TWI344462B - Indole derivatives having an apoptosis-inducing effect - Google Patents

Description

1344462 ⑴ 玖 '發明說明 【發明所屬之技術領域】 本發明係關於一種具有更佳之生物學效應及耐藥力， 並可展現較佳的口服利用率的新穎之吲哚衍生物，同時彼 可用做爲治療腫瘤疾病之藥物，特別是在對其他活性化合 物存在有抗藥性及癌會轉移的情況。

【先前技術】 癌症的治療在醫學上非常地重要。爲了達成適於病患 且是標靶定向的治療，能有效地治療癌症已是一世界性的 需求。此可從近來發表於應用腫瘤學及相關於癌治療之基 礎硏究的大量科學硏究中看出。

腫瘤抑制劑的效果係導因於非常多種的機制，其中只 有一些機制已爲人所知。對已知之腫瘤藥物而言並不常發 現其具有新的機制作用。所以在如本發明之化合物中便期 待有一新的機制。許多的腫瘤藥物係藉由如下之機制而發 揮作用，如封鎖細胞內之細胞分裂機制，阻止供應腫瘤營 養份及氧（抗血管生成），阻止轉移，阻止腫瘤細胞接收 或往前傳遞生長訊息’或是迫使腫瘤細胞進入設計好的細 胞死亡（凋亡）中。 由於這些藥物有不同的機制作用，包括與不同之細胞 內標靶起交互作用’所以臨床上相關的細胞抑制生長劑經 常是以組合方式投藥’以便達成協合的治療效果。 吲哚衍生物常以種種方式使用做爲具藥效性之活性化 (2) (2)1344462 合物’並也常做爲製藥化學之合成上的積木。 文獻中’國際公告申請案WO 99/5 1 2 24 A1案號及 WO 0 1 /22954 AI案號係揭示吲哚-3_基衍生物，其具有抗 腫瘤效果並可被大多數之基，包括2-、3-、4 -及8_D|啉基 或2- ' 3- ' 4- ' 5-及6-吡啶基取代。在實施例6〇中則提 及2-甲基-8-鸣咐基可做爲醯胺基上之取代基。然而，其 並沒有提到生物學特性。 國際公告申請案WO 99/55696 A1案號係揭示經取代 之羥基吲哚做爲磷酸二酯酶4之抑制劑。然而，其並未報 導如本發明之化合物具有任何抗腫瘤活性，也並未暗示彼 等可能具有此一活性。 國際公告申請案WO 02/0822 5 A1案號係揭示2·( 1 Η -吲哚· 3 -基）-2 -氧代乙醯胺衍生物，其具有和固態腫瘤 有關之抗腫瘤效果。然而，其並沒有提到含有曈啉、吡啶 並吡嗪或吲唑基之特定的執行性實施例。 專利說明書WO 00/67 8 02案號則揭示吲哚-3-乙醛醯 胺’其可經相對上長鏈脂肪酸取代而做爲具潛力之抗腫瘤 劑。然而，其並沒有提到含有喹啉、吡啶並吡嗪或吲唑基 之特定的執行性實施例。對此類執行性實施例也未出示任 何生物學資料。 W.-T. Li 等人之公告（：!· Med. Cheni. 2003 年，46 期 ，1 706頁及其後）係揭示以N-雜環系吲哚基乙醛醯胺做 爲口服方式之活性化合物，彼具有抗腫瘤活性。然而，關 於其機制作用則沒有提供任何資訊。 -6 - (3) (3)1344462 專利申請案WO 03/0222 80 A2案號係揭示3-乙醛醯 胺吲哚及彼等在做爲抗腫瘤治療之藥物的用途。彼等之通 式還包括6·鸣啉衍生物。此外，也提及了兩個含有6_D奎 啉基之實施例可做爲執行性實施例並可藉助於生物學結果 而證明。然而，其並沒有提到含有吡啶並吡嗪或吲唑基之 特定的執行性實施例。 美國申請案US 03 /0 1 8 1 4 82 A1案號係揭示新穎之吲 哚基乙醛醯胺。在此情況中，該等如發明之化合物係揭示 做爲擁有細胞毒性活力之抗腫瘤劑及血管生成抑制劑。除 此之外，也顯示6· D奎啉衍生物是做爲執行性實施例（化 合物3; p.10)並可藉助於抗增生數據而證明（參閱p.19 :表1 a及1 b )。然而，其並沒有提到含有吡啶並吡嗪或 吲唑基之特定的執行性實施例。 本申請人之WO 02/ 1 0 1 5 2 A2案號已揭示第二種類之 治療腫瘤的吲哚衍生物。在此文獻中，尤爲特別地是在各 種腫瘤細胞系上試驗活性化合物N- ( 2-甲基-6-哇啉基）-〔1- ( 4-氯苄基）吲哚-3基〕乙醛醯胺的抗增生效果。 可束縛住微管（紫杉酚及長春新碱）或可抑制局部異 構酶 Π(阿霉素、鬼E3乙叉式及密它西蔥（mitoxantrone 俗稱小藍莓）的臨床上試驗化合物目前能成功地引用在癌 症治療上，尤其是乳癌、卵巢癌、胃癌及肺癌，以及卡波 西氏肉瘤和白血病。然而，彼等之用途因抗藥性的出現而 受到限制，同時也受限於嚴重的神經學上、胃腸上、心血 管及肝之副反應。 (4) 1344462 【發明內容】 目前，本發明之目標係製造有效用之細胞毒素物質， 彼將擁有結合之機制作用’且適於治療大多數之腫瘤，特 別是當活性化合物會對抗其他藥物以及癌會轉移時。 此一目標可經由如下通式I之吲哚衍生物而達成 R7、η

R3 R5 R4

式I 其中

R :表示飽和、不飽和或芳族系之經取代或未取代的（h Cm) _雜環，其可包含—或多個選自N、〇及s之雜原子 並可直接鍵結在醯胺之氮上，且該雜環較佳地係 (1 )未取代或經取代之5 -、6 - ' 7 -卩奎啉基， (11)未取代或經取代之 、3·、6-、7-及 8-吡啶並 吡嗪基， (111)未取代或經取代之 3-、4-、5 - ' 6- ' 及 7·吲唑 基， (丨v )不取代或經取代之 2-' 3-、扣、5-及6-吡啶基 -8- (5) 1344462 (v) 未取代或經取代之3-、4-及5-異噁唑基， (vi) 未取代或經取代之3-、4-及5-異噻唑基， R1 :表示未取代或經取代之烷基-芳基， R2 :表示（i )氫， (ii )未取代或經取代之（CrQ ) ·烷基， R3-R6 :表示 (i )氬，

(ii )未取代或經取代之（Κ6 )-烷基， (iii )未取代或經取代之（C3-C7 )-環烷基， (iv)胺基、一 -(<：,-(：4)-烷胺基、二-((：,-(：4)-烷胺基， (v )鹵素， (vi )可經一或多個氟原子取代之（C,-C4 )-烷基， 較佳地爲三氟甲基， (vii) 氰基、直鏈或支鏈之氰基-(C,-C6)-烷基，

(viii )( C^-Ce )-烷羰基， (ix)羧基 ' -烷氧羰基、羧基- 烷基或（Κ6)-烷氧羰基-((:,-(:6)-烷基， (X )羥基， (xi) (C]-C6)-院氧基 * (xii) 芳基-烷氧基，較佳地是苄氧基， (xiii) (Ci-D-烷氧羰基胺基、（C,-C6)-烷氧羰 基胺基·（ C!-C6)-院基， R7 :表示 -9- 1344462 ⑹ -烷羰基，較佳地是乙醯基或丙醯基， (c^g)-烷氧羰基，較佳地是甲氧羰基、乙氧羰基 或丙氧羰基， 以及 X、Υ :表示氧或硫， 彼之互變異構物及立體異構物，包括非對映異構物和對映 異構物，以及其生理學上可接受之鹽類。

當R是未取代或經取代之2…3- ' 4·、5-及6-吡啶基 且R1-R6具有上述之定義時，在此情況下R7不必須是乙 醯基或第三·丁氧羰基。 再者，本發明係關係如下化學式I之吲哚衍生物，其 中

N一R R7n

R:係直接鍵結在醯胺之氮上，並表示爲 (i )經取代之6-α|啉基，未取代或經取代之74奎啉 基’其中排除了 2 -甲基-6 -喹啉基，並且當X表示硫原子 時’ R也可爲未取代之6 -鸣啉基， (Η )未取代或經取代之2-、3-、6-、7-及8-吡啶並 -10- (7) 1344462 吡嗪基， (i i i )未取代或經取代之3 -、4 -、5 -、6 -、及7 -吲唑 基， R 1 :表示未取代或經取代之烷基-芳基， R 2 :表示氣， R3-R6 ：表示 (xiv )氳，

(XV )未取代或經取代之（K6 )-烷基， (xvi )未取代或經取代之（C3-C7 )-環烷基， (xvii )胺基、一 -(CrCe)-烷胺基 '二- (CrCa )·烷胺基， (xviii )鹵素， (xix)可經一或多個氟原子取代之-烷基， 較佳地爲三氟甲基， (XX)氰基、直鏈或支鏈之氰基- (Ci-Cd -烷基，

(xxi ) ( C】-C6)-烷羰基， (xxii )羧基、 （Ci-Ca)-院氧類基 '殘基- (C,-C6 )-院基或（C|-Ce)-院氧類基-(Ci-Ce)-院基’ (xxiii ) - ( C】-C6 )-烷氧基， (xxiv) 芳基- (C,-C4)-烷氧基，較佳地爲苄氧基， (xxv) (C,-C6)-烷氧羰基胺基、（CrQ)-烷氧羰 基胺基-(Ci-C6)-院基’ 以及 R 7 :表不氨， -11 - (8) (8)1344462 X、Y :表示氧或硫， 彼之互變異構物及立體異構物，包括非對映異構物和對映 異構物，以及其生理學上可接受之鹽類。 本發明係該揭示於W0 02/] 0 1 52案號之發明的進— 步發展。頃發現，該藉以未取代或經取代之2 -、3 -、6-、 7-及8-吡啶並吡嗪基或是未取代或經取代之3_、4_、5_、 6 - '及7 -吲唑基置換2 -甲基-6 · D|啉基而製得的吲哚衍生 物可在各種腫瘤細胞系上展現了更優異之抗增生效果。 再者，也可觀察到，如本發明之化合物因具各種不同 之機制而能行使更有功效的細胞毒素效果。本發明之化合 物的機制之一，經証明係立基於抑制微管蛋白之聚合反應 ，及立基於抑制局部異構酶Π。此舉可在G 2 Μ階段阻止 致瘤細胞。除此之外，本發明之化合物也可誘發細胞凋亡 〇 而且，頃觀察到’如本發明之化合物具有優異的水溶 解度，因此也就會有優異的口服利用率。 此外，經證明若導入乙醯基做爲R 7基時，則可產生 具有優異之活體內活性的本發明之化合物，同時也會有更 佳之耐藥力。 本發明所揭示之物質種類應能製得比藉使用已知之抑 制細胞生長劑所達成者更具較低、較長持久性及較佳耐藥 力之抗腫瘤藥劑。特定言之’其應可能防止已知之發生在 許多抗腫瘤劑上之抗藥性的不利發展。利用本發明之吲哚 衍生物所達到之強化效果將使藥物的使用更有效益。除此 -12- 1344462 Ο) 之外，其應可能延伸到有抗療性病況的治療。 在一較佳具體實施例中，於化學式I之吲哚衍生物中 R1係表示4-氯基苄基，R2-R6表示氫’ R是雜環且R7爲 烷羰基或烷氧羰基。 在另一較佳具體實施例中，於化學式I之吲哚衍生物 中R係表示未取代之5 -喹啉基、未取代之6 -鸣啉基或未 取代之7·喹啉基，而R7表示乙醯基或丙醯基。 在另一較佳具體實施例中，於化學式I之吲哚衍生物 中R係表示未取代之5 -鸣啉基、未取代之6 -曈啉基或未 取代之7 -鸣啉基，而R7表示甲氧羰基 '乙氧羰基或丙氧 羰基。 本說明書及申請專利範圍內所使用之某些名詞乃定義 如下。 關於“雜環”，在上文未明確提及的範圍內該名詞係 表示爲吡咯 '呋喃、噻吩、吡Π坐、噻D坐、吲哚 '噁哩、咪 唑、異噻唑、異噁唑、1，2,3 -三卩坐、1 , 2,4 -三唑、1，2，4 -嚼 二唑、1，3,4 -噁二唑' I，2,5 -噻二唑、】，3,4-噻二唑、四唑 '批啶、唆Π定、噠嗪、吡嗪、苯並呋喃、吲唑、咔唑、苯 並噁唑 '苯並咪唑、苯並噻唑、苯並三唑 '喹啉、噌啉、 〇奎噁啉、鸣唑啉、酞嗪、吡啶並吡嗪、】，2,3 -三嗪' I，2，4 _ 二曉、1 ,3 / -三嗪、嘌呤、蝶啶、吖啶及啡啶。 在本發明之定義中’ “烷基”之詞意乃包括可爲直鏈 或支鏈之非環系飽和或不飽和烴類。關於“烷基”，在本 發明定義及上文未明確提及的範圍內，‘‘經取代，’ 一詞係 -13- (10) (10)1344462 表不氫基是經F、Cl、Br、I、CN、MH2、NH-院基' NH-環烷基、OH或0 -烷基置換’其中多取代基可表示那些在 不同原子或相同原子上經一次以上如兩次或三次取代者， 例如在相同C原子上經三次取代，即—c F 3和-C Η 2 C F 3之情 況’或者在不同位置上之取代，即(〇Η) -CH2-CHCl2 。多取代作用可藉使用相同之取代基或不同之取代基來進 行。 “烷基·芳基"一詞係表示（Ci-D ·烷基.（Cl-Cl4 )·芳基’較佳地爲（C , · C 6 )-烷基_ C 6 -芳基。關於‘‘烷 基-方基及環院基、經一次或一次以上之取代’， ’在本發明定義及上文未明確提及的範圍內，可理解表示 爲在環系統中的一或多個氣原子係在一個原子或不同原子 (若適當時）上經F、C】、Br ' I、CN、NH2 ' NH-垸基、 OH、0-院基 ' CF3、院基、（C6-Cl。）·芳基 ' ( )-芳基-(C】-C6)-垸基及/或雜原子單次或多次，如兩次 -三次或四次置換（對取代基而言，若適當時其部份是可 能被取代的）。在此關係中’多次置換作用係可藉使用相 同之取代基或不同之取代基來進行。 關於“雜環” '“經一次或一次以上之取代，，，在本 發明定義及上文未明確提及的範圍內，可理解爲，環系統 中的一或多個氫原子係在一個原子或不同原子（若適當時 )上經F、Cl、Br、1、硝基、胺基、（Ci_c6 )院基（較 佳地爲甲基）、—-(c丨-c 6)-烷胺基、二_ ( c广c 6)-烷 胺基' 羥基、（c^cd-烷氧基、苄氧基、羧基、（c]_ -14- (11) (11)1344462 c6 )-烷氧羰基、（C,-C6 )-烷氧羰基胺基或經氟一或多 次取代之（（^-(：6 )-烷基（較佳地爲三氟甲基）、（c6-c10)-芳基及/或（C6-CIG) ·芳基-(CrQ)-烷基單次或 多次，如兩次、三次或四次置換（對取代基而言，若適當 時其部份是可能被取代的）。在此關係中，多次置換作用 係藉使用相同之取代基或不同之取代基來進行。 假若如化學式I之本發明化合物擁有至少一個不對稱 中心時，彼等就可以消旋物形態、純對映異構物及/或非 對映異構物形態、或者以這些對映異構物及/或非對映異 構物之混合物存在。這些立體異構物可依任意比例存在於 混合物中。若可行時，如本發明之化合物可以互變異構物 形態存在。 因此，可使用本身已知之方法使該等擁有一或多個對 掌中心並以消旋物出現之如化學式I的本發明化合物分離 爲光學異構物，也就是對映異構物或非對映異構物。此離 析可藉助於對掌相之柱型離析，或從光學活性溶劑中再結 晶，或藉使用光學活性酸或鹼或是藉以光學活性試劑（如 光學活性醇）衍生，隨後再使殘留基裂解而進行。 假若如化學式I之本發明化合物含有充足之酸性基如 羧基時’彼等可使用無機及/或有機鹼而轉化爲其生理學 上可接受之鹽類。合適之無機鹼實例有氫氧化鈉、氫氧化 鉀及氫氧化鈣，而合適之有機鹼實例有乙醇胺、二乙醇胺 、三乙醇胺、環己胺、二苄基乙二胺及賴氨酸。在此關係 中’如本發明之化合物其所生成之鹽類的化學計量可爲整 -15- (12) (12)1344462 數或非整數倍數中之一個。 假若如化學式I之本發明化合物具有充足之鹼性基如 弟一或第二胺基時’彼等可使用無機及/或有機酸而轉化 爲鹽類。該依據通式之本發明化合物其藥學上可接受之鹽 類較佳地是與鹽酸、氫溴酸、硫酸、碟酸、甲磺酸、對-甲苯磺酸、碳酸、甲酸、醋酸、三氟醋酸、草酸 '丙二酸 '馬來酸 '號拍酸、酒石酸 '丙酮酸' 蘋果酸、雙羥萘酸 、扁桃酸、富馬酸、乳酸、檸檬酸、麥氨酸或天門冬氨酸 反應而生成。尤爲特別地，這些生成之鹽類包括鹽酸化物 、氫溴化物、硫酸鹽、磷酸鹽、甲磺酸鹽、磺基醋酸鹽、 甲苯磺酸鹽、碳酸鹽、碳酸氫鹽、甲酸鹽、醋酸鹽、三氟 甲磺酸鹽' 草酸鹽、丙二酸鹽、馬來酸鹽、琥珀酸鹽、酒 石酸鹽 '蘋果酸鹽、雙羥萘酸鹽、扁桃酸鹽 '富馬酸鹽、 乳酸鹽、檸檬酸鹽或麥氨酸鹽。在此關係中，如本發明之 化合物所生成之鹽類的化學計量可爲整數或非整數倍數中 之一個。 同樣較佳地是如本發明之化合物I的溶劑化物，特別 是水合物’舉例之’彼等是藉由從溶劑或水溶液中結晶而 製得。在此關係中’一 '二、三或任意之溶劑或水分子可 與如本發明之化合物組合而形成溶劑化物和水合物。 已知悉，若化學物質是生成以不同次序狀態存在的固 體時乃稱之爲多形態形式或變體。多形態物質的不同變體 係因其物理特性而大大地不同。如化學式I之本發明化合 物可存在有不同的多形態形式’且對特定之變體而言是具 -16- (13) (13)1344462 有亞穩的。 化學式I之化合物及其鹽類皆具有生物學活性。化學 式】之化合物可以自由形態或帶有生理學上可接受之之酸 或鹼的鹽類形式投藥。 該等通式之化合物可經口服方式、直腸方式、口腔路 徑（即舌下地）、非經腸方式（即皮下、肌肉內' 皮內或 靜脈內之方式）、局部方式或經皮方式投藥。 再者’本發明係關於具有至少一個如化學式1之化合 物含量的藥物’或其帶有生理學上可接受之無機酸或有機 酸的鹽類’且若適當時還可具有藥學上可利用之載劑物質 及/或稀釋劑或輔助物質。 這呰藥物可用來治療腫瘤疾病，特別是用來治療牽涉 到對其他活性化合物有抗藥性的腫瘤疾病及/或牽涉到轉 移癌之腫瘤疾病。 合適的投藥形式之實例有藥錠、糖衣藥錠、膠囊、用 於注入或安瓿之溶液、藥膏、以吸入方式使用之散劑、懸 浮液、乳霜及軟膏。 如本發明之化合物也可分散於顯微粒，及奈米微粒之 組成物中。 詳細言之，已發現之治療上有價値的特性係關於如下 之優點： • 如本發明之化合物其特徵爲有功效的抗增生特性； • 如本發明之化合物可抑制微管蛋白的聚合； • 如本發明之化合物可抑制局部異構酶]I ; -17- (14) (14)1344462 * 如本發明之化合物可阻止在G2/M階段的細胞分裂； * 本發明之化合物可誘發細胞凋亡； * &本發明之化合物其特徵爲有功效的活體內抗腫瘤活 f生’且同時還有更佳之耐藥力； * 與紫杉酚 '長春新碱、阿霉素或鬼臼乙叉甙對照時， $式I之本發明化合物對mdr-抗性之細胞系具有活體 內活性。 最佳的如通式I之化合物係選自如下所列： 2 _〔 1 - ( 4 -氯苄基）·] Η -吲哚-3 -基〕-2 -氧代-N -吡啶 並〔2,3-b〕吡嗪-7-基乙醯胺（1 ) 2 -〔 I - ( 4 -氯苄基）-1 Η - D引哚-3 -基〕· N - ( I Η -吲唑-5 . 基）-2-氧代乙醯胺（4 ) Ν - { 2 -〔】·（ 4 -氯苄基）-1 Η -吲哚-3 -基〕-2 -氧代乙醯 基卜Ν-卩奎啉-6-基乙醯胺（2 ) 〔 1 - ( 4-氯苄基）-1 Η-吲哚-3-基〕-2-氧代乙醯基} D奎啉-6-基胺基甲酸甲酯（3 ) {2·〔〗·（ 4 -氯苄基）-〗Η·吲哚-3-基〕-2 -氧代乙醯基} D奎琳-6·基胺基甲酸乙酯（5 ) {2-〔 1· ( 4 -氯苄基）-1H -卩引哚-3-基〕-2 -氧代乙醯基} 口奎琳-6·基胺基甲酸丙酯（6 ) 1^-{2-〔】-(4-氯苄基）-11^-吲哚-3-基〕-2-氧代乙醯 基卜N-喑啉-6-基丙醯胺（7 ) 〔】·（ 4-氯苄基）-1 H-吲哚-3-基〕-2-氧代乙醯基） 口比Π定-4 -基胺基甲酸乙酯（8 ) -18- (15) 1344462 2-〔 1- (4 -氯苄基）-1H -吲哚-3-基〕-N -[I 奎啉-6-基- 2- 硫代氧代乙醯胺（]1 ) 化合物（1) 、 （4)及（】1)係表示其中R7基爲氫 之化合物。化合物（2 ) 、 ( 3 ) 、 （ 5 )及（6 )至（8 ) 則是含有以烷氧羰基做爲R7基之烷羰基。 下列化合物（9 ) 、 （ 1 0 ) ' ( 1 2 ) 、 （ 1 3 ) 、 （ 1 4 )及（I 5 )是基於對照目的用於硏究之化合物。化合物（

9 ) 、 （ 1 〇 ) 、 （ 1 4 )及（1 5 )係先前技藝中已知悉者。 化合物（9 )係是揭示於本申請人之W0 02Π 0〗52案號中 ，化合物（10)是揭示於WO 03/022280案號，化合物（ ]3 )則涵蓋於WO 02/08 22 5 A]案號之申請專利範圍內， 而化合物（1 2 ) 、（ 1 4 )及（1 5 )則涵蓋於WO 99/5 1 2 24 A1案號及WO 01/22954案號之申請專利範圍內。 2-〔】-(4 -氯苄基）-1H -吲哚-3-基〕-N- ( 2 -甲基D奎 啉-6-基）-2-氧代乙醯胺（9 )

2 -〔 1 - ( 4 -氯苄基）-1 Η -吲哚· 3 -基〕-2 -氧代-N -暗啉-6-基乙醯胺（1 0 ) 2-〔 1 - ( 4-氯苄基）-]Η-D弓丨哚-3 -基〕-2-氧代-Ν-□奎啉· 8-基乙醯胺（1 2 ) 2-〔 1-(4 -氣卞基）-]Η -卩引哄-3 -基〕-Ν -異卩奎琳-5-基· 2 -氧代乙醯胺（1 3 ) 2 -〔 ：1 - ( 4 -氯苄基）-]Η -卩引哚-3 -基〕-2 -氧代-Ν -吡啶- 4 -基乙醯胺（1 4 ) 2-〔]-(4-(氟苄基）-】1^吲哚-3-基〕->^-(2-甲基 -19- (16) 1344462 唾啉-8-基）-2-氧代乙醯胺（1 5 ) 通式I a及I b之化合物可依據如下流程1而製得： 流程】

第一步驟

(RC0)20 DMAP, TEA 第二步驟 1. (COCI)2 2. H,N-Het

la 通式Ic之化合物（其中X= S) 而製備： 可依據如下流程

-20- (17) 1344462 流程2

通式lc之化合物（其中X= S )可藉由文獻中所熟 之方法製得（W.-D. Mai mberg 等人之 Liebigs Ann. Che 1 〇 期，1 983 年，1 649- 1 7 1 1 頁）。 起始化合物II ' III及IV可以商品化產品取得或藉 用本身已知之步驟製備。起始化合物Π、III及IV是製 如化學式I之本發明吲哚衍生物的有價値中間產物。 關於起始化合物及目標化合物之製備，舉例之，可 閱下列有機合成之標準操作，彼等之內容將意圖倂入本 請案之說明內： • H〇uben-\Veyl，E 卷 7a (第一部份）290-492 頁 57 ] -74 0 頁 • Houben-Weyl，E 卷 7a (第二部份）119-]56 頁 205 - 686 頁，1 5 7 - 204 頁 • 專題論文 Heterocyclic Compounds” ( Elderfield j 第 1 卷，]]9-207 頁，397-6]6 頁 第3卷，1-274頁， 知 m . 使 造 參 串 (18) (18)1344462 第 6卷，10】-135頁，234-323 頁 • 專題論文 “Comprehensiv Organic Chemistry” ( S. D. Barton, W. D. Ollis) 第 4 卷，15 5 -204 頁，2 0 5 -23 2 頁，4 9 3 - 5 64 頁 熟諳此藝者基於其專業知識，若適當時可熟練地使用 溶劑和輔助劑、以及反應參數如反應溫度及反應時間。 下列化合物（其在下文之檢測中的內容可從彼等之各 別化學名稱中顯而易見）是根據合成流程〗及2之步驟] ' 2和3的通用指示而合成。該等如本發明之化合物將藉 助於其熔點及/或1 H NMR光譜學及/或質譜儀之分析而檢 定。 所用之化學品及溶劑可從平常之供應廠商（Acros, Avocado. Aldrich, Fluka, Lancaster, Maybridge, Merck, Sigma，TCI，等公司）中以商品化物質取得，或是合成。 本發明將藉助下列不受其限制之實施例而詳細說明。 【實施方式】 實施例 實施例】（依據流程1，第]步驟之反應）： ]· ( 4 -(氯苄基）吲哚之製備 將5.86公克（〇.〇5莫耳）吲哚於25毫升DMSO之溶 液加入於1 . 3 2公克氫化鈉（〇 · 0 5 5莫耳，礦物油懸浮液） 於5 〇毫升二甲基亞諷的混合液中。在6 0 t下加熱該所得 之混合物1 . 3小時；之後，讓其冷卻並逐滴加入1 7.7公 -22 - (19) (19)1344462 克（0.1 I莫耳）之4-氯苄基氯。將此溶液加熱至60°c再 靜置過夜；然後，邊攪拌地將之倒入200毫升水中。以總 量7 5毫升之C Η 2 C12萃取此混合液數次，之後，以無水硫 酸鈉乾燥有機層並過濾之，並在真空中蒸發濾出液。 產量：Π .5公克 （95%理論値） 實施例2 (依據流程1之第2步驟的反應）： 2 -〔] - ( 4 -氯苄基）-】Η -吲哚-3基〕-2 -氧代-Ν -吡啶並〔 2,3-b〕吡嗪-7-基乙醯胺（1) 在〇。(：及氮氣下，將1〇.2公克（1〇.7毫莫耳）]-(4-氯苄基）_吲哚之200毫升乙醚溶液逐滴地加入於】毫 升草醯氯於5 0毫升乙醚之溶液中。將此混合物加熱至回 流達2小時’隨後將溶劑蒸發掉。然後’將3 0毫升D M F 加入殘留物中’之後’加入1.93公克（13.9毫莫耳）碳 酸鉀’並將此懸浮液冷卻至0 °C ;接著’逐滴加入溶於1 0 毫升DMF之57公克（10.7毫莫耳）胺基組份。在室溫下 攪拌此反應混合物至過夜。最後’拌入冰水中並以抽吸方 式濾出所得之沉澱物。使用正-庚烷/醋酸乙酯=4 : 1並 在1 00公克矽膠上使所得之粗產物進行色層分析。

產量：3.23公克（68.0%) m . p . ： 2 5 0 °C 'H-NMRCDMSO-De) (5 =11.56 (s, 1H) >9.53(d, 1H) ，9.]2(s: 1H) ’9.09(d, ]H) ’9.04(s, IH) ’ 8.32(d. 1H) ’ 7-6( d，]H) ，7.40( d, 2H) ’7.35 (m， -23- (20) 1344462 3H ) 7.32 ( m, 2H ) ，5.64 ( s，2H ) ppm。 實施例3 (依據流程1之第3步驟（a )的反應）； N-{2-〔 1-(4 -氯苄基）-]Η·吲哚-3基〕-2 -氧代乙醯 基奎啉-6-基乙醯胺（2 ) 在氮氣下將0.833公克（6.82毫莫耳）DMAP、1.38 公克（13.6毫莫耳）三乙胺及13.9公克（136毫莫耳） 醋酸酐加入於一攪拌中之含有6.0公克（13.6毫莫耳）2-〔1-(4 -氯苄基）-1H -吲哚-3基〕-2 -氧代-N-D奎啉-6-基乙 醯胺於6 0毫升DMF之溶液中。在室溫下攪拌此反應混合 物]〇分鐘，之後，將之倒入200毫升醋酸乙酯中》待加 入3 0 0毫升水後，於分離漏斗中搖晃此混合液，之後則分 離出兩個相。20分鐘後會開始沉澱。濾出淡黃色結晶物 並在60°C之真空中乾燥。

產量：4.04公克（61.5%) m . p . ： 1 2 2.9 °C 'H-NMR ( 600MHz > DMSO-D6) 6 =9.02 ( d, 1H )， 8.54 ( s, 1H ) ，8.44(d，lH) ，8.21(d，lH) > 8.17 ( d, 1H) ' 8.10 ( m, 1H ) > 7.88 ( m, 1H ) ，7.65(m，lH)， 7.58 ( m, 1 H ) ，7.44(d，2H) ，7.33(d，2H) > 7.28 ( m, 2H) ，5.60 ( s，2H) ，，2.15 ( s，3H)。 MS ( ESI ) m/z 4 82.1 (MH+)，（理論値 48 1.94) 實施例4 (依據流程]之第3步驟（a )的反應）： -24 - (21) (21)1344462 {2-[卜（4 -氯苄基）-1H -吲哚-3基〕-2 -氧代乙醯基}卩奎 咐-6-基胺基甲酸甲酯（3 ) 在氮氣下將930.2毫升（27.3毫莫耳）之NaH (溶於 礦物油之60°/。強度的分散液）加入於一冷卻且攪拌中之含 有】0.0公克（22.7毫莫耳）2-〔 1-(4-氯苄基）-1H，吲 哚-3基〕-2-氧代- N-D奎啉-6-基乙醯胺於500毫升無水THF 之溶液中。在〇 °C下，攪拌此溶液直到黃色沉澱物析出爲 止，之後，在低於+5 °C下逐滴加入2.58公克（27.3毫莫 耳）之氯基甲酸甲酯。以薄層色層分析法（洗提液：正-庚烷/醋酸乙酯 W1 RF = 0.]])監控反應。將反應混合物 倒入水中，並以醋酸乙酯萃取所得之混合物；用氯化鈉飽 和溶液淸洗有機相，再於無水MgS〇4上乾燥。蒸發溶劑 後可產生一粗產物，再以柱型色層分析（正-庚烷/丙酮 2 /1 )純化，即可獲得3。薄層色層分析顯現3仍含有微量 雜質，其可藉使該粗產物3與丙酮一起攪拌1小時而除去 。過濾後即可生成淡黃色結晶。 產量：3.0公克（25.6%)

m . p . : 1 7 8 · 5 °C 'H-NMR ( 600MHz · DMSO-D6) ό =9.02 ( d, 1Η )， 8.58 ( s, 1Η ) ，8.47(d, 1Η) ，8.】7(m，3H) ，7.84(m， 1H ) 1 7.63 ( m, 2H ) ，7.44(d，2H) ，7.34(m，4H)， 5.60 ( s, 2H ) ，3.65 ( s, 3H )。 MS ( ESI) m/z 498.2 ( MH+ )，（理論値 497.94) (22) (22)1344462 實施例5 (依據流程2之第3步驟（b )的反應）： 製備2-〔 1-(4 -氯苄基）-1H-Q引哚-3基〕-N-D奎啉-6-基- 2-硫代氧代乙醯胺（】1 ) 在氮氣下將3.68公克（9.1毫莫耳）之2,4_雙（4·甲 氧基苯基）-1,3-二硫雜-2,4-二膦烷（（1丨？11〇5?1^31^)-2,4·二硫化物加入於一含有4.00公克（9.1毫莫耳）2-〔 1-(4-氯苄基）-]H-吲哚-3基〕-2-氧代-N·喹啉-6-基乙 醯胺於2 00毫升甲苯之懸浮液’之後，在7 5 °C下使此混 合物加熱3小時。將生成之殘留物以熱的形態從反應溶液 中濾出，隨後再以1 00毫升二氯甲烷淸洗°在真空中濃縮 濾出液，並使此殘留物在急驟矽膠上進行層析（洗提液： 二氯甲烷/甲醇 9 9 :])。待溶劑再次除去後’在急驟矽 膠上濾出產物餾份（洗提液：正-庚烷/醋酸乙酯]:】） 〇 產量：0.46公克（1 1%理論値） ESI-MSm/e456.1(MH+)，（理論値 455.97) 'H-NMR ( DMSO-De) <5 =10.89 (s, lH) ' 8.8 ( s, 1H )，8.75(s，lH) > 8.55 ( s, 1H ) 1 8. 1 2 ( d, 1H ) > 8.35 (d，IH) ，8.0(d，lH) ，7.93(d，lH) ，7.63(d，]H) ! 7.50 ( m, 1H ) ，7.4(m，3H) ，7.3(m，3H) ，5.6(s， 2H ) ppm o 下列化學式I之化合物將以類似流程】之合成路徑並 依據實施例2和3而予於簡化。 -26- (23) 1344462 實施例6

2 -〔】-(4 -氯苄基）-1 Η -吲哚-3基〕-Ν - ( 1 Η -吲唑-5 -基 )-2-氧代乙醯胺（4 ) m . ρ . ： 2 0 3 °C 1H-NM R ( DMSO-D6 ) (5 =13.02 ( s，1H ) ，10.7 ( s, 1 H ) ，9.04(s, ]H) > 8.48 ( s, 1 H ) - 8.42 ( d, 1H )， 8.06 ( s, 1 H ) > 7.73 ( d, 1H ) ' 7.6 ( d, 1H ) - 7.55 ( d,

1H ) ，7.40 ( d, 2H ) ，7.2 8 - 7.3 5 ( m, 4H ) > 5.63 ( s, 2H )ppm。 實施例7

{2-〔 I- (4 -氯苄基）-1H -吲哚-3基〕-2 -氧代乙醯基} 口奎 啉-6-基胺基甲酸乙酯（5 ) m . p . ： 1 9 9 °C 'H-NMR ( 600MHz，DMSO-D6 ) <5 =9.02 ( m, 1 H )，

8.60 ( s, 1H ) ' 8.48 ( d, 1H ) ，8.15(m，3H) ，7.83( m, 1H ) ，7.63(m，sH) ，7.43(d，2H) ，7.32(m，4H) > 5.60 ( s, 2H ) ，4.15 ( q，2H) ，0.95 ( t，3H)。 MS ( ESI) m/z 514.2 > 512.1 ( MH+)，（理論値 5 11 . 97 ) 實施例8 { 2 -〔]· ( 4 -氯苄基）]Η -吲哚-3基〕-2 -氧代乙醯基} 〇奎 啉-6-基胺基甲酸丙酯（6 ) -27- (24) 1344462

m . p . : 1 6 4 〇C 'H-NMR ( 600MHz ' DMSO-D6) 5 =9.02 ( m, 1H )， 8.60 ( s, 1H ) > 8.48 ( d, 1H ) > 8. 1 7 ( m, 3H ) ，7.84( m, 1 H ) ，7.63(m，2H) ，7.43(d, 2H) ，- 7.33 ( m, 14 )，5.61 ( s, 2H ) ，4.03 ( t, 2H ) ，1.32 ( m, 2H ) ，0.56 (t，3H )。

實施例9 1{2-〔1-(4-氯苄基）-]}^-吲哚-3基〕-2-氧代乙醯基}-N · 〇奎啉· 6 -基丙醯胺（7 ) 'H-NMR ( 600MHz ' DMSO-D6) 6 =9.03 ( m, 1H )， 8.52 (s，]H) ，8.45(d，lH) ，8.23(d, 2H) ，8.18(d, 1H ) > 8.13 ( m； 1H ) ，7.88(m，lH) ，7.65(m，lH)， 7.58 (m，lH) ，7.45(d，2H) ，7.30(m，4H) ，5.59(s， 2H ) ' 2.61 ( q, 3H ) ，0.88 ( t, 3H )。

實施例1 〇

{ 2 -〔 1 - ( 4 -氯苄基）-1 Η - D引哚-3基〕-2 -氧代乙醯基}吡 啶-4-基胺基甲酸乙酯（8 ) m . p . : 6 2 °C 'H-NMR ( 500 MHz > DMSO-D6) (5 =8.74 ( m, 2H )， 8.52 (s，]H) > 8.12 ( m, 1H ) · 7.60 ( m, ] H ) ，7.55(m, 2 H ) ，7.4 0 ( m，2 H ) ，7.3 0 ( m，4 H ) ，5 · 5 7 ( s，2 H )， 4.10 ( q, 2H ) ，0.95 ( t，3H )。 -28- (25) 1344462 實施例1 1 (對照物質） 2-〔 1- ( 4 -氯苄基）-】H -吲哚-3基〕-N- ( 2 -甲基卩奎啉- 6-基）-2-氧代乙醯胺（9 )之製備

產量：〗4.8公克（77 .3%理論値） m . p . * 1 8 2 - 1 8 5 °C 'H-NMR ( CDC13 ) <5 =9.58 ( s，1H ) ，9.12 ( s，1H ) -8.5 ( s, 1 H ) > 8.4 1 ( s, 1H ) > 8.05 ( t, 2H ) - 7.78 ( d, 1H ) ，7.4(dd，lH) ，7.32(m，4H) > 7.26 ( s, 1H )， 7.15 (d，lH) ，5.38(s，2H) ，2.73 (s，3H) ppm。 實施例I 2 (對照物質） 2 -〔】-(4 -氯苄基）-1 Η -卩引哚-3基〕-2 -氧代-N - D奎啉-6 -基 乙醯胺（I 〇 )

m · p . : 2 0 0 °C

'H-NMR ( DMSO-D6 ) ό =11.5 ( s，1H) ，9.05 ( s，1H )，8.85(s，IH) ' 8.66 ( s, 1H ) > 8.32 ( d, 2H ) > 8.12

(d, 1 H ) - 8.03 ( d, 1 H ) ，7.63(d，lH) ，7.53(dd，]H )，7.42 ( d，2H ) ，7.3 0- 7.3 8 ( m，4H ) ，5.63 ( s，2H ) ppm。 實施例1 3 (對照物質） 2-〔 1-( 4 -氛卞基）-1H-D引卩朵-3基〕-2 -氧代-N-口奎琳-8-基 乙醯胺（1 2 ) -29- (26)1^44462 m . p . : ] 7 8 °C 實施例14 (對照物質） 2-〔】-(4 -氯苄基）-1H-D引哚-3基〕-N -異口奎啉-5-基-2-氧 代乙醯胺（1 3 )

m.p. ： 2 3 9 - 2 4 1 °C

實施例1 5 (對照物質） 2-〔 1-(4 -氣卞基）-1H -卩引晚-3基〕-2 -氧代-N-卩J：t卩疋-4-基 乙醯胺（〗4 ) m.p. ： 2 6 4 °C 實施例1 6 (對照物質）

2-〔 1-(4-(氟苄基）·〗Η -吲哚-3基〕-N-(2 -甲基喹啉-8-基）-2-氧代乙醯胺（I 5 ) m.p. ： 200-202。。 如本發明之化合物的生物學效應 在選擇性腫瘤模型上進行活體外及活體內試驗可顯現 出下列之藥理學活性。 實施例1 7 :對各種腫瘤細胞系之抗增生效果 在一已規定之腫脹細胞系上進行增生試驗時，硏究物 質1 ' 2 ' 4、9、Π ' ] 2、1 3及]5之抗增生活性（D. A. -30-

I (27) ^44462

Scuderio 等人之 Cancer Res. 1 9 8 8 年，48 期，4 8 2 7 -4 8 3 3 頁）。所進行之試驗可測量細胞脫氫酶活性，並可間接地 測量細胞生存力及細胞數目。所用之細胞系是人類子官頸 癌細胞系 KB/HeLa ( ATCC CCL1 7 ) '卵巢腺癌細胞系 SKOV-3 ( ATCC HTB77 )、人類成膠質細胞瘤細胞系SF-268 ( NCI 503]38)及肺癌細胞系 NCI-H460 (NCI 503473 XTT增生測定，EC50，單位是微克/毫升 實施例 KB/HeLa SKOV3 SF-268 NCI-H460 1 0.045 0.029 0.042 0.046 2 0.202 0.123 0.166 0.168 4 0.335 0.144 >3.16 0.233 11 0.036 0.029 0.036 0.057 9 (C) 0.183 0.174 0.261 0.344 12(C) >3.16 >3.16 >3.16 >3.16 13 (C) >3.16 >3.16 >3.16 >3.16 15 (C) >3.16 n.d. >3.16 n.d. C =對照物質：n.d.:未測量 表]:於人類腫瘤細胞系上進行X TT細胞毒性試驗時’本 發明之物質其抑制增生的能力° 這些結果顯示，執行性實施例1、2、4及n在所選 擇之腫瘤細胞系的增生上是非常有效的抑制劑。 -31 - (28) 1344462 實施例]8 :對MDR腫瘤細胞系之抗增生效果 爲了進一步之特徵描述，可硏究物質]、2、4及11 對多藥劑抗性細胞系之效果，並與無抗藥性之未馴化形態 (wild-type )細胞系做比較。 所硏究之細胞系有鼠細胞系L 1 2 1 0、急性骨髓性白血 病細胞系LT12及抗藥性系L1210/mdr和LT12/mdr。同時 鼠細胞系P 3 8 8 (甲膽蒽-誘發之淋巴瘤）及阿霉素-抗性 P3 88也涵蓋在內以做爲試驗系統。 其結果乃摘述於下表2 : XTT增生測定，EC50，單位是微克/毫升 實施例 LT12 LT12mdr L1210 L1210VCR P388 P388ADR 1 0.015 0.017 0.018 0.02】 0.012 0.019 2 0.225 0.272 0.206 0.558 0.224 0.215 4 0.084 0.093 0.246 0.241 0.175 0.231 11 0.023 0.054 0.052 0.067 0.018 0.051 紫杉酚 0.005 0.34 0.048 >3.16 0.035 >3.16 長春新碱 0.002 0.134 0.015 >3.16 0.004 0.93 阿霉素 0.029 >3.16 0.269 >3.16 0.204 >3.16 密它西蔥（小藍莓） 0.006 3.1 0.09 2.1 0.053 0.608 鬼臼乙叉甙 0.094 >3.16 0.269 >3.16 0.202 >3.16

C =對照實施例 表2 :在XTT增生試驗中各物質對人類腫瘤細胞系之抑制 效果。 -32-

I (29) 1344462 物質1 ' 2、4及1 1對所有試驗之細胞系展現多 效之抑制效果，同時也可看出具有微管蛋白抑制效身 型物質，如紫杉酚或長春新碱，以及局部異購酶11 劑（阿霉素 '密它西蔥（小藍莓）及鬼臼乙叉& M D R ]-抗性細胞系之效果已大大地被減低。 實施例】9 :微管蛋白聚合作用之抑制 在活體外試驗中檢驗物質1、4、9、11、]2、 15抑制牛微管蛋白之聚合作用的能力（m.D. Bo]】ag 之 Cancer Res. 1995 年，55 期，2325-2333 頁）。jtt 是使用已藉由聚合及解聚作用之循環純化（其係經由 GMP並加熱之以引起聚合反應）的微管蛋白^表3 了 E C 5 〇値’其係藉由抑制含有3 〇 %相關聯蛋白質（ )之微管蛋白的聚合而產生。 常有 之典 抑制 )對 1 3及 等人 :試驗 !添加 提供 MPAs (30) (30)1344462 實施例 微管蛋白聚合作用之抑制，EC50，單 位是微克/毫升 1 0.7 1 4 1.26 1 1 0.97 9 ( C ) 1.16 12 ( C ) > 1 0 ί/ Μ 13 ( C ) > 1 0 // Μ 15 ( C ) > 1 0 // Μ 長春新碱 0.3 5 C =對照實施例 表3:微管蛋白聚合作用之抑制。兩個單獨實驗之平均値。 其結果（參考表3 )顯示物質1、4、9及1 1對微管 蛋白之聚合作用有著非常有效的抑制效果，而化合物]2 、：1 3及]5則沒有任何效果。 實施例2 0 :局部異構酶Π之抑制 以兩個不同之活體外試驗檢驗物質】抑制局部異構酶 II的能力。 • 試驗局部異構酶活性之kDNA測定 在由 P. Arimondo所說明之此測定（Anti-Cancer -34 - (31) (31)1344462

Drug Design 2000 年，]5 期（6 月份），413-421 頁）中 ，kDNA將在試驗化合物存在或不存在下以人類DNA局 部異構酶Π處理。在此測定中，如本發明之化合物1係 在三個不同之濃度（】00，31.6及10"Μ)下檢驗。並使 用在每一情況中皆具有1 00 // Μ濃度之陽性對照組及參考 化合物m ·安吖啶（m - a m s a )、紫杉酚（紫杉醇）及長春 新碱做爲比較用。 測定之執行 以吸量管將2以L,之1 0 X測定用緩衝液、1 L之 kDNA (200毫微克）'0.5//L人類局部異構酶Π(1單 位）及]5.5//L之H2〇加入於1//L之最初導入的試驗物 質內（2 0倍濃度，溶於]〇 〇 % D M S ◦中），並將這些試劑 混合。 將反應之分析試樣放在一已預熱至3 7 t之加熱台上 ，並在37°C下共置10分鐘。待加入4；uL之5χ中止用緩 衝液後就可使共置作用停止，隨後以CIΑ萃取物質。之 後’將20/iL之上層淸液裝塡在含有0.25微克溴乙非啶/ 毫升之1 %瓊脂糖凝膠上，並在1 〇 〇 V下離析達1小時。 最後’在UV激發下拍攝該凝膠（參考圖])。並藉使用

GelPro® Analyzer Software (分析儀軟體）來量化 kDNA 解除鏈接之抑制率（參考圖2)。 • 試驗局部異構酶〗I活性之p R Y G鬆弛測定 (32) (32)1344462 使用此鬆弛測定以進一步證明如本發明之化合物對局 部異構酶II的抑制特性。在此測定中，如本發明之化合 物1係在三個不同之濃度（100，31.6及10//M)下檢驗 。並使用濃度在3 1 6和1 00以Μ之參考化合物m —安吖啶（ m-amsa )、紫杉酚（紫杉醇）及長春新碱做爲比較用。 測定乃如下進行： 以吸量管將2 " L之]Ox測定用緩衝液、〇· 5 // L之 pRYG DNA(125毫微克）、0.5/^L人類局部異構酶Π (1單位）及1 6 ν L之H20加入於lyL之最初導入的待 試驗物質內（2 0倍濃度，溶於1 0 0 % D M S Ο中），並將這 些試劑混合。將反應之分析試樣放在一已預熱至3 7 °C之 加熱台上，並在37t下共置30分鐘。待加入4//L之5x 中止用緩衝液後就可使共置作用停止。之後，將】0 L之 分析試樣裝塡在含有0.2 5微克溴乙非啶/毫升之1 . 2 %瓊 脂糖凝膠上，並在100V下離析達2.5小時。最後，在UV 激發下拍攝該凝膠（參考圖3)。並藉使用 GelPro® Analyzer Software (分析儀軟體）來量化pRYG鬆弛之抑 制率（參考圖4 )。 總括而言，如本發明之化合物]經顯示，在此兩個測 定中可顯著地抑制局部異構酶11。將化合物]所得之結果 與局部異構酶Π抑制劑m-安吖啶所得之抑制値做比較。 如所預期地，紫杉酚及長春新碱在此兩個測定中都沒有觀 察到任何抑制效果。 -36- (33) (33)1344462 實施例2 1 :細胞循環之分析 細胞循環包括從一個細胞產生至下一個細胞的細胞進 展。在休眠階段（G 0 )與預合成階段（G 1 )期間，細胞 擁有兩套染色體（2c )。在合成階段（S )中，DNA的量 會經由複製而增加。當預有絲分裂階段（G 2 Μ )達成時， 即其中該細胞將擁有加倍的染色體補體（4c )及雙倍含量 的DN A，S階段就會終止。在隨後之有絲分裂階段（Μ ) 階段（其持續時間很短）中，加倍的染色體補體將均一地 分配在兩個子代細胞之間，然後在每一情況中此子代細胞 將在G01階段中再次擁有含有二倍含量之DNA，此乃表 示細胞循環可重新開始。 關於細胞循環之分析，是在3 7 t：下用不同濃度之試 驗物質（0·1-1000ηΜ)處理KB/HeLa細胞達24小時。 在使用參考物質或所選擇之試驗物質處理後，細胞循 環之G 2 /M階段中所阻止的細胞百分比是顯示於下表4中 。此一結果係使用特殊之分析軟體（Μ 〇 d F i tτ M )來分析。 -37- i (34) (34)1344462 實施例 EC50，單位爲ηΜ (在G2/M中之 50%細胞） 一 1 25.2 2 125.3 4 252 1 1 4 1.8 14 ( C ) >1000 紫杉酚 26.9 密它西蔥（小藍莓） 25.3 表4 :在G 2 / Μ階段中抑制5 0 %細胞所需之濃度。 如本發明之化合物]' 2、4及1 ]展現了可與那些參 考化合物紫杉酚及密它西蔥（小藍莓）相比較的活性。 實施例2 2 :細胞凋亡之證明 Φ CDDP|US核小體酶聯免疫吸附測定試驗： 核破裂是細胞凋亡過程的晚期結果。在此關係中所觀 察到的變化可歸結於DNA股因核酸內切酶而裂開並破裂 成依此所產生之核小體粒子。 使用由Roche Me】 ecular Biochemicals公司所揭示之 CDDplus核小體酶聯免疫吸附測定試驗來證明核小體粒子 . 〇 Nuc]eosome elisa <r 依此’以不同濃之度 （]η Μ -】0 V Μ ; 2 4小時之處理 -38- (35) 1344462 )硏究化合物1及2對U - 9 3 7細胞系之結果。（參考圖5 及圖6 )。 在此試驗中，可觀察到化合物1及2可使核小體在細 胞溶解產物中有濃度依屬性的增加》但無法證明在細胞培 養物之上層淸液中有任何顯著的增加，此舉是支持以化合 物1及2處理後凋亡細胞死亡發生的證據。

實施例23 :如本發明之化合物其飽和水溶解度之證明 化合物]、2 '] 〇及1 4之飽和水溶解度可如下所述般 測量。爲了溶解物質並增進試樣之潤濕，可加入最大限度 之1%DMS0。使用HPLC-UV方法檢驗含量。其結果是摘 述於下表 5中： 化合物名稱 飽和水溶解度 〔 微克/ 1 25.0 2 28.5 10 (C) 0.03 8 14 (C) 0.35 表5 :化合物1、2、】0及]4之飽和溶解度。

如本發明之化合物】及2是不同於化合物】〇及1 4， 其更能溶於水中。 實施例24 :活體內活性 -39 - (36) 1344462 在與物質]0和1 4比較時，如本發明之化合物2的活 體內活性及耐力係在人類異種移植模型（黑素瘤，Μ Ε X F · 462)中檢驗。其結果乃摘述於下表6: 化合物2、10及1 4之活體內活性（黑素瘤;MEXF462 ) 化合物 劑量[毫克/公斤] 投藥方式 死亡η1 最佳T/C% (天） 2 80 ρ,ο. 0/6隻老鼠 0.0% (18) 在所有6隻動物中 完全地緩解 10 (C) 70 ρ.ο 5/6隻老鼠死亡 2.3% (7) 10 (C) 55 ρ.ο. 2/6隻老鼠死亡 0.8% ( 14) Η (C) 32 ρ.ο 3/5隻老鼠死亡 14.6% (7) 14 (C) 16 ρ.ο 3/5隻老鼠死亡 0.7% (18)

])與總數比較時死亡動物之數目。 表6 :化合物2 ' 1 0及14之活體內活性（黑素瘤；

MEXF462 ) 在此異種移植模型中，可觀察到化合物2能在經處理 之動物的腫瘤中產生完全地緩解，同時也非常地有耐力（ 無死亡）。然而，在化合物]0及1 4的情況中則只觀察到 可資比較的抗腫瘤效果，且化合物]0及1 4較沒有耐力。 實施例2 5 :活體內活性 在與物質〗〇比較時，如本發明之化合物2的活體內

L -40 - (37) (37)1344462 活性及耐力係在另一人類異種移植模型（乳腺，MAXF85 7 )中檢驗。其結果乃顯示於下表中： 2及1 0對乳腺癌M A X F 8 5 7之； 吉果 化合物 劑量 [毫克/公斤] 投藥方式 死亡d 最佳T/C% (天） 2 80 p.o. 0/6隻老鼠 9.6% (10) 10 (C) 40 p.o 2/6隻老鼠死亡 6.5% (10) 1 )與總數比較時死亡動物之數目。 表7 :化合物2及1 0之活體內活性（乳腺，M A X F 8 5 7 ) 同時可觀察到化合物2和〗0皆具有可資比較的抗腫 瘤效果，而物質]〇 ( 2 /6隻老鼠死亡）之耐力則實質上比 2還差。 【圖式簡單說明】 接著將參照圖示詳細說明本發明，其中 圖〗爲kDNA測定之照片； 圖2爲kDNA解除鏈接之抑制率； 圖3爲pRYG鬆弛測定之照片； 圖4爲p R Y G D N A鬆弛之抑制率； 圖5爲化合物1之CDDplus核小體酶聯免疫吸附測定 試驗；以及 圖6爲化合物2之CDDplus核小體酶聯免疫吸附測定 (38)1344462 試驗。

-42 -

Claims (1)

1344462 附件3A :第0931 15555號申請專利範圍修正本 • · . · · · · · - --.1 民丨國99年12月玲白P爹正 拾、申請專利範圍 1 · 一種吲哚衍生物’其係選自下列之化合物： 2-〔 1- ( 4 -氯苄基）-1H -吲哚-3-基〕-Ν-α奎啉-6-基- 2-硫代氧代乙醯胺（1 1 ) 2 -〔 1 - ( 4 ·氯节基）-1 Η - D引哄-3 -基〕-2 -氧代-Ν -卩比啶 並〔2,3-b〕吡嗪-7-基乙醯胺（1 ) 2 -〔 1 - ( 4 -氯苄基）-1 Η -吲哚-3 -基〕-N - ( 1 Η -吲唑-5- 基）-2 -氧代乙醯胺（4 ) >1-{2-〔1-(4-氯苄基）-1^1-吲哚-3-基〕-2-氧代乙醯 基卜Ν-喹啉-6-基乙醢胺（2 ) 彼之互變異構物及立體異構物，包括非對映異構物和對映 異構物’以及其生理學上可接受之鹽類。 2 · —種用於治療腫瘤疾病之藥物，其含有至少一個 如申請專利範圍第1項之吲哚衍生物。 3 _如申請專利範圍第2項之藥物，彼在顯微粒或奈 米微粒之組成物中包含該D引哄衍生物。 4.如申請專利範圍第2或3項之藥物，彼包含該吲 哚衍生物和藥學上可利用之載劑及/或稀釋劑及輔助物質 ’並可爲藥錠、糖衣藥錠、膠囊、用於注入或安瓿之溶液 、检劑 '藥膏、以吸入方式使用之散劑、懸浮液、乳霜及 軟膏之形態。 5 · —種如申請專利範圍第1項之吲哚衍生物在製造 1344462 用於治療腫瘤疾病之藥物上的用途。 6-如申請專利範圍第5項之用途，其係用於治療牽 涉到對其他活性化合物有抗藥性的腫瘤疾病之病況上。 7 ·如申請專利範圍第5項之用途，其係用於治療牽 涉到轉移癌之腫瘤疾病的病況上。