TWI232108B - Synthetic peptide vaccines for foot-and-mouth disease - Google Patents

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經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 Ϊ232108 A7 B7 i、發明說明（i ) I明領域 本發明係關於作為免疫原之胜肽組合物之用途，包含於 其中之每個胜肽包括衍生自口蹄疫病毒（FMDV)之VP1外套 蛋白質之目標抗原部位，該抗原部位係共價鍵連結到助手 T細胞抗原表位及，較佳地，連結到其它的免疫刺激序 列，較佳藉一般胜肽鍵經直接合成，用於FMDV感染之預 防及口蹄疫（FMD)之根除。 較特別地’本發明係關於利用作為免疫原之此胜肽組合 物以在動物（包括豬、牛、綿羊、山羊及易感染之野生種類） 誘發能在體外有效中和多種FMDV之多型菌株或血清型尤 高效價多株抗體，及使用作為疫苗之此組合物以預防及/或 減少無關血清型之FMDV感染之發生，並因此影響FMD之 根除。 本發明也關於用於組合物之胜肽，及免疫分析及/或包含 一或多個此等胜肽之診斷套組，及使用此等物質於哺乳動 物診斷FMDV之方法。 本發明亦關於用於組合物之胜肽，及免疫分析及/或包含 一或多種此類胜肽或其片段之診斷套組。 發明背景 口蹄疫（FMD)是家畜中最具經濟重要性的疾病。屬偶蹄 目（Artiodactyla order)的偶蹄動物，如牛、豬、綿羊和山羊 為易受感染者。引發劑，口蹄疫病毒（FMDV)，是小RNA病 毒科中的aphthovirus，具有編碼四種外套蛋白質（γρι·νρ4) 和非構造性多胜肽的正義RNA基因組。FMDV基因組、編 -4 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公爱）

1232108 五、發明說明（2 碼外套及非構造性蛋白質的區域以及藉裂解蛋白質之處理 路瓜係間示於圖 1 (從 Tesar 等人，virus Genes，1989; 2:29-44 而來）。 FMD是藉隔離及屠殺經感染及已遭暴露之動物，及藉著 含有化學減活病毒組合物的疫苗接種來控制。此等疫苗調 配物的顯著難處為FMDV之顯著的抗原歧異性。7個相異的 血清型係經描述：A，0, C，亞洲及南非SAT-1，2,3型，其每 一種可細分成多種亞型。血清型A，〇及亞州的病毒最普 遍。血清型A病毒最為多變，具有多於30種之亞型。 血清型之間並沒有交叉保護，因此自一種血清型感染而 復原或經對抗一種血清型病毒接種之動物仍易受其餘6個 血清型病毒感染。此外，血清型内之抗原變異程度係使得 有效對抗-亞型之疫苗可能無法保護性對抗相同血清型内之 另一亞型。因此，現在的疫苗是以包括每一相關血清型或 亞型之典型菌株之減活病毒混合物為主，該菌株藉監測在 當地流通之病毒菌株而決定。週期性監測田間分離物間之 抗原關係，包括出現之變異株，及用於疫苗製備物之病毒 係為預防爆發所需要者。 - 因此’目前疫苗的製造需要數種病毒株必須可生長及減 活，每一具確實效力，及產物必須以目前田野病毒株而定 期再調配以避免因新變異株出現造成保護功效之損失。用 於面對抗原變異而維持免疫原功效之製備多病毒株之方法 導致病毒株對病毒株間效力變異性及製造期間產量之惱人 問題。 -5 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項寫本頁) 裝： -1 . 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1232108 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 五、發明說明（3) 週期性依次改變減活病毒疫苗之需要在疫苗製造上產生 新的缺點。當疫苗改變成符合以新範圍病毒株發動之挑戰 時，發動的病毒株必須被人工的適應以在組織培養中有效 生長。進一步，適應組織培養之新出現亞型之篩選過程可 導致減少的保護性免疫原性，導致生產的進一步延緩 (Barteling 及 Vreesuijk，Vaccine，1991; 9:75-88 Brown， Vaccine，1992; 10:1022-1026)。 減活的FMDV疫苗的其它顯著缺點為與生物安全性及穩定 性有關。此病毒必須在高級密閉式的設施内製造，以避免 附近環境之污染。可能性的傷害限制夠資格的疫苗供應商 至極少的數目，限制疫苗的可用供應，及防礙世界上 FMDV先前不存在（FMDV-free)的區域中爆發FMD時的應變 努力。減活病毒產物的無毒並無法絕對確定。在歐洲數個 最近的疾病案例可追溯到未完全減活之病毒。此傷害阻止 疫苗在無疾病區域之使用，引起先前未受影響之區域缺乏 免疫保護。 不穩定性產品及各批產品間的多變性起源於減活病毒疫 苗之複雜及不明確的組合物。此等複雜的混合物必須定期 檢查以確定免疫效力。在一些國家，此經常是每年三次。 冷房是必須的以維持不穩定產品的效力，及這對某些國家 而言卻很難保證能做到。 有害效果之可能性為複雜組合物之另一結果。過敏性休 克雖是不常發生的問題，但是一旦發生就足以造成嚴重問 題。此等缺點已由 Brown (Mo/ecw/ar 〇/ P/corwavz’rws -6 - (請先閱讀背面之注意事項寫本頁) > F-裝 訂· 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1232108 A7 B7 五、發明說明（4) /n/ee"·d Deiec"·⑽的第 11 章，Semler 和 Ehrenfeld 出版， American Societ for Microbiology: Washington，DC，1989，第 179-191頁）所综合回顧。起因於目前FMDV疫苗的複雜組合 物之另外缺點是它不能藉血清學試驗分辨經免疫的動物及 已感染的動物（Lubroth 等人，Vaccine，1996; 14: 419-427)。 根據部位專一性之免疫原的疫苗可促進免疫診斷試劑的設 計以區別疫苗謗導之抗體及感染謗導，並因此確定疫苗接 種計畫之有效性。 現存商業疫苗的缺點已促進研究以更安全、更定義明確 的次單元體產品來取代它們。然而，為了可被接受，此類 產品需要做到其免疫原性和現在可得的減活疫苗相等，及 需要提供對抗抗原變異體之廣泛保護性。 設計FMDV之明確的次單元體疫苗之企圖開始自病毒顆粒 之破壞及其組成蛋白之鑑定（如圖1所示）。此導致相較於 完整的減活病毒顆粒具有相當大的免疫原活性損失 (Brown，1989)。然而，頃發現分離的夕卜套蛋白質（現在被統 一地定名為VP1 )，本身即具有引發中和抗體的能力及在牛 和豬的攻擊中引起免疫；雖然活性是亞型專一性，且其強 度比完整的減活病毒之活性低好幾倍。其它的病毒蛋白中 沒有一個能引發中和活性。（Laporte等人，C R Acad Sci Paris，1973; 276: 3399_3401 和 Bachrach 等人，J. Immunol.， 1975; 115: 1636-1641) VP1之中和活性集中注意於此蛋白質，且一開始它就被 慎重地考慮為基因工程次單元疫苗的候選者（Kleid等人， 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事 本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1232108 五、發明說明（5)

Science，1981; 214: 1125-1129)。重組 VP1 之免疫原性不足以 保護動物係很快變成明顯的。（Brown，1989; Brown，1992)儘 管如此，此工作導致V P 1上的免疫原性決定子的發現，及 基於合成胜肽之較有效力之部位·專一性的次單位疫苗之可 能性。 VP1係對免疫原性部位進行圖譜，藉由Strohmaier等人（J Gen Virol，1982; 59:295-306)測試藉溴化氰和蛋白質消化而 產生之VP1裂解產物；藉由Bittle和Lemer (W083/3547)測試 對應於最高變異區的合成胜肽之胺基酸序列；Acharya等人 (Nature，1989，337: 709-711)則藉著X-射線結晶圖譜鑑定位 於FMDV的表面暴露部位；乃藉Pfaff等人（EMBO J，1982; 7:869-874)篩選藉在VP1之顯著的兩性螺旋構形之預測而引 發中和抗體之胜肽。所有四個研究集中於VP1跨越殘基137-160(帶有引發中和抗體之決定子）的迴圈區域。 相對應於VP1的14M60區域的血清型-專一性胜肽，亦稱 為·’ G - Η迴圈n，得自所有7種血清型的FMDV分離株，已顯 示在天竺鼠可引發具保護程度之中和抗體（Francis等人， Immunology，1990; 69: 171-176)。很清楚地，此區域含有顯 性的免疫原性部位，其亦帶有病毒之血清型專一性。對此 等141-160 VP1胜肽之免疫原性的起始觀察係使用結合至載 體蛋白質KLH (鎖孔貝血藍蛋白）之合成胜肽而達成，此過 程忽略製造良好定義之合成免疫原之優點。然而，VP1合 成免疫原之發展係由DiMarchi和Brook (美國專利第4,732,971 號）所促成的，他們顯示得自亞型0分離株之2個VP 1序 -8 _ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） '

1232108 A7 B7 五、發明說明（6) (請先閱讀背面之注意事項 寫本頁) 列，連接到 200_213-Pro-Pro-Ser-141-158-Pro-Cys-Gly 嵌合構築 體，引發可保護乳牛對抗攻擊之抗體濃度。儘管如此，此 作用的功效係受限於胜肽免疫原之低免疫原性。需要1 - 5 毫克之高劑量以自同型舌頭皮下注射之攻擊（homotypic intradermalingual challenge)中達到保護，且獲得5毫克劑量之 動物中之一未受到保護。實際應用要求對以少量胜肽免疫 原之同型及異型排戰提供完全保護之疫苗調配物。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 對FMD V之有效胜肽疫苗之重要要素為自G-Η迴圈區域 篩選精確序列，其為用於最適呈現引發中和抗體之B細胞 抗原表位者。由胜肽最適展現此區域的架構可藉小如單一 胺基酸位置之轉移而受影響（Moore，iSyw/zei/c尸之第 二章·· d t/seri GwzWe，出版 Grat，WH Freeman and Company: New York，1992，pp 63-67)。包括免疫顯性G-H迴圈具中和 決定子之較佳合成免疫原已揭示包括殘基141-160 (WO 83/0537; Francis 等人，1990)、141-158 (US 4,732,971)、142-158 (Parry 等人，WO 91/03255)、137-168 (Morgan 和 Moore，Am J Vet Res，1990; 51: 40-45)、138-156 (Taboga 等人，J Viro卜 1997; 71:2602-2614)，及選自130-160胺基酸中之任何20個胺 基酸之連續序列（WO 83/0354)。很清楚地，對最適於呈現 G-Η迴圈VP1中和部位之獨特VP1片段並沒有一致的意見。 此外，先前的胜肽疫苗中之B細胞抗原表位的有限種類 並不足以刺激保護對抗高變異性FMDV所需之廣泛反應性 之中和抗體。直到現在，只有具相當有限的專一性之抗體 被誘發，及存有進一步的價值上限制，即使此等限制的特 -9 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1232108 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 五、發明說明（7) 點是由於長期發生點突變而引起逃脫突變種（Tab〇ga等人， 1997)。需要替代的方法來提供具免疫原性的胜肽疫苗，其 足以廣泛克服多種病毒株間的抗原變異性，及由逃脫突變 種的出現而引起的暫時變異。 另一個影響用於FMDV疫苗的合成胜肽之免疫原性的重要 因子為呈現給免疫系統中適合宿主的T輔助細胞抗原表 位。短的合成胜肽，只有在當他們除了抗體結合部位外， 還包含可以和輔助T細胞受體及類Η MHC分子反應之部 位，才可瞭解其作為疫苗的潛力（Babbitt等人，Nature，1985; 317:359-361)，單此141-160 VP1胜肽對天竺鼠和小鼠具少許 的免疫原性，指出序列中之適合彼等物種的τ細胞抗原表 位之存在。相對於彼等實驗動物之結果’牛和豬隻的疫苗 測試建議對VP1區域中的Τ細胞抗原表位的免疫反應性變異 太大所以不能為此等具經濟價值的物種個體提供適當的保 護。（Rodriguez 等人，Virology，1994; 205:24_33 ;及 Taboga等 人，J Viro卜 1997; 71:2606-2614)。最近，其它對應於 FMDV 構造蛋白區域之合成胜肽已被確認是可被T輔助細胞辨識 的位置。對應於VP1胺基酸21-40的胜肽被發現可以在母牛 中提供T細胞輔助至VP1中和迴圈序列（Collen等人，J Immunol，1991; 146:749-755);然而，此T細胞抗原表位的存 在不足以在母牛内提供一致的保護（Taboga等人，1997)。仍 然沒有關於可以選擇適當的T輔助細胞決定子的資料，也 沒有在已知的FMDV胜肤疫苗中B和T細胞抗原表位的最適 方位。 (請先閱讀背面之注意事項坪填寫本頁) 裝 寫夫 訂---J----- #

W 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1232108 A7 B7 五、發明說明（8) 仍然需要對FMDV之以合成胜肽為主的疫苗，其具優於傳 統疫苗之有效性及廣泛性。前面所討論之先前技術之胜月太 無法充份地滿足該需要。 本發明之一目的是提供符合這項需要的合成胜肽的FMDV 疫苗。被用來達成此目標的方法有： 1_辨認高親和性抗原表位的有效步驟。 2.藉組合化學以表現具少量胜肽合成物之b細胞及τ細 胞抗原表位的擴大功能的方法。 3·藉合併B細胞目標抗原表位與強效τ輔助細胞（Th)抗 原表位及供應對族群之可變免疫反應性之Th抗原表 位以增加B細胞目標抗原表位之免疫原性的方法，及 4·藉環狀限制之導入來穩定所欲的構形特徵。 合成胜肽已用於M抗原表位圖譜”以辨識位於蛋白質表面 之免疫顯性決定子或抗原表位，用於新疫苗及診斷之發 展。抗原表位圖譜利用一系列對應於有興趣蛋白質區域之 重疊胜肽以辨識參與抗體-免疫原性決定子交互作用之部 位。最普通的，抗原表位圖譜利用相當短長度的胜肽以精 確地檢測線性決定子。已知為"PEPSCAN”的抗原表位圖譜 之快速方法係以同時合成數百個8-14個胺基酸長度的重疊 胜肽，偶合至固相支持物為主，此偶合的胜肽被用來測試 它們接合抗體的能力。此法可以有效地定位線性決定子， 但是疫苗發展所需之免疫顯性抗原表位通常為高親和性且 不連續的抗原表位及為PEPSCAN方法難以定義者。（Meloen 等人，d⑽ 5紿/ C/z>2，1991; 49:231-242)。 -11 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝 〔再填寫大 訂---------- 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1232108 A7 B7 五、發明說明（9) 一替代方法係根據範圍自15至60個殘基之多種長度之套 疊及重疊胜肽組。此等較長的胜肽是由一系列耗費人力的 獨立固相胜肽合成法所合成，而非用快速且同時合成之 PEPSCAN合成法。所得套疊及重疊的胜肽組可接著用於接 合研究和實驗性免疫接種之抗體以辨識最佳呈現之免疫顯 性決定子的長胜肽，包括簡單且不連續之胜肽。此方法係 藉Wang之研究可得到例證：自HTLV I/II(US 5,476,765)和 HCV(US 5，106,726)的免疫顯性部位之圖譜；及其可用於篩 選可以最佳呈現HIV中和抗原表位之gp 120序列中之精準的 位置。（Wang等人，Science，1991;254:285-288)。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 組合胜肽庫已經設計成涵蓋廣範圍序列（包括因地理或族 群差異及高變異性抗原之暫時變異）而克服個別胜肽免疫原 之有限能力。例如，特別的胜肽抗原可設計成含有圍繞不 變殘基之結構架構而組成多種位置取代物。此組合維持免 疫顯性部位之構形且涵蓋現有及預期之抗原變異。此等結 合胜肽，對應於HIV和HCV的高變異性免疫顯性部位，曾 被Gras-Masse等人取名為n混合抗原表位n (mixotopes) (Peptide Research，1992; 5:211-216)，及被Wang等人稱為結構合成抗 原庫或 nSSALn。（WO 95/11998)。 π結構合成抗原庫”或”SSAL"係由包含於較大不變結構骨 架，可維持該部位之抗原性，診斷價值或治療生物活性之 相關胜肽序列組組成。 方程式1提供SSAL胺基酸序列的表示。 AAjj AA2j.......AAjj.......AAxj (Eqn.l) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（21〇 X 297公爱） 1232108 A7 B7 五、發明說明（10 ) 序列AAu到AA〗j表示SSAL的胜肽中之N端到C端的胺基酸 序列。每個在此資料庫中的胜肽具長度X，且x對每個庫為 常數。在每一胺基酸位置i，j自1至n變化，其中η代表在第i 位置已知（或所欲）之不同胺基酸之數目。缺口或插入之特 別引入或天然發生，如彼等列於表1之VP1序列，係藉以不 同X值分開SSALs之合成而提供。 方程式2是在SSAL序列之供應之可變位置i之胺基酸的相 對比率的總合之數學表示式。 η

XfAA^l (Eqn.2) 方程式2說明在每個位置i，η個個別胺基酸的莫耳分率總 合是合一的。在位置i的第j個胺基酸【AAij】的莫耳分率則 由參與者篩選，根據（1)在自然界發現的FMDV血清型中的 亞型（subtype)病毒株之間的AAu之普遍性，及，視需要 地’（2)為了預期逃脫的突變種而欲包括相似的胺基酸。胺 基酸ΑΑυ —般係選自天然發生的胺基酸，但可包括修飾過 的胺基酸，如鳥胺酸和正白胺基酸以及非天然的胺基酸， 如D -胺基酸。藉著下列的公式，具長度X之SSal變異序列 可在單一合成中同時製備。 SSAL的序列係藉線性排列相關抗原族之一級胺基酸序列 及藉辨識線性排列内之不變及變異位置而決定。不變位置 通常代表SSAL的結構骨架。在SSAL内的簡併性係藉存有 相對於任意原型序列之不同胺基酸殘基之線性排列内之位 置而決定。決定何者胺基酸在每一不變位置後，對SSAL庫 之可變位置之簡併性程度係由呈現每一替代胺基酸之變異 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） —ϊ—^------裝— (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂：—Γ----. 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 ·γ · 1232108 A7 -----—___B7__ 五、發明說明（11 ) 體之數目而決定。SSAL係接著以在不變位置之單一胺基酸 及在可變位置之必要簡併性而合成。 在變異位置的胺基酸殘基之相對比例可被設定成彼此相 等’或者他們可以以不等量的比例呈現。在一較佳具體實 施例’在一或多個變異位置的胺基酸的比例被設定成對映 發現於天然序列之每一胺基酸之相對感染率。例示於圖2 及3之SSAL庫顯示此等較佳具體實施例，其中右下角所附 的數字（subscripts)顯示在SSAL之每個變異位置之個別殘基 之相對量。必須要注意的是存於SSAL的大部份胜肽可代表 在自然界中尚未觀察到的變異胺基酸之組合。ssal之此特 欲可藉由本發明之胜肽組成提供對新的、剛出現的FMDV 變異株所增加之抗FMDV感染的保護程度。 # 經 濟 部 智 慧 財 產 局 員 工 消 費 合 作 社 印 製 因此’在簡單的方法，特定胺基酸，及视需要的它們在 SSAL内之每一位置之出現頻率，係藉用於線性排列之不同 抗原之初級序列而定義。在逃脫突變株之預期下，可在線 性排列之抗原表位内之變異位置之天然存在的未知胺基酸 可視需要的併入庫中。例如，特定類型（如疏水性、帶電 性、中性或極性）胺基酸之數種或全部殘基，可在任何變異 位置被併入。在特定位置併入之胺基酸類型可由線性排列 内之此變異位置所發現之主要胺基酸類型來決定。 被稱為’’濫叉Th ”的抗原表位引發有效的τ細胞輔助，且 可以和Β細胞的抗原位結合，其藉本身為差的免疫原性而 產生強效的胜肽免疫原。定義良好之濫交Th/B細胞抗原表 位攸合胜肽可誘發Th反應且所得抗體反應在大部份遺傳歧 ~ 14 -

1232108 A7 B7 五、發明說明（13) 請 先 閱 讀 背 之 注 意 事 項 再 填 寫 本 頁 SSAL Th抗原表位。可變位置及較佳胺基酸之列舉者可用 於 MHC-結合基序（Meister 等人，Vaccine，1，1995; 13:581-591);例如，在\^0 95/11998描述為”88八[1丁111’，之簡併性丁11 抗原表位係模擬自取自痲疹病毒F蛋白（Partidos等人，1991) 之濫交抗原表位。SSAL1TH1 (W0 95/11998)係設計成用於與 LHRH目標胜肽抗原前後縱排。像痲疹抗原表位， SSAL1TH1遵循羅士拔（Rothbani)序列及1、4、5、8規貝丨J。 (請參見SSAL1TH1中的第6, 9, 10, 13個位置）： 1 5 10 15

Asp-Leu-Ser-Asp-Leu-Lys-Gly-Leu-Leu-His-Lys-Leu-Asp-Gly-Leu-

Glu lie Glu IleArg lie lie lie Arg lie Gly lie Val Val Val Val Val Val Val Phe Phe Phe Phe Phe Phe Phe 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 帶電價殘基Glu或Asp係加到位置1以增加圍繞在Th疏水面 的電價。此兩性螺旋體的疏水面則藉在2，5，8，9，10， 13及16的疏水性殘基而維持。位置2，5，8，9，10和13被 改變以提供具結合至廣範圍MHC限制元素的能力之外觀。 SSAL特徵的淨效果為擴大人造Th (WO 95/11998)的免疫反應範 圍。如S SAL之所有變異體係在單一固相胜肽合成以目標B 細胞抗原表位及其它序列前後縱排而同時製得。 胜肽免疫原一般比蛋白質還要柔韌而且較不傾向保持任 何較佳結構。因此，藉引進環狀限制來穩定胜肽免疫原是 有用的。一個正確地環狀胜肽免疫原可以模擬並保留標的 抗原表位的構形及藉此引發位於真正分子上的部位之交叉 -16 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1232108 A7 B7 五、發明說明（14) 瓦 Μ 性的抗體（Moore，Syntheiic Peptieds A User’s guide 第二章 sii 版：Grant，WH Freeman及Company: New York，1992，63 - 67 頁）。代 表FMDV免疫顯性VP1迴圈區域之胜肽已藉在胺及羧端添加 半胱胺酸殘基並藉2個半胱胺酸殘基之氧化而完成（WO 83/03547)。然而，仍然需要VP1迴圈區域之更有效的胜肽 類似物。 本發明已提供更具免疫上有效構形之胜肽。此等已藉發 現彼等導致天然抗原表位之較正確模擬之半胱胺酸之位置 而得（Valer 等人，Biomedical 胜肽，Proteins 及 Nucleic Acids， 1995 ; 1:133-140)。 發明概述 本發明提供以上述之胜肽技術和胜肽設計要素而設計成 的胜肽免疫原，即，精確的抗原表位圖譜、SSAL庫胜肽、 強效的Th抗原表位的設計、及環狀限制。此等胜肽免疫原 為有效地合成FMDV疫苗的基礎。此類胜肽係較佳於以最 適位置及構形限制之VP1中和部位之呈現，藉FMDV血清型 變異所需之廣範圍序列之呈現，及其廣反應性Th反應性。 本發明進一步提供此類作為免疫原之胜肽組合物之用 途，包含於其中之每一胜肽包括衍生自口蹄疫病毒（FMDV) 之VP1外套蛋白質之目標抗原部位，較佳該抗原部位共價 連接至輔助T細胞抗原表位，及，視需要的，其它免疫刺 激序列，較佳藉經由直接合成之一般胜肽鍵結，用於預防 FMDV感染及FMD之根除。 較特別的，本發明係關於此等作為免疫原之胜肽組合物 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事 寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1232108

五、發明說明（is) 足用途以在動物（包括豬、牛、綿羊、山羊及易受FMDV感 染之動物）引發可有效中和（在體外）FMDV之多種病毒株或 血清型之多株抗體，及此種組合物作為疫苗之用途以有效 預防，及/或減少FMDV感染（無關其抗原歧異性）之適應 症’並因此導致FMD之根除。 本發明亦關於用於組合物之胜肽，及免疫分析及/或含有 一或多個此等胜肽或其片段之診斷套組。 本發明的目標抗原部位係經由以衍生自FMDV A12病毒株 之VP1蛋白質之胺基酸序列資料為主之抗原表位圖譜而篩 選並代表對位於FMDV VP1蛋白質之中和決定子，胺基酸 134至168之最適呈現的框架。此等殘基如表丨（SEq ID n〇:i) 之胺基酸”134-169’·所示，由於在位置142之間隙之存在，其 為引入前後縱排之目的。它們在本文中如胺基酸134-169， 但殘基134-168 (SEQ ID N0:1)為下列討論之實際片段已被暸 解。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 本發明之目標抗原部位係較佳藉對2個天然胺基酸之半胱 胺酸之取代而修飾自G - Η迴圈區域之天然存在之FMDV VP1序列，及此等半胱胺酸間之雙硫鍵形成使產生半胱胺 酸間之具自約20至約25個殘基之環狀結構（如SEQ ID NO:2)。其它血清型中對應於VP1的目標抗原部位可衍生自 相關血清型之同源G - Η迴圈區域片段。 本發明進一步提供具有根據含包埋於不變結構架構内之 高度可變位置之一致性序列之FMDV VP1目標抗原部位，其 中對每一高度可變位置之最常用胺基酸係被提出，如藉分 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1232108 A7 B7 五、發明說明（16) 析得自相關於專一性FMDV血清型之FMDV亞型之vpl序列 而測定。 本發明進一步提供根據胺基酸SEq ID N〇:1的最佳目標抗 原胜肽架構之結構性合成抗原庫（或SSALs)，其中每個 SSAL是由一組有次序且相關的胜肽所組成，胜肽是在單一 胜肽合成反應中同時製造，具有利用可以維持目標抗原胜 肽的抗原性的不變構造架構上的序列。 此外，胜肽的目標部位及本發明的類似物乃藉前後縱排 以共價鍵結到合成免疫刺激要素（包括得自耶爾森氏菌 (Fer如⑷（SEQ ID NO:22)之免疫刺激性侵染素胜肽（Inv)，衍 生自外來病原之濫交Th抗原表位、衍生自FMDV蛋白質（如 序列鑑別號碼24，表5 )之自體同源Th抗原表位，人工Th抗 原表位（如：SEQIDNO:25和26，表6)及其它藉直接合成的 抗原表位而成為免疫原。本發明胜肽可以下式表示·· (A)n - ( FMDV 抗原）-(B)。- (Th)m _ X 或

(A)n - (Th)m - (B)。- (FMDV 抗原）-X 或 (FMDV 抗原） (B)。- (Th)m - (A)n - X 或

(Th)m - (B)。 (FMDV 抗原）-(A)n - X 其中 每個A各自為胺基酸或一般性免疫刺激序列； 每個B各自為胺基酸或如以下所進一步定義之化學連接 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注 意事寫 本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1232108 A7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 Β7 五、發明說明（17 ) 基； 每個Th各自為組成輔助T細胞抗原表位之胺基酸序列， 或免疫增強類似物或其片段； ·’ FMDV抗原π為如以下進一步定義之合成胜肽抗原； X 是胺基酸 a-COOH 或 cx-CONH2 ; η為自0至約10 ; m為自1至約4 ;及 〇為自0至約10。 亦提供佐劑及/或遞送媒劑及投遞工具以及其它例常併入 疫苗配方的成份，及劑量說明，使得針對抗FMDV VP1標的 抗原之多株抗體被產生。 本發明係關於作為免疫原之胜肽組合物之用途以在動物 (包括豬、牛、綿羊、山羊和易受FMDV感染的野生物種） 引發高效價多株抗體的產生。：FMDV保護機制，藉抗體中 介及藉本發明胜肽組合物誘導，可有效地中和（在體 外）FMDV之多種病毒株（與血清型或亞型無關），並因此導 致FMDV感染之保護性免疫及協助fmd之根除。 選__式簡要說明 圖1描寫FMDV基因組的組織，藉轉譯產品被切割成病毒 蛋白的處理途徑，及外套和非構造蛋白的命名。 圖2A描述結構合成抗原庫”a SSAL (1)(完整）（134-169)"之 胺基酸組合物。下標表示每個在其對應位置的胺基酸的相 對數量。 圖2B描述結構合成抗原庫，·Α SSAL⑴（完整）[134(N—C)- 本紙張尺度適用中國國窆煙進日M --- a 公 97 2 X 1U NJ Ϊ V -

1232108 A7 B7 五、發明說明（18) 158(Q—C)-169]’’之胺基酸組合物。 圖3A描述結構合成抗原庫nA SSAL (2)(完整）（134-169广之 胺基酸組合物。下標表示每個在其對應位置的胺基酸相對 數量。 圖3Β描述結構合成抗原庫’’A SSAL (2)(完整）[134(N->C)-158(Q—C)4l69]’•之胺基酸組合物。 圖4 A描述結構合成抗原庫”0 SSAL (完整）（134-169)”之胺 基酸組合物。 圖4 B描述結構合成抗原庫·’0 SSAL (完整）[134-158(T->C)-169]’’之胺基酸組合物。 發明詳細說明 本發明係關於作為免疫原之胜肽組合物之用途，該組合 物包括一或較佳為多個胜肽，含於其中之每一胜肽包括衍 生自口蹄疫病毒（FMDV)之VP1外套蛋白質之目標抗原胜 肽，該抗原胜肽較佳為共價連接至輔助T細胞抗原表位及 視需要連接至免疫刺激序列。共價連接係較佳藉經由直接 合成而產生之胜肽键。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 胜肽組合物係有用於動物之FMDV感染之預防，且可預期 協助根除FMD。較佳地，本發明係關於此等胜肽組合物作 為免疫原之用途以在動物（包括豬、牛、綿羊、山羊及亦受 感染野生物種）產生可，在體外，有效中和FMDV之多型病 毒株或血清型之高效價多株抗體，及此等組合物作為疫苗 之用途以預防無關血清型之FMDV感染，並因此有效根除 FMD。 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1232108 A7 B7 五、發明說明（19) (請先閱讀背面之注意事項寫本頁) 本發明亦關於用於組合物之胜肽，及免疫分析及/或含有 一或多個此等胜肽或其片段之診斷套組。免疫分析及/或含 有-或多個此等胜肽或其片段之診斷套組係有用於辨識疫苗 一誘導的抗體及藉感染誘導之抗體，並因此可用於篩選 FMDV感染之存在及/或監測疫苗接種計畫之有效性。 本發明提供在哺乳動物診斷FMDV感染之方法，包括下列 步驟： (a) 連接根據申請專利範圍第1項之胜肽至固體支持物， (b) 暴露連接至該固體支持物之胜肽至含有得自該哺乳 動物之抗體之樣品，在有利於抗體結合至胜肽之條 件下，及 (c) 檢測抗體（結合至連接於該固體支持物之該胜肽）之 存在。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 包括主要中和FMDV VP1 ( G - Η迴圈之目標抗原序列係基 於潛在迴圈的構形及對G _ Η迴圈之殘基之表面暴露之考慮 而最適化，如推論自藉網址為http://www.pdbids之Brookhaven National Laboratory 及 Acharya 等人，Nature，337:709-111， 1989之報導而製造之FMDV VP1之三維構造。用於環化作用 之候選位置係併入胜肽構築體之設計，且經修飾及未經修 飾之序列係藉共價連接至含或不含其它免疫刺激序列之濫 交Th抗原表位而合成為免疫原，藉連續合成。經修飾之胜 肽構築體係以特殊雙硫鍵之併入而合成為環狀胜肽，使得 安定可動胜肽成可能的較為生物上相關構形。藉超免疫血 清之製備及在FMDV中和作用分析之效能之血清的測試鑑 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1232108 A7 B7 五、發明說明（) 請 先 閱 讀 背 面 之 注 意 事 項 S< 寫 本 頁 定包括相關免疫原性之VP1抗原部位之合成構築體。特別 地，本發明之目標抗原部位係經由基於FMDV病毒性A12之 VP1蛋白質之胺基酸序列的抗原表位圖譜而篩選（實例2 )。 目標抗原胜肽之架構，示於表1為SEQ ID NO]之AA134. 169，已發現最適於位於FMDV VP1之G - Η迴圈中和決定子 之免疫原呈現。抗原胜肽之目標抗原部位可藉在原來的 FMDV VP1序列中的134位置（天門冬醯胺）和157位置（半胱 胺酸）上用半胱胺酸來取代，及在此二個半胱胺酸取代物之 間形成雙硫鍵而產生環形構造（SEQ ID ΝΟ:2)而修飾自天然 存在的FMDV VP1序列。該環形構造也包括取自VP1的134-157片段的一端之額外的1至13個胺基酸，排除單一雙硫鍵 迴圈的構造被保留（見表1之SEQ ID N0:3 )。如本發明之目 標抗原胜肽的實例，具下列序列之FMDV VP1之目標抗原已 被提供半胱胺酸取代物以黑體字標出）： Cys-Lys-Tyr-Ser-Ala-Ser-Gly-Ser-Gly-Val-Arg-Gly-Asp-Phe-Gly-Ser-Leu-Ala-Pro-Arg-Val-Ala-Arg-Cys-Leu-Pro-Ala-Ser-Phe-Asn-Tyr-Gly-Ala-Ile-Lys (SEQ ID N0:2) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 同樣地，其他血清型之VP1的對應目標部位可衍生自從 相關血清型之同源片段。舉例來說，替代性之胜肽類似物 可根據得自FMDV血清型0和Asia之對應序列經由如示於表 1具下列代表性序列之序列線性排列而製得： Cys-Lys-Tyr-Ser-Lys-Ala-Val-Pro-Asn-Val-Arg-Gly-Asp-Leu-Asn-Val-Leu-Glu-Lys-Ala-Ala-Arg-Cys-Leu-Pro-Thr-Ser-Phe-Asn-Tyr-Gly-Ala-Ile-Lys (SEQ ID N0:5) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1232108 A7 B7 五、發明說明（η) 及

Cys-Pro-Tyr-Gly-Glu-Thr-Thr-Ser-Arg-Arg-Gly-Asp-Met-Ala-Ala-Leu-Ala-

Gln-Arg-Leu-Ser-Ala-Cys-Leu-Pro-Thr-Ser-Phe-Asn-Tyr-Gly-Ala-Val-Lys (SEQ ID NO:7) 本發明進一步提供環狀和線性FMDV VP1目標抗原胜肽， 具一致性保留序列，此序列是根據在SEQ ID N0:1 (AA 134-169)中一個固定之最佳構造骨架上插入高度變異性位置， 而其中此高度變異性及其代表性胺基酸序列的採用可藉分 析比對一特定FMDV血清型之相關病毒群的VP1序列而定 出。如此等本發明之一致序列之實例，提供衍生自血清型 A(SEQ ID N0S:8, 9)、血清型 〇(SEQ ID NOS:10, 11)、及血清 型Asia (SEQ ID NOS: 12, 13)之FMDV變異株之一致序列，如 表1所示。 本發明進一步提供環狀和線性之結構合成抗原庫，根據 SEQ ID N0:1之最佳抗原目標胜肽架構，其中每個SSAL是 由一組有規律的相關胜肽組所組成，他們是藉在可以維持 目標胜肽抗原之抗原性的不變構造的骨架上加上序列，以 單一胜肽合成同時製得。如本發明的此等SSALs之實例， 提供9個SSALs，具衍生自如表2，3及4所示的血清型 A(SEQ ID NOS:14-17，圖 2A，2B，3A，3B)、血清型 0(SEQ ID N0S:18, 19，圖 4A，4B)和血清型 Asia(SEQ ID NOS:20, 21，35) 之複合的FMDV亞型的組合序列。 目標V P 1部位為短胜肽序列。當以它們作為本發明之胜 肽，此等胜肽通常為弱免疫原。此等短胜肽可藉化學鍵結 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 請 先 閱 讀 背 面 之 注 意 事 項

頁 經濟部智慧財產局員工消費合·作社印製 1232108 A7 B7 五、發明說明（22) 至衍生自外來病原包括，但不限於，肝炎表面和核心抗原 Th抗原表位（HBs Th和HBc Th)、百日咳毒素辅助τ細胞抗原 表位（PT Th)、破傷風毒素輔助τ細胞抗原表位（TT Th)、麻 疹病毒F蛋白輔助T細胞抗原表位（MVF Th)、砂眼披衣菌主 要外膜蛋白輔助T細胞抗原表位（CT Th)、白喉毒素輔助τ 細胞抗原表位（DT Th)、鐮形虐原蟲環形孢子輔助τ細胞抗 原原位（PF Th)、曼森氏住血吸蟲三鱗酸同質異構膦輔助τ 細胞抗原表位（SM Th)、大腸桿菌TraT輔助T細胞抗原表位 (TraT Th)之溢交Th抗原表位而更具免疫潛力。篩選於此的 病原衍生的Th為ί監交Th之代表實例係列美國專利us 5,759,551 中的 SEQIDNOS:2-9 和 SEQIDNOS:42-52; Stagg 等人 所述之 CT Th P11 (如/m則⑽/叹y，79P3; 79: 1-9);和 Ferrari 等 人所述之HBc 胜肽 1991; 88:214-222)，且 併於此中作為參考。溢交Th亦包括衍生自FMDV蛋白質之 自體Th抗原表位（表5，如SEQ ID NO:24 )(併入此中作為參 考）或如表6所示（如SEQ ID NO:25, 26, 36, 37和38)之經設計 人工Th抗原表位。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 本發明免疫原都具部位專一性之免疫反應性以提供FMDV 之主要中和決定子之精確目標❶特殊實例係提供作為本發 明胜肽之較佳具體實施例提供如SEQ ID NOS:2, 11之特定相 關範例。實例，如SEQ ID NO:2, 11。進一步實例係提供作 為本發明之較佳胜肽，其提供合成免疫刺激要素至FMDV VP1抗原部位之連接（如表7-10中之SEQ ID NO:27-34)使得在 遺傳歧異性寄主族群產生廣泛反應性強效中和抗體，對抗 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公爱） 1232108 A7 B7 五、發明說明（23) 位於FMDV VP1蛋白質之目標部位。此等抗VP1抗體導致有 效的FMDV中和作用並因此保護並免於FMDV感染。 在主動免疫方面，此中之用語π免疫原”係關於胜肽組合 物，其可誘導抗FMDV的VP1蛋白質上G - Η迴圈部位之抗 體，導致有效地FMDV多種血清型之中和作用，並因此預 防FMDV感染。本發明之胜肽組合物較佳包括含有濫交輔 助T細胞抗原表位（Th抗原表位）及視需要之其它免疫刺激 序列之合成胜肽。Th胜肽係以間隔區（如Gly-Gly )共價連接 至FMDV VP1目標抗原部位（如SEQ ID N0S:1-21，35)，使得 連結至目標抗原部位的N端或C端，以便引起有效的抗體反 應。免疫原亦可包括一般性的免疫刺激要素，例如，對應 於得自耶爾森氏菌•stW)之侵染素蛋白質之區域 (Brett 等人，jEwr /mrnwwi)/，1993，23 : 1608_1614) (SEQ ID NO:22)。當存在，一般性免疫刺激區域可包括經胜肽連接 之間隔區。 本發明的胜肽可藉下式表示： (A)n - ( FMDV 抗原 MB)。- (Th)m - X 或

(A)n - (Th)m - (B)。- ( FMDV 抗原）-X 或 (FMDV 抗原）-(B)。- (Th)m - (A)n - X 或

(Th)m - (B)。- ( FMDV 抗原）-(A)n - X 其中 26 一 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 請 先 閱 讀 背 面 之 注 意 事 f 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1232108 A7 B7 五、發明說明（24) 每個A各自為胺基酸或一般性免疫刺激序列。 (請先閱讀背面之注意事項寫本頁) 每個B各自為選自下列所組成之群··胺基酸， -NHCH(X)CH2SCH2CO-，-NHCH(X)CH2SCH2CO(e_N)Lys-， -NHCH(X)CH2CH2S-琥珀醯亞胺基（s-N)Lys-，及 -NHCH(X)CH2S-(琥域酿亞胺基）_; 母個Th各自為包括輔助τ細胞抗原表位，或其免疫增強 類似物或其片段之胺基酸序列。 ’’ FMDV抗原”為進一步如下所定義之合成胜肽抗原； X 為胺基酸 oc-COOH 或 a-CONH2 ; η為自0至約10 ; m為自1至約4 ;及 〇為自0至約10。 本發明胜肽免疫原包括自約35至約100個胺基酸殘基，較 佳為自約45至約90個胺基酸殘基及更佳為自約50至約75個 胺基酸殘基。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 當A為胺基酸，它可為任何非天然存在或天然存在的胺 基酸，非天然存在的胺基酸包括，但不限於，β -丙胺酸、 鳥胺酸、正白胺酸、正纈胺酸、羥基脯胺酸、甲狀腺素、 γ -胺基丁酸、高絲胺酸、瓜胺酸及其類似物。天然存在的 胺基酸包括丙胺酸、精胺酸、天門冬醯胺、天門冬胺酸、 半胱胺酸、麩胺酸、麩胺醯胺、甘胺酸、組胺酸、異白胺 酸、白胺酸、離胺酸、甲硫胺酸、苯丙胺酸、脯胺酸、絲 胺酸、蘇胺酸、色胺酸、酪胺酸及纈胺酸。此外，當m大 於，及2或較多個A為胺基酸時，每個胺基酸可各自為相同 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公爱) 1232108 A7 B7 五、發明說明（25 ) 或不同。 當A為侵染素區域，它為得自耶爾森氏菌種之侵染素蛋 白質之免疫刺激性抗原表位。免疫刺激性質係起因於侵染 素區域與呈現於T細胞之βΐ整聯蛋白分子反應之能力，特 別是主動免疫或記憶型Τ細胞。發現可與βΐ整聯蛋白交互 作用之知：染素區域之專一性序列已經由Brett等人描述（五wr J /mmw⑽/，1993)。用於連接至濫交Th抗原表位之侵染素區域 (Inv)之較佳具體實施例已先前描述於美國專利第US 5,759,551 號，且併於此中參考。較佳Inv區域具序列：Thr_Ala_Lys_Ser_

Lys-Lys-Phe_Pro-Ser_Tyr-Thr-Ala-Thr_Tyr_Gln-Phe (SEQ ID NO : 2)，或為 得自另一耶爾森氏菌種之對應區上之免疫刺激性同源物。 此類同源物因此可含有取代、刪除或插入胺基酸殘基以適 應菌株與菌株間的變異，排除同源物保有免疫刺激性質。 (A)n最佳包括如Gly-Gly的間隔區，經由inv區域便能連到此 胜肽上。在一個較佳具體實施例中，（a)3的排列次序是侵 染素（Inv)區域、甘胺酸及甘胺酸，即（Inv)_Giy_Giy。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 B為間隔區及為胺基酸，其可為如上述之天然存在或非 天然存在之胺基酸。每個B可各自為相同或不同。B之胺基 酸亦可提供；監交Th抗原表位及FMDV VP1抗原部位（如SEQ ID NOS : 1-21及35 )及其反應性及功能免疫原性類似物之間 隔區。除了在生理上自B細胞抗原表位分隔Th抗原表位， Gly - Gly間隔區可打亂藉Th抗原表位與FMDV VP1抗原之聯 接所創造之任何人工之二級結構及因此消除Th及/或B細胞 反應之干擾。B群中的胺基酸亦可形成間隔區，其作為增 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1232108 A7 B7 五、發明說明（26) (請先閱讀背面之注意事項再碑寫本頁) 強Th及IgE區域之分隔之彈性絞鏈。編碼彈性絞鏈之基因序 列的實例係發現於免疫球蛋白的重鏈絞鏈區。彈性絞鏈的 序列通常富含脯胺酸。一特別有用的彈性絞鏈係藉？1：0-?1*0-Xaa-Pro-Xaa-Pro (SEQ ID NO : 23)所提供，其中 Xaa 為任何胺 基酸及較佳為天門冬胺酸。由於B的胺基酸提供之構形上 的分離使得呈現的胜肽免疫原和適當的Th細胞及B細胞之 間具較有效的交互作用，且因此加強對Th抗原表位及抗體 誘發抗原表位的免疫反應。

Th是包含Th抗原表位的胺基酸（天然或非天然胺基酸）序 列。Th抗原表位可由連續或不連續的抗原表位組成。因此 並不是Th的所有胺基酸都是抗原表位之必要部份。因此， Th抗原表位，包括Th抗原表位之類似物及其片段，可增強 或刺激對FMDV VP1抗原部位（如SEQ ID NOS : 1-21，35)及 其免疫類似物的免疫反應。免疫顯性及ί監交的Th抗原表位 在具廣泛歧異之MHC型的動物及人類族群中為高度及廣泛 反應性者（Partidos等人1991 ; US 5,579,551)。本胜肽的Th區域具 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 有自約10至約50及較佳為自約10至約30個胺基酸。當存有 多個Th抗原表位時（亦即m ^ 2 )，每個Th抗原表位各自為 相同或不同。Th片段為Th抗原表位的連續部份，此部份足 以有效地增強或刺激對FMDV VP 1抗原部位的免疫反應。 本發明的Th抗原表位包括例如，但不限於，衍生自外來 的病原的 Th，如：HBs Th、HBc Th、PT Th、TT Th、MVF Th、CT Th、DT Th、PF Th、SM Th、TraT Th ;從 FMDV 蛋白 質來的自體Th (表5，如SEQ ID NO:24);經設計的人工 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公爱） 1232108 Α7 Β7 五、發明說明（27 ) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

Th (表 6，如 SEQ ID NOS:25, 26, 36, 37 和 38);及免疫上功能 類似物。免疫上功能Th類似物包括免疫增強類似物，反應 性類似物及任何此等Th抗原表位之片段。免疫上功能Th類 似物較佳併入保存型取代，加入，刪除及插入自1至約10 個胺基酸殘基於Th抗原表位，其不實質上修飾Th-抗原表 位之Th刺激功能。 ，’FMDV VP1’1抗原部位指的是FMDV A12病毒株（即序列鑑 別號碼1 )的VP1蛋白質上之第134-169胺基酸，及其它血清 型的FMDV病毒株的VP1蛋白質中與FMDV A12 VP1之134-169的序列相類似的片段。FMDV VP1抗原部位亦指具衍生 自血清型A、Ο或Asia的FMDV病毒株之一致性序列之胜 肽，對應至FMDV A12病毒株之VP1蛋白質之胺基酸134_ 169 ;及胜肽符合SEQ ID NOS:14，16，18和20之遺傳上定 義。FMDV VP1抗原部位也指如此中定義之SSAL成員中之 胜肽。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 根據本發明之FMDV VP1抗原部位（如SEQ ID NO]-21，35) 之反應性及免疫上功能類似物，可進一步包括保存性取 代，加入，刪除或插入自1至約4個胺基酸殘基，排除可引 發與FMDVVP1抗原部位（如，SEQIDNOS:l-21及35)之免疫 反應反應性之胜肽類似物。保存性取代，加入，及插入可 以如此中定義之天然或非天然胺基酸而達成。 目標抗原部位係較佳修飾自藉以半胱胺酸取代在位置134 之天然天門冬醯胺及在位置157之麩胺醯胺之天然存在 FMDV VP1序列之G - Η迴圈區域，及此等半胱胺酸間形成 -30 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1232108 A7 B7 五、發明說明（28) 雙硫鍵使產生環狀結構（SEQ ID N0:2)。此等環狀構造亦可 包括取自VP1的134-157片段之終端之1至13個額外胺基 酸，排除保留單一雙硫鍵迴圈之構造（SEQ ID N0:3)。自天 然序列之修飾物係藉在表1中以（N—C)、（Q—C)、（R—C) 和劃底線表示者。含有導入半胱胺酸之胜肽序列可提供如 SSAL，如 SEQ ID N0S:15, 17, 19，且此等 SSALs 也可用於作 為FMDV VP1抗原部位。 因此，本發明之較佳胜肽免疫原為包含FMDV VP1抗原部 位（如SEQ ID N0S:1-21和35)或其免疫上功能類似物及Th胜 肽之胜肽。較佳胜肽免疫原為彼等包含FMDV VP1抗原部位 或其反應性及免疫上功能類似物之構築體）；間隔區（如 Gly-Gly);為 HBs Th、MVF Th、TT Th 和自體性 FMDV Th (如 SEQ ID NO:24)、人工的 Th (SEQ ID NOS:25, 26, 36, 37 和 38 )、 或其類似物；及，視需要的，Inv區域（SEQ ID NO:22)或其 類似物之Th抗原表位。 含具二或多個Th抗原表位之本胜肽免疫原之混合疫苗可 增強在廣泛族群中的免疫功效，及因此提供對FMDV VP1抗 原部位之增進的免疫反應。 本發明之胜肽免疫原可用普通技藝人士所熟知之化學方 法製造。例如，參見Fields等人，Synthetic Peptides中之第3 章：A User’s Guide, Grant，W.H. Freeman & Co.出版，New York，NY， 1992，第382頁。因此，胜肽可用自動化美利弗德（Merrifield ) 固相合成法來合成，以t - Boc或Fmoc化學保護α · NH2，使用 側鏈保護之胺基酸於，例如，應用生物系統胜肽合成儀 -31 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 請 先 閱 讀 背 面 之 注 意 項

頁 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1232108 A7 B7 五、發明說明（29) <請先閲讀背！T寫會) 430A 或 431 型（Applied Biosystems Peptide Synthesizer Model 430A 或 431 )。包括對B及T細胞抗原表位之結構合成抗原庫（SSALs ) 之胜肽構築體之製備可藉提供在所給可變位置偶合之替代 性胺基酸之混合物而達成。 所欲胜肽免疫原組合完成後，依標準步驟處理樹脂，將 胜肽自樹脂上切下，且去保護胺基酸支鏈上的功能基。游 離的胜肽以HPLC純化及生化上特徵化，例如，胺基酸分析 或定序。胜肽純化及特徵化的方法為一般技藝熟練人士所 熟知。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 其他製造含本發明之含VP1 G-Η迴圈及Th部位的合成胜肽 構築體的化學方法包括藉"硫醚n (thioether)連結的形成，將 鹵乙醯化及半胱醯基化的胜肽結合。例如，在含Th胜肽的 C端加上半胱胺酸，此半胱胺酸的硫醇基（thiol group)可用於 一個親電子基如Na氯乙醯基-修飾的或順丁烯二醯亞胺-衍 生的離胺酸之α -或ε - NH2基形成共價鍵，其依次連接至 FMDV VP1抗原部位（如，SEQ ID NOS : 1-21)或其反應性及 免疫上功能類似物的N端。以此方式，可得到含Th- (FMDV VP1抗原部位）或其可逆物（FMDV VP1抗原部位）-Th之構築 體。 此免疫原亦可被聚合。聚合作用可例行方法例如藉免疫 原與交聯劑之反應完成，例如戊二醛離胺酸殘基之-NH2基 團反應而冗成。另一方法，合成免疫原，如n (A)n - Thm -Gly-Gly-(FMDV VP1抗原部位）-χ ”，利用添加額外的半胱胺 酸至合成免疫原之N -端進行聚合或共同-聚合。N -端半胱 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 χ 297公爱） 1232108 A7 B7 五、發明說明（3〇 ) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 胺酸的硯醇基可用於與_乙醯基-修飾的胺基酸或順丁烯二 酸亞胺-衍生的接在一個分支的多-賴胺酸核心分子（如 K：2K，K4K2K或K8K4K：2K )的N端之離胺酸殘基的α _或卜nh2基 形成n硯醚”鍵。本免疫原也可經由在分支的多-離胺酸核 心樹脂上直接合成所欲胜肽構造而聚合為分支結構（Wang等 人，Science，1991 ; 254:285-288)。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 或者，較長的合成胜肽結合物亦可另選擇熟知的核酸選 殖技術來合成。許多分子選殖技術的標準手冊均提供詳細 的操作流程，藉基因重組DNA和RNA的表現以製造包括本 發明Th抗原表位的胜肽。建構表現本發明胜肽的基因，胺 基自义序列係反轉譯成核酸順序’較佳係使用將被用來表現 該基因的生物的最佳密碼。接著，製造編碼胜肽之基因， 藉典型地合成編碼胜肽及必需調節元素之重疊寡核甞酸。 合成的基因係經組合並插入所欲之表現載體。本發明所包 含的合成核酸順序包括彼等編碼本發明之胜肽，其免疫功 能的同系物及類似物’及其特徵為改變非-編碼順序卻不改 變藉其編碼之胜肽的核酸構築體。包括編碼本發明胜肽序 列之核酸亦被提供。合成的基因係插入適當之選殖載體並 得到及特化重組體。胜肽係接著在適合於所選擇之表現系 統及宿主的條件下表現。藉標準方法純化及特化Th抗原表 位或胜肽。 本發明的胜肽組合物之功效可藉注射動物（如天竺氣和豬） 免疫原調配物（如SEQ ID NOS:27-34, 36)，並接著藉監測抗 FMDV VP1抗原部位（如SEQ ID N0S:1_21，35及其反應性及免 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公爱） 1232108 A7 ___B7___ 五、發明說明（31 ) 疫功能同源物）的人類免疫反應（如實例所例示）而完成。 (請先閱讀背面之注意事項本頁) 本發明之另一觀點提供包括免疫上有效量之一或多種本 發明之胜肽免疫原之醫藥組合物於醫藥上可接受之遞送系 統中。因此，本胜肽可用佐劑，醫藥上可接受的載劑或其 他例行提供於胜肽組合物之成份而調配成疫苗組合物。可 用於本發明之成份為佐劑或乳劑包括明礬，不完全弗羅恩 特氏佐劑（IFA)，里波席（iip0Syn)，皂角甞，鯊婦，L12i，依 馬氏吉（emulsigen)，單磷醯基脂質 a (MPL)，QS21，ISA 51， ISA 35，ISA 206及ISA 720以及其他有效的佐劑和乳劑。此類 調配物包括可立即釋放及/或可持續釋放的調配物，及全 身性免疫之誘導，其可藉，例如，免疫原包埋或以微粒子 共同投藥而完成。此類調配物可由一般技藝人士輕易決 定。此疫苗可藉任何一般途徑施用，包括皮下，口服，肌 肉，腹膜或其他非經腸途徑或腸胃途徑。相似地，疫苗可 以單一劑量或多劑量施用。免疫作用的時程也很容易由一 般熟習技術者決定。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 本發明之核苷酸其本身可有用於作為稱為” DnA疫苗"的 成份。在本發明之較佳具體實施例中，本發明之免疫原胜 肽之表現係包括於病人本身的細胞，藉導入編碼胜肽之核 茹酸於彼等細胞。製造及使用DNA疫苗之方法係揭示於美 國專利 5,580,859,5,589,466 及 5,703,055;也見於初 97/02840 及 W· McDonnelRF· AskariA^ 細/ 乂泌必 1996, 334:2 45， 所有此等皆併入此中作為參考。此等製造和使用本發明之 胜肽和胜肽結合物的方法皆可被包括為本發明的範疇内。 -34 -

1232108 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明說明（32) 對FMDVVP1抗原部位免疫原之免疫反應可藉經由包埋在 CVHagan等人所描述的生物分解性微顆粒之中或之上的形態 輸送而改良（Vaccine，1991 ; 9 : 768-771)。此免疫原可含或不含 佐劑而膠囊化，以強化免疫反應，包括局部化粘膜免疫， 並提供時間控制之釋出或持續性或週期性反應，及用於口 服投藥及局部投藥（O’Hagan等人，1991 ;及Eldridge等人， 1991 ; 28:287_294) 〇 此等胜肽組合物係有用於誘導中和對FMDV之抗體並作用 預防及根除FMD之疫苗。 特殊胜肽免疫原及組合物係提供於下列實例以說明本發 明。此等實例只為了說明，因此不能用它們以任何方式來 侷限本發明涵蓋之範圍。 貫例之目標抗原胜肽是藉實例1所述之固相方法所合成 的。FMDV VP 1抗原部位係藉由從已知病毒分離株選出的線 性或環型的胜肽而例示，包括其它FMDV血清型和亞型的 類似物或胜肽同源物（如SEQ ID N0S:l-7)及一致性部位（如 SEQ ID NOS:8-13)及 SSAL 胜肽（如 SEQ ID 14-21 和 35)。每個 用於此等實例之胜肽具有在免疫原性要素（如SEQ ID NOS:30-32)間的Gly-Gly間隔區，但本發明之胜肽可具有其 它間隔區（如SEQ ID NO:23)或不具間隔區。Th包括衍生自 外來病原如B型肝炎病毒及其它併入此中作為列為參考者 濫交補助部位、從FMDV來的自體性Th (如SEQ ID NO:24)、 及人工Th (如SEQ ID NOS:25, 26，和36-38)。此等實例中的 胜肽視需要包括一般性免疫刺激部位（如SEQ ID NO:22)。 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐）

1232108 A7 B7 五、發明說明（33 ) 實例一 評估目標抗原性胜肽之典型程序 與FMD V相關的合成胜肽 具衍生自VP1的FMDV G-Η迴圈區域序列之胜肽是在生物 應用系統胜肽自動合成儀（Applied Biosystems automated peptide synthesizers，型號 430，431 和 433A)以美利弗德 (Merrifield)固相合成技術使用Fmoc化學而合成。包括結構 合成抗原庫（SSALs)之B或T細胞抗原表位，如”0 SSALM(SEQ ID NO:19)或 ”1，4, 9 PALINDROMIC Th"(SEQ ID MO:26),之胜肽構築體之製備係藉提供在所提供之可變位 置偶合之替代性胺基酸之混合物，在適當比例（如示於圖 2A，2B，3A，3B，4A，4B之SSALs之設計式之下標所界定之適 當比例）或在等莫耳比例（若未在設計式中界定）而達成。完 全組合所欲胜肽後，樹脂根據標準程序使用三氟醋酸處理以 自樹脂切除胜肽並去除胺基酸側鏈之保護基。對環狀胜 肽，切下的胜肽係溶於15% DMS0 (於水中）48小時以促進 半胱胺酸間之内雙硫鍵之形成。經切下，萃取及清洗的胜 肽係藉HPLC純化及藉質譜儀及逆相HPLC特徵化。它們亦 被用於作為疫苗發展之免疫原或用於以得自經免疫動物之 血清評估反應性而作為抗原基質。 天竺鼠和豬的免疫作用 3隻Duncan Hartley天竺鼠（雌性，9週大，450公克，無病 毒感染）和豬（雌性，9週大）之實驗組被用於合成FMDV VP1 目標抗原胜肽免疫原之免疫原性研究。每隻動物以每劑量 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 請 先 閱 讀 背 面 之 注 意 會 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1232108 A7 B7 五、發明說明（34) 100微克之含有本發明胜肽組合物（單一目標抗原胜肽或其 混合物，乳化於特殊佐劑調配物）之FMDV疫苗在第0及3週 經肌肉免疫接種。動物在第〇, 3, 5及8或10週抽血並用於免 疫原性測試。 免疫原性之評估 合成目標抗原胜肽免疫原之免疫原性測試係藉合成FMDV VP1胜肽為主的ELISA，使用只含目標，中和部位之對應 FMDV VP1目標抗原胜肽作為固相抗原。經連續稀釋的實驗 動物血清係經測試及正效價係以倒數稀釋度之Logl。表示。 正血清性樣品株併在一起後收集起來及免疫原性測試係藉 如下所述之對抗各種FMDV分離株之中和活性之決定子而 擴大。 以合成VP1 (AA134-169)胜肽為基質的ELISAs 以胜肽為主的ELISA是在塗覆胜肽之96孔平盤進行，以 FMDV VP1部位胜肽（溶於NaHC03緩衝液，ρΗ9·5)在5微克/ 毫升，每孔使用100微升塗覆，在37t下培育1小時。塗覆 月生肽的微孔以250微升的動物膠（溶於PBS，以重量計為3% ) 在37°C培育1小時，以封阻非專一性蛋白質結合部位，再用 含有以體積計為0.05%的TWEEN 20之PBS沖洗3次後再將之 乾燥。受測樣品以含有以體積計為20%正常山羊血清、以 重量計為1%的動物膠，以及以體積計為20%的TWEEN之 PBS加以稀釋（以1:20體積稀釋，除非有特別註明）。添加 100微升之經稀釋樣品至每一孔並允許在37°C反應1小時。 試孔接著以〇·〇5%以體積計之TWEEN 20於PBS清洗6次以去 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 先 閱 讀 背 面 之 注 項

f 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1232108 A7 B7 五、發明說明（35 除未結合之經標示抗體。添加100微升之以含有1%正常山 羊血清、0.05% TWEEN 20之PBS適當稀釋已用山葵過氧化 酶標定之羊抗-天竺鼠IgG抗體或抗-豬IgE抗體，至每一試 孔中並在37°C培育15分鐘。試孔以0.05%以體積計之TWEEN 20 PBS清洗6次以去除未結合之經標示抗體結合物，並以 100微升之含有0.04%以重量計之鄰伸苯基二胺（OPD)及 0· 12%以體積計之過氧化氫於檸檬酸鈉緩衝液（pH5.0)之受質 混合物反應15分鐘。反應藉添加100微升之1.0莫耳濃度之 H2S04中止反應並在492 nm測定吸光值（A492) 〇 ELISA效價， 以Log1G表示，係以吸光值之線性迴歸計算，臨界值 (cutoff) A492 訂為 0.5。 FMDV病毒 各種不同的FMDV病毒株（如血清型A之A12、A24 ;血清型 0之〇ι、〇2等）係生長於幼小倉鼠腎臟（BHK)細胞之單層並 經純化，在 USDA (Greenport，NY)梅島（Plum Island)動物疾病 中心中之嚴密保護的設施中進行，其步驟詳述於Brown和 Cartwright 發表之論文中（J Gen Microbilo 1963; 31:179-186)， 經由15-45%的蔗糖梯度離心前，以1% SDS或1%的Nonidet P-40處理團塊。純化之病毒峰是藉吸取每個離心管之内容 物經由分光光譜儀（spectrophotometer)在260 nm鑑定並分 離。 FMDV中和作用的血清性評估 收集自豬（cranial vena cava)和天竺鼠（cardiac puncture)的血 清樣品先經處理，並保持在-20°C直到測試。藉血清樣品之 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 請 先 閱 讀 背 面 之 注 意 事 項,

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1T 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1232108 A7 B7 五、發明說明（36) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 1:100稀釋度之中和病毒之評估係藉中和位於連續增加注入 病毒負載之決定子，使用如上製備之各種血清型之定量 (10,000 MPD5〇)而達成。藉已施行之測試方法（Morgan和

Moore，Am J Vet Res，1990; 51:40-45)，當動物之血清在以 1:100稀釋時，其減少的FMDV微溶菌斑（microplaque)之形成 達2.5Log1G以上時，則可預期此疫苗具有防止FMDV感染之 保護性免疫力。 實例二 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 藉序列、構形和免疫刺激性要素之FMDV目標胜肽抗原最佳化 7種FMDV VP1血清型A胜肽係如表7所示。它們對應之 VP1胺基酸序列在表1中排成一線經排列比對並加上編號。 此組帶有Th的胜肽具自體性FMDV Th如表5所述的乂？121-40(SEQ ID NO:24)，之下列的序列：Glu-Thr_Gln-Ile-Gln-Arg-Arg-Gln-His-Thr-Asp-Val.Ser-Phe-Ile-Met-Asp-Arg-Phe-Val(SEQ ID NO:24)。Inv是侵染素區域的序列（SEQ ID NO:22)。在表7 中7個構築體的5個序列則是根據SEQ ID NOS:l，2，和27·29 而詳細訂定。此等胜肽係經合成，其產生的免疫血清再做 免疫原性評估。在起始免疫接種後5週所得的血清是以胜 肽-ELISA的來分析它們對FMDV VP1胜肽之反應力，並藉以 AFP當做標的病毒的標準FMDV中和分析，來分析它們中和 血清型A的FMDV之能力。 此血清之效力則在以1:100稀釋之血清以病毒中和後，以 LoglO (抗-FMDV VP1 之 ELISA 效價）及的 FMDV AFP (MPD50) 之Log1G值來表示。 -39 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1232108 A7 B7 五、發明說明（37) 結果： 沒有Th和環狀化的A12 (134-159)胜肽p2228a，和沒痛環狀 化的P2229c ’可以分別在1 /3和2/3的動物内謗發抗-抗原 胜肽的抗體反應。反之，較長的胜肽p2224a、A12(134-169)、及較長之環型的胜肽在3隻動物中之3隻具免疫原 性。此外’環化之Ai2(134-159)胜肽p2233c在3隻天竺鼠中 之3隻具免疫原性。在免疫反應性之血清樣品中，ELISA效 價在對所有7個胜肽構築體為類似的。 然而’藉血清中和活性（示於表7 )評估之胜肽構築體間之 顯著差異並分級如下：p2228a<p2224a<p2229c<p2225c<p2223a<p2236c。 根據中和作用功效之分級。在得到最佳的FMDV VP1胜肽 抗原有下列結論： (1) 涵蓋從134-169的胺基酸殘基之較長胜肽構築體提供 較高的中和作用功效並因此較彼等短胜肽為佳序列 (ΑΑ134·159)(亦即 p2224a>p2228a， p2225c>p2229c 以及 p2236c>p2233c)。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 (2) 人工環型構築體提供較好的構形並因此較對應它們 之非環狀構築體為佳（如p2223a>p2229c及 p2236c>p2225c)。 (3) 包含免疫刺激性要素的合成構築體提供較高的中和 作用功效並因此較彼等不含者為佳（如 p2236c>p2223a ; p2229c>p2228a ;以及p2225〉p2224a)。 實例三 代表VP1蛋白質中高度變異區域的一致性序列之合成構築 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（21〇 x 297公釐） 1232108 A7 B7 五、發明說明（38) 體提供廣泛的FMDV中和作用 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 採用一致性VP1目標抗原部位的二個環狀構築體乃依照 表1所示的血清型0序列（SEQ ID NO] 1)而設計。一個一致 性的胜肽係以包括Inv區域（SEQ ID NO:22)及表6 (SEQ ID NO:26)所示的人工SSAL Th之免疫刺激要素而合成；另一個 則是不含額外免疫刺激序列而合成。此等FMDV VP1之所有 構築體係如表8a之p2569a(SEQ ID N0:11)及表8b之 p2570c (SEQ ID NO:30)所描述。 在起始免疫接種後3及5週之超免疫豬所得的血清是以胜 肽-ELISA來評估它們的FMDV VP1胜肽之反應性，及藉標準 FMDV 中和分析，使用 FMDV病毒株 AFP、01PI、0-1 Taiwan、 〇Fran、〇Taiwan、〇kauf 和Asia 1當做標的病毒，來評估它們中和 FMDV多種血清型Ο、A和Asia之能力。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 單一免疫接種後第3週可觀察高抗-FMDV VP1胜肽抗體效 價，說明二個合成FMDV免疫原之高免疫效力。然而，起 始免疫接種後3週内看到血清之高中和活性，及其專一性 之廣泛性（對血清型A，0和Asia之FMDV )為未被預期的。此 等廣範圍之中和活性係很少從減活病毒製備而得之最佳的 FMDV疫苗觀察到。 FMDV目標抗原胜肽之一致性設計提供對FMDV疫苗之廣 反應性中和作用活性之基礎。 實例四 為增進FMDV VP1免疫原性和FMDV中和作用之廣泛性的人 工Th和SSAL目標抗原胜肽 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1232108 A7 B7 五、發明說明（39) 2個目標抗原胜肽，pl522b(SEQ ID N0:31)及 P1592c(SEQ ID NO:32)，係被設計，每一具如結構合成抗原庫（SSAL)製 備之FMDV目標抗原部位。此二個胜肽述於表9。 pl522b(SEQ ID N0:31)之Th SSAL目標抗原部位為表3所示的 血清型0之亞型的G - Η迴圈VP1序列之完整代表。此目標 抗原位係根據圖4Β所述之序列鑑別號碼19的1Ό SSAL (COMPLETE)1·序列而設計。相似地，pl592c包括代表 所有對血清型Asia之亞型的G _ Η迴圈序列（列於表4)之 SSAL目標抗原部位。此對Asia的SSAL部位是根據SEQ ID N0:21所示的"Asia SSAL”序列而設計的。在表6中稱為nSyn Th(l，2, 4)” 的人工 Th(SEQ ID NO:25)被键結到 1522b 和 pl592c 作為免疫原性，及Inv免疫刺激部位（SEQ ID NO:22)係偶合 至 pl592c 〇 這兩個SSAL目標抗原胜肽係經合成並用於3隻天竺鼠之 超免疫組（如實例1 )所述。得自起始免疫後5及10週之血清 係藉胜肽-ELISA評估它們的FMDV VP1蛋白質反應性及藉標 準FMDV中和作用分析，使用FMDV病毒株Al、A12FP、AFL、 A23、01;H、01P2和Asia 1作為標的病毒，來評估它們中和 FMDV血清型（Ο、A和Asia)之能力。表9顯示此實驗結果。 抗目標抗原部位之高抗·胜肽效價（>5.0 LoglO)是由pl522b 和pl592c在起始免疫後第5週所引發的（並沒取更早期的 血）。所有7種FMDV病毒株（屬於三種不同血清型（即A，0 及Asia))之廣泛原有效FMDV中和作用係觀察不管此系病毒 株及血清型間之序列的廣泛變異之二者抗血清。此說明此 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 請 先 閱 讀 背 面 之 注 意 項

f 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1232108 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 五、發明說明（40) SSAL方法在設計對抗一個高度變異之目標抗原或功能之合 成胜肽疫苗時的有用性。 此FMDV目標抗原胜肽的SSAL設計提供廣泛反應中和作 用活性之FMD V疫苗的基礎。 實例五 有效FMDV中和作用之多血清型混合物 具合成胜肽pi520b、pi522b 和 pi888b (SEQ ID NO:33, 31 和 34) 的三種SSAL目標抗原胜肽之混合物乃敘述於表10。此混合 物包括呈現血清型A(SEQ ID NO:15，表2)、血清型0(SEQ ID NO: 19，表3)、及血清型，a(序列鑑別號碼35)之SSAL目 標抗原部位，連接到人工Th抗原位nSyn Th(l，2, 4)(序列鑑 別號碼25)。此混合液用來免疫接種一組三隻的豬。100微 克的劑量的疫苗分別在第〇週（用弗羅恩特氏^代1111(113)完全 佐劑）和第3週注射（用Freund’s不完全佐劑）投藥。得自起始 免疫接種之血清可用做評估此疫苗之免疫原性，藉胜肽-ELISA方法來定量抗FMDV VP1抗原部位置，以及用FMDV 中和試驗來定FMDV中和抗體之效價的，在中和試驗中， 被用來當標的病毒的是從最近一次臺灣爆發得到的一個含 未明的VP1序列的FMDV病毒株：ΟΙ-Taiwan。對此免疫產生 反應之全部三隻豬而能從其血清中測得抗-胜肽抗原之抗體 反應（平均 FMDV Ol-Taiwan VP1 ELISA 效價= 3·7 Log1())。雖 然FMDV Ol-Taiwan VP1序列之未知性質，得自3隻經免疫接 種之宿主之1:100稀釋血清說明4.5 Log1()之顯著中和活性。 此中和活性量可用來預測預防FMDV感染之保護性免疫。 請 先 閱 讀 背 面 之 注 意 事 項

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本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1232108 A7 B7 五、發明說明（41) (請先閱讀背面之注意事項寫本頁) 基於USDA梅島（Plum Island)動物疾病中心對疫苗之FMDV保 護性質之預期所累積之深厚研究經驗（Morgan和Moore， 1990) ··在體外分析可以中和2Logi。的FMDV(MPD5G)以上之 血清，可預期此疫苗在注射過的宿主中能有效地防止 FMDV的感染。 觀察修正藉具保護豬（疫苗之標的宿主之一）免於感染之 本發明胜肽組合物之疫苗作用之免疫反應。它說明本發明 之FMDV VP1胜肽組合物之潛力以扮演作為有效的通用 FMDV疫苗（即有效對抗多種血清型之抗原性變異分離 株），為自1950年代減活FMDV疫苗之引導以來，當未達成 之成就。 實例六 評估免疫狀態之胜肽 本發明胜肽係併入ELISA測試而用來評估關於暴露至 FMDV及疫苗作用之已知狀態之動物的血清上反應性。所 使用的胜肽係經篩選為用於疫苗作用之FMDV病毒株之代 表者，並相信為動物曾曝露之病毒株之相同血清型。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 診斷試驗套組係經製備並用於述於實例1之合成 VP1 (AA134-169)胜肽為主的ELISAs部份。以對應於病毒株 〇1campos(p2463=AA128-158(T — C)-169)和 病毒株 〇lManisa(p2466=AA128-158(T—C)-169)的 VP1 胜肽作為固相抗 原而塗覆平盤。此等套組係用於收集自已歷經9個月前爆 發FMD的國家的動物群之受測血清樣品。動物群依其已知 狀態分類為’’被感染群’’和”經疫苗注射之疑似被感染群 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1232108

五、發明說明（42) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 "(已歷經大爆發的區域）、，·接種疫苗之動物群"和"正常動 物群"（來自相信無膽V的區域）。樣品在所顯示的吸收值 等於或大於分界值（分界值：強反應對照樣本之吸光ο 〇·2 )，則被評為有反應❶此測試結果顯示在表u。 此等結果顯示對以胜肽為主ό_Α反應性為可預測動 物群之暴露。已暴露的動物群顯示約聰的顯著反應活 性’然而自正常動物群之動物不具反應性。曝露動物之 聽反應性可為較高，若㈣已進行於接近9個月之爆發 期。經疫苗處理之動物群的結果顯示驚人的變異性，反映 得自數個供應者之用於-般疫苗的有效各種疫苗作用計劃 之向度變異性。 所有以上引用之參考文獻係藉此併入作為參考。 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（21〇 χ 297公釐） 1232108 A7 B7 五、發明說明（43 ) /\r:f 137--s) Λ I 2| 13iNicH5s(Q->CH69. Λ12( 125.134^10). 15S0—0H71) 01 0aser0s(l34.l69) 01 caseros{134*3&c(TI>c).l691 Asia 1(154-16*)) Asia 二 l3iRic)-15co(Ric)*6oj CONSENSUSVV(l>M69)0ONSE2SUS ·>【1345ic 丫 153010丫 169j CONSENSUS :0:( 13二.169) CONSENSUS :0:【134.15s(TicHSI OisIS :/\sia:{ 134· 169) nonscnsus :/\sia:【13 二(Tic)-138(T->CH691 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

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MO lcrkvo ίFivjk 砵陆>>ρ tAsia~^眭^νρι^^^ϊ ----:1--.-----衣(請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 1§ ϋ ·ϋ I·-，· ϋ ·· ϋ 11 I 1_1 ϋ I -\η°: *

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Is 171 - >2 FMDVjk 砵眭觯 Α^^^^νρι^^^ί ---,---；------裝(請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) --1--訂.· ^----Ί---- # 1232108 A7 B7 五、發明說明（45 )

olr.tscros Ol Cascros Ol Cjcrll>^s2 ?2.Brescia 0 0「：K '0/K2/7501 c snir olslksoulh 广ebancn cKamiuaka India 0 Tunisia ipateur/oo9 0 Golan Isr/S 1 0 Yrjgoyen、\rg/82 o.lbFS 0 (、/s_ ΟΒΓΠΚ) 0(4¾分 ΟΒΛΝ) o(sf#ONDR0 0(忒諉弈3 5) · o(sf 57) 0 - SBS (請先閱讀背面之注意事項 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 .130 140 150 160 171I I - I I vrATVY NCECKYSSKA VP1RCDLNV LEQKAARTLP TSFNYGAIKAT{fls2271} vrATVY NGmcKYSSKA, vpl^GDi nrnQKAAFrrrp HSFZYGAIKAS (3 M89900) vrATVY MGECKYSSMA \/pi?oGDPirEQKAApoTrp XXXXXXXXXXT Ξ Z218crkl) VLATVY NGESRYSRNA VPNVRGDLQA LAQKAARTLP TSFNYGAIRAT (s M55287) VLATVY NGNCQYGKSS VTiGDLQV LAQKAARALP TSFNYGAIKATUX88862) VLATVY NGNCKYGDGA VTNIRGDLOV LAQKAARALP TSFNYGAIKAT(3XS863} VLATVY NGECRYNRNA VPNLRGDLQV LAQKVARTLP TSFNYGAIKATSX00871) vrATVY2:GEC?0YGESS VTAVpoGDrovrARKAAirrr^ TSFMYGAIKAT {}f s^773 55》 vrAHVYMGMCpoYGESS VHAVpoGDr'.ov LAPCIKAARTrp TTSFZYGAIKAH {; S773 5办} VLASCY NGNCKYGDGT VTNIRGDQQV LAQKAARALP TSFNYGAIKATUX88861) VLATVY NGNCKYGSSH V^NVRGDLQV LSQKAERTLP TSFNYGAIKATSZ21859} vrATVYzCMCpoYGNVA VHMV^GDrovrAoKAARITrp T'SFMYGAIKXH {Z218 60) vrAT'VYMGraCTYSSNA vpiGDPML LEQKAA 匁 Mrp AYFZYGAI KAT (If Z2100仍 2) VLATVY NGECRYSRN>'VPNLRGDLQV LAQKVARTLP TSFNYGAIKATSJ02185) VLATVY MGMCKYGmMS VTMJLRGDLiov LiAoKAARALP HSFMYGAIKAT {ft X99066) VLATWZGMOKYGTWA VHMIRGDLOV LAOKAARALP TSFZYGAIKAHSX9 9070) VLATVY NGNCKYGESS VTNVRGDLQV LAQKAARTLP TSF21YGAIKATΞX99069) VLATVY QRNCKYGDGA VHNIRGDLQV LAQKAARALP TSFNYGAIKATSX9 9068) VLASVY YGYCKYGDGG VTNIRGDLQV LAQKiyARALP TSFNYGAIKAT(IIX9 906 5) VLATVYMRNCKYGEWS VHNIRGDLQV LAQKAARALP HSFNYGSKAT Uf X9 9Q-6 7} 8 4 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） >3 FMDVjki净眭誕o^lw^^vpl^^^^^ • ϋ I « ί ϋ 寫本頁) --：--訂.；----：----- 1232108 A7 _B7五、發明說明（46 )

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130 I VTLATVY VLATVY VLATVY VLATVY VLATVY 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

NGKTTYGTOP T--R?oGDLAV LAo?3VSKRrn3TSFNYGAVKAD MGKPTYGKOP s:R?oGDMAA LAoRrsJOorp TSFNYGAVKAE NGKTTYGEOF S--刃为 GDMAA LAo»rs»orp TSFNYGAVKAE NGKTTYGTOP T--RPOGDLAV LAopoVSNRrp TSFNYGAVKAD NGKRPYGETT S:RRGDMAA LAORLSARLP TSFNYGAVKAD 1^0 150 160 171 FMDVjk 砵 ^^Asia^^^^vpl^^^^^ _ ---------訂 >·'---I----. (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 9 4 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1232108 A7 B7 五、發明説明（47 ) 表5 FMDV的輔助T細胞抗原表位（Th) I---------装—— (請先閱讀背面之注意事本頁) 訂 線 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 FMDV Th的來源 宿主種系 參考文獻 VPl(35-53) 牛 Van Lierop等人，Immunology 84:79, 1995 VP2(74-88) 牛 Van Lierop等人，Immunology 84:79, 1995 VP4(20-34) 牛 Collen等人，J. Gen. Virology 71:309, 1990 VPl(21-40) (SEQ ID NO:24) 牛 Collen等人，J. Gen. Virology 146:749, 1991 VP1(135-144) 小鼠 Zarorano 等人，Immunology 146:749, 1991 VP 1(62-76) 牛 Rodriguez等人,Virology 205:24, 1994 VP 1(83-104) 牛 Rodriguez等人，Virology 2O5:24, 1994 VP1(188-209) 牛 Rodriguez等人，Virology 2O5:24, 1994 VP1(111-132) 牛 Rodriguez等人，Virology 205:24, 1994 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐） 1232108 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 五、發明說明（48 ) 表6人工輔助T細胞抗原表位（Th)的序列

描 述 胺基酸序列 胺基酸順序鑑別號碼 Syn Th(l,2,4) KKKIITITRIITIITTID SEQ ID NO:25 IS(1, 4, 9 PALIDROMIC) ISISEIKGVIVHKIEGILF SEQ ID NO:26 LF簡化的Th MT RT TRM TM L L V IS(1, 4, 9 PALIDROMIC)LF Th ISEIKGVIVHKIEGI SEQ ID NO:38 MT RT TRMTM L L V (1, 4, 9 PALIDROMIC)Th ISEIKGVIVHKIEGI SEQ ID NO:36 MT RT TRM TM L L V (1, 4, 9 PALIDROMIC) ISEIKGVIVHKIEGI SEQ ID NO:37 簡化的Th T RT TR T (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1232108 A7 B7 五、發明説明（49 .沙涂 VP1^2~NS^^^C -沙涂 vpl^^J^Qllit 寐系ο 。^铷汝沴海躺雜漭5卿砮岑恭聆3^裨^;!|3:竣黎婵1!301=3) 」f+ELISA斜沖；i S缈穿确烴S淋t 砵^。一 :100 恭«萍 SJk 砵~t^>SJI * 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 p2236c j p2223a p2225c p2224a p2233c p229c 'Z ro to 00 03 胜肽編碼 Inv-GG-VPl(2M0)Th-GG-AI2 [134(N->C)a-158(Q —C)b-169】 A12【134(N—C)M58(Q ->C)b-169] Inv-GG-VPl(2M0)Th-GG- Ai2(134-169) Inv-GG-VPl(2M0)Th-GG- A12(134-169) A12(134-169) > 3 α o ^sr I D- 6 o / > z_^ 、一 1. 胜肽抗原的描述 胺基酸鑑別順序 號碼：29 胺基酸鑑別順序1 號碼：2 胺基酸鑑別順序 號碼：28 胺基酸鑑別順序 號碼：1 i胺基酸鑑別順序 1號碼：27 胺基酸鑑別順序 號碼 / ： U) / LO u> U) U) K) 具反應的動物的 丨數量c ί_(η=3)_ 4.333 5.489 1 5.120 3.395 3.987 4.188 4.144 Loglb ^FMDV-VPl ELISA 效價d 00 〇 b Os b Lr» -j ο LT\ K) Lm > & ξι a-fr V* NJl 己^ 3 N* ^rj r S eg § s > (請先閱讀背面之注意事項再UP本頁) •裝_ 訂 ··線 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 1232108 A7 B7 五 ^發 5 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 p2570c 胜肽密碼 Inv-GG-IS(l，4,9 PALINDROMIC)LF simplified Th-GG-〇c〇NSENSUS 【129-158(T->C)a-169】 胜肽抗原的描述 溲漭 〇涅 胺基酸鑑別 序列號碼 U) WPIb to K) 具反應的動物 的數量(11=3) 4.864 4.155 抗 FMDV-VP1 ELISA^cjfc^Log10 to Ιλ to Lh A12FP 血清 e’d 中中和FMDV (MPD5。)之 Log10 b 0-1 PI Lt\ Ο Lm 0-1 Taiwan to ο Asia 1 H8b^^^FMDVt^^>!i八SSAL Th·^丨焊寐@詾郭細辟斧 p2569a 胜肽密碼 OConsensus【134-158(T—C)a-169】 的描述 目標抗原胜肽 > s 1 ^ f錄 一 Μ 序列號碼 胺基酸鑑別 U\ WPIb U) 的數量(n=3) 具反應的動物 戶 ELISA 滴度。之1^^10 抗 FMDV-VP1 U) b Ofran 血清c’d 中中和FMDV (MPD5。)之Log10 U) U\ Otaiwan to b 〇 i ro Ln U) Lh Asia 1 sooa^涔i?FMDV-6-^沖綠^丨 sg:±Im雜郭钿痒穿 — IJIIJI — — — — · I — (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂---------- Γ . 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1232108 A7

7 B 五、發明説明（51 ) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 。庠ELISA斜沖；is净42:fi_js琳奇^ rt 一:looliif贫 tfs pi592c pl 522b 胜肽密碼 Inv-GG-Syn Th(l，2,4)l-GG-AsiassAL [134(T->C)b-158(R-^C)b-169】，環狀 Syn Th(l，2,4)-GG-Oc⑽p 丨 ete ssal 【134-158(T^C)a-169】，環狀 標的抗原性位置 ••靡 *}iV 涇漭 M 龄 ••錄 胺基酸鑑別 序列號碼 LTi WPI u> U) 反應動物之 數目（n=3) 5.256 5.158 ►η | ί > U) b U) •o Aj2FP 由血清“中和所得之FMDV(MP50)Log10 >4.5 >4.5 O-l(JH) to o to b > r ►—a Κ) ih 0-1P2 U) ο 4^ in A-23 to I/Ι >6.0 Asia 1 Lr, Lh o > >9 细寐tFMDVt才备逆^濉^寐-^AhThtssALIm^郭备Ji穿 (請先閱讀背面之注意事項 本頁) •裝· 訂 線' 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 1232108 A7B7 五、發明說明（52) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 净萍和和拚辩赴沙滸萍3窗£ia岑涔鰣3i^s。 $si S ^ A2/Asialg【134CN—C)-158(Q1C)-169】(漭；&髁錄窆本湮绋為：35) pl520b+ pl522b+ P1888b 胜肽密碼 SynTh(l52?4)-GG-A(l)complete ssal(134(N->C-158(Q^C)- 169)； Syn Th(l5254)-GG-OcompleteSSAL 【134-158(T^C)-169】，+ SynTh(l，2,4)-GGd-A2/AsiaadjustedsSAL [134(N->C)-158(Q—C)-169】 FMDV VP1疫苗構築體之描述 ··&··“··“ ^ L L Lu •^髁e涔 w髁 錄 錄 錄 bq irt 4S=^ ^=. ^ ^ ^ ^=- ^=- cy^ 胺基酸鑑別序列號碼 U) P 具反應性動物的數目 (n=3) 3.688 抗FMDV VP 1 ELISA 之效價bL〇glai 2 s-H B： _· ίψ* p ~9* & t ^ σ hv Ο §A si $0 裝------1— 訂--------- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 5 5 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1232108 A7 B7 五、發明說明（53 ) 序列表 1) 一般資料： (i) 申請者：王長怡 Shen，Ming (ii) 發明標題：用於口蹄疫之合成性胜肽疫苗 (iii) 序列號碼：3 7 (iv) 伐表人住址： (A) 住址： (B) 街道：345 Park Avenue (C) 城市：紐約市 (D) 州：紐約州 (E) 國家：美國 (F) ZIP ： 1 0 1 5 4-00 54 Ο )電腦可讀之型式： (A) 媒體型式：軟式磁碟片 (B) 電腦：I B Μ可相容之個人電腦

(C) 操作系統：P C - D Ο S / M S - D Ο S (D) 軟體：Patentin Release #1.0，版本 #1.25 (vi) 目前應用資料：

(A) 應用編號：U S (B) 完成日期： (C) 種類： (vii) 代理人/代理商資料： (A)姓名： 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公m (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

· I I I I I J I ^ ,·1111--I 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1232108 A7 B7 五、發明說明（54) (B) 登記號碼： (C) 參考/標籤號碼：1151-4156 (viii)電話聯絡資料： (A) 電話：212-758-4800 (B) 傳真：2 1 2 - 7 5 1 - 6 8 4 9 (2) SEQIDNO:l 的資料： (i )序列特性： (A) 長度：3 5個胺基酸 (B) 種類：胺基酸 (C) 表面結構：線狀 (ii ) 分子種類：胜肽 (iii)序列敘述：S E Q I D Ν Ο : 1 :

Asn Lys Tyr Ser Ala Ser Gly Ser Gly Val Arg Gly 1 5 10

Asp Phe Gly Ser Leu Ala Pro Arg Val Ala Arg Gin 15 20

Leu Pro Ala Ser Phe Asn Tyr Gly Ala lie Lys 25 30 35 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 (2)SEQ ID NO:2 的資料： (i )序號特性： (A) 長度：35個胺基酸 (B) 種類：胺基酸 (C )表面結構：線狀 (ii)分子種類：胜肽 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 1232108 A7 _B7_ 五、發明說明（55 ) (iii)序列敘述：SEQIDNO:2:

Cys Lys Tyr Ser Ala Ser Gly Ser Gly Val Arg Gly 1 5 10 Asp Phe Gly Ser Leu Ala Pro Arg Val Ala Arg Cys 15 20 Leu Pro Ala Ser Phe Asn Tyr Gly Ala lie Lys 25 30 35 (2 ) S E Q I D N O : 3 的資料： (i) 序號特性： (A) 長度：46個胺基酸 (B) 種類：胺基酸 (C )表面結構：線抉 (ii) 分子種類：胜肽 (iii) 序列敘述：SEQIDNO:3: (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝 i 訂----------

Val Leu Ala Thr Val Tyr Asn Gly Thr Cys Lys Tyr 1 5 10

Ser Ala Ser Gly Ser Gly Val Arg Gly Asp Phe Gly 15 20

Ser Leu Ala Pro Arg Val Ala Arg Cys Leu Pro Ala 25 30 35

Ser Phe Asn Tyr Gly Ala lie Lys Ala Glu 40 45 (2 ) S E Q I D N O : 4 的資料： (i)序號特性： (A)長度：36個胺基酸 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） % 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1232108 A7 B7 五、發明説明ς6 ) (B)種類：胺基酸 (C )表面結構：線狀 (ii) 分子種類：胜肽 (iii) 序列敘述：SEQIDN0:4:

Cys Lys Tyr Ser Ser Lys Ala Val Pro Asn Val Arg 1 5 10 Gly Asp Leu Asn Val Leu Glu Gin Lys Ala Ala Arg 15 20 Thr Leu Pro Thr Ser Phe Asn Tyr Gly Ala lie Lys 25 30 35 (2 ) S E Q I D N O : 5 的資料： (i )序號特性： (A) 長度：3 6個胺基酸 (B) 種類：胺基酸 (C )表面結構：線狀 (ii) 分子種類：胜肽 (iii) 序列敘述：SEQ ID NO:5 : 择衣-- (請先k閲讀背&之注意事項本頁) 訂 線 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

Cys Lys Tyr Ser Ser Lys Ala Val Pro Asn Val Arg 1 5 10 Gly Asp Leu Asn Val Leu Glu Gin Lys Ala Ala Arg 15 20 Cys Leu Pro Thr Ser Phe Asn Tyr Gly Ala lie Lys 25 30 35 (2 ) S E Q I D N O : 6 的資料： 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 1232108 A7 ______B7五、發明説明（57 ) (i) 序號特性： (A) 長度：3 4個胺基酸 (B) 種類：胺基酸 (C )表面結構：線狀 (ii) 分子種類：胜肽 (iii) 序列敘述：SEQIDNO:6: Arg Pro Tyr Gly Glu Thr Thr Ser Arg Arg Gly Asp 1 5 10 Met Ala Ala Leu Ala Gin Arg Leu Ser Ala Arg Leu 15 20 Pro Thr Ser Phe Asn Tyr Gly Ala Val Lys 25 30 ----------批衣-- (請先閲讀背面之注意事項再頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 (2)SEQ ID NO:7 的資料： (i) 序號特性： (A) 長度：3 4個胺基酸 (B) 種類：胺基酸 (C )表面結構：線狀 (ii) 分子種類：胜肽 (iii) 序列敘述：SEQIDNO:7:

Cys Pro Tyr Gly Glu Thr Thr Ser Arg Arg Gly Asp 1 5 10 Met Ala Ala Leu Ala Gin Arg Leu Ser Ala Cys Leu 15 20 Pro Thr Ser Phe Asn Tyr Gly Ala Val Lys 25 30 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -線 1232108 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 ____ B7_ 五、發明説明（58 ) (2 ) S E Q I D Ν Ο : 8 的資料： (i) 序號特性： (A) 長度：35個胺基酸 (B) 種類：胺基酸 (C )表面結構：線狀 (ii) 分子種類：胜肽 (iii) 序列敘述：SEQIDNO:8: Asn Lys Tyr Ser Val Ser Gly Ser Gly Arg Arg Gly 1 5 10 Asp Leu Gly Ser Leu Ala Ala Arg Val Ala Lys Gin 15 20 Leu Pro Ala Ser Phe Asn Tyr Gly Ala lie Lys 25 30 35 (2 ) S E Q I D N O : 9 的資料： (i) 序號特性： (A) 長度：3 5個胺基酸 (B) 種類：胺基酸 (C )表面結構：線狀 (ii) 分子種類：胜肽 (iii) 序列敘述：SEQIDNO:9: Cys Lys Tyr Ser Val Ser Gly Ser Gly Arg Arg Gly 1 5 10 Asp Leu Gly Ser Leu Ala Ala Arg Val Ala Lys Cys ____- 61 ~_ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） (請先_閱讀背心之注意事項 本買) -裝_ 訂 線 1232108 A7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 B7五、發明説明（59 ) 15 20 Leu Pro Ala Ser Phe Asn Tyr Gly Ala lie Lys 25 30 35 (2 ) S E Q I D N O : 1 0 的資料： (i) 序號特性： (A) 長度：36個胺基酸 (B) 種類：胺基酸 (C )表面結構：線狀 (ii) 分子種類：胜肽 (iii) 序列敘述：SEQIDNO:10: Cys Lys Tyr Gly Glu Asn Ala Val Thr Asn Val Arg 1 5 10 Gly Asp Leu Gin Val Leu Ala Gin Lys Ala Ala Arg 15 20 Thr Leu Pro Thr Ser Phe Asn Tyr Gly Ala lie Lys 25 30 35 (2 ) S E Q I D N O : 1 1 的資料： (i )序號特性： (A) 長度：36個胺基酸 (B) 種類：胺基酸 (C )表面結構：線狀 (ii) 分子種類：胜肽 (iii) 序列敘述：SEQIDNO:ll: (請先M·讀背¾.之注意事項本頁) •絮· -絲 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 1232108 Δ7 Α7 Β7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 五、發明説明（6。） Cys Lys Tyr Gly Glu Asn Ala Val Thr Asn Val Arg 1 5 10 Gly Asp Leu Gin Val Leu Ala Gin Lys Ala Ala Arg 15 20 Cys Leu Pro Thr Ser Phe Asn Tyr Gly Ala lie Lys 25 30 35 (2 ) S E Q I D N O : 1 2 的資料： (i) 序號特性： (A)長度：34個胺基酸 (B )種類：胺基酸 (C )表面結構：線狀 (ii) 分子種類：胜肽 (iii) 序列敘述：SEQIDNO:12:

Thr Thr Tyr Gly Thr Gin Pro Ser Arg Arg Gly Asp 1 5 10 Met Ala Ala Leu Ala Gin Arg Leu Ser Arg Arg Leu 15 20 Pro Thr Ser Phe Asn Tyr Gly Ala Val Lys 25 30 (2 ) S E Q I D N O : 1 3 的資料： (i) 序號特性： (A) 長度：3 4個胺基酸 (B) 種類：胺基酸 (C )表面結構：線狀 (ii) 分子種類：胜肽 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） (請先^-讀背‘之注意事項^一®^ 本貢) -裝- -Ε1Γ 線 1232108 Α7 Β7 五、發明説明（61 ) (iii)序列敘述：SEQIDN0:13:

Cys Thr Tyr Gly Thr Gin Pro Ser Arg Arg Gly Asp 1 5 10

Met Ala Ala Leu Ala Gin Arg Leu Ser Arg Cys Leu 15 20

Pro Thr Ser Phe Asn Tyr Gly Ala Val Lys 25 30 (2 ) S E Q I D N O : 1 4 的資料： (i) 序號特性： (A) 長度：35個胺基酸 (B )種類：胺基酸 (C )表面結構：線狀 (ii) 分子種類：胜肽 (iii) 特性： (A )名稱/關鍵：修飾部位 (B) 位置：1 (C) 其他資料：/註=”Asn，ser or Gly，， (iii) 特性： (A )名稱/關鍵：修飾部位 (B)位置：4 (C )其他資料：/ 註=” Ser，Thr or Ala " (iv) 特性： (A)名稱/關鍵··修飾部位 (B )位置·· 5 本紙張尺度適用中國國家標準M規格（2ϋ97&- (請先，閱讀背I之注意事項本頁) •絮· 絲 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1232108 A7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 ______B7_ 五、發明説明（62 ) (C )其他資料：/ 註=，，Val or Ala，， (vi) 特性： (A) 名稱/關鍵：修飾部位 (B) 位置：6 (C )其他資料：/ 註=Ser，Gly or Asp ·’ (vii) 特性： (A)名稱/關鍵：修飾部位 (B )位置：8 (C )其他資料：/ 註=，，Ser，Thr or Met，， (iv)特性： (A) 名稱/關鍵：修飾部位 (B) 位置：9 (C )其他資料：/註=” Gly or Asn丨丨 (viii) 特性： (A )名稱/關键：修飾部位 (B) 位置：1 0 (C) 其他資料：/註="ArgorVal，， (iv)特性： (A )名稱/關键：修飾部位 (B)位置：14 (C )其他資料·· / 註=” Leu，Met or Phe " (iii)特性： (A )名稱/關键：修飾部位 (B)位置：1 5 _________- 6 5 _ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閱讀背面之注意事項 本頁) 裝 訂 線 1232108 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 五、發明説明（63 ) (C )其他資料：/ 註=·· Gly or Glu π (iii) 特性： (A) 名稱/關鍵：修飾部位 (B) 位置：1 6 (C) 其他資料：/註="SerorPro·’ (iv) 特性： (A) 名稱/關鍵：修飾部位 (B) 位置：1 9 (C) 其他資料：/註="Ala or Pro” (vi) 特性： (A) 名稱/關鍵：修飾部位 (B )位置：2 2 (C )其他資料：/ 註=·· Ala or Val ·’ (vii) 特性： (A )名稱/關键：修飾部位 (B) 位置：23 (C )其他資料：/ 註=·’ Lys，Arg or Ala (iv)特性： (A) 名稱/關键：修飾部位 (B) 位置：24 (C )其他資料：/ 註=’· Gin or Ala ’’ (viii) 特性： (A) 名稱/關鍵：修飾部位 (B) 位置：27 (請先閱讀背面之注意事項 本I) -裝- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 1232108 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 五、發明説明（64 ) (C )其他資料：/ 註=” Ala w Thr，， (iv)特性： (A )名稱/關鍵：修飾部位 (B )位置：3 1 (c)其他資料：/註=”Thr〇rPhe„ (iii)特性： (A )名稱/關鍵：修飾部位 (B )位置：3 4 (C )其他資料：/註=” ue 〇rVal ” (iii)特性： (A )名稱/關鍵：修飾部位 (B)位置：35 (C )其他資料：/ 註=，，Lys or Gin n (iii)序列敘述：SEQ ID N0:14: Xaa Lys Tyr Xaa Xaa Xaa Gly Xaa Xaa Xaa Arg Gly 1 5 10 Asp Xaa Xaa Xaa Leu Ala Xaa Arg Val Xaa Xaa Xaa 15 20 Leu Pro Xaa Ser Phe Asn Xaa Gly Ala Xaa Xaa 25 30 35 (2)SEQ ID NO:15 的資料： (i)序列特性： 長度：3 5個胺基酸 種類：胺基酸 (請先閱讀背面之注意事項 本頁) -裝· 訂 -線 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 1232108 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 五、發明説明（65 ) 表面結構：線狀 (ii) 分子種類：胜肽 (iii) 特性： (A )名稱/關鍵：修飾部位 (B)位置：4 (c)其他資料：/註：=” Ser，Thr 〇r Ala" (iv) 特性： (A )名稱/關鍵：修飾部位 (B)位置：5 (B )其他資料：/ 註：=” vai or Ala，， (vi) 特性： (A )名稱/關鍵：修姊部位 (B)位置：6 (C )其他資料：/ 註=” Ser，Gly or Asp，， (vii) 特性： (A )名稱/關鍵：修飾部位 (B)位置：8 (C )其他資料：/ 註=，，Ser，Thr or Met，， (iv)特性： (A )名稱/關鍵：修飾部位 (B)位置：9 (C )其他資料·· / 註=” Gly or Asn ’， (viii) 特性： (A )名稱/關鍵：修飾部位 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閱讀背面之注意事項 本頁) -裝· 訂 線 1232108 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 五、發明説明（66 ) (B) 位置：10 (C) 其他資料：/註="Argor Val·’ (iv)特性： (A) 名稱/關键：修飾部位 (B) 位置：1 4 (C )其他資料：/ 註=M Leu, Met or Phe (iii)特性： (A) 名稱/關键：修飾部位 (B )位置：1 5 (C )其他資料：/ 註=” Gly or Glu ·’ (iii) 特性： (A )名稱/關鍵：修飾部位 (B) 位置：1 6 (C )其他資料·· / 註=n Ser or Pro ” (iv) 特性： (A )名稱/關鍵：修飾部位 (B) 位置：1 9 (C) 其他資料：/註="Ala or Pro·· (vi) 特性： (A )名稱/關鍵：修飾部位 (B) 位置：22 (C) 其他資料：/註="AlaorVal” (vii) 特性： (A )名稱/關鍵··修飾部位 (請先閲讀背面之注意事項本頁) .裝· 線 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 1232108 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 五、發明説明（67 ) (B)位置：23 (C )其他’貝料· / 註=” LyS，Arg or Ala，， (viii)特性： (A )名稱/關鍵·修斜部位 (B) 位置：27 (C) 其他資料：/註=，，Aia〇rThr” (iv)特性： (A) 名稱/關鍵：修飾部位 (B )位置：3 1 (c)其他資料：/註=”ThrorPhe” (iii)特性： (A )名稱/關鍵：修飾部位 (B) 位置：34 (C) 其他資料：/柱=”iieorVal” (iii)特性： (A )名稱/關鍵··修飾部位 (B)位置：35 (C )其他資料：/ 註=，，LyS or Gin n (iii)序列敘述：SEQIDNO:15: Cys Lys Tyr Xaa Xaa Xaa Gly Xaa Xaa Xaa Arg Gly 1 5 10 Asp Xaa Xaa Xaa Leu Ala Xaa Arg Val Xaa Xaa Cys 15 20 Leu Pro Xaa Ser Phe Asn Xaa Gly Ala Xaa Xaa 25 30 35 (請先閲讀背面之注意事項 本頁) -裝一 # 線 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X29?公釐) 1232108 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（68 ) (2)SEQ ID NO:16 的資料： (i) 序列特性： 長度：34個胺基酸 種類：胺基酸 表面結構：線狀 (ii) 分子種類：胜肽 (iii) 特性： (A )名稱/關鍵：修飾部位 (B)位置：1 (C )其他資料：/ 註=n Asn，Ser or Gly π (iii) 特性： (A )名稱/關鍵：修飾部位 (B) 位置：2 (C )其他資料：/ 註=·’ Lys or Arg ” (iv) 特性： (A )名稱/關键：修飾部位 (B )位置：3 (C )其他資料：/ 註=Tyr or Ser ’’ (vi) 特性： (A )名稱/關键：修飾部位 (B )位置：4 (C) 其他資料：/註="SerorPro·’ (vii) 特性： (請先閱讀背面之注意事項 本頁) -裝- 訂 線 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐） 1232108 A7

五、發明説明（69 ) (A )名稱/關鍵：修飾部位 (B )位置：5 (C )其他:貝料：/ 註=丨，Thr，Ala，Pro, Arg，Ser or Asn，· (iv)特性： (A) 名稱/關鍵··修飾部位 (B) 位置：6 (C )其他資料：/ 註=丨丨 Asp，Gly，Ser，Ala，Pro or Leu (viii)特性： (A) 名稱/關鍵：修飾部位 (B )位置：7 (C )其他資料：/ 註=” Gly，Asp or Arg，， (iv)特性： (A )名稱/關鍵：修飾部位 (B) 位置：8 (C )其他資料·· / 註=” Pr〇, Ser，Arg，Thr，Val，Gln 〇r Leu” (iii)特性： 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 (A )名稱/關鍵：修飾部位 (B)位置·· 9 (C )其他資料：/ 註=” Arg，Gly 〇r Tyr ” (iii) 特性： (A )名稱/關鍵：修飾部位 (B)位置：1〇 (C )其他資料：/ 註=” Arg，Ser，Ala，Gly or Pro” (iv) 特性： 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公董) 1232108 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 五、發明説明（70 ) (A) 名稱/關鍵··修飾部位 (B )位置· 1 1 (C )其他資料：/ 註=·’ Gly or Asp ·· (vi) 特性： (A )名稱/關鍵··修飾部位 (B )位置：1 2 (C )其他資料：/柱=n Asp or Pro丨’ (vii) 特性·· (A )名稱/關鍵：修飾部位 (B) 位置：1 3 (B )其他資料：/ 註=，，Leu，Met，Thr or Arg π (iv)特性： (A) 名稱/關鍵··修飾部位 (B) 位置：14 (C )其他資料：/ 註=，，Gly，Pro or Trp，， (viii) 特性： (A )名稱/關鍵：修飾部位 (B)位置：1 5 (C )其他資料：/ 註=Ser，Pro, Ala or Arg ’， (iv)特性： (A )名稱/關鍵：修飾部位 (B)位置：1 6 (C )其他資料：/ 註=，，Leu，Pro Thr or lie π (iii)特性： _____- 73 _ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（2^297公楚) (請先閱讀背面之注意事項 本頁) 裝· 訂 線 1232108 A7 B7 經濟部智慧財產局S工消費合作社印製 五、發明説明（71 ) (A )名稱/關鍵：修飾部位 (B)位置：1 7 (C )其他資料：/ 註=” Ah，Thr，Leu，Arg or lie (iii)特性： (A )名稱/關鍵：修飾部位 (B)位置：18 (C )其他資料：/ 註：=，，Ala，Gly，Thr or Gin，， (iii)特性： (A )名稱/關鍵：修飾部位 (B)位置：19 (B )其他資料：/ 註=” Arg，Glu or Lys ·’ (iii) 特性： (A )名稱/關鍵：修飾部位 (B)位置：20 (C )其他資料：/ 註=” Aia，vai，ASp，Thr or Tyr (iv) 特性： (A )名稱/關鍵：修姊部位 (B) 位置：21 (C) 其他資料：/註=："AlaorArg” (vi) 特性： (A )名稱/關鍵：修飾部位 (B)位置：22 (C )其他資料：/ 註=Lys，Thr，Arg or Ala ’’ (vii) 特性： -74 - 本紙張尺度適用中國國家標<( CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再ml本頁) -裝· 訂 線 1232108 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 五、發明説明（72 ) (A) 名稱/關鍵：修飾部位 (B) 位置：24 (C )其他資料：/ 註=’’ Leu or Pro ·’ (iv)特性： (A )名稱/關鍵：修飾部位 (B) 位置：25 (C) 其他資料·· /註="Pro or Sern (viii)特性： (A )名稱/關鍵：修飾部位 (B)位置：26 (C )其他資料：/ 註=’’ Ala or Thr π (iv)特性： (A) 名稱/關键：修飾部位 (B) 位置：3 0 (C) 其他資料：/註=丨丨TyrorPhe丨丨 (iii)特性： (A )名稱/關键：修飾部位 (B)位置：3 3 (C )其他資料：/ 註=’· lie or Val ’’ (iii)特性： (A )名稱/關鍵：修飾部位 (B)位置：34 (C )其他資料：/ 註=·’ Arg，Lys or* Gin (iii)序列敘述：SEQIDN0:16: (請先閱讀背面之注意事項 本瓦) 裝· 訂 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 1232108 A7 B7 五、發明説明（73 )

Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5 10

Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Gin Xaa 15 20

Xaa Xaa Ser Phe Asn Xaa Gly Ala Xaa Xaa 25 30 (2 ) S E Q I D N O : 1 7 的資料： (i) 序列特性： 長度：3 4個胺基酸 種類：胺基酸 表面結構：線狀 (ii) 分子種類：胜肽 (iii) 特性： (A )名稱/關鍵：修飾部位 (B)位置：2 (C )其他資料：/ 註=” Lys or Arg，， (iv) 特性： (A )名稱/關鍵：修飾部位 (B)位置：3 (C )其他資料：/ 柱=Tyr or Ser " (vi)特性： (A )名稱/關鍵：修飾部位 (B)位置：4 (C )其他資料：/ 註=’’ Ser or Pro ’’ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（2i〇x 297公楚） (請先閲讀背面之注意事項再ml本頁)

-5-U 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 Ι232ι〇8 經濟部中央標準局員工消費合作社印11 Α7 發明説明（74 ) (Vii)特性： (A )名稱/關鍵··修飾部位 (B)位置：5 (C )其他;貝料· / 註="丁心，Aia，pr〇, Arg，Ser or Asn *， (iv)特性： (A )名稱/關鍵：修飾部位 (B)位置：6 (C )其他資料：/ 註=” Asp，Gly，Ser，Ala，Pr〇 〇r Leu，， (viii)特性： (A )名稱/關鍵··修飾部位 (B)位置：7 (C )其他資料：/ 註=” Gly，Asp or Arg ” (iv)特性： (A )名稱/關鍵··修飾部位 (B )位置：8 (C )其他資料：/ 註=” Pr〇, Ser, Arg，Thr，Va丨，Gln 〇r Leu " (iii)特性： (A )名稱/關鍵：修飾部位 (B)位置：9 (C )其他資料：/ 註=，，Arg，Gly or Tyr π (iii)特性： (A )名稱/關鍵：修飾部位 (B)位置：1〇 (C )其他資料：/ 註=” Arg，Ser，Ala，Gly or Pro ’， ____ - 77 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) AAmt, (Ίλ〇χ291^ΤΓ) (請先閱讀背而之注意事項再本頁)

12321〇§

立 經濟部中央標準局员工消费合作社印^ 發明説明（75 ) (iv)特性： (A) 名稱/關鍵：修飾部位 (B) 位置：1 1 (C) 其他資料：/註=”Gly 〇r Asp” (vi) 特性： (A )名稱/關鍵：修飾部位 (B) 位置：12 (C) 其他資料：/註=，，Asp 〇r Pro” (vii) 特性： (A )名稱/關鍵：修舞部位 (B )位置：1 3 (C )其他資料：/ 註=’，Leu，Met，Thr or Arg，， (iv)特性： (A) 名稱/關鍵：修飾部位 (B) 位置：1 4 (C )其他資料：/ 註=，，Gly，pro or Trp，， (viii) 特性： (A )名稱/關鍵·修飾部位 (B )位置：1 5 (C )其他資料：/ 註=，，Ser，Pro，Ala or Arg ·， (iv)特性： (A )名稱/關鍵：修飾部位 (B)位置：1 6 (C )其他資料：/ 註=，，Leu，Pro Thr or lie ” 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Λ4坭；(¾ ( 21〇X2^iry (請先閱讀背而之注意事項再本頁)

、-0 線 1232108 Α7 Β7 五、發明説明（76 ) (iii)特性： (A )名稱/關鍵：修飾部位 (B )位置：1 7 (C )其他資料：/ 註=Ala，Thr，Leu，Arg or lie (iii)特性： (A )名稱/關鍵·修飾部位 (B )位置：1 8 (C )其他資料：/ 註==’，Ala，Gly，Thr or Gin，， (iii)特性： (A )名稱/關鍵：修姊部位 (B)位置：19 (C )其他資料：/ 註=，，Arg，Glu or Lys，， (iii) 特性： (A )名稱/關鍵：修飾部位 (B)位置：20 (C )其他資料：/ 註=” Ala，val，Asp，Thr or Tyr (iv) 特性： 經满部中央標苹局员工消費合作社印^ (A )名稱/關鍵：修飾部位 (B)位置：2 1 (C )其他資料：/ 註=” Ala or Arg，· (vi)特性： (A )名稱/關鍵··修飾部位 (B)位置：22 (C )其他資料：/ 註” LyS，Thr，Arg or Ala，， _________ - 79 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS〉( 210χ 297^ /η 1232108 A7 B7 五、發明説明（77 ) (vii) 特性： (A )名稱/關键：修飾部位 (B)位置：24 (C )其他資料：/ 註=n Leu or Pro π (iv)特性： (A )名稱/關鍵：修飾部位 (B)位置：25 (C )其他資料：/ 註=n Pro or Set*π (viii) 特性： (A) 名稱/關键：修飾部位 (B) 位置：26 (C) 其他資料：/註=nAlaorThrn (iv)特性： (A )名稱/關鍵：修飾部位 (B) 位置：3 0 (C) 其他資料：/註=丨丨TyrorPhe，丨 (iii)特性： 經濟部中央標羋局另工消费合作社印¾ (A) 名稱/關键：修飾部位 (B) 位置：3 3 (C )其他資料：/ 註="lie or Valπ (iii)特性： (A )名稱/關键：修飾邵位 (B)位置：34 (C )其他資料：/ 註=·’ Arg，Lys or Gin -80 - 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) Ad坭抬（210X 297公筇） 1232108 A7 B7 五、發明説明（78 ) (iii)序列敘述：SEQIDNO:17:

Cys Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5 10

Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Cys Xaa 15 20

Xaa Xaa Ser Phe Asn Xaa Gly Ala Xaa Xaa 25 30 (2 ) S E Q I D N O : 1 8 的資料： (i )序列特性： 長度：3 6個胺基酸 種類：胺基酸 表面結構：線狀 (ii) 分子種類：胜肽 (iii) 特性： (A )名稱/關鍵：修飾部位 (B)位置：1 (C )其他資料：/ 註=” Cys or Ser π (iii)特性： (A )名稱/關鍵：修飾部位 (B)位置：2 (C )其他資料：/ 註=” LyS，Arg or Gin，’ (vi)特性： (A )名稱/關鍵：修飾部位 (B)位置：4 ___________ _ 81 - 本紙張尺錢财關家料（CNS) (請先閱讀背面之注意事項再本頁) -裝- 訂 經满部中央標率局貝工消費合作社印製 1232108 經漪部中央標嗥局員工消費合作社印¾ Α7 Β7 五、發明説明（79 ) (C )其他資料：/ 註=，，G1y，ser or Asn，， (vii) 特性： (A )名稱/關鍵：修飾部位 (B)位置：5 (C )其他資料：/ 註=丨丨 Glu，Ser，Asp，Thr，Lys or Asn " (iv)特性： (A )名稱/關鍵：修飾部位 (B )位置：6 (C )其他資料：/ 註=” Asn，Ser，Gly，Val or Trp，， (viii) 特性： (A )名稱/關鍵：修飾部位 (B)位置：7 (C )其他資料：/ 註=，，Ala，Ser，Thr or Gly，， (iv)特性： (A )名稱/關鍵：修飾部位 (B)位置：9 (C )其他資料·· / 註=” Thr，Pro or Ala π (iii)特性： (A )名稱/關鍵：修飾部位 (B) 位置：1 0 (C) 其他資料：/註=nAsnorAlan (iii)特性： (A) 名稱/關鍵：修飾部位 (B) 位置：1 1 - 82 - _____ 本紙張尺度適用中國國家標隼（CNS ) Λ4規格(210Χ297λ>^ ) (請先閱讀背面之注意事項再本頁) |裝· -一口 1232108 A7 B7 經漪部中央標準局貝工消f合作社印^ 五、發明説明（80 )(c )其他資料：/ 註=n Val，lie or Leu π (iv)特性： (A) 名稱/關鍵：修飾部位 (B) 位置：1 5 (C )其他資料：/ 註=n Leu，Pro or Gin · (vi) 特性： (A )名稱/關鍵：修飾部位 (B )位置·· 1 6 (C )其他資料：/ 註=Gin or Asn π (vii) 特性： (A) 名稱/關鍵：修飾部位 (B) 位置：1 7 (C )其他資料：/ 註=·· Val，Ala or Leu11 (iv)特性： (A) 名稱/關鍵··修飾部位 (B) 位置：1 9 (C )其他資料：/ 註=Ala，Glu or Ser ’’ (viii) 特性： (A )名稱/關鍵：修飾部位 (B)位置：20 (C )其他資料：/ 註=n Gin or Arg ·· (iv)特性： (A )名稱/關鍵：修飾部位 (B)位置：22 -83 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS )八4規枋（210X2W公兑） (請先閱讀背面之注意事項 本頁) -裝一 訂 1232108

五、 發明説明（81 經满部中央標率局貝工消費合作社印裝 (C)其他資料：/ 註=，，Aia〇 rValn (Hi)特性： (A) 名稱/關鍵··修飾部位 (B) 位置：23 (C) 其他資料：/註=，，Ala〇r Glu” (Hi)特性： (A )名稱/關鍵：修飾部位 (B) 位置：25 (C) 其他資料：/註=，，Thr，AlaorMetn (iii)特性： (A) 名稱/關鍵：修飾部位 (B) 位置：28 (c)其他資料：/註="ThrorAla” (iii) 特性： (A )名稱/關鍵·修飾部位 (B) 位置：29 (C) 其他資料：/註=”SerorTyr，， (iv) 特性： (A )名稱/關鍵：修飾部位 (B) 位置：36 (C) 其他資料：/註=”LysorArgn (iii)序列敘述：S E Q I D N 0 : 1 8 :

Xaa Xaa Tyr Xaa Xaa Xaa Xaa Val Xaa Xaa Xaa Arg -84 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Λ4規彳M 21 Ox 297公^ ) (請先閱讀背面之注意事項再^τ本頁) 訂 1232108 Α7 Β7 五、發明説明（82 ) 1 5 10

Gly Asp Xaa Xaa Xaa Leu Xaa Xaa Lys Xaa Xaa Arg 15 20

Xaa Leu Pro Xaa Xaa Phe Asn Tyr Gly Ala lie Xaa 25 30 35 (2 ) S E Q I D N O : 1 9 的資料： (i) 序列特性： 長度：3 6個胺基酸 種類：胺基酸 表面結構·線狀 (ii) 分子種類：胜肽 (iii) 特性： (A) 名稱/關鍵：修飾部位 (B) 位置：2 (C )其他資料：/ 註=，，Lys，Arg or Gin，， (iii) 特性： (A )名稱/關鍵：修飾部位 (B)位置：4 經濟部中央標率局另工消费合作社印氣 (C )其他資料：/ 註=·’ Gly，Ser or Asn π (iv) 特性： (A )名稱/關键：修飾部位 (B) 位置：5 (C) 其他資料：/註=，，Glu，Ser，Asp，Lys or Asn (v) 特性： (A )名稱/關键··修飾部位 本紙張尺度適用中國國家標導（CNS ) Λ4規格（2ΐ〇χ2^ϋ^ 1232108 A7 B7 五、發明説明（83 ) (B)位置：6 (C )其他資料：/ 註=，，Asn，Gly 〇r Trp ” (vi) 特性： (A )名稱/關鍵：修飾部位 (B)位置：7 (c)其他資料：/ 註=，，Ala，Ser or Thr ” (vii) 特性： (A) 名稱/關鍵：修飾部位 (B) 位置：9 (C )其他資料：/ 註=” Thr，pr〇 〇r Ala " (iv)特性： (A )名稱/關鍵：修飾部位 (B)位置：1〇 (C )其他資料：/ 註=” Asn or Ala π (viii) 特性： (A )名稱/關鍵：修錦部位 (B)位置：1 1 (B )其他資料：/ 註=丨，val，lie or Leu '， (iv)特性： (A )名稱/關鍵··修飾部位 (B)位置：1 5 (C )其他資料：/ 註=，，Leu，Pro or Gin，， (iii)特性： (A )名稱/關鍵：修飾部位 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Λ4规格（210x297^1 (請先閱讀背面之注意事項再本頁) 、*! 經漪部中央標率局貝工消费合作社印^ 1232108 Α7 Β7 五、發明説明（84 ) (B)位置：16

(C )其他資料：/ 註=·’ Gin or Asn M (iii) 特性： (A) 名稱/關鍵：修飾部位 (B) 位置：1 7 (C )其他資料：/ 註=” Val，Glu or Ser (iv) 特性： (A )名稱/關鍵：修飾部位 (B)位置：1 9 (C )其他資料：/ 註=” Ala，Glu or Ser (v) 特性： (A )名稱/關鍵：修飾部位 (B)位置：20 (C )其他資料：/ 註=Gin or Arg ’’ (vi) 特性： (A )名稱/關鍵：修飾部位 (B) 位置：22 (C) 其他資料：/註=nAlaorValn (vii) 特性： (A )名稱/關鍵：修飾部位 (B) 位置：23 (C) 其他資料：/註=’’AlaorGlu·’ (iv)特性： (A )名稱/關鍵：修飾部位 本紙張尺度適用中國國家標隼（CNS ) Λ4^格（210X297公兑） (請先閱讀背而之注意事項死

丁 、τ 經濟部中央標苹局貝工消費合作社印^ 1232108 經漪部中央標嗥局負工消费合作社印狀 Λ' ΙΓ 五、發明説明（85 ) (B)位置：25 (C )其他資料：/ 註=Thr，Ala or Met ’’ (viii) 特性： (A )名稱/關鍵··修飾部位 (B)位置：28 (C )其他資料·· /4註=” Thr or Ala ’’ (iv)特性： ’ (A )名稱/關鍵：修飾部位 (B) 位置：29 (C) 其他資料：/註=’’SerorTyr·* (iii)特性： (A )名稱/關鍵：修飾部位 (B)位置：36 (C )其他資料：/ 註=” Lys or Arg π (ix) 序列敘述：SEQ ID Ν0:19 :

Cys Xaa Tyr Xaa Xaa Xaa Xaa Val Xaa Xaa Xaa Arg 1 5 10

Gly Asp Xaa Xaa Xaa Leu Xaa Xaa Lys Xaa Xaa Arg 15 20

Xaa Leu Pro Xaa Xaa Phe Asn Tyr Gly Ala lie Xaa 25 30 35 (2)SEQ ID NO:20 的資料： (i)序列特性： 長度：3 4個胺基酸 (对先閱讀背而之注意事項再填寫本頁)

本紙張尺度適用中國國家橾枣（CNS ) Λ4Μ% ( 2丨0 X i 1232108 A7 五、發明説明（86 ) 種類：胺基酸 表面結構：線狀 (ii) 分子種類：胜肽 (iii) 特性： (A )名稱/關鍵：修飾部位 (B )位置：1 · (C )其他資料：/ 註=n Thr5 Pro or Arg (iii) 特性： (A )名稱/關鍵：修飾部位 (B )位置：2 (C)其他資料：/註="ThrorPro” (iv) 特性： (A )名稱/關鍵：修飾部位 (B )位置：5 (C )其他資料：/ 註=M Thr? Glu or Lys (v )特性： (A )名稱/關鍵：修飾部位 (B )位置：6 (C)其他資料：/註=nGlnorThr·’ (vi) 特性： (A )名稱/關鍵：修飾部位 (B)位置：7 (C )其他資料：/ 註=” Pro or* Thr π (vii) 特性： _ 8 9 - 請先間讀背而之注意事項再填寫本頁 -裝· TJ. 、-口 經濟部中央標準局只工消费合作社印裝 本紙張尺度適用中國國家梢:專（CNS ) ( 210X 297公筇） 1232108 Λ' ΙΓ 經濟部中央標準局貝工消费合作社印裂 五、發明説明（87 ) (A )名稱/關键：修飾部位 (B) 位置：8 (C) 其他資料：/註=”Sei*orThrn (iv)特性： (A )名稱/關键：修飾部位 (B )位置：1 3 4 (C)其他資料：/註="Met or Leu'’ (viii) 特性： (A )名稱/關键：修飾部位 (B) 位置：1 5 (C) 其他資料：/註=’’AlaorVal” (iv)特性： (A )名稱/關键：修飾部位 (B) 位置：20 (C) 其他資料：/註=’’LeuorVal’1 (iii)特性： (A )名稱/關鍵：修飾部位 (B)位置：22 (C )其他資料：/ 註=” Arg，Asn or Ala " (iii)特性： (A )名稱/關键：修飾部位 (B )位置·· 2 3 (C )其他資料：/ 註=” Arg or Gin π (ix) 序列敘述：S Ε Q I D Ν Ο : 2 0 : 对先閱讀背而之注意事 1· 項界填. 裝— 寫本頁 、-口 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) 格（210x 297 :,> ί;·.) 經滴部中央標準局員工消费合作社印製 1232108 A7 B7 五、發明説明（88 )

Xaa Xaa Tyr Gly Xaa Xaa Xaa Xaa Arg Arg Gly Asp 1 5 10

Xaa Ala Xaa Leu Ala Gin Arg Xaa Ser Xaa Xaa Leu 15 20

Pro Thr Ser Phe Asn Tyr Gly Ala Val Lys 25 30 i (2) SEQ ID NO :2 1 的資料：， (i) 序列特性· 長度：34個胺基酸 種類：胺基酸 表面結構：線狀 (ii) 分子種類：胜肽 (iii) 特性： (A )名稱/關鍵：修飾部位 (B )位置：2 (C )其他資料：/ 註=’’ Thr or Pro ’’ (iii) 特性： (A )名稱/關鍵：修飾部位 (B) 位置：5 (C )其他資料：/ 註=，，Thr，Glu or Lys，， (iv) 特性： (A )名稱/關鍵：修飾部位 (B )位置：6 (C) 其他資料：/註="Gin or Thr’， __________________~ 91 - 本紙张尺度適用中國國家標苹（CNS ) Λ4圯彳Μ 210χ 2W公々） (¾先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

1232108 A7 B7 五 '發明説明（89 ) (V)特性： (請先閱讀背而之注意事項再填fcT本頁 (A )名稱/關鍵：修飾部位 (B )位置：7 (C )其他資料：/ 註=Pro or Thr n (vi) 特性： (A )名稱/關键：^修飾部位 (B) 位置：8 ， (C) 其他資料：/註="SerorThr” (vii) 特性： (A )名稱/關鍵：修飾部位 (B )位置：1 3 (C)其他資料：/註=’’Met or Leu” (iv)特性： (A )名稱/關鍵：修飾部位 (B)位置：1 5

(C )其他資料：/ 註=Ala οι* ValM (viii) 特性： 經濟部中央標挲局負工消费合作社印製 (A )名稱/關鍵：修飾部位 (B) 位置：20 (C) 其他資料：/註="LeuorVal·’ (iv)特性： (A )名稱/關键：修飾部位 (B )位置：2 2 (C )其他資料·· / 註="Arg，Asn or Ala 本紙張尺度通用中國國家榡準（CNS ) 格（210X297公棼） 經漪部中央標挲局負工消费合作杜印說 1232108 Λ 7 ____Β7 五、發明説明（9〇 ) (ix)序列敘述：S E Q I D Ν Ο : 2 1 :

Cys Xaa Tyr Gly Xaa Xaa Xaa Xaa Arg Arg Gly Asp 1 5 10

Xaa Ala Xaa Leu Ala Gin Arg Xaa Ser Xaa Cys Leu 15 20

Pro Thr Ser Phe Asn Tyr Gly Ala Val Lys 25 3〇- (2)SEQ ID NO : 22 的資料： (i) 序列特性： (A )長度：1 6個胺基酸 (B)種類：胺基酸 (C )表面結構：線狀 (ii) 分子種類：胜肽 (iii) 序列敘述：SEQIDNO:22:

Thr Ala Lys Ser Lys Lys Phe Pro Ser Tyr Thr Ala 1 5 10

Thr Tyr Gin Phe (2)SEQ ID NO:23 的資料： (i) 序列特性： (A )長度：6個胺基酸 (B)種類：胺基酸 (C )表面結構：線狀 (ii) 分子種類：胜肽 ___ 一 _ - 93 - 本紙烺尺度適用中國國家榡苹（CNS ) Λ4規格(2 1 ()〆八7 ::> /;· i — (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

1232108 ΑΊ Β7 五、發明説明（91 ) (iii)序列敘述：SEQIDNO:23: (請先閱讀背而之注意事項再填寫本頁

Pro Pro Xaa Pro Xaa Pro 1 5 (2 ) S E Q I D N O : 2 4 的資料： (i) 序列特性： f (A) 長度：20個胺基酸 (B) 種類：胺1基酸 (C )表面結構：線狀 (ii) 分子種類：胜肽 、-口 (iii) 序列敘述：SEQIDNO:24:

Glu Thr Gin lie Gin Arg Arg Gin His Thr Asp Val 1 5 10

Ser Phe lie Met Asp Arg Phe Val 15 20 (2)SEQ ID NO:25 的資料： 經濟部中央標準局员工消费合作社印狀 (i) 序列特性： (A )長度：1 8個胺基酸 (B)種類：胺基酸 (C )表面結構：線狀 (ii) 分子種類：胜肽 (iii) 序列敘述：SEQIDNO:25: 本紙張尺度適用中國國家標專（CNS ) 210X2W公灯） 1232108 A? 五、發明説明（92 )

Lys Lys Lys lie lie Thr lie Thr Arg lie lie Thr 1 5 10 ¾先閱讀背面之注意事項再填寫本頁 lie lie Thr Thr lie Asp 15 (2)SEQ ID NO :26 的資料： (i) 序列特性： < (A) 長度：19個胺基酸， (B) 種類：胺基酸 (C )表面結構^線狀 (ii) 分子種類：胜肽 (iii) 特性： 丁 -、\=α (A )名稱/關鍵：修飾部位 (B)位置：4 (C )其他資料：/ 註=Ser or Thr ” (iii) 特性： (A )名稱/關鍵：修飾部位 (B)位置：7 (C )其他資料：/ 註=” Lys or· Arg ’’ 經濟部中央標挲局另工消资合作杜印裝 (iv) 特性： (A )名稱/關键：修飾部位 (B)位置：8 (C )其他資料：/ 註=Gly or Thr π (ν )特性： (A )名稱/關鍵：修飾部位 1232108 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A 7 Η-7五、發明説明（93 ) (B)位置：12 (C )其他資料：/ 註=His or Thr π(vi) 特性：(A )名稱/關鍵：修飾部位 (B)位置：1 3 (C )其他資料：/ 註=n Lys or Arg π (vii) 特性： ’(A )名稱/關鍵：修飾部位 (B)位置：16 (C )其他資料：/ 註=Gly or Thr π (ix)序列敘述：S Ε Q I D Ν Ο : 2 6 : lie Ser lie Xaa Glu lie Xaa Xaa Val lie Val Xaa 1 5 10 Xaa lie Glu Xaa lie Leu Phe 15 (2 ) S E Q I D N O : 2 7 的資料：(i) 序列特性：(A)長度：65個胺基酸 (B )種類：胺基酸 (C )表面結構：線狀(ii) 分子種類：胜肽 (iii) 序列敘述：SEQIDNO:27: 請先閲讀背而之注意事項再填寫本頁 I裝· 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) 格（) 經濟部中央標準局员工消费合作社印狀 1232108 A7 B7五、發明説明（94 ) Thr Ala Lys Ser Lys Lys Phe Pro Ser Tyr Thr Ala 1 5 10 Thr Tyr Gin Phe Gly Gly Glu Thr Gin lie Gin Arg 15 20 Arg Gin His Thr Asp Val Ser Phe He Met Asp Arg 25 30 35 Phe Val Gly Gly Cys Lys Tyr Ser Ala Ser Gly Ser 40 45 Gly Val Arg Gly Asp Phe, Gly Ser Leu Ala Pro Arg 50 55 60 Val Ala Arg Cys Leu ， 65 (2)SEQ ID NO:28 白勺資料： (i) 序列特性： (A) 長度：75個胺基酸 (B) 種類：胺基酸 (C )表面結構：線狀 (ii) 分子種類：胜肽 (iii) 序列敘述：SEQIDNO:28:

Thr Ala Lys Ser Lys Lys Phe Pro Ser Tyr Thr Ala 1 5 10 Thr Tyr Gin Phe Gly Gly Glu Thr Gin lie Gin Arg 15 20 Arg Gin His Thr Asp Val Ser Phe lie Met Asp Arg 25 30 35 Phe Val Gly Gly Asn Lys Tyr Ser Ala Ser Gly Ser 40 45 Gly Val Arg Gly Asp Phe Gly Ser Leu Ala Pro Arg 50 55 60 Val Ala Arg Gin Leu Pro Ala Ser Phe Asn Tyr Gly 65 70 Ala lie Lys __ _- 97 - 張尺適用中國國家標苹（CNS ) /\4现格(210/八7公筇） 請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁

_ -AT d 1232108 A7 B7 五、發明説明（95 ) 75 (2)8£()10>10:29的資料： (i )序列特性： (A) 長度：75個胺基酸 (B) 種類：胺基释 (C )表面結構：線狀 ， (ii) 分子種類：胜肽 (iii) 序列敘述：SEQ ID NO:29 : (請先閱讀背而之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標决局員工消費合作社Q^

Thr Ala Lys Ser Lys Lys Phe Pro Ser Tyr Thr Ala 1 5 10 Thr Tyr Gin Phe Gly Gly Glu Thr Gin lie Gin Arg 15 20 Arg Gin His Thr Asp Val Ser Phe lie Met Asp Arg 25 30 35 Phe Val Gly Gly Cys Lys Tyr Ser Ala Ser Gly Ser 40 45 Gly Val Arg Gly Asp Phe Gly Ser Leu Ala Pro Arg 50 55 60 Val Ala Arg Cys Leu Pro Ala Ser Phe Asn Tyr Gly 65 70 Ala lie Lys 75 (2)SEQ ID NO:30 的資料： (i)序列特性： (A) 長度：80個胺基酸 (B) 種類：胺基酸 (C )表面結構：線狀 丁 - 4 本紙張尺度適用中國國家ί’?:專（CNS ) AWWM 210X297^*7 1232108 經濟部中央標萆局貝工消t合作社印裝

A B7 五、發明説明（％ ) (ii) 分子種類：胜肽 (iii) 序列敘述：SEQ ID NO:30 :

Thr Ala Lys Ser Lys Lys Phe Pro Ser Tyr Thr Ala 1 5 10

Thr Tyr Gin Phe Gly Gly lie Ser lie Ser Glu lie 15 , 20

Lys Gly Val lie Val His Lys lie Glu Gly lie Leu 25 30 ’ 35

Phe Gly Gly Val Tyr Asn Gly Asn Cys Lys Tyr Gly 40 45

Glu Asn Ala Val Thr Asn Val Arg Gly Asp Leu Gin 50 55 60

Val Leu Ala Gin Lys Ala Ala Arg Cys Leu Pro Thr 65 70

Ser Phe Asn Tyr Gly Ala lie Lys 75 80 (2 ) S E Q I D N O : 3 1 的資料： (i) 序列特性： (A) 長度：5 6個胺基酸 (B) 種類：胺基酸 (C )表面結構：線狀 (ii) 分子種類：胜肽 (iii) 序列敘述：SEQIDNO:31:

Lys Lys Lys lie lie Thr lie Thr Arg lie lie Thr 1 5 10 lie lie Thr Thr lie Asp Gly Gly Cys Lys Tyr Gly 15 20

Glu Asn Ala Val Thr Asn Val Arg Gly Asp Leu Gin 25 30 35 -9 9 - 本紙张尺度適用中國國家標嗥（CNS ) Λ4^ ( 210Χ 2Μτ"：^ fi ') " (請先閱讀背而之注意事項再填寫本頁)

1232108 經濟部中央標嗥局只工消费合作社印我 A7 Η 7 五、發明説明（97 )

Val Leu Ala Gin Lys Ala Ala Arg Cys Leu Pro Thr 40 45

Ser Phe Asn Tyr Gly Ala lie Lys 50 55 (2 ) S E Q I D N O : 3 2 白勺資料： (i) 序列特性： (A) 長度：72個(胺基酸 (B) 種類：胺基酸 ’ (C )表面結構；：線狀 (ii) 分子種類：胜肽 (iii) 序列敘述：SEQIDNO:32:

Thr Ala Lys Ser Lys Lys Phe Pro Ser Tyr Thr Ala 1 5 10

Thr Tyr Gin Phe Gly Gly Lys Lys Lys lie lie Thr 15 20 lie Thr Arg lie lie Thr lie lie Thr Thr lie Asp 25 30 35

Gly Gly Cys Thr Tyr Gly Thr Gin Pro Ser Arg Arg 40 45

Gly Asp Met Ala Ala Leu Ala Gin Arg Leu Ser Arg 50 55 60

Cys Leu Pro Thr Ser Phe Asn Tyr Gly Ala Val Lys 65 70 (2)SEQIDN〇：33的資料： (i)序列特性： (A) 長度：55個胺基酸 (B) 種類：胺基酸 本紙張尺度適用中國國家枕準（CNS ) Λ4規彳Μ 21()χ2ϋϋ (請先閱讀背面之注意事項界填艿本頁)

1232108 Λ' 1Γ 五、發明説明（98 ) (C )表面結構：線狀 (請先閱讀背而之注念事項再填寫本頁 (ii) 分子種類：胜肽 (iii) 序列敘述：SEQIDNO:33:

Lys Lys Lys lie lie Thr lie Thr Arg lie lie Thr 1 5 10 lie lie Thr Thr lie Asp Gly Gly Cys Lys Tyr Ser 15 20

Val Ser Gly Ser Gly Arg Arg Gly Asp Leu Gly Ser 25 30 35

Leu Ala Ala Arg Val Ala Lys Cys Leu Pro Ala Ser 40 45

Phe Asn Tyr Gly Ala lie Lys 50 55 (2)SEQ ID NO:34 的資料： (i) 序列特性： (A) 長度：54個胺基酸 (B) 種類：胺基酸 (C )表面結構·線狀 (ii) 分子種類：胜肽 經濟部中央楳擎局只工消费合作社印鉍 (iii) 序列敘述：SEQ ID NO:34 :

Lys Lys Lys lie lie Thr lie Thr Arg lie lie Thr 1 5 10 lie lie Thr Thr lie Asp Gly Gly Cys Lys Tyr Ser 15 20

Thr Asp Gly Pro Arg Arg Gly Asp Met Gly Ser Leu 25 30 35

Ala Ala Arg Ala Ala Lys Cys Leu Pro Ala Ser Phe 40 45 -101 - 本紙张尺度適用中國國家標準（^^8)/\4规祜（2丨0,291公/;·) 1232108 Λ' 1Γ 五、發明説明（99 )

Asn Tyr Gly Ala He Arg 50 (2) SEQ ID NO:35 的資料： (i) 序列特性： (A) 長度：3 4個胺基酸 (B) 種類：胺基叙 (C )表面結構··線狀 ’ (ii) 分子種類：脾肽 (iii) 特性： (A )名稱/關键：修飾部位 (B)位置：2 (C )其他資料：/ 註=’’ Lys，Thr，Pro or Arg ’’ (iii) 特性： (A) 名稱/關键：修飾部位 (B) 位置：3 (C) 其他資料·· /註=’’Tyr or Sern (iv) 特性： 經濟部中央標冬局負工消费合作社印¾ (請先閱讀背而之注*事項再填艿本頁) (A )名稱/關键··修飾部位 (B)位置：4 (C )其他資料·· / 註=’’ Ser，Gly or Pro ’’ (v )特性： (A )名稱/關键··修飾部位 (B )位置：5 (C )其他資料：/ 註=’’ Thr，Ala，Glu，Lys，Asn，Pro, Arg or Ser _- 102 - 本纸张尺度用中國國家掠苹（CNS )14规# ( 210x297.：,>j·) 經濟部中央標皐局負工消费合作杜印奴 1232108 A7 _____ π 五、發明説明（100 ) ^ —·—·— (Vi)特性： (A) 名稱/關鍵·.修飾部位 (B) 位置：6 ()”：具料· /註=” Asp，Gly，Gln，Ser，Ala，Pro, Leu or Thr (vii) 特性： (A) 名稱/關鍵”修飾部位 (B) 位置：7 , (C )其他資料：/註=，，Gly，pr〇 ，Asp，Arg or Thr ’’ (iv)特性： (A )名稱/關鍵：修飾部位 (B)位置：8 (C )其他資料：/註二 ” Pr〇,批 Thr，Arg，，Gln 〇r Leu ” (viii) 特性： (A )名稱/關鍵：修飾部位 (B)位置：9 (C )其他資料：/ 註=：，，Arg，〇ιγ 〇r Tyr ” (iv)特性： (A )名稱/關鍵·修韩部位 (B )位置：1 0 (C )其他資料·· / 註=” Arg，Ser，Ala, Gly or Pro，， (iii)特性： (A )名稱/關鍵：修飾部位 (B )位置：1 1 (C )其他資料：/ 註=” Gly or Asp，’ -103 - 本紙張尺度f用中國囤家標導（CNS )—乂 松(210X297^^ ) (¾先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

1232108 kl B7 五、發明説明（1〇1 ) (iii) 特性： (A )名稱/關键：修飾部位 (B)位置：1 2 (C )其他資料·· / 註=n Asp or Pro π (iv) 特性： (A )名稱/關鍵：4修飾部位 (B )位置：1 3 ， (C )其他資料：/ 註=Met，Leu，Thr or Arg ·’ (v )特性： (A )名稱/關鍵：修飾部位 (B)位置：1 4 (C )其他資料：/ 註=Gly，Ala, Pro or Typ ’’ (vi) 特性： (A )名稱/關键：修飾部位 (B)位置：15 (C )其他資料：/ 註=M Ser5 Pro，Ala，Val or Arg (vii) 特性： 經漪部中央標挲局貝工消费合作社印狀 (A )名稱/關鍵：修飾部位 (B)位置：1 6 (C )其他資料：/ 註=’’ Leu，Pro，Thr or lie ’’ (iv)特性： (A )名稱/關键：修飾部位 (B)位置：1 7 (C )其他資料：/ 註=’’ Ala, Thr, Leu，lie or Arg

本紙張尺度適用中國國家標唪（CNS ) /\4規格（2l〇x2(^:MM !2321〇8 ________ 五、發明説明（102) (Viii)特性： (A )名稱/關键：修飾部位 (B)位置：1 8 (C )其他資料：/ 註=f’ Ala，Gln，Gly or Thr ” (iv)特性： (A )名稱/關鍵：4修飾部位 (B )位置：1 9 ， (C )其他資料：/ 註=” Arg，Glu or Lys ’’ (iii)特性： (A )名稱/關键：修飾部位 (B)位置：20 (C )其他資料：/ 註=’’ Ala，Val，Leu，Asp，Thr or Tyr (iii)特性： (A )名稱/關鍵：修飾部位 (B)位置：2 1 (C )其他資料：/ 註=’’ Ala，Ser or Arg ’’ (iii) 特性： (A )名稱/關鍵··修飾部位 (B)位置：22 (C )其他資料· / ?主=Lys，Arg, Thr，Asn or Ala，， (iv) 特性： (A )名稱/關鍵··修錦部位 (B )位置：2 4 (C )其他資料·· / 註=” Leu，pro 0Γ Thr，， _____105 - 本紙張尺度適用中國國家標苹（CNS ) A4AL彳M ------------ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁 丨•丨 裝· 經漪部中央標準局負工消费合作社印¾ 1232108 、發明説明（ 103 經濟部中央標苹局員工消费合作社印狀 (V )特性： (A )名稱/關鍵：修飾部位 (B) 位置：25 (C )其他資料·· / 註=，，Pro or Ser，， (vi) 特性： (A )名稱/關鍵··*修姊部位 (B )位置：2 6 ， (C )其他資料：/ 註=，，Ala or Thr，， (vii) 特性： (A )名稱/關鍵：修飾部位 (B )位置：3 0 (C) 其他資料：/註=’’TyrorPhe，， (iv)特性： (A )名稱/關鍵：修飾部位 (B)位置：33(C )其他資料：/ 註=lie or Valπ (viii) 特性： (A )名稱/關鍵：修飾部位 (B)位置：34(C )其他資料：/ 註=Arg，Lys or Gin (ix) 序列敘述：S E Q I D N Ο : 3 5 ·· C y s X a a X a a X a a X a a X a a X a a X a a X a a X a a X a a X a 3· 1 5 10Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Cys Xaa -106 - 本紙張尺度適用中國國家標隼（CNS ) ( 210X297,公兑 (詰先閱讀背而之注意事項再填寫本頁) 1232108 經滴部中央標苹局負工消费合作社印說 Λ_ Β 五 '發明説明（104) 15 20

Xaa Xaa Ser Phe Asn Xaa Gly Ala Xaa Xaa 25 30 (2)SEQ ID NO :36 的資料： (i) 序列特性： (A) 長度：15個胺基酸 (B )種類：胺基酸 · (C )表面結構：線狀 (ii) 分子種類：胜肽 (iii) 特性： (A )名稱/關鍵：修飾邵位 (B )位置：1 (C )其他資料：/ 註=n lie，Met or Leu n (iii) 特性： (A )名稱/關鍵：修飾部位 (B) 位置：2 (C) 其他資料·· / 註="SerorThr” (iv) 特性： (A )名稱/關鍵：修飾部位 (B)位置：4 (C )其他資料：/ 註="lie or Arg π (ν )特性： (A )名稱/關鍵：修飾部位 (B )位置：5 -107 - 本紙烺尺度適用中國國家行:隼（CNS ) Λ4ΑΊ ( 210/?97 ) (¾先間讀背而之注意事項再填寫本頁)

1232108 經濟部智慈財產局員工消費合作社印製 A7 _ B7五、發明説明（105 ) (C )其他資料：/ 註=·’ Lys or Thr π (vi) 特性： (A )名稱/關鍵：修飾部位 (B)位置：10 (C )其他資料：/ 註=n His or Thr π (vii) 特性： * (A) 名稱/關鍵：修飾部'位 (B) 位置：1 1 (C )其他資料：/ 註=n Lys or Arg π (iv)特性： (A )名稱/關鍵：修飾部位 (B)位置：1 2 (C )其他資料：/ 註=” lie，Met or Leu ’’ (viii) 特性： (A )名稱/關鍵：修飾部位 (B)位置：1 4 (C )其他資料：/ 註=，’ Gly or Thr，’ (iv)特性： (A )名稱/關键：修飾部位 (B)位置：1 5 (C )其他資料：/ 註=·’ lie，Met or Val ’， (ix) 序列叙述·· S E Q I D N Ο : 3 6 : Xaa Xaa Glu Xaa Xaa Gly Val He Val Xaa Xaa Xaa ____- 108 _ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Λ4規格（210x297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

Jj In IT _裝· 訂 1232108 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 五、發明説明（106 ) 1 5 10 Glu Xaa Xaa 15 (2)SEQ ID NO:37 的資料： (i) 序列特性： (A) 長度：1 5個<胺基酸 (B) 種類：胺基酸 ， (C )表面結構：線狀 (ii) 分子種類：胜肽 (iii) 特性： (A )名稱/關鍵：修飾部位 (B) 位置：2 (C) 其他資料：/註="SerorThr” (v) 特性： (A )名稱/關键：修飾部位 (B )位置：5 (C )其他資料·_ / 註=n Lys or Thr ’’ (v )特性： (A )名稱/關鍵：修飾部位 (B )位置：6 (C )其他資料：/ 註=” Gly or Thr ’’ (vi) 特性： (A )名稱/關鍵：修飾部位 (B )位置：1 0 ! 0 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -裝· 訂 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐） 1232108 A7 B7 五、發明説明（1〇7 ) (C )其他資料：/ 註=” H i s 〇 r T h r π (vii) 特性： (A )名稱/關鍵：修飾部位 (B)位置：1 1 (C )其他資料：/ 註=n Lys or Arg π (viii) 特性： 4

(A) 名稱/關鍵：修飾部A (B) 位置：14 (C )其他資料：/ 註=n Gly or Thr*π (ix) 序列敘述·· S Ε Q I D Ν Ο : 3 7 : lie Xaa Glu lie Xaa Xaa Val lie Val Xaa Xaa lie 1 5 10

Glu Xaa lie 15 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐）

Claims (1)

1. 公2

   8 8 8 8 A BCD

   _^j〇6134號專利申請案 请專利範圍替換本(93年5月） 申請專利範圍 1· 一種選自下列所組成之群之胜肽： (i) SEQIDNOrl ； (11)胜肽’其為除了 FMDV A12病毒株之外的FMDV病毒株 的VP1蛋白質之片段，且其為FMDv Ai2病毒株的vpi 蛋白為上之胺基酸134· 168之同源物，該同源物片段 係選自SEQ ID N0:4至91之胺基酸殘基134-168 所組成之群； (ui)由衍生自血清型A、〇或Asia的FMDV病毒株的VP1蛋 白質的保留序列所組成之胜肽，其序列對應於FMDV Aw病毒株之VP1蛋白質上之胺基酸134-168 ; (iv) 符合SEQ ID N0S:14、16、18和20之定義的胜肽；及 (v) 如上述（i)-(iv)所定義之胜肽，其中存於fmDV A12病毒 株之VP1蛋白質上的第134和157的胺基酸已被半胱胺 酸取代；及 (vi) 如上述（i)-(iv)所定義之胜肽，另包含取自VP1之 1 3 4 - 1 5 7片段末端之1至1 3個額外胺基酸； 其中SEQ IDΝαΐ之序列如下： Asn Lys Tyr Ser Ala Ser Gly Ser Gly Val Arg Gly 1 5 10 Asp Phe Gly Ser Leu Ala Pro Arg Val Ala Arg Gin 15 20 Leu Pro Ala Ser Phe Asn Tyr Gly Ala lie Lys 25 30 35 2. —種具下列胺基酸序列之胜肽，其包含 (i) 申請專利範圍第1項之胜肽之胺基酸序列，及 (ii) 輔助T細胞抗原表位（Th)之胺基酸序列。 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐)

   1232108 έβ8 C8 D8 六、申請專利範圍 3. —種具下列胺基酸序列之胜肽，其包含 (i) 申請專利範圍第2項之胺基酸序列，及 ⑼一般性免疫刺激序列之胜肽之胺基酸序列。 4. 根據申請專利範圍第1項之胜肽，其中位於對應於FMDV A12病毒株之VP1蛋白質之胺基酸134及157位置之胺基酸 係經半胱胺酸取代。 5. 根據申請專利範圍第4項之胜肽，其中至少一個胜肽係 選自SEQ ID NO:2及衍生自FMDV之其它病毒株之同源序 列所組成之群。 6. 根據申請專利範圍第1項之胜肽，其中胜肽為如第（v)項 所定義之胜肽。 7. 根據申請專利範圍第6項之胜肽，其中至少一個胜肽係 取自SEQ ID NO:3及衍生自FMDV之其它病毒株之同源序 列所組成之群。 8. 根據申請專利範圍第1項之胜肽，其係選自下列所組成 之群：SEQ ID NO:l，SEQ ID NO:2，SEQ ID NO:4，SEQ ID NO:5，SEQ ID NO:6，SEQ ID NO:7，SEQ ID NO:8，SEQ ID NO:9，SEQ ID NO:10，SEQ ID NO:ll，SEQ ID NO:12及SEQ ID NO:13。 9. 一種結構合成抗原，其具有選自SEQ ID NO: 14，SEQ ID NO:15，SEQ ID NO:16，SEQ ID NO:17，SEQ ID NO:18，SEQ ID NO:19，SEQ ID NO:20，SEQ ID NO:21 及 SEQ ID NO:35 所組成之群之數種胜肽。 10. —種由下式代表之胜肽或胜肽結合物： -2 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐) 1232108 έ88 C8 D8 六、申請專利範圍 (A)n- ( FMDV 抗原）-(B)。- (Th)m - X 或 (A)n-(Th)m - (B)。- ( FMDV 抗原）-X 或 (FMDV 抗原）-(B)。- (Th)m - (A)n - X 或 (Th)m - (B)。- ( FMDV 抗原）-(A)n - X 其中 每個A各自為胺基酸或侵染素區域，SEQ ID NO: 22 ; 每個B各自為： 胺基酸， -NHCH(X)CH2SCH2CO-， -NHCH(X)CH2SCH2CO(8-N)Lys-5 -NHCH(X)CH2S-琥珀醯亞胺基（s-N)Lys-，和 -NHCH(X)CH2S-(琥珀醯亞胺基）-; 每個Th各自為組成輔助T細胞抗原表位，或其免疫加強 類似物之胺基酸序列，其係根據羅士拔（Rothbard)序 列及1 .、4、5、8規則所製備； ” FMDV抗原’’為選自下列所組成之群之胺基酸序列； (i) 申請專利範圍第1項之序列，及 (ii) SEQ ID NO:14，SEQ ID NO:15，SEQ ID NO:16，SEQ ID NO:17，SEQ ID NO:18，SEQ ID NO:19，SEQ ID NO:20， SEQ ID NO:21 及 SEQ ID NO:35 ; X為胺基酸α-COOH或a-CONH2 ; -3 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公爱) A8 B8 C8 D8 1232108 六、申請專利範圍 η為自0至約10 ; m為自1至約4 ;及 〇為自〇至約1〇。 η.根據申請專利範圍第丨〇項之胜肽或胜肽結合物，其中 Th抗原表位係選自已知fmdV Th，得自外來抗原之已知 Th，SEQ ID ΝΟ··25，26，36及37及其免疫刺激類似物或 其片段所組成之群。 12.根據申請專利範圍第1〇項之胜肽或胜肽結合物，其中至 少一個Α為侵染素區域（Ιην)。 13·根據申請專利範圍第12項之胜肽或胜肽結合物，其中侵 染素區域係選自SEQ ID ΝΟ:22及其免疫刺激類似物及其 片段所組成之群。 14·根據申請專利範圍第1〇項之胜肽或胜肽結合物，其中至 少一個 Β 為 Pr〇-Pr〇-Xaa_pro_xaa-pro(SEQ ID ΝΟ:23)，其中 Xaa為任何胺基酸。 15·根據申請專利範圍第1〇項之胜肽或胜肽結合物，其中 為3 ’及（Α)3為（侵染素區域）-Gly-Gly。 16· —種謗發對口蹄疫病毒（F μ d V )具專一性之抗體之醫藥 組合物，包括免疫上有效量之申請專利範圍第丨1項中之 一或多個胜肽及醫藥上可接受之載劑。 17.根據申請專利範圍第16項之醫藥組合物，其中該免疫上 有效量為每公斤體重每劑量約〇 . 5微克至約1毫克。 18·根據申請專利範圍第丨6項之醫藥組合物，其中至少一個 胜肽係選自SEQ ID ΝΟ:1-21及SEQ ID NO:35所組成之群。 -4 - 本紙張尺度適财S时標準(CNS) A4規格(210X297公釐)

   裝 訂

   8 8 8 8 A BCD 1232108 六、申請專利範圍 19. 根據申請專利範圍第16項之醫藥組合物，其中胜肽或胜 肽群係選自SEQ ID ΝΟ:1-21及SEQ ID NO:35所組成之群。 20. —種具編碼申請專利範圍第1項之胜肽的序列之核酸。 21. —種診斷哺乳動物FMDV感染之方法，包括下列步騾： (a) 連接根據申請專利範圍第1項之胜肽至固體支持物， (b) 在有益於抗體結合至胜肽之條件，暴露該連接至該 固體支持物之胜肽至含有得自該哺乳動物之抗體之 樣品中，及 (c) 檢測結合至該已連接至該固體支持物之胜肽的抗 體0 -5 - 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐)