WO2020263062A1 - 구제역 바이러스 백신 조성물 - Google Patents

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WO2020263062A1
WO2020263062A1 PCT/KR2020/008478 KR2020008478W WO2020263062A1 WO 2020263062 A1 WO2020263062 A1 WO 2020263062A1 KR 2020008478 W KR2020008478 W KR 2020008478W WO 2020263062 A1 WO2020263062 A1 WO 2020263062A1
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WO
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type
foot
mouth disease
seq
vaccine
Prior art date
Application number
PCT/KR2020/008478
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French (fr)
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김은진
엄태기
송경주
김민지
육근영
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(주)플럼라인생명과학
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Publication date
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    • C12N2770/32122—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
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    • C12N2770/32111—Aphthovirus, e.g. footandmouth disease virus
    • C12N2770/32134—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein

Definitions

  • the present invention relates to polypeptides, polynucleotides, plasmids, and vaccine compositions containing them, which are involved in generating an immune response against foot-and-mouth disease virus.
  • the present invention relates to a method of generating an immune response against foot-and-mouth disease virus in a subject.
  • the present invention relates to a polypeptide, a polynucleotide, a plasmid involved in the generation of an immune response against a foot-and-mouth disease virus, and a pharmaceutical composition for preventing foot-and-mouth disease containing them.
  • the present invention relates to a method for preventing foot-and-mouth disease in a subject.
  • FMD Foot and Mouth Disease
  • livestock cows, pigs, sheep, goats, deer, etc.
  • various wild animals It is characterized by the formation of blisters.
  • FMD is a very contagious disease with a mortality rate of 40% or more, which has a great social and economic impact.
  • OIE International Waters Office
  • FMDV Foot and Mouth Disease Virus
  • RNA virus belonging to the genus Appdovirus of the Picornavirus family, and has a strong invasion power and a wide range of infections. The incubation period varies from animal to animal, but is short, about 6-10 days. In addition, since the virus is already excreted outside the body before clinical symptoms appear, transmission can easily occur. FMDV is transmitted through the respiratory, digestive, and genitals. In particular, viruses released into the respiratory tract can be transmitted through the air for up to 250 km.
  • FMDV can be classified into 7 serotypes (O, A, C, SAT1, SAT2, SAT3, Asia1) according to the sequence of the coding region of VP1, which is the most mutated among structural protein gene regions and is important for determining immunogenicity such as formation of neutralizing antibodies. have.
  • each serotype can be classified into up to 80 subtypes according to genetic characteristics.
  • type O serotype FMD is most common in Asia, Southeast Asia, and Europe, including Korea, the type O serotype FMD vaccine has been actively studied and inoculated.
  • the type O serotype FMD vaccine that has been studied so far has not been effective in protecting against foot-and-mouth disease virus recently occurring in Asia including Korea. Accordingly, there is a great need for the development of a vaccine against a new foot-and-mouth disease virus type O serotype.
  • foot-and-mouth disease virus type Asia1 is known to have relatively weak pathogenicity among foot-and-mouth disease serotypes, but in East Asia, Asia1 type has been continuously occurring since the outbreak of Asia1 type foot and mouth disease in China in 2005 (Hammond J. 2009. OIE/FAO World Reference Laboratory report , January-March 2009, Foot-and-mouth Diasease.World Reference Laboratory, Pirbright: 1-33).
  • These are viruses belonging to the genotype Group V and have been found to be genetically related to viruses isolated in India (Park, Jong-Hyun et al., 2008a, "Recent Global Outbreak Characteristics and Molecular Epidemiology of Foot-and-mouth Disease", Journal of the Korean Society of Veterinary Public Health).
  • Vaccines against a specific serotype virus do not immunize against other serotype viruses, and there are cases where the DNA sequence of two strains belonging to the same serotype differs by up to 30% of the total genes.
  • FMDV has several serotypes and subtypes, so foot-and-mouth disease vaccines have to be applied individually for each serotype.
  • it is difficult to produce an effective vaccine because there are many variations within one serotype.
  • a bivalent or more multivalent vaccine should be inoculated to prevent the simultaneous appearance of two or more types of viruses. Accordingly, there is a need for a multivalent vaccine capable of generating antigens against two or more serotypes with a single vaccination.
  • One object of the present invention is to provide a polypeptide capable of generating an immune response against foot-and-mouth disease virus and a polynucleotide encoding the same.
  • Another object of the present invention is to provide a plasmid capable of generating an immune response against foot-and-mouth disease virus.
  • Another object of the present invention is to provide a vaccine composition against foot-and-mouth disease virus.
  • Another object of the present invention is to provide a method for generating an immune response against foot-and-mouth disease virus in a subject.
  • Another object of the present invention is to provide a pharmaceutical composition for preventing foot-and-mouth disease in an individual.
  • Another object of the present invention is to provide a method of preventing foot-and-mouth disease in a subject.
  • an aspect of the present invention provides a polypeptide comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1 or an amino acid sequence having 90% or more homology thereto.
  • the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1 or an amino acid sequence having 90% or more sequence homology thereto may be a sequence corresponding to the VP1 region of foot-and-mouth disease virus O type.
  • the term "homology” refers to the degree to which a given polypeptide sequence or polynucleotide sequence is matched and may be expressed as a percentage.
  • a given polypeptide sequence and its homologous sequence having the same or similar activity as "% homology" are indicated.
  • the homology is, for example, using standard software that calculates parameters such as score, identity, and similarity, for example, BLAST 2.0, or hybridization used under defined stringent conditions. It can be confirmed by comparing the sequences by experimentation, and the appropriate hybridization conditions to be defined can be determined by methods well known to those skilled in the art.
  • the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1 is an amino acid sequence obtained by recombining VP1s of serotype O foot-and-mouth disease virus recently generated in Asia.
  • a polypeptide consisting of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1 or an amino acid sequence having 90% or more homology thereto can effectively function as an antigen capable of generating an immune response against foot-and-mouth disease virus, particularly, type O foot-and-mouth disease virus.
  • One aspect of the present invention provides a polypeptide comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1 or an amino acid sequence having 90% or more homology thereto, and the amino acid sequence of proteins VP2 to VP4 of foot-and-mouth disease virus.
  • the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1 or an amino acid sequence having 90% or more homology thereto may be sequentially linked with amino acid sequences corresponding to proteins VP2, VP3 and VP4, preferably derived from foot-and-mouth disease virus.
  • the VP4 region amino acid sequence-VP2 region amino acid sequence-VP3 region amino acid sequence- may be linked in the sequence of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1.
  • the amino acid sequence of the VP2 to VP4 proteins may preferably be derived from foot-and-mouth disease virus, particularly O-type foot-and-mouth disease virus.
  • an amino acid sequence of a furin cleavage site may be included between the sequence of each VP region.
  • the purine cleavage site may be an RGRKRRS sequence, or an AGGGGAAGAAAGAGGAGAAGC sequence, or an AGGGGACGCAAGAGGCGCTCA sequence.
  • the polypeptide may further include a Kozak sequence, an IgE leader sequence and/or a 2A amino acid sequence.
  • the polypeptide may include an IgE leader sequence-VP4 region amino acid sequence-VP2 region amino acid sequence-VP3 region amino acid sequence-amino acid sequence of SEQ ID NO: 1-2A amino acid sequence (preferably included in the above order) .
  • an amino acid sequence of a purine cleavage site may be further included between the sequences of each region.
  • the 2A amino acid sequence may be, for example, an amino acid sequence corresponding to the ACCCTGAACTTCGACCTCCTCAAACTGGCTGGCGATGTGGAAAGCAATCCTGGATGATAA nucleotide sequence.
  • the polypeptide may include a polypeptide that generates an immune response against two or more different serotype foot and mouth disease viruses.
  • the polypeptide produces an immune response against 2, 3, 4, 5, 6 or 7 selected from O, A, C, SAT1, SAT2, SAT3 and Asia1 serotype foot-and-mouth disease virus. It may include a polypeptide.
  • the polypeptide has an IgE leader sequence-FMDV type A VP4 region-FMDV A type VP2 region-FMDV A type VP3 region-FMDV A type VP1 region-FMDV O type VP4 region- FMDV O type VP2 region-FMDV O type VP3 region-FMDV O type VP1 region-2A amino acid sequence.
  • the amino acid sequence of the purine cleavage site may further be included between the sequence of each region, for example, the IgE leader sequence-the VP4 region of FMDV A type-the purine cleavage site-the VP2 region of FMDV A type-the purine cleavage site-FMDV A VP3 area of type-Purine cleavage site-FMDV type A VP1 area-Purine cleavage site-FMDV O type VP4 area-Purine cleavage site-FMDV O type VP2 area-Purine cleavage site-FMDV O type VP3 area-Purine Cleavage site-FMDV type O VP1 region-Purine cleavage site-2A amino acid sequence.
  • This type of divalent vaccine can exhibit immunity against type O and type A foot-and-mouth disease viruses.
  • the polypeptide has an IgE leader sequence-FMDV type A VP4 region-FMDV A type VP2 region-FMDV A type VP3 region-FMDV A type VP1 region-FMDV O type VP4 region- FMDV O type VP2 area-FMDV O type VP3 area-FMDV O type VP1 area-FMDV Asia1 type VP4 area-FMDV Asia1 type VP2 area-FMDV Asia1 type VP3 area-FMDV Asia1 type VP1 area-2A It may contain an amino acid sequence.
  • the amino acid sequence of the purine cleavage site may further be included between the sequence of each region, for example, the IgE leader sequence-the VP4 region of FMDV A type-the purine cleavage site-the VP2 region of FMDV A type-the purine cleavage site-FMDV A VP3 area of type-Purine cleavage site-FMDV type A VP1 area-Purine cleavage site-FMDV O type VP4 area-Purine cleavage site-FMDV O type VP2 area-Purine cleavage site-FMDV O type VP3 area-Purine Cleavage site-FMDV O type VP1 area-Purine cleavage site-FMDV Asia1 type VP4 area-Purine cleavage site-FMDV Asia1 type VP4 area-Purine cleavage site-FMDV Asia1 type VP4 area-Purine cleavage site-FMDV Asia1 type VP4 area-Purine
  • the VP1 region of FMDV O type comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1.
  • FMDV type A is a sequence disclosed in another patent application No. 10-2018-0149242 of the present applicant (application date: November 28, 2018).
  • the VP1 region of FMDV type A includes the amino acid sequence of SEQ ID NO: 85 or 86.
  • SEQ ID NOs: 85 and 86 are recombinant sequences corresponding to the VP1 region of foot-and-mouth disease virus A serotype.
  • the VP4 region of FMDV type A-VP2 region of FMDV type A-VP3 region of FMDV type A is the amino acid sequence of SEQ ID NO: 87 or comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 87.
  • the amino acid sequence of the purine cleavage site may be further included between each VP region.
  • One aspect of the present invention provides a polynucleotide comprising the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 2 or a nucleotide sequence having 90% or more homology thereto.
  • another aspect of the present invention provides a polynucleotide encoding the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1.
  • the polynucleotide encoding the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1 may be the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 2.
  • the polynucleotide encoding the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1 may be a sequence in which the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 2 is changed to a codon optimized for an animal to generate an immune response.
  • the animals include all animals, such as pigs, cows, and sheep, as long as they may develop foot-and-mouth disease, and may preferably be pigs.
  • One aspect of the present invention provides a plasmid comprising a polynucleotide comprising the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 2 or a nucleotide sequence having 90% or more homology thereto.
  • Another aspect of the present invention provides a plasmid comprising a polynucleotide encoding an amino acid sequence of SEQ ID NO: 1 or an amino acid sequence having 90% homology to the sequence of SEQ ID NO: 1.
  • plasmid refers to a DNA preparation containing a DNA sequence operably linked to a suitable regulatory sequence capable of expressing DNA in a suitable host.
  • the plasmid can be a vector, a phage particle, or simply a potential genomic insert.
  • the plasmid may be used interchangeably with a vector (or viral vector).
  • the plasmid may further include a nucleotide sequence encoding proteins VP2 to VP4 of foot-and-mouth disease virus.
  • the nucleotide sequence encoding the VP2 to VP4 protein may preferably be derived from a foot-and-mouth disease virus, particularly an O-type foot-and-mouth disease virus.
  • a polynucleotide comprising the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 2 or a nucleotide sequence having 90% or more homology thereto may be linked to the nucleotide sequence encoding the VP2 to VP4 protein of foot and mouth disease virus, preferably derived from foot and mouth disease virus. It can be sequentially linked with a nucleotide sequence encoding a VP2, VP3 and VP4 protein.
  • the plasmid may include a polynucleotide linked in the sequence of the nucleotide sequence of the VP4 region-the nucleotide sequence of the VP2 region-the nucleotide sequence of the VP3 region-the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 2 (5'->3' basis). have.
  • Additional nucleotide sequences may be included between the nucleotide sequences of each region.
  • the additional nucleotide sequence may be a nucleotide sequence corresponding to the purine cleavage site region.
  • the purine cleavage site may be an AGGGGAAGAAAGAGGAGAAGC sequence, or an AGGGGACGCAAGAGGCGCTCA sequence.
  • the plasmid may contain the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 3.
  • the plasmid may further include a Kozak sequence, an IgE leader sequence and/or a 2A sequence.
  • the plasmid may include an IgE leader sequence-a nucleotide sequence of the VP4 region-a nucleotide sequence of the VP2 region-a nucleotide sequence of the VP3 region-a nucleotide sequence of SEQ ID NO: 2-2A nucleotide sequence (preferably the above sequence Inclusive).
  • the 2A nucleotide sequence may be, for example, ACCCTGAACTTCGACCTCCTCAAACTGGCTGGCGATGTGGAAAGCAATCCTGGATGATAA nucleotide sequence.
  • the plasmid may contain a polynucleotide that generates an immune response against two or more different serotype foot-and-mouth disease viruses.
  • the polynucleotide generates an immune response against 2, 3, 4, 5, 6 or 7 selected from O, A, C, SAT1, SAT2, SAT3 and Asia1 serotype foot and mouth disease viruses. It may include a polynucleotide.
  • the polynucleotide has an IgE leader sequence-FMDV A type VP4 region-FMDV A type VP2 region-FMDV A type VP3 region-FMDV A type VP1 region-FMDV O type VP4 region -FMDV O type VP2 region-FMDV O type VP3 region-FMDV O type VP1 region-2A base sequence may be included.
  • each region may further include a nucleotide sequence of the purine cleavage site, for example, the IgE leader sequence-FMDV type A VP4 region-Purine cleavage site-FMDV A type VP2 region-Purine cleavage site-FMDV A VP3 area of type-Purine cleavage site-FMDV type A VP1 area-Purine cleavage site-FMDV O type VP4 area-Purine cleavage site-FMDV O type VP2 area-Purine cleavage site-FMDV O type VP3 area-Purine Cleavage site-FMDV O type VP1 region-Purine cleavage site-2A nucleotide sequence may be included.
  • This type of divalent vaccine can exhibit immunity against type O and type A foot-and-mouth disease viruses.
  • the polynucleotide is an IgE leader sequence-FMDV A type VP4 region-FMDV A type VP2 region-FMDV A type VP3 region-FMDV A type VP1 region-FMDV O type VP4 region -VP2 area of FMDV O type-VP3 area of FMDV O type-VP1 area of FMDV Asia1 type-VP4 area of FMDV Asia1 type-VP2 area of FMDV Asia1 type-VP3 area of FMDV Asia1 type-FMDV Asia1 type VP1 area- It may contain the 2A nucleotide sequence.
  • each region may further include a nucleotide sequence of the purine cleavage site, for example, the IgE leader sequence-FMDV type A VP4 region-Purine cleavage site-FMDV A type VP2 region-Purine cleavage site-FMDV A VP3 area of type-Purine cleavage site-FMDV type A VP1 area-Purine cleavage site-FMDV O type VP4 area-Purine cleavage site-FMDV O type VP2 area-Purine cleavage site-FMDV O type VP3 area-Purine Cleavage site-FMDV O type VP1 area-Purine cleavage site-FMDV Asia1 type VP4 area-Purine cleavage site-FMDV Asia1 type VP4 area-Purine cleavage site-FMDV Asia1 type VP4 area-Purine cleavage site-FMDV Asia1 type VP4 area-Purine cleavage site-
  • the VP1 region of FMDV O type comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1.
  • FMDV type A is a sequence disclosed in another patent application No. 10-2018-0149242 of the present applicant (application date: November 28, 2018).
  • the VP1 region of FMDV type A includes a nucleotide sequence of SEQ ID NO: 88, 89 or 90.
  • SEQ ID NOs: 88, 89 and 90 are recombinant sequences corresponding to the VP1 region of foot-and-mouth disease virus A serotype, respectively.
  • the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 89 is an optimized nucleotide sequence of SEQ ID NO: 88 with a pig codon.
  • the VP4 region of FMDV type A-VP2 region of FMDV type A-VP3 region of FMDV type A is the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 91 or comprises the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 91 .
  • a base sequence of a purine cleavage site may be further included between each VP region.
  • the VP4 region of FMDV type A-VP2 region of FMDV type A-VP3 region of FMDV type A-VP1 region of FMDV type A is the base sequence of SEQ ID NO: 92 or SEQ ID NO: It contains the nucleotide sequence of 92.
  • a base sequence of a purine cleavage site may be further included between each VP region.
  • the VP4 region of FMDV Asia1 type-the VP2 region of FMDV type A-the VP3 region of FMDV type A-the VP1 region of FMDV type A is the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 94 or SEQ ID NO: It contains the nucleotide sequence of 94.
  • a base sequence of a purine cleavage site may be further included between each VP region.
  • Another aspect of the present invention provides a foot-and-mouth disease vaccine composition comprising the polypeptide of the present invention, the polynucleotide of the present invention, or the plasmid of the present invention.
  • the polypeptide, the polynucleotide, and the plasmid are as described above unless otherwise stated.
  • vaccine is a biological preparation containing an antigen that gives immunity to an individual, and refers to an immunogen or an antigenic substance that gives immunity to a living body by administration to humans or animals, for example by injection or oral administration, to prevent infection.
  • the vaccine may be a DNA vaccine.
  • DNA vaccine refers to a vaccine that causes an immune response by artificially replicating some of the genes such as pathogens or viruses and then administering the same.
  • These DNA vaccines have various advantages over existing protein vaccines. i) First of all, since they can be synthesized only with the genetic information of the pure target pathogen antigen, there is no need to directly deal with dangerous pathogens, and ii) genes necessary for inducing toxicity. It has various advantages, such as being able to develop vaccines in response to various infectious diseases that occur rapidly due to its simplicity consisting of only plasmid DNA because it uses only some of them. do.
  • the foot-and-mouth disease vaccine composition may preferably have a protective immunity against foot-and-mouth disease virus, in particular, type O foot-and-mouth disease virus.
  • the vaccine composition of the present invention may contain a veterinary acceptable carrier.
  • vehicleinarily acceptable carrier includes any and all solvents, dispersion media, coatings, adjuvants, stabilizers, diluents, preservatives, antibacterial and antifungal agents, isotonic agents, adsorption delaying agents, and the like.
  • Carriers, excipients, and diluents that may be included in the vaccine composition include lactose, dextrose, sucrose, sorbitol, mannitol, xylitol, maltitol, starch, glycerin, starch, gum acacia, alginate, gelatin, calcium phosphate, calcium silicate, cellulose.
  • composition for a vaccine of the present invention may be formulated in the form of oral dosage forms such as powders, granules, tablets, capsules, suspensions, emulsions, syrups, aerosols, etc., and sterile injectable solutions according to a conventional method.
  • oral dosage forms such as powders, granules, tablets, capsules, suspensions, emulsions, syrups, aerosols, etc., and sterile injectable solutions according to a conventional method.
  • it can be prepared using diluents or excipients such as generally used fillers, extenders, binders, wetting agents, disintegrants, and surfactants.
  • poly-L-Glutamic acid may be used to aid in stabilization.
  • the vaccine composition may be injected into a subject in various forms.
  • injection may be performed by any one method selected from the group consisting of subcutaneous injection, intramuscular injection, subcutaneous injection, intraperitoneal injection, nasal administration, intravenous administration, transdermal administration, and oral administration.
  • the vaccine composition may include one or more adjuvants to improve or strengthen the immune response.
  • Suitable adjuvants include peptides, aluminum hydroxides, aluminum phosphates, aluminum oxides and compositions consisting of mineral or vegetable oils such as Marcol 52 and one or more emulsifiers or surface active substances such as resolcecitin, polyvalent cations, polyanions, etc. .
  • One aspect of the present invention provides a multivalent vaccine composition against two or more serotypes of foot-and-mouth disease virus.
  • Foot-and-mouth disease virus having protective immunity of the vaccine composition may be two or more selected from O, A, C, SAT1, SAT2, SAT3 and Asia1 serotype foot-and-mouth disease virus, for example, 2, 3, 4, 5, It can be 6 or 7.
  • the foot-and-mouth disease virus having protective immunity in the vaccine composition may be type O and type A, in which case the vaccine composition acts as a divalent vaccine composition.
  • the foot-and-mouth disease virus having protective immunity in the vaccine composition may be type O, type A, and type Asia1, in which case the vaccine composition acts as a divalent vaccine composition.
  • One aspect of the present invention provides a method of generating an immune response against a foot-and-mouth disease virus in an individual, comprising administering to the individual the vaccine composition of the present invention.
  • the vaccine composition is as described above unless otherwise stated.
  • immune response refers to the activation of the host's immune system, eg, the mammalian's immune system in response to introduction of an antigen.
  • the immune response can be in the form of a cellular response or a humoral response, or both.
  • the term "individual” as used herein refers to animals including humans, and may be, for example, mammals, cows, more specifically pigs, cows, sheep, and the like.
  • the term “subject” may be used interchangeably with a subject.
  • the vaccine composition of the present invention may contain an effective amount of an active ingredient, that is, a total recombinant polypeptide, a recombinant polynucleotide, or a plasmid containing the same, together with a pharmaceutically acceptable carrier and adjuvant.
  • an effective amount means that a component of the vaccine is an amount sufficient to induce a specific immune response against foot-and-mouth disease virus type O in the vaccinated animal.
  • the effective amount can be easily determined by a person skilled in the art, for example, through routine experimentation in animals.
  • the administration may be administered by any route suitable for administration of the DNA vaccine, for example, by subcutaneous, intramuscular, intraperitoneal or intravenous injection.
  • the foot-and-mouth disease virus is an O-type foot-and-mouth disease virus.
  • Another aspect of the present invention provides a method for preventing foot-and-mouth disease, preferably type O foot-and-mouth disease, in a subject, comprising administering to the subject the vaccine composition of the present invention.
  • Another aspect of the present invention provides a pharmaceutical composition for preventing foot-and-mouth disease, preferably O-type foot-and-mouth disease, comprising the polypeptide, polynucleotide or plasmid according to the present invention.
  • each term has the same meaning as described above unless otherwise noted.
  • prevention means all actions in which foot-and-mouth disease is suppressed or delayed by administration of the composition according to the present invention.
  • the foot-and-mouth disease virus vaccine composition according to the present invention can provide a DNA vaccine composition exhibiting high immunogenicity against foot-and-mouth disease virus. Accordingly, when the vaccine composition of the present invention is administered, antibodies against foot-and-mouth disease virus are produced at a remarkably high level in the inoculated individual, and thus an immune response is effectively exhibited. In particular, it has excellent protective immune response against foot-and-mouth disease type O virus, especially foot-and-mouth disease type O virus, which has recently occurred in Asia.
  • foot-and-mouth disease virus vaccine composition according to the present invention when administered to an individual such as pigs or cows, it is possible to achieve excellent preventive effects against foot-and-mouth disease.
  • foot-and-mouth disease vaccine composition according to the present invention may be used in combination with other serotype foot-and-mouth disease virus vaccines or inhibitors, or other serotype foot-and-mouth disease treatment or prevention agents.
  • the foot-and-mouth disease virus vaccine composition according to the present invention may be constructed and used to prevent two or more serotype foot-and-mouth disease as a multivalent vaccine.
  • SEQ ID NO: 1 shows a recombinant VP1 amino acid sequence (SEQ ID NO: 1) prepared by substituting some of the amino acids of the existing serotype O FMD DNA vaccine VP1.
  • SEQ ID NO: 2 shows a recombinant VP1 nucleotide sequence (SEQ ID NO: 2) prepared by substituting a part of the amino acid of the existing serotype O FMD DNA vaccine VP1.
  • Figure 3 is a schematic diagram showing the process of replacing the existing serotype O FMD DNA vaccine VP1 region with a new recombinant VP1 nucleotide sequence.
  • Figure 4 specifically shows the partial sequence and site of the PLS-FMD-O DNA vaccine.
  • 5 shows the results of analysis of the antibody formation effect according to the vaccine administration of the present invention in mice by SPC ELISA.
  • FIG. 6 is an illustration of a bivalent DNA vaccine according to the present invention, which is a multivalent vaccine showing effects against foot-and-mouth disease type A and type O.
  • FIG. 8 is an illustration of a trivalent DNA vaccine according to the present invention, which is a multivalent vaccine showing effects against foot-and-mouth disease type A, type O, and type Asia1.
  • the VP1 region of foot-and-mouth disease virus has the most mutation among the P1 structural protein gene regions of foot-and-mouth disease virus and is an important site for determining immunogenicity such as formation of neutralizing antibodies.
  • the survey targets were Bangladesh, Bhutan, Cambodia, China, Hong Kong, Indonesia, India, Japan, Laos, Malaysia, Mongolia, Vietnamese, Nepal, Philippines, Russia, Singapore, South Korea, Sri Lanka, Taiwan, Thailand, and Vietnam in a total of 21 countries.
  • Virus name VP1 amino acid sequence AB618503 JPN/MZ1/2010 (SEQ ID NO: 4) TTSTGESADPVTATVENYGGETQVQRRHHTDVSFILDRFVKVTPKDSINVLDLMQTPSHTLVGALLRTATYYFADLEVAVKHEGDLTWVPNGAPEAALDNTTNPTAYHKAPLTRLALPYTAPHRVLATVYNGNCKYAGGSLPNVRGDLVDLQVLAKKAQARRPELLVDLQVLAKKAQAR MF461724 (XJ/CHA/2017) (SEQ ID NO: 5) TTSTGESADPVTTTVENYGGETQVQRRQHTDVSFILDRFVKVTPKDQINVLDLMQTPAHTLVGALLRTATYYFADLEVAVKHEGNLTWVPNGAPETALDNTTNPTAYHKAPLTRLALPYTAPHRVLATVYNGNCKYGEGAVTNVRLPLLTSYDLQVLAQKAQKARTY MF947474
  • the 81 amino acid sequences of SEQ ID NOs: 4 to 84 were aligned by Clustal/muscle.
  • the consensus sequence of VP1 was derived based on the alignment results.
  • a new FMD O type vaccine was prepared using the polynucleotide represented by the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 2, and an overall schematic diagram is shown in FIG. 3.
  • the specific sequence and each site of the recombinant nucleotide prepared as described above are shown in FIG. 4 and indicated by SEQ ID NO: 3.
  • the DNA plasmid containing the nucleotide of SEQ ID NO: 3 was named "PLS-FMD-O".
  • E. coli with PLS-FMD-O was inoculated into 2.5 L of LB medium, and then cultured at 37°C overnight. Then, a plasmid was extracted from the cultured E. coli using EndoFree Plasmid Giga kit (QIAGEN, Cat#12391). The extracted plasmid was dissolved in Endo-free water and stored at -70°C. The stored plasmid was then used in an antibody formation experiment to confirm the vaccination effect in animals.
  • mice C57BL/6 (8 weeks old, female) After dividing 15 mice C57BL/6 (8 weeks old, female) into 3 groups of 5 mice per group, the vaccine of the present invention, the existing vaccine, and mock plasmid inoculation were carried out 3 times every 2 weeks for each group as follows. I did. Inoculation was performed using an electroporation device (cellectra 2000), and a DNA vaccine was administered at a concentration of 30 ⁇ g/dog.
  • Blood collection was performed using the orbital blood collection method before administration (week 0), after the second administration (week 4), and after the third administration (week 6). Serum was separated from the collected blood and stored at -80°C. The stored serum was dissolved and subjected to SPC (solid phase competition) ELISA analysis.
  • the SPC ELISA was performed using PrioCHECK FMDV Type A ELISA KIT (Prionics lelystad B.V/Netherlands), and the experimental method was performed according to the experimental protocol provided by the kit manufacturer.
  • the vaccine PLS-FMD-O of the present invention has a higher response inhibition (PI value) compared to the existing vaccine pGX1414.
  • the higher the response inhibition (PI value) the more specific antibodies to foot-and-mouth disease serotype O were produced. That is, the vaccine PLS-FMD-O of the present invention has a significantly greater amount of antibodies formed at the same time point compared to the existing vaccine pGX1414.
  • foot-and-mouth disease is highly contagious, and by excreting the foot-and-mouth disease virus to the outside of the body before clinical symptoms appear, not only does it easily occur between animals, but also has a very short incubation period. Therefore, in order to exhibit an effective function as a vaccine against foot-and-mouth disease, not only must the effect of inhibiting foot-and-mouth disease virus be excellent, but also the speed of antibody production against foot-and-mouth disease virus must be fast.
  • the vaccine according to the present invention is administered, not only has the inhibitory ability against foot-and-mouth disease virus significantly, but also the antibody production rate is significantly faster than that of the existing vaccine, so that the foot-and-mouth disease transmission can be inhibited early. It is very important in the vaccine against
  • Bivalent DNA vaccines for foot-and-mouth disease type A and type O were prepared using the previously prepared recombinant sequences.
  • the VP1 region of FMD A type may include the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 88, 89 or 90
  • the VP1 region of the FMD O type may include the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 2.
  • the bivalent DNA vaccine for foot and mouth disease A and O type prepared using the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 89 as the FMD A type VP1 region and the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 2 as the FMD O type VP1 region, is "PLS -FMD-A,O".
  • E. coli having PLS-FMD-A,O was inoculated into 2.5 L of LB medium, and then cultured at 37°C overnight. Then, a plasmid was extracted from the cultured E. coli using EndoFree Plasmid Giga kit (QIAGEN, Cat#12391). The extracted plasmid was dissolved in Endo-free water and stored at -70°C. The stored plasmid was then used in an antibody formation experiment to confirm the vaccination effect in animals.
  • mice C57BL/6 (8 weeks old, female) After dividing 15 mice C57BL/6 (8 weeks old, female) into 3 groups of 5 mice per group, plasmid inoculation was performed 3 times at intervals of 2 weeks for each group.
  • Group 2 was vaccinated with the combination of A-type monovalent vaccine and O-type monovalent vaccine
  • Group 3 was vaccinated with type A and type O bivalent vaccines. Inoculation was performed using an electroporation device (cellectra 2000), and a DNA vaccine was administered at a concentration of 30 ⁇ g/dog.
  • Blood collection was performed using the orbital blood collection method before administration (week 0), after the second administration (week 4), and after the third administration (week 6). Serum was separated from the collected blood and stored at -80°C. The stored serum was dissolved and subjected to SPC (solid phase competition) ELISA analysis.
  • the SPC ELISA was performed using PrioCHECK FMDV Type A ELISA KIT (Prionics lelystad B.V/Netherlands), and the experimental method was performed according to the experimental protocol provided by the kit manufacturer.
  • both O-type antibodies and A-type antibodies are formed early after vaccination, from which the recombinant O-type vaccine according to the present invention is inoculated with other serotypes or in combination with other serotypes. It can be seen that even if inoculated in the form of the prepared bivalent vaccine, it does not counteract the effect between different serotypes. Therefore, the recombinant O type vaccine according to the present invention has proven useful both as a monovalent vaccine and as a multivalent vaccine.
  • Trivalent DNA vaccines were prepared for foot-and-mouth disease type A, type O, and type Asia1 using the previously prepared recombinant sequences.
  • Figure 8 shows a specific example of the prepared trivalent vaccine.
  • the VP1 region of FMD A type may contain the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 88, 89 or 90
  • the VP1 region of the FMD O type may contain the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 2, FMD Asia1
  • the VP1 region of the type may include a conventionally known nucleotide sequence.
  • nucleotide sequence of SEQ ID NO: 89 as the VP1 region of FMD A type
  • nucleotide sequence of SEQ ID NO: 2 as the VP1 region of FMD O type
  • nucleotide sequence of SEQ ID NO: 93 as the VP1 region of FMD Asia1 type
  • the prepared, trivalent DNA vaccine against foot-and-mouth disease type A, type O and Asia1 was named "PLS-FMD-A,O,Asia1”.
  • nucleotide sequence of SEQ ID NO: 93 used as the VP1 region of the FMD Asia1 type is the VP1 region of the FMD Asia1 type contained in pGX9010 provided by INOVIO, USA.
  • the PLS-FMD-A,O,Asia1 plasmid was prepared in the same manner as in Example 4.
  • PLS-FMD-O inhibits the response at a significantly higher level even when co-vaccinated with other serotypes, namely A type foot-and-mouth disease vaccine and Asia1 type foot-and-mouth disease vaccine.
  • Figure (PI value) is shown.
  • PI value is shown.
  • the recombinant O type vaccine according to the present invention has proven useful both as a monovalent vaccine and as a multivalent vaccine.

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Abstract

본 발명은 구제역 바이러스에 대한 면역 반응 생성에 관여하는 폴리펩티드, 폴리뉴클레오티드, 플라스미드 및 이들을 함유하는 백신 조성물에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 개체에서 구제역 바이러스에 대한 면역 반응을 생성하는 방법에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 구제역 바이러스에 대한 면역 반응 생성에 관여하는 폴리펩티드, 폴리뉴클레오티드, 플라스미드 및 이들을 함유하는 구제역 예방용 약학 조성물에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 개체에서 구제역을 예방하는 방법에 관한 것이다.

Description

구제역 바이러스 백신 조성물
본 발명은 구제역 바이러스에 대한 면역 반응 생성에 관여하는 폴리펩티드, 폴리뉴클레오티드, 플라스미드 및 이들을 함유하는 백신 조성물에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 개체에서 구제역 바이러스에 대한 면역 반응을 생성하는 방법에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 구제역 바이러스에 대한 면역 반응 생성에 관여하는 폴리펩티드, 폴리뉴클레오티드, 플라스미드 및 이들을 함유하는 구제역 예방용 약학 조성물에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 개체에서 구제역을 예방하는 방법에 관한 것이다.
구제역(Foot and Mouth Disease, FMD)은 가축(소, 돼지, 양, 염소, 사슴 등) 및 다양한 야생 동물을 포함하는, 발굽이 갈라진 우제류에서 나타나는 바이러스성 질환으로, 입, 코, 유두, 발굽 등에 수포가 형성되는 것이 특징이다. FMD는 전염성이 매우 강하고 치사율이 40% 이상으로 사회 경제적으로 미치는 영향이 큰 질병이다. 이 때문에 국제수역사무국(OIE)에서 FMD를 A급 질병으로 분류하여 관리하고 있으며, 대부분 국가에서도 제1종 가축전염병으로 지정하여 관리하고 있다. 게다가, 경제적으로 엄청난 손상을 준 FMD 집단발병이 거의 모든 대륙에서 과거 십 년에 걸쳐 일어났다.
구제역 바이러스(Foot and Mouth Disease Virus, FMDV)는 피코르나바이러스과의 애프도바이러스속에 속하는 단일가닥 포지티브 RNA 바이러스로서, 침입력이 강할 뿐만 아니라 감염 범위가 넓다. 잠복기간은 동물마다 다르나 약 6~10일 정도로 짧다. 또한 임상 증상을 나타내기 이전에 이미 바이러스를 체외로 배설하기 때문에 전파가 쉽게 일어날 수 있다. FMDV는 호흡기, 소화기, 생식기 등을 통해 감염되는데, 특히 호흡기로 배출된 바이러스는 최고 250km까지 공기를 통해 전파될 수 있다.
FMDV는 구조단백질 유전자 부위 중에 가장 변이가 심하고 중화항체 형성 등 면역원성 결정에 중요한 VP1의 코딩 영역 서열에 따라 7개의 혈청형(O, A, C, SAT1, SAT2, SAT3, Asia1)으로 구분될 수 있다. 또한, 각 혈청형은 유전자 특성에 따라 최대 80여 종의 서브타입으로 분류될 수 있다.
한국을 포함한 아시아, 동남아시아와 유럽 등지에서는 O형 혈청형 FMD가 가장 흔하게 발생하므로 O형 혈청형 FMD 백신을 활발히 연구하고 접종해왔다. 그러나, 현재까지 연구된 O형 혈청형 FMD 백신은 최근 한국을 포함한 아시아에서 발생하는 구제역 바이러스에 대해 방어능을 효과적으로 발휘하고 있지 못하다. 이에, 새로운 구제역 바이러스 O형 혈청형에 대한 백신의 개발에 대한 필요성이 크게 존재한다.
한편, 대한민국 내에서 주로 발생하는 구제역이 혈청형 O형 바이러스였기 때문에 A형 바이러스에 대한 대비가 미비하였다가, 2017년 2월 대한민국 연천에서 발생한 구제역이 혈청형 A 바이러스로 판명됨에 따라 사태가 심각해졌다.
또한, 구제역 바이러스 Asia1형은 구제역 혈청형 중 비교적 병원성이 약하다고 알려졌으나 동아시아 지역에서는 2005년 중국의 Asia1형 구제역 발생 이후 지속적으로 Asia1형이 발생하고 있다(Hammond J. 2009. OIE/FAO World Reference Laboratory report, January-March 2009, Foot-and-mouth Diasease. World Reference Laboratory, Pirbright: 1-33). 이들은 유전형 Group V에 속하는 바이러스로 인도에서 분리된 바이러스와 유전적으로 관련이 깊은 것으로 확인되었다(박종현 등, 2008a, "구제역의 최근 세계적 발생 특성과 분자역학적 고찰" 한국수의공중보건학회지). 이와 같은 대한민국 주변 지역의 구제역 발생 현황을 고려하면, A형과 O형 이외에도 Asia1형 구제역 바이러스가 국내에 유입될 상황에 대한 대비가 필요하다.
특정 혈청형 바이러스에 대한 백신은 다른 혈청형 바이러스에 대하여 면역 작용을 하지 않으며, 같은 혈청형에 속하는 두 균주(strain)가 가진 DNA 서열에서 전체 유전자의 30%까지 차이가 나는 경우도 있다. 이와 같이 FMDV는 여러 혈청형과 서브타입이 있으므로 구제역 백신은 혈청형마다 각각 개별적으로 적용해야 하는 번거로움이 있다. 뿐만 아니라, 한 혈청형 내에서도 많은 변이가 존재하므로 유효한 백신을 생산하기 어렵다. 또한 구제역 백신을 접종하더라도 수 개월만 면역이 유지된다는 단점이 있다.
앞서 언급하였듯이, 구제역의 한 혈청형에 대한 백신은 다른 혈청형에 대하여 면역 작용을 하지 않기 때문에, 두 종류 이상의 바이러스가 동시에 출현하는 경우를 예방하기 위해서는 2가 이상의 다가 백신을 접종하여야 한다. 이에 따라, 한 번의 백신 접종으로 2종 이상의 혈청형에 대한 항원 생성이 가능한 다가 백신이 요구되고 있다.
본 발명의 일 목적은 구제역 바이러스에 대한 면역 반응을 생성할 수 있는 폴리펩티드 및 이를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 구제역 바이러스에 대한 면역 반응을 생성할 수 있는 플라스미드를 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 구제역 바이러스에 대한 백신 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 개체에서 구제역 바이러스에 대한 면역 반응을 생성하는 방법을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 개체에서 구제역 예방용 약학 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 개체에서 구제역을 예방하는 방법을 제공하는 것이다.
상기 목적을 달성하기 위해, 본 발명의 일 양태는 서열번호 1의 아미노산 서열 또는 이와 90% 이상의 상동성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드를 제공한다. 상기 서열번호 1의 아미노산 서열 또는 이와 90% 이상의 서열 상동성을 갖는 아미노산 서열은 구제역 바이러스 O형의 VP1 영역에 해당하는 서열일 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "상동성"은 주어진 폴리펩티드 서열 또는 폴리뉴클레오티드 서열과 일치하는 정도를 의미하며 백분율로 표시될 수 있다. 본 명세서에서, 주어진 폴리펩티드 서열과 동일하거나 유사한 활성을 갖는 그의 상동성 서열이 "% 상동성"으로 표시된다. 상기 상동성은 예를 들면, 점수(score), 동일성(identity) 및 유사도(similarity) 등의 매개 변수(parameter)들을 계산하는 표준 소프트웨어, 예를 들어 BLAST 2.0을 이용하거나, 정의된 엄격한 조건하에서 썼던 혼성화 실험에 의해 서열을 비교함으로써 확인할 수 있으며, 정의되는 적절한 혼성화 조건은 당업자에게 잘 알려진 방법으로 결정될 수 있다.
상기 서열번호 1의 아미노산 서열은 최근 아시아 지역에서 발생한 혈청형 O형 구제역 바이러스의 VP1들을 재조합하여 얻은 아미노산 서열이다. 서열번호 1의 아미노산 서열 또는 이와 90% 이상의 상동성을 갖는 아미노산 서열로 이루어지는 폴리펩티드는 구제역 바이러스, 특히 O형 구제역 바이러스에 대한 면역 반응을 생성할 수 있는 항원으로서 효과적으로 작용할 수 있다.
본 발명의 일 양태는 상기 서열번호 1의 아미노산 서열 또는 이와 90% 이상의 상동성을 갖는 아미노산 서열, 및 구제역 바이러스의 VP2 내지 VP4 단백질의 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드를 제공한다.
상기 폴리펩티드에서 상기 서열번호 1의 아미노산 서열 또는 이와 90% 이상의 상동성을 갖는 아미노산 서열은 바람직하게는 구제역 바이러스부터 유래한 VP2, VP3 및 VP4 단백질에 해당하는 아미노산 서열과 순차적으로 연결될 수 있다. 예를 들면, VP4 영역 아미노산 서열 - VP2 영역 아미노산 서열 - VP3 영역 아미노산 서열 - 서열번호 1의 아미노산 서열의 순서로 연결될 수 있다. 상기 VP2 내지 VP4 단백질의 아미노산 서열은 바람직하게는 구제역 바이러스, 특히 O형 구제역 바이러스로부터 유래한 것일 수 있다.
각 아미노산 서열 사이에는 추가적인 아미노산 서열이 포함될 수 있다. 예를 들면, 각 VP 영역의 서열 사이에는 퓨린 절단 부위(furin cleavage site)의 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 예를 들어, 상기 퓨린 절단 부위는 RGRKRRS 서열이거나, 또는 AGGGGAAGAAAGAGGAGAAGC 서열이거나, 또는 AGGGGACGCAAGAGGCGCTCA 서열일 수 있다.
또한 상기 폴리펩티드는 Kozak 서열, IgE leader 서열 및/또는 2A 아미노산 서열을 더 포함할 수 있다. 예를 들면, 상기 폴리펩티드는 IgE leader 서열 - VP4 영역 아미노산 서열 - VP2 영역 아미노산 서열 - VP3 영역 아미노산 서열 - 서열번호 1의 아미노산 서열 - 2A 아미노산 서열을 포함할 수 있다 (바람직하게는 상기 순서대로 포함). 또한 이 경우 바람직하게 각 영역의 서열 사이에는 퓨린 절단 부위의 아미노산 서열을 더 포함할 수 있다. 상기 2A 아미노산 서열은 예를 들어 ACCCTGAACTTCGACCTCCTCAAACTGGCTGGCGATGTGGAAAGCAATCCTGGATGATAA 염기서열에 상응하는 아미노산 서열일 수 있다.
또한 상기 폴리펩티드는 둘 이상의 다른 혈청형 구제역 바이러스에 대한 면역반응을 생성하는 폴리펩티드를 포함할 수 있다. 예를 들어, 상기 폴리펩티드는 O, A, C, SAT1, SAT2, SAT3 및 Asia1 혈청형 구제역 바이러스 중에서 선택된 2개, 3개, 4개, 5개, 6개 또는 7개에 대한 면역반응을 생성하는 폴리펩티드를 포함할 수 있다.
2가 백신의 구체적인 일례로서, 상기 폴리펩티드는 IgE leader 서열 - FMDV A형의 VP4 영역 - FMDV A형의 VP2 영역 - FMDV A형의 VP3 영역 - FMDV A형의 VP1 영역 - FMDV O형의 VP4 영역 - FMDV O형의 VP2 영역 - FMDV O형의 VP3 영역 - FMDV O형의 VP1 영역 - 2A 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 각 영역의 서열 사이에는 퓨린 절단 부위의 아미노산 서열을 더 포함할 수 있으며, 예를 들어 IgE leader 서열 - FMDV A형의 VP4 영역 - 퓨린 절단 부위 - FMDV A형의 VP2 영역 - 퓨린 절단 부위 - FMDV A형의 VP3 영역 - 퓨린 절단 부위 - FMDV A형의 VP1 영역 - 퓨린 절단 부위 - FMDV O형의 VP4 영역 - 퓨린 절단 부위 - FMDV O형의 VP2 영역 - 퓨린 절단 부위 - FMDV O형의 VP3 영역 - 퓨린 절단 부위 - FMDV O형의 VP1 영역 - 퓨린 절단 부위 - 2A 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 이와 같은 형태의 2가 백신은 O형 및 A형 구제역 바이러스에 대해 면역능을 나타낼 수 있다.
3가 백신의 구체적인 일례로서, 상기 폴리펩티드는 IgE leader 서열 - FMDV A형의 VP4 영역 - FMDV A형의 VP2 영역 - FMDV A형의 VP3 영역 - FMDV A형의 VP1 영역 - FMDV O형의 VP4 영역 - FMDV O형의 VP2 영역 - FMDV O형의 VP3 영역 - FMDV O형의 VP1 영역 - FMDV Asia1형의 VP4 영역 - FMDV Asia1형의 VP2 영역 - FMDV Asia1형의 VP3 영역 - FMDV Asia1형의 VP1 영역 - 2A 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 각 영역의 서열 사이에는 퓨린 절단 부위의 아미노산 서열을 더 포함할 수 있으며, 예를 들어 IgE leader 서열 - FMDV A형의 VP4 영역 - 퓨린 절단 부위 - FMDV A형의 VP2 영역 - 퓨린 절단 부위 - FMDV A형의 VP3 영역 - 퓨린 절단 부위 - FMDV A형의 VP1 영역 - 퓨린 절단 부위 - FMDV O형의 VP4 영역 - 퓨린 절단 부위 - FMDV O형의 VP2 영역 - 퓨린 절단 부위 - FMDV O형의 VP3 영역 - 퓨린 절단 부위 - FMDV O형의 VP1 영역 - 퓨린 절단 부위 - FMDV Asia1형의 VP4 영역 - 퓨린 절단 부위 - FMDV Asia1형의 VP2 영역 - FMDV Asia1형의 VP3 영역 - FMDV Asia1형의 VP1 영역 - 퓨린 절단 부위 - 2A 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 이와 같은 형태의 3가 백신은 O형, A형 및 Asia1형 구제역 바이러스에 대해 면역능을 나타낼 수 있다.
바람직하게는, 상기 2가 또는 3가 백신에서 FMDV O형의 VP1 영역은 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함한다.
바람직하게는, 상기 2가 또는 3가 백신에서 FMDV A형은 본 출원인의 다른 특허출원 제10-2018-0149242호(출원일: 2018년 11월 28일)에 개시되어 있는 서열이다.
일례로서, 상기 2가 또는 3가 백신에서 FMDV A형의 VP1 영역은 서열번호 85 또는 86의 아미노산 서열을 포함한다. 여기서, 서열번호 85 및 86은 구제역 바이러스 A 혈청형의 VP1 영역에 해당하는 재조합 서열이다.
또다른 예로서, 상기 2가 또는 3가 백신에서 FMDV A형의 VP4 영역 - FMDV A형의 VP2 영역 - FMDV A형의 VP3 영역은 서열번호 87의 아미노산 서열이거나 서열번호 87의 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 여기서, 각 VP 영역 사이에 퓨린 절단 부위의 아미노산 서열을 더 포함할 수 있다.
본 발명의 일 양태는 서열번호 2의 염기서열 또는 이와 90% 이상의 상동성을 갖는 염기서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
또는, 본 발명의 또 다른 양태는 서열번호 1의 아미노산 서열을 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 제공한다. 상기 서열번호 1의 아미노산 서열을 코딩하는 폴리뉴클레오티드는 서열번호 2의 염기서열일 수 있다.
또 다르게는, 상기 서열번호 1의 아미노산 서열을 코딩하는 폴리뉴클레오티드는 서열번호 2의 염기서열을 면역 반응을 생성하고자 하는 동물에게 최적화된 코돈으로 변경시킨 서열일 수 있다. 상기 동물은 예를 들면, 돼지, 소, 양 등 구제역이 발병할 수 있는 동물이면 모두 포함되며, 바람직하게는 돼지일 수 있다.
본 발명의 일 양태는 서열번호 2의 염기서열 또는 이와 90% 이상의 상동성을 갖는 염기서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 플라스미드를 제공한다.
본 발명의 또 다른 양태는 서열번호 1의 아미노산 서열 또는 서열번호 1의 서열과 90%의 상동성을 갖는 아미노산 서열을 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 플라스미드를 제공한다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "플라스미드"는 적합한 숙주 내에서 DNA를 발현시킬 수 있는 적합한 조절 서열에 작동가능하게 연결된 DNA 서열을 함유하는 DNA 제조물을 의미한다. 상기 플라스미드는 벡터, 파지 입자, 또는 간단하게 잠재적 게놈 삽입물일 수 있다. 본 명세서에서 플라스미드는 벡터(또는 바이러스 벡터)와 상호 교환적으로 사용될 수 있다.
상기 플라스미드는 구제역 바이러스의 VP2 내지 VP4 단백질을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 더 포함할 수 있다. 상기 VP2 내지 VP4 단백질을 코딩하는 뉴클레오티드 서열은 바람직하게 구제역 바이러스, 특히 O형 구제역 바이러스로부터 유래한 것일 수 있다.
상기 플라스미드에서 서열번호 2의 염기서열 또는 이와 90% 이상의 상동성을 갖는 염기서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드는 구제역 바이러스의 VP2 내지 VP4 단백질을 코딩하는 뉴클레오티드 서열과 연결될 수 있으며, 바람직하게는 구제역 바이러스부터 유래한 VP2, VP3 및 VP4 단백질을 코딩하는 뉴클레오티드 서열과 순차적으로 연결될 수 있다. 예를 들면, 상기 플라스미드는 VP4 영역의 뉴클레오티드 서열 - VP2 영역의 뉴클레오티드 서열 - VP3 영역의 뉴클레오티드 서열 - 서열번호 2의 뉴클레오티드 서열의 순서(5'->3' 기준)로 연결된 폴리뉴클레오티드를 포함할 수 있다.
각 영역의 뉴클레오티드 서열 사이에는 추가 뉴클레오티드 서열이 포함될 수 있다. 상기 추가 뉴클레오티드 서열은 퓨린 절단 부위 영역에 해당하는 뉴클레오티드 서열일 수 있다. 예를 들어, 상기 퓨린 절단 부위는 AGGGGAAGAAAGAGGAGAAGC 서열이거나, 또는 AGGGGACGCAAGAGGCGCTCA 서열일 수 있다.
바람직한 예로서, 상기 플라스미드는 서열번호 3의 염기서열을 포함하는 것일 수 있다.
또한, 상기 플라스미드는 Kozak 서열, IgE leader 서열 및/또는 2A 서열을 더 포함할 수 있다. 예를 들면, 상기 플라스미드는 IgE leader 서열 - VP4 영역의 뉴클레오티드 서열 - VP2 영역의 뉴클레오티드 서열 - VP3 영역의 뉴클레오티드 서열 - 서열번호 2의 뉴클레오티드 서열 - 2A 뉴클레오티드 서열을 포함할 수 있다 (바람직하게는 상기 순서대로 포함). 상기 2A 뉴클레오티드 서열은 예를 들어 ACCCTGAACTTCGACCTCCTCAAACTGGCTGGCGATGTGGAAAGCAATCCTGGATGATAA 염기서열일 수 있다.
또한 상기 플라스미드는 둘 이상의 다른 혈청형 구제역 바이러스에 대한 면역반응을 생성하는 폴리뉴클레오티드를 포함할 수 있다. 예를 들어, 상기 폴리뉴클레오티드는 O, A, C, SAT1, SAT2, SAT3 및 Asia1 혈청형 구제역 바이러스 중에서 선택된 2개, 3개, 4개, 5개, 6개 또는 7개에 대한 면역반응을 생성하는 폴리뉴클레오티드를 포함할 수 있다.
2가 백신의 구체적인 일례로서, 상기 폴리뉴클레오티드는 IgE leader 서열 - FMDV A형의 VP4 영역 - FMDV A형의 VP2 영역 - FMDV A형의 VP3 영역 - FMDV A형의 VP1 영역 - FMDV O형의 VP4 영역 - FMDV O형의 VP2 영역 - FMDV O형의 VP3 영역 - FMDV O형의 VP1 영역 - 2A 염기서열을 포함할 수 있다. 각 영역의 서열 사이에는 퓨린 절단 부위의 염기서열을 더 포함할 수 있으며, 예를 들어 IgE leader 서열 - FMDV A형의 VP4 영역 - 퓨린 절단 부위 - FMDV A형의 VP2 영역 - 퓨린 절단 부위 - FMDV A형의 VP3 영역 - 퓨린 절단 부위 - FMDV A형의 VP1 영역 - 퓨린 절단 부위 - FMDV O형의 VP4 영역 - 퓨린 절단 부위 - FMDV O형의 VP2 영역 - 퓨린 절단 부위 - FMDV O형의 VP3 영역 - 퓨린 절단 부위 - FMDV O형의 VP1 영역 - 퓨린 절단 부위 - 2A 염기서열을 포함할 수 있다. 이와 같은 형태의 2가 백신은 O형 및 A형 구제역 바이러스에 대해 면역능을 나타낼 수 있다.
3가 백신의 구체적인 일례로서, 상기 폴리뉴클레오티드는 IgE leader 서열 - FMDV A형의 VP4 영역 - FMDV A형의 VP2 영역 - FMDV A형의 VP3 영역 - FMDV A형의 VP1 영역 - FMDV O형의 VP4 영역 - FMDV O형의 VP2 영역 - FMDV O형의 VP3 영역 - FMDV O형의 VP1 영역 - FMDV Asia1형의 VP4 영역 - FMDV Asia1형의 VP2 영역 - FMDV Asia1형의 VP3 영역 - FMDV Asia1형의 VP1 영역 - 2A 염기서열을 포함할 수 있다. 각 영역의 서열 사이에는 퓨린 절단 부위의 염기서열을 더 포함할 수 있으며, 예를 들어 IgE leader 서열 - FMDV A형의 VP4 영역 - 퓨린 절단 부위 - FMDV A형의 VP2 영역 - 퓨린 절단 부위 - FMDV A형의 VP3 영역 - 퓨린 절단 부위 - FMDV A형의 VP1 영역 - 퓨린 절단 부위 - FMDV O형의 VP4 영역 - 퓨린 절단 부위 - FMDV O형의 VP2 영역 - 퓨린 절단 부위 - FMDV O형의 VP3 영역 - 퓨린 절단 부위 - FMDV O형의 VP1 영역 - 퓨린 절단 부위 - FMDV Asia1형의 VP4 영역 - 퓨린 절단 부위 - FMDV Asia1형의 VP2 영역 - FMDV Asia1형의 VP3 영역 - FMDV Asia1형의 VP1 영역 - 퓨린 절단 부위 - 2A 염기서열을 포함할 수 있다. 이와 같은 형태의 3가 백신은 O형, A형 및 Asia1형 구제역 바이러스에 대해 면역능을 나타낼 수 있다.
바람직하게는, 상기 2가 또는 3가 백신에서 FMDV O형의 VP1 영역은 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함한다.
바람직하게는, 상기 2가 또는 3가 백신에서 FMDV A형은 본 출원인의 다른 특허출원 제10-2018-0149242호(출원일: 2018년 11월 28일)에 개시되어 있는 서열이다.
일례로서, 상기 2가 또는 3가 백신에서 FMDV A형의 VP1 영역은 서열번호 88, 89 또는 90의 염기서열을 포함한다. 여기서, 서열번호 88, 89 및 90은 각각 구제역 바이러스 A 혈청형의 VP1 영역에 해당하는 재조합 서열이다. 특히, 서열번호 89의 염기서열은 서열번호 88의 염기서열을 돼지 코돈으로 최적화시킨 것이다.
또다른 예로서, 상기 2가 또는 3가 백신에서 FMDV A형의 VP4 영역 - FMDV A형의 VP2 영역 - FMDV A형의 VP3 영역은 서열번호 91의 염기서열이거나 서열번호 91의 염기서열을 포함한다. 여기서, 각 VP 영역 사이에 퓨린 절단 부위의 염기서열을 더 포함할 수 있다.
또다른 예로서, 상기 2가 또는 3가 백신에서 FMDV A형의 VP4 영역 - FMDV A형의 VP2 영역 - FMDV A형의 VP3 영역 - FMDV A형의 VP1 영역은 서열번호 92의 염기서열이거나 서열번호 92의 염기서열을 포함한다. 여기서, 각 VP 영역 사이에 퓨린 절단 부위의 염기서열을 더 포함할 수 있다.
또다른 예로서, 상기 2가 또는 3가 백신에서 FMDV Asia1형의 VP4 영역 - FMDV A형의 VP2 영역 - FMDV A형의 VP3 영역 - FMDV A형의 VP1 영역은 서열번호 94의 염기서열이거나 서열번호 94의 염기서열을 포함한다. 여기서, 각 VP 영역 사이에 퓨린 절단 부위의 염기서열을 더 포함할 수 있다.
본 발명의 또 다른 양태는 본 발명의 폴리펩티드, 본 발명의 폴리뉴클레오티드, 또는 본 발명의 플라스미드를 포함하는 구제역 백신 조성물을 제공한다.
상기 구제역 백신 조성물에서 상기 폴리펩티드, 상기 폴리뉴클레오티드, 상기 플라스미드는 달리 언급하지 않는 한 상기한 바와 같다.
용어 "백신"은 개체에 면역을 주는 항원을 함유한 생물학적인 제제로서, 감염증의 예방을 위하여 사람이나 동물에게 투여, 예컨대 주사하거나 경구 투여함으로써 생체에 면역이 생기게 하는 면역원 또는 항원성 물질을 말한다.
상기 백신은 DNA 백신일 수 있다. 용어 "DNA 백신"이라 함은, 병원균이나 바이러스 등의 유전자들 중 일부를 인공적으로 복제한 후 이를 투여함으로써 면역 반응을 야기하는 백신을 의미한다. 이러한 DNA 백신은 기존 단백질 백신에 비해 다양한 장점을 갖는 바, i) 우선 순수한 표적 병원체 항원의 유전정보만으로 합성제작이 가능하기 때문에 위험한 병원체를 직접 취급할 필요가 없으며, ii) 독성 유발에 필요한 유전자들 중 일부만을 사용하므로 투여체에 투여되더라도 별다른 독성을 나타낼 염려가 없고, iii) 플라스미드 DNA만으로 구성되는 단순함 때문에 갑자기 발생하는 다양한 감염병에 대해서 신속하게 대응하여 백신을 개발하는 것이 가능하다는 등 다양한 장점들을 보유한다.
상기 구제역 백신 조성물은 바람직하게 구제역 바이러스, 특히 O형 구제역 바이러스에 대한 방어 면역능을 갖는 것일 수 있다.
본 발명의 백신 조성물은 수의학적으로 허용 가능한 담체를 포함할 수 있다. 용어, "수의학적으로 허용 가능한 담체"란 임의의 및 모든 용매, 분산 매질, 코팅제, 항원보강제, 안정제, 희석제, 보존제, 항균제 및 항진균제, 등장성 작용제, 흡착지연제 등을 포함한다. 백신 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제, 희석제로는 락토즈, 덱스트로스, 슈크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 말티톨, 전분, 글리세린, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘포스페이트, 칼슘실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로즈, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다. 또한, 본 발명의 백신용 조성물은 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용되는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제할 수 있다. 특히 바람직하게는, Poly-L-Glutamic acid를 사용하여 안정화에 도움을 줄 수 있다.
상기 백신 조성물은 다양한 형태로 개체에 주입될 수 있다. "주입"은 피하주사, 근육내 주사, 피하내 주사, 복막내 주사, 비강투여, 정맥투여, 경피투여 및 경구투여로 구성된 군에서 선택된 어느 하나의 방법으로 수행될 수 있다.
상기 백신 조성물은 면역 반응을 개선 또는 강화시키기 위하여 하나 이상의 보조제 등을 포함할 수 있다. 적절한 보조제에는 펩티드, 알루미늄 하이드록시드, 알루미늄 포스페이트, 알루미늄 옥시드 및 Marcol 52 같은 미네랄 오일 또는 식물성 오일 및 하나 이상의 유화제로 구성된 조성물 또는 리졸세시틴, 다가 양이온, 다가 음이온 같은 표면 활성물질 등이 포함된다.
본 발명의 일 양태는 둘 이상의 혈청형의 구제역 바이러스에 대한 다가 백신 조성물을 제공한다.
상기 백신 조성물이 방어 면역능을 갖는 구제역 바이러스는 O, A, C, SAT1, SAT2, SAT3 및 Asia1 혈청형 구제역 바이러스 중에서 선택된 둘 이상일 수 있으며, 예를 들어 2개, 3개, 4개, 5개, 6개 또는 7개일 수 있다. 구체적인 일례로서, 상기 백신 조성물이 방어 면역능을 갖는 구제역 바이러스는 O형 및 A형일 수 있으며, 이 경우 상기 백신 조성물은 2가 백신 조성물로서 작용한다. 또다른 구체적인 일례로서, 상기 백신 조성물이 방어 면역능을 갖는 구제역 바이러스는 O형, A형 및 Asia1형일 수 있으며, 이 경우 상기 백신 조성물은 2가 백신 조성물로서 작용한다.
본 발명의 일 양태는 본 발명의 백신 조성물을 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 개체에서 구제역 바이러스에 대한 면역 반응을 생성하는 방법을 제공한다.
상기 면역 반응 생성 방법에서, 상기 백신 조성물은 달리 언급하지 않는 한 상기한 바와 같다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "면역 반응"은 항원의 도입에 대한 반응으로의 숙주의 면역계, 예를 들어 포유동물의 면역계의 활성화를 의미한다. 면역 반응은 세포 반응 또는 체액 반응, 또는 둘 모두의 형태일 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "개체"는 인간을 포함한 동물을 의미하며, 예를 들어 포유류, 우제류, 보다 구체적으로 돼지, 소, 양 등일 수 있다. 상기 용어 "개체"는 대상체와 상호교환적으로 사용될 수 있다.
상기 면역 반응 생성 방법에서 본 발명의 백신 조성물은 효과량의 유효 성분, 즉, 전체 재조합 폴리펩티드, 재조합 폴리뉴클레오티드 또는 이를 포함하는 플라스미드를 약학적으로 허용가능한 담체 및 보조제와 함께 포함할 수 있다. 용어 "효과량"은 백신의 성분이 백신접종되는 동물에서 구제역 바이러스 O형에 대해 특이적 면역 반응을 유도하기에 충분한 양임을 의미한다. 효과량은 당 분야의 숙련자에 의해 쉽게 결정될 수 있고, 예를 들면 동물에서의 통상적인 실험을 통해 결정될 수 있다.
상기 투여는 DNA 백신의 투여에 적합한 임의의 경로로 투여될 수 있고, 예를 들면 피하, 근육내, 복강내 또는 정맥내 주사에 의해 투여될 수 있다.
바람직하게는, 상기 구제역 바이러스는 O형 구제역 바이러스이다.
본 발명의 또다른 일 양태는 본 발명의 백신 조성물을 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 개체에서 구제역, 바람직하게는 O형 구제역을 예방하는 방법을 제공한다.
본 발명의 또다른 일 양태는 본 발명에 따른 폴리펩티드, 폴리뉴클레오티드 또는 플라스미드를 포함하는 구제역, 바람직하게는 O형 구제역 예방용 약학 조성물을 제공한다.
본 발명에 따른 구제역 예방 방법 및 구제역 예방용 약학 조성물에서, 각 용어들은 특별히 언급하지 않는 한 상기한 바와 동일한 의미를 갖는다.
본 발명에서 사용되는 용어 "예방"은 본 발명에 따른 조성물의 투여에 의해 구제역이 억제 또는 지연되는 모든 행위를 의미한다.
본 발명에 따른 구제역 바이러스 백신 조성물은 구제역 바이러스에 대해 높은 면역원성을 나타내는 DNA 백신 조성물을 제공할 수 있다. 이에 따라, 본 발명의 백신 조성물을 투여하는 경우, 접종된 개체에서 구제역 바이러스에 대한 항체가 현저하게 높은 수준으로 생산되며, 이에 따라 면역 반응이 효과적으로 나타난다. 특히, 구제역 O형 바이러스, 특히 최근 아시아에서 발생한 구제역 O형 바이러스에 대해 방어적 면역 반응능이 우수하다.
따라서, 본 발명에 따른 구제역 바이러스 백신 조성물이 돼지, 소 등과 같은 개체에게 투여될 경우, 구제역에 대해 우수한 예방 효과를 달성할 수 있다.
또한, 본 발명에 따른 구제역 바이러스 백신 조성물은 다른 혈청형 구제역 바이러스 백신 또는 억제제, 또는 다른 혈청형 구제역 치료 또는 예방용 제제와 함께 병용하여 사용할 수 있다. 또다르게는, 본 발명에 따른 구제역 바이러스 백신 조성물은 다가 백신으로서 둘 이상의 혈청형 구제역을 예방할 수 있도록 구축되어 사용될 수 있다.
도 1은 기존 혈청형 O형 FMD DNA 백신 VP1의 아미노산 일부를 치환시켜 제조한 재조합 VP1 아미노산 서열(서열번호 1)을 나타낸다.
도 2는 기존 혈청형 O형 FMD DNA 백신 VP1의 아미노산 일부를 치환시켜 제조한 재조합 VP1 염기서열(서열번호 2)을 나타낸다.
도 3은 기존 혈청형 O형 FMD DNA 백신 VP1 영역을 신규 재조합 VP1 염기서열으로 대체하는 과정을 나타낸 모식도이다.
도 4는 PLS-FMD-O DNA 백신의 부분적인 서열과 부위를 구체적으로 나타낸 것이다.
도 5는 마우스에서 본 발명의 백신 투여에 따른 항체 형성 효과를 SPC ELISA로 분석한 결과를 나타낸다.
도 6은 본 발명에 따른 2가 DNA 백신을 예시한 것으로서, 구제역 A형 및 O형에 대해 효과를 나타내는 다가 백신이다.
도 7은 마우스에서 본 발명의 2가 백신 투여에 따른 항체 형성 효과를 SPC ELISA로 분석한 결과를 나타낸다.
도 8은 본 발명에 따른 3가 DNA 백신을 예시한 것으로서, 구제역 A형, O형 및 Asia1형에 대해 효과를 나타내는 다가 백신이다.
도 9는 마우스에서 본 발명의 3가 백신 투여에 따른 항체 형성 효과를 SPC ELISA로 분석한 결과를 나타낸다.
이하 본 발명을 실시예에 의해 보다 상세하게 설명한다. 그러나 이들 실시예는 본 발명을 예시적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것은 아니다.
실시예 1: 구제역 바이러스 혈청형 O형의 서열 분석
WRLFMD(World Reference Laboratory for Foot-and-Mouth Disease)의 웹사이트로부터 최근 아시아 지역에서 발생한 혈청형 O형 구제역 바이러스의 VP1 영역에 대한 ME report(Molecular epidemiology report)를 조사하였다.
구제역 바이러스의 VP1 영역은 구제역 바이러스의 P1 구조단백질 유전자 부위 중에서 변이가 가장 많이 일어나며 중화항체 형성 등 면역원성 결정에 중요한 부위이다.
조사 대상은 방글라데시, 부탄, 캄보디아, 중국, 홍콩, 인도네시아, 인도, 일본, 라오스, 말레이시아, 몽고, 미얀마, 네팔, 필리핀, 러시아, 싱가포르, 대한민국, 스리랑카, 대만, 태국, 베트남 총 21개 국가이다.
(1) 캄보디아
년도 바이러스 명 Accession %Id Topotype Lineage
2016 VIT/47/2013 KY492072 96.7% ME-SA PanAsia
VIT/46/2013 KX944731 96.7% ME-SA PanAsia
VIT/51/2013 KY492073 96.4% ME-SA PanAsia
VIT/12/2014 KY492074 96.5% ME-SA PanAsia
VIT/13/2013 KX944715 96.5% ME-SA PanAsia
VIT/15/2013 KX944717 96.5% ME-SA PanAsia
VIT/32/2013 KX944725 96.5% ME-SA PanAsia
2015 CAM/01/2010 KR401196 95.7% ME-SA PanAsia
CAM/03/2010 KR401197 95.7% ME-SA PanAsia
VIT/20/2010 KR401207 95.7% ME-SA PanAsia
(2) 중국
년도 바이러스 명 Accession %Id Topotype Lineage
2018 GZSD/CHA/2018 MG840803 100% CATHAY
MYA/9/2017 MG972523 97.5% ME-SA Ind-2001
2017 XJBC/CHA/2017 KY696708 100% ME-SA Ind-2001
XJPS/CHA/2017 KY696707 100% ME-SA Ind-2001
2016 SCGH/CHA/2016 KX161429 100% CATHAY
2013 HN/CHA/HK212/2013 KU204893 100% CATHAY
GD/CHA/JH12/2013 KU204894 100% CATHAY
(3) 홍콩
년도 바이러스 명 Accession %Id Topotype Lineage
2015 O/HKN/1/2013 KM243172 96.7% CATHAY
2014 HKN/3/2011 KM243166 97.5% CATHAY
HKN/4/2011 KM243165 97.3% CATHAY
HKN/26/2010 KM243164 96.7% CATHAY
(4) 인도네시아: 1986년에 FMD free 선언됨
(5) 일본
년도 바이러스 명 Accession %Id Topotype Lineage
2010 O/JPN/MZ1/2010 AB618503 100% SEA Mya-98
O/TZ/CHA/2010 HQ652081 99.5% SEA Mya-98
O/CHA/31/2010 JF792356 99.3% SEA Mya-98
O/BY/CHA/2010 JN998085 99.2% SEA Mya-98
O/HKN/7/2010 JQ070303 99.2% SEA Mya-98
(6) 라오스
년도 바이러스 명 Accession %Id Topotype Lineage
2016 MYA/2496/2015 KY399470 ME-SA Ind-2001d
2015 IND189/2013 KM264361 98.6% ME-SA Ind-2001d
IND205/2013 KM264362 98.4% ME-SA Ind-2001d
UAE/2/2014 KM921878 98.4% ME-SA Ind-2001d
(7) 말레이시아
년도 바이러스 명 Accession %Id Topotype Lineage
2016~2018 Zabaikalskiy/3/RUS/2016 MG972584 99.2% ME-SA Ind-2001
SKR/1/2017 MG972599 99.1% ME-SA Ind-2001
Zabaikalskiy/2/RUS/2016 MG972583 99.1% ME-SA Ind-2001
BAN/GKa-236(pig)/2015 KX712091 99.1% ME-SA Ind-2001
(8) 몽고
년도 바이러스 명 Accession %Id Topotype Lineage
2017~2018 VIT/05/2011 KT153087 99.4% ME-SA PanAsia
VIT/5/2011 KR401211 99.7% ME-SA PanAsia
MAY/2/2014 KY322671 99.4% SEA Mya-98
MOG/BU/2-7/2015 LC320038 98.9% ME-SA Ind-2001
Zabaikalskiy/3/RUS/2016 MG972584 98.7% ME-SA Ind-2001
XJBC/CHA/2017 KY696708 98.7% ME-SA Ind-2001
XJ/CHA/2017 MF461724 98.7% ME-SA Ind-2001
VIT/20/2016 MG972619 98.6% ME-SA Ind-2001
VIT/13/2013 KX944715 98.1% ME-SA PanAsia
(9) 미얀마
년도 바이러스 명 Accession %Id Topotype Lineage
2017 MYA/9/2017 MG972523 100% ME-SA Ind-2001
MYA/6/2017 MG972521 100% ME-SA Ind-2001
MYA/19/2017 MG972529 100% ME-SA Ind-2001
MYA/1/2017 MG972517 100% SEA Mya-98
MYA/4/2017 MG972519 100% SEA Mya-98
MYA/5/2017 MG972520 100% SEA Mya-98
2016 NEP/6/2016 KY449054 99.2% ME-SA Ind-2001
NEP/17/2015 KY449050 99.2% ME-SA Ind-2001
NEP/19/2015 KY449051 99.2% ME-SA Ind-2001
(10) 필리핀: 2005년 12월 이후 기록된 FMD 발병 없음
(11) 러시아
년도 바이러스 명 Accession %Id Topotype Lineage
2018~2019 XJPS/CHA/2017 KY696707 97% ME-SA Ind-2001
2016 Zabaikalskiy/1/RUS/2016 MG983720 100% ME-SA Ind-2001d
Zabaikalskiy/2/RUS/2016 MG972583 100% ME-SA Ind-2001d
Zabaikalskiy/3/RUS/2016 MG972584 100% ME-SA Ind-2001d
Zabaikalskiy/4/RUS/2016 MG972585 100% ME-SA Ind-2001d
(12) 싱가포르: FMD free, 1973에 근절됨
(13) 대한민국
년도 바이러스 명 Accession %Id Topotype Lineage
2019 XJPS/CHA/2017 KY696707 97% ME-SA Ind-2001
2017 SKR/1/2017 MG972599 100% ME-SA Ind-2001
SKR/2/2017 MG972600 100% ME-SA Ind-2001
170205/SKR/2017 SKR/1,2/2017 100% 100% ME-SA Ind-2001
Zabaikalskiy/1/RUS/2016 MG983720 99.4% ME-SA Ind-2001
Zabaikalskiy/2/RUS/2016 MG972583 99.4% ME-SA Ind-2001
(14) 대만
년도 바이러스 명 Accession %Id Topotype Lineage
2013 O/TAW/1/2009 KM243161 96.9% CATHAY
O-TW-258-2009 GQ292740 96.9% CATHAY
2012 O/NC/CHA/2010 HQ652080 97.2% SEA Mya-98
O/HKN/1/2010 JQ070301 97% SEA Mya-98
O/VN/YB10/2010 HQ260720 96.7% SEA Mya-98
(15) 태국
년도 바이러스 명 Accession %Id Topotype Lineage
2017~2018 Zabaikalskiy/3/RUS/2016 MG972584 98.6% ME-SA Ind-2001
MYA/1/2017 MG972517 98.6% ME-SA Ind-2001
MYA/9/2017 MG972523 98.4% ME-SA Ind-2001
BAN/GKa-236(pig)/2015 KX712091 98.4% ME-SA Ind-2001
SKR/2/2017 MG972600 98.4% ME-SA Ind-2001
2016 TAI-269-2-2016 MG972602 ME-SA Ind-2001
TAI-225-2016R3 MG972601 ME-SA Ind-2001
(16) 베트남
년도 바이러스 명 Accession %Id Topotype Lineage
2016~2017 NEP/15/2015 MG972547 98.9% ME-SA Ind-2001
Zabaikalskiy/3/RUS/2016 MG972584 98.6% ME-SA Ind-2001
VIT/20/2016 MG972619 97.3% CATHAY
VIT/13/2013 KX944715 96.7% ME-SA PanAsia
VIT/8338/2017 MH891503
MYA/4/2017a MG972519
VIT/36/2013 KX944726 CATHAY
(17) 방글라데시
년도 바이러스 명 Accession %Id Topotype Lineage
2009 BAN/1/2009 HQ630676 100% ME-SA Ind-2001
(18) 부탄
년도 바이러스 명 Accession %Id Topotype Lineage
2017~2018 NEP/2/2017 MG972582 99.8% ME-SA Ind-2001d
NEP/36/2016 MG972578 99.8% ME-SA Ind-2001d
UAE/1/2015 MG972605 98.9% ME-SA Ind-2001
BAN/TG/Ba-268/2015 KY077621 ME-SA Ind-2001d
2015~2016 BAN/NL/Lo-245/2015 KY077611 99.7% ME-SA Ind-2001d
NEP/6/2016 KY449054 99.1% ME-SA Ind-2001d
BAR/15/2015 MG972473 98.9% ME-SA Ind-2001d
IND205/2013 KM264362 98.6% ME-SA Ind-2001d
(19) 인도: 없음
(20) 네팔
년도 바이러스 명 Accession %Id Topotype Lineage
2017 NEP/2/2017 MG972582 100% ME-SA Ind-2001
NEP/1/2017 MG972581 100% ME-SA Ind-2001
NEP/7/2016 KY449055 100% ME-SA Ind-2001
BHU/18/2009 KM921822 94.5% ME-SA Ind-2001
2016 NEP/20/2016 MG972564 100% ME-SA Ind-2001
NEP/25/2016 MG972568 100% ME-SA Ind-2001
NEP/30/2016 MG972572 ME-SA Ind-2001
(21) 스리랑카
년도 바이러스 명 Accession %Id Topotype Lineage
2018 BAN/GKa-236(pig)/2015 KX712091 98.3% ME-SA Ind-2001
Zabaikalskiy/3/RUS/2016 MG972584 98.1% ME-SA Ind-2001
2016~2017 SRL/2/2014 MF947475 98.7% ME-SA Ind-2001d
SRL/1/2014 MF947474 98.7% ME-SA Ind-2001d
SRL/6/2014 MF947478 98.7% ME-SA Ind-2001d
SRL/9/2014 MF947481 98.6% ME-SA Ind-2001d
상기 ME report 결과로부터 NCBI GeneBank에서 뉴클레오티드 서열 정보를 알 수 있는, 즉 GeneBank No.가 있는 바이러스 균주(strain)를 선택하였다. 그 결과 총 81개의 바이러스 균주가 선택되었으며, 이들 바이러스의 VP1 뉴클레오티드 서열들을 아미노산 서열로 변환하였다. 선택된 바이러스의 VP1 아미노산 서열에 서열번호 4 내지 84를 부여하였다.
바이러스 명 VP1 아미노산 서열
AB618503(JPN/MZ1/2010)(서열번호 4) TTSTGESADPVTATVENYGGETQVQRRHHTDVSFILDRFVKVTPKDSINVLDLMQTPSHTLVGALLRTATYYFADLEVAVKHEGDLTWVPNGAPEAALDNTTNPTAYHKAPLTRLALPYTAPHRVLATVYNGNCKYAGGSLPNVRGDLQVLAPKAARPLPTSFNYGAIKATRVTELLYRMKRAEAYCPRPLLAVHPSAARHKQKIVAPVKQSL
MF461724(XJ/CHA/2017)(서열번호 5) TTSTGESADPVTTTVENYGGETQVQRRQHTDVSFILDRFVKVTPKDQINVLDLMQTPAHTLVGALLRTATYYFADLEVAVKHEGNLTWVPNGAPETALDNTTNPTAYHKAPLTRLALPYTAPHRVLATVYNGNCKYGEGAVTNVRGDLQVLAQKAARTLPTSFNYGAIKATRVTELLYRMKRAETYCPRPLLAIHPEQARHKQKIVAPVKQLL
MF947474(SRL/1/2014)(서열번호 6) TTSTGESADPVTTTVENYGGETQVQRRQHTDVSFILDRFVKVTPKDQINVLDLMQTPAHTLVGALLRTATYYFADLEVAVKHEGNLTWVPNGAPETALDNTTNPTAYHKAPLTRLALPYTAPHRVLATVYNGNCKYGESNVPNVRGDLQVLAQKAARPLPTSFNYGAIKATRVTELLYRMKRAETYCPRPLLAIHPSEARHKQKIVAPVKQLL
MF947475(SRL/2/2014)(서열번호 7) TTSTGESADPVTTTVENYGGETQVQRRQHTDVSFILDRFVKVTPKDQINVLDLMQTPAHTLVGALLRTATYYFADLEVAVKHEGNLTWVPNGAPETALDNTTNPTAYHKAPLTRLALPYTAPHRVLATVYNGNCKYGESNVPNVRGDLQVLAQKAARPLPTSFNYGAIKATRVTELLYRMKRAETYCPRPLLTIHPSEARHKQKIVAPVKQLL
MF947478(SRL/6/2014)(서열번호 8) TTSTGESADPVTTTVENYGGETQVQRRQHTDVSFILDRFVKVTPKDQINVLDLMQTPAHTLVGALLRTATYYFADLEVAVKHEGNLTWVPNGAPETALDNTTNPTAYHKAPLTRLALPYTAPHRVLATVYNGNCKYGESNVPNVRGDLQVLAQKAARPLPTSFNYGAIKATRVTELLYRMKRAETYCPRPLLAIHPSEARHKQKIVAPVKQLL
MF947481(SRL/9/2014)(서열번호 9) TTSTGESADPVTTTVENYGGETQVQRRQHTDVSFILDRFVKVTPKDQINVLDLMQTPAHTLVGALLRTATYYFADLEVAVKHEGNLTWVPNGAPETALDNTTNPTAYHKAPLTRLALPYTAPHRVLATVYNGNCKYGESNVPNVRGDLQVLAQKAARPLPTSFNYGAIKATRVTELLYRMKRAETYCPRPLLAIHPSEARHKQKIVAPVKQLL
MH891503(VIT/8338/2017)(서열번호 10) TTATGESADPVTTTVENYGGETQVQRRQHTDVSFILDRFVKVTPKDQINVLDLMQTPAHTLVGALLRTATYYFADLEVAVKHEGNLTWVPNGAPEAALDNTTNPTAYHKAPLTRLALPYTAPHRVLATVYNGNCKYGEGAVTNVRGDLQVLAQKAARTLPTSFNYGAIKATRVTELLYRMKRAETYCPRPLLAIHPEQARHKQKIVAPVKQLL
MG840803(GZSD/CHA/2018)(서열번호 11) TTSAGESADPVTTTVENYGGETQVQRRQHTDVAFILDRFVKVKPQEQVNVLDLMQVPAHTLVGALLRTATYYFSDLELAVKHEGDLTWVPNGAPETALDNNTNPTAYHKEPLTRLALPYTAPHRVLATVYNGSSKYGDASANNVRGDLHVLAKNAERTLPTSFNYGAIKAARVTELLYRMKRAETYCPRPLLAIQPNTARHKQKIVAPAKQLL
MG972473(BAR/15/2015)(서열번호 12) TTSTGESADPVTTTVENYGGETQVQRRQHTDVSFILDRFVKVTPKDQINVLDLMQTPAHTLVGALLRTATYYFADLEVAVKHEGNLTWVPNGAPEVALDNTTNPTAYHKAPLTRLALPYTAPHRVLATVYNGNCKYGESNVPNVRGDLQVLAQKAARPLPTSFNYGAIKATRVTELLYRMKRAETYCPRPLLAIHPSEARHKQKIVAPVKQLL
MG972517(MYA/1/2017)(서열번호 13) TTSTGESADPVTTTVENYGGETQVQRRQHTDVSFILDRFVKVTPKDQINVLDLMQTPAHTLVGALLRTATYYFADLEVAVKHEGNLTWVPNGAPEAALDNTTNPTAYHKAPLTRLALPYTAPHRVLATVYNGNCKYGEGAVTNVRGDLQVLAQKAARTLPTSFNYGAIKATRVTELLYRMKRAETYCPRPLLAIHPEQARHKQKIVAPVKQLL
MG972519(MYA/4/2017)(서열번호 14) TTSTGESADPVTTTVENYGGETQVQRRQHTDVSFILDRFVKVTPKDQINVLDLMQTPAHTLVGALLRTATYYFADLEVAVKHEGNLTWVPNGAPEAALDNTTNPTAYHKAPLTRLALPYTAPHRVLATVYNGNCKYGEGAVTNVRGDLQVLAQKAARALPTSFNYGAIKATRVTELLYRMKRAETYCPRPLLAIHPEQARHKQKIVAPVKQLL
MG972520(MYA/5/2017)(서열번호 15) TTSTGETADPVTTTVENYGGETQVQRRQHTDVSFILDRFVKVTPKDQINVLDLMQTPAHTLVGALLRTATYYFADLEVAVKHEGNLTWVPNGAPEVALDNTTNPTAYHKAPLTRLALPYTAPHRVLATVYNGNCKYGEGAVTNVRGDLQVLAQKAARTLPTSFNYGAIKATRVIELLYRMKRAETYCPRPLLAIHPAQARHKQKIVAPVKQLL
MG972523(MYA/9/2017)(서열번호 16) TTSTGESADPVTTTVENYGGETQVQRRQHTDVSFILDRFVKVTPKDQINVLDVMQTPAHTLVGALLRTATYYFADLEVAVKHEGNLTWVPNGAPEAALDNTTNPTAYHKAPLTRLALPYTAPHRVLATVYNGNCKYGEGAVTNVRGDLQVLAQKAARTLPTSFNYGAIKATRVTELLYRMKRAETYCPRPLLAIHPEQARHKQKIVAPVKQLL
MG972521(MYA/6/2017)(서열번호 17) TTSTGESADPVTTTVENYGGETQVQRRQHTDVSFILDRFVKVTPKDQINVLDLMQTPAHTLVGALLRTATYYFADKEVAVKHEGNLTWVPNGAPEAALDNTTNPTAYHKAPLTRLALPYTAPHRVLATVYNGNCKYGEGAVTNVRGDLQVLAQKAARALPTSFNYGAIKATRVTELLYRMKGAETYCPRPLLAIHPEQARHKQKIVAPVKQLL
MG972529(MYA/19/2017)(서열번호 18) TTSTGETADPVTTTVENYGGETQVQRRQHTDVSFILDRFVKVTPKDQINVLDLMQTPAHTLVGALLRTATYYFADLEVAVKHEGNLTWVPNGAPEVALDNTTNPTAYHKAPLTRLALPYTAPHRVLATVYNGNCKYGEGAVTNVRGDLQVLAQKAARTLPTSFNYGAIKATRVIELLYRMKRAETYCPRPLLAIHPAQARHKQKIVAPVKQLL
MG972547(NEP/15/2015)(서열번호 19) TTSTGESADPVTTTVENYGGETQVQRRQHTDVSFILDRFVKVTPKDQINVLDLMQTPAHTLVGALLRTATYYFADLEVAVKHEGNLTWVPNGAPEAALDNTTNPTAYHKAPLTRLALPYTAPHRVLATVYNGNCKYGESAVTNVRGDLQVLAQKAARTLPTSFNYGAIKATRVTELLYRMKRAETYCPRPLLAIHPEQARHKQKIVAPVKQLL
MG972564(NEP/20/2016)(서열번호 20) TTSTGESADPVTATVENYGGETQVQRRQHTDVSFILDRFVKVTPKDQINVLDLMQTPAHTLVGALLRTATYYFADLEVAVKHEGNLTWVPNGAPEAALDNTTNPTAYHKAPLTRLALPYTAPHRVLATVYNGNCKYGEGAVTNVRGDLQVLAQKAARTLPTSFNYGAIKATQVTELLYRMKRAETYCPRPLLAIHPEQARHKQKIVAPVKQLL
MG972568(NEP/25/2016)(서열번호 21) TTSTGESADPVTATVENYGGETQVQRRQHTDVSFILDRFVKVTPKDQINVLDLMQTPAHTLVGALLRTATYYFADLEVAVKHEGNLTWVPNGAPEAALDNTTNPTAYHKAPLTRLALPYTAPHRVLATVYNGNCKYGEGAVTNVRGDLQALAQKAARTLPTSFNYGAIKATQVTELLYRMKRAETYCPRPLLAIHPEQARHKQKIVAPVKQLL
MG972572(NEP/30/2016)(서열번호 22) TTSTGESADPVTTTVENYGGETQVQRRQHTDVSFILDRFVKVTPKDQINVLDLMQTPAHTLVGALLRTATYYFADLEVAVKHEGNLTWVPNGAPEAALDNTTNPTAYHKAPLTRLALPYTAPHRVLATVYNGNCKYGEGAVTNVRGDLQVLAQKAARTLPTSFNYGAIKATRVTELLYRMKRAETYCPRPLLAIHPEQARHKQKIVAPVKQLL
MG972578(NEP/36/2016)(서열번호 23) TTSTGESADPVTTTVENYGGETQVQRRQHTDVSFILDRFVKVTPENQINVLDLMQTPAHTLVGALLRTATYYFADLEVAVKHEGNLTWVPNGAPEAALDNTTNPTAYHKAPLTRLALPYTAPHRVLATVYNGNCKYGEGAVTNVRGDLQVLAQKAARTLPTSFNYGAIKATRVTELLYRMKRAETYCPRPLLAIHPEQARHKQKIVAPVKQLL
MG972581(NEP/1/2017)(서열번호 24) TTSTGESADPVTTTVENYGGETQVQRRQHTDVSFILDRFVKVTPENQINVLDLMQTPAHTLVGALLRTATYYFADLEVAVKHEGNLTWVPNGAPEAALDNTTNPTAYHKAPLTRLALPYTAPHRVLATVYNGNCKYGEGAVTNVRGDLQVLAQKAARTLPTSFNYGAIKATRVTELLYRMKRAETYCPRPLLAIHPEQARHKQKIVAPVKQLL
MG972582(NEP/2/2017)(서열번호 25) TTSTGESADPVTTTVENYGGETQVQRRQHTDVSFILDRFVKVTPENQINVLDLMQTPAHTLVGALLRTATYYFADLEVAVKHEGNLTWVPNGAPEAALDNTTNPTAYHKAPLTRLALPYTAPHRVLATVYNGNCKYGEGAVTNVRGDLQVLAQKAARTLPTSFNYGAIKATRVTELLYRMKRAETYCPRPLLAIHPEQARHKQKIVAPVKQLL
MG972583(Zabaikalskiy/2/RUS/2016)(서열번호 26) TTSTGESADPVTTTVENYGGETQVQRRQHTDVSFILDRFVKVTPKDQINVLDLMQTPAHTLVGALLRTATYYFADLEVAVKHEGNLTWVPNGAPEAALDNTTNPTAYHKAPLTRLALPYTAPHRVLATVYNGNCKYGEGAVTNVRGDLQVLAQKAARTLPTSFNYGAIKATRVTELLYRMKRAETYCPRPLLAIHPEQARHKQKIVAPVKQLL
MG972584(Zabaikalskiy/3/RUS/2016)(서열번호 27) TTSTGESADPVTTTVENYGGETQVQRRQHTDVSFILDRFVKVTPKDQINVLDLMQTPAHTLVGALLRTATYYFADLEVAVKHEGNLTWVPNGAPEAALDNTTNPTAYHKAPLTRLALPYTAPHRVLATVYNGNCKYGEGAVTNVRGDLQVLAQKAARTLPTSFNYGAIKATRVTELLYRMKRAETYCPRPLLAIHPEQARHKQKIVAPVKQLL
MG972585(Zabaikalskiy/4/RUS/2016)(서열번호 28) TTSTGESADPVTTTVENYGGETQVQRRQHTDVSFILDRFVKVTPKDQINVLDLMQTPAHTLVGALLRTATYYFADLEVAVKHEGNLTWVPNGAPEAALDNTTNPTAYHKAPLTRLALPYTAPHRVLATVYNGNCKYGEGAVTNVRGDLQVLAQKAARTLPTSFNYGAIKATRVTELLYRMKRAETYCPRPLLAIHPEQARHKQKIVAPVKQLL
MG972599(SKR/1/2017)(서열번호 29) TTSTGESADPVTTTVENYGGETQVQRRQHTDVSFILDRFVKVTPKDQINVLDLMQTPAHTLVGALLRTATYYFADLEVAVKHEGNLTWVPNGAPEAALDNTTNPTAYHKAPLTRLALPYTAPHRVLATVYNGNCKYGEGAVTNVRGDLQVLAQKAARTLPTSFNYGAIKATRVTELLYRMKRAETYCPRPLLAIHPEQARHKQKIVAPVKQLL
MG972600(SKR/2/2017)(서열번호 30) TTSTGESADPVTTTVENYGGETQVQRRQHTDVSFILDRFVKVTPKDQINVLDLMQTPAHTLVGALLRTATYYFADLEVAVKHEGNLTWVPNGAPEAALDNTTNPTAYHKAPLTRLALPYTAPHRVLATVYNGNCKYGEGAVTNVRGDLQVLAQKAARTLPTSFNYGAIKATRVTELLYRMKRAETYCPRPLLAIHPEQARHKQKIVAPVKQLL
MG972601(TAI-225-2016R3)(서열번호 31) TTSTGESADPVTTTVENYGGETQAQRRQHTDVSFILDRFVKVTPKDQINVLDVMQTPAHTLVGALLRTATYYFADLEVAVKHEGNLTWVPNGAPEAALDNTTNPTAYHKAPLTRLALPYTAPHRVLATVYNGNCKYGEGAVTNVRGDLQVLAQKVARTLPTSFNYGAIKATRVTELLYRMKRAETYCPRPLLAIHPEQARHKQKIVAPVKQCL
MG972602(TAI-269-2-2016)(서열번호 32) TTSTGESADPVTTTVENYGGETQAQRRQHTDVSFILDRFVKVTPKDQINVLDVMQTPAHTLVGALLRTATYYFADLEVAVKHEGNLTWVPNGAPEAALDNTTNPTAYHKAPLTRLALPYTAPHRVLATVYNGNCKYGEGAVTNVRGDLQVLAQKVARTLPTSFNYGAIKATRVTELLYRMKRAETYCPRPLLAIHPEQARHKQKIVAPVKQLL
MG972605(UAE/1/2015)(서열번호 33) TTSTGESADPVTTTVENYGGETQVQRRQHTDVSFILDRFVKVTPKDQINVLDLMQTPAHTLVGALLRTATYYFADLEVAVKHEGNLTWVPNGAPEAALDNTTNPTAYHKAPLTRLALPYTAPHRVLATVYNGNCKYGEGAVTNVRGDLQVLAQKAARTLPTSFNYGAIKATRVTELLYRMKRAETYCPRPLLAIHPEQARHKQKIVAPVKQLL
MG972619(VIT/20/2016)(서열번호 34) TTSTGESADPVTTTVENYGGETQVQRRQHTDVSFILDRFVKVTPKDQINVLDLMQTPAHTLVGALLRTATYYFADLEVAVKHEGNLTWVPNGAPEVALDNTTNPTAYHKAPLTRLALPYTAPHRVLATVYNGNCKYGEGAVTNVRGDLQVLAQKAARTLPTSFNYGAIKATRVTELLYRMKRAETYCPRPLLAIHPEQARHKQKIVAPVKQLL
MG983720(Zabaikalskiy/1/RUS/2016)(서열번호 35) TTSTGESADPVTTTVENYGGETQVQRRQHTDVSFILDRFVKVTPKDQINVLDLMQTPAHTLVGALLRTATYYFADLEVAVKHEGNLTWVPNGAPEAALDNTTNPTAYHKAPLTRLALPYTAPHRVLATVYNGNCKYGEGAVTNVRGDLQVLAQKAARTLPTSFNYGAIKATRVTELLYRMKRAETYCPRPLLAIHPEQARHKQKIVAPVKQLL
GQ292740(O-TW-258-2009)(서열번호 36) TTSAGESADPVTATVENYGGETQVQRRQHTDIAFILDRFVKVKPEDEVNVLDLMQIPAHTLVGALLRTATYYFSDLELAVKHEGDLTWVPNGAPVAALDNTTNPTAYHKEPLTRLALPYTAPHRVLATVYNGSSKYGDTSTNNVRGDLQVLARKTERTLPTSFNFGAIKAARVTELLYRMKRAETYCPRPLLAIQPSSARHKQRIVAPAKQLL
HQ260720(O/VN/YB10/2010)(서열번호 37) TTSTGESADPVTATVENYGGETQVQRRHHTDVSFILDRFVKVTPKDSINVLDLMQTPPHTLVGALLRTATYYFADLEVAVKHEGDLTWVPNGAPEAALDNTTNPTAYHKAPLTRLALPYTAPHRVLATVYNGNCKYAGGSLTNVRGDLQVLAQKAARPLPTSFNYGAIKATRVTELLYRMKRAETYCPRPLLAVHPSAARHKQKIVAPVKQSL
HQ630676(BAN/1/2009)(서열번호 38) TTSTGESADPVTTTVENYGGETQVQRRQHTDVSFILDRFVKVAPGDQINVLDLMQTPAHTLVGALLRTATYYFADLEVAVKHEGNLTWVPNGAPEAALDNTTNPTAYHKAPLTRLALPYTAPHRVLATVYNGNCKYGESDVTNVRGDLQVLAQKAARTLPTSFNYGAIKATRVTELLYRMKRAETYCPRPLLAIHPSQARHKQKIVAPVKQLL
HQ652080(NC/CHA/2010)(서열번호 39) TTSTGESADPVTATVENYGGETQVQRRHHTDVSFILDRFVKVTPKDSINVLDLMQTPPHTLVGALLRTATYYFADLEVAVKHKGDLTWVPNGAPEAALDNTTNPTAYHKAPLTRLALPYTAPHRVLATVYNGNCKYAGGSLTNVRGDLQVLAQKAARPLPTSFNYGAIKATRVTELLYRMKRAETYCPRPLLAVHPSAARHKQKIVAPVKQSL
HQ652081(TZ/CHA/2010)(서열번호 40) TTSTGESADPVTATVENYGGETQVQRRHHTDVSFILDRFVKVTPKDSINVLDLMQTPSHTLVGALLRTATYYFADLEVAVKHEGDLTWVPNGAPEAALDNTTNPTAYHKAPLTRLALPYTAPHRVLATVYNGNCKYAGGSLPNVRGDLQVLAPKAARPLPTSFNYGAIKATRVTELLYRMKRAEAYCPRPLLAVHPSAARHKQKIVAPVKQSL
JF792356(CHA/31/2010)(서열번호 41) TTSTGESADPVTATVENYGGETQVQRRHHTDVSFILDRFVKVTPKDSINVLDLMQTPSHTLVGALLRTATYYFADLEVAVKHEGDLTWVPNGAPEAALDNTTNPTAYHKAPLTRLALPYTAPHRVLATVYNGNCKYAGGSLPNVRGDLQVLAQKAARPLPTSFNYGAIKATRVTELLYRMKRAETYCPRPLLAVHPSAARHKQKIVAPVKQSL
JN998085(BY/CHA/2010)(서열번호 42) TTSTGESADPVTATVENYGGETQVQRRHHTDVSFILDRFVKVTPKDSINVLDLMQTPSHTLVGALLRTATYYFADLEVAVKHEGDLTWVPNGAPEAALDNTTNPTAYHKAPLTRLALPYTAPHRVLATVYNGNCKYAGGSLPNVRGDLQVLAQKAARPLPTSFNYGAIKATRVTELLYRMKRAETYCPRPLLAVHPSAARHKQKIVAPVKQSL
JQ070301(HKN/1/2010)(서열번호 43) TTSTGESADPVTATVENYGGETQVQRRHHTDVSFILDRFVKVTPKDSINVLDLMQAPPHTLVGALLRAATYYFADLEVAVKHEGDLTWVPNGAPEAALDNTTNPTAYHKAPLTRLALPYTAPHRVLATVYNGNYKYAGGSLTNVRGDLQVLAQKAARPLPTSFNYGAIKATRVTELLYRMKRAETYCPRPLLAVHPSAARHKQKIVAPVKQSL
JQ07030(HKN/7/2010)(서열번호 44) TTSTGESADPVTATVENYGGETQVQRRHHTDVSFILDRFVKVTPKDSINVLDLMQTPPHTLVGALLRTATYYFADLEVAVKHEGDLTWVPNGAPEAALDNTTNPTAYHKAPLTRLALPYTAPHRVLATVYNGNCKYAGGSLPNVRGDLQVLAQKAARPLPTSFNYGAIKATRVTELLYRMKRAETYCPRPLLAVHPSAARHKQKIVAPVKQSL
KM921822(BHU/18/2009)(서열번호 45) TTSTGESADPVTTTVENYGGETQVQRRQHTDVSFILDRFVKVTPKDQINVLDLMQTPAHTLVGALLRTATYYFADLEVAVKHEGNLTWVPNGAPEAALDNTTNPTAYHKAPLTRLALPYTAPHRVLATVYNGNCKYGESDVTNVRGDLQVLAQKAARTLPTSFNYGAIKATRVTELLYRMKRAETYCPRPLLAIHPSQARHKQKIVAPVKQLL
KM921878(UAE/2/2014)(서열번호 46) TTSTGESADPVTTTVENYGGETQVQRRQHTDVSFILDRFVKVTPKDQINVLDLMQTPAHTLVGALLRTATYYFADLEVAVKHEGNLTWVPNGAPEAALDNTTNPTAYHKAPLTRLALPYTAPHRVLATVYNGNCKYGESNVPNVRGDLQVLAQKAARPLPTSFNYGAIKATRVTELLYRMKRAETYCPRPLLAIHPSEARHKQKIVAPVKQLL
KM243127(PHI/1/2005)(서열번호 47) TTSAGESADPVTTTVENYGGETQTQRRQHTDIAFILDRFVKVKPKEQVNVLDLMQIPAHTLVGALLRTATYYFSDLELAVKHEGDLTWVPNGAPEAALDNTTNPTAYHKEPLTRLALPYTAPHRVLATVYNGSSKYGDASTNNVRGDLQVLAQKTERTLPTSFNFGAIKATRVTELLYRMKRAETYCPRPLLAIQPSDARHKQKIVAPAKQLL
KM243128(PHI/1/2005)(서열번호 48) TTSAGESADPVTTTVENYGGETQTQRRQHTDIAFILDRFVKVKPKEQVNVLDLMQIPAHTLVGALLRTATYYFSDLELAVKHEGDLTWVPNGAPETALDNTTNPTAYHKEPLTRLALPYTAPHRVLATVYNGSSKYGDASANNVRGDLQVLAQKTERTLPTSFNFGAIKATRVTELLYRMKRAETYCPRPLLAIQPSDARHKQKIVAPTKQLL
KM243131(PHI/3/2005)(서열번호 49) TTSAGESADPVTTTVENYGGETQTQRRQHTDIAFILDRFVKVKPKEQVNVLDLMQIPAHTLVGALLRTATYYFSDLELAVKHEGDLTWVPNGAPEAALDNTTNPTAYHKEPLTRLALPYTAPHRVLATVYNGSSKYGDASTNNVRGDLQVLAQKTERTLPTSFNFGAIKATRVTELLYRMKRAETYCPRPLLAIQPSDARHKQKIVAPAKQLL
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KY492073(VIT/51/2013)(서열번호 75) TTSTGESADPVTATVENYGGETQVQRRQHTDVSFILDRFVKVTPKDQINVLDLMQTPAHTLVGALLRTATYYFADLEVAVKHEGNLTWVPNGAPETALDNTTNPTAYHKAPLTRLALPYTAPHRVLATVYNGNCRYGASPVTNVRGDLQVLAQKAARTLPTSFNYGAIKATRVTELLYRMKRAETYCPRPLLAIHPSEARHKQKIVAPVKQLL
KY492074(VIT/12/2014)(서열번호 76) TTSTGESADPVTATVENYGGETQVQRRQHTDVSFILDRFVKVTPKDQINVLDLMQTPAHTLVGALLRTATYYFADLEVAVKHEGNLTWVPNGAPETALDNTTNPTAYHKAPLTRLALPYTAPHRVLATVYNGNCRYGASPVTNVRGDLQVLAQKAARTLPTSFNYGAIKATRVTELLYRMKRAETYCPRPLLAIHPSEARHKQKIVAPVKQLL
KY399470(MYA/2496/2015)(서열번호 77) TTSTGEYADPVTTTVENYGGETQVQRRQHTDVSFILDRFVKVTPKDQINVLDLMQTPAHTLVGALLRTATYYFADLEVAVKHEGNLTWVPNGAPEAALDNTTNPTAYHKAPLTRLALPYTAPHRVLATVYNGNCKYGEGAVTNVRGDLQVLAQKAARTLPTSFNYGAIKATRVTELLYRMKRAETYCPRPLLAIHPEQARHKQKIVAPVKQLL
KY449050(NEP/17/2015)(서열번호 78) TTSTGESADPVTTTVENYGGETQVQRRQHTDVSFILDRFVKVTPKDQINVLDLMQTPAHTLVGALLRTATYYFADLEVAVKHEGNLTWVPNGAPEAALDNTTNPTAYHKAPLTRLALPYTAPHRVLATVYNGNCKYGEGAVTNVRGDLQVLAQKAARTLPTSFNYGAIKATRVTELLYRMKRAETYCPRPLLAIHPEQARHKQKIVAPVKQLL
KY449051(NEP/19/2015)(서열번호 79) TTSTGESADPVTTTVENYGGETQVQRRQHTDVSFILDRFVKVTPKDQINVLDLMQTPAHTLVGALLRTATYYFADLEVAVKHEGNLTWVPNGAPEAALDNTTNPTAYHKAPLTRLALPYTAPHRVLATVYNGNCKYGEGAVTNVRGDLQVLAQKAARTLPTSFNYGAIKATRVTELLYRMKRAETYCPRPLLAIHPEQARHKQKIVAPVKQLL
KY449054(NEP/6/2016)(서열번호 80) TTSTGESADPVTTTVENYGGETQVQRRQHTDVSFILDRFVKVTPKDQINVLDLMQTPAHTLVGALLRTATYYFADLEVAVKHEGNLTWVPNGAPEAALDNTTNPTAYHKAPLTRLALPYTAPHRVLATVYNGNCKYGEGAVTNVRGDLQVLAQKAARTLPTSFNYGAIKATRVTELLYRMKRAETYCPRPLLAIHPEQARHKQKIVAPVKQLL
KY449055 (NEP/7/2016)(서열번호 81) TTSTGESADPVTTTVENYGGETQVQRRQHTDVSFILDRFVKVTPKDQINVLDLMQTPAHTLVGALLRTATYYFADLEVAVKHEGNLTWVPNGAPEAALDNTTNPTAYHKAPLTRLALPYTAPHRVLATVYNGNCKYGEGAVTNVRGDLQVLAQKAARTLPTSFNYGAIKATRVTELLYRMKRAETYCPRPLLAIHPEQARHKQKIVAPVKQLL
KY696707(XJPS/CHA/2017)(서열번호 82) TTSTGESADPVTTTVENYGGETQVQRRQHTDVSFILDRFVKVTPKDQINVLDLMQTPAHTLVGALLRTATYYLADLEVAVKHEGNLTWVPNGAPEAALDNTTNPTAYHKAPLTRLALPYTAPHRVLATVYNGNCKYGEGAVTNVRGDLQVLAQKAARTLPTSFNYGAIKATRVTELLYRMKRAETYCPRPLLAIHPEQARHKQKIVAPVKQLL
KY696708(XJBC/CHA/2017)(서열번호 83) TTSTGESADPVTTTVENYGGETQVQRRQHTDVSFILDRFVKVTPKDQINVLDLMQTPAHTLVGALLRTATYYFADLEVAVKHEGNLTWVPNGAPETALDNTTNPTAYHKAPLTRLALPYTAPHRVLATVYNGNCKYGEGAVTNVRGDLQVLAQKAARTLPTSFNYGAIKATRVTELLYRMKRAETYCPRPLLAIHPEQARHKQKIVAPVKQLL
LC320038(MOG/BU/2-7/2015)(서열번호 84) TTSTGESADPVTTTVENYGGETQVQRRQHTDVSFILDRFVKVTPKDQINVLDLMQTPAHTLVGALLRTATYYFADLEVAVKHEGNLTWVPNGAPEAALDNTTNPTAYHKAPLTRLALPYTAPHRVLATVYNGNCKYGEGAVTNVRGDLQVLAQKAARTLPTSFNYGAIKATRVTELLYRMKRAETYCPRPLLAIHPEQARHKQKIVAPVKQLL
실시예 2: 신규 DNA 백신의 제조
상기 서열번호 4 내지 84의 아미노산 서열 81개를 Clustal/muscle에 의해 얼라인먼트를 수행하였다. 얼라인먼트 결과에 기초하여 VP1의 컨센서스(consensus) 서열을 도출하였다. 이와 같이 도출된 컨센서스 서열을 종래의 혈청형 O형 FMD DNA 백신(pGX9014)의 서열과 비교한 결과, 총 5개의 아미노산 미스매치가 있음을 확인하였다.
기존 혈청형 O형 FMD DNA 백신(pGX9014)의 VP1 영역에 있어서, 상기 컨센서스 서열과 미스매치된 5개의 아미노산으로 치환하였다. 도 1은 치환을 통해 수득된 VP1의 아미노산 서열(서열번호 1)을 나타낸다. 도 2는 치환을 통해 수득된 VP1의 염기서열(서열번호 2)을 나타낸다.
상기 서열번호 2의 염기서열로 표시되는 폴리뉴클레오티드를 이용하여 신규 FMD O형 백신을 제조하였으며, 도 3에 전체적인 모식도를 나타내었다. 도 3에서 볼 수 있듯이, Msc I 부위, VP3 C-말단 부위, 퓨린 절단 부위, 서열번호 2의 염기서열로 표시되는 재조합 VP1 부위, 퓨린 절단 부위, 2A, Xho I 부위가 순차적으로 연결된 재조합 뉴클레오티드를 준비하였다. 이와 같이 준비된 재조합 뉴클레오티드의 구체적인 서열과 각각의 부위는 도 4에 나타내었으며, 서열번호 3으로 표시하였다. 서열번호 3의 뉴클레오티드를 포함하는 DNA 플라스미드를 "PLS-FMD-O"라고 명명하였다.
PLS-FMD-O를 보유한 대장균을 LB 배지 2.5 L에 접종 후, 37℃에서 밤새 배양하였다. 그리고 나서 배양된 대장균으로부터 EndoFree Plasmid Giga kit (QIAGEN, Cat#12391)를 이용하여 플라스미드를 추출하였다. 추출된 플라스미드를 엔도톡신-프리 물(Endo-free water)에 녹여 -70℃에서 보관하였다. 보관된 플라스미드는 이후 동물에서의 백신 접종 효과를 확인하기 위한 항체 형성 실험에 사용하였다.
실시예 3: 신규 DNA 백신의 항체 형성 효과
3.1. DNA 백신 접종
마우스 C57BL/6 (8주령, 암컷) 15마리를 그룹당 5마리씩 총 3그룹으로 나눈 후, 각 그룹별로 아래와 같이 본 발명의 백신, 기존 백신, 목(mock) 플라스미드 접종을 2주 간격으로 3회 실시하였다. 전기천공(electroporation) 기기(cellectra 2000)를 이용하여 접종하였으며, 30㎍/마리 농도로 DNA 백신을 투여하였다.
· 그룹 1(대조군) - Mock 플라스미드 DNA
· 그룹 2(비교군) - FMD DNA type O (pGX1414, 기존 백신)
· 그룹 3(실험군) - FMD DNA type O (PLS-FMD-O, 본 발명의 백신)
채혈은 투여 전(0주차), 2차 투여 후(4주차) 및 3차 투여 후(6주차)에 안와채혈 방법을 이용하여 실시하였다. 채혈된 혈액으로부터 혈청(serum)을 분리하여 -80℃에서 보관하였다. 보관된 혈청은 녹여서 SPC (solid phase competition) ELISA 분석을 실시하였다.
3.2. 항체 형성 측정 - SPC ELISA 분석
SPC ELISA는 PrioCHECK FMDV Type A ELISA KIT (Prionics lelystad B.V/네덜란드)를 사용하였으며, 실험방법은 키트 제조사에서 제공한 실험 프로토콜에 따라 수행하였다.
그 결과는 도 5에 나타내었다. 도 5에서 볼 수 있듯이, 본 발명의 백신 PLS-FMD-O는 기존 백신 pGX1414에 비해 반응억제도(PI값)가 높은 것을 확인하였다. 여기에서, 반응억제도(PI값)가 높을수록 구제역 혈청형 O에 대한 특이적 항체가 많이 생성되었다는 것을 의미한다. 즉, 본 발명의 백신 PLS-FMD-O는 기존 백신 pGX1414에 비해 같은 시점에서 형성된 항체의 양이 유의적으로 더 많다.
전술한 바와 같이 구제역은 전염성이 매우 강하고, 임상 증상을 나타내기 전에 이미 구제역 바이러스를 체외로 배설함으로써 동물간 전파가 쉽게 일어날 뿐만 아니라, 잠복기간이 매우 짧다는 특징을 갖고 있다. 따라서, 구제역에 대해 백신으로서 효과적인 기능을 나타내기 위해서는, 구제역 바이러스를 억제하는 효과가 우수해야 할 뿐만 아니라, 구제역 바이러스에 대한 항체 생성 속도도 빨라야 할 것이다. 본 발명에 따른 백신을 투여할 경우 구제역 바이러스에 대한 억제능이 유의적으로 우수할 뿐만 아니라, 항체 생성 속도가 기존 백신에 비해 유의적으로 빨라 구제역 전염을 조기에 억제할 수 있으므로, 이와 같은 점은 구제역에 대한 백신에 있어서 매우 중요하게 작용한다.
실시예 4: 신규 DNA 2가 백신의 제조
앞서 준비된 재조합 서열들을 이용하여 구제역 A형 및 O형에 대한 2가 DNA 백신을 제조하였다.
도 6에는 제조된 2가 백신의 구체적인 예가 도시되어 있다. 2가 백신에서 FMD A형의 VP1 영역은 서열번호 88, 89 또는 90의 염기서열을 포함하는 것일 수 있으며, FMD O형의 VP1 영역은 서열번호 2의 염기서열을 포함하는 것일 수 있다.
FMD A형의 VP1 영역으로서 서열번호 89의 염기서열을 사용하고 FMD O형의 VP1 영역으로서 서열번호 2의 염기서열을 사용하여 제조된, 구제역 A형 및 O형에 대한 2가 DNA 백신을 "PLS-FMD-A,O"라고 명명하였다.
PLS-FMD-A,O를 보유한 대장균을 LB 배지 2.5 L에 접종 후, 37℃에서 밤새 배양하였다. 그리고 나서 배양된 대장균으로부터 EndoFree Plasmid Giga kit (QIAGEN, Cat#12391)를 이용하여 플라스미드를 추출하였다. 추출된 플라스미드를 엔도톡신-프리 물(Endo-free water)에 녹여 -70℃에서 보관하였다. 보관된 플라스미드는 이후 동물에서의 백신 접종 효과를 확인하기 위한 항체 형성 실험에 사용하였다.
실시예 5: 신규 DNA 2가 백신의 항체 형성 효과
5.1. DNA 백신 접종
마우스 C57BL/6 (8주령, 암컷) 15마리를 그룹당 5마리씩 총 3그룹으로 나눈 후, 각 그룹별로 플라스미드 접종을 2주 간격으로 3회 실시하였다. 그룹 2는 A형 단가 백신과 O형 단가 백신을 병용하여 접종한 것이며, 그룹 3은 A형 및 O형 2가 백신을 접종한 것이다. 전기천공(electroporation) 기기(cellectra 2000)를 이용하여 접종하였으며, 30㎍/마리 농도로 DNA 백신을 투여하였다.
· 그룹 1(대조군) - Mock DNA 플라스미드
· 그룹 2(실험군) - FMD type A 플라스미드 + PLS-FMD-O
· 그룹 3(실험군) - PLS-FMD-A,O
채혈은 투여 전(0주차), 2차 투여 후(4주차) 및 3차 투여 후(6주차)에 안와채혈 방법을 이용하여 실시하였다. 채혈된 혈액으로부터 혈청(serum)을 분리하여 -80℃에서 보관하였다. 보관된 혈청은 녹여서 SPC (solid phase competition) ELISA 분석을 실시하였다.
5.2. 항체 형성 측정 - SPC ELISA 분석
SPC ELISA는 PrioCHECK FMDV Type A ELISA KIT (Prionics lelystad B.V/네덜란드)를 사용하였으며, 실험방법은 키트 제조사에서 제공한 실험 프로토콜에 따라 수행하였다.
그 결과는 도 7에 나타내었다. 도 7에서 볼 수 있듯이, PLS-FMD-O는 다른 혈청형, 즉 A형 구제역 백신과 함께 병용 접종한 경우에도 유의적으로 높은 수준의 반응억제도(PI값)를 나타내었다. 또한, 2가 백신을 단일 접종한 경우에도 유의적으로 높은 수준의 반응억제도(PI값)를 나타내었다.
특히, O형 항체와 A형 항체가 모두 백신 접종 후 빠른 시기에 형성된다는 것을 알 수 있는데, 이로부터 본 발명에 따른 재조합 O형 백신은 다른 혈청형의 백신과 병용 접종되거나 또는 다른 혈청형과 함께 제작된 2가 백신의 형태로 접종되더라도, 다른 혈청형간에 효과를 상쇄시키지 않는다는 점을 확인할 수 있다. 따라서, 본 발명에 따른 재조합 O형 백신은 단가 백신으로서 그리고 다가 백신으로서 모두 유용성이 입증되었다.
실시예 6: 신규 DNA 3가 백신의 제조
앞서 준비된 재조합 서열들을 이용하여 구제역 A형, O형 및 Asia1형에 대한 3가 DNA 백신을 제조하였다.
도 8에는 제조된 3가 백신의 구체적인 예가 도시되어 있다. 3가 백신에서 FMD A형의 VP1 영역은 서열번호 88, 89 또는 90의 염기서열을 포함하는 것일 수 있으며, FMD O형의 VP1 영역은 서열번호 2의 염기서열을 포함하는 것일 수 있으며, FMD Asia1형의 VP1 영역은 종래 알려져 있는 염기서열을 포함하는 것일 수 있다.
FMD A형의 VP1 영역으로서 서열번호 89의 염기서열을 사용하고, FMD O형의 VP1 영역으로서 서열번호 2의 염기서열을 사용하고, FMD Asia1형의 VP1 영역으로서 서열번호 93의 염기서열을 사용하여 제조된, 구제역 A형, O형 및 Asia1형에 대한 3가 DNA 백신을 "PLS-FMD-A,O,Asia1"이라고 명명하였다. 참고로, FMD Asia1형의 VP1 영역으로서 사용된 서열번호 93의 염기서열은 미국 INOVIO사에서 제공되는 pGX9010에 포함되어 있는 FMD Asia1형의 VP1 영역이다.
PLS-FMD-A,O,Asia1 플라스미드는 실시예 4와 같은 방식으로 준비하였다.
실시예 7: 신규 DNA 3가 백신의 항체 형성 효과
7.1. DNA 백신 접종
실시예 5와 같은 방식으로 준비하되, 그룹 1 내지 3은 다음과 같이 설정하였다.
· 그룹 1(대조군) - Mock DNA 플라스미드
· 그룹 2(실험군) - FMD type A 플라스미드 + PLS-FMD-O + FMD type Asia1 플라스미드
· 그룹 3(실험군) - PLS-FMD-A,O,Asia1
7.2. 항체 형성 측정 - SPC ELISA 분석
SPC ELISA 분석을 수행한 결과, 도 9에서 볼 수 있듯이, PLS-FMD-O는 다른 혈청형, 즉 A형 구제역 백신 및 Asia1형 구제역 백신과 함께 병용 접종한 경우에도 유의적으로 높은 수준의 반응억제도(PI값)를 나타내었다. 또한, 3가 백신을 단일 접종한 경우에도 유의적으로 높은 수준의 반응억제도(PI값)를 나타내었다.
따라서, 본 발명에 따른 재조합 O형 백신은 단가 백신으로서 그리고 다가 백신으로서 모두 유용성이 입증되었다.

Claims (17)

  1. 서열번호 1의 아미노산 서열 또는 이와 90% 이상의 상동성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드.
  2. 서열번호 1의 아미노산 서열 또는 이와 90% 이상의 상동성을 갖는 아미노산 서열; 및 구제역 바이러스의 VP2, VP3 및 VP4 단백질의 아미노산 서열 중 하나 이상;을 포함하는 폴리펩티드.
  3. 제2항에 있어서,
    상기 구제역 바이러스의 VP2, VP3 및 VP4 단백질은 O형 구제역 바이러스로부터 유래한 것을 특징으로 하는 폴리펩티드.
  4. 서열번호 1의 아미노산 서열 또는 이와 90% 이상의 상동성을 갖는 아미노산 서열을 코딩하는 염기서열, 또는 서열번호 2의 염기서열 또는 이와 90% 이상의 상동성을 갖는 염기서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드.
  5. 제4항의 폴리뉴클레오티드를 포함하는 플라스미드.
  6. 제5항에 있어서,
    서열번호 3의 염기서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 플라스미드.
  7. 제5항에 있어서,
    구제역 바이러스의 VP2, VP3 및 VP4 단백질 중 하나 이상을 코딩하는 염기서열을 더 포함하는 것을 특징으로 하는 플라스미드.
  8. 제7항에 있어서,
    상기 구제역 바이러스의 VP2, VP3 및 VP4 단백질은 O형 구제역 바이러스로부터 유래한 것을 특징으로 하는 플라스미드.
  9. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항의 폴리펩티드, 제4항의 폴리뉴클레오티드, 또는 제5항 내지 제8항 중 어느 한 항의 플라스미드를 포함하는 구제역 백신 조성물.
  10. 제9항에 있어서,
    상기 백신은 단가 백신 또는 다가 백신인 것을 특징으로 하는 구제역 백신 조성물.
  11. 제9항에 있어서,
    상기 폴리뉴클레오티드는 A형, C형, SAT1형, SAT2형, SAT3형 및 Asia1형으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 구제역 바이러스의 VP1 단백질의 아미노산 서열을 더 포함하는 것을 특징으로 하는 구제역 백신 조성물.
  12. 제9항에 있어서,
    상기 폴리뉴클레오티드는 A형, C형, SAT1형, SAT2형, SAT3형 및 Asia1형으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 구제역 바이러스의 VP2, VP3 및 VP4 단백질의 아미노산 서열을 더 포함하는 것을 특징으로 하는 구제역 백신 조성물.
  13. 제9항의 백신 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 상기 대상체에서 구제역 바이러스에 대한 면역 반응을 생성하는 방법.
  14. 제13항에 있어서,
    상기 투여는 전기천공(electroporation)에 의한 투여인 것을 특징으로 하는 방법.
  15. 제9항의 백신 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 구제역을 예방하는 방법.
  16. 제15항에 있어서,
    상기 투여는 전기천공(electroporation)에 의한 투여인 것을 특징으로 하는 방법.
  17. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항의 폴리펩티드, 제4항의 폴리뉴클레오티드, 또는 제5항 내지 제8항 중 어느 한 항의 플라스미드를 포함하는 구제역 예방용 약학 조성물.
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