TWI329646B - O, o'-amidomalonate and n, o-amidomalonate platinum complexes - Google Patents

Description

1329646 (1) 九、發明說明 【發明所屬之技術領域】 本發明係關於醯胺基丙二酸根 〇,〇’-Pt與N， 合物以及以實質上純的形態製得彼等之方法》 O-Pt 螯 r

V 【先前技術】 順鉑（CDDP或順-二氨二氯鉑（II )，圖1 ) 用於人類之鉑化療化合物中應用最廣者且現今已被 療睪九，卵巢，與頭頸腫瘤，以及與其他藥劑倂用 治療鱗狀細胞與小細胞肺癌。咸信順鉛之抗腫瘤活 自體內地喪失氯配位子而形成反應性單水合或二水 物，其進而於腫瘤細胞中形成DNA股內或股間的 造成細胞死亡。 但是順鉑的腎毒性與耳毒性使其應用有重大限 已製造並測試許多新穎小分子Pt錯合物以期發現 進治療指標（最大耐受劑量對最小有效劑量之比値 合物。例如，英國的癌症硏究中心顯示將氯原子替 他離去基可以使化合物的腎毒性降低。此點導致 carboplatin )(圖1 )的發現，卡鈾爲一種順鉑同 其中該氯離子配位子被1,1-環丁烷二羧酸螯合物所 該螯合物較順鉑的氯離子不易發生變化，所以得用 量的卡鈿方能達到類似順鉑的殺腫瘤功效。但是卡 高治療指標與不同毒性性質抵銷了此一可能的缺點 之劑量限定毒性爲骨髓抑制。 爲核准 用於治 而用於 性係來 合錯合 交聯， 制。業 具有增 )之化 換成其 卡銷（ 系物， 替代》 較高劑 鉑的較 。卡鈾 -5- (2) 1329646 f

奧沙利銷（oxaliplatin)(圖1)爲另一核准用於人 類的Pt螯合物。奧沙利鉑係由將順鉑中不易變化的（氨 )與易變化的（氯離子）配位子均替換成其他基團的功效 硏究中所得到的結果。奧沙利鉑中，氨配位子被替換成 反-1R，2R-二胺基環己烷（1R，2R-DACH )螯合物’而氯離 子配位子則被替換成草酸螯化物。奧沙利鉑用於治療結腸 直腸癌。奧沙利鉑之劑量限定毒性爲知覺的神經病。 許多其他小分子Pt錯合物業經製造出來並加以測試 ，但是目前只達到功效與治療指標上的些微進步。許多爲 了改善核准之鉑錯合物治療指標的嘗試涉及組合療法，例 如，共同投予順鈾與太平洋紫杉醇（paclitaxel )，或配方 改變，如，以微脂粒來遞送。 另一改良Pt錯合物治療指標的方法係將錯合物導向 腫瘤細胞。習知小分子Pt錯合物，如，順鈾、卡鈾、與 奧沙利鉑並非特異性地導向腫瘤細胞，所以在靜脈注射後 ，無異於進入腫瘤細胞般地，會擴散進入正常細胞中。曾 被仔細硏究過的一種非-Pt化療劑導向腫瘤方法涉及將化 療化合物附接到聚合物或其他大分子結構，如，樹枝狀高 分子，血淸蛋白質或抗體。已知聚合物與奈米粒子在靜脈 注射後於腫瘤中的濃度超過其於正常組織中的濃度。此一 較佳的腫瘤積聚機制被稱爲“增強的滲透性與滯留性”（ EPR )功效。基本上，腫瘤內皮細胞層較正常內皮細胞層 爲「易漏的」，所以大的化學體如，聚合物與奈米粒子較 易穿過腫瘤維管結構的內皮細胞層而進入腫瘤的間質區域 -6 - (3) 1329646 . (“增強的滲透性”）。另外，腫瘤胞外液的淋巴引流較正 常細胞不有效，所以使聚合物與奈米粒子從腫瘤，相較於 正常組織，流出的速率降低（“增強的滯留性”）。 _ 經由EPR效應使化療劑被動導向至腫瘤的構成物實 例包括接附至線型聚羥丙基甲基丙醯胺聚合物（聚（ . HPMA ))之多索魯必辛（doxorubicin)，該接附經由四 肽，且該四肽被設計成可被溶酶體酶切斷。此水-可溶共

V _ 軛物，稱爲“PK1”，爲無數文獻之主題而探討其化學性質 ，臨床前測試與臨床評估。類似地，已將聚（HPMA )與 太平洋紫杉醇、喜樹驗（camptothecin)共範以選擇性地 將這些化療分子遞送至腫瘤。

除了被動導向腫瘤，亦可使用主動機制使Pt錯合物 導向腫瘤，如，使Pt錯合物偶合至與特定受體結合之部 分（該特定受體於腫瘤細胞中爲向上調控（up-regulated )，相較於正常細胞中）。許多種此類向上調控受體爲已 知（Heppeler，et al.，2000 ; S c h 1 a epp i，e t a 1 ·，1 9 9 9 ; Sudimack， et a 1., 2000 ; Dubowchik, et a 1., 1 9 99 ；

Weiner, 1 999； Buolamwini，1999)。受體結合劑的實例 包括單株抗體，肽，生長抑素（somatostatin)同系物， 葉酸衍生物，血球凝集素，維生素，如，鈷胺（維生素 B12)及其衍生物，生物素與聚陰離子性多醣。已有Pt與 單株抗體共軛之硏究報導（McIntosh，et al.，1 997 ; Hata，et al·，1 992 ) ，P t與類固醇共軛之硏究報導（G u s t， et al·，1 995 ; DiZio, et al., 1 992, Gibson, et al.5 1 9 9 0 ) (4) 1329646 以及Pt與葉酸共軛之硏究報導（vitols，et al_，1 98 7 )， 但是沒有任一者達到臨床評估。

亦可合倂被動與主動導向。例子有PK2，其爲包括聚 (HPMA)與共軛接合至該聚（HPMA)之多索魯必辛與半 乳糖的化合物，該多索魯必辛係經由酶可切斷的肽共軛接 合，該半乳糖爲對缺乏唾液酸基醣蛋白 （ asialoglycoprotein)受體具有強親和性之碳水化合物（其 於肝中高度濃縮）。 故需要一種製備醫藥可接受Pt-聚合物錯合物的手段 ’即，具有已知且可再現結構與純度之錯合物，且可使用 主動與被動導向技術而用於導向腫瘤。本發明提出此等手 段以及由彼製得之Pt錯合物。 【發明內容】 所以’本發明第一態樣提出具有如下化學結構之醯胺 基丙二酸根N,〇-Pt錯合物：

R3 其中： X 爲 c = o 或 so2; -8 - ⑧ (5) 1329646 1^係選自氫，脂基，水可溶基團，導向腫瘤的基團與另包 括一或多個導向腫瘤基團之水可溶基團； q爲Ok或1 : r 爲 1-500 ; 〔連結基〕係選自烷基，胺基酸，聚胺基酸，聚乙二醇（ PEG )及其組合； R2與R3獨立地選自NH3，一級胺，二級胺，三級胺與含

R2與R3獨立地爲一級，二級或三級胺基，二者均共價地 鍵結至脂基、脂環基、芳基、芳烷基或雜環基的碳原子， 其中，當胺基氮原子與Pt原子形成螯合物則形成5至7 土孩， R4係選自氫，陽離子與形成酯的基團，其中，. 該錯合物係由下述方法以實質上純的型態得到，此方法包 括令對應醯胺基丙二酸根 Ο,Ο'-Pt錯合物或醯胺基丙二酸 _ 根Ο,Ο'-Pt與N，0-Pt錯合物之混合物與pH爲6.0至10.0 之水溶液接觸。 本發明另一態樣提出具有如下化學結構之醯胺基丙二 酸根0，CT-Pt錯合物： -9 ⑧ 1329646

- 其中： ^ X 爲 C= 0 或 S 0 2 ;

Ri係選自氫，脂基，水可溶基團’導向腫瘤的基團與另包 括一或多個導向腫瘤基團之水可溶基團； q爲0或1 ; r 爲 1-500 ； 〔連結基〕係選自烷基，胺基酸，聚胺基酸，聚乙二醇（ PEG )及其組合； R2與R3獨立地選自NH3 ’ 一級胺，二級胺，三級胺與含 氮雜環基；或， ^ R2與R3獨立地爲一級，二級或三級胺基，二者均共價地 . 鍵結至脂基、脂環基、芳基、芳院基或雜環基的碳原子， 其中，當胺基氮原子與Pt原子形成螯合物則形成5至7 員環； 該錯合物係由下述方法以實質上純的型態得到，此方法包 栝令對應醯胺基丙二酸根N，〇-pt錯合物或醯胺基丙二酸 根N，〇-Pt與0,0'-Pt錯合物之混合物與pH爲3.5或以下 之水溶液接觸。 於本發明一態樣中，用於製造該實質上純的醯胺基丙 -10- (7) 1329646 二酸根N，0-Pt錯合物之pH爲7.0-8.0。 於本發明一態樣中，用於製造該實質上純的醯胺基丙 二酸根0,0’-Pt錯合物之pH爲2.0-3.5。

於本發明一態樣中，該水溶液之溫度爲2(TC至50°C

於本發明一態樣中，該水溶液之溫度爲35°C至40°C

於本發明一態樣中，使用緩衝劑將該水溶液維持於特 定pH。 於本發明一態樣中，該緩衝劑爲磷酸鹽緩衝劑。 於本發明一態樣中，藉由pH恆定法（pHstating)將 PH維持於特定範圍。 於本發明一態樣中，該陽離子係選自Li+，Na+，K+，

Ca2+ ’ Mg2 +與四級銨離子。 於本發明一態樣中，該陽離子爲Na+。 於本發明一態樣中，R2與R3爲NH3。 於本發明一態樣中，r2與r3合倂包括1，2 -二胺基環 ^\^nh2- 己院，。 於本發明一·態樣中，該I，2·—胺基環己垸爲1R，2R-二胺基環己烷。 於本發明一態樣中，〔連結基〕包括- Gly-(W)pGly-， 其中P爲0’ 1，2’ 3’ 4或5’ W爲一胺基酸或可爲相同 或互異之胺基酸所成直鏈。 於本發明一態樣中，p爲0。 -11 - (8) 1329646 於本發明一態樣中，p爲1，W爲Gly。 於本發明一態樣中，p爲2，W爲-Phe-Leu-。 於本發明一態樣中，p爲2，W爲Gly-Gly。 於本發明一態樣中，R i爲水可溶基團。

於本發明一態樣中，該水可溶基團爲 N-(2-(羥丙 基）甲基丙烯醯胺以及丙烯醯基（CH2 = CHC(〇)-)或甲 基丙烯醯基（CH2 = C(CH3) C(0)-)之共聚物。 於本發明—態樣中，R ι爲聚胺基酸。 於本發明一態樣中，該聚胺基酸係選自聚麩胺酸鹽， 聚天冬胺酸鹽與聚離胺酸。 於本發明一態樣中，心爲多醣。 於本發明一態樣中，1^爲另包括一導向腫瘤的基團之 水可溶基團。 於本發明一態樣中，該導向腫瘤的基團係選自葉酸， 葉酸衍生物’葉酸同系物，維生素Bl2，維生素B12衍生 物’維生素Bn同系物，生物素，去硫生物素與生物素同 系物。 於本發明一態樣中，Ri爲導向腫瘤的基團。 於本發明一態樣中，該導向腫瘤的基團係選自葉酸， 葉酸衍生物’葉酸同系物，維生素Bl2，維生素B12衍生 物’維生素B12同系物，生物素，去硫生物素與生物素同 系物。 於本發明一態樣中，p t呈+ 2氧化態。 於本發明一態樣中，pt呈+4氧化態。 -12- (9) 1329646 於本發明—態樣中，Ri爲具有如下化學結構之水可溶 無規共聚物：

其中 t 爲 0.75-0.99 ; v 爲 〇.〇1—0.25 ; t + v=l .〇〇 ; z代表聚合物分子量且爲1至5000仟道爾吞（kDal tons) R5與R5，獨立地選自氫與CH3 ; R6爲2C-6C羥烷基。 於本發明一態樣中，R6爲 2-羥丙胺基（ ch3ch(oh)ch2nh-)。 於本發明一態樣中，爲得到實質上純的錯合物，另包 括超過濾。 於本發明一態樣中，超過濾包括切向流式過濾。 於本發明一態樣中，超過濾包括離心超過濾。 本發明一態樣爲一醫藥組成物，其包括上述任一醯胺 基丙二酸根〇,〇’-Pt或N，〇，-Pt錯合物以及—或多個醫藥 可接受賦形劑。 本發明一態樣爲治療實性瘤之方法，其包括對所需病 -13- (10) 1329646 ‘ 患投予醫療有效量之上述任一醒胺基丙二酸根〇,〇，-Pt或 N，0-Pt錯合物》 於本發明一態樣中，非經腸投予該錯合物。 本發明一態樣爲製造實質上純的醯胺基丙二酸根 N，0-Pt整合物之方法，其係由實質上純的醯胺基丙二酸根 . 〇,〇'-Pt蜜合物或酸胺基丙二酸根N，0-Pt與〇,〇'-Pt蜜合 % 物之混合物製得’包括令該醯胺基丙二酸根0,0，-Pt螯合 物或醯胺基丙二酸根N，0-Pt與〇,〇，-Pt螯合物之混合物與 p Η爲6.0- 1 0 · 〇之水溶液接觸。 於本發明一態樣中，上述方法中之pH爲7.0-8.0。 本發明一態樣爲製造實質上純的醯胺基丙二酸根 0,0’-Pt蜜合物之方法，其係由實質上純的醯胺基丙二酸 根N，0-Pt螯合物或醯胺基丙二酸根N，〇-Pt與〇,〇，_Pt螯 合物之混合物製得’包括令該酿胺基丙二酸根N，0_Pt螯 合物或酿胺基丙二酸根N，0-Pt與〇,〇'-pt螯合物之混合物 ^ 與PH爲3.5或以下之水溶液接觸。 於本發明一態樣中，上述方法中pH爲2-3.5。 於本發明一態樣中’上述方法中，該水溶液之溫度爲

S 20°C 至 5 0°C。 於本發明一態樣中’上述方法中，該水溶液之溫度爲 3 5°C 至 40°C。 於本發明一態樣中’上述方法中，使用緩衝劑將該水 溶液維持於特定pH範圍。 於本發明一態樣中，上述方法中，該緩衝劑爲磷酸鹽 -14 - ⑧ (11) 1329646 緩衝劑。 於本發明一態樣中，上述方法中’藉由pH恆定 pHstating)將pH維持於特定範圍。 【實施方式】 表之簡單說明 錯合 錯合 根（ 之組 胺基 1 0 0 % 關係 較。 酸根

表1顯示pH對主要由0,0 -醯胺基丙二酸根Pt 物所成組成物，於38 °C，的影響。 表2顯示pH對由100%N,0-醯胺基丙二酸根Pt 物所成組成物，於3 8 °C，的影響。 表3顯示二種陰離子，氯離子（cr)與過氯酸 CIO，），於ρΗ5·0-5·5對醯胺基丙二酸根Pt錯合物 成物的影響，由主要爲0,0-Pt螯合物與100% N，0-醯 丙二酸根者開始。 表 4 顯示聚（HPMA) -GFLG-Ama-Pt ( NH3 ) 2， N，〇-螯合物，之隨時間變化的Pt釋出百分比與pH之 表5顯示本發明各化合物與順鉑、卡鈾之1C 5〇比 表6顯示小鼠對本發明〇，〇 ’ _與N，0 _醯胺基丙二 Pt錯合物之耐受性程度的比較。 定義 “實質上純的”指醒胺基丙二酸根Pt整合物（Ama = Pt )中大於90%，較好大於 95%，更好大於99%之Pt被螯 (12) 1329646 合成異構物之一，即，〇,〇'-Pt或N，0-Pt醯胺基丙二酸根 螯合物之一。 “治療有效量”指投予量造成腫瘤或病患腫瘤停止生長 ，生長速率降低，變小或完全消失之結果。爲達本發明之 目的，本案化合物之治療有效量預期將爲約lmg Pt/kg至 約lgm Pt/kg體重。

本文所用“病患”指哺乳類，特別是人類。 “丙醯胺聚合物”指聚丙醯胺，聚甲基丙醯胺及二者之 共聚物。 “Pt錯合物”一詞指物種中Pt原子與4個（若爲Pt ( II ))或6個（若爲Pt ( IV ))配位子配位。 “螯合物”指與Pt錯合物之Pt原子形成環之二牙圑配 位子。 氨”一詞指NH3。 “一級胺”一詞指具有化學式RaNH2之化合物，其中Ra 係選自脂基，脂環基，芳基或雜環基。 “二級胺”一詞指具有化學式 RaRbNH之化合物，其中 Ra與Rb獨立地選自脂基，脂環基，芳基或雜環基。 “三級胺”一詞指具有化學式RaRbReN之化合物，其中 Ra，Rb與Re獨立地選自脂基，脂環基，芳基或雜環基。 “四級錢”一詞指具有化學式RaRbR<：RdN +之化合物，其 中Ra，Rb，Rc與Rd獨立地選自脂基，脂環基，芳基或雜 環基。四級錢基團需要一個對離子（counterion)，例如 ，但不限於，氯離子（C1·)或羧酸根（C00·)，其中後 -16- (13)1329646 者可爲含四級錢基團之分子的一部分（即，兩性離子）或 爲外部者’例如，但不限於，物理性分隔之F3ccoo·基團

本文所用"脂基"一詞指直鏈或支鏈，飽和或不飽和（ 即，包含一或多個雙鍵及/或三鍵）烴類。較好，脂基係 由1至1 0個碳原子所組成（當使用數字範圍如，"1 _ 1 0"或 “1至10”，其表示該基團可由1個碳原子，2個碳原子，3 個碳原子’等等，至（包括）所述最大數目碳原子所組成 )。此例中更好爲具有1至6個碳原子之低脂基。 本文所用“脂環基”一詞指脂基中至少有些碳形成環。 “羥烷基”指脂基中不包含任何雙鍵或三鍵，且被一或 多個-OH基團取代。 本文所用“形成酯的基團部分”指脂基，脂環基，芳烷 基或雜芳烷基R基團當與羧酸根的氧，即，-C(O) 氧 ，共價鍵結，便產生酯，即’ -C ( Ο ) OR基團。

本文所用”芳基"指所有環中具有完全非定域π電子系 統的碳之單環或稠合多環（即，共享相鄰碳原子對之環） 。芳基之實例，但不限於’有苯基，萘基與蒽基。 本文所用芳烷基指有脂基共價鍵結之芳基，該脂基爲 該芳烷基之接合點。芳烷基實例包括’但不限於，苯甲基 ，苯乙基等。 本文所用”雜環基"指單環或稠合環基團，其中一或多 個環包含一或多個選自氮，氧與硫之原子。此一詞包括雜 芳基，其中該環具有完全非定域π電子系統且根據 -17- (14) 1329646 H u c k e 1 ’ s法則爲芳香族。雜芳基的實例，但不限於，有吡 咯，呋喃，噻吩，咪唑，噁唑，噻唑，吡唑，異噁唑，異 噻唑，吡啶，嘧啶，曈啉，異喹啉，嘌呤與咔唑。此一詞 亦包括雜脂環基，其中該環可包括一或多個雙鍵，但不具 有完全非定域π電子系統。

本文所用“導向腫瘤的基團"指將治療用化合物，例如 ，本發明化合物，選擇性遞送至腫瘤（相較於其他組織） 的基團。導向可爲被動，即利用EPR功效，或主動，即， 與抗體，血球凝集素，葉酸，生物素，維生素Β12，及其 同系物，如，胺甲葉酸（methotrexate )與去硫生物素形 成共軛物。 本文所用“水可溶基團"指提供或增加含0,0-Pt與 Ν,Ο-Pt醯胺基丙二酸根螯合物的分子水溶性之基團，該分 子本身的水溶性通常有限。水可溶基團的實例包括，但不 限於，聚合物如，聚（羥烷基丙烯醯胺），聚（羥烷基-甲基丙烯醯胺）及其共聚物；聚乙二醇（PEGs);聚環氧 丙烷（PEOs ):聚乙烯醇；聚（乙烯吡咯烷酮）；水可溶 樹狀聚合物；糖類，如，甘露糖與葡萄糖；抗壞血酸；甘 油；包含水可溶基團之胺基酸與聚胺基酸，如，絲胺酸， 羥丁胺酸’麩胺酸’天冬胺酸，酪胺酸，精胺酸，瓜胺酸 等；多醣’如，右旋糖，糊精，羥丙基纖維素與羧甲基纖 維素；葡萄胺基葡聚糖如，玻尿酸，硫酸皮膚素（ dermatan sulfate)，硫酸軟骨素（chrondiotin sulfate)， 肝素；磺酸，磺酸鹽，四級銨鹽與個別之水可溶官能基， -18- (15) 1329646 如，羥基，甲氧基’多元醇，多元醚，醯胺等等。 “聚合物-結合n，o -醯胺基丙二酸根二氨鈾（η)錯合 物”指Pt(II)螯合至醯胺的氮以及Ama中羧酸根的氧， 且一或多個此等Ama = Pt部分共價鍵結至聚合物骨架（直 接或經由連結基）所成化合物。

“連結基”指使Ama = Pt螯合物與聚合物骨架空間分隔 之基團。連結基可爲任一類個體，如，但不限於，聚乙二 醇，胺基酸或聚胺基酸，其一端可與聚合物骨架形成共價 鍵結，另一端可與Ama形成共價鍵結。 本文所用“陽離子”指醫藥可接受帶正電物種，包括， 但不限於，鹼金屬與鹼土金屬陽離子與四級銨基團。特別 是，本發明陽離子係選自 H+，Na+，K+，Li+，Ca2+，

Mg2 +與四級銨基團。 本文所用“陰離子”指醫藥可接受帶負電物種，包括， 但不限於，氯離子，溴離子，碘離子，硝酸根，硫酸根， ^ 磺酸根，碳酸氫根，碳酸根，四氟硼離子，四苯硼離子， 六氟磷離子，過氯酸根，等等。 本文所用“胺基酸”指具有一或多個共價鍵結至非羰基 碳原子之NH2基團的有機酸，例如，但不限於，β·丙胺 酸，4-胺基丁酸，6-胺基己酸，對胺基苯甲酸與羧基以 PEG間隔基分隔之胺類。“胺基酸”亦指所有天然與非天然 α-胺基酸及其N·烷基衍生物。 本文所用“聚胺基酸”指以肽鍵連接所成之胺基酸的線 型或分支鏈。組成聚胺基酸之胺基酸可爲相同或互異。 -19-

(§J (16) 1329646 . 本文所用“聚（Glu) -Ama-diEt”指儘有一部分（即 1 5% )羧基側鏈被Am a-diEt基團置換之聚合物。 本文所用“聚（G丨u - A m a - d i E t ) ”指所有羧基側鏈被 Ama-diEt基團置換之聚合物。 本文所用“聚（Glu) Ama = Pt(NH3) 2”指兩個Et基團 . 被順-二氨Pt基團置換之聚（Glu) -Ama-diEt基團，其中 該Pt亦螯合至Ama兩個羧基（〇,(V-Pt螯合物）或螯合至 « ^ 兩個羧基基團之一以及醯胺基團之氮（Ν,Ο-Pt螯合物）。 本文所用“聚（Glu-Ama) =Pt(NH3) 2”指儘有一部分 (即10-15%) Ama基團配位至順-二氨鉑（II )之Ama-Pt 螯合物》 本文所用“-Ama = Pt = DACH”指Pt螯合至Ama之0,0*-或Ν,Ο-且亦與1，2-二胺基環己烷（DACH)之胺基螯合所 成基團。 本文所用"聚（HPMA) -GG-，” “聚（HPMA) -GGG-，，’

“聚（HPMA) -GGGG-，’’ “聚（HPMA) -GFLG-,” 等指 HPMA與丙烯醯胺或甲基丙烯醯胺共聚物，且共價鍵結有 GG，GGG，GGGG，GFLG等。即，用於說明本發明，應

R 〇 〇

了解到GG，例如，實際指 〇 其中R 爲氫或甲基，GG部分的C-終端另被ONp，Ama-diEt等 所取代，而於本案申請專利範圍所述化合物中，則爲醯胺 基丙二酸根〇,〇’-Pt及/或N，〇，-Pt螯合物。 pH恆定法（stating ) ”指使用能夠使溶液PH維持於 -20- (17) 1329646 一選定的範圍之設備，無論是連續地或於特定間隔時測量 溶液pH’並視所需以酸或鹼滴定使pH重回該選定的範圍 下標“r”指下標所示部分的實際數目；例如，若“r”爲 1〇〇，則指1〇〇個括號中的部分共價鍵結至ri〇

本文所用“另包括一或多個導向腫瘤的基團之水可溶 基團”一詞指下述兩種情形：該水可溶基團之中或本身可 爲導向腫瘤的基團或者一或多個導向腫瘤的基團接附至水 可溶基團。此一詞亦指前述兩種情形之組合；即，該水可 溶基團亦可爲導向腫瘤的基團，此外亦接有一或多個另外 的導向腫瘤的基團。 本文所用「對應」一詞當用於醯胺基丙二酸根_ Pt與N，0-Pt錯合物時，指由相同分子衍生之“對應，，錯合 物’主要差異爲Pt係經由兩個羧酸根氧原子螯合至醯胺 基丙二酸根或是經由一個殘酸根氧原子與醯胺的氮蟹合至 醯胺基丙二酸根。 縮寫

Ama :醯胺基丙二酸 Ama-diEt:醯胺基丙二酸二乙酯 DACH : 1，2·二胺基環己烷 1R，2R-DACH : 1R，2R-二胺基環己烷 DCC :二環己基碳二亞胺 DMAP: N，N-二甲胺吡啶 -21 - (18) 1329646 DMF:二甲基甲醯胺

EDC: ]-(3 -二甲胺丙基）-3 -乙基碳二亞胺鹽酸鹽 FID :自由感應衰減 E或G1 u :麩胺酸 F或Phe :苯丙胺酸 G或g 1 y :甘胺酸 L或leu :白胺酸 HOBt :羥基苯並三唑 ΗΡΑ : 2-羥丙基胺 ΗΡΜΑ:Ν-(2-羥丙基）甲基丙烯醯胺 ΜΑ :甲基丙烯醯胺 MTD :最大耐受劑量，評估中未因藥物毒性造成死亡 之最高劑量。 N，〇-Pt: Ama-Pt螯合物中該Pt結合至醯胺基團之氮 以及醯胺基丙二酸根部分中一個羧酸根的氧 〇,〇|-Pt: Ama-Pt螯合物中該 Pt結合至醯胺基丙二 酸根部分中二個羧酸根的氧 〇Np或〇Np酯：對硝基酚酯中的硝基苯氧基 RCF :相對離心力 TFF :切向流式過濾 討論 本發明有關於一種選擇性且再現性地製備實質上純的 0,0'-Pt螯合物（圖3A )或N，0-Pt螯合物（圖3B )的方 -22- (19) 1329646 .法’該製備係由前述二物種之混合物製得，該二物種爲形 .成Ama-pt螯合物之反應中通常所得者。 申請序號爲 09/755,229乙案（本案之母案）中， 0,0’-Pt與N，〇_Pt醯胺基丙二酸根螯合物之初始混合物以 磷酸鹽-緩衝的鹽水溶液（pH爲約7.4，其中該氯化鈉濃 . 度爲65mM或以上）處理得出幾乎全部爲N，0-Pt螯合物 , 。其他陰離子亦得出類似結果。基於這些結果，推測某一 * ^ 特定陰離子濃度爲〇,〇’-Pt螯合物轉化成N，0-Pt螯合物所 必須的。現今發現，若陰離子可能有利於轉化，事實上 pH更是得到何種異構物的決定因素。事實上，視異構物 混合物要接受哪個pH的處理，可以完全控制所得到的螯 合物結構。即，於較低PH，即 3.5或以下，0,0’-Pt螯合 物佔大多數，甚至可以完全排除N，0-Pt螯合物，若pH爲 約6.0至約1〇.〇，N，0-Pt螯合物佔大多數，同理甚至可以 完全排除0，CT-Pt螯合物。於中間的pH，可得到各種比値 ^ 之異構物，且若pH上升至6或以上則N，0-Pt螯合物越佔 大多數。詳如下表所示。 表！中，大多數由 p(HPMA) -GFLG-Ama = Pt(NH3)2 ^ 之〇,〇|-Pt螯合物所成水溶液於各種pH範圍且於38°c接 受處理。 -23- (20) 1329646 表1 由 p (HPMA) -GFLG-Ama=Pt (NH3) 2之 92%0,0-螯合物，8%N，0-螯合物開始 pH3.l 3-3.5 pH4.l 5-4.5 pH5. 0-5.5 pH6. )-6.5 時間 Ο,Ο- N，0- 0,0- N,0- 0,0- N，0- 0,0- N，0- 1 h 100 0 75 25 67 33 57 43 5h 97 3 79 21 51 49 34 66 20 h 98 2 72 28 35 65 9 91

可以看到，於PH3.0-3.5，混合物變成完全爲0,0'-Pt 螯合物，但是於PH6.0-6.5，0,0’-Pt螯合物幾乎完全轉化 爲N，〇-Pt螯合物。於中間的pH，4.0-4.5與5.0-5.5，隨 時間增長，得到越多的N，Ο - P t螯合物。 當 p(HPMA) -GFLG-Ama = Pt ( NH3) 2 100% N, Ο -

Pt螯合物於相同pH範圍與溫度處理，得到表2所示結果

表 2 由 p (HPMA) -GFLG-Ama=Pt (NH3) 2之 100%N，O-螯合物開始 pH3. [)-3.5 PH4.0-4.5 pH5. 0-5.5 PH6.0-6.5 時間 0,0- N,0- 0,0- N,0- OsO- N,0- 0,0- N，0- 1 h 98 2 45 55 6 94 0 100 5h 100 0 56 44 15 85 0 100 20 h 100 0 68 32 19 81 0 100 (21) 1329646 ‘可以看到，於ρΗ6·0-6·5該N，0-Pt螯合物幾乎保持不 變，但是p Η若降低開始有〇，〇 ·_ p t螯合物轉化，而到 ► PH3.0-3.5’ N，0-Pt螯合物幾乎完全轉化爲0，cr_Pt螯合物 〇 爲了顯示添加陰離子對異構物轉化完全沒有功效，於 . 中間PH範圍’ 5.0-5.5與3 8°C，於所加氯或過氯酸根陰 離子存在時進行試驗。可以看到，有添加陰離子與完全沒 λ ^ 有添加陰離子時的轉化百分比沒有顯著差異。 表 3 由92 % 0,0·螯合物與8 % N，0-螯 合物開始，PH5.0-5.5 由100%Ν，0-螯合物開始，ρΗ5·0-5.5 lOOmMCr 100mMC104* lOOmMCl* 100 mM C104' 時間 0,0- Ν,Ο- 0,0- Ν,Ο- 0,0- Ν,Ο- 0,0- Ν,Ο- 1 h 69 31 69 31 9 91 10 90 5h 46 54 44 56 8 92 12 88 8h 32 68 33 67 11 89 23 77 22 h 32 68 40 60 13 87 25 75

上示現象似乎爲一般通則，Pt = DACH同系物亦得到類 似結果（數據未顯示）。每當Ν,Ο-Pt醯胺基丙二酸根 DACH螯合物於低於6.0的pH時，便會重排成爲〇，CT-Pt 醯胺基丙二酸根 DACH螯合物，若pH更低則該轉化更迅 速且更完全。類似地，當Ο,Ο'-Pt醯胺基丙二酸根DACH -25- (22) 1329646 - 螯合物於高於3.5的pH時，則會轉化爲N,0_Pt醯胺基丙 . 二酸根DACH螯合物’直到pH爲6.0或更高，則完全轉 化爲N，0-Pt螯合物。觀察到DACH螯合物與順-二氨螯合 物之轉化有一不同點，即，前者當呈現N，0-Pt螯合物之 形式時’不會像後者般完全轉化爲〇,〇i-Pt螯合物。另— • 方面，相較於順-二氨者，DACH螯合物之由0,0，-Pt轉化 έ 爲N，〇-pt螯合物較迅速且完全，即，DACH螯合物於約8 ^ 小時便幾乎完全轉化，相較於順-二氨者則須至少20小時 (數據未顯示）。 開始時，螯合物轉化實驗使用去氣水與氬氣氛圍。但 是去氣與惰性氛圍似乎不是必須。事實上，另一〇,〇，_Pt 螯合物之合成設計中，該起初得到的螯合物混合物在轉化 之前並未單離。相反地，在1小時鉑化期間，係於開放氛 圍中使用未去氣水將螯合物混合物之pH調節至pH3.0-3.5 而得出幾乎爲純的0,0’-Pt螯合物。但是若想要得到更純 __ 的〇,〇'-Pt螯合物，可使用去氣水與惰性氛圍，雖然功效 很小。 若本發明化合物Ama-Pt螯合物之異構物種類的製備 * 能夠幾乎完全控制，至少有兩個優點：首先，本發明方法 提出實質上純的化合物，其應符合主管單位的要求而登記 爲化療劑。第二，該化合物的治療指標可被控制符合特定 療法所需。易言之，先前顯示（美國專利申請序號 09/75 5,229 ) N，0-Pt螯合物具有實質上較高MTDs，故推 知具有較佳治療指標，相較於對應〇，CT-Pt螯合物。不想 -26- (23) 丄329646 受限於任何特定理論’前述現象推測是由於〇，〇 I - p t螯合 物比N，0-Pt螯合物更快釋出活性小分子Pt化合物。此可 見於實例31所示實驗，其中聚（hPMA) -GFLG-Ama-Pt (NH3) 2’ 100% Ν，0·蜜合物，約20 kDa，於各pH範圍 處理。結果示於表4。

時間 表 4

(h) ρΗ3·4 ρΗ4.4 ρΗ5.4 ρΗ6·4 ρΗ7·4 ΡΗ8.2 1 2.0% 〇.9±0.1% 0.5% 0.4 % 〇.36±0.01% 0.39±0.0% 2 4.2±0.1°/〇 1.9% 0.9±0.08°/〇 0.7±〇.〇7% 0.5±0.07% 0.7±0.08% 4 6.6% 3‘3±0.4% 1.4±0.2°/〇 0.9±0.06°/〇 0.7±0.04% 0.7±0.04% 8 12.0±0.1% 5.1±1.2% 2.6±0.4% 1.3±0.1°/〇 0.9±0.02°/〇 0.8±0.16〇/〇 24 29.1 士 3.9% 17.0±3.6% 7.3 % 2.7±0.1% 1.6±0.0% 1.8±0.02% 可以看到當pH大於約6.0時，只有很少的Pt釋出， 即使是24小時後。另—方面’ pH3.4時8小時釋出12%而 24小時釋出30 %。表ι_3顯示N，〇-Pt螯合物於較低pH 時轉化爲0,0’-Pt螯合物，而〇,〇_Pt螯合物於較高pH時 轉化爲N，〇-Pt螯合物，另外N 〇_pt螯合物在pH大於6.〇 時較女定 所以可預期1〇〇% Ν,Ο-Pt蟹合物，當處於實例 31之PH6.4，7.4與8.2時，將保持爲N，〇_Pt螯合物而不 改變。另一方面，於pH3.4，表U顯示N，〇_pt螯合物相 當快速地轉化爲0,0、Pt螯合物。於中間pH5 〇_5 5，表 -27- (24) 1329646 1-3顯示N，0’-Pt螯合物喪失一些安定性而開始轉化爲 Ο,Ο’-Pt螯合物。於表4中，ρΗ6·4，7.5與8.2時很少pt 釋出，支持了 Ns〇-Pt蝥合物不易釋出Pt之假設，pH3.4 時有顯著量Pt釋出，支持了 0,0’-Pt蜜合物更有效率地釋 出Ph中間ΡΗ5·4時，表1-3顯示N，0-Pt螯合物轉化成 爲Ο,Ο’-Pt螯合物，但與較低pH相比，速率較低，表4 顯示中等數量的Pt釋出。

基於生理學’上述結果建議了：腫瘤與正常細胞均包 含溶酶體，胞器包含溶胞各種基質之酶。這些酶需要暴露 至酸性環境方能活化。溶酶體提供了所需環境；其內部 pH爲約5.0。本案揭示預期當N，〇-Pt蜜合物進入溶酶體 後將以顯著量轉化成Ο,Ο’-Pt螯合物，然後該〇,〇，_Pt蜜 合物將釋出活性小分子Pt物種。本發明聚合物結合或巨 分子結合Ν,Ο’-螯合物將優先積聚於腫瘤中而遭遇該細胞 之溶酶體。該酸性環境使該化合物轉化爲〇,〇，_Pt螯合物 ’該〇,〇’-Pt蜜合物將釋出活性小分子pt物種，進而殺死 該細胞’最後殺死該腫瘤。另一方面，聚合物結合或巨分 子結合Ν,Ο-螯合物因爲結構完整性較高所以較難接近正常 器官的細胞（與溶酶體）’因此被驅逐而於血管系統循環 ’此循環之生理pH (約7.4)使該化合物保持爲較不毒的 N，0-Pt螯合物形式。 實例 化學品 ⑧ (25) 1329646

順鉛，吡啶，乙醇，乙酸乙酯，二乙醚，胺基丙二酸 二乙酯 HC1鹽，N-乙醯胺基丙二酸二乙酯，AgN03， NaOH，1R，2R-二胺基環己院，聚麩胺酸-Na鹽，ΚΙ與PBS 由Sigma-Aldrich USA所提供◊所用溶劑爲HPLC級，試 劑爲 ACS級或以上。離子交換樹脂，AG 501-X8 ( D ) H+，HO·型，AG 50W-X8 H+，與 C h e 1 e x 1 0 0 生技級由 Bio-Rad Laboratories 所供應。第 1 級（Class 1)水得自 Milli-Q 水系統。K2PtCl4 由 All-Chemie Ltd. ，Mt.

Pleasant，SC 所供應。助爐劑 289 得自 Schleicher and Schuell。 ( ΗΡΜΑ ) -GFLG-ONp，聚（ΗΡΜΑ ) -GFLG-

Ama-diEt ( 45 kDa )，與聚（ΗΡΜΑ) - G F L G - A m a - d i E t ( 3 5 1 kDa)由 Polymer Laboratories，Shropshire，UK 戶斤合 成。胺基酸分析與 MALDI-TOF-MS 由 Peptide Technologies Corp. Gaithersburg > MD 所進行。 # 裝置與儀器 視數量大小* 〇.2μηι無菌過據係以25 mm Whatman GD/X PVDF針筒過濾器，Steritop介質瓶過濾器與GP快 ^ 速膜（Mill ipore )，或是Mill ipak線上過濾器與 PVDF 膜（Millipore )來進行。以具有UV光之層流風櫥進行無 菌操作。以Beckman Phi-34 pH計測量pH，其具有凝膠電 極，且用於低pH測量時以pH4校正而用於高PH測量時 以pHIO校正。凍乾固體時之靜電以Zerostat槍（Aldrich ) 中和，且以靜電場計（SIMCO，Hatfield，PA )進行 -29- (26) 1329646

引導。鉑以ICP-OES分析，使用Jobin Yvon JY24光譜儀 ，且將試樣與標準品以3% ΗΝ03稀釋至l-60ppm。水係使 用 Aqu astar C2 000 ( E M Sc i ence )以 Karl Fi sher 滴定分 析。Na，C1，與 P 之元素分析由 D e s e r t A n a 1 y t i c s， Tucson ， AZ ，進行。4 NMR 圖譜於 400 MHz Unity/Inova 系統（Varian，Inc)測得。195PtNMR 圖譜 於 300 MHz Mercury 系統（Varian)或 300 MHz Avance Bruker 系統測得。使用 Freezemobile 12EL(Virtus)進行 凍乾。 0,0’-Pt與N，0-Pt螯合物百分比之取樣純化 反應混合物於預定時間取樣中0,0·-與N，0-螯合物之 百分比如下測得：移出足量反應混合物（4-1 5mL，視濃度 而定）得出大於lOOmg Pt-螯合物（若只要測19SPtNMR 圖譜）或約200mg (若％Pt與％H20均要測）。以超過濾 純化試樣，即，使用Centricon Plus-20離心濾器與5kDa Biomax 膜（Millipore)，於建議之RCF旋轉至剩下不到 lmL。丟棄濾液，滯留物以 15-18mL水稀釋，然後令試 ' 樣離心。重複一次，滯留物凍乾得出用於分析之試樣。 自PBS釋出之鉑 如下測量小分子鉑物種隨時間之釋出百分比。將約3 0 mg聚合物-鉛共軛物溶於]5mL磷酸鹽緩衝之鹽水中（10 mM磷酸鹽’ 123 mM C1·)，然後於37 °C水浴中培養。於 -30- (27) 1329646 •所示時間，取2. OmL試樣，移至離心濾器（3 kDa標稱分 , 子量截斷（Centricon YM-3，Millipore))並旋轉直到累 積 > 1 .5mL的濾液。各時間取得的濾液與原本的溶液以 ICP-OES分析鉑。使用下式定出小分子Pt物種釋出之百 分比：（（濾液中Pt的ppm數）/ (貯液中Pt的ppm數 . ))X 1 00。 % 大小排斥層析 Ν,Ο-Pt螯合物以SEC系統分析，該SEC系統由下列 所組成：配置有兩個PL Aquagel-OH Mixed 8 μπι管柱（ Polymer Labs )之HPLC ’管柱烘箱爲35°C與RI偵測器。 動相由35/65之MeOH/H20混合物與10.0 mM.LiCl〇4所 組成，流速爲1.0mL/min。管柱以ΡΕΟ/PEG標準品校正， 將結果代入1 〇 g ( Μ p )之4級多項式，其爲滯留時間倒數 的函數與Μη之値爲1〇〇 yL濃度爲2 mg/mL溶於動 相中試樣之三次測量的平均。 切向流式過濾 以大於約2克的規模，聚合物之〇,〇'_pt與N，0-Pt螯 合物以切向流式過濾（TFF )純化，使用膜之面積爲〇 〇5 _〇_1 m2(由Biomax聚醚颯製成，具有5kD標稱分子量 截斷）。在過濾之前，將系統淸潔淨化，即，用〇1N N a OH以建議流速流3〇·6〇分鐘。移除該鹼性物，使新鮮 的Milli-Q水循環至滯留物與滲透液的pH爲幾乎中性（ -31 - (28) 1329646 pH< 8)。滲透液的流速於入口壓力爲2.0 bar與出口壓力 爲0.3 5 bar時測量。亦使用Mil li-Q水作爲補充水。 N M R圖譜術

195PtNMR圖譜由置於5 mm管中之已過濾〇.70mL溶 液（溶於93/7 H20/D20 )而得到。使用足量試樣（80-120 mg)以得出鈾濃度>50 mM之溶液。各試樣之探針均 調整。脈衝寬度爲90度，擷取時間爲10 msec，圖譜寬度 爲100 kHz，且未使用延遲。射頻器調至約〇,〇|_pt與 Ν,Ο-Pt螯合物位移的半中間（順二氨Pt爲-1 896 Ppm而 D ACH-Pt爲-2450 ppm)。典型而言，順二氨與 DACH = Pt物種各需要約50,000與1百萬次瞬變以得到足 夠的s/n比値（>35 : 1 )。所成FID持續左移直到成爲平 坦基線’應用100 Hz峰線寬化，處理前先應用2048之 Fourier fill。設定積分區域，且使用VNMR軟體V6.1使 圖譜基線符合雲型線。以 100mM K2PtCl4之 95/5 H20/D20與100mM HC1 (於- 1 624 ppm)溶液試樣作爲外 部參考品。其亦用於測定9 0度脈衝寬度與T1。 13C NMR圖譜係使用與i95ptNMR相同之試樣而得到 。擷取時間爲0.50秒，延遲爲3.0秒，約70度脈衝寬度 與收集5000- 1 0000次瞬變，並施加3.5 Hz之峰線寬化。 通常s/n >100。含水試樣以67.19 ppm之1，4-二噁烷（於 9 3/7 H2〇/D2〇中）作爲外部參考。其他試樣則以溶劑峰線 作爲參考。 -32 - (29) 1329646 'η NMR圖譜以TMS或TMSP作爲參考 標準參數而得到。通常使HOD訊號預飽和。1 ► )的單位爲赫兹（Hertz)。 下述實例，其進一步例示本發明，並不以 來限制本發明範圍。 實例 1:聚（HPMA) -GFLG-Ama-diEt (約 25 鲁 備 烘箱乾燥後之1L圓底燒瓶與磁攪拌子一 (s e p t u m )塞好，於真空中冷卻。冷卻後加入 如意塞，將29.79 g(140.8mmol)胺基丙二酸 鹽加入。取走如意塞，將800mL無水吡啶以插 中。50g 聚（HPMA) -GFLG-ONp ( US 5 965 1 1 ? 合物I)取三分之一加入。當幾近溶解時，將 ON p-聚合物加入。當此第二份三分之一幾近溶 後的三分之一 ONp -聚合物加入。 反應以 HPLC監看其自由對硝基酚與總 HPLC使用C18管柱，pH4.5 MeCN動相與3: ' 偵測。試樣經鹼水解（pH 1 2，5分鐘）後分析 基酚與總對硝基酚。於約23 °C攪拌20-24小時 已完成（圖6)。

反應混合物以水浴於40-45°C加熱3小時 溫，於真空及< 4〇 °C移除吡啶。令殘留物老 E10 Η中得出2 5 % w t / v ο I溶液。粗產物以2.5 L 物，並使用 異合常數（J 任何方式用 kDa )之製 同以如意塞 氮氣，移去 二乙酯HC1 管加入燒瓶 :之圖1 A化 另三分之一 解時，將最 對硝基酚， 6nm 之 UV 其自由對硝 ，反應大致 ，冷卻至室 容解於絕對 無水EtOAc -33- (30) 1329646 - 與〇.5L二乙醚進行析出。此混合物攪拌3-5小時後以中 r 孔玻璃濾片過濾。殘留物以約1 〇〇mL乙醚淸洗三次，於隔 濕橡皮障（rubber dam)中乾燥得出57-59g淺黃色固體， 將其溶解於500mL EtOH中，然後於每克濾餅中加入 3.1gAG 501-X8 (D) IX樹脂（H +與〇H_型）。此混合物輕 . 輕地攪拌2.5小時後過濾移除樹脂。濃縮EtOH體積得出 . 25 % wt/vol溶液令產物析出。收集產物，淸洗得出45-46 g淺黃色固體。4 NMR顯示Ama-diEt基團的特徵峰線且 除了各爲<1%之EtOH與EtOAc以外，沒有小分子。 胺基酸分析（gly: HIPA: leu: phe莫耳比）：3.1: 7.1· 1.0: 1.2; 4 NMR(D2〇) δ 7.2-7.4(br s，5，Ar// )’ 4.66 ( br s’ 1，a-H-phe ) ’ 4.31 ( br s，5，a-//-leu ’與 OC//2CH3 ) ，4.1-3.8 (高 s 與短 m，~13，_ NHCH2C//(OH)CH3 與-NHC//2C02- ) ，3.3-2.9 ( m > -NHC//2CH ( OH ) CH3 與 phe-C//2 ) ，2.25.K2 ( m，聚合 物骨架之- CA-’ leu 之 C//2 與 CW) , i.2〇(br s，〜31，_ NHCH2CH(OH)C//3，與-OCH2C//3 ) ，0.99 ( s，聚合物骨 架之 C//3-) ，0.93 與 0.87 ( sh 與 s，6，leu-C//3)。 實例2 :順-二氨二水合銷（11 )二硝酸鹽之製備 順銷（8.996 g ’ 29.98mmol) ，AgN03 ( 9.959 g， 5 8.62mmol ) ，3-5 滴 5% HN03’ 與 19〇mL 水所成懸浮液 於銘泊覆盖之低光化介質瓶中在室溫攪拌過夜，然後於 6 0 - 6 5 °C加熱3 . 5小時。冷卻至< 3 〇它後，混合物以〇 2 2 -34- (31) 1329646 μιη濾器過濾得到pH爲2之澄淸溶液。Pt與Ag分析（ I C P - 0 E S )典型範圍爲 1 5，0 0 0 - 2 5，0 0 0 p p m P t 與 4 -1 4 ρ ρ Π1 Ag。每次製備後都分析Pt，於使用前則加熱至55°C歷時 5分鐘，然後冷卻至室溫。 順-二氨二水合鉑（II )二硝酸鹽之二-15N同位素異構 物的195PtNMR顯示於- 1 5 8 2 ppm有一三重峰，接近 Appleton，etal·，1989 於文獻中所述-1580 ppm 的數値。 實例J 3:聚（HPMA) -GFLG-Ama = Pt(NH3) 2 0,0'-Pt 螯 合物之製備 A. 聚（ϋΡΜΑ ) -GFLG-Ama-diEt 之水解 於備有攪拌棒之1 L介質瓶中置入2 0OmL水，加入 4 5 g 聚（HPMA) - G F L G - A m a - d i E t ( 1 9.3 5 m m o 1 Ama-diEt 殘基），激烈攪拌後，加入 135mL水，得到 12-13% ( wt/v )混合物，溶解達成後（1 - 2小時），加入 27mL (

5 4mmol ) 2 N NaOH 以提高 pH 至 12.5-12.7。維持此 pH 歷時30分鐘。然後加入45gAG 50i-X8(D) IX樹脂（H + 與OH_)。當pH降至7以下時，無菌過濾地將移除樹脂 。濾液pH以 2 N NaOH升至7 · 6而得到聚（}^1^八）-GFLG-Ama- ( CO:' Na+) 2 之溶液。 B .聚（HPMA) -GFLG-Ama = Pt ( NH3 ) 2，Ο, Ο' - P t 螯合物之製備

於上述ρΗ7·6之溶液中加入l99mL 590.9 mM ( 22,940 ppm Pt )順-二氨二水合鉑（Π )二硝酸鹽溶液，得到PH -35- (32) 1329646 爲5 · Ο ± Ο _ 1之反應混合物。攪拌過夜時，ρ η降低至約4.2 ’並生成少量沉澱物。16-18小時後，加入17g Chelex 1 〇 〇樹脂’混合物攪拌〗· 5小時後，加入約〇. 5 g助濾劑 使其分散後過濾。混合物以粗燒結玻璃過濾器過濾。移出 —份濾液’其包含約125mg產物，以〇·2 μιη濾膜過濾， 以離心超過濾純化。將滯留物凍乾得出約llOmg產物。

NMR ( D20 ) δ 7.6 與 7.55 ( br s，交換，N//)， 7.4 與 7.3(br s，5，Ari/) ，5.9(br s，部分交換，〇·2 ，N//-Ama) * 4.65 ( br s，1，a -p h e ) ，4 · 3 7 ( b r s，1 ，a-i/-leu) ，4.05 ( sh，gly 的 N//3 或 C//2 ) ，4.1-3.8 ( 高 s 與短 m，〜13，-NHCH2C// ( OH ) CH3，-NHC//2C02-)’ 3.35-2.9 ( br m，-NHC//2CH ( OH ) CH3 與 phe-C//2 ) ’ 2.25-1.2 (m，聚合物骨架之-C//2-，白胺酸C/i2與Ci〇 ，1.20 與 1 · 1 9 ( s，~27，-NHCH2CH ( OH ) CH3 ) ，0.99 (s，聚合物骨架之 C//3-) ，0.9(sh，6，leu-C//3) ;13c NMR ( 93/7 H20/D20) δ 180.1，179.8，179.6，175.0， 174.2，173.3，171.5，171.1，170.7，136.6，129.8， 129.4，127.8，66.5，66.3，59.6，55.6，54.7，53.0， 47.9，46.7，46.0 - 45.6 > 43.1，40.5 > 37.8 > 24.9 > 23.1 ，21.6 ; 195Pt NMR ( 93/7 H20/D20) δ - 1 587，- 1 73 3， -2020’與-2056’面積比爲1 : 38: 1 : 4。分析顯示此物 質包含約9%Pt，5-10%水，與0.02%Na。 實例 4:聚（HPMA) -GFLG-Ama = Pt ( NH3 ) 2，Ns〇-Pt 蜜 -36- (33) 1329646 -合物之製備 A. 0，CT-Pt至N，0-Pt螯合物之轉化 實例3 Che】ex 100樹脂過濾後得出約1 L濾 溶液藉著加入 5.85g ( lOOmmol) NaCl，16.35g ( )Na2HP04.7 H2〇 與 1 . 9 3 g ( 1 4 m m o 1 ) NaH2P〇4 . lOOmMNaCl 與 7 5 m M 磷酸鹽（p H = 7.4 )之溶液。 , Na〇H或5% HN〇3將pH調節至7.4，無菌過濾並以 % 緩衝劑淸洗，置入無菌介質瓶得出1.2L溶液，將 0.22 μπι膜螺旋蓋蓋上。以水浴將此溶液溫熱至37-然後置於37°C烘箱中22小時。此時一份以超過濾 試樣的195Pt NMR圖譜顯示該鉑螯合物爲2 95% 螯合物且<5% 0,0、Pt螯合物（圖 7 )。 B. N，0-Pt螯合物之TFF純化與凍乾 1.2 L N，0-Pt螯合物如本文他處所述般以TFF 滯留物（爲澄淸暗紅色溶液）無菌過濾與凍乾得出 ^ 紅棕色固體：％ Pt = 7.9±0.15，5.6%，1.07% Na，< ，0.07%(：1;111應11(020)5 7.4與7.3(1^5， )，5.23(1^5，部分交換£1，八1113之（：孖），4.65( 1，a-//-phe ) * 4.37 ( br s,l > a-/f-leu) ' 4.05 ( s 之 N//3 或 C//2 ) ，4.1-3.8 (高 s 與短 m， NHCH2C// ( OH ) CH3，-NHC//2C02- ) ，3.35-2.9 NHCH2CH ( OH) C//3 與 phe-C//2 ) ，2.25-1 .2 ( m 物骨架之- CH2-，leu 之 C//2 與 C//) ，1.20 與 1.1 ~27，-NHCH2CH ( OH ) CHi ) ’ 0.99 ( s，聚合物 液，此 6 1 mmo 1 而配成 以IN 同濃度 瓶子以 •3 8〇C 1 純化之 Ν,Ο-Pt 純化。 41,4g .0 5 % P 5 > ΑτΗ :br s， ;h ， gly ~1 3 » -(m，- ，聚合 9 ( s， 骨架之 -37- (34) 1329646

C//3- ) ，0.93 與 0.87 ( sh 與 s，6，1 eu-C//3 ) ; 13C NMR

(93/7 H20/D20) δ 186.5 ， 185.0 ， 180.1 ， 179.9 ， 179.6 ，176.3 ， 175.2 ， 175.0 ， 174.6 ， 174.4 ， 174.0 ， 173.9 ， 173.2，17 1.4 > 171.0，136.6，129.8 > 129.4 > 127.8 > 71.0 ，66.5，66.3，55·6，54·7，52·8，47·9，46.0，45.6， 41.8，40.5，37.9，24.8，23.1，2 1.5，20.9，20.7 > 18.7 ，1 7.3 ; 195Pt NMR ( 93/7 H2〇/D20，64·4ΜΗζ ) δ - 1 73 3 ( v br s，0,0’-螯合物），-205 6 ( s，N，0-螯合物），0,0'-/N，0 之比例爲 < 5: > 95; SEC Mp = 24.5，Mw = 24.3 kDa， Mn=15.7 kDa，與 Mw/Mn=1.55:於 37°C PBS 之 Pt 釋出 :3小時爲0.6%，24小時爲2.0%。 實例 5 :聚（HPMA) =GFLG-Ama = Pt = DACH > Ο,Ο'-Pt 螯 合物之製備 A. 順-二水合-lR，2R-DACH = Pt ( II )二硝酸鹽之製 備 將 3.65g(8.79mmol)K2PtCl4 與 37mL 水於 125mL 錐型瓶中溫熱得出棕紅色溶液，然後於其中加入5.84g ( 35.2mm〇l) ΚΙ於6mL水所成溶液，得出暗紅色溶液。冷 卻至室溫後，加入〇.962glR，2R-二胺基環己烷。立刻形成 黃色沉澱。於25°C攪拌3小時後，將混合物冷卻至4°C並 過夜。收集沉澱，以冷水，EtOH與乙醚淸洗得出 4.98g 順- I2Pt-lR，2R-DACH。接著，令 l.OOg ( 1.776mmol)順-I2Pt-1 R,2R-DACH ， 0.5 8 9 8 g ( 3 · 4 7 2 mm ο 1 ) A gN Ο 3 ，與 -38- (35) 1329646 16mL水於避光容器中合倂，於室溫攪拌過夜後於60 -6 5 °C 攪拌3.5小時。冷卻至室溫後，過濾移除AgCl，再以少量 水淸洗一次。以ICP-OES分析濾液顯示其包含13,500 ppm Pt ( 69.1 mM )順-(H20) Pt-1R，2R-DACH。 B. 聚（HPMA) -GFLG-Ama = Pt = DACH > O’O'-Pt 螯 合物之製備

將聚（HPMA) -GFLG-Ama-diEt ( 2.80g · 1.232mmol Ama-diEt 基團）水解並中和，得出 PH7.6之聚（HPMA )-GFLG-Ama- (C〇2Na) 2 溶液。於其中加入 1.48mmol 順-(H20 ) 2Pt-lR,2R-DACH二硝酸鹽水溶液，然後令此 混合物於室溫攪拌過夜。所成沉澱在加入0 . 1 g助濾劑後 以無菌過濾移除。接著將三分之一的反應混合物以0.3 g Chel ex樹脂處理90分鐘，無菌過濾後以離心超過濾純化 。此試樣凍乾得出 0.71克紅棕色固體：8.7 % Pt，4.2% H20 ; 'H NMR ( D20，400 MHz) δ 7.7 與 7.6 ( br s，〜5， ΠΗ) ，7.4 與 7.3 ( br s，5，Ar//) ，5.86 ( s，1.6)， 4.65 ( br s，1，αΗ-phe) ，4.39 ( br s，l，aH-leu) ，4.1-3.8( brm » 4 > -NHC//2C02- ) ，3.95 ( br s，9，NHCH2C// (OH) CH3 ) ，3.35-2.9 ( m，20，NHC//2CH ( OH ) CH3 與 phe-C//2) ，2.6-2.3 ( br s，N-CH-DACH ) ，2.25-1.2 ( m > 聚合物骨架之- C/^-，leu之C//2與C//與DACH)， 1.45-0.8 ( br s 與 m，-97，-NHCH2CH( OH) C//3,聚合物 骨架之 C//3-，leu 之 C//3 與 DACH) ; 13C NMR(H20/D20 93/7) δ 180.0 ， 175.2 ， 174.1 ， 173.3 ， 171.8 ， 170.7 ， -39- (36) 1329646 136.8 > 129.9 > 129.5 > 128.6， 128.0， 66.5， 66.3 ' 63.4， 5,5 ， 54.7 > 52.8 > 47.9 ' 46.7 > 46.0 > 45.6 > 43.5 > 40.5 ’ 37.4，32.4，24.8，23.2，21.5，20.9，20.8，18.6 ’ 17.6 > 與 17_2 ; l95Pt NMR ( H20/D20 93/7 ) δ - 1 900 ( vbr s，幾乎觀察不到，〇,〇’-Pt = DACH )；於 37°C PBS 之 Pt 釋出：3小時爲 6.0%，24小時爲10.9%。

實例 6 :聚（HPMA ) -GFLG-Ama = Pt = DACH，N，0-Pt 螯 合物之製備 實例5剩下之三分之二的反應混合物與0.6g Chelex 樹脂攪拌 90分鐘後無菌過濾。所得澄淸溶液配成 llOmMNaCl與85mM磷酸鹽（pH = 7.4)溶液。令此溶液於 3 7-.3 8 °C靜置22小時，然後以離心超過濾純化，凍乾得出 1 · 3 3 g 紅棕色固體：8 . 1 % P t，7.1 °/。Η 2 〇 ; 1 Η N M R ( D 2 Ο， 400 1^1^)3 7.4與7.3(1^5，5，八1·//) ，5.17(s，0.3) ，4.65 ( br s，1，aH-phe ) ，4.38 ( br s，l，aH-\eu )， 4· 1-3 · 8 ( br m，4，-NHCi/2C〇2- ) ，3.95(brs，9，- NHCH2C7/ ( OH ) CH3, ) ，3.35-2.9 ( m，20，NHC//2CH ( OH) CH3 與 phe-C//2) - 2.6-2.2. ( brm > N-C//-DACH)， 2.25-1.2 (m，聚合物骨架之- CH2·， C//2，leu 之 C//，與 DACH) ，1 .45-0.8 ( br s 與 m，〜1 00，-NHCH2CH ( OH ) CH3 · 聚合物骨架之C//3-，丨eu之C//3，與DACH) ;13C NMR ( H20/D20 93/7 ) δ 186.8，185.3，180.0，175.1， 174.6 ， 174.1 ， 173.5 ， 171.5 ， 171.1 ， 136.7 ， 129.9 ， -40- (37) 1329646 129.5，127.9 ’ 70.2，66.5，66.3，64.2，63.3 ’ 61.0 ’ 55.6 > 54.7 * 52.9 1 47.9 > 56.7 > 46.0 > 45.6 * 44.2 > 43.3 ，41.2，40.5，37.9，32.7 ’ 24.8 ’ 24_6，23_1 ’ 21.5 ’ 20.9，20.7，18.6 ’ 17.3 ; 195Pt NMR ( H20/D20 93/7 ) δ -2293，無峰線位於-1900，且無其他峰線；於37 °C PBS 之P t釋出：3小時爲2.0 %，2 4小時爲2.1 °/〇。

實例7:聚（Glu) -Ama-diEt之製備 於瓶中置入〇.5g(3.29mmol -C02基團）聚麩胺酸鹽 與攪拌棒，於乾燥箱中加入l〇4mg( 0.493mm〇l)胺基丙 二酸二乙酯 HC1 鹽，3mgDMAP 與 10mL 無水 DMF ( HPLC 級，置於4A分子篩上> 4 8 h)，然後攪拌得出雲霧狀混 合物。接著，加入 315mg ( 1.36mm〇I ) DCC，將如意塞塞 入瓶口，加入2mL 1.0 M HC1/乙醚，令混合物於室溫攪拌 過夜。加入約15mL CHC13後將此雲霧狀混合物以3 8 5 0 RCF離心15分鐘。丟棄上淸液，殘留的白色膠狀物與 2.5% NaHC03攪拌30分鐘。此混合物離心後將上淸液凍 乾得出1.91g白色固體，其1H NMR圖譜顯示DMF，EtOH ’ DCC/DCU之存在以及聚麩胺酸鹽，醯胺基丙二酸二乙 酯，與胺基丙二酸二乙酯之峰線（4.3 ppm ( glu之α-C Η 與-OC//2CH3)與2·4 ppm(glu之C//2)之峰線面積比爲 約1:1’但於聚麩胺酸鹽中該比例爲1:2)。將此物質 溶於水中，以離心超過濾純化得出 216mg白色固體，其 'H NMR圖譜顯示DCC/DCU之存在。另外，將NaOD加 -41 - (38) 1329646 .入此物質之D20溶液則釋出EtOH，其對應於0.67mmol Ama-diEt基團/每克之聚（glu) -Ama-diEt。此物質無須 純化即可用於實例8。 實例 8 :聚（Glu) -Ama = Pt ( NH3 ) 2，0,0，-Pt 與 N，0-Pt . 螯合物之製備 A. 聚（glu) -Ama = Pt(NH3) 2 〇,〇’-Pt 蜜合物之 ^ 製備 於備有攪拌棒之20mL小瓶中置入4mL水，加入 188mg 實例 7 之聚（glu) -Ama-diEt (相當於 〇.126mmol Ama-diEt)。溶解後其pH上升至12.4-12.8，20分鐘後加 入0.2gAG-50W-X8 H+ IX 樹脂。2分鐘內，pH會降至6 。以粗燒結玻璃過濾器過濾移除樹脂，將濾液無菌過濾。 以新鮮之2N NaOH將濾液pH升至7.1，然後加入 1.3mL 含 19,000 ppm Pt(0，126mmol)之順-二氣二水合鈾（π) 二硝酸鹽溶液加入。攪拌3 5分鐘後以離心超過濾純化， 濃縮至18mL後以15mL水淸洗三次，將滯留物凍乾得出 182mg白色固體，其195PtNMR圖譜顯示兩峰線： • -1595與-1732 ppm，比例約1: 4。主要峰線-1732爲順二 氨鉑（II)之〇,〇’-Pt螯合物。 B. 聚（鍵胺酸鹽）-Ama = Pt(NH3) 2 Ν,Ο-Pt 蜜合 物之製備 令上述聚（麩胺酸鹽）-Ama = Pt ( NH3 ) 2，0,0，-Pt 螯合物接受實例4所述Ο，Ο · - P t轉化至N，Ο - P t螯合物的 -42 - (39) 1329646 條件：llOmM NaCl，85mM 磷酸鹽，PH= 7.4。38°C 約 22 小時後，以離心超過濾純化，將滞留物凍乾得出 1 63mg 白色固體，其包含15.5% Pt ( 0.77mmol Pt/g聚合物）， 0.035 % P； i3C NMR(93/3 H2〇/D20) δ 186.9 > 183.6 > 182.8' 182.1 ( p-glu) > 180.0 > 175.3 > 174.2( p-glu)， 173.6， 172.5 > 171.0， 170.7， 155.7， 72.1 ， 63.6 > 62.7, 60.4 > 25.4 5 54.2 ( p-glu) > 53.5 > 51.6 » 34.2 ( p-glu)

，32.1 ， 31.4 ， 30.8 > 28.6( p-glu) ， 26.0 ， 25.5 > 25.0 ； 195Pt NMR ( 93/3 H20/D20 ) δ 1 5 95 ( v br s，22%， (NH3)2Pt ( RC02 )與 RC〇2，H2〇 及 /或 OH)與-205 3 ( br s，78%，醯胺基丙二酸根N，0-Pt螯合物）》 實例9:聚（glu-Ama-diEt)之製備 於備有攪拌棒之瓶中置入〇.5g ( 3.29mmol -C02Na基 團）聚魅胺酸鹽，於乾燥箱中加入1.39g(6.58mmol)胺 基丙二酸二乙酯 HC1 鹽，1.89g( 9.862mmol) EDC， 0.503g ( 3.287mmol) HOBt，與 20-25mL 無水 DMF ( HPLC級，置於4A分子篩上> 48h)攪拌得出雲霧狀混合 物。於室溫攪拌過夜，將混合物倒入150mL水中，得出白 色沉澱。將此物質懸浮於水中’過濾後以水淸洗。於真空 乾燥 3 天，得到 0.79g 固體：NMR(CDC13) δ 8.25( v br s，1，N//-glu) ，7.24(br s’ 1，N//-Ama) ，5.16( d，1，J = 5.7，C//-Ama ) ，4.22 與 4.1 ( m 與 br s， OC//2CH3 與 C//-gly ) 2.65，2.33，與 2. 1 8 ( br s，4， (40) 1329646

CH2CH2-glu )，與 1 ·26 ( br t，6，OCH2C//3 ) ； 13C NMR (CDC13) δ 175.9，171.9，166.5，62.4，56.8，56.4 ’ 32.5，26.3，與13.9。此物質不必進一步純化便用於實例 10° 實例 1〇:聚（glu-Ama) =Pt ( NH3 ) 2，〇,〇'-Pt 與 N，0-Pt 螯合物之製備

約 30mL 的 〇.79g ( 2.75mmol Ama-diEt 基團）聚（ glu-AmadiEt )之 EtOH 淤漿調成 40mMNaOH。令其 pH 保持於12.3-12.6，將混合物溫熱並以超音波震盪30分鐘 得出略微渾濁的溶液。以1 .8gH+ IX樹脂使pH降至7.26 ’然後無菌過濾得出淺黃色溶液《真空濃縮使體積降至約 3〇mL，將 4.2mL 含 18,400 ppm Pt(0.39mmol)之順-二氨 二水合-鉑（II )二硝酸鹽溶液加入，得出pH爲5.97的溶 液。以5% HN〇3使其pH降至 5.0，然後於室溫攪拌1小 時。 攪拌1小時後，取反應混合物之一部分試樣凍乾，得 出90mg白色固體，其1H NMR圖譜顯示只有67 %乙酯被 水解：10.3% Pt; ’H NMR(D20) δ 5.93(s，0.1 交換 d ，CH-ama) ，4.4 - 4 . 1 ( m，3 · 4，C//-g 1 u，0 C//2 C H3，與 N//3 ( ? ) ) ，2.46 ( br s，2，CH2CU2 ) ，2.07 ( br s，2 > CU2CH2 )，與 1.25 ( br q - 2 > OCH2C//3 ) ； ,3C NMR (H20/D20 93/7 ) δ 175.1，175.0，174.8，174.5，]73.8 > 171.1 > 171.0 > 170.8 > 170.5 > 63.6 > 60.7 > 60.4 > 60.0 -44 - (41) 1329646 ，53.7，31·9，27.8，與 14.0 ; l95Pt NMR ( H20/D20 93/7 )δ -】734 ( 0,0'-Pt，86%)與- 2034 (N，O-Pt，14%)。

剩餘之 32mL 聚（glu-Ama) =Pt ( NH3 ) 2，Ο,Ο'-Pt 螯合物溶液藉著加入 2 0 7mgNaCl，7 6 m g N a Η 2 P Ο 4 · Η 2 0與 5 8 8 m g N a 2 Η P Ο 4 · 7 Η 2 O 而配成 1 1 0 m Μ N a C 1 與 8 5 m M 磷酸 鹽。將其pH調節至7.4，溶液經無菌過濾後於42°C培養 1 6小時。此時溶液爲微微混濁。再次過濾後以離心超過濾 純化。滯留物凍乾得出約600mg淺黃色固體：1 1.4% Pt ; 4 NMR ( D20 ) δ 5.2 ( br s，0.1 交換 d，C//-ama)， 4.59 ( br s > 0.2 ) ，4.4 - 4 · 1 ( m，2.5，C//-g 1 u，與 OC/f2CH3 ) ，4.00 與 3.85 ( br s，0.25 ) > 2.47 ( br s，2 ，C//2CH2 ) ，2.06 ( br s，2，CH2C//2 )，與 1.25 ( br q -2 > OCU2CH3 ) ； 13C NMR ( H20/D2〇 93/7) δ 175.1， 174.8 ， 174.4 ， 173.7 ， 171.0 ， 170.8 ， 170.5 ， 63.5 ， 63.1 ，62.7，53.7，32.2，31.8，27.9，14.0 ; ,95Pt NMR ( H2O/D2O 93/7) δ -1730 (〇,〇，-Pt，8%)與- 2053 (N，〇-Pt > 9 2%)。 實例 11: Ac-Ama = Pt(NH3) 2 0,0’-Ρί 與 N，0-Pt 螯合物 之製備 於20mL小瓶中，令800mg(3.68mmol) N -乙酸胺基 丙二酸與8mL水與2.0mL 2N NaOH —同攪拌《於3分鐘 內可得到淺黃色且pH爲12.6之溶液。30分鐘後，加入 H+ IX樹脂，使pH降至7.0。過濾移除樹脂，PH升至 -45- ⑧ (42) 1329646 - 7·5，力卩入 2.53mL 含 28,375 ppm Pt ( 3.68mmol)之順-二 氨二水合-鉑（II )二硝酸鹽溶液。pH降至4.4。加入2滴 2N NaOH後，形成白色固體。將此混合物過濾，取出試樣 而以10%溶於D20中，進行195Pt NMR分析。只有-1734 之峰線是明顯的。 . 將濾液配成 lOOmMKI 與 50mMKHCO3(pH7.7 - 7.9) ，然後無菌過濾。溫熱至40 °C並維持18小時。過濾移除 ^ 所生成之橙色沉澱，濾液於真空濃縮。殘留物與20mL丙 酮攪拌1小時。取一部分進行過濾，以7%溶於D20中 ，進行195Pt NMR分析。只有-2057 ppm之峰線，即， N，0-AC-Ama-Pt ( NH3) 2 爲明顯。 實例 12 :聚（HPMA) -GFLG-Ama-diEt ( 45 kDa 與 350 kDa)之製備 A. MA-GFLG-Ama-diEt 之製備

約25gMA-GFLG-ONp以1.2 當量胺基丙二酸二乙酯 HC1鹽，3當量 TEA與1當量HOBt/DMF於50°C處理 約16小時。真空中移除DMF，殘留物於二乙醚中形成淤 漿後冷卻至4°C過夜。過濾收集產物，乙醚淸洗後真空乾 燥得出 MA-GFLG-Ama-diEt，利用1H NMR 與 HPLC 進行 鑑定確認以及純度測量：4 NMR(DMSO-d6) δ 8.74(d ，1 ’ J = 7.3，N//-Ama ) ，8 · 1 4 ( t，1，J = 5 · 9，C//2 - g 1 y ) ’ 8.11 ( d > 1 » J = 8.2 » a-CH leu) ，8.03 ( t，1，J = 8.2， C//2gly ) ，8.01 ( d，1，J = 8.2，N//-phe ) = 7.3-7.0 ( m > (43) 1329646 5 · ΑχΗ ) ，5 · 70 ( s，1，-C//2 ) ，5 · 3 7 ( t，1 ’ J = 1 6 ’ CH2 ) ，5.09 ( d，1，J = 7-3，C//-Ama-diEt ) ’ 4 · 5 3 ( m， 1，aCH phe ) > 4.32 ( m，4 ’ OC//2CH3 ) ’ 3.9-3.7 ( m » 3 > C//2-gly) ，3.63 與 3.59(dd’l，J=16’3’5.8) ’ 3 . 1-3.0 與 2.8 3 -2.7 3 ( m，2，C//2-phe ) ’ 2.51 ( m ’ 3 ’ J = 1 .7 > CH3CH2 ) ，1 .59 ( m ’ 1 ’ J = 6.5 ’ CH2CH ( CH3 ) 2 )，1.49 ( t，2，J = 7.5，CN2CH ( CH3 ) 2 ) ，1.216 與

1.214 (二個 t，6，J = 7.2，OCH2C//3 ) ，0.88 ( d ’ 3 ’ 11=6.6，CH2CH ( C//3 ) 2 )，與 〇·84 ( d，3，J = 6.5， CH2CH ( Ci/3 ) 2 )。 B.聚（HPMA ) -GFLG-Ama-diEt (約 45 kD )之製備 於配置有冷凝管之燒瓶中置入12.7 wt%比例爲90/10 之 HPMA 與 MA-GFLG-Ama-diEt 單體，0.6 wt%純 AIBN， 對硝基酚（總單體之10 mol% )，與86 wt %丙酮。混合物 ^ 以氮氣去氣約30分鐘，然後於50°C加熱65小時。過濾收 集聚（HPMA ) -GFLG-Ama-diEt，以乙醒淸洗。再次溶 於絕對EtOH中（約25% wt/vol )，以8倍體積之EtOAc _ 使其沉澱出來。所成固體以過濾收集，乙醚淸洗後真空乾 燥得出約20g灰白色粉末。其1H NMR圖譜極類似於25 kDa 化合物：Mw = 44.5 kDa，PDI=1.76，雙峰。胺基酸分 析：（pmol/mg聚合物）gly: 2-羥丙胺：leu: phe之比 爲 2.7: 8.1: 0.9: 0.9; MALDI-TOF-MS(NBA 基質） m / z Μ + 4 0 - 4 5 k D a，Μ + 2 1 4 -1 6 k D a。 ⑧ (44) 1329646 C.聚（HPMA) -GFLG-Ama-diEt (約 3 5 0 kD )之製 備 重複 45 kD 聚（HPMA) -GFLG-Ama-diEt 所用步驟 ，但是將對硝基酚省略。得到約2 5 g白色粉末。其1 Η NMR圖譜極類似25 kDa化合物者，但是峰線較寬： Mw = 351 kDa，PDI = 3.95，三峰。

實例 13 :聚（HPMA) -GFLG-Ama = Pt ( NH3 ) 2，N，0-Pt 螯合物（45 kDa)之製備 於配置有攪拌棒之250mL介質瓶中加入72mL水與 15.5g ( 6.82mmol Ama-diEt 基團）聚（HPMA) -GFLG-Ama-diEt。 於激 烈攪拌 中加入 48mL 水 ，令此混合物攪拌 約1小時，得出淺紫色溶液。於此溶液中加入1 2mL新鮮 之2 M NaOH，使得pH上升至12.6。令此pH維持於12.4 -12.8歷30分鐘，然後加入15.4g混合床IX樹脂（AG 5〇1 -X8 ( D ) H+，OH—形式）。3分鐘後pH降至5_0，然 後濾經無菌Steritop 1.50mL濾器而移除樹脂。以新鮮之2 N NaOH使濾液pH上升至7.60，然後將8.14mmol(64mL ，24,20 0 ppm Pt )剛配好的順-二氨鈾（II )溶液一次加入 。加完後，pH爲5.1。然後令混合物攪拌過夜。隔天，其 pH爲4.42，然後加入5.10g Che lex 100樹脂》其pH上升 至5.3 3，令混合物攪拌90分鐘》濾經粗燒結玻璃濾器移 除樹月旨，得出 460mL溶液。加入 2.96gNaCl， l.〇8g NaH2P〇4，H20，與 7.66g Na2HP04 7H20 將濾液配成 -48 - (45) 1329646 - llOmM NaCl 與 80mM 磷酸鹽。用 2N NaOH 與 5% HN〇3 將pH調節至7.4，然後以Steritop濾器無菌過濾至滅菌 介質瓶（預先於生物安全櫥櫃以膜蓋予以封蓋）。然後置 於3 9°C水浴中20分鐘，再置於3 7-3 8°C培養烘箱中22小 時。 . 於3 7-3 8 〇C歷22小時後，溶液以TFF純化》將此溶 液濃縮至5% wt/vol，收集7倍體積之滲透液，滯留物則 ^ 濃縮至8-10 %。此滯留物以Millipak 20濾器無菌過濾至 滅菌過之凍乾瓶。凍乾後得到1 1.2g灰白色固體：8.89 % P t > 5.4 % Η 2 〇 * 1.03 % N a > 0.0 5 % C1 > < 0.0 5 % P ； 1 H NMR ( D20 ) δ 67.4 與 7.3 ( br s，5，Ar//) ，5.23 ( br s， 部分交換 d’ Ama 之 C//) ’ 4.66(br s’ 1，α-β-phe )， 4.3 7 ( br s，l，α-Η-leu ) ，4.05 ( sh，gly 之 或 CH2) ，4」- 3.8(高 s 與短 m，〜13，-NHCH2C//(OH) CH3，-NHC//2CO2- ) ，3.35-2.9 ( m，18，-NHC#2CH ( OH ) CH3 ^ 與 phe-C/f2 ) ，2.25-1.2(m，聚合物骨架之- C/^-deu 之 與 C/ί) ，1.20 與 1 .1 9 ( s，〜27，-NHCH2CH ( OH ) CH3 ) ，0.99(s，聚合物骨架之 C//3-) ，0·93 與 0_87(sh 與 s，6，leu-C//3 ) ； ,3C NMR ( H2O/D2O 93/7) δ 186.7 ，71.0，以及其他如實例4之峰線；195Pt NMR(H20/D20 93/7) δ -2055 ( 100%) ° 實例 14:聚（ΗΡΜΑ) -GFLG-Ama = Pt ( ΝΗ3 ) 2，Ν,Ο-Pt 螯合物（>35 1 kDa )之製備 ⑧ (46) 1329646 於配置有攪拌棒之5 00mL介質瓶中加入i20mL水 與 20g ( 8.80mmol Ama-diEt)聚（HPMA) -GFLG-Ama-diEt(351 kDa)。激烈攪拌中加入i〇〇mL水，令此混合 物攪拌2小時得出無色溶液。插入一pH電極，加入l4mL 新鮮的2 N NaOH’ pH上升至12.74，且維持於 12.4-12.8 歷30分鐘。然後加入19.9g混合床（H+，OH·形式）IX 樹脂（AG 501-X8(D) ) ，3分鐘內該PH降至^混合

物以 Steritop瓶頂濾器無菌過濾，以 2N NaOH與5% HN〇3將pH調節至7.63。將85.5mL剛配好的順-二氨二水 合-鉑（II )二硝酸鹽溶液（含 24,200 ppm Pt 溶液（ 10.6mmol))加入，得出pH爲5.02之溶液。此混合物， 其由於粒徑關係而呈輕微雲霧狀，於室溫攪拌過夜。此時 pH降至4.25，將6.77g Chelex 100樹脂加入。pH上升至 5.33並攪拌 90分鐘，然後加入0.2g助濾劑。混合物以 粗燒結玻璃濾器無菌過濾。此溶液（有 725mL )藉著 4.661g ( 79.8mmol ) NaCl ， 1 2.2 4 g ( 4 5.7 m m ο 1 )

Na2HP〇4 1 2H2〇 與 1 -703g ( 1 O.lmmol ) NaH2P04 . H2 0 的加 入而配成ll〇mM NaC1與85 mM磷酸鹽。將其PH調節至 7.4後，混合物通過Steritop濾器而置入1 L·介質瓶中 。將瓶子以膜蓋密封後置於40°C水浴中20分鐘’然後置 於3 7 - 3 8 °C培養烘箱中。約22小時後，內容物以TFF純 化。使用約50mg物質測量得到NMR圖譜’因爲越濃縮 的溶液太黏稠。凍乾滞留物得出19.9§白色固體：7·95% Pt > 7.0% Ηι〇 * 1-03% Na ' 0.09% Cl ^ <0.05% P ； 'H NMR -50- ⑧ (47) 1329646 (D20 ) δ 7.4 與 7.3 ( br s，5，Ar/〇 ，5.23 ( br s，部分 交換 d，A m a 之 C H) ，4.65 ( br s，1，a-H-phe ) >4.38 (br s，1，ct-7/-Ieu ) ，4 · 0 5 ( s h，Ni/3 或 gly 之 CH2)， 4.1-3.8(高 s 與短 m，~13，-NHCH2C//(OH)CH3，-NHC7/2C〇2- ) ，3.35-2.9 ( m，1 8 > -NHC//2CH ( OH ) CH3 與 phe-C//2) ，2.25-1.2 ( m，聚合物骨架之- C//2-，Leu 之

CH2 與 CH) ，1.20 與 1 · 1 9 ( s，〜27，-NHCH2CH ( OH ) CB3 ) ，0.99(8，聚合物骨架之（：//3-) ，0.93 與 0.87(sh 與 s，6，leu-C//3 ) ； 13C NMR ( H2〇/D2〇 93/7) δ 186.7 > 7 1 .0，其他峰線如實例 4所列者；195Pt NMR ( H20/D20 93/7 ) δ -205 5 ( 1 00% Ν,Ο- ) ； SEC 三峰，Mp = 468 kDa， 147 kDa，Mn = 66.3 kDa > PDI= 1 3.8； Pt 釋出：3 小時爲 0.6 8 %，2 4 小時爲 2.2 8 %。 實例 15:聚（HPMA) -GG-ONp(23kDa)之製備 於配置有緊密接頭三向蓋（Omnifit)沖洗管與攪拌棒 、且以鋁箔覆蓋之乾燥的5 L介質瓶中，置入HPM A ( 245.5g，1.7146 mol，1 1 當量），MA-GlyGly-ONp ( 50.0g ，0.1556 mol，1 當量），與無水 HPLC 級丙酮（1970g) 。將此不勻相混合物激烈攪拌並通以氬氣90分鐘而得出 雲霧狀無色混合物。於250mL介質瓶中將 AIBN(14.2g ，0.8647 mol，自CH2C12再結晶）溶解於75mL丙酮》通 以氬氣90分鐘，將此溶液倒入激烈通以氬氣之介質瓶中 。前述250mL介質瓶以30mL丙酮沖洗後將洗液移至反 (48) 1329646

應容器中。90分鐘後將通氣停止，反應容器則置於50°C 水浴中4 8小時。然後，令反應混合物（底部有白色沉澱 )冷卻至室溫後使容器換氣》反應混合物移至四個7 5 0mL 離心瓶中。各瓶於5°C以2600 RCF(3800 rpm )旋轉 10 分鐘。丟棄上清液，重複前述步驟至所有聚合物都已收集 。粗製之聚合物沉澱物以1-2床體積（約200mL)丙酮 淸洗三次，再以1-2床體積（約15 0mL)乙醚。每次的 淸洗時，將溶劑加入，搖盪瓶子1分鐘後如前述般離心。 最後一次淸洗後，於真空乾燥聚合物至恆重，得出22 8.8g 聚（HPMA ) -GlyGly-ONp ：NMR ( DMSO-d6 ) : δ 8.7(s-醯胺 NH) ，8.3(d，ONp 芳基 Η) * 7.4 ( d -ONp 芳基 Η) ’ 4.8 ( s，CH2CHO//CH3 ) ，4.3 ( s，gly 之 C//2- ) ， 3.7 ( s ， CH2C//OHCH3 ) ， 3 ( s ， C//2CHOHCH3 ) ，1.5(br，m，聚合物骨架之 CH2) > 1.0 (s，聚合物骨架之 C//3 ) ，0.9 ( d，CH2CHOHC//3 )； 0.433mmol ONp/g 聚合物。除 了各爲 <1% 之 EtOH 與 EtOAc以外，沒有小分子。 實例 16:聚（HPMA) -GG-Ama-diEt 之製備 於配置有攪拌棒與如意塞且經烘箱乾燥後之500mL介 質瓶中置入 6.0g 聚（HPMA) -GG-ONp(3.162mmol ONp )與 2.673g(12.6mmol)胺基丙二酸二乙酯 HCl(Ama-diEt HC1 )。無水吡啶（87mL )以插管加入燒瓶中，令混 合物於40°C攪拌至得到一溶液。反應程度藉由測量游離與 -52- (49) 1329646 總HON p而定出，且直到二者爲相等，然後加入800mL無 水乙酸乙酯並攪拌1小時使產物沉澱。混合物於3840 RCF離心10分鐘後以l〇〇mL Et20淸洗三次。將沉降物溶 解於 70mL EtOH 中並與 18gAG 501-X8(D) IX 樹脂（ H + & OH_形式）一同緩緩攪拌1小時。過濾樹脂，藉離 心沉降使聚合物沉澱並純化。真空乾燥後得出6.25g白色 粉末之聚（HPMA) -GG-Ama-diEt:NMR(DMSO-d6)

:δ 7.3 (m，醯胺 NH) ，5.1 (d，NHC) ，4.6(s， CH2CHO//CH3 ) ，4.2 ( q ’ NHC) ，3.6 ( s，C H 2 C//0 H C H 3 )· 3.1 ( s - C//2CHOHCH3 ) ，1.7(br.m.，聚合物骨架之 CH2 ) > 1.2 ( q * NHC) ，l.l(s，聚合物骨架之 C//3 )， 0.9 ( s，CH2CHOHCif3 )，除 了各爲 <1% 之 EtOH 與 EtOAc以外，沒有小分子。 實例 1 7 :聚（HPMA ) -GG-Ama = Pt ( NH3 )螯合物（約 22 _ kDa)之製備 A. 聚（HPMA) -GG-Ama-diEt (約 25 kDa )之水解 於配置有攪拌棒之5 0mL離心管中置入〇.5gp( HPMA )-GG-Ama-diEt ( 0.263 5mmol Ama 殘基），與 4.2mL Milli-Q H2O。溶解後，加入 0.347mL( 0.694mmol NaOΗ )2 M NaOH使 pH於12.6維持90分鐘。然後令溶液與 0.71gBio-Rex MSZ 501D 樹脂一同攪拌。當 pH 降至 7.84 ，過濾移除樹脂。然後將濾液之pH以2 M NaOH調節至 7.3 1。 -53- (50) 1329646 B-聚（HPMA) -GG-Ama = Pt(NH3) 2 0,0·-螯合物之 製備

於上述pH7.3之溶液中，加入2.40mL濃度爲30,149 PPm ( 0.3l6mmol Pt)之順-二氨二水合鉑（II)二硝酸鹽 之溶液。其pH以2 M NaOH迅速調節至5.6。攪拌過夜後 該pH降至 3.31，使其升至5.4後加入0.192g Che lex樹 脂。緩緩攪拌90分鐘，無菌過濾移除樹脂而得出 9mL標 題化合物之淡色溶液。 C.聚（HPMA)-GG-Ama = Pt(NH3)2N,0 螯合物之 製備 上述 9mL 據液中加入 0.069g(0.89mmol)NaCl> 0 · 0 1 9 g ( 0 . 1 4 2 m m ο 1 ) N aH 2 P 〇 4 · Η 2 〇，與 〇 · 1 5 3 g ( 0 · 5 7 mm ο 1 )Na2HP04_7H20 而配成 llOmM NaCl 與 80 mM 磷酸鹽（ pH = 7.4)。將pH調節至7.4，然後於水浴中將溶液溫熱至 38t，再移至38°C 烘箱置放24小時。此溶液經離心超 過濾純化，凍乾後得出0.41 3g標題化合物，其爲灰白色 固體：1 0.5 % Pt，7_3 1 % H20 ; 3 & 24 h 之 Pt 釋出 ％ : 1.4%，4.6%。195Pt NMR(93: 7 H20: D20) ： δ -2060 (br s，N，0-Pt 螯合物）。SEC : Μρ = 24·6 kDa，Mw = 25.4 kDa，Mn=17.6 kDa，Mw/Mn =1.44。 實例 18:聚（HPMA) -GG-Ama^PtsDACH 螯合物（約 24 kDa )之製備 A.聚（HPMA) -GG-Ama-diEt (〜24 kDa ) ( 53b)之 -54- ⑧ (51) 1329646 水解 於配置有攪拌棒之250mL介質瓶中置入5.0gp ( HPMA ) -GG-Ama-diEt ( 2.635mmol Ama-diEt )與 42mL Milli-Q H20。溶解後，加入 3.47mL 2 M NaOH (

6.94mmol NaOH )，並令pH於12.6維持90分鐘。接著， 加入 5gBio-Rex MSZ 501D樹脂，令混合物緩緩攪拌至 pH降至7.41，此時，將樹脂過濾移除。然後將濾液pH以 2MNaOH 調節至 7.49。 B.聚（HPMA) -GG-Ama = Pt = DACH 0,0’ 螯合物之 製備 於上述ρΗ7·5之瀘液中，加入25.9mL 23,808 ppm順-二水合-lR，2R-DACH = Pt ( II )二硝酸鹽溶液（3.16mmol Pt)。將pH調節至5.23。攪拌過夜後，pH降至以 2 M NaOH再次將pH調節至5.4，然後加入1.92 g Che lex 樹脂，接著緩緩攪拌此混合物90分鐘，然後無菌過濾得 出1 OOmL包含標題化合物之濾液。 C.聚（HPMA) -GG-Ama = Pt = DACH N，0-螯合物之製 備 上述濾液藉著加入 〇_648g ( llmmol) NaCl，〇.221g ( 1.6 m m ο 1 ) NaH2P〇4'H2〇 ，與 1.71g ( 6.4 m m o 1 )

Na2HP04.7H20 而配成 llOmMNaCl 與 80mM 磷酸鹽。將 pH調節至7·4，於水浴中令混合物溫熱至38°C，然後移至 3 8 °C烘箱中24小時。此溶液以 TFF 純化後凍乾得出 4.31g灰白色固體：9.7 % Pt，7.62% H2O; 3與24小時的 (52) 1329646 P t 釋出。/〇 : 1. 3 %，5 · 5 % ; 1 Η N M R ( D 2 Ο ) : δ 6.3 ( s， 醯胺質子）4_8(s，HOD) ，4_2(s) - 4.0 ( s ) > 3.2 ( d ，C//2 of HPMA 側鏈），1.8 ( d，聚合物骨架之 C//2 )， 1.2(s，CH3 of HPMA側鏈），0.9(s，聚合物骨架之 CH3 ) ； 195Pt NMR ( 93 : 7 H20 : D20 ) : δ -2269 與 -2295 (N，0-螯合物，>93%) ，-2590 (N，N-螯合物，佔所 有螯合物 <7% ) ； SEC Mp = 24.1 kDa > Mw = 24.4 kDa >

Μη=15·7 kDa，Mw/Mn =1.56。 實例 19:聚（HPMA) -GGG-Ama-diEt 之製備 A. Gly-Ama-diEt，TFA 鹽之製備 將 NaHC03 ( 3 24.98g，3_87 mol )與 1 .5 L 水之混合 物緩緩加至裝有胺基丙二酸二乙酯 HC1 ( 74 0.78g，3.50 mol)之4 L錐形瓶中。加入CH2C12(1 L)，所成兩相混 合物進行激烈攪拌15分鐘。收集CH2C12層，將0.5 L CH2C12力卩至水層，此混合物攪拌1 5分鐘後收集CH2C12 層。水層的pH爲7.8。合倂CH2C12層，以無水Na2S04 乾燥後過濾。於真空移除CH2C12至體積減至約0.6 L。將 此溶液置於2 L之三頸圓底燒瓶中，加入t-BOC-Gly-OH (5 69.3 4 g » 3.25 mol )。混合物攪拌並冷卻至 10 °C。 DCC ( 670.5 7g > 3.25 mol)溶解於 400mL CH2C12 中，然 後於2.5小時期間加至激烈攪拌中之胺基丙二酸二乙酯A -BOC-Gly-Ame混合物，同時並維持溫度低於 2 5 °C。待 DCC添加完成後’令混合物於冰浴中攪拌45分鐘使溫度 -56- (53) 1329646 降至約5 ° C。移除冰浴，令反應混合物於室溫再攪拌4小 時，然後靜置過夜。過濾出所形成的白色沉澱以l〇〇mL CH2C12淸洗。合倂濾液與CH2C12洗液，於真空移除溶劑 得出結晶物，其於真空中乾燥得出881.881-80(：-0^ Ama-diEt ： 'H NMR ( CDC13) ： δ 7.44 ( d > 1Η > N//)， 5.69 ( t » 1H > N//) « 5.19 ( d > 1H - CH) - 4.27 ( m > 4H ，CH2 ) ，3.90 ( d，2H > CH2 ) · 1.46 ( s，9H，CH3 )，

1 -29 ( t * 6H，CH3 )。 令 t-BOC-GIy-Ama-diEt ( 985.2g , 2.96moI )於 7 70mL CH2C12中形成溶液，再加入770mL三氟乙酸（ TFA )。令所成混合物攪拌，6小時後有沉澱形成，其於8 小時後收集。以CHC13再結晶得出1 025.1 gTFA-Gly-Ama-diEt，呈白色固體：NMR ( DMSO-i/6 ) : δ 9.34 ( d， 1 Η > -NH) > 8.13 ( b.s. > 3H > N//2 TFA 鹽），5.17(d， 1H，CH) ，4.20 ( m，4H > CH2 ) ，3.71 ( d，2H，CH2 ) ，1.22 ( t，6H，CH3 )。 B. 聚（HPMA) -GGG-Ama-diEt (約 23 kD)之製備 於配置有如意塞，攪拌棒，與氬氣入口之烘箱乾燥後 的 5 L 介質瓶中，置入 TFA-Gly-Ame( 104.28g，0.3012 mol ) ’ 吡啶（2.1516 kg)與 TEA(45.01g，0.4448 mol ) » —旦形成溶液，於30分鐘期間將聚（^1^人）-〇丨7〇1丫-ONp (225g，0.10316 moi ONp)分成 4 - 5 份加入。2.5 小 時後，當所有或幾近所有聚合物溶解後’取出一份試樣測 量游離與總HONp百分比。分析期間仍令反應繼續攪拌。 -57- ⑧ (54) 1329646

當分析顯示反應爲1 Ο Ο %完成（室溫3 · 5至4小時），將 反應容器蓋好，加熱至4 0 °C並保持2小時。將五份每份爲 500-550mL之澄淸黃色反應混合物移至五個5 L介質瓶（ 各包含磁攪拌子）。激烈攪拌下，於各5 L介質瓶中穩 定加入 580mL EtOAc/二乙酸（ 500mL/80mL)使粗產物沉 澱出來。雲霧狀黃色混合物攪拌1小時後，離心收集沉澱 物，以1-2床體積EtOAc淸洗一次，以1-2床體積二乙醚 淸洗二次。於真空中乾燥產物，然後將之緩緩加至置於5 L介質瓶中的約2 L激烈攪拌中的EtOH ( 1 0· 1 5% wt/vol )。溶解後，加入 1008gBio-Rex MSZ 501D指示 IX 樹 脂（EtOH淸洗）。混合物緩緩攪拌2.5小時，然後每30 分鐘檢査是否有該指示藍色小珠殘留。若沒有藍色小珠， 則再將1 5 0 -200 g該IX樹脂加入。若藍色小珠殘留30分 鐘以上，以WhatmanGF/B玻璃微纖維濾器過濾移除樹脂 。令該聚合物如上述般自EtOH溶液沉澱出來，收集，淸 洗，然後於真空乾燥約72小時得出 204.14g聚（HPMA )-GlyGlyGly-Ame，其爲黃色細粉。SEC ( MeOH/H20 ) Mp = 24 kDa » Mw = 24 kDa > M„=15 kDa > PDI=1.6 ； 'H NMR (300 MHz，DMSO-A ) δ 0.83 ( br s > 6 > RCH2C ( )R ) - 1.04(br d> 3> RCH(OH) CHj) ' 1.22- (brt ，3，RC ( O) OCH2CIi3 ) ，1.40-2.3 0 RC^C ( CH3 ) C ( 0)R(2brs，4，RC]i2C(CH3)C(0)R) > 2.93 ( br s，2，RNHCHjCH ( OH ) CH3 ) ，3.69 RNHCH2Cii ( OH ) CH3 ( br s，1，RNHCH ( OH ) CH3 ) ，3.86 ( br s，6 (55) 1329646 ，RNHCMjC ( 0) R ) ，4.05-4.30 ( br m，4，ROC H2CH3 )，4.7 1 RCH ( OH) CH3，（ br s，1，RCH ( 〇ϋ) CH3 ) ，5.08 ( d，2，RNHCH_ ( C ( 0 ) ) 2 ) ，6.60- 7.70，( br m，1，RNHCH2CH ( OH ) CH3 ) ，7.98-8.47 ( br m，3， 連結基 NH )，與 8.83 ( br，1 RNiLCH ( C ( O ) ) 2 )。

實例 20:聚（HPMA) -GGGG-Ama-diEt(22kDa)之製備 A. t-BOC-GlyGly-OH 之製備 於配置有如意塞與攪拌棒的烘箱乾燥後之20mL小瓶 中置入 6mL 二噁院，Gly-Gly( 1.325g，lO.Ommol)， BOC-ON ( 2.714g，ll.Ommol )，與 Et3N ( 2.10mL， 1 5mmol )。令混合物攪拌2小時，於此期間形成澄淸黃色 溶液。混合物以EtOAc(20mL)與 H20 ( 15mL)萃取。 收集水層，以EtOAc淸洗後加至50mL 5%檸檬酸。此t-BOC-GlyGlyOH 以 EtOAc ( 200mL )萃取後以無水 Na2S〇4 乾燥。於真空移除EtOAc後以熱 Et20碾製。收集白色晶 體，Et20淸洗後乾燥得出1.309g標題化合物：4 NMR ( 300 MHz > DMSO-i/6 ) : δ 12.3 ( bs 1H，C02H) ，8.04 ( t ，1，N//) ，6.98 ( t，1H，N//) > 3.75 ( d > 2H > CH2 ) ，3.56 ( d，2H，CH2 )，與 1 · 3 8 ( s，9 H，C ( C//3 ) 3) B. t-BOC-GlyGly-Ama-diEt 之製備 於 lOOmL 介質瓶中置入 t-BOC-GlyGly-〇H(10_02g， 43.15mmol )，胺基丙二酸二乙酯 HC1 ( 9.13g， -59- (56) 1329646 43.1 5mmol ) > EDC ( 12.66g，66.04 mmol) ，HOBt ( 0.66g，4.3 1 5mmol )，與200mL吡啶》於室溫攪拌21小 時，於真空移除吡啶，殘留物則以3 x 3 0 0 m L C H C13萃取 °CHC13層以無水MgS04乾燥，於真空移除CH2C12，殘 留物自4 °C己烷：乙醚（7 : 3 )再結晶。收集t-BOC-GlyGly-Ama-diEt，得到 12_32g 白色晶體.：4 NMR( CDC13 ) δ 7.07 ( br d，1 > J=6.7 Hz > N//CH ) ，6.85 ( br t

，1，N//CH2) ，5.21 ( br t，1，N//CH2) ，5.15 ( d，1， 3 = 6.7 Hz ， C//-Ama-diEt ) > 4.22-4.3 3 ( m > 4H > OC//2CH3 ) ，4.08 ( br d，2，C/i>Gly ) ，3.86 ( br d，2 -CH2-G\y) ，1.45(高 s，9，第三丁基），：l.3](t， 6，OCYilCHs )。 C . TF A - G1 y G1 y - Am a - d i Et 鹽之製備 於配置有如意塞與攪拌棒之l〇〇mL介質瓶中置入^ BOC-GlyGly-Ama-diEt(5.12g，13.14m mol)與 CH2C12( 1 5mL )。激烈攪拌中逐滴加入 TFA(25mL in 25mL CH2C12)。反應於1小時後完成，於真空移除TFA以 Et20使該三氟乙酸鹽沉澱。過濾收集TFA-GlyGly-Ama-diEt鹽，Et20淸洗後以絕對EtOH :乙醚（7 : 3 v/v )再 結晶。白色晶體經真空乾燥得出5.21g產物：’H NMR ( DMSO-d6 ) δ 8.96 ( br d，1 ’ -N//CH- ) ’ 8.63 ( br t ’ 1 .-N//CH2- ) ，8.02 ( V br s 1 3 > N//jCH2 ) ’ 5.09 ( d，1 ’ CH ( C02Et ) ) ，4.12-4.24 ( m ’ 4 ’ OCH2CU3 ) ，3.94 (br d，2，-NHC//2- ) . 3.59 ( br s * 2 > -NHC//2-) ’ -60- (57) 1329646 1.2 1 ( t > 6 > OCH2C//3 ) . 13C NMR ( CDCI3 ) δ 168.8， 166.4 > 158.3， 158.0 > 119.3 > 115.4， 61.9， 56.3， 41.5-13.9。 D.聚（HPMA) -GGGG-Ama-diEt (約 22 kDa )之製 備

於配置有攪拌棒與如意塞且經烘箱乾燥後之250-mL 圓底燒瓶中置入 5.724g(14.19mmol) TFAgG-Ama-diEt， 並使此混合物通以N 2。然後，加入7 0 m L無水吡啶，溶解 後將7.015g聚（HPMA) -GG-ONp分三次加入，各次加入 須於前次加入溶解後才進行。將混合物溫熱至40 °C，以 HPLC監看反應程度。反應於23小時後完成。接著於室溫 加入700mL無水EtOAc與lOOmL無水Et20，令混合物攪 拌1小時以使聚合物沉澱。離心收集沉澱物。所成沉降物 溶解於 60mL 絕對 EtOH 中並與 22.0gAG 501，X8(D) IX 樹脂（H+ & ΟίΤ形式）一同攪拌 2.5小時。過濾移除樹 脂，以800mL EtOAc使聚合物沉澱。攪拌1小時後，離心 單離出沉澱物，依序以EtOAc與乙醚淸洗，真空乾燥得出 5.77g標題化合物，其爲灰白色粉末：】H NMR(DMSO-d6 ):δ 4.30 (br m，4，-OC//2CH3) ，4.15 ( EtOAc)， 4.05 -3.95 ( m，8，連結基 C//2 ) ，3.89 ( s，1，- CH2C//OHCH3 ) ，3.65 ( EtOH ) ，3.20 ( br d，2，· C//2CHOHCH3 ) ，2.09( EtOAc ) ，2.00-1 .60 ( br m，聚 合物骨架之 C//2 ) ，1.60-1.20(m，6，OCH2C7/3) ，1·Ι9 (br m，3，-CH2CHOHC//3) ，l_〇〇(br s，聚合物骨架之 -61 - (58) 1329646 C//3 ) » 實例 21 :聚（HPMA) -GGGG-Ama = Pt=lR，2R-DACH (約 22 kDa )之製備 A. 聚（HPMA ) -GGGG-Ama-diEt 之水解

於包含攪拌棒之250mL瓶中，使 5.5g( 2.895mm〇l Ama 殘基）聚（HPMA ) -GGGG-Ama-diEt 與 46mL Milli-Q H20 攪拌至溶解。以 3.81mL ( 7.62mmol) 2M NaOH 使 pH上升至 12.6並維持 90分鐘。以 5.5gBio-Rex MSZ 501D樹脂將混合物pH調節至7.51，然後過濾移除樹脂 。以2M NaOH調節濾液 p Η至6.9 3，得出聚（1^]\4人）-G G G G - A m a ( C Ο 2 N a ) 2 溶液。

B. 聚(HPMA ) -GGGG-Ama = Pt=lR,2R-DACH 螯合物之製備 於上述聚（HPMA) -GGGG-Ama(C02Na) 2溶液中加 入 27.5mL ( 3.47mmol Pt )順-二水合-1 R，2R-DACH = Pt ( II )二硝酸鹽之溶液。其PH降至4.41，以2 M NaOH調節 至5.14«攪拌過夜後，pH降至2.44。以2 N NaOH將pH 調節至5.4，加入2.U4g Chelex 100樹脂後緩緩攪拌此 混合物。90分鐘後，無菌過濾移除樹脂得出10 0mL濾液 C. 聚（HPMA) -GGGG-Ama = Pt= 1 R，2R-D ACH N;0-螯合物之製備 以 0.648 g ( 1 1 mmol ) NaCl，0.2 2 1 g ( 1 · 6 m m ο 1 ) (59) 1329646

NaH2P04.H20 與 1.71g ( 6.4mmol) Na2HP04.7H20 將上述 】00mL濾液配成llOmMNaCl與80mM磷酸鹽，並以2 M NaOH將pH調節至7.4。於水浴中將此溶液溫熱至38它， 然後移至3 8 °C烘箱中24小時。以TFF純化溶液，凍乾得 出 4.31g 灰白色固體：8.86 % Pt，9.35% H20; 3 & 24 小 時之 P t 釋出 ％ : 〇 · 9 7 2 % ’ 3 . 1 7 3 % ; 1 9 5 P t N M R ( 9 3 : 7 H20 : D2〇 ) : δ -2270 與-2295 ( Ν，0-螯合物）。SEC (

Me0H/H20) Mw 19.3 kDa，Mn = l〇.l 〇 實例22: 3-胺丙基磺醯胺基丙二酸，二乙酯，HC1鹽之 製備 A. 3-氯丙烷磺醯胺基丙二酸二乙酯 （ Cl(CH2)3S02Ama-diEt ) 於惰性氣體下，以穩定的液流將 3 -氯丙烷磺醯氯（ 21.25g，0.12 mol)於lOOmL CHC13之溶液加入胺基丙二 酸二乙酯 HCl(Ama-diEt HC1，24.34g，0.115 mol)於 400mL CHC13與 Et3N ( 5 Om L )之溶液中。所成混合物回 流3小時後冷卻至室溫，以1 N HC1 ( 2 x 300mL)與水（ 2 x 300mL)萃取。收集有機層，以無水Na2S04乾燥， 真空移除 CHC13 得出 29.05gCl-(CH2)3-SO2-Ama-diEt: 'Η NMR ( CDC13 ) ： δ 1 .3 1 ( t，6，OCH2C//j ) ，2.33 ( m 1 2，CH2 ) ，3.28 ( t，2，CH2 ) ，3.68 ( t，2，CH2 )， 4.26 ( m > 4 > OC//2CH3 ) ，4.84 ( d，1，CH ) ，5.59 ( d ，1，N//) 。13C NMR ( CDC13 ) δ 1 3 · 6，2 6 · 3，4 2 · 5， -63- (60) 1329646 51·2 ， 58.5 ， 62.7 ， 165.9 。 Β. 3-碘丙烷醯胺基丙二酸二乙酯

於Nal( 34.47g，0.23 mol)之400mL丙酮溶液中加 入 Cl- ( CH2) 3-S02-Ama-diEt ( 29.05g，0.092 mol )。此 反應混合物回流6小時後冷卻至室溫。過濾移除NaCl ’ 濾液於真空汽提，將殘留物溶於300mL CH2C12中。此溶 液以 Na2S203 水溶液（3 X 250mL)與水（3 X 250mL)淸 洗。有機層以無水Na2S04乾燥，於真空移除溶劑得出 29.07g 標題化合物·· 4 NMR(CDC13) δ 1.31 (t，6’ OCH2C//3 ) ，2.36 ( m，2，CH2 ) ，3.24 ( t，2，CH2 )， 3.3 1 ( t - 2 - CH2) ，4.26 ( m，4，OC//2CH3 ) ，4.85 ( d ，\ > CH) - 5.98 ( d > 1 > N// ) 。13 C N M R ( C D C13 ) δ 3.00 > 13.7- 27.1 > 54.5 > 58.6 * 62.7， 165.9。 C. 3-疊氮基丙烷磺醯胺基丙二酸二乙酯 N3-(CH2)3-S〇2_AmadiEt 之製備 方法A :(注意：NaN3可與鹵化溶劑反應形成烷基二 疊氮化物，若單離後可能會爆炸）。3-碘丙烷-磺醯胺基丙 二酸二乙酯（ 29.00g，0.071 mol)於 300mL CC14 所成溶 液中，加入NaN3( 11.38g，0.175 mol)於50mL水之溶液 (包含10 mol%氯化三辛基甲基銨）。所成混合物於8 0°C 攪拌1 6小時。令反應混合物冷卻至室溫。分離水層，以 二氯甲院（l〇〇mL)淸洗。有機層合倂後以水（3 X l〇〇mL )淸洗，然後以無水Na2S04乾燥。於真空移除溶劑得出 I8.94g標題化合物。 64- (61) 1329646 方法B: 3·氯丙烷磺醯胺基丙二酸二乙酯（44.21g， 〇·14 mol)於 200mL DMF 之溶液中添加 NaN3.( 29.2 5 g’ 〇 · 4 5 m ο 1 )。反應混合物於9 0 °C攪拌1 6小時後冷卻至室 溫。將混合物倒入冰水中，以二氯甲烷萃取。合倂有機層 ’以鹽水淸洗再以無水Na2S04乾燥。於真空移除溶劑得 出 28.02g 標題化合物：NMR(CDC13) : δ 1.31 (t’ 6H > CH3 ) ，2.1 3 ( m，2H，C//2 ) ，3.2 1 ( t，2 H，C)

’ 3.50 ( t > 2H » CH2 ) ，4.22-4.35 ( m，5H，與 C/Z) ，6.17 ( d，1H，N/〇 。13C NMR ( CDC13 ) δ 1 3.7，22.9 ’ 50.9 ， 53.3 ， 58.4 ， 62.4 ， 165.8 。 D. 3-胺基丙烷磺醯胺基丙二酸二乙酯之製備 3 -疊氮基丙烷磺醯胺基丙二酸二乙酯（ 27.60g，0.086 mol)之乙醇（70mL)溶液與lgPd/C(10%)置於Parr氫 化裝置中於60 psi H2歷 8小時。每2小時補充氫。混合 物經Celite墊過濾，將IN HC1乙醇（10mL)溶液加至濾 ^ 液中。於真空移除溶劑，殘留物以A1203管柱層析（使用 CH2Cl2/MeOH ( 4/1，v/v )沖提）純化得出 26_84g 標題 化合物，呈鹽酸鹽：4 NMR(CDC13) δ 1.30(t，6，CA ' )’ 2.12 ( m，2，OCH2CN3 ) ，3.21 ( t » 2 > CH2 ) ，3.50 (t，2，CH2 ) ，4.26 ( m，4，〇C//2CH3 ) ，4.84 ( d，l，

CH) ，6.09 ( d，1，N//) ，8.29 ( br.s，2，) 。"C NMR ( CDC13) δ 13.6 > 26.3 > 42.5 > 51.2 > 58.5 » 62.7 > 165.9。 ⑧ -65- (62) 1329646 實例 23 :聚（ΗΡΜΑ ) -GG-NH ( CH2 ) 3S02Ama-diEt (約 22 kDa)之製備

於lOOmL介質瓶中置入3-胺基丙烷磺醯胺基丙二酸 二乙酯（2.81g，8.46mmol)，攪拌中加入吡啶（80mL) 。加入 p ( HPMA) -GG-ONp ( 8.00g，4.22mmol)與 HOBt (〇.〇968g > 0.6321mmol)，混合物攪拌21小時後置於40 °C水浴中。總共在44小時後，HPLC 分析顯示游離 HONp等於總HONp，故反應已完成。將混合物移至1 L 介質瓶中，恆定攪拌下加入EtOAc ( 900mL )使聚合物沉 澱。離心（4800 rpm，5分鐘，5°C)單離出固體。丟棄上 淸液，將固體溶解於絕對EtOH中（10 %溶液）。加入 Bio-Rex MSZ 501D樹脂（30.0g)，令混合物攪拌2.5小 時。過濾移除樹脂，將濾液濃縮至約25%溶液。加入 EtOAc ( 900mL )，令混合物攪拌1小時。離心單離聚合 物，以EtOAc與Et2〇淸洗，真空乾燥得出6.00g ( 75 % )灰白色粉末：NMR ( D20 ) : δ 3.90 ( s，1，. CH2C/iOHCH3 ) ，3.20 ( br d，2，-C//2CHOHCH3 )， 2.30-1.60 (聚合物骨架 C//2，丙基 C丑2) ，1.20(br m，3 > -CH2CHOHCN3 ) ，1.00 ( br s，聚合物骨架 C片3 )。 實例 24:聚（HPMA) -GG-NH ( CH2 ) 3S02Ama = Pt(NH3 )2 (約22 kDa)之製備 A.聚（HPMA) -GG-NH ( CH2 ) 3 S O 2 Am a ( C 02N a ) ι ⑧ 之製備 -66 (63) 1329646 聚（ΗΡΜΑ ) -GG-C3-Sulf-Ama-diEt 之水解以上述用 於羧醯胺化合物之相同條件來進行，即，使用聚（HP ΜΑ )-GGNH ( CH2 ) 3S02Ama-diEt ( 0.50g，0.263 5mmol

Ama-diEt 殘基），4.2mL H2〇，2 N NaOH(0.35 m， 0.70mmol )。於PH12.4-12.6歷30分鐘後，將溶液pH以 Bio-Rex MSZ 501 (D)樹脂（〇.50g)調節至 <7。

B.聚（HPMA ) -GG-NH ( CH2 ) 3 S 0 2 A m a = P t (N Η 3) 2 〇,〇·-螯合物（主要成份）之製備 令步驟Α所得物質以2.05mL含3 0,060 ppm Pt之順-二氨二水合鉑（II)二硝酸鹽溶液處理。令pH維持於 5.0-5.4歷 90分鐘，然後令混合物與 Chelex樹脂（ 0.1 923 g )—同緩緩再攪拌90分鐘，之後，過濾移除樹脂 C.聚（HPMA ) -GG-C3-Sulf-Ama = Pt ( NH3 ) 2 Ν,Ο-螯合物之製備 得自Β之大部分爲〇,〇·-螯合物的物質以〇.〇77g( 1.3 1 75 mmol ) NaCl > 0.026 5 g ( 0.1 920mmol )

NaH2P〇4.H20 與 0.2 0 5 9 g ( 0.7 6 8 1 m m o 1 ) Na2HP04 處理。 將pH調節至7.4，混合物置於38°C水浴中1小時’然後 於3 8 t 烘箱中置放2 0小時。離心超過濾後凍乾，得到 〇.134g 棕色固體：】95PtNMR(H20: D2〇，93: 7) δ -20 1 8 ( br s ) ，Ν，0-螯合物 1 0 0 % ; S E C Μ p = 2 0.3 kD， Mw = 21.6 kD > Mn=14.5 kD，與 PDI=1.49。 •67 - (64) 1329646 實例 25:聚（HPMA) -GG-NH ( CH2 ) 3 S02 Ama = Pt = D ACH ，約22 kDa，之製備

於 lOOmL介質瓶中置入聚（HPMA) -GG-NH(CH2) 3S〇2-Ama-diEt ( 6.0g，3.162mmol Ama-diEt 基團）與 50mL H20。聚合物以 2N NaOH(4.2mL)於 ρΗΙ2·4-12.6 水解2小時，然後以IX樹脂中和。pH以2N NaOH與5% HN〇3 調節至 7.4，加入 30.3mL 順-二水合-1R，2R-DACH-Pt (II)二硝酸鹽（ 24,484 ppm Pt，1.2 當量/ Ama-diEt)。 使pH上升至5.4，令混合物攪拌過夜。加入Chelex樹脂 (1.92 g)，混合物再緩緩攪拌90分鐘。移除樹脂，將溶 液體積調節至 l〇〇mL，然後加入 NaCl ( 0.643 1 g )， NaH2P〇4'H2〇 ( 0.22 1 g )，與 N a2 HP Ο 4 7 H2 Ο ( 1 · 7 1 g )。 待這些鹽溶解後，過濾溶液，於3 8 °C維持24小時，再以 TFF純化，凍乾得出 5.13g棕色固體：％Pt 6.25 ; %H20 9.3 7%; 3小時與 24小時之 Pt釋出％: 1.0 %與 1.93%， ,95Pt NMR ( H2〇 : D20 * 93 ： 7) δ -2257，約- 2280，與 -2432 ° 實例 26: GG-NH(CH2) 3S02Ama，二乙酯，TFA 鹽之製 備 令 t-BOC-Gly-Gly-OH ( 9.29g，0.0400 mol )與 HOBt ( 6.1260g，0.0400 mol)於 DMF ( 18mL)之溶液在 0eC 攪 拌，加入DCC(8.25g，0.0400 mol)。當混合物於0°C攪 拌45分鐘時，於另一燒瓶中將TEA ( 5.0595g，0.0500 -68- (65) 1329646

mol)加至3-胺基丙烷磺醯胺基丙二酸二乙酯HC1鹽（ 13.3136g，0.0400 mol )於 1 OmL DMF 之混合物中。另此 混合物於室溫攪拌10分鐘，過濾後將濾液於50mL燒瓶中 置於高真空 5分鐘。將此3-胺基丙烷磺醯胺基丙二酸二 乙酯之 DMF 溶液加至攪拌中的 t-BOC-Gly-Gly-OH/HOBt/DCC混合物。所成混合物於0°C攪拌2小時， 令其溫熱至室溫後再攪拌6小時。過濾混合物，將濾液倒 入300mL水中，以CH2C12 ( 3 X 400mL)萃取。.合倂有機 層，以鹽水（3 X 300mL)與水（3 X 300mL)淸洗，無水 Na2S04乾燥後過濾。於真空移除溶劑。以矽膠（CH2C12/ 丙酮：99/1至0/100 )純化殘留物，得出 9.10g產物，呈 白色固體：NMR(CDC13) : δ 7.47(t，lH，N//)， 7.35 ( t，1H，N//) ，6.24 ( d，1H，N//) ，5.83 ( d，1H 1 N // ) ，4.8 3 ( d，1 H，C// ) ，4 · 2 0 - 4.2 7 ( m，4 H， OC//2CH3 ) ，3.91 ( d，2H，G\y-CH2 ) » 3.83 ( d > 2H *

Gly-C//2) ，3.37 ( m，2H，C//2) ，3·16 ( t，2H， * 2.28 ( m * 2H > CH2 ) ，1.44(s，9H，第三 丁基）， 1.32 ( t > 6H，CH3 )。

於氬氣下令140(：-017-01”3-胺丙基磺醯胺基丙二酸 二乙酯（7.7880g，0.0200 mol )於 40mL TFA/DCM ( 1/1 )之溶液攪拌2小時，然後TLC分析（CH2Cl2/MeOH， 9/1，v/v)顯示反應已完成，於真空移除溶劑。殘留物以 5 mL二乙醚碾製，過濾，沉澱物於真空乾燥得出7.6 6g標 題化合物：NMR ( CDC13 ) : δ 8.53 (t，3H，N//·，TF A -69- ⑧ (66) 1329646 鹽），7.66 ( t，1H，N//) - 7.61 ( t > 1H - N//) ，6.44 (

d，1H，N//) ，4.36 ( d，1H，C/〇 >4.19- 4.26 (m>4H ，CH2 ) ，3.91 ( d，2H，CH2 ) ，3.80 ( d，2H，CH2 )， 3.37 ( m - 2H ， CH2 ) ， 3.16 ( t， 2H ， CH2 ) ， 2.33 ( q ， 2H > CH2 ) ， 1.29 ( t， 6H， ) »

實例 27 :聚（HPMA ) -GFLG-NH ( CH2 ) 3 S O 2 - A m a - d i E t ，約24 kDa，之製備 於配置有攪拌棒與如意塞且經烘箱乾燥後之lOOmL介 質瓶中置入 2.24g ( 6.74mmol ) NH2 ( CH2 ) 3S〇2-Ama- diEt HC1與80mL無水吡啶，攪拌此混合物。加入8.03g 聚（HPMA ) -GFLG-ONp，攪拌混合物至其溶解，然後於 40-45 °C維持44.5小時。於此期間，取出試樣分析游離 與總HONp。43小時後，反應完成。粗產物以〇.6 L無水 EtOAc與0.2 L二乙醚沉澱出來。於室溫攪拌1.5小時， _ 以離心單離出沉澱物。丟棄上淸液，淸洗九粒，以30mL 二乙醚進行三次離心與丟棄。乾燥後，將固體溶於80mL 絕對 EtOH 中，與 25.0gAG501-X8(D) IX 樹脂（Η + &.ΟΗ ' 形式）一同緩緩攪拌。2 · 5小時後，過濾移除樹脂，以〇. 9 L EtOAc與0.2 L二乙醚使聚合物沉澱出來。攪拌丨小時 後，如前單離與淸洗該聚合物。將產物於真空乾燥得出 7.08g標題化合物’其爲灰白色粉末：j NMR(CD3OD) :δ 7.48 與 7.28 ( br.s.，& Αγ片）> 4.7(br.s. 1Η» α- //-phe) ，4.44 ( br s 1Η，α/Ζ-leu) ，4.11 ( br.m.，4Η， ⑧ (67) 1329646 OC//2CH3 ) ，3.63 ( br.s.，NHCH2C// ( OH ) CH3 與 Ci/2- gly ) ，3.18 與 3.00 ( br.m.，NHC//2CH ( OH ) CH3 )， 2.1 -1.2 ( m，- C//2 C C H 3 · C H 2 -1 e u，C H -1 eu ) ，1 . 1 9 ( br s ，NHCH2CH ( OH) CHi ) ，0.94 ( br s，-CH2CC//3 ) > 0.8 (brs，C//3-leu)。

實例 28 :聚（HPMA) -GFLG-NH ( CH2 ) 3S02-Ama = Pt ( NH3 ) 2之製備 A.聚（HPMA ) -GFLG-NH ( CH2 ) 3S02-Ama-diEt 之 水解 如前相同方式進行水解，即，使用聚（HPMA )-GFLG-NH2 ( CH2 ) 3S02-Ama-diEt ( 0_50g，0.2110mmol Ame-diEt 殘基），4.2mL H20(形成 12% 溶液）與 2 N NaOH ( 0.29 5mL，0.590mmol )。於 pH 1 2.4 -1 2.6 歷 3 0 分 鐘後’添加 Bio-Rex MSZ 501 (D)樹脂（0.50g)使 pH 降至<7。 B. 聚（HPMA ) -GFLG-C3-Su】f-Ama = Pt ( NH3 ) 2 螯合物之製備 如前述方式進行鉑化，βρ，使用1.60mL( 0.253mmol )順-二氨二水合鉑（Π)二硝酸鹽與0.1 540g Chelex樹 脂。 C. 聚（HPMA ) -GFLG-C3-Sulf-Ama = Pt ( NH3 ) 2 N，0-螯合物之製備 如前述方式進行此螯合物之轉化與純化，即，使用 -71 - (68) 1329646 0.0482g ( 〇.8248mmol ) NaCl ’ 0.0 1 66g ( 0.1 203 mmol ) NaH2P〇4· H2〇 ’ 與 0.1 287g ( 0.480 1 mmol) Na2HP04 7H20 。離心超過濾與凍乾之後’得到0.219g呈棕色固體之標 題化合物：1HNMR(D2〇) ： δ 7.3 8 ( br d > 5 » Ar )， 4.68 ( br s，1，a-//-phe ) > 4.40 ( br s · 1 · a-//-leu ) > 3.95 ( b r s · H * - C H 2 CΟ H C H 3 ) ’ 3.80-3.50 ( m ’ 丙基）

，3.20 ( br d，C//2CHOHCH3) ，2.40- 1.47 ( br m，聚合 物骨架之 C//2 ) ，1.47- 1.05 ( br s，CH2CHOHC//3 ) > 1 .05-0.50 ( br s，聚合物骨架之 C//3 ) ; 195Pt NMR ( H20/D20，93/7 ) : δ -2015 ( br s ) ，：N，0-螯合物 10 0% ； SEC: Mp= 21.1 kD > Mw= 24.0 kD > M„= 7.6 kD · ，PDI =3.18。於 37 °C PBS 之 Pt 釋出：3 小時爲 3.02 % 實例 29 :聚（HPMA)-GFLG-NH(CH2)3S02-Ama = Pt = DACH ^ 之製備 A.聚（HPMA ) -GFLG-C3-NH ( CH2 ) 3S〇2-Ama-diEt 之水解 ' 聚（HPMA ) -GFLG-C3-sulf-Ama-diEt 之水解以上述 所用之相同條件來進行，即，使用聚（HPMA ) -GFLG-NH (C Η 2 ) 3S〇2-AmadiEt ( 5.50g > 2.3 2 1 mmo 1 Ame-diEt 殘基 )，46mL H20 (形成 1 2% 溶液），2 N NaOH ( 3.241 mL ，6.48mmol)與 Bio-Rex MSZ 501 (D)樹脂（5.50g)。

B.聚（HPMA)-GFLG-NH(CH2)3S〇2-Ama = Pt = DACH -72- (69)1329646 〇，〇'-螯合物之製備 以前述相同條件來製備此化合物，即，使用20.50mL 含 26,487 ?卩111?1之順-二水合-111，211-0八(：11鉑（11)二硝 酸鹽溶液與Chelex樹脂（l_6943 g)。 C.聚（HPMA)-GFLG- N H (C H 2) 3 S 0 2 - Am a= P t = D A C Η N，0-螯合物之製備

以上述用於類似轉化之相同條件來進行此製備。PBS 溶液中的試劑用量爲 0.6428g(llmmol) NaCl，0.2208g( 1 . 6 0 m m ο 1 ) NaH2P〇4，與 1.7156g ( 6.40 mmol) Na2HP〇4 。切向流式過濾純化後，得到4.lOg呈棕色固體之產物： % P t = 6.5 8 ·】H NMR ( D2O) · δ 7.38 ( b r d，5，Ar )， 5.8 (Ama 之 C//，N，0-螯合物），4.68(br s, 1，α-//-phe ) > 4.40 ( br s，1，a-H-leu ) ，3.95 ( br s，H，-

CH2C//OHCH3 ) > 3 · 8 0-3 · 5 0 ( m，丙基），3 · 20 ( br d， C//2CHOHCH3 ) ，2.60-2.20 ( br m > DACH-C//2 ) ，2.20-1.47 ( br m，聚合物骨架之 CH2 ) ，1.47-1.10 (br s， CH2CHOHC//3 ) ’ 1.10-0.50 (br s，聚合物骨架之 C//3) ;於37°C PBS之Pt釋出：3小時爲2 12 %，24小時爲 4.54 % 〇 實例30 : 0,0’-Pt與N，0-Pt螯合物異構物比與pH之關係 取四個50mL離心管，各置入1.00gp(HPMA)_ GFLG-Ama = Pt(NH3) 2(爲 100 % N，〇_ 螯合物或是 92% 〇,〇-螯合物與8°/〇N，0-蜜合物之混合物）。將這些物質溶 (70) 1329646 於2 7 m L M i 11 i - Q水中（約4 w t %溶液），適當地使用1 M NaOH或5 % HCl〇4調節pH至所需範圍。然後將試樣 於38 °C水浴加熱並攪拌’同時維持各自特定的pH範圍 。於適當時間範圍內，分期取出試樣並將之冷凍，前述適 當時間後將溶液以離心超過濾而濃縮（ 4800 rpm，30。C) ，然後移至NMR管中。各管中加入少量d20，紀錄195Pt NMR圖譜。數據如表1至3所示。

實例 31:聚（HPMA) -GFLG-Ama-Pt ( NH3 ) 2，Ν,Ο -螯合 物（約20 kDa )隨時間之Pt釋出百分比與ΡΗ之關係 製備檸檬酸鹽PBS貯液（含I OmM檸檬酸鹽，20mM 磷酸鹽’與lOOmMNaCl)後分裝至各瓶中並調節至所需 pH。將各瓶於烘箱中溫熱至37°C，加入聚（HPMA) -GFLG-Ama = Pt ( NH3 ) 2 之 Ν,Ο-螯合物（〜20 kDa)，得出 濃度爲約2mg聚合物鉑共軛物/每mL緩衝劑。混合物充 _ 分混合得出無色溶液。於所示時間，自各pH溶液取三份 各約2.5mL之試樣，移至已先淸洗過之YM-3超離心裝置 (Amicon )，於 5000 RCF，37 °C 旋轉 50 分鐘。一旦各時 " 間點所有試樣收集並準備好，以ICP-OES分析濾液與貯液 ’相對於Pt標準品（0-10 ppm)，鉑之發射線爲214.42 nm。於各時間點與各PH，進行三個試樣之製備與分析。 實例32: Ο,Ο'-Pt與Ν,Ο-Pt螯合物之體外活性 於體外評估各C^O'-Pt螯合物同系物之相對胞毒性， -74- (71) 1329646

即，利用B16F10黑色素瘤細胞組織培養之群落（形成群 落）分析。利用此法比較同系物與順鈾、卡鈾的活性。亦 評估轉化爲Ν,Ο-Pt螯合物之功效。簡言之，將細胞種於 培養皿中使其黏附，於包含預期濃度試劑之介質中培養7 天。固定後，將包含>50個細胞之細胞簇數目計算爲群落 。各濃度之試劑作三次分析。各組三個培養皿的群落平均 數除以對照組（無試劑）培養皿的群落平均數得出各濃度 試劑之存活値百分比。使用高於與低於50%存活點之上述 數據以線性回歸分析而得到各試劑之IC5Q(造成50%生長 抑制之濃度）。結果示於表5。 (72)1329646 表5 群落分析所得醯胺基丙二酸根〇,〇’-Pt與N，0-Pt螯合物 之胞毒性結果

螯合物 IC50 (μΜ) 對照組 >300 p ( HPMA ) -GFLG-Ama，90 kDa，0,0’-Na >100 p (HPMA) -GFLG-Ama=Pt= (NH3) 2，25 kDa，N，0-Pt 3.4 p (HPMA) -GFLG-Ama=Pt= (NH3) 2 ' 25 kDa > 0,0'-Pt 0.8-1.1 p (HPMA) -GFLG-Ama=Pt= (NH3) 2 5 45 kDa j 0,0-Pt 1.0 p (HPMA) -GFLG-Ama=Pt= (NH3) 2 1 90 kDa > Ο,Ο'-Pt 0.9 p (HPMA ) -GFLG-Ama > 45 kDa > Ο,Ο'-Na >100 p ( HPMA ) -GFLG-Ama=Pt=DACH > 25 kDa > Ο,Ο'-Pt 1.0 p (HPMA) -GFLG-Ama=Pt=DACH > 25 kDa > N,0-Pt <4 順鈿 0.5 卡鉑 2.4 實例3 3 :耐受性與最大耐受劑量硏究 單劑量 IV 硏究，比較聚（HPMA) -GFLG-Ama-Pt(NH3)2 ( Mw ~20 kD)之 0,0'-Pt 螯合物與 N，0-Pt 螯合 物形式，顯示〇,〇’-Pt螯合物與N，0-Pt螯合物之小鼠最 大耐受劑量（MTD)分別爲80-100與400mg Pt/kg，表示 結合Ν,Ο-Pt螯合物之聚合物有較高安全界限。這些硏究 中，MTD定義爲沒有因藥物引起毒性而造成之小鼠死亡數 目之最高劑量。 -76- (73) 1329646 二螯合物多劑量之耐受性如表6所示’其表爲接受五 日劑量任一螯合物之小鼠（帶有B16黑色素瘤，】0隻— 組）的最大平均體重損失。此數據亦顯示N，〇-pt螯合物 在與0,0’-Pt螯合物相當劑量時沒有毒性，而且Ν,ο-Pt螯 合物須有較高劑量才能造成當量的平均體重損失。 表 6

耐受性，表爲因日劑量 X 5之聚（HPMA ) -GFLG-Ama = Pt(NH3)2，〇,〇'-Pt 與 N，0-Pt 螯合物，25 kDa，之平 均體重損失百分比 ____ Ο,Ο’-Pt螯合物 Ν,Ο-Pt螯合物 劑量（mgPt/kg) 體重損失％ 劑量（mgPt/kg) 體重損失％ 7.5 -10.3 10 +5.6 20 -29.9 20 -2.5 40 -4.8 80 -7.7 200 -19.9 240 -26.0 實例34: 皮下（s.c.) B16黑色素瘤模型之腫瘤生長抑 制：Ν,Ο-Pt螯合物 聚（HPMA ) -GFLG-Ama = Pt ( NH3 ) 2 > N，0-Pt 螯合 物’ 25 kDa ’與順鉑與食鹽水對照組的腫瘤生長抑制比較 以雌性C57BL/6小鼠來評估。N，0-Pt螯合物與順鉑之劑 (74) 1329646

量爲 17.5mgPt/kg 與 3mgPt/kg(qd χ 5 療程，一天一次共 五天）。N，0-Pt螯合物的劑量遠低於MTD，但是順鈾的 劑量則接近於Μ T D。每個治療組有十隻動物，於其右後側 腹s.c.接種106 B16F10鼠科的黑色素瘤細胞。植入後第 6天’開始每天以測徑器測量腫瘤尺寸（於輕微甲尿固烷 (Methiurane )麻醉時進行）。所成腫瘤質量（mg )以算 式（W2XL) /2(其中W爲較短邊腫瘤尺寸之長度mm，L 爲較長邊之長度mm)來計算。當動物之腫瘤大於50mg 以上時開始治療。 各硏究動物個別處理，所以治療的第1天相當於腫瘤 尺寸顯示可以開始用藥的那一天。所有測試化合物均經由 尾靜脈給藥，劑量體積爲0.2-0.3mL/每20g體重。每天用 藥前觀察動物並秤體重，以計算用藥的劑量體積，每天用 藥後亦觀察動物並秤體重直到硏究結束。結果示於圖9。 ^ 實例35 : s.c. B16黑色素瘤模型之腫瘤生長抑制：0,0’-Pt 螯合物 聚（HPMA ) -GFLG-Ama = Pt ( NH3 ) 2，0,0，-Pt 螯合 ' 物，25 kDa ( 〇5〇'-Pt )，與順鉑與食鹽水對照組的腫瘤生 長抑制比較以雌性C57BL/6小鼠來評估。0,0'-Pt螯合物 與順鈾之劑量爲17.5mgPt/kg與3mg/kg ( qd χ 5療程）。 Ο,Ο’-Pt螯合物的劑量接近於MTD，與順鉑情況一樣。結 果示於圖1 〇。 -78- (75)1329646 實例36: s.c B16黑色素瘤模型之腫瘤生長抑制：N，0-Pt 螯合物 聚（HPMA) -GFLG-Ama = Pt ( NH3 ) 2 N，0-Pt 蜜合物 ，25 kDa ( Ν,Ο-Pt )，與卡鉛與食鹽水對照組的腫瘤生長 抑制比較以雌性C57BL/6小鼠來評估。N，0_Pt螯合物與 卡鉑之劑量爲200mgPt/kg與65mg/kg(qd X 5療程）。 N，0-Pt螯合物的劑量接近於MTD，與卡鉑情況一樣。結

實例47 : s.c.鱗狀細胞異種移植模型之腫瘤生長抑制： N , 0 - P t 螯合物

聚（HPMA) -GFLG-AmaPt ( NH3 ) 2 5 Ν,Ο-Pt 螯合物 ，25 kDa·，與卡鉑與載體對照組（等張葡萄糖）的腫瘤生 長抑制比較以每治療組7隻BALB/c nu/nu小鼠來進行。 將人類鱗狀腫瘤細胞（UMSCClOb )植入四個位置（左肩 '右肩、左側腹與右側腹）（1 〇6細胞/每個位置）。 Ν,Ο-Pt螯合物與卡鉑之劑量爲400mg Pt/kg與65mg/kg ( 單次IP注射）。Ν,Ο-Pt螯合物的劑量接近於MTD，與卡 鈾情況一樣。當腫瘤達組平均5 0mg時’所有小鼠開始進 行測試。結果示於圖1 2。 實例38:使用多劑量法之B16黑色素瘤模型的p(HPMA )-GFLG-Ama = Pt = DACH 抗腫瘤活性 以B16黑色素瘤模型進行硏究比較聚（HPMA )- -79- ⑧ (76) (76)

1329646 GFLG-Ama = Pt = DACH與卡鉑的抗腫瘤活性，各試 以IP注射給藥共5天（qd X 5 ) *聚（HPMA )

Ama = Pt = DACH亦於第1 5，16，與1 7天給藥。療 化合物以各自的最大耐受（等毒性）劑量給藥。 重 18-20g之雌性 C57BL/6小鼠 s.c.植入 B 1 6F 1 0腫瘤細胞（得自組織培養）。於硏究期間 理各隻所成腫瘤的大小。腫瘤質量（mg )以（W2 > 計算，其中W爲較短邊腫瘤尺寸之長度，L爲較長 度。當腫瘤大小爲75-1 00mg時對動物用藥處理。 積爲0.04mL/克體重，腹膜內給藥。每天測量腫瘤 體重。數據表爲腫瘤質量平均±SEM且在各治療組 動物死亡或因腫瘤質量過大、腫瘤潰瘍或生病而宰 將數據繪圖。用於試劑之活性比較時，各試劑以其 受劑量（MTD )給藥，MTD定義爲下述劑量：再現 不超過1 0% (每組中1 0隻動物的1隻）不可歸因 之早期毒死，且於減重恢復後造成之平均最大體重 颂，各小鼠重量最低點（不論是第幾天）之組平 10-15%。 此模型中以qd X 5療程進行之p(HPMA) Ama = Pt = DACH的最大耐受劑量爲 100mgPt/kg，卡 之最大耐受劑量爲60mg/kg (相當於32mgPt/kg ) 療組之平均腫瘤生長繪於圖13。這些結果顯示卡鉑 瘤生長的效應中等。相反地，P(HPMA) Ama = Pt = DACH的治療使腫瘤生長實質地減緩與延長 劑每天 -GFLG- 程中二 1〇6個 個別處 c L ) /2 邊之長 注射體 質量與 5 0 %的 殺之前 最大耐 地引起 於腫瘤 損失（ 均）爲 -GFLG- 鉑對應 。各治 抑制腫 -GFLG- (77) 1329646 實例39:使用多劑量法之B16黑色素瘤模型的p( HP M A )-GFLG-C3-Sulf-Ama = Pt = DACH 抗腫瘤活性

以 B16黑色素瘤模型進行硏究比較p( ΗΡΜΑ )-GFLG-C3-Sulf-Ama = Pt = DACH與卡鉑的抗腫瘤活性，各試 劑每天以IP注射給藥共5天（qd X 5 )。聚（ΗΡΜΑ )-GFLG-Ama = Pt = DACH 亦於第 1 5，1 6，1 7 天給藥。療程 中二化合物以各自的最大耐受（等毒性）劑量給藥。療程 中二化合物以各自的最大耐受（等毒性）劑量給藥。 本硏究所用方法與實例38所用 p(HPMA) -GFLG-C3-Sulf-Ama = Pt = DACH 的硏究一致。 此模型中以qd X 5療程進行之p (HPMA) -GFLG-C3-Sulf-Ama = Pt = DACH的最大耐受劑量爲 75mgPt/kg，卡鉑 之對應最大耐受劑量爲60mg/kg(相當於32mgPt/kg)。 各治療組之平均腫瘤生長繪於圖14。此結果顯示本硏究中 卡鉑抑制腫瘤生長的效應很低。相反地，p ( HPMA )-GFLG-C3-Sulf-Ama = Pt = DACH 抑制腫瘤生長的效應較顯 . 著。 結論 所以’本發明提出選擇性製備實質上純的醯胺基丙二 酸根Ο,Ο'-Pt與N，0-Pt螯合物的手段。亦提出使用上述方 法製得的實質上純的醯胺基丙二酸根0,0’-Pt與N，0-Pt螯 合物。N，0-螯合物於pH約6.0及以上時較安定，低於上 -81 - (78) 1329646 述pH時則釋出小Pt物種’造成在較低pH時活性小pt 物種選擇性地於腫瘤與微脂粒等結構中釋出。

熟習此項技藝人士可輕易知道本發明方法可再變化與 改良。此變化與改良爲本發明範圍內。例如，但不限於， 熟習此項技藝人士知道不同於聚（HPMA )與聚（glu )之 具有羧酸根、磺酸根或硫酸根之其他聚合物（包括，但不 限於葡萄胺基葡聚糖如’玻尿酸，硫酸皮膚素（dermatan sulfate) ’ 肝素’硫酸軟骨素（chrondiotin sulfate))可 於含水或非水條件以習知偶合劑偶合至Ama-diEt，直接地 或經由間隔物，如，胺基酸或聚胺基酸。然後這些聚合 物-醯胺基丙二酸根共軛物可如上述水解與鉛化得出 0,0’-Pt螯合物，其可再轉化成對應N，0-Pt螯合物。同 理，熟習此項技藝人士根據本發明可了解N，0-Pt螯合物 可製成醯胺基丙二酸的半酯或單烷酯。例如，將二烷酯以 1當量NaOH或KOH部分水解可產生其單酯或以丙二酸或 水解 N -醯胺基丙二酸處理便各可產生其半酯。純化後， 單酯可於PH4-5鉑化。然後可將pH上升至約6或更高而 得出N，0-Pt錯合物。所有這類本發明化合物之排列置換 均在本發明範圍內 【圖式簡單說明】 圖1顯示順鉑，卡鉑，奧沙利鉑的結構’以及醯胺基 丙二酸根·順-二氨鉑（II) 0,0，-Pt與N，〇-Pt螯合物的基 本結構。 -82 - (79) 1329646 圖2A顯示醯胺基丙二酸-順-二氨鉑（II ) 〇, 〇 I-pt螯 合物的結構。 圖2B顯示醯胺基丙二酸-順-二氨鈾（π) Ν,Ο-Pt螯 物的結構。 圖3A顯示醯胺基丙二酸根-順-二氨鉑（π) 0,0'-Pt 螯合物的結構。

圖3B顯示醯胺基丙二酸根-順-二氨鉑（II) N，0-Pt 螯合物的結構。 圖 4 顯不聚（HPMA) -GFLG-Y’ 其中 Y = 〇Np(ONp = 對硝基酚酯）或 Ama-diEt，的製備與結構。當 Y = 0Np， 形成較低分子量且較窄多分散性之聚合物。沒有ONp基 團或加入對硝基酚時，得到較高分子量之聚（HPMA )聚 合物。3 5 1 kDa物質係由沒有任何ONp酯且沒有任何加入 對硝基酚之反應而得到。當對硝基酚加至沒有ONp酯之 聚合反應時，得到較小、且較窄與較均勻分子量分布之 Η Ρ Μ A聚合物。 圖'5 顯不製備聚（HPMA) -GFLG-Ama = Pt(NH3) 2 N，0-Pt螯合物之合成流程圖。 圖6顯示聚（HPMA) -GFLG-AmadiEt之製備時對硝 基酚的釋出情形。此爲藉由小分子釋出而監看該取代反應 的方式之一。 圖 7 顯示聚（HPMA ) -GFLG-Ama = Pt ( NH3 ) 2 之 0,0'-Pt與N，0-Pt螯合物的結構與其對應195Pt NMR圖譜 。該圖譜顯示二螯合物峰線位置的差異。〇，〇'-pt螯合物 -83- ⑧ (80) 1329646 的圖譜顯不其由約8 5 % 〇 , - p t與1 5 % N，Ο - P t螯合物所組 成。N，0-Pt螯合物的圖譜顯示其由約i〇%〇,〇,_pt與 90%N,O-Pt螯合物所組成。 圖8顯示圖5步驟C中〇,〇，-pt與Ν,Ο-Pt螯合物的 百分比繪圖。此表示〇,〇，-Pt螯合物於i _2小時內完全生 成。

圖9顯示實例35之B16黑色素瘤腫瘤生長抑制硏究 的繪圖，其中食鹽水作爲對照組，順鈾之劑量接近其MTD (最大耐受劑量），聚（HPM A ) -GFLG-Ama = Pt ( NH3 ) 2 之Ν,Ο-Pt螯合物劑量遠低於其MTD。 圖10顯示實例36之B16黑色素瘤腫瘤生長抑制硏究 的繪圖，其中食鹽水作爲對照組，順鉑之劑量接近其MTD ’聚（HPMA) -GFLG-Ama = Pt ( NH3 ) 2 之 〇,〇’-Pt 蜜合 物之劑量亦接近其MTD。 圖〗1顯示實例37之Β16黑色素瘤腫瘤生長抑制硏究 的繪圖，其中食鹽水作爲對照組，卡鉑之劑量接近其MTD ，聚（HPMA) -GFLG-Ama = Pt ( ΝΗ3 ) 2 之 N，0-Pt 螯合物 劑量接近其MTD。 圖12顯示人類異種移植腫瘤生長抑制硏究的繪圖’ 其中等張葡萄糖作爲對照組，卡鉑之劑量接近其MTD ’聚 (HPMA) -GFLG-AmaPt ( NH3 ) 2 之 N，〇-Pt 螯合物劑量 遠低於與接近其MTD。 圖13爲實例38所得結果之圖示’其爲P(HPMA) _ GFLG-Ama = Pt = DACH與卡鉑於B16黑色素瘤腫瘤模型中 1329646 (81) 抗腫瘤活性的比較。 圖14爲實例39所得結果之圖示，其爲p( HPMA )-GFLG-C3-Sulf-Ama = Pt = DACH與卡銷於B16黑色素瘤腫瘤 模型中抗腫瘤活性的比較。

Claims (1)

1. 曰修(更)正本 公告本 '申請專利範圍 附件3A . 第941 04200號專利申請案 中文申請專利範圍替換本 民國99年4月7曰修正

   L —種具有如下化學結構之醯胺基丙二酸根Ns〇-Pt 錯合物， Ri- —[連結基]q〆'

   0 R3 其中：

   X 爲 C = 〇 或 s〇2 ; Rl係選自 ei-Cu直鏈或支鏈、飽和或不飽和烴基， 水可溶基團，係選自：聚（羥烷基丙烯醯胺），聚（羥 院基-甲基丙烯醯胺）及其共聚物；聚乙二醇（PEGs) ;聚環氧丙烷；聚乙烯醇；聚（乙烯吡咯烷酮）：甘露 糖：葡萄糖；抗壞血酸：甘油：胺基酸；聚胺基酸：多 醣；葡萄胺基葡聚糖；硫酸皮膚素（dermatansulfate) :硫酸軟骨素（chrondiotin sulfate);肝素；磺酸； 磺酸鹽；四級銨鹽；羥基；甲氧基；多元醇；多元醚； 1329646 以及醯胺；

   導向腫瘤的基團，係選自：抗體，血球凝集素，葉酸， 生物素，維生素 b12，及其衍生物或同系物；以及 另包括一或多個導向腫瘤基團之水可溶基團，且該導向 腫瘤基團係選自：抗體，血球凝集素，葉酸，生物素， 維生素 Bi2，及其衍生物或同系物；該水可溶基團係選 自：聚（羥烷基丙烯醯胺），聚（羥烷基-甲基丙烯醯 胺）及其共聚物；聚乙二醇（PEGs );聚環氧丙烷； 聚乙烯醇：聚（乙烯吡咯烷酮）：甘露糖；葡萄糖：抗 壞血酸；甘油；胺基酸；聚胺基酸；多醣；葡萄胺基葡 聚糖；硫酸皮膚素（dermatan sulfate ):硫酸軟骨素（ chrondiotin sulfate );肝素；擴酸；磺酸鹽；四級錢 鹽；羥基；甲氧基；多元醇；多元醚；以及醯胺； q爲〇或1 ; r 爲 2 - 5 0 0，

   〔連結基〕係選自Ci-Cu烷基，胺基酸，聚胺基酸，聚乙 二醇（PEG)及其組合； R2與R3各爲NH3;或R2與R3合併包括1，2-二胺基環己

   R4係選自氫，陽離子與形成酯的基團，其中， 該錯合物係由下述方法以實質上純的型態得到，此方法包 括令對應醯胺基丙二酸根 〇,〇^Pt錯合物或醯胺基丙二 酸根0，CV-Pt與N，0-Pt錯合物之混合物與pH爲6.0至 10.0之水溶液接觸。 -2- 1329646 Ο,Ο'-Pt 2. —種具有如下化學結構之醯胺基丙二酸 錯合物，

   其中：

   X 爲 C = 〇 或 s〇2 ; R!係選自 Ci-C丨〇直鏈或支鏈' 飽和或不飽和烴基， 水可溶基團，係選自：聚（羥烷基丙烯醯胺） 烷基-甲基丙烯醯胺）及其共聚物；聚乙二醇 ;聚環氧丙烷；聚乙烯醇；聚（乙烯吡咯烷酮 糖；葡萄糖；抗壞血酸；甘油；胺基酸；聚胺 醣；葡萄胺基葡聚糖；硫酸皮膚素（dermatan :硫酸軟骨素（chrondiotin sulfate ):肝素 磺酸鹽；四級銨鹽；羥基；甲氧基；多元醇； 以及醯胺； 導向腫瘤的基團，係選自：抗體，血球凝集素 生物素，維生素 B12，及其衍生物或同系物； 另包括一或多個導向腫瘤基團之水可溶基團， 腫瘤基團係選自：抗體，血球凝集素，葉酸， ，聚（羥 (PEGS) );甘露 基酸；多 sulfate ) ;磺酸； 多元醚； ，葉酸， 以及 且該導向 生物素， -3- 1329646 維生素b12，及其衍生物或同系物；該水可溶基團 自：聚（羥烷基丙烯醯胺），聚（羥烷基-甲基丙 胺）及其共聚物；聚乙二醇（PEGs):聚環氧丙 聚乙烯醇；聚（乙烯吡咯烷酮）：甘露糖；葡萄糖 壞血酸；甘油；胺基酸；聚胺基酸；多醣；葡萄胺 聚糖；硫酸皮膚素（dermatan sulfate):硫酸軟骨 chrondiotin sulfate);肝素；磺酸；礎酸鹽；四 鹽；羥基；甲氧基；多元醇；多元醚；以及醯胺； q爲0或1 ; r 爲 2-500 : 〔連結基〕係選自C 1-C , 〇烷基，胺基酸，聚胺基酸， 二醇（PEG )及其組合； 尺2與各爲NH3;或R2與R3合倂包括1,2-二胺基

   該錯合物係由下述方法以實質上純的型態得到，此方 括令對應醯胺基丙二酸根N，〇-Pt錯合物或醯胺基丙 根N，0-Pt與0,0'-Pt錯合物之混合物與pH爲3.5或 之水溶液接觸。 3. 如申請專利範圍第1項之錯合物，其中_該pH 7.0- 8.0 。 4. 如申請專利範圍第2項之錯合物，其中該pH 2.0- 3.5 。 5·如申請專利範圍第1或2項之錯合物，其中 溶液之溫度爲20°C至50°C。 係選 烯醯 烷； :抗 基葡 素（ 級錢 聚乙 環己 法包 二酸 以下 値爲 値爲 該水 1329646 6. 如申請專利範圍第1或2項之錯合物，其中該水 溶液之溫度爲35°C至40°C。 7. 如申請專利範圍第1或2項之錯合物，其中該水 溶液藉著使用緩衝劑保持在所選pH値。 8 ·如申請專利範圍第7項之錯合物，其中該緩衝劑 爲磷酸鹽緩衝劑。 9. 如申S靑專利fe圍第1或2項之錯合物，其中該pH Φ 以pH恆定法（stating )維持在所選範圍。 10. 如申請專利範圍第1項之錯合物，其中該陽離子 係選自 Li+，Na+，K+ ’ Ca2+，Mg2 +與四級銨離子。 11. 如申請專利範圍第1〇項之錯合物，其中該陽離 子爲Na+。 12. 如申請專利範圍第1或2項之錯合物，其中該 1，2-二胺基環己烷爲1R，2R-二胺基環己烷。

   13. 如申請專利範圍第1或2項之錯合物，其中 〔 -Gly- ( W ) pGly- 其中： p 爲 0，1，2，3’4或 5; W爲一胺基酸或可爲相同或互異之胺基酸所成直鏈。 14. 如申請專利範圍第13項之錯合物，其中p爲〇。 15. 如申請專利範圍第13項之錯合物，其中1)爲卜 W 舄 Gly 。 16.如申請專利範圍第13項之錯合物，其中p爲2, -5- 1329646 W 爲-Phe-Leu-。 1*7.如申請專利範圍第13項之錯合物，其中p爲2, W 爲 Gly-Gly 。

   18.如申請專利範圍第1或2項之錯合物，其中R! 爲水可溶基團，係選自：聚（羥烷基丙烯醯胺），聚（羥 烷基-甲基丙烯醯胺）及其共聚物；聚乙二醇（PEGs)； 聚環氧丙烷；聚乙烯醇；聚（乙烯吡咯烷酮）：甘露糖； 葡萄糖；抗壞血酸；甘油；胺基酸；聚胺基酸；多醣；葡 萄胺基葡聚糖；硫酸皮膚素（dermatan sulfate);硫酸軟 骨素（chrondiotin sulfate );肝素；磺酸；磺酸鹽；四級 銨鹽；羥基；甲氧基；多元醇；多元醚；以及醯胺。 1 9 .如申請專利範圍第1 8項之錯合物，其中該水可 溶基團爲N-( 2-(羥丙基）甲基丙烯醯胺以及丙烯醯基（ CH2 = CHC ( 0)-)或甲基丙烯醯基(CH2 = C ( CH3 ) C ( 〇 )-)之共聚物。

   20.如申請專利範圍第18項之錯合物，其中 Ri爲 聚胺基酸。 21. 如申請專利範圍第20項之錯合物，其中該聚胺 基酸係選自聚麩胺酸鹽’聚天冬胺酸鹽與聚離胺酸。 22. 如申請專利範圍第18項之錯合物，其中h爲多 醣。 23.如申請專利範圍第1或2項之錯合物，其中R, 爲另包括導向腫瘤基團之水可溶基團，且該導向腫瘤基團 係選自：抗體’血球凝集素，葉酸，生物素，維生素 Bi2 -6 - 1329646

   ’及其衍生物或同系物；該水可溶基團係選自：聚（經院 基丙烯醯胺），聚（羥烷基-甲基丙烯醯胺）及其共聚物 :聚乙二醇（PEGs);聚環氧丙烷；聚乙烯醇；聚（乙燦 吡格院酮）；甘露糖；葡萄糖；抗壞血酸；甘油；胺基酸 :聚胺基酸；多醣；葡萄胺基葡聚糖；硫酸皮膚素（ dermatan sulfate);硫酸軟骨素（chrondiotin sulfate); 肝素；磺酸；磺酸鹽；四級銨鹽；羥基；甲氧基；多元醇 :多元醚；以及醯胺。 24. 如申請專利範圍第23項之錯合物，其中該導向 腫瘤的基團係選自葉酸，葉酸衍生物，葉酸同系物，維生 素B〗2’維生素Bi2衍生物，維生素B12同系物，生物素 ，去硫生物素與生物素同系物。 25. 如申請專利範圍第1或2項之錯合物，其中R, 爲導向腫瘤的基團。 26. 如申請專利範圍第25項之錯合物，其中該導向 腫瘤的基團係選自葉酸，葉酸衍生物，葉酸同系物，維生 素B!2，維生素Bl2衍生物，維生素B12同系物，生物素 ，去硫生物素與生物素同系物。 27. 如申請專利範圍第1或2項之錯合物，其中Pt 呈+2氧化態。 28. 如申請專利範圍第1或2項之錯合物，其中pt 呈 +4氧化態。 29. 如申請專利範圍第1或2項之錯合物，其中： Ri爲具有下示化學結構之水可溶無規共聚物： 1329646

   其中： t 爲 0.75-0.99 ; v 爲 0.01-0.25 ; t + v = 1.00； z代表聚合物分子量且爲1至5000仟道爾吞（kDal tons) > Rs與r5,獨立地選自氫與CH3 ; 尺6爲2-羥丙胺基（（：113(：11(011)(：112^-)。 3〇·如申請專利範圍第丨或2項之錯合物，其中爲得 到實質上純的錯合物，另包括超過濾。 31. 如申請專利範圍第3〇項之錯合物，其中超過濾 包括切向》IL 式過據（tangential flow filtration)。 32. 如申請專利範圍第30項之錯合物，其中超過濾 包括離心超過德。 33·—锺醫藥組成物，包括： 如1申Sf專利範圍第1或2或29項之錯合物，以及， 一或多個醫藥可接受賦形劑。 34· ~~種用於治療實性瘤之醫藥組成物，包括醫療有 效量如申⑽專利範圍第1或2或2 9項之錯合物。 3 5 ·如申請專利範圍第3 4項之醫藥組成物，其中該 -8- 1329646 錯合物非經腸投予。 36.—種由實質上純的醯胺基丙二酸根〇，0’-Pt螯 合物或醯胺基丙二酸根N，O-Pt與0，O'-Pt螯合物之混 合物製備實質上純的醯胺基丙二酸根N，Ο-Pt螯合物之方 法，包括令醯胺基丙二酸根〇，〇'-Pt螯合物或醯胺基丙 二酸根N，Ο-Pt與0，O’-Pt螯合物之混合物與pH爲6.0-1 〇 . 〇之水溶液接觸。

   37.如申請專利範圍第36項之方法，其中該pH爲 7.0-8.0 〇 38.—種由實質上純的醯胺基丙二酸根N，〇-Pt螯合 物或酸胺基丙—酸根Ν’ 〇_Pt與〇，0’_pt蜜合物之混a 物製備實質上純的醯胺基丙二酸根

   酸根N，0-Pt鸾含物或醯胺基丙 pH爲3.5或以 其中該p Η値爲 酸根N，0-Pt與0,0’-Pt螯合物之混合物與 下之水溶液接觸。 3 9 .如申請專利範圍第3 8項之方法， 2.0-3.5 。 法，其中該水 法，其中該水 法，其中該水 其中該緩衝劑 4 0.如申請專利範圍第36或38項；^方 溶液之溫度爲20°C至50°C。 41. 如申請專利範圍第36或38項5 + 、<方 溶液之溫度爲35°C至40°C。 42. 如申請專利範圍第36或38 一、β方 溶液藉著使用緩衝劑保持在所選pH値。 4 3.如申請專利範圍第42項之方$， -9- 1329646 爲磷酸鹽緩衝劑。 44.如申請專利範圍第36或38項之方法，其中該水 溶液以pH恒定法（stating)維持在所選pH範圍。