TWI317358B - Novel 1,2,4-thiadiazolium derivatives as melanocortin receptor modulators - Google Patents

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/V 五、發明說明（！） 相關申請案之交又參考文獻 此申請案主張2001年11月8日申請之美國臨時申請 案60/337,762之權益’其内容已以引用之方式完全併入 本文中。 5 發明範疇 本發明提供一種適用於治療黑皮質素受體所媒介病變 之新穎1，2, 4-噻二唑-2-銪衍生物。更特定言之，本發明 適用於治療代謝性、CNS及皮膚之病變，如：肥胖症、口 服葡萄糖耐受性受損、血糖濃度增加、II型糖尿病、X-症 10候群、糖尿病性腎病變、急性神經變性病變、慢性神經變 1·生病變、神經叢病變、男性勃起功能障礙、乾眼症、座 瘡、皮膚乾燥、皮膚老化、皮脂漏皮膚炎、酒渣鼻、耳垢 過多、臉板腺病變、假毛囊炎、酵母菌感染、頭皮屑、化 膿性汗腺炎、眼紅斑痤瘡、及分泌腺病變。 15 發明背景 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 黑皮質素為由前阿黑皮質素（pro_〇pi〇melan〇c〇rtin (P0MC))產生之神經肽，主要表現在下視丘之弓狀核、腦 垂體葉、及腦幹之孤立徑核[Gantz，I.，et al.， Molecular Cloning, Expression, and Gene 20 Localization of a Fourth Melanocortin Receptor, J. Biolog· Chem.，1993，268,15174-15179]。此等肽包含 ACTH、α-MSH、β-MSH、γυ-MSH、及合成類似物 NDP-aMSH (Wikberg, J E S, Melanocortin Receptors: new opportunities in drug discovery, Exp. Opin. Ther.

本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐）91501A 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1317358 A7 B7 五、發明說明（2 )

Patents，2000，11(1)，6卜76)。 »於 此等肽結合5種黑皮質素受體（MC1-MC5)，其係與G-蛋白質偶合之受體，均可正向調節腺苷酸環化酶。MC4與 MC5受體廣泛分布於腦與脊柱中，其中MC3受體主要位 5 於下視丘[Gantz，I.，et al·，如上述文獻]。MC4受體可被 aMSH選擇性活化，並可在神經（Neuro)2A細胞中誘發神經 突成長（Adan R.A.H，et al·，Molecular Brian Research， 1996,36， pp 37-44: Mount joy, K. G., Mortud, Μ. T, ,Low, M. J., Simerly, R. B. and Cone, R. D., Mol. 10 Endocrinol.，1994，8，pp 1298-1308)。ACHT 為效力低 於 ctMSH 之 MC4 受體活化劑（Adan, R.A. Η., Cone, R.D.， Burbach, J_P· H. and Gispen，W. Η.，mol· pharmacol.， 1994，46，pp 1182-1190)。可活化MC5受體之物質依其 程度依序為 NDP二α-MSH > ACHT (1-24)上aMSH ACHT 15 (1-39) = (pMSH>>yMSH (The Melanocortin Receptors,

Cone, R. D., Editor, Human Press Inc., Totowa, N. J., 2000，Chen, W.，pp449-472)。 在大鼠之動物試驗中，壓擊坐骨神經模式已證實，a-. MSH提高神經突之成長，且其為最強效之ACTH衍生肽， 20 可顯著促進神經末端分支、增加終板面積、與周長 [Bijlsma，W. A., et al., The Enhanced Recovery of Sensorimotor Function in Rats is Related to the Melantropic Moiety of ACTH/MSH Neuropeptides,

Eur.J.Pharmacol, 1983, 92, 231-236;Van der Neut. -4- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐）

經濟部智慧財產局員工消費合作社印制衣 1317358 A7 B7 五、發明說明（3 ) R.，et al. , Stimulation by Melanocortin of Neurite „ Outgrowth from Spinal and Sensory Neurons In Vitro, Peptides, 1992, 13, 1109-1115; Van Der Zee, C. E. E. M., et al., α-MSH and Org 2766 in Peripheral 5 Nerve Regeneration: Different Route of Delivery,

Eur. J. Pharmacol., 1988, 147, 351-357; Strand, F. L, et al., Melanocortin as Factors in Somatic Neuromuscular Growth and Regrowth, Pharmac. Ther., 1994，62, 1-27]。此外，神經受損後投與a-MSH與其他 10 黑皮質素後，可縮短恢復運動功能之時間[Strand，F. L.， et al.，如上述文獻]。 小白鼠之MC4受體經基因尋標法處理失去活性後變得 肥胖之結果顯示，MC4受體應涉及攝食作用[Huszar，D.， et al., Targeted Disruption of the Melanocortin-4 15 Receptors Results in Mice, Cell, 1997, 88， 131-141 ]。此點更由文獻中提出多種MC4肽促效劑可抑制刺 鼠之攝食行為之報告證實[Fan, W., et al.，R〇le 〇f Melanocortingenic Neurons in Feeding and the Agouti Obesity Syndrome, Nature, 1997, 385, 165-20 168]。α-MSH誘發大鼠添毛行為，但並不顯著，而且可能 不經由 MC4 受體媒介[Adan，R. A. H.，etal，， Differential Effects of Melanocortin Peptide on Neural Melanocortin Receptors, Molecular Pharmacology， 1994,46,1182-1190]。 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐）

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五、發明說明（4) 亦已知黑皮質素aMSH與ACTH分別有能力刺激色素沉，, 積及分泌腎上腺糖皮質激素。黑皮質素，特定言之aMSH， 於調節皮脂腺（係一種腺溶分泌型外分泌腺）活性上之角色 敢早於大鼠中發現。更特定言之，該試驗顯示，去除腦垂 5體中葉（係產生POMC肽）後，可降低皮脂產生，使用aMSH 進行置換療法後，則完全恢復至正常程度（Thody，A. J. and Shuster, Nature，237，346-347, 1972)。完全切除 腦下垂體之大鼠之試驗中，以aMSH治療之結果為提高皮 脂產生’但僅經過aMSH與睪固酮之組合治療後，即可完 10全恢復正常皮脂產生程度（Thody，A.J.，Shuster, S.，J. Endocr. 64, 503-510, 1975; Ebling, F. J., Ebling, E., Randall, V. anci Skinner, J., J. Endocr. 66, 407-412, 1975)。經刪除MC5受體之擊倒處理小白良（knock-out mice) ’因皮脂生產降低，而在排水及調節熱度上出現嚴 15 重缺陷（Chen, W. Kelly，M. A.，Opitz-Araya, X.,

Thomas, R. E., Low, M. J., and Cone, R., Cell, 91，788-798,1997)。 已知MC5受體表現在人類皮脂腺中，可能涉及調節人 類皮脂之合成作用。已有人選殖出人類MC5-R ，並判別 20 其特性（Chhajlani，V.Muceniece，R.，Wikberg，JES·， Biochem. Biophys. Res. Commun. 195, 866-873, 1993)。此外，人類皮脂腺中所含之MC5-R m RNA已利用 RT-PCR證實，並使用免疫組織化學及西方墨點分析法檢測 蛋白質（Thiboutot，D.，Sivarajah，Gililand，K.， 本纸張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐）

經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1317358 A7 B7 五、發明說明（5)

Cong, Z. and Clawson, G.，J. Invest. Dermatol. 115(4), 614-619, 2000)。 人類皮脂之組成不同於其他哺乳動物。人類皮脂中之 5 主要脂肪為三酸甘油酯、蠟酯及角鯊烯（Greene, R. S.， Downing, D. T., Poci, Ρ. Ε., Strauss, J. S., JID 54, 240-247，1970)。例如：除了水獺與海狸以外，角業稀不 會出現在許多哺乳動物中。三酸甘油酯為人類皮脂之主要 組成，卻很少出現在其他物種，且許多動物（例如：黑猩 10 獲）似乎完全沒有（Thody，A.J.，Shuster, S.，Physiolog. Rev. 69，383-415，1989)。此外，黑皮質素對來自不同 物種之細胞具有不同效應。例如：aMSH (EC5〇=3. 7nM)與 ACTH (ECs〇=16.4nM)為兔子脂肪細胞之強力溶脂劑，而在 大鼠體内，則只有ACTH才有強力溶脂活性（EC5〇=1.34nM) 15 (Ramachadran, J., Lee, V.， 428,339-346, 1987:

Richter, W. 0., Schwandt, P., Neuropeptides 9, 59-74, 1987)。儘管ACTH在嚆齒類動物及兔子體内具有溶 脂活性，但其在單離之人類與非人類靈長類脂肪細胞中， 即使在高達ΙμΜ濃度下，其溶脂效應仍極低（Ng，T.B. 20 Comparative Biochem. 97, 441-446, 1990)。因此，在動 物皮脂模式系統化中界定黑皮質素與其受體之角色並不一 定可以預估其於人類皮脂調節作用中之角色》 近年來，Basu等人於WIP0公開案W099/55679中揭 示異喳琳衍生物，係一種小分子非肽化合物，其對MCI與 -7- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐）

五、發明說明 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1317358 MC4受體之親和性低達微莫耳濃度，可降低花生四稀酸所， 誘發之皮膚發炎，及降低體重及攝食量。

Nargund等人於wiP〇公開案w〇99/64〇〇2中揭示一種 螺環略。定料物作為黑皮質素受體促效劑，適用於治療 5如：肥胖、糖尿病與性功能障礙等疾病與病變。 因此，需要黑皮質素受體之小分子介質，更特定言之 黑皮質素-3、黑皮質素-4與/或黑皮質素_5受體。 發明概要 本發明係有關通式（I)化合物

X (0 15 其中 R1係選自下列各物組成之群中：芳基、芳烷基、雜芳 基、雜芳基-烷基、雜環烷基、雜環烷基—烷基、環烷基與 環烷基-烷基；其中芳基、芳烷基、雜芳基、雜環烷基、 雜環烷基-烷基或環烷基可視需要經一個或多個分別獨立 20選自下列之取代基取代：齒素、羥基、烷基、烷氧基；鹵 化烷基、齒化烷氧基、胺基、烷胺基或二（烷基）胺基； R2係選自下列各物組成之群中：芳基、芳烷基、雜芳 基、雜壞烧基與環烧基-烧基；其中芳基、芳燒基、雜芳 基、雜環烷基或環烷基可視需要經一個或多個分別獨立選 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐）

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zrf\' 五、發明說明（7) 自下列之取代基取代：鹵素、羥基、烷基、烷氧基；鹵化 烷基、i化烷氧基、胺基、烷胺基或二（烷基）胺基； R3係選自下列各物組成之群中：氫、烧基、烯基與炔 基；其中烯基之雙鍵或炔基之參鍵為自附接點移除至少— 個碳原子所形成； R4係選自下列各物組成之群中：芳基、芳烷基、雜芳 基、雜環烷基、及環烷基-烷基；其中芳基、芳烷基、雜芳 基、雜環烷基或環烷基可視需要經一個或多個分別獨立選 10 15 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 20 自下列之取代基取代：1¾素、羥基、烷基、烷氧基； i化烷基、齒化烷氧基、胺基、烷胺基或二（烷基）胺基； X係選自下列各物組成之群中：溴離子、氯離子、碘 離子乙酸根'苯甲酸根、檸檬酸根、乳酸根、頻果酸 根、石肖酸根、磷酸根、二磷酸根、伽酸根、硫酸根、酒 石酸根與T苯磺酸根； —但ΐ限制條件為# Rl為笨基、氯苯基或苯甲基，R2為 本^或本並嗔吩基且P為苯基或芳院基時，μ r3為選自 基與炔基組成之群中；其情基之雙鍵或块基之 參鍵為自附接點移除至少—個碳原子所形成； 甲苯制牛: 4為笨曱基或曱苯基’ R2為苯基或 二;接¥=成之群中;其中烯基之雙鍵或炔基之參 鍵為自附接點移除至少—個碳原子所形成； 條件為當^為笨 時，則R3為選自Γ κ馬本基且R為本基 C3—8烧基（亦即非甲基或乙基）、烯基與炔 本紙張尺錢— 1317358 A7

五、發明說明（ B7

原子所形成 基組成之群中較佳為R3係選自烯基與炔基組成之群中； 其中烯基之雙鍵或炔基之參鍵為自附接點移除至少一個碳 及其醫樂上可接受之鹽類。 本發明進一步有關治療黑皮質素受體所媒介病變之方 法，其包括對有此需要之個體投與醫療有效量之式（1)化 合物 10

X' (I) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 其中 R1係選自下列各物組成之群中：烷基、芳基、芳烷 15 基、雜芳基、雜芳基-烷基、雜環烷基、雜環烷基—烷基、 環烷基與環烷基-烷基；其中芳基、芳烷基、雜芳基、雜 芳基-烧基、雜環烧基、雜環炫基-烧基、環燒基或環烧 基-烧基可視需要經一個或多個分別獨立選自下列之取代 基取代：齒素、羥基、烧基、烷氧基；i化烧基、鹵化烧 20 氧基、胺基、烷胺基或二（烷基）胺基； R2係選自下列各物組成之群中：烷基、芳基、芳烷 基、雜芳基、雜環烷基與環烷基-烷基；芳基、芳烷基、 雜芳基、雜環烷基或環烷基-烷基可視需要經一個或多個 分別獨立選自下列之取代基取代：函素、羥基、烷基、烷 -10- 本纸張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐）

發明說明 Ι3ι7358 氧基；鹵化烷基、_化烷氧基、胺基、烷胺基或二（烷基乂 胺基； > R3係選自下列各物組成之群中：氫、烷基、烯基與炔 基，其中烯基之雙鍵或炔基之參鍵為自附接點移除至少一 5 個碳原子所形成； R係選自下列各物組成之群中：氫、烷基、芳基、芳 烷基、雜芳基、雜環烷基、及環烷基—烷基；其中芳基、 芳烷基、雜芳基、雜環烷基或環烷基_烷基可視需要經一 個或多個分別獨立選自下列之取代基取代：鹵素、羥基、 10烷基、烷氧基；_化烷基、鹵化烷氧基、胺基、烷胺基或 二（烷基）胺基： X係選自下列各物組成之群中··溴離子、氣離子、碘 離子、乙酸根、笨曱酸根、檸檬酸根、乳酸根、蘋果酸 根、硝酸根、磷酸根、二磷酸根、琥珀酸根、硫酸根、酒 I5 石酸根與甲苯項酸根； 及其醫藥上可接受之鹽類。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 本發明並說明—種醫藥組合物，其包含醫藥上可接受 之載劑及上述任何化合物。本發明說明一種由上述任何化 合物與醫藥上可接受之載劑混合製成之醫藥組合物。本發 20明並δ兒明-種製造醫藥組合物之方法，其包括混合上述任 何化合物與醫藥上可接受之載劑。 本發明實例為對有需要之個體治療黑皮質素受體所媒 介病變之方法，其包括對該個體投與醫療有效量之上述任 何化合物或上述醫藥組合物。 -11- 1317358

五、發明說明（10) 10 15 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 20 自下列使用本文所述任何化合物治療春 ϋ 變、CNS病變與皮膚病變。 病變為一種對有需要之個體治療選自下列 增加、Η型糖口服葡萄糖耐受性受損、企糖濃度 宝 t糖尿病、X-症候群、糖尿病性腎病變、脊 。、神經傷害、急性神經變性 神經叢症#…該届變、忮性神經變性病變、 ^叢㈣、男性勃起功能障礙、乾眼症、痤瘡、皮声乾 :病:膚老化、皮脂漏皮膚炎、酒潰鼻、耳垢過多、：板 炎、目^假ί囊炎、酵母菌感染、頭皮屑、化膿性汗腺 療有效量之上述化合物或醫藥組合物。 體技”醫 醫藥本tr—項實例為使用本文所述任何化合物於製造 對有需要之個體治療選自下列病變之方法：（a)肥 口服葡萄糖耐受性受損，(c)血糖濃度增加， |性、=糖尿病’（e)x—症候群，⑴糖尿病崎病變，（g) :申:峻性病變，⑹慢性神經變性病變，⑴神經叢病 ，J)男性勃起功能障礙，（k)乾眼症， 膚錢’ω皮膚老化，（。）皮脂漏皮膚炎，（㈣清鼻， (C1)耳垢過多，（r)臉板腺病變，（S)假毛囊炎，⑴酵母菌 ” ’（U)頭皮屑，⑴化膿性汗腺炎，（w)眼紅斑痤瘡， 或（X)分泌腺病變。 本發明詳細銳日q 本發明係有關新穎之經取代之lum錯衍 生物其適用於治療黑皮質素受體所媒介之病變。更特定

12- 1317358 五、發明說明（11 言之 ’本發明係有關式（I)化合物 5

-N,,Ν. / R1〆 +、S R4

-N X' 其中XU 、R> 4

皮質素受體促效劑或拮抗劑。文中定義，其適用為,! 本發明進一步有關—種、A 10 15 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 20 之方法’該病變較佳為 皮質素受體所媒介病續 括抗作用治療之病變。二二=素受體之促效作㈣ 素-3、黑皮質素-4與黑^^體巍傾自^ 較佳者，R1係選自τ ' 烧基與雜芳基；其中芳基、成之群中：芳基、聋 個或多個分別獨立選自下列===;=- 二（烧基鳩。更S 氧基、胺基、烧胺《 芳基可視芳基組狀群中；其中 ....次夕個分別獨立選自下列之取代基承 έ 心魏氧基。亦更佳者，R1#ii自下列各物 、，且ΐ群中.苯基、2-氯苯基、4-氯苯基、"苯基、4_ 曱苯基、2-甲氧苯基與4_甲氧苯基。最佳者， 氧苯基。 較佳者，R2係選自下列各物組成之群中：芳基、芳烧 •13- 本纸張尺度適用中國國豕標準(CNS)A4規格（210x297公爱） 317358 五、發明說明（12 A7 B7 η’ 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 基與雜芳基；其中芳基、—P甘+ 或多個分別獨立選自下基可視需要經一低 其m -Γ列之取代基取代：齒素、經基、烧 基、院乳基，二_甲其-上ro — 。土、二鹵曱氧基、胺基、烷胺基或二 (烧基if更佳者J係選自芳基經成之群中；盆中芳 基可視S要經-個或多個分 代：烧基與烧氧基。亦争㈣d2 /自下列之取代基取 群中m甲苯#、選自下列各物組成之 佳者，R2係選自苯基與2_甲氧苯基。甲軋本基取 較佳者，R3係選自_ 係選自氫與甲基組叙基組成之群中。更佳者，R3 選自下列各物組成之群中:芳基、芳烧 基f"方基；其中芳基、芳烧基或雜芳基可視需要經-個 或户個^別獨立選自下列之取代基取代：函素、經基、烧 ，貌氧基，—齒甲基、三_甲氧基、胺基、燒胺基或二 (土）胺基。更佳者’ R4選自下列各物組成之群中：芳 基、芳烧基與雜芳基；其中芳基或芳烧基可視需要經一個 或多個分別獨立選自下列之取代基取代：鹵素、烧基與烧 氧基。f更佳者’ R4係選自下列各物組紅群中：'苯 基、2-氯苯基、4-氯苯基、4_漠苯基、2_甲苯基、4—甲苯 20基、2-甲氧苯基、4_曱氧苯基、苯甲基、2 一氯苯甲基、 4-氣笨曱基、2-甲基苯甲基、4_甲基苯甲基、2〜曱氧^甲 基、4-甲氧苯甲基、2, 6_二氣苯基、3,5—二氣苯基、2— 氣-6-甲苯基與3-対基。最佳者’ R4係選自下列各物組 成之群中：苯基、2-曱苯基、4-甲苯基、2-曱氧苯基與4_ 10 d 計 15 線 -14- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐） A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1317358 五、發明說明（13) : ^ 曱氧苯基。 本發明一類式（I)化合物中，R1、R2與R4分別獨立選 自芳基與經取代之芳基；且R3為氫。 較佳者，X_係選自下列各物組成之群中：溴離子、氯 5 離子、碘離子、乙酸根、苯曱酸根、檸檬酸根、乳酸根、 蘋果酸根、硝酸根、磷酸根、二磷酸根、琥珀酸根、硫酸 根、酒石酸根與甲苯磺酸根。更佳者，XI系選自下列各物 組成之群中：溴離子、氣離子與碘離子。最佳者，Γ為溴 離子。 10 本文所使用''黑皮質素受體所媒介病變"一詞，除非另 有說明，否則包括（但不限於）：肥胖症、口服葡萄糖耐受 性受損、血糖濃度增加、II型糖尿病、X-症候群、糖尿病 性腎病變、急性神經變性病變、慢性神經變性病變、神經 叢病變、男性勃起功能障礙、乾眼症、痤瘡、皮膚乾燥、 15 皮膚老化、皮脂漏皮膚炎、酒渣鼻、耳垢過多、臉板腺病 變、假毛囊炎、酵母菌感染、頭皮屑、化膿性汗腺炎、眼 紅斑痤瘡、及分泌腺病變。 本文所使用"代謝病變"一詞，除非另有說明，否則包 括（但不限於）：肥胖症、口服葡萄糖耐受性受損、血糖濃 2〇 度增加、π型糖尿病與X-症候群。 本文所使用"CNS病變” 一詞，除非另有說明，否則包 括（但不限於）：糖尿病性腎病變、急性神經變性病變、慢 性神經變性病變與神經叢病變。 本文所使用"皮膚病變''一詞，除非另有說明，否則包 -15- 本紙張尺度適用t國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐）

A7 B7 1317358 五、發明說明（14 ) 括（但不限於）：乾眼症、痤瘡、皮膚乾燥、皮膚老化、皮 脂漏皮膚炎、酒渣鼻、耳垢過多、臉板腺病變、假毛囊 炎、酵母菌感染、頭皮屑、化膿性汗腺炎、眼紅斑痤瘡、 及分泌腺病變。 5 本文所使用之急性神經變性病變包括與神經元細胞死 亡或受損有關之各種不同急性神經變性病變，包括腦血管 官能不足、局灶性或擴散性腦創傷、擴散性腦傷害、及脊 趙傷害’亦即腦缺血或梗塞，包括插塞性閉鎖與血栓性閉 鎖、急性缺血後之再灌流、周邊缺氧-缺血傷害、心跳停 10 止、及任何型態之顱内出血（包括，但不限於硬膜上、硬 膜下、蜘蛛膜下、與大腦内），及顱内與椎管内損傷（包 括，但不限於：挫傷、穿透、切剪、壓迫與裂傷）及頸部 受傷振盪嬰兒症候群（whiplash shaken infant syndrome) 〇 15 本文中，在本發明方法範圍内使用之慢性神經變性病 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 變包括阿茲海默氏症、皮克氏症（Pick，s disease)、擴散 性路威體症（diffuse Lewy body disease)、漸進性核上 麻痒（史迪爾-理查森症候群（Stee卜Richardson syndrome))、多發性全身變性（赛—查格症狀群（Shy_ 2〇 Drager syndrome))、與神經變性有關之慢性癲癇病症、 運動神經元疾病，包括肌萎縮性側鎖硬化、退化性失調 症、皮質基底變性、ALS-巴金森氏症-關氏痴呆複合症 (Parkinson’s-Dementia complex of Guam)、亞急性硬化 性全腦炎、亨丁頓氏症（Huntington’s disease)、巴金森 -16- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐） A7 B7 ,τ\ ：Pr 1317358 五、發明說明（15) 丨' : ί 氏症、結瘢性病變（包括多發性全身萎縮（multiple,， system atrophy))、原發漸進性失語症、紋狀體黑質變 性、馬奇多-約塞吱症（Machado-Joseph disease)第3型 脊髓小腦失調症及橄欖體橋腦小腦變性、杜萊德氏症 5 (Gilles De La Tourette’s disease)、延髓與假性延髓 麻痺、脊髓及脊髓延髓肌肉萎縮（甘乃迪氏症（Kennedy’s disease))、原發性侧鎖硬化、家族性痙攣性下身麻痒' 威尼-霍吱曼症（Werdnig-Hoffmann disease)、古柏-偉蘭 德症（Kugelberg-Welander disease)、戴-薩克氏症（Tay-10 Sach’s disease)、山霍吱症（Sandhoff disease)、家族 性痙攣症、沃發特-古柏-偉

Welander disease)、痙攣性下身輕癱、漸進性多灶性腦 白質炎、家族性自主神經功能異常（理萊-戴依症狀群 (Riley-Day syndrome))、及蛋白病毒疾病（包括，但不限 15 於：古茲威德-雅哥症（Creutzfeldt-Jakob)、葛茲曼-史 特勞塞-史萘克症（Gerstmann-Straussler-Scheinker disease)、古魯症（Kuru)及致命性失眠症）。 本文所使用神經叢病變包括神經叢麻痒、多灶性神經 病變、運動神經病變、感覺神經病變、感覺-運動神經病 20變、感染性神經病變、自主神經病變、感覺-自主神經病 變、脫趙鞘神經病變（包括，但不限於吉巴症候群 (Guillain-Barre syndrome)與慢性發炎脫髓鞘多發性神 經根神經病變）、其他炎性與免疫性神經病變、因藥物引 起之神經病變 '因醫藥治療引起之神經病變、因毒素引起 -17- 本紙張尺度適用巾國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐）

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Λ 五、發明說明（16 ) — 之神經病變、創傷性神經病變（包括，但不限於：壓迫、， 壓擊、撕裂、與節裂神經病變）、代謝性神經病變、内分 泌與腫瘤形成癥兆性神經病變、及其他神經病變（如：查 考特-馬利-土奇症（Charcot-Marie-Tooth disease)(la、 5 lb、2、4a、1-X聯結型）、弗利德氏失調症、異染色性腦 白質營養不良、李吱森氏症（Refsum’ s disease)、腺脊鑛 神經病變、失調症-毛細血管擴張症、德延林-索嗒士神經 病變（Dejerine-Sottas neuropathy)(A 與 B 型）、蘭伯特-依頓症候群（Lambert-Eaton syndrome)，及顧神經病變。 10 本文所使用”鹵素"一詞，除非另有說明，否則包括 碘、溴、氣與氟。 本文所使用"烷基"一詞不論單獨使用或作為取代基之 一部份使用時’均包括含有1至8個碳原子之直鏈與分支 鏈。例如：烷基，包括曱基、乙基、丙基、異丙基、丁 15基、異丁基、第一 丁基、第三丁基、戊基，等等。除非另 有說明，否則用在烷基上之"低碳數”係指碳鏈組成為1至 4個礙原子。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 本文所使用"烯基"一詞不論單獨使用或作為取代基之 一部份使用時’均包括含有2至8個碳原子之直鏈與分支 2〇鏈烯烴。適當實例包括：乙烯基' 1-丙烯基、2-丙烯基、 1-丁烯基、2-丁烯基、1-戊烯基、2-戊烯基、1-異丁-2-烯基，等等。 同樣地炔基"一詞不論單獨使用或作為取代基之一 部份使用時，均包括含有2至8個破原子之直鏈與分支鏈 -18- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） A7 B7 1317358 五、發明說明（I7 块烴。適當實例包括：2-丙炔基、2~丁炔基、丨_丁块基、 1-戊炔基，等等。 、土 本文所使用''烧氧基''一詞除非另有說明，否則應指上 述直鏈與分支鏈烷基之氧醚基。例如：甲氧基、乙氧& 5正丙氧基、第二丁氧基、第三丁氧基、正己氧基，等等。 本文所使用”環烧基"一詞除非另有說明，否則應指包 含3至8個環碳之飽和單環結構，較佳者包含5至^ 碳。適當實例包括環丙基、環丁基、環戊基、環己基、環 庚基、與環辛基。 10 本文所使用"芳基"一詞指芳香系碳環結構，如：笨 基、萘基，等等。 本文所使用"芳烷基"一詞除非另有說明，否則應指經 芳基取代之任何低碳數烷基。例如：苯甲基、苯乙基、苯 丙基、萘曱基，等等。 15 本文所使用”雜芳基"一詞除非另有說明，否則應指包 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 含至少1個選自〇、N與S中雜原子之5或6員單環芳香 環結構’其可視需要另包含1至3個分別獨立選自〇、N 與S之雜原子；或指包含至少1個選自〇、N與$中雜原 子之9或10員雙環芳香環結構，其可視需要另包含丨至4 20個分別獨立選自0、N與S之雜原子。雜芳基可附接在可 形成安定結構之任何環碳原子上。 適當雜芳基實例包括（但不限於）：吡咯基、呋喝基、 噻吩基、啐唑基、咪唑基、吡唑基、異嘮唑基、異噻唑 基、二唾基、嗔二唾基、U比咬基、塔!!井基、嘴咬基、吼〇井 -19- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐） [317358 五、 發明說明 18 二二比喃基、吱咱基L井基、啊基、異啊咐基、 基、異十坐基、苯並吱喃基、苯並嗓吩基、苯並味唾 ^苯並料基、封基'料基、料基、料咐基、 其〜坐基、啥《、㈣基、料力基、4料基、蒸咬 義蝶絲，等等。較佳雜芳基包括1^基、4吩基與咪 本文所使用π雜環烷基”一詞應指任何5至7員單環、 飽和、部份聽和或部份芳㈣結構，其包含至少丨個選 10 15 Μ濟部智慧財產局員工消費合作社印製 20 自0、Ν與S中雜原子，可視需要另包含j至3個分別獨 立選自0、Ν與S之雜原子；或指9至1〇員飽和、部份不 和或σ卩伤务香系雙環結構，其包含至少1個選自〇、ν 、S中雜原子，可視需要另包含1至4個分別獨立選自 〇、Ν與S之雜原子。雜環烷基可附接在可形成安定、结構之 任何環碳原子上。 適當雜環烷基實例包括（但不限於）：吡咯咁基、吡咯 啶基、一喝茂烷基、咪唑咁基、咪唑啶基、吡唑咁基、吡 唑啶基、哌啶基、二啐烷基、嗎咁基'二噻烷基、硫嗎啉 ^辰井基、二Β塞烧基、吲哚啉基、色烯基、3, 4-亞曱二 氧苯基、2, 3-二氫苯並呋喃基，等等。 本文所使用代號應指其中含有立體性形成中心。 右根據本發明化合物含有至少一個對掌性中心時，其 可出現對映異構物。若化合物含有兩個或更多個對掌性中 心時，其可再出現非對映異構物。咸了解，所有此等異構 物與其混合物均涵括在本發明範圍内。此外，化合物之有 本紙張尺⑽財^家標準 -20- 1317358 Λ7 - —— Β7 五、發明說^(丨9) ' ' ' 些結晶型可呈多晶型，且均包括在本發明中。此外，有些 化&物可與水形成溶合物（亦即水合物）或與一般有機溶劑 形成溶合物，此等溶合物亦包括在本發明範圍内。 當某特定基團為"經取代"時（例如：環烷基、芳基、芳 5烧基、雜芳基、雜環炫基），該基團可具有一個或多個取 代基，較佳為1至5個取代基，更佳為丨至3個取代基， 最佳為1至2個取代基，此等取代基則分別獨立選自取代 基列表中。 分子中特定位置上之任何取代基或代號之定義應與分 10子中其他位置之定義分別獨立。咸了解，本發明化合物上 之取代基與取代型態可由習此技藝之人士選擇，以形成化 學上安定且容易由相關技藝已知之技術及本文所說明之方 法合成之化合物。 依據本揭示内容所採用之命名法，先說明指定側鏈之 15末端部份，然後為附接點之相鄰官能基。因此，例如：„ 本基Ci-C6烧胺幾基Ci-Ce烧基"取代基指下式基團 ο C1 _。6 Ν Η 本文所使用”個體”一詞指要接受或已接受治療、觀察 或實驗之動物’較佳為哺乳動物，最佳為人類。 本文所使用組合物"一詞包括含有指定量之指定成分 -21- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（21〇 x 297公釐）

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經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1317358 五、發明說明（20) :二乂 ： 之產物，及由該指定量之指定成分之組合直接或間接產生 之產物。 本文所使用''醫療有效量"一詞指研究者、獸醫、醫師 或其他臨床學家可在組織系統、動物或人體中引起所需生 5 物或醫學反應（包括減輕所處理疾病或病變之症狀）之活性 化合物或藥劑之用量。 用於醫學之本發明化合物之鹽類係指無毒性”醫藥上可 接受之鹽類”。然而，其他鹽類亦可用於製備根據本發明 化合物或其醫藥上可接受之鹽類。本發明化合物之適當之 10 醫藥上可接受之鹽類包括酸加成鹽類，其可例如：由化合 物之溶液與醫藥上可接受之酸之溶液混合形成，如：鹽 酸、硫酸、富馬酸、馬來酸、琥珀酸、乙酸、苯甲酸、檸 檬酸、酒石酸、碳酸或磷酸。 本發明之範圍内包括本發明化合物之前藥。通常此等 15 前藥為很容易於活體内轉化成所需化合物之化合物官能衍 生物。因此，本發明之治療法中，π投藥” 一詞應包括使 用已明確揭示或未明確揭示，但投與患者後可於活體内轉 化成該明確化合物之化合物治療多種不同病變。選擇及製 備適當前藥衍生物之一般製程已說明於例如：Η. 20 Bundgaard 編輯之"Design of Prodrugs”，Elsevier, 1985 〇 本說明書中，特定言之反應圖與實例中所採用之縮寫 如下： BHT =2, 6-雙-(第三丁基）-4-甲基-苯酚 -22- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐）

1317358 A7 B7 五、發明說明（21

BSA cAMP或環狀 DCE DEAD 5 DM DMF DMEM DMSO DPBS 10 EDTA FBS GDP GTP GM 15 HBSS HEPES HS IgG %Inh 20 MEM NBS NCS NDP aMSH PBS 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 =牛血·清白蛋白 AMP=環腺苷單磷酸 =1，2-二氯乙烷 =偶氮二羧酸二乙酯 =分化培養基 =二曱基甲醯胺 =杜氏最基本培養基 =二甲亞砸 =杜氏磷酸鹽缓衝食鹽水 =乙二胺四乙酸鹽 =胎牛血清 =鳥σ票呤核苷二填酸 =鳥嗓呤核菩三構酸 =生長培養基 =漢克氏緩衝鹽溶液 =4-(2-羥乙基）-1-哌畊乙磺酸 =人類血清

=免疫球蛋白G =抑制百分比 =最基本培養基 =N-溴琥珀醯亞胺 =N-氯琥珀醯亞胺 = [Nle4, D-Phe7]aMSH，aMSH 之類似物 =磷酸鹽緩衝食鹽水 -23- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐） 1317358 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印制衣 五、發明說明（22 15 20 10 PEG =聚乙二醇 PNC =青黴素 rt 或 RT =室溫 SPA =閃爍近似分析法 STM =鏈黴素 TLC =薄層層析法 TM =過渡培養基 TMS =三甲矽烷基 式（I)中 ，R3為氫之化合物可依反應圖1所示方法製 R2—ΟΞΝ (IM) R1—NH2 (IV)

N 、S .R1 R4 NH,Λ

R4——NCS .R1 (VI)

R2人N H (VII) (V)

反應圖1 更特定言之，由式（III)之適當取代之氰基化合物（係 已知化合物或依已知方法製備之化合物）與式（IV)之適當 取代之一級胺（係已知化合物或依已知方法製備之化合物） -24-

本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1317358 Λ7 —---- --B7 五、發明說明（23 ) 反應’其係於鹼之存在下，如：NaNH2、NaH、NaN(TMS)2，. 等等，較佳為NaNH2，於加溫下，較佳為約回流下進行， 產生相應之式（V)化合物。 由式（V)化合物與式（VI)之適當取代之硫氰酸醋化合 5 物（係已知化合物或依已知方法製備之化合物）反應，其係 於DCE之存在下，於加溫下，較佳為約45°C下進行，產 生相應之式（VII)化合物。 由式（VII)化合物於Bn之存在下，及於室溫下，進行 環封合/氧化反應，產生式（Ia)化合物。 10 式（Π)化合物之製法為由適當取代之式（I)化合物， 其中R3為氫，依據反應圖2所示方法製備。

(la) (II) 反應圖2 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 更特定言之，由適當取代之式（la)化合物經鹼處理， 如· NaHC〇3、Na2C〇3、NaOH,等等，較隹為 NaHC〇3 ’ 其係 20於室溫下進行，產生相應之式（II)化合物。 式（II)化合物亦可由式（VII)適當取代之化合物依據 反應圖3所示方法製備。 -25- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐） 1317358 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 五、發明說明（24 10 15 R2 R4\NH人k,/R1 'N" Η (VII)

R4 Ν 反應圖3 更特定言之，由式（VII)適當取代之化合物與氧化劑 反應，如：NBS、NCS、DEAD，等等，較佳為NBS，其係於 室溫下進行，產生式（II)之相應化合物。較佳者，自驗性 水溶液中（如：NaHC〇3、Na2C〇3、NaOH，等等）萃取式（II) 化合物。 式（I)中R3為烧基之化合物可由式（II)適當取代之化 合物依據反應圖4所示方法製備。

R3—X (VIII) (II)

R4 N 20 反應圖4 因此，由式（II)適當取代之化合物與式（VIII)中Γ為 三氟曱項酸根、Br_及Γ之適當取代之化合物（係已知化合 物或依已知方法製備之化合物），於室溫下反應，產生相 應之式（I)化合物。 -26-

本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X297公釐） A7 B7 1317358 五、發明說明（25 ) 式（I)中R3為氫之化合物可由式（II)適當取代之化合， 物依據反應圖5所示方法製備。

O') (la) 反應圖5 因此，由式（II)適當取代之化合物與醫藥上可接受之 10酸（如：HC1、HBr、HN〇3，等等，較佳為HC1)，於室溫下 反應，產生相應之式（la)化合物，其中χ-為C1-、、 N(V，等等。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 若根據本發明製法產生立體異構物之混合物時，此等 異構物可依傳統技術分離，如：製備性層析法。化合物可 15製成消旋型，或個別之對映異構物可依對映專一性合成法 或利用解析法製備。化合物可例如：依標準技術解析成其 對映異構物成分，如：與光學活性酸（如：（_)_二—對甲笨 醯基-d-酒石酸與/或（+ )_二—對甲苯醯基_丨_酒石酸）形= 一對非對映異構性鹽，然後進行分段結晶法，及再生成游 20離鹼。化合物之解析法亦可形成非對映異構性酯或醯胺 後，經層析分離，並排除對掌性輔劑。或者，可使用對 性HPLC管柱解析化合物。 製備本發明化合物之任何方法中，可能必需及/或需 要保護相關分子上任何敏感與/或反應性基團。此作法可 -27- 本紙張尺度適用t國國家標準(CNS)A4規格（210x297公f

1317358 五、發明說明（26 ) 利用一般保護基達成，如：彼等述於j.F.W _ McOMIE編, 輯之 Protective Groups_in Organic Chemistry, Plenum

Press, 1973，及 Τ· W. Greene & P_ G. M. Wuts，Protective

Groups——in——Organic—Synthesis John Wiley & 5 Sons, 1991。可在接續之合宜階段，使用相關技藝已知之 方法排除保護基。 本發明化合物用於治療黑皮質素受體所媒介病變之用 途可依據本文中實例4-11所述方法測定。因此，本發明 提供-種治療此等病變之方法，其包括投與治療該等病變 10有效量（亦即醫療有效量）之本文所定義之任何化合物。可 依任何傳統途徑投與化合物給罹患此等病變之患者，包括 (但不限於）：經π、皮下、肌内、皮内、非經腸式及穿皮 式投藥。 本發明亦提供-種醫藥組合物，其包含一種或多種本 15發明化合物與醫藥上可接受之載劑組合。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 製備本發明之醫藥組合物時，由一種或多種式⑴與/ 或（II)化合物或其鹽（活性成份）與醫藥上可接受之載劑， 依據傳統之製藥技術均勻混合’該載劑可呈多種不同形 式，端賴所需投藥製劑形式而定，例如：經口或非經腸式 20如··經肌内。製備口服劑型時，任何常用之醫藥介質均可 使用。因此，製備口服液，如，例如：懸浮液、_、與 溶液時，合適之載劑與添加物包括水、甘醇、油類、醇 類、香料、防腐劑、著色劑，等等；製備固態口服製劑， 如，例如：散劑、膠囊、膜衣錠、明膠囊與旋劑時，合適 -28- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1317358 A7 B7 五、發明說明（27 ) 之載劑與添加物包括澱粉、糖類、稀釋劑、製粒劑、潤滑,, 劑、結合劑、崩解劑，等等。由於錠劑與膠囊方便投藥， 因此代表最有利之口服劑型，此時當然使用固態醫藥載 劑。若必要時，錠劑可依標準際技術包覆糖衣或腸溶性包 5 衣。非經腸式投藥時，載劑通常包括無菌水，但亦可包含 其他成份，例如：有助於溶解或防腐之成份。亦可製備注 射用懸浮液，此時可使用適當液態載劑、懸浮劑，等等。 包括在本發明範圍内之局部用調配物包括（但不限於） 乳霜、洗液、多重乳液、微乳液、微脂粒乳霜或凝膠、凝 10 膠、溶液、懸浮液、油膏、發泡氣溶膠、硬式或軟式明膠 囊、面膜、拭條、滚輪棒、散劑、喷霧泡沫，等等。局部 用調配物中，除了活性成份外，尚可包含一種或多種非活 性成份，包括（但不限於）：螯合劑、缓衝劑、著色劑、防 腐劑、香料、乳化劑、界面活性劑、不透明劑、軟化劑、 15 溶劑、防晒劑、黏度改良劑、抗氧化劑、濕化劑、滲透加 強劑、膜形成劑，等等。 包括在本發明範圍内治療痤瘡用之局部用調配物亦可 包含一種或多種下列成分，包括：去粉刺劑與/或去角質 劑、抗微生物劑與類固醇性或非類固醇性消炎劑。（去粉 20 刺劑指可瓦解黑頭粉刺之任何化合物。去角質劑指可打破 角質細胞，以致表皮剝落之任何化合物）。合適之去粉刺 劑與/或去角質劑包括（但不限於）：類視黃素、水揚酸、 乙醇酸、鯨蠟基甜菜鹼，等等。合適之抗氧化劑包括（但 不限於）：苯曱醯基過氧化物、紅黴素、四環黴素、克林 -29- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐）

經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1317358 A7 B7 五、發明說明（28) 達黴素、壬二酸，等等。局部用調配物典型地包含0.01-,, 1%活性成份。 本文之醫藥組合物中，每劑量單位（例如：錠劑、膠 囊、散劑、注射液、茶匙量，等等）將包含為了傳送上述 5 有效劑量所必要之活性成份用量。本文之非局部用醫藥組 合物中，每劑量單位（例如：錠劑、膠囊、散劑、注射 液、栓劑、茶匙量，等等）將包含約0. 03 mg至100 mg/kg(較佳為 0.1-30 mg/kg)，且可依約 0.1-300 mg/kg/ 天之劑量投藥（較佳為1-50 mg/kg/天）。然而，該劑量可 10 依患者之需求、所治療之病症嚴重性及所使用之化合物而 定。可採用每天投藥或周期後之投藥法。 此等組合物最好呈單位劑型如：鍵劑、丸劑、膠囊、 散劑、粒劑、無菌非經腸式溶液或懸浮液、定量氣溶膠或 液體喷液、滴劑、安瓶、自動注射裝置或栓劑；經口、非 15 經腸式、經鼻内、舌下、或直腸内投藥，或經吸入或吹入 投藥。或者，組合物可呈適合一週投藥一次或一個月投藥 一次之型式；可採用例如：活性化合物之不可溶性鹽類， 如：癸酸鹽，製成儲積式製劑，供經肌内注射。製備固體 組合物如：錠劑時，由主要活性成份與醫藥載劑混合，例 20 如：常用之製錠成分如：玉米澱粉、乳糖、蔗糖、山梨糖 醇、滑石、硬脂酸、硬脂酸鎂、磷酸二鈣或膠質，及其他 醫藥用稀釋劑，例如：水，以形成含有本發明化合物或其 醫藥上可接受之鹽類之均勻混合物之固體預調配組合物。 當提及此等預調配組合物為均勻混合物時，表示活性成份 -30- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐）

Α7 Β7 1317358 五、發明說明（3。） — 投藥之組合物包括固體形式，如：丸劑、鍵劑、膜衣鍵、 膠囊（各包括立即釋出型、定型與持續釋出型）、粒，， 劑與散劑，及液體形式如：溶液、糖漿、酏劑、乳液、與 懸浮液。適用於非經腸式投藥之形式包括無菌溶液、乳液 5 與懸浮液。 本發明化合物宜呈單一每曰劑量投藥，或每曰總劑量 可分成每日2、3或4次小劑量投藥。此外，本發明化合 物可利用局部用之合適鼻内用媒劑經鼻内投藥，或利用習 此技藝之人士熟知之穿皮式皮膚貼布投藥。以穿皮式傳送 1〇系統投藥時，投藥療程中之投藥劑量當然為連續性而非間 斷性。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 例如：呈藥錠或膠囊形式經口投藥時，活性藥物成分 可與口服用無毒性醫藥上可接受之惰性載劑組合，如：乙 醇、甘油、水，等等。此外’當需要或必要時，亦可在混 15合物中加入合適結合劑、潤滑劑、崩解劑與著色劑。合適 結合劑包括（但不限於）：澱粉、明膠、天然糖如：葡萄糖 或β-乳糖、玉米甜味劑、天然膠與合成膠如：金合歡 膠、黃耆膠或油酸鈉、硬脂酸鈉、硬脂酸鎂、苯甲酸鈉、 乙酸鈉、氣化鈉’等等。崩解劑包括（但不限於）：澱粉、 20甲基纖維素、洋菜、皂土、黃原膠，等等。 液體形式可包括適當調味之懸浮劑或勻散劑，如：合 成膠與天然膠，例如：黃耆膠、金合歡膠、甲基纖維素， 等等。供非經腸式投藥用時，需要無菌之懸浮液與溶液。 當經靜脈内投藥時，需要通常包含合適防腐劑之等張性製 -32- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公爱） 1317358 五、發明說明（31) 劑。 本發明化合物亦可呈微脂粒傳送系統投藥，如：單層 小囊胞、單層大，胞、與多層囊胞。微脂粒可由多種鱗脂 形成，如：膽固醇、硬脂基胺或磷醯基膽鹼。 5 纟發_可彻單株抗體作為與化合物分子偶 合之個別載劑傳送。本發明化合物亦可與作為目標藥物載 劑之合適聚合物偶合。此等聚合物可包括聚乙歸吼洛烧 酮、吡喃共聚物、聚羥丙基甲基丙烯基醯胺苯酚、聚羥= 基天冬醯胺苯酚、或經棕櫚醯基取代之聚環氧乙烷聚離胺 10酸。此外’本發明化合物可與一類適用於控制藥物釋出之 生物降解性聚合物偶合，例如：聚乳酸、聚卜己内酯、 聚羥基丁酸、聚正酸酯、聚縮醛、聚二氫吡喃、聚氰基丙 烯酸酯及水凝膠之交聯或親兩性嵌段共聚物。 本發明化合物可呈上述任何組合物，依據相關技藝上 15用於治療黑皮質素受體所媒介病變所建立之劑量療程投 藥。 產品之每曰劑量可在每位成人每天0. Oi-丨〇〇〇毫克 之相當大範圍内變化。經口投藥時，組合物最好呈含 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 0. 01、0. 05、0. 1、0. 5、1. 〇、2. 5、5. 0 ' 10. 〇、15. 0、 20 25. 0、50, 〇、100、150、200、250 與 500 毫克活性成份之 錠劑形式，隨所治療患者之症狀調整劑量。有效藥物劑量 通常為每日每公斤體重約0.01毫克至約1〇〇毫克。較佳 範圍為每曰每公斤體重約〇. 03毫克至約1〇毫克。化合物 可以一天投與1至4次。 -33- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐）

經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 20 1317358 五、發明說明（32) 最適當之投藥劑量很容易由習此技藝之人士決定，且 將會隨所採用之特定化合物、投藥模式、製劑強度、投藥 模式、及病情發展而變化。此外，亦需要依據與所治療特 定患者之相關因素調整劑量’包括：患者年齡、體重、飲 5 食、及投樂時間。 下列實例有助於了解本發明’並不應以任何方式限制 下文之申請專利範圍中所界定之本發明。 f例1 1〇 蜂-2-錯 合物# 31 CH·, 15 步驟A : 取含鄰甲氧基苯胺（15兔121.8麵丨）與胺化納⑽ 重量岬笨懸浮液）⑴.4〇g，146.2_⑷之無水甲苯⑽ ml)混合物於室溫下攪拌1小時。纽合物中添加苯基氰 (9.86 ml’ 96.6 _〇1)，回流加熱16小時。反應混合物 冷卻’添加L〇NHC1 (150ml)中止反應。添加活性碳， -34-

1317358 一 ：； 五、發明說明（33 ) 反應ί昆合物經寅式鹽墊過濾。添加l.ON NaOH (200 ml)調,, 整混合物pH至約14。水層經氣仿（3x150 ml)萃取。合併 之有機層經無水MgSCU脫水，蒸發。所得固體經己烷洗 條’真空乾燥，產生淺白色固體產物。 5 !H NMR (300MHz, CDCh)™ 3.83(s, 3H), 4.79(s, 2H),6.96(m, 3H),7. 04 (m, 1H), 7. 43(ιη, 3H), 7. 93(d, 2H) ! MS (APCI, MH+) 227 步驟B : 10 取含N-芳基苯曱脒（3.0 g，13. 27 mmol)(步驟A製備） 與4-甲苯基異硫氰酸酯（2.18 g，14. 60 mmol)之無水氣仿 (30 ml)混合物回流加熱16小時。反應混合物冷卻，蒸發 溶劑。所得殘質經急驟管柱層析法，使用25%己烷之二氣 甲烧/谷液為移動相純化。合併之溶離份蒸發；所得固體真 15空乾燥，產生黃色固體產物。 一 NMR (300MHz, CDCla)™ 2.36(s, 3H), 3.66(s 3H)’6.76(m，1H)，6.97 (t，1H)，7.17-7.39 (m，7h)’ 7.47 (d，2H)，7.60 (d，2H)，8.20 (s，1H)，14. 18 ’ 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 (s，1H) 20 MS (ES,MH+) 376.29 步驟C : 緩緩添加溴（438 μΐ, 8. 51 mmol)至含硫脲（2. 7· 73匪〇1)(依步驟b製備）之無水氯仿（15 ml)溶液中。’ 授拌16小時後’蒸發溶劑。所得固體經無水乙喊洗膝。 -35- 本纸張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1317358 A7 B7 五、發明說明（34) 粗產物自20%乙醇水溶液中再結晶，產生黃色固體產物。 'H NMR (300MHz, CDCh)™ 2. 39(s, 3H), 3. 66 (s, 3H),6.96 (d, 1H),7.06 (t, 1H), 7.20 - 8.07 (m, 7H), 7.61 (d, 2H), 7.80 (d, 2H), 12.40 (s, 1H) 5 MS (ES,MH+) 374.25 實例2 2-(2-甲氧笨基）-3-(2-甲氣茉某笨胺基-「上立41喧二 唑-2-錄 化合物#74

步驟A : 取含鄰甲氧基苯胺（13.5 g，110.0 mmol)與胺化納（5〇 重量％曱苯懸浮液）（9.40 g，120.0 mmol)之無水曱苯（2〇〇 20 ml)混合物於室溫下攪拌1小時。在混合物中添加2-甲氧 基苯基氰（16 ml, 131.0 mmol)，反應混合物回流加熱16 小時。反應混合物冷卻，添加1. ON HC1 (150 ml)中止反 應。添加活性碳，反應混合物經寅式鹽墊過濾。添加0N NaOH (200 ml)調整混合物PH至約14。水層經氯仿（3x150 -36- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公爱）

A7 B7 1317358 ml)萃取。合併之有機層經無水m娜脫水，蒸發。所得 體經己烧洗務’真空乾燥，產生淺白色固體產物。 MS (APCI，MH+) 257 步驟B : 5 取含N''芳基笨甲脎（15.5 g，6〇.6 mmol)(依步驟A製 備）與苯基異硫氰酸酿（U〇 ml，72_7 mmol)之無水氯仿 (—30 ml)混合物於45t下加熱16小時。反應混合物冷卻， ’备發/合㈣，所得殘質經急驟管柱層析法，使用25%己院之 二氯甲烧溶液為移動相純化。合併之溶離份紐：所得固 體真空乾燥，產生黃色固體產物。 MS (ES,MH+)391.50 步驟C : 緩緩添加溴（1. 78 ml, 34. 75 _〇1)至含硫脲 (12.95g，33. 1 mm〇i)(依步驟B製備）之無水氯仿（15 ral) 15溶液中。攪拌16小時後，蒸發溶劑。所得固體經無水乙 醚洗滌。粗產物自20%乙醇水溶液中再結晶，產生黃色固 體產物。 MS (ES，MH+) 390.1 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 依本文說明之製法製備本發明之代表性式（I)化合 20物’如表1所示。 -37- 本紐尺度適用中關家標準(CNS)A4規格（21Q χ 297公爱） 1317358 五、發明說明（％ A7 B7 表1 經 濟 部 智 慧 財 產 局 員 工 消 費 合 社 印 製 r2\^N R4 T V-N R1/+^S 、R3 Br' ID No. Ri R2 R3 R4 1 4-曱苯基 苯基 Η 4-甲氧苯基 2 4-甲苯基 苯基 Η 苯基 3 4-曱苯基 苯基 Η 2-曱氧苯基 4 4-曱苯基 苯基 Η 4-曱苯基 5 4-曱苯基 苯基 Η 2-曱苯基 6 4-曱苯基 苯基 Η 4-氯苯基 7 4-曱苯基 苯基 Η 2-氣苯基 8 2-曱苯基 苯基 Η 苯基 9 2-甲苯基 苯基 Η 4-甲氧苯基 10 2-甲苯基 苯基 Η 2-甲氧苯基 11 2-曱苯基 苯基 Η 4-甲苯基 12 2-曱苯基 苯基 Η 2-曱苯基 13 2-甲苯基 苯基 Η 4-氯苯基 14 2-曱苯基 苯基 Η 2-氯苯基 15 4-氣苯基 苯基 Η 苯基 16 4-氣苯基 苯基 Η 4-甲氧苯基 17 4-氣苯基 苯基 Η 2-甲氧苯基 18 4-氣苯基 苯基 Η 4-甲苯基 19 4-氣苯基 苯基 Η 2-甲苯基 20 4-氣苯基 苯基 Η 4-氣苯基 21 4-氣苯基 苯基 Η 2-氣苯基 22 苯基 苯基 Η 苯基 -38· 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1317358 A7 B7 經 濟 部 智 慧 財 產 局 員 工 消 費 合 h 社 印 製 五、發明說明（37 ) 23 苯基 苯基 Η 4-甲氧苯基 24 苯基 苯基 Η 2-甲氧苯基 U 25 苯基 苯基 Η 4-曱苯基 26 苯基 苯基 Η 2-甲苯基 27 苯基 苯基 Η 4-氯苯基 28 2-曱氧苯基 苯基 Η 苯基 29 2-曱氧苯基 苯基 Η 4-曱氧苯基 30 2-曱氧苯基 苯基 Η 2-曱氧苯基 31 2-甲氧苯基 苯基 Η 4-甲苯基 32 2-曱氧苯基 苯基 Η 2-曱苯基 33 2-曱氧苯基 苯基 Η 4-氯苯基 34 2-曱氧苯基 苯基 Η 2-氣苯基 35 4-曱氧苯基 苯基 Η 苯基 36 4-甲氧苯基 苯基 Η 4-甲氧苯基 37 4-曱氧苯基 苯基 Η 2-曱氧苯基 38 4-曱< 氧苯基 苯基 Η 4-曱苯基 39 4-甲氧苯基 苯基 Η 2-甲苯基 40 4-曱氧苯基 苯基 Η 4-氣苯基 41 4-甲氧&基 苯基 Η 2-氣苯基 42 2-氣苯基 苯基 Η 苯基 43 2-氣苯基 苯基 Η 4-甲氧苯基 44 2-氣苯基 苯基 Η 2-甲氧苯基 45 2-氣苯基 苯基 Η 4-曱苯基 46 2-氣苯基 苯基 Η 2-甲苯基 47 2-氣苯基 苯基 Η 4-氯苯基 48 2-氣苯基 苯基 Η 2-氣苯基 49 苯基· 苯基 Η 2-氣苯基 50 4-甲苯基 苯基 Η 4-曱氧苯基 51 苯基 苯基 Η 4-甲氧苯曱基 52 苯基 苯基 Η 2-曱氧苯曱基 53 苯基 苯基 Η 4-甲基苯甲基 -39- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1317358 A7 B7 五、發明說明（3〇 經 濟 部 智 慧 財 產 局 員 工 消 費 合 社 印 製 54 苯基 苯基 Η 2-甲基苯曱基 55 苯基 苯基 Η 4-氣苯甲基 56 苯基 苯基 Η 2-氣苯甲基 57 4-曱氧苯基 4-曱氧苯基 Η 苯基 58 4-甲氧苯基 4-甲氧苯基 Η 4-曱氧苯基 59 4-曱氧苯基 4-曱氧苯基 Η 2-曱氧苯基 60 4-曱氧苯基 4-曱氧苯基 Η 4-曱苯基 61 4-甲氧苯基 4-曱氧苯基 Η 2-曱苯基 62 4-甲氧苯基 4-甲氧苯基 Η 4-氯苯基 63 4-曱氧苯基 4-曱氧苯基 Η 2-氯苯基 64 4-曱氧苯基 4-甲氧苯基 Η 3-·1比唆基 65 2-甲氧苯基 4-甲苯基 Η 苯基 66 2-曱氧苯基 4-曱苯基 Η 4-甲氧苯基 67 2-曱氧笨基 4-曱苯基 Η 2-曱氧苯基 68 2-甲氧苯基 4-曱苯基 Η 4-甲苯基 69 2-曱氧苯基 4-曱苯基 Η 2-曱苯基 70 2-曱氧苯基 4-曱苯基 Η 4-氯苯基 71 2-甲氧苯基 4-曱苯基 Η 2-氯苯基 72 2-甲氧苯基 4-甲苯基 Η 3 -。比淀基 73 2-曱氧苯基 苯基 Η 3 -吼咬基 74 2-曱氧苯基 2-甲氧苯基 Η 笨基 75 2-曱氧苯基 2-曱氧苯基 Η 4-曱氧苯基 76 2-甲氧苯基 2-甲氧苯基 Η 2-曱氧苯基 77 2-曱氧苯基 2-曱氧苯基 Η 4-曱苯基 78 2-曱氧苯基 2-甲氧苯基 Η 2-曱苯基 79 2-甲氧苯基 2-甲氧笨基 Η 4-氯苯基 80 2-甲氧苯基 2-甲氧苯基 Η 2-氣苯基 81 2-曱氧苯基 2-甲氧苯基 Η 3-吡啶基 84 苯基 苯基 Η 苯甲基 85 2-甲氧苯基 2-甲氧苯基 Η 4-溴苯基 86 2-甲氧苯基 2-甲氧苯基 Η 2,6-二敦苯基 40· 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1317358 A7 B7 五、發明說明（39) 87 2-甲氧苯基 2-曱氧笨基 Η 2-氣-6-曱笨基 88 2-甲氧苯基 2-甲氧苯基 Η 3,5-二氟苯基 實例3 2-(2-甲氧苯基）-3-(2-曱氧笨基)-5 -笨胺基-[1，2, 4]口塞二 σ坐 5 化合物# 89

經濟部智慧財產局員工消費合作社印制衣 添加Ν-氯玻珀醯亞胺（326 mg, 2.71 _〇1)至含實例 2步驟B所製備化合物（0.921 g, 2. 36 mmol)之無水氯仿 (10 mL)溶液中。反應混合物攪拌16小時後，中止反應， 15 以NaHCCb水溶液洗滌2次。有機層經硫酸鎂脫水，真空排 除殘留溶劑，產生標題化合物之固體。 MS (ES,MH+) 390.1 依本文說明之製法製備本發明之代表性式（II)化合 物，如表2所示。 20 -41- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐） 1317358 五、發明說明（4〇 A7 B7 表2 RVN\ /R4 1 )=N Z、s厂 ID No. R1 R2 R4 82 4-甲苯基 苯基 苯基 83 4-曱苯基 苯基 4-曱氧苯基 89 2-甲氧苯基 2-曱氧苯基 苯基 90 2-曱氧苯基 2-曱氧苯基 2,6-二氟苯基 91 2-曱氧苯基 2-甲氧苯基 2-氯-6-甲苯基 92 2-甲氧苯基 2-甲氧苯基 3,5-二氟苯基 除非另有說明，否則NMR光譜係於Bruker Avance 300 MHz丽R分光計上測定。除非另有說明，否則分子量 係採用Micromass LC平台式電喷灑質譜儀測定，如表3 所示。 經 濟 部 智 慧 財 產 局 員 工 消 費 合 h 社 印 製 -42- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1317358 經 濟 部 智 慧 財 產 局 員 工 消 費 合 社 印 製 A7 B7 五、發明說明（41) 表3 ID No MW 1 (正離子） MW 2 (w/Br-) 平均MW 1 374.49 454.39 374.0 2 344.46 424.36 344.0 3 374.49 454.39 374.3 4 358.49 438.39 358.3 5 358.49 438.39 358.4 6 378.91 458.81 378.1,380.3 7 378.91 458.81 378.2, 380.2 8 344.46 424.36 344.3 9 374.49 454.39 374.2 10 374.49 454.39 374.2 11 358.49 438.39 358.3 12 358.49 438.39 358.3 13 378.91 458.81 378.2, 380.2 14 378.91 458.81 378.2, 380.2 15 364.88 444.78 346.2, 366.2 16 394.90 474.81 394.1,396.1 17 394.90 474.81 394.1,396.1 18 378.91 458.81 378.2, 380.2 19 378.91 458.81 378.2, 380.2 20 399.32 479.23 398.1,400.1 21 399.32 479.23 398.1,400.0 22 330.43 410.34 330.3 23 360.46 440.37 360.3 24 360.46 440.37 360.3 -43- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐） 1317358 A7 B7 五、發明說明（42) 經 濟 部 智 慧 財 產 局 員 工 消 費 合 社 印 製 25 344.46 424.37 344.4 26 344.46 424.37 344.3 27 364.88 444.78 364.2, 366.2 28 360.46 440.37 360.3 29 390.49 470.39 390.2 30 390.49 470.39 390.2 31 374.49 454.39 374.3 32 374.49 454.39 374.3 33 394.90 474.81 394.1,396.1 34 394.90 474.81 394.1,396.1 35 360.46 440.37 360.3 36 390.49 470.39 390.3 37 390.49 470.39 390.3 38 374.49 454.39 374.3 39 374.49 454.39 374.3 40 394.90 474.81 394.2, 396.2 41 394,90 474.81 394.2, 396.2 42 364.88 444.78 364.3, 366.3 43 394.90 474.81 394.2, 396.2 44 394.90 474.81 394.2, 396.2 45 378.91 458.81 378.2, 380.2 46 378.91 458.81 378.2, 380.2 47 399.32 479.23 398.1,400.1 48 399.32 479.23 398.1,400.1 49 364.88 444.78 364.2, 366.2 50 388.51 537.58 388.3 51 374.49 454.39 374.3 52 374.49 454.39 374.3 53 358.49 438.39 358.4 54 358.49 438.39 358.4 55 378.91 458.81 378.3, 380.3 -44- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐） 1317358 A7 B7 五、發明說明（43 ) 經 濟 部 智 慧 財 產 局 員 工 消 費 合 h 社 印 製 56 378.91 458.81 378.3, 380.3 57 390.49 470.39 390.1 58 420.51 500.42 420.1 59 420.51 500.42 420.1 60 404.51 484.42 404.1 61 404.51 484.42 404.0 62 424.93 504.83 424.0, 426.0 63 424.93 504.83 424.0, 426.0 64 391.47 471.38 391.0 65 374.49 454.39 374.2 66 404.51 484.42 404.2 67 404.51 484.42 404.1 68 388.51 468.42 388.3 69 388.51 468.42 388.2 70 408.93 488.84 408.6,410.0 71 408.93 488.84 408.1,410.0 72 375.47 455.38 375.2 ' 73 361.45 441.35 361. 74 390.49 470.39 390.2 75 420.51 500.42 420.2 76 420.51 500.42 420.2 77 404.51 484.42 404.1 78 404.51 484.42 404.1 79 424.93 504.84 424.1,426.1 80 424.93 504.84 424.1,426.1 81 391.47 471.38 391.1 82 343.45 344.3 83 373.48 374.3 84 344.46 424.36 344.3 85 469.38 549.29 86 426.5 506.4 426.3 -45- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐） 1317358五、發明說明（44) A7 B7

~~^^1 439.0 518.9 438.3, 440.3 〇〇 426.5 506.4 426.2 89 389.5 390.1 — 90 425.5 426.2 — 91 -— 437.9 438.3, 440.3 y2 425.5 ~-·· — 426.2 經 濟 部 智 慧 財 產 局 〇 消 費 合 作 社 印 製 實例4 黑皮質素MC~4受體結合性分析法 10 取購自Receptor Biology公司之黑皮質素[MC-4]-膜 與塗覆小麥胚芽凝集素之聚乙烯基甲苯之閃爍近似分析法 用之小珠[購自Amersham Pharmacia公司]，於25°C下偶 合30分鐘。在％孔〇pti板[購自加州packard公司]之 各孔中添加2.5 膜與〇.25mg小珠’於1〇〇汕體積之培 15養基中混合。培養基為50mM HEPES，pH 7.4，其中包含 〇. 1 %牛血清白蛋白、2 mM CaCl2、2 mM MgCh、與蛋白酶 抑制劑。添加含試驗化合物之ImM 30% DMSO-50mM HEPES， PH 7.4緩衝液（1.5μ1)至板上各孔中。在各孔中添加放射 活f生配位體卜NDP-黑細胞刺激性激素[nen， 20 2000Ci/職〇1](每孔48.5 μ1，終濃度4〇 pM)。培養板密封 後，於25°C下靜置16小時。使用NDP—黑細胞刺激性激素 肽與黑細胞刺激性激素肽[購自Pal〇mar Research公 司，ΙμΜ]作為參考抑制劑化合物，以定義非專一性結合性 ⑻。使用30% DMS0-5G mM UEPES，pH 7.4缓衝液定義總 -46-

A7 B7 1317358 五、發明說明（45 ) 結合性（T)。以TopCount [加州Packard公司]測定各孔中 結合放射活性（Y)，以每分鐘計數（cpm)表示。抑制百分比 之計算法為： 5 [(T-Y)/(T-N)]*100% 實例5 環狀腺苷單磷酸[cAMP]刺激作用分析法 使表現人類黑皮質素MC-4受體之人類包威氏黑色素 10 瘤細胞（Human Bowes melanoma cel Is)於 24-孔培養板中 生長至融合止。生長培養基棄置不要，在各孔中添加 〇· 5mL漢克氏溶液（Hank’s solution)。添加試驗化合物至 96孔板之各孔中。添加NDP-黑細胞刺激性激素肽（ΙμΜ)至 陽性對照組孔中，而陰性對照組孔則添加含30%DMSO-50mM 15 HEPES ’ PH7緩衝液之媒劑。培養板於37°C與5%C〇2中培養 30分鐘。棄置上澄液，以漢克氏溶液洗滌細胞2次。在各 孔中添加乙醇（80%，〇.5ml)，培養板於4°C下培養30分 鐘。使用NEN Flashplate套組[NEN]測定環狀AMP含量。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 黑皮質素受體促效劑之定義為在本分析法中使cAMP產量 20提高之試驗化合物。 實例$ 复活化作用分妍法 每次分析法中，使表現黑皮質素MC-4受體之膜 (5口g)，於 25°C下與 0.5 nM 35S-GTP YS，於 100μ1 之含 -47- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（21〇谓公策） 1317358 at B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 五、發明說明（46) 10 15 20 100 mM NaCl、蛋白酶抑制劑、0. 5μΜ GDP、5 mM 2-氫硫, 基乙醇、1 mM MgCl2之 25 mM HEPES 缓衝液 ’ ΡΗ?·5 中’ 與試驗化合物、ΙμΜ NDP-黑細胞刺激性激素或NDP-黑細 胞刺激性激素與試驗化合物之組合共同培養。基礎35s-gtp yS結合性係由含30% DMSO之10 mM HEPES缓衝液， pH7. 4 測定。添加 50μ1 含 25 mM HEPES 缓衝液，pH7. 5、 20 mM MgCh、蛋白酶抑制劑、ΙΟΟμΜ GDP、1〇〇μΜ GTP、5 mM 2-氫硫基乙醇之中止反應緩衝液及清潔劑（0· 5%毛地黃 皂苷、0.2%去氧膽酸鈉、與0.5% NP-40)中止反應。膜於 25°C下溶解30分鐘。結合35S-GTP YS之GaS蛋白質係使 用聯結抗兔子IgG蛋白質A共軛SPA之抗GaS(0.5pg)進 行免疫沉澱法測定。於Topcount [ Packard公司]上測定結 合之放射活性。非專一性5S-GTP yS結合性係由與正常兔 子IgG(0.5pg)免疫沉澱之35S-GTP YS決定。 基礎結合性（B) =經抗GaS免疫沉殿之平 均計數/分鐘（cpm) 非專一性結合性（NSB) 澱之平均cpm 專一性基礎結合性（SB) 各孔中cpm 各孔中淨cpm(N) 刺激 ％ =[(N-SB)/SB]xl00% 使用黑皮質素MC-3受體重覆上述黑皮質素齓_4受體 之方法。依所說明之方法測試本發明代表性化合物於MC一4 :經正常兔子IgG免疫沉

=B-NSB =C =C-NSB -48- 本纸張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐） 1317358 a7 B7

發明說明（47) 與/或MC-3分析法中之結合性，如表4所示。 表4 ID No. IC5〇 MC-4 (μΜ) IC5〇 MC-4 (nM) (過濾） (SPA) 1 1.1 174 2 1.5 234 -3 0.7 159 4 無活性 297 5 1.3 207 6 2.5 293 7 2.2 218 8 1.4 201 9 1.1 217 10 2.3 130(90) 11 2.4 243 12 不可溶 不可溶 13 3.4 347 14 5.6 234 15 4.5 482 16 4.3 424 17 7.7 351 18 6.0 463 19 3.9 460 20 3.5 636 21 7.8 392 22 124 23 124 24 76 25 57 -49- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐） A7 B7 1317358 五、發明說明（48) 26 63 27 89 28 68 29 43 30 103 31 22 32 48 33 91 34 46 35 100 36 79 37 72 38 159 39 146 40 133 41 483 42 482 43 237 44 89 45 246 46 368 47 874 48 444 49 96 50 30,000 51 1,000 52 1,000 53 1,000 54 800 55 800 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐） 1317358 B7 、發明說明（49 ) 56 3,000 57 無活性 58 無活性 59 無活性 60 無活性 61 無活性 62 無活性 63 1,000 64 1,200 65 114 66 120 67 130 68 110 69 139 70 566 71 234 72 155 73 725 74 194 75 103 76 332 77 4.4 78 99 79 216 80 378 81 672 82 1.5 826 83 1.9 833 84 82 nm -51- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） A7 B7 1317358 五、發明說明（50 ) 實例7 嚅齒類動物攝食試驗：禁食么皇主食物摄取量（MC-4) 取雄性Long-Evans大鼠（體重180-200克）分別關在 籠内隔離後，保持一天餵食一次之計畫（亦即早上1〇點至 5下午4點）’共5天，使動物適應攝取粉末狀飼料（#5〇〇2 PMI合格嚅齒類動物飼料（Certified R〇dent Meal))。飼 料置於以鐵線固定在籠上之開口瓶中，飼料上覆蓋一個從 動輪，以防止飼料溢出。可以自由飲水。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 試驗前’動物禁食18小時。禁食期結束時，對動物 10 投與試驗化合物或媒劑。媒劑或試驗化合物係於實驗前 分鐘經口投藥（5 mL/kg)，實驗前30分鐘經皮下投藥q mL/kg) ’或實驗前30分鐘經腹膜内投藥（1 mL/kg)。經0 投藥之試驗化合物係呈0.5%曱基纖維素-0.4% Tween 之水性懸浮液，或經腹膜内投藥之試驗化合物係呈含於 I5 PEG 200中之溶液或懸浮液；化合物濃度之典型範圍為1 rag/kg至100 mg/kg，較佳為10-30 mg/kg。稱取實驗前铜 料瓶中飼料量與指定時間點之飼料量，決定投藥後2、^ 及6小時之飼料攝取量。實驗結束時，所有動物均接受— 週之清洗期，以便進一步下一次試驗。 20 依上述方法’試驗所選定之本發明化合物，測定禁令 老鼠之食物攝取量，如表5與6所示。 -52- 1317358 五、發明說明（51 A7 B7 經 濟 部 智 慧 財 產 局 員 工 消 費 合 作 社 印 製 表 ID No. [mg/kg], 途徑 食物攝取量 0-2小時 食物攝取量 2-6小時 PEG-200 ip 8.25 g 13.38 g 1 10μ, ip 7.29 g 8.43 g 表6 ID No. [mg/kg], 途徑 食物攝取 量之變化 0-2 小時ί°/。） 食物攝取 量之變化 2-6小時(％) MCT對照組 po 0 0 PEG-200對照組 ip 0 0 1 10, ip -11.60% -37.00% 1 30, po -21.2 -6.7 84 10, ip -7 -24.5 84 10, ip 3.9 -17.8 84 30, po -7 32 26 10, ip -12.7 -32.3 27 30, ip -27.4 -29.1 29 30, po -26.3 -3.7 29 10, ip -62.3 -70.7 31 3, ip -37.8 -50 31 1, ip -20.6 -71.2 -53- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐） 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1317358 μ B7 五、發明說明（52 ) 31 30, po -23.6 31.5 31 10, p〇 -10.1 39.7 31 3, po -9 52.1 31 1, p〇 1.2 19.5 32 10, ip -29.6 -60.2 32 30, po -12.5 -15 32 10, po -20 -1 32 3, po -11.5 31.17 32 1, po -13.8 26 34 10, ip -38 -72 34 30, po -7.5 2 34 10, po -1.3 -6 49 30, ip -20.6 -21.2 實例8 神經突細胞成長分析法 15 細胞培養物： 依 Mattson, M.P·, Barger，S.W·，Begley, J 與 Mark, R.J.述於"Methods CellBiol., 1994，46:087-216"中之 方法，自18天大胚胎切下海馬回與皮質細胞培養物。簡 言之，依據AVMA安樂死小組（Panel on Euthanasia)之方 20 法，以氟烧麻醉懷孕母鼠（Sprague-Dawley品種），剖腹取 出胚胎。切下小鼠頭，取出腦部，置入HEPES-緩衝之漢克 氏平衡鹽溶液（Hank’s Balanced Salt solution (HBSS; Gibco))中。切下海馬回與皮質，依據組織型態分開收 集。組織經姨蛋白酶處理15分鐘（lmg/ml胰蛋白酶- -54- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐）

A7 B7 1317358 五、發明說明（53 ) HBSS;Worthington)，以新鮮HBSS潤洗後，於胰蛋白酶抑 制劑（lmg/ml; Sigma)中培養5分鐘，再以新鮮HBSS潤 洗，然後於lml新鮮HBSS中，使用經過火磨光之玻璃吸 管研磨。將所分離之細胞接種至塗覆聚-D-離胺酸之96孔 5 板上（Col laborative Bioscience)，每孔 30, 000 個細 胞。各孔中含有補充26mM NaHC〇3(Sigma)、56mM葡萄糖 (Sigma)、15mM KCl(Sigma)、ImM 丙酮酸納（Sigma)、 1. ImM L-麩醯胺（Sigma)、10%(v/v)加熱去活性之胎牛血 清（Hyclone)及 0.001% 健大黴素硫酸鹽（Sigma) (pH 7. 4) 10 之ΙΟΟμΙ伊格氏最基本培養基（Eagle’s Minimal Essential Media (MEM; Gibco))。實驗前，細胞置於有 濕氣之37°C與5%C〇2培養箱中24小時，使之附著。每3 天吸出培養基，換成新鮮培養基。 分析法： 15 塗覆24小時後，以媒劑（PBS+0. 1% BSA)、α-黑細胞 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 刺激性激素（cHJSH)或試驗化合物（於DPBS中稀釋）處理培 養物。各處理條件均進行四重覆。培養第3天時，吸出培 養基，換成新鮮培養基與試驗化合物。培養一週時，使用 10%磷酸鹽缓衝之福馬林固定細胞15分鐘，然後以dpbs 20 (Sigma)潤洗，置入阻斷血清中30分鐘（馬血清；於])ΡΒς 中稀釋1 : 50; Vector Labs)。再以DPBS潤洗培養物，然 後於第一抗體（與微小管連接之蛋白質-2(MAP-2)，係— 種用於樹突細胞之選擇性計號；抗小白鼠單株抗體 (Chemicon); MAP-2 於抗體稀釋液（Zymed)中稀釋 1 : 100^ -55- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐） 1317358 Αν B7 五、發明說明（54 ) 中培養2小時。陰性對照組孔則於只含抗體稀釋劑中培 養。由空白孔（無細胞）在有或沒有抗體下培養，決定背景 訊號。再以DPBS潤洗培養物，然後置入螢光素中1小時 (FITC;抗小白鼠IgG;吸附大鼠；於DPBS中稀釋1 : 5 50;Vector Labs)。最後以DPBS潤洗培養物，培養板再於

Cytofluor4000螢光讀數機上讀取數據。神經突之成長以 相對於對照組（媒劑）之百分比變化表示。 於上述分析法中，試驗本發明選定之化合物，結果示 於表7。數據以相對於媒劑反應之百分比變化表示。所有 10 化合物均於50nM下篩選。縮寫NA表示沒有變化/沒有活 性；縮寫ND表示該化合物未測試/未測定反應。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐） A7 1317358 B7 五、發明說明（55) 表7:神經突成長試驗 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 ID No. 海馬回細胞 皮質細胞 媒劑 19% 4% 1 6% NA 2 18% 18% 3 17% 23% 4 20% 21% 5 28% 9% 6 23% 24% 7 NA 11% 8 NA 12% 9 NA NA 10 7% 11% 11 9% 10% 12 28% 20% 13 29% 32% 14 30% 19% 15 18% 31% 16 8% 18% 17 8% 17% 18 17% 17% 19 22% NA 20 17% NA 21 27% 2% 22 NA 30% 23 10% 20% 24 10% 16% 25 NA 23% 26 16% 47% 27 17% 52% 28 NA 25% -57- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐） 1317358 at B7 五、發明說明（56 ) 29 NA 8% 30 NA NA 31 NA 16% 32 NA 6% 33 NA 21% 34 NA 22% 35 NA 28% 36 NA 16% 37 NA 26% 38 NA NA 39 NA ND 40 26% NA 41 36% 5% 42 26% NA 43 30% 37% 44 43% 19% 45 46% 25% 46 40% 19% 47 20% 13% 48 NA 19% 49 16% 51% 50 46% NA 51 74% 28% 52 65% NA 53 67% NA 54 45% NA 55 19% NA 56 33% NA 57 9% NA 58 72% 10% 59 61% 21% -58- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐） 1317358 A7 -- B7 五、發明說明（57)

經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 上列數據顯示，由MAP2-FITC免疫螢光測定本發明所 10 選定化合物處理培養物之結果為可顯著提高神經突成長。 比較試驗化合物與α-MSH顯示，許多試驗化合物在試驗濃 度下促進神經突成長之結果均優於α-MSH。此外，有數種 5式驗化合物對海馬回或皮質細胞中神經突之成長展現選擇 性效應。 15 ίΜΛ 2^1置顏面神經愿珀描:式. 於顏面神經壓迫模式中探討試驗化合物提供保護神經 或再生神經效應之能力。顏面神經運動軸索係獨特地自特 定腦橋核中之神經元長成。顏面神經壓迫結果造成接近受 20傷位置產生退化反應，及在其遠端部份造成華李倫變性 (Wallerian degenerati〇n)，以致受傷側邊鬍鬚之運動減 少〇 使雄性Long-Evans大鼠（150_180 g)接受3_5%異氟烷 (13(^10]：3此）誘發麻醉，於手術期間使用跦維持麻醉。曝 -59- 本纸張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（21〇 x 297公釐） 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1317358 a7 B7 五、發明說明（58 ) ' 露出右邊顏面神經，使用鑷子在神經突乳突孔之出口處壓,, 迫30秒。左邊顏面神經則接受假手術處理，作為内部對 照組。壓迫神經會造成鬍鬚肌肉麻痒，因此降低受傷側邊 之鬍鬚運動，此點在自麻醉中恢復後立即可見。所觀察到 5 與功能缺陷有關之異常形態如下： (1) 受傷侧邊之顏面神經核中之神經元周膠質細胞數 目增加，約第3-6天時，增加數達最高峰； (2) 受傷後約一週時，壓迫之顏面神經中，染色之髓 勒顏色較淡，且趙鞍質驗性蛋白質之數量較少； 10 (3) N-M接合處及鬍鬚小囊區周邊之形態出現變化， 且顏面神經核中運動神經元逐漸變性。 自麻醉中恢復後，將老鼠隨機分成媒劑組、α.Η組或 試驗化合物組，每組6隻動物。以aMSH組（每48小時經 皮下投與7〇ug)作為陽性對照組。試驗化合物係經口投與 15 20mg/kg，每天2次，共14天。手術後，採用兩項標準， 每天追蹤鬍鬚恢復運動之情形： (1)受傷侧邊之鬍鬚運動頻率相對於作為基線對照組 之相反側邊（假手術組）之變化， 20 (2)以鬍鬚肌肉強度進行半定量性測定（0至4+)，其 特徵在於依據所觀察到運動之鬍鬚百分比、鬍鬚肌肉之肌 肉彈性，及鼻子之位置。行為觀察者對進行所有觀察之實 驗設計均保持盲目未知。 行為分析結果顯示，兩種試驗化合物：化合物#31與 -60- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐）

A7 B7 1317358 五、發明說明（59 #84均可使受傷老鼠恢復鬍鬚運動之時間比媒劑對照級罐 短（p< 〇. 05)。鬍鬚運動恢復比例以相對於其自身内部董十 照組（假手術）之百分比表示’如表8所示。 5 表8 鬍 顏面神經壓迫模式中’經口投與化合物#31與#84後之 鬚運動功能恢復結果 恢復百分比 ^ D9 D10 D11 D12 D13 未受傷位置 100 100 100 100 100 ~~ϊ〇〇~~ 媒劑 0 5.0 土 27.6 土 72.5 土 86.4 ± — '^Γ3Τ~ 6.8 15.9 21.2 14.5 8.3 a-MSH 2.0 土 24.6 土 60_1 士 93_8 土 98_1 土 ΊοοΤ- 2.8 15.8 19.3 14.0 5.3 0.0 化合物#31 0 3.5 土 67.8 土 98.5 土 100 + Ίοο±"_ (246377) 3.1 9.5 3.7 0.0 0.0 化合物#84 0 4.8 土 35_1 土 90.0 土 98_3± _ 100 土 (153791) 4.3 12.9 10.9 4.1 0.0 實例10 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 活體外分析法：調節皮脂合成作用之測定法 20 步驟A:餵養層之製法 取3T3小白鼠纖維母細胞（瑞士小白鼠（Swiss Albino mouse)，ATCC CCL-92)之半融合培養物，經絲裂黴素 C( 4pg/ml)處理3小時，以胰蛋白酶處理，接種至含杜 氏最基本培養基（DMEM)(内含10%科羅拉多（Colorado)小牛 -61- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（21〇x297公爱） 1317358 at ___ B7 五、發明說明（6〇) 血清、PNC (i〇〇u/mi)、STM (lOOpg/ml)、L-麩醯胺,, (0-3mg/ml)、丙鲷酸鈉（lmM)與非必需胺基酸（1〇〇μΜ))之 組織培養板中’密度為2.5xl05/9.5cm2。細胞於37°C下 培養24小時後，才用為皮脂細胞之餵養層。 5步驟B:人類皮脂細胞之單離法 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 自人體深0.4-0. 8mm皮膚處（過去已顯示此皮膚部份 富含皮脂腺）手術取得皮膚之植皮刀刮屑中（Dermat〇me shavings)單離出人體皮脂細胞。所得之刮屑於含ι〇%血清 之艾絲考呋培養基（Iscoves medium)中，以1% Dispase， 10於37°C下處理20分鐘。然後將組織置於含〇. 3%胰蛋白酶 /1%EDTA之璘酸鹽緩衝食鹽水（pbS)中，於37°c下10分 鐘。經過此培養後，小心地將組織上之細胞刮至含 DMEM/F12培養基混合物之生長培養基（GM)(3:1)t，其中 並補充8%加熱去活性之FBS、2%加熱去活性之人體血清 15 (HS)、ImM丙酮酸鈉、表皮生長因子a〇ng/mi)、胰島素 (lOpg/ml)、氫可體松（o.^g/mi)與+/—霍亂弧菌毒素 (lOOpg/ml)、L-麩醯胺與抗生素。所得之細胞經尼龍篩網 (孔徑100μ)過濾’於750RPM下離心，再懸浮於GM中， 並計數。 20步驟C :人類皮質細胞之培養 取上述單離法所得之細胞塗覆在生長培養基中之3Τ3 餵養層上，2xl〇5/9.5cm2，維持在37°C與5%C〇2下3天（第 I期）。初生長期之後，移至過渡培養基（TM)中，其中包含 補充1M丙酮酸鈉、胰島素（lOpg/mi)、鐵傳遞蛋白 -62- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公爱） A7 B7 1317358 五、發明說明（61) (6.7ng/ml)與硒（5.5ug/ml)(ITS)、2% 加熱去活性之 FBS與2%加熱去活性之人體血清與霍亂弧菌毒素 (ch. t. KlOOpg/ml)、L-麩醯胺與抗生素之DMEM/F12培養 基（第II期）。3天後，細胞換至分化培養基（DM)中，即補 5 充ITS、3, 3’，5-三碘-L-曱腺原胺酸鈉（3ηΜ)、1%(ν/ν)微 量元素混合物及選用之分化劑，亦即牛腦垂體抽出物 (l〇Ug/ml)之DMEM/F12。每3天更換此培養基（第ΙΠ 期）。 步驟D:皮脂細胞分化與脂質合成之試驗刺激劑或抑制劑 10 在第III期開始時，添加激素、激素混合物（亦即牛 腦垂體抽出物）或試驗化合物至培養物中。採用兩項標準 評估此等物質對皮脂培養物之影響：1)目視觀察與2)評 估皮脂堆積與合成。採用尼羅紅方法（Ni 1 e red method) 分析脂質之堆積。此方法依據目視尼羅紅對中性脂質之染 15色，以讀板機於535nm激發光與580nm發射光下，讀取螢 光值定量。脂質合成之分析法係採用uC乙酸鹽進行放射 活性標記，以磷顯影器（Bi0 Rad Ph0sph0imager) (Molecular Imager, FX)，使用 4.1 軟體定量。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 步驟E:脂質堆積之目視觀察與尼羅紅分析法 20 由於細胞會擴大，且細胞中之脂質顆粒在亮視野光學 顯微鏡下呈現黃色圓環，因此很容易由形態辨認脂質堆 積《皮脂細胞中中性脂質之堆積/抑制作用之定量法係採 用尼羅紅結合性分析法進行。簡言之，皮脂細胞曝露在試 驗化合物下後，使細胞與1μΜ尼羅紅於含DMS〇及 -63- 本ΙΛ張尺度適用中》標準(CNS)^規格（210x297公釐) ' " 1317358 A7 ----- B7 五、發明說明（62 )

Pluronic F127之漢克氏緩衝食鹽水中交互反應。培養I 小時後，洗務，培養一夜’以螢光讀板機於535ηιη激發光 與580nm發射光下，讀取螢光值定量。為了測定化合物是 否對細胞生長具有抑制效應，計算細胞數。 5 依上述方法，測試本發明所選定化合物於脂質堆積試 驗之目視結果與尼羅紅分析結果，示於表9。 表9 10 ID No. 抑制％ 0.4 μΜ 抑制％ 〇·8 μ|\/| 目視* 0.4μΜ 目視* 〇.8μΜ MC5^R~^ ^50 74 72 100 +++ + + + + 154ηΐνΓ~ 76 48 88 + + ++ + 317^Γ~ 80 61 91 ++ + + + + ~T38m~~ 67 Ν.Τ. Ν.Τ. ++ + + + 246ηΜ~~ 15 50 0 0 0 0 未結合 84 0 0 0 ----- 0 未結^ * +記號數目增加表示抑制程度提高，抑制脂質顆粒形成 +H+ =100%，+++ = 75%，++ = 50% 及+ = 25%。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 步驟F:使用皮脂細胞評估皮脂合成作用 20 於培養第11天時，以咤乙酸鹽標記皮脂細胞，終濃 度為2μ(：ί/πι1 ’於無血清培養基中24小時。自培養板上 刮下細胞至玻璃瓶中，於-80°C下冷凍。使用Bligh__以打 法（Bligh，E. G. and Dyer, W.J·，Can· J. Biochem. Physiol.，1959’ 3?卯 -64- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 x 297公釐） 1317358 五、發明說明 63 10 15 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 20 中 916)萃取脂質，其中稍作修改且將說明於本文中。簡言 之，取細胞於2:1氯仿-甲醇混合物中，於KC1之存在下 均質化。自混合物中取出有機層，分離之脂質於氬氣下乾 燥，點在高效薄層層析（HPTLC)板上《層析板經3種分開 之移動相展開。首先使用己烧（展開至板子頂端），然後為 曱苯（至頂端），最後使用70:30:1己烷：醚：乙酸混合物 (半途至板子-l〇cm)。層析板曝露在放射照相底片上，目 視觀察放射活性脂質。觀察未標記之脂質時，以8%銅酸喷 灑層析板，於加熱板上燒烤。採用Image Pro Plus 3.0 (Media Cybernetics，Silver Springs，MD)得到定量結 果。 依上述方法，測試本發明所選定化合物對人體皮脂細 胞分化作用之抑制效應。經化合物#74處理之染色細胞培 養物之目視觀察結果顯示’經過7天處理後，皮脂細胞培 養物中之脂質顆粒已完全消失。由HpTLC測定所分離之標 記放射活性脂質’檢視相同細胞之料合成結果顯示，角 鯊烯、膽固醇酯與蠟酯已受到抑制。採用Image pr〇 pius (5.0版）測定條帶強度，為細胞板定量。依據處理組樣本 與媒劑處理對肋之間差異計算抑愼，其結果示於表1〇 65. 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐）

1317358 A7 B7 五、發明說明（64 ) 表10 脂質 誘發劑 細胞性別 抑制°/。@ 0.4μΜ 私制°/〇@ 0.6μΜ 角鯊烯 霍亂弧菌毒素 與牛 F/M 100/100 100/100 膽固醇酯 腦垂體抽出物 F/M 85/64 88/76 未知物 腦垂體抽出物 F/M 75/68 85/80 蠟酯 腦垂體抽出物 F/M 70/50 67/42 三酸甘油酯 腦垂體抽出物 F/M 0 0 實例11 5 試驗化合物對皮脂生產影響之活體内分析法：人體古膚-SCTT)小白鼠嵌合體模式 經濟部智慧財產局員工消費合作杜印製 嚴重複合式免疫缺陷小白鼠（SCID)為皮膚異種移植提 供無價之模式。此等動物已被剝除T與B細胞免疫力。 SCID小白鼠中之人體皮膚移植物則保留人類細胞組織成 10 分，包括皮膚免疫細胞，亦即朗格漢細胞（Langerhans cel Is)、巨噬細胞與淋巴球，及一部份植入之内皮 (Kaufman R., et al., Exp. Dermatol. 1993: 2: 209-216, 1993)。由此等性質可以探討人類皮膚細胞對試驗化 合物之生理與/或病理反應。 15 步驟A :移植法 使用 5-6 週大之 C.B-17 scid/scid 小白鼠（Taconic, Germantown, N. Υ·)進行移植。使用福曼植皮刀（Forman Dermatome)刮下全厚度之人類顏面皮膚至約0.4 mm處。 皮膚刮屑於含抗生素與抗黴菌素（青黴素、鍵黴素、兩性 -66- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1317358 A7 B7 五、發明說明（65 10 15 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 20 黴素）（Lifetechnologies)之杜氏改良式伊格培養(Dulbecco’s Modified Eagle Medium) (DMEM， Life Technologies)中洗滌3次。取橢圓形皮膚約& 2. 5x1. 0-1. 5移植至預備好之移植床上，使用4. 〇絲線缝 合。手術期間，小白鼠使用Ketaset (〇· 16 mg/g體重）與 Rompun (8. 〇!ig/g體重）之混合物麻醉。 咸了解，SCID小白鼠之移植皮膚傷口癒合過程需費 時一個月，此時才可使用人類皮膚進行實驗。吾等亦發現 移植之人類皮膚中之皮脂腺逐漸再生，由Sebutape及組 織形悲測定計之結果顯示，此等皮脂腺於7週後完全再生 並分泌皮脂。當移植後3個月，觀察到皮脂腺之最大面 積。皮脂線仍保留其生產人類專—性皮脂之能力，且皮脂 腺組織表現人類專一性記號，包括MC5_R。由於皮脂腺在 移植後2-3個月時達到最大面積，因綠此時間點測定抑 制劑對皮脂分泌之影響。 步驟B:處理法 使用接受人類顏面皮膚移植後2_3個月之小白鼠進疒 試驗。移植區域使用溶於聚乙二醇—乙醇⑵_ 之所需漠度試驗化合物處理。對照組只使用媒劑處理。除 了週末以外，每天施用試驗化合物。於處理後l5 Μ ^ 天時，使用Sebutape測定皮脂分泌。 步驟C:實驗終點 實驗終點係使用测刪進行皮脂生產之預備臨庆 分析法敎。此時切下人類皮膚雜物，收集代表性樣 -67- 本纸張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） 裝 計 線 1317358 五、發明說明（66 ) 5 10 15 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 20化合物#74對人類皮脂之影響（處理11天） 本’供進行組織分析。更特定言之，以打孔機剪下2mm活 體組織’用於分析處理組織中之脂f合成及脂質總堆積 量。 步驟山所檢視組織中脂質合成與脂質總堆積量之分析法 將所收集之2mm活體組織片分別置於含有克氏（Krebs) 緩衝液之96孔板中，以l¥i C14乙酸鹽標記3小時。經 過此期後’樣本於培養基巾洗務，收集5 #活體組織 樣本，稱重，用於萃取脂質。脂質萃取法與Ηρτιχ分析法 均如上述來自組織培養物之細胞所使用之相同方法。 依上述方法，測試本發明化合物#74對移植至SCID 小白鼠之人類皮膚處理u天後之抑制皮脂腺活性結果。 、使用化合物#74之0.1%溶液局部處理皮脂腺後之目 視分析結果顯示，皮脂腺出現可見之縮小現象且皮脂分泌 減1。以〇·〇5%及0 005%溶液局部處理15天時，不足以 ^脂質產量向下調降。使用HPTLC分析此等細胞之人類皮 月曰文抑制之分析結果數據，結果示於表n、12與^。抑 制％數值係相對於對照組表示。 表11

297公釐）

-68- 73 1X 13 58

發明說明（67 ) 玉 表12 化合物#74輕質堆積之影響(處理 30天） 蠘 _酸甘油酯 膽1¾

5 表13 化合物#74對皮脂合成之影響（處理3〇天） — 月旨 質 角鯊希 ' 抑制 Q/oOAOS% —--------------- 抑制 α/οΟ/Ο.ΟΙ % 90 80 磁.醋 三酸甘油酯 ~~ ^ 93 86 90 75 膽固醇 82 33 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

ο 5 lx IX 如上述表12與13所示，在使用化合物#74之0. 05% 及0.01%溶液局部處理3G天後，皮減堆積量及重新合成 之皮脂量顯著減少。 實例12 口調配物 口服組合物之明確具體實施例中，使用100mg實例2 之化合物#74與充分細碎之乳糖調配，形成總量58〇至 590 mg ’供填入〇號規格之硬明膠囊中， -69- 尺 張 紙 本 l適用中a國家標準(CNS)A4規格⑵G χ297公爱）

kl 1317358 B7 五、發明說明（α) 實例13 局部用調配物 A :微乳液 微乳液之明確具體實施例係混合下列成分，必要時可 5 加熱： 聚山梨酸酯60 (例如：來自ICI界面活性劑之Tween60) 20份 棕櫚酸異丙酯 20份 油酸山梨糖醇酐酯 (例如：來自ICI界面活性劑之Span 80) 13份 2-乙基己二醇-1，3 4份 丁基化羥基-曱苯 0.05 份 化合物#74 0.05 份 在混合物中缓缓添加水（42. 9份重量比），必要時可以 混合，形成乳液。 10 B :含水醇凝膠 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 含水醇凝膠之明確具體實施例係混合聚丙二醇（10份 重量比）、丁二醇（10份重量比）、苯甲醇（2份重量比）、 EDTA (0.05份重量比）與BHT (0.05份重量比）及水（總量 占74.85份重量比）。混合混合物至所有成分均溶解為 15 止。然後緩緩添加Carbomer (例如：Goodrich公司之 Carbopol 934P)(3份重量比）並常常旋轉混合，形成凝 -70- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1317358 at B7 77 5

ο 1A 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

5 1X 發明說明Ο) 膠。然後將化合物#74 (0.05份重量比）混合勻散至凝膠,Λ 中。凝膠pH調至約pH 3-4。 C :無水凝朦 無水凝膠之明確具體實施例中，添加異丙醇（2〇份重 量比）至丁二醇（20份重量比）中。然後添加βητ(0. 05份重 里比）與本甲醇（1.0份重量比）至異丙醇/丁二醇混合物 中。在所得混合物中’於持續攪拌下，添加環四石夕氧户 與有機聚石夕氧烧-11(例如：Grant Industries夕r _ 4) 、bransi1 比） GSM凝膠）（58. 85份重量比）。取化合物#74 (〇 1份重θ 微粉化，在連續攪拌下勻散至凝膠中，並均勻分里 D :乳霜 〇/w(油/水）乳霜之明確具體實施例中，依指a θ 下列成分（重量份數）。最終混合物使用鹽酸調至約pH °

Cetearyl 醇 〜'' ίϊΐ~~ ' ~~~ Ceteth-20界面活性劑 〜 (例如：來自ICI界面活性劑之Brii58) 癸酸/辛酸三酸甘油酯 (例如：來自 GoldSchmidt 之TesosoftCD 甘胺酸 〜 化合物#74 Π BHT ~~ 水 〜 雖然上述說明已教示本發明，其中利用實例說明 咸了解，本發明之操作涵括下列申請專利範圍及其 但 之範圍内之所有一般變化、擷用與/或修飾。 物 -71-本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公爱）

Claims (1)

1317358 A8 -'一 B8 專利申請案第91133318號 ROC Patent Appln. No. 91133318 六、申請專利範圍 正後無劃線之申請專利k圍中文本~ _tr-Amended Claims in Chinese ~ — I ΐ良國97年5月30日送 — (Submitted on May 30, 2008) 1. 一種式(I)化合物

經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 其中 R1係為苯基，其經一個分別獨立選自下列之取代基 取代：函素、Cl-6燒基、或Q烧氧基； R2係為苯基，其經-個分別_立選自下列之取代基 取代：Ck烷基、或Cw燒氧基；R3係選自下列各物組成之群巾：氫、及“烧基； Μ係選自下列各物組成之群中：苯基'笨甲基、及 比咬基，其中苯基、或笨甲基可視需要經一個或 二個分別獨立選自下列之取代基取代：i素、Cl.6 烷基、及Cw烷氧基； X-係選自下列各物組成之群中：漠離子、氣離子、 碘離：、乙酸根、笨甲酸根、檸檬酸根、乳酸 根、頻果酸根、墙酸根、碟酸根、二磷酸根、琥 猶根、硫雜、酒石㈣與甲料酸根；但書^當RU苯基或鹵苯基，r2為苯基且r4為苯基 或鹵苯基時’則R3不為氫；及其醫藥上可接受之鹽類。2.根據申請專利範圍第丨項之化合物，其中-72 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4^ (210x297公^ 10 15 20 91501B-接 3 A8 B8 C8 D8 1317358 \、申請專利範圍 R3係為氫； R4係為苯基；其中苯基可視需要經1至2個分別獨 立選自鹵素、Cm烷基與Cw烷氧基之取代基取 代； 5 及其醫藥上可接受之鹽類。 3.根據申請專利範圍第2項之化合物，其中 R1係選自下列各物組成之群中：2-氯苯基、4-氯苯 基、2-曱苯基、4-甲苯基、2-曱氧苯基與4-甲氧苯 基， 10 R2係選自下列各物組成之群中：4-甲苯基、2-甲氧苯 基與4-曱氧苯基， R3係選自氫與曱基組成之群中； R4係選自：苯基、2-氯苯基、4-氯苯基、4-溴苯基、 2-曱苯基、4-曱苯基、2-甲氧苯基、4-曱氧苯基、 15 苯甲基、2-氯苯曱基、4-氯苯曱基、2-甲基苯曱 基、4-曱基苯曱基、2-曱氧苯曱基、4-曱氧苯曱 基、2,6-二氟苯基、3,5-二氟苯基、2-氯-6-甲苯基 與3-吡啶基； 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 及其醫藥上可接受之鹽類。 20 4.根據申請專利範圍第3項之化合物，其係選自下列各 物組成之群中： 2-(2-曱氧苯基)-3-(2-曱氧苯基)-5-苯胺基-[1,2,4]-噻二 。坐-2-1翁； 2-(2-曱氧苯基）-3-(2-曱氧苯基）-5-(2-甲氧苯胺基）- -73- 本纸張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） A8 B8 C8 D8 1317358 六、申請專利範圍 [1,2,4]-噻二唑-2-鑕； 2-(2-曱氧苯基)-3-(2-曱氧苯基)-5-(4-甲苯胺基)-[1,2,4]-噻二唑-2-鑌； 及其醫藥上可接受之鹽類。 5 5.根據申請專利範圍第4項之化合物，其係選自2-(2-甲 乳苯基)-3-(2-甲氧苯基)-5-苯胺基 其醫藥上可接受之鹽類。 6. —種用於治療黑皮質素受體所媒介的病症之醫藥組合 物，其包含根據申請專利範圍第1項之化合物與醫藥 10 上可接受之載劑。 7. —種製造用於治療黑皮質素受體所媒介的病症之醫藥 組合物之方法，其包括混合根據申請專利範圍第1項 之化合物與醫藥上可接受之載劑。 8. 根據申請專利範圍第6項之醫藥組合物，其中黑皮質 15 素受體所媒介之病症係選自包括代謝病症、CNS病症 與皮膚病症。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 9. 根據申請專利範圍第6項之醫藥組合物，其中黑皮質 素受體所媒介之病症係選自包括肥胖症、口服葡萄糖 耐受性受損、血糖濃度增加、II型糖尿病、X-症候 20 群、糖尿病性腎病變、急性神經退化病症、慢性神經 退化病症、神經叢病變、男性勃起功能障礙、乾眼 症、痤瘡、皮膚乾燥、皮膚老化、皮脂漏皮膚炎、酒 逢鼻、耳垢過多、臉板腺病症、假毛囊炎、酵母菌感 染、頭皮屑、化膿性汗腺炎、眼紅斑痤瘡、及分泌腺 -74 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） • A8 1317358 ?88 •_D8_ 六、申請專利範圍 病症。 10. 根據申請專利範圍第6項之醫藥組合物，其中黑皮質 素受體所媒介之病症係選自包括肥胖症、口服葡萄糖 而于受性受損、血糖濃度增加、II型糖尿病、及X-症候 5 群。 11. 根據申請專利範圍第6項之醫藥組合物，其中黑皮質 素受體所媒介之病症係選自包括痤瘡、皮膚乾燥、及 皮脂漏皮膚炎。 12. 根據申請專利範圍第6項之醫藥組合物，其中黑皮質 10 素受體係選自包括黑皮質素-3、黑皮質素-4及黑皮質 素-5受體。 13. 根據申請專利範圍第6項之醫藥組合物，其中該醫藥 組合物為局部用調配物。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐）