JP4491235B2 - メラノコルチン受容体調節剤としての新規な１，２，４−チアジアゾリウム誘導体 - Google Patents

Description

関連出願の相互参照

本出願は、２００１年１１月８日付けで提出した米国仮出願６０／３３７，７６２（引用することによって全体が本明細書に組み入れられる）の利点を請求するものである。

本発明は、メラノコルチン受容体（ｍｅｌａｎｏｃｏｒｔｉｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ）が介在する障害の治療で用いるに有用な新規な１，２，４−チアジアゾール誘導体を提供するものである。より詳細には、本発明の化合物は、代謝障害、ＣＮＳ障害および皮膚科学的障害、例えば肥満症、減退した経口グルコース耐性、高くなった血液グルコース濃度、ＩＩ型糖尿病、Ｘ症候群、糖尿病性網膜症、急性神経変性障害、慢性神経変性障害、プレキソパシー（ｐｌｅｘｏｐａｔｈｉｅｓ）、男性の勃起機能不全、ドライアイ、アクネ、乾燥皮膚、老化した皮膚、脂漏性皮膚炎、しゅさ、過剰な耳垢、マイボーム腺障害、偽性毛包炎（ｐｓｅｕｄｏｆｏｌｌｉｃｕｌｉｔｉｓ）、酵母菌感染、ふけ、ヒラデニチス・スプラチバ（ｈｉｒａｄｅｎｉｔｉｓ ｓｕｐｐｕｒａｔｉｖｅ）、眼のしゅさおよびエクリン腺障害などの治療で用いるに有用である。

メラノコルチンは、視床下部の弓状核、下垂体葉および脳幹の弧束核の中で最も頻繁に発現するプロ−オピオメラノコルチン（ＰＯＭＣ）から生じるニューロペプチドである（非特許文献１）。前記ペプチドにはＡＣＴＨ、α−ＭＳＨ、β−ＭＳＨ、γ_１−３−ＭＳＨおよび合成類似物であるＮＤＰ−αＭＳＨが含まれる（非特許文献２）。

前記ペプチドは、Ｇ蛋白結合受容体である５種類のメラノコルチン受容体（ＭＣ１−ＭＣ５）（これらは全部がアデニレートシクラーゼをポジティブに調節する）と結合する。ＭＣ４およびＭＣ５受容体は脳および脊髄の中に幅広く分布している一方、ＭＣ３受容体は主に視床下部に存在する（非特許文献１）。ＭＣ４受容体はαＭＳＨによって選択的に活性化して、ニューロ２Ａ細胞における神経突起の生長を誘発し得る（非特許文献３および４）。ＡＣＴＨの方がαＭＳＨよりも効力が弱いＭＣ４受容体活性化剤である（非特許文献５）。ＭＣ５受容体は下記の度合の順で活性化される：ＮＤＰ≒α−ＭＳＨ＞ＡＣＴＨ（１−２４）≧αＭＳＨ ＡＣＨＴ（１−３９）＝βＭＳＨ＞＞γＭＳＨ（非特許文献６）。

動物全体として、ラット座骨神経粉砕モデル（ｃｒｕｓｈ ｍｏｄｅｌ）における研究で、α−ＭＳＨが神経突起の生長を向上させそしてそれはＡＣＨＴ誘導ペプチドの最も効力のある助長剤として神経の末端分枝、終板領域および突出部を有意に助長することが示された（非特許文献７、８、９、１０）。その上、α−ＭＳＨおよび他のメラノコルチンを投与すると神経損傷後に運動機能が回復する時間も短くなる（非特許文献１０）。

遺伝子ターゲティングによってＭＣ４受容体を不活性にしたマウスは肥満になり、このことは、ＭＣ４受容体が食べることに関与していることを示唆している（非特許文献１１）。これは、いろいろなＭＣ４ペプチド作動薬がアグーチマウスにおける食べる挙動を抑制すると言った報告によって実証されている（非特許文献１２）。α−ＭＳＨがラットのグルーミング挙動を誘発するが、これの有意さは明瞭ではなく、これにＭＣ４受容体が介在していない可能性もある（非特許文献１３）。

メラノコルチンであるαＭＳＨおよびＡＣＨＴはまたそれぞれ色素沈着および副腎のグルココルチコイド分泌を刺激する能力も有することが知られている。メラノコルチン、特にαＭＳＨが脂腺活性（全分泌型の分泌を伴う外分泌腺）の調節で果たす役割が最初にラットで示された。より詳細には、その研究により、下垂体の中間葉（ＰＯＭＣペプチドを産生する）を除去すると結果として皮脂（ｓｅｂａｃｅｏｕｓ ｌｉｐｉｄ）の産生が減少したが、αＭＳＨを用いた補充治療を行うと正常なレベルにまで完全に回復することが示された（非特許文献１４）。全下垂体切除後のラットの研究でαＭＳＨを用いた治療を行うと結果として皮脂の産生が増加したが、皮脂産生の完全な回復が達成されたのはαＭＳＨとテストステロンを組み合わせた治療を行った後のみである（非特許文献１５、１６）。ＭＣ５受容体を切除したノックアウトマウスでは、脂質の産生が減少することが理由で水斥（ｗａｔｅｒ ｒｅｐｕｌｓｉｏｎ）および熱調節のひどい欠乏を示すことが観察された（非特許文献１７）。

ＭＣ５受容体はヒト脂腺の中に発現することが知られており、これはヒト脂質合成の調節に関与している可能性がある。ヒトＭＣ５−Ｒのクローン化および特徴付けが行われた（非特許文献１８）。その上、ＲＴ−ＰＣＲにより、ヒト脂腺にＭＣ５−ＲのｍＲＮＡが存在することが示され、その蛋白質が免疫組織化学およびウエスタンブロット分析で検出された（非特許文献１９）。

ヒトの皮脂は組成の点で他の哺乳動物のそれとは異なる。ヒトの皮脂に存在する主な脂質はトリグリセリド、ワックスエステルおよびスクワレンである（非特許文献２０）。例えば、スクワレンはかわうそおよびビーバーを除く多くの哺乳動物に見られない。ヒトの皮質の主成分であるトリグリセリドは他の種にほとんど見られず、多くの種（例えばチンパンジー）には明らかに全く存在しないと（非特許文献２１）。その上、メラノコルチンが細胞に対して示す影響は種が異なると異なる可能性がある。例えば、αＭＳＨ（ＥＣ_５０＝３．７ｎＭ）およびＡＣＴＨ（ＥＣ_５０＝１６．４ｎＭ）は両方ともがラビットの脂肪細胞にとって効力のある脂肪分解剤であるが、ラットではＡＣＴＨ（ＥＣ_５０＝１．３４ｎＭ）のみが効力のある脂肪分解活性を示す（非特許文献２２、２３）。ＡＣＴＨは、齧歯類およびラビットでは脂肪分解活性を示すが、単離したヒト脂肪細胞およびヒトではない霊長類の脂肪細胞では濃度を１μＭの如く高くした時でも脂肪分解に対してほとんど全く効果を示さない（非特許文献２４）。このように、メラノコルチンおよびこれらの受容体が動物の皮脂モデル系で示す役割を明らかにすることは必ずしもヒトの脂質調節においてそれらが果たす働きの予測になるとは限らない。

最近、ペプチドではない小型分子化合物であるイソキノリン誘導体が特許文献１に開示され、これはＭＣ１およびＭＣ４受容体に低マイクロモル親和性を示し、アラキドン酸によって誘発された皮膚炎症を軽減し、そして体重および食物摂取を減少させることが示された。

肥満、糖尿病および性機能不全の如き病気および障害の治療で用いるに有用なメラノコルチン受容体作動薬としてスピロピペリジン誘導体が特許文献２に開示された。

従って、メラノコルチン受容体、より詳細にはメラノコルチン−３、メラノコルチン−４および／またはメラノコルチン−５受容体の調節剤である小型分子の必要性が存在する。
Ｂａｓｕ他、ＷＩＰＯ公開ＷＯ９９／５５６７９ Ｎａｒｇｕｎｄ他、ＷＩＰＯ公開ＷＯ９９／６４００２ Ｇａｎｔｚ，Ｉ．他、「Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ、Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，ａｎｄ Ｇｅｎｅ Ｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ａ Ｆｏｕｒｔｈ Ｍｅｌａｎｏｃｏｒｏｔｉｎ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ」、Ｊ．Ｂｉｏｌｏｇ．Ｃｈｅｍ．、１９９３、２６８、１５１７４−１５１７９ Ｗｉｋｂｅｒｇ，ＪＥＳ、「Ｍｅｌａｎｏｃｏｒｔｉｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ：ｎｅｗ ｏｐｐｏｒｔｕｎｉｔｉｅｓ ｉｎ ｄｒｕｇ ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ」、Ｅｘｐ．Ｏｐｉｎ．Ｔｈｅｒ．Ｐａｔｅｎｔｓ、２０００、１１（１）、６１−７６ Ａｄａｎ Ｒ．Ａ．Ｈ．他、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｒｉａｎ Ｒｅｓｅａｒａｃｈ、１９９６、３６、３７−４４頁、 Ｍｏｕｎｔｊｏｙ，Ｋ．Ｇ．、Ｍｏｒｔｕｄ，Ｍ．Ｔ．、Ｌｏｗ，Ｍ．Ｊ．、Ｓｉｍｅｒｌｙ，Ｒ．Ｂ．およびＣｏｎｅ，Ｒ．Ｄ．、Ｍｏｌ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．、１９９４、８、１２９８−１３０８頁 Ａｄａｎ Ｒ．Ａ．Ｈ．、Ｃｏｎｅ，Ｒ．Ｄ．、Ｂｕｒｂａｃｈ，Ｊ．Ｐ．Ｈ．およびＧｉｓｐｅｎ，Ｗ．Ｈ．、ｍｏｌ．ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１９９４、４６、１１８２−１１９０頁、 「Ｔｈｅ Ｍｅｌａｎｏｃｏｒｔｉｎ Ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ」、Ｃｏｎｅ，Ｒ．Ｄ．編集、Ｈｕｍａｎ Ｐｒｅｓｓ Ｉｎｃ．、Ｔｏｔｏｗａ、Ｎ．Ｊ．、２０００、Ｃｈｅｎ．Ｗ．、４４９−４７２頁 Ｂｉｊｌｓｍａ，Ｗ．Ａ．他、「Ｔｈｅ Ｅｎｈａｎｃｅｄ Ｒｅｃｏｖｅｒｙ ｏｆ Ｓｅｎｓｏｒｉｍｏｔｏｒ Ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｉｎ Ｒａｔｓ ｉｓ Ｒｅｌａｔｅｄ ｔｏ ｔｈｅ Ｍｅｌａｎｔｒｏｐｉｃ Ｍｏｉｅｔｙ ｏｆ ＡＣＴＨ／ＭＳＨ Ｎｅｕｒｏｐｅｐｔｉｄｅｓ」、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｌ．、１９８３、９２、２３１−２３６ Ｖａｎ ｄｅｒ Ｎｅｕｔ．Ｒ．他、「Ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ ｂｙ Ｍｅｌａｎｏｃｏｒｔｉｎｓ ｏｆ Ｎｅｕｒｉｔｅ Ｏｕｔｇｒｏｗｔｈ ｆｒｏｍ Ｓｐｉｎａｌ ａｎｄ Ｓｅｎｓｏｒｙ Ｎｅｕｒｏｎｓ Ｉｎ Ｖｉｔｒｏ」、Ｐｅｐｔｉｄｅｓ，１９９２、１３、１１０９−１１１５ Ｖａｎ Ｄｅｒ Ｚｅｅ，Ｃ．Ｅ．Ｅ．Ｍ．他、α−ＭＳＨ ａｎｄ Ｏｒｇ ２７６６ ｉｎ Ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ Ｎｅｒｖｅ Ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ：Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ Ｒｏｕｔｅ ｏｆ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ」、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．、１９８８、１４７、３５１−３５７ Ｓｔｒａｎｄ，Ｆ．Ｌ．他、「Ｍｅｌａｎｏｃｏｒｔｉｎｓ ａｓ Ｆａｃｔｏｒｓ ｉｎ Ｓｏｍａｔｉｃ Ｎｅｕｒｏｍｕｓｃｕｌａｒ Ｇｒｏｗｔｈ ａｎｄ Ｒｅｇｒｏｗｔｈ」、Ｐｈａｒｍａｃ．Ｔｈｅｒ．、１９９４、６２、１−２７ Ｈｕｓｚａｒ，Ｄ．他、「Ｔａｒｇｅｔｅｄ Ｄｉｓｒｕｐｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ Ｍｅｌａｎｏｃｏｒｔｉｎ−４ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ Ｒｅｓｕｌｔｓ ｉｎ Ｍｉｃｅ」、Ｃｅｌｌ、１９９７、８８、１３１−１４１ Ｆａｎ，Ｗ．他、「Ｒｏｌｅ ｏｆ Ｍｅｌａｎｏｃｏｒｔｉｎｇｅｎｉｃ Ｎｅｕｒｏｎｓ ｉｎ Ｆｅｅｄｉｎｇ ａｎｄ ｔｈｅ Ａｇｏｕｔｉ Ｏｂｅｓｉｔｙ Ｓｙｎｄｒｏｍｅ」、Ｎａｔｕｒｅ、１９９７、３８５、１６５−１６８ Ａｄａｎ，Ｒ．Ａ．Ｈ．他、「Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ Ｍｅｌａｎｏｃｏｒｔｉｎ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ ｏｎ Ｎｅｕｒａｌ Ｍｅｌａｎｏｃｏｒｔｉｎ Ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ」、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ、１９９４、４６、１１８２−１１９０ Ｔｈｏｄｙ，Ａ．Ｊ．およびＳｈｕｓｔｅｒ、Ｎａｔｕｒｅ、２３７、３４６−３４７、１９７２ Ｔｈｏｄｙ，Ａ．Ｊ．、Ｓｈｕｓｔｅｒ，Ｓ．、Ｊ．Ｅｎｄｏｃｒ．、６４、５０３−５１０、１９７５ Ｅｂｌｉｎｇ，Ｆ．Ｊ．、Ｅｂｌｉｎｇ，Ｅ．、Ｒａｎｄａｌｌ，Ｖ．およびＳｋｉｎｎｅｒ，Ｊ．、Ｊ．Ｅｎｄｏｃｒ．６６、４０７−４１２、１９７５ Ｃｈｅｎ．Ｗ．、Ｋｅｌｌｙ，Ｍ．Ａ．、Ｏｐｔｉｚ−Ａｒａｙａ，Ｘ．、Ｔｈｏｍａｓ，Ｒ．Ｅ．、Ｌｏｗ，Ｍ．Ｊ．およびＣｏｎｅ，Ｒ．、Ｃｅｌｌ、９１、７８８−７９８、１９９７ Ｃｈｈａｊｌａｎｉ，Ｖ．、Ｍｕｃｅｎｉｅｃｅ，Ｒ．、Ｗｉｋｂｅｒｇ，ＪＥＳ．、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ，Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ，１９５、８６６−８７３、１９９３ Ｔｈｉｂｏｕｔｏｔ，Ｄ．、Ｓｉｖａｒａｊａｈ，Ｇｉｌｉｌａｎｄ，Ｋ．、Ｃｏｎｇ，Ｚ．およびＣｌａｗｓｏｎ，Ｇ．、Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．１１５（４）、６１４−６１９、２０００ Ｇｒｅｅｎｅ，Ｒ．Ｓ．、Ｄｏｗｎｉｎｇ，Ｄ．Ｔ．、Ｐｏｃｉ，Ｐ．Ｅ．、Ｓｔｒａｕｓｓ，Ｊ．Ｓ．、ＪＩＤ ５４、２４０−２４７、１９７０ Ｔｈｏｄｙ，Ａ．Ｊ．、Ｓｈｕｓｔｅｒ，Ｓ．、Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ，Ｒｅｖ．６９、３８３−４１５、１９８９ Ｒａｍａｃｈａｄｒａｎ，Ｊ．、Ｌｅｅ，Ｖ．、４２８、３３９−３４６、１９８７ Ｒｉｃｈｔｅｒ，Ｗ．Ｏ．、Ｓｃｈｗａｎｄｔ，Ｐ．、Ｎｅｕｒｏｐｅｐｔｉｄｅｓ ９、５９−７４、１９８７ Ｎｇ，Ｔ．Ｂ．、Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ Ｂｉｏｃｈｅｍ．９７、４４１−４４６、１９９０

本発明は、一般式（Ｉ）

［式中、
Ｒ^１は、アリール、アラルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリール−アルキル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルキル−アルキル、シクロアルキルおよびシクロアルキル−アルキルから成る群から選択され、ここで、前記アリール、アラルキル、ヘテロアリール、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルキル−アルキルまたはシクロアルキル基は場合によりハロゲン、ヒドロキシ、アルキル、アルコキシ、ハロゲン置換アルキル、ハロゲン置換アルコキシ、アミノ、アルキルアミノまたはジ（アルキル）アミノから独立して選択される１個以上の置換基で置換されていてもよく、
Ｒ^２は、アリール、アラルキル、ヘテロアリール、ヘテロシクロアルキルおよびシクロアルキル−アルキルから成る群から選択され、ここで、前記アリール、アラルキル、ヘテロアリール、ヘテロシクロアルキルまたはシクロアルキル基は場合によりハロゲン、ヒドロキシ、アルキル、アルコキシ、ハロゲン置換アルキル、ハロゲン置換アルコキシ、アミノ、アルキルアミノまたはジ（アルキル）アミノから独立して選択される１個以上の置換基で置換されていてもよく、
Ｒ^３は、水素、アルキル、アルケニルおよびアルキニルから成る群から選択され、ここで、前記アルケニルの二重結合または前記アルキニル基の三重結合は結合点から少なくとも炭素原子１個分離れており、
Ｒ^４は、アリール、アラルキル、ヘテロアリール、ヘテロシクロアルキルおよびシクロアルキル−アルキルから成る群から選択され、ここで、前記アリール、アラルキル、ヘテロアリール、ヘテロシクロアルキルまたはシクロアルキル基は場合によりハロゲン、ヒドロキシ、アルキル、アルコキシ、ハロゲン置換アルキル、ハロゲン置換アルコキシ、アミノ、アルキルアミノまたはジ（アルキル）アミノから独立して選択される１個以上の置換基で置換されていてもよく、
Ｘ⁻は、ブロマイド、クロライド、ヨージド、アセテート、ベンゾエート、サイトレート、ラクテート、マレート、ナイトレート、ホスフェート、ジホスフェート、スクシネート、スルフェート、タートレートおよびトシレートから成る群から選択されるが、
但しＲ^１がフェニル、クロロフェニルまたはベンジルであり、Ｒ^２がフェニルまたはベンゾチエニルでありかつＲ^４がフェニルまたはアラルキルの場合にはＲ^３がアルキル、アルケニルおよびアルキニルから成る群から選択され、ここで、前記アルケニルの二重結合または前記アルキニル基の三重結合は結合点から少なくとも炭素原子１個分離れていることを条件とし、
更に、Ｒ^１がベンジルまたはメチルフェニルであり、Ｒ^２がフェニルまたはメチルフェニルでありかつＲ^４がメチルフェニルまたは４−メトキシフェニルの場合にはＲ^３がアルキル、アルケニルおよびアルキニルから成る群から選択され、ここで、前記アルケニルの二重結合または前記アルキニル基の三重結合は結合点から少なくとも炭素原子１個分離れていることも条件とし、
更に、Ｒ^１がフェニルであり、Ｒ^２がフェニルでありかつＲ^４がフェニルの場合にはＲ^３がＣ_３−８アルキル（即ちメチルでもエチルでもない）、アルケニルおよびアルキニルから成る群から選択され、好適には、Ｒ^３がアルケニルおよびアルキニルから成る群から選択され、ここで、前記アルケニルの二重結合または前記アルキニル基の三重結合は結合点から少なくとも炭素原子１個分離れていることも条件とする］
で表される化合物およびこれらの薬学的に受け入れられる塩に向けたものである。

本発明は、更に、メラノコルチン受容体が介在する障害を治療する方法にも向けたものであり、この方法は、それを必要としている被験体に式（Ｉ）

［式中、
Ｒ^１は、アルキル、アリール、アラルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリール−アルキル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルキル−アルキル、シクロアルキルおよびシクロアルキル−アルキルから成る群から選択され、ここで、前記アリール、アラルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリール−アルキル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルキル−アルキル、シクロアルキルまたはシクロアルキル−アルキル基は場合によりハロゲン、ヒドロキシ、アルキル、アルコキシ、ハロゲン置換アルキル、ハロゲン置換アルコキシ、アミノ、アルキルアミノまたはジ（アルキル）アミノから独立して選択される１個以上の置換基で置換されていてもよく、
Ｒ^２は、アルキル、アリール、アラルキル、ヘテロアリール、ヘテロシクロアルキルおよびシクロアルキル−アルキルから成る群から選択され、ここで、前記アリール、アラルキル、ヘテロアリール、ヘテロシクロアルキルまたはシクロアルキル−アルキル基は場合によりハロゲン、ヒドロキシ、アルキル、アルコキシ、ハロゲン置換アルキル、ハロゲン置換アルコキシ、アミノ、アルキルアミノまたはジ（アルキル）アミノから独立して選択される１個以上の置換基で置換されていてもよく、
Ｒ^３は、水素、アルキル、アルケニルおよびアルキニルから成る群から選択され、ここで、前記アルケニルの二重結合または前記アルキニル基の三重結合は結合点から少なくとも炭素原子１個分離れており、
Ｒ^４は、水素、アルキル、アリール、アラルキル、ヘテロアリール、ヘテロシクロアルキルおよびシクロアルキル−アルキルから成る群から選択され、ここで、前記アリール、アラルキル、ヘテロアリール、ヘテロシクロアルキルまたはシクロアルキル−アルキル基は場合によりハロゲン、ヒドロキシ、アルキル、アルコキシ、ハロゲン置換アルキル、ハロゲン置換アルコキシ、アミノ、アルキルアミノまたはジ（アルキル）アミノから独立して選択される１個以上の置換基で置換されていてもよく、
Ｘ⁻は、ブロマイド、クロライド、ヨージド、アセテート、ベンゾエート、サイトレート、ラクテート、マレート、ナイトレート、ホスフェート、ジホスフェート、スクシネート、スルフェート、タートレートおよびトシレートから成る群から選択される］
で表される化合物およびこれの薬学的に受け入れられる塩を治療有効量で投与することを含んで成る。

本発明の具体的な組成物は、薬学的に受け入れられる担体（ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｌｙ ａｃｃｅｐｔａｂｌｅ ｃａｒｒｉｅｒ）とこの上に記述した化合物のいずれかを含んで成る薬剤組成物である。本発明の一例は、この上に記述した化合物のいずれかと薬学的に受け入れられる担体を混合することで作られた薬剤組成物である。本発明の具体的な方法は、この上に記述した化合物のいずれかと薬学的に受け入れられる担体を混合することを含んで成る薬剤組成物製造方法である。

本発明の例である方法は、メラノコルチン受容体が介在する障害の治療を必要としている被験体（ｓｕｂｊｅｃｔ）におけるそれを治療する方法であり、この方法は、前記被験体にこの上に記述した化合物または薬剤組成物のいずれかを治療有効量で投与することを含んで成る。

本発明の１つの態様は、本明細書に記述する化合物のいずれかを代謝障害、ＣＮＳ障害および皮膚科学的障害から成る群から選択される障害を治療する目的で用いる態様である。

本発明の一例は、肥満症、減退した経口グルコース耐性、高くなった血液グルコース濃度、ＩＩ型糖尿病、Ｘ症候群、糖尿病性網膜症、脊髄損傷、神経損傷、急性神経変性障害、慢性神経変性障害、プレキソパシー、男性の勃起機能不全、ドライアイ、アクネ、乾燥皮膚、老化した皮膚、脂漏性皮膚炎、しゅさ、過剰な耳垢、マイボーム腺障害、偽性毛包炎、酵母菌感染、ふけ、ヒラデニチス・スプラチバ、眼のしゅさおよびエクリン腺障害から成る群から選択される障害の治療を必要としている被験体におけるそれを治療する方法であり、この方法は、前記被験体にこの上に記述した化合物または薬剤組成物のいずれかを治療有効量で投与することを含んで成る。

本発明の別の例は、本明細書に記述する化合物のいずれかを（ａ）肥満症、（ｂ）減退した経口グルコース耐性、（ｃ）高くなった血液グルコース濃度、（ｄ）ＩＩ型糖尿病、（ｅ）Ｘ症候群、（ｆ）糖尿病性網膜症、（ｇ）急性神経変性障害、（ｈ）慢性神経変性障害、（ｉ）プレキソパシー、（ｊ）男性の勃起機能不全、（ｋ）ドライアイ、（ｌ）アクネ、（ｍ）乾燥皮膚、（ｎ）老化した皮膚、（ｏ）脂漏性皮膚炎、（ｐ）しゅさ、（ｑ）過剰な耳垢、（ｒ）マイボーム腺障害、（ｓ）偽性毛包炎、（ｔ）酵母菌感染、（ｕ）ふけ、（ｖ）ヒラデニチス・スプラチバ、（ｗ）眼のしゅさまたは（ｘ）エクリン腺障害の治療を必要としている被験体におけるそれを治療するための薬剤を製造する時に用いる例である。
（発明の詳細な説明）
本発明は、メラノコルチン受容体が介在する障害の治療で用いるに有用な新規な置換１，２，４−チアジアゾール−２−イウム誘導体に向けたものである。より詳細には、本発明は、メラノコルチン受容体の作動薬および拮抗薬として用いるに有用な式（Ｉ）

［式中、Ｘ、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３およびＲ^４は、本明細書で定義する通りである］
で表される化合物に向けたものである。

本発明は、更に、メラノコルチン受容体が介在する障害、特にメラノコルチン受容体の作動作用または拮抗作用によって治療可能な障害を治療する方法に向けたものである。このメラノコルチン受容体は好適にはメラノコルチン−３、メラノコルチン−４およびメラノコルチン−５受容体から成る群から選択され、より好適には、このメラノコルチン受容体はメラノコルチン−４またはメラノコルチン−５である。

好適には、Ｒ^１をアリール、アラルキルおよびヘテロアリールから成る群から選択し、ここで、前記アリール、アラルキルまたはヘテロアリール基は場合によりハロゲン、ヒドロキシ、アルキル、アルコキシ、トリハロメチル、トリハロメトキシ、アミノ、アルキルアミノまたはジ（アルキル）アミノから独立して選択される１個以上の置換基で置換されていてもよい。より好適には、Ｒ^１をアリールから成る群から選択し、ここで、アリール基は場合によりハロゲン、アルキルおよびアルコキシから独立して選択される１個以上の置換基で置換されていてもよい。更により好適には、Ｒ^１をフェニル、２−クロロフェニル、４−クロロフェニル、２−メチルフェニル、４−メチルフェニル、２−メトキシフェニルおよび４−メトキシフェニルから成る群から選択する。最も好適には、Ｒ^１は２−メトキシフェニルである。

好適には、Ｒ^２をアリール、アラルキルおよびヘテロアリールから成る群から選択し、ここで、前記アリール、アラルキルまたはヘテロアリール基は場合によりハロゲン、ヒドロキシ、アルキル、アルコキシ、トリハロメチル、トリハロメトキシ、アミノ、アルキルアミノまたはジ（アルキル）アミノから独立して選択される１個以上の置換基で置換されていてもよい。より好適には、Ｒ^２をアリールから成る群から選択し、ここで、前記アリール基は場合によりアルキルおよびアルコキシから独立して選択される１個以上の置換基で置換されていてもよい。更により好適には、Ｒ^２をフェニル、４−メチルフェニル、２−メトキシフェニルおよび４−メトキシフェニルから成る群から選択する。最も好適には、Ｒ^２をフェニルおよび２−メトキシフェニルから成る群から選択する。

好適には、Ｒ^３を水素およびアルキルから成る群から選択する。より好適には、Ｒ^３を水素およびメチルから成る群から選択する。

好適には、Ｒ^４をアリール、アラルキルおよびヘテロアリールから成る群から選択し、ここで、前記アリール、アラルキルまたはヘテロアリール基は場合によりハロゲン、ヒドロキシ、アルキル、アルコキシ、トリハロメチル、トリハロメトキシ、アミノ、アルキルアミノまたはジ（アルキル）アミノから独立して選択される１個以上の置換基で置換されていてもよい。より好適には、Ｒ^４をアリール、アラルキルおよびヘテロアリールから成る群から選択し、ここで、前記アリールまたはアラルキル基は場合によりハロゲン、アルキルおよびアルコキシから独立して選択される１個以上の置換基で置換されていてもよい。更により好適には、Ｒ^４をフェニル、２−クロロフェニル、４−クロロフェニル、４−ブロモフェニル、２−メチルフェニル、４−メチルフェニル、２−メトキシフェニル、４−メトキシフェニル、ベンジル、２−クロロベンジル、４−クロロベンジル、２−メチルベンジル、４−メチルベンジル、２−メトキシベンジル、４−メトキシベンジル、２，６−ジフルオロフェニル、３，５−ジフルオロフェニル、２−クロロ−６−メチルフェニルおよび３−ピリジルから成る群から選択する。最も好適には、Ｒ^４をフェニル、２−メチルフェニル、４−メチルフェニル、２−メトキシフェニルおよび４−メトキシフェニルから成る群から選択する。

