TW505654B

TW505654B - Synthesis of analogs of PTH and PTHrP

Info

Publication number: TW505654B
Application number: TW086109753A
Authority: TW
Inventors: Humberto Bartolome Arzeno
Original assignee: Hoffmann La Roche
Priority date: 1996-07-30
Filing date: 1997-07-10
Publication date: 2002-10-11
Also published as: ZA976555B; ATE277080T1; IL121391A0; DK0822200T3; ES2227639T3; NZ328411A; AR016981A2; PE91998A1; NO973482D0; NO973482L; AU731160B2; CO4650046A1; EP0822200B1; BR9704138A; CA2206008A1; EP0822200A1; KR980009282A; HUP9701277A3; CN1293096C; US6849710B1

Description

505654 A7

經濟部中央標準局員工消費合作社印製本發明係關於一種在治療骨質疏鬆症上有用的甲狀旁腺激素及甲狀旁腺激素相關胜肽之某些新穎類似物之合成方法0 骨質疏鬆症爲代謝性骨疾病之最常見形式，且被認爲是骨質減失（骨質減少症）之有症狀骨折階段。雖然骨質疏鬆症可能繼發於許多原發疾病，但所有病例中之90%爲自^^發^ 。停經後婦女特別有自發性骨質疏鬆症（停經後或類型〗骨質疏鬆症）之危險。另一自發性骨質疏鬆症之高危險群爲任一性別之老年人（老年性或類型Π骨質疏鬆症）。骨質疏鬆症亦與類腎上腺皮質固醇之使用、無法行動或長期臥床休息、酒精中毒、糖尿病、對性腺產生毒性之化學治療法、高泌乳激素血症、神經性壓食症、原發性及繼發性無經症及即巢切除手術有關。在各種形式之骨質疏鬆症中，經常發生骨折，其爲骨質減失到達機械力衰竭點之結果。停經後之骨質疏鬆症以腰邵及脊椎骨折爲特徵，而大腿骨頸部骨折似乎爲老年性骨質疏鬆症之主要特徵。咸信骨質疏鬆症患者骨質減失之機制涉及骨路本身換新過程之不平衡。該過程被稱爲骨再塑造。其發生於一系列分開之活性骨袋中。這些袋天然存在於骨表面之骨基質中，以做爲骨吸收部位。破骨細胞（骨溶解或再吸收細胞）負責一部份通常具怪定尺寸之骨之再吸收。該再吸收過程之後爲出現成骨細胞（骨生成細胞），其將新骨質再填入破骨細胞所留下的空腔。 -4- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210x297公釐） (請先閱讀背面之注意事項寫本頁} •裝. 505654 A7 B7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製五、發明説明（2 在健康成人體内，成骨細胞與破骨細胞之生成速率爲能使骨生成與骨再吸收達到平衡者。不過，在骨質疏鬆症患者體内，發生骨再塑造過程不平衡，而導致骨質減失速率快於其生成速率。雖然大多數人年老時會出現某種程度之此種不平衡，但在停經後骨質疏鬆症患者或卵巢切除之後該不平衡將嚴重得多且發生在較年輕的年紀。

Adachi等人在關節炎與風濕症研討會，22:6，3 75- 84(1993年6月）中報告雖然關於類腎上腺皮質固醇引起之骨質疏鬆症之病理學有許多衝突之數據，但一般同意此等病人骨質生成相對減少而骨質再吸收相對增加。骨質減失而造成骨折及骨壞死爲類腎上腺皮質固醇治療之最常見結果。註據顯示骨質減失於類腎上腺皮質固醇治療之最初6至 12個月内迅速發生；骨質減失速率與類腎上腺皮質固醇劑量之間似乎存在密切關係。男人對於類腎上腺皮質固醇之作用具有同等感受性。骨折及骨壞死之估計發生率爲3〇· 5 0% 〇曾有許多人嘗試治療骨質疏鬆症而以減緩骨質進一步減失’或更佳促進骨質淨重增加爲目標。某些藥劑，諸如動情素及二膦酸鹽，似乎能減緩骨質疏鬆症患者之骨質進一步減失。減緩骨質減失之藥劑，由於骨質再吸收及生成之期間不同，所以能增加骨質（3-7%之程度）。不過，該擬似增加在時間上有限，非持續進行，以及係由於「再塑造空間」減少。此外，由於再吸收與生成間之密切偶合，能阻礙骨質再吸收之治療最終也會阻礙骨質之生成。 (請先閱讀背面之注意事項㈣填寫本頁) 裝. 訂 505654 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（3 ) 曾有人暗示用甲狀旁腺激素（PTH)治療將同時導致骨轉換增加及正性鈣平衡。不過，人類臨床試驗顯示小梁骨之任何增加將以骨皮質減少爲代價，以致骨質總淨重沒有增加0

Hefti等人在 Clinical Science 公，389-396 (1982)中曾報告在正常及患有骨質疏鬆症之成年雌鼠中，每日給予皮下劑量之bPTH (1-84)或hPTH(l-34)會增加體内總鈣量及骨骼灰重。

Liu等人在 J· Bone Miner· Res. 4，10，1071-1080 中提到成年雌鼠切除卵巢後會使得近端脛骨骨骺中之小梁骨減失4 7 % ，同時伴隨成骨細胞及脛骨破骨細胞明顯的增加。每日皮下注射hPTH (1-34)能完全逆轉脛骨骨質之減失及造成脛骨骨質之量超過對照組者。此外，成骨細胞之數目增加及破骨細胞之數目減少。

Hock 等人在 J. Bone Min· Res_ 1，1，65-71 (1992)中曾報告每日皮下注射hPTH(l-34)至健康成年雄鼠體内歷12日會增加脛骨及骨皮質#5及乾重。全部骨質，脛骨體積，脛骨厚度及成骨表面皆增加。哺乳動物之甲狀旁腺激素，例如人類（hPTH)、牛 (bPTH)及豬（pPTH)之甲狀旁腺激素，爲具有84個胺基酸殘基之多胜肽單鏈，其分子量約爲9 5 0 0。生物活性與n -端部份有關，最少需要殘基（1 - 3 4 )。人類PTH之N -端片段與牛及豬激素之N -端片段不同之處分別僅在於3個及2個胺基酸殘基： -6- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） IJ 1----^裝丨— (請先閲讀背面之注意事填寫本頁) 訂經濟部中央榡準局員工消費合作社印製 505654 A7 _B7 __ 五、發明説明（4 ) hPTH(l-34):

Ser Val Ser Glu lie Gin Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu 1 5 10 15

Asn Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gin Asp 20 25 30

Val His Asn Phe (序列鑑別編號：1); bPTH (1-34):

Ala Val Ser Glu 工le Gin Phe Met His Asn Leu Gly Lys His Leu 1 . 5 · 10 15

Ser Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gin Asp 20 25 30

Val His Asn Phe (序列鑑別編號:2); pPTH(l-34):

Ser 'Val Ser Glu lie Gin Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu 1 5 10 15

Ser Ser Leu Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Qln Asp 20 25 30

Val His Asn Phe (序刿鑑另;(編號:3>· P ΤΗ之主要功能爲引起適應性改變，以在細胞外液中維持恆定的鈣離子濃度。Ρ Τ Η作用於腎臟，以使腎小管對尿液中Ca + 2之再吸收增加，以及刺激鈣二醇（calcifedi〇l)轉換爲鈣三醇（calcitriol)，鈣三醇負貴自腸中吸收Ca + 2。其一主要作用爲促進Ca + 2自骨中移出。PTH作用於骨骼上’以增加Ca + 2及磷酸鹽之再吸收速率、PTH刺激破骨細胞再吸收骨質，增加間葉細胞分化成破骨細胞之速率以及延長破骨細胞之半生期。在PTH長期作用下，生成骨質之成骨細胞之數目亦增加；因此骨轉換及再塑造之速率增加。不過’ 调別成骨細胞之活性比正常者低。、

Rosenblatt 等人在美國專利第 4,423,037 ’ 4,968,669 及夂001，223中曾揭示藉N -端（1-6)胺基酸之殘基及Phe7， Met8，18及Gly12之選擇性取代而得到PTH拮抗劑。據報告 Tyr34-NH2能增加此等化合物之活性及安定性。本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閱讀背面之注意事項 d填寫本頁) -裝· 、11 505654 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 _ B7 五、發明説明（5 ) 與甲狀旁腺激素-相關的胜肽（PTHrp)，140 +胺基酸殘基及其片段能產生PTH之主要生物作用。PTHrp藉著許多人類及動物腫瘤以及組織而被製造且其在惡性腫瘤之高#5 血症上占有一席之地。hPTHrp (1-34)之序列如下：八la Val Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser lie h 5 10 15

Gin Asp Leu Arg Arg Arg Phe Phe Leu His His Leu lie Ala Glu 20 25 30

Ue His Thr Ala (序外_小纖：4 )。 h P T H與h P T H r p間之序列同等性大部份限於i 3個n ·端殘基，其中8個完全相同；而在hPTH之（25-34)受器結合區中只有1 · 1 0個胺基酸被保留在hPTHrp中。組態之相似性造成共通的活性。Cohen等人在J. Biol. Chem. 266· 3? 1997-2004 (1991)中曾提議 ΡΤΗ(1-3 4)及 PTHrp(l-3 4)之大部份序列，尤其在區域（5-18)及（21-34)爲一 α -螺旋構形，同時注意到在生理條件下對羧基終端而言該構形是否占優勢有一些疑問。該二次結構對脂·質交互作用，受器交互作用及/或結構之安定性相當重要。在恢復哺乳動物（包括患有骨質疏鬆症者）之骨質上具有改良治療性質之ΡΤΗ及PTHrp類似物已被揭示於國際專利申請案第WO 94/01460號中。、本發明之一目的爲提供一種甲狀旁腺激素（pTH)或甲狀旁腺激素相關胜肽（P T H r p )或其鹽之合成多胜肽類似物之改良合成法，在該合成多胜肽類似物中，胺基酸殘基（2 2 _ 土1)構成兩性沈-螺旋，該等殘基（2 2-31)選自序列鑑別編號本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閲讀背面之注意事項㈣填寫本頁) •裝·

、1T 505654 A7 B7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製五、發明説明（ ••85，86 ’26 ’27, 28, 29及30,該方法包含a)藉溶液或固相技術分別合成多胜肽之先質胜肽片段，b)將該等片段彼此縮合，以形成所期望的多胜肽產物，以及e)移除胺基酸保護基。在一具體例中，本發明提供一種改良方法，其包含a)分別在樹脂支持物上合成多胜肽之先質胜肽片段，b)將多胜肽片段自個別樹脂支持物上打斷，c)繼而將該片段縮合，以形成期望的多胜肽產物，以及d)移除胺基酸保護基。在一較佳具體例中，除了多胜肽之C-端片段以外，所有片¥又白自個別树脂支持物打斷，c)該等片段與結合有c _端片段之樹脂接續縮合，以形成所期望的多胜肽產物，d)胺基酸保護基被移除及多胜肽產物自樹脂支持物打斷。在一較佳具體例中，該法用三個先質胜肽片段實施：N-端片段，中間片段及C ·端片段。在一更佳具體例中，當片段與所期望之取終多胜肤之序列一致時，在其C ·端具有魏胺酸、甘胺酸和白胺酸殘基。在最佳具體例中，多胜肽產物自二個先質肽片段-即N-端、中間及c·端片段製備，其中 N-端片段以Gly爲C-端，中間胜肽片段以Leu爲c·端，以及C-端片段以Leu爲N·端。在另一具體例中，中間胜肽片段具有C -端Glu以及C·端片段具有端Leu。再者，本發明之一目的爲提供一種醫藥組合物之製法，其特徵爲用上述方法製備PTH或PTHrp類似物，然後將得到的PTH或PTHrp類似物與一種或以上醫藥可接受之添加劑混合’更特定而言，本發明提供一種治療骨質疏鬆症， -9- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ297公襲） (請先閱讀背面之注意事項 _填寫本頁) -裝-

、1T 505654 A7 B7 五、發明説明（7 ) 尤是促進骨折癒合之醫藥組合物之製法。各種常見核甞酸鹼基及胺基酸之一字及三字縮寫依照Pure Appl· Chem. 11，639-645 ( 1 972)及池 277-290 ( 1 974)及 IUPAC-IUB生化命名委員會之建議且符合37 CFR §1.822 (55 FR 18245，5月1日，1990年）之規定。一字及三字縮寫如下：

胺基酸三字代號一字代號丙胺酸 Ala A 精胺酸 Arg R 天冬胺醯胺 Asn N 天冬胺酸 Asp D Asn+Asp Asx B 半胱胺酸 Cys C 麩胺醯胺 Gin Q 麩胺酸 Glu E Gln+Glu Glx Z 甘胺酸 Gly G 組胺酸 His H 異白胺酸 lie I 白胺酸 Leu L 離胺酸 Lys K 甲硫胺酸 Met M 苯丙胺酸 Phe F 脯胺酸 Pro P 經濟部t夹標率局員工消費合作杜¥製 (請先閱讀背面之注意事填寫本頁) -10- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） 505654 五、發明説明（絲胺酸羥丁胺酸色胺酸酪胺酸纈胺酸其他胺基酸

Ser ThrTrp Tyr Val Xaa

S T W Y V X 經濟部中央標準局員工消費合作社印製除非另外指定爲D-或D，L-，縮寫代表L -胺基酸。某些胺基酸，包括天然與非天然者，不具不對稱c，例如甘胺酸。所有胜肽序列皆是以N·端胺基酸在左及C ·端胺基酸在右表示〇本文所用之其他胺基酸及化合物之縮寫如下： hser 高碳絲胺酸 hSerlac 高碳絲胺酸内酯 Nle 去甲白胺酸「PTH或PTHrp之具生理活性之截短類似物」係指一多胜肽，其序列所包含之胺基酸少於在PTH或PTHrp中所發現之全長胺基酸，不過其引發相似之生理反應。要引發相似之生理反應，截短之PTH或PTHrp不需要與pth或 PTHrp完全同等。PTh(1-34)及ΡΤΗΓρ(1-34)爲該群之較佳代表，但非限於此。「兩性α -螺旋」係指某些多胜肤所顯示之二次結構，並中胺基酸構成螺旋構形，其沿著螺旋之長軸方向具有相對的極性面及非極性面。該多肽中從-螺旋結構之可能性藉具有適當間距之「史契夫-艾德蒙森輪」之結構[= (請先閱讀背面之注意事項一^填寫本頁) -裝· -11- 505654 A7 B7 五、發明説明（

Schiffer 及 Α· Β· Edmundson，Biophys. J. L 121 (1967)] 作了某種程度之探討，且注意到在環繞螺旋之圓柱體之相對面，親水性殘基及親脂性殘基被隔離。另外，實驗証據諸如環形分光特性或X-光繞射數據顯示在特定的多胜肽中存在α -螺旋區。理想的π -螺旋每轉具有3 · 6個胺基酸殘基，且與相鄰的支鏈隔開100°派。Eisenberg等人在Nature 299, 371-374 (1982)及Proc. Nat· Acad· Sci· USA 紅，140-144 (1984)中將疏水性測定標度與螺旋輪結合在一起，以將兩性螺旋之概念予以定量。平均疏水力矩被界定爲構成螺旋之胺基酸成分之疏水性之向量和。胺基酸之下列疏水性係由 Eisenberg(1984)報告且現爲「公認」的標度：

He 0.73; Phe 0,61; Val 0.54; Leu 0.53; Trp 0.37; Met 0.26 Ala 0.25; Gly 0.16/ Cys 0.04; Tyr 0.02; Pro 一0.07; Thr -0.18; Ser -0.26/ His -0.40; Glu -0-62: Asn -0.64/ Gin -0.69; Asp -0.72; Lys -1,10； Arg -1-76· 每轉具有3.6個殘基（或支鏈'間具100°弧（ = 360°/3.6))之理想沈-螺旋之疏水性力矩# η可自下式計算： X H^sind(N-l) + ( X HNcos3(N-l) 丨_.--^----^批衣！ (請先閲讀背面之注意事寫本頁) 訂經濟部中央標準局員工消費合作社印製式中HN爲第N個胺基酸之疏水性値且總和得自’週期性 3= 1 00 °之序列中之N個胺基酸。疏水性力矩可以每殘基之平均疏水力矩表示，即# η除以N，以得到< # H >。在1 〇〇。 ± 2 0 °之< // h>値爲約〇. 2 0或以上暗示兩性螺旋生成。 hPTHrp(22-31)及 hPTH(22-31)於 1〇〇。之h> 値分別 -12- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐）經濟部中央標準局員工消費合作社印製 505654 A7 __________B7 五、發明説明（10 ) 爲 0.19 及 0.37。

