히드록시프로필 메틸셀룰로스가 히드록시프로필 메틸셀룰로스 아세테이트 숙시네이트 (HPMC-AS-L)인 제약 제제이다. 추가의 실시양태는 본 발명이 청구하는 바의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 히드록시프로필메틸 셀룰로스와 접촉시키는 것을 포함하는 제제의 제조 방법이다. 추가의 실시양태는 히드록시메틸 셀룰로스가 히드록시프로필 메틸셀룰로스 아세테이트 숙시네이트 (HPMC-AS-L)인 제약 제제의 제조 방법이다.

"제약상-허용되는 염"은 임상적 및/또는 수의학적 용도에 허용 가능한 것으로 간주되는 본 발명의 화합물의 염을 지칭한다. 이러한 염은 당업자에게 공지된 방법에 의하여 제조될 수 있다. 제약상 허용되는 염 및 이의 제조를 위한 통상의 방법은 당업계에 익히 공지되어 있다. 예를 들면 문헌 [P. Stahl, et al., HANDBOOK OF PHARMACEUTICAL SALTS: PROPERTIES, SELECTION AND USE, (VCHA/Wiley-VCH, 2002)]; [S.M. Berge, et al., "Pharmaceutical Salts," Journal of Pharmaceutical Sciences, Vol. 66, No. 1, January 1977]을 참조한다. 본 발명의 화합물은 다양한 경로에 의하여 투여되는 제약 조성물로서 바람직하게는 제조된다. 용어 "제약상 허용되는 담체"는 담체, 희석제, 부형제 및 염이 조성물의 기타의 성분과 제약상 적합성을 갖는다는 것을 의미한다. 가장 바람직하게는, 이러한 조성물은 경구 투여를 위한 것이다. 제약상 허용되는 조성물 및 그의 제조 방법은 당업자에게 익히 공지되어 있다. 예를 들면 문헌 [REMINGTON: THE SCIENCE AND PRACTICE OF PHARMACY (A. Gennaro, et al., eds., 19 th ed., Mack Publishing Co., 1995]을 참조한다.

본 발명의 화합물은 하기 반응식 A, B, C, D, E, F, G, H, I 및 J에 예시되어 있고, 제조예 및 실시예에 기재된 바와 같은 방법을 사용하여 제조될 수 있다. 제조예 및 실시예는 사이믹스(Symyx)^® 드로우 버젼 3.1을 사용하여 명명한다.

본원에서 반응식, 제조예, 실시예 및 절차에서 사용된 용어 및 약어는 반대의 의미로 명시하지 않는다면 그의 통상의 의미를 갖는다.

본원의 반응식, 제조예, 실시예 및 절차에서 사용된 용어 및 약어는 반대의 의미로 명시하지 않는다면 그의 통상의 의미를 갖는다. 예를 들면, 본원에서 사용한 바, 하기의 용어는 제시된 의미를 갖는다: N,N-디메틸포름아미드 (DMF); 메틸 tert-부틸 에테르 (MTBE); 테트라히드로푸란 (THF); 모의 이동상 (SMB) 크로마토그래피; 메탄올 (MeOH); 수산화리튬 (LiOH); N-메틸-2-피롤리돈 (NMP); 아이오딘화구리 (CuI); [1,3-비스(2,6-디이소프로필페닐)이미다졸-2-일리덴] (3-클로로피리딜) Pd(II) 디클로라이드; 아이오딘화Cu(I) [펩시(PEPPSI)™]; N,N-디메틸에틸아민 (DMEA); 및 1,3,5,2,4,6-트리옥사트리포스포리난, 2,4,6-트리프로필-2,4,6-트리옥시드 (T3P).

<반응식 A>

상기 반응식에서, 바람직하게는, R¹은 H, F, Cl, -CF₃, -CH₃, -OH, -O(C₁-C₄ 알킬), -O-시클로프로필, -O-CH₂-페닐, -OC(H)F₂ 및 -OCF₃으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 더욱 바람직하게는, R¹은 -O(C₁-C₄ 알킬) 또는 Cl이다. 가장 바람직하게는, R¹은 -OCH₂CH₃ 또는 Cl이다.

제조예 1

에틸 1-[(4-에톡시벤조일)아미노]시클로프로판카르복실레이트

옥살릴 클로라이드 (189 ㎖, 2.17 mol)를 디클로로메탄 (3 ℓ) 중의 4-에톡시벤조산 (334.5 g, 1.99 mol) 및 N,N-디메틸포름아미드 (1 ㎖)에 첨가하였다. 25-26℃에서 1시간 후, 혼합물을 감압하에서 일정한 중량이 달성될 때까지 농축시켰다. 에틸 1-아미노시클로프로판카르복실레이트 클로라이드 (300 g, 1.81 mol) 및 디클로로메탄 (2.5 ℓ)을 빙수조 중에서 교반하였다. 트리에틸아민 (631 ㎖, 4.53 mol)을 첨가한 후, 디클로로메탄 (500 ㎖) 중의 산 클로라이드 (약 380 g)의 용액을 첨가하였다. 반응 혼합물을 약 16시간 동안 주위 온도에서 교반하였다. 반응액을 수성 1 N 염산 (1 ℓ)으로 희석하였다. 수성 층을 디클로로메탄 (1 ℓ)으로 추출하였다. 유기 층을 물 (2 ℓ) 및 염수 (2 ℓ)로 세척하였다. 용액을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압하에서 농축시켰다. 잔류물을 헥산 중에서 슬러리화하고, 여과하여 표제 화합물 (478 g, 95%)을 아이보리색 분말로서 얻었다: MS (질량 분광측정) (m/z): 278 (M+1).

제조예 2

1-[(4-에톡시벤조일)아미노]시클로프로판카르복실산

에틸 1-[(4-에톡시벤조일)아미노]시클로프로판카르복실레이트 (478 g, 1.72 mol)를 테트라히드로푸란 (2 ℓ) 및 메탄올 (1 ℓ)에 첨가하였다. 수산화리튬 (LiOH) (144.7 g, 3.45 mol)을 물 (1 ℓ)에 용해시키고, 이를 혼합물에 첨가하였다. 반응 혼합물을 55℃로 가열하면서 교반하였다. 반응을 주위 온도로 냉각시키고, 감압하에서 농축시켰다. 2.5 ℓ의 용매를 제거한 후, 혼합물을 물 (2 ℓ)로 희석하고, 이를 빙수조에 침지시켰다. 수성 5 N 염산 (750 ㎖)으로 pH 2로 조절하였다. 침전물을 여과하고, 케이크를 물 (2×2 ℓ)로 세척하고, 건조시켜 표제 화합물 (425 g, 99%)을 백색 분말로서 얻었다: MS (m/z): 250 (M+1).

제조예 3

에틸 1-[(4-클로로벤조일)아미노]시클로프로판카르복실레이트

에틸 1-아미노시클로프로판카르복실레이트 (89.2 g, 0.54 mol)를 디클로로메탄 (900 ㎖) 중의 디이소프로필에틸아민 (187.86 ㎖, 1.08 mol)에 첨가하였다. 플라스크를 냉수조에 침지시키고, 4-클로로벤조산 클로라이드 (75.46 ㎖, 0.59 mol)를 서서히 첨가하였다. 첨가를 완료한 후, 냉수조를 제거하고, 반응을 20℃로 평형이 되도록 하고, 약 2시간 동안 교반하였다. 1 N 염산 (HCl)에 이어서 포화 중탄산나트륨 (NaHCO₃), 물에 이어서 염수로 세척하였다. 유기 층을 황산나트륨 (Na₂SO₄) 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압하에서 농축시켰다. 잔류물을 헵탄으로 슬러리화하고, 여과하고, 헵탄으로 헹구어 표제 화합물 (142 g, 98%)을 백색 분말로서 얻었다: MS (m/z): 268 (M+1).

제조예 4

1-[(4-클로로벤조일)아미노]시클로프로판카르복실산

1,4-디옥산 (2.4 ℓ) 중의 에틸 1-[(4-클로로벤조일)아미노]시클로프로판카르복실레이트 (157 g, 0.58 mol)에 물 (1.2 ℓ) 중의 수산화리튬 (123.05 g, 2.93 mol)의 용액을 첨가하였다. 반응 혼합물을 주위 온도에서 4시간 동안 교반한 후, 이를 감압하에서 농축시켰다. 혼합물을 물 (1 ℓ)로 희석하고, 이를 빙수조에 침지시켰다. 수성 5 N HCl을 사용하여 pH를 약 2로 조절하였다. 침전물을 여과하고, 케이크를 물 (3×1 ℓ)로 세척하고, 건조시켜(50℃, 진공 오븐) 표제 화합물 (132 g, 94%)을 백색 분말로서 얻었다: MS (m/z): 240 (M+1).

제조예 5

벤질 N-[(3R)-2-옥소-1,3,4,5-테트라히드로-1-벤즈아제핀-3-일]카르바메이트

메탄올 (5,000 ㎖) 및 5 N 염화수소 수용액 (1,393 ㎖, 5.57 mol)을 합하고, 35℃로 15분 동안 가열하였다. tert-부틸 N-[(3R)-2-옥소-1,3,4,5-테트라히드로-1-벤즈아제핀-3-일]카르바메이트 (Armstrong III, Joseph D, et al., Tetrahedron Let. 35(20) pp. 3239-3242 (1994)) (770 g, mmol 및 시판중임)를 1시간에 걸쳐 일부분씩 첨가하였다. 혼합물을 감압하에서 농축시켜 백색 고체를 얻었다. 이 고체를 추가의 (3R)-3-아미노-1,3,4,5-테트라히드로-1-벤즈아제핀-2-온 (상이한 로트, 동일한 방법; 660 g, 3.78 mol)과 합하고, 물 (2.5 ℓ)에 용해시켰다. 생성된 용액에 탄산나트륨 (3.17 ㎏, 3.18 mol) 및 아세토니트릴 (7.5 ℓ)을 첨가하였다. 벤질 클로로포르메이트 (7.14 mol, 1.21 ㎏)를 2시간에 걸쳐 적가하였다. 주위 온도에서 2시간 후, 에틸 아세테이트 (8 ℓ)를 첨가하고, 여과하였다. 젖은 케이크를 물 (4.0 ℓ), 아세토니트릴 (2.0 ℓ) 및 에틸 아세테이트 (3.0 ℓ)로 세척하였다. 고체를 감압하에서 48시간 동안 건조시켜 표제 화합물 (2.14 ㎏, 105%)을 얻었다: MS (m/z): 310.8 (M+1).

제조예 6

벤질 N-(2-티옥소-1,3,4,5-테트라히드로-1-벤즈아제핀-3-일)카르바메이트

2-메틸-테트라히드로푸란 (15 ℓ) 중의 N-[(3R)-2-옥소-1,3,4,5-테트라히드로-1-벤즈아제핀-3-일]카르바메이트 (2.13 ㎏, 6.88 mol)에 오황화인 (1.68 ㎏, 7.57 mol)을 30분에 걸쳐 첨가하고, 50℃로 24시간 동안 가열하였다. 29℃로 냉각시키고, 실리카 겔 (2.0 ㎏)을 첨가하고, 여과하고, 감압하에서 농축시켰다. 생성된 잔류물을 클로로포름 (4.0 ℓ)에 용해시키고, 크로마토그래피 (1:1 에틸 아세테이트:헥산)를 경유하여 정제하여 표제 화합물 (1.65 ㎏, 73%)을 적색 고체로서 얻었다: MS (m/z): 327 (M+1).

제조예 7

벤질 N-[2-(2,2-디메톡시에틸아미노)-4,5-디히드로-3H-1-벤즈아제핀-3-일]카르바메이트

벤질 N-(2-티옥소-1,3,4,5-테트라히드로-1-벤즈아제핀-3-일)카르바메이트 (1.78 ㎏, 5.13 mol) 및 파라-톨루엔 술폰산 일수화물 (48.8 g, 256 mmol)을 디클로로메탄 (12 ℓ)에 용해시켰다. 아미노아세트알데히드 디메틸 아세탈 (2.70 ㎏, 25 mole)을 1시간에 걸쳐 적가하고, 36시간 동안 주위 온도에서 교반하였다. 추가의 아미노아세트알데히드 디메틸 아세탈 (1.40 ㎏, 13 mol)을 첨가하고, 12시간 동안 주위 온도에서 교반하였다. 물 (5.0 ℓ)을 첨가하고, 유기 층을 분리하고, 수성 층을 디클로로메탄 (2.0 ℓ)으로 추출하였다. 유기 층을 합하고, 물, 포화 염화암모늄 (6.0 ℓ) 및 염수 (4.0 ℓ)로 세척하였다. 유기 층을 규조토를 통하여 여과하고, 감압하에서 농축시켜 표제 화합물 (2.30 ㎏, 118%)을 황색 오일로서 얻었다: MS (m/z): 398 (M+1).

제조예 8

벤질 N-[(4R)-5,6-디히드로-4H-이미다조[1,2-a][1]벤즈아제핀-4-일]카르바메이트

벤질 N-[2-(2,2-디메톡시에틸아미노)-4,5-디히드로-3H-1-벤즈아제핀-3-일]카르바메이트 (1.80 ㎏, 4.1 mol) 및 포름산 (6.4 ℓ)의 혼합물을 95℃에서 80분 동안 가열하였다. 혼합물을 감압하에서 농축시켜 검정색 오일을 얻고, 이를 디클로로메탄 (7.0 ℓ) 및 물 (5 ℓ) 사이에 분배시켰다. 수성 층의 pH가 7이 될 때까지 탄산나트륨을 첨가하였다. 유기 층을 제거하고, 물 (3회)로 세척하였다. 수성 층을 디클로로메탄으로 추출하였다. 유기 층을 합하고, 감압하에서 농축시켜 검정색 오일을 얻었다. 2.297 ㎏의 검정색 오일을 약 250 g 분획으로 나누고, 각각의 분획을 디클로로메탄 (250 ㎖)에 용해시켰다. 3.5 ㎏ 머크(Merck) 9385, 60 A, 230-400 메쉬 실리카에 첨가하였다. 목표 화합물을 6배 칼럼 부피로 개시하는 75:25 에틸 아세테이트/헵탄으로 용리시켰다(더 빠르게 용리되는 불순물이 먼저 용리되었다). 5:95 메탄올/에틸 아세테이트로 실시하여 나머지 생성물을 제거하였다(1,082 g 회수함). 하기와 같이 키랄 HPLC 조건을 사용하여 생성물 혼합물을 검정하였다: 4.6×150 ㎜ 키랄팩(Chiralpak) AD-H 칼럼, 15:85:0.2 아세토니트릴/3A 등급 에탄올/디메틸에틸아민 이동상, 0.6 ㎖/min 유속, 250 ㎚ UV 검출. 이들 조건하에서 목적하는/원치않는 이성질체 비율 3:2가 관찰되었다. 이성질체 혼합물을 30 ㎎/㎖ 20:80 아세토니트릴/3A 에탄올로 용해시켰다. 이성질체를 정제용 키랄 HPLC 조건을 사용하여 하기와 같이 정제하였다: 8×40.5 ㎝ 키랄팩 AD (20 ㎛) 칼럼, 20:80:0.2 아세토니트릴/3A 에탄올/N,N-디메틸에틸아민 (DMEA) 이동상, 490 ㎖/min 유속, 250 ㎚ UV 검출, 1.5 g (50 ㎖) 주입, 스테디 스테이트 리사이클(Steady State Recycle) (SSR) 기술을 사용한 4.6분 사이클 시간/주입 (J.H. Kennedy, M.D. Belvo, V.S. Sharp, J.D.Williams, Comparison of separation efficiency of early phase active pharmaceutical intermediates by steady state recycle and batch chromatographic techniques, Journal of Chromatography A, 1046 p55-60 (2004)). 이성질체 1의 수집은 0.4-0.9분이며, 이성질체 2의 수집은 2.4-4.2분이었다. 목적하는 이성질체(이성질체 2; R 이성질체)는 두번체 용리물이었다: 벤질 N-[(4R)-5,6-디히드로-4H-이미다조[1,2-a][1]벤즈아제핀-4-일]카르바메이트. 생성물 함유 분획을 감압하에서 농축시켜 표제 화합물 (615 g, 73%)을 백색 고체로서 얻었다: MS (m/z): 334 (M+1).

제조예 9

(4R)-5,6-디히드로-4H-이미다조[1,2-a][1]벤즈아제핀-4-아민 디히드로아이오다이드

아이오도트리메틸실란 (783 ㎖, 5.49 mol)을 디클로로메탄 (800 ㎖)에 첨가하고, 빙수조 중에서 냉각하였다. 벤질 N-[(4R)-5,6-디히드로-4H-이미다조[1,2-a][1]벤즈아제핀-4-일]카르바메이트 (610 g, 1.83 mol)를 디클로로메탄 (1 ℓ)에 용해시키고, 아이오도트리메틸실란 용액에 첨가하였다. 첨가를 완료한 후, 빙수조를 제거하고, 반응물이 약 16시간 동안 주위 온도에서 교반되도록 하였다. 헥산 (6 ℓ) 및 에탄올 (1 ℓ)의 혼합물을 빙수조 중에서 교반하였다. 반응 혼합물을 교반중인 헥산/에탄올 혼합물에 조심스럽게 첨가하여 발포를 방지하였다. 이를 주위 온도에서 10분 동안 교반하였다. 생성된 고체를 여과로 제거하고, 케이크를 헥산 (3×2 ℓ)으로 세척하여 표제 화합물 (817.1 g, 98%)을 오렌지색으로 자유 유동하는 고체로서 얻었다: MS (m/z): 200 (M+1).

제조예 10

(4R)-5,6-디히드로-4H-이미다조[1,2-a][1]벤즈아제핀-4-아민

벤질 N-[(4R)-5,6-디히드로-4H-이미다조[1,2-a][1]벤즈아제핀-4-일]카르바메이트 (120.0 g, 359.9 mmol) 및 에탄올 (2.0 ℓ)을 부치(Buechi) 수소화기 중에서 합하고, 톨루엔 (200 ㎖) 중에서 슬러리화한 10% 탄소상 팔라듐 (Pd/C) (10.0 g, 9.4 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 약 64시간 동안 수소화 (60 psi, 주위 온도)시켰다. 혼합물을 규조토를 통하여 여과하고, 케이크를 THF (300 ㎖)로 세척하였다. 여과물을 감압하에서 농축시켜 표제 화합물 (60 g, 84%)을 백색 발포체로서 얻었다: MS (m/z): 200 (M+1).

실시예 1

N-[1-[[(4R)-5,6-디히드로-4H-이미다조[1,2-a][1]벤즈아제핀-4-일]카르바모일]시클로프로필]-4-에톡시-벤즈아미드

(4R)-5,6-디히드로-4H-이미다조[1,2-a][1]벤즈아제핀-4-아민 디히드로아이오다이드 (650 g, 1.43 mol), 1-[(4-에톡시벤조일)아미노]시클로프로판카르복실산 (427 g, 1.71 mol) 및 1-히드록시벤조트리아졸 수화물 (262.5 g. 1.71 mol)을 디클로로메탄 (3 ℓ)에 첨가하였다. 혼합물을 빙수조 중에서 교반하고, 디이소프로필에틸아민 (797 ㎖, 4.57 mol)을 서서히 첨가하였다. 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드 히드로클로라이드 (333.6 g, 1.71 mol)를 10분에 걸쳐 첨가하였다. 빙수조를 제거하고, 혼합물을 약 16시간 동안 주위 온도에서 교반하였다. 반응 혼합물을 물 (3×4 ℓ)로 세척하였다. 유기 상을 황산나트륨 상에서 건조시켰다. 여과하고, 혼합물을 감압하에서 약 1 ℓ 부피로 농축시켰다. 잔류물을 에틸 아세테이트 (4 ℓ)로 희석하였다. 2 ℓ의 용매를 감압하에서 제거하였다. 혼합물을 1시간 동안 주위 온도에서 정치시켰다. 생성된 침전물을 여과로 분리하고, 케이크를 헥산 (2×2 ℓ)으로 세척하여 표제 화합물 (569.9 g, 93%)을 담황갈색 고체로서 얻었다: MS (m/z): 431 (M+1). H¹ NMR (399.81 MHz, DMSO): 8.91 (s, 1H), 7.95-7.93 (d, J=7.5 Hz, 1H), 7.87-7.83 (d, J=8.7 Hz, 2H), 7.49 (d, J= 1.4 Hz, 1H), 7.44-7.43 (d, J=7.6 Hz, 1H), 7.38 (m, 2H), 7.34-7.29 (m, 1H), 7.00-6.96 (d, J=8.7 Hz, 2H), 6.95 (d, J= 1.3 Hz, 1H), 4.65-4.60 (m, 1H), 4.08 (q, J= 7.0 Hz, 2H), 2.70-2.65 (m, 1H), 2.59-2.56 (m, 1H), 2.33-2.28 (m, 1H), 2.04-2.00 (m, 1H), 1.34-1.31 (m, 4H), 1.27-1.25 (m, 1H), 1.03-0.98 (m, 1H), 0.96-0.90 (m, 1H).

실시예 2

4-클로로-N-[1-[[(4R)-5,6-디히드로-4H-이미다조[1,2-a][1]벤즈아제핀-4-일]카르바모일]시클로프로필]벤즈아미드

1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드 히드로클로라이드 (29 g, 151 mmol)를 THF (300 ㎖) 중의 (4R)-5,6-디히드로-4H-이미다조[1,2-a][1]벤즈아제핀-4-아민 (30 g, 151 mmol), 1-히드록시벤조트리아졸 (20 g, 151 mmol), 트리에틸아민 (41.97 ㎖, 301 mmol) 및 1-[(4-클로로벤조일)아미노]시클로프로판카르복실산 (40 g, 166 mmol)의 10℃ 슬러리에 첨가하였다. 얼음조를 제거하고, 혼합물을 주위 온도로 가온시키고, 이를 4시간 동안 교반하였다. 혼합물을 물 (1.0 ℓ)에 붓고, 에틸 아세테이트 (1.0 ℓ)로 추출하였다. 유기 상을 포화 중탄산나트륨 (500 ㎖)으로 세척하고, 황산마그네슘 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압하에서 농축시켰다. 잔류물을 에틸 아세테이트 (300 ㎖) 중에서 슬러리화하고, 71℃로 가열하였다. 주위 온도로 냉각시키고, 침전물을 여과하고, 에틸 아세테이트 (100 ㎖)로 세척하여 표제 화합물 (38.8 g, 61%)을 얻었다: MS (m/z): 421 (M+1).

<반응식 B>

상기 반응식 B에서, 키랄 합성 절차는 "R" 이성질체를 생성하였다.

제조예 11

(3R)-3-아미노-1,3,4,5-테트라히드로-1-벤즈아제핀-2-온 히드로클로라이드

tert-부틸 N-[(3R)-2-옥소-1,3,4,5-테트라히드로-1-벤즈아제핀-3-일]카르바메이트 (본질적으로 문헌 [Armstrong III, Joseph D, et al., Tetrahedron Let. 35(20) pp. 3239-3242 (1994)]에 기재된 방법에 의하여 제조함, 15 g, 54.28 mmol)를 1,4-디옥산 (100 ㎖, 1.17 mol)에 슬러리화하고, 이를 얼음조 내에서 냉각시켰다. HCl을 디옥산 (100 ㎖, 4.0 M)에 신속하게 첨가하고, 첨가를 완료한 후 얼음조를 제거하였다. 3시간 후, 추가의 디옥산 중의 HCl (100 ㎖, 4.0 M)을 첨가하였다. 반응액을 약 16시간 동안 교반하였다. 고체를 여과로 수집하고, 이를 작은 부피의 에테르로 세척하고, 이를 오븐에서 건조시켜 표제 화합물 (11.2 g, 99%)을 백색 고체로서 얻었다: MS (m/z): 177 (M+1).

제조예 12

탄산칼륨 (K₂CO₃) (19.50 g, 141.06 mmol)을 물 (36 ㎖)에 용해하고, 이를 디클로로메탄 (CH₂Cl₂) (270 ㎖) 중의 1-아미노-1,3,4,5-테트라히드로-2H-벤즈아제핀-2-온 HCl 염 (6 g, 28.21 mmol)의 용액에 첨가하였다. 벤질 클로로포르메이트 (6.24 ㎖, 42.32 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 격렬하게 주위 온도에서 약 16시간 동안 교반하였다. 침전물을 여과로 수집하고, 이를 물 및 에테르로 세척하고, 진공 오븐에서 건조시켜 표제 화합물 (7.2 g, 82%)을 백색 고체로서 얻었다: MS (m/z): 311 (M+1).

제조예 13

벤질 N-[(3R)-2-티옥소-1,3,4,5-테트라히드로-1-벤즈아제핀-3-일]카르바메이트

라웨슨(Lawesson's) 시약 (12.25 g, 30.29 mmol)을 테트라히드로푸란 (470 ㎖) 중의 벤질 N-[(3R)-2-옥소-1,3,4,5-테트라히드로-1-벤즈아제핀-3-일]카르바메이트 (9.4 g, 30.29 mmol)의 용액에 첨가하고, 반응액을 질소하에서 약 16시간 동안 주위 온도에서 교반하였다. 침전물을 여과로 제거하고, 이를 버린다. 여과물을 감압하에서 농축시키고, 잔류물을 에틸 아세테이트에 용해시켰다. 물 및 염수로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 유기 층을 감압하에서 농축시켜 진한 황색 오일을 얻었다. 이 진한 오일에 에테르를 첨가하고, 이를 스크래치 처리하여 고체를 형성하였다. 고체를 여과로 수집하고, 이를 에테르로 세척하였다. 고체를 에테르로 분쇄하고, 여과로 수집하여 표제 화합물 (7.28 g, 74%)을 백색 고체로서 얻었다: MS (m/z): 349 (M+23).

제조예 14

벤질 N-[(3R)-2-(2,2-디메톡시에틸아미노)-4,5-디히드로-3H-1-벤즈아제핀-3-일]카르바메이트

벤질 N-[(3R)-2-티옥소-1,3,4,5-테트라히드로-1-벤즈아제핀-3-일]카르바메이트 (8.71 g, 26.68 mmol), 수은 디클로라이드 (HgCl₂) (9.42 g, 34.69 mmol) 및 아미노아세트알데히드 디메틸 아세탈 (11.65 ㎖, 106.73 mmol)을 테트라히드로푸란 (250 ㎖) 중에서 합하고, 55℃로 20분 동안 가열하였다. 혼합물을 주위 온도로 냉각시키고, 이를 규조토를 통하여 여과하였다. 케이크를 THF 및 에틸 아세테이트로 세척하고, 여과물을 감압하에서 농축시켰다. 생성된 오일을 디클로로메탄에 용해시키고, 따뜻한 물 (4회) 및 염수로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 유기 층을 감압하에서 농축시켜 표제 화합물 (9.78 g, 92%)을 고체로서 얻었다: MS (m/z): 398 (M+1).

제조예 15

벤질 N-[(3R)-2-(2,2-디메톡시에틸아미노)-4,5-디히드로-3H-1-벤즈아제핀-3-일]카르바메이트 (9.78 g, 24.61 mmol)를 포름산 (60 ㎖, 96%)에 용해시키고, 100℃에서 1.5시간 동안 가열하였다. 혼합물이 냉각되도록 하고, 이를 유리 울 플러그(wool plug)로 여과하여 검정색 침전물을 제거하였다. 여과물을 감압하에서 농축시키고, 이를 물에 붓고, 1 M NaOH로 염기성으로 만들었다. 생성된 침전물에 에틸 아세테이트를 첨가하고, 유기 층을 분리하였다. 수성 층을 에틸 아세테이트로 추출하였다. 합하고, 세척(염수)하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 유기 층을 감압하에서 농축시켜 표제 화합물 (6.95 g, 85%)을 얻었다: MS (m/z): 334 (M+1), 97.8% ee, 이성질체 1 (R 이성질체)에 대한 체류 시간, 4.58 min; 이성질체 2 (S 이성질체), 3.20 min. (키랄팩 AD-H 칼럼; 0.2% 디메틸에틸아민을 함유한 100% EtOH; 유속 1.0 ㎖/min; 225 nM).

제조예 16

(4R)-5,6-디히드로-4H-이미다조[1,2-a][1]벤즈아제핀-4-아민

벤질 N-[(4R)-5,6-디히드로-4H-이미다조[1,2-a][1]벤즈아제핀-4-일]카르바메이트 (6.95 g, 20.85 mmol)를 무수 에탄올 (375 ㎖, 6.44 mol)에 용해시키고, 10% 탄소상 팔라듐 (Pd/C) (0.70 g, 6.57 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 파르(Parr) 진탕기 상에서 수소 (H₂) 하에서 7시간 동안(60 psi, 주위 온도) 두었다. 촉매를 여과로 제거하고, 여과물을 감압하에서 농축시켜 표제 화합물 (4.17 g, 100%)을 황색 고체로서 얻었다: MS (m/z): 200 (M+1).

<반응식 C>

반응식 C에서, 합성 절차에 의하여 라세미 혼합물이 생성되었다.

제조예 17

라웨슨 시약 (6.52 g, 16.11 mmol)을 톨루엔 (120 ㎖) 중의 벤질 N-[(3R)-2-옥소-1,3,4,5-테트라히드로-1-벤즈아제핀-3-일]카르바메이트 (10.0 g, 32.22 mmol)의 용액에 첨가하고, 반응액을 질소하에서 100℃에서 2.5시간 동안 가열하였다. 반응이 냉각되도록 하고, 침전물을 여과로 수집하였다. 케이크를 (에테르) 세척하고, 이를 진공 오븐 내에서 건조시켜 표제 화합물 (5.5 g, 16.8 mmol)을 얻었다. 여과물을 감압하에서 농축시키고, 이를 플래쉬 크로마토그래피 (30% 헥산/CH₂Cl₂로부터 100% CH₂Cl₂)로 정제하여 표제 화합물 (3.48 g, 10.7 mmol)을 얻었다. 화합물은 부분적으로 라세미화하였다. 표제 화합물의 총 수율은 85%이었다: MS (m/z): 327 (M+1).

제조예 18

출발 물질로서 벤질 N-(2-티옥소-1,3,4,5-테트라히드로-1-벤즈아제핀-3-일)카르바메이트 (4.2 g, 12.87 mmol)를 사용하여 제조예 14의 방법을 사용하여 표제 화합물 (4.68 g, 92%)을 황갈색 고체로서 얻었다: MS (m/z): 398 (M+1).

제조예 19

벤질 N-(5,6-디히드로-4H-이미다조[1,2-a][1]벤즈아제핀-4-일)카르바메이트

출발 물질로서 벤질 N-[2-(2,2-디메톡시에틸아미노)-4,5-디히드로-3H-1-벤즈아제핀-3-일]카르바메이트 (4.6 g, 11.57 mmol)를 사용하고, 제조예 15의 방법을 사용하여 표제 화합물 (3.8 g, 88%)을 얻었다: MS (m/z): 334 (M+1).

제조예 20

5,6-디히드로-4H-이미다조[1,2-a][1]벤즈아제핀-4-아민

출발 물질로서 벤질 N-(5,6-디히드로-4H-이미다조[1,2-a][1]벤즈아제핀-4-일)카르바메이트 (3.36 g, 10.08 mmol)를 사용하여 제조예 16의 방법을 사용하여 표제 화합물 (2.2 g, 100%)을 황색 오일로서 얻었다: MS (m/z): 200 (M+1).

<반응식 D>

제조예 21

벤질 N-[(3R)-1-아세토닐-2-옥소-4,5-디히드로-3H-1-벤즈아제핀-3-일]카르바메이트

분말 수산화칼륨 (KOH) (0.72 g, 12.89 mmol)을 테트라히드로푸란 (65 ㎖) 중의 벤질 N-[(3R)-2-옥소-1,3,4,5-테트라히드로-1-벤즈아제핀-3-일]카르바메이트 (2.0 g, 6.44 mmol), 클로로아세톤 (1.19 g, 12.89 mmol) 및 테트라부틸암모늄 플루오라이드 (1.29 ㎖, 1.29 mmol, THF 중의 1 M 용액)의 용액에 첨가하였다. 혼합물을 약 16시간 동안 주위 온도에서 교반하였다. 추가의 수산화칼륨 (0.361 g, 6.44 mmol), 클로로아세톤 (0.59 g, 6.44 mmol), 테트라부틸암모늄 플루오라이드 (0.65 ㎖, 0.65 mmol, THF 중의 1 M 용액) 및 THF (20 ㎖)를 반응에 첨가하고, 약 48시간 동안 주위 온도에서 교반하였다. 반응 혼합물을 규조토를 통하여 여과하고, 여과물을 감압하에서 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (10% 에틸 아세테이트/헥산으로부터 100% 에틸 아세테이트)로 정제하여 표제 화합물 (1.64 g, 65%)을 얻었다: MS (m/z): 389 (M+23).

제조예 22

벤질 N-(2-메틸-5,6-디히드로-4H-이미다조[1,2-a][1]벤즈아제핀-4-일)카르바메이트

아세트산 (20.0 ㎖) 중에서 벤질 N-[(3R)-1-아세토닐-2-옥소-4,5-디히드로-3H-1-벤즈아제핀-3-일]카르바메이트 (0.7 g, 1.91 mmol)를 아세트산암모늄 (2.94 g, 38.2 mmol)과 합하고, 115℃에서 24시간 동안 가열한 후, 혼합물을 주위 온도에서 약 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 빙수에 붓고, 수산화암모늄 (28-30%)으로 염기성으로 만들고, 디클로로메탄으로 추출하였다. 물 및 염수로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 유기 층을 감압하에서 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (10% 에틸 아세테이트/헥산으로부터 50% 에틸 아세테이트/헥산), 이어서 SCX 칼럼 (메탄올에 이어서 메탄올/CH₂Cl₂ 중의 10% 2 N 암모니아)으로 정제하여 표제 화합물 (0.21 g, 32%)을 백색 고체로서 얻었다: MS (m/z): 348 (M+1). (이러한 중간체로부터 생성된 최종 화합물을 기준으로 하여 표제 화합물이 부분적으로 라세미화되었다).

제조예 23

2-메틸-5,6-디히드로-4H-이미다조[1,2-a][1]벤즈아제핀-4-아민

출발 물질로서 벤질 N-(2-메틸-5,6-디히드로-4H-이미다조[1,2-a][1]벤즈아제핀-4-일)카르바메이트 (0.19 g, 0.55 mmol)를 사용하고, 제조예 16의 방법을 사용하여 표제 화합물 (0.082 g, 69%)을 얻었다: MS (m/z): 214 (M+1).

<반응식 E>

제조예 24

벤질 N-[(3R)-2-메틸술파닐-4,5-디히드로-3H-1-벤즈아제핀-3-일]카르바메이트

벤질 N-[(3R)-2-티옥소-1,3,4,5-테트라히드로-1-벤즈아제핀-3-일]카르바메이트 (1.5 g, 4.60 mmol)를 THF (40 ㎖)에 용해시키고, 0℃로 냉각시키고, 수소화나트륨 (NaH) (192.9 ㎎, 4.83 mmol, 광유 중의 60%)를 한번에 첨가하였다. 조를 제거하고, 반응액을 약 1시간 동안 질소하에서 교반하였다. 메틸 아이오다이드 (300 ㎕, 4.83 mmol)를 첨가하고, 약 1시간 동안 주위 온도에서 교반하였다. 반응액을 감압하에서 농축시켜 대부분의 THF를 제거하고, 잔류물을 에틸 아세테이트로 희석하고, 포화 중탄산나트륨 및 염수로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 유기 층을 감압하에서 농축시켜 표제 화합물 (1.5 g, 96%)을 백색 고체로서 얻었다: MS (m/z): 341 (M+1).

제조예 25

벤질 N-(1-메틸-5,6-디히드로-4H-이미다조[1,2-a][1]벤즈아제핀-4-일)카르바메이트

벤질 N-[(3R)-2-메틸술파닐-4,5-디히드로-3H-1-벤즈아제핀-3-일]카르바메이트 (500 ㎎, 1.47 mmol), 프로파르길아민 (197.28 ㎕, 2.94 mmol) 및 p-톨루엔술폰산 일수화물 (30 ㎎, 157.71 μmol)을 페닐 에테르-비페닐 혼합물 (2 ㎖, 6.53 mmol) (다우썸(Dowtherm) A) 중에서 합하고, 혼합물을 약 45분 동안 180℃에서 교반하였다. 반응액을 냉각시키고, 에테르 (20 ㎖)에 이어서 2 M HCl (20 ㎖)을 첨가하였다. 수 분 동안 교반하고, 수성 층을 제거하고, 유기 층을 2 N HCl (2회)로 추출하였다. 수성 층을 합하고, 수산화암모늄 (28%)으로 알칼리성이 될 때까지 염기성으로 만들었다. 침전물을 여과로 수집하고, 물로 세척하고, 진공 오븐에서 건조시켰다. 침전물을 플래쉬 크로마토그래피 (디클로로메탄 중의 암모니아/메탄올 (2 M)의 5% 용액의 50%로부터 5% 용액의 90%까지)로 정제하여 표제 화합물 (358 ㎎, 70%)을 회백색 고체로서 얻었다: MS (m/z): 348 (M+1). 이성질체 1 (S 이성질체)의 경우 체류 시간 = 3.3 min; 이성질체 2 (R 이성질체) = 3.7 min. (키랄팩 AD-H 칼럼; 0.2% 디메틸에틸아민을 함유한 100% EtOH; 유속 1.0 ㎖/min; 225 nM). 키랄 분석은 약 20% 라세미화를 나타내었다.

제조예 26

1-메틸-5,6-디히드로-4H-이미다조[1,2-a][1]벤즈아제핀-4-아민

벤질 N-(1-메틸-5,6-디히드로-4H-이미다조[1,2-a][1]벤즈아제핀-4-일)카르바메이트 (0.99 g, 2.85 mmol) 및 10% Pd/C (200 ㎎, 1.88 mmol)를 무수 에탄올 (50 ㎖) 중에서 합하였다. 혼합물을 파르 진탕기에 7시간 동안 (수소 (H₂) 60 psi, 주위 온도) 두었다. 촉매를 여과로 제거하고, 여과물에 10% Pd/C (200 ㎎, 1.88 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 파르 진탕기에 추가 7시간 동안(60 psi, 주위 온도) 두었다. 7시간 후, 추가의 10% Pd/C (189 ㎎, 1.78 mmol)를 첨가하고, 추가 7시간 동안 진탕하였다. 촉매를 여과로 제거하고, 여과물을 감압하에서 농축시켜 표제 화합물 (0.53 g, 87%)을 얻었다: MS (m/z): 214 (M+1).

<반응식 F>

반응식 F에서, R¹은 H, F, Cl, -CF₃, -CH₃, -OH, -O(C₁-C₄ 알킬), -O-시클로프로필, -O-CH₂-페닐, -OC(H)F₂ 및 -OCF₃으로 이루어진 군으로부터 선택되며; R²는 H 및 CH₃으로 이루어진 군으로부터 선택되며; R³은 H 및 CH₃으로 이루어진 군으로부터 선택되며, 단 R² 및 R³으로 이루어진 군 중 적어도 하나는 H이고; n = 1, 2, 또는 3이고; R⁴는 CH₃ 또는 CH₂CH₃일 수 있다. 바람직하게는, R⁴는 CH₂CH₃이다.

제조예 27

1-브로모-4-비닐옥시-벤젠

톨루엔 (430 ㎖) 중의 4-브로모페놀 (75 g, 433.5 mmol), 아세트산 에테닐 에스테르 (80.5 ㎖, 867.0 mmol) 및 탄산나트륨 (27.6 g, 260.10 mmol)의 혼합물에 디-뮤-클로로비스((1,2,5,6-에타)-1,5-시클로옥타디엔)디이리듐 (2.9 g, 4.34 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 100℃에서 2.5시간 동안 가열하였다. 혼합물을 주위 온도로 냉각시키고, 에틸 아세테이트 (EtOAc) (300 ㎖)로 희석하고, 물 (400 ㎖)로 한번 세척하였다. 유기 분획을 분리하고, 염수 (250 ㎖)로 한번 세척하였다. 물질을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압하에서 농축시켰다. 미정제 혼합물을 플래쉬 크로마토그래피 (0%로부터 5% EtOAc/Hex)로 정제하여 표제 화합물 (63.5 g, 74%)을 얻었다: GCMS: 198.

제조예 28

1-브로모-4-(시클로프로폭시)벤젠

1,2-디클로로에탄 (410 ㎖) 중의 1-브로모-4-비닐옥시-벤젠 (31.75 g, 159.51 mmol) 및 클로로아이오도메탄 (101.3 g, 574.2 mmol)의 0℃ 용액에 온도를 5℃ 미만으로 유지하면서 디에틸아연 (헵탄 중의 1 M, 380 ㎖)을 1시간에 걸쳐 서서히 첨가하였다. 백색 혼합물을 0-5℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응을 서서히 5℃에서 수성 포화 염화암모늄 (400 ㎖, 발열)으로 켄칭하고, 층을 분리하였다. 수성 층을 디에틸 에테르 (2×200 ㎖)로 추출하였다. 유기 층을 합하고, 포화 염화암모늄 (400 ㎖)으로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압하에서 농축시켜 표제 화합물 (33 g, 97%)을 오일로서 얻었다: GCMS: 212.

제조예 29

4-(시클로프로폭시)벤조산

온도를 -70℃ 미만으로 유지하면서 테트라히드로푸란 (500 ㎖) 중의 1-브로모-4-(시클로프로폭시)벤젠 (33 g, 154.9 mmol)의 -78℃ 용액에 헥산 중의 1.6 M 부틸 리튬 (96.8 ㎖, 154.9 mmol)을 첨가하였다. 첨가 후, 혼합물을 -78℃에서 20분 동안 교반하였다. 드라이아이스 (464.6 mmol)를 3개의 분획으로 5분 간격으로 첨가하였다. 혼합물을 -78℃에서 30분 동안 교반하였다. 냉각조를 제거하고, 혼합물을 10% 황산수소나트륨 (NaHSO₄) (200 ㎖)으로 켄칭하였다. 혼합물을 주위 온도로 가온시키고, EtOAc (300 ㎖)로 3회 추출하였다. 유기물을 합하고, 염수로 1회 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압하에서 농축시켰다. 잔류물을 디에틸 에테르에 현탁시키고, 여과하였다. 고체를 진공 오븐에서 건조시켜 표제 화합물 (12.9 g, 47%)을 얻었다: MS (m/z): 179 (M+1).

제조예 30

에틸 1-[[4-(시클로프로폭시)벤조일]아미노]시클로프로판카르복실레이트

2 방울의 DMF를 함유하는 디클로로메탄 (350 ㎖) 중의 4-시클로프로폭시벤조산 (24.5 g, 137.3 mmol)의 0℃ 현탁액에 옥살릴 클로라이드 (23.8 ㎖, 274.7 mmol)를 서서히 첨가하였다. 첨가 후, 냉각조를 제거하고, 2시간 동안 교반하였다. 물질을 감압하에서 무수 상태로 농축시켰다. 잔류물을 디클로로메탄 (500 ㎖)에 용해시킨 후, 에틸 1-아미노시클로프로판카르복실레이트 클로라이드 (인도파인(Indofine) #04-265, 24.9 g, 150.5 mmol)) 및 트리에틸아민 (57.2 ㎖, 410.4 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 주위 온도에서 약 16시간 동안 교반하였다. 혼합물을 10% NaHSO₄ (250 ㎖)로 1회 세척하였다. 유기 분획을 분리하고, 수성 분획을 디클로로메탄 (200 ㎖)으로 2회 추출하였다. 유기물을 합하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압하에서 농축시켰다. 미정제 혼합물을 플래쉬 크로마토그래피 (0%로부터 45% EtOAc/Hex)로 정제하여 표제 화합물 (33.7 g, 85%)을 얻었다: MS (m/z): 290 (M+1).

