TW317572B - - Google Patents

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317572 專利申請案第81106636號 (民國84.年今月丨$曰送呈）-附’件二- 五、發明説明（1} 一般含抗生素的培餐掖是在逹最高含量後才搜集。在 大多數的例子中•第一铒步想是以過濾或離心分離细胞和 固體。接箸可Μ萃取或吸附法濃编有價值的成分》—般纯 化後的產物再被结晶並加工而得半合成的抗生素。 / 此一步接一步的方法的缺點是大量抗生素分子如頭芽 胞菌素C(CPC)不穩定。CPC在發酵過程中已分解。此可由 純化學性以水攻擊;8 -內醯.胺環•或酵素性如Μ酯酶達成 (Konecny等人，1973，J. of Antib·, 26,3.135-141 ) 。發酵過程中也會形成的一糸列二级產物如去乙睡氧基頭 穿胞菌素C(DOCPC)及去乙醯基頭芽胞菌素CCDCPG)，必須 在純化步驟中從CPC移除。造成可觀的產量損失。 使用聚合物或陶瓷膜之交叉滾動過濾条统已被用於搜 集含抗生素之培養液（Harris等人，J. Chem, Techn. Biotechnol.· 1988,42,19-30)。尚未證明在這些過程中頭 芽胞菌素C的分解量可降低。 經濟部屮央栉準局β工消费合作社印製 r 修正 84 4. 1 3，補充 (請先閲讀背面之注意事項存项寫木页) 本發明之目的係發現一棰方法，其中頭芽胞菌素C之 分解及二绿蓋物之形成可降低•且相對於基質使用量之產 率增加。 令人驚S牙的是*現在已發現在Acremonium chrysogenum的發酵過程中使用交叉流動過液组合元件可 使CPC產量增加，DCPC的形成減少•且生產時間延長。過 濾及少置QC PC之形成更簡化了頭芽胞菌素C實質上的 收集。 317572 經濟部屮央梂準局£3:工消费合作社印^ Λ 6 _IIJ_ 五、發明説明（2) 因此本發明亦俤關於製備CPC的方法*其包括在發酵 期間發酵液經由交叉過濾条统過濾及替換發酵槽中濾液抽 出量的可能性。 只要能生產CPC衍生物之Acremonium chrysogenum ( Cephalosporium acremoniuB)突變株友篩選株卽適合在本 發明的方法中使用。 營養液含碳源如蔗糖、玉米澱粉、葡萄糖或糖蜜*及 氣源如大豆粉、落花生粉、麥芽抽出物或醋酸銨。 營養液亦含無機鹽如磷酸氫二納、氯化鈉、氯化鈣、 碕酸鈣、磺酸鈣、碕酸鎂或磷酸氫二鉀。脂肪如油酸甲基 酯或大豆油可加入營養液中。亦可添加撤量元素如鐵、锰 、銅、鋅、鈷或其他金靥鹽。 Acremon i um chrysogenum(Cephalosporium acremoniuB),較佳為DSM6473，培養於溫度20¾至3〇υ間 ，較佳為25·〇，並在ρΗ5至8間，較佳為ρΗ7。先在振盪燒 瓶中通氣培養，再於醱酵槽中攪拌及通空氣或純氧。撤生 物在發酵槽中培養120至240小時·較佳為130至170小時。 ' 使用的交叉流動過濾糸統可為平面組件、管狀組件、 毛細管组件、彎曲組件或中空缕維膜組件，由聚合物、碳 或陶瓷製成，分離界限從超過濾至無菌過濾範圍。較佳使 用的過濾组件孔徑為0.2/im至4nm。可使用的膜物質為聚 «、聚癍胺、绻維素醋酸酯，氧化鋁或氧化锆。過濾可連 續或分批作用。約在發酵槽接種後2-3天後開始，並可持 ________- _______ - 4 ** (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝* 訂_ 線· 本紙張尺度逍用中ΚΙ Η家標準（CNS)肀4規格（210x297公放) Λ 6 Μ 6 五、發明説明（3 ) 續至發酵停止。發酵液通過過濾表面的流速在0.5及 20m/s間，1至 ΙΟβ/s較佳。 在發酵過程中由發酵槽中抽掉的濾出液可用相當量的 液體取代，或是在分離掉有債值的產物後，例如吸附濾出 液，可再循環至發酵槽中。為此，富有適當鹽或其他營養 基成分的水可被打入。 未滲過膜的液體再循環/至發酵槽。發酵槽及交叉流動 過濾条统要連接至適當的管路，並在發酵前先殺菌。對 100升的發酵槽需要將近〇.2b2的過濾表面。亦可使用較大 或較小的過濾面。 實例1 : Acremonium chrysogenum D S M 6473之發酵作用 使用下列營養液進行發酵： 前培養基 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 裝· 訂- 線. 經濟部屮央棵準局β工消費合作社印製 玉米液 醋酸銨 蔗糖 CaSO-» . 2H2〇 MgSO^ . Η=0 ρΗ7.0(用 15% 重量 l:bHaOH調） 發酵培養基 5 民紙張尺度逍用中國國家標準（CNS) ΤΜ規格(2丨0x297公；》:) g/1 11.75 4.520.0 0.5 g/1 317572 五、發明説明（4) 脫脂落花生粉 100.0 酯酸銨 6.0 蕕萄糖單水合物 5.0 油酸甲酯 5.0 D,L-甲硫胺酸 3.0 CaS(U . 2H2〇 5.0 MgSCU . H2〇 / 5.0 C a C 〇3 5.0 消泡劑 0.5 批次飼入液： «萄糖單水合物 500.0 D,L-甲硫胺酸 24.75 (請先閲讀背面之注意事項再填寫木頁) 裝· 訂- 線· 經濟部屮央標準局β工消费合作社印製 使用斜面洋菜基接種100ml前培養基（500ml振盪燒瓶 配備4個調節板）。燒瓶以150每分鐘轉速（「pm)於25至28它 培養48小時。使用這些培養物接種下一個前培養基（1〇〇〇 、ml 培養基，5000ml 燒瓶，25 至 28C，120rpm，58 至 60 小時 )。第二次前培養基是用來接種在攪拌發酵槽中的60升發 酵培養基。在25T：進行發酵。氣流控制方式為發酵營養液 中P〇2高於20%。 發酵74小時後，以交叉流動陶瓷組件開始過濾（由 只611|1^3{>1〇»製造，（1-612〇3)，其具有過减表面〇.21112*孔 本紙張尺度边用中Η國家榣準（CNS)甲4規格（210X297公龙） A6 B6 五、發明説明（5 ) 徑0.2 « B。附帶下列過程參數： 流速： 2 m/s 1500 1/h 2 1/h 68小時 推動速率： 過濾能力： 過濾時間： 接下來的表顯示在發酵142小時後不用（A)及用（B)交 叉流動過濾法的測試結果： 表1 : CPC DCPC/CPC CPC產率 DCPC產率 m [ίϋ] 最高[%] 在6天後U] 6天後U] A 100 100 100 100 100 B 140 44 200 400 53 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 實例2 如實例1發酵。表2顯示在發酵167小時後用交叉流 動過濾法（B)的結果，與沒有過濾的對照發酵比較，其在 142小時後停止。 表2 : CPC (%.) DCPL/CPC ⑴ A (142小時） 100 100 B (167小時） 129 69 -7 - 本纸張尺度適用中國國家標準（CNS)甲4規格（210x297公楚) ................................................装..............................打…：ί ...................線 (請先聞讀背面之注意事項再填寫本页)

A6 B6 五、發明説明（厶） 專利申請案第81106636號 ROC Patent Appln. No.81106636 補充之試驗資料中文本-附件二 Supplemental Teist Data in Chinese - Enel. II (民國82年12月4日送呈> (Submitted on December ^ , 1993) 比較實例： Al-A4批次發酵 Βι-Β4根據本發明之發酵 發酵 编號 發酵時間 (小時） CPC含量 (96) (請先聞讀背面之注意事項再埔寫本頁)

1 1 1 2 2 2 3 3 3 4 4 4 ABB ABB ABB ABB 140 100 140 130.4 212 163.5 167 100 167 128.9 263 150.5 167 100 167 117.3 263 150.4 140 100 140 135.2 212 178.1 --装- 訂_ •線. 嫌濟部中央»準«霣工消费合作社印« 其反應條件基本上係與説明書中之實例1相同’唯具 下列之差異處： a)係採用1〇〇升之發酵槽及7〇升之發酵培養基。 b>所列示之測試結果係比較用發酵Αι至及本發明發 酵Βι至B4之CPC-濃度。 c)在發酵期間乃另外添加營養液。 -8 - 本紙張尺度適用中0國家標準（CNS)甲4規•格（210 X 297公釐） 82-6. 40,000

Claims (1)

1. 經濟部中央標準局貝工消费合作杜印製

   修正之申請專利範圍中文本-附件一 Amended Claims in Chinese - Enel. I (民國82年12月J日送呈） (Submitted on Dcecmber-a^. 1993) 1. 一 種利用 Acremonium chrysogenum# 酵生產頭芽 胞菌素C的方法，其包括在發酵過程中經由交叉流 動過濾系統過濾發酵液，該過濾系統中之濾器孔徑 爲4至200 ηια且發酵液通過過濾表面的流速爲1至 10 m/s，及可替換發酵槽中濾出液量。 2. 根據申請專利範圍第1項之方法，其中使用聚合物 濾器或陶瓷濾器作爲交又流動過濾系統。 3. 根據申請專利範圍第1項之方法，其中發酵槽中之 過遽液可以水替換。 4. 根據申請專利範圍第1項之方法，其中過濾液以營 養液$換。 5. 根園第1項之方法，其中過濾液在有價 値移出後再循環至發酵槽中。 -9 - ------------------------裝------.玎------線 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本紙張尺度適用中國圉家標準（CNS>甲4規格（210 X 297公釐）