TW482672B - Apoptosis inducing agent pharmaceutical composition - Google Patents

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482672 A7 B7 五、發明説明（ 發明所颶之技術領域 請 先 閱 讀 背 面 之 注 意 事 項 再 填 本發明為關於以來自對增強健康有用之植物、徹生物 或動物之生理活性物質作為有效成分，且有用於作為醫 藥品之細胞自滅誘發劑醫藥組成物、含有該生理活性物 質之機能性食品或飲料、及其製法。 先前之技術 近年，關於細胞組織之死亡，乃以所謂細胞自滅 (apoptosis,亦稱為脫嗤作用，自爆性死亡或細胞自滅） 之樣式受到注目。 此細胞自滅為與病理性細胞死亡之隳死不同，被認為 係於細胞本身之基因中所最初编入之死亡。卽，其被認 為傜經由某些外部性或内部性要因成為令策劃細胞自滅 基因活化之導火線，並以此基因為基礎地生物合成策劃 死亡基因蛋白質，且經由生成的策割死亡蛋白質而使細 胞本身分解，並逹死亡。 若可令此類細細自滅於所欲之組織、細胞中表現，則 可將不需要或者是病原細胞，以自然形式由生體中排除 ，乃極同深遠意義。 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 近年，注目於神經醯胺為中心之神經鞘脂質與細胞自 滅之關連，亦報導經由棕櫊酸、硬脂酸引起神經醯胺之 從新（de novo)合成，並因此而誘發細胞自滅〔Journal of Biological Chemistry(J. Biol· Chem·),第 272卷 。第 3 324 〜3329頁（ 1 997 )〕。 發明所欲解決之課題 一 3 -本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） 482672 Μ Β7 r έ 才 % 乂 土 •ρ ι 五、發明説明（2 ) 雖然期望將神經醯胺和游離脂肪酸，開發作爲細胞自 滅誘發劑，但對於來自生物體以外之脂溶性物質的細胞 自滅誘發作用，則完全不明。 本發明之目的爲開發來自植物、微生物或動物之具有 誘發細胞自滅作用之安全性高的萃取餾分，並提供含有 該餾分之細胞自滅誘發劑醫藥組成物、以該餾分作爲構 成成分之機能性食品或飮料、及其製法。 解決課題之手段 本發明者等爲了達成此類目的致力檢討，結果發現由 植物、微生物或動物所取得之分子構造中不含磷酸酯或 膦酸酯之甘油脂質，甘油糖脂質，爲具有強力的細胞自 滅誘發作用，並完成本發明。 即，本發明之第一發明爲關於細胞自滅誘發劑醫藥組 成物，且其特徵爲以分子構造中不含磷酸酯或膦酸酯之 甘油脂質和/或甘油糖脂質作爲有效成分。 本發明之第二發明爲關於本發明第一發明之醫藥組成 物之製法，且於本發明第一發明之醫藥組成物之製造方 法中，其特徵爲包含以有機溶劑萃取來自植物、微生物 或動物之甘油脂質和/或甘油糖脂質之工程。 本發明之第三發明爲關於含有、添加和/或稀釋分子 構造中不含磷酸酯或膦酸酯之甘油脂質和/或甘油糖脂 質所構成之細胞自滅誘發用食品或飮料。 本發明之第四發明爲關於本發明第三發明食品或飮 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ297公釐） ----------- (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 482672 A7 B7 五、發明説明（3 ) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 料之製法，且於本發明第三發明食品或飮料之製造方 法中，其特徵爲包含以有機溶劑萃取來自植物、微生物 或動物之甘油脂質和/或甘油糖脂質之工程。 圖式之簡單說明 第1圖爲示出透析內液之經由DEAE-Sepharose Fast Flow柱溶離型式之圖示。 第2圖爲示出B餾分及精製物之細胞自滅誘發作用 之圖示。 第3圖爲示出精製物之NMR光譜圖。 第4圖爲示出試料Α之全離子層析圖。 第5圖爲示出試料B之全離子層析圖。 第6圖爲示出Sepharose LH-60柱層析之圖示’。 第7圖爲示出分餾編號20之脂質成分的全離子層析圖。 第8圖爲示出分餾編號21之脂質成分的全離子層析圖。 第9圖爲示出分餾編號23之J旨質成分的全離子層析圖。 第10圖爲示出分餾編號20之糖成分的全離子層析圖。 第11圖爲示出分餾編號21之糖成分的全離子層析圖。 第12圖爲示出分餾編號23之糖成分的全離子層析圖。 第13圖爲示出氯仿溶離餾分之脂質成分的全離子層析圖。 第14圖爲示出氯仿和丙酮之比爲80: 20之溶離餾分之 脂質成分的全離子層析圖。 第15圖爲示出氯仿溶離餾分之糖成分的全離子層析圖。 -5· 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X297公釐) 482672 A7 B7 五、發明説明（4 ) 第16圖為示出氛仿和丙_之比為80: 20之溶離餾分之 糖成分的全離子層析圖。 第17圓為示出Rf值約0.25之點漬的脂質成分之全離子 餍析圖。 第18圖為示出Rf倌約0.25之點漬的糖成分之全離子層 析圖。 第19圖為示出Rf值約0.33之點漬的脂質成分之全離子 餍析圖。 第20圖為示出Rf值約0.33之點漬的糖成分之全離子層 析_ 第21圖為示出掬玉輦之乙醇萃取液中之脂質成分的全 離子餍析圖。 第22圖為示出掏玉輦之乙醇萃取液中之糖成分的全離 子層析圖。 第23圖為示出茶葉末之乙醇萃取液中之脂質成分的全 離子層析圓。 第24画為示出茶葉末之乙醇萃取液中之糖成分的全離 子餍析圖。 經*部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 第25圖為示出米糠之75%乙醇萃取液中之脂質成分的 全離子層析圖。 第26圖為示出米糠之75%乙醇萃取液中之糖成分的全 離子層析圖。 發明之實施形態 以下，具體説明本發明 -6 一 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） 482672 A7 __B7 五、發明説明（5 ) 本發明所使用之甘油脂質和/或甘油糖脂質只要於分 子構造中不含磷酸酯及膦酸酯，則並無特別限定，且可 由植物、微生物或動物製造，或亦可由化學合成。 於本發明中可使用之植物、微生物或動物，若為含有 甘油脂質和/或甘油糖脂質之甘油脂質和/或甘油糖脂 質含有物者、即可，，並無特別限定，於檀物可例示例如菠 菜、人參、洋勝等之蔬菜類、茶類等之雙子藥植物、麥 、米等之單子葉植物、胡椒、豆蔻、大蒜、月桂、芹菜 、芥末、餐、辣椒、百里香、蕃紅花、肉桂、香草、牙 買加胡椒、芥子、水芹、山椒、紫蘇、藥草、八角、矮 糠、ή菜、蛇麻草、山备菜等之香辣料原料、穀物渣滓 等之此些植物加工物、褐藻類、紅藻類、綠藻類、單細 胞綠藻類等之藻類，微生物可例示輦類、酵母、絲狀菌 例如麴謹、細菌例如納豆菌、乳酸_ >動物可例示脊椎 動物或無脊椎動物等。 本說明書中所指之茶類若為一般被稱為茶者即可，例 如於非醱酵茶可列舉綠茶、煎茶、粗茶、烘焐茶、茶葉 i 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 末於半醱酵茶可列舉排包茶、烏龍茶、包種茶，於醱酵 茶可列舉红葉，於後醱酵茶可列舉普m茶。其他之馬黛 茶、枸杞茶、薏米茶、麥茶等亦被包含於此處之茶類。 本説明書中所指之輦類雖無特別限定，但以一般食用 者為較佳，可例示例如掬玉輦、撢玉輦、香菇、松輦、 盤玉輦、榎茸、滑子、岩茸、木耳、衣筮茸、栗茸、黑 皮、黃苜、松露、蛋茸、乳茸、権茸、髮茸、平茸、舞 -7 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） 482672 A7 B7 五、發明説明（6 ) 茸.、松櫻子、蘑菇等之擔子菌類、冬蟲夏草等之子囊菌 類。 本說明書中所指之藻類並無恃別限定，可例示袋狀紫 菜、海雲、真海帶、高果美（Gagome)海帶、裙帶菜、阿 若美（Aram e)、羊栖菜等之褐藻類、石花.菜、衣奇斯 (E d s υ )等之紅藻類、阿屋薩（A 〇 s a )、河紫菜、米露 (M i r u )等之綠藻類、小球藻等之單細胞綠藻類等。 本說明書中所指之榖物渣滓並無特別限定，可例示米 糠、小麥糠、麥根、豆腐渣等。 於本發明中，由此些被利用作為食品之茶類、輦類、 藻類、穀物渣滓，調製甘油脂質和/或甘油糖脂質，並 使用作為細胞自滅誘發劑醫藥組成物、機能性食品或飲料 之有效成分為較佳。 經濟部中央標準局員工消費合作社印^ (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本發明中所使用之具有細胞自滅誘發作用之甘油脂質 甘油耱脂質並無特別限定，於甘油脂質可使用單-、二-及三-醯化甘油、於甘油糖脂質可使用於斥水性部分具有 甘油之耱脂質，例如以單醯基、二醯基、烷醯基、二烷 醯基、烯醯基、二雙植烷醚等作為斥水性基之具有斥水 基的甘油耱脂質，例如於中性甘油糖、脂質可使用單半乳 糖基二醯化甘油、單糖基二醯化甘油、二半乳糖基二醯 化甘油、二糖基二醯化甘油、二甘露糖基二醯化甘油、 三糖基二醯化甘油、四糖基二醯化甘油、聚糖基二醯化 甘油，於酸性甘油糖脂質可使用C e η ο 1 i p i d、磺基睦莫 雙甘油酯、葡糖甘酸基二醯化甘油等。 -8 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） 482672 A7 _ B7_ 五、發明説明（<| ) (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本發明所使用之甘油脂質、甘油糖脂質之構成脂肪酸 爲飽和及/或不飽和脂肪酸，可例示例如十四酸（肉豆寇 酸、C14:0)、十六酸（棕櫚酸，C16:0)、十四烯酸（ 肉豆寇腦酸、C14:l)、十六烯酸（棕櫚油酸、C16:l) 、十八烯酸（油酸、C18:l)、順-9，順-12 -十八碳二烯 酸（亞油酸、C18: 2)、9, 12 ,15-十八碳三烯酸（亞麻酸 、C18: 3)等，構成糖可例示岩藻糖、木糖、甘露糖、 半乳糖、葡糖醛酸、葡萄糖、甘露醇、肌醇等。又，甘 油糖脂質爲包含糖脂質與糖類和/或蛋白質之複合體等 〇 涇齊郎皆慧財產苟員工消費合阼钍印製 本發明所使用之來自植物、微生物或動物之具有細胞 自滅誘發作用的甘油脂質和/或甘油糖脂質、可藉由包 含含水親水性有機溶劑例如含水乙醇之萃取工程的製法 ，而簡便地製造，且該甘油脂質和/或甘油糖脂質之製 法並無特別限定，可使用包含簡單的水萃取，且可使用 於該甘油脂質和/或甘油糖脂質精製之公知方法。又亦 可將來自植物、微生物或動物之甘油脂質和/或甘油糖 脂質含有物於化學性、物理性或酵素學處理後，進行精 製目的之甘油脂質和/或甘油糖脂質。於精製時，亦可 將甘油脂質和/或甘油糖脂質之理化學性質、或細胞自 滅誘發作用等生理活性作爲指標進行精製。 於本發明中，來自植物、微生物或動物之甘油脂質和 /或甘油糖脂質，可藉由將其以有機溶劑例如己烷、氯 -9- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS )八4胁（210X297公釐） 482672 A7 B7 五、發明説明（8 ) 仿、醋酸乙酯、或丙酮、丙醇、乙醇、甲醇等之親水性 有機溶劑、其混合溶劑、或其與水之混合溶劑進行萃取 ，例如以包含含水乙醇萃取工程之製法，即可簡便地製 诰適於食品之甘油脂質和/或甘油糖脂質含有物。於使 用在食品或飲料時，適當之萃取條件為以有機溶劑，特 別是親水性有機溶劑例如以10〜95%,較佳為20〜80% 乙醇水溶液，通常以數分鐘〜數日，較佳為數十分鐘至 數十小時，通常於10¾〜701C,較佳為20〜60¾下萃取 ，刖可有效率地萃取作為細胞自滅誘發化合物之甘油脂 ϊ 質和/或甘油糖脂質。又，以有機溶劑特別是親水性有 機溶劑萃取前，經由令來自植物、徹生物或動物之甘油 脂質和/或甘油糖脂質含有物，以酸或鹼處理，則可更 有效率萃取出作為細胞自滅誘發化合物之甘油脂質和/ 或甘油耱脂質。 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 採集本發明所使用之甘油脂質和/或甘油糖脂質之經 純化物質之方法可為B 1 i g h - D y e r法、F ο 1 c h分配法等之 公知方法（日本生化學會编、新生化學實驗講座、第4 卷、脂質III、第104〜109頁、1990年、東京化學同人） ,依據目的，可用於本發明所使用乏甘油脂質和/或甘 油耱脂質之萃取。 於本發明所使用之甘油脂質、甘油糖脂質之精製中， 經由令上述萃取物進行使用斥水性載體、逆相載體，順 相載體等之層析，則可更有效率地分離。 對於斥水性載體並無限定，若使用公知之載體即可， -10- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Λ4規格（210X 297公釐） 482672 A7 _ B7 五、發明説明（9 ) 該載體可例示導入丁基、辛基、苯基之Sephacryl条、 Sepharose条、Toyopearl条等樹脂、XAD-1、 2、4、200 、7、8等之Amberlite吸附樹脂等。又，對於逆相載體 並無限定，若使用公知之載體即可，該載體可例示以烷 基鏈共價鍵結之矽膠。再者對於順相載體並無限定，若 使用公知之載體卽可，該載體可例示矽膠。尚，於精製 時，可將甘油脂質、甘油糖脂質之理化性質、或細胞自 滅誘發作用等生理活性作爲指標進行精製。 本發明所使用之來自植物、徹生物或動物之甘油脂質 和/或甘油糖脂質，為例如可將食用植物、食用微生物 、食用動物之含水乙醇萃取物，以通常之離子交換樹脂 處理、斥水性層析處理、膠過濾處理等進行精製。 . ' 一般，植物、撒生物或動物中之甘油脂質、甘油糖脂 質為在接近膜邊且多以與糖類和/或蛋白質結合之高分 子形態存在，且例如經由熱水萃取，則可取得甘油脂質 和/或甘油糖脂質與糖類和/或蛋白質結合之甘油脂質 和/或甘油糖脂質含有物。尚，所謂糖類，偽為存在於 、 i 棺物、微生物或動物的糖質，其包含單糖、寡糖、多糖 請 先 閲 讀 背 面 % 事 項 再 頁 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 或目物質 \ 用或脂 。 和使 \ 糖質 質視和油脂 脂可性甘糖 油亦學或油 甘且化 \ 甘 子，、和或 分用性質 \ 高使素脂和 之樣酵油質 得原以甘脂 所此予取油 理就質採甘 處可白 ，的 此，蛋製化 如物或精純 ，有 \ 由被 C 中含和並更 質明質類 ，，得 糖發脂糖理取 合本糖將處可 複於油，性則 、 甘的理 ， 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） 482672 Μ Β7 五、發明説明（ρ (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 依上述方法所取得之本發明所使用之甘油脂質和/或 甘油糖脂質含有物，爲由天然取得之安全性高之物質， 其特別有用於作爲食品和/或飮料用。 所取得之甘油脂質和/或甘油糖脂質，藉由辨識單株 抗體等標的細胞並與配位體結合，則可對任意之標的細 胞誘發專一性地細胞自滅。再者，經由令白蛋白等載體 與本發明化合物結合，則可提供吸收性更高之物質。 本發明之細胞自滅誘發劑若爲以甘油脂質和/或甘油 糖脂質，例如來自植物、微生物或動物之甘油脂質和/ 或甘油糖脂質作爲有效成分，且將其與公知之醫藥用載 體組合並且製劑化即可。一般，將本發明之細胞自滅誘 發化合物，例如甘油脂質和/或甘油糖脂質與藥學容許 之液狀或固體狀載體配合，且視需要加入溶劑、分散劑 、乳化劑、緩衝劑、安定劑、賦形劑、結合劑、崩散劑 、潤滑劑等，作成錠劑、顆粒劑、散劑、粉末劑、膠囊 劑等之固形劑、通常液劑、懸浮劑、乳劑等之液劑。又 ，其可作成在使用前經由添加適當載體而呈液狀之乾燥 品。 本發明之細胞自滅誘發劑可經由經口劑、注射劑、點 滴用劑等之非經口劑任一者進行投予。 醫藥用載體可依據上述投予形態及劑型而選擇，於經 口劑之情況，可利用例如澱粉、乳糖、白糖、甘露糖醇 -12- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4ft格（210X297公釐） 482672 A7 B7 五、發明説明（u) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 、羧甲基纖維素、玉米澱粉、無機鹽等。又，於經口劑 之調製中，亦再可配合結合劑、崩散劑、界面活性劑、 潤滑劑、流動性促進劑、矯味劑、著色劑、香料等。 另一方面，於非經口劑之情況，爲依據常法’將本發 明之有效成分之具有細胞自滅誘發性之例如來自植物、 微生物或動物之甘油脂質和/或甘油糖脂質、溶解或懸 浮於作爲稀釋劑之注射用蒸餾水。生理食鹽水、葡萄糖 水溶液、注射用植物油、芝麻油、花生油、大豆油、玉 米油、丙二醇、聚乙二醇等中，且視需要，加入殺菌劑 、安定劑、等張劑、無痛化劑等予以調製。 本發明之細胞自滅誘發劑，可經由對應於製劑形態之 適當的投予路徑進行投予。投予方法亦無特別限定，且 可爲內用、外用及注射。注射劑爲例如丁於靜脈內、肌 肉內、皮下、皮內等投予，且於外用劑中亦包含栓劑等 〇 淫齊郎皆慧讨4¾員工消費合阼fi印製 本發明之細胞自滅誘發劑之投予量，可依據其製劑形 態、投予方法、使用目的及其所應用之患者年齡、體重 、症狀而適當設定，雖無一定，但一般爲製劑中所含有 之有效成分量爲成人每日以0.1〜20 0rng/kg。因爲投予 量爲依據各種條件而變動，故當然亦有比上述投予量更 少之份量下而爲充分之情形，或者亦有必須超過範圍之 -13- 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 482672 A7 _ B7__ 五、發明説明（A ) 情形。本發明藥劑除了可就其原樣經口投予以外，亦可 添加至任意之飮食品中令以日常攝取。 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 由本發明之細胞自滅誘發劑所提供之細胞自滅誘發方 法，爲可用於生體防禦機構、免疫機能或癌等疾病關係 之硏究、細胞自滅誘發抑制劑之開發等。特別地，由具 有長歷史作爲食品之植物、微生物或動物調製細胞自滅 誘發化合物之甘油脂質和/或甘油糖脂質，於經口投予 之情形中，爲安全性高之物質。又，含有、添加和/或 稀釋本發明之甘油脂質和/或甘油糖脂質，例如來自植 物、微生物或動物之甘油脂質和/或甘油糖脂質所構成 之食品或飮料當然爲安全性高，且經由其細胞自滅誘發 作用，乃極適合用以作爲健康食品。 所謂本發明之食品或飮料並無特別限定，可列舉例如 榖物加工品（小麥粉加工品、澱粉類加工品、預混合加工 品、麵類、通心粉類、麵包類、餡類、蕎麥類、麵筋、 冬粉、包裝餅等）、油脂加工品（可塑性油脂、天婦羅油 、沙拉油、美乃滋類、調味汁等）、大豆加工品（豆腐類 、味噌、納豆等）、食肉加工品（火腿、培根、燻製香腸 、臘腸等）、水產製品（冷凍魚肉碎、魚糕、竹輪、魚肉 山芋九子、炸蕃薯、壽司、魚肉火腿、臘腸、乾松魚、 -14- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS )八4^洛（210X297公釐） 482672 A7 _ B7 五、發明説明（14 ) 魚卵加工品、水産罐頭、佃煮等）、乳製品（原料乳、奶 油、酸乳酪、牛油、乳酪、煉乳、粉乳、冰淇淋等）、 蔬菜和水果加工品（脅醬類、果醤類、鹼菜類水果飲料 、蔬菜飲料、混合飲料等）、點心類（巧克力、餅乾類、 點心麺包類、蛋糕、點心餅、米巣類等）、酒精飲料（曰 本酒、中國酒、葡萄酒、威士忌、燒酒、伏特加、白蘭 地、琴酒、蘭姆酒、啤酒、清涼酒精飲料、水果酒、利 口酒等）、_好飲料（緣茶、紅茶、烏龍茶、咖啡、清涼 飲料、乳酸飲料等）、調眛料（醬油、辣醬油、酢、味_ 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (讀先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 等）、香辣料（大蒜、胡椒、辣椒、豆蔻、Μ、八角、藥 草、矮糠等之萃取物等）、罐裝和瓶裝和袋裝食品（牛肉 飯、鍋飯、紅飯、咖哩、其他各種之已調理完畢之食品） 、半乾燥或濃縮食品（肝醬、其他之塗抹食品、蕎麥和 烏龍之汁、濃縮湯汁類）、乾燥食品（速食麵類、速食咖 哩、卽溶咖啡、粉末果汁、粉末湯汁、速食味噌汁、已 調理完畢之食品、已調理完畢之飲料、已調理完畢之湯 汁等）、冷凍食品（鋤燒、茶碗蒸、烤鰻魚Η、漢堡牛排 、燒賣、餃子、各種牛排、水果雞尾酒等）、固形食品 、液體食品（湯類等）、香辣料類等之農産和林産加工品 、畜産加工品、水産加工品等。 本發明之食品或飲料之製法並無限定，可列舉經由調 理、加工及一般所使用之食品或飲料之製法予以製造， a若所製造之食品或飲料中含有甘油脂質和/或甘油糖 脂質，例如來自植物、徹生物或動物之細胞自滅誘發化 -15- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Λ4規格（210X29?公釐） 482672 A7 B7 五、發明説明（15 ) 經濟部中央標準局員工消費合作社印掣 滅 加糖油或 含質質 \ 糖簡過或油義 甘誘量選每 自 和油甘 \ 中脂脂和油可經 \ 甘定 或滅含當品 胞 理甘該和 程糖糖質甘，使和明被 \ 自之適食 細 調或至質 工油油脂.或此卽質發乃 和胞中而為 具 及\ 加脂 之甘.甘油 \ 因 C 脂本， 質細品面量 有。、和添油 意.或或甘和。料油釋料 脂之食方含 C 含可，時質，甘 任 / \ 該質加飲甘稀.飲 油物於性之 可後卽 Η 脂·料將 在和和至脂添或之‘或或 甘動質活質 即 Η 質加油材並 或質質加油行品性 \品 之或脂理脂 質加脂和甘其， ，脂·脂添甘進食發和食 用物糖生糖 脂、糖理之及中 中油油料該次之誘加之 作生油和油 糖理油調性品物 造甘甘原釋數，用滅添成 發微甘能甘 油調甘、發工有 製之該其I稀’過作自、構 誘、或官或6-甘於或前誘加含 之用加和為經發胞料所。滅物 \ 其 \-16 或若 \工滅和質。料作添料可或誘細飲’質料自植和由和 _ \ ，和加自理脂可飲發為飲亦次滅具或脂飲胞自質可質 和中質和胞調耱亦或誘可或且一自有品糖或細來脂，脂 質工.脂理細將·油釋品滅法品，為胞含食油品有如油定油 脂加油調有可甘稀食自方食質，可細亦之甘食具例甘限甘 油及甘於具亦或質於胞有將脂 ，有時質或之之 ，之別該 甘理之可加a\ 脂，細含可耱又·具程脂 \ 明明質物特如 之調性，添，和耱次有其亦油。造，工糖和發發脂合無例 物於發卽後質質油其具令且甘質製何油質本本耱化並 ， 合 誘 η 脂脂甘 有 C,或脂便仟甘脂為 油發，擇 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X 297公釐） 482672 A7 B7 五、發明説明（< ) 100份，以1〇_9份以上，而由作爲食品之官能、生理作用 方面而言，則較佳爲1〇_8〜5份，更佳爲1〇·7〜2份。 本發明之具有細胞自滅誘發作用之甘油脂質和/或甘 .油糖脂質，例如來自植物、微生物或動物之甘油脂質和 /或甘油糖脂質於飮料中之含量，並無特別限定，可由 其官能和生理活性方面而適當選擇，例如該甘油脂質和 /或甘油糖脂質之含量爲飮料每100份，以10·9份以上 ，而由作爲飮料之官能、生理作用方面而言，則較佳爲 10·8〜5份，更佳爲10·7〜2份。尙，本說明書中，份爲 意指重量份。 本發明之食品或飮料，若爲含有、添加和/或稀釋本 發明之具有細胞自滅誘發性之甘油脂質和/或甘油 糖脂質，則對其形狀並無特別限定，且亦包含藥片狀、 顆粒狀、膠囊狀、膠狀、溶膠狀等形狀之可經口性攝取 之形狀物。 ‘ 本發明之食品或飮料爲大量含有具生理活性之本發明 之細胞自滅誘發化合物之甘油脂質和/或甘油糖脂質， 且經由該甘油脂質和/或甘油糖脂質所具有之細胞自滅 誘發作用，使得藉由攝取該物，特別於保持腸胃健康上 ，可爲有用的食品或飮料。 本發明之細胞自滅誘發化合物之甘油脂質和/或甘油 糖脂質爲來自植物、微生物或動物，特別以來自食用植 -17- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 衣· :1齊¥和曰鋈吋查奇員11肩費合阼^印製 482672 A7 B7 五、發明説明（々） 物、微生物或動物之甘油脂質和/或甘油糖脂質於食品 或飮料之使用，爲極具優異安全性之物質，該細胞自滅 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 誘發化合物於生理性機能表現濃度中，對動物並無毒性 〇 食用植物、微生物或動物中之本發明之細胞自滅誘發 化合物之甘油脂質和/或甘油糖脂質，爲具有長歷史作 爲食品者，由其所調製之本發明之甘油脂質和/或甘油 糖脂質含有物，於經口投予之情形中，爲安全性極高之 物質。因此，添加和/或稀釋該甘油脂質和/或甘油糖 脂質所構成之食品或飮料當然爲安全性高。 以上，可知依據本發明之生物體脂質之甘油脂質及甘 油糖脂質，爲具有細胞自滅誘發活性。 本發明所使用之細胞自滅誘發化合物之甘油脂質和/ 或甘油糖脂質，爲大量存在於植物、微生物或動物之膜 部分，特別可由食用植物或微生物廉價且簡便地製造。 又，依據其斥水性程度、選擇合適的溶劑，則可選擇性 地精製目的之細胞自滅誘發化合物之甘油脂質和/或甘 油糖脂質。 本發明中所使用之細胞自滅誘發化合物之甘油脂質和 /或甘油糖脂質，例如來自植物、微生物或動物之甘油 脂質和/或甘油糖脂質，可將其細胞自滅誘發作用簡便 地賦與食品或飮料，本發明之具有細胞自滅誘發性之甘 • 1 8 · 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS〉A4規格（210X297公釐） 482672 A7 B7 五、發明説明（卩） 油脂質和/或甘油糖脂質，爲極有用於作爲對食品或飮 料之添加劑。 實施例 以下，列與實施例，再具體說明本發明’但本發明不 被此些實施例限定。尙，實施例中之％爲意指重量％。 實施例1 由海藻調製具有細胞自滅誘發作用之組成物 (1)含高果美海帶充分乾燥後，將乾燥物20公斤以自 由粉碎機（奈良機械製作所製）予以弄碎。 於自來水900公升中溶入氯化鈣二水合物（日本曹達公 司製）7.3公斤，其次混合高果美粉碎物20公斤。由液溫 12 °C至液溫90 °C爲止吹入水蒸氣地令其升溫40分鐘， 其次在攪拌下於90〜95 °C中保溫1小時，並於其後冷卻 ，取得冷卻物1100公升。 其次使用固液分離裝置（West Phallia Separator公司 製CNA型），進行冷卻物的固液分離’調製約900公升之 固液分離上淸液。 將固液分離上淸液360公升’使用Diacel公司製 FE10-FC-FUS0382(分級分子量3萬），濃縮至20公升。其 次，加入20公升自來水，並重覆濃縮至20公升之操作5 次，進行脫鹽處理，調製來自高果美海帶之萃取液25公 升。 將該溶液1公升冷凍乾燥’取得乾燥物13克。 -19- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 二\5

T 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 482672 A7 B7 五、發明説明（19 ) (2)令筲施例1_(1)記載之萃取液1.4公升，以含有0.2M CaCl2之20mM醋酸緩衝液、PH6透析，取得透析内液。 DEAE-Sepharose Fast Flow柱（4 14cmX 45.5cm)以同缓 衝液平衡化，並加入透析内液後，以同緩衝液清洗，以 含有2M NaCl之同緩衝液的濃度梯度法令其溶出。以苯 酚硫酸洗及Bt唑硫酸法，算出總糖含量及糖醛酸含量， 依溶出順序取得A餾分、B餾份及C餾分。令其對蒸餾 水透析、冷凍乾燥、取得B餾分7 60毫克。 於此B餾分中察見細胞自滅誘發活性。 第1圖示出萃取液之DEAE-Sepharose Fast Flow柱 溶離型式之圖示。卽，第1圖為示出來自海藻萃取物之 DEAE-Sepharose Fast Flow柱14cmX 45,5cm)之溶離 型式之_示，縱軸為表示於W唑硫酸法之530nm吸光度 、於苯酚硫酸法之480ηπι吸光度、及導電度（mS/crn),橫 軸為表示分餾编號，圖中白圏符號為表示於苯酚硫酸法 之480nm吸光度、黑圈符號為表示ft唑硫酸法之5 3 0 nm吸 光度，圖中實線為表示導電度。尚，1餾分之液量為 1 000毫升。 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) (3 )將上述方法所分餾之B餾分8 . 6克，加至調整於最 终濃度 1M NaCl 目.以 1M NaCl平衡化之 Phenyl-Sepharose 6 Fast Flow 柱（<^4.4cmX20cm)。以 1M HaCl 將柱洗淨 後，以對水之濃度梯度取得溶離餾分。將其以旋轉蒸發 器濃縮後，對蒸餾水透析，取得約6 . 5毫升之精製餾分 。將精製餾分冷凍乾燥，取得精製物60毫克。於此精製 -20- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 482672 A7 B7 五、發明説明（2〇) 物中察导細胞自滅誘發活性。 (4) 精製物之細胞自滅誘發作用之測定 上述B餾分、及實施例1-(3)記載之精製物中的細胞 自滅誘發活性為如下測定。於含有牛胎兒血清1 0 %之 RPMI1640 培養基培養之 HL-60UTCC CCL-240)2.5X 10S 個/ 4.5毫升中，添加餾分或該精製物之水溶液0.5毫 升，並於3 7勺培養4 8小時。同時地添加蒸餾水及判定具 有細胞自滅誘發活性之放線菌素D溶液（10wg/ml)作為 對照試料。於光學顯徹鏡下，以肉眼觀察細胞自滅小體 之形成、細胞之收縮、核之凝縮，並計數活細胞數。觀 察到此呰現象、並察見活細胞數減少者，則判斷為具有 細胞自滅誘發活性。 於添加B餾分、精製物及放射菌素D中，確認細胞自 滅誘發作用。其結果示於第2圖。卽，第2圖為示出在 上述H L - 6 0細胞之培養液中添加最終濃度2 in g / m 1之B餾 分或最终濃度〇.9mg/nil之精製物時之培養時間與培養液 中之活細胞數之關傺圖，橫軸為表示培養時間（小時）， 縱軸為表示培養液中之活細胞數（X10S個/ 5毫升）。 圖中白四角形符號為表示添加水之對照組、白薆形符號 為表示添加B餾分、白圏符號為表示添加精製物。 (5) 具有細胞自滅誘發作用之精製物的理化性質 測定實施例1 - (3 )記載之精製物的理化性質。 使用J N Μ - A 5 0 0核磁共振裝置（日本電子公司製）測定 1 H-NMR光譜。 -21 - 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） (讀先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) #

-、1T 482672 A7 B7 五、發明説明（2工） 經濟部中央標準局員工消費合作社印繁

其結果以第3圖所示之1 H-NMR光譜表示。第3圖中 ，縱軸為表示訊號強度、橫軸為表示化學移動值（P P m ) 。尚，於1 H-NMR之化學移動值為以HOD之化學移動值視 為4,65ppm表不。 1 H-NMR (D 2 0) δ0,7(脂肪酸終端之甲基的H)、1,1(脂肪酸之亞甲基 及岩藻糖之C-5位之甲基的Η)、3.1〜5·6(來自糖之Η) 取出實施例1-(3)記載之精製物2毫升，加入5%鹽酸 甲醇溶液1毫升並封管，於8 5 t下加熱3小時。冷卻後 ，以正己烷1毫升萃取3次，所得之正己烷萃取物於氮 氣流下濃縮至約500μ1,作成試料Α。 於剩餘的甲醇層中加入碩酸銀中和後，過濾，並於濾 液中吹入氮氣流予以濃縮乾燥，並以真空泵乾燥4小時 。乾燥後，於殘渣中加入TMS試藥（將六甲基二矽氮烷2.6 毫升加至乾燥吡啶2.0毫升中，其次加入三甲基氯矽烷 1.6毫升後，將生成之白濁物質以離心分離予以除去， 使用上清液）5滴，並於室溫中放置3 0分鐘。其次，於 5 0 t下加溫1 0分鐘，冷卻後，加入氛仿1毫升並攪拌後 ,將氛仿層以水1毫升洗淨3次。將所得之氯仿溶液作 為試料Β。 將上述之試料Α及Β ，使用DX-302質量分析計（日本 電子公司製），以下述條件供於GC-MS分析Q 試料A 柱：TC-1 (GL Sc i ence) 30 -22- 2 5 m in I . 請 閲 讀 背 ί; 5

I 頁 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） 482672 A7 B7 五、發明説明（22 ) 溫度：由130£〇至25〇1〇為止以410 /分鐘升溫，於2501C 下維持5分鐘 流鼉；気氣、1.2毫升/分鐘 光譜測定質量範圍；m/z 50〜500 光譜測定重覆時間：3秒 試料B $ 柱：T C- 1 (G L Science)30mfflX 0*25mm I . D · 溫度：由UOtMSOOt：為止以4t! /分鐘升溫，於3001C 下維持5分鐘 流量；気氣、1，2毫升/分鐘 光譜測定質量範圍；m/Z 50〜800 光譜測定重覆時間：3秒 其結果，試料A、試料B為分別以第4圖、第5圖所示 之全離子餍析圖表示。於各圖中、縱軸為表示相對強度 (%)、橫軸上方為表示保持時間（分鐘）、下方為表示掃 描編號。 由試料A、試料B所得之層析圖中之波峰構造的確認 i ,為經由解析各波峰之光譜而進行。 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 由試料A確認主成分為十四酸（肉豆寇酸）（波峰2)、 十六酸（棕櫊酸）（波峰3)、及十四烯酸（波峰1)之各甲酯。 又，由試料B確認來自甘油之波峰（波峰1 )、來自岩 藻糖之波峰（波峰2、3、4 )，來自木糖之波峰（波峰5、6 )、 來自甘露糖之波峰（波峰7 )、來自半乳糖之波峰（波峰8 、9、10)、及來自葡萄糖醛酸之波峰（波峰11)。 -23- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 482672 A7 B7 五、發明説明（23 ) 以上，判知上述精製物含有甘油脂質和/或甘油糖脂 質。 實施例2 (1)將乾燥之高果美海帶粉碎物2公斤、懸浮於20公 升之8 0 %乙醇中，並於2 5 1C下攪拌3小時，以過濾除去 可溶物。將所得之殘渣，懸浮於含有1 . 5單位橋型含岩 藻糖硫酸多糖分解酶（參照W097/26896)、10%乙醇、 10mM氣化鈉、50mM氛化鈣之20公升缓衝液（PH8.2),並 於251下攪拌24小時。其次，將此攪拌液過濾，且以含 有50mM氯化鈉之10%乙醇洗淨殘渣。將洗淨之殘渣懸浮 於含有4克藻酸裂解酶（Nagase生化學工業公司製）、 \ lOOmM磷酸二氫鈉、100mM氛化鈉、及10%乙醇之緩衝液 (p Η 6 . 6 ) 4 0公升中，於2 5 °C下攪拌9 6小時。將此溶液離心 分離，所得之上清液以裝配排除分子量1 0萬空心絲之超 過濾器濃縮後，以含有1 0 0 m Μ氛化鈉之1 0 %乙醇更換溶液 。於此溶液中添加等量的0.4Μ醋酸鈣溶液，攪拌30分鐘 後，離心分離，且將所得之上清液以同上述之條件下超 過濾，並以100 mM氛化鈉更換溶液。於此溶液中令呈1Μ 地加入氯化鈉，調整至PH8,取得來自高果美海帶之萃取 液1 . 4公升。 將此萃取液，加至事先以1 Μ氯化鈉平衡化之2 . 9公升 苯基- Cellulofine (生化學工業公司製）柱，並以6公升 1M氯化鈉、6公升水、8公升乙醇之順序將其溶離。 各溶離餾分之細胞自滅誘發作用為以實施例1 - ( 4 )記 -24- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

1T 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 482672 A7 B7 五、發明説明（24 ) 載之方法測定，a在乙醇溶離餾分中察見細胞自滅誘發 作用。 將乙醇溶離餾分濃縮乾燥後，溶解於乙醇中並作成 17 5毫升，將其中58毫升令以事先以乙醇平衡化之1130 毫升Sepharose LH-60(Pharmacia公司製）柱，並以乙醇 溶離，目.以各60毫升分取。 溶離型式示於第6圖。卽，第6圖為示出Sepharose LH-60柱層析之圖示，縱軸為表示230nm之吸光度，橫軸 為表示分餾编號。 溶離餾分之細胞自滅誘發活性以f實施例1-(4)記載之 方法測定時，於分餾編號8〜15之餾分、27〜49之餾分 中無活性，於分餾編號16〜21、22〜26之各黯分中察見 細胞自滅誘發作用。 於此活性強之餾分中，對於3値餾分（餾分编號20、21 、23)以實施例1記載之方法，進行各種成分之分析。 於第7、8、940、11、12圖中示出餾分編號20、21、23 之各脂質成分或糖成分之全離子層析圖。即，第7、8、 9圖為示出餾分編號20、21、23之各脂質成分之全離子 餍析圖，第10、11、12圖為示出餾分编號20、21、23之 各耱成分之全離子層析圔。於各圖中，縱軸為表示相對 強度（％ )、橫軸上方為表示保持時間（分鐘）、下方為掃 描編號。 如第7、1 0圖所示，由餾分编號2 0之餾分撿測出十四 酸（肉豆寇酸）（第7 _波峰1)、十六酸（棕櫊酸）（第7圖 -25- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) —m ”訂 482672 A7 B7 五、發明説明（25 ) 請 先 閲 ik 背 之 注 意 事 項 再 填 寫 本 頁 波峰3)、十六烯酸（第7圖波峰3)、及十八烯酸（油酸）（第 7圖波峰4)之各甲酯、來自甘油之波峰（第10圖波峰1)、 來自半乳耱之波峰（第10圖波峰2、3、4)。又，如第8圖 、第1 1圖所示，由餾分编號2 1之餾分檢測出十四酸（肉豆 寇酸）（第8園波峰1)、十六酸（棕櫊酸）（第8圖波峰3 )、十 六烯酸（第8園波峰2)、及十八烯酸（油酸）（第8圖波峰 4)之各甲酯;來自甘油之波峰（第11圖波峰1)、來自半 乳耱之波峰（第1 1画波峰2、3、4 )。 又，如第9 、12圖所示，由餾分編號23之餾分撿測出 十六酸（棕櫊酸）（第9圖波峰1 )、及十八烯酸（油酸）（第 9圖波峰2)之各甲酯、來自甘油之波峰（第12圖波峰1)、 來自半乳耱之波峰（第1 2圖波峰2、3、4 )。 以上，於上述餾分中確認含有甘油脂質和/或甘油糖 脂質，且得知甘油脂質和/或甘油糖脂質為具有細胞自 滅誘發活性。 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (2)牧集實施例2_(1)中記載之Sepharose LH-60柱溶 離餾分之餾分编號16〜26,濃縮乾燥後，將乾燥物溶解 於氛仿中，且加至事先以氛仿平衡化之20毫升Iatro Beads 6RS-8060(Yatron公司製）柱，以氣仿溶離，且其 次以氛仿和丙酮比為80: 20、60: 40、40: 60、20: 80 之混合物順次令其溶離。其結果，於氯仿溶離餾分、氛 仿與丙酮之比為8 0 : 2 0之溶離餾分中確認出強的細胞自 滅誘發活性。 對於確認細胞自滅誘發活性之餾分，以實施例1記載 -26- 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210>< 297公釐） 482672 A? B7 五、發明説明（26 ) 之方法進行各種成分之分析。 第13、14、15、16中示出氣仿溶離餾分、氣仿與丙酮 之比為80: 20之溶離餾分的各脂質成分或糖成分之全離 子餍析即，第13, 14圖為示出氛仿溶離餾分、氛仿 與丙酮之比為80 : 20之溶離餾分的各脂質成分之全離子 餍析圖，第1 5 , 1 6圖為示出氣仿溶離餾分、氛仿與丙酮 之比為80: 20之溶離餾分的各糖成分之全離子層析圖。 於各圖中，縱橫為表示相對強度（％)，橫軸上方為表示 保持時間（分鐘）、下方為表示掃描編號。 如第13、15圖所示，由氛仿溶離餾分檢測出十六酸 (棕櫊酸）（第13圖波峰1)之甲酯、來自甘油之波峰（第15 圖波峰1)、又如第14、16圖所示，由氯仿和丙醒I之比為 80: 20之溶離餾分檢測出十四酸（肉豆寇酸）（第14圖波 峰1)、及十六酸（棕櫊酸）（第14圖波峰2)之甲酯、來自 甘油之波峰（第1 6圖波峰1 )。 以上，於上述餾分中確認含有甘油脂質、且得知甘油 脂質為具有細胞自滅誘發活性。 ί 實施例3 經濟部中央標準局員工消費合作社印繁 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) (1 )將實施例1 - (1 )記載之來自高果美海帶之萃取液的 40倍濃縮物230毫升，添加至水中並作成910毫升，於其 中添加乙醇4 9 0毫升，攪拌2小時後，離心分離，調製 3 5 %乙醇可溶物。將此3 5 %乙醇可溶物濃縮乾燥後，添 加水100毫升，其次添加氛仿：甲醇=2: 1之混合液400 毫升，充分攪拌後，回收分離之上層液。將下層之有機 -27 - 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ 297公釐） 482672 Λ7 B7 五、發明説明（27 ) 溶劑相蒸除後，加水使呈100毫升，並將重覆此操作3 次所得之上餍液濃縮乾燥後，添加氛仿1 0毫升，取得氯 仿可溶物c將此氣仿可溶物濃縮後，加至事先以氯仿平 衡化之 20 0 毫升 Iatro Beads 6RS- 8 06 0 (Yatron公司製）柱 ，以氛仿溶離，且其次以氛仿和丙酮之比為9 0 : 1 0、 70: 30、40: 60、20: 80之混合物順次令其溶離。 其結果，於氛仿溶離餾分、氛仿與丙酮之比為40: 60 之溶離餾分中確認出強的細胞自滅誘發活性。 (2)將氛仿溶離餾分，於矽膠板60F254 (Melc公司製） 上點清後，使用己烷：乙醚=9 : 1作為展開溶劑，進行 薄層層析時，於Rf值約0.25檢測出為具有細胞自滅誘發 活件之單一點漬。 對於此點漬，以實施例1記載之方法，進行各種成分 之分析。 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 於第1 7、18圖中示出R f值約〇 . 2 5之點漬的脂質成分或糖 成分之全離子層析圖。即，第17圖為示出Rf值約0.25之 點漬的脂質成分之全離子層析圖，第18圖為示出Rf值約 0.2 5之點漬的耱成分之全離子層析圖。於各圔中，縱軸 為表示相對強度（％)、橫軸上方為表示保持時間（分鐘） 、下方為表示掃描編號。 如第1 7、 1 8圖所示，由R f值約0 . 2 5之點漬檢測出十四 酸（肉豆寇酸）（第17圖波峰1)、十六酸（棕櫊酸）（第17圖 波峰2 )、及十八烯酸（油酸）（第1 7圖波峰3 )之各甲酯、 及夾自甘油之波峰（第1 8圖波峰1 )。 -28- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Λ4規格（210X 297公釐） 經濟部中央標準局員工消費合作社印取 482672 A7 B7 五、發明説明（28 ) (3)將氣仿與丙酮之比為40: 60之溶離餾分，使用氯仿 :甲醇=9 5 : 1 2作為展開溶劑，進行薄層層析時，於R f 倌約0.33中檢測出具有細胞自滅誘發活性之點漬。 對於此點漬，以實施例1記載之方法，進行各種成分 之分析。 於第19、20中示出Rf值約0.33之點漬的脂質成分或糖 r 【 、 成分之全離子層析圖。卽，第19圖為示出Rf值約0.33之 點清的脂質成分之全離子層析圖，第20圖為示出Rf值約 0,33之點漬的糖成分之全離子層析圔。於各.圖中，縱軸 為表示相對強度（％ )、橫軸上方為表示保持時間（分鐘） 、下方為表示掃描編號。 如第1 9、2 0圖所示，由R f值約0 . 3 3之點漬檢測出十四 酸（肉豆寇酸）（第19圖波峰1)及十六酸（棕櫊酸）（第19圖 波峰2)之甲酯、來自半乳糖之波峰（第20圖波峰2、3、4) 及來自甘油之波峰（第2 0圖波峰1 )。 以上，於上述實施例3 - ( 2 )及實施例3 - ( 3 )記載之點漬 中確認含有甘油脂質、甘油糖脂質，且得知甘油脂質及 甘油耱脂質為具有細胞自滅誘發活性。 奮施例4 於髙果美海帶乾燥物之1 m m正方破碎品2 . 5公斤中，添 加1 0倍份景之水，令海帶泡脹後，離心除去上清液。於 ( 海帶泡脹物中添加10倍量之令其呈60%乙醇之乙醇及水 -29- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) . 、\呑 482672 A7 B7 五、發明説明（29 ) ，並於37 t攪拌3小時後，以離心分離調製上清液。將 上清液濃縮後，於此水溶液7 50毫升中，令氛仿、甲醇以 氣仿：甲醇··水=2: 4: 0.8地添加並充分攪拌後，分 離下餍之有機相液體。 將此下層液濃縮乾燥後，調製成氛仿可溶物後，加至 事先以氣仿平衡化之200毫升Iatro Beads 6RS-8060 (Yatron公司製）柱，以氛仿溶離，且其次以氛仿與丙酮 之比為40 : 60之混合物、丙酮、甲醇順次令其溶離。 將各溶離餾分濃縮後，於矽膠板6 0 F 254上點漬，且分 別使用櫻草靈（p r i ra u 1 i η )試藥及苔黑酚硫酸試藥進行糖 脂質之檢測，確認兩餾分存在糖脂層。其結果，顯示極 性愈低之溶劑所溶離之餾分的脂質含量愈高，且細胞自 滅誘發作用亦顯示出爲強活性。 實施例5 將乾燥的高果美海帶以混合機予以弄碎。對於此海帶 粉末0.5克，添加25毫升之①60mM HC1、②1Μ醋酸、③ 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 1 % NaHCO 3 .④ 1% Na 2 C0 3 .⑤ 1% Na 2 C0 3 Λ ⑥氛 仿：甲醇=2: 1、⑦75%乙醇水溶液、⑧0.1% SDS、 或@0,01%80$,且將©、©、@、@、及©於60 1〇下、 其他為在3 7 下萃取3小時。尚，此後將①〜⑨之溶液 稱為一次萃取液π①和②為以N a 2 C 0 3中和、④和⑤為 以H C 1中和，且其他為就其原樣離心分離後，進行以下 操作。 A .於沈澱中加入2 5毫升之7 5 %乙醇水溶液並於6 0 1C下 -30- 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 482672 A7 B7 五、發明説明（3〇 ) 萃取2小時，將離心上清液於減壓下濃縮乾燥後，溶解 於1毫升之7 5%乙醇水溶液。 B.於10毫升之上清液中加入30毫升之乙醇並混合，將 離心上清液於減壓下濃縮乾燥後，溶解於0.4毫升之75% 乙醇水溶液。 C .將上清液於減壓下乾燥，並溶解於1毫升之75%乙 醇水溶液。 將如此處理所得之萃取液，以7 5 %乙醇水溶液稀釋， 並各以5 ^ 1加至9 6孔穴徹標度平板之孔穴中且於風乾後 ，加人100α 1含^5000個HL-60細胞之含10%胎牛血清 之RPMI 1 640培養基，且依據後述實施例7記載之MTT法 ,測定癌細胞增殖抑制活性。 其結果，取得表1所示之結果。即，表1為示出萃取 方法與癌細胞增殖抑制活性之關偽表，表1中之數字為 表示具有癌細胞增殖抑制活性之稀釋液的稀釋倍率。以 75%乙醇水溶液萃取前之酸性（①A·)或鹼性（③A·、 、⑤A.)之一次萃取液，處理海帶粉末，則可比未處理 i 區（⑦C 萃取出2倍的抑制癌細胞增殖之活性物質。又 ,對於此些餾分依據後述實施例8記載之方法，測定細 胞自滅誘發活性，並確認抑制癌細胞增殖活性餾分之細 胞自滅誘發作用。 -31- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） (讀先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) · ί 丁 、-口 482672 A7 B7 五、發明説明（V ) 表1

(請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 丨»· I 丁 、1· 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 實施例6 (1) 分別將市售之掬玉輦、撢玉輦、舞茸、模茸、香 菇、滑子冷凍乾燥，調製成冷凍乾燥物，並調製其粉碎 物。 於上述輦類之各粉碎物0.5克中，添加25毫升之75% 乙醇水溶液，並於室溫下萃取2小時，經由離心分離， 取得萃取液後將該萃取液於減壓下濃縮乾燥，調製成乾 燥物。將此乾燥物溶解於水1毫升中，調製成乙醇萃取 液。 (2) 測定上述實施例6-(1)記載之乙醇萃取液的癌細胞 增殖抑制活性。 -32-本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） 482672 A7 B7 五、發明説明（32 ) 將乙醇萃取液分別以GD/X PES濾紙（Waterman公司製） 過濾滅蘭，並以滅菌水製作成稀釋条列。將各稀釋液1 0 /i 1 責入96孔穴微標度平板之孔穴中，並於其中加入100m 1 含有5000値HL-60細胞之含10%胎牛血清之RPM 1 1640培 養基，於5% C〇2氣體存在下，於37°C下培養48小時。 以光學顯徹鏡觀察細胞形態後，加入5 m g / m 1之溴化3 - ( 4 ，5 -二甲基瞎唑-2-基）-2,5 -二苯基四唑鐵（MTT: Sigma 公司製）磷酸緩衝食鹽水溶液10//1並再繼續培養4小時 後，以顯撒鏡觀察細胞之生長狀態。又，加入含有〇. 04N HC1之2 -丙醇100ul並仔細攪拌，測定590nm中之吸光度 並將其視為細胞增殖程度。 關於輦類之乙醇萃取液的癌細胞增殖抑制活性，於掏 玉輦之30倍稀釋液、和撢玉輦之10倍稀釋液中，其細胞 、 為死滅，確認具強的癌細胞增殖抑制活性，並且察見細 胞自滅小體。又，於舞茸、擾茸、香菇、滑子之3倍稀 釋液中，其細胞為死滅，於10倍稀釋液中察見細胞自滅 小體，良各輦類之乙醇萃取液為具有強的癌細胞增殖抑 制活性和細胞自滅誘發作用。 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) (3 )對於實施例6 - ( 1 )記載之掏玉辇的乙醇萃取液，以 實施例1記載之方法，進行各種成分之分析。 於第21、22中示出掬玉輦之乙醇萃取液中的脂質成分 或糖成分之全離子層析圖。即，第21圖為示出掬玉輦之 乙醇萃取液中的脂質成分之全離子層析圖，第22圖示出 掬玉螢之乙醇.萃取液中的糖成分之全離子層析圖。於各 -33- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） 482672 A7 B7 五、發明説明（33 ) 圖中，縱軸為表示相對強度（％),橫軸上方為表示保持 時間（分鐘）、下方為表示掃描編號。 如第20、22圖所示，於掏玉輦之乙醇萃取液中撿測出 十六酸ί棕櫊酸）（第2 1圖波峰1 )、及順-9、順-1 2 -十八 磺二烯酸（亞油酸）（第21圖波峰2)之甲酯、來自葡萄糖之 波峰（第22圖波峰2、3、4)、來自甘露糖醇之波峰（第22 圖波峰5 )及來自甘油之波峰（第2 2圖波峰1 )。 又，其他之輦類的乙醇萃取物亦確認存在有甘油脂質 和/或甘油耱脂質。 實施例7 將實施例6記載之掏玉輦之冷凍乾燥粉碎物5克，懸 浮於2 5 0毫升之7 5 %乙醇水溶液中，並於室溫下振盪2 r 、 小時後，以離心分離將上清液與沈澱分離，取得萃取液 。將此萃取液以旋轉蒸發器（3 0 )濃縮乾燥，並再溶解 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 於20毫升之75%乙醇水溶液中，取得掏玉輦萃取濃縮物 。於此掏玉輦萃取濃縮物之一部分中，添加1/2體積之水 、與掬玉輦举取濃縮物等量之氛仿並懸浮後，靜置令其 分餍成上層及下層。將區分出之上層、下層分別濃縮乾 燥後，再溶解於分層中所用之掬玉輦萃取濃縮物之1 / 2 最的7 5 %乙醇水溶液中，並如下述測定各部分之癌細胞 增殖抑制活性。 以75%乙醇水溶液，製作各部分之75%乙醇水溶液再 溶解物的稀釋条列。將各稀釋液5^/1置入96孔穴微標度 平板，並乾燥後，於其中加入100α 1含有5000 ® HL-60 -34- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ 297公釐） 482672 A7 B7 五、發明説明（34 ) 細胞（ATCC CCL- 240 )之含10%胎牛血清之RPMI 1 6 4 0培 養基，並於5 % C 0 2氣體存在下、3 7 °C上培養4 8小時。 以光學顯撤鏡觀察細胞之形態後，.加入5mg/nil之MTT磷 酸緩衝食鹽水溶液1 0 u 1並再繼續培養4小時後，以顯 徹鏡觀察細胞之生長狀態。又，加入含有0.04H HC1之 2 -丙醇1 0 0 1並仔細摄拌，測定59 0 ^中之吸光度並將 其視為細胞增殖程度（MTT法）。 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 其結果，來自下餍之上述部分的20倍稀釋液中，其細 朐為死滅，察見到強的癌細胞增殖抑制活性，並確認到 細胞小體。於是，將此掬玉輦萃取濃縮物以同樣之操作 下，進行氛仿分層，且不以7 5 %乙醇水溶液，於矽膠柱 餍析用之移_動相中再溶解後，進行矽膠層析。矽膠層析 為以氯仿：甲醇··水=65 :25:4(條件1)、氛仿：甲醇 =6 5 : 2 5 (條件2 )作為移動相之二條件下分別獨立進行。 將各矽膠柱層析之餾分濃縮乾燥，並再溶解於最初液量 之1/ 20量之75%乙醇水溶液中，且，以同於前述之MTT法 ，測定癌細胞增殖抑制活性，經確認活性之餾分，以TLC (氛仿··甲醇：水=65」2 5 : 4)分析。其結果，於條件 1中，存在與櫻草槩試藥反應之點漬（脂質）、與水和第 三围試藥反應之點漬（胺基）、與苔黑酚硫酸反應之點漬 (耱）、與D ί t 〇 m e r試藥反應之點漬（磷脂質）的A餾分、和 存在與櫻草靈試藥反應之點漬、與苔黑酚硫酸反應之點 漬的B餾分。於條件2中，存在與苔黑酚硫酸反應之點 漬的C餾分、和存在與櫻草靈試藥反應之點漬、與苔黑 -35- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 482672 A7 B7 五、發明説明（35 ) 酚硫酸反應之點漬的D餾分、和存在與櫻草靈試藥反應 之點清、與水和第三酮試藥反應之點漬、與苔黑酚硫酸 反應之點潰的E餾分。再者，將條件1之A餾分收集並 濃縮乾燥後，令其溶劑於移動相中，並進行矽膠柱層析 。使用氛仿：甲醇= 95: 5(條件3)作為移動相。與前回 相同地將各餾分以MTT法分析，且將確認活性之餾分以 TLC(氛仿：甲醇= 95: 5)予以分析。其結果，於條件3 中，存在與櫻草靈試藥反應之點漬的F餾分、和存在與 櫻草靈試藥反應之點漬、與苔黑酚硫酸反應之點漬的G 餾分、和存在與苔黑酚硫酸反應之點漬的Η餾分。此些 癌細胞增殖抑制活性餾分的細胞自滅誘發活性、為經由 細胞自滅小體之形成而確認。 ^實施例8 將實施例6記載之掏玉輦的冷凍乾燥粉碎物1克，懸 浮於50毫升之75%乙醇水溶液、及50%乙醇水溶液中， 於37 t下振盪2小時後，以離心分離將上清液與沈澱物 分離，取得各萃取液。將此些萃取液以旋轉蒸發器（3 0 t：) 濃縮乾燥，並分別再溶解於8毫升之7 5 %乙醇水溶液、 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 5 0 %乙醇水溶液，取得掏玉輦萃取濃縮物。 此些掬玉輦萃取濃縮物以7 5 %乙醇水溶液、或5 0 %乙 醇水溶液稀釋。使用此些各稀釋液，以實施例7記載之 Μ Τ Τ法予以分析。於7 5 %乙醇水溶液、5 0 %乙醇水溶液 萃取液之1 0倍稀釋液添加餾分中察見細胞死亡，並確認 癌細胞增殯抑制活性，且於7 5 %乙醇水溶液、5 0 %乙醇 -36- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X 297公釐） 482672 A7 B7 五、發明説明（36 ) 水溶液兩萃取條件中，確認萃取出癌細胞增殖抑制活性 物質。再者，使用此些掬玉輦萃取濃縮物，測定細胞自 滅誘發活性。即，以上述之萃取濃縮液25ul作為試料， 並令乙醇揮發後，添加於含有10%胎牛血清之RPMI 1640 培養基中培養之HL-60細胞2.5X105個/ 4.5毫升，並 在37 10培養48小時。同時地添加蒸餾水及被判定具有細 胞自滅誘發活性之放線菌素D溶液（10ug/ml)作為對 照試料。於光學顯微鏡下，以肉眼觀察細胞自滅小體之 形成、細胞之收縮、核之凝縮，並計數活細胞數。觀察 到I比些現、象、且察見活細胞數減少者則判斷為具有細胞 自滅誘發活性。其結果，於75%乙醇水溶液，50%乙醇 水溶液萃取液中，確認存在細胞自滅誘發物質。 實施例9 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) Π)於市售之平茸和磨菇之各冷凍乾燥粉末0.5克中， 加入2 5毫升之7 5 %乙醇水溶液，並於3 7它下萃取2小時 。將離心上清液於減壓下濃縮乾燥，並溶解於1毫升之 7 5 %乙醇水溶液後，以7 5 %乙醇水溶液稀釋。於稀釋液 Ι/i]中，添加10 0卢1含有5000個HL-60細胞之含10%胎牛 血清之RPMI 1 6 4 0培養基，且以實施例7記載之MTT法測 定癌細胞增殖抑制活性，以實施例8記載之方法測定細 胞自滅誘發活性。其結果，於平茸之2倍稀釋液和蘑菇 之非稀釋中察見兩活性。 (2)於40克實施例6記載之掬玉輦中，加入0(0%)、 5 0(2 5%)、 100(50%)、或 150 毫升（75%)之乙醇和 160、 -37- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐） 482672 A 7 B7 五、發明説明（37 ) 110、60、或10毫升之水，並以混合器物質均質30秒鐘 ，目於室溫下振盪2小時後，經過濾取得萃取液。此萃 取以75%乙醇水溶液稀釋，並以實施例7記載之MTT法 測定癌細胞增殖抑制活性，以實施例8記載之方法測定 細胞自滅誘發活性。其結果，於0、25、50%乙醇水溶 液窣取物之2倍稀釋液和75%乙醇水溶液萃取物之5倍 稀釋液中察見兩活性。 於裁斷成3〜5mm正方之前述掏玉輦40克中，加入50 (25%)、1 00(50%)、或 150 毫升（75%)之乙醇和 110、 60、或10毫升之水，並於室溫下振盪2小時後，經過濾 取得萃取液。此萃取液以7 5 %乙醇水溶液稀釋，並以實 施例7記載之MTT法測定癌細胞增殖抑制活性，以實施 例8記載之方法測定細胞自滅誘發活性。其結果，於2 5 % 乙醇萃取物之原液（非稀釋）和5 0 %及7 5 %乙醇水溶液萃 取物之2倍稀釋液中察見兩活性。 (3)將市售之香菇冷凍乾燥並弄碎之粉末，於表2所 示之條件下萃取2小時。 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 、\st>

經濟部中央標準局員工消費合作社印製 -38- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公漦） 482672 A7 B7 五、發明説明（39 ) 表 2 香菇 粉末（克） 乙醇 濃度（％ ) 萃取液量 (毫升） 萃取溫 度（υ ) ① 0,5 2 5 20 60 ② 0,5 75 10 室溫 ③ 0.5 50 10 室溫 ④ 0 . 5 75 25 室溫 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) *訂 萃取後，以離心除去不溶物，且將上清液於減壓下濃 縮至乾燥後之萃取後，溶解於同濃度之乙醇水溶液1毫 升中。此液以7 5 %乙醇水溶液稀釋，並以實施例7記載 之MTT法測定癌細胞増殖抑制活性，以實施例8記載之 方法測定細胞自滅誘發活性，於①之1 0倍稀釋液、②之 2倍稀釋液、③之5倍稀釋液、及④之5倍稀釋液中察 見兩活性。 i 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (4 )將市售香菇之傘和柄分開，並分別冷凍乾燥後予 以弄碎，目在此粉末0 . 5中加入2 5毫升之7 5 %乙醇水溶 液，並於3 7 下萃取2小時。將離心上清液於減壓下濃 縮乾燥，並溶劑於1毫升之7 5 %乙醇水溶液後，以7 5 % 乙醇水溶液稀釋。此稀釋液之癌細胞增殖抑制活性以實 施例7記載之ΜΤΤ法測定，且細胞自滅誘發活性以實施 例8記載之方法測定時，於傘萃取液之2倍稀釋液和柄 -39- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ 297公釐） 482672 A7 B7 五、發明説明（39 ) 萃取液之20倍稀釋液中察見兩活性。對於中國産_乾之 番菇上級品、中級品之傘和柄亦以混合器弄碎且同樣萃 取並進行細胞自滅誘發活性之測定時，於上级品萃取液 、中级品傘萃取液、及中级品柄萃取液之各5倍稀釋液 中察見兩活性。 實施例1 0 於市售茶葉末0.5克中，加入水或75%乙醇水溶液25 毫升，並於室溫下振盪2小時。將萃取物離心分離後， 其上清液於減壓下濃縮乾燥，並溶解於1毫升之水中。 將此萃取液由1倍稀釋至100倍，並將稀釋液ΙΟ/il和 100/i 1含有5000個 HL-60細胞之含10%胎牛血清之RPMI 1 640培養基，添加至96孔穴徹標度平板之孔穴中，且培 養4 8小時，以光學顯徹鏡觀察細胞之生長狀態。其結果 ，於水萃取物、75%乙萃取物全部之稀釋階段添加部 分中，其細胞為死滅，於茶之水萃取物、乙醇萃取物為 具有強的癌細胞增殖抑制活性。又，經由細胞自滅小體 之形成，確認細胞自滅誘發作用。 (2)對於實施例10-U)記載之茶葉末之乙醇萃取液， 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 以實施例7記載之方法，進行各種成分之分析。 於第23、24圖中示出茶葉末之乙醇萃取液中的脂質成 分或糖成分之全離子層析圖。即，第23圖為示出茶葉末 之乙醇萃取液中之脂質成分的全離子層析圖，第24圖為 示出茶葉末之乙醇萃取液中之糖成分的全離子層析圖。 於各圖中，縱軸為表示相對強度（％),橫軸上方為表示 -40- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） 482672 A7 B7 五、發明説明（4〇 ) 保持時間（分鐘），下方為表示掃描编號。 如第23、24圖所示，於茶葉末之乙醇萃取液中確認存 在被檢測出十六酸（棕櫊酸）（第2 3圖波峰1 )及9 , 1 2 , 1 5 -+八碳三烯酸（亞麻酸）（第2 3圖波峰2 )之甲酯、來自葡 萄糖之波峰（第2 4圖波峰3、4)及來自甘油之波峰（第2 4 波峻1 )之甘油脂質和/或甘油糖脂質。又，亦撿測出來 自肌醇之波峰（第24圖波峰5)、來自奎寧酸之波峰（第24 _波峰2 )。 實施例1 1 (1) 於米糠0.5克中加入水、75%乙醇水溶液或90%乙 醇水溶液或9 0 %乙醇水溶液，並於室溫下振盪2小時， 將萃取物離心分離後，令上清液於減壓下濃縮乾燥， 並溶解於1毫升之水中。對於9 0 %乙醇水溶液萃取物為 將水不溶物溶解於乙醇中。將此些試料稀釋，並以實施 例7記載之MTT法測定癌細胞增殖抑制活性，以實施例 S記載之方法測定細胞自滅誘發活性時，於水萃取物為 存5倍稀釋液，於7 5 %乙醇萃取物為在非稀釋液，於9 0 % 乙醇萃取物為在乙醇可溶餾分之10倍稀釋液中察見兩活 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 件，米糠之乙醇萃取物為具有強的癌細胞增殖抑制活性 及細胞自滅誘發作用。 (2) 對於實施例11-(1)記載之75%乙醇萃取物，以實 施例1記載之方法，進行各種成分之分析。 於第25、26圖中示出米糠之75%乙醇萃取物中的脂質 成分或糖成分之全離子層析圖。即，第25圖為示出米糠 -41 - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） 482672 A7 B7 五、發明説明（4工） 之75%乙醇萃取物中之脂質成分的全離子層析圖，第26 圖為示出米糠之75%乙醇萃取物中之糖成分的全離子層 析圖。於各圖中，縱軸為表示相對強度（多）、橫軸上方 為表示保持時間（分鐘）、下方為表示掃描编號。 如箆25、26圖所示，於米糠之75%乙醇萃取物中確認存 在被檢測出+六酸（棕櫊酸）（第2 5圖波峰1 )及十八烯酸 (油酸）（第2 5圖波峰3 )、順-9、順-1 2 -十八碩二烯酸（亞 油酸）（第25圖波峰2)之甲酯、來自®萄糖之波峰（第26 圖波峰2、3 )及來自甘油之波峰（第2 6波峰1 )之甘油脂質 和/或甘油糖脂質。 實施例13 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 將來自菠菜之單半乳耱二甘油酯（和光純藥公司製）、 來自小麥之單半乳糖二甘油酯（Funacosy公司製）、來 自小麥之二半乳糖二甘油酯懸浮於微量之正癸烷，以超 音波處理令其更分散，並於其中令以正癸烷：乙醇=2 :9 8之比例地加入乙醇。此溶液以R Ρ Μ I 1 6 4 0培養基稀 釋至50倍，並再將其0.5毫升，加入以含10%胎牛血清 之RPMI 1640培養基之含有2.5Χ105個HL-60細胞之培 養液4 , 5毫升中，並於3 7 °C培養4 8小時，且各細胞自滅 誘發作用為依據實施例1 - ( 4 )記載之方法測定，並且確 認其強的細胞自滅誘發作用和癌細胞增殖抑制活性。 實施例1 4 將市售之包心菜、茄子之皮、除去茄皮之部分、及茄 菜_冷凍乾燥後弄碎，並以同於實施例9 - ( 4 )之方法進 -42- 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） 482672 A7 B7 五、發明説明Ui ) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 行萃取，並以實施例7記載之MTT法測定癌細胞增殖抑 制活性，以實施例8記載之方法測定細胞自滅誘發活性 時，於包心菜萃取液、茄皮萃取液、及菠菜葉萃取液之 2倍稀釋液和除去茄皮部分萃取液之5倍稀釋液中察見 兩活性。 發明之效果 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 依據本發明，提供以甘油脂質和/或甘油糖脂質，例 如來自植物、微生物或動物之具有強力細胞自滅誘發作 用之甘油脂質和/或甘油糖脂質作爲有效成分之細胞自 滅誘發劑。此甘油脂質和/或甘油糖脂質爲大量存在於 植物、微生物或動物之膜成分中，經由含水乙醇萃取等 則可有效率地萃取、簡便地取得本發明之有效成分。於 溶劑萃取前，經由進行酸或鹼處理，則可令萃取效率提 高。又，依據其斥水性程度，可選擇萃取溶劑之極性、 及選擇分離用層析載體等，並可選擇性地製造目的甘油 脂質和/或甘油糖脂質。特別地，含有，添加和/或稀 釋由食用植物、微生物或動物所萃取和/或精製之本發 明細胞自滅誘發化合物之甘油脂質和/或甘油糖脂質所 構成之食品或飮料，經由日常性地攝取則可增進健康， 且係爲作爲健康食品之極爲有用物質。 -43- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐）

Claims (1)

1. 482672 Α8 Β8 C8 D8 、申請專利範圍 第86 1 1 6636號「細胞自滅誘發劑醫藥組成物」專利案 (88年9月23曰修正） 六、申請專利範圍： 1. 一種細胞自滅誘發劑醫藥組成物，其特徵爲以分子構 造中不含磷酸酯及膦酸酯之甘油脂質和/或甘油糖脂 質作爲有效成分。 2. 如申請專利範圍第1項之醫藥組成物，其中甘油脂質 和/或甘油糖脂質爲來自植物微生物或動物之甘油脂 質和/或甘油糖脂質。 3. 如申請專利範圍第2項之醫藥組成物，其中甘油脂質 和/或甘油糖脂質爲來自茶類、蕈類、藻類或榖類渣 滓之甘油脂質和/或甘油糖脂質。 4. 一種如申請專利範圍第2項之醫藥組成物之製法，其 特徵爲包含將來自植物、微生物或動物之甘油脂質和 /或甘油糖脂質，以有機溶劑萃取之工程。 5. 如申請專利範圍第4項之醫藥組成物之製法，其中包 含將來自植物、微生物或動物之甘油脂質和/或甘油 糖脂質含有物，以酸或鹼處理之工程。 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 >Λ 月 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 6. 如申請專利範圍第4項之醫藥組成物之製法，其中包 含將來自植物、微生物或動物之甘油脂質和/或甘油 糖脂質，經由斥水性層析、逆相層析或順相層析所選 出之方法予以分離之工程。 7. 如申請專利範圍第4〜6項中任一項之醫藥組成物之製 法，其中甘油脂質和/或甘油糖脂質爲來自茶類、蕈 類、藻類或穀類渣滓之甘油脂質和/或甘油糖脂質。 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ297公釐） 482672 A8 B8 C8 D8 六、申請專利範圍 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 8· —"種細胞自滅誘發作用食品或飮料，其爲含有、添力口 和/或稀釋分子構造中不含磷酸酯及膦酸酯之甘油脂 質和/或甘油糖脂質而成。 a如申請專利範圍第8項之食品或飮料，其中甘油脂質 和/或甘油糖脂質爲來自植物、微生物或動物之甘油 脂質和/或甘油糖脂質。 ΙΟ·如申請專利範圍第9項之食品或飮料，其中甘油脂質 和/或甘油糖脂質爲來自茶類、蕈類、藻類或穀類渣 滓之甘油脂質和/或甘油糖脂質。 11· 一種如申請專利範圍第9項食品或飮料之製法，其特 徵爲包含將來自植物、微生物或動物之甘油脂質和/ 或甘油糖脂質，以有機溶劑萃取之工程。 12·如申請專利範圍第11項之食品或飮料之製法，其特徵 爲包含將來自植物、微生物或動物之甘油脂質和/或 甘油糖脂質，以酸或鹼處理之工程。 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 13. —種如申請專利範圍第11項食品或飮料之製法，其特 徵爲包含將來自植物、微生物或動物之甘油脂質和/ 或甘油糖脂質，經由斥水性層析，逆相層析或順相層 析所選出之方法予以分離之工程° 14. 如申請專利範圍第1 1〜1 3中項任一項之食品或飮料 之製法，其中甘油脂質和/或甘油糖脂質爲來自茶類 、蕈類、藻類或榖類渣滓之甘油脂質和/或甘油糖脂 質。 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐）