JP4841231B2 - 組織増殖能診断用薬剤 - Google Patents

Description

本発明は、組織増殖能の診断を目的とした放射性フッ素標識ヌクレオシド誘導体の使用、及びその標識前駆体に関する。

ポジトロンエミッション断層撮影（ＰＥＴ）法とは、ポジトロンを放出する同位体で標識された化合物を生体に投与し、体外からポジトロンカメラを用いてその生体内での動態や代謝を画像化することによって、各種疾患の診断に応用される検査法である。この目的を達する為に、炭素同位体（^１１Ｃ）で標識した生体物質をPETに使用することも可能であるが、その半減期（２０．５分）が短いので、病院内に^１１Ｃ製造のためのサイクロトロンが必要であり、迅速な化合物合成と精製が求められ、その有用性は限定されている。他の同位体ではさらに短い半減期のものがあり、^１３Ｎの半減期は１０分であり、^１５Ｏの半減期はさらに短く２分である。

実用的に有用な同位体として^１８Ｆは１１０分の半減期を有する。これは、放射性標識化合物の合成・精製およびヒトまたは動物の被検体への投与に対して十分な時間である。さらに、^１８Ｆの比較的長い半減期は病院から離れた、他施設のサイクロトロンから^１８Ｆ標識された化合物の供給を可能にし得る。^１８Ｆの不利な点は、生体物質とは異なるフッ素化化合物の設計、およびサイクロトロン中で発生する^１８Ｆを効率的に利用する標識前駆体の設計ならびに製造方法の困難さである。

以上の理由から、ＰＥＴにおける^１８Ｆ標識された化合物の使用は、いくつかの化合物に限定されている。最も広く使用されているＰＥＴ診断法は^１８Ｆ-フルオロデオキシグルコースを用いた悪性腫瘍の診断である。^１８Ｆ-フルオロデオキシグルコースは、悪性腫瘍細胞における糖代謝の亢進を利用しており、腫瘍の細胞増殖に伴うエネルギー代謝を反映している。この本質的な理由によって、^１８Ｆ-フルオロデオキシグルコースは炎症や良性疾患といった病変を検出し、偽陽性を生じる欠点があり、とりわけ治療効果の早期かつ正確な判定に関しては注意を要する。これに対し、悪性腫瘍の本質である細胞増殖をより直接的に観察できれば、^１８Ｆ-フルオロデオキシグルコースの問題点を克服する事が可能であり、放射性同位体標識されたヌクレオシド誘導体の研究が行われてきた。多くの研究成果から、理想的な化合物は、核酸輸送担体を介して細胞内に取りこまれ、チミジンキナーゼ１によりリン酸化を受け、最終的にＤＮＡに組みこまれる性能を有す一方で、生体内での速やかな代謝分解反応を引き起こすチミジンホスホリラーゼによる、グリコシド結合の開裂反応に抵抗性を有する化合物であることが知られている。近年、実用的に有用な^１８Ｆで標識された３´−デオキシ−３´−フルオロチミジンが合成され、生体内での高い安定性と腫瘍組織への集積が認められた（Ｓｈｉｅｌｄｓ Ａ．Ｆ．ら、 Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄ． ４、１３３４−１３３６頁（１９９８年））。しかしながら、この化合物は、ホスホジエステルリン酸結合に必要な３´位が^１８Ｆで置換されているため、理論的にＤＮＡへ組み込まれず、実際にＤＮＡ合成の指標であるチミジンキナーゼ１によるリン酸化が細胞内への集積の主たる機序であり、本質的にＤＮＡ合成を反映する薬剤ではない。

２´位に^１８Ｆを導入した１−（２−デオキシ−２−フルオロ−β−D―アラビノフラノシル）チミン（１−（２−ｄｅｏｘｙ−２−ｆｌｕｏｒｏ−β−Ｄ―ａｒａｂｉｎｏｆｕｒａｎｏｓｙｌ）ｔｈｙｍｉｎｅ）は生体内での高い安定性を示す化合物として、腫瘍の増殖能の画像化への使用が試みられている（Ｓｕｎ Ｈ．ら、Ｅｕｒ． Ｊ． Ｎｕｃｌ． Ｍｅｄ．３２、１５−２２頁（２００５）；Ｓｕｎ Ｈ．ら Ｊ． Ｎｕｃｌ． Ｍｅｄ． ４６、２９２−２９６頁（２００５））。しかしながら、この化合物は、チミジンキナーゼ１への親和性が低く、むしろヒトヘルペスウイルスのチミジンキナーゼによる特異的なリン酸化反応を利用した遺伝子治療用ベクターの導入及び発現の生体内での確認に利用されている（Ａｌｌａｕｄｉｎ Ｍ．Ｍ．ら、Ｊ． Ｎｕｃｌ． Ｍｅｄ． ４５、２０６３−２０６９頁（２００４））。一方、本発明者はＷＯ2002/058740においてヌクレオシド誘導体を開示しているが、本願発明はこれとは異なる構造のヌクレオシド誘導体によって細胞増殖の画像診断用薬剤の実用可能性を見出すことを目的とする。
国際公開第02/058740号パンフレット 米国特許第４７６２８２３号明細書 欧州特許第０２２２１９２５号明細書 国際公開第91/04982号パンフレット 特表平５−５０５７９１号公報 Ｓｈｉｅｌｄｓ Ａ．Ｆ．ら、 Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄ． ４、１３３４−１３３６頁（１９９８年） Ｓｕｎ Ｈ．ら、Ｅｕｒ． Ｊ． Ｎｕｃｌ． Ｍｅｄ．３２、１５−２２頁（２００５） Ｓｕｎ Ｈ．ら Ｊ． Ｎｕｃｌ． Ｍｅｄ． ４６、２９２−２９６頁（２００５） Ａｌｌａｕｄｉｎ Ｍ．Ｍ．ら、Ｊ． Ｎｕｃｌ． Ｍｅｄ． ４５、２０６３−２０６９頁（２００４） Ｇｒｉｅｎｇｅｌ Ｈ.ら、Ｊ. Ｍｅｄ. Ｃｈｅｍ．３０、１１９９−１２０４頁（１９８７） Ｒａｈｉｍ Ｓ.Ｇ.ら、Ｊ. Ｍｅｄ. Ｃｈｅｍ．３９、７８９−７９５頁（１９９６） Ｔｊａｒｋｓ Ｗ．ら、 Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ ２０、６９５−６９８頁（２００１年）

本発明は、上述の如き状況を鑑み、^１８Ｆで標識可能な、３´位に水酸基を有するヌクレオシド誘導体であって、チミジンホスホリラーゼによる、グリコシド結合の開裂反応に抵抗性を有し、かつ、ヌクレオシドトランスポーターを通過した後、チミジンキナーゼ１によりリン酸化を受けて、ＤＮＡ合成活性を直接反映する化合物の提供、並びに、その製造方法を目的とする。

上述の目的を達成するために、発明者らは、種々の^１８Ｆ標識可能な化合物を合成し、細胞増殖の画像評価が可能であるかについて鋭意研究を進めた結果、下記式(I)を有する放射性フッ素標識ヌクレオシド誘導体が細胞増殖すなわち組織増殖能の画像診断に使用できることを見出し、本発明を完成するに至った。

即ち、本発明は、下記式(I)で表される^１８Ｆ標識化合物又はその医薬として許容できる塩を有効成分として含有する組織増殖能診断用薬剤である。

（式(I)中、Ｒ_１はメチル基又は炭素原子１〜２個の^１８Ｆ標識フルオロアルキル置換基、Ｒ_２は水素又は炭素原子１〜６個の^１８Ｆ標識フルオロアルキル置換基、Ｒ_３は酸素又は硫黄、Ｒ_４は水素又はフッ素である。ただし、Ｒ_１及びＲ_２の両方が^１８Ｆ標識フルオロアルキル置換基である場合、及び、Ｒ_１がメチル基でＲ_２が水素である場合を除く。）

本発明の放射性標識化合物は、生体内において安定で、かつ、ヌクレオシドトランスポーターを通過した後、チミジンキナーゼ１によりリン酸化を受けて細胞内に滞留するか、またはＤＮＡに組みこまれＤＮＡ合成活性を反映するので、細胞増殖すなわち組織増殖能の画像診断に有用である。
したがって、本発明の他の局面によれば、上記式(I)で表される¹⁸F標識化合物又はその医薬として許容できる塩の有効量を哺乳動物に投与した後、その生体内における分布を撮像することからなる細胞増殖の画像診断方法が提供される。ここにおいて、哺乳動物にはヒトも含まれる。
本発明において、上記式(I)で示される^１８Ｆ標識化合物は、塩又はこれらの水和物もしくは溶媒和物の形態であってもよい。塩としては、塩酸もしくは硫酸塩などの鉱酸または酢酸などの有機酸との塩のような医薬として許容できるものが挙げられる。また、水和物または溶媒和物としては、本発明の^１８Ｆ標識化合物またはその塩に対して水分子または溶媒分子が付着したものを意味する。さらに、互変異性体などの各種異性体も本発明化合物に包含されうる。

また、上記式(I)中、Ｒ_１は、メチル基が好ましい。また、Ｒ_２としては、例えば、^１８Ｆ標識フルオロメチル基、^１８Ｆ標識フルオロエチル基、^１８Ｆ標識フルオロプロピル基、^１８Ｆ標識フルオロブチル基、^１８Ｆ標識フルオロペンチル基、^１８Ｆ標識フルオロヘキシル基などが挙げられ、^１８Ｆ標識フルオロエチル基、^１８Ｆ標識フルオロプロピル基、^１８Ｆ標識フルオロペンチル基が好ましい。また、Ｒ_３は酸素が、Ｒ_４は水素が好ましい。特に好ましい化合物としては、Ｒ_１がメチル基、Ｒ_２が^１８Ｆ標識フルオロエチル基、Ｒ_３が酸素、Ｒ_４が水素の化合物が挙げられる。なお、上記式(I)中、Ｒ_４のフッ素は、通常、非放射性フッ素である。

上記式(I)の化合物中、Ｒ_１がフルオロメチル基、Ｒ_２が水素、Ｒ_３が酸素、Ｒ_４が水素の化合物の化学構造及び抗がん剤ならびに抗ウイルス剤としての用途、^１８Ｆ標識化合物としてのヘルペス脳炎ＰＥＴ診断薬としての用途は既に公知である（米国特許第４７６２８２３号明細書；欧州特許第０２２２１９２５号明細書）。
また、上記式(I)の化合物中、Ｒ_１がフルオロエチル基、Ｒ_２が水素、Ｒ_３が酸素、Ｒ_４が水素の化合物の化学構造及び抗ウイルス剤としての用途は既に公知である（Ｇｒｉｅｎｇｅｌ Ｈ.ら、Ｊ. Ｍｅｄ. Ｃｈｅｍ．３０、１１９９−１２０４頁（１９８７））。加えて、Ｒ_１がフルオロメチル基またはフルオロエチル基で、Ｒ_２が水素、Ｒ_３が硫黄、Ｒ_４に水素を導入した上記式(I)の化合物の化学構造及び抗ウイルス剤としての用途は既に公知である（国際公開ＷＯ９１０４９８２号公報；特表平５−５０５７９１号公報；Ｒａｈｉｍ Ｓ.Ｇ.ら、Ｊ. Ｍｅｄ. Ｃｈｅｍ．３９、７８９−７９５頁（１９９６））。しかし、これらの放射性フッ素標識化合物ならびに放射性画像診断薬としての用途は知られていない。

また、上記式(I)の化合物中、Ｒ_１がメチル基、Ｒ_２がフルオロメチル基またはフルオロエチル基で、Ｒ_３が酸素、Ｒ_４が水素の化合物の化学構造ならびにチミジンキナーゼ１によりリン酸化を受けることは既に公知である（Ｔｊａｒｋｓ Ｗ．ら、 Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ ２０、６９５−６９８頁（２００１年））。しかし、その放射性フッ素標識化合物ならびに放射性画像診断薬としての用途は従来知られていない。

上記式(I)の放射性フッ素標識化合物は、例えば、図１に示す二種類の方法によって合成することができる（図１）。一つは、^１８Ｆ導入部位に脱離基(leaving group)を有する適当な長さのアルキル基が５位または３位に導入された標識前駆体を準備し、３´位及び５´位の水酸基を保護基（protecting group）で保護しておき、これとサイクロトロンで製造した^１８Ｆイオンを、相間移動触媒存在下に有機溶媒中で反応（[¹⁸F]Fluorination）させた後、脱保護(deprotection)する方法である（Ｍｅｔｈｏｄ １）。また、上記式の放射性フッ素標識化合物のうち３位にフルオロアルキル基を持つ化合物は、脱離基(leaving group)を２箇所に有するアルキル基の一方の脱離基のみを^１８Ｆで置換（[¹⁸F]Fluorination）したのち、もう一方の脱離基を利用してチミジンの誘導体に求核置換反応によって導入(substitution)することによっても合成できる（Ｍｅｔｈｏｄ ２）。

かくして、本発明の別の局面によれば、下式(II)で表されるヌクレオシド誘導体が標識前駆体として提供される。

（式(II)中、Ｒ_１はメチル基又は脱離基を有する炭素原子１〜２個のアルキル置換基、Ｒ_２は水素又は脱離基を有する炭素原子１〜６個のアルキル置換基、Ｒ_３は酸素又は硫黄、Ｒ_４は水素又はフッ素、Ｒ_５は保護基である。ただし、Ｒ_１及びＲ_２の両方が脱離基を有する炭素原子１〜６個のアルキル置換基である場合、及び、Ｒ_１がメチル基でＲ_２が水素である場合を除く。）

式(II)中、Ｒ_１は、好ましくは、メチル基又はトシル基、メシル基及びトリフレート基からなる群より選ばれた脱離基を有する炭素原子１〜２個のアルキル置換基であり、中でもメチル基が特に好ましい。
式(II)中、Ｒ_２は、好ましくは、水素又はトシル基、メシル基及びトリフレート基からなる群より選ばれた脱離基を有する炭素原子１〜６個のアルキル置換基であり、中でも脱離基を有するエチル基、脱離基を有するプロピル基、及び脱離基を有するペンチル基からなる群より選ばれたアルキル置換基がより好ましく、脱離基を有するエチル基が特に好ましく、脱離基としてはトシル基が好ましい。

式(II)中、Ｒ_５は、好ましくは、トルイル基、４´，４´−ジメトキシトリチル基、トリチル基及びベンジル基からなる群より選ばれた保護基であり、中でもトルイル基が特に好ましい。
また、式(II)中、Ｒ_３は酸素が、Ｒ_４は水素が好ましい。

本発明において、上記式(II)で示される標識前駆体とサイクロトロンで製造した^１８Ｆイオンを、相間移動触媒存在下に有機溶媒中で反応させることにより、上記式(I)の放射性フッ素標識化合物を製造することができる。
本発明の画像診断用薬剤の投与量や投与経路などは対象疾患や使用目的に応じて選択されるべきであるが、組織増殖能診断用薬剤として使用する場合は、例えば３７ＭＢｑ〜７４０ＭＢｑ、好ましくは１１１ＭＢｑ〜３７０ＭＢｑの放射能を投与する。通常は静脈内に投与するが、場合により動脈内や腹腔内または直接腫瘍等の患部内に投与するなど静脈内以外の投与経路を選択してもよい。

本発明において、組織増殖能診断としては、病的増殖を伴う増生、再生、移植又はウィルス感染の診断が例示される。
病的増殖を伴う増生の診断としては、例えば、増殖性炎症、良性腫瘍又は悪性腫瘍の診断が挙げられる。増殖性炎症の診断としては、例えば、慢性関節リウマチの活動度および治療効果の判定に関する診断が挙げられる。良性腫瘍の診断としては、例えば、局在診断・活動度および治療効果の判定に関する診断が挙げられる。悪性腫瘍の診断としては、例えば、原発性および転移性悪性腫瘍の局在診断・進展度診断・悪性度および治療効果の判定に関する診断が挙げられる。良性腫瘍としては、例えば、前立腺増生症、子宮内膜増生症（嚢胞性腺増生症・子宮腺筋症・子宮筋腫）、卵巣腫瘍（嚢胞腺腫）、乳腺（乳腺症・乳腺繊維腺腫）、下垂体腺腫、頭蓋咽頭腫、甲状腺腺腫、副腎皮質腺腫・クロム親和性細胞腫が挙げられる。悪性腫瘍としては、例えば、悪性リンパ腫（ホジキン病・非ホジキンリンパ腫）、咽頭癌、肺癌、食道癌、胃癌、大腸癌、肝癌、膵臓癌、腎臓腫瘍（腎臓癌・腎芽細胞腫）、膀胱腫瘍、前立腺癌、精巣腫瘍、子宮癌、卵巣癌、乳癌、甲状腺癌、神経芽細胞腫、脳腫瘍（原発性脳腫瘍・転移性脳腫瘍）、横紋筋肉腫、骨腫瘍（骨肉種・転移性骨腫瘍）、カポジ肉腫、悪性黒色腫が挙げられる。

病的増殖を伴う再生の診断としては、血液の生理的再生の機能診断及び血球などが病的に失われた際に生じる病的再生の診断が例示され、具体的には、抗がん剤治療時における骨髄の生理的造血機能の評価又は再生不良性貧血における骨髄の病態機能の診断が挙げられる。

病的増殖を伴う移植の診断としては、血液系腫瘍患者の骨髄移植および抗がん剤の超大量化学療法などにおける診断が例示され、具体的には骨髄移植おける骨髄移植細胞の生着・増殖機能の診断が挙げられる。

病的増殖を伴うウィルス感染の診断としては、例えば、単純ヘルペスウイルス１型もしくは２型、水痘−帯状ヘルペスウィルス、サイトメガロウィルス、エプスタイン−バール（Epstein-Barr）ウィルス又はヒト免疫不全ウィルス感染、特に、単純ヘルペスウイルス１型もしくは２型又はヒト免疫不全ウィルスによる中枢神経系感染症（ウィルス感染性脳炎または髄膜炎など）におけるウイルス感染部位および増殖の診断が挙げられる。

本発明の放射性フッ素標識ヌクレオシド誘導体は、生体内において安定で、かつ、ヌクレオシドトランスポーターを通過した後、チミジンキナーゼ１によりリン酸化を受けて細胞内に滞留するか、またはＤＮＡに組みこまれＤＮＡ合成活性を反映するので、細胞増殖の画像診断に有用である。

以下、本発明を実施例により具体的に説明するが、本発明はこれらによって何等限定されるものではない。なお、本明細書で使用している略号の意味は下記のとおりである。
DMF：ジメチルホルムアミド、
TBAF：テトラ−ｎ−ブチルアンモニウムフルオライド、
THF：テトラヒドロフラン、
DMAP：４−ジメチルアミノピリジン、
FMAU:１−（２−デオキシ−２−フルオロ−β−Ｄ−アラビノフラノシル）チミン、
PPh₃：トリフェニルホスフィン、
NBS：N-ブロモコハク酸イミド、
HPLC：高速液体クロマトグラフィー。

実施例１（ＮＦＴ２０２）

Ｎ ^８ −（２−フルオロエチル）−チミジン（Ｎ ^８ −（２−Fｌｕｏｒｏｅｔｈｙｌ）−ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ）（２）
W.F. Edgellらの方法（J. Am. Chem. Soc., 77, 4899 (1955）)に従い合成した化合物１（３．６ｇ、１７ｍｍｏｌ）と炭酸カリウム（４．６ｇ、３３ｍｍｏｌ）のアセトン（acetone）とDMFの混合溶液(１：１)５００ｍLに、チミジン（２．０ｇ、８．３ｍｍｏｌ）を加え、５０℃で７時間攪拌した。溶媒を濃縮した後、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー （ＳｉＯ_２、クロロホルム：メタノール＝５：１）により精製した。白色固体として化合物２（２．２ｇ、９４％）を得た。

¹H NMR (CD₃OD, 500 MHz) δ 7.85 (s, 1H, H-5), 6.29 (t, H-1’, J_{1’, 2’a} = J_{1’, 2’b} = 5.6 Hz), 4.62, 4.53 (each t, each 1H, H-2”), 4.39 (m, 1H, H-3'), 4.25 (m, 2H, H-1"), 3.91 (dd, 1H, H-5'a, J_{5'a, 4'} = 2.4, J_{5'a, 5'b} = 9.6 Hz), 3.80 (dd, 1H, H-5'b, J_{5'b, 4'} = 2.8, J_{5'b, 5'a} = 9.6 Hz), 3.72 (m, 1H, H-4'), 2.27 (ddd, 1H, H-2'a, J _{2'a, 3'} = 2.8, J _{2'a, 1'} = 6.0, J_{2'a, 2'b} = 10.8 Hz), 2.21 (m, 1H, H-2'b) ), 1.89 (s, 3H, 5-CH₃).

実施例２（ＮＦＴ２０３）

Ｎ ^８ −（３−フルオロプロピル）−チミジン（Ｎ ^８ −（３−Fｌｕｏｒｏpropyl）−ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ）（４：NFT２０３）
アルゴン気流下、市販の化合物３（５．０ｇ、３６ｍｍｏｌ）とTBAF（１M THF溶液 ６２ｍL、６２ｍｍｏｌ）のTHF４０ｍLに、チミジン（１．５ｇ、６．２ｍｍｏｌ）を加え、室温で１時間攪拌した。溶媒を濃縮した後、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー （ＳｉＯ_２、クロロホルム：メタノール＝５：１）により精製した。白色固体として化合物２（２．０ｇ、１００％）を得た。

¹H NMR (CD₃OD, 500 MHz) δ 7.82 (s, 1H, H-5), 6.28 (t, H-1’, J_{1’, 2’a} = J_{1’, 2’b} = 5.6 Hz), 4.51, 4.42 (each t, each 1H, H-2”), 4.39 (m, 1H, H-3’), 4.04 (m, 2H, H-1”), 3.91 (dd, 1H, H-5’a, J_{5’a, 4’} = 2.4, J_{5’a, 5’b} = 9.6 Hz), 3.80 (dd, 1H, H-5’b, J_{5’b, 4’} = 2.8, J_{5’b, 5’a} = 9.6 Hz), 3.72 (m, 1H, H-4’), 2.27 (ddd, 1H, H-2’a, J _{2’a, 3’} = 2.8, J _{2’a, 1’} = 6.0, J_{2’a, 2’b} = 10.8 Hz), 2.21 (m, 1H, H-2’b), 1.95 (m, 1H, H-2’’), 1.89 (s, 3H, 5-CH₃).

実施例３ （NFT４０１）

１, ６−ヘキサンジオールジトシレート（１, ６−Hexanediol ditosylate）（６）
アルゴン雰囲気下、塩化トシル(TsCl)（４．９１ｇ、２．５ｍｍｏｌ），DMAP（３．０５ｇ、２５ｍｍｏｌ）のアセトニトリル溶液（５０ｍＬ）に１，６-ヘキサンジオール（１，６-hexanediol）（１．１８ｍｇ、１０ｍｍｏｌ），トリエチルアミン（３．４８ｇ、２５ｍｍｏｌ）のアセトニトリル溶液を加え、室温で２時間攪拌した。析出した固体をろ過し、ろ液を酢酸エチル（ｃａ．５００ｍＬ）により希釈し、水（５００ｍＬ）、飽和食塩水（５００ｍＬ）で洗浄した。無水硫酸ナトリウムにより乾燥し、濃縮した後、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、ヘキサン：酢酸エチル＝２：１）により精製した。白色固体として化合物６（２．４ｇ、５．６ｍｍｏｌ、５６％）を得た。

¹H NMR (CDCl₃, 400 MHz) δ 7.77 (m, 4H, Tol), 7.35 (m, 4H, Tol), 3.98 (t, 4H, H-1, 6, J = 4.8 Hz), 2.45 (s, 6H, Tol-CH₃), 1.60 (m, 4H, H-2, 5), 1.27 (m, 4H, H-3, 4).

Ｎ ^８ −（６−フルオロ−１−ヘキシル）−チミジン（Ｎ ^８ −（６−Fｌｕｏｒｏ−１−hexyl）−ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ）（７：ＮＦＴ４０１）
アルゴン雰囲気下、フッ化カリウム（５０ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ），クリプトフィックス［２．２．２］（２２６ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ）をアセトニトリル（１．５ｍL）に溶かし、化合物６（２３１ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）のアセトニトリル溶液（１．０ｍＬ）を加え、８０℃で１時間攪拌した。この溶液に、チミジン（１２１ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ），炭酸セシウム（１９５ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ）のDMF溶液を加え、８０℃でさらに１．５時間攪拌した後、放冷し、濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、クロロホルム：メタノール＝２０：１）により精製し、白色固体として化合物７（８０ｍｇ、０．２３ｍｍｏｌ、４６％）を得た。

¹H NMR (CDCl₃, 500 MHz) δ7.83 (s, 1H, H-6), 6.30 (t, H-1’, J_{1', 2'a} = J_{1', 2'b} = 5.6 Hz), 4.45, 4.36 (each t, each 1H, H-6"), 4.39 (m, 1H, H-3'), 3.92 (m, 2H, H-1"), 3.80 (dd, 1H, H-5'a, J_{5'a, 4'} = 2.4, J_{5'a, 5'b} = 9.6 Hz), 3.73 (dd, 1H, H-5'b, J_{5'b, 4'} = 2.8, J_{5'b, 5'a} = 9.6 Hz), 3.56 (m, 1H, H-4'), 2.28 (ddd, 1H, H-2'a, J _{2'a, 3'} = 2.8, J _{2'a, 1'} = 6.0, J_{2'a, 2'b} = 10.8 Hz), 2.20 (m, 1H, H-2'b), 1.90 (s, 3H, 5- CH₃), 1.72〜1.59 (m, 4H, H-2”, 5”), 1.46〜1.35 (m, 4H, H-3”, 4”).

実施例４（NFTS２０２）

１−（２−デオキシ−４−チオ−エリスロ−ペントフラノシル）−Ｎ ^３ −（２−フルオロエチル）−チミン（１−（２−Deoxy-４−thio-erythro-pentofuranosｙｌ）−N ³ −（２−fluoroethyl）-thymine）（９：NFTS２０２）
M.R. Dysonらの方法およびG.P. Otter らの方法（Carbohydrate Research, 216, 237 (1991)： J. Chem. Soc. Perkin. Trans., 2, 2343 (1998)）に従って合成した化合物８（１２９ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）と、炭酸セシウム（１９５ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ）のDMF溶液に市販の２−フルオロ−1-ブロモエタン（２−fluoro−1−bromoehtane）（１２７mg、１mmol）を加え、８０℃で１０時間攪拌した後、放冷し、濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、クロロホルム：メタノール＝２０：１）により精製し、白色固体として化合物９（１２２ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ、８０％）を得た。

¹H NMR (CDCl₃, 500 MHz) δ6.６0 (dd, H-1’, J_{1’, 2’a} = 4.6, J_{1’, 2’b} = 7.0 Hz), 5.７4 (m, 1H, H-3’), 4.８１ (dd, 1H, H-5’a, J_{5’a, 4’} = 2.4, J_{5’a, 5’b} = 10.0 Hz), ), 4.５４-4.７７ (m, 2H, H-5’b, H-1”b), 4.６０ (m, 1H, H-1”a), 4.5５ (m, 1H, H-4’), 4.35 (m, 1H, H-2”a), 4.33 (m, 1H, H-2”a), 2.99 (ddd, 1H, H-2’a, J _{2’a, 3’} = 1.2, J _{2’a, 1’} = 4.6, J_{2’a, 2’b} = 11.2 Hz), 2.83 (m, 1H, 2”-OH), 2.30 (ddd, 1H, H-2’b, J _{2’b, 3’} = 5.2, J _{2’b, 1’} = 7.0, J_{2’b, 2’a} = 11.2 Hz), 1.65 (s, 3H, 5- CH₃);

実施例５（NFAU２０２）

１−（２−デオキシ−２−フルオロ−β−Ｄ−アラビノフラノシル）−Ｎ ^３ −（２−フルオロエチル）−チミン（１-（２-Deoxy-２-fluoro-β-D-arabinofuranosyl）-N ³ -（２−fluoroethyl）-thymine）（１０：NFAU２０２）
アルゴン気流下、W. F. Edgellらの方法（J. Am. Chem. Soc., 77, 4899 (1955)）に従い合成した化合物１（５４１ｍｇ、２．５ｍｍｏｌ）と炭酸カリウム（６３０ｍｇ、４．６ｍｍｏｌ）のアセトンとDMFの混合溶液(１：１)３０ｍLに、C.J.WildsとM. Ｊ. Damhaらの方法（Nucleic Acids Research, 28, 3625 (2000)）により合成したFMAU（３２３ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）を加え、５０℃で８時間攪拌した。溶媒を濃縮した後、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー （ＳｉＯ_２、クロロホルム：メタノール＝５：１）により精製した。白色固体として化合物１０（２７２ｍｇ、７２％）を得た。

¹H NMR (CD₃OD, 500 MHz) δ 7.73 (s, 1H, H-5), 6.20 (dd, 1H, H-1’, J_{1’, F} =17 Hz, J_{1’, 2’} = 4.0 Hz), 5.03 (dt, 1H, H-2’, J_{2’, F} =52 Hz, J_{1’, 2’} = J_{2’, 3’} = 2.5 Hz), 4.58 (dd, 2H, H-2’’, J_{2’’, F} =47 Hz, J_{1’, 2’b} = 5.0 Hz), 4.32 (m, 1H, H-3’), 4.28 (m, 2H, H-1’’), 3.91 (m, 1H, H-4’), 3.86 (dd, 1H, H-5’a, J_{5’a, 4’} = 12.0, J_{5’a, 5’b} = 4.0 Hz), 3.76 (dd, 1H, H-5’b, J_{5’b, 4’} = 12.0, J_{5’b, 5’a} = 4.0 Hz), 2.66 (s, 3H, 5-CH₃).

実施例６
３´，５´−ジ−Ｏ−トルオイル―Ｎ ^８ ―（２―ｐ―トルエンスルホキシエチル）−チミン（３´,５´-Ｄｉ-Ｏ-ｔｏｌｕｏｙｌ-Ｎ ^８ -（２-ｐ-ｔｏｌｕｅｎｅｓｕｌｆｏｘｙｅｔｈｙｌ）-ｔｈｙｍｉｎｅ）

３´、５´−ジ−Ｏ−トルオイルチミジン（３´、５´−Ｄｉ−Ｏ−ｔｏｌｕｏｙｌｔｈｙｍｉｄｉｎｅ）（１２）
アルゴン雰囲気下、チミジン（１．９５ｇ、８ｍｍｏｌ）のピリジン(pyridine)溶液（８０ｍＬ）に塩化トルイル(TolCl)（２．１ｍＬ、１６．１ｍｍｏｌ）を加え、室温で１６時間攪拌した。反応液を氷水にあけ５分攪拌した後、析出した固体をろ取した。水で洗浄した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ_２、ヘキサン：酢酸エチル＝３：１）により精製した。白色固体として化合物１２（３．４ｇ、７．１ｍｍｏｌ、８９％）を得た。

¹H NMR (CDCl₃, 500 MHz) δ 8.45 (bs, 1H, NH), 7.96 (m, 4H, o-Tol), 7.26 (m, 5H, H-6, m-Tol), 6.46 (dd, H-1’, J_{1’, 2’a} = 4.4, J_{1’, 2’b} = 6.8 Hz), 5.64 (m, 1H, H-3'), 4.79 (dd, 1H, H-5'a, J_{5'a, 4'} = 2.8, J_{5'a, 5'b} = 9.6 Hz), ), 4.65 (dd, 1H, H-5'b, J_{5'b, 4'} = 2.8, J_{5'b, 5'a} = 9.6 Hz), 5.53 (m, 1H, H-4'), 2.70 (ddd, 1H, H-2'a, J _{2'a, 3'} = 1.2, J _{2'a, 1'} = 4.4, J_{2'a, 2'b} = 11.2 Hz), 2.44, 2.43 (each s, each 3H, Tol-CH₃), 2.31 (ddd, 1H, H-2'b, J _{2'b, 3'} = 5.2, J _{2'b, 1'} = 6.8, J_{2'b, 2'a} = 11.2 Hz), 1.62 (s, 3H, 5- CH₃); ¹³C NMR (CDCl₃, 100 MHz) δ 166.10, 166.04, 163.06, 150.11, 144.64, 134.44, 129.85, 129.53, 129.51, 129.32, 126.54, 126.25, 111.64, 84.91, 82.82, 77.28, 74.91, 64.18, 38.08, 21.76, 21.72, 12.13.

３´，５´−ジ−Ｏ−トルオイル−Ｎ ^８ −（２−ヒドロキシエチル）−チミジン（３´,５´−Ｄｉ−Ｏ−ｔｏｌｕｏｙｌ−Ｎ ^８ −（２−ｈｙｄｏｒｘｙｅｔｈｙｌ）−ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ）（１３）
アルゴン雰囲気下、化合物１２（３．７ｇ、８ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（１２０ｍＬ） に溶かし、ＴＢＡＦ(１．０Ｍ ｉｎ ＴＨＦ、８０ｍＬ、８０ｍｍｏｌ)、２-ブロモエタノール（２−ｂｒｏｍｏｅｔｈａｎｏｌ）（１４ｍＬ、０．２ｍｏｌ）を加え室温で２時間攪拌した。反応液を氷水にあけ５分攪拌した後、析出した固体をろ取した。固体を水に入れ１５分攪拌した後、再びろ取し、デシケーターにより乾燥させ白色固体として化合物１３（３．３ｇ、６．５ｍｍｏｌ、８１％）を得た。

¹H NMR (CDCl₃, 500 MHz) δ 7.96 (m, 4H, o-Tol), 7.26 (m, 5H, H-6, m-Tol), 6.48 (dd, H-1’, J_{1’, 2’a} = 4.4, J_{1’, 2’b} = 6.8 Hz), 5.64 (m, 1H, H-3’), 4.79 (dd, 1H, H-5’a, J_{5’a, 4’} = 2.4, J_{5’a, 5’b} = 9.6 Hz), ), 4.66 (dd, 1H, H-5’b, J_{5’b, 4’} = 2.8, J_{5’b, 5’a} = 9.6 Hz), 5.53 (m, 1H, H-4'), 4.21 (m, 1H, H-1"), 3.86 (m, 1H, H-2"), 2.72 (ddd, 1H, H-2'a, J _{2'a, 3'} = 1.2, J _{2'a, 1'} = 4.4, J_{2'a, 2'b} = 11.2 Hz), 2.53 (m, 1H, 2"-OH), 2.44, 2.43 (each s, each 3H, Tol-CH₃), 2.31 (ddd, 1H, H-2'b, J _{2'b, 3'} = 5.2, J _{2'b, 1'} = 6.8, J_{2'b, 2'a} = 11.2 Hz), 1.65 (s, 3H, 5- CH₃); ¹³C NMR (CDCl₃, 100 MHz) δ 166.06, 166.34, 164.12, 151.56, 144.61, 132.93, 129.81, 129.51, 129.48, 129.30, 126.51, 126.25, 110.99, 85.78, 82.85, 77.25, 74.89, 64.13, 61.79, 43.97, 38.19, 21.73, 21.69, 12.84.

３´，５´−ジ−Ｏ−トルオイル−Ｎ ^８ −（２−ｐ−トルエンスルホキシエチル）−チミン（３´,５´-Ｄｉ-Ｏ-ｔｏｌｕｏｙｌ-Ｎ ^８ -（２-ｐ-ｔｏｌｕｅｎｅｓｕｌｆｏｘｙｅｔｈｙｌ）-ｔｈｙｍｉｎｅ）（１４）
アルゴン雰囲気下、化合物１３（５２２ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）のピリジン溶液（１０ｍＬ）に塩化トシル（２２９ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）を加え、０℃で１６時間攪拌した。クロロホルム（ｃａ．５０ｍＬ）により希釈し、１Ｎ塩酸（４０ｍＬ）、水（４０ｍＬ）、飽和重曹水（４０ｍＬ）さらに飽和食塩水（４０ｍＬ）で洗浄した。無水硫酸ナトリウムにより乾燥し、濃縮した後、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ_２、ヘキサン：酢酸エチル＝１：１）により精製した。白色固体として化合物１４（５００ｍｇ、０．７４ｍｍｏｌ、７４％）を得た。

¹H NMR (CDCl₃, 500 MHz) δ 7.96 (m, 4H, o-Tol), 7.69 (m, 2H, o-Ts), 7.26 (m, 7H, H-6, m-Tol, m-Ts), 6.44 (dd, H-1’, J_{1’, 2’a} = 4.4, J_{1’, 2’b} = 6.8 Hz), 5.63 (m, 1H, H-3’), 4.81 (dd, 1H, H-5'a, J_{5'a, 4'} = 2.4, J_{5'a, 5'b} = 10.0 Hz), 4.65 (dd, 1H, H-5'b, J_{5'b, 4'} = 2.8, J_{5'b, 5'a} = 10.0 Hz), 5.54 (m, 1H, H-4'), 4.27 (m, 1H, H-2"), 4.22 (m, 1H, H-1"), 2.71 (ddd, 1H, H-2'a, J _{2'a, 3'} = 1.2, J _{2'a, 1'} = 4.4, J_{2'a, 2'b} = 11.2 Hz), 2.53 (m, 1H, H-2"), 2.45, 2.42, 2.40 (each s, each 3H, Ts-CH_3, Tol-CH₃), 2.28 (ddd, 1H, H-2'b, J _{2'b, 3'} = 5.2, J _{2'b, 1'} = 6.8, J_{2'b, 2'a} = 11.2 Hz), 1.58 (s, 3H, 5- CH₃); ¹³C NMR (CDCl₃, 100 MHz) δ 166.05, 166.12, 162.81, 150.60, 144.70, 144.57, 144.55, 132.86, 132.77, 129.79, 129.50, 129.46, 129.28, 127.79, 126.48, 126.25, 110.52, 85.72, 82.86, 77.21, 74.89, 66.30, 64.14, 39.73, 38.09, 21.71, 21.66, 21.55, 12.75.

実施例７
３´，５´−ジ−Ｏ−トルオイル−Ｎ ^８ −（２−メタンスルホキシエチル）−チミジン（３´,５´-Ｄｉ-Ｏ-ｔｏｌｕｏｎｙｌ-Ｎ ^８ -（２-ｍｅｔｈａｎｓｕｌｆｏｘｙｅｔｈｙｌ）-ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ）

３´，５´−ジ−Ｏ−トルオイル−Ｎ ^８ −（２−メタンスルホキシエチル）−チミジン（３´,５´−Ｄｉ−Ｏ−ｔｏｌｕｏｎｙｌ-Ｎ ^８ −（２−ｍｅｔｈａｎｓｕｌｆｏｘｙｅｔｈｙｌ）−ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ）（１５）
アルゴン雰囲気下、化合物１３（３５０ｍｇ、０．６７ｍｍｏｌ）のピリジン溶液（６．７ｍＬ）に塩化メシル(MsCl)（６３μｇ、０．８１ｍｍｏｌ）を加え、０℃で１６時間攪拌した。クロロホルム（ｃａ．５０ｍＬ）により希釈し、１Ｎ塩酸（４０ｍＬ）、水（４０ｍＬ）、飽和重曹水（４０ｍＬ）さらに飽和食塩水（４０ｍＬ）で洗浄した。無水硫酸ナトリウムにより乾燥し、濃縮した後、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ_２、ヘキサン：酢酸エチル＝３：１）により精製した。白色固体として化合物１５（３１２ｍｇ、０．５２ｍｍｏｌ、７８％）を得た。

¹H NMR (CDCl₃, 500 MHz) δ 7.93 (m, 4H, o-Tol), 7.28 (m, 5H, H-6, m-Tol), 6.46 (dd, H-1’, J_{1’, 2’a} = 5.5, J_{1’, 2’b} = 8.5 Hz), 5.63 (m, 1H, H-3’), 4.78 (dd, 1H, H-5’a, J_{5’a, 4’} = 2.5, J_{5’a, 5’b} = 12.0 Hz), 4.65 (dd, 1H, H-5’b, J_{5’b, 4’} = 4.0, J_{5’b, 5’a} = 12.0 Hz), 5.53 (m, 1H, H-4’), 4.47 (m, 1H, H-2”), 4.31 (m, 1H, H-1”), 3.01 (s, 3H, Ms-CH₃), 2.72 (ddd, 1H, H-2’a, J _{2’a, 3’} = J _{2’a, 1’} = 5.5, J_{2’a, 2’b} = 14.0 Hz), 2.43, 2.42 (each s, each 3H, Tol-CH₃), 2.31 (ddd, 1H, H-2’b, J _{2’b, 3’} = 6.5, J _{2’b, 1’} = 8.5, J_{2’b, 2’a} = 14.0 Hz), 1.64 (s, 3H, 5- CH₃); ¹³C NMR (CDCl₃, 100 MHz) δ 166.04, 166.02, 163.04, 150.75, 144.56, 133.02, 129.79, 129.51, 129.45, 129.27, 126.49, 126.25, 110.67, 85.80, 82.86, 74.88, 65.73, 64.18, 40.06, 38.09, 37.82, 21.71, 21.66, 21.55, 12.80.

実施例８
３´，５´−ジ−Ｏ−トルオイル−Ｎ ^８ −（２−ｐ−メトキシフェニルスルホキシエチル）−チミジン（３´,５´-Ｄｉ-Ｏ-ｔｏｌｕｏｙｌ-Ｎ ^８ -（２-ｐ-ｍｅｔｈｏｘｙｐｈｅｎｙｌｓｕｌｆｏｘｙｅｔｈｙｌ）-ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ）

３´，５´−ジ−Ｏ−トルオイル−Ｎ ^８ −（２−ｐ−メトキシフェニルスルホキシエチル）−チミジン（３´,５´−Ｄｉ−Ｏ−ｔｏｌｕｏｙｌ-Ｎ ^８ −（２−ｐ−ｍｅｔｈｏｘｙｐｈｅｎｙｌｓｕｌｆｏｘｙｅｔｈｙｌ）−ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ）（１６）
アルゴン雰囲気下、化合物１３（８１６ｍｇ、１．５６ｍｍｏｌ）のピリジン溶液（１５ｍＬ）に塩化パラメトキシフェニルスルホニル(p-MeOPhSO₂Cl)（３８７ｍｇ、１．８７ｍｍｏｌ）を加え、０℃で１６時間攪拌した。クロロホルム（ｃａ．１５０ｍＬ）により希釈し、１Ｎ塩酸（１４０ｍＬ）、水（１４０ｍＬ）、飽和重曹水（１４０ｍＬ）さらに飽和食塩水（１４０ｍＬ）で洗浄した。無水硫酸ナトリウムにより乾燥し、濃縮した後、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ_２、ヘキサン：酢酸エチル＝３：１）により精製した。白色固体として化合物１６（２２７ｍｇ、０．３３ｍｍｏｌ、２１％）を得た。

¹H NMR (CDCl₃, 500 MHz) δ 7.94 (m, 4H, o-Tol), 7.79 (m, 2H, o-ph), 7.26 (m, 5H, H-6, m-Tol), 6.95 (m, 2H, m-Ts), 6.44 (dd, H-1’, J_{1’, 2’a} = 5.5, J_{1’, 2’b} = 8.0 Hz), 5.63 (m, 1H, H-3’), 4.80 (dd, 1H, H-5’a, J_{5’a, 4’} = 2.5, J_{5’a, 5’b} = 12.0 Hz), 4.65 (dd, 1H, H-5’b, J_{5’b, 4’} = 3.0, J_{5’b, 5’a} = 12.0 Hz), 5.53 (m, 1H, H-4’), 4.28-4.20 (m, 4H, H-1”, 2”), 3.83 (s, 3H, Ph-CH₃), 2.71 (ddd, 1H, H-2’a, J _{2’a, 3’} = J _{2’a, 1’} = 5.5, J_{2’a, 2’b} = 14.0 Hz), 2.44, 2.42 (each s, each 3H, Tol-CH₃), 2.28 (ddd, 1H, H-2’b, J _{2’b, 3’} = 6.0, J _{2’b, 1’} = 8.0, J_{2’b, 2’a} = 14.0 Hz), 1.59 (s, 3H, 5- CH₃); ¹³C NMR (CDCl₃, 100 MHz) δ 166.10, 166.07, 163.71, 162.86, 150.66, 144.62, 144.60, 132.84, 130.05, 129.85, 129.55, 129.51, 129.32, 127.33, 126.52, 126.30, 114.41, 110.61, 85.78, 82.89, 77.22, 74.94, 66.15, 64.20, 60.40, 55.64, 39.80, 38.14, 21.76, 21.70, 12.80.

実施例９
３´，５´−ジ−Ｏ−トルオイル−Ｎ ^８ −（２−ブロモエチル）−チミジン(３´,５´−Ｄｉ−Ｏ−ｔｏｌｕｏｙｌ-Ｎ ^８ −（２−ｂｒｏｍｏｅｔｈｙｌ）−ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ)

３´，５´−ジ−Ｏ−トルオイル−Ｎ ^８ −（２−ブロモエチル）−チミジン（３´,５´−Ｄｉ−Ｏ−ｔｏｌｕｏｙｌ-Ｎ ^８ −（２−ｂｒｏｍｏｅｔｈｙｌ）−ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ）（１７）
アルゴン雰囲気下、化合物1３（５５２ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）のピリジン溶液（１０ｍＬ）にＰＰｈ_３（３１４ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、ＮＢＳ（２１３ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）を加え、室温で３０分攪拌した。クロロホルム（ｃａ．１００ｍＬ）により希釈し、飽和重曹水（１００ｍＬ）さらに飽和食塩水（１００ｍＬ）で洗浄した。無水硫酸マグネシウムにより乾燥し、濃縮した後、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、ヘキサン：酢酸エチル＝１：１）により精製した。白色固体として化合物１７（１５０ｍｇ、０．２６ｍｍｏｌ、２６％）を得た。

¹H NMR (CDCl₃, 500 MHz) δ 7.93 (m, 4H, o-Tol), 7.28 (m, 5H, H-6, m-Tol), 6.48 (dd, H-1’, J_{1’, 2’a} = 5.5, J_{1’, 2’b} = 9.0 Hz), 5.64 (m, 1H, H-3’), 4.80 (dd, 1H, H-5’a, J_{5’a, 4’} = 2.5, J_{5’a, 5’b} = 12.0 Hz), 4.65 (dd, 1H, H-5’b, J_{5’b, 4’} = 3.5, J_{5’b, 5’a} = 12.0 Hz), 5.53 (m, 1H, H-4’), 4.35 (m, 1H, H-1”), 3.54 (m, 1H, H-2”), 2.71 (ddd, 1H, H-2’a, J _{2’a, 3’} = 1.0, J _{2’a, 1’} = 5.5, J_{2’a, 2’b} = 14.0 Hz), 2.44, 2.43 (each s, each 3H, Tol-CH₃), 2.31 (ddd, 1H, H-2’b, J _{2’b, 3’} = 7.0, J _{2’b, 1’} = 9.0, J_{2’b, 2’a} = 14.0 Hz), 1.65 (s, 3H, 5- CH₃); ¹³C NMR (CDCl₃, 100 MHz) δ 166.07, 166.03, 162.79, 160.62, 150.64, 144.62, 144.59, 132.88, 129.81, 129.53, 129.48, 129.31, 126.53, 126.27, 110.84, 85.65, 82.82, 77.21, 74.86, 64.10, 42.19, 38.11, 27.25, 21.74, 21.70, 12.83.

実施例１０（［ ^１８ Ｆ］ＮＦＴ２０２）
Ｎ ^８ −（２−［ ^１８ Ｆ］フルオロエチル）−チミジンの合成（Ｒａｄｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ Ｎ ^８ −（２−［ ^１８ Ｆ］ｆｌｕｏｒｏｅｔｈｙｌ）−ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ（［ ^１８ Ｆ］ＮＦＴ２０２）
［^１８Ｆ］フルオライド（Ｆｌｕｏｒｉｄｅ）水溶液（１５８０ＭＢｑ）、４０ｍｍｏｌ／Ｌクリプトフィックス［２．２．２］アセトニトリル溶液（０．２５ｍＬ、１０μｍｏｌ）、６６ｍｍｏｌ／Ｌ炭酸カリウム水溶液（７５０μＬ、５μｍｏｌ）の混合溶液をアルミブロック（１１０℃）を用いて濃縮しアセトニトリル（１ｍＬ）を用いて２回共沸した。標識前駆体１４（１３．５ｍｇ、２０μｍｏｌ）のアセトニトリル溶液（１ｍＬ）を加え、１３０℃で５分攪拌した（ｓｔｅｐ１）。次に、０．２４Ｍナトリウムエトキシド／エタノール溶液１．０ｍＬ（２４０μｍｏｌ）を加え、室温で１０分間放置した後、１．０Ｍ酢酸ナトリウム水溶液（０．３ｍＬ、３００μｍｏｌ）を加えて中和した（ｓｔｅｐ２）。アルミブロック（１１０℃）を用いてアセトニトリル、エタノールを蒸散させ、水（２．５ｍＬ）で希釈し濾過（０．４５μ）した後、濾液をＨＰＬＣを用いて精製し、［^１８Ｆ］ＮＦＴ２０２（７３．２ＭＢｑ）を合成した。

精製；HPLC 固定相：C18 column (300 x 30 mm, 10μ)
移動相： 水:エタノール=3:1 (v/v)
流速 ：6 .0 mＬ/min
検出器：NaI (Tl) シンチレータ−, UV検出器 (254 nm)

実施例１１
３´，５´−ジ−Ｏ−トルオイル−Ｎ ^８ −（３−ｐ−トルエンスルホキシ−１−プロピル）−チミジン（３´,５´-Ｄｉ-Ｏ-ｔｏｌｕｏｙｌ-Ｎ ^８ -（３-ｐ-ｔｏｌｕｅｎｅｓｕｌｆｏｘｙ-１-ｐｒｏｐｙｌ）-ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ）

３´,５´-ジ−Ｏ−トルオイル−Ｎ ^８ −（３−ヒドロキシ−１−プロピル）−チミジン（３´,５´-Ｄｉ−Ｏ−ｔｏｌｕｏｙｌ−Ｎ ^８ −（３−ｈｙｄｒｏｘｙ−１−ｐｒｏｐｙｌ）−ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ）（１８）
アルゴン雰囲気下、化合物１２（４８５ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（１０ｍＬ）に溶かし、ＴＢＡＦ（１．０Ｍ ｉｎ ＴＨＦ、１０ｍＬ、１０ｍｍｏｌ）、３−ブロモ−１―プロパノール（３−ｂｒｏｍｏ−１−ｐｒｏｐａｎｏｌ）（２．８ｍＬ、３０ｍｍｍｏｌ）を加え室温で２時間攪拌した。反応液を氷水にあけ５分攪拌した後、析出した固体をろ取した。 固体を水に入れ１５分攪拌した後、再びろ取し、デシケーターにより乾燥させ 白色固体として化合物１８（４１４ｍｇ、０．７７ｍｍｏｌ、７７％）を得た。

¹H NMR (CDCl₃, 400 MHz) δ 7.87 (m, 4H, o-Tol), 7.24-7.19 (m, 5H, H-6, m-Tol), 6.41 (dd, H-1’, J_{1’, 2’a} = 4.4, J_{1’, 2’b} = 6.8 Hz), 5.56 (m, 1H, H-3’), 4.73 (dd, 1H, H-5’a, J_{5’a, 4’} = 2.4, J_{5’a, 5’b} = 9.6 Hz), ), 4.58 (dd, 1H, H-5’b, J_{5’b, 4’} = 2.8, J_{5’b, 5’a} = 9.6 Hz), 5.46 (m, 1H, H-4’), 4.03 (m, 1H, H-1”), 3.42 (m, 1H, H-3”), 3.19 (m, 1H, 2”-OH), 2.63 (ddd, 1H, H-2’a, J _{2’a, 3’} = 1.2, J _{2’a, 1’} = 4.4, J_{2’a, 2’b} = 11.2 Hz), 2.37, 2.36 (each s, each 3H, Tol-CH₃), 2.25 (ddd, 1H, H-2’b, J _{2’b, 3’} = 5.2, J _{2’b, 1’} = 6.8, J_{2’b, 2’a} = 11.2 Hz), 1.79 (m, 2H, H-2”), 1.58 (s, 3H, 5- CH₃); ¹³C NMR (CDCl₃, 100 MHz) δ 171.13, 166.06, 166.01, 163.92, 151.23, 144.62, 132.90, 129.80, 129.51, 129.46, 129.30, 126.52, 126.24, 110.83, 85.71, 82.85, 77.25, 74.83, 64.07, 60.37, 58.53, 38.19, 37.83, 30.47, 21.73, 21.69, 21.03, 14.18, 12.87.

３´，５´−ジ−Ｏ−トルオイル−Ｎ ^８ −（３−ｐ−トルエンスルホキシ−１−プロピル）−チミジン（３´,５´−Ｄｉ−Ｏ−ｔｏｌｕｏｙｌ-Ｎ ^８ −（３−ｐ−ｔｏｌｕｅｎｅｓｕｌｆｏｘｙ−１−ｐｒｏｐｙｌ）−ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ）（１９）
アルゴン雰囲気下、化合物１８（２６７ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）のピリジン溶液（５ｍＬ）に塩化トシル（１１７ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ）を加え、０℃で１６時間攪拌した。クロロホルム（ｃａ．２０ｍＬ）により希釈し、１Ｎ塩酸（１５ｍＬ）、水（１５ｍＬ）、飽和重曹水（１５ｍＬ）さらに飽和食塩水（１５ｍＬ）で洗浄した。無水硫酸ナトリウムにより乾燥し、濃縮した後、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、ヘキサン：酢酸エチル＝１：１）により精製した。白色固体として化合物１９（２０５ｍｇ、０．３０ｍｍｏｌ、６０％）を得た。

¹H NMR (CDCl₃, 400 MHz) δ 7.87 (m, 4H, o-Tol), 7.71 (m, 2H, o-Ts), 7.26-7.19 (m, 7H, H-6, m-Tol, m-Ts), 6.40 (dd, H-1’, J_{1’, 2’a} = 4.4, J_{1’, 2’b} = 6.8 Hz), 5.56 (m, 1H, H-3’), 4.72 (dd, 1H, H-5’a, J_{5’a, 4’} = 2.4, J_{5’a, 5’b} = 10.0 Hz), 4.58 (dd, 1H, H-5’b, J_{5’b, 4’} = 2.8, J_{5’b, 5’a} = 10.0 Hz), 5.45 (m, 1H, H-4’), 4.02 (t, 1H, H-3”, J_{3”, 2”} = 5.2 Hz), 3.91 (m, 1H, H-1”), 2.64 (ddd, 1H, H-2’a, J _{2’a, 3’} = 1.2, J _{2’a, 1’} = 4.4, J_{2’a, 2’b} = 11.2 Hz), 2.37, 2.36, 2.35 (each s, each 3H, Ts-CH_3, Tol-CH₃), 2.25 (ddd, 1H, H-2’b, J _{2’b, 3’} = 5.2, J _{2’b, 1’} = 6.8, J_{2’b, 2’a} = 11.2 Hz), 1.89 (m, 1H, H-2”), 1.54 (s, 3H, 5- CH₃); ¹³C NMR (CDCl₃, 100 MHz) δ 166.08, 163.03, 150.71, 144.69, 144.59, 144.54, 132.99, 132.65, 129.82, 129.81, 129.56, 129.48, 129.30, 127.94, 126.54, 126.29, 110.72, 85.62, 82.78, 77.25, 74.92, 86.53, 64.15, 38.16, 38.10, 27.15, 21.74, 21.69, 21.62, 12.83.

実施例１２（［ ^１８ Ｆ］ＮＦＴ２０３）
Ｎ ^８ −（３−［ ^１８ Ｆ］フルオロプロピル）−チミジンの合成（Ｒａｄｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ Ｎ ^８ −（３−［ ^１８ Ｆ］ｆｌｕｏｒｏｐｒｏｐｙｌ）−ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ）（［ ^１８ Ｆ］ＮＦＴ２０３）
［^１８Ｆ］フルオライド（Fluoride）水溶液（１６６６ＭＢｑ）、４０ｍｍｏｌ／Ｌクリプトフィックス［２．２．２］アセトニトリル溶液（１．０ｍＬ、４０μｍｏｌ）、６６ｍｍｍｏｌ／Ｌ炭酸カリウム水溶液（０．３μＬ、２０μｍｏｌ）の混合溶液をアルミブロック（１１０℃）を用いて濃縮しアセトニトリル（１．０ｍＬ）を用いて２回共沸した。標識前駆体１９（２７．６ｍｇ、４０μｍｏｌ）のアセトニトリル溶液（１．０ｍＬ）を加え、８０℃で１０分攪拌した（ｓｔｅｐ１）。次に、０．２４Ｍナトリウムエトキシド／エタノール溶液１．０ｍＬ(２４０μｍｏｌ)を加え、室温で１０分間放置した後、１．０Ｍ酢酸ナトリウム水溶液（０．３ｍＬ、３００μｍｏｌ）を加えて中和した（ｓｔｅｐ２）。アルミブロック（１１０℃）を用いてアセトニトリル、エタノールを蒸散させ、水（２．５ｍＬ） で希釈し濾過（０．４５μ）をした後ＨＰＬＣを用いて精製し、［^１８Ｆ］ＮＦＴ２０３（１６７．２ＭＢｑ）を合成した。

精製；HPLC 固定相：C18 column (300 x 30 mm, 10μ)
移動相：水：エタノール= 3:1 (v/v)
流速 ：5.0 ml/ml
検出器：NaI (Tl) シンチレータ−, UV検出器 (254 nm)

実施例１３
１,６−ヘキサンジオールジトシレート（１,６−hexanediol ditosylate）

１, ６−ヘキサンジオールジトシレート（１, ６−hexanediol ditosylate）（２０）
アルゴン雰囲気下、塩化トシル（４．９１ｇ、２．５ｍｍｏｌ），DMAP（３．０５ｇ、２５ｍｍｏｌ）のアセトニトリル溶液（５０ｍＬ）に１，６-ヘキサンジオール（１，６-hexanediol）（１．１８ｍｇ、１０ｍｍｏｌ），トリエチルアミン（３．４８ｇ、２５ｍｍｏｌ）のアセトニトリル溶液を加え、室温で２時間攪拌した。析出した固体をろ過し、ろ液を酢酸エチル（ｃａ．５００ｍＬ）により希釈し、水（５００ｍＬ）、飽和食塩水（５００ｍＬ）で洗浄した。無水硫酸ナトリウムにより乾燥し、濃縮した後、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、ヘキサン：酢酸エチル＝２：１）により精製した。白色固体として化合物２０（２．４ｇ、５．６ｍｍｏｌ、５６％）を得た。

¹H NMR (CDCl₃, 400 MHz) δ 7.77 (m, 4H, Tol), 7.35 (m, 4H, Tol), 3.98 (t, 4H, H-1, 6, J = 4.8 Hz), 2.45 (s, 6H, Tol-CH₃), 1.60 (m, 4H, H-2, 5), 1.27 (m, 4H, H-3, 4).

実施例１４（［ ^１８ Ｆ］ＮＦＴ４０１）
Ｎ ^８ −（６−［ ^１８ Ｆ］フルオロヘキシル）−チミジンの合成（Ｒａｄｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ Ｎ ^８ −（６−［ ^１８ Ｆ］ｆｌｕｏｒｏhexｙｌ）−ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ）（［ ^１８ Ｆ］ＮＦＴ４０１）
［^１８Ｆ］フルオライド（Ｆｌｕｏｒｉｄｅ）水溶液（３６３０ＭＢｑ）、４０ｍｍｏｌ／Ｌクリプトフィックス［２．２．２］アセトニトリル溶液（１．２ｍＬ、５３μｍｏｌ）、６６ｍｍｏｌ／Ｌ炭酸カリウム水溶液（０．３ｍＬ、２０μｍｏｌ）の混合溶液をアルミブロック（１１０℃）を用いて濃縮しアセトニトリル（１ｍＬ）を用いて２回共沸した。標識前駆体２０（１７．０ｍｇ、４０μｍｏｌ）のアセトニトリル溶液（１ｍＬ）を加え、８０℃で１０分攪拌した（ｓｔｅｐ１）。次に、チミジン（Thymidine）（１9.３ｍｇ、８０μｍｏｌ）のDMF溶液（０．５ｍL）及び炭酸セシウム（５２．１ｍｇ、１６０μｍｏｌ）のDMF懸濁液（０．５ｍL）を加えて、８０℃で１５分攪拌した（ｓｔｅｐ２）。アルミブロック（１１０℃）を用いてアセトニトリルを蒸散させ、水（２．５ｍＬ）で希釈しＨＰＬＣを用いて精製し、［^１８Ｆ］ＮＦＴ４０１（145.1ＭＢｑ）を合成した。

精製；HPLC 固定相：C18 column (300 x 30 mm, 10μ)
移動相： 水:エタノール=3:1 (v/v)
流速 ：5 .0 mＬ/min
検出器：NaI (Tl) シンチレータ−, UV検出器 (254 nm)

実施例１５（NFT２０１）
Ｎ ^８ −（フルオロメチル）−チミジン（Ｎ ^８ −（ｆｌｕｏｒｏmｅｔｈｙｌ）−ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ）（２１:NFT２０1）
K. K. Ogiliveらの方法（Nucleic Acids Research, 6, 1695 (1979)）に従い,市販のチミジン11から１工程でNFT２０１（21）を合成した。

¹H NMR (CD₃OD, 500 MHz) δ7.89 (s, 1H), 6.28 (t, J = 6.5 Hz, 1H), 5.97 (d, J = 50.5 Hz, 2H), 4.40 (quint, J= 3.0 Hz, 1H), 3.92 (q, J = 3.0Hz, 1H), 3.80 (dd, J = 12.5 and 3.0Hz, 1H), 3.73 (dd, J = 12.5 and 3.5Hz, 1H), 2.28 (ddd, J = 13.5, 6.5 and 3.5Hz, 1H), 2.22 (dd, J = 13.5 and 3.5Hz, 1H), 1.91 (s, 3H).

実施例１６（FT２０２）
５−（２−フルオロエチル）−2’-デオキシウリジン（５−（２−Fｌｕｏｒｏｅｔｈｙｌ）−2’−deoxyuridine）（２２：FT２０２）
J.D. Fissekisらの方法およびH. Grienglらの方法（J. Org. Chem., 29, 2670 (1964): J. Med. Chem., 30, 1199 (1987)）に従い,市販のγ−ブチロラクトン（γ−Butyrolactone）から９工程でFT２０２を合成した。

¹H NMR (CD₃OD, 500 MHz) δ7.92 (s, 1H), 6.26 (t, J = 6.5 Hz, 1H), 4.53 (dtd, J = 47.0, 5.5 and 3.0 Hz, 2H), 4.37 (quint, J= 3.0 Hz, 1H), 3.92 (q, J = 3.0Hz, 1H), 3.80 (dd, J = 12.0 and 3.0Hz, 1H), 3.73 (dd, J = 12.0 and 3.5Hz, 1H), 2.71 (td, J = 5.5 and 2.0Hz, 1H), 2.68 (td, J = 5.5 and 1.5Hz, 1H), 2.26 (m, 1H), 2.21 (m, 1H).

実施例１７（FＴＳ２０２）
１−（２−デオキシ−４−チオ−エリスロ−ペントフラノシル）−５−（２−フルオロエチル）−ウラシル（１−（２−Deoxy-４−thio-erythro-pentofuranosｙｌ）-５−（２−fｌｕｏｒｏｅｔｈｙｌ）-uracil）（２３：FTS２０２）
S.G.Rahimらの方法およびJ.A.Secristらの方法（J. Med. Chem., 39, 789 (1996): J. Med. Chem., 34, 2361 (1991)）に従い,市販のD-エリスロ-ペントフラノシド（D-erythro-pentofuranoside）から12工程でFTS２０２（23）を合成した。

¹H NMR (DMSO-d₆, 400 MHz) δ 11.4 (s, 1H), 7.91 (s, 1H), 6.27 (t, J = 7.4 Hz, 1H), 5.26 (d, J = 3.8 Hz, 1H), 5.18 (t, J = 5.4 Hz, 1H), 4.50 (dt, J = 40.0 and 6.4 Hz, 2H), 4.37 (quint, J= 3.5 Hz, 1H), 3.60 (m, 2H), 3.29 (m, 1H), 2.68 (td, J = 6.2 and 3.3Hz, 1H), 2.62 (td, J = 6.0 and 3.7Hz, 1H), 2.18 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 2.16 (d, J = 3.8 Hz, 1H).

実施例１８
２−［ ^１４ Ｃ］−ＮＦＴ２０２の合成
実施例１と同様に、アルゴン気流下、W. F. Edgellらの方法（J. Am. Chem. Soc., 77, 4899 (1955）)に従い合成したフルオロトシロキシエタン（Ｆｌｕｏｒｏｔｏｓｙｌｏｘｙｅｔｈａｎｅ）（６．８ｍｇ、３３．８μｍｏｌ）、Ｋ_２ＣＯ_３（９．３ｍｇ、６７．６μｍｏｌ）、２−［^１４Ｃ］−チミジン（ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ） （３７ＭＢｑ、１６．９μｍｏｌ）を５ｍＬのＡｃｅｔｏｎｅ／ＤＭＦ溶媒中で５０℃一晩反応させた。反応液を１０ｍＬのｅｔｈｅｒで希釈し、ＳｅｐＰａｋ Ｓｉｌｉｃａカートリッジカラムを通して、未反応のフルオロトシロキシエタン（Ｆｌｕｏｒｏｔｏｓｙｌｏｘｙｅｔｈａｎｅ）を吸着させ、１０ｍＬのＣＨＣｌ_３／ＭｅＯＨ＝５／１で目的物を溶出した。溶出画分の溶媒を留去後、ＴＬＣ（Ｓｉｌｉｃａｇｅｌ ６０）にて精製を行い。２−［^１４Ｃ］−ＮＦＴ２０２を得た（３５．２ＭＢｑ、９５％）。

実施例１９
フルオロチミジン誘導体のインビトロにおけるリン酸化能の検討
フルオロチミジン誘導体の組換え型ヒトチミジンキナーゼ１（ｒＴＫ_１）に対するリン酸化活性を測定した。ｒＴＫ_１は、Ｌｕｎａｔｏ ＡＧ ら、（Ｊ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ． ４２、３３７８−３３８９頁（１９９９））の方法に従い、調製した。リン酸化活性はγ-^３３Ｐ−ＡＴＰのリン酸転移反応により得られる、放射性リン酸化モノヌクレオシドを薄相クロマトグラフによって分離定量した。すなわち、反応溶液（５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．６）、５ｍＭ ＭｇＣｌ_２、１５ｍＭ ＮａＦ、１２５ｍＭ ＫＣｌ、１０ｍＭ ＤＴＴと０．５％ＢＳＡ）に１ｍＭのγ-^３３Ｐ−ＡＴＰおよび基質１００μＭを加え、６１５ｎｇ／ｍＬのｒＴＫ_１を添加する事により、反応を開始させた。酵素反応は、３７℃、１５分間行い、引き続き１００℃、３分の加熱処理によって反応を停止させた。反応停止後の反応溶液を、遠心し、上清を回収して、ＰＥＩ−ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ ｐｌａｔｅ（Ｍｅｒａｃｋ）に２μＬづつ添加した。薄相板は、イソ酪酸／水酸化アンモニウム／水（ｉｓｏｂｕｔｙｌｉｃ ａｃｉｄ／ａｍｍｏｎｉｕｍ ｈｙｄｒｏｘｉｄｅ／ｗａｔｅｒ）＝６６／１／３３で１２時間展開し、ＢＡＳ−１５００にて放射性ピーク成分の割合を解析した。

フルオロチミジン誘導体の組換え型ヒトチミジンキナーゼ１（ｒＴＫ_１）に対するリン酸化活性を表４に示す。リン酸化活性は天然の基質であるチミジン（ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ）を１００とした場合の相対活性で示した。リン酸化能はチミジン（ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ）＞ＮＦＴ２０２＞ＮＦＴ２０１＝ＮＦＴＳ２０２＞ＦＴＳ２０２＝ＮＦＴ２０３＝ＦＴ２０２＞ＮＦＡＵ２０２の順であった。

実施例２０
フルオロチミジン誘導体のヌクレオシドトランスポーター輸送活性の検討
フルオロチミジン誘導体のヌクレオシドトランスポーターに対する親和性を測定した。材料として、ＩＣＲマウス（雌♀、７〜８週齢、体重３０ｇ）の赤血球を用いた。ケタミン（１００ｍｇ／ｋｇ）＋キシラジン（１０ｍｇ／ｋｇ）の腹腔内投与により麻酔をほどこし、心臓採血により、静脈血を ３．２％クエン酸三ナトリウム水溶液中に採取した。採取した血液を、４℃、３，０００ｒｐｍ×１０分遠心処理し、血漿と白血球層を取り除いた。その後、緩衝液（１４０ｍＭ ＮａＣｌ、１．４ｍＭ ＭｇＳＯ_４、１８ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ ｐＨ７．４）で４回洗浄して赤血球を得た。フルオロチミジン誘導体の核酸輸送担体に対する親和性は、Ｇａｔｉ ＷＰ ら、（Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ． ３３、３３２５−３３３１頁（１９８４）；Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２３、１４６−１５２頁（１９８２））の方法を参考に実施した。すなわち、赤血球を緩衝液にてヘマトクリット値が１１％になるように希釈した。２−［^１４Ｃ］−チミジン（Ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ）（３７ＫＢｑ／ｍＬ）を含む０．０５-０．５０ｍＭ（０．０５、０．１、０．２５、０．５０）のチミジン（ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ）溶液ならびに、フルオロチミジン誘導体を０．０−２．０ｍＭ（０、０．５、１．０、２．０）含む計１６通りのアッセイ溶液を調製した。それぞれ０．２ｍＬのアッセイ溶液を、予め１．５ｍＬチューブに入れた０．２ｍＬの赤血球溶液に加え、３秒間取り込ませた。その後、ヌクレオシドトランスポーターの選択的阻害剤である、０．０２ｍＭ ニトロベンジルチオイノシン（ｎｉｔｒｏｂｅｎｚｙｌｔｈｉｏｉｎｏｓｉｎｅ（ＮＢＭＰＲ））溶液を ０．４ｍＬ加えることにより、２−［^１４Ｃ］−チミジン（Ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ）の取り込みを停止させた。試料は、すばやく１２，８００ｇで１分間遠心処理し、再度１．０ｍＬのＮＢＭＰＲ溶液で洗浄後、０．５ｍＬの５％過塩素酸溶液で２−［^１４Ｃ］−チミジン（Ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ）を抽出した。過塩素酸処理後のチューブを再度遠心し、上清を０．１５ｍＬ分取後、１０ｍＬの液体シンチレータ（ＡＣＳ−ＩＩ;Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）を加え、放射能を液体シンチレーションカウンター（ＬＳＣ−５０００；Ａｌｏｋａ）にて測定した。測定は、各サンプルに付き２回実施し、平均値を求め、初速度：Ｖ（ｐｍｏｌｅｓ ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ／μｇ ｐａｃｋｅｄ ｅｒｙｔｈｒｏｃｙｔｅ／ｓｅｃ）を求めた。フルオロチミジン誘導体のＫｉ値は、Ｌｉｎｅｗｅａｖｅｒ−Ｂｕｒｋ ｐｌｏｔ（１／ｖ〜１／ｓ ｐｌｏｔ）より得られたプロットの勾配 （Ｋｍａｐｐ／Ｖｍａｘ）を各フルオロチミジン誘導体（阻害剤と解釈される）の濃度に対してプロットする２次プロット（ｒｅｐｌｏｔ、Ｋｍａｐｐ／Ｖｍａｘ〜ｉ）により求めた（大西正健著、酵素反応速度論実験入門：学会出版センター）。

結果を表５に示す。チミジン（Ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ）のＫｍ値は、０．２６±０．０９ｍＭであった。ヌクレオシドトランスポーターに対する親和性はＮＦＴＳ２０２＞ＦＴＳ２０２＞Ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ＞ＮＦＴ２０１＞ＮＦＴ２０３＝ＮＦＡＵ２０２＞ＦＴ２０２＝ＮＦＴ２０２の順であった。

実施例２１
フルオロチミジン誘導体のインビトロにおける代謝分解感受性に関する検討
フルオロチミジン誘導体のチミジンホスホリラーゼに対する分解感受性を評価した。20 nmolの基質を含む0．1 Mリン酸カリウム緩衝液（pH7．4）に0．015 unitの酵素液（大腸菌由来，Sigma社製）を添加することにより，反応を開始させた。酵素反応は，25℃， 60分間行い，次いで2 Nの過塩素酸水溶液を加えることにより停止させた。反応停止後の反応溶液を遠心し，回収した上清に一定量の水酸化カリウム水溶液を加えて中和させた。中和した試料を遠心し，上清を回収した。回収した上清中の親化合物濃度を，高速液体クロマトグラフィーを用いて，絶対検量線法にて定量した（カラム：Mightysil RP-18 GP Aqua（関東化学），移動相：メタノール/水/TFA混液）。

フルオロチミジン誘導体の，チミジンホスホリレースに対する代謝安定性を表６に示す。０分点における親化合物濃度を100%として，６０分点における親化合物濃度の相対値を示した。代謝分解が認められたのは、陽性対照のチミジン（Ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ）とＦＴ２０２のみであった。

実施例２２
チミジンキナーゼ１依存的な２−［ ^１４ Ｃ］−ＮＦＴ２０２の細胞取り込み
２−［^１４Ｃ］−ＮＦＴ２０２のチミジンキナーゼ１依存的な細胞への取り込みに関して、チミジンキナーゼ欠損細胞株Ｌ−Ｍ（ＴＫ−）及びその親株であるＬ−Ｍ細胞との取り込みを比較検討した。対数増殖期のＬ−Ｍ及びＬ−Ｍ（ＴＫ−）細胞を２．０×１０^５個ずつ２４穴プレートに植え、一晩培養後に２−［^１４Ｃ］−ＮＦＴ２０２ １．８５ＫＢｑ（０．８ｎｍｏｌ）加えて１時間細胞に取りこませた。細胞を３回氷冷リン酸緩衝液で洗い、細胞を０．５ｍＬの０．２Ｎ ＮａＯＨで溶解後、１０ｍＬの液体シンチレータ（ＡＣＳ−ＩＩ;Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）を加え、細胞に取り込まれた放射能を液体シンチレーションカウンター（ＬＳＣ−５０００;Ａｌｏｋａ）にて測定した。その結果、２−［^１４Ｃ］−ＮＦＴ２０２はＬ−Ｍ細胞へ２４．７０±１．７１（ｐｍｏｌ／１０^６ｃｅｌｌｓ／ｈ）とＬ−Ｍ（ＴＫ−）細胞の３．０６±１．２２（ｐｍｏｌ／１０^６ｃｅｌｌｓ／ｈ）に比べて、８倍以上の高集積を示した（Ｓｔｕｄｅｎｔ‘ｓ ｔ−ｔｅｓｔ；ｐ＜０．０００００５）。

実施例２３
２−［ ^１４ Ｃ］−ＮＦＴ２０２の細胞取り込みと増殖度との相関
２−［^１４Ｃ］−ＮＦＴ２０２の細胞集積が、増殖度の違いを反映するか否かを明らかにする目的で、増殖状態の異なるＡ５４９ヒト肺がん細胞株への２−［^１４Ｃ］−ＮＦＴ２０２取り込みと細胞増殖マーカーであるＳ期画分の割合の変化を比較検討した。Ａ５４９細胞への２−［^１４Ｃ］−ＮＦＴ２０２取り込みアッセイ方法は、実施例２２と同様に行った。Ｓ期画分の測定は、取り込み実験と同様に培養したＡ５４９細胞株をトリプシン処理によって回収し、１５ｍＬ遠心チューブに集めた。細胞を遠心処理によって沈殿させ、ＣｙｃｌｅＴＥＳＴ^ＴＭ ＰＬＵＳ ＤＮＡ Ｒｅａｇｅｎｔ Ｋｉｔ（Ｂｅｃｋｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）を用いてＫｉｔ添付の手順書にしたがってＤＮＡ分析のための試料を調製した。 試料の細胞あたりのＤＮＡ含量はフローサイトメトリー（ＦＡＣＳ Ｃａｌｉｂｅｒ;Ｂｅｃｋｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）によってヒストグラムで表され、Ｓ期画分の割合（％Ｓ−Ｐｈａｓｅ）はＭｏｄ−Ｆｉｔ ＬＴ ｓｏｆｔｗａｒｅ（Ｂｅｃｋｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）を用いて算出した。

結果を図２に示す。２−［^１４Ｃ］−ＮＦＴ２０２のＡ５４９細胞への取り込みは、細胞増殖マーカーのＳ期画分（％Ｓ−Ｐｈａｓｅ）とよく相関した（ｒ^２＝０．９２）

実施例２４
［ ^１８ Ｆ］ＮＦＴ２０２の正常マウスを用いた体内分布
４週齢のｄｄＹマウス（平均体重28.9g，各群4匹）にラボナール麻酔を施し、［^１８Ｆ］ＮＦＴ２０２を１匹あたり約１．４８MBｑ尾静脈投与した。各時間経過後に心採血により屠殺し、臓器重量と放射能量をシングルチャンネルアナライザーにて測定した。組織への放射能取りこみは、時間に対する組織ｇあたりの投与量の百分率で算出した（表７）。その結果、増殖組織である小腸における放射能の取りこみは、非増殖組織である脳及び筋肉より明らかに高かった。また、下肢骨（増殖組織の骨髄を含む）への放射能集積も認められた。

実施例２５
［ ^１８ Ｆ］ＮＦＴ２０２の腫瘍移植マウスを用いた体内分布
ルイス肺癌細胞株を皮下移植したＣ５７ＢＬ／６マウスにおける体内分布を実施例２４と同様に実施した。その結果（表８）、増殖組織である小腸における放射能の取りこみは、非増殖組織である筋肉より明らかに高かった。また、下肢骨（増殖組織の骨髄を含む）への放射能集積も認められた。腫瘍における放射能の取りこみは、非増殖組織である筋肉より高かった。

実施例２６
［ ^１８ Ｆ］ＮＦＴ２０３の腫瘍移植マウスを用いた体内分布
ルイス肺癌細胞株を皮下移植したＣ５７ＢＬ／６マウスにおける体内分布を実施例２４と同様に実施した。その結果（表９）、増殖組織である小腸における放射能の取りこみは、非増殖組織である筋肉より明らかに高かった。また、下肢骨（増殖組織の骨髄を含む）への放射能集積も認められた。腫瘍における放射能の取りこみは、非増殖組織である筋肉より高かった。

実施例２７
［ ^１８ Ｆ］ＮＦＴ４０１の腫瘍移植マウスを用いた体内分布
ルイス肺癌細胞株を皮下移植したＣ５７ＢＬ／６マウスにおける体内分布を実施例２４と同様に実施した。その結果（表１０）、増殖組織である小腸における放射能の取りこみは、非増殖組織である筋肉より明らかに高かった。また、下肢骨（増殖組織の骨髄を含む）への放射能集積も認められた。腫瘍における放射能の取りこみは、投与後３０分において、非増殖組織である筋肉より高かった。

実施例２８
［ ^１８ Ｆ］ＮＦＴ２０２のインビボ代謝
［^１８Ｆ］ＮＦＴ２０２の生体内での安定性を確認する目的で、マウス血漿及び尿中代謝物の分析を行った。[¹⁸F]ＮＦＴ２０２投与後マウスの血漿ＴＬＣラジオクロマトグラムでは５つの放射化学的成分が確認された（図３）。放射化学的成分比（％）を表１１に示す。３０分点では、血漿中放射能の７４．８、８０．１％が未変化体の［^１８Ｆ］ＮＦＴ２０２であった．２時間点では５成分のすべてが検出され、血漿中放射能の４０％強が未変化体であり、同程度の割合で原点成分（Ａ）が観察された。

尿のＴＬＣラジオクロマトグラム分析の結果を図４及び表１２に示す。３０分点では、放射化学的成分の９８％が未変化体であった。一方、２時間点では、尿中放射能の８１．４％、５８．８％が未変化体であり、残りの大部分が原点成分（Ａ）であった。以上の結果から、［^１８Ｆ］ＮＦＴ２０２の生体内で比較的安定であることが確認された。

本発明の放射性フッ素標識ヌクレオシド誘導体は、生体内において安定で、かつ、ヌクレオシドトランスポーターを通過した後、チミジンキナーゼ１によりリン酸化を受けて細胞内に滞留するか、またはＤＮＡに組みこまれＤＮＡ合成活性を反映するので、細胞増殖の画像診断に有用である。

本発明の放射性フッ素標識化合物を製造するスキームを示す反応式である。 ２−［^１４Ｃ］−ＮＦＴ２０２の細胞取り込みと増殖度との相関を示すグラフである。 [¹⁸F]ＮＦＴ２０２投与後マウスの血漿ＴＬＣラジオクロマトグラムである。 [¹⁸F]ＮＦＴ２０２投与後マウスの尿のＴＬＣラジオクロマトグラムである。

Claims (4)

1. 下記式(I)で表される^１８Ｆ標識化合物又はその医薬として許容できる塩を有効成分として含有する組織増殖能診断用薬剤。
   

   

   
   （式(I)中、Ｒ _１ はメチル基、Ｒ_２ は炭素原子１〜６個の^１８Ｆ標識フルオロアルキル置換基、Ｒ_３は酸素又は硫黄、Ｒ_４は水素又はフッ素である。）
2. Ｒ_２が^１８Ｆ標識フルオロエチル基、^１８Ｆ標識フルオロプロピル基、及び^１８Ｆ標識フルオロペンチル基からなる群より選ばれたフルオロアルキル置換基である請求項１に記載の薬剤。
3. Ｒ_３が酸素でＲ_４は水素である請求項２に記載の薬剤。
4. Ｒ_２が^１８Ｆ標識フルオロエチル基である請求項３に記載の薬剤。

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