CN106290854A - 基于微流控芯片的巴贝虫病血清学检测方法及其应用 - Google Patents

基于微流控芯片的巴贝虫病血清学检测方法及其应用 Download PDF

Info

Publication number
CN106290854A
CN106290854A CN201510278304.9A CN201510278304A CN106290854A CN 106290854 A CN106290854 A CN 106290854A CN 201510278304 A CN201510278304 A CN 201510278304A CN 106290854 A CN106290854 A CN 106290854A
Authority
CN
China
Prior art keywords
micro
antibody
fluidic chip
babesiasis
analysis
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201510278304.9A
Other languages
English (en)
Inventor
程训佳
隋国栋
付永锋
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Fudan University
Original Assignee
Fudan University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Fudan University filed Critical Fudan University
Priority to CN201510278304.9A priority Critical patent/CN106290854A/zh
Publication of CN106290854A publication Critical patent/CN106290854A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
    • G01N33/56905—Protozoa
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
    • B01L3/00—Containers or dishes for laboratory use, e.g. laboratory glassware; Droppers
    • B01L3/50—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes
    • B01L3/502—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes with fluid transport, e.g. in multi-compartment structures
    • B01L3/5027—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes with fluid transport, e.g. in multi-compartment structures by integrated microfluidic structures, i.e. dimensions of channels and chambers are such that surface tension forces are important, e.g. lab-on-a-chip
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/58—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances
    • G01N33/582—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances with fluorescent label

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Clinical Laboratory Science (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Automatic Analysis And Handling Materials Therefor (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Investigating, Analyzing Materials By Fluorescence Or Luminescence (AREA)

Abstract

本发明属于生物医学研究及临床应用领域，具体涉及一种基于微流控芯片专门用于高通量快速巴贝虫病血清学检测方法及其应用。本发明以微流控芯片为基础，提供巴贝虫病患者血清中巴贝虫抗原的血清抗体检测方法，与传统血清学如酶联免疫吸附试验进行对比和验证，证实本发明的基于微流控芯片的巴贝虫病血清免疫学诊断方法与传统血清学诊断结果相一致，同时具备了血清标本使用量低，同时检测多种抗原，试剂和能量消耗低，检测成本低以及自动化程度高，防止标本间的污染的特点，本方法能为进一步用于巴贝虫病患者血清免疫学诊断提供有意义的参考依据。

Description

基于微流控芯片的巴贝虫病血清学检测方法及其应用
技术领域
本发明生物医学研究及临床应用领域，涉及巴贝虫病血清免疫学检测方法；具体涉及一种基于微流控芯片专门用于高通量快速巴贝虫病血清学检测方法及其应用。
背景技术
研究报道了巴贝虫病(Babesiosis)是由寄生于红细胞内的原虫—-巴贝虫感染引起的新发人兽共患病。巴贝虫感染的严重程度依据宿主的免疫状态和虫种的不同而异；在健康人群表现为无症状或是轻微的非特异性疾病，如发热、肌痛、头痛；而对于年龄大于50岁的老年人，与HIV、伯氏疏螺旋体共感染人群，癌症患者，经历化疗或是免疫抑制的个体等免疫受累人群，田鼠巴贝虫可以导致致死性的感染，如各类血细胞减少，溶血性贫血，黄疸，血红蛋白尿，肝脾肿大，血管内凝血，急性呼吸窘迫综合症，肾衰竭。另外，患有血红蛋白病，无脾人群，慢性心力衰竭个体，肝肺疾病患者或是器官移植个体也有患严重巴贝虫病的风险。相比于住院病人6％-9％的致死率，免疫抑制、经输血传播病人的致死率接近20％。
目前最广泛应用的巴贝虫病诊断方法是显微镜镜检，该方法是巴贝虫病诊断的金标准，但该方法操作复杂、费时、费力，容易漏检，而且对镜检人员和设备的要求较高。目前，临床实践中尚无一个标准化并且经过相关部门验证的免疫学检测方法可用于巴贝虫病血清学诊断。虽然现在酶联免疫吸附试验(ELISA)、间接免疫荧光检测(IFA)、免疫斑点法(dot-ELISA)等免疫血清学方法可作为巴贝虫病流行病学调查、血液筛查使用的常规方法，但这些方法经常伴随着非特异性吸附，以及容易出现交叉污染等诸多缺点。20世纪90年代发展起来的微流体学科是指操作微小网络通道(5-500微米)中流体的科学技术。现有技术公开了微流控芯片技术是分子生物学技术、微加工技术、机械制造技术、计算机技术等多种现代技术的发展与融合，其中，可将生化反应的若干步骤包括分析、洗涤、检测等集成在一块或几块微流体芯片上，其微通道孔径只有微米级大小，具有浓缩和富集的作用，可以加速反应缩短测试时间，从而大大降低测试成本。与常规的实验技术相比较，该技术能极大降低试剂的消耗量(至少3个数量级)、同时分析产生的废液极少。在微流控芯片上进行免疫分析，将微流控芯片的分析能力和抗原-抗体反应的特异性相结合，能有效的克服常规免疫分析的缺点，使得反应效率提高，操作步骤简化，检验时间缩短，样品、试剂和能量消耗显著降低。用于免疫分析的微流控芯片是运用微加工技术建立微米级的免疫反应空间，由于尺寸上的减小，加快了反应动力学过程，使得基于生物大分子扩散控制的免疫反应速度提高几个数量级。微流控芯片多种功能结合与集成化的特点也使微流控芯片上的免疫分析与常规免疫分析相比有很多潜在的优势，因此受到越来越多的关注。
本申请的发明人拟在现有技术的基础上，提供新的巴贝虫病血清学检测方法；具体涉及一种基于微流控芯片专门用于高通量快速巴贝虫病血清学检测方法及其应用。
发明内容
本发明的目的在于提供新的巴贝虫病血清免疫学检测方法，具体涉及一种基于微流控芯片的巴贝虫病血清学检测方法，尤其是一种基于微流控芯片专门用于高通量快速巴贝虫病血清学检测方法及其应用。
本发明的基于微流控芯片的巴贝虫病血清学检测方法，其特征在于，其包括如下步骤：
1.将抗HIS抗体泵入微流控芯片的分析室，抗HIS抗体与固定有protein A的分析室表面结合；
2.泵入HIS标签的巴贝虫表面抗原BMSA蛋白，通过特异性结合，使巴贝虫表面抗原BMSA与抗HIS抗体结合固定在分析室表面；
3.将含有有5％牛白蛋白的磷酸盐缓冲液泵入微流控芯片分析室，对结合了重组巴贝虫蛋白抗原的分析室进行封闭；
4.定量的血清经稀释后，泵入微流控芯片的分析室，血清中的抗巴贝虫表面抗原BMSA的特异性抗体与重组巴贝虫表面抗原结合；
5.将标记的抗人抗体泵入微流控芯片的分析室；
6.通过信号采集模块采集数据，并由软件进行分析。
本发明方法步骤(1)中，抗HIS抗体可是单克隆抗体，也可是多克隆抗体；
本发明方法步骤(1)中，所述的微流控芯片由样品富集及免疫分析模块和信号采集模块以及对芯片的控制系统组成，其中，样品富集及免疫分析模块由并行的一个或几个单独的纳升体积的免疫微分析室所组成，每个分析室连接有多个进样空和出样口，每个分析室表面键合固定了protein A，能够和抗体特异性免疫反应；免疫分析信号由标记的反应物(抗体或抗原)实现，经过多次洗涤之后，免疫标记信号的产生的变化如荧光强度的变化可以被信号采集模块采集分析；信号采集模块由紫外LED和荧光光敏器件阵列组成，血清中抗巴贝虫表面抗原BMSA抗体与BMSA的特异性结合后，与标记的羊抗人二抗结合导致的光学信号都可被光敏器件阵列采集并传至到微处理器(计算机)中和数据库相比较，分析检测血清中特异性抗巴贝虫抗原的抗体浓度；对芯片的控制系统包括测试系统控制硬件部分和软件系统，其中，测试系统控制硬件部分主要由控制部分(计算机)，操作系统(集成化微流体芯片，数控界面)和数据采集，数据分析部分(计算机)；软件系统主要包括LABVIEW程序(控制)和ImagePro程序(数据分析)；
本发明方法步骤(1)中，微流控芯片的材料为PDMS高分子聚合材料；
本发明方法步骤(1)中，微流控芯片的分析室表面固定有Protein A蛋白；
本发明方法步骤(1)中，微流控芯片的分析室个数可由实际情况确定，如样品数及其中各成分的性质差别，在本发明的实施例中制备了一个双样品的微流控芯片，可根据实际情况将该单通道以不同方式并联、串联；
本发明方法步骤(2)中，重组疟原虫蛋白抗原为HIS标签融合蛋白BMSA；
本发明方法步骤(5)中，标记的抗人抗体不受物种来源限制，优选羊抗人抗体；
本发明方法步骤(5)中，抗人抗体的标记可是酶标抗体或荧光标记抗体；
本发明方法步骤(6)中，信号采集模块由紫外LED和荧光光敏器件阵列组成，对免疫分析结果结合导致的光学信号进行采集并传至到微处理器(计算机)分析。
本发明中，按所述的检测方法和步骤对巴贝虫病患者的血清进行了检测，结果显示，巴贝虫病患者血清中抗巴贝虫抗原BMSA的特异性抗体均可快速被所述的微流控芯片检测出，且其血清中巴贝虫抗原BMSA的特异性抗体的含量与ELISA结果相一致(如图2所示)。
本发明的基于微流控芯片专门用于高通量快速巴贝虫病血清检测方法为进一步用于巴贝虫病患者血清免疫学诊断提供有意义的参考依据。
与现有技术相比，本发明具有如下优点：在微流控芯片上进行巴贝虫抗原的免疫学诊断，将微流控芯片的分析能力和抗原-抗体反应的特异性相结合，能有效的克服常规免疫分析的缺点，使得反应效率提高，操作步骤简化，检验时间缩短，可以大量降低病人血清样本使用量，试剂和能量消耗大大降低，从降低整个检测成本，同时该方法自动化程度高，可以防止标本间的污染，提高诊断准确性。
附图说明
图1是微流控芯片设计图。
图2显示了以微流控芯片对巴贝虫病患者血清进行抗BMSA抗体免疫学检测分析室照片。
具体实施方式
实施例1 制备微流控芯片
将硅片放入Piranha溶液(98％浓硫酸：30％双氧水＝7：3)煮沸清洗15min。用去离子水冲洗5遍后用氮气吹干，并在200℃烘培30min。将Microchem公司的SU-8胶倒在硅片中央，缓慢旋转，使SU-8覆盖住硅片大部分区域。用旋涂机以3000转/min旋涂60s，使胶分布较为均匀，静置10min缓解边缘突起效应。随后进行软烘。软烘的目的是使SU-8光刻胶中的溶剂挥发，工艺控制的关键是使溶剂挥发以可控的速率进行。在65℃、95℃和65℃分别保持3min、6min和3min。之后以0.5℃/min的速率缓慢降至室温。采用接触式曝光机(波长365nm)。曝光后烘培(PEB，post exposure bake)。再热板上以5℃/min的速率由室温逐步升到95℃，期间在65℃和95℃分别保持1min和5min。之后以0.5℃/min的速率缓慢降至室温。显影在通风厨中进行，显影液的主要成分是丙二醇甲醚醋酸酯。将模具放入显影液中显影7min，之后分别用异丙醇和去离子水清洗干净，并用氮气吹干。在热板上120℃加热5min，180℃加热5min，200℃加热20min，在缓慢降至室温。将PDMS单体与固化剂按照5：1的质量配比混合均匀，除净气泡。倒在经三甲基氯硅烷处理过的SU-8模具上，在调整好的水平热板上80℃保持1h固化。形成上层具有反应微通道层的基片。在硅片上甩涂光刻胶，经紫外曝光、显影，制成硅基光阳模，用三甲基氯硅烷在气相中熏蒸5min，使其表面硅烷化，以防止在注塑过程中PDMS的粘附。并且具有控制通道的PDMS层单体与固化剂的比例为18：1，相对较软。在甩胶机上2000转/min甩涂35s。形成下层具有控制阀门通道的基片。键合及接口制作。将上层基片打孔，下层基片打孔用于控制通道。上下两片仔细对合，80℃过夜固化。整个芯片结构如图1所示。管道内泵入Protein A，分析室表面通过吸附将Protein A固定于表面。
实施例2 酶联免疫吸附试验(ELISA)检测巴贝虫病患者血清
96孔酶标板分别每孔加入含100ng巴贝虫表面抗原BMSA的Coating Buffer100μl，4℃湿盒中过夜。PBS(含0.05％Tween20)洗板后每孔加入含3％脱脂奶的PBS 400μl，湿盒中室温封闭1h。每孔中分别加入100μl健康人或病人血清(1:400稀释)，阴性对照为健康人血清(1:400稀释)湿盒中室温孵育1h。PBS(含0.05％Tween20)洗板后每孔中加入100μl辣根过氧化物酶标记的山羊抗人IgG(1:1000稀释)100μl，湿盒中室温孵育1h。PBS(含0.05％Tween20)洗板后加入显色液200μl/孔，室温下避光反应30min，最后每孔加入2M H2SO450μl终止显色反应。酶标仪490nm测定吸光度。结果显示巴贝虫病患者抗BMSA的抗体均为阳性。
实施例3 以微流控芯片对巴贝虫病患者血清进行检测
将抗HIS抗体泵入微流控芯片的分析室后，经过数次PBS洗涤，不同的分析室中分别泵入数个填料体积的重组巴贝虫表面抗原BMSA溶液，通过特异性结合，使溶巴贝虫蛋白抗原分析室表面结合。经数次PBS洗涤后，将含有有5％牛白蛋白的PBS泵入微流控芯片分析室，对结合了重组巴贝虫抗原的分析室进行封闭。随后将巴贝虫病患者的血清经稀释后，泵入微流控芯片的分析室，血清中的抗巴贝虫表面抗原BMSA抗体特异性与分析室表面上的重组巴贝虫表面蛋白结合。经数次PBS洗涤后，将标记的抗人抗体泵入微流控芯片的分析室，抗体的特异性结合导致的光学信号可被信号采集模块的光敏器件阵列采集并传至到微处理器(计算机)中和数据库相比较，来分析样品。整个测试系统控制硬件部分主要由控制部分(计算机)，操作系统(集成化微流体芯片，数控界面)和数据采集，数据分析部分(计算机)；软件系统主要包括LABVIEW程序(控制)和ImagePro程序(数据分析)；结果显示，巴贝虫病患者血清中抗巴贝虫抗原BMSA的特异性抗体均可被该微流控芯片检测出，其血清中巴贝虫抗原BMSA的特异性抗体的含量与ELISA结果相一致(如图2所示)。

Claims (10)

1.基于微流控芯片的巴贝虫病血清学检测方法，其特征在于，其包括步骤：
(1)将抗HIS抗体泵入微流控芯片的分析室；
(2)不同分析室泵入巴贝虫表面抗原BMSA溶液，通过特异性结合，使其与分析室表面结合；
(3)将含有有5％牛白蛋白的磷酸盐缓冲液泵入微流控芯片分析室，对结合了重组巴贝虫表面抗原的分析室进行封闭；
(4)定量的患者血清经稀释后，泵入微流控芯片的分析室，血清中的抗巴贝虫蛋白抗原的抗体特异性与分析室表面上的重组巴贝虫表面抗原结合；
(5)将标记的抗人抗体泵入微流控芯片的分析室；
(6)通过信号采集模块采集数据，并由软件进行分析所采集的数据。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)中，微流控芯片由样品富集及免疫分析模块和信号采集模块以及对芯片的控制系统组成；
其中，样品富集及免疫分析模块由并行的一个或一个以上单独的纳升体积的免疫微分析室所组成，每个分析室连接有一个以上进样空和出样口，每个分析室表面键合固定protein A，使与样品混合物中的抗体发生特异性免疫反应；
免疫分析信号由标记的反应物抗体或抗原实现，经过多次洗涤之后，免疫标记信号的产生的变化如荧光强度的变化被信号采集模块采集分析；
信号采集模块由紫外LED和荧光光敏器件阵列组成，所述的血清中抗巴贝虫特异性抗体与阿米巴抗原的特异性结合后，与标记的羊抗人二抗结合导致的光学信号被光敏器件阵列采集并传至到微处理器中与数据库相比较，分析检测血清中特异性抗巴贝虫抗原的抗体浓度；
对芯片的控制系统包括测试系统控制硬件部分和软件系统，其中，
测试系统控制硬件部分主要由控制部分(计算机)，操作系统(集成化微流体芯片，数控界面)和数据采集，数据分析部分(计算机)；软件系统主要包括LABVIEW程序(控制)和ImagePro程序(数据分析)。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述的微流控芯片其制备的材料为PDMS高分子聚合材料。
4.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述的微流控芯片的分析室个数由样品数及其中各成分的性质差别确定；分析室的单通道以不同方式并联、串联。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)中，抗HIS抗体是单克隆抗体，或是多克隆抗体。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)中，重组巴贝虫表面蛋白BMSA为HIS标签融合蛋白。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(5)中，标记的抗体为抗人抗体。
8.根据权利要求1或7所述的方法，其特征在于，所述抗体的标记是酶标抗体或荧光标记抗体。
9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(6)中，信号采集模块由紫外LED和荧光光敏器件阵列组成，对免疫分析结果结合导致的光学信号进行采集并传至到微处理器分析。
10.权利要求1所述的方法在用于巴贝虫病血清免疫学诊断中的用途。
CN201510278304.9A 2015-05-27 2015-05-27 基于微流控芯片的巴贝虫病血清学检测方法及其应用 Pending CN106290854A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201510278304.9A CN106290854A (zh) 2015-05-27 2015-05-27 基于微流控芯片的巴贝虫病血清学检测方法及其应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201510278304.9A CN106290854A (zh) 2015-05-27 2015-05-27 基于微流控芯片的巴贝虫病血清学检测方法及其应用

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN106290854A true CN106290854A (zh) 2017-01-04

Family

ID=57634755

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201510278304.9A Pending CN106290854A (zh) 2015-05-27 2015-05-27 基于微流控芯片的巴贝虫病血清学检测方法及其应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN106290854A (zh)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106978425A (zh) * 2017-02-17 2017-07-25 华中农业大学 东方巴贝斯虫1‑脱氧‑d‑木桐糖‑5‑磷酸还原异构酶基因及其编码的蛋白
CN109021089A (zh) * 2017-06-12 2018-12-18 复旦大学 一种与巴贝虫病患血清特异性结合的多肽片段及其应用

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102175852A (zh) * 2011-01-06 2011-09-07 云南省畜牧兽医科学院 一种口蹄疫固相竞争elisa检测方法
CN102759621A (zh) * 2011-04-26 2012-10-31 复旦大学 基于微流控芯片的高通量快速检测疟疾血清的方法
CN104155441A (zh) * 2014-04-22 2014-11-19 山东理工大学 一种基于微流控芯片的农药残留检测方法

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102175852A (zh) * 2011-01-06 2011-09-07 云南省畜牧兽医科学院 一种口蹄疫固相竞争elisa检测方法
CN102759621A (zh) * 2011-04-26 2012-10-31 复旦大学 基于微流控芯片的高通量快速检测疟疾血清的方法
CN104155441A (zh) * 2014-04-22 2014-11-19 山东理工大学 一种基于微流控芯片的农药残留检测方法

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
RICHARD E. BEHRMAN，ET AL.: "《尼尔森儿科学 第17版》", 31 October 2007 *
YUZI LUO ET AL.: "Identification and characterization of a novel secreted antigen 1 of Babesia microti and evaluation of its potential use in enzyme-linked immunosorbent assay and immunochromatographic test", 《PARASITOLOGY INTERNATIONAL》 *
周明行: "《感染病手册》", 31 August 2000 *

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106978425A (zh) * 2017-02-17 2017-07-25 华中农业大学 东方巴贝斯虫1‑脱氧‑d‑木桐糖‑5‑磷酸还原异构酶基因及其编码的蛋白
CN106978425B (zh) * 2017-02-17 2019-10-18 华中农业大学 东方巴贝斯虫1-脱氧-d-木酮糖-5-磷酸还原异构酶基因及其编码的蛋白
CN109021089A (zh) * 2017-06-12 2018-12-18 复旦大学 一种与巴贝虫病患血清特异性结合的多肽片段及其应用
CN109021089B (zh) * 2017-06-12 2022-01-18 复旦大学 一种与巴贝虫病患血清特异性结合的多肽片段及其应用

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN104360060B (zh) 一种基于微流控芯片的肺炎支原体和流感病毒特异抗体IgM的检测方法
Ouellet et al. Parallel microfluidic surface plasmon resonance imaging arrays
CN102147414B (zh) 基于纳米探针的微流体芯片检测微量蛋白的方法
CN104374919B (zh) 糖蛋白的测定方法、试剂及糖链标记物
US20100279309A1 (en) Microfluidic chips and systems for analyzing protein expression, and methods of use thereof
US10695759B2 (en) Microfluidic reagent card and detection method and application thereof
CN108686721A (zh) 用于全血样品分离检测的微流控芯片及其检测方法
TWI743430B (zh) 用於a型流感快篩之自驅動微流體晶片
CN104136123A (zh) 微流体反应器系统
EP1938101A2 (en) Microfluidic assay devices and methods
CN109212201A (zh) 一种用于血清中乙肝病毒五项检测的离心式微流控芯片
CN101884941A (zh) 基于免疫反应的生物检测微流控芯片及其制备方法
CN102243234B (zh) 一种基于免疫方法的细菌自动分选标记方法和装置
CN102749443B (zh) 双层微流控芯片器件及其在免疫检测中的用途
CN108700581A (zh) 用于定量生物试样中的测定对象物质的试剂盒及定量生物试样中的测定对象物质的方法
CN106984368A (zh) 一种基于泵阀控制的乙肝快检微流控芯片及分析方法
Garcia-Seyda et al. Microfluidic device to study flow-free chemotaxis of swimming cells
Fu et al. Diagnosis of mixed infections with swine viruses using an integrated microfluidic platform
CN108051588A (zh) 用于全血样品分离检测的微流控芯片上的抗体固定方法
CN102759621B (zh) 基于微流控芯片的高通量快速检测疟疾血清的方法
CN106290854A (zh) 基于微流控芯片的巴贝虫病血清学检测方法及其应用
CN108169194A (zh) 一种基于大蓝闪蝶的微流体芯片及其制作方法
KR102047517B1 (ko) 막 기반 다중튜브를 포함하는 생체 물질 분석 장치
CN107271674B (zh) 一种用于脂肪性肝炎检测的靶标志物gp73及检测应用方法
CN106513062B (zh) 酶联免疫快速检测的微流控芯片及其预处理和检测方法

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination