TW581761B

TW581761B - Compounds useful as metalloprotease inhibitors and pharmaceutical composition comprising the same

Info

Publication number: TW581761B
Application number: TW087101299A
Authority: TW
Inventors: Neil Gregory Almstead; Biswanath De; Yetunde Olabisi Taiwo; Rimma Sandler Bradley; Zhe Wang
Original assignee: Procter & Gamble
Priority date: 1996-08-28
Filing date: 1998-02-03
Publication date: 2004-04-01
Also published as: AU736238B2; ID19418A; AU4153297A; CN1228779A; DK0927183T3; US6015912A; ZA977699B; DE69730033T2; ES2225983T3; KR100326611B1; BR9713178A; IL128667A; CZ63799A3; NO990856D0; IL128667A0; PL331920A1; CN1105723C; HUP9904694A2; SK25599A3; TR199900429T2

Description

581761 A7 B7 五、發明説明（1 ) 相互參考案本申請案以1996年8月28曰申請暫時申請案第 60/024,766，依美國法规119⑷第35條中請優先權。技術領域本發明係關於用於治療與不欲金屬蛋白酶活性有關疾病、病症與病況之化合物。背景許多結構有關金屬蛋白酶[MPs]景響結構蛋白質之崩解。這些金屬蛋白酶常作用於細胞間基質，因而涉及組織崩解輿重塑。些種蛋白質係關於金屬蛋白酶或MPs。依序列相同性分類，MPs有數種不同譜系。已知MPS譜系以及其實例揭示於技藝中。經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 這些MPs包括基質金屬蛋白酶[MMPs】，鋅金屬蛋白酶，多爲膜結合金屬蛋白酶，TNF轉化酶，血管加壓素轉化酶（ACEs)，崩解素，包括ADAMs(見Wolfsberg等人， 131 J. Cell Bio. 275-78 October 1995)，及腦啡肽酶。MPs實例包括人類皮膚成纖維細胞膠原蛋白，人類皮膚成纖維細胞明膠酶，人類唾液膠原蛋白酶，聚集蛋白聚糖 —(aggrecanse)及明膠酶與人類溶基質素（stromelysin) 。膠原蛋白酶溶基質素與聚集蛋白聚糖酶與有關酶被認爲於調介許多疾病症狀上很重要。 MP抑制之潛在治療指癥已討論於文獻中。例如見美國專利 5,506,242 (Ciba Geigy Corp·);美國專利 5,403,952 (Merck & Co·) ; PCT 公告專利申請案 WO 96/06074 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 581761 A7 B7 五、發明説明（2 ) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) (British Bio Tech Ltd) ; PCT 公告 WO 96/00214 (Ciba Geigy) ; WO 95/35275 (British Bio Tech Ltd) ；WO 95/35276 (British Bio Tech Ltd) ； WO 95/33731 (Hoffmann-LaRoche) ‘， WO 95 /33709 (Hoffmann-LaRoche) * WO 95/32944 (British Bio Tech Ltd) ； WO 95/26989 (Merck) ; WO 9529892 (DuPont Merck) ； WO 95/24921 (Inst. Opthamology)； WO 95/23790 (SmithKline Beecham) ♦ WO 95/22966 (Sanofi Winthrop) ； WO 95/19965 (Glycomed) ； WO 95 19956 (British Bio Tech Ltd) ； WO 95/19957 (British Bio Tech Ltd) ； WO 95/19961 (British Bio Tech Ltd) WO 95/13289 (Chiroscience Ltd.) ； WO 95/12603 (Syntex) ； WO 95/09633 (Florida State Univ) ； WO 95/09620 (Florida State Univ.) ； WO 95/04033 (Celltech) ； WO 94/25434 (Celltech) i WO 94/25435 (Celltech) ； WO 93/14112 (Merck)； WO 94/0019 (Glaxo) ； WO 93/21942 (British Bio Tech Ltd) ; WO 92/22523 (Res. Corp. Tech. Inc.) ； WO 94/10990 (British Bio Tech Ltd) ； WO 93/09090 (Yamanouchi);及英國專利GB 2282598 (Merck)與GB 226893 4 (British Bio Tech Ltd);公開歐洲專利申請案 EP 95/684240 (Hoffman LaRoche) ； EP 574758 (Hoffman LaRoche) ； EP 575844 (Hoffman LaRoche) * 公開日本專利申請案；JP 08053403 (Fujusowa Pharm. 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（21〇X2S>7公釐） 581761 Μ Β7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製五、發明説明（3)

Co. Ltd·) ; JP 7304770 (Kanebo Ltd.);及 Bird 等人 L» Med Chem vol.37, pp. 1 58-69 ( 1 994)。MP抑制劑潛在治療用之實例包括類風濕性關節炎（Mullins, D.E·，等人 Biochim· Biophys· Acta· (1983) 695:117_214);骨關節炎（Henderson, B·，等人 Drugs of the一Future (1990) 15:495-508 ;腫癌知胞轉移（ibid, Broadhurst，Μ· J·，等人，歐洲專利申請案276,436 (1987公開），Reich R·，等人， 48 Cancer Res. 3307-3312 (1988);及不同溃瘍或組織溃癆病況。例如，溃瘍病況可導致角膜如鹼性燒傷或如緣膿桿菌、Acanthamoeba、單純疮療病毒或癌苗病毒感染所致結果。不欲金屬蛋白酶活性所特化病況之其它實例包括牙周病、大皰性表皮鬆解、發熱、發炎及鞏膜炎（Cf. DeCicco等人，WO 95 29892公告於1995年1 1月9曰）〇由許多疾病病況中金屬蛋白酶涉入觀之，已嘗試製備這些酶之抑制劑。許多此種抑制劑揭示於文獻中。實例包括 1993年2月2日頒給〇&1以<^之美國專利第5，183,900號； 1991年2月26日頒給Handa等人美國專利第4,996,358號 ;I"8年9月13曰頒給Wolanin等人美國專利第 4,771，038號；1986年5月10曰頒給Dickens等人美國專利第 4,743,587 號；1993 年 12 月 29 日公開 Broadhurst 等人歐洲專利第575,844號；1993年5月13曰公開Isomura等人國際專利WO 93/09090 ; 1992年10月15日公開 Markwell等人世界專利92/17460 ;及1992年8月12曰公 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 、1Τ -6- 本紙張尺度適用中國國豕檩準（CNS〉A4規格（210X 297公董） 581761 A7 B7 五、發明説明（開Beckett等人歐洲專利公開號498,665號。金屬蛋白酶抑制劑用於治療因至少部份由結構蛋白質崩解所引起疾病。雖然已製備不同抑制劑，仍持續需求用於治療此疾病之有效基質金屬蛋白酶。申請人令人訝異地發現，本發明化合物係有效金屬蛋白酶抑制劑。本發明之標的故，本發明之標的係提供用於治療不欲MP活性所特化病況與疾病之化合物。本發明之另一標的係提供有效金屬蛋白酶抑制劑。本發明之進一步標的係提供含此抑制劑之醫藥組合物。本發明之另一標的係提供治療有關金屬蛋白酶疾病之方法。發明摘述本發明提供用於當作金屬蛋白酶抑制劑之化合物，其有效治療這些酶之過量活性所特化病況。明細言之，本發明係關有式（I)結構之化合物 0 〇2?R1〇、N^/N Λ .Ar (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) ·裝. 訂 R2 γ "On 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 z (I) 其中：

Ar係烷基、雜烷基、芳基或雜芳基，經取代或未經取代； RjH ; -7* 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 581761 A7 B7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製五、發明説明（5) R2係氬、虎基或斑基； W係無或一或多個低碳烷基，或係二個相鄰或非相都碳( 如此形成一裯合環）間伸燒基、伸芳基或仲雜芳基鍵； Y係一或多個氳、羥基、SR3、sor4、so2R5、烷氧基、胺基，其中胺基係式NR6R7，其tR6輿分別選自氬、烷基、雜烷基、雜芳基、芳基、〇R3、so2r8、cor9 、CSR10、P〇(Rn)2 ;且 R3係氮、嫁基、芳基、雜芳基； R4係烷基、芳基、雜芳基； R8係烷基、芳基、雜芳基、雜烷基、胺基、烷胺基、二烷胺基、芳胺基、二芳胺基及烷芳胺基； R9係氳、烷氧基、芳氧基、雜芳氧基、烷基、芳基、雜芳基、雜烷基、胺基、烷胺基、二烷胺基、芳胺基與烷芳胺基‘， R10係烷基、芳基、雜芳基、雜烷基、胺基、烷胺基、二烷胺基、芳胺基、二芳胺基及烷芳胺基； Rn係烷基、芳基、雜芳基、雜烷基； Z係琢部份（spiro moiety); η係1至3。此結構亦包括式（I)之光學異構物、非鏡像異構物或鏡像異構物’或其醫藥上可接受鹽、或生物性水解醢胺酯或亞醯胺。這些化合物具有抑制至少一種哺乳類金屬蛋白酶之能力。故’本發明另一方面係含式（1)化合物之醫藥組合物，及本紙張尺度it财關家檩準（CNS ) Α4規格（2丨Gx 297公羡） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 、1Τ 581761 Α7 Β7 五、發明説明（6 ) 用這些化合物或含彼等之醫藥组合物治療不欲金屬蛋白酶活性所特化疾病之方法。可以本發明化合物偶合至標定之配體標定於特別不欲位置上（例如器官或某類細胞）有活性之金屬蛋白酶，該配髏對該位罝（如抗體或其片段或受體配體）之記號物有專一性。偶合方法係技藝中已知者。本發明亦針對不同其它方法，其利用這些化合物獨特性質。如此，本發明另一方面係針對偶合至固體撑髏之式（I) 化合物。這些偶合體可用做所欲金屬蛋白酶純化之親和性試劑。另一方面，本發明係關偶合至標記物之式（I)化合物。如本發明化合物結合至至少一金屬蛋白酶，該標記物可用來偵測相當高含量金屬蛋白酶，最妤爲活體内或活體外細胞培養之基質金屬蛋白酶之存在。此外，式（I)化合物可偶合至載劑，其用這些化合物於免疫流程中以製備輿本發明化合物有專一免疫反應之抗體。典型偶合方法係技藝中已知者β然後這些抗體可用於治療及偵測抑制劑之劑量。詳細説明經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本發明化合物係哺乳類金屬蛋白酶之抑制劑，較佳爲基質金屬蛋白酶。較隹者，化合物爲式（I)化合物或其醫藥上可接受盥或生物可水解醯胺、酯或亞醯胺。經過此揭示、公開與專利充份描敘該技藝之狀態。文中所用全部參考文件併入文中供參者。 -9- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X297公釐） 581761 A7 B7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製五、發明说明（7) 下列係文中所用術語定義。 ·*酿基”或”羰基"係描敘爲一基，其可由羧酸移除羥基而形成（即R_c卜〇)_)。較隹酿基包括（例如）乙酿基、甲酿基及丙酿基。 «酿氧基”係一具有酿基取代基之氧基（即釀基）；例如 -〇-c(=〇)坑基。 "熄氧釀基，•係一具有烷氧基取代基（即-O-R)之贐基 (-C(=〇)_> 例如<(=〇>-〇-烷基。此基可被認爲一酯。 ••斑胺基”係一具有醮基取代基之胺基（即-N-醮基）；例如 •nh-c(=o)燒基。 "烯基W除非另有所指否則爲具有2至15(較隹爲2至10，更隹爲2至8)個碳原子之未經取代或經取代烴鏈基；缔取代基具有至少一缔烴雙鏈（包括例如乙烯基、缔丙基與丁缔基）。 •’块1基’除非另有所指否則爲具有2至15(較隹2至10，更隹2至8)個碳原之未經取代或經取代烴鏈基❶該鏈至少有一個碳碳叁鍵。 ••统氧基W係有烴鏈取代基之氧基，其中烴鏈係烷基或缔基（即坡基或_〇_缔基）。較佳烷氧基包括（例如氧基、乙氧基、丙氧基與埽丙氧基。 ••燒氣虎基”係未經取代或用烷氧基取代之烷基（即-炕基· Ο-燒基）°較佳者係其中烷基具有1至6個碳原子（更隹具有 1至3個碳原子），且烷氧基具有1至6假碳原子（更隹具有1 _____ -10- 本紙張尺度 ---------— (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 、11 76 五 A7 _ B7發明説明（8) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製至3個碳原子）。 •’烷基"除非另有所指否則係未經取代或經取代飽和烴鏈基，具有1至15個碳原子；較隹具1至10個，更佳具1至4 個碳原子。較佳烷基包括（例如）經取代或未經取代甲基、 6基、丙基、異丙基及丁基。文中有關"螺環"或"螺環的"係分享另一環圓上碳原子之環基。此環基可爲天然碳環或雜環。包含於雜環螺環骨幹之較佳雜原子包括氧、氮及硫。螺環可未經取代或經取代。較佳取代基包括氧、羥基、烷基、環烷基、芳烷基、烷氧基、胺基、雜烷基、芳氧基、稠環（如苯幷嘍唑、環烷基、雜環坑基、苯幷咪攻、说淀硫峻等，其亦可取代）等等。此外，若價數允許雜環之雜原子可被取代。較佳螺環大小包括3至7貝環。伸烷基係關二基而非一基之烷基、缔基或決基。"雜件貌基”相似定義爲一（二基）伸烷基，具有雜原子於其鏈上。 ••烷胺基"係具有一（二級胺）或二（三級胺）個烷基取代基之胺基（即烷基）。例如，甲胺基（-NHCHJ、二甲胺基 (-N(CH3)2)、f 6胺基（-N(CH3)CH2CH3)。 M胺醯基”係一具有胺取代基（即-C(==0)-N)之醢基；例如 -C( = 0)-NH2。胺酿基之胺基可被取代（即一級胺）或可用一（二級胺）或二（即三級胺）烷基取代。 "芳基”係芳香碳環基。較佳芳基包括（例如）笨基、甲苯基、二甲苯基、茴香基、蓁基、聨苯基及蕹基。此基可經取代或未經取代。 -11· 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁} 衣· 訂 581761 Μ Β7 五、發明説明（9 ) ，•芳烷基"係用芳基取代烷基。較佳芳烷基包括苄基、苯乙基、及苯丙基。此基可經取代或未經取代。 *·芳胺基，，係用芳基取代胺基（如··ΝΗ-芳基）。此基可經取代或未經取代。 w芳氧基，•係具有芳基取代基之氧基（即芳基）。此基可經取代或未經取代。 "碳環，，係未經取代或經取代、飽和、未飽和或芳香族烴環基。破環係單環或稠合、架捺或嫘多環系。單環破環一般含4至9較隹4至7個原子。多環碳環含7至17較佳7至12 個原子。較隹多環系包括4-、5-、6-或7-貝環稠合至5-、 6-或7-員環。 w碳環烷基”係未經取代或經碳環取代烷基0除非另有所指，碳環最好爲芳基或環烷基·，更隹爲芳基。較佳碳環烷基包括芊基、苯乙基及苯丙基。，•碳環雜烷基"係未經取代或用碳環取代雜烷基。除非另有所指，碳環最好爲芳基或環烷基·，更佳爲芳基。雜烷基較隹爲2-嘮丙基、2-嘮乙基、2-嘍丙基或2-嘍乙基。 ”羧炕基"係未經取代或用羧基（_C( = 0)0H)取代烷基。例如-ch2-c(=o)oh ❹ 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) "環坑基"係飽和碳環基。較隹環烷基包括（例如）環丙基、環丁基及環己基。 "環雜烷基”係飽和雜環。較隹環雜烷基包括（例如）嗎啉基、六氳吡啶基、六氩吡喷基、四氬呋喃及脲乙醮基。 "稠合環"係將環加在一起使彼等共享二環原予一環可 -12- 本紙張尺度適用中國國家榡準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 581761 A7 __B7 五、發明説明（10 ) 稠合至一個以上其它環。預期稠合環爲锥芳基、芳基、及雜環基等。 ••雜環烷基"係一用雜環取代烷基。雜環最妤爲雜芳基或環雜烷基β較佳雜環烷基包括C1_C4烷基，具有較佳雜芳附至彼等^更佳係例如吡啶基、吡啶烷基等等。 "雜環雜烷基”係未經取代或用雜環取代律烷基。雜環最妤爲芳基或環雜烷基；更隹爲芳基。 ••雜原子”係氮、硫或氧原子。含一或多個雜原子之基可含不同雜原子。 w雜晞基••係未經取代或經取代未飽和之3至8貝基，包含破原子輿一或二個雜原子。該鏈至少有一破-碳雙鍵。 "雜燒基"係未經取代或經取代飽和之2至8貝基，包含碳原子與一或二個雜原子。雜環"係未經取代或經取代，飽和，未飽和或芳香族基，現t包括碳原子與一或多個雜原子。雜環係單環或稠含、橋鍵螺多環系統。單環雜環含3至9，較佳4至7個原子。多環含7至17，較隹7至13個原子。經濟部中央標準局員工消費合作社印裝 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) ”雜芳基"係芳香族雜環，爲單環基或雙環基。較隹雜芳基包括（例如）嘧吩基、呋喃基、吡咯基、吡啶基、吡ρ井基、遠峻基、嘧啶基、喹啉基與四唑基、苯幷,塞唑基、笨弁呋味基、啕哚基等等。此基可經取代或未經取代。 "由”，"瘈素"或"_化物"係氣、溴或碘原子基。涘、氣及氟係較佳鹵化物。另外，文中有關"低碳，，烴部份（如，，低碳，，烷基）係含1至6 •13- 本紙張尺度適财Η目家系準（CNS ) Α4規格（210x197公f ) 581761 Μ Β7 五、發明説明（11 ) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製個，較佳1至4個碳原子之烴鏈。 "醫藥上可接受盥"係任何酸基（如羧基）所形成陽雜子鹽，或任何蜍基（如胺基）所形成陰雜子瘇。許多此種鹽係技藝中已知者，如見述世界專利公開案87/05297, J〇hnstQn 等人’ 1987年9月11曰公開（併入文中參考）。較佳陽離子度包括鹼金屬蠆（如鈉及鉀），及鹼土金屬鹽（如鎂及鈣）與有機费❶較佳陰離子蕹包括由化物（如氣鹽）。 11生物性可水解醢胺"係本發明醯胺化合物，其不會干擾化合物之抑制活性，或於哺乳類個艘内藉活雜内輊易轉化而產生活性抑制劑。 "生物性可水解羥基釀胺"係式（1)之亞釀胺，其不會干擾這些化合物之金屬蛋白餘抑制活性或於哺乳類個髗内藉活饉内輊易轉化而產生活性式（I)化合物〇此羥基亞贐胺包括不干擾式（I)化合物之生物活性之亞醯胺。 "生物性可水解酯"係關式（1)化合物，其不干擾這些化合物之金屬蛋白畴抑制活性或於動物嫌内輕易轉化而虞生活性式（I)化合物。 "溶劑合物"係一結合溶質（如金屬蛋白嗨抑制劑）及溶劑（如水）所形成複合物。見Je Honig等人，Jhe Van Nostrand Chemists Dictionary, ρ· 650 (! 953) 〇依本發明所用醫藥上可接受溶劑包括不干擾金屬蛋白醃抑制劑生物活性者（如水、乙醇、乙酸、N N-二甲基甲酿胺及及其它已知者或熟習該項技術者輕易決定者。 w光學異構物，·，"立體異構物"，"非鏡像異構物"於文中 • 14· 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ 297公f ) --- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 、1Τ 581761 A7 B7 五、發明説明（12 ) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製具有標準技藝所認可定義（參考Hawlev1» Condensed Chemical Dictionary, 11 版）〇式（I)化合物之特別保護形式及其它衍生物之説明不是用來限制。其它有用保護基、盥形式等之施用列入精藝者能力内❶ 如上定義及文中所用取代基可自身被取代。此取代作用可有一或多個取代基。此取代基包括列於c. Hansch及Α. Leo，Siibstituent Constants for Correlation Analysis iHL-Chemistry and Biology (1979)者，併入文中參者。較佳取代基包括（例如）烷基、晞基、烷氧基、羥基、氧基、硝基、胺基、胺烷基（如胺甲基等）、氰基、_、羧基、烷氧乙酿基（如羧乙氧基等）、硫唑基（thiol)、芳基、環坑基、雜芳基、雜環烷基（如六氩说淀基、嗎11林基、峨洛度基等）、亞胺基、硫氧基、羥烷基、芳氧基、芳烷基及其組合〇文中所用"哺乳類金屬蛋白酶••意指發現於哺乳類來源之任何含金屬蛋白酶，其於合宜分析條件下可催化膠原蛋白、明膠或蛋白多醣之崩解。合宜分析條件可見如美國專利第 4,743,587 號，其參照 Cawston 等人 Biochem. (1979) 99:340-345 之程序使用 Weingarten，Η 等人 Biochem. Biophy. Res· Comm. (1984) 139. n84_ 1187所述合成基質。當然，可用分析這些結構蛋白崩解之任可標準方法。文中所參照金屬蛋白酶係所有含鋅之蛋白蘇，其結構相似於例如人溶基質素或皮膚成織維細胞膠原 -15- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（21〇x297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 、\\0 581761 A7 ____ B7 _____-一^^^ ^ ~------ _ -" __ 五、發明説明（13 ) 蛋白酶。當然，侯選化合物抑制金屬蛋白酶活性之能力可以上述析進行試驗。可用已分離金屬蛋白酶確認本發明化合物之抑制活性，或可用含能讓組織崩解酶之粗製萃取物 0 化合物: 本發明化合物見述於發明摘逑。本發明較佳化合物係其中£係雜嫘仲烷基，較隹具有相鄰母環結構之雜原子，更隹此種螺雜仲烷基有4至5貝較佳雜原子係二價❹ 本發明提供用作金屬蛋白鷗（較佳爲基質金屬蛋白酶）抑制劑之化合物，且其有效治療這些酶遇度活性所特化病沉。明細言之，本發明係關具有式（I)結構之化合物 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁

-一口 Ζ 其中‘· （1)

Ar係烷基、雜烷基、芳基或雜芳基，經取代或未經取代 « f 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 RAH ; R2係氩、恍基或酸基； W係無或一或多個低碳燒基，或係二個相鄰或非相鄰碳 (如此形成一稠合環）間仲烷基、伸芳基或伸雜芳基鍵； Y係一或多個氩、羥基、sr3、sor4、so2r5、烷氧基 16- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） 581761 、胺基，其中胺基係式nr6r7，其十1輿1^7分別選自氫 I 、烷基、雜烷基、雜芳基、芳基、or3、so2r8、cor9 I 、CSR10、PO(RVl)2 ;且 i R3係氬、坑基、芳基、雜芳基； ! | r4係烷基、芳基、雜芳基； I r8係烷基、芳基、雜芳基、雜烷基、胺基、烷胺基、二 I 烷胺基、芳胺基、二芳胺基及烷芳胺基； r9係氳、烷氧基、芳氧基、錐芳氧基、烷基、芳基、雜芳基、雜烷基、胺基、烷胺基、二烷胺基、芳胺基輿烷芳胺基； R1()係烷基、芳基、雜芳基、雜烷基、胺基、烷胺基、二烷胺基、芳胺基、二芳胺基及烷芳胺基； | Rn係烷基、芳基、雜芳基、雜烷基； Z係螺部份（spiro moiety); I η係1至3。 | 此結構亦包括式（I)之光學異構物、非鏡像異構物或鏡像 ! 異構物，或其醫藥上可接受鹽、或生物性水解醯胺酯或亞醯胺。 I 化合物製備： ! 丨丨可用不同程序製備式（I)之異羥肋酸化合物。包括下列之 :::.\ 一般流程圖。 3 ! Y部份之製備 ;丨爲了Y操作，精藝者須知於製備雜環前、後或同時可選 4丨擇製備Y。明確言之，W與Z部份不顯示於下。超過一個以 λ'ί ! 費i 作； •17- 581761 j 五 i 15 上Y與Z可存於式（I)化合物。就化合物其中Y係不相鄰至環氮，製備此化合物之較佳方法係： VR(A) s'丨ΝJ—ΥΒ) 02 X (ΟΛ

Ar SIN cS* 〇 IN L_Υ ΑΓ 流程圖i 其中R係可衍生基或可被操作或取代，此種化合物係已知或以已知方法製備。例如，當R係OH且η係1，市售羥基脯胺酸（Α)被轉化成爲其相似磺内酿胺酯且在本或接續步驟期間操作羥基產生（Β)。可加入或轉變Υ輿Ζ，接在鹸性修件下用羥胺處理以產生式（C)之化合物。當Υ係相鄰至環氮，製備式I化合物之較佳方法如下。爲了明確，W及Ζ部份未顯示：

(D) (E) (F)

流程圖II 當然，此路徑亦是製備其中Ζ爲雜伸烷基且Ζ相鄰至環氮之化合物的較佳者。將螺部份Ζ轉變係技藝中已知的。當然，精藝者基於此或其它流程圖知悉步驟順序可轉變。當 -18- ： CNS ) ( 297 ^^- 581761 酿胺D係已知者或市售，或由已知物以已知方法製備且用已知技術轉化成對應磺内醯胺酯E，之後如上流程圈I所述，合宜操作而製備Y，然後竭力完成Ϊ化合物中心11 (見F) 。當然，可重新整理或改變步驟而提供可接受產率輿所欲產物。 Z部份之製備當然精藝者知悉用於γ製備之流程圖可用於上面Z之製備。提供其它較法給研讀者。當Z係縮嗣或硫縮網時，本發明化合物可以下列方法製備。评與丫再次未顯現供明確；

經濟部中央標準局員工消費合作社印f

流程圖III R係羥基、胺基、亞胺基、烷氧基、氧基或可變爲羰基化合物之其它基，而R”係氣或可置換形成磺内酿胺酯之任何其它基。可改變縮酮、1或磺内酿胺操作順序。製備本發明化合物其中z爲碳環或雜環而非以縮酮形成製備之較隹方法如下所示。下所燴螺部份z當作碳環但雜原子可散伟於螺環任何部位。下面流程圈中，z被縮成爲碳螺環，但一或多個雜原子可散佈於螺環之骨幹中。雜原子之刪去目的是協助研讀者❻而非限制申請專利範固。w • 19 - ———__ —_ _—______ —

本 4 /5 A」i ”，!>11¾ 孓 ν' e ( CNS )八4規格（210 X 581761 發明説明（l7 與Y再次未顯示供明確：〇 -()π HO〆〇

還原 On 〇

,ί)η 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 R爲可產生W或Y之任何基。B係可操作變成K之基（或於烷氧基係R!情形中）。當然，如上所述進行1^、磺内醮胺酯及其它其之操作。這些方法中，W可存於起始物或一已知起始物用已知方法具有一或多個W部份。須知悉於磺内醮胺酯形成期間，最妤任何官能活性之保護基如叛基、獲基等。此爲標準實務，爲精藝者所知正规實務。製造本發明螺化合物之較隹方法係經由羰基化合物，用技藝中已知••保護基••技術如硫酮醇或縮酮等。縮酮、縮醛等可由羰基化合物以技藝中已知方法製備。此種羰基化合物可以環羥基仲烷胺經由酮或内醯胺之氧化（提供2-胺螺官能性）而製得。可以相似方式，用上列流程圈指示產生不同化合物。上列流程圖中，若R’係烷氧基或烷硫基，可用標準去烷化步骤由終化合物衍生對應羥基或硫醇化合物(Bhatt等人 " Cleaving of Ethers"，Synthesis. 1983，pp. 249-281)。 -20- 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐）讀先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 581761 Λ 7 R7 ™ ^ -----—— — -. - 五、發明就,明（18 ,/ 可改變這些步樣以增加所欲產物之產率。精藝者亦知反應物、溶劑與溫度之明智選擇對成功合成係重要成份。當最隹條件之決定等係路徑時，須知可以相似方式使用上二流程圈敎示產生不同化合物。用於製備本發明化合物之起始物係已知，以已知方法製得或市售者當起始物。須知精於有機化學者無須進一步指示可輊易進行有機化合物之標準操作；即，精藝者熟悉範圃及實施法進行此操作。這些包括不限於還原羰基化合物成其對應醇，擭基等之氧化，芳香族取代作用，親電子及親核，醚化，酯化與皀化等。這些操作實例討論於標準參考書如March， Advanced Organic Chemistry (Wiley), Carey aiid Sundberg, Advanced Organic Chemistry (Vol· 2) and Keeting, Heterocyclic Chemistry (所有 17册）〇精藝者將輊易知悉某些反應最隹係在遮蓋或保護分子中其它官能性下進行，如此避免任何不欲侧反應及/或增加反應產率。通常，精藝者利用保護基以完成此增加產率或避免不欲反應。這些反應見於文獻且亦爲精藝者所熟知範国。許多此操作之實例可見例如T. Greene，Protecting Groups in Organic Synthesis 〇當然用做起始物之胺基酸若有活性侧鏈最好阻斷以預防不欲侧反應。本發明化合物可具有一或多個對掌中心。結果，可選擇性製備一光學異構物，包括非鏡像異構物及鏡像異構物，另一者，例如以對掌起始物，催化劑或溶劑，或可製備立 •21· 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） -nmt m -In —.HI —.ϋ n BB^Ia 一 . 讀先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 581761 A7 __B7五、發明説明（19 ) ' ^ 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 11異構物或光學異構，包括同時有非鏡像異構物輿鏡像異構物（消旋混合物）。由於本發明化合物可存有消旋混合物 '光學異構物之混合物，包括非鏡像異構物輿鏡像異構物 ’或用已知方法如對掌鹽、對掌色析法等可分開立體異構物。此外，須知光學異構物，包括非鏡像異構物輿非鏡像異構物或立髄異構物較它者具有更有利性質。如此，當揭亦與申請本發明時，若揭示一消旋混合物，清楚預期光學異構物包括非鏡像異構物輿鏡像異構物或實質無它者之立髏異構物被揭示及申請β 見於身體内金屬蛋白酶（MPs)部份操作係崩解細胞外基質，其包括細胞外蛋白質與醣蛋白質。言些蛋白質及醣蛋白質在維持身體内組織之大小、形態結構及穩定上扮演一重要角色。金屬蛋白醃之抑制劑用於治療至少部份因此蛋白質崩解所引起疾病。已知金屬蛋白酶密切有闕组織重塑。由於彼等活性，據説彼等於下列涉及多疾病上有活性： •组織崩解；包括退化性疫病，如關節炎，多發性硬化症等；身髏内组織之轉移或活動； •组織重塑，包括纖維性疾病、疮、良性增殖等。本發明化合物治療此類蛋白_不欲或昇高活性所特化病症、疾病及/或不欲病沉。例如，該化合物可用於抑制蛋白酶，其 •破壞結構蛋白質（即維持組織穩定及結構之蛋白質）； •22- 本紙張尺度適财 Η H ( CNS ) Α4^ ( 210X 297^1 ) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

、1T 581761 A7 B7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製五、發明説明（2〇 ) •干擾胞内/胞間訊號，包括細胞素向上調節作用及/或細胞素處理及/或發炎，組織崩解及其它疾病所牵連者【Mohler KM 等人，Nature 370 (1994) 218-220, Gearing AJH，等人 Nature 370 (1994) 555-557 McGeehan GM，等人 Nature 370 (1994) 558-561] ，及/或 •利於被治療個髏内不欲處理作用，例如精子成熟，卵子受精作用之處理。文t所用"MP有關病症w或”MP有關疾病”係疾病或病症之生物性表現中涉及不欲或昇高MP活性。此MP"涉及作用"包括； •不欲或昇高MP活性視爲病症或生物性表現之"病因··，不論該活性係基因性昇高，感染，自雒免疫，外傷，生物機械病因，生活習性[如肥胖]或一些其它病因所致活性异高； • MP當作疾病或病症之可觀察表現之部份。即，有關增加MP活性上疾病或病症係可測得的或由臨床觀點，不欲或昇高MP活性含量指該疾病。MP無需做爲疾病或病症之”保證擦記”。 •不欲或昇高MP活性係部份生化或細胞階梯物 (cascade)，其結果或闕於疾病或病症。此點上，MP 活性抑制打斷陏梯物因而控制疾病。有利地，許多MP非散佈全身體内。故，不同组織表現 MP之分佈常特定對這些组織。例如，關節内组織崩解所 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) •罐衣訂 -23- 本紙張尺度適用中酬家標準（CNS ) A4規格（2lQx 297公麓） 581761 A7 B7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製五、發明説明（21 ) 牵連金屬蛋白嗨分佈與其它組織所見金屬蛋白_之分佈不相同。雖然，對活或功效非必要，某些病症最妤用化合物處理，作用於身體内受景影響组織或區域可見特定ΜΡ。例如，展現較高程度親和性及抑制關節（如软骨細胞）内所見ΜΡ之化合物最妤用於治療該處對其它化合較不具特異性所見疾病。此外，某些抑制劑相較於其它組織對某些組織更有生物可用性，且如上所述具選擇性抑制劑之決定性選用提供病症、疾病或不欲病況之特定治療。例如，本發明化合物於穿透至中榧神經系統之能力上有不同。故可選用化合物產經由中榧神經系列外特定所見ΜΡ所調介作用。某些ΜΡ之ΜΡ抑制劑專_性之決定係該領域中精藝者所知。逋當分析條件可見於文獻。溶基質素及膠原蛋白酶之特定分析係已知的。例如美國專利第4,743,587號參照 Cawston筝人Anal Biochem (1979) 99:340-345之程序 ❹於分析方法中使用合成基質見述Weingarten，Η等人 Biochem Biophv Res Comm Π984) 130:1 184-1 187 -當然可用分析結構蛋白質崩解之任何標準方法。當然，文獻中所見分析法或其變異法可測試本發明化合物抑制金屬蛋白酶活性之能力。可用分開金屬蛋白酶確認本發明化合物或含可組織崩解酶之粗製萃取物的抑制活性。由於本發明化合物之MP抑制性作用，本發明化合物亦可用於治療實質上由金屬蛋白酶活性所致下列病症。本發明化合物係用於預防或急性治療。醫藥領域之精藝 •24- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 衣·

、1T 581761 A7 B7 五、發明説明（22) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製者可以任何所欲方式投予彼等。顯然對精簪者給藥之較隹路徑視治療疾病狀態及選用劑量而定。全身性給藥之較佳路徑包括經口或非腸系給藥。然而’精藝者將輕易知悉將MP抑制劑直接投至許多病症之受影響區域的優點。例如，可有利直接投輿MP抑制劑至疾病或病況之區域，如同受手術挫傷（例如血管成形術）影響區域，受疤或燒傷（如局部對皮膚）影響區域。由於骨重塑涉及MP，故本發明化合物可用於預防修補物鬆脱。技藝已知歷經一段時間，修補物鬆脱，變痛導致進一步骨傷害，因而需置換。置換此種修補物之需要包栝如關節置換（例如髖骨、膝骨及肩骨置換），牙修補物，包栝假牙，架橋物（bridge)及固定上顎骨輿/或顎骨之修補物。 MP亦對心血管系统之重塑（例如，先天性心衰竭）有活性。頃建議血管成形術比預料長期有較高失敗率（一段時間閉合）之原因係血管基膜"受損"時，身體可能認知此反應而提昇或有不欲MP活性。故，MP活性於逋應症如擴張心肌病變、先天性心衰竭、動脈硬化、斑痕破裂、再灌流受損、局部缺血、慢性阻塞性肺病、血管成形術再狹窄及主動脈瘤之調節可増加任何其它治療或自身治療之長期成功。於皮膚防護上，MP牽連皮膚”重塑"或"更新”。結果MP 調整改善皮膚條件之治療，包栝但不限於萎縮修復，調節及預防輿修補紫外線誘使皮膚傷害Λ此種治療包括預防性治療或生理表現明顯前治療❶例如，可施用MP當做預曝光處理以預防紫外線傷害及/或曝光期間或之後以預防或儘 -25- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Μ規格（21〇>< 297公餐）衣-- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

、1T 581761 A7 B7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製五、發明説明（23) 量減少曝光後傷害。此外，MP牵速有關異常換新之異常組織的皮膚症症包括金屬蛋白酶活性，如大皰性表皮鬆懈、牛皮癬、硬皮症與異位皮膚炎。本發明化合物亦可用於治療皮膚，•正常"傷害結果包括疤或燒傷後組織"收縮··。 MP抑制劑亦可用於涉及皮膚之手術步驟供疤痕預防及正常组織生長之促進包括施用如肢體接附與難作手術（不管是雷射或切除手術）。此外，MP係關於涉及其它组織（如骨，例如骨硬化症及/ 或骨質疏鬆症，或特定器官如肝硬化輿織維性辟病）之不規則重塑病症。相似如多發性硬化症之疾病，MP可能涉及血腦障壁及/或神經组織髄鞘之不規則重塑❹如此可用調整 MP活性當作治療、預防及控制此疾病之策略。 MP亦被認爲涉及許多感染病，包括巨噬細犯病毒 [CMV];視網膜炎；HIV及所導致症候群AIDS❶ MP亦涉及額外血管形成，其中園繞組織須崩解讓新血管形成如血管纖維瘤及血管瘤。由於MP崩解胞外基質，臆測這些酶之抑制劑可用做生產控制劑，例如預防排卵，預防精子穿入卵子細胞外環境’ 受精_植入及預防精子成熟。此外，彼等亦被臆測可用於預防或暫停早產及分娩。由於MP牽連發炎反應與細胞素之處理作用，該化合物亦可用做消炎劑以用於發炎廣泛之疾病，包括發炎性腸炎、 Crohn氏疾病、溃瘍性腸炎、胰臟炎、憩室炎、氣嚆或相關肺疾、類風濕性關節炎、痛風及Reite氏症候群。 •26· 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 581761 ΚΊ B7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製五、發明説明（24 ) 若自體免疫係因病症引起，免疫反應常引發MP與細胞素活性。MP治療此自體免疫病症之調節係有用治療策略。如此，MP抑制劑可用於治療病症包括紅斑性狼瘡、粘速性脊椎炎、及自體免疫角膜炎。常常自體免疫療法之副作用導致MP調介其它病沉之惡化，此MP抑制劑亦對例如自體免疫治療所誘生織維爲有效。此外，其它纖維病要此類型治療，包栝肺病、氣管炎、氣腫、纖維性囊腫、急性呼吸壓迫症候群（特別是急性相反應” 若MP牵連外源藥劑不欲组織崩解，可用MP抑制劑治療彼等。例如，彼等可有效當作響尾蛇咬之解毒劑，當作抗血管劑（anti vessicant)治療過敏性炎、敗金症及休克。例如，彼等被認爲用於治療或預防病毒感染包括疱症、" 感冒"（如鼻病毒感染）、腦膜炎、肝炎、HIV感染及AIDS 〇 MP抑制劑亦被認爲用於治療阿茲海默氏症、侧邊肌萎縮硬化症（ALS)、肌肉萎縮、糖尿病所致併發症，特別涉及组織活性喪失者、凝固、對宿主移植症、白血病、惡病質、壓食、蛋白尿，及可能毛髮生長之調節。對某些疾病、病沉或病症，MP抑制劑牽涉治療較隹之方法❶此疾病、病況或病症包括關節炎（包括骨闕節炎及類風濕性關節炎）、癌（特別預防或遏止腫瘤生長輿轉移）、眼病 (特別是角膜溃癌、缺乏角膜治療、肌肉退化及翼狀臂肉），及膠質症（特別是牙周病及牙齦炎）。 -27- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210x7^7釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 衣·

、1T 581761 A7 B7 五、發明説明（25) 治療關節炎（包括骨蘭節炎與類風濕性關節炎）之較隹但不受限化合物係遘擇金屬蚤白醃及崩解素金屬蛋白_之化合物。治療癌（特別是預防或遏止腫瘤生長輿轉移）之較佳但未受限化合物係較隹抑制明膠酶或IV塑膠原蛋白酶之化合物〇治療眼病（特別是角膜溃瘍、缺乏角膜治癒、肌肉脱化輿翼狀赞肉）之較隹但未受限化合物係廣泛抑制金屬蛋白酶之化合物。較隹係局部投輿，更隹以滴劑或凝膠投輿化合物〇治療膠質症（特別是牙周病輿牙齦炎）之較隹但未受限化合物係較隹抑制膠原蛋白酶之化合物。組合物本發明化合物包括： (a) 安全有效量式（I)化合物及 (b) 醫藥上可接受載劑。經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 如上述，已知許多疾病係受過量或不欲金屬蛋白蘇活性所調介。這些包括腫瘤轉移、骨關節炎、風濕性關節炎、皮膚發炎、溃瘍（特別是角膜）、發炎反應、牙周病等。如此，本發明化合物可用於治療有關此不欲活性之病況。因此，本發明化合物可調配成用於治療或預防這些病況之醫藥组合物。听用榉準醫鏟詷配物技術如Remington·^ PharmacetitinAl Sciences. Mack 出版公司，Easton，Pa ，最近版所揭示。 -28- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 581761 kl B7五、發明説明（％ ) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製式（I)化合物之"安全有效量”係指用量在哺乳類個體治性位S上有效抑制金屬蛋白嗨，但不會有不當副作用（如毒性、刺激或遇敏反應），當用於本發明之方法時，有相應合理有益/危險比例。特定"安全有效量"顯然随此因素而有所不同’此因素係如治療之特殊情沉、病況生理狀沉、治療期間、伴随療法之性質（視需要）、所用特定劑型、所施用載劑、文中式（I)化合物之溶解性及供組合物之所欲劑量。除了本發明化合物外，本發明组合物含一醫藥上可接受載劑。文中所用術語，，醫藥上可接受載劑"意指一或多個相容固態或液態填充稀釋劑或封囊物，其遑合投與哺乳動物 6文中所用術語"相容•，意指組合物之成份可混合本發明化合物且以此方法成份彼此間於正常使用情形下，不會有實質減少組合物之藥效之交互作用。當然，醫藥上可接受載劑必須純度夠高且相當低毒性以讓彼等逋合投舆動物，最妤係受治療哺乳類。可視做醫藥上可接受載劑或其成份之物質的一些實例係糖（如乳糖、葡萄糖及蔗糖）；澱粉（如玉米澱粉及馬铃薯澱粉）；織維素及其衍生物（如羧甲基纖維素鈉、乙基纖維素輿甲基纖維素）；粉狀黃蓍膠；麥芽；明膠；滑石；固態潤滑劑如硬脂酸輿硬脂酸鎂；硫酸鈣；蔬菜油（如花生油、棉花籽油、芝麻油、橄欖油、玉米油及可可油多元醇（如聚乙二醇、甘油、山梨醇、甘霧糖醇及聚已二醇）；藻酸；乳化劑如TWEENS ;濕劑(如月桂硫酸鈉；色劑·•矯味劑 ;錠劑；穩定劑；抗氧化劑；防腐劑；無熱原水；等張食衣-- (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 、!! -29· 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（21〇χ 297公鐘） 581761 A7 B7 五、發明説明（27) 鹽水；及磷酸黴緩衡劑溶液。用於選用之醫藥上可接受載劑併合本發明化合物基本上依輿化合物方式而定。若注射本發明化合物，較佳醫藥上可接受載劑係滅菌、生理食蕹水，具有血液相容懇浮劑’調整PH至约7 4。明細言之，全身投藥之醫藥上可接受載劑包栝糖、澱粉、纖維素及其衍生物，麥芽、明膠、滑石、硫酸鈣、蔬菜油、合成油、多元酵、藻酸、磷酸鹽缓衡溶液、乳化劑、等張食《水及無熱原水。非腸系投藥之較佳載劑包括聚乙二醇、油酸6酴、吡咯啶酮、乙醇與芝麻油。最妤非腸系投藥之醫藥上可接受載劑包括估總组合物至少約90重量百分比。本發明组合物最好以單位劑量形式提供。文中所用·•單位劑量形式，•係含式（I)化合物量之本發明组合物，具依良妤醫藥實務以單一劑量投給動物（最好係哺乳類）。組合物最妤含約5至約1000，較隹约1〇至約500，更隹約1〇至約 300毫克之式（I)化合物。經濟部中央標準局員工消費合作社印製本發明组合物，可呈任何不同形式逋合（例如）口、直腸、局部、鼻、眼或非勝系投藥。視所欲投藥之特別路徑，可用技藝中廣爲所知不同醫藥上可接受載劑。彼等包固態或液態填充劑、稀释劑、水溶助長劑、界面活性劑及包靠物。可包括視需要活性物但不會實質干擾式（I)化合物之抑制活性。用於併合式（I)化合物所用載劑量足夠於每式（I) 化合物之單位劑量中提供投與實際量物質。用於製備本發 -30- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 581761 A7 B7 五、發明説明（28) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製明方法之劑型的技術及組合物見述下列參考文獻，均併入文中參考：Modern Pharmaceutics，9 及 10 聿（Banker & Rhodes，editors, 1979); Lieberman 等人-， Pharmaceutical Dosage Forms:錠劑(1981):及 Ansel, Introduction to Pharmaceutical Dosage Form 2版（1976)〇除了本案化合物外，本發明组合物含醫藥上可接受載劑。文中所用術語”醫藥上可接受載劑"意指一或多個相容固態或液態填充稀释劑或封囊物，其逍合投輿哺乳動物。文中所用術語”相容·•意指组合物之成份可混合本發明化合物且以此方法成份彼此間於正常使用情形下，不會有實質減少组合物之藥效之交互作用。當然，醫藥上可接受載錨必須純度夠高且相當低毒性以讓彼等遑合投輿動物，最好係受治療哺乳類。可視做醫藥上可接受載劑或其成份之物質的一些實例係糖（如乳糖、葡萄糖及蔗糖〉；澱粉（如玉米澱粉及馬鈐薯澱粉）·，織維素及其衍生物（如羧甲基織維素鈉、乙基纖維素與甲基纖維素）；粉狀黃蓍膠；麥芽；明膠；滑石；固態潤滑劑如硬脂酸與硬脂酸鎂；硫酸鈣；蔬菜油（如花生油、棉花籽油、芝麻油、橄欖油、玉米油及可可油）；多元醇（如聚乙二醇、甘油、山梨醇、甘霧糖醇及聚乙二醇)；藻酸；乳化劑如TWEENS ;濕劑（如月桂硫酸鈉；色劑；矯味劑 ;錠劑；穩定劑；抗氧化劑；防腐劑；無熱原水；等張食豫水；及磷酸盪缓衝劑溶液❹ -31- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -

、1T 581761 Μ Β7 五、發明説明（29) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製用於選用之醫藥上可接受載劑併合本發明化合物基本上依與化合物方式而定。 * 若注射本發明化合物，較隹醫藥上可接受載劑係滅菌、生理食嫌水，具有血液相容懸浮劑，調整pH至約7·4。可用不同口服劑形，包括如錠劑、膠囊、粒劑及大量粉末之固態形式。口服劑形包括一安全有故量，通常至少約 5%，較隹約25%至約50%之式（I)化合物。錠劑可被蜃擠，錠制研製，塗覆腸衣，塗覆糖衣，塗覆薄膜或多次壓擠，含合宜粘合劑、潤滑劑、稀釋劑、崩解劑、色劑、矯味劑、導引流動劑及溶解劑。液態口服劑形包括水溶液、乳劑懇浮劑、稀釋劑、溶液及/或由非發泡顆粒重组想浮劑，及由發泡顆粒重组發泡製劑含合宜溶劑，防腐劑，乳化劑，懸浮劑，稀釋劑，甜味劑，溶解劑，色劑輿嬸味劑。遒合製備經口投藥之單位劑型之醫藥上可接受載劑係技藝中已知的。錠劑典形包括昔知醫藥上相容佐劑如惰性稀釋（例如碳酸鈣、碳酸鈉、甘露糖醇、乳糖及織維素）；粘合物如澱粉、明膠及蔗糖；崩解劑如澱粉、藻酸及 croscarmelose ;潤滑劑如硬脂酸鎂、硬脂酸與滑石。 Gildatis如二氧化碎可用於改良粉末混合物之流動性質。色劑如FD&C染料可加入供表觀用。甜味劑與矯味劑如阿斯巴甜、糖精、薄荷轉、薄荷及水果矯味劑係咀噼錠劑之可用佐劑。膠囊典型包含一或多個如上述固態稀釋劑。載劑成份之選用視之要考量（如味遒、價錢及自我安定性）而定，其科本發明之目的棒暴重要的且精藝者可輕易製得。 -32- 本紙張尺度適用中( CNS ) A4規格（21〇Χ297^ϊΤ (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 、1Τ 581761 A7 B7 五、發明説明（3〇 ) 經口組合物亦包瀵態溶液、乳劑、懸浮劑等❹逋合製備此組合物之醫藥上可接受載劑係技藝中已知的。糖漿、_ 劑、乳劑與懸浮劑中載劑之典型成份包括乙醇、甘油、聚乙二醇、液態蔗糖、山梨醇及水。就懸浮剤而言，典型懸浮劑包括甲基織維素、羧甲基織維素鈉、AVICEL RC-591、黃蓍膠及藻酸鈉·，典型濕劑包括卵磷脂輿聚山梨裔 80 ;且典型防腐劑包括對羥基笨甲酸甲辕及苯甲酸鈉。經口液態组合物亦可含一或多個成份如上文揭示之甜味劑、姆味劑及色劑β 此组合物亦可以昔知方法塗覆，典型用pH或依賴時塒之塗料，使本案化合物释入f腸道，所欲局部施用附近或在不同時間延長所欲作甩。此劑型典型包括但未受限一或多個緘維素酞酸乙酯、聚乙缔酞酸乙酯、纖維素酞酸羥丙甲酯、Eudragit塗料、蠟及蜂蠟。本發明組合物可視需要包括其它藥物活性物。經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 用於達到本案化合物全身投藥之组合物包括舌下、頰及鼻劑型。此組合物典型包括一或多個可溶填充劑物質如蔗糖、山梨醇；及粘合物如阿拉伯膠、微晶纖維素、羧甲基纖維素與瘦丙甲基纖維素。亦可也括如上述Gildants、潤滑劑、#味劑、色劑、抗氧化劑與矯味劑。本發明組合物亦可局部投輿個體，例如直接置放或散伟组合物於個嫌之表皮或上皮组織，或經由"贴费穿皮給藥 "此组合物包括例如洗劑、乳霜、溶液、凝膠輿固體。這些局部組合物最妤包括一安全有效量通常至少約0.1%，較 _ -33- I紙張尺度適用中國®^^YCNS) M規格（210x297公餐） 581761 A7 B7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製五、發明説明（31 ) 佳約1%至約5%式（I)化合物。局部投藥之逋宜載劑依然置於皮膚上當作連續薄膜，且抗拒因流汗或浸水之移除作用。一般載劑係天然有機物且能將式（I)化合物分散或溶於其中。載劑可€挺醫藥上可接受軟化劑、乳化劑、增稠劑、溶劑等。投藥之方法本發明亦提供治療或預防動物體（較隹爲哺乳類個體）内過量或不欲金屬蛋白蜂活性有關病症之方法，其投輿安全有效量式（I)化合物給該個體。文t所用”遇量或不欲金屬蛋白酶活性有關病症"係蛋白質退化所特化任何病症。本發明方法用於治療病症如骨關節炎、牙周病、角膜溃瘍、腫瘤入侵及類風濕性關節炎。本發明式（I)化合物可局部或全身性投藥。全身性施用包括引式（I)化合物進入身體组織之任何方法如關節内（特別用於治療類風濕性關節炎）、椎管内、硬膜外、肌内、穿皮、靜脈内、腹膜内、皮下、舌下、直腸及口部投藥。本發明式（I)化合物最好以口服投藥。投與抑制劑之特定劑量，以及治療期間與是否以局部或全身性治療係互相依賴的〇劑量輿治療法將依所用特定式 (1)、治療逋應症、式（I)化合物在欲抑制金屬蛋白酶位置上達到最小抑制濃度之能力、個體之個人屬性（如體重）、治療法之順從性及治療任何副作用之出現輿嚴重性等因子而定。典型地，成人（重約70公斤）之全身性投藥係每天投與約 -34- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁 ••衣_

、1T 刈 1761 kl 五、發明説明（32) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 5至約3000，較隹約5至1000，更隹約1〇至約1〇〇毫克之式（I)化合物。須知這些劑量範國僅係例示且可依上子麵整每曰投藥。冶療風濕性關節炎之較佳給藥法係經口服或骨闕筇内注 ^之非腸系給藥方式。技藝中已知資務，非腸系給藥之所有輛配物必須诚菌。就哺乳類特別是人（假設約7〇公斤髏重），個別劑量最好约10至1000毫克。全身投藥之較隹方法係口服。個別劑量約10至，較隹約10至約300毫克。可用局部投藥以傳送全身性式（1)化合物，或局部治療個濮。局部投輿式（I)化合物之量端賴皮膚敏感性、欲治療组織之類型輿位置、投藥之组合物輿載劑（若存在），投輿特別式（I)化合物及以治療特別病症與所欲全身性（與局部區別）作用❶ 本發明抑制劑可標定至特定位置，其中金屬蛋白酶用標定配體而聚集。例如，集中將含金屬蛋白晦之抑制劑進入腫痗，偶合抑制劑至投體或其片段其與腫瘤標記物免疫反應如同尋常瞭解一般免疫毒素製法。標定配髏亦可是一逋合存於腫癌受髗之配體。任何標定配饉與欲樣定组織之標記物有特定反應者均可用。偶合本發明化合物至標定配髗之方法係廣爲所知且具下述偶合至載饉之相似方法。若爲局部情沉，最妤用局部給藥。例如治療溃瘍性角膜，直接施用至受影響之眼晴可用如眼藥水或氟溶膠之調配物。若爲角膜治療，本發明化合物亦可調配成凝膠、滴劑或 -35· 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4规格（21 ox297公釐）衣-- (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 、-ιτ 581761 A7 B7 五、發明説明（33) 軟膏或何併入膠原蛋白或親水性聚合屏障物。物質亦可如隱形眼鏡或貯留物般插入或當作結合膜下調配物。若治療皮膚發炎，化合物可以凝膠、糊劑、藥劑或軟膏試局部施用。如此，治療模式反映病況性質且任何選用路徑之合宜調配物係技藝中可用的。當然，綜上所述，本發明化合物可單獨或呈混合物給藥，且組合物可進一步包括適合適應症之額外藥物或賦形劑 Ο 雖然一般在哺乳類金屬蛋白酶呈現較低量，但本發明某些化合物亦抑制細菌金屬蛋白酶。某些細菌金屬蛋白酶似乎較不依賴抑制劑之立體化學性，然而在去活化哺乳類蛋白酶之活性上非鏡像異構物間發現有實質上差異。故，可用此型活性區別哺乳動物酶與細菌酶。抗體之製備及用途經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本發明化合物亦可用於免疫法中以獲得對本發明化合物有免疫專一性之抗血清。由於本發明化合物相當少，彼等便利偶合至抗原中和載劑如昔用匙孔血藍蛋白（KLH)或血清白蛋白載劑。就具有羧基官能性之本發明化合物，可以技藝中一般已知方法偶合至載劑。例如，可還原羧基成酸且經由蛋白質爲主載劑上侧鏈胺基反應偶合至載劑，視需要接著將所形成亞胺鏈還原。羧基可用縮合劑如二環己基碳化二亞醯胺或其它碳化二亞醯胺脱水劑與侧鏈胺基反應〇亦可用連接子（linker)化合物進行偶合；同雙官能性與 -36· 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 581761 A7 B7 五、發明説明（34) 異雙官能性連接子可得自Pierce Chemical Company， Rockford，III。然後所得免疫原複合物可注入合宜浦乳動物個體如鼠、兔等。依提高血清中抗體產量之流程合宜法涉及在佐劑存在下重覆注射免疫原。免疫血清效價可用免疫分析程序（現爲技藝中標準），用本發明化合物當作抗原輕易測得。可直接用所得抗血清或以收獲周邊血液淋巴球或經免疫動物之脾臟及不朽化產生化抗體之細胞，接著用標準免疫分析技術鑑定合宜抗體步驟可得到單株抗體。多株或單株製劑用於監測本發明化合物所涉治療或預防法。可於治療法期間不同時，用標準免疫分析技術（使用本發明抗體製劑）測試合宜檢體如衍生自血液、血清、尿或唾液檢體是否有投與抑制劑存在。本發明化合物亦可用標準偶合法偶合至標記物如閃爍標記，例如銲99或1-131。。投與經標記化合物至個體以決定一或多種活體内金屬蛋白酶之過量位置。可選擇性結合金屬蛋白酶之抑制劑之能力可有利定位這些酶在原位分佈。該技術亦可用於組織學程序且經標記本發明化合物可用於競爭性免疫分析法。經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 下列非限制性實例描述本發明之化合物、組合物及用途。實例用合宜iH及13C NMR、元素分析、質譜及/或IR光譜分析化合物。所用典型惰性溶劑最妤呈乾燥形式。例如四氫呋喃 -37- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 581761 ΑΊ B7 五、發明説明（35) (THF)蒸餾自鈉與二苯酮，二異丙胺係蒸饀自氫化鈣且所有其它溶劑係售得適當等級。在合宜矽膠（70-230網孔； Aldrich)或（230-400網孔；Merck)進行色析。在矽膠盤 (2 00-3 00網孔；Baker)上所置玻璃進行薄層色析分析 (TLC)及用UV或5%磷鉬酸於EtOH顯像。實例1 OMe

HO

t)H

1) ArSQ2Cl/Et3N 2) SOCl2 / MeOH

MeO oo2s^ 义山 Jones oxid.

MeO

O 02S j〇t OMe (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 1a

bH 1b 〇 BF3〇Et2 HS〆

,SH 〇〇2s

XT OMe

KOH/ MeOH

MeO 羥胺 HO.

O 02S A^N

jCT OMe 1c 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 la. lN-(4-甲氧苯磺醢基）-4-(R)-羥基·吡咯啶-2(R)_羧酸甲酯：順式-羥基-D-脯胺酸（50克，0.38莫耳）溶於水：二噚烷（1 : 1，300毫升）於三乙胺（135毫升，0.96莫耳）。4-(甲氧苯磺醯基氯化物（87克，0·42莫耳）與2,6-二甲胺基吡啶（4.6克，0.038莫耳）一起加入旦在室溫時攪拌混合物14小時。濃縮混合物並用EtOAc稀釋。分離各層且用 IN HC1二次用食鹽水一次沖洗有機層，以MgS04乾燥，過濾及蒸發以得到83克固態物質，其溶於MeOH(500毫升）。滴加硫醯氯（50毫升）且攪拌所得之混合物14小時。蒸乾混合物並用CHC13捣泥以產生白色的固體，其純度夠無須 38 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 581761 A7 B7 五、發明説明（36 ) 進一步純化。 lb.中間物Α 1Ν-(4-甲氧苯磺醯基）-4-氧-吡咯啶-2(R)-羧酸甲酯··製備8M Jones試劑。將醇la (10.0克，31.7 毫莫耳）溶於175毫升之丙酮且冷卻至0°C。加Jones試劑直到溶液依然爲橘色爲止且在室溫時攪拌混合物14小時。加異丙醇至溶液以終止過量的鉻試劑且經由矽藻土過濾所得的固體。在減壓下濃縮濾液且將殘餘物溶於二氧甲烷及用水沖洗。以硫酸鎂乾燥所得的溶液，且在減壓下濃縮。在矽膠上用EtOAc :己烷（1 : 1)進行色析來純化殘餘物得到所得的酮。MS(ESI) : 374 [M + + H]。 1c· 7N-(4-甲氧苯磺醯基）-1，4_二嘧-7-偶氮螺[4.4]壬烷-8(R)-羧酸甲酯：將酮lb(1.3克，4.15毫莫耳）溶於30毫升之無水二氯甲烷接著加入1，2乙烷二硫醇（0.800毫升， 8.30亳莫耳）及靆化硼烷三氧化物（0.20毫升，1.66毫莫耳) 。在室溫時挽拌混合物過夜。該溶液基本上已加入1N之氫氧化鈉然後用EtOAc萃取混合物三次而製得。用水及氣化銨沖洗有機層，以硫酸鎂乾燥，過濾及蒸發以產生標題化合物。MS(ESI) : 390 [M + + H]，407 [M + + NH4]。經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

Id· N-羥基-7N_(4-甲氧苯磺醯基）-1，4_二嘧-7-偶氮螺 [4.4]壬烷-8(1〇-羧醯胺：製備1.761^羥胺化鉀於甲醇的溶液。將1.76溶液（1.46毫升，2.57毫莫耳）直接加至甲酯lc (0.100克，0.257毫莫耳）且攪拌反應混合物過夜。用IN 之HC1酸化溶液，用乙酸乙酯萃取混合物三次，用硫酸鎂乾燥，過濾及蒸發。在矽膠上用乙酸乙酯：己烷：甲酸 -39- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 581761 A 7 B7 五、發明説明（37 ) (1 : 1 : 0.1)進行色析純化產物而產生標題化合物。 MS(ESI) : 391 [M + + H]，408 [M + + NH4] 〇實例2

2a. ΓΝ-(4-甲氧苯磺醯基）-螺[1，3_苯幷喹唑·2,4’_吡咯啶]-2*(R)-羧酸甲酯：將酮lb(0.5克，1.59毫莫耳）溶於 10毫升的無水二氯甲烷接著加入1，2·苯二硫醇（0.450克， 3.19毫莫耳）及醚化硼烷三氟化物（0.07毫升，0.63毫莫耳) 。在室溫時挽拌混合物過夜。該溶液基本上已加入1N之氫氧化鈉且接著用乙酸乙酯萃取混合物三次而製得。用水及氣化胺沖洗有機層，以硫酸鎂乾燥且在減壓下蒸發以得到固體。MS(ESI) : 438 [M + + H]。經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 2b· N-羥基·1’Ν_(4-甲氧苯磺醯基）-螺[1，3-苯幷嘧唑-2,4’-吡咯啶]-2’（R)羧醯胺：製備1.76Μ羥胺化鉀於甲醇的溶液。將1.76M溶液（7.3毫升，13.0毫莫耳）直接加至甲酯2a(0.590克，1.3毫莫耳）且攪拌反應混合物過夜。將 IN HC1加至溶液以酸化之，且用乙酸乙酯萃取溶液三次，用硫酸鎂乾燥且在減壓下蒸發。在矽膠上用乙酸乙酯/己烷/甲酸（1/1/0.1)進行色析完成產生的純化而得到純的化合物。MS(ESI) : 439 [M + + H]。 -40· 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） 581761 A7 B7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製五、發明説明（38 ) 實例3

MeO Ο 02S'

Xr0Me .OMe .OMe BF-,OEt?

MeO oof

KOH / MeOH HO、 O 02S" 〇 3a 3b 3a. 8N-(4-甲氧苯磺醯基）-l，5-二嘧-8-氮螺[4.5]壬烷- 9(R)-羧酸甲酯：將酮lb(1.5克，4.79毫莫耳）溶於30毫升的無水二氯甲烷且接著加入1，3-丙二硫醇（1.20毫升， 11·9毫莫耳）及醚化的硼烷三氟化物（0.24毫升，1.91毫莫耳）。在室溫時攪拌混合物過夜。該溶液基本上已加入1Ν 的氫氧化鈉且接著用乙酸乙酯萃取混合物三次而製備。用水及氣化胺沖洗有機層，以硫酸鎂乾燥且在減壓下蒸發以產生固體。MS(ESI) : 403 [Μ + + Η]，420 [Μ + + ΝΗ4]。 3b. N-羥基-8Ν·(4_甲氧苯磺醢基）-l，5-二嘧-8-氮螺 [4.5]壬烷-9(R)-羧醯胺：製備1.76M羥胺化鉀於甲醇的溶液。將1.76M的溶液（1.4毫升，2.48毫莫耳）直接加至甲酯3 a(0.100克，0.2 48毫莫耳）且攪拌反應混合物過夜。將 1N之HC1加至溶液以酸化之，用乙酸乙酯萃取所得的混合物三次，以硫酸鎂乾燥且在減壓下蒸發。在矽膠上用乙酸乙酯/己烷/甲酸（1/1/0.1)進行色析完成產物的純化而得到純的化合物。MS(ESI) : 404 [M + + H]，421 [M + + NH4] 41 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 581761 A7 B7 五、發明説明（39 實例4

MeO

Ο 02S tA/N

p-TsOH HO〆

,OH MeO O 02S Λ^ν, J〇r OMe KOH/ MeOH ~錄 HO、

O 02S A^N ja0Me 4a 4b 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 4a. 7N-(4·甲氧苯磺醢基）-1,4-二哼-7-氮螺[4.4]壬烷- 8(R)羧酸甲酯：將酮lb(0.5克，1.59毫莫耳）溶於50毫升的苯，加入1,2乙二醇（0·108克，1_76毫莫耳）及對甲苯磺酸（0.006克，0.0160毫莫耳）。迴流加熱反應混合物18小時。用醚稀釋混合物且用碳酸氫鈉（10毫升）中和，用醚萃取三次且用氣化銨沖洗結合的醚層，以硫酸鎂乾燥及蒸發。在矽膠上用己燒么酸乙酯（1/1)進行色析而完成所得油體的純化以獲得純產物。MS(ESI) : 437 [Μ + + Η】，454 [M + + NH4]。 4b. N-羥基-7N-(4-甲氧苯磺醯基）-1,4-哼-7-氮螺[4·4] 壬烷-8(R)-羧酸酯：製備羥胺化鉀於甲醇的溶液。將 1.76M的溶液（2·0毫升，3·52毫莫耳）直接加至甲酯4a (0.146克，0.408毫莫耳）且攪拌反應混合物過夜。將IN HC1加至溶液以酸化之。用乙酸6酯萃取所得的溶液三次，以硫酸鎂乾燥且蒸發成油體。在矽膠上用乙酸乙酯/己烷 /甲酸（2/1 /0 1.)進行色析完成所得油體的純化而產生純化物。MS(ESI) : 438 [M + + H]，455 [M + + NH4]。 -42 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 581761 A7 B7 五、發明説明（40 ) 實例5 ,XT〇Me z〇Me 〇Me

p-TsOH

Ο 〇2$ MeO

HO X OH MeO 0 o2sx

KOHI MeOH 5a

〇〇2s HO、

5b /〇.

經濟部中央標隼局員工消費合作社印製 5a· 8N-(4-甲氧苯碟酿基〉-I，％二今·3,3_二甲基8氣螺【5,4]癸烷-9(R)-羧酸f酯：將酮ib(2克，3·19毫莫耳）溶於 50毫升的苯，加入2,2-二甲基-1，3-丙二醇（〇·4克，3 83 毫莫耳）及辦甲苯磺酸單水合物(57毫克，0.3毫莫耳）〇用迪恩史塔克裝置迴流混合物過夜。該溶液藉加入水性之 NaHCOs而製得用EhO萃取三次。用氟化銨沖洗有機層，以硫酸頷:乾燥，過波及蒸發在梦膠上用已燒/Et〇Ac(7 : 3)進行色析完成產物的純化而產生所欲的產物。離子嘖霧 MS:m/z : 417【ΝΓ+ΝΗ4】，440 [M++H]。 5!>.>1-經基_81^-(4-甲氧苯碟睡基）-1，5-二味-3,3-二甲基 -8-氮螺[5,4]癸坑_9(R>.叛酸胺：以 Fieser及Fieser，Vol 1，p 478所述製餚1·5Μ羥胺化_於甲醇的溶液。將i.5M 溶液(5·7毫升，8毫莫耳）直接加至甲酯5a(0.32克，〇·8毫莫耳）且攪拌反應混合物過夜❶用IN JJC1酸化溶液，用6 酸6發萃取混合物三次，以硫酸鎂乾燥，遇濾及蒸發c藉逆向製備 HPLC (60A40B，A，95 ❶/〇水，5❶/〇乙腈，〇·1°/〇甲酸；Β，80❶/〇 6腈，20%水；19 X 300毫米的水 SymmertryPrep 〇18柱）纯化產物而得到如白色泡沬狀固 -4*3 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐）衣-- f請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁j -吕 581761 Α7 Β7 五、發明説明（41 ) 體之標題化合物。離子喷霧MS : m/z 418 [M++NH4]， 401 [ΚΓ + Η】〇實例6

6a. 7N_(4-甲氧苯磺酿基）-l，4-二噚-(2S)，（3S)-反式-環己基-7-氮螺【4,4]壬烷-8(R)羧酸甲酯：將酮lb(l克， 3.10毫莫耳）溶於50毫升的苯，加入（18,28>-反式-，2-環己烷二醇(0.45克，3.82毫莫耳）及對甲苯磺酸單水合物 (57毫克，0.3毫莫耳）。用迪恩史塔克裝置迴流混合物過夜。該溶液基本上以加入水性的NaHC03而製得用Et20萃取三次。用氯化銨沖洗有機層，以硫酸鎂乾燥，遇濾及蒸發。在矽膠上用已烷/EtOAc(l :3)進行色析完成產物的純化而得到所欲的產物。離子噴霧MS : m/z 429 [M + + NH4】，412 [M + + H]。經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 6b· N-羥基 7N-(4-甲氧苯磺醃基）-l，4-二哼 _(2S)，（3S)_ 反式-環己基-7·氮螺[4,4]壬烷-8(R)-羧醯胺：以Fieser及 Fieser，Vol 1，p 478所述製餚1.5M羥胺化鉀於甲醇的溶液。將1.5M溶液（5.7毫升，8毫莫耳）直接加至甲酯 6a((K33克，0·8毫莫耳）且攪拌反應混合物過夜。用1N HC1酸化溶液，用乙酸乙酯萃取混合物三次，以硫酸鎂乾 -44 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X297公釐） 581761 A7 ______ B7 五、發明説明（42 ) 燥，遇濾及蒸發❶藉逆向製儒HPLC (60 A40B，A， 95% 水，5% 乙腈，〇.i%f 酸；B，80% 乙漪，20% 水； 19乂 300毫米的水8丫1||111〇1^5^代卩€；18柱）純化產物而得到如白色泡洙狀固髄之樣題化合物•離子噴霧MS : m/z 430 [M + + NH4]，413 [M + + H]❼ 實例7 OMe 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

MeO

p-TsOH OH HO、 7a· 7N_(4-甲氧苯磺酿基）-i，5-二嘮-(2R)，（3R)-反式-環己基-7·氮螺[4,4]壬坑_8(R)_羧酸甲酯：將酮lb(l克， 3·19毫莫耳）溶於35毫升的苯，加入（1R，2R>-反式-1，2-環已坑二醇（0.45克，3·82毫莫耳）及對甲苯磺酸單水合物 (29毫克，〇·ΐ 5毫莫耳）。用迪恩史塔克裝置遨流化合物過夜❶該溶液藉加入水性之怳&110：〇3而製得用Et2〇萃取三次。用氟化銨沖洗有機層，以硫酸銕乾燥，遇濾及蒸發。在矽膠上用己烷/EtOAc(l : 3)進行色析完成產物的純化而產生所欲的產物σ離子噴霧M!S : m/z 429【M++NHU1， 412 [M+ + H] 〇 7b· N-羥基-7N-(4-甲氧苯磺酿基）-l，4-二哼 _(2R)，（3R)-反式-環已基·7-氮螺【4,4】壬坑-8(R)-羧醢胺：以FUser及 Fieser, Vol 1，p 478所逑製備1.5M羥胺化If於甲醇的溶 -45- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 581761 A7 B7 五、發明説明（43 液。將1·5Μ溶液（12·8毫升，19.2毫莫耳）直接加至甲酯 7a((K8克，1.92毫莫耳）且攪拌反應混合物遇夜。用1Ν HC1酸化溶液，用乙酸乙酴萃取混合物三次，以硫酸鎂乾燥，過濾及蒸發。藉逆向製備HPLC (60A40B，A， 95%水，5%乙腈，0.1%f酸；B，80❶/〇乙腈，20%水； 19X300毫米的水SymmertryPrep (：18柱）純化產物而得到如白色泡洙狀固髏之標題化合物。離子噴霧MS : m/z 430 [M++NH4】，413 [M+ + H】。實例8 --------^^衣-- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

MeO Ο 02S ,/ Ή ,.〇rOMe

p-TsOH HO OH MeO OBn

O 02S A^N

KOH/ MeOH 羥胺 παΧΙ -*0

、1T 8s OBn 8b OBn 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 8a· 8N-(4·甲氧苯磺酿基）-l，5-二嘮苄氧基氮嫘【5,4]癸規-9(R)-叛酸甲锻：將網ib(3.4克，ι〇·98毫莫耳 )溶於65毫升的苯’加入2·予氧基-1 3丙二醇(2克，ι〇·98 毫莫耳）及姆甲苯磺酸單水合物（1〇4毫克，〇 15—毫莫耳）。用逾恩史塔克裝置遨流化合物過夜6該溶液藉加入水性之 NaHCC^而製得用叫〇萃取三次。用氣化按沖洗有機層，以硫酸鎂乾燥，遇邃及蒸發。在矽膠上用己烷獅Α〇(3 :7)進行色析完成產物的纯化而產生所欲的產物。離子嘖霧MS : m/z 495【M++NH4]，478【M+ + H卜队Ν·羥基8Ν·(4.甲氧苯確醸基)、15二味小节氧基冬

581761 Μ Β7 五、發明説明（44 氣端[5,4]癸坑-9(R)-羧酸胺：以Fieser及Fieser，Vol 1， p 478所述製儀1.5M羥胺化_於甲醇的溶液。將1.5M溶液（9·3毫升，13毫莫耳）直接加至甲鷗8a(0.78克，1.63毫莫耳）且攪拌反應混合物遜夜。用IN HC1酸化溶液，用6 酸6糖萃取混合物三次，以硫酸緩乾燥’過滅及蒸發。藉逆向製餚 HPLC (60Α40Β，A，95% 水，5% 乙腈，0.1% 甲酸；B，80%乙腈，20°/〇水；19 X 300毫米的水 SymmertryPrep 018柱）纯化產物而得到如白色泡沬狀固體之操題化合物。離子嘖罄MS : m/z 510【M++NH4J， 479 [M + + H】❶ 實例9 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

Me〇 I：: TMSOJf

TMSO

OTMS MeCT

O 02S ：',N ^Y〇Me .OMe

KOH/ MeOH 羥膀 H〇、 ri -q 1b 9a 9b 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 9a. 8N-(4-甲氧苯磺贐基）-l，5-二嘮_3,3-二乙基_8·氮爆【5,4】癸炕-9(R).羧酸甲醻：將酮Π>(2·0克，6_39毫莫耳）溶於二氣甲燒（40毫升）接著加入贰（三甲矽氧基）-2,2-二乙基-1，3-丙二醇（8.8克，31.9毫莫耳）1在乾冰/丙酮浴中冷卻反應混合物至-78Λ：，且力入三氟甲磺酸三甲矽酸酯 (0.075克，0.31毫莫耳，〇·〇48當t)。溢熱反應混合物至室溫且攪拌過夜。加入飽和碳酸氬鉤以中和混合物，然後用水及二氟甲烷萃取混合物。以硫酸鈉乾燥有機層且在減 4? 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ297公釐） 581761 Α7 Β7 五、發明説明（45 ) 壓下蒸發。以矽膠色析並用3 : 7乙酸乙酯：己烷之溶析劑系統完成純化。MS(ESI) : 428 [M + + H] ，445 [M+ + NH4]。 9b. N-羥基-8N-(4-甲氧苯磺醯基）-1，5-二哼-3,3_二乙基 •8-氮螺[5,4]癸烷-9(R)-羧醯胺：將縮酮9a(4.0克，9.68 毫莫耳）加至1_5M羥胺化鉀之溶液（77毫升，14當量，如 Fieser 及 Fieser，Vol 1，p 478 所述製備）〇用 IN HC1 讓 pH至4-5後4小時冷卻反應。以硫酸鈉乾燥有機層，且在減壓下蒸發成泡沫狀固體。以矽膠色析，用3%甲醇： 97%氯仿當作溶析劑完成純化。MS(ESI) : 429 [M + + H] ，446 [M+ + NH4] 〇 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 實例1 0

OBn OH OH 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 10a· 8N-(4-甲氧苯磺醯基）·1，5-二嘮-3-羥基-8-氮螺 [5,4】癸烷-9(R)-羧酸甲酯··以20毫升EtOH吸收縮醛（1.2 克，2.51毫莫耳）且用10%鈀/碳（120毫克）充填混合物且在氮氣攪拌32小時。TLC(EtOAc/己烷1 : 1)指示反應完成。經由矽藻土過濾混合物且濃縮以產生所欲產物。離子噴霧MS : m/z 405 [M + + NH4]，388 [M + + H]。 l〇b· N-羥基8N-(4-甲氧苯磺醢基）·1，5·二噚-3-羥基-8- -48- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X297公釐） 581761 A7 B7 五、發明説明（46 ) 氮螵【5,4]癸烷-9(R)-羧醯胺：以Fieser及Fieser，Vo〖1， p 478所述製佛1.5M羥胺化鉀於甲醇的溶液將ι.5Μ溶液（11毫升，16·5毫莫耳）直接加至甲發10a(0.8克，2.06 毫莫耳）且攪拌反應混合物遇夜。用IN HC1酸化溶液，用乙酸乙躕萃取混合物三次，以硫酸鎂乾燥，過濾及蒸發。藉逆向製儒HPLC (60Α40Β，A，95❶/〇水，5°/〇乙腈， 0·1°/〇甲酸；B，80% 6骑，20%水；19 X 300毫米的水 SymmertryPrep 018拄>纯化產物而得到如白色泡沬狀固體之標題化合物。離子嘖審MS · m/z 406 [M ++NH4]， 389 [M+ + HJ。

資例U --------—— (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

O 0〇S

MeO〆 1b

XT

/>TsOH

HO OH M

MeO

KOH/ MeOH OMe HO' o o2s XT0Me 11b

經濟部中央標準局員工消費合作社印製 11a· 7N-(4-甲氧苯磺釀基）-l34-二吟·(2R)·甲基-3(R)-甲基-7_氮螺[4,4J壬炕-8(R)-羧酸甲酯：將辆ib(2克， 6·38毫莫耳）溶於4〇毫升的苯，加入（2R，3R)-㈠-2,3_丁二醇（〇·67克，7·66毫莫耳)及對甲苯磺酸單水合物（12〇毫克，〇·63毫莫耳）。用速恩史塔克裝置遨流化合物遇夜。該溶液藉加入水性之NaHCG3而製得用Et20萃取三次。用氣化銨沖洗有機層，以硫酸鎂乾燥，遇濾及蒸發。而產生所欲的產物。離子噴霧MS : m/z 404 [M + + NH4]，386 、· 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） 581761 \Ί Β7 五、發明説明（47 [Μ + + Η】ο lib· Ν-瘦基7Ν·(4-甲氧苯磺醣基）-1，4_二嘮-(2R)_甲基-(3R)，甲基-7-氮螺[4,4]壬烷-8(R)-羧醢胺·•以Fieser及 Fieser，Vol 1，p 478所逑製餚1.5M幾胺化#P於甲酵的溶液。將1·5Μ溶液（32毫升，48毫莫耳）直接加至甲醻 lla(2.5克，6·7毫莫耳）且攪拌反應混合物遇夜❶用1Ν HC1酸化溶液，用乙酸乙酯萃取混合物三次，以硫酸鎂乾燥，遇濾及蒸發。在矽膠上以驟色析(CH2Cl2/EtOAc/己烷，5 : 3 : 2至5 : 4 : 1)純化產物而得到如白色泡沬狀固醴之標題化合物。離子喷霧MS : m/z 404 [M'NHJ， 387 [M + + H卜實例12 衣--- (讀先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) tr

MeO 1b Ο

p-TsOH

HO OH M

MeO O 02S' KOH/ MeOH I胯 HO. O 02S«Vz,

XT 12a 12b

經濟部中央標準局員工消費合作社印製 12a· 7N-(4-甲氧苯磺酿基）-l，4-二吟-(2S)-甲基-3(S)- 甲基-7-氮螺[4,4]壬烷-8(R)-羧酸甲酶：將酮ib(1.52克，4.78毫莫耳）溶於45毫升的苯，加入（28,3 8)_( + )-丁二醇（0·52克，5·74毫莫耳 > 及對甲苯磺酸單水合物（89毫克，〇·47毫莫耳）。用迪恩史塔克裝置遨流化合物過夜❹該溶液藉加入水性之NaHCOs而製得用Et20萃取三次。用氟化銨沖洗有機層，以硫酸鎂乾燥，過濾及蒸發產生所欲的本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X297公釐） 581761 A7 B7 五、發明説明（你），物離予嘴霧⑽：m/z 4〇3 [M + + NH4】，[m + + hj 12b· N_羥基7Ν-(4·甲氧笨磺嫌基）>β1，‘二嘮-(2S)·甲基_ (3S)_甲基.7_氮螺[44]壬燒_8⑻羧醮胺：以……及

FieSer’ V〇1 L P 478所逑製餚1·5Μ羥胺化銲於甲醇的溶洗。將1·5Μ溶液（1〇毫升，19毫莫耳）直接加至甲酯 7a(0.92克，2 39毫莫耳y且攪拌反應混合物過夜◊用1Ν HC1酸化溶液，用乙睃乙鞔萃取潞合物三次，以硫酸鎂乾燥，過濾及蒸發❶在矽膠上用驟色， 95 : 5)純化產物而得到如白色泡沬狀固醴之樣題化合物。離子噴霧MS : m/z 409 [Μ++ΝΗ4]，387【Μ+ + Η] 〇贵例13 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) •_衣·

、1T ^OMe

^yc 〇 p-TsOH ^OMe

MeO^ rr' 0 o2sy^^) 丨人羟脖

KOH/ MeOH HO、 O 02S- ，矿 Λ 〇 13b 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 13a· 8N-(4-甲氧苯磺酿基）-1,5-二嘮-3-亞甲基-8-氮蠓【5,4]癸坑_9(R)_羧酸甲酯：將酮lb(3克，9·58毫莫耳）溶於45毫升的苯，加入2·亞甲基-1，3-丙二酵（1·〇4克，11·8 毫莫耳）及對甲苯磺酸單水合物（182毫克，0·95毫莫耳）。用迪恩史塔克装置邂流化合物過夜β該溶液藉加入水性之 NaHCOs而製得用Et2〇萃取三次。甩氣化銨沖洗有械層，以硫酸鎂乾燥，遇濾及蒸發°在矽膠上用己坑/EtOAc(3 57· 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210x297公釐） 581761 A7 B7 五、發明説明（49 ) :7至4 : 6)進行色析完成產物的纯化而產生所欲的產物。離子噴寒MS : m/z 401 [M + + NH4】，384 [M + + H】。 13b· N-羥基8N_(4-甲氧苯磺釀基）-l，5-二嘮-3-亞甲基-8-氮螵[5,4】癸烷-9(R)-羧醎胺·以Fieser及Fieser，Vol 1，p 478所述製儻1·5Μ羥胺化鉀於甲醇的溶液。將1.5M 溶液（14毫升，26毫莫耳）直接加至甲酯13a(1.25克， 3.26毫莫耳）且嫌拌反應瑕合物遇夜°用11^!1€1酸化溶液，用6酸乙酯萃取混合物三次，以硫酸鎂乾燥，過濾及蒸發。在矽膠上用驟色析(CH2Cl2/CH3OH，95 : 5)纯化產物而得到如白色泡沬狀固髖之樣題化合物❶離子嘖霧MS :m/z 407 [M++NH4】，385 W + H] 〇實例14 · -- (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

、1T

MeO 〇2f ,Ν 1b

XT TMSOTf

TMSO’^^'^OTMS MeO

0 02S A^N XT' OMe OMe

KOH/ MeOH HO、

o o，s H 14a 14b

經濟部中央標準局員工消費合作社印製 14a. 1Ν·【（4-甲氧苯基）磺酸基]-l，4_二噚-氮螵[4·5]壬烷-2·羧酸甲酴將酮ib(20.0克，63.9毫莫耳）溶於二氯甲烷（500毫升）接著加入贰（三甲矽氧基）-1,3-丙二醇（5 1.9克，221.9毫莫耳）。在無水的冰冷丙SB中冷卻反應混合物到 -78°C，加入三甲矽烷三氟甲坑磺酸藥(3·6克，3·07毫莫耳，0.048當量）。溫热反應混合物至室溫並且挽拌過夜。加入飽和的碳酸氬納以中和混合物，用水及二氟f燒（3Χ 52· 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 581761 A7 B7 五、發明説明（5〇 ) 200毫升）萃取混合物。以硫酸鈉乾燥有機層且在減蜃下蒸發。以矽膠色析並用1 : 1乙酸乙醱：己坑之溶析劑系統完成纯化而得到如無色油髏之產物。MS(ESI) : 372 [M + + H]，389 [Μ++ΝΗ41 1 14b. N-羥基-1Ν-【(4-甲氧苯基）磺酿基]-1，4-二噚·氮螺 [4.5]壬燒-2-羧釀胺（〇縮酮14&(14.0克，37 7毫莫耳）加至1.5Μ瘦胺化鉀溶液（300毫升，14當量，如Fieser及 Fieser，Vol 1，p 478 所述製備）。用 IN HC1使 pH 値至 4.5 1俩小時後冷卻反應。用水稀释反應混合物且用乙酸乙酯萃取。以（Na2S04)乾燥有秦脣且在減暑下蒸發成泡沫狀的固髗。以矽膠色析（溶析劑：3%甲醇·· 97〇/〇之氣仿）完成純化❶得到如白色粉末產物° MS (ESI) : 372 [M++H] ，390【M++NH4]。實例15 ^^衣-- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 0 〇2〇

MeO

MJ OMe ,OMe

p-TsOH HO〇<p〇H MeO 0、/0

Γ2?. A^n :/ 了 I

LiOH 經濟部中央標準局員工消費合作社印製

O 02S 15b

2) 早酿風mm H〇X1

XT 15c 15我.11尺-【（4-甲氧苯基）磺醮基1-2,4,8，14-四嘮-11-氮二螺【4·2.5·2】·十五炕）-2-羧酸甲酯：在室溫時挽拌酮 53· 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（2丨0X297公釐） 581761 A7 B7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製五、發明説明（51 ) π>(1·0克，3·19毫莫耳）於苯（60毫升）加入13二嘮燒-5,5 二甲醇（〇·56克，3.83毫莫耳）及對·苯磺酸（0·01當董>。在氮氣下用迪恩史塔克井及迴流的冷凝錨進行反應。迺流加熱反應過夜❶冷鄱反應混合物且用飽和的碳酸氳納嬝化❶ 用乙酸6酯及水萃取所得的渑合物且以硫酸鈉乾燥有輾層並在減愚下浪縮〇在矽膠上用己坑：乙酸乙酯（1 ·· 1)色析完成炖化。MS(ESI)444 [Μ + + Η]，461 [Μ ++ΝΗ4】。 15b· 11Ν-[(4-甲氧苯基）磺酿基】·2,4,8，14-四噚-11-氮二媒[4·2·5·2】-十五坑-2·羧酸：將編晒15λ(0·90克， 2·08毫莫耳）溶於甲醇（10毫升）及THF(5毫升)。接著加入溶於水（5毫升）之氳氧化鋰（1.0克，遇量），攪拌所得的混合物1小時。加入IN HC1到pH = 2以终止反應❶用二氣甲烷及水萃取反應混合物。以硫跋麵乾燥有機層且在減|下濃縮以產生產物。MS(ESI) ·· 430 [M+ + H]，447 [M++NH4】。 15c· N-羥基-1Ν-[(4-甲氧苯基>磺醢基】-2,4,8，14-四嘮-11·氮二螵【4·2·5·2Ρ十五烷-2-羧醢胺：將羧酸15b (0·43 克，1.0毫莫耳）溶於二氣甲烷（15毫升），接著在氮氣下加單醯氱（〇·26克，2.05毫莫耳）及DMF<0.07克，10毫奠耳）。在分開的燒瓶中，將羥胺之盥酸盥(0.28克，4·0毫莫耳）溶於水(3毫升），接著入THF (10毫升）。於冰浴中冷卻胺溶液且加入三乙胺（〇·61毫升，6.0毫莫耳）。在〇°C将酸化的混合物加至羥胺液液。接著將反應混合物溫热至室溫並攪拌1小時。爲了要t和溶液，加入IN HC1使pH達 mS4m 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） --------衣-- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 581761 A7 B7 五、發明説明（52) 到約5。用二氣甲坑及水萃取混合物。以硫酸鈉乾燥有機層益且在減鏖下濃縮。以逆向色析法（Waters Syminetry C18)用 40% A (95 ❶/〇水，5%6 脒，0·1% 甲酸）及 60% B (20%水，80〇/〇水）之溶析劑系統完成纯K〇MS(ESI): 445【M + + H】，462【M + + NH4]❹ f例16

衣— (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 16a· 1N-(4-甲氧苯磺醯基>-1，5-二吟、氪螵[4· 5 J壬坑-2S，4S_二甲基-2-羧酸甲箱：赙明lb(1.0克，3·19毫莫耳)溶於苯（60毫升）加入2S，4S-( + )-戊二醇（〇.40克，3.82毫莫耳）及對-甲苯磺酸（〇.〇1當量）。在氮氣下用迪恩史塔克井及迴流冷凝器預備反應。迴流加热反應過夜。終止反應混合物且用跑和的破酸氮納溶液餘化。用乙酸乙糖及水萃取渑合物，以硫酸鈞乾燥有機層且在減壓下濃縮。在矽膠上用己烷：6酸乙躕(7 ·· 3)進行色析而完成纯化❶ 161>.1^擭基-11^(4-甲氧苯磺釀基）-1，5-二嘮-氮螵【4.5】壬烷-2S，4S-二甲基-2-羧酸胺：將縮酮16a(0.9克，2·25 毫莫耳）加至1.5Μ羥胺化鉀溶液毫升，18毫莫耳，以Fieser及Fieser，Vol 1，ρ 478所述製餚）且嫌拌所得的混合物過夜。终止反應且用IN HC1中和pH值=5 »用水稀 -55- 本紙張尺度適用中國國^準（CNS M4規格（210X297公釐）

、1T 53 581761 五'發明説明釋溶液且用乙酸乙酯萃取。以硫酸納乾燥有機層且在減蜃下滚端。以逆向HPLC(Waters Symmetry C18)用 60% A (9 5%水，5%乙腈，〇·ΐ甲酸）及40% B (20❶/❶，80%乙胯）進行純化。MS(ESI) : 386 [M + + H] , 403 [M++NH41。實例17 ΜβΟ 0 o2s ,Ν.

,^ν^ΟΜβaJ

P-TsOH

MeO O 02S" 1b 0

HO

OH KOH/ MeOH 瓣 HO、

0 02S xre -〇、讀先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 衣. 17a 17b 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 17a· lN-(4-甲氧苯磺醯基）-l，5-二嘮-氮螵[4β5J壬坑-2R，4R-二甲基_2-羧酸甲酶：將酮(l·o克，319毫莫耳〉溶於苯（60毫升）加入2R，4R_( + )-戊二酵（0 4〇克，3 82毫莫耳）及對·甲苯磺酸（〇·〇1當量）❶在氮氣下用迪恩史塔克井及迴流冷凝器預備反應。遨流加热反應過夜。终止反應混合物且用餘和的破酸氳釣溶液驗化。用乙酸乙酯及水萃取現合物，以硫酸餉乾缲有機層且在減蜃下濃縮。在矽膠上用己姨^乙酸乙酯（7 : 3)進行色析而完成純化。mS(ESI) :400 [M + H + ]，417 [MVNH4] 〇 17b· N-羥基-1N-(4-甲氧苯磺醯基)-ΐ，5·二嘮-氮蟏【45】壬烷-2R，4R-二甲基-2·羧醮胺：將縮酮（〇·9克，2·25毫莫耳）加至1.5Μ羥胺化鉀溶液（10.2毫升，18毫莫耳，以 Fieser及Fieser，Vol 1，ρ 478所述製備)且攪拌所得的混合物過夜0终止反應且用1N HCl·中和pH値=5。用水稀释本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐丁訂 581761

溶液且用乙酸乙酯萃取。以硫酸鈉乾燥有機層且在減屋下滚縮。用乙腈經由結晶而完成纯化❶MS(ESI) : 401 【M + + H]，418 [M + + NH4]。實例18

MeO xx〇Me 。。^σ O 〇2S^^ TMSOTf 〇〇2S Λ^Λ Μβο^-ζ) OMe KOH/ MeOH 羥胺〇〇2S' xx0Me 18a 18b (讀先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 18a. lN-[(4-甲氧苯基）磺醯基>1，5-二哼-氮螺【4.6]癸烷·2·羧酸甲酯：將蹰lb(1.0克，3.19毫莫耳）溶於二氟甲烷（25毫升）接著加入貳（三甲矽氧基)-1，4-丁二醇（3.73克，15.9毫莫耳，5.0當量）。在無水冰冷的丙_浴中冷卻反應混合物至-78eC中，且加入三氟甲烷碘酸三甲矽（0.36克，1.52毫莫耳，0.048當量）。溫熱反應混合物至室溫且攪拌過夜。加入饞和的碳酸氬Μ以中和混合物，用水及二氣甲烷（3 X 50毫升）萃取混合物。以硫酸鈞乾燥有襪看且在減塵下蒸發。以矽膠色析用1 : 1乙酸乙酯··己烷至溶析劑系統而完成純化而獲得產物。MS(ESI> : 386 [Μ + + Η]， 403 [M4 + NH4]" 18b. N-羥基-1Ν·[(4-甲氧苯基）磺醢基]-1,5-二噚·氮螺【4·6】癸烷-2-羧醮胺：將縮晒（1·0克，2.6毫莫耳）加至 1.5Μ羥胺化鉀的溶液（12毫升，8當量，以Fieser及 Fieser，Vol 1，p 478所逑製備）。冷卻混合物1小時後用 S7- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） 581761 A 7 發明説明（55 IN HC1中和pH值至4·5。用水稀释反應混合物且用乙酸乙皭萃取❶以Na2S04乾燥有機層且在減蜃下蒸發成泡沬狀固撤❶以矽膠色析（溶析射：3%甲酵：97%氣仿）完成纯化。得到如白色粉末之產物。MS(ESI) : 387【M+ + H]， 4〇4 [M ++NH4] ° 實例19

Xr0Me

LiOH

MeO

HO 〇2s .N. jCt 〇Me ,OMe υ 草醯氧 2) N. 甲基離 1c 19a 〇02S η〇、νλ^λ Me 一 S、 19b n ...... -s- ii am— ml HI—— ml ^ϋϋ m n-i 請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 19a· N-甲基-7N[(4-甲氧苯基)磺醯基1-1，4-二雀_1-氮瀑【4 4】妥坑-S(r)·羧酸：將縮酮ic(〇j〇克，2·31毫莫耳) 溶於甲酵（10毫升>1THF(5毫升>。接著加入氳氧化鋰 (1·〇克，過量）於水（5毫升>，且攩捍所得的混合物1小時。接著加入IN HC1使ρΗ = 2終止反應❶用二氟甲熄及水萃取反應混合物。以硫酸鈉乾燥有機看且在減蜃下滚縮以產生產物〇 MS(ESI) : 376【Μ+ + Η]，393【ΝΓ + ΝΗ4】ι 1朴· Ν_巍基-Ν-甲基-7Ν-【（4·甲氧苯基）磺醯基】-1,4-二喳-7-氮縹【4 4]壬坑-8(R)-羧醮胺：將羧酸19a(0、5克， 133毫莫耳）溶於二氣甲烷（15毫升），接著在氮氣下加入草釀氟（〇·35克，2.73毫莫耳）及DMF (0.097克，1·33毫莫耳）。在分間的燒瓶中，將羥胺盥酸*(〇·37克，5.33毫莫耳>溶於水(3毫升），接著加入THF (10毫升)。在冰浴中 -58- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210x297公釐） 581761

冷卻胺溶液且加入三乙胺（1·1毫升，8.0毫莫耳）。在〇eC將酸的混合物加至羥胺溶液。接著溫熱反應混合物至室溫且攙拌1小時。中和溶液，加入IN HC1使pH約5。甩二氯甲烷及水萃取混合物。以硫酸鈉乾燥有機層且在減壓下濃縮。以逆向色析（Waters Symmetry C18)用 40% A (95%之水，5%之6腈，0·1%甲酸）及60% B (20%水，80❶/〇水）之溶劑系統完成純化。MS(ESI) ·· 391 [M、H]，408 [M + + NH4】。資例20

經濟部中央標準局員工消費合作社印製 20a. 6’-(l-吡咯啶基）標[環己^ ^ 喷-3’-羧酸乙酯：在室溫時攪拌環己亞甲基）吡咯啶 (9·0克，54.4毫莫耳）於THF(100毫升）且分批加入3-澳· 2-羥亞胺丙酸乙醻（12·2克，57·7毫莫耳，1β〇6當量，參考 OtUnheijm，Η· C· J·; Plate，R·; No〇rdUk j Η

Herscheid, J. D. M. J. 〇rge Chem. 1982, 47, 2147 ) 歷時15分。反應混合物溫無且在室溫時攙拌所得之混合物 30分。接著加入三乙胺（5·9克，583毫莫耳，t 〇7當^量）本紙張尺度適用中國國家標準（cns ) 刈 1761 /五經濟、邺中央標準局員工消費合作社印製 .明説明（57 ) °反應混合物再次溫热。且在室溫時攪拌所得的溶液鎮外 2個小時。用水（1 〇〇毫升）稀蹕反應藏合物且用乙酸乙酿萃取。以Na2S〇4乾燥有機萃取物且在減蘑下濃輸成油體。在矽膠上用85/15己坑/EtO Ac當作溶析劑進行色析而完成油髏的纯化。得到如淡黄色油體的產物。MS(ESI) : 295 【M ++H] 〇 2〇b· 1-氮二環_[4.5.0】-癸坑-2·羧酸6酯：將嘮哜（2·0克，6·8毫莫耳)於乙醇（100毫井）置於由雷尼鎳（AMrich，你-2,2克）之Parr瓶中❶在氬氣（30psi)下篡入反應混合物 I接董直到氫氣吸收停止。經由碎藻土遇滅反應泥合物且渡矯成淡色的油鳢。無須進一步妹化便可進行。MS(ESI): 2!2 【M++H]。 2〇c· lN-(4-甲氧苯磺醯基）-1-氮二環-【4·5_0]·癸烷）-2-幾酸乙醱：在室溫時攪拌胺（1·4克，6·6毫莫耳)於二嘮烷 (4〇毫升）及水（40毫升）加入於三乙胺(2.0克，19.8毫莫耳， 3當量）接著加入4·甲氧苯確醯氟（1·51克，7·2毫莫耳，當量）❻在室溫時攪拌所得的溶液18小時〇用1N HC1 酸化反應混合物後將混合物倒入水中。用二氟甲貌萃取溶液且以MgS〇4乾燦結合之有機萃取物並在減|下滚縮成油雜。在冷膠上用8/2已娱;/EtOAc當作溶析劑進行色析而完成油撤的純化。得到如清澈色油嫌的產物，其靜置時固化〇 20d· 1Ν·(4-甲氧苯碟醮基）-1-氮二環_[4·5·〇]_癸烷-2-

羧酸：在室溫時攪拌6酯（1·5克，3·93毫莫耳）於THF •60· 本紙張尺度適用中國國家檩準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 581761

(10毫升）及甲轉（20毫升)加入氣氧化鋰（2 ·〇克）於水（2〇毫升）。在室潘時攪拌所得的溶液18小時。用1N HC1酸化反應混合物後將混合物甸入水中。用二氣甲坑萃取溶液且以 NadO4乾燥有機的萃取物益在減壓下濃縮成油髗❹一旦靜置油禮固醴成白色的固體β 20e· N-羥基-1Ν-(4·甲氧苯磺醮基卜卜氮二環_[4 5 〇]· 癸烷·2·羧嬝胺：在室溫攪拌羧酸（〇 7克，1 毫莫耳）於二氯甲烷（1〇毫升）加入苯釀氯（〇·52克，4·06毫莫耳， 2·05當量)及DMF((K14克，ι·98毫莫耳）。在室溫時攪拌所得的溶液30分。在分閹的燒瓶中，於〇〃c時攪择羥胺金酸*(〇·55克，7·92毫荚耳，4當量》於THF(1〇毫升）及水 (2毫升）❶加入三6胺（ι·2克，u .9毫莫耳，6當量)且在〇 X：攪拌所得的溶液15分❻接著在將酸氣化物的溶液加至經胺溶液且讓所得的混合物在室溫下嫌拌過夜^用^风 HC1酸化反應混合物用二氯甲烷萃取溶液。以Ν&8〇4乾燥有機萃取物且在減壓下濃縮成固體。由CH3CN/H2〇中再結晶固髏以提供如白色粉末之所欲產物❶MS(ESI) : 369 [KT + H]，386 [M+ + NH4] 〇 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 衣、1Τ 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 •62- 本纸張尺度適用中國國家檩準（CNS ) Α4規格（2ΐ〇χ297公釐） 581761

五、發明说明（59 tmx

請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁經濟部中央標準局員工消費合作社印製 21 g Boc 21 h Boc 21a· 1-第三-丁二碳酸鷗-4-六氬地啶羧酸：將異旅破甲酸（15·0克，95.1毫莫耳）溶於對·二嘮熄（75毫升）’接著加入NaOH(4.0克，100毫莫耳>於水（75毫升)。向樣拌的溶液加入二-第三-丁二碳酸酯（2〇·8克，951毫莫耳> ’及攪拌反應混合物遇夜◊终止反應且用1N HC1酸化使 pH=l-2。用水稀释所得的混合物，且用二氣甲烷萃取。以硫酸鈉乾燥有機層，且在減壓下滚縮以產生無色油髗的所欲產物〇 MS(ESI) : 230 [M++HJ，247 [M++NH41) 2lb· 1·第三-丁二酸酯-4-(氬甲基）六氣蝻啶：將經保護的叛酸2U(21.7克，95·1毫莫耳）溶於THF(300毫升）且在冰俗中冷卻至〇eC加入1.0M BH3、THF(237-75毫升， 237·25毫英耳）溶液至攪拌反應混合物y溫熱反應至室溫 -62.· 本紙張尺度適用中國國^^⑽了祕^^^釐）· 、1Τ 581761 Μ ΫΠ五、發明説明（60 ) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製且攪拌遇夜。冷卻反應混合物至o°c且非常缓慢地加入水以终止反應直到冒泡停止。一旦反應完成時，用IN HC1酸化且用乙酸乙酯萃取。以硫酸鈉乾燥有機層，且在減壓下滚缩以提供所欲的產物❶MS(ESI> : 216 [M+ + H]。 21c· 1-第三-丁二碳酸醻-4-六氬毗啶羧醛：將醇 21b(20.2克，93.9毫莫耳）溶於二氟甲烷（300毫升）〇向攪拌溶液加入氟路酸峨錠<20.2克，93.9毫莫耳，10脅量 )。反應混合物變成暗色的鑤浮渐，其在室溫時挽拌4小時。之後由黑色的殘渣中倒空溶液且用醚满洗殘餘物數次。經由矽膠酸遜滅結合的有機層，且用一些額外的醚當作溶析劑在減餍下浪縮所得的溶液且在矽膠柱上用己坑：乙酸乙酯（1·5 : 1)色析而纯化❻ 21d· 1-第三-丁碳酸酯-4-(吡咯啶件乙基）六氬吡啶：將路2 1ο(8·3克，39.1毫莫耳）溶於150毫升的苯&接著加入吡咯啶（4.2克，58.6毫荚耳）❶用迪恩史塔克井及迴流的冷凝器預儒反應之燒瓶且迺流5小時❶在減蜃下移除溶#J ，無須進一步纯化。MS(ESI> : 267【M+ + H]。 21e· 吡咯啶基）螺[4-第三_ 丁二碳酸發·六氳蟪啶- 2,5’（6’H)-[4H-1，2】·嘮喑]-3'羧酸乙酯：將缔胺21d (8·9克，33·17毫莫耳）溶於THF(80毫升）且在室溫時攪拌。分批加入3-溴-2-羥亞胺丙酸乙酯（7.42克，35.16毫莫耳，1·06 當量，參考：〇ttenheijm，H_ C· J·; Plate，R·; Noordlik, J. H.； Herscheid, J. D. M. J. Org. Chem.1982, 47, 2147·)歷時15分❶在此遇程中溫熱溶液 • 63· 本紙張尺度適用中國國家標準（〇]^)/\4規格.（210';< 297公釐） 8 - - -3 - - —11 ..... -- - - - - —i i— ϋ (讀先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 、1Τ 581761 五、發明説明（a 。在室滋時攪拌所得的溶液30分。加入三 3”毫莫=公〇7當幻。攙拌反應現合物•外U加入水（100毫升）终止反應且用乙酸乙醱萃取。以硫酸鈉燥有機層，且在聽下Μ成油f切膠上用已坑：乙酸乙發（3: υ當崎劑色析^㈣化以得到如發清的油饉。MS(ESI) : 396 [Μ + + Η] 〇 21f. 8N·第三·Τ二錢m二从雙壤·【4 5 〇]癸坑 )·2-叛酸⑽：將糾21e(2.G33克，514毫莫耳）溶於乙醇（1〇〇毫升)於？術的叛子接著加入蓄尼鑲(Wet)(2 〇克，重量當量）。在氩HT(4G psi)將PaTrifcat於產錢十5小時，塡充氳氣數次。㈣藻土遢衫尼鎳，在祕下濃端所得的混合物❹MS(ES!) : 313【κι、Η1 0 21g· 1Ν-[(4-甲氧苯基）磺醃基】_8N第三· 丁二碳酸酴· 經濟部中央標準局員工消費合作社印製讀先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

、1T 1，8·二供氮雙環-【HOI-癸姨^2·羧酸乙鷗：將乙酯21f (1·7克，5.48毫莫耳）溶於對·二吟燒··水y : ^，1〇〇毫升 >A加入4·甲氧苯磺釀氟（1 3名克，6 6毫莫耳)及三乙胺 (1.66克，16.44毫奠耳）。攪拌反應混合物遇夜β終止反應用且1Ν Ηα酸化，用水稀释且用二氣甲烷萃取。以硫酸鈉乾燥有機萃取物，且在減壓下滚蝓。在矽膠上用已烷 :乙酸乙酯（3 : 1)進行色析而完成纯化。MS(ESI) : 483 [M+ + H] ^ 500 [M++NH4] 〇 21h· 1N_【（4-甲氧苯基）磺醮基j-8n-第三-丁二破酸躕- M-二供氮雙環_【4·5·0]_癸燒_2_羧酸：將乙餚21克（1·〇克，2·07毫莫耳）溶於甲醇（1〇毫升）及thF(5毫升）。加入本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210x297公釐 I ) 581761

A

F 五 '發明説明（62 ) S9i iis-pl. ϋ ϋ_ϋ1 Ik——· nn i_nl_— —ml mu I 請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁} 氣氧化鋰（1.5克，遇量》於水（5毫升）的溶液。且攪拌所得混合物1小時。终止反應瀑合物且用HCl酸化用二氟甲烷及水萃取反應混合物。以硫酸鈉乾燥有機層且在減蜃下濃縮以產生產物。MS(ESI) : 455 [M + + H】，472 【M++NH4】， 21i· N-羥基·1Ν·丨（4-甲氧苯基）磺酿基]-8N-第三_ 丁二碳酸醣-l，8-二供氮雙環·丨4.5.0]-癸毖-2-羧酸胺：將羧酸 2111 (0·92克，2·02毫莫耳>溶於二氟甲统(20毫升）且接著在氮氣下加入草醮氯（0.525克，4·14毫莫耳>及1>^|1? (0.148克，1.0毫莫耳）❶在分閹的燒瓶中，將瘦胺褰酸逢 (0.56克，8.08毫莫耳）溶於水（5毫升），接著加入THf (15毫升）❶在冰浴申冷卻反應混合物且加入三乙胺（122 毫升，12_12毫莫耳）。在0°C將酸的混合物加至羥胺之溶液。溫熱反應混合物至室溫且攪拌1小時❶爲了要中和簿^ 液加入IN HC1以達到pH 5。用二氟甲烷及水萃取藏合物。以硫酸納乾燥有機層且在減麈下浓縮。以逆向 (Waters Symmetry Cl8)用 50% A (95% 水，5% 乙赌，〇·1%甲酸）及50% B (20%水，80%水）的溶劑系蘇兩進行色析。MS(ESI) : 470 [M+ + H]，487 [M.+NHy。經濟部中央標準局員工消費合作社印製 -65^- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公iT" 581761 發明説明（63 實例22

t)H

XT

Me〇 s〇Cl2/MeOH 2) 0 〇2今 22a⑼

Jones oxid.

Z7P BF3〇Et2 ^

MeO L U KOH / MeOH °2· HO、 “Ο 22d 22c -----------^^衣-- 讀先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 22n· lN-(4-正· 丁氧苯磺醯基_(4R)-羥基·毗咯啶_(2R)· 羧酸甲ϋ :艙順式-4-樂基脯胺酸（14·8克，I12·95毫莫耳）¾合水：二唠烷（1 : 1，90毫升〉，三己胺（39.3毫升，282毫莫耳）及N-二甲胺基吡啶（1·3克，11·3毫莫耳)。加入4_(正-丁氧基）苯磺醯氣（29·5克，118.6毫莫耳)且在室溫時挽拌混合物14小時。濃縮蚝合物並且用EtO Ac及1Ν HC1稀释i分離各層且用IN HC1二次，食瘇水一次沖洗有機層，以MgS04乾燥，過濾及蒸發以產生37.4克的固髗物質，其溶於MeOH(200毫升）。滴加硫醣氟（20毫升， 272毫莫耳）且攪拌所得的混合物14小時。蒸乾混合物以產生白色的固髏，其足夠純無須進一步純化。離子喷霧MS ♦ m/z 375【M++NH4】，358·3 [M+ + H]， 22b· 1Ν-(4-丁氧苯磺醯基Μ·氧-吡咯啶-2(R)j酸甲醻 •製備 8N Jones 試劑的溶液（Oxidations in Organic Chemisuy，P273)。將酵 22a(40 克，112 毫莫耳）溶於 300毫升丙駟且冷卻至〇〃c。加入J〇nes試劑(12〇毫升， 66· 訂本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格 (210X 297公釐） 581761 l、發明説明（64 ) 經濟部中央標隼局員工消費合作社印製 960毫莫耳）（顏色由橘紅變成緣色>且在室溫時攩拌混合物 14小時。用水稀释反應混合物且用EtOAc萃取三次。用水三次且用氣化納一次沖洗有機層，以疏酸鎂乾燦，及蒸發由EtOAc中結晶固髗以產生所欲的固髗產物β離子噴赛 MS : m/z 378·3 [M++Nal，356·3 [Μ + .Η】。 22c· 8N-(4-丁氧苯磺蘸基）-i，5_二嘍-8-氮螺【54]癸烷_ 9(R)-羧酸甲_ :將_221>(1.5克，4.22毫莫耳）溶於3〇毫升之無水二氟甲坑且接著加入1，3_丙二硫醇(〇·84毫升， 8·45毫莫耳）及醚化的硼燒三氟化物（〇·42毫升，3.98毫莫耳）。在室潘時嫌拌混合物遇夜。接著加入1Ν之氫氧化納以鹼化溶液且接著用EtOAc萃取混合物三次❶用水及氣化銨沖洗有機層，以硫酸鈉乾燥，過滅及蒸發以產生如油髓的櫟題化合物。離子嘖霧MS : m/z 463 [M++NH4]，446 【ΜΤ+Η]。 22d· Ν·羥基-8Ν-(4·正· 丁氧苯磺醮基）-l，5-二嘍_8_氛螺 [5,4]癸坑-9(R)-羧醸胺：以 Fieser 及 Fieser，Vol 1，ρ 478所述製備。製備1.5M之羥胺化鉀與甲醇的溶液。將 1.5M之溶液（10毫升，14·3毫莫耳）直接加至甲癍22c (0·8克，1.8毫莫耳）且攪拌反應混合物遇夜。用in HC1 酸化溶液，用6酸己發萃取混合物三次，用硫酸鎂乾燥，遇濾及蒸發。以逆向製備HPLC(40A60B，A，95%水， 5 % 乙腈，〇·1 % 甲酸；B 80% 乙骑，20% 水；19 X 300 mm Waters Symmetry Prep (：18醋）纯化產物以產生如白色泡沫固锺之標題化合物。離子噴霧：MS : m/z 464 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） ks SI5 ---- - mf ! I— . . __ —----- 請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) -訂 581761 五、發明説明 65 [M + + NH4J，447【M+ + HJ ❶ 資例23

MeO' Ο 02S A^n 灯。、

p-TsOH HCT^、0H Me〇

23a

KOH/ MeOH 練 HO. ,15 22b 23b 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 23a· 8N-(4-丁氧苯磺酸基）-l，5-二哼-8-氮螵【5,4J癸统， 9(R)-羧酸甲醱：將獼22b(1.5克，4.22毫莫耳）溶於40毫升的苯，加入1，3-丙二醇（0·32克，4·22毫莫耳）及對甲苯磺酸單水合物(8毫克，0 042毫莫耳)。用迪恩史塔克裝置迴流混合物遇夜。該溶液藉加入水性之NaHC03而製得用 Et20萃取三次。用氟化胺沖洗有機層，以硫酸嫫乾燥、遇濾及蒸發❶在矽膠上用己燒/EtOAc(4 : 1)進行色析完成產物的蜷化而產生所欲的產物&離子噴寒!^ :m/z 431 [M ++NH4]，414 [M++H1 ❶ 23b· Ν·羥基-8N-(4-正丁氧苯磺釀基）-l，5-二嘮·8·氮螵【5,4】癸燒 _9(R)_ 叛醮胺：以 Fieser 及 Fieser，Vol 1，ρ 478所述製備1·5Μ羥胺化鉀於甲醇的溶液❶將15M溶液 (15毫升，22_5毫莫耳）直接加至甲贛23a(0.8克，1.9毫莫耳)且攪拌反應混合物過夜❶用IN HC1酸化溶液，用乙酸乙酯萃取混合物三次，以硫酸鎂乾燥，遇濂及蒸發。藉逆向製備HPLC (60A40B，A，95%水，5%乙腈，〇·ι% 甲酸；Β，80%乙麻，20%水；19 X 300毫米的水 •68 · 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210x 297公釐) ---------- 衣-- 請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 、1Τ

581761 A

[、發明説明（66 ) I !

SymmetryPrep €；18柱）純化產物而得到如白色泡沬狀固髏之擦題化合物❶離子噴霧MS : m/z 432 [M+ + NH4]，415 【M+ + H】。實例24 KOH/MeOH —_ 一 H〇、Nh

---------衣-- 請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 24a. 8Ν·(4- 丁氧苯磺釀基）-1，5·二嘮-》，3-二甲基-8·氮螺[5,4]癸嫁-9(R)-羰酸甲發：將明22b(15克，4·22毫莫耳）溶於40毫升的甲苯，加入新戍基乙二醇(〇·44克，4.22 毫莫耳）及對甲苯磺酸單水合物（8毫克，0.042毫莫耳）· 用迪恩史塔克裝置迴流混合物遇夜。該溶液藉加入水性之 NaHC〇3而製得用Et20萃取三次。用氣化銨沖洗有機層，以硫酸鎂乾燥，遇濾及蒸發。在矽膠上用己烷/EtOAc(7 :3)進行色析完成產物的純化而產生所欲的產物。離子嘴霧MS : m/z 459 [M ++NH4]，442【M ++H] 〇 24b· N-羥基-8N-(4-正丁氧苯磺酿基）-l，5-二嘮-3,3-二甲基-8-氣媒[5,4]癸坑-9(汉)-瘦殖胺:以Fieser及Fieser， Vol 1，p 478所逑製儀1·5Μ羥胺化鉀於甲醇的溶液。將 1·5Μ溶液（12毫升，18_1毫莫耳）直揍加至甲糖24a(1.0克，2·27毫莫耳）且攪拌反應混合物遇夜。用in HC1酸化溶液，用乙酸乙酯萃取混合物三次，以硫酸鎂乾燥，遇濾及 -69- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐）訂 A7 581761 _ Β7 五、發明説明（67 蒸發。在矽膠上用驟色析（CH2Cl2/Et〇Ac，1 : 〇纯化粗虞物而得到如白色泡沬狀固髏之標題化合物❼離子噴霧 MS : m/z 460 [Μ++ΝΗ4]，443【ΝΓ + Η]。實例25

Xrc

p-TsOH Μβ〇

〇〇2^ ____ HO OH

KOH/ MeOH nm

HO X2;

XT 22b 25a 25b

-------- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁訂 25a. 7N-(4-丁氧苯磺醯基）-l，4-二嘮-(2R)_甲基-7•氮螺 [4,4】壬燒_8(R>-羧酸甲顳：將酮22b(1.5先，4·2毫莫耳）溶於40毫升的苯，加入（2R，3RH->-2,3 丁二醇（〇 46克， 5_〇7毫莫耳）及對甲苯續酸單水合物（80毫克，〇 42毫莫耳 )°用迪恩史塔克裝置遨流泥合物遇夜❶該溶液藉加入水性之NaHCOj而製得用EtrO萃取三次。用氯化缺沖洗有機層 ’以硫酸義乾燥’遇遽及蒸發。而產生所欲的產物。離子喷霧MS : m/z 445 [M ++NH4]，428 [M+ + H]。經濟部中央標準局員工消費合作社印製 25 b· N-羶基7N-(4-丁氧苯續醸基）_1，4_二吟_(2反)二甲基· (3R)-甲基-7-氮螵[4,41壬烷^幻-羧酿胺：以Fieser及 Fieser，Vol 1，p 478所述製餚1·5Μ羥胺化幹於甲醇的溶液。將1·5Μ溶液（15毫升，26毫莫耳）蛊接加至甲發 25a(l ·4克，3·28毫莫耳）且攪拌反應潺合物遇夜众用^ HC1酸化溶液，用乙酸乙醱萃取混合物三次，以硫酸候乾燥，過濾及蒸發❶在矽膠上用猓色析（CH2Cl2/eH3OH， 70· 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（21 Οχ 297公釐） 581761 A7 B7 五、發明説明（68 ) 95 : 5)纯化產物而得到如白色泡沬狀固髄之標题化合物離子噴霧MS : m/z 451 [M+ + NH41,429 [M+ + HJ。實例26

〇〇2S

p-TsOH

Xr

UOH

Me〇"

?H 9H MeO

26a 〇2s-^ iL

oo.XTC 2)經胺 HO、 0〇2广、 --------— (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 26b 26c 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 26a· lN-[4-丁氧苯基>碳醯基】、1，5_二嘮氮蠓[4·51-去烷 )-2R,4R_二甲基-2-羧酸甲發：將鲷22b(1.0克，2 82毫莫耳）溶於苯（60毫升），加入2R，4R_( + >_戍二酵（0.44克， 4·22毫莫耳）及舞-笨磺酸（α·01當量）❶在氮氣下用迪恩史塔克井及遨流的冷凝射進行反應❶避流加熱反應遜夜❶冷卻反應混合物且用鉋和的碳酸氳鈉驗化❶用乙酸乙發及水萃取所得的混合物且以硫酸納乾燥有機看益在減壓下滚输。在矽膠上用己坑：乙酸乙發(7 : 3)色析完成純化。 MS(ESl) ·· 442 [Μ+ + Η]，459【Μ++ΝΗ4] 〇 26b. 1Ν-[(4-丁氧苯基）碘酿基ϊ-ί，5-二嘮·氮二蠓〖4·5] 壬虼-2R，4R-二甲基-2-羧酸：將縮麟26a(0.70克，1·56 毫莫耳）溶於甲醇（10毫升）及THF(5毫升)❶接著加入溶於水（5毫升）之氬氧化鋰（1.0克，遇量），攪拌所得的混合物 U· 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐）訂 581761 A7 B7 五經濟部中央標準局員工消費合作社印製發明説明（69 ) 1小時。加入IN HC1到pH = 2以終止反應。用二氣甲坑及水萃取反應混合物。以硫酸鈉乾燥有衊層且在減壓下浪縮以產生產物。MS(ESI) : 428【M + + H]，445 [M + + NH4] 26c· N-羥基-1Ν-【（4-丁氧苯基）磺醮基]-1，5-二嘮氮二蠓 [4·5]壬坑-2R，4R-二甲基-2·羧醮胺：將羧酸26 b (0.60克，1.4毫莫耳）溶於二氣甲坑（15毫升），接著在氮氣下加草醮氟（0.36克，2·87毫莫耳）及DMF(0.102克，1.4毫奠耳 >❼在分闕的燒瓶中，將羥胺之幾酸襄(〇·39克，5·2毫奠耳)溶於水（3毫升），接著入THF (ία毫升）❶於冰浴中冷卻胺液液且加入三乙胺（116毫升，8·4毫莫耳）。在0Χ：將酸化的混合物加至羥胺溶液。接著將反應混合物溫熱至室湛並嫌拌1小時。爲了要中和溶液，加入1N HC1使ΡΗ達到約5。用二氟甲烷及水萃取混合物。以硫酸納乾燥有機層並且在減壓下濃縮。以逆向色析法（Waters symmetry c18> 用 40〇/〇 A (95% 水，5% 乙腈，0.1% 甲酸）及 60% B (20%水，80%水）之溶析劑系统完成純化。MS(ESI): 443 [M+ + H]。下列國表顢示如下所述進一步實例2Ή6之結構：實例27-116 用上面例示所述方法製備下列（其_w係無）化合物。 •72- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） --------衣-- (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 581761 A7 B7 五、發明説明（7〇 H〇、

〇〇2S- A .Ar

、（）n z 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 Y Z Y Ar n 'f W 27 4-(-SCH2CH2CH2S-) 3,3-(CH])2 4-(MeO)-C6H4- 1 賞_ 28 4.(.SCH2CH2CH2S-) H 4-Br-C5H4~ 1 實例29 4-(-SCH2CH2CH2S-) H 4-(4-C5H4N)0-C6H4- 1 實例30 4-(-SCH2CH2S-) H 4-(4-C5H4N)OC6H4- 1 實例31 4-(-OCH2CH2〇-) H 4-NO2-C6H4- 1 f例32 4-(-0CH2CH20-) H 4-/-BUO-C5H4- 1 實例：33 4-(-0CH2CH20-) H 4.(C6H5)〇.C6H4- 1 T 34 4-(-OCH2CH2〇.) H 4-(4-F-C6H4)0-C6H4- 1 實例35 4-(-OCH2CH20-) H 4-(4-Cl-C6H4)0-C6H4- 1 實例36 4-(-OCH2CH2〇-) H 4-(4-Br-C6H4)0-C6H4- 1 f Μ 37 4-(-0CH?CH20-) H 4-(4-Me-C6H4)0-C6H4- 1 n 38 4-(-〇CH2CH2〇.) H 4-(4-Me0-C6H4)0-C6H4- 1 實供39 4-(-OCH2CH2〇-) H 4-(4-CN-C6H4)0-C6H4- 1 9 40 4-(-〇CH2CH2〇-) H 4-(4-Me2N-C6H4)0-C6H4- 1 η 41 4-(-OCH2CH2〇-) B 4-EtO-C6H4- 1 實例42 4-(-0CH2CH20-) H 4-/-ΡγΟ-〇6Η4- 1 實列43 4-(-〇CH2CH2〇.) H 4-λ-ΡγΟ-〇6Η4- 1 實例44 4-(-〇CH2CH20-) H 4-Βγ-〇5Η4* 1 實例45 4-{-〇CH2CH2〇-) H 2-CH1-4-Br-C6H1- 1 實例46 4-(-0CH2CH20-) H 4-C6H5-C6H4- 1 f例47 4-(-OCH2CH20-) H 4.(4.F-C6H5)-C6H4. 1 實例48 4-(-OCH2CH2〇-) H 4-(4-Cl-C6H5)-C6H4- 1 賞例49 4-(-OCH2CH2〇-) H 4.(4-Br-C6H5>C6H4- 1 賞例50 4-(.〇CH2CH2〇.) H 4-(4-Me2N-C6H4)-C6H4- 1 實例51 4-(-0CH2CH20-) H 4-(4-CN-C6H4)-C6H4- 1 f例52 4-(-〇CH2CH2〇-) H 4-(4-Me〇.C6H4)-C6H4- 1 實例53 4-(-OCH2CH2〇-) H 4-(4-C5H4N)0-C6H4- 1 實例54 4-(-OCH2CH2〇-) H 4-(3-CsH4NP-C6H4- 1 T列55 4-(-0CH2CH20-) H 4-(2-C5H4N)0-C6H4- 1 Vi- (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） 581761 五、發明説明（Ή ) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 56 4-(-〇CH2CH20-) H C6H5CH7CH9- 1 實例57 4-(-〇CH2CH20-) H c6h5ch?- 1 實例58 4-(-OCH2CH20-) H (4-C5H4N)CH7CH2- 1 實例59 4-(-〇CH2CH20-) H (2-C5H4N)CH7CH2- 1 f例60 4-(-〇CH2CH2〇-) H 4-(C6Hn)〇.C6H4- 1 實例61 4-(-〇CH2CH2〇-) H 4.(C5Hn)〇.C6H4- 1 賞例62 4-(-〇CH2CH20-) H 4-(C6HnO)-C6H4- 1 f例63 4-(-0CH2CH20-) H 4-(CH3〇CH2CH2)〇-C6H4- 1 實例64 4-(-OCH2CH2〇-) H ’ -哎口定忘)-二-’基'卷 1 實例65 4-(-〇CH2CH20-) H 5-(3-異吟竣基)-2-嗔呀基 1 實例66 4-(-OCH2CH2〇-) H 5-(2-(甲藏；基)- 1 實例67 4-(-〇CH2CH2〇-) H 5-G-赏基-5—:三氣口基>比吵基)心兮基 1 1Γ 68 4-(-〇CH2CH2CH20-) H 4-(C6H5)〇-C6H4- 1 f例69 4-(-0CH2CH2CH20-) H 4.(4-F-C6H4)〇-C6H4- 1 實_ 70 4-(-OCH2CH2CH2〇-) H 4-(4-Cl-C6H4)〇-C6H4- 1 實例71 4-(-OCH2CH2CH2〇-) H 4-(4-Br-C6H4)〇-C6H4- 1 實焚]72 4-(-〇CH2CH2CH20-) H 4-(4-Me-C6H4)0-C6H4- l 實例73 4-(-〇CH2CH2CH20-) H 4-(4-Me0-C6H4)0-C6H4- 1 I例74 4-(-0CH2CH2CH20-) H 4-(4-CN-C6H4)0-C6H4- 1 f例75 4-(-0CH2CH2CH20-) H 4-(4-Me2N-C6H4)0-C6H4- 1 實例76 4-(-〇CH2CH2CH2〇-) H 4-EtO-C5H4- 1 實例77 4-(-OCH2CH2CH20-) H 4>kPtO-〇6H4- 1 實例78 4-(-〇CH2CH2CH20-) H 4-/7-ΡγΟ-〇5Η4~ 1 實例79 4-(-〇CH2CH2CH20-) H 4-Br-C^H4- 1 實例80 4-(-0CH2CH2CH20-) H 2-CHr4-Br-C6Hv 1 實例81 4-(-〇CH2CH2CH20-) H 4-C6Hs-C6H4· 1 實例82 4-(-0CH2CH2CH20-) H 4-(4-F-C6H5)-C6H4- 1 實例83 4-(.〇CH2CH2CH2〇.) H 4-(4-Cl-C6H5)-C6H4- 1 實例84 4-(-0CH2CH2CH20-) H 4-(4-Br-C6H5)-C6H4- 1 實例85 4-(-0CH2CH2CH20-) H 4-{4-Me2N-C6H4)-C6H4- 1 實例86 4-(-OCH2CH2CH2〇-) H 4-(4-CN-C6H4>C6H4- 1 實例87 4-(-0CH2CH2CH20-) H 4-(4-MeO-C6H4)-C6H4- 1 實例；88 4-(-0CH2CH2CH20-) H 4-/-BU.O-C5H4· I 實例89 4-(-0CH2CH2CH20-) H 4-(4-C5H4N)0-C6H4- 1 • 174 · (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 581761 經濟部中央標準局員工消費合作社印製實例90 --- ^r-OCH^CH^CH^O-) H 4-(3-C5H4N)0-C6H4- 1 f例91 4-(-〇CH9CH2CH9〇-) H 4-(2-C5H4N)0-C6H4- 1 實例92 4-(-OCH2CH2CH2〇-) H C6H5CH2CH9- 1 實例93 4-(-〇CH2CH2CH20-) H c6h5ch2- 1 實例94 4-(-〇CH2CH2CH2〇-) H (4-C5H4N)CH9CH2- 1 95 4-(-〇CH2CH2CH20-) H (2-C5H4N)CH2CH2- 1 實 ” 96 - 4-(-0CH2CH2CH20-) H 4-(C6Hn)〇.C6H4. 1 實例97 4-(-OCH2CH2CH2〇-) H 4-(C5Hn)〇.C6H4. 1 貨例98 4-(-OCH2CH2CH2〇-) H 4-(C6Hn)〇-C6H4- 1 實，99 4-(-〇CH2CH2CH2〇-) H 4-(CH3〇CH2CH2)〇-C6H4- 1 實例 100 4-(-0CH2CH2CH20-) H 4-(MeO)-C6H4- 2 實例 101 4(-SCH2CH2S-) H 4-(MeO)-C6H4- 2 實例 102 4(-SCH2CH2CH2S-) H 4-(MeO)-C6H4- 2 實例 103 3(-OCH2CH2〇-) H 4-(MeO)-C6H4- 2 實例 104 3(-SCH2CH2CH2S-) H 4-(MeO)-C6H4- 2 實例 105 3(-SCH2CH2CH2S-) H 2 實例 106 4-(-CH2CH2CH2CH2-) H 4-(MeO)-C6H4- 1 賞例 107 4-(-CH2CH2CH2CH2-) H 4-(4-Me2N-C6H4)-C6H4- 1 實例 108 4-(-CH2CH2CH2CH2-) H 4-(4-F-C6H5)-C6H4- 1 實例 109 4-(-CH2CH2CH2CH2·) H (4-C5H4N)CH2CH2- 1 實例 110 4-(-CH2CH2CH2CH2-) H 4-(4-C5H4NO)-C6H4- 1 實例 111 4-(-CH2CH2CH2CH2-) 5-CH3 4-(MeO)-C6H4- 1 實例 112 4-(-CH2CH2CH2CH2CH2-) H 4-(w-^uO)-C5H4- 1 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) .着衣. 、v 一口 •75- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） 581761 Μ Β7 ______~ - -__________^一一五、發明説明（73 ) 實例 112 4-(-CH2CH2N(Me)CH2CH2-) Η 4-(MeO>〇6H4- 1 實例 1 14 4-(-C(0)NHC(0)NH-) Η 4-(MeO)-C6H4- 1 實例 115 4-(-CH2NHC(0)CH2-) Η 4-(MeO)-C6H4- 1 實例 116 4-(-CH2NBnC(0)CH2-) Η 4-(MeO)-C6H4- 1 方法實例 27 係 Raman Sharma 及 WUliam D· Lube11 111 J·

Org· Chetn. 1996, 61，202所述的合宜官能化巍基膽胺酸衍生物之縮醛的引成而製備β 實例28-99係以相似於資例1所述的方式而製備的合宜官能化羥基脯胺酸衍生物之縮酿的形成而製備❶用於製儀上述實例的磺酿氯可市售或以已知的方法製儀。例如用於實例 17製儀的4-苯氬苯碟蘸氣，可以R· J· Cremlyn等人於

Aust. J· Chem·，1979, 32, 445·52所述製備。實例 100-102 係以 J.-P. Obrecht 等人Oiganic Synthesis 1992, 200所述之合宜官能化4-酮哌凌酸之縮醛形成，還原及/或親和性取代作用而製傲。經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 實例 1Θ3_105 係以 Μ E· Freed 及 A· R· Day in J· Org· Chem. 1960, ϋ 2105所述之合宜官能化5·明裱啶酸或以 J· Boscht等人於Tetrahedron 1984, 4〇U 2505 所述之合宜官能化3-網哌啶酸之縮離形成還原及/或親和性的取代作用而製備。實例 106-113 係以 R· Helming 等人於 Synthesis，1989, 本紙張尺度適用中國國家標f ( CNS ) A4規格（ • 76. 581761 A7 B7 五、發明説明（74 ) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 265所述的合宜官能化烯胺之環化，運原及/或親和性取代作用及進一步的如實例5所逑操作而製備。實例114(螺乙内烯胺〉係以Smith等人，j. Med. Chem. 1995, 38, 3772所述之合宜經取代酮（lb)氰化鉀輿破酸胺而製備。實例 115_116 係以 Smith 等人 J. Med. Chem. 199 5，3 8, 3772所述的Wittig反應及接著之碡甲烷^Miehael加成作用而製備。接著遘原及親和性的取代作用提供所欲的化合物❹ 下列的實例提供精藝者足夠f丨導以製傭本發明化合物而非以任何方式來限制。使用實例之组合物及方法本發明化合物係用於製餚治療疾病等之組合物〇下列组合物方法資例未限制本發明，但提供精藝者製備及使馬本發明化合物，組合物及方法之指引。於各情形t，化合物式I可經取代，供下列所示具有相似結果實例化合物。例示用的方法#限制本發明，但提供精藝者使用本發明化合物，組合物及方法之指引❶經於資施者將知悉實例提供的指引且可基於條件及病人而有所政變❶ 實例A 製備本發明供口服的錠#1，包括：成份复實例9 15毫克乳糖 120毫克 -77· ____________---- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） >ϋϋ m· βί m ϋϋ n m_i J· (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

1T 581761 A7 —---—— — B7五、發明説明（75 ) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製玉米激粉 70毫克滑石 4毫先硬腐酸鍰 1毫克使用具有式（I)之其他化合物會有實質相拟的結果。重60公斤（132旬遭受類風濕性關節炎之女性以本發明的方法治療，明麵言之，該療法是给病患口服每日三錠，歷時〇期間結束後，撿查病患發減少發炎，並且改進活動力而無伴隨疼癱。實例B 製造本發明口服的膠囊，包括：量（％ w/w> 實例3 15%聚乙二醇 8 5% 用具有式（I)結構其他化合物會有實質相似的結果。重90公斤（198碎）遣受骨關節炎之男性，以本發明的方法治療，明Μ言之，每天給予該病患含7〇毫克實例3之膠囊，歷時5年。治療期結束時，經由骨蘭節鏡檢查病患，發現闕節教骨沒有進一步的磨耗/織維化❹ 實例G 製備本發明方法，局部投藥之食賨水爲主的组合物。包括 -78- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（21〇χ 297公釐） ! -- (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 、-!! 581761 A7 B7 五、發明説明（76 )

成份量（％ w/wY 實例13 5% 聚乙缔酵 15% 食蠆水 80% 用具有式（!）結構之其他化合物會有實質相似的結果。具有深度角膜磨裉之病患，每兩天對各眼施用一滴、療效快速，益沒有肉眼可見的績發症众實例D 製#本發明局部投藥的局部施用组合物，包括成份组合物(％ w/v ) 資例3的化合物 0.20 氟化苯烷钂 0.02 乙基汞硫代水楊酸鏑 0002 d-山梨醇 5.00 甘胺酸 0.35 芳香物 0.075 纯水總計= 100.00 使用具有式（1>結構的任一其他化合物會有實質相你的結果〇 m- B — «——I— ml mi m^i ιιϋ —ϋϋ ϋ>ϋ I (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂經濟部中央標準局員工消費合作社印製遭受化學燒傷的病患在各椒墊之變化物（bid)上施用组合物。疤痕實質的消失。實例E 製備本普明吸入之氣溶聲组合物，包栝： •79，本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 581761 A7 B7 五、發明説明（77 經濟部中央標準局員工消費合作社印製成份组合物w/v) 實例2的化合物 5.0 醇 33.0 抗壤▲酸 0.1 薄荷醇 0 1 Ak. Αι, 0.2 推進劑 q.s. 總計= 100.00 使用具有式（I)結構的任一其他化合物會有實質相似的結果 0 逯受氣喘者，在吸入時經由幫浦刺漱器噴瀛0.01毫升進入口 _❶氣喘症狀消失。實例F 製備本發明局部眼藥之組合物，包括·· 成份组合物w/v ) 實例5的化合物 0.10 氣化苯坑鑌 0.01 EDTA 0.05 羥乙基嬝維素（NATROSOL Μ™> 0·50 焦亞硫酸鈉 0.10 氟化鈞（0.9%) q.s. 總計== 100.00 使用具有式（I)結構的任一其他化合物會有實質相似的結果 ο (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) •8〇 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） 581761

A 五、發明説明（78 ) 重90公斤（198磅）之另性，遣受與膜濟觸，用本發明之方法治療，明麯言之，舞該病患受影響的取部，一天兩次給予含10克實例5的食瘡水溶液，歷時二個月。

資例G 製備非腸系投藥的組合物，包括：處曼 * 實例4 100毫克/毫升載劑栽劑: 獰樣酸鎢缓衡麴（重量百分比的载劑): 卵磷廯 0.48% 羧T基編摩素 0,51 普凡 _(povidoiie} 0.50 對叛基苯甲酸甲醱 0.11 姆羥基苯甲酸丙酯 0.011 混合上面的部分形成蟠浮费}，經由注射投以約兩毫升鷂浮劑给有原位轉移雇癟的病患。注射位蜃醮接贐瘭❶重覆此劑量每天兩次，约30天❶30夭後，疾病症狀消退，且鉗董逐獅減少以維持病患❶ 使用具有式（I)結構的其他化合物會有實質相似的結果。經濟部中央標準局員工消費合作社印製實例Η 製備漱π水的组合物；成份_%w/v 資例1 3-00 SDA 40醇 8·0❹ 本紙張尺度適用中國國家;CNS ) Α4規格（—2—10 x197公釐j ------- -- ------- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 581761 B7 五‘ '…發明説明（79 ) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製嫱味渐 0.08 乳化劑 0.08 氟化鎢 0.05 甘油 10.00 甜味劑 α·α2 苯甲酸 0.05 氬氧化鈞 0.20 色渐 0.04 水均衡至100% 具有膠狀疾病的病患每天三次使用一毫升的漱口水以須口部的退化。使用具有式（I)結構的其它化合物會有貧質相似的結果。實例Ϊ 製播糖衣錠的組合物·· 成份 %w/v 實例3 0.01 山梨 17.50 甘露糖醇 17.50 激粉 13.60 甜味劑 1.20 鑄味劑 11.70 色谢 0.10 玉米蒙均衡至100% 病患使用糖衣錠以預防鬆動顆骨内的移植物。使用## m 1 5 - la -- usil -mi i —*^^1 .ϋϋ (請先閱讀背面之注意事項#填寫本頁) •82 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 581761 80 經濟部中央標準局員工消費合作社印製式（I)結構的其他化合物有實質相似的結果。實例J 咀嘴膠组合物V 成份 w/v% 實例1 0.03 山梨醇精體 38.44 Paloja-T膠基質 518 20.00 山梨醇(70%水溶液） 22.00 甘露錶酵 10.00 甘油 7.56 矯味劑 1.00 病患咀嚼膠以預防鬆動假牙。使用具有式(I)結構的其他化合物會有實質相似的結果實例K 成份 w/v% USP水 54.656 對羥基苯甲酸甲酯 0 05 對羥基苯甲酸丙酯 0.01 黄聲 0.12 瓜耳膠 0 09 破酸鈣 12.38 消泡劑 1.27 蔗糖 15.0 山梨醇 11.0 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁 •Φ衣·

、1T •83 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ2Φ7公釐） 581761 A7 B7 五、發明説明（81 ) 甘油 5.0 苄醇 0·2 檸檬酸 0.15 冷卻劑 0.00888 矯味劑 0.0645 色劑 0.0014 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 實例I係先混合80公斤的甘油及苄醇接著加熱至65 °C，然後緩慢加入及一起派合對巍基苯子酸甲黯、對巍基苯甲酸丙醱、水、黄膠及瓜耳膠〃而製#。用SUverson調渑機混合這些成份約12分鈸。然後依下列的順序缓慢加入下列的成份：剩下的甘油、山梨醇、消泡劑C、碳酸鈣、檸檬酸及蔗糖。分別結合螩味劑及冷卻劑然後加至其他的成份。混合約40分鐘。病患服用鋼懿物以預於驟發的腠炎。文中所述的所有麥考文簌併入文中參考。雖然已描述本發明特佳的具髗實例，然而對熟悉該項技術者明顯的知道在無須偏離本發明的精神輿範面下可做出本發明的不同改良與改變。所附申請專利範固欲涵蓋本發明範醑内之所有改良。經濟部中央標準局員工消費合作社印製 84 麵本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 19 一修正申請曰期 — -87:02:&3j 崔'參； t ^ 1../ ? ? 1 * -*"**一. Ά"^/1 案號 87101299 ——一· /\ 斗 C4 洛了（9〇年6月修正頁）類别翁|專利説明書 581761 發明、新型名％中文可作為金屬酶抑制劑之化合物及含彼之醫藥組合物

COM^OUNDS^UStsFUL AH lbASE !NHIBITORS akd pharmaceutical composition COMPRISING THE SAME 姓名國籍 1·尼爾葛瑞哥里艾姆史迪 2. 比斯瓦納斯狄 3. 葉唐迪歐拉比西泰沃 4·瑞瑪珊德勒布蘭迪一5.王希 6. 史坦羅皮庫爾 7. 麥可喬治納奇斯發明創作人住、居所 I.2,4.7均美國 3.荷蘭5.中華民國6.波蘭亥俄州愛地市翠爾瑞吉廣場6348號刻我州辛辛那提市柯尼伍路11269號亥俄州西契斯特市寇奇福路刀98號 5 I 5 州法爾菲德市威斯特伍路60號來ί州威明镇市海芬路2106-C號吴國俄茨俄州馬森市普雷斯波提達財勞 i t 姓名 (名稱）美商寶鹼公司經濟部智慧財產局員工消費合作社印製三、申請人國籍住、居所 (事務所) 代表人姓名美國美國俄亥制辛辛那財魏廣場遞傑可巴斯·西.雷瑟 (CN 準標家國國中用適度尺張紙木

X 一釐公

rL

Claims

581761 ，α ^第οδΉΟΐ2"號專利申請案中文申請專利範圍替換本(92年11月) 六、申請專利範圍 1. 一種具有式（I)結構之化合物〇 °^fΑΓ •N-VVw R2 Y/u-nn 2 (I) 其中： Ar係經苯基或吡啶基取代或未經取代之匚厂匕烷基、經取代或未經取代之C6-C1G芳基（取代基為(^-匕烷基、CrC6烷氧基、鹵素、硝基、c3-c6環烷氧基、C!-C6 fe氧C! - C 6燒氧基、ρ比咬氧基、取代或未經取代之苯基或苯氧基（取代基為鹵素、Ci-Ce烷基、（^-(：6烷氧基、氰基、二-C i - C6燒胺基））或經取代或未經取代之魂吩基（取代基為p比淀基、異崎峻基或可經c i _ c 6燒硫基取代之嘧啶基）； Rj、H ; R2係氫、CVC6烷基或CVC3烷醯基； W係無； Y係獨立為一或多個氫或C! - C 6燒基； Z係螺部份（s p i r 〇 moiety)，其中之螺部山四、 i或多個選自氧、硫或氮組成之雜環，經：代代，及包括3至7員環，其中取代基為€1< 甲基、苄氧基、羥基、氧基、苄基、c _c 土，稠合環（其中稠合環為苯基、（：3_〇6觀基 η係1至3 ; O:\49\49293-921104.DOC\ 581761 圍範利專請中 ABCD 立結構亦包括式（I)之光學異構物異構物，或其醫藥上可接受鹽。根據中請專利範圍第1項之化合物代苯基。根據申請專利範圍第2項之化合物 …^ C 1 C6 k氧基、c丨-C 6烷氧C丨-C 6烷氧基、硝基或產常取代。根據申請專利範圍第3項之化合物溴、硝基及丁氧基取代。根據申請專利範圍第4項之化合物醯基之鄰位或對位上取代。根據申請專利範圍第1項之化合物接附碳原子形成5至7員環。根據申請專利範圍第6項之化合物或用稠合環取代。根據申請專利範園第7項之化合物選自氧或硫之雜原子。一種用以預防或治療與哺乳類個體内不欲金屬蛋白酶活个有關疾病之醫藥組合物，包括 (a) —種安全有效量根據申請專利範圍第1項之化合物及 (b) 醫藥上可接受載劑。根據申請專利範圍第9項之醫藥組合物，包括 (a) 安全有效量根據申請專利範圍第3項之化合物；及 (b) 醫藥上可接受載劑。 11·根據申請專利範圍第9項之醫藥組合物，包括 2 3· 5. 7. a 9· 10. O:\49\49293-921104. D〇〇 5 2- 本紙張尺舰财®目家標準(CNS)if4規格(21〇χ297公董) 非鏡像異構物或鏡像其中A r係苯基或經取其中Ar係經取代苯基烷氧基、硝基或鹵其中Ar係用甲氧基、其中Ar係在相對於磺其中螺部份，Z，與其中螺環係未經取代其中Z具有一或多個 A8 B8

12 13· 效！根據申請專利範圍第4項之化合物；及 (b)醫樂上可接受載劑。根據申請專利範園第9嚷之醫藥組合物，包括 =ί有效量根據申請專利範圍第6項之化合物；及 (b)醫樂上可接受載劑。根據申請專利範圍第9項之醫藥組合物，包括 (&)安^有效量根據申請專利範圍第7項之化合物；及 (b)醫藥上可接受載劑。 :種預防或治療金屬蛋白酶所調介病症之醫藥組合物，其中縣症選自關節炎、癌…心血管病症、皮膚病症、眼病 ^ ^炎及膠質病，其係包含-安全有效量根據中請專利範圍第1項之化合物。 16t 17. ia 19. 根據申清專利範圍第丨4項預防或治療病症之醫藥組合物其中病症係關節炎且選自包括骨關節炎與類風溼性關節炎。根據申請專利範圍第1 4項預防或治療病症之醫藥組合物，其中病症係癌，且該治療為預防或遏止腫瘤生長及轉移〇根據申請專利範圍第丨4項預防或治療病症之醫藥組合物 ’其中病症係心血管病症，選自包括擴張心肌病變、先天性心衰竭、動脈硬化、斑痕破裂、再灌流受損、局部缺血、k性阻塞性肺病、血管成形術再狹窄及主動脈瘤。根據申請專利範圍第14項預防或治療病症之醫藥組合物 ’其中病症係眼部病症，選自包括角膜潰瘍，缺乏角膜治癒，黃斑退化及翼狀胬内。根據申請專利範圍第1 4項預防或治療病症之醫藥組合物 O:\49\49293-92l 104.DOQ -3- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公釐）

’其中病症係齒齦症且選自包括牙周病及牙齦炎。 2°·根據申請專利範圍第1 4項預防或治療病況之醫藥組合物 ’其中病況係皮膚病選自包括皺紋修補與預防，紫外線皮膚傷害、大皰性表皮鬆懈、牛皮癬、硬皮症、異位性皮膚炎及症。 21· 一種預防修補物裝置鬆動之醫藥組合物，該裝置係選自包括關節置換物及牙修補物，其包括一安全有效量根據申請專利範圍第1項之化合物。及根據申請專利範圍第14項之醫藥組合物，其中發炎病況係選自包括發炎性腸炎、Crohn氏疾病、潰瘍性腸炎、胰臟炎、憩室炎、痤瘡炎、骨骨遗炎、支氣管炎、關節炎、氣 23· —種治療多發性硬皮症之醫藥組合物，其係包括一安全有效量根據申請專利範圍第1項之化合物。 24· —種治療肌肉骨胳疾病或惡病質之醫藥組合物，其係包括一安全有效量根據申請專利範圍第1項之化合物。 -4- O:\49\49293-921104.DOO 5 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公爱）

第八七一〇一二九九號專利申請案中文補充說明書（九十年八月） _ 581761 -、名稱：具強力選擇性與Π服活性之以_酮為主之基質金屬蛋白酶抑制劑二、詳細說明基質金屬蛋⑽為在巾性pH下具有最騎雜之含軸切蛋白酶，此等酵素主要由多種結缔組織分泌，包括纖維母細胞、成^田胞、軟骨細胞、内皮細胞，及發炎細胞如：巨嗟細胞、嗜中性白2 球與淋巴球“。此等蛋觸之合成法無化法均為受到精密調節之過程。除了含MMPS之RXKR胺基酸序列（基質溶素_3與膜型 MMPs (MT-MMPS))以外’其餘_s均呈無活性之酶原分泌，並在細胞外被血纖維蛋白溶酶原連鎖系統或另一種跡族群成員活化。-旦活化後，MMPS再受細胞外職巾金屬蛋自酶之_性組織抑制劑（TIMPs)調節，或受血漿中巨球蛋白調節。 MMPs可依據其受質專一性與結構同質性分類。第一類應^包括膠原酶（MMPs ：1 ’ 8與13)。這類_ps主要降解丨、π與m型膠原。第二類MMPs包含二種明膠酶，明膠酶_八與明膠酶七，這二種均裂解iv型與v型膠原，並使膠原（明膠）變性。第三類腑3由基質溶素組成。其受質專一性廣，且降解蛋白多醣、昆布胺 (lammin)、纖維網蛋白及某些膠原。最近說明之穿膜 MMPs)7含有三呋喃基二氫吡唑辨識要素-Ιιχκιι_，咸信此係其活化 U:\TYPE\WCK\WAU\B\49293-lSUP.DOC 位置。近來的研究證實，mt-mmpi具有水解明膠之活性，且與 TIMP-2形成複合物分泌8。此外，MT-MMP1已顯示可依序列專一性方式裂解明膠酶-A之肽原序列9。在正常生理條件下，MMPs之蛋白質水解活性受到活性型之合成及活化作用與活性型受到基質金屬蛋白酶之組織抑制劑（TIMps)之抑制作用之間平衡控制。此等依賴鋅與鈣之酵素之異常表現與因病理疾病造成結缔組織加速降解有關，此等疾病包括關節炎kw!，腫瘤知害及轉移12-16，牙周病17及多發性硬化18-2〇。因此著重於發展 MMP抑制劑，因為這種製劑可以控制生產作用之異常調節作用’進而调控因這種平衡改變所致之各種病症21。採用基質金屬蛋白酶抑制劑之臨床研究已用於治療癌症、骨關節炎及其他病症。早期使用馬利斯塔（marimastat)之實驗已判別出與馬利斯塔治療法相關之臨床副作用23。這種副作用為發生肌肉骨骼疼痛及發炎，特別出現在使用高劑量馬利斯塔0寺24，〜26。ag_334〇為一種由Agounm藥廠在目前之臨床研究發展以磺醯胺為主之抑制劑，供治療癌症及與年齡有關之斑變性，其肌肉骨骼副作用已經證實27’28。該副作用主要始自肩膀、膝部或手部，隨劑量與時間而異，而進-步涉及關節，其·可能為無意間抑制了涉及關節中骨骨各與軟骨再造之巨嗟細胞之蛋白質水解過程27。供治療涉及結缔組織降解之疾病之選擇性抑制劑之發展近年來已漸f重視，以期發現不會&舰肖骨關作用之抑制劑μ。 BAY-12,9566為-種以叛酸為主之選擇性論^抑制劑，已積極用於 U:\TYPE\WCK\WAU\B\49293-1 SUP.DOC -2- 581761 臨床試驗中’供治療癌症與骨關節炎29。這種化合物為不會抑制膠原酶(MMP-l)或母質溶素（MMP-7)之高度選擇性MMP抑制劑。在人類臨床試驗中，沒有肌肉骨骼副作用之報告，且在長期動物試驗中亦未觀察到肌肉骨骼異常。根據這些發現，而且一般相信，選擇性抑制MMPs可比廣效性抑制作用更能提供醫療優點，吾等即探討選擇性抑制劑之設計與合成。本文即說明一種選擇性對抗^_3 1 與7之構形上受限制之新穎抑制劑之設計、合成與生物分析法。構形上受限制之MMP已成為吾等研究小組之重要領域3〇-33。抑制劑<設計係使用脯胺酸架構，作為主幹，經過結構修飾後可包括螺縮酮要素。化學以螺縮酮為主之MMP抑制劑合成法之一般方法示於反應圖1。該合成法以可自商品取得之順·4·羥基_D_脯胺酸為起始物。以甲醇之酸性溶液處理M·脯胺酸可產生所需甲酯，使之與適當續醯氯於三乙胺中反應，產生伽胺丨。添加軸潮⑽㈣氧化成酮 2。酉同2再於標準條件下轉形成螺縮酉同3 = s或〇广。以驗性羥基胺溶液處理甲酯3，得到所需之異羥肟酸4。反應圖1 -一般製程a U:\TYPE\WCK\WAU\B\49293-1 SUP.DOC

&試劑：⑻S〇C12，Me〇H ; (b)ArS〇2a，Et3N，1，4-二呤烷，水；（C) 鐘斯試劑；（d)H〇(CH2)nOH，p-Ts〇H ; (e)HS(CH2)nSH，BF3 · Et2〇； (f)NH2OH，Na〇H，Me〇H。 581761 改良Henmg之方法35，由相應之肟5與烯胺6製備螺環抑制劑30 與31 (反應圖2)。於三乙胺之存在下添加肟至烯胺中，產生適度數量之所需噚畊7。嘮畊使用阮來鎳作為觸媒進行氫化，產生吡咯啶中間物8之游離鹼。依下文所示三步騾，由胺基酯轉化成所需異羥月亏酸30 〇反應圖2

U:\TYPEVvVCK\WAU\B\49293Ul SUP.DOC - 4 - a試劑：（a)Et3N ’ THF ; (b)阮來鎳/氫氣；⑷4-Me〇PhS〇2a， Et3N ’ 1，4-二。亏燒’水；⑼氫氧化4里；⑼草醯氯，^^〗，^^〕· ΝΗ2〇Η · HC1，Et3N，THF，H2〇。結果與討論以螺縮酮為主之MMP抑制劑之發展：螺縮酮環大小、環取代及環雜原子對MMP抑制作用之影響。所有化合物均於試管内測試對截短之膠原酶-1 (MMIM)36、基質溶素（MMPJ)37、母質溶素一 7)36及膠原酶-3 (MMP-13)36之抑制作用。先檢視螺縮酮環大小、環取代及環雜原子對抑制MMPs之影響（表1}。採用以脯胺酸為主之對曱氧苯基磺醯胺（化合物9)作為評估螺縮酮效力與選擇性之參考分子。表1中所有化合物均使用對曱氧苯基磺醯胺製備，以方便比較。無5承之一石爲乙基細酉同與一甲氧基縮嗣（化合物1〇與13)之效力均低於相應之脯胺酸類似物9。將硫縮酮11與12加至螺縮酮環中結果會使其對MMP-3之效力稍微提高，但對之反應則有改變。二嘧茂烷類似物11對MMP-3之選擇性高於化合物9，而相應之二喳烷12對MMP-3之效力則確實高於化合物9。塞烷之選擇性 (MMP-3對於MMP-1)低於相應之二嘧茂烷之原因則尚未明瞭。由二醇衍生之螺縮酮14-16證明環大小對整體效力及選擇性有顯著影響。二吟茂烷14為此系列中效力及選擇性最低之化合物，而二嘮烷與二吖4衍生之抑制劑（分別指15與16)則證實對mmpg之效力及選擇性向於對MMPs 1與7。二哼茂烷或二吟烷環上之取代作用通常不會顯著影響母化合物之效力（由化合物14及15與化合物17_27比較）。 U:\TYPE\WCiC\WAU\B\49293.1SUP.DOC 581761 通常，以二概融之_嶋明對贈_3之效力最高，且相對於 1 1及MMP 7具有較高之選擇性。 31)。含有螺縮酮雜原子之化合物對着_3具有加強之效力，相對於對MMP-1則對MMP-3具有較高選擇性。螺義環雜原子似乎對抑制劑之效力及選擇性均有顯著影響。柏視6員職_發現，以氧置換魏料時，會縣改變其到着S 1及3之抑侧選擇性（比較化合物Π與化合物15)。脫_ 縮酮雜原子結果產生效力及選擇性均下降之抑制劑（化合物％輿

以二呤烷及二呤茂烷為主之抑制劑之柄胺取代作用_Mp抑

制作用之影響。其次檢視伽胺基對二舰及二〶聽系列之效力及選擇性之影響（表2)。使用未取代之二，垸M及二物完^作為本試驗之參雜合物。增加P1，取代基之長度可使^靴及二号茂燒系列之效力與選擇性著提高。丁氧苯基顧胺35及43對着_ 3之選擇性高於對MMP](選擇性超過倍），同時對3、9 及13仍保有效力。溴苯基磺醯胺％及似為从__3之較低效力抑制劑’但此等化合物對MMIM之效力卻為任何所探討之螺縮酉同中具最高效力之化合物。苯氧苯基（39與49)及吡啶氧苯基（4〇與51)磺酉蠢為MMPs 3與13之極強力抑制劑。苯氧苯基續醯胺對隱叫只具有適度選擇性，而吡啶氧苯基磺醯胺則具高度選擇性。根據這些結果，修飾磺醯胺基顯然可對以螺縮酮為主之从_抑制劑之效力及選擇性產生重大影響。亦利用二嘧烷及二嘍茂烷系列（表3)探討磺醯胺基對抑制劑效力 U:\TYPE\WCK\WAU\B\49293-1 SUP.DOC -6- 及選擇性之影響。類似結果亦出現在以硫為主之螺縮酮上。二噻烷系列中因引進丁氧苯基磺醯胺而大幅影響選擇性（比較表3中化合物 U與55)。丁氧苯基續醯胺之效力超過相應甲氧苯基績酸胺1〇〇倍以上。引進苯氧苯基或吡啶氧苯基磺醯胺亦顯著加強對MMPs 3與13 之效力（化合物53、54及57)，相應之吡啶氧苯基磺醯胺對MMP-3 之選擇性高於對MMP-1，此選擇性遠高於相應之苯氧苯基磺醯胺 (比較化合物53與54)。樣縮酮環大小、環取代及確醢胺取代對MMP抑制作用之影響。活體外之吸收性。由活體外老鼠迴腸傳送試驗評估表1至4所示幾種特定化合物之相對腸部吸收潛力38。活髓内之功效。採用碘乙酸鹽謗發關節炎模式測定特定化合物在老鼠體内之活體内效力39，4〇’41，其結果示於表5。經關節内注射碘乙酸鹽後第一個7天内，每天投與35毫克/公斤化合物2次。投與碘乙酸鹽後21天，殺死老鼠，評估關節傷害。實驗部份二彀獅。所有化學藥品與溶劑均為試劑級，未再純化即使用，除非另有說明，溶劑與試劑之簡寫如下：四氫呋喃（THF)、乙醚既〇）、二甲亞砜（DMSO)、乙酸乙酯（EtOAc)、二甲基曱醯胺 (DMF)、甲醇（MeOH)。除了水性介質中之反應外，所有反應均採用排除水份之標準技術進行。於0 25毫米矽膠板上（6〇F_254，E Merck)進行薄層層析法追踪，以uv光，碘蒸汽，或5%構翻酸之 95%乙醇溶液目視檢查。最終化合物主要利用矽膠急驟層析法（E U:\TYPE\WCK\WAU\B\49293-1 SUP.DOC 581761 流成，4〇-63微米）或製備性逆相高壓液相層析法（RP-HPLC)，使用 Waters 4000 型 Delta Prep 儀器，加裝 Waters Symmetry 製備性不務鋼管柱（C-18，19毫米X 300毫米）作為固定相進行純化。移動相使用 0.1%三氟乙，以乙腊作為有機改制。所有例子均採用線性梯度’ >觅速為20 *升/分鐘。使用加裝二極排列光度計（入範圍 200-400 rnn)之Waters 600系統進行rp—hplc分析純度。固定相為 Waters Symmetry C-18管柱（4·6毫米χ 2〇〇毫米）。移動相使用〇1% 二氟乙水溶液，以乙腈為有機改質劑，流速丨〇毫升/分鐘。於Varian Unity-300儀器上記錄Ih-nmr光譜。化學位移以百萬分之一（ppm，（5單位）表示。偶合常數以赫兹單位（Hz)表示。分裂型態代號為s ’單峯；d，雙峯；t，參輋；q，四秦；m，多峯；b，見。低解析度質谱（MS)係於Micromass Platform四極質譜儀上記錄。以陽離子或陰離子型式表示之質譜係於電噴灑離子化法（ESI)取得。燃燒分析法則以内燃法進行。自堪薩斯大學醫學中心（University of Kansas Medical Center，Kansas City, KS)之Dr. Hideaki Nagase取得人類滑膜MMP-3原。人類纖維母細胞MMEM原、人類MMP-9及人類重組體MMP-7催化區則得自猶太醫院（Jewish Hospital，St. Louis，MO)之 Dr. Howard Welgus。人類重組體MMP-8催化區則得自德國必勒菲大學（University Bielefeld， Bielefeld)之Dr Harald Tschesche，人類重組體MMP-2原則依下文所述，自CHO細胞中純化。人類重組體截短之MMP-3與截短之 MMP-1係依下文說明，自大腸桿菌細胞中純化。自Bachem U:\TYPE\WCK\WAU\B\49293-1 SUP.DOC 581761 Bioscience (King of Prussia pa)購得 Mca-Pro-Leu-Gly-Leu_Dpa_Ala_ Arg-NH2。苯氧苯基磺醯氧42與㈣淀斗基）氧苯磺醯氯43係依下列方法製備。酮基··續g!胺之一船拜 1Ν-(4_甲氧苯磺醯基)_4 (R)-羥基吡咯啶_2⑻邊酸甲g旨⑴：取順式邊基-D-脯胺酸（5〇克，〇 %莫耳）溶於水/二吟烷〇/〗，3〇〇毫升）與三乙胺（135毫升，〇·96莫耳）中。在反應混合物中添加4-甲氧苯磺醯氯（87克，0.42莫耳）及2,6-二甲胺基吡啶（4.6克，38毫莫耳），混合物於室溫下攪拌14小時。混合物減壓濃縮，以Et〇Ac稀釋。分層，有機層以IN HC1洗滌2次，以鹽水洗滌一次，以MgS〇4 脫水，過濾，排除溶劑，產生83克固體，溶於Me〇H (5〇〇毫升) 中。滴加亞硫醯氣（50毫升），所得混合物攪拌14小時。混合物蒸發至乾’與CHCI3碾磨，產生白色固體，其純度足以進行下一個反應，不需再純化。 1Ν-(4-甲氧苯磺醯基)_4_氧代-吡咯啶_2 (R)_羧酸甲酯（2) ··取醇j (1〇.〇克’ 31.7毫莫耳）溶於丨75毫升丙酮中，冷卻至叱。添加8 M 叙斯4劑洛液，直到落液保持橙色為止，混合物於室溫下攪拌Μ小時。添加異丙醇至溶液中，終止過量#試劑之反應，所得固體經赛力特石夕藻土過濾、。滤液減壓濃縮，殘㈣於二氯甲財，以水洗 I所得洛液脫水（Mgs〇4)，減壓濃縮。產物經矽膠層析，使用 EtOAc/己燒（1/1)純化，產生所需嗣。廳（孤）：(w+H)。

U.\TYPE\\VCK\WAU\B\49293-1 SUP.D0C -9- 581761 7-(4-甲氧苯磺醯基)-1，‘二噻_7_吖螺[4，4]壬烷_8 (r)_羧酸甲酯 (3a):取酉同（2) (1.3克，4·15毫莫耳）溶於30毫升無水二氯甲燒中，然後添加1，2-乙烷二硫醇（0·800毫升，8 3〇毫莫耳）與三氟化硼乙醚化物（0.20耄升，1.66耄莫耳）。混合物於室溫下攪拌一夜。添加 1Ν氫氧化麵調整溶液至鹼性，然後以Et〇Ac萃取混合物3次。以水及氯化銨洗滌有機層，脫水（MgS〇4)，過濾及蒸發，產生標題化合物。H-NMR (CDC13 ’ 300 MHz): J 2.45 (dd5 J = 8.8，6.4 Hz, 1H)， 2.55 (dd，J = 8.8 ’ 6.4 Hz，1H)，3.18-3.32 (m，4H), 3·78 (s5 3H)，3.85 (s5 3H)? 6.98 (d5 J = 9.0 Hz, 2H)? 7.83 (d5 J = 9.0 Hz5 2H). MS (ESI): 390 (ΝΓ+Η)，407 (Nf+NHU). N-藉基-7-[(4_甲氧苯基）磺醯基]]54_二备7_吖螺[4 · 4]壬烷-8 (R)_ 複酿胺（11):製備1.76 Μ羥胺鉀之甲醇溶液。直接添加此176 μ溶液（1.46毫升），2.57毫莫耳）至曱酯3a (ο.·克，0.257毫莫耳）中，反應混合物攪拌一夜。以1N ϋα酸化溶液，以乙酸乙酯萃取混合物 3次，脫水（MgS〇4)，過濾，減壓排除溶劑。產物經矽膠使用乙酸乙酯/己烷/甲酸（1/1/0.1)層析純化，產生標題化合物。〗h-nmr (CDC13) δ 2.36-2.58 (m，2H)，3.22 (dd，J = 16.1，4.3 Hz，4H)，3·68 (d5 13.0 Hz? 2H)? 3.85 (s5 3H)? 4.13 (m5 1H)? 7.12 (d? J = 9.0 Hz, 2H), 7.9 (d5 J = 9.0 Hz，2H)，8.1 (br s，1H)，MS (ESI): 391 (Nf)，408 (M^+NKb). 依下文說明之一般製程製備下列化合物·· N-羥基-4,4-雙（乙硫基)-1-[(4-甲氧苯基）磺醯基]-2(R)w比咯啶羧醯胺（10) ··由甲酯（0.320克，0.89毫莫耳）轉化成標題化合物，經矽膠 U:\TYPE\WCK\WAU\B\49293-1 SUP.DOC -10- 使用EtOAc/己燒/甲酸（Ι/I/O」）為溶離液層析純化，產生210 毫克（44%)化合物 1〇。W-NMR (CDC13) δ 1.07 (t5 J 二 7·4 Hz，1H)， 1.17 (t，J = 7.4 Hz，3H)，2.40 (m，5H)，2.53 (dd5 J = 15.2，7.4 Hz，1H)， 3.47 (d5 J = 9.3 Hz, m\ 3.72 (d? J = 10.2 1H)5 3.84 (s5 3H)5 4.26 (br s? 1H)，6.97 (d，J = 9.0 Hz，2H)，7.78 (d，/ = 9.0 2H)，9.7 (br s，1H)，Cr MS : 421 (M〇. 443 (Nf+Na)·分析(C19H24N2〇5S3) C5 H，N. N_窥基-8-[(4-甲氧苯基）續Si基]-1，5_二p塞-8-0丫螺[4,5]壬垸-9 (R)-竣醯胺（12):由甲酯（0.100克，0.248莫耳）轉化成標題化合物，經矽膠使用乙酸乙酯/己烷/甲酸（1/1/0.1)為溶離液層析純化，產生化合物 12。々-NMR (CDC13) δ 1.82-1.91 (m5 6H)，2.29-2.36 (m，1H)， 2.75-2.85 (m，3H)，3.63-3.80 (m5 1H)，3.80 (s，3H)，4.3 (m5 1H)，6.93 (d，J -9.0 Hz5 2H), 7.7 (d? J = 9.0 Hz, 2H). MS (ESI): 404 (MT)5 421 (Nf+NKO. N-羥基-7-[[4-(2-甲氧乙氧基）苯基]磺醯基]-1，4-二嘧-7-吖螺[4,4]壬烷-8 (R)-羧醯胺（52):依上述方法製備標題化合物。1H-NMR (CDC13) δ 9.19 (s，1H)，7.95 (d5 J = 8.9, 2H)，7.26 (d5 J = 8.9, 2H)，4.33 (m，2H)， 4.05 (m? 1H)? 3.82 (m, 4H)5 3.47 (s? 3H)5 3.37 (m? 4H), 2.51 (m? 2H)? 13C-NMR (CDC13) δ 167.60, 162.55, 130.33, 129.19, 115.13, 70.47, 67.83, 66.82，61.61，60.26，58.56，47.24，MS (ESI):435 (W)·分析 (C16H22N2〇6S3 · H2〇）C，H，N. N-羥基-8-[(4-甲氧苯基）磺醯基]二嘧-8-吖螺[5.4]癸烷-9(R)-羧醯胺（53):依上述方法製備標題化合物。Ih-NMR (CDC13) δ 9.07 (s. U:\TYPEWVC K\WAU\B\49293-1 SUP. DOC -11 - 1 H)，7.90 (d，J = 8.8, 2 H)，7.46 (m，2 η), 7.25 (m，1 H)，7.11 (m5 4 H)， 3.93 (m，1 H)，3.73 (m 2 H)，3·24 (m，4 h)，2.44 (m，2 H)· 13C-NMR (CDC13) δ 167.60，161.37，155.61，131.55，130.75，125.08，119.98, Π8.5〇，66.91，61·71，60.35，46.97· MS (ESI) 453 _)分析 (C19H2〇N205S3 · 0·25 H20) C，H，N. N-羥基各[(4七比淀-Φ·基)氧)苯基磺醯基]]，5二噻各吖螺[54]癸燒_ 9(R)邊S&胺（54) ··依上述方法製備標題化合物。也抓他（CDCl3) δ 11.04 (s· 1 Η)，9·13 (s，1 Η)，8.56 (dd，^ 1.5, 4.7, 2 Η)，8.03 ((!，/ = 8.7, 2 Η)，7.42 (d，J = 8.7, 2 Η)，7·02 (dd，J = 1.5, 5.6, 2 Η)，3·99 (m 1 Η), 3·79 (m，2Η)，3.23 (m，4Η)，2·38 (in，2Η). 13C-NMR (CDC13) δ 167.60, 163.38, 158.11，152.13, 133.85, 130.86, 121.29, 113.11，67.01，61.71， 6〇·35, 46.98.分析· 〇·33 Η2〇）C5 Η，Ν. Ν-羥基各[(4-丁氧苯基）磺醯基]十5二嘧各吖螺ρ 4]癸烷-9(R)邊醯胺（55):由甲酯（0.8克，1.8毫莫耳）轉化成標題化合物，經逆相製備性HRLC純化（40A60B，A，95%H2〇，5%乙腈，0.1%甲酸： B ’ 80%乙赌 ’ 20%H2〇，19X300 晕米 Waters SymmetryPrep C!8 管柱），產生0.32克（40%)化合物54之白色泡沫狀固體。 ]H-NMR (DMSO-^6) δ 0.86 (t. J - 7.3? Hz, 3 H). 1.33-1.48 (m? 2H)? 1.57-1.84 (m5 4H), 1.99-2.13 (m? 1H)5 2.39-2.50 (m5 2H)5 2.54-2.67 (m5 1H)，2.70-2.83 (m，1H)，2.84-3.00 (m，1H)，3.50 (d· J = 11.4 Hz，1H)， 3.90-4.08 (m，4H)，7.05 (d5 / = 9·0 Hz，2H)，7.79 (d，J = 9.0 Hz，2H)， 9.02 (s，1H)，10.86 (s, 1H)· MS (ESI): 464 (MV丽3)，447 (100, MT).分 U:\TYPE\WCK\WAU\B\49293-1 SUP.DOC -12- 581761 析（C18H26N205S3) C5 Η, Ν· Ν-經基-8-[[4-(2-甲氧乙氧基)苯基]磺醯基]4,5_二嘧-8-吖螺[5.4]癸烷-9(R)-叛醯胺（56) ··依上述方法製備標題化合物。Ih-nmr (CDCi3) δ 9.07 (s，：IH)，7·83 (d· J = 8·8, 2H)5 7.11 (d5 J = 8.8, 2H)，4.19 (m，2HX 4.00 (m，2H)，3.67 (m，2H)，3.33 (s，ih)，3.30 (s，3H)，2.93 (m5 1H)，2·81 (m，lH)，2.63 (m5 1H)，2.49 (m，1H)，2.08 (m5 1H)，1·81 (m，1H)，1.70 (m5 1H)· 13C-NMR(CDC13) δ 167.70, 162.46, 130.19, 129.29, 114.93, 70.48, 67.79, 61.42, 59.07, 58.55, 52.10, 44.71，27.97, 27.23, 25.02· MS (ESI) 499 (MT). N-羥基各[(4七比啶基)氧)苯基磺醯基]^二嘧各吖螺丨叫癸燒-9(R)-羧醯胺（57):依上述方法製備標題化合物。Ih-nmr (CDCl3) 9.12 (s，1H)，8.56 (d，/ = 5.0, 2H)，7·96 (d，J = 8.8, 2H)，7.33 (d，J = 8.8, 2H)，6.92 (d，J = 5.0, 2H)，4.10 (m，明，3 99 ㈣邱，3 67 (m，1H)，2 % (m，1H)，2.80 (m，1H)，2.71 (m5 1H)，2·〇6 (m5 1HX 1.97 (m5 1H)，1.80 (m， 1H)· 13C-NMR (CDC13) δ 167.60，163.40，158.03，152.13，133.91， 130.74, 121.07, 113.08, 61.53, 59.08, 5225, 44.69, 27.94, 27.26, 25.01. MS (ESI) 435 (Nf).分析（C19H2iN3〇5S3 · 0.33 H2〇）C5 H，N. 以二嘮垓與；今茂烷為矣^^同之一般製程 7-[(4_曱氧苯基)磺醯基]-1，‘二。号^吖螺[4.4]壬燒_8(R)-叛酸甲酯 (3b):取銅2 (0.5克，1.59毫莫耳）溶於5〇毫升苯中，然後添加以乙二醇（0.108克’ 1.75毫莫耳）與對甲苯續酸（〇〇〇6克，〇 0160毫莫耳）。反應混合物加熱至回流18小時，以醚稀釋混合物，以碳酸氫鈉 U:\TYPE\WCK\WAU\B\49293-1 SUP.DOC -13 - 581761 (10毫升）中和，以醚萃取3次，合併醚層，以氯化銨洗滌，脫水 (MgS〇4)，減壓排除溶劑。所得油經矽膠層析，以己垸/乙酸乙酯（in) 純化，產生純化合物。1H-NMR (CDC13) δ 2.20 (d· J = 12·2 Hz，2HX 3.37 (d5J = 9.4, Hz 2H)，3.72 (s，3H)，3.74-3.82 (m，2HX 3.85 (s，3H)， 4.06 (dd5 J - 8.8, 6.2 Hz? 1H)? 6.95 (d5 J = 9.0 Hz? 2H)? 7.79 (d5 J = 9.0? Hz5 2H). MS (ESI): 437 454 (IVT + NH3). N-#莖基-7-[(4-甲氧苯基)磺醯基]-1，4-二嘮-7-吖螺[4.4]壬烷-8(R)-#发醯胺（14):製備1.76M羥胺鉀之甲醇溶液，直接添加此1.76M溶液 (2.0毫升，3.52毫莫耳）至甲酯3b (0.146克，0.408毫莫耳）中，反應混合物攪拌一夜。添加IN HC1，直到混合物呈酸性為止，以乙酸乙酿萃取所得溶液3次，以硫酸鎂脫水，減壓濃縮成油。所得油經梦膠層析，使用乙酸乙酯/己烷/甲酸（2/1/0.1)純化。 !H-NMR (CDCls) δ 2.30 (d^J= 12.63 Hz5 2H)5 3.162 (d, J = 10.51 Hz? 1H)，3.49 (d，J = 10.49 Hz，1H)，3.73-3.88 (m5 2H)，3.85 (s，1HX 4.07 (d， ^ 7.14 Hz，1H) 4.26 (d，J = 7.51 Hz, 1H)，6.95 (〇U = 9.0 Hz，2H)，7.77 (d5 J = 9.0? 2H)5 9.71 (s? 1H). MS (ESI): 438 (1^), 455 (M^+NHs). N-髮基-l-[(4-甲氧苯基)續醯基]-4,4-二甲氧吡u各啶_2_幾醯胺（13): 依上述方法製備標題化合物，產物經碎膠層析法純化（溶離液：3% 甲醇：W%氯仿）。得到白色粉末固體。 ^-NMR (DMS0^6) δ 10.75 (s? 1 H)5 7.82 (d, J = 8.75 2H)? 7.14 (d? J 47, 2H)，3.93 (m，1H)，3.87 (s，3H)，3.43 (d，J = u.5, 1H)，3 24 (d, ^/二 U.5, 1H)，3.08 (〇H)，2.68 (s，3H)，2.16 (m，1H)，195 (m，1H) MS U:\TYPE\WCK\WAIAB\49293-1SUP.DOC -14- 581761 (ESI): 361 (ΙνΤ). N ^基-2-[(4-甲氧苯基)橫驢基]_6，1〇_二+2_。丫螺[4习癸垸⑻-羧醯胺（15):依上述方法製備標題化合物，產物經矽膠層析法純化（溶離液：3%甲醇：97%氯仿）。得到白色粉末固體。 ]H-NMR (CDC13) δ 9.4 (br s5 1 H)5 7.81 (d? J - 7.70, 2H)5 7.04 (d? J = 7.70? 2H)? 4.2 (m5 1H)5 3.90 (s5 3H), 3.70 (m3 6H)? 3.29 (s5 2H)? 2.80 (m? 1H)，1.84 (m，1H)，1.59 (m5 1H). MS (ESI): 372.1 (IVT)，390 (Ivf+NH3)· 分析（Ci5H2qN2〇5S) C，H，N. · N-羥基-2-[(4-甲氧苯基)磺醯基]·6，η_二嘮冬吖螺[46]十一碳烷-3(R)-羧醯胺（16):依上述方法製備標題化合物，產物經矽膠層析法純化（溶離液：3%曱醇：97%氯仿）。得到白色粉末固體。 iH-NMR (CDC13) δ 7.85 (d，J = 7.9, 2H)，7·13 (d，J = 7.9, 2H)，4.88 (m，1H)，4.06 (m5 1H)，3.91 (s5 3H)，3.66 (m，2H)，3.33 (m，4H)，2.11 (m， 2H)，1·54 (m，4H)· MS (ESI): 387 (Nf)，404 (Nf+NHs)·分析 (Ci6H22N207S · 0.5 H20). N-經基-2_[(4-甲氧絲)續g錄]-6J〇〇号々丫卵习癸燒_职），9 % ⑻-工曱基-3(R)-叛酿胺（Π):依上述方法製備標題化合物，產物經乙腈結晶純化。也NMR (CDC13) δ 7.89 (d5 J = 7.6, 2Η)，7.02 (d J = 7.6, 2H)，4.87 (m，1H)，3.99 (m5 1HX 3.91 (s，3H)，3·82 (m，2H)，3.35 (m 2H), 2.25 (m5 1H)5 2.06 (m? 1H)5 1.54 (m5 2H)5 1.20 (m? 3H)5 0.89 (m5 3H). MS (ESI): 401 (M")，418 (Ivf+NHA 分析（Ci7H24N2〇7S · 〇 5 %〇) N-羥基-2-[(4-甲氧苯基)續g!基]-6，l〇-二，〜丫螺[4 5]癸燒_7⑸，4 U:\TYPE\WCK\WAU\B\49293-1 SUP.DOC -15 - 581761 (S)-二甲基-3⑻-叛醯胺（18):依上述方法製備標題化合物，產物經逆相 HPLC (Waters Symmetry C18)，使用 60% a (95% 水，5% 乙腈， 0.1 甲酸）與 40% B (20% 水，80% 乙腈）純化。iH-NMR (CDC13) δ 7.84 (d，J = 7·6, 2Η)，7·03 (d，J = 7.6, 2Η)，6·36 (br s，1Η)，2.87 (q，J = 8.4, 6.0, 1HX 3.89 (s，3H)，3.80 (m5 2H)，3.48 (m，2H)5 2.41 (m5 1HX 2_16 (m5 1H)，1.89 (m，2H)，1.19 (m，3H)，1.01 (m，3 H)· 13C-NMR (CDC13) δ 174.39，163.68，130.22，128.54，114.66，104.63，68.18，65.26，59.51， 55.92, 55.56, 39.68? 39.29, 25.82, 21.39. (MS (ESI): 386 (M"), 403 (M" + NH3)·分析（C17H24N2O7S · 1.0 H2O). N-羥基_7-[(4-曱氧苯基)續醯基]-2⑻，3(R)_二曱基_1，4-二。号-7-口丫螺 [4.4] 壬燒-8(R)-叛醢胺（19) ··依上述方法製備標題化合物，產物經矽膠急驟層析純化（QH^CVEtOAc/己燒，5/3/2至5/4/1)，產生1.6克 (62%)化合物19之白色泡沫狀固體。iH-NMR (CDC13) δ 1.05 (d，*/ = 5.9 Hz5 3H)5 1.16 (d5 J = 5.9 Hz, 3H)? 1.83-2.02 (m, 1H)? 2.22-2.32 (m? 1H)，3.16 (d，J = 10.6 Hz，1HX 3.40-3.58 (m，3H) 3.80 (s，3H)，4.20-4.24 (m，1H)，6.98 (d5 J = 9.0 Hz, 2H)，7.80 (d，J = 9.0 Hz，2H)，9.62 (s，1H). MS (ESI)·· 404 (Nf+NI^)，387 (MT)·分析（Cl6H22N207S) C，H，N. N-輕基_7_[(4_甲氧苯基)磺醯基]_2(s)，3(s)·二甲基-1，4-二崎_7_吖螺 [4.4] 壬烷-8(R)-瘦醯胺（20):依上述方法製備標題化合物，產物經矽膠急驟層析純化（CH2C12/CH3〇H，95/5)，產生0.79克（89%)化合物 2〇之白色泡沫狀固體。W-NMR (CDC13) δ 0.82 (d5 J = 6·0 Hz，犯)， 1.08 (d，J = 6.0, Hz，3H)，1·89·2·08 (m，2H)，3.17-3.23 (m5 2H)，3.32-3.42 U:\TYP E\WCK\WAU\B\49293-1 SUP.DOC -16- (m，2H)，3.79-3.90 (m，2H)，3.86 (s，3H)，7.14 (d，J = 9.0 Hz，2H)，7.82 (山 J = 9.0 Hz，2H)，10·77 (s，1H)· MS (ESI): 409 (Ivf+Na)，387 (VT).分析 (C16H22N207S · 0·5 H20) C，H，N. N-經基-1’-[(4_甲氧苯基)磺醯基]-螺[i(R)，3(R)_苯并二嘮茂_2，y一吨咯啶]4(R)-羧醯胺（21) ··依上述方法製備標題化合物，產物經逆相 HPLC (60A40B，A，95% 水，5% 乙腈，〇 ι〇/〇甲酸；b，20〇/〇水，80% 乙腈；Waters SymmetryPrep C18 管柱）純化，產生〇 36 克 (45%)標題化合物之白色泡沫狀固體。也她服（DMS0-4) δ 1.〇2- 1·34 (m，4Η)，1.57-1.76 (m，3Η)，1.88-2.08 (m，3Η)，2.94-3.04 (m，1Η)， 3.08-3.21 (m? 1H)? 3.26-3.41 (m? 2H) 3.81-3.96 (m3 1H)? 3.88 (s? 3H), 7·〇8 (d，J = 9.0 Hz，2H)，7.78 (d，·/ = 9.0 Hz, 2H)，9.02 (s5 lH)，10.72 (s， 1H)· MS (ESI): 430 (]^+丽3)，413 (]VT)·分析（c17H24N2〇7S · 0.5 H20) C，H，N. N-輕基-Γ_[(4_甲氧苯基)續酿基]-螺[i(s)，3(s)-苯并二p号茂_2，3,-p比 p各咬]-5’(R)-叛疏胺（22) ·依上述方法製備標題化合物，產物經逆相製備性 HPLC (60A40B，A，95%水，5%乙腈，〇·1〇/0甲酸；b，20% 水，80%乙腈；19X300 毫米 Water SymmetryPrep C18 管柱）純化，產生0.19克（60%)標題化合物之白色泡沫固體。iH-NMR (DMS〇〇 δ 1.02-1.34 (m，4H)，1.53-1.78 (m，3H)，1.86-2.06 (m5 3H)，2.94-3.04 (m5 1H)，3.08-3.21 (m，1H)，3.26-3.41 (m，2H)，3.81-3.96 (m，1H)，3.88 (s， 3H)，7.08 (d，J = 9.0 Hz，2H)，7.78 (d，J = 9.0 Hz，2H)，9.02 (s5 1H)， 10.72 (s，1H). MS (ESI): 430 (M>NH3)，413 (Nf).分析 U:\TYPE\WCK\WAU\B\49293-1 SUP.DOC -17- 581761 (C17H24N2〇7S · 0.5 H2〇)c5 H，N. N-羥基-2-[(4_甲氧苯基)橫醯基]—8_亞曱基-6，1〇-二噚_2_吖螺[4习癸烷-3(R)-羧酸胺（23):依上述方法製備標題化合物，產物經矽膠急騾層析純化（O^CWCEbOH，95/5)，產生0 78克（64%)標題化合物之白色泡沫固體。1H-NMR (DMS〇〇 δ mo4 (m，1Η)，2 18_2π (m，1Η)，3.24-3.37 (m，1H)，3.73-3.91 (m，4HX 3.87 (s5 3H)，4.20 (s，2HX 4.86 (d，J = 5.1 Hz，2H)，7.13 (d5 J = 9.0 Hz，2H)，7·84 (d.〇 Hz， 2H)，9.03 (s，1H)，10.76 (s，1H)· MS (ESI): 407 (Ivf+Na)，385 (VT)·分析(Ci6H2〇N2〇7 S · 0.25 H20) C，H，N. N，9-羥基-2-[(4-曱氧苯基)續醯基]-6，1〇-二冬2_吖螺[4习癸烷-职)_ 胺（24) ·依上述方法製備標題化合物，產物經逆相製備性班I。 (80A20B，A，95%水，5%乙腈，〇.1%甲酸：b，20%水，8〇%乙腈：Waters SymmetryPrep C〗8管柱）純化，產生〇 45克（58%)標題化合物之白色泡沫固體。也驗卩1似〇_成）§1.92_2.31(111，411)，2勢 3.13 (m，2H)，3.22-3.52 (m，2H)，3.68-3.90 (m，2H)，3.95 (s，3H)，4.98 (dd， J - 14.2, 4.5 Hz, 1H)? 7.12-7.18 (m, 2H)5 7.78-7.88 (m? 2H)? 9.03 (s5 1H). MS (ESI): 406 (MVNH3)，389 (Ivf). HRMS C15H21N208 S (MtT)計算值 389.1019,實測值 389.1014. N-起基-2_[(4-甲氧苯基)續g篮基]各(苯基甲氧基)_6，1〇_二。号_2_0 丫螺 [4.5]癸k-3(R)-^gi胺（25) ·依上述方法製備標題化合物，產物經逆相製備性HPLC (60A40B，A，95%水，5%乙腈，〇 1%甲酸；B， 20%水，80%乙腈；Waters SymmetryPrep Ci8 管柱）純化，產生〇 42 U:\TYPE\WCK\WAU\B\49293* 1 SUP.DOC -18- 克（54%)標題化合物之白色泡沫狀固體。W-NMR (DMSO-為）δ 1.92-2.03 (m，1Η)，2.10-2.21 (m，1Η)，3.17-3.36 (m，3Η)，3.44-3.58 (m， 2H)，3.64-3.72 (m5 1H)，3.82-3.92 (m5 2H)，3.86 (s5 3H)，4.22-4.51 (m， 2H)，7.14 (d5 ·/ = 9.0 Hz，2H)，7.27-7.40 (m5 5H)，7.82 (d，J 二 9.0 Hz，2H)， 9.01 (s，1H)，10.73 (s5 1H)· MS (ESI): 510 (Nf+Na)，479 (Nf).分析 (C22H26N2〇8S · 0.25 H2〇）C5 H，N. N-經基-2-[(4-甲氧苯基)磺醯基]-8，8-二乙基-6，10-二呤-2-吖螺 [5.4]癸烷-3(R)-瘦醯胺（26):依上述方法製備標題化合物。1h_nMR (DMSO-^6) δ 10.75 (s5 1H), 9.02 (s? 1H)5 7.83 (d? J - 8.9? 2H), 7.13 (d3 J 8.9, 2H)，3.86 (s，3H)，3.83 (m，1H)，3.61-3.02 (m，6H)，2.06 (m5 1H)， 2.01 (m，1HX 1.34 (m，2H)，1.12 (m，2H)，〇·67 (m，6H). 13C-NMR (DMSO〇 δ 167.61，163.14，130.26，128.96，114.56，104.26，69.72, 68¾ 58.10, 56.09, 52.80, 34.41，23.05, 22.25, 7.37, 6.88. MS (ESI): 429 (IVT)，分析（C19H28N207S · 0.33 H2〇）C5 H，N N-經基-2-[(4-甲氧苯基)續醯基H，8_二曱基，1〇_二今2_口丫螺 [4.5]癸燒-3(Rm醯胺（27):依上述方法製備標題化合物。產物經逆相製備性飢C，備’ A ’ 95%水，5%乙腈，〇 1%甲酸;b， 2〇〇/。水，80%乙腈；Waters SymmetryPrep Ci8 管柱）純化，產生〇 n 克（34%)所需化合物之白色泡沫狀固體。也歷（dms〇_糾 0.73 (s, 3H)，〇.88 (s，3H)，W (m，1H)，2抓2 18 ㈣，ih), 2別 @ ^Π,Ηζ1Η),3.10((1,,= Π,Ηζ,1ΗΧ3.22(ά?</=11.7Ηζ5ΐΗ) 3-31-3.38 (m, 2Η), 3.80-3.92 (m, 2H), 3.86 (s, 3Ηχ ?,〇 (d； 9 〇 Hz U:\TYPE\WCK\WAU\B\49293-1 SUP.DOC -19- 581761 2H)，7.82 (d，J = 9·0 Hz，2H)，9·02 (s5 1Η)，1〇·76 (s5 1Η)· MS (ESI): 418 (ΙνΓ+ΝΗ3)，401 (NT).分析(Ci7H24N2〇7 S) C，H，N. N-羥基_8-[(4-甲氧苯基)磺醯基l·5，11-二呤各吖螺[2.2.4.2]十二碳烷-9(R)-羧醯胺（28) ··依上述方法製備標題化合物，產物與乙腈碾磨純4匕。(DMSO-成）δ 10.50 (s5 1H)，8.75 (s，1H)，7·57 (d5 J = 8.8, 2H)，6.84 (d，J = 8.8, 2H)，3·62 (m，1H)，3.58 (s，3H)，3.44 (m，1Η)， 3.14 (m，1H)，3.04 (m5 3H)，2.64 (m，2H)，1.95 (m5 1H)，1.74 (m，1H)， 0.10 (m5 4H). 13C-NMR (DMSO-^6) δ 167.87, 163.43, 130.55, 129.27, 114.91，104.38, 69.92, 67.90, 58.43, 56.40, 53.39, 17.63, 10.91，7·64. MS (ESI)·· 399 (M^).分析（CnH22N2〇7S) C5 H，N. N-羧基-2_[(4-甲氧苯基)續S盘基]四口号_2_口丫螺μ 2 5 2 ]十五碳烧-3(R)-叛g&胺（29) ··依上述方法製備標題化合物，產物經逆相層析（Waters Symmetry C18)使用 40%八（95%水，5%乙腈，0.1%甲酸) 與60% B (20%水，80%乙腈）之溶劑系統純化。iH-NMR (CDCl3) δ 7.90 (d，J 二 7·9, 2Η)，6.99 (d，J = 7.9, 2Η)，4·35 (t，J = 7·9, Η), 3.85 (s， 3H)，3.61 (m，10H)，2.29 (m，2H)，1.25 (m，2H). 13C-NMR (CDC13) δ 172.36, 163.32, 129.97, 114.39, 104.84, 65.64, 64.27, 60.58, 59.36, 55.86, 54.57, 52.73, 40.92, 39.29, 21.41，14·4〇· MS (ESI): 455 (的，462 (Nf +NH3).分析（C18H24N2〇9S) C，H，N. N-減-7_[(4-乙氧苯基)續紅，_7_口、闲4 4]壬^8(R)邊酶月文（32) ·依上逑万法製備標題化合物。也液^ (cD3〇D) s 7 81 (d， ·/ 二 8.6, 2H)，7.12 (d，J = 8.6, 2H)，4·13 (m，3H)，3·86 (m5 2H)，3·74 (m， U:\TYPE\WCK\WAU\B\49293-1SUP.DOC -20 - 581761 2H)，3.22 (m，2H)，2.18 (m，1H)，2 Q3 (瓜，ih)，丨 45 & a 6 % 犯)13〇_ NMR (OMSOd6) δ 167.60, 162.405 130.24, 128.58, 114.94, 111.96, 64·99, 64·01，58·55, 54·91，K8〇· MS (ESI): 373 (M+)•分析 (C15H20N2O7S · 0.67 H20) C Η N N歹工基7 [(4丙氧苯基)績醯·]缸今㈣[4 4]壬燒華)邊醯 Eic (33) 〇 iH-NMR (DMS〇^6) δ ι〇 76 (s5 1ΗΧ 9.02 (s? IK), 7.79 j ^ 8 2h^ ^ i〇 ^ ^ ^ §4 〇4 ^ 2H), 3.92 3.59 (m，4H)，1·98 (m，2H)，182 _，況)，i Q9 (〖，j = 7 3, 3h) C NMR (DMSO 句 δ 167.60, 162.61，130.24, 128.58, 114.98, 111.97, 69.83, 64.99, 64.00, 58.56, 54.91，22.21，10.67· MS (ESI): 387 (Nf).分析（Q6H22N2Q7S · 0.5 H2〇) c Η N N焱基7 [(4兴丁氧苯基掩酉蝴仏工口号口丫螺p j]壬燒j⑻遗 H (34)依上逑方法製備標題化合物。§ $ i8 & 1H)? 7.95 (d5 J 8.9, 2H)3 7.27 (d5 J =： 8.9, 2H), 4.05-3.80 (m? 6H)5 3.43 K 3H)3 2.03 (m5 3HX U5 (d? j ^ 6 ^ 6H)) § 167·5〇, 162·%，13”3,⑽风丨28 6〇, lls 5〇, U2 35, 7信，65 ⑻， 64.00，58.55，54.92，27.99，19·30. MS (ESI)· 401 (NT)·分析 (C17H24N2O7S · 0.67 H20) C Η N N-減-7-[(4-丁氧丰基)續酉叫认二口号^丫螺間壬垸華)__ 月文〇5) ·依上逑方法製備標題化合物。產物經朋^層析，使用 5〇% A與5〇% B純化。收量為！ 5克。1η·^ (〇卿§ 7.83 (d，J - 8.2, 2H)，7.10 (d，j = 8 2, 2H)，4 8 & 2H)，4 12 ㈣ 3h)， U:\TYPE\WCK\WAU\B\49293-1SUP.DOC -21 - 3.83 (m，4H)，2·19 (m5 1H)，2.04 (m，1HX 1·82 (m，2H)，1.53 (m5 2HX 1-02 (m，3H)· 13C-NMR (CDC13) δ 170.51，164.72, 131.33, 129.03, 115.90, 113.42, 69.38, 65.64, 60.67, 56.00, 40.21，32.30, 20.27, 14.19.分析（CnHw^C^S · 0.33 H2〇)C5 H，N. N-羥基-7-[(4_甲氧苯基)績醯基；μ，4_二崎_7_吖螺[4.4]壬烷-8(R)-羧醯胺（36):依上述方法製備標題化合物。W-NMR (CDC13) δ 7.75 (4J =8.7? 2H)? 7.42 (d? J = 8.7, 2H)5 3.91 (m? 1H)? 3.70 (m5 4H)? 2.39 (s? 3H)? L98 (m，4H). 13C，NMR (CDC13) δ 167.20, 143.90, 134.23, 129.91， 129.02, 112.27, 111.93, 65.00, 63.99, 58.53, 54.92, 21.37· MS (ESI): 343 (Ivf)分析（C14H18N2〇6S · 0·33 H2〇）C，H，N. N-羥基-H[(4-(2-甲氧乙氧基)苯基)磺醯基]_i，4-二吟》7-吖螺[4.4]壬烷-8(R)-叛醯胺（37):依上述方法製備標題化合物。產物經hplc層析，使用 5〇%A 與 5〇%B 純化。iH-NMRpMSO-OS 10.89(s，1H)， 9.02 (s，1H)，7.78 (d，J = 8.8, 2HX 7·06 (d5 J = 8.8, 2H)，4.23 (m，2H)， 3.86 (m，1H)，3.70 (m，4H)，3.28 (m，7H)，1.99 (m，2H)· MS (ESI): 403 (IVT).分析（C〗6H22N2〇8S · H20) C，H，N. N-藉基；[(4-溴苯基)磺醯基]-i，4-二吟：吖螺[4.4]壬烷-δ (R)_幾醯胺（38):依上述方法製備標題化合物，產物經HPLC層析，使用 50% A 與 50% B 純化。bNMR (DMS〇〇 δ MS (ESI): (M4*).分析 (C13H15BrN206S · 0.8H2〇）C，H，N. N-幾基冬[(4_甲氧苯基)磺醯基]-1，4_二嘮吖螺[4.4]壬烷-8 (R)-幾醯胺（39):依上述方法製備標題化合物，產物經矽膠急驟層析純化 U:\TYPE\WCK\WAU\B\49293-1 SUP.DOC -22- (5% CHsOH/a^a2)，產生0.21克（59%)標題化合物之白色泡沫狀固體。1H-NMR (DMSO-成）δ 1.97-2.08 (m，2 H)，3.23 (m，2H)，3.52-3.61 (m5 1H), 3.62-3.81 (m5 3H)? 3.82-3.93 (m5 1H), 7.08 (m5 4H)? 7.20-7.28 (m，1H)，7.41-7.52 (m，2H)，7.84 (d5 8·9 Hz，2H)，9.02 (s，1H)，10.77 (s，1H)· MS (ESI): 438 (ΝΓ+ΝΗ3)5 421 (ΜΓ).分析（C19H20N2〇7S · 0.5H2〇)C，H，N· N-經基-7-[(4-(〇比淀_4-基)氧)苯基績醯基)-i，4_二u号口丫螺[4.4]壬貌-8(R)-瘦酿胺（40):依上述方法製備標題化合物，產物經HpLc層析，使用 50% A 與 50% B 純化。iH-NMR (DMS〇〇 δ 9·03 (s，1H)， 8.62 (d5 J = 5.0, 2H)5 7.96 (d5 J = 8.85 2H)? 7.36 (d? J = 8.85 2H)? 7.02 (d5 «7 = 5,0, 2H)，3.96 (m，1H)，3·83 (m，4H)，3.61 (m，1H)，3.42 (m5 1H)，2.03 (m，2H). C-NMR (DMS〇-<i6) δ 167.60, 163.29, 158.01，152.72 133 57 130.76, 120.93, 113.26, 111.88, 65.14, 64.00, 58.49, 54.78· MS (ESI): 422 (Nf).分析（C18H〗9N3〇7S) C，H，N. N-羥基各[(4-乙氧苯基)續醯基]-1，5_二+8-吖螺[4习癸烷-9(R)邊酿胺（41) ··依上述方法製備標題化合物，產物經HpLc層析，使用 50% A 與 50% B 純化。iH-NMR (DMS〇〇 δ 10.92 (s，1H)，9.02 (s， 1Η)，7.80 (d，J = 8.8, 2Η)，7·06 (d，J = 8.8, 2ΗΧ 4.06 (m5 2Η)，3.91-3.70 (m，4H)，3.43 (m，4H)，2·20 (m，1H)，1.96 (m，1H)，1.65 (m，1H)，1.33 (m5 3H)· 13C-NMR (DMS〇〇 δ 167.60, 162.41，130.23, 128.75, 114.94, 104.15, 64.10, 62.71，60.72, 58.08, 53·14· 24.97, 14.78. MS (ESI)·· 387 (Nf)·分析（C16H22N2〇7S · 〇.67H2〇）C，N，H. U:\TYPE\WCK\WAlAB\49293-1 SUP.DOC -23 - N_羧基各[(4_丙氧苯基)磺醯基H，5〇号各，丫螺Μ]癸燒_9(r)_致醯胺（42) ·依上述方法製備標題化合物，產物經hplc層析，使用 50% A 與 50% B 純化。(DMSO-怂）δ 10.90 (s，1H)，9 〇2 (s 1Η)，7.80 (d，J = 8·8, 2H)，7·〇6 (d，J = 8.8, 2H)，4.08 (m，2H)，3 8〇 (m， 4H)，3.33 (m，2H)，2.24 (m，IH)，2.05 (m, 1H)，1.82 (m5 2H)，1·7〇 (m，1H)· 1.54 (m? 1HX L04 (m5 3H). 13C-NMR (DMSO-^6) δ 167.65 162 57 130.22, 128.75, 114.98, 103.90, 69.84, 62.71，60.73, 58.08, 53.16 % 97 22.2〇, 10.64· MS (ESI): 4〇l (ivf)分析（CnH24N2〇?S) C5 H，N N-羥基各[(4-丁氧苯基)續醯基]·丨，5-^号_8_吖螺[4习癸烷_9(R)_複酿胺（43) ·依上述方法製備標題化合物，產物經逆相製備性hplc (40A60B，A，95% 水，5% 乙腈，0.1% 甲酸；B，20% 水，80% 乙腈；Waters Sy_etryPrep C】8管柱）純化，產生0.25克（31%)標題化合物之白色泡沫狀固體。iH-NMR (DMS〇〇 δ 0.94 (t5 J = 7 4 Hz 3H)，1.28-1.44 (m，3H)，1.46-1.61 (m5 1H)，1.61-1.78 (m，2H)，1 88-1 99 (m，1H)，2.08-2.20 (m，1H)，3.22 (d，J = 10.8 Hz，1H)，3.26-3.42 (m 2H) 3.61-3.89 (m? 4H)5 4.06 (t5 J - 6.4 Hz? 3H)? 7.12 (d5 J ^ 9.〇 Hz5 2H) 7 80 (d，J = 9.0 Hz, 2H)，9.01 (s，1H)，10.73 (s，1H). MS (ESI): 432 (ΜΤ+ΝΗ3)5 415 (IVT).分析（C18H26N2〇7S) C，H，N. N邊基冬[(4-甲苯基)磺醯基]-:^二吟冬吖螺⑷习癸烷^⑻-叛酿胺 (44):依上述方法製備標題化合物，產物經逆相製備性 (40A60B，A，95% 水，5% 乙腈，0.1% 甲酸；B，2〇〇/。水，80% 乙腈；Waters SymmetryPrep C1S管柱）純化，產生白色固體產物。1h_ U:\TYPE\WCK\WAU\B\49293-1 SUP.DOC -24- NMR (DMS〇.^6) δ 1〇 8〇 1 Ηχ ? ?6 ^ = 8 ^ 2H)^ 7^ ^ ^ ^ ^ 2H)5 3.70 (m5 4HX 3.18 (m? 3Ηχ 2 38 3Ηχ 2 3〇 i ^ ^ 159 (m，1H)，133 K 1H)· 13C_NMR (DMSO-成）δ 169风 145 83, 136·29, 131.85, Ι29·9λ 105.8M4.68, 62.65, 6a⑻，55Ό4, 26.9Q5 23.29. MS (ESI)·· 357 (W).分析(C15H2()N206S · G.75H20) C5 H，N. N-經基-8俗兩笨基)續醯基H，5_)号如丫螺[4.5]癸垸傅 ()衣C方去製備標題化合物，產物經HPLC層析，使用5〇% a 與 5〇% B 純化。1扣龜(DMSO-為）δ 10.77 (s，1H)，9.03 (br s，1H)， 7.79 (d? J = 8.35 2H)5 7.42 (d? J = 8.3, 2H)? 3.86 (m5 2H)? 3.70 (m5 2H)5 3.28 (m5 4HX 2.65 (ζ j ^ ? ^ 2Ηχ 213 m)? 2 93 = n ^ 1H)，169 ㈣ 3H)，124 (m，2H)，G.88 (t5 J = 7.5, 3H)· 13C-NMR (DMSO-句 δ 167.6〇5 148 27, 134 52, 129 35, 128 〇6, l〇3 %，62 % 60.63, 58.04? 52.98, 37.26, 24.96, 22.25, 14.24. MS (ESI)： 385 (MT). N-每基-8-[(4-戊笨基)磺醯基]4,5_二，各吖螺[4习癸烷_9(r)_叛醯胺 (46) ·依上述万法製備標題化合物，產物經册^^層析，使用5〇% a 與 50% B 純化。1h_NMR (DMSO, δ 10.78 (s，1H)，9.03 (bi· s，1H)， 7·79 (d，7 = 8.3, 2H)，7.42 (d，7 = 8.2, 2H)，3.90 (m，2H)，3.77 (m5 2H)， 3.24 (m5 4H)5 2.67 (ty j = 7 5? 2H)? 2.18 (m? 1H), 1.91 (m? 1H)? 1.59 (m, 2H)，L27 (m，4H)，Ο·% (t，·/ = 7丄 3H). 13C-NMR (DMS〇〇 δ 165.70, 148.50，134.52. 129.30，128.08，127.84，104.23, 62.74, 61.09, 58.04, 52.96, 35·18, 31.05, 30.63, 24.93, 22.26, 21.74, 14.24. MS (ESI): 413 (IVT). U:\TYPE\WCK\WAU\B\49293-1SUP.DOC -25- 581761 N-經基-2-[[4-(2-甲氧乙氧基)苯基]續醯基]_6，10_二。号冬吖螺[4习癸燒-3(R)-叛St胺（47):依上述方法製備標題化合物，產物經逆相製備性 HPLC (40A60B，A，95〇/〇水，5%乙腈，〇.1% 甲酸；B，2〇% 水，8〇%乙腈；Waters SymmetryPrep C〗8，管柱）純化，產生白色泡沫狀固體產物。iH_NMR (DMS〇〇 δ 10.75 (s，1HX OS (s，1H) 7.74 (d，J = 8.8, 2H)，7.03 (d5J = 8.8, 2H)，4·08 (m，2H)，3.77 (m，iH)5 3·60 (m，4H)，3.22 (m，7H)，2.03 (m5 1H)，1.90 (m5 1H)，1.68 (m，1H)， 1.30 (m5 1H). MS (ESI): 417 (MT). N-岁技各[4”臭苯基]磺醯基]]，5_二，各口丫螺p习癸燒_9(r)_幾醯胺 (48):依上述方法製備標題化合物，產物經層析，使用％% a 與 50% B 純化。(DMS〇w6) δ 1102 (s，m)5 7 77 (m，4H)， 3.88 (m，1H)，3.79 (m，2H)，3.39 (m5 3H)，2.30 (m，1H)，1.98 (m5 1HX 1.55 (m，m)，1.40 (m，1H) 13〇_證（DMS(M) § 167 6〇, i36 6i， 132.68, 129.94, 127.49, 103.79^ 62.8〇5 60.70, 57.97, 52.20, 24.95. MS (ESI): 422 (IvT). ^ (Ci4H17BrN206S) C? H? N. N ^基8 [4苯氧苯基]續酸基]el，5_二今&丫螺[4 5]癸燒_职)-叛醯胺（49)依上述方法製備標題化合物，產物經迎層析，使用 5〇% A 與 5〇% B 純化。(DMS〇4) s 1〇 % & 邱，9 〇冰 1HX 7.92 (d5 J = 8.85 7.49 (m5 2H)5 7.25 (m5 1H)? 7.08 (d5 J = 8.8? 2H)? 3.90 (m，2H)，3.80 (m，2H)，3 % (m，2H)5 3 3〇 (m，m)，2 % ㈣，m乂 1.98 (m，1H)，1.62 (m，邱，148 (m，m) (DMS〇〇 j 167.60, 161.35, 155.26, i3L27? 130.80, 130.55, 125.31, 120.34, 117.91, U:\TYPE\WCK\WAU\B\49293-1 SUP.DOC -26- 581761 103.84, 62.77, 60.73, 58.08, 53.16, 25·〇〇. MS (ESI): 435 (MT)·分析 (C20H22N2O7S · 0·67Η2Ο) C5 Η，Ν. Ν-經基各[[4-(4_氟苯氧基)苯基]磺醯基号如丫螺μ习癸燒_ 9(R)-羧醯胺（50):依上述方法製備標題化合物，產物經hplc層析，使用 50% A 與 50% B 純化。(DMS〇〇 § 1〇 9〇 (s，j Η)，7·93 (m，2H)，7·37 (m，3H)，7·20 (m，3H)，7 10 (m，2H)，3 8〇-3 22 (如 8H)5 2.23 (m? 1H), 1.62 (m5 1H), 1.45 (m? m). 13C-NMR (DMS0^6) δ 167.50, 161.62, 151.18, 131.26, 130.56, 122.55, 122.44, 117.50, 117.25 i〇3.83, 62.8〇, 6〇·72,58·〇7,53·ΐ3, 2s 〇〇 MS (ESI): 435 ⑽)分析 (C20H21FN2O7S · H20) C5 H，Ν. N-羥基_2_[4·㈣淀冰基)氧)苯磺醯基]_6，二哼冬吖螺[45]癸燒、 3(R)-羧醯胺（51) ·依上逑方法製備標題化合物，產物經逆相製備性 HPLC (40A60B，A，95% 水，5% 乙腊，〇 1% 甲酸；B，2〇% 水， 80%乙腈；Waters SymmetxyPrep &管柱)純化，產生白色泡朱狀固體產物。H-NMR (DMS〇〇 δ 1〇 S1 (s，m)，9 〇6 (s，m)，g π (历 2H), 7.99 (d5 J = 8.95 2H)5 7.40 (d5 j ^ 8 ^ ? 〇5 ^ ^ 3 92 ^ 2H)，3.76 (m，2H)，3.28 (m，3H)，2.22 (m，1H)，196 (m，1H)，156 (m 1H) 1.40 (m? 1H). MS (ESI): 436 (^). (〇1^^3〇73 . 〇 75^ Q N. N-獲基-2| 丁氧苯基)销基Ku〇f々丫螺[a]十一碳燒_ 聊叛醯胺（58):依上述方法製備標題化合物，產物經肌c声析，使用5G% A與5Q% B純化。丨乐職(DMSM6)請％ & m)， U:\TYPE\WCK\WAU\B\49293-1 SUP.DOC '27- 581761 9.00 (br s5 1HX 7.78 (d5 J = 8.8, 2H)5 7.n (d5 J = 8.8, 2H)5 4.05 (m? 2H), 3.84 (m5 1H)3 3.65-3.10 (m? 7H)5 2.82 1H)? 2.03 (m5 1H)? 1.85 (m, 1H)? 1.68 (m，2H)，1.38 (m，6H)，a93 (t山 7 5, 3H)13C-NMR (DMS〇㈤ δ 167.5, 162.48, 130.29, 128.75, 115.0^ m g9^ 68 〇7? 64 56^ 62 91? 59>〇4? 54.53, 30.81，29.08, 28.98, 18.97, 13 % MS (ESI): 429 (Nf)·分析 (C19H28N207S · 0·5Η2〇）C，H，N. N-羥基-2’苯氧苯基)續醯旬灿·二+2_ 口丫螺[46]十一魏_ 胺（59) ·依上述方法製備標題化合物，產物經層鲁析，使用50% A與50% B純]匕。丸麵^ (DMS〇〇 δ 10.75 (s，1H)， 9.03 (br s5 1H)5 7.88 (d3 J = 8.9? 2H), 7.48 (m? 2H)? 7.26 (m5 1H)? 7.13 (m? 4H)，3.85 (dd，h 7.4, 9.6, 1H)，3.67·3.20 (m5 7H)，2.88 (m，1H)· 2.20 (m， 1H)，1.83 (dd，J = 10.5, 12.2, 1H)· 1,39 (m，4H) (DMS〇〇 δ 167.60· 161.22, 155.41，131.38, 130.79, 125.26, 120.22, 118.10, 106.96， 64.67，63.00，59.03，54.57，29.08. MS (ESI): 449 (Ivf).分析 (C21H24N2〇7S · 0.5H2〇）C5 H，N. N-經基-2_[(4_丁氧苯基)磺醯基]_6，11_二卞2_吖螺[4习癸燒_职)，9 _ (R)-二甲基-3(R)-羧醯胺（60):依上述方法製備標題化合物，產物經逆相層析（Waters Symmetry C18)，使用 40% A (95% 水，5。/0 乙腈， 0.1%甲酸）與60% B (2〇%水，S0%乙腈）之溶劑系統純化。 ^-NMR (CDCI3) δ 7.89 (d, J = 8.3, 2H)? 7.03 (d5 J -= 8.3, 2H) 4 87 (s 1H)，4.19 (m，4H)，3.94 (m，3H)，3.76 (m，2H)，3.33 (m，1H)，2.21 (m，1H) 1.81 (m，2H)，1.53 (m，3H)，1.20 (m，3H)，1.08 0.98 (m 3H) U:\TYPE\WCK\WAIAB\49293-1 SUP.DOC -28- 581761 C-NMR (CDC13) δ 166.53, 162.51, 130.27, 114.60, 104.79, 68.09, 65.23, 63.73, 59.65, 56.95, 39.17, 38,86, 31.06, 20.51，19.04, 12.91. MS (ESI): 443 (IVT).分析（C2〇H3〇N2〇7S · 0·67Η2〇）c Η Ν N噏基·7-[(4-丁氧苯基)續醯基]-2(R)，3(R)c甲基―认工今7_吖螺 [4.4]壬烷-8(R)-羧醯胺（61):依上述方法製備標題化合物，產物經矽膠急騾層析純化（CHsCWCHsOH，95:5)，產生〇 95克（69%)標題化合物之白色泡沫狀固體。iH-NMR (CDC13) δ 0.84-0.98 (m，6H)，1.13 (d? J = 5.9 Hz5 3HX 1.38-1.50 (m5 2H)? 1.65-.179 (m5 2H)? 2.0 (d5 J ^ 8.5 Hz，2H)，3.21-3.41 (m，3H)，3.44-3.58 (m，1H)，3.65 (t，J = 7.7 Hz，1H)， 4.02-4.13 (m5 2H), 7.08 (d5 J = 9.0 Hz? 2H)5 7.79 (d5 J = 9.0 Hz? 2H)5 9.02 (s，1H)，10.77 (s，1H). MS (ESI): 451 (IVT+Na)，429 (IVT)·分析 (C19H28N207S · 0·25 H20) C，H，N. N-輕基-2_[(4-丁氧苯基)磺醯基]二乙基_6，1〇^α号J—吖螺[4习癸烷-3(R)-致醯胺（62):依上述方法製備標題化合物，產物經hplC層析，使用 50%A 與 50%B 純化。iH-NMR (DMS〇-d6) δ 10.49 (s，1H)， 9·84 (br s，1Η)，7.56 (d5 J = 8.9, 2Η)，6.87 (d，J = 8.9, 2Η)，3.83 (dt，J = 1.4, 6.4, 2H), 3.62 (m，2H)，3.30-2.70 (m，8H)，1.87 (m，1H)，1.74 (m5 1H)， L48 (m，2H)，U8 (m，4H)，0.87 (m，2H)5 0.68 (t，J = 7.3, 3H)，0.41 (m， 6H)· 13C-NMR (DMS〇-d6) δ 167.70, 162.58, 130.26, 128.73, 114.99, 103.97, 69.74, 68.20, 68.04, 58.10, 52.70, 34.40, 30.78, 23.04, 22.23, 18.98, 13.97, 7.35, 6.85. MS (ESI): 471 (Ivf).分析（C22H34N2〇7S · 0·5 H20)C，H，N. U:\TYPE\WCK\WAU\B\49293-1 SUP.DOC -29- 1每基-2-[(4-苯氧苯基)續醯基]二乙基_6，1〇-二螺[4 5]癸烷-3(R)-羧醯胺（63)··依上述方法製備標題化合物，產物經層析，使用5〇%A與5〇%B純化。(鹽处山）δ 1〇 77扣& 1H)，7·85 (m，2H)，7.49 (dm，2H)，7.26 (m，ih)5 7.12 (m，4HX 3.83 (m， 1H)，3.62-2.94 (m，4HX 2·22_1·98 (m，2H)，i 32 ㈣，2H)，} 〇7 ⑽ 2H)， 0.75 (m，6H)· 13C-NMR (DMSO-d6) δ 173 5〇 J67.72, 161.34, 155.35, 131.53, 130.61，130.39, 125.32, 12Q.36 m 99, 1G4 37, 1Q3 89 Ms (ESI): 491 (K/T). N-羥基-2_[(4-丁氧苯基)磺醯基]_8,8_二甲基_6，1〇二今2_吖螺[4习癸烷-3(R)-羧醯胺（64):依上述方法製備標題化合物，產物經矽膠急驟層析純化（a^Cb/EtOAc，1:1)，產生〇 46克（47%)標題化合物之白色泡沫狀EH hNMR (DMSad6) δ 0.77 (s，3H)，G.90 (s，3H)，0.99 (t5 J - 6.3 Hz? 1HX 1.39-1.52 (m? 2H)5 1.66-1.79 (m5 2H)? 1.97-2.02 (m5 1H)，2.10-2.19 (m，1H)，2.92 (d，·/= iq 4 Hz，1H)，3 1〇 (t，j = 1〇 4 出， 1H)，3.22 (d，J = 10·5 Hz，1H)，3抓3 % (m，2H)，4Ό0-4.08 (m5 2H)， 7.12 (d，J = 9.0 Hz，2H)，7.81 (d，J =9〇 Hz，2H)，9 〇〇 & m)，1〇 72 & 1H). MS (ESI): 460 (仏蘭3)，443 ⑽分析（C2qH3〇N2〇7S · 〇 5 H2〇) C5 H，Ν· N-經基各[(4-苯氧苯基)續醯基]_5511-二口号各口丫螺p 2 j习十二碳燒- 9(R)_羧醞胺（6习：依上述方法製備標題化合物，產物與乙腈碾磨純化。1H-NMR (DMSOd6) δ 10.51 (s，1H)，8 76 (s，1H)，7 63 (d，8 8, 2H), 7.22 (m5 2H)? 7.01 (m5 1H)5 6.83 3H), 3.63 (m5 2H)5 3.40 (m, 1H)? U:\TYPE\WCK\WAU\B\49293* 1 SUP.DOC -3〇. 3.03 (m，4H)，2.64 (m，1H)，2·〇2 (m，m)，i 74 (m，m)，q 1〇扣，呵 13C-N· (DMSO-d6) δ 167.76, i6l 66, 155 64, 131 63, 131 〇7, 125.62, 120.65, 118.32, 104.33, 69.96, 67.93, 58.47, 53.35, 17.62, l〇 95 7.70. MS(ESI):461(MV分析（C22H24N2〇7S)C，H，N· ，… N-羥基各[(4-丁氧苯基)績醯基]，55ΐ1〇号各口丫螺p 2 4 2]十二碳燒_ 9(R)-羧醯胺（66):依上述方法製備標題化合物，產物與乙腊環磨純化。1H-NMR (DMSO-d6) δ 1〇·5ι (s，m)，g % (s，m)，7 55 (d，^ 8 * 2H)5 6.83 (d5 8.4, 2H)5 3.85 (m5 2H)5 3.63 (m? 2H)? 3.40 (m? 1H)5 3.06 (m，4H)，2.64 (m，1H)，1.98 (m，1H)，ι·79 (m，1H)，i.42 (m，2H)，l,〇4 (m， 2H)，0.60 (t，7.1，3H)，0.10 (m，4H) i3C-NMR (DMS〇-d6) § 167 87, 162.88, 130.55, 129.08, 115.32, 104.41，69.89, 68,39, 67.94, 58.46, 53.41， 31.17, 19.32, 17.62, 14.33, 10.90, 7.67· MS (ESI): 441 (Ivf)·分析 (C20H28N2O7S) C, H? N. 6’-(14咯啶基)螺(環己烷-2,5，(6，H)_[4H_U卜号畊1羧酸乙酯：取 1-(環亞己基甲基比咯啶（9.0克，54.4毫莫耳）之THF (100毫升）溶液於室溫下攪拌，以15分鐘時間分批添加3-溴-2-經亞胺丙酸乙醋 44(12.2克，57.7毫莫耳，ΐ·〇6當量）。反應混合物轉呈溫熱，所得混合物於室溫下攪拌30分鐘，然後添加三乙胺（5.9克，58.3毫莫耳， 1.07當量）。反應混合物再次轉呈溫熱，所得溶液再於室溫下攪掉2 小時。加水（100毫升）稀釋反應混合物，以乙酸乙酯萃取。有機萃液脫水（NaJCU)，減壓濃縮成油。此油經矽膠使用85/15己烷/EtOAc 為溶離液層析純化。得到淺黃色油產物（6.2克，39%)。 ]H-NMR U:\TYPE\WCK\WAU\B\49293.1 SUP.DOC -31- 581761 (CDC13) δ 7.71 (d5 8.6, 2H)，6·88 (d，/= 8.6, 2H)，5·83 (d，J二 11，lti) 3.78 (s5 3H)5 3.77 (m5 1H)? 3.63 (br m5 2H)? 3.38 (s5 3H)5 2.75 (br m, 2H) 2.42 (br s5 1H)，1.38 (S，6H)· 13C-NMR(CDC13) δ 170.17, 162.86, l3〇 71 129.29, 113.91，63.57, 61.14, 55.46, 51.99, 46.70, 31.53, 26.31，26.03 MS (ESI): 295 (Ivf). 2-口丫螺[4.5]癸烷-3遵酸乙酯··取含噚畊（20克，6 8毫莫耳）之乙醇（1〇〇毫升）置於含阮來鎳（Aldrich, W-2, 2克）之帕爾（paix)瓶中。反應混合物置於氫蒙氣（3〇psi)下，振盪至停止吸收氫氣止。反應混合物經夫式鹽過滤，濃縮成淺色油（收量：全收量）。不再純化。1]^- NMR (CDC13) δ 7.61 (d，8.6, 2H)，6·92 (d，8·6, 2H)，4.38 (s，1H)， 4·01 (m，1H)，3.83 (s，3H)，3.72 (dt，A = 2.9, 12.5, 1H)，3.39 (s，3H)，3.10 (dt, Jd = 3. Jt = 13, 1H)5 2.42 (m, 1H)5 1.59 (s5 3H)? 1.24 (s, 3H). 13C- NMR (CDC13) δ 168.48, 162.73, 130.29, 128.92, 113.85, 62 55 55.40, 51.13, 40.94, 39.87, 28.21，27.01，24.40. MS (ESI): 212 〇f) 2N-[(4-甲氧苯基)磺醯基]冬吖螺[4.5]癸烷各羧酸乙§旨）：取含胺 (1.4克，6.6毫莫耳）之二吟烷（40毫升）與水（4〇毫升）於室溫下攪拌，然後依序添加三乙胺（2.0克，19.8毫莫耳，3當量）及4_甲氧苯磺醯氯（1.51克，7.2毫莫耳，1.1當量）。所得溶液於室溫下揽掉18 小時。以IN HC1酸化反應混合物，混合物倒入水中。以-氯甲燒萃取溶液，合併之有機萃液脫水（MgSa〇，減壓濃縮成油。油經矽膠使用8/2己烷/EtOAc為溶離層析純化。得到澄清油產物（丨乃克， 70%)，靜置時固化。WNMRCCDCb) δ 7.67 (d5 8 8, 2H) 6 91 ⑷ U:\TYP E\WCK\WAU\B\49293-1 SUP.DOC -32- 581761 〜8·8, 2H)，4·44 (s5 1H)，3.99 (m，1H)，3.81 (s，3H)，3.68 (dt5 A = 3, Λ = 12.5,识)，3.08 (dt，A = 3.6, Λ = 12.7, 1H)，2·40 (m，1H)，1·58 (s，3H)， 136 (s，3H). 13〇NMR (CDC13) δ 172.92, 162.78, 130.41，129.06, 113.91，62.75, 55.39, 40.90, 39.76, 28.39, 27.23, 24.31. 甲氧苯基)續g蠢基]-2·叶螺[4·5]癸燒各幾酸··取含乙酯（1 5 克’ 3.93毫莫耳）tTHF(10毫升）與甲醇（2〇毫升）於室溫下攪拌， 4加含氧氧化_ (2.0克）之水（20毫升）。所得溶液於室溫下撥拌18 小時。以IN HC1酸化反應混合物，混合物倒至水中。以二氯甲烷萃取溶液，合併之有機萃液脫水（NajC»4)，減壓濃縮成油。油靜置時固化成白色固體（1.32 克，95%)。iH-NMR(CDCl3)5 7.67(d，h8.8, 2HX 6.91 (d5 8.8? 2HX 4.44 (s5 1H)5 3.99 (m5 1H)5 3.81 (s5 3H)5 3.68 (dt5 Jd ^ 3. Jt = 12.5, 1H)5 3.08 (dt? Jd = 3.6. Jt = 12.7, 1H)? 2.40 (m3 1H)5 1 58 (s，3H)5 1·36 (s，3H)· 13C-NMR (CDC13) δ 172.92, 162.78, 130.41， 129.06, 113.91, 62.75, 55.39, 40.90? 39.76? 28.39, 27.235 24.31. MS (ESI)： 346 (Nf). 363 (NT+NHs). N-織-2N|曱氧苯基)翻蝴士·…]癸垸I幾酸胺⑽·· 取幾酸（ο·7克，㈣毫莫耳）之二氯甲燒（1〇毫升）溶液於室溫下授半】力草1^氯（0·52克，4 〇6毫莫耳，2 〇5當量）與〇嫌（〇 Μ 克’ I·98愛旲耳）。所得溶液於室溫下授拌3〇分鐘。在另一個燒瓶中，取含鐘鹽酸鹽㈣克，毫莫耳，4t量）之THF(10毫升) 與水（2 _於叱下授拌。添加三乙胺（1.2克，U 9毫莫耳，6备量），所得溶液於叱下授拌15分鐘。然後添力嘴基氣溶液至（rci U:\TYPE\WCK\WAU\B\49293-1 SUP.DOC -33 - 羥胺溶液中，所得溶液於室溫下攪拌一夜。以IN HC1酸化反應混合物，以二氯曱烷萃取溶液。有機萃液脫水，減壓濃縮成固體。固體自Ci^CN/HbO再結晶，產生所需產物之白色粉末（0.62 克，850/〇)。 iH-NMR (CD3〇D) δ 7.68 (d，8.8, 2H)，7.03 (d，8.8, 2H)5 4.08 (s5 1H)? 3.88 (m5 1H)5 3.86 (s? 3H)5 3.02 (m5 1H)? 2.44 (m5 1H)5 1.57 (s，3H)，1.22 (s，3H). 13C-NMR (CD3OD) δ 167·01，164.61，132.01， 130.30, 115·38, 61.01，56.14, 42·75, 40.64, 29.12, 27.27, 25.54. MS (ESI): 369 (!<)· 386 (]Vr+NH3). 4-(1-吡咯啶亞曱基)-1-旅啶叛酸_l，l_二甲基乙酯：取μ第三丁氧裝基斗哌啶羧基醛45 21c (8.3克，39.1毫莫耳）溶於150毫升苯中，添加p比洛淀（4.2克’ 58.6毫莫耳）。在反應燒瓶中加裝狄恩-史塔克收集器（Dean-Stark trap)及回流冷凝器，回流5小時。減壓排除溶劑。不再純化。1H-NMR (CDC13) δ 7.31 (s，1H)，5.68 (s5 1H)，3.32 (m，4H)， 2.96(m，5H)，2.30(m，lH)，2.07(nUH)，1.63(m，5H)，：L44(S59H).13C-NMR (CDC13) δ 155.03, 233.65, 128.53, 113.90, 79.39, 53.87, 46.19, 33.43, 28.71，25.17. MS (ESI): 267 (N〇. 6’-(l-吡咯啶基)-螺[4-第三丁氧羰基-♦啶-2,5’（6'H)-[4H_1，2>’井-3，-叛酸乙酯：取烯胺2ld (8·9克，33.17毫莫耳）溶於thF (80毫升) 中，於室溫下攪拌。以15分鐘時間分批添加3-溴！羥胺基丙酸乙酯 40 (7.42克，35.16毫莫耳，1.06當量）。溶液加溫，所得溶液於室溫下攪拌30分鐘。添加三乙胺（3.59克，35.5晕莫耳，1 當量），反應混合物再攪拌2小時。加水（100毫升）中止反應，以乙酸乙g旨萃取。 U:\TYPEWVCK\WAU\B\49293-1 SUP.DOC -34- 有機層經硫_脱水，減壓濃縮，產生油。經郷使用己燒/乙酸乙醋（3/1)為溶離液層析純化，產生澄清油。丸舰㈣^ 9 61 (s，1H)，4.72 (m，1H)，4.26 (m, 2H)，4_08 (m，1H), 3.92 (m, 2H), 3.14 (m， 2H), 2.89 (m, 5H), 2.47 (m, 2H), 1.69 (m, 4H), 1.44 (s, 9H), 1.25 (m, 2H). t_NMR 2G3 12, 163 % 147 & % 52，職錢 6〇兑 9.61，48.13, 43,02, 39.30, 34.22, 32.06, 31.71, 29.78, 28.57, 25.99, 24.78, 22.80, 14.30· MS (ESI): 396 (M4). 8料三丁氧羰基从^丫螺⑽癸燒，酸乙醋：取今井^ (2.033克，5.14毫莫耳）溶於含在帕爾瓶中之乙醇（毫升）中，然後添加阮來鎳（濕）（2.0克，當量重）。_瓶置於氫餘（4㈣下之氫化态上5小時’此期間再填充氫氣數次。卩元來鎳經寅式鹽過遽，所得混合物減壓濃縮M (ESI) : 313 (M4). 2N-[(4-甲氧苯基)續醯基]魯第三丁氧羰基^_二吖螺队5]癸烷各羧酸乙酯：取乙酯21f (1.7克，5.48毫莫耳）溶於對_二，号垸/水（1:1 , 100耄升）中’添加4-甲氧苯續醯氯（1.36克，6·6毫莫耳）與三乙胺 (1.66克’ 16.44耄莫耳）。反應混合物攪摔一夜。以in hci中止反腐並酸化，加水稀釋，以二氯甲烷萃取。有機萃液經硫酸鈉脫水，減壓濃縮。經矽膠使用己烷：乙酸乙酯（3/1)層析純化。b-NMR (CDC13) 5 7.87(d，J=8.5,2H)，7.02(d，J=8.5,2H)，4.16(m5 5H)，3.88 (s· 3H)，3·43 (m，3H)，3·11 (m，3H)，2.11 (m，4H)，1.84 (m，1H)，1.51 (m， 2H)，1.46 (s5 9H)· 13C-NMR (CDC13) 5 172.44, 129.96, 114.40, 79.96, 61.75, 60.61，59.76, 57.00, 55.86, 41.68, 34.71，33.60, 28.62, 21.27, U:\TYPE\WCK\WAU\B\49293-1 SUP.DOC -35 - 581761 14.43. MS (ESI): 483 (ivT), 500 (M^+NHs). 2N-[(4-甲氧苯基)磺醯基]第三丁氧羰基_3表二7 丫螺μ]癸燒^ 羧酸：取乙酯21g(l.〇克，2.07毫莫耳）溶於甲醇（10毫升）與丁把（5 毫升）中。添加氫氧化鋰（1.5克，過量）之水（5毫升）溶液，所得混合物攪拌1小時。以IN HC1酸代反應混合物。以二氯甲燒及水萃取反應混合物。有機層經硫酸鈉脫水及減壓濃縮，產生產物， NMR(CDC13) (5 7.86 (d5J= 8.5, 2HX 7.16 8.5, 2HX 4.89 (s? 4H) 3.91 (s，3H), 3.74 (m5 3H)，3.33 (m5 3H)，1.89 (m，3HX 1·43 (s，9H). Ms (ESI): 455 (Nf)5 472 (ivf+NHs). N-羥基-2N-[(4-曱氧苯基)續醯基]第三丁氧羰基_2表3 丫螺[4.5] 癸烷-3-羧醯胺（31):取羧酸21h (0.92克，2·02毫莫耳）溶於二氯甲坑（20耄升）中’於氮蒙氣下添加草醯氯（〇 525克，4.14亳莫耳）與 DMF (0.148克’ 1.0毫莫耳）。在另一個燒瓶中，取輕胺鹽酸鹽（ο % 克’ 8.08毫莫耳）溶於水（5毫升）中，添加THF (15毫升）。反應於冰浴中冷却’添加三乙胺（1.22毫升，12.12毫莫耳）。添加酸混合物至〇°c之羥胺溶液中。反應混合物回升至室溫，攪拌1小時，添加 HC1中和溶液。以二氯甲烷及水萃取混合物。有機層經硫酸鈉脫水，減壓;辰縮。經逆相HPLC層析（Waters Symmetry C18)，使用溶劑系統 5〇% A (95%水，5%乙腈，〇·ι〇/0甲酸）及 5〇%B (2〇%水，8〇%乙腈）純化。1H-NMR (CDC13) 5 7.82 (d，J = 8.5, 2H)，7.07 (d，·/ = 8.5, 2H)， 4.51 (s，4H)，3.89 (s，3H)，3·39 (m5 3H)，3.17 (m5 3H)，2.01 (m5 3H)，1.41 (s，9H). MS (ESI): 470 (IVT)，487 (MT+NH3). U:\TYPE\WCK\WAU\B\49293-1 SUP.DOC -36- 581761 人類重組體截短之ΜΜΡ-l之表現與純彳J2ij：〇簡言之，利用聚合酶連鎖反應，採用可自商品取得之編碼人類間質MMP-1之質體p35-l (ATCC, Rockville, MD; N. S. Templeton et al. (1990) Cancer Res. 50? 5431-543乃擴增編碼MMP-1原之Val 82-Pro 249之DNA序列。取 PCR片段枯接至表現媒體pET-lla中（Novagen，Madison，WI)，於大腸桿菌BL21 (DE3)細胞中表現。以6M尿素，0.15M NaC卜pH 7.5 自包涵體中溶出蛋白質，於50 ιώΜ Tris-HCl pH 7.5，10 mM CaCl2， 0·1 mM乙酸鋅中再摺疊，然後依先前技藝說明，經異羥肪酸抑制劑親和性管柱純化至均質上（W· A· Moore與C. A. Spilburg (1986) Bbdiemistry 25, 5189_5195)。N-末端序列分析證實含有 Val_Leu-Thr-Glu-Gly-Asn，Met-Val-Leu_Thr-Glu-Gly-Asn 及 Leu-Thr-Glu-Gly-Asn (少量）之3個N末端序列。人類重組體MMP-2原之表現與純化-自ATCC取得MMP-2之部份 cDNA純系，已知為 K-121 (Tryggvason K·，J· Biol· Chem· 265, 1990, 11〇77_11〇82)，次選殖至 pBlueScript sk· (pBS)質體中。由森格 (Sanger)二去氧序列分析法證實，K-121之5’末端已流失第一段134 bp編碼序列。為了回復流失之序列，設計並合成二個重疊之9〇_聚體寡核甞酸。使用此等寡核苷酸與3’反義寡核苷酸用為一系列聚合酶連鎖反應（PCR)實驗之K-121模板之引子，供合成全長度mmP_2 cDNA ° PCR產物次選殖至pBS中。為了在哺乳動物cH〇D-細胞系、统中表現MMP-2，首先次選殖至含有DHFR基因之哺乳動物表現媒體pJTl (J. Tmg，CRD)中。將重組體轉感染至CH〇D- U:\TYPE\WCK\WAU\B\49293-1 SUP.DOC -37- 細胞中。使用專一性寡核苷酸引子及逆轉錄PCR單離並篩選生產 MMP-2 mRNA之純系細胞族群。選拔可生產高量Mjyfpj mRNA之純系，經由逐漸提高培養基胺甲碟呤（MTX，DHFR抑制劑）濃度，來擴增DHFR/MMP-2構築體，於MMP螢光分析法（M. Anastasio, CRD) 中，於酶譜凝膠上分析MMP生物活性後，進一步縮小純系選拔範圍。取展現活性之純系，利用艾德曼（Edman)降解作用蛋白質序列分析法（F· Wang, P & GP Cell & Molecular Biology Core)及西方墨點法測試其MMP-2蛋白質生產力。根據這些結果，取一株純系於旋轉瓶中擴增生長，產生約9升含有約35毫克/升濃度之MMP-2之無血清調理培養基。依先前技藝說明之方法，但經過下列改良條件，自調理培養基中純化 MMP-2 原（T. Crabbe et al (1993)，Eur: J. Biochem. 218, 431-438)。無血清之調理培養基先經過Amicon SIY 30螺旋卡管濃縮體積後，於已先經 25 mM Tris/HCl，30 mM NaCl，10 mM CaGL pH 7·5 (TNC緩衝液）平衡之明膠-Sepharose 4B管柱上層析。以平衡緩衝液洗滌管柱後’使用含1 M NaCl之TNC缓衡液，再以含1M NaCl與10% (體積比）二甲亞砜（DMS〇）之TNC緩衝液溶離結合之蛋白質。MMP-2原溶離份於Amicon超過濾容槽中，使用YM30膜濃縮，相對於 25 mM MES/Na〇H，30 mM Naa，10 mM CaCl2，pH 6·0 (MNC緩衝液）透析。濃縮物經第二支已經過mnc緩衝液平衡之明膠-Sepharose 4B管柱層析，以平衡緩衝液洗滌排除未結合之蛋白質及以含〇·3 M NaCl及10% (體積比）DMSO之MNC緩衝液溶離。收集含有明膠酶原A之溶離份，稀釋，加至已經過緩衝液平衡 U.\TYPE\\VCK\WAU\B\49293-1 SUP.DOC -38- 之S-Sepharose快速流管柱上，以含〇 3 μ NaCl之MNC緩衝液溶離。合併純化之MMP-2原濃縮溶離份，保存在_7〇它下，含0.3 Μ NaCl之MNC緩衝液中。由Ν-末端序列-胺基酸與質譜分析證實該純化之蛋白質與明膠酶原A所期望之序列相同。人類重組體截短之MMP-3之表現與純化法〇簡言之，採用聚合酶連鎖反應，由Dr. Hideaki Nagase (堪薩斯大學醫學中心（University 〇f Kansas Medical Center, Kansas City，KS)及 Dr. Markuku Kurkinen (UMDN J-羅柏特伍德強生醫學院（UMDNJ-Robort Wood Johnson Medical School，醫學系）提供之編碼人類滑膜前MMP-3原之重組質體擴增。證明DNA序列後，取此DNA片段粘接至表現媒體pET-3d 中（Novagen，Madison，WI)，並依先前技藝所述，於大腸桿菌BL21 (DE3)中表現（Α· I· Marcy et al.5 (1991) Biochomistry 30, 6476-6483)。於8M胍-HC1中，自包涵體溶解出MMP-3原，於100 mM Tris-HCl pH 7.5, 10 mM CaCl2, 0.5 mM乙酸鋅中再摺疊，於37°C下，使用1.5 mM乙酸對一胺基苯基汞活化一夜。依文獻所述，經異經肪酸抑制劑親和性管柱純化活性之截短之MMP-3至均質性（W.A· Moore與C.A. Spilburg (1986) Biochemistry 25，5189-5195)。N-末端序列分析證實此序列與MMP-3原之催化區，Phe83，Thr 255 —致。膝原酶（MMP-1)抑制分折法。分析前，先使用胰蛋白酶處理，活化MMP-1原。依先前技藝所述36，採用螢光分析法追踪MMP-1活性。在Dynatech MicroFLUOR板中，由活化膠原酶與8μΜ Mca-ProLeu-Gly-Leu-Dpa-Ala-Arg-NH〗’於 5〇 Tris-HCl，10 mM U:\TYPE\WCK\WAU\B\49293-1 SUP.DOC -39- 581761 CaCl2，0.15M NaCl，0.05% Brij中，於37°C下，於各種不同抑制劑濃度存在下培養20-30分鐘。然後以50 mM EDTA中止、反應， Perkin-Elmer LS50B 螢光光度計（λ ex 328 nm，又 em 393 nm)追踪到其螢光提高。以相對於沒有抑制劑時之對照組活性之百分比測定活性。抑制劑濃度係測定三重覆，由單次實驗中數據之4個參數對數代入法計算IC50 〇基_質溶素（MMP-3)抑制分柝法。分析前，先以乙酸對胺基苯基汞或胰蛋白酶處理，活化MMP-3原。追踪3[H]還原之叛甲基化轉鐵蛋白之降解情形37，測定MMP-3活性，在多重篩選DP過濾板 (Millipore公司）1，lw 5〇毫微克活化之MMpj，3〇微克3同_轉鐵蛋白’及各種不同濃度之抑制劑於5〇mM Tris-Ηα，lOraM CaCl2，〇.15^4恤0’0.〇5%81^117.5之緩衝液中，於37。(3下培養3小時。添加4.4%丁CA中止反應，計算TCA可溶物片段之放射活性。以相對於沒有抑制劑時之對照組活性之百分比作為活性，抑制劑濃度係進行二重覆，以單次實驗中數據之4個參數對數代入法計算幻犯。

尾醜KMMP-13) 。根據下文有關MMP_2之代表性製程，測定對所有酵素之抑制作用。爾-2原於分析前先經lmM乙酉又對胺基苯基水，於37 ^下處理Μ分鐘活化，原經勵^ 活化（1:20, MMP-3: MMP-9)，保存在|C下直到使用時為止， MMP-7與13均王活性酵素供應，並冷祕存至使用時止。依先前文獻說月’採用螢光分析法追踪活性，但改用微滴定板模式。 U.\TYPE\\VCK\WAU\B\49293- 1 SUP.DOC -40- 在 Dynatech MicroFLUOR 板中，由活性酵素與 8//M Mca-Pro-Leu-Dpa-Ala-Arg-NH2 於 50 mM Tris-HCl pH 7.5，10 mM CaCl2，0.15M NaCl ’ 0.05% Bry中，37°C下，於各種不同濃度抑制劑存在下，培養20-30分鐘。以50 mM EDTA中止反應，以加裝微滴定板讀數機之此1〇11疋1謂：]^50 3螢光光度計（;1饮328慮，；1咖393 _)上追踪相對螢光。以相對於沒有抑制劑時之對照組活性之百分比測定活性。抑制劑▲度係進行二重覆，由單次實驗中數據之4個參數對數代入法計算IC50。适孩外勝部通逢性辞轮38。簡言之，自老鼠體内取下一段新鮮迴 % ’架在活fa外擴散槽系統上（NaviCyte，San Diego，CA)。於37°C 下，在改良之克氏（Krebs)碳酸氫鹽緩衝液中測定各種不同藥物供體濃度下，傳送通過組織之藥物量隨時間之變化，依費克氏（Fick，s)擴散定律，採用下列公式，計算穩定期之通透係數〜（公分/分鐘） kP = [S]/[ACv] 其中S為隨時間作圖之傳送通過膜累計量之線性梅定期）部份之斜率，以微克/分鐘表示。A為曝露在傳送溶質下之組織表面積之橫切面面積，以平方公分表示（0.636平方公分），且cv為供體槽中溶質之初濃度，以微克/毫升表示（試驗化合物約2^65微克/毫升）。由試驗化合物之kp值除以甘露糖醇内標準物之kp之比例（kp比），依下列公式得到吸收性預估百分比Abs : Abs = [100] / [1 + exp{-7.42(kp Λ-0.812)}] 邊乙羞遘_後發之關節炎模式。取體重220-230克之Sprague- U:\TYPE\WCK\WALABV49293-1 SUP.DOC -41 - Dawley公鼠（Harian，incHanapoUs，IN)分開安置在有溫度控制、濕度技制及定期光照循環之無菌空氣動物實驗内鐵絲籠中。准許自由攝取嚙齒類飼料（Ralston-Purina，Richmond，NJ)及自由飲水，實驗前，使動物適應環境一週。在關節内注射一次硪乙酸鹽至經3:1 C〇2/〇2麻醉之為老鼠膝部。使用注射用生理食鹽水作為溶媒，製備1〇毫克/毫升濃度之碘乙酸一鈉鹽（MIA) (Aldrich Chemical Company, Milwaukee，WI)。經過適當麻醉後’使每隻老鼠仰臥，將左腿膝蓋彎曲90度。觸診膝蓋骨下面之韌帶，並注射至此區域内。每隻老鼠使用27號1/2吋針頭之玻璃氣密式針筒注射0.25毫升至左膝蓋關節中。小心插入針頭以免遠離交又章刃帶處。注射碘乙酸鹽後第一個7天内，每12小時對動物投與抑制劑，一天兩次（b.Ld)或投與21天。溶媒對照組及MMP抑制劑處理組各包括15隻動物。注射碘乙酸鹽21天後，殺死動物，並立即取出左膝關郎先固足在10%經緩衝之福馬林中24至48小時，然後再照相。固足後’使用Optimas影像分析系統（〇ptimas，Media Cybernetics LP，Silver Spring, ΜΑ)捕捉脛骨軟骨表面之影像。採用脛骨平頂部份進行影像分析，因為其所提供之表面比股骨髁之表面平坦，方便分析衫像之相機聚焦在整個軟骨表面上。採用影像為損傷之嚴重性分級。以百目分析方式，由三位獨立之觀察者分析軟骨之傷害，使用〇至4級評估漸增之嚴重性（〇 =正常，4 =最嚴重）。旌社金赶。採用非參數法（Wilcoxon分級總和）分析數據。數據以 uatype\\vc •K\WAU\B\49293-1 SUP.DOC -42- 581761 平均值土S.E.M·表示，與溶媒處理之對照組有統計上差異之數據 (ρ<0.05)以星號表示。致謝。本作者感謝多位與ΜΜΡ計畫有關之P&GP科學家，由於他們多年來的辛勤工作與努力，方促成此工作完成。春老文獻 (1) Beckeci. R. P.; Davidson. A. H.: Drummond. A. H.: Huxley. P.; Wlmtaker. M. Recent Advances in Matrix Metalloproteinase Inhibitor Research. Drug Discovery Today I99i L 16-26. ^ (2) Birkedal-Hansen, H.; Moors, W.; Bodden, Μ. K.; Windsor. L. J.; Birkedai-Hansen. B.: DeCarlo, A.; Engler, J. A. Matrix metalloproteinases: a review. Crit. Rev. Oral. Biol. Med 1993, 4, 197-250. (3) Docherty, A. J. P.; Murphy, G. A. Tne tissue metalloproteinase family and the inhibitor TIMP: a study using cDNAs and recombinant proteins. Ann. Rheum. Dis. 1990, 49, 469- (4) (5) (6) 479. ^ · Matrisian, L. M. Metalloproteinases and their inhibitors in matrix remodeling. Trends ^ Genet 1990, 6, 212-225. Murphy, G.; Dochcrty, A. J. P. The matrix metalloproteinases and their inhibitors. Am. J. Respir. Cell. Mol. Biol. 1992, 7, 120-125. Woessner, J. F. Jr. Matrix Metalloproteinases and Their Inhibitors in ConnectiveJTissue Remodeling. FASEB J. 1991, 5. 2145-2154. (7) Seiki, M. Membrane type-matrix metalloproteinase and rumor invasion. Curr. Top. Micorbioi Immunol. 1996, 213. 23-32. (8) Imai, K·； Ohuchi, E.; Aoki, T. e. a. Membrane-type matrix metalloproteinases 1 is a U:\TYPE\WCK\WAU\B\49293-l SUP.DOC -43 - 581761 gelatinoiytic enzyme and is secreted in a complex with tissue inhibitor of metalloproteinases 2. Cancer Res 1996, 56, 2707-2710. (C)) Kinoshit::· T.; Sato. H.: 丁akino. T. c.丄[Jroc:essmg oi.a precursor ol’72-kilud:ilu)n (ype collagenase/gelatinase A by a recombinam membrane-〔ype 1 macrix metalloprcuease. C脈π 此 1996，沉 2535-2538. (10) Cawston, T.; . Metalloproteinase Inhibitors and the Prevention of Conneciive Tissue Breakdown. Pharmacol. Ther. 1996, 70, 163-182. (11) Clark, I. M., Rowaii, A. D., Cawston, T. E. Matrix metalloproteinase inhibitors in the- treatment of arthritis. Curr. Opin. Anti-Inflammatory Immunomodulatory Invest. Drugs 2000, 2, 16-25. (12) Yu, A. E.; Hewitt, R. E.; Connor, E. W.; Stetler-Stevenson, W. G. Matrix Metalloproteinases: Novel Targets for Directed Cancer Therapy. Drugs ά Aging 1997, /7,229-244. (13) Sugiia, K. Recent advances in inhibitors of matrix metalloproteinases for cancer therapy. Curr Opin. Oncol , Endocr. Meiab. Invest, Drugs 1999, /, 475-487. (14) Chambers, A. F.; Marrisian, L. M. Changing Views of the Role of Matrix

Metalloproteinases in Metastasis. J. Natl Cancer Inst. 1997, 89, 1260-1270. (15) Brown. P. D. Matrix Metalloproteinases in Gastrointestinal Cancer. Gut 1998, 43, 161-163. (16; Dramhall. S. R. Tne Matrix Metalloproteinases and Their Inhibitors in Pacrcadc Cancer. Ira. J. Pancreat. 1997, 27, 1-12. (17) OveralT C. M.; Wiebkin, O. W.； Thonard, J. C. Demonstration of Tissue Collagenase Activity in vivo and its Relationship to Inflammation Seventy in Human Gingiva. J. Periodontal Res. 1987, 22, 81-88. (18) Yong. V. W. The Potential Use of MMP Inhibitors to Treat CNS Diseases. Expert Opin. Invest. Drugs 1999, 5, 255-268. U:\TYPE\WCK\WAU\B\49293· l SUP.DOC -44- 581761 《卜Giibcls. k.: Gabrd> · L.. Stcinnun. L. ltsuI丨’ Expenmemal Auiuimmune Encephalomyelitis with a Hydroxamate Inhibitor of tVlatrix Metalloproteinases../ Clin. Invest. 1994. 9V. 2177-2182. ' (20) Liedtke. W.； Cannella. B.; Mazzaccaro, R. J.: Clements, J. M.: Miller, K. M.; Wucherpfennig, K. W.； Gearing, A. J. H.: Raine, C. S. Effective Treatment of Models of Multiple Sclerosis by Matrix Metalloproteinase Inhibitors. Ann. Neurol. 1998, 44, 35-46. — 二：

(21) Beckert, R. P.; Whittaker, M. Matrix Metalloproteinase Inhibitors 1998. Exp. Opin, Thez.s Patents 1998, <S, 259-282. (22) Beloni, D., Paganoni, PM Giavazzi, R. MMP inhibitors: experimental arid clinical studies. InL 1 Biol. Markers 1999,14y 232-238. (23) Millar, A. W.; Brown, P. D.; Moore, J. Results of Single and Repeat Dose Srudies of the Oral Matrix Metalloproteinase Inhibitor Marimastat in Healthy Volunteers. Br. Clin, Pharmacol. 1998,45, 21-26. (24) Whinaker, M.; Floyd, C. D.; Brown, P.; Gearing, A. J. H. Design and Therapeutic

Application of Matrix Metalloproteinase Inhibitors. Chem. Rev. 1999, 99y 2735-2776. (25) Rhomberg, W. Marimastai(British Biotech pic). Curr. Gpin. Oncol. , Endocr. Metab. Invest. Drugs 1999, 7, 507-524. (26) Dmmmond, A. H.; Beckett, P.; Brown, P. D.; Bone, E. A.; Davidson, A. H.; Galloway, W. -ir· A.; Gearing, A. J. H.; HuxJey, P.; Labcr, D.; McCourt, M.; Whittaker, M.; Wood, M. L.; Wrichu A. Preclinical and Clinical Studies of MMP Inhibitors in Cancer. Ann. N. Acad. Sci. 1999, 575, 228-235. U:\TYPE\WCK\WAU\B\49293-1 SUP.DOC -45 - (27) Griifiocn. Λ. . AG-334〇(Ayouron i^harmaceuucals Inc). Curr. Uptn. ()>ια>1 . EnJocr Mciah. Invest. Drugs 1999. L 573-5S2. (28) Shalinsky D.R.; Brekken J.; Zou H.; McDermott C.D.; Forsyth P.; Edwards D.; Margosiak S.: Bender S.; Train G.; Wood A.: Varki N.M.; Appelt K. Broad antitumor and amiangiogenic activities of AG3340, a potent and selective MMP inhibitor undergoing advanced oncology clinical trials. Annals of the New York Acad Sci 1999, 878, 236-27P， (29) Leif, R. L. Clinical trials of a stromelysin inhibitor: Osteoarthritis, matrix metalloproteinajse 二、s inhibition, cartilage loss, surrogate markers, and clinical implications. Ann. N. Y. Acad. Sci. 1999,(575,201-207. (30) Almstead, N. G.; Bradley, R. S.; Pikul, S.; De, B.; Natchus, M. G.; Taiwo, Y. 〇.; Gu, F.; Williams, L. E.; Hynd, B. A.; Janusz, M. J.; Dunaway, C. M.; Mieling, G. E. Design, Synthesis, and Biological Evaluation of Potent Thiazine- and Thiazepine-Based Matrix Metalloproteinase Inhibitors. J. Med Chem. 1999, 42, 4547-4562. (31) Cheng, M., De, B., Pikul, S., Almstead, N. G., Natchus, M. G., Anastasio, Μ. V., McPhail, S. J., Snider, C. E., Taiwo, Y. 〇., Chen, L., Dunaway, C. M., Gu；F., Dowry, Μ. E., Mieling, G. E., Janusz, M. J., Wang-Weigand, S. Design and Synthesis of Pip>era2dne-Based Matrix Metalloproieinase Inhibitors. J. Med. Chem, 2000, 43, 369-380. (32) Cheng· M·，De，B·, Almstead, N. G·· Pikul，S·，Dowry，Μ. E·，Dietsch, C· R·，Dunaway，C. M·，Gu，F·，Hsieh，L· C·，Janus乙 M· J·，Taiwo, Y.〇·，Natchus，M. G·，Hudlicky, T.， ir T Mandel, M. Design, Synthesis, and Biological Evaluation of Matrix Metalloproteinase Inhibitors Derived from a Modified Proline Scaffold. J. Med. Chem. 1999, 42, 5426-5436. U:\TYPE\WCK\WAU^\49293-1 SUP.DOC -46- 581761 i.'3) Pikul. S.. Md)〇\v i^unii^ni. K.. L.: .Almstcud. N Cj.. Uc. B.: Nacchu.v M. 0 . Anasiasu'. M \ .:丨McPhail. S. J_: Snider. C. E·: Tai、v〇. Y. Rvdel. T·: D⑽auay. C. Nl.: Gu. F.: Mieling. G. E. Discovery of Potent. Achiral iMatrix Metalioproceinase Inhibitors. J. Mad. Chem. 1998,V/, 3568-3571. (34) Greene, T. W.; Wuts, P. G. M. Protective Groups in Organic Synthesis. John Wiley & Sons: New York, 1999. (35) Henning, R.JL^rch, U.; Urbach, H. Synthesis of Esters of Lipophilic Proline Analogs by Reduction of Ethyl 5,6-Dihydro-4//-l,2-Oxazine-3-Carboxylates. Synthesis 1989, 265-268. (36) Knight, C. G.; Willenbrock, F.; Murphy, G. A. A Novel Coumarin-labeled PqDtide for Sensitive Continuous Assays of the Matrix Metalloproteinases. FEES Lett 1992, 296, 263-266. (37) Okada, Y.; Nagase, H.; Harris, E. D. A Metalloproteinase from Human Rheumatoid Synovial Fibroblasts that Digests Connective Tissue Matrix Components. Purification and Characterization. J. Biol. Chem. 1986 , 2(57, 14245-142 5 5. (38) Dowry, Μ. E., Dietsch, C. R. Improved prediction of in vivo peroral absorption from in vitro intestinal permeability using an internal standard to control for intra- and inter-rat variability. Res. 1997, 14. 1792-1797. (39) Kalbhen, D. A. and Buchmann, U. Tiercxpcrimentalle Gonarthrose Der Rarte Unde Ihre Jr JT， Thcrapie Mit Glykosaminoglykanpolysulfat (GAGPS). Z.Rheumatol. 44, 100-107：-1985. Ref Type: Abstract U:\TYPE\WCK\WAU\B\49293-1 SUP.DOC -47- 581761 (40) Williams, λ M. and 巳randt. K. D. Exercise Increases Osteophyte Formauon and Diminishes Fibrillations Following Chemically Induced Anicular Canilage Injun·. J.Anat. 139, 599-611. 1984. Ref Type: Abstract (41) Guingamp，C.，Gegout-Portie，P.，Philippe，乙·，丁erlain，B” Nener，P.，Gillet，P. Mono- iodoacetate-induced experimental osteoarthritis: a dose-response srudy of loss of mobility, morphology, and biochemistry. Arthritis Rheum. 1997, 40, 1670-1679. (42) Cremlyn, R. J.; Cronje, T.; Goulding, K. Some Phenoxybenzenesulfonyi Chlorides and ；- Related Compounds」uyr. J 1979, 32, 445^452· (43) Schraufstatter, E., Schmidt-Kastner, G., Wirth, W. Ger. Patent 1,078,129 (44) Ouenheijm, H. C. J.; Plate, R.; Noordik, J. H.; Herscheid, J. D. M. N-Hydroxytryptophan in the Synthesis of Natural Products Containing Oxidized Dioxopiperazines. An Approach to the Neoechinulin and Sporidesmin Senes. J. Org. Chem. 1982, 47, 2147-2154. (4^) Klein, S. L; Molino, B. F.; Czekaj, M.; Gardner, C. J.; Chu, V.; Brown, K.; Sabatino, R. D.; Bostwick, J. S.; Kasiewski, C.; Bentley, R.; Windisch, V.； Perrone, M.; Dunwiddie, C. T.: Leadley, R. J. Design of a New Class of Orally Active Fibrinogen Receptor Amagoiiists. J. Med. Chem. 1998, 41, 2492-2502. U:\TYPE\WCK\WAU\B\49293-1 SUP.DOC -48 - 581761 表1.以螺縮酮為主之抑制劑之MMP控制作用〇Μβ 專利申請 # 化合物 R, 〇o:s HO、

«4 1 u\ 1夕 \ 1 \6 \1 Ί %\0S 15 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 -Η -Η -SEt -SEt -SCH2CH2S- -sch2ch2ch2s- -〇Me -OMe -0CH2CH20--ocH.ckcko- -0(CH2)40-

0^0 0 o IC.〇 (mM)^ 預估 -0CH:C(CH:)CH20- -0CH:CH(0H)CH:0- -0CH:CH(0Bn)CH:0- -0CH:C(Et):CH20- -0CH:C(Me):CH:0- -(CH2)r -CH,CH，NBocCH，CH，· MMP-1 MMP-3 MMP-7 MMP-13 吸收性 345 40.1 9848 2.1 nd 304 61 2520 nd 29-32 851 25.6 7410 5.1 86 126 17.2 2360 2.4 .24^34 >1000 103.1 55670 144 nd _ 314 80.5 .10100 nd nd 1560 17.6 9850 2.1 64^7 1823 62.9 23491 4.2 nd 937 18.9 17888 6.0 nd 1836 82.3 >10000 6.9 34-48 630 49.5 12462 1.9 • 32-40 316 61.5 5453 1.1 nd 716 52.7 nd ^ 2.4 5-6 748 81.9 nd 2.7 3-4 596 16 7127 2.4 36-40 407 22.7 5137 1.6 35-42 1423 150.8 49175 9.9 3-4 1802 28.5 23382 3.1 26-55 1195 41.1 nd 2.4 61-80- 1119 31.2 9564 4.2 nd 758 12.1 27397 4.7 8 663 151.4 31418 nd 78 2592 215.3 nd 30.6 nd a. 酵素分析法之詳細說明參見本文實驗部分 b. 吸收性分析法之詳細說明參見本文實驗部分，nd=未測定 -49- 581761 表2.以二吟茂烷及以二哼烷為主之螺縮酮之MMP控制作用〇 c:s’ ·*

專利申請 # IC50 (nM)^ 預估編號 η R, MMP-1 iMMP-3 MMP-7 MMP-13 吸收性b Μ 14 0 MeO- 314 80.5 10100 nd nd ^ Μ 1 32 0 EtO- 707 29.5 15393 2.7 17-25^ - 33 0 A7-PrO >1000 74.7 45912 8.5 nd 3乙 34 0 z-BuO- 865 29.3 17997 1.0 . nd 35 0 n-BuO- 3061 12.1 2715 . i.i 53-55 36 0 Me- 1598 669 9667 41 * nd 6 3 37 0 Me0(CH2)20- 7589 199 >10000 13.3 nd MV 38 0 Br- 102 156 1431 5.6 nd 3!> 39 0 PhO- 90 4.8 1418 0.1 62-77 5 3 40 0 4-pyridylO- 6361 17.9 4059 1.4 10 1 S 15 1 Me〇- 1560 17.6 9850 64-67 Ί b 41 1 EtO- >1000 62 44150. 62.1 5-8 1 S 42 1 n-PrO- 2267 18.7 12470 1.8 34-57 23 43 1 n-BuO- 946 7.2 2036 0.6 21-27 44 l Me- 2043 424 〇，， OJ J J 52.7 nd 45 1 /7-Pr- 4697 181 >10000 23.2 nd 46 1 n-C5H丨丨- Mr 23334 39.9 >10000 9.2 nd 二· 卩 47 I Me0(CH2):0- >10000 176 >10000 19.8 nd 1 i 48 1 Br- 149 128 1847 7.4 nd es 49 1 Ph〇- 262 12.2 2636 <0.4 9-11 SO 1 4-F-PhO- 755 1.9 5111 1.1 4-6 51 1 4-pyridylO- 2736 8.5 >10000 <0.4 4-5 a. 酵素分析法之詳細說明參見本文實驗部分 b. 吸收性分析法之詳細說明參見本文實驗部分· nd =未測定 -50- 581761 表3.以二噻茂烷及以二4烷為主之螺縮酮之MMP控制作用

專利申請 # 編號 η R| MMP-1 IC5〇 (nM)^ MMP-3 MMP-7 MMP-13 預估吸收性b 11 0 Me- 851 25.6 7410 5.1 86 - ' 52 0 MeO(CH2)2- >10000 185 >10000 15.9· nd 53 0 Ph 75 4.2 1193 <0.4 nd 54 0 4-pyridyl 2322 10.9 26034 0.2 0 12 1 Me 126 17.2 2360 2.4 24-34 22 55 1 n-Bu 3079 5.3 2074 . 0.3 1 56 1 MeO(CH2)2- 5653 101 >10000 8.3 nd 57 1 4-pyridyl 1330 5.7 7750 <0.4 1 a. 酵素分析法之詳細說明參見本文實驗部分 b. 吸收性分析法之詳細說明參見本文實驗部分· nd=未測定 581761 表4.以螺縮酮為主之MMP控制劑 R. -R: 專利申請 # IC50(nM)^ R, MMP-1 MMPo MMP-7 MMP-I3 Me 1823 62.9 23491 4.2 /l-Bu 4651 14.9 8712 i.2 Ph 154 17.1 3586 <0.4 Me 937 18.9 17888 6.0 π-Bu 6063 li.3 10663 0.7 Me 630 49.5 12462 1.9 n-Bu 1648 11.2 2688 0.8 Me 1802 28.5 23382 3.1 n-Bu 6361 17.9 4059 1.4 Ph 247 18.9 2884 <0.4 Me 1195 41.1 nd 2.4 n-Bu >1000 6.3 2781 0.5 Me 1119 31.2 9564 4.2 Ph 150 9.0 1322 <0.4 n-Bu 3083 11.8 3994 1.1 -0(CH2)4〇- -〇(.ch2)4〇- 一 -o(ch2)4o IV -0CH2C(Et)2CH:0- -0CH2C(Et)2CH:0- -〇CH:C(Et):CH2〇- -0CH:C(Me)2CH30- -〇CH:C(Me)2CH:〇- o^o 0^0 0^0 a.酵素分析法之詳細說明參見本文實驗部分.nd =未測定 ~52- 581761 a.洚涔谇聆||#缭Λ娘今茸尜^IfI·势适咿扣碲鎵者今 b·^斜今命Ϊ抒妗竣£#冷蜜I卫许耸餐6漭铖丄函cv^i^ .b.Ld·^滁3 5»£/>>坏 * SS^^M ^ Λ PS nd =>Μ^> 21-27 36-§ 64-67 006 24.34 34.57 00-16 9·ι 8 61-000 17 丨25 nd nd nd !id nd _1d nd nd nd nd nd nd id id id id tid nd nd nd nd nd nd nd nd nd nd ml nd nd 2(38) 一.7(70) V 2 (47) 3 (27) 10(19)二(15) 59) 28(14) 3 55) 610(32) 22 6S (28) d s(18) ^ nd mi ml ml 蠢 Γ.ιν^ ινΓ% πζ vdss Έ §ss^ ^ ?l) 24) (¾ 半eHt/l»j-) (¾ 丰/l»/t) (％) 羅族~岑$(+專)8 诹5· vx*i^.i^MMPHit:#j^Q 薄涔 Λ 知滁参缓 Λ 榷W碡兹淼今itTI^/0'cr 28. 23-21- 2: 27. IV d, 17 12 9 oo -53 - 76 81 Dr. Biswanalh De

MMyl ip.2 ip-3 震P.7 MSP.8 630 么9.5 12.462 ΜΜΡ·9 MMP.13 ip-i4 B 1.9 「[glICDliswana-hDa flmpuHTF

Rna 7,. 5Afp-i >1000 55ρ·2 SAIPCL6.3 55P.7 2.781 MfAyB 25ρ-ί MAfy2 MsyJ MSP.7 ssym Alap 二 52ρ·2 sss sap-7 M2P-S MSP.1 5213-2 5SP.3 MMyr ΑΙ5ρ·αο 1.423 1508 έ」75 748 4 3 81.9 716 30 52 7 βωεωπί IV i/3rrbJ: —2 SAfp.iJ 1^.2 ΜΣΡ.9 MAtyiJ MMyu §5 Msy9 Msy13 Msyu sTrb#J 0.5 9CO 2 7 22:^-9 M2:p.13 MMyu i/3rrb#J ΤΓ 2 2 ^ft^MMPS#_#pfHi oLns} 7 〕 sffcc 气cra/ c/ass Sufion -卜淨啦^^ Log P c 0.77 m LOglJ c 2.11 m _I!h硪It命w Log P c 1.51 m 蜗φ碭t:命w -皆满啦^薛 LO0P .91 3 mihfjt 命w Log P c 0.91 3 戔翁1 % ^ Tiii hs s % mg/ml iAbs. · 3210 0/0 1· Ή7Γ 森蒸1 % RFi hrs ω> % mg/m一 Λβ>· 10-17 % Met hrsmg/3 a> 4bs. a®. hrs % Ϊ % ΤΤ7Γ h『s3g/ml hrs 3g/m 一 k承Zt Log P —0 0 1 ιττ ω> Λο-s· Afef. hrs % ϊ % ω> Λο-s· Mat hrs % 5.6 % $ ¾沐备(PI<^. BA$l!i St i #愛 % SM % ^it^llp= Η X X #♦〗% .^iH&^p= H X. ίj % ^it?i*^p= Η X MES p^$0 #j:i:*^/>>> Lr OQ # -54- υχ Dr. BiswanasDe

Msyl 316 Afap-2 S5P.3 61.5 MMP.7 5,453 MMPm 2Mpi MMyiCJ Msyu sTrsH 1.1 Jkljt^^>w Log P hrs mg/ml Df. Biswaslh 〇6

Fina ip·/ ΑΙΑΙΡ·2 SM2 my7 MMyoo 58 0 9 11.2 2-688 5Afp-i 一m23 ιρ·2 55P-3 62 9 SAfp-7 23,491 5ap-8 么 07 ip-2 MMy3 227 /ΜΑΙΡ·7crluCJ-NJ MMyB

602 二.3 10.S3 ΜΜΡ·9 25p-i3 MMyu i/=b#J da, c 2.36 m Ή7Π 0.9 Ob i/JvrbJ: ΜΜΡ·9 Μ3:ρ·ί3 4.2 SSI^ ims J~ΤΪ MSP.9 AfMP-fJ 16 MSP.14 ΜΜΡ·9 ΜΜΡ-13 Msyu ί/η5 33Γ P7 $綠%^择務蓉)¾二N> Log Ρ -i^s^,锊赛缽r.a» LoglJ m 0.5 Log Ρ c ·1ο1 m 锊赛蛑Ob Log Ρ c 2/11 m 1.8 y〇 hrs mg/ml % hrs 3g/ml ΉΑΠ hrs mg/ml hrs mg/ml 〕 ^ft 芩 Μ Μ P 黎♦Ifni li -. DUHOn J wJk 漪啭府、i?rj/2 Log P 翁It I § Λ?· Afei. % hrs % 戔I# 1 Ts ω> 4crs· l. hrs % 8·16 % 森爵11 ω> hcrs. Afei. % hs % Ts 5 Λο-s. Afei. hrs % 35-L2 % JM ω> Abs. Af®· hrs % 6 % t澇—浄备(PK ΒΑ(Φ^ ij % ^itc^^p= H X #¾% 27 游4:^線 p= 0.0- il!55::II. x x #¾% ^ifii^p= X. X #瘦％ ^it^線 p= H X 菩窆 % ^it^_p= H x •/WES ^Φ^ΜΠ 薄 M 棊ρβ0 #J#»'^/>>4- ? •oo 10 # -55- 76 If 8 5 丄^^1£4!Β1;0ι?ϊί?Ν > >r!-Liirl Rimma Bradley

Find ί Recent _p-f 5513-2 M52 Msp-7 MMP.8 Msyl Μ2:ρ·2 Msp-3 M2:y7 MMyB Msyl MSP.2 55ρ·3 Msyr S5P-8 -sty l >1000 136J VI opooo Hooo 103.1 55-670 >1000 62.0 4 产 150

MMyl ΜΜΡ·2 IP· 7 Afs^i 1,8s 94 3 28.5 23.382 Moob aiMsy13 Μ5ρ·ί4 s MSP.9 i.2 MMP.U f/JTrbs; 17.6 Jk^%^>w Log P 3 m hrs mg/mi a> Abs. Afei. 0/0 hrs % H X 1440 .- Log Ρ 3 hrs 3g/ml σ> Abs. Afef. % hrs % ΜΜΡ·9 MSP.13 Msyu s 5J iAIP—9Msyi3 AfMP 二各sTrb! 62.1 $11:^^15: 霖zt Log P c 002 m hrs mg/ml MMP-9 MsylCJ MMyu 粢I# 1 toA 5®. d ^ ΠΓ 2 1跨渖啭辟寐 f σ> 祷蓉無 2011 mg/m 一 sbs· Log P Me， J3~|c 1.32 m 3rlrs % 5 8 % 0 0 1 hrs % 53 丨 501% ^^^~Π—匕 JMR%^p:f m> 務鸯^~2 JE>crs· .rogp δβί· —3 |c 1·58 m j 一,1淼懿IT hrs % 26.55 % 谇 fl 芩MMP# .Hi ο"—} T sircctcrajl cmms t/ion 零涔it裨啭府#Ty2 Log P t綠+滩著(p BAS a) ββ s #竟％ x i J % 叫X. $ X X SM % ^ifl£n;p= IT X X —Es 笤餐6粦鎢 #J# 辦^/»^ 14 J # -56- 581761

sap 二 56 SMP.2 〜0 1 i2 7.9 55P.7 M18 5MPa»fp3 ip 二 55P—2 ΜΜΡ·3 ai 261 3Ί 13kJ69 MAtp.2 2ΑΙΡ·3 mfy7 MMPOC»

>，000 74 7 45.912 cas 29 3 17,997 Find 9 S5J sap-9 io.s Msyica<0 4 Msyu 003 i^Bl·碱雖呤寐 ^肆啦^>^ 轉赛i^o.s Log P c 1.91 m hrs mg/ml srrbsf^7 51 Μ3:ρ·ί3 s?s po 錄赛碎 Γ-og P lc 2.10 m i/JTrbJ: aap.9 <{m Afap.fJ <0 4 MMyu - ^ ί/JTrbJ:I~TT 25ρ·9 55p-iJ 8 5 55P.9 55p-i3 MMPU 1/3Trbs 谇ft 岑ΜM ICLnM》 --T lllmlnmniw/ Structural clas D 0 0 1 d/t ω> Abs· Afef. 0 hrs J/31 hrs % 62447¾ 1 Ts s a0f. hrs % 申价磷捸呤菸 Ja J,s Rr^ 皆薄#^>寐 f s 沴轉填^广0® 3g/ml S6S· 9·11 % r-og、22. c 1.67 3 _赛碎3.17 Γ-ogpm 1.0 r*ogp 1 19 3 1.3 (t)m IW E —4 hrs mg/ml 涔t澇啪辟寐ΤΪΝ2 Log P Γ-31 ί w^^os mg/ml 034 Abs· 50f. */〇 hrs 0> 034 46s· Afa. hrs % ▲ 7-71% BAS) asr 3 #窆％ Mbifi(y^p= X X #¾0\0 ^4:l&^p= .jr d p.o. X. X #寺j % = ^ItDt縛 p= 〇 § _3 #愛 % ^it^np= H X Hx AMES #iNNJ!^/>>;f MS 3 2. 奇 If # -57- 8i\l&ulyl£rii3i 多、u V 5 76 3imma Bradley

1,330

2-657 58CO P848 MMyl 2.322 ΜΜΡ·2 fa2 55P.3sco aap-7 -26034 21 10-^

7S Ijxm

imbJ:nMy~|c 1.74 m ai MMP.iCJ<0.4 ip 二 4 MMP.9 55p-i3 s?s f/JTrb#J srrb! J3 MSP.9〜p么 MMy13 P4 2AIFi 25P43 ΜΜΡ·ί4 i/JTrtJ: dH f/Jrrb#〗I~BT S2pi 55P4J 5MPr 0 8 0 3 二、U/ 卜 CCC __________________________________111....... —丨ρξ-cl(il’cn?2l2.lgs ) ^Bufion u ^?lcenf〕i^ft^SMP—^ij 寐 *rl> /:. ^]φ 碡I#命·H?l^―if f σ> % 将赛^005 mg/ml 46s· · 1 r-og P aa j「丨到_ 1 i m> i#^^os 39/31 401.«·p-osf13Afa· 3 . ί δ 轉赛^0.012 mg/31 4CTS· r*o<Qp sz c 1.42 m 1.1 . i m> 轉赛^1.24 3g/ml Λο-s. LogP δβί. c 1.85 m 1.6 娜Jk肄啭辟寐ri/2 s/t ·:-Log P 鮮3]?译 Γ*Ο0 P 1 CP74 m Ύα hrs mg/3 一 σ> 4bs. sef. να X X % hrs % hrs % 0 yo hrs y〇 4—6 a> 93, hrs ? V〇 o% 滩备(PI ΒΑ(Φ^)洚斧 $# # 窆 0/0 H X ir x *x菩意％ 9 ^Itl6^p= 0.21 ii % 絮4:lD4^p= H X H X TU ims Ρ^?β0 #J#^^/^/r Γ1 二| θ-η 3Q S3 # -58- _ /55¾ £f iEZ1 76 2mma®adley

c j, ®『ftllaLI«Iy Ei- 42 二ο 8.333 ssp_i MSP.2 ΜΜΡ·3 MSP.7 5Afpo> 1.5CO8 6690 9.667 ISO 1,431

FinOL f?eceni Afapi 5/MP43 s s S.M2 AfAfp43 ΜΜ13·ί4 srrb#J 410 雪_ r-osfp i 5.6 二雲/一 Log P 3 5api is MMP-N i/JTrb^-J 52.7 r*o0p J C 3 s昼 TT f/JltJ:nyM ip9 si <0 4 2? 2 Γ-Ο0Ρ 3 52pisap.fj <0么 Msp.u 01- 〕 sircciurai class 933Ί 0¾ T Log P c CM9 m (iguffon ) · TW IT hrs mg/31 Jn 4bs· 50f· % hrs % j —0^3, hrs mg/ml hrs 3g/mi hrs mg/3 ω> Afa· y〇 hs ak s Λο-s· 5ef. yo hrs ak m> Λο-s. Afa· % hrs yo nflwd, hrs mg/3- Hi ω> 4CTS· Af£· ，8 hrs % 么—5 。/0 LogP BA(：#^) ββ 3 專窆％ ,^1t^^p= H X X 菩窆 0\0 ^if |&簿|>= H X iJ % ^it^np= #p¾% ^it?t^p= H irrls i Ds -2 1 -59- 581761 ϋ rr Γ4. ϋ

53ma Bradley

FinOL -'*j5sp-i 5fficxl3 MMP.2 l?s 8 3 55ρ·3 10105MP-r 52F.7 >10000 ssym sTrb#J FT 3 % ^hrs ω> mg/31^bs. Afa· m 森IS 1 ·/0 hrs% X Αιδρ-3«50δ3ρ·Ν ιρ·7 >10000 MMPS f/JTrbJ: ΑΙΑΙΡ.ί >10000 5SFi c/· Hs 55P-2 MsylCJ159 jk 薄啦^、fi3-s m> % 轉泰無 39/31 At!? JLO0 飞δβί· a— 0 0 1 % ί % 55Ί3·ί >10000 ΜΣΡ.9 ΜΜΡ·2 Μ3:ρ·ί3S8 —13·3 17601.2 5ΑΙΡ·7 >10000 51 srrs W 申φ碡淼呤1¾ 释赛/I r-ogp c 3 ΐ hrs mg/m_ a> bibs· sa. % hrs % 52p-i 25pi MMP.2 Msyi3 133 S2P-3 1990Msp.f4 5MP-7 >10000 mpao 1 N f 5 務霍碎 I— >^. Log p δβί· c m 。/0 % Μ3:ρ·1rto Μ3:ρ·2 5MP-3^ODO ΜΜΡ·7 1.27 25pqo f/3rrt#J 7 么 Msyu 碎鷂芩Μ Μ P — ♦菩愛寐 is-- Jkf!L^^#fi锊赛綷 r-ogp C 3 hrs mg/ml 粦懿I σ> 4bs· 20i. y〇 hrs Rfoceni 〕 sifucturafl cfmuts 〕 (Buff 0/0 w^^Jk潍啭辟寐TJ4 :vr- iv bll-f^尧(2. οα>(φ^) £t成ίί Η X #瘦 % 絮4:|£ 線 ρ= ill % ^4-#D4^p= Η X 背Ϊ 0X0 u i As:ms ^ί^β0 #J-一:养>/>>> -t-^t^ # -60- 581761

33ogefmookland SSI MMP.2 5AIP3 55ρ·7 MMys 5sp*f sap_2 AISP—3 AI5P.7 MMys Afspi 5ap.2 25P-3 MMyr ipQr>

513 0 9 t.1 1,285 1.7 aapi ssy^ ΜΜΡ·ί4 s ΊΤ 01.2 0.9 Log P Ί c 2 Find Freest Afsp-f —23,334 sap-2 2SP-3 399 ip-7 >10000 I 552 δδρ-ί3 δ2ρ·ί4 sTrb^j 难flh磯靛呤谇9 2 · Jkss r-Qsf P 40597 1810 >10000 —pi 5SP44 1/3 Λ.Ψ1 23 2 .161^^^1¾ Log P i/JTrbJ:nd~|c 247 18.9 21 -2 17 1 3.586 i^wi 22F-i3 AOJX ssyx lo<q13 fiTrbJ: δδρ·9 i?2 Λο^ 5ΜΡ·Μ 谇織々-Τ·ΜΜΡ«^# 者 -s_-V 〕 -sfrccicra/ csrCA^ 〕 (igcffon〕 $ 薄^^>w s/t ,r-og13 1 1 hrs lco/ml hrs mg/3 i. hrs 3g/ml ΤΑΠ hrs 3CQ/3 ΤΡΠ 7〇 hrs mg/mi 0 ^^Jkljl^^>fiTy2 Mr*03 0> f· % hrs % 渙I# i % hrs yo m> Λ65· Alef. y〇 hrs y〇粦翁I m> 4bs· Afef. y〇 hrs 。/0 翁I# 1 a> 么6S· si. */〇 hrs Vn s#£(plp BAS a.) • ββ i X ί % ^4:ιειιρ= H x SM % M,it^^p= H X ij % ^if I6^PF= H X #¾0/0 M,it^^p= H X —Es ΜΜρβ0 #J# > -61 - 581761 of.&iswaslh De Dr. Neil >lmslead

Isi

二/cr/NCccFind f?eceni

s 55P-CO30 2MP-i3 24 1 55p-i4 ▲0!▲ . f ^^^21.2 3g/mi ro^p 3 05 I齡1 0> Ajbs· Afa. ri SAfp-i 55P2 ip—3 S5P-7 Afspi 2ΑΙΡ·ί ΜΜΡ·2 52ρ·3 SAIP.7 5ΑΙΡ·β 937 8 7 189 17OD88 1M 946 os 7 2 2036 Ρ7

y〇 hrs y〇 5 si ρι^ια3 1.0 AlAlpi 29 5?s 60 2δρ·ί4 士濰凇抑寐?g ^赛^0.2 I— i-〇gP ω> 4r Afef. •Λ hrs y〇 imbJ:rm 55ρ·9 PQ3 ΜΜΡΊ3 06 Msyu 5 锊填碎2.4 Log P c 3 1·7 ims Π310 55Fi 2MP 二 3 55p-i4 7.1 2 1 74.7 j「丨到Idw hrs 3g/ml Ts a> δ£· y〇 hrs y〇 $ -婵 #^>寐轉赛Ji s s 2g/m一 r-ogp 3 TW β 0 1 034 >F Afa. 0/0 hrs % MMP.f >10000 MMP-9 V 3-000.0 5M^2Q1S30aMfMJ116070Jk»#^>]5: M5P.3 v10ooposMfM4 濟赛_ 5/ΜΡ·7vfoooo Ur 55PQQ衾isof/JTrb^j c Logp 3 「|33|>|一「淼淼[1< hrs J/ml § 465· Afef. a> hrs % 睬fl 孚 IIΓ- 〕 siruciurml cimuts 〕 V难φ碡t:命寐洙辨 a 濘 #^>isTy2 J iv -2X 3Γ Ο x X #愛。/。23 游4:|&隸1>= 0.04 X X 2 5 I 5K5rp^「 2X'2.5 p? 2 Xal 菩窆 28 2 t β^^βνη 0 00 0^ p o. #¾a\a ^3:0 ^薄 FF=o一 3 0」5 0 50 8 7 2 X s 2 X t2 5 2 xCJl 女ϊ % ^it?i^p^ H X X •ώ. Ill^^^(l^jlf BA(^^) AMES p o. φΐρβαβ #JN®^>A>>/t I 3 二 # -62- 6 L7 ^ ηίί ^^ ^~^ 3mma®ad<riy

ip-i MSP.2 MSP.3 MMyr Msp-e 4,651 14.9 P712 ΑΙ5ρ·ί Afsp-2 55ρ·3 ΜΜΡ·7 55PQ»

Ilnd jsi13_i aAfp.2 AIAIF4 *1513· 7 sapQa 〕 6-361 17.9 4,0s 150 90 1-:322 3-0033 二.8 3.9s M1CO 31 2 (0.56 么 s ^J3~-n M?s 12 J6t«H->^i5 LogP 2 j「IdlFl^ hrs J/m 一 s 4crs. Afef. τ f/JwbJ:Π755· SAIP-iJ s M A 綠 #^>i4 JLoglJ c 2 hrs 3g/ml 0> 4Jbs· Afei. iapi ip.s<P4 i.x ipi i?2 5? 2 5/ΜΡ·ί3 21 fiTrbJ: N 谇It孚MMP #Φ#P愛寐 ICSS2-, simcturaii clmuts 〕 LO013 103 r-og13 Γ-Ο0 P c i j TW i hrs mg/ml ^ hrs mg/ml ΤΤΑΠ hrs J/3_ Έεη ) β eas#siTy2 雲/ϋ Η; Log Ρ ak '•?s % 。/。 hrs y〇 ill# 1 ω> 4bs. Afa· % hrs yo 淼翁1 a> ^bs. Afs.. 0/0 hrs y〇粦 Ι3Π-1 σ> 4Jbs· si. 。/0 hrs % ΒΑ(^^ £ i 一J % 絮4|£H；p= H X X X X ill %濟^:|6 薄 ρ= 言瘦 % .^iH6^p= H X #愛。/〇 ^itlcu線 p= 菩愛％ .s^sl H X u 5>SES φ^^βϋβ #J# 靡亨/1/t -63 - Df. NeilAlmstead

1·195 2 6 4 二 -14 307CO S5P.2 οω lf?3 53 *fsp-7 Ifspa 二iRnd ijseni S5P-CO 55p-i3 s?s B AfMpi Is ssy^ f/JTrb 宣 d « o.s 2 26.9 一一申进碣|卿命1¾% Ts hrs s 一一 jk 濘啭辟#f s f 锊填淨 1.S —i Λ?· 34丨48 % r-ogp 5βί· ffi ipi Μδρ-ί3 2 么 52p-r i/JTrb#j AIMS MMP-iJ 2? 2 1/3 -rrts 2 申 Φ 碭¾命1¾% Hs RFi ΖΓ3-·§y〇務赛^3.68 mg/3>^ω. 8 */〇 ILOgp Μβί· ?2·30 3 ·0·3 Jkn%^w Log P I c 0.52 3

0 3 碭據命w锊赛綷 LogP I c 2.32 3 ΗΆΠ j「！Idww hrs 3g/ml 4 034 sa. lirs y〇 6iio。/0 MMyf 2.592 MSP9 ΜΜΡ·2 36 2 ·ρ 二 j Qoo 55ρ·3 215 3 i*2 ΛΙ2:ρ-7 ssym iiTrb!

Jkil^^w f Log P ΠI hrs m> 3g/ml zlcrs· 5£· TPT| j hrs mg/ml m> 40-s. ai. y〇 hrs % 。/0 hrs % m ϊ s if I 愛 :令〕 sirccfcra/ c/asol 〕 (iBuffond i i-og^ 嘗室 0/0β^^βι yxx 菩愛％ΰ棼耸|6鶉ρ=0」2 ._p, 3CJ1? βX· X #¾ yoco β^βιρ^ Ql #¾% |&缚|}= Hxx IT X X •薄如蜂奢basmo irrls ir^聲 $$0 %ϊ l(r -5 VL ίί^# -64- 76 Df. Car! Johnson

Dr. Μ3Γ0 Nalchs

Or. NeH Almstead

Find J^Gcst 5ΜΡ·ί 么 2 ΜΜΡ·2 έο 552 55Ρ·7 MSP.8 s SSS ι?2 100 5·'5ρ·ί4 SAIP-l ss?2^C3 Ϊ5Ί3-3 5δρ·7 5SP.QB SAfp-f 广 000 iAIP.2 ΞΡΟ ΜΣΡ·3 266 4 5SP-7 5SPQB 55p-f -000 MMP.2 55P-3 >10000 ΑΙ5Ρ·7 55ρ·8 Msp.i S3 113-2 115 5ΪΡ0*t5M 5ΪΡ·7 31X18 55PS ϊω 〕 fiTrb#! y 5spi 170 i/3Trb#J Af/MP.co 5?sM2 ssyz 55ρ·«ο 25ρ-ί3 51 55ρ·<ο —Ρ·ί3 55pr ί/JTrbJ: 2360 3 r-ogp jk嬅啭_寐篇/一 1 _ll·碡捸命寐 LoglJ r-ogp C 3 15 3 < 【00 P 诼鎵芩 MMP^_#P^I5: 01 sfrccicfQI/ cQrss 〕 r^uffon) j「，F1_PI hrs mg/3 m> 4Jbs· Afa· y〇 hrs j「IM hrs 3g/ml BA 4?.二 AI2.· y〇 hrs va TWH 燊！i 1 hrs m> mg/3- 4bs· s£· 4 y〇 hrs 0/0 hrs m> 3g/mi 46s· δβί. j「I0 4 % hrs mg/3 σ> >F Ara· J Logp ak hrs y〇 hrs y〇 7®% H X 戈Ϊ oxo 薄 p= H X x X. 菩杳】 0\0 粱 itft鹑 P= X #音】 % ί^βι H x X zc BA(i) AMES s 犛涞！MS α潍 s$0 #J##s^/t is # -65 - 58^5^lbiwsl§l^「rhelhf 76 DrolaH Johson

Dr. carljohson

Dr. Carl Johnson

Find 23esni /ymmsssFn 31、 SMP-iv50ooo S5P-9 S2P-2 V 7500AfAf/MJ >7500 i.000.0 i.i sap.7 Msp s s Jt滓啭府寐 r-ogp Jc 2 hrs mg/3 m> 4bs. Mmt Vo 。/0 ssp 二 iAfpKl Afapul 5SP-7 55ρ·β

5.1 209J 820 368 327 3 <5890 s If r_lc sss I r-ogTJ 3 hrs mg/3 m> Λ?1 M&.· hrs ·/0 sss I? 2 ssy^ srrtM 1530 P-O0P -JC 2 「Id翁1^1 hrs 3ca/m 隹 a> 4o*s· f· •Λ hrs •Λ 5ap-i ws® sss 55ρ·2 >750055p-i3 >7500 5/ΜΡ·3 15·577·0ΜΜ?ί4 55P.7 i ί/JTrb^:IT r-og Ρ hrs mg/mt TuT 4CTS. Mmt y〇 hrs y·

7 产 S5SMP9 1210S5pi3 81.730 55pi4 srrbs 161 诼鏵芩Μ Μ P黑♦言.H4 IrsM} sfrccicra/ c/as D Έ§)# / . Log P ^ JLog P hrs 5g、m_ 端：薪1 ω> Abs· i. y〇 hrs % 菩愛 oxo ^iH&^p= H X X #ϊ %.^itl6^p= H X X #¾0\0 H X. X iJ % >< X x H X X BASU —Co ir 方聲 Ρ0^β0 #J-f-*^|^>;^· Π 10¾ d GfNi # -66 - 6 7 Dr. NeHAIrnslead

l55p-iisp,2 5SP-3 5Afp‘ip-QB ιρ·ί 5s13_2 25P-3 55ρ·7 5AIP.QD

js/wpi S5P-2 55ρ·3 ip-7 ipe ...........

62.S 230 SAfpiAfap 二 3 2δρ-ί4 f/JTrbJ: 1M00MMP4 512 56000ip-ί 4 s wb#J 126 17 2 2-360 32 610 2,520 3H 805 10-100 ipi I? 2 si s^s 7 7 2 4 f/3Trrr#j j~W 5i S5P43 5SP 二瓠 IP4 ispi δδρ44 sTrlsJ: mlcol Find i^lco_『lcciur3i cfalutl(Au (Buffo’o^ft^M Μ P 揉^#¾^ 5*32- 53'edf 1 A滓啭鯽w LO0P Jc 3 jk滓啭辦寐 r-ogp ΈΑΊ hrs mg、ml 粦爵s T^r σ> bibs· s:mt ϋ hs mg/31 § Are， f 01 II LogP 3 磷l£命w Ur s^. Loosp c 1·95 3 vr-ogp 1 c 3 % hrs y〇 y· hrs y〇 n^nrljslltlll 5 40-0»· sa· hrs yo 24.34 ®/〇 $ hrs mg/3 —T hrs J/mi 轉啦^isT》 ΙΓ·09ν s$ σ> Afa· hrs % 29-32¾¾¾ s 46s· set. % hrs yo #¾0/0 H X X #¾0/0 ^4:ι£^ρ= X x 茗釐％ 1^^10 00 0 a 27 jk嫜卡烽砮(pp ba(^^)_!es ^聲 ΤΊΓ i X· X X X X J, X X 7cn p.o. po· ^^βαβ p聲(>β0 L 2 03 称 -67- 76 81^3Λ11ρ3ή rf2II^H

Find Ϊ5Ρ·7 -12.470 ssym 1.7 §1 S5P-2 Ϊ5Ρ·3 2,267 2 3 18.7 SSI M?r I55pf 5M2 707 6 2 Af5?3 29 5 ιρ·7 !1s,393 SSPODso) MMP4ssyz 5S^ %*節··.·!Λ Τ7Γ 3.1 % rs 18 - Jl 露 si f 5 26.1 轉赛^®±3g/ml Albs· LO0lJ5:-ei. ^ Jk_啭砷β ί 12.5 将承^18.10

19/5| -ί-og Ρ 3~Ic 1 s 1ϋ ^fI 芩 Μ Μ P 揉♦菩寺Jp oLn2--= Sircc’llra/ c/ass ) V?lcsiu r^uffon〕 ^'Jk肄啭辦寐T1/2 €v % 113 y〇 β 0 I Him> Mrnt· ·/0 hrs ❹/· $ """"""ms* X X #愛。/0 27 s$lps _8_ tr 背 i oxo « 濟4:^隸1>=0.29 $ HI caAS^) Z\2ES ββ ί ί iyc £ 林 -68-