CN107365367A - A型口蹄疫病毒vp1蛋白抗原表位基因多肽及其应用 - Google Patents

A型口蹄疫病毒vp1蛋白抗原表位基因多肽及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了口蹄疫病毒FMDV‑A型VP1蛋白抗原表位多肽，还公开了该抗原表位多肽在预防和诊断口蹄疫病毒中的应用，属于分子免疫学领域。本发明所述的抗原表位多肽的氨基酸序列是FMDV‑A型VP1蛋白抗原表位的串联体。抗原表位来自不同A型FMDV病毒，本发明将能引起中和抗体的FMDV‑A型VP1蛋白抗原表位作为免疫原或疫苗，免疫动物机体后能够产生针对口蹄疫病毒FMDV‑A型的中和抗体，并能够在体外中和FMDV‑A型，阻止病毒感染动物机体。本发明抗原表位串联体能够作为检测FMDV‑A型抗体或者多肽抗体的试剂。

Description

A型口蹄疫病毒VP1蛋白抗原表位基因多肽及其应用
技术领域
本发明涉及抗原表位多肽，尤其涉及口蹄疫病毒VP1蛋白能诱导中和抗体的抗原表位多肽，本发明还涉及该抗原表位多肽在防治和诊断口蹄疫病毒中的应用，属于分子免疫学领域。
背景技术
口蹄疫(foot-and-mouth disease,FMD)是由口蹄疫病毒(FMDV)引起的偶蹄动物(牛、猪、羊、骆驼和鹿等)的一种急性、高度接触性传染病。典型的口蹄疫病理特征是在蹄、口腔黏膜和母畜乳头上均有水泡发生。本病以流行范围广、传播速度快和发病率高为特点，该病危害大，一旦暴发会给畜牧业造成严重的经济损失。
口蹄疫病毒属于小RNA病毒科口蹄疫病毒属成员，根据交叉保护试验已确定的病毒血清型有7个：O、A、C、SAT1、SAT2、SAT3和Asia1型，各血清型间无交叉反应。这些血清型的流行具有明显的地域性，在亚洲地区，主要流行A、O和Asia1型。其基因组编码4个结构蛋白和8个非结构蛋白，结构蛋白包括VP1、VP2、VP3和VP4。其中VP1、 VP2和VP3位于病毒表面，VP4位于病毒内部。其中VP1能诱导机体产生中和抗体，本发明尝试选择VP1蛋白的抗原表位作为诊断抗原，用于FMDV相应亚型抗体水平的检测和表位疫苗的研制，以期获得具有良好的免疫原性的表位疫苗。
发明内容
针对以上现有技术，本发明的目的提供一种A型口蹄疫病毒VP1蛋白抗原表位基因多肽及其应用。
为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：
本发明的第一个方面，提供一种牛A型口蹄疫病毒重组多表位抗原，是具有如下氨基酸序列之一的多肽：
(1)如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列；
(2)将SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列通过一个或多个氨基酸残基的替换、缺失或插入而获得的仍具有抗原表位功能的蛋白衍生物。
其中，所述一个或多个氨基酸残基的替换、缺失或插入为不超过5个氨基酸残基的替换、缺失或插入。
本发明的第二个方面，提供一种核苷酸序列，其特点是：所述核苷酸序列用于编码上述牛A型口蹄疫病毒重组多表位抗原。
进一步的，是具有如下核苷酸序列之一的多核苷酸：
(1)SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列；
(2)在严格条件下与SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列杂交且编码具有相同功能的多肽的核苷酸序列。
本发明的第三个方面，提供一种重组载体，其含有上述编码牛A型口蹄疫病毒重组多表位抗原的核苷酸序列。
进一步的，本发明还保护一种重组表达菌，其含有上述重组载体。
经重组载体转化的重组菌选自重组大肠杆菌。
本发明的第四个方面，提供上述的牛A型口蹄疫病毒重组多表位抗原或上述核苷酸序列在制备表位疫苗中的应用。
本发明的第五个方面，提供上述的牛A型口蹄疫病毒重组多表位抗原在制备检测抗 FMDV-A抗体或者抗FMDV-A多肽抗体的试剂盒或试剂中的应用。
本发明的第六个方面，提供上述的牛A型口蹄疫病毒重组多表位抗原、核苷酸序列、重组载体或重组菌在制备预防或治疗口蹄疫病毒药物中的应用。
本发明的第七个方面，提供一种检测、预防或治疗牛A型口蹄疫病毒疫苗组合物，所述疫苗含有上述的口蹄疫病毒重组多表位抗原。
进一步的，该疫苗组合物还包括药物学上可接受的辅料，以促进体内注射后形成抗体。药学上可接受的辅料的选择可以通过本领域的已知技术来实现。
与现有技术相比，本发明的技术方案具有如下有益效果：
本发明设计合成的口蹄疫病毒重组多表位抗原，在设计时，采用的是不同毒株FMDV-A 型VP1蛋白上的9个抗原表位串联组成，抗原表位之间由4GS-4GS柔性氨基酸连接，保证抗原不形成空间结构，能够将抗原表位展示在表面，保证有足量的抗原表位与抗体结合。同时，参照大肠杆菌密码子偏嗜表，对重组抗原表位FMDV-A的氨基酸序列进行密码子优化，以提高其原核表达效率。另在重组多表位抗原N端和C端添加酶切位点和保护性碱基。
本发明将能引起中和抗体的FMDV-A型VP1蛋白抗原表位作为免疫原或疫苗，免疫动物机体后能够产生针对口蹄疫病毒FMDV-A型的中和抗体，并能够在体外中和FMDV-A 型，阻止病毒感染动物机体。本发明抗原表位串联体能够作为检测FMDV-A型抗体或者多肽抗体的试剂，并且检测效果优异。
附图说明
构成本发明的一部分的说明书附图用来提供对本发明的进一步理解，本发明的示意性实施例及其说明用于解释本发明，并不构成对本发明的不当限定。
图1为FMDV-A型多肽原核表达载体构建图谱。将人工合成的FMDV-A型多肽插入到PET-28a多克隆位点区域限制性内切酶NotI/EcoRI之间。上游NotI起始，下游EcoRI终止。
图2为FMDV-A型VP1蛋白抗原表位重组表达质粒构建成功的鉴定结果。M为分子大小为10000bp的Marker，1为重组表达质粒酶切后的图谱，上面的条带为pET-28a(+)，大小为5369bp，下面的条带为抗原表位的串联体，大小为969bp。
图3为FMDV-A型VP1蛋白抗原表位多肽融合蛋白与抗FMDV-A型兔血清Western-blot 鉴定结果。M为100KD的蛋白Marker，1为抗FMDV-A型兔血清与FMDV-A型VP1蛋白抗原表位多肽融合蛋白发生反应的单一目的条带，大小为33.43KD。
图4为FMDV-A型VP1蛋白抗原表位多肽融合蛋白与FMDV-A型阳性牛血清 Western-blot鉴定结果。1为FMDV-A型阳性牛血清与FMDV-A型VP1蛋白抗原表位多肽融合蛋白发生反应的单一目的条带，大小为33.43KD。2为FMDV-A型阴性牛血清与 FMDV-A型VP1蛋白抗原表位多肽融合蛋白反应，无目的条带。
具体实施方式
应该指出，以下详细说明都是示例性的，旨在对本发明提供进一步的说明。除非另有指明，本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同含义。
需要注意的是，这里所使用的术语仅是为了描述具体实施方式，而非意图限制根据本发明的示例性实施方式。如在这里所使用的，除非上下文另外明确指出，否则单数形式也意图包括复数形式，此外，还应当理解的是，当在本说明书中使用术语“包含”和/或“包括”时，其指明存在特征、步骤、操作和/或它们的组合。
正如背景技术所介绍的，目前亟需一种新型的口蹄疫病毒重组多表位抗原，免疫动物机体后能够产生针对口蹄疫病毒FMDV-A型的中和抗体。VP1是主要的保护性抗原，能诱导机体产生中和抗体，因此尝试选择VP1蛋白的抗原表位作为诊断抗原，用于FMDV相应亚型抗体水平的检测和表位疫苗的研制。针对此，本发明提供一种口蹄疫病毒重组多表位抗原及其应用。
在本发明优选的实施例中，所述口蹄疫病毒重组多表位抗原如SEQ ID NO.1所示，它由不同毒株FMDV-A型VP1蛋白上的9个抗原表位串联组成，抗原表位之间由4GS-4GS 柔性氨基酸连接，保证抗原不形成空间结构，能够将抗原表位展示在表面，保证有足量的抗原表位与抗体结合。同时，参照大肠杆菌密码子偏嗜表，对重组抗原表位FMDV-A的氨基酸序列进行密码子优化，以提高其原核表达效率。另在重组多表位抗原N端和C端添加酶切位点和保护性碱基。
本发明中所述的FMDV-A抗原表位可以通过基因工程技术制备得到。
本发明中FMDV-A抗原表位可连接到原核表达载体，通过纯化获得目的蛋白。目的蛋白免疫动物可以产生中和抗体，感染细胞后也可抑制相应亚型FMDV的增殖。也可将目的蛋白制备成检测抗FMDV-A抗体或者抗FMDV-A多肽抗体的试剂。
为了使得本领域技术人员能够更加清楚地了解本发明的技术方案，以下将结合具体的实施例详细说明本发明的技术方案。
下述实施例中所用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径获得。
实施例1FMDV-A型VP1蛋白抗原表位的筛选及多表位蛋白的设计与合成
根据NCBI上的文献报道和Genebank数据库中所公布的FMDV-A型流行株VP1基因序列，设计重组抗原表位，在设计的同时选取了VP1蛋白上保守性好能诱导产生中和抗体的9个抗原表位，基因序列为如SEQ ID NO.3～11所示，将9个抗原表位重复串联，每段抗原表位之间由4GS-4GS柔性氨基酸连接，Linker的基因序列为SEQ ID NO.12所示。同时，参照大肠杆菌密码子偏嗜表，对重组抗原表位的核苷酸序列进行优化，以提高其原核表达效率。最后，在重组抗原表位序列两端添加EcoR I和Not I限制性内切酶酶切位点及保护性碱基，并利用基因工程的方法合成该重组抗原表位，其序列如SEQ ID NO.1所示。
在选取抗原表位时，本发明人查阅相关参考文献及利用生物学软件，对多种FMDV-A 型流行株VP1蛋白上的抗原表位和各抗原表位的串联体进行筛选，同时选取能够诱导T细胞或者B细胞产生中和抗体的抗原表位，经试验验证，各抗原表位的长度不宜太长，太长后会形成空间结构或者存在疏水基，不利于后期蛋白的纯化，过少的抗原表位抗原位点偏少，不能很好的与抗体结合。同时各抗原表位之间利用柔性氨基酸进行连接，使各抗原表位之间不形成空间结构，保证各抗原表位的线性结构和独立的生物学特性，保持其独立的生物学特性。最终选取了由不同毒株FMDV-A型VP1蛋白上的9个抗原表位串联组成的多表位抗原。
实施例2FMDV-A型VP1蛋白抗原表位重组表达载体的构建与鉴定
用EcoR I和Not I限制性内切酶双酶切原核表达载体pET-28a(+)及FMDV-A型VP1蛋白抗原表位串联体，分别回收载体片段和目的基因片段，用T4DNA连接酶将目的基因片段连接到pET-28a(+)载体上，转化至BL21(DE3)感受态细胞，挑取双酶切鉴定为阳性的单菌落，送北京六合华大基因科技股份有限公司测序。FMDV-A型多肽原核表达载体构建图谱如图1所示。FMDV-A型VP1蛋白抗原表位重组表达质粒构建成功的鉴定结果如图2 所示，其中，M为分子大小为10000bp的Marker，1为重组表达质粒酶切后的图谱，上面的条带为pET-28a(+)，大小为5369bp，下面的条带为抗原表位的串联体，大小为969bp，这说明本发明的FMDV-A型VP1蛋白抗原表位重组表达载体构建成功。
实施例3FMDV-A型间接ELISA检测方法的建立
FMDV-A型VP1蛋白重组抗原表位诱导表达纯化的蛋白作为抗原，按0.1-20μg/ml不同的蛋白浓度包被96孔板酶标板，用FMDV-A型阳性牛血清做一抗，以犊牛阴性血清作为一抗的阴性对照，按照1:10、1:20、1:50、1:80、1:100、1:200的比例稀释，与蛋白稀释度形成矩阵，HRP-兔抗牛IgG 1:4000稀释作为二抗，摸索蛋白和一抗的最佳浓度。初步建立 FMDV-A型间接ELISA检测方法。
表1FMDV-A型间接ELISA检测
注：+表示阳性血清OD450值，-表示阴性血清OD450值。
判定结果：空白对照及阴性血清孔吸光值小于0.2，阳性血清孔对照孔吸光值大于0.3 时结果有效。
由表1可得，蛋白包被最佳浓度为2.30μg/ml，血清稀释浓度为1:20时，检测效果最佳，其P/N为13.85。ELISA方法建立中P/N值越高，证明阳性值和阴性值差异越明显，检测方法越灵敏。可见，本发明成功建立FMDV-A型间接ELISA检测方法。
实施例4FMDV-A型VP1蛋白抗原表位多肽融合蛋白与抗FMDV-A型兔血清(阳性牛血清)的Western-blot鉴定
Western-blot具体试验过程如下:
(1)SDS-PAGE：将获得的FMDV-A型VP1蛋白抗原表位多肽融合蛋白进行 SDS-PAGE。
(2)膜处理：预先裁好与胶条同样大小的滤纸和NC膜，在转膜缓冲液中浸泡10min。
(3)转膜：转膜装置从下至上依次按阳极碳板、滤纸、NC膜(膜盖下后不可再移动)、凝胶、滤纸、阴极碳板的顺序放好，滤纸、凝胶、NC膜精确对齐，每一步都需去除气泡。接通电源，恒流200mA，转移2h。转移结束后，断开电源将NC膜取出。
(4)免疫反应：用TBST洗膜，5min×3次；用5％的脱脂奶粉包被，室温平稳摇动 2h；弃包被液，用TBST洗膜，5min×3次；加入一抗FMDV-A兔血清/阳性牛血清(按1:1000 比例用5％的脱脂奶粉稀释，液体必须覆盖膜的全部)，室温平稳摇动结合2h；加入山羊抗兔/兔抗牛的二抗(按1:3000稀释比例用5％的脱脂奶粉稀释)，平稳摇动结合2h；弃二抗，用TBST洗膜，5min×3次；
(5)化学发光，显影，定影：将A和B两种试剂等体积混合，1min后，将膜蛋白面朝下与此混合液充分接触，放入仪器成像，观察结果。
FMDV-A型VP1蛋白抗原表位多肽融合蛋白与抗FMDV-A兔血清Western-blot鉴定结果见图3，结果说明FMDV-A型VP1蛋白抗原表位多肽融合蛋白免疫兔只能产生抗该抗原表位的抗体。
FMDV-A型VP1蛋白抗原表位多肽融合蛋白与FMDV-A阳性牛血清Western-blot鉴定结果见图4，结果说明FMDV-A型VP1蛋白抗原表位多肽能够中和FMDV-A的阳性牛血清，FMDV-A型VP1蛋白抗原表位多肽具有抗原性。
实施例5FMDV-A型与抗原表位多克隆抗体的中和试验
选取3月龄雄性新西兰大白兔5只，其中2只免疫pET-28a(+)空载菌体蛋白，另外3只免疫融合蛋白。分别用弗氏完全佐剂和弗氏不完全佐剂与提纯的抗原蛋白充分混合成油乳状。每只新西兰大白兔免疫重组抗原200μg，免疫三次，间隔期为2周，均为背部皮下多点注射，首免用弗氏完全佐剂，二免、三免用弗氏不完全佐剂。每次免疫前采血留样，三免14d后肌肉注射蛋白100μg加强免疫一次，加强免疫3天后，耳静脉采血测定效价，效价达到要求后心脏采血分离血清，获得FMDV-A型抗原表位的多克隆抗体。
FMDV-A型抗原表位多克隆抗体56℃灭活30min，2000rpm离心5min，过滤，用不含有FBS的DMEM稀释血清，从1:2、1:4、1:8……..1:1024连续倍比稀释，将A型-FMDV用不含有FBS的DMEM稀释至200TCID50/100μL，然后将稀释的血清与等体积的病毒液混合，于37℃作用1h。接种已长成单层的BHK细胞，100μL/孔，每个血清稀释度作3个复孔， 37℃培养2～3d。同时设置阴阳对照。结果判定，当阳性孔(未添加血清)出现CPE时，而阴性血清(未添加病毒)及空白对照孔均未出现CPE时记录每个血清稀释度的CPE孔数。以能够完全抑制CPE的血清最大稀释度作为待检血清的中和效价(FMDV-A的中和实验在兰州兽医研究所P3实验室完成)。
表2中和试验CPE孔数
FMDV-A型与抗原表位多克隆抗体的中和试验的结果如表2所示，由表2可得，本发明的FMDV-A型VP1蛋白重组抗原表位免疫新西兰大白兔后能够产生多克隆抗体，并且该多克隆抗体在体外有效的中和口蹄疫病毒。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。
SEQUENCE LISTING
<110> 山东省农业科学院奶牛研究中心
<120> A型口蹄疫病毒VP1蛋白抗原表位基因多肽及其应用
<130> 2017
<160> 12
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 323
<212> PRT
<213> 氨基酸
<400> 1
Pro Glu Phe Tyr Ser Ala Gly Gly Thr Gly Arg Arg Gly Asp Leu Gly
1 5 10 15
Pro Leu Ala Ala Arg Val Ala Ala Gln Leu Pro Ala Ser Phe Asn Phe
20 25 30
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ser Arg Ser Gly Asp Leu
35 40 45
Gly Ser Ile Ala Ala Arg Val Ala Thr Gln Leu Pro Ala Ser Gly Gly
50 55 60
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Tyr Lys Gln Lys Ile Ile Ala Pro
65 70 75 80
Ala Lys Gln Leu Leu Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Tyr
85 90 95
Ser Ala Pro Gly Leu Cys Thr Arg Gly Asp Leu Gly Tyr Pro Arg Ala
100 105 110
Arg Val Ala Ala Glu Leu Pro Ala Ser Phe Asn Phe Gly Gly Gly Gly
115 120 125
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Tyr Ser Ala Ala Ser Gly Arg Arg Arg Gly
130 135 140
Asp Leu Gly Thr Val Ala Ala Arg Ile Ala Ala Gln Leu Pro Ala Ser
145 150 155 160
Phe Asn Phe Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Tyr Ser Ala
165 170 175
Thr Gly Ala Ser Thr Arg Gly Asp Leu Gly Pro Phe Ala Ala Arg Val
180 185 190
Ala Glu Gln Leu Pro Ala Ser Phe Asn Phe Gly Gly Gly Gly Ser Gly
195 200 205
Gly Gly Gly Ser Tyr Ser Ala Pro Gly Ala Gly Arg Arg Gly Asp Leu
210 215 220
Gly Pro Leu Ala Ala Arg Thr Ala Ala Gln Leu Pro Ala Ser Phe Asn
225 230 235 240
Phe Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Tyr Ser Ala Ala Ser
245 250 255
Gly Arg Thr Arg Gly Asp Leu Gly Gln Leu Ala Ala Arg Val Ala Ala
260 265 270
Gln Leu Pro Ala Ser Phe Asn Phe Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
275 280 285
Gly Ser Tyr Ser Ala Thr Gly Gly Arg Thr Arg Gly Asp Leu Gly Gln
290 295 300
Leu Ala Ala Arg Val Lys Val Gln Leu Pro Ala Ser Phe Asn Phe Ala
305 310 315 320
Ala Ala Leu
<210> 2
<211> 969
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 2
ccggaattcu auagcgcagg ugguaccggu cgucguggug aucugggucc gcuggcagca 60
cguguugcag cacagcugcc ggcaagcuuu aauuuuggug guggugguag cggugguggu 120
gguagcagcc guagcgguga ucuggguagc auugcagcac guguugcaac ccagcugccg 180
gcaagcggug guggugguag cggugguggu gguagcuaua aacagaaaau uauugcaccg 240
gcaaaacagc ugcugggugg uggugguagc ggugguggug guagcuauag cgcaccgggu 300
cuguguaccc guggugaucu ggguuauccg cgugcacgug uugcagcaga acugccggca 360
agcuuuaauu uugguggugg ugguagcggu ggugguggua gcuauagcgc agcaagcggu 420
cgucgucgug gugaucuggg uaccguugca gcacguauug cagcacagcu gccggcaagc 480
uuuaauuuug gugguggugg uagcgguggu ggugguagcu auagcgcaac cggugcaagc 540
acccguggug aucugggucc guuugcagca cguguugcag aacagcugcc ggcaagcuuu 600
aauuuuggug guggugguag cggugguggu gguagcuaua gcgcaccggg ugcaggucgu 660
cguggugauc uggguccgcu ggcagcacgu accgcagcac agcugccggc aagcuuuaau 720
uuugguggug gugguagcgg uggugguggu agcuauagcg cagcaagcgg ucguacccgu 780
ggugaucugg gucagcuggc agcacguguu gcagcacagc ugccggcaag cuuuaauuuu 840
ggugguggug guagcggugg uggugguagc uauagcgcaa ccgguggucg uacccguggu 900
gaucuggguc agcuggcagc acguguuaaa guucagcugc cggcaagcuu uaauuuugcg 960
gccgcttta 969
<210> 3
<211> 87
<212> RNA
<213> E1
<400> 3
uauagcgcag gugguaccgg ucgucguggu gaucuggguc cgcuggcagc acguguugca 60
gcacagcugc cggcaagcuu uaauuuu 87
<210> 4
<211> 60
<212> RNA
<213> E2
<400> 4
agccguagcg gugaucuggg uagcauugca gcacguguug caacccagcu gccggcaagc 60
<210> 5
<211> 39
<212> RNA
<213> E3
<400> 5
uauaaacaga aaauuauugc accggcaaaa cagcugcug 39
<210> 6
<211> 87
<212> RNA
<213> E4
<400> 6
uauagcgcac cgggucugug uacccguggu gaucuggguu auccgcgugc acguguugca 60
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<210> 7
<211> 87
<212> RNA
<213> E5
<400> 7
uauagcgcag caagcggucg ucgucguggu gaucugggua ccguugcagc acguauugca 60
gcacagcugc cggcaagcuu uaauuuu 87
<210> 8
<211> 87
<212> RNA
<213> E6
<400> 8
uauagcgcaa ccggugcaag cacccguggu gaucuggguc cguuugcagc acguguugca 60
gaacagcugc cggcaagcuu uaauuuu 87
<210> 9
<211> 87
<212> RNA
<213> E7
<400> 9
uauagcgcac cgggugcagg ucgucguggu gaucuggguc cgcuggcagc acguaccgca 60
gcacagcugc cggcaagcuu uaauuuu 87
<210> 10
<211> 87
<212> RNA
<213> E8
<400> 10
uauagcgcag caagcggucg uacccguggu gaucuggguc agcuggcagc acguguugca 60
gcacagcugc cggcaagcuu uaauuuu 87
<210> 11
<211> 87
<212> RNA
<213> E9
<400> 11
uauagcgcaa ccgguggucg uacccguggu gaucuggguc agcuggcagc acguguuaaa 60
guucagcugc cggcaagcuu uaauuuu 87
<210> 12
<211> 30
<212> RNA
<213> linker
<400> 12
ggugguggug guagcggugg uggugguagc 30

Claims (10)

1.一种牛A型口蹄疫病毒重组多表位抗原，其特征是，是具有如下氨基酸序列之一的多肽：
（1）如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列；
（2）将SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列通过一个或多个氨基酸残基的替换、缺失或插入而获得的仍具有抗原表位功能的蛋白衍生物。
2.一种核苷酸序列，其特征是：所述核苷酸序列用于编码权利要求1所述的牛A型口蹄疫病毒重组多表位抗原。
3.如权利要求2所述的核苷酸序列，其特征是，是具有如下核苷酸序列之一的多核苷酸：
（1）SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列；
（2）在严格条件下与SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列杂交且编码具有相同功能的多肽的核苷酸序列。
4.一种重组载体，其含有权利要求2所述的核苷酸序列。
5.一种重组表达菌，其含有权利要求4所述的重组载体。
6.权利要求1所述的牛A型口蹄疫病毒重组多表位抗原或权利要求2所述的核苷酸序列在制备表位疫苗中的应用。
7.权利要求1所述的牛A型口蹄疫病毒重组多表位抗原在制备检测抗FMDV-A抗体或者抗FMDV-A多肽抗体的试剂盒或试剂中的应用。
8.权利要求1所述的牛A型口蹄疫病毒重组多表位抗原、权利要求2所述的核苷酸序列、权利要求4所述的重组载体或权利要求5所述的重组菌在制备预防或治疗牛A型口蹄疫病毒药物中的应用。
9.一种检测、预防或治疗牛A型口蹄疫病毒疫苗组合物，其特征是：所述疫苗含有权利要求1所述的口蹄疫病毒重组多表位抗原。
10.如权利要求9所述的疫苗组合物，其特征是：该疫苗组合物还包括药物学上可接受的辅料。
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109187993A (zh) * 2018-09-13 2019-01-11 中国农业科学院兰州兽医研究所 一种口蹄疫A型病毒sIgA抗体ELISA检测试剂盒及其应用
CN112004819A (zh) * 2017-12-29 2020-11-27 株式会社准绳生命科学 用于a型口蹄疫病毒的疫苗组合物

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN86103718A (zh) * 1985-06-03 1987-02-04 伊莱利利公司 口蹄疫合成疫苗的制备方法
CN1354674A (zh) * 1998-06-20 2002-06-19 美国联合生物医学公司 用于口蹄疫的合成肽疫苗
WO2014077825A1 (en) * 2012-11-16 2014-05-22 United Biomedical, Inc. Synthetic peptide-based emergency vaccine against foot and mouth disease (fmd)
CN104119443A (zh) * 2013-04-24 2014-10-29 中国农业科学院兰州兽医研究所 牛a型口蹄疫国外流行毒株广谱多表位重组疫苗及其制备方法和应用
CN104119441A (zh) * 2013-04-24 2014-10-29 中国农业科学院兰州兽医研究所 牛a型口蹄疫广谱多表位疫苗及其制备方法和应用
CN104119442A (zh) * 2013-04-24 2014-10-29 中国农业科学院兰州兽医研究所 牛a型口蹄疫多表位疫苗及其制备方法和应用

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN86103718A (zh) * 1985-06-03 1987-02-04 伊莱利利公司 口蹄疫合成疫苗的制备方法
CN1354674A (zh) * 1998-06-20 2002-06-19 美国联合生物医学公司 用于口蹄疫的合成肽疫苗
WO2014077825A1 (en) * 2012-11-16 2014-05-22 United Biomedical, Inc. Synthetic peptide-based emergency vaccine against foot and mouth disease (fmd)
CN104119443A (zh) * 2013-04-24 2014-10-29 中国农业科学院兰州兽医研究所 牛a型口蹄疫国外流行毒株广谱多表位重组疫苗及其制备方法和应用
CN104119441A (zh) * 2013-04-24 2014-10-29 中国农业科学院兰州兽医研究所 牛a型口蹄疫广谱多表位疫苗及其制备方法和应用
CN104119442A (zh) * 2013-04-24 2014-10-29 中国农业科学院兰州兽医研究所 牛a型口蹄疫多表位疫苗及其制备方法和应用

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
易建中等: "A 型口蹄疫病毒VP1免疫活性肤基因串联片段的化学合成及克隆与表达", 《复旦大学学报（自然科学版）》 *

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112004819A (zh) * 2017-12-29 2020-11-27 株式会社准绳生命科学 用于a型口蹄疫病毒的疫苗组合物
CN112004819B (zh) * 2017-12-29 2024-01-05 株式会社准绳生命科学 用于a型口蹄疫病毒的疫苗组合物
CN109187993A (zh) * 2018-09-13 2019-01-11 中国农业科学院兰州兽医研究所 一种口蹄疫A型病毒sIgA抗体ELISA检测试剂盒及其应用
CN109187993B (zh) * 2018-09-13 2020-06-16 中国农业科学院兰州兽医研究所 一种口蹄疫A型病毒sIgA抗体ELISA检测试剂盒及其应用

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