TW397840B

TW397840B - Crystalline maltotetraosyl glucoside, and its production and use

Info

Publication number: TW397840B
Application number: TW084101884A
Authority: TW
Inventors: Takahiko Mandai; Takashi Shibuya; Toshiyuki Sugimoto; Toshio Miyake
Original assignee: Hayashibara Biochem Lab
Priority date: 1994-03-01
Filing date: 1995-03-01
Publication date: 2000-07-11
Also published as: DE69505437D1; EP0670327B1; US5922691A; KR100469524B1; KR100356840B1; KR100381897B1; KR100350846B1; DE69505437T2; KR950032256A; EP0670327A1

Description

經濟部中央標準局負工消费合作社印製五、發明説明（4 ) 澱粉，液化澱粉，溶解化澱粉，直鏈激粉，支鏈澱粉及糊精接受α -澱粉酶或α _澱粉酶與澱粉脫分支酶之混合物之作用而得。本發明可用之α —澱粉酶爲具有較高麥芽五糖生產力者，例如'TERMAMYL 601/道種由丹麥哥本哈根Novo 1^£^(1丨8 1：生化工業所售之〇!-澱粉海· 本發明可用之澱粉脫分支酶爲可將澱粉性物質之分支結構分離，並藉由與α -澱粉酶之共同作用而提髙澱粉性物質中麥芽五糖之生產力者，例如由日本岡山Hay ash iba-ra生化實驗室公司所售之由產氣氣桿菌所衍生之支鏈澱粉酶及由假單胞菌（Pseudomonas amv loderamosa )所衍生之異澱粉酶可予使用，又因爲異澱粉酶之特定性質，故最好與異澱粉酶共同使用* 藉令澱粉性物質接受α -澱粉海或α -澱粉酶與澱粉脫分支酶之混合物之作用後所得之麥芽五糖溶液通常含有 2 0至4 Ow/w% (除非另有指定，否則下文所用之百分比應意指'佔乾燥固體之w/w%# )之麥芽五糖，如有需要，則可根據慣用之分離及純化法將溶液中之麥芽五糖量提髙，所濃縮之溶液爲理想可用者· 本發明可用之非還原糖一形成性酶爲（例如）本發明者於日本專利申請書第349, 21 6/93中所揭示者，根瘤菌Μ-11 及節桿菌Q36業已分別以FERM ΒΡ-4130及FERM ΒΡ-4316之登記號碼寄存於日本 Patent Microorganism Depository, Nation-al Institute of Bioscience and Human-techn (請先聞讀背面之注$項再填寫本頁) 本紙張尺度逋用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 7 經濟部中央標隼局貝工消費合作社印製 Α7 Β7 五、發明説明（i ) 發明之背醫 1 .發明之範圖本發明係關於新穎之結晶狀糖’以及彼之製備及使用 ’尤其關於結晶狀麥芽四糖基葡萄糖替，以及彼之製備及使用。 2 .先前技藝之說明麥芽五糖爲一種由通式◦一 a _ D -妣喃葡萄糖基一（1— 4) — 0 — a — D —吡喃葡萄糖基—（1 — 4 )—0 — a — D —吡喃葡萄糖基—（1 — 4) — 0 - α — D —吡喃葡萄糖基一（1 — 4) — D-吡喃葡萄糖所代表之五糖’其已知爲甜味劑，且係合併至澱粉糖漿或其粉末中。此糖具有低甜度及適當黏度之特徵，且用於組成物包括飲料’食品及風味產品諸如煙草及香煙中。然而，既然麥芽五糖爲還原糖，故缺點爲其易與飮料及食品中所含的蛋白質及胺基酸共同導致褐化反應因而誘導這些產品之變質及退化。本發明者努力研究以克服這些缺點，結果發現由麥芽五糖中製備非還原性麥芽四糖基葡萄糖苷之方法可藉令葡萄糖聚合程度爲3或更高之還原性部分澱粉水解產物接受可形成以海藻糖結構爲終端單位之非還原糖之酵素（其後於本專利說明書中稱之爲，非還原糖一形成性酶〃）之作用而得，這些乃於日本專利申請書第3 4 9，2 1 6/ 9 3號中揭示，然而，此粉狀形式麥芽四糖基葡萄糖苷之本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再#寫本頁) 訂 4

五、發明説明（ ology,Agency of Industrial Science and Technology, 1-3,Higashi 1-chome, Tsukuba-sh i, Ibarak i-ken * 該根瘤菌M-11與節桿菌Q3 6亦於1994年6月21日寄存於食品工業發展研究所，寄存編號分別爲CCRC 9 1 0002及 CCRC 910001;而酵素製劑可藉將可形成非還原糖之慣用微生物例如微黃短桿菌（ATCC 1 1 822 ) *水生黄桿菌 (IF0 3772)，藤黄微球菌（IF0 3064) *玫瑰色微珠菌 (ATCC 186)，檸檬色曲桿菌（IF0 15231)，恥垢分枝桿菌（AT CC 19420)及 T errahanter tumescens (I FO 129 60)等微生物於營養培養基中培養而得，如有需要，可於使用前根據慣用方法任將酵索製劑純化· 經濟部中央橾準局貝工消费合作社印*. 所得之非還原糖酵素具有可由一或數個具3或更高葡萄糖聚合程度之還原性部分澉粉水解產物中形成以海藻糖結構爲終端單位之非還原糖之特徴•所選擇之令非還原糖一形成性酶於本發明中作用所用之酵素反應時間可在使麥芽五糖溶液接受此酵素之作用後轉換成麥芽四糖基葡萄糖苷之時間範圍內，且此酵素可任於使用α —澱粉酶或α — 澱粉酶與澱粉脫分支酶之混合物之作用之後使用，或與這些酵索一起使用。只要可令酵素反應持績進行之任何酵素反應狀況均可使用，通常本發明所用之基質濃度在約1至7 0%之範圍內，所用反應溫度在約1 0至8 0 °C之範圍內，所用反應 pH在約4至10之範圍內，所用反應時間在約1至 1 0 0小時之範圍內。如有需要，當反應中之酵素藉惯用本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4规格（210X297公釐） 8 B7五、發明説明（2 ) 非還原糖爲無定形且爲物理不安定性，基於安定性之原因，故期望確立結晶狀之麥芽四糖基葡萄糖苷。發明之目的本發明係確立具有無收濕性，無還原力，優良流動性較低醱酵力及優良溶解度之結晶狀麥芽四糖基葡萄糖苷並提供彼之製備及使用》發明之略要說明請先閲背面之注項養 *表經濟部中央標準局員工消费合作社印策欲達雖然可藉糖溶液，將麥芽五現，溶液此沈澱物之結晶狀明。此外糖基葡萄糖苷之製本發明將高純再令所糖轉變變得不爲結晶麥芽四，本發糖苷均備及其之目的，度之麥芽得溶液接成麥芽四透明而形狀麥芽四糖基葡萄明者明白存在，故使用而完本發明者五糖調製受非還原糖基葡萄成沈澱物糖基葡萄糖替及其指出，水藉由確立成本發明竭力進行研究成較高度濃縮糖-形成性酶糖苷，，且更糖苷，製備及合及無結晶狀然而本進一步故藉由使用而水結晶麥芽四。結果，之麥芽五之作用以發明者發明白指出確立新穎完成本發狀麥芽四糖基葡萄附圖之簡要說明圖1說明溫度對來自根瘤菌Μ—11之非還原酶一形成性酶之活性之影響》圖2說明pH對來自根瘤菌M—l 1之非還原糖—形本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐）訂 ____B7 五、發明説明（3 ) 成性酶之活性之影響。圖3說明來自根瘤菌Μ-11之非還原糖一形成性酶之熱安定性。圖4說明來自根瘤菌Μ-11之非還原糖一形成性酶之P Η安定性》圖5說明水合結晶狀麥芽四糖基葡萄糖苷之紅外線吸收光譜。圖6說明無水結晶狀麥芽四糖基葡萄糖苷之紅外線吸收光譜。圖7說明麥芽四糖基葡萄糖替之碳核共振分析結果。圖8說明水合結晶狀麥芽四糖基葡萄糖苷之粉末X光繞射圖。圖9說明無水結晶狀麥芽四糖基葡萄糖苷之粉末父光繞射圖。發明之詳細說明經濟部中失標準局員工消費合作社印裝本發明可行之結晶狀麥芽四糖基葡萄糖葑之製法爲彼些可形成本發明結晶之方法，通常係藉將麥芽四糖基葡萄糖Μ之水性溶液結晶以復收所得結晶，而又以將麥芽四糖基葡萄糖苷溶液過飽和再予結晶之方法爲本發明之理想可行法。欲製備麥芽四糖基葡萄糖葑，可於本發明中使用例如令麥芽五糖溶液作用於非還原糖一形成性酶上之方法。麥芽五糖溶液方面，可使用高純度之麥芽五糖溶液，此麥芽五糖溶液通常係藉令澱粉性物質諸如澱粉產品，凝膠化本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α视#( 210X297公釐) ~

經濟部中央標準局負工消费合作社印製五、發明説明（4 ) 澱粉，液化澱粉，溶解化澱粉，直鏈激粉，支鏈澱粉及糊精接受α -澱粉酶或α _澱粉酶與澱粉脫分支酶之混合物之作用而得。本發明可用之α —澱粉酶爲具有較高麥芽五糖生產力者，例如'TERMAMYL 601/道種由丹麥哥本哈根Novo 1^£^(1丨8 1：生化工業所售之〇!-澱粉海· 本發明可用之澱粉脫分支酶爲可將澱粉性物質之分支結構分離，並藉由與α -澱粉酶之共同作用而提髙澱粉性物質中麥芽五糖之生產力者，例如由日本岡山Hay ash iba-ra生化實驗室公司所售之由產氣氣桿菌所衍生之支鏈澱粉酶及由假單胞菌（Pseudomonas amv loderamosa )所衍生之異澱粉酶可予使用，又因爲異澱粉酶之特定性質，故最好與異澱粉酶共同使用* 藉令澱粉性物質接受α -澱粉海或α -澱粉酶與澱粉脫分支酶之混合物之作用後所得之麥芽五糖溶液通常含有 2 0至4 Ow/w% (除非另有指定，否則下文所用之百分比應意指'佔乾燥固體之w/w%# )之麥芽五糖，如有需要，則可根據慣用之分離及純化法將溶液中之麥芽五糖量提髙，所濃縮之溶液爲理想可用者· 本發明可用之非還原糖一形成性酶爲（例如）本發明者於日本專利申請書第349, 21 6/93中所揭示者，根瘤菌Μ-11 及節桿菌Q36業已分別以FERM ΒΡ-4130及FERM ΒΡ-4316之登記號碼寄存於日本 Patent Microorganism Depository, Nation-al Institute of Bioscience and Human-techn (請先聞讀背面之注$項再填寫本頁) 本紙張尺度逋用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 7

五、發明説明（ ology,Agency of Industrial Science and Technology, 1-3,Higashi 1-chome, Tsukuba-sh i, Ibarak i-ken * 該根瘤菌M-11與節桿菌Q3 6亦於1994年6月21日寄存於食品工業發展研究所，寄存編號分別爲CCRC 9 1 0002及 CCRC 910001;而酵素製劑可藉將可形成非還原糖之慣用微生物例如微黃短桿菌（ATCC 1 1 822 ) *水生黄桿菌 (IF0 3772)，藤黄微球菌（IF0 3064) *玫瑰色微珠菌 (ATCC 186)，檸檬色曲桿菌（IF0 15231)，恥垢分枝桿菌（AT CC 19420)及 T errahanter tumescens (I FO 129 60)等微生物於營養培養基中培養而得，如有需要，可於使用前根據慣用方法任將酵索製劑純化· 經濟部中央橾準局貝工消费合作社印*. 所得之非還原糖酵素具有可由一或數個具3或更高葡萄糖聚合程度之還原性部分澉粉水解產物中形成以海藻糖結構爲終端單位之非還原糖之特徴•所選擇之令非還原糖一形成性酶於本發明中作用所用之酵素反應時間可在使麥芽五糖溶液接受此酵素之作用後轉換成麥芽四糖基葡萄糖苷之時間範圍內，且此酵素可任於使用α —澱粉酶或α — 澱粉酶與澱粉脫分支酶之混合物之作用之後使用，或與這些酵索一起使用。只要可令酵素反應持績進行之任何酵素反應狀況均可使用，通常本發明所用之基質濃度在約1至7 0%之範圍內，所用反應溫度在約1 0至8 0 °C之範圍內，所用反應 pH在約4至10之範圍內，所用反應時間在約1至 1 0 0小時之範圍內。如有需要，當反應中之酵素藉惯用本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4规格（210X297公釐） 8 Α7 Β7 經濟部中央標準局貝工消費合作社印裝五、發明説明（6 ) 方法包括載體結合法，交聯法及截留法固定時，則可任以連續或分批方式使用。除了上述之麥芽四糖基葡萄糖苷製法外，使用糖轉移酶之方法亦爲本發明中理想可行之方法，例如，麥芽四糖基葡萄糖苷溶液可藉令含有海藻糖與澱粉性物質之混合物之水性溶液或令含有以海藻糖結構爲終端單位之非還原糖之水性溶液接受環麥芽糊精葡聚糖轉移酶之作用，或者如有需要，再於環麥芽糊精葡聚糖轉移酶之反應後更進一步令α -澱粉酶或α —澱粉酶與澱粉脫分支酶之混合物作用於其上而得，此爲本發明之理想可行法以增加麥芽四糖基葡萄糖苷於此溶液中之量。藉上述酵素反應所得之溶液通常含有約1至9 0%之麥芽四糖基葡萄糖Μ。欲由此溶液中製得結晶狀麥芽四糖基葡萄糖苷，通常將其濃縮以使麥芽四糖基葡萄糖苷結晶出，繼而將結晶復收》通常，共存之糖類係根據慣用之方法由粗製溶液中移除，所得溶液則含有高純度之麥芽四糖基葡萄糖Μ，再將此溶液濃縮，繼而將麥芽四糖基葡萄糖苷結晶出，再將結晶復收。有關上述分離及純化作用方面，通常可任使用（例如 )酵母菌醱酵法，膜濾法，分步沈積法，鹼處理法及/或柱色層分離法，尤其，日本專利公開公報第2 3，7 9 9 /83號及第148，794/84號中所揭示之使用強酸性陽離子交換劑進行之柱色層分離法乃適用以供移除共存之糖類並收集富含麥芽四糖基葡萄糖苷之溶離份。此色 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝. 訂本紙張尺度適用中國國家揉準（CNS) Α4規格（210Χ297公釐）經濟部中央標隼局員工消費合作社印製 A7 B7五、發明説明（7 ) 層分離法中，可任使用慣用之固定床法，流動床法及模擬流動床法。在供由富含麥芽四糖基葡萄糖苷之上述溶解份中將麥芽四糖基葡萄糖苷結晶方面，乃依結晶形式之種類而選擇供此結晶所用之適當狀況。本發明可行之結晶狀況爲其中過飽和之麥芽四糖基葡萄糖苷溶液可使麥芽四糖基葡萄糖奋結晶者* 尤其，於供上述結晶作用之狀況下，乃將不小於約 1 0%之麥芽四糖基葡萄糖Μ溶液濃縮以得約5至9 5% 之濃度，所得溶液之溫度及落在使溶液不冷凍且具有超過結晶狀麥芽四糖基葡萄糖苷熔點且不使麥芽四糖基葡萄糖苷導致令人不滿之褐化反應及分解作用之溫度範圍內》例如，如爲水合結晶狀麥芽四糖基葡萄糖苷，則具有不小於約5 %水量之麥芽四糖基葡萄糖苷溶液之結晶作用可於約 5至1 0 0°C下進行，如爲無水結晶狀麥芽四糖基葡萄糖苷，則具有不大於約1 〇 %水量之麥芽四糖基葡萄糖苷溶液之結晶作用可於約9 0至1 5 0°C下進行。此外，無水結晶狀麥芽四糖基葡萄糖替可藉將水合結晶狀麥芽四糖基葡萄糖Μ於減壓下乾燥或藉加熱乾燥而輕易製得》欲安排結晶過程中麥芽四糖基葡萄糖苷之過飽和度及黏度，可任使用乙醇，甲醇及/或丙酮。本發明中供將麥芽四糖基葡萄糖苷結晶之方法通常係藉將過飽和之麥芽四糖基葡萄糖苷溶液調整至較高溫，再置於結晶器中，如有需要則藉與 0.1至5%量之晶種摻合置入，而後將所得混合物逐漸本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X297公釐） I- 11 I m I- I- I ·1 1— 1 I I— ^^1 I I— -- ^11 (請先閲讀背面之注意事項再%寫本頁) -10 - A 7 B7 經濟部中央標準局員工消費合作社印簟五、發明説明（8 ) 冷卻，同時攪拌以促進結晶以形成糖膏。此外，既然結晶狀麥芽四糖基葡萄糖替具有可輕易誘生結晶作用之特徵，故將麥芽四糖基葡萄糖苷連續濃縮以使麥芽四糖基葡萄糖苷連續結晶之方法爲本發明可行之理想方法。欲由此結晶化糖膏中製得結晶狀麥芽四糖基葡萄糖替，可使用例如分離法，成塊粉碎法，流動化粒化法及噴霧乾燥法等慣用方法。例如，分離法通常係藉將糖育送入籃型離心器中，再將結晶之麥芽四糖基葡萄糖Μ由糖寡蜜中分離出，如有需要，此結晶可藉將小量冷卻水或醇噴霧於其上而輕易清洗，此分離法乃適於製造高純度之結晶狀麥芽四糖基葡萄糖替。其它三種方法乃適於製造含結晶狀麥芽四糖基葡萄糖苷之粉末而不必分離糖蜜，此乃因彼等具有增加結晶狀麥芽四糖基葡萄糖苷產率之特性，然而由此三種方法所得之結晶之純度則未改善。因此，本發明中，除了麥芽四糖基葡萄糖苷結晶外，寡糖包括麥芽四糖基及麥芽五糖通常乃存在於物料中或於製造過程中形成。噴霧乾燥法方面，通常將結晶度約3 0至6 0%之麥芽四糖基葡萄糖苷糖膏由高壓泵經由其噴嘴噴霧，於高溫，例如於約6 0至1 0 0°C下加熱乾燥以避免麥芽四糖基葡萄糖苷之結晶熔化，再將熱氣吹入予以陳化，以形成結晶狀麥芽四糖基葡萄糖苷粉末。成塊粉碎法方面，通常令結晶度約2 0至8 0%之麥芽四糖基葡萄糖苷糖膏靜置約0.5至3天以結晶並形成 (請先閲讀背面之注意事項再4'寫本頁) Ί I! JH · 裝- 訂本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4规格（210X297公釐> -11- Α7 Β7 經濟部中央標準局員工消费合作社印裝五、發明説明（9 ) 塊狀物，再將所得塊狀物粉碎或刮碎，繼而乾燥以形成結晶狀麥芽四糖基葡萄糖苷粉末。所得之結晶狀麥芽四糖基葡萄糖苷實質上乃無收濕性且爲自由流動性，然此無收濕性乃依純度而有所變化，且其可輕易處理而不會有導致黏滯及固化之虞，這些性質降低了供控制結晶狀麥芽四糖基葡萄糖苷之包裝，運送及貯存所需之物料及人事成本》本發明之結晶狀麥芽四糖基葡萄糖苷爲具較高耐熱性及安定性之實質無或具較低收濕性之粉末，其可用以作爲粉化甜味劑混合物，巧克力，口香糖’即食汁，即食湯，可藉慣用方式獲得之顆粒及粉末，例如飮料，化妝品，藥劑，成形體及其它組成物，以及各種不同之應用諸如化學工業中可用之試劑及粗製物質中之載色劑，賦形劑及粉未基質。而且，結晶狀麥芽四糖基葡萄糖苷之物化性質諸如熔點及比旋光度乃依純度而變。熔點乃依麥芽四糖基葡萄糖苷純度之降低而降低且範圍亦廣泛化’故結晶狀麥芽四糖基葡萄糖Μ可依所需藉任選擇供其目的所欲之純度予以使用。本發明之結晶狀麥芽四糖基葡萄糖苷具有良好之甜度。當經口投服時，其可消化並用以作爲能源。而且，因其實質上不被齲齒誘導性微生物所醱酵，故其可用以作爲停齲甜味劑，又因結晶狀麥芽四糖基葡萄糖苜之良好甜度及有用以作爲載色劑，故其可藉與結合劑諸如支鏈澱粉及/ 或羥乙基澱粉共同使用以作爲藥片之糖衣劑。此外，結晶狀麥芽四糖基葡萄糖苷具有其它性質諸如身體傳送力，濕本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ297公釐） ------------ 裝------訂 (請先閲讀背面之注意事項再4寫本頁) A7 B7 五、發明説明（10 氣保留力，預防其它糖類結晶之能力，較低醱酵力及較低溶解度。結晶狀麥芽四糖基葡菊糖葡悔糖甘之迫些性質使其有利於用在各種不同之組成物包含食品，飾臥苜茛οα欧料，飼料，化妝品，藥劑及成形體中。本發明之結晶狀麥芽四糖基葡萄糖奋可完整地用以作爲供甜味劑用之調味劑，如有需要，此結晶狀麥芽四糖基葡萄糖Μ可與適量之一或多種其它甜味劑例如粉狀澱粉糖漿’葡萄糖’麥芽糖，蔗糖’異構化糖，蜜，槭糖，山梨糖醇，一氫查耳酮，斯替維轻，α —葡萄糖基斯替維苷， rebaudioside’甘草甜素’ L —天冬胺醯—l -苯基丙胺酸甲酯，糖精，甘胺酸及丙胺酸’如有需要，亦與填料諸如糊精’澱粉及乳糖等共同使用。此外，本發明亦可將具高溶解度之結晶狀麥芽四糖基葡萄糖替與寡糖諸如麥芽四糖及麥芽五糖等共同使用。經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閲讀背面之注意事項再'4:寫本頁) 此外，結晶狀麥芽四糖基葡萄糖苷可完整地作爲填料，載色劑或粉末基質’或者如有需要，可與其它填料，載色劑及/或結合劑摻合後使用。其亦可任定形成顆粒，球 ’短桿’盤，立方體或片劑形式。而且’本發明之結晶狀麥芽四糖基葡萄糖苷一般乃有利於用以將食品及飲料甜化，且因爲其口味可充分地與具有其它口味形式諸如酸味，鹹味，澀味，好吃及苦味之物質調和’故亦可改良其口味及品質，例如，本發明之結晶狀麥芽四糖基葡萄糖替可用於各種不同之調味劑諸如醬油本紙張尺度適用中國國家榡準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -13 - 經濟部十央梯率局員工消費合作社印製 A7 B7五、發明説明（11 ) ，味僧，醋，酱，美乃滋及’mirin(重度甜化之酒中。此外，本發明之結晶狀麥芽四糖基葡萄糖苷亦有利於用以將各種不同之食品包括日式糕餅，西式糕餅，冷凍點心，糖漿，糊’加工蔬菜，醃製產品，肉製品，魚肉製品，酒精飲料予以甜化以改良其口味及品質。既然本發明之結晶狀麥芽四糖基葡萄糖苷乃具較低收濕性且可自由流動’故如爲口香糖，^su-konbu 〃，糖果及，gyuhi(澱粉糊）# ，則結晶狀麥芽四糖基葡萄糖苷 (藉塗覆於這些產品之表面上）可有利於作爲塗覆物料以避免包裝紙與產品之表面黏合或改善包裝紙由產品表面滑動之現象。此外，既然本發明之結晶狀麥芽四糖基葡萄糖替爲可食性’較低可溶性及耐熱性，故結晶狀麥芽四糖基葡萄糖Μ可利於作爲供米-糕包衣，麵包及油炸品包衣用之預混物，及作爲麵包及蛋糕所用上部及糖衣物料之替代品，且可更進一步用之取代一部分或全部之粉狀物料諸如小麥粉’玉米粗碾粉及澱粉以得供布丁，熱蛋糕，糕餅及麵包用之預混物。而且’本發明之結晶狀麥芽四糖基葡萄糖苷可用於供家畜及家禽用之飼料及寵物食品中，且有利於充作供組成物包括化妝品及藥劑諸如香煙，牙育，錠劑及內用藥使用之甜味劑’以及作爲口味改良劑，遮味劑及品質改良劑。本發明組成物爲完整之結晶狀麥芽四糖基葡萄糖苷，或者通常係藉將結晶狀麥芽四糖基葡萄糖苷與一或多種由營養物質諸如蛋白質，胺基酸，脂肪酸，維生素及礦物質本紙張尺度適用中國國家棣準（CNS ) Μ規格（21〇><297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印氧 A7 B7 五、發明説明（12) 中所擇定之成員，或與製藥學物質諸如抗菌物質，酵素，荷爾蒙及細胞活素等（彼此組成物之用途而定）共同混合而製得。如有需要，則可任將其它適當物質，例如一或多種由遮味劑，著色劑，增香劑，安定劑，填料及載色劑中所擇定之成員置入本發明之此組成物中，且可依組成物之用途而任製成適當之形狀。將結晶狀麥芽四糖基葡萄糖替置入本發明組成物中之方法爲於完成其製備過程之前可包容結晶狀麥芽四糖基葡萄糖苷者。例如，可任使用慣用之方法諸如混合法，捏合法，溶解法，熔化法，浸泡法，滲透法，擴展法，塗敷法，塗覆法，噴霧法，注射法，結晶法及固化法等。置入這些組成物中之結晶狀麥芽四糖基葡萄糖Μ之量乃依此組成物之種類而定，通常爲0·1%或更多，最好爲0 . 2%或更多。所得組成物可廣泛地用於食品，飮料，化妝品及藥劑（經口或非經腸部使用），以及用於家庭，農業，森林，漁業，試劑及化學工業產品中。下列實驗將更詳盡地解釋本發明》實驗Α係先說明來自根瘤菌Μ-11之非還原糖-形成性酶之製備，純化及特徵化，而後說明海藻糖及具有以海藻糖結構作爲終端單位之非還原糖由還原性部分澱粉水解產物中藉使用此酵素製備之方法。實驗Β係說明本發明結晶狀麥芽四糖基葡萄糖苷之製備及物化性質。窗驗Α - 1 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐〉 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝·

、1T -15 - A7 B7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製五、發明説明（13 ) 瘤茴Μ - 1 1 Φ製浩非還原酶一形成件酯之方法將含有2 . Ow/v%麥芽糖’ 0 . 5w/v%陳’ 0 . lw/v%酵母萃取物，0 . lw/v%磷酸氫二鈉 ’ 〇 · lw/v%磷酸二氫鉀及水之液態培養基調整至 pH7 . 0，再將液態培養基分成100毫升之整份，而後分別置於5 0 0毫升燒瓶中，繼而於壓熱器中，於 1 2 〇°c下滅菌2 0分鐘，再予冷卻，接種上根瘤菌 M〜ll (FERM BP — 4130)，繼而邊於 27 °(：下，邊於1 3〇 r pm之攪拌狀況下保溫24小時，故得晶種培養物。將2 0升與晶種培養物所用者相同之培養基安置於 3 〇升缸式醱酵器中，滅菌，冷卻至3 0°C，接種上1 v/v%晶種培養物，及於30°C及pH6 . 0 — 8 · 0 下，於充氣-攪拌狀況下保溫2 4小時。所得培養物之酵素活性約1.5單位/毫升。再將一部分培養物離心以分離出細胞及上層液，繼而令細胞懸浮於5 0毫莫耳濃度磷酸鹽緩衝液（PH7 . 0 )中以得起始量，而後分析所得細胞懸浮液及上層液之酵素活性。結果，細胞懸浮液具有約0 . 6單位/毫升之酵素活性，而上層液具有約0 . 9 單位/毫升之酵素活性。非還原糖一形成性酶之分析如下：將1毫升酵素溶液加至4毫升作爲基質之1. 2 5w/v%麥芽五糖（5 0 毫莫耳濃度磷酸鹽緩衝液，PH7 . 0)中，再將混合物於4 0°C下保溫6 0分鐘，於1 0 0°C下加熱1 0分鐘以 (請先閲讀背面之注意事項再^；寫本頁) -I —^1 4H · 袈_ 訂本紙張尺度適用中國國家榡準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -16 - 經濟部中央標準局員工消费合作社印製 A7 __B7_五、發明説明（14 ) 使酵素鈍化，而後於去離子水中精確稀釋1 0倍，再藉 Somogyi-Nelson法測定還原力。對照組方面，乃將相同酵素溶液之新鮮製劑藉於1 0 0°C下加熱1 0分鐘予以鈍化，而後藉類同於上述之法測試。一單位之酵素乃定義爲於上述狀況下每分鐘使麥芽五糖還原力減少1微莫耳所需之酵素量。實驗2 酵素之純化作用將約1 8升實驗A - 1所得培養物以’ MINI-LAB'，一種超高壓細胞均化器（日本大阪Dainippon製藥有限公司之產品），處理以將細胞壓碎。再將所得物以 10，OOOrpm離心30分鐘以得約16升上層液，。令硫酸銨溶於上層液中以得0.2之飽和度，再令所得溶液於4 °C下靜置1小時，而後以10，OOOrpm之速離心3 0分鐘以得上層液。此外，令硫酸銨溶於此上層液中以得0 . 6之飽和度，再令所得溶液於4 °C下靜置2 4小時，而後以 1 0，0 0 0 r pm之速離心3 0分鐘以收集所得沈積物。令沈積物溶於1 0毫莫耳濃度磷酸鹽緩衝液（Ρ Η 7 . 0 )中，對相同緩衝液之新鮮製劑進行滲析2 4小時，再以10，OOOrpm之速離心30分鐘以移去不可溶之物質。將滲析溶液（3 6 0毫升）分成兩部分，而後分別應用在使用3 0 0毫升、1^4£1'(^0?£八1^@'(曰本請先閲讀背面之注項再r 填<彥裝 1 訂本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4规格（210X297公釐） -17 - 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7_ 五、發明説明（15 ) 東京Tosoh公司之膠）進行之離子交換柱色層分離上。將已吸附於DEAE T0Y0PEARL®上之目標酵素使用含氯化鈉之相同磷酸鹽緩衝液新鮮製劑由柱中洗提出》再將所得含酵素活性之溶離份對含2莫耳濃度硫酸銨之相同磷酸鹽緩衝液新鮮製劑進行滲析，而後更進一步以 1 0，0 0 0 r pm之速離心3 0分鐘以移去不可溶物質，繼而將所得上層液應用至使用3 0 0毫升^ BUTYL T0Y-0PEARL® 650〃（日本東京Tosoh公司之膠）進行之流水柱色層分離法上。將已吸附於柱上之酵素使用由2莫耳濃度降至0莫耳濃度之線性梯度緩衝液以由柱中洗提出，而後收集含酵素活性之流離份。此外，亦將流離份應用在使用3 0 0毫升^10丫0?£人眈@!^-55'(日本東京1〇3〇}1公司之膠）進行之膠濾色層分離法上，再收集含酵素活性之溶離份。特定純化步驟後所得之酵素活性，比活性及產率乃示於表1中。 .^1. I -I I --- ^^1 - 1 — :· In In - f s I (請先閱讀背面之注意事項再4?寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐）經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（16 ) 表 1 純化步驟酵素活性 (單位）比活性 (單位/毫克蛋白質）產率 (96 ) 培養物 26,800 100 細胞壓碎後之上層液 20,300 0. 10 76 鹽析後之滲析溶液 16, 100 0.32 60 由離子交換柱中所得之洗提液 11,300 5.5 42 由離子流水柱中所得之洗提液 5, 730 98. 0 21 由膠濾法中所得之洗提液 3,890 195.0 15 將表1膠濾步驟中所得作爲洗提液之純化酵素製劑使 (請先閱讀背面之注意事項再氣寫本頁) 袈·

、1T 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X297公釐） A7 B7 五、發明説明（17 ) 用聚丙烯醯胺膠（7.5w/v%)進行電泳以測定其純度，電泳所得之單一蛋白質帶意指此酵素製劑爲電泳均一性且具高度純性。實驗3 酵素之特徵化將一部分實驗A — 2所得之純化酵素製劑於含1 〇 W κ V % SDS —聚丙烯醯胺膠上進行電泳，而後藉與已於相同膠上進行電泳之標準分子標記（日本東京Nippo-n Bio-Rad Laboratories KK之產品）相比較以測定其分子量，結果顯示酵素之分子量約爲7 7，0 0 0_ 87，000道耳吞。將另一部分之純化酵素製劑使用2w/v% ’ ΑΜΡΗ0-LINE®'(由瑞典Uppscla之Pharmacia LKB之聚丙烯醯胺膠）進行等電點電泳，而後藉測量電泳膠之pH以測定其等電點，結果顯示酵素之等電點約爲3 . 6 - 4 . 6。經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 溫度及P Η對酵素活性之影響係根據上述之分析法測試。結果乃分別示於圖1(溫度之影響）及2 (pH之影響）中。吾人發現當於PH7 . 0下保溫60分鐘時，最理想的溫度約爲4 ，而當於4 0°C下保溫6 0分鐘時，則最理想之pH約爲7 . 〇，酵素之熱安定性係藉將之於50毫莫耳濃度磷酸鹽緩衝液（pH7.0)中，於不同溫度下保溫6 0分鐘，繼而將溶液於水浴中冷卻，再分析餘留之酵素活性而測知。而p Η安定性則藉將酵素於本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4规格（210X297公釐）經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 _______B7_ 五、發明説明（18 ) 5 0毫莫耳濃度磷酸鹽緩衝液中，於不同pH下及於2 5 °C下保溫16小時，調整緩衝液至ph7 . 0，再分析餘留活性而測知。結果乃分別示於圖3 (熱安定性）及4 ( pH安定性）中。酵素乃於最高達4〇〇c下及於約6 — 9 之p Η範圍內安定。實驗A — 4 非還原糖之製備將2 0w/v%作爲基質之葡萄糖，麥芽糖，麥芽三糖’麥芽四糖，麥芽五糖，麥芽六糖或麥芽七糖之水性溶液與2單位/克基質固體之實驗A - 2所得純化酵素製劑混合’再於40°C及pH7 · 0下反應48小時，而後將所得溶液去離子，再將反應產物使用"WAKO BEAD® WB-T-33(T (日本大阪Wako純化學工業有限公司之柱）進行高效能液體色層分離。高效能液體色層分離係於室溫下進行，而作爲洗提液之水係以0.5毫升/分之流速施至柱上，同時使用'RI—8012"這種差示折射器（曰本東京Tosoh公司之產品）監視洗提液》結果則示於表2 中。如同表2所證實，由餘留基質與新形成之糖P I ， ph，pm，Piv及pv及無其它糖類所組成之反應產物可實質地檢出。本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） n· ^^1 1 省 —II 4.1 —^1 — 1 i 1 -........ —^1 ^^1 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) B7 五、發明説明（19 ) 表 2 基質反應產物於Η P L C之組成物洗提時間（分鐘） (% ) 葡萄糖葡萄糖 33.4 100. 0 麥芽糖麥芽糖 28.5 100.0 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部 t k 標準局員工消費合作社印製麥芽三糖 Ρ I 23. 3 35. 0 麥芽三糖 25.9 65.0 麥芽.四糖 Ρ Π 21.6 85.6 麥芽四糖 24.1 14. 4 麥芽五糖 pm 19.7 92. 7 麥芽五糖 22.6 7.3 麥芽六糖 P IV 18.7 93. 5 麥芽六糖 21.4 6. 5 麥芽七糖 P V 17.8 93.4 麥芽七糖 21.0 6. 6 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） -22 - 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 __B7 五、發明説明（20 ) 注意事項：表中之P I ，ΡΠ，Pm，P!V及PV乃意指由個別基質’亦即麥芽三糖，麥芽四糖，麥芽五糖’麥芽六糖及麥芽七糖中新形成之產物》雖然葡萄糖聚合程度爲3之P I之產率較低，然而葡萄糖聚合程度爲4或更高之ΡΠ，Pm，PIV及PV之產率則高’亦即8 5%或更高。表2亦顯示無糖類可由葡萄胃及麥芽糖中形成。欲將這些新形成之糖類純化，乃將反應產物脫色，去離子，濃縮並令之使用鹼金屬形式之強酸性陽離子交換劑 ("X T - 1 〇 1 6 " ’Na+形式，4%交聯度，曰本東京之東京有機化學工業有限公司之產品）進行柱分餾作用。尤其，將陽離子交換劑裝填於3套管式不銹鋼柱（內徑2.0公分，長度各1公分，階式串連）內，而後將各反應產物以佔陽離子交換劑體積之5 v/v%之量裝載入，繼而將5 5°C之水以Ο · 1 3之空間速度施入以供分餾，再收集含9 7%或更多新形成糖之餾份。而後將所得餾份分別低壓凍乾成高純度之糖製劑》相對於特定物料基質之產率在P I約爲9%，在ΡΠ約爲6 5%，在p羾約爲 82%，PIV約爲80%，PV約爲77%，而最終純度在？1爲97.5%，卩11爲98.6%，？]11爲 99 . 5%，PIV 爲 98 . 4% 且 PV 爲 98 . 4%。這些高純度糖製劑係使用Somogyi-Nelson法測試還原力，其還原力係以DE (右旋糖當量）表示。結果則示於本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） nn ^n> J^i m^i k n^i ml 、一eJ (請先閱讀背面之注意事項再4;寫本頁) -23 - 五、發明説明（21 ) 表3中。表 3 糖製劑純度（％ ) D E P I 9 7 . 5 0 .8 3 Ρ Π 9 8 . 6 0 • 3 5 p m 9 9 . 5 0 .1 0 P IV 9 8 .4 0 .2 7 P V 9 8 . 4 0 .2 3 經濟部中央標準局員工消費合作社印製如同表3所證實，所有製劑均僅顯現輕微之還原力。吾人認爲此還原力係由於仍留在製劑中之基質內之痕量還原麥芽寡糖所致，而所有新形成之糖實質上乃無還原力。實驗A — 5 使用葡萄糖澱粉醅推行之酵素降解作用令五十毫克實驗A-4所得之非還原糖製劑PI ，本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -24 -

A B 五、發明説明（22 ) ΡΠ，ΡΙΠ，PIV或PV溶於1毫升5 0毫莫耳濃度乙酸鹽緩衝液（PH4 · 5)中，再將所得溶液與1單位葡萄糖澱粉酶（日本東京Seikagaku公司之產品）混合，於 4 0°C下保溫6小時以供酵素降解，而後令降解產物進行高效能液體色層分離分析。結果，所有水解產物中僅檢出葡萄糖及海藻糖。葡萄糖及海藻糖之量及莫耳比乃示於表 4中。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製表 4 糖製劑葡萄糖 (% ) 海藻糖 (% ) 莫耳比 (葡萄糖/海藻糖） P I 3 6.2 6 3 · 8 1 .0 7 Ρ Π 5 2.0 4 8 . 0 2.0 6 pm 6 1.4 3 8 . 6 3 . 0 2 P IV 6 8.3 3 1 · 7 4 · 0 9 P Y 7 2.9 2 7 · 1 5 · 1 1 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Μ規格（210X297公釐） -25 - ______B7______ 五、發明説明（23 ) 如同表4之結果所證實，P I乃被葡萄糖澱粉酶降解成1個葡萄糖分子及1個海藻糖分子；ΡΠ被降解成2個葡萄糖分子及1個海藻糖分子；pm降解成3個葡萄糖分子及1個海藻糖分子；PIV降解成4個葡萄糖分子及1個海藻糖分子；且PV降解成5個葡萄糖分子及1個海藻糖分子。基於葡萄糖澱粉酶之反應特徵，故這些非還原酶製劑乃具有使一或更多個葡萄糖分子經由α — 1 ，4或a — 1 ，6鍵而結合至海藻糖分子上之結構。尤其，P I爲葡萄糖聚合程度爲3之非還原糖，其係1個葡萄糖分子結合至 1個海藻糖分子上；ΡΠ，葡萄糖聚合程度爲4之非還原糖，其係2個葡萄糖分子結合至1個海藻糖分子上；pm ，葡萄糖聚合程度爲5之非還原酶，其係3個葡萄糖分子結合至1個海藻糖分子上；PIV，葡萄糖聚合程度爲6之非還原糖，其係4個葡萄糖分子結合至1個海藻糖分子上 ;fiPV，葡萄糖聚合程度爲7之非還原酶，其係5個葡萄糖分子結合至1個海藻糖分子上。將P I ，ΡΠ，ΡΠΙ ，PW及PV暴露至yS —澱粉酶上後，顯示P I及ΡΠ並未水解，但ΡΠΙ水解成1個麥芽糖分子及一個Ρ I分子； PIV水解成1個麥芽糖分子及1個ΡΠ分子；PV則水解成2個麥芽糖分子及1個ΡI分子。由上示結果可知藉本發明非還原糖-形成性酶所進行之反應爲不伴隨基質降解或聚合作用之分子內轉換反應，換言之，其並不改變彼等之葡萄糖聚合程度，故藉酵素所本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ297公釐） -26 - A7 B7 五、發明説明（24 >

製得之P 藻糖以G ，Pd，pm，Pw及Ρν.α 一葡萄糖基海 — Τ'代表’其中g及τ分別代表葡萄糖殘基及傅澳糖’且η爲1或更大之整數），亦即分別爲 α葡萄糖基海藻糖（或α -麥芽糖基葡萄糖替），α — 麥牙糖基海藻糖（或α -麥芽三糖基葡萄糖@)，α —麥牙-糖基海藻糖（或α -麥芽四糖基葡萄糖g)，α_麥牙四糖基海藻_ (或α-麥芽五糖基葡萄糖苷）及α-麥牙五糖基海藻糖（或α_麥芽六糖基葡萄糖苷）。經濟部中央標準局員工消费合作社印裂藉加熱法將4 DEX #4> ，日本京 )溶於6 0重量份後調整至ρ Η 6 . 產物之實驗Α~2 再令之反應9 6小之非還原糖，繼而化。而後將反應混部分澱粉水解產物生化有限公司所售應4 0小時，再加性炭脫色，以離子 6 0 %溶液。所得蓋糖作爲終端單位之非還原糖之鄹備 0重量份部分澱粉水解產物（’ΡΙΝΕ-都Matsutani化學工業有限公司之產品水中，再將所得溶液加熱至4 5 °C，而 5，與1單位/克還原性部分澱粉水解方法所製之非還原糖一形成性酶混合，時以形成具有以海藻糖結構爲終端單位於1 0 0°C下加熱1 0分鐘以使酵素鈍合物稀釋達約2 0%，與1 0單位/克之UC0ZYME"(由日本京都Nagase 之葡萄糖澱粉酶或樣品）混合，令之反熱以使酵素鈍化。繼而將所得產物以活交換劑去離子，再以一般方式濃縮成約糖溶液乃含有29.5%海藻糖。而後本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -97 - -----—— in* 裝—-----訂 1 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 27 A7 B7 經濟部中央梯準局員工消費合作社印製五、發明説明（25 ) 將此濃縮物於6 0 °C及空間速度〇 . 4下裝載至已預裝填有強酸性陽離子交換劑（tCG6000〃，Na+形式，日本東京之日本有機有限公司之產品）之不銹鋼柱上。溶離份乃含有約9 0%之海藻糖。將溶離份收集，再將溶液濃縮成約7 5%，送入結晶器中，與作爲晶種之約2% 結晶狀海藻糖水合物混合，再逐漸冷卻以得結晶度約4 5 %之糖膏。而後將所得糖育由裝配在乾燥塔上部之噴嘴中以1 5 0公斤/平方公分之壓力噴霧。同時，將8 5 °C之空氣由乾燥塔上部朝其底部送入，再將所得粉末（其已累積在備於乾燥塔底部之輸送器之金屬網上）漸次由乾燥塔中輸送出，同時將4 5 °C之空氣送至金屬網之下。其後，將結晶狀粉末送至陳化塔中，再於熱空氣之蒸汽中陳化 1 0小時以完成其結晶作用及脫水作用，即得結晶狀海藻糖水合物粉末。實驗B —] 結晶狀麥芽四糖某葡萄糖符之製備藉加熱法令五重量份9 8%麥芽五糖（日本岡山Hay-ash i bar a生化實驗室公司之產品）溶於 1 0 0 重量份水中，再將所得溶液加熱至4 0°C，而後調整至pH7 . 0，與實例A — 2方法所製之2單位/克麥芽五糖量之非還原酶形成性酶混合，繼而令之反應4 8小時，再於1 0 0°C 下加熱2 0分鐘以使酵素鈍化。而後令溶液於4 °C冷卻室中靜置過夜以形成沈澱物。繼而將所沈澱之懸浮液藉加入 (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) 袈. 、«! 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS M4規格（21 〇 X 297公釐） A7 B7 五、發明説明（26 ) 氫氧化鈉以調整至〇 . 1當量濃度，再於10 〇°c下加熱 2小時以使還原糖分解。而後將所得溶液以活性炭脫色，再以離子交換劑（H+或〇H_形式）純化以得9 7 · 5% 麥芽四糖基葡萄糖苷之溶離份。繼而收集溶離份，再將溶液濃縮以得5 0%之濃度’將之置於玻璃燒杯中，令之於 2 5 °C下靜置1小時以於燒杯內壁形成結晶。將所得結晶藉離心法收集，再藉將小量水噴霧而予以清洗以得 99.5%水合結晶狀麥芽四糖基葡萄糖替產物。將產物於減壓下於1 0 0°C乾燥過夜，即得無水結晶狀產物。將這些結晶狀產物之物化性質加以測定，結果如下： (1)元素分析（酐形式）水合結晶 C = 43 . 13%，H = 6 · 37% 無水結晶 C = 43 . 20%，H=6 . 35% 理論值 C=43.48%，H=6.32% (2 )質譜分析（酐形式）分子量= 8 2 8 (分子式：C3OH5202e) (3 )水量經濟部中央標準局貝工消费合作社印裝 ^ϋ.-- In 4— 1^1 —I ^ ^^1 1^1 n ml *—^1 ,:,. (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 藉卡爾費休氏（Karl Fischer’s)法測量水合結晶 4 . 2% (麥芽四糖基葡萄糖苷對水之莫耳比=1 : 2 ) 無水結晶 0.2% (4 )熔點將1毫克水合或無水麥芽四糖基葡萄糖苷結晶分別置於特定之鋁容器中，再藉差示掃描量熱本纸張尺度適财賴家辦 ( CNS ) A4^ ( 21GX297公釐) _ —29 - A7 ___B7 五、發明説明（27 ) 器D S C - 8 2 3 0 (由日本東京RIGAKU國際公司所售）測量。水合結晶乃於1 7 0至 1 72°C及2 3 0至2 3 3 °C顯現兩個吸熱尖峰’而無水結晶則於2 3 0至2 3 3 t顯現吸熱尖峰。吾人認爲在水合結晶中所觀察到之 2 3 0至2 3 3。(：之吸熱尖峰係因於溫度速率之增加期間將水合結晶轉換成無水結晶所致。因此’水合結晶或無水結晶之熔點分別認爲是 170 至 172。(：或 230 至 233 °C。 (5) 比旋光度（酐形式）水合及無水結晶均具有下列之比旋光度。〔α〕έ0 + 208.8。（c = l.〇, Η 20 ) (6) 紫外線吸收光譜當於其水性溶液中分析時，水合及無水結晶均未顯現特有之吸收光譜。 (7) 紅外線吸收光譜經濟部中央樣準局貝工消費合作社印製 ----^---«----裝------訂 (請先閲讀背面之注意事項再^寫本頁) 將二毫克粉狀水合或無水結晶與2 〇〇毫克乾燥溴化鉀混合，而後製成透明片劑，再分析紅外線吸收光譜。水合及無水結晶之結果乃示於圖5及6中。 (8 )溶解度（酐形式）最多各約1克之水合或無水結晶可溶於1 〇〇毫升2 5 °C水中* 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X29?公釐) " -- ~ 30 - A7 〜----Β7_ 五、發明説明（28) (9 )甜度結晶狀麥芽四糖基葡萄糖苷之飽和溶液乃顯現略有風味之低甜度》 (1 0 )呈色反應水合及無水結晶經過Μ酮-硫酸反應後將轉成綠色，但其對費林氏（Feling’s)反應及碘反應則呈陰性。 (1 1 )結構（酐形式） (a )以1當量濃度硫酸水解後，結晶僅形成D —葡萄糖。 (b )當暴露至葡萄糖澱粉酶時，結晶乃各形成三莫耳葡萄糖及一莫耳海藻糖。 (c )碳核共振分析（13C - NMR)之結果乃示於圖7中。如同Klaus Bock等人於 Advances in Carbohydrate Chemistry and Biochemistry. Vo 1. 經濟部中央梯準局貝工消費合作社印製 42，pp. 193-225 (1984)所述之標準物質，結晶中之所有碳原子均分配在α — D—Π比喃葡萄糖，α，α —海藻糖及麥芽四糖之化學位移上，吾人認爲結晶乃具有〇_ α — D —吡喃葡萄糖基一（1 — 4) — 〇 - α — D — 吡喃葡萄糖基-(1 — 4) - 0- α 一 D -吡喃葡萄糖基一（1 — 4) 一本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4规格（210X297公釐） -31 - 經濟部中央標準局員工消費合作杜印製 A7 __B7五、發明説明（29 ) α — D —社喃.葡萄糖基-〇： - D — [I比喃葡萄糖苷所代表之結構，亦即麥芽四糖基葡萄糖替結構。 (1 2 )粉末X光繞射作用結晶狀麥芽四糖基葡萄糖替係根據F.H. St-odola等人於 JLournal of the American Chemical Society. Vo 1. 78，pp. 2,514- 2, 518 (1956)中所述之法使用C u K a — 光來測定其粉末X光繞射圖。水合結晶或無水結晶之結果乃分別示於圖8或圖9中。如同圖8及9之結果所證實，水合結晶可於粉末X光繞射分析中得到12.6° ， 21.3° ，22.1°及22.8°之主要繞射角（20)，而無水結晶則得 12.7° ，13·70 ，：L8.80 及 23.2°之主要繞射角。以這些結果爲基準，本發明之結晶乃經認定爲尙未知之麥芽四糖基葡萄糖苷結晶。眚驗Β — 2 急件毒件吾人乃對鼷鼠進行口服試驗以測試實驗Β - 1方法所製之水合及無水結晶狀麥芽四糖基葡萄糖苷之急性毒性。結果發現’這些結晶狀麥芽四糖基葡萄糖苷之毒性低，且本紙張尺度適用中國國家標準（CNS )从胁（21QX297公兼j —-32 - (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局貝工消費合作社印製 A7 __B7__五、發明説明（30 ) 即使使用最大之可投服劑量亦無鼷鼠死亡。由結果可知其 L D5。約爲5 0克/公斤或更高》下列實例A及實例B係分別說明結晶狀麥芽四糖基葡萄糖苷之製備及使用法。實例A — 1 邊加熱邊令五十重量份9 8%麥芽五糖（日本岡山 Hay ash i bar a生化實驗室公司所售之產品）溶於2 0 0重量份水中，再將所得溶液加熱至4 0°C，而後調整至p Η 7 . 0，與實驗A— 2方法所製之5單位/克麥芽五糖量之非還原酶-形成性酶混合，令之反應2 4小時，繼而於 1 0 0°C下加熱2 0分鐘以使酵素鈍化。所得溶液乃含有約9 0%之麥芽四糖基葡萄糖苷，其餘則爲麥芽五糖。將溶液藉加入氫氧化鈉以調整至0.1當量濃度，再於 1 0 0 °C下加熱2小時以使還原糖分解。而後將溶液以活性炭脫色及以離子交換劑（H+及OH-形式）脫鹽以得 9 8%麥芽四糖基葡萄糖苷溶離份。將溶離份收集，再將溶液濃縮以得6 0%之濃度，置於結晶器中，再與作爲晶種之2 %結晶狀麥芽四糖基葡萄糖苷混合，而後邊攪拌邊將所得混合物漸次冷卻以供結晶而形成糖膏。再將所得糖膏由糖蜜中分離出以得佔初始物質產率約5 0 %之 99.9%水合結晶狀麥芽四糖基葡萄糖苷。當令所得結晶狀麥芽四糖基葡萄糖苷於房室中靜置時，其顯現無收濕性。請先聞之注項再， % 本頁裝訂本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4规格（210X297公釐） A7 B7 經濟部中央樣準局員工消費合作社印製五、發明説明（ 31 ) 本發明之結晶狀麥芽四糖基葡萄糖甘有利於用以作爲晶種 > 此外亦可作爲試劑 > 亦即供分析血清及化學粗製物料中之澱粉酶所用之基質 » 而且有利於用於各種不同之組成物包括食品 > 飲料 * 化妝品 t 藥劑及成形體 FUZ. 中〇實例 A — 2 將含 0 1 % 碳酸鈣之約 2 0 % 馬鈴薯澱粉調整至 P Η 6 0 而後 Cba 與佔澱粉固體 0 3 % 量之 % TERMAMYL ® 601/ ( 由丹麥哥本哈根之 Novo N or di sk生化工業所售之 a — 澱粉酶 ) 混合於 9 5 — 1 0 0 °C 下液化 > 再加熱使酵素鈍化以得 D E ( 右旋糖當量 ) 1 9 . 5 之液化澱粉溶液〇繼而將所得溶液加熱至 4 0 °c 再調整至 Ρ Η 6 2 而後與 3 單位 / 克澱粉之由實驗 A -2 方法所得之非還原糖 — 形成性酶及與 1 0 0 0 單位之異澱粉酶 ( 由曰本岡山 Hayash i bar a生化實驗室公司所售）共同混合再令之反應 7 2 小時 0 將混合溶液於 9 5 °C 下加熱 1 0 分鐘以使酵素鈍化 0 溶液乃含有約 3 0 % 麥芽四糖基葡萄糖甘繼而以活性炭脫色以離子交換樹脂 ( Η + 及 0 Η — 形式 ) 脫鹽並予濃縮以得 4 0 % 濃度〇而後將此濃縮物於 6 0 °c 及 0 4 之空間速度下裝載至已預先裝填強酸性陽離子交換劑 ( X T — 1 0 1 6 > N a +形式 ) 曰本東京之曰本有機公司之產品 ) 之套管式不銹鋼柱 ( 階式 4 個柱 5 4 公分 X 4 公分 ) 中再以 6 0 °C 水洗提以得富含麥芽四继糖基葡萄糖甘之溶酿離份 0 溶離份乃含本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） A7B7 脫鹽，，繼而四糖基以供結塊狀物切削型率約3 所於用在及成形定劑及五、發明説明（32 ) 有約9 2 %麥芽溶液以活性炭脫並以一般將之置於葡萄糖笹晶而形成

A rrf-| ILK 。令塊狀粉磨機磨 0 %之水得產物及各種不同體中以作載色劑。四糖基葡萄糖苷，而色，以離子交換樹脂方式濃縮以得8 0% 結晶器中，與作爲晶混合，再邊攪拌邊將糖資。而後將所得糖物於約2 5 °C下靜置成粉狀，再予以流化合結晶狀麥芽四糖基顯現無實質收濕性且之組成物包括食品，爲甜味劑，味道改良後收集溶離份，再將 (Η +及Ο Η -形式）濃度，d . s . b . 種之1 %結晶狀麥芽所得混合物漸次冷卻資置於容器中以形成 2天，繼而陳化，藉乾燥及分級，即得產葡萄糖苷粉末。可輕易處理，其有利飲料，化妝品，藥劑劑，品質改良劑，安請先閲讀背之注項 I裝訂經濟部中央樣準局貝工消费合作社印装眚例A — 3 將'PINE-DEX #4〃（日本京都Matsutani化學工廠有限公司所售之部分澱粉水解產物）調整至2 0 %濃度， 45°C及pH5 . 5 ，再與500單位/克部分澱粉水解產物之異激粉酶（由日本岡山Hayashibara生化實驗公司所售）混合，而後令之反應24小時以將澱粉之α_1 ， 6鍵分解，再將反應溶液於1 0 0°C下加熱，令之靜置 10分鐘，繼而冷卻至40°C，再調整至PH6 . 5，將所得溶液與5單位/克固體之實驗A - 2所製非還原糖-形成性酶及佔澱粉固體0 . 3%量之'TERMAMYL® 601/ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -35 - 經濟部中央標準局貝工消費合作社印製 A7 B7___五、發明説明（33 ) (由丹麥哥本哈根Novo Nord i sk生化工業所售之α -澱粉酶）混合，而後令之反應4 8小時，繼而將溶液加熱以使酵素鈍化，再予冷卻。溶液乃含有約3 2%麥芽四糖基葡萄糖苷，繼而純化，濃縮，再依類同於實例A - 1之法使用強酸性陽離子交換樹脂進行色層分離以得富含麥芽四糖基葡萄糖苷之溶離份。溶離份乃含有約8 1 %之麥芽四糖基葡萄糖苷。收集溶離份後，將溶液以活性炭脫色，以離子交換樹脂（Η+及OH-形式）脫鹽，再以一般方式濃縮以得約7 0%濃度，而後將之置於結晶器中，與作爲晶種之2%結晶狀麥芽四糖基葡萄糖替混合，再邊攪拌邊將所得混合物漸次冷卻以供結晶而形成結晶度約7 0 %之糖膏。繼而將糖膏由裝配在乾燥塔上部之噴嘴中以1 5 0公斤 /平方公分之壓力噴霧。同時，將8 5 °C之空氣由乾燥塔上部朝其底部送入，再將所得粉末（其已累積在備於乾燥塔底部之輸送器之金羼網上）漸次由乾燥塔中輸送出，同時將4 5 °C之空氣送至金靥網之下》其後，將結晶狀粉末送至陳化塔中，再於熱空氣之蒸汽中陳化2 4小時以完成其結晶作用及脫水作用，即得佔初始物料約2 5%產率之含結晶狀麥芽四糖基葡萄糖苷之粉末。所得產物乃顯現無實質收濕性且易於處理，其有利於用在各種不同之組成物包括食品’飲料，化妝品，藥劑及成形體中以作爲甜味劑，味道改良劑，品質改良劑，安定劑及載色劑。 (請先閲讀背面之注意事項再4寫本頁) 本紙張尺度適用中國國家標率（CNS ) A4規格（210X297公釐）經濟部中央梯準局貝工消費合作社印袋 A7 _____B7 _五、發明説明（34 ) 實例A - 4 將藉與實例A — 1相同之方法所製得之水合結晶狀麥芽四糖基葡萄糖笹於1 0 〇°C下，於減壓下乾燥過夜以得具有約0.2%水量之無水結晶狀麥芽四糖基葡萄糖苷。當此產物於房室中靜置時乃顯現收濕性，且轉換成具約4 %水量之水合結晶狀麥芽四糖基葡萄糖苜以供安定化。無水結晶狀麥芽四糖基葡萄糖苷可利於用作收濕劑，脫水劑及化學粗製物料，且類同於實例A — 1之水合結晶狀麥芽四糖基葡萄糖苷，可更進一步用於各種不同之組成物包括食品，飲料，化妝品，藥劑及成形體中。實例A — 5 邊加熱邊令一重量份海藻糖及一重量份'PINE-DEX #4# (由日本京都Matsutani化學工業有限公司所售之產品）溶於3重量份水中，再將所得溶液加熱至6 5 °C，而後調整至PH6 . 0，與10單位/克部分澱粉水解產物之由嗜熱脂肪芽孢桿菌所衍出之環麥芽糊精葡聚糖轉移酶 (由日本岡山Hayashibara生化實驗室公司所售）混合，令之反應2 4小時，繼而加熱以使酵素鈍化。其後將溶液調整至5 5 °C，分別與2 5單位/克部分澱粉水解產物之支鏈澱粉酶（由日本岡山Hayashibara生化實驗室公司所售）.及5單位/克部分澱粉水解產物之'"TERMAMYL® 60L ’（由丹麥哥本哈根Novo Nordisk生化工業所售之α —澱粉酶）混合，再令之反應2 4小時’而後加熱以使酵素鈍本紙張尺度適用中國國家梯準（CMS ) Α4规格（210X297公釐） I---^— I J---- 裝—--I--訂 (請先聞讀背面之注意事項再^k本頁) -37 - A7 __B7_ 五、發明説明（35 ) 化。溶液乃含有約15%之麥芽四糖基葡萄糖替。再將所得溶液純化，再依實例A - 2之相同方法使用強酸性陽離子交換樹脂進行色層分離以得富含麥芽四糖基葡萄糖替之溶離份。收集溶離份後，將溶液脫色，脫鹽，濃縮，結晶並置於容器中以形成塊狀物。再將塊狀物磨成粉狀，乾燥及分類，即得佔初始物料約1 〇%產率之含水合結晶狀麥芽四糖基葡萄糖苷之粉末。所得產物乃顯現無實質收濕性且易於處理，其有利於用於各種不同之組成物包括食品，飲料，化妝品，藥劑及成形體中以作爲甜味劑，味道改良劑，品質改良劑，安定劑及載色劑。啻例B - 1 甜味劑經濟部中央標準局貝工消費合作社印製將0.5重量份實例A-2方法所得含水合結晶狀麥芽四糖基葡萄糖苷之粉末，1 · 5重量份| SUNMALT®， (由日本岡山Hayashibara Shoji公司所售之結晶狀麥芽糖），及0.1重量份’a G SWEET"(由日本東京Toyo 精製糖有限公司所售之α —葡萄糖基蛇菊苷）混合至均勻，再將混合物送至粒化器中以得粒狀甜味劑。甜味劑乃具有優良之風味及約兩倍強度之甜化力，而以甜化力之角度而言，則卡洛里約爲蔗糖之一半。此甜味劑乃適於作爲低卡甜味劑以供將低卡食品及飲料甜化以供需要限制卡洛里攝取之肥胖或糖尿病者所用’而且甜味劑本紙張尺度逋用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ297公釐） -38 - 經濟部中央樣準局貝工消費合作杜印製 A7 B7五、發明説明（36 ) 亦適於將用來壓制銷齒之食品及飲料予以甜化，此乃因其較不易使致齲微生物產生酸且不可溶之葡聚糖所致。實例B — 2 乳酸飲料將+重量份脫脂牛奶於8 0°C下巴氏殺菌2 0分鐘，冷卻至4 0 °C，與0 · 3重量份起動劑混合，再於3 7 °C 下醱酵1 0小時’而後將所得物均勻化，與〇 . 4重量份實例A - 3方法所得之水合結晶狀麥芽四糖基葡萄糖苷， 1 · 6重量份 TETRUP® (由日本岡山Hayashibara Shoji公司所售之麥芽四糖漿），1重量份蔗糖及3重量份異構化糖混合，繼而藉將混合物保持於7 O°C而予以巴氏殺菌。再將混合物冷卻，與適當增香劑混合，並予裝瓶以得乳酸飲料。此產物爲具有香味及甜度且充分與酸味調和之高品質乳酸飲料。實例B ~ 3 果汁粉將三十三重量份已噴霧乾燥之柳橙汁與5重量份實例 A - 5方法所得之水合結晶狀麥芽四糖基葡萄糖苷粉末， 3 5重量份結晶狀麥芽糖，2 0重量份蔗糖，〇 . 6 5重量份檸檬酸酐，0 . 1重量份蘋果酸，〇 . 1重量份L — 抗壞血酸，0 · 1重量份檸檬酸鈉，〇 . 5重量份支鏈澱本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再4寫本頁) 裝·

*1T -39 - 經濟部中央標準局員工消费合作社印裝 A7 _ _B7 _五、發明説明（37 ) 粉及適當粉狀增香劑混合至均匀，磨成細粉，送至流化床粒化器中，再於4 0°C之通風溫度下粒化3 0分鐘，同時將作爲結合劑之澱粉糖漿噴霧至其上’再分成預定量’並予包裝以得果汁粉。此產品爲具有約3 0%天然果汁之果汁粉’且其不含令人不期望之口味及嗅味，收濕性及固化現象’且於長時間貯存時極爲安定。實例B - 4 巧克力將四十重量份可可糊，1 0重量份可可油，5重量份實例A - 1方法所得之水合結晶狀麥芽四糖基葡萄糖Μ， 1 0重量份結晶狀麥芽糖及3 5重量份蔗糖混合，再將所得混合物送至精碾機中以降低微粒尺寸，再送至殼中，並於5 0 °C下捏合2天。在此捏合之時，將混合物與0 . 5 重量份卵磷脂混合，充分混合及分散。其後使用熱控制器令混合物保持於3 1°C，於油產生固化之前立即倒至模中，使用振動器除去空氣，再令之通過1 0°C冷卻隧道中 2 0分鐘以完成固化作用。繼而將模內之內容物取出，並予包裝，即得巧克力。此無收濕性，優良顏色，光澤及組織之產品乃具有令人滿意之內部組織，而於口內之均勻熔化則顯現溫和之甜度及柔順之香味。本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公嫠） --I - ^— - J— n - 裝 I I II I 訂 (請先閲讀背面之注^^項再4/^'本頁) -40 - 經濟部中央橾準局貝工消費合作社印製五、發明説明（38 ) 實例B — 5 口香糖將三重量份膠基質藉加熱法軟化，與3重量份" MABIT® 〃（由日本岡山Hayashibara Shoji公司所售之結晶狀麥芽糖醇），3重量份蔗糖及1重量份實例A- 2所製之含水合結晶狀麥芽四糖基葡萄糖Μ之粉末混合，與適量增香劑及著色劑混合’使用輥捏合，再以一般方式予以定形及包裝，即得口香糖。此產品爲具有優良組織，香味及口味之口香糖。奮例Β — 6 ~Uiro-no-moto (艮口食 ^ u i r o ^ ) 將九十重量份米粉末與2 0重量份玉米澱粉，1 0重量份實例A - 3方法所得含結晶狀麥芽四糖基葡萄糖苷之粉末，6 0重量份麥芽四糖粉末，5 0重量份蔗糖及4重量份支鏈澱粉混合至均勻以得、uiro-no-moto"。再將t uiro-no-moto#與適量’macchaf (綠茶粉）及水捏合’ 而後將所得混合物分裝於容器中，再蒸6 0分鐘以得， maccha-u i ro^ ° 此產品乃具有平滑光澤，良好可口性及好吃的口味’ 又因澱粉之退減作用有效地受到抑制，故亦具有長適用期〇實例B - 7 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） A 7 B7 經濟部中央標準局貝工消費合作社印褽五、發明説明（39 ) 供液態食品用少因化揆料先製備含1 0 0重量份實例A - 4方法所製無水結晶狀麥芽四糖基葡萄糖奋，1 〇〇重量份結晶狀麥芽糖， 3 5 0重量份麥芽四糖粉末，2 7 0重量份乾燥蛋黃， 209重量份脫脂牛奶，4 . 4重量份氯化鈉，1 _ 85 重量份氯化鉀，4重量份硫酸鎂，0 · 〇 1重量份硫胺素 ’ 0 . 1重量份抗壞血酸鈉，〇 . 6重量份維生素E乙酸鹽及0 · 0 4重量份菸醯胺之組成物，再將組成物分成 2 5克之整份至小型層壓鋁包中，繼而熱封》令一包產品溶於約150-300毫升水中，所得溶液可用以作爲經腸部投服至鼻腔，胃或腸之液態送料。實例B - 8 外_傷用軟膏將二十重量份實例A - 1方法所得水合結晶狀麥芽四糖基葡萄糖苷，2 8 0重量份結晶狀麥芽糖及2 0 0重量份麥芽四糖粉末與5 0重量份含3重量份碘之甲醇混合，再將所得物與2 0 0重量份1 0%支鏈澱粉混合，即得具有適當擴張性及黏合性之外傷用軟膏。此產品可令醫療期限縮短，而且可治療外傷而無疤痕產生。實例B — 9 糖衣片劑 ^—1- 1^1 1^1 m 1^11 m^— (請先閎讀背面之注意事項再4<寫本頁}

.IT 本紙張尺度適用中國國家梯準（CNS ) A4規格（210X297公嫠） -42 - 經濟部中央標準局貝工消費合作社印製五、發明説明（40 ) 使用含5重量份實例A - 2方法所得水合結晶狀麥芽四糖基葡萄糖Μ粉末，4 0重量份結晶狀麥芽糖醇，2重量份支鏈澱粉（平均分子量：200，〇〇〇) ，30重量份水，2 5重量份滑石及3重量份氧化鈦之溶液將 1 5 0毫克重之粗製片劑覆予糖衣直至片劑重增至約 2 3 0毫克爲止，再更進一步使用含1 0重量份上示結晶狀麥芽四糖基葡萄糖Μ粉末，5 5重量份結晶狀麥芽糖醇，1重量份支鏈澱粉及34重量份水之溶液覆予糖衣，而後使用磨光蠟使有光澤，即得具有光澤外觀之糖衣片劑。此產品在供包糖衣之過程及抗衝擊方面之效力極爲優良，且於長時間貯存後仍保留其高度品質。實例Β — 1 0 乳液令0 · 5重量份聚氧化乙烯山簧基醚，1重量份聚氧化乙烯山梨糖醇四油酸酯，1重量份油溶性甘油單硬脂酸酯，0 ‘ 5重量份山荼醇，1重量份鰐梨油，1重量份實例Α — 2方法所得含水合結晶狀麥芽四糖基葡萄糖苷之粉末，2 5重量份麥芽糖醇，1重量份α —葡萄糖基芸香替及適量維生素Ε及殺菌劑以一般方式藉加熱法溶解，再將混合物與5重量份1 ，3 — 丁二醇，0 · 1重量份羧乙烯基聚合物及8 5 . 3重量份精製水混合，而後使用均化器乳化，即得乳液》此產品爲保濕乳液，其有利於用作遮光劑及皮虜白化本紙張尺度適用中國囷家橾準（CNS ) Α4規格（210X297公釐） -43 - 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 __B7五、發明説明（41 ) 劑。實例B _ 1 1 皮膚用乳油令二重量份聚氧化乙二醇單硬脂酸酯，5重量份自動乳化之甘油單硬脂酸酯，2重量份α -葡萄糖基芸香μ， 1重量份液態石蠘，10重量份甘油三辛酸酯，1重量份實例A_1方法所得之水合麥芽四糖基葡萄糖苷，3重量份麥芽糖醇及適量防腐劑以一般方式藉加熱法溶解，再將所得溶液與5重量份1，3 -丁二醇及6 6重量份精製水混合，以均化器乳化，繼而與適量增香劑藉攪拌而混合，即得皮膚用乳油。此產品爲充分擴展之乳油，其有利以充作遮光乳油，皮膚淨化乳油及皮庸白化劑。實例B - 1 2 牙眘將四十五重量份磷酸氫鈣，1.5重量份月桂酸鈉， 2 5重量份甘油，0 . 5重量份聚氧化乙烯山梨糖醇酐月桂酸酯，2重量份實例A - 3方法所製含水合結晶狀麥芽四糖基葡萄糖苷之粉末，3重量份支鏈澱粉，1 〇重量份麥芽糖醇，0 · 02重量份糖精及0 · 05重量份防腐劑與1 3重量份水混合以得牙膏。此具有優良光澤及潔淨力之產品乃適於作爲牙膏° 本紙張尺度適用中國國家梯準（CNS ) A4规格（210X297公釐） -44 - 經濟部中央標準局負工消費合作社印裝 A7 B7 五、發明説明（42 ) 亶例B - 1 3 肥_料捧條將肥料組成物（氮=1 4%，五氧化二磷=8%，氧化鉀=12%)，支鏈澱粉，實例A — 3方法所得含水合結晶狀麥芽四糖基葡萄糖苷之粉末，硫酸鈣及水分別以 7 〇，5，5，1 5及5之重量比混合，再將所得混合物送至擠壓器（L/D = 20，壓縮比=1 · 8，骰子直徑 =3 0毫米）中，同時於8 0°C下加熱以得肥料棒條^ 此產品可予處理而不需使用肥料用容器，且其具有適當硬度以供全層施用，其可藉安排組成物之比率而調整其熔化速度。如有需要，此產品可輕易地與植物荷爾蒙，農業化學品及土壤調節劑混合。如同以上之說明所證實，本發明之結晶狀麥芽四糖基葡萄糖苷爲平時尙未知之物質，其乃異於還原性麥芽五糖，爲無還原性，低收濕性，安定且易於處理者。而且，既然本發明結晶狀麥芽四糖基葡萄糖苷可輕易分離及純化，故結晶狀麥芽四糖基葡萄糖替之製造可在不昂貴之前提下進行。結晶狀麥芽四糖基葡萄糖替有利以用以作爲試劑，亦即作爲供分析血清及化學物料中澱粉酶所用之基質，亦有利以用於各種不同組成物包括食品，飲料，化妝品，藥劑之製造中。故本發明結晶狀麥芽四糖基葡萄糖苷及其製備及使用之確立在相關工業中具有工業上之意義。雖然現今說明者乃被認爲是本發明之理想具體實施例本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） ------------' 裝------訂 '/ (請先閲讀背面之注意事項再表寫本頁) -45 - B7五、發明説明（43 ) 真圍明範發利本專在請落申有之所加而附 ,在行蓋可涵亦欲然均當法法良良改改之之內同圍不範種及各髓但精。，正內 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印装本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -46 -

Claims

_申請專利範圍

第84101884號專利申請案中文申請專利範圍修正本經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1 . 其純度至葡萄糖苷 2 1.3 ，且熔點糖基葡萄 13.7 ，且熔點 2 . 晶狀麥芽 (a 溶液中結水性溶液糖及澱粉接受環麥 (b 3 . 五糖溶液與澱粉脫 4 . 民國88年10月修正一種水合或無水之結晶狀麥芽四糖基葡萄糖苷，少爲9 9 . 5%，其中該水合結晶狀麥芽四糖基於粉末X光繞射分析上具有12. 6° ’ ° ，22.1° 及 2 2.8° 之繞射角（20) 爲170° - 172° ，而該無水結晶狀麥芽四糖替於粉末X光繞射分析上具有12.7° ， 8 .8 爲2 3 0 一種製四糖基 )將麥晶出，接受非性物質芽糊精 )回收如申請係藉令分支酶如申請備如申葡萄糖芽四糖該麥芽還原糖之水性葡聚糖結晶狀專利範澱粉性之混合專利範 °及2 3 . 2 °之繞射 2 3 3 〇C。請專利範圍第1項之水苷的方法，其包括：基葡萄糖替由麥芽四糖四糖基葡萄糖苷溶液係 -形成性酶之作用，或令含有非還原糖之作用而製得；糖基葡萄糖替。角（2 0 ) 合或無水結基葡萄糖替令麥芽五糖令含有海藻之水性溶液及溶液或轉移酶麥芽四圍第2項之方法，其中，上述麥芽物質接受物之作圍第2 澱粉酶或澱粉酶 ----------餐------訂·------0 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 衣紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐）用而製得。項之方法，其中上述非還 -1 _申請專利範圍

第84101884號專利申請案中文申請專利範圍修正本經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 1 . 其純度至葡萄糖苷 2 1.3 ，且熔點糖基葡萄 13.7 ，且熔點 2 . 晶狀麥芽 (a 溶液中結水性溶液糖及澱粉接受環麥 (b 3 . 五糖溶液與澱粉脫 4 . 民國88年10月修正一種水合或無水之結晶狀麥芽四糖基葡萄糖苷，少爲9 9 . 5%，其中該水合結晶狀麥芽四糖基於粉末X光繞射分析上具有12. 6° ’ ° ，22.1° 及 2 2.8° 之繞射角（20) 爲170° - 172° ，而該無水結晶狀麥芽四糖替於粉末X光繞射分析上具有12.7° ， 8 .8 爲2 3 0 一種製四糖基 )將麥晶出，接受非性物質芽糊精 )回收如申請係藉令分支酶如申請備如申葡萄糖芽四糖該麥芽還原糖之水性葡聚糖結晶狀專利範澱粉性之混合專利範 °及2 3 . 2 °之繞射 2 3 3 〇C。請專利範圍第1項之水苷的方法，其包括：基葡萄糖替由麥芽四糖四糖基葡萄糖苷溶液係 -形成性酶之作用，或令含有非還原糖之作用而製得；糖基葡萄糖替。角（2 0 ) 合或無水結基葡萄糖替令麥芽五糖令含有海藻之水性溶液及溶液或轉移酶麥芽四圍第2項之方法，其中，上述麥芽物質接受物之作圍第2 澱粉酶或澱粉酶 ----------餐------訂·------0 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 衣紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐）用而製得。項之方法，其中上述非還 -1 六、申請專利範圍原糖-形成性酶可由還原性部分澱粉水解產物中形成非還原糖》 (請先閱讀背面之注f項再填寫本頁) 5 .如申請專利範圍第4項之方法，其中，上述還原性部分澱粉水解產物之葡萄糖聚合程度爲3或更高。 6 . —種製備如申請專利範圍第1項之水合或無水結晶狀麥芽四糖基葡萄糖Μ的方法，其包括： (a )將麥芽四糖基葡萄糖苷水性溶液以鹼處理，其中該麥芽四糖基葡萄糖替溶液係藉令麥芽五糖水性溶液接受非還原糖-形成性酶之作用，或令含有海藻糖及澱粉性物質或含有非還原糖之水性溶液接受環麥芽糊精葡聚糖轉移酶之作用而製得； (b )令所得溶液進行色層分離以得富含麥芽四糖基葡萄糖替之溶離份； (c )將溶離份濃縮及結晶；及 (d )回收結晶狀麥芽四糖基葡萄糖替。經濟部智慧財產局員工消費合作社印製 7 .如申請專利範圍第6項之方法，其中，上述麥芽五糖溶液係藉令澱粉性物質接受α -澱粉酶或《 -澱粉酶與澱粉脫分支酶之混合物之作用而製得。 8 .如申請專利範圍第6項之方法，其中，上述非還原糖-形成性酶可由還原性部分澱粉水解產物中形成非還原糖。 9 ·如申請專利範圍第6項之方法，其中，上述非還原糖乃具有作爲終端單位之海藻糖結構》 _1 0 . —種用於食品、飲料、d粧品、藥物及成形體本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 11.如申請專利範圍第1〇項之組成物，其中，上述組成物乃含有佔乾燥固體基準之〇·1W/W%或更多之量之上述結晶狀麥芽四糖基葡萄糖苷。經濟部智慧財產局員工消费合作社印製 (請先Μ讀背面之注f項存填寫本頁)

之組成物，其含有申請專利範圍第1項之水合或無水結晶狀麥芽四糖基葡萄糖苷》 12 .如申請專利範圍第1〇項之組成物，其中，上述組成物爲食品’飲料，化妝品，藥劑或成形體之形式。本紙張尺度逋用中國國家標率（CNS > A4说格（210X297公釐） -3 -