TWI329016B

TWI329016B - Therapeutic methods and uses of sapogenins and their derivatives

Info

Publication number: TWI329016B
Application number: TW092106926A
Authority: TW
Inventors: Rees Daryl; Gunning Phil; Orsi Antonia; Qin Xia Zong; Hu Yaer
Original assignee: Phytopharm Plc
Priority date: 2002-03-27
Filing date: 2003-03-27
Publication date: 2010-08-21
Also published as: RU2332999C2; IL164161A0; WO2003082893A2; PE20040306A1; ATE424211T1; PL213697B1; WO2003082893A8; NZ547344A; KR20100093621A; CN1642558A; NZ547897A; TW200400042A; WO2003082893A3; PL372941A1; RU2004130281A; CN1642558B

Description

1329016 五、發明說明（1) 【發明所屬之技術領域】本發明係有關於皂素配質，相關化合物與其衍生物之用途及治療方法。皂素配質，相關化合物與其衍生物係用以治療非認知神經退化’非認知神經肌肉退化，運動感覺神經退化了或受體的異常或喪失。另一方面，本發明係有關於用以作該治療的組合物。【先前技術】認知異常（cognitive dysfunction)是痴呆 (dement i a)狀況與症狀的特徵，例如：阿茲海默症 (Alzheimer’s disease (AD))，阿茲海默型老年痴呆症 (senile dementia of the Alzheimer's type (SDAT)) > 雷維氏體痴呆症（Lewy body dementia)以及血管性痴呆 (vascular dement i a)。程度較小的認知異常也是某些非痴呆狀況與症狀的特徵，例如：輕度知能障礙（m i 1 d cognitive impairment (MCI))，年齡相關性記憶缺損 (age-associated memory impairment (AAMI))，自閉症 (autism)和神經障礙（neuroimpairment)。非認知神經退化（即在缺乏認知障礙情況下的神經退化），非認知神經肌肉退化（即在缺乏認知障礙情況下的神經肌肉退化）以及運動感覺神經退化為下列狀況與症狀的特徵，例如：帕金森氏症（parkinson，s disease)，肌肉失養症（muscular dystrophy)(包括：顏肩肱肢型進行性

1329016 五、發明說明（2)

肌肉萎縮症（facioscapulohumeral muscular dystrophy (FSH) ’杜顯氏肌肉失養症（Duch enne muscular dystrophy)，貝克氏肌肉失養症（Becker muscular dystrophy)與布魯氏肌肉失養症（Bruce’ s muscular dystrophy))，Fuch’s 失養症（Fuch’s dystrophy)，強直型肌肉萎縮症（myotonic dystrophy)，角膜營養不良 (corneal dystrophy)，反射性交感神經失養症（reflex sympathetic dystrophy syndrome (RSDSA))，神經血管營養不良（neurovascular dystrophy)，重症肌無力 (myasthenia gravis)，蘭勃特伊頓症（Lambert Eaton disease)，漢丁頓舞蹈症（Huntington’s disease)，肌萎縮側索硬化症（amyotrophic lateral sclerosis (A L S)) ’和多發性硬化症（m u 1 t i p1e sclerosis) ° 受體障礙或喪失（receptor dysfunction or loss)—

特別是菸鹼受體（nicotinic)和/或蕈驗乙醯膽鹼接受器 (muscarinic acetylcholine receptors)和 / 或多巴胺受體（dopamine receptors)和/或腎上腺素受體 (adrenoceptors)的障礙或喪失一是上述某些或全部狀況與症狀的特徵。在缺之認知下的受體障礙或喪失，神經和神經肌肉缺損也是下列狀況與症狀的的特徵，例如：姿勢性低血壓（postural hypotension)，慢性疲勞症候群 (chronic fatigue syndrome)，氣喘（asthma)，易患性心衰竭（susceptibility to heart failure)和黃斑病變 (macular degeneration)。

3002-5563-PF(Nl);Chiumeow.ptd 第7頁 1329016 五、發明說明（3) ，於預期哥命（life expectancy)增加以及對於偶發性疾病的控制，上述的狀況與症狀在所有社會當中是曰漸嚴重的問題’其中’較年老的族群的人口統計學數據正持續增加中。現在迫切需要的是可以治療或有助處理、預防這些疾病的藥劑。併入參考文獻的DE-A-430321 4揭露皂素（sap〇nins)與皂素配質（sapogenins)對於病毒性疾病的治療，但是未提供數據以供熟習此技術者選擇特定類別的化合物來治療任何特定病毒性疾病。併入參考文獻的世界專利第W0_A_99/16786號揭露某些皂素與皂素配質在治療痴呆上的使用。併入參考文獻的世界專利第W0-A-99/48482號，第 WO-A-99/48507 號，第WO-A-01/23406號，第 WO-A-0 1 /23407號，第WO-A-01 /23408號係有關於某些皂素’皂素配質及其衍生物在治療認知障礙與相關症狀上的使用。併入參考文獻的中國專利第CN-A-1096031號（Chinese Patent Application No. CN-A- 1 0 9603 1 )揭露在 /5-腎上腺素與Μ型膽驗能受體（j0-adregergic and M-cholinergic receptors)之雙向調控下，螺旋甾烧皂素配質（spirostane sapogenin)與薩爾薩皂元 (sarsasapogenin)的生物活性（bioactivity)。其中未提供特定的藥學活性。然而，在1 9 9 8年"同位素標記化合物的合成與應用（Synthesis and Applications of

3002-5563-PF(Nl);Chiumeow.ptd 第8頁 1329016 五、發明說明（4) I so top i ca11y Labe lied Compounds)" —書中315-320 頁， Y i等人描述薩爾薩皂元在治療老年痴呆症上的使用。有一些所謂的”頻譜"疾病（_· spectrum" dis〇rder)，這些疾病有廣泛的症狀結合與相對的嚴重性。每一個症狀的嚴重性和特定的症狀結合將會因人而異，同時，根據該疾病的發展階段也會有所不同。例如，在帕金森氏症，重症肌無力’蘭勃特伊頓症，姿勢性低血壓和慢性疲勞症候群的病例中，認知障礙雖然是一些可能發生之次要症狀 (secondary symptom)其中之一，但並非主要症狀 (primary symptom)。此外，這些症狀並非病毒性疾病或痴呆。許多這類的疾病即為所謂的"頻譜”疾病。因此，— 許多病例當中’並不需要治療認知障礙（例如：痴呆）。本發明係以我們的發現結果為基礎，某些皂素配其衍生物（包括皂素）具有驚人的疾病修飾活性 (disease-modifying activity)，可抵抗非認知神經、艮化，非認知神經肌肉退化，運動感覺神經退化，以及= 在缺乏認知下的受體障礙或喪失，神經和神經肌肉缺防因而有效地預防與改變這些症狀。此發現能改善對於=’ 認知障礙並非其主要症狀之非病毒性、頻譜和非碰’、些的治療。 '疾病【發明内容】本發明之簡單說明根據本發明之型態’本發明提供活性劑（如此處a 及*義）

1329016 五、發明說明（5) 的使用，3玄活性劑係用於治瘠成預卩大a瓶淑此Λ & & * , a . . ^ ,, α縻忒頂防人類與非人類動物所

恩或易患的症狀，或用以制/共、Α ,由A / * 入 4用以製備治療或預防該症狀之組合物 (例如樂學組合物，今〇，人， σο &物補給品與飲料），這些症狀為（i )非認知神經退化，（i i )非認知神經肌肉退化，（丨丨i ) 運動感覺神經退化，（i v )缺乏認知下的受體障礙或喪失，神經和神經肌肉缺損。 ”活性劑”係指下列通式ί，Η和丨丨丨的化合物，如同以下參考文獻中所定義的皂素配質衍生物，該衍生物至少具有一個已定義的X基取代基，如以下所定義之此類化合物的糖取代衍生物（sugar-substituted derivatives)，其所有立體異構物（stereoi somers)與消旋混合物（racemic mixtures)，其所有藥學上可接受的前驅藥物（pro-drugs) 與鹽類，以及其所有的混合物與結合。分子式I :

3002-5563-PF(Nl) ;Chiumeow.ptd 第ίο頁 1329016

M3 18 -R丨，R2，R3，R4，r5 R21 ’ R22 ’ R23，R24，R26

，r7 ， r8 R。，’ Rq

R

R ，K2〇個別白組成為氫（H)，OH，=0 二::二 1Ym K32 ” (Me-SO-) ，（MeS0-) ，M 原子（3 atom) ,(Me-S-) r ,, . . , 2 ) N3-，nh2-，MeS02NH_，烷基 (31让丫1)，或不存在，+ 1 2 A (. 、或者為〇R’其中R為烷基或醯基 (acyl group)； -9 ’ m r15 ’ Rl6，Ri7，R25，‘ 可為氫，0H，_ 原子，（Me-S-)，（Me-S0-)，（MeS〇2-) , m3_，Nh2_，

MeSC^NH- ’烷基’或不存在，或者為⑽，其中r為烷基或醯基； …表示任意的雙鍵（optional double bound)，其中，除了以上所述外，

1329016 五、發明說明（7) -R33與Ri4其中之一為烧基分子式（I I):

Rl4 5 5 ^10 ' ^13 * ^18 ? ^19 5 ^20 * R9S 5 R〇q * Rqn ' Rqi * Rqq * R34 在通式（I I)當中： -比，R2，R3，R4，R5，R6，R7 ^21 ’ 尺22 ，尺23 ’ 尺24 ’ 尺26 ，尺27 1 iv28 1V29 1V30 1V31 ' lv32 別為氫，OH ， =0 ， _ 原子，（Me-S-) ，（Me-SO-)， (MeS02-)，N3-，NH2-，MeS02NH-，烷基，0R(其中之R 為烷基或醯基），或者不存在； _ R〇 ^11 5 ^12 5 ^14 15 iv16 1V17 lv25 1V33 lv35 R35可為氫 NH, OH，鹵原子，（Me-S-)，（Me —SO-)，（MeS0?_)，N,

MeS02NH_ *烧基，0R(其中之R為烧基或酿基）*或者不存在；

3002-5563-PF(Nl) ;Chiumeow.ptd 第12頁 1329016 五、發明說明（8) ...表示任意的雙鍵，其中，除了以上所述外， -R33與尺14其中之一為烧基；分子式I I I :

在通式（III)當中： -Rt，R2，R3，R4，R5，R6，R7，R8，R10，R13，R丨4，R18，R19，尺20，尺21 ’ 尺22，尺23 ’ 尺24 ’ 尺26 ’ 尺27 ’ 尺28，尺29 ’ 尺30 ’ 尺31 ’ R32， R33，R34，R35，R36，R37 分別為氫，OH，=0，鹵原子， (Me-S-)，（Me-S0-)，（MeS02-)，N3-，NH2-，MeS02NH-，烷基，0R(其中之R為烷基或醯基），或者不存在； -R9，Ru ，R12，R15，R16，R17，R25 可為氫，0H，鹵原子， (Me-S-)，（Me-SO-)，（MeS02-)，N3-，NH2-，MeS02NH-，烷基，0R(其中之R為烷基或醯基），或者不存在；

3002-5563-PF(Nl) ;Chiumeow.ptd 第13頁 1329016 五、發明說明（9) ^ ·-表示任意的雙鍵， -- 其中，除了以上所述外， —R33與R14其中之一為烷基；而 R25的立體化學（stereochemistry)位於0方位 (orientation); 尤其是皂素配質衍生物（但並不專指類固醇螺旋留烷皂素配質衍生物）具有至少一個X基取代基，其中的X是選自以下包含的基團： -鹵原子， -(Me-S-) ，（Me-S0-) ，（Me-S02-) ， φ -Ν3-，ΝΗ2-，MeS02NH-，與 ~烷基；以及任何上述化合物的衍生物形式’其中，在位置3的碳原子 (即Ra連結之碳原子，或以上定義之未附分子式之皂素配質衍生物的相同位置），或分子式（II)和（III)當中位置3與 2 6 (即R34連結之碳原子）的碳原子’或每一個位置3與2 6的碳原子’都會帶一個〇糖基團（〇-SUgar moiety)，其中之糖基為單，二或三糖（saccharide)。皂素配質活性劑的帶糖衍生物形式通常是指習知技術中的皂素。此處所用的"碳水化合物（carb〇hydrate)n特別攀地包括此類糖基。類固醇皂素配質 )’皂素，以及可接受的前驅藥本發明使用的活性劑最好是非雌激素 (non-estrogen i c steroidal sapogen ins 其以上定義的衍生物，包括其所有生理上

1329016 五、發明說明（10) 物和鹽類。該活性劑可天然地產生或非天炒 k F太然地產生。根據習知技術以及以下的描述，經由修飾天鈇吝A “ γ 」热產生之化合物的側基 (side groups)和/ 或侧原子（side A . , Α1 e at〇ms)，可適當地製備非天然產生的活性劑。本發明也提供相同的方法治療人類與非人類動物，以及提供包含該活性劑的組合物’以使用於所述的治療方法中。如果有需要，本發明的活性劑可添加一個或以上的活性劑，然後一起給予，這些活性劑包括：膽鹼脂酶抑制劑 (cholinesterase inhibitors) ’ 多巴胺激動劑（d〇pamine agonists)(例如：左旋多巴L-dopa)，兒茶酴氧位曱基轉移酵素（COMT inhibitors)，單胺氧化酶b抑制劑（MA0-B inhibitors) ’ 抗膽索性藥物（anti-cholinergics)，乙醯膽驗激動劑（acetylcholine agonists)，血清素激動劑 (serotonin agonists) ’ α-胺基-3-羥基-5-甲基異惡唑 -4-丙酸受體激動劑（AMPA receptor agonists)，氨基丁酸受體激動劑（GABA receptor agonists)，N-曱基- D-天門冬胺酸受體激動劑（NMDA receptor agonists)，腎上腺素受體激動劑（/5-adrenoceptor agonists)，毛地黃 (digoxin)，多巴酴丁胺（dobutamine)，抗炎藥 (anti-inflammatories)，親神經因子（neurotrophic factors) ’斯達丁（statins)，腺苷A2a受體激動劑 (adenosine A2a receptor agonists)，搭糖還原酵素抑

