TWI296926B - Interleukin-4 gene expression inhibitors - Google Patents

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Description

1296926 A7 B7 五、發明說明 發明領域 本發明涉及治療炎性疾病的方法，所述炎性疾病為例 如過敏反應、哮喘、鼻炎、皮炎、B-細胞淋巴瘤、腫瘤和 與細菌、鼻病毒或呼吸道合胞病毒(RSV)感染有關的疾 病。更具體說，本發明涉及通過給患者施用能夠抑制白介 素-4(IL-4)資訊轉錄、IL-4釋放或IL-4產生的化合物來治 療患者中前述的炎性疾病。具體說，本發明涉及各種吲哚 衍生物的應用。 10 現有技術 免疫系統由複雜排列的細胞組成，並且利用細胞的相 互作用，使用兩種普通類型免疫應答之一來識別和消滅各 種各樣的微生物；這些應答中的一種涉及抗體的產生，而 另一種涉及細胞介導的應答。在這些不同應答的每一種中 15 都涉及到特異化免疫細胞，特別重要的一類細胞類型是已 知的淋巴細胞。
淋巴細胞在骨髓中產生並且一類淋巴細胞在胸腺中受 訓，該類細胞被稱作T細胞。淋巴細胞進一步的特徵是存 在特異性細胞表面標誌，通常已知為決定簇（CDs)。由 20 此，T細胞的兩個主要子類是輔助性T細胞（其表達CD4 受體並因此是CD4+)和細胞毒性T細胞（其表達CD8受體 並因此是CD8+)。輔助性T細胞可通過分泌各種局部仲介 體、淋巴因數、白介素和/或細胞因數來增強或啟動其他 白細胞的應答，如巨嗤細胞或B細胞。相反，細胞毒性T 計 線 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） 92161a 1296926 A7 B7 五、發明說明（2 10 15 細胞殺死被病毒或其他細胞内微生物感染的細胞。當受到 主要組織相容性複合體(MHC)分子（表達在呈遞抗^二胞 (APCs)上)上呈遞的抗原刺激時，T淋巴細胞或丁細胞可產 生細胞因數白介素-2(IL-2)並且克隆性擴充。由於這此 CD4+T輔助細胞尚沒有被極化，戶斤以它們可以分泌祀多不 同類型的細胞因數’這些細胞被稱作ThO細胞。Th〇細胞 能夠分化成至少兩種T細胞亞型，各亞型表達新形式的細 胞因數，產生不同的效應子功能。Thl和Th2細胞通過細 胞因數基因的排列而區分，各細胞類型表達並似乎涉及到 不同類型的免疫應答。 Thl細胞對消滅微生物來說是重要的，所說的微生物 包括細菌、寄生物、酵母和病毒，Thl細胞主要是介導細 胞的免疫性。Thl細胞表達干擾素-γ(ΐΡΝ-γ)和淋巴毒素， 其可以啟動殺微生物活性，並可在巨噬細胞中產生細胞因 數。Thl應答的啟動常常包括產生IgG2a同型的補體結合 性抗體，以及啟動天然殺傷(NK)細胞和表達IFN_y及穿孔 素的細胞毒性CD8+T細胞。然而，如果失控，Thi細胞 則是導致自身免疫疾病如i型糖尿病、類風濕性關節炎和 tt- 線 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 20 多發性硬化(MS)的原因 Th2細胞在螺蟲和其他胞外寄生物的消滅中是重要的 並且涉及變應性和特應性反應。Th2細胞產生的細胞因數 可以誘發氣管反應性過強以及產生坨^。丁}12細胞表達細 胞因數IL-4、IL-5和IL-13並且可以啟動肥大細胞和嗜曙 紅細胞。Th2細胞刺激b細胞增殖並有效地分泌抗體（體 -4- 木紙張尺度適用中_^?(CNS)A4規格（_h〇 X 297公釐） A7 B7 1296926 五、發明說明（3) 液免疫）° 有證據表明，Thl和Th2細胞及它們的細胞因數(如 IFN-γ和IL-4)在生理條件下可以相反調節彼此並且試圖達 到免疫平衡（參見’例如，Abbas A. K.等，Nature， 5 (1996)，383，787-793 ; Ray A 和 Cohn，L· Current -線· 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製
Opinion In Investigational Drugs，（2000)，1，442-448 ; Robinson D· S·等，New Engl· J. Med·，（1992)，326，298-304 ; Busse W.W 和 Lemanske R.F·，New Engl· J· Med·， (2001) ’ 344 ’ 350-362)。由此 ’ IL-12 刺激原初 CD4十細胞 10 分化成Thl細胞，而IL-4刺激原初CD4+細胞分化成Th2 細胞。轉錄因數(GATA-3)的表達，在原初CD4+細胞中是 低的，在分化成Th2細胞的細胞中增量調節並且在分化成 Thl細胞的細胞中減量調節（Zhang D. H.等，又8沁1· Chem· ’（1997) ’ 272 ’ 21597-21603，Ouyang，W·等， 15 Immunity，（1998)，9，745_755)。當在 Thl-誘導性細胞因 數IL-12和抗-IL-4的存在下體外再啟動時，Th2細胞的極 化種群可以被誘導轉變’產生Thl細胞因數(Heinzel，F.P. 等，J· Exp. Med.，（1993)，177，1505-1509 以及 Mocci，S· 和 Coffman，ILL·，J. Immunol.，（1995)，154，3779-20 3787)，並且反之亦然。 白介素-4是由Th2細胞、嗜鹼細胞、嗜曙紅細胞和肥 大細胞回應於受體-介導的啟動事件產生的多效性I型細胞 因數。IL-4运由T細胞的特化亞型產生，特化亞型中的一 些表達ΝΚ1·1並且似乎特異於CD-1(NKT細 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐） A7 B7 1296926 五、發明說明（4 ) 胞）(Yoshimoto，T·等，Science，Π 995、，270，1845-1847)。T細胞產生IL-4，缺乏這些細胞的小鼠當免疫接種 存在於明礬中的卵清蛋白時不能發育成IL-4-依賴性氣管 超敏性。 5 IL-4在調節抗原-刺激的原初T細胞的分化中起著關 經濟部智慧財產局員工消費合作社印制衣 鍵作用。IL-4可引起這種細胞發育成能夠產生IL-4和一 系列其他細胞因數（包括IL-5、IL-10和IL-13)的細胞（即類 似Th2的細胞）。IL-4可有效地抑制產生lFN-γ的CD4+T 細胞(例如Thl細胞）的表像。主要生理學重要性的次要功 10 能是IL_4可以控制免疫球蛋白類別轉換的特異性。il-4 決定了轉換為人B細胞表達IgE和IgG4和小鼠B細胞表 達IgE和IgGl的開關。在IL-4和IL-4受體-α剔除小 鼠，以及缺乏信號轉導物和轉錄啟動劑(STAT-6，與IL-4 受體信號有關的主要基因）的小鼠中，IgE的產生減少至原 15 來的百分之一或更少。IL-4受體剔除小鼠和STAT-6剔除 小鼠還缺乏發育在驅蟲寄生物尽名及姨4多 brasiliensis(Nipp〇strongylus brasiliensis)象染的小餐、今的 IL-4-產生用T細胞。IL-4的這些生理學功能使其在調節變 應性狀恶中起卓越的作用，它還在發育對續蟲和其他胞外 20寄生物的保護性免疫應答中起主要作用。在實驗性和臨床 情形中，IL-4似乎具有能夠改善破壞組織的自身免疫性的 作用。 IL-4在造血組織中具有各種其他作用。正_4可以增加 II類MHC分子在B細胞中的表達，增強CD23的表達， 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） A7 B7 1296926 五、發明說明（5 ) 增量調節IL-4受體的表達，並且與脂多糖聯合使得B細 胞可以表達Thy i。IL-4還可以作為B細胞生長的共促細 胞分裂劑。雖然IL-4本身對休眠的淋巴細胞而言不是生長 因數，但在實質上匕可以延長T和B淋巴細胞在培養物中 5的壽命，並且可以通過表達IL-4受體的因數依賴性骨髓系 來防止編程性細胞死亡。 IL-4還在組織枯合和炎症中具有重要作用。與 TNF作用誘導血管細胞粘合分子-yvcAM-i)在血管内皮 細胞上的表達，並且IL-4減量調節E-選擇蛋白的表達。 10 據認為，這種由IL-4引起的在粘合分子表達平衡中的移變 有助於使T細胞和嗜曙紅細胞（而非粒細胞)募集到發炎部 位。 IL-4受體存在於造血、内皮、上皮、肌、成纖維細 胞、肝細胞和腦組織中並且通常以100-5000個位點/細胞 15 表達，與這個細胞因數廣泛的作用相一致。通過結合到高 親和受體複合體中，IL-4可引起各種各樣的生物學應答。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 在實驗條件下，據顯示Thl和Th2細胞可以抑制彼 此的活性。很多對哮喘患者的臨床研究將Th2細胞因數的 過量表達與特異性疾病狀態聯繫起來。除此之外，考慮到 20 Th2細胞因數在抑制Thl細胞分化中的作用（例如，參見 Abbas，Α· K_等，Nature > (1996)，383，787-793 ; Ray A 和 Cohn，L.，Current Opinion In Investigational Drugs， (2000)，1，442-448 ; Robinson D. S·等，New Engl. J. Med·，（1992、，326，298-304 ; Busse W· W 和 Lemanske -7- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐） 1296926 A7 B7 五、發明說明（6 ) R.F· ’ New Engl. J. Med.，（2001)，344，350-362)，Th2 細胞因數的過量啟動對健康具有附加的危險，即使患者易 於患與低Thl細胞含量有關的疾病。IL-4的高度局部表達 與變應原-誘導的晚期鼻應答有聯繫。因此，高含量的 5 4與IgE產生、組織嗜曙紅細胞增多和其他認為與變應性 發炎有關的事件有關，通過IL-4與其受體互相作用並且啟 動至少兩條相互不同的通信途經，其在特異性靶基因的轉 錄中達到高潮。一條途經涉及STAT-6的啟動。例如參 見，Ghaffar，0·等，Clin. Exp. Allergy > r^nnn) , 30(1) ^ 10 86-93，探究了 STAT-ό在變應原-誘導的晚期鼻應答中表 達和局部類固醇治療對STAT_6表達的作用，結果證明了 局部類固醇治療可減少STAT-6表達，這與IL-4表達的減 少相似。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 特應性疋一種ia傳趨向，為哮喘、鼻炎和濕療的基 15礎，並且產生抗普通抗原的高非特異性IgE和/或高特異性 IgE。IL-4和IL-13是獨特的細胞因數，其獨特之處在於它 們可誘導B細胞中的IgE合成和Τ細胞中的Th2型分化。 這兩種細胞因數通過與其在靶細胞上的功能性受體結合而 顯示它們的生物學活性。這些受體被認為構成異源二聚 20體，二者均具有IL-4R α鏈(IL^Ra)作為級分。在和 IL-13的信號-轉導用的分子中，STAT_6(其通過這些細胞 因數所啟動並且募集IL-4Ra)對這些細胞因數的生物學活 性來說是必需的。Izuhara，K 和 Shirakawa，T. Int J Mol ΜΜ· ’（1999) ’ 3(1)，3-10，驗證了 存在於 IL-4RCC 基因中 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（21〇 X 297公爱） A7 B7 1296926 五、發明說明（7 ) 的至少一種多形性，Ile5〇Val，在遺傳性和功能性兩個方 面與特應性有關係。 很多研究證明，哮喘（一種特徵是空氣流動梗阻、支氣 管反應過強和氣管發炎的疾病）、其他炎性疾病和變應性 5疾病的致病原因都牽涉到IL-4的啟動並且il-4的刺激產 生相關免疫啟動的級聯。 據扭明’ IL-4在人過敏反應中起顯著作用，包括增強 趨向變應性反應的誘因。例如，Ghaemmaghami，Amir M. 等在 Eur. J. Immunol > (?οπη，31(4)，1211-1216 中報導 l〇 了房屋灰塵滿唁皮瞒屬（Dermatophagoides) pteronyssinus 變應原’ Der p 1，在可觀比例的患有灰塵蟎過敏反應患者 中引起IgE抗體應答。他們證明Der p 1蛋白酶剪切了在 人IgE合成的内環境穩定控制中所包含的細胞表面分子， 即T細胞上的IL-2受體(CD25)。結果，這些T細胞在應 15答對抗-CD3抗體刺激時的增殖和iFN-γ分泌明顯地減 少。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 IL-4還在職業性哮喘和其他因與各種化學品接觸而引 起的呼吸道變應性過敏中起作用。因化學品誘導的變應性 過敏可以是各種形式，包括變應性接觸皮炎（皮膚過敏)和 20變應性哮喘和鼻炎（呼吸道過敏）。據證明，儘管接觸變應 原激發小鼠中的選擇性1型免疫應答，其特徵是通過導流 淋巴節細胞(LNC)來分泌高含量細胞因數IFN-γ，但是化學 呼吸變應原卻反而優先刺激2型應答，其中2型應答與相 對高含量的IL-4和IL-10有聯繫，參見，例如， -9- 本紙張尺度適用家標準(CNS)A4規格（210 X 297Ί1Τ Ϊ296926
五、發明說明（Ο
Dearman，R· J 和 Kimber，I.，J. AdpL Toxicol.，（2001)， 21(2)，153-163。化學過敏反應是普通且重要的職業性健 康問題。可以使用淋巴節細胞(LNCs)的細胞因數指紋分析 來區別化學接觸變應原和呼吸變應原，並且近來的研究已 5 經得出結論，即接觸變應原可以刺激1型免疫應答的選擇 性發育，而1型免疫應答與通過導流LNCs來分泌lFN-γ 而很少分泌IL-4或IL-10相聯繫，參見Pearlman，David S·，J. Allergy Clin· Immunol·，（1999、，104 (4，Pt· 1) S132-S137。相反，化學呼吸變應原優先誘導2型免疫應 10 答的出現，其特徵是產生IL-4和IL-10，但產生相對低量 的 IFN-γ。 IL-4以及組胺，與皮膚中的肥大細胞變應性風團反應 有關。例如，Saarinen，J. V·等在 Allergy (Copenhagen") > (2001)，56(1)，58-64中報導了對母牛-皮屑變應原刺痛測 15 試的敏感特應性患者的健康和風團皮膚的活組織檢查，披 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 露了 IL-4-陽性肥大細胞的百分率和數目與風團大小本 身、以及與通過母牛變應原和通過組胺對照引起的風團大 小的比顯示明顯的正陽性關係。除此之外，類胰蛋白酶_ 、胃促胰酶-和IL-4-陽性肥大細胞與總lgE有關，但與特 20異性1SE含量無關，並且他們得出結論IL-4-陽性的，但 不是類胰蛋白酶-和胃促蛋白酶-陽性的肥大細胞與刺痛測 試風團的程度有緊密關係。 變應性支氣管肺曲黴病(ΑΒΡΑ)表徵為，與非ΑΒΡΑ的 特應性哮喘和膽囊纖維樣變性患者相比，Th2 CD4+T細胞 -10- 本纸張尺度適用申國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1296926 A7 B7 五、發明說明（9 對煙曲黴變應原的應答增高以及具有超-IgE狀態。相比于 其他特應性個體，ΑΒΡΑ患者對IL-4刺激的敏感性增加。 相比于特應性和非特應性患者，ΑΒΡΑ患者中的B細胞明 顯對IL-4刺激更敏感。]χ-4還刺激特應性患者中Β細胞 5上的CD86表達增量調節，而對非特應性患者幾乎沒有作 用 ^ Khan，S·等在 Int. Arch. Allergy TmmunoL，（2000)， 123(4) ’319-326中假定這種應答的一個原因是ΑΒΡΑ中 對IL-4的敏感性增加，由此造成CD23和CD86的表達增 加，導致產生正向擴增機理，從而增加了 Th2 CD4+T細胞 10 應答。 15 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 20 IL-4在變應原-誘導的氣管炎症和支氣管反應過強 (BHR)的發育中也具有重要作用。Tanaka，H•等在Allerg〇1 Μ· ’（2000)，49(；4)，253-261中研究了用兩種不同近交 IL-4基因-剔除的小鼠；一種是BALB/c，已知該種鼠是高 IgE回應物，另一種是C57BL/6，已知該種鼠是低IgE回 應物並且對氣管中的乙醯膽鹼(ACh)是較低的回應物，將 所说的小鼠免疫接種抗原並且通過測定ACh和採用支氣 管肺泡灌洗來分析支氣管反應性。此項研究表明遺傳背景 中的差異可以直接影響支氣管性哮喘的病理生理學，包括 IgE的作用，該項研究表明il-4在不依賴遺傳背景的變應 原-誘導的BHR的發育中具有決定性作用。 在關於IL-4在特應性致病原因中的作用的另一項研究 中’近來發現用曼氏裂體吸毒（Schistosoma mansoni)印抗 原（SEA)鼻内敏化的BALB/c小鼠中增加了啟動變應性鼻 -11- A7 B7 1296926 五、發明說明（10) 炎的 Th2應答（參見，Okano，Μ·等，Allergy (Copenhagen)，(2000)，55(8)，723-731)。此研究結果顯 示，IL-4對產生與Th2-關聯的抗體、特別是IgE-是必要 的，但IL-4對產生與Th2-相關聯的細胞因數IL-5和IL-10 5 或者誘導鼻内嗜曙紅細胞增多不是必需的。 在對節段變應原攻擊後從支氣管肺泡灌洗液(BAL)中 獲得的細胞所進行的另一項研究中，Schroeder，J.T.等在L Allergy Clin. Immunol.，（2001)，107(2)，265-271 中報導 了用特異性變應原啟動後，人血嗜鹼細胞分泌高含量的 10 IL-4，並且得出結論變應原攻擊後遷移到肺中的嗜驗細胞 (不是淋巴細胞或嗜曙紅細胞)是IL-4的主要來源。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 人肥大細胞合成並分泌很多與變應性疾病如哮喘和鼻 炎致病原因相關的細胞因數。具體說’ IL_4和il-5在表 現這些疾病的炎性應答的形成中可能起關鍵作用。對人鼻 15 和支氣管粘膜活組織的免疫組織化學研究表明，IL-4和 IL-5可能在肥大細胞中以預先成形的形式儲存。例如， Wilson，S· J·等在 Clin. Exp. Allergy，（2000) , 30(4) ^ 493-500中分析了來自切除肺標本的支氣管粘膜和肺實質以及 來自活性變應性鼻炎患者的鼻粘膜活組織，並且確定了是 2〇 對IL-4(而不是對IL-5)的免疫反應性被局限至所有組織樣 品的肥大細胞的顆粒體中。由此可見，預先成形的IL_4在 肥大細胞顆粒體内的儲存在變應性免疫學應答的引發和維 持過程中可能具有重要的影響。 氣管樹突細胞對刺激應答吸入抗原的原初τ細胞和對 -12- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐） 1296926 A7 B7 五、發明說明（U) 變應性致敏的發育是必需的。比較CDla、IL-4和IL-4受 體在哮喘和對照中的表達，表明CDla+細胞的數目與IL-4細胞數目有正比關係，並且支氣管活組織連續切片研究 顯示CDla+細胞可以表達IL-4受體。Bertorelli，G·等在 5 Allergy (Copenhagen) ? (2000)，55(5)，449-454 中得出結 論’增加量的IL-4可能在禮冷維持樹突細胞庫中起病理生 理學性作用。因此，由於IL-4在對變應原的T-細胞免疫 應答中的呈遞抗原細胞上可能具有活性，所以IL-4在哮喘 炎症中起著重要作用。 10 採用小鼠模型進行的流行病研究和實驗表明，柴油廢 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 氣顆粒中包含的聚芳族烴可以促使過敏反應的發生。基於 IL-4在邀巧形成了變應性應答，Bommel，H•等在l Allergy Clin. Immunol.，（2000)，105(4)，796-802 中調查 了嵌二萘（柴油廢氣顆粒中的一種主要化合物）是否可以影 15響IL-4的產生，其中採用ELISA法來評估IL-4在初級人 T細胞中的產生並採用RNA印跡法來評估mRNA轉錄， 結論是嵌二萘誘導了 IL-4 mRNA的轉錄和il-4蛋白質在 初級人T細胞中的表達。是嵌二萘、而不是相關的聚芳族 烴增加了人和小鼠IL-4啟動子的基礎轉錄，從而表明是嵌 20 二萘可能通過誘導IL-4的產生而促發變應性疾病。
Th2-型細胞因數(IL-4和IL-5)的產生及組織嗜曙紅細 胞產生是變應性疾病的特徵性特點。在變應原激發後 24h ’ CD3+ T-淋巴細胞都成為在特應性哮喘和鼻炎中的 IL-4和IL-5 mRNA轉錄物的首要細胞源。嗜曙紅細胞相 -13- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1296926
當於IL-4的早期源，可以有助於後期鼻應答期間的Th厶 型應答並且發展成變應性鼻炎。Nouri-Aria，K_ T·等在 CUikJBxp. Allergy > ^2000^，30(12)，1709-1716 中發現， 在變應性鼻炎的患者中，是嗜曙紅細胞、而不是丁_細胞 5 (CD3+細胞)在變應原攻擊6h時於鼻枯膜中增加。6h時表 達IL-4 mRNA和IL-5 mRNA的細胞的數目也增加。在非 特應性患者中沒有檢測到T-細胞、嗜曙紅細胞或細胞因數 表達的增加。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印制衣 與花粉自然接觸可激發患季節性變應性鼻炎的非哮喘 10患者中的氣管反應性增加。這種自然接觸可以誘導炎性細 胞募集和細胞因數的釋放，從而導致下部氣管發炎。 Chakir，J·等在 J. Allergy Clin. Immunol. > (?nnn)， 106(5)，904-910中，通過對鼻炎患者支氣管活組織標本的 免疫組織化學測試(所說的患者沒有過去或當前的哮喘病 15 史），表徵了非哮喘性花粉敏感型患者的下部氣管發炎特 徵’並且評價了在花粉季節和非花粉季節細胞因數表達和 炎性細胞數目和啟動。作者發現，在花粉季節CD4+、 CD8+和CD45RO+淋巴細胞亞種群的數目明顯高於非花粉 季節。作者得出結論，自然花粉接觸會導致患有變應性鼻 20 炎的非哮喘性患者的支氣管粘膜中的淋巴細胞數目、嗜曙 紅細胞募集和IL-5表達增加。 已知用糖皮質激素(GCs)局部治療可減少變應性鼻炎 患者中的嗜曙紅細胞，但不減少嗜中性白細胞。Benson， Mikael 等在 J. Allergy Clin. Immunol-，（2000)，106(2)， -14- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公爱） 1296926
五、發明說明（u) 10 15 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 20 307-312中，研究7 GC治療對嗜曙紅細胞與嗜中性白细 胞的不同作用以及對Thl/Th2細胞因數與嗜中性白細旧 關的細胞因數IL-Ιβ和TNF-α的不同作用，作者採 法是檢查來自局部CG治療的6G名季節彳峻應性鼻炎^ 童患者的鼻流體中的嗜曙紅細胞和嗜中性白細^的含=， 測定 IFN_Y、IL-4、IL.6、IL_10、IL部、ΤΝρ_α、诚二畦 曙紅細胞陽離子蛋白質(ECP)在鼻流體中的含量。gc、、Λ 9 後J Th2細胞因數IL_4、IL_6和IL，以及二和袖合J 統计學意義的減少。然而，IFN-γ、IL-1 β、tnf α戈唾中 性白細胞的含量沒有明顯變化’由此作者得出結；-，= 應性鼻炎患者騎GC局料療的有錢果可以歸因於 Th2細胞因數的減量調節，從而引起嗜曙紅細胞、Ecp IgE的降低。 類似特應性鼻炎、支氣管哮喘和蓴麻疹的變應性疾病 廣為流行並且發病率正在增加。已知τ細胞在變應性疾病‘ 中起重要作用，通過識別抗原並且分泌Th2_型細胞因數今 (如IL-4、IL-5和IL-13)不僅誘導IgE的合成而且還將諸如 嗜曙紅細胞和嗜驗細胞的效應細胞募集到變應性發炎的位 點。近來的研究·表明，除攜帶α，β T-細胞受體(TCR)的細 胞外，不很普遍的攜帶γ，δ TCR的細胞在變應性炎症的發 展和延續中可能作為效應細胞和免疫調節細胞起著重要作 用’參見 Pawankar，R.，Clin· Exd· Allergv，（2000、， 3〇(3)，318-323 〇 .kE存在于變應性鼻炎和支氣管哮喘的人患者的氣管 -15- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐） ά 計 線 1296926 A7 B7 五、發明說明（ί4) 分泌物中。Zuberi，R· I·等在 J^Immunol. , (2〇〇〇), 164(5)，2667-2673中，證明了從先用存在於明礬中的 OVA全身性敏化、然後用霧化〇VA進行攻擊的balb/c 小鼠中獲得的BAL中含有大量的igE，其中多於5〇%是 5 Ag特異性的，並且在Ag接觸終止後，氣管分泌物中的 IgE 3里仍保持15天以上的面水準。在qva-攻擊小氣的 BAL流體中檢測到大量的IgE_〇VA免疫複合體。IgE免疫 複合體不能增大高親和IgE受體(FcsRI)-缺損小鼠中的炎 性應答。 10 從3個主要細胞因數(il-4、IL-12和lFN-γ)對人外周 血單核細胞(PBMC)邀命IgE合成的效果方面分析細胞因 數在特應性中的調節機理，其中所說的人外周血單核細胞 (PBMC)來自正常個體和特應性患者。參見，例如，Liu， Meng，等的 Chin. Med. J. (Beijing，Engl· Ed·)，（1999)， 15 112(6)，550-553。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 特應性皮炎(AD)是一種慢性炎性皮膚疾病，經常與哮 喘、鼻炎和食物過敏反應有關。據認為，產生Th2-型細胞 因數(如IL-3、IL-4和IL-5)的淋巴細胞在疾病的發病機制 中具有關鍵作用。高血清含量的可溶形式的CD30 2〇 (sCD30)(—種Th2-細胞克隆的啟動標記)與患AD的兒科患 者的疾病活性有關，並且臨床試驗證明環孢菌素A(CsA) 治療可明顯改善AD患者中的臨床症狀。Bottari，V.等在 Allergy (Copenhagen) ? (1999)，54(5)，507-510 中，評估 了在用CsA治療的嚴重AD成人患者組中的CsA調節釋 -16- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐） 1296926 A7 B7 五、發明說明。。 " -- 放SCD30、的作用，並且證明了 IU4和sCD3〇的血清含量 都有月顯減>，與臨床症狀改善相一致，由此表明可 以阻止AD中的Th2細胞的啟動。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 特異隹變應原免疫療法(SIT)可有效治療IgE-介導的疾 5病。儘管其作用機理仍不清楚，但是可以確定的是在應答 特異性變應原時產生IL_4 *正七。Gabrid_，s•等在 Ailergy (Copenhagen) > .(2001) ’ 56(4)，293-300 中，調查 了 SIT對變應原_特異性IgE和IgG4含量的作用，採用的 方法對金樣品進行細胞因數分析，所說的血樣品是在花粉 10季節之前(治療前)和花粉季節期間（SIT或安慰治療後)從花 粉-敏化的個體中收集到的，所說的細胞因數分析是測定 用變應原邀介啟動的外周血單核細胞中的iL-4_、IL-13… IL-10-和IFN个產生用細胞的數目並且測定變應原_特異性 IgE和IgG4的血清含量。據顯示，在花粉季節期間安慰劑 15組中的辽-4·和IL-13-產生用細胞增加，這種增加是在接收 變應原SIT的患者中所沒有的。SIT-治療個體的變應原-特 異性IgG4增加，但安慰劑組中沒有這種增加。兩個組在 花粉季節期間都顯出了高特異性IgE含量。作者得出結 論，即在SIT治療後的外周血中存在有il-4-和IL-13-產生 20用細胞的減量調節，這表明這些細胞的非反應性/耐性或 重分配’以及SIT通過增加特異性IgG4含量來作用於抗 體的產生。 還有證據表明，Thl與Th2細胞之比與許多免疫學-介 導的臨床疾病（包括B-細胞淋巴瘤、腫瘤或包括抗-細菌疾 -17- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公髮） A7 B7 1296926 五、發明說明（16) 病的感染性疾病）非常有關係。例如，包括慢性感染（如人 免疫缺陷病毒(HIV)和結核感染）和某些轉移癌的多種人類 疾病的是由Thl或Th2開關來表徵的，參見，例如， Shearer 5 G. Μ·和 Clerici，Μ·，Prog. Chem. Immunol.， 5 (1992)，54，21-43 ; Clerici，M 和 Shearer，G. M.，
Immunology Today，(1993)，14，107-111 ; Yamarnura，M· 等，J. Clin. Invest. (1993)，91，1005-1010 ; Pisa，P·等， Proc· Natl· Acad· Sci· USA，（1992)，89，77089-7712 以及 Fauci，A.S·，Science (1988)，239，617-623 o 10 IL-4還與其他腫瘤生長有關。例如，人頭和頸鱗狀細 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 胞癌細胞系的通過IL-4的生長刺激已有報導，參見 Myers，J. N·等，Clin. Cancer Res·，Π 996、，2(1)，127-135。據顯示，胰腺癌細胞可表達IL-13和IL-4並且它們 的生長受到與IL-13和IL-4偶聯的假單胞桿菌屬 15 (Pseudomonas)外毒素的抑制，參見Kornmann M·等， Anticancer Res.，(1999)，19(1A)，125-131。近來的研究 還顯示，IL-2和IL-4在腫瘤細胞的自發增殖中起自分泌 生長因數的作用，特別是被逆轉錄病毒誘導的細胞，參見 Hassuneh，M. k·，Nagarkatti，P· S·，Nagarkatti，Μ·， 20 Blood，（1997)，89(2)，610-620。 此外，有證據證明，IL-4基因表達在下列多種病理生 理狀態中可導致觸發生物學作用，所述病理生理狀態包括 表現為功能異常性白細胞、T-淋巴細胞狀態，例如，急性 和慢性炎性疾病，自身免疫病症，類風濕性關節炎，重症 -18- 本紙張尺度細帽S家標準(CNS)A4規格（210x 297公爱） - A7 B7 1296926 五、發明說明（l7) 肌無力，移植體排斥反應和何傑金氏病（參見，例如，WO 99/21993，1999.5.6 公開）。 還有證據說明已存在的哮喘性炎症可以使某些病毒感 染，特別是鼻病毒感染惡化。參見，例如，Message S. 5 D·，Johnston S. L·，Eur. Respir. J. (2001) ^ 18(6) 5 1013-25 ; O’Sullivan S·等，Am. J. Respir. Crit. Care Med.， (2001) ，164(4)，560-4 ;還參見，Schwarze，J·， Gelfand，E· W.，Eur. Respir. J. (2002)，19(2)，341-349 以 及 Imani，F·，Proud，D·，Griffin，D· Ε·，J. Immunol·， 10 (1999)，162(3)，1597-1602。據顯示，鼻病毒感染誘導上 皮細胞中IL-8、IL_6和GM-CSF產生增加，參見 Subauste，M· C·等，J· Clin. Invest·，（1995)，96(1)，549-557。 還有報導說，呼吸道合胞病毒(RSV)感染與Th2型免 15 疫應答有關（參見，例如，Boelen A.等，J. Med. Virol.， 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 (2002) ，66(4)，552-560)。有證據表明，RSV-關聯的氣管 反應性過強（AHR)存在于具有變應性應答的宿主中並且當 先被RSV感染時，變應性炎症減少，參見Peebles，R. S.，Jr.，J. Infect，Dis·，（2001)，184(11)，1374-1379。還 20 顯示說，隨著RSV感染惡化，Thl和Th2關聯的細胞因 數的局部產生增加，特別是IL-13。在此研究中，得到的 結論是導致慢性RSV-誘導型氣管功能異常的原發性因素 是由於IL-13的不合適產生，參見Tekkanat，Κ· K.等，L Immunol.，（2001)，166(5)，3542-3548。 -19- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐） 1296926 A7 B7 五、發明說明 18 因此，有相當多的證據表明，過敏反應和相關的疾病 與較高含量的Th2細胞因數有關，並且臨床證據也支援了 降低Th2細胞因數的作用與臨床改善有關這一觀點。因 此，非常需要一種能夠禮巧調節Th2細胞因數的化合物以 及鑒定這種化合物的方法。 本文中所描述的參考文獻均將其整體引入本文中作為 參考。 10 15 發明概述 因此，在本發明的實施中，本發明提供各種炎性疾病 狀態的治療方法。總的來說，可以在本發明的實施中來治 療的疾病狀態包括但不限於··過敏反應、哮喘、鼻炎、皮 炎、B-細胞淋巴瘤、腫瘤和與細菌、鼻病毒或啤吸道合胞 病毒(RSV)感染有關的疾病。在本文中所公開的疾病可以 通過給需要這種治療的患者施用治療有效量的下式I的化 合物來治療： 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 其中
(I) 20 X和Y相同或不同，並且獨立地選自氫、_素、硝基、胺 基、^基、Ci_6烧基、C2_6鏈烯基、c2_6炔基、Ci 6烷氧 -20- 1296926 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 五、發明說明（ 基、Cl-6全氟烧基、C!-6全氟燒氧基、苯基和苄基，其 中苯基或苄基任選被一個或兩個取代基取代，所說的取 代基各自獨立地選自Cw烷基、cU6全氟烷基、函素、 羥基或Ck烷氧基或Ci-6全氟烧氧基； 5 Z是N-R或S，其中R選自氫、Cw烷基、Cw烷基羰 基、Cw烷氧基羰基Cw烷基、CK6烷基胺基甲醯基-Cw 烷基和Cw二烷基胺基甲醯基Cw烷基； &選自氫、CV6烷基、€2-6鏈烯基、C2-6炔基、Cw全氟烷 基、C3-8環烷基、C3-8環烷基Cu烷基、Cw烷氧基Cw 10 炫基、經基Ci-6烧基、胺基Ci-6烧基、一或二-Ci-6烧 基-胺基Ci-6烧基、甲酿基、Ci-6院基叛基、胺基Ci-6烧 基羰基、Cw烷氧基羰基、苯基、二苯基Cw烷基和笨 基Cw烷基、苯基羰基-Cw烷基、苯氧基Cw烷基，其 中苯基任選被一個或兩個取代基取代，所說的取代基各 15 自獨立地選自Cw烷基、Cw全氟烷基、函素、羥基或 Cw全氟烷基或Cw全氟烷氧基； R3是
CH 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐） 1296926 A7 B7 五、發明說明（2〇)
0 -C(CH2)n~^ r4 ο
II
-〇(CH2)n^^N «4 其中 R4選自氫、鹵素、硝基、胺基、羥基、Ck烷基、Q.6烷 5 氧基、Cw全氟烷基、Cw全氟烷氧基、苯基和苄基， 其中苯基或苄基任選被一個或兩個取代基取代，所說的 取代基各自獨立地選自Cw烷基、Q-6全氟烷基、鹵 素、羥基或CN6全氟烷基或（^_6全氟烷氧基；且 η是0-4的整數；並且 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 10 R2選自氫、Cw烷基、Cu6全氟烷基、全氟芳基、2,3-二氫 化茚基、Cw烷氧基Cu烷基、c2_6醯氧基CN6烷基、 Cw烷氧基羰基Cm烷基、Cw烷氧基羰基氧基Q-6烷 基、C3_8環烷基、C3_8環烷氧基羰基氧基-Cw烷基、金 剛烷氧羰基氧基烷基、C3_8環烷氧基羰基-Cm烷 15 基、一或二_Ci_6烧基胺基-Ci_6烧基、C3-8氮雜環烧基Ci_ 6烷基、一或二-Cm烷基胺基甲醯基-Cw烷基、C3_8氮 雜環烷基羰基氧基Ci_6烷基、苄基CN6烷基胺基曱醯基 烷基、一或二-Cm烷基胺基甲醯氧基（^_6烷基、C3_8 -22- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1296926 A7 B7 五、發明說明（21) 氮雜環烷基羰基氧基-Q-6烷基、苄基Ck烷基胺基甲醯 氧基Cw烷基、苄基胺基甲醯氧基CN6烷基、Q-6烷氧 基獄基胺基-氧-Ci_6娱*基、
R6—/CH「 and 〇 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 r| ， 5 6 其中 R5是氫或Ci.6烧基， R6是Ci_6烷基、苯基或甲苯基，且. 10 A 是 CH2、NH 或 Ο。 也可以將本文所述化合物的任一種以其可藥用鹽的形 式給藥，只要可以形成這種可藥用鹽即可。此外，可以將 上述化合物任選與可藥用載體聯合給藥。 本發明的另一方面，本發明還公開了某些疾病的治療 15 方法，所說的疾病包括但不限於過敏反應、哮喘、鼻炎、 -23- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1296926 A7 B7 五、發明說明（22) -- 皮炎或感染性疾病如鼻病麵啊道合胞病毒感染 。根據 本發明的此方面，本發明的方法包括給需要這種治療的患 者施用治療有效量的能夠調節τ輔助細胞⑽ ，Thl/Th2 的化合物，該化合物具有如上定義的式⑴。 5 林發_再—财面，供某些包括但不限於過 敏反應、哮喘、鼻炎或皮炎的疾病的治療方法。在本發明 的攻個方面中，本發明的方法包括給需要這種治療的患者 施用治療有效量的能夠抑制白介素-4(IL_4)資訊轉錄、IL_4 釋放或IL-4產生的化合物，該化合物具有如上定義的式 10 ⑴。 在本發明的另一個方面，本發明還公開了一種藥物組 合物，該組合物含有如上所述的化合物。此化合物以有效 用於治療各種如本文所描述的疾病的量來施用。可以舉出 的疾病包括但不限於過敏反應、哮喘、鼻炎、皮炎、B-細 15胞淋巴瘤、腫瘤和與細菌、鼻病毒或呼吸道合胞病毒(RSV) 感染有關的疾病。另外’該樂物組合物中還可含有至少一 種可藥用載體。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 附圖簡介 20 圖1是一棒形圖，描繪了 3-(4-吡啶基胺基 2-曱酸(實施例28)對小鼠中的支氣管肺泡灌洗液(BALF)細 胞因數和肺炎的作用效果。 圖2是一棒形圖’描繪了 3-(4-p比咬基胺基引σ朵_ 2-甲酸(實施例28)對大鼠中變應原-誘導肺炎的抑制作用。 -24- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐） 1296926 A7 B7 五、發明說明（23 ) 圖3A描繪了 3-(4-吡啶基胺基)_1H-吲哚-2-甲酸(實施 例28)對抗原-誘導的早期和晚期支氣管應答的作用效果。 圖3B是一棒形圖，描繪了 3-(4-吡啶基胺基)-1Η-吲 哚_2_甲酸(實施例28) (3mg/kg)對攻擊後氣管反應性的作用 5 效果。 圖4是序列表，SEQ ID NO : 1，含有人IL-4基因啟 動子核菩酸-6635至+66的6.7kb片段。 發明詳述 1〇 本文中所用的術語具有以下含義： 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 本文中，用語"Cw烷基"包括甲基和乙基及直鏈或支 鏈的丙基、丁基、戊基和己基。具體的烷基是甲基、乙 基、正丙基，異丙基和叔丁基。由此，可以相應地解釋派 生用語，例如"Cw烷氧基"、"Cy烷氧基Cw烷基"、"輕 15基Ci-6烷基”、"Cw烷基羰基"、"Cw烷氧基羰基Cw烷基 ”、"C!-6烷氧基羰基"、”胺基Cw烷基"、"Cw烷基胺基甲 醯基Q_6烷基”、"Cw二烷基胺基甲醯基cN6烷基，，、"一 或二-C!·6烷基胺基Cw烷基"、”胺基Ci_6烷基羰基"、"二 苯基Cw烷基π、"苯基Cw烷基"、"苯基羰基Cl-6烷基"和 20 ”苯氧基Cw烷基”。 本文中，用語”Cw鏈烯基，，包括乙烯基及直鏈或支鏈 的丙烯基、丁烯基、戊烯基和己烯基。類似地，用語”c2-6 炔基”包括乙炔基和丙炔基及直鏈或支鏈的丁炔基、戊炔 基和己炔基。 -25- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公爱丁------ 1296926 A7 B7 五、發明說明（24) 10 15 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 20 本文中，用語"Cm全氟烷基"是指所說的烷基中的所 有氫原子被氟原子所取代。示例性的實例包括三氟甲基和 五氟乙基以及直鏈或支鏈的七氟丙基、九氟丁基、十一氣 戊基和十三氟己基。派生用語"C!·6全氟烷氧基”作相應地 解釋。 本文中，用語"C3·8環烷基’’是指環丙基，環丁基，環 戊基，環己基，環庚基和環辛基。 本文中，用語"C3·8環烷基Cw烷基"是指本文定義的 C3-8環烷基進一步與本文所定義的Ck烧基相連。代表性 的實例包括環丙基甲基、1-環丁基乙基、2-環戊基丙基、 環己基甲基、2-環庚基乙基和2-環辛基丁基等等。 "CsA"是指環孢菌素A。 "鹵素"或"齒"是指氣、氟、溴和碘。 "IL"是指白介素。 "Luc"是指螢光素酶。 本文中，各種形式的術語"調節"，其含義包括刺激(例 如，增加或增量調節特定的應答或活性)和抑制（例如，降 低或減量調節特定的應答或活性）。 本文中，”患者"是指溫血動物，例如大鼠、小鼠、 狗、猶、豚鼠和靈長目動物，如人。 & 本文中，用語"可藥用載體"是指非毒性溶劑、分散 =、職形劑、可與本發_化合㈣合則更 、、且合物（即能夠給患者施用的劑型）的其他材料。這巷 體的—個實例是腸胃外給藥中常規使用的可藥用油， 裝 計 線 -26- 1296926
五、發明說明（25) 5 10 15 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 20 本文中，術語”可藥用豳"B t 、用皿疋指可以在藥用製劑中使用 的本發明化合物的鹽。銬而，* ^ 恐而，其他鹽也可以在本發明化合 ?或其可㈣鹽的製備中使^本發明化合物的適宜的可 包括酸加成鹽’其例如可以通過將本發明化合物的 溶液與藥學可接受的酸的、、交达、日人α 的，合液浥合來形成，其中所說的酸 例如鹽酸、氫溴酸、硫酸、 — 甲％酸、2-經基乙績酸、對-甲 Z酸、富馬酸:馬來酸、_馬來酸、蘋果酸、抗壞血 —伽酸、戊一酸、乙酸、水揚酸、肉桂酸、苯氧基 ^甲酸、祕苯甲酸、笨基乙酸、苯甲酸、草酸、檸檬 /酉石酸、乙醇酸、乳酸、丙酮酸、丙二酸、碳酸或填 酸。也可喊㈣式金屬鹽，如魏—氫齡硫酸氫鉀。 :且’如此形成的鹽可以是酸價或二酸價鹽的形式提 二並且可以水合的形式存在或可以是基本上無水的形式。 二，之外，备本發明的化合物帶有酸性部分時，其適宜的 可藥用鹽可以包括鹼金屬鹽，例如鈉或鉀鹽；鹼土金屬 7例如約或鎮鹽；以及與適宜的有機配位體形成的鹽， 例如季銨鹽。 用語"立體異構體"是一帛泛性的術語，用來表示僅其 原子在空間中的取向不同的各個分子的所有的異構體。一 般來說匕包括通常因含有至少一個不對稱中心而形成的 鏡，異構，(對映異構體）。當本發明的化合物擁有兩個或 更夕&中心時’它們還可以非對映異構體的形式存在，而且 某些個，的分子可以以幾何異構體(順式/反式)的形式存 在。應當理解，所有這些異構體及其任何比例的混合物都 -27- (210x297 公董） 1296926 A7 _______B7____ 五、發明說明（26 ) 屬於本發明的範圍。 "被取代’’是指被1-2個取代基所取代，所說的取代基 獨立地選自CU6烷基、Q.6全氟烷基、羥基、-C〇2H、 酯、醯胺、CrC6烷氧基、CrC6全氟烷氧基、-NH2、Cl、 5 Br、1、F、·ΝΗ-低級烷基和-N(低級烷基)2。 •’治療有效量"是指化合物對治療所針對的病症或狀態 的有效的量。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 在如下的實施例和製劑中，所用的術語具有如下所示 的含義："kg"指千克，”g"指克，”mg"指毫克，>g"指微 10 克，"pg"指皮克，"mol"指摩爾，"mmol"指毫摩爾， "nmole"指納摩爾，"L"指升，"mL"或"ml·*指毫升，>L，，指 微升，"°C"指攝氏度，"Rf"指保留因數，"mp"或”ιη·ρ·"指熔 點，"dec"指分解，"bp”或"b.p·"指沸點，，’mmHg"指以毫米 汞柱計的壓力，"cm”指釐米，"nm"指納米，”[a]2GD”指在i 15 分米池中獲得的20°C下的鈉的D線的比旋光，"c，，指 g/mL計的濃度，"THF”指四氫呋喃，"DMF"指二甲基甲醯 胺，"NMP”指1-甲基_2_吡咯烷酮，”鹽水”指飽和氣化鈉水 溶液，"M"指摩爾濃度，”mM"指毫摩爾濃度，"μΜ"指微 摩爾濃度，"ηΜ"指納摩爾濃度，”TLC"指薄層色譜法， 20 "HPLC"指高效液相色譜法，"HRMS”指高解析度質譜， "lb"指磅，"gal"指加侖，”LO.D·"指乾燥損失，"μα"指微 居裏，"i.p·”指腹膜内，”i.v.”指靜脈内。 在本發明的一個方面，提供各種炎性疾病的治療方 法。總的來說’可以根據本發明治療的疾病包括但不限於 -28- 本紙張尺度適用中國國家標準(⑶幻八4規格（210x297公釐） 1296926 A7 B7 五、發明說明（27) 過敏反應、哮喘、鼻炎、皮炎、B-細胞淋巴瘤、腫瘤和與 細菌、鼻病毒或呼吸道合胞病毒(RSV)感染有關的疾病。 本發明所公開的疾病可以通過給需要這種治療的患者施用 治療有效量的下式⑴的化合物來治療：
⑴ 其中 X和Y相同或不同，並且獨立地選自氫、鹵素、硝基、胺 10 基、羥基、Cm烷基、C2-6鏈烯基、C2-6炔基、C!-6烷氧 基、全氟烷基、Cw全氟烷氧基、苯基和苄基，其 中苯基或苄基任選被一個或兩個取代基取代，所說的取 代基各自獨立地選自CN6烷基、Cw全氟烷基、函素、 羥基或Cw烷氧基或Cw全氟烷氧基； 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 15 Z是N_R或S，其中R選自氫、Cw烷基、Cm烷基羰 基、Cw烷氧基羰基Cm烷基、Cm烷基胺基甲醯基-Cw 烷基和Cw二烷基胺基甲醯基Ck烷基； I選自氫、CN6烷基、C2_6鏈烯基、C2_6炔基、Cm全氟烷 基、（^3_8環烷基、C3_8環烷基Cw烷基、C!_6烷氧基Cw 2〇 烷基、羥基Cw烷基、胺基Cy烷基、一或二-Cw烷 基-胺基CN6烷基、甲醯基、Cp6烷基羰基、胺基Ck烷 29· 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐） 1296926 A7 B7 五、發明說明（28) 基羰基、Cw烷氧基羰基、苯基、二苯基Cm烷基和苯 基C!-6烷基、苯基羰基-Cw烷基、苯氧基Cw烷基，其 中苯基任選被一個或兩個取代基取代，所說的取代基各 自獨立地選自Cw烷基、Cm全氟烷基、齒素、羥基或 Cw全氟烷基或Cw全氟烷氧基； R3是 r4 0II •C(CH2)n
N^N r4o —S(〇H2)n-^> r4
oII —C(CH2)n r4
10其中 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 15 R4選自氫、鹵素、硝基、胺基、羥基、Cw烷基、Cw烷 氧基、全氟烷基、Cm全氟烷氧基、苯基和苄基， 其中苯基或苄基非必須地取代有一個或兩個取代基，其 中苯基或苄基任選被一個或兩個取代基取代，所說的取 代基各自獨立地選自Ci-6烷基、Cl-0全氟烷基、鹵素、 羥基或C!_6全氟烷基或Cw全氟烷氧基；且 -30- 本紙張尺度適用〒國國冢標準(CNS)A4規格（21〇乂297公发) A7 1296926 B7 五、發明說明（29) η是0-4的整數；並且 R2選自氫、Q-6烷基、Cw全氟烷基、全氟芳基、2,3-二氫 化節基、Ci-6烧氧基Ci-6烧基、C2-6酿氧基Ci-6烧基、 Cw烷氧基羰基Cw烷基、C!-6烷氧基羰基氧基Cw烷 5 基、C3_8環烷基、C3_8環烷氧基羰基氧基-C^烷基、金 剛烷氧羰基氧基Cw烷基、C3-8環烷氧基羰基-Cw烷 基、一或二-Cw烷基胺基-Cw烷基、C3_8氮雜環烷基 Cw烷基、一或二烷基胺基甲醯基-Cw烷基、C3_8 氮雜環烷基羰基氧基烷基、苄基CN6烷基胺基甲醯 10 基cle6烷基、一或二-Cw烷基胺基甲醯氧基Q-6烷基、 C3_8氮雜環烷基羰基氧基-Cw烷基、苄基Cw烷基胺基 甲醯氧基Cw烷基、苄基胺基甲醯氧基Cw烷基、Cw 烧氧基幾基胺基-氧-C1-6烧基、 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 5 lx 0 N//N\y vol
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本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1296926 A7 B7 五、發明說明（30) 5 10 15 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 20 其中 R5是氫或Ci-6燒基， Re是C〗·6烷基、苯基或甲笨基，並且 A 是 CH2、NH 或 〇。 本文所述的化合物的任一種還可以以其可藥用鹽的形 式給藥。此外，本發明的化合物任選與可藥用載體聯合給 藥。 在本發明的另一個方面，本發明還公開某些疾病的治 療方法，所說的疾病包括但不限於過敏反應、哮喘、鼻 炎、皮炎、感染性疾病如鼻病毒或呼吸道合胞病毒(RSV) 感染。根據本發明的此方面，本發明的方法包括給需要這 種治療的患者施用治療有效量的能夠調節τ輔助細胞 (Th)，Thl/Th2的化合物，該化合物具有如本文所述的式 ⑴。 如上所述，在本發明方法的這個實施方案中，術語，， 調節"意指通過施用具有如此活性的化合物來抑制與Th_2 有關的細胞因數的產生，由此減少Th2細胞相對於Thl的 數量，從而恢復免疫應答的平衡。 本發明的再一個方面，還提供某些包括但不限於過敏 反應、哮喘、鼻炎或皮炎的疾病狀態的治療方法。在本發 明的這個方面中，本發明的方法包括給需要這種治療的串 者施用治療有效量的能夠抑制白介素_4(il-4)資訊轉錄“ IL-4釋放或il-4產生的化合物，該化合物具有式⑺。 在本發明前述方法的一個實施方案中，待處理的疾病 -32- 本紙張尺度適用T國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐） 計 1296926 A7 B7 五、發明說明（31) 狀態是過敏反應、哮喘、鼻炎、皮炎和鼻病毒或呼吸道合 胞病毒感染。 在本發明方法的另一個實施方案中，本發明的式⑴化 合物具有如下部分： X和Y相同或不同，並且獨立地選自氫、鹵素、Q.3 烷基、Q-3全氟烷基、Cw烷氧基、Cw全氟烷 氧基、苯基和苄基； 10 Z是N-R或S，其中R選自氫、Cw烷基、Cw烷氧 基羰基Cw烷基和Cw二烷基胺基甲醯基-Cw 烧基； &是氫、Cw烷基或苯基Cy烷基； R3是
N^N
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經濟部智慧財產局員工消費合作社印製
r4
15 其中 -33- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1296926 A7 B7 五、發明說明（32) 尺4是氫或Ci.6烧基；且 η是0-3的整數；並且 R2選自氫、Cm烷基、全氟芳基、2,3-二氫化茚基、 Ci_3烷氧基C!-3烷基、C2_5醯氧基Ci.3烷基、Cw烷 5 氧基羰基Cm烷基、Cm烷氧基羰基氧基烷 基、C4-6環烷氧基羰基氧基-Cw烷基、金剛烷氧羰 基氧基-Cm烷基、一或二-Cw烷基胺基-Cw烷 基、C4_6氮雜環烷基-Cw烷基、一或二-Cw烷基胺 基甲醯基-Cw烷基、C4-6氮雜環烷基羰基Cw烷 10 基、苄基Cw烷基胺基甲醯基-Cw烷基、一或二- CN3烷基胺基甲醯氧基CN3烷基、C3-8氮雜環烷基 羰基氧基CN6烷基、苄基胺基甲醯氧基Cw烷基、 Cw烷氧基羰基胺基-羰基Cw烷基、 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製
本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1296926 A7 B7 五、發明說明（33 ) 其中 R5是氫或Q_3烷基， ^是心^烷基、苯基或甲苯基，並且 A是0， 5 或其可藥用鹽，任選與可藥用載體聯用。 在本發明方法的再一個實施方案中，本發明的式⑴化 合物具有如下部分： X和Y相同或不同，並且獨立地選自氫、氟、氣、三 氟甲基、甲氧基、苯基和苄基； 10 z是N-R或S，其中R選自氫、甲基、乙氧基羰基甲 基和二乙基胺基甲醯基甲基； R!是氫、甲基或丙基； R3是
〇 II —C(CH2)r r4
N^N 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製
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15 -35- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐） 1296926 A7 B7 五、發明說明（34) 其中 R4是氫；且 η是0-2的整數；並且 R2選自氮、甲基、乙基、叔-丁基、五氟苯基、2,3-二 5 氫化茚基、甲氧基乙基、乙氧基丙基、乙醯氧基曱 基、2,2-二甲基丙醯氧基甲基、戊醯氧基甲基、甲 氧基羰基-1-乙基、乙氧基羰基甲基、異丙氧基羰 基氧基甲基、叔丁氧基羰基氧基甲基、環己氧基羰 基氧基甲基、金剛烷氧羰基氧基甲基、二乙基胺基 10 乙基、二甲基胺基乙基、哌啶基-1-乙基、二乙基 胺基甲醯基曱基、苄基乙基胺基甲醯基甲基、2-氮 雜環丁烧-1-基-2-氧-乙基、2-氧-2-17比咯院-1-基-乙 基、哌啶-1-羰基氧基甲基、二乙基胺基甲醢氧基 甲基、苄基胺基甲醯氧基甲基、乙氧基羰基胺基-15 羰基曱基、 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製
II Rfi-S、 /CH7 -6 ij\N/ -36- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1296926 A7 __________B7 五、發明說明（35) 其中 R5是氫或甲基， R6是甲基、苯基或甲笨基，並且 A是〇， 5或其可藥用鹽，任選與可藥用載體聯用。 本發明方法中所用的幾種化合物是已知的，並且本發 明所用的少數化合物是新的。總體來說，本發明的化合物 可以通過本領域技術人員已知的任何工藝容易地合成。具 體說’本發明方法中所用的已知化合物可以按照US專利 10 號 5，177,088 ; 5，189,054 ; 5,328,920 ; 5,491，153 和 5,675,018中所述的方法來製備。這些專利的每一篇都整體 引入本文作為參考。 更具體說，本發明公開的化合物可以按照以下路徑A-H所示的方法來合成，除非另有說明，其中X、γ、Ζ、 15 RpRz和R3取代基如上述的式⑴中所定義。 總的來說，對本發明方法中所用的吲哚衍生物來說， 可以按照以下流程A-D所示的方法來製備起始3-胺基吲 哚。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製
20 流程A
1
x CN
F -37- 本紙張尺度適用1國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1296926 A7 _____ Β7_ 五、發明說明（36) ^一 " ~~ - 在流程A中，步驟A1中，使取代的2-氟苄腈(丨)與 a-胺基叛酸酯(2)反應，形成3-胺基吲哚衍生物(3)。反應 通常在驗性反應條件下淨進行或在適宜的有機溶劑的存在^ 下進行。適宜的鹼包括鹼性氫氧化物，如氫氧化鈉或鉀； 5鹼性碳酸鹽，如碳酸鈉或鉀；氨或氫氧化銨等等。反應通 常在常溫或約80°C至15〇〇C範圍的高溫下於惰性氣^如 氮或氬中進行。
流程B
經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 流程B顯示了合成3_胺基吲哚衍生物(3)的另一種途 徑，包括由取代的2-胺基苯甲酸(4)起始的5個步驟。在此 途徑中，首先在步驟B1和B2中將羧酸基團轉變成腈基 15團。可以使用本領域已知的有助於此轉變的任何方法。由 此，例如，在流程B的步驟B1中，將取代的2_胺基苯甲 酸(4)用活化部分如N_羥基琥珀醯亞胺在適宜脫水劑的存 在下于適宜的有機溶劑中處理。然後使此活化的羧酸衍生 -38- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公爱y 1296926 A7 B7 五、發明說明（37) 10 15 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 20 物與胺如叔丁胺反應，形成苯甲醯胺衍生物(5)。適宜的脫 水劑包括二環己基碳二亞胺、氰尿醯氣等等。反應可以在 吊溫或低於常溫下進行，例如，在_2〇〇c至25°C下。 在流程B的步驟B2中，使步驟B1中形成的苯甲醯 胺(5)進一步反應’形成苄腈衍生物(6)。總的來說，此反 應可以通過使苯甲醯胺與適宜的羧酸酐如三氟乙酸酐反 應形成苄腈衍生物(6)來完成，此步驟的反應可以在適宜的 有機溶劑如二氣甲烷中於常溫至低於常溫下進行，優選在 大約0°C下進行。 在流程B的步驟B3中，使苄腈衍生物(6)進一步與所 需的α-齒代羧酸酯（7)在適宜鹼的存在下於有機溶劑如 DMF中反應。適宜的鹼包括鹼性氳化物（如氫化鈉）或烷 基-驗性化合物(如丁基鋰）等等。反應通常在惰性氣氛如氮 或氬中進行，並且在低於常溫的溫度如〇〇c下進行，然 而，也可以使用常溫至高於常溫的反應溫度。 在流程B的步驟B4中，將步驟B3的加成產物(8)在 鹼的存在下於惰性反應條件下、一般在低於常溫的溫度如 0°C下環化。可以使用可有效進行此環化反應的任何鹼， 其實例包括鹼性氫氧化物，如氫氧化鈉或鉀；驗性碳酸 鹽，如碳酸鈉或鉀；鹼性醇鹽，如叔_丁醇鉀；氨或氫氧 化銨等等。叔-丁醇鉀是特別優選的。 最後，在流程B的步驟B5中，通過將吲哚化合物(8) 胺基上的二氟乙醯基裂解，製備起始吲哚化合物(3)。這種 裂解可以使用本領域已知的任何方法來實現。例如，可以
I 計 碍 -39- 1296926 A7 B7 五、發明說明（38) 通過用諸如碳酸鉀的鹼在常溫或高於常溫的反應溫度下處 理B4的產物⑻來完成；5〇至80〇c範圍的溫度是特別優 選的。
5 流程C
經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 流程C顯示了取代3-胺基噶丨哚衍生物(3A)的一種特 別類型的合成方法，其中吲哚環上的取代基是苯基。按照 10流程C的步驟可以合成各種其他的一或二芳基取代的3-胺 基丨哚衍生物。在流程C的步驟C1，通過用乙酸酐處理 來使2-胺基-4-氣·苄腈(9A)上的胺基受到乙醢基保護。可 以按相似方式使用各種其他保護基。在流程C的步驟 中，使用本基化劑如苯基侧酸，在過渡金屬催化劑如乙酸 15鈀的存在下，將受保護的胺基化合物(6A)笨基化。在流程 C的步驟C3中，使用與描述流程B之步驟B3和B4時類 似的方法’使苯基化的化合物(6B)與α-齒代緩酸酯反應。 -40- 1296926 A7 B7 五、發明說明（39 ) 有趣的是，在此步驟中，加成和環化可以在一個步驟中同 時進行，形成吲哚衍生物(8B)。這種聯合式的反應一般可 以在適宜鹼如叔-丁醇鉀的存在下完成。反應一般在有機 溶劑如NMP、THF或其混合物中於約〇〇c至40〇C範圍的 5 溫度下進行。最後，在流程C的步驟C4中，按照流程B 之步驟B5的方法，將乙醯基吲哚衍生物(8B)脫保護。
流程D
6B 8B 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 10 知D顯不了可在本發明化合物合成中使用的3-胺 基4丨哚衍生物的另一種類型的合成方法。流程D的步驟 D3-D5與上述流程B和C中所述的步驟類似。由此，可以 在步驟D3-D5中使用如上所述的合成方法。然而，在一些 15 情況下，無需將胺基保護並且可以按照流程D的步驟D1 和D2，直接與所需的齒代_羧酸酯反應，形成3-胺基_ -41- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規^ ( 210 X 297公釐了 1296926 A7 B7 五、發明說明（4〇) 吲哚衍生物(3)。所以，在流程D的步驟D1中，反應可以 通過將取代的2_胺基苄腈(9)用α-鹵代羧酸酯在適宜鹼如 碳酸鉀或鈉的存在下處理形成產物（10)，隨後在諸如叔-丁 醇鉀的鹼的存在下環化成吲哚化合物(3)來實現。 流程Ε
3 11 V * 流程Ε顯示了本發明方法中所用的各種吲哚化合物的 10 製備。在流程Ε的步驟Ε1中，使按照本文所述流程Α至 D任一流程所生產的3-胺基-巧哚衍生物(3)與適宜的鹵素 取代的&化合物在如US專利號5,328,920所述的適宜的 有機溶劑的存在下反應。此反應一般在常溫至高於常溫的 溫度條件下進行，一般是在20°C至150°C的溫度範圍 15 内。流程E特別適宜於製備其中仏是CN6烷基或Cw全 氟烧基、優選CN4烧基、更優選乙基或叔-丁基的本發明 方法的化合物。
流程F -42- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐） 計 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 I296926 流程F顯示了製備本發明方法中使用的化合物的各種 其他合成途徑。總而言之，流程F描繪了通過酯交換反應 5來製備本發明方法中所用的各種化合物的兩條途徑。可以 使用任何其他已知的酯交換反應來製備這些化合物。最 後’流程F在步驟F8中還顯示了 N-取代吲唏的製備。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7
Η H R 12 11Α 15 在流程F的步驟F1中，使用適宜的鹼，如氫氧化 钟’將羧酸酯，優選吲哚衍生物的烷基酯（11)水解，形成 1〇相應的鉀鹽（12)。一般來說’水解在含水介質、含醇介質 或其混合物中進行。此反應通常在常溫或高於常溫的溫度 下完成，一般是在約25°c至80oC的溫度範圍中。 在流程F的步驟F2中，使流程F之步驟F1生產的鉀 鹽（12)與適宜的齒代化合物反應，產生本發明方法中使用 15的所需的酯交換吲哚化合物（11A)。此反應一般在極性或 非極性無水溶劑中進行。適宜的溶劑包括醚溶劑如四氫吱 -43- 本紙張尺度適用t國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐） 1296926 A7 ___ B7_ 五、發明說明（42 ) 喃或極性溶劑如二甲基曱醯胺(DMF)。此反應可以在常溫 或高於常溫的溫度下進行，一般來說優選30°C至100°C 的溫度範圍。此反應還可以在諸如碘化鉀的催化劑的存在 下進行。 5 流程F的步驟F3和F4顯示了製備本發明方法中所用 的酯交換吲哚化合物（11A)的另條途徑。在流程F的步驟 F3中，將吲哚化合物（11)的酯衍生物在酸性反應條件下於 常溫、低於常溫或高於常溫的反應條件下水解，形成游離 羧酸衍生物（13)。適宜的酸催化劑包括無機酸如鹽酸或硫 10酸；有機磺酸如甲磺酸、三氟甲磺酸或對-甲苯磺酸以及 羧酸如乙酸或三氟乙酸等等。也可以使用固體酸催化劑如 Nafion-H®或H-ZSM-5。一般的反應溫度為約〇〇c至 50。〇 在流程F的步驟F4中，將流程F之步驟F3所生產的 15羧酸衍生物（13)酯化，獲得本發明方法中所用的所需的吲 11 朵化合物（11A)。酯化反應的條件取決於所欲形成的酯。 這種反應條件的改變是本領域技術人員容易確定的。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 例如，當所得的產物中含有對水解敏感的部分時，則 在基本上中性的條件下於羧酸活化劑的存在下進行此酯化 20反應。然而，任選酯化在受阻鹼如二乙基異丙基胺的存在 下進行。適宜的酯化活化劑包括苯並三唑_丨_基氧基三（二 甲基胺基)鱗六氟磷酸鹽(BOP)或苯並三唑·丨_基氧基三（吡 口各烧基)-鱗六I磷酸鹽（PYB0P)。此反應一般土在極^溶劑 如1-甲基-2-吡咯烷酮(NMP)或DMF中進行。此反應通 -44- 1296926 A7 __ B7 五、發明說明（43) 在低於常溫至常溫的溫度下進行，即在約_2〇。(：至25°C的 溫度範圍内。 或者，在流程F的步驟F4中，酯化反應還可以在溫 和鹼性條件下于適宜催化劑存在下進行。適宜的鹼包括碳 5酸絶或碳酸钟。可選擇的催化劑包括埃化钟。此反應一般 在約40°C至80°C的溫度範圍下進行。 在另一條途徑中’流程F的步驟F5和F7顯示了製備 本發明方法中所用的吲哚化合物（11A)的另一種方法。在 流程F的步驟F5中，首先將羧酸衍生物酯化，形成五氟 10苯基酯衍生物（14)。此反應一般在有機鹼如吡啶和五氟苯 基二I乙酸醋作為酯化劑的存在下進行。此反應一般在常 溫如20°C至30°C下進行。 在流程F的步驟F7中，使五氟苯基酯與所需的酯化 劑在諸如氫化鈉的鹼的存在下反應，形成所需的吲哚化合 15物（11A)。適宜於此反應的典型的溶劑包括NMP或 DMF。此反應通常在低於常溫的溫度下進行，一般來說， 是約-20°C至0°C。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 在流程F的步驟F8中，將吲哚化合物（11八)的丨_氮位 上用如本文所定義的R部分取代，形成所需的吲哚化合物 20 (15)。為此，可以使用任何已知的N-取代反應。具體說， 可以通過使未取代的吲哚化合物與適宜的烷基化劑如碘烧 或烷基硫酸酯反應進行N_烷基化。這種烷基化劑的具體 實例包括蛾曱烧、蛾乙烧、硫酸二甲酯、硫酸二乙酯、三 氟甲硕酸甲酯等等。此反應一般在諸如叔-丁醇鉀的鹼的 -45- 本紙張尺度適用中國國家標準(cns)X?^^21〇χ297公楚） 1296926 A7 B7 五、發明說明（44 ) 存在下於大約〇°c下在適宜的極性溶劑如DMF中進行
流程G
經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 5 流程G顯不了製備本發明方法中所用的各種吲哚化合 物的另一種優選的方法。在流程G的步驟G1中，使所需 的取代2-胺基-午腈與代羧酸酯如溴乙酸乙酯在適宜 的驗如碳酸氮納的存在下和在諸如碘化鈉的催化劑的存在 10下于適宜的有機溶劑如乙醇中反應。此反應通常在約60°C 至120QC的溫度範圍下進行。如果需要較高的反應溫度的 話，則可以使用較高沸點的溶劑。總的來說，較高的溫度 可加速反應速率，因而需要較短的反應時間。 在流程G的步驟G2中，將N-取代的苄腈衍生物（10) -46- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規"g^T5_x 297公爱----- 1296926 A7 B7 五、發明說明（45 ) 在適宜的鹼如叔-丁醇鉀的存在下於溶劑如THF中在惰性 氣氛如氮的條件下進行環化反應。一般來說，通過用適宜 的冷卻劑如冰來冷卻反應混合物，使反應溫度保持在常溫 或低於常溫，即大約25°C。分離所得的取代吲哚衍生物 5 (3)〇 在流程G的步驟G3中，將取代的吲哚衍生物(3)進行 如流程E所述的N-取代反應。此反應一般是通過使α弓卜朵 衍生物(3)與適宜的由代化合物如4-氣吼唆反應形成相應的 σ比啶基胺基化合物（11)來實現。此取代反應一般在適宜的 10有機溶劑如ΝΜΡ中進行。此反應一般在高溫下進行，通 常來說是約80°C至120。(：。 在流程G的步驟G4中，將N-取代的化合物（11)水解 形成吲哚化合物的鉀鹽（12)。此步驟類似於上述的流程ρ 的步驟F1。此水解反應優選使用氫氧化鉀在作為溶劑的 15 乙醇中進行。 在流程G的步驟G5中，將鉀鹽（11)在常溫的反應溫 度下用適宜的酸如鹽酸處理，產生游離羧酸(13)。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 流程Η -47- 本纸張尺度適用中國國家H^NS)A4規格（2ι〇χ297公楚） 1296926 A7 B7 五、發明說明（46)
流程Η顯示了兩種製備本發明方法中所用的苯並(b) 噻吩化合物（16和17)的方法。起始的取代3-胺基苯並(b) 5 噻吩（15)可以通過本領域已知的各種方法來製備。例如， 如上所述，US專利號5,328,920中便描述了幾種這樣的方 法。 在流程Η的步驟H1中，使取代的3-胺基苯並(b)噻吩 (15)與適宜的鹼如二-異丙基氨化鋰反應，就地產生化合物 10 (15)的陰離子。此反應一般在低於常溫的反應溫度下進 行，通常是大約-120。(：至0°C。此反應還在惰性氣氛如氮 環境中並且在非極性溶劑如醚性溶劑包括乙醚、THF、鍵 烷溶劑包括庚烷、己烷等和芳族烴如乙基苯或其組合中進 行。然後使此步驟形成的化合物（15)的陰離子與任何所需 15的碳酸的酯包括二烷基碳酸酯如碳酸二乙酯反應。得到化 合物（16)。 -48- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297 ------------ 1296926 A7 ____ B7___ 五、發明說明（47) 或者，在流程Η的步驟H2中，使化合物（15)與適宜 的驗如烷基鋰反應，產生陰離子，然後使其與二氧化碳反 應形成游離羧酸化合物（17)。化合物（15)的陰離子一般是 在如上所述的低於常溫的反應條件下形成的，然後與乾冰 5 反應，乾冰即二氧化碳的固體形式。 屬於本發明方法實踐範圍内的具體的化合物包括： 3-(4-吡啶基胺基)-1Η-吲哚-2-甲酸， 3-(4-吡啶基胺基)-1Η-吲哚-2-甲酸乙酯， 6-三氟甲基-3-(4-吡啶基胺基)-1Η-吲哚-2-甲酸乙 10 醋， 6-氣_3_(4_吡啶基胺基)-1Η-吲哚-2-甲酸乙酯， 5-氣-3-(4-吡啶基胺基)-1Η-β丨哚-2-甲酸乙酯， 6_氟-3-(4-吡啶基胺基)·1Η_吲哚-2_甲酸乙酯， 5- 氟-3-(4-吡啶基胺基)_1Η-吲哚-2-甲酸乙酯， 15 4-氟-3-(4-吡啶基胺基)-1Η-吲哚-2-甲酸叔丁酯， 6- 苯基-3-(4-吡啶基胺基)-1Η-吲哚-2·甲酸乙酯， 3-(4_吡啶基胺基)-1Η-吲哚-2-甲酸叔丁酯， 5,6-二甲氧基-3-(4-吡啶基胺基)-ΐΗ-吲哚-2-甲酸 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 乙酉旨， 2〇 3-甲氧基-3-(4-吡啶基胺基)·1Η-吲哚-2-甲酸叔丁 酉旨， 吼咬基胺基)-111-,°朵-2-甲酸乙§旨， 3-(嘧啶_2_基胺基)_1Η-吲哚_2_甲酸乙酯， 5-氟-1-甲基-3-(4-吡啶基胺基)-ΐΗ-吲哚-2-甲酸乙 -49- 本紙張尺度通用肀㈣^^(CNS)A4規格（210x以/公幻 1296926 A7 B7 五、發明說明（48) 酯， 4- 氟-1-甲基-3-(4-吡啶基胺基)-1Η-吲哚-2-曱酸叔 丁酯， 5- 氣-1-甲基-3-(4-吡啶基胺基)-1Η_吲哚·2-甲酸乙 5 酯， 6- 氣-1-甲基-3-(4-σ比咬基胺基)-1Η-ρ弓丨σ朵-2-甲酸乙 酯， 1 -甲基-3 -(4-吡啶基胺基)-1Η-吲哚-2-甲酸馬來酸 鹽， 10 4-氟-3-(4-吡啶基胺基)-1Η-吲哚-2-甲酸三氟乙酸 鹽， 4- 氟_1_甲基·3-(4·吡啶基胺基)-1Η-吲哚-2-甲酸三 氟乙酸鹽， 5- 甲氧基-3-(4-吡啶基胺基)-1H-吲哚-2-甲酸三氟 15 乙酸鹽， 6- 乳-1 -二乙基胺基甲酿基曱基-3-(ϋ比咬-4-基胺 基)-ΙΗ-ρ弓|u朵-2-曱酸乙S旨’ 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 3-(4-吼咬基胺基)-1Η-<17朵-2-甲酸五氣苯基S旨’ 3-(4-吡啶基胺基)-1Η-吲哚-2-甲酸2-二乙基胺基-20 乙酯， 3-(4-吡啶基胺基)-1Η-吲哚-2-甲酸2-二甲基胺基-乙酯， 3-(4-σ比淀基胺基)-1Η*Ίΐσ朵-2-甲酸2-ρ底咬-1-基-乙 酯， -50- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐） 1296926 A7 B7 五、發明說明（49) 3-(α比唆-4-基胺基)-m-巧丨哚-2-甲酸(S)-l-曱氧基m 基-乙醋^ 3·(吡啶-4-基胺基)-1Η-吲哚·2-甲酸乙氧基羰基甲 酯， 5 3-(4-吡啶基胺基）-1Η-吲哚-2-甲酸2-甲氧基乙 酯， 3-(4-吡啶基胺基）-1Η-吲哚-2-甲酸3-乙氧基丙 酯， 3-(吡啶-4-基胺基)-1Η-吲哚-2-曱酸2,3二氫化茚-10 5-基酯， 3-(吡啶-4-基胺基)-1Η-吲哚-2-甲酸二乙基胺基甲 醯基甲酯， 基胺基)·1Η-弓卜朵-2-曱酸2-嗎咐-4-基-2_ 氧·乙S旨’ 15 3-(吡啶-4-基胺基)-1Η-吲哚-2-甲酸2-氧-2-吡咯 烧-1·基-乙醋’ 3-(吡啶-4-基胺基)-1Η-吲哚-2-曱酸2·氮雜環丁烷-1-基-2-氧-乙醋’ 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 3-(吡啶-4-基胺基)-1Η-吲哚-2-甲酸（苄基乙基-胺 20 基甲醯基)-曱酯， 3-(°比咬-4-基胺基)-1Η-口弓丨°朵-2-曱酸二乙基胺基甲 醯氧基-曱酯， 3-(吡啶-4-基胺基)-1Η-吲哚-2-甲酸苄基(bezyl)胺 基甲醯氧基曱酯， -51- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1296926 A7 B7 五、發明說明（50) 3-(吡啶-4-基胺基)-1Η-吲哚-2-甲酸哌啶-1-羰基氧 基甲酯， 3-(吡啶-4-基胺基)-1H-吲哚-2_甲酸嗎咁-4-羰基氧 基甲酯， 5 3-(吡啶-4-基胺基)-1Η-吲哚-2-甲酸2-乙氧基羰基 胺基-2-氧基-乙醋’ 3-(ϋ比咬-4-基胺基)-1Η-^ 朵-2-甲酸異丙氧基魏基 氧基-甲S旨， 3-(11比淀-4-基胺基)-111-|1引1；1朵-2-甲酸1，1，2-二甲基 10 丙氧基基氧基-甲醋* 3-(吡啶-4-基胺基)-1Η-吲哚-2-曱酸環己基氧基-羰 基氧基-甲酯， 3-(0比唆-4-基胺基)-111-$卜朵-2_甲酸金剛烧_1-基氧 基羰基氧基甲酯， 15 3·( π比唆-4-基胺基）-1Η· 口引11 朵-2-甲酸乙酿氧基甲 酯， 3-(吡啶-4-基胺基)-1Η-吲哚-2-曱酸2,2-二甲基-丙 醯氧基曱酯， 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 3-(吡啶-4-基胺基）_1Η-吲哚-2-甲酸戊醯氧基甲 20 酯， 3-(σ比唆_4_基胺基)-1 Η- ρ引17朵-2-甲酸-2-氧-σ辰咬-1 _ 基甲酯， 3-(吼17定-4-基胺基)-1Η- ^引σ朵-2-曱酸（苯曱酿基-乙 氧基幾基曱基-胺基)-曱S旨’ -52- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐） 1296926 A7 B7 五、發明說明（5〇 3-(11比唆_4-基胺基)-111-口弓丨11朵-2-甲酸2-氧-11比洛烧-1 -基甲醋^ 3-(11比唆-4-基胺基)-111-0引〇朵_2-甲酸5-甲基-2-氧-(1，3)二氧雜環戊烯-4-基甲酯， 5 3-(吡啶-4-基胺基)·1Η-吲哚-2-甲酸(苯基-(甲苯-4- 磺醢基)-胺基)-甲酯， 3-(11比咬-4-基胺基)-1Η-ρ弓丨11 朵-2-甲酸（苯績酿基-甲 基-胺基)-甲醋’ 3-(吡啶-4-基胺基)-1Η-吲哚-2-甲酸（甲基-(甲苯-4-10 績醯基)-胺基)-甲酯， 3-(吡啶-4-基胺基)-1Η-吲哚-2-甲酸叔丁氧基羰基 氧基-甲酯， 3-(4-11比唆基胺基)-苯並(b)嗔吩-2-甲酸乙S旨， 6·氣-3-(4-σ比唆基胺基)-苯並(b)嗔吩-2-甲酸乙醋’ 15 3-((4-11比咬基)胺基-N_甲基)-苯並(b)嗔吩基-2_甲酸 乙酯， 3-(4-吡啶基胺基)-6-三氟甲基-苯並(b)噻吩-2-甲酸 甲磺酸鹽 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 3-(4-吡啶基胺基)-苯並(b)噻吩-2-甲酸鹽酸鹽， 20 3-(4-σ比咬基胺基)-6·二亂甲基-苯並(13)0塞吩-2-甲酸 乙酯鹽酸鹽， 3-(丙基-4-吡啶基胺基）-苯並（b)噻吩-2-甲酸乙 酯， 3-((3 -苯基丙酿基）甲基胺基)-1H-6-氣-口引17朵-2-甲 -53- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐） 1296926 A7 B7 五、發明說明（52) 酸， 3-((苯甲醯基）甲基胺基)_4,6_二氣-1 H_吲哚-2-曱 酸， 3-((苯甲醯基)胺基)-6-氣-1H-吲哚-2-甲酸， 5 3-((苯甲醯基)胺基)-6-氣_1Η·吲哚_2_曱酸2-二甲 基胺基-乙醋’ 3-((4-氣苯甲醯基）甲基胺基)-4,6-二氣-1Η-吲哚-2-甲酸， 3-((苯甲醯基）苄基胺基)-4,6-二氣-1H-吲哚-2·甲 10 酸， 3-((4-哌啶醯基）曱基胺基）_6_氣-1 H_吲哚-2-甲 酸， 3-((苯甲醯基）甲基胺基)-4,6-二氣-1H-吲哚-2-甲酸 乙酯， 15 3-((苯甲醯基）甲基胺基)-5,6·二氣_1H-吲哚_2-甲 酸， 3-((苯甲醯基）乙基胺基)-4,6-二氣-1H-吲哚-2-甲 酸， 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 3-((苯甲醯基）甲基胺基)-6-氟-1H·吲哚-2-甲酸， 20 3-((2-卞基苯甲酿基)胺基)-4,6-二氯-111-口引11朵-2-甲 酸， 3-((3-氟苯曱醯基）曱基胺基)-4,6-二氣-1H-吲哚-2-曱酸， 3-((苯甲醯基)苄基胺基)-4,6_二氣-1H-吲哚-2-曱酸 -54- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1296926 A7 B7 五、發明說明（53) 乙酯， 3_((苯基磺醯基)胺基)-4,6-二氣-1H-吲哚-2_甲酸乙 酯， 3-((苯基磺醯基)胺基)-4,6-二氣-1H·吲哚-2-甲酸， 5 和 3-((苯基續酿基）甲基胺基)-4,6-二氣-1H-口引。朵_2甲 酸。 以下化合物在本發明方法的實踐中是優選的： 10 3-(4•吡啶基胺基)-1Η-吲哚-2-甲酸， 3-((3-苯基丙醯基）甲基胺基)-1//-6-氯-吲哚_2_甲 酸， 3-((苯曱醯基）甲基胺基)_4,6·二氣-1H-吲哚_2_曱酸， 3-((苯曱醯基)胺基)-6-氣-1H-吲哚-2·甲酸， 15 3·((苯甲醯基）甲基胺基)-5,6-二氣-1H-吲哚-2-曱 酸， 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 3·((苯甲醯基）甲基胺基)-6_氟-ΙΗ·吲哚-2-甲酸， 3-((4-氣苯甲酿基）甲基胺基)-4,6-二氣-ΙΗ-”引〇朵-2· 甲酸， 20 3-((苯甲醯基）苄基胺基)-4,6-二氣-1H-吲哚-2-甲 酸， 3-((苯甲酿基）乙基胺基）-4,6-二氣-1H_口引π朵-2-甲 酸， 3-((2-苄基苯曱醯基)胺基)-4,6-二氣-1Η-吲哚-2-甲 -55- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐） 1296926 A7 B7 五、發明說明（54) 酸， 3-((3_氟苯甲酿基）甲基胺基)-4,6-二氣-ΙΗ-ρ引σ朵-2-甲酸， 3-((4-哌啶醯基）甲基胺基）-6-氣-1Η-吲哚-2-曱 5 酸， 3-((苯基績酿基)胺基)_4,6_二氣-ΙΗ-β卜朵-2-甲酸’ 3-((苯基磺醯基）甲基胺基)-4,6-二氣·1Η·吲唏-2-甲 酸， 3-(4-吡啶基胺基)-1Η-吲哚-2-曱酸乙酯， 10 6-二氣甲基-3-(4-11比咬基胺基)-1Η-ρ5丨鳴-2-甲酸乙 酯， 3-(嘴唆-2-基胺基)-1Η-弓丨17朵-2-曱酸乙S旨’ 3-((苯甲醯基)胺基)-6-氯-1Η-吲哚-2_甲酸2·二曱 基胺基•乙醋’ 15 3-((苯甲醯基）甲基胺基)-4,6·二氣-1H-吲哚-2-甲酸 乙酯， 3-((苯曱醯基)苄基胺基)-4,6-二氣-1H-吲哚-2-甲酸 乙酯，和 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 3-((苯基績酿基）胺基)-4,6-二氣-1H-。引〇朵-2-曱酸乙 20 酯。 本發明還提供藥物組合物，該組合物含有本發明的一 種或多種化合物以及與之聯用的可藥用載體。優選這些組 合物是單位劑量的形式，如片劑、丸劑、膠囊劑、粉劑、 -56- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1296926 A7
5 10 15 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 20 ^劑外溶液㈣浮液、計量氣_或液體喷 入、鼻内、舌下或直腸給藥或者用於吸入或吹 入…樂。或者，組合物可以是適合於每周_次或每月一次 給樂的形式；例如，可以採黯性化合物的不可溶性睡， 如癸酸鹽，提供肌岐射用的貯存製劑。可以包括含活性 成分的可浸㈣聚合物。在製備@體組合物，如片劑時， 可將主要的成分㈣賴體混合，所說的藥用載體為 例如常規的製片用成分，如玉綠粉、乳糖、歸、山梨 糖醇、滑石粉、硬脂酸、硬脂酸鎂、磷酸氫㈣樹膠，以 及其，藥用稀釋劑，例如水，從㈣成含本發明化合物或 其可藥用鹽的均相齡物賴體預成型製敝合物。當說 到这些均相形式的預成型制組合物時，是指活性成分均 勻分散遍及整個組合物，從而組合物可以容易地分成同樣 有效的單位劑量形式，如片劑、丸劑和膠囊劑。然後，將 這種固體預成型製劑組合物分成含有G1_約則mg本發明 化合物的上述類型的單位劑量形式。矯味的單位劑量形式 中含有MOOmg，例如卜2、5、1〇、25、5〇或卿吨的 活性化合物。新組合物的片劑或丸劑可以包衣或者進行其 他的配製加工，以提供具有延長作用優點的劑量形式。例 如，片剤或丸劑中可以含有内劑量和外劑量組分，後者是 包封刖者的外膜的形式。此二組分可以通過腸層分開，腸 層起阻止在胃中崩解的作用並且可以使得内組分完整無損 地進入十二指腸或者延遲釋放。可以使用各種材料來用於 計 線 -57· 1296926 A7 B7 五、發明說明（56) 1腸層或包衣層，這種材料包括許多聚合物酸以及聚合 物S夂與諸如蟲膠、乡純醇和乙酸纖維素之類的物質的混合 物。 用於口服或注射給藥的摻有本發明新組合物的液體形 2匕括水性H適當矯味的糖漿、水性或油性混懸液和 3食用油的橋味乳液，所說的食用油如棉籽油、芝麻油、 椰子油或化生油，以及酏劑和類似的藥用基質。用於水性 =懸劑的魅的分散誠料純括合絲天然樹膠，如 只膠、合金歡樹膠、藻酸鹽、葡聚糖、羧甲基纖維素 10鈉、甲基纖維素、聚乙烯基轉朗或明膠。 一本發明藥物組合物的優選的給藥方式是通過鼻内途 經。可以使用任何已知的通過鼻内給藥的方法來施用本發 明的組合物。 在冶療如上所述的各種疾病狀態時，適宜的劑量是約 15 0.01-250mg/kg每天’優選約〇 〇51〇〇mg/kg每天特別是 約0-〇5-2〇mg/kg每天。化合物可以按每天1-4 :欠的方案來 給藥。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 生物學實施例·· 20 使用以下測5式方案來確認本發明化合物的生物學特 性。 第-個方法包括將化合物添加到含有載體的細胞中， 所說的載體含有至少100個外源人白介素_4啟動子的鄰接 核苷酸’將這些核苷酸在能夠表達可檢測蛋白質的條件下 -58- 本紙張尺度適用中國國家標準(^^)八4規格（21G X 297公着）— ------- 1296926 A7 B7 發明說明（57) 與編碼可檢測蛋白質的基因可操作性連接，並且檢測。 測蛋白質。 ’、、可檢 適宜的可檢測蛋白質包括可以通過標準實驗室技術測 定的蛋白質，所說的標準實驗室技術如染色方法(例如，3 半乳糖苷酶）；免疫測定，如FLAG-標記蛋白質法；發光 蛋白質，如螢光素酶或GFP。 10 15 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 20 使用適宜於可檢測蛋白質的標準實驗室技術，例如， 通過免疫化學或螢光法，可以直接測得可檢測蛋白質的相 對量。或者，可以通過測定對應於可檢測蛋白質的瓜咖入 或cDNA的含量，間接地測得可檢測蛋白質的相對量。 優選，本發明方法中所用的細胞不表達内源性可檢測 蛋白質。然而，在另一個可供選擇的實施方案中，可以改 進試驗條件，以使當向細胞添加化合物時不表達内源蛋白 質。 ’、 優選，本發明方法中所用的細胞是能夠採用細胞培養 技術培養的細胞。適宜的細胞的商業來源是公知的，這些 來源包括 the American Type Culture Collection (ATCC)及其 它銷售商。適宜的細胞的實例包括標準培養細胞，如中國 层鼠卵巢細胞(CHO)、淋巴細胞、T細胞、原初τ細胞、 Thl細胞、Th2細胞、巨噬細胞或其他來自免疫系統的細 胞。通常來說，人的細胞是優選的。本發明的方法中也可 以使用初級細胞。 在建立鑒定能夠調節一種或多種Th2細胞因數的化合 物的試驗時，使用哺乳動物細胞是優選的。在這種試驗中 -59- 本紙張尺度適用+圈因冢標準(CNS)A4規格（21〇 x 297公楚） 1296926 A7 一___B7_ 五、發明說明（5〇 更優選使用靈長目動物細胞，並且在這種試驗使用人的細 胞是特別優選的。 細胞可以得自身體的任何組織，但通常來說優選細胞 得自免疫系統，如淋巴細胞、T細胞、原初τ細胞、Thl 5 細胞、Th2細胞、巨噬細胞或得自免疫系統的其他細胞。 可檢測蛋白質可以是可直接測定或檢測的蛋白質，如 上所述，例如，β-半乳糖苷酶、FLAG-標記蛋白質、螢光 素酶或GFP。或者，可檢測蛋白質可以間接地被檢測，如 啟動途經、而該啟動是可被檢測的。後者的實例是轉錄因 10數，該因數的表達使得第二個基因的增量調節或減量調節 轉錄可被檢測。可間接測定的可檢測蛋白質可能會涉及表 型的變化，例如編程性細胞死亡。 在本發明的一個實施方案中，將可檢測蛋白質的含量 與化合物不存在時的可檢測蛋白質的含量進行比較。 15 在本發明的另一個實施方案中，將可檢測蛋白質的含 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 量與存在參照化合物時的可檢測蛋白質的含量進行比較。 參照化合物可以是已知的Th2細胞因數的調節劑，如環抱 菌素A、FK-506和納巴黴素等，或者可以是以前未知的 Th2細胞因數的調節劑。 20 本發明中的Th2細胞因數是IL-4、IL-5和IL-13。 在以下的生物學實施例中，使用下列縮寫： ai(oh)3 氫氧化鋁 抗-DNP 抗-二硝基苯基抗體 -60- 本紙張尺度適用中國國家標标^X 297公楚） 1296926 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 五、發明說明 (59) 抗-OVA 抗-卵清蛋白抗體 BALF 支氣管肺泡灌洗液 CsA 環孢菌素A DMSO 二甲亞礙 DNP-KLH 二确基苯紛-匙孔血藍蛋白 ED50 半數有效量 ELISA 酶聯免疫吸附測定法 GFP 綠色螢光蛋白質 IC5〇 抑制濃度50% IFN-γ 干擾素-γ IgE 免疫球蛋白Ε IgGl 免疫球蛋白G1 IgG2a 免疫球蛋白G2a IL-4 白介素-4 IL-5 白介素-5 IL-13 白介素-13 i.n. 鼻内 i.p. 腹膜内 i.v. 靜脈内 LD50 半數致死量 NY-1 命名為NY-Thl的Thl細胞系 NY-2 命名為NY-Th2的Th2細胞系 PC400 增加SRL超過基線400%的後氨甲醯膽鹼 濃度 -61- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐） 1296926 A7 B7 五、發明說明（6〇 ) p.o. PHA Rl SD SE SEM STAT-6 SRl s.c. Th Thl Th2 經口（口服） 植物凝集素 肺中的抗性 標準差 標準誤差 平均標準誤差 轉錄-6的信號轉導物和啟動劑 肺中的比抗性 皮下 T辅助細胞 T-輔助細胞1 T-辅助細胞2 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 10
Jurkat細胞中的IL-4塋光素酶試驗 可以使用IL-4螢光素酶試驗來篩選調節IL-4轉錄水 平的化合物。已開發了幾個螢光素酶試驗，來篩選對轉錄 性調節基因表達並由此影響由細胞表達的基因所編碼的蛋 白質的含量來說有效的化合物。例如，使用轉錄性試驗方 法表明，在負責T-細胞啟動信號的人IL-4基因中包含11 鹼基對DNA序列基元，參見Abe，E·等，Proc. Natl. Acad. Μ· USA，(1992)，89，2864_2868。還據顯示，通過從 JurkatT細胞中篩選cDNA表達文庫並且分離編碼NF-IL-6 的cDNA，核因數-IL-6 (NF_IL_6)與T細胞中的人IL-4啟 動子的轉錄性啟動有關，參見Davydov，I. V·等，匕 -62- 钱張尺度適用r圈國家標準(CNS)A4規格（210x297公复了 1296926 A7 B7 五、發明說明（61 )
ImmunoL，（1995)，155(11)，5273-5279 〇 其他啟動子位點對T細胞特異性表達的有助性已在用 與螢光素酶基因相聯的IL-13啟動子構建體的暫態表達試 驗中評估過，一開始集中於核心結合因數(CBF)位點，其 5 被邀冷足印於T細胞的啟動上，參見Taylor，D· S·等，j Biol· Chem.，(1996)，271(14)，14020-14027。最近據報 導，人IL-4啟動子存在有多種在IL-4-陽性T細胞中顯示 不同轉錄活性的等位形式，參見Song，Z·等，j. Immunol· ’（1996) ’ 156(2)，424-429。近來，US 專利號 10 5,863,733和5,976,793公開了轉錄性調節基因表達的方法 和發現能夠作為基因表達調節劑的化學物質的方法。 人IL-4基因啟動子的分離： 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 從人基因組P-1文庫中分離含有IL-4基因啟動子的核 15 苷酸-6635 至+66(圖 4 ; SEQ ID NO : 1)的 6.7kb 片段，其 中所說的人基因組P-1文庫，克隆F0178，獲得自BIOS Laboratories (New Haven，CT)，使用 IL-4 特異性 5,端偏 4吕的探針（Arai 等，J, of Immunol.，（1989)，142，274_ 282)。通過連接兩個分別為5·5和12 KBs的EcoRj限制 20性片段，來產生啟動子構建體。將一個Hindlll限制性位 點添加到1.2 KB EcoRI片段的3,端，並且克隆到 pGL3Neo上多個克隆區的相似位點中。類似地，將一個 Xhol限制性位點添加到5·5 KB Ec〇RI片段的5，端，並且 克隆到pGL3Neo上的XhoI位點中。通過測序校驗此IL_4 -63-
1296926 A7 ____B7 五、發明說明（62) 啟動子構建體。 使 Jurkat 細胞生長在 RPMi i640(Gibco/BRL，目錄 號：11875-093 ; 10% FBS Gibco/BRL，目錄號：16000· 096 ; 1%抗生素/抗真菌劑，Gibco/BRL，目錄號：15240-5 096)並且按照 Staynov 等在 Proc. Natl. Acad. Sci. USA， (1995)，92 , 3606-3610中所描述的方案用上述DNA轉 染，並且採用 800 pg/ml 的 G418 (Geneticin，Gibco/BRL， 目錄號：10131_035)進行選擇。通過限制稀釋方法從穩定 轉染的多克隆種群中得到單克隆系，1F7，F8和C5，並且 10用於試驗。將這些單克隆細胞系在上述的培養基中於400 pg/mlG418的存在下進行培養。 使IL-4 6.7 Luc單克隆系在i5〇cm通風T-燒瓶中生長 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 兩天（以100,000細胞/ml接種）。將細胞收穫，重懸浮於新 的培養基中並且以120 pL體積中50,000個細胞/每孔的密 15度，平板接種在96孔平板中並且使其生長16小時。將測 試化合物以15 μί體積計添加到培養基中（按DMSO最終 濃度0.5%)，平行進行3或4份試驗。一般來說，使用三 (10、1 和 0·1μΜ)或五個濃度（1〇、1、（U、〇 〇1 和 0·001μΜ)得到劑量反應曲線。然後將培養物用5〇 ng/mH· 20波醇12-肉豆蔻酯13-乙酸鹽（PMA，Sigma ,目錄號：P-8139)和1鄭]^鈣離子載運體(八23187,8丨§11^，目錄號：（：- 7522)在25 μί培養基中刺激8小時。通過添加50 pL的 lx溶胞緩衝劑（25 mM Tris磷酸鹽，pH 7.8，2.0 mM DTT，2·0 mM EDTA，100 ml/L 甘油，1.0% Triton X-100 -64- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公爱^ !296926 A7 B7 五、發明說明（63 ) (^/V))終止此刺激過程。將細胞在溶胞緩衝劑的存在下溫 月5分鐘，上下移液，5χ，確保完成溶胞。將一 i㈨叫 等分量的細胞溶胞產物轉移至白色發光計平板(Dynatech) 並且用Dynatech發光計測定螢光素酶活性。將底物，螢 5光素酶試劑(47(^M螢光素，530μΜ ΑΤΡ , 270μΜ輔酶A 和33.3 mM DTT)溶解在2χ螢光素酶測定緩衝液⑼應 Tncine ^ 1.07 mM (MgC03)4Mg(0H)2.5H20 ^ 2.67 mM MgS04，〇·ΐ mM EDTA，PH 7.8)中。 所有實驗平板包括未誘導和誘導型對照孔。此外，平 10板上包括濃度為1、〇·3、〇丨、〇 〇3和〇 〇1μΜ的CsA(環 孢菌素A ’ Sigma目錄號：C_3662)作為陽性對照。 結果分析：在6·7 IL-4-Luc中觀察到5-6倍的誘導(通 過刺激與非刺激之比測得）。將試驗產生的結果按百分比 15 活性來表示。 (Α有化合物晚的Luc活性)-(夫諉導的抬侍)yi叩 (誘導的對照的均值)-(未誘導的均值） 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 此初級試驗測定了化合物調節報導基因含量的能力， 其中所說的報導基因，螢光素酶，與轉染至人Jurkat細胞 20系中的人IL-4啟動子相聯。使用此試驗，發現25〇種能夠 調卽IL-4含量的陽性化合物。 可以使用其他試驗來進一步表徵化合物調節其他Th2 細胞因數例如IL-13的能力，或者，表徵化合物調節ΤΜ 細胞因數例如IFN-γ的能力。 -65- 本紙張尺度適时@ @家標準(CNS)A4規格（2H) X 29_7"¥"爱)------- 1296926 A7 _ B7 五、發明說明（64) 在表1中，顯示了本發明化合物對用IL-4、IL-13和 IFN-γ轉染的Jurkat細胞的基因表達的效果 表1 5 本發明化合物對在Jurkat細胞系中il-4和IL-13基因表達 的抑制 化合物 6.7-IL-4 Luc (%對照） 2.1-IL-13- Luc (%對照） 2.7-IFN-y-Luc (%對照） 3-(4-吼咬基胺基)_ 62 ±29 50 ±12 100 ±15 1H-吲哚-2-甲酸(實 施例28) CsA (IC5〇 , μΜ) 0.06+0.01 0.06+0.001 0.06 +0.001 IFN-γ Luc 試驗： 10 將含有核苷酸-3218至+128的人IFN-γ啟動子片段克 隆到 pGL3NEO III)中，得到 IFN-γ Luc。用上述 DNA 轉染 Jurkat 細胞(生長在 RPMI 1640 中，10% FBS， 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1%抗生素/抗真菌劑）（Staynov 等在 Proc. Natl. Acad. Sd. Π^Α，（1995)，92，3606_3610中描述的方案）並且採用 15 800 pg/ml的G418(Geneticin)進行選擇。從穩定轉染的多 克隆種群中得到單克隆系並且用於試驗。將這些單克隆細 胞系在上述的培養基中於400 pg/ml G418的存在下進行培 養。 將含2.3IFN-Y Luc(單克隆系）的Jurkats以120 pL中 -66- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公爱） A7 1296926 ___B7 五、發明說明（65)
50,000個細胞/每孔的密度平板接種，並且生長μ小時。 然後將培養物用10 ng/ml佛波醇π-肉豆蔻酯13-乙酸鹽 (PMA)和1·0μΜ鈣離子載運體a23187在1〇 μι培養基中刺 激8小時。通過添加50 μΐ的1χ溶胞緩衝劑(25 mM Tris 5 磷酸鹽，pH 7·8，2.0 mM DTT，2·0 mM EDTA , 100 ml/L 甘油’ 1.0%TritonX-100(v/v))終止此刺激過程。將細胞在 溶胞緩衝液的存在下溫育5分鐘，上下移液，5x，以確保 完成溶胞。將一 100 μΐ等分量的細胞溶胞產物轉移至白色 發光計平板(Dynatech)並且用Dynatech發光計測定勞光素 10 酶活性。將底物、螢光素酶試劑(7.1mg螢光素、14.6mg ATP、10.4mg 輔酶 A 和 250mg DTT，以 50 ml 體積計）溶 解在2x螢光素酶測定緩衝液（于2L水中的14.33g
Tricine，2.07g (MgC03)4Mg(0H)2.5H20，2.63g MgS04 , 0.15g EDTA，並且將pH調節至7.8)中。 15 在使用此試驗從化學文庫中篩選興奮劑或拮抗劑時， 與PMA/Amw混合物一同直接添加所需劑量的化合物。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 在FN-g Luc中觀察到大於20倍的誘導(通過刺激與非 刺激之比測得）。將得自HTPS的結果以在給定濃度（即： 0·1μΜ、ΙμΜ和ΙΟμΜ)下對照的百分率來表示。 20 參考文獻·· Staynov，D. Ζ.，Cousins，D· J·及 Lee，Τ Κ·，Proc. Natl. Acad. Sci. USA，（1995)，92，3606-3610 〇 IL-13 Luc 試驗 將含有核苷酸-2154至+53的人IL-13啟動子片段(如 -67- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公爱） 1296926 A7 _B7 五、發明說明（66 )
Dulganov 等，Blood，（1996)，87，3316-3326 中所述)克隆 到 pGL3NEO III)中，得到 2.1IL-13 Luc。用上 述DNA轉染Jurkat細胞（生長在RPMI 1640中，1〇〇/。 FBS，1%抗生素/抗真菌劑）（Staynov 等在 Proc. Natl. AcaH 5 .SciJgA，（1995)，92，3606-3610 中所描述的方案）並且 採用800 pg/ml的G418(Geneticin)進行選擇。從穩定轉染 的多克隆種群中得到單克隆系並且用於試驗。將單克隆細 胞系在上述培養基中於400 pg/ml G418的存在下進行培 養。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 10 將含mn Luc(單克隆系）的Jurkats以12〇 pL中 50,000個細胞/每孔的密度平板接種並且生長16小時。然 後將培養物用10 ng/ml佛波醇12-肉豆蔻酯13-乙酸鹽 (PMA)和1·0μΜ舞離子載運體A：m87在10吣培養基中刺 激8小時。通過添加50 pL的lx溶胞緩衝液(25 mM Tris 15 磷酸鹽，pH 7.8，2·0 mM 二硫蘇糖醇(DTT)，2.0 mM 乙二 胺四乙酸(EDTA)，100 ml/L 甘油，1·〇〇/。Triton X_l〇〇 (v/v)) 終止此刺激過程。將細胞在溶胞緩衝液的存在下溫育5分 鐘，上下移液，5x，以確保完成溶胞。將一 1〇〇]LIl等分量 的細胞溶胞產物轉移至白色發光計平板(Dynatech)並且用 20 Dynatech發光計試驗螢光素酶活性。將底物，螢光素酶試 劑(7.1mg 螢光素、i4.6mg ATP、l〇.4mg 輔酶 A 和 250mg DTT ’以50 ml體積計)溶解在2X螢光素酶測定緩衝液(在 2L 水中的 14.33g Tdcine，2.07g(MgCO3)4Mg(OH)2.5H2O， 2·63 g MgS04 ’ 〇.15g EDTA，並且將 PH 調節至 7.8)中。 -68- 本紙張尺度適用中國國豕標準(CNS)A4規格（210 X 297公爱） A7 B7 1296926 五、發明說明Ο) 在使用此試驗從化學文庫篩選興奮劑或拮抗劑時，與 ΡΜΑ/Α23187混合物一同直接添加所需劑量的化合物。 在IL-13 Luc中觀察到大於15倍的誘導(通過刺激與 非刺激之比測得）。這種從高輸出量筛選產生的結果(HTS) 5 以在給定濃度（即：〇·1μΜ、ΙμΜ和ΙΟμΜ)下對照的百分率 來表示。 參考文獻：Staynov，D· Ζ·，Cousins，D.J 和 Lee， T.K. Proc· Natl· Acad· Sci· USA，（1995)，92，3606-3610。 10 第二種方法包括將化合物添加到在能夠使可檢測蛋白 質表達的條件下分泌可檢測細胞因數特別是IL-4蛋白質的 初級人細胞中，並且檢測可檢測蛋白質。 人初級Thl和Th2細胞的產生和使用： 15 本文所描述的方法使得初級人外周血細胞極化成Thl 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 和Th2細胞並且產生足量的Thl和Th2細胞，例如，數十 億個細胞，從而可以進行藥物篩選。簡單地說，使從健康 供體的外周血單核細胞中分離的CD4+CD45RA+T細胞在 抗-CD3/CD28抗體和各種生長因數的存在下受訓，獲得類 20似Thl或類似Th2的表型，通過這兩細胞類型的已知細胞 因數分佈圖測定。初級人Thl細胞分泌iFN-γ和IL-2細胞 因數，而初級人Th2細胞分泌IL-4、IL-5、IL-13和基礎 ϊ的IFN-γ，其可通過酶聯免疫吸附試驗(ELISA)測量。 -69-
1296926 A7 --------B7_ 五、發明說明（68) 人血Thl和Th2細胞系的產生和維持： 從人血中通過Fic〇ll_Hypacque (Pharmacia)製備外周血 單核細胞(PBMC)。將細胞在Hanks平衡鹽溶液(HBSS)中 洗滌兩次並且計數。 5 通過負選擇方法使用以下抗體和Dynabeads來製備原 初 T 細胞(CD4+/CD45RA):將抗-CD8、抗-HLA-DR(其中 HLA是指人白細胞抗原）抗-CD14、抗-CD16、抗-CD19、 抗-CD45RO 抗體(所有來自 r&d Systems，1-2 pg/ml)添加 到細胞中，並且將細胞在冰上保持30 min。將細胞在 10 HBSS中洗條兩次’並且添加山羊抗_小鼠ig_珠(珠··把比 為5 : 1)。將細胞和珠在4°C下緩慢旋轉20 min(按照 Dynal提供的方案）。取出上清液並且向上清液中添加新的 山羊抗-小鼠Ig-珠，在4°C下緩慢旋轉20 min。將細胞計 數並且通過流式細胞計量分析來表型表徵。一般來說，在 15負選擇後，CD4+/CD45RA+細胞的純度為96%。CD8+、 CD14+、CD16+ CD19+和CD45RO+細胞污染低於可檢測水 平(<0·1%) 〇 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製
Thl/Th2細胞的產生：將24孔平板用300 pL抗-CD3 Ab塗布（10 pg/m卜在PBS中，37°C下l-2h或4°C下過 20 夜），並且用PBS洗滌兩次。製備以在rpmi中l〇6/ml密 度的CD4+/CD45RA+細胞，並且添加到含1〇% jjyclone血 清/榖氨醯胺和1-2 pg/ml抗-CD28 Ab的RPMI培養基中。 將細胞分成兩等分。對Thl細胞：向各孔中添加抗-IL-4
Ab (1-2 pg/ml)、IFN-γ (1 pg/m卜或 5000 單位/ml)。對 Th2 -70- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） A7 1296926 B7 五、發明說明Ο) 細胞：向孔中添加IL-4 (100-200 ng/ml)、抗-IFN-γ中和用 Ab (1-2 pg/ml)、抗-IL-12 中和用 Ab(l-2 pg/ml)。將細胞在 37°C下溫育2-3天。將細胞轉移至新的孔中並且通過每隔 一天供給含IL-2的培養基並且按需要1 : 2或1 : 3分開培 5 養物，在200單位/ml IL-2中生長2周。通過用來自 Pharmingen的抗-IFN-γ和抗-IL-4抗體給細胞細胞内染 色，並且使用來自Becton Dickinson (BD)的流式細胞儀， 按照製造商的說明，來測定極化的程度。在第14和28天 將細胞用PHA和異源抗原刺激，如下所述。在第二次異 10 源刺激後的八天，細胞便可以用來進行化合物篩選或將其 冷凍以作以後使用。對化合物測試而言，將得自一定供體 (NYThl和NYTh2)的大量的Thl和Th2細胞以等分部分 的形式在液氮中膨脹並且冷凍。當需要時將細胞解凍並且 培養。將解凍的細胞用異源抗原/PHA聯合刺激。在培養 15 後的8-10天使用此細胞來用於化合物篩選。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 採用異源細胞再刺激··通過Ficoll分離，從新抽的血 中分離欲用作異源抗原的人PBMCs。將細胞重懸浮於含 50 pg/ml絲裂黴素C的培養基中並且在37QC下溫育40分 鐘，然後充分洗滌以除去所有的絲裂黴素C。將細胞計數 2〇 並且稀釋至在含10 pg/ml PHA和200單位/ml IL-2的培養 基中的最終濃度達2 X l〇6/m卜將Thl或Th2細胞(3 X 1〇5 細胞/ml)與上述的PBMC以1 : 1比在24孔平板中混合並 且在37°C下溫育。一般來說，在8-10天後，可以使用如 此形成的細胞來用於化合物測試。 -71- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規;^ U10 X 297公釐） 1296926 A7 B7 五、發明說明（7〇 10 15 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 20 化合物測試： 在實驗前一天，將96孔Falcon組織培養平板(Fisher Scientific)塗布1〇〇微升/每孔的1〇网/〇11存在於磷酸鹽緩 衝液(PBS)中的抗-CD3 (PharMingen)抗體並且在4°C下儲 藏。 試驗當天，將此塗布有抗-CD3抗體的平板用PBS洗 滌一次，以除去所有可溶的抗-CD3抗體。將T細胞離心 並且用不含IL-2的1640 RPMI細胞培養基(GibC0)洗滌， 計數並且重新懸浮至最終濃度1 χ 1〇6細胞/ml。將本發明 化合物的貯備溶液(10 mM濃度)在0·1% DMSO (二甲基亞 砜）中稀釋至最終濃度達10μΜ，並且使用3倍的稀釋液滴 疋7排用於IC%測定。將所有的化合物和對照均平行進行 二份試驗。對照孔由〇·25%乙醇、〇·1% DMSO、抗-CD3 和抗CD28刺激的細胞(作為陽性對照）或未刺激的細胞(作 $陰性對照）組成，一式三份。同時包括存在於乙醇中的 %孢菌素A (CsA) (ΙμΜ濃度），滴定整個7排，作為每次 試驗第—個平板⑽平板對照。向所有的孔添加1 μ_ 抗-CD28抗體(R&D Systems)作為共刺激物並且將丨⑻微 升的1 X 105細胞移液至每個孔中。 ,將細胞在咖下於5%c〇2氣氛中溫育。48小時 後，取出上清液作ELISA _用。通過從三份的平均〇D :減去背景值，並且與對照的平均〇D減背景值相比，測 疋百刀比對照，即(X化合物的〇D_背景值)/(x〇D對照-背 計 -72- 1296926 A7 ______B7_ 五、發明說明（71 ) 厅、值)X100 ’ 採用 ELISA 試劑盒測定 IL-5 (PharMingen)、 IL-4 (R&D Systems)、IL-13 (R&D Systems)和 IFN-y(R&D Systems)並且將結果按％對照來表示。48小時後，用剩餘 的細胞，使用購買自Promega的非放射性MTS試驗試劑 5盒進行"生存力測試"。因為能生存的細胞繼續增生，在表 中將結果按‘增殖”來表示（毒性化合物抑制Th細胞的增 殖）。 在表2中，顯示了本發明化合物即3<4-吡啶基胺基)-1H-吲哚-2-甲酸對人初級Th2細胞的作用。按方法部分中 10所述，在或不在本發明化合物的存在下，用抗-CD3和抗-CD28啟動Th2細胞。在刺激48 hr後，收集上清液，通 過標準ELISA來測定細胞因數。將剩餘的細胞再溫育 20hr，然後用MTS試驗試劑盒(Promega)測定細胞數目。 給出一式三份培養物的標準偏差。 15 表2 3-(4-吡啶基胺基)-1Η-吲哚-2-甲酸(實施例28)對人Th2細 胞的細胞因數表達和增殖的作用效果 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 增殖 IL-5 il-4 IFN-γ IL-13 (%對照） (%對照） (%對照） (%對照） (%對照） μΜ 平均 SD 平均 SD 平均 SD 平均 SD 平均 SD 10 71.55 0.07 53.90 3.96 30.80 4.95 75.00 10.32 68.40 4.10 3 72.05 0.64 70.40 0.00 36.40 0.00 83.50 7.07 73.40 0.71 -73- X 297公釐）
本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規焉了21J 1296926 A7 B7 五、發明說明（π 1 77.25 1.06 70.70 2.12 42.55 2.90 89.25 5.30 75.15 1.77 0.3 80.60 3.68 70.80 7.21 45.00 0.00 92.10 2.26 80.60 0.00 0.1 86.70 1.84 78.60 5.37 59.75 1.77 91.75 0.21 82.30 0.85 0.03 85.05 6.86 85.20 0.00 65.30 0.00 91.60 2.97 86.40 0.00 0.01 89.50 8.34 102.45 3.46 102.15 3.61 96.90 1.70 91.05 1.91 在表3中，顯示了 1〇個不同實驗的合併資料。如上 所述啟動Th2細胞。標準偏差小於15%並且因此不包括在 内。作為對照CsA，使用非選擇性細胞因數抑制劑。本發 明的化合物即3-(4-σ比唆基胺基)-1Η-弓丨11 朵-2_甲酸選擇性抑 制IL-4，但不抑制IFN-γ和細胞增瘦，而CsA抑制il-4、 IFN-γ和細胞增殖。 表3 10 3-(4-吡啶基胺基)-1Η-吲哚-2-甲酸(實施例28)對人Th2細 胞的效果匯總 tl 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 用： 處理人初級Th2細 胞 IL- 4IC5〇 (μΜ) IL-13 IC5〇 (μΜ) IL- 5IC5〇 (μΜ) IFN-γ ICso (μΜ) Prol. IC5〇 (μΜ) IFN-y/ IL-4 比 3-(4-吡啶基胺基）-1H-吲哚-2-甲酸 (n=10) 0.24 ^10 =10 >10 >10 >41 環孢菌素A (CsA) (n=25) 0.006 0.008 0.008 0.008 1.0 4- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X297公釐） A7 B7 1296926 五、發明說明（73) 在表4中，顯示了本發明化合物即3-(4-吡咬基胺基)-1Η-Θ丨哚-2-甲酸對人初級NYThl細胞的作用。如表1和2 中所示，用抗-CD3和抗-CD28啟動NYThl細胞。將得自 8個不同實驗的資料匯總，所有這些實驗均使用了 3-(4-吡 5 啶基胺基)-lH_吲哚-2_甲酸。標準偏差小於15%並且因此 不包括在内。使用CsA，一種非特異性免疫抑制藥物作為 對照。這些實驗證明了本發明的方法對Thl細胞沒有效 果。 10 ΑΛ 3-(4-吡啶基胺基)_1H_吲哚-2-甲酸(實施例28)對人Thl細 胞的效果匯總 用： 歲理人初級Thl細胞 IFN-γ IC5〇 (μΜ) 增殖IC5〇 (μΜ) IFN-y/IL-4 比 3-(4-吼淀基胺基)-1H-, 哚-2-甲酸(n=8) >10 >10 - 環孢菌素A 0.006 0.005 1.0 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 15 在表5中，顯示了 3-(4-吡啶基胺基)-iH-吲哚冬甲酸 的幾種相近類似物對人初級Th2細胞的作用效果。按方法 部分所述’在或不在本發明化合物的存在下，用抗—CD3 和抗-CD28激活細胞，並且將結果作為1(^5()以μΜ為單位 給出。4示準偏差小於15%並且因此不包括在内。正如所觀 -75- 本紙張尺度適用中國國蒙¥^(CNS)A4規格（210x297公楚） 1296926 A7 B7 五、發明說明（74) 察到的，本發明的各種化合物選擇性地抑制IL-4的表達並 且具有與3·(4-吡啶基胺基)-1Η-吲哚_2_甲酸類似的選擇性 特徵。 5 表5 本發明化合物的活性和選擇性特徵匯總 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 IL-4IC50 增殖 ICso IL-5 IC50 IFN-ylCso IL-13 IC5〇 化合物# μΜ μΜ μΜ μΜ μΜ 實施例11 >10 >10 >10 >10 >10 實施例24A 2.0 >10 >10 >10 >10 實施例28 (馬來酸鹽） 0.24 >10 >10 >10 〜10 實施例76 4.0 >10 >10 >10 >10 實施例77 3.6 >10 >10 >10 >10 實施例78 0.3 >10 >10 >10 >10 實施例79 5.0 >10 >10 >10 >10 實施例80 6.0 >10 >10 >10 >10 實施例81 6.0 >10 7.0 9.5 >10 實施例82 0.15 >10 >10 >10 >10 實施例83 1.0 >10 >10 >10 >10 實施例84 1.0 >10 >10 >10 >10 實施例85 0.9 >10 >10 >10 >10 -76- 計 線 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1296926 A7 B7 五、發明說明（75) 實施例86 實施例87 實施例88 實施例89 實施例90 實施例91 實施例92 1.0 0.6 2.5 2.5 1.0 1.0 0.45 >10 >10 >10 4.0 >10 >10 >10 >10 2.0 >10 8 >10 >10 >10 >10 >10 >10 >10 >10 >10 >10 >10 >10 >10 >10^ >10 >10 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 在表6中，顯示了 3-(4-吼啶基胺基)·1Η-Θ卜朵-2-甲酸 對穩態IL-4mRNA含量的作用效果。在10μΜ3-(4·吡啶基 胺基)-1Η-吲哚-2-曱酸溶液或100 ηΜ環孢菌素A (CsA)的 5 存在下用抗-CD3和抗-CD28激活人Th2細胞(按方法部分 中所述)18小時。從收穫的細胞中分離RNAs並且通過 Taqman分析IL-4資訊。使用GAPDH資訊作為標準化的 内標。通過將未經藥物處理過的抗-CD3和抗-CD28刺激 的Th2細胞作為100% ,據此處理數值，來計算百分比活 10 性。表6匯總了來自兩個獨立進行的實驗的資料。在第二 個實驗中，還通過標準ELISA如前所述地測定了培養物上 清液中的IL-4蛋白質含量。這些結果證明3-(4-吡啶基胺 基)-111-5卜木-2-曱酸抑制初級人丁細胞中的1]^-4 1111^[八。 15 表6 人Th2IL-4轉錄性試驗 計 線 I I m -77- A7 B7 1296926 五、發明說明（76 )
處理人初級Th2細胞18 hrs RNA 實驗#1 RNA 實驗#2 IL-4蛋白質 實驗#2 %活性 %活性 pg/ml 未經過刺激的 6 24 3.2+/-0.0 經過刺激的：CD3/CD28 100 100 625.0+/-23 經過刺激的：CD3/CD28+3-(4-吡 啶基胺基)-1Η-吲唏-2-甲酸(實施 例28) 44 45 286.2+/-19 經過刺激的：CD3/CD28+環孢菌 素A 12 ND ND ND_未檢測到。 本發明中所利用的第三個試驗涉及邀冷細胞毒性試 驗。此試驗用來進一步表徵化合物，以便評價化合物對接 5 觸抑制型非分裂性3T3成纖維細胞的毒活性。可以使用其 他毒性試驗。 任何殺死3T3成纖維細胞的化合物不作進一步研究。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 從ATCC購買接觸抑制型瑞士 3T3成纖維細胞。將細 胞在補充有10%胎牛血清(Gibco)的1640RPMI保存。 0 試驗當天，將細胞通過胰蛋白酶消化從燒瓶中脫離， 用培養基洗務並且計數。將1〇〇微升的2·5 X 1〇4細胞/每 孔平板接種到Falcon牌96孔組織培養平板中並且將細胞 在5%C〇2的存在下37°C溫育2天或者直至融合。 試驗的第2天，向各孔添加75微升培養基並且以1〇_ -78- 1296926 A7 B7 五、發明說明（77) 5 10 15 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 20 0·01μΜ範圍的濃度添加25 測試化合物。將所有化合 物的稀釋液平行進行三份試驗。對照包括1〇μΜ氨甲蝶呤 (Sigma)、ΙΟμΜ放線菌素d (Sigma)和ΙΟμΜ環孢菌素a (Sigma)。將細胞返回培養箱培養2天。 溫育2天後，使用MTS試驗試劑盒(promega)試驗 3T3細胞的生存力。將培養基添加到空白孔中以便作背景 值計算。在試劑盒試劑中溫育2小時後，通過平板讀出器 測定各化合物和對照在490 nm下的光學密度。 將結果以百分比細胞毒性表示，即，（化合物孔的平均 OD-背景值〇D)/(對照的平均0D-背景值）。 在此試驗中可以使用臨床使用的藥物作為對照，並且 包括預計對3T3細胞沒有作用的藥物，例如，類固醇、環 孢菌素A、氨甲蝶呤等或已知具有毒性效果的藥物，例如 放線菌素D。 在表7中，顯示了 3-(4-吡啶基胺基)-iH_吲嘴1甲酸 和某些已知標準化合物對休眠3T3細胞生存力的作用效 果。正如所預計的，放線菌素D是影響非分裂性細胞生存 力的唯一的化合物。注意，CsA的起始濃度是1μΜ。弘(4_ 吼咬基胺基).1H_L2·甲酸對這些細胞沒有顯出毒性作 用（本發明的各種其他化合物在此試驗中也呈陰性）。 -79- 本紙張尺度適用中國國家«^^)八4規格（21〇χ297公釐）------------ 計 線 1296926 A7B7 五、發明說明（78) 表7 3-(4-吡淀基胺基)-1H-吲哚-2-曱酸(實施例28)缺乏體外細 胞毒性 化合物 μΜ 培養基 %對照 實施例28 %對照 放線菌 素D %對照 氨甲蝶呤 %對照 地塞米松 %對照 環孢菌 素A %對照 10 100 99.1 16.8 92.4 60.5 99.8 3 100 109.7 29.7 93.8 60.7 103.0 0.1 100 110.7 28.2 98.9 64.2 104.0 0.03 100 111.1 33.9 100.0 67.8 105.0 0.01 100 111.8 67.2 102.8 71.6 105.5 0.003 100 1116.3 74.9 105.2 77.9 114.4 0.001 100 124.0 79.0 113.2 100.0 ----- 121.0 5 體内魏 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 也可以使用邀外免疫學試驗或疾病模型來進一步表徵 化合物調節Th2細胞因數水平的能力。這種試驗是本領域 所公知的，並且公開出版了很多方案。以下是<以用來進 10 一步表徵化合物調節Th2細胞因數水平能力炎由此證明 IL-4抑制效能的邀冷試驗的實施例。 除非另有說明，在以下所有的禮戌實驗中’均使用3_ (4-吼啶基胺基)-1Hn2_甲酸(實施例28)的馬來酸鹽。 -80- 本紙張尺度適ft屮囤®豕標準(cnS)A4麻（21()χ297"^7 A7 B7 1296926 五、發明說明（79) 遨冷卵清蛋白(OVA)小鼠模型： 設計此模型，以便測定測試品在調節抗原-誘導的肺 炎性細胞在敏化Balb/c小鼠中累積的能力，其中所說的小 鼠來自Charles River Laboratories。在致敏之前，使小鼠從 5 抵達日開始適應兩周的時間。 致敏和攻擊 在第0、7、14天，給各動物腹膜内（i.p·)注射〇·2 mi 印清蛋白Hydragel溶液。各動物接收存在於0.2 mL 10 Hydragel中的1〇 Pg卵清蛋白，其中Hydragel是含2%氧 化鋁的氫氧化鋁吸附凝膠。第21天，在5%卵清蛋白氣霧 劑攻擊之前30-60分鐘，給動物施用測試化合物。第22 天’從一個組的動物中收集BALF樣品並且用於細胞因數 分析。第24天，從第二個組的動物中獲得BALF並且用 15 於分類細胞計數。 方法和實驗設計 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 測試系統：雌性 Babl/cJ 小鼠(Jackson Laboratories)， 大約6-9周齡，每只重約20至25g，分成每組ι〇只動 20 物。 馴化/檢疫：在小鼠抵達之後，由獸醫人員或適宜的選 派者評估動物們的一般健康狀況。在進行實驗前，將動物 圈養最少7天，以便使它們適應實驗室環境並且觀察它們 感染性疾病的發生。將認為在本研究中不可用的動物用相 -81- A7 B7 1296926 五、發明說明（80) 同供應商提供的相似鼠齡和體重的動物替換。 動物飼養：將所有動物依照USDA的指導進行圈養 (成組或個體）。控制動物的房間環境，目標條件··溫度18 °C-26°C，相對濕度30%-70%，12小時人造光和12小時黑 5 暗。每日監測溫度和相對濕度。 使所有動物自由接觸Harlan Teklad Rodent Diet®，或 者任何其他可接受的Lab Chow，每日檢查並且按需要添 加或替代。將喂食器設計成減少污染、橋接和雜散的類 型。動物可自由飲水。 10 致敏方案：將小鼠在第0、7和14天，通過腹膜内注 射與4mg氩氧化鋁Al(OH)3凝膠混合的1〇 印清蛋白 (OVA)在0.2 ml無菌鹽水中的懸浮液來敏化。在給每只小 鼠腹膜内注射前一小時製備此懸浮液。第21天時對動物 準備好進行OVA攻擊。 15 抗原攻擊：第21天使動物與氣霧化0VA接觸（5〇/〇 w/v在無邊鹽水中）2〇分鐘。此氣霧劑通過pApj-Master喷 霧器來產生’其出口與裝有動物的小Plexiglas⑧室相連。 第22天時進行支氣管肺泡灌洗。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 性能研究方法··第24天，在與氣霧〇VA接觸後72 20小時，將一單獨組的動物用胺基甲酸乙酯(0.15-0.2 g/kg)麻 醉’暴露出氣管並且插套管。將肺用2 X 0.5 ml含0·1% EDTA的無Ca2+和Mg2+的Hank’s平衡鹽溶液(HBSS; Gibco，Grand Island，NY)灌洗。30秒後通過溫和吸引回 收灌洗液並且將每只動物的灌洗液彙集。將樣品在5〇c、 -82- 本紙張尺度適用甲國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐） 1296926 A7 __________B7 五、發明說明（81) 2000 rpm下離心15分鐘。離心後，將各樣的上清液於_ 80 C下冷康儲藏。將所得的沈澱物重新懸浮於〇.5 ml含 〇·1% EDTA的HBSS中。分別使用Technicon H1和細胞載 玻片測定總的細胞和嗜曙紅細胞。 5 測試/對照品的給藥：在OVA攻擊前30-60分鐘，使 用200 μΐ移液管將測試品和載體定量製劑一次地鼻内給與 每只麻醉的小鼠。使每只動物在每個時間點接收50 μΐ (25 μΐ/鼻孔）。處死方法：服過劑量胺基甲酸乙酯致生命結 束。 10 統計學分析：使用ANOVA接著進行多重比較測試來 比較來自各種處理組的總細胞和嗜曙紅細胞數目。 小鼠實驗的結果示於表8中。在進行卵細胞敏化小鼠 中的氣霧劑卵清蛋白攻擊之前30分鐘將化合物給藥。氣 霧劑攻擊後24小時收穫BALF。Ν=6/組。3·(4·吡啶基胺 15 基)-1Η-吲哚-2-甲酸以劑量依賴性的方式明顯抑制BALF 中的IL-4和IL-13含量。 表8 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 小鼠中的邀冷變應原-誘導的肺炎。3-(4-吡啶基胺基)-1Η-20 吲哚-2-甲酸（實施例28)對支氣管肺泡灌洗液(BALF)細胞 因數的作用效果 -83- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（21〇 X 297公釐） A7 B7 1296926 五、發明說明（82)
化合物 劑量(mg/kg) (鼻内） IL-4 pg/ml (土 SEM) IL-13 pg/ml (士SEM) 裁體 — 1220.4±207.7 120.2±19.8 環孢菌素A 30 144.4±35.7 15.9±2.4 實施例28 30 123.9±48.7 15·1±7·1 實施例28 10 414.3±115.5 59.9+12.7 實施例28 3 835.1+40.4 ND pg=皮克；ND-沒有檢測到 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 圖1匯總了一個具代表性實驗(三個實驗中的一個）的 結果’其巾除BALF細胞目數外，制定_嗜曙紅細胞 5增多。第〇、7和14天’將小鼠(每組12只動物）用〇2ml 含5〇yg/ml卵清蛋白的AIOH3水凝膠懸浮液(2% A1〇H^敏 化。第21天，在用5%印清蛋白（〇VA)進行2_η攻擊前 的30min，給小鼠施用各種劑量的3_(4_錢基胺基)_1Η· ♦朵-2-甲酸(實施例28) : 3、10和3〇mg/kg。包括糖皮質 10激素布地縮松（l〇mg/kg)作為對照。所有化合物以在〇·5% 甲基纖維素/0·2〇/〇吐溫80中給與，鼻内給藥(5_〇〇va 攻擊24小時後，對小鼠進行支氣管肺泡灌洗並且通過 EUSA測定几-4和IL]3含量。對另一組的小鼠進行支氣 管肺泡灌洗(處理後72小時），以測定嗜曙紅細胞的數目 15 (*ρ<0·05，**ρ<0·01)。如圖 1 所示，3 (4魏基胺基 +朵-2-甲酸(實施例28)明顯抑制了 BALF中的變應原_誘 導的IL-4和IL-13含量，各種細皰因數的ED5g值大約為 -84- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公^- 1296926 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 五、發明說明（83) 10mg/kg。雖然3-(4-吡啶基胺基)-1Η-吲哚-2-曱酸是相對差 的IL-13邀分抑制劑，但3-(4-吡啶基胺基)-1Η-吲哚-2-甲 酸對IL-13的抑制效果幾乎與邀冷對IL-4的抑制效果同樣 好。 5 表9匯總了 3-(4-吡啶基胺基)-lH-吲咱-2-甲酸(實施 例28)和本發明各種其他化合物對BALF中的OVA-誘導 IL-4和嗜曙紅細胞增多的作用效果。除非有另外注釋，在 OVA攻擊前30分鐘將化合物一次性地鼻内給藥 (30mg/kg)。OVA攻擊後24小時，收集BAL流體並且通 10過標準ELISAs測定細胞因數水平。從動物的平行試驗 中’ 48小時時收集BAL並且測定嗜曙紅細胞的數目。測 試3-(4-吡啶基胺基)-1Η-吲哚-2-甲酸的各種鹽，包括馬來 酸鹽、甲磺酸鹽（EF ,實施例146)和鉀鹽(ZD ,實施例 146)，結果匯總在表9中。 15 表9 小鼠中的邀冷變應原-誘導的肺炎： 3-(4-吡啶基胺基)-1Η-吲哚-2-甲酸（實施例28)的不同鹽和 類似物的禮冷效果匯總、 實驗# 化合物# 途經 劑量 (mg/kg) 24小時時的 IL-4 % ctl 72小時時的嗜 曙紅細胞^iL 109 實施例24A (馬來酸鹽） i.n. 30 3 8 130 實施例24A (馬來酸鹽） i.p. 12 50 ----- -85- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐）
[296926 A7B7 五、發明說明（84) 140 實施例28 i.n·(馬來酸鹽） 12 50 沒有做 146 實施例28(馬來酸鹽） ι.η. 10 57 53 146 實施例28(馬來酸鹽） ι.η. 30 34 28 146
實施例28-EF ι.η. 30 27 42 146
實施例28· ZD ι.η. 30 49.6 37.4 115 實施例28 (馬來酸鹽） ι·ρ· 30 43 沒有做 109 實施例90 ι.η. 30 37 71 i.n.=鼻内；i.p.=腹膜内；ρ·ο·=σ廣（經口） 表10匯總了 3-(4·吡啶基胺基)-1Η-吲哚-2-甲酸對小鼠 中OVA誘導IgE的作用效果。本研究中使用雌性小鼠(5-8 5 周齡，Balb/c，Charles River)。將卵清蛋白（Sigma)吸附到 氫氧化鋁吸附性凝膠(Inter)中並且在實驗的第0天和第7 天腹膜内注射10 pg/〇.2ml/小鼠。地塞米松(Sigma)和3-(4-吡啶基胺基）-1Η-吲哚-2-甲酸（實施例28)是在 10%HPCD(羥基丙基-β-環糊精，Aldrich)中。從第6天至 10 第14天，每天一次給小鼠腹膜内注射地塞米松 (10mg/kg)、3-(4-吡啶基胺基)-1Η-吲哚-2-甲酸（實施例28) (3 和 10mg/kg)和 10% HPCD(0.2 ml/小鼠）。第 15 天從它們 中取血。通過標準ELISA使用鹼性磷酸酯酶標記的山羊 抗-小鼠IgE抗體測定血清卵清蛋白特異性IgE含量。通過 -86- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐） 計 線 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1296926 A7 B7 五、發明說明（85) 對測試血清進行系列稀釋並且與載體對照比較’測定抗-OVA效價。 表10 5 通過3-(4-吡啶基胺基)-1Η-吲哚-2-甲酸(實施例28)抑制小 鼠中的變應原特異性IgE抗體 處理 抗-OVA IgE SE 載體 150.8 52.9 地塞米松 27.4 9.4 實施例 28 (3mg/kg) 41.8 8.5 實施例 28 (10mg/kg) 45.6 15.7 還研究3-(4-吡啶基胺基)-lH-吲哚_2_甲酸對大鼠中 10 OVA-誘導肺炎的作用效果。大鼠模型非常類似於前面所 描述的小鼠模型。簡單地說，使用Haczku等描述的肺炎 模型，對其做很小改良（Haczku A.等，Immunology， 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 (1996)，88，247-251)。在第1、2和3天，通過腹膜内注 射lml含卵清蛋白（lmg)和Al(〇H)3 (lOOmg)的懸浮液，將 15體重160-20() g的雄性棕色挪威大鼠敏化。三周後，用載 體和藥物經腹膜内注射對大鼠進行處理。一小時後，在一 10升的Plexiglas室中，其與具有i升/分鐘載氣流的 DeVilbiss (Ultra-NEB®99)噴霧器相連，用印清蛋白吸入劑 (1%溶液，10mg/ml無菌鹽水液)攻擊大。 -87- Ϊ296926
發明說明（86) 圖2中，將3和比咬基胺基)孤啊、冬甲酸對經過 ^蛋白敏化和攻擊⑽色挪威大鼠的嗜曙紅細胞流入支 ^管肺減體中的劑量反應研究結料製成棒形圖。還包 單劑量的環_素A (CsA)和地塞㈣(Dex)作為參照標 仏〜3-(4-吡啶基胺基)_1H•吲哚_2-甲酸，通過腹膜内注射 給藥，以劑量依賴性的方式抑制了嗜曙紅細胞的流入，其 ED50 為 1〇 〇7mg/kg 〇 小鼠中體液免疫的邀玲模型 10 15 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 20 本試驗的目的為測定IL_4抑制劑對正常抗體應答的作 用效果，已知正常抗體應答是依賴於可調節B細胞以形成 抗體的T辅助細胞。此模型證明了 3-(4-u比啶基胺基)_1Η· ’哚-2_甲酸對小鼠普通免疫抑制活性的作用。 使用雌性Balb/c小鼠，每只重大約20-25 g，鼠齡54 周。每個實驗使用30只小鼠。 小鼠的免疫接種： 免疫接種所用的抗原是與匙孔血藍蛋白（KLH)綴合的 2,4·二硝基苯基φΝΡ)或2,4,6-三硝基苯基(TNP)。將此抗 原（100 pg/小鼠）吸附到輔劑（膠體氫氧化鋁）中並且以總體 積0.2-0.3 ml i.p.施用給動物。本文所描述的用於產生免疫 應答的方法類似于其他研究者所使用的方法（參見，例 如，Wilder，J· A·，等，J· Immunol·，（1996、，156，146-152 ;和 Leenaars 等，Tmmunologv，Π997、，90，337- -88-本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1296926 A7 ____B7 五、發明說明（87 ) 343) 〇 方案和化合物處理： 將動物隨機分成5組，每組6只小鼠。第1組是陽性 5 對照組，第2、3和4組是測試化合物組，第5組是載體 對照組。化合物可以通過ί·η·、ί·ρ·、ρ·〇·、s.c·、i.m·或ί·ν 給藥。通常來說，每日給小鼠施用本發明的化合物，從免 疫接種前的一至二天開始，直至免疫接種後的7天(9-1〇 次）。免疫接種後的第8天，將小鼠通過在麻醉(異碟氟燒) 10 條件下的心臟穿刺術取血，並且將血清樣品在-20。(：下儲 藏’直至需要進行抗體分析。在實驗結束時，將麻醉的動 物用過劑量的戊巴比妥鈉處死。使用ANOVA進行資料的 統計學分析。 表11中所示的結果證明了 3-(4-吡啶基胺基)-ΐΗ,卜朵_ 15 2-甲酸禮冷的Th2細胞因數選擇性。給小鼠免疫接種半抗 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 原載體共輛物，DNP-KLH並且以如上所述的同型特異性 方式測定抗-DNP抗體含量。用3-(4-吡啶基胺基)-1Η^引 哚-2-甲酸處理可引起IgGl抗-DNP抗體含量（部分地對 Th2，IL-4-依賴型）的明顯減少，但對IgG2a抗體含量 20 (Th卜1FN_丫依賴型）沒有明顯作用。本研究中作為對照使 用的10mg/kg的CsA可同時抑制][gG2a和IgGl抗體。 表11 -89- ^紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297 ^7 1296926 A7 B7 五、發明說明（88) 3-(4-吡啶基胺基)-1Η-吲哚-2_曱酸(實施例28)對不同的同 型抗_半抗原抗體的不同效果 動物# IgG2a抗-DNP抗體效價 IgGl抗-DNP抗體效價 載體 實施例28 載體 實施例28 1 31.40 30.59 123.14 72.42 2 30.64 38.60 149.30 185.22 3 38.46 14.09 205.93 19.83 4 24.21 17.45 236.97 40.19 5 27.64 30.21 158.70 83.11 6 - 27.98 132.12 37.83 平均+/_SE 30.47+Λ2.37 26.49+/-3.72 167.69+/-8,19 73.KH-/-2438 抑制 - 13% - 56.5% 5 綿羊哮喘模型： 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 以下的邀冷模型證明了能夠調節Th2細胞因數(特別 是1]-4)的化合物也能夠禮冷改善肺功能和減少肺的抵抗 力。以下的肺功能研究在對發妨過敏的綿 羊中進行，按以前Abraham (Abraham，W· M·，"過敏反應 10和變應性疾病”中的"變應性支氣管收縮的綿羊模型"， Kay ’ a.B.，Ed· Blackwell Science - Oxford，（1997)， ^454055)中所描述的方法。先前已證明了本研究中所用 的綿羊對氨甲醯膽鹼接著用磋舫蠤提取物吸入攻擊具有早 期和晚期氣管反應和氣管反應性過強。簡單地說，測定了 -90- 本紙張尺度適用中面1：豕係準(cns)a4規格⑴x297公釐） 一 1296926
五、發明說明（89) 跨肺壓力、肺抵抗力（RL)、特異性肺抵抗力（SRl氣管反應 性過強，氣管反應性）。 方法 5 動物準備：所有動物對豬細蟲抗原吸入攻擊同時顯示 早期和晚期氣管反應。從外周大腿靜脈或頸靜脈中獲得靜 脈血樣品(〜5 ml)，以做藥物動力學資料。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 氣管力學測定：將未鎮靜的綿羊以俯衝方向限制在拖 車中’使其頭不能移動。用2%利多卡因溶液經鼻局部麻 10醉後，將一氣囊式導管穿過一個鼻孔伸進到下部食管中。 用一帶膠管管頭的氣管内管穿過另一個鼻孔來培育 (incubate)動物，使用一彈性光學纖維支氣管鏡作為導向裝 置。（將氣管内管的膠管管頭充氣，僅用於測定氣管力學 並且在氣霧劑攻擊期間防止過度的不適。此過程對氣管力 15學沒有影響）。用食管氣囊式導管(填充有一毫升空氣)估測 胸膜壓力，其中所說的氣囊式導管位於離胃食管接合5_ 10cm處。在此位置上，末端呼氣胸膜壓力的範圍為_2至_ 5cm HsO。當放入氣囊後，將其固定以便它在實驗的過程 中保留在應有的位置上。用一穿過並處於氣管内管末梢遠 20 端位置的側孔導管（内部尺寸為2.5 mm)測定氣管中的旁 壓。用分壓轉導器導管系統測定跨肺壓力，即氣管壓力和 胸膜壓力之間的差。在測定肺抵抗力（rl)時，將氣管内管 的近側端連接一呼吸描記器（Fleisch，Dyna Sciences，Blue
Bell ’ PA)。將氣流的信號和跨肺壓力記錄在示波器記錄儀 -91- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐） 1296926 A7 B7 10 15 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 20 五、發明說明（9〇) 上，將此記錄儀與在線計算用的電腦相連，該電腦用於由 跨肺壓力計算RL、呼吸體積(通過數位積分獲得)和流量。 分析5-10次呼吸來測定rl。在測定rl後立即在恒定體積 身體體積描記器中測定胸的氣體體積(Vtg)，獲得特異性肺 抵抗力（SRL = RL · vtg)，以 L X cm H20/LPS 計。 氣霧劑傳遞系統：使用一次性醫用喷霧器 (RaindropR，Puritan Bennett)形成豬蛔蟲提取物（用磷酸鹽 緩衝的鹽水稀釋20 : 1 ; 82,000 PNU/ml)的氣霧劑，其中 所說的醫用喷霧器可產生具有3.2 μπι直徑質均（mass median)空氣動力學直徑的氣霧劑（幾何標準偏，丨9)，由7 階Andersen級聯碰撞機(impact〇r)測定。將喷霧器中的喷 出霧導入一塑膠t-物件中’其一端與Harvard呼吸器的吸 氣口相連。為更好地控制氣霧劑傳遞，在Harvani呼吸器 系統吸氣迴圈開始時，啟動一由電磁閥和壓縮空氣(2〇 psi) 源組成的劑量計Is。以500 ml的潮氣量和20次呼吸每分 鐘的速率傳遞氣霧劑20分鐘。在對照和藥物試驗中，用 相等劑量的抗原（400次呼吸)攻擊每只綿羊。還用如上所 述的喷霧器系統產生氨甲醯膽鹼氣霧劑。 吸入的氨甲醯膽驗的劑量反應曲線：製作氨甲醯膽鹼 劑篁反應曲線，在吸入緩衝液後且在濃度遞增的氨曱醯膽 驗溶液(0·25ο/〇 ’ 0·5ο/〇，1·〇〇/0，2·〇〇/。和 4 〇% w/_ 1〇 次呼 吸的每次傳遞後，應當立即重復SRl的測定。為評價氣管 反應性’由劑量反應曲線計算增加SRl斗⑻。/。超過緩衝液 值（即pcuoo)時累積的氨甲醯膽鹼的量，以呼吸單位(BU) -92-
Ϊ296926 A7 B7 五、發明說明（91) 叶。一個呼吸動物單位為1% W/V氨甲醯膽鹼溶液的一次 呼吸。 實驗方案 5 在抗原攻擊之前1-3天，獲得對氣霧劑氨甲醯膽鹼的 基線劑量反應曲線。必要時獲得特異性肺抵抗力（SRL)至少 2周的基線值，然後在抗原攻擊前30分鐘，給綿羊施用鹽 火(對照）或樂物（劑量為3mg的測試化合物，3-(4-吼咬基 胺基)-1Η-吲哚-2·甲酸(實施例28)，在NaOH/鹽水中）。在 1〇 這些研究中，將化合物3-(4-吡啶基胺基)-1Η-吲哚-2-甲酸 (實施例28)通過氣霧劑給藥。然後用豬蛔蟲抗原攻擊綿 羊。在攻擊後即刻、攻擊後1-6 h内的每小時和攻擊後 6·5_8 h内的每半小時，獲得SRL的測量值。在抗原攻擊後 24h獲得SRL的測量值，接著獲得24 h攻擊後氨甲醯膽鹼 15 劑量反應曲線。在初期的研究中，將藥物試驗與動物的歷 史對照資料進行比較。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 在評價3-(4-吡啶基胺基)-1Η-吲哚-2-曱酸(實施例28) 時’首先獲得SRL的基線值，然後給綿羊施用載體或藥物 (3mg/kg)，以在PEG400載體中的氣霧劑的形式給藥。再 20 測定SRL並且在給藥之後30分鐘將動物用潜妨蠤抗原氣 霧劑攻擊。在攻擊後立刻、攻擊後1-6小時内的每小時和 攻擊後6.5-8小時内的每半小時，獲得SRL的測量值。 圖3中所不的結果顯不了 2只綿年每組的平均值 土sem。圖3A描繪了 3-(4-吡啶基胺基)-1Η-吲哚-2-甲酸(實 -93- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1296926 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 五、發明說明（92) 施例28)對抗原-誘導的早期和晚期支氣管應答的作用效 果。在抗原氣霧劑攻擊前30分鐘施用3-(4-吡啶基胺基)_ 1H-弓卜朵-2-甲酸(實施例28) (3mg/kg)。它不影響特異性肺 抵抗力（SRL)的急性增加，但相比於對照，它阻斷了晚期應 5 答。 圖3B描繪了 3·(4-吼咬基胺基弓卜朵_2_甲酸(實施 例28) (3mg/kg)對攻擊後氣管反應性的作用效果。在對照 試驗中，抗原攻擊後PC4〇〇(引起SRL 400%增加率的氨甲醯 膽鹼的值）降低（即，綿羊變得反應過強）。用3_(4_吡啶基 10胺基MH-吲哚-2_甲酸（實施例28)處理防止了這種效果。 所有的值均為2只緯羊的平均值：tSE。將應答與歷史對照 值(對照)和載體對照進行比較。 將通過以下化合物的實施例對本發明做進一步的說 15明，這些本發明所用的化合物的實施例是因舉例說明目的 而提出的，而不以任何方式限制本發明的範圍。 复施例（總論） 避表徵所用的一般性分析拮術：使用各種分析技術 2〇來表徵本發明方法中所用的化合物，這些方法包括以下： 短語π真空濃縮或旋轉式蒸發”表示使用Buchi裝置在 20-60oC和15-30托下用KNF Neuberger隔膜泵進行旋轉 式蒸發。室溫簡寫作，，rt，，。 製備型反相HPLC在Rainin SD1裝置上使用Dynamax -94- 本紙張尺度週用中國國家標準(〇^)八4規格（21yx297公楚 1»»-------
1296926 A7 _ B7_____ 五、發明說明（93) C18柱(60 A球形13μπι顆粒）來進行。流動相由乙腈/緩衝 液混合物組成，緩衝液由蒸餾水、乙腈和三氟乙酸(TFA) 以實驗過程中所列的比例組成。 在 Varian Gemini 300、Unity 300、Unity 400 或 Unity 5 500分光計上記錄lH NMR光譜，化學位移（δ)以ppm 計，相對於四甲基矽烷(0·00 ppm)或氣仿(7·26 ppm)作為參 照來報告。信號指定為s(單峰），d(雙重峰），t(三重峰）， q(四重峰），p(五重峰），m(多重峰），br(寬峰）。 使用預填充型 Isco 或 Biotage cartidges (32-63μιη，60 10 A)，在矽膠上進行色譜法（閃蒸)純化。 在Finnigan MAT型TSQ 700質譜儀系統通過120 eV 下的化學電離使用甲烷來獲得質譜(MS) (CI，120 eV)。將 指定為(M++1)的質子化的分子離子在圓括號中給出。 液相色譜與質譜分析(LC/MS) : HPLC :柱·· 50 X 4.6 15 mm，Hypersil BDS C18 3u。流動相：A=含 0.05%三氟乙 酸的水，B=含0.05%三氟乙酸的乙腈，流速=ι·〇 mi/min， 梯度=3分鐘内5%B至1〇〇%Β，停留至100% 2分鐘。質 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 谱法·來自 Micromass 的 Flight Mass Spectrometer 的 Let API LC/Orthogonal Time 和 Masslynx Data System。電離模 20式=電喷霧(ESI)，源溫度= 120°C，去溶劑化溫度=25〇°C， 錐形電壓=25伏特，取數質量範圍w/z從145至1〇〇〇。測 定質子化分子離子(M++1)的值。 -95- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1296926 A7 B7 五、發明說明（94)
流程A ’步驟A1 : 3-胺基-6-二氣甲基-ΙΗ-βΙρ朵-2-甲 5 酸乙酯 在氮氣條件下，於115-120°C攪拌和加熱2-氟-4-(三 氟甲基）苄腈（1·〇 g，5.29 mmol)、甘胺酸乙酯鹽酸鹽 (886mg，6.3 mmol)、碳酸鉀（1.46 g，6.3 mmol)和 1-甲基· 2-吡咯烷酮（20 mL)的混合物。6小時锋添加叔-丁醇鉀 10 (700mg，6.2 mmol)，並且常溫下攪拌2h。在冰/水中停止 反應，用乙醚萃取此含水混合物，用水洗滌萃取液並且用 硫酸鎂乾燥。過濾並且真空濃縮，得到粗產物。將粗產物 在矽膠(10 g，Sepack柱)上色譜法純化，用二氣甲烷作為 洗脫劑，得到332mg (23%)標題化合物。經TLC(矽膠，二 15 氣甲烷)鑒定與US專利5，189,054中公開的化合物相同。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 實施例2
-96- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1296926 A7 B7 五、發明說明（95) 10 15 流程A，步驟八1:3-胺基-6_氣-111-吲唼_2-甲酷^旨 在氮氣條件下，攪拌並加熱2,4-二氟苄腈（i.i4g，8.2 mmol)、甘胺酸乙酯鹽酸鹽（L5mg，10·7 mmol)、破酸斜 (3.4 g，24.6 mmol)和1-甲基-2-吡咯烷酮（20 mL)的混合 物。2h後，使反應冷卻至40°C並且添加叔-丁醇鉀 (300mg，2.7 mmol)。攪拌反應物lh，然後再添加叔-丁醇 鉀(500mg，4.4 mmol)。冷卻至室溫過夜，將反應混合物傾 在冰上。在反應燒瓶中加水以便溶解固體並且添加到反應 停止。濾掉沈澱的棕色固體並且用乙酸乙酯萃取濾液。用 水(2x’s)、鹽水洗滌此萃取液並且經過硫酸鎂乾燥。過濾 並且真空濃縮得到殘餘物，將其用二氣甲烧研製，得到固 體。收集此固體，將濾液濃縮並且在矽膠（10 g，Sepack 柱）上色譜法純化固體，用二氣甲烷作為洗脫劑。收集合 適的級分並且濃縮，獲得固體。與前面收集的固體合併， 得到 136.7mg (7.5%)標題化合物：MS 223(M+H)。 實施例 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 NH.
流程B : 3-胺基-5-氣-1H-吲哚-2-甲酸乙酯 2〇 步驟B1 : 2-胺基-N士丁篡-5-氣笨甲醯胺 -97- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1296926 A7 _ B7 五、發明說明（96)
將2-胺基-5-氣笨曱酸(ι·2ΐ g，1〇 mm〇i)和N-羥基琥珀 醯亞胺（1.38 g，12 mmol)的二氣甲烷（12 mL)溶液攪拌並且 冷卻至0°C。逐滴添加1M的二環己基碳二亞胺的二氣甲 烷（12 mL，12 mmol)溶液，並且在〇乞下攪拌ih。通過注 5射器添加叔丁胺（1.74 g，23.79 mmol)並且常溫攪拌過夜。 過濾此反應混合物並且用碳酸氫鈉水溶液洗滌濾液。用 MgS〇4乾燥有機相並且在矽膠上色譜法純化，用4%乙酸 乙酯/二氣甲烷洗脫，得到1·74 g標題化合物：MS 227(M+H)，m.p· 126-127°C。 10 步lgu(4-氣_2H基)-2,2.2三氣乙醯胺
將2-胺基叔丁基_5_氣苯甲醯胺(5.07 g，22.36 mmol) 的二氣甲烷(200 mL)溶液攪拌並且冷卻至〇。(：，並且逐滴 添加三氟乙酸酐。常溫攪拌過夜並且減壓濃縮。在氣仿和 15 碳酸氫鈉水溶液之間分配，並且收集有機層。用MgS04 乾燥萃取液，過濾並且蒸發溶劑。將殘餘物用庚烷研製並 且收集白色固體，獲得4·80 g(82%)標題化合物：MS 249(Μ+Η)，ηι·ρ· 105_107oC。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 20步驟B3 : ((4-氣-2-氰策某W2么2_三荦r△醯基)胺基V乙酸 乙酯 在氮氣條件下，將冰(4-氣_2-氰基-苯基)-2,2,2-三氟乙 醯胺(4.80 g，19.31 mmol)的二甲基曱醯胺(50 mL)溶液攪 拌並且冷卻至〇°C，並且添加NaH (0.7 g，29.1 mmol)。將 -98- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4嶷格（210x297*^7 1296926 A7 B7 五、發明說明（97) 反應物在常溫下攪拌lh並且借助注射器添加溴乙酸乙酯 (4·3 mL ’ 38·77 mmol)。在50°c下攪拌過夜，然後將反應 物傾在含水氣化銨-乙酸乙酯。用鹽水洗滌有機層（2x，s)， 經過MgS〇4乾燥，過濾並且蒸發，獲得油。將油經色譜 5法純化，用20%乙酸乙酯/庚烷然後用30%乙酸乙酯/庚烷 洗脫。濃縮合適的級分並且獲得6〇 g固體，335(M+H)， m.p· 71-73〇C 〇 免弊B4 : 3_胺茱-5-氣-1·(2·2·2-三氟_乙醯篡νιΗ_+朵-2-甲 10 酸乙酷 在氮氣條件下，將[(4-氣_2_氰苯基)-(2,2,2-三氟-乙醯 基)胺基]-乙酸乙醋(93·34 g，10 mmol)的四氫吱喃(20 mL) 溶液攪拌並且冷卻至〇〇C，並且逐滴添加iM的叔-丁醇鉀 的四氳呋喃溶液(12 mL，12 mmol)。常溫下授拌反應物2 15 h，然後在氣化銨水溶液/乙酸乙酯之間分配。分離有機 層，經過MgS〇4乾燥，過濾並且濃縮獲得固體。將固體 用庚烷研製，過濾固體並且空氣乾燥，獲得2.86 g (86%) 標題化合物：MS 335(M+H)，m.p· 249-251°C。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 2〇 步驟B5 : 3-胺基-5-氦-1H-吲哚-2-甲酸乙酯 將3_胺基-5-氣-l-(2,2,2-三氟-乙醯基)-1Η-吲呼、-2-甲酸 乙酯（3.34 g，10 mmol)、乙醇(50 mL)和石炭酸鉀（1 50 g， 10.85 mmol)的混合物在70°C下加熱並且攪拌。ι·75 h 後，加水(20mL)，並且在另一個小時之後再添加碳酸鉀 -99- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐） 1296926 A7 B7 五、發明說明（98 ) (0.58g，4.20 mmol)。冷卻反應混合物至常溫並且在水/乙 酸乙酯之間分配。分離有機層，經過MgS04乾燥，過滤 並且濃縮，得到1·70 g固體形式的標題化合物。MS 239(M+H) 〇
經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 流程B : 3-胺基-5-氟·1Η·吲哚_2_甲酸乙酯 10 步驟Β1: 2-胺基·Ν-叔丁基-5-氣苯甲醢胺 將2-胺基-5-氟苯甲酸(7.75 g，50 mmol)、Ν_經基破J白 醯亞胺(6·9 g，60 mmol)和二甲基胺基吡啶(ι·〇 g)的二氣甲 烷(200 mL)溶液攪拌並且冷卻至〇〇〇逐滴添加1M的二 15環己基石厌一亞胺的二氣甲统(60 mL，60 mmol)溶液，並且 在〇°C下攪拌lh。通過注射器添加叔丁胺(2〇 mL，19〇.3 mmol)並且在〇。(：下攪拌3 h然後在常溫下攪拌過夜。傾 在石夕膠墊上並且用5%乙酸乙酯/二氣甲烧洗脫。合併相似 的級分並且濃縮獲得粗固體。將固體用庚烷研製並且過濾 20 獲得 7.7g (73%)標題化合物：MS 211(m+H) , m.p. 77- 78〇C。 -100- 不離錢週用中關家W(⑽)A4規格⑵υ χ 297公----^ 1296926 A7 B7 五、發明說明（99) 按照實施例3(步驟Β2-Β5)的方法，獲得3—胺基一5一 氟-1Η-吲哚-2-甲酸乙酯：MS 223(M+H) , TLC(矽膠，4%乙 酸乙S旨/二氯甲烧），Rf= 〇. 50。 5 實施例5 10 15
流程B ’堂發担: 3-胺基·1Η-<4、_2-甲酸叔丁酯 按照實施例3(步驟Β3-Β5)的方法，但開始時用Ν-(2-氰基-苯基)-2,2,2-三氟乙醯胺（其合成見又卩11!〇1^116〇^111· 1981，18，（2)，185_95)和溴乙酸叔丁酯，獲得標題化合 物：MS 310(M+H)，TLC(石夕朦，二氣甲烧/甲醇，7: l)Rf=0.38 〇 實施例6 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製
流程B，步驟B1-B5 : 3-胺基-5-甲氣基-1H-吲哚-2-甲 101- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐） 1296926 A7 B7 五、發明說明（100) 酸叔丁酯 按照實施例3的方法，但開始時用2-胺基-5·甲氧基苯 甲酸，並且在步驟B3中使用溴乙酸叔丁酯代替溴乙酸乙 酯，獲得標題化合物：MS 263(M+H)，m.p. 146-147°C。 5 實施例7
逾程g二步輝B3二B5 : 氟-1H_，口朵-2-甲酸叔 10 丁酯 按照實施例5的方法，但開始時用3h(2_氣基苯 基)-2,2,2-三敗乙酿胺（其合成見j Flu〇rine198卜 15 18，（2)，185-95)和漠乙酸叔丁g旨，獲得標題化合物：MS 251(M+H)，TLC(石夕膠，二氣甲烷/甲醇，7 :收㈣％。 實施例8 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製
?衷程C : 3_胺基-6-笨基-11^引0朵_2_甲酿 -102- 酯 用 適 度 尺 張 紙 本 標 家 國 國
格 規 4 )A 釐 公 97 1296926 A7 B7 五、發明說明（101) 步驟Cl : N-(5-氣-2-氰茉某）&硫峡 將2-胺基-4-氣+腈(2〇·〇 g，131 mmol)和乙酸針（80 mL)的混合物在蒸汽浴上加熱40 min。加水(300 mL)並且 攪拌lh。過濾所得的固體，用水洗滌並且在4〇。(：下真空 乾燥，獲得22.9 g產物。將12.8 g樣品從乙醇-乙酸乙酯 中重結晶並且獲得9·83 g標題化合物：MS 195(M+H)， TLC (石夕膠，乙酸乙酯/庚燒1 : 1) 0 38。 10 步驟C2 : N-(2-氰苯基-5-装基）乙醢脍 15 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 將N-(5-氣-2_氰苯基)-乙醯胺(〇·389 g，2.0 mmol) '苯 基硼酸(0.366 g，3·0 mmol)、乙酸鈀(π) (8.8mg)、2-(二環 己基膊基)聯本(28.0ing)、敗化卸(〇·348 g，5.99 mmol)和四 氫呋喃（5 mL)的混合物在常溫下攪拌過夜。將反應混合物 傾在碳酸鉀的水溶液(30 mL)中並且用乙酸乙酯萃取(2X25 mL)。合併萃取液並且用水和鹽水洗滌，經過MgS04乾燥 並且真空濃縮，獲得褐色固體。將此固體用乙醚研製並且 收集0.365 g (77%)灰白色粉末狀的標題化合物：Ms 237(M+H)，m.p. 168-170°C。 20 步驟C3 : 3-胺基-1·(乙醯基V6-笑篡吲唼甲醢乙 將N-(2-乳本基-5-本基）乙酿胺（ΐ5·〇 g，63.5 mmol)的 1-甲基-2-吡咯烷酮（150 mL)溶液冷卻至4〇c並且逐滴添加 1M的叔-丁醇鉀的四氫呋喃溶液(77.0 mL，77.0 mmol；)。 -103- 1296926 A7 B7 五、發明說明（102) 將反應物在0°C下老化30 min然後添加溴乙酸乙酯（12.0 g ’ 72·1 mmol)。室溫下攪拌過夜並且將反應物在水(600 mL)中停止反應。用乙醚萃取此含水混合物(3χ 300 mL)， 合併萃取液，用水和鹽水洗滌此萃取液並且經過MgS04 5 乾燥。過濾並且真空濃縮萃取液，獲得20.6 g黑色油。在 W^ers Prep Pak矽膠柱(500 g)上色譜法純化並且用分別為 5%、10%和20%乙酸乙酯/二氣甲烷的步階式梯度洗脫。 濃縮含起始物料的級分並且獲得黃色固體。將此固體用乙 醚研製並且過濾，得到2.61 g白色固體。 10 將上述得到的濾液與色譜法中分離的含有產物的級分 合併並且濃縮得到16.2 g黑色油。將此油在Waters Prep Pak矽膠柱上色譜法純化並且用分別為2%、5%和10%乙 酸乙酯/二氣甲烷的步階式梯度洗脫。合併相似的級分並 且濃縮獲得7.33 g標題化合物：MS 323(M+H)，TLC(矽 15 膠，20%乙酸乙酯/二氣甲烷），尺严〇石7。 步驟C4 : 3-胺某-6-茉某-1H-吲哚-2-甲酸乙酯 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 將3·胺基小（乙醯基)·6-苯基-1H-吲哚-2·曱酸乙酯（7.3 g，22.6 mmol)、20%含水碳酸鉀（1〇〇 mL)和乙醇（1〇〇 mL) 20 的混合物回流1·75 h。使反應物在常溫下放置過夜，然後 用水(500 mL)稀釋。在〇°C下冷卻並且收集紫色固體。將 固體用水洗滌並且在40°C下真空乾燥，獲得5.7 g紫色固 體。將此固體用二氣甲烷(40 mL)研製，過濾並且用二氯甲 烷和乙酸乙酯洗滌固體，然後在40°C下真空乾燥，獲得 -104- 本紙張尺度適用中國國冢標準(CNS)A4規格（210x297公爱）~ 1296926 A7 B7 五、發明說明（1〇3) 2·5 g 標題化合物固體：ESI/MS 281 (M+H)，HPLC ·· Rt= 1·83 min·，m.p· 181_183〇C。
經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 D · 3-啤基-5,6-二甲氣基·1Η·$1。朵-2·甲酸乙酷 = (g基-4,5-二甲氧基-茉基胺基)-乙酸乙酯 10 在N2下，將2-胺基·4,5-二甲氧基苄腈(2.0 g，12.25 mmol)懸浮在乙醇(5〇 mL)中，並且以一份的形式添加碳酸 氫納(3.09 g，36.78 mmol)。通過注射器緩慢添加溴乙酸乙 S旨(2.72 mL ’ 24·5 mmol)，然後添加蛾化納（l〇mg)。將反應 物在65°C下加熱，然後冷卻至常溫。過濾所得的固體並 15且用乙酸乙酯洗滌以溶解有機物。將濾液濃縮，獲得〇·66 g (23%)標題化合物；MS 265(Μ+Η)。 步驟D2 :上胺基_5,6_二甲氫某_1Η-吲哚_2_甲酸乙酷^ 在Ν2下攪拌(2-氰基-4,5-二甲氧基-苯基胺基乙酸乙 20酯（0·124 g，〇·47 mmol)的四氫呋喃（6 mL)溶液並且逐滴添 加1M的叔·丁醇卸的四氫吱喃溶液（ο·% mL，0.66 mmol)，常溫下攪拌i h並且傾入冰/水中。用乙酸乙醋 -105- 1296926 A7 B7 五、發明說明（ι〇4) 取，經過MgS04乾燥萃取液，過濾並且真空濃縮成固 體。在Sep Pak矽膠柱(2 g)上色譜法純化，用二氣甲烷、 然後用2:1庚烷-乙酸乙酯洗脫。合併相似的級分並且濃 縮，得到61.9mg (49%)標題化合物固體：MS 265(M+H)。 5 實施例10
NK
經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 流裎D : 3-胺基_6_氮-1H-碎1喵-2-甲酸乙酯 10 步驟D4 : 3-胺基-1-(乙醯某V6-氣-1Η-Θ1哚-2-甲醢乙酯 將Ν-(5·氣-2-氰苯基）乙醯胺（參見實施例8，1.0 g， 5·14 mmol)和THF (10 mL)的混合物授拌並且冷卻至0°C， 添加叔-丁醇鉀(6·2 mL，1M的THF溶液），在〇。(：下攪拌 15 30 min。以一份的形式添加溴乙酸乙酯（0·6 mL)。室溫下 攪拌2h。用水(40 mL)將反應物停止反應並且與乙酸乙酯 攪拌。分層並且用乙酸乙酯反萃取此水溶液。合併有機萃 取液並且用水和鹽水洗滌。經過MgS04乾燥並且減壓濃 縮，獲得棕色固體。將此固體用乙醚研製並且收集淡棕色 20 固體。將固體在矽膠上色譜法純化，用2%乙酸乙酯/二氣 甲烷、接著用10%乙酸乙酯/二氣甲烷洗脫，獲得0.65 g (45%)淡棕色固體的標題化合物：MS 281(M+H)，HPLC ·· -106- _本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1296926 A7 B7 五、發明說明（l〇5 )
Rt= 3·20 min. ’ TLC(石夕膠’ 1〇%乙酸乙醋/二氣甲烧），r产 0.53。 步驟D5··.·胺基-6-氣甲醅a舷 5 向3-胺基小（乙醯基1甲酸乙醋（3·5 g，12·5 ·〇1)中添加1Ν氣氧化卸乙醇溶液⑽mL)並且 使反應物放置20 min。將所得的衆液傾人代的水中，同 時决速擾，在〇 c下老化10 min，收集固體，用水洗 滌’在40 C下真工乾燥，獲得2 42g⑻標題化合物： 10 MS 239(M+H) 〇 15 實施例11-22 麵E ’步驟12顯示了本發明的3_(4-吡啶基 胺基）-1Η-吲哚-2-甲酸酯，其可以用類似於us專利 的方法來合成。因此，使合適的3•胺基_ 吲哚-2-曱酸酯與4-氣吡啶鹽酸鹽在^甲基_2_毗咯烷酮中 反應產生所需的化合物。參見下表，改變參考工藝中的反 應時間和溫度。表13列出了相應的物理性質。 計 線 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 20
N ,107- 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1296926 A7 B7 五、發明說明（l〇6) 表12反應條件 實施 例 X Y Z R r2 溫度.°C 時間 小時 11 Η H NH H c2h5 165c 6 12 6-CF3 H NH H C2H5 80 18 13 6-C1 H NH H C2H5 100 5 14 5-C1 H NH H C2H5 100 4.5 15 6-F H NH H C2H5 80 d 16 5-F H NH H C2H5 100 2 17 4_F H NH H C(CH3)3 75 16 18 6-苯基 H NH H C2H5 100 d 19 H H NH H C(CH3)3 100 2 20 5-OCH3 6-OCH3 NH H C2H5 80 6 21 5-OCH3 H NH H C(CH3)3 80 3.5 d=過夜，約16 - 20 h 表13物理性質 實施例 MS (M+H) 保留時間 分鐘 (HPLC) mp°C 11 282 248-250 12 350 13 316 1.90 258-261(分解） 14 316 15 300 16 300 17 328 1.58 210-212 18 358 241-243 19 310 20 342 1.20 21 340 1.13 217-219 -108 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1296926 A7 B7 五、發明說明（1〇7) 實施例22
流程E，步驟El : 3-(2-吡啶基胺基V1H-吲哚-2-甲酸 5 乙酯 將3-胺基吲哚-2-甲酸乙酯(250mg，1.2 mmol)和2-溴 σ比咬(1.0 mL，10 mmol)的混合物在150°C下加熱1 h。冷 卻此反應物，使其在氣化銨水溶液和乙酸乙酯之間分配。 分離有機層並且濃縮得到粗混合物。將混合物在矽膠上閃 10 蒸色譜法純化，用25%乙酸乙酯/二氣甲烷洗脫，得到 50mg 標題化合物：MS 282(M+H)。 實施例23 計 線 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 15
流程E，步驟E1 : 3彳嘧啶-2-基胺基)-1Η-吲哚-2-甲酸 乙酯 -109- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐） 1296926 A7 B7 五、發明說明（108) 將3-胺基吲哚-2-甲酸乙酯(2〇4mg，1·〇 mmol)和2-氣 嘧咬（1·2 g，1〇·5 mmol)的混合物在i〇〇〇c下加熱16 h。冷 卻反應物並且添加氣化錄水溶液和乙酸乙酯。濾掉多餘的 2-氣嘧啶，分離有機層，用MgS04乾燥，過濾並且濃縮， 5 得到粗混合物。將混合物在矽膠上閃蒸色譜法純化，用 25%乙酸乙酿/二氣甲烧洗脫，得到50mg標題化合物：MS 283 (M+H)，TLC(矽膠，25%乙酸乙酯/二氣甲烷），R产 0.44 〇 10 實施例24
流程F，步驟F8 : 5-氟-1-甲基-3-(4-吡啶基胺某 吲哚-2-甲酸乙酯 將5-氟_3-(4-吡啶基胺基）-1Η-吲哚-2-甲酸乙醋 (0.195mg，0.65 mmol)的二甲基甲醯胺(3.0 mL)溶液在 〇〇C 下攪拌，並且添加1M的叔-丁醇鉀的四氫呋喃溶液(0.8 mL，0.8 mmol)。在〇°C下攪拌0.5-lh，然後添加峨甲燒 (0·05 mL，0.78 mmol)。1 h後，添加飽和氣化錄水溶液(5 mL)和乙酸乙酯（1〇 mL)。分層並且用乙酸乙酯反萃取。合 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 15 20 110- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐） A7 B7 1296926 五、發明說明（1〇9) 併有機層並且用水(3x’s)、鹽水洗滌，用MgS04乾燥。濃 縮萃取液，獲得60mg (30%)標題化合物棕色固體： ESI/MS 314 (M+H) ; HPLC : Rt= 1.50 min。
5 實施例24A
流程F，步驟Fg :甲某_3_(4-吡啶基胺基V1H-吲喵-2-甲酸乙酯 10 在此實施例中，基本上重復實施例24的方法，不同 之處是所用的起始物料是3-(4-吡啶基胺基)-1Η-吲哚-2-甲 酸乙醋。此化合物在us專利號5,328,92〇中也有描述。此 化合物的馬來酸鹽的mp為169M7〇〇C(分解）。 15 實施例25 計
線 I I 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製
-111· 本紙張尺度適用中國國家標準(CNSW^^o χ 297公訂 1296926 A7 攀 B7 五、發明說明（no) 流程F ’步驟F8 · 4-乱_ 1 -甲基咬_基胺基)-1Η-吲哚-2-甲酸叔丁酯 按照實施例24的方法，但開始時用4-氟-3-(4-吡啶基 胺基)-1Η·吲哚-2-甲酸叔丁酯，用四氫呋喃代替二曱基曱 醯胺，獲得標題化合物：ESI/MS 342 (Μ+Η) ; HPLC : Rt= 1·41 min 〇 實施例26
广N
計 10 流程F，步驟F8 : 5-氣-1-甲基-3·(4-吡啶基胺基)-1Η-吲哚-2-甲酸乙酯 按照實施例24的方法，開始時用5-氣-3-(4-吡啶基胺 基)_1H-吲哚-2-曱酸乙酯，獲得標題化合物·· ESI/MS 330 15 (M+H) ; HPLC : Rt= 1·58 min。 實施例27 -112- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐） 線 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7
經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1296926 五、發明說明（111) Η Ν'
經F ,步驟F8 : 6-氣-1_甲基-3-(4-〇比唆基胺基)-1Η· 碎丨#-2-甲酸乙酯 按照實施例24的方法，開始時用6-氣_3-(4-吡啶基胺 基)-1Η-喵哚-2-甲酸乙酯，獲得標題化合物·· ESI/MS 330 (Μ+Η) ; HPLC : Rt= 1.64 min ’ ιη·ρ· 154-155〇C ° 實施例28 10 流程；：3-Γ4-吡啶基胺基V1H-咱哚-2-甲酸 步驟Gl jX2-氰笨基胺基）乙酸乙醋 15 將 10.0kg (84·6 mol)胺基苯甲腈、21.2kg (127.0 mo卜 1.5當量）溴乙酸乙醋、12.0kg (143·〇 mol ’ 1·7當量） NaHC〇3、1〇·〇 g (催化）破化納和33.0 L乙醇的混合物裝入 -113- 本紙張尺度適用举(CN^A4規格(210 X四7公爱）
1296926 A7 B7 五、發明說明（U2) 30-加侖的反應器中。在氮氣條件下加熱此反應混合物至 78-80°C並且保持在此溫度下。通過HPLC (柱-150 X 3.9 mm Waters Symmetry C18，5 微米；流動相-60%乙腈/40% 0·1% TFA于水中；流速-1.0 mL/min ;波長-225 nm ; RT :胺基苯 5 甲腈-1.8 min (2-氰苯基胺基）乙酸乙酯-2.7 min)監測反應的 進程。一般來說約40-44 h後達到70-72%轉化率。使混合 物冷卻至60°C並且趁熱過濾以除去無機固體。用1〇·〇 L溫 (70 °C)乙醇洗滌濾餅。冷卻濾液至-20°C並且在此溫度下保 持4h。濾出所形成的固體並且用6.0L冷(-20°C)乙醇洗 10 滌，空氣乾燥，得到11.02kg、64.0%產率的標題化合物： HPLC分析1〇〇%純。 步驟G2 : 3-脸篡-1H-吲哚-2-甲酸乙酯 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 在氮氣條件下，將總共30.0L的四氫呋喃裝入30-加侖 15 反應器中。添加總共4.0kg (32.72 mo卜1.045當量)叔-丁醇 鉀。觀察放熱從20°C升至25°C。冷卻混合物至20。(：。將 總共6.40kg (31·3 mol)的(2-氰基苯基胺基）乙酸乙酯溶解在 30.0 L四氫呋喃中，並且在20-25°C下用5 h的時間添加。 在20-23°C下攪拌反應混合物18 h。通過HPLC(柱·15〇 χ 20 3.9 mm Waters Symmetry C18，5 微米；流動相 _60% 乙腈 /40% 0.1% TFA 于水中；流速-1·〇 mL/min ;波長-225 nm ; RT: 3-胺基-1H•吲哚-2-甲酸乙酯-1.5 min; (2-氰苯基胺基) 乙酸乙酯-2.7 min)監測反應的進程。一般來說達到97%的 轉化率。在30°C/50托下濃縮混合物成固體殘餘物。向殘餘 -114- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐） 1296926 A7 — _B7_ _ 五、發明說明（1U) 物中添加總共60.0 L水並且在23°C下攪拌混合物2 h。濾 出固體並且用60.0 L水洗滌，空氣乾燥。將固體在55〇C的 迫風式烘箱中進一步乾燥24 h，得到4.45kg、69.5%產率的 標題化合物：HPLC分析79.2%純。 5 步驟G3 : 3-(4•吡啶基胺某V1H-吲哚-2-甲酸乙酯 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 在氮氣條件下，將總共4.0kg (19.56 mol)的3-胺基·1Η-吲哚-2·甲酸乙酯、4.10kg (27.33 mo卜1.4當量）的4-氯吡啶 鹽酸鹽和8.0 L的1-甲基-2-吡咯烷酮裝入30-加侖反應器中 10 並且加熱至 100°C。通過 HPLC(柱-150 X 3·9 mm Waters Symmetry C18，5 微米；流動相-60%乙腈/40% 0.1% TFA 于 水中；流速_1·0 mL/min ;波長-225 nm ; RT : 3-胺基-1H-吲 呼、-2-甲酸乙酿-1·5 min; 3-(4-吼唆基胺基)-1Η-θ丨哚-2-甲酸 乙酯-6.0 min ; 4-氯吡啶-1.1 min)監測反應的進程。一般來 15 說在lh内達到99%的轉化率。使混合物冷卻至20°C並且 添加總共55.0 L水。用總共20.0L乙酸乙酯萃取此混合物 並且分層。使用25%氫氧化鈉溶液，調節含水相的PH至 ρΗ = 9·3。濾出所形成的固體並且用45.0L水洗滌，空氣乾 燥。將固體在50°C迫風式烘箱中進一步空氣乾燥24 h，得 20 到4.20kg、77%產率的標題化合物：HPLC分析95·8%純。 步驟G4」3-(4-吡啶基胺基V1H-畔丨4-2-曱酸鉀鹽 將7.50kg (26.66 mol)3-胺基-1H-吲哚-2-甲酸乙酯、 37.5L乙醇和37.5 L 4M KOH的混合物裝入30-加侖反應 -115- ^纸張尺度適用屮幽幽家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） ^296926 A7 ___B7__ $'發明說明（m) 器並且用30min的時間加熱至75。0通過HPLC (柱-150 x 3.9 mm Waters Symmetry C18，5 微米；流動相-20%乙腈 /80% 〇.l〇/0 TFA 于水中；流速-1.0 mL/min ;波長_225 nm ; h : 3·胺基_1H-吲哚-2-甲酸鉀-3.3 min ; 3-胺基-1H-吲哚-I甲酸乙酯-6.0 min)監測反應的進程。一般來說在3 h内 達到100%的轉化率。用2 h的時間冷卻混合物至25°C並 且在50-60。(：/50托下濃縮成殘餘物。添加總共37.5 L的 水並且將混合物加熱至85°C並且在此溫度下保持30 min。用2小時的時間冷卻混合物至10QC，然後進一步冷 10 卻至5°C並且在此溫度下保持2小時。濾出所形成的固 體，用總共10 L的4M KOH溶液洗滌並且空氣乾燥。將 固體在迫風式烘箱中35。(：下進一步乾燥72 h，得到 l〇.9kg、140%產率的標題化合物：HPLC分析70.7%純。 15 步驟G5 : 3-(4·吡啶基胺基V1H_吲哚-2-甲酸 經濟部智慧財產局員Η消費合作社印製 將總共10.9kg (37·4 mo卜對酯水解來說140%產率）的 3-胺基甲酸卸鹽和75.0 L的水裝入30-加命玻 璃襯裏的反應器中。用75.0L(3X25.0L)乙酸乙酯萃取授 拌著的混合物。通過添加20-22°C的7.0 L 6N HC1 ,調節 20 含水相的 pH 至 pH = 6.0，通過 HPLC (柱-150 X 3.9 mm Waters Symmetry C18，5 微米；流動相。(^/。乙腈/⑽。/。 0·1% TFA 于水中；流速-1·0 mL/min ;波長-225 nm ; RT : 3-胺基-1H-吲哚-2-甲酸-3.3 min)檢測產物的純度。授拌混 合物45 min並且測定pH為6.0。濾出所形成的固體，用 -116- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1296926 A7 B7 五、發明說明（115) 總共50 L水洗滌並且空氣乾燥。將固體在迫風式烘箱中 35°C下進一步乾燥24小時，得到615kg、65·5%產率的 3-胺基.«-2-甲酸。HPLC分析顯示化合物為93 8% 純。將總共 6.15kg (24.28 mol)的產物，U3kg (97 35
5 m〇卜4·0當量）的馬來酸，62.〇L的甲醇和6.2]1的水裝入 30-加侖反應器中並且在氮氣條件下加熱至7〇χ，在此溫 度下保持45。用1·5小時的時間冷卻混合物至3〇〇c並且 在60°C/50托下濃縮成濕固體。添加總共2〇 〇 L的lpA， 在60〇C/50托下將混合物濃縮成固體。重復此過程。向殘 10餘物添加總共50·0 L的IPA並且將混合物加熱至7〇〇c， 在此溫度下保持60 min，然後用16 h的時間冷卻至 20°C。在2°C下冷卻混合物並且保持丨小時。通過HpLC (柱-150 X 3.9 mm Waters Symmetry C18 , 5 微米；流動相_ 20%乙腈/80% 0.1% TFA于水中；流速_[〇 mL/min ;波長_ 15 225 nm ; RT : 3-胺基·ιη·吲哚-2-甲酸_ 3·3 min ;馬來酸- 1·2 min)檢測產物的純度。濾出固體，用1〇 〇 L冷^。。) IPA洗滌並且在迫風式烘箱中35〇c下乾燥，得到5.4kg、 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 60.6%產率的3-胺基-1H-吲哚-2-甲酸馬來酸鹽：HPLC分 析99.0%純。 20 將總共7.9kg (兩輪5.4kg+2.5kg)的3-胺基-1H·吨哚-2- 甲酸馬來酸鹽和50.0 L的4M KOH裝入30-加侖反應器 中’加熱並保持至70°C。添加總共12.0 L的乙醇，直至 混合物在70°C下變為均相。使用2 h的時間冷卻混合物 至20°C °進一步冷卻混合物至4°C並且在此溫度下保持1 -117- 本紙張尺度適用T國國家標準(CNS)A4l^7210x297公爱） 1296926 A7 B7 五、發明說明（ll6) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 小時。通過 HPLC (柱-150 X 3·9 mm Waters Symmetry C18，5微米；流動相_20%乙腈/80% 0.1% TFA于水中； 流速-1·0 mL/min ;波長-225 nm ; RT : 3-胺基朵-2-甲酸鉀鹽-3·3 min)檢測產物的純度。濾掉固體並且用10.0 5 L的4M KOH (22.5%溶液)洗滌並且在氮氣條件下乾燥， 得到9.4kg、151%產率的3-胺基-1H-吲哚-2-甲酸鉀鹽， HPLC 分析 97.4%純。 將總共 18.1kg (兩輪 9.4kg+8.7kg) 3_胺基-1H-吲哚-2-曱酸鉀鹽和100.0 L的裝入30-加侖反應器中。通過添加 10 23_27°C 的 13.0 L 6N HC1 調節混合物 pH 至 pH = 5.95。在 22-25°C下攪拌混合物1.5 h。濾出所形成的固體並且用 60.0 L 水洗滌。通過 HPLC (柱-150 X 3.9 mm Waters Symmetry C18，5 微米；流動相_20%乙腈/80% 0.1% TFA 于水中；流速-1.0 mL/min ;波長-225 nm ; RT ·· 3-胺基-1H-15 吲哚-2-甲酸-3.3 min)檢測產物的純度。在60QC/50托下乾 燥固體，得到10.2kg、41.1%產率的標題化合物：HPLC 分析98.4%純。 分析：根據 C14HnN302M.21 H20 計算：％C 61.15% ; %H 4.91% ; %N 15.28%。實際：％C 60.83% ; %H 5.05% ; 20 %N 15.37%。 實施例29 -118- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐） 計 線 1296926 A7 B7 五、發明說明（1Π) 10 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 15
,co2h 、co2h : 1-甲基-3-(4-吡啶基胺基馬來酸轉 在N2條件下，於50。(：攪拌1-甲基1(4-吼啶基胺基)-1H·吲哚-2-甲酸乙酯(如實施例24A中所述製備，也可參見 US專利號5,328,920，0.5 g，1·69 mmol)、氫氧化鋰水合 物(0·106 g，2.53 mmol)和1 : 4水-乙醇的混合物4h。除去 一部分乙醇並且將反應混合物在大約5°C下存放過夜。過 濾所得的固體，用水洗滌，在40。(：下高真空乾燥，獲得 〇·41 g白色固體。將此固體懸浮在曱醇中並且添加馬來酸 (0.346 g)，放置h。過濾並且將濾液濃縮獲得褐色固 體。將此固體從甲醇/乙酸乙酯中重結晶並且獲得〇.19g (29%)標題化合物：MS 224 (_C02，M+H)，m.p· 192-194°C (分解）。 分析：根據 C15H13N3CVC4H404 計算：59.53%C ; 4·47%Η ; 1〇·96%Ν ;實際：59.47%C ； 4.56%H ； 10·86%Ν 〇 實施例30 -119- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐） 1296926 A7 B7 五、發明說明（ιι〇
cf3co2h 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 流裎F，步驟F3 : 4-氟-3-(4-吡啶基胺基V1H-吲哚-2-曱酸三氟乙酸鹽 5 將4-氟-3-(4-吡啶基胺基)-1Η-吲哚-2-曱酸叔丁酯（實施
例17，0.15 g，0.458 mmol)的35%三氟乙酸/二氯曱烷溶 液在常溫下攪拌3 h。真空濃縮此反應物，獲得灰色固 體。將此固體40QC下真空乾燥，然後用熱乙酸乙酯研 製。使其冷卻至常溫並且收集淺灰色粉末。將粉末在 10 45°C下真空乾燥2 h，獲得0.15 g (88%)標題化合物：MS 272(1^1+11)，111私 231-234。€：(分解）。 實施例31 15
CF3C〇2H -120- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐） [296926 A7 A7 B7 五、發明說明（II9) 流裎F，步驟F3 : 4-氟-1-甲基-3-(4·吡啶基胺基V1H-吲哚-2-甲酸三氟乙酸鹽 按照實施例30的方法，開始時用4-氟-1-甲基-3-(4-吡 啶基胺基)-1Η-吲哚-2-甲酸叔丁酯（實施例25)，獲得灰白 色粉末狀的標題化合物：MS 286(M+H)，m.p· 197-199°C。 實施例32 CH3〇
cf3co2h Η 10 流程F，步驟F3 : 5-甲氣基-3-(4-吡啶基胺基)-1Η-吲 哚-2-甲酸三氟乙酸鹽 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 按照實施例30的方法，開始時用5-曱氧基-3-(4-吡啶 基胺基)-1Η-吲哚-2-甲酸叔丁酯（實施例21)，獲得亮白色 15 粉末狀的標題化合物·· ESI/MS 284(M+H)，m.p· 211-213°C。 實施例33 -121- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1296926 A7 B7 五、發明說明（120)
經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 輝，£gJ 1-4氣基羰某甲某-3-f毗嘧-4-篡胺 羞上iH-崎g朵-2-甲醯Λ醢 5 在氮氣條件下，將3_(4_吡啶基胺基)弓丨哚-2_甲酸乙酯 (參見 US 專利 5,328,920 ; 〇·2〇 g , 0.711 mmol)在二曱基甲 醯胺(5 mL)中的混合物攪拌並且冷卻至〇〇c。以一份的形 式添加1M的叔-丁醇鉀的四氫呋喃溶液⑴75 mL，〇 75 mmol)’攪拌10min，然後以一份的形式添加溴乙酸乙酯 1〇 (〇·12 g ’ 〇·72 mmol)。〇。(：下攪拌5〇 min並且將反應物在 水(30 mL)中停止反應。將此含水混合物用乙酸乙酯萃取(2 X 20 mL)，合併萃取液，用水(25 mL)、鹽水(25 mL)洗滌， 經過MgS〇4乾燥。真空濃縮，將殘餘物在Redisep矽膠柱 (10 g)上色譜法純化，用5%曱醇/二氣曱烷至2〇%甲醇/二 15氣甲烷洗脫。合併非均相的級分，濃縮並且如上再次色譜 法純化。合併所有均相級級分並且濃縮，獲得〇13g (5〇%) 白色固體的標題化合物·· MS 368(M+H)。 -122-
1296926 A7 B7 五、發明說明（m 實施例34 ΓΊ 產皇-F ’步驟卫：6-氣-1-二乙基胺基甲醯篡甲其丄 胺基V1H_$卜朵-2-甲酸乙酯 在氣氣條件下’將6-氣-3-(4-吼淀基胺基)弓丨鳴-2-甲酸 乙酯（0·50 g，1.58 mmol)在二甲基甲醯胺(5 mL)中的混合 10 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 15
物攪拌並且冷卻至〇〇c。用2min的時間添加1M的叔丁 醇鉀的四風吱喃溶液（1.7 mL，1.7 mmol)，並且攪拌1〇 mm。以一份的形式添加2-氣_N，N-二乙基乙醯胺（0.22 mL ’ 1.6 mmol)並且常溫攪拌過夜。將反應物在水(35 mL) 中停止反應，並且將此含水混合物用乙酸乙酯萃取(2 X 20 mL)。合併萃取液，用水(25 mL)、鹽水(25 mL)洗滌並且經 過MgS〇4乾燥。真空濃縮，並且將殘餘物在Redisep矽膠 柱（1〇 g)上色譜法純化，用5%甲醇/二氣甲烷至20%甲醇/ 二氣甲烧洗脫。合併所有均相級分並且濃縮，獲得固體。 將此固體從乙酸乙酯中重結晶，獲得g白色固體的標 題化合物：MS 429(M+H)，m.p. 212-214°C -123- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（21〇 x 297公釐） 1296926 A7 B7 五、發明說明（122) 實施例35
r^N
Η ^ II
F
經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 5 流程F，步驟F5 : 3-(吡啶_4·基胺基)-1Η-吲哚-2-甲酸 五氟笨基酯 在Ν2條件下，攪拌3-(4-吡啶基胺基)-1Η-吲哚-2-曱酸 (0.2 g，0.78 mmol)在二甲基甲醯胺中的懸浮液，添加吡啶 (0.13 mL，1·6 mmol)，然後逐滴添加三敦乙酸五氟苯基醋 10 (0.31 g，1·13 mmol)。常溫下攪拌此反應物過夜並且在水 中停止反應。將此含水混合物用乙酸乙酯萃取，用5%含 水碳酸鉀、鹽水洗滌並且經過MgS04乾燥。真空濃縮得 到粗固體，將其用乙醚研製，獲得0.13 g (41%)標題化合 物：MS 420(M+H)。 15 實施例36
-124- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1296926 A7 B7 五、發明說明（l23) 盈_程F，步驟F7 : 3_(吡啶-4-某胺基甲酸 2-二乙基胺基-乙酷 在N2條件下，於〇〇c攪拌NaH(29mg，0.72 mm〇1的 60%油分散液)在ι_甲基-2-吡咯烷酮（15 mL)中的懸浮液， 5 並且緩慢添加N，N-二乙基乙醇胺(0.095 mL，0·72 mmc)1)。 攪拌10 min，然後逐滴添加3七比啶-4-基胺基)-11^%咕_2 甲酸五氟苯基酯（lOOmg，〇·24 mmol)。使反應物達到常溫 並且攪拌過夜。在水中停止反應並且用乙酸乙酯萃取。用 水、鹽水洗務此萃取液，MgS〇4乾燥，過濾並且真空濃 10 縮，獲得粗產物。在石夕膠（10 g，Sepack柱)上色譜法純化 並且使用1:1甲醇/乙酸乙酯作為洗脫劑。合併相似的級 分並且真空濃縮，獲得26.3mg (31%)標題化合物：MS 353 (M+H) 〇 15 實施例37 計 線 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製
Η 流程F，步驟F7 : 吡啶-4-某胺某V1H-#丨哚-2-甲酸 2-二曱基胺基-LSS 20 按照實施例36的方法，開始時用N，N-二甲基-乙醇 125- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1296926 A7 - ___B7 五、發明說明（m) 胺，獲得標題化合物固體：MS 325(M+H)。 實施例38
Η 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 5 流程F，步驟F4 : 3-(吡啶-4-基胺基)-1Η-吲哚-2-甲酸 2_喻咬-1-某-乙醢 在Ν2條件下，於〇°C攪拌3-(4-吡啶基胺基)-1Η-吲哚-2-曱酸(0.25 g，1 mmol)、苯並三ϋ坐-1-基氧基三（ϋ比洛烧 10 基)·鱗六氟磷酸鹽（0.52 g，1 mmol)、二乙基異丙基胺 (0.175 mL，lmmol)和 1-甲基-2-吼洛烧_(4.0 mL)的混合 物，以一份的形式添加1-喻咬乙醇(0·50 mL，3.8 mmol) 並且常溫下攪拌18·5 h。將反應物傾入5%含水碳酸鉀中 並且用乙酸乙酯萃取(2 X 20 mL)。將合併的萃取液用水(20 15 mL)、鹽水(20 mL)洗滌，經過MgS04乾燥，過濾並且真 空濃縮成黑色殘餘物。在矽膠(Redisep柱，30 g)上色譜法 純化並且用10%曱醇/二氣甲烷(150 mL)至20%甲醇/二氯 甲烷的步階式梯度洗脫。將相似的級分真空濃縮成油，將 此油在高真空下常溫乾燥，獲得〇·14 g褐色泡沫狀的標題 20 化合物：MS 365(M+H)，TLC (矽膠，0.5/9.5/90 氫氧化銨/ -126- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1296926 A7 B7 五、發明說明（⑵） 甲醇/二氣曱烷），11尸0.25。 實施例39
經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 5 疫程Η，步驟HI : 3-(4-吡啶基胺基)-茉並W嘧吩-2- 將無水四氫呋喃(25 mL)和3-[(4-吡啶基)胺基]苯並(b) 喧吩 HC1 (參見 US 專利 5,328,92〇 ; 298mg，1.09 mmol)的 10溶液冷卻至_78。0：，並且添加2摩爾濃度的二異丙基氨化 链的庚烷/四氫呋喃/乙基苯（1.9 mL，3·8 mmol)溶液。2 h 後’添加碳酸二乙醋（1·2 mL，9·89 mmol)。再擾拌反應物 3 h同時將溫度升至_40。(：。除去冷浴並且在30min後通過 添加水(10 mL)使反應驟停。用乙酸乙酯萃取反應物。分離 15 有機層，用鹽水洗滌，經過硫酸鈉乾燥，過濾並且濃縮。 將殘餘物在ISCO RediSep 10-克石夕膠柱上純化，用乙酸乙 酯-50%庚烷和乙酸乙酯作為洗脫劑。合併含級分的產物並 且濃縮，得到3-[(4-吡啶基)胺基]-苯並[b]噻吩基-2-曱酸乙 酯褐色固體(289mg，86%) : ESI/MS 299 (M+H) ; ^-NMR 20 δ 1.41-1.43 (m，3H)，4.11-4.43 (m，2H)，6·81 (2H)， 7.23-7.52 (m，1H)，7.60 (d，J=9 Hz，1H)，7·84 (d，J=9 -127- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） A7 B7 1296926 --—-^__ 五、發明說明（l26)
Hz，1H)，8·36 (br d，2H)，8.43 (s，1H，NH) ; 13C-NMR δ 14.29，61.44，112·61，113.92，123.36，124.11， 125.15，127·86，132.53，139.49，141.75，149.68， 150.36，164.53。 5 實施例40
經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 流程Η，步驟HI : 6_氟-3_(4-吡啶基胺基)-苯並[b]噻 10 吩-2-甲酸乙酯 將無水四氫呋喃(20 mL)和6-氟-3-[(4-吡啶基)胺基]苯 並[b]噻吩(參見 US 專利 5，177,088 ; 181mg，0.741 mmol) 的溶液冷卻至-78°C並且添加2摩爾濃度的二異丙基氨化 鍾的庚烧/四氫吱喃/乙基苯(〇·74 mL，1.5 mmol)溶液。2 h I5 後’添加碳酸二乙S旨（0·8 mL，6·59 mmol)。再擾拌反應物 1 h，使其緩慢升溫至室溫並且繼續攪拌過夜。通過添加水 (10 mL)使反應驟停。在旋轉式蒸發器中除去溶劑並且將殘 餘物吸收到乙酸乙酯中。用水和鹽水洗務此乙酸乙酯，經 過硫酸鈉乾燥’過濾並且濃縮。將殘餘物在ISC〇 RediSep 20 1〇β克矽膠柱上純化，用乙酸乙酯-50%庚烷和乙酸乙酯-〇·5% ΝΗ4〇Η作為洗脫劑。合併含產物的級分並且濃縮， -128- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規;^ (210 X 297公爱) 1296926 A7 B7 五、發明說明（m) 得到6-氟-3·[(4-吡啶基)胺基]苯並[b]噻吩基-2-甲酸乙酯： ESI/MS 317 (M+H) ； ^-NMR δ 1.40-1.43 (m ^ 3H) ； 4.35- 4.42(m，2H);6.80(brd，2H);7.04-7.10(m，lH);7.48- 7·57 (m，2H) ; 8.37 (br s，2H) ; 8·43 (s，1H，NH) ; 13〇 5 NMR δ 14.3 ; 61.5 ; 109.2 (JCF=25 Hz) ; 112.7 (JCF=4 Hz); 113.4 ； 113.7 (Jcf=25 Hz) ； 126.7 (JCF=9 Hz) ; 129.0 ; 140.9 (JCF=11 Hz) ； 141.4 ; 149.5 ; 150.5 ; 162·4 (Jcf=26〇
Hz) ; 164.1 ; 19F-NMR (282 MHz) δ -110.8。 10 實施例41
經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 流程Η，步驟HI : 3-IY4-吡啶基)胺某-N-甲基1笨益也! 喧吩基-2·甲酸乙酷 15 在氮氣條件下，將無水四氫吱嗔(4 mL)和3-[(4-α比咬 基）胺基甲基]苯並[b]噻吩HC1(參見US專利 5,328,920 ; 50mg，0.18 mmol)的溶液冷卻至_76。(1；，添加 2 摩爾濃度的二異丙基氨化裡的庚烧/四氫吱喃/乙基苯(0.28 mL ’ 0·54 mmol)溶液。20 min後，用冰/水浴代替乾冰/丙 20 酮浴。1 h後，添加碳酸二乙酯（〇·27 mL，2.23 mmol)並且 在此溫度下攪拌反應物4 h，然後室溫下攪拌過夜。通過 -129-
1296926 A7 B7 五、發明說明（128) 添加水(3 mL)使反應驟停。用乙醚萃取反應物，用鹽水洗 滌萃取液，經硫酸鈉乾燥，過濾並且濃縮。將殘餘物在 ISCO RediSep 4克矽膠柱上純化，用乙酸乙酯-3%甲醇-NH4OH作為洗脫劑。合併含產物的級分並且濃縮，得到 5 3-[(4-吡啶基)胺基-N-甲基]苯並[b]噻吩基-2-甲酸乙酯褐色 固體(30mg，53%) : ESI/MS 313 (M+H) ; b-NMR δ 1·26 (t，3Η，J=9 Hz)，3·38 (s，3Η，Me)，4·30 (q，2Η，J=6 Hz)，6.42 (br s，2H)，7.57 (m，3H)，7.90 (d，1H，J=9 Hz)，8·21 (br s，2H) ; 13C-NMR δ 14.1，38·2，61·6， 10 107.7，123·3，123·4，125.2，127·9，135.8，139·3， 142·6，149·9，153·5，161.2 〇 實施例42
經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 流程Η ’步驟Η2 : 3-(4-吡啶基胺基)-6-三氟甲基-苯並 [b]噻吩-2_甲酸甲磺酸鹽 在氮氣條件下，將無水四氫呋喃(6〇 mL)和3-(4-吡啶 基胺基)-6-三氟曱基笨並[b]噻吩(參見us專利5,328,92〇 ; 20 0.47g，1.6 mmol)的溶液冷卻至_78〇c，並且通過注射器添 加2.5摩爾濃度的正丁基鐘（1 3 mL，3·25輸叫的己燒溶 -130- 1296926 A7 B7 五、發明說明（l29) 液。攪拌反應物2 h ,將其傾入含140 g乾冰和1〇 mL無 水四氫吱味的燒杯中。攪拌反應物1 h，加水(50 mL)，並 且用10%氫氧化鈉水溶液鹼化至ρΗ ι3-14。用乙醚(2χ1〇 mL)萃取此鹼性溶液並且用3%HC1水溶液酸化含水部分。 5在約PH 7時，溶液中沈澱出白色固體。收集此固體並且 真空乾燥過夜，得到〇·35 g (65%)標題化合物的游離鹼。 將一部分的游離鹼與曱磺酸反應，獲得59〇mg標題化合 物：ESI/MS 339 (M+H) ; HPLC : Rt= 1.38 min· (95/5/0.1 (A) 5/95/0.1 ⑻水 /CAN/ 甲酸 YMC 〇DS_A 2X5〇 mm 10 ImL/min，梯度組合：loo% a洗脫0·1 min，線性梯度至2 min時為100% B，保持直至3.5 min·) 實施例43
經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 15 流_程Η，步驟H2 : 3-(4-吡啶基胺基V苯並fbl噻吩-2-甲酸鹽酸鹽 按照實施例42的方法，開始時用3-(4-吡啶基胺基)-6-苯並[b]噻吩（其合成參見US專利5,328,920)。在甲醇和 20 HC1醚溶液中形成鹽酸鹽，獲得白色固體的標題化合物： ESI/MS 271 (M+H) 〇 -131- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1296926 A7 B7 五、發明說明（130) 實施例44
5 產程Η ’步释吡啶某胺基V6_三氩甲基-苯並 「bl噻吩-2_甲酸乙醢_酿賺 按照實施例4〇的方法，開始時用3_(4_吡啶基胺基)-6· 三氟甲基苯並[b]噻吩(其合成參見us專利5 328 92〇)。在 HC1醚溶液中形成鹽酸鹽，獲得灰白色固體的標題化合 10物· MS 367(M+H)，TLC (石夕膠，乙酸乙酉旨/甲醇/氫氧化敍)
Rf^ 0.80 〇 實施例45
經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 15 步驟H1 : 3-(反基冰吡啶基胺基）茉並叫嘧 吩-2-曱酸乙酷 -132- 本紙張尺度通用中關家標準(CNS)A4規格（210 X 297公爱了 A7 1296926 五、發明說明（131) 按照實施例40的方法，開始時用3-(丙基-4-吡啶基-胺基)苯並[b]噻吩(其合成參見US專利5,328,920)。獲得褐 色固體標題化合物：ESI/MS 341 (M+H) ; HPLC : Rt= 1.53 min· (95/5/0.1 (A) 5/95/0.1 (B)水/CAN/甲酸 YMC ODS-A 5 2X50 mm lmL/min，梯度組合：100% A 洗脫 0.1 min，線 性梯度至2min時為100% B，保持直至3.5 min·) 實施例46
經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 流程F，步驟F4 ·· 3·(吼啶-4-基胺其甲酸 (S)_l-甲氧基羰某-乙酯 〇°C下攪拌3-(4吡啶基胺基>1沁吲哚-2-甲酸(3.0 g， 12 mmol)、（S)_(-)-乳酸甲酯(2·3 mL，24 mmol)、4-甲基嗎 15 咁(2·6 mL，24 mmol)和 DMF (50.0 mL)的混合物。以一份的 形式添加苯並三嗤-1-基氧基三（二甲基胺基)鱗六氟磷酸鹽 (BOP，5.32 g，12 mmol)並且常溫攪拌過夜。添加鹽水(5〇 mL)並且用乙酸乙酯萃取(3x200 mL)。真空濃縮成油。在 石夕膠(5 g)上色譜法純化並且用二氣甲烷、Et〇AC# Me〇H 20洗脫。將相似的級分真空濃縮成油。用存在於乙醚（i〇 mL) -133- 本紙張尺度適用中國國冢標準(CNS)A4規格（210x297公爱)--------- 1296926 A7 B7 五、發明說明（132) 中的HC1處理此油，再添加乙醚(50 mL)並且真空濃縮成 油。用5% NaHC〇3水溶液處理此油並且用EtOAc萃取。 將萃取液經過NaJO4乾燥’過渡並且濃縮成油。將此油 用玻璃棒在乙醚的存在下到擦，獲得粘性固體。添加 5 CH3CN，然後添加乙醚並且獲得黃色固體的標題化合物， 140mg : MS 340(M+H)，Rt= 2.73 min· (95/5/0.1 (A) 5/95/0.1 (B)水 /CAN/ 甲酸 YMC ODS-A 2X50 mm lmL/min，梯度組合：100% A洗脫0.1 min，線性梯度至2 min時為100% B，保持直至3·5 min·) 10 實施例47
經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 流程F，步驟F4 : 3-(吡啶-4-某胺基吲哚-2-甲酸 15 2-甲氣基-乙酯 按照實施例46的方法，但將反應物冷卻至-10至-15°C，用2-曱氧基乙醇代替（S)-(-)-乳酸甲酯並且通過柱色 譜法在矽膠上純化，用15% MeOH/二氣甲烷洗脫，獲得 標題化合物·· MS 312(M+H)，TLC (矽膠，15% MeOH/二 20 氣曱烷），R尸0.53。 -134- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐） J296926 A7 B7 五、發明說明（⑴） 實施例48
經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 旒i F ’步輝g4 : 3-(吼啶-4-基胺篡)_1丑-吲哚-2-甲酸 5 &氧基-丙酯 按照實施例47的方法，用2-乙氧基乙醇代替2-甲氧 基乙醇並且通過柱色譜法在矽膠上純化，用8.5% Me〇H/ 一氣甲烧洗脫，獲得標題化合物：MS 340(M+H)，TLC (矽膠，8.5%MeOH/二氣甲烷），R产 〇 3〇。 10 實施例49
嚴鞋F，步驟F4 : 3_卜比啶-4-基胺某Vm-吲哚-2-f醅 15 羰基甲酯 按照實施例46的方法，用羥基乙酸乙酯代替（s)_㈠_ 乳酸甲酯並且用NMP代替DMF，通過柱色譜法在矽膠上 -135- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐） "" _________ 1296926 A7 B7 五、發明說明（134) 純化，用二氣甲烷、EtOAc和1% MeOH/二氣甲烷洗脫， 獲得標題化合物·· MS 340(M+H)，Rt=l.l9 min. (95/5/0.1 (A) 5/95/0.1 (B)水/CAN/甲酸 YMC ODS-A 2X50 mm lmL/min，梯度組合：100% A洗脫0.1 min，線性梯度至2 min 時為 100% B，保持直至 3·5 min·) TLC Rf = 0·51 (3 : 1 EtOAc ·· CH3OH，矽膠）。 實施例50
Η 計 10 流程F，步驟F4 : 3-(吡啶-4-基胺基Vl/i-吲喵-2-甲酸 2,3二乳化^-5-基5旨 按照實施例49的方法，用5-茚滿醇代替羥基乙酸乙 酯並且用苯並三唑-1-基氧基三（吡咯烷基)-鱗六氟磷酸鹽 15 (PYBOP)代替BOP。通過柱色譜法在矽膠上純化，用 EtOAc洗脫，獲得標題化合物：MS 370(M+H)，Rt= 1.35 min· (95/5/0.1 (A) 5/95/0.1 (B)水/CAN/甲酸 YMC ODS-A 2X50 mm lmL/min，梯度組合：100% A 洗脫 0.1 min，線 性梯度至2 min時為100% B，保持直至3.5 min.) ; TLC Rf 20 = 0·52 (EtOAc，石夕膠）。 136- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐）
線 I I 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1296926 A7 B7 五、發明說明（US) 實施例51
鬌 5 流程F，舟驟F4 : 3-(吡啶-4-基胺基VI//-吲哚-2·甲酸 苎乙基胺某甲醯篡甲酯 將3-(4-吡啶基胺基）-1Η-吲哚-2-甲酸（2.0 g，8 mmol)、ΚΙ (l〇mg)和 Cs2C03 (2.8 g，，8·6 mmol)於 DMF (125 mL)中的混合物在50°C下攪拌10 min。使其冷卻至 10 常溫，然後在冰浴中冷卻。添加2-氣-N，N-二乙基乙醯胺 (1.077 g，〇·9 mmol)並且使其升溫至常溫。向反應物中添 加鹽水溶液並且用EtOAc萃取(3X)。用鹽水和水洗滌萃取 液，MgS04乾燥，過濾並且真空濃縮，得到半固體。在矽 膠上閃蒸色譜法純化。先用EtOAc再用10%MeOH/EtOAc 15 洗脫並且獲得0.317 g標題化合物固體：MS 367(M+H); HPLC : Rt= 4·75 min· (95/5/0.1 (A) 5/95/0· 1 (B)水/CAN/甲 酸 YMC ODS-A 2X50 mm lmL/min，梯度組合：100% A 洗脫〇·1 min，線性梯度至2 min時為100% B，保持直至 -137- 本紙張尺度適用1f7國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） 計 線 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1296926 A7 B7 五、發明說明（136) 3.5 min) 實施例52
10 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 15 流程F ·· 3-(吡啶-4-基胺墓)-1Η-吲哚-2-甲酸2-嗎咁-4-基-2_氣-乙S旨 中間體：4-(氣乙醯基)嗎咁 使用Quest 205 Parallel合成器並且向嗎咐(2.6 g，30 mmol)、二氣甲烷(45 mL)和2M K2C03的混合物中緩慢添 加存在於二氣甲烷（10 mL)中的氣乙醯基（3.73 g，33 mmol)。將反應物攪拌過夜並且濾掉有機層。用二氣曱烷 P〇mL)萃取含水層並且向其中添加前面所收集的有機層。 乾燥有機相（MgS04)並且真空濃縮獲得標題化合物。 步驟F4 : 吡啶-4-基胺基)-1Η-吲哚-2-曱酸2-嗎咁-4-基- 2-乳-乙醋 按照實施例51的方法，用4-(氯乙醯基)嗎咁代替2- -138- 計 線 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐） 1296926 A7 B7 五、發明說明（l37) 氣-N，N-二乙基乙醯胺。將所形成的沈殿收集在Et〇Ac萃 取液中，用乙醚洗滌，獲得標題化合物固體：MS 381(M+H) ； HPLC ： Rt= 2.48 min. (95/5/0.1 (A) 5/95/0.1 (B) 水/CAN/甲酸 YMC ODS-A 2X50 mm lmL/MIN，梯度組 5 合：100% A洗脫0.1 min，線性梯度至2 min時為100% B，保持直至3.5 min)。 實施例53
流程F : 3-(〇比唆-4-基胺基p朵-2-曱酸2-氣 洛烧-1-某-?^酷 中間體：1氣代乙醯吼哈炫 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 10 按照實施例53的方法，用吡咯烷代替嗎咁，獲得標 15 題化合物。 步驟F4 : 3-(批咕-4-某胳基引哚-2-曱酸2-氣-2-吼各 貌 1 -基-乙酉| -139- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公' A7 B7 1296926 五、發明說明（U〇 I « 按照實施例51的方法，用1-(氣乙醯基)吡咯烷代替 2-氣-N，N-二乙基乙醯胺。將所形成的沈澱收集在EtOAc 萃取液中，用乙醚洗滌，獲得標題化合物固體：MS 365(M+H) ； HPLC ： Rt= 2.58 min. (95/5/0.1 (A) 5/95/0.1 (B) 水/CAN/甲酸 YMC ODS-A 2X50 mm lmL/min，梯度組 合：100% A洗脫0·1 min，線性梯度至2 min時為100% B，保持直至3.5min·)。 實施例54 10
計 線 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 15 流裎F : 3-(吡啶-4-基胺基Vlff-崆唼-2-甲酸（芊基-乙 基-胺基甲醯基甲酯 中間體：2-氣-N-乙基-N-(笨基甲基）乙醯胺 按照實施例53的方法，用N-苄基-N-乙胺代替嗎咁， 獲得標題化合物。 -140- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐） A7 B7 1296926 五、發明說明（l39) 步驟F4 ·· 3-(吡说基胺基V1好:吲啤、_2-甲藏(苄基-乙基二騰_ 基甲醯基 按照實施例51的方法’用2-氣-1^乙基-N-(苯基甲基） 乙醢胺代替2-氣-Ν，Ν-二乙基乙醢胺。將所形成的沈澱收 5 集在EtO Ac萃取液中，用乙醚洗滌’獲得黃色固體的標題 化合物：MS 429(M+H) ; HPLC : Rt= 2.72 min· (95/5/0.1 (A) 5/95/0.1 ⑼水 /CAN/ 甲酸 YMC ODS-A 2X50 mm lmL/min ,梯度組合：100% A洗脫0·1 min，線性梯度至2 min時為1〇〇%Β，保持直至3·5 min)。 10 實施例55
經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 流裎F : W吡啶-4-基胺基)-1Η-吲哚-2-甲酸2-氮雜曼 15 丁烷-1-某 中間體：U氣乙醯基）氮雜環丁烷 向攪拌著的氣乙醯氣和K2C03(4.14 g，30 mmol)在二 氣甲烷-水(45-15 mL)中的溶液中，通過注射器緩慢添加氮 -141- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公楚) ' 1296926 A7 B7 五、發明說明（HO ) 雜環丁烷(2.8 g , 30 mmol)。添加後，常溫下攪拌過夜。分 離有機層並且用H20(兩次)和鹽水（兩次）洗滌’然後減壓 濃縮，得到標題化合物。 5 步驟F4 : 3-(吡啶-4-基脸D-1H-吲哚-2-甲酸2-氮雜環丁 烷-1-某-2-氣-乙酯 按照實施例51的方法，用氯乙酿基)氮雜環丁烷代 替2-氣-N，N-二乙基乙醯胺。將所形成的沈澱收集在 EtOAc萃取液中，用乙醚洗滌，獲得黃色固體的標題化合 10 物：MS 351 (M+H) ; HPLC : Rt= 2·52 min· (95/5/0.1 (A) 5/95/0.1 (B)水 /CAN/ 甲酸 YMC ODS-A 2X50 mm lmL/min，梯度組合：100% A洗脫〇·1 min，線性梯度至2 min時為100% B，保持直至3·5 min)。 15 實施例56
Q N-
經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 流程F,·:·主鄉杜：3_(吡啶士基駿基吲哚_2_甲酿 5·甲基-之-氧-『1，31二1雜環成嫌_4_基甲酷 -142- 1296926 Λ7 B7 五、發明說明〇1) 按照實施例51的方法，用4-(溴甲基)-5-甲基-1，3_二 氧雜環戊烯酮（其按照Saari，W. S.，等，J. Meri Chem·，（1984)，27，713-717中所述的方法製備)代替2_ 氣-N，N-二乙基乙酿胺。通過柱色譜法在石夕膠上純化，用 5 10% MeOH/EtOAc、然後用 15% MeOH/EtOAc 洗脫，獲得 淡黃色粉末的標題化合物：MS 366(M+H)。 實施例57
經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 10 流_程F : 3_(口比咬·4_基胺基V17Z-,啤-9,甲酸二a其聪： 基曱酿氣基甲酷 史間體··二乙某脸其甲酸氯曱基酯 •2〇°C下向攪拌著的氣甲基氣甲酸酯(7 〇9 g，5 5 mm()1) 15在庚烷（100 mL)中的溶液中，逐滴添加二乙胺（1〇4 g， 14·7 mmol)的庚烷(50 mL)溶液。將内部溫度保持在_15〇c 至-5〇C之間並且lh後用水使反應驟停。分層並且用1〇% 含水HC1、水和NaHC〇3溶液洗滌有機相。乾燥有機層 (MgS〇4)，過濾並且減壓濃縮，獲得8.3g標題化合物。曰 20 -143- 本紙張尺度適用中國國家標準(〇^)八4規格（21〇χ297公釐） A7 B7 1296926 步驟F4 : ^(毗嘧-4-基胺基)-1丑-吲哚-2-甲醯二乙基胺基甲 醯氮基甲酯 常溫下將3-(4-吡啶基胺基)-1Η-吲哚-2-甲酸(2.0 g，8.0 mmol)、二乙基胺基甲酸氣甲基酯（1.7 g，10.4 mmol)和 5 K2C03在DMF (50 mL)中的混合物攪拌過夜。向反應混合 物添加EtOAc (400 mL)，用鹽水溶液(400 mL)洗滌有機層 並且濃縮成油。在矽膠（40 g)上閃蒸色譜法純化，用 EtOAc、然後用10% MeOH/EtOAc洗脫。收集相似的級分 並且真空濃縮，得到油。從庚烷-乙醚中結晶，獲得丨·1 g 10 (36%)白色粉末狀標題化合物：MS 383(M+H)。 實施例58
Q
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Η Ο 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 15 流程F : 3彳吡啶-4-基胺基VI//-#卜朵-2-曱醛旅嗓_-1-幾, 基氧基甲酷 中間體：1-哌啶羧酸氣曱酯 按照實施例57的方法，用哌啶代替二乙胺，獲得標 題化合物。 20 .144- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐） A7 B7 1296926 五、發明說明（143) 步驟F4 : 3-(吡啶-4-基胺基)-1//-吲哚-2-甲酸哌啶-1-羰基氣 基甲酯 按照實施例57步驟F4的方法，用1-哌啶甲酸，氣甲 酯代替二乙基胺基甲酸氣甲酯.，獲得標題化合物固體： 5 MS 395(M+H)。 實施例59
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N- -H
0
經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 10 流程F : 3-(吡啶-4-基胺基)-1丑-吲哚-2-甲酸嗎咁-4-羰 基氣基曱酯 中間體：4-嗎咁羧酸氣甲酯 按照實施例57的方法，用嗎啉代替二乙胺，獲得標 題化合物。 15 步驟F4 : 3-(吡啶-4-基胺基)-1沁吲哚-2-曱酸嗎咁-4-羰基氣 基曱酯 按照實施例57的方法，用4-嗎咁羧酸氣曱酯代替二 乙基胺基曱酸氣甲酯，獲得標題化合物固體：MS 20 397(M+H)。 -145- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1296926 五、發明說明（l44 ) 實施例60
Ο Η 5 流裎F，步驟F4 : 3-(吡啶-4-基胺基)_1Η-吲哚-2-甲酸 2_乙氣基魏基胺基-2-氣-乙醋 按照實施例57的方法，用N-氣乙醯胺基甲酸乙酯代 替二乙基胺基曱酸氣甲酯。通過柱色譜法純化，用10% MeOH/EtOAc、然後用 15% MeOH/EtOAc 洗脫。從 CH3CN 10 中重結晶，獲得標題化合物固體：MS 383(M+H)。 實施例61 15
Ο 流程F · 3-(°比咬_4_基胺基) 1//-^引口朵_2_甲酸卞基胺基 -146- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐） A7 B7 1296926 五、發明說明（145) 甲醯氧基甲酯 Φ胡艚：（茉基甲基)胺基甲酸氣甲酯 按照實施例57的方法，用苄基胺代替二乙胺，獲得 標題化合物。 步_ F4 : 3-(°比咬-4-基胺基p朵-2-甲酸苦基胺基甲酿 氣基甲酯 按照實施例57步驟B的方法，用（苯基甲基)胺基甲酸 氣曱酯代替二乙基胺基曱酸氯甲酯。通過柱色譜法純化， 10 用 10% MeOH/EtOAc、然後用 20% MeOH/EtOAc 洗脫， 獲得標題化合物固體：MS 417(M+H)。 計 實施例62
4·! 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 15 座程F : 3-(吡啶-4-某胺基Vli/-吲哚-2-甲醢異丙氣基 羰基氣基甲酯 :氣甲基碳酸1-甲酯 將氣曱酸氣甲酯（3.55 g，27.5 mmol)在二氣甲烷(30 20 mL)中的溶液攪拌並且冷卻至_15°C，逐滴添加異丙醇（1·51 -147- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1296926 B7
g ’ 2·5 mmol)在吼咬(2·18 g，2.5 mmol)中的溶液，以便保 持内部溫度在-18〇C至-5〇C之間。2h之後，在水中停止反 應，分層並且用10%HC1水溶液、水、NaHC〇3溶液和水 洗滌有機相。用MgS04乾燥，過濾並且濃縮，獲得3.6容 5 無色油狀的標題化合物。 盘显—F4 : 3十比啶-4_基胺某Vl/f-吲哚-2-甲酸異丙氳篡 氡基甲酯 按照實施例57的方法，用氣基碳酸ι_甲酯代替二己 10基胺基甲酸氣甲酯並且向反應混合物添加Kl(lOOmg)。使 反應進行3小時，獲得標題化合物固體：MS 370(M+H)。 實施例63
經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 15 疫進3·(吼啶-4-基胺基Vli/-吲难-2-曱酸金剛烷ί 基氧基羰基氧基甲酯 土氣甲基1-金剛校基碳酸酯 按照實施例62的方法，用1-金剛醇代替異丙醇，獲 20 得標題化合物。 -148- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（21〇x297公釐） A7 B7 1296926 五、發明說明（l47) 步驟F4 : 3-(吡啶-4-基胺基)-1好-吲哚-2-甲酸金剛烷-1·基氣 基羰基氣基甲酯 按照實施例62的方法，用氣甲基1-金剛烷基碳酸酯 5 代替氣甲基碳酸1-甲酯，但使反應進行過夜。獲得標題化 合物固體：MS 462(Μ+Η)。 實施例64
經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 10 流程F : 3·(吡啶-4-基胺基)-1//-吲哚-2-甲酸1,1,2-三甲 基-丙氧基羰基氧基曱酯 中間體：碳酸氣甲酯U,2-三曱基-丙酯 按照實施例62的方法，用2,3-二曱基-2-丁醇代替異 15 丙醇，獲得標題化合物。 步驟F4 : 3-(吡啶-4-基胺基吲哚-2-甲酸1丄2-三甲基-丙氧基羰基氧基甲酯 按照實施例62的方法，用碳酸氯甲酯1，1，2-三甲基-20 丙酯代替氣甲基碳酸1-曱酯，但使反應進行過夜。獲得標 -149- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） A7 B7 1296926 五、發明說明（HS) 題化合物固體：MS 412(M+H)。 實施例65
經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 流程F : 3-(吡啶-4-基胺基)-1沁吲哚-2-甲酸環己基氣 基羰基氧基甲酯 中間體：碳酸氣甲酯1,1,2-三甲基-丙酯 按照實施例62的方法，用環己醇代替異丙醇，獲得 10 標題化合物。 步驟F4 : 3-(吡啶-4-基胺基吲哚-2-甲酸環己基氧基羰 基氧基甲酯 按照實施例62的方法，用氣甲基環己基碳酸酯代替 15 氯甲基碳酸1-甲酯，使反應進行過夜。獲得標題化合物固 體：MS 410(M+H)。 實施例66 -150- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐） A7 1296926 B7 五、發明說明（149 )
〇
0 流裎F，步驟F4 : 3-(吡啶-4-基胺基νίπ吲哚_2_甲酸 乙醯氧基甲酯 5 將3-(4-吡啶基胺基)-1Η-吲哚-2-甲酸(1.27 g，5 mmol) 在DMF(25 mL)中的混合物50°C下攪拌10 min，並且添加 Cs2C03(1.63 g，5 mmol)。10 min之後添加乙酸溴曱酯 (0.95 g，6.21 mmol)並且一分鐘之後在含水NH4C1溶液中 停止反應。用EtOAc萃取並且用NaHC03水溶液洗滌萃取 10 液。乾燥萃取液(MgS04)，過濾並且真空濃縮，得到固 體。將此固體用EtOAc研製並且獲得標題化合物固體： MS 326(M+H) 〇 實施例67 h、n 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製
15 Η 〇 〇 流程F，步驟F2 : 3-(吡啶-4-基胺基吲哚-2-甲酸 2,2-二曱基-丙醯氧基曱酯 -151- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） A7 B7 1296926 五、發明說明（150) 將3-(4-吡啶基胺基)-1Η-吲哚-2-甲酸鉀鹽（1.0 g，3.43 mmol)、ΚΙ (0·16 g)、2,2-二甲基-丙酸氯曱酯(0·63 g，4·16 mmol)在DMF(20 mL)中的混合物50°C下攪拌1·5 h 〇冷卻 並且在H20- EtOAc之間分配。用NaHC03水溶液洗滌萃 5 取液，乾燥萃取液(MgS04)，過濾並且真空濃縮，得到粗 產物。將產物在矽膠柱上色譜法純化，用8% MeOH/EtOAc洗脫，獲得0.64 g標題化合物固體；MS 326(Μ+Η) ，πι·ρ· 223_224°C ，TLC(矽膠，8%
MeOH/EtOAc)，Rf= 0.30。 10 實施例68
經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 流程F，步驟F2 : 3-(吡啶-4-基胺基)-1//-吲哚-2-曱酸 15 戊醯氧基甲酯 按照實施例67的方法，但是戊酸氣曱酯代替2,2-二曱 基-丙酸氣甲酯並且使反應在50°C下進行過夜。通過柱色 譜法在矽膠上純化，用5% MeOH/EtOAc洗脫，獲得標題 化合物：MS 368(M+H)。 20 實施例69 -152- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐） A7 B7 1296926 五、發明說明（151)
經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 流程F : 3-(吡啶-4-某胺基）-1Η-吲哚-2_甲酸2-氳-哌 哈-1-基-甲醋 5 中問艚·· 氮甲基V2-畈啶酮 按照 Moreira，R·等，Tet. Lett.，（1994)，35，7107-7110中所述的方法製備標題化合物。由此，在N2條件 下，將2-喻唆嗣（1.0 g，10.09 mmol)和低聚甲搭(500mg)的 混合物在無水THF (30 mL)和氣三甲基矽烷(30 mL)中回流 10 過夜。真空濃縮溶劑，得到油狀N-(氣甲基)·2·哌啶酮（1.30 g). 步驟F2 : 3-〔吡啶-4-某胺某V1H-吲哚-2-甲酸2-氣-畈啶-1-基曱酯 15 將3-(4-吡啶基胺基)-1Η-吲哚-2-甲酸鉀鹽（1.6 g，5.49 mmol)在無水THF (30 mL)中的懸浮液在油浴中50QC下加 熱20 min。逐滴添加N-(氣甲基)-2-旅唆酮（850mg，5·76 mmol)在無水THF(5 mL)中的溶液。30 min後，冷卻反應 -153- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐） A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1296926 五、發明說明（⑸）
物至常溫。加水（100 rnL)並且用乙酸乙酯萃取（3x100 mL)。合併有機層，用NaHC03(飽和）、水、鹽水洗滌，用 Mgs〇4乾燥，然後濃縮。將殘餘物在ISCO RediSep 35克 石夕膠柱上純化，用存在於乙酸乙酯中的5%甲醇、然後用 5 存在於乙酸乙酯中的20%甲醇洗脫。合併含產物的級分並 且濃縮’得到白色固體的標題化合物(520mg，26%) : MS 365 (M+H)，TLC (矽膠，MeOH/EtOAc 25 : 75)，Rf= 0.18，咕 NMR (DMSO-d6) δ 11·77 (1H，s) , 8·46 (1H， s)，8·08 (2Η，d，J=5.7Hz)，7·50 (3Η，m)，7.09 (1Η， 10 m)，6·58 (2H，d，J=6Hz)，5·54 (2H，s) , 3.27 (2H， br2)，2·23 (2H，brs)，1.66 (4H，brs)· 13C NMR (DMSO-d6) δ 170.00，160.43，152.25，149.44，135.54，125.60， 122.96，121·84，120.22，119·87，118.99，113.00， 108.59，70.99，47.00，31·99，22.39，20.60。 15 實施例70
-154- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐）
1296926 A7 B7 五、發明說明（153) 迹AF : 3-(吡咬二4-基胺基VI//-吲哚-2-甲酸(茉甲醯其-乙氧基魏幕甲基-胺基)-甲醋 N-氢甲基-乙基装甲醯胺某乙酸酯 將苯甲醯胺基乙酸乙酯（1.0 g，4.83 mmol)和低聚甲路 5 (450 mg)在氣三甲基石夕烧(40 mL)中的混合物在N2條件下 回流過夜。真空濃縮溶劑，得到油狀的N·氣甲基-乙基苯 甲醢胺基乙酸酯（1.2 g，98%)。 : 3-(吡啶-4-基胺某吲哚-2-甲酸（茉甲醯某-乙 10 氣某羰基甲基-胺某V甲酯 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 在N2條件下，將3_(4_吡啶基胺基)-1Η-吲唏-2-甲酸鉀 鹽（1.3 g，4.46 mmol)在無水THF(20 mL)中的懸浮液在油 浴中50°C下加熱20 min。逐滴添加N-氣甲基-乙基苯甲醯 胺基乙酸酯（1·2 g，4.69 mmol)在無水THF(5 mL)中的溶 15 液。30 min後，冷卻反應物至常溫。加水並且用乙酸乙酯 萃取。用NaHC03(飽和）、水、鹽水洗滌有機層，用 MgS〇4乾燥，然後濃縮。將殘餘物在isc〇 RediSep 35克 矽膠柱上純化，用50%庚烷/乙酸乙酯（200 mL)、100%乙 酸乙酯（300 mL)、然後用1%曱醇/乙酸乙酯洗脫。合併含 2〇 產物的級分並且濃縮，得到黃色固體的標題化合物 (834mg) : MS 473(M+H)，NMR (DMSO-d6) δ 11.81 (1H，s)，8·47 (1H，s)，8.10 (2H，d，J=5.8 Hz)，7.38 (8H，m)，7.08 (1H，m)，6·66 (2H，J=6.0 Hz)，5·49 (2H，s)，4.30 (2H，s)，4·09 (2H，m)，1·99 (3H，m)· )· -155- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐） 1296926 A7 B7 五、發明說明（l54) 13C NMR (DMS0-d6) δ 171.5 卜 168·86，160·30，152·07， 149.58，135.72，134.06，130.51，128.46，127.13， 125.76，122.65，122.34，120.50，119.90，118.51， 113·06，108·89，74·53，60·79，59·74，47·52，20.75， 5 14.07，13·95。 實施例71
Q Ν一 Η
Ο 計 線 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 10 流程F : 3-(吡啶-4-基胺基哚-2-甲酸2-氣-吡咯 烷-1-基甲酯 中間體：Ν-(氣曱基)-2-吡咯烷酮 將2-°比洛烧酮（1.0 g，11.75 mmol)和低聚曱酸(500mg) 在氣三甲基矽烷(40 mL)中的混合物在N2條件下回流2 15 hrs。真空蒸發溶劑，得到油狀的N-(氣曱基)-2-吡咯烷酮 (1.55 g，99%)。 步驟F2 : 3-(吡啶-4-基胺基MH-吲哚-2-曱酸2-氣吡咯烷- -156- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1296926 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 五、發明說明（155) 1-基-甲酯 將3_(4-吡啶基胺基)-1Η-吲哚·2_甲酸_鹽(2.0 g，6.86 mmol)在無水THF(100 mL)中的懸浮液在油浴中50。(：下加 熱20 min。逐滴向其中添加N-(氣甲基)-2-吡哈烧酮（1.10 5 g，8.23 mmol)在無水THF(5 mL)中的溶液。3 hrs後，冷卻 反應物至常溫。加水（100 mL)並且用乙酸乙酯萃取(3x100 mL)。合併有機層並且用NaHC03(飽和）、水、鹽水洗滌， 用MgS〇4乾燥，然後濃縮。將殘餘物在ISc〇 RediSep 10-克矽膠柱上純化，用乙酸乙酯、然後用存在於乙酸乙酯中 10的5%甲醇洗脫。合併含產物的級分並且濃縮，得到淡黃 色固體的標題化合物(205mg) : MS 313(M+H)，TLC (矽 膠，MeOH/EtOAc 1 : 1)· Rf = 0·33，NMR (DMSO-d6) δ 11·78 (1H，s)，8·47 (1H，s)，8·09 (2H，d，J=6.2 Hz)， 7·49 (3H，m)，7.09 (1H，m)，6.59 (2H)，5.76 (殘留的 15 CH2C12)，5.44 (2H，s)，3·37 (2H，m)，2·22 (2H，m)， 1·87 (2H，m) 〇 實施例72
•157- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐） A7 B7 1296926 五、發明說明（156) 漭裎F : 3_(吡啶-4·基胺基VI//-吲π朵-2-甲醢Γ笑篡彳甲 笑-4-碏醯基V胺基1-甲篮 中Fal體：N-氣曱基-N-笨基-4-甲基笨墙酿胺 5 按照 Iley，J·等，Bioorg. Med. Chem.，（2000)，8， 1629-1636中所述的方法製備標題化合物。由此，將N-苯 基-對·甲苯績醯胺(3.0 g，12.13 mmol)和低聚曱搭(6〇〇mg) 的混合物在氣三曱基梦烧(50 mL)中回流3 hrs。真空濃縮 溶劑，得到油狀的N-氣甲基-N-苯基-4-曱基苯磺醯胺(3.2 10 g)。 步驟F2 : 3·(吡啶-4-基胺基Μπ吲哚-2-甲酸Γ策某彳甲i 4-磺醯基V胺基1-甲酯 在N2條件下，於60°C將3_(4_吡啶基胺基)-1Η_吲嘴-15 2-甲酸鉀鹽（2.2 g，7.5 mmol)溶解在無水THF和 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 DMF(90 : 10 mL)的混合物中。冷卻至〇°C並且逐滴添加 N-氣甲基-N-苯基-4-曱基苯磺醯胺(2.6 g，8.80 mmol)在無 水THF中的溶液(5mL)。20 min後加水(100 mL)，然後用 乙酸乙酯萃取(4 X 50 mL)。合併有機層，用NaHC〇3(飽 2〇 和）、水、鹽水洗滌，用NajO4乾燥，然後濃縮。將殘餘 物在ISCO RediSep 35克矽膠柱上純化，用乙酸乙酯、然 後用30%甲醇/乙酸乙酯洗脫。合併含產物的級分並且濃 縮成固體。將此固體溶解在甲醇中並且用乙醚沈澱，得到 黃色固體的標題化合物（390mg) : ESI/MS 313 (M+H)， -158- 本紙張尺度適用中國國家標準((^幻八4規格（210 χ 297公釐） 1296926 A7 B7 五、發明說明（m NMR (CD3OD) δ 8·05 (2H，2br d，J=6.5Hz，J=6.8 Hz)， 7·38 (14H，m)，6.61 (2H，br d，J=7.0 Hz)，5.93 (2H， s)，2.44 (3H，s)。 實施例73
Ο Ο 流程F : 3_(吡啶-4-基胺基Vi//-吲喵-2-甲酸(笈碏！^ 甲基-胺基V甲酷 10 中間體：N-氣甲基-N-甲基-4-甲某茉碏醯胺 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 將N-甲基苯續醢胺(2.0 g，11·68 mmol)和低聚甲媒 (600 mg)的混合物在氣三甲基矽烷(40 mL)中回流2·5 hrs。 真空濃縮，得到白色固體的N-氣曱基甲基-4-甲基苯磺 醯胺(2.5 g)。 15 步驟F2 : 3彳吡噔-4-基胺基Vl/f-哨畔甲酸（笨磺連 基-胺基曱酉旨 在乂條件下，於60°C將3-(4-吡啶基胺基 2-曱酸钟鹽（2.2 g，7.55 mmol)溶解在無水THF和 -159- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐） A7 B7 1296926 五、發明說明（丨58) DMF(150 : 40 mL)的混合物中。冷卻至〇°C並且逐滴添加 N-氣甲基-N_甲基-4-甲基苯磺醯胺(2.0 g，9.10 mmol)在無 水THF (10 mL)中的溶液。20 min後，加水(100 mL)，然 後用二氣甲烷萃取（3x100 mL)。合併有機層，用 5 NaHC03(飽和）、水、鹽水洗滌，用Na2S04乾燥，然後濃 縮。將殘餘物在ISCO RediSep 35克矽膠柱上純化，用 50%庚烷/乙酸乙酯、乙酸乙酯、然後用1〇〇/0甲醇/乙酸乙 酯洗脫。合併含產物的級分並且濃縮成油。將此油溶解在 曱醇中並且添加乙醚，獲得白色固體的標題化合物 10 (800mg) ： MS ： 437(M+H),1H NMR (DMS0-d6) δ 11.52 (1H，s)，8·29 (1H，s)，8·04 (2H，d，J=5.5 Hz)，7·76 (2H，d，J=7.2 Hz)，7·43 (6H，m)，7·03 (1H，m)，6.46 (2H，d，J=6.0 Hz)，5.60 (2H，s)，2·79 (3H，s) 〇 15 實施例74
N 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製
I
H 產: 3-(吡啶-4-基胺基)-17/-崆喵_2-甲酸「甲基彳曱 -160- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNQA4規格（210x297公釐） A7 B7 1296926 五、發明說明（l59) 装-4-碏醯篡V胺基1-甲酯 中問體：N-氣甲基-N-甲基-4-甲基策碚醯胺 將N-甲基-4_甲基苯磺醯胺(2.3 g，12·4 mmol)和低聚 甲醛(600mg)在氣三甲基矽烷(40 mL)中的混合物回流2 5 hrs。真空濃縮，得到白色固體的N_氣甲基-N-甲基-4-甲基 苯磺醯胺(2.8 g)。 步驟F2 : 吡啶-4-基胺基)-1//-《喵-2-甲酸Γ甲基_(甲茉· 4-碏醯基V胺基1-甲酯 10 在N2條件下，於60°C將3-(4-吡啶基胺基)-1Η·吲哚- 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 2-曱酸鉀鹽（2.0 g，6.89mmol)溶解在無水THF和 DMF(60 : 10 mL)的混合物中，冷卻至-5°C，添加哌啶基甲 基聚苯乙烯HL樹脂(NOVA #01_64_〇212，3〇mg)，接著逐 滴添加N-氣甲基-N_甲基-4-甲基苯磺醯胺（1.9 g，8.34 15 mmol)在無水THF(10 mL)中的溶液。30 min後，加水(1〇〇 mL)，然後用二氣甲烧萃取(3 X 50 mL)。合併有機層，用 NaHC03(飽和）、水、鹽水洗滌，用MgS04乾燥，然後濃 縮。將殘餘物在ISCO RediSep 35-克矽膠柱上純化，用 50%庚烷/乙酸乙酯、乙酸乙酯' 然後用10%甲醇/乙酸乙 20 酯洗脫。合併含產物的級分並且濃縮成固體（1·1 g)。用甲 醇/乙醚洗滌此固體並且乾燥，得到白色固體的標題化合 物（720mg) : TLC (矽膠，EtOAc/MeOH，8 : 2)，Rf= 0·49，]H NMR (DMSO-d6) δ 11.47 (1H，s)，8·32 (1H， s)，8.09 (2Η，d，J = 5·7 Hz)，7.63 (2Η，d，J = 8.3 Hz)， -161- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1296926 A7 B7 五、發明說明（160) 7·48 (1H，d，J = 8·3 Ηζ)，7·34 (2H，m)，7·14 (3H，m)， 6·52 (2H，d，J = 6.0 Hz)，5·61 (2H，s)，2.83 (3H，s)， 2·05 (3H , s)。 5 實施例75
經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 流程F : 3-(吡啶-4-基胺基)-1//-吲哚-2-甲酸焱7"農羞 羰基氣基甲酯 10 中間體：叔丁基氣甲基碳酸酯 按照實施例62的方法，用叔-丁醇代替異丙醇，獲得 標題化合物。 步驟F4 : 3-(吡啶-4-基胺基吲哚-2-甲酸焱T歲差羰基 15 氧基曱酯 按照實施例62的方法，用叔丁基氣曱基碳酸酯代替 氣曱基碳酸1-甲酯，但使反應進行過夜。獲得標題化合物 固體：MS 384(M+H)，HPLC : Rt= 2.94 min。 20 實施例76 -162- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1296926 A7 B7 五、發明說明（⑹）
M(3-笨基丙醯基）甲基胺基Vl/f-6-氣-吲喵-2-甲酸^ 10 將溶解在5 mL THF和5 mL水溶劑混合物中的3_((3 本基丙酿基）甲基胺基)-1//-6-氣-弓卜朵-2-甲酸乙S旨(213mg , 〇·55 mmol)和氳氧化鋰(35mg，〇·83 mmol)的溶液室溫下授 拌過夜。用水(〜10 mL)稀釋此反應混合物並且用乙酸乙酽 洗滌以除去任何有機雜質。用1N鹽酸酸化含水層，以沈 派出標題化合物。過濾分離標題化合物並且在6〇(>c下真 空乾燥，得到 197mg (99%產率）；mp 220。- 221°C。 實施例77
經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 15 曱基胺基V4.6-二氮-1H-+朵 1 製 按照US專利號5,675,018實施例11所述的方 備標題化合物；mp 275°C。 163- 本紙張尺度適用中^孫平(CNS)A4規格（2Ϊ0 χ 297公 1296926 A7 B7 五、發明說明（162) 實施例78
經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 5 3-((茉甲醢基)胺基V6-氮-1H-吲哚-2-甲酸 按照US專利號5,675,018實施例4所述的方法，製備 標題化合物；mp 205° - 210°C(分解）。 實施例79
3-((笨曱醯基)胺基)-6-氮-1H-吲哚-2-曱酸2-二甲基胺基-乙 m 按照US專利號5,675,018實施例5所述的方法，製備 15 標題化合物。 -164- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐） A7 B7 1296926 五、發明說明（163) 實施例80
CI
5 3-((4-氣茉甲醯基）甲基胺基V4,6-二氣-1H-咤哚-2-甲酸 按照US專利號5,675,018實施例28Q所述的方法， 製備標題化合物；mp 279° · 283°C。根據C17HnCl3N203分 析計算：C，51·35 ; Η，2.79 ·· N，7·04 ;實際：C， 51.30 ; Η，2·81 ; Ν，7·00。 10 實施例81
經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 3-((笨曱醯基）苄基胺基)-4,6-二氣-1Η-吲哚-2-曱酸 -165- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） A7 B7 1296926 五、發明說明（l64) 按照US專利號5,675,018實施例17所述的方法，製 備標題化合物；mp 266° - 267°C。 實施例82
10 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 3-((4-哌啶醯基）甲基胺基)-6-氣-1H·吲哚-2-甲酸 按照US專利號5,675,018所述的方法，製備標題化合 物0 實施例83
CH, Η 3-((笨曱醯基）曱基胺基)-4,6-二氣-1Η-吲哚-2-甲酸乙酯 15 按照US專利號5,675,018實施例10所述的方法製備 標題化合物；mp 143° - 144°C。 166- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1296926 A7 B7 五、發明說明（165) 實施例84
5 3·((茉甲醯基）甲基胺基V5,6-二氯-1H-吲哚-2-甲酸 按照US專利號5,675,018實施例41c所述的方法製備 標題化合物。 實施例85
經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 3-((笨曱酿基）乙基胺基)-4,6-二氣-1 H-p引p朵-2-曱酸 按照US專利號5,675,018實施例15所述的方法製備 標題化合物；mp 254° _ 256°C。 15 實施例86 -167- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐） 1296926 A7 B7 五、發明說明（l66)
3-((茉甲醯基）甲基胺基)-6-氟-1H-吲哚-2-甲酸 按照US專利號5,675,018實施例4L所述的方法製備 5 標題化合物；mp 142° - 143°C。根據CnH13FN203分析計 算：C，55·00 ; Η，5.45 : N，11.66 ;實際：C，55.09 ; Η，5·19 ; Ν，11.63。 實施例87
經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 3-((2-芊基笨曱醯基)胺基)-4,6-二氣-1Η-吲哚-2-甲酸 按照US專利號5,675,018實施例21所述的方法製備 標題化合物；mp 234° - 235°C。根據C23H16C12N203分析計 -168- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） A7 B7 1296926 五、發明說明（167) 算：C，62.88 ; Η，3·67 : N，6.38 ;實際：C，63.04 ; Η，4·05 ; Ν，5.97。 實施例88 Ο
經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 3-((3-氟茉甲醯基）甲基胺基V4,6-二氣-1Η-吲哚-2-甲酸 按照US專利號5,675,018實施例28j所述的方法製備 標題化合物；mp 270° - 280°C。根據C17HnCl2FN203分析 10 計算：C，53·57 ; Η，2.91 : N，7.35 ;實際：C，53.54 ; Η，3·15 ; Ν，7.24 〇 實施例89
15 3-((笨曱醯基）芊基胺基)-4,6-二氣-1Η-吲哚-2-曱酸乙酯 -169- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） A7 B7
1296926 —1— 五、發明說明（l68) 按照US專利號5,675,018實施例16所述的方法製備 標題化合物；mp 174。- 175°C。 實施例90 5
Idi笨基碏醯某)胺基)-4,6-二氢^ ^ 按照US專利號5,675,018實施例29所述的方法裝備 標題化合物；mp 245。- 247。(：。 10 實施例91
笨基磺醯基)胺某V4.6-二氣-1H-咱上制他 一~ - #述的方法製備 按照US專利號5,675,018實施例3〇所 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 15 標題化合物；mp 229° - 235°C。 實施例92 -170- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1296926 A7 B7 五、發明說明（l69)
3-((茉基碏醯基）甲基胺基V4,6-二氣-1H-吲哚-2-甲酸 按照US專利號5,675,018實施例32所述的方法製備 5 標題化合物；mp 286° _ 290°C。 儘管通過前述的某些實施例已對本發明作了舉例說 明，但不能認為本發明就此受到限制；相反，本發明包括 了如本文之前所公開的一般範圍。在不背離本發明的實質 10 和範圍的前提下可以作出各種改進方案和實施方案。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 -171- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐）

Claims (1)

  1. 六、申請專利範圍 專利申請案第92109279號 ROC Patent Appln. No.92109279 修正後無劃線之申請尊利範圍中文本-附件(三） — Amended Claims in Chinese - Encl.riTT^ (民國96年9月28曰送呈） (Submitted on September 28,2007) 一種供治療過敏反應、哮喘、鼻炎、皮炎、B-細胞淋 巴瘤、腫瘤、抗-細菌、鼻病毒或呼吸道合胞病毒（RSV) 用之醫藥品製造之式（I)化合物之用途： R
    (I) I m 4 其中 10 15 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 20 X和Y相同或不同，並且獨立地選自氫、鹵素、硝 基、胺基、經基、Cl-6烧基、C2-6烯基、C2-6炔基、Cl-6 烧氧基、Cl-6全氟烧基、Cl-6全氟烧氧基、苯基和+ 基，其中苯基或苄基任選被一個或兩個取代基取 代，所說的取代基各自獨立地選自G-6烷基、Ci-6全 氟烧基、齒素、經基或Cl-6全氟烧基或Cl-6全鼠烧氧 基； Z是IHR或S，其中R選自氫、Ci-6烷基、Cm烷基羰 基、Cl-6烧氧基幾基Cl-6烧基、Cl-6烧基胺基甲酿基-Cl-6烧基和Cl-6二烧基胺基曱酿基Cl-6烧基， Rl選自氮、Cl-6烧基、C2-6稀基、C2-6快基、Cl-6全鼠燒 基、C3-8環烷基、C3-8環烷基G-6烷基、Cw烷氧基Cm 烧基、經基C1-6烧基、胺基C1-6烧基、一或·一-Cl-6烧 基-胺基Cl-6烧基、甲醯基、Cl-6烧基幾基、胺基Cl-6 烷基羰基、Cw烷氧基羰基、苯基、二苯基CM烷基 -172 - 訂 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） 92161B-接 1296926 A8 B8 C8 D8 六、申請專利範圍 和苯基G-6烷基、苯基羰基Ci-6烷基、苯氧基G-6烷 基，其中苯基任選被一個或兩個取代基取代，所說 的取代基各自獨立地選自烷基、G-6全氟烷基、 鹵素、經基或Cl-6全默烧基或Cl-6全氣烧氧基； 5 R3是
    R4 R4 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 其中 10 R4選自氫、鹵素、石肖基、胺基、經基、Cl-6烧基、Cl-6烧 氧基、G-6全氟烷基、G-6全氟烷氧基、苯基和苄基， 其中苯基或苄基任選被一個或兩個取代基取代，所 說的取代基各自獨立地選自Cm烷基、Ci-6全氟烧 基、_素、羥基或G-6全氟烷基或Ci-6全氟烷氧基； 15 且 η是〇-4的整數；並且 R2選自氫、Cm烷基、Cw全氟烷基、全氟芳基、氳茚 -173 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐） 1296926 A8 B8 C8 D8 10 六、申請專利範圍 基、Cl-6烧氧基Cl-6烧基、C2-6酿氧基Cl-6烧基、Cl-6烧 氧基羰基G-6烷基、G-6烷氧基羰基氧基CH烷基、C3-8 環烷基、C3-8環烷氧基羰基氧基-CM烷基、金剛烷氧 幾基氧基Cl-6烧基、C3-8環烧氧基幾基-Cl-6烧基、一 或二-Cl-6烧基胺基_Cl-6烧基、C3-8氮雜環烧基Cl-6烧 基、一或二-Cl-6烧基胺基甲酿基-Cl-6烧基、C3-8氮雜 環烷基羰基氧基C!-6烷基、苄基Ci-6烷基胺基甲醯基 Cl-6烧基、一或二-Cl-6烧基胺基甲酿氧基Cl-6烧基、 C3-8氮雜環烷基羰基氧基-G-6烷基、苄基G-6烷基胺 基甲醯氧基C!-6烷基、苄基胺基曱醯氧基Ci-6烷基、 Cl-6烧氧基幾基胺基-氧-Cl-6烧基、 A N- ή2- O
    .CH 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 及 ίι 'π\ O hT R 2 其中 15 Rs是氫或Ch烷基， Re是Ci-6烷基、苯基或甲苯基，並且 -174 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1296926 A8 B8 C8 D8 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 六、申請專利範圍 A 是 CH2、Μ 或 0， 或其醫藥上可接受之鹽，任選與醫藥上可接受之載劑 聯用。 2. 如申請專利範圍第1項之用途，其中治療的是過敏反 5 應。 3. 如申請專利範圍第1項之用途，其中治療的是哮喘。 4. 如申請專利範圍第1項之用途，其中治療的是鼻炎。 5. 如申請專利範圍第1項之用途，其中治療的是皮炎。 6. 如申請專利範圍第1項之用途，其中治療的是鼻病毒 10 或呼吸道合胞病毒。 7. 如申請專利範圍第1項之用途，其中化合物具有： X和Υ相同或不同，並且獨立地選自氩、鹵素、G-3烧 基、Cl-3全氟烧基、Cl-3烧氧基、Cl-3全氟烧氧基、苯 基和苄基； 15 Z是N-R或S，其中R選自氫、Cw烷基、烷氧基幾 基Cl-3烧基和Cl-3二烧基胺基甲酿基-Cl-3烧基； Rl是氫、Cl-6烧基或苯基Cl-6烧基； r3是 20
    N J N^N -175 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1296926 A8 B8 C8 D8 六、申請專利範圍 10 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 15 〇II •C(CH2)r
    R4
    其中 R4是氫、氟或C!-6烷基；且 η是0-3的整數：並且 R2選自：氫、C!-4烷基、全氟芳基、氫茚基、G-3烷氧基 Cl-3烧基、C2-5酿氧基Cl-3烧基、Cl-3烧氧基幾基Cl-3娱》 基、G-4烷氧基羰基氧基Ch4烷基、C4-6環烷氧基羰基 氧基_Cl-3烧基、金剛烧氧魏基氧基_Cl-3烧基、一或 二-Cl-3烧基胺基-Cl-3烧基、C4-6氮雜環烧基-Cl-3烧 基、一或二-G-3烷基胺基甲醯基-Ci-3烷基、C4-6氮雜 環烷基羰基C!-3烷基、苄基Ci-3烷基胺基甲醯基-G-6 烷基、一或二-G-3烷基胺基甲醯氧基G-3烷基、C3-8 氮雜環烷基羰基氧基Ci-6烷基、苄基胺基甲醯氧基 Cl-3烧基、Cl-3烧氧基戴基胺基-魏基Cl-3烧基、 -176 - 本紙張尺度適用申國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐） 1296926 A8 B8 C8 D8 六、申請專利範圍 A N- :H2一 0 V o. /CH2- _N O H«C- 2I N
    及 o II ll\ O N' Re 10 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 15 其中 R5是氫或Cl-3烧基， R6是Cl-6烧基、苯基或甲苯基，並且 A是0， 或其醫藥上可接受之鹽，任選與醫藥上可接受之載劑 聯用。 如申請專利範圍第1項之用途，其中化合物具有： X和Y相同或不同，並且獨立地選自氫、氟、氯、三 氟甲基、甲氧基、苯基和苄基； Z是N-R或S，其中R選自氫、甲基、乙氧基羰基甲基 和二乙基胺基曱醯基甲基； Ri是氮、甲基或丙基； R3是 -177 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1296926 Α8 Β8 C8 D8 六、申請專利範圍
    〇 II •C(CH2)n N^N Μ
    〇II -S(CH2)n IIο
    r4 r4 οII -C(CH2)n
    ,Ν οII •c(ch2) NH R. 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 R. 其中 5 R4是氫；且 n是0-2的整數；並且 R2選自氫、甲基、乙基、叔-丁基、五氟苯基、氫茚 基、甲氧基乙基、乙氧基丙基、乙醯氧基甲基、 2, 2-二甲基丙醯氧基甲基、戊醯氧基曱基、甲氧基 10 羰基-1-乙基、乙氧基羰基甲基、異丙氧基羰基氧基 甲基、叔丁氧基羰基氧基甲基、環己氧基羰基氧基 甲基、金剛烷氧羰基氧基甲基、二乙基胺基乙基、 二甲基胺基乙基、σ辰咬基-1-乙基、二乙基胺基曱酿 基甲基、苄基乙基胺基甲醯基甲基、2-氮雜環丁烷-15 1-基-2-氧-乙基、2-氧-2-。比σ各烧-1-基-乙基、嗓 啶-1-羰基氧基甲基、二乙基胺基甲醯氧基甲基、苄 基胺基甲酿氧基甲基、乙氧基魏基胺基-獄基甲基、 -178 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） 8 8 8 8 A B c D 1296926 六、申請專利範圍
    經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 其中 r5是氫或甲基， 5 R6是甲基、苯基或甲苯基，並且 A是0， 或其醫藥上可接受之鹽，任選與醫藥上可接受之載劑 聯用。 9.如申請專利範圍第1項之用途，其中化合物選自： 10 3-(4-吡啶基胺基）-1Η-吲哚-2-曱酸， 3-(4-吡啶基胺基）- 1H-吲哚-2-曱酸乙酯， 6-三氟曱基-3-(4-吡啶基胺基）-1Η-吲哚-2-曱酸乙 酯， 6-氯-3-(4-吡啶基胺基）-1Η-吲哚-2-甲酸乙酯， 15 5-氯-3-(4-吡啶基胺基）-1Η-吲哚-2-曱酸乙酯， 6_氣-3-(4_11比咬基胺基）-111-151弓丨°朵_2-甲酸乙醋’ -179 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐） 1296926 Α8 Β8 C8 D8 六、申請專利範圍 5- 敗-3-（4-吼°定基胺基）-1Η-ρ引0朵-2-甲酸乙酉旨， 4- 氟-3-（4-11比°定基胺基）-111-口引11朵-2-甲酸叔丁酉旨， 6- 苯基-3-(4-吡啶基胺基）-1Η-吲哚-2-甲酸乙酯， 3 -（4-吡啶基胺基）-1Η-吲哚-2 -曱酸叔丁酯， 5 5, 6-二甲氧基-3-(4-吡啶基胺基）-1Η-吲哚-2-甲酸乙 酉旨， 3-甲氧基-3-(4-吡啶基胺基MH-吲哚-2-甲酸叔丁 酯， 3- (2-吡啶基胺基）- 1H-吲哚-2-甲酸乙酯， 10 3-(嘧啶-2-基胺基）-1Η-吲哚-2-甲酸乙酯， 5- 氟-1-甲基-3-(4-吡啶基胺基）-1Η-吲哚-2-甲酸乙 酯， 4- 氟-1-甲基-基胺基）-1Η-丨ϋ朵-2-甲酸叔丁 酯， 15 5-氯-1-甲基-3-（4-吡啶基胺基）-1Η-吲哚-2-甲酸乙 酯， 6- 氯-1-甲基-3-（4-吼ϋ定基胺基）-lH-口引σ朵-2-甲酸乙 酯， 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1-甲基-3-（4-吡啶基胺基）-1Η-吲哚-2-甲酸馬來酸 20 鹽， 4-氟-3-(4- °比ϋ定基胺基）-1Η-口引σ朵-2-甲酸三氧乙酸 鹽， 4-氣-1-甲基-3-（4-口比咬基胺基）-1Η-口引口朵-2-甲酸三氣 乙酸鹽， -180 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） 8 8 8 8 ABC D 1296926 六、申請專利範圍 5 -曱氧基-3-(4-吡啶基胺基）-1Η-吲哚-2-曱酸三氟乙 酸鹽， 6-氯-1-二乙基胺基甲酿基甲基-3-(σ比唆-4-基胺基）-1Η-吲哚-2-曱酸乙酯， 5 3-(4-吡啶基胺基）-1Η-吲哚-2-甲酸五氟苯基酯， 3一（4-σ比ϋ定基胺基）—-弓丨17朵-2-曱酸2-二乙基胺基-乙 酯， 3-（4-吡啶基胺基）- 1Η-吲哚-2-甲酸2-二甲基胺基-乙 酯， 10 3-（4-11比唆基胺基）-lH-Slσ朵-2-甲酸2-呢唆-1 -基-乙 酯， 3-(吡啶-4-基胺基）- 1Η-吲哚-2-甲酸（S)-1-甲氧基羰 基-乙S旨， 3-（吡啶-4-基胺基）-1Η-吲哚-2-甲酸乙氧基羰基甲 15 酯， 3-(4-吡啶基胺基）- 1Η-吲哚-2-甲酸2-甲氧基乙酯， 3-(4-吡啶基胺基）-1Η-吲哚-2-甲酸3-乙氧基丙酯， 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 3-（σ比咬-4-基胺基）-1Η-口引ϋ朵-2-甲酸2, 3二氫化節-5-基酉旨， 20 3-(吡啶-4-基胺基）-1Η-吲哚-2-甲酸二乙基胺基甲醯 基甲酯， 3-（吡啶-4-基胺基）-1Η-吲哚-2-甲酸2-嗎咁-4-基-2-氧-乙酯， 3-(吡啶-4-基胺基）- 1Η-吲哚-2-甲酸2-氧-2-吡咯烷- -181 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1296926 A8 B8 C8 D8 六、申請專利範圍 1-基-乙酯， 3-（吡啶-4-基胺基）-1Η-吲哚-2-甲酸2-氮雜環丁烷-1-基-2-氧-乙酯， 3-（0比°定-4-基胺基）-1H-叫丨σ朵-2-曱酸（辛基-乙基-胺基 5 甲醯基）-曱酯， 3-（吡啶-4-基胺基）-1Η-吲哚-2-甲酸二乙基胺基甲醯 氧基-甲酯， 3-（吡啶-4-基胺基）-1Η-吲哚-2-甲酸苄基胺基甲醯氧 基甲酯， 10 3 -（σ比咬-4-基胺基）- 1Η-弓卜朵-2-甲酸喻咬-1-戴基氧基 甲酯， 3-（11比咬-4-基胺基）-1Η-^σ朵-2-甲酸嗎咐-4-幾基氧基 甲酯， 3-(吼唆-4-基胺基）-1Η-弓卜朵-2-甲酸2-乙氧基幾基胺 15 基-2-氧-乙酯， 3-比唆-4-基胺基）-1Η-,1:1系-2-曱酸異丙氧基幾基氧 基-甲酯， 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 3-（吡啶-4-基胺基）-1Η-吲哚-2-曱酸1，1，2-三甲基丙 氧基-羰基氧基-甲酉旨， 20 3-比唆-4-基胺基）-lEh,。朵-2-甲酸環己基氧基-獄基 氧基-曱酯， 3-（吡啶-4-基胺基）-1H-吲哚-2-甲酸金剛烷-1-基氧基 罗炭基氧基甲酉旨， 3-(吡啶-4-基胺基）-1Η-吲哚-2-甲酸乙醯氧基甲酯， -182 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） 8 8 8 8 A B c D 1296926 六、申請專利範圍 3-(吡啶-4-基胺基）-1H-吲哚-2-曱酸2, 2-二甲基-丙 醯氧基甲酯， 3-(吡啶-4-基胺基）-1H-吲哚-2-曱酸戊醯氧基曱酯， 3-（吡啶-4-基胺基）-1Η-吲哚-2-甲酸-2-氧-哌啶-1-基 5 甲酯， 3-（吡啶-4-基胺基）- 1H-吲哚-2-曱酸（苯甲醯基-乙氧 基羰基甲基-胺基）-甲酯， 3-（吡啶-4-基胺基）-1H-吲哚-2-曱酸2-氧-吡咯烷-1-基甲酯， 10 3-(吡啶-4-基胺基）- 1H-吲哚-2-甲酸5-甲基-2-氧- (1，3)二氧雜環戊烯-4-基甲酯， 3-（吡啶-4-基胺基MH-吲哚-2-甲酸（苯基-（甲苯-4 -確酿基）-胺基）-甲酯， 3-(吡啶-4-基胺基）- 1H-吲哚-2-甲酸（苯磺醯基-甲基- 15 胺基甲酯， 3-（吡啶-4-基胺基）-1Η-吲哚-2-曱酸（甲基-(曱苯-4-磺醯基）-胺基）-甲酯， 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 3-(吼°定_4-基胺基）-1H-0引°朵-2-甲酸叔丁氧基幾基氧 基-甲醋， 20 3-(4-吡啶基胺基）-苯並（b)噻吩-2-甲酸乙酯， 6-氣基胺基）-苯並（b)11塞吩-2-甲酸乙醋’ 3-（（4-吡啶基）胺基-Ν-曱基）-苯並（b)噻吩基-2-曱酸 乙酯， 3-(4-吡啶基胺基）-6-三氟甲基-苯並（b)噻吩-2-曱酸 -183 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1296926 A8 B8 C8 D8 六、申請專利範圍 曱磺酸鹽 3-(4-。比唆基胺基）-苯並（b)。塞吩-2-甲酸鹽酸鹽， 3-（4-吡啶基胺基）-6-三氟甲基-苯並（b)噻吩-2-甲酸 乙酯鹽酸鹽， 5 3-(丙基-4-吡啶基胺基）-苯並（b)噻吩-2-曱酸乙酯， 3-（（3-苯基丙醯基）甲基胺基）-1Η-6-氯-吲哚-2-甲 酸， 3-（（苯曱醯基）甲基胺基）-4, 6-二氯-1H-吲哚-2-曱 酸， 10 3 -（（苯甲醯基）胺基）-6-氣-1H-吲哚-2-甲酸， 3-((苯甲醯基）胺基）-6-氣-1H-吲哚-2-甲酸2-二甲基 胺基-乙酯， 3-（（4-氣苯曱醯基）甲基胺基）-4, 6-二氯-1H-吲哚-2-甲酸， 15 3-((苯甲醯基）苄基胺基）-4, 6-二氯-1H-吲哚-2-甲 酸， 經濟部智慧財產局員工消費合作社印制衣 3-（（4-哌啶醯基）甲基胺基）-6-氯-1H-吲哚-2-甲酸， 3-((苯甲醯基）曱基胺基）-4,6-二氯-1H-吲哚-2-甲酸 乙酯， 20 3-((苯曱醯基）甲基胺基）-5,6-二氯-1H-吲哚-2-甲 酸， 3-((苯甲醯基）乙基胺基）-4, 6-二氣-1H-吲哚-2-甲 酸， 3-((苯甲醯基）甲基胺基）-6-氟-1H-吲哚-2-甲酸， -184 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐） 1296926 Α8 Β8 C8 D8 六、申請專利範圍 3-（（2-苄基苯甲醯基）胺基）-4,6-二氣-111-吲哚-2-甲 酸， 3-（（3-就苯甲醢基）甲基胺基）-4, 6-二氯-1Ησ朵-2-甲酸， 5 3-（（苯甲醯基）苄基胺基）-4, 6-二氣-1Η-吲哚-2-曱酸 乙酯， 3-苯基磺醯基）胺基）-4, 6-二氣-1Η-吲哚-2-甲酸乙 酯， 3-苯基磺醯基）胺基）-4, 6-二氣-1Η-吲哚-2-甲酸， 10 和 3-苯基磺醯基）甲基胺基）-4, 6-二氣-1Η-吲哚-2-甲 酸。 10.如申請專利範圍第1項之用途，其中化合物選自： 3 -（4-吼咬基胺基）-111-口弓卜朵-2-曱酸， 15 3-（（3-苯基丙醯基）曱基胺基）-1Η-6-氯-吲哚-2-甲 酸， 3-((苯曱醯基）甲基胺基）-4, 6-二氣-1Η-吲哚-2-甲 酸， 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 3 -（（苯甲醯基）胺基）-6-氯-1Η-吲哚-2-曱酸， 20 3-（（苯甲醯基）曱基胺基）-5, 6-二氣-1Η-吲哚-2-曱 酸， 3-（（苯甲醯基）曱基胺基）-6-氟-1Η-吲哚-2-曱酸， 3-（（4-氯苯甲醯基）甲基胺基）-4, 6-二氣-1Η-吲哚-2-甲酸， -185 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1296926 Α8 Β8 C8 D8 六、申請專利範圍 3-（（苯曱醯基）苄基胺基）-4, 6-二氯-1H-吲哚-2-甲 酸， 3-（（苯甲醯基）乙基胺基）-4, 6-二氯-1H-吲哚-2-曱 酸， 5 3-（（2-辛基苯甲酿基）胺基）-4, 6-二氣-1Η-口弓卜朵-2-甲 酸， 3-（（3-氟苯甲醯基）甲基胺基）-4, 6-二氣-1Η-吲哚-2-甲酸， 3-（（4-哌啶醯基）甲基胺基）-6-氯-1Η-吲哚-2-甲酸， 10 3-((苯基磺醯基）胺基）-4, 6-二氯-1Η-吲哚-2-甲酸， 3-苯基磺醯基）曱基胺基）-4, 6-二氣-1Η-吲哚-2-甲 酸， 3 -（4-吡啶基胺基）-1Η-吲哚-2-甲酸乙酯， 6-三氟甲基-3-（4-吡啶基胺基）-1Η-吲哚-2-甲酸乙 15 酯， 3-(嘧啶-2-基胺基）- 1Η-吲哚-2-甲酸乙酯， 3-((苯甲醯基）胺基）-6-氣-1Η-吲哚-2-甲酸2-二曱基 胺基-乙酯， 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 3-（（苯甲醯基）甲基胺基）-4, 6-二氯-1Η-吲哚-2-甲酸 20 乙酯， 3-((苯甲醯基）苄基胺基）-4, 6-二氯-1Η-吲哚-2-曱酸 乙酉旨，和 3-苯基磺醯基）胺基）-4, 6-二氯-1Η-吲哚-2-甲酸乙 酯。 -186 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） 8 8 8 8 A B c D 1296926 六、申請專利範圍 11. 一種用於醫藥品製造之式（I)化合物之用途，該化合物 能夠調節T輔助細胞（Th)、Thl/Th2以治療過敏反 應、哮喘、鼻炎、皮炎、B-細胞淋巴瘤、腫瘤、抗細 菌、鼻病毒或呼吸道合胞病毒（RSV):
    經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 20 (I) 其中 X和Y相同或不同，並且獨立地選自氫、鹵素、確 10 基、胺基、經基、Cl-6烧基、C2-6稀基、C2-6炔基、Cl-6 烷氧基、C!-6全氟烷基、Cm全氟烷氧基、苯基和苄 基，其中苯基或苄基任選被一個或兩個取代基取代， 所說的取代基各自獨立地選自Ci-6烷基、匕-6全氟烷 基、鹵素、經基或Cl-6全氟烧基或Cl-6全氟烧氧基； 15 Z是N-R或S，其中R選自氫、Ci-6烧基、Ci-6烧基幾 基、Cl-6烷氧基羰基Cl-6烷基、（：1-6烷基胺基甲醯基-Ci-6 烧基和C1-6二烧基胺基甲酿基C1-6烧基； Ri選自氫、G-6烷基、C2-6烯基、Cw炔基、Cw全氟烷 基' C3-8環烧基、C3-8環烧基Cl-6烧基、Cl-6烧氧基Cl-6 烧基、經基Cl-6烧基、胺基Cl-6烧基、一或二—Cl-6烧 基-胺基C!-6烷基、曱醯基、Ch烷基羰基、胺基Cw 烧基幾基、Cl-6烧氧基羰基、苯基、二苯基C1-6烧基 187 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（21GX297公爱） 8 8 8 8 A B c D 1296926 六、申請專利範圍 和苯基Cl-6烧基、苯基戴基Cl-6烧基、苯氧基Cl-6烧 基，其中苯基任選被一個或兩個取代基取代，所說的 取代基各自獨立地選自Ci-6烷基、G-6全氟烷基、鹵 素、羥基或全氟烷基或G-6全氟烷氧基； 5 R3是
    R4 R4 其中 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 10 R4選自氮、函素、頌基、胺基、經基、Cl-6烧基、Cl-6 烷氧基、Cm全氟烷基、Cm全氟烷氧基、苯基和苄 基，其中苯基或苄基任選被一個或兩個取代基取 代，所說的取代基各自獨立地選自G-6烷基、Ci-6全 氟烷基、ifi素、羥基或G-6全氟烷基或Cw全氟烷氧 15 基；且 η是0-4的整數；並且 R2選自氫、Cm烷基、C!-6全氟烷基、全氟芳基、氫茚 -188 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1296926 A8 B8 C8 D8 10 六、申請專利範圍 基、Cl-6烧氧基Cl-6烧基、C2-6酿氧基Cl-6烧基、Cl-6烧 氧基羰基烷基、G-6烷氧基羰基氧基G-6烷基、Cw 環烷基、C3-8環烷氧基羰基氧基-Cm烷基、金剛烷氧 羰基氧基（V6烷基、C3-8環烷氧基羰基-Cm烷基、一 或二-Cl-6烧基胺基-Cl-6烧基、C3-8氮雜環烧基Cl-6烧 基、一或二-Cl-6烧基胺基甲酿基-〇1-6烧基、C3-8氣雜 環烷基羰基氧基C!-6烷基、苄基Ci-6烷基胺基甲醯基 Cl-6院基、一或二-Cl-6烧基胺基甲酿氧基Cl-6烧基、 C3-8氮雜環烷基羰基氧基-C!-6烷基、苄基G-6烷基胺 基甲醯氧基Ci-6烷基、苄基胺基甲醯氧基C!-6烷基、 Cl-6烧氧基戴基胺基-氧-Cl-6烧基、 A N- 0
    .CH； 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 R； 及 Ο II "π\ ο ν' Re 其中 15 R5是氫或Cl-6烧基， R6是tv6烷基、苯基或甲苯基，並且 -189 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1296926 8 8 8 8 ABC D 六、申請專利範圍 10 15 A 是 CH2、NH 或 0， 或其醫藥上可接受之鹽，任選與醫藥上可接受之載劑 聯用。 12. 如申請專利範圍第11項之用途，其中治療的是過敏反 應。 13. 如申請專利範圍第11項之用途 14. 如申請專利範圍第11項之用途 15. 如申請專利範圍第11項之用途 16. 如申請專利範圍第11項之用途 或呼吸道合胞病毒。 17. 如申請專利範圍第11項之用途，其中化合物具有： X和Y相同或不同，並且獨立地選自氫、鹵素、G-3烷 基、Ci-3全氟烷基、Ci-3烷氧基、Cw全氟烷氧基、苯 基和苄基； Z是N-R或S，其中R選自氫、Cw烷基、G-3烷氧基羰 基Cl-3烧基和Cl-3二烧基胺基甲酿基-Cl-3烧基； Rl是氮、Cl-6烧基或苯基Cl-6烧基； r3是 其中治療的是哮喘。 其中治療的是鼻炎。 其中治療的是皮炎。 其中治療的是鼻病毒 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 20 N
    N^N r4 r4 -190 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1296926 A8 B8 C8 D8 六、申請專利範圍
    R4 R4
    其中 R4是氮或Cl-6烧基；且 5 η是Ο-3的整數；並且 R2選自氫、Ci-4烷基、全氟芳基、氫茚基、Ci-3烷氧基 G-3烷基、C2-5醯氧基G-3烷基、烷氧基羰基C!-3烷 基、G-4烷氧基羰基氧基G-4烷基、C4-6環烷氧基羰基 氧基-Cl-3烧基、金剛烧氧幾基氧基-Cl-3烧基、一或 10 二-Cl-3烧基胺基-Cl-3烧基、C4-6氣雜環烧基-Cl-3烧 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 基、一或二-Cl-3烧基胺基甲酿基-Cl-3烧基、C4-6氣雜 環烷基羰基Ci-3烷基、苄基Ci-3烷基胺基甲醯基-G-6 烷基、一或二-Ci-3烷基胺基甲醯氧基G-3烷基、C3-8 氮雜環烷基羰基氧基C!-6烷基、苄基胺基甲醯氧基 15 Cl-3烧基、Cl-3烧氧基幾基胺基-幾基Cl-3烧基、 -191 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1296926 A8 B8 C8 D8 六、申請專利範圍
    經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 其中 Rs是氫或Ch烷基， 5 R6是Cl-6烷基、苯基或甲苯基，並且 A是0， 或其醫藥上可接受之鹽，任選與醫藥上可接受之載劑 聯用。 18.如申請專利範圍第11項之用途，其中化合物具有： 10 X和Y相同或不同，並且獨立地選自氫、氟、氯、三 氟曱基、曱氧基、苯基和苄基； Z是N-R或S，其中R選自氫、曱基、乙氧基羰基曱基 和二乙基胺基甲醯基甲基； Ri是氫、曱基或丙基； 15 R3 是 -192 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐） 1296926 A8 B8 C8 D8 六、申請專利範圍 -Q r4 〇 II —C(CH2)n 〇 II ——C(CH2)n 其中 5 R4是氫；且 n是Ο-2的整數；並且 R2選自氫、甲基、乙基、叔-丁基、五氟苯基、2, 3-二 氫化茚基、曱氧基乙基、乙氧基丙基、乙醯氧基甲 基、2, 2-二甲基丙醯氧基甲基、戊醯氧基曱基、甲 10 氧基羰基-1-乙基、乙氧基羰基甲基、異丙氧基羰基 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製
    R4 R4 氧基曱基、叔丁氧基羰基氧基甲基、環己氧基羰基 氧基曱基、金剛烧氧魏基氧基甲基、二乙基胺基乙 基、二甲基胺基乙基、旅。定基-1-乙基、二乙基胺基 甲醯基甲基、苄基乙基胺基甲醯基甲基、2-氮雜環 15 丁烷-1-基-2-氧-乙基、2-氧-2-吡咯烷-1-基-乙 基、哌啶-1-羰基氧基甲基、二乙基胺基甲醯氧基甲 基、苄基胺基甲醯氧基甲基、乙氧基羰基胺基-羰基 -193 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1296926 A8 B8 C8 D8 六、申請專利範圍
    經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 其中 5 Rs是氫或甲基， Re是甲基、苯基或甲苯基，並且 A是0， 或其醫藥上可接受之鹽，任選與醫藥上可接受之載劑 聯用。 10 19.如申請專利範圍第11項之用途，其中化合物選自： 3-(4-吡啶基胺基）- 1H-吲哚-2-甲酸， 3 -（4-吡啶基胺基）-1Η-吲哚-2-曱酸乙酯， 6-三氟曱基-3-(4-吡啶基胺基）-1Η-吲哚-2-甲酸乙 酉旨， 15 6-氣-3 -（4-吡啶基胺基）- 1H-吲哚-2-甲酸乙酯， 5-氣-3-（4-吡啶基胺基）- 1H-吲哚-2-甲酸乙酯， -194 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1296926 A8 B8 C8 D8 六、申請專利範圍 6-氟-3-（4-吡啶基胺基）-1Η-吲哚-2-甲酸乙酯， 5- 氟-3-(4-吡啶基胺基）-1Η-吲哚-2-甲酸乙酯， 4-1-3-（4-ϋ比ϋ定基胺基）- 1H-口引°朵-2-甲酸叔丁酉旨， 6- 苯基-3-(4-吡啶基胺基）- 1Η-吲哚-2-甲酸乙酯， 5 3-(4-吡啶基胺基）-1Η-吲哚-2 -曱酸叔丁酯， 5, 6-二甲氧基-3-(4-吡啶基胺基）-1Η-吲哚-2-甲酸乙 酯， 3-甲氧基-3-（4-吡啶基胺基）-1Η-吲哚-2-甲酸叔丁 酯， 10 3-(2-吡啶基胺基）-1Η-吲哚-2-甲酸乙酯， 3- （嘧啶-2-基胺基）- 1Η-吲哚-2-甲酸乙酯， •5-氟-1-甲基-3-（4-吡啶基胺基）-1Η-吲哚-2-甲酸乙 醋， 4- 氟-1-甲基-3-（4-吡啶基胺基）- 1Η-吲哚-2-甲酸叔丁 15 酯， 5- 氣-1-曱基-3-(4-1:1比咬基胺基）-111-0引°朵-2-甲酸乙 酯， 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 6- 氯-1-甲基-3-（4-吡啶基胺基）-1Η-吲哚-2-甲酸乙 酯， 20 1-甲基-3-(4-吡啶基胺基）-1H-吲哚-2-甲酸馬來酸 鹽， 4-氟-3-(4-吡啶基胺基）-1Η-吲哚-2-甲酸三氟乙酸 鹽， 4-氟-1-甲基-3-(4-吡啶基胺基）-1Η-吲哚-2-甲酸三氟 -195 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐） 1296926 A8 B8 C8 D8 六、申請專利範圍 乙酸鹽， 5- 曱氧基-3-（4-吡啶基胺基）-1Η-吲哚-2-曱酸三氟乙 酸鹽， 6- 氯-1-二乙基胺基甲醯基甲基-3-(吡啶-4-基胺基）- 5 1H-吲哚-2-甲酸乙酯， 3-(4-吡啶基胺基）-1Η-吲哚-2-曱酸五氟苯基酯， 3-（4-吡啶基胺基）-1H-吲哚-2-甲酸2-二乙基胺基-乙 酯， 3-（4-吡啶基胺基）- 1H-吲哚-2-甲酸2-二甲基胺基-乙 10 酯， 3-（4-吡啶基胺基）- 1H-吲哚-2-甲酸2-哌啶-1 -基-乙 酯， 3-（吡啶-4-基胺基）-1Η-吲哚-2-甲酸（S)-1-甲氧基羰 基-乙酯， 15 3-（吡啶-4-基胺基）-1H-吲哚-2-甲酸乙氧基羰基甲 酯， 3-（4-吡啶基胺基）-1Η-吲哚-2-甲酸2-曱氧基乙酯， 3-(4-吡啶基胺基）-1Η-吲哚-2-甲酸3-乙氧基丙酯， 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 3-（吡啶-4-基胺基）-1Η-吲哚-2-曱酸2, 3二氫化茚-5-20 基酯， 3-(吡啶-4_基胺基）- 1H-吲哚-2-甲酸二乙基胺基曱醯 基甲酯， 3-(吡啶-4-基胺基）-1Η-吲哚-2-曱酸2-嗎咁-4-基-2-氧-乙酯， -196 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1296926 六、申請專利範圍 3-〇比咬-4-基胺基）- 1H-吲哚-2-甲酸2-氧-2-吼洛烧-1-基-乙醋， 3-(吡啶-4-基胺基MH-吲哚-2-甲酸2-氮雜環丁烷-1-基-2-氧-乙酯， 5 3-(吡啶-4-基胺基）-1H-吲哚-2-甲酸（苄基-乙基-胺基 甲醯基甲酯， 3-(吡啶-4-基胺基）-1Η-吲哚-2-甲酸二乙基胺基甲醯 氧基-甲酯， 3-（吡啶-4-基胺基）- 1H-吲哚-2-甲酸苄基胺基甲醯氧 10 基甲酯， 3-（吡啶-4-基胺基）-1Η-吲哚-2-甲酸哌啶-1-羰基氧基 甲酯， 3-（吡啶-4-基胺基）-1Η-吲哚-2-甲酸嗎咁-4-羰基氧基 甲醋， 15 3-(吡啶-4-基胺基）-1Η-吲哚-2-甲酸2-乙氧基羰基胺 基-2-氧基-乙酯， 3-(吡啶-4-基胺基）-1H-吲哚-2-甲酸異丙氧基羰基氧 基-甲酯， 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 3-(12比咬-4-基胺基）-1Η-弓卜朵-2-甲酸1，1，2-三曱基丙 20 氧基-羰基氧基-甲酯， 3-(吡啶-4-基胺基）-1Η-吲哚-2-曱酸環己基氧基-羰基 氧基-甲酯， 3-(吡啶-4-基胺基）-1Η-吲哚-2-曱酸金剛烷-1-基氧基 羰基氧基甲酯， -197 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1296926 A8 B8 C8 D8 六、申請專利範圍 3-（吡啶-4-基胺基）- 1H-吲哚-2-甲酸乙醯氧基甲酯， 3-（吡啶-4-基胺基MH-吲哚-2-甲酸2, 2-二甲基-丙 醯氧基甲酯， 3-（吡啶-4-基胺基）-1Η-吲哚-2 -甲酸戊醯氧基曱酯， 5 3-(σΛσ定-4-基胺基）- 1H-口引朵-2-曱酸-2-氧辰咬-1-基 甲酯， 3-（吡啶-4-基胺基）-1Η-吲哚-2-曱酸（苯曱醯基-乙氧 基羰基甲基-胺基甲酯， 3-(117比唆-4-基胺基)-111-1?引11朵-2-甲酸2-氧-1[2比洛烧-1-10 基甲酯， 3-(吡啶-4-基胺基）_1H-吲哚-2-甲酸5-甲基-2-氧-(1，3)二氧雜環戊烯-4-基甲酯， 3-（吡啶-4-基胺基）-1Η-吲哚-2-甲酸（苯基-（甲苯-4-磺醯基）-胺基）-甲酯， 15 3-(吡啶-4-基胺基）-1Η-吲哚-2-曱酸（苯磺醯基-甲基- 胺基）-曱酯， 3-（吡啶-4-基胺基）-1Η-吲哚-2-甲酸（曱基-（甲苯-4-續醯基）-胺基）-甲醋， 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 3-(吡啶-4-基胺基）-1Η-吲哚-2-甲酸叔丁氧基羰基氧 20 基-甲酯， 3 -（4-吡啶基胺基）-苯並（b)噻吩-2-甲酸乙酯， 6-敗- 3-(斗-咐咬基胺基）-苯並（b)11 塞吩-2-甲酸乙醋， 3-（（4-。比咬基）胺基-Ν-甲基）-苯並（b)17塞吩基-2-甲酸 乙酯， -198 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1296926 A8 B8 C8 D8 六、申請專利範圍 3-（4-吡啶基胺基）-6-三氟曱基-苯並（b)噻吩-2-曱酸 甲磺酸鹽 3-(4-吡啶基胺基）-苯並（b)噻吩-2-曱酸鹽酸鹽， 3-(4-吡啶基胺基）-6-三氟甲基-苯並（b)噻吩-2-甲酸 5 乙酯鹽酸鹽， 3-（丙基-4-吡啶基胺基）-苯並（b)噻吩-2-甲酸乙酯， 3-（（3-苯基丙醯基）甲基胺基MH-6-氯-吲哚-2-甲 酸， 3-((苯甲醯基）曱基胺基）-4,6-二氯-1H-吲哚-2-甲 10 酸， 3-（（苯甲醯基）胺基）-6-氯-1H-吲哚-2-甲酸， 3-((苯甲醯基）胺基）-6-氣-1H-吲哚-2-曱酸2-二甲基 胺基-乙酯， 3-（（4-氯苯甲醯基）甲基胺基）-4, 6-二氯-1H-吲哚-2-15 甲酸， 3-（（苯甲醯基）苄基胺基）-4, 6-二氣-1H-吲哚-2-甲 酸， 3-（（4-哌啶醯基）甲基胺基）-6-氯-1H-吲哚-2-甲酸， 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 3-((苯甲醯基）曱基胺基）-4, 6-二氯-1H-吲哚-2-甲酸 20 乙酯， 3 -（（苯甲醯基）甲基胺基）-5, 6-二氯-1H-吲哚-2-甲 酸， 3-((苯曱醯基）乙基胺基）-4, 6-二氣-1H-吲哚-2-甲 酸， -199 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1296926 A8 B8 C8 D8 六、申請專利範圍 3-（（苯甲醯基）甲基胺基）-6-氟-1H-吲哚-2-曱酸， 3-((2-苄基苯甲醯基）胺基）-4, 6-二氣-1H-吲哚-2-甲 酸， 3-((3-氟苯甲酿基）曱基胺基）-4, 6-二氣-1Ησ朵-2-5 甲酸， 3-((苯甲醯基）苄基胺基）-4,6-二氯-1Η-吲哚-2-甲酸 乙酯， 3 -苯基磺醯基）胺基）-4,6-二氣-1Η-吲哚-2_甲酸乙 酯， 10 3_((苯基磺醯基）胺基）-4,6-二氣-1Η-吲哚-2_甲酸， 和 3-（（苯基績酿基）甲基胺基）-4, 6-二氯-1Η-,σ朵-2-甲 酸。 20.如申請專利範圍第11項所述之用途，其中化合物選 15 自： 3 -（4-吡啶基胺基）- 1Η-吲哚-2-甲酸， 3-（（3-苯基丙酿基）甲基胺基）-1Η-6-氯-弓丨σ朵-2-甲 酸， 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 3-((苯甲醯基）甲基胺基）-4,6-二氯-1Η-吲哚-2-甲 20 酸， 3-（（苯曱醯基）胺基）-6-氣-1Η-吲哚-2-曱酸， 3 -（（苯甲醯基）甲基胺基）-5,6-二氯-1Η-吲哚-2-曱 酸， 3-((苯甲醯基）甲基胺基）-6-氟-1H-吲哚-2-甲酸， -200 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） 8 8 8 8 A B c D 1296926 六、申請專利範圍 3-（（4-氯苯曱醯基）曱基胺基）-4, 6-二氣-1H-吲哚-2-甲酸， 3-（（苯甲醯基）苄基胺基）-4, 6-二氯-1H-吲哚-2-甲 酸， 5 3-((苯甲醯基）乙基胺基）-4, 6-二氯-1H-吲哚-2-曱 酸， 3-（（2-苄基苯甲醯基）胺基）-4, 6-二氣-1H-吲哚-2-甲 酸， 3-（（3-氟苯甲醯基）甲基胺基）-4, 6-二氣-1H-吲哚-2-10 甲酸， 3-（（4-哌啶醯基）甲基胺基）-6-氣-1H-吲哚-2-甲酸， 3-苯基磺醯基）胺基）-4, 6-二氣-1H-吲哚-2-甲酸， 3-苯基磺醯基）甲基胺基）-4, 6-二氣-1H-吲哚-2-曱 酸， 15 3-（4-吡啶基胺基）-1Η-吲哚-2-甲酸乙酯， 6-三氟甲基-3-（4-σ比咬基胺基）-1H-口引13朵-2-甲酸乙 酯， 3-（嘧啶-2-基胺基）- 1Η-吲哚-2-曱酸乙酯， 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 3-（（苯甲醯基）胺基）-6-氯-1Η-吲哚-2-甲酸2-二甲基 20 胺基-乙酯， 3-（（苯曱醯基）甲基胺基）-4, 6-二氯-1Η-吲哚-2-甲酸 乙酯， 3-（（苯甲醯基）苄基胺基）-4, 6-二氣-1Η-吲哚-2-甲酸 乙酯，和 -201 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1296926 A8 B8 C8 D8 六、申請專利範圍 3 -苯基磺醯基）胺基）-4,6-二氯-1H-吲哚-2-曱酸乙 酯。 21. —種用於醫藥品製造之式（I)化合物之用途，該化合物 能夠抑制白介素-4(IL-4)資訊轉錄、IL-4釋放或IL-4 產生以治療過敏反應、哮喘、鼻炎或皮炎：
    (I) 其中 、X和Y相同或不同，並且獨立地選自氫、鹵素、硝基、 10 胺基、經基、Cl-6烧基、C2-6稀基、C2-6快基、Cl-6烧氧 基、全氟烷基、Ci-6全氟烷氧基、苯基和苄基，其 中苯基或苄基任選被一個或兩個取代基取代，所說的 取代基各自獨立地選自Ci-6烷基、Ci-6全氟烷基、鹵 素、羥基或CM全氟烷基或Ci-6全氟烷氧基； 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 15 Z是N-R或S，其中R選自氫、Cw烷基、Cw烷基羰 基、Ci-6烷氧基羰基G-6烷基、Ci-6烷基胺基甲醯基-Cl-6烧基和Cl-6二烧基胺基甲酿基Cl-6烧基， Rl選自氫、Cl-6烧基、C2-6浠基、C2-6快基、Cl-6全氣烧 基、C3-8環烧基、C3-8環烧基C卜6烧基、C卜6烧氧基Cl-6 20 烧基、备基Cl-6烧基、胺基Cl-6烧基、一或二-Cl-6烧 基-胺基Cl-6烧基、甲酿基、Cl-6烧基叛基、胺基Cl-6 烷基羰基、G-6烷氧基羰基、苯基、二苯基Ci-6烷基 -202 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐） 1296926 “8 C8 _D8 六、申請專利範圍 和苯基G-6烷基、苯基羰基Ci-6烷基、苯氧基G-6烧 基，其中苯基任選被一個或兩個取代基取代，所說 的取代基各自獨立地選自烷基、Ci-6全氟烷基、 鹵素、羥基或G-6全氟烷基或G-6全氟烷氧基； 5 R3是
    其中 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 10 R4選自氫、鹵素、硝基、胺基、經基、Cl-6烧基、Cl-6烧 氧基、G-6全氟烷基、G-6全氟烷氧基、苯基和苄 基，其中苯基或苄基任選被一個或兩個取代基取 代，所說的取代基各自獨立地選自G-6烷基、0-6全 氟烷基、鹵素、羥基或Cm全氟烷基或G-6全氟烷氧 15 基；且 η是0-4的整數；並且 R2選自氫、G-6烷基、G-6全氟烷基、全氟芳基、氫茚 -203 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐） 1296926 A8 B8 C8 D8 10 六、申請專利範圍 基、Cl-6烧氧基Cl-6烧基、C2-6酿氧基Cl-6烧基、Cl-6烧 氧基魏基Cl-6烧基、Cl-6烧氧基叛基氧基Cl-6烧基、C3-8 環烧基、C3-8環烧氧基戴基氧基-Cl-6烧基、金剛烧氧 羰基氧基G-6烷基、C3-8環烷氧基羰基-Cl-6烷基、一 或二-Cl-6烧基胺基-Cl-6烧基、C3-8氮雜環烧基Cl-6烧 基、一或二-Cl-6烧基胺基甲酿基-Cl-6烧基、C3-8氮雜 環烷基羰基氧基Ci-6烷基、苄基Cm烷基胺基曱醯基 Cm烷基、一或二-Cw烷基胺基甲醯氧基Cw烷基、 C3-8氮雜環烧基戴基氧基-Cl-6烧基、+基Cl-6烧基胺 基甲醯氧基Ci-6烷基、苄基胺基甲醯氧基G-6烷基、 Cl-6烧氧基幾基胺基-氧-Cl-6烧基、 A N- 0
    ,CH 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 及 Ο II R— O NT R 2 其中 15 R5是氫或Cl-6烧基， Re是G-6烷基、苯基或甲苯基，並且 204 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1296926 A8 B8 C8 D8 六、申請專利範圍 A 是 CH2、NH 或 0， 或其醫藥上可接受之鹽，任選與醫藥上可接受之載劑 聯用。 22. 如申請專利範圍第21項之用途，其中治療的是過敏反 5 應。 23. 如申請專利範圍第21項之用途，其中治療的是哮喘。 24. 如申請專利範圍第21項之用途，其中治療的是鼻炎。 25. 如申請專利範圍第21項之用途，其中治療的是皮炎。 26. 如申請專利範圍第21項之用途，其中化合物具有： 10 X和Y相同或不同，並且獨立地選自氫、鹵素、Cw烷 基、匕-3全氟烷基、Ci-3烷氧基、G-3全氟烷氧基、苯 基和苄基； Z是N-R或S，其中R選自氫、Ch烷基、G-3烷氧基羰 基Cl-3烧基和Cl-3二烧基胺基甲酿基-Cl-3烧基； 15 Rl是氮、Cl-6烧基或苯基Cl-6烧基； r3是 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製
    以， r4 -205 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1296926 A8 B8 C8 D8 六、申請專利範圍
    0 —C(CH2)n^^) r4 Ο II /^\ -C(〇H2)n-^N r4 其中 R4是氫或Cl-6烧基；且 η是0_3的整數； 5 R2選自氫、G-4烷基、全氟芳基、氳茚基、C!-3烷氧基 Ci-3烷基、C2-5醯氧基Ci-3烷基、G-3烷氧基羰基Ci-3烷 基、C!-4烷氧基羰基氧基G-4烷基、C4-6環烷氧基羰基 氧基-G-3烷基、金剛烷氧羰基氧基-G-3烷基、一或 二-Cl-3烧基胺基-Cl-3烧基、C4-6氮雜環烧基-Cl-3烧 10 基、一或二-Cl-3烧基胺基甲酿基-Cl-3烧基、C4-6氣雜 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 環烧基幾基Cl-3烧基、辛基Cl-3烧基胺基甲酿基-Cl-6 烧基、一或二-Cl-3烧基胺基曱酿氧基Cl-3烧基、C3-8 氮雜環烷基羰基氧基C!-6烷基、苄基胺基曱醯氧基 Cl-3院基、Cl-3烧氧基戴基胺基-幾基Cl-3烧基、 15 -206 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1296926 A8 B8 C8 D8 六、申請專利範圍
    R6 ， 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 其中 R5是氫或Cl-3烧基， Re是Ci-6烧基、苯基或甲苯基，並且 5 A 是0， 或其醫藥上可接受之鹽，任選與醫藥上可接受之載劑 聯用。 27.如申請專利範圍第21項之用途，其中化合物具有： X和Y相同或不同，並且獨立地選自氫、氟、氣、三 10 氟甲基、曱氧基、苯基和苄基； Z是N-R或S，其中R選自氫、甲基、乙氧基羰基甲基 和二乙基胺基甲醯基甲基； R!是氫、曱基或丙基； R3是 -207 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1296926 Α8 Β8 C8 D8 六、申請專利範圍 rf^N -¾ r4 ο II ——C(CH2)n- 其中 R4是氫；並且 5 n是0-2的整數；並且 選自氫、甲基、乙基、叔-丁基、五氟苯基、氫茚 基、甲氧基乙基、乙氧基丙基、乙醯氧基甲基、 2,2-二曱基丙醯氧基曱基、戊醯氧基曱基、甲氧基 羰基-1-乙基、乙氧基羰基甲基、異丙氧基羰基氧基 10 甲基、叔丁氧基羰基氧基甲基、環己氧基羰基氧基 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 o II -C(CH2)n
    甲基、金剛烷氧羰基氧基甲基、二乙基胺基乙基、 二曱基胺基乙基、哌啶基-1-乙基、二乙基胺基曱醯 基甲基、苄基乙基胺基曱醯基甲基、2-氮雜環丁烷-1-基-2-氧-乙基、2-氧-2-吼13各烧-1-基-乙基、喻 15 啶-1-羰基氧基甲基、二乙基胺基甲醯氧基曱基、苄 基胺基甲醯氧基甲基、乙氧基羰基胺基-羰基甲基、 -208 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1296926 Α8 Β8 C8 D8 六、申請專利範圍
    r6 , 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 其中 r5是氫或甲基， Re是甲基、苯基或曱苯基，並且 5 A是0， 或其醫藥上可接受之鹽，任選與醫藥上可接受之載劑 聯用。 28.如申請專利範圍第21項之用途，其中化合物選自： 3-（4-吡啶基胺基）-1Η-吲哚-2-曱酸， 10 3 -（4-吡啶基胺基）-1Η-吲哚-2-甲酸乙酯， 6-三氟甲基-3-（4-吡啶基胺基）-1Η-吲哚-2-曱酸乙 酯， 6-氯-3 -（4-吡啶基胺基）- 1H-吲哚-2-甲酸乙酯， 5-氯-3-(4-σ比咬基胺基）- 1Η-,σ朵-2-甲酸乙醋， 15 6-氟-3 -（4-吡啶基胺基）- 1Η-吲哚-2-甲酸乙酯， 5-氟-3-(4-吡啶基胺基）-1Η-吲哚-2-曱酸乙酯， -209 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐） 1296926 Α8 Β8 C8 D8 六、申請專利範圍 4-氟_3-(4-吡啶基胺基）-1Η_吲哚-2-甲酸叔丁酯， 6-笨基-3-(4-吡啶基胺基）-1Η-吲哚-2-曱酸乙酯， 3 -（4-吡啶基胺基）- 1H-吲哚-2 -甲酸叔丁酯， 5, 6-二曱氧基-3-（4-吡啶基胺基）-1Η-吲哚-2-曱酸乙 5 酯， 3-甲氧基-3-(4-吡啶基胺基）-1Η-吲哚-2-曱酸叔丁 酯， 3 -（2-吡啶基胺基）- 1H-吲哚-2-甲酸乙酯， 3- (嘧啶-2-基胺基）- 1H-吲哚-2-甲酸乙酯， 10 5-氣-1 -甲基-3-（4-吼°定基胺基）-111-口引σ朵-2-甲酸乙 酯， 4- 氟-1-甲基-3-（4-吡啶基胺基）-1Η-吲哚-2-甲酸叔丁 酯， 5- 氣-1-甲基-3-（4-吡啶基胺基）-1Η-吲哚-2-甲酸乙 15 酯， 6- 氣-1-甲基-3-(4-吡啶基胺基）-1Η-喵哚-2-甲酸乙 酯， 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1-甲基-3-（4-吡啶基胺基）-1H-吲哚-2-甲酸馬來酸 鹽， 20 4-氟-3-（4-吼咬基胺基）-1H-口引σ朵-2-甲酸三氟乙酸 鹽， 4- 1-1-甲基-3-(4_吼°定基胺基）-1Η-1卜朵-2-曱酸三氟 乙酸鹽， 5- 甲氧基-3-(4-吡啶基胺基）-1Η-吲哚-2-曱酸三氟乙 -210- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1296926 Α8 Β8 C8 D8 六、申請專利範圍 酸鹽， 6-氯-1-二乙基胺基曱酿基甲基-3 -（吼11 定-4-基胺基）-1H-吲哚-2-曱酸乙酯， 3 -（4-吡啶基胺基MH-吲哚-2-甲酸五氟苯基酯， 5 3-（4-吡啶基胺基）-1H-吲哚-2-甲酸2-二乙基胺基-乙 酯， 3-（4-吡啶基胺基）-1Η-吲哚-2-甲酸2-二甲基胺基-乙 酯， 3-（4-0比唆基胺基）- 1Η-,朵-2-曱酸2-σ底唆-1 -基-乙 10 酯， 3-（吡啶-4-基胺基）- 1Η-吲哚-2-甲酸（S)-1-甲氧基羰 基-乙酯， 3-（吡啶-4-基胺基）-1Η-吲哚-2-甲酸乙氧基羰基甲 酯， 15 3-（4-吡啶基胺基）-1Η-吲哚-2-甲酸2-曱氧基乙酯， 3一（4-〇比咬基胺基）-ΐΗ-τι引σ朵一2-甲酸3-乙氧基丙醋， 3-(吼淀-4-基胺基）-1Η-弓卜朵-2-甲酸2, 3二氮化茚-5-基酯， 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 3-(吡啶-4-基胺基）-1Η-吲哚-2-甲酸二乙基胺基甲醯 20 基曱酯， 3-（吡啶-4-基胺基）-1Η-吲哚-2-甲酸2-嗎咁-4-基-2-氧-乙酯， 3-〇比唆-4-基胺基）-1Η-口引哚-2-甲酸2-氧-2-吼口各院-1-基-乙酉旨， -211 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1296926 Α8 Β8 C8 D8 六、申請專利範圍 3-(^ba定-4-基胺基）-1Η-,ϋ朵-2-曱酸2-氮雜環丁烧-1-基-2-氧-乙酯， 3-（吡啶-4-基胺基）-1Η-吲哚-2-甲酸（苄基-乙基-胺基 甲醯基）-甲酯， 5 3-(吡啶-4-基胺基）-1Η-吲哚-2-曱酸二乙基胺基甲醯 氧基-甲酯， 3-（吡啶-4-基胺基）-1Η-吲哚-2-甲酸苄基胺基甲醯氧 基甲酯， 3-（吡啶-4-基胺基）-1Η-吲哚-2-甲酸哌啶-1-羰基氧基 10 甲酯， 3-(吡啶-4-基胺基）-ΙΗ-吲哚-2-甲酸嗎咁-4-羰基氧基 甲酯， 3-（吡啶-4-基胺基）-1Η-吲哚-2-曱酸2-乙氧基羰基胺 基-2-氧基-乙酯， 15 3-(吡啶-4-基胺基）-1Η-吲哚-2-甲酸異丙氧基羰基氧 基-甲酯， 3-（吡啶-4-基胺基）-1Η-吲哚-2-曱酸1，1，2-三甲基丙 氧基-魏基氧基-甲醋’ 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 3-(吡啶-4-基胺基）-1Η-吲哚-2-曱酸環己基氧基-羰基 20 氧基-甲酯， 3-（吡啶-4-基胺基）-1Η-吲哚-2-甲酸金剛烷-1-基氧基 羰基氧基甲酯， 3-（吡啶-4-基胺基）-1Η-吲哚-2-甲酸乙醯氧基甲酯， 3-(吡啶-4-基胺基）-1Η-吲哚-2-甲酸2, 2-二甲基-丙 -212 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1296926 A8 B8 C8 D8 六、申請專利範圍 醯氧基曱酯， 3-（吡啶-4-基胺基）- 1H-吲哚-2-曱酸戊醯氧基曱酯， 3-（吡啶-4-基胺基）-1Η-吲哚-2-曱酸-2-氧-哌啶-1-基 甲酯， 5 3-(吡啶-4-基胺基）-1H-吲哚-2-甲酸（苯甲醯基-乙氧 基羰基甲基-胺基）-甲酯， 3-（17比唆-4-基胺基）- 1H-口引σ朵-2-甲酸2-氧-比嘻院-基甲酯， 3-（吡啶-4-基胺基）-1Η-吲哚-2-曱酸5-甲基-2-氧-10 (1，3)二氧雜環戊烯-4-基曱酯， 3-（吡啶-4-基胺基）- 1Η-吲哚-2-甲酸（苯基-(曱苯-4-磺醯基）-胺基甲酯， 3-（吡啶-4-基胺基）-1Η-吲哚-2-甲酸（苯磺醯基-甲基-胺基）-甲酯， 15 3-（σ比咬-4-基胺基）-1Η-,σ朵-2-甲酸（甲基-(甲苯-4- 續醯基）-胺基）-甲S旨， 3-（吡啶-4-基胺基）-1Η-吲哚-2-曱酸叔丁氧基羰基氧 基-甲酯， 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 3 -（4-吡啶基胺基）-苯並（b)噻吩-2-甲酸乙酯， 20 6-氟-3-（4-0比贫基胺基）-苯並（1))。塞吩-2-曱酸乙酯， 3-（（4-比咬基）胺基-N-甲基）-苯並（1))嗔吩基-2-甲酸 乙酯， 3-(4-吡啶基胺基）-6-三氟甲基-苯並（b)噻吩-2-甲酸 甲磺酸鹽 -213 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐） 1296926 A8 B8 C8 D8 六、申請專利範圍 3 -（4-吡啶基胺基）-苯並（b)噻吩-2-甲酸鹽酸鹽， 3-(4-吡啶基胺基）-6-三氟甲基-苯並（b)噻吩-2-曱酸 乙酯鹽酸鹽， 3-（丙基-4-吡啶基胺基）-苯並（b)噻吩-2-甲酸乙酯， 5 3-((3-苯基丙醯基）曱基胺基）- 1H-6-氣-吲哚-2-甲 酸， 3-（（苯甲醯基）甲基胺基）-4, 6-二氯-1H-吲哚-2-甲 酸， 3 -（（苯甲醯基）胺基）-6-氯-1H-吲哚-2-甲酸， 10 3-（（苯甲醯基）胺基）-6-氣-1H-吲哚-2-甲酸2-二曱基 胺基-乙醋， 3-（（4-氯苯甲醯基）甲基胺基）-4, 6-二氯-1H-吲哚-2-甲酸， 3-（（苯甲醯基）苄基胺基）-4, 6-二氯-1H-吲哚-2-甲 15 酸， 3-((4-哌啶醯基）曱基胺基）-6-氣-1H-吲哚-2-曱酸， 3-((苯甲醯基）甲基胺基）-4, 6-二氯-1H-吲哚-2-甲酸 乙酯， 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 3-（（苯甲醯基）甲基胺基）-5, 6-二氯-1Η- 1丨σ朵-2-曱 20 酸， 3-((苯曱醯基）乙基胺基）-4, 6-二氣-1Η-吲哚-2-甲 酸， 3-((苯甲醯基）甲基胺基）-6-氟-1Η-吲哚-2-甲酸， 3-((2-苄基苯甲醯基）胺基）-4,6-二氣-1Η-吲哚-2-甲 -214 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐） 1296926 A8 B8 C8 D8 六、申請專利範圍 酸， 3-（（3-氟苯曱醯基）曱基胺基）-4,6-二氯-1H-吲哚-2-曱酸， 3-（（苯曱醯基）苄基胺基）-4, 6-二氯-1H-吲哚-2-甲酸 5 乙酯， 3-（（苯基績醯基）胺基）-4, 6-二氯-ΙΗ-ΘΙ哚-2-甲酸乙 酯， 3-（（苯基續醢基）胺基）-4, 6-二氯-111-弓丨11朵-2-甲酸， 和 10 3-苯基磺醯基）甲基胺基）-4,6-二氣-1Η-吲哚-2-甲 酸。 29.如申請專利範圍第21項之用途，其中化合物選自： 3-(4-吡啶基胺基）- 1H-吲哚-2 -甲酸， 3-（（3-苯基丙醯基）甲基胺基）- 1H-6-氣-吲哚-2-甲 15 酸， 3-（（苯甲醯基）甲基胺基）-4,6-二氯-1H-吲哚-2-甲 酸， 3-((苯甲醯基）胺基）-6-氯-1H-吲哚-2 -甲酸， 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 3 -（（苯甲醯基）曱基胺基）-5, 6-二氯-1H-吲哚-2-甲 20 酸， 3-（（苯甲醯基）甲基胺基）-6-氟-1H-吲哚-2-甲酸， 3-((4-氣苯甲醯基）甲基胺基）-4, 6-二氯-1H-吲哚-2-甲酸， 3-（（苯曱醯基）苄基胺基）-4, 6-二氣-1H-吲哚-2-甲 -215 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1296926 Α8 Β8 C8 D8 六、申請專利範圍 酸， 3-（（苯甲醯基）乙基胺基）-4, 6-二氯-1H-吲哚-2-甲 酸， 3-((2-苄基苯曱醯基）胺基）-4, 6-二氣-1H-吲哚-2-曱 5 酸， 3-((3-氟苯甲醯基）甲基胺基）-4, 6-二氯-1H-吲哚-2-甲酸， 3-（（4-哌啶醯基）甲基胺基）-6-氣-1H-吲哚-2-甲酸， 3-苯基磺醯基）胺基）-4, 6-二氣-1H-吲哚-2-曱酸， 10 3-（（苯基績酿基）甲基胺基）-4, 6-二氣-1Η-口引11朵-2-甲 酸， 3-（4-0比唆基胺基）- 1Η-弓卜朵-2-甲酸乙S旨， 6-三氟甲基-3-（4-σ比咬基胺基）-1Η- ρ引σ朵-2-甲酸乙 酯， 15 3-（喊咬-2-基胺基）-1Η-,σ朵-2-甲酸乙醋， 3-((苯曱醯基）胺基）-6-氯-1Η-吲哚-2-甲酸2-二甲基 胺基-乙酯， 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 3-((苯甲醯基）甲基胺基）-4, 6-二氯-1Η-吲哚-2-甲酸 乙酯， 20 3-（（苯甲醯基）苄基胺基）-4,6-二氣-1Η-吲哚-2-甲酸 乙酉旨，和 3-((苯基磺醯基）胺基）-4,6-二氯-1Η-吲哚-2-甲酸乙 酉旨。 30.如申請專利範圍第21項之用途，其中化合物還能夠抑 -216 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210x297公釐） 1296926 六、申請專利範圍 制白介素-5(IL-5)資訊的轉錄、il-5釋放或il-5產 生。 31·如申請專利範圍第21項之用途，其中化合物還能夠抑 制白介素-13(IL-13)資訊的轉錄、IL—13釋放或IL-13 5 產生。 32· —種醫藥組合物，含有如申請專利範圍第丨項所定義 的化合物與至少一種醫藥上可接受之載劑聯用，所說 的化合物的含篁對治療過敏反應、哮喘、鼻炎、皮 炎、B-細胞淋巴瘤、腫瘤、抗-細菌、鼻病毒或呼吸道 10 合胞病毒（RSV)是有效的。 33·如申請專利範圍第32項之組合物，其中化合物選自： 3-（4-吼咬基胺基）- 1H - S卜朵-2-甲酸， 3 -（4-吼唆基胺基）-1Η-叫卜朵一 2 一甲酸乙醋， 6-三氟甲基-3-（4-吡唆基胺基）一in一吲哚一2—甲酸乙 15 酯， 6-氣-3 -（4-u比咬基胺基）- 1H-口弓卜朵-2 -曱酸乙酉旨， 5- 氯-3-(4-°比咬基胺基朵-2-甲酸乙醋， 6- 氟-3-（4-0比°定基胺基）-1Η-弓丨。朵-2-甲酸乙S旨， 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 5- 氟-3-(4-吡啶基胺基）- 1Η-吲哚-2-甲酸乙酯， 20 4-敗-3 -（4 -0比0定基胺基）- 1Η - ρ引σ朵-2-甲酸叔丁醋， 6- 苯基-3 -（4-吡啶基胺基ΜΗ-吲哚-2-甲酸乙酯， 3 -（4-吡啶基胺基）- 1Η-吲哚-2-甲酸叔丁酯， 5,6-二曱氧基-3-(4-吡啶基胺基）-1Η-吲哚-2-甲酸乙 酯， -217 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） A8 B8 C8 D8 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1296926 六、申請專利範圍 3-曱氧基-3-（4-吡啶基胺基）-1H-吲哚-2-曱酸叔丁 酯， 3-(2-吡啶基胺基）- 1H-吲哚-2-甲酸乙酯， 3- （嘧啶-2-基胺基）- 1H-吲哚-2-曱酸乙酯， 5 5-氟-1-甲基-3-（4-吡啶基胺基）-1H-吲哚-2-甲酸乙 酯， 4- 氟-1-甲基-3-(4-咐咬基胺基）-ΙΗ-ρ引哚-2-甲酸叔丁 酯， 5- 氯-1-甲基-3-(4-吡啶基胺基）-1Η-吲哚-2-曱酸乙 10 酯， 6- 氣-1-甲基-3-(4-吡啶基胺基）-1H-吲哚-2-甲酸乙 酯， 1-甲基-3-(4-吡啶基胺基）-1Η-吲哚-2-曱酸馬來酸 鹽， 15 4-氟-3-(4-吡啶基胺基）-1Η-吲哚-2-甲酸三氟乙酸 鹽， 4- 氟-1-甲基-3-（4-吡啶基胺基）- 1H-吲哚-2-甲酸三氟 乙酸鹽， 5- 甲氧基-3-(4-吡啶基胺基）- 1H-吲哚-2-曱酸三氟乙 20 酸鹽， 6- 氯-1-二乙基胺基甲醯基甲基-3-(吡啶-4-基胺基）-1H-吲哚-2-甲酸乙酯， 3 -（4-吡啶基胺基）-1Η-吲哚-2-甲酸五氟苯基酯， 3-（4-吡啶基胺基）- 1H-吲哚-2-甲酸2-二乙基胺基-乙 -218 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐）
    8 8 8 9? A B c D 1296926 六、申請專利範圍 酯， 3-（4-吡啶基胺基）- 1H-吲哚-2-甲酸2-二曱基胺基-乙 酯， 3-(4-11比咬基胺基）-ΙΗ-,11朵-2-甲酸2-喻咬-1-基-乙 5 酯， 3-（吡啶-4-基胺基）-1H-吲哚-2-甲酸（S)-1-甲氧基羰 基-乙S旨， 3-（吡啶-4-基胺基）- 1H-吲哚-2-甲酸乙氧基羰基甲 酯， 10 3-(4-吡啶基胺基）- 1H-吲哚-2-甲酸2-甲氧基乙酯， 3-（4-吡啶基胺基）-1Η-弓丨哚-2_甲酸3-乙氧基丙酯， 3-(σ比咬-4-基胺基）-111-1卜朵-2-甲酸2, 3二氫化節-5-基酯， 3-(吡啶-4-基胺基）-1Η-吲哚-2-甲酸二乙基胺基甲醯 15 基甲酯， 3-（吡唆-4-基胺基）-1H-吲哚-2-甲酸2-嗎咁-4-基-2-氧-乙酯， 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 3-(吡啶-4-基胺基）-1Η-吲哚-2-甲酸2-氧-2-吡咯烷-1-基-乙醋， 20 3-(吡啶-4-基胺基）-1H-吲哚-2-甲酸2-氮雜環丁烷- 1-基-2-氧-乙6旨， 3-(吡啶-4-基胺基）-1Η-吲哚-2-甲酸（苄基-乙基-胺基 甲醯基）-甲酯， 3-(吡啶-4-基胺基）-1Η-吲哚-2-甲酸二乙基胺基曱醯 -219 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） 8 8 8 8 A B c D 1296926 六、申請專利範圍 氧基-甲酯， 3-（吡啶-4-基胺基）-1Η-吲哚-2-甲酸苄基胺基甲醯氧 基甲酯， 3-（吡啶-4-基胺基）-1Η-吲哚-2-曱酸哌啶-1-羰基氧基 5 曱酯， 3-(σ比唆-4-基胺基σ朵-2-甲酸嗎咐-4-幾基氧基 甲酯， 3-（吡啶-4-基胺基）-1Η-吲哚-2-曱酸2-乙氧基羰基胺 基-2-氧基-乙酯， 10 3-(吡啶-4-基胺基）-1Η-吲哚-2_甲酸異丙氧基羰基氧 基-甲酯， 3-（吡啶-4-基胺基）-1Η-吲哚-2-甲酸1，1，2-三甲基丙 氧基-羰基氧基-甲酯， 3-（吡啶-4-基胺基）-1Η-吲哚-2-甲酸環己基氧基-羰基 15 氧基-甲酯， 3-（吡啶-4-基胺基）-1Η-吲哚-2-甲酸金剛烷_1-基氧基 羰基氧基甲酯， 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 3-（吼咬-4-基胺基）-1Η-口弓卜朵-2-曱酸乙醯氧基甲醋， 3-（°比咬-4-基胺基）-111-11引1：1朵-2-甲酸2,2-二甲基-丙 20 醯氧基曱酯， 3-（吡啶-4-基胺基）-1Η-吲哚-2-甲酸戊醯氧基甲酯， 3-（°比°定-4-基胺基）- 1Η-^ °朵-2-甲酸-2-氧-唆唆-1-基 甲酯， 3-（吡啶-4-基胺基）-1Η-吲哚-2-曱酸（苯曱醯基-乙氧 -220 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1296926 A8 B8 C8 D8 六、申請專利範圍 基戴基曱基-胺基）-甲酉旨， 3-（σ比咬-4-基胺基）-1Η-口弓卜朵-2-曱酸2-氧比洛烧-1-基甲酯， 3-（吡啶-4-基胺基）-1H-吲哚-2-曱酸5-甲基-2-氧-5 (1，3)二氧雜環戊烯-4-基甲酯， 3-（吡啶-4-基胺基）- 1H-吲哚-2-甲酸（苯基-（甲苯-4-磺醯基）-胺基）-甲酯， 3-（吡啶-4-基胺基）- 1H-吲哚-2-甲酸（苯磺醯基-甲基-胺基甲酯， 10 3-(吡啶-4-基胺基）- 1H-吲哚-2-甲酸（甲基-（甲苯-4- 磺醯基）-胺基）-甲酯， 3-（吡啶-4-基胺基）-1Η_吲哚-2-甲酸叔丁氧基羰基氧 基-甲酯， 3-(4-吡啶基胺基）-苯並（b)噻吩-2-甲酸乙酯， 15 6-氟-3 -（4 -17比唆基胺基）-苯並（b)a塞吩-2-甲酸乙醋， 3-（（4-吡啶基）胺基-N-甲基）-苯並（b)噻吩基-2-甲酸 乙酯， 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 3-（4-吡啶基胺基）-6-三氟甲基-苯並（b)噻吩-2-甲酸 曱磺酸鹽 20 3-(4_吡啶基胺基）-苯並（b)噻吩-2-甲酸鹽酸鹽， 3-(4-吡啶基胺基）-6-三氟甲基-苯並（b)噻吩-2-甲酸 乙酯鹽酸鹽， 3-(丙基-4-吡啶基胺基）-苯並（b)噻吩-2-甲酸乙酯， 3-（（3-苯基丙醯基）甲基胺基）- 1H-6-氯-吲哚-2-甲 -221 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） 8 8 8^ ABC D 1296926 六、申請專利範圍 酸， 3-（（苯甲醯基）曱基胺基）-4, 6-二氣-1H-吲哚-2-甲 酸， 3-((苯甲醯基）胺基）-6-氣-1H-吲哚-2-甲酸， 5 3-((苯甲醯基）胺基）-6-氣-1H-吲哚-2-甲酸2-二甲基 胺基-乙酯， 3-（（4-氯苯甲醯基）曱基胺基）-4, 6-二氯-1H-吲哚-2-甲酸， 3-（（苯甲醯基）苄基胺基）-4, 6-二氣-1H-吲哚-2-甲 10 酸， 3 -（（4-哌啶醯基））甲基胺基）-6-氯-1H-吲哚-2-甲酸， 3-（（苯甲醯基）甲基胺基）-4, 6-二氯-1H-吲哚-2-甲酸 乙酯， 3-（（苯甲醯基）甲基胺基）-5, 6-二氣-1H-吲哚-2-甲 15 酸， 3-((苯曱醯基）乙基胺基）-4, 6-二氯-1H -吲哚-2-甲 酸， 3-((苯甲醯基）甲基胺基）-6-氟-1H-吲哚-2-甲酸， 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 3-（（2-苄基苯甲醯基）胺基）-4, 6-二氣-1H-吲哚-2-曱 20 酸， 3-((3-氟苯甲醯基）曱基胺基）-4, 6-二氣-1H-吲哚-2-甲酸， 3-（（苯甲醯基）苄基胺基）-4, 6-二氣-1H-吲哚-2-曱酸 乙酯， -222 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） 8 8 8^ A B c D 1296926 六、申請專利範圍 3-（（苯基確龜基）胺基）-4, 6-二氣-1Η-1(1引σ朵-2-甲酸乙 酯， 3-苯基磺醯基）胺基）-4, 6-二氯-1Η-吲哚-2-甲酸， 和 5 3-((苯基磺醯基）甲基胺基）-4,6-二氯-1Η-吲哚-2-甲 酸。 34.如申請專利範圍第32項之組合物，其中化合物選自： 3-（4-吡啶基胺基）- 1Η-吲哚-2-甲酸， 3-（（3-苯基丙醯基）甲基胺基）-1Η-6-氯-吲哚-2-甲 10 酸， 3-（（苯甲醯基）甲基胺基）-4, 6-二氣-1Η-吲哚_2-甲 酸， 3-（（苯甲醯基）胺基）- 6-氯-1Η-吲哚-2-曱酸， 3-（（苯甲醯基）甲基胺基）-5, 6-二氯-1Η-吲哚-2-甲 15 酸， 3-（（苯曱醯基）甲基胺基）-6-氟-1Η-吲哚-2-甲酸， 3-（（4-氯苯曱醯基）甲基胺基）-4, 6-二氣-1Η-吲哚-2-曱酸， 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 3-((苯甲醯基）苄基胺基）-4, 6-二氣-1Η-吲哚-2-甲 20 酸， 3-((苯甲醯基）乙基胺基）-4, 6-二氣-1Η-吲哚-2-甲 酸， 3-((2-苄基苯甲醯基）胺基）-4, 6-二氯-1Η-吲哚-2-甲 酸， -223 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1296926 A8 B8 C8 D8 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 六、申請專利範圍 3-((3-氟苯甲醯基）甲基胺基）-4, 6-二氯-1H-吲哚-2-曱酸， 3-（（4-哌啶醯基）曱基胺基）-6-氯-1H-吲哚-2-曱酸， 3-（（苯基磺醯基）胺基）-4, 6-二氯-1H-吲哚-2-甲酸， 5 3-((苯基磺醯基）曱基胺基）-4,6-二氯-1H-吲哚-2-甲 酸， 3-(4-吡啶基胺基）-1Η-吲哚-2-甲酸乙酯， 6-三氟甲基-3-（4-吡啶基胺基）-1H-吲哚-2-甲酸乙 酯， 10 3-（嘧啶-2-基胺基）-1Η-吲哚-2-甲酸乙酯， 3-((苯甲醯基）胺基）-6-氣-1H-吲哚-2-甲酸2-二甲基 胺基-乙酯， 3-((苯甲醯基）甲基胺基）-4, 6-二氣-1H-吲哚-2-甲酸 乙酯， 15 3-（（苯甲醯基）苄基胺基）-4, 6-二氯-1H-吲哚-2-甲酸 乙酯，和 3-（（苯基磺醯基）胺基）-4, 6_二氣_1H-吲哚-2-甲酸乙 酯0 -224 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS)A4規格（210 X 297公釐）
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