TWI289566B

TWI289566B - Antithrombotic compound

Info

Publication number: TWI289566B
Application number: TW089124693A
Authority: TW
Inventors: Boeckel Constant Adriaan Anton Van; Cornelia Maria Tromp; Tamara Theodora Maria Geertsen
Original assignee: N.V.Organon
Priority date: 1999-12-07
Filing date: 2000-11-21
Publication date: 2007-11-11
Also published as: EP1237897A2; SK7942002A3; PL355484A1; US20030114361A1; PL202840B1; ZA200203799B; CN1407989A; HUP0203471A2; CA2393042C; CZ303385B6; IL149628A0; KR20020070988A; WO2001042262A2; SK287682B6; NZ519100A; CZ20021958A3; PE20010935A1; RU2266913C2; CA2393042A1; NO20022689D0

Description

1289566 A7 B7 五、發明說明（_ 1) 本發姻係關於一種新的抗血栓形成性化合物，含此化合物作爲活性成份之醫藥組成物，以及該化合物用於製造藥劑之用途。絲胺酸蛋白酶是在血液凝固級聯中扮演重要角色之一種酶，一種重要的絲胺酸蛋白酶是是因子X a，其催化將凝血酶原轉化成凝血酶，凝血酶是在凝固級聯中的最終絲胺酸蛋白酶，凝血酶之主要功能是分解血纖維蛋白原而產生血纖維蛋白單體，其交聯化後形成不溶的膠體，此外，凝血酶經由在早期級聯中活化因子V及V I I I而調節其本身之製造，其在細胞階段也有重要的作用，在此其作用在特定的受體而造成血小板聚集，內皮細胞活化及纖維母細胞增殖，因此凝血酶在止血及血栓形成中具有重要的調節角色。在發展絲胺酸蛋白酶之合成抑制劑中，最近一種合成的N A P A P —五糖共軛體經報導作爲抗血栓形成劑，同時具有直接抗凝血酶活性及A T I I I -居間影響的抗-X a活性（A T I I I :抗凝血酶I I I )之雙重效應（ Bioorg. Med. Chem. Lett. 1 9 9 9，9 ( 1 4 )， 2 0 1 3 — 8 )，雖然報導的抗血栓形成劑可能是一種有價値的化合物，由於五糖基之高硫酸根含量，經由p F 4 之Η I T交叉反應性及中和作用將與此化合物有關（丁hromb. Haem . Suppl . 1997，p363 P D 1 4 8 5 )。

現在經發現式（I )化合物是具有極佳及有利@ ^ S (請先閱讀背面之注意事丨--- 項寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） -4 - 1289566 A7 B7 五、發明說明（2) ---------裝--- (請先閱讀背面之注意事項寫本頁) 效I之杭-血栓形成劑，式（I )化合物具有藥理價値之半衰期，容許每天一次之治療，且不容易被PF 4中和化，而且，出血之風險很低，總而言之，式（I )化合物具有吸引力的組合之藥理性質。

其中1^獨立地是3〇3—或<：113; 間隔基是長度爲1 3 - 2 5個原子之撓性間隔基，較宜是 16 — 22，且最宜是19個原子；五糖基之電荷是由正電荷之抗衡離子補償；經濟部智慧財產局員工消費合作社印製且在五糖基中的硫酸根基總數是4、5或6 ; 或其藥學上可接受之鹽類、前驅藥或溶劑化物。本發明之化合物可用於治療及預防凝血酶居間影響及與凝血酶相關的病症，此包括多種血栓形成及前血栓形成狀態其中凝結級聯經活化，其包括但不限於深靜脈血栓、肺栓塞、血栓性靜脈炎、從血栓或栓塞之動脈閉合、血管 5- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1289566 A7 B7 五、發明說明（.3) 成fel或查栓溶解期間或之後之動脈再閉合、動脈手術或侵入性心臟手術法後之再閉合、手術後的靜脈血栓或栓塞、急性或慢性動脈硬化症、中風、心肌梗塞、癌症及轉移、及神經變性病症，本發明之化合物也可在滲析及手術需要之體外血液循環中作爲抗凝固劑使用，本發明之化合物也可作爲試管內之抗凝固劑使用。式（I )化合物特別可作爲抗血栓形成劑用於動脈適應症。根據本發明之較佳化合物是其中五糖基具有下列結構之化合物： (請先閱讀背面之注意事項^^寫本頁}

. 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製間隔基之化學本質對本發明化合物之抗血栓形成活性不重要，但是本發明化合物之間隔基是撓曲性，其表示此間隔基不含剛性成份，例如不飽和的鍵或環狀結構，從事此項技藝者可以很容異地設計合適的間隔基，較佳的間隔基含至少一個一（C Η 2 C Η 2〇）一成份，更佳的間隔基含三個—（CH2CH2〇）一成份，最佳的間隔基是* 一 (CH2CH2〇）3 — （CH2) 2 — NH — C (〇）一( CH2) 3 — NH — C (〇）一CH2 —，用*標示之端係本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） -6- 1289566 A7 B7

五、發明說明（4) 連?妾1五艄基。較佳的式I化合物是式（I a )化合物，其中p是1 —5， η是1 一 5且m是1或2，最佳的式I化合物是式 (I a)化合物，其中p是3，η是3且m是1。 r—〇s〇3 (請先閱讀背面之注意事項寫本頁) 〇 och3 cc\

NH, 正電荷抗衡離子係指H +、N a +

K

da). C E 等，經濟部智慧財產局員工消費合作社印製式（I )化合物較宜是在其鈉鹽形式。良詞 ''前驅藥〃_係Jj本發明化合物其中脒基部份之胺基經保護，例如經由羥基或（1 一 6 C )烷酯基。根據本發明之溶劑化物包括水合物。本發明之化合物，其可發生爲自由態鹼之形式，可從藥學上可接受的鹽類形式之反應混合物分離，藥學上可接受的鹽類也可得自用有機或無機酸處理式（I )之自由態鹼，例如用氫氯酸、氫溴酸、氫碘酸、硫酸、磷酸、醋酸、丙酸、乙醇酸、馬來酸、丙二酸、甲磺酸、富馬酸、琥本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1289566 A7 B7 五、發明說明（5) 珀1 ~、酒石酸、檸檬酸、苯甲酸、抗壞血酸等。本發明之化合物含有對掌性碳原子，且因此可得到爲純的對掌異構物、或對掌異構物之混合物、或含非對掌異構物之混合物，得到純的對掌異構物之方法熟知於此項技藝中，例如得自光學活性酸及外消旋性混合物的鹽類之結晶法，或使用對掌性管柱之層析法，正相或逆相層析法可用於非對掌異構物。製備本發明之化合物可經由先活化式I I之 NAPAP同系物之羧酸酯類，且隨後加成含五糖基間隔基之胺類（式I/I I )，視需要隨後將脒基部份去除保護〇 V，. ·. /Ί 請先閱讀背面之注意事項本頁

(II)

[spacer^ I NH2 (lll> 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製在式I I化合物中的酯基可活化成混合的酸酐或更宜是活化的酯例如N -羥基琥珀醯亞胺、五氟酚或1 -羥基苯并三唑之酯，在偶合步驟中，在式II中之苄脒基可未經保護（R ’ = R ” = Η )，或可視需要使用胺基甲酸酯基保護，較宜是烯丙酯基（R’及/或R”是H2C = CH— CH — C,(〇）〇）或苄酯基（R’及/或R”是 PhCH2 — C (〇）〇），烯丙酯基及苄酯基保護基可在本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） -8 - 1289566 A7 B7

P P 五、發明說明（6) 相當溫和询情形下去除，在弱親核基例如嗎福啉或丙二酸酯存在下，使用p d可將烯丙酯基去除，在例如氫/ P d ( C )之情形下可將苄酯基去除，或者是，可以施以苄脒之合成前驅物例如N -烷氧基苄脒或N -苄氧基苄脒 (R ’ = Η ’ R ” =烷氧基或苄氧基），使用還原情形例如氫化作用可將這些合成前驅物轉化成苄脒（例如Fujii，Τ et al · Chem · Pharm · Bull，39，301，1991 及 Fujii，丁 et al. Chem· Pharm. Bull ’ 4 2 ，1 2 3 1 ， 1 9 9 4 )。較佳的苄脒前驅物是1 ，2，4 一鳄二唑啉一 5 -酮 (—R ’ 一 R ” 一 = 一 C (〇）〇一），此前驅物可經由氫化作用轉化成爷脒（Bolton, R.E. et al., Tetrahedron Letters, Vol 36，No 25，1995 4 4 7 1 - 4 4 7 4 式I I化合物可使用此項技藝中已知的方法在不同的方式下製備，在EP 05 1 3 543揭示一種其中R’二 R”=H ; η是3且m是1之式I I化合物之製法，其中脒經例如用烯丙酯基或苄酯基保護之式I I化合物可從式 IV化合物製備，其中脒是使用在肽偶合之技藝中普遍已知的方法用烯丙酯基或苄酯基保護，式I V之胺基甲酸酯可例如從對應之脒（式I V，R ’二R ” = Η )製備，例如揭示在文獻例如 Weller, T et al· Η· Med· Chem· 3 9 ，3 1 1 9 ，1 9 9 6 ° 請先閱讀背面之注意事項

頁經濟部智慧財產局員工消費合作社印製本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） -9 - 1289566 A7 B7 五、發明說明（

R，UR"

(IV) .0

H0_0

經濟部智慧財產局員工消費合作社印製式I I之N —烷氧基苄脒及N —苄氧基苄脒化合物可從化合物V (揭示在E P 〇 5 1 3 5 4 3 )製備，經由用〇-烷基-羥基胺或0 -苄基-羥基胺處理此氰基化合物，隨後使用酸性情形去除第三丁酯基，或者是，製備式 I I之N -烷氧基苄脒及N -苄氧基苄脒化合物可經由先使用酸性情形將化合物V之第三丁酯去除而得到化合物 V I且隨後使此氰基化合物與〇一烷基一羥基胺或〇一爷基-羥基胺反應。其中一R，一 R”一 = — C (〇）〇一（1 ，2 ，4 — 口萼二唑啉一 5 -酮基）之式I I化合物，可使用在肽偶合之技藝中已知的方法從其中一 R，一 R”一 = (〇）〇一之式I V化合物製備。. 合成式I I I之胺基-寡糖間隔基可例如經由使用揭不在EP 0649854之方法進行，本發明化合物之糖基可根據此項技藝中已知的步驟製備，·例如從w〇99/25720。在本發明化合物上述製備方法中之肽偶合步驟，可使用在肽偶合一或縮合的技藝中普遍已知的方法進行，例如 — ---·---f 裝· — 丨 (請先閱讀背面之注意事項寫本頁) 157 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） -10- 1289566 A7 B7 五、發明說明（8) (請先閱讀背面之注意事項3寫本頁) 經1疊氮北物法、混合酸酐法、活化酯法或較宜經由碳化二亞胺法，尤其是添加催化及外消旋作用抑制性化合物例如N-羥基琥珀醯亞胺及N-羥基苯并三唑，回顧文獻見 The Peptides, Analysis, Synthesis, Biology, Vol 3, E.

Gross and J. Meienhofer, eds. (Academic Press, New York ，19 8 1)¾ Bodanszky, M.; Principles of peptide synthesis, Springer-Verlag，1 9 8 4。存在於化合物中的胺官能基在合成步驟中可經由N -保護基保護，其係指在用於保護α -胺基之肽化學中普遍使用的基，例如第三丁酯基（Β 〇 c )、苄酯基（Ζ)、 9 —芴基甲酯基（Fmoc)或酞醯基（Phth)，決定於這些保護基之本質，去除保護基可在不同的方式下進行，通常是在酸性情形及在淸除劑存在下進行去除保護，胺基保護基及其去除方法之回顧文獻見於上述The PepUdes ，Analysis, Synthesis, Biology, Vol 3 及 Greene, T.W. and Wuts，P.G.M·之 Protevtive groups in organic synthesis, John Wiley & Sons Inc. 19 9 1。經濟部智慧財產局員工消費合作社印製本發明化合物可經腸道或不經腸道用藥，這些化合物及其組成物之確實劑量及療法必須決定於用藥的個別受治療者之需求、感染之程度或需求及醫生之判斷，一般不經腸道用藥比更決定於吸收作用之其他用藥方法需求較低的給藥劑量，但是，人類之每日給藥劑量較宜是0 . 0 0 1 一100毫克每公斤體重，更宜是0·01-10毫克每公斤體重。 _11 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1289566 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製五、發明說明（9) '^在急-性抗凝結療法中，也可使用本發明化合物製造之藥劑作爲輔藥，在此情形下，此藥劑是與用於治療此病症狀態之其他化合物用藥。混合藥學上可接受的輔劑，例如揭示在標準參考文獻 Gennaro et al ·，Remington’s Pharmaceutical Sciences,( 18th ed ·，Mack Publishing Company ，1 9 9 0，見尤其是 P a r t 8 : P h a r m a c e u t i c a 1 P r e p a r a t i ο n s a n d T h e i r Manufacture ),此化合物可壓製成固體給藥劑量單元，例如九劑、片劑，或處理成膠囊劑或栓劑，經由藥學上合適的液體，此化合物也可在溶液、懸浮液、乳液之形式使用，例如以注射製劑使用，或作爲噴霧劑例如作爲鼻子噴霧劑使用。對於製造給藥劑量單元，例如片劑，可使用慣用的添加劑例如塡充劑、染劑、聚合性黏著劑等，通常可使用不會干擾活性化合物功能之任何藥學上可接受之添加劑，可與組成物用藥之合適載劑包括適當用量之乳糖、澱粉、纖維素衍生物等或其混合物。經由下列實例進一步說明本發明。使甬的縮寫： Ac =乙酿基 Β η二爷基 DBU=1 ，8 —二氮雜二環〔5 · 4 · 〇〕~f--碳一 7 · .---^------- (請先閱讀背面之注意事項本頁) 訂- 線‘ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） -12 - 1289566 A7 B7 五、發明說明（10) —- D C C =二環己基碳化二亞胺 DMF = N，N —二甲基甲醯胺 S u二號拍醯亞胺基 M e二甲基 TBTU=2 — (1H - 苯并三 π坐一 1—基）—1 ，1 ， 3，3 —四甲基糖醛鑰四氟硼酸酯 T E： A =三乙胺 TFA=三氟醋酸 Z =苄酯基化合物之號碼係指在圖式1製7中的化合物。化合物3 在化合物1(53.6克，143.6毫莫耳）（R. Roy; W.K.C. Park; Q. Wu; S-N. Wang, Tetrahedron Lett. » 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1995 ，36 (25) ，4377 — 8 〇）及化合物 2 (2 7 · 9 克，8 9 · 3 鼋莫耳）（S.J. Danishefsky; Μ· P. DeNinno; G.B. Philips; R.E. Zelle，Tetrahedron，ΕΝ ， 1986，42，11，2809 — 2819)於 930 耄升D M F之攪拌溶液中，在5 0 °C下加入氫化鈉（ 7 .7克，60% —分散液，192.2毫莫耳），經1 小時後將反應混合物加熱至1 2 0 °C，攪拌5分鐘後使反應混合物冷卻至4 0 °C，用水稀釋並用二氯甲烷萃取三次，將合倂的有機層用水淸洗並在真空下濃縮，得到粗產物 -13- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1289566 A7 B7 五、發明說明（11) 3 Y 5 -4-克），TLC:Rf=0.23，乙醚 10 0% 化合物4 在化合物3 (89·3毫莫耳）於800毫升無水甲苯及8 0 0毫升醋酸酐之攪拌溶液中，在一 3 0°C下逐滴加入3 6 1 · 5毫升硫酸在醋酸酐之冷卻溶液（1 6 . 5 毫升濃硫酸及3 4 5 . 0毫升醋酸酐），經2小時後用 2 4 0毫升T E A並在室溫下攪拌使反應混合物停止反應，在溶液中加入碳酸氫鈉水溶液（5 % )並將水層用醋酸乙酯萃取三次，將合倂的有機層用水淸洗兩次並在真空下濃縮，重複此步驟，得到粗化合物4 ( 5 3克），T L C :Rf = 0.29，乙醚 100%。化合物5 在化合物4 (89 · 3毫莫耳）及乙硫醇（11 · 1 毫升，150.3毫莫耳）於370毫升無水甲苯之攪拌溶液中，在0 °C下逐滴加入B F 3 —醚化物在甲苯之溶液（ 23 . 9毫升BF3 -醚化物及190毫升甲苯），經在室溫下攪拌1 6小時後用T E A及碳酸氫鈉水溶液使反應混合物停止反應並用醋酸乙酯萃取三次，將合倂的有機層用水淸洗並在真空下濃縮，經由管柱層析法（甲苯/醋酸乙酯二1 / 1至0 / 1，體積/體積）純化後得到化合物5 (21·4克），TLC:Rf=0·31 ，甲苯/醋酸本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） -14 - (請先閱讀背面之注意事項 --- 寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1289566 A7 B7 五、發明說明（12) 乙Sr = 4/ 6，體積/體積。化合物7 (請先閱讀背面之注意事項寫本頁) 將化合物5 (15 · 0克，30 · 3毫莫耳）及受體 6 (23.0 克，30. 3 毫莫耳）（W0 99/ 25720)於無水乙醚/二氯甲烷（232毫升，3/ 1，體積/體積）之溶液在分子篩4埃（7 · 6克）存在下在氮氣流中攪拌3 0分鐘，然後在7 5分鐘中將1 ，3 一二溴一 5 ’ 5 —二甲基乙內醯脲（5 · 5克，19.1 毫莫耳）及三氟甲基磺酸（〇 . 49毫升，5 · 6毫莫耳 )在二鸣烷/二氯甲烷（69· 8毫升，1/1，體積/ 體積）之溶液添加至在一 2 0 °C之反應混合物，經3 0分鐘後將T E A ( 5毫升）加入反應混合物，將其攪拌1 〇分鐘後過濾，將過濾液用硫代硫酸鈉水溶液（1 〇 % )及碳酸氫鈉水溶液（1 0 % )淸洗並在真空下濃縮，經由管柱層析法（0至5 %在二氯甲烷中的丙酮）純化產物後得到化合物 7 ( 1 9 · 6 克），T L C ·· R f 二〇 . 1 ，乙醚/庚烷=8/2，體積/體積。經濟部智慧財產局員工消費合作社印製化合物8 在化合物7 ( 1 9 · 5克，1 6 · 4毫莫耳）於無水甲苯/醋酸酐（442毫升，1/1，體積/體積）之攪拌溶液中在一 2 6 °C下逐滴加入1 3 1 · 5毫升硫酸在醋酸酐之冷卻溶液（1 1 · 5毫升濃硫酸及1 2 0毫升醋酸 $紙&尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） -15 - 1289566 A7 B7 五、發明說明（13) 酐V，經-7 5分鐘後在一 20 t：下加入丁 EA (73 · 5 毫升），使溫度保持在2 5 °C至3 0 °C經由逐滴加入 3 3 0毫升水使醋酸酐分解，攪拌1 6小時後將混合物倒入8 0 0毫升水並用甲苯萃取兩次，將合倂的有機層用水淸洗並在真空下濃縮，經由管柱層析法（甲苯/醋酸乙酯 /乙醇二9 6/2/2，體積/體積/體積）純化粗產物後得到8之白色泡沬（1 3 · 2克），T L C : R f二〇.29 ，甲苯/乙醇=9/1，體積/體積。化合物9 在化合物8 (13.2克，11.7毫莫耳）於無水甲苯（6 6毫升）在3 2 °C之溶液中加入嗎福啉（4 · 1 克，4 6 · 9毫莫耳），在3 2 °C攪拌4 2小時後使反應混合物冷卻至室溫並加入氫氯酸水溶液（1 7 . 6毫升， 4當量濃度），將混合物用水稀釋並用醋酸乙酯萃取兩次，將合倂的有機層用水淸洗兩次，經由硫酸鈉乾燥並在真空下濃縮，得到粗化合物9 ( 1 2 · 6克），T L C : Rf=0 · 32，甲苯/；丙酮= 7/ 3，體積/體積。化合物1 1 在化合物9 (12.6克，11·6毫莫耳）於二氯甲烷（1 1 4毫升）之溶液中加入三氯乙腈（3 · 5毫升，34.9毫莫耳）及DBU(52.2微升，0.35 毫莫耳），在室溫攪拌2小時後將在二氯甲烷（4 5毫升請先閱讀背面之注意項

頁經濟部智慧財產局員工消費合作社印製本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） -16- 1289566 A7 B7 五、發明說明（14) )V的分子篩4埃（24克）及受體11 (8 .9克， 13.0毫莫耳）（〜〇 99/25720)加入反應 (請先閱讀背面之注意事項寫本頁) 混合物，在室溫下攪拌3 0分鐘後，將混合物冷卻至一 2 並逐滴加入三氟甲基磺酸三甲基矽烷酯（4 〇 5 微升，2.1毫莫耳）在二氯甲烷（100毫升）之溶液，攪拌3 0分鐘後，在一 2 0 °C下加入碳酸氫鈉並將反應混合物過濾，將過濾液倒入碳酸氫鈉水溶液並用二氯甲烷萃取三次，將合倂的有機層用水淸洗兩次在真空下濃縮，經由管柱層析法（1 : S i〇2: 0 — 10%在乙醚中的丙酮；2 : Si〇2甲苯/丙酮=85/1 5至80/20，體積/體積；3:RP—18:水/乙腈=2/8至〇/ 1 〇，體積/體積）純化產物後得到純的化合物1 2 ( 8 · 9 克），TLC :Rf = 0 · 37 ’ 甲苯/丙酮 / 3，體積/體積。化合物1 4 將化合物12 (8·9克，5.1毫吴耳）及10% 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

Pd/C (8 · 9克）於3 12毫升1：)乂1?及45毫升水之懸浮液在連續氫氣蒸汽下攪拌，經4 · 5小時後’經由過濾佳P d / C觸媒去除，將過濾液濃縮至體積爲4 0 0 毫升並在氫氣流下用10%Pd/C (1 · 5克）氨化 5 · 5小時，經由過濾將觸媒去除，在過滤液（9 0 0毫升）中加入氫氧化鈉水溶液（3 2毫升，4當量濃度），在室溫下攪拌4小時後，用1當量濃度氯氯酸將混合物酸本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） -17 - 1289566 A7 B7 五、發明說明（.15)

化k p 6 · 6，然後在真空下濃縮，在Sephadex G - 2 5管柱上用水流洗將粗產物去鹽，收集適當的流洗份並冷凍乾燥後得到化合物1 4 ( 4 · 0克）。化合物1 5 將五糖化物14(700毫克，0.61毫莫耳）溶解在水（13·2毫升）及DMF (3·3毫升）並加入 N —（苄酯氧基）一琥珀醯亞胺（224毫克，0.90 毫莫耳）及N -乙基嗎福啉（233微升，1 · 83毫莫耳），攪拌1 5分鐘後將反應混合物直接加入R P - 1 8 管柱，用水/乙腈1 0 / 0至7 / 3流洗，收集適當的流洗份並濃縮成少量體積後施加至在水中的D 〇wex 5 0 W X 4 - Η +離子交換管柱，將流洗份在真空下濃縮並得到純的1 5 ( _4 8 2毫克）。化合物1 6 在化合物15 (471毫克，0·37毫莫耳）於 D M F ( 4 · 7毫升）之溶液中加入三氧化硫一吡啶複合物（1 · 1克，6 · 6毫莫耳）並將混合物在3 0 °C攪拌 1 6小時，使混合物冷卻至室溫並逐滴添加至冷卻的1 0 %碳酸氫鈉溶液（16 .7毫升，19. 9毫莫耳）並在室溫下攪拌1小時，將混合物濃縮至少量體積並施加至 Sephadex G - 2 5管柱，用水流洗，收集適當的流洗份並濃縮成少量體積，隨後用水流洗使其通過Dowex N a + ---.---;---:---"^裝--- (請先閱讀背面之注意事項本頁) · --線」經濟部智慧財產局員工消費合作社印製本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） -18- 1289566 A7 B7 五、發明說明（.16) (請先閱讀背面之注意事項3寫本頁) ~tr c R-W 2管柱，將流洗份濃縮並再度溶解在8 · 3毫升〇 · 2當量濃度氫氯酸並使其在4 °C下放置1 6小時，用8毫升〇 · 2當量濃度氫氧化鈉將反應混合物中和化並在Sephadex G — 2 5管柱上用水流洗去鹽，收集適當的流洗份並在真空下濃縮後得到純的1 6 ( 8 4 0毫克）。化合物1 7 將化合物16 (0 · 37毫莫耳）及l〇%Pd/C (8 20毫克）在第三丁醇（8 5毫升）及水（7 9毫升 )及數滴醋酸之懸浮液在氫氣連續氣流下攪拌，經3小時後經由過濾將P d / C去除並將過濾液濃縮及冷凍乾燥後得到純的1 7 ( 6 7 5毫克）。 4 一〔〔4 —〔〔（1R) - 1 一〔〔4—(胺基亞胺基甲基）苯基〕甲基〕一 2 —酮基一 2 —（ 1 一六氫吡啶基）乙基〕胺基〕一 3 —〔〔（4 —甲氧基一 2 ，3 ， 6 —三甲基苯基）磺醯基〕胺基〕一 1 ，4 (S)—二酮基丁基〕胺基〕丁酸苄酯鹽酸鹽（1 8) 在4 —〔〔（1R) — 1 一〔〔4 —(胺基亞胺基甲經濟部智慧財產局員工消費合作社印製基）苯基〕甲基〕一 2 —酮基一 2 —（1 一六氫吡啶基）乙基〕胺基〕一3 —〔〔（4 一甲氧基一2 ，3 ，6 —三甲基苯基）磺醯基〕胺基〕—4 一酮基一（3 S ) 丁酸鹽酸鹽（2.38 克，3.96 毫莫耳）（Tetrahedron 51 ，12047 — 12068 ’ 1995)及苄基一（ 4一胺基丁酸）苯磺酸酯（1·52克，3·96毫莫耳 -19- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公爱） 1289566 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製五、發明說明（17) )(Chem. Soc. 105，5278 — 5284， 1983)在DMF (40毫升）之溶液中在氮氣壓下加入N，N —二異丙基乙基胺（0.689毫升，3.96 毫莫耳）及四甲基-苯并三唑基糖醛鑰四氟硼酸鹽（ 1 · 91克，5 · 94毫莫耳），用N，N —二異丙基乙基胺使反應混合物之P Η保持在6，將反應混合物在室溫下攪拌4天，濃縮，溶解在醋酸乙酯，用5%碳酸鈉及 0 · 1當量濃度氫氯酸淸洗，在硫酸鎂上乾燥並濃縮，將殘留物溶解在無水乙醇（5毫升），用無水二異丙基醚沈澱，過濾，得到2 . 4 7克標題化合物1 8。 Rf=0 · 8，醋酸乙酯/吡啶/醋酸/水=88/ 3 1/1 8/7，體積/體積/體積/體積；質譜（ E S I + ) :777.4〔M + H〕+。 4 —〔〔4 —〔〔（1R)— 1—〔〔4—(胺基亞胺基甲基）苯基〕甲基〕一 2 —酮基一 2 —（ 1 一六氫吡啶基）乙基〕胺基〕一 3 —〔〔（4 一甲氧基—2 ，3 ， 6 —三甲基苯基）磺醯基〕胺基〕一 1 ’ 4 (S) —二酮基丁基〕胺基〕丁酸鹽酸鹽（19) 將18 (2 .42克，3· 11毫莫耳）及 Pd/C(400毫克）在甲醇/水（40毫升，3/1 ，體積/體積.）之懸浮液在氫氣的連續氣流下攪拌，經8 小時後將反應混合物過濾，將過濾液濃縮並與甲醇/甲苯 (1/1 0，體積/體積）共同蒸發三次，將殘留物溶解在無水乙醇（5毫升），用無水乙醚使其沈澱，過濾'並乾 (請先閱讀背面之注意事項裝--- 寫本頁) · 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） -20- 1289566 Α7 Β7 五、發明說明（1δ) 燥V將殘-·留物溶解在水中並直接施加至製備性Η P L C DeltaPak R P — C 1 8使用梯度流洗系統之2 Ο % A / 60%B/2 0%C 至 20%A/1 4%B/6 6%C，在40毫升/分鐘之流速下進行60分鐘，（Α:0·5 莫耳濃度磷酸鹽緩衝液Ρ Η 2 . 1 : Β :水；C :乙腈/ 水=6/4)，產量598毫克。

Rt=26 · 4 分鐘（3 — 10 分鐘：20 - 43% C + 20%A; 10 — 50 分鐘：43 — 66%C + 20 % A ) , ( A :磷酸鹽緩衝液ρ Η 2 · 1 ·· Β :水；C : 乙腈/水二6/4，體積/體積），分析級HPLC supelcosil LC— 18 — DB;質譜（ESI+): 687.2〔M + H〕+，(ESI-) :685.2〔 Μ - Η〕。化合物2.1從化合物1 7及化合物1 9 在化合物19 (40毫克，58·3微莫耳）於 D M F ( 8 0 0微升）的溶液中加入N -羥基琥珀醯亞胺 (9.0 毫克，78.1 微莫耳）、DCC(18.5 毫克，89 . 7微莫耳）及1 一羥基苯并三唑（8 · 8毫克，6 5 . 1微莫耳），將反應混合物在室溫下攪拌4 0小時，將反應混合物經由矽藻土過濾並用D M F ( 2 8 4微升）淸洗矽藻土四次，在過濾液中加入0 . 1莫耳濃度 Na2HP〇4緩衝液（1936微升，ρΗ = 7·5)及五糖化物17(94.7毫克，52.6微莫耳），攪拌 3 0分鐘後將將混合物經由矽藻土過濾，濃縮並施加至：：---.------- (請先閱讀背面之注意事項寫本頁) - 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） -21 - 1289566 A7 B7 五、發明說明（3

Sekadex— G ——5 0管柱·用乙腈/水（1 / 1 ,體積/ 體積）流洗，收集適當的流洗份，濃縮並經由Sephadex G - 5 0管柱層析法（水）去鹽兩次，收集適當的流洗份並冷凍乾燥後得到共軛物2 1之白色固體（9 5 . 8毫克 )，質譜（ESI+)=2469，HPLC:Rt=8. 3分鐘（2 0 — 8 0%B於15分鐘，A=水/乙腈8/ 2 ; B = 2莫耳濃度NaC 1/乙腈8/2，體積/體積 )，分析 HPLC Μ ο η 〇 Q HR5。化合物2 2 將（R) — Ν - Boc (4 —氰基苯基）丙胺酸（ 25.0克，86.1毫莫耳）、六氫吡啶（21.3毫升，215 · 3毫莫耳）及TBTU (41 · 5克， 129 · 2毫莫耳）於無水二氯甲烷（500毫升）之溶液在室溫下的氮氣流中攪拌2小時，將反應混合物依序用 0 · 2當量濃度氫氯酸、水、碳酸氫鈉水溶液（飽和）及水淸洗，將有機層在M g S〇4中乾燥，過濾並在真空下濃縮，將產物溶解在熱醋酸乙酯（3 5毫升），用庚烷（ 1 9 0毫升）沈澱，過濾後得到化合物2 2 ( 2 7 . 7 5 克），TLC ·· Rf=〇 · 58，庚烷/醋酸乙酯二3/ 7，體積/體積。化合物2 3 將化合物2 2 ( 2 5 · 6克，7 1 · 7毫莫耳）、羥 (請先閱讀背面之注意事項Λ寫本頁) 寫女經濟部智慧財產局員工消費合作社印製本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） -22- 1289566 A7 B7 五、發明說明（20) 基*1 安—·Η〜0· 1 (7 · 1克，101 · 8毫莫耳）及三乙胺（ (請先閱讀背面之注意事項寫本頁) 16 .8毫升，120· 5毫莫耳）於無水乙醇（307 毫升）之溶液在8 0 °C下攪拌4小時，將混合物冷卻至室溫後形成結晶，將結晶過濾，用乙醇及乙醚淸洗，在乾燥箱中乾燥後得到化合物2 3 ( 2 4 · 5克），T L C ·· Rf=〇 · 15，庚烷/醋酸乙酯=3/7,體積/體積化合物2 4 將化合物23 (24 · 5克，62 · 7毫莫耳）及氯甲酸乙酯（7 . 2毫升，7 5 · 3毫莫耳）於無水吡啶（ 2 4 5毫升）之溶液在1 1 5 °C下攪拌2小時，將混合物冷卻至室溫並倒入水（1 2 5 0毫升）且用醋酸乙酯（ 5 0 0毫升）.萃取三次，將合倂的有機萃取液在M g S〇4 中乾燥，過濾並在真空下濃縮後得到化合物2 4 ( 24.3 克），TLC:Rf = 〇.42，CH2Cl2/ M e Ο Η 95/5,體積/體積。經濟部智慧財產局員工消費合作社印製化合物2 5 將化合物24(24·3克，58.4毫莫耳）於無水CH2C12 (122毫升）及TFA (122毫升）之溶液在室溫下攪拌2小時，在甲苯存在下在真空下濃縮後得到化合物2 5 ( 3 7 · 6克），T L C : R f = 〇 · 35，CH2Cl2/Me〇H 8/2，體積/體積 -23- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1289566 A7 ' ___B7_ 五、發明說明（· 21) 〇 " t合物2 6 將 H — Asp — (〇tBu)—〇H (39 克， . 2〇6·35毫莫耳）、4 —甲基一2，3，6 —三甲基 $磺醯基氯（62克，249 .3毫莫耳）及二異丙基胺 (89毫升，635毫莫耳）於DMF(950毫升）及 j ( 4 5 0毫升）之懸浮液在0 °C下攪拌3小時，將反應 ^合物倒入冰/水（5升）並用乙醚淸洗兩次，用氫氯酸 7欠溶液（4當量濃度，7 2毫升）酸化並用醋酸乙酯萃取 3次，將合倂的醋酸乙酯層在M g S〇4中乾燥，過濾並在真空下濃縮後得到化合物2 6 ( 9 7 · 7克），T L C :

Rf 二〇· 67 ，CH2Cl2/Me〇H 二 8/2，體積 /體積。化合物2 7 將化合物2 5 ( 3 3 · 5克）、化合物2 6 ( (請先閱讀背面之注意事項β寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製莫}空氫彳，，毫耳真用液燥} 6 莫在，溶乾克 • 毫並 } 水中 8 4 1時升酸04. 1 · 小毫氯 3 I S 1 4 2 ο 氫 3 ，9 拌 5 及彳克 1 攪 7 } 7 8 ，液彳升 2 •升溶酯毫),物 6 毫之乙 ο 升合 3 2 } 酸 5 毫化 (•升醋 2 ο 到 U 7 毫在 1 5 得 T2 ο 解，2 後 B { 7 溶%1 縮 T 胺 6 物 5 ，濃、基 { 留 { 度下 } 丙 F 殘液濃空克異 Μ 將溶量真 7 二D，水當在 •及水縮鈉 1 並 4 }無濃化 ·濾 2 耳於下氧 ο 過 -24- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1289566 A7 厂 _B7_ —_ _ 五、發明說明（22) T 1 C : -R f = 〇 · 8 8，c Η 2 C 1 2 / M e 〇 Η = 8 / 2，體積/體積。化合物2 8 將化合物27 (33·8克，48·3毫莫耳）於無水CH2C 12 (170毫升）及TFA (170毫升）之溶液在室溫下攪拌2小時，在甲苯存在下在真空下濃縮後得到化合物2 8 ( 3 2 · 3克），T L C ·· R f =： 0 · 73 ，CH2Cl2/Me〇H 8/2，體積 / 體積化合物2 9 將化合物 28 (32 · 3 克）、H — GAGB — 〇七：811.11(：1(9.5克，48.4毫莫耳）、 TBTU(29·0克，90·5毫莫耳）及二異丙基胺 (25· 2毫升，179.8毫莫耳）於無水〇1^1?( (請先閱讀背面之注意事項 --- 本頁) · 縮鈉濃氫下酸空碳真用在，並 } 時升小毫 2 ο 伴 4 攬 8 下C 溫酯室乙在酸液醋溶在之解 )溶升物毫留 2 殘 2 將 6 ，經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 ο ο ， 4 % 1 5 ， C 度液濃溶量水當

ο ο 4 一—I 升 l·)洗毫、、 ο 燥 C乾液中溶水酸氯氫及〇 S g Μ 在過並合 }化升到毫得 5 ， 7 ) C 升醇毫乙 ο 在 9 解 9 溶 2 物C 留醚殘丙將異，二縮的濃拌下攪空至真加在添並慢濾緩 R IX C / L 9 τ II ，Η ^ Ge ο Μ 2 / 2 3 1 (c 體 2 晶 Η 色 c 灰，之 6 9 5 2 . 物 ο 積體 \ 積體本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） -25- 1289566 A7 __ B7 五、發明說明（，23) 0 — _ 化合物3 0 (請先閱讀背面之注意事項3寫本頁) 將化合物29 (3 · 〇克，3 · 82毫莫耳）於無水 CH2C12(15毫升）及TFA(15毫升）之溶液在室溫下攪拌2小時，在甲苯存在下在真空下濃縮，在;^夕膠上使用 CH2C l2/Me〇H (〇%— 6%Me〇H)純化殘留物後得到化合物3 0 ( 1 · 9 8克），τ L C : Rf=0 · 56 ，CH2Cl2/Me〇H 8/2，體積 /體積。化合物3 1 將化合物30 (900毫克，1 · 23毫莫耳）、 TBTU(3. 96毫克，1.23毫莫耳）及二異丙基胺 (215微升，1.53毫莫耳）於DMF (45毫升）之溶液在室溫下攪拌2小時，加入化合物1 7 ( 2 · 0克，1 · 1 1毫莫耳）並攪拌4小時，在真空下濃縮後得到化合物3 1 ( 4 · 1 7克）。經濟部智慧財產局員工消費合作社印製化合物2 1從化合物3 1 將化合物.31 (4 · 17克）及10%Pd/C ( 2 · 8克）在第三丁醇（28毫升）及水（56毫升）中的懸浮液在連續氫氣流下攪拌過夜，經由過濾將P d / C 觸媒去除並將過濾液在真空下濃縮，將殘留物溶解在水中 -26- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1289566 A7 _B7 五、發明說明（24) 並i⑤由-Osepharose管柱純化，收集適當的流洗份，濃縮並經由Sephadex G — 2 5管柱層析法（水）去鹽，收集適當的流洗份並冷凍乾燥後得到共軛體2 1之白色固體（ 1 · 7 4 克）。 (請先閱讀背面之注意事項寫本頁) 裝經濟部智慧財產局員工消費合作社印製本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） -27- 1289566 A7 B7 五、發明說明（2¾ 圖〜式1 -…

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OBn OMe OMe 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） -28- 1289566 五、發明說明（3 圖〜式—2 -… A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

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OMe OMe OMe (請先閱讀背面之注意事項API寫本頁) ·. 14 R^H.^H 15 Η^Ζ,^Η 16 R，=Z，R2=S〇3·

本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） -30- A7 B7 1289566 五、發明說明（2¾ 圖〜式4 - 一

本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） -31 · A7 _B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） -33 - 1289566 五、發明說明（3 圖 iT6 -- 1289566 A7 ___Β7 五、發明說明（巧圖式~ 5… 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

--------------裝--- (請先閱讀背面之注意事項寫本頁) 線！ Φ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） -32- 1289566 A7 B7 五、發明說明（31) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

(請先閱讀背面之注意事項J寫本頁) R"N 裝訂： % 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） -34- 1289566 A7 B7 五、發明說明（.32) 實被2 -… 本發明化合物之生物活性係經由下列測試方法測定。 I ·抗凝血酶測試方法 (請先閱讀背面之注意事項β寫本頁) 凝血酶（因子I I a )是在凝固級聯中的一種因子，評定本發明化合物之抗凝·血酶活性是經由分光光度法測量產生色素的作用物s - 2 2 3 8經凝血酶引起之水解速率，使用在緩衝液系統中的此抗凝血酶活性測試法評定測試化合物之I Cs。—値。測試介質:三羥甲基胺基甲烷一 Na C 1 —聚乙二醇（丁 N P )緩衝液參考化合物=1 2 5 8 1 ( Kabi ) 媒介物:T N P緩衝液使用在最終反應混合物中的濃度達2 · 5 %而無負面效應之二甲亞碾、甲醇、乙醇、乙腈或第三丁醇可幫助溶解作用。技術：經濟部智慧財產局員工消費合作社印製鼠.劑1 · 三羥甲基胺基甲烷—N a C 1 ( Τ N )緩衝液；緩衝液之組成物：三羥甲基胺基甲烷（T r i s ) 6.057 克（50 毫莫耳），NaCl 5.844 克 (100毫莫耳），水至1升，用HC1 (10毫莫耳/ 升）將溶液之pH在37 °C下調整成7.4, 2. Τ N P緩衝液：將聚乙二醇6 0 0 0溶解在Τ N緩衝液而得到濃度爲3克/升，3 . S — 2 2 3 8溶液：將1瓶 S — 2238 (25 毫克 Chromogenix;Sweden )溶解在本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） -35- 1289566 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明說明（3 2 (T毫升—τ· N緩衝液而得到濃度爲1 · 2 5毫克/毫升（ 2毫莫耳/升），4 · 凝血酶溶液··將人類凝血酶（ 1 〇 Ο Ο N I Η 單位 / 瓶，Enzyme Res. Lab. Inc.，USA )溶解在T N緩衝液而得到5 Ο N I H單位/毫升之儲備溶液，使用前立即將此溶液用T N P緩衝液稀釋而得到濃度爲30.2NIH單位/毫升。 * - 使用的全部成份是分析等級〜對於水溶液是使用超純水（Milli-Q品質）。製..備J1M.1參…考…化..盒..物..溶..液.. 將測試及參考化合物溶解在Milli-Q水中而得到1 0 2 莫耳/升之儲備溶液，各濃度逐步用媒介物稀釋而得到 1 〇 ~ 3、 1 0 — 4及1 0 — 5莫耳/升之濃度，在測試法中使用稀釋液包括儲備溶液（反應混合物中的最終濃度分別是3.1〇_4;1〇-4;3.10-5;1〇-5;3.10一6 ;1 0 6 ; 3 · 1 0 - 7 及 1 0 - 7 ) 〇在室溫下將0·075毫升及〇·〇25毫升測試化合物或參考化合物溶液或媒介物交替吸入微量滴定盤之槽內並分別用0·115毫升及0·0165毫升丁NP緩衝液稀釋這些溶液，將整份部份之0 . 〇 3 0毫升S - 2 2 3 8溶液添加至各槽並在3 7 °C下將此盤在培養器（ Amersham )中在搖動下預熱及預培養，培養1分鐘後開始：I .-----------^--------- (請先閱讀背面之注意事項寫本貢〕

本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） -36- 1289566 A7

五、發明說明（34) ’便用動微重滴疋feg賈取器（Twinreader plus，Flow

Laboratories )每2分鐘在4 Q 5毫微米測量各樣品之吸收値歷時9 0分鐘。使用數據處理程式（Biolise )將全部數據收集在個人電腦，各化合物濃度（以莫耳/升反應混合物表示）及空白之吸收値對反應時間分鐘繪圖。評定回應：從測試法之繪圖計算各最終濃度之最大吸收値，根據 Hafner et al. (Arzneim.-Forsch./Drug Res. 1977，27 (I I) : 1871 — 3)使用 i〇git 轉化分析計算I C 5 〇 -値（最終濃度，以微莫耳/升表示，造成5 0 %抑制空白之最大吸收）。實例1化合物之抗凝血酶活性：I C 5 Q -値：1 7毫 — ^* ------------------ · 微莫耳濃度一、 I I ·抗X a因子測試法經濟部智慧財產局員工消費合作社印製：：---,---裝--- (請先閱讀背面之注意事項m寫本頁) ^ 活化的X因子（X a )是在凝固級聯中的一種因子，評定本發明化合物之抗X a活性是經由分光光度法測量產生色素的作用物s — 2 2 2 2經X a引起之水解速率，使用在緩衝液系統中的此抗X a活性測試法評定測試化合物之I C 5 Q —値。參考化合物:五糖物〇rg 31540 媒介物:T N P緩衝液使用在最終反應混合物中的濃度達1 % (對D M S〇 )及2 · 5 % (對其他溶劑）而無負面效應之二甲亞硕、本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） -37- 1289566 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製五、發明說明（.3¾ 甲1^、乙_醇、乙腈或第三丁醇可幫助溶解作用。技術: 試_.劑1 · 三羥甲基胺基甲烷—N a C 1 ( Τ N )緩衝液；緩衝液之組成物：三羥甲基胺基甲烷（T r i s ) 6·11 克（50·4 毫莫耳），NaCl 10.17 克（174毫莫耳），聚乙二醇6000 3克/升，水至1升，用HC1 (10毫莫耳/升）將溶液之pH在 3 7 t：下調整成7 · 4，3 . S — 2 2 2 2溶液：將1 瓶 S — 2222 (25 毫克；Chromogenix; Sweden )溶解在水中而得到濃度爲0 · 3 7 5毫克/毫升（〇 · 5毫莫耳 / 升），4 · X a 溶液··將 Bovine Factor Xa Human (7 1 η K a t / 瓶；Chromogenix)溶解在 1 0 毫升 Τ N P緩衝液並再用Τ N P緩衝液稀釋而得到0 · 7 5 η K a. t · ( 1 · 5 U ) /毫升，稀釋必須新鮮地製備， 5 · A 丁 I I I 溶液：將人類 A Τ I I I ( Chromogenix )溶解在水中而得到濃度爲1 U /毫升，然後再用3倍體積之TNP緩衝液稀釋成濃度爲〇.25U/毫升， 6 · 標準溶液：將5 · 7抗X a U /毫升〇r g 3 1 5 4 0之儲備溶液在Τ N P緩衝液中稀釋成0 · 〇 5 U /毫升，6 . 測試樣品：各製劑溶解在水中並用 TNP緩衝液稀釋成濃度爲〇·〇5毫微莫耳/毫升，各製劑進行9個稀釋（稀釋因子1 · 5 )。測定X a活件 -Η - --------------裝 (請先閱讀背面之注意事寫本頁) · % 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） -38 - 1289566 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製五、發明說明（3 在室-溫下將各測試樣品（0 · 0 5毫升）吸入微量滴定盤之槽內，在各樣品內加入A T — I I I溶液（ 0 · 05毫升）並使用Va r i —搖動機搖動盤子，加入 A 丁一 I I I溶液經1 〇分鐘後將整份部份之X a溶液（ 0 · 0 5毫升）吸入各槽內並再度搖動盤子，加入Xa溶液剛好2分鐘後，將0 · 1毫升S — 2 2 2 2溶液吸入各槽內並再度搖動盤子，全部添加是使用1 2個通道之吸液器，剩餘量之X a催化S - 2 2 2 2之水解，在室溫下分別培養經2及2 2分鐘後，光度測量其速率，使用Reader Microelisa 3 10C 型（Organon Teknika,〇ss， The Netherlands )在4 0 5毫微米測量個樣品之吸收，並計算吸收增加量 (△〇D ),各測試樣品重複測定，每1 〇個樣品包括一個空白（0 · 0 5毫升T N P緩衝液）。校正曲線從校正樣品標準溶液之整份部份進行系列稀釋（〇r g 3 1 5 4 0樣品之稀釋因子是1 · 4 )，所得的標準樣品（約1 2個樣品）必須含介於0 · 0 1 -0 · 0 5抗X a U /毫升，在各操作中，根據 ''測定X a活性〃之敘述，0 · 0 5毫升各標準樣品至少測試3次，使用最小平方法，經由將直線套至 ,平均空白)-平均(標準樣品）糾拉％ log-平均頌標準樣品)-封㈣抗 (請先閱讀背面之注意事項 --- 寫本頁} · % 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） -39- 1289566 A7 B7 五、發明說明（37) u>毫升顧，得到校正曲線。評定回應:使用校正曲線測定在u/毫升下之各樣品平均抗X a活性。實例1化合物之抗X a因子活性. . .：..1 . £L _1 2 U /微莫耳 (請先閱讀背面之注意事項寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） -40-

Claims

1289566 A8 B8 C8 D8 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製々、申請專利範圍附件2A :第89124693號專利申請案中文申請專利範圍替換本民國95年8月21日修正 1 . 一種式（I )之化合物

其中尺獨立地是5〇3—或（：113; 間隔基是氺-(CH2CH2〇）h(CH2)2-NH_C(〇）-(CH2)hNH-C(〇）-CH2· ，其中用*標示之端係連接至五糖基；五糖基之電荷是由正電荷之抗衡離子補償；且在五糖基中的硫酸根總數是6 ; 或其藥學上可接受之鹽類。 2 ·根據申請專利範圍第1項之化合物，其中五n基具有下列結構本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

8 8 8 8 ABCD 1289566 六、申請專利範圍

3 · —種製備如申請專利範圍第1項之化合物之方法包括以下步驟= 將式（II )化合物之羧酸酯基活化成酸酐或酯’ (請先閲脅背面之注意事項再填寫本頁)

其中R/與R"連成一C (〇）◦一；將所得化合物與式（ΠΙ)化合物偶合經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

間隔基 I nh2 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（21(^29*7公釐） -2- 1289566 A8 B8 C8 D8 六、申請專利範圍其中R各自獨立爲S〇3_或CH3 ; 及將所得產物藉著對脒基部分去保護化，而形成式（I ) 化合物。 4 . 一種用於治療或預防血栓或其他與凝血酶相關的病症之醫藥組成物，其含有根據申請專利範圍第1或2項之化合物及藥學上可接受之輔劑。 (請先閱脅背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐） -3-