TWI230078B - Topical skin care composition - Google Patents

Description

1230078 五、發明說明（1) 發明範圍 本發明係關於塗抹於人類皮膚之局部用組合物及關於其 改良皮膚狀況與外觀之用途。 發明背景 皮膚會經由皮膚學上失調、環境濫用（風、空調及中央 暖氣）或經由皮膚曝露於日光下可能加速的正常老化過程 (時間老化）受到傷害。最近已廣大提升對改良皮膚外觀及 狀況之化粧組合物及化粧法之需求。 消費者正擴大尋找π抗老化”化粧產品，以其治療或延缓 時間老化及光照老化皮膚之視學記號，如皺紋、條紋、鬆 弛、過度色素沉澱及老斑。 消費者也時常自化粧產品尋找除了抗老化之外的其它好 處。敏感性皮膚之概念也已提升消費者的對改良敏感性、 乾性及/或脫皮性皮膚之外觀及狀況之化粧用產品之需 求。消費者也希望化粧用產品具有控油/皮脂效果。 許多人關心其皮膚的色素沉殿程度。例如，有老斑或雀 斑的人希望這些色素沉澱的斑點不明顯。其它人可能希望 減少因曝露於曰光下造成的皮膚暗沉或淡化皮膚原色。為 了迎合這些要求，已進行許多發展產品之計劃，以減少在 黑細胞中的色素產生。但是，因此廣泛證實之物質傾向於 不希望的副效果，例如，皮膚刺激性。 結果這些物質不適合於化粧品用途，或只可以使用使其 皮膚的淡化效果未如預期之濃度。可考慮使用不同的皮膚 淡化物質之組合物，以減低相反的副效果，但是，使用這

1230078 五、發明說明（2) 種皮膚組合物有實質上的風險。因此，特別有改良化粧品 皮膚淡化產品有效性之要求，使得其不會刺激皮膚。 在本技藝中已知在供治療頭髮之化粧用配方中使用脂肪 酸’包括巖芹酸。歐洲專利申請案第1 1 6 4 3 9號說明包括脂 肪酸（如巖芹酸）之頭髮滋補劑，以減輕頭皮屑及頭皮癢與 刺激頭髮生長。 歐洲專利申請案第7 0 9 0 8 4號說明在化粧用組合物中使用 含豐§巖芹酸三酸甘油酯之胡妥籽油，使乾性皮膚狀態保 濕。 視黃醇（維它命A)是在人體中自然發生及正常的上皮細 胞分化基本之内源化合物。已在治療各種皮膚失調中外用 天然及合成的維它命A衍生物（視黃類），並已將其當成皮 膚修護或再生劑使用。例如，已利用視黃酸治療各種皮膚 狀況，例如，粉刺、皺紋、乾癖、老斑及褪色，參考例如 Vahlquist， A.等人之 J· Inves t · Dermato 1 ·，第 94 冊， Holland D· Β·及Cunliffe， W.J· (1990 年）第496-498 頁’Ellis， C.N·等人之π在皮膚中的視黃醇藥理學 n(Pharmacology 〇f Retinols in Skin), Vasel,

Karger ’第3 冊（ 1 9 8 9 年）第 2 4 9 - 2 5 2 頁；Lowe， N.J·等人之 Π在皮膚中的視黃醇藥理學"，第3冊（ 1 9 8 9年）第240 -248 頁；PCT專利申請案第W09 3/ 1 9743號。 但疋’仍持續對治療/延緩老化及受光害皮膚之視覺記 號（如敏紋、條紋、鬆弛、過度色素沉澱及老斑）之局部塗 抹之替換性有致的化粧組合物有要求。

1230078 五、發明說明（3) 目前吾等已發現有效治療及預防正常（但化粧學上不希 望）的皮膚狀況’因為可經由在皮膚上塗抹由特殊的脂肪 酸-巖芹酸及/或其衍生物與視黃類及/或酵素醯基C〇A視黃 醇轉移酶（ARAT)或酵素卵磷脂視黃醇轉移酶（LRAT)抑制劑 (以下稱為L R A T / A R A T抑制劑）組成的化粧組合物獲得治療 及預防時間老化及光照老化（如皺紋、條紋、鬆弛、過度 色素沉殿及老斑）。吾等也已發現這些化粧組合物之用途 有利於提供除了抗老化之外進一步的皮膚好處，如減緩敏 感性及/或受刺激皮膚、控油/皮脂分泌及淡化皮膚。 以上討論的技藝未揭示巖芹酸與視黃類/LRAT/ARAT抑制 劑特殊的增效組合物，也未揭示以這種特殊的組合物治療 皱紋、敏感性皮膚、乾性皮膚、控油/皮脂分泌或淡化皮 膚。

Ujjg概述 根據本發明的第一個目的，其係提供一種局部用組合 物，其包含： (a )巖芹酸及/或其衍生物； (b) 視黃類及/或LRAT/ARAT抑制劑；及 (c) 皮膚學上可接受之媒劑。 根據本發明的第二個目的，其係提供一種改良至少一種 選自以下的皮膚護理好處之化粧法：治療/預防皺紋、鬆 弛、乾性、老化及/或受光害皮膚·，有助於在皮膚中膠原 質沉積作用；有助於在皮膚中的去皮質素產生作用；增強 組織修護；減緩受刺激、紅腫及/或敏感性皮膚；改良皮

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五、發明說明（4) 膚紋理、平滑性及/或緊實性；淡化皮膚；控油/皮脂八 泌’該方法包含將根據以上說明之局部用組合物条^ 77 膚上。 主抹於皮 本發明也包含以本發明組合物之用途，以提供至少 選自以下的皮膚護理好處：治療/預防皺紋、鬆弛、 種 及/或受光害皮膚；有助於在皮膚中膠原蛋白沉積作用化 有助於在皮膚中的去皮質素產生作用；增強組織修鱗·’、、 缓受刺激、紅腫及/或敏感性皮膚；改良皮膚紋理Ί’、減 性及/或緊實性；淡化皮膚及控油/皮脂/刀泌。

根據本發明還有的進一步目的，其係提供在化粧σ p 7工 OQ Jirr 用組合物中使用巖芹酸及其衍生物與視黃類及/或 ° LRAT/ARAT抑制劑之組合，以提供至少一種選自以下的 膚護理好處：治療/預防皺紋、鬆弛、老化及/或受光、金 膚；有助於在皮膚中膠原蛋白沉澱作用；、有助於在皮^ ^ 的去皮質素產生作用·’增強組織修護；減緩刺激性、^腫 及/或敏感性皮膚；改良皮膚紋理、平滑性及/或緊實性； 淡化皮膚及控油/皮脂分泌。

本發明的組合物、方法及用途因此k供起因於改良彈性 及減低或延緩皺紋與老化皮膚的外觀及改良皮膚色彩促進 平滑及柔軟的皮膚之抗老化好處。本發明會達到一般性的 外觀、紋理及狀況的改良，特別是關於皮膚的光彩、透明 度及全面性年輕的外觀。本發明的組合物、方法及用途也 具有減缓及鎮定敏感性及/或受刺激皮膚、淡化皮膚及控 油/皮脂分泌的好處。因此’本發明有利於提供寬廣的皮

1230078 五、發明說明（5) 膚護理好處。

根據本文使用的π治療"術語包括就所有的化粧用目的而 言在其範圍内減低、延緩及/或預防以上正常的皮膚狀況 (如起皺、老化、及/或受光害及/或受刺激皮膚）、全面性 增強皮膚品質及以預防或減低皮膚之刺激性、起皺及增加 柔韌度、緊實性、平滑性、柔軟性及彈性改良其外觀及紋 理。根據本發明的組合物、方法及用途也有用於治療已在 起皺、老化、受光害、受刺激狀況下之皮膚或治療年輕的 皮膚，以預防或減低那些上述因為正常老化/光照老化過 程的不預期變化。 本發明的詳細說明 巖芹酸 巖芹酸（以下稱為ΡΑ)是具有化學式CH3(CH2)1QCH二 CH(CH2)4C00H之單不飽和長鏈（C18)脂肪酸。

本發明也包含自由酸衍生物，其因此包含巖芹酸部份。 衍生物以包括那些衍生自酸的羧基取代作用者，如酯（例 如，三酸甘油醋、單酸甘油自旨、二酸甘油醋）、鹽（例如， 鹼金屬及鹼土金屬鹽、銨鹽）及/或那些衍生自C 1 8碳鏈取 代作用者，如α -經基及/或/5 -羥基衍生物。 在三酸甘油醋衍生物實例中，包含在甘油主鏈上的Ρ Α取 代物的所有位置異構物。三酸甘油酯必須包括至少一個P A 部份。例如，在甘油主鏈上的三個可酯化位置中，可以P A 及在位置3的另一個類脂酯化位置1及2，或可替換以在位 置1及3之P A及在位置2之類脂S旨化甘油主鏈。

第9頁 1230078 五、發明說明（6) 含豐富的巖芹酸三酸甘油酯之油也適用於本發明。這些 油可自商業上取得，並包括荷蘭芹籽油、胡蘿蔔籽油、茴 香果油、防風草籽油、胡妥籽油、山蘿蔔籽油、香旱芹菜 籽油及芹菜籽油。 在本申請書中無論何處使用的M巖芹油π或π P Aπ術語當然 也包括其含PA部份之衍生物。π PA”部份係指PA衍生物之PA 脂肪醯基部份（等）。 根據本發明使用的P A以有效量存在於局部用組合物中。 活性總量正常係以介於0 . 0 0 0 1 %至5 0重量％之組合物之間的 量存在。以從0. 01%至10%的量更佳及以從0. 1%至5%的量最 佳，以最低的成本達到最大的好處。 視黃類 以π視黃類π術語包括例如視黃酸、視黃醯酯、視黃醇、 視黃醋。 π視黃醇"術語包括視黃醇以下的異構物：所有反式視黃 醇、1 3 -順式視黃醇、1 1 -順式視黃醇、3 -順式視黃醇、3， 4 -二氫視黃醇。較佳的異構物是所有反式視黃醇、1 3 -順 式視黃醇、3，4 -二氫視黃醇、9 -反式視黃醇。最佳的是所 有反式視黃醇，因為其廣泛的商業有效性。 視黃醋是視黃醇之S旨。已在以上定義"視黃醇”術語。適 用於本發明的視黃酯是視黃醇之(：厂(：3(3酯，以c2-c2()酯較佳 及以C2-C:3及(：16酯最佳，因為其最常使用。供本發明使用較 佳的酷係選自棕櫚酸視黃酯、酷酸視黃S旨、丙酸視黃醋及 亞油視黃酯，因為這些最具商業有效性及因此最便宜。視

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黃酯也較佳，因為其效率。 視黃醯酯是視黃酸之酯。適用於本發明的彳 ν^酯向拓 視黃酸之（：丨-C:3。酯，以CfC2。酯較佳及以Cf C,及Γ . j人匕16 a曰攻佳。 供本發明使用較佳的酯係選自亞油酸視黃酸 m •曰、才示搁酸满 黃醒S旨、油酸視黃酸醋、壞血酸視黃酿g旨及 酯。 久亞麻酸視黃醯 LRAT/ARAT抑制劑 視黃醇是在人體中自然發生及正常的上皮έ 、 叹阳胞分化笑太 之内源化合物。視黃醇之g旨在活體内水解產吐 土 7生玍視黃醇。式 信視黃酯與視黃醇會根據以下的機制在皮膚+ 风 視黃酸 q中代谢轉換成 視黃酸±5 |視黃醇 視黃酸 但是，大部份内源使用的視黃醇會迅速轉換成貯存4 皮細胞中的失活脂肪酯（k e r a t i η 〇 c y t e s )。 表

以酵素醯基CoA視黃醇轉移酶（ARAT)催化醯基c〇A > # R 妒苴μ < Λ日肪 &暴轉移或以酵素卵磷脂視黃醇醯基轉移酶（LRAT)催化碟 脂酸膽鹼之醯基轉移達成在細胞中的視黃醇成為失活視^ ®曰之黯化作用。這些酯化反應在keratinocytes中非常有 效一大部份（9 5 % )的細胞視黃類是視黃基脂肪酯形狀。 在本發明應用中的，1 LR AT/A RAT抑制劑”術語因此代表— 種抑制這些酯化反應之試劑，並因此以增加有效轉換成視 黃酸之視黃醇量加強視黃醇活性。

1230078 五、發明說明（8) 根據以下的實施例1說明的以活體外微粒體分析之測 量，在本發明範圍内之LRAT/ARAT抑制劑可與那以1 00微克 分子量濃度抑制至少20%以LR AT或AR AT催化之視黃醇酯化 作用之化合物一樣。在本發明較佳的具體實施例中， L· RAT/A RAT抑制劑是以1(30微克分子量濃度抑制至少4(3% (以 至少5 0 %最佳）以L R A T或A R A T催化之視黃醇醋化作用之化合 物。供測量化合物是否是這種LR AT /AR AT抑制劑使用的活 體外微粒體分析是根據以下實施例1的說明。

因此，根據活體外微粒體分析的測量，如果化合物通過 該活體外微粒體分析，即其會充份抑制以LRAT或AR AT催化 之視黃醇酯化作用，該測量屬於本發明的範圍，即使在本 文中未特別提到。 滿足實施例1所說明的分析的這些L R A T / A R A T抑制劑的實 例包括脂肪酸醯胺、羥基脂肪酸醯胺、神經醯胺、亞油甲 T胺（m e 1 i n a m i d e )、咪唑院酮、及環系脂肪族不飽和烴、 萜烯及脂肪羥乙基咪唑啉界面活性劑。 環系脂肪族不飽和化合物

根據上述的活體外微粒體分析試驗選擇適合的環系脂肪 族不飽和化合物。 較佳的環系脂肪族不飽和化合物係選自環系脂肪族不飽 和搭、酮、醇及醋，如α -二氫大馬酮、/3 -二氫大馬酮、 5 -二氫大馬酮、異二氫大馬酮、大馬酮、α -紫羅蘭酮、 /5 -紫羅蘭酮、稀丙基α -紫羅蘭酮、異丁基紫羅蘭酮、α -甲基紫羅蘭酮、Τ -曱基紫羅蘭酮、婆羅門醇

第12頁 1230078 五、發明說明（9) (brahmanol)、檀香醇（sandanol)、松香醇、新鈐蘭 酸、藏花酸乙酯（ethyl saf franate)及其混合物。為了以 最低的成本達到最大的性能’環系脂肪族不飽和化合物係 選自由二氫大馬酮及紫羅蘭酮組成的各物較佳。 環系脂肪族不飽和化合物是α -二氣大馬酮及/或α —紫 羅蘭明最佳。 雙萜 根據上述的活體外微粒體分析試驗選擇適合的雙萜。較

佳的雙萜化合物是#牛兒基牛兒醇，其是視黃醇酯化作 用之有效抑制劑。 歷肪智乙基咪嗤D林界面活性劑 包括在本發明的脂肪羥乙基咪唑啉界面活性劑會通過上 述的活體外微粒體分析試驗。較佳的骑肪經乙基咪嗤啉具 有以下的通式結構：

R

C^C^OH Ο

其中R是含有從8至2 0個碳原子之脂肪族飽和或不飽和、直 鍵或支化氮-碳鍵。 在脂肪經乙基咪嗤啉中的r包括從8至1 8個碳原子較佳， 以從1 1至1 8個碳原子更佳，脂肪經乙基味°坐啉是以油基經 乙基咪唑啉最佳，因為其商業有效性及效率。 脂肪酸驢胺

第13頁 1230078 五、發明說明（10) 脂肪酸醯胺以包括至少6個碳原子較佳。適合的脂肪酸 包括飽和及不飽和、直鏈或支化脂肪酸。適合的脂肪酸以 包括從8至2 4個碳原子，以從1 2至2 0個碳原子較佳及以從 1 2至1 8個碳原子最佳，因為越長鏈的脂肪酸醯胺對皮膚的 調理越有好處。在本發明最佳的具體實施例中利用必需脂 肪酸之醯胺，因為必需脂肪酸會提供皮膚的營養素。必需 脂肪酸之實例包括（但不限於此）亞油酸、亞麻酸、花生四 稀酸、T -亞麻酸、均-了 -亞麻酸及其混合物。以亞油酸 最佳，因為其也是神經醯胺之先質。 包括在本發明中較佳的醯胺是單-及二-烷醇醯胺，特別 是必需胺基酸之單-及二-烷醇醯胺。烷醇醯胺比烷基醯胺 更具常見的有效性。 最佳的脂肪酸醯胺係選自亞油酸、棕櫚酸及椰子油之單 -及二-乙醇醯胺及磷脂醯乙醇胺、二乙基柯卡醯胺、亞油 驗胺基二甲基胺、二甲基亞油酸胺、二乙基亞油S藍胺、棕 櫚酸二甲基酯及肉豆蔻醯基肌氨酸。 羥基脂肪酸醯胺 羥基脂肪酸之醯胺結構如下： OH 〇 '1

I II R4 — CH—R3— c—n\R2| 其中心、R2及匕各自單獨是選自氫及含有從1至20個碳原子 之脂肪族飽和或不飽和、直鏈或支化烴鏈，可將其羥基 化0

第14頁 1230078 五、發明說明（U) R3是-(以2),，在此η是從〇至18的整數。 &、I?2及I各自早獨包括從1至2 0個碳原子較佳，以從2 至1 5個碳原子更佳及以從3至1 3個碳原子最佳。 含氧酸醯胺是以α -或；3 -含氧酸之醯胺較佳，即n是〇或 1 ° 包括在本發明組合物中最佳的羥基脂肪酸醯胺是乳酸胺 -單乙醇驢胺、C13- /3 -含氧酸醯胺（2-羥基-ci3 -醯胺）、N-羥乙基-2 -羥基-Cw醯胺、12 -羥基-N-(2 -羥乙基）十八院酿 胺及篦麻油之單乙醇醯胺。 多瑗系三萜烯羧酸（PTCA) 適合的L R A T / A R A T抑制劑的進一步實例是通過活體外微 粒體分析之PTCA。 PTCA是以五環系三萜烯單羧酸較佳。 PTCA以選自由鳥搔酸、齊墩果酸、甘草亭酸及甘草酸最 佳。 PTCA在商業上可取自Aid rich及Sigma。含PTCA之植物萃 取物適用於本發明’例如，Rosmarinus officinalis(迷 迭香）、Diospyros spp.(柿樹）、F〇rsythia suspensa(連 翹屬植物）、Lavandula angustifolia(薰衣草）、 Prunella vulgaris(夏枯草屬植物）、Paeonia lactifolia 、Glycyrrhiza glabra(甘草）。 應該瞭解P T C A可以當成鹽存在組合物中，例如，驗或驗 土金屬鹽，其係根據組合物之pH而定。 神經醯胺

第15頁 1230078 五、發明說明（12) 神經驢胺可以是例如天然形成的神經胺、植物-神經 醯胺短鏈神經醯胺、假神經醯胺或新神經醯胺。在歐洲專 利申請案第A 7 1 1 5 5 8號中說明這些分子之通式結構，將其 内容併入本文以供參考。 最佳的神經醯胺衍生物是乙醯基鞘氨醇，因為其效率。 可在本發明的組合物中包括以從〇. 〇 〇 〇 1 %至5 0重量％之組 合物的量為範圍之視黃類及/或LRAT/ARAT，以從0. 01%至 1 0 %較佳及以從0 . 1 %至5 %最佳。 皮膚學上可接受之媒劑 根據本發明使用的組合物也包含皮膚學上/化粧用可接 受之媒劑，其具有當成活性物之稀釋劑、分散劑或載體之 作用。媒劑可以包含常在皮膚護理產品中使用的材料，如 水、液體或固體軟化劑、石夕S同油、乳化劑、溶劑、濕潤 劑、增稠劑、粉末、喷射劑及類似物。 媒劑將經常構成從5%至99. 9重量％之組合物（以從2 5%至 8 0 %較佳）’並可以在沒有其它化粧品佐劑的存在下構成組 合物的其餘部份。 視需要之皮膚受益材料及化粧品佐劑 除了活性物之外，也可以包括其它特殊的皮膚受益活性 物，如防曬劑、其他皮膚淡化劑及皮膚助曬劑。媒劑也可 以進一步包括如香料、遮光劑、防腐劑、著色劑及緩衝液 之類的佐劑。 產品製備作用、形狀、用途及包裝 為了製備在本發明的方法中使用的局部組合物，可以使

1230078 五、發明說明（13) 用製備皮膚護理產品的一般方式。通常以熟知的方式將活 性組份併入皮膚學上/化粧用可接受之載體中◦可適合先 將活性組份溶解或分散在欲併入組合物中的部份水或其它 溶劑或液體中。較佳的組合物是水包油型或油包水型或水 包油包水型乳液。 組合物可以是熟知的皮膚護理產品之形狀，如乳膏或化 粧水、膠囊或類似物。組合物也可以是又稱為π沖洗型π產 品，例如，泡澡或淋浴凝膠，其可能包括活性物之輸送系 統，以促進活性物在沖洗期間黏附於皮膚上。產品是以π 留置型π產品最佳，即欲塗抹於皮膚之產品在塗抹於皮膚 之後，沒有刻意沖洗的步驟。可以任何適合的方式包裝產 品，如罐、瓶、管、圓球或類似方式。也假設可將本發明 的組合物包裝成一組兩個欲同時或連續塗抹於皮膚之單獨 的組合物，一個包括巖芹酸及另一個包括視黃類 / L R Α 丁 / A R Α 丁和ρ制劑組合物。 也可將根據本發明的組合物調備成適合於口服消化的形 狀，如藥錠、膠囊或類似形狀。 可以每日一或數次在需要治療的皮膚上進行本發明的方 法。在3至6個月之後，經常變成可看出皮膚外觀的改良， 其根據皮膚的狀況、在本發明方法中使用的活性組份濃 度、塗抹時使用的組合物量及頻率而定。通常將少量的局 部用組合物（例如，從0. 1至5毫升）自適當的容器或塗抹器 塗抹在皮膚上，並利用手或指頭或適當的設計將其擴散及 /或磨擦至皮膚中。接著是可視需要之沖洗步驟，其係根

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第19頁 1230078 五、發明說明（16) tw^si^-DEArODEA) &>'ffi-si^-DEA ι^^ρ爵-DEA(LOMEA) ^>'ffi-r,^-DEA 系^際^;&晏硌口# ^^^π;ϋ^# JH^M^&azolldmyl)^^ 嵙漭 香4Θ 舛^舛琳^^淼濘 部^硌 1>一 ^^(萚^冷屮4) 100 S 00 S S0 Sso Sso 100 100sososo 100so 茗重ARAT% 62 19 仁3 12 35 0 90 M 0 0 0 0 0 0 0 5j LRAT% 50 s 51 11 35 0 95 28 8 0 0 0 0 0 0 0 第20頁 l23〇〇78 五、發明說明（17) ，可以覲察出乙醯基神經鞘氨醇、L〇DEA、L〇MEA及羥乙基 咪唑啉界面活性劑是有效的視黃醇酯化抑制劑，而其它的 界面，舌性劑及其它雜環系化合物基本上無活性。辛酸羥乙 基咪唾啉（r=ch3(ch2)6)未充份抑制LRAT。 在表2A及2B中陳列的化合物上進行活體外微粒體分析試 驗。 克分子量的濃度測試表2A中的化合物。以1〇〇微 克7刀子量的濃度測試表2 B中的化合物。 r~55^TRATr 化合物

A2A_ 二氫大馬酮 β-二氫大馬酉同 δ-二氫大馬酮 異—鼠大·馬酉同 大馬S同 逆丙基α-紫羅籣酮 主材醇(Timberol) 舞蘭駿_ 主香(Tonalid) 酸乙酉旨_ 歐來德(Traseolide) 同(Sandalone)

第’21頁 1230078 五、發明說明（18)

表2B 化合物 抑制％，ARAT 抑制％，LRAT α-二氮大馬i同 67 87 β-二氮大馬酮 45 52 δ-二氫大馬酮 58 64 大馬酮 23 29 烯丙基α-紫羅蘭酮 16 17 可自表2 A及2 B中觀察出特定的環系脂肪系不飽和化合物 (特別是紫羅蘭酮及二氫大馬酮）是以LRAT及ARAT催化視黃 醇酯化作用有效的抑制劑。這些包括存在視黃醇中的三甲 基環己烯環系統。 以另外的環系脂肪族不飽和化合物進行活體外微粒體分 析試驗。將獲得的結果總結在表3中。 以1 0 0微克分子量的濃度測試表3中的化合物。

第22頁 1230078 五、發明說明Q g ) 表3 -----— _____化合物 一 七 … .· ~-__ 抑制％，ARAT 二紫羅闌 n ¥P 士 七 —- 13 三蘭酮 β 匕 μρ 一士一 " --- 0 p-各羅闌酮 —-- rh\ -- 0 --- 0 闌醛 ------- 0 才文油精 ------ 亡左 -V各一上> ----- 0 溥何酉竽 _ 0 紙回香酮 ----- 4Ά 〇/// -- 0 〜 於 m /、， ~~---- 0 (Mentone) -Vf-二—_w ------ 0 〜 回杳酉竽 -—----- 12 ' 是環攏牛兒醇 18 ’ —曱基紫羅蘭锏 0 — δ-甲基紫羅蘭酮

可自表3中觀察出不是所有的環系浐 會抑制或充份抑制以LRAT及ARAT催化稍主*不飽和化合物 以二疏稀化合物、舾牛兒基顧牛=:化作用。 體外微粒體分析試驗。 -或靡子油醇進行活 將獲得的結果總結在表4中。 表4 濃度(微克分子量) 100 10 Ίοό" "To"

化合物 犧牛兒基犧牛兒醇 '攏牛兒基;櫳牛兒醇 麝子油醇2 靡子油醇

1230078 五、發明說明（20) — 1取自TCI Amenca(奧勒岡州波特蘭市）。也取自Slgma& CTC 0rganics(喬治亞州亞特蘭大市）。 2取自Gi vaudan公司；Bedouk i an公司或agoc◦公司。 可自表4中觀察出牛兒基牛兒醇與麝子油醇兩者會 抑制或充份抑制視黃醇S旨化作用。牛兒基牛兒醇實9質 上是比麝子油醇更有效的醋化抑制劑。 ' 實施例2 在以U交—為目的之局部視..黃毯之後證f在活體 中的溶膠原蛋白-I與去皮質素調節 用 已知膠原蛋白（優勢基質皮膚蛋白質）會提供皮膚抗張強 度。去皮質素是蛋白多糖，已知其對控制及校正在皮膚細 胞基質中的膠原蛋白沉積作用的重要性。在本技藝中也已 知在皮膚中的知原蛋白里及去皮質素量會隨年齡及/或受 光害皮膚而明顯地減少。許多研究已展現在皮膚中的膠原 蛋白-1量會隨年齡及/或隨增加的受光害而降低（例如〔、

Lavker，R.J· Inv· Derm·，（ 1 97 9 年）73，79- 6 6 ; Griffiths 等人在 N. Eng· J. med.( 1 9 9 3 年）3 2 9， 5 3 0 - 5 3 5 )。在去皮質素實例中已展現已大量減少在活體外 受光害皮膚中的mRNA表現及蛋白.多糖的表現（Bernstein等 人Lab· Invest.(1995 年）72 ，662-669)。因此，這些皮膚 蛋白質的減少量與降低造成皺紋與鬆弛之皮膚抗張強度有 關連。 在本技藝中已熟知視黃酸是有效的抗老化活性物及誘發 受光害皮膚之真皮修護。已出現在以視黃酸局部治療之後

第24頁 1230078 五、發明說明（21) 之除敏紋及真皮修護起因於在皮膚中的新膠原蛋白沉積及 合成（例如，Griffiths 等人N· Eng· j. med.(1993 年）3 2 9，5 3 0 - 5 3 5 )。已廣泛地接受利用視黃酸援助在皮膚 中的膠原強白量強化真皮基質的方式提供抗老化/真皮修 瘦的好處。溶膠原強白I是膠原蛋白之先質。以對應於試 驗化合物應用增加溶膠原蛋白I的產生是增加膠原蛋白量 的記號。 徵募兩組在每一個外前臂上具有相同或幾乎相同的溫和 至中度光害程度之婦女。供給其保濕基礎之〇 . Q 5 %視黃酸 (R e t i η 〇 v a 〇)及也供給具有類似的知覺特徵之色彩符合之 保濕膏（Deirmacare®乳膏），但無活性成份，將其當成安慰 劑控制用。將Ret inova®塗在兩組的每一個參與者的一隻 外前臂上及將安慰劑（Dermacare®)塗在另一隻外前臂上。 第1組每曰將產品塗在其外前臂上經1 4週及第2組將產品塗 在其外前臂上經2 8週。在研究結束時，自每一個前臂的治 療區域上取下兩片4毫米均勻厚度之打孔切片。在自參與 者取得的切片組織進行免疫組織纖維化學分析，以證實在 皮膚外細胞基質組份、去皮質素及溶膠原蛋白-I之表面上 的視黃酸治療效果，與以安慰劑治療之前臂比較。進行以 下的步驟： 材料 壤切面之抗體稀釋緩衝液由T r i s緩衝之食鹽水（T B S )、 3% 牛血清蛋白（BSA)、〇· 〇5% Tri ton X-1 00 及〇· 05% 疊氮化 物組成的。自Chemicon International公司獲得溶膠原蛋

第25頁 1230078 五、發明說明（22) 白-1(胺基末端）之一級抗體（編號#MAB 1912，老鼠igGi )，並以1 : 8 0 0的稀釋應用在氣切片上’在切片以騰蛋白 酶（〇 · 5毫克/毫升，2 5分鐘，3 7 °C )預處理之後，在4 t下 經隔夜。自Biogenesis獲得去皮質素之一級抗體（兔子多 抹抗體），並以1 : 8 0 0的稀釋應用在蠟切片上，在4。〇 丁經 隔夜。將取自DAK0(編號#E046 8，兔子多抹抗體）以抗鼠之 抗生物素化二級抗體以1 : 4 0 0的稀釋應用在蠟切片上。將 取自 Amersham(編號 #RPN 1 0 04，驢子 p〇lyCi〇nai)以抗兔 子之抗生物素化二級抗體以1 : 40 0的稀釋應用在壤切面 上。使用濃度1 : 2 5 0 0之以鏈霉抗生物素蛋白共耗之驗性 磷酸酶，其係取自Zymed(編號#43-4322 )。自DAK0取得快 速紅色原。過濾及使用未稀釋之G丨丨丨s # 3蘇木素核逆著色 素劑，其係取自Sigma(編號#GHS-3)。胰蛋白酶取自 Sigma(編號#Τ-7186)，並以取自DAK〇之甘油凝膠（編號 #C5 6 3 )計算載片。 " 方法 。將切片組織之蠟切面裝載在以矽烷塗佈之載片上及在55 C下烘烤18小#。將載片經由二曱苯及醇脫蠟，並放入中 及接著轉移至TBS。Μ用DAK㈣筆圈住切面。利用肤蛋白酶 ^需要的每一個抗體根據指示處理切片之抗原修補。在需 補之處，以〇。·5毫克/毫升胰蛋白酶（Sigma編號 . 將載片在35 C下培育25分鐘。將著以TBS沖洗（2 X 2?)蛋白酶。在抗原修補之後，如果必要或以其它方 式’直接在圈住切面之後’在室溫下的濕室中以在tbs/

第26頁 1230078 發明說明（23) 0.5%BSA/0. 1%疊氮化物中的5%二級抗體宿主血 阻溶劑）以至少20分鐘封阻無特殊抗體聯結。將^^封 阻溶液排出，但不容許栽片乾燥。接著將切面二=封 室中以一級抗體（根據以上的指示經適當的稀 匸的」愚 育二然後將抗體自切面排出，不容許其乾燥。培 以i BS清洗，以除去未聯結之一級抗體_先清洗丄：，刀面 清洗3分鐘，並接著在室溫下的濕室中以適當的二=於 (根據以上的指示經適當的稀釋）經丨小時培育。、’几_ 然後將抗體溶液自載片排出，不容許切面乾 在服中清洗，先清洗1分鐘，#清洗4x5分鐘：以：：二 聯結之二級抗體。關於生物素化之二級載體，接著: 以鏈每抗生物素蛋白共軛物經45分鐘培育，並接著在TBs 中清洗」以除去未聯結之鏈霉抗生物素蛋白共軛物。加入 色原及觀察顯像的色彩，以避免過度著色。接著將切面逆 著色及裝載。 利用光顯微術之免疫組織纖維化學著色之切面之視測評 4貝方式測定在視黃酸（Ret in〇va®)與安慰劑（Derjnacare@) 之間的溶膠原蛋白-1表現與去皮質素表現之差異。 °亥刀析證實在局部塗抹視黃酸（r e丨丨n 〇 v a ®)之後的受光 f皮膚中的溶膠原蛋白一丨與去皮質素兩者顯著的向上調 節’如在以下表5中的陳列。

第27頁 1230078 五 發明說明（24) 視黃酸治療對活體内 參與者 總人數 在14週之後的弟1組 在28週之後的第2組 溶膠原蛋白-I表現與^人數 9" 表現出顯著增加的 去皮質素表現的參 與者人數 16

額外的細胞基質組份溶膠-- ,, 、 、史白丨與方皮質夸於早w:主 疋證實以視黃酸誘發真皮修護之記號。 、/、、 /月實施例3 成纖維細_丨鱼去虔質辛 合成之步，驟 - ^~反累j 真皮成纖維細胞調理介質之製備作用 將路彳二2 ( P 2 )上的一級人類包皮成纖維細胞以1 〇⑽〇個細 胞/平方公分接種成1 2-井狀平板，並在5%二氧化碳及4%氧 的大氣中以補充10%胎牛血清之Dulbec⑶s MQdlf ied Eagles介質（DMEM)中維持24小時。在該時間之後，將細胞 以然D Μ E Μ之金清清洗及接著在無d μ £ μ的新鮮血清中再培育 6 0小時。接著再以無d Μ Ε Μ之血清清洗成纖維細胞單層。將 試驗試劑及媒劑控制物以3倍加入〇 · 4毫升/井之#DMEM之 新鮮血清之最終體積中’並再培育24小時。或立即分析該 成纖維細胞調理介質，或急速冷卻在液態氮中及貯存在 —70 °C下，供未來分析。然後計算細胞及接著將來自斑點 分析之數據標準化成細胞數。 實施例4 在—真隹細胞調理」LULjl溶膠原蛋鱼-:[及去皮質素

第28頁 1230078

1 ·Μ 2 〇宅克分子量二硫蘇糖醇（2㈣毫克分子量原料溶液以 • 1 〇稀釋）及ο · 1 %十二烷基硫酸鈉〇 〇 %原料溶液以1 : 1 〇 〇 2釋）補充以媒劑（當成控制物）或試驗試劑處理之真皮成 ^栽、維i細胞之調理介質樣品，充份混合及接著在π t下培育 \刀，。在1 75平方公分的燒瓶中以來自1 0 0 0 0個細胞/平方 A分下接種成纖維細胞之純成纖維細胞調理介質的一系列 稀釋’以產生供分析用標準品，並如上述維持在無DMEM之 血清中。 ，著利用取自Bio-Rad之96-井Bio-Dot裝置，根據製造 者4曰南的。兒明將分析樣品以3倍塗抹在欲濕的I仍m 〇 b丨1 〇 n — p 轉移獏薄片上。每一個井塗抹約2 0 0微升介質。允許介質 經由膜在重力下過濾（3〇分鐘），然後以pBS(2〇〇微升）清洗 膜兩次。允許這些PBS洗液經由膜在重力下（2χ 15分鐘）過 遽。接著將Bi〇-Dot裝置附著在真空岐管上，並在抽氣下 進行第三次及最後的PBS清洗。將裝置拆解，取出膜，並 在放入4 °C下經隔夜的封阻緩衝液之前，先將其根據需要 迅速切割。將供去皮質素分析所製備之膜以在Ρβ8中的 3%(重量/體積）BSA/0.1%(體積/體積）Tween 20封阻，將那 些供溶膠原蛋白—I分析所製備之膜以在p B s中的5 % (重量/ 體積）無脂肪之乾燥奶粉/〇· 05% (體積/體積）Tween20封 阻。 隔天將膜在室溫下插入以一級抗體對或人類溶膠原蛋白 -I (MAB 1 9 1 2 ;老鼠單抹抗體；加州 Temecula 之Chemicon

第29頁 1230078 五、發明說明（26)

Int.公司），或人類去皮質素（兔子多抹抗體；B1〇gensis 之1 : 1 0 0 0 0稀釋液中2小時。接著將膜以TBS/0. 05% Tween20(3 X 5分鐘）清洗，並接著在室溫下根據需要 以 125 I -共軛抗鼠或抗兔子F(ab’）2片段（Amersham)之1 1 0 0 0稀釋液培育1小時。然後在允許I m m 0 b i 1 〇 η細條在室溫 的空氣中乾燥之前，再將其以T B S / T w e e η 2 0 ( 3 X 5分鐘）清 洗。將乾燥膜包裏在玻璃紙中及曝露在分子動態 (Molecular Dynamics)貯存黃磷篩中16-18小時。在該時 間結束時，利用ImageQuantTM軟體之黃磷顯影器 (Molecular Dynamics Phosphorunager SF)掃描曝露篩。 利用ImageQuantn之定量工具，以電腦輔助影像分析評定 點強度，將其標準化成細胞數，並以相對於以1 0 0個任意 單位之經媒劑處理之控制物值測定各種試驗試劑對去皮質 素及〉谷膠原蛋白-I合成作用之效應。 實施例5 試驗 以下的表指出巖芽酸與L R a T / A R A T抑制劑神經醯胺6或 L0MEA之組合對人類真皮成纖維細胞中的溶膠原蛋白〜丨及 ^皮質素合成及塗抹之活性物量之增效效應。為了使結果 標準化，以相對於以丨〇 〇個任意單位之經媒劑處理之控制 物值測定試驗物質之效應。在試驗中使用的試劑濃度對細 胞生存能力沒有任何影響。

第30頁 1230078 五 、發明說明（28) 表7 未處理之控制fcioo%。_結果以該值標準仆, 以活性物處理 『01微克分子量^" 0.01微克分子量反式視黃酸 0.01微克分子量PA+0.01微克分子式視黃酸 0.01微克分子量PA 0.0丨微克分子量視黃醇 0^2微克分子量PA+ool微克分子量視黃醇 0.01微克分子量PA 0.1微克分子量亞油酸視黃酯 86.0% 95.0〇/〇 126.4% 1〇^% ^2.30/0 克分子量PA+O.l微克分子量亞油酸視黃翌 與控制物比較，在表7的結果顯示以巖序酸與 組合會明顯向上調節在人類真皮成纖維細胞中、 白-I及/或去皮質素之合成作用。 、岭勝原蛋 在皮膚中=皮質素值與皮膚的改良狀態及 連。增加在皮膚中的去皮質素值具有控制及校規有關 的膠原蛋白沉積作用的重要性，其與許多二^在皮膚中 連，如皺紋消除及受光害皮膚之真皮修護。@又贫有關 實施色L§ 本實施例例證根據本發明的水包油型乳膏。 黃類之 的溶膠

第32頁 1230078 五、發明說明（29) 重量/重量％ A B C D E 嚴芹酸(三酸甘油酯)取自NU Check Prep 1.15 1.15 3 2 1 亞油酸視黃酯 0.15 —— 0.001 --- 視黃醇 0.15 — 0.15 礦物油 4 4 4 4 4 …紫羅蘭酮 1 — - 異二氫大馬酮 — 0.3 --- - Brij 56* 4 4 4 4 4 Alfol 16RD* 4 4 4 4 4 三乙醇胺 0.75 0.75 0.75 0.75 0.75 丁院-1，3-二酵 3 3 3 3 3 漢生膠 0.3 0.3 0.3 0.3 0.3 香料 qs qs qs Qs qs 丁基化羥基甲苯 0.01 0.01 0.01 0.01 0.01 水 加至 加至 力u至 加至 加至 100 100 100 100 100

*Brij 56是鯨蠟醇P〇E(10) *Alfol 16RD是鯨蠟醇 實施例7

本實施例例證根據本發明的醇系乳液。

第33頁 1230078 五、發明說明（31) 實施例9 本實施例例證併入本發明組合物之高内相油包水型乳 液。 重量/重量％ A B C D PA(三酸甘油g旨)取自NU Check Prep 1 2 0.5 3 視黃醇 0.5 - - - LODEA 2 - - LODEA 取自 Rhone Poulenc - 1 - - 全氫化椰子油 3.9 3.9 3.9 3.9 Bnj 92* 5 5 5 5 膨潤土 38 0.5 0.5 0.5 0.5 MgS047H20 0.3 0.3 0.3 0.3 丁基化羥基曱苯 0.01 0.01 0.01 0.01 香料 Qs Qs Qs Qs 水 加至100 加至100 加至100 加至100 *Bnj 92是聚乙稀(2)油基_

實施例6至9例證根據本發明的局部組合物。可以熟知的 方式處理組合物。其適用於化粧品。組合物特別適合於塗 抹於起皺、粗糙、乾性、脫皮、.老化及/或受光害皮膚， 以改良皮膚外觀與其感覺，並適合於塗抹於健康的皮膚， 以預防或延緩其惡化。

第35頁

Claims (1)

1230078 _案號89117492_年月曰 修正_ 六、申請專利範圍 成· (a)巖芹酸化合物； (b )亞油酸之脂肪酸醯胺；及 (c )皮膚學上可接受之媒劑。 1 0 .根據申請專利範圍第9項之局部用皮膚調理組合物， 其中該脂肪酸醯胺為亞油酸單乙醇醯胺。 1 1 .根據申請專利範圍第9項之局部用皮膚調理組合物， 其中該巖芹酸化合物係選自由巖芹酸、巖芹酸鹽、巖芹酸 醯胺、巖芹酸酯及其組合所組成群。 1 2 ·根據申請專利範圍第9項之局部用皮膚調理組合物， 其中該巖芹酸化合物係源自胡妥籽油。 1 3. —種化粧用局部用皮膚調理組合物，其基本上由下 列所組成： (a)嚴芹酸化合物； (b )麝子油醇；及 (c )皮膚學上可接受之媒劑。 1 4.根據申請專利範圍第1 3項之化粧用局部用皮膚調理 組合物，其中該巖芽酸化合物係選自由巖芹酸、巖芹酸 鹽、巖芹酸醯胺、巖芹酸酯及其組合所組成群。 1 5 .根據申請專利範圍第1 3項之化粧用局部用皮膚調理 組合物，其中該巖芽酸化合物係源自胡妥籽油。

O:\65\65269-930903.ptc 第38頁 Λv f· 9Λ3農正 11230078 申請曰期：洗以 * 案號^8911^492 -聲无丨- 類別： 偏 (以上各欄由本局填註) 發明專利說明書 中文 局部用皮膚調理組合物 、 發明名稱 英文 TOPICAL SKIN CARE COMPOSITION 姓名 〔中文） 1. 卡雷伊利莎白巴雷特 2. 馬丁理察葛林 3. 安東尼文生羅林斯 發明人 姓名 (英文） 1. KAREN ELIZABETH BARRETT 2. MARTIN RICHARD GREEN 3. ANTHONY VINCENT RAWLINGS 國籍 1.英國2.英國3.英國 住、居所 1. 英國貝佛特市雪恩布魯克路科瓦區聯合利華研究中心 2. 英國貝佛特市雪恩布魯克路科瓦區聯合利華研究中心 3. 英國麥塞區威瓦市貝英頓魁爾東路坡特日光聯合利華研究中心 姓名 (名稱） (中文） 1.荷蘭商聯合利華公司 姓名 (名稱） (英文） 1. UNILEVER N. V. 國籍 1.荷蘭 申請人 住、居所 (事務所) 1.荷蘭鹿特丹市威納455號 代表人 姓名 (中文） 1.健.保拉斯.凡.吉特 代表人 姓名 (英文） 1. JAN PAULUS VAN GENT

O:\65\65269-930903.ptc 第1頁 1230078 __案號 89117492 五、發明說明（27)

修正 以巖芹酸盥LRAT/ARAT抑制劑之組合對溶膠原蛋白-I 及/成去杳質素合成之增效故$_ 處理 溶膠原蛋白-I 去皮質素 控制物(媒劑） 100 100 0.01微克分子量ΡΑ 85.1% 〇·〇1微克分子量神經醯胺6 94.3% 0.01微克分子量ΡΑ+0.01微克分子量神精醯胺6 125.6% 0_01微克分子量ΡΑ 101.8% 〇·〇1微克分子量LOMEA 133.9% ϋ·(Η微克分子量ρα+〇·ι微克分子量LOMEA 239.1% 表6

與控制物比較，在表6中的結果顯示以巖芹酸與 LRAT/ARAT抑制劑之組合會明顯向上調節在人類真皮成纖 維細胞中的溶膠原蛋白一丨及/或去皮質素之合成作用。 在皮膚中的去皮質素值與皮膚的改良狀態及外觀有關 連。$增加在皮膚中的去皮質素值具有控制及校正在皮膚中. 的膠原蛋白沉積作用的重要性，其與許多皮膚受益有關 ，二如敵紋消除及受光害皮膚之真皮修護。 1¾.酸與視i類之增效效應

以I的表指出巖芹酸與視黃類之組合對人類真皮成纖維 細^中的溶膠原蛋白-;[及/或去皮質素合成及塗抹之活性 物f之私效效應。為了使結果標準化，以相對於以1 0 0個 任，單位之經媒劑處理之控制物值測定試驗物質之效應。 在Λ驗中使用的试劑濃度對細胞生存能力沒有任何影響。

1230078 _案號 89117492 圖式簡單說明 「>年乂月1 y曰

O:\65\65269-920612.ptc 第36頁