TWI247609B

TWI247609B - Agent for diagnosis of tissue proliferation activity or the treatment of proliferative disease

Info

Publication number: TWI247609B
Application number: TW091100830A
Authority: TW
Inventors: Jun Toyohara; Akio Hayashi
Original assignee: Nihon Mediphysics Co Ltd
Priority date: 2001-01-23
Filing date: 2002-01-18
Publication date: 2006-01-21
Also published as: US7118731B2; NZ520934A; CN100400107C; WO2002058740A1; DE60210538T2; DE60210538D1; EP1270017B1; US7045115B2; US20050129611A1; CA2402991A1; CA2402991C; AU2002226690B2; NO20024324D0; US20030124054A1; CN1455683A; JP4210118B2; ATE322912T1; HK1059396A1; NO328812B1; JPWO2002058740A1

Description

1247609 A7 _________B7 五、發明説明（）技術領Μ 本發明係有關放射性標示核甘誘導體的使用，以用於組織拎殖能的診斷及增殖性疾病的治療。、#曰 f景技術如可透過影像診斷，以非侵襲方式計測腫瘤細胞的增殖能，可用於腫瘤增殖度的評估、惡性度的評估。並且，透過影像珍斷檢測出正急速增殖的腫瘤部位，也可用於放射線治療的照射範圍計劃及生檢部位的界定。並且，如可早期並正確判定利用電腦斷層诠查（CT)或核磁共振造影檢查（MRI)的解剖學式評估，或利用正子造影檢查（PET)的糖代謝變化計測的高難度治療效果，尤其可用於早期判定副作用強的抗癌劑的治療效果。為了解決這些臨床上的重要課提，目前正利用放射性碘標示 5 -碘脫氧尿核甘（i〇dine deoxyuridine)，或屬於正子（p〇sitr〇n) 核種的碳11標示胸腺嘧啶酵素（thymidine)進行檢討 JG等人，核醫學雜誌（j〇urnal 〇f Nuclear心^^此），35期， 1407 -1417 頁（1994 年）；Blasberg RG 等人，癌症研究（Cancer ^search) , 60 期，624-635 頁（2000 年）；Mart iat 博士等人，核醫學雜誌（Journal of Nuclear Medicine)，29 期，頁（1998 年）；Eary JF 等人，癌症研究（Cancer« Research)，59 期，615-621頁（1999年）；美國專利第5094835號發明說明；美國專利第5308605號發明說明）。這些放射性標示化合物是從細胞内取出，係為正急速增殖腫瘤的細胞分裂所需合成的前驅體，經過胸腺嘧啶激酵素（thymidine kinase)的磷酸化後，最後混入DNA，反映出腫瘤的增殖能。然而，因為這些放射性標示化口物會在生體内急速分解，因此很難以非侵襲方式評估腫瘤的增殖能。尤其，使用碳11標示胸腺嘧啶酵素時，必須進行很多的數學模式解析，故一般並非普遍的核醫學影像診斷方法。 4 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) M規格（21〇χ 297公釐）~' -— (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) —^1— ϋϋ · -訂經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 1247609 ________B7 五、發明説明（) 這些放射性標示化合物在生體内產生的急速代謝分解反應，可視為胸腺嘧啶磷酵素（thymidine phosphorilase)造成ON天然寡糖結合的開裂反應及標示生體内不安定性的起因。C-N天然寡糖結合被切斷的化合物，會失去對腫瘤的親和性，並減少對腫瘤的放射能集積性。一方面，這些放射性代謝物會使背景放射能升高，造成腫瘤影像化的困難。為了解決這些問題，藉由將電氣陰性度高的氟原子導入某種核甘的2’或3’位，合成出具有化合物代謝安定性的放射性標示化合物，並檢討腫瘤的影像化❶並判定將屬於正子核種的氟18導入 3位的3 -脫氧3’氟胸腺,咬酵素（3’-deoxy 3’7f luorothymidine)，在生體内具有高安定性，並會往腫瘤組織集積（Shields AF 等人，自然醫學（Nature Medicine)，4 期， 1334-1336頁（1996年））。這種放射性標示化合物雖然在生體内安定’但因屬於壽命短的正子標示化合物，故醫院内須備有原子核破壞裝置（cyclotron)，因此缺乏通用性。並且，這種放射性標示化合物’疋以DNA合成指標-胸腺喊咬激酵素（thymidine kinase) 造成的磷酸化，作為往細胞内集積的機序，所以本質上並非可反映DNA合成的藥劑。最近也有報告指出，利用同樣方法研發出達到在生體内安定化，並將氟導入3’位的5-碘脫氧尿核甘（iodine deoxyuridine) 這種誘導體。這種放射性標示化合物雖然在生體内安定，但往腫瘤的集積性並不高於血中滯留性高的5-蛾脫氧尿核甘（i〇dine deoxyuridine)(Choi SR 等人，核醫學雜誌（J0urnal 〇f Nuclear Medicine)，41 期，233 頁（2000 年））。將氣導入 2位的 2’-氟-5-埃阿拉伯-尿定 (2’-fluoro-5-iodine arabino-uridine)，顯示出在生體内的高安定性，可用於導入利用人類泡疹病毒胸腺嘧啶激酵素 5 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂· 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1247609 at B7 五、發明説明（） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) (thymidine kinase)所產生特異填酸化反應的遺傳因子治療用病媒，或在發現有病毒的生體内進行確認，也可利用對病毒胸腺嘧啶激酵素（thymidine kinase)的高選擇性，應用在病毒感染的影像診斷（Tjuvajev JG 等人，癌症研究（Cancer Research)，56 期， 4087-95 頁（1996 年）；Tjuvajev JG 等人，癌症研究（Cancer Research)，58 期，4333-4441 頁（1998 年）；Wiebe LI 等人，核甘與极甘酸混合物（Nucleosides Nucleotides)，18 期，1065-1076 頁（1999 年）；Gambhir SS 等人，核醫學生物學（Nuclear Medicine Biology)，26 期，481-490 頁（1999 年）；Haubner R 等人，歐洲核醫學雜諸（European Journal of Nuclear Medicine)，27 期， 283-291 頁（2000 年）；Tjuvajev JG 等人，癌症研究（Cancer Research)，59 期，5186-193 頁（1999 年）；Bengel FM 等人，循環（Circulation)，102 期，948-950 頁（2000 年））。本發明鑑於上述狀況，目的在於提供具有臨床實用性，在生體内安定，並可反映出是否會受到哺乳類胸腺嘧啶激酵素 (thymidine kinase)所產生的填酸化，導致在細胞内滯留，或會混入DNA，具有DNA合成活性的放射性標示化合物，以及利用含有這類放射性標示化合物的藥劑的組織增殖能診斷法及增殖性疾病治療法。發明之公開經濟部智慧財產局員工消費合作社印製為了達到上述目的，發明者等人藉由合成出多種放射性標示化合物，並深入研究是否可能進行組織增殖能影像評估的結果，發現具有下列分子式的放射線標示化合物可用於組織增殖能診斷或增殖性疾病治療，進而完成本發明。亦即，本發明係為含有以下列分子式來表示的放射性標示化合物，或以可作為醫藥使用的鹽類當作有效成份的組織增殖能診斷用或增殖性疾病治療用藥劑。 6 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐）經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

1247609 A7 A7 - __-____ B7 五、發明説明（） 0 (上述分子式中，h代表丨〜8個氫或碳原子呈直鎖狀或分支鎖狀的烧基，R2代表氫、氫氧基、或_素置換基，R3代表氮或氣置換基，R4代表氧、硫、或甲燒置換基，Rs代表放射性_素置換基但不包括Ri、R2及R3為氫，R4為氧，為放射性氟、溴、蛾、或哎（astatine) ; 1及&為氫，為氟，L為氧，Rs為放射性溴或碘；以及1及R2為氫，I為氟，I為氧，Rs為放射性溴或碘三種情況。）本發明的放射線標示化合物，因在生體内安定，並可反映出是否會受到哺乳類胸腺嘧啶激酵素（thymidine kinase)所產生的磷酸化，導致在細胞内滯留，或會混入DNA，具有DNA合成活性，可用於組織增殖能診斷或增殖性疾病治療，尤其適合作為組織增殖能診斷上的放射性影像診斷藥劑，或内服放射線治療或局部放射線療法等增殖性疾病治療上用來投與的放射性治療劑。因此’從本發明的其他層面來看，提供了將上述分子式所表示的放射性化合物或可作為醫藥使用的鹽類有效量，投與到哺乳動物後’再拍攝在該生體内的分佈狀況的組織增殖能診斷方法，以及將該標示化合物或鹽類有效量，投與到哺乳動物的增殖性疾 7 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 1τ^ I (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 1247609 A7 ____ B7 五、發明説明（）病治療方法。其中，哺乳動物也包括人類。在本發明中，上述分子式所表示的放射性化合物可採鹽類或鹽類水混合物或溶劑混合物等形態。在鹽類部份，可列舉鹽酸、硫酸鹽之類的礦酸、或醋酸之類的有機酸等可作為醫藥使用的鹽類。水混合物或溶劑混合物部份，是指將水分子或溶劑分子附著在本發明的放射性標示化合物或其鹽類的形態。此外，互變異性體等各種異性體也包含在本發明化合物内。上述分子式中，以R,表示1〜8個碳原子呈直鎖狀或分支鎖狀的烷基，可列舉曱基、乙基、丙基、卜丁基、n 一戊基等，其中以甲基較好。以R2表示的齒素置換基，以氟基、氣基、或溴基較好。 R4以氧或硫較好，硫尤其更好。上述分子式中，以Rs表示的放射性齒素置換基，可列舉氟一 18、氣-36、溴-75、溴-76、溴-77、溴-82、碘-123、碘-124、碘-125、碘-131、哎-211，其中作為診斷之用時，以氟一18、溴—76、碘-123、碘-124較好，作為治療之用時，以溴—77、碘-125、碘 -131、哎-211 較好。上述分子式中，較理想的化合物可列舉h為氫或甲基，R2為氫或鹵素置換基，&為氫，R4為氧或硫的化合物，尤其更好的化合物可列舉Ri、R2及R3皆為氫，Rs放射性齒素置換基為氟_18、換-123、礙-125或峨-131的化合物。經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁} 暴· 在上述子式的化合物中（但Rs為非放射性齒素置換基），有報告指出，根據抗病毒劑的研究結果，某種4,硫代核酸誘導體顯示出對細菌胸腺嘧啶激酵素（thymidine phosph〇rilase)的耐性 (Dyson MR 等人，醫學化學雜諸（journai 〇f Medicine Chemistry)，34 期，2782-2786 頁（1991 年）；RahimSG 等人，醫學化學雜諸（Journal of Medicine Chemistry)，39 期，789-795 頁（1996年））。也得知某種5—碘-及5—甲基_4，_硫置換體可防止 8 本紙張尺度適财酬家縣（CNS ) M規格（21Gx297公楚） _ --- 1247609 A7 ____ B7 五、發明説明（）人類胸腺嘧啶激酵素（thymidine kinase)造成的磷酸化 (Strosselli S 等人，生物化學雜誌（Biochem Journal)，334 期， 15-22頁（1998年））。這些將硫導入4’位的化合物的化學構造，以及作為抗病毒劑的用途，雖已眾所周知（國際公開W09101326 號公報、國際公開W09104982號公報、特開平10-087687號公報），但該放射性化合物，以及作為放射線影像診斷藥劑和放射性治療劑的用途’卻從未被發現。在上述分子式的化合物中（但h為非放射性函素置換基），將置換基導入1，位的某種化合物的化學構造及製造方法，雖已眾所周知（特開平07-109289號公報），但該放射性化合物，以及作為放射線影像診斷藥劑和放射性治療劑的用途，卻從未被發現。上述分子式的化合物，因具有在生體内的安定性、細胞内滯留性、或可混入DNA的性質，故可用於各種組織增殖能診斷及增殖性疾病治療。組織增殖能診斷可列舉伴隨病變增殖的增生、再生、移殖、或病毒感染診斷。伴隨病變增殖的增生診斷可列舉增殖性發炎症、良性腫瘤、或惡性腫瘤的診斷。增殖性發炎症的診斷可列舉慢性關節風濕炎的活動度及治療效果的判定相關診斷❶良性腫瘤的診斷可列舉局部存在診斷、活動度及治療效果的判定相關診斷。惡性腫瘤的診斷可列舉原發性及轉移性惡性腫瘤的局部存在診斷、進展度診斷、惡性度及治療效果的判定相關診斷。良性腫瘤可列舉前列腺增生症、子宮内膜增生症（嚢胞性腺增生症、子宮腺肌症、子宮肌腫）、即巢腫瘤（囊胞腺腫）、乳腺（乳腺症、乳腺纖維腺腫）、腦下垂體腺腫、頭蓋咽頭腫、曱狀腺腺腫、副腎皮質腺腫、鉻親和性細胞腫。惡性腫瘤可列舉惡性淋巴腫（何杰金病、非何木金淋巴腫）、咽頭癌·、肺癌、食道癌、胃癌、大腸癌、騰臟癌、腎臟腫瘤 ----------舞— (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 _____ 1247609 五、發明説明（） (腎臟癌、腎芽細胞腫）、膀胱腫瘤、前列腺癌、精巢腫瘤、子宮癌印巢癌、乳癌、甲狀腺癌、神經芽細胞腫、腦瘤（原發性腦瘤、轉移性腦瘤）、橫紋肌腫瘤、骨腫瘤（骨肉腫瘤、轉移性骨腫瘤）、卡波西肉瘤、惡性黑色種瘤。伴隨病變增殖的再生診斷可列舉血液生理再生機能診斷，以及因病變失去血料的錢再生料，具體而言，可列舉進行抗癌劑治療時的㈣生理造血機能評估，以及再生不良性貧血方面的骨髓病態機能診斷。伴隨病變增殖的移殖診斷可列舉針對有血液方面腫瘤的患者，在月髓移殖及使用超高量抗癌劑的化學治療等方面的診斷，具體而s,可列舉骨髓移殖時骨髓移殖細胞的著床、增殖機能診斷。伴隨病變增殖的病毒感染診斷可列舉單純泡疹病毒丨型或2 型、水痘-帶狀泡疹病毒、巨細胞病毒、愛潑斯坦―巴爾二氏（Εβ) 病毒或人類免疫不全病毒感染，尤其以單純泡疹病毒丨型或2型、或人類免疫不全病毒引發的中樞神經系統感染症（病毒型感染性腦炎或趙膜炎等）方面的病毒感染部位及增殖診斷。經濟部智慧財產局員工消費合作社印製增殖性疾病的治療可列舉伴隨病變增殖的惡性腫瘤或病毒感染治療。惡性腫瘤可列舉惡性淋巴腫（何杰金病' 非何杰金淋巴腫）、咽頭癌、肺癌、肝癌、膀胱腫瘤、直腸癌、前列腺癌、子宮癌、卵巢癌、乳癌、腦瘤（原發性腦瘤、轉移性腦瘤）、惡性黑色腫瘤。病毒感染可列舉單純泡疹病毒1型或2型、或人類免疫不全病毒引發的中樞神經系統感染症，尤其是病毒型感染性腦炎或髓膜炎等。在上述分子式化合物的5位標示放射性齒素的方法，可採用眾所周知的方法，例如同位素交換反應法、利用將汞導入5位的 5-氣枣一體，或在5位沒有置換基的5_氫體的方法等。利用5_ 10 I紙張尺度適用中關家標準（CNS) Α4規格(1ωχ297&^ ) ~~ --- 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製是在 1247609 發明説明（乳水一體的方法’是一種用來進行5 — - a 丁0碘一2—脫氧尿核甘這種碘桿不的方法，已眾所周知（美國專利第 R , v 号〜弟4、如、520號發明說明；

Baranowska-Kortylewicz J 等人，痺 p τ 應用放射性同位素（Applied

Radlatl〇n IS〇t〇Pe)，39期，挪頁⑽8年））。但這種方法且有反應（5-氣化、脫汞反應）的進行，會產生無機汞化物等、，不“屬於減半期放射性核種的標示醫藥品製造方法。利用5一氫想的方法，是-種從2，_脫氧尿核甘取得5令2，_脫氧尿核甘的方法，已眾所周知（Knaus EE等人，應用放射性同位素（細㈣

Radlat1〇n Isotope)，37 期，901 頁（1986 年）；Fin R 等人，桿示用商品與放射性製藥⑽（lGurnal Gf UbeHng c。咖仙二

Radi〇Pharmacy)，40期，103頁（1997年））。但這種方法因須加熱到65t〜115t，所以很難適用於在加熱條件下容易分解的化合物’再加上考慮、職射㈣素的性f，在放射性㈣標示反應上最好避免加熱操作，所以不見得是理想的標示方法。此外，利用同位素交換反應的放射性標示方法，無法取得不含載體 (carrier free)的標示體，再加上报難控制每次進行標示操作時的放射能比分散，所以不適合須保持一定品質水準的醫藥品製造方法。 μ 此外，在上述分子式化合物的5位標示放射性齒素的其他方法，可使用圖1的化學式11、圖2的化學式21、圖3的化學式 28、圖4的化學式40、圖5的化學式50、以及圖6的化學式58 所示，將primidine鹽基的5位以三烷亞錫基（triaikyistannyl) 置換的化合物（5-三烷錫體），放到三氣曱烷等適合的溶劑内，與放射性_素為0· 1N的氫氧化鈉溶液進行反應，藉此將5位的三烷亞錫基置換成放射性鹵素置換基的方法。這種利用5-三烷錫體的標示方法，因未沒有前述三種標示方法中所發現的問題，所以較好的方法。亦即，反應所需時間較短，也不會產生5—氣體， 11 表紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Λ4規格（210X297公釐） I---------#------訂^------"基· (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 1247609 A7 五、發明説明（至溫下便容易進行反應，所以不需加熱。而且·，標示體因不含載體（carrier free)，所以即使在希望放射能比較低的情況下，仍可藉由添加載體，輕易調製出一定放射能比的標示體。而且，利用此方法，還有反應後的精製操作較簡便的特徵。亦即，5_三烷锡體因與5位置換基的電氣性質不同，故相較於對應的放射性鹵素標不體，在整個分子極性上具有極不同的性質。因此，利用此刀子極性差’用市面上以矽膠充填的過濾筒（cartridge)，便可在標不反應後輕易分離標示體與未反應的標示前驅艎。藉此，可避免更煩雜的高速液體層析法精製操作。精確來說’從本發明的其他層面來看，是將下述分子式中所示的核甘誘導體：

HN Ο

Rs 〇

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,(上述分子式中，Rl代表丨〜8個氫或碳原子呈直鎖狀或分支鎖狀的烷基，R2代表氫、氫氧基、或鹵素置換基，匕代表氫或氟置換基，R4代表氧、硫、或曱烷置換基，Rs代表三烷亞錫基。）放在溶劑中與放射性_素鹼性溶液反應，藉此將匕的三烷亞錫基置換成放射性函素置換基。提供以下述分子式表示的放射性標示化合物製造方法。 12 本紙張尺度適用中關家標準（CNS ) M規格（2數297公優） I Φ-------、玎------^0— (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 1247609 A7 _____B7 五、發明説明（） 0

(請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) (上述分子式中’ Ri代表1〜8個氫或碳原子呈直鎖狀或分支鎖狀的烷基，R2代表氫、氫氧基、或鹵素置換基，仏代表氫或氟置換基’ R4代表氧、硫、或曱烷置換基，Rs代表放射性函素置換基。）圖1的化學式11、圖2的化學式21、圖3的化學式28、圖4 的化學式40、圖5的化學式50、以及圖6的化學式58所示的5-三烷錫體為新規化合物，也是用來製造本發明放射性標示化合物的有用中間體。精確來說，從本發明的其他層面來看，提供下述分子式所示的化合物。

、1T 線在經濟部智慧財產局員工消費合作社印製本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ297公釐） 1247609 A7

IT. Iii~ (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 1247609 at B7 五、發明説明（）

Dyson MR 等人，碳氫化杨研究（Carbohydrate Research)，216 期，237頁（1991年），以及化學式8〜10 : OivanenM等人，化學學會雜誌、（Journal of Chemistry Society)，柏金交換法（Perkin Transaction)，2期，2343頁（1998年））來合成。亦即，將1%鹽酸-甲醇溶液與 2-脫氧 -D-同排戊糖 (2-deoxy-D-erythro-pentose)(化合物 1)，轉換成化合物 2 後，將化合物2、氫化鈉、碘化四丁基銨與溴化苯作用，取得已保護氫氧基的化合物3。將此與α -甲苯硫石蠛油（a -toluene thiol) 和濃鹽酸作用，取得化合物4，再將此與三苯基磷化氫、安息香酸、及二曱基氧化偶氮幾酸鹽（dime thy- azoxy- carboxyl ate)作用，取得化合物5。再用甲氧化納（sodium methoxide)，分離出化合物5的苯，製成化合物6後，利用氣化曱烷硫基轉換成化合物7。再用碘化鈉與碳酸鈀進行環化，製成化合物8後，在雙三曱基續錄醋酸石夕（bistrimethylsilylacetamide)的存在下，將此與5-破尿，咬（5-iodouracil)作用，接著與N-破代丁二亞錄作用，取得化合物9。再利用氣化甲烷為化合物9脫去保護，取得化合物10。圖2的化合物20 (ITAU)可用眾所周知的方法（化學式13〜 17 : Yoshimura Y 等人，有機化學雜言志（Journal of Organic Chemistry)，61 期，822 頁（1996 年），以及化學式 17 〜20: Yoshimura Y 等人，醫學化學雜誌（Journal of Medicine Chemistry)，40 期，2177 頁（1997 年））來合成。亦即，將 1, 2:5, 6-二氧異丙烯基葡萄糖（化合物13)與氫化鈉和溴化苯作用，製成3-苯體後，再依序將此與鹽酸、過碘酸鈉水溶液、氫化硼鈉作用，取得化合物14，再利用氯化氫轉換成化合物15。將此依序與氣化曱烷、硫化鈉作用，製成化合物16，再將此與鹽酸、氫化硼鈉作用，取得化合物17。利用氫化鈉與溴化苯來保護氫氧基（化合物 15 本紙張尺度適用中國國家榡準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1247609 A7 __ B7 五、發明説明（） 18) ’並利用m-氣過安息香酸（m-cPBA)將此與無水醋酸，轉換成化合物19。將化合物19在1, 1, 1, 3, 3, 3-六甲烷二甲珪醚 (l，l，l，3,3,3-hexamethylene dixilasane)(HMDS)的存在下，與 5-碘尿嘧啶（5-iodouracil)作用，轉換成葡萄糖基化體，再將此與氯化硼作用，取得化合物20。圖3的化合物27是利用以下方法取得。亦即，以圖2所示的化合物17作為出發原料，在二曱基甲醯銨（DMF)中，在咪坐 (imidazole)存在下，與t_ 丁基二甲基氣化矽（TBDMSC1)反應，製成5位氫氧基受到石夕基保護的化合物23。將此放在础°定（pyridi ne) 中加入無水三氟甲烷磺酸（ThO)，製成2位氫氧基被三氟曱烷磺酸匕的化合物24。然後將此放在氰甲烷中，與氟化鈣同時和 Kryptofix(註冊商標）222與碳酸鈣反應，製成2位置換基的立體被反轉的氟化物25。然後將此放在氣化甲烷中，與η-氣過安息香酸（m-CPBA)反應後，再用無水醋酸處理過，製成化合物26。再將此與藉由5-碘尿嘧啶（5-iodouracil)與1，1, 1, 3, 3, 3-六甲烷二曱理謎（1，1，1，3,3,3-1^又311161:11716116(11乂11853116)(1^08)的反應得到的生成物’和三氟甲烷磺酸（TMSOTf)產生反應。再將取得的生成物放在氯化甲烷中，利用氣化硼進行處理，取得化合物27。圖4的化合物39(FIAU)可用眾所周知的方法（化學式30〜 37 : ReichmanU 等人’石炭氫化物研究（Carbohydrate Research)， 42期，233頁（1975年）’以及化學式37〜39 : Asakura J等人’ 有機化學雜就（Journal of 0rganic Chemistry) ’ 55 期 ’ 4928 頁（1990年））來合成°亦即’將1，2:5, 6-二氧異丙豨基葡萄糖（化合物30)分四階段合成的化合物31 ’與陽離子交換樹脂 Umberlite IR—120)作用’製成化合物32 ’再將此與過蛾酸約作用，取得化合物33。再將此與曱氧化鈉（sodium methoxide)作用，製成化合物34後，將氫氧基乙醯基化，取得化合物35。將此利 16 本紙張尺度適用中國國家梂準^⑽…規格⑺以别公潑） (請先閲讀背面之、注意事項再填寫本頁) 訂 -線在經濟部智慧財產局員工消費合作社印製經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1247609 A7 B7 五、發明説明（）用溴化氫-醋酸溶液處理，製成化合物36後，將此與尿嘧啶進行縮合反應，取得化合物37。再將此與硫酸二氨硒（III )(CAN)作用，製成化合物38，再利用曱氧化鈉（sodium methoxide)為氫氧基脫去保護，取得化合物39。圖5的化合物49(FITAU)可用眾所周知的方法（化學式42〜 46 : Yoshimura Y 等人，有機化學雜諸（Journal of Organic Chemistry)，62 期，3140 頁（1997 年），以及化學式 46〜49 : Yoshimura Y等人，生物有機醫學化學（Bioorganic Medicine Chemistry)，8 期，1545 頁（2000 年））來合成。亦即，將 1，2:5, 6-二氧異丙烯基葡萄糖（化合物42)分四階段合成的化合物43,與三氟二乙氨基續酸（diethyl amino sulfate trifluoride)(DAST) 作用，轉換成化合物44，再將此與m-氣過安息香酸（m-CPBA)作用，取得化合物45。將此與無水醋酸作用，製成化合物46後，再將此與三氟甲烷磺酸（TMSOTf)作用，並與5-碘尿嘧啶 (5-iodouracil)誘導體產生反應，取得化合物47。然後為兩個氫氧基的保護基脫去保護，取得化合物4 9。圖6的化合物57CIMBAU)可用眾所周知的方法（化學式52〜 54 : Itoh Y 等人，有機化學雜誌、（Journal of Organic Chemistry)，60 期，656 頁（1996 年），以及化學式 55〜56: Asakura J 等人’有機化學雜结（journal of Organic Chemistry)，55 期， 4928頁（1990年）），以及一般已知的氫氧酸保護/脫去保護反應 (化學式54〜55與56-57)來合成。亦即，將卜[3, 5,-雙-氧-(第二-丁基曱基石夕基）一2-脫氧-D-erythropent-Ι-enophranosy 1 ]尿喊啶（化合物52)，與枇杷酸和溴琥珀酸酯（NBS)作用，轉換成化合物53 ’再將此與三甲基鋁作用，取得化合物54。將氫氧基的保護基從第三-丁基曱基矽基轉換成乙醯基後，再與硫酸二氨硒 (III)CCAN)作用，製成化合物56。然後再用氨為化合物56脫去 17 1紙張尺度適用中國國家^51(：]^)八4規格（210/297公釐） I--------------、玎------ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1247609 Α7 ---- Β7 五、發明説明（）保護，取得化合物57。本發明的放射性標示化合物的投與量或投與路徑等，雖應依對象疾病或使用目的來選擇，但當作組織增殖能診斷用藥劑使用時，須投與37MBq〜740MBq ,或甚至更好lUMBq〜370MBq的放射月b。雖然通常是投與到靜脈内，但也可視情況選擇投與到動脈内、腹腔内、或直接在腫瘤等的患部内等靜脈内以外的投與路徑。當作增殖性疾病治療用藥劑使用時，須投與37MBq〜 7400MBq，或甚至更好185MBq〜37〇〇MBq的放射能。雖然通常是投與到靜脈内，但也可視情況選擇投與到動脈内、腹腔内、或直接在腫瘤等的患部内等靜脈内以外的投與路徑。以治療為目的時，可依適切投與間隔，多次投與上述投與量。本發明的組織增殖能診斷用藥劑，可利甩spECT核種進行全身與局部的合成圖（Synth-Gram)攝影，以及全身與局部的SEPCT 攝影。也可利用正子標示核種，拍攝全身與局部的正子影像。本發明的組織增殖能診斷用藥劑，可利用適切的模式解析，定量算出局部的增殖活性。也可藉由與非增殖組織比對，半定量輕易界定局部的增殖活性。本發明的組織增殖能診斷用藥劑如採用卜丨“之類的石線放出核種作為核種，可依其飛程，對直徑在lcm以上的腫瘤具有縮小效果。另外，如採用At-211之類的α線放出核種，對於直徑在 0.1mm以内的微小病變，具有比万線放出核種更大的治療效果。採用I-125之類會放出〇j電子的核種，須在被標示化合物開始往 DNA附近集積後，才能發揮伴隨DNA切斷的抗腫瘤效果。因此，在包含轉移巢的全身性腫瘤巢治療上，以At-2U為代表的α線放出核種，或1-131之類依本身的飛程效力可擴及到四周的々線放出核種，為最適合的標示核種。最有效的方法是混合使用α線放出核種，或/5線放出核種作為標示化合物的雞尾酒療法。 18 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（21〇χ297公釐） IT (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) Α7 Β7 1247609 五、發明説明（）另外，在透過局部投與的治療上，以丨-丨託之類會放出〇J電子的核種作為標示化合物，因在其放出放射線的特性上，對增殖中病變細胞以外的部份不會造成傷害，所以對手術無法完全切除的腦瘤、惡性黑色腫瘤的殘餘腫瘤，以及從功能保留觀點來看，對乳癌、直腸癌、前列腺癌、口腔惡性腫瘤的應用上尤其有用。局部投與的方法包括透過内視鏡投與到大腸癌等體腔内的方法、進行腦瘤的開頭術時直接投與到患部的方法、透過導管投與到肝癌等發生病變臟器的主動脈中。凰面之簡單說明圖1為本發明的化合物合成路徑顯示圖。圖2為本發明的化合物合成路徑顯示圖。圖3為本發明的化合物合成路徑顯示圖。圖4為本發明的化合物（5—三烷錫體）及從中取得的 [I-125]FLIAU合成路徑顯示圖。圖5為本發明的化合物合成路徑顯示圖。圖6為本發明的化合物合成路徑顯示圖。圖7為實施例16中所測出[I - 125]ITDU及[I - 125]ΙΤΑϋ在生體内的標示安定性，與對照用[1-125] IUR的顯示圖表。圖8為實施例π中所測出[i-125]ITDU、[M25]ITAU、 [I - 125]FITAU、及[I-125]IMBAU在生體内的標示安定性，與對照用[I-125] IUR(易分解性）的顯示圖表。圖9為所測出[i_125]ITDU在正常老鼠的體内分佈顯示圖表。圖1〇為[I - 125]FITAU及[卜125]IMBAU在生體内往增殖組織的集積性，與對照用[卜125 ] IUR的顯示圖表。圖11為實施例19中Wa 1 ker腫瘤的合成圖造影顯示圖片（生物形態）。 19 本紙張尺度適财關( CNS ) M規格（210X297公羡） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁} 訂 Φ— 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1247609 A7 B7 五、發明説明（實施例以下依實施例具體說明本發明，但本發明並不只限施例。〜二貝實施例1 k三曱烷亞錫基-4,-硫代核甘的合点如圖1所示以2-脫氧.同排戊糖（化合物】）為原料，鮮 DysonMR等人（碳氫化物研究，216期，237頁（1991年））的方法，合成出苯3, 51氧-苯|脫氧]，[硫代_α, p —卜⑽浙叩邮 Phranosade (化合物8)。再依照0ivanenM等人（化學學會雜誌，柏金交換法，2期，2343頁（1998年））的方法，從化合物8取得 5-破-4’-硫代-2’-脫氧尿核甘（丨TDU :化合物1〇^再以此化合物 10作為原料，利用以下方法取得5_三曱烷亞錫一4，—硫代-2，一脫氧尿核甘（化合物11)。在氬氣下使化合物1〇(9· 5mg，〇· 〇26腿〇1)、雙（三烷錫）（17. 3mg，0· 〇52mmol)以及氣化雙（三苯基磷化氫）鈀 (II)(5mg),溶解於無水1，4_二氧雜環己烷（3mL)中，進行加熱還流3小時後，在減壓下加以濃縮。利用矽膠薄層層析儀（三氣曱烷 -甲醇=6: 1)將殘留物加以精製，取得目的化合物n(6. 9mg，65%)。 1H NMR (270MHz，CD3〇D) δ 0.26 (s, 9H, CH3Sn), 2.26 (ddd, 1H, J=4.6, 7.9, 13.2 Hz, 1H, H-29), 2.27 (ddd, J=4. 6, 6.6, 13.4

Hz, 1H, H-2，），3.42(m, 1H，H-4，），3.71 (dd, J=5.9, 11.2 Hz, 1H, H-59), 3.80(dd, J=4. 6, 11. 2 Hz, 1H, H~5〇, 4. 47 (a, J=4. 0 Hz, 1H，H-3，)，6.41 (t, J = 7.2 Hz, 1H, H-1，)，7.93 (s, 1H, H-5) 〇實施例2 [I-125] - 5-碰-4’-硫代-2’-脫氧尿核甘（「1-1251ITDU :化合物 12)的合成 20 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） I #1 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1247609 at B7 五、發明説明（）將水（lmL)與三氣曱院（lmL)加入[I -125]-蛾化鈉（33MBq)與 0. 1N氫氧化鈉混合溶液（50μΙ〇中，再加入蛾（60pg，〇. 47μιηο1) 與三氯甲烷混合溶液（4. 7μί)，並振動10秒。只將水層去除後，加入化合物lKlOOgg，0· 25μπιο1)與醋酸乙稀混合溶液（ι〇〇μ[)，在室溫下靜置2小時。再加入1滴IN硫代硫酸鈉水溶液，析出三氣曱烧。加入水（ImL)後，讓溶液流過Sep-Pak Plus QMA過濾筒凸輪，再用水（〇· 5mL><2)洗淨凸輪，與取得的水溶液加以混合，便取得1-125標示化合物12(7. 3MBq，22°/〇。實施例3 「I-1231 - 5-碘-4’-硫代-2，-脫氣尿核甘（「I-1231ITDU :化合物 12)的合成將1N鹽酸（O.lmL)與三氣曱烷（imL)加入含有[M23]-碘化氨（2· OGBq)的0· 1%磁化氨水溶液（imL)，再加入填（6〇pg , 0 · 4 7μιηο 1)與二氣曱烧混合溶液（4 · 7μί»)，並振動10秒。只將水層去除後，加入化合物11 (1 OOpg，〇· 25μπιο1)與醋酸乙烯混合溶液（100μΟ ’在室溫下靜置2小時。再加入1滴1Ν硫代硫酸鈉水溶液，析出三氣曱烷。加入水（lmL)後，讓溶液流過Sep-Pak Plus QMA過濾筒凸輪，再用水（0· 5mL><2)洗淨凸輪，與取得的水溶液加以混合，便取得1-125標示化合物12(228MBq，15°/。）。實施例4 5-二烧亞錫碁-1-(4-硫代-D-arabino-phranosy 1)尿嘴咬（化合物 21)的合成如圖2所示以1,2:5,6-二氧異丙烯基葡萄糖（化合物13)為原料，依照Yoshimura Y等人（有機化學雜誌，61期，822頁（1996 年））的方法’合成出1,4-非氫（unhydro)-3氧-苯-4-硫代 - cx - D-arabitole(化合物Π)。再依照Yoshimura γ等人（醫學化學雜誌，40期，.2177頁（1997年））的方法，從化合物17取得5_ 21 本紙張尺度適财_家CNS ) Α4規 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂經濟部智慧財產局員工消費合作社印製經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1247609 A7 '-----—--------B7 五、發明説明（） ‘ 碘-1-(4-硫代-D-arabinphranosyl)尿嘧啶（化合物20)。再以此化合物為原料，利用以下方法取得5_三烷亞錫基—1-(4-硫代 -D-arabino-phranosyl)尿嘧啶（化合物 21)。在氬氣下使化合物20(4· Omg，0· OlOmmol)、雙（三烧錫）（6. 6mg，0· 020mmol)以及氣化雙（三苯基磷化氫）鈀 (II)(5mg)，溶解於無水1,4-二氧雜環己烷（3mL)中，進行加熱還流4小時後，在減壓下加以濃縮。利用矽膠薄層層析儀（25%曱醇/ 三氣曱烷）將殘留物加以精製，取得目的化合物21(2. 3mg，55%)。 1H NMR (270MHz » CDaOD) δ 0. 7 (s, 9Η), 3.55-3.67 (m, 1H), 3.77-3.95 (m, 2H), 4.07 (t, J=5. 9 Hz, 1H), 4.16 (t, J = 5. 9 Hz，-1H), 6·28 (d, J = 5.3 Hz, 1H), 8.03(s，1H)。實施例5 II-_二 5-蛾-l-(4-硫代-D-arabino-phranosvl)尿嘧唆 iII-125]ITAU :化合物22)的合成將水（lmL)與三氣曱烷（lmL)加入[I-125]-礎化鈉（67MBq)與〇· 1N氫氧化鈉混合溶液（50μΙ〇中，再加入磁（60pg，〇. 47μηιο1) 與三氣曱烷混合溶液（4· 7μ〇，並振動10秒。只將水層去除後，加入化合物21(10(^g，0· 24μπιο1)與醋酸乙烯混合溶液（ΐ〇〇μ[), 在室溫下靜置2小時。再加入1滴1Ν硫代硫酸納水溶液，析出三氣曱烧。加入水（lmL)後，讓溶液流過Sep-Pak Plus QMA過濾筒凸輪，再用水（0.5niL><2)洗淨凸輪，與取得的水溶液加以混合，便取得1-125標示化合物22(71. 3MBq，26%)。實施例6 5-三烧亞錫基-1_(2-脫氧-2-說-β-D-arabino-pent- phranosvl) 尿嘧啶（化合物40)的合成如圖4所示以1,2:5, 6-二氧異丙烯基葡萄糖（化合物30)為原料，依照.Reichman U等人（碳氫化物研究，42期，233頁（1975 22 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） I Φ------1T-----.100— (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 V 1247609 五、發明説明（）年））的方法，合成出1-(3,5 —2—氧—乙醯基—2—脫氧^2—氟 -β-D-arabino-pent-phranosyl)尿嘧啶（化合物 37)。再依照 Asakura J等人（有機化學雜誌，55期，4928頁（199〇年广的方法，取得5♦卜（2-脫氧+marabin"en卜phr_syl)尿嘲啶（化合物39)。再以此化合物為原料，利用以下方法取得5—三烷亞錫基-1-(2-脫氧-2-氟arabin〇_pent—phran〇sy丨）尿嘧啶 (化合物40)。在氬氣下使化合物39(5. 〇mg，〇· 〇13mmol)、雙（三烷錫）（20. 5mg，〇· 〇63mmol)以及氣化雙（三苯基磷化氫）纪 (11)(6. 2mg)，溶解於無水1，4-二氧雜環己烷（3mL)中，進行加熱還流2小時後，在減壓下加以濃縮。利用矽膠薄層層析儀（三氣曱烷-曱醇=6 · 1)將殘留物加以精製，取得目的化合物4〇(3. 6mg， 66%) 〇 1Η-NMR (500MHz , CD3〇D) δ 0·25 (S, 9Η, CH3Sn)，3.72 (dd, 1Η， J=5.0, 12.0 Hz, 1H, H-55), 3.79-3.91 (m, H-45), 4.33 (ddd, J=3.0, 5.0, 18.5 Hz, 1H, H-3〇, 5.02 (td, 1=4.0, 53.0 Hz, 1H, H-29), 6.24 (dd, J=4. 5, 16. 0 Hz, 1H, H-l9), 7. 56 (S, 1H, Η-5)。實施例7 II-1251 二 5-埃-1-(2-脫氧-2 - It -β-D-arabino-pent-phranosvl) 尿响p定（[1-1251FIAU :化合物41)的合成將[1-125] -碘化鈉（80MBq)與0.1N氫氧化鈉混合溶液蒸餾析出，加入曱醇（lmL)，再加入碘（61pg，〇· 48μπιο1)與甲醇混合溶液（4· 8pL)，並振動10秒。加入化合物40(100pg，0· 24μπιο1) 與曱醇混合溶液（ΙΟΟμΟ，在室溫下靜置2小時。再加入1滴IN 硫代硫酸鈉水溶液，析出曱醇。加入水（lmL)後，讓溶液流過 Sep-Pak Plus QMA過濾筒凸輪，再用水（1. 〇mL)洗淨凸輪，與取 23 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） H. II II — I II II ί —I! ..... - - ----- - -- - - m ,------ \¥ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 線 1247609 A7 r-----— _ B7 五、發明説明（）得的水溶液加以混合，便取得卜125標示化合物41(05M如，12%)。 ^_^一_院亞場一^_二1_(2-1氧—2—氣一4-硫代 ziz^_arab 1 no-pent-phranosv 1)屁嘧啶（化合物 5(Π 的合戎如圖5所示以1,2:5, 6_二氧異丙烯基葡萄糖（化合物42)為原料，依照Yoshimura Υ等人（有機化學雜誌，62期，314〇頁（1997 年））的方法，合成出1 -氧-乙醯基一3一氧一苯一5一氧_(第三一丁基曱基矽基）-2-脫氧-2-氟-4-硫代-D-arabino-pent-phranose (化合物46)。再依照Y〇shimura γ等人（生物有機醫學化學，8期，1545 頁（2000年））的方法，從化合物46取得卜碘—卜^-脫氧氟一4一硫代-D-arabino-pent-phranosyl)尿嘧啶（化合物49)。再以此化合物為原料，利用以下方法取得5_三烷亞錫基脫氧—2一氟 -4-硫代-β-D-arabino-pent_phranosyl)尿嘧啶（化合物 5〇)。在氬氣下使化合物49(5. Omg，〇· 〇13mmol)、雙（三烧錫）（16. 9mg，0· 〇52mmol)以及氣化雙（三苯基磷化氫）鈀 (11)(6. Omg)，溶解於無水1，4-二氧雜環己烷（3mL)中，進行加熱還流3. 5小時後，在減壓下加以濃縮。利用矽膠薄層層析儀（三氣曱烷-甲醇=6: 1)將殘留物加以精製，取得目的化合物5〇(1. 9mg， 35%)。 1H-NMR (500MHz，CD3〇D) δ 0· 26 (s, 9H，CH3Sn)，3· 61 -3. 68 (m， 1H, H-5，），3.80-3.81 (m，H-4，），4.37 (td, J=6. 0, 12.0 Hz, 1H，H-3’），4.97 (td，J = 5.5，49.0 Hz, 1H，H-2’），6.46 (dd, J=5.5，11.5 Hz, 1H，H-1，)，7. 99 (S, 1H, H-5)。實施例9 [I_125] 一 5一蛾-1-(2-脫氧 -2- 氟 -4 - 疏代 -P-D_arabino-pent-phranosyl)尿嘧啶（「I-125]FITAU :化厶铷 51)的合成 24 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Λ4規格（2Ι0Χ297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

、1T --線經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1247609 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製五、發明説明（）將[1-125] -碘化鈉（45MBq)與0.1N氫氧化鈉混合溶液蒸餾析出，加入曱醇（lmL)，再加入埃（61pg，0· 48μπιο1)與曱醇混合溶液（4· 8μί)，並振動10秒。加入化合物50(10〇Hg，0· 24μπιο1) 與甲醇混合溶液（ΙΟΟμΟ，在室溫下靜置2小時。再加入1滴IN 硫代硫酸鈉水溶液，析出曱醇。加入水（lmL)後，讓溶液流過 Sep-Pak Plus QMA過濾筒凸輪，再用水（l.OmL)洗淨凸輪，與取得的水溶液加以混合，便取得1-125標示化合物51(3. 5MBq， 7·8%)〇實施例10 5-三甲烷亞錫基-1-甲基（2_脫氧 -2-溴 -β-D-arabino-pent-phranosy 1) ^°f°^([I-125] IMBAU '化合物 58)的合成如圖6所示以1-[3,5,-雙-氧-（第三_ 丁基甲基矽基）-2-脫氧 - D-erythropent-1-enophranosyl]尿癌咬（化合物 52)為原料，依照ItohY等人（有機化學雜誌，60期，656頁（1 996年））的方法，合成出1-[2-溴-3, 5-雙-氧-（第三一丁基甲基矽基）-2-脫氧 -1-〇甲基-0-〇-3『81^11〇-口11厂311〇371]尿响咬（化合物54)。再依照 Asakura J等人（有機化學雜誌，55期，4928頁（1990年））的方法，從化合物 54 取得 5-碘-1-曱基（2-脫氧-2-溴 -β-D-arabino-pent-phranosy 1)尿喊咬（化合物57)。再以此化合物為原料，利用以下方法取得5-三甲烷亞錫基-1-甲基（2-脫氧 -2-溴-β-D-arabino-pent-phranosyl)尿响咬（化合物 58)。在氬氣下使化合物57(4. 9mg，0. 011 mmol )、雙（三烧錫）（16. Omg，0· 049mmol)以及氯化雙（三苯基磷化氫）鈀 (11)(5mg)，溶解於無水1，4-二氧雜環己烧（3mL)中，進行加熱還流2. 5小時後，在減壓下加以濃縮。利用矽膠薄層層析儀（三氯甲烷-甲醇=6 ·· 1)將殘留物加以精製，取得目的化合物58(3. 8mg， 25 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 、11 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） 1247609 at __B7 五、發明説明（） 720/〇)。 1H NMR (500MHz，CD3〇D) δ 〇· 25 (s，9H, CH3Sn), 1.95 (S, 3H, ' I’—CHO, 3.61-3.70 (m, 2H，H-5，），4.08-4. 11 (m, 1H, H-4，）， 4.53 (d，J = 3.0 Hz，1H，H-5，），4.79 (S, 1H, H-2，），7.75 (S’ 1H，H-5)。免施例11 LX -1251 — 5-蛾 -1-甲基-(2-脫氧 - 2- 浪：liz£-arabino-pent-phranosvl)屁嘧啶（「I-1251IMBAU :化合你 ⑪）的合成將[1-125]-碘化鈉（62MBq)與0.1N氫氧化鈉混合溶液蒸館析出，加入甲醇（lmL)，再加入蛾（51pg，0· 40μπιο1)與甲醇混合溶液（4· Ομί)，並振動10秒。加入化合物58(100pg，〇· 20μιηο1) 與甲醇混合溶液（ΙΟΟμυ，在室溫下靜置2小時。再加入1滴in 硫代硫酸鈉水溶液，析出曱醇。加入水（lmL)後，讓溶液流過 Sep-Pak Plus QMA過濾筒凸輪，再用水（l.〇mL)洗淨凸輪，與取得的水溶液加以混合，便取得1-125標示化合物59(8. 3MBq，13〇/〇)。實施例12 U- 1251ITDU及[I-1251ITAU的試營内磷酸化檢討利用從老鼠肺癌細胞株LL/2抽出的粗酵素，測定標示化合物因胸腺嘧啶激酵素（thymidine kinase)產生的磷酸化活性。依照

Wolcott RM 及 Colacino JM (分析生物化學（Analytical Biochemistry)，178 期，38-40 頁（1989 年））的方法，從對數增殖期的LL/2老鼠肺癌細胞株抽出酵素液。再將2nm〇le的標示體與酵素液，加入含有可供給磷酸的ATP的反應液内，在37°C下持續反應了一定時間。再加入lmL的i〇〇mM氣化鑭/5mM三乙醇銨 (tri ethanol ami η)混合溶液，讓反應停止。用磷酸化體作為磷酸一金屬錯體，透過離心分離使之沉澱，再用自動井γ線計測器（Ar〇ka 26 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 、11 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1247609 A7 -- B7 五、發明説明（）公司製造，ARC-380)，測定所取得沉殿物的放射活性。其結果如表1所示。從表1可判定[M25]ITDU、[I-125]ITAU都有因胸腺嘧啶激酵素（thymidine kinase)產生的填酸化活性。表1 ·蛾標示核酸誘導體的填酸化活性（n=3) 碘標示核酸填酸化體產生速度（p mole/mg protein/h) [I~125]ITDU 1182 士 100· 1 [I-125]ITAU 13. 6土6. 6 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製實施例13 LLiI2_5]ITDU及「I-1251ITAU的試管内代謝安定性檢討為了評估天然寡糖結合的代謝安定性，針對從大腸菌取得的胸腺嘧啶磷酵素（thymidine phosphorilase)檢討分解反應性。在反應液内加入2nmole的標示體與酵素液（Sigma公司製造），在37 °〇下持續反應了一定時間，再用沸水浸浴處理3分鐘，讓反應停止。然後進行反應液離心處理，將上面清澈部份加到代謝物標準品（5_破尿嘧啶：IU)及非標示親化合物内，同時也加到薄層石夕膠板上，在三氣曱烷：異丙醇混合液（3 ·· 1)上展開後，用生物顯像分析儀（富士軟片公司製造，B AS-150 0 )拍下自動X光照片。然後设定代謝物標準品上相當於Rf值的峰值成份的可能產生範圍，從所產生的代謝物比例算出產生代謝物量。其結果如表2所示。從表2可看出，相較於放射性碘標示5—錤脫氧尿核甘([卜 125]IUR)，[I-125]ITDU 及[I-125]ITAU 都較安定。 27 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X 297公釐）

、1T )09 yc47 12 A7 B7 發明説明（表2 :姨核酸誘導體的C-N天然寡糖結合分解活性（n=3) ~~~----- 標不核酸 5-碘尿嘧啶產生速度*(相對活性） [I-125JIUR 138606·2土14902·3(1. 00) [I-125]ITDU 4075. 9土736. 4(0. 03) [I-125]ITAU --------―. 524.3士373.8(<0.01) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製复施例14 射性埃標示核酸誘導體的試管內脑腺嘧啶磷激酵， Iltoiidine phosphorilase)代謝安定性檢討為了評估各放射性碘標示核酸誘導體的天然募糖結合代謝夺定性’針對從大腸菌取得的胸腺嘧啶磷激酵素(thymidin, Bhos^horilase)#：討分解反應性。在反應液内加入〇. 5〜丨2nm0 j、的標示體與0. 0009〜9· 0單位的酵素液（Sigma公司製造），在2丨 C下持續反應了一定時間，再用沸水浸浴處理3分鐘，讓反應有止。因[1-125] IBMAU經過加熱處理會變得不安定，須用冰塊將及應液冷卻，讓反應停止。然後進行反應液離心處理，將上面清涕部份加到代謝物標準品（5_碘尿嘧啶：11〇及非標示親化合物内，同時也加到薄層矽膠板上，在三氣曱烷：異丙醇混合液（3 : 1 )上展開後，用生物顯像分析儀（富士軟片公司製造，BAS一 1 500)拍下自動X光照片。然後設定代謝物標準品上相當於Rf值的峰值成伤的可旎產生範圍，從所產生的代謝物比例算出產生代謝物量。 [I-125]FITAU及[I-125]IMBAU則使用逆層矽膠板，在曱醇：水混合^液（3: 1)上展開後，與等一樣，用生物顯像分析儀 (虽士軟^公司製造，BAS_l5〇〇)拍下自動X光照片。解析結果如表3所示。從表3可看出，相較於，[卜125]17卯及 [I- 125]ITAU都較明顯安定。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -訂 28 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1247609 at B7 五、發明説明（) 表3 ·礎標示核酸誘導體因胸腺鳴咬峨激酵素(thymidine phosphori lase)產生的ΟΝ天然寡糖結合分解活性（n=3) 蛾標示核酸 5-碘尿嘧啶產生速度 (pmole/units/0. 5h) 相對活性 [I-125]IUR 138606.2土14902.3 1.00 [I-125JITDU 3778· 7土692· 0 0. 03 [I-125]ITAU 514· 8±367· 0 <0.01 [I-125JFITAU 0. 5士0· 1 < 0.0001 [I-125JIMBAU 0· 0 0· 0 實施例15 利用缺少胸腺嘧啶激酵素的細胞，所進行的胸腺嘧啶激酵素往依存細胞混入檢言十對於標示化合物的胸腺嘧啶激酵素往依存細胞混入，利用缺少胸腺嘧啶激酵素的細胞株L-M(TK-)，及其母株L-M細胞株，來比較檢討兩者間的混入差。將對數增殖期的L-M及L-M(TK-)細胞植入2 4孔板上’每孔〇 X1 〇5個’培養一晚後，再加入放射性埃標示核酸誘導體2nmo 1，混入細胞内1小時。用冰冷的磷酸緩衝液清洗細胞3次，用0.1N氫氧化訥將細胞溶解後，再用ARC - 380 或ARC-300測定。然後根據測定結果評估各細胞蛋白質量的標示體混入。其結果如表4所示。從表4可確認，和對照用的[I -125 ] IUR 一樣’ [I-125]ITDU及[I-125]FITAU都會混入對胸腺嘧咬激酵素依存的細胞内。 29 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） I--------------1T------^^_ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1247609 A7 _ B7 五、發明説明（）表4 : L-M及L-M(TK-)細胞内的放射性碘標示核酸混入碘標示核酸混入值 (L-M)/{L-M(TK-)} (pmol/mg protein/h) 比 L-M L-M(TK-) [I-125]IUR 77. 80士7· 45 27. 86±2. 94 2. 79* [I-125]ITDU 10· 90土 1· 48 3· 94±0· 63 2.77* " [I-125]ITAU 1· 68土0·28 1· 20士0· 20 1·40*氺 [I-125]FITAU 0· 34士0· 05 〇· 21 士0· 05 1.62*** *Ρ<0·0005，**ρ<〇·〇5, ***ρ<0·01 (T-測試）實施例Ifi

Lbllj] ITDU及「I-1251ITAU在生體内的標示安定性檢討為了評估[I-125]ITDU及[I-125]ITAU在生體内的標示安定性’檢討了正常老鼠甲狀腺内的脫離碘集積。用1〇週大的正常老鼠’從尾靜脈分別注射了 370KBq的標示體，依各時間間隔，宰殺並解剖3隻。為了對照用，也檢的體内分佈。再用自動井γ線計測器（Ar〇ka公司製造，ARC-380),測定甲狀腺内的放射能混入。組織内的混入以相對時間每克組織的投與量百分比算出，結果如圖7所示。此結果顯示，相較於對照用藥劑 [I_125]IUR，[卜^^^卯及门一^^^㈣在甲狀腺内的放射集積明顯較低，證明了這些藥劑在生體内的標示安定性。實施例17 體在生艚内的摁彔忠佘匕 —為了進一步評估放射性碘標示核酸誘導體在生體内的標示安疋，檢°寸了正常老鼠甲狀腺内的脫離埃集積。用ig週大的正常老鼠（C57BL/6)，從尾靜脈分別注射了 185KBq的標示體，依較前 I 批#------、玎------^0— (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁} 30 1247609 Λ7 _— B7 五、發明説明（） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 項時間更長的各時間間隔，宰殺並解剖3隻。再用έ動井γ線計測器（Aroka公司製造，ARC.)，測定甲狀腺内的放射能混入。組織内的混入以相對時間每克組織的投與量百分比（％id)算出，结果如圖8所示。此結果顯示，相較於對照用藥劑[：[一125]順易代謝性物質），[I- 125]ITDU、[I-125]ITAU、[H25]FITAU、及 [I- 125]IMBAU在曱狀腺内的放射能集積明顯較低，證明了這些藥劑在生體内的標示安定性。實施例18 II- 1251ITDU在正當老鼠的體内分佑用ίο週大的正常老鼠，從尾靜脈分別注射了 37〇〇q的 [I-125] ITDU，依各時間間隔，宰殺並解剖3隻。再用自動井γ 線計測器（Aroka公司製造，ARC-380 )，各組織内的放射能混入。組織内的混入以相對時間每克組織的投與量百分比算出，結果如，9所示。此結果顯示，在屬於增殖組織的胸腺及小腸内的放射能混入，比屬於非增殖組織的腦、肝及肌肉明顯較高。經濟部智慧財產局員工消費合作社印製為了評估各放射性碘標示核酸誘導體往增殖組織的集積性，檢討了正常老鼠的體内分佈。用10週大的正常老鼠（(：57虬/6)，從尾靜脈分別注射了 185KBq的每種標示體，依各時間間隔，宰殺並解剖3隻。再用自動井γ線計測器（Ar〇ka公司製造，一犯〇)，測定各組織内的放射能混入。組織内的混入以相重量單位的投與量百分比刪算出。結果如w:;且:：了 [I - 125]IUR(陽性對照）、[卜125]ITDU尤其顯示往對年輕正;老鼠增殖組織-胸腺的集積性。實施例 ϋ用[I-123] ITDU的Walker腫瘤合成造影以增殖疾病的代表-惡性腫瘤為例，進行了合成造影。將 31

1247609 A7 B7 五、發明説明（）

Walker腫瘤細胞移植到Wister大鼠的右鼠頸部皮下。完成移植後，在大鼠身上長出用手觸摸便可判知適合造影的腫瘤後，從尾靜脈注射37MBq的[I —123]iTDU。在投與藥劑4小時後，為接受腫瘤移植的大鼠進行實驗示麻醉，讓大鼠仰躺加以固定，再用7線攝影機顯像裝置（東芝公司製造，GCA_9〇B),進行靜態拍攝。拍攝條件包括須安裝高分解力中量光軸儀，並以解像度256χ256收集衫像10分鐘。其結果如圖丨丨所示。根據此結果可確認， [I-123] ITDU可為Wister大鼠的移植腫瘤（箭頭部份）清晰造影。產業上之實用性本發明的放射性標示化合物因在生體内安定，且會反映出是否因受到哺乳類的胸腺嘧啶激酵素所產生的磷酸化，導致在細^ ⑽留，或會混入DNA，具有DNA合成活性，所以可用於組織增殖能診斷或增殖性疾病治療，尤其適合作為組織增殖能診斷上的放射性影像診斷藥劑，或内服放射線治療或局部放射線療法等增殖性疾病治療上用來投與的放射性治療劑。 .曰 ΙΦΙ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 2 3 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐）

Claims

第91100830號申請專利範圍修正本 94/10/17 1. 一種組織增生診斷用藥劑組成物，其含有以下述分子式表示之放射性標示化合物，或其可用作醫藥的鹽類作爲有效成份； Ο

上述分子式中R i代表1〜8個氫或碳原子呈直鏈狀或分枝鏈狀的烷基，R2代表氫、氫氧基、或鹵素置換基，R3代表氫或氟置換基，R4代表硫置換基，R5代表放射性鹵素置換基。 2. 如申請專利範圍第1項所述之組織增生診斷用藥劑組成物，其中R5爲放射性鹵素置換基是從氟-18、氯-36、溴-75、溴-76、溴-77、溴-82、碘-123、碘_124、碘_125、碘-131、砸-211 中選出者。 3. 如申請專利範圍第1項所述之組織增生診斷用藥劑組成物，其中R 4爲硫。 4. 如申請專利範圍第1項所述之組織增生診斷用藥劑組成物，其中匕爲氫或甲基，R2爲氫或鹵素置換基，R3爲氫，R4爲硫。 5.如申請專利範圍第1項所述之組織增生診斷用藥劑組成物，其中R!、R2、及R3爲氫，R4爲硫、R5爲從氟-18、碘-123、捵 -125及碘-131中選出的放射性鹵素置換基。 6. 如申請專利範圍第1項所述之組織增生診斷用藥劑組成物，其中組織增生診斷是指伴隨病變的增生、再生、移植、或病毒感染等相關診斷的組織增生診斷。 7. 如申請專利範圍第6項所述之組織增生診斷用藥劑組成物，其中伴隨病變增殖的增生診斷係指增殖性發炎症、良性腫瘤或惡性腫瘤等相關診斷的組織增生診斷。 8. 如申請專利範圍第7項所述之組織增生診斷用藥劑組成物，其中增殖性發炎症診斷係指慢性關節風濕炎的活動度，及治療效果相關診斷的組織增生診斷。 9. 如申請專利範圍第7項所述之組織增生診斷用藥劑組成物，其中良性腫瘤的診斷是指局部存在診斷、活動度及治療結果判定相關診斷的組織增生診斷。 10. 如申請專利範圍第7項所述之組織增生診斷用藥劑組成物，其中惡性腫瘤的診斷係指原發性及轉移性惡性腫瘤之局部存在診斷、進展度診斷，惡性度及治療效果判定等相關診斷。 11. 如申請專利範圍第6項所述之組織增生診斷用藥劑組成物，其中伴隨病變增殖的再生診斷係指進行抗癌劑治療時的骨髓生理造血機能評估，以及再生不良性貧血方面的骨髓病態機能診斷。 12. 如申請專利範圍第6項所述之組織增生診斷用藥劑組成物，其中伴隨病變增殖的移植診斷係指骨髓移植時骨髓移殖細胞的著床、增移機能診斷。 13. 如申請專利範圍第6項所述之組織增生診斷用藥劑組成物，其 1247609 中伴隨病變增殖的病毒感染診斷是係單純泡疹病毒1型或2 型、水痘-帶狀泡疹病毒、巨細胞病毒、愛潑斯坦-巴爾二氏(EB) 病毒或人類免疫不全病毒感染中病毒感染部位及增殖診斷。

上述分子式中R ^代表1〜8個氫或碳原子呈直鏈狀或分枝鏈狀的院基’ R2代表氣、氨氧基、或鹵素置換基^ R_3代表氣或氟置換基，R4代表硫置換基，R5代表三烷亞錫基。 15. 如申請專利範圍第14項所述之核苷誘導體，其中R4爲硫。 16. 如申請專利範圍第14項所述之核苷誘導體，其中R肩氫或甲基，R2爲氫或或鹵素置換基，R3爲氫，R4爲硫。 17. 如申請專利範圍第14項所述之核苷誘導體，其中R5的三烷亞錫基爲三甲烷亞錫基、三乙烷亞錫基、或三丁烷亞錫基。 18. —種放射性標示化合物製造方法:其係以下述分子式所表示的核苷誘導體： 1247609

R5 上述分子式中R χ代表1〜8個氫或碳原子呈直鏈狀或分枝鏈狀的院基，R2代表氫、氫氧基、或鹵素置換基，RM表氫或氟置換基，代表硫置換基，R5代表三烷亞錫基。置入溶劑中與放射性鹵素鹼性溶液反應，藉此使R5所代表的三烷亞錫基置換成放射性鹵素置換基，如下分子式：

上述分子式中R i代表1〜8個氫或碳原子呈直鏈狀或分枝鏈狀的烷基，R 2代表氫、氫氧基、或鹵素置換基，R 3代表氫或氟置換基，R 4代表硫或亞甲基置換基，R 5代表放射性鹵素置換基。