TW513420B - Chromanone and thiochromanone derivatives having steroid sulfatase inhibiting activity - Google Patents

Description

513420

技術範圍

本發明係關於笨并二氫哌噚及硫代 物。其係關於式I 笨并二氫呢。弄衍生

r4

I 之化合物，其中 心及匕獨立是氫，酿基，烧氧 該胺0磺酿氧側鏈是結合至該6位置= R3 疋烧基，鍵嫌某·細此里· 烷基，烷氧基或自取代；芳“二固：：之分選擇性被 ^ A * ^ P. ^ ^ ,方烷基，方鏈烯基；芳鏈炔基； 鯭基，衣烷烷基；3一氧代_2_氧雜莰基；6,6_二 [3.1.1]庚一2 -婦-2 -美· 一德左&朴甘、 又义 每益^ 1 雜方基分選擇性被烷基，烷 氧基或函取代，或是雜芳烧基；及 &疋氣’烧基，·基；或烧氧基； 或該胺續醯氧側鏈是結合至該7位置； R3有以上為R4指出之意義；及 R4有以上為R3指出之意義； X 疋氧或硫，及該符號二：一_是^一個早或一個雙鍵； 以自由形態或鹽形態；在此以後簡稱為、、本發明之化合 物。 σ 式I之化合物可以以自由，是即中性或鹼，形態存在， 513420 五、發明說明（2) 或以鹽，特別是酸加成鹽，形態存在。以自由形態之式夏 之化合物可以以習用方式轉化為鹽形態及反之。 該胺磺醯氧側鏈宜是連結至該6位置。 醯基宜是一種羧酸，特別是一種烷基，芳烷基或芳基羧 ，，之殘基。其宜是合計2至5個碳原子之烷羰基，其特別 是乙醯基。烷氧羰基宜是合計2至5個碳原子者，其特別是 曱氧羰基。烷基作為一個R!或匕分或作為一個取代基之邙 ^宜，1至5個碳原子者，其特別是曱基。烧基作為—個 或h为宜是1至12個碳原子者，其特別是甲基，乙基 丁基，尤其是第三丁基。鏈烯基宜是2至5個碳原 者’其宜是乙烯基。 -個環烧基分可Μ單環或多冑。當其是單環時，盆宜 ϊ Λ Λ原子者，其特別是環丙基，環戊基或環己、 二’：其疋夕環時，其宜是金剛烷基，特別是 j金剛烧基；或雙環 取代者，其宜是被烷基取代。 衣烷基疋 笨至4個碳原子在其伸烧基部分者。其宜是2_ 部分^11是2芳；=是2至4個礙原子在其伸鏈稀基 —曰〇 , 本乙烯基’宜是以反式構型。关鍅ϋ苴 且疋2至4個碳原子在其伸鏈块基部分者。 方鏈炔基 袖Ϊίϋΐ宜是1至4個碳原子者，特別是1個碳原子在立 =基c環烷部分可以是單環或多環，當其在， S : ί疋3至1 2個碳原子者，其特別是環戊Α田Ί产疋Ρ 基，當其是環時，其宜是雙環[2.2. U庚-2-基基或壤己 513420 五、發明說明（3) 雜芳基及雜芳烷基之雜芳基部分宜是吡啶基或噻吩基。 其且疋未取代的。雜芳烷基之伸烷基部分宜是丨至4個碳原 子者’特別是1至2個碳原子者。 尸烧氧基宜是1至4個碳原子者，其特別是甲氧基。鹵是 氟，氣或溴，宜是氯。 比及匕宜是氫或烷基，特別是氫。它們宜是相同。&宜 是烷基或環烷基^ R4宜是氫^ X宜是氧。 ^ 一 個雙鍵。 付贶且疋 ^發，之化合物之一個較可取的亞群中，r!是相 或甲基，及R3是第三_ 丁基；環戊基；環己基； Γϋΐ「1 [2.2.1]庚|基甲基；正-金剛烧基㈠- i:2二上2] 基；6, 6_ 二甲基雙環[3. I 1]庚-2- 4個石-二早士人，土 ，本乙烯基；2,2,3，3一四甲基環丙基；1至 部分反者'之烷基或苯烷基有1至4個碳原子在其伸烷基 在另一較可取的亞群中 D XLV S ^ 側鏈是連結至該6位置.R /1 =虱；該胺續醯氧 意義，宜是4至12個；：龐/其分選自以上為&指出 -個5至12個礙原子：=，支鏈烧基，諸如第三-丁基； 之雙-哎=π p A \衣％烷基分或一個6至1 0個碳原子 ΐ-或；：；:\院獨基立分，各選擇性被1至5個m 二甲基又雙；; 3一氧好 是如以上所界定。 2稀-2-基’及X及該符號^_ 本心明之化合物之另一亞群是具式Ip

第9頁 513420 五、發明說明（4)

RlP X\/R3p

Ip n_〇2s—〇一r R,p 6 之化合物，其中

Rlp及R2p獨立是氫或烷基： 該胺磺醯氧側鏈是結合至該6位置； R3p除3-氧代-2-氧雜莰基外有以上為R3指出之意義 R4p是氫； 或該胺磺醯氧側鏈是結合至該7位置； hp是氫；及 R4p除3-氧代-2-氧雜莰基外有以上為R3指出之意義 X及該符號二二---是如以上所界定； 以自由形態或鹽形態。 本發明之化合物之另一較可取的亞群是具式Is 及 Φ 及 'n——〇2s—〇

Is a 之化合物，其中

Rls是氫，甲基，乙醯基或甲氧羰基； R2s是氫或甲基： 該胺續醯氧側鍵是結合至該6位置；

第10頁 513420 五、發明說明（5) R3s是1至1 2個碳原子之烷基，3至1 2個碳原子之單環環 烷基分選擇性被甲基取代，1 -金剛烷基；正-金剛烷基； 4-戊基雙環[2.2.2]辛-1-基；7至9個碳原子之苯烧基；2-苯乙烯基；雙環[2.2.1]庚-2 -基曱基；3 -氧代-2 -氧雜莰 基；或6, 6_二曱基雙環[3· 1. 1 ]庚-2-烯-2-基，及 是氫； 或該胺磺醯氧側鏈是結合至該7位置； R3s是氫；及 R4s是5至7個碳原子之環烷基；及 X及該符號=二是如以上所界定； _ 以自由形態或鹽形態。 本發明也提供一種用於製備本發明之化合物之方法，其 包含 a )胺磺醯化式11

« 之化合物，其中 R3，R4，X及該符號：:-是如以上所界定， b)為製備式la

513420 五、發明說明（6) --- 之代合物，其中 X ’ 及該符號：--是如以上所界定及 R!及1’除鏈烯基’鏈块基，芳鏈烯基 6, 6一二甲基雙環[3· 1· 1]庚-2-烯-2〜美外右鍵诀基及 及匕指出之意義， 土外有M上分別為& 還原式lb

R, 之對應化合物，其中取代基是如以上所界定，· c)為製備式I之化合物其中Ri及匕之至少之—: 基或燒氧羰基， 疋烧基 N-取代式I之化合物其中該取代基匕及匕之至少 醯 氫 之一是 及以自由形態或鹽形態回收所得之式丨之化合物。 :吏於胺續醯化作用之標準條件進行方法變體a)，例 如藉反應式11之一種化合物與： a ^硫醯氯及疊氮化納或卸以產生對應中間物其中該羥 原子是以一個基團，Λ置換，其於還原該疊氮基 後付式I之化合物其中Ri及匕是氫，或 /3 )C1S02-NC0，繼以水級 ％ ^ , ^ 人二社^ η θ 广解所得之中間物以產生式I之化 合物其中匕及1?2是氫，或 r )式 πι

第12頁 五、發明說明（7) R丨、 /N-〇2SsY hi r2 團，種化合物’其中及匕是如以上界定及Y是一個離去基 中，例如函’宜是氣，在一種鈍性溶劑例如二曱基曱醯胺 種盔如適當加入一種有機鹼，諸如一種有機第三胺，或一 鋼“。、、機驗’例如一種驗（氫）碳酸鹽或鹼氫化物，宜是氫化 行方^變體b)可^以依照以次用於氫化雙鍵之標準程序進 列如催化加氫，宜使用氫與一種加氫觸媒諸如pd，pt 配，最宜是Pd在木碳上。自式丨之代合物其中匕是-一鏈炔基，芳鏈烯基或芳鏈炔基開始，在反應之第 一 中廷些基團還原。反應可以停止於此階段及在苯并 一虱哌弄％中之雙鍵保持不變。進一步還原得式丨a之化合 物其中§亥符號:一-一是一個單鍵。 方法變體c)是依照用於N-取代作用之標準程序進行， 藉烷基化作用或醯化作用，宜使用烷基_，_硫酸鹽或_甲_ 磺酸鹽，宜是烷基碘，或醯基-或烷氧羰基鹵，宜是氣， 宜是在一種適當的鹼，諸如一種鹼碳酸鹽或鹼氫化物之存 在下，宜是在一種鈍性及宜是極性溶劑諸如二曱基甲醯胺 中’宜是於溫度介於-20與約12(TC，宜是介於室溫與約

第13頁

513420 60t 0 可以以習用方式自該反應混合物回收及分離及精裝本發 明之所得之化合物。可以以習用方式，例如藉分級結晶^ 不對稱合成’自對應的不對稱取代，例如旋光起始物料= 獲得異構物諸如對映體。 ’ 起始物料及中間化合物是已知者或可依照已知之方法咬 類似地如描述於例中之方法製備。 實例說明 以次之例例證本發明。全部溫度是以攝氏度（t)。除另 行指出者外本發明之化合物是以自由形態。使用以次之縮4 寫： '

Ad = 1-金剛烷基=三環[3·3·1·13.7]癸—1 一基

Cam = 1-获基=4，，7，7-三曱基雙環[2.2.1]庚-1-基 db =雙鍵 DMS0 = 二甲基亞楓 - mp = 熔點 nor-Ad = 正金剛烧基 sb =單鍵 t- =第三 Μ1 : 2—第三丁基—喃g希一 4一酮一 6 — 胺基墙酸酷 [方法變體a)] 加入158毫克氫化納（80%在礦油中）至4〇〇毫克6 -輕-4-H -苯并-4-哌〇弄-2-第三-丁醋在無水二甲基甲醯胺中之溶 液。在室溫於攪拌30分鐘後加入630毫克醯胺基續醯氯，

O:\57\57721.ptc 第14頁 2000.10. H· 014 513420

第15頁 513420 五、發明說明（ίο) 例編號 胺磺醯 氧分之 位置 Ri r2 R3 Ra X — mp 2 6 Η Η Η 0 db 158-160° 3 6 Η Η Η ο sb 127° 4 6 Η Η Η ο db 170-171° 5 6 Η Η Η 0 sb 136-138° 6 6 Η Η —二〇 Η 0 db 185-188° 7 6 Η Η •c(ch3)3 Η 0 sb 118-120° 8 6 Η Η -ch2ch2-<^) Η 0 db 155-158° 9 6 Η Η Ad Η ο db 166-168° 10 6 ch3 ch3 -c(ch3)3 Η ο db 83-85° 11 6 Η Η -CH2-<Q> Η 0 db 157-160° 12 6 - Η Η .(CH2)8：CH3 Η 0 db 77-80° 13 6 Η Η (+)-3-氧代-2-氯雜-Cara Η 0 db 210-212° 14 6 Η Η ㈠-3-氧代-2-氣雜"Cara Η 0 db 213-215° 15 6 Η Η Ad . Η 0 sb 192-194° 16 6 Η Η 雙環 [2.2.1]庚-2-堯甲基· Η 0 db 1650

第16頁 513420 五、發明說明（11) 例編號 胺磺醯 氧分之 位置 R丨 R2 R3 Ra X — mp 17 〇 Η Η nor-Ad Η 0 db 165-167° 18 6 Η Η nor-Ad Η 0 sb 165-167° 19 6 Η Η \ —< 1 2, 2, 3, 3- hs y c 〖曱基環丙基 Η 0 db 1480 20 6 Η Η 4-戊基雙環[2. 2. 2]辛 -卜基 .. Η 0 db 1850 21 6 Η Η -ch2ch2ch3 Η 0 db 1480 22 6 Η Η (1R)㈠-6, 環[3· 1.1]肩 ί 6-二甲基雙 卜2:娣-2-基 Η 0 db 112° 23 6 Η Η -c(ch3)3 Η S db 150-153° 24 6 Η Η Ad Η S db 220° 25 \ 7 Η Η Η Ο 0 db 160-163° 26 6 . Η Η 環十二基 Η 0 db 168-170° 26a 6 Η Η 1，1-二曱基壬-1-基 Η 0 db 122° 第17頁 513420 五、發明說明（12) 一 例27 :._苯.立二氫-4 -峨哜一 6 — 0—胺基石黃酸2 -環己酯 [方法變體b)] 溶解9 0毫克4H-苯并-4-哌噚-6-0 -胺基磺酸2 -環己酯（例 4)於乙酸乙酯中及經鈀（1〇%在木炭上）於大氣壓及室溫氫 化3小時。過濾該混合物經矽凝膠（矽藻土）及在真空中蒸 發該濾液。在矽凝膠上（環己烷/乙酸乙酯2 /1)層析該殘留 物。獲得標題化合物（無色結晶；mp 1 36-1 38。）。 類似如例2 7中所述獲得本發明之以次化合物：

例3 2 : N -乙龜基胺基石黃酸2 - (1 -金剛惊· n zt η -芣并- 4 -哌 哧-6 -基酉旨 [方法變體c)] 溶解100毫克2-(1-金剛烷基）-4-苯并-4 -哌。弄-6-〇_胺基 石黃酸S旨（例9)及32¾克之三乙胺於無水二氣甲烧中及以32 毫克之乙酸於室溫處理。於室溫攪拌該混合物1小時，然 後倒至Ρ Η 7水缓衝溶液中及以乙酸乙酯萃取。經硫酸錢乾

第18頁 513420 五、發明說明（13) 燥該併合有機層及在真空中濃縮。獲得標題化合物（點性 膠）〇 [!H-NMR (DMSO-d6): 7.71 (d, J = 2.8Hz, IH); 7.59 (d, J = 9Hz, 1H); 7.51 (dd, J = 2 8 + 9Hz, 1H); 6.10(s, IH);5.77 (s, 1H);2.06 (br.s, 3H); 1.93 (br , 6H); 1.73 (br.s, 6H); 1.69 (s, 3H)].

[方法變體C )] 加入52毫克氫化鈉（95%)至240毫克2-第三-丁基-4H〜笨 并一 4 -哌。弄一 6 - 〇 -胺基石黃酸酯（例1 )在無水二甲基甲醯胺中 之溶液。於室溫授拌該混合物2 0分鐘及然後以2 〇 〇毫克之 甲基碘處理。繼續攪拌另2小時，倒該混合物至PH 7水緩 衝溶液中及以乙酸乙酯萃取。經硫酸鎂乾燥該併合有機層 及在真空中〉農縮。在石夕凝膠（環己烧/乙酸乙酯5 / 1 )層析兮 殘留物。獲得標題化合物（無色結晶；mp 8 3 - 8 5。）。 類似如例32及33中所述獲得本發明之以次化合物： 例編號 胺續酿 氧分之 位置 Ri r2 r3 R4 X — mp — 34 6 -COOCH3 Η Ad H 0 db 無定形*

H-NMR (DMSO-d6): 7.75 (d, J = 2.7Hz, 1H); 7.63 (d, J = 9Hz, 1H); 7.57 (dd, J = 2.7 + 9Hz, 1H); 6.12 (s, 1H); 3.38 (s, 3H); 2.09 (br.s, 3H); 1.96 (s, 3H)· 1.95 (s, 3H); 1.75 (br.s, 3H).

第19頁 513420 五、發明說明（14) 以以次方式製備起始物料 Α) ，^>酸乙醋中，纪（10%在木炭上）於大氣塵及室溫氫化 ^卞#1-2-（2-曱本基）-4H-苯并—哌噚（mp 115〇)1小時。 ,濾該混合物經矽藻土，及在真空中蒸發該濾液。獲 題化合物（無色結晶；mp 1 8 0。）。 心 B) -金剛基）-6-：!-4H-笑并-4 -哌口弄 a)加入4克1-金剛烷醯氣至丨· 5克2,卜二羥基乙醯笨 無水吡啶中之溶液。於40。攪拌該混合物18小時，倒至水 中及以乙酸乙酯萃取。以1 N鹽酸水溶液洗滌該併合有機 層3次及隨後以碳酸鈉水溶液，經硫酸鎂乾燥及在真空中 濃縮。溶解該粗產物於無水二曱基曱醯胺中及於5。一滴— 滴加入至30 0毫克之氫化鈉（80%在礦物油中）在無水二甲基 曱醯胺中之懸浮液。移去該冷却浴，及在室溫攪拌該入 物4小時。然後加入1· 5毫升之乙酸及250毫升之水，繼以 以乙酸乙酯萃取。經硫酸鎂乾燥該併合萃取物及在真空中 蒸發。在矽凝膠（環己烷/乙酸乙酯6 / 1 )層析該殘留物以移 除起物料及主要副產物。藉以2 0毫升之3 2 %鹽酸水溶液在 曱醉/一卩*^烧中達成所得之1 - [5-(1-金剛烧g蓝氧）一2 —經苯 基]- 3-（1-金剛烧基）-1,3-丙二酮之環化作用。獲得6 — (1 — 金剛烷醯氧）-2-(1-金剛烷基）-4H-苯并-4 -哌。弄： !H-NMR (CDC13)： 7.81 (d，J = 2.7 Hz, 1H)，7·48 (d，J = 9 Hz，1H), 7.35 (dd，J = 2·7 + 9 Hz， 1H)，6.19 (s，1H)，2.12 (br.s，12H), 1.97 (s，3H)，1.95 (s，3H)，1.78 (s，12H)·

第20頁

：)1：342U 五、發明說明（15) —--- —b,) >谷解330毫克6_(1-金剛烷醯氧）—2 —(卜金剛烷基）_4H_ ^ 底弄s於一鳴烧中及以5耄升之10%氫氧化納水溶液 、。於至溫授拌該混合物3小時及然後倒至PH 7 2M水 緩ί 了，t。以乙酸乙醋萃取，於乾燥及蒸發後得一種粗 產物八疋措層析法純化。獲得標題化合物[無色結晶； 230。（自 2-丙醇）]。 以類似方式可製備以次化合物·· 6 一羥—2 — (2一笨乙烯基）-4H-苯并-4-哌噚（mp 2 1 7-222。）； 2- ^ 三-丁基-6H4H-苯并-4-哌噚（mp 169-171。）； 2- τ基-6 -羥-4Η-苯并—4-哌。弄 [^-NMR (CDC13): 9.10 (br.s, 1H), 7.50 (d, J = 2.9 Hz, H), 7.20 - 7.35 (m, 6H), 7.18 (dd, J = 2.9 + 9 Hz, 1H), 6.03 (s.. 1H), 3.91 (s, 2H)]; (+)_6-羥-2-（4, 7, 7-三曱基-3-氧代-2_氧雜-雙環[2· 2· 1] 庚-1-基-4H-苯并—4-哌哜（mp 227。）； 2-壬基-6-羥-4H-苯并-4-哌译（mp 95-97。）； (-）-6-羥-2-（4, 7, 7-三曱基-3-氧代-2-氧雜-雙環[2· 2· 1] 庚-1-基-4H-苯并-4-脈。弄（mp 232。）； 〇 2-（雙環[2. 2· 1 ]庚-2 -基曱基）-6-羥-4H-苯并-4 -哌噚（mp 186°)； 6 -羥-2 -正金剛烧基-4H-苯并-4 -哌^(mp 19 0。）； 6-羥-2-(2, 2, 3, 3-四曱基環丙基）-4H-苯并-4-哌噚（mp 173°)； 6-經-2-(4-戊基雙環[2·2· 1]辛_1_基）-4H-苯并_4-峨°弄 (mp 1 80-1 82°)；

第21頁 )13420 五、發明說明（16) 6 一羥-2-丙基-4H-苯并-4-哌噚（mp 150。）； (1R)(-)一6, 6-二甲基雙環[3· 1· 1 ]庚-2-烯-2-基}-6-羥 〜4H〜笨并_4-哌唏（mp 1 55-1 58。）； 環十二烧基-6 -羥-4H-苯并-4 -脈^(ίηρ 168-17 0。）； 2環己基-6 -羥- 4Η-苯并-4-哌°弄 [!H-NMR (DMSO-d^): 10.72 (br.s, 1H); 7.98 (s, . H); 7.89 (d, J = 8.7Hz, 1H); 6.89 (dd, J = 2.2 + 8.7H2, 1H), 6.79 (d, J = 2.2Hz, 1H); 2.58-2.70 (m, 1H); 1.65- 1.80 (m, 5H); 1.20- 1.35 (m, 5H)]; 2一（1，1-二甲基壬-1-基）-6-羥-4H-苯并-4-哌哜。

^1-金剛烧基）-6_4H -硫代笨并-4 -脈p弄 a)加入1 · 4克4-甲氧硫代酚至1 〇克之預熱至約9〇。之多 1酸。然後慢慢加入2· 5克3-(1-金剛烷基）_3-氧代丙酸乙 醋’及於90。攪拌該混合物為時合計1· 5小時。倒該混合物 至冰/水’劇烈攪拌及以乙酸乙酯萃取。經硫酸鎂乾燥該 併合有機層及在真空中蒸發。藉層析法在矽凝膠（環己烷/ 乙酸乙酯6 /1 )純化該殘留物。 獲得2-(1-金剛烷基）—6-曱氧—4H-硫代苯并—4-贩。弄（無 色結晶；mp 1 40。）。

b)在氬氣下於室溫加入14毫升之在二氣甲烷中 ίΤ:/1.12 克 2—(1-嫩基= -物Λ t水二氣甲烷中之溶液。於攪拌1小時後倒該 :併人萃取°以碳酸氫納水溶液洗满 化合物（無色結晶；mp 257。於切凝膠使用

第22頁 513420 五、發明說明（17) 乙醋4/1作為洗脫液層析後）。 以類似方式可以製備以次化合物： 2一第三-丁基—6-羥-4H-硫代苯并-4 -哌哜（mp 1 88-1 90。）。 式ί之化合物以自由形態或藥物可接受的鹽形態，在此 以後簡稱為、、本發明之藥劑”，具藥物效能。它們被指出 可用作藥物。特別是它們抑制類固醇硫酸酯酶活性。 類固醇激素特別是組織是與數種疾病，諸如乳，子宮内 Ϊ ^别列腺之腫瘤相關連。這些類固醇激素之局部生產之 刖肢疋類固醇3-〇-硫酸酯其是在該目標組織被該酶類固醇 硫酸=酶脫硫酸酯。抑制此酶造成該對應的活性類固醇激· /σ療上關連的降低之局部程度。此外，類固醇硫酸酯 ，抑制劑可能也是免疫壓制性的，及當輸送至腦部增進記 尚有，茲 在皮膚之内 腺早位之由 性象徵之脫 刺是由多種 用造成之一 之產生；在 者較大及產 是受雄激素 定性角色， 始及發展兩 已發現 生量及 於雄激 髮及多 因素， 種多病 幾乎全 生較多 控制， 其也關 者具重 本發明之藥 是因此特別 素之病症， 毛症及用於 諸如遺傳， 因疾病。粉 部粉刺患者 皮脂。皮脂 其對粉刺以 連由於雄激 要性。產生 劑降低雄 被指出供 諸如粉刺 鱗狀細胞 皮脂，激 刺之最重 中皮脂腺 腺之發展 及皮脂溢 素之皮脂 男性象徵 双系及/或雌激素 用於治療毛囊皮脂 ，皮脂溢，產生男 癌之局部治療。粉 素，及細囷交相作 要造成因素是皮脂 比有健康皮膚之人 及皮脂之生產程度 之發病機理扮演決 生成及對粉刺之開 之脫髮是由在頭皮

第23頁 Μ 3420 五 '發明說明（18) 中毛囊進入毛髮生長終期相之數目择 之期間增加造成。其是由雄激素us長終期相 強化其是由一種在穿土用各，毛之一種病理的濃密化及 特徵。多毛病是由雄；辛之ί性毛髮生長範式說明其 或由於毛囊對雌n t ΐ 疋由於雄激素之生成增加 七襄對雄激素之過敏性增加。 劑，23:此疋被指出供用作類固醇硫酸醋酶抑制 ίΐ色其中硫酸醋酶分裂之類固醇產物扮演一 單位之由於；^私主 寺殊情況·毛囊皮脂腺 徵之脫髮及多毛症；癌症皮月曰溢，產生男性象 腫瘤諸如乳，子宮内膜i疋由於雌激素及雄激素之 炎性及自r上 腺之腫瘤，及鱗狀細胞癌， :疫疾病諸如風濕性關節炎，型I及型II糖尿 身f生、，J1斑狼瘡，多發性费彳 炎，血營$ ，生广U夕w生硬化，重症肌無力，甲狀腺 ^血g九，潰瘍性結腸炎及克羅 皮癖，濕疹及接觸性皮炎；抗宿主敕：扃’皮f病老如牛 術德罘它姑f · 移植疾病，就喘，移植 ❹ 呆：包括阿耳茨海默氏病。力…進’如於老年性痴 以上之效能可以示於，例如，/ 是攝氏度）： 於W如’以-欠之測定中（全部溫度 L 制劑在^管内_ a)人的類固醢銪si?酯_夕趾儿•丄λ 接組織分娩及剝除膜及連 ^〖υ储存忒物料。於解凍後於4。進

第24頁 513420 五、發明說明（19) 行全部進一步的步驟，而於20◦調節pH值。在1· 2升之緩衝 液（50 mM Tris - HC1，pH 7·4; 0.25M 蔗糖）中均化 4〇〇 克 之組織。於1 0 ’ 0 0 0 g (重力）離心該組織均漿4 5分鐘。將上 澄液放置一旁及在500毫升之缓衝液a中再均化該小粒。於 ， 離心後併合該兩上澄液及接受超離心作用（1〇〇, 〇〇〇g，丨小 時）。再懸浮該小粒於緩衝液A中及重覆該離心作用。懸浮 該小粒於50毫升之50 mM Tris-HC1，pH 7·4中及儲存於 -20。直至進一步精製。 、 於解凍後，如上述藉超離心作用收集微粒體及再懸浮於 50 毫升之緩衝液Β(10 _ Tris — HC1，pH 7 〇; lmM edta; 2 mM 2-酼基乙醇；1% Trit〇n χ—1〇〇 容積/ 容積；〇· 1%， 柳肽酶容積/容積）中。在冰上以溫和攪拌丨小時後，離心 該懸浮液（100’ 0 00g，1小時）。收集含該酶效能之上澄液 及以1M Tris調節pH至8.〇。 然以施用該溶液至一支以緩衝液Β，ρΗ 8· 〇平衡之羥基 磷灰石柱（2· 6 X20公分）。以缓衝液β以2毫升/分鐘之流量 洗滌該柱。調節該併合液至pH 7· 4及在一支在緩衝液c (20 mM Tris-HC1，pH 7·4; 〇·1% Trit〇n X一 1〇〇 容積/容

積；0·5 M NaCl)中平衡之伴刀豆球蛋白一A琼脂糖柱層 析，及然後該結合之蛋白質以10%容積/容積甘露糖苷在缓 衝液c中洗脫。併合活性分及對緩衝液D(2〇 mM Tris—HCl， pH 8·0; 1 mM EDTA; 〇·1% Trit〇n χ —1〇〇 容積/ 容積；1〇% 甘油容積/容積）滲析。 施用該活性分至一支以緩衝液!）平衡之藍琼脂糖柱（〇 · 8

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X10公分）；以線型梯度之緩衝液1)至2]^ “^在 洗滌及然後洗脫該柱。併合活性分，如所需濃縮、之中 (Centric^n 1 0)，對緩衝液滲析及以等分儲存於。 b) iM一塞··純化之人類固醇硫酸酯酶也快速 酸鹽諸如4-甲基-7一經基香豆素基硫酸鹽。 = 之溶液： mM 4-甲基7-羥基香豆素 7· 5中）（最終濃度〇. 5 mM)

1) 50微升之基質溶液（15 基硫酸鹽在0.1M Tris-HCl，pH 2) 50微升之稀釋試驗化合物溶液稀釋於Q.i μ Tris-HCl，pH 7·5，〇·ι% Triton Χ-100 容積 / 容積中（試 驗化合物之儲液是製備於二曱基亞楓中；該溶劑之最終濃 度在該測定混合物中不超過1 %); 3) 50微升之酶溶液（約12 u/毫升）（1酶單位u是類固 醇硫酸醋酶於500 //Μ之初始基質濃度在〇· 1M Tris_HCl， pH 7· 5 ;0· 1% Triton X-100容積/容積中；於37°自小時 水解1 nmlo之4-曱基7-羥基香豆素基硫酸鹽之量）。 這些板於37。培育1小時。藉加入100微升之〇· 2M NaOH停 止反應。以 Aex =355 nm 及 Aem =46 0nm (Titertek Fluoroskan II)測定螢光強度。 c)袓Ji: IQ值上計算:自於試驗化合物之不同濃度（c) 獲得之螢光強度（I)使用以次關係

第26頁 513420 五、發明說明（21) 100 l + (c/IC50 户

甘 由 J Γι略1GQ不用抑制劑觀測到之強度及s是斜率因數，計算抑 制酶活性5〇%(IC5〇)之濃度。 卞介抑 人3 〇胺基續酸酯供用作參比化合物及是與試驗化 1 ·平行及是約60 Μ測定其IC5〇值，相對1 C5〇值是界定如 相對IC5()值:

試驗化合物之I C5Q —----- ---__ __

雌_胺基磺酸酯之IC5Q 本發明之藥劑在此測定中以相對IC5Q值在0· 0 06至30之範 圍抑制類固醇硫酸酯酶。 2·氮眉^琉—醵醋&ΜΜΛ細胞萃取物中： 〜使用標準細胞培養技術生長人的角質化細胞（HaCaT)或 知生自人皮膚之纖維細胞（1BR3GN)至匯合。藉胰蛋白酶作 用收集細胞，以磷酸鹽緩衝之鹽水（PBS)洗滌i次及懸浮在 20 mM Tris-HCl，pH 8·〇中。聲震該懸浮液及然後於 1 20 0 0g離心30分鐘。該上澄液接受超離心作用於 i〇〇〇〇〇g6〇分鐘。再懸浮所得之微粒體小粒於含〇 1% Triton X-10〇容積/容積之緩衝液中及任由其放置⑽分 鐘。於另離心於lOOOOOg為時3〇分鐘後，移出該上澄液其

第27頁 513420 五、發明說明（22) 含該溶解化之酶及儲存於40。 為測定酶活性加入10微升之酶溶液至丨〇〇微升之5〇 //Μ脫 氫表雄酯酮硫酸鹽（〇犯儿3)含約6〇〇〇〇(10111[311]-〇11£人3(21

Ci/mmol)在 0·1 M Tris-HCl，ΡΗ 7·5; 0.1% 容積 / 容積

Tri ton X-100中。自在DMS0中之儲液加入不同濃度之試驗 化合物。在37G培育30分鐘後，加入250微升之IN NaOH。 以1¾升之甲苯萃取該混合物。8〇〇毫升之該有機層是接受 液體閃爍計數以測定基質其已分裂至脫氫表雄酯酮（DHEA) 之分。如以上所述計算I Cm。對類固醇硫酸酯酶抑制之該 雌酮胺基石黃酸酯之I Cm是在約1 - 5 nM之範圍，視使用之酶_ 濃度而定。 ， 本發明之藥劑以相對I Cm值在〇 · 〇 〇 6至5 〇之範圍抑制類固 醇硫酸S旨酶活性在HaCaT角質化細胞及1BR3GN纖維細胞 中 〇 制在以DHEAS培盲之HaCaT細始 3·獻固醇硫酴酷 -—~!-二_------- η 〜次坩乃巴 ψ 在Eagle媒質之Dulbecco修訂（DMEM)輔以1〇%容積/容積 胎牛血，（FCS)中培育HaCaT角質化細胞。它們生長至匯合 及然後藉胰蛋白酶作用收集。置約2 χ1〇6個細胞至9· 6平。 方公分孤及在含FCS之媒質中培育直至達成匯合。缺 變該媒質為不含血清之卯腿；加入〇·3//Μ dheas作為美 續培育96小時。自儲液在乙醇中加入 ； 定中該最終乙醇濃度不高於1%容積/容積。與：平 以沒有細胞之媒質培fDHEAS作為非_酶水解之對照。於培

第28頁 513420 五、發明說明（23) 育後，移出上澄液及1毫升是以4毫升之曱苯萃取。收集3 毫升之有機層及在真空中蒸發去溶劑。溶解殘留物於乙腈 中。加入10微克DHEA作媒質。藉高效液相層析法（HPLC)使 用一支RP C-8柱及以1〇 mM硫酸銨PH 6/乙腈（ 60/40 )於1 毫升/分鐘之流量等度洗脫。自藉以一具裝設一個流動細 胞之放射偵測儀連續監測測定之對應放射峰之面積計算在 培育期間裂開之DHEA量。自於試驗化合物之不同濃度獲得 之數據如以上測定1中所述計算丨及相對〗值。雌酮胺 基磺酸酯之IC5Q值是約〇.1 nM。 在此測定中本發明之藥劑示相對κ⑼在〇· i至1〇〇之範 _ 供以上之使 特定藥劑，給 上，當該藥劑 物體重之每天 得滿意的結果 至約2 5 0 0毫克 接受的載體或 本發明之藥 方式給藥。這 釋劑及，選擇 鍵片及膠囊口 替代方式是 軟膏及乳膏腸 扣1文用 藥之方 是以自 劑量給 °單位 之該化 稀釋劑 劑可以 些藥劑 性，其 服給藥 這些藥 胃外局 m 里 f 式及所需之治療 約〇· 1毫克/公斤 藥’適當地分成 劑量形態包含， 合物與至少一種 混合。 以供用於此類指 可以與習用化^ 他賦形劑混合，' 〇 當然，視例如使用之 而定。然而，一般 至約1 0 0毫克/公斤動 每天2至4次給藥，獲 例如，自約1 · 2 5毫克 固體或液體藥學上可 示之已知標準之相似 上可接受的載體及稀 及例如以此類形態如 劑可以以習用形 部或靜脉内給藥 態諸如洗液，溶液， 。有效物質之濃度當

第29頁 513420 五、發明說明（24) 然將視例如使用之特定藥 + 、 而定。通常，局部施用形铲 所需之治療及該形態之性質 约5重量％，特別是自〜^ ;辰度例如自約0 · 0 5重量％至 果。 、’、·至約1重量％，獲得滿意的結 含本發明之一種藥劑連 或稀釋劑之藥物組合物主 >、一種藥學上可接受的载體 明之一種藥劑連同至少一 ^發明之一部分，藉混合本發 以製備該藥物組合物I方藥學上可接受的載體或稀釋劑 藥劑供用作藥物，特別a、亦然。本發明也包含本發明之 別是在預防或治療回應Γ固旨酶抑制劑’特 疾病在纟中硫酸醋_之類曰酶抑制之疾$，諸如 特別是在預防或治產物裂開扮演-個角色者， 明之藥劑供用於製備—種情況。其另包含本發 劑。 種樂物供用作類固醇硫酸酯酶抑制 本發明特別包含本發明之藥 位之由於雄激素之病症，諸如粉刺，。，毛=脂腺單 徵之脫髮及多毛症，或用於鏠 曰他，產生男生象 :為本發明之藥劑供用於製備一= ;腺單位之由於雄激素之病症或用於鱗狀 丁 T之=合物，4H_苯并_4_哌译_6+胺基石黃酸2_第三_ γ列9之化&物，4H-苯并-4-哌唔-6 — 0—胺基磺酸 〔1 —金剛烷基）酯’及例24之化合物，4H-护冲犮丑d °弄-6-0-胺基磺酸2-(ι—金剛烷基）酯，特別是例}之化合哌 mar 第30頁 513420 五、發明說明（25) 物，是本發明在這些指示中之最可取的藥劑。例如，在以 上測定1中已測定，這些藥劑分別有約0. 4，0. 1及0. 0 0 64 之相對I C5〇值。

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Claims (1)

1. 513420 _案號 88105316 六、申請專利範圍 1 . 一種式I s之化合物 案號 88105316 %年夕月 >' 曰 修正孝 献’91· 5.’21

   其中 Rls是氫，曱基，乙醯基或曱’氧羰基； R2s是氫或曱基； 該胺磺醯氧側鏈是結合至該6位置； R3s 是1至1 2個碳原子之烷基；一個3至1 2個碳原子之 單環環烷基分選擇性被曱基取代；1 -金剛烷基；正-金剛 烷基；4 -戊基雙環[2.2.2]辛-1-基；7至9個碳原子之苯烷 基；2 -苯乙烯基；雙環[2.2.1]庚-2-基曱基；3-氧代-2-氧雜莰基；或6 ,6 -二曱基雙環[3·1·1]庚-2 -烯-2-基；及 R4s是氫； 或該胺磺醯氧側鏈是結合至該7位置； R3s是氫；及 R4s 是5至7個碳原子之環烷基；及 X 是氧或硫；及該符號---是一個單或一個雙鍵； 以自由形態或鹽形態。 2 ·根據申請專利範圍第1項之化合物，其為2 -第三丁基 4 Η -喷唏-4 -酮-6 - 0 -胺基磺酸酯以自由形態或鹽形態。

   O:\57\57721-910521.ptc 第33頁 513420 案號 88105316 年夕月曰 修正 六、申請專利範圍 3 ·根據申請專利範圍第1項之化合物，其為2 - ( 1 -金剛烷 基）4H—喷σ希一4 一酉同一6 — 0 -胺基石黃酸S旨或2 —（1 一金岡4烧基）4H — 硫代咬：唏-4-酮-6-0-胺基磺酸酯，以自由形態或鹽形態。 4 · 一種用於製備根據申請專利範圍第1項之化合物之方 法，包含 a ) 胺磺醯化式I I

   R4 Π 之化合物，其中r3， 利範圍第1項中所界定；或 b )為製備式I a X及該符號——是如申請專 R, N-〇，S —〇

   la 是如申請專利範圍第1項中所 之化合物，其中 X ’ R i ’ R 2及該符號 界定及 R3’及1?4’除鏈烯基，鏈炔基，芳鏈烯基，芳鏈炔基

   O:\57\57721-910521.ptc 第34頁 513420 _案號88105316 q丨年夂月 日 修正__ 六、申請專利範圍 及6, 6 -二曱基雙環[3·1·1]庚-2 -烯-2 -基外有申請專利範 圍第1項中分別為R3及1?4指出之意義， 還原式I b •R】、 ZXYR3 n_o2s-〇一^ I o lb 之對應化合物，其中取代基是如申請專利範圍第1項中所 界定；或 c )為製備如申請專利範圍第1項中所界定之式I s之化 合物及其中I及1?2之至少之一是烷基，醯基或烷氧羰基， Ν -取代式I s之化合物其中該取代基h及1?2之至少之 · 一是氫， 及以自由形態或鹽形態回收所得之式I s之代合物。 — 5 · —種用於治療毛囊皮脂腺單位之由於雄激素之病症、 或用於鱗狀細胞癌之局部治療、或供製備一種藥物用於治 療毛囊皮脂腺單位之由於雄激素之病症或用於鱗狀細胞癌 之局部治療之醫藥組合物，包含根據申請專利範圍第1至3 項中任何一項之化合物以自由形態或藥學上可接受的鹽形❶ 態，連同至少一種藥學上可接受的載體或稀釋劑。 6.根據申請專利範圍第1至3項中任何一項之化合物，其

   O:\57\57721-910521.ptc 第35頁 513420 _案號88105316 Θ丨年夕月>·)曰 修正__ ^、申請專利範圍 係以自由形態或藥學上可接受的鹽形態，供作為一種藥物 用於預防或治療疾病其回應類固醇硫酸酯酶抑制者。 7.根據申請專利範圍第1至3項中任何一項之化合物，其 係以自由形態或藥學上可接受的鹽形態，供用於治療毛囊 皮脂腺單位之由於雄激素之病症，或用於鱗狀細胞癌之局 部治療，或#供用於製備一種藥物供用於治療毛囊皮脂腺單 位之由於雄激素之病症或用於鱗狀細胞癌之局部治療。

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