3002-5563-PF(Nl) ;Chiumeow.pid 第15頁 1329016 五、發明說明（11) 制劑（aldose reductase inhibitors)，免疫調節劑 (immunomodulators)，大麻驗激動劑（cannabinoid agonists)，干擾素々（interferon /9)或三環類抗憂鬱劑 (tricyclic ant i-depressants ) 0 該活化劑可應用於治療以及預防人類與非人類動物罹患或易患非認知神經退化，非認知神經肌肉退化，運動感覺神經退化’或受體的障礙或喪失等症狀與疾病。此類症狀與疾病的例子於下文中描述。

因此，對於之前所述人類與非人類動物罹患或易患之一個或以上的症狀與疾病，本發明也提供活化劑（如其中所定義）於治療或預防該症狀上的使用，或提供活化劑在製備治療或預防該症狀之組合物上的使用。【實施方式】本發明之詳細說明活性劑之實施例以下特別說明數種活性劑： 1.上述通式I之化合物，其中：

-R丨，R2，R3，R4 ’ R5，R6，r7，&，Ri。，L R2丨，R22，R23，R24，R26，r27，r28，b，‘，氫，OH，=0，i 原子，（^16-3-)，（1^-30-N3-，NH2-，MeS02NH-，烷基或不存在，或基或醯基； ’ Rl8 ’ Rig ’ 尺20，，R32分別為 )’（Me-S02-)，為OR，其中r為烷

1329016 五、發明說明（12) 原子，（Me-S-)，（Me-S0-)，（Me-S02_)，N3-，NH2-， MeS02NH-，烷基或不存在，或為OR，其中R為烷基或醯基； •..表示任意的雙鍵，其乍，除了以上所述外， -R33與尺14其中之一為烧基’ 而R25的立體化學位於/3方位； 2. 上述通式I之化合物，其中： -Ri ’ R2，R3，R4，R5，R6，R7，R8，R10，R13，R18，R19，R20，尺21 ’尺22 ’尺23，尺24 ’尺26 ’尺27 ’尺28 ’心9 ’尺3。’尺31 ’尺32分別為氫，OH，=0，_ 原子，（Me-S-)，（Me-S0-)，（Me-S02-)， N3-，NH2-，MeS02NH-，烷基，或不存在，或者為OR，其中之R為院基或酿基； _尺9 ’尺12 ’尺15 ’尺16 ’尺17為氮， -Ru，R14，R25，R33 可為氫，OH，鹵原子，（Me-S-)， (Me-SO-)，（Me-S02-)，N3-，NH2-，MeS02NH-，烷基，或不存在，或者為OR，其中之R為烷基或醯基； ...表示任意的雙鍵，其中，除了以上所述外， -R33與尺14其中之一為烧基，而R25的立體化學位於/5方位； 3. 上述通式I之化合物，其中： η —η _ρ —D —D —D —p — d _ p — p _ p _ p _ p _ n _ p _ p — p

Kj - K2 - K4 - K5 - K6 - K7 - K8 - K10 - K!! - K9 - K12 - K13 - K15 - K16 - K17 - K18 - K19 - K _ p _ P _ P _ P _ P — P _ p _ p — p — P _ P — P — P _ 01 , 20 _K21 _K22 _K23 — K24 _K25 _K26 _K27 _K28 _K29 _K30 _K31 _K32 _K33 _ 乳 -R33與R14其中之一為曱基（ch3)

3002-5563-PF(Nl);Chiumeow.ptd 第17頁 1329016 五、發明說明（13) U-： >.表示單鍵， -碳2 5 ( C 2 5 )上的曱基可為鏡像異構物順時針（R )或逆時針 (S )結構 125的立體化學位於冷方位，而除了以上所述之外， h或ί?23至少有一個為X基’可能的剩餘取代基為氫，〇H ’ _〇，與0R ’其中之R為烧基或醯基或不存在，而X選自以下包含的基團： -鹵原子， -(Me-S-) ’（Me-S0-) ’（Me-S02-)，以及 -N3，NH2-，MeS02NH--烷基； 4.上述通式I之化合物，其中：Ri = R2 = R4 = R5 = R6 = R7 = R8 = R]0 = ru=r9 = ri2 = Rj3 = r = 20 _ U21 二尺22 =尺23 =尺24

15 _Rl6 =R 17」R18 = R19 25 、26 l27 l28 v29 33」甲基二表示單鍵 =^31 =尺32 =虱 -r25的立體化學位於召方位，而除了以上所述之外，

R3〇或1中個fx基’可能的剩餘取代基為氫，〇h -〇，與0R，其中之R為烷而X選自以下包含的基團：、不存在 _鹵原子， -(Me-S-) « (Me-s〇-) , (Me-S02-) 以及

3002-5563-PF(Nl);Chiumeow.ptd 第18頁 1329016 五、發明說明（14) -N3，NH2-，MeS02NH- _烧基； 5. 上述通式II之化合物，其中： -Ri ’ R2 ’ R3 ’ R4 ’ R5，R6 ’ R7 ’ R8，R10，R13 ’ R18 ’ R19 ’ R2〇，尺21 * 尺22 * 尺23 * ^24 * 尺26 5 尺27 5 尺28 ’ 尺29 * R3。J R31 * R32 ’ R34 分別為氮 ’OH ,=0 ’ _原子，（Me_S_) ’（Me-S0_) ’ (Me-S02_)，N3-，NH2-，MeS02NH-，烷基，OR(其中R 為烷基或酿基），或是不存在； -尺9，Rll ’ Rl2 ’ 尺14，^15 ’ 尺16，尺17，尺25，尺33，尺35 可為虱， OH，鹵原子，（Me-S-)，（Me-SO-)，（Me-S02_)，N3-， NH2-，MeS02NH-，烷基，0R(其中之R為烷基或醯基），或不存在， ...表示任意的雙鍵，其中，除了以上所述之外， -R33與尺14其中之一為烧基，而R25的立體化學位於々方位； 6. 上述通式I I之化合物，及其碳水化合物衍生物，其中： -R!，R2，R3，R4，R5，R6，R7，R8，R1D，R13，R18，Rig，R20， R21 ’ R22 ’ R23 ’ R24，R26，R27 ’ R28，R29 ’ R3Q ’ R31 ’ R32 個分別為氫，OH ， =0 ，鹵原子，（Me-S-) ，（Me-S0-)， (Me-S02-)，N3-，NH2-，MeS02NH-，烷基，OR(其中R 為烷基或酿基），或是不存在； _Rg，R12 ’ Rl5，Rl6 ’ 尺17 為氮，

3002-5563-PF(Nl);Chiumeow.ptd 第19頁 1329016 五、發明說明（15) -R34為氫’ 0H，=0，與〇R(其中之r為烷基，醯基或碳水化合物）；一R" ’ R14，R25，R33，R35 可為氫，〇H，函原子，（Me-S-)， (Me-S0-)，（Me-S02-)，n3-，NH2-，MeS02NH-，烷基，〇R(其中之R為烧基或酿基），或不存在； • . ·表示任意的雙鍵》其中，除了以上所述之外， -R33與R14其中之一為烷基，而R25的立體化學位於沒方位； 7.上述通式I I之化合物，及其碳水化合物衍生物，其中： ’、 20=R21=R22=R23=R24=R25=R26=R27=R28=R29=R30=R31=R32=R33 =氫， -rh=曱基為-0H或-OR ’其中之R為烷基，醯基或碳水化合物，而 R35為氫或不存在， ...表示任意的雙鍵，而 -碳25 (C25)上的曱基可為鏡像異構物順時針（R) (S)結構而R25的立體化學位於冷方位，除了以上所述之外， I?3或R23至少有一個為X基，可能的剩餘取 =0，與0R(其中R為烷基或醯基或不存在），土：’、、氫，〇H，而X選自以下包含的基團：

1329016 五、發明說明（16) -鹵原子，以及 -(Me-S-) ，（Me-S0-) ，（Me-S02-) -N3，NH2-，MeS02NH- 烧基 8.上述通式I I之化合物，及其碳水化合物衍生物，其中： D — D —D —D _D —P —D —D _ D _ D — D — D -Kj - κ2 - κ4 - κ5 - κ6 - K7 - K8 - 〇 - Kj L - K9 - Kj 2 - κ13 l15

i16 = R17 = R 18 _Rl9 氫《28 = ^29 ^ ^ =Rc -R14=R33=曱基 -R34 為-OH或-OR，其中之R為烷基，醯基或碳水化合物，而 -R35為氫或不存在，表示任意的雙鍵， 20 、27 L30 V31 v32 • · · 而R25的立體化學位於/3方位，而除了以上所述之外， R3或‘至少有一個為X基，可能的剩餘取代基為氫，0H =0，與0R(其中之R為烷基或醯基或不存在），而X選自以下包含的基團： _鹵原子* -(Me_S_)，（Me-S0_)，（Me_S09_)，以及 N, ，NH,

MeS0,NH — -烧基 •’ 9.上述通式III之化合物，其中 —R! ，R2，R3，R4，R5，R6，R7，R8，R10 l13 L14 l18 l19

R 20 ^21 v22 、23

R 24

R 26

R 27 、28 l29 ^30 V31 l32

m

3002-5563-PF(N1);Chiumeow.ptd 第21頁 1329016 五、發明說明（17) 133 134 ^35 (36

R37分別為氮，〇H (Me-S-)，（Me-S0-)，（Me-S02_) ，N3 0，鹵原子，，NH9- ，MeS09NH-

R25可為氫，0H 烷基，OR (其中之R為烷基或醯基），或不存在 _尺9 ' Rll，尺12 ’ 尺15 ’ 尺16 ’ 尺17 (Me-S-)，（Me-S0-)，（MeS02-)，N3-，NH2 基，OR (其中R為烷基或醯基），或不存在 • ·.表示任意的雙鍵，其中，除了以上所述之外， -R；^與Ru其中之一為烧基，鹵原子， MeS09NH-，烷而R25的立體化學位於冷方位； 1 0 .上述通式I I I之化合物， -Ri R20 R, R2 21 、33 35

5，R6，R7，R8 ^24 ' ^26 ' K27 R,fi，R,7分別為氫，OH

r3 R 22

R4，R 23

其中：’ Rl。’ Rl3R28，R l14 M8 M9

Rc (Me-S〇-)，（Me-S02-)，N3-，NH2-0R(其中R為烷基或醯基），或不存在 29 1V30 ιν31 1Χ·32 5鹵原子5 (Me-S-） MeS02NH-，烷基， _R9，R12 -R34為氫

R

15 OH

R 16 0 47 氫函原子，（Me-S-) ，（Me-S0-） (Me-S02-)，N3-，NH2-，MeS02NH-，烷基基，醯基或碳水化合物），或不存在； -R^ ’ R25 可為氣，0H，鹵原子，（Me-S-) (Me-S02-)，N3-，NH2-，MeS02NH-，烷基基或醯基），或不存在； ...表示任意的雙鍵， 0R(其中之R為烷 (Me-S0-)， 0R(其中之R為烷

3002 - 5563-PF(N1);Chiumeow.ptd 第22頁 1329016 五、發明說明（18) 其中，除了以上所述之外， -R33與1?14其中之一為烷基，而R25的立體化學位於/3方位； 1 1.上述通式I I I之化合物，及其碳水化合物衍生物，其中：

R—D —D —D —D —D —D —D — D _ D — D — D _ D —D — D _ D _ D _ D

2 - κ2 - κ4 - κ5 - κ6 - κ7 - κ8 - κ10 - κπ - κ9 - κ12 - κ13 - κ15 - κ16 - Kj 7 - κ18 - κ19 - K 20 ν21 ι22 ι23 ι24 (25 ι26 ι27 ι28 ι29 L30 1 ^32 ^33 氫 -r14=曱基 -R%為-〇H或-OR，其中之R為烧基，醯基或碳水化合物，而 r35為氫或不存在， _ R37為氫，-0H或=0 R36為氫或-0 Η •..表示單鍵，而 -碳25(C25)上的甲基可為鏡像異構物順時針（R)或逆時針 (S)結構而R25的立體化學位於；5方位，除了以上所述之外， R3或1?23至少有一個為X基，可能的剩餘取代基為氫，0H， =0，與0R，其中之R為烷基或醯基或不存在，而X選自以下包含的基團： -鹵原子，以及 _(Me-S_) ，（Me_S〇-) ，（Me_S02_) -N3，NH2-，MeS02NH--炫基；

3002-5563-PF(Nl);Chiumeow.ptd 第23頁 1329016 五、發明說明（19) 1 2.上述通式I I I之化合物及其碳水化合物衍生物’其中： -心咄2=1^=^6=^841()=1{11=1^咄12=1^咄15=1?16=1?17 = 1?18=1^=尺 20 = R21=R22 = R23 = R24=R25 = r26 = r27 = r28 = r29 = r3() = r3i=r32 = r19 = r2〇=氫， -R14=R33 =甲基 -R34為-0H或-0R，其中之r為烷基，醯基或碳水化合物，而 R35為氫或不存在， R37為氫，-0H或=〇 R36為氫或_ 0 Η ...表示單鍵， -碳25(C25)上的甲基可為鏡像異構物順時針（R)或逆時針 (S)結構而R25的立體化學位於沒方位，除了以上所述之外， R3或R23至少有一個為χ基，可能的剩餘取代基為氫，〇H， =0，與0R，其中之r為烷基或醯基或不存在，而X選自以下包含的基團： -鹵原子， -(Me-S-) ，（Me-S〇-) ，（Me_S〇2_)，以及 -N3，NH2-，MeS02NH- _烧基； 13.特別的取代皂素配質（substituted sapogenins)，但並不專指類固醇螺旋留烷皂素配質，龙中，至少有一個皂素配質之0H基以X取代，而X選自以下包

3002-5563-PF(Nl);Chiumeow.ptd 第24頁 1329016 五、發明說明（20) 含的基團： _鹵原子， _(Me-S-) ，（Me_SO_) ，（Me-S02_) ’ 以及 -N3，NH2-，MeS02NH-，以及 _烧基； 1 4.以上所定義之特別的皂素配質，但不專指類固醇螺旋甾烷皂素配質，其中，在X定義中的鹵原子係指氟原子； 15. 從以下物質選出的取代皂素配質： 3 β- t.-5 β ，20 α，22 α，25R-螺旋甾烧（3 冷—f luro-5 冷， 20 a , 22 a , 25R-spirostane)，3，3 -二氟-5 yS, 20 a，22 a, 25R-螺旋留烷（3, 3-di f luoro-5 /5，20 a , 22 a，25R-spirostane)，3 a -甲基續酿胺基-5 /3,20 a，22 a，25R-螺旋留烧（3 a-methylsulphonylamino-5 y3,20 α， 22 a , 25R-spi rostane)，3 a -三吐-5 召，20 a, 22 a，25R-螺旋留烧（3 a-azido-5 yS，20 a,22 a, 25R-spirostane)， 3 a —胺基-5 /5,20 a，22 a，25R -螺旋甾统（3 a-amino-5 /5, 20a，22a,25R-spirostane)，及其立體異構物與消旋混合物，以及其藥學上可接受的前驅藥物與鹽類； 16. 取代的皂素配質，其中之母體皂素配質（parent sapogen i η )接下來以至少一個上述定義的X基取代，而該母體皂素配質選自薩爾薩皂元（sarsasapogenin) ’表薩爾薩皂元（episarsasapogenin)，異菝契皂甘元 (smilagenin)，表異菝契皂甘元（epismilagenin) ’ 與恩

3002.5563-PF(Nl);Chiumeow.ptd 第25頁 1329016 五、發明說明（21) 兹羅皂甘元-D(部分音譯anzurogenin-D) 17.通式la之化合物：

R

參㈣其中之R基團選自氫；烧幾基（alkylcarbonyl);烧氧獄基 (alkoxycarbonyl);烷胺甲醯基（alkylcarbamoyl);或芳羰基（arylcarbonyl);或硫代基（sulpho (H03S));膦酸基 (phosphono ((Η0)2Ρ(0)-);或者單、二或三糖；其中，任一烷基皆可隨意地以芳基，胺基，單或二烷胺基（mon〇- or di-alkyl-amino) ’ 羧酸殘餘物（carboxylic acid residue (-C00H));或任何由此產生的結合來作取代。 18.如以上1至17項定義之化合物的衍生物形式，其中之位置3的碳原子’或者’在分子式11和I π當中之位置3 的碳原子，位置2 6的碳原子或每一個在位置3和2 6的碳原子，都帶有一個0 -糖基團，其中該糖基團是單、二或三糖’例如：具有5或6個碳原子的單盤聽或酮醣（m〇n〇 aldose or ketose)，最好是環合的呋喃糖（cyclised

3002-5563-PF(Nl);Chiumeow.ptd 第26頁 1329016 五、發明說明（22) furanose)與狐痛醣（pyranose)形式，或是具有D或L之旋光異構現象（optical isomerism)的α或々首旋異構物 (anomer)，或任何其二和三寡醣（oligosaccharide)結合；糖殘餘物的酿化形式（acylated forms)也包含在"糖11 類之中；適當的糖包括葡萄糖（glucose)，甘露糖 (mannose)，果糖（fructose)，半乳糖（galactose)，麥芽糖（maltose) ’ 纖維雙醣（cellobiose)，蔗糖（sucrose)，鼠李糖（rhamnose)，木糖（xylose)，阿拉伯糖 (arabinose) ’ 海藻糖（fucose)，異鼠李糖（quinovose)，芹菜糖（apiose)，乳糖（lactose)，半乳糖-葡萄糖，葡萄糖-阿拉伯糖’海藻糖-葡萄糖，鼠李糖-葡萄糖，葡萄糖— 葡萄糖-葡萄糖，葡萄糖-鼠李糖，甘露糖-葡萄糖，葡萄糖-(鼠李糖）-葡萄糖，葡萄糖—（鼠李糖）—鼠李糖，葡萄糖 -(葡萄糖）-葡萄糖，半乳糖-(鼠李糖）-半乳糖與其醯化 (例如：乙醢化（a c e t y 1 a t e d))衍生物。在以上化合物的定義中：其中隨意存在之烷基的胺基，單烷胺基 (mono-alkyl-ami no)與二烷胺基取代基最好是在烷基之α 位置上的單取代基（mono-substituent) 〇其中隨意存在之烷基的羧基（-C00H)取代基可位於烷基的末端或任何其他位置。 "烷基（311^1)"係指脂肪族烴基（31丨01131：1〇 hydrocarbon group)，該脂肪族烴基可為大約具有1至20 個碳原子的直鏈或分支鏈。烧基之鏈中最好具有1至大約

3002-5563-PF(Nl) ;Chiumeow.ptd 第27頁 1329016 五、發明說明（23) 1 2個碳原子。分支係和一個或以上之低烧基（1 〇 w e r a 1 k y 1 g r o u p s )(例如：甲基，乙基或丙基）連接至線性的烧鏈》" 低烷基"係指直鏈成分支鏈中大約有1至4個碳原子，烷基的例子包括：曱基’乙基’正丙基（n-propyl)，異丙基 (i-propyl)，正丁基（n-butyl)，第三丁基（t-butyl)，第二丁基（s-butyl)，正戊基（n-pentyl)，3 -戊基。 "芳基（aryl )π係指任何包含芳香環或稠合環（fused r i ngs )系統之基團，而其中包含的碳原子最好達到1 2個。苯基是一個芳基的例子。芳基可任意地以一例如，鹵原子 (如：氣或溴），炫基，環烧基，羥基（hydroxy)，烷氧基 (alkoxy)，胺基，硝基，醯化胺基（acylamino)，竣基 (carboxy)和環氧羰基（alkoxycarbonyl) —分別作單取代或多取代。 "叛酸殘餘物（carboxylic acid residue)"係指羧基 -C00H 。 "醯基π係指H-C0-或烷基-C0-基，其中之烷基定義如下。醯基類最好包含低烷基，醯基的例子包括曱醯基 (formyl )，乙醯（acetyl)，丙醯基（pr opanoy 1 )，2-曱基丙酿基（2-methylpropanoyl)，丁醢基（butanoyl)與十六醢（palmitoyl)；任意地取代（optionally substituted)"係指先前提及之基團可以一個或以上的取代基作取代，該取代基可為相同或不同的取代基，而關於被取代的母基團（parent group)，最好有一個或以上小分子（例如：小於最大分子

3002-5563-PF(Nl);Qiiumeow.ptd 第28頁 1329016 五、發明說明（24) 的20%)的取代基；適當的取代基包括鹵原子（例如：氯或溴），烷基’環烷基，羥基，烷氧基，胺基，醯化胺基，芳基’芳酰胺基（aroylamino)，羧基，環氧羰基 (alkoxycarbonyl) ’ 芳環氧幾基（araikoxycarbonyl)，雜芳環氧羰基（heteroaralkoxycarbonyl)，以及任意取代的氨基曱醯基（carbamoyl )，其大小最好如上所述；

"藥學上可接受的"係指在健全的檢查與獸醫的診斷範圍内’適合用於接觸人類與其他動物的細胞，而不引發不當的毒性、刺激、過敏反應與類似的反應，並且有合理的效益/風險比（benefit/risk ratio)。"藥學上可接受的前驅藥物"係指化合物的前驅藥物’該前驅藥物在健全的檢查與獸醫的診斷範圍内’適合用於接觸人類與其他動物的細胞，而不引發不當的毒性、刺激、過敏反應與類似的反應’並且有合理的效益/風險比，以及有效的作用，如化合物的兩性離子形式（zwitterionic forms)。”前驅藥物·, 係指化合物在體内（in vivo)快速轉變成上述分子式的母體化合物（parent compound)，例如：透過血液中的水解作用（hydrolysis)以達到該反應。經由代謝裂解 (metabolic cleavage)，官能基在體内能迅速轉變成一列與羧基反應的基團。由於化合物的代謝裂解基團容^ 體内裂解，帶有此類基團的化合物即作用為前驅藥物。關刖驅藥物的元整討論列於以下文獻：D e s丨g n 〇 f

Prodrug, H. Bundgaard, ed., Elsevier, 1985；

Methods in Enzymology, K. Widder et al, Εά

1329016 五、發明說明（25)

Academic Press, 42, p.309-396, 1985; A Textbook of

Drug Design and Development, Krogsgaard-Larsen and H. Bundgaard, ed.， Chapter 5; Design and Applications of Prodrugs p.113-191, 1991; Advanced

Drug Delivery Reviews, H. Bundgard, 8, p.1-38, 1992; Journal of Pharmaceutical Sciences, 77, p.285, 1988; Chem. Pharm. Bull., N. Nakeya et al, 32, p.692, 1984; Pro-drugs as Novel Delivery

Systems, T. Higuchi and V. Stella, Vol. 14 of the A.C.S. Symposium Series, and Biorevcrsible Carriers in Drug Design, Edward B. Roche, ed.,

American Pharmaceutical Association and Pergamon

Press, 1987，這些文獻全部併入參考文獻； "藥學上可接受的鹽類”係指本發明中相對無毒，無機與有機酸加合鹽類’以及鹼加合鹽類（base addition s a 11 s )化合物。在化合物之最後分離與純化期間，可於原位（in si tu)配製這些鹽類》尤其是將游離鹼態（free base form)的純化化合物分別與適當的有機或無機酸反應。參考S. M. Berge， Pharm. Sci. , 66 : 。將酸態（acid

後，再將鹽分離，可形成酸加合鹽類 et a 1. , Pharmaceutical Salts, J. p. 1-19 (1977)，此文已併入參考文獻 form)的純化化合物分別與適當的有機或無機鹼反應後，再將鹽分離’可形成鹼加合鹽類。鹼加合鹽類包括藥學上可接受的金屬與胺鹽。適當的酸加合鹽類的例子為那些盥

3002-5563-PF(Nl);Chiumeow.ptd 第30頁 1329016

下列酸類反應形成的鹽類，該酸類如下：鹽酸，炉瓜自文，踏酸與硝酸。適當的鹼加合鹽類的例子為那些與下列驗類^ 應形成的鹽類’該鹼類如下：氫氧化鈉（s〇dium 反 hydroxide) ’ 氫氧化鉀（potassium hydroxide)與氫氣化銨（ammonium hydroxide) ° 有一類更好的活性劑是通式I a之化合物。在一些分子式la的化合物中’碳25的曱基為逆時針 (S)結構；這些本發明的化合物為薩爾薩皂元與表緩爾薩皂元或其衍生物。在其他分子式la的化合物中，碳25的甲基為順時針（R )結構；這些本發明的化合物為異菝契專甘元與表異菝契皂甘元或其衍生物。

上述分子式la中的-OR可選自如下的基團（除非附上但書排除）：經基，甲酸乙酯（cathylate)(乙氧幾基氧 (ethoxycarbonyloxy))，醋酸鹽（acetate)，琥拍酸鹽 (succinate)，桂皮酸鹽（cinnamate)，阿魏酸鹽 (ferulate)，丙酸鹽（propionate)，丁酸鹽（butyrate)，戊酸鹽（valerate)，異戊酸鹽（isovalerate)，己酸鹽 (caproate)，異己酸鹽（isocaproate)，二乙基醋酸鹽 (diethylacetate)，辛酸鹽（octanoate)，癸酸鹽 (decanoate)，月桂酸鹽（laurate)，菫蔻酸鹽 (myristate)，棕櫚酸鹽（palmitate)，硬脂酸鹽 (stearate)，苯甲酸鹽（benzoate)，苯乙酸鹽 (phenylacetate)，苯基丙酸鹽（phenylpropionate)，桂皮酸鹽（cinnamate)，對石肖基笨曱醯基氧

3002-5563-PF(Nl);Chiumeow.ptd 第31頁 1329016 五、發明說明（27) (p-ni trobenzoy loxy)，3, 5 -二硝基苯甲醯基氧 (3,5-dinitrobenzoyloxy)，對氣苯甲醯基氧 (p-ch lorobenzoy 1 oxy )，2, 4 -二氯苯曱醯基氧 (2, 4-dichlorobenzoyloxy)，對溴苯曱醯基氧 (p-bromobenzoyloxy)，間溴笨曱醯基氧 (m-bromobenzoyloxy)，曱氧苯甲酉盘基氧 (p-methoxybenzoyloxy)，苯二甲醯（phthalyl)，甘胺酸鹽（glycinate)，氨基丙酸鹽（alaninate)，纈胺酸鹽 (valinate)，苯基氨基丙酸鹽（phenylalaninate)，異白氨酸鹽（isoleucinate)，甲硫氨酸鹽（methioninate)，精氨酸鹽（argininate)，天門冬醯胺酸鹽（aSparaginate)，天門冬胺酸鹽（aspartate)，半胱It酸鹽（cysteinate)，麩胺酸鹽（glutamate)，組氨酸鹽（histidinate)，賴氨酸鹽（lysinate) ’氮茂氨酸鹽（pr〇linate)，絲氨酸鹽 (serinate) ’ 羥丁胺酸鹽（threoninate)，色氨酸鹽 (tryptophanate) ’ 酪氨酸鹽（tyrosinate)，延胡索酸鹽 (fumarate)或順丁烯二酸鹽（maleate)。特別優先使用之通式la的化合物及其藥學上可接受的鹽類如下：薩爾薩皂元薩爾薩皂元曱酸乙S旨（cathylate) 薩爾薩皂元醋酸鹽薩爾薩皂元琥珀酸鹽及其藥學上可接受的鹽類薩爾薩皂元甘胺酸鹽及其藥學上可接受的鹽類

3002-5563-PF(Nl);Chiumeow.ptd 第32頁 1329016 五、發明說明（28) 薩爾薩皂元氨薩爾薩皂元纈薩爾薩皂元苯薩爾薩皂元異薩爾薩皂元異表薩爾薩皂元表薩爾薩皂元表薩爾薩皂元表薩爾薩皂元表薩爾薩皂元表薩爾薩皂元表薩爾薩皂元表薩爾薩皂元表薩爾薩皂元表薩爾薩皂元異菝契皂甘元異菝契皂甘元異菝契皂甘元異菝契皂甘元異菝契皂甘元異菝契皂甘元異菝契皂甘元異菝契皂甘元異菝契皂甘元基丙酸鹽及其藥學上可接受胺酸鹽及其藥學上可接受的基氨基丙酸鹽及其藥學上可白氨酸鹽及其藥學上可接受曱硫氨酸鹽及其藥學上可接曱酸乙酯（cathylate) 醋酸鹽琥珀酸鹽及其藥學上可接受甘胺酸鹽及其藥學上可接受氨基丙酸鹽及其藥學上可接纈胺酸鹽及其藥學上可接受苯基氨基丙酸鹽及其藥學上異白氨酸鹽及其藥學上可接異曱硫氨酸鹽及其藥學上可曱西楚乙酉旨（cathylate) 醋酸鹽琥珀酸鹽及其藥學上可接受甘胺酸鹽及其藥學上可接受氨基丙酸鹽及其藥學上可接纈胺酸鹽及其藥學上可接受苯基氨基丙酸鹽及其藥學上異白氨酸鹽及其藥學上可接的鹽類鹽類接受的鹽類的鹽類受的鹽類的鹽類的鹽類受的鹽類的鹽類可接受的鹽類受的鹽類接受的鹽類的鹽類的鹽類受的鹽類的鹽類可接受的鹽類受的鹽類

3002-5563-PF(Nl) ;Chiumeow.ptd 第33頁五、發明說明（29) 異减契皂甘元異曱硫氨酸鹽及其藥學上可接受的鹽類 &異菝契皂甘元表異滅契皂甘元曱酸乙g旨（cathylate) 表異菝契皂甘元醋酸鹽表異菝契皂甘元琥珀酸鹽及其藥學上可接受的睡表異藉…元甘胺酸鹽及其藥學上可…； $異菝契皂甘元氨基丙酸鹽及其藥學上可接受的鹽類 ^異菝契皂甘元纈胺酸鹽及其藥學上可接受的鹽= 表異菝契皂甘元苯基氨基丙酸鹽及盆藥孤汉再樂學上可接受的鹽類 ^異援契皂甘元異自氨酸鹽及其藥學上可接受的鹽類表異菝契皂甘元異甲硫氨酸鹽及其藥學上可接受的鹽類 =於通式U的4素（R為糖）化合物，特別優先者為下矣Π匕二物.薩爾薩皂元’表薩爾薩皂&，異菝契皂甘元與 —、藉契皂甘兀，每個化合物當中位置3的碳原子都帶有、二個0糖基團’其中之糖基團選自葡萄糖，甘露糖，果糖’半乳糖，麥芽糖，纖維雙聰，嚴糖，鼠李糖， ;拉伯糖’海簾糖，異鼠李糖1菜糖，乳糖，半乳糖— =萄糖，葡萄糖-阿拉伯糖’海薄糖_葡萄糖，鼠李糖萄糖，葡萄糖-葡萄糖-葡萄糖，葡萄糖—鼠李糖，甘露葡萄糖’葡萄糖-(鼠李糖葡萄糖，葡萄糖_(鼠李糖，葡萄糖-(葡萄糖）-葡萄糖，半乳糖_(鼠李糖）_ = 糖及其醯化（例如：乙醯化）衍生物。孔其他適當的活化劑例子包括16,22_環氧糞固_3点一醇 (16,22-epoxycoprostan-3 /3-〇1)，異薇契息甘綱

3002-5563-PF(Nl );Chiumeow.ptd 第34頁 1329016 五、發明說明（30) (smilagenone)，糞固醇（coprosterol)及其藥學上可接受的前驅藥物與鹽類。組合物與使用因此本發明能提供治療或預防以下症狀的方法，這此症狀包括非認知神經退化’非認知神經肌肉退化，運動感覺神經退化或在缺乏認知下的受體異常或喪失，神經或神經肌肉損傷（特別提出但不只包括以上所述特別的疾病狀況）。該方法包括投與所述人體或非人類動物一有效劑量之活性劑（如此處定義）或其藥學上可接受的鹽類。該活性劑能以包含活性劑與任何適當添加成分的組合物形式給與。該組合物可能為藥學組合物（藥劑），食品: 食物補給品或飲料。此組合物可包含指定化合物的混合物，和/或其藥學上可接受的鹽類。根據本發明的另一型態，本發明提供一組合物該組合物具有活性以對抗並治療人類與非人類動物之非認知神經退化’非認知神經肌肉退化，運動感覺神經退化，或在缺乏認知下的受體異常或喪失，神經或神經肌肉損傷。該組合物包含一有效量之活性劑化合物。本發明内谷當中的"藥學組合物"係指包含活性劑，以及包含添加之藥學上可接受的媒介物，稀釋劑，佐藥 (adjuvants) ’ 辅藥（excipients)，或賦形劑 (vehicles)，例如：保存劑，填充料，分解劑，濕潤劑 (wetting agents)，乳化劑，懸浮劑，甜味劑，矯味劑 (flavoring agents)，芳香劑（perfuming agents)，抗菌

1329016 五、發明說明（31) 劑’抗真菌劑（antifungal agents)，潤滑劑 (lubricating agents)與分配劑（dispensing agents)，這些添加物的使用係根據給藥方式與劑量形式而定。此處所用的"食品食物補給品"和"飲料"等項目皆具一般的意義，並不限於藥劑的配製。活性劑的劑量範圍很廣’當視欲治療或預防之症狀的嚴重性而定。適當劑量的選擇是一般的習知技術，不會造成困擾。例如’活性劑的劑量可大約大於〇 _ 1毫克/公斤身體重量，或例如’大於0.3毫克/公斤身體重量，最好每天給藥一次。更典性的是劑量將大約介於1和2 5毫克/公斤之間，例如’劑量大約在1與1 〇之間，最好每天給藥一次。以人體來說’合宜的劑量是每天大約給藥7〇至7〇〇毫克。 11藥學上可接受的劑量形式"係指本發明之化合物或組合物的劑量形式，包括片劑（tablets)，糖衣錢，粉末，酏劑（elixirs)，糖漿，液體製劑（liquid preparations) ’包括懸浮液，噴霧，吸入劑，片劑，錠劑（lozenges)，乳狀液，溶液，細粒（granuies)，膠囊與栓劑（suppositories)，液體製劑也用以注射，包括脂質體製劑（1 i posome preparat i ons)。有關的技術與詳細說明可參考Remington, Pharmaceutical Sciences，Mack

Publishing Co.， Easton， PA， latest edition. 〇一般來說’此處說明一特定類別化合物的參考文獻在其範圍内包括兩個或以上此類化合物之通合物的說明。本發明提供人類或非人類動物在罹患或易患下列疾病

1329016 五、發明說明（32) 之後產生之（i )非認知神經退化，（i i )非認知神經肌肉退化，（1 1 1 )運動感覺神經退化，或（i V )缺乏認知下的受體障礙或喪失，神經和神經肌肉缺損方面的治療，該疾病包括帕金森氏症，腦炎後的帕金森症（p〇stencephal i tic

Parkinsonism)，抑鬱（depression)，精神分裂症 (schizophrenia)，肌肉失養症（包括顏肩肱肢型進行性肌肉萎縮症’杜顯氏肌肉失養症，貝克氏肌肉失養症以及布魯氏肌肉失養症）’ Fuch’ s失養症，強直型肌肉萎縮症，角膜營養不良’反射性交感神經失養症，神經血管營養不良’重症肌無力，蘭勃特伊頓症，漢丁頓舞蹈症，運動神經元病（包括肌萎縮側索硬化症，多發性硬化症，姿勢性低企壓’中風或意外事故之後的創傷性神經退化（例如：頭部或脊椎神經的創傷），貝坦氏症（Batten，s disease) ’ 柯凱因氏症候群（Cockayne syndrome)，唐氏症（Down syndrome)，皮質基底核神經節退化 (corticobasal ganglionic degeneration)，多發性系統萎縮症（multiple system atrophy)，腦萎縮（cerebral atrophy)，撖欖體橋腦小腦萎縮症 (olivopontocerebellar atrophy)，齒狀紅核萎縮症 (dentatorubral atrophy)，蒼白球萎縮症 (pallidoluysian atrophy)，脊髓與延髓萎縮症 (spinobulbar atrophy)，視神經炎（optic neuritis)，亞急性硬化性腦炎（sclerosing pan-encephalitis (SSPE))，注意力無法集中症（attention deficit

3002*5563-PF(Nl);Chiumeow.ptd 第37頁 1329016 五、發明說明（33) disorder) ’ 病毒後腦炎（post-viral encephalitis)，小兒麻痺症後症候群（post-poliomyelitis syndrome)， F a h r ’ s症候群，J 〇 u b e r t症候群，格巴二氏症候群 (Guillain-Barre syndrome)，平腦症（lissencephaly)，

小兒腦中風（Μ o y a m o y a d i s e a s e)，神經元移行症 (neuronal migration disorders)，自閉症候群，多麩胺驢胺疾病群（polyglutamine disease)，尼曼匹克症 (Niemann P i ck d i sease)，進行性多病灶腦白質症 (progressive multi focal 1 eukoe ncepha 1 opa thy )，假性腦瘤（pseudotumor cerebri )，雷弗素姆氏病變（Ref sum disease) ’ 瓦登伯格氏症候群（Zellweger syndrome)，核上痲痺症（supranuclear palsy)，弗瑞德瑞克氏失調症 (Friedreich’s ataxia)，髓小腦運動失調第二型

(spinocerebellar ataxia type 2)，瑞特症候群（Rhett syndrome)，Shy-Drager 症候群（Shy-Drager syndrome)，結節硬化症（tuberous sclerosis)，匹克氏病（Pick’s d i sease ) ’慢性疲勞症候群，神經病變 (neur op athies)(包括遺傳性神經病變（hereditary neuropathy)，糖尿病神經病變（diabetic neuropathy)與有絲分裂的神經系病（mi tot ic neuropathy))，變性蛋白基神經退化（prion-based neurodegeneration)(包括庫賈氏症Creutzfeldt-Jakob disease (CJD)，變型庫賈氏症 (variant CJD) ’ 新變型庫賈氏症（new variant CJD)，狂牛症（Bovine spongiform encephalopathy (BSE))，家族

3002-5563-PF(Nl);Chiumeow.ptd 第38頁 1329016 五、發明說明（34) 遺傳失眠症（GSS)，致死性家族失眠症（ffi)，kuru與

Alper’s syndrome)，約瑟氏症（joseph，s disease)，急性播散性脊髓炎（acute disseminated encephalomyelitis) ’脊神經蜘蛛膜炎 (arachnoiditis) ’中樞神經系統的血管損傷（vascular lesions of the central nervous system)，極度神經元功月b 的喪失（loss of extremity neuronal function)，夏科-馬利-杜斯式疾病（Charcot-Marie-Tooth disease) (macular 因此患或易患或非人類也用於製在帕自閉症，综合徵，露其治療常的症狀肌肉退化或喪失，予以治療本發明使異菝，易患性心衰竭 degeneration) 本發明包括治療之疾病與情況的動物一有效之此備組合物以達到金森氏症，腦炎慢性疲勞症候群以及任何其他與方法的症狀中，不存在，就是對，運動感覺神經神經與神經肌肉的任何認知異常用之化合物的製契皂甘元，表異氣喘（asthma)，以及黃斑病變或預防方法，處定義所述的後的巴，重症本發明本發明於非認退化或缺損等症狀是備菝契皂上述人類或該方法包括的活性劑，治療或預防金森症，姿肌無力，與相關並已在受制於但書知神經退化在缺認知乏症狀來說，次要或補助非人類動物罹投與所述個體而且該活性劑〇勢性低血壓，蘭勃特-伊頓習知技術中揭 ’不是認知異，非認知神經下的受體異常個體所呈現並的。甘元與薩爾薩息元是市面第39頁 1329016 五、發明說明（35) 上可賭付的原料’供應廠商包括Sigma Aldrich，

Research Plus Inc.與Steraloids Inc.等公司。這些原料的製備方法也記載於文獻之中（例如，表薩爾薩皂元的製備記載於JACS p. 5225 (1959))。經由儲氫合金還原劑 (metal hydride reducing agent)將洋菝契皂苔元3酮 (sarsasapogenone)還原可製得表薩爾薩皂元。利用Ujis etal·’ Steroids’ 1 993，58，387-389.的方法可製得洋减契皂甘元3 酮（sarsasapogenone)。

作為初始原料之未取代的皂素與皂素配質也存在於一些天然的植物當中，尤其是菝契屬，天門冬屬 (Asparagus) ’ 知母屬（Anemarrhena)，絲蘭屬（Yucca)或龍舌蘭屬（Agave)屬。本發明使用的異菝契皂甘元或薩爾薩皂几可為菝契屬，天門冬屬，知母屬，絲蘭屬或龍舌蘭屬植物的萃取物形式，或乾粉末狀的植物原料。製備活性劑的方法是眾所周知的習知技術^可參考 WO-A-0 2/0 79 221中的實施例（其中的實施例5至16描述薩爾薩皂元曱酸乙S旨，表薩爾薩皂元甲酸乙 —酸鹽，.異较契…曱酸…鹽酸表=== 胺酸鹽（episarsasapogenin glycinate

hydrochloride)，鹽酸薩爾薩皂元甘胺酸鹽，鹽酸表異菝契息甘元甘胺酸鹽’鹽酸表異藉契皂甘元左型氨基丙酸鹽 (ep1Smilagenin L-alaninate) ’鹽酸表異菝契皂甘元左型绳=酸鹽，㈣表異藉契皂甘以型異白氨酸鹽，鹽酸表異拔契皂甘兀左型苯基氨基丙酸鹽’以及鹽酸表異菝契

1329016 五、發明說明（36) 息甘元左塑甲硫氨酸鹽）。分子式la之化合物（除了那些具有R = Η的化合物）可透過傳統技術從R = η的化合物製得。較好的反應是親核取代反應，其中，在位置3具有〇Η 的化合物與分子式L-R的化合物反應，R選自烧幾基；烧氧戴基；烧胺曱酿基；或芳幾基；或者其中之任何烧基可任意地以方基，胺基，早烧胺基（mono-alkyl-amino)，二炫胺基（di-alkyl-amino) ’羧酸殘餘物（-C00H)，或任何由此產生的結合作取代，而L疋脫離基團（leaving group)，適合作親核的取代作用。該L-R化合物可為羧酸，或者，在適當的情況下為酐 (anhydride) ’或醯基_化物（acyl halide)(例如：醯基氯化物）。舉例來說，當R為cathylate(乙氧羰基）基團時，L-R化合物可適當.地為氯曱酸乙g旨（ethyl ch1oroformate)。此反應適當地於驗（例如：卩比咬（pyridine))中完成，並任意地在酸（例如鹽酸）存在下完成。親核取代反應的詳細内容為習知技術。可參考實施例 RC Larock, in Comprehensive Organic Transformations, VCH publishers, 1989.。使用Marker and Rohrmann (1939), Sterol LIII 當中描述的方法可製得二氫薩爾薩皂元 (dihydrosarsasapogenin)；薩爾薩皂元的側鏈（side chain)結構可見J. Am. Chem. Soc. 61，ρρ 846-851.。使用Scheer et al.，（1955)當中描述的方法可製得

3002-5563-PF(Nl);Chiume〇vv.ptd 第41頁 1329016 五、發明說明（37) 16,22 -環氧糞固-3/5 -醇。異菝契皂甘元與薩爾薩皂元的碳25 同分異構性（isomerism)可見J. Am. Chem. Soc. 77, pp 641-646.。此處描述的反應必須保護反應的官能基（該官能基需存在於最後產物中，例如：羥基，羧基或胺基），以避免其參與不必要的反應。傳統的保護基可依照標準程序使用。相關内容可參考TW Green and PGM Wuts， in "Protective Groups in Organic Chemistry", John Wiley & Sons, 1991; JFW McOmie in "Protective Groups in Organic Chemistry", Plenum Press, 1 973.。為了保護分子式L-R化合物（其中之R為胺基取代）中的胺基取代基，最好使用烷氧羰基保護基《透過此保護基的作用，合成步驟中之胺基的功能如同烷氧羰胺基 (alkoxycarbony lamino group)，直到在酸性乾溶劑下的去保護基作用（deprotection)。如此製得的化合物可藉由傳統的方式重新從反應混合物獲得。例如，將反應混合物中的溶劑蒸餾去除，或者，如果有需要，在蒸餾去除反應混合物中的溶劑後，將殘餘物倒入水中，接著以水溶性溶劑萃取並且蒸餾去除萃取物的溶劑，則可重新獲得該化合物。此外，如果有需要，則進一步使用習知技術純化該產物，習知技術的例子有再結晶作用（r e c r y s t a 1 1 i s a t i ο η)，再沉澱作用 (reprecipitation)或各種層析技術，尤其是管柱層析法或製備式薄層層析法（preparative thin layer

3002-5563-PF(Nl);Chiumeow.ptd 第 42 頁 1329016 五、發明說明（38) chromatography) ° 對於活性基礎的討論（Discussion 〇f the Basis for the Activity) 本發明下的治療功能係來自一些新的觀察報告，這些報告詳細記載於以下實施例。為了解本發明的基本原理，本文將概述這些觀察報告’並且解釋在以上定義的活性劑範圍下，如何預測本發明所稱的治療活動（therapeutic activities) ° 異菝契皂甘元，表異菝契皂甘元，薩爾薩皂元與表薩爾薩皂元修補細胞中簟毒鹼乙醯膽鹼受體（muscarinic acetylcholine receptors)與腎上腺素受體 (adrenoceptors)的喪失，該細胞在體外（in vitr〇)表現此類爻體。這些結果顯示這些化合物修復受體至正常程度的細胞受體喪失（實施例1)。在體外（in vitro)的試驗中，薩爾薩皂元，表薩皂元曱酸乙酯，表薩爾薩皂元，表異菝契皂甘元以及異契皂甘元預防大鼠皮質神經元（c〇rtical neur〇nes)之化學上引發的神經退化。這些結果顯示這些化合物在體神經保護的化合物以及預防神經退化與神經缺損（實施例’’、、 2 ) ° 在體外（in vitro)的試驗中，薩爾薩皂元，甘7C ’16, 22-環氧糞固-3/3-醇，異菝契皂甘酮、 (smilagenone)，鹽酸異菝契皂甘元甘胺酸鹽與糞固轉大执皮質神經元之化學上弓丨發的神經退化。這些結果顯 3002-5563-PF(Nl );Chiumeow.ptd 第43頁 1329016

示該化合物在體外逆轉感覺神經退化與神經缺損（實施例異菝契皂甘元逆轉神經元中由化學引發的細胞凋亡 (apoptosis) ’證明此化合物在體外可抗細胞凋亡 (anti-apoptotic)以及具有神經保護作用（實施例4)。在體外試驗中，異菝契皂甘元與薩爾薩皂元增加大氣皮質神經元之軸突生成（neUrite outgrowth)(軸突數量與轴突分支）’證明它們在體外具有神經營養 (neurotrophic)作用（實施例5)。在體外試驗之中腦多巴胺性神經細胞 (mesenchephalic dopaminergic neurones)中，異菝契 | 甘元與薩爾薩皂元預防以及逆轉由神經毒素引發的 (neurotoxin-induced)神經退化，該神經毒素為1-曱基 -4-苯基卩比咬（l-methyl-4-phenylpyridinium (MPP+))。這些結果證明這些化合物在體外能預防與逆轉神經退化以及神經缺損（實施例6與7)。在體外試驗中，薩爾薩皂元與異菝契皂甘元逆轉大鼠脊髓運動神經元（spinal motor neurones)中化學上弓I名务的神經退化。這些結果證明這些化合物在體外逆轉運動神經元的神經退化與神經缺損（實施例8 )。在體内（in vivo)的認知能力試驗（cognitive ability test)中，薩爾薩皂元，表薩爾薩皂元甲酸乙酯與異菝契皂甘元會減少老年大鼠的錯誤反應，此結果與投與老年大鼠試驗的化合物之後，大鼠腦中的蕈毒鹼乙醯膽

3002-5563-PF(Nl)；Chiumeow.ptd 第44頁 1329016 五、發明說明（40) 鹼受體密度增加有關。這些結果證明這些化合物在體内逆轉神經缺損（實施例9 )。異菝契皂甘元與薩爾薩皂元逆轉老年動物之簟毒鹼乙醯膽鹼受體與多巴胺受體的減少以及腦源性神經營養因子 (brain derived neurotrophic factor, BDNF)的減少 ° 這些結果證明該化合物在體内逆轉運動感覺神經退化與神經缺損以及具有神經營養的特性（實施例9 )。在體内（in vivo)的認知能力試驗（cognitive ability test)中，表薩爾薩皂元曱酸乙酯，薩爾薩皂元甲酸乙酯’表薩爾薩皂元與表異菝契皂甘元會減少暴露於神經毒劑（neurotoxic agents)(鵝膏簟酸（ibotenic ac i d)與類澱粉（amy loid))之年輕大鼠的錯誤反應次數，並且增加腦中簟毒鹼乙醯膽鹼受體密度。這些結果證明這些化合物在體内逆轉神經缺損（實施例1 〇 )。在肌萎縮側索硬化症與夏柯—馬利-杜斯氏病的小鼠模式中’異菝契皂甘元與薩爾薩皂元增加小鼠存活率以及改善運動感覺神經退化與神經缺損（實施例11 )。簡而s之’這些化合物會減緩或逆轉某些神經元的退化。這些包括：在細胞體中有害變化的逆轉，神經元延伸的萎縮（軸突）’神經營養因子的釋出減少（該神經營養因子如·腦源性神經營養因子，神經生長因子（N g F )，神經營養素-3(NT-3) ’神經營養素4/5(NT4/5)等神經營養素 (neurotrophins)) ’轉型生長因子-/3超族神經營養因子 (TGF-^ super-family neurotrophic factors)(例如：

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第45頁 1329016 五、發明說明（41) 睫狀神經營養因子（CNTF)，白血病抑制因子（LIF))，以及神經元毒，或死亡（凋亡）。這些化合物具有極大的神經保 β蔓特性’成刺激軸突生成’以及預防神經毒性。這些化合物也可以減緩或逆轉膽鹼能（cholinergic)與多巴胺能 (dopaminergic)功能的減小，例如’減少蕈毒鹼乙醯膽鹼與夕巴胺文體岔度。此外，我們發現神經保護與受體喪失的逆轉=用為主動調節的作用，它會將過去惡化的狀況逆轉成正吊或年輕的狀態’防止持續地惡化。另外，我們發現該化合物之凋亡作用的逆轉似乎在細胞生命（ce i 1 ljfe)的非贅生的區域（n〇n_ne〇plastic d〇main)受到調節’並且有可能引起腫瘤形成（ne〇plasia)。綜合以上的數據，有關對抗疾病狀態的活性 (=CtivityJ)已列於本說明書内。此外，以上的數據顯示可能不會有嚴重或威脅生命的副作用，如癌症。該活性劑是典型地非雌激素的（n〇n_〇estr〇genic)活性劑。以上所述的習知技術顯示對於上述觀察之延伸所作之預測的合理基礎，以及顯示包含在本發明"活性劑"項目内’相關化學結構與衍生物之治療活動的合理預測。在習知技術與藥理學中，類固醇分子上位於適當位置 (特別是位置3和/或26)的糖，s旨（ester)與其他基團，在體内可經由水解輕易地裂解，而在分子的其他碳原子也預期會有相同的作用❶此外，在習知技術與藥理學中，根據活性劑存在之體液的p Η值，在此處使用之"活性劑"範圍内的鹽類’游離酸與游離鹼立刻在體内彼此轉換。此外，眾

3002-5563-PF(Nl);Chiumeow.ptd 第46頁 1329016

所周知地，以廣泛形式表現的側某取> 五、發明說明（42) 死〜W巷取代基可以複合的烷架構（complex carbon skeleton)存在，而且大體上不合對該結構的藥理活性有不良的影響’尤其是當側基小於s整個分子之大小時。由於所有這些原因，本申請書提出之有益的藥理學活性申明專利範圍疋適當的，並且以此處收集與呈現之測試數據為合理和可信預測的基礎。

不希望受到理論的限制，一般相信活性劑之一生理作用為增加神經營養因子（例如：腦源性神經營養因子和/或神經生長因子或其受體）之合成、釋放或降低退化速度的能力。這些在生長因子上的作用可能是由於化合物對於細胞 /谷質或核受體（cytosolic or nuclear receptor)的作用’或一化合物連結至促進區域（pr〇m〇ter region)後直接影響生長因子之信使核醣核酸（mRNA)的產生速率，或是增加另一原料因子（material fac1：〇r)的結果。此外，該化合物似乎會調節受體，例如’有些化合物會預防或逆轉腦中蕈毒鹼乙醯膽鹼與多巴胺受體的喪失。一般相信該化合物係藉由改正受體數量或功能或轉換率之不足以行使其作用。為讓本發明之上述和其他目的、特徵、和優點能更明顯易懂’下文特舉出較佳實施例，並配合所附圖式，作細說明如下：實施例1 體外試驗中受體喪失的修復

1329016 五、發明說明（43) 本文研究表異菝契皂甘元曱酸乙酯，薩爾薩皂元甲酸乙酯，表薩爾薩皂元曱酸乙酯，表薩爾薩皂元琥拍酸鹽，表異菝契皂甘元醋酸鹽與薩爾薩皂元對於蕈毒鹼乙醯膽鹼受體（m)在中國倉鼠卵巢細胞（CHO cell)或/32與m3受體在中國倉鼠卵巢細胞之表現上的影響。其中，對於m受體，該中國倉鼠卵巢細胞以一媒介（vector)轉移感染 (transfected)，或者，對於点2與m3受體，中國倉鼠卵巢細胞以該媒介共轉移感染（co-transfected)。其結果以下列表1與圖1說明。對於m受體來說，在中國倉鼠卵巢細胞以一媒介轉移感染的培養期間，給與表異菝契皂甘元甲酸乙酯，薩爾薩皂元曱酸乙酯，表薩爾薩皂元甲酸乙酯，表薩爾薩皂元琥珀酸鹽，與薩爾薩皂元，每一個化合物都預防m受體數量的減少。對於/5 2與m3受體來說，在中國倉鼠卵巢細胞以該媒介共轉移感染的培養期間，m3受體的密度並未改變；而/52腎上腺素受體的密度減少。以表異菝契皂甘元醋酸鹽培養（圖1 )未明顯改變m3 受體的密度；但卻明顯防止/3 2腎上腺素受體的減少。 _ 表1-表異菝契皂甘元甲酸乙酯，薩爾薩皂元甲酸乙酯，表薩爾薩皂元曱酸乙酯，表薩爾薩皂元破珀酸鹽，與薩爾薩皂元對於m型乙醯膽鹼受體密度之修復的影響

3002-5563-PF(Nl) ;Chiumeow.ptd 第48頁 1329016 五、發明說明（44) 化合物濃度(微摩爾.mic「oM) 活性(activity) 表異薇契皂甘元甲酸乙酯 10 + + 薩爾薩皂元甲酸乙酯 10 + + 表薩爾薩皂兀甲酸乙酯 10 + + 表薩爾薩皂7C琥珀酸鹽 r 1〇 + + 薩爾薩皂元 10 + + 因此’此實驗顯示表異菝契皂甘元曱酸乙酯，薩爾薩皂元曱酸乙酯，表薩爾薩皂元甲酸乙酯，表薩爾薩皂元琥拍酸鹽’表異菝契皂甘元醋酸鹽與薩爾薩皂元能預防受體數量隨時間下降’同時當細胞内的受體減少，也能修復受體數量至正常量。實施例2 薩爾薩皂元，表薩爾薩皂元曱酸乙酯，表薩爾薩皂元，表異菝契皂甘元與異菝契皂甘元在神經元中的神經保護作用此研究的目的在檢測薩爾薩皂元’表薩爾薩皂元曱酸乙醋’表薩爾薩皂元’表異菝契皂甘元與異菝契皂甘元對於初級皮質神經元暴露在麩胺酸鹽（已知糙胺酸鹽會引發神經退化）之大鼠存活率的影響。將大鼠皮質神經元培養10天；在第10天將培養基改變成無血清的培養基（serum-free defined medium)。在第 1 2天’即暴露於麩胺酸鹽前24小時，將培養基洗掉，並以包含陽性控制組（positive control)( /9 -雌二醇（沒 -oestradiol)) ’測試化合物（薩爾薩皂元，表薩爾薩皂元曱酸乙酯，表薩爾薩皂元，表異菝契皂甘元與異较契皂甘元）或賦形劑控制組（二甲基亞楓（DMS0)，25%)或陰性控制

遞-5563-pF(Nl);Chiumeow.ptd 第49頁 1329016 五、發明說明（45) 組（皂甘（diosgenin))的新鮮培養基替換。在第13天將培養物暴露於麩胺酸鹽。培養期之後，即暴露於麩胺酸鹽24小時後，洗掉培養基並置於新鮮培養基，補充適當的化合物或賦形劑以評估其保護效果。透過測量乳酸脫氫（lactate dehydrogenase, LDH)的活性’可評估神經元細胞的存活率。在培養基中活性的釋放是給與測试化合物或暴露於楚胺酸鹽與測試化合物2 4小時之後’利用CytoTox 96非放射性套組（CytoTox 96 non-radioactive kit)測得’並在吸光波長（wavelength absorbance)為450nm時將其定量。在將大鼠初級皮質培養物暴露於麩胺酸鹽之後，皮質神經元有明顯的退化現象，處理後2 4小時，證明由於乳酸脫氫釋放至培養基而使皮質神經元增加。以化合物前處理（pre-treated)初級皮質培養物24小時，也會明顯減少由麩胺酸鹽引發的神經退化現象（圖2 ; 表2)。表2-薩爾薩皂元，表薩爾薩皂元甲酸乙酯，表薩爾薩皂元’表異菝契皂甘元與異菝契皂甘元對於由麩胺酸鹽引發之神經退化的影響

3002-5563-PF(Nl) ；Chiumeow.ptd 第50頁 1329016 五、發明說明（46) 條件平均値±標準誤平均 (Meant s.e.m)(%) 控制組 100 +麩胺酸鹽 66t 3 +麩胺酸鹽+薩爾薩皂兀(3〇nM) 79± 3 控制組 100 +麩胺酸鹽 65t 3 十麩胺酸鹽+表薩爾薩皂元甲酸乙酯(3〇nM) 74t 3 控制組 100 +麩胺酸鹽 68t 4 +麩胺酸鹽+表薩爾薩皂元(3〇nM) 88t 3 控制組 100 +麩胺酸鹽 71± 2 +麩胺酸鹽+表異菝契皂甘元(30η M) 79t 2 控制組 100 +麩胺酸鹽 68t 4 +麩胺酸鹽+異薇契皂甘元(30ηΜ) 91t 4 控制組 100 +麩胺酸鹽 68± 4 +麩胺酸鹽+息甘(3〇ηΜ)陰性控制組 72± 4 在大鼠初級皮質神經元的體外試驗中，薩爾薩皂元，表薩爾薩皂元甲酸乙酯，表薩爾薩皂元，表異菝契皂甘元與異菝契皂甘元全都表現出明顯的神經保護作用，防止由麩胺酸鹽引發之神經退化的現象。實施例3 薩爾薩皂元，異菝契皂甘元，16, 22 -環氧糞固-3/? -醇，異菝契皂甘酮，鹽酸異菝契皂甘元甘胺酸鹽與糞固醇對於神經元中神經退化的逆轉如以上所述，暴露於麩胺酸鹽（100微摩爾（//M) ;10 分鐘）的大鼠初級皮質培養物，在2 4小時後，經由檢測發現其乳酸脫氫的活性增加，表示有明顯的神經退化現象。

3002-5563-PF(Nl);Chiumeow.ptd 第51頁 1329016 五、發明說明（47) 與暴露於麩胺酸鹽的神經元相比較，暴露於麩胺酸鹽後再給與1 7 /3 -雌二醇，其乳酸脫氫的活性明顯地減少，這表現了明顯的神經保護作用。同樣地，與暴露於糙胺酸鹽的神經元相比較，給與薩爾薩皂元，異菝契皂甘元，1 6，2 2 -環氧糞固-3冷-醇，異菝契皂甘酮，鹽酸異菝契皂甘元甘胺酸鹽與糞固醇之後，其乳酸脫氫的活性明顯地減少，這表現了明顯的神經保護作用（表3 )。表3 -不同化合物對於預先暴露於麩胺酸鹽之皮質神經元的影響 #

3002-5563-PF(Nl);Chiumeow.ptd 第52頁 1329016 五、發明說明（48) 條件平均値t標準誤平均 (Meant s.e.m)(%) 控制組 100± 4 麩胺酸鹽[1〇〇以叫 66± 2 麩胺酸鹽+17办-雌二醇[3nlVl] 69± 2 麩胺酸鹽+17石-雌二醇[30ηΜ] 75t 5 控制組 100± 1 麩胺酸鹽[1〇〇" Μ] 67± 3 麩胺酸鹽+薩爾薩i兀[3ηΜ] 101t 3 麩胺酸鹽+薩爾薩息元[3〇_ 112+ 1 麩胺酸鹽+異菝契島甘元ΡηΜ] 109+ 6 麩胺酸鹽+異菝契昼甘元[3〇nlVl] 104± 1 控制組 100土 8 麩胺酸鹽[1M 4 M] 40t 1 麩胺酸鹽+皂甘[3〇nM,陰性控制組] 49± 6 控制組 100+ 5 麩胺酸鹽[1〇〇 βΜ] 64t 4 懸胺酸鹽+16,22-環氧糞固-3；5-醇[3_] 114+ 7 麩胺酸鹽+1S ,22-環氧糞固-3办-醇[30ηΜ] 134± 7 麩胺酸鹽+異菝契S甘酮[3ηΜ] 119± 7 麩胺酸鹽+異菝契島甘酮[3〇ηΜ] 119+ 4 控制組 100+ 4 麩胺酸鹽 58± 3 麩胺酸鹽+鹽酸異薇契皂甘元甘胺酸鹽[3ηΜ] 117± 4 麩胺酸鹽+鹽酸異藏契皂甘元甘胺酸鹽[3〇ηΜ] 141+ 6 麩胺酸鹽+糞固醇ΡηΜ] 126± 5 麩胺酸鹽+糞固醇[3〇ηΜ] 116t 4 總而言之，薩爾薩皂元，異菝契皂甘元，16, 22 -環氧糞固-3冷-醇，異菝契皂甘酮，鹽酸異菝契皂甘元甘胺酸鹽與糞固醇逆轉大鼠初級皮質神經元中由麩胺酸鹽引發的神經退化，表現其對於神經退化疾病的治療潛力。實施例4 異菝契皂甘元在神經元的抗細胞凋亡作用

3002-5563-PF(Nl);Chiumeow.ptd 第53頁 1329016 五、發明說明（49) ^本研究的目的疋要檢測在大鼠初級皮質培養物中，異较契息甘兀在硫脱氨酸蛋白梅_3(caspase_3)(細胞凋亡的標記）上的抗細胞凋亡作用。皮質神經元的初級培養物將大鼠皮質神經元培養6天，在第6天加入麩胺酸鹽 (1 0 0微摩爾；1 0分鐘），然後洗掉培養物，再將培養基換成含有異菝契皂甘元或賦形劑控制組（二曱基亞楓， 0. 2 5%)的新鮮培養基，經過6小時後，測量硫胱氨酸蛋白晦-3的活性以評估細胞凋亡的情況。從色度的硫胱氨酸蛋白晦-3 文質（colorimetric caspase-3 substrate)，乙醯 -天冬氨酸-榖氨酸-纈氨酸-天冬氨酸對硝基醢替苯胺 (acetyl_Asp-Glu-Val-Asp p-nitroani 1 ide)上打斷對硝基笨胺（p-ni troani 1 ine)可偵測到硫胱氨酸蛋白腾-3的活性。對硝基苯胺在40 5nM具有高吸收值。相對的硫胱氨酸蛋白腾-3活性係以光學密度測得。除了將硫胱氨酸蛋白臃 -3的相對活性標準化外，樣本的蛋白質濃度也可以光學密度測量（Du et al.，J Neurochem.，69，1 382-1 388， 1997; Sawada et al.， Faseb J.， 14， 1202-1214， 2000)。異菝契皂甘元逆轉在大鼠初級皮質神經元中麵胺酸鹽引發的硫胱氨酸蛋白梅-3活性的增加，顯示異菝契皂甘元具有抗細胞凋亡作用（表4 )。表4 -異菝契皂甘元對於皮質神經元中麩胺酸鹽引發的硫胱氨酸蛋白腺-3活性的影響

3002-5563-PF(N1);Ch i umeow.p td 第54頁 1329016

條件硫胱氛酸蛋白晦活性 (對控制組的百分th) 控制組 100 +_酸鹽 131 +_酸鹽+異菝契皂甘兀(300ntvn 105 實施例5 神經退化疾病的特色是神經元的逐漸喪失以及神經_ 隆起（軸突）的減少。能引發軸突生成的藥劑可促進神經$ 間的連結’以及改善神經退化的症狀（K a t z m a n e t a 1 Faseb J.， 5， 278-286， 1991)。 ’ 將大鼠的初級皮質神經元暴露於17冷-雌二醇（0.3， 3 ’ 30pM)會明顯增加存在軸突的長度（表5)，將大鼠的初級皮質神經元暴露於1 7冷-雌二醇（3，3 0pM)會明顯増加表現軸突之神經元的百分比（表6 ) *將大鼠的初級皮質神經元暴露於異菝契皂甘元與薩爾薩皂元（〇.3，3，30 pM)，會明顯增加存在軸突的長度以及表現轴突之神經元的百分比 (表5與6)。總而言之，異菝契皂甘元與薩爾薩皂元在體外具有神經營養作用。表5 -利用光學測微法（〇 p t i c a 1 m i c r 〇 m e t r y)測量1 7 /5 -雌二醇，異菝契皂甘元與薩爾薩皂元對於軸突長度的影響

1329016 五、發明說明（51) 條件長度控制組 100± 4 17石-雌二醇(0.3pM) 154± 5 17/3-雌二醇(3pM) 163± 4 17/3-雌二醇(3(^1\/1) 183t 5 異菝契皂甘元(〇.3pM) 159± 5 異菝契皂甘元(3pM) 190t 8 異薇契皂甘元(3〇pM) 204t 6 薩爾薩皂元(〇.3pM) 177t 5 薩爾薩皂元(3pM) 197t 5 薩爾薩皂元(30pM) 211t 6 -雌二醇，異菝契皂 .神經元數量的影響條件數目控制組 47± 2 17石-雌二醇(0.3卩1\/1) 48± 2 17/3-Ht-g|(3pM) 60± 2 17石-雌二醇(30卩(^) 59± 2 異菝契息甘元(〇.3pM) 63t 2 異菝契皂甘元(3pM) 63± 2 異薇契皂甘元(3 Op Μ) 66± 2 薩爾薩皂元(〇.3ρΜ) 55± 2 薩爾薩皂元(3ρΜ) 61± 1 薩爾薩皂元(30ρΜ) 62± 2 _ 實施例6 在體外之帕金森氏症的模式中，異菝契皂甘元與薩爾薩皂元預防大白鼠中腦的（mesencephalic)多巴胺能神經元在暴露於神經毒素（neurotoxin)，1-曱基-4-苯基卩比咬 (MPP+)之後產生的神經退化。

3002-5563-PF(Nl) iChiumeow.ptd 第56頁 1329016 五、發明說明（52) 由神經毒素，1_曱基-4 -苯基吡啶，1-曱基-4苯基-1， 2, 3,6 -四氫D比啶 (l-methyl-4-phenyl-l，2, 3，6-tetrahydropyridine， MPTP)之代謝物引發的損傷在神經退化疾病（例如：帕金森氏症）中，呈現紋狀體多巴胺能神經元（nigrostriatal dopaminergic neurones)的退化現象（Mytinlineou et al.，Science, 225，529-531, 1984)。由此毒素引起之最顯著的生化改變包括多巴胺及其於黑質致密區 (substantia nigra pars compacta)與尾核（caudate nucleus)的代謝物減少（Burns et al.，Proc Natl Acad Sci U.S. A.，80，4546-4550，1 98 3) ’ 以及在紋狀體神經突觸（synaptosomal)製造中多巴胺攝入的減少（He ikkila et al.， J Neurochem.， 44， 310-313， 1985)。與單獨給與1-甲基-4-笨基吡啶組相比，以異菝契皂甘元與薩爾薩皂元對多巴胺能神經元作前處理，會明顯降低暴露於特定多巴胺能神經毒素丨―甲基_4-苯基吡啶（2 # Μ )後產生的神經元死亡現象。神經膠質細胞神經營養因子 (Glial cell line-derived neurotrophic factor, GDNF)與腦源性神經營養因子，與神經元生長有關的分子皆作為陽性控制組。與單獨暴露於卜曱基—4_苯基吡啶的神經7C相比，以異菝契皂甘元與薩爾薩皂元作前處理，其神經元的存活明顯地增加（表7 )。表7-以腦源性神經營養因子與神經膠質細胞神經營養因子，異菝契皂甘元與薩爾薩皂元前處理對於暴露於丨_曱基

1329016 五、發明說明（53) -4-苯基吡啶之多巴胺能神經元的影響條件存活控制組 100± 3 + 1-甲基-4-苯基吡啶(24 M) 55± 3 + 1-甲基-4-苯基吡啶(2“ M)+腦源性神經營養因子 (1 ·85ηΜ)&砷經膠質細胞神經營養因子(0.17nM) 122± 7 +1-甲基-4-苯基吡陡(2y M)+異藏契甘元(3〇nM) 98t 4 +1-甲基-4-本基吡啶卩“ M)+睦爾暱层兀(3〇nlvn 89t 3 一 _…也朴a 7瓜饮八τ ，M兴拔哭县甘兀興薩爾薩皂元前處理可明顯預防暴露於特定多巴胺能神經毒素i _ 甲基-4-苯基吡啶之後所產生的神經元退化，證明盆' 保護的作用。、實施例7 薩皁在Γ夕，卜5帕金森氏症的模式巾’異菝契皂甘元與薩爾辛1 产鼠中腦的多巴胺能神經元在暴露於神經毒 H基卩比樣p+)之後產生的神經退化。獨給與卜甲基_4_苯基吡啶組相比，甘兀與薩爾薩皂元處理多呉祓Θ皂露於特定神經毒辛广；胺月“申經疋，▼明顯降低在暴生的神經元死亡素1神：；暂4:苯基哦靡P+)(^M)之後產經營養因子，盘神έ_質、、田胞神經營養因子與腦源性神皆作為陽性控制I經分子，與17,雄二醇神經元相比，給與異+路於*甲基4~苯基吡啶的神經元的存活（表^)、。、皂甘70與薩爾薩皂元會明顯增加表8-給與腦源性神子，異菝契皂甘元二子與神經膠質細胞神經營養因，兔爾薩皂元與17点-雌二醇對於暴露

3002-5563-PF(Nl)；Chiumeow •Ptd 第58頁 1329016 五、發明說明（54) 於卜曱基-4-苯基吡啶之多巴胺能神經元的影響條件存活控制組 100t 6 +1-甲基-4-苯基吡啶(2p M) 76± 4 +1 —甲基_4-苯基吡啶(2 a M)+腦源性神經營養因子 (1.85n M)&i申經膠質細胞神經營養因子(0.17n M) 98t 5 +1 -甲基-4-苯基吡陡(2 4 M)+異菝契皂甘元(0.03nM) 111± 6 +1 -甲基-4-苯基吡陡(2 β M)+薩爾薩息元(0.03ηΜ) 112t 6 +1-甲基-4-苯基吡啶(2以Μ)+17谷-雌二醇(0.03ηΜ) 106t 5 暴露於卜曱基-4-苯基吡啶不但引起多巴胺能數量明顯地減少，而且也使軸突百分比減少。本研究顯示異菝契皂甘元與薩爾薩皂元在體外明顯地增加神經元的軸突數量 (表9 )，這些結果顯示該化合物逆轉運動神經退化。表9 -異菝契皂甘元與薩爾薩皂元對於暴露於卜甲基-4 -苯基吡啶（2 # Μ)之多巴胺能神經元軸突百分比的影響條件軸突百分比控制組 41± 4 + 1-甲基-4-苯基吡啶(2以Μ) 27± 5 + 1-甲基-丰苯基％啶(24|\/|)+異菝契皂甘元(0.03ηΜ) 41± 4 +1 -甲基-4-苯基吡陡(24 Μ)+薩爾薩息元;(0.03ηΜ) 43± 4 實施例8 薩爾薩皂元與異菝契皂甘元在脊髓運動神經元的神經保護

本研究的目的在檢測薩爾薩皂元與異菝契皂甘元對於暴露於麩胺酸鹽之大鼠初級脊髓運動神經元的存活，已知此運動神經退化模式會引發神經退化。以1 7 /5 -雌二醇與腦源性神經營養因子為陽性控制組。

3002-5563-PF(Nl);Chiumeow.ptd 第59頁 1329016 五、發明說明（55) 脊髓運動神經元的初級培養物根據Martinou 等人之論文Neuron, 8，737-744, 1 992 所描述的方法準備大鼠運動神經元’在第1〇天移除培養基並在37 C下於特定培養基中，將培養物暴露於麩胺酸鹽（4微摩爾）1〇分鐘。暴露於麩胺酸鹽之後在37。匚下以

Dulbecco 改良細胞培養液（Duibecco modified Eagle med 1 um)清洗培養物’然後置放入含有測試化合物的新鮮培養基。經過48小時後，經由測量釋入上述培養基的乳酸脫氫可確定脊髓運動神經元退化的程度。

結果故在暴露於麩胺酸鹽之後，48小時的後處理，由乳酸脫氫釋入培養基的增加，顯示大鼠初級脊髓運動神經元有明顯的退化現象。以薩爾薩皂70或異菝契皂甘元處理大鼠初級脊髓運動神”二48小時，由麩胺酸鹽弓丨發的神經退化有明顯的減少 C 表 1 0 ) 〇表10 -薩爾薩皂元與異菝契皁#_ ^ ^ ,^ ^ 甘兀對於合髓運動砷經元中由麩胺酸鹽引發之神經退化的作用、

3002-5563-PF(Nl);Chiumeow.ptd

1329016 五、發明說明（56) 條件神經退化控制組+二甲基亞楓[0.25%] 100t 1 结胺酸鹽[4微摩爾]+二甲基亞楓[0.25%] 94t 1 _酸鹽+腦源性神經營養因子[3_] 148± 8 结胺酸鹽+17 /3 -雌二醇[0.03nM] 102± 2 结胺酸鹽+17 /3 -雌二醇[3πΜ] 110+ 1 @胺酸鹽+17 /3 -雌二醇[300πΜ] 116± 6 替胺酸鹽+薩爾薩皂元[0.03ηΜ] 123t 2 替胺酸鹽+薩爾薩皂元[3ηΜ] 137t 1 替胺酸鹽+窿爾薩皂元[300ηΜ] 136± 6 替胺酸鹽+異菝契皂甘元[0.03ηΜ] 128± 4 替胺酸鹽+異菝契皂甘元[3ηΜ] 154± 1 _酸鹽+異菝契皂甘元[300ηΜ1 144± 4 在此體外的運動神經退化模式中，薩爾薩皂元與異菝契皂甘元逆轉在大鼠脊髓運動神經元中由麩胺酸鹽引發的神經退化。實施例9 在生命的後半段時期（人類的4 0歲左右），腦中的神經元密度減少（Selkoe，D J, Sci. Am. 267， 1 34-1 42， 1 9 9 2 )。皮質功能的改變是由於神經元數量的減少，其互相連接減少’神經營養素（例如：腦源性神經營養因子； Bothwe11, M, Functional interactions of neurotrophins and neurotrophin receptors, Annu.

Rev. Neurosci.， 18， 223-253， 1 995 )的減少，乙醯膽鹼受體密度（蕈鹼與菸鹼受體）減少和/或在皮質區域結合功能的減少（Rinne et al.， Brain Res.， 336， 19-25， 1985; Selkoe， D J， Sci. Am. 267， 134-142， 1992)。

3002-5563-PF(Nl);Chiuineow.ptd 第61頁 1329016 五、發明說明（57) 此外在年紀變老期間’較老的大鼠（B i egon e t a 1.， Neurobiol. Aging.，10，30 5-3 1 0，1 989 )與人類（Rinne et al.，Brain Res.，336， 19-25，1985)之海馬體 (hippocampus)(Narang, N, Mech. Ageing Dev.，78， 221-239， 1995)與紋狀體（striatum)當中，蕈毒驗乙醯膽驗受體的結合明顯地減少。另外，在阿茲海默症當中，膽鹼的活性降低與類澱粉沒斑沉澱物（amyloid 0 plaque deposition)(von der Kammer et al., Biochem. Soc. S y m p. 1 3 1 - 1 4 0，2 0 0 1 )有關。其他的神經退化疾病，例如帕金森氏症，表現了多巴胺能活性降低的特性（Drukarch et al., Expert. Opin. Investig. Drugs, 10, 1855-1868,2001)。口服給與老年大鼠（Sprague-Dawley大鼠，20個月大）薩爾薩皂元，表薩爾薩皂元曱酸乙酯或異菝契皂甘元，在一或二個月之間會逆轉老化過程中會改變的特徵，例如：學習與s己憶能力缺損’簟毒驗乙醯膽驗與多巴胺受體減少以及神經營養素腦源性神經營養因子降低。將老年大鼠分成不同組，一組為控制組，其他組分別給與薩爾薩皂元，表薩爾薩皂元曱酸乙酯或異菝契皂甘元 (18毫克公斤-1天-1，n=1〇)2_3個月。另外一組控制組 (n^l 4 )為未給藥的年輕大鼠。每日給與的藥劑皆混合在最小量的食物中’於每天早上分別餵食每隻大鼠。以Υ型電迷宮裝置（Y_maze apparatus)作學習與記憶 ’則減在Y型電迷宮每一個支臂的層板（floor)上是一列銅

第62頁 1329016 五、發明說明（58) 棒’當有需要時’能供應電流於該銅棒，調整至所需要的電t °每一個支臂長45公分，在其末端有一個15 E(w)的燈’需要時此燈便打開。給藥3個月之後，依照下列方式連續7天訓練每隻大鼠。在每一次訓練期間，將大鼠放入γ 型電迷宮的一個支臂，休息2分鐘之後，供應一電流至銅棒’同時’順時針方向支臂的燈亮起以顯示未刺激區域 (non-stimulation area)。如果大鼠進入那個支臂，就記錄為一次正確反應（correct response)，否則就記錄為一次錯誤反應（wrong response)。每天重覆20次此刺激反應測試（st i mu 1 at i on-response test)，每二次連續測試之間t斷5秒鐘。在第7天經過2 0次測試後，得到的正確反應數目即用以表示學習能力（數目愈高表示學習能力愈好）。然後讓大鼠休息3 0天，再重覆此步驟。休息3 〇天之後再作 2 0次測試’得到的正確反應數目即用以表示記憶能力。接下來測量腦中的蕈毒鹼乙醯膽鹼受體密度。組織的準備方式如下：將大鼠斷頭後迅速取出腦，冰在乾冰内，並轉移至冰箱。將腦均質化，而其顆粒狀物質最後會懸浮在缓衝液中。以雙位競爭性配體結合分析法（dua卜si te competitive ligand binding assay)測量蕈毒鹼乙醯膽鹼受體密度。其結果顯示於圖3與圖4 型電迷宮實驗顯示老年大鼠的學習能力與記憶力都減弱。在給與老年大鼠薩爾薩矣元，表薩爾薩皂元甲酸乙醋與異藉契喜甘元之後，修復了

3002-5563-PF(Nl);Chiumeow.ptd 第63頁 1329016 五、發明說明（59) 大鼠的學習與記憶能力。老年大鼠的蕈毒鹼乙醯膽鹼受體密度有顯著下降的現象。薩爾薩皂元’表薩爾薩皂元曱酸乙酯與異菝契皂甘元修復了蕈毒鹼乙醯膽鹼受體密度。與老年大鼠^與1)2分別為129. 2 ± 36, 8 ; 153. 8 土 40· 5fmol/毫克蛋白質）相比，年輕大鼠明顯表現較高的多巴胺（D)l與2受體密度（分別為157. 5± 33.2 ; 200. 6土 50. 9fmol /毫克蛋白質）。相比之下，給與異菝契皂甘元與薩爾薩皂元3個月的老年大鼠修復了1)1與〇2受體密度（異菝契皂甘元組分別為177± 10.9 ;217±45.7fmol /毫克蛋白質；薩爾薩皂元組分別為172.0± 44.0 ;206.4土 60. 5fmol/毫克蛋白質）。與老年大鼠相比（I 20 5 ± 〇. 21 9ng /克組織），年輕大鼠明顯表現較高程度的腦源性神經營養因子. 6 4 7 土 ο^Λ7711?/克組織）。相比之下’給與異较契皂甘元與薩爾裎产Γ八：年大鼠部分修復了腦源性神經營養因子

因此，0± 0.232ng/克組織）。源性神經營養因子程^ ^老年大鼠之神經缺損，腦巴胺受體密度減少的^象降以及簟毒鹼乙醯膽鹼與多實施例1 0 以阿兹海默症模式為神經退化的楔以一體内的阿茲海默症模式Α Γ 模式中’將神經毒劑(類殿粉''斑為珅：退化的模式。在此腦，這會導致神經元的喪森'續膏蕈酸）注射入大鼠的人體喪失與認知缺損。之前

第64頁 1329016

的研九顯示在大鼠腦中的脈管核（nilcieus vasalis)；^^ 注射類澱粉谷後’在長達2個月期間會導致膽鹼能的機3 不足與行為缺損（Giovannelli et al., 1995: 匕

Neuroscience, M，78卜792)。另外，將類澱粉万連同少量的鵝膏蕈酸一起注射入大鼠的海馬體，不但在鄰近注射部位’而且也在遠離注射部位處產生神經元喪失以及神經膠貝細胞（glial cells)的滲透（Morimoto et al.， 1998. Neuroscience, 84, 479-487)。我們的研究使用Morimoto的方法（Morimoto et al., 1 998: Neuroscience, ϋ, 479-48 7)，並經過一些修改 (以單邊注射取代雙邊注射）。將3個月大的Sprague Daw ley大鼠隨意分成不同組別，以立體定位儀 (stereotaxic instrument)(Stoelting Co.)完成進行類澱粉石ho與鵝膏蕈酸（皆來自Sigma)的注射，其定位座標為ΑΡ = -〇· 5毫米（mm)(由中線往右），L = -2. 8毫米（由前囪 (bregma)往後），H = -7. 0毫米（由硬膜往腹面方向）。每隻大鼠的給藥劑量為每1微升（以1 )的生理食鹽水中含4微克類澱粉仏,與1微克鵝膏簟酸。在20分鐘内完成注射，10 分鐘之後抽出針頭，然後將皮膚縫合。這八組為：手術給與生理食鹽水的控制組（控制組）模式組（mode 1 )(控制組再給與類澱粉/5與鵝膏簟酸）模式組+表薩爾薩皂元甲酸乙酯（18毫克/公斤/天模式組+薩爾薩皂元曱酸乙酯（18毫克/公斤/天）*

3002-5563-PF(Nl) ;Qiiumeow,ptd 第65頁 1329016 五、發明說明（61) 模式組+表薩爾薩皂元乙基琥珀酸鹽（18毫克/公斤/ 天）（比較組）模式組+表薩爾薩皂元（18毫克/公斤/天）* 模式組+表異菝契皂甘元（18毫克/公斤/天）* 模式組+皂甘（即陰性控制組，18毫克/公斤/天） *與本發明一致的化合物

將表薩爾薩皂元曱酸乙酯，薩爾薩皂元甲酸乙酯，表薩爾薩皂元乙基琥珀酸鹽（對照化合物），表薩爾薩皂元，表異菝契皂甘元與皂甘（所有劑量皆為18毫克/公斤/天）以溶於羧甲基纖維素鈉（CMC-Na)(0. 5%)之穩定懸浮液形式經由胃管（gastric tube)餵食大鼠，每天餵食一次。給與控制紅與模式組大鼠相同體積的羧甲基纖維素鈉（〇. 5%)，每天給與一次。在手術前2 〇天，開始給與藥物與賦形劑兩個月時間。接下來評估簟毒鹼乙醯膽鹼受體的密度。將腦部樣本均質化、離心，然後將2 7 0 0 0 X g離心後的顆粒狀物質再均質化’並測量之。二苯羥乙酸奎中酯（3H-QNB)的濃度選擇在飽和範圍。經過培養與分離後，以液體閃爍計數器 (liquid scintillation counter)計量結合的部分 0

避暗法（Step-Through Test):學習與記憶。利用避暗法估量測試化合物對於學習與記憶的影響。將_ 6 〇

60 X 1 5公分的箱子平均分成兩室，一暗室具有鋼棒基X 底，當使用時會充電（40 V ac)，另一個是亮室，不具荷。在兩室之間有一開口（孔洞）供大鼠通過。每隹 $ *^又人鼠皆

1329016 五、發明說明（62) 連續兩天進行此實驗。第一天先作訓練：前3分鐘先鼠在箱子内適應’然後將大鼠放入亮室，使其背向兩室之間的孔洞，並使广室的銅棒充電5分鐘。第二天作測試， s己錄5分鐘内大鼠穿越孔洞的次數。穿私憶的增進》穿越次數減少表示記 ”mm的蕈毒驗乙醯膽驗受體密度明顯低於控制組。表薩爾薩皂凡甲酸乙酯，薩爾薩皂元甲酸 :旨，表薩爾薩皂元與表異藉契皂甘元使腦中的蕈毒鹼乙醯膽鹼受體密度產生明顯的增加，而皂甘與表薩爾薩皂元基琥珀酸鹽卻未明顯改變蕈毒鹼乙醯膽鹼受體密度。此，本實驗顯示本發明之化合物的作用在使受體=量正化，亦即當給與受體量降低的動物該化合修復受體數量至正常量的傾向。于化。物有神經退化模式組在5分鐘内的錯誤反應（錯誤次顯尚於控制組，表示記憶的缺損（見表⑴。）月表薩爾薩息元甲酸乙酿，表薩爾薩息元與薩爾= 減少錯誤反應的次數，而皂甘與表薩爾薩皂兀乙基琥珀馱鹽卻都無法降低錯誤反應的表11 第67頁 3002-5563.PF(Nl);Chiumeow.ptd 1329016 五、發明說明（63) 組別 Μ型受體密度學習與記億避暗法 (fmo曉克頜白質）錯誤次數控制組(n=10) mm^=m 一…—一 +表薩_減_識— +薩爾薩皂元甲酸乙酯(n= 1 ” +_爾薩皂元之基_酸鹽(η;”) +表薩爾薩·&元(11= 10) +表異菝契皂甘元(η=11) +ΐ甘(陰括1^纏—rT=8) 859± 101 —71—3上—48 877± 89* 一―9Τ6Γ 丽— 774±_79 ' 869± 104* 877± 90* 770±'68~ ' 0.60± 0.70 —[Οόϊτ—Π 1.36± 0.92* 'Ί.36± 1.03* 3.73± 1.35 1.50± 1.18* 1.73± 0.9ί*'_ 3.75± 1.49 — 寿1】用unpaired Student t test作、统計分析，木表示 p<0. 05。

實施例11 肌萎縮側索硬化症是一種進行性致死神經退化性疾病，會導致運動神經元退化，骨骼萎縮（skeletal atrophy) ’麻痺（paraiysis)與死亡。此疾病的成因是異源的（heter〇geneous):有些形式的人體肌萎縮側索硬化症是由於銅鋅超氧化物歧化酵素（Cu/Zn super〇xide dismutase，S0D4)基因的突變。此疾病的動物模式包括過度表現銅鋅超氧化物歧化酵素基因的銅鋅超氧化物歧化酵素基因轉殖小鼠（S0D_ltransgenic mice :rexpressing sod—1 以及進行性運動神經性病

斯 m〇t〇r neUr〇Pathy)(Pmn，夏柯一馬利一31 命期限，並且改善肌萎異二皂二儿與薩爾薩皂元增加生氏病的模式下之超硬化症以及夏柯-馬利-杜1 動神經性病變小鼠二=歧上酵素小鼠(圖5)與進行性運氣〔圖6)的行為不足（behavi〇ural

3002-5563-PF(Nl) ；Chiumeow.ptd 第68頁 1329016 五、發明說明（64) deficit)狀況。雖然本發明已以較佳實施例揭露如上，然其並非用以限定本發明，任何熟習此技藝者，在不脫離本發明之精神和範圍内，當可作各種之更動與潤飾，因此本發明之保護範圍當視後附之申請專利範圍所界定者為準。參

3002-5563-PF(Nl);Chiumeow.ptd 第69頁 1329016 圖式簡單說明第1圖表示在中國倉鼠卵巢-)52/m3(CH0- yS2/m3)共轉染細胞株（co-transfected cell line)在第五天時，表異菝契皂甘元醋酸鹽對m3與/32腎上腺素受體密度的影響。第2圖表示薩爾薩皂元，表薩爾薩皂元甲酸乙酯與異菝契皂甘元對於大鼠初級皮質神經元（primary cortical neurons)中之麩胺酸鹽弓I發之神經退化的影響。第3圖表示薩爾薩皂元，表薩爾薩皂元甲酸乙酯（乙氧羰基氧）與異菝契皂甘元對於老年大鼠之學習能力與記憶力的影響。第4圖表示薩爾薩皂元，表薩爾薩皂元曱酸乙酯（乙氧羰基氧）與異菝契皂甘元對於蕈毒鹼受體數量的影響。第5圖表示在口服給與銅鋅超氧化物歧化酵素（S0D-1) 小鼠異菝契皂甘元之後小鼠之存活曲線圖。第6圖表示在口服給與進行性運動神經元疾病（pmn)小鼠薩爾薩皂元之後小鼠之存活曲線圖。 _

3002-5563*PF(Nl);Chiumeow.ptd 第70頁

Claims

1329016 申請專 5 ?年千月1 (；?日_#ί； 1 . 一個或以上用於I台▲或預每類及動物疾病之活性劑，其中該活性劑選自物：通式I a的化合物：

㈣其中之R基團選自於氫。的烷羰基（alkylcarbonyl); Ci_C2〇的院氧幾基（alkoxycarbonyl) ; C^-C^o的烧胺甲酿基 (alkylcarbamoyl);或芳羰基（arylcarbonyl);或硫代基 (sulpho (H03S));膦酸基（phosphono ((Η0)2Ρ(0)-);或者單、二或三糖；其中，任一的烷基皆可隨意地以芳 ^基’胺基，單或二院胺基（mono- or di- alkyl-amino)，幾酸殘餘物（carboxylic acid residue (-C00H))，或任何由此產生的結合作取代；以及包括其藥學上可接受之前驅藥與鹽，以及其所有混合物結合物；其中該人類或#人類動物疾病擇自於：漢丁頓舞蹈症

3002-5563-PF4(Nl).ptc 第71頁 1329016 _案號92106926_年月日__ 六、申請專利範圍 (Huntington’s disease)，運動神經元病（包括肌萎縮側索硬化症），及夏科-馬利-杜斯式疾病（Charcot-Marie-Tooth disease) ° 2.如申請專利範圍第1項所述之活性劑，其中之活性劑，或至少其中之一的活性劑係選自：薩爾薩皂元，薩爾薩皂元甲酸乙酯，薩爾薩皂元醋酸鹽，薩爾薩皂元琥珀酸鹽及其藥學上可接受的鹽類， I爾薩皂元甘胺酸鹽及其藥學上可接受的鹽類，薩爾薩皂元氨基丙酸鹽及其藥學上可接受的鹽類，薩爾薩皂元纈胺酸鹽及其藥學上可接受的鹽類，薩爾薩皂元苯基氨基丙酸鹽及其藥學上可接受的鹽類，薩爾薩皂元異白氨酸鹽及其藥學上可接受的鹽類，薩爾薩皂元異甲硫氨酸鹽及其藥學上可接受的鹽類，表薩爾薩皂元，表薩爾薩皂元甲酸乙酯，表薩爾薩皂元醋酸鹽，鲁表薩爾薩皂元琥珀酸鹽及其藥學上可接受的鹽類，表薩爾薩皂元甘胺酸鹽及其藥學上可接受的鹽類，表薩爾薩皂元氨基丙酸鹽及其藥學上可接受的鹽類，表薩爾薩皂元纈胺酸鹽及其藥學上可接受的鹽類，表薩爾薩皂元苯基氨基丙酸鹽及其藥學上可接受的鹽類，表薩爾薩皂元異白氨酸鹽及其藥學上可接受的鹽類，

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1329016 9210RQ9R 六' 申請專利範圍修正曰原子都帶有一個〇糖基團，其甘露糖，果糖，半乳糖，麥之糖基團係選自葡萄糖，糖，木糖，阿拉伯糖，海’，纖維雙醣，蔗糖，鼠李糖，半乳糖-葡萄糖，葡萄' 異鼠李糖，芹菜糖，乳糖’鼠李糖-葡萄糖，葡萄糖u伯糖，海藻糖-葡萄李糖，甘露糖-葡萄糖，葡萄葡萄糖-葡萄糖，葡萄糖-鼠糖-(鼠李糖）一鼠李鼠李糖）-葡萄糖，葡萄，鼠李.半乳糖及葡萄糖，半乳 ^的刖驅藥物及其鹽類。 1生物，以及藥學上可接受 3. 如申請專利範圍第2項以上活性劑為薩爾薩皂元及建之活性劑，其中該一或 4. 如申請專利範圍第丨項所契^甘元。劑存在並選自藥學組合物，通之活性劑，其中該活性料。品’食物補給品組合物與飲其中該活性 5. 如申請專利範圍第1 劑與-個或以上添加的活性劑同：存：劑其中之一個 6. 如申請專利範圍第5項所述之活性劑或u上添加的活性劑係選自膽鹼脂腾抑制劑 •CCh〇linesterase inhibit〇rs)，多巴胺激動劑（d〇pamine agoni si;s)(例如：左旋多巴L-d〇pa)，兒茶酚氧位甲基轉移酵素（COMT inhibitors)，單胺氧化酶B抑制劑（MA0-B inhibitors) ’ 抗膽索性藥物（anti-cholinergics)，乙醮膽驗激動劑（acetylcholine agonists)，血清素激動劑 (serotonin agonists)，α -胺基-3 -經基-5-甲基異惡。坐_

3002-5563-PF4(Nl).ptc 第74頁 1329016 _案號 9210fi926 _年月日__ 六、申請專利範圍

4-丙酸受體激動劑（AMPA receptor agonists)，7 -氨基丁酸受體激動劑（GABA receptor agonists)，N-曱基- D-天門冬胺酸受體激動劑（NMDA receptor agonists)，腎上腺素受體激動劑（^3-8(1：^11006口1：0『&£011151：5)，毛地黃 (digoxin)，多巴酚丁胺（do butamine)，抗炎藥（anti-inf 1 animator i es ) ，親神經因子（neurotrophi c factors)，斯達丁（statins)，腺苷A2a受體激動劑 (adenosine A2a receptor agonists)，醛糖還原酵素抑制劑（aldose reductase inhibitors)，免疫調節劑籲immunomodulators)，大麻驗激動劑（cannabinoid agonists) ’干擾素々（interferon yS)或三環類抗憂營劑 ("tricyclic a.nt.i_depr.essan"ts) 〇 7.如申請專利範圍第3項中所述之活性劑，其中該活性劑或至少一活性劑用於治療或預防肌蒌縮性脊髓侧索硬化（ALS)及其他運動神經疾病（㈣切；!· neurone disease) °

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