本発明の１つの種類の化合物は、Ｒ^１、Ｒ^２およびＲ^４が各々独立してアリールおよび置換アリールから選択されかつＲ^３が水素である式（Ｉ）で表される化合物である。

好適には、Ｘ⁻をブロマイド、クロライド、ヨージド、アセテート、ベンゾエート、サイトレート、ラクテート、マレート、ナイトレート、ホスフェート、ジホスフェート、スクシネート、スルフェート、タートレートおよびトシレートから成る群から選択する。より好適には、Ｘ⁻をブロマイド、クロライドおよびヨージドから成る群から選択する。最も好適には、Ｘ⁻はブロマイドである。

用語「メラノコルチン受容体が介在する障害」を本明細書で用いる場合、特に明記しない限り、この用語に、これらに限定するものでないが、肥満症、減退した経口グルコース耐性、高くなった血液グルコース濃度、ＩＩ型糖尿病、Ｘ症候群、糖尿病性網膜症、急性神経変性障害、慢性神経変性障害、プレキソパシー、男性の勃起機能不全、ドライアイ、アクネ、乾燥皮膚、老化した皮膚、脂漏性皮膚炎、しゅさ、過剰な耳垢、マイボーム腺障害、偽性毛包炎、酵母菌感染、ふけ、ヒラデニチス・スプラチバ、眼のしゅさおよびエクリン腺障害を包含させる。

用語「代謝障害」を本明細書で用いる場合、特に明記しない限り、この用語に、これらに限定するものでないが、肥満症、減退した経口グルコース耐性、高くなった血液グルコース濃度、ＩＩ型糖尿病およびＸ症候群を包含させる。

用語「ＣＮＳ障害」を本明細書で用いる場合、特に明記しない限り、この用語に、これらに限定するものでないが、糖尿病性網膜症、急性神経変性障害、慢性神経変性障害およびプレキソパシーを包含させる。

用語「皮膚科学的障害」を本明細書で用いる場合、特に明記しない限り、この用語に、これらに限定するものでないが、ドライアイ、アクネ、乾燥皮膚、老化した皮膚、脂漏性皮膚炎、しゅさ、過剰な耳垢、マイボーム腺障害、偽性毛包炎、酵母菌感染、ふけ、ヒラデニチス・スプラチバ、眼のしゅさおよびエクリン腺障害を包含させる。

本明細書で用いる如き「急性神経変性障害」には、ニューロン細胞の死亡またはこれが危うくなることに関連したいろいろな種類の急性神経変性障害が含まれ、それには大脳血管不全、病巣性または拡散性脳外傷（ｆｏｃａｌ ｏｒ ｄｉｆｆｕｓｅ ｂｒａｉｎ ｔｒａｕｍａ）、拡散性脳損傷および脊髄損傷、即ち大脳虚血もしくは梗塞（塞栓性閉塞および血栓性閉塞を包含）、急性虚血後の再潅流、周産期の低酸素虚血性損傷、心拍停止ばかりでなくいずれかの種類の頭蓋内出血（これらに限定するものでないが、硬膜上、硬膜下、クモ膜下および大脳内を包含）、そして頭蓋内および脊椎内損傷（これらに限定するものでないが、打撲、貫入、せん断、圧迫および裂傷を包含）およびむちうち振とう産児症候群（ｗｈｉｐｌａｓｈ ｓｈａｋｅｎ ｉｎｆａｎｔ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）が含まれる。

本発明の方法の範囲内に含まれる本明細書で用いる如き「慢性神経変性障害」には、アルツハイマー病、ピック病、拡散性レービィ体病、進行性核上麻痺（Ｓｔｅｅｌ−Ｒｉｃｈａｒｄｓｏｎ症候群）、マルチシステム変性（ｍｕｌｔｉ−ｓｙｓｔｅｍ ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ）（Ｓｈｙ−Ｄｒａｇｅｒ症候群）、神経変性に関連した慢性てんかん状態、運動ニューロン病（これには筋委縮性側索硬化症が含まれる）、変性運動失調、皮質基底変性、グアムのＡＬＳ−パーキンソン−痴呆コンプレックス、亜急性硬化性汎脳炎、ハンティングトン病、パーキンソン病、シヌクレイノパシーズ（ｓｙｎｕｃｌｅｉｎｏｐａｔｈｉｅｓ）［これにはマルチプルシステムアトロフィー（ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｓｙｓｔｅｍ ａｔｒｏｐｈｙ）が含まれる］、原発性進行性失語症、線条体黒質変性、Ｍａｃｈａｄｏ−Ｊｏｓｅｐｈ病／旧小脳運動失調タイプ３およびオリーブ橋小脳変性、Ｇｉｌｌｅｓ Ｄｅ Ｌａ Ｔｏｕｒｅｔｔｅ病、延髄および疑延髄麻痺、脊髄および脊髄延髄筋萎縮（Ｋｅｎｎｅｄｙ病）、原発性側索硬化症、家族性痙性対麻痺、Ｗｅｒｄｎｉｇ−Ｈｏｆｆｍａｎｎ病、Ｋｕｇｅｌｂｅｒｇ−Ｗｅｌａｎｄｅｒ病、Ｔａｙ−Ｓａｃｈ病、Ｓａｎｄｈｏｆｆ病、家族性痙性病、Ｗｏｈｌｆａｒｔ−Ｋｕｇｅｌｂｅｒｇ−Ｗｅｌａｎｄｅｒ病、痙性不全対麻痺、進行性多病巣性白質脳症、家族性自律神経障害（Ｒｉｌｅｙ−Ｄａｙ症候群）およびプリオン病（ｐｒｉｏｎ ｄｉｓｅａｓｅｓ）［これらに限定するものでないが、Ｃｒｅｕｔｚｆｅｌｄｔ−Ｊａｋｏｂ、Ｇｅｒｓｔｍａｎｎ−Ｓｔｒａｕｓｓｌｅｒ−Ｓｃｈｅｉｎｋｅｒ病、Ｋｕｒｕおよび宿命的家族性不眠病（ｆａｔａｌ ｆａｍｉｌｉａｌ ｉｎｓｏｍｎｉａ）が含まれる］が含まれる。

本明細書で用いる如き「プレキソパシー（ｐｌｅｘｏｐａｔｈｉｅｓ）」には、プレキサス麻痺（ｐｌｅｘｕｓ ｐａｌｓｉｅｓ）、多病巣性神経障害、感覚神経障害、運動神経障害、感覚−運動神経障害、感染神経障害、自律神経障害、感覚−自律神経障害、脱髄神経障害［これには、これらに限定するものでないが、Ｇｕｉｌｌａｉｎ−Ｂａｒｒｅ症候群および慢性炎症性脱髄多発神経障害が含まれる］、他の炎症性および免疫神経障害、薬剤によって誘発された神経障害、薬理学的治療によって誘発された神経障害、トキシンによって誘発された神経障害、外傷神経障害（これには、これらに限定するものでないが、圧迫、挫傷、裂傷および断片化神経障害が含まれる）、代謝神経障害、内分泌神経障害およびパラネオプラスティック（ｐａｒａｎｅｏｐｌａｓｔｉｃ）神経障害、そして他の神経障害、例えばＣｈａｒｃｏｔ−Ｍａｒｉｅ−Ｔｏｏｔｈ病（タイプ１ａ、１ｂ、２、４ａ，１−Ｘ関連）、フリートライヒ運動失調、異染性白質萎縮症、Ｒｅｆｓｕｍ病、副腎脊髄神経症状、運動失調−毛細血管拡張症、Ｄｅｊｅｒｉｎｅ−Ｓｏｔｔａｓ神経障害（タイプＡおよびＢ）、Ｌａｍｂｅｒｔ−Ｅａｔｏｎ症候群および頭蓋神経障害などが含まれる。

特に明記しない限り、本明細書で用いる如き用語「ハロゲン」はヨウ素、臭素、塩素およびフッ素を包含する。

本明細書で用いる如き用語「アルキル」は、これを単独で用いるか或は置換基の一部として用いるかに拘らずか、炭素原子を１から８個含有する直鎖および分枝鎖を包含する。例えば、アルキル基にはメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ｓ−ブチル、ｔ−ブチル、ペンチルなどが含まれる。特に明記しない限り、アルキルに関して「低級」を用いる場合、これは炭素原子数が１から４の炭素鎖組成を意味する。

用語「アルケニル」は、これを単独で用いるか或は置換基の一部として用いるかに拘わらず、炭素原子を２から８個含有する直鎖および分枝アルケン鎖を包含する。適切な例にはビニル、１−プロペニル、２−プロペニル、１−ブテニル、２−ブテニル、１−ペンテニル、２−ペンテニル、１−イソブテ−２−エニルなどが含まれる。同様に、用語「アルキニル」は、これを単独で用いるか或は置換基の一部として用いるかに拘わらず、炭素原子を２から８個含有する直鎖および分枝アルキン鎖を包含する。適切な例には２−プロピニル、２−ブチニル、１−ブチニル、１−ペンチニルなどが含まれる。

本明細書で用いる如き「アルコキシ」は、特に明記しない限り、上述した直鎖もしくは分枝鎖アルキル基の酸素エーテル基を表す。例えばメトキシ、エトキシ、ｎ−プロポキシ、ｓ−ブトキシ、ｔ−ブトキシ、ｎ−ヘキシルオキシなど。

本明細書で用いる如き用語「シクロアルキル」は、特に明記しない限り、環炭素を３から８個、好適には炭素を５から７個含有する単環状飽和環構造を表す。適切な例にはシクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチルおよびシクロオクチルが含まれる。

本明細書で用いる如き「アリール」は、炭素環状芳香環構造、例えばフェニル、ナフチルなどを示す。

本明細書で用いる如き「アラルキル」は、特に明記しない限り、アリール基で置換されている低級アルキル基のいずれかを意味する。例えばベンジル、フェニルエチル、フェニルプロピル、ナフチルメチルなど。

本明細書で用いる如き「ヘテロアリール」は、特に明記しない限り、Ｏ、ＮおよびＳから成る群から選択されるヘテロ原子を少なくとも１個含有しかつ場合によりＯ、ＮおよびＳから成る群から独立して選択される追加的ヘテロ原子を１から３個含有していてもよい５員もしくは６員の単環状芳香環構造、またはＯ、ＮおよびＳから成る群から選択されるヘテロ原子を少なくとも１個含有しかつ場合によりＯ、ＮおよびＳから成る群から独立して選択される追加的ヘテロ原子を１から４個含有していてもよい９員もしくは１０員の二環状芳香環構造のいずれかを表す。このヘテロアリール基は結果として生じる構造が安定な構造であるように環の炭素原子のいずれの所で結合していてもよい。

適切なヘテロアリール基の例には、これらに限定するものでないが、ピロリル、フリル、チエニル、オキサゾリル、イミダゾリル、プラゾリル、イソキサゾリル、イソチアゾリル、トリアゾリル、チアジアゾリル、ピリジル、ピリダジニル、ピリミジニル、ピラジニル、ピラニル、フラザニル、インドリジニル、インドリル、イソインドリニル、インダゾリル、イソキサゾリル、ベンゾフリル、ベンゾチエニル、ベンズイミダゾリル、ベンズチアゾリル、プリニル、キノリジニル、キノリニル、イソキノリニル、イソチアゾリル、シンノリニル、フタラジニル、キナゾリニル、キノキサリニル、ナフチリジニル、プテリジニルなどが含まれる。好適なヘテロアリール基にはピリジル、チエニルおよびイミダゾリルが含まれる。

本明細書で用いる如き用語「ヘテロシクロアルキル」は、Ｏ、ＮおよびＳから成る群から選択されるヘテロ原子を少なくとも１個含有しかつ場合によりＯ、ＮおよびＳから成る群から独立して選択される追加的ヘテロ原子を１から３個含有していてもよい５員から７員の単環状飽和、部分不飽和または部分芳香環構造、またはＯ、ＮおよびＳから成る群から選択されるヘテロ原子を少なくとも１個含有しかつ場合によりＯ、ＮおよびＳから成る群から独立して選択される追加的ヘテロ原子を１から４個含有していてもよい９員から１０員の飽和、部分不飽和または部分芳香二環状環系のいずれかを表す。このヘテロシクロアルキル基は結果として生じる構造が安定な構造であるように環の炭素原子のいずれの所で結合していてもよい。

適切なヘテロシクロアルキル基の例には、これらに限定するものでないが、ピロリニル、ピロリジニル、ジオキサラニル、イミダゾリニル、イミダゾリジニル、ピラゾリニル、ピラゾリジニル、ピペリジニル、ジオキサニル、モルホリニル、ジチアニル、チオモルホリニル、ピペラジニル、トリチアニル、インドリニル、クロメニル、３，４−メチレンジオキシフェニル、２，３−ジヒドロベンゾフリルなどが含まれる。

本明細書で用いる如き記号「＊」は立体幾何中心（ｓｔｅｒｅｏｇｅｎｉｃ ｃｅｎｔｅｒ）の存在を表す。

本発明に従う化合物がキラル中心を少なくとも１つ有する場合、それらはそれに応じてエナンチオマーとして存在し得る。本化合物がキラル中心を２つ以上有する場合、それらは追加的にジアステレオマーとして存在し得る。そのような異性体およびこれらの混合物の全部を本発明の範囲内に包含させると理解されるべきである。その上、本化合物の結晶形態の数種は同質異像として存在する可能性があり、このように、それらも本発明に包含させることを意図する。加うるに、本化合物の数種は水と一緒に溶媒和物（即ち水化物）または通常の有機溶媒と一緒に溶媒和物を形成する可能性があり、そのような溶媒和物もまた本発明の範囲内に包含させることを意図する。

個々の基（例えばシクロアルキル、アリール、アラルキル、ヘテロアリール、ヘテロシクロアルキル）が「置換されている」場合、そのような基は置換基のリストから独立して選択される置換基を１つ以上、好適には置換基を１から５個、より好適には置換基を１から３個、最も好適には置換基を１から２個持っていてもよい。

