CN102175852A - 一种口蹄疫固相竞争elisa检测方法 - Google Patents

一种口蹄疫固相竞争elisa检测方法 Download PDF

Info

Publication number
CN102175852A
CN102175852A CN201110001730XA CN201110001730A CN102175852A CN 102175852 A CN102175852 A CN 102175852A CN 201110001730X A CN201110001730X A CN 201110001730XA CN 201110001730 A CN201110001730 A CN 201110001730A CN 102175852 A CN102175852 A CN 102175852A
Authority
CN
China
Prior art keywords
foot
mouth disease
elisa
detection method
antibody
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201110001730XA
Other languages
English (en)
Inventor
李华春
李乐
苗海生
廖德芳
高林
信爱国
胡骑
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Yunnan Animal Science and Veterinary Institute
Original Assignee
Yunnan Animal Science and Veterinary Institute
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Yunnan Animal Science and Veterinary Institute filed Critical Yunnan Animal Science and Veterinary Institute
Priority to CN201110001730XA priority Critical patent/CN102175852A/zh
Publication of CN102175852A publication Critical patent/CN102175852A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Landscapes

  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)

Abstract

本发明涉及一种口蹄疫固相竞争ELISA检测方法，属于动物疫病血清学诊断技术领域。本发明将口蹄疫抗体通过包被技术结合在ELISA板上，然后通过抗原-抗体结合反应将口蹄疫抗原牢固结合ELISA板孔内，经稳定剂处理和干燥后进行真空包装，最后置低温长期保存。当需要检测口蹄疫抗体时，可以将该ELISA板直接用于实验，它可以让实验过程变得既简单又省时。

Description

一种口蹄疫固相竞争ELISA检测方法
技术领域
本发明涉及一种用于口蹄疫固相竞争ELISA的检测方法，属于动物疫病血清学诊断技术领域。
技术背景
口蹄疫是国际兽医局认定I类病，对疫区经济有严重影响，口蹄疫抗体水平的检测对疫苗免疫、疫病控制有重要意义，
ELISA是enzyme linked immuno-sorbent assay的缩写，即酶连免疫吸附实验，是当今口蹄疫抗体检测的一个重要方法，该方法分为液相阻断ELISA，即LPB-ELISA(liquid phase block，LPB)，和固相竞争ELISA，即SPC-ELISA(soil phase competition，SPC)。其中SPC-ELISA以其高敏感性和高相关性，正逐渐成为主流的口蹄疫抗体检测方法。但是SPC-ELISA的弱点是操作比较复杂，即使是有经验的操作人员也得需要4-5小时才能完成。
发明内容
针对以上情况，本发明的目的，就是要解决口蹄疫固相竞争ELISA中操作复杂的问题。
本发明的技术方案是：
把口蹄疫标准SPC-ELISA操作中必做的抗体包被和抗原结合提前完成。也就是说在进行口蹄疫抗体检测的SPC-ELISA之前，将包被口蹄疫抗体和连结口蹄疫抗原在ELISA板上提前完成，然后加入稳定剂作用一段时间后控干，干燥后形成保护膜，再该ELISA板真空包装，然后低温保存。此板便称为：口蹄疫抗原固定板，即口蹄疫ASP(antigen-soild-plate，ASP)。
当需要进行口蹄疫抗体检测时，将口蹄疫抗原固定板取出直接进行实验就行，此方法也就叫口蹄疫ASP SPC-ELISA。
和口蹄疫标准SPC-ELISA相比，本发明省去了4个步骤，即，口蹄疫抗体的包被与洗脱，口蹄疫抗原的结合与洗脱。这就使得整个口蹄疫ASP SPC-ELISA的实验时间缩短到1-2小时，还可以减少试剂盒内缓冲体系的数量。
用口蹄疫ASP SPC-ELISA检测口蹄疫抗体，与LPB-ELISA和标准中和抗体检测(virus neutralizing test，VNT)方法相比较，结果见表一。在口蹄疫中和抗体阳性血清样品中，用ASP SPC-ELISA与SPC-ELISA、LPB-ELISA检测口蹄疫抗体相比较，结果见表二。
表一口蹄疫ASP SPC-ELISA与LPB-ELISA、VNT比较
  检测方法   阳性   阴性   阳性率
  ASP SPC-ELISA   94   59   61.4％
  LPB-ELISA   101   52   66.0％
  VNT   83   70   54.2％
表二口蹄疫ASP SPC-ELISA与SPC-ELISA、LPB-ELISA比较
  检测方法   阳性   阴性   阳性率
  ASP SPC-ELISA   82   1   98.8％
  LPB-ELISA   76   6   91.6％
  SPC-ELISA   82   1   98.8％
从表一可以看出，153份检测样品中，ASP SPC-ELISA方法检出的阳性率61.4％更接近标准中和抗体检测的阳性率54.2％，且ASP SPC-ELISA方法和其它ELISA方法一样，无需动用活病毒，而标准中和抗体检测方法必须有活病毒参加才能进行。从表二可以看出，用83份口蹄疫中和抗体阳性血清再进行口蹄疫抗体检测，ASP SPC-ELISA方法和标准SPC-ELISA检出的结果是一致的。
具体实施方式
实施例1
口蹄疫抗原固定板的制备：
将标准兔抗口蹄疫病毒抗体用pH 9.6的碳酸-碳酸氢钠缓冲液按比例稀释后，每孔50微升加入到96孔ELISA板孔内，轻微震动后置4℃过夜。次日弃除孔内液体，用ELISA专用洗涤液(磷酸缓冲液，pH7.2，0.05％吐温20)洗涤3次，按每孔50微升加入口蹄疫标准抗原，置37℃震荡孵育60分钟后弃除板内液体，用ELISA专用洗涤液洗涤3次，每孔加入50微升稳定剂，置4℃过夜，控干后进行真空包装。包装后的ELISA板置4℃保存使用，长期保存可置-20℃低温保存。
口蹄疫抗原固定板的使用：
拆封口蹄疫抗原固定板，按照试验设计将待检血清样品、阳性对照血清、阴性对照血清加入相应的孔内，每孔50微升，然后按每孔50微升加入豚鼠抗口蹄疫病毒抗体，置37℃震荡孵育30分钟，弃除板内液体，用ELISA专用洗涤液洗涤3-5次，加入兔抗豚鼠IgG辣根过氧化物酶胶连剂50微升，置37℃震荡孵育30分钟，弃除板内液体，用ELISA专用洗涤液洗涤3-5次，每孔加入底物50微升，置37℃孵育10分钟进行显色，加入50微升终止液终止显色后用ELISA仪在450nm波长处读取光密度值(OD值)，通过电脑自动运算程序直接将实验结果输出。

Claims (2)

1.一种口蹄疫固相竞争ELISA检测方法，其特征在于：
a、口蹄疫抗原通过与口蹄疫抗体结合后固定在ELISA板孔内。
b、固定在ELISA板孔内的口蹄疫抗原覆盖有稳定剂保护膜。
c、口蹄疫抗原固定板可以长期保存。
2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，被检样品可直接加入口蹄疫抗原固定板孔内进行检测。
CN201110001730XA 2011-01-06 2011-01-06 一种口蹄疫固相竞争elisa检测方法 Pending CN102175852A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201110001730XA CN102175852A (zh) 2011-01-06 2011-01-06 一种口蹄疫固相竞争elisa检测方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201110001730XA CN102175852A (zh) 2011-01-06 2011-01-06 一种口蹄疫固相竞争elisa检测方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN102175852A true CN102175852A (zh) 2011-09-07

Family

ID=44519057

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201110001730XA Pending CN102175852A (zh) 2011-01-06 2011-01-06 一种口蹄疫固相竞争elisa检测方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN102175852A (zh)

Cited By (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103063854A (zh) * 2013-01-10 2013-04-24 中国农业科学院兰州兽医研究所 一种鸭坦布苏病毒抗体固相竞争elisa检测试剂盒
CN104792990A (zh) * 2015-03-31 2015-07-22 洛阳莱普生信息科技有限公司 一种a型口蹄疫竞争elisa抗体检测试剂盒
CN105388282A (zh) * 2015-10-22 2016-03-09 中国农业科学院兰州兽医研究所 一种elisa试剂盒抗原间接包被酶标板的包被方法
CN106290854A (zh) * 2015-05-27 2017-01-04 复旦大学 基于微流控芯片的巴贝虫病血清学检测方法及其应用
CN106405092A (zh) * 2016-08-31 2017-02-15 中国农业科学院兰州兽医研究所 一种基于型特异性单抗的o型口蹄疫病毒抗体固相竞争elisa试剂盒
CN106405093A (zh) * 2016-08-31 2017-02-15 北京市农林科学院 抗牛传染性鼻气管炎病毒抗体的检测试剂盒
CN106442998A (zh) * 2016-08-31 2017-02-22 中国农业科学院兰州兽医研究所 一种基于型特异性单抗的a型口蹄疫病毒抗体固相竞争elisa试剂盒
CN110161237A (zh) * 2018-04-17 2019-08-23 云南省畜牧兽医科学院 一种延长保存期的口蹄疫病毒cELISA抗体检测试剂盒
CN110161238A (zh) * 2018-04-17 2019-08-23 云南省畜牧兽医科学院 一种口蹄疫病毒抗原保护剂

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1089759A1 (en) * 1998-06-20 2001-04-11 United Biomedical, Inc. Synthetic peptide vaccines for foot-and-mouth disease
WO2004097418A1 (en) * 2003-04-28 2004-11-11 Republic Of Korea (National Veterinary Research And Quarantine Service) Method of diagnosis of foot and mouth disease and the diagnostic kit
CN101140281A (zh) * 2007-10-26 2008-03-12 云南省畜牧兽医科学研究所 口蹄疫146s抗原快速定量方法
CN101246167A (zh) * 2008-03-17 2008-08-20 广东省昆虫研究所 一种stlv双抗原夹心酶联免疫吸附测定法及其试剂盒
CN101421619A (zh) * 2004-03-25 2009-04-29 邹松 通用快捷的免疫检测法及试剂和试剂盒

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1089759A1 (en) * 1998-06-20 2001-04-11 United Biomedical, Inc. Synthetic peptide vaccines for foot-and-mouth disease
WO2004097418A1 (en) * 2003-04-28 2004-11-11 Republic Of Korea (National Veterinary Research And Quarantine Service) Method of diagnosis of foot and mouth disease and the diagnostic kit
CN101421619A (zh) * 2004-03-25 2009-04-29 邹松 通用快捷的免疫检测法及试剂和试剂盒
CN101140281A (zh) * 2007-10-26 2008-03-12 云南省畜牧兽医科学研究所 口蹄疫146s抗原快速定量方法
CN101246167A (zh) * 2008-03-17 2008-08-20 广东省昆虫研究所 一种stlv双抗原夹心酶联免疫吸附测定法及其试剂盒

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
《口蹄疫》 20050430 毕英佐 第五章第七节 具体的实验室诊断技术 146-149 1，2 , *
谢庆阁: "《口蹄疫》", 31 August 2004, article "第五章第七节 具体的实验室诊断技术", pages: 219-223 *

Cited By (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103063854A (zh) * 2013-01-10 2013-04-24 中国农业科学院兰州兽医研究所 一种鸭坦布苏病毒抗体固相竞争elisa检测试剂盒
CN103063854B (zh) * 2013-01-10 2014-12-10 中国农业科学院兰州兽医研究所 一种鸭坦布苏病毒抗体固相竞争elisa检测试剂盒
CN104792990A (zh) * 2015-03-31 2015-07-22 洛阳莱普生信息科技有限公司 一种a型口蹄疫竞争elisa抗体检测试剂盒
CN106290854A (zh) * 2015-05-27 2017-01-04 复旦大学 基于微流控芯片的巴贝虫病血清学检测方法及其应用
CN105388282A (zh) * 2015-10-22 2016-03-09 中国农业科学院兰州兽医研究所 一种elisa试剂盒抗原间接包被酶标板的包被方法
CN106405092A (zh) * 2016-08-31 2017-02-15 中国农业科学院兰州兽医研究所 一种基于型特异性单抗的o型口蹄疫病毒抗体固相竞争elisa试剂盒
CN106405093A (zh) * 2016-08-31 2017-02-15 北京市农林科学院 抗牛传染性鼻气管炎病毒抗体的检测试剂盒
CN106442998A (zh) * 2016-08-31 2017-02-22 中国农业科学院兰州兽医研究所 一种基于型特异性单抗的a型口蹄疫病毒抗体固相竞争elisa试剂盒
CN110161237A (zh) * 2018-04-17 2019-08-23 云南省畜牧兽医科学院 一种延长保存期的口蹄疫病毒cELISA抗体检测试剂盒
CN110161238A (zh) * 2018-04-17 2019-08-23 云南省畜牧兽医科学院 一种口蹄疫病毒抗原保护剂

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN102175852A (zh) 一种口蹄疫固相竞争elisa检测方法
DE502006003868D1 (de) Immunoassay zur bestimmung der freisetzung von neurotensin in die zirkulation
CN103630690B (zh) 丙型肝炎病毒抗原抗体联合检测试剂盒及其检测方法
CN102072957B (zh) 丙型肝炎病毒抗体诊断试剂盒及其制备方法
JP6348553B2 (ja) ＨＢｓ抗原を検出するための前処理用試薬キットおよびＨＢｓ抗原検出用試薬キット
CN102243232A (zh) 肠道病毒71型抗体(IgM)诊断试剂盒(酶联免疫法)
CN105388282B (zh) 一种elisa试剂盒抗原间接包被酶标板的包被方法
CN104237517B (zh) 检测人Lp-PLA2蛋白的荧光免疫层析试纸及其制备方法
WO2008027942A3 (en) Combination hepatitis c virus antigen and antibody detection method
CN101551397A (zh) 丙型肝炎病毒抗体化学发光定性检测试剂盒
CN103308684A (zh) 一种猪伪狂犬病毒IgM抗体ELISA检测试剂盒
CN105324669B (zh) 用于检测rsv的免疫层析装置
CN105223365A (zh) Gp73胶乳增强免疫比浊法体外定量测定诊断试剂盒
CN106093383A (zh) 猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体elisa诊断试剂盒及其制备方法
CN104792990A (zh) 一种a型口蹄疫竞争elisa抗体检测试剂盒
CN102331495A (zh) 食物过敏原检测试剂盒及其制备方法
WO2015181324A1 (en) Antisecretory factor complex assay
CN113265006A (zh) 一种用于捕获prrsv核衣壳蛋白抗体的融合蛋白3an及其应用
CN102854316A (zh) 一种甲型肝炎病毒IgM和IgG抗体胶体金法检测试剂盒
CN105606814B (zh) 检测人ApoE‑ε4蛋白的荧光免疫层析试纸及其制备方法
CN102128937B (zh) 用于脱敏治疗效果评价的过敏原特异性IgG4抗体检测试剂盒的制备方法
CN104418937B (zh) 人pgii抗原表位肽、抗原、抗体、用途及试剂盒
CN103364552A (zh) 猪细小病毒IgM抗体ELISA检测试剂盒及其制备方法和其应用
EP2023139A4 (en) IMMUNOASSAY METHOD AND CHIP
CN104502605A (zh) 检测犬弓形虫IgM抗体的ELISA试剂盒及其制备方法

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C02 Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001)
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

Application publication date: 20110907