TWI249405B - Adsorbent for endocrine disruptors, and foods and drinks containing the same - Google Patents

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1249405 A7 B7 五、發明説明（1 ) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本發明係有關可吸附去除口服攝取之擾亂內分泌化學 物質之吸附劑，更詳細者係有關吸附擾亂內分泌之化學物 質於人體及動物之腸管內後，可抑制該物質往體內之吸收 ，同時具有效促進一旦被吸收之該物質往體外排出之擾亂 內分泌之化學物質吸附用劑及含此之食品者。 先行技術中，報告指出爲防止附著貝殼於船底，因此 長年塗佈有機錫化合物，而造成貝類生殖器異常之起因（ Gibbs 等 J.Mar.Biol.Assoc.UK.66,767，1 986 )，此契機擾亂 內分泌之化學物質（環境激素），造成社會極大問題點。 生體之內分泌系藉由各種激素的作用後，控制個體產生， 生殖器之增長，及維持生體之恆常性之極重要系統者。擾 亂內分泌之化學物質係影響此等內分泌系平衡障礙之物質 者，被曝露於生活排水，棲息於湖沼之野生動物的繁殖， 造成形態之異常者。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 人體，動物一般由消化管，肺，皮膚吸收擾亂內分泌 之化學物質，而，通常生活環境中人體較少經由空氣，水 ，土壞吸收之，主要由日常攝取之食品（肉類，魚類）被 污染者。其中又以下式（1 )所示之草脫淨（Atrazine )、 草滅淨（Simazine )等之三嗪系除草劑及馬拉松（ Malathion )等目前仍被使用之農藥被指出有生體污染之危 險性。此口服被攝取之擾亂內分泌之化學物質係由腸管被 吸收，蓄積於肝臟，脂肪組織。 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -4- 1249405 A7 B7 五、發明説明（2

(CH3)2CHNH、 N

nhch2ch3 (I) 另外，由各種食品容器所使用之聚碳酸酯樹脂等所溶 出之雙酣 A (Krishnan 等 Endocrinology，132,2279 ( 1 993)，01ea 等 Environ.Health Perspect.，1 04,298(1 996)，以 及 4 —壬基苯酹（Soto 等 Environ.Health Perspect·，92, 1 67(1 991)，Nimrod 等 Crit.Rev.Toxicol.，2 6,33 5(1 996))係結 合於針對女性激素之雌激素細胞受容體後，影響此等內分 泌系平衡障礙之物質者，影響人體更甚，造成極大社會問 題。 雙酚A係下式（I I )所示之化合物者，主要用於聚 碳酸酯樹脂及環氧樹脂之原料外，亦可做爲苯酚樹脂，可 塑性聚酯，聚碾，聚丙烯酸酯等樹脂原料，聚氯化乙烯之 安定劑，以及氧化防止劑之使用。日本國平成8年度之生 產量約爲2 5萬噸，其中食品用途達4萬噸。 (II) 以雙酚A做爲原料之聚碳酸酯樹脂係具有良好耐熱性 及耐衝擊性者，被利用於煮咖啡器等高溫下所使用之器具 ’幼兒用，給食用食器，以及奶瓶等。聚碳酸酯製品中不 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（2l〇x 297公釐）

I t 經濟部智慧財產局g(工消費合作社印製

-5- 1249405 A7 B7 五、發明説明（3 ) 僅殘留未反應之雙酚A，於高溫條件下亦具有易由聚合體 溶出之性質。 又，多半不銹鋼及鋁製食品罐以環氧樹脂或氯化乙烯 樹脂塗裝內面。環氧樹脂做爲原料，氯化乙烯樹脂做爲安 定劑，而使用雙酚A，因此，被指出於加熱殺菌，保存時 ，其殘留於塗膜之雙酚A可能移行至食品（Brotons等 Environ Halth Perspect., 1 03,608( 1 995) ) 〇 更且，雙酚A以聚碳酸酯塑料之形式，做爲齒科用材 料，亦可用於治療蛀牙時之塡充物，乳牙之塗劑者（keith 等 「 Environmental Endocrine Disruptors 」 Willey-Inteuscience，New York，pl232(1997))。針對此牙科用材料 亦被指出其聚合物之聚合不完全，進行高壓蒸氣滅菌等加 熱時，可能溶出雙酚 A ( krishnan 等 Endocrinology, 132,227 9( 1 993) ) 〇 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 又，下式（I I I )所示之4 一壬基苯酚爲壬基苯酚 乙醇酯之形態者，做爲非離子性界面活性劑使用之’其年 間生產量約爲2萬噸。壬基苯酚乙醇酯其起泡性低’在曰 本主要做爲工業用洗淨劑，做爲分散劑之纖維工業，製紙 工業，金屬工業，農藥工業等使用之。因此’含4 一壬基 苯酚之下水處理放流水其流入河川•海洋之魚類等被污染 之。 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） -6- 1249405 A7 B7 五、發明説明（4 ) H0(in) 如上述，現代人急欲尋求一種防禦日常中始於雙酚A ，4 -壬基苯酚以及阿特拉津之各種擾亂內分泌之化學物 質的危險性被曝露於人體之污染基材，去除方法等。 而，口服攝取擾亂內分泌之化學物質由腸管通過被吸 收之血流到達全身器官，造成破壞內分泌系平衡之不良影 響。只要於腸管內發現吸附該擾亂內分泌之化學物質之物 質者，藉由此物質之利用後，抑制住體內吸收該擾亂該內 分泌之化學物質後，促進排出體外可藉由上述機序可由擾 亂內分泌系進行生體之防禦。 相關此用途者，報告指出目前爲止有米糠纖維，菠菜 纖維，綠藻，螺旋藻爲促進擾亂內分泌化學物質之代奧辛 及部份多氯聯苯（P C B )化合物排出體外（森田等 Jpn.J.Toxicol.Environ.Health，43,42-47(1997) ) 〇 惟，針對擾亂內分泌化學物質存在於主要被吸收部位 之腸管內其腸內微生物進行吸附該物質者，具有對於人體 ，動物內之吸收抑制作用等均未被提出報告。 本發明鑑於上述狀況以提供一種由食品容器溶出以雙 酚A，4 -壬基苯酚，阿特拉津爲始之擾亂內分泌之化學 物質，攝取被此污染之食品時，同時或日常口服攝取後， 可控制往體內吸收且，一旦被體內吸收之擾亂內分泌化學 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) .裝· 訂 經濟部智慈財產局員工消費合作社印製 -7- 1249405 A7 ____B7__ 五、發明説明（5 ) 物質可促進其排出體外之藥劑者爲其課題。 請 先 閱 讀 背 之 注 意 事 項 再 本發明者針對擾亂內分泌化學物質，特別是雙酚類， 烷基苯酚類，三嗪類等之吸附物質進行精密硏討後，發現 各種腸內微生物之菌體或其構成物可有效吸附此等物質， 進而完成本發明。 亦即，本發明係提供一種以含有腸內微生物生菌體或 死菌體或其構成物做爲有效成分之擾亂內分泌化學物質之 吸附劑者。 又，本發明係提供一種含有該擾亂內分泌化學物質的 吸附用劑的食品者。 本發明更提供一種，抑制投入人體之擾亂內分泌化學 物質之吸附劑所成之擾亂內分泌化學物質往人體吸收之方 法以及促進排出人體之方法者。 〔圖面之簡單說明〕 圖1係代表腸內微生物時，腸內微生物濃度與雙酚A 吸附量相互之關係圖面者。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 圖2代表腸內微生物濃度與殘存雙酚A量以及雙酚A 之吸附量相互之關係圖面者。 圖3代表腸內微生物存在於飼料中時，腸內微生物濃 度與雙酚A吸附量相互關係之圖面者。 圖4代表飼料濃度與腸內微生物之雙酚A吸附量相互 關係之圖面者。 圖5代表反應系之p Η與雙酚A吸附量相互關係之圖 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） -8- 1249405 A7 B7 五、發明説明（6 ) 面者。 圖6代表反應時間與雙酚a吸附量相互之關係圖面者 〇 圖7代表各種腸內微生物種類與雙酚a吸附量相互之 關係圖面。 圖8代表纖維素類與雙酚A吸附量相互之關係圖面者 〇 圖9代表各種腸內微生物類與4 -壬基苯酚吸附量相 互之關係圖者。 圖1 0代表各種腸內微生物類與阿特拉津吸附量相互 之關係圖者。 圖11代表腸內微生物類與其投用量及雙酚A之糞便 總排出量相互之關係圖者。 圖1 2代表腸內微生物類與其投用量及糞便乾燥重量 相互之關係圖者。 圖1 3代表腸內微生物類與其投用量及盲腸內容物中 投與菌體之生菌數相互關係圖者。 圖14代表腸內微生物投用量與糞便乾燥重量之雙酚 A濃度相互之關係圖者。 〔發明實施之形態〕 本發明擾亂內分泌化學物質之吸附劑中所使用之腸內 微生物公知者自古係做爲製造食品（乳酸菌飮料，優酪乳 等）所使用之菌株者，對人體爲極安全之微生物者。本發 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ：297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) •裝.

*1T 經濟部智慈財4局8工消費合作社印製 -9- 1249405 A7 _B7_ 五、發明説明（7 ) 明腸內微生物中除含腸內常在菌之外，亦含由食品所攝取 之滯在腸內某種程度期間之細菌。 做爲此腸內微生物例者如：乳桿菌屬，雙岐桿菌屬， 乳球菌屬，鏈球菌屬，腸球菌屬，Weissella屬，明串珠菌 屬，四雙烯球菌屬，丙酸桿菌，擬桿菌，梭菌屬，真桿菌 屬，片球菌屬或巨球形菌屬所屬之微生物例。 該各屬所屬微生物均極易取得，而特別理想例者如以 下列舉之微生物。 •乾酪乳桿菌（Lactobacillus casei) YIT 9029 生命工學工業技術硏究所條寄第BP — 1 3 6 6號（ 1981年5月1日受託） •嗜酸乳桿菌（Lactobacillus acidophilus) YIT 0168 生命工學工業技術硏究所條寄第BP — 7 5 3 6號（ 1981年12月16日受託） •短雙岐桿菌（Bifidobacterium breve) YIT 4065 生命工學工業技術硏究所條寄第B P - 6 2 2 3號（ 1996年2月29日受託） •兩岐雙岐桿菌（Bifidobacterium bifidum) YIT 4007 生命工學工業技術硏究所條寄第B P - 7 9 1號（ 1981年5月1日受託） •乳酸乳珠菌（Lactococcus Iactis) YIT 2027 生命工學工業技術硏究所條寄第BP - 6 2 2 4號（ 1997年2月10日受託） •嗜熱鏈球菌（Streptococcus thermophilus) YIT 2001 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) ;裝· 訂 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 -10- 1249405 A/ _____B7__ 五、發明説明（8 ) 生命工學工業技術硏究所條寄第BP — 7 5 3 8號（ 2001年1月31日受託） •嗜熱鏈球菌（Streptococcus thermophilus) YIT 202 1 生命工學工業技術硏究所條寄第B P — 7 5 3 7號（ 1996年11月1日受託） • Enterococcus fecium YIT 2039 Weissella confusa YIT 0233 •乳明串珠菌（Leuconostoclactis) YIT 3001 •乳酸片球菌（Pediococcus acidilactici) YIT 3025 •丙酸丙酸桿菌（Propionibacterium acidipropionici)YIT 3 50 1 •埃氏巨球形菌（Megasphaera elsdenii) YIT 6063 本發明所使用之腸內微生物係依常法，於含有酵母浸 劑，聚腺之複合培養基下，藉由培養此等微生物後，可取 得其生菌體，惟，使用如下記組成之複合培養基者爲更理 想者。又，腸內微生物可單獨使用一種該微生物，亦可使 用不同屬或不同種所屬微生物之2以上組合者。 <複合培養基組成> 變法G A Μ培養基（日水製藥股份公司製） 41.7g D ——葡萄糖（和光純藥工業股份公司製）i〇.〇g 聚環氧乙烷（2 0 )山梨糖醇酐單油酸酯 (和光純藥工業株式會社製） 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 請 先 閱 讀 背 面 之 注 意 項

經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 l.〇g -11 - 1249405 A 7 B7 五、發明説明（9 )

脫離子水 1.0L (pH 7.3) 又，腸內微生物加熱菌體（死菌體）係於8 0〜 1 2 0 °C之溫度下，以1 5〜3 0分鐘進行處理該生菌體 後取得者。 另外，腸內微生物之構成物可以一般所使用之方法取 得，如：以細胞壁溶解酶處理菌體後，去除部份細胞壁部 份之原生質體畫分，菌體細胞壁溶解酶可溶畫分，以有機 溶劑處理該原生質體後進行粉碎細胞質膜畫分，菌體粉碎 物或菌體後，核酸分解酵素，蛋白質分解酵素處理後所取 得之細胞壁畫分等，在不損及本發明效果下，亦可使用處 理加工者。 該取得腸內微生物生菌體，加熱菌體（死菌體）或其 構成成份（以下稱「腸內微生物菌體等」）可直接或與公 知的藥學上可容許載體相互組合後，做爲本發明擾亂內分 泌之化學物質之吸附用劑者。 爲於腸管內發揮擾亂內分泌化學物質之吸收作用之腸 內微生物菌體等之所需量依菌株不同而異，通常，一曰約 10mg〜30g之攝取量爲宜，1〜5g較易發揮效果 ，因此，本發明擾亂內分泌化學物質之吸附劑做成適於此 投用量之配合量，劑型者宜。 又’本發明擾亂內分泌化學物質之吸附劑如：發酵乳 ’果汁飮料，湯，煎餅，餅乾等例。針對此等食品之擾亂 內分泌化學物質之吸附用劑配合量並無特別限定，一般只 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) '裝· 訂 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 -12- 1249405 A7 __B7_ 五、發明説明（1〇 ) 要結果可攝取上述量之腸內微生物菌體等即可。 如以上取得之本發明擾亂內分泌化學物質之吸附劑及 含此之食品係吸附各擾亂內分泌化學物質，如：雙酚A等 之雙酚類，4 -壬基苯酚等烷基苯酚類，阿特拉津等三嗪 類後，防止由腸管往體內吸收，往體外排出，因此，藉由 此等物質之作用可由擾亂內分泌系防禦生體者。 〔實施例〕 以下列舉實施例進行本發明更詳細之說明，惟，本發 明並未限定於此等實施例者。又，以下實施例中吸附擾亂 內分泌化學物質衍生物之吸附量及排出動物體外之排出量 係藉由以下方法所測定者。 (1 ) 微生物之雙酚A吸附作用： (甲） 供試試料之調製 將保存於分散媒之微生物的1白金線圈植菌於含有 1 0 2該複合培養基之試管（1 5m〇中，於3 7 °C下進 行靜置培養。2 4小時後，將試管1根份接種於含2 4 0 J同一培養基之三角燒瓶（5 0 0 4 )後，於3 7 °C下進 行1 6小時靜置培養之。培養結束後，於下記條件下利用 冷卻離心分離器進行分成菌體與上淸液，將菌體以磷酸緩 衝液（2 0 m Μ之磷酸二氫鉀水溶液與2 〇 m Μ之磷酸氫 二鉀水溶液相互混合後，調整ρ Η爲7 · 0之溶液）進行 2度洗淨。將此洗淨菌體或8 0 °C下3 0分鐘加熱處理之 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 請 先 閱 讀 背 之 注 項

頁 經濟部智慈財產局8工消費合作社印製 -13- 1249405 A7 B7 五、發明説明（11 ) 加熱菌體懸浮於磷酸緩衝液後，供與吸附試驗 <冷卻離心分離之條件> 冷卻離心分離機：R S — 1 8 1 1 1 (富一精工股份 公司製） 轉子：TA - 18BH (富一精工股份公司製） 旋轉數（重力加速度） 2，0 0 0 X g ) 離心時間：2 0分鐘 溫度：4 t :8 ，0 0 0 r p m 請 先 閱 讀 背 面 之 注 意 事 項 再 經濟部智慧財產局K工消費合作社印製 (乙） 雙酚A試料之調製 以電子天秤於容量瓶（1 0J)中秤取1 〇 〇mg之 雙酚A (東京化成工業股份公司製）後，以乙醇（和光純 藥工業股份公司製•特級）精確調製1 〇 W。1 J此溶液 以無刻度吸管分取至另一容量瓶（5 0 2 )中，以乙醇精 確調製5 0 m£後，將此溶液供於吸附試驗中。 又，做爲內部標準物質者，使用下式（I V )所示之 雙酚B者。

(IV) (丙） 測定微生物與雙酚A相互之吸附反應及殘存雙酚 A之量 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -14- 1249405 A7 B7 經濟部智慧財產局8工消費合作社印製 五、發明説明（12) 於含有3 · 8 4之該（甲）所載生菌體或加熱菌體懸 浮液之玻璃試管中，添加〇 · 2^£之（乙）所載之雙酚A 乙醇溶液後，充份進行攪拌後，靜置於3 7 °C水浴中。 6 0分鐘後，將微生物進行離心分離後沉澱，將〇 · 9 5 之上淸液分取於另一玻璃試管中。於上，添加〇 · 〇 5 之內部標準物質（雙酚B )乙醇溶液及1 W之二氯甲烷 後’於振動器進行劇烈振動。2 0分鐘後，藉由離心分離 二氯甲烷層與水層後，將〇 · 2 W二氯甲烷層（下層）分 取於另一玻璃試管。將二氯甲烷進行蒸發乾固後，於乾燥 器內放置一晚。又，於微生物不存在下進行以上操作者做 爲陰性對照。 接著，於殘渣中添加0 . 16mC之二氯甲烷後，使雙 酚A進行再溶解後，爲進行苯酚性氫氧基之三甲基矽烷（ TMS)化，而添加N，〇一雙（三甲基矽烷）一三氟乙 醯胺（B S T F A )，室溫下，放置1小時。T M S化反 應結束後，藉由後記條件，使用氣體層析法（G C )，使 殘存雙酹Α進行定量分析。 <氣體層析法-測定條件> 氣體層析法裝置G C - 1 4A (島津製作所股份公司 製） 毛細管柱體 NEUTRABOND-1 ( G.L.Seience股份公司 製，2 5 m X 0 · 2 5 m m ; d f = 〇 · 4 // m ) 柱體溫度 1 0 0 °C — 3 0 0 °C，1 0 t： / 分 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝. 訂

本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -15- 1249405 A7 B7 五、發明説明（13 ) 攜帶氣體 氨

注射器 Split，T = 3 1 〇 r 檢出器 fid，丁 = 310 °C 檢體注入量 1 // L 分析時間 2 0分 (丁）藉由殘留雙酚A量算出吸附於微生物之雙酚a量 吸附於微生物之雙酚A量係由藉由該（丙）所測定之 微生物所未被吸附之殘存雙酚A量利用下式算出者。 Y = X -（SAxCB/SBxCA)xX Y:微生物中吸著之雙酚A量 X :反應液中添加之雙酚A量 C A :微生物非存在下反應液所含雙酚a之頂點面積 CB:針對CA之雙酚B的頂點面積 S A :微生物中未吸著之雙酚A的頂點面積 S B :針對S A之雙酚B的頂點面積 (戊）測定微生物與雙酚A相互之吸附反應及微生物吸附 雙酚A量 於含有3 · 8 2載於該（甲）生菌體或加熱體之懸浮 液玻璃試管中，添加0 · 2 載於（乙）之雙酚a乙醇溶 液後’充份攪拌之後，靜置於3 7 °C水浴中。6 0分鐘之 後使微生物進行離心分離後，沉澱後，分取上淸液於另一 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X 297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) -裝·

、1T 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 -16- 1249405 A7 B7五、發明説明（14 ) 玻璃試管，將微生物以磷酸緩衝液（2 0 m Μ之磷酸二氫 鉀水溶液與2 0 m Μ之磷酸氫二甲水溶液混合後調整ρ Η 爲7 · 0之溶液）進行2度洗淨。於此微生物之顆粒及預 先分取之上淸液上添加2 0 # g雙酚A — d 1 6 (代用品 物質）與2 4二氯甲烷進行劇烈振動（2 0 〇動程/分鐘 )。2 0分鐘後將0 · 2 之離心分離取得上淸液分取於 另一玻璃試管中。將二氯甲烷蒸發乾固後，於乾燥器內放 置1晚。 再於殘渣中添加0 · 2 64二氯甲烷後，使雙酚a進 行再溶解之後，爲使苯酚性進行T M S化，添加 B S T F Α後，於室溫下放置1小時。T M S化反應結束 後，添加0 · 1W之菲一 dlO (內標準物質）之二氯甲 烷溶液（1 0 // g / J)之後，藉由下記條件，利用氣體 層析法/質量分析計（GC/MS)，進行雙酚A之定量 分析。 <氣體層析法一測定條件> 氣體層析法裝置 GC 1 7A (島津製作所股份公司 請 先 閱 讀 背 之 注 意

食 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 製） 毛細管柱體 Η P - 5 ( Agilent社製， 0 . 25mm； df=〇 . 25mm) 液相 5 %苯基甲基矽 柱體溫度 60°C (1 分280 °C (5 分），1〇 。(：/ 分 0 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X 297公釐） -17- 1249405 A7 ___B7____ 五、發明説明（15 ) 注入口溫度 2 8 0 °C 注入法 Splitless法（1分後純化）

注入量 1 m L

攜帶氣體 高純度氨氣，線速度=4 4 c m/秒 界面溫度 2 8 0 °C 採樣時間 1分鐘 分析時間 2 8分 <質量分析測定條件> 質量分析裝置 QP5000 (島津製作所股份公司 製） 離子化法 E I ( 7 〇 e V ) 檢出器電壓 1.5kV 檢出方式 S I Μ 採樣率 0 . 2秒 <測定離子> 對象物質，代用品內標準物質之測定離子如表1所示 經濟部智慈財產局員工消費合作社印製 表1 測定對象物質 測定離子數 雙酚A * 357， 372 雙酚A -dl6 368， 371， 386 菲-dlO 188 * TMS體：三甲基矽烷衍生物 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ297公釐） ^ 18- 1249405 ΑΊ _Β7 五、發明説明（16 ) (己）微生物所吸附之雙酚A量的算取 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 由G C / M S測定取得之雙酚A 丁 M S體與代用品物 質之T M S體相互的頂點面積値比藉由檢量線求出雙酚a 之檢出量。再利用下式由檢出量，G C / M S之試料注入 量以及濃縮倍率等算出雙酚Α之量。 Y = Dx(Lxl 000/1) Y :微生物所吸附之雙酚A量（// g ) D:GC/MS之檢出量（//g) L :試料之最終液量（m L ) I :GC/MS之試料注入量（//L) (2 ) 各種微生物之4 -壬基苯酚吸附作用 (甲）供試試料之調製 與該（甲）同法進行調製供試試料。 (乙）4一壬基苯酚之調製 經濟部智慧財產局8工消費合作社印製 於電子天秤以容量瓶（1 〇m£)秤取1 0 〇mg 4 -壬基苯酚（G.L. Science股份公司製），以乙醇精確調整 1 〇 4，以無刻度吸管將3 此溶液分取另一容量瓶（ 5 0 J )中，以乙醇精確調製5 0 J，此溶液供於吸附試 驗。 又，做爲內部標準物質者利用上述之雙酚B。 (丙）測定微生物與4 -壬基苯酚相互之吸附反應及殘 存4 -壬基苯酚量 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -19- 1249405 A7 B7 五、發明説明（17 ) 方令含有3 . 8 J之載於該（甲）生菌體或加熱菌體之 懸浮液玻璃試管中添加0 · 2 W之載於（乙）之4 一壬基 苯酌乙醇溶液，充份攪拌後，靜置於3 7 °C水浴中。6 0 分鐘後’離心分離微生物後沉澱，分取0 · 9 5 2之上淸 '液於另一玻璃試管中。此中加入0 · 0 5 4內部標準物質 (雙酌B )之乙醇溶液及1』二氯甲烷後，於振動器劇烈 ί辰盪之° 2 〇分鐘後，藉由離心分離二氯甲烷層與水層後 ’將〇 · 24二氯甲烷層（下層）分取於另一玻璃試管中 。蒸發乾固二氯甲烷後，放置於乾燥器中一晚。又於微生 物非存在下進行以上操作者做爲陰性對照。 再於殘渣中加入〇 · i 6 4之二氯甲烷後，再溶解4 一壬基苯酚後，使苯酚性氫氧基進行T M S化而添加 B S T F A，於室溫下放置1小時。τ M S化反應結束後 ’與雙酚Α測定時相同條件下，利用氣體層析法（G C ) 進行4 -壬基苯酹之定量分析。 (丁）算出微生物所吸附之4-壬基苯酚量 於微生物所吸附之4 -壬基苯酚量係由未吸附該（丙） 所測定之微生物的4 -壬基苯酚量利用下式算取者。

Y = X -（SAxCB/SBxCA)xX Y :微生物所吸附之4 -壬基苯酚之量 X:反應液所添加之4-壬基苯酚之量 CA :微生物非存在下含於反應液中之4 -壬基苯酚 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) •裝. 訂 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 -20- 1249405 A7 —^__ B7 _ 五、發明説明（18 ) @頂點面積 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) C B : C A所對應之雙酚b的頂點面積 S A :微生物未吸附之4 -壬基苯酚的頂點面積 S B : S A所對應之雙酚B的頂點面積 (3 ) 各種微生物之阿特拉津吸附作用 (甲）供試試料之調製 與上記（1 )(甲）同法進行調製供試試料。 (乙）阿特拉津試料之調製 於電子天秤以容量瓶（1 〇”』）秤取1 〇 〇mg阿特 拉津（G · L · S c i e n c e股份公司製），以乙醇（和光純藥股份 公司製’特級）精確調製1 〇 ”』。以無刻度吸管分取3 ^ 此溶液於另一容量瓶（5 0 2 )後，以乙醇精確調製 5 0 d後，將此溶液供於吸附試驗。 經濟部智慧財產局Β工消費合作社印製 (丙）測定微生物與阿特拉津相互之吸附反應以及殘存 阿特拉津量 於含有3 · 8 W之載於該（甲）生菌體或加熱菌體懸 浮液玻璃試管中添加0 · 2 J之（乙）所載之阿特拉津乙 醇溶液後，充份攪拌後靜置於3 7 °C水浴中。6 0分鐘後 ，離心分離微生物後沉澱分取1 2上淸液於另一玻璃試管 中。此中加入1 α二氯甲烷於振動器進行劇烈振動，2 0 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（2Ι〇Χ；297公釐） -21 - 1249405 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 五、發明説明（19) 分鐘後將二氯甲烷層與水層進行離心分離後，分取 0 · 24二氯甲烷層（下層）於另一玻璃試管中。蒸發乾 固二氯甲烷後，放置於乾燥器內一晚。且，於未存在微生 物下進行以上操作者做爲陰性對照者。 再於殘查中添加0 · 2 之乙腈與5 0 m Μ 1^114112?〇4水溶液之混液（5 5:4 5)，使阿特拉 津再溶解後，藉由後記條件後，使用高速液體層析法（ HP L C )進行阿特拉津之定量分析。 < Η P L C測定條件> Η P L C 裝置：Waters 2 690(Waters股份公司製） 柱體：Symmetry Ci8 5mm(Waters股份公司製 4.6x1 50mm) 柱體溫度：3 7 °C 流速：lmL/分鐘 移動相：乙腈（和光純藥，Η P L C用）與5 0 m Μ Ν Η 4 Η 2 Ρ〇4水溶液之5 5對4 5混合液 檢出器：Waters 996 Photodiode Array Detector(Waters 股份公司製） 檢出波長：23〇nm 分析時間：1 0分鐘 (丁）算取微生物所吸附之阿特拉津量 於微生物所吸附之阿特拉津量係使用下式由該（丙） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) -裝- 訂

本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（2l〇x297公釐） -22- 1249405 A7 B7 五、發明説明（2〇) 所測定微生物未被吸附之阿特拉津量被算取者。

Y-X - (S/C)xX Y:微生物所吸附之阿特拉津量 X :反應液所添加之阿特拉津量 S :微生物未吸附阿特拉津之頂點面積 C :微生物非存在下含於反應液中之阿特拉津的頂點 面積 (4 ) 微生物對於老鼠糞便中雙酚A之促進排出作用： (甲）試驗飼料及群設定 試驗飼料係依A I N — 7 6組成（Report of the American Institute of Nutrition Ad Hoc Committee on Standards for Nutritional Studies;J.Nutr.51 07,1 340,1 977.) 之飼料爲基準，表2組成進行調製。使用以添加2 . 5 % 、5 %或1 〇 %之凍結乾燥生菌體投用群做爲驗群與未添 加菌體之對照群之後，各群爲8隻。又，各飼料中含有於 菌體凍結乾燥時所使用保護劑之脫脂奶粉各爲飼料重量之 1 5 %者。飼料組成如表2所示。 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ 297公釐） 丨, (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) .裝-

、1T 經濟部智慧財產局8工消費合作社印製 -23- 1249405 A7 B7 五、發明説明（21 ) 表2 成份 對照群 菌體投與群 2.5% 5% 10% 酪蛋白 12.5 12.1 11.8 1 1.0 DL-蛋胺酸 0.3 0.3 0.3 0.3 a-玉米澱粉 15.0 14.6 14.1 13.2 蔗糖 42.5 41.3 40.0 37.5 纖維素纖維 5.0 4.9 4.7 4.4 玉米油 5.0 4.9 4.7 4.4 AIN-76礦物質混合 3.5 3.4 3.3 3.1 AIN-76維他命混合 1.0 1.0 0.9 0.9 重酒石酸膽鹼 0.2 < 0.2 0.2 | 0.2 脫脂粉乳 15.0 15.0 15.0 15.0 凍結乾燥生菌體 ^ 0.0 2.5 5.0 10.0 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝· 訂 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 表中之數字爲質量％ (乙）動物及試驗飼料之投與方法 將1 0週齡之fischer 3 44系雌實驗鼠（日本0^&製）進行 馴化飼育（自由攝取Oriental酵母製M F飼料）1週後，以體 重爲基準進行分成7群。試驗飼料投與1 2日後，飼料， 飮用水均自由攝取。飼育環境做成明暗1 2小時循環，室 溫2 5 °C，濕度5 5 %。 (丙）雙酚A之投用方法及糞便之採取 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -24- 1249405 A7 B7 五、發明説明（22 ) (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 於開始投與試驗飼料之第5天進行絕食1晚，隔天投 用含1 0 0 // g之雙酚A 1 0 g試驗飼料。全量採取由雙 酚A之投用日開始至第7天之糞便後，進行凍結乾燥。 (丁）糞便中雙酚A之萃取 糞便中雙酚A係依「下水道中攪亂內分泌化學物質調 查手冊」（財團法人下水道新技術推廣機構）以及「攪亂 內分泌化學物質（環境激素）之分析I I I」（G.L.S ci ence 股份公司）爲基準進行萃取之。 又，雙酚A之萃取時，使用殘留農藥試驗用之有機溶 媒。亦即，秤取0 · 5 g凍結乾燥之糞便於玻璃試管中， 再添加1 // g之雙酚A — d 1 6 (代用品物質）與1 〇 4 甲醇後，進行劇烈振動（2 0 0振動/分鐘）。1 0分鐘 後，將離心分離（2，0 0 0 r p m，2 0分鐘）取得之 上淸液分取於另一玻璃試管。於離心分離後之殘渣中加入 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1 0 4之甲醇後劇烈振動之後，將離心分離後取得之上淸 液與之前取得之上淸液合倂之。此上淸液（約2 0 4 )進 行濃縮至54後，加入〇 . 125^£精製水與2 · 54之 正一己烷後劇烈振動（2 0 0振度/分鐘）。1 〇分鐘後 ，於甲醇層重新加入2 . 5 W正一己烷後劇烈振盪（ 2 0 0振度/分鐘）。1 〇分鐘後，使甲醇層濃縮至1 4 左右，以0 · 125N HC1溶液進行調整pH爲3。 於此溶液中添加4 之3 · 7 5 %之N a C 1水溶液 及5 之二氯甲酸後，進行劇烈振動（2 0 0振度/分鐘 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -25- 1249405 A7 B7 五、發明説明（23 ) )。1 0分鐘後，將下層之二氯甲烷層分取於另一玻璃試 管後，於上層添加5 W之新的二氯甲烷，進行劇烈振盪（ 2 0 0振度/分鐘）。1 0分鐘後，將二氯甲烷層合倂之 前之同層後，濃縮成約5 W後，加入1 · 5 g之無水硫酸 鈉後，進行脫水。此溶液負荷於矽膠柱體（4 0 m m X 1 2 m m )後，流動1 〇 W之正一己烷後捨去溶出液。再 流動1 0 丙酮後分取溶出液。將取得溶出液進行蒸發乾

固後，於殘渣加入0 · 2 6 J之二氯甲烷，再溶解雙酚A 〇 之後，爲使苯酚性氫氧基進行T M S化，加入 B S T F Α後，於室溫下放置1小時。T M S化反應結束 後，添加菲一 dlO (內標準物質）之〇 · 1^二氯甲烷 溶液（1 0 // g / 4 )後，藉由後記條件使用氣體層析法 /質量分析計（GC/MS)，進行雙酚A之定量分析。 (戊）G C /M S測定條件 與該（2 ) (丁）同法進行測定。 (己）雙酚Α之定量 由G C /M S測定取得之雙酚A TM S體與雙酚A -d 1 6之T M S體以及頂點面積値之比藉由檢量線求取雙 酚Α之檢出量。再由檢出量，G C/MS之試料注入量， 供於試驗之糞便量以及濃縮倍率等利用下式算出糞便中雙 酚A濃度。 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝. 訂 經濟部智慈財產局員工消費合作社印製 -26- 1249405 A7 ____B7_ 五、發明説明（24 )

Y = Dx(Lxl〇〇〇/I)/F (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) Y :微生物所吸著之雙酚A量（//g/g) D : GC/MS之檢出量（//g) L :試料之最終液量（m L ) I :GC/MS之試料注入量（//L) F :試驗所供與之糞便量（g ) (庚）測定肓腸內容物中之生菌數 經濟部智总財產局員工消費合作社印製 由1 2天混餌投用該（甲）所載生菌之老鼠以戊巴比 妥麻醉下採其肓腸後，保管於冰中。盲腸內容物中生菌數 係依結城等方法（結城功勝，境谷有希子，田上陽子，諸 富正己，「發酵乳中之 Lactobacillus casei strain Shirota 之消化管內生殘性」，健康，營養食品硏究，2 · 1〜6 ’ 1 9 9 9 ·)或朝原等方法（朝原崇，淸水健介，大橋 雄二，松木隆廣，松本一政，高田敏彥，結城功勝，高出 博夫，田中隆一郎，「針對藉由加熱處理之絞肉攝取後上 昇之人尿中變異原活性之抑制乳酸菌發酵乳之效果」，腸 內細菌學雜誌：1 2，8 9 — 9 6，1 9 9 9 ·)進行測 定之。 (辛）統計解析 所取得數據之統計解析係於Danet之多重比較檢定進行 之。 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公楚) _ 27 - 1249405 A7 B7 __ 五、發明説明（25 ) 〔實施例1〕 藉由乾酪乳桿菌Y I T 9 0 2 9之雙酚 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) A吸附試驗（1 ) ·· 依該（1 )(甲）之供試試料調製法後取得乾酪乳桿 菌Y I T 9 0 2 9之生菌體或加熱菌體。利用此檢測微 生物濃度與雙酚A之吸附量相互關係。做爲試驗樣品者係 使用乾酪乳桿菌Y I T 9 0 2 9之生菌體或加熱菌體調製 成分別最終濃度爲〇、〇 · 6 2 5、1 · 2 5、2 · 5、 5及1 0 g / L者。於此等試驗樣品中加入4 〇从g之雙 酚A，反應之後，以氣體層析法進行定量殘存於離心後上 淸液之雙酚A量，由其値求取吸附量。此結果示於圖χ。 (結果） 如圖1所不’乾酪乳桿菌Y I T 9 0 2 9所吸附之雙 酚A量依存反應液中該微生物濃度後上昇。此吸附作用均 出現於生菌體或加熱菌體，加熱菌體比生菌體吸附更多雙 酚A。此顯示本發明之微生物對於生菌或死菌均可發揮其 效果。 經濟部智慈財產局員工消費合作社印製 因此，利用此等微生物製造食品時，並非_定生存菌 體’可利用更寬廣加工方法（溫度’ pH等）製造食品。 〔實施例2〕 藉由乾酪乳桿菌Y I T 9 0 2 9之雙酚A吸附試驗 (2 ) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） -28 - 1249405 A7 B7 五、發明説明（26 ) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 以乾酪乳桿菌Y I T 9 0 2 9生菌體做爲微生物之使 用後，進行檢測微生物濃度與雙酚A吸附量及殘存之雙酌 A相互之關係。使乾酪乳桿菌Y I T 9 0 2 9生菌體其分 別最終濃度調整爲0、0 · 6 2 5、1 · 2 5、2 · 5、 5及1 〇 g / L者做爲試料樣品使用之。於此等樣品中加 入2〇//g之雙酚A，反應後，分別依該（1)(丙）及 (戊）之測定方法，於G C / M S，氣體層析法進行定量 菌體所吸附之雙酚Α量及離心後上淸液所殘存之雙酚Α量 後，由該（1 ) (丁）及（己）之算取法求出。此結果如 圖2所示。 (結果） 如圖2所示，吸附於乾酪乳桿菌γ I τ 9 0 2 9之雙 酚A量係依存反應液中該微生物濃度後上昇者。針對此， 殘存於反應液離心後上淸液之雙酚A量爲依存該微生物濃 度後下降者。此時，藉由該微生物後吸附量與離心後上淸 液中之殘存量總和等於添加於反應液之雙酚A量（2 0 // g )者。 經濟部智慧財產局Μ工消費合作社印製 由此顯示，未吸附菌體之雙酚A量均存在離心後之上 淸液中，由殘存於離心後上淸液中之雙酚A量所算出吸附 於菌體之雙酚A量實際上與菌體所吸附之雙酚A量爲等値 者。 〔實施例3〕 -29- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210x 297公釐） 1249405 經濟部智慈財產局員工消費合作社印製 A7 B7__五、發明説明（27 ) 藉由乾酪乳桿菌Y I τ 9 0 2 9之雙酚A吸附試驗（ 3 )： 以乾酪乳桿菌Y I T 9 0 2 9生菌體或加熱菌體做爲 微生物使用，於動物試驗所使用之飼料（商品名：F 一 2 ，船橋農場公司製）之共存下，進行檢測微生物或飼料濃 度與雙酚A吸附量之關係。調製乾酪乳桿菌 Y I T 9 0 2 9生菌體，加熱菌體或飼料之最終濃度爲〇 、0 · 625、1 · 25、2 · 5、5 及 10g/L 者做 爲試料樣品使用。於此等樣品中添加4 0 // g之雙酚A ’ 反應後，於氣體層析法進行定量殘存於離心後上淸液之雙 酚A量，由其値求取吸附量。此結果示於圖3。 (結果） 如圖3所示，乾酪乳桿菌Y I T 9 0 2 9即使於一定 濃度之飼料共存下仍依存菌體濃度吸附雙酚A。 又，如圖4所示，一定濃度之乾酪乳桿菌 Y I T 9 0 2 9所吸附之雙酚A量不被反應液中之飼料濃 度影響之。 由此顯示，乾酪乳桿菌Y I T9 0 2 9不被存在於人 體、動消化管內食餌成份之影響選擇性吸附雙酚A者。 〔實施例4〕 .藉由乾酪乳桿菌Y I T 9 0 2 9之雙酚A吸附試驗（ 4 ) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝· 訂 -30- 1249405 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7__ 五、發明説明（28 ) 以乾酪乳桿菌Y I T 9 0 2 9之生菌體或加熱菌體做 爲微生物之使用，進行檢測反應系之P Η與微生物濃度及 雙酚Α吸附量相互之關係。該試驗係將2 0 m g之乾酪乳 桿菌Y I T 9 0 2 9與4 0 // g之雙酚A於4 J之緩衝液 中3 7 °C下進行加溫，6 0分鐘後進行測定吸附量。試驗 檢品之pH做成2〜9。pH爲2〜4之緩衝液係藉由添 加鹽酸於2 0 m Μ Κ Η 2 Ρ〇4水溶液後進行調製者。又 ，pH爲5〜8之緩衝液係藉由混合2 OmM之 Κ Η 2 P 0 4水溶液與2 0 m Μ Κ 2 Η Ρ〇4水溶液後進行 調製者，ρ Η爲9之緩衝液係使用2 0 m Μ之Κ 2 Η Ρ〇4 水溶液後進行調製者。此結果示於圖5。 (結果） 如圖5所示，加熱之乾酪乳桿菌Υ I Τ 9 0 2 9於任 一氫離子濃度（pH)中所吸附雙酚Α量均爲同量者。針 對此，生菌體於強酸性領域（Ρ Η 2 )中，吸附雙酚A量 更多。又，無論於任一 Ρ Η中加熱菌體均比生菌體之吸附 雙酚Α量更多。 此結果顯示，由食道至且肛門之消化管內任一氫離子 濃度部位中該微生物均具有吸附雙酚A之能力。且，其作 用不管生菌或死菌均出現該作用。 〔實施例5〕 藉由乾酪乳桿菌Y I T 9 0 2 9之雙酚A吸附試驗（ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X29*7公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝·

、1T

-31 - 1249405 A7 _B7___ 五、發明説明（29 ) 5 ) (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 以乾酪乳桿菌Y I T 9 0 2 9之生菌體或加熱菌體做 爲微生物使用，進行檢測反應時間與雙酚A之吸附量相互 之關係。該試驗係將2 0 m g之乾酪乳桿菌 Y I T9029與40//g之雙酚A於4m£之緩衝液中 3 7 °C下進行加溫後，測定1 ，2，5，1 0，3 0， 6 0及1 4 4 0分（2 4小時）後之吸附量。此結果如圖 6所示。 (結果） 如圖6所示證明，生菌體或加熱菌體均於反應開始時 其吸附雙酚A之量達最大量，至2 4小時（1 4 4 0分鐘 )爲止維持其吸附作用者。 此結果顯示，該微生物一旦吸附雙酚A後，不會由菌 體遊離，使消化管輸送至肛門，做爲糞便被排出體外。 〔實施例6〕 藉由各種微生物之雙酚A吸附試驗： 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 將2 Omg之生菌體或加熱菌體與4 0 // g之雙酚A 於4 4緩衝液中3 7 °C下進行靜置。6 0分鐘後，測定殘 存於離心後上淸液中之雙酚A量，算取菌體所吸附之雙酚 A量。吸附於菌體之雙酚A量係，以微克單位代表1 m g 菌體吸附雙酚量者。 此結果如圖7所示。 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） -32- 1249405 A7 B7 五、發明説明（3〇 ) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 又，針對具有擾亂內分泌化學物質之吸附效果之纖，維 素類檢測對於雙酚A吸附力做爲比較。做爲纖維類者，可 使用用動物試驗中做爲食物纖維使用之植物纖維（東洋濾 紙製）及具有比植物纖維素更微細之纖維結構之微生物纖 維素（巴氏醋桿菌Y I T 61 09產生之纖維素）者。 此結果如圖8所示。 (結果） 如圖7所示，各微生物間均有差異，而本發明之微生 物均吸附雙酚A。且，不論何種微生物，不僅生菌，加熱 菌體亦可吸附大量雙酚A者。 又，如圖8所示，植物纖維素幾乎未吸附雙酚A。另 外，具有比植物纖維素更微細之纖維結構的微生物纖維素 雖有吸附雙酚A，惟，具吸附作用比起本發明微生物之作 用明顯降低。 以上結果顯示，食物纖維及一般微生物對於雙酚A均 無吸附作用，僅本發明之腸內微生物具特別之作用者。 經濟部智慧財產局g(工消費合作社印製 〔實施例7〕 藉由各種微生物之4 -壬基苯酚吸附試驗 將2 · 5mg生菌體或加熱菌體與40//g之4 一壬 基苯酚於4 2之緩衝液中，3 7 t下靜置後，6 0分鐘之 後，算出吸附於菌體之4 -壬基苯酚量。吸附於菌體之4 -壬基苯酚量係以微克單位代表吸附1 m g菌體之4 -壬 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210Χ 297公釐） -33- 1249405 A7 B7 五、發明説明（31 ) 基苯酚量。此結果如圖9所示。 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) (結果） 如圖9所示，各微生物間雖有差異，而本申請之微生 物均吸附4 -壬基苯酚。又，無論任何微生物不僅生菌體 ，加熱菌體亦吸附多量4 -壬基苯酚。 〔實施例8〕 藉由各種微生物之阿特拉津之吸附試驗 將2 Omg之生菌體或加熱菌體與4 0 // g之阿特拉 津於4 J之緩衝液中，3 7 °C下靜置後，6 0分鐘後，算 出吸附於菌體之阿特拉津量。吸附於菌體之阿特拉津量係 以微克單位代表吸附1 m g菌體之阿特拉津量。結果如圖 1 0所示。 (結果） 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 如圖1 0所示，各微生物間雖有差異，而，本申請之 微生物均吸附阿特拉津。且，任何微生物不僅生菌體，加 熱菌體中仍吸附多量阿特拉津。 〔實施例9〕 藉由實驗鼠中乾醋乳桿菌Y I T 9 0 2 9或短雙岐桿 菌Y I T 4 0 6 5之吸附雙酚A試驗 以乾醋乳桿菌Y I T 9 0 2 9或短雙岐桿菌Y I τ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） -34- 1249405 A7 _____B7 五、發明説明（32 ) (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 4 0 6 5之生菌體做爲微生物之使用，進行檢測微生物之 投用量與雙酚A排出量相互之關係。做爲試驗檢體者使用 分別調製乾酪乳桿菌Y I T 9 0 2 9及短雙岐桿菌Y I T 4 0 6 5之凍結乾燥生菌體之最終濃度爲0、2 · 5、5 及1 0 %之飼料。又，將植物纖維素（東洋濾紙製）調成 最終濃度爲1 0 %之飼料做爲比較之使用。依該（4 )( 丙）之方法，投用試驗飼料開始第5天進行絕食1晚後， 得1 0 0 // g之含雙酚A之試驗飼料（1 0 g )投於實驗 鼠中。 投與試驗飼料之投與開始後回收7天糞便之總量，測 定糞便重量，糞便中之雙酚A量，平均攝取量及體重總增 加量。又，試驗飼料投用第7天測定實驗鼠盲腸內容物中 之投與菌體生菌數。 (結果） 經濟部智慈財產局g(工消費合作社印製 如圖1 1所示，對照群實驗鼠糞便所排出之雙酚A量 7曰份爲17/zg，此乃投用量（100/zg)之僅17 %而已。針對此，投用乾酪乳桿菌Y I T 9 0 2 9或短雙 岐桿菌Y I T 4 0 6 5之實驗鼠其糞便所排出之雙酚A 量依存菌體投用量而增加者。此時，此等菌體以1 〇 %混 餌投與後，投用之雙酚A之4 5〜48%於糞便便被排出 。又，試驗期間，群間之體重與攝餌量未出現有意差。 又，如圖1 2所示，雙酚A投用於7天糞便量依存菌 體投與量而上昇。又，如圖13所示，雙酚A投用第7天 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） -35- 1249405 A7 B7 五、發明説明（33) 之實驗鼠盲腸內容物中投用菌體之生菌數亦存菌體投用量 而上昇。此顯示藉由菌體之投用後，腸內增加生菌數’其 結果顯示促進糞便之排出。 更如圖1 4所示，實驗鼠糞便中雙酚A濃度其群間並 不一定，而任一菌體投與後比較對照群及植物纖維素呈有 意者。 此等結果顯示，乾酪乳桿菌Y I T9 0 2 9及短雙岐 桿菌Y I T 4 0 6 5與食餌共同攝取之雙酚A由腸管抑 制吸收，具有促進排便作用者。且，藉由投與菌體後雙酚 A之糞便排出量增加，惟，菌體投與後，並非造成增加糞 便量之原因而是顯示對於該物質之菌體本身吸附量增加之 結果者。 〔實施例1 0〕 各種食用組成物的製造： 使用本發明之微生物後，製造各種食用組成物。以下 代表其處方例，惟本發明並非僅限於此。 (1 )健康食品（錠劑） 將下列處方之組成物進行打錠做成錠劑。 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 1Γ (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) -裝· 訂 經濟部智慧財產局g(工消費合作社印製 -36- 1249405 A7 B7 五、發明説明（34 ) (處方） 質量％ 腸內微生物菌體之乾燥物1> 10 植物萃取末 30 蜂王膠粉末 5 膠原末 5 乳糖 25 玉米澱粉 20 羥丙基纖維素 4 硬脂酸鎂 1 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) •裝· 1 } 實施例1取得之乾酪乳桿菌γ I τ 9 0 2 9生菌體 或加熱菌體經凍結乾燥後製造之。 (2 ) 健康飮料 藉由以下處方製造健康飮料。 (處方） 質量％ 腸內微生物菌體之乾燥物1 > 5 蜂蜜 15 檸檬酸 0.1 dl-蘋果酸 0.1 植物萃取液（肉桂） 20 D-山梨糖醇液（70%) 10 苯甲酸鈉 〇.〇5 香料 適量 精製水 做成 100 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X29*7公釐） 訂 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 -37- 1249405 A7 ___ Β7 五、發明説明（35 ) 1 )實施例1取得乾酪乳桿菌γ I τ 9 0 2 9之生菌體或力口 熱菌體經乾燥後製造之。 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) (3 )果汁飮料 藉由下列處方製造果汁飮料 (處方） 質量％ 腸內微生物菌體之乾燥物1) 5 葡萄糖液糖 33 葡萄柚果汁 60 香料 適量 酸味料 適量 1 ' 實施例1取得乾酪乳桿菌Y I T 9 0 2 9之生菌體或 加熱菌體經乾燥後製造之 (4 ) 發酵乳 藉由以下方法製造發酵乳。 經濟部智慈財產局8工消費合作社印製 (A ) 藉由1種菌株之發酵乳 將1 0 %脫脂奶粉與5 %葡萄糖進行滅菌後，進行腸內 微生物之植菌後製造發酵乳。做爲植菌之腸內微生物者由 乾酪乳桿菌YIT9029，嗜酸乳桿菌YIT 016·8，短雙岐桿菌YIT 4065，兩岐雙桿菌 ΥΙΤ 4007，乳明串株菌ΥΙΤ 2027，嗜熱 鏈球菌ΥΙΤ 2001 ，嗜酸鏈球菌ΥΙΤ 2021 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ：297公釐） -38- 1249405 A7 五、發明説明（36 ) ，以及 Enterococcus faecium，YIT 2039 中各選 1 株後，製造總計8種之發酵乳。所取得發酵乳中菌體量爲 〇 · 1〜10g/L (生菌數約爲4χ108〜4x1qi〇 c e 1 1 s /m 1 )者。此等發酵乳均呈良好風味，嗜好 性高者。 (B) 藉由複數菌株之發酵乳 使1 0 %脫脂奶粉與5 %葡萄糖進行滅菌後，^ @ & 下組合腸內微生物之植菌後，製造總計1 0種之發_1。 組合1 ·嗜酸乳桿菌 Y I T 0 1 6 8 & 乾酪乳桿菌 Y I T 9 0 2 9 組合2 ·短雙岐桿菌 Y I T 4 0 6 5及

乾酪乳桿菌 YIT9029 組合3·兩岐雙岐桿菌 YIT40〇7S 乾酪乳桿菌 YIT9029 組合4 ·乳酸乳桿菌 Y I T 2 0 2 7 & 乾酪乳桿菌 YIT9029 組合5·嗜熱鏈球菌 YIT20〇ls 乾酪乳桿菌 Y I T 9 0 2 9 組合6·嗜熱鏈球菌 YIT2021& 乾酪乳桿菌 Y I T 9 0 2 9 組合 7 · Enterococcusfaecium ΥΙΤ2〇^Ωέ, u y及 乾酪乳桿菌 YIT9029 組合8 ·短雙岐桿菌 Y I T 4 0 6 5、 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X297公釐） ΊΤ (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) -裝· -訂 經濟部智慈財產局員工消費合作社印製 -39- 1249405 A7 B7 五、發明説明（37 )

兩岐雙岐桿菌 嗜酸乳桿菌 Y 組合9 ·嗜熱鏈球菌 短雙岐桿菌 嗜酸乳球菌 Y 組合1 0 ·嗜熱鏈球菌 短雙岐桿菌 乳酸乳球菌 Y Y I 丁 4 0 0 7 及 T 0 1 6 8 Y I T 2 0 2 1 Y I T 4 0 6 5 及 T 〇 1 6 8 Y I T 2 0 〇 1 Y I T 4 0 6 5 及 T 2 0 2 7 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 所取得發酵乳中總菌體量爲0 · 1〜1 0 g / L (生菌數 約爲4xl08〜4X101。 ce11s/W)者。此等 發酵乳其風味佳，嗜好性高者。 〔產業上可利用性〕 如上所述，腸內微生物之生菌體或死菌體或其構成物 係於人體及動物腸管內吸附雙酚A，4 -壬基苯酚，阿特 拉津等內攪亂分泌之化學物質後，抑制該物質往生體內吸 收同時亦促進一旦被吸收該物質時可排出體外，因此，藉 由攪亂內分泌化學物質後，對於人體污染之防禦極爲有效 者。 且，腸內微生物自古以來極普遍用於製造乳酸菌飮料 ，優酪乳等食品爲一無病原性之安全微生物者。 因此，含該腸內微生物之菌體等的本發明擾亂內分泌 化學物質之吸附劑除可做爲口服藥劑使用之外，可混於食 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） -40- 1249405 A7 B7 五、發明説明（38 ) 品供日常攝取後，藉由擾亂內分泌化學物質後防禦人體污 染，對於維護健康爲極有效者。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -裝.

、1T 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Λ4規格（210X 297公釐） -41 -

Claims (1)

1. A8 B8 C8 D8

   1249405 六、申請專利範圍 1 . 一種擾亂內分泌之化學物質的吸附劑，其特徴係 含有以腸內微生物之生菌體或死菌體抑或其構成物做爲有 效成份者。 2 .如申請專利範圍第1項之擾亂內分泌之化學物質 的吸附劑，其中該擾亂內分泌之化學物質爲雙酚類’烷基 苯酚類或三嗪類者。 3 .如申請專利範圍第1項之擾亂內分泌之化學物質 的吸附劑，其中該腸內微生物係1種或2種屬於乳桿菌屬 ，雙岐桿菌屬，乳球菌屬，腸球菌屬，Weissella屬，明串 珠菌屬，四雙烯球菌屬，丙酸桿菌屬，擬桿菌屬，梭菌屬 •，真桿菌屬，片球菌屬或巨球形菌屬之微生物者。 4 .如申請專利範圍第1項或第3項之擾亂內分泌之 化學物質的吸附劑，其中該腸內微生物爲具有抑制擾亂內 分泌之化學物質由人體及動物之腸管往體內吸收之作用者 〇 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 5 .如申請專利範圍第1項或第3項之擾亂內分泌之 化學物質的吸附劑，其中該腸內微生物爲具有促進擾亂內 分泌之化學物質往體外排出之作用者。 6 .如申請專利範圍第1項或第3項之擾亂內分泌之 化學物質的吸附劑，其中該吸附劑爲使用腸內微生物之加 熱菌體者。 7 · —種食品，其特徴係含有如申請專利範圍第1項 至第6項中任一項之擾亂內分泌之化學物質的吸附劑者。 8 · —種抑制擾亂內分泌之化學物質向體內吸收之方 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐）_ 42 - 8 8 8 8 ABCD 1249405 六、申請專利範圍 法，其特徴係對人體及動物投與申請專利範圍第1項之攪 亂內分泌之化學物質的吸附劑。 9 · 一種促進擾亂內分泌之化學物質排出體外之方法 ，其特徴係投對人體及動物投與申請專利範圍第1項之擾 亂內分泌之化學物質的吸附劑。 (請先聞讀背面之注意 :寫本頁) 裝· 訂 ^---- 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 / 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4说格（2】0X297公釐）· 43 -