제조예 31

4-에톡시벤조산 (10.0 g, 60.18 mmol), 에틸 1-아미노시클로프로판카르복실레이트 히드로클로라이드 (시판중임, 10.96 g, 66.19 mmol), 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드 히드로클로라이드 (EDC) (13.84 g, 72.21 mmol) 및 1-히드록시벤조트리아졸 (HOBT) (9.76 g, 72.21 mmol)을 테트라히드로푸란 (500 ㎖) 중에서 합하였다. 디이소프로필에틸아민 (DIEA) (23.09 ㎖, 132.39 mmol)을 3-5분에 걸쳐 첨가하고, 반응액을 약 16시간 동안 주위 온도에서 질소하에서 교반하였다. 혼합물을 에틸 아세테이트로 희석하고, 묽은 HCl로 세척하고, NaHCO₃에 이어서 염수로 희석하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 유기 층을 감압하에서 농축시켰다. 잔류물을 에탄올로부터 재결정화에 의하여 정제하여 표제 화합물 (13.93 g, 84%)을 백색 고체로서 얻었다: MS (m/z): 278 (M+1).

하기 표 1에서의 제조예는 본질적으로 제조예 31의 방법에 기재된 바와 같이 하여 4-에톡시벤조산 대신에 칼럼 3의 시약을 사용하여 제조할 수 있었으며, 그 후 정제 없이 사용할 수 있거나 또는 재결정화 (에탄올 또는 메탄올) 또는 플래쉬 크로마토그래피 (10-50% 범위의 EtOAc/헥산 구배)에 의하여 정제할 수 있었다. 제조예 36 및 37의 경우, 에틸 1-아미노시클로프로판카르복실레이트 히드로클로라이드 대신에 메틸 1-아미노시클로펜탄카르복실레이트 히드로클로라이드 (시판중임)를 사용하였다. 제조예 32 및 35는 에탄올로부터 재결정에 의하여 정제하였다. 제조예 33 및 34는 플래쉬 크로마토그래피로 정제하였다. 제조예 36은 정제하지 않고 사용할 수 있다. 제조예 37은 메탄올로부터 재결정화에 의하여 정제하였다.

<표 1>

제조예 38

1-[[4-(시클로프로폭시)벤조일]아미노]시클로프로판카르복실산

에탄올 (380 ㎖) 중의 에틸 1-(4-시클로프로폭시벤즈아미도)시클로프로판카르복실레이트 (33.7 g, 6.48 mmol)의 용액에 수산화나트륨 (174.7 ㎖, 174.7 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 65℃에서 3시간 동안 교반하였다. 물질을 주위 온도로 냉각시키고, 감압하에서 농축시켜 에탄올을 제거하였다. 잔류물을 10% NaHSO₄로 산성으로 만들었다. 생성된 고체를 여과하고, 물 (3회) 및 디에틸 에테르 (2회)로 세척하였다. 물질을 진공 오븐에서 건조시켜 표제 화합물 (29.9 g, 98%)을 백색 고체로서 얻었다: MS (m/z): 262 (M+1).

제조예 39

1-[(4-에톡시벤조일)아미노]시클로프로판카르복실산

에틸 1-[(4-에톡시벤조일)아미노]시클로프로판카르복실레이트 (4.25 g, 15.33 mmol)를 1,4-디옥산 (60 ㎖)에 용해시키고, 물 (30 ㎖)에 용해된 수산화리튬 (LiOH) (3.22 g, 76.63 mmol)을 첨가하였다. 반응액을 약 16시간 동안 주위 온도에서 교반하였다. 혼합물을 감압하에서 농축시키고, 물을 첨가하고, 5 N HCl로 산성으로 만들고, 침전물을 여과로 수집하여 표제 화합물 (2.8 g, 73%)을 백색 고체로서 얻었다: MS (m/z): 248 (M+1).

하기 표 2의 제조예는 본질적으로 제조예 39의 탈보호 방법에 의하여 기재된 바와 같이 하여 제조될 수 있었다.

<표 2>

실시예 3

(4R)-5,6-디히드로-4H-이미다조[1,2-a][1]벤즈아제핀-4-아민 (0.50 g, 2.51 mmol), 1-[(4-에톡시벤조일)아미노]시클로프로판카르복실산 (0.75 ㎎, 3.01 mmol), 1-히드록시벤조트리아졸 (407 ㎎, 3.01 mmol) 및 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드 히드로클로라이드 (577 ㎎, 3.01 mmol)을 테트라히드로푸란 (40 ㎖) 중에서 합하였다. 디이소프로필에틸아민 (0.53 ㎖, 3.01 mmol)을 첨가하고, 반응액을 약 16시간 동안 주위 온도에서 질소하에서 교반하였다. 반응액을 에틸 아세테이트로 희석하고, 포화 중탄산나트륨 및 염수로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 유기 층을 감압하에서 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (25% EtOAc/헥산으로부터 100% EtOAc)로 정제하여 표제 화합물 (860 ㎎, 80%)을 얻었다: MS (m/z): 431 (M+1).

하기 표 3의 실시예는 본질적으로 실시예 3의 방법에 의하여 기재된 바와 같이 하여 제조될 수 있었다.

<표 3>

제조예 46

4-(시클로프로폭시)-N-[1-(5,6-디히드로-4H-이미다조[1,2-a][1]벤즈아제핀-4-일카르바모일)시클로프로필]벤즈아미드

디클로로메탄 (8 ㎖) 중의 5,6-디히드로-4H-이미다조[1,2-a][1]벤즈아제핀-4-아민 (400 ㎎, 2.01 mmol), 1-(4-시클로프로폭시벤즈아미도)시클로프로판카르복실산 (577 ㎎, 2.21 mmol), 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드 히드로클로라이드 (462 ㎎, 2.41 mmol) 및 1-히드록시벤조트리아졸 수화물 (369 ㎎, 2.41 mmol)의 혼합물에 트리에틸아민 (1.26 ㎖, 9.03 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 주위 온도에서 약 16시간 동안 교반하였다. 미정제 혼합물을 플래쉬 크로마토그래피 (0%로부터 5% MeOH/디클로로메탄)로 정제하여 표제 화합물 (791 ㎎, 89%)을 황갈색 발포물로서 얻었다: MS (m/z): 443 (M+1).

실시예 16

N-[1-[[(4R)-5,6-디히드로-4H-이미다조[1,2-a][1]벤즈아제핀-4-일]카르바모일]시클로프로필]-4-플루오로-벤즈아미드

(4R)-5,6-디히드로-4H-이미다조[1,2-a][1]벤즈아제핀-4-아민 (95.0 ㎎, 0.48 mmol), 1-[(4-플루오로벤조일)아미노]시클로프로판카르복실산 (128.0 ㎎, 0.57 mmol) 및 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 (HATU) (218.0 ㎎, 0.57 mmol)를 N,N-디메틸포름아미드 (4 ㎖) 중에서 합하였다. 디이소프로필에틸아민 (0.21 ㎖, 1.19 mmol)을 첨가하고, 반응액을 약 16시간 동안 주위 온도에서 질소하에서 교반하였다. 반응액을 에틸 아세테이트로 희석하고, 포화 중탄산나트륨 및 염수로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 유기 층을 감압하에서 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (메탄올/디클로로메탄 중의 3% 암모니아 (2 M) 용액)로 정제하여 표제 화합물 (131.0 ㎎, 68%)을 얻었다: MS (m/z): 405 (M+1).

실시예 17

N-[1-[[(4R)-5,6-디히드로-4H-이미다조[1,2-a][1]벤즈아제핀-4-일]카르바모일]시클로프로필]벤즈아미드

실시예 17은 본질적으로 실시예 17의 방법에 의하여 기재된 바와 같이 하여 제조될 수 있었다. MS (m/z): 387 (M+1). 수율 63%.

<반응식 G>

반응식 G에서, R¹은 H, F, Cl, -CF₃, -CH₃, -OH, -O(C₁-C₄ 알킬), -O-시클로프로필, -O-CH₂-페닐, -OC(H)F₂ 및 -OCF₃으로 이루어진 군으로부터 선택되며; R²는 H 및 CH₃으로 이루어진 군으로부터 선택되며; R³은 H 및 CH₃으로 이루어진 군으로부터 선택되며, 단 R² 및 R³으로 이루어진 군 중 적어도 하나는 H이고; n = 1, 2, 또는 3이다.

제조예 47

tert-부틸 N-[1-[[(4R)-5,6-디히드로-4H-이미다조[1,2-a][1]벤즈아제핀-4-일]카르바모일]시클로프로필]카르바메이트

(4R)-5,6-디히드로-4H-이미다조[1,2-a][1]벤즈아제핀-4-아민 (570 ㎎, 2.86 mmol), 1-(tert-부톡시카르보닐아미노)시클로프로판카르복실산 (시판중임, 633.19 ㎎, 3.15 mmol), 1-히드록시벤조트리아졸 (464 ㎎, 3.43 mmol) 및 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드 히드로클로라이드 (658 ㎎; 3.43 mmol)를 테트라히드로푸란 (10 ㎖) 중에서 합하였다. 디이소프로필에틸아민 (599 ㎕, 3.43 mmol)을 첨가하고, 반응액을 약 16시간 동안 주위 온도에서 질소하에서 교반하였다. 반응액을 에틸 아세테이트로 희석하고, 묽은 중탄산나트륨 및 염수로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 유기 층을 감압하에서 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (25% EtOAc/헥산으로부터 85% EtOAc/헥산까지)로 정제하여 표제 화합물 (860 ㎎, 79%)을 백색 고체로서 얻었다: MS (m/z): 383 (M+1).

제조예 48

tert-부틸 N-[1-(5,6-디히드로-4H-이미다조[1,2-a][1]벤즈아제핀-4-일카르바모일)시클로프로필]카르바메이트

제조예 48은 5,6-디히드로-4H-이미다조[1,2-a][1]벤즈아제핀-4-아민을 사용한 것을 제외하고, 본질적으로 제조예 47의 방법에 의하여 기재된 바와 같이 하여 제조될 수 있었다. 30-95% 에틸 아세테이트/헥산 범위의 구배를 사용하는 플래쉬 크로마토그래피로 정제하였다. MS (m/z): 383 (M+1).

제조예 49

tert-부틸 N-[1-(5,6-디히드로-4H-이미다조[1,2-a][1]벤즈아제핀-4-일카르바모일)시클로펜틸]카르바메이트

제조예 49는 1-(tert-부톡시카르보닐아미노)시클로펜탄카르복실산 (시판중임)을 사용한 것을 제외하고, 본질적으로 제조예 47의 방법에 의하여 기재된 바와 같이 하여 제조될 수 있었다. 20-90% 에틸 아세테이트/헥산 범위의 구배를 사용하는 플래쉬 크로마토그래피로 정제하였다. MS (m/z): 411 (M+1).

제조예 50

1-아미노-N-[(4R)-5,6-디히드로-4H-이미다조[1,2-a][1]벤즈아제핀-4-일]시클로프로판카르복스아미드

tert-부틸 N-[1-[[(4R)-5,6-디히드로-4H-이미다조[1,2-a][1]벤즈아제핀-4-일]카르바모일]시클로프로필]카르바메이트 (856 ㎎, 2.24 mmol)를 디클로로메탄 (20 ㎖)에 용해시키고, 얼음조에서 냉각시켰다. 트리플루오로아세트산 (10 ㎖, 132.25 mmol)을 첨가하였다. 얼음조를 제거하고, 반응액을 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 감압하에서 농축시키고, 에틸 아세테이트를 첨가하였다. 1 N NaOH 및 염수로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 유기 층을 감압하에서 농축시켜 표제 화합물 (470 ㎎, 74%)을 백색 고체로서 얻었다: MS (m/z): 283 (M+1).

제조예 51

1-아미노-N-(5,6-디히드로-4H-이미다조[1,2-a][1]벤즈아제핀-4-일)시클로펜탄카르복스아미드

제조예 51은 tert-부틸 N-[1-(5,6-디히드로-4H-이미다조[1,2-a][1]벤즈아제핀-4-일카르바모일)시클로펜틸]카르바메이트를 사용한 것을 제외하고, 본질적으로 제조예 50의 방법에 의하여 기재된 바와 같이 하여 제조될 수 있었다. MS (m/z): 311 (M-1).

제조예 52

1-아미노-N-(5,6-디히드로-4H-이미다조[1,2-a][1]벤즈아제핀-4-일)시클로프로판카르복스아미드

제조예 52는 tert-부틸 N-[1-(5,6-디히드로-4H-이미다조[1,2-a][1]벤즈아제핀-4-일카르바모일)시클로프로필]카르바메이트를 사용한 것을 제외하고, 본질적으로 제조예 50의 방법에 의하여 기재된 바와 같이 하여 제조될 수 있었다. MS (m/z): 283 (M+1).

실시예 18

4-클로로-N-[1-(5,6-디히드로-4H-이미다조[1,2-a][1]벤즈아제핀-4-일카르바모일)시클로펜틸]벤즈아미드

1-아미노-N-(5,6-디히드로-4H-이미다조[1,2-a][1]벤즈아제핀-4-일)시클로펜탄카르복스아미드 (158 ㎎, 509.02 μmol), 4-클로로벤조산 (95.64 ㎎, 610.83 μmol), 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드 히드로클로라이드 (117.10 ㎎, 610.83 μmol) 및 1-히드록시벤조트리아졸 (82.54 ㎎, 610.83 μmol)을 테트라히드로푸란 (12 ㎖) 중에서 합하였다. 디이소프로필에틸아민 (106.53 ㎕, 610.83 μmol)을 첨가하고, 반응액을 주위 온도에서 약 16시간 동안 교반하였다. 반응액을 EtOAc로 희석하고, 묽은 중탄산나트륨 및 염수로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 유기 층을 감압하에서 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (암모니아/메탄올/디클로로메탄 (2 N)/디클로로메탄의 5% 용액 0-40%)로 정제하여 표제 화합물 (101.0 ㎎, 44%)을 얻었다: MS (m/z): 449 (M+1).

하기 표 4의 실시예는 칼럼 3에 제시된 시약을 사용한 것을 제외하고 본질적으로 실시예 18의 방법에 의하여 기재된 바와 같이 하여 제조될 수 있었다. 정제를 위하여 0-80% 범위의 디클로로메탄 중의 메탄올 중의 5% 암모니아 (2 M) 용액/디클로로메탄 구배를 사용하는 플래쉬 크로마토그래피를 사용하였다.

<표 4>

실시예 21

1-아미노-N-[(4R)-5,6-디히드로-4H-이미다조[1,2-a][1]벤즈아제핀-4-일]시클로프로판카르복스아미드 (160 ㎎, 0.57 mmol), 4-클로로벤조산 (106 ㎎, 0.68 mmol) 및 O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 (HATU) (259.0 ㎎, 0.68 mmol)를 N,N-디메틸포름아미드 (4 ㎖) 중에서 합하였다. 디이소프로필에틸아민 (DIEA) (0.25 ㎖, 1.42 mmol)을 첨가하고, 반응액을 주위 온도에서 약 5시간 동안 질소하에서 교반하였다. 반응액을 에틸 아세테이트로 희석하고, 중탄산나트륨, 물 (2회) 및 염수로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 유기 층을 감압하에서 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (40% EtOAc/헥산으로부터 100% EtOAc까지)로 정제하여 표제 화합물 (190.0 ㎎, 80%)을 얻었다: MS (m/z): 421 (M+1).

하기 표 5의 실시예는 4-클로로벤조산 대신에 칼럼 3에서의 시약을 사용하고, 약 16시간의 반응 시간을 사용하고, 키랄 및 라세미 아민을 사용하여 본질적으로 실시예 21의 방법에 의하여 기재된 바와 같이 하여 제조될 수 있었다. 정제는 (방법 1; 실시예 22, 23, 24, 25, 27, 28, 29, 30, 31 및 32): 0-100% 범위의 디클로로메탄 중의 메탄올 중의 3-5% 암모니아 (2 M) 용액/디클로로메탄 구배 또는 (방법 2; 실시예 26): 에틸 아세테이트/헥산의 구배 25-90% 범위를 사용하는 플래쉬 크로마토그래피에 의하여 실시하였다.

<표 5>

<화학식 H>

라세미 혼합물을 분리하고, 이성질체를 방법 A, B, C, D, E 및 F하에서 제시된 크로마토그래피 조건에 의하여 분리할 수 있다.

라세미 혼합물은 R 및 S 이성질체로 분리할 수 있다. 키랄 크로마토그래피에 대한 조건:

방법 A

SFC - 키랄 칼럼: 키랄팩 AD-H

용리제: 0.2% 이소프로필 아민 개질제 및 CO₂를 사용한 20-30% 에탄올 범위 내의 등용매 조건.

225 nM 파장에서 검출된 신호

방법 B

SFC - 키랄 칼럼: 키랄팩 AD-H

용리제: 0.2% 이소프로필 아민 개질제 및 CO₂를 사용한 25-40% 이소프로판올 범위 내의 등용매 조건.

225 nM 파장에서 검출된 신호

방법 C

SFC - 키랄 칼럼: 키랄팩 OD-H

용리제: 0.2% 이소프로필 아민 개질제 및 CO₂를 사용한 20% 에탄올과의 등용매 조건.

225 nM 파장에서 검출된 신호

방법 D

SFC - 키랄 칼럼: 키랄팩 OD-H

용리제: 0.2% 이소프로필 아민 개질제 및 CO₂를 사용한 15-20% 메탄올 범위 내의 등용매 조건.

225 nM 파장에서 검출된 신호

방법 E

LC - 키랄 칼럼: 키랄팩 AD-H

용리제: 0.2% 이소프로필 아민 개질제를 사용한 100% 메탄올과의 등용매 조건.

225 nM 파장에서 검출된 신호

방법 F

SFC - 키랄 칼럼: 키랄셀(Chiralcel) OJ-H

용리제: 0.2% 이소프로필 아민 개질제 및 CO₂를 사용한 10% 이소프로판올 범위 내의 등용매 조건.

225 nM 파장에서 검출된 신호

하기 표 6에서, 실시예 (두번째 칼럼)는 크로마토그래피 방법 A, B, C, D, E 및 F를 사용하여 이성질체 1 (R 이성질체) 및 이성질체 2 (S 이성질체)로 분리하였다. 실시예 29, 30, 20, 8 및 6은 방법 A를 사용하여 분리하였고; 실시예 10, 13, 18, 19 및 15는 방법 B를 사용하여 분리하였고; 실시예 14, 12 및 11은 방법 C를 사용하여 분리하였고; 실시예 7은 방법 D를 사용하여 분리하였고; 실시예 9는 방법 E를 사용하여 분리하였고; 제조예 47은 방법 F를 사용하여 분리하였다. 이성질체 1 (R 이성질체) 및 이성질체 2 (S 이성질체), 이성질체의 실시예 번호 및 이성질체의 체류 시간은 칼럼 1에 제시하였다.

<표 6>

<반응식 I>

실시예 49

4-클로로-N-[1-[[(4R)-5,6-디히드로-4H-이미다조[1,2-a][1]벤즈아제핀-4-일]카르바모일]시클로프로필]벤즈아미드; 4-메틸벤젠술폰산

4-클로로-N-[1-[[(4R)-(5,6-디히드로-4H-이미다조[1,2-a][1]벤즈아제핀-4-일카르바모일]시클로프로필]벤즈아미드 (439 ㎎, 1.04 mmol)를 이소프로필 알콜 (13.9 ㎖)에 용해시키고, 이소프로필 알콜 (1.60 ㎖) 중의 4-메틸벤젠술폰산 일수화물 (198.40 ㎎, 1.04 mmol)을 서서히 주위 온도에서 첨가하였다. 혼합물을 약 2시간 동안 교반하고, 고체를 여과로 수집하였다. 이를 진공 오븐 내에서 건조시켜 표제 화합물 (487 ㎎, 79%)을 백색 고체로서 얻었다: MS (m/z): 421 (M+23).

하기 표 7의 실시예는 본질적으로 실시예 49에서의 방법에 의하여 기재된 바와 같이 제조할 수 있었다.

<표 7>

실시예 54

4-클로로-N-[1-[[(4R)-5,6-디히드로-4H-이미다조[1,2-a][1]벤즈아제핀-4-일]카르바모일]시클로프로필]벤즈아미드; 히드로클로라이드

4-클로로-N-[1-[[(4R)-(5,6-디히드로-4H-이미다조[1,2-a][1]벤즈아제핀-4-일카르바모일]시클로프로필]벤즈아미드 (350.0 ㎎, 0.83 mmol)를 메틸 알콜 (12.0 ㎖)에 용해시키고, 용액을 얼음조 중에서 냉각시켰다. 에테르 중의 염화수소 (1 N) (3.33 ㎖, 3.33 mmol)를 적가하였다. 얼음조를 제거하고, 혼합물을 30분 동안 교반하고, 감압하에서 농축시켜 표제 화합물 (323 ㎎, 85%)을 백색 고체로서 얻었다: MS (m/z): 421 (M+1).

실시예 55

4-클로로-N-[1-(5,6-디히드로-4H-이미다조[1,2-a][1]벤즈아제핀-4-일카르바모일)시클로프로필]벤즈아미드 히드로클로라이드

본질적으로 실시예 54의 방법에 기재된 바와 같이 실시예 55를 제조하였다. MS (m/z): 421 (M+1).

실시예 56

N-[1-[[(4R)-5,6-디히드로-4H-이미다조[1,2-a][1]벤즈아제핀-4-일]카르바모일]시클로프로필]-4-히드록시-벤즈아미드

4-벤질옥시-N-[1-[[(4R)-5,6-디히드로-4H-이미다조[1,2-a][1]벤즈아제핀-4-일]카르바모일]시클로프로필]벤즈아미드 (145 ㎎, 294.37 μmol)를 에탄올 (20 ㎖)에 용해시키고, 파르 진탕기 상에서 10% Pd/C (22.8 ㎎, 10.71 μmol)를 사용하여 18시간 동안(60 psi, 주위 온도) 수소화 처리하였다. 촉매를 여과로 제거하고, 여과물을 감압하에서 농축시켜 표제 화합물 (107 ㎎, 90%)을 백색 고체로서 얻었다: MS (m/z): 403 (M+1).

하기 반응식 J는 N-[1-[[(4R)-5,6-디히드로-4H-이미다조[1,2-a][1]벤즈아제핀-4-일]카르바모일]시클로프로필]-4-에톡시-벤즈아미드의 합성에 대한 대안의 절차를 도시하였다.

<반응식 J>

제조예 53

5,6-디히드로이미다조[1,2-a][1]벤즈아제핀-4-온

반응기에 630 ㎏의 DMF를 가하고, 1 내지 2시간 동안 질소 블리드하에서 교반하였다. 171 ㎏의 탄산세슘 및 45.0 ㎏의 3-(2-브로모페닐) 프로피온산을 가하고, 혼합물을 1 내지 2시간 동안 80℃ 내지 85℃에서 교반하고, 이어서 다시 20℃ 내지 25℃로 냉각시켰다. 반응기에 27.0 ㎏의 이미다졸 및 4.4 ㎏의 아이오딘화구리를 가하고, 혼합물을 1 내지 2시간 동안 질소 블리드하에서 20℃ 내지 25℃에서 교반하였다. 온도를 115℃ 내지 125℃로 조절하고, 격렬하게 20 내지 24시간 동안 교반하였다[HPLC < 3%, 3-(2-브로모페닐) 프로피온산]. 반응을 60℃로 냉각시키고, 181 ㎏의 에탄올을 서서히 채웠다. 반응을 0℃ 내지 15℃로 냉각시키고, 혼합물을 8 내지 10시간 동안 교반하였다. 고체 부산물을 원심분리로 분리하였다. 젖은 케이크 및 184 ㎏의 에탄올 및 36 ㎏의 DMF를 반응기에 가하고, 0.5 내지 1시간 동안 0℃ 내지 15℃에서 교반하였다. 고체 부산물을 원심분리로 분리하였다. 여과물을 합하고, 파이프 필터를 경유하여 반응기로 옮겨서 미립자를 제거하였다. 내부 온도를 65℃ 미만으로 유지하면서, 혼합물을 675 내지 720 ℓ로 감압하에서 농축시켰다. 25℃ 내지 35℃로 냉각시키고, 174 ㎏의 에탄올을 반응기에 채웠다. 10 내지 15분 동안 교반하고, 용액의 물 함유량을 체크하였다(KF 값 < 0.5%).

내부 온도를 25℃ 내지 40℃ 사이로 유지하면서 95 ㎏의 티오닐 클로라이드를 상기 용액에 서서히 채웠다. 혼합물을 가열하여 7 내지 10시간 동안 환류시켰다[HPLC < 3% 3-(2-이미다졸-1-일-페닐)-프로피온산]. 20℃ 내지 35℃로 냉각시켰다. 혼합물을 여과하고, 필터 케이크를 189 ㎏의 에탄올로 세척하였다.

합한 여과물을 반응기에 가하고, 내부 온도 65℃를 유지하면서 감압하에서 진탕으로 675 내지 720 ℓ로 농축시켰다. 온도를 20℃ 내지 30℃로 조절하였다. 내부 온도를 20℃ 내지 30℃에서 유지하면서 450 ㎏의 물을 서서히 가하고, 10 내지 15분 동안 교반하였다.

생성된 혼합물을 헵탄 (3×153 ㎏)으로 세척하고, 내부 온도를 30℃ 미만으로 유지하면서 25% 수성 Na₂CO₃ (45 ㎏)을 사용하여 수성 층의 pH를 pH 8.0으로 조절하였다. 생성된 혼합물을 MTBE (3×450 ㎏)로 추출하고, 합한 MTBE 층 (1×369 ㎏의 2% NH₄OH; 2×362 ㎏의 H₂O)을 세척하였다. 내부 온도를 40℃ 미만으로 유지하면서 유기 층을 90 내지 180 ℓ로 감압하에서 농축시켰다. 220 ㎏의 2-MeTHF를 파이프 필터를 경유하여 채워서 미립자를 제거하고, 내부 온도를 40℃ 미만으로 유지하면서 90 내지 180 ℓ로 감압하에서 농축시켰다. 214 ㎏의 2-MeTHF를 파이프 필터를 경유하여 채워서 미립자를 제거하고(인-프로세스 KF 값 < 0.2%), 용액을 깨끗한 플라스틱 드럼으로 옮겨서 2-MeTHF 중의 에틸 3-(2-(1H-이미다졸-1-일)페닐)프로파노에이트의 195.8 ㎏ 용액을 얻었다.

반응기에 281 ㎏의 2-MeTHF 및 31 ㎏의 디이소프로필아민을 채웠다. -80℃ 내지 -70℃로 냉각시키고, 내부 온도를 -80℃ 내지 -70℃에서 유지하면서 n-헥산 중의 n-부틸 리튬 86 ㎏을 서서히 가하고, 1 내지 3시간 동안 교반하였다. 2-MeTHF중의 에틸 3-(2-(1H-이미다졸-1-일)페닐)프로파노에이트의 195.8 ㎏ 용액을 -80℃ 내지 -70 ℃에서 반응기에 서서히 가하고, 2 내지 4시간 동안 -80℃ 내지 -70℃에서 교반하였다(인-프로세스 HPLC < 3%, 에틸 3-(2-(1H-이미다졸-1-일)페닐)프로파노에이트). 47.8 ㎏의 에탄올을 반응기 내로 -80℃ 내지 -70℃에서 서서히 가하고, 0.5 내지 2시간 동안 -80℃ 내지 70℃에서 교반하였다. 내부 온도를 -25℃ 미만으로 유지하면서 310 ㎏의 MTBE를 반응기에 채웠다. 292 ㎏의 10% 시트르산 수용액으로 pH를 7.5로 조절하였다. 온도를 약 0℃로 조절하였다. 수성 층을 분리하고, 유기 층을 202 ㎏의 25% NaCl 수성으로 세척하였다. 층을 분리하고, 내부 온도를 40℃ 미만으로 유지하면서 유기 층을 감압하에서 41 내지 82 ℓ로 농축시켰다. 수성 층을 200 ㎏의 디클로로메탄으로 추출하였다. 유기 층을 합하고, 0.5 내지 1시간 동안 15℃ 내지 25℃에서 교반하였다. 이산화규소 패드 (20 ㎏)를 통하여 여과하고, 패드를 60 ㎏의 디클로로메탄으로 세척하였다. 내부 온도를 40℃ 미만으로 유지하면서 여과물을 감압하에서 82 내지 123 ℓ로 농축시켰다. 170 ㎏의 MTBE를 잔류물에 가하고, 내부 온도를 50℃ 미만으로 유지하면서 감압하에서 82 내지 123 ℓ로 농축시켰다. 208 ㎏의 MTBE를 가하고, 10 내지 15분 동안 교반하였다(인-프로세스 조절은 10.8% 2-MeTHF 및 4.6% DCM을 나타냄). 279 ㎏의 MTBE를 가하고, 내부 온도를 50℃ 미만으로 유지하면서 감압하에서 82 내지 123 ℓ로 농축시켰다(잔류 2-MeTHF% = 1.6%, 잔류 DCM% = 2.7%). 14.5 ㎏의 메틸 아세테이트를 잔류물에 가하고, 혼합물을 가열하여 30 내지 60분 동안 환류시켰다. 혼합물을 0℃ 내지 15℃로 냉각시키고, 6 내지 8시간 동안 0℃ 내지 15℃에서 교반하였다. 고체를 원심분리로 분리하고, 케이크를 35 ㎏의 MTBE로 세척하였다. 생성된 고체를 건조시켜 15.8 ㎏의 5,6-디히드로이미다조[1,2-a][1]벤즈아제핀-4-온을 얻었다. LC/MS = 199 (M+1), 419 (2M+23).

제조예 54

5,6-디히드로-4H-벤조[f]이미다조[1,2-a]아제핀-4-온 옥심

질소 대기하에서, 반응기에 42 ㎏의 (5,6-디히드로이미다조[1,2-a][1]벤즈아제핀-4-온), 15.5 ㎏의 히드록실아민 히드로클로라이드, 21.5 ㎏의 무수 아세트산나트륨 및 171 ㎏의 메탄올을 가하였다. 생성된 갈색 현탁액을 60℃ 내지 70℃로 20시간 동안 가열하였다(인-프로세스 HPLC < 3% 5,6-디히드로이미다조[1,2-a][1]벤즈아제핀-4-온). 반응을 23℃ 내지 25℃로 냉각시키고, 8시간 동안 교반하였다. 고체를 원심분리로 분리하고, 33 ㎏의 저온의 메탄올로 헹구었다. 생성된 고체를 반응기로 옮기고, 210 ㎏의 물로 85℃ 내지 90℃에서 2시간 동안 슬러리화하였다. 고체를 원심분리로 분리하고, 고체를 85 ㎏의 물로 헹구었다. 생성된 고체를 건조시켜 39.65 ㎏의 5,6-디히드로-4H-벤조[f]이미다조[1,2-a]아제핀-4-온 옥심을 얻었다. MS = 214 (M+1).

제조예 55

5,6-디히드로-4H-이미다조[1,2-a][1]벤즈아제핀-4-아민 디히드로클로라이드

불활성 대기가 있는 반응기에 153 ㎏의 메탄올, 9.6 ㎏의 5,6-디히드로-4H-벤조[f]이미다조[1,2-a]아제핀-4-온 옥심, 1.9 ㎏의 수산화나트륨 고체, 10 ㎏의 물 및 10 ㎏의 래니 니켈 (쑤저우 타일리다 사이-테크 컴파니 리미티드(Suzhou Tailida Sci-tech Co., Ltd.))을 가하였다. 반응기를 수소 기체로 58 내지 65 psi로 가압하고, 60℃ 내지 65℃로 가열하였다. 40시간 후, 10℃ 내지 20℃로 냉각하고, 여과하여 8 ㎏의 규조토 패드를 통하여 니켈 촉매를 제거하고, 33 ㎏의 메탄올로 헹구었다. 반응기 온도를 50℃ 미만으로 유지하면서 여과물을 진공하에서 1 내지 2 부피로 농축시켰다. 130 ㎏의 디클로로메탄을 가하고, 1 내지 2 부피로 농축시키고, 추가의 130 ㎏의 디클로로메탄 및 104 ㎏의 물을 가하였다. 10℃ 내지 20℃에서 10 내지 15분 동안 교반하고, 교반하지 않으면서 30 내지 35분 동안 유지하였다. 층을 분리하고, 유기 및 수성 층을 별도의 탱크로 옮겼다. 유기 층을 104 ㎏의 정제수 및 104 ㎏의 25% 염화나트륨 용액으로 세척하였다. 유기 층을 수성 층으로부터 분리하였다. 상 분리에 사용된 초기 반응기는 최소량의 에탄올 (20 ㎏)로 헹구어야만 하며, 에탄올 헹굼액을 유기 층에 첨가하였다. 내부 온도를 40℃ 미만으로 유지하면서, 유기 층을 1 내지 2 부피로 진공하에 농축시켰다. 57 내지 58 ㎏의 에탄올을 가하고, 내부 온도를 40℃ 미만으로 유지하면서 1 내지 2 부피로 농축시키고, 디클로로메탄이 잔류 용매 분석 (GC)에 의하여 검출되지 않을 때까지 반복하였다. 3 부피의 에탄올을 가하고, 잔류 디클로로메탄(GC)에 대하여 검정하였다. 아무것도 검출되지 않을 경우, 10℃ 내지 15℃로 냉각시키고, 에틸 아세테이트 중의 4 N HCl 100 ㎏을 서서히 가하였다. 3 내지 8시간 동안 10℃ 내지 20℃에서 교반하고, 여과하고, 케이크를 25 ㎏의 에탄올로 헹구었다. 케이크를 50℃ 내지 55℃에서 12 내지 16시간 동안 건조시켜 11.1 ㎏의 라세미 아민 비스 HCl 염 (5,6-디히드로-4H-벤조[f]이미다조[1,2-a]아제핀-4-아민 1.5-2.0 HCl 염)을 얻었다. MS = 200 (M+1).

제조예 56

(4R)-5,6-디히드로-4H-이미다조[1,2-a][1]벤즈아제핀-4-아민

반응기에 35.9 ㎏의 5,6-디히드로-4H-이미다조[1,2-a][1]벤즈아제핀-4-아민 디히드로클로라이드 및 453 ㎖의 물을 가하였다. 온도를 25℃ 미만으로 유지하면서 29.7 ℓ의 NH₄OH 25%를 30분 이내에 서서히 첨가하였다. 첨가 후, pH는 9이며, 맑은 갈색 용액이었다. 31.5 g의 시드(seed)를 22℃에서 첨가하여 결정화를 유도하였다. 현탁액을 8시간 동안 교반하고, 5℃로 냉각하였다. 여과하고, 필터 케이크를 54 ℓ의 저온수로 세척하고, 필터 중의 생성된 필터 케이크를 N₂/진공을 사용하여 31시간 동안 건조시켜 5,6-디히드로-4H-이미다조[1,2-a][1]벤즈아제핀-4-아민을 얻었다. 29 ㎏의 미정제 필터 케이크를 145 ℓ의 에탄올에 일부분씩 용해시켰다. 73 ℓ의 용매를 진공 증류에 의하여 제거하였다. 108 ℓ의 에탄올을 첨가하고, 제거하고, 최종 농도가 2 ℓ/㎏이 될 때까지 133 ℓ의 용매를 증류시켰다. 인-프로세스 칼 피셔(Karl Fischer) 분석을 수행하여 ≤0.1% w/w에서의 최종 물 함유량을 측정하였다.

키랄 정지상(CSP)으로서 키랄팩 AS-V, 20 Qm상에서 5,6-디히드로-4H-이미다조[1,2-a][1]벤즈아제핀-4-아민의 SMB 분리를 수행하였다. 이동상은 에탄올/메탄올/N,N-디에틸메틸아민 = 70:30:0.1 v:v:v이었다. 목표 거울상이성질체 (4R)-5,6-디히드로-4H-이미다조[1,2-a][1]벤즈아제핀-4-아민은 두번째로 용리되는 거울상이성질체이었다. 추출물 스트림의 인-스펙(in-spec) 분획을 모아서, 약 20%의 잔류 부피에 대하여 To ≤ 65℃ 및 p = 300 내지 79 mbar에서 농축시켰다. 농축을 위하여 가한 풀(pool)은 하류 인라인-필터 폴리캡 HD (5.0 ㎛)를 갖는 챠콜 카트리지 제타-카본(Zeta-Carbon) R55SP를 경유하여 통과시켰다[키랄팩 AS-V, 20 ㎛; 이동상: 에탄올/메탄올/N,N-디에틸메틸아민 = 70:30:0.1 v:v:v; 공급물: 용리제 중의 약 173 g 미정제/ℓ(이동상); 추출물: 220.60 ㎖/min; 라피네이트: 46.22 ㎖/min; 용리제: 245.03 ㎖/min; 공급물: 21.80 ㎖/min; 재순환: 382.38 ㎖/min; 기간: 1.00분; 온도: 실온; 압력: 약 42 bar].

제조예 57

800 ℓ 반응기에 4-에톡시벤조산 (11.0 ㎏) 및 디클로로메탄 (132.6 ㎏)을 가하였다. 디메틸포름아미드 (34 ㎖)를 첨가한 후, 온도 27±2℃를 유지하면서 옥살릴 클로라이드 (9.2 ㎏)를 약 45 분에 걸쳐 첨가하였다. 반응기의 내용물을 27±2℃에서 4.5시간 동안 교반하였다. HPLC 분석에 의하면, 2.5%의 4-에톡시벤조산이 나타났다. 과량의 옥살릴 클로라이드를 진공 증류로 제거하였다. 오일상 잔류물을 디클로로메탄 (55 ㎏)에 용해시켰다. 800 ℓ 반응기에 1-아미노시클로프로판-1-카르복실산 에틸 에스테르 히드로클로라이드 (10 ㎏) 및 디클로로메탄 (110 ㎏)을 가하였다. 트리에틸아민 (15.3 ㎏)을 가하고, 첨가 중에 10℃ 미만의 온도를 유지하였다. 온도를 15℃ 미만으로 유지하면서 산 클로라이드 용액을 45분 이상 동안 첨가하였다. 생성된 혼합물을 23℃에서 밤새 (12시간) 교반하였다. HPLC 분석에 의하면 순도가 약 85%이었다. 생성물 슬러리를 1 N HCl (33.4 ℓ)로 추출하고, 수성 층을 디클로로메탄 (44.3 ㎏)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 8% 수성 NaHCO₃ 용액 (50.4 ㎏)으로 세척하였다. 유기 층을 물 (33.4 ㎏) 및 염수 (33.4 ㎏)로 세척하였다. 증류물 부피가 약 70 ℓ에 도달할 때까지 디클로로메탄을 증류시키고, 이어서 우수한 슬러리로 헵탄 (164 ㎏)을 첨가하였다. 증류물 부피가 추가의 70 ℓ의 디클로로메탄에 도달할 때까지 증류를 지속하였다. 이러한 진공 증류 중의 배치 온도는 0℃ 정도로 낮았다. 생성물 슬러리를 20±5℃에서 1시간 동안 교반하였다. 생성물을 여과하고, 헵탄 (2×20 ㎏)으로 세척하고, 진공하에서 건조시켜 에틸 1-[(4-에톡시벤조일)아미노]시클로프로판카르복실레이트 (14.6 ㎏, 86% 수율, HPLC에 의한 순도 93.5% )를 얻었다.

에틸 1-[(4-에톡시벤조일)아미노]시클로프로판카르복실레이트의 재결정화:

800 ℓ 반응기에 미정제 에틸 1-[(4-에톡시벤조일)아미노]시클로프로판카르복실레이트 (14.19 ㎏) 및 디클로로메탄 (144 ㎏)을 가하였다. 혼합물을 25±2℃에서 30분 동안 교반하여 맑은 용액을 얻었다. 헥산 (191 ㎏)을 30분에 걸쳐 상기 용액에 첨가하였다. 생성된 생성물 슬러리를 25±2℃에서 20분 동안 교반한 후, 디클로로메탄을 진공 증류에 의하여 20±5℃에서 제거하였다. 우수한 슬러리 진탕을 위하여 추가의 헥산 (29 ㎏)을 첨가하고, 25±2℃에서 1시간 동안 교반하였다. 고체를 여과하고, 헥산 (19 ㎏, 38 ㎏, 29 ㎏ 및 19 ㎏)으로 세척하였다. 에틸 1-[(4-에톡시벤조일)아미노]시클로프로판카르복실레이트의 젖은 케이크는 HPLC 분석에 의하여 검출한 바 불순물 (4-에톡시벤조산 무수물)을 나타내지 않았다. 40℃에서 진공하에서 23시간 동안 건조시켜 에틸 1-[(4-에톡시벤조일)아미노]시클로프로판카르복실레이트 (12.21 ㎏, 86% 회수 수율, HPLC에 의한 순도 99.9%)를 백색의 솜털과 같은 분말로서 얻었다. 양성자 NMR은 구조와 일치하였다.

제조예 58

1-[(4-에톡시벤조일)아미노]시클로프로판카르복실산

800 ℓ 반응기에 에틸 1-[(4-에톡시벤조일)아미노]시클로프로판카르복실레이트 (12.19 ㎏), THF (45.5 ㎏) 및 MeOH (20.2 ㎏)를 가하였다. 전달중에 온도를 23℃ 미만으로 유지하면서 반응기에 물 (25.6 ㎏) 중의 LiOH 일수화물 (2.49 ㎏)의 용액을 첨가하였다. 생성된 용액을 20±3℃에서 밤새 (19시간) 교반하였다. THF 및 MeOH를 진공 증류에 의하여 제거한 후, 물 (67 ㎏)을 반응기에 첨가하였다. 5 N HCl (약 12 ℓ)을 사용하여 반응의 pH를 17±2℃에서 약 2.0으로 조절하였다. 생성된 생성물 슬러리를 17±2℃에서 50분 동안 교반하였다. 고체를 여과로 수집하고, 물 (3×40 ㎏)로 세척하였다. 젖은 케이크를 47℃에서 진공하에 건조시켜 1-[(4-에톡시벤조일)아미노]시클로프로판카르복실산 (10.74 ㎏, 98% 수율, HPLC에 의한 순도 > 99%, 0.03% KF)을 백색 분말 고체로서 얻었다. LC-MS (M+1 = 250).

실시예 57

(4R)-5,6-디히드로-4H-이미다조[1,2-a][1]벤즈아제핀-4-아민의 에탄올성 용액 46.36 ㎏을 하류 인라인 필터 폴리캡 HD (5.0 ㎛)가 있는 제타-카본 R55SP 챠콜 카트리지를 경유하여 여러 부분으로 20 ℓ 회전증발기로 옮기고, 55℃ 내지 58℃에서 p = 130 내지 079 mbar에서 농축시켜 최종적으로 고형화되는 잔류물을 얻었다. 물질을 2개의 부분으로 나누었다(4.524 ㎏ 및 4.468 ㎏).

제1의 부분을 11 ㎏의 디클로로메탄에 용해시키고, 다시 55℃ 및 600 내지 200 mbar에서 농축시켰다. 무수 상태로 증발시킨 후, 생성된 고체를 11 ㎏ 디클로로메탄에 용해시키고, 생성된 용액을 잔류 에탄올에 대한 NMR 측정을 위하여 샘플을 채취하였다. 55℃ 및 p = 600 내지 200 mbar에서 무수 상태로 증발시켰다. 11 ㎏의 디클로로메탄에 다시 용해시켰다. 유기 용액을 새로운 드럼으로 옮기고, 회전증발기를 5.5 ㎏ 디클로로메탄으로 헹구고, 헹굼액을 제1의 농축액과 합하였다.

제2의 부분을 11 ㎏의 디클로로메탄에 용해시키고, 55℃ 및 p = 600-200 mbar에서 증발시키고, 11 ㎏의 디클로로메탄에 다시 용해시켰다. 무수 상태로 증발시켰다. 11 ㎏의 디클로로메탄에 다시 용해시키고, 에탄올을 위하여 샘플을 채취하였다. 55℃ 및 p = 600 내지 200 mbar에서 증발시킨 후, 11 ㎏의 디클로로메탄에 다시 용해시켰다. 잔류 에탄올을 위하여 샘플을 채취하였다. 제1의 농축액과 합하였다. 회전증발기를 5.5 ㎏의 디클로로메탄으로 헹군 후, 나머지 농축액과 합하였다. 160 ℓ 반응기를 불활성 상태로 만들고, 반응기로 옮겼다. 20℃에서 반응기에 34 ℓ의 디클로로메탄, 10.4 ㎏의 1-[(4-에톡시벤조일)아미노]시클로프로판카르복실산 및 17.5 ℓ의 트리에틸아민을 가하였다. 생성된 용액을 -20℃로 50분 이내에 냉각시켰다. 서서히 반응 혼합물에 첨가 탱크를 경유하여 3시간 이내에 -20℃에서 27 ℓ의 T3P를 첨가하였다. 반응액을 9시간 동안 -18℃에서 교반하였다. 반응액을 -3℃로 40분 이내에 가온시켰다. 42 ℓ의 물을 45분 이내에 첨가하여 온도를 6℃로 승온되도록 하여 밝은 황색 현탁액을 형성하였다. 20℃에서 45분 후, 반응 혼합물은 여전히 현탁액 상태이었다. 17 ℓ의 디클로로메탄을 첨가하여 20분 후 고체를 완전 용해시켰다. 상 분리 후(25분), 수성 층 (pH 8)을 제거하고, 유기 디클로로메탄 상을 43 ℓ의 물로 세척하였다. 상 분리 후, 수성 층 (pH 9)을 제거하였다. 유기 디클로로메탄 층을 다시 42 ℓ의 물로 세척하였다. 상 분리(15분) 후, 유기 층을 새로운 드럼으로 옮겼다. 수성 층을 세척하고, 반응기로 옮기고, 21 ℓ의 디클로로메탄으로 2회 세척하였다. 반응기 내의 모든 유기 추출물 상을 합하고, -10℃에서 약 5일 동안 사용 또는 저장하였다. 반응기를 메탄올로 헹구고, 반응기로 인라인 필터를 경유하여 옮겼다. 용액을 7.0 ℓ/㎏의 (4R)-5,6-디히드로-4H-이미다조[1,2-a][1]벤즈아제핀-4-아민으로 65℃에서 및 p = 1 bar 내지 700 mbar로 농축시켜 73 ℓ의 용매를 제거하였다. 생성된 농축물을 20℃에서 밤새 교반하여 현탁액을 형성하였다. 현탁액을 66.5 ℓ 인라인-여과된 이소프로필 아세테이트로 희석하였다. 현탁액을 65℃ 및 p = 1 bar 및 300 mbar에서 농축시켜 58 ℓ의 용매를 제거하였다. 현탁액을 67 ℓ의 인라인 여과된 이소프로필 아세테이트로 65℃에서 희석하고, 다시 65℃에서 및 p = 300-140 mbar에서 농축시켜 67 ℓ의 용매를 제거하였다. 모든 증류 단계 중에서의 최대 온도는 50℃이었다. 농축된 현탁액을 65℃로 45분 이내에 가열하였다. 55 ℓ의 인라인 여과된 n-헵탄을 35분 이내에 65℃ 내지 62℃에서 첨가하였다. 12시간 이내에, 현탁액을 중간 속도에서 교반하여 20℃까지 냉각되도록 하였다. 현탁액을 너츠(nutsch)(급속 여과: 16분)를 경유하여 여과하였다. 반응기를 25 ℓ의 인라인-여과된 n-헵탄으로 플러쉬 처리하고, 세척되는 현탁액을 필터 케이크에 통과시켰다. 필터 케이크를 블로우 드라이 처리하고, 진공 (p = 200-100 mbar)하에서 건조시켜 16.8 ㎏의 N-[1-[[(4R)-5,6-디히드로-4H-이미다조[1,2-a][1]벤즈아제핀-4-일]카르바모일]시클로프로필]-4-에톡시-벤즈아미드를 생성하였다. 실시예 57의 물질의 NMR은 실시예 1의 물질과 일치하였다.

제조예 59

5,6-디히드로-4H-이미다조[1,2-a][1]벤즈아제핀-4-아민

공기하의 25 ㎖ 둥근 바닥 플라스크에 (4S)-5,6-디히드로-4H-이미다조[1,2-a][1]벤즈아제핀-4-아민 (1.0 g, 5.02 mmol), 나트륨 t-부톡시드 (492 ㎎, 5.12 mmol), 펩시™ (37 ㎎, 0.054 mmol) 및 교반 막대를 첨가하였다. 플라스크를 격막으로 닫고, 이를 2중 매니폴드에 니들을 경유하여 부착시켰다. 플라스크를 비우고, 질소로 3회 다시 채웠다. 에탄올 (12 ㎖)을 주사기를 경유하여 첨가하고, 60℃ 오일조에서 24시간 동안 가열하였다. 플라스크를 오일조로부터 제거하였다. 1 g의 실리카 겔 및 400 ㎎의 Si-티올 금속 스캐빈저를 첨가하고, 140분 동안 교반하였다. 혼합물을 여과지를 통하여 여과하고, 여과물을 회전 증발을 경유하여 농축시켰다. 잔류물을 75℃에서 진공하에서 건조시켜 1.0 g의 황갈색 고체를 얻었다. 키랄 LC (키랄셀 OD-H 칼럼 상에서 0.2% DMEA를 갖는 10% 에탄올/90% 헵탄)-0.2% ee. ES/MS m/z 200.2 [m+H].

실시예 58

커플링 반응에 사용하기 이전에 (4R)-5,6-디히드로-4H-이미다조[1,2-a][1]벤즈아제핀-4-아민의 에탄올성 용액을 무수 상태로 농축시켰다. 15.0 g의 (4R)-5,6-디히드로-4H-이미다조[1,2-a][1]벤즈아제핀-4-아민 및 18.03 g의 1-[(4-클로로벤조일)아미노]시클로프로판카르복실산을 120 ㎖의 디클로로메탄 및 32 ㎖의 트리에틸아민에 용해시켰다. -20℃로 냉각시킨 후, -19℃의 온도를 유지하면서 53.0 ㎖ (1.2 eq.)의 T3P를 40분 이내에 첨가하였다. 반응이 실온으로 밤새 가온되도록 하였다. 출발 물질의 완전한 소비에 대하여 HPLC로 시험하였다. 0℃ 내지 6℃에서의 수성 켄칭 (75 ㎖의 물) 및 디클로로메탄을 사용한 추가의 희석 후(침전중인 고체를 추가의 180 ㎖의 디클로로메탄의 첨가 후 용해시킴), 상을 분리하였다. 유기 층을 75 ㎖의 물로 2회 세척한 후, 합한 수성 층을 75 ㎖의 디클로로메탄으로 1회 역추출하였다. 유기 추출물 상 (420 ㎖)을 농축시켜 290 ㎖의 용매를 제거하였다(고체의 침전이 개시되었다). 240 ㎖의 이소프로필 아세테이트를 첨가한 후, 추가의 250 ㎖의 용매를 제거하였다. 생성된 진한 현탁액을 70℃로 가온시키고, 30 ㎖의 n-헵탄을 첨가하고, 현탁액을 실온으로 밤새 서서히 냉각시켰다. 현탁액을 유리 필터 너츠를 경유하여 여과하고, 필터 케이크를 n-헵탄으로 세척하였다. 회전증발기로 건조시킨 후, 담갈색 고체 [29.65 g, 93.58% 수율, HPLC (비키랄)]를 생성하였다. LC-MS (질량 분광측정)(m/z): 421.

생물학적 검정

DGAT-1 효소 검정: DGAT-1의 억제제는 효소 공급원으로서 sf9 곤충 세포 중에서 발현되는 재조합 인간 DGAT-1을 사용하는 시험관내 효소 검정으로 확인하였다. DGAT-1 효소는 DGAT-1 발현 벡터를 함유하는 재조합 바큘로바이러스로 세포를 감염시켜 생성되었다. 48시간 후, 감염 세포를 원심분리로 수거하고, 저온의 20 mM NaCl로 재현탁시키고, 다운스(Dounce) 균질화기로 파열시켰다. 각각의 1 ℓ의 감염된 세포 현탁액에 대하여 세포 펠릿에 15 ㎖의 20 mM NaCl을 첨가하였다. 균질물 중의 DNA는 세포 추출물을 25 게이지 니들을 통하여 당기어 전단 처리하였다. 바큘로바이러스 감염된 세포 균질물에서의 DGAT-1 활성을 감염되지 않은 세포로부터의 균질물과 비교하여, sf9 세포와 관련된 백그라운드 효소 활성을 평가하였다.

검정은 문헌 [Coleman, Methods in Enzymology 209. pp98-102 (1992)]에 기재된 검정의 변형을 사용하여 96 웰 플레이트 중에서 수행하였다. 간단히, 화합물을 100 μM 내지 1.7 nM 최종 농도의 1:3 단계 희석으로 시험하였다. 효소 반응 혼합물은 150 mM 헤페스(Hepes) 완충제 (pH 7.4), 0.7% vol/vol 트리톤(Triton)^® X-100 및 컴플리트(Complete)™ 프로테아제 억제제를 함유하는 수성 완충제 중의 기질 250 μM 1,2-sn-디아실글리세롤 (아반티 폴라 리피드(Avanti Polar Lipids)), 5 μM ¹⁴C 올레오일 CoA 및 45 μM 올레오일 CoA를 함유하였다. 반응 웰당 2 ㎍의 sf9 균질물을 사용하였다. 총 반응 부피는 50 ㎕이었다. 반응을 실온에서 25분 동안 인큐베이션한 후, 58.8% 이소프로판올, 14.7% n-헵탄, 11.5% 물, 12.5% 에탄올 및 2.5% 1 N 수산화나트륨을 함유하는 50 ㎕의 용액을 첨가하여 중지시켰다. 그후, 100 ㎕의 신틸레이션 칵테일을 첨가하고, 8시간 후, 플레이트를 계수하였다. 액티비티베이스(ActivityBase)(IDBS) 데이터 분석 소프트웨어를 사용하여 기초 데이터로부터 화합물에 대한 농도 반응 곡선 및 IC₅₀ 값을 도출하였다.

본원에 개시된 실시예의 모든 화합물은 실질적으로 본원에 기재된 바와 같은 DGAT-1 효소 검정에서 600 nM 미만의 IC₅₀ 측정값으로 활성이 입증되었다. 화합물 N-[1-[[(4R)-5,6-디히드로-4H-이미다조[1,2-a][1]벤즈아제핀-4-일]카르바모일]시클로프로필]-4-에톡시-벤즈아미드 (실시예 1, 3, 57)의 경우 IC₅₀ 측정값은 134±8.0 nM (n = 2; 기하 평균±표준 오차)이고, 화합물 4-클로로-N-[1-[[(4R)-5,6-디히드로-4H-이미다조[1,2-a][1]벤즈아제핀-4-일]카르바모일]시클로프로필]벤즈아미드 (실시예 2, 21, 58)의 경우 IC₅₀ 측정값은 89.0±0.98 nM (n = 3; 기하 평균±표준 오차)이었다.

DGAT-1 효소 검정으로부터의 결과는 본원에 개시된 실시예가 DGAT-1 효소의 유효한 억제제라는 것을 입증하였다.

지방세포 트리글리세리드 합성 검정: 본 검정은 무손상 마우스 3T3-L1 지방세포에서의 트리글리세리드 합성을 억제하는 화합물의 능력을 측정하였다. 미분화된 3T3-L1 세포를 96 웰 플레이트에서 웰당 25,000개의 세포 밀도로 표준 조직 배양 조건하에서 배양하였다. 배양에서 2일 후, 세포를 0.5 mM 1-메틸-3-이소부틸크산틴 (IBMX), 10 ㎍/㎖ 인슐린 및 1 μM 덱사메타손이 보충된 배지에 넣어 지방세포로 분화시켰다. 배양에서 5일 후, 세포는 10 ㎍/㎖ 인슐린만이 보충된 배지 중에서 성장시켰다. 세포 배양 12일 후 검정을 수행하였다. 검정을 개시하기 위하여, 배양 배지를 세포로부터 제거하고, 0.375 μCi/웰 ¹⁴C 아세테이트를 함유하는 50 ㎕ OptiMEM^® 배지로 대체하였다. 그후, 세포를 37℃에서 7.5% CO₂ 중에서 4시간 동안 인큐베이션하였다. 이러한 인큐베이션 종료 시, 배지를 제거하고, 세포를 행크스 평형 염으로 1회 세척하고, 25 ㎕의 0.7% 트리톤^® X-100을 각각의 웰에 첨가하고, 세포를 5분 동안 추출되도록 하였다. 이 기간이 종료된 후, 58.8% 이소프로판올, 14.7% n-헵탄, 11.5% 물, 12.5% 에탄올 및 2.5% 1 N 수산화나트륨을 함유하는 75 ㎕의 용액을 각각의 웰에 첨가하고, 플레이트를 오비탈 진탕기 상에서 2분 동안 진탕시켰다. 그후, 100 ㎕의 헵탄을 첨가하고, 플레이트를 또다른 2분 동안 진탕시켰다. 그후, 플레이트를 저속 원심분리기에서 회전시켜 상 분리를 용이하게 하고, 50 ㎕의 소수성 상을 신틸레이션 계수를 위하여 제거하였다. 화합물에 대한 농도 반응 곡선 및 EC₅₀ 값은 액티비티베이스 (IDBS) 데이터 분석 소프트웨어를 사용하여 기초 데이터로부터 도출하였다. 화합물은 실질적으로 본원에 기재된 지방세포 트리글리세리드 합성 검정 방법에 의하여 시험하였다.

화합물 N-[1-[[(4R)-5,6-디히드로-4H-이미다조[1,2-a][1]벤즈아제핀-4-일]카르바모일]시클로프로필]-4-에톡시-벤즈아미드 (실시예 1, 3, 57)의 경우, EC₅₀ 측정값은 175 nM±94.0 (n = 2; 기하 평균±표준 오차)이었다. 화합물 4-클로로-N-[1-[[(4R)-5,6-디히드로-4H-이미다조[1,2-a][1]벤즈아제핀-4-일]카르바모일]시클로프로필]벤즈아미드 (실시예 2, 21, 58)의 경우, EC₅₀은 213 nM±78.2 (n = 4; 기하 평균±표준 오차)이었다.

지방세포 트리글리세리드 합성 검정으로부터의 결과는 화합물 N-[1-[[(4R)-5,6-디히드로-4H-이미다조[1,2-a][1]벤즈아제핀-4-일]카르바모일]시클로프로필]-4-에톡시-벤즈아미드 및 4-클로로-N-[1-[[(4R)-5,6-디히드로-4H-이미다조[1,2-a][1]벤즈아제핀-4-일]카르바모일]시클로프로필]벤즈아미드가 무손상 마우스 3T3-L1 지방세포에서 트리글리세리드 합성의 유효한 억제제라는 것을 입증하였다.

오일 볼루스 흡수 모델: DGAT-1이 소장으로부터의 지질 흡수와 관련이 있다는 것을 입증하는 문헌 [Buhman et al., Journal of Biological Chemistry 277 pp25474-25479 (2002)]의 실험에 기초하여 올리브 오일 볼루스를 래트에게 경구 투여후 혈장 트리글리세리드 수준을 측정하는 DGAT-1 억제의 생체내 모델을 개발하였다. 정상 식이 하의 스프라그-돌리 래트 수컷 (280-320 g, 시험군당 n = 6)을 화합물 평가 적어도 1주 전 시험 동물사육장에 순응시켰다. 화합물 시험 전에, 래트를 16시간 동안 단식시켰다. 화합물을 1 ㎖/㎏의 부피로 10% 에탄올/90% 옥수수 오일의 비히클 중의 경구 영양으로 투여하였다. 화합물 투여 4시간후, 0.5 ㎖ 혈액 샘플을 꼬리 정맥을 경유하여 수집하였다. 4시간 혈액 수집 직후, 올리브 오일의 3.0 ㎖ 볼루스를 경구 영양으로 투여하였다. 화합물 투여 6시간 후 최종 혈액 샘플을 꼬리 정맥으로부터 수집하였다. 혈장은 혈액 샘플로부터 원심분리에 의하여 준비하고, 트리글리세리드 함유량 (히타치(Hitachi) 912 임상적 화학 분석기를 사용) 및 시험 화합물 수준 모두에 대하여 분석하였다. 혈장 트리글리세리드에서의 증가를 50% (ED₅₀) 및 80% (ED₈₀) 감소시키는 유효 용량을 결정하였다. DGAT-1 억제는 비히클 처치된 (대조군) 동물에서 실험의 4 내지 6시간 사이 (변형된 모델에서 14 내지 16시간 사이)에 발생되는 혈장 트리글리세리드의 증가를 억제하는 시험 화합물의 능력에 대한 지표가 된다. 모델의 변형에서, 1차 혈액 샘플 수집 및 오일 볼루스 투여 14시간 전 화합물을 투여하였다. 투여 후 16시간에 최종 혈액 샘플을 수집하였다. 이와 같은 모델의 더 긴 기간 변형에서, 모델의 더 짧은 시간 변형과 일치하도록 화합물 투여 후 10시간에서 화합물 없이 10% 에탄올/90% 옥수수 오일 비히클을 투여하였다. 화합물을 실질적으로 본원에 기재된 오일 볼루스 흡수 래트 모델 방법에 의하여 시험하였다.

화합물 N-[1-[[(4R)-5,6-디히드로-4H-이미다조[1,2-a][1]벤즈아제핀-4-일]카르바모일]시클로프로필]-4-에톡시-벤즈아미드 (실시예 1, 3, 57)의 경우, 3종의 실험은 1, 3, 10 및 30 ㎎/㎏의 용량을 사용하였다. 화합물 4-클로로-N-[1-[[(4R)-5,6-디히드로-4H-이미다조[1,2-a][1]벤즈아제핀-4-일]카르바모일]시클로프로필]벤즈아미드 (실시예 2, 21, 58)의 경우, 실험 1은 0.3, 1, 3, 10 및 30 ㎎/㎏의 용량을 사용하였고, 실험 2 및 3의 경우, 사용한 투여량은 0.1, 0.3, 1, 3 및 10 ㎎/㎏이었다. 결과를 하기 표 8 및 표 9에 제시한다.

<표 8>

<표 9>

데이터는 메타-분석을 사용하여 분석하였다. 전체 ED₅₀ (ED₈₀)은 각각의 실험으로부터의 ED₅₀ (ED₈₀)의 가중 평균으로서 추정하며, 가중치는 ED₅₀ (ED₈₀) 추정치의 분산의 역이다. 동질성 Q-테스트를 수행하였다. 이 테스트가 0.10 수준에서 유의성이 있는 경우, 혼합-효과 모델을 사용하여 실험간 및 실험내 변이성을 모두 포함시켰다. 가중치는 각각의 실험으로부터 ED₅₀ (ED₈₀)의 실험간 분산 및 실험내 분산의 합의 역으로 조절하였다. 실험간 분산은 폴-만델(Paule-Mandel) 추정자에 의하여 추정하였다. (문헌 [Sutton, A.J., Jones, D.R., Abrams, K.R., Sheldon, T.A. and Song, F., Methods for Meta-analysis in Medical Research London, John Wiley, ISBN 0-471-49066-0 (2000)]. [Dersimonian R. and Kacker, R., Random-effects model for meta-analysis of clinical trials: An update, Contemporary Clinical Trials 28 p105-114 (2007)] 참조).

<표 10>

<표 11>

결과에 의하면, N-[1-[[(4R)-5,6-디히드로-4H-이미다조[1,2-a][1]벤즈아제핀-4-일]카르바모일]시클로프로필]-4-에톡시-벤즈아미드 (실시예 1, 3, 57) 및 4-클로로-N-[1-[[(4R)-5,6-디히드로-4H-이미다조[1,2-a][1]벤즈아제핀-4-일]카르바모일]시클로프로필]벤즈아미드 (실시예 2, 21, 58)가 오일 볼루스 흡수 래트 모델에서의 혈장 트리글리세리드의 증가를 억제한다는 것을 입증하였다. 이러한 결과는 DGAT-1의 억제를 나타낸다.

식이-유도된 비만 마우스 모델: 체중 및 식품 섭취에 대한 효과를 측정하기 위하여, 화합물을 고 지방 식이를 공급한 C57 Bl6 마우스에서 시험하였다(연구 식이 D12492). D12492로 사육된 14주령 마우스를 시험 동물사육장에 2주간 12시간 명/암 주기로 순응시켰다. 화합물 시험 7일전, 동물에게 1일 1회 또는 2회로 적절한 비히클과 함께 경구 위관영양으로 투여하여 마우스가 취급에 익숙하게 하였다. 비히클 투여 6일차에, 신체 조성은 정량적 핵 자기 공명 (QNMR)으로 측정하였다. 비히클 투여 7일차에, 동물을 체중에 따라 무작위로 나누고, 시험군 (n = 8)으로 분류하였다. 화합물 투여는 1일 2회로 비히클 투여 7일후 개시하였다. 동물에게 명/암 주기의 암 단계 이전 30분에 화합물을 투여하고, 필요할 경우, 다시 암 단계로 5.5시간에 투여하였다. 화합물 투여는 식품 섭취 도중에 15 내지 22일 동안 지속하고, 체중을 매일 측정하였다. 실험 14일차에, 신체 조성을 QNMR에 의하여 다시 측정하였다. 15일차에, 혈장 중의 시험 화합물 수준의 측정을 위한 최종 투여후 0, 2, 4 및 6시간에서 시험군당 2 마리의 동물로부터 말단 혈액을 채혈하였다.

데이터를 메타-분석을 사용하여 분석하였다. 체중 증가율(감소율) 및 지방 질량 증가율(감소율)의 경우, 메타-분석에서의 처치 효과의 측정은 처치군 및 대조군 사이의 군 평균 차이이다. 대조군으로부터 식품 섭취 변화의 누적율 (%CFICFC)의 경우, 처치 효과의 측정은 %CFICFC 그 자체이다. 전체 처치 효과는 개개의 실험으로부터의 처치 효과의 가중 평균으로서 추정하며, 가중치는 개개의 실험의 처치 효과의 추정의 분산의 역이다. 동질성 Q-테스트를 수행하였다. 이 테스트가 0.10 수준에서 유의성이 있는 경우, 혼합-효과 모델을 사용하여 실험간 및 실험내 변이성 모두를 포함시켰다. 가중치는 각각의 실험으로부터 처치 효과 추정의 실험간 분산 및 실험내 분산의 합의 역으로 조절하였다. 실험간 분산은 폴-만델 추정자에 의하여 추정하였다. (문헌 [Sutton, A.J., Jones, D.R., Abrams, K.R., Sheldon, T.A. and Song, F., Methods for Meta-analysis in Medical Research London, John Wiley, ISBN 0-471-49066-0 (2000)]; [Dersimonian R. and Kacker, R., Random-effects model for meta-analysis of clinical trials: An update, Contemporary Clinical Trials 28 p105-114 (2007)] 참조). 화합물을 실질적으로 본원에 기재된 식이-유도된 비만 마우스 모델 방법에 의하여 시험하였다.

N-[1-[[(4R)-5,6-디히드로-4H-이미다조[1,2-a][1]벤즈아제핀-4-일]카르바모일]시클로프로필]-4-에톡시-벤즈아미드 (실시예 1, 3, 57)의 경우, 3종의 실험을 1, 3, 10 및 30 ㎎/㎏ (실험 중 2개) 및 3 및 30 ㎎/㎏ (실험 중 하나)의 용량으로 수행하였다. 3 및 30 ㎎/㎏ 용량이 실험에 공통적이므로, 이러한 용량을 사용하여 결과를 비교하였다.

4-클로로-N-[1-[[(4R)-5,6-디히드로-4H-이미다조[1,2-a][1]벤즈아제핀-4-일]카르바모일]시클로프로필]벤즈아미드 (실시예 2, 21, 58)의 경우, 2종의 실험을 3, 10, 30 및 60 ㎎/㎏의 용량으로, 그리고 0.3, 1, 3 및 10 ㎎/㎏의 용량으로 수행하였다. 각각의 실험의 경우, 용량은 1일 2회 제공하였다. 3 및 10 ㎎/㎏ 용량이 실험에 대하여 공통적이므로, 이러한 용량을 사용하여 결과를 비교하였다.

하기 표 12, 표 13 및 표 14는 N-[1-[[(4R)-5,6-디히드로-4H-이미다조[1,2-a][1]벤즈아제핀-4-일]카르바모일]시클로프로필]-4-에톡시-벤즈아미드 (실시예 1, 3, 57)에 대한 체중, 지방 질량 및 식품 섭취에서 평균 증가율(+) 또는 감소율(-)의 결과를 나타낸다.

<표 12>

<표 13>

<표 14>

하기 표 15, 표 16 및 표 17은 4-클로로-N-[1-[[(4R)-5,6-디히드로-4H-이미다조[1,2-a][1]벤즈아제핀-4-일]카르바모일]시클로프로필]벤즈아미드 (실시예 2, 21, 58)에 대한 체중, 지방 질량 및 식품 섭취에서 평균 증가율(+) 또는 감소율(-)의 결과를 나타낸다.

<표 15>

<표 16>

<표 17>

결과에 의하면, N-[1-[[(4R)-5,6-디히드로-4H-이미다조[1,2-a][1]벤즈아제핀-4-일]카르바모일]시클로프로필]-4-에톡시-벤즈아미드 (실시예 1, 3, 57) 및 4-클로로-N-[1-[[(4R)-5,6-디히드로-4H-이미다조[1,2-a][1]벤즈아제핀-4-일]카르바모일]시클로프로필]벤즈아미드 (실시예 2, 21, 58)가 식이-유도된 비만 마우스 모델에서 체중, 지방 질량 및 식품 섭취를 감소시킨다는 것이 입증된다.

제제

pH 5.5에서 용해되며 30% N-[1-[[(4R)-5,6-디히드로-4H-이미다조[1,2-a][1]벤즈아제핀-4-일]카르바모일]시클로프로필]-4-에톡시-벤즈아미드/70% HPMC-AS-L 고체 분산액을 생성하는 등급인 히드록시프로필 메틸셀룰로스 아세테이트 숙시네이트 (HPMC-AS-L)를 사용한 제제의 제조.

필름 캐스팅: 350.12 ㎎의 HPMC-AS-L, 150 ㎎의 N-[1-[[(4R)-5,6-디히드로-4H-이미다조[1,2-a][1]벤즈아제핀-4-일]카르바모일]시클로프로필]-4-에톡시-벤즈아미드 및 용매로서 5 ㎖의 50/50 MeOH/아세톤 용액을 사용하여 샘플을 제조하였다. 약 60℃로 예열시킨 평편 바닥 페트리 접시에서 용액의 부분을 분포시켰다. 필름을 진공 오븐 내에서 55℃에서 3.5시간 동안 보관하여 모든 잔류 용매를 제거하였다.

샘플을 접시로부터 긁어내고, 막자와 사발을 사용하여 입자 크기를 감소시켰다. HPMC 중합체는 탄성의 필름을 형성하는데, 이는 제거가 용이하면서 추가의 입자 크기 감소가 곤란하게 되는 취급 가능한 분말을 형성하지 않았다. 샘플을 막자와 사발로 분쇄하여 균일한 덩어리 크기를 형성하였다.

기 네로 SD마이크로(GEA NERO SDMICRO)™ 분무 건조기를 사용하여 HPMC-AS-L(25.7 g); N-[1-[[(4R)-5,6-디히드로-4H-이미다조[1,2-a][1]벤즈아제핀-4-일]카르바모일]시클로프로필]-4-에톡시-벤즈아미드 (11.0 g)를 분무 건조하였다; 분무화 기체 유속 (약 2.0 ㎏/h); 용매 흐름 중의 출구 온도 (52℃); 용액 유속 (약 8 내지 10 ㎖/min). 용매로서 아세톤:메탄올의 70:30 혼합물을 사용하였다. 시스템으로의 질소의 질량 유속은 각각의 실시에 대하여 32.5 ㎏/h이었다. 각각의 실시는 약 4 중량% 고체의 용액을 사용하였다. 더 많은 중량%의 고체를 사용할 수 있다.

Claims

하기 화학식의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.

상기 식에서,
R¹은 H, F, Cl, -CF₃, -CH₃, -OH, -O(C₁-C₄ 알킬), -O-시클로프로필, -O-CH₂-페닐, -OC(H)F₂ 및 -OCF₃으로 이루어진 군으로부터 선택되며;
R²는 H 및 -CH₃으로 이루어진 군으로부터 선택되며;
R³은 H 및 -CH₃으로 이루어진 군으로부터 선택되며;
단, R² 및 R³으로 이루어진 군 중 적어도 하나는 H이고;
n은 1, 2, 또는 3이다.
제1항에 있어서, n이 1인 화합물 또는 그의 염.
제1항 또는 제2항에 있어서, R²가 H이고, R³이 H인 화합물 또는 그의 염.
제1항 또는 제2항에 있어서, R¹이 Cl 및 -O-(C₁-C₄ 알킬)로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 화합물 또는 그의 염.
제1항 또는 제2항에 있어서, 화합물이 R 이성질체인 화합물 또는 그의 염.
제1항 또는 제2항에 있어서, 하기 화학식의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
제1항 또는 제2항에 있어서, 하기 화학식의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
제약상 허용되는 담체 및 제1항 또는 제2항에 따른 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 포함하는, 비만 또는 당뇨병의 치료에 사용하기 위한 제약 조성물.
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