TW580393B

TW580393B - Novel vaccine composition comprising HBV and HSV antigens

Info

Publication number: TW580393B
Application number: TW088103595A
Authority: TW
Inventors: Jean Stephenne; Martine Anne Cecil Wettendorff
Original assignee: Smithkline Beecham Biolog
Priority date: 1998-03-09
Filing date: 1999-03-09
Publication date: 2004-03-21
Also published as: KR20010041629A; HUP0101047A1; NO20004487D0; JP4510283B2; MY135965A; EP1064025A2; TR200002608T2; AU750720B2; AR014684A1; BR9908599A; CN1299288A; NZ506602A; WO1999045957A3; EP1064025B1; ES2273482T3; DE69933200T2; ATE339223T1; PL343429A1; WO1999045957A2; US6451320B1

Description

580393 A7 B7 五、發明說明（本發明係關於一種新穎的疫苗調配物，其製備方法及其於治療的用途。特別是本發明係關於給青春期人員使用的組合疫苗。 HSV-2是生殖器疱疹的主要病原。HSV_2及Hsv_i(唇部疱殄的主要病原）的特徵是可引起急性病症及主要於神經元的神經節細胞引起潛伏性感染的能力。在美國估計約有5百萬人罹患生殖器疱疹，同時每年有5〇萬的臨床病歷記錄（初次感染及重覆感染）。初次感染通常於青春期後發生，其伴隨著區域性的皮膚疼痛傷害，且維持2-3個星期。於初次感染後，5〇%的患者會有復發的現象。約有25%的患者每年會復發1〇_15次。相較於正常的患者’免疫受損的患者在統計上有較頻繁的復發機會。 HSV-2及HSV-1於病毒表面具有許多醣蛋白。其已知是 gB ’ gC ’ gD及gE 等。我們已知包含一或多種B型肝炎抗原之預防B型肝炎感染的疫田。如史克美占生物公司（SmithKline Beecham Biologicals)用來預防b型肝炎iEngerix-B(商標）疫苗。該疫苗包括B型肝炎表面抗原（尤其是研究生醫學雜誌，1987， 63(補充2)第65-70頁中，由Harford等人所提出的226胺基酸經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 S-抗原），且以氫氧化鋁做爲佐劑調配。目前需要一種有效的組合疫苗，用來預防青春期人員特別容易罹患的疾病。本發明提供一種疫苗組合物，其包括： a) B型肝炎病毒（HBV)抗原；及 -4 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公爱) 580393 A7 B7 五、發明說明（2 ) b)單純性疱疹病毒（HSV)抗原與佐劑的混合物’該佐劑係爲引發TH1細胞反應之較佳的刺激劑。本發明之疫苗組合物對於會被HBV，及/或HSV感染危及的青少年使用有極大的益處。本發明疫苗組合物可選擇性另外包括下述一或多種下述的其他抗原。令人驚对的是根據本發明之疫苗組合物並不產生干擾現象’也就是説針對本發明之組合物中的每一種抗原所產生的免疫反應’與每一種抗原分別與佐劑相混合後，所得的免疫反應相同’該佐劑係爲引發丁則細胞反應之較佳的刺激劑0 同樣由史克美占生物公司製造的Havrix(商標名）疫苗，是一種可用來預防A型肝炎感染的疫苗範例。其以氫氧化鋁做爲佐劑調配。該疫苗包含經甲醛處理使不活化之減弱的HM- 175 A型肝炎病毒；參見Andre等人（Pr〇g Med. Virol·，vol 37, pl-24) 〇本處所使用的名詞，A型肝炎病毒（HAV)抗原係指衍生自 A型肝炎病毒的蛋白質或是經減弱的ηav，其選擇性的是不活化態，例經曱醛處理。若是HAV抗原是衍生自Α型肝炎病毒的蛋白質，其選擇性的可是重組蛋白質。

Twinrix(商標名）疫苗是重組b型肝炎抗原與前述不活化的經減弱A型肝炎病毒的組合物。該疫苗可同時用來抗a型肝炎及B型肝炎。 -5- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） # (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂---------線

經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 580393 A7 B7 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製五、發明説明Q )歐洲專利第0 339 667號（Chemo Sero)中描述將Α型肝炎抗原與B型肝炎抗原組合以製成組合疫苗的概念。於該專利中提及佐劑的使用並非重點所在：佐劑只要能增進免疫活性至所要的程度’同時不引起副作用即可。該專利中同時提到可使用鋁膠，特別是氫氧化鋁膠及磷酸鋁膠。另外’本發明可提供一種疫苗組合物，其中包括； a) B型肝炎病毒（HBV)抗原； b) 單純性疱疹病毒（HSV)抗原；及 c) A型肝炎病毒（HAV)抗原與佐劑的混合物，該佐劑係為引發TH1細胞反應之較佳的刺激劑。本發明之疫苗組合物對於會被HBV，及/或HSV，及/或 HAV感染危及的青少年使用有極大的益處。免疫反應可廣泛的被分為極端的兩大類，體液免疫或細胞調節免疫反應（一般分為抗體及細胞效應物保護機制）。該反應已被命名為ΤΗ 1反應（經細胞調節反應），及TH2免疫反應（體液免疫反應）。極端的ΤΗ 1免疫反應的特性是產生具抗原專一性，僅有單倍型細胞毒殺性T淋巴細胞，及天然殺手細胞的反應。於老鼠’ ΤΗ 1免疫反應的特性是產生igG2a亞型的抗體，在人類則是產生IgGl的抗體。TH2免疫反應的特性是產生廣泛的免疫球蛋白亞型，在老鼠中包括，IgGi，IgA及IgM。目前認為引起這兩種免疫反應的驅使力是細胞激素。高量的ΤΗ 1細胞激素容易對所針對的抗原引發經細胞調節的免疫 -6 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS )八4規格（2丨0x297公羡） (請先閱讀背面之注意事項再本頁) I — 本一

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580393 A7 B7 五、發明説明（ 4 反應，而高量的TH2細胞激素容易對所針對的抗原引發體液免疫反應。 TH1及TH2免疫反應的分別並不是絕對的。事實上，個體將會支援是以TH1或以TH2為主的免疫反應。不過，通常是以老鼠中，由 Mosmann及Coffman(Mosmann，T.R.及Coffman， R· L. (1989) ΤΗ 1及TH2細胞：分泌不同型態的淋巴激素將導致不同的功能特性。免疫學年報（Annual Review of Immunology)，7，第 145-173 頁）所選殖出，被稱做 CD4+ve T 細胞株來考慮細胞激素的種類較為方便。一般而言，ΤΗ 1細胞反應伴隨著由Τ淋巴細胞來生產INF- r及IL-2細胞激素。其他伴隨著TH-1免疫反應引發所出現細胞激素，並不是由T 細胞所產生，如，IL_12。同樣的，TH2反應伴隨著11^4，11^-5，IL_6，IL-10及腫瘤壞死因子-/3(TNF-々）的分泌。已知有些疫苗佐劑特別適合用來刺激TH1或TH2細胞激素反應。一般，於注射疫苗或感染後，最佳的TH1 : TH2免疫反應均衡指示包括，於體外直接測量在經過抗原再刺激後，由T淋巴細胞所產生的TH1或TH2細胞激素，及/或測量具抗原專一性之抗體反應IgGl : IgG2a比例。所以，若於體外以抗原再刺激，TH1佐劑將刺激獨立的T 細胞群產生高量的TH1細胞激素，並且引發伴隨著TH1亞型之具抗原專一性的免疫球蛋白反應。特別適合用來刺激TH1細胞反應之佐劑如國際專利申請第 WO 94/00153及WO 95/17209所描述。 3-去-氧-醯基化單磷醯脂質A(3D-MPL)是如上述之佐劑。本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再本頁)

、1T 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 580393 A7 __ B7 五、發明說明（5 ) 已由GB 2220211 (Ribi)申請。在化學上，其爲3-去-氧-醯基化單磷醯脂質A與4，5或6醯基化鏈的混合物，並由在蒙大旱州（Montana)的Ribi免疫化學公司（Immunochem)所製造0 較佳的3-去-氧-醯基化單磷醯脂質A如歐洲專利〇 689 454 B1 (史克美占生物公司，SA)所描述。較佳的，3D-MPL的顆粒應小到可通過〇.22em的濾膜做無菌過濾（如歐洲專利0 689 454 B1所描述）。3D-MPL的量是每份劑量中佔10 " g-l〇〇# g，較佳爲25-50 # g，而抗原通常是每份劑量中占2-50//g。另一種較佳的佐劑是QS21，一種經HPLC純化的，由 Quillaja Saponaria Molina樹皮所衍生，不具毒性的部份。其選擇性的與3 -去-氧-醯基化單磷醯脂質a(3D-MPL)相混合，選擇性的與載體相混。生產QS21的方法如美國專利第5,057,540中所描述。包括QS21之非反應性佐劑調配物已被申請專利（w〇 96/33739)。已知包括QS21及膽固醇的調配物，若與抗原一起調配時，是有效的TH1刺激佐劑。因此，本發明的部份疫苗組合物中可包括QS21及膽固醇的組合。其他較佳的TH1細胞反應刺激物的佐劑包括，具免疫調節性的春核芬酸’如WO 96/02555中所申請的未經甲基化之 CpG序列。將上述不同的ΤΗ 1刺激佐劑組合，也是提供一種較佳TH i 細胞反應刺激物佐劑。例如，QS2i可與3D-MPL互相調配。 QS21 : 3D-MPL的比例，一般是1 : 1〇至1〇 :丨，較佳是i : 5 -8 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公髮） ----------------------- 訂，--------線 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 580393 A7 · B7 五、發明説明ς ) 至5 : 1，但實際上是1 : 1。較佳之最適協同範圍是2.5 ·· 1至 1 : 1的3D-MPL : QS21。根據本發明之疫苗組合物以包含載體為佳。該載體可是油在水中的乳化液，或鋁鹽，如磷酸鋁或氫氧化鋁。較佳的油在水中的乳化液包括，可代謝的油，如鯊烯，α 生育醇及吐溫（Tween)80。另外的油在水中的乳化液尚包括史般（span)85及/或卵麟質及/或三飢普林（tricaprylin)。較佳的，根據本發明疫苗組合物中的抗原係與3D-MPL及鋁相混合。一般而言，若是給人類使用的，則QS21及3D-MPL於每劑疫苗中的含為 1 //g_200 ，如 10-100 //g，較佳是 l〇//g_5〇//g。一般而言，油溶於水將包括2_ 10%的鯊烯，2-10%的α生育醇及0·3_3%的吐溫80。鯊烯對α生育醇的最佳比例是等於或小於1，因為在此狀況下的乳化液較安定。史班（Span)85 的量約為1%。本發明疫苗中較佳的可包括安定劑。非毒性的水包油性乳化液，較佳的，其於水性載體中包括非毒性的油’例如，鯊燒或鯊稀，乳化劑，例，吐溫8 〇。水性載體可是，如，經磷酸緩衝之生理食鹽水。於WO 95/17210中描述了溶於水包油之乳化液的qS2i， 3D-MPL及生育醇。較佳的，本發明組合物中的單純疱疹病毒抗原係衍生自單純疱瘆病毒-2，一般是醣蛋白d。醣蛋白D位在病毒的膜上，同時也出現在被感染細胞的細胞質中（Eisenberg R j et al ;病毒學雜誌1980，428-435)。其由393個胺基酸所組 _________ - 9 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再本頁) —ϋ ^^^1 本一、11 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 580393 A7 B7 五、發明說明（7 ) 成，包括訊息胜肽，且其分子量純爲60 kD。單純痙療病毒的外殼醣蛋白中，醣蛋白D可能是被瞭解的最清楚者（Cohen et al ;病毒學雜誌，哑，157-166)。已知醣蛋白D於病毒連結到細胞表面時拌演著重要的角色。尤其是醣蛋白D在活體上可謗發中和性抗體產生（Eing et al醫藥病毒學雜誌127 : 59-65)。不過，雖然在患者血清中出現高量的中和性抗體，具潛伏性的單純疮療病毒-2病毒可被再活化，並引起疾病再犯。本發明内容是包括308個胺基酸之經截取的單純疱疹病毒-2 St蛋白D，其中包含胺基酸1至306之自然發生的糖蛋白，加上在C端經截取去除膜固定區域，以天門冬醯胺及麩胺爲C 端。該蛋白質包括訊息胜肽的部份可被切除後獲得成熟的 283個胺基酸的蛋白質。在〇61^1^6(：11申請的歐洲專利£?-：6-139 417中描述了在中國倉鼠卵細胞中生產此蛋白質。較佳的，使用該重組成熟單純疱疹病毒-2經截取醣蛋白D 做爲本發明之疫苗調配物，並編號爲rgD2t。 WO 92/16231中曾描述抗原與佐劑3D-MPL之組合物。本發明組合物之B型肝炎病毒（HBV)抗原，一般是B型肝炎病毒表面抗原。已有完備的文獻敘述B型肝炎病毒表面抗原（HBsAg)的製備。參見下述範例，Harford et· al·於Develop. Biol· Standard 54，第 125 頁（1983)，Gregg et· al·於生物技術（Biotechnology) 5，第 479 頁（1987)，EP-A-0 226 846，EP-A-0 299 108及列入本篇之各項文獻。 -10- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公爱） .丨丨丨丨丨丨丨丨丨·!· I —丨丨丨1丨訂4丨丨丨丨丨丨丨 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

580393 Α7 Β7 五、發明説明t ) 如本處所使用，B型肝炎病毒表面抗原，的表現，本處縮寫為’HBsAg’或’HBS’包括其任何可表現HBV表面抗原之抗原性 HBsAg抗原或其片段。已知除了 226個胺基酸之HBsAg S抗原（參見1^〇11&丨861&1自然雜誌，317,489(1985)及列入本篇之各項文獻），若有需要，本處所描述的HBsAg可包括如上述及ΕΡ-Α-0 278 940之S抗原之前的所有或部份序列。本處所描述的HBsAg也可是變異體，例如，w〇 91/14703中所提及的’逃脫突變體’。HBsAg也包含於歐洲專利申請第〇 414 374中以L*表示的蛋白質，也就是說，該蛋白質的胺基酸序列包括一部份B型肝炎病毒大（L)蛋白質（ad或ay亞型）的胺基酸序列，該蛋白質胺基酸序列的特性包括： (a) 序列12-52之後接著序列133-145，其後再接著該L蛋白質之序列175-400 ;或 (b) 序列12之後接著序列14-52，再接著序列133-145，其後再接著該L蛋白質之序列175-400。 HBsAg也代表EP 0 198 474或EP 0 304 578中之多胜肤。一般而1，HBsAg為顆粒型態。其可單獨包括8蛋白質或或是組合態的顆粒，例如（L*，s)，其中L *如上定義，而s 代表B型肝炎病毒表面抗原的蛋白質。 HBsAg可如WO 93/24148中所描述，將其吸附至磷酸鋁表面。口較佳的，用在本發明調配物中的B型肝炎病毒（hbv)抗原疋HBsAg S-抗原，如商品Engerix-B(商標名：史克美占生物公司）所使用。適财酬家標準（CNS ) (請先閱讀背面之注意事項再本頁)

、1T 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 580393 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 五、發明說明（9 ) 歐洲專利申請第0 633 784中描述包括B型肝炎病毒表面抗原與3D-MPL相混的疫苗。屬於疱疹病毒的非洲淋巴細胞瘤病毒（EBV)主要會造成人類感染性單核白血球增多症，並主要發生在孩童或青年人身上。超過90%經非洲淋巴細胞瘤病毒感染的成人，在其一生中於周邊B淋巴細胞中會持續發生感染。患者一生在耳下腺都會產生該病毒，並且主要由唾液交換傳染。大部份經非洲淋巴細胞瘤病毒感染的孩童的症狀都不明顯，或是僅有輕微的症狀，但被感染的青少年或成年人都有典型的感染性單核白血球增多症，其特徵為發燒，咽頭炎，及腺體炎。經感染的患者一輩子都帶有抗-非洲淋巴細胞瘤病毒的抗體，因此’不會再一次的被感染。除了具有感染的特性之外，非洲淋巴細胞瘤病毒被發現可將淋巴球轉形為快速分裂的細胞，因此被認為與數種淋巴腫瘤有關，包括非洲伯克（African Burkitt，s)淋巴腫瘤（BL)。非洲淋巴細胞瘤病毒被認為與引起鼻咽癌有關（Npc) ^估計全世界有80,000人罹患鼻咽癌，尤其是中國人。非洲淋巴細胞瘤病毒初次感染的結果是產生感染性單核細胞增多症。如果沒有其他具危險性的症狀出現是不會有生命危險的。所謂的膜抗原複合體是由4種非洲淋巴細胞瘤病毒外殼蛋白質所組成。通常被稱為gp 220/350或gp 250/350或簡稱為 gp 250或350(參見EP_A_151079)。有明顯的證據顯示gp 35() 及gp 250可引導中和抗體的產生，而抗gp 35〇及gp 25〇的抗體也具有中和的特性。因此，上述蛋白質適合用來做為非 --------------------^—訂---------線 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

-12- 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 580393 A7 ------ -B7 ___ 五、發明說明（1〇 ) 洲淋巴細胞瘤病毒疫苗。有關將gp 250/350用來做爲預防及治療與非洲淋巴細胞瘤病毒相關的疾病，請參見EP 〇 173 254 〇非洲淋巴細胞瘤病毒表面主要的醣蛋白gp 350/220藉由·與細胞膜的蛋白質，CD21互相作用而感染標的的人類細胞。在人類身上，gp 350/220是非洲淋巴細胞瘤病毒中和抗體的主要目標，同時，有些gp 350/220可保護而抵抗與非洲淋巴細胞瘤病毒相關的疾病。根據本發明之疫苗組合物，雖然可使用其他具保護性的抗體，但以包含非洲淋巴細胞瘤病毒之gp 350爲佳。乳頭狀瘤病毒是小型的DNA瘤病毒，且具有高度的種族專一性。直到目前爲止，已報導超過7 0個不同的人類乳頭狀瘤病毒基因型。人類乳頭狀瘤病毒一般專一發生在皮膚 (如，人類乳頭狀瘤病毒-1及-2)或是黏膜表面（如，人類乳頭狀瘤病毒-6或-11)，同時，通常會造成可持續數月或數年的良性腫瘤（疣）。這樣的良性腫瘤會造成患者的苦惱，除了少數例外之外，並不會造成生命的威脅。有些人類乳頭狀瘤病毒與癌症有關。人類乳頭狀瘤病毒與人類癌症最強烈的相關性是存在人類乳頭狀瘤病毒-丨6及人類乳頭狀瘤病毒-1 8及子宮頸癌之間。子宮頸癌的發生最常見於開發中國家，每年全世界約有500,000個新病歷發生。目前，在技術上已可有效的以疫苗克服人類乳頭狀瘤病毒_ 1 6的初期感染，甚至是已包含有人類乳頭狀瘤病毒_丨6的癌症。參見Cason J·，臨床免疫醫療雜誌1994 ; 1(4) 293-306及 -13- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） -------------------訂，--------線 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 580393 A7

五、發明說明（11 )

Hagenesee μ·Ε·，醫學上的感染 1997 14(7) 555·556，559_ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 564 °根據本發明之疫苗組合物以包含主要殼衣蛋白，L i蛋白質爲佳。在今天’已分離出多種不同的人類乳頭狀瘤病毒，並藉由在細菌中的選殖系統及近來發展的PCR複製技術的輔助而瞭解其特性。人類乳頭狀瘤病毒的基因組在與已經完整定性之牛乳頭狀瘤病毒I型（BPV1)的比對下，已可定義其分子組織。、、雖然有些微的變異，但是所有人類乳頭狀瘤病毒的基因組至少有7組早期基因，e 1至E 7，以及2組晚期基因組l 1 -L2。另外’在上游的調節區匯聚的調節序列可控制人類乳頭狀瘤病毒基因組大部份的轉錄作用。 E 1及E 2基因分別涉及病毒的複製及轉綠控制，同時在病毒被整合後即被破壞。E6及E7，以及最近有證據顯示E5則與病毒轉形有關。牵涉到子宮頸癌的人類乳頭狀瘤病毒，如人類乳頭狀瘤病毒1 6及1 8，其致癌步驟於病毒DNA整合後開始。整合將使得製造殼衣蛋白質的L 1及L2基因不活化，並且不斷表現2種早期蛋白質E6及E7的結果將造成正常細胞分化功能逐漸喪失，並且開始形成癌。經濟部智慧財產局員工消費合作社印製子宮頸癌通常發生在婦女身上，並且由前癌化間期發展到具侵略性可導致死亡結果的癌症。已知該病症間期將使内細胞贅瘤增長，並依其嚴重性被分爲第I至ΠΙ期。在臨床上，人類乳頭狀瘤病毒感染女性的内生殖道產生子宮頸平滑肌增厚現象，其於感染後主要影響子宮頸鱗片上 -14- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 580393 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 五、發明說明（12 皮細胞的表面及間層細胞。多核症是病毒感染的結果，將使細胞呈多核狀，並在核的外圍有清楚的光暈。上皮細胞將因不正常的角質化作用而增厚’因此造成傷口的疣狀外觀。當血清中出現人類乳頭狀瘤病毒丨6或1 8，並有平滑肌增厚現象’則有發展爲子宮内皮細胞增加（CIN)且於該處癌化的南度危險’這即是侵略性子宮頸癌的前兆。國際專利申請第W0 96/19496中提出人類乳頭狀瘤病毒E6 及E7蛋白質的變異體，特別是於e 6及E7蛋白質均有缺失的 E6/E7融合蛋白質。該缺失融合蛋白質被認爲可產生免疫性。 W094/00152，WO94/20137，WO93/02184 及 WO94/05792 中提出以人類乳頭狀瘤病毒L1爲主的疫苗。該疫苗可包括單體，设粒或類似於病毒顆粒的L 1抗原。該顆粒可另外包括L2蛋白質。其他的人類乳頭狀瘤病毒疫苗係以早期蛋白質爲主’如E7或融合蛋白質，如L2-E7。較佳的’本發明疫苗係利用以E 6或e 7蛋白質連接到具τ 細胞抗原決定部位的免疫融合部位所組成。較佳的，本發明之免疫融合部位係衍生自嗜血性流行性感冒病毒B的蛋白質D。較佳的，蛋白質D的衍生物包括該蛋白質的如1 / 3，特別是約前n端的1 〇〇_ 11 〇個胺基酸。根據本發明，其中包括衍生自如上述之人類乳頭狀瘤病毒的抗原。較佳的’本發明包括如下述所組成的融合蛋白質，包括來自人類乳頭狀瘤病毒丨6之E 6的蛋白質D，來自 -15- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

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五、發明說明（13 ) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製人類乳頭狀瘤病毒16及£7的蛋白質1)，來自人類乳頭狀瘤病毒18之E7的蛋白質D，及來自人類乳頭狀瘤病毒18之£6 勺蛋白為D。較佳的，蛋白質d的邵份包含蛋白質d的前 1/3 〇較佳的，將本發明蛋白質於大腸桿菌中表現。較佳的，該蛋白質表現時帶有包含5 - 9個組織胺酸的尾巴，較佳係帶有 6個組織胺酸。其可輔助使易於純化。該蛋白質的製造完整的描述於懸致中的英國專利申請第GB 9717953.5號。較佳的，本發明之疫苗組合物另外包括水痘帶狀疱疹病毒抗原（VZV抗原）。適合包括在疫苗調配物中的水痘帶狀疱疹病毒柷原包括由 Longnecker et al·，Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84, 4303-4307(1987)所描述的 gpI-V。較佳爲使用gpl(參見Ellis et al之美國專利4,769,239)。同時參見歐洲專利第0 405 867 B1。較佳的，本發明之疫苗組合物另外包括人類巨細胞病毒 (HCMV)抗原。人類巨細胞病毒是屬於疱疹病毒家族之人類 DNA病毒。人類巨細胞病毒在全世界各地都具有流行傳染性。但對於兩種族群，人類巨細胞病毒特別容易引起嚴重的病症。人類巨細胞病毒是引起新生兒先天性缺陷的主要原因。第二種高危險族群是免疫功能不全的患者，如遭受愛滋病毒感染及接受移植的患者。該病症於臨床上有多種症狀，包括發燒，肝炎，肺炎及感染性單核增多症。用於抗人類巨細胞病毒疫苗中之較佳抗原是如WO 95/31555中提出的gB685**。用在抗人類巨細胞病毒疫苗的免疫原包栝 -16- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） -------T·訂，--------線 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 580393 Μ ----------Β7__ 五、發明説明（） 14 7 ΡΡ65，如WO 94/0015〇(希望之城）中所描述的人類巨細胞病毒間質蛋白。較佳的，本發明之疫苗組合物另外包括水痘帶狀疱疹病毒及人類巨細胞病毒抗原，特別是前述抗原。主較佳的，本發明之疫苗組合物另外包括毒漿體原蟲抗原。母漿體原蟲是一種強制性細胞内寄生的原生動物，其可引起溫血動物。包括人類罹患毒漿體原蟲病。雖然毒漿體原蟲病在健康的患者身上不會有明顯的症狀，但是對懷孕婦女及免左不全的患者會造成嚴重的併發症。抗毒漿體原蟲疫旬中使用的較佳抗原是如WO 96/02654中所描述的SAG1 (或被稱為？3 0)或是如\\^〇 92/1 1366中所描述的丁§34。較佳的，本發明之疫苗組合物另外包括水痘帶狀疱疹病毒或人類巨細胞病毒抗原與毒漿體原蟲抗體的混合物，特別是前述抗原。較佳的’本發明之疫苗組合物是多效價疫苗，如四·或五效價疫苗。本發明之調配物可有效的引發保護性免疫反應，即使其中只有極少量的抗原（如低到5 rgD2t)。其對初次感染提供極佳的保護作用，同時可有效的刺激專一性的體液（中和抗體）及效應物經細胞調節（DTH)免疫反應。本發明也提供可用於治療的疫苗調配物，特別是用於治療或預防單純疱疹病毒感染及B型肝炎病毒感染。本發明疫苗也包含具有免疫保護性數量的抗體，且可以傳 ____-17- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（21〇X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再本頁) I 本一 - 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 580393 A7 B7 五、發明說明（15 ) 統技術製備。疫苗的製備一般於藥劑生物技術，Vol.61，疫苗的設計-次單體及佐劑的研討，由Powell及Newman編輯，Plenum Press，1995。疫苗的新趨勢及發展，由Voller et al.，編輯， University Park Press，巴爾的摩，馬里蘭州，美國，1978。於微脂粒中封入殼中，如Fullerton於美國專利4,235,877中所描述。將大分子與蛋白質結合，如Likhite於美國專利 4,372,945中及如Armor等人於美國專利4,474,757中所描述。疫苗中蛋白質劑量的選擇是以所引起的免疫性保護反應不會有重大的副作用產生。該劑量依所使用的免疫原而有不同。一般而言，每一劑中包括1-1000"8的蛋白質，較佳是 2-100eg，最佳是4-40eg。對每一種疫苗中最適蛋白質劑量的確定是以觀察抗體的滴定度，及患者的反應而定。於初次接受疫苗後，患者於約4星期内需再追加一劑。除了給予可能受到單純疱疹病毒或B型肝炎病毒感染的人員施打疫苗外，本發明之藥劑組合物可用來對被該病毒感染的患者做免疫治療。尤其是本發明提供一種製造的方法，該方法包括將疱疹病毒抗原及B型肝炎病毒抗原與TH-1謗導佐劑，如，3D-MPL 及，較佳的，與載體，如銘相混合。若需要，可將其他抗原以任何方便的順序加入，以提供如本處所述的多效價疫苗組合物。範例1 :以gD+HBs組合做免疫性測試

本試驗目的是證明在Al(OH)3/3D-MPL中之HSV gD/HBV -18- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） --------------------- - 訂，--------線 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 580393 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 ---------- 五、發明說明（16 ) HBs組合之凋配物的可行性。將比較單獨使用上述抗原或組合使用後在天竺鼠身上所表現的免疫反應。HBs是B型肝炎病毒表面抗原的縮寫，特別是本處所指的8_蛋白質。§〇是本處所指的rgD2t的縮寫。實驟步驟其實驗步驟如下。將6隻母的Hartley天竺鼠於第〇天及第 2 8天以下列調配物做肌肉注射：

-第 1 組：HBs 5 " g/Al(OH)3 125 " g/3D-MPL 12·5 " g -第 2組：gD 5//g/Al(OH)3 125"g/3D-MPL 12·5 "g -第 3 組：HBs 5 v g+gD 5 a g/Al(OH)3 125# g/3D-MPL· 12·5 // g -第 4組：HBs 5"g+gD 5"g/Al(OH)3 125//g/3D-MPL* 12·5 jug *不同批的3D-MPL 再做第2次免疫注射後的第1 4及3 1天將動杨放血。利用 ELISA法測定兩個時點的抗HSV gD及HBV HBs的體液免疫反應。同時測定對HBs之延遲性過敏反應（DTH)。其i〇"g HBs做兩次皮下注射。於注射〇，24及48小時後測定皮膚的厚度以訂定DTH反應的狀況。結果 1 .抗體反應圖1爲抗-gD經ELISA測定的滴定度。經gD免疫後所產生的抗-gD滴定度與經gD+HBs組合物免疫後於動物中所誘發的滴定度相似。於調配物中出現HBs並不影響抗-gD抗體反應的謗發。 -19- 本紙張尺度適用中關家標準（CNS)A4規格（21G X 297 Μ } ------------------丨丨訂---------線 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 580393 Α7 _Β7_ 五、發明說明（17 ) 同樣的，抗-HBs抗體的滴定度與經單獨的HBs或與gD相組合物進行免疫後的滴定度相似。圖2表示經單獨以HBs或以HBs+gD免疫後的動物可產生相似的抗-HBs滴定度。由圖1 -4的結果顯示，於測試調配物中，gD/HBs組合物謗發的抗體反應與僅用相同的抗原所謗發的抗體反應相似，同時，對HBs組合物的DTH反應與僅由HBs所謗發的相似。所以，對僅由HBs所謗發的DTH反應與經HBs+gD免疫後動物之DTH反應之間無顯著的差異。gD的存在並不影響對 HBs所謗發的DTH反應。範例2 : HBV/HSV組合物的PRO30實驗本實驗目的是用來評估HSV天竺鼠模型中將溶於3D-MPL/ 鋁調配物之HSV gD+HBV HBs組合物與僅gD溶於3D-MPL/ 鋁之調配物的保護效率。3D-MPL/鋁調配物係將鋁（10%重量比）溶於3D-MPL(1%重量比）。實驗步驟將1 2隻母Hartley天竺鼠以下述調配物使免疫或是不加以處理： gD+HBs/3D- g〇 ai(oh)3， 3D-MPL MPL/鋁調配物 (5/^g) (62.5^g) (6.25/^g) +HBs + + 3D-MPL (5/^g) ai(oh)3， (62.5//g) (6.25/^g) gD/3D-MPL g〇 ai(oh)3， 3D-MPL /鋁調配物 (5 Mg) (125/. g) (12.5//g) 在第0天及第2 8天，每天分別對動物進行肌肉下注射免疫 -20- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） ------------------J—訂'--------線 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 580393 A7 _ B7 五、發明說明（18 ) 兩次。在第57天時（第2次免疫過後1個月），以1〇5菌落數的 HSV2 MS菌株（100//1)於陰道内注射，然後再每天觀察初之 (注射後第4-12天）及重覆（注射後第13-39天）發病的臨床徵兆。根據表1所描述的數種範疇及根據累積積分曲線測量所謗發的保護結果。在第1 4及第2 8天做追加II次免疫後，收集其血清並測量其抗4〇£1^18八抗體的滴定度（以£11/1111表示）；同時測定在第2 8天追加11次免疫後所獲得的血清的HSV中和活性 (，NEUTRA,;相對於經稀釋血清可給予抗HSV2細胞療效 100%的保護所回應之滴定度）。結果血清試.驗結果下表及圖5係其免疫產生性的結果：第28天做追加II次免疫後的Neutra/ELISA比例調配物 ELISA(GMT) NEUTRA (GMT) NEUTRA/ ELISA比例 gD+HBs/3D-MPL/鋁調配物 6687 238 3.5% gD/3D-MPL/鋁調配物 7475 200 2.7% 由gD(5 " g)+HBs(5 " g)溶於3D-MPL/鋁調配物的組合物與 gD/3D-MPL/鋁調配物所謗發的ELIS A中和滴定度相似。抗初次病徵的保護性如圖6(累積積分曲線）及下表I，gD+HBs/3D-MPL/鋁調配物的組合相較於僅有gD溶於3D-MPL/鋁調配物對初次病徵 -21 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） ------------------!訂 ---------線 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 580393 A7

五、發明說明（19 ) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製有較佳的保護性。拉再發病徵的保護性如圖7 (累積積分曲線）及下表2所示爲抗疱疹再犯的保護性。gD+/HBs/3D_MPL/銘調配物的組合相較於僅有扣溶於 3D-MPL/銘調配物對再犯病徵有較佳的保護性。於gD+HBs及僅有gD的實驗組中，有相似數目的動物有發生再犯在觀察期間（追加後第13至39天），有完全相同數目的動物發生1次以上的再犯情況。記錄病徵複發的動物的病情嚴重性的大抵相似。表1 :初次病徵妒組 η 調配物初次病徵未發病動物陰道受傷的％外在受傷的％ PI 指標** 受傷的嚴重性* 中等 %vs控制組 η 1 1 2 gD/3D-MPL/ 鋁 75.0 16.7 8.3 25.0- 96% 0.50 •96% 3 2 1 2 gD+HBs/3D-MPL/鋁 83.3 0.0 16.7 50.0- 91% 9.00 -22% 2 3 1 2 未處理 16.7 8.3 75.0 587.5 11.5 0 10 *注射後第4天至第12天受傷積分總合（同時考慮未受傷的動物）。受傷積分：未受傷（0)，陰道傷害（0.5或1)，外皮起疹（2， 4 ， 8或16) **初次感染指數=(最大積分i)的總和X (發生機率％;其中 i=0，0.5，1，2，4，8或 1 6 -22- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） --------—訂---------線 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 580393 A7 B7

明說明發 ^____I__ 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 Μ — K) 3 Γ«3 c ί 翁！ σ 2 a r & S 9 參 00 U) 00 U) 00 U) > 萍 K) Lh b 〇\ Lh 00 U) ο b K) U\ b to b 族吟啣2 ^雄 ^§r <1 a b oo U) h—k » t <1 b U) U) U) 私 h-* <1 Lh H—k ON On H-^ On 雄p 〇 o Lh Ui o U) b o 4ί litnU — W * 1 to 重 <1 者 VO ON b o U) o b o 奇 4¾ VO --------------------------_—訂，--------線 ------ i (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)____ W膝sgD+KBS^命參燐相瀚sgDit^^^^iis^l^^-摩 118<3:漆^^斜兹#命^郭寐。誇。 _2 ··孰_荈_ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 580393 A7 B7 五、發明說明（21 ) 範例3 : (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本實驗目的是用來評估包括經鋁鹽及3D-MPL調劑之 HAV，HBs及gD之疫苗組合物於老鼠中所謗發的血清免疫反應。本範例中所使用的A型肝炎（本處經縮寫爲fHAV，）組成分係於Havrix中發現的不活化的ΗΜ175菌株。材料及方法抗原/3D-MPL批次： HBs : A1 : 4550" g/ml，先經吸附的 HBs : 227,62//g/ml HAV:Al:1380eg/nU，HAV:25230EU/ml gD ： 493 μ g/ml 3D-MPL ： 957// g/ml 調劑步驟

•第 1 組：HBs A1P04/3D-MPL

HBs/H20/NaCl/苯氧基/A1P04 15 分後+ 3D-MPL培養1 小時 •第 2 組：gD A10H3/3D-MPL H20/A10H3，5 分後+gD 15 分後+3D-MPL 30分+PBS 15 分 + 苯基 •第 3 組：HAV A10H3/3D-MPL H20/NaCl/苯氧基 5 分後+A10H3/HAV 30分後/3D-MPL •第4組：經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1· H20/NaCl/苯氧基 5 分後+A1P04/HBs 5 分後/3D-MPL 30分 2. gD/A10H3 15 分+ 3D-MPL 30分將1及2混合2 0分後+HAV混合1小時。血清學結果 •利用HBs或gD做爲塗佈抗原以ELISA方法測量定量抗- -24- $紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格(210 X 297公經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 580393 A7 B7 五、發明說明（22 ) HBs及抗-gD抗體。每個盤孔中抗原及抗體的用量是50/H。抗原以PBS稀釋至最終濃度爲l"g/ml，並以4°C，整夜的條件下，使吸附至9 6孔的細胞培養盤之盤孔中 (Maxisorb Immuno-plate，Nunc，丹麥）。再將該培養盤以包括1%牛血清白蛋白及0.1%吐溫20(飽和緩衝液）之 PB S於3 7 °C下培養1小時。將以飽和緩衝液做2倍稀釋的血清加入經抗原塗佈的盤中，並於37°C培養1小時3 0 分。以包含0.1%吐溫20之PBS清洗4次，再加入經飽和緩衝液稀釋爲1/1000倍之經生物素結合之抗-老鼠Ig (Amersham, UK)至每一個盤孔中，並於37°C下培養1小時3 0分。經過清洗步驟後，再加入以經飽和緩衝液（分另U對HBs及抗_gD ELISA)稀釋爲1/5000或1/1000倍之 streptavidin-經生物素化過氧化酶複合物（Amersham， UK)，並於37°C下培養30分。將培養盤以上述方法清洗，並以包含溶於0.1%吐溫20及0.05M檸檬酸pH 4.5之鄰-苯烯基二胺（Sigma) 0.04%，H202 0.03% 中培養 20 分。以2N H2S04停止反應，並於492/620 nm下讀取指數。以SoftmaxPro(利用4種參數的方程式）做爲參考計算 ELISA滴定度，並表爲EU/ml。 • 根據製造商提供的方法，以Enzymun ELISA(Boehringer) 定量抗-H AV抗體。實驗步驟以下述調配物將7隻Balb/C老鼠於肌肉下進行免疫反應（相應於1 /1 0人類的劑量）。 -25- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） ------------------1 訂----------線 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 580393 A7 B7_ 五、發明說明（23 ) 1 · HBs(2" g)/AlPO4(50 // g)/3D-MPL(5 A g) 2 · gD(2" g)/Al(OH)3(50 " g)/3D-MPL(5 e g) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 3 . HAV(72EU)/A1(OH)3(50// g)/3D-MPL(5 μ g) 4. HAV(72U)/A1(0H)3(5 μ g)+HBs(2 μ g)/AlPO4(40 μ g)/3D- MPL(2.5 μ g)+gD(2 μ g)/Al(OH)3(5 μ g)/3D-MPL(2.5 μ g) 以50//1疫苗，於第0及第2 1天，對動物進行2次免疫。在免疫後的多重時點（第I劑後21天及第II劑後14天）收集血清，並測量其抗-HAV，HBs及gD抗體之滴定度。結果表3爲第I劑後2 1天及第II劑後14天之個別結果，摘錄如下：經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 -26- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 580393 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明說明（24 ) 表3 抗HBs反應抗HAV反應抗-gD反應 (EU/ml) (mIU/ml) EU/ml) 第I劑後 14天第II劑後 14天第I劑後 14天第II劑後 14天第I劑後 14天第II劑後 14天第1組DHi GMT 第2組 i56A2:HBs 659 935 979 934 1606 879 409 880 gD 20/( 20/ΡΟ4/3Γ 127282 165796 118574 55063 102040 90388 39447 75015 3H/3D-M )-MPL 50 [PL 50 989 1150 564 1087 805 1135 598 149616 97672 61866 100172 73340 186113 122633 -27- --------------------丨訂*--------線 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 580393 A7 B7 五、發明說明（25 ) GMT 1 1 871 106123 第3組 HAV 720/OH/3D-MPL 50 20 20 20 20 20 41 20 20 20 37 20 20 20 20 GMT 20 25 第4組 HAV 720/OH-HBs 20/PO4/3D-MPL 25-gD/20/OH/3D-MPL 25 88 63427 25 272 202 61711 336 72765 20 28 1166 105676 395 78781 20 498 730 65277 474 99881 20 380 819 62107 890 112439 20 20 395 76378 542 120652 20 20 493 54908 1020 41460 20 20 345 35466 GMT 414 79699 21 91 549 69312 HBs血清學結果分組 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製

HBs A1P04 3D-MPL HAV Al(OH)3/HBs A1P04 3D_MPL/gD Al(OH)j 3D-MPL 抗-Hbs ELISA滴定度(EU/mi) 追加第I劑後追力u第Π劑後 880 414 75015 79699 -28- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐） 580393 A7 B7 五、發明說明（26 ) • gD血清學結果

分組 gD Al(OH)3 3D-MPL HAV A1(OH)3/HBs A1P04 3D-MPL/gD Al(OH)3 3D-MPL 抗、gD ELISA滴定度（EU/ml) 返知第I劑後追加第II劑後 871 106123 549 69312 • HAV血清學結果分組抗-HAV ELISA滴定度(Elj/mi) 追加第I劑後追加第II劑後 HAV Al(OH)3 3D-MPL 20 25 HAV A1(OH)3/HBs A1P04 3D-MPL/gD 21 91 Al(OH)3 3D-MPL 結論 • 組合疫苗及包括鋁鹽及3D-MPL之HBs疫苗所觀察到的抗 _HBs抗體滴定度相仿。 • 組合疫苗及包括紹鹽及3D-MPL之gD疫苗所觀察到的抗_ gD抗體滴定相仿。 • 組合疫苗及包括鋁鹽及3D-MPL之HAV疫苗所觀察到的抗-HAV抗體滴定度相仿。因此，當HBs，gD及HAV同組於包含鋁鹽及3D、MPL之疫苗中時，彼此之間不產生干擾。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

丨1訂·--------線經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 -29 - 7紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210 X 297公釐）申請曰期案號類別 Αι,ιΚ , C4 中文說明書修正頁(91年6月） f篇專利説明書 -、II名稱中文含有HBV及HSV抗原之新穎疫苗組合物英文 "NOVEL VACCINE COMPOSITION COMPRISING HBV AND HSV ANTIGENS，，姓名 1.珍史蒂芬尼國籍 2·馬汀安希希利威惴道夫 1-2.比利時發明創作> 三、申請人住、居所姓國籍名 1 ·比利時利克森沙特市第一學院路89號 2·比利時利克森沙特市第一學院路89號比利時商史密斯克萊美占生物公司比利時比利時利克森沙特市第一學院路89號詹恩史帝芬

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580393 第088103595號專利申請案合8 中文申請專利範圍修正本(91年6月） D8 々、申請專利範圍 1. 一種疫苗組合物，其包括： (a) B型肝炎病毒（HBV)抗原；及 (b) 單純性疱疹病毒（HSV)抗原‘ 與佐劑的混合物，該佐劑係為引發TH1細胞反應之較佳的刺激劑，其中B型肝炎抗原與HSV抗原非為共價結合。 2. 根據申請專利範圍第1項之疫苗組合物，其中另外包含載劑。 3 .根據申請專利範圍第1項或第2項之疫苗組合物，其中引發ΤΗ 1細胞反應之較佳的刺激劑係選自包括下述佐劑： 3D-MPL，或是其中3D-MPL的顆粒以約為或約小於100 nm為佳之3D-MPL，QS21，QS21與膽固醇的混合物，及 CpG寡核苷酸。 4.根據申請專利範圍第3項之疫苗組合物，其中引發TH1細胞反應之較佳的刺激劑是3D-MPL。 5 .根據申請專利範圍第1項之疫苗組合物，其中的B型肝炎抗原是B型肝炎表面抗原。 6 .根據申請專利範圍第3項之疫苗組合物，其中的B型肝炎抗原是B型肝炎表面抗原。 7 .根據申請專利範圍第1項之疫苗組合物，其中的單純疱疹病毒抗原是單純疱疹病毒2 gD或其截留體。 8.根據申請專利範圍第3項之疫苗組合物，其中的單純疱疹病毒抗原是單純疱疹病毒2 gD或其截留體。 9 .根據申請專利範圍第1項之疫苗組合物，其中另外含有非本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐) 580393 A8 B8 C8 D8 六、申請專利範圍洲淋巴細胞瘤病毒（EBV)抗原。 10. 根據申請專利範圍第9項之疫苗組合物，其中的非洲淋巴細胞瘤病毒抗原是gp 3 5 0。 11. 根據申請專利範圍第1項之疫苗組合物，其中另外含有A 型肝炎抗原。 12. 根據申請專利範圍第1 1項之疫苗組合物，其中的A型肝炎病毒抗原係衍生自HM-175株。 13. 根據申請專利範圍第1項之疫苗組合物，其中另外含有人類乳頭狀瘤病毒（HPV)抗原。 14. 根據申請專利範圍第1 3項之疫苗組合物，其中的人類乳頭狀瘤病毒抗原係選自一或多種下述物：LI，L2，E6， E7，蛋白質D-E6，蛋白質D-E7或L2-E7。 15. 根據申請專利範圍第2項之疫苗組合物，其中的載體係選自包括氫氧化鋁，磷酸鋁及生育酚及水包油性乳化液。 16. 根據申請專利範圍第1項之疫苗組合物，其中另外包含水痘帶狀疱疹病毒（VZV)抗原。 17. 根據申請專利範圍第1 6項之疫苗組合物，其中的水痘帶狀癌療病毒抗原是gpl。 18. 根據申請專利範圍第1項之疫苗組合物，其中另外包含人類巨細胞病毒（HCMV)抗原。 19. 根據申請專利範圍第1 8項之疫苗組合物，其中的人類巨細胞病毒抗原是gB685**或pp65。 20. 根據申請專利範圍第1項之疫苗組合物，其中另外包含毒漿體原蟲（Toxoplasma gondii)抗原。 -2- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐) 580393 A8 B8 C8 D8 、申請專利範圍 21. 根據申請專利範圍第20項之疫苗組合物，其中的毒漿體原蟲（Toxoplasma gondii)抗原是 SAG1 或TG34。 22. 根據申請專利範圍第1項之疫苗組合物，其中包含HBsAg S抗原及HS V2gDt，且選擇性包括一或多個非洲淋巴細胞瘤病毒gp350 ;水痘帶狀癌療病毒gpl ; A型肝炎病毒HM-175不活化株；人類乳頭狀瘤病毒之LI，L2，E6，E7，蛋白質D-E6，蛋白質D-E7或L2-E7 ;人類巨細胞病毒之 gB685** 或ρρ65及毒衆體原蟲（Toxoplasma gondii)之 SAG 1 或TG34抗原。 23. 根據申請專利範圍第3項之疫苗組合物，其中包含HBsAg S抗原及HSV2gDt，且選擇性另包括一或多個非洲淋巴細胞瘤病毒gp350，水症帶狀癌療病毒gpI，A型肝炎病毒 HM_175不活化株；人類乳頭狀瘤病毒之LI，L2，E6， E7，蛋白質D-E6，蛋白質D-E7或L2-E7 ;人類巨細胞病毒之 gB 685** 或 pp 65 及毒蒙體原蟲（Toxoplasma gondii)之 SAG1或TG34抗原。 -3- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210X297公釐)