ある分子中の個々の位置の所の如何なる置換基の定義も変数の定義もその分子中の他の場所の定義から独立していることを意図する。本分野の通常の技術者は本技術分野で公知の技術ばかりでなく本明細書に挙げた方法を用いて化学的に安定で容易に合成可能な化合物が得られるように本発明の化合物の置換基および置換様式を選択することができると理解する。

本開示の全体に渡って用いる標準的命名法の下では、表示する側鎖の末端部分を最初に記述し、その後、それに隣接する官能性を結合点に向かって記述する。従って、例えば「フェニルＣ_１−Ｃ_６アルキルアミノカルボニルＣ_１−Ｃ_６アルキル」置換基は、式

で表される基を指す。

本明細書で用いる如き用語「被験体」は、治療、観察または実験の対象であるか或は対象であった動物、好適には哺乳動物、最も好適には人を指す。

本明細書で用いる如き用語「組成物」は、これに、指定材料を指定量で含んで成る製品ばかりでなく指定材料を指定量で組み合わせる結果として直接または間接的にもたらされる如何なる生成物も包含させることを意図する。

本明細書で用いる如き用語「治療有効量」は、研究者、獣医、医者または他の臨床医が探求している活性化合物または薬剤が組織系、動物または人に生物学的もしくは医薬的反応（治療を受けさせる病気または障害の症状の軽減を包含）を引き出す量を意味する。

本発明の化合物の塩を薬剤で用いる場合、これは無毒の「薬学的に受け入れられる塩」を指す。しかしながら、本発明に従う化合物またはこれらの薬学的に受け入れられる塩を調製する時に他の塩を用いることも有効である。本発明の化合物の適切な薬学的に受け入れられる塩には酸付加塩が含まれ、これらは、例えば本化合物の溶液を薬学的に受け入れられる酸、例えば塩酸、硫酸、フマル酸、マレイン酸、こはく酸、酢酸、安息香酸、クエン酸、酒石酸、炭酸または燐酸などの溶液と一緒に混合することで調製可能である。

本発明は、本発明の化合物のプロドラッグ（ｐｒｏｄｒｕｇｓ）を本発明の範囲内に包含する。そのようなプロドラッグは、一般に、インビボで必要な化合物に容易に変化し得る本化合物の機能的誘導体である。このように、本発明の治療方法では、用語「投与する」に、具体的に開示した化合物を用いるか或は具体的には開示することができなかったが患者に投与した後にインビボで指定化合物に変化する化合物を用いて記述したいろいろな障害を治療することを包含させる。適切なプロドラッグ誘導体を選択および調製する通常の手順は、例えばＨ．Ｂｕｎｄｇａａｒｄ、Ｅｌｓｅｖｉｅｒ編集の「Ｄｅｓｉｇｎ ｏｆ Ｐｒｏｄｒｕｇｓ」（１９８５）などに記述されている。

本明細書、特にスキームおよび実施例で用いる省略形は下記の通りである：
ＢＨＴ＝２，６−ビス−（ｔ−ブチル）−４−メチル−フェノール
ＢＳＡ＝ウシ血清アルブミン
ｃＡＭＰまたは環状ＡＭＰ＝環状アデノシンモノホスフェート
ＤＣＥ＝１，２−ジクロロエタン
ＤＥＡＤ＝アゾジカルボン酸ジエチル
ＤＭ＝分化用媒体
ＤＭＦ＝ジメチルホルムアミド
ＤＭＥＭ＝Ｄｕｌｂｅｃｃｏｓ最少必須培地
ＤＭＳＯ＝ジメチルスルホキサイド
ＤＰＢＳ＝Ｄｕｌｂｅｃｃｏｓ燐酸塩緩衝食塩水
ＥＤＴＡ＝エチレンジアミンテトラ酢酸
ＦＢＳ＝ウシ胎児血清
ＧＤＰ＝グアノシンジホスフェート
ＧＴＰ＝グアノシントリホスフェート
ＧＭ＝増殖用培地
ＨＢＳＳ＝Ｈａｎｋの緩衝塩溶液
ＨＥＰＥＳ＝４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペリジンエタンスルホン酸
ＨＳ＝ヒト血清
ＩｇＧ＝免疫グロブリンＧ
％Ｉｎｈ＝抑制パーセント
ＭＥＭ＝最少必須培地
ＮＢＳ＝Ｎ−ブロモスクシニミド
ＮＣＳ＝Ｎ−クロロスクシニミド
ＮＤＰαＭＳＨ＝αＭＳＨの類似物である［ＮＩｅ^４，Ｄ−Ｐｈｅ^７］αＭＳＨ
ＰＢＳ＝燐酸塩緩衝食塩水
ＰＥＧ＝ポリエチレングリコール
ＰＮＣ＝ペニシリン
ｒｔまたはＲＴ＝室温
ＳＰＡ＝シンチレーションプロキシミティーアッセイ（Ｓｃｉｎｔｉｌｌａｔｉｏｎ Ｐｒｏｘｉｍｉｔｙ Ａｓｓａｙ）
ＳＴＭ＝ストレプトマイシン
ＴＬＣ＝薄層クロマトグラフィー
ＴＭ＝転移用培地
ＴＭＳ＝トリメチルシリル
Ｒ^３が水素である式（Ｉ）で表される化合物の調製はスキーム１に概略を示す方法に従って実施可能である。

より詳細には、公知化合物または公知方法で調製可能な化合物である式（ＩＩＩ）で表される適切に置換されているシアノ化合物と公知化合物または公知方法で調製可能な化合物である式（ＩＶ）で表される適切に置換されている第一級アミンを塩基、例えばＮａＮＨ_２、ＮａＨ、ＮａＮ（ＴＭＳ）_２など、好適にはＮａＮＨ_２の存在下で高温、好適にはほぼ還流温度で反応させることで、相当する式（Ｖ）で表される化合物を生じさせる。

式（Ｖ）で表される化合物と公知化合物または公知方法で調製可能な化合物である式（ＶＩ）で表される適切に置換されているチオシアネートをＤＣＥの存在下で高温、好適には約４５℃で反応させることで、相当する式（ＶＩＩ）で表される化合物を生じさせる。

式（ＶＩＩ）で表される化合物に閉環／酸化をＢｒ_２の存在下、室温で受けさせることで、相当する式（Ｉａ）で表される化合物を生じさせる。

式（ＩＩ）で表される化合物の調製は、スキーム２に概略を示す方法に従い、Ｒ^３が水素である式（Ｉ）で表される適切に置換されている化合物を用いて実施可能である。

より詳細には、式（Ｉａ）で表される適切に置換されている化合物に塩基、例えばＮａＨＣＯ_３、Ｎａ_２ＣＯ_３、ＮａＯＨなど、好適にはＮａＨＣＯ_３による処理を室温で受けさせることで、相当する式（ＩＩ）で表される化合物を生じさせる。

式（ＩＩ）で表される化合物の調製は、また、スキーム３に概略を示す方法に従い、式（ＶＩＩ）で表される適切に置換されている化合物を用いることでも実施可能である。

より詳細には、式（ＶＩＩ）で表される適切に置換されている化合物と酸化剤、例えばＮＢＳ、ＮＣＳ、ＤＥＡＤなど、好適にはＮＢＳを室温で反応させることで、相当する式（ＩＩ）で表される化合物を生じさせる。好適には、式（ＩＩ）で表される化合物に抽出を塩基水溶液、例えばＮａＨＣＯ_３、Ｎａ_２ＣＯ_３、ＮａＯＨなどの水溶液を用いて受けさせる。

Ｒ^３がアルキルである式（Ｉ）で表される化合物の調製は、スキーム４に概略を示す方法に従い、式（ＩＩ）で表される適切に置換されている化合物を用いて実施可能である。

従って、式（ＩＩ）で表される適切に置換されている化合物と公知化合物または公知方法で調製可能な化合物である式（ＶＩＩＩ）［式中、Ｘ⁻はトリフルオロメチルスルホネート、Ｂｒ⁻またはＩ⁻である］で表される適切に置換されている化合物を室温で反応させることで、相当する式（Ｉ）で表される化合物を生じさせる。

Ｒ^３が水素である式（Ｉ）で表される化合物の調製は、スキーム５に概略を示す方法に従い、式（ＩＩ）で表される適切に置換されている化合物を用いて実施可能である。

従って、式（ＩＩ）で表される適切に置換されている化合物と薬学的に受け入れられる酸、例えばＨＣｌ、ＨＢｒ、ＨＮＯ_３など、好適にはＨＣｌを室温で反応させることで、Ｘ⁻がＣｌ⁻、Ｂｒ⁻、ＮＯ_３ ⁻などである相当する式（Ｉａ）で表される化合物を生じさせる。

本発明に従う化合物を生じさせる過程で立体異性体の混合物がもたらされる場合には、通常の技術、例えば調製用クロマトグラフィーなどを用いてそのような異性体を分離することができる。このような化合物はラセミ形態で調製可能であるか、或は鏡像特異的（ｅｎａｎｔｉｏｓｐｅｃｉｆｉｃ）合成または分割のいずれかを用いて個々の鏡像異性体を生じさせることも可能である。標準的技術、例えば光活性酸、例えば（−）−ジ−ｐ−トルオイル−ｄ−酒石酸および／または（＋）−ジ−ｐ−トルオイル−ｌ−酒石酸などを用いて塩を生じさせた後に分別結晶化を行いそして遊離塩基を再生させてジアステレオマー対を生じさせることなどで、前記化合物を例えばそれらの成分である鏡像異性体に分割してもよい。また、ジアステレオマーであるエステルまたはアミドを生じさせた後にクロマトグラフィーによる分離を行いそしてキラル補助剤（ｃｈｉｒａｌ ａｕｘｉｌｉａｒｙ）を除去することで前記化合物の分割を行うことも可能である。別法として、キラルＨＰＬＣカラムを用いて前記化合物の分割を行うことも可能である。

本発明の化合物を生じさせる過程のいずれかを行っている間に、関係する分子のいずれかが有する敏感または反応性基を保護する必要がありそして／またはその方が望ましい可能性がある。これは通常の保護基、例えばＪ．Ｆ．Ｗ．ＭｃＯｍｉｅ編集「Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ」、Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ、１９７３、そしてＴ．Ｗ．ＧｒｅｅｎｅおよびＰ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ、「Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ、１９９１に記述されている如き保護基を用いて達成可能である。このような保護基は本技術分野で公知の方法を用いて後の便利な段階で除去可能である。

本発明の化合物をメラノコルチン受容体が介在する障害の治療で用いる時の有用性は本明細書の実施例４−１１に記述する手順に従って測定可能である。従って、本発明はそのような障害を治療する方法を提供し、この方法は、本明細書で定義する如き化合物のいずれかを前記障害の治療に有効な量（即ち治療有効量）で投与することを含んで成る。本化合物を前記障害にかかっている患者に投与する時、通常の如何なる投与経路も使用可能であり、それには、これらに限定するものでないが、静脈内、経口、皮下、筋肉内、皮内、非経口および経皮が含まれる。

本発明は、また、本発明の１種以上の化合物を薬学的に受け入れられる担体と一緒に含んで成る薬剤組成物も提供する。

本発明の薬剤組成物を調製する時、式（Ｉ）および／または（ＩＩ）で表される１種以上の化合物またはこれの塩（活性材料）を薬学的担体（ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ ｃａｒｒｉｅｒ）と一緒に通常の薬剤配合技術に従って密に混合するが、そのような担体は投与、例えば経口または非経口、例えば筋肉内投与などで望まれる調剤の形態に応じて幅広く態様な形態を取り得る。本組成物を経口投薬形態で調製する時、通常の薬学的媒体のいずれも使用可能である。このように、液状の経口用調剤、例えば懸濁液、エリキシルおよび溶液などの場合の適切な担体および添加剤には、水、グリコール、油、アルコール、風味剤、防腐剤、着色剤などが含まれ、固体状の経口用調剤、例えば粉末、カプセル、カプレット、ゲルカップおよび錠剤などの場合に適切な担体および添加剤には、澱粉、糖、希釈剤、顆粒剤、滑剤、結合剤、崩壊剤などが含まれる。投与が容易なことが理由で錠剤およびカプセルが最も有利な経口投薬単位形態に相当し、この場合には明らかに固体状の薬学的担体を用いる。望まれるならば、錠剤に糖被覆または腸被覆を標準的な技術で受けさせてもよい。非経口投与の場合の担体は一般に無菌水を含んで成るが、他の材料、例えば溶解性を補助するか或は防腐の目的などで他の材料を含有させることも可能である。また、注射可能懸濁液を調製することも可能であり、この場合には適切な液状担体、懸濁剤などを用いてもよい。

本発明の範囲内に含まれる局所的調剤には、これらに限定するものでないが、クリーム、ローション、マルチプルエマルジョン（ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｅｍｕｌｓｉｏｎｓ）、ミクロエマルジョン、リポソームのクリームまたはゲル、ゲル、溶液、懸濁液、軟膏、発泡するエーロゾル、硬質もしくは軟質ゼラチン製カプセル、マスク、スティック、ロールオン（ｒｏｌｌ−ｏｎｓ）、粉末、スプレー形態などが含まれる。このような局所的調剤に、本活性材料１種または２種以上に加えて、活性剤ではない成分の１種以上を含有させてもよく、そのような成分には、これらに限定するものでないが、キレート剤、緩衝剤、着色剤、防腐剤、香料、乳化剤、界面活性剤、不透明化剤、皮膚軟化薬、溶媒、サンスクリーン、粘度修飾剤、抗酸化剤、湿潤剤（ｍｏｉｓｔｕｒｉｚｅｒｓ）、浸透性強化剤（ｐｅｒｍｍｅａｔｉｏｎｓ ｅｎｈａｎｃｅｒｓ）、膜形成剤などが含まれる。

本発明の範囲内に含まれるアクネ治療用局所的調剤に、また、下記の成分［コメド溶解（ｃｏｍｅｄｏｌｙｔｉｃ）／角質溶解剤、抗菌剤およびステロイド系もしくは非ステロイド系抗炎症剤を包含］の１種以上を含有させることも可能である［コメド溶解剤はコメドを崩壊させ得る化合物のいずれかを指す。角質溶解剤はケラチノサイトを崩壊させる結果として表皮の脱皮をもたらし得る化合物のいずれかを指す］。適切なコメド溶解／角質溶解剤には、これらに限定するものでないが、レチノイド類、サリチル酸、グリコール酸、セチルベタインなどが含まれる。適切な抗菌剤には、これらに限定するものでないが、ベンゾイルパーオキサイド、エリスロマイシン、テトラシクリン、クリンダマイシン、アゼライン酸などが含まれる。局所的調剤の活性材料含有量を典型的には０．０１−１％にする。

本明細書に示す薬剤組成物では、投薬単位、例えば錠剤、カプセル、粉末、注射、茶サジ１杯など当たりの活性材料含有量を、それをこの上に記述した如き有効量で搬送するに必要な量にする。本明細書に示す非局所的薬剤組成物では、単位投薬単位、例えば錠剤、カプセル、粉末、注射、座薬、茶サジ１杯など当たりの含有量を約０．０３ｍｇから１００ｍｇ／ｋｇ（好適には０．１−３０ｍｇ／ｋｇ）にして、それを約０．１−３００ｍｇ／ｋｇ／日（好適には１−５０ｍｇ／ｋｇ／日）の投薬量で投与してもよい。しかしながら、このような投薬量は当該患者の要求、治療すべき状態のひどさおよび用いる化合物に応じて変わり得る。毎日の投与またはポストペリオディックドーシング（ｐｏｓｔ−ｐｅｒｉｏｄｉｃ ｄｏｓｉｎｇ）のいずれの使用も利用可能である。

本組成物を好適には経口、非経口、鼻孔内、舌下もしくは腸投与、または吸入またはガス注入手段による投与に適した単位投薬形態、例えば錠剤、ピル、カプセル、粉末、顆粒、非経口用無菌溶液もしくは懸濁液、計量されたエーロゾルもしくは液体スプレー、ドロップ、アンプル、オートインジェクター装置（ａｕｔｏｉｎｊｅｃｔｏｒ ｄｅｖｉｃｅｓ）または座薬などの形態にする。別法として、本組成物を週に１回または月に１回の投与に適した形態で提供することも可能であり、例えば、筋肉内注射に適したデポット調剤（ｄｅｐｏｔ ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ）を提供する時には本活性化合物の不溶塩、例えばデカン酸塩などが適合し得る。固体状の組成物、例えば錠剤などを調製する場合には、主要な活性材料を薬学的担体、例えば通常の錠剤用材料、例えばコーンスターチ、ラクトース、スクロース、ソルビトール、タルク、ステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム、燐酸ジカルシウムまたはゴムなど、および他の薬学的希釈剤、例えば水などと一緒に混合することで、本発明の化合物またはこれの薬学的に受け入れられる塩の均一な混合物を含有する固体状の予備調合組成物（ｐｒｅｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓ）を生じさせる。そのような予備調合組成物が均一であると述べる場合、これは、前記組成物を等しく有効な投薬形態、例えば錠剤、ピルおよびカプセルなどに容易に細分することができるように活性材料が前記組成物の全体に渡ってむらなく分散していることを意味する。次に、この固体状の予備調合組成物を細分して本発明の活性材料の含有量が０．１から約５００ｍｇの前記種類の単位投薬形態にする。本新規組成物の錠剤またはピルに被覆を受けさせるか或は他の様式で配合することで作用が長期であると言った利点を示す投薬形態を生じさせることができる。例えば、錠剤またはピルが内部の投薬成分と外側の投薬成分を含んで成るようにしてもよく、後者が前者を封じ込めている形態にする。この２つの成分を腸層（ｅｎｔｅｒｉｃ ｌａｙｅｒ）［これは胃の中で起こる崩壊に抵抗しかつ前記内部の成分が無傷のまま通過して十二指腸の中に入ることを可能にする働きするか或は放出を遅らせる働きをする］で分離してもよい。そのような腸層または被膜としていろいろな材料を用いることができ、そのような材料にはいろいろな高分子量酸が含まれ、そのような材料はシェラック（ｓｈｅｌｌａｃ）、セチルアルコールおよび酢酸セルロースの如き材料である。

経口または注射による投与の目的で本発明の新規な組成物を取り込ませることができる液状形態には、水溶液、適切な風味のシロップ、水性もしくは油懸濁液および風味を付けた乳液（食用油、例えば綿実油、ゴマ油、ヤシ油または落花生油などばかりでなくエリキシルおよび同様な薬学的媒体を用いた）が含まれる。水性懸濁液で用いるに適した分散もしくは懸濁剤には、合成および天然ゴム、例えばトラガカント、アカシア、アルギネート、デキストラン、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、メチルセルロース、ポリビニルピロリドンまたはゼラチンなどが含まれる。

本発明に記述するメラノコルチン受容体が介在する障害を治療する方法の実施で、また、本明細書で定義した如き化合物のいずれかと薬学的に受け入れられる担体を含んで成る薬剤組成物を用いることも可能である。非局所的薬剤組成物の本化合物含有量を約０．０１ｍｇから１００ｍｇ、好適には約５から５０ｍｇの範囲にしてもよく、そしてこれを選択した投与様式に適した如何なる形態に構築してもよい。担体には、必要かつ不活性な薬学的賦形剤（ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ）が含まれ、これには、これらに限定するものでないが、結合剤、懸濁剤、滑剤、風味剤、甘味剤、防腐剤、染料およびコーティングが含まれる。経口投与に適した組成物には、固体形態、例えばピル、錠剤、カプレット、カプセル［各々に瞬時放出、好機放出および徐放調剤が含まれる］、顆粒および粉末など、そして液状形態、例えば溶液、シロップ、エリキシル、乳液および懸濁液などが含まれる。非経口投与で用いるに有用な形態には無菌の溶液、乳液および懸濁液が含まれる。

本発明の化合物は有利に１日１回の投与で投与可能であるか、或は１日当たりの投薬量全体を１日当たり２回、３回または４回に分割した用量で投与することも可能である。更に、本発明の化合物を適切な鼻内媒体を局所的に用いることによる鼻内形態で投与するか或は本分野の通常の技術者に良く知られた経皮皮膚パッチを用いて投与することも可能である。投与を経皮搬送系の形態で行う時には、勿論、そのような投与は断続的ではなくむしろ投薬管理全体に渡って連続的であろう。

例えば錠剤またはカプセル形態の経口投与の場合には、本活性薬剤成分を無毒で薬学的に受け入れられる不活性な経口用担体、例えばエタノール、グリセロール、水などと一緒にしてもよい。その上、望まれるか或は必要な場合には、また、適切な結合剤、滑剤、崩壊剤および着色剤をそのような混合物に添加することも可能である。適切な結合剤には、これらに限定するものでないが、澱粉、ゼラチン、天然糖、例えばグルコースまたはベータ−ラクトースなど、コーン甘味剤、天然および合成ゴム、例えばアカシア、トラガカントなど、またはオレイン酸ナトリウム、ステアリン酸ナトリウム、ステアリン酸マグネシウム、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウムなどが含まれる。崩壊剤には、これらに限定するものでないが、澱粉、メチルセルロース、寒天、ベントナイト、キサンタンゴムなどが含まれる。

そのような液体は適切な風味の懸濁もしくは分散剤、例えば合成および天然ゴム、例えばトラガカント、アカシア、メチル−セルロースなどに入っている形態である。非経口投与の場合には無菌の懸濁液および溶液が望まれる。静脈内投与が望まれる場合には一般に適切な防腐剤が入っている等浸透圧性調剤を用いる。

また、本発明の化合物をリポソーム搬送系、例えば小型の単層ベシクル、大型の単層ベシクルおよび多層ベシクルなどの形態で投与することも可能である。いろいろな燐脂質、例えばコレステロール、ステアリルアミンまたはホスファチジルコリンなどを用いてリポソームを生じさせることができる。

また、本化合物の分子を結合させたモノクローナル抗体を個々の担体として用いて本発明の化合物を搬送することも可能である。また、本発明の化合物を標的可能薬剤担体としての可溶重合体と結合させおくことも可能である。そのような重合体には、ポリビニルピロリドン、ピラン共重合体、ポリヒドロキシプロピルメタアクリルアミドフェノール、ポリヒドロキシ−エチルアスパルトアミドフェノール、またはパルミトイル残基で置換されているポリエチレンオキサイドポリリジンが含まれ得る。更に、本発明の化合物を薬剤の徐放の達成で用いるに有用な種類の生分解性重合体、例えばポリ乳酸、ポリイプシロンカプロラクトン、ポリヒドロキシ酪酸、ポリオルトエステル、ポリアセタール、ポリジヒドロピラン、ポリシアノアクリレート、そしてヒドロゲルの架橋もしくは両親媒性ブロック共重合体などと結合させておくことも可能である。

本発明の化合物は前記組成物のいずれかの形態でメラノコルチン受容体が介在する障害の治療が必要とされている時にはいつでも本技術分野で確立された投薬管理に従って投与可能である。

本製品の１日当たりの投薬量は成人１人当たり０．０１から１，０００ｍｇ／日に及んで幅広い範囲に渡って多様であり得る。経口投与の場合には、本組成物を、好適には、治療を受けさせるべき患者の症状で投薬量を調整して、本活性材料を０．０１、０．０５、０．１、０．５、１．０、２．５、５．０、１０．０、１５．０、２５．０、５０．０、１００、１５０、２００、２５０および５００ミリグラム含有する錠剤の形態で提供する。通常は、有効量の本薬剤を体重１ｋｇ当たり約０．０１ｍｇ／日から体重１ｋｇ当たり約１００ｍｇ／日の投薬レベルで供給する。この範囲は好適には体重１ｋｇ当たり約０．０３ｍｇ／日から体重１ｋｇ当たり約１０ｍｇ／日である。本化合物を１日当たり１から４回の管理で投与してもよい。

本分野の技術者は投与すべき最適な投薬量を容易に決定することができ、これは使用する個々の化合物、投薬様式、調剤の濃度、投与様式および病気の状態の進行に伴って変わるであろう。加うるに、治療を受けさせる個々の患者に関連した要因の結果として投薬量を調整する必要もあり、そのような要因には、患者の年齢、体重、食事および投与時期が含まれる。

以下に示す実施例は本発明の理解の補助で挙げるものであり、決して本明細書に示す請求の範囲に挙げる発明を限定することを意図するものでなく、そのように解釈されるべきでない。

２−（２−メトキシフェニル）−３−フェニル−５−ｐ−トリルアミノ−［１，２，４］チアジアゾール−２−イウム 化合物＃３１

段階Ａ：
ｏ−アニシジン（１５．０ｇ、１２１．８ミリモル）とナトリウムアミド（トルエン中５０重量％の懸濁液）（１１．４０ｇ、１４６．２ミリモル）を無水トルエン（２００ｍｌ）に入れることで生じさせた混合物を室温で１時間撹拌した。この混合物にベンゾニトリル（９．８６ｍｌ、９６．６ミリモル）を加えた後、還流下に１６時間加熱した。この反応混合物を冷却した後、反応を停止させる目的で１．０ＮのＨＣｌ（１５０ｍｌ）を添加した。活性炭を添加した後、反応混合物をセライトの詰め物に通して濾過した。１．０ＮのＮａＯＨ（２００ｍｌ）を添加して前記混合物のｐＨを約１４に調整した。その水層をクロロホルム（３ｘ１５０ｍｌ）で抽出した。その有機層を一緒にして無水ＭｇＳＯ_４で乾燥させた後、蒸発させた。その結果として生じた固体をヘキサンで洗浄した後、真空下で乾燥させることで、生成物を淡白色固体として得た。
^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ_３）^ＴＭ３．８３（ｓ、３Ｈ）、４．７９（ｓ、２Ｈ）、６．９６（ｍ、３Ｈ）、７．０４（ｍ、１Ｈ）、７．４３（ｍ、３Ｈ）、７．９３（ｄ、２Ｈ）
ＭＳ（ＡＰＣｌ、ＭＨ^＋）２２７
段階Ｂ：
段階Ａと同様にして調製したＮ−アリールベンズアミジン（３．０ｇ、１３．２７ミリモル）と４−トリルイソチオシアネート（２．１８ｇ、１４．６０）を無水クロロホルム（３０ｍｌ）に入れることで生じさせた混合物を還流下に１６時間加熱した。この反応混合物を冷却した後、溶媒を蒸発させた。その結果として得た残留物をジクロロメタン中２５％のヘキサンを可動相として用いたフラッシュカラムクロマトグラフィーで精製した。その画分を一緒にして蒸発させ、その結果として生じた固体を真空下で乾燥させることで、生成物を黄色固体として得た。
^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ_３）^ＴＭ２．３６（ｓ、３Ｈ）、３．６６（ｓ、３Ｈ）、６．７６（ｍ、１Ｈ）、６．９７（ｔ、１Ｈ）、７．１７−７．３９（ｍ、７Ｈ）、７．４７（ｄ、２Ｈ）、７．６０（ｄ、２Ｈ）、８．２０（ｓ、１Ｈ）、１４．１８（ｓ、１Ｈ）
ＭＳ（ＥＳ、ＭＨ^＋）３７６．２９
段階Ｃ：
段階Ｂと同様にして調製したチオ尿素（２．９０ｇ、７．７３ミリモル）を無水クロロホルム（１５ｍｌ）に入れることで生じさせた溶液に臭素（４３８μｌ、８．５１ミリモル）をゆっくり添加した。撹拌を１６時間行った後、溶媒を蒸発させた。その結果として生じた固体を無水エチルエーテルで洗浄した。その粗生成物をエタノール中２０％の水から再結晶化させることで、生成物を黄色固体として得た。
^１Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ_３）^ＴＭ２．３９（ｓ、３Ｈ）、３．６６（ｓ、３Ｈ）、６．９６（ｄ、１Ｈ）、７．０６（ｔ、１Ｈ）、７．２０−８．０７（ｍ、７Ｈ）、７．６１（ｄ、２Ｈ）、７．８０（ｄ、２Ｈ）、１２．４０（ｓ、１Ｈ）
ＭＳ（ＥＳ、ＭＨ^＋）３７４．２５

２−（２−メトキシフェニル）−３−（２−メトキシフェニル）−５−フェニルアミノ−［１，２，４］チアジアゾール−２−イウム 化合物＃７４

段階Ａ：
ｏ−アニシジン（１３．５ｇ、１１０．０ミリモル）とナトリウムアミド（トルエン中５０重量％の懸濁液）（９．４０ｇ、１２０．０ミリモル）を無水トルエン（２００ｍｌ）に入れることで生じさせた混合物を室温で１時間撹拌した。この混合物に２−メトキシベンゾニトリル（１６ｍｌ、１３１．０ミリモル）を加えた後、この反応混合物を還流下に１６時間加熱した。この反応混合物を冷却した後、反応を停止させる目的で１．０ＮのＨＣｌ（１５０ｍｌ）を添加した。活性炭を添加した後、反応混合物をセライトの詰め物に通して濾過した。１．０ＮのＮａＯＨ（２００ｍｌ）を添加して前記混合物のｐＨを約１４に調整した。その水層をクロロホルム（３ｘ１５０ｍｌ）で抽出した。その有機層を一緒にして無水ＭｇＳＯ_４で乾燥させた後、蒸発させた。その結果として生じた固体をヘキサンで洗浄した後、真空下で乾燥させることで、生成物を淡白色固体として得た。
ＭＳ（ＡＰＣｌ、ＭＨ^＋）２５７
段階Ｂ：
段階Ａと同様にして調製したＮ−アリールベンズアミジン（１５．５ｇ、６０．６ミリモル）とフェニルイソチオシアネート（８．７０ｍＬ、７２．７ミリモル）を無水クロロホルム（３０ｍｌ）に入れることで生じさせた混合物を４５℃に１６時間加熱した。この反応混合物を冷却した後、溶媒を蒸発させた。その結果として得た残留物をジクロロメタン中２５％のヘキサンを可動相として用いたフラッシュカラムクロマトグラフィーで精製した。その画分を一緒にして蒸発させ、その結果として生じた固体を真空下で乾燥させることで、生成物を黄色固体として得た。
ＭＳ（ＥＳ、ＭＨ^＋）３９１．５０
段階Ｃ：
段階Ｂと同様にして調製したチオ尿素（１２．９５ｇ、３３．１ミリモル）を無水クロロホルム（１５ｍｌ）に入れることで生じさせた溶液に臭素（１．７８ｍＬ、３４．７５ミリモル）をゆっくり添加した。撹拌を１６時間行った後、溶媒を蒸発させた。その結果として生じた固体を無水エチルエーテルで洗浄した。その粗生成物をエタノール中２０％の水から再結晶化させることで、生成物を黄色固体として得た。
ＭＳ（ＥＳ、ＭＨ^＋）３９０．１
本明細書に開示した手順に従って、表１に挙げる如き本発明の式（Ｉ）で表される代表的な化合物を調製した。

２−（２−メトキシフェニル）−３−（２−メトキシフェニル）−５−フェニルアミノ−［１，２，４］チアジアゾール 化合物＃８９

実施例２の段階Ｂと同様にして調製した化合物（０．９２１ｇ、２．３６ミリモル）を無水クロロホルム（１０ｍＬ）に入れることで生じさせた溶液にＮ−クロロスクシニミド（３２６ｍｇ、２．７１ミリモル）を添加した。次に、この反応混合物を１６時間撹拌した後、ＮａＨＣＯ_３水溶液で停止させかつそれで２回洗浄した。その有機層を硫酸マグネシウムで乾燥させた後、残存する溶媒を真空下で除去することで、表題の生成物を固体として得た。
ＭＳ（ＥＳ、ＭＨ^＋）３９０．１
本明細書に記述した手順に従って、表２に挙げる如き本発明の式（ＩＩ）で表される代表的な化合物を調製した。

特に明記しない限り、Ｂｒｕｋｅｒ Ａｖａｎｃｅ ３００ＭＨｚ ＮＭＲ分光計を用いてＮＭＲスペクトルを測定した。特に明記しない限り、Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ ＬＣプラットフォームエレクトロスプレーマススペクトロメーター（ｐｌａｔｆｏｒｍ ｅｌｅｃｔｒｏｓｐｒａｙ ｍａｓｓ ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｅｒ）を用いて分子量を測定し、それらは表３に挙げる如くである。

メラノコルチンＭＣ−４受容体結合検定
メラノコルチン［ＭＣ−４］膜［Ｒｅｃｅｐｔｏｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ Ｉｎｃから購入］をポリビニルトルエンを覆っている麦芽アグルチニン−Ｓｃｉｎｔｉｌｌａｔｉｏｎ Ｐｒｏｘｉｍｉｔｙ Ａｓｓａｙビーズ［Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｉｎｃ．から購入］に２５℃で３０分間結合させた。９６個ウエルのＯｐｔｉプレート［Ｐａｃｋａｒｄ（ＣＡ）から購入］の各ウエルに入れた体積が１００μＬの培地の中で２．５μｇの膜と０．２５ｍｇのビーズを混合した。前記培地は５０ｍＭのＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．４）であり、これにウシ血清アルブミンを０．１％、ＣａＣｌ_２を２ｍＭ、ＭｇＣｌ_２を２ｍＭおよびプロテアーゼ阻害剤を含有させた。前記プレートの個々のウエルに試験化合物（１．５μＬ）を３０％ＤＭＳＯ−５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．４）緩衝液中１ｍＭで添加した。各ウエルに放射性リガンドである^１２５Ｉ−ＮＤＰ−メラノサイト刺激ホルモン［ＮＥＮ、２０００Ｃｉ／ミリモル］を加えた（ウエル１個当たり４８．５μＬ、最終濃度４０ｐＭ）。次に、前記プレートを密封した後、２５℃に１６時間放置した。非特異的結合（Ｎ）を確認する目的で、ＮＤＰ−メラノサイト刺激ホルモンペプチドおよびα−メラノサイト刺激ホルモンペプチド［Ｐａｌｏｍａｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎｃから購入、１μＭ］を基準阻害剤化合物として用いた。３０％ＤＭＳＯ−５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．４）緩衝液を用いて全結合（Ｔ）を確認した。各ウエル毎に結合した放射能（Ｙ）［１分当たりのカウント数（ｃｐｍ）として測定］をＴｏｐＣｏｕｎｔ［Ｐａｃｋａｒｄ（ＣＡ）］で測定した。阻害パーセントを下記の如く計算した：
［（Ｔ−Ｙ）／（Ｔ−Ｎ）］＊１００％

環状アデノシンモノホスフェート［ｃＡＭＰ］刺激検定
ヒトメラノコルチンＭＣ−４受容体を発現するヒトＢｏｗｅｓ黒色腫細胞を２４個ウエル培養プレートの中で集密になるまで増殖させた。増殖用培地を廃棄した後、各ウエルにＨａｎｋの溶液を０．５ｍＬ加えた。９６個ウエルプレートのウエルに試験化合物を加えた。正対照ウエルにはＮＤＰ−メラノサイト刺激ホルモンペプチド（１μＭ）を加える一方、負対照ウエルには媒体である３０％ＤＭＳＯ−５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．４）緩衝液を入れた。そのプレートを３７℃において５％のＣＯ_２下で３０分間インキュベートした。上澄み液を廃棄した後、細胞をＨａｎｋの溶液で２回洗浄した。各ウエルにエタノール（８０％、０．５ｍＬ）を加えた後、そのプレートを４℃で３０分間インキュベートした。ＮＥＮ Ｆｌａｓｈｐｌａｔｅキット［ＮＥＮ］を用いて環状ＡＭＰの含有量を測定した。この検定で結果としてｃＡＭＰの産生増加をもたらした試験化合物をメラノコルチン受容体の作動薬として定義する。

Ｇ−蛋白質活性化検定
各検定毎にメラノコルチンＭＣ−４受容体を発現する膜（５μｇ）を２５℃で１００μＬの２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．５）［ＮａＣｌを１００ｍＭ、プロテアーゼ阻害剤、ＧＤＰを０．５μＭ、２−メルカプトエタノールを５ｍＭ、ＭｇＣｌ_２を１ｍＭに加えて試験化合物、１μＭのＮＤＰ−メラノサイト刺激ホルモンまたはＮＤＰ−メラノサイト刺激ホルモンと試験化合物の組み合わせを含有させた］に入れた０．５ｎＭの^３５Ｓ−ＧＴＰγＳと一緒に５分間インキュベートした。ＤＭＳＯを３０％入れておいた１０ｍＭのＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．４）緩衝液を用いて基本的^３５Ｓ−ＧＴＰγＳ結合を確認した。停止用緩衝液［ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．５）を２５ｍＭ、ＭｇＣｌ_２を２０ｍＭ、プロテアーゼ阻害剤、ＧＤＰを１００μＭ、ＧＴＰを１００μＭ、２−メルカプトエタノールを５ｍＭに加えて界面活性剤（ジジトニン（ｄｉｇｉｔｏｎｉｎ）が０．５％でデオキシコール酸ナトリウムが０．２％でＮＰ−４０が０．５％）を含有］を５０μｌ添加することで反応を停止させた。前記膜を２５℃で３０分間溶解させた。抗−ラビットＩｇＧ蛋白質Ａ接合ＳＰＡと結合している抗Ｇαｓ（０．５μｇ）を用いて、^３５Ｓ−ＧＴＰγＳと結合したＧαｓ蛋白質を免疫沈澱させた。結合した放射能をＴｏｐｃｏｕｎｔ［Ｐａｃｋａｒｄ］で測定した。通常のラビットＩｇＧ（０．５μｇ）を用いて^３５Ｓ−ＧＴＰγＳを免疫沈澱させることで、非特異的^３５Ｓ−ＧＴＰγＳ結合を確認した。
基本的結合（Ｂ）＝抗−Ｇαｓで免疫沈澱した平均数／分（ｃｐｍ）
非特異的結合（ＮＳＢ）＝通常のラビットＩｇＧで免疫沈澱した平均ｃｐｍ
特異的な基本的結合（ＳＢ）＝Ｂ−ＮＳＢ
各ウエルにおけるｃｐｍ＝Ｃ
各ウエルにおける正味のｃｐｍ（Ｎ）＝Ｃ−ＮＳＢ
刺激％＝［（Ｎ−ＳＢ）／ＳＢ］ｘ１００％
この上にメラノコルチンＭＣ−４受容体に関して記述した手順をメラノコルチンＭＣ−３受容体でも繰り返した。その記述した手順に従って、本発明の代表的な化合物に結合に関する試験をＭＣ−４および／またはＭＣ−３検定で受けさせ、それは表４に挙げる如きであった。

齧歯類飼育：食物を剥奪しておいたラットにおける食物摂取（ＭＣ−４）
オスのＬｏｎｇ−Ｅｖａｎｓラット（１８０−２００グラム）を個別にケージに入れて、この動物が粉末食物（＃５００２ ＰＭＩ Ｃｅｒｔｉｆｉｅｄ Ｒｏｄｅｎｔ Ｍｅａｌ）の食餌に順化するように指定時間の間隔離した後、５日間に渡って１日１回の食餌スケジュール（即ち１０ａ．ｍ．から４ｐ．ｍ．まで）に維持した。こぼれる度合が最小限になるように餌を覆う金属製従動部と一緒にワイヤーでケージの中に固定した開放ジャーの中に前記食物を入れて自由に入手できるようにした。水を随意に入手できるようにした。

試験に先立って動物を１８時間絶食させた。この絶食期間が終了した時点で動物に試験化合物または媒体のいずれかを投与した。媒体および試験化合物を経口投与の場合には実験前６０分の時に投与（５ｍＬ／ｋｇ）するか、皮下投与の場合には実験前３０分の時に投与（１ｍＬ／ｋｇ）するか、或は腹腔内投与の場合には実験前３０分の時に投与（１ｍＬ／ｋｇ）した。試験化合物を経口投与の場合にはメチルセルロースが０．５％でＴｗｅｅｎ ８０が０．４％の水溶液に入れた懸濁液として投与するか、或は腹腔内投与の場合にはＰＥＧ ２００に入れた溶液または懸濁液として投与し、化合物の濃度を典型的には１ｍｇ／ｋｇから１００ｍｇ／ｋｇ、好適には１０−３０ｍｇ／ｋｇの範囲にした。餌を入れておいた特殊なジャーの重量を実験前そして指定時間の時に測定することを通して、投与後２、４および６時間の時の食物摂取量を測定した。この実験が終了した時点で、再び試験する前に、あらゆる動物に１週間の洗浄（ｗａｓｈｏｕｔ）期間を与えた。

この記述した手順に従って、本発明の選択した化合物に試験を受けさせることで、断食させたラットにおける食物摂取に対してそれが示す効果を測定し、それは表５および６に挙げる通りであった。

神経細胞生長検定
細胞培養：
Ｍａｔｔｓｏｎ，Ｍ．Ｐ．、Ｂａｒｇｅｒ，Ｓ．Ｗ．、Ｂｅｇｌｅｙ，Ｊ．およびＭａｒｋ，Ｒ．Ｊ．、「Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．」、１９９４、４６：０８７−２１６に記述されているようにして、胎芽日が１８日目のラット胎児から分離した海馬および皮質細胞培養物を確立した。簡単に述べると、妊娠している母親（Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ）から胎児を帝王切開で取り出した後、ＥｕｔｈａｎａｓｉａのＡＶＭＡパネルに従ってハロタンを用いて麻酔をかけた。子の首を切り落とした後、脳を取り出して、ＨＥＰＥＳ緩衝Ｈａｎｋ’ Ｂａｌａｎｃｅｄ Ｓａｌｔ溶液（ＨＢＳＳ；Ｇｉｂｃｏ）の中に入れた。海馬および皮質を切断して取り出して、組織の種類に従ってプールした。組織をトリプシンで１５分間処理（１ｍｇ／ｍｌのトリプシン−ＨＢＳＳ；Ｗｏｒｔｈｉｎｇｔｏｎ）し、新鮮なＨＢＳＳで濯ぎ、トリプシン阻害剤（１ｍｇ／ｍｌ；Ｓｉｇｍａ）に入れて５分間インキュベートし、再び新鮮なＨＢＳＳで濯いだ後、１ｍｌの新鮮なＨＢＳＳに入れて、炎で磨いておいたガラス製ピペットで磨り潰した。分離させた細胞をポリ−Ｄ−リシンで被覆しておいた９６個ウエルプレート（Ｃｏｌｌａｂｏｒａｔｉｖｅ ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅ）にウエル１個当たり３０，０００個の細胞になるように種付けした。各ウエルにＥａｇｌｅの最少必須培地（ＭＥＭ；Ｇｉｂｃｏ）［ＮａＨＣＯ_３（Ｓｉｇｍａ）を２６ｍＭ、グルコース（Ｓｉｇｍａ）を５６ｍＭ、ＫＣｌ（Ｓｉｇｍａ）を１５ｍＭ、ピルビン酸ナトリウム（Ｓｉｇｍａ）を１ｍＭ、Ｌ−グルタミン（Ｓｉｇｍａ）を１．１ｍＭ、熱で不活性にしておいたウシ胎児血清（Ｈｙｃｌｏｎｅ）を１０％（体積／体積）および硫酸ゲンタマイシン（Ｓｉｇｍａ）を０．００１％補充しておいた（ｐＨ７．４）］を１００μｌ入れた。細胞を湿っている３７℃の５％ＣＯ_２インキュベーターの中で２４時間付着させた後、実験処置を行った。３日毎に培養培地を吸引して、新しい培地と交換した。
検定：
平板培養して２４時間後に培養物を媒体（ＰＢＳ＋０．１％ＢＳＡ）でか、アルファ−メラノサイト刺激ホルモン（α−ＭＳＨ）でか或は試験化合物（ＤＰＢＳで希釈）で処理した。各処理条件を４回実施した。培養３日目に培地を吸引で除去して、新鮮な媒体および試験化合物と交換した。培養１週間目に細胞を１０％燐酸塩緩衝ホルマリンで１５分間固定し、ＤＰＢＳ（Ｓｉｇｍａ）で濯いだ後、ブロッキング用血清（ウマ血清；ＤＰＢＳで１：５０に希釈；Ｖｅｃｔｏｒ Ｌａｂｓ）の中に３０分間入れた。この培養物をＤＰＢＳで再び濯いだ後、一次抗体の中に入れて２時間インキュベートした［微小管結合蛋白質−２（ＭＡＰ−２）が樹状突起の選択的マーカーである；抗マウスモノクローナル（Ｃｈｅｍｉｃｏｎ）；ＭＡＰ−２を抗体希釈剤（Ｚｙｍｅｄ）で１：１０００に希釈］。負の対照ウエルでは抗体希釈剤単独でインキュベートした。ブランクのウエル（細胞なし）を抗体の有り無しで培養することで背景シグナルを測定した。培養物を再びＤＰＢＳで濯いだ後、フルオレセインの中に１時間入れた［ＦＩＴＣ；抗マウスＩｇＧ；ラット吸着（ｒａｔ ａｄｓｏｒｂｅｄ）；ＤＰＢＳで１：５０に希釈；Ｖｅｃｔｏｒ Ｌａｂｓ］。培養物を最後にＤＰＢＳで濯いだ後、Ｃｙｔｏｆｌｕｏｒ ４０００蛍光プレート読み装置を用いて前記プレートを読み取った。神経突起生長を対照（媒体）からの変化パーセントとして表した。

本発明の選択した化合物に前記検定試験を受けさせた結果は表７に挙げる通りであった。データを媒体反応に対する変化パーセントとして表す。あらゆる化合物に５０ｎＭで選別を受けさせた。省略形ＮＡは変化無し／活性無しを示し、省略形ＮＤは化合物に試験を受けさせなかった／反応を測定しなかったことを示す。

この上に示したデータは、培養物を本発明の選択した化合物で処理すると結果としてＭＡＰ２−ＦＩＴＣ免疫蛍光で測定した時に神経突起生長が有意に向上したことを示している。試験化合物とα−ＭＳＨの間の比較により、神経突起生長の助長に関して試験化合物の多くが試験した濃度においてα−ＭＳＨよりも優れていたことを示している。加うるに、試験化合物のいくつかは海馬または皮質細胞における神経突起生長に対して選択的効果も示した。

インビボ顔面神経圧縮モデル
試験化合物が神経保護または神経再生効果を示し得るか否かを顔面神経圧縮モデルで調査した。顔面神経運動軸索は充分に限定された核の脳橋中のニューロンから排他的に生じる。顔面神経を圧縮すると結果として損傷部位に近い所では逆行する反応がもたらされそしてそれの基部の所ではＷａｌｌｅｒｉａｎ変性が生じ、それによって、損傷側のひげの動きが低下する。

オスのＬｏｎｇ−Ｅｖａｎｓラット（１５０−１８０ｇ）を手術している間に麻酔をかけたが、誘導では３−５％のイソフロランを用いそして維持では２％のイソフロランを用いた。右顔面の神経を露出させた後、鉗子を用いて、茎乳突孔から出ている所を３０秒間圧縮した。左顔面の神経にはみせかけの手術を施して、内部対照として用いた。神経を圧縮するとひげの筋肉が麻痺し、それによって損傷側のひげの動きが低下するが、これを麻酔から回復した後直ちに観察する。機能不全に関連して下記の形態的異常を観察した：
（１）損傷側の顔面核の中でニューロン周囲のグリア細胞の数が多くなり、約Ｄ３−６のピークになるまで多くなることが観察される。
（２）損傷を与えてほぼ１週間後に圧縮顔面神経の中のミエリン殻が薄くなりかつミエリン塩基性蛋白質の染色が減少する。
（３）Ｎ−Ｍ連結およびひげ小胞領域の回りの形態が変化しかつ顔面核の中の運動ニューロンが次第に変性する。

麻酔から回復した後のラットを媒体を与える群またはαＭＳＨを与える群または試験化合物を与える群に１群当たり６匹の動物になるように無作為に分割した。αＭＳＨ（ｓ．ｃ．、７０ｕｇ／各４８時間）を正の対照として用いた。試験化合物をｐ．ｏ．で２０ｍｇ／ｋｇの指定値で１４日間投与した。手術後のひげの動きの回復度を下記の２つの判断基準を用いて毎日監視した：
（１）基本線対照として用いる反対側（見せかけの手術を施した）と比較した損傷側のひげの動きの頻度
（２）動くひげのパーセント、ひげの筋肉の筋肉状態および鼻の位置を観察することを基にして特徴付けたひげ筋肉の強度に関する半定量的測定（０から４＋）。あらゆる観察に関して、挙動観察者が実験案を分からないようにした。

挙動評価の結果は、試験化合物である化合物＃３１および＃８４の両方ともが損傷を与えたラットがひげ筋肉動きを回復するまでの回復時間を媒体対照に比べて加速させることを示していた（ｐ＜０．０５）。ひげの動きの回復率をそれ自身の内部対照（見せかけの手術を施した）のパーセントとして表し、それは表８に挙げる如くであった。

インビトロ検定：皮脂合成の調節の測定
段階Ａ：支持細胞層の調製
３Ｔ３マウス線維芽細胞（Ｓｗｉｓｓ Ａｌｂｉｎｏマウス、ＡＴＣＣ ＣＣＬ−９２）の半集密培養物をマイトマイシンＣ（４μｇ／ｍｌ）で３時間処理し、トリプシンで処理した後、Ｄｕｌｂｅｃｃｏｓ最少必須培地（ＤＭＥＭ）［Ｃｏｌｏｒａｄｏ Ｃａｌｆ Ｓｅｒｕｍを１０％、ＰＮＣ（１００Ｕ／ｍｌ）、ＳＴＭ（１００μｇ／ｍｌ）、Ｌグルタミン（０．３ｍｇ／ｍｌ）、ピルビン酸ナトリウム（１ｍＭ）および非必須アミノ酸（１００μＭ）を含有］に入れて、組織培養プレート９．５ｃｍ^２当たり２．５ｘ１０^５個の密度になるように種付けした。前記細胞を皮脂細胞用支持細胞層として用いるに先立って３７℃で２４時間インキュベートした。
段階Ｂ：ヒト皮脂細胞の単離
手術後のヒト皮膚片のＤｅｒｍａｔｏｍｅ薄切り片から０．４−０．８ｍｍの深さの所のヒト皮脂細胞を単離した（前記皮膚のその部分には脂腺が豊富に存在することが以前に示されていた）。そのようにして得た薄切り片を３７℃において血清含有量が１０％のＩｓｃｏｖｅｓ培地中１％のＤｉｓｐａｓｅで２０分間処理した。次に、前記組織を燐酸塩緩衝食塩水（ＰＢＳ）中０．３％のトリプシン／１％のＥＤＴＡに３７℃で１０分間入れた。このインキュベーションを行った後、前記組織をＤＭＥＭ／Ｆ１２培地混合物（３：１）を含有させておいた増殖用培地（ＧＭ）［熱で不活性にしたＦＢＳを８％、熱で不活性にしたヒト血清（ＨＳ）を２％、ピルビン酸ナトリウムを１ｍＭ、表皮成長因子（１０ｎｇ／ｍｌ）、インシュリン（１０μｇ／ｍｌ）、ヒドロコルチゾン（０．４μｇ／ｍｌ）および±コレラトキシン（１００μｇ／ｍｌ）、Ｌ−グルタミンおよび抗生物質を補充］に入れて、それから細胞を穏やかにかき取った。そのようにして得た細胞をナイロンメッシュ（孔サイズが１００μ）に通して濾過し、遠心分離に７５０ＲＰＭでかけ、ＧＭに入れて再び懸濁させた後、数を数えた。
段階Ｃ：ヒト皮脂細胞の培養
この上に示した単離手順の結果として得た細胞を増殖用培地に入れて３Ｔ３支持細胞層の上で９．５ｃｍ^２当たり２ｘ１０^５個になるように平板培養して、３７℃において５％のＣＯ_２下に３日間維持した（段階Ｉ）。この初期増殖期間後、それらを移行培地（ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ ｍｅｄｉｕｍ）（ＴＭ）［ピルビン酸ナトリウムを１ｍＭ、インシュリン（１０μｇ／ｍｌ）、トランスフェリン（６．７ｎｇ／ｍｌ）およびセレン（５．５μｇ／ｍｌ）（ＩＴＳ）、熱で不活性にしたＦＢＳを２％および熱で不活性にしたヒト血清を２％に加えて±コレラトキシン（ｃｈ．ｔ．）（１００μｇ／ｍｌ）、Ｌ−グルタミンおよび抗生物質を補充しておいたＤＭＥＭ／Ｆ１２培地で構成］に移した（段階ＩＩ）。３日後、細胞を分化培地（ＤＭ）、即ちＩＴＳ、３，３’，５−トリイド−Ｌ−チロニンナトリウム（３ｎＭ）、微量元素混合物を１％（体積／体積）および選択した分化剤、即ちウシ下垂体抽出液（１０μｇ／ｍｌ）を補充しておいたＤＭＥＭ／Ｆ１２に変えた。この培地を３日毎に交換した（段階ＩＩＩ）。
段階Ｄ：脂肪細胞分化および脂質産生の刺激剤または抑制剤の試験
ホルモン、ホルモン混合物、即ちウシ下垂体抽出液または試験化合物を段階ＩＩＩ開始時の前記培養物に添加した。前記材料が皮脂培養物に対して示す効果を評価する目的で下記の２つの判断基準を用いた：脂質蓄積または合成の１）目で見た観察および２）評価。ナイルレッド（Ｎｉｌｅ ｒｅｄ）法を用いて脂質蓄積の評価を実施した。この方法は、ナイルレッドを用いて中性脂質を可視化しそしてプレート読み器を用いて５３５ｎｍで励起させた時に起こる５８０ｎｍの所の蛍光の発光を読み取ることで定量を行うことに頼っている。^１４Ｃアセテートを用いて放射線標識を付けそして４．１ソフトウエアを用いてＢｉｏ Ｒａｄ Ｐｈｏｓｐｈｏｉｍａｇｅｒ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍａｇｅｒ、ＦＸ）で量化することで脂質合成の評価を行った。
段階Ｅ：脂質蓄積の目で見た観察およびナイルレッド評価
脂質蓄積の形態学的評価の識別は容易である、と言うのは、細胞が大きくなりかつ脂質粒［これは明視野光学顕微鏡で細胞の中の黄色がかった円として見られる］を示すからである。皮脂細胞の中の中性脂質の蓄積／抑制の量化をナイルレッド結合検定で達成した。簡単に述べると、皮脂細胞を試験化合物に接触させた後、その細胞をＨａｎｋｓ緩衝食塩溶液（ＤＭＳＯとＰｌｕｒｏｎｉｃ Ｆ１２７を含有）中１μＭのナイルレッドと相互作用させた。４時間のインキュベーション、洗浄および一晩のインキュベーション後、蛍光プレート読み器を用いて、５３５の所で励起させた時に起こる５８０の所の蛍光の発光を読み取った。当該化合物が細胞増殖に対して抑制効果を示すか否かを測定する目的で、細胞の数を数えた。

この上に記述した手順に従って、本発明の選択した化合物に脂質蓄積の目で見た評価およびナイルレッド評価に関する試験を受けさせ、その結果は表９に挙げる如きであった。

段階Ｆ：脂肪細胞による脂質合成の評価
培養１１日目の皮脂細胞に^１４Ｃアセテートによる標識を血清を含まない培養培地の中で最終濃度が２μＣｉ／ｍｌになるように２４時間かけて付けた。次に、プレートから細胞をかき落とした後、ガラスびんに入れて−８０℃で凍らせた。Ｂｌｉｇｈ−Ｄｙｅｒ法（Ｂｌｉｇｈ，Ｅ．Ｇ．およびＤｙｅｒ，Ｗ．Ｊ．、Ｃａｎ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．、１９５９、３７、９１１−９１６頁）に本明細書に詳細に示す如き若干の修飾を受けさせた方法を用いて脂質抽出を実施した。簡単に述べると、細胞をクロロホルム：メタノールが２：１の混合物に入れてＫＣｌの存在下で均一にした。この混合物から有機相を取り出し、脂質を分離してアルゴン下で乾燥させた後、高性能の薄層クロマトグラフィー（ＨＰＴＬＣ）板に斑点として付けた。前記板に現像を個々別々の３種類の可動相を用いて受けさせた。１番目の可動相はヘキサン（前記板の上部に付けた）に続いてトルエン（上部に付けた）そして最後にヘキサン：エーテル：酢酸が７０：３０：１の混合物を付けた（前記板の中間−１０ｃｍ）。次に、前記板をラジオグラフフィルムに接触させることで、放射性脂質種を可視化した。標識を付けていない脂質の可視化では、前記板に８％の銅酸を噴霧した後、ホットプレートの上で焦がした。Ｉｍａｇｅ Ｐｒｏ Ｐｌｕｓ ３．０（Ｍｅｄｉａ Ｃｙｂｅｒｎｅｔｉｃｓ、Ｓｉｌｖｅｒ Ｓｐｒｉｎｇｓ、ＭＤ）で結果の量化を行った。

この上に記述した手順に従って、本発明の選択した化合物にこれがヒト皮脂細胞の分化に対して示す抑制効果に関する試験を受けさせた。目で見た時、化合物＃７４で処理して染色した細胞培養物は７日間の処理の後に皮脂細胞培養物の中に存在していた脂質粒の完全な消滅を示した。同じ細胞を脂質合成に関して試験する目的で放射能標識を付けた脂質をＨＰＴＬＣで分離することで測定を行った時、スクワレン、コレステロールエステルおよびワックスエステルが抑制されることが分かった。Ｉｍａｇｅ Ｐｒｏ Ｐｌｕｓ（バージョン５．０）を用いて帯の強度を測定することで細胞パネル（ｃｅｌｌ ｐａｎｅｌｓ）を量化した。処理したサンプルと媒体で処理した対照の間の差を基にして抑制％を計算し、その結果は表１０に挙げる通りであった。

試験化合物が皮脂産生に対して示す効果のインビボ評価：ヒト皮膚−ＳＣＩＤマウスキメラモデル
重症複合性免疫不全マウス（ＳＣＩＤ）は非常に貴重な皮膚異種移植モデルを与えるものである。このような動物ではＴおよびＢ細胞免疫が欠如している。ＳＣＩＤマウスに移植したヒト皮膚移植片はヒト細胞組織成分を保持し、そのような成分には、皮膚免疫細胞、即ちランゲルハンス細胞、マクロファージおよびリンパ球、そしてまた合体している内皮の一部が含まれる（Ｋａｕｆｍａｎ Ｒ．他、Ｅｘｐ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．１９９３：２：２０９−２１６、１９９３）。そのような特性を用いて、ヒト皮膚細胞が試験化合物に対して示す生理学的および／または病理学的反応を研究することができる。
段階Ａ：移植方法
５−６週令のＣ．Ｂ−１７ｓｃｉｄ／ｓｃｉｄマウス（Ｔａｃｏｎｉｃ、Ｇｅｒｍａｎｔｏｗｎ、Ｎ．Ｙ．）を移植で用いた。Ｆｏｒｍａｎ Ｄｅｒｍａｔｏｍｅを用いてヒト顔面皮膚を〜０．４ｍｍの全厚で切り取った。この皮膚薄切り片をＤｕｌｂｅｃｃｏの修飾Ｅａｇｌｅ培地（ＤＭＥＭ、Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）に入れた抗生物質および抗菌剤［ペニシリン、ストレプトマイシン、ファンギゾン］（Ｌｉｆｅ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）で３回洗浄した。この調製した移植床（ｇｒａｆｔ ｂｅｄ）に楕円形（〜２．０−２．５ｘ１．０−１．５）の皮膚を移植した後、４．０の絹を用いて縫合した。手術中、Ｋｅｔａｓｅｔ（体重１ｇ当たり０．１６ｍｇ）とＲｏｍｐｕｎ（体重１ｇ当たり８．０μｇ）の混合物を用いてマウスに麻酔をかける。

ＳＣＩＤマウスに移植した皮膚の創傷治癒過程に１カ月要することは充分に受け入れられており、その時点でヒト皮膚を実験の目的で用いることができる。我々は、また、Ｓｅｂｕｔａｐｅおよび組織−体型測定で示されるように、移植したヒト皮膚では脂腺が徐々に再生して７週目に脂腺が完全に再生して皮脂を分泌するようになることも確認した。移植後３カ月で脂腺が最大の大きさになることを観察した。この脂腺はヒトに特異的な皮脂を産生する能力を保持しており、脂腺の組織がヒトに特異的なマーカー（ＭＣ５−Ｒを包含）を発現した。脂腺が移植後２−３カ月で最大の大きさに到達したことから、その時点で脂質分泌の抑制効果を試験した。
段階Ｂ：処理方法
ヒト顔面皮膚を移植して２−３カ月後のマウスを研究で用いた。移植領域をポリエチレングリコール−エタノールに所望濃度１種または２種以上で溶解させておいた試験化合物で処理した（２０μｌ／２ｃｍ^２）。対照には媒体単独による処理を受けさせた。試験化合物を週末を除いて毎日投与した。Ｓｅｂｕｔａｐｅを用いて、処理後１５日目および３０日目に皮脂分泌を測定した。
段階Ｃ：実験の終結
ＳＥＢＵＴＡＰＥを用いて皮脂の産生を予備的に臨床評価することを通して実験の終結を決定した。この時点で、ヒト皮膚移植片を切除して、代表的なサンプルを組織学的評価の目的で集めた。より詳細には、２ｍｍのパンチバイオプシー（ｐｕｎｃｈ ｂｉｏｐｓｉｅｓ）を調製して、処理した組織における脂質合成および全脂質蓄積の評価で用いた。
段階Ｄ：試験を受けさせた組織における脂質合成および全脂質蓄積の評価
集めた２ｍｍのパンチバイオプシーを個別にＫｒｅｂｓ緩衝液に入れて９６個ウエルのプレートに入れた後、１０μＣｉの^１４Ｃアセテートによる標識を３時間かけて付けた。この標識付け期間の後のサンプルを培地で洗浄し、５個のバイオプシーをプールし、重量を測定した後、脂質抽出で用いた。脂質抽出およびＨＰＴＬＣによる分析は組織培養誘導細胞で記述したそれらと同じであった。

この上に記述した手順に従って、本発明の化合物＃７４に、ＳＣＩＤマウスに移植したヒト皮膚を１１日間処理した後の脂腺活性抑制に関する試験を受けさせた。

化合物＃７４の０．１％溶液を用いた局所的処置を受けさせた後の脂腺を目で見て評価した結果、目で見て脂腺が収縮しておりかつ脂質がダウンレギュレートされていた。０．０５％の溶液および０．００５％の溶液を用いて局所的に１５日間処理した場合、これは脂質をダウンレギュレートするに充分ではなかった。ＨＰＴＬＣを用いて前記細胞に関するヒト脂質の数値的抑制評価を分析し、その結果は表１１、１２および１３に挙げる如くであった。対照を基準にした抑制％数値を挙げる。

この上に示した表１２および１３で分かるように、化合物＃７４の０．０５％溶液および０．０１％溶液を用いて局所的に処理すると３０日後に全脂質蓄積および脂質のデノボ（ｄｅ ｎｏｖｏ）合成の両方が有意に低下した。

経口用調剤
経口用組成物の具体的な態様として、実施例２の化合物＃７４を１００ｍｇ用いて、サイズが０の硬質ゲルカプセルを充填するに充分な量の微細ラクトースと一緒に全量が５８０から５９０ｍｇになるように調合する。

局所的調剤
Ａ：ミクロエマルジョン
ミクロエマルジョン組成物の具体的態様として下記の成分を混合し、必要に応じて熱をかける：

次に、その混合した混合物に水（４２．９重量部）をゆっくり添加し、必要に応じて混合することで、エマルジョンを得た。
Ｂ：水アルコール系ゲル
水アルコール系ゲル組成物の具体的態様として、ポリプロピレングリコール（１０重量部）、ブチレングリコール（１０重量部）、ベンジルアルコール（２重量部）、ＥＤＴＡ（０．０５重量部）およびＢＨＴ（０．０５重量部）を水（全体で７４．８５重量部）と混合する。この混合物の混合を全成分が溶解するまで行う。次に、絶えず回転させながらカルボマー（例えばＧｏｏｄｒｉｃｈのＣａｒｂｏｐｏｌ ９３４Ｐ）（３重量部）をゆっくり添加することでゲルを生じさせる。次に、このゲルを混合しながらこれに化合物＃７４（０．０５重量部）を分散させる。このゲルのｐＨを約ｐＨ３−４に調整する。
Ｃ：無水ゲル
無水ゲルの具体的な態様として、イソプロパノール（２０重量部）をブチレングリコール（２０重量部）に添加する。次に、このイソプロパノール／ブチレングリコール混合物にＢＨＴ（０．０５重量部）およびベンジルアルコール（１．０重量部）を添加する。次に、その結果として得た混合物を絶えず混合しながらこれにシクロテトラシロキサン（Ｄ_４）およびオルガノポリシロキサン−１１（例えばＧｒａｎｔ ＩｎｄｕｓｔｒｉｅｓのＧｒａｎｓｉｌ ＧＳＭ Ｇｅｌ）（５８．８５重量部）を添加する。このゲルを絶えず混合しながらこれに化合物＃７４（０．１重量部）を入れて、それが均一に分散するまで微粉砕して分散させる。
Ｄ：クリーム
ｏ／ｗ（油／水）クリームの具体的な態様として、下記の成分を以下に示す如き量（重量部）で混合する。塩酸を用いて最終混合物のｐＨを約２に調整する。

この上に示した明細に説明の目的で与えた実施例を伴わせて本発明の原理を教示してきたが、本発明の実施は本請求項およびこれらの相当物の範囲内に入る如き通常の変形、応用形および／または修飾形の全部を包含することは理解されるであろう。

Claims (26)

1. 式（Ｉ）
   

   

   ［式中、
   Ｒ¹は、アリールであり、かつ、前記アリールはハロゲン、ヒドロキシ、アルキル、アルコキシ、ハロゲン置換アルキル、ハロゲン置換アルコキシ、アミノ、アルキルアミノまたはジ（アルキル）アミノから独立して選択される１個以上の置換基で置換されており、
   Ｒ²は、アリールであり、かつ、前記アリールはハロゲン、ヒドロキシ、アルキル、アルコキシ、ハロゲン置換アルキル、ハロゲン置換アルコキシ、アミノ、アルキルアミノまたはジ（アルキル）アミノから独立して選択される１個以上の置換基で置換されており、
   Ｒ³は、水素であり、
   Ｒ⁴は、アリールまたはアラルキルであり、かつ、前記アリールまたはアラルキルのアリール部分はハロゲン、ヒドロキシ、アルキル、アルコキシ、ハロゲン置換アルキル、ハロゲン置換アルコキシ、アミノ、アルキルアミノまたはジ（アルキル）アミノから独立して選択される１個以上の置換基で置換されていてもよく、
   Ｘ^-は、ブロマイド、クロライド、ヨージド、アセテート、ベンゾエート、サイトレート、ラクテート、マレート、ナイトレート、ホスフェート、ジホスフェート、スクシネート、スルフェート、タートレートおよびトシレートから成る群から選択される］
   で表される化合物。
2. Ｒ¹がアリールであり、かつ、前記アリールがハロゲン、アルキルおよびアルコキシから独立して選択される１または２個の置換基で置換されており、
   Ｒ²がアリールであり、かつ、前記アリールがアルキルおよびアルコキシから独立して選択される１または２個の置換基で置換されており、
   Ｒ³が水素であり、
   Ｒ⁴がアリールであり、かつ、前記アリールがハロゲン、アルキルおよびアルコキシから独立して選択される１個以上の置換基で置換されていてもよい、
   請求項１記載の化合物。
3. Ｒ¹が２−クロロフェニル、４−クロロフェニル、２−メチルフェニル、４−メチルフェニル、２−メトキシフェニルおよび４−メトキシフェニルから成る群から選択され、
   Ｒ²が４−メチルフェニル、２−メトキシフェニルおよび４−メトキシフェニルから成る群から選択され、
   Ｒ³が水素であり、
   Ｒ⁴がフェニル、２−クロロフェニル、４−クロロフェニル、４−ブロモフェニル、２−メチルフェニル、４−メチルフェニル、２−メトキシフェニル、４−メトキシフェニル、ベンジル、２−クロロベンジル、４−クロロベンジル、２−メチルベンジル、４−メチルベンジル、２−メトキシベンジル、４−メトキシベンジル、２，６−ジフルオロフェニル、３，５−ジフルオロフェニル、２−クロロ−６−メチルフェニルおよび３−ピリジルから成る群から選択される、
   請求項１記載の化合物。
4. ２−（２−メトキシフェニル）−３−（２−メトキシフェニル）−５−フェニルアミノ−［１，２，４］−チアジアゾール−２−イウム、
   ２−（２−メトキシフェニル）−３−（２−メトキシフェニル）−５−（２−メトキシフェニルアミノ）−［１，２，４］−チアジアゾール−２−イウム、または
   ２−（２−メトキシフェニル）−３−（２−メトキシフェニル）−５−（４−トリルアミノ）−［１，２，４］−チアジアゾール−２−イウムである請求項３記載の化合物。
5. ２−（２−メトキシフェニル）−３−（２−メトキシフェニル）−５−フェニルアミノ−［１，２，４］−チアジアゾール−２−イウムである請求項４記載の化合物。
6. 請求項１記載の化合物と薬学的に受け入れられる担体を含んで成る薬剤組成物。
7. 薬剤組成物の製造方法であって、請求項１記載の化合物と薬学的に受け入れられる担体を混合することを含んで成る方法。
8. 請求項１記載の化合物と薬学的に受け入れられる担体を混合することで調製された薬剤組成物。
9. 請求項２記載の化合物と薬学的に受け入れられる担体を含んで成る薬剤組成物。
10. 請求項３記載の化合物と薬学的に受け入れられる担体を含んで成る薬剤組成物。
11. 薬剤組成物が局所調剤である請求項８記載の組成物。
12. 薬剤組成物が局所調剤である請求項９記載の組成物。
13. 薬剤組成物が局所調剤である請求項１０記載の組成物。
14. 請求項１１記載の組成物であって、コメド溶解剤／角質溶解剤、抗菌剤、ステロイド系抗炎症剤および非ステロイド系抗炎症剤からなる群より選択される１種以上の成分をさらに含んでなる、上記組成物。
15. 請求項１４記載の組成物であって、コメド溶解剤／角質溶解剤がレチノイド、サリチル酸、グルコール酸およびセチルベタインからなる群より選択される、上記組成物。
16. 請求項１４記載の組成物であって、抗菌剤がベンゾイルパーオキサイド、エリスロマイシン、テトラサイクリン、クリダマイシンおよびアゼライン酸からなる群より選択される、上記組成物。
17. Ｘ^-がブロマイド、クロライドおよびヨージドからなる群より選択される、請求項１記載の化合物。
18. Ｘ^-がブロマイド、クロライドおよびヨージドからなる群より選択される、請求項２記載の化合物。
19. Ｘ^-がブロマイド、クロライドおよびヨージドからなる群より選択される、請求項３記載の化合物。
20. Ｘ^-がブロマイド、クロライドおよびヨージドからなる群より選択される、請求項４記載の化合物。
21. Ｘ^-がブロマイドである、請求項４記載の化合物。
22. ２−（２−メトキシフェニル）−３−（２−メトキシフェニル）−５−フェニルアミノ−［１，２，４］−チアジアゾール−２−イウム ブロマイド。
23. 請求項２２記載の化合物と薬学的に受け入れられる担体を含んで成る薬剤組成物。
24. 請求項２２記載の化合物と薬学的に受け入れられる担体を混合することを含んでなる薬剤組成物の調製方法。
25. 請求項２２記載の化合物と薬学的に受け入れられる担体を混合することにより調製された薬剤組成物。
26. ２−（２−メトキシフェニル）−３−（２−メトキシフェニル）−５−フェニルアミノ−［１，２，４］−チアジアゾール−２−イウムのブロマイド、クロライド、ヨージド、アセテート、ベンゾエート、サイトレート、ラクテート、マレート、ナイトレート、ホスフェート、ジホスフェート、スクシネート、スルフェート、タートレートまたはトシレート塩を有効成分として含んでなる、アクネの治療用製剤。