Cornett 等人在 J· Mol. Biol·，m，659-685 (1987)中藉著引進「兩性指數」做爲兩性性質之預測指標而進一步擴大對兩性α -螺旋之研究。他們之結論爲所有已知之沈-螺旋中約有半數爲兩性，其主要的頻率爲97.5。而非100。，以及每轉之殘基數目接近3.7，而非3.6。雖然此等精密研究在科學上令人感到興趣，但Eisenberg等人之基本方法已足以將一存在之序列歸類爲兩性，尤是當刻意設計一序列，以形成兩性α -螺旋時。替代之兩性α -螺旋胺基酸序列可能與天然多胜肽之特定片段之序列缺乏同等性，但在生理環境中能產生相似之二次結構’亦即具有相對極性面與非極性面之從-螺旋。用另外的序列取代天然胺基酸序列，對於被改變之母多胜肽之生理活性、安定性或其他性質可能具有利之影響。關於此等序列之設計及選擇之指南可參考j. L. Krstenansky，et al.， FEBS Letters 211，2, 409-413 (1989)，&J.P.Segrest，etal· Proteins:Structure? Function, and Genetics 8_, 103-117 (1990) 等。決定一序列是否具有充分的兩性性質而爲本發明序列之方便方法爲計算如上文界定之平均疏水力矩。若於1〇〇。土 2 0 °之每殘基尖峰平均力矩超過約〇 · 2 〇，則該序列將形成兩性螺旋且爲本發明之序列。舉例言之，序列鑑別編號：26 (Xaa = Glu)於100。之每殘基平均疏水力矩被如下計算： -13- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) a4規格（210X297公釐） (請先閲讀背面之注意事項 ^填寫本頁) 裝· -訂 505654 A7 B7 五、發明説明（ 11

A. A E L L E K L L E K L

1 I 1 12 332133213 6556 -556 -5 LN-l). ILsin d(U-l) β 0 0 100 .52 200 -.18 300 .34 400 一 .70 500 .34 600 -.46 700 • 21 800 ,-1-08 900 _iL· Σ^Ο.81 [(0.81)2 + (-4.43)2] _ = 4.50 < μΗ > = 4.50/10 = 0.45 N /1 3 S 0 Σ- 2701517893^4 6153842511TJ 一 3 4 (請先閲讀背面之注意事項y填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製就該序列而言，平均尖峰疏水力矩於9 2 °出現且其値爲 0.48 ° 另一方面，本發明提供PTH，PTHrp，以及PTH及PTHrp之具生理活性之類似物，或其鹽之合成方法，其中胺基酸殘基 (22-3 1)構成兩性α -螺旋，該殘基（22-3 1)之序列選自下 a ) Xaa1 Xaa2Leu Xaa4 Xaa5 Leu Xaa7 }^aa8 Xaa9 Xaa10，其中 Xaa1 及Xaa4各獨立爲Glu，Glu(OCH3)，His，或Phe;

Xaa2 爲 Leu 或 Phe;

Xaa5 爲 Lys 或 His;

Xaa7及Xaa1G各獨立爲Leu或lie; 、

Xaa8爲Ala，Arg或Glu ;以及

Xaa9爲Lys或Glu(序列鑑別編號：85) 較佳爲 Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Xaa Lys Leu，其中 Xaa 爲Glu或Arg(序列鑑別編號:26)。 -14- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） 505654 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（12) b) Xaa1 Xaa2 Leu Xaa4 Arg Leu Leu Xaa8 Arg Leu，其中 Xaa1 及Xaa4各獨立爲Glu，Glu(OCH3)，His，或Phe;

Xaa2 爲 Leu 或 Phe;

Xaa8爲Glu或Lys(序列鑑別編號:86); 較佳爲Glu Leu Leu Glu Arg Leu Leu Xaa Arg Leu，其中 Xaa爲Glu或Lys(序列鑑別編號:27); c) Ala Leu Ala Glu Ala Leu Ala Glu Ala Leu(序列鑑別編號：28); d) Ser Leu Leu Ser Ser Leu Leu Ser Ser Leu(序列鑑別編號 ••29); e) Ala Phe Tyr Asp Lys Val Ala Glu Lys Leu(序列鑑別編號 :30)。另一方面，本發明提供一種具下式之PTH，PTHrp，以及ΡΤΗ及PTHrp之具生理活性之類似物或其鹽之製法：

Xaa1 Xaa2 Xaa3 Xaa4 Xaa5 Xaa6 Xaa7 Leu His Asp Xaa11 Gly Xaa13 Ser lie Gin Asp Leu Xaa19 Xaa20 Xaa21 Xaa22'31 Xaa32 Xaa33 Xaa34 Xaa35 Xaa36 Xaa37 Xaa38 Term，其中 Xaa1不存在或爲Ala;

Xaa2不存在或爲Val;

Xaa3不存在或爲S er;

Xaa4不存在或爲Glu或Glu(OCH3);

Xaa5不存在或爲His或Ala;

Xaa6不存在或爲Gin;

Xaa7不存在或爲Leu; -15- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閲讀背面之注意事項寫本頁) 裝· 505654 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（l3 )

Xaa11 爲Lys，Arg，或Leu;

Xaa13 爲Lys，Arg，Tyr，Cys，Leu，Cys(CH2CONH(CH2)2NH(生物素基）），Lys(7-二甲胺基_2_氧基_2Η·1·苯幷哌喃-4-乙醯基），或Lys(二氫桂皮醯基）；

Xaa20 舄 Arg 或 Leu;

Xaa19 及 Xaa21 各獨立爲 Lys，Ala 或 Arg;

Xaa22·31選自（序列鑑別編號：26，27，28，29或30);

Xaa32爲His，Pro或Lys ;

Xaa33不存在，或者爲pro, Thr，Glu或Ala;

Xaa34不存在，或者爲pro，Arg，Met，Ala，hSer，hSer内酯，

Tyr 或 Leu;

Xaa35不存在或者爲pro，Glu，Ser，Ala或Gly;

Xaa36不存在或者爲Ala，Arg或lie;

Xaa37不存在或者爲Arg，Trp，或3_(2·莕基)-L·丙胺酸；

Xaa38 不存在或爲 Ala 或 hSer，或者 Xaa38-42 爲 Thr Arg Ser Ala Trp; 以及Term爲OR或NR2，其中各R獨立爲H，（CVCd烷基或苯基 (Ci-CJ烷基·，以及其醫藥上可接受之鹽。本發明之再一方面包括式（I)所示之具生理活性之截短同等物h P T H r p (1 - 3 4 )之多胜肽類似物之合成法：

Ala Val Ser Glu Xaa5 Gin Leu Leu His Asp Xaa11 Gly Xaa13 Ser He Gin Asp Leu Xaa19 Arg Xaa21 Xaa22'31 Xaa32 Xaa33 Xaa34 Term,其中： -16- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閱讀背面之注意事填寫本頁) 、言

T 505654 A7 B7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製五、發明説明（14) Xaa5 爲His或Ala; Xaa11 及Xaa13各獨立爲Lys，Arg，或Leu; Xaa19及Xaa21各獨立爲Ala或Arg; Xaa22·31 選自 a) Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Xaa Lys Leu Xaa爲Glu或Arg(序列鑑別編號:26); b) Glu Leu Leu Glu Arg Leu Leu Xaa Arg Leu其中 Xaa爲Glu或Lys(序列鑑別編號:27); c) Ala Leu Ala Glu Ala Leu Ala Glu Ala Leu (序列鑑別編號：28); d) Ser Leu Leu Ser Ser Leu Leu Ser Ser Leu (序列鑑別編號：29); e) Ala Phe Tyr Asp Lys Val Ala Glu Lys Leu (序列鑑別編號：30); Xaa32 爲 His 或 Lys; Xaa33爲Thr，Glu，或Ala; Xaa34爲Ala，hSer，Tyr，或Leu; 以及Term爲Gly Arg Arg，内酯，OH或NR2，其中R爲H或（CV C4)烷基；以及其醫藥上可接受之鹽（式I)。本發明之較特殊方面包括此等式（I)中Xaa22·31爲序列鑑別編號:26之多胜肽（於100°之<// H>超過0.45)之合成。本發明再一特殊方面包括式（I)中Xaa22·31爲序列鑑別編號:26，Xaa11及 Xaa13皆爲Lys，Xaa19及Xaa21皆爲Arg之多胜肽。可藉本文所述方法製備之代表性多胜肽非限定性地包括： -17- (請先閱讀背面之注意事填寫本頁) -裝· 訂 k 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 505654 A7 B7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製五、發明説明（15 ) Λ].α Val Sei： Glu His Gin Leu Leu ilis Asp Lys Gly Lys Ser lie Gin Asp Leu Arg Arg 八rg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Arg Lys Leu His Thr八la OH (外列飧別編敗:5) △la Val A/— nis Gln ^ 心心八sp — ay 吻 ^ Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys ( Leu nis,Thr 八la OH (/T.列媼別編號:(5) ； | Ala Val Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser lie Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys ^ Leu His Thr Ala NH2 (序列娥別编就:7) / 八la Val Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser lie Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys Leu His Thr hSer ΝΠ2 (序列鑑別编號:8) ; · Ala Val Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser lie Gin 八sp Leu Arg Axg Axg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys Leu liis Tlu: hSerlac (斤列銀別编號:9) Ala Val Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser Ile^ 、 . Gin 7\sp Leu Arg Arg Axg G丄ύ· Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys Leu His Thr Ala Gly Arg Arg OH (序列飧別编號:l〇)::及 Λΐξΐ Val Ser Glu Ilis Gin Leu Leu His 八sp Lys Gly Lys Ser lie * * Gin 八sp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys ··， ’ . Leu Lys Glu Leu NH2 ·(序列姐別編號:Η) · ;Ί本發明之另一方面包括式（I)中Xaa22_31爲序列鑑別編號 .:26，Xaa!1 及 Xaa13 二者均爲 Lys，以及 Xaa19 及 Xaa21 之 .一爲Arg而另一爲Ala之多胜肽冬合成。可藉本文所述之方 ;法製備之該亞屬之代表性多胜肽非限定性地包括： Ai心y夺1 S今;τ Glu Leu teu His Asp Lys Gly Lys Ser lie Gin Asp Leu Ala Arg Arg Glu Leu, Leu： Glu Lys Leu Leu: Glu Ly5 ... ...:..:. .. ... :；：·；/. , _ ；：：；：；·· ； . ;· Leu His Thr Ala NH2 (序列飧別編號:12):.及· ：:"： (請先閲讀背面之注意事π -裝—— K舄本頁) 訂線_ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐）經濟部中央標準局員工消費合作社印裝 505654 A7 B7 五、發明説明（16 ) 八la Val Ser Glu ills Gin Leu Leu HJLs Asp Lys Gly Lys Ser lie <GJ.n Asp Leu Arg 八八la Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys

Leu His Thr八la 1丨Π2 (汴列鍛別編號丨3)· · · 本發明之再一方面包括式（I)中Xaa22-31爲序列鑑別編號 :26，Xaa11 與 Xaa13 之一爲 Leu 而另一爲 Lys，以及 Xaa19 及Xaa21皆爲Arg之多胜肽之合成。可藉本文所述方法製備之該亞屬之代表性多胜肽非限定性地包括：

Ala Val Ser Glu Ala Gin Leu Leu His Asp Leu Gly Lys Ser lie

Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys

Leu His Ala Leu Oil (序列鑑別编號:14) I · 本發明之另一方面包括式（I)中Xaa22-31爲序列鑑別編號 :27之多胜肽（於100°之<# h>超過〇·50)之合成。本發明之再一方面包括式（I)中Xaa22·31爲序列鑑別編號：27， Xaa"與Xaa13二者皆爲Lys或二者皆爲Arg，以及Xaa19 與Xaa21二者皆爲Arg之多胜也之合成。可藉本發明方法製備之該亞屬之代表性多胜肽非限定性地包括：

Ala Val Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser lie

Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Arg Leu Leu Glu Arg

Leu His Thr Ala O.U (序列饊別编號:15); '、 ! I t

Ala Val Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Arg Gly Arg Ser lie • r

Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Arg Leu Leu Glu Arg 、、

Leu His Thr Ala OH (序列鑑別編號:16)(;

Ala Val Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Arg Gly Arg Ser lie

Gin Asp Leu Arg Arg 八rg Glu Leu Leu Glu Arg Leu Leu Lys Arg

Leu His Tlir Ala OH (序列鑑別编號:17).; .丨： -19- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ297公釐）

: · I ^-- (請先閱讀背面之注意事填寫本頁) 、τ 505654 A7 B7 五、發明説明（17) 本發明之另一方面包括式（1)中Xaa22_31爲序列鑑別編號 :28之多胜肽（於1〇〇°之<#h〉爲約〇·25)之合成。可藉本發明方法製備之該亞屬之代表性多胜肽非限定性地包括：

Ala Val Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser lie

Gin Asp Leu Arg Arg Arg Ala Leu Ala Glu Ala Leu Ala Glu Ala

Leu His Thr Ala NH2 (序列鑑別编號:2〇) · 本發明之再一方面包括式（1)中Xaa22·31爲序列鑑別編號 :29之多胜肽（於1〇〇。之h〉爲約〇·28)之合成。可藉本發明方法製備之該亞屬之代^性多胜肽非限定性地包括：

Ala Val Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser lie

Gin Asp Leu Arg Arg Arg Ser Leu Leu Ser Ser Leu Leu Ser Ser

Leu His Thr Ala NH2 (序列鑑別編號:21): · 本發明之再一方面包括式（1)中Xaa22-31爲序列鑑別編號 :30之多胜肽（於1〇〇。之</^>爲約〇.29)之合成。可藉本發明方法製備之該亞屬之代表i多胜肽非限定性地包括：

Ala Val Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser lie

Gin Asp Leu Arg Arg Arg Ala Phe Tyr Asp Lys Val Ala Glu Lys

Leu His Thr Ala NH2 (序列鑑別編號:22) . 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項-»<填寫本頁) 本發明之又再一方面包括如式（11)所示之bpTH(1-34)之生理活性同等物之多胜肽類似物之合成：

Xaa1 Val Ser Glu lie Gin Xaa7 Xaa8 His Asn Leu Gly Lys His Leu Xaa16 Ser Xaa18 Xaa19 Arg Xaa21 Xaa22"31 -20- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（2l〇X297公釐） 505654 A7 B7______ 五、發明説明（18 )

His Asn Xaa34 Term，其中：

Xaa 1 爲 Ser或Ala;

Xaa7 爲Leii或Phe;

Xaa8 爲 Met 或 Nle;

Xaa16 爲 Asn 或 Ser;

Xaa18 爲 Leu，Met，或Nle;

Xaa19 爲 Glu 或 Arg;

Xaa21 爲 Val 或 Arg;

Xaa22·31係選自（序列鑑別編號：26，27，28，29及30);

Xaa34 爲 Phe 或 Tyr;

Term爲OH或NR2，其中各R爲Η或（CrCd烷基；以及其醫藥上可接受之鹽。可藉本發明方法合成之，代表性多胜肽非限定性地包括：

Ala Val Ser Glu lie Gin Phe Nle His Asn Leu Gly Lys His Leu

Ser Ser Nle Glu Arg Val Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys

Leu His Asn Tyr NH2 (序列鑑別編號:23)

Ala Val Ser Glu lie Gin Phe Nle His Asn Leu Gly Lys His Leu

Ser Ser Nle Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閲讀背面之注意事項#填寫本頁)

Leu His Asn Tyr NH2 (序列鑑別編號:24) · ，、本發明之又再一方面係提供一種具有少於3 4個胺基酸之 PTH及PTHrp之類似物之合成方法。此等化合物具有下列通式： -21- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 505654 A7 B7 五、發明説明（19 )

Ala Val Ser Glu Xaa^ Gin Leu Leu His Asp Xaa^·^· Gly Xaa^^ ger

He Gin Asp Leu Xaa19 Arg Xaa21 Xaa22"'31 Xaa32 Xaa33 Xaa34 Termf 可藉本發明方法製備之代表性多胜肽非限定性地包括：化合物41: AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LHP-NH2 Ala Val Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lvs Gly Lys Ser lie 1 5 10 15 I ' III'!

Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys 20 25 30

Leu His Pro NH2 (序列鑑別編號:55) · 化合物 42: AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LP-NH2

Ala Val Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser lie 15 10 15

Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys 20 25 30

Leu Pro NH2 (序列鑑別编號:56) · 熟悉本技藝者當了解可以合成多種組合之多胜肽類似物，假若於100° 土 20°之每殘基平均疏水力矩大於約〇·20之胺基酸序列被插於位置（22-3 1)，則其將具有前文所述之期望性質。 .' 本發明之多胜肽片段可藉下列文獻所述之方法合成：G. Barany，R.B. Merrifield in The Peptides，Ε. Gross 及 J. jMieienhofer eds., Academic Press, New York (1979), Vol. 2, 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項,填寫本頁) 0p· 1-284; J.M. Stewart 及 J.D. Young，Solid Phase Peptide Synthesis，2nd ed·，Pierce Chemical Co·，Rockford, Illinois (1984)以及 J. Meienhofer，Hormonal Proteins and Peptides, Vol. 2，Academic Press，New York，（1973)所述之固相合成考；以及 E. Schroder 及 K. Lubke，The Peptides，Vol_ 1， -22- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210XΜ公釐）經濟部中央標準局員工消費合作社印製 505654 A7 ------ B7 五、發明説明（20 )

Academic Press，New York，（1965)所述之液相合成法。一般而言，此等方法涉及將經保護之胺基酸接續加到正在生長之胜肽鏈上。通常，第一個胺基酸不是胺基就是羧基被保濩，以及反應性支鏈基被保護。該被保護之胺基酸不是被接在惰性的固體支持物上，就是在溶液中被利用，然後於適於形成醯胺鍵之條件下加入序列中之下一個胺基酸（亦被適當保護）。所有期望的胺基酸皆以適當順序被連接後，保護基及任何固體支持物被移除，以提供粗製的多胜肽。該多胜肽被除鹽及純化（較佳利用層析的方法），得到最終產物。在實施本發明時，先質胜肽片段可藉溶液相或固相技術或其之組合製備。舉例言之，一些片段可在溶液中被製備 ’然後與結合有C-端片段之樹脂縮合，或者片段可各藉固相法製備，自樹脂打斷及在溶液中縮合，或者可採用溶液相及固相合成之混合法。製備具有少於約40個胺基酸之本發明pth及PTHrp類似物之較佳方法涉及固相片段縮合以合成胜肽。在該法中，最終產物得自數個胜肽先質片段之縮合。可使用片段之任何組合’其視本技藝專業人士的偏好而定。舉例言之，3 4 個胺基酸之產物可自兩個具17個胺基酸之胜肽先質片段，三個具不同長度之胜肽先質片段，四個先質片段等合成。例示説明見P. LLoyd-Wimams et al·，"Convergent Solid Phase

Peptide Synthesis,M in Tetrahedron, 49., 1 1 0 6 5- 1 1 1 3 3 (1993) 〇一般而T，a ·胺基（N α )官能及任何反應性支鏈藉酸敏感 -23- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNs ) A4規格（210X297公釐） (請先閲讀背面之注意事項 _填寫本頁) 裝· 訂經濟部中央標準局員工消費合作社印製 505654 A7 _______ B7 五、發明説明（21 ) 性或鹼敏感性基團保護。保護基應對生成胜肽鍵之條件安定，而在不影響既存的多胜肽鏈下易於被移除。適當的沒· 胺基保護基非限定性地包括第三-丁氧羰基（B〇c)、苄氧談基（Cbz)、鄰-氯苄氧羰基、聯苯基異丙氧羰基、第三·戊氧羧基（Amoc)、異7白氧窥基、α，從·二甲基_3,5_二甲氧爷氧羰基、鄰-硝基苯磺亞醯基、氰基-第三丁氧羰基，以9_ 苐基甲氧談基（F m 〇 c)爲較佳。適當的支鏈保護基非限定性地包括乙醯基、苄基（BZ1)、笮氧甲基（B〇m)、第三丁基、環己基、鄰_溴芊氧羰基、第三_丁基二甲基矽烷基、2_氣卞基（Cl-z)、2,6 -二氯苄基、2,4_二硝基苯基、環戊基、異丙基、三甲基乙醯基、四氫哌喃_2 -基、甲苯磺醯基 (Tos)、三甲矽烷基、甲基三苯甲基、i，3,5_三甲苯磺醯基 (Mts)、4·甲氧基·2,3,6_三甲基苯磺醯基（Mt〇、 2,2,4,6,7-五甲基二氫苯并吱喃-5-橫醯基（pbf)、2,2,5,7,8_ 五甲基私并一鼠旅喃_6_續醯基（Pmc)，以及三苯甲基。在固相合成法中，C -端胺基酸首先被接在適當的樹脂支持物上。適當的樹脂支持物爲對逐步縮合及去保護反應的試劑及反應條件爲惰性且不溶於所用介質之物質。市售樹脂之例包括用反應性基團修飾之苯乙晞/二乙烯基苯樹脂，例如氯甲基化之共聚（苯乙烯-二乙埽基苯）、羥甲基化之共聚（苯乙烯-二乙烯基苯，以及苄基化、羥甲基化之苯乙醯胺甲基（P A Μ)树月曰。爲了製備酸終端胜肤，可以使用王氏樹脂。較佳的樹脂爲對-甲基二苯甲胺基·共聚（苯乙晞·二乙烯基苯）樹脂（ΒΜΗΑ)。 — 批衣-- (請先閲讀背面之注意事寫本頁) -訂 k -24- 505654 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（22 ) ^ 在較佳具體例中，除了 C -端片段以外之所有片段在酸敏感性樹脂[諸如Sasrin (2-甲氧基_4_烷氧基苄醇）或4·羥甲基-3-甲氧苯氧丁酸4-甲基二苯甲胺（HMPB-MBHA)]上製備。 HMPA-MBHA，HMPB-BHA 及HMPA-BHA樹脂亦適於做爲 <：-端胜肽。（：-端片段用1^11〇1^處理之]^611八樹脂製備。西伯（Sieber)醯胺樹脂，凌克（Rink)聯結子-MBHA或BHA樹脂，以及萊梅吉（Ramage)聯結子-MBHA或BHA樹脂皆適於做爲以醯胺爲終端之胜肽。此等樹脂在市面上有售，且第一個胺基酸己被結合或者第一個胺基酸可被接在聯結子上。HMPB-MBHA及Knorr處理樹脂可如實施例1，2及3所述自MBHA樹脂製備。其餘被保護之胺基酸之接續偶合可用本技藝熟知之方法進行。各被保護之胺基酸較佳以約1β 5 至2 · 5倍之過量被引進，該偶合在惰性、非水性、極性溶劑諸如Ν -甲基ρ比洛淀酮（ΝΜΡ)、二氯甲燒、二甲基甲醯胺 (DMF)、一甲基亞ί風（DMSO)、或其混合物中進行，以在室溫下進行爲較佳。代表性偶合劑有Ν，Ν，-二環己基碳化二醯亞胺（DCC)、Ν，Ν，-二異丙基碳化二醯亞胺（DIC)或其他碳化二醯亞胺，彼等單獨使用，或於存在下列化合物下被使用；1-羥基苯幷三唑（HOBt)、0-醯基脲、苯并三唑-1 — 基-氧參（峨P各淀基）鳞六氟嶙酸鹽（PyB〇p)、N·經基琥J白醯亞胺、其他N-每基醯亞胺或肋。另一選擇爲可以使用被保護之胺基酸活性酯（例如對-硝基苯基、五氟苯基及類似物）或者對稱酸肝。被F m 〇 C保護之胺基酸之接續偶合用二級胺（諸如吡啶）之 -25- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) M規格（21G><297公董） (請先閲讀背面之注意事填寫本頁) -裝· 、11 k 505654

經濟部中央標準局員工消費合作社印製減進行，以移除FmGe基。胜肽樹脂於各偶合步驟之後藉飢塞（Kaiser)試驗檢查是否完全偶合。固相合成終結之時，被完全保護之胜肽於不會引起支鍵保護基之過早去保護之條件下自樹脂移除。該胜肽可藉t 化或轉移酯化，或微酸去保護法（例如使用1%三氟乙酸 (TFA)被打斷。被保護之胜肽可藉矽膠層析法純化。溶液可被除鹽（例如用BioRad AG_3⑧陰離子交換樹脂）以及胜肽藉一序列之層析步驟純化，該層析步驟可使用下列類型之任一種或全部：在未衍化之共聚（苯乙烯_二乙晞基苯）（例如Ambedite® XAD)上之疏水性吸附層析；矽膠吸附層析；在羧甲基纖維素上之陽離子交換層析；分溶層析，例如在Sephadex⑧G-25上；逆流分配；或逆相高效液相層析 (HPLC) ’尤其是在裝填有辛基或十八基珍燒基碎石結合相之層析柱上進行陽離子交換及逆相H p l C。在多段合成法之一具體例中，中間片段及Ν-端片段被分離且與C -端片段接續縮合。多胜肽產物被去保護及自樹脂打斷’且被進一步純化。純化過程通常爲一長串的層析分離。Η P L C分析決定純化之順序及選擇。一典型的順序爲進行陽離子交換，逆相HPLC及逆相濃度層析柱。最終溶液接受凍乾以及將藥物產物貯存在琥珀色瓶中。被保護之胺基酸自 Genzyme (Cambridge， MA， USA)， Propeptide (Princeton，NJ，USA)或Synthetec (Albany，OR，USA)得到。實施例用三片段縮合法製備序列鑑別編號：7之多胜肽，一種3 4 • 26- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐) (請先閲讀背面之注意事填寫本頁) 裝· 訂 505654 A7 B7 五、發明説明（24 ) 個胺基酸之胜肽，AVSEHQLLHDKGKSIQDLRRRELLEKLLEKLHTA-ΝΗ^Ν·端片段由胺基酸1-12組成，中間片段由胺基酸13-23組成以及C -端片段由胺基酸24-34組成。各片段藉固相法在Vega 296自動胜肤合成器上製備。使用自動方式打斷 Να·保護基及於偶合後沖洗。將偶合試劑及溶劑於偶合步驟經由人工方式加到反應槽中。中間片段及Ν-端片段藉 HPL C純化以及接續與C -端片段縮合。將最終得到之多胜肽去保護，自樹脂打斷及純化。實施例1 Ν-端片段之製備由胺基酸1 -1 2組成之Ν-端片段，AVSEHQLLHDKG，在酸敏感性樹脂（4-羥甲基·3 -甲氧苯氧基丁酸4 -甲基二苯甲胺（ΗΜΡΒ-ΜΒΗΑ)以上250毫莫耳之量製備。該樹脂如下從 ΜΒΗ Α樹脂（Novabiochem)製備： J雙_處理内容_時間(分鐘）I 1重覆次數 (請先閱讀背面之注意事項㈣填寫本頁) -裝· 、11 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 1· CH2C12/DMF (1/1)沖洗 2· 含10% Et3N 之 CH2CI2 3. CH2C12/DMF .(1/1) 4· HMPB 聯錶子 (1.15當量>/ 含 PyBOP/DIPEA 之 CH2Cl2/DMF(1/1) 5 · CH2Cl2 沖洗· 6- DMF沖洗 ^ · CH2CI2 沖洗 8. i-PrOH 沖洗 9. CH2C12 沖洗 ο ο . · · · · 535111 11

04OC Θ RT 1 2 ，、3 1 2 2 1、2 3 用DMF/CH2C12至少沖洗一次之後，用Fm〇e-GlyOH 1.5-2.2 當量），DIC (1.5-2.2 當量）及 DMAP (0·05 當量）於室溫 F，在DMF/CH2C12(1/1)中，用下列方案進行約1 5小時。 -27- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 505654 A7 B7 五、發明説明（25 ) 步驟處理内容 _時間(分鐘）重覆次數 1. dmf/ch2ci2 (1/1) 60 1 2. Fmoc-X-OH (2 當量）/ DIC-DMAP (0·05 當量） in CH2C12/DMF (1/1) 900 1 3. CH2CI2 沖洗 1.5 2 4 · DMF沖洗 1.5 2 5. i-PrOH 沖洗 . 、 1·5 2 6 · DMF/CH2C12 (1/1) 1.5 2 7 . i-PrOH 1.5 2 8. CH2C12 沖洗 1 1.5 3 該樹脂然後藉重覆步驟3至8以進行沖洗，以及用下列方案封端：步驟_處理内容_l時間(分鐘)_重覆次數 9. DMF 15 1 10. PhCOCl(0.18M)/ 含吡啶（0·36Μ>之 30-180 1 11. 含 ι DMF/CH2CI2 CH2C12 沖洗 1.5 2 12. DMF 沖洗 1.5 2 13. i-PrOH 沖洗 1·5 2 14 . DMF/CH2Cl2 (1/1)沖洗 ' 1.5 1 15. CH2C12 沖洗 *、 1· 5 3 剩餘之胺基酸在接續的偶合循環中，用下列被保護之胺基酸以逆向順序接在樹脂上I aall Na-Fmoc_Ne 第三丁氧羰基-L·離胺酸經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閲讀背面之注意事項-«填寫本頁) aalO IT-Fmoc-L·天冬胺酸-卢-第三丁酯、 aa9 Na-Fmoc_Nim-三苯甲基-L-組胺酸 aa8 Na_Fmoc-L·白胺酸 aa7 N、Fmoc-L-白胺酸 aa6 lST-Fmoc_Nq·三苯甲基-L-麩胺酸 -28- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 505654 A7 B7 五、發明説明（26 ) aa5 N"-Fmoc-Nim-三苯甲基_L·組胺酸 aa4 N -Fmoc_L -越胺敗·弟二丁酉旨 aa3 >T-Fmoc_0-第三丁基-L-絲胺酸 aa2 Να -Fmoc-L-纈胺酸 aal 1ST·第三丁氧羰基-L_丙胺酸偶合在NMP中，用1.5至2.2當量胺基酸（0·1_0·25Μ)， HOBt及DIC於室溫下進行。1 .5-3小時之後，加入DMSO 並繼續進行偶合歷1 . 5 - 3小時。各偶合包含下列步驟：步驟，處理内容時間(分鐘）重覆次數 (請先閱讀背面之注意事項寫本頁) 3 5 0 12 3 4 1111 1 DMF 沖涣含20%六霞吡啶乏 NMP 20%六氫吡啶之 NMP DMF 沖洗 CH2C12 沖洗, i-PrOH 沖洗 DMF/CH2C12 (1/1)沖洗偶合 ^ CH2C12沖洗 DMF 沖洗 i-PrOH 沖洗 - DMF/CH2Cl2 沖洗· i一PrOH CH2C12 沖洗 55 55 05 555 55 ····· « ♦·· · 3111 11 21 111 11 ο 3 5 2 2 2 2 2 2 經濟部中央標準局員工消費合作社印製偶合完畢藉凱塞（Kaiser)試驗確認；若試驗爲陽性，則重覆步驟8-14，可選擇性地使用PyBOP做爲偶合劑。、爲了自樹脂打斷被保護之胜肽，將樹脂之懸浮液於含1 % TFA之CH2C12(4 ml/gm樹脂）中，在0°C或室溫下攪拌歷時至多1 5分鐘。將溶液過濾，並用5 % NaHC03萃取。重覆樹脂之TF A處理三次。將有機相合併，並用水，5 % -29- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐） 505654 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7五、發明説明（27 ) NaHS04及再次用水沖洗。將有機相經硫酸鈉乾燥及蒸發。殘餘物藉如下之HPLC純化：層析柱：Z orb ax Pro -10/150 C8，6” X 40 cm 柱溫：室溫流速:2.2-3.〇1111^/111丨11.(：1112 檢測波長:250 nm 移動相：0.1% HOAc，pH 6-6.2，連帶三乙胺，CH3CN 將被保護之胜肽裝載於65-70% CH3CN平衡之層析柱上。將C H 3 C N之比例漸增至8 5 %，以進行梯度溶析。將溶析份合併，濃縮及藉CH2C12萃取分離出產物。將有機相用碳酸獻鋼之稀溶液或水洗條，經硫酸鋼乾燥、過滤及蒸發。實施例2中間片段之製備由胺基酸13-23組成之中間片段，KSIQDLRRREL，在酸敏感性樹脂（4-羥甲基·3·甲氧苯氧基丁酸-4 -甲基二苯甲胺 (ΗΜΡΒ-ΜΒΗΑ)上以23 0 mmole之量製備。該樹脂按實施例 1所述自MBHA樹脂製備。第一個胺基酸（aa24)用Fmoc_L-白胺酸引進。剩餘之胺基酸在接續之偶合循環中，藉實施例 1之步驟接在樹脂上。 aa23 N"-Fmoc-L-麩胺酸-第三丁酯 aa22 N"-Fmoc-Ng_4-甲氧基_2,3,6_三甲基苄磺醯基_L-精胺酸 aa21 N"_Fmoc-Ng-4·甲氧基-2,3,6_三甲基苄磺醯基-L-精胺酸 aa20 N"-Fmoc-Ng_4·曱氧基_2,3,6_三甲基苄磺醯基-L·精胺酸 aal9 N"-Fmoc-L·白胺酸 -30- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閱讀背面之注意事項㈣填寫本頁) -裝· 訂 k_ 505654 A7 B7 五、發明説明（ 28 aal8 N、Fmoc_L-天冬胺酸第三丁酯 aal7 N'Fmoc-Ng三苯甲基-L-麩醯胺 aal6 Na-Fmoc-L-異白胺酸 aal5 N'Fmoc-O-第三丁基-L-絲胺酸 aal4 N、Fmoc-N、第三丁氧羰基-L·離胺酸將胜肽以游離酸形式自樹脂打斷，然後如實施例1之敎示，萃取、乾燥及蒸發有機相。殘餘物藉溶於二氯甲烷及加至第三丁基甲基醚（t-BuOMe)中而析出。過濾後，用t-BuOMe沖洗及眞空乾燥，產物如上述藉在Zo r bax層析柱上進行HPLC及用75%CH3CN溶析；檢測波長爲267 nm。實施例3 C -端片段之製備由月安基酸24-34組成之C_端片段，LEKLLEKLHTA，在 MBHA樹脂上，如下述用Fmoc-2,4·二甲氧基-4’-(羧甲氧基 )·二苯甲胺聯結子以130 mm之量製備： _ 處理内容_ . 時間(分鐘）首霜次數 (請先閱讀背面之注意事項_填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 , 13. 14 , 15. 16. 17. 18.

Luge丄2 .% 含 10% DIPEA 之 CH2C,l2 CH2C12 DMF 聯結子/HOBt/DIC (1·5當量，在CH2CJL2/DMF (1/1)中 CHoClo DMF iPrOH CH2C12/DMF iPrOH CH2C12 DMF Λ 在DMF/CH2C12 中 Ac2〇, DIPEA；在DMF/CH2CI2 中 CH2C12 1^1% 60 5 5 5 300- 420 1.5 DMF 沖洗 i-PrOH 沖洗 DMF / CH2C12 ch2c12沖洗沖洗 -31- 5 3 5 5 5 5 5 一 5 5 5 5 5 .....ο ci ····· 12X21 1 3 1 X 1 1 1 12 3 3 1 2 2b^223 1 1 2 2 2 13 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） 505654 A7 B7 五、發明説明（29 ) (請先閱讀背面之注意事項寫本頁) 剩餘之胺基酸在接續的偶合循環中，用下列被保護之胺基酸以逆向順序接在樹脂上： aa34 N"-Fmoc_L-丙胺酸 aa33 N"-Fmoc-O·第三丁基-L_羥丁胺酸 aa32 1ST-Fmoc-Nim-三苯甲基組胺酸 aa3 1 IST-Fmoc-L·白胺酸 aa30 N"-Fmoc-Ne_第三丁氧羰基_L_離胺酸 aa29 1ST-Fmoc-L-麩:胺酸-r-第三丁酯 aa28 N、Fmoc_L-白胺酸 aa27 N'Fmoc-L-白胺酸 aa26 N'Fmoc_Nε _第三丁氧羰基-L-離胺酸 aa25 N'Fmoc-L-麩胺酸卜第三丁酯 aa2 4 N、Fmoc-L -白胺酸偶合在NMP中，用1.5至2.2當量胺基酸，HOBt及DIC 於室溫下進行1 .5至3小時，以偶合胺基酸3 4至26。使用3 當量的胺基酸，HOBt及Dip以偶合胺基酸24及25。1.5-3 小時之後，加入2 0 % D M S Ο並繼續偶合歷1 · 5 · 3小時。每次偶合包含下列步驟，其包括打斷F m 〇 c及後續偶合沖洗：步驟_處理内容____ 時間(分鐘). 重覆次數經濟部中央標準局員工消費合作社印製 12345 67 89 11 111

0 12 3 4 X DMF 吃洗，六氫p比哮，在NMP 中 2 · 5 — 30 (1 、1 20%六氫吡啶，在NMP 中 14 1 DMF 命洗 1.5 3 CH2CI2 沖洗 1.5 2 i-PrOH 沖洗 1.5- 2.5 2 DMF/CH2Cl2 沖洗 1.5 3 偶合 240 1 ch2ci2 沖洗 ' 1·5 2 DMF 沖洗 1.5 2 i-PrOH 沖洗 1.5- 2.5 2 DMF/CH2CI2 沖洗 1.5 2 iPrOH 沖洗 2.5 2 CH2CI2 沖洗 -32- 1·5 3 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 505654 Α7 Β7 五、發明説明（3〇 ) 沒几瑟試驗 15. DMF 2.5- 15 1 16. ac2〇/dipea/ 30- 35 1 17. CH2CI2/DMF CH2CI2 沖洗 1.5 2 18, DMF沖洗， 1.5 2 19. i-PrOH 沖洗 1,5 2 20. DMF/CH2C12 沖洗 1.5 1 21. CH2Cl2沖洗 1.5 3 各次偶合步驟之後藉凱塞試驗確認偶合之完成。若該試經濟部中央標準局員工消費合作社印製驗爲陽性（1 · 5 %未被偶合），重覆步驟8至1 4 ;若該試驗爲陰性，將樹脂乙醯基化。免施例4 三片段縮合三個片段如上文實施例1，2及3所述製備。C -端片段之殘餘1ST-Fmoc基用最後所述之實施例3方案之步驟1至7移除。中間片段B(172克，61.8毫莫耳），HOBt(59.2毫莫耳），HOAt(3.7毫莫耳）及DIC(61.9毫莫耳）於NMP(900毫升 )及C Η2 C 12中，被加到C -端片段樹脂（1 9 0克，4 1亳莫耳）上。將該混合物於室溫下攪拌22小時。加入DIPEA(7毫升 )並再繼續攪拌1天。將樹脂如實施例1所述沖洗（步驟9 _ 1 3 ) 。凱塞試驗顯示有少於2 %不對'偶殘餘將樹脂乙醯化（實施例 3 ’步驟14_20)並移除Fmoc基（實施例3，步驟1-7)。將爲鈉鹽之N-端片段（153克，62.4毫莫耳）， HO'Bt(59.2 毫莫耳），HOAt(3.7 亳莫耳），PyBOP(62.5 毫莫耳）及DIPEA(125.15毫莫耳）在NMP(900毫、升）及 C Η2 C 12中加到樹脂上。將該混合物於室溫下授拌2 4小時，過濾及沖洗（實施例3，步驟9 · 1 3 )。凱塞試驗顯示殘留少於 1 %之未偶合部份。樹脂被乙醯基化（實施例3，步驟1 4 - 2 0) ，自反應器移出及於眞空乾燥。 -33- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ297公釐） (請先閱讀背面之注意事項寫本頁) -裝· 訂 505654 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（31 ) 將酚（60.3克）溶於硫大茴香醚（152.6亳升）及TFA(1公升 )之溶液於N 2之下，加到胜肽-樹脂（64克）上。將混合物冷卻至-10°C並緩慢添加TMSBr。將混合物在密閉系統中於-1 0 °C攪拌0 · 5小時，並於室溫攪拌1至2小時。將該混合物於5 0 °C下眞空濃縮至一半體積，並將該樹脂過濾及用 TF A (250毫升）及冰乙酸（250毫升）沖洗。濾液藉添加至第三丁基甲基醚：己烷之3 : 1混合物（6 · 5公升）中而沉澱。將粗製胜肽過濾，用第三丁基甲基醚，甲苯及第三丁基甲基醚（各2x250毫升）沖洗，然後藉溶於甲醇（5 00毫升）及加至第三丁基甲基醚（7公升）而再沉澱。將粗製物過濾，用第三丁基甲基醚沖洗並眞空乾燥，得到3 3克胜肽。下列PTHrp類似物可以類似方式製備，不過對於以酸爲終端之胜肽以適當的樹脂取代。 AVSEHQLLHDKGKSIQDLRRRELLEKLLEKLHTA-OH (序列鐘別編號:6) AVSEHQLLHDKGKSIQDLRRRELLERLLERLHTA-OH (序歹丨J 鑑別編號:15) AVSEHQLLHDRGRSIQDLRRRELLERLLERLHTA-OH (序列鑑別编號:16) AVSEHQLLHDRGRSIQDLRRRELLERLLKRLHTA-OH (序列鑑*別編號:17) AVSEHQLLHDKGKSIQDLRRRELLEKLLRKLHTA-OH (序列鑑別編號:5) AVSEHQLLHDKGKS IQDLRRRELLEKLLEKLHTAGRR - OH (序歹ι[鑑別編號:1 〇) AVSEAQLLHDLGKSIQDLRRRELLEKLLEKLHAL-OH (序列鑑別編號:h) » avsehqllhdkgksiqdlrrrellekllellkel-nh2 (序列鑑別编號:11)、 AVSEIQFXHNLGKHLSSXERVELLEKLLEKLHNY~NH2《X=Nle,序列鑑另丨J編號· 23 > AVSEIQFXHNLGKHLSSXRRRELLEKLLEKLHNY-NH2 (X-Nlef 序歹·】鍛另.J編號 24) AVSEHQLLHDKGKSIQDLRRRAL7VEALAEALHTA-NH2 (序列鑑別編號:20); AVSEHQLLHDKGKSIQDLARRELLEKLLEKLHTA~NH2 (序歹丨】鑑知编號:12) AVSEHQLLHDKGKSIQDLRRAELLEKLLEKLHTA-NH2 (序列鑑*別編號:13) -34- ^紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） ~ ~—- (請先閱讀背面之注意事項為填寫本頁) 裝· 寫太

、1T 505654 A7 B7 五、發明説明（32 ) —__ ^—....... AVSEHQLLHDKGKSIQDLRRRSLLSSLLSSLHTA-NH2 (序列鑑別編號:21): AVSEHQLLHDKGKSIQDLRRRAFYDKVAEKLHTA-NH2 (序列鑑別編號:22) AVSEIQFLHN LGKHLSSLRR RELLEKLLEK LHNY-NH2 (序列鑑別編號:35) AVSEHQLLHD KGKSIQDLKL KELLEKLLEK LHTA-NH2 (序歹丨】鑑別編號:38)， AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLERLLER LHTA-NH2 (序列鑑別編號:39) AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLERLLER LHTAP-OH (序列鑑別編號:40) AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLERLLER LHTAGRR-OH (序列鑑別編號:41) AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LHTY-NH2 (序列鑑別編號:43) AVSEHQLLHD KGYSIQDLRR RELLEKLLEK LHTA-NH2 (序列鑑別编號:44) AVSEHQLLHD KGCSIQDLRR RELLEKLLEK LHTA-NH2 (序列鑑別編號:45) AVSEHQLLHD KGXSIQDLRR RELLEKLLEK LHTA-NH2 (序列鑑別編號:46) (X = Cys(CH2CONH(CH2}2NH (生物素基))) AVSEHQLLHD KGXSIQDLRR RELLEKLLEK LHTA-而2 (序列鑑別编號:47) (X - Lys(7-二甲胺基-2-氧基-2H小苯幷哌喃-4-乙醯基)） - ' AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LHTAG-OH (序列鑑別編號:48), AVSXXHQLLHX2 KGKSIQX2LRR RX1LLX1KLLX1K LHA-OH (序列鑑別编號:49) (Χχ - Glu(OCH3)； X2 = Asp(OCH3)) AVSX1HQLLHX2 KGKSIQX2LRR RXiLLXxKLLXiK LHA-OCH3 (序列鑑別編號:50) / [Χχ « Glu(OCH3)/ X2 = Asp(OCH3)) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閲讀背面之注意事項用填寫本頁) AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LHTAP-OH (序列鑑別編號:52) AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LHTP-OH (序列鐘另編號:53): AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LHTP-NH2 (序列鍾另〉J編號:54) AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LHP-NH2 (序歹鍛另》J編號:55) AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LP-NH2 (序列鑑別编號:56) AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LHTRSAW-OH (序列鑑另編號:57)

AVSEHQLLHD RGRSIQDLRR RELLERLLER LHTAGRRTRSAW-OH .·(序列鑑別編號:58) AVSEHQLLHD RGRSIQDLRR RELLERLLER LHTAGRRTRSAW-NH2 (序列鑑別編號:59) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 505654 A7 B7 五、發明説明（ 33 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 AVSEHQLLHD RGXSIQDLRR RELLERLLER IiHTAGRRTRSAW—OH (序歹鑑另編號:60) X=Lys(二氫桂皮酿基)） AVSEIQFXHN LGKHLSSXTR SAWLRKKLQD VHNY-NH2 (序列鏗別編號:61)V (X=去甲白胺酸）； AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LHTMA**NH2 (序列鑑別編號:62) AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RFFLEKLLEK LI1TA-NH2 (序列鑑別编號:64) AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLHKLLEK LHTA-NH2 (序列鑑別编號:65) AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEHLLEK LIITA-NH2 (序列鑑別編號:66). AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEKLIAK LIITA~NH2 (序列鑑別编號:67) AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEE IHTA-NH2 (序列銀另编號:68) AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LHTRSAW-NH2 (序列鑑別編號:72) AVSEHQLLHD KGKSIODLRR RELLEKLLEK LHTRSAX-OH (序列鑑別編號:73) (X - Nal(2) - 3-(2-萘基)心丙胺酸） AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LHTASAW-OH (序列鑑別編號:74). AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LHTAEIRA-OH (序列鑑別編號:75) AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LHTAEIR-OH (序歹鑑別编號:76) AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LHTAEI-OH (序列鑑別編號:77)) AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LHTAE-OH (序歹丨J鑑別編號:78). SEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LHTA~NH2 (序列鑑別編號:8(^ LLHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LHTA-NH2 (序歹鑑另i編號:81) LHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LHTA-NH2 (序列鑑別編號:82) 、 SEHQLLHD RGRSIQDLRR RELLERLLER LHAGRRTRSAW-OH (序歹丨J鑑別编號:83) LLHD RGRSIQDLRR RELLERLLER LHAGRRTRSAW-OH (序列鑑別編號·84) (請先閲讀背面之注意事項寫本頁) -裝· 訂 -36- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐）

In m In m 505654 經濟部中央標準局員工消費合作杜印製 A7 _B7__五、發明説明（34 ) [Met34，Ala35](SEQIDNO:25)，AVSEHQLLHDKGKSIQDL-RRRELLEKLLEKLHTMA_NH2，（SEQ ID NO:25)，可藉下述步驟製備及純化。將該多胜肽按下述轉變成高碳絲胺酸内酯。將純化的胜肽溶解在4 4 %甲酸中。將該溶液於〇 °C下，與含溴化氰（700毫克）及酚（1 ·6毫克）之44%甲酸之預混溶液組合。將該溶液於〇°C攪拌2小時並於室溫再攪拌2小時。產物之形成可藉 HPLC(Vydac® C-18，300承 4.6x250 mm，流速 1.2 mL/min，以在0.1%TFA中之梯度25-45%乙腈溶析10 分鐘）。將樣品濃縮並用製備用1^_11?1^(¥丫(1&(^(：_18，以在0.1 % TFA中之梯度25-45%乙腈溶析）純化，得到序列鑑別編號：9。 AVSEHQLLHDKGKSIQDLRRRELLEKLLEKLHTX (X=hSerlac，序列鑑別編號:9) 同樣地，（序列鑑別編號：79)可依照該步驟製備。 AVSEIQFX! HN KGKHLSSXi ER VEWLRKKLQD VHNX2 (序列鑑別編號:79) (XfL-去甲白胺酸；X2=高碳絲胺酸内酯）爲了製備高碳絲胺酸醯胺，將粗製高碳絲胺酸内酯類似物（化合物4)濃縮並用25毫升溶於甲醇之飽和氨溶液處理。將溶液於0 °C攪拌2小時並於室溫攪拌1 6小時。反應藉 HPLC 監測（Vydac® C-18, 30〇4，4.6x250 mm，流速爲 1.2毫升/ 分鐘，以在0.1% TFA中之20-45%乙腈梯度溶析）。將該溶液濃縮並用製備用RP-HPLC(Vydac® C-18,以在0.1% TFA中之25-45%乙腈梯度溶析）純化。將高碳絲胺酸醯胺胜肽溶析份匯集 -37· 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閱讀背面之注意事項寫本頁) •裝· 訂 k 505654 A7 B7 35 五、發明説明（及凍乾，以得到序列鑑別編號：8 Αν8ΕΗ()ΙΧΗΟΚΧ}Κ8Ι(^〇αΐΚΕΙΧΕΚΙΧΕΚΧΗΤΧ-ΝΗ2(Χ=1ι&ι·，序列鑑別編號:8) 同樣地，化合物2 2，2 3及2 8可遵循該步驟，用甲硫胺酸做爲C -終端而製備。 AVSEIQFLHN LGKHLSSLRR RELLEKLLEK LHNX-ΝΗ2丨（序列鑑別编號:36) (X =高碳絲胺酸 )丨 AVSEIQFLHN KGKHLSSLRR RELLEKLLEK LHNX-NH2 (序列鑑別編號:37) (x==s高碳絲胺酸} • 』 .......... .. ….-.· ' AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLERLLER LIITAGRRX-NH2 (序歹，J鏗別编號:42) (X == 高碳絲胺酸）高碳絲胺酸烷醯胺同樣地自高碳絲胺酸内酯製備，即藉著將該内酯溶於含有過多對應烷胺之DMF，於室溫下攪捽數日後（反應藉分析用HPLC監測），將該混合物蒸發至乾且胜肽藉製備用HPLC純化。代表性的高碳絲胺酸烷醯胺爲化‘ 合物5 5及5 6。 AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LHTX-NHCH2CH3 r .高碳絲胺酸（序列鑑別編號:69) AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LHTX-NHCH2CH2C6H5(序列鎩別編號:7〇) 高碳絲胺酸）經濟部中央榡準局員工消費合作杜印製將上述高碳絲胺酸内酯類似物之水溶液用豬肝酯解酶（密蘇里州聖路易市之西格瑪化學公司）處理。内酯水解成C -端高碳絲胺酸可藉分析用HPLC監測。當水解被判定爲完全時，該物質可用上述製備用HPLC純化。 AV；5EHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LHTX-9H (序列鑑別編號:51)( (X=高碳絲胺酸） -38- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐） 505654 A7 ______ B7 五4明説明（36 ) 雖然本發明已藉揭示3 4個胺基酸多胜肽自三個片段之人成而例示説明，但其也可同樣地應用於自不同片段合成具不同長度的其他PTH及PTHrp類似物。一般而言，絶胺酸、甘胺酸、白胺酸及脯胺酸爲期望的片段C -端。在前述實施例中，片段2與3間之白胺酸-白胺酸偶合出乎意料之外地提供高產率。同樣地，自片段1-7，8-23，24-27及28-34 製備序列鑑別編號：7之多胜肽可以利用白胺酸-白胺酸偶合。在另一具體例中，當胺基酸24-27(1^〖1〇與2 8-3 1相同時，四個胺基酸之片段可藉溶液相或固相技術製備，並自行縮合’以提供片段24-31。另^一方法爲製備具四個胺基酸之片段23-2 6 (LLEK)且自行縮合。使用較小之片段（其易於結晶）能增加純化之容易度，不過，片段的數目增加需要較多的片段縮合步驟。 (請先閱讀背面之注意事項寫本頁) 裝· 、寫本經濟部中央標準局員工消費合作社印製 9 3 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 505654

(iii)序列乏數目 86 (iv) 通訊地址 (A>住址街填城丰州a家 (B) (C) (D) (E) 區號 ·: F. HOFFMANN-LA ROCHE AG :Grenzacherstrasse 124. Basle ：BS :Switzerland CH—4070 (v)電腦可讀形式 (A>媒體類型 ⑻電腦 (Π操作系統 (E>)軟體 :敕碟 · \ IBM PC 相容· ‘：PC-DOS/MS-DOS Patentln Release #1.0i

Version #1.25 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (2)序列鑑別編號：1之資料： (ί)序列特徵：㈧長度：34個胺基酸 (B)類型：胺基酸，‘ (D)構形：鏈狀 . (ii) 分子類型:胜肽 .· (iii) 假設者：否 · (v)片段類型：N-端 :(xi)序列描述：序列鑑別編號：1: 、、 * ， Ser Val Ser Glu 工le Gin Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu 1 5 10 15 Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gin Asp Val 20 25 30 A^n Phe 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) 規格（21〇X297公釐） -40-

裝· 訂 (請先閲讀背面之注意事項^?^寫本頁) • In · .- 1 - 1 I —il 505654 A7 B7 五、發明説明（38 ) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (2)序列鑑別編號：2之資料： (0序列特徵： (Λ)長度：34個胺蕋酸 (B)類型：胺蕋酸 . (D)構形：鏈狀 (ii)分子類型：胜肽 (⑴)假設者：否、 (v)片段灘ί型：N- ;: :端 W)序列描述：序列鑑別編號：2: Ala Val Ser Glu lie Gin Phe Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Sex 1 5 10 15 Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gin Asp Val His 20 25 30 Asn Phe „ (2)序列鑑別編號：3之資料： (i) 序列特徴： (Λ)長度：3姻胺湛酸 ·. (B)類型：胺蕋酸 · (D)構形：鏈狀，. (ii) 分子類型：胜肽 (iii) 假設茗：否 ^ (v)片段類型：N-端 ' . (xi)序列描述：序列鑑別編號：t · Ser Val Ser Glu lie Gin Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Ser一 1 5 10 15 Ser Leu Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gin Asp Val His / 一20 25 .、30 Asn Phe '、 ⑺序列鑑別編號：4之資料： (i)序列特徵：， (Λ)長度:34個胺基酸 (B)類型：胺蕋酸 .(D)構形：鏈狀· -41- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（2l〇X297公釐） (請先閱讀背面之注意事項巧填寫本頁) 寫本 505654 Α7 Β7五、發明説明（） (ii) 分子類型：胜肽 (iii) 假設者：否 (v)片段類型：N-端 (xi)序列描述：序列鑑別編號 Ala Val Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser lie Gin 1 5 10 15 Asp Leu Arg Arg Arg Phe Phe Leu His His Leu lie Ala Glu lie His 20 25 30 Thr Ala (2)序列鑑別編號：5之資料： (i) 序列特徴： (A)長度:34個胺蕋酸 ⑼類型：胺基酸 (D)構形：鏈狀 (ii) 分子類型：fli肽 . (iii) 假設者：否 (v)片段類型：N-端 (xi)序列描述：序列鑑別編號：5 : I . Ala Val Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser lie Gin 1 5 10 15 Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Arg Lys Leu His 20 25 30 (請先閱讀背面之注意事項寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製

Thr Ala (2)序列鑑別編號·· 6之資料： (i) 序列特徵： (Λ)長度;34個胺®酸 (B)類型：胺蕋酸 (D)構形：鏈狀 (ii) 分子類型·· fl生肽 (iii) 假設者：番 (v)片段類型：N-端 ·>·. 〇d)序列描述：序列鑑別編號 -42- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 505654 A7 B7 五、發明説明（40

Ala Val Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser lie Gin 15 10 15 Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys Leu His 20 25 30 Thr Ala (2)序列鑑別編號：7之資料：、 (i)序列特徴： (Λ)長度：34個胺基酸 (B)類型：胺酸 (D)構形：鏈狀 (Γι)分子類型：胜肽 (iii)假設者：否 (v)片段類型：N-端 (xi)序列描述：序列鑑別編號：7 : — Ala Val Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser lie Gin 1 5 10 15 Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys Leu His 20 25 30 Thr Ala (請先閱讀背面之注意事項寫本頁) --裝- _^^寫木經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (2)序列鑑別編號：s之資料： w序列特徵： . * (八）長度:34個胺基酸 .\ (Β)類型：胺基酸 (D)構形：鏈狀 (ii)分子類型:胜肽 /(叫假設者：否 (v)片段類型：N-端 .、 (ix)特徵： · ’ . . 、、 (Λ)名字/關键字··修改邵位 · (B)位置:34 ，, (D>其他資料:/註=nXaa34=高碳絲胺酸” • 高碳絲胺酸，〇ά)序列描述：序列鑑別編號：8 : Ala Val Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser lie Gin 1 5 10 15 43 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 505654 A 7 B7 五、發明説明（41 )

Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys Leu His 20 25 30

Thr Xaa (2)序列鑑別編號：9之資料： (i) 序列特徵： (Λ)展度：34個胺越酸 ' (B)類型：胺基酸 (D)構形：鏈狀 (ii) 分子類型.肽丨 (iii) 假設者：否 (v) 片段類型：N-端 (vi) 特徴： (Λ)名字/關鏈字：修改部位 (13)位朦:：34 (D琪他資料：/註=“Xaa34 =高絲胺酸内酿 \xi)序列描述：序列鑑別編號：9 :

Ala Val Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser lie Gin 1 5 10 15

Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys Leu His 20 25 30

Thr Xaa (2)序列鑑別編號：10之資料： , (i)序列特徵： · . ^ (Λ)長度：37個胺基酸 ‘ (13)類型：胺基酸 (D)構形：鏈狀 , (ii)分子類型：胜肽 (iii)假設者：否 . 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項寫本頁) ⑺片段類型：N-端 S 、 (χί)序列描述：序列鑑別編號：1G:

Ala Val Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser lie Gin 1 5 10 15

Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys Leu His 20 25 · 30

Thr Ala Gly Arg. Arg 35 -44- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 505654 A7 B7 五、發明説明（42 ) (2)序列鑑別編號：n之資料： (!)序列特徵： (A) 長度:34個胺蕋酸 (B) 類型：胺蕋酸 ‘ ⑼構形：鏈狀 (ii)分子類型·· 胜肽 ' (ϋί)假設者：否 (ν)片段類型：Ν-端 (χί)序列描述：序列鑑別編號：11:

Ala Val Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser lie Gin 15 10 15

Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys Leu Lys 20 25 30

Glu Leu _ (2)序列鑑別編號：12之資料： (i) 序列特徴： . (八）長度：34個胺邀酸 (B)類型：胺基酸 (D)構形：鏈狀 ' (ii) 分子類型：胜肽 (即假設者：否 … ^ W片段類型：N-端 .. ⑽序列描述：序列鑑別編號12: ’

Ala Val Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser lie Gin 1 5 10 15 ,Asp Leu Ala Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys Leu His 20 25 .，、30 經濟部中央標準局員工消費合作社印裝 (請先閱讀背面之注意事項寫本頁)

Thr Ala v (2)序列鑑別編號：13之資料： (i) 序列特徵：， · (A) 長度：34個胺蕋酸 (B) 類型：胺基酸 .(D)構形：鏈狀. (ii) 分子類型·· 胜肽 45- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 505654 A7 B7五、發明説明（43 ) (Πί)假設者：否 (ν)片段類型：Ν-端 ⑽序列描述：序列鑑別編號：13:

Ala Val Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys 1 5 10 se 1 5 I 1 經濟部中央標準局員工消費合作社印製

Asp Leu Argr Arg Ala Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys Leu His 20 25 30 Thr Ala (2)序列鑑別編號：14之資料： (i) 序列特徵_· (Λ)長度:34個胺蕋酸 (B)類型：胺基酸 (D)，構形：鏈狀 „ (ii) 分子類型：胜肽 (iii) 假設者：否 (v)片段類型：N-端 (xi)序列描述：序列鑑別編號：14 Ala Val Ser Glu Ala Gin Leu Leu His Asp Leu Gly Lys Ser lie Gin 1 5 10 15 Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys Leu His 20 25 30 Ala Leu (2)序列鑑別編號::15之資料： W)序列特徵：㈧長度:34個胺基酸 ⑼類型'•胺基酸 ·’、 (D)構形：鍵狀 (ii)分子類型：胜肽. (Hi)假設者：否 »片段類型：N-端 ⑽序列描述：序列鑑別編號：15: -46- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（2丨〇><297公釐） (請先閲讀背面之注意事項寫本頁) •裝· 訂 505654 A7 __ B7 五、發明説明（44 )

Ala Val Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser He Gin 1 5 10 15

Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Arg Leu Leu Glu Arg Leu His 20 25 30

Thr Ala ⑺序列鑑別編號：16之資料： ' (0序列特徵： (Λ)長度：34個胺蕋酸 (13)類型：胺蕋酸 (D)構形··鏈狀 (ii) 分子類型：胜肽、 (iii) 假設者：否 (v)片段類型：N-端 (xi)序列描述：序列鑑別編號：16:

Ala Val Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Arg Gly Arg Ser lie Gin 1 5 10 15

Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Arg Leu Leu Glu Arg Leu His 20 25 30

Thr Ala (2)序列鑑別編號:17之資料： (i) 序列特徵：，4 . (Λ)長度· 34個胺酸 / (Β)類型：胺基酸 (D)構形：鏈狀 (ii) 分子類型：‘胜肽假設者：否經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項一^寫本頁) (v)片段類型：N-端，.、，、 ⑽序列描述：序列鑑別編號：Π: _

Ala Val Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Arg Gly Arg Ser lie Gin 1 5 10 15

Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Arg Leu Leu Lys Arg Leu His 20 25 30

Thr Ala -47- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） 505654 A7 B7五、發明説明（45 ) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (2)序列鑑別編號：18之資料： (i) 序列特徵： (A) 長度：34個胺-酸 (13)類型：胺蕋酸 .(D)構形：鏈狀 (ii) 分子類型：胜肽 (iii) 假設者：否 ' (v) 片段類型：N…端 (vi) 特徵： (Λ)名字/關鍵字：修改部位 (B) 位躓：29 t (D)其他資料:/註=“X⑽29 =離胺酸-(0CC1I2 ( OCII2CH2) 2OCH3) ” • ’㈤序列抓述：序列鑑別編號：18 : Ala Val Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Arg Gly Arg Ser lie Gin 15 10 15 Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Arg Leu Leu Xaa Arg Leu His 20 .25 30 Thr Ala (2)序列鑑別編號：19之資料： (i) 序列特徵：， (八）長度：34個胺_酸 (B)類型：胺羅酸 · (D)構形：鏈狀 .· . ‘ (ii) 分子類型：肢肽 · (Ui)假設者：否 (v)片段類型：N-端 ⑽特徵： (八)名子/關鍵字：修改部位 '，、 ⑼位置:29 .、 ' 』（D)其他資料：敬=“Xaa29 =離胺酸-(〇CCI 12 (OCH2CII2) IIQ〇CH3)，，序列描述：序列鑑別編號：19 : * / Ala Val Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Arg Gly Arg Ser lie Gin 1 5 10 15 -48- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（21 〇X297公釐） (請先閱讀背面之注意事項,填寫本頁) ^-裝寫太訂 505654 A7 B7 五、發明説明（46 )

Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Arg Leu Leu Xaa Arg Leu His 20 25 30

Thr Ala (2)j芋列鑑BU編號：20之資料：、 ⑴序列特徵：㈧長度：34個胺基酸 (B)類型：胺酸 (D)構形：鏈狀 (Π)分子類型：胜肽 (ϋί)假設者：否 (ν)片段類型：Ν-:端 (xi)序列描述：序列鑑別編號20 = AJa Val Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser lie Gin 1 5 10 15

Asp Ley Arg Arg Arg Ala Leu Ala Glu Ala Leu Ala Glu Ala Leu His 20 25 30

Thr Ala (2)序列鑑別編號：21之資料： (i)序列特徵： · (A) 長度:34個胺基酸 · * (B) 類型：胺_酸 (D)構形：鏈狀 (Π)分子類型：胜肽 .· (iii)假設者：否 (ν)片段類型：Ν-端經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項^^寫本頁) (xi)序列描述：序列鑑別編號^

Ala Val Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser lie Gin 1 5 10 ，、 15

Asp Leu Arg Arg Arg Ser Leu Leu Ser Ser Leu Leu Ser Ser Leu His 20 25 30

Thr Ala -49- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 505654 A7 B7 五、發明説明（47 ) (2)序列鑑別編號:22之資料： (i) 序列特徵： (Λ)長度：34個胺骓酸 (B)類型：胺基酸 (D)構形：鏈狀 (ii) 分子類型：胜肽 t (iii) 假設者：否 (v)片段類型：N·端 ⑽序列描述：序列鑑別編號：22: Ala Val Ser Glu Ills Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser lie Gin 1 5 10 15 Asp Leu Arg Arg Arg Ala Phe Tyr Asp Lys Val Ala Glu Lys Leu His 20 25 30 Thr Ala (請先鬩讀背面之注意事項再填寫本頁) (再填經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (2)序列鑑別編號：23之資料： (i)序列特徵： · (Λ)長度：34個胺蕋酸 (〗3)類型：胺蕋酸 . (D) 形：鏈狀 (Π)分子類型：胜肽 . (Hi)假設者：否 ·· * (v)片段類型：N-端 · * 〇>0特徵： (Λ)名字/關鍵字：修改部位 ,(B)位瞪：8 (D)其他資料：/註=“Xaci8 =去IP白胺酸” (ix)特徵：，、，、 (A) 名字/關鍵字:修改部位 (B) 位置:i8 (D)其他資料:/註8=去甲白胺酸" (xi)序列之描述··序列鑑別編號:23 Ala Val Ser Glu lie Gin Phe Xaa His Asn Leu Gly Lys His Leu Ser 15 10 15 Ser Xaa Glu Arg Val Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys Leu His 20 25 30 Asn Tyr -50- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐） 505654 A7 B7 五、發明説明（48 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (2)序列鑑別編號：24之资利： (i)序列特徴： (八）畏度：3，l·㈣關鹽 (U靡® :胺拙酸 (I))構形：鏈狀 (Π)分Τ類狈：丨_人，· (iii)假設莕：¾ ' ' (v) η猶ίΜ : N-端 (ix)特徵： (A) &字劇鍵字：修改部位 (B) 位厭：8 ⑼其他資料：/丨丨卜“X⑽8 =去11泊胺酸” (ix)择徵： •(Λ)名字/關鍵字:降改_位 (13)^1:18 . 丨 (D)其他资料:/柱="乂即18=去^〗胺酸” ' (xi)4列芝描述:片列媼別私敗:24 Ala Val Ser Glu lie Gin Phe Xaa His Asn Leu Gly Lvs His Leu Ser 1 5 10 15 Ser Xaa Arg Arg Arg Glu JLeu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys Leu His 20 25 30 Asn Tyr (2)序列鑑別編號：25之資料： (i)序列特徵： · * (Λ)畏度：35㈣|安拙酸 · ’ (13)類Μ :胺1酸 (1〕）惝肜：_狀 ,(ίί)分了類Μ 胜狀 (ίΝ)假設巷：否 (ν)丨V段類型：队端 (xi)序列丨W述：序列鑑別編號:· 25: Ala Val Ser Glu Ills Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser lie Gin 1 5 l〇 15 Asp Leu Arg Arg 八rg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Ly3 ijeu

Thr Met Ala 35 請先閲讀背面之注意事 1« 寫 t 20 25 30 -51- 本k:張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 505654 A7 B7五、發明説明（49 ) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (2)序列鑑別編號：26之資料： —— (i) 序列特徵： (Λ)長度：10個胺®酸 (B)類型：胺®酸 (I))構形：螺旋狀 (ii) 分子類型：胜肽 '(iii)假設者：否 ⑺片段類型：內部、 (ix)特徴： (八)名字/關鍵字：修改部位 ^ (B)位置：8 (D淇他資料：/註=“Xim8 =麩胺酸或精胺酸” (ix)特徵： (Λ)名字/關鍵字：區域 „ (B)位麗：1 ······10 (D)其他資料：/註=“序列26被嵌在序列5, 6, 7, 8, 9, 10, 11，12, 13及14之位置22至3Γ · (M)序列描述：序列鑑別編號：26 : Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Xaa Lys Leu 1 5 10 (2)序列鑑別編號：27之資料：，· · / ⑺序列特徵：、、、 (Λ)長度：10個胺蕋酸 ⑼類型：胺誨酸 ⑼構形：螺旋狀 tii)分子類型：fli肽 (叫假設者：否 ' (v)片段類型：內部 Λ ㈣特徵： (Λ)名字/關鍵字：修改部位 · (Β)位置：8 (D)其他資料：/註=“Xaa8 =麩胺酸，離胺酸，或離胺酸-(〇cCH2PEGX)，， -52- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閱讀背面之注意事項寫本頁) -裝· 訂 505654 A7 B7 五、發明説明（5()) 經濟部中央標準局員工消費合作社印策 (ix)特徵： ‘ (Λ)名字/關鍵字：區域 (B)位置：1 ·..·.·10 ⑼其他資料：/註=“序列27被嵌在序列15, 16,17, 18及19之位麗 22 31” (xi)序列描述：序列鑑別編號：27 ' Glu Leu Leu Glu. Arg Leu Leu Xaa Arg Leu 1 5 10 (2)序列鑑別編號：28之資料： W序列特徵： ' (A) 長度：10個胺蕋酸 (B) 類型··胺蕋酸 (D)構形：螺旋狀 ⑼分子類型_肽 (叫假設者：否 ~ (v)片段類型：內部办）特徵： . ㈧名字/關鍵字:fl生肽 . (B)位置：1 ·..·.·1〇 ([))其他資料：駐=“序列28被嵌在序列20之位置22至31” ⑽序列描述：序列鑑別編號ί 28 Ala Leu Ala Glu Ala Leu Ala Glu Ala Leu 1 5 ·· i〇 ⑺序列鑑別編號：29之資料： ‘· - (i)序列特徴： (八）長度M0個胺基酸 ,(聊型：胺纖 (D)構形：螺旋狀 ⑻分子類型：··胜肽 ·、 (Πί)假設者：否 (ν)片段類型：內部 (ix)特徵：， * (Λ)名字/關鍵字：辦私. (B)位置：1•…··10 .(⑺其他資料：潘[:=“序列29被嵌在序列21之位置22至31” -53- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項#|填寫本頁) 裝· 寫太訂

505654 A7 B7五、發明説明（51 ) 經濟部中央標隼局員工消費合作社印製㈨)序列描述：序列鑑別編號：29 : Ser Leu Leu Ser Ser Leu Leu Ser Ser Leu 1 5 10 ⑵序列鑑別編號：30之資料： > (i) 序列特徵： (Λ)長度·· 10個胺酸 ' .(B)類型：胺基酸 (D) _形：螺旋狀 (ii) 分子類型：朋肽 (Π0假設者：否 (v)片段類型：內部 (ix)特徵： (Λ)名字/關鍵字:胜肽 (B) 位置：1……1〇、 (⑺社他資料：/註=“序列3〇被嵌在¥列22之位置22至3 Γ (xi)序列描述：序列鑑別編號：30 :> Ala Phe Tyr Asp Lys Val Ala Glu Lys Leu 1 5 10 P)序列鑑別編號：31之資料： . (i)序列特徵：β ’ (Λ)畏度：88個鹼蕋對 * 丨 (Β)類型：核酸 ~ . (C) 股數：單股 . (D) 構形：鏈肤 (Π)分子類型：cDNA ，(iii)假設者：盃 (iv)反義：否 ‘ ⑽序列描述：序列鑑別編號：31 : 、 'N CCTCTAGATC TCCGCGGCGC TAGCATGGCT GTTTCTGAAC ATCAGCTGCT TCATGACAAA 60 GGTAAATCGA TTCAAGATCT GAGACGTC 88 (2)序列鑑別編號：32之資料： / (i)序列特徵： — (A)長度：90個鹼基對 .:· . 【B)類型：核酸； -54- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閲讀背面之注意事項寫本頁) -裝_ 505654 A7 B7五、發明説明（52 ) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (C) 股數：單股 (D) 構形：鏈狀 1_，《（Π)分子類型：cDNA ⑽假設者：否 . • · (iv)反義：是 . (xi)序列彳彷述：序列鑑別編號·· 32 : ， ! CCTCGAAGCT TATGCATCAT TATCTAGACA TAGTATGCAG CTTTTCAAGC AGTTTCTCCA 60 GCAGCTCGCG ACGTCTCAGA TCTTGAATCG 90 (2)序列鑑別編號：33之資料： (i)序列特徵： (八）長度：23個鹼_對 ⑼類型：核酸 (Q股數：單股 (Dj構形：鏈狀 ” (vi)分子類型：cDNA 假設者：否 (iv)反義：否 / ⑽序列描述：序列鑑別編號：3；?: CCTCTAGATC TCCGCGCGCT AGC 23 · (2)序列鑑別編號：34之資料·： · , · (1) 序列特徵：' .·. . ' (Λ)長度：24個鹼施對 ' ⑼類型：核酸〆 (C)股數：單股 '(D)構形：SI!狀； ,(ii)分子類型：cDNA , .· ⑼)假設者：否 ' (iv)反轉：是、'、 ⑽序列描述：序列鑑別編號：34 : . ’ , 厂 ' CCTCGAAGCT TATGCATCAT TATC 24 (2) 序歹ij鑑別編號：35之資料： · .(丨）序列特徵： ’ (Λ)長度·· 34個胺酸 ,\ -55- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閱讀背面之注意事項寫本頁) -裝_ 訂 505654 A7 B7 五、發明説明（53 ) (B)類型：胺基酸 (D)構形：鏈狀 (ii) 分子類型：蛋白質 (iii) 假設者：否 (v) 片段類型：N·端 00序列描述：序列鑑別編號：35 : .

Ala Val Ser Glu lie Gin Phe Leu His Asn Leu Gly Lys His Leu Ser 1 5 10 15

Ser Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys Leu His 20 25 30

Asn Tyr (2)序列鑑別編號：36之資料： (0序列特徵： (A) 長度：34個胺基酸 (B) 類型：胺基酸 . (D)構形：鏈狀 (ii) 分子類型：蛋白質 (iii) 假設者：否 , (vi) 片段類型：N-端 (ix)特徵：· . ㈧名字/關鍵字：修改部位 .· * (B)位置：34 · (D)其他資料：/註=“Xaa爲高碳絲胺酸” 丨 (xi)序列描述：序列鑑別編號：36 : / 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項寫本頁)

Ala Val Ser Glu lie Gin Phe Leu His Asn Leu Gly Lys His Leu Ser 1 5 10 '、15 v S^r Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys Leu His 20 25 30

Asn Xaa (2)序列鑑別編號：37之資料： (i)序列特徵： ι (A) 長度：34個胺基酸 (B) 類型：胺基酸 .肩構形：鏈狀 -56- 本紙張:尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（21〇X 297公釐） 505654 A7 B7 五、發明説明（54 ) (ii) 分子類型：蛋釣質 (iii) 假設者：否 (vii)片段類型：N-端 (ix)特徵： (A) 名字/關鍵字：修改部位 (B) 位置：34 (D)其他資料：/註=“乂脱爲高碳絲胺酸” (xi)序列描述：序列鑑別編號：37 :

Ala Val Ser Glu 工le Gin Phe Leu His Asn Lys Gly Lys His Leu Ser 1 5 10 15

Ser Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys Leu His 20 25 30

Asn Xaa (2)序列鑑別編號：38之資料： (i)序列特徵：㈧長度：34個胺基酸 (B)類型：胺基酸 (D)構形：鏈狀 . (丨i)分子類型：蛋白質 ' (ϋί)假設者：否 (V)片段類型：N-端 .· ' ίΧΐ婷列描述：序列鑑別編號：38 :

Ala Val Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser lie Gin 15 10 15

Asp Leu Lys Leu Lys Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys Leu His 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項本頁)

20 25 3Q '丨：、 - \

Thr Ala (2)序列鑑別編號：39之資料： (i) 序列特徵： u (Λ)長度：34個胺基酸 ,(B)類型：胺基酸 : ” (D>構形：鏈狀 (ii) 分子類型：蛋白質 ' -57- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（21〇X297公釐）經濟部中央標準局員工消費合作社印製 505654 A7 B7 五、發明説明（55 ) (Hi)假設者：否 (V)片‘段類型：N-端 (xi)序列描述：序列鑑別編號：39 :

Ala Val Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser lie Gin 15 10 15

Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Arg Leu Leu Glu Arg Leu His 20 25 30

Thr Ala 1 (2)序列鑑別編號：40之資料： ⑴序列特徵： (A) 長度：35個胺基酸 (B) 類型：胺基酸 . (D)構形：鏈狀 ⑼分子類型：蛋白質 (iii)假設者：否 (v)片段類型：N_端 (xi)序列描述：序列鑑別編號：40:.

Ala Val Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser lie Gin 1 5 10 15

Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Arg Leu Leu Glu Arg Leu His 20 '25 30

Thr Ala Pro · 35 . (2)序列鑑別編號：41之資料:......... (i) 序列特徵： (A)長度：37個胺基酸 \ ;(B)類型：胺基酸，、 (D)構形：鏈狀 (ii) 分子類型：蛋白質 (叫假設者：否㈧片段類型：N-端 ⑽$列描述：序列鑑別編號：41 :

Ala Val Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser lie Gin + 5 . 10 15 _ 58 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項^填寫本頁) -裝- 505654 A7 B7 五、發明説明（ 56 經濟部中央標準局員工消費合作社印製

Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Arg Leu Leu Glu Arg Leu His 20 25 30 Thr Ala Gly Arg Arg 35 (2)序列鑑別編號：42之資料： (i)序列特徵： (A) 長度：38個胺基酸’ … (B) 類型：胺基酸 (C) 稱形：鏈狀 1 (H)分子類型：蛋白質 (iii)假設者：否 (V)片段類型：N-端 (ix)特徵： (Λ)名字/關鍵字：修改部位 (B)位置：38 (D琪他資料：/註=“Xaa爲高碳絲胺酸” f (xi)序列描述：序列鑑別編號：42 : Ala Val Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser lie Gin 15 10 15 Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Arg Leu Leu Glu Arg Leu His 20 25 30 Thr Ala Gly Arg Arg Xaa · 35 · . (2)序列鑑別編號：43之資料： . (i) f列特徵：長度：34個胺基酸 ,(Β_型：胺基酸 (D)構形：鏈狀 '、 (ii) 分子類型：蛋白質 ’、 (iii；(假設者：否，卜)>段類型：乂端 (xi)序列描述：序列鑑別編號：43: Ala Val Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser lie Gin 1 5 10 15 Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys Leu His , 2〇 25 30 -59 - (請先閱讀背面之注意事項寫本頁) 寫太

、1T 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（21〇X297公釐） 505654 A7 _________B7 五、發明説明（57)

Thr Tyr (2)序列鑑別編號：44之資料： (0序列特徵： (Λ)長度：34個胺基酸 (B)類型：胺基酸 (D)構形：鏈狀 (ii)分子類型：蛋白質 (m)假設者··否 (v)片段類型：N·端 1 ⑽序列描述：序列鑑別編號：44 :

Ala Val Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Tyr Ser lie Gin 15 10 15

Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys Leu His 20 25 30 ，

Thr Ala (2)序列鑑別編號：45之資料： ’ · ⑴序列特徵：㈧長度：34個胺基酸 ·， (13)類型：胺基酸 (D)構形：鏈狀、 (ii) 分子類型：蛋白質 ' ^ ^ (iii) 假設者：否 ‘ (v)片段類型：N-端 (xi)序列描述：序列鑑別編號：45 : Ι,π ' 經濟部中央檫準扃員工消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項 ^^寫本頁)

Ala Val Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Cys Ser lie Glr 1! 5 10 15 - . v

Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu I s Leu Leu Glu Lys Leu His 20 25 30

Thr Ala (2)序列鑑別編號：46之資料： (i)序列特徵： •(A)長度：34 ·|胺基酸 (Β)類型：胺基酸 :」， . i - 60 - 本紙張克度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 505654 A7 B7 五、發明説明（ 58 (D)構形：鏈狀 (ii) 分子類型：蛋白質 (iii) 假設者：否 (v)片段類型：Ν·端 •(ix)特徵：㈧名字/關鍵字：修改部位 (B)位匱：13 1 .(D)其他資料：/驻=“Xaa 爲 Cys ( CH2 CONH ( CH 2 ) :? NH (生物素鉴）） (xi)序列描述：序列鑑別編號：46 :

Ala Val Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Xaa Ser lie Gin 15 10 15 Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys Leu His 20 25 30 Thr Ala (請先閱讀背面之注意事項\^寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (2)序列鑑別編號：47之資料： - (i) 序列特徵： . (A) 長度：M個胺氍酸 (B) 類型：胺蕋酸 (D)構形：鏈狀 (ii) 分子類型：蛋丨白質 ' (Hi)假設者：否，· ' (0片段類型：_端 .. .· · 、、 (ix)特徵： (Λ)名字/關鍵字：修改部位 ,(B)位置：13 (D)其他W料· /n ^ = “xaa爲離胺酸（孓二甲胺基孓氧基苯并p欣宿冰乙醯雜）” 、 ⑽序列描述:序列鑑別編號：47 :

Ala Val Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Xaa Ser 1 5 l〇

Π 1 G e 15 II

Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys Leu His 20 25 30

Thr Ala -61- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 505654 A7 B7 五、發明説明（59 ) (2)序列鑑別編號：48之資料： (i)序列特徵： (A) 長度：35個胺基酸 (B) 類型：胺基酸 (D)構形：鏈狀 GO分子類型：蛋白質 ⑽假設者：否 (v)片段類型：N-端 > 序列描述：序列鑑別編號：48 :

Ala Val Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser lie Gin 15 l〇 15

Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys Leu His 20 25 30

Thr Ala Gly 35 (2)序列鑑別編號：49之資料： · (i)序列特徵： . (Λ)長度：33個胺基酸 ♦ (Β)類型：胺基酸 . (D)構形：鏈狀 . (Π)分子類型：蛋白質，' (抑假設者：否 / ' (ν)片段類型：Ν-端 · 丨Γ::丨(b〇特徵：」：/ (A)名字/關鍵字：修改部位經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項^^寫本頁) (B)位置：4 ,、 (D琪他資料：/註=“Xaa 4爲G】u(OCII3)” (ix)特徵：、 , (A)名字/關鍵字：修改部位 (丨: (B)位置：10 μ (D)其他資料：/註=“XaalO 爲 Asp(OCH3)” : (ix)特徵： . (Λ)名字/關鏈字：修改部位 (B)位置：17 ' V" (D)其他資料：/註=“Xeial7 爲 Asp(OCH;)” ’ · -62-本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐）經濟部中央標準局員工消費合作社印製 505654 A7 B7__ 五、發明説明（6G ) (ix)特徵： (Λ)名字/關鍵字：修改部位 (13)位隱：22 ^ Φ)其他資料：/註=“Xaa22爲G丨u(OCH3)” 如）特徵： ‘ (八)名字/關鍵字：修改部位 ⑼位置：25 (D)其他資料：/註=“Xaa25 爲 G1u(OCH3)” (ix)特徵： (Λ)名字/關鍵字：修改部位 ' (Β)位置：29 ⑼其他資料：/註=“Xaa爲G1u(OCH3)” ⑽序列描述：序列鑑別編號：49 :

Ala Val Ser Xaa His Gin Leu Leu Iiis Xaa Lys Gly Lys Ser lie Gin 15 10 15

Xaa Leu Arg Arg Arg Xaa Leu Leu Xaa Lys Leu Leu Xaa Lys Leu His 20 25 30

Ala , ~ (2)序列鑑別編號：50之資料： (i)序列特徵： (八）長度：33個胺諶酸 (3)類型：胺蕋酸 . (D)構形： ⑼ 分子類型：蛋ή質 · 〔Hi)假設者：否 : ‘ (v)片段類型：N-端 . (ix)特徵： (Λ)名字/關鍵字：修改部位： ' (B)位置：4 (D)其他資料：/註=“Xaa 4 爲 Glu(〇CH3)” ，.、 (ix)特徵：. ·、 (Λ)名字/關鍵字：修改部位 (Β)位置：10 ' (D)其他資料：/証= “XaalO 爲 AsP(OCII3)” (ix)特徴：： (Λ)名字/關鏈字：修改部位 (B)位丨置：17 * . • (D)其他資料：駐=“Xaal7 爲 AsiXOCID” (i>0特徵：.… : (Λ)名字/關鍵字：修改部位 ' (B)位置：22 ' -63- 本紙張又度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項寫本頁) •裝_

、tT 505654 A7 B7 五、發明説明（ (D)其仙資料：/註=“Xaa22 爲 GlU(OCH3)” (ix)特徵： (Λ)名字鍵字：修改部位 (13)位置：25 (D)其他資料：/註=“Xaa25 爲 G1u(OC1I3)” (ix)特徵： (Λ)名字/關鍵字：修改部位 (B)位置：29 、 (D)其他資料：駐=“Xaa 爲 Glu(OCII3)” (xi)序列描述：序列鑑別編號：50 :

Ala Val Ser Xaa His Gin Leu Leu His Xaa Lys Gly Lys Ser lie Gin 15 10 15 Xaa Leu Arg Arg Arg Xaa Leu Leu Xaa Lys Leu Leu Xaa Lys Leu His 20 25 30 Ala ⑺序列鑑別編號：51之資料： . (i)序列特徵： ~ (Λ)長度：34個胺骓酸 . (13)類型：胺_酸 ⑽構形：鏈狀 · (Π)分子類型：蛋丨白質假設者：否 , (v)片段類型：队.端 (ix)特徵： ' (Λ)名字/關鍵字：修改部位 \ (13)位麗：34 * (D)其他資料：/註=“Xaa爲高碳絲胺酸” (啲序列描述：序列鑑別編號：51 : (請先閱讀背面之注意事項？％寫本頁) -裝· 訂經濟部中央標準局員工消蚤合作社印製

Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Servile Gin 10 ，、 15 Ala Val Ser Glu His Gin 1 5 Asp Leu Arg Arg Arg Glu 20 Thr Xaa (2)序列鑑別編號：52之資料： (i)序列特徵： . (Λ)長度：35個胺雜酸 (B)類型：胺基酸

-64- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（21〇'〆297公釐） 505654 A7 ___B7 五、發明説明（62 ) ⑼構形：鏈狀 ' (ii) 分子類型：蛋白質 (iii) 假設者：否 (v)片段類型：N-端 * (xi)序列描述：序列鑑別編號：52 :

Ala Val Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser lie Gin 1 5 10 15

Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys Leu His 20 25 30

Thr Ala Pro 35 (2)序列鑑別編號：53之資料： (0序列特徵： (A) 長度：34個胺基酸 (B) 類型：胺基酸㈣構形：鍵狀 .· (ii)分子類型：蛋白質 (叫假設者：否 .· · (v)片段類型：N-端 (xi)序列描述：序列鑑別編號：53 : ^

Ala Val Ser Glu His Gin Leu 1/eu His Asp Lys Gly Lys Ser lie Gin 1 5 10 15

Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys Leu His 20 25 30

Thr Pro 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項寫本頁)

(2)序列鑑別編號：54之資料：，V (i)序列特徵： (Λ)長度：34個胺基酸 :(B)類型：胺基酸 ⑽構形：鏈狀 (H)分子類型：蛋白質 (iii)假設者：否 (V)片段類型：N-端 -65- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐） 505654 A7 B7__ 五、發明説明（63 ) ⑻)序列描述：序列鑑別編號：54 :

Ala Val Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser lie Gin 15 10 15

Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys Leu His 20 25 30

Thr Pro (2)序列鑑別編號：55之資料： (i) 序列特徵： (Λ)長度：33個胺基酸 (Β)類型：胺基酸 ⑽構形：鍵狀 (ii) 分子類型：蛋白質 (iii) 假設者：否 (v)片段類型：N-端 (xi)序列描述：序列鑑別編號：55 :

Ala Val Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser lie Gin 1 5 10 15 ♦

Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys Lei; His 20 25 30

Pro , i * (2)序列鑑別編號：56之資料： / (i)序歹lj特徵： " (Λ)長度：32個胺基酸 (ΙΪ)類型：胺基酸經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項^:寫本頁) ㈣構形：鏈狀 '、 ⑼分子類型：蛋白質，、 (Hi)假設者：否 . (V)片段類型：队端 (xi)序列描述：序列鑑別編號：56 : 1 Ala Val Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser lie Gin 1 5 10 15

Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys Leu Pro 20 25 30 -66 - ^紙張；I度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐) 505654 A7 B7 經濟部中央標準局員工消費合作衽印製五、發明説明（64 ) (2)序列鑑別編號：57之資料： (ί)序列特徵： (Α)長度：37個胺基酸 (Β)類型：胺基酸 ⑽構形：鏈狀 (ii) 分子類型：蛋白質 (iii) 假設者：否 (v)片段類型：N- ·端，、 (xi)序列描述：序列鑑別編號：57 : Ala Val Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser lie Gin 15 10 15 Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys Leu His 20 25 30 Thr Arg Ser Ala Trp 35 (2)序列鑑別編號：58之資料： (i) 序列特徵： (Λ)長度：42個胺基酸 · (B)類型：胺基酸 * ㈣構形：鏈狀 . 、 (ii) 分子類型：蛋白質 > (Hi)假設者：否 · (v)片段類型：N-端 (x〇序列描述：序列鑑別編號：58 : 丨,.：丨._ " (Ala Val Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Arg Gly Arg Ser lie Gin 1 5 10 15，， Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Arg Leu Leu Glu Arg Leu His 20 25 30 Thr Ala Gly Arg Arg Thr Arg Ser Ala Trp 35 40 (請先閲讀背面之注意事項\^%寫本頁) 裝· (2)序列鑑別編號：59之資料: (i)序列特徵：乂⑻長度：42個胺基酸 :;(B)類型：胺基酸 -67. 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 505654 A7 B7 五、發明説明（65 ) (D>構形：鍵狀 (π)分子類型：蛋d質 -(Πί)假設者：否 (ν)片段類型：Ν-端 ⑽序列描述：序列鑑別編號：59 : 1

Ala Val Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Arg Gly Arg Ser lie Gin 1 5 10 15

Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Arg Leu Leu Glu Arg Leu His 20 25 30

Thr Arg Gly Arg Arg Thr Arg Ser Ala Trp 35 40 (2)序列鑑別編號：60之資料： ~ (i) 序列特徵： „ (Λ)貞度：42個胺_酸 (13)類型：胺恶酸 · ⑽構形：鍵狀 (ii) 分子類型：蛋白質 ’ (iii) 假設者：否 (ν)片段類型：N…端 · (ίχ)特徴： (Λ)名字/關鍵字：修改部位（_ (13)位置：13 (1))其他資料：/註=“XaeU3爲Lys(二氫桂皮醯基)” ⑽序列描述：序列鑑別編號：60 : ’ Ala Val Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Arg Gly Xaa Ser lie Gin 15 10 15 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項寫本頁) ，、 …、

Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Arg Leu Leu Glu Arg Leu His 20 25 30

Thr Arg Gly Arg Arg Thr Arg Ser Ala Trp 35 40 (2)序列鑑別編號：61之資料： (i)序列特徵： (八)畏度：34個胺蕋酸 (D)類型：胺蕋酸 • 68- 本紙張尺度適用中國國家榡準（CNS ) Α4規格（210X297公釐） 505654 A7 B7 五、發明説明（66 ) ㈣構形：鏈狀 (ii) 分子類型：蛋白質 (iii) 假設者：否 (v)片段類型：N-終端 (ix)特徵： (Λ)名字/關鍵字：修改部位 (B)位置：8 、 (D)其他資料：/註=“Leu8爲去Ψ 1白胺酸” (ix)特徵： (A)名字/關鍵字：修改部位 ’ (13)位置：18 (D)其他資料：/註= “Leul8爲去甲白胺酸” (xi)序列描述：序列鑑別編號：61 :

Ala Val Ser Glu lie Gin Phe Leu His Asn Leu Gly Lys His Leu Ser 1 5 10 15

Ser Leu Thr Arg Ser Ala Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gin Asp Val His 20· 25 30 ♦

Asn Tyr (2)序列鑑別編號：62之資料：、， (i) 序列特徵： . (A) 長度:35個胺基酸 (B) 類型：胺基酸 · ‘ (D)構形：雛伏 · (ii) 分字類型：蛋白質經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閲讀背面之注意事項寫本頁) (iii) 假設者：否 ^ (V),片段類型：N-終端 (χί)序列描述：序列鑑別編號：62: · 1 *\

Ala Val Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser lie Gin 1 5 10 15

Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys Leu His 20 25 30

Thr Met Ala 35 -69- 本紙張欠度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐）~ 505654 A7 B7 ——_____ 五、發明説明（67 ) (2)序列鑑別編號：63之資料： (i)序列特徵： (八）長度：33個胺基酸 (13)類型：胺越酸 (D)構型：鏈狀 ' (ii)分子類型：蛋由質 (iii)假設者：丙 (v)片段類型：N-端1 (ix)特徴： (Λ)名字/關鍵字：修改部位 αυ位匱：33 (D )其他資料：/註=“Xaa爲Thr i，4-二胺_丁醯蕋内两&胺" (xi)序列之描述：序列鑑別編號：63 :

Ala Val Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser He Gin ! 5 l〇 15

Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys Leu His 20 25 30

Xaa U)序列鑑別編號：&丨之資料： (i) 序列特徵： . · (Λ)長度：Μ個胺蕋酸 · (β)類型：胺賴駿 ^ (D)構型：鏈狀 (ii) 分子類型：蛋白質 ’ (iH)假設者：否 / (v)片段類型：N-端、，、經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閲讀背面之注意事項\^寫本頁) (xi)序列之描述：序列鑑別編號：64 : 1 ?

V

Ala Val Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser lie Gin X 5 10 15

Asp Leu Arg Arg Arg Phe Phe Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys Leu His 20 25 30

Thr Ala 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 505654 A7 B7 20 30 五、發明説明（68 ) (2)序列鑑別編號：65之資料： (i) 序列特徴： (Λ)長度：34個胺蕋酸 (B)類型：胺蕋酸 * (1))構型：鏈狀 (ii) 分子類型：蛋甶質 • (iii)假設者：否 1 (v)片段類型：N-端 (xi)序列之描述：序列鑑別編號：65 :

Ala Val Ser Glu Ills Gin Leu Leu His 八sp Lys Gly Lys Ser lie Gin 1 5 10 15

Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu His Lys Leu Leu Glu Lys Leu His 25

Thr Ala

經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (2)序列鑑別編號：66之資料： (i) 序列特徵： I (Λ)長度：34侧__ * * (Β)類型：胺蕋酸 ⑼，型：鏈狀 ^ (ii) 分子類型：蛋白質：、 (iii) 假設者：否 * (v)片·段類型：N-端 Ui)序列之描述：序列鑑別編號：66 : Ala Val Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser lie Gin ^ 1 5 10 15 Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu His Leu Leu Glu ,Lys Leu His

Thr Ala 20 25 U)序列鑑別編號：67之資料： • (i)序列特徵： -71- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X297公釐） 505654 A7 B7 五、發明説明（69 ) (Λ)長度：34個胺越酸 (B)類胺蕋酸 (D)構型：謎狀 . (ii)分子類型：逛白質 •(iii)假設者：否 (v)片段類型：N-端 (xi)序列之描述：序列鑑別編號：67 :

Ala Val Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser lie Gin 15 10 15

Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu lie Ala Lys Leu His 20 25 30

Thr Ala (2)序列鑑別編號：68之資料： (i) 序列特徵： . (Λ)長度：34個胺蕋酸 (B)類型：胺基酸 (D)構型：鏈狀 . (ii) 分子類型：蛋白質 (Ui)假設者：否 ’ (v)片段類型：N-端 . * ' (xi)序列之描述：序列鑑別編號：68 :

Ala Val Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser lie Gin 1 5 10 15

Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Glu lie His ‘ ' 20 25 30 ' \ 經濟部中央標準局員工消費合作社印製

Thr Ala (2)序列鑑別編號：69之資料： (0序列特徴： (Α)提度：34個胺蕋酸 . (B)類型：胺蕋酸 -72- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 505654 A7 ______ B7 五、發明説明（7〇 ) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) (D) 型：鏈狀 (Π)分子類型：蛋白質 (m)假設者：否 (v)片段類型：N-端 (ix)特徴： (Λ)名字/關鍵字：修改郃位 (B)位蹬：34 ' (I))其他資料：/註=“Xaa爲高碳絲胺酸” (xi)序列之描述：序列鑑別編號：69 :

Ala Val Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser lie Gin 15 10 15

Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys Leu His 20 25 30

Thr Xaa U)序列鑑別編號：70之資料： (i) 序列特徵： (Λ)丧度：Μ個胺骓酸 (Β)類型：胺避酸 * (D) 型：鏈狀 (ii) 分子類型：蛋白質 . ' ‘ (ίϋ)假設者：西 1 * (V)片段類型：N-端 (ix)特徵： . (Λ)名字/關鍵字：修改部位 ' (B)位隱：34 經濟部中央標隼局員工消費合作社印製 (D)其他資料：/註=“Xaa爲高碳絲胺酸” ，、 ,'、 (xi)序列之描述：序列鑑別編號：70 :

Ala Val Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser lie Gin 1 5 10 15

Asp Leu Arg Arg Arg Glu Levi Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys Leu His 20 25 30

Thr Xaa -73- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（21〇X297公釐） 505654 A7 B7 五、發明説明（71 ) (2)序列鑑別編號：71之資料： (i) 序列特徴： (八）長度：34個胺蕋酸 03)類型：胺蕋酸 • (D)構型：二者 (ii) 分子類型：蛋丨~丨質 (iii) 假設者：否 ' (v)片·段類型：N-端 (xi)序列之描述：序列鑑別編號：71 : Ala Val Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser lie Gin 15 10 15 Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys Leu His 20 25 30 Thr Ala (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 再填& 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (2)序列鑑別編號：72之資料： (i)序列特徵：， (八）畏度：37個胺骓酸 (13)類型：胺蕋酸 (D)構型：鏈狀 . ' (Π)分子類型：蛋白質 · · (iii)假設者：否 ‘ (v)片段趣S:N-端 ,(xi)序列之描述：序列鑑別編號：72 : Ala Val Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser lie Gin ，1 5 i〇 ’、 15 Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys Leu His 20 25 30、 Thr Arg Ser Ala Trp 35 (2)序列鑑別編號：73之資料： (i)序列特徵： . -74- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 505654 A7 B7 五、發明説明（72 ) (八）長度：36個胺蕋酸 (B)類型：胺避酸 (D)構型：鍵狀 (ii) 分子類型：蛋β質 (iii) 假設者：否 (v)片段類型：N-端 Ox)特徵： (八）名字/關鍵字：修改部位 (B)位置：36 (D)其他資料：= 爲Ala 3-(2-蔡勘-L·丙胺酸” (xi)序列之描述：序列鑑別編號：73 :

Ala Val Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser lie Gin 1 5 10 15 « —

Asp Leu Arg Arg Arg.Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys Leu His 20 25 30

Thr Arg Ser Xaa 35 請先閱讀背面 I 事項 m 寫士經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (2)序列鑑別編號：74之資料： α)序列特徴： (Λ)長度：37個胺酸· 、 · 03)類型：胺雜酸^ . (D)構型：鏈狀 (ii)分子類型：蛋白質 ,(Hi)假設者：西 ,(v)片段類型：N-端 Ui)序列之描述：序列鑑別編號：74 : ，，N Ala Val Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser lie Gin 1 5 10 15 Asp Leuj Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys Leu His 20 Thr Ala Ser Ala Trp 35 25 30 -75- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐） 505654 A7 B7 五、發明説明（73 ) (2)序列鑑別編號：75之資料： (i)序列特隞： (Λ)長度：38個胺基酸 (B)類型：胺骓酸 (I))構型：鏈狀 * (ii)分子類型：蛋β質 (iii)假設者：否、 (v)片段類型：N-端 (xi)序列之描述：序列鑑別編號：75.:

Ala Val Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser lie Gin 15 10 15

Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys Leu His 20 25 30

Thr Ala Glu lie Arg Ala ， 35 — 請先閱讀背 ιδ 之注意事項

經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (2)序列鑑別編號：76之資料： .’ (i) 序列特徵： ♦ (Λ)長度：37個胺蕋酸， # (B)類型：胺菡酸 * ⑼構型：鏈狀 (ii) 分子類型：蛋白質、 . . (iii) 假設者：否 .· · (v)片段類型：N-端 ‘ (h)序列之描述：序列鑑別編號：76 : 'Ala Val Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser lie Gin 1 5 10 15 Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys Leu His 20 Thr Ala Glu lie Arg 35 (2)序列鑑別編號：77之資料： 25 30 -76- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ297公釐） 505654 A7 B7 五、發明説明（74 (i) 序列特徵： (Λ)長度：36個胺驰酸 (B)類型：胺錐酸 (I))構型：鏈狀 · (ii) 分子類型：蛋白質 (iii) 假設者：否 (v)片段類型：N-端1 (χί)序列之描述：序列鑑別編號：77 :

Ala Val Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser lie Gin 1 5 10 15

Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys Leu His 20 25 30

Thr Ala Glu lie 35 請先聞讀背之注意事項

經濟部中央標準局員工消費合作社印製 U)序列鑑別編號：78之資料： (i) 序列特徵： (Λ)畏度：35個胺_酸 (B)類型：胺蕋酸 * (D)構型：鏈狀 (ii) 分子類型：遊白質 .· * (Hi)假設者：否 · 1 . (v)片段類型：N-端 (xi)序列之描述：序列鑑別編號：78 : · / Ala Val Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser lie Gin 15 10 ·、 15 Asp Leu Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lyb Leu His 20 25 30

Thr Ala Glu J 35 -77- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 505654 A7 B7 五、發明説明（75 ) (2)序列鑑別編號：79之資料： (i)序列特徵： (八）長度：34個胺蕋酸 0))類型：胺蕋酸 ⑼構型：鍵狀 (Π)分子類型： (iii)假設者：否、 (v)片段類型：N-端 (ix)特徴： (A)名字/關鍵字：修改部位 03)位匿：8 (D)其他資料：/註= “Leu8爲去呢撇酸” (ix)特徵： (Λ)名字/關鍵字：修改部位，（B)位置：18 — (D)其他資料：/註= “Lcul8爲去φ臼胺酸” (ίχ)特徵： (Λ)名字/關鍵字：修改部位 (Β)位置：34 (⑴其他資料：/註=“Xrm爲高碳絲胺酸內酯” ， U0序列之描述：序列鑑別編號：79 : *

Ala Val Ser Glu lie Gin Phe Leu His Asn Lys Gly Lys His Leu Ser 1 5 10 15 .

Ser Leu Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gin Asp Val His 20 25 30

Asn Xaa 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (2)序列鑑別編號：80之資料： (υ序列特徵： (Λ)長度：32個胺蕋酸 (U)類型：胺蕋酸 (D)構型：鏈狀 (ίί)分子類型：蛋甶質 * (Hi)假設者：否 -78- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 505654 A7 B7 五、發明説明（76 ) (v)片段類型：內部 (xi)序列之抓述：丨予列鑑別編號· 80 .

Ser Glu His Gin Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser lie Gin Asp Leu 1 5 10 15

Arg Arg Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys Leu His Thr Ala 20 25 30 (2)序列鑑別編號：81之資料： (i) 序列特徴： (Λ)長度：28個胺蕋酸 (B)類型：胺蕋酸 • (D)構型：_狀 " (ii) 分子類型：蛋甶質 (iii) 假設者：否 (v)片殺類型：內部 (xi)序列之描述：序列鑑別編號：81 :

Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser He Gin Asp Leu Arg Arg Arg Glu 1 5 l〇 . 15

Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Lys Leu His Thr Ala 20 . , 25 (2)序列鑑別編號：82之資料：經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (i) 序列特徵： (八）長度：27個胺蕋酸 (Β)類型：胺蕋酸 (D)構型：鏈狀 (ii) 分羊類型：蛋白質 (iii) 假設#:丙 (v)片段類型：內部 '(xi)序列之描述：序列鑑別編號：82 : _ 79 · 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 505654 經濟部中央標準局員工消費合作社印製

本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐） 505654 A7 ._ B7 ----___ 五、發明説明（78 ) (2)序列鑑別編號：85之資料： (i) 序列特徵： (A) 長度：10個胺基酸 (B) 類型：胺蕋酸 (D)構型：螺旋狀

(ii) 分子類型：胜肽 W假設者：S (V)片段類型：內部 ' (ix)特徵： (Λ)名字/關键字:修改部位 (B)位置:1及4 ^ (D)其乂也資料:/註=nXaal及Xaa4 =Glu，Glu(OCH3)，His 或 Phe (ix)特徵： (A) 名字/關鍵字：修改部位 03)位膣：2 (D )其他資料：/註=“Xaa2 = Leu 或 Phe” (ix)特徴： (Λ)名字/關鍵字：修改部位 (B) 位置：5 (D )其他資料：/証=“Xaa5 = Lys 或 His” (be)特徵： - (Λ)名字/關鍵字：修改部位 (B)位置：7及10: (D )興他資料：/証=“Xaa7 及 Xaal0 = Leu 或 lie” (ix)特徴： (Λ )名字/關鍵字：修改部位 (13)位獄：8 . 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (D )其他資料：/証=’“xaa8 = Ala，Arg 或 Glu” ⑻特徵： • (A)名字/關鍵字：修改部位 , (13)位置：9 0))其他資料：/註=“xaa9 = j^s 或 CHii” (xi)序列之描述：序列鑑別編號：85 :

Xaa Xaa Leu Xaa Xaa Leu Xaa.Xaa Xaa Xaa 1 5 10 •81- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（2l〇x297公釐） 505654 A7 B7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製五、發明説明（79 ) (2)序列鑑別編號：86之資料： (i)序列特徵： (Λ)長度：1()個胺蕋酸 (B)類型：胺蕋酸 ’ (D)構型：螺旋狀 (Π)分子類型：吐肽 (iH)假設者：否 ^ (v)片段類型：內部 (ix)特徴： . (Λ)名字/關鍵字：修改部位 03)位置：1及4 (D )其他資料：/註=“Xaal 及 Xaa4 = Glu，Glu ( OCI-I3)，His 或 l)he” (ix)特徵：，（Λ)名字/關鍵字：修改部位 (13)位蹬：2 (D )其他資料：/註=“Xaa2 = Leu 或 Phe” (b〇特徵： .· (Λ)名字/關鍵字：修改部位 (B)位置：8 . (D)其他資料：/註= “Xaa8 = Glu，Lys或Lys (COCH2PEGX) ’’ · (xi)序列之描述：序列鑑別編號：86 :

Xaa Xaa Leu Xaa Arg ^eu.Leu Xaa Arg Leu 1 5 10 - 2 8 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS )八4規格（210X297公釐）

Claims

505654 第086109753號專利申請案中文申請專利範圍修正本（91年4月） ABCD, 申請專利範圍公

修正 m·4· is補充____ 甲狀旁腺激素（PTH)或甲狀旁腺激素相關胜肽 (PHTrp)或其鹽之合成方法，其中選自序列鑑別編號•85，86，26，27, 28, 29及30之胺基酸殘基（22-31)構成兩性α -螺旋，該方法包含： a) 在固體樹脂支持物上各別合成所期望多胜肽之先質胜肽片段； b) 除了所期望多胜肽之最終匕端先質胜肽片段以外，將所有片段自其個別樹脂支持物打斷； c) 將該等被打斷之先質胜肽片段與結合有c-端胜肽片段之樹脂接續縮合，以形成所期望之多胜肽產物； d) 移除支鏈保護基；以及 e) 將多胜肽產物自樹脂支持物打斷，其中至少兩個片段係經白胺酸-白胺酸鍵結偶合。 2.根據申請專利範圍第1項之方法，其中多胜肽產物自三個先質胜肽片段：N -端片段，中間片段及c -端片段製備。3·根據申請專利範圍第2項之方法，其中n -端片段具有c -端甘胺酸，中間片段具有C-端白胺酸及C-端片段具有N_ 端白胺酸。 4·根據申請專利範圍第1項之方法，其中最終多胜肽產物包含具有下式之PTH或PTHrp類似物： Xaa1 Xaa2 XaaJ Xaa4 Xaa5 Xaa6 Xaa7 Leu His Asp Xaa11 Gly Xaa13 Ser lie Gin Asp Leu X Xaa20 Xaa21 Xaa22·31 Xaa32 Xaa33 Xaa34 xaa3 Xaa36 Xaa37 X a a 3 8 Term，其中本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐） 19

505654 A8 B8 C8 D8 々、申請專利範圍 ^~ " Xaa1不存在或為Ala; Xaa2不存在或為Val; Xaa3不存在或為Ser; Xaa4不存在或為Glu或Glu(OCH3); Xaa5不存在或為His或Ala; Xaa6不存在或為Gin; Xaa7不存在或為Leu; Xaa11 為 Lys，Arg，或 Leu; Xaa13 為 Lys， Arg， Tyr， Cys， Leu, Cys(CH2CONH(CH2)2NH(生物素基））， L y s (7 - 一甲胺基-2-氧基- 2H-lv苯并咬喃-4_乙醯某），或Lys( 一氣桂皮酿基）； Xaa2Q 為 Arg 或 Leu; Xaa19 及 Xaa21 各獨立為 Lys，Ala 或 Arg; Xaa22·31選自（序列鑑別編號：26，27，28，29或30); Xaa32 為 His，Pro 或 Lys; Xaa33不存在，或者為pro，Thr，Glu或Ala; Xaa34 不存在，或者‘pro，Arg，Met，Ala，hSer， hSer内酉旨’ Tyr或Leu; X a a。5 不存在或者為 p r 〇，g 1 u，S e r，A1 a 或 G 1 y ; Xaa36不存在或者為Aia，Arg或lie; Xaa。7不存在或者為Arg，Trp,或3_(2 -莕基）-L -丙胺酸； Xaa38不存在或為Ala或hSer，或者Xaa38·42為Thr -2- 本紙張尺度適用中國國豕標準(CNS) A4規格(210 x 297公羡） ^^654

8 8 8 8 A B c D π、申請專利範圍 Arg Ser Ala Trp; 以及Term為OR或NR2，其中各r獨立為h，（Cl-C4)烷基或苯基（Ci-C4)燒基；以及其醫藥上可接受之鹽。 5. 根據申請專利範圍第1項之方法，其中pth或PTHrp之多胜肽類似物包含下式： Xaa Val Ser Glu lie Gin Xaa7 Xaa8 His Asn Xaa11 Gly Lys His Leu Xaa16 Ser Xaa18 Xaa19 Arg Xaa21 Xaa22·31 His Asn Xaa34 Term，其中： Xaa1 為 Ser 或 Ala; Xaa7 為 Leu 或 Phe; Xaa8 為 Leu, Met 或 Nle; Xaa11 為 Leu 或 Lys; Xaa16 為 Asn 或 Ser; Xaa18 為 Leu，Met，或Nle; Xaa19 為 Glu，Thr 或 Ai*g; Xaa21 為 Val，Ser 或 Arg; Xaa22·31係選自（序列鑑別編號：26，27，28，29或 3〇)； Xaa34 為 Phe，hSer 或 Tyr; Term為OR或NR2，其中R為H或（Ci-CJ烷基；以及其醫藥上可接受之鹽。 6. 根據申請專利範圍第i項之方法.，其中PTH或PTHirp類似物選自下列序列組成之群： -3- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(21〇 X 297公釐) 505654 8 8 8 8 A B c D 々、申請專利範圍 avsehqllhdkgksiqdlrrrelleklleklhta-nh2 (序列別铉號:7) AVSEHQLLHDKGKSIQDLRRRELLEKLLEKLHl'A-OH (序列別揉號:6) AVSEHQLLHDKGKSIQDLRRRELLERLLERLHTA - OH (外列把別編號:15)· AVSEHQLLIIDRGRSIQDLRRRELLERLLERLHTA~OIl (序列七別编珑:16) AViSEHQLLHDRGRSIQDLRRRELLERLLKRLHTA-OH (；?·列姐·別编號:17)· AVSEHQLLHDKGKSIQDLRRRELLEKLLRKLIITA-OII (序列祀別编號:5). AVSEHQLLHDKGKSIQDLRRRELLEKLLEKLHITVGRR-OH (序歹；[祀別瑞就:10) AVSEAQLLI1DLGKSIQDLRRRELLEKLLEKLHAL-OU (序歹，方j编號:14) ·. AVSEHQIiLHDKGKSIQDLRRJRELLEKIiLEJLLKEL-NIi^ (序歹另编號:11) AVSEIQFXI1NLGKHLSSXERVELLEKLLEKLHNY-NI12 (X=Nlef 序？另，j编號：23} . 、 iWSEIQFXHNLGKnLSSXRRREULEKLLEK]LHNY-Nn2 (X=Nler .序列尤 24) AVSEHQLWIDKGKSIQDLRRRALAEALAEALHTA-NIh (序列钯別编號;20)·.. AVSEIIQLLnDKGKSIQDLARRELLEKLLEKLHTA-NH2 (序列餵如编號:12) * · * avsehqllhdkgksiqdlriu\elleklleklhta-nh2 ·(序列銀別编號:13), AVSEHQLLHDKGKSIQDLRRRSLLSSLLSSLHTA-NI12 (序列银別编號:21): AVSEHQLLHDKGKSIQDLRRRAFYDKVAEKLI1TA-NH2 (外歹另编號:22) • 、 AVSEIQFLHN LGKI1LSSLRR RELLEKLLEK LHNY-NH2 (序歹逛另1编女乞:35) AVSEHQLLHD KGKSIQDLKL fCELLEKLLEK LHTA-NH2 (序歹他別编號:38)· AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLERLLER LHTA-NH2 (序歹边另 AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLERLLER LHTAP-OH (序列佐別编號:4〇) AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLERLLER LHTAGRR-OH AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LHTY-NH2 (序歹编5尤:43) AVSEHQLLHD 'KGYSIQDLRR RELLEKLLEK LIITA-NH2 (序列另,j瑞5尤:44) AVSEUQLLI1D KGCSIQDLRR RELLEKLLEK LHTA-NH2 (序列祀別瑞號:45)· AVSEllOLLIID KGXSIQOLRR RELLEKLLEK LHTA-NH2 . (X « Cys (CH2C〇NH(CH2) 2NH (生 4*7 素基）>> -4- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐) 505654 8 8 8 8 A BCD 六、申請專利範圍 AVSEHQLLilD KGXSIQDLRR RELLEKLLEK LHTA-NH2 · U = Lys(7-二T胺基-2·.?1*-2ΙΙ-卜莕幷哌喃-4-乙醯基)） · AVSEHQLLHD KGICSIQDLRR RELLEKLLEK LI1TAG-OH (序列边別编珑:48), AVSX1HQLLHX2· ICGKSIQX2LRR RXxLLXjLKLLXiK LHA-OH (序列银別编犹:49) (Χχ = Glu(OCH3) ； X2 = Asp(OCH3)). AVSX1HQLLHX2 KGKSIQX2LRR RX1LLX1KLLX1K LHA-OCH3 . (序列鑑別编竑:50) . (Xl = Glu(OCH3)； X2 = AsP(〇CH3)) AVSEHQLLIID KGKSIQDLRK RELLEKLLEK. LHTAP-〇H (序列穷1 別编珑:52)· AVSEHQLLilD KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LHTS-OH (序列銀別编號:53) iivSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEK ΠΓΓΡ — Νμ2 (；f·列另，J编號:54) .· ' V AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LHP-NH2 (序列側编焱:55). AVSEHQLLIID KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LP-NH2 (序列《ί另编號:56) • · * AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LHTRSAW-OH (序歹方J编號:57) AVSEHQLLHD RGRSIQDLRR RELLERLLER LHTAGRRTRSAW-OH (序列別编说:5 8) AVSEHQLLHD RGRSIQDLRR RELLERLLER LHTAGRRTRSAW-NH2 (7T-列把別编珑:59) AVSEHQLLIID RGXSIQDLRR RELLERLLER LHTAGRRTRSAW—OH (序列iS別鴒號:60) X=Lys(二氮桂皮铯基)） AVSi：工QFXHN LGKHLSSXTR SAWLRKKLQD VHNY-NH2 (序列钽別编號:61) (X=去甲白胺故）. AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LHTMA-NH2 (序歹J«1 另1i编δ,1^2) AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RFFLEKLLEK LHTA-NH2 (序歹另1J编5尤:64) AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLHKLLEK： LHl，A-mi2 (序到《1別编號:65) AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEHLLEK LI1TA~NH2 (序歹另，j每號:66) · AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEKLIAK LIiTA~NH2 (序列別编U7) AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEE IHTA--NII2 (序列逬別编號:68) AVSEHQLLIID KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LHTESAW-NH2 (序歹另*J编坑:72) -5- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐) 505654 8 8 8 8 A BCD 圍範利專請中 AVSEHQLLHD KGKSIODLRR RELLEKLLEK LUTRSAX-OH (X = Nal (2) - 3，(2-苒基)心丙胺崞） * AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LHTASAW—〇H (序列it別编號:74) AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LHITVEIRA-OH (序列过另，j瑞號:75) AV5EI1QLLHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LHTAEIR-OH (序列银別·瑞號:76) · AVSEHQLLIID KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LHT、AEI-〇H (序列边別编i.t:77) AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEfL’LEK LH1，AE-〇!i (序 H边別编 E:78). SEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LHTA~NH2 (序列边別编铳』〇)· LLHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LHI7V-NH2 (序列边別编號:81) LIID KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LHTA-NH2 (序列別编號:82) SEHQLLIID RGRSIQDLRR RELLERLLER LHAGRRTRSAW—OH .(^列缉別编5尤:83) LLHD RGRSIQDLRR RELLERLLER LIIAGRRTRSAW-OH (序列妞別运號:S4):, AVSEHQLLHDKGKSIQDLRRRELLEKLLEKLHTX · (X*hSerlac,(序列拔別挪號·9) AVSEIQFXiHN KGKHLSSXiER VEWLRKKLQD VHNX2 (序列达別运號：79). (Xl 去甲白胺酸· ·；· X2 e高碳絲胺酸内酯！ · ） AVSEHQLLHDKGKS：[QDLRRR£LL£KLLEKLHTX-NH2 (X*hSer, ·序列银別运號：8) AVSEIQFLHN LGKHLSSLRR RELLEKLLEK LHra-NH2 (序列逍別编號：36) (X = ·高碳絲胺酸·.） s AVSEIQFLHN KGKHLSSLRR RELLEKLLEK LHNX-NH2 (序列拔別运號：37) (X =.高琰絲胺δ_ίί.) 、今 AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLERLLER LHTAGRRK-NH2 (序心S別瑞抗：42) (X = 高碳絲胺δέ ) AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LHTX-NHCH2CH3 (.序列祀別线达：69) (X s :高碳絲胳酸.） AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LHTX-NHCH2CH2C 5H5 编it: 7 〇) (X = 高後絲胺酸：），以及 AVSEHQLLHD KGKSIQDLRR RELLEKLLEK LHTX-OH (序列逍別编號·· 51) (X * 高碳絲胺酸 ). -6- 本紙張尺度適用中國國家標準(CNS) A4規格(210 X 297公釐）

505654 A8 B8 C8 D8 六、申請專利範圍 7. 根據申請專利範圍第1項之方法，其中PTH或PTHrp之類似物為具有序列鑑別編號：7之多胜肽， AVSEHQLLHDKGKSIQDLRRRELLEKL LEKLHTA-NH2。 8. 根據申請專利範圍第7項之方法，其中該第一片段包含 AVSEHQLLHDKG，該第二片段包含 KSIQDLRRREL，以及第三片段包含LEKLLEKLHTA。 9. 根據申請專利範圍第8項之方法，其中該第三片段由 LEKL，LEKL與ΗΤΑ縮合而形成。 10. 根據申請專利範圍第7項之方法，其中該第一片段包含 AVSEHQLLHDKG，該第二片段包含 KSIQDLRRRE，以及第三片段包含LLEKLLEKLHTA。 11. 根據申請專利範圍第1 0項之方法，其中該第三片段由 LLEK，LLEK與LHTA縮合而形成。本紙張尺度適用中國國家標準(CMS) A4規格(210X297公釐）