TW202400581A - 驅動蛋白kif18a抑制劑及其應用 - Google Patents

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Abstract

本發明提供了一種KIF18抑制劑及其合成方法，本發明的化合物能夠調節KIF18A蛋白，從而影響細胞週期和細胞增殖過程以治療癌症和癌症相關疾病。本發明還包括包含所述化合物的藥物組合物以及用於治療與KIF18A活性相關的病況的方法。

Description

驅動蛋白KIF18A抑制劑及其應用
本發明屬於醫藥領域，涉及一類驅動蛋白KIF18A抑制劑及其作為抑制癌細胞增殖和治療癌症的用途。
本申請要求以下申請的優先權： 1）於2022年05月13日提交到中國國家智慧財產權局，申請號為202210520744.0，發明名稱為“驅動蛋白KIF18A抑制劑及其應用”的中國專利申請； 2）於2022年07月25日提交到中國國家智慧財產權局，申請號為202210878192.0，發明名稱為“驅動蛋白KIF18A抑制劑及其應用”的中國專利申請； 3）於2022年09月27日提交到中國國家智慧財產權局，申請號為202211183092.2，發明名稱為“驅動蛋白KIF18A抑制劑及其應用”的中國專利申請； 4）於2022年12月02日提交到中國國家智慧財產權局，申請號為202211537992.2，發明名稱為“驅動蛋白KIF18A抑制劑及其應用”的中國專利申請； 5）於2023年01月16日提交到中國國家智慧財產權局，申請號為202310071265.X，發明名稱為“驅動蛋白KIF18A抑制劑及其應用”的中國專利申請； 6）於2023年03月22日提交到中國國家智慧財產權局，申請號為202310288871.7，發明名稱為“驅動蛋白KIF18A抑制劑及其應用”的中國專利申請； 7）於2023年04月27日提交到中國國家智慧財產權局，申請號為202310475180.8，發明名稱為“驅動蛋白KIF18A抑制劑及其應用”的中國專利申請； 其全部內容均通過引用結合在本申請中。
KIF18A是驅動蛋白kinesin-8家族中的一員，在細胞內能夠依靠水解ATP釋放的能量，以微管為軌道向正極方向運動。同時，KIF18A定位在微管正極末端，可調控微管的動態不穩定性，發揮類似於微管解聚酶的活性。在有絲分裂過程中，KIF18A能夠調控紡錘體微管動力學和染色體振幅，對有絲分裂期染色體及時完成整列、維持基因組穩定和順利完成有絲分裂具有關鍵作用。
KIF18A基因屬於驅動蛋白kinesin-8亞家族並且是一個正端定向馬達。KIF18A被認為影響著絲粒微管的正端的動力學以控制正確的染色體定位和紡錘體張力。人KIF18A的耗盡在HeLa宮頸癌細胞中導致更長的紡錘體，在中期增加的染色體振盪(chromosome oscillation)以及有絲分裂紡錘體組裝檢查點的激活(MI Mayr等人，Current Biology[當代生物學]17，488–98，2007)。KIF18A似乎是癌症治療的可行靶標。KIF18A在多種類型的癌症中過表達，包括但不限於結腸癌、乳腺癌、肺癌、胰腺癌、前列腺癌、膀胱癌、頭癌、頸癌、子宮頸癌和卵巢癌。此外，在癌細胞系中，基因缺失或敲除或KIF18A抑制影響有絲分裂紡錘體裝置。特別地，已發現抑制KIF18A來誘導有絲分裂細胞停滯，這是一種已知的弱點，其可以通過凋亡、有絲分裂災變或多相驅動致死性或分裂間期中有絲分裂滑脫後的死亡來促進有絲分裂細胞死亡。因此，對尋找KIF18A蛋白的抑制劑存在著強烈的興趣。因此，KIF18A ATP酶活性的抑制是一種有前途的開發新的抗癌劑的方法。
本發明屬於醫藥領域，涉及一類驅動蛋白KIF18A抑制劑，具體涉及所述化合物或其立體異構體，互變異構體，內消旋體，外消旋體，對映異構體，非對映異構體或其混合物形式或其可藥用的鹽，共晶，代謝產物，溶劑化物，前藥或同位素標記物，其製備方法及含有該類化合物的藥物組合及其作為治療劑，尤其作為抑制癌細胞增殖和治療癌症的用途。
本發明提供了一類新的化合物，所述化合物單獨或在與微管的結合複合物中用於調節KIF18A蛋白，用以治療KIF18A介導的病症和/或疾病，包括癌症、炎症或纖毛病理學。
本發明提供的化合物具有基於MT的KIF18A調節活性，特別地，具有KIF18A抑制活性。為此，本發明還提供了這些化合物及其藥學上可接受的鹽在製備和製造用於治療性、預防性、急性或慢性治療KIF18A介導的疾病和障礙(包括但不限於癌症)的藥物組合物或藥物中的用途。
本發明提供了技術方案：具有式(I)結構的化合物或其藥學上可接受的鹽、立體異構體、同位素異構體、前藥、水合物或溶劑合物： 式(I) 其中，W 1表示CR W1或N； 其中，W 2表示CR W2或N； 其中，Z表示-CR TR T'或-NR SR S'； 其中，R T和R T'與與之共同相連的C原子一起形成具有選自以下結構的環： 其中，R S和R S'與與之共同相連的N原子一起形成具有選自以下結構的環： 其中，Y 1、Y 2、Y 3各自獨立地表示-(CR aR b) o-(NR a) p-(CR a'R b') q-； 其中，A、B各自獨立地表示-(CR aR b) m-； 其中，L 1表示-C(O)NH-、-HNC(O)-、5-6元雜芳基、 、 、 、 、 、 ； 其中，L 2表示不存在、-C 1-C 6亞烷基-、-NR a-、-NR a(C 1-C 6亞烷基)-、-C(O)NR a(C 1-C 6亞烷基)-、-O-、-O-(C 1-C 6亞烷基)、-S-、-S(O)-、-S(O) 2-、-S(O) 2NR a-或者-S(O)(NR a)-； 其中，R 1表示L 3-R 3； 其中，R 2表示氫、鹵素、氰基、硝基、羥基C 1-C 6烷基、C 1-C 6烷基、C 3-C 8環烷基、鹵代C 1-C 6烷基、-OR a、-SO 3R a、-SR a、-SF 5、-S(O)R a、-O-鹵代C 1-C 6烷基或-NR aR b； 其中，L 3表示不存在、C 1-C 6亞烷基、-NR a-、-NR aSO 2-、-SO 2NR a-、-S(=O)(NR a)-、-P(O)(OR a) 2、-NR aP(O)(OR a) 2或-NR aP(O)(R a) 2； 其中，R 3表示不存在、氫或者被0-3個選自鹵素、-OR a、-NR aR b、氰基、-O-鹵代C 1-C 6烷基取代的C 1-C 6烷基或C 3-C 6環烷基； 其中，R W1和R W2各自獨立地表示氫、鹵素、氰基、硝基、羥基C 1-C 6烷基、C 1-C 6烷基、C 3-C 8環烷基、鹵代C 1-C 6烷基、-OR a、-SO 3R a、-S(O)R a、-O-鹵代C 1-C 6烷基、-SR a、-SF 5或-NR aR b； 其中，Cy 1表示具有以下結構基團； ， 並且所述的Cy 1還可以任意地被0-3個選自以下取代基的基團所取代：鹵素、C 1-C 6烷基、鹵代C 1-C 6烷基、羥基C 1-C 6烷基、OR a、-O-鹵代C 1-C 6烷基、5-6元雜芳基、苯基、-SR a、-SF 5、氰基、硝基、-NR aR b、-NR aC(O)R b、-C(O)NR aR b、-OC(O)R a、-C(O)R a、-P(O)R aR b、-C(O)OR a、-S(O)R a、-S(O) 2R a和-S(O) 2NR aR b； 其中，Cy 2表示3-12元飽和或不飽和的單環或者雙環，該環中可以任意地含有0-3個選自O、N和S的雜原子，並且所述的Cy 2還可以任意地被0-3個選自以下取代基的基團所取代：鹵素、C 1-C 6烷基、鹵代C 1-C 6烷基、羥基C 1-C 6烷基、-OR a、-O-鹵代C 1-C 6烷基、-SR a、-SF 5、氰基、硝基、-NR aR b、-NR aC(O)R b、-C(O)NR aR b、-OC(O)R a、-C(O)OR a、-S(O)R a、-S(O) 2R a和-S(O) 2NR aR b； 其中，R a、R b、R a'、R b'各自獨立地表示氫、鹵素、C 1-C 6烷基、C 3-C 6環烷基、鹵代C 1-C 6烷基或羥基C 1-C 6烷基；或者R a、R b一起與與之相連的原子形成3-6元飽和或不飽和環，該環中可以任意地含有0-2個選自O、S和N的雜原子；或者R a'、R b'一起與與之相連的原子形成3-6元飽和或不飽和環，該環中可以任意地含有0-2個選自O、S和N的雜原子； 其中，虛線表示單鍵或雙鍵； 其中，m、o、p、q表示0-3的整數。
在本發明的優選技術方案中，其中，W 1表示CH或N。
在本發明的優選技術方案中，其中，W 2表示CH或N。
在本發明的優選技術方案中，其中， L 3表示-NR aSO 2-、-SO 2NR a-或-S(=O)(NR a)-。
在本發明的優選技術方案中，其中， L 3表示-NR aSO 2-。
在本發明的優選技術方案中，其中，R 3表示氫或者被0-3個選自鹵素、-OR a、-NR aR b、氰基和-O-鹵代C 1-C 6烷基之基團取代的C 1-C 6烷基或C 3-C 6環烷基。
在本發明的優選技術方案中，其中，R 3表示被0-3個選自鹵素、-OR a、-NR aR b、氰基和-O-鹵代C 1-C 6烷基之基團取代的C 1-C 6烷基。
在本發明的優選技術方案中，其中，Z表示-NR SR S'。
在本發明的優選技術方案中，其中，Z表示： 其中，R a、R b各自獨立地表示氫、C 1-C 6烷基、C 3-C 6環烷基、鹵代C 1-C 6烷基或羥基C 1-C 6烷基；或者R a、R b一起與與之相連的原子形成3-6元飽和或不飽和環，該環中可以任意地含有0-2個選自O、S和N的雜原子。
在本發明的優選技術方案中，其中，Z表示： ，其中，R a、R b各自獨立地表示氫、C 1-C 6烷基、C 3-C 6環烷基、鹵代C 1-C 6烷基或羥基C 1-C 6烷基；或者R a、R b一起與與之相連的原子形成3-6元飽和或不飽和環，該環中可以任意地含有0-2個選自O、S和N的雜原子。
在本發明的優選技術方案中，其中，Z表示： 。
在本發明的優選技術方案中，其中，L 1表示-C(O)NH-、-HNC(O)-、5-6元雜芳基、 、 、 、 、 、 。
在本發明的優選技術方案中，其中，L 1表示-C(O)NH-。
在本發明的優選技術方案中，其中，Cy 1表示以下基團： 。
在本發明的優選技術方案中，其中，L 1表示：-C(O)NH-、-HNC(O)-、5-6元雜芳基、 、 、 、 、 、 。
在本發明的優選技術方案中，其中，L 1表示以下任意基團之一： 。
在本發明的優選技術方案中，其中，L 2表示不存在、-C 1-C 6亞烷基-或-NH-。
在本發明的優選技術方案中，其中，L 2表示不存在。
在本發明的優選技術方案中，其中，Cy 2表示飽和，部分飽和或不飽和的3-、4-、5-、6-、7-元單環，或3-、4-、5-、6-、7-元並環，且含有0~3個N雜原子和0~2個O或S雜原子，同時單環或並環被0-3個選自以下取代基：鹵素、氰基、硝基、羥基C 1-C 6烷基、C 1-C 6烷基、C 3-C 8環烷基、鹵代C 1-C 6烷基、-OR a、-SO 3R a、-S(O)R a、-O鹵代C 1-C 6烷基、-SR a、-SF 5或NR aR b取代的嗎啉基、呱啶基、氮雜環丁烷基、吡咯烷基、環丙基、環丁基、環戊基、環己基、呱嗪基或四氫呋喃基，其中，R a、R b各自獨立地表示氫、鹵素、C 1-C 6烷基、C 3-C 8環烷基、鹵代C 1-C 6烷基或羥基C 1-C 6烷基；或者R a、R b一起與與之相連的原子形成3-6元環，該環中含有0-2個選自O、N和S的雜原子。
在本發明的優選技術方案中，其中，Cy 2表示： 。
具體地，本發明提供化合物，具有以下結構：
1 2
3 4
5 6
7 8
9 10
11 12
13 14
15 16
17 18
19 20
21 22
23 24
25 26
27 28
29 30
31 32
33 34
35 36
37 38
39 40
41 42
43 44
45 46
47 48
49 50
51 52
53 54
55 56
57 58
59 60
61 62
63 64
65 66
67 68
69 70
71 72
73 74
75 76
77 78
79 80
81 82
83 84
85 86
87 88
89 90
91 92
93 94
95 96
97 98
99 100
101 102
除此之外，本發明還提供了一種藥物組合物，其含有本發明技術方案中任意一種化合物或其藥學上可接受的鹽、立體異構體、同位素異構體、前藥、水合物或溶劑合物，以及其藥學上可接受的載體。
除此之外，本發明還提供了一種通過抑制KIF18A來治療腫瘤的方法，包括向有需要的個體施用本發明中任意一種化合物或其藥學上可接受的鹽、立體異構體、同位素異構體、前藥、水合物或溶劑合物。
定義
如無相反指示，本發明的化合物除化合物具體結構之外，還可以被延伸解讀還包括該化合物藥學上可接受的鹽，其立體異構體、同位素異構體（例如氘代化物）、溶劑合物、水合物、前藥、代謝產物，也即是該化合物藥學上可接受的鹽，其立體異構體、同位素異構體、溶劑合物、水合物、前藥、代謝產物也落入化合物的保護範圍。
除非另有述及，否則於本專利說明書與權利請求中使用的下述術語具有下文所討論的意義。再者，此處定義的許多基團可選擇性地被取代。在此定義部分中典型取代基的清單是作為舉例，並非意欲限制本專利說明書與權利要求書中別處所定義的取代基。
術語“烷基”是指飽和脂族烴基團或連接臂，包括1至20個碳原子，優選為1至12個碳原子，更優選為1至8個碳原子，或1至6個碳原子，或1至4個碳原子的直鏈與支鏈基團。“低級烷基”特別指具有1至4個碳原子的烷基。烷基的實例包括-(CH 2) 3-，甲基、三氟甲基、乙基、丙基、異丙基、正丁基、異丁基、叔丁基、戊基等。烷基可為被取代或未被取代。典型取代基包括環烷基、芳基、雜芳基、雜環烷基、羥基、烷氧基、芳氧基、巰基、烷硫基、芳基硫基、氰基、鹵代基、羰基、硫代羰基、O-氨基甲醯基、N-氨基甲醯基、O-硫代氨基甲醯基、N-硫代氨基甲醯基、C-醯氨基、N-醯胺基、C-羧基、O-羧基、硝基、矽烷基、氨基及-NR xR y，其中R x與R y獨立選自包括氫、烷基、環烷基、芳基、羰基、乙醯基、磺醯基、三氟甲烷磺醯基及合併的5-或6-元雜環基環。
術語“烯基”表示含一個或更多個雙鍵且通常長度為2至20個碳原子的直鏈或支鏈的烴基。例如，“C 2-C 6烯基”含有兩個至六個碳原子。烯基包括但不限於例如乙烯基、丙烯基、丁烯基、1-甲基-2-丁烯-1-基等。
術語“炔基”表示含一個或更多個三鍵且通常長度為2至20個碳原子的直鏈或支鏈的烴基。例如，“C 2-C 6炔基”含有兩個至六個碳原子。代表性炔基包括但不限於例如乙炔基、1-丙炔基、1-丁炔基等。
術語“烷氧基”或“烷基氧基”是指-O-烷基。“C 1-C 6烷氧基”(或烷基氧基)意欲包括C 1、C 2、C 3、C 4、C 5、C 6烷氧基。烷氧基的實例包括但不限於甲氧基、乙氧基、丙氧基(例如正丙氧基和異丙氧基)和叔丁氧基。類似地，“烷基硫基”或“硫代烷氧基”表示具有指定數量碳原子的經硫橋連接的如上文所定義的烷基；例如甲基-S-和乙基-S-。
術語“環烷基”是指3至8元全碳單環狀環或二環結構，全碳5-元/6-元或6-元/6-元經稠合的雙環狀環，或多環狀稠合環(“經稠合”環系統是指在此系統中的每一個環系與此系統中的其它環至少共有一個相鄰碳原子)基團，其中一或多個環可含有一或多個雙鍵，但這樣的環均不具有完整的共軛π-電子系統，亦或雙環通過共用一個碳形成螺環。環烷基的實例是(但不限於)環丙烷、環丁烷、環戊烷、環戊烯、環己烷、環己二烯、金剛烷、環庚烷、環庚三烯等。二環的環狀烷基包括橋環、螺環或融合環的環烷 基。環烷基的說明性實例衍生自(但不限於)下列: 。
“芳基”是指6至12個碳原子的全碳單環狀或稠合環多環基團，具有完整共扼π-電子系統。芳基的實例是但不限於苯基、萘基及蒽基。芳基可為被取代或未被取代。典型取代基包括鹵代基、三鹵代甲基、烷基、羥基、烷氧基、芳氧基、巰基、烷硫基、芳基硫基、氰基、硝基、羰基、硫代羰基、C-羧基、O-氨基甲醯基、N-氨基甲醯基、O-硫代氨基甲醯基、N-硫代氨基甲醯基、C-醯氨基、N-醯胺基、亞磺醯基、磺醯基、氨基及-NR aR b，其中R a與R b系如上文定義。芳基稠合飽和或不飽和環烷基/飽和或不飽和雜環烷基可看作為芳基的特殊取代基，典型的實例包括但不限於： 。
“雜芳基”是指5至12個環原子的單環狀或稠合環，含有一、二、三或四個選自N, O及S的環雜原子，其餘環原子為C，且此外，具有完整共扼π-電子系統。典型的雜芳基的實例是但不限於吖啶基、氮雜環丁基、吖辛因基、苯並咪唑基、苯並呋喃基、苯並硫代呋喃基、苯並噻吩基、苯並噁唑基、苯並噁唑啉基、苯並噻唑基、苯並三唑基、苯並四唑基、苯並異噁唑基、苯並異噻唑基、苯並咪唑啉基、哢唑基、4aH-哢唑基、哢啉基、色滿基、色烯基、噌啉基、十氫喹啉基、2H,6H-1,5,2-二噻嗪基、二氫呋喃並[2,3-b]四氫呋喃基、呋喃基、呋咱 基、咪唑烷基、咪唑啉基、咪唑基、1H-吲唑基、咪唑並吡啶基、假吲哚基(indolenyl)、二氫吲哚基、吲嗪基、吲哚基、3H-吲哚基、靛紅醯基(isatinoyl)、異苯並呋喃基、異色滿基、異吲唑基、異二氫吲哚基、異吲哚基、異喹啉基、異噻唑基、異噻唑並吡啶基、異噁唑基、異噁唑並吡啶基、亞甲基二氧基苯基、嗎啉基、二氮雜萘基、八氫異喹啉基、噁二唑基、1,2,3-噁二唑基、1,2,4-噁二唑基、1,2,5-噁二唑基、1,3,4-噁二唑基、噁唑烷基、噁唑基、噁唑並吡啶基、噁唑烷基、萘嵌間二氮雜苯基、羥吲哚基、嘧啶基、菲啶基、菲咯啉基、吩嗪基、吩噻嗪基、吩噁噻基、吩噁嗪基、酞嗪基、呱嗪基、呱啶基、呱啶酮基、4-呱啶酮基、胡椒基、喋啶基、嘌呤基、吡喃基、吡嗪基、吡唑烷基、吡唑啉基、吡唑並吡啶基、吡唑基、噠嗪基、吡啶並噁唑基、吡啶並咪唑基、吡啶並噻唑基、吡啶基、嘧啶基、吡咯烷基、吡咯啉基、2-吡咯烷酮基、2H-吡咯基、吡咯基、喹唑啉基、喹啉基、4H-喹嗪基、喹喔啉基、奎寧環基、四唑基、四氫呋喃基、四氫異喹啉基、四氫喹啉基、6H-1,2,5-噻二嗪基、1,2,3-噻二唑基、1,2,4-噻二唑基、1,2,5-噻二唑基、1,3,4-噻二唑基、噻蒽基、噻唑基、噻吩基、噻唑並吡啶基、噻吩並噻唑基、噻吩並噁唑基、噻吩並咪唑基、噻吩基、三嗪基、1,2,3-三唑基、1,2,4-三唑基、1,2,5-三唑基、1,3,4-三唑基和呫噸基、喹啉基、異喹啉基、酞嗪基、喹唑啉基、吲哚基、異吲哚基、二氫吲哚基、1H-吲唑基、苯並咪唑基、1,2,3,4-四氫喹啉基、1,2,3,4-四氫異喹啉基、5,6,7,8-四氫-喹啉基、2,3-二氫-苯並呋喃基、色滿基、1,2,3,4-四氫-喹喔啉基和1,2,3,4-四氫-喹唑啉基。術語“雜芳基”還可以包括由 上述所定義的“芳基”與單環“雜芳基”所形成的聯芳基結構，例如但不限於“-苯基聯吡啶基-”、“-苯基聯嘧啶基”、“-吡啶基聯苯基”、“-吡啶基聯嘧啶基-”、“-嘧啶基聯苯基-”；其中本發明還包括含有例如上述雜環的稠環和螺環化合物。
藥學上可接受的雜芳基是足夠穩定以被連接至本發明的化合物被配製成藥物組合物，及隨後被施用有需要的病患者。
除非另有定義，本發明的取代基的定義是各自獨立而非互相關聯的，例如對於取代基中R a(或者R b)而言，其在不同的取代基的定義中是各自獨立的。具體而言，對於R a(或者R b)在一種取代基中選擇一種定義時，並不意味著該R a(或者R b)在其他取代基中都具有該相同的定義。更具體而言，例如(僅列舉非窮舉)對於NR aR b中，當R a(或者R b)的定義選自氫時，其並不意味著在-C(O)-NR aR b中R a(或者R b)必然為氫。
“鹵代”或“鹵素”包括氟、氯、溴和碘。“鹵代烷基”意欲包括具有指定碳原子數且取代有1個或多個鹵素的支鏈和直鏈飽和脂族烴基團。鹵代烷基的實例包括但不限於氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、三氯甲基、五氟乙基、五氯乙基、2,2,2-三氟乙基、七氟丙基和七氯丙基。鹵代烷基的實例還包括意欲包括具有指定碳原子數且取代有1個或多個氟原子的支鏈和直鏈飽和脂族烴基團的“氟烷基”。
“鹵代烷氧基”或“鹵代烷基氧基”表示具有指定數量碳原子的經氧橋連接的如上文所定義的鹵代烷基。例如，“C 1-C 6鹵代烷氧基”意欲包括C 1、C 2、C 3、C 4、C 5、C 6鹵代烷氧基。鹵代烷氧基的實例包括但不限於三氟甲氧基、2,2,2-三氟乙氧基和五氟乙氧基。類似地，“鹵代烷基硫基”或“硫代鹵代烷氧基”表示具有指定數量碳原子的經硫橋連接的如上文所定義的鹵代烷基；例如三氟甲基-S-和五氟乙基-S-。
本公開內容中，當提到一些取代基團時使用Cx1-Cx2的表述，這表示所述取代基團中的碳原子數可以是x1至x2個。例如，C0-C8表示所述基團含有0、1、2、3、4、5、6、7或8個碳原子，C1-C8 表示所述基團含有1、2、3、4、5、6、7或8個碳原子，C2-C8表示所述基團含有2、3、4、5、6、7或8個碳原子，C3-C8表示所述基團含有3、4、5、6、7或8個碳原子，C4-C8表示所述基團含有4、5、6、7或8個碳原子，C0-C6表示所述基團含有0、1、2、3、4、5或6個碳原子，C1-C6表示所述基團含有1、2、3、4、5或6個碳原子，C2-C6表示所述基團含有2、3、4、5或6個碳原子，C3-C6表示所述基團含有3、4、5或6個碳原子。
本公開內容中，當提到環狀基團(例如芳基、雜芳基、環烷基和雜環烷基)時使用“x1-x2元環”的表述，這表示該基團的環原子數可以是x1至x2個。例如，所述3-12元環狀基團可以是3、4、5、6、7、8、9、10、11或12元環，其環原子數可以是3、4、5、6、7、8、9、10、11或12個；3-6元環表示該環狀基團可以是3、4、5或6元環，其環原子數可以是3、4、5或6個；3-8元環表示該環狀基團可以是3、4、5、6、7或8元環，其環原子數可以是3、4、5、6、7或8個；3-9元環表示該環狀基團可以是3、4、5、6、7、8或9元環，其環原子數可以是3、4、5、6、7、8或9個；4-7元環表示該環狀基團可以是4、5、6或7元環，其環原子數可以是4、5、6或7個；5-8元環表示該環狀基團可以是5、6、7或8元環，其環原子數可以是5、6、7或8個；5-12元環表示該環狀基團可以是5、6、7、8、9、10、11或12元環，其環原子數可以是5、6、7、8、9、10、11或12個；6-12元環表示該環狀基團可以是6、7、8、9、10、11或12元環，其環原子數可以是6、7、8、9、10、11或12個。所述環原子可以是碳原子 或雜原子，例如選自N、O和S的雜原子。當所述環是雜環時，所述雜環可以含有1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多個環雜原子，例如選自N、O和S的雜原子。
本發明內容中，一個或更多個鹵素可以各自獨立地選自氟、氯、溴和碘。
本文中所用的術語“取代”意指至少一個氫原子被非氫基團替代，條件是維持正常化合價且所述取代得到穩定的化合物。本文所用的環雙鍵為在兩個相鄰環原子之間形成的雙鍵(例如C＝C、C＝N或N＝N)。
在本發明化合物上存在氮原子(例如胺)的情形下，可通過使用氧化劑(例如mCPBA和/或過氧化氫)進行處理來將這些氮原子轉化成N-氧化物以獲得本發明的其它化合物。因此，所顯示和要求保護的氮原子視為均涵蓋所顯示氮及其N-氧化物以獲得本發明衍生物。
當任何變數在化合物的任何組成或式中出現一次以上時，其每次出現時的定義均獨立於其在其它每種情況下出現時的定義。因此，例如如果顯示基團取代有0-3個R，則所述基團可任選地取代有至多三個R基團，且在每次出現時R獨立地選自R的定義。此外，取代基和/或變數的組合僅在上述組合可產生穩定的化合物時才容許存在。
本文使用的術語“患者”是指通過本發明的方法進行治療的有機體。這類有機體優選包括但不限於哺乳動物(例如鼠類、猿/猴、馬、牛、豬、犬、貓等)且最優選是指人類。
本文使用的術語“有效量”意指將會引起例如研究人員或臨床醫師所尋求的組織、系統、動物或人的生物學或醫學回應的藥物或藥劑(即本發明化合物)的量。此外，術語“治療有效量”意指這樣的量：與未接受上述量的相應受試者相比，所述量導致改善的治療、治癒、預防或減輕疾病、病症或副作用，或降低在疾病或病症的進展速度。有效量可以一個或更多個給藥、施用或劑量給予且不意欲被特定的製劑或給藥途徑限制。該術語還包括在其範圍內的增強正常生理機能的有效量。
本文使用的術語“治療”包括其廣義上的含義，涵蓋對物件的治療性處理和/或預防性處理。具體而言，所述“治療”包括導致病症、疾病、障礙等的緩和、抑制、消除和改善和/或預防的任何處理，例如減輕、減少、調節、改善、消除、預防、防止或改善其症狀。所述治療性處理包括緩和、抑制或改善疾病的症狀或狀況；抑制併發症的產生；改善潛在代謝綜合症；抑制疾病或症狀的產生，如控制疾病或情況的發展；減輕疾病或症狀；使疾病或症狀減退；減輕由疾病或症狀引起的併發症，或治療由疾病或症狀引起的徵兆。所述預防性處理包括事先處理以防止、阻斷或延遲、減緩疾病或病症的發生或發展或者減弱疾病或病症的嚴重程度。
同樣，“治療劑”也包括對物件具有治療性處理和/或預防性處理的藥劑或試劑。
術語“藥用”或“藥學上可接受的”在本文中用於指如下那些化合物、物質、組合物和/或劑型：在合理醫學判斷的範圍內，其適於與人類和動物的組織接觸使用而無過高毒性、刺激性、過敏反應和/或其它問題或併發症，並與合理的益處/風險比相稱。
特定藥學及醫學術語
術語“癌症”，如本文所用，指一種不能控制的細胞的異常生長，並且在某種條件下能夠轉移(傳播)。這種類型的癌症包括但不限於，實體腫瘤(如膀胱、腸、腦、胸、子宮、心臟、腎、肺、淋巴組織(淋巴瘤)、卵巢、胰腺或其它內分泌器官(如甲狀腺)、前列腺、皮膚(黑色素瘤)或血液瘤(如非白血性白血病)。
術語“聯合給藥”或其類似術語，如本文所用，指將幾種所選的治療藥物給一個病人用藥，以相同或不同的給藥方式在相同或不同的時間給藥。
術語“增強”或“能增強”，如本文所用，指預期的結果能夠在效價或是持續時間方面都有增加或延長。因此，在增強藥物的治療效果方面，術語“能增強”指藥物在系統中有提高或延長效價或持續時間的能力。本文所用的“增效值”，指在理想的系統中，能夠最大限度地的增強另外一個治療藥物的能力。
術語“免疫性疾病”指對內源性或外源性抗原產生的不良或有害反應的疾病或症狀。結果通常會造成細胞的功能障礙、或因此而破壞並造成機能障礙、或破壞可能產生免疫症狀的器官或組織。
術語“試劑盒”與“產品包裝”是同義詞。
術語“對象”、“受試者”或“病人”包括哺乳動物和非哺乳動物。哺乳動物包括但不限於，哺乳類：人、非人靈長類如猩猩、猿及猴類；農業動物如牛、馬、山羊、綿羊、豬；家畜如兔、狗；實驗動物包括齧齒類，如大鼠、小鼠及豚鼠等。非哺乳類動物包括但不限於，鳥、魚等。在一優選例中，所選哺乳動物是人。
如本文所用，某一化合物或藥物組合物，給藥後，可以使某一疾病、症狀或情況得到改善，尤指其嚴重度得到改善，延遲發病，減緩病情進展，或減少病情持續時間。無論固定給藥或臨時給藥、持續給藥或斷續給藥，可以歸因於或與給藥有關的情況。
給藥途徑
適合的給藥途徑包括但不限於，口服、靜脈注射、直腸、氣霧劑、非腸道給藥、眼部給藥、肺部給藥、經皮給藥、陰道給藥、耳道給藥、鼻腔給藥及局部給藥。此外，僅作舉例說明，腸道外給藥，包括肌肉注射、皮下注射、靜脈注射、髓內注射、心室注射、腹膜內注射、淋巴管內注射、及鼻內注射。
本發明化合物給藥方式可以是局部的給藥方式。在特定的具體實施例中，長效製劑通過植入給藥(例如皮下或肌肉)或通過肌肉注射。此外，在另一具體化實施例中，藥物通過靶向藥物給藥系統來給藥。例如，由器官特異性抗體包裹的脂質體。在這種具體實施例中，所述脂質體被選擇性的導向特定器官並吸收。
藥物組合物和劑量
本文使用的短語“可藥用載體”意指藥用物質、組合物或媒介物，諸如液體或固體填充劑、稀釋劑、賦形劑、製造助劑(例如潤滑劑、滑石、硬脂酸鎂、硬脂酸鈣或硬脂酸鋅或硬脂酸)或溶劑包囊物質，其涉及將主題化合物從一個器官或身體的部分攜帶或運送至另一個器官或身體的部分。每種載體在與製劑的其它成分相容和對患者無害的意義上必須是“可接受的”。
術語“藥物組合物”意指包含本發明化合物與任選的其它可藥用載體的組合物。“可藥用載體”是指本領域中通常接受用於將生物活性劑遞送至動物(具體為哺乳動物)的介質，包括(即)佐劑、賦形劑或媒介物，諸如稀釋劑、防腐劑、填充劑、流動調控劑、崩解劑、潤濕劑、乳化劑、懸浮劑、增甜劑、矯味劑、芳香劑、抗細菌劑、抗真菌劑、潤滑劑和分散劑，這取決於給藥模式和劑型的性質。
本發明的藥用組合物可包含治療有效量的與任選的一種或多種可藥用載體(添加劑)和/或稀釋劑一起配製的一種或多種本發明的化合物，以及任選的一種或多種其它治療劑。可通過任意合適方式給予本發明化合物以用於任意上述用途，例如口服，諸如片劑、丸劑、粉劑、顆粒劑、酏劑、酊劑、懸浮液(包括奈米懸浮液、微懸浮液、噴霧乾燥的分散液)、糖漿和乳液；經舌下；含服；經腸胃外，諸如通過皮下、靜脈內、肌內或胸骨內注射或輸注技術(例如以無菌可注射水性或非水性溶液或懸浮液形式)；經鼻，包括向鼻膜給藥，諸如通過吸入噴霧；局部，諸如以乳膏劑或軟膏劑形式；或經直腸，諸如以栓劑形式；或經瘤內注射。它們可單獨給藥，但通常使用基於所選給藥途徑和標準藥學實踐選擇的藥物載體給藥。
根據本領域技術人員認識範圍內的諸多因素來調配可藥用載體。這些因素包括，但不限於：所調配活性劑的類型和性質；含有活性劑的組合物所要給藥的受試者；組合物的預期給藥途徑；及所靶向的治療適應症。藥用載體包括水性和非水性液體介質及各種固體和半固體劑型。
上述載體可包括除活性劑外的諸多不同成分和添加劑，上述其它成分出於本領域技術人員公知的各種原因包括於製劑中，例如穩定活性劑、黏合劑等。關於合適的藥用載體和載體選擇中所涉及的因素的描述可參見多個容易獲得的來源，例如Allen L.V.Jr.et al.Remington: The Science and Practice of Pharmacy(2 Volumes),22nd Edition(2012),Pharmaceutical Press。
當然，本發明化合物的劑量方案取決於已知因素而有所變化，諸如具體藥劑的藥效學特性及其給藥模式和途徑；接受者的物種、年齡、性別、健康狀況、醫學病狀和重量；症狀的性質和程度；同時治療的種類；治療頻率；給藥途徑、患者的腎和肝功能及期望效應。根據一般指導，當用於指定效應時，各活性成分的日口服劑量應為約0.001mg/天至約10-5000mg/天，優選地為約0.01mg/天至約1000mg/天，且最優選地為約0.1mg/天至約250mg/天。在恆速輸注期間，靜脈內最優選劑量應為約0.01mg/kg/分鐘至約10mg/kg/分鐘。本發明化合物可以單一日劑量給藥，或可以每日兩次、三次或四次的分開劑量給藥總日劑量。
所述化合物通常以與根據預期給藥形式(例如口服片劑、膠囊劑、酏劑和糖漿劑)適當地選擇且與常規藥學實踐相符合的合適藥物稀釋劑、賦形劑或載體(在本文中統稱為藥物載體)的混合物形式進行給藥。
適於給藥的劑型(藥物組合物)可含有約1毫克至約2000毫克活性成分/劑量單位。在這些醫藥組合物中，以組合物的總重量計，活性成分通常將以約0.1-95重量％的量存在。
本發明範圍包括(單獨或與可藥物載體組合)包含治療有效量的至少一種本發明化合物作為活性成分的藥物組合物。任選地，本發明化合物可單獨使用、與本發明其它化合物組合使用或與一種或多種其它治療劑(例如抗癌劑或其它藥學活性物質)組合使用。
不考慮所選擇的給藥路徑，通過本領域技術人員已知的常規方法來將本發明的化合物(其可以合適的水合形式使用)和/或本發明的藥物組合物配製成藥用劑量形式。
可改變活性成分在本發明的藥物組合物中的實際劑量水準，從而獲得對於實現特定患者的期望的治療回應、組成和給藥模式有效的而對患者無毒的活性成分量。
選定的劑量水準會取決於多種因素，包括所用的本發明的特定化合物或其酯、鹽或醯胺的活性；給藥路徑；給藥時間；所用的特定化合物的排泄速率；吸收速率和程度；治療的持續時間；與所用的特定化合物組合使用的其它藥物、化合物和/或物質；所治療的患者的年齡、性別、重量、狀況、一般健康和先前的醫學史等醫學領域公知的因素。
具有本領域普通技術的醫生或獸醫可容易地確定並開出有效量的所需藥物組合物。例如，為了達到所期望的治療效果，醫師或獸醫可在低於所需的水準開始藥物組合物中所用的本發明化合物的較量，並逐步增加劑量直至實現所期望的效果。通常，合適日劑量的本發明化合物將是有效產生治療效果的最低劑量的化合物的量。此種有效劑量通常取決於上述因素。通常，口服、靜脈內、腦室內和皮下劑量的用於患者的本發明化合物的範圍為約0.01至約50mg/kg體重/天。如果需要的話，有效日劑量的活性化合物可以兩個、三個、四個、五個、六個或更多個亞劑量在一天當中的適當的間隔分別給藥，任選地呈單位劑型形式。在本發明的某些方面中，服藥為每天一次給藥。
雖然本發明化合物可單獨給藥，但優選以藥物製劑(組合物)形式給予化合物。
試劑盒/產品包裝
為了用於上述適應症的治療，試劑盒/產品包裝也在此進行描述。這些試劑盒可以由輸送器、藥包或容器盒組成，容器盒可被劃分成多格，以容納一種或多種容器，如管形瓶、試管及類似物等，每個容器中包含所述方法中的單獨一種成分。合適的容器包括瓶子，管形瓶，注射器和試管等。容器由可接受的玻璃或塑膠等材料製作而成。
舉例來講，容器可裝有一種或多種在此所述的化合物，化合物可能以藥物組分形式存在，也可能與在本文中所述的其它成分組成混合物體存在。容器可有一個無菌輸出口(例如容器可為靜脈輸液包或瓶，瓶塞可被皮下注射器針頭刺破)。這樣的試劑盒可帶有一種化合物，及本文中所述的使用方法的說明、標籤或操作說明。
一個典型的試劑盒可包括一種或多種容器，為適應商業推廣和使用者對化合物使用的需求，每個容器裝有一種或多種材料(如試劑，也可以是濃縮的母液，和/或器械)。這些材料包括但不局限於緩衝液、稀釋液、濾器、針頭、注射器、輸送器、包、容器、瓶和/或試管，附有內容清單和/或使用說明書，內置包裝也附有說明書。整套的說明都要包括在內。
標籤可顯示在容器上或與容器緊密相關。標籤出現在容器上即指標籤字母、數位或其它特徵被黏貼、鑄模、刻在容器上；標籤也可出現在裝有多種容器的容器盒或運輸盒內，如在產品插頁中。一個標籤可用來提示內容物的某種特定治療用途。標籤也可標示內容物使用說明，諸如在上述方法中描述的。
在本說明書中被描述的所有特徵(包括任何所述的請求項、摘要和圖)，和/或任何方法或過程中涉及的所有步驟，均有可能以任意一種組合存在，除非某些特徵或步驟在同一組合中是相互排斥的。
本發明提到的上述特徵，或實施例提到的特徵可以任意組合。本案說明書所揭示的所有特徵可與任何組合物形式並用，說明書中所揭示的各個特徵，可以任何可提供相同、均等或相似目的的替代性特徵取代。因此除有特別說明，所揭示的特徵僅為均等或相似特徵的一般性例子。
下面結合具體實施例，進一步闡述本發明。應理解，這些實施例僅用於說明本發明而不用於限制本發明的範圍。下列實施例中未註明具體條件的實驗方法，通常按照常規條件或按照製造廠商所建議的條件。除非另外說明，否則所有的百分數、比率、比例、或份數按重量計。
本發明中的重量體積百分比中的單位是本領域技術人員所熟知的，例如是指在100毫升的溶液中溶質的重量。除非另行定義，文中所使用的所有專業與科學用語與本領域熟練人員所熟悉的意義相同。此外，任何與所記載內容相似或均等的方法及材料皆可應用於本發明方法中。文中所述的較佳實施方法與材料僅作示範之用。
下面通過實施例的方式進一步說明本發明，但並不因此將本發明限制在所述的實施例範圍之中。下列實施例中未註明具體條件的實驗方法，按照常規方法和條件，或按照商品說明書選擇。
NMR的測定是用Bruker AVANCE-400核磁儀。測定溶劑在譜圖解析中註明。
MS的測定用Agilent 1200-G1956A/1200-6110A/1200-6140A/1260-6125B/ Prime-6125B/1260-6120液質聯用儀，SHIMADZU 20A-2010/20A-2020液質聯用儀，Waters ACQ-QDA液質聯用儀。
HPLC分析使用SHIMADZU 20A 高效液相色譜儀。
SFC分析測定使用Waters UPCC with PDA Detector and QDa Detector超高效合相色譜儀，Waters UPC2 with PDA detector超高效合相色譜儀，Agilent 1260 with DAD detector高效液相色譜儀，Shimadzu LC-20AB with PDA detector高效液相色譜儀，Shimadzu LC-20AD with PDA detector高效液相色譜儀。
製備型HPLC分離使用Shimadzu LC-20AP pump，Shimadzu LH-40 Liquid Handler，Shimadzu SPD-20A Detector，Gilson GX-281 Liquid Handler，Gilson 322 pump，Gilson 156 UV Detector製備型色譜儀。
SFC分離使用The Berger MG II、MG III，Sepiatec's Prep SFC 100 system，Waters Prep 80Q SFC SYSTEM、Prep 150 AP SFC SYSTEM、Prep 200 SFC SYSTEM、Prep 350 SFC SYSTEM。
快速柱色譜分離使用Biotage IsoleraOne快速製備色譜儀。
薄層層析矽膠板使用安徽良臣矽源材料有限公司的GF254丙烯酸黏合劑矽膠板，薄層色譜法（TLC）使用的矽膠板採用的規格是0.25mm，薄層層析分離純化產品採用的規格是0.5mm。
加壓氫化反應氫化瓶和氫氣鋼瓶。
微波反應使用Biotage Initiator +微波合成儀。
手套箱使用德力斯DELLIX 定製手套箱。
下面通過實施例對本發明進行詳細描述，但並不意味著對本發明任何不利限制。本發明的化合物可以通過本領域技術人員所熟知的多種合成方法來製備，包括下面列舉的具體實施方式、其與其他化學合成方法的結合所形成的實施方式以及本領域技術上人員所熟知的等同替換方式，優選的實施方式包括但不限於本發明的實施例。對本領域的技術人員而言，在不脫離本發明精神和範圍的情況下針對本發明具體實施方式進行各種變化和改進將是顯而易見的。
中間體 A1：2-(4,4-二氟呱啶-1-基)-6-甲基嘧啶-4-胺
第一步：在25°C下，向2,4-二氯-6-甲基嘧啶(3.00 g，18.40 mmol)的二甲亞碸(30 mL）溶液中加入氨水(2.5 mL，18.04 mmol)，反應液在25°C下攪拌16小時。反應液用乙酸乙酯(50 mL x 3)萃取，合併的有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮乾的黃色油狀物，經打漿(乙酸乙酯：石油醚=1:1，10 mL)純化得白色固體2-氯-6-甲基嘧啶-4-胺(2.00 g，收率：75%)。LCMS (ESI): [M+H] += 144.1。
第二步：在25°C下，向2-氯-6-甲基嘧啶-4-胺(7.50 g，41.79 mmol)、4,4-二氟呱啶鹽酸鹽(12.00 g， 76.13 mmol)的N-甲基吡咯烷酮(75 mL)的溶液中加入N,N-二異丙基乙胺(25 mL)。反應液在160°C下攪拌6小時，然後將反應混合物濃縮乾溶於二氯甲烷(50 mL)經快速柱層析純化(矽膠，0-10%梯度的甲醇/二氯甲烷)得到黃色油狀物的粗品。該粗品溶於乙酸乙酯(50 mL)，用水(50 mL x 2)洗。有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮得淡黃色固體，在石油醚(30 mL)中攪拌30分鐘。將白色沉澱過濾得2-(4,4-二氟呱啶-1-基)-6-甲基嘧啶-4-胺(3.00 g，收率：38%)。LCMS (ESI): [M+H] += 229.1。
中間體 A2：4-溴-N-(2-(4,4-二氟呱啶-1-基)-6-甲基嘧啶-4-基)-2-(6-氮雜螺[2.5]辛-6-基)苯甲醯胺
第一步：將4-溴-2-氟苯甲酸(20.00 g，90.41 mmol)、碳酸鈉(14.52 g，135.61 mmol)溶解在N,N-二甲基甲醯胺(200 mL)中。在30°C下向溶液中加入溴化苄(17.18 g，99.45 mmol)。反應混合物在30°C下攪拌15小時。反應混合物用水(400 mL)淬滅，並用甲基叔丁基醚(3 x 300 mL)萃取。用鹽水(400 mL)洗滌合併的有機提取物，無水硫酸鈉乾燥，過濾並減壓濃縮，得到粗品白色固體4-溴-2-氟苯甲酸苄酯(29.00 g)。LCMS (ESI): [M+H] += 308。
第二步：向4-溴-2-氟苯甲酸苄酯(20.00 g，59.79 mmol)的二甲基亞碸(120 mL)溶液中添加碳酸鈉(21.82 g，203.8 mmol)，隨後添加6-氮雜螺環[2.5]辛烷鹽酸鹽(13.38 g，89.69 mmol)，反應混合物在100°C下攪拌反應混合物15小時。反應混合物用水(200 mL)淬滅，並用甲基叔丁基醚(3 x 200 mL)萃取。用鹽水(3 x 200 mL)洗滌合併的有機提取物，無水硫酸鈉乾燥，過濾並減壓濃縮，得到紅色油狀物4-溴-2-(6-氮雜螺環[2.5]辛烷-6-基)苯甲酸苄酯(23.00 g，收率：89%)。LCMS (ESI): [M+H] += 402.1。
第三步：向4-溴-2-(6-氮雜螺環[2.5]辛烷-6-基)苯甲酸苄酯(7.00 g，16.24 mmol)的甲醇/水(60 mL/15 mL)溶液中添加氫氧化鋰一水合物(1.15 g，48.72 mmol)，在35°C下攪拌15小時。濃縮反應混合物，將殘留物溶解在水(50 mL)中，乙酸乙酯(3 × 70 mL)洗水相，然後用氯化氫水溶液(1M aq，20 mL)將水相調節至pH= 5，並用乙酸乙酯(3 × 50mL)萃取，飽和氯化鈉水溶液(100 mL)洗有機層，無水硫酸鈉乾燥並濃縮，得到紅色固體2-(6-氮雜螺環[2.5]辛烷-6-基)-4-溴苯甲酸(4.00 g，收率：73%)。LCMS (ESI): [M+H] += 311.7。
第四步：向4-溴-2-(6-氮雜螺[2.5]辛-6-基)苯甲酸(1000 mg，3.22 mmol)的二氯甲烷(10 mL)，N,N-二甲基甲醯胺(0.2 mL)的溶液中加入二氯亞碸(1.10 g，9.67 mmol)，反應液室溫攪拌2小時。反應液旋乾，甲苯(10 mL)加入，濃縮，重複操作3次。2-(4,4-二氟呱啶-1-基)-6-甲基嘧啶-4-胺(735 mg，3.22 mmol)，叔丁醇鉀(1096 mg，9.67 mmol)加到四氫呋喃(10 mL)中，上步粗品溶於四氫呋喃(20 mL)中，緩慢滴加到反應液，室溫攪拌4小時。反應液抽濾，濃縮，快速柱色譜(矽膠，0-25%梯度的乙酸乙酯/石油醚)得4-溴-N-(2-(4,4-二氟呱啶-1-基)-6-甲基嘧啶-4-基)-2-(6-氮雜螺[2.5]辛-6-基)苯甲醯胺(600 mg，收率：35%)，淡黃色固體。
中間體 A3：4-硝基-2-（6-氮雜螺環[2.5]辛烷-6-基）苯甲醯氯
第一步：含有2-氟-4-硝基苯甲酸(10.00 g，53.48 mmol)、6-氮雜螺環[2.5]辛烷鹽酸鹽(8.69 g，58.83 mmol)、碳酸鉀(22.60 g，160.45 mmol)和二甲基亞碸(50 mL)的混合溶液在140°C下攪拌12小時。向反應液中滴加2 M 鹽酸水溶液調節pH至5左右，然後過濾，濾餅乾燥後得到化合物4-硝基-2-（6-氮雜螺環[2.5]辛烷-6-基)苯甲酸(10.60 g)，為黃色固體。
第二步：將4-硝基-2-(6-氮雜螺環[2.5]辛烷-6-基)苯甲酸(500 mg，1.81 mmol)和二氯亞碸(5 mL)的混合溶液在90°C下攪拌1小時。用二氯甲烷濃縮反應液得到化合物4-硝基-2-(6-氮雜螺環[2.5]辛烷-6-基)苯甲醯氯(620 mg)，為黃色固體。LCMS (ESI): [M+H] += 291.1。
中間體A4：2-氨磺醯乙酸乙酯
第一步：2-(氯磺醯基)乙酸乙酯(5.00 g，26.53 mmol)加到二氯甲烷(25 mL)中，反應液冷卻至0°C。六甲基二矽氮烷(4.32 g，26.53 mmol)緩慢滴加到反應液。反應液25°C攪拌1小時。反應液蒸乾得殘餘物。0°C下，將殘餘物溶於乙醇(20 mL)，反應液25°C攪拌1小時。反應液蒸乾得白色固體2-氨磺醯乙酸乙酯(4.20 g，收率：94%)。
中間體 A5：4，6-二氯-1-甲基-1，3-二氫呋喃並[3，4-c]吡啶
第一步：在氮氣保護下將2,2,6,6-四甲基呱啶(8.91 g，62.50 mmol)溶解在四氫呋喃(40 mL)溶液中，將混合物於-70°C下攪拌1小時。然後緩慢滴加正丁基鋰溶液(72 mL，125 mmol，2.5 M正己烷溶液)，混合物控溫-70°C下攪拌3小時。將2,6-二氯煙酸(6.0 g，31.2 mmol)溶解到四氫呋喃(40 mL)並將其緩慢注射到反應體系中，控溫-70°C下攪拌1小時後緩慢升至室溫攪拌4小時。再次控溫至-70°C並緩慢滴加乙醛溶液(13.76 g，312.50 mmol)，滴加完畢後升至室溫攪拌24小時。用稀鹽酸(200 mL，6M水溶液 )調pH至2。加入乙酸乙酯 (200 mL × 3)，萃取3次，合併有機相，飽和食鹽水(100 mL)洗滌一遍，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮，得到粗品用甲醇(50 mL)打漿攪拌1小時，過濾得到白色固體4,6-二氯-1-甲基氫呋喃並[3,4-c]吡啶-3-酮(4.00 g，收率：59%)。LCMS (ESI): [M+H] += 218.0。
第二步：在氮氣保護下將4,6-二氯-1-甲基氫呋喃烷[3,4-c]吡啶-3-酮(4.00 g，18.30 mmol)溶解在四氫呋喃(40 mL)中降溫至-78°C下攪拌1小時。然後緩慢滴加二異丁基氫化鋁(46 mL，45.87 mmol，1.0 M正己烷溶液)。將反應混合物在-78°C下攪拌1.5小時，並在-78°C下滴加飽和氯化銨(30 mL)淬滅。 將混合物緩慢加熱至室溫並攪拌30分鐘。過濾反應混合物，濾液用乙酸乙酯(30 mL×3)萃取。合併的有機層，用硫酸鈉乾燥並在真空中濃縮至乾。殘餘物經柱層析純化，得到4,6-二氯-1-甲基-1,3-二氫呋喃並[3,4-c]吡啶-3-醇(2.40 g，收率：59%)。LCMS (ESI): [M+H] += 221.0。
第三步：將(4,6-二氯-1-甲基-1,3-二氫呋喃並[3,4-c]吡啶-3-醇(2.40 g，10.80 mmol)溶解在二氯甲烷(30 mL)中，加入三氟乙酸(6.15 g，54.00 mmol)和三乙基矽烷(3.76 g，32.40 mmol)，反應混合物在25°C下攪拌5小時。減壓除去溶劑，將殘渣溶解在水(50 mL)中，然後用飽和碳酸氫鈉水溶液調節pH = 8，並用乙酸乙酯(50 mL x 3)萃取，合併有機相，飽和氯化鈉水溶液(50 mL)洗滌有機層，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，粗品用快速柱色譜純化(矽膠，0-20%梯度的乙酸乙酯/石油醚)得到無色油狀產物4，6-二氯-1-甲基-1，3-二氫呋喃並[3，4-c]吡啶(1.70 g，收率：77%)。LCMS (ESI): [M+H] += 204.0。
中間體 A6：4,6-二氯-1-乙基-1-甲基-1,3-二氫呋喃並[3,4-c]吡啶
第一步：將正丁基鋰 (52.1 mL，130 mmol)在-70 °C下滴加到二異丙胺 (15.8 g，156 mmol)的四氫呋喃(50 mL)溶液中，並在-70 °C攪拌40分鐘。將2,6-二氯尼古丁酸 (10.0 g，52.1 mmol)的四氫呋喃(100.00 mL)溶液在-70 °C滴加到反應體系中，在-70 °C攪拌3小時。然後將丁酮 (33.8 g，468 mmol) 在-70 °C滴加到反應中，升溫至25 °C並攪拌16小時。使用飽和氯化銨溶液 (200 mL)淬滅，加水 (100 mL)稀釋，使用乙酸乙酯(200 mL x 2)萃取，有機相乾燥過濾濃縮，殘留物用快速柱色譜純化 (矽膠，0-11%梯度的四氫呋喃/石油醚)得到黃色固體4,6-二氯-1-乙基-1-甲基呋喃並[3,4-c]吡啶-3(1H)-酮 (1.90 g，7.29 mmol，收率：14%)。LCMS (ESI): [M+H] += 246.0。H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 8.11 (s, 1H), 2.10 - 1.93 (m, 2H), 1.63 (s, 3H), 0.71 (t, J= 7.6 Hz, 3H) 。
第二步：將4,6-二氯-1-乙基-1-甲基呋喃並[3,4-c]吡啶-3(1H)-酮 (1.90 g，7.72 mmol)溶於甲苯 (40 mL)中，在-70 °C滴加二異丁基氫化鋁 (17.76 mL，17.76 mmol)，並在-70 °C攪拌2小時。反應液倒入水 (200 mL)中淬滅，過濾後濾液使用乙酸乙酯 (200 mL x 2)萃取，有機相乾燥過濾濃縮，殘留物用快速柱色譜純化(矽膠，0-15%梯度的四氫呋喃/石油醚)得到黃色油狀4,6-二氯-1-乙基-1-甲基-1,3-二氫呋喃並[3,4-c]吡啶-3-酚 (1.80 g，7.02 mmol，收率：91%)。LCMS (ESI): [M+H] += 247.9。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 7.69 (d, J= 2.8 Hz, 1H), 7.23 - 7.11 (m, 1H), 6.29 (dd, J= 6.8, 14.0 Hz, 1H), 1.81 - 1.76 (m, 2H), 1.53 - 1.38 (m, 3H), 0.86 - 0.60 (m, 3H) 。
第三步：將4,6-二氯-1-乙基-1-甲基-1,3-二氫呋喃並[3,4-c]吡啶-3-酚 (1.80 g，7.25 mmol)溶於二氯甲烷 (36 mL)中，0 °C加入三氟乙酸 (3.52 g，36.3 mmol)，並在0 °C攪拌30分鐘，0 °C 加入三乙基矽烷 (2.56 g，21.7 mmol)，升溫至25 °C並攪拌3小時。將反應液倒入水(50 mL)中，使用飽和碳酸氫鈉溶液將pH值調至7，使用乙酸乙酯(100 mL x 2)萃取，有機相乾燥過濾濃縮，殘留物用快速柱色譜純化(矽膠，0-5%梯度的四氫呋喃/石油醚)得到白色固體4,6-二氯-1-乙基-1-甲基-1,3-二氫呋喃並[3,4-c]吡啶(1.40 g，5.94 mmol，收率：82%)。LCMS (ESI): [M+H] += 232.0。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 7.64 (s, 1H), 5.09 - 4.90 (m, 2H), 1.80 (td, J= 7.2, 14.0 Hz, 2H), 1.42 (s, 3H), 0.73 (t, J= 7.6 Hz, 3H)。
中間體 A7：1,3-二溴吡咯並[1,2-a]吡嗪
第一步：向2-吡咯甲酸甲酯(37.0 g，296 mmol)的N,N-二甲基甲醯胺(400 mL)溶液中加入2-氯乙醯胺(33.2 g，355 mmol)和碳酸銫(128 g，384 mmol)，將混合物在20°C攪拌14小時。將反應液倒入至冰水(500 mL)當中，並用乙酸乙酯(300 mL x 3)進行萃取，合併有機相，用飽和食鹽水(300 mL x 3)洗滌，再用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮得到白色固體1-(2-氨基-2-氧亞基乙基)-1H-吡咯-2-甲酸甲酯(17.4 g，粗品)。LCMS (ESI): [M+H] += 182.9。
第二步：向1-(2-氨基-2-氧亞基乙基)-1H-吡咯-2-甲酸甲酯(17.4 g，95.5 mmol)的四氫呋喃(200 mL)溶液中加入叔丁醇鉀(32.7 g，288 mmol) ，將混合物在70°C攪拌14小時。將反應液用2N鹽酸調pH至6，用乙酸乙酯(200 mL x 3)萃取。合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液旋乾得殘留物。殘留物用乙醇打漿後過濾得到棕色固體吡咯並[1,2-a]吡嗪-1,3(2H,4H)-二酮(6.50 g，43.3 mmol，收率：45%)。LCMS (ESI): [M+H] += 151.1。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 11.31 (br s, 1H), 7.17 (s, 1H), 6.89 (m, 1H), 6.35 (m, 1H), 4.99 (s, 2H)。
第三步：向吡咯並[1,2-a]吡嗪-1,3(2H,4H)-二酮(6.50 g，43.3 mmol)的二氧六環(60 mL)溶液中加入三溴氧磷(24.8 g，86.6 mmol)。將反應混合物加熱至100°C攪拌2小時。將反應液濃縮，加入乙酸乙酯，再用碳酸氫鈉水溶液調pH至7。混合物用乙酸乙酯(200 mL x 3)萃取，合併有機相，用飽和食鹽水(200 mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液旋乾得殘餘物。殘留物用快速柱色譜純化(矽膠，0-5%梯度的乙酸乙酯/石油醚)得到黃色固體1,3-二溴吡咯並[1,2-a]吡嗪(3.19 g，11.6 mmol，收率：27%)。LCMS (ESI): [M+H] += 276.9。
中間體 A8：6,8-二氯-3-甲基咪唑並[1,5-a]吡嗪
第一步：將3,5-二氯吡嗪-2-甲腈(25.0 g，144 mmol)加入至乙酸(250 mL)中，然後加入雷尼鎳(2.50 g)。將混合物用氫氣置換三次，並在氫氣(50 psi)氛圍下加熱至50°C攪拌24小時。將反應液過濾，濾液旋乾得到綠色固體(3,5-二氯吡嗪-2-基)甲胺(12.3 g，69.1 mmol，收率：48%)。LCMS (ESI): [M+H] += 177.9。
第二步：將(3,5-二氯吡嗪-2-基)甲胺(12.0 g，67.4 mmol)的乙酸酐(60 mL)溶液在25°C攪拌16小時。向反應液乙酸乙酯(250 mL)，用飽和碳酸氫鈉水溶液洗滌。合併有機相，飽和食鹽水洗滌(250 mL)，再用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液旋乾得到黃色固體N-((3,5-二氯吡嗪-2-基)甲基)乙醯胺(10.8 g，49.1 mmol，收率：73%)。LCMS (ESI): [M+H] += 219.9。
第三步：將N-((3,5-二氯吡嗪-2-基)甲基)乙醯胺(10.8 g，49.1 mmol)加入到三氯氧磷(110 mL)中。混合物在100°C攪拌2小時。將反應液滴加到水(500 mL)中，用乙酸乙酯(300 mL x 3)萃取，用飽和碳酸氫鈉水溶液洗滌。合併有機相，飽和食鹽水洗滌(300 mL)，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液旋乾得殘餘物。殘留物用快速柱色譜純化(矽膠，0-100%梯度的乙酸乙酯/石油醚)得到黃色固體6,8-二氯-3-甲基咪唑並[1,5-a]吡嗪(2.7 g，13.3 mmol，收率：27%)。LCMS (ESI): [M+H] += 201.9。
中間體 A9：6,8-二溴-[1,2,4]三唑[1,5-a]吡嗪
第一步：將3,5-二溴吡嗪-2-胺(20.00 g，79.08 mmol)溶解在乙醇(200 mL)中加入N，N-二甲基甲醯胺二甲基縮醛(48.08 g，395.41 mmol)，氮氣保護下升溫至70°C反應4小時，將反應液冷卻至室溫，有大量固體析出，過濾，濾餅烘乾得到(E) -N'-(3,5-二溴吡嗪-2-基)-N，N-二甲基甲醯胺(23.00 g，收率：94%)；LCMS (SI): [M+H] += 308.6。
第二步：將(E)-N'-(3,5-二溴吡嗪-2-基)-N，N-二甲基甲醯胺 (20.00 g，64.94 mmol)溶於甲醇(200 mL)中加入鹽酸羥胺(6.77 g，97.41 mmol)，氮氣保護下升溫至60°C反應16小時。將反應液冷卻至室溫，有大量固體析出，過濾，濾餅烘乾得到(E)-N-(3,5-二溴吡嗪-2-基)-N'-羥基甲醯胺亮黃色固體(10.00 g，收率：52%)；LCMS (ESI): [M+H] +=295.6。
第三步：將(E) -N-(3,5-二溴吡嗪-2-基)-N'-羥基甲醯胺(10.00 g，33.79 mmol)溶於甲苯(100 mL)中，加入三氟乙酸酐(35.49 g，168.97 mmol)，對甲基本磺醯氯(7.23 g，37.17 mmol)，氮氣保護下升溫至90°C反應16小時。把反應液緩慢倒入飽和碳酸氫鈉(50 mL)中，用乙酸乙酯(50mL*3)萃取，合併的有機相用飽和食鹽水(50 mL)洗一次，無水硫酸鈉乾燥，旋乾，用快速柱色譜純化(矽膠，5-20%梯度的乙酸乙酯/石油醚)得到6,8-二溴-[1,2,4]三唑[1,5-a]吡嗪黃色固體(5.8 g，收率：62%)；LCMS (ESI): [M+H] +=444.2。
中間體 A10：6-溴-8-氯-[1,2,4]三唑並[4,3-a]吡嗪
第一步： 2,3-二氯吡嗪(25.00 g，167.81 mmol)加到乙醇(50 mL)中，水合肼(80%，21.53 g，344.00 mmol)加入反應液，反應液85°C攪拌2小時。反應液濃縮，抽濾，固體用水(50 mL x 3)洗，烘乾得2-氯-3-肼基吡嗪為橘紅色固體(19.00 g，收率：78.32%)。LCMS (ESI): [M+H] +=145.1, 147.1。
第二步：2-氯-3-肼基吡嗪(19.00 g，131.43 mmol)，N,N-二異丙基乙胺(34.67 g，262.87 mmol)加到二氯甲烷(50 mL)中，反應液冷卻至0°C。三氟乙酸酐(30.67 g，144.58 mmol)緩慢滴加至反應液，滴加完後，反應液25°C攪拌1小時。反應液倒入水(100 mL)中，乙酸乙酯(50 mL x 3)萃取，有機相合併，飽和氯化鈉水溶液(50 mL x 3)洗，有機相無水硫酸鈉乾燥，濃縮得粗品。粗品快速柱色譜純化(矽膠， 0-25%梯度的乙酸乙酯/石油醚)得N'-(3-氯吡嗪-2-基)-2,2,2-三氟乙醯肼為淡黃色固體(14.00 g，收率：44.28%)。LCMS (ESI): [M+H] +=241.0。
第三步：N'-(3-氯吡嗪-2-基)-2,2,2-三氟乙醯肼(14.00 g，58.20 mmol)加到N,N-二甲基甲醯胺(45 mL)中，反應液冷卻至0°C。N-溴代丁二醯亞胺(11.39 g，64.02 mmol)分3次緩慢加到反應液，加完後，反應液25°C攪拌4小時。反應液緩慢加水(50 mL)淬滅，乙酸乙酯(50 mL x 3)萃取，有機相合併，飽和氯化鈉水溶液(50 mL x 3)洗，無水硫酸鈉乾燥，濃縮得粗品。粗品快速柱色譜純化(矽膠，0-25%梯度的乙酸乙酯/石油醚)得N'-(5-溴-3-氯吡嗪-2-基)-2,2,2-三氟乙醯肼為白色固體(5.90 g，收率：31.73%)。LCMS (ESI): [M+H] +=321.0。
第四步：N'-(5-溴-3-氯吡嗪-2-基)-2,2,2-三氟乙醯肼(5.90 g，18.47mmol)加到乙醇(50 mL)中，濃鹽酸(12M，10 mL)加入反應液，反應液80°C攪拌4小時。反應液濃縮得粗品，飽和碳酸氫鈉水溶液中和至pH=7，乙酸乙酯(50 mL x 3)萃取，有機相合併，無水硫酸鈉乾燥，濃縮得5-溴-3-氯-2-肼基吡嗪為棕色固體(3.50 g，收率：85%)。LCMS (ESI): [M+H] +=225.0。
第五步：5-溴-3-氯-2-肼基吡嗪(3.50 g，15.73 mmol)加到原甲酸三乙酯(10 mL)中，對甲苯磺酸(138 mg，0.79 mmol)加到反應液，反應液130°C反應4小時。反應液倒入水(50 mL)中，乙酸乙酯(50 mL x 3)萃取，有機相合併，無水硫酸鈉乾燥，濃縮得6-溴-8-氯-[1,2,4]三唑並[4,3-a]吡嗪為棕色固體(2.10 g，收率：57.17%)。LCMS (ESI): [M+H] +=234.9。
中間體 A11：5,7-二氯咪唑[1,2-c]嘧啶
第一步：含有6-氯-2-(甲硫基)嘧啶-4-胺(5.00 g，28.47 mmol)、2-溴-1,1-二甲氧基乙烷(5.77 g，34.16 mmol)和二氧六環/水=4/1(50 mL)的混合溶液在100°C下攪拌12小時，將反應液倒入水中(100 mL)並用乙酸乙酯(50 mL x 3)萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾並濃縮得到化合物7-氯-5-(甲硫基)咪唑[1,2-c]嘧啶(7.90 g)，為棕色固體。LCMS (ESI): [M+H] += 200.0。
第二步： 含有7-氯-5-(甲硫基)咪唑[1,2-c]嘧啶(7.90 g，39.57 mmol)、氫氧化鉀水溶液(60 mL，2M)和甲醇(20 mL)的混合溶液在100°C下攪拌12 小時。反應液用乙酸乙酯(50 mL x 3)萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾並濃縮，得到化合物7-氯咪唑[1,2-c]嘧啶-5-醇(3.50 g)，為黃色固體。LCMS (ESI): [M+H] += 170.0。
第三步：含有7-氯咪唑並[1,2-c]嘧啶-5-醇(3.40 g，20.05 mmol)和三氯氧磷(20 mL)的混合溶液在90°C下攪拌2小時，濃縮反應液，然後加入飽和碳酸氫鈉水溶液(100 mL)將pH調節至8左右，然後用乙酸乙酯(30 mL x 3)萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾並濃縮後得到化合物5,7-二氯咪唑[1,2-c]嘧啶(2.80 g)，為棕色固體。LCMS (ESI): [M+H] += 188.0。
中間體 A12：5,7-二氯-[1,2,4]三唑並[4,3-c]嘧啶
第一步：向2,4,6-三氯嘧啶(35.0 g，191 mmol)和三乙胺(57.9 g，572 mmol)的乙醇(700 mL)的溶液中加入單鹽酸肼(12.0 mL，28.5 mmol)，將混合物在25°C攪拌2小時。反應液直接旋乾，然後用乙醇(200 mL)打漿純化得到黃色固體 2,4-二氯-6-肼基嘧啶(60.0 g，175 mmol，收率：86%)。LCMS (ESI): [M+H] += 179.1。
第二步：在0°C下向乙酸酐(200 mL)溶液中滴加甲酸(100 ml)，在0°C攪拌10分鐘，加熱至50°C攪拌15分鐘。然後降溫至0°C，向混合物中加入2,4-二氯-6-肼基嘧啶(55.0 g，307 mmol)，將反應液在0-25°C下繼續攪拌2小時。反應液用水(500 mL)稀釋，乙酸乙酯(800 mL x 3)萃取。合併有機相，用無水硫酸鎂乾燥，過濾，濾液旋乾得到殘留物。殘留物用甲基叔丁基醚(200 mL)打漿純化得到粉色固體N-[(2,6-二氯嘧啶-4-基)氨基]甲醯胺(22.0 g，106 mmol，收率：35%)。LCMS (ESI): [M+H] += 207.1。
第三步：在氮氣保護下，向三氯氧磷(180 mL，1937 mmol)溶液中加入N'-(2,6-二氯嘧啶-4-基)甲醯肼(22.0 g，106 mmol)，將混合物加熱至100°C攪拌4小時。反應液旋掉大部分三氯氧磷，緩慢分次倒入到(500 mL)水焠滅，加入二氯甲烷(500 x 3 mL)萃取，有機相合併用飽和氯化鈉(500 mL)洗滌。有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液旋乾得殘餘物。殘留物用快速柱色譜純化(矽膠，0-50%梯度的乙酸乙酯/石油醚)得到淡褐色固體5,7-二氯-[1,2,4]三唑並[4,3-c]嘧啶(1.04 g，5.3 mmol，收率：5%)。LCMS (ESI): [M+H] += 189.1。
中間體 A13：5,7-二氯-3-甲基-[1,2,4]三唑並[4,3-c]嘧啶
第一步：向2,4-二氯-6-肼基嘧啶(30.0 g，168 mmol)中加入乙酸酐(30 mL)，將混合物加熱至50°C攪拌1小時，向反應混合物中加入水(500 mL)，用乙酸乙酯(200 mL x 3)萃取。合併有機相，用無水硫酸鎂乾燥，過濾，濾液旋乾得殘餘物。殘留物用甲基叔丁基醚(200 mL)打漿，過濾，濾渣為黃色固體N'-(2,6-二氯嘧啶-4-基)乙醯肼(6.00 g，27.1 mmol，收率：16%)。LCMS (ESI): [M+H] += 221.0。
第二步：向氧氯化磷(60 mL)中緩慢加入N'-(2,6-二氯嘧啶-4-基)乙醯肼(6.00 g，27.1 mmol)，將反應混合物在100°C攪拌4小時。反應混合物在25°C下加入水(200 mL)淬滅，用乙酸乙酯(200 mL x 2)萃取。合併有機相，用無水硫酸鎂乾燥，過濾，濾液旋乾得殘餘物。殘留物用快速柱色譜純化(矽膠，0-25%梯度的乙酸乙酯/石油醚)得到黃色固體5,7-二氯-3-甲基-[1,2,4]三唑並[4,3-c]嘧啶(2.00 g，9.85 mmol，收率：36%)。LCMS (ESI): [M+H] += 203.0。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 8.11 (s, 1H), 2.55 (s, 3H)。
中間體 A14：5,7-二溴噻吩並[2,3-c]吡啶
第一步：向甲基 3-甲基噻吩-2-甲酸基酯(20.0 g，128 mmol)的四氯化碳(400 mL)溶液中加入2,2'-偶氮二(2-甲基丙正離子基腈) (6.31 g，38.4 mmol)和N-溴代丁二醯亞胺(27.3 g，153 mmol)。將混合物加熱至80°C攪拌16小時，向反應混合物中加入水(200 mL)，用乙酸乙酯(200 mL x 2)萃取。合併有機相，用無水硫酸鎂乾燥，過濾，濾液旋乾得到黃色油狀物甲基 3-(溴甲基)噻吩-2-甲酸基酯(43.0 g，128 mmol，粗品)。
第二步：在冰浴下向氰化鈉(11.6 g，237 mmol)的水(170 mL)溶液中加入甲基 3-(溴甲基)噻吩-2-甲酸基酯(43.0 g，182. mmol)的甲醇(350 mL)溶液，將反應混合物加熱到55°C攪拌2小時。向反應混合物中加入水(100 mL)，用二氯甲烷(300 mLx3)萃取。合併有機相，用無水硫酸鎂乾燥，過濾，濾液旋乾得殘餘物。殘留物用快速柱色譜純化(矽膠，0-4%梯度的乙酸乙酯/石油醚)得到白色固體甲基 3-(氰基甲基)噻吩-2-甲酸基酯(8.5 g，182 mmol，收率：26%)。LCMS (ESI): [M+H] += 182.0。
第三步：向甲基 3-(氰基甲基)噻吩-2-甲酸基酯(8.50 g，46.9 mmol)的甲醇(45.0 mL)和水(45.0 mL)的混合溶液中加入氫氧化鋰-水合物 (5.96 g，140 mmol)。將混合物在25°C下攪拌4小時。將反應混合物減壓濃縮，得殘餘物。殘餘物為白色固體3-(氰基甲基)噻吩-2-羧酸(6.00 g，46.9mmol，粗品)。LCMS (ESI): [M+H] += 168.0。
第四步：在0°C下向三溴磷(20.0 mL)的N,N-二甲基甲醯胺(4.00 mL)溶液中加入3-(氰基甲基)噻吩-2-羧酸(2.70 g，0.00 mmol)，然後將反應混合液加熱至120°C攪拌3小時。將反應混合物用冰水浴冷卻至室溫。然後將反應混合物倒入冰水中，過濾收集析出物得到棕色固體5,7-二溴噻吩並[2,3-c]吡啶(2.1 g，粗品)。LCMS (ESI): [M+H] += 293.7。
中間體 A15：5,7-二溴呋喃並[2,3-c]吡啶
第一步：在6-二溴吡啶-3-酚(10.0 g，39.5 mmol)和碳酸氫鈉(11.7 g，138 mmol)的水(200 mL)溶液中加入碘(17.2 g，67.2 mmol)。將混合物在25°C下攪拌16小時。反應液用飽和硫代硫酸鈉溶液(200 mL)稀釋，稀鹽酸調節pH為2。用二氯甲烷(900 mL*2)萃取。有機層用飽和食鹽水(1000 mL)洗滌，用硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮，得到殘渣。用快速矽膠層析法(矽膠，0~0%的梯度的乙酸乙酯/石油醚)得到白色固體2,6-二溴-4-碘吡啶-3-酚(12.0 g，39.5 mmol，收率：76%)。LCMS (ESI): [M+H] += 379.7。
第二步：在2,6-二溴-4-碘吡啶-3-酚(6.00 g，15.8 mmol)、乙炔基三甲基矽烷(2.33 g，23.7 mmol)、碘化亞銅 (0.31 g，1.58 mmol)和三乙胺(4.91 g，47.5 mmol)的氯仿(2.00 mL)和四氫呋喃(120 mL)的溶液中加入二氯雙(三苯基膦)鈀(II)(1.12 g，1.58 mmol)，用氮氣置換3次，並將混合物加熱至100°C攪拌16小時。向反應液中加入水(100 mL)，用乙酸乙酯(300 mL*2)萃取。合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液旋乾得殘餘物。殘留物用快速矽膠層析法(矽膠，0-1%梯度的乙酸乙酯/石油醚)得到白色固體2,6-二溴-4-((三甲基甲矽烷基)乙炔基)吡啶-3-酚(1.0 g，15.8mmol，收率：18.1%)。LCMS (ESI): [M+H] += 349.8。
第三步：在三乙胺(10.0 mL)/乙醇(10.0 mL)中的混合液中加入2,6-二溴-4-((三甲基甲矽烷基)乙炔基)吡啶-3-酚(1.20 g，3.44 mmol)和碘化亞銅(0.33 g，1.72 mmol)，用氮氣置換3次，在氮氣的保護下將混合物加熱至70°C攪拌4小時。向反應液中加入水(20 mL)，用二氯甲烷(60 mL*2)萃取。合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液旋乾得殘餘物。殘留物用快速矽膠層析法(矽膠，0-1%梯度的乙酸乙酯/石油醚)得到黃色固體5,7-二溴呋喃並[2,3-c]吡啶(0.40g，3.44 mmol，收率：42%)。LCMS (ESI): [M+H] += 277.8。
中間體 A16：4,6-二氯呋喃並[3,2-c]吡啶
第一步：向4-氯呋喃並[3,2-c]吡啶(5.00 g，32.6 mmol)的氯仿(100 mL)溶液中加入間氯過氧苯甲酸(9.92 g，48.8 mmol)。將混合物在25°C下攪拌16小時。向反應液中加入水(100 mL)，用乙酸乙酯(100 mLx3)萃取。合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液旋乾得殘餘物。殘留物用快速矽膠層析法(矽膠，0-2%梯度的甲醇/二氯甲烷)得到棕色固體4-氯呋喃並[3,2-c]吡啶 5-氧化(3.00 g， 32.5 mmol，收率：54%)。LCMS (ESI): [M+H] +=170.0。
第二步：向1，2-二氯乙烷(30.0 mL)和三氯氧磷(3.00 mL)的溶液中緩慢加入4-氯呋喃並[3,2-c]吡啶 5-氧化(3.00 g，17.7 mmol)。將混合物加熱至85°C下攪拌16小時。向反應液中加入水(20 mL)，用二氯甲烷(20 mLx3)萃取。合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液旋乾得殘餘物。殘留物用快速矽膠層析法(矽膠，0-35%梯度的四氫呋喃/石油醚)得到黃色固體4,6-二氯呋喃並[3,2-c]吡啶(1.00 g，17.7 mmol，收率：30%)。LCMS (ESI): [M+H] +=188.0。
中間體 A17：4,6-二氯-[1,2,5]噻二唑[3,4-c]吡啶
第一步： 含有4-氨基-2,6-二氯-3-硝基吡啶(10 g，48.08 mmol)、鐵粉(27.1 g，480.76 mmol)、氯化銨(26.0 g，480.76 mmol)，乙醇(100 mL)和水(20 mL)的溶液在60°C下攪拌2小時，反應液過濾並濃縮，然後用乙酸乙酯(100 mL x 3)萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾並濃縮，得到化合物2,6-二氯吡啶-3,4-二胺(8 g，44.94 mmol， 收率：93%)，為淡黃色固體的產品。LCMS (ESI): [M+H] += 178.0。
第二步：含有2,6-二氯吡啶-3,4-二胺(8 g，44.94 mmol)和二氯亞碸(80 mL)的反應液在90°C下攪拌12小時，將反應液濃縮，然後加入飽和碳酸氫鈉水溶液(200 mL)，將pH調節至接近8，然後用乙酸乙酯(100 mL x 3)萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾並濃縮後經柱層析純化(矽膠，0-100%梯度的乙酸乙酯/石油醚)，得到化合物4,6-二氯-[1,2,5]噻二唑[3,4-c]吡啶(2.1 g，10.19 mmol，收率：23%)，為黃色固體。LCMS (ESI): [M+H] += 223.1。
中間體 A18：6-溴-4-氟苯並[c]1,2,5-噻二唑
第一步：將4-溴-2-氟-6-硝基苯胺(5.00 g，21.30 mmol)溶解在四氫呋喃(50 mL)，乙醇(10 mL)，水(5 mL)的混合溶液中，加入鐵粉(6.00 g，106.30 mmol)和氯化銨(1.72 g，31.90 mmol)，並在90°C下攪拌22小時。將反應液降至室溫，用矽藻土過濾並用乙醇洗滌固體直到沒有進一步的顏色通過篩檢程式。將濾液濃縮，殘餘物溶解在乙酸乙酯(50.00 mL)中萃取3次，合併有機相，飽和食鹽水(10mL)洗滌一遍，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮，得到棕色固體5-溴-3-氟苯二胺(3.10 g，收率：71%)。LCMS (ESI): [M+H] += 205.0。
第二步：將5-溴-3-氟苯二胺(3.00 g，14.50 mmol)溶解在二氯甲烷(30.00 mL)溶液中，加入三乙胺 (5.89 g，58.00 mmol)，二氯亞碸(2.81 g，31.9 mmol)。將混合物在60°C下回流12小時，將混合液濃縮，殘餘物溶解在水(20.00 mL)，乙酸乙酯(30.00 mL)萃取3次，合併有機相，飽和食鹽水(30 mL)洗滌一遍，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮，得到粗品用快速柱色譜純化(矽膠，0-50%乙酸乙酯/石油醚)，得到6-溴-4-氟苯並[c]1,2,5-噻二唑(3.10 g，收率：91%)。 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 8.34 (d, J= 1.6 Hz, 1H), 7.89 – 7.86 (m, 1H)。
中間體 A19：6-溴-4-碘-1,3-苯並噻唑-2-胺
第一步：在25°C下，向4-溴-2-碘苯胺(10.0 g，33.6 mmol)的醋酸(100 mL)溶液中加入硫氰酸鉀(16.3 g，168 mmol)，該混合物在20°C攪拌10分鐘後，緩慢滴加液溴(5.36 g，33.57 mmol)，反應液在25°C攪拌3小時。將反應液過濾，濾餅用醋酸(30 mL)洗滌，後將濾餅用熱水(100 mL)溶解，用氨水調節pH至11。將所產生的沉澱物過濾，用水洗滌，乾燥得到黃色固體產物6-溴-4-碘-1,3-苯並噻唑-2-胺(3.30 g，9.41 mmol，收率：28%)。LCMS (ESI): [M+H] += 356.6。
第二步：在25°C下，將6-溴-4-碘-1,3-苯並噻唑-2-胺(1.20 g，3.38 mmol)加入到四氫呋喃(20 mL)中， 然後滴加亞硝酸叔丁酯(0.42 g，4.06 mmol)和二甲基亞碸(2.00 mL)，反應液在50°C下繼續攪拌4小時。反應液加入水(50 mL)，用乙酸乙酯(80 mL x 3)萃取。合併有機相，用無水硫酸鎂乾燥，過濾，濾液旋乾得到殘餘物。殘留物用快速柱色譜純化(矽膠，0-6%梯度的四氫呋喃/石油醚)得到棕色固體產物6-溴-4-碘-1,3-苯並噻唑-2-胺(0.69 g，2.03 mmol，收率：60%)。LCMS (ESI): [M+H] += 339.6。
中間體 A20：6,8-二氯-2-[(4-甲氧苯基)甲基]-2,3,4-三氫吡啶並[3,4-c]吡啶-1-酮
第一步：在25°C下，向甲基2,6-二氯-4-甲基吡啶-3-甲酸基酯(3.00 g，13.6 mmol)的N,N-二異丙基乙胺(30 mL)的溶液中加入N,N-二甲基甲醯胺二甲基縮醛(4.97 g，40.9 mmol)，該混合物在100°C攪拌12小時。反應液緩慢滴加到水(60 mL)裡，有黃色沉澱析出，然後收集所得到的沉澱物用油泵拉乾，得到黃色固體粗品甲基 4-[(1E)-2-(二甲氨基)乙烯基]-2,6-二氯吡啶-3-甲酸基酯(3.60 g，39.3 mmol，收率：96%)。
第二步：在25°C下，將甲基 4-[(1E)-2-(二甲氨基)乙烯基]-2,6-二氯吡啶-3-甲酸基酯(2.10 g，7.63 mmol)加入到四氫呋喃(30 mL)中，然後滴加濃鹽酸(18 mL)，反應液在25°C下繼續攪拌4小時。反應液中加入食鹽水(100 mL)，用乙酸乙酯(100 mL x 3)萃取。合併有機相，用無水硫酸鎂乾燥，過濾，濾液旋乾得到黃色油狀物粗品甲基 2,6-二氯-4-(2-氧亞基乙基)吡啶-3-甲酸基酯(1.80 g，7.25 mmol，收率：95%)。 1H NMR (400 MHz, CHLOROFORM-d) δ ppm 9.65 (s, 1H), 7.18 - 7.10 (m, 1H), 3.88 (s, 3H), 3.76 (s, 2H)。
第三步：在25°C下，向異丙醇(18 mL)和甲醇(18 mL)溶液中加入甲基 2,6-二氯-4-(2-氧亞基乙基)吡啶-3-甲酸基酯(1.8 g，7.26 mmol)和4-甲氧苄基胺(1.01 g，7.26 mmol)，將混合物在25°C下攪拌2小時。然後再將反應液中加入醋酸(1.31 g，21.8 mmol)和氰基硼氫化鈉(1.35 g，21.8 mmol)，將反應液加熱到80°C攪拌12小時。向反應液中緩慢分次倒入飽和碳酸氫鈉溶液(100 mL)調節pH到7-8，然後加入乙酸乙酯(150 x 2 mL)萃取，有機相合併用飽和氯化鈉(100 mL)洗滌。有機相用無水硫酸鎂乾燥，過濾，濾液旋乾得殘餘物。殘留物用快速柱色譜純化(矽膠，0-50%梯度的乙酸乙酯/石油醚)得到白色固體6,8-二氯-2-[(4-甲氧苯基)甲基]-2,3,4-三氫吡啶並[3,4-c]吡啶-1-酮(1.60 g，4.72 mmol，收率：65%)。LCMS (ESI): [M+H] += 336.6。
中間體 A21：6-氯-8-（4,4-二氟呱啶-1-基）吡啶並[3,4-d]嘧啶
第一步：將N-氯代丁二醯亞胺(19.3 g，144.59mmol)分批加入含有3-氨基吡啶-4-羧酸甲酯(10 g，65.73mmol)和N,N-二甲基甲醯胺(100 mL)的混合溶液中，反應液在20°C下攪拌12小時，將反應液倒入水(500 mL)中並用乙酸乙酯(100 mLx3)萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾並濃縮後經柱層析(矽膠，0-100%梯度的乙酸乙酯/石油醚)純化，得到化合物 3-氨基-2,6-二氯異煙酸甲酯(11 g，49.76 mmol，收率：75.7%)，為白色固體。LCMS (ESI): [M+H] += 221.0。
第二步：氮氣氛圍，-78°C下，將二異丁基氫化鋁(113 mL，113 mmol)緩慢滴加到含有3-氨基-2,6-二氯吡啶-4-羧酸甲酯(10 g，45.24 mmol)和四氫呋喃(200 mL)的溶液中，然後升溫至20°C，反應液在20°C下攪拌12小時，向反應液加入十水硫酸鈉淬滅反應，然後過濾濃縮，得到化合物(3-氨基-2,6-二氯吡啶-4-基)甲醇(6 g， 31.08 mmol，收率：68.7%)，為白色固體。LCMS (ESI): [M+H] += 193.0。
第三步：將戴斯馬丁氧化劑(20 g，46.63mmol)分批加入到含有(3-氨基-2,6-二氯-4-吡啶基)甲烷-1-醇(6 g，31.08 mmol)、二氯甲烷(60 mL)和四氫呋喃(60 mL)的混合溶液中，反應液在20°C攪拌12小時，向反應體系中加入碳酸氫鈉水溶液(500 mL)淬滅反應，然後用乙酸乙酯(100 mLx3)萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾並濃縮後經柱層析(矽膠，0-100%梯度的乙酸乙酯/石油醚)純化，得到化合物3-氨基-2,6-二氯異煙醛(2g，10.47 mmol， 收率：33.7%)。LCMS (ESI): [M+H] += 228.3。
第四步：含有3-氨基-2.6-二氯吡啶-4-甲醛(1.5 g，7.85 mmol)、乙酸甲脒(1.24 g，11.78 mmol)、4.4-二氟呱啶鹽酸鹽(6.25 g，39.26 mmol)、三乙胺(8.11 g，78.53 mmol)、吡啶(3.3 g，39.26  mmol)和叔丁醇(70 mL)的混合溶液在90°C下攪拌12小時，將反應液倒入水(50 mL)中並用乙酸乙酯(50 mL x3)萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾並濃縮後經柱層析(矽膠，0-100%梯度的乙酸乙酯/石油醚)純化，得到化合物6-氯-8-(4,4-二氟呱啶-1-基)吡啶並[3,4-d]嘧啶(700 mg， 2.46 mmol，收率：31.3%)，為黃色固體。LCMS (ESI): [M+H] += 285.10。
中間體 A22：6-溴-8-碘-2-甲氧基喹啉
第一步：將4-溴-2-碘苯胺(25.00 g，84.17 mmol)溶解在四氫呋喃(250 mL)中，加入(E)-3-乙氧基丙烯醯氯(22.70 g，168.34 mmol)和N,N-二異丙基乙胺(43.70 g，336.68 mmol)，並在25°C下攪拌12小時。把反應液緩慢倒入水(200 mL)中，再加入乙酸乙酯 (200 mL×3) ，萃取3次，合併有機相，飽和食鹽水(100 mL)洗滌一遍，無水硫酸鈉乾燥，過濾，減壓濃縮，得到粗品用甲醇(50 mL)打漿攪拌1小時，過濾得到白色固體(E)-N-4-溴-2-碘苯基-3-乙氧基丙烯醯胺(17.00 g，收率：51%)。LCMS (ESI): [M+H] += 396.0。
第二步：將(E)-N-4-溴-2-碘苯基-3-乙氧基丙烯醯胺(17.00 g，42.90 mmol)分批次加入濃硫酸(34 mL)中。反應混合物在25°C下攪拌3小時。待反應完成後，將混合液緩慢滴加到冰水(100 mL)中，並攪拌1小時，混合液中有白色固體析出，過濾混合液，收集白色固體，乾燥得白色固體6-溴-8-碘喹啉-2(1H)酮(11.00 g，收率：73%)。LCMS (ESI): [M+H] += 350.0。
第三步：將6-溴-8-碘喹啉-2(1H)酮(11.00 g，31.40 mmol)溶解在三氯氧磷(50 mL)中，反應混合物在100°C下攪拌5小時。減壓除去三氯氧磷，將殘渣溶解在水(50 mL)中，然後用飽和碳酸氫鈉水溶液(40 mL)將水層調節至pH=8，並用乙酸乙酯(50 mL x 3)萃取，合併有機相，飽和氯化鈉水溶液(50 mL)洗滌有機層，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，粗品用快速柱色譜純化(矽膠，0-50%梯度的乙酸乙酯/石油醚)得到黃色固體6-溴-2-氯-8-碘喹啉(8.00 g，收率：69%)。LCMS (ESI): [M+H] += 367.9。
第四步：將6-溴-2-氯-8-碘喹啉(5.00 g，13.50 mmol)，甲醇鈉(5.10 g，9.50 mmol)溶解在甲醇(50 mL)中，反應混合物在70°C下回流攪拌8小時。減壓除去溶劑，將殘渣溶解在水(100 mL)中，並用乙酸乙酯(50 mL x 3)萃取，合併有機相，飽和氯化鈉水溶液(50 mL)洗滌有機層，無水硫酸鈉乾燥，得到白色固體6-溴-8-碘-2-甲氧基喹啉(4.00 g，收率：80%)。LCMS (ESI): [M+H] += 364.0。
中間體 A24：6-溴-8-碘喹啉-2-腈
第一步：4-溴-2-碘苯胺(5.00 g，16.62mmol)，丙三醇(7.73 g，83.08mmol)，3-硝基苯磺酸鈉(4.91 g，21.60mmol)加到濃硫酸(30 mL)和水(20 mL)的溶液中，反應液120°C攪拌16小時。反應液倒入水(100 mL)中，用2M氫氧化鈉水溶液將pH調至10，所得溶液抽濾，濾得固體用水(50 mLx3)洗，乾燥得6-溴-8-碘喹啉(3.00 g，粗品)，為淡黃色固體。LCMS (ESI): [M+H] +=333.9。
第二步：6-溴-8-碘喹啉(3.00 g，8.98mmol)，間氯過氧苯甲酸(4.56 g，22.16mmol)加到二氯甲烷(50 mL)中，反應液30°C攪拌16小時。反應液倒入飽和碳酸氫鈉溶液(50 mL)中，二氯甲烷(30 mL x 3)萃取，有機相合併，無水硫酸鈉乾燥，濃縮得粗品。粗品快速柱色譜(矽膠，0-8%梯度的甲醇/二氯甲烷)得6-溴-8-碘喹啉-1-氧化物(1.20 g，3.44 mmol，收率：38.2%)，為淡黃色固體。LCMS (ESI): [M+H] +=349.9。
第三步：6-溴-8-碘喹啉-1-氧化物(1.10 g，3.14 mmol)，三甲基氰矽烷(955 mg，9.43 mmol)和醋酸碘苯(3.10 g，9.43 mmol)加到1,2-二氯乙烷(10 mL)中，反應液80°C攪拌16小時。反應液倒入水(30 mL)中，二氯甲烷(30 mL x 3)萃取，有機相合併，無水硫酸鈉乾燥，濃縮得粗品。粗品快速柱色譜(矽膠，5-10%梯度的乙酸乙酯/石油醚)得6-溴-8-碘喹啉-2-腈(800 mg，2.23 mmol，收率：70.9%)，為白色固體。LCMS (ESI): [M+H] +=358.9。
中間體 A25：6-溴-8-碘-2-(三氟甲基)喹啉
第一步：25°C下，將4-乙氧基-1,1,1-三氟-3-丁烯-2-酮 (4.27 g，25.17 mmol)加到4-溴-2-碘苯胺(5.00 g，16.78 mmol)的乙腈(50 mL)溶液中，所得的反應混合物在50°C下攪拌4小時。將反應混合物得殘餘物經快速柱層析純化(矽膠，0-20%梯度的乙酸乙酯/石油醚)得(3E)-4-[(4-溴-2-碘苯)胺基]-1,1,1-三氟丁-3-烯-2-酮(6.00 g，14.18mmol，收率：84.5%)，為黃色固體。LCMS (ESI): [M+H] +=421.9， 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 11.81 (d, J= 12.9 Hz, 1H), 8.29 (dd, J= 12.9, 7.6 Hz, 1H), 8.13 (d, J= 2.2 Hz, 1H), 7.68 (dd, J= 8.8, 2.2 Hz, 1H), 7.59 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 5.79 (d, J= 7.4 Hz, 1H)。
第二步：25°C下，將三氯氧磷(7.5 mL)加到(3E)-4-[(4-溴-2-碘苯)胺基]-1,1,1-三氟丁-3-烯-2-酮(3.00 g，7.14 mmol)和4-溴-2-碘苯胺 (2.15 g，7.14 mmol)中，所得反應混合物在100°C下攪拌16小時。將反應混合物濃縮，用乙酸乙酯(100 mL)稀釋，濾液用飽和碳酸氫鈉溶液(100 mL x 3)洗滌。有機相用無水硫酸鈉乾燥、過濾、濃縮得殘餘物，殘餘物經快速柱層析純化(矽膠，0-20%梯度的乙酸乙酯/石油醚)得6-溴-8-碘-2-(三氟甲基)喹啉(2.30 g，5.72 mmol，收率：80.1%)，為淡黃色固體。LCMS (ESI): [M+H] +=402.0， 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 8.70 – 8.62 (m, 2H), 8.51 (q, J= 1.7 Hz, 1H), 8.09 (dd, J= 8.5, 1.5 Hz, 1H)。
中間體 A26：6-溴-7-氟-8-碘喹啉
第一步：含有3-氟-2-碘-1-硝基苯(9.50 g，35.58 mmol)、鐵粉(10.00 g，177.90 mmol)，氯化銨(9.60 g，177.90 mmol)，乙醇(100 mL)和水(20 mL)的混合溶液在60°C下攪拌1小時，反應液趁熱過濾後濃縮，然後用乙酸乙酯(50 mL x 3)萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾並濃縮後經柱層析(矽膠，0-50%梯度的乙酸乙酯/石油醚)純化，得到化合物3-氟-2-碘代苯胺(6.70 g，收率：79.5%)，為白色固體。LCMS (ESI): [M+H] += 238.0。
第二步：將N-溴代琥珀醯亞胺(5.0 g，28.27 mmol)添加到含有3-氟-2-碘苯胺(6.70 g，28.27 mmol)和N,N-二甲基甲醯胺(60 mL)的混合溶液中，反應液在20°C下攪拌1小時，將反應液倒入水(300 mL)中並用乙酸乙酯(100 mL x 3)萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾並濃縮後經柱層析(矽膠，0-30%梯度的乙酸乙酯/石油醚)純化，得到化合物4-溴-3-氟-2-碘苯胺(7.00 g，收率：78.7%)，為灰色固體。LCMS (ESI): [M+H] += 317.9。
第三步：將甘油(5.60 g，59.83 mmol)和3-硝基苯磺酸鈉鹽(5.40 g，23.93 mmol)加到含有濃硫酸(20 mL)和水(15 mL)組成的溶液中，將混合物加熱至110°C，然後緩慢添加4-溴-3-氟-2-碘苯胺(6.30 g，19.94 mmol)，將所得混合物在130°C攪拌12小時。將反應液倒入冰/水中並用乙酸乙酯(50 mL x 3)萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾並濃縮後經柱層析(矽膠，0-50%梯度的乙酸乙酯/石油醚)純化，得到化合物6-溴-7-氟-8-碘喹啉(2.20 g，收率：31%)，為灰色固體。LCMS (ESI): [M+H] +=353.9。
中間體 A27：8-(4,4-二氟呱啶基)-6-溴-7-(三氟甲基)喹啉
第一步： 25°C下，向2-氟-3-(三氟甲基)苯胺(9.00 g，50 mmol)的N,N-二甲基甲醯胺(100 mL)溶液中加入N-溴代丁二醯亞胺 (9.80 g，55 mmol)，所得的反應混合物在25°C攪拌16小時。反應液中用乙酸乙酯(300 mL)稀釋，用飽和氯化鈉溶液(200 mL x 3)、水(200 mL x 2)洗滌。有機相經無水硫酸鈉乾燥、過濾、濃縮得殘餘物，殘餘物經快速柱層析純(矽膠，0-15%梯度的乙酸乙酯/石油醚)得4-溴-2-氟-3-(三氟甲基)苯胺(12.00 g，收率：93%)為紫色固體。LCMS (ESI): [M+H] +=259.9。
第二步：甘油(11.00 g，116 mmol) 和3-硝基苯磺酸鈉鹽 (9.70 g，42 mmol)的水(70 mL)和濃硫酸(30 mL)的混合物升溫到100°C。向此反應混合物中緩緩加入4-溴-2-氟-3-(三氟甲基)苯胺(10.00 g，39.00 mmol)。反應混合物在100°C下攪拌36小時。將反應混合物倒入碎冰(400 mL)中，用飽和碳酸氫鈉溶液將pH調到8，用乙酸乙酯 (200 mL x 2)萃取。有機相用無水硫酸鈉乾燥、過濾、濃縮得殘餘物，殘餘物經快速柱層析純化(矽膠，0-20%梯度的乙酸乙酯/石油醚) 得6-溴-8-氟-7-(三氟甲基)喹啉 (6.70 g，收率：59%)，為紫色固體。LCMS (ESI): [M+H] +=296.0。
第三步： 25°C下，向6-溴-8-氟-7-(三氟甲基)喹啉(3.7 g，12 mmol)，4,4-二氟呱啶鹽酸鹽(3.0 g，19 mmol) 的二甲基亞碸(50 mL)溶液中加入碳酸銫(5.3 g，38 mmol) ，反應混合物在100°C下攪拌24小時。反應混合物經過濾，濾液用乙酸乙酯(200 mL)稀釋。有機相用飽和氯化鈉溶液(50 mL x 3)洗滌，有機相用無水硫酸鈉乾燥、過濾、濃縮得殘餘物，殘餘物在石油醚:乙酸乙酯(10:1，11 mL)的溶液中攪拌10分鐘，過濾、濾液經濃縮得殘餘物，經快速柱層析純化(矽膠，0-50%梯度的乙酸乙酯/石油醚)得8-(4,4-二氟呱啶基)-6-溴-7-(三氟甲基)喹啉(450 mg，收率：9%)，為白色固體。LCMS (ESI): [M+H] +=395.1。
中間體 A28：6-溴-7-氯-8-氟喹啉
第一步：將甘油(12.40 g，133.65 mmol)和3-硝基苯磺酸鈉鹽(12.20 g，53.46 mmol)，水(60 mL)和濃硫酸(80 mL)的混合物加熱至100°C。向混合物中加入4-溴-3-氯-2-氟苯胺(10.00 g，44.55 mmol) ，將混合物在120°C下攪拌12小時。將反應液倒入水中(300 mL)並用乙酸乙酯(300mL x 3)萃取，有機層用無水硫酸鈉乾燥，過濾並濃縮，得到化合物6-溴-7-氯-8-氟喹啉(9.50 g, 36.47 mmol，收率：81.9%)，為棕色固體。LCMS (ESI): [M+H] +=260.1。
中間體 A29：6-氯-8-氟喹啉-7-腈
第一步：25°C下，向3-溴-2-氟苯胺(10.00 g，52.63 mmol)的N,N-二甲基乙醯胺(100 mL)的溶液中加入氯代丁二醯亞胺(7.00 g，52.60 mmol)，所得反應混合液在55°C下攪拌16小時。將反應混合物用乙酸乙酯(150 mL)稀釋、用飽和食鹽水(150 mL x 3)洗滌。有機相經過濃縮、乾燥、過濾、濃縮得殘餘物，經快速柱層層析(矽膠，0-30%梯度的乙酸乙酯/石油醚)得到3-溴-4-氯-2-氟苯胺(6.00 g，26.67 mmol，收率：55.0%)，為紫色固體。LCMS (ESI): [M+H] +=226.0；1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 7.12 (dd, J = 8.8, 1.8 Hz, 1H), 6.82 – 6.74 (m, 1H), 5.60 (s, 2H)。
第二步：丙三醇(10.00 g，111.4 mmol)的濃硫酸(50 mL)和水(30 mL)的混合溶液在100°C下攪拌15分鐘，然後將混合物冷卻到40°C。向該反應混合物中加入3-溴-4-氯-2-氟苯胺(5.00 g，22.3 mmol)和3-硝基苯磺酸鈉(5.57 g，24.50 mmol)。所得反應混合物在100°C下攪拌16小時。將反應混合物倒入冰水(500 mL)，將pH用碳酸鉀調到8，混合液用乙酸乙酯(200 mL x 2)萃取，有機相經無水硫酸鈉乾燥、過濾、濃縮得粗品，經快速柱層析純化(矽膠， 0-20%梯度的乙酸乙酯/石油醚)得7-溴-6-氯-8-氟喹啉(3.80 g，14.56 mmol，收率：65.5% )，為灰色固體。LCMS (ESI): [M+H] +=262.1； 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 9.04 – 9.00 (m, 1H), 8.46 (dq, J= 8.4, 1.5 Hz, 1H), 8.26 (t, J= 2.0 Hz, 1H), 7.74 (dd, J= 8.4, 4.2 Hz, 1H)。
第三步：25°C，向7-溴-6-氯-8-氟喹啉(2.50 g， 9.60 mmol) ，氰化鋅 (5.17 g，43.19 mmol)，四(三苯基膦)鈀(1.13 g，0.96 mmol)中加入N,N-二甲基甲醯胺(40 mL)，所得反應混合物用氮氣鼓氣1分鐘，並在120°C下攪拌16小時。將反應液過濾，濾液用乙酸乙酯(100 mL)稀釋，有機相用飽和氯化鈉(50 mL x 3)洗滌，有機相經乾燥、過濾、濃縮得殘餘物，經快速柱層析純化(矽膠，0-30%梯度的乙酸乙酯/石油醚)得6-氯-8-氟喹啉-7-腈(650 mg，3.15 mmol，收率：32.8%)， 為白色固體。LCMS (ESI): [M+H] +=207.1。
中間體 A30：6-溴-7-氟-8-碘-2-甲基喹喔啉
第一步：4-溴-3-氟-2-碘苯胺(4.40 g，14.00 mmol)和(2E)巴豆醛(3.90 g，56.00 mmol)的鹽酸水溶液(116 mL，6M)在100°C下攪拌16小時。將反應混合物倒入碎冰中(500 mL)，將pH調到8。混合物用乙酸乙酯(150 mL x 3)萃取，有機相經無水硫酸鈉乾燥、過濾、濃縮得殘餘物，殘餘物經快速柱層析純(矽膠，0-20%的乙酸乙酯/石油醚) 得6-溴-7-氟-8-碘-2-甲基喹喔啉(1.00 g，收率：20%)，為白色固體。LCMS (ESI): [M+H] +=365.9。
中間體 A31：6-溴-8-氟異喹啉
第一步：將4-溴-2-氟苯甲醛(5.00 g，24.63 mmol)溶於甲苯(100 mL)，加入2,2-二甲氧基乙烷-1-胺(3.88 g，36.94 mmol) ，反應液加熱至140°C攪拌16小時。冷卻至室溫後將反應液濃縮，得到粗品(E)-1-(4-溴-2-氟苯基)-N-(2,2-二甲氧基乙基)甲胺(7.00 g，粗品)為棕色油狀物，無需純化直接用於下一步反應。
第二步：將(E)-1-(4-溴-2-氟苯基)-N-(2，2-二甲氧基乙基)甲胺 (3.00 g，10.34 mmol)溶於甲醇(30 mL)，冷卻至0°C後加入氰基硼氫化鈉(270 mg，7.24 mmol)，升至室溫攪拌2小時。向反應液中加入冰水，濃縮除去甲醇，加入乙酸乙酯(30 mL x 3)萃取。合併後的有機相用飽和氯化鈉溶液洗滌，無水硫酸鈉乾燥，濃縮後得到的殘留物快速柱色譜純化(矽膠，10-20%梯度的乙酸乙酯/石油醚)純化得到N-(4-溴-2-氟苄基)-2,2-二甲氧基乙烷-1-胺(2.50 g，8.50 mmol，收率：83.3%)，為白色固體。LCMS (ESI): [M+H] += 292.0。
第三步：將N-(4-溴-2-氟苄基)-2,2-二甲氧基乙烷-1-胺(2.50 g，8.50 mmol)溶於二氯甲烷(20 mL)，依次加入4-二甲氨基吡啶(156 mg，1.28 mmol)和三乙胺(2.59 g，25.5 mmol)，在氮氣保護的條件下將反應液降溫至0°C，加入對甲基苯磺醯氯(2.44 g，12.75 mmol)。反應液升至室溫攪拌16小時後用冰水(20 mL)淬滅，水相用二氯甲烷(30 mL x 3)萃取。分出的有機相用無水硫酸鈉乾燥後濃縮，得到的殘留物快速柱色譜純化(矽膠，0-10%梯度的乙酸乙酯/石油醚)得到N-(4-溴-2-氟苄基)-N-(2,2-二甲氧基乙基)-4-甲基苯磺醯胺(3.04 g， 6.81 mmol，收率：80.2%)。LCMS (ESI): [M+H] += 446.0。
第四步：將二氯甲烷(20 mL)加入到裝有三氯化鋁(1.34 g，10.08 mmol)的反應瓶中，在氮氣保護的條件下降溫至0°C，加入N-(4-溴-2-氟苄基)-N-(2,2-二甲氧基乙基)-4-甲基苯磺醯胺(3.00 g，6.72 mmol)的二氯甲烷(10 mL)溶液。反應液升至室溫攪拌16小時後用冰水(30 mL)淬滅，用氨水調節溶液的pH值為10，水相用二氯甲烷(50 mL x 3)萃取。合併的有機相用無水硫酸鈉乾燥，濃縮後得到的殘留物通過快速柱色譜純化(矽膠，10-20%梯度的乙酸乙酯/石油醚)得到6-溴-8-氟異喹啉(1.36 g，6.00 mmol，收率：89.4%)。LCMS (ESI): [M+H] += 228.0。
中間體 A32：6-溴-8-氟噌啉
第一步：將(1E)-1-(4-溴-2-乙炔基-6-氟苯基)-3,3-二乙基三氮雜-1-烯(2.00 g，6.71 mmol)的1，2二氯苯(20.0 mL)的混合液在200°C攪拌5小時。將反應混合物用快速柱色譜純化(矽膠，0-20%梯度的乙酸乙酯/石油醚)得到黑色固體6-溴-8-氟噌啉(500 mg，2.14 mmol，收率：33%)。LCMS (ESI): [M+H] += 229.0。
中間體 A33：7-溴-5-碘喹喔啉
第一步：25°C下，將氯化銨(3.90 g，73.00 mmol) 加到4-溴-6-碘-2-硝基苯胺(5.00 g，14.00 mmol)和鐵(2.5 g，44 mmol)的水(10 mL)和乙醇(50 mL)的混合液中，所得的反應混合物在50°C下攪拌1小時。將反應混合物過濾、用乙醇洗(20 mL x 2)。有機相經過濃縮、乾燥 、過濾、濃縮得殘餘物(4.50 g，收率：98%)，褐色固體，不需純化用於下一步。LCMS (ESI): [M+H] +=312.9。
第二步：25°C下，將 碳酸鉀(6.00 g，43.00 mmol)加到 5-溴-3-碘苯-1,2-二胺(4.50 g，14.00 mmol)和乙二醛(1.70 g，29.00 mmol)的乙醇(50 mL)溶液中。所得反應混合物在80°C下攪拌16小時。將反應混合物過濾，用乙酸乙酯(30 mL)洗滌，濾液用飽和氯化鈉溶液(20 mL x 3)洗滌。有機相用無水硫酸鈉乾燥、過濾、濃縮得殘餘物，殘餘物經快速柱層析純化(矽膠，0-20%梯度的乙酸乙酯/石油醚)得7-溴-5-碘喹喔啉(970 mg，收率：20%)，為淡黃色固體。LCMS (ESI): [M+H] +=336.9。 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 9.04 (d, J= 1.8 Hz, 1H), 8.98 (d, J= 1.8 Hz, 1H), 8.62 (d, J= 2.1 Hz, 1H), 8.40 (d, J= 2.1 Hz, 1H)。
中間體 A34：6-溴-7,8-二氟-3-碘喹啉
第一步：將濃硫酸 (400 mL)滴加到純水 (308 mL)中，加入3-硝基苯磺酸鈉 (23.2 g，102 mmol)和丙三醇 (32.2 g，346 mmol)，反應液加熱到110°C，分批加入4-溴-2,3-二氟苯胺 (20.0 g，96.2 mmol)，140°C攪拌16小時。反應液緩慢加入到攪拌下的冰水500 mL中，使用氫氧化鈉溶液 (2000 mL，600 g)調節pH至7，過濾後將濾餅分散到水 (1000 mL)中，使用乙酸乙酯2000 mL (1000 mL x 2)萃取，有機相使用飽和食鹽水 (400 mL)洗滌，有機相乾燥過濾濃縮。殘留物使用甲基叔丁基醚 (250 mL)打漿16小時純化，過濾後得到棕色固體6-溴-7,8-二氟喹啉 (22.0 g，88.5 mmol，收率：92.0%)。LCMS (ESI): [M+H] += 245.9； 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 9.01 (d, J= 4.0 Hz, 1H), 8.44 (br d, J= 8.4 Hz, 1H), 8.34 (dd, J= 2.0, 7.2 Hz, 1H), 7.67 (dd, J= 4.4, 8.4 Hz, 1H)。
第二步：將6-溴-7,8-二氟喹啉 (9.50 g，59%)溶於乙酸 (160 mL)中，加入N-碘代琥珀醯亞胺 (17.7 g，78.7 mmol)，95 °C攪拌16小時。將反應液緩慢倒入到飽和碳酸氫鈉溶液 (1500 mL)中，使用乙酸乙酯1000 mL (500 mL x 2)萃取，有機相使用飽和食鹽水 (400 mL)洗滌，有機相乾燥過濾濃縮，殘留物用快速柱色譜純化 (矽膠，0-7%梯度的四氫呋喃/石油醚)得到棕色固體6-溴-7,8-二氟-3-碘喹啉 (6.40 g，17.1 mmol，收率：26.0%)。LCMS (ESI): [M+H] += 371.7； 1H NMR (400 MHz, CHLOROFORM-d) δ ppm 9.02 (d, J= 1.6 Hz, 1H), 8.40 (s, 1H), 7.70 (dd, J= 2.4, 6.4 Hz, 1H)。
實施例 1：N-(2-(4,4-二氟呱啶-1-基)-6,7-二氫-5H-環戊烷[d]嘧啶-4-基)-4-((2-羥乙基)磺胺基)-2-(6-氮雜螺環[2.5]辛烷-6-基)苯甲醯胺
第一步：2,4-二氯-6,7-二氫-5H-環戊[d]嘧啶(5.00 g，26.45 mmol)、氨水(9.90 g，79.35 mmol)和乙醇(50 mL)的混合溶液在40°C下攪拌12小時，反應液直接濃縮得到化合物2-氯-6,7-二氫-5H-環戊烷[d]嘧啶-4-胺(4.60 g)，為白色固體。LCMS (ESI): [M+H] += 170.1。
第二步：含有2-氯-6,7-二氫-5H-環戊烷[d]嘧啶-4-胺(4.60 g，27.12 mmol)、4,4-二氟呱啶(3.90 g，32.55 mmol)、N,N-二異丙基乙胺(10.70 g，81.36 mmol)和二氧六環(50 mL)的反應液在100°C下攪拌12小時，將反應液倒入水中(100 mL)並用乙酸乙酯(100 mL x 3)萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾並濃縮後經柱層析純化(矽膠，0-50%梯度的乙酸乙酯/石油醚)得到化合物2-(4,4-二氟呱啶-1-基)-6,7-二氫-5H-環戊烷[d]嘧啶-4-胺(3.60 g)，為白色固體。LCMS (ESI): [M+H] += 255.1。
第三步：將4-硝基-2-(6-氮雜螺環[2.5]辛烷-6-基)苯甲醯氯(2.10 g，7.08 mmol)溶於四氫呋喃(10 mL)後滴加到含有2-(4,4-二氟呱啶-1-基)-6,7-二氫-5H-環戊烷[d]嘧啶-4-胺(1.00 g，3.93 mmol)、叔丁醇鉀(1.30 g，11.80 mmol)和四氫呋喃(10 mL)的反應液中，室溫下攪拌30 分鐘後，將反應液倒入水中(50 mL)並用乙酸乙酯(50 mL x 3)萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾並濃縮後經柱層析純化(矽膠，0-100%梯度的乙酸乙酯/石油醚)得到化合物N-(2-(4,4-二氟呱啶-1-基)-6,7-二氫-5H-環戊烷[d]嘧啶-4-基)-4-硝基-2-(6-氮雜螺環[2.5]辛烷-6-基)苯甲醯胺(620 mg，含有異構體)，為黃色固體。LCMS (ESI): [M+H] += 513.3。
第四步：N-(2-(4,4-二氟呱啶-1-基)-6,7-二氫-5H-環戊烷[d]嘧啶-4-基)-4-硝基-2-(6-氮雜螺環[2.5]辛烷-6-基)苯甲醯胺(620 mg，1.21 mmol)、鐵(341 mg，6.05 mmol)、氯化銨(327 mg，6.05 mmol)、乙醇(5 mL)、水(2 mL)和四氫呋喃(5 mL)組成的溶液在60°C下攪拌30分鐘，反應液趁熱過濾，然後倒入水中(20 mL)並用乙酸乙酯(20 mL x 3)萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾並濃縮後經柱層析純化(矽膠，0-100%梯度的乙酸乙酯/石油醚)得到化合物4-氨基-N-(2-(4,4-二氟呱啶-1-基)-6,7-二氫-5H-環戊烷[d]嘧啶-4-基)-2-(6-氮雜螺環[2.5]辛烷-6-基)苯甲醯胺，為黃色固體(290 mg)。LCMS (ESI): [M+H] += 483.4。
第五步：在0°C下，將氯磺醯乙酸乙酯(136 mg，0.721 mmol)滴加到含有4-氨基-N-(2-(4,4-二氟呱啶-1-基)-6,7-二氫-5H-環戊烷[d]嘧啶-4-基)-2-(6-氮雜螺環[2.5]辛烷-6-基)苯甲醯胺(290 mg，0.60 mmol)、N,N-二異丙基乙胺(238 mg，1.80 mmol)和二氯甲烷(2 mL)的反應液中，25°C下攪拌1小時，將反應液倒入水中(30 mL)並用乙酸乙酯(30 mL x 3)萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾並濃縮後經柱層析純化(矽膠，0-100%梯度的乙酸乙酯/石油醚)得到化合物2-(N-(4-((2-(4,4-二氟呱啶-1-基)-6,7-二氫-5H-環戊基[d]嘧啶-4-基)氨甲醯)-3-(6-氮雜螺環[2.5]辛烷-6-基)苯基)氨磺醯)乙酸乙酯(100 mg) ，為黃色固體。LCMS (ESI): [M+H] += 633.3。
第六步：將四氫化鋁鋰(17 mg，0.474 mmol)加入含有2-(N-(4-(2-(4,4-二氟呱啶-1-基)-6,7-二氫-5H-環戊烷[d]嘧啶-4-基)氨甲醯)-3-(6-氮雜螺環[2.5]辛烷-6-基)苯基)氨磺醯)乙酸乙酯(100 mg，0.16 mmol)和四氫呋喃(3 mL)的反應液中，25°C下攪拌30分鐘，向反應瓶中滴加飽和氯化銨水溶液(20 mL)並用乙酸乙酯（20 mL x 3)萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾並濃縮後經HPLC純化(C18, 30%-100%梯度的水/乙腈)得到化合物N-(2-(4,4-二氟呱啶-1-基)-6,7-二氫-5H-環戊烷[d]嘧啶-4-基)-4-((2-羥乙基)磺胺基)-2-(6-氮雜螺環[2.5]辛烷-6-基)苯甲醯胺(16.3 mg)，為白色固體。LCMS (ESI): [M+H] += 591.3； 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12.70 (s, 1H), 10.22 (s, 1H), 7.94 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 7.24 (d, J= 2.4 Hz, 1H), 7.10 (dd, J= 8.4, 2.0 Hz, 1H), 4.96 (s, 1H), 3.75 (t, J= 6.8 Hz, 2H), 3.29-3.43 (m, 6H), 2.91-3.04 (m, 4H), 2.88 (t, J= 7.2 Hz, 2H), 2.78 (t, J= 7.6 Hz, 2H), 2.08 (s, 2H), 1.86 -2.03(m, 6H), 1.66-1.74 (m, 2H), 0.38 (s, 4H)。
實施例 2：N-(2-(4,4-二氟呱啶-1-基)-5,7-二氫呋喃[3,4-d]嘧啶-4-基)-4-((2-羥乙基)磺醯胺)-2-(6-氮雜螺環[2.5]辛烷-6-基)苯甲醯胺
實施例2參照實施例1的類似合成路線製備得到的： LCMS (ESI): [M+H] += 593.4； 1H NMR (500 MHz, DMSO) δ 13.29 (s, 1H), 10.32 (s, 1H), 9.06 (s, 1H), 8.01 (d, J= 7.2 Hz, 1H), 7.28-7.32 (m, 1H), 7.14 (dd, J= 6.8, 1.6 Hz, 1H), 5.19 (s, 3H), 4.79 (s, 2H), 3.87-4.01 (m, 4H), 3.75 (t, J= 5.2 Hz, 2H), 3.36 (t, J= 5.2 Hz, 2H), 2.92-3.04 (m, 4H), 1.93-2.09 (m, 4H), 1.61-1.84 (m, 3H), 1.54 (d, J= 5.6 Hz, 2H), 0.39 (s, 4H)。
實施例3：N-(4-(4,4-二氟呱啶-1-基)-6,7-二氫-5H-環戊二烯[d]嘧啶-2-基)-4-((2-羥乙基)磺醯胺)-2-(6-氮雜螺[2.5]辛-6-基)苯甲醯胺
第一步：2,4-二氯-5,6-三甲基嘧啶(2.00 g，10.47 mmol) 、 4,4-二氟呱啶鹽酸鹽(1.75 g，10.99 mmol)和N,N-二異丙基乙胺(4.14 g，31.42 mmol) 加到乙腈(10 mL)中，反應液加熱至60°C並攪拌4小時。待反應液冷卻至室溫後，水(50 mL)倒入反應液，乙酸乙酯(50 mL x 3)萃取，飽和氯化鈉水溶液(50 mL x 3)洗，合併有機相，無水硫酸鈉乾燥，濃縮得粗品棕色固體2-氯-4-(4,4-二氟呱啶-1-基)-6,7-二氫-5H-環戊二[d]嘧啶(2.60 g，收率：90%)。LCMS (ESI): [M+H] += 274.1,276.1。
第二步：2-氯-4-(4,4-二氟呱啶-1-基)-6,7-二氫-5H-環戊二[d]嘧啶(2.80 g，10.23 mmol)、4-甲氧基苄胺(1.70 g，12.28 mmol)和碳酸銫(11.90 g，35.80 mmol)加到N,N二甲基甲醯胺(30 mL)中，反應液加熱到140°C並攪拌6小時。待反應液冷卻至室溫後，水(50 mL)倒入反應液，二氯甲烷(50 mL x 3)萃取，飽和氯化鈉水溶液(50 mL x 3)洗，有機相合併，無水硫酸鈉乾燥，濃縮得粗品棕色固體4-(4,4-二氟呱啶-1-基)-N-(4-甲氧基苄基)-6,7-二氫-5H-環戊二烯[d]嘧啶-2-胺(3.70 g，收率：96%)。LCMS (ESI): [M+H] += 375.3。
第三步：4-(4,4-二氟呱啶-1-基)-N-(4-甲氧基苄基)-6,7-二氫-5H-環戊二烯[d]嘧啶-2-胺(3.70 g，9.88 mmol)加到四氫呋喃(20 mL)，三氟乙酸(20 mL)中，反應液加熱到50°C並攪拌30分鐘。反應液冷卻至室溫後，水(50 mL)倒入反應液，飽和碳酸氫鈉水溶液調pH至7，二氯甲烷(50 mL x 3)萃取，有機相合併，無水硫酸鈉乾燥，濃縮。殘餘物快速柱色譜(矽膠，0-6%梯度的甲醇/二氯甲烷)得淡黃色固體4-(4,4-二氟呱啶-1-基)-6,7-二氫-5H-環戊二烯[d]嘧啶-2-胺(1.50 g，收率：59%)。LCMS (ESI): [M+H] += 255.3。
第四步：4-溴-2-(6-氮雜螺[2.5]辛-6-基)苯甲酸(878 mg，2.83 mmol)加到二氯甲烷(5 mL)中，一滴N,N-二甲基甲醯胺加入反應液，二氯亞碸(1.13 g，9.44 mmol)加到反應液，25°C下攪拌2小時。反應液蒸乾得殘餘物。4-(4,4-二氟呱啶-1-基)-6,7-二氫-5H-環戊二烯[d]嘧啶-2-胺(600 mg，2.36 mmol)，叔丁醇鉀(802 mg，7.08 mmol)加到四氫呋喃(5 mL)中，上步殘餘物溶於四氫呋喃(5 mL)中，緩慢滴加至反應液，反應液25°C攪拌2小時。反應液抽濾，濃縮，快速柱色譜(矽膠，0-10%梯度的甲醇/二氯甲烷)得棕色固體4-溴-N-(4-(4,4-二氟呱啶-1-基)-6,7-二氫-5H-環戊二烯[d]嘧啶-2-基)-2-(6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲醯胺(450 mg，收率：35%)。LCMS (ESI): [M+H] += 546.2, 548.2。
第五步：氮氣保護下，4-溴-N-(4-(4,4-二氟呱啶-1-基)-6,7-二氫-5H-環戊二烯[d]嘧啶-2-基)-2-(6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲醯胺(200 mg，0.37 mmol)，碘化亞銅(71 mg，0.37 mmol)，磷酸鉀(159 mg，0.73 mmol)，(1S,2S)-N,N'-二甲基-1,2-環己二胺(53 mg，0.37 mmol)和2-氨磺醯乙酸乙酯(62 mg，0.37 mmol)加到N,N-二甲基甲醯胺(4 mL)中，反應液加熱至100°C攪拌6小時。待反應液冷卻至室溫後，水(30 mL)加到反應液，二氯甲烷(30 mL x 3)萃取，飽和氯化鈉水溶液(30 mL x 3)洗，有機相合併，濃縮得殘餘物。殘餘物快速柱色譜(矽膠，0-10%梯度的甲醇/二氯甲烷)得淡黃色固體乙基2-(N-(4-((4-(4,4-二氟呱啶-1-基)-6,7-二氫-5H-環戊[d]嘧啶-2-基)氨基甲醯基)-3-(6 -氮雜螺環[2.5]辛-6-基)苯基)氨磺醯基)乙酸酯(100 mg，收率：43%)。LCMS (ESI): [M+H] += 633.4。
第六步：乙基2-(N-(4-((4-(4,4-二氟呱啶-1-基)-6,7-二氫-5H-環戊[d]嘧啶-2-基)氨基甲醯基)-3-(6 -氮雜螺環[2.5]辛-6-基)苯基)氨磺醯基)乙酸酯(100 mg，0.16mmol)加到四氫呋喃(2 mL)中，反應液冷卻至0°C。氫化鋁鋰(12 mg，0.32 mmol)分3次30分鐘內加至反應液，反應液0°C繼續攪拌1小時。飽和氯化銨水溶液(30 mL)加到反應液，乙酸乙酯(30 mL x 3)萃取，有機相合併，無水硫酸鈉乾燥，濃縮得殘餘物。殘餘物製備HPLC(40-60%梯度的乙腈/水)得N-(4-(4,4-二氟呱啶-1-基)-6,7-二氫-5H-環戊二烯[d]嘧啶-2-基)-4-((2-羥乙基)磺醯胺)-2-(6-氮雜螺[2.5]辛-6-基)苯甲醯胺(5 mg，收率：5.98%)。LCMS (ESI): [M+H] += 591.4。 1HNMR (400 MHz, DMSO) δ ppm 13.20-13.00 (m,1H), 10.23 (s, 1H), 7.97(s, 1H), 7.23(s, 1H), 7.12-7.09(m, 1H), 4.96(s, 1H), 3.83-3.74(m,6H), 3.01-2.98(m, 6H), 2.97-2.80(m, 2H), 2.62-2.53(m, 2H), 2.10-2.00(m, 6H), 1.66(s,4H), 0.38(s, 4H)。
實施例 4：N-(4-(4,4-二氟呱啶-1-基)-5,7-二氫呋喃並[3,4-d]嘧啶-2-基)-4-(2-羥基乙基磺醯氨基)-2-(6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲醯胺
實施例4參照實施例3的類似合成路線製備得到的： LCMS (ESI): [M+H] += 593.3。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 12.72 (s, 1H), 10.15 (s, 1H), 7.93 (br d, J=8.4 Hz, 1H), 7.20 (s, 1H), 7.07 (dd, J= 1.8, 8.6 Hz, 1H), 5.19 (s, 2H), 4.79 (s, 2H), 3.75 (t, J=6.5 Hz, 2H), 3.62 - 3.72 (m, 4H), 3.34 - 3.40 (m, 3H), 2.92 - 3.00 (m, 4H), 1.96 - 2.09 (m, 4H), 1.48 - 1.80 (m, 4H), 0.37 (s, 4H)。
實施例5：N-(4-(4,4-二氟呱啶-1-基)-1,3-二氫呋喃並[3,4-c]吡啶-6-基)-4-(2-羥基乙基磺醯氨基)-2-(6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲醯胺
實施例5參照實施例3的類似合成路線製備得到的： LCMS (ESI): [M+H] += 592.2。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 12.87 (s, 1H), 10.19 (s, 1H), 8.04 (d, J=8.6 Hz, 1H), 7.69 (s, 1H), 7.24 (d, J=1.6 Hz, 1H), 7.10 (dd, J= 1.9, 8.6 Hz, 1H), 5.07 (s, 2H), 4.94 (s, 2H), 3.75 (t, J=6.4 Hz, 2H), 3.57 (br t, J=4.9 Hz, 4H), 3.35 - 3.38 (m, 3H), 2.90 - 3.05(m, 4H), 1.96-2.08 (m, 4H), 1.37-1.93 (m, 4H), 0.38 (s, 4H)。
實施例 6：叔-丁基 4-(4,4-二氟呱啶-1-基)-2-(4-(2-羥基乙基磺醯氨基)-2-(6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲醯氨基)-5H-吡咯並[3,4-d]嘧啶-6(7H)-甲酸基酯
實施例6參照實施例3的類似合成路線製備得到的： LCMS (ESI): [M+H] += 692.5。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 12.68 (br s, 1H), 10.17 (br s, 1H), 7.95 (d, J= 1.2 Hz, 1H), 7.22 (s, 1H), 7.09 (br d, J= 8.8 Hz, 1H), 5.08 - 4.84 (m, 1H), 4.80 - 4.62 (m, 2H), 4.49 - 4.27 (m, 2H), 3.76 (m, 7H), 2.96 (m, 4H), 2.15 - 1.98 (m, 4H), 1.73 - 1.58 (m, 4H), 1.50 - 1.44 (m, 9H), 0.38 (s, 4H)。
實施例7：N-(4-(4,4-二氟呱啶-1-基)-6,7-二氫-5H-吡咯並[3,4-d]嘧啶-2-基)-4-(2-羥基乙基磺醯氨基)-2-(6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲醯胺
第一步：向叔-丁基 4-(4,4-二氟呱啶-1-基)-2-(4-(2-羥基乙基磺醯氨基)-2-(6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲醯氨基)-5H-吡咯並[3,4-d]嘧啶-6(7H)-甲酸基酯(40.0 mg，0.06 mmol)的二氯甲烷(6.00 mL)溶液中加入三氟乙酸(1.00 mL)。將混合物在25°C下攪拌2小時。混合物製備型HPLC (C18，0-38%梯度的水(甲酸)/乙腈)純化，得到白色固體化合物N-(4-(4,4-二氟呱啶-1-基)-6,7-二氫-5H-吡咯並[3,4-d]嘧啶-2-基)-4-(2-羥基乙基磺醯氨基)-2-(6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲醯胺(15mg, 0.06mmol，收率：44%)。LCMS (ESI): [M+H] +=592.5。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 12.44 (s, 1H), 8.17 (s, 1H), 7.94 (br d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.21 (s, 1H), 7.08 (dd, J= 2.0, 8.8 Hz, 1H), 4.30 - 4.21 (m, 2H), 3.96 - 3.88 (m, 2H), 3.79 - 3.70 (m, 6H), 3.36 - 3.34 (m, 2H), 3.01 - 2.93 (m, 4H), 2.10 - 1.98 (m, 4H), 1.83 - 1.46 (m, 4H), 0.38 (s, 4H)。
實施例 8：N-(4-(4,4-二氟呱啶-1-基)-6-甲基-6,7-二氫-5H-吡咯並[3,4-d]嘧啶-2-基)-4-(2-羥基乙基磺醯氨基)-2-(6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲醯胺
第一步：向N-(4-(4,4-二氟呱啶-1-基)-6,7-二氫-5H-吡咯並[3,4-d]嘧啶-2-基)-4-(2-羥基乙基磺醯氨基)-2-(6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲醯胺(40.0 mg，0.07 mmol)和三乙胺(13.9 mg，0.14 mmol)的乙腈(1.00 mL)溶液中加入甲醛水溶液(9.23 mg，0.10 mmol)和醋酸硼氫化鈉(14.6 mg， 0.07 mmol)。混合物在25°C下攪拌2小時。反應液用乙酸乙酯萃取，抽濾，固體用純水(5 mL)25°C下打漿一小時，過濾得到粗品，加入純水(5 mL)凍乾，得到白色固體N-(4-(4,4-二氟呱啶-1-基)-6-甲基-6,7-二氫-5H-吡咯並[3,4-d]嘧啶-2-基)-4-(2-羥基乙基磺醯氨基)-2-(6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲醯胺(12 mg，0.07 mmol，收率：29%)。LCMS (ESI): [M+H] +=606.5。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 12.62 (br s, 1H), 10.16 (br s, 1H), 7.93 (br d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.20 (br s, 1H), 7.12 - 7.02 (dd, J=1.6 Hz, 8.4Hz, 1H), 5.19 - 4.72 (m, 1H), 4.03 - 3.97 (m, 2H), 3.81 - 3.62 (m, 8H), 3.36 - 3.34 (m, 2H), 3.04 - 2.90 (m, 4H), 2.49 (s, 3H), 2.09 - 1.95 (m, 4H), 1.81 - 1.47 (m, 4H), 0.37 (s, 4H)。
實施例 9：N-(4-(4,4-二氟呱啶-1-基)-1-甲基-1，3-二氫呋喃並[3,4-c]吡啶-6-基)-4-((2-羥乙基)磺醯胺基)-2-(6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲醯胺
實施例9參照實施例3的類似合成路線製備得到的： LCMS (ESI): [M+1] += 606.1。 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12.89 (s, 1H), 9.98 (s, 1H), 8.05 (d, J= 8.6 Hz, 1H), 7.63 (s, 1H), 7.26 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 7.12 (dd, J= 8.8, 2.0 Hz, 1H), 6.25 – 4.36 (m, 4H), 3.76 (t, J= 6.4 Hz, 2H), 3.57 (dt, J= 7.2, 3.8 Hz, 4H), 3.33 (d, J= 3.2 Hz, 2H), 2.97 (d, J= 5.6 Hz, 4H), 2.11 – 2.00 (m, 4H), 2.00 – 1.47 (m, 4H), 1.39 (d, J= 6.4 Hz, 3H), 0.38 (s, 4H)。
實施例10：N-(4-(4,4-二氟呱啶-1-基)-1-乙基-1-甲基-1,3-二氫呋喃並[3,4-c]吡啶-6-基)-4-(2-羥基乙基磺醯氨基)-2-(6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲醯胺
實施例10參照實施例3的類似合成路線製備得到的： LCMS (ESI): [M+H] += 634.3。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 12.96 (s, 1H), 11.06 - 9.21 (m, 1H), 8.06 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 7.57 (s, 1H), 7.26 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 7.12 (dd, J= 2.0, 8.4 Hz, 1H), 5.04 (d, J= 1.6 Hz, 3H), 3.76 (t, J= 6.8 Hz, 2H), 3.56 (br d, J= 4.0 Hz, 4H), 3.38 - 3.34 (m, 2H), 3.06 - 2.92 (m, 4H), 2.10 - 1.99 (m, 4H), 1.98 - 1.40 (m, 6H), 1.37 (s, 3H), 0.76 (t, J= 7.2 Hz, 3H), 0.38 (s, 4H)。
實施例11：N-(1-(4,4-二氟呱啶-1-基)-吡咯[1,2-a]吡嗪-3-基)-4-(2-羥基乙基磺醯氨基)-2-(6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲醯胺
實施例11參照實施例3的類似合成路線製備得到的： LCMS (ESI): [M+H] += 589.1。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 12.62 - 12.88 (m, 1H), 9.98 -10.41 (m, 1H), 8.64 - 8.87 (m, 1H), 8.02 (s, 1H), 7.69 - 7.83 (m, 1H), 7.26 - 7.33 (m, 1H), 7.09 - 7.21 (m, 1H), 6.81 - 6.90 (m, 1H), 6.68 - 6.79 (m, 1H), 3.86 - 3.92 (m, 4H), 2.97 - 3.06 (m, 4H), 2.12 - 2.24 (m, 4H), 1.78 (br s, 4H), 1.26 (s, 4H), 0.34 - 0.48 (m, 4H)。
實施例12： N-(8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-3-甲基咪唑並[1,5-a]吡嗪-6-基)-4-(2-羥基乙基磺醯氨基)-2-(6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲醯胺
LCMS (ESI): [M+H] += 604.4。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 12.81 (s, 1H), 10.38 - 10.05 (m, 1H), 8.36 (s, 1H), 8.07 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 7.81 (s, 1H), 7.27 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 7.13 (dd, J= 2.0, 8.8 Hz, 1H), 5.14 - 4.77 (m, 1H), 4.03 -3.88 (m, 4H), 3.76 (t, J= 6.4 Hz, 2H), 3.40 - 3.34 (m, 2H), 3.07-2.85 (m, 4H), 2.53 (s, 3H), 2.20 - 2.04 (m, 4H), 2.04 - 1.32 (m, 4H), 0.40 (s, 4H)。
實施例13：N-(8-(4,4-二氟呱啶-1-基)咪唑[1,2-a]吡嗪-6-基)-4-((2-羥乙基)磺醯胺)-2-(6-氮雜螺環[2.5]辛烷-6-基)苯甲醯胺
實施例13參照 實施例3的類似合成路線製備得到的： LCMS (ESI): [M+H] += 590.0。 1HNMR (400 MHz, DMSO) δ 12.89 (s, 1H), 10.21 (s, 1H), 8.84 (s, 1H), 8.08 (d, J= 8.8 Hz, 2H), 7.56 (d, J= 0.8 Hz, 1H), 7.28 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 7.14 (dd, J= 8.6, 2.0 Hz, 1H), 4.43 (s, 5H), 3.76 (t, J= 6.6 Hz, 2H), 3.34 (s, 2H), 2.99 (s, 4H), 2.54 (s, 4H), 2.16 – 2.06 (m, 4H), 0.41 (s, 4H)。
實施例14：N-(8-(4,4-二氟呱啶-1-基)咪唑並[1,2-a]吡啶-6-基)-4-((2-羥乙基)磺醯胺基)-2-(6-氮雜螺[2.5]辛-6-基)苯甲醯胺
第一步： 含有8-溴-6-硝基-4-氫咪唑並[1,2-a]吡啶(3.50 g，14.46 mmol)、鐵粉(2.40 g，43.38 mmol)、氯化銨(2.30 g，43.38 mmol)，乙醇(50mL)和水(10mL)組成的溶液在90°C下攪拌6小時，反應液濃縮後用乙酸乙酯(50 mL x 3)萃取，有機層用無水硫酸鈉乾燥，過濾並濃縮後經柱層析(矽膠，0-100%梯度的乙酸乙酯/石油醚)純化得到化合物8-溴咪唑並[1，2-a]吡啶-6-胺(3.00 g，14.15 mmol，收率：97.8%)，為黑色固體。LCMS (ESI): [M+H] +=214.0。
第二步：含有8-溴-4-氫咪唑並[1,2-a]吡啶-6-基胺(3.00 g，14.15 mmol)、二碳酸二叔丁酯(3.70 g，16.98 mmol)、N,N-二異丙基乙胺(5.60 g，42.44 mmol)和二氯甲烷(20mL)的溶液在50°C下攪拌12小時，將反應混合物濃縮後，殘餘物經柱層析(矽膠，0-50%梯度的乙酸乙酯/石油醚)純化，得到化合物叔丁基(8-溴咪唑並[1,2-a]吡啶-6-基)氨基甲酸酯 (1.80 g，5.77 mmol，收率：40.8%)，為白色固體。LCMS (ESI): [M+H] +=312.1。
第三步：在氮氣氣氛下，將4,5-雙二苯基膦-9,9-二甲基氧雜蒽(340 mg，0.58 mmol)和三(二亞苄基丙酮)二鈀(539 mg，0.58 mmol)加入到含有叔丁基(8-溴咪唑並[1,2-a]吡啶-6-基)氨基甲酸酯(1.80 g，5.77 mmol)、4,4-二氟呱啶鹽酸鹽(1.40 g，8.65mmol)、碳酸銫(7.70 g，23.07 mmol)和1,4-二氧六環(20 mL)的混合溶液中，反應液在100°C下攪拌12小時，將反應混合物倒入水中(30 mL)並用乙酸乙酯(30 mL x 3)萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾並濃縮後經柱層析(矽膠，0-30%梯度的乙酸乙酯/石油醚)純化，得到化合物叔丁基(8-(4,4-二氟呱啶-1-基)咪唑並[1,2-a]吡啶-6-基)氨基甲酸酯(500 mg，1.42 mmol，收率：24.6%)，為黃色固體。LCMS (ESI): [M+H] += 353.3。
第四步：含有叔丁基(8-(4,4-二氟呱啶-1-基)咪唑並[1,2-a]吡啶-6-基)氨基甲酸酯(500 mg，1.42 mmol)、三氟乙酸(5 mL)和二氯甲烷(5 mL)組成的溶液在20°C下攪拌1小時，濃縮反應液並加入碳酸氫鈉水溶液將pH調節至接近8，然後用乙酸乙酯(30 mL x 3)萃取，有機層用無水硫酸鈉乾燥，過濾並濃縮，得到化合物8-(4,4-二氟呱啶-1-基)咪唑並[1,2-a]吡啶-6-胺(360 mg，粗品) ，為棕色固體。LCMS (ESI): [M+H] += 253.1。
第五步：將2-(6-氮雜螺[2.5]辛-6-基)-4-溴苯甲醯氯(502 mg，1.53 mmol)加到含有8-(4,4-二氟呱啶-1-基)咪唑並[1,2-a]吡啶-6-胺(350 mg，1.39 mmol)、N,N-二異丙基乙胺(915 mg，6.94 mmol)和四氫呋喃(5 mL)的溶液中，反應液在20°C下攪拌30分鐘，將反應液倒入水中(30 mL)並用乙酸乙酯(30 mL x 3)萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾並濃縮後經柱層析(矽膠，0-30%梯度的乙酸乙酯/石油醚)純化得到化合物4-溴-N-(8-(4,4-二氟呱啶-1-基)咪唑並[1,2-a]吡啶-6-基)-2-(6-氮雜螺[2.5]辛-6-基)苯甲醯胺(390 mg，0.72 mmol，收率：51.6%)，為黃色固體。LCMS (ESI): [M+H] += 544.3； 1HNMR (400 MHz, DMSO) δ 11.25 (s, 1H), 9.04 (d, J= 1.6 Hz, 1H), 8.00 (d, J= 1.2 Hz, 1H), 7.67 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.46 (dd, J= 2.8, 1.6 Hz, 2H), 7.39 (dd, J= 8.4, 2.0 Hz, 1H), 6.59 (d, J= 1.6 Hz, 1H), 3.77 (t, J= 5.6 Hz, 4H), 3.03 (t, J= 5.2 Hz, 4H), 2.26-2.05 (m, 4H), 1.58-1.44 (m, 4H), 0.32 (s, 4H)。
第六步：含有4-溴-N-(8-(4,4-二氟呱啶-1-基)咪唑並[1,2-a]吡啶-6-基)-2-(6-氮雜螺[2.5]辛-6-基)苯甲醯胺(370 mg，0.68 mmol)、2-羥基乙磺醯胺(174 mg，1.36 mmol)、磷酸鉀(442 mg，2.04 mmol)、2-二-叔丁膦基-2',4',6'-三異丙基聯苯(29 mg，0.068 mmol)、三(二亞苄基丙酮)二鈀(64 mg，0.068 mmol)和1,4-二氧六環(5 mL)的反應液在氮氣氛圍下100°C攪拌12小時，將反應液倒入水中(30 mL)並用乙酸乙酯(30 mL x 3)萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾並濃縮後經柱層析(矽膠，0-100%梯度的乙酸乙酯/石油醚)純化得到化合物N-(8-(4,4-二氟呱啶-1-基)咪唑並[1,2-a]吡啶-6-基)-4-((2-羥乙基)磺醯胺基)-2-(6-氮雜螺[2.5]辛-6-基)苯甲醯胺 (50.04 mg，0.085 mmol，收率：12.5%)，為白色固體。LCMS (ESI): [M+H] += 589.4； 1HNMR (400 MHz, DMSO) δ 11.60 (s, 1H), 10.15 – 10.02 (m, 1H), 9.05 (d, J= 1.6 Hz, 1H), 7.98 (d, J= 1.2 Hz, 1H), 7.80 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.46 (d, J= 1.2 Hz, 1H), 7.16 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 7.04 (dd, J= 8.4, 2.0 Hz, 1H), 6.57 (d, J= 1.6 Hz, 1H), 4.96 (s, 1H), 3.86-3.66 (m, 6H), 3.37-3.32 (m, 2H), 2.98 (t, J= 5.2 Hz, 4H), 2.25-2.09 (m, 4H), 1.67-1.48 (m, 4H), 0.35 (s, 4H)。
實施例15：N-(8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-2,3-二甲基咪唑並[1,2-a]吡嗪-6-基)-4-(2-羥乙基)磺醯胺)-2-(6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲醯胺
第一步：5-溴-3-氯吡嗪-2-胺(2.00 g，9.50 mmol)、4,4-二氟呱啶鹽酸鹽(2.27 g，14.25 mmol)和碳酸鉀(4.02 g，28.50 mmol)加到N-甲基吡咯烷酮(5 mL)中，反應液130°C攪拌16小時。反應液抽濾，濾液倒入飽和氯化銨溶液(50 mL)中，乙酸乙酯(30 mL x 3)萃取，有機相合併，飽和氯化鈉水溶液(50 mL x 3)洗，無水硫酸鈉乾燥，濃縮得粗品。粗品快速柱色譜(矽膠，10-15%梯度的乙酸乙酯/石油醚)得棕色固體5-溴-3-(4,4-二氟呱啶-1-基)吡嗪-2-胺(2.20g，收率： 67%)。LCMS (ESI): [M+H] +=293.1、295.1。
第二步：向100 mL密閉反應器中加入5-溴-3-(4,4-二氟呱啶-1-基)吡嗪-2-胺(2.20 g，6.38 mmol)、3-溴-2-丁酮(1.49 g，9.57 mmol)和 1,4-二氧六環(5 mL)中，反應液120°C攪拌24小時。反應液倒入水(30 mL)中，乙酸乙酯(30 mL x 3)萃取，有機相合併，無水硫酸鈉乾燥，濃縮得粗品。粗品快速柱色譜(矽膠, 0-10%梯度的乙酸乙酯/石油醚)得淡黃色固體6-溴-8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-2,3-二甲基咪唑並[1,2-a]吡嗪(1.85 g，收率：85%)。LCMS (ESI): [M+H] +=345.1、347.1。
第三步：6-溴-8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-2,3-二甲基咪唑並[1,2-a]吡嗪(1.90 g，4.13 mmol)、二苯甲酮亞胺(1.53 g，8.26 mmol)、1,1'-聯萘-2,2'-雙二苯膦(262 mg，0.41 mmol)、三(二亞苄基丙酮)二鈀(193 mg，0.21 mmol)和碳酸銫(2.74 g， 8.26 mmol)加到1,4-二氧六環(20 mL)中，反應液115°C攪拌16小時。反應液抽濾，濾液倒入水(50 mL)中，乙酸乙酯(30 mL x 3)萃取，有機相合併，無水硫酸鈉乾燥，濃縮得粗品。粗品快速柱色譜(矽膠，0-6%梯度的乙酸乙酯/石油醚)得黃色固體N-(8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-2,3-二甲基咪唑並[1,2-a]吡嗪-6-基)-1,1-二苯基甲亞胺(990 mg，收率：54%)。
第四步：N-(8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-2,3-二甲基咪唑並[1,2-a]吡嗪-6-基)-1,1-二苯基甲亞胺(500 mg，1.12 mmol)加到二氯甲烷(5 mL)中，4M鹽酸二氧六環溶液(1.5 mL)緩慢加至反應液，反應液25°C攪拌30分鐘。反應液濃縮得粗品。粗品加到乙腈(5 mL)中，2-氟-4-碘苯甲酸(508 mg，1.91 mmol)、N,N-二異丙基乙胺(1.01 g，7.63 mmol)，1-丙基磷酸酐(50%乙酸乙酯溶液，2.43 g，3.81 mmol)加入反應液，反應液85°C攪拌16小時。反應液倒入水(30 mL)中，乙酸乙酯(30 mL x 3)萃取，有機相合併，無水硫酸鈉乾燥，濃縮得粗品。粗品快速柱色譜(矽膠，0-9%梯度的乙酸乙酯/石油醚)得N-(8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-2,3-二甲基咪唑並[1,2-a]吡嗪-6-基)-2-氟-4-碘苯甲醯胺(320 mg，收率：48%)。LCMS (ESI): [M+H] +=530.1。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 10.44–10.40 (m, 1H), 8.34 (s, 1H), 7.80 (ddd, J= 9.2, 8.1, 1.5 Hz, 1H), 7.70 (ddd, J= 9.8, 8.1, 1.5 Hz, 1H), 7.48 – 7.32 (m, 1H), 4.36 (s, 4H), 2.33 (d, J= 12.4 Hz, 6H), 2.09 – 1.95 (m, 4H)。
第五步：N-(8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-2,3-二甲基咪唑並[1,2-a]吡嗪-6-基)-2-氟-4-碘苯甲醯胺(320 mg， 0.60 mmol)、6-氮雜-螺[2.5]辛烷鹽酸鹽(135 mg，0.91 mmol)、碳酸鉀(256 mg，1.81 mmol)加到甲苯(5 mL)中，反應液130°C攪拌18小時。反應液抽濾，濾液倒入飽和氯化銨溶液(30 mL)中，乙酸乙酯(30 mL x 3)萃取，有機相合併，無水硫酸鈉乾燥，濃縮得粗品。粗品快速柱色譜(矽膠，5-15%梯度的乙酸乙酯/石油醚)得淡黃色固體N-(8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-2,3-二甲基咪唑並[1,2-a]吡嗪-6-基)-4-碘-2-(6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲醯胺(120 mg，收率： 32%)。
第六步：N-(8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-2,3-二甲基咪唑並[1,2-a]吡嗪-6-基)-4-碘-2-(6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲醯胺(120 mg，0.19 mmol)、2-羥基-1-磺醯胺(37 mg，0.19 mmol)、磷酸鉀(126 mg，0.58 mmol)、碘化亞銅(38 mg，0.19 mmol)和(1S,2S)-(+)-N,N'-二甲基-1,2-環己二胺(56 mg，0.38 mmol)加到N,N-二甲基甲醯胺(2 mL)中，氮氣置換，反應液115°C攪拌2小時。反應液抽濾，濾液倒入飽和氯化銨溶液(30 mL)中，乙酸乙酯(30 mL x 3)萃取，有機相合併，飽和氯化鈉溶液(30 mL x 3)洗，無水硫酸鈉乾燥，濃縮得粗品。粗品製備HPLC(C18，25-55%梯度的乙腈/水)純化得白色固體N-(8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-2,3-二甲基咪唑並[1,2-a]吡嗪-6-基)-4-(2-羥乙基)磺醯胺)-2-(6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲醯胺。LCMS (ESI): [M+H] +=618.3。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 12.90 (s, 1H), 10.21 (s, 1H), 8.46 (s, 1H), 8.09 (d, J= 8.7 Hz, 1H), 7.29 (d, J= 2.1 Hz, 1H), 7.14 (dd, J= 8.6, 2.1 Hz, 1H), 4.95 (s, 1H), 4.41 (t, J= 5.6 Hz, 4H), 3.77 (t, J= 6.5 Hz, 2H), 3.37 (d, J= 6.4 Hz, 2H), 2.99 (t, J= 5.3 Hz, 4H), 2.35 (d, J= 14.3 Hz, 6H), 2.16 – 2.01 (m, 4H), 1.60 (d, J= 111.7 Hz, 4H), 0.42 (s, 4H)。
實施例16：氮雜螺環[2.5]辛烷-6-基)-4-{(2-羥乙基磺醯基]氨基}苯基)-N-[8-(4,4-二氟呱啶基) (4-氫-1,2,4-三唑基[1,5-a]吡嗪-6-基)]甲醯胺
實施例16參照實施例3的類似合成路線製備得到的： LCMS (ESI): [M+H] +=591.3； 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 13.39 (s, 1H), 8.91 (s, 1H), 8.42 (s, 1H), 7.90 (d, J= 8.7 Hz, 1H), 7.15 (s, 1H), 7.03 (s, 1H), 6.87 (d, J= 8.3 Hz, 1H), 6.61 (s, 1H), 6.06 (s, 1H), 5.26 (t, J= 4.8 Hz, 1H), 4.32 (m, 4H), 3.67 (t, J= 6.6 Hz, 2H), 3.31 (m, 2H), 3.09 (s, 2H), 2.91 (s, 4H), 2.09 (dd, J= 15.2, 9.5 Hz, 4H), 1.94 (dd, J= 14.4, 6.8 Hz, 4H), 0.35 (s, 4H)。
實施例17：N-(4-(4,4-二氟呱啶-1-基)吡唑並[1,5-a]吡嗪-6-基)-4-(2-羥乙基)磺醯胺基)-2-(6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲醯胺
實施例17參照實施例3的類似合成路線製備得到的： LCMS (ESI): [M+1] += 590.0。 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 13.06 (s, 1H), 10.24 (s, 1H), 8.95 (d, J= 0.9 Hz, 1H), 8.09 (d, J= 8.6 Hz, 1H), 7.98 (d, J= 2.4 Hz, 1H), 7.30 (d, J= 2.2 Hz, 1H), 7.15 (dd, J= 8.7, 2.1 Hz, 1H), 7.06 (d, J= 2.7 Hz, 1H), 3.95 (dd, J= 7.1, 4.5 Hz, 4H), 3.77 (d, J= 6.5 Hz, 3H), 3.36 (t, J= 6.5 Hz, 2H), 2.99 (d, J= 10.5 Hz, 4H), 2.17 (td, J= 13.6, 6.6 Hz, 4H), 1.76 (s, 4H), 0.41 (s, 4H)。
實施例18：N-(8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-[1,2,4]三唑並[1,5-a]吡啶-6-基)-4-(2-羥乙基)磺醯胺基)-2-(6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲醯胺
實施例18 參照實施例3的類似合成路線製備得到的： LCMS (ESI): [M+1] += 590.0。 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12.23 – 12.16 (m, 1H), 9.23 (d, J= 1.6 Hz, 1H), 8.37 (s, 1H), 7.76 (d, J= 8.6 Hz, 1H), 7.03 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 6.95 – 6.85 (m, 2H), 5.99 (s, 1H), 3.81 (t, J= 5.6 Hz, 4H), 3.74 (t, J= 6.8 Hz, 2H), 3.18 (d, J= 13.4 Hz, 3H), 2.97 (t, J= 5.2 Hz, 4H), 2.21 – 2.12 (m, 4H), 1.58 (t, J= 5.2 Hz, 4H), 0.36 (s, 4H)。
實施例19：N-(8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-[1,2,4]三唑並[4,3-a]吡嗪-6-基)-4-((2-羥乙基)磺醯胺基)- 2-(6-氮雜螺[2.5]辛-6-基)苯甲醯胺
實施例19參照實施例3的類似合成路線製備得到的： LCMS (ESI): [M+H] +=591.1。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 13.08 (s, 1H), 10.20 (s, 1H), 9.37 (d, J= 1.1 Hz, 1H), 8.79 (d, J= 1.1 Hz, 1H), 8.08 (d, J= 8.6 Hz, 1H), 7.29 (d, J= 2.2 Hz, 1H), 7.15 (dd, J= 8.8, 1.9 Hz, 1H), 4.97 (s, 1H), 4.45 (s, 4H), 3.76 (t, J= 6.4 Hz, 2H), 3.17 (d, J= 5.1 Hz, 2H), 2.98 (t, J= 5.2 Hz, 4H), 2.22 – 2.11 (m, 4H), 1.74 (s, 4H), 0.42 (s, 4H)。
實施例20：N-(1-(4,4-二氟呱啶-1-基)吡咯並[1,2-c]嘧啶-3-基)-4-(2-羥基乙基磺醯氨基)-2-(6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲醯胺
第一步：向(±)-苄基氧基羰基-α-膦醯甘氨酸三甲酯(17.8 g，53.7 mmol)的二氯甲烷(170 mL)溶液中加入四甲基胍(6.66 g，57.8 mmol)，將混合物在25°C攪拌15分鐘。然後將2-吡咯甲醛 (5.00 g，52.5 mmol)的二氯甲烷(12 mL)溶液在-30°C緩慢加入到混合物中並攪拌45分鐘。將混合物加熱至50°C攪拌24小時。向反應混合物中加入水(100 mL)，用二氯甲烷(100 mL x 2)萃取。合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液旋乾得殘餘物。殘留物用快速柱色譜純化(矽膠，0-15%梯度的乙酸乙酯/石油醚)得到黃色固體甲基1-羥基吡咯並[1,2-c]嘧啶-3-甲酸基酯(5.00 g，52.5 mmol，收率：49%)。LCMS (ESI): [M+H] +=193.2。
第二步：向甲基 1-羥基吡咯並[1,2-c]嘧啶-3-甲酸基酯(5.00 g，26.01 mmol)的三氯氧磷(50 mL)溶液中加入N,N-二異丙基乙胺(10.1 g，78.0 mmol)，將反應混合物在100°C攪拌16小時。將反應液濃縮旋乾，向反應混合物中加入水(100 mL)，用乙酸乙酯(100 mL x 3)萃取。合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液旋乾得殘餘物。殘留物用快速柱色譜純化(矽膠，0-15%梯度的乙酸乙酯/石油醚)得到黃色固體甲基 1-氯吡咯並[1,2-c]嘧啶-3-甲酸基酯(1.20 g，26.0 mmol，收率：21.9%)。LCMS (ESI): [M+H] += 210.9。
第三步：向甲基 1-氯吡咯並[1,2-c]嘧啶-3-甲酸基酯(1.20 g，5.70 mmol)和鹽酸4,4-二氟呱啶(1.08 g，6.84 mmol)的叔丁醇(24 mL)的溶液中加入三乙胺(1.73 g，17.1 mmol)。將混合物加熱至90°C攪拌16小時。向反應液中加入水(20 mL)，用乙酸乙酯(20 mL x 3)萃取。合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液旋乾得殘餘物。殘留物用快速柱色譜純化(矽膠，0-10%梯度的乙酸乙酯/石油醚)得到黃色固體甲基 1-(4,4-二氟呱啶-1-基)吡咯並[1,2-c]嘧啶-3-甲酸基酯(1.70 g，5.69 mmol，收率：96%)。LCMS (ESI): [M+H] += 295.9。
第四步：向甲基 1-(4,4-二氟呱啶-1-基)吡咯並[1,2-c]嘧啶-3-甲酸基酯(1.70 g，5.76 mmol)的甲醇(17 mL)和水(17 mL)的溶液中加入氫氧化鈉(0.69 g，17.2 mmol)。將混合物在25°C攪拌16小時。將反應液中甲醇濃縮旋乾，剩餘的水相用1N鹽酸將pH值調至4，用乙酸乙酯(20 mL x 3)萃取。合併有機相，用無水硫酸鎂乾燥，過濾，濾液旋乾得殘餘物1-(4,4-二氟呱啶-1-基)吡咯並[1,2-c]嘧啶-3-羧酸 (1.70 g，5.75 mmol，收率：100%)。LCMS (ESI): [M+H] += 281.9。
第五步：向1-(4,4-二氟呱啶-1-基)吡咯並[1,2-c]嘧啶-3-羧酸(1.00 g，3.13 mmol)、苯甲醇(0.52 g，4.80 mmol)和三乙胺(0.65 g，6.40 mmol)的甲苯(9 mL)溶液中加入疊氮磷酸二苯酯(1.32 g，4.80 mmol)。將混合物加熱至90°C攪拌16小時。向反應液中加入水(10 mL)，用乙酸乙酯(10 mL x 2)萃取。合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液旋乾得殘餘物。殘留物用快速柱色譜純化(矽膠，0-10%梯度的乙酸乙酯/石油醚)得到黃色固體苯甲基 (1-(4,4-二氟呱啶-1-基)吡咯並[1,2-c]嘧啶-3-基)氨基甲酯(0.70 g，3.19 mmol，收率：56.6%)。LCMS (ESI): [M+H] += 387.0。
第六步：向苯甲基 (1-(4,4-二氟呱啶-1-基)吡咯並[1,2-c]嘧啶-3-基)氨基甲酯(600 mg，1.55 mmol)的乙腈(3 mL)和水(3 mL)溶液中加入 溴化氫乙酸溶液(6 mL，35%)。將混合物在25°C攪拌48小時。將反應液旋乾。殘留物用製備型HPLC (C18，0-60%梯度的乙腈/水)純化，得到黃色固體化合物1-(4,4-二氟呱啶-1-基)吡咯並[1,2-c]嘧啶-3-胺(200 mg，1.55 mmol，收率：51%)。LCMS (ESI): [M+H] +=253.2。
第七步：向1-(4,4-二氟呱啶-1-基)吡咯並[1,2-c]嘧啶-3-胺(200 mg，0.79 mmol)、4-碘-2-(6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲醯氯化 (357 mg，0.95 mmol)的四氫呋喃(4 mL)溶液中加入三乙胺(0.65 g，6.40 mmol)的甲苯(9 mL)溶液中加入N,N-二異丙基乙胺(313 mg，2.38 mmol)。 將混合物在25°C攪拌16小時。向反應液中加入水(10 mL)，用乙酸乙酯(10 mL x 2)萃取。合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液旋乾得殘餘物。殘留物用快速柱色譜純化(矽膠，0-10%梯度的乙酸乙酯/石油醚)得到黃色固體N-(1-(4,4-二氟呱啶-1-基)吡咯並[1,2-c]嘧啶-3-基)-4-碘-2-(6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲醯胺(255 mg，0.79 mmol，收率：54.3%)。LCMS (ESI): [M+H] += 592.3。
第八步：向2-羥基乙磺醯胺(67.4 mg，0.54 mmol)、2-(甲基氨基)乙酸(36.9 mg，0.41 mmol)、磷酸鉀(358 mg，1.66 mmol)的N,N-二甲基甲醯胺(5 mL)溶液中加入碘化亞銅(40.2 mg，0.21 mmol)。將混合物在50°C攪拌5分鐘。然後將N-(1-(4,4-二氟呱啶-1-基)吡咯並[1,2-c]嘧啶-3-基)-4-碘-2-(6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲醯胺(245 mg， 0.41 mmol)在50°C加入到反應混合物中，將混合物在氮氣的保護下加熱至100°C攪拌16小時。向反應液中加入水(10 mL)，用乙酸乙酯(10 mL x 2)萃取。合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液旋乾得殘餘物。殘留物用製備型HPLC (C18，0-60%梯度的乙腈/水)純化，得到黃色固體化合物N-(1-(4,4-二氟呱啶-1-基)吡咯並[1,2-c]嘧啶-3-基)-4-(2-羥基乙基磺醯氨基)-2-(6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲醯胺(29 mg，0.41 mmol，收率：11%)。LCMS (ESI): [M+H] += 589.5。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 13.15 - 12.87 (m, 1H), 10.39 - 9.98 (m, 1H), 8.16 - 8.02 (m, 1H), 7.98 - 7.82 (m, 1H), 7.46 - 7.36 (m, 1H), 7.31 - 7.23 (m, 1H), 7.20 - 7.05 (m, 1H), 6.94 - 6.74 (m, 1H), 6.49 - 6.28 (m, 1H), 5.05 - 4.81 (m, 1H), 3.81 - 3.70 (m, 2H), 3.57 - 3.45 (m, 4H), 3.42 - 3.35 (m, 2H), 3.06 - 2.91 (m, 4H), 2.35 - 2.19 (m, 4H), 2.05 - 1.49 (m, 4H), 0.49 - 0.32 (m, 4H)。
實施例21：N-(5-(4,4-二氟呱啶-1-基)咪唑[1,2-c]嘧啶-7-基)-4-((2-羥乙基)磺醯胺)-2-(6-氮雜螺環[2.5]辛烷-6-基)苯甲醯胺
實施例21參照實施例3的類似合成路線製備得到的： LCMS (ESI): [M+H] += 590.3； 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 13.86 (s, 1H), 10.37 (s, 1H), 8.13 (s, 1H), 8.11 (s, 2H), 8.03 (s, 1H), 7.32-7.36 (m, 1H), 7.16-7.22 (m, 1H), 3.77 (t, J= 6.4 Hz, 2H), 3.66-3.73 (m, 4H), 2.96-3.04 (m, 4H), 2.22-2.32 (m, 4H), 1.65-1.83 (s, 4H), 1.54 (d, J= 6.8 Hz, 1H), 1.20-1.34 (m, 2H), 0.42 (s, 4H)。
實施例22：N-(7-(4,4-二氟呱啶-1-基)咪唑[1,2-c]嘧啶-5-基)-4-((2-羥乙基)磺胺基)-2-(6-氮雜螺環[2.5]辛烷-6-基)苯甲醯胺
實施例22參照實施例3的類似合成路線製備得到的： LCMS(ESI): [M+H] +=590.4。 1H-NMR (400 MHz, DMSO) δ 12.27 (s, 1H), 10.13 (s, 1H), 7.79 – 7.61 (m, 2H), 7.40 (d, J= 1.5 Hz, 1H), 7.05 (d, J= 7.2 Hz, 2H), 6.53 (s, 1H), 4.96 (s, 1H), 3.77 (t, J= 6.5 Hz, 2H), 3.46 – 3.32 (m, 6H), 2.80 (s, 4H), 1.89 (d, J= 16.2 Hz, 4H), 1.28 (s, 4H), 0.25 (s, 4H)。
實施例23：N-(5-(4,4-二氟呱啶-1-基)咪唑並[1,2-c]嘧啶-7-基)-6-((2-羥乙基)磺醯胺基)-4-(6-氮雜螺環[2.5]辛烷-6-基)煙醯胺
實施例23參照實施例3的類似合成路線製備得到的： LCMS(ESI): [M+H] +=633.3。
實施例24: N-(5-(4,4-二氟呱啶-1-基)-[1,2,4]三唑並[4,3-c]嘧啶-7-基)-4-(2-羥基乙基磺醯氨基)-2-(6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲醯胺
實施例24參照實施例3的類似合成路線製備得到的： LCMS (ESI): [M+H] +=591.5。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 13.37 (s, 1H), 10.27 (br s, 1H), 8.42 (s, 1H), 8.11 (d, J= 8.6 Hz, 1H), 7.91 (s, 1H), 7.30 (d, J= 1.9 Hz, 1H), 7.16 (dd, J= 1.9, 8.7 Hz, 1H), 4.96 (br s, 1H), 4.23 (br t, J= 5.2 Hz, 4H), 3.77 (br s, 2H), 3.40 - 3.35 (m, 2H), 3.00 (br s, 4H), 2.31 - 2.11 (m, 4H), 2.01 - 1.30 (m, 4H), 0.41 (s, 4H)。
實施例25：(2-(6-氮雜螺[2.5]辛-6-基)-5-氟-4-{[(2-羥基乙基)磺醯]氨基}苯基)-N-[5-(4,4-二氟呱啶基)(4-氫-1,2,4-三唑並[4,3-e]嘧啶-7-基)]甲醯胺
實施例25參照實施例3的類似合成路線製備得到的： LCMS (ESI): [M+H] +=609.2。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 13.69 (s, 1H), 10.12 (br s, 1H), 8.44 (s, 1H), 7.97 - 7.84 (m, 2H), 7.61 (d, J= 7.2 Hz, 1H), 5.17 - 4.80 (m, 1H), 4.31 - 4.17 (m, 4H), 3.88 - 3.76 (m, 2H), 3.43 - 3.40 (m, 2H), 3.05 – 2.95 (m, 4H), 2.28 - 1.51 (m, 8H), 0.42 (s, 4H)。
實施例26：N-(5-(4,4-二氟呱啶-1-基)-8-氟-[1,2,4]三唑並[4,3-c]嘧啶-7-基)-4-(2-羥基乙基磺醯氨基)-2-(6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲醯胺
實施例26參照實施例3的類似合成路線製備得到的： LCMS (ESI): [M+H] += 609.2。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 12.68 (s, 1H), 10.12 (s, 1H), 8.55 (s, 1H), 7.94 (br d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.24 (br s, 1H), 7.10 (dd, J= 1.6, 8.4 Hz, 1H), 5.11 (s, 1H), 4.10 (br s, 4H), 3.76 (t, J= 6.4 Hz, 2H), 3.33 - 3.31 (m, 2H), 3.03 - 2.91 (m, 4H), 2.26 - 2.08 (m, 4H), 1.80 - 1.55 (m, 4H), 0.39 (s, 4H)。
實施例 27：N-(5-(4,4-二氟呱啶-1-基)-3-甲基-[1,2,4]三唑並[4,3-c]嘧啶-7-基)-4-(2-羥基乙基磺醯氨基)-2-(6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲醯胺
實施例27參照實施例3的類似合成路線製備得到的： LCMS (ESI): [M+H] += 605.0。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 13.34 (s, 1H), 10.31 (s, 1H), 8.10 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.81 (s, 1H), 7.30 (s, 1H), 7.15 (br d, J= 8.4 Hz, 1H), 5.29 - 4.67 (m, 1H), 4.21 (br s, 4H), 3.77 (br t, J= 6.4 Hz, 2H), 3.39 - 3.38 (m, 2H), 2.99 (br s, 4H), 2.47 - 2.40 (m, 3H), 2.25 - 2.14 (m, 4H), 1.92 - 1.58 (m, 4H), 0.41 (s, 4H)。
實施例28：N-(7-(4,4-二氟呱啶-1-基)噻吩並[2,3-c]吡啶-5-基)-4-(2-羥基乙基磺醯氨基)-2-(6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲醯胺
實施例28參照實施例3的類似合成路線製備得到的： LCMS (ESI): [M+H] += 606.5。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 12.91 (s, 1H), 10.21 (s, 1H), 8.30 (s, 1H), 8.09 (d, J= 8.6 Hz, 1H), 8.01 (d, J= 5.4 Hz, 1H), 7.51 (d, J= 5.4 Hz, 1H), 7.27 (d, J= 1.9 Hz, 1H), 7.13 (dd, J= 2.0, 8.6 Hz, 1H), 3.82-3.80 (m, 4H), 3.76 (t, J= 6.5 Hz, 2H), 3.37 (br d, J= 6.5 Hz, 2H), 3.05-2.95 (m, 4H), 2.25 - 2.10 (m, 4H), 2.06 - 1.40 (m, 4H), 0.47 - 0.35 (m, 4H)。
實施例29：N-(7-(4,4-二氟呱啶-1-基)呋喃並[2,3-c]吡啶-5-基)-4-(2-羥基乙基磺醯氨基)-2-(6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲醯胺
實施例29參照實施例3的類似合成路線製備得到的： LCMS (ESI): [M+H] += 590.5。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 12.82 (s, 1H), 10.18 (s, 1H), 8.12 - 8.05 (m, 2H), 7.99 (s, 1H), 7.27 (d, J= 1.9 Hz, 1H), 7.12 (dd, J= 1.8, 8.6 Hz, 1H), 6.99 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 4.95 (br d, J= 1.4 Hz, 1H), 3.97 (br t, J= 5.6 Hz, 4H), 3.76 (br t, J= 5.9 Hz, 2H), 3.37 - 3.36 (m, 2H), 2.98 (br s, 4H), 2.22 - 2.03 (m, 4H), 1.99 - 1.37 (m, 4H), 0.40 (s, 4H)。
實施例30：N-(7-(4,4-二氟呱啶-1-基)苯並呋喃-5-基)-4-(2-羥基乙基磺醯氨基)-2-(6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲醯胺
實施例30參照實施例3的類似合成路線製備得到的： LCMS (ESI): [M+H] += 589.3。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 11.68 (s, 1H), 10.09 (s, 1H), 7.96 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 7.84 (d, J= 1.2 Hz, 2H), 7.17 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 7.10 (d, J= 1.6 Hz, 1H), 7.04 (dd, J= 2.0, 8.4 Hz, 1H), 6.96 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 5.33 - 4.50 (m, 1H), 3.80 - 3.72 (m, 2H), 3.48 - 3.44 (m, 4H), 3.33 - 3.29 (m, 2H), 3.01 - 2.95 (m, 4H), 2.23 - 2.13 (m, 4H), 1.60 - 1.53 (m, 4H), 0.35 (s, 4H)。
實施例31： N-(4-(4,4-二氟呱啶-1-基)呋喃並[3,2-c]吡啶-6-基)-4-(2-羥基乙基磺醯氨基)-2-(6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲醯胺
實施例31參照實施例3的類似合成路線製備得到的： LCMS (ESI): [M+H] +=590.5。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 12.98 (s, 1H), 10.22 (br s, 1H), 8.08 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 7.95 (d, J= 0.8 Hz, 1H), 7.91 (d, J= 2.4 Hz, 1H), 7.27 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 7.18 (d, J= 1.2 Hz, 1H), 7.12 (dd, J= 2.0, 8.6 Hz, 1H), 5.14 - 4.79 (m, 1H), 3.87 - 3.81 (m, 4H), 3.78 - 3.73 (m, 2H), 3.38 - 3.35 (m, 2H), 3.02 - 2.94 (m, 4H), 2.16 - 2.05 (m, 4H), 1.99 - 1.25 (m, 4H), 0.40 (s, 4H)。
實施例32：N-(4-(4,4-二氟呱啶-1-基)呋喃[3,2-d]嘧啶-2-基)-4-((2-羥乙基)磺胺)-2-(6-氮雜螺環[2.5]辛烷-6-基)苯甲醯胺
實施例32參照實施例3的類似合成路線製備得到的： LCMS (ESI): [M+H] +=591.4。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 12.69 (s, 1H), 9.90 (s, 1H), 8.24 (d, J= 2.2 Hz, 1H), 7.97 (d, J= 8.6 Hz, 1H), 7.22 (s, 1H), 7.09 (dd, J= 8.6, 2.1 Hz, 1H), 6.96 (d, J= 2.2 Hz, 1H), 5.47 (s, 1H), 4.07 (t, J= 5.7 Hz, 4H), 3.76 (t, J= 6.5 Hz, 2H), 3.35 (d, J= 6.7 Hz, 2H), 2.96 (d, J= 5.5 Hz, 4H), 2.13 (s, 4H), 1.85 – 1.43 (m, 4H), 0.38 (s, 4H)。
實施例33：N-(4-氯-7-(4,4-二氟呱啶-1-基)呋喃並[2,3-c]吡啶-5-基)-4-(2-羥基乙基磺醯氨基)-2-(6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲醯胺
第一步：向N-(7-(4,4-二氟呱啶-1-基)呋喃並[2,3-c]吡啶-5-基)-4-(2-羥基乙基磺醯氨基)-2-(6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲醯胺(30.0 mg，0.05 mmol)的乙腈 (1.00 mL)溶液中加入N-氯代丁二醯亞胺(8.15 mg，0.06 mmol)。將混合物加熱至50°C攪拌4小時。向反應混合物中加入水(5 mL)，用乙酸乙酯(5 mL x 3)萃取。合併有機相，用無水硫酸鎂乾燥，過濾，濾液旋乾得殘餘物。用製備型HPLC(C18，18-58%梯度的水(甲酸)/乙腈)純化，得到白色固體N-(4-氯-7-(4,4-二氟呱啶-1-基)呋喃並[2,3-c]吡啶-5-基)-4-(2-羥基乙基磺醯氨基)-2-(6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲醯胺(8.00 mg，0.05 mmol，收率25%)。LCMS (ESI): [M+H] += 624.2。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 11.72 (s, 1H), 10.13 (br s, 1H), 8.26 (d, J= 2.1 Hz, 1H), 7.90 (br d, J= 8.3 Hz, 1H), 7.21 (br s, 1H), 7.14 - 6.99 (m, 2H), 4.95(br s, 1H), 4.08 - 3.85 (m, 4H), 3.82 - 3.72 (m, 2H), 3.43 - 3.37 (m, 2H), 3.07 - 2.95 (m, 4H), 2.18 - 2.02 (m, 4H), 1.76 - 1.55 (m, 4H), 0.37 (s, 4H)。
實施例34：4-(4，4-二氟呱啶基)-3-甲基-3H-咪唑並吡啶-6-基-4-羥乙基磺醯胺基-2-(2-羥乙基)苯甲醯胺
實施例34參照實施例3的類似合成路線製備得到的： LCMS（ESI）m/z: 604[M+H] +; 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 13.05 (s, 1H), 10.18 (s, 1H), 8.24 (d, J= 18.6 Hz, 2H), 8.10 (d, J= 8.6 Hz, 1H), 7.27 (d, J= 2.2 Hz, 1H), 7.13 (dd, J= 8.6, 2.1 Hz, 1H), 4.95 (s, 1H), 4.04 (s, 3H), 3.76 (q, J= 5.4, 4.7 Hz, 2H), 3.38 – 3.33 (m, 5H), 3.17 (d, J= 5.2 Hz, 1H), 2.99 (t, J= 5.2 Hz, 5H), 2.22 (td, J= 13.6, 12.7, 6.6 Hz, 4H), 1.78 (s, 4H), 0.39 (s, 5H)。
實施例35：N-(4-(4,4-二氟呱啶-1-基)-1-甲基-1H-咪唑[4,5-c]吡啶-6-基)-4-((2-羥乙基)磺醯胺基)-2-(6-氮雜螺環[2.5]辛烷-6-基)苯甲醯胺
實施例35參照實施例3的類似合成路線製備得到的： LCMS (ESI): [M+H] += 604.4。 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12.71 (s, 1H), 10.18 (s, 1H), 8.10 – 8.02 (m, 2H), 7.86 (s, 1H), 7.26 (d, J= 2.2 Hz, 1H), 7.13 (dd, J= 8.6, 2.1 Hz, 1H), 4.94 (s, 1H), 4.29 (t, J= 5.7 Hz, 4H), 3.77 (s, 5H), 3.36 (t, J= 6.5 Hz, 2H), 2.99 (s, 4H), 2.12 – 1.98 (m, 4H), 1.74 (s, 4H), 0.40 (s, 4H)。
實施例36： 2-(4-環丙基呱嗪-1-基)-N-(2-(4,4-二氟呱啶-1-基)-6-甲基嘧啶-4-基)-4-((2-羥乙基)磺醯胺基)苯甲醯胺
實施例36參照實施例3的類似合成路線製備得到的： LCMS (ESI)m/z: 604[M+H] +; 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12.80 (s, 1H), 8.24 (d, J= 1.0 Hz, 1H), 8.08 (d, J= 8.6 Hz, 1H), 7.79 (d, J= 0.8 Hz, 1H), 7.26 (d, J= 2.2 Hz, 1H), 7.13 (dd, J= 8.6, 2.1 Hz, 1H), 4.99 (s, 1H), 3.97 (dd, J= 6.8, 4.6 Hz, 4H), 3.92 (s, 3H), 3.77 (t, J= 6.4 Hz, 2H), 3.36 (t, J= 6.4 Hz, 2H), 2.98 (d, J= 5.6 Hz, 4H), 2.10 (dt, J= 14.8, 5.5 Hz, 4H), 1.23 (s, 1H), 0.39 (s, 4H)。
實施例37：N-(7-(4,4-二氟呱啶-1-基)-1-甲基-1H-吡咯[2,3-c]吡啶-5-基)-4-(2-羥乙基)磺胺基)-2-(6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲醯胺
實施例37參照實施例3的類似合成路線製備得到的： LCMS (ESI): [M+H] += 603.4。 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12.86 (s, 1H), 10.15 (s, 1H), 8.16 (s, 1H), 8.08 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.45 (d, J= 3.2 Hz, 1H), 7.26 (d, J= 2.4 Hz, 1H), 7.12 (dd, J= 8.4, 2.0 Hz, 1H), 6.46 (d, J= 3.2 Hz, 1H), 4.94 (s, 1H), 4.05 (s, 3H), 3.76 (t, J= 6.4 Hz, 2H), 3.35 (t, J= 6.4 Hz, 2H), 3.30 (d, J= 6.4 Hz, 4H), 2.98 (t, J= 5.2 Hz, 4H), 2.25-2.08 (m, 4H), 1.75 (s, 4H), 0.39 (s, 4H)。
實施例38：4-(4,4-二氟呱啶基)-1-甲基吡咯-3,2-吡啶-6-基)-4-羥乙基磺醯胺基-2-(6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲醯胺
實施例38參照實施例3的類似合成路線製備得到的： LCMS (ESI): [M+1] += 603。 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12.79 (s, 1H), 10.27 (s, 1H), 7.96 (d, J= 8.6 Hz, 1H), 7.90 (d, J= 0.8 Hz, 1H), 7.20 (d, J= 3.2 Hz, 1H), 7.07 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 6.93 (dd, J= 8.6, 2.0 Hz, 1H), 6.55 (dd, J= 3.2, 0.8 Hz, 1H), 5.80 (s, 2H), 3.87 – 3.77 (m, 4H), 3.72 (d, J= 9.8 Hz, 5H), 3.17 (t, J= 6.6 Hz, 3H), 2.97 (t, J= 5.2 Hz, 4H), 2.34 (s, 4H), 2.09 (ddd, J= 14.3, 7.6, 3.5 Hz, 4H), 0.38 (s, 4H)。
實施例39：N-(4-(4,4-二氟呱啶-1-基)-[1,2,5]噻二唑[3,4-c]吡啶-6-基)-4-(2-羥乙基)磺胺基)-2-(6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基苯甲醯胺
實施例39參照實施例3的類似合成路線製備得到的： LCMS (ESI): [M+H] += 608.3。 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12.92 (s, 1H), 10.23 (s, 1H), 8.10 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 8.06 (s, 1H), 7.29 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 7.14 (dd, J= 8.4, 2.0 Hz, 1H), 4.95 (t, J= 5.6 Hz, 1H), 4.43 (t, J= 5.6 Hz, 4H), 3.77 (q, J= 6.4 Hz, 2H), 3.37 (t, J= 6.4 Hz, 2H), 3.00 (t, J= 5.2 Hz, 4H), 2.24 – 2.14 (m, 4H), 1.74 (s, 4H), 0.41 (s, 4H)。
實施例40：2-(6-氮雜螺[2.5]辛-6-基)-4-(2-羥乙基磺醯基]氨基苯基)-N-[4-(4，4-二氟呱啶基)苯並[3,4-c]1,2,5-噻二唑-5-基甲醯胺
實施例40參照實施例3的類似合成路線製備得到的： LCMS (ESI): [M+1] += 607。 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 11.95 (s, 1H), 10.10 (s, 1H), 8.29 (d, J= 1.6 Hz, 1H), 7.85 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.18 (d, J= 2.4 Hz, 1H), 7.10 – 7.02 (m, 2H), 4.99 (s, 1H), 3.78 (d, J= 6.4 Hz, 2H), 3.76 – 3.72 (m, 4H), 3.35 (d, J= 6.4 Hz, 2H), 3.00 (t, J= 5.2 Hz, 4H), 2.21 (tt, J= 13.6, 5.5 Hz, 4H), 1.57 (t, J= 5.2 Hz, 4H), 0.35 (s, 4H)。
實施例41：2-{6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基}-N-[4-(4,4-二氟呱啶-1-基)-1,3-苯並噻唑-6-基]-4-(2-羥基乙磺醯氨基)苯甲醯胺
實施例41參照實施例3的類似合成路線製備得到的： LCMS (ESI): [M+H] += 606.2， 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 11.88 (s, 1H), 10.11 (s, 1H), 9.20 (s, 1H), 8.37 (d, J= 1.2 Hz, 1H), 7.85 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.17 (dd, J= 1.6, 14.0 Hz, 2H), 7.05 (dd, J= 2.0, 8.4 Hz, 1H), 5.06 - 4.86 (m, 1H), 3.77 (br t, J= 6.4 Hz, 2H), 3.65 (br s, 4H), 3.36 (br s, 2H), 2.99 (br s, 4H), 2.26 - 2.11 (m, 4H), 1.58 (br s, 4H), 0.36 (s, 4H)。
實施例42：N-[2-氨基-4-(4,4-二氟呱啶-1-基)-5-氟-1,3-苯並噻唑-6-基]-2-{6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基}-4-(2-羥基乙磺醯氨基)苯甲醯胺
第一步：向1-溴-2,3-二氟-4-硝基苯 (10.0 g，42.0 mmol)、4,4-二氟呱啶鹽酸鹽(7.28 g，46.2 mmol)的二甲基亞碸(200 mL)的溶液中加入碳酸鉀(17.8 g，126 mmol)。將混合物在氮氣保護下加熱到100°C攪拌16小時。向反應液中加入水(200 mL)，用乙酸乙酯(200 mL x 3)萃取。合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液旋乾得到黃色固體1-(3-溴-2-氟-6-硝基苯基)-4,4-二氟呱啶 (12.0 g，35.3 mmol，收率84%)。LCMS (ESI): [M+H] +=338.9； 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 7.72 - 7.61 (m, 2H), 3.16 (br t, J= 5.3 Hz, 4H), 2.16 - 2.01 (m, 4H)。
第二步：向1-(3-溴-2-氟-6-硝基苯基)-4,4-二氟呱啶 (12.0 g，35.4 mmol)和氯化銨(7.64 g，141 mmol)的甲醇(240 mL)和水(80 mL)的溶液中分批加入鐵粉(13.3 g，236 mmol)。將混合物在氮氣保護下加熱到60°C攪拌16小時。將反應液過濾。向濾液中加入水(160 mL)，用乙酸乙酯(200 mL x 3)萃取。合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液旋乾得到黃色固體4-溴-2-(4,4-二氟呱啶-1-基)-3-氟苯胺 (10.8 g，34.9 mmol，收率98.7%)。LCMS (ESI): [M+H] +=308.9。
第三步：向4-溴-2-(4,4-二氟呱啶-1-基)-3-氟苯胺 (1.00 g，2.73 mmol)，二-叔-丁基二碳酸鹽(1.79 g，8.19 mmol)的二氯甲烷(20.0 mL)的溶液中加入三乙胺(846 mg，8.19 mmol)和4-二甲氨基吡啶(34.0 mg， 0.27 mmol)。將混合物在25°C攪拌16小時。向反應液中加入水(20 mL)，用乙酸乙酯(20 mL x 3)萃取。合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液旋乾殘留物用快速矽膠層析法(矽膠，0-8%梯度的乙酸乙酯/石油醚)得到黃色油狀物叔-丁基 N-[6-溴-4-(4,4-二氟呱啶-1-基)-5-氟-1,3-苯並噻唑-2-基]氨基甲酯(490 mg，1.04 mmol，收率38%)。LCMS (ESI): [M+H] +=465.9； 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 11.86 (s, 1H), 7.93 (d, J= 6.4 Hz, 1H), 3.44 (br t, J= 5.2 Hz, 4H), 2.18 - 2.01 (m, 4H), 1.50 (s, 9H)。
第四步：向叔-丁基 N-[6-溴-4-(4,4-二氟呱啶-1-基)-5-氟-1,3-苯並噻唑-2-基]氨基甲酯(480 mg，1.03 mmol)、二苯基甲亞胺(280 mg，1.54 mmol)和碳酸銫(1027 mg，3.09 mmol)的二氧六環(20.0 mL)溶液中加入4,5-雙(二苯基膦)-9,9-二甲基氧雜蒽(60.1 mg，0.10 mmol)，(2-氨基-1,1-聯苯-2-基)鈀(II) (96.2 mg，0.10 mmol)，混合物用氮氣置換3次，在氮氣下保護下將混合物加熱至100°C攪拌12小時。反應液用水(5 mL)稀釋，用二氯甲烷(15 mL x 2)萃取，有機層用飽和食鹽水(20 mL)洗滌，用硫酸鎂乾燥，過濾，減壓濃縮，得到殘渣。殘留物用快速矽膠層析法(矽膠，0-6%梯度的乙酸乙酯/石油醚)得到黃色固體叔-丁基 N-[6-溴-4-(4,4-二氟呱啶-1-基)-5-氟-1,3-苯並噻唑-2-基]氨基甲酯(260 mg，0.46 mmol，收率45%)。LCMS (ESI): [M+H] +=567.1； 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 11.61 (br s, 1H), 7.71 - 7.65 (m, 2H), 7.60 - 7.54 (m, 1H), 7.52 - 7.46 (m, 2H), 7.34 - 7.32 (m, 2H), 7.16 (dd, J= 2.8, 6.4 Hz, 2H), 6.99 (d, J= 7.2 Hz, 1H), 3.27 (br t, J= 5.6 Hz, 4H), 2.10 - 2.00 (m, 4H), 1.48 (s, 10H)。
第五步：向叔-丁基 N-[6-溴-4-(4,4-二氟呱啶-1-基)-5-氟-1,3-苯並噻唑-2-基]氨基甲酯(240 mg，0.42 mmol)和甲醇(2.00 mL)的混合溶液中加入鹽酸羥胺(59.0 mg，0.85 mmol)和醋酸鈉(104 mg，1.27 mmol)。將混合液在25°C下攪拌1小時。反應液用水(5 mL)稀釋，用二氯甲烷(15 mL x 2)萃取，有機層用飽和食鹽水(20 mL)洗滌，用硫酸鎂乾燥，過濾，減壓濃縮，得到殘渣。(矽膠，0-50%梯度的乙酸乙酯/石油醚)得到黃色固體叔-丁基 N-[6-氨基-4-(4,4-二氟呱啶-1-基)-5-氟-1,3-苯並噻唑-2-基]氨基甲酯(120 mg，0.30 mmol，收率70%)。LCMS (ESI): [M+H] +=403.0。
第六步：向叔-丁基 N-[6-氨基-4-(4,4-二氟呱啶-1-基)-5-氟-1,3-苯並噻唑-2-基]氨基甲酯(120 mg， 0.30 mmol)和4-碘-2-(6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲醯氯化(168 mg，0.45 mmol)的四氫呋喃(4.00 mL)溶液中加入N,N-二異丙基乙胺(118 mg，0.89 mmol)。將混合物在25°C下攪拌3小時。反應液用水(5 mL)稀釋，用二氯甲烷(15 mL x 2)萃取，有機層用飽和食鹽水(20 mL)洗滌，用硫酸鎂乾燥，過濾，減壓濃縮，得到殘渣。(矽膠，0-10%梯度的乙酸乙酯/石油醚)得到黃色固體叔-丁基 N-[6-(2-{6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基}-4-碘苯甲醯氨基)-4-(4,4-二氟呱啶-1-基)-5-氟-1,3-苯並噻唑-2-基]氨基甲酯(80 mg，0.10 mmol，收率36%)。LCMS (ESI): [M+H] +=742.2。
第七步：向2-羥基乙磺醯胺(23.6 mg，0.19 mmol)，反式-N,N-二甲基-1,2-環己二胺(13.6 mg，0.09 mmol)，磷酸鉀 (80.1 mg，0.38 mmol)的N,N-二甲基甲醯胺(4.00 mL)溶液中加入碘化亞銅(9.17 mg，0.05 mmol)。將混合物在50°C攪拌5分鐘。然後將叔-丁基 N-[6-(2-{6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基}-4-碘苯甲醯氨基)-4-(4,4-二氟呱啶-1-基)-5-氟-1,3-苯並噻唑-2-基]氨基甲酯(70.0 mg，0.09 mmol)在50°C加入到反應混合物中，將混合物在氮氣的保護下加熱至100°C攪拌4小時。向反應液中加入水(5 mL)，用乙酸乙酯(5 mL x 2)萃取。合併有機相，用氨水(5 mL x 2)洗滌，用無水硫酸鎂乾燥，過濾，濾液旋乾得到黃色固體化合物叔-丁基 N-[6-(2-{6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基}-4-(2-羥基乙磺醯氨基)苯甲醯氨基)-4-(4,4-二氟呱啶-1-基)-5-氟-1,3-苯並噻唑-2-基]氨基甲酯(69 mg，粗品)。LCMS (ESI): [M+H] +=739.2。
第八步：向三氟乙酸(1.00 mL)和二氯甲烷(3.00mL)的混合溶液中加入叔-丁基 N-[6-(2-{6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基}-4-(2-羥基乙磺醯氨基)苯甲醯氨基)-4-(4,4-二氟呱啶-1-基)-5-氟-1,3-苯並噻唑-2-基]氨基甲酯(60.0 mg，0.08 mmol)。將混合液在25°C下攪拌16小時。向反應液中加入水(5 mL)，用乙酸乙酯(5 mL x 2)萃取。合併有機相，用氨水(5mL x 2)洗滌，用無水硫酸鎂乾燥，過濾，濾液旋乾得殘餘物。殘留物用製備型HPLC(C18，30 %-70%梯度的水(甲酸)/乙腈)純化，得到白色固體N-[2-氨基-4-(4,4-二氟呱啶-1-基)-5-氟-1,3-苯並噻唑-6-基]-2-{6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基}-4-(2-羥基乙磺醯氨基)苯甲醯胺(2.5 mg，0.04 mmol，收率4.8 %)。LCMS (ESI): [M+H] +=639.2； 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 12.07 (s, 1H), 10.17 (s, 1H), 8.43 (d, J= 6.4 Hz, 1H), 8.23 - 7.44 (m, 3H), 7.27 (d, J= 1.6 Hz, 1H), 7.11 (dd, J= 2.0, 8.4 Hz, 1H), 3.77 - 3.74 (m, 2H), 3.41 - 3.34 (m, 6H), 3.03 - 2.94 (m, 4H), 2.24 - 2.05 (m, 4H), 1.67 - 1.50 (m, 4H), 0.37 (s, 4H)。
實施例43： N-(1-(4,4-二氟呱啶-1-基)-8-氧亞基-5,6,7,8-四氫-2,7-萘啶-3-基)-4-(2-羥基乙基磺醯氨基)-2-(6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲醯胺
實施例43參照實施例3的類似合成路線製備得到的： LCMS (ESI): [M+H] += 619.3。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 13.30 (s, 1H), 10.53 - 9.86 (m, 1H), 8.06 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 7.83 (br s, 1H), 7.63 (s, 1H), 7.26 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 7.13(dd, J= 2.0, 6.8 Hz, 1H), 5.14 - 4.76 (m, 1H), 3.76 (br t, J= 6.4 Hz, 2H), 3.56 - 3.46 (m, 4H), 3.30 (br d, J= 5.6 Hz, 4H), 2.90 - 3.00 (m, 4H), 2.84 (br t, J= 5.6 Hz, 2H), 2.20 - 1.35 (m, 8H), 0.39 (s, 4H)。
實施例44：N-(8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-1,7-萘啶-6-基)-4-(2-羥乙基)磺胺基)-2-(6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲醯胺
第一步：含有8-溴-1,7-萘啶-6-胺(2 g，8.93 mmol)、4,4-二氟呱啶鹽酸鹽(1.7 g，10.71 mmol)、碳酸銫(3.6 g，10.71 mmol)和DMF(20 mL)的混合溶液在100°C下攪拌12小時，將反應液倒入水中(50 mL)並用乙酸乙酯(50 mL x 3)萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾濃縮後經柱層析純化(矽膠，0-50%梯度的乙酸乙酯/石油醚)得到化合物8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-1,7-萘啶-6-胺(1.9 g)，為黃色固體。LCMS (ESI): [M+H] += 265.1。
第二步：含有8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-1,7-萘啶-6-胺(1.9 g，7.19 mmol)、2-氟-4-硝基苯甲酸(1.5 g，7.91 mmol)、丙基磷酸三環酸酐 (9.2 g，14.38 mmol，50% in EA)、 N,N-二異丙基乙胺(2.8 g，21.57 mmol)和1,2-二氯乙烷(20 mL)的混合溶液在80°C下攪拌12小時。將反應液倒入水中(50 mL)並用乙酸乙酯(50 mL x 3)萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾濃縮後經柱層析純化(矽膠，0-100%梯度的乙酸乙酯/石油醚)得到化合物N-(8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-1,7-萘啶-6-基)-2-氟-4-硝基苯甲醯胺(1.7 g)，為黃色固體。LCMS (ESI): [M+H] += 432.2。
第三步：含有N-(8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-1,7-萘啶-6-基)-2-氟-4-硝基苯甲醯胺(900 mg，2.09 mmol)、6-氮雜-螺[2.5]辛烷鹽酸鹽(373 mg， 2.50 mmol)、碳酸鉀(883 mg，6.26 mmol)和二甲基亞碸(10 mL)的混合溶液在110°C下攪拌12小時，將反應液倒入水中(30 mL)並用乙酸乙酯(30 mL x 3)萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾濃縮後經柱層析純化(矽膠，0-20%梯度的甲醇/二氯甲烷)得到化合物N-(8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-1,7-萘啶-6-基)-4-硝基-2-(6-氮雜螺環[2.5]辛烷-6-基)苯甲醯胺(820 mg)，為黃色固體。LCMS (ESI): [M+H] += 523.3。
第四步：含有N-(8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-1,7-萘啶-6-基)-4-硝基-2-(6-氮雜螺環[2.5]辛烷-6-基)苯甲醯胺(700 mg，1.34 mmol)、鐵粉(756 mg，13.40 mmol)、氯化銨(724 mg，13.40 mmol)和乙醇/水(5：1) (24 mL)的溶液，在60°C下攪拌30 分鐘，將反應液趁熱過濾後倒入水中(30 mL)，乙酸乙酯(30 mL x 3)萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾並濃縮得到化合物4-氨基-N-(8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-1,7-萘啶-6-基)-2-(6-氮雜螺環[2.5]辛烷-6-基)苯甲醯胺(500 mg，產率：88.5%)，為黃色固體。LCMS (ESI): [M+H] += 493.4。
第五步：0°C下將氯磺醯乙酸乙酯 (230 mg，1.22 mmol)滴加到含有4-氨基-N-(8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-1,7-萘啶-6-基)-2-(6-氮雜螺環[2.5]辛烷-6-基)苯甲醯胺(500 mg，1.02 mmol)，N,N-二異丙基乙胺(402 mg，3.05 mmol)和四氫呋喃(5 mL)的混合溶液中，反應液在20°C下攪拌1小時，將反應液倒入水中(30 mL)並用乙酸乙酯(30 mL x 3)萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾濃縮後得到化合物乙基2-(N-(4-(8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-1,7-萘啶-6-基)氨甲醯)-3-(6-氮雜螺環[2.5]辛烷-6-基)苯基)氨磺醯)醋酸鹽(310 mg)，為黃色固體。LCMS (ESI): [M+H] += 643.4。
第六步：0°C將氫化鋁鋰(50 mg，1.40 mmol)分批加入到含有乙基2-(N-(4-(8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-1,7-萘啶-6-基)氨甲醯)-3-(6-氮雜螺環[2.5]辛烷-6-基)苯基)氨磺醯)醋酸鹽(300 mg，0.467 mmol)和四氫呋喃(5 mL)的溶液中，反應液在20°C下攪拌30分鐘，十水硫酸鈉加入到反應液中，攪拌30分鐘後，反應液過濾濃縮後經柱層析純化(矽膠，0-100%梯度的乙酸乙酯/石油醚)得到化合物N-(8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-1,7-萘啶-6-基)-4-(2-羥乙基)磺胺基)-2-(6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲醯胺(35.77 mg)，為黃色固體。LCMS (ESI): [M+H] += 601.4。 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12.90 (s, 1H), 10.65–9.58(m, 1H), 8.75 – 8.68 (m, 1H), 8.24 (dd, J= 8.4, 2.0 Hz, 1H), 8.10 (t, J= 4.4 Hz, 2H), 7.61 (dd, J= 8.4, 4.0 Hz, 1H), 7.28 (d, J= 2.4 Hz, 1H), 7.14 (dd, J= 8.4, 2.0 Hz, 1H), 5.23–4.64 (m, 1H), 4.20 (t, J= 5.6 Hz, 4H), 3.77 (t, J= 6.4 Hz, 2H), 3.01 (d, J= 5.2 Hz, 6H), 2.22 – 2.13 (m, 4H), 1.76 (s, 4H), 0.41 (s, 4H)。
實施例45：N-(8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-1,7-萘啶-6-基)-5-氟-4-((2-羥乙基)磺醯胺)-2-(6-氮雜螺環[2.5]辛烷-6-醯基)苯甲醯胺
實施例45參照實施例3的類似合成路線製備得到的： LCMS (ESI): [M+H] += 619.4。 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 13.22 (s, 1H), 10.07 (s, 1H), 8.73 (dd, J= 4.0, 1.6 Hz, 1H), 8.25 (dd, J= 8.4, 2.0 Hz, 1H), 8.10 (s, 1H), 7.91 (d, J= 11.6 Hz, 1H), 7.62 (dd, J= 8.4, 4.0 Hz, 1H), 7.58 (d, J= 7.2 Hz, 1H), 5.01 (s, 1H), 4.27 – 4.11 (m, 4H), 3.81 (t, J= 6.4 Hz, 2H), 3.42 (t, J= 6.4 Hz, 2H), 3.00 (t, J= 5.2 Hz, 4H), 2.23-2.12 (m, 4H), 1.76 (s, 4H), 0.42 (s, 4H)。
實施例46：N-(8-(4,4-二氟呱啶-1-級)-1,7-萘啶-6-基)-2-氟-4-((2-羥乙基)磺醯胺基)-6-(6-氮雜螺環[2.5]辛烷-6-基)苯甲醯胺
實施例46參照實施例3的類似合成路線製備得到的： LCMS (ESI): [M+H] +=310.30。 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 10.69 (s, 1H), 10.17 (s, 1H), 8.72 (dd, J= 4.1, 1.7 Hz, 1H), 8.26 (dd, J= 8.5, 1.7 Hz, 1H), 7.96 (s, 1H), 7.61 (dd, J= 8.4, 4.1 Hz, 1H), 6.80 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 6.71 (dd, J= 11.9, 1.9 Hz, 1H), 4.97 (s, 1H), 4.21 (t, J= 5.7 Hz, 4H), 3.77 (d, J= 6.9 Hz, 2H), 3.37 (t, J= 6.5 Hz, 2H), 3.02 (t, J= 5.2 Hz, 4H), 2.13 (td, J= 14.2, 7.0 Hz, 4H), 1.44 (t, J= 5.2 Hz, 4H), 0.27 (s, 4H)。
實施例47：(R) -4-(2-羥乙基)磺胺基)-N-(8-(2-甲基嗎啉基)-1,7-萘啶-6-基)-2-(6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-甲基)苯甲醯胺
實施例47參照實施例3的類似合成路線製備得到的： LCMS (ESI): [M+H/2] += 581.4。 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12.81 (s, 1H), 10.21 (s, 1H), 8.70 (dd, J= 4.0, 2.0 Hz, 1H), 8.22 (dd, J= 8.4, 1.8 Hz, 1H), 8.14 -8.04 (m, 2H), 7.59 (dd, J= 8.4, 4.0 Hz, 1H), 7.29 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 7.14 (dd, J= 8.4, 2.0 Hz, 1H), 5.00 – 4.80 (m, 3H), 3.99-3.91 (m, 1H), 3.85-3.73 (m, 4H), 3.37 (t, J= 6.4 Hz, 2H), 3.17-3.07 (m, 1H), 3.01 (d, J= 5.6 Hz, 4H), 2.83 (dd, J= 12.8, 10.2 Hz, 1H), 2.55-2.47 (m, 4H), 1.76 (s, 4H), 1.19 (d, J= 6.0 Hz, 3H), 0.41 (s, 4H)。
實施例48：4-(2-羥乙基)磺胺基)-N-(8-(4-甲基呱嗪-1-基)-1,7-萘啶-6-基)-2-(6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-甲基)苯甲醯胺
實施例48參照實施例3的類似合成路線製備得到的： LCMS (ESI): [M+H/2] += 580.4。 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12.95 (s, 1H), 10.74-9.50(m, 1H), 8.69 (d, J= 4.0 Hz, 1H), 8.20 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 8.11 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 8.04 (s, 1H), 7.58 (dd, J= 8.4, 4.0 Hz, 1H), 7.29 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 7.14 (dd, J= 8.8, 2.0 Hz, 1H), 5.48-4.58(m, 1H), 4.07 (d, J= 6.0 Hz, 4H), 3.77 (t, J= 6.4 Hz, 2H), 3.37 (d, J= 6.4 Hz, 2H), 3.00 (t, J= 5.2 Hz, 4H), 2.52 – 2.48 (m, 4H), 2.28 (s, 3H), 1.77 (s, 4H), 0.41 (s, 4H)。
實施例49： 4-(2-羥基乙基磺醯氨基)-2-(6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基)-N-(8-(4-(2,2,2-三氟乙基)呱嗪-1-基)-1,7-萘啶-6-基)苯甲醯胺
實施例49參照實施例3的類似合成路線製備得到的： LCMS (ESI): [M+H] += 648.3。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 13.02 (s, 1H), 10.21 (br s, 1H), 8.69 (dd, J= 1.6, 4.0 Hz, 1H), 8.21 (dd, J= 1.6, 8.4 Hz, 1H), 8.11 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.59 (dd, J= 4.0, 8.4 Hz, 1H), 7.29 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 7.14 (dd, J= 2.0, 8.8 Hz, 1H), 5.23 - 4.71 (m, 1H), 4.16 - 3.99 (m, 4H), 3.83 - 3.70 (m, 2H), 3.33 - 3.11 (m, 4H), 3.08 - 2.93 (m, 4H), 2.91 - 2.77 (m, 4H), 2.31 - 1.27 (m, 4H), 0.40 (s, 4H)。
實施例50： 4-(2-羥基乙基磺醯氨基)-2-(6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基)-N-(8-(1-(2,2,2-三氟乙基)呱啶-4-基)-1,7-萘啶-6-基)苯甲醯胺
第一步：向8-溴-1,7-萘啶-6-胺(2.00 g，8.93 mmol)和叔-丁基 4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼戊環-2-基)-1,2,5,6-四氫吡啶甲酸基酯(3.31 g，10.7 mmol)的二氧六環(16.0 mL)/水(4.00 mL)的溶液中加入1,1-二(叔丁基磷)二茂鐵氯化鈀(0.60 g，0.89 mmol)和碳酸鉀(3.78 g，26.8 mmol)。然後在氮氣的保護下加熱至100 °C攪拌16小時。反應液用水(10 mL)稀釋，用二氯甲烷(10 mL x 3)萃取。合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液旋乾得殘餘物。(矽膠，0-25%梯度的乙酸乙酯/石油醚)的到黃色油狀物叔-丁基 4-(6-氨基-1,7-萘啶-8-基)-5,6-二氫吡啶-1(2H)-甲酸基酯(1.90 g, 5.78 mmol，收率65%)。LCMS (ESI): [M+H] += 327.1。
第二步：向叔-丁基 4-(6-氨基-1,7-萘啶-8-基)-5,6-二氫吡啶-1(2H)-甲酸基酯(1.50 g，4.60 mmol)的甲醇(20.0 mL)溶液中加入濕鈀碳(0.50 g，10% purity)，通入氫氣。將混合物在25°C下攪拌2小時。旋乾溶液得到殘渣。殘留物用製備型HPLC (C18，18-58%梯度的水(甲酸)/乙腈)純化，得到黃色油狀物叔-丁基 4-(6-氨基-1,7-萘啶-8-基)呱啶-1-甲酸基酯(210 mg，0.60 mmol，收率8%)。LCMS (ESI): [M+H] += 329.1。
第三步：向叔-丁基 4-(6-氨基-1,7-萘啶-8-基)呱啶-1-甲酸基酯(200 mg，0.61 mmol)和2-(6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基)-4-碘苯甲醯氯(343 mg，0.91 mmol)的四氫呋喃(4 mL)溶液中加入叔丁醇鉀(1.83 mL，1M)的四氫呋喃溶液和N,N-二異丙基乙胺(241 mg，1.83 mmol)。混合物在25°C攪拌16小時。反應液用水(20 mL)和乙酸乙酯(20 mL x 3)萃取。合併有機相，飽和食鹽水洗滌(20 mL)，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液旋乾得殘餘物。殘留物用快速柱色譜純化(矽膠，0-13%梯度的乙酸乙酯/石油醚)得到黃色固體叔-丁基 4-(6-(4-碘-2-(6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲醯氨基)-1,7-萘啶-8-基)呱啶-1-甲酸基酯(250 mg， 0.23 mmol，收率61%)。LCMS (ESI): [M+Na] += 690.1。
第四步：向叔-丁基 4-(6-(4-碘-2-(6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲醯氨基)-1,7-萘啶-8-基)呱啶-1-甲酸基酯(230 mg，0.34 mmol)的二氧六環(2 mL)溶液中加入鹽酸二氧六環(2 mL)。將混合物在25 °C下攪拌2小時。將反應液濃縮得到4-碘-N-(8-(呱啶-4-基)-1,7-萘啶-6-基)-2-(6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲醯胺鹽酸鹽(200 mg，粗品)。
第五步：4-碘-N-(8-(呱啶-4-基)-1,7-萘啶-6-基)-2-(6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲醯胺鹽酸鹽(200 mg，粗品) (330 mg，0.58 mmol)和三氟甲磺酸化2,2,2-三氟乙基(202 mg， 0.87 mmol)的乙腈(5.00 mL)溶液中加入三乙胺(180 mg，1.74 mmol)。將混合物在70 °C下攪拌16小時。旋乾溶液得到殘渣。(矽膠，0-8%梯度的乙酸乙酯/石油醚)的到白色固體4-碘-2-(6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基)-N-(8-(1-(2,2,2-三氟乙基)呱啶-4-基)-1,7-萘啶-6-基)苯甲醯胺(130 mg，0.19 mmol，收率34%)。LCMS (ESI): [M+H] += 650.1。
第六步：向磷酸鉀(133 mg，0.62 mmol)、2-羥基乙磺醯胺(38.5 mg，0.31 mmol)和肌氨酸(14.0 mg, 0.15 mmol)的二甲基甲醯胺(5.00 mL)溶液中加入碘化亞銅(29.9 mg，0.15 mmol)。將混合物加熱至50°C攪拌5分鐘。並將4-碘-2-(6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基)-N-(8-(1-(2,2,2-三氟乙基)呱啶-4-基)-1,7-萘啶-6-基)苯甲醯胺(100 mg，0.15 mmol)加入到混合物中，然後在氮氣的保護下加熱至100°C攪拌16小時。反應液用水(10 mL)稀釋，用二氯甲烷(10 mL x 3)萃取。合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液旋乾得殘餘物。殘留物用製備型HPLC (C18，46-86%梯度的水(甲酸)/乙腈)純化，得到白色固體4-(2-羥基乙基磺醯氨基)-2-(6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基)-N-(8-(1-(2,2,2-三氟乙基)呱啶-4-基)-1,7-萘啶-6-基)苯甲醯胺(33 mg，0.05 mmol，收率33%)。LCMS (ESI): [M+H] += 647.3。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 13.57 (s, 1H), 10.26 (br s, 1H), 8.89 (dd, J= 1.2 Hz, 1H), 8.53 (s, 1H), 8.39 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 8.14 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.71 (dd, J= 4.0, 8.4 Hz, 1H), 7.31 (s, 1H), 7.17 (br d, J= 8.4 Hz, 1H), 5.07 - 4.87 (m, 1H), 4.24 - 4.06 (m, 1H), 3.84 - 3.72 (m, 2H), 3.41 - 3.35 (m, 2H), 3.27 - 3.16 (m, 2H), 3.14 - 2.93 (m, 6H), 2.63 - 2.52 (m, 2H), 2.37 - 1.32 (m, 8H), 0.41 (s, 4H)。
實施例51： N-(8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-2-甲基-1,7-萘啶-6-基)-4-(2-羥基乙基磺醯氨基)-2-(6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲醯胺
第一步：向2-(吡啶-3-基)乙腈(23.0 g，194 mmol)的醋酸(200 mL) 的溶液中加入過氧化氫(55.1 g，584 mmol，36% 純度)。將混合物在95°C下攪拌16小時。將反應液濃縮旋乾得到黃色固體3-(氰基甲基)吡啶 1-氧化(24.0 g，178 mmol，收率91.9%)。
第二步：向3-(氰基甲基)吡啶 1-氧化(24.0 g，178 mmol)的甲苯(240 mL) 的溶液中加入二甲基氨甲氯化(19.2 g，178 mmol)和三甲基氰矽烷(21.7 g，214 mmol)。將混合物在60°C下攪拌16小時。反應液用碳酸鉀的水溶液(240 mL，1M)淬滅，然後用乙酸乙酯(240 mL x 2)萃取。合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液旋乾得殘餘物。殘留物經過柱分離(矽膠，0-45%梯度的乙酸乙酯/石油醚)得到 3-(氰基甲基)氰基吡啶(21.0 g，146 mmol，收率81.9%)。
第三步：向 3-(氰基甲基)氰基吡啶(14.0 g，97.8 mmol) 的醋酸(140 mL) 的溶液中加入過氧化氫(18.5 g，196 mmol，36%純度) 將混合物在90°C下攪拌16小時。將反應液濃縮旋乾得到2-氰基-3-(氰基甲基)吡啶 1-氧化(15.6 g，75.4 mmol，收率77.1 %)。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 8.46 (br d, J= 6.4 Hz, 1H), 7.73 (br t, J= 7.2 Hz, 1H), 7.54 (br d, J= 8.0 Hz, 1H), 4.31 (s, 2H)。
第四步：向2-氰基-3-(氰基甲基)吡啶 1-氧化 (6.00 g，37.7 mmol) 的二氯乙烷(60 mL) 的溶液中加入三氯氧磷(6 mL) 將混合物在90°C下攪拌16小時。反應液用水(100 mL)稀釋，用二氯甲烷(100 mLx2)萃取，有機層用飽和食鹽水(100 mLx2)洗滌，用硫酸鎂乾燥，過濾，減壓濃縮，得到殘渣。殘留物經過柱分離(矽膠，0-30%梯度的乙酸乙酯/石油醚)得到6-氯-3-(氰基甲基)氰基吡啶(3.50 g，19.7 mmol，收率52.3 %)。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 8.17 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.96 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 4.36 (s, 2H)。
第五步：向氫溴酸和醋酸的混合液(30 mL)中加入6-氯-3-(氰基甲基)氰基吡啶(3.50 g，19.7 mmol)，將混合物在25°C下攪拌16小時。反應液倒入水中(100 mL)，用碳酸鈉的水溶液(240 mL，1M)調節pH至8，然後用乙酸乙酯(500 mL x 3)萃取。有機層用飽和食鹽水(100 mLx2)洗滌，用硫酸鎂乾燥，過濾，減壓濃縮，得到2,8-二溴-1,7-萘啶-6-胺(3.70 g，12.2 mmol ，收率62.0 %)。LCMS (ESI): [M+H] +=303.9 。
第六步：向 2,8-二溴-1,7-萘啶-6-胺(3.20 g，10.6 mmol)的叔丁醇 (60 mL)的溶液中加入4,4-二氟呱啶(3.33 g，21.1 mmol)和 N,N-二異丙基乙胺 (6.97 g，52.8 mmol)。將混合物在140°C下攪拌16小時。反應液用水(100 mL)稀釋，用乙酸乙酯(100 mLx2)萃取，有機層用飽和食鹽水(100 mLx2)洗滌，用硫酸鎂乾燥，過濾，減壓濃縮，得到殘渣。殘留物經過柱分離(矽膠，0-15%梯度的乙酸乙酯/石油醚)得到2-溴-8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-1,7-萘啶-6-胺 (1.50 g，4.38 mmol，收率41.4 %)。LCMS (ESI): [M+H] +=342.9。
第七步：向2-溴-8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-1,7-萘啶-6-胺(300 mg，0.87 mmol)，碳酸鉀 (247 mg，1.75 mmol)，三甲基環硼氧烷 50%四氫呋喃 (0.37 mL，1.31 mol)的二氧六環 (6 mL)和水(1.2 mL)溶液中加入1,1-二(叔丁基磷)二茂鐵氯化鈀 (59.0 mg，0.09 mmol)。將混合物在氮氣的保護下加熱至90°C攪拌16小時。向反應液中加入水(10 mL)，用乙酸乙酯(10 mL x 2)萃取。合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液旋乾得殘餘物。殘留物經過柱分離(矽膠，0-20%梯度的乙酸乙酯/石油醚)得到8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-2-甲基-1,7-萘啶-6-胺(110 mg，0.39 mmol，收率45.2 %)。LCMS (ESI): [M+H] +=279.2。
第八步：向8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-2-甲基-1,7-萘啶-6-胺(100 mg，0.36 mmol)和4-碘-2-(6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲醯氯化 (162 mg，0.43 mmol)的四氫呋喃(1.00 mL)溶液中加入叔丁醇鉀 (1.08 mL，1.08 mmol，1M)和N,N-二異丙基乙胺 (142 mg，1.08 mol)。將混合物在25°C下攪拌16小時。向反應液中加入水(10 mL)，用乙酸乙酯(10 mL x 2)萃取。合併有機相，有機層用飽和食鹽水(200 mL)洗滌，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液旋乾得殘餘物。殘留物經過柱分離(矽膠，0-10%梯度的乙酸乙酯/石油醚)得到N-(8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-2-甲基-1,7-萘啶-6-基)-4-碘-2-(6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲醯胺 (120 mg，0.19 mmol，收率54.1 %)。LCMS (ESI): [M+H] +=618.2。
第九步：向2-羥基乙磺醯胺(48.6 mg，0.39 mmol)、肌氨酸(17.3 mg，0.19 mmol)、磷酸鉀(168 mg，0.78 mmol)的N,N-二甲基甲醯胺(2 mL)溶液中加入碘化亞銅(18.9 mg，0.10 mmol)。將混合物在100°C攪拌16小時。然後將N-(8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-2-甲基-1,7-萘啶-6-基)-4-碘-2-(6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲醯胺(120 mg，0.19 mmol)在50°C加入到反應混合物中，將混合物在氮氣的保護下加熱至100°C攪拌16小時。向反應液中加入水(20 mL)，用乙酸乙酯(20 mL x 2)萃取。合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液旋乾得殘餘物。殘留物用製備型HPLC(C18，50-90%梯度的水(甲酸)/乙腈)純化，得到白色固體化合物N-(8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-2-甲基-1,7-萘啶-6-基)-4-(2-羥基乙基磺醯氨基)-2-(6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲醯胺 (51.0 mg，0.08 mmol，收率42.7 %)。LCMS (ESI): [M+H] +=615.1。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 12.85 (s, 1H), 10.22 (s, 1H), 8.22 - 8.01 (m, 3H), 7.52 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.28 (d, J= 1.6 Hz, 1H), 7.14 (dd, J=2.0, 8.8 Hz, 1H), 5.06 - 4.85 (m, 1H), 4.31 - 4.05 (m, 4H), 3.77 (br t, J= 6.4 Hz, 2H), 3.40 - 3.36 (m, 2H), 3.12 - 2.88 (m, 4H), 2.63 (s, 3H), 2.28 - 2.10 (m, 4H), 1.98 - 1.42 (m, 4H), 0.41 (s, 4H)。
實施例52： N-(8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-2-甲氧基-1,7-萘啶-6-基)-4-(2-羥基乙基磺醯氨基)-2-(6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲醯胺
第一步：向 2-溴-8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-1,7-萘啶-6-胺(500 mg，1.46 mmol)的二氯甲烷(10 mL)溶液中加入三乙胺(451 mg，4.37 mmol)、4-二甲氨基吡啶(36.3 mg，0.29 mmol)和二-叔-丁基二碳酸鹽(954 mg，4.37 mmol )。將混合物在25°C下攪拌16小時。向反應液中加入水(10 mL)，用乙酸乙酯(10 mL x 2)萃取。合併有機相，有機層用飽和食鹽水(10 mL)洗滌，用硫酸鎂乾燥，過濾，減壓濃縮，得到殘渣。殘留物經過柱分離(矽膠，0-20%梯度的乙酸乙酯/石油醚)得到叔-丁基 (2-溴-8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-1,7-萘啶-6-基) 叔丁氧羰基氨基甲酸酯 (200 mg，1.46 mmol，收率25.3%)。LCMS (ESI): [M+H] +=543.1。
第二步：向 叔-丁基 (2-溴-8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-1,7-萘啶-6-基) 叔丁氧羰基氨基甲酸酯(300 mg，0.55mmol)的二氧六環(1 mL)溶液中加入甲醇(53.1 mg，1.66mmol)、氫氧化鉀(93.9 mg，1.66mmol )和甲磺酸(2-二環己基膦基-3,6-二甲氧基-2,4,6-三異丙基-1,1-聯苯)(2-氨基-1,1-聯苯-2-基)鈀(II)(50.5 mg，0.06 mmol)，將混合物在氮氣的保護下加熱至100°C攪拌16小時。反應液用水(10 mL)稀釋，用乙酸乙酯(10 mL x 2)萃取，有機層用飽和食鹽水(10 mL x 2)洗滌，用硫酸鎂乾燥，過濾，減壓濃縮，得到殘渣。殘留物經過柱分離(矽膠，0-20%梯度的乙酸乙酯/石油醚)得到黃色固體叔-丁基 (8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-2-甲氧基-1,7-萘啶-6-基)氨基甲酯(200 mg，0.55 mmol，收率91.9 %)。LCMS (ESI): [M+H] +=395.1。
第三步：向叔-丁基 (8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-2-甲氧基-1,7-萘啶-6-基)氨基甲酯(200 mg，0.51 mmol)的二氯甲烷(4 mL)溶液中加入三氟乙酸(1 mL)。 將混合物在25°C攪拌2小時。反應液用碳酸氫鈉(5 mL)淬滅，用二氯甲烷(10 mLx2)萃取，有機層用飽和食鹽水(10 mL x 2)洗滌，用硫酸鎂乾燥，過濾，減壓濃縮，得到黃色固體8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-2-甲氧基-1,7-萘啶-6-胺(130 mg，0.44 mmol，收率87.1 %)。LCMS (ESI): [M+H] +=295.1。
第四步：向8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-2-甲氧基-1,7-萘啶-6-胺 (130 mg，0.44 mmol)的四氫呋喃(4 mL)溶液中加入4-碘-2-(6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲醯氯化 (199 mg，0.53 mmol)和N,N-二異丙基乙胺(174 mg，132 mmol)。將混合物在25°C攪拌16小時。將反應液冷卻至室溫，用水(10 mL)和乙酸乙酯(10 mL x 2)進行萃取，合併有機相，用飽和食鹽水(10 mL x 2)洗滌，再用無水硫酸鎂乾燥，過濾，濾液旋乾得殘餘物。殘留物用快速柱色譜純化(矽膠，0-10%梯度的乙酸乙酯/石油醚)得到黃色固體N-(8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-2-甲氧基-1,7-萘啶-6-基)-4-碘-2-(6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲醯胺 (200 mg，0.31 mmol，收率71.5 %)。LCMS (ESI): [M+H] +=634.5。
第五步：向2-羥基乙磺醯胺(39.5.0 mg，0.32 mmol)、肌氨酸(22.7 mg，0.16 mmol)、磷酸鉀(137 mg，0.63 mmol)的N,N-二甲基甲醯胺(2 mL)溶液中加入碘化亞銅(15.3 mg，0.08 mmol)。將混合物在50°C攪拌5分鐘。然後將 N-(8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-2-甲氧基-1,7-萘啶-6-基)-4-碘-2-(6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲醯胺(100 mg，0.16 mmol)在50°C加入到反應混合物中，將混合物在氮氣的保護下加熱至100°C攪拌16小時。向反應液中加入水(20 mL)，用乙酸乙酯(20 mL x 2)萃取。合併有機相，用氨水(20 mL x 2)洗滌，用無水硫酸鎂乾燥，過濾，濾液旋乾得殘餘物。殘留物用製備型HPLC(C18，50-90%梯度的水(甲酸)/乙腈)純化，得到白色固體化合物N-(8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-2-甲氧基-1,7-萘啶-6-基)-4-(2-羥基乙基磺醯氨基)-2-(6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲醯胺 (43 mg，0.07 mmol，收率43.2 %)。LCMS (ESI): [M+H] +=631.2。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 12.90 (s, 1H), 10.22 (s, 1H), 8.18 (d, J= 9.2 Hz, 1H), 8.12 - 8.06 (m, 2H), 7.27 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 7.19 - 7.10 (m, 2H), 4.97 (br s, 1H), 4.07 (br s, 4H), 3.96 (s, 3H), 3.76 (br t, J= 6.0 Hz, 2H), 3.44 (br s, 2H), 2.99 (br s, 4H), 2.27 - 2.15 (m, 4H), 2.01 - 1.40 (m, 4H), 0.40 (s, 4H)。
實施例53： N-(2-氨基-8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-1,7-萘啶-6-基)-4-(2-羥基乙基磺醯氨基)-2-(6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲醯胺
第一步：向2-溴-8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-1,7-萘啶-6-胺(600 mg，1.75 mmol)的二氧六環(12 mL)溶液中加入碳酸銫(1709 mg，5.25 mmol)和氨基甲酸叔丁酯 (310 mg，2.62 mmol)，最後加入氯(2-二環己基膦基-2,4,6-三異丙基-1,1-聯苯基)[2-(2-氨基-1,1-聯苯)]鈀(II) (137 mg，0.17 mmol)，將混合物用氮氣置換三次，在100°C攪拌16小時。將反應液冷卻至室溫，用水(50 mL)和乙酸乙酯(50 mL x 2)進行萃取，合併有機相，用飽和食鹽水(50 mL x 2)洗滌，再用無水硫酸鎂乾燥，過濾，濾液旋乾得殘餘物。殘留物用快速柱色譜純化(矽膠，0-10%梯度的乙酸乙酯/石油醚)得到黃色固體叔-丁基 (6-氨基-8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-1,7-萘啶-2-基)氨基甲酯 (200 mg，0.52 mmol，收率30.2 %)。LCMS (ESI): [M+H] +=380.1。
第二步：向叔-丁基 (6-氨基-8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-1,7-萘啶-2-基)氨基甲酯(200 mg，0.53 mmol)的四氫呋喃(4 mL)溶液中加入4-碘-2-(6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲醯氯化 (238 mg，0.63 mmol)和N,N-二異丙基乙胺(209 mg，1.58 mmol)。將混合物在25°C攪拌16小時。將反應液冷卻至室溫，用水(10 mL)和乙酸乙酯(10 mL x 2)進行萃取，合併有機相，用飽和食鹽水(10 mL x 2)洗滌，再用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液旋乾得殘餘物。殘留物用快速柱色譜純化(矽膠，0-10%梯度的乙酸乙酯/石油醚)得到叔-丁基 (8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-6-(4-碘-2-(6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲醯氨基)-1,7-萘啶-2-基)氨基甲酯(110 mg，0.15 mmol，收率29.0 %)。LCMS (ESI): [M+H] +=719.1。
第三步：向2-羥基乙磺醯胺(34.8 mg， 0.28 mmol)、肌氨酸(19.9 mg，0.14 mmol)、磷酸鉀(121 mg，0.56 mmol)的N,N-二甲基甲醯胺(2 mL)溶液中加入碘化亞銅(13.5 mg，0.07 mmol)。將混合物在50°C攪拌5分鐘。然後將叔-丁基 (8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-6-(4-碘-2-(6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲醯氨基)-1,7-萘啶-2-基)氨基甲酯(100 mg，0.14 mmol)在50°C加入到反應混合物中，將混合物在氮氣的保護下加熱至100°C攪拌16小時。將反應液冷卻至室溫，用水(20 mL)和乙酸乙酯(20 mL x 2)進行萃取，合併有機相，用氨水(20 mL x 2)洗滌，再用無水硫酸鎂乾燥，過濾，濾液旋乾得到粗品叔-丁基 (8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-6-(4-(2-羥基乙基磺醯氨基)-2-(6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲醯氨基)-1,7-萘啶-2-基)氨基甲酯(80.0 mg，0.11 mmol，收率80.0 %)。LCMS (ESI): [M+H] +=716.2。
第四步：向叔-丁基 (8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-6-(4-(2-羥基乙基磺醯氨基)-2-(6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲醯氨基)-1,7-萘啶-2-基)氨基甲酯(80 mg，0.11 mmol)的二氯甲烷 (2 mL)溶液中加入三氟乙酸(0.40 mL)，將混合物在25°C攪拌2小時。將反應液濃縮得殘餘物，殘留物用製備型HPLC (C18，10-50%梯度的水(甲酸)/乙腈)純化，得到黃色固體N-(2-氨基-8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-1,7-萘啶-6-基)-4-(2-羥基乙基磺醯氨基)-2-(6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲醯胺(19.0 mg，0.03 mmol，收率28.0 %)。LCMS (ESI): [M+H] +=616.1。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 12.68 (s, 1H), 10.44 - 9.80 (m, 1H), 8.07 (br d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.94 (s, 1H), 7.83 (br d, J = 8.9 Hz, 1H), 7.25 (br s, 1H), 7.11 (br d, J = 8.5 Hz, 1H), 6.87 (br d, J = 8.8 Hz, 1H), 6.43 (br s, 2H), 4.96 (br s, 1H), 4.01 (br s, 4H), 3.86 - 3.64 (m, 2H), 3.59 - 3.47 (m, 2H), 2.98 (br s, 4H), 2.24 - 2.05 (m, 4H), 1.96 - 1.38 (m, 4H), 0.39 (br s, 4H)。
實施例54：2-{6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基}-N-[8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-2-羥基-1,7-萘啶-6-基]-4-(2-羥基乙磺醯氨基)苯甲醯胺
第一步：向 2-溴-8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-1,7-萘啶-6-胺(1.00 g，2.91 mmol)的二氯甲烷(20 mL)溶液中加入三乙胺(902 mg，8.74 mmol)、 4-二甲氨基吡啶(36.3 mg，2.91 mmol)和二-叔-丁基二碳酸鹽(1.91 g，8.74 mmol)。將混合物在25°C下攪拌16小時。向反應液中加入水(10 mL)，用乙酸乙酯(10 mL x 2)萃取。合併有機相，有機層用飽和食鹽水(10 mL)洗滌，用硫酸鎂乾燥，過濾，減壓濃縮，得到殘渣。殘留物經過柱分離(矽膠，0-20%梯度的乙酸乙酯/石油醚)得到叔-丁基 N-[2-溴-8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-1,7-萘啶-6-基]-N-{[2-溴-8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-1,7-萘啶-6-基]氨基羰基}氨基甲酯(1.00 g，1.22 mmol，收率42 %)。LCMS (ESI): [M+H] +=812.9。
第二步：向 叔-丁基 N-[2-溴-8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-1,7-萘啶-6-基]-N-{[2-溴-8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-1,7-萘啶-6-基]氨基羰基}氨基甲酯(1.00 g，1.23 mmol)的二氧六環(20 mL)溶液中加入水(0.22 g，12.3mmol)、氫氧化鉀(0.69 g，12.3mmol)和甲磺酸(2-二環己基膦基-3,6-二甲氧基-2,4,6-三異丙基-1,1-聯苯)(2-氨基-1,1-聯苯-2-基)鈀(II)(0.11 g，0.122 mmol)。將混合物在氮氣的保護下加熱至100°C攪拌16小時。反應液用水(10 mL)稀釋，用乙酸乙酯(50 mLx2)萃取，有機層用飽和食鹽水(50 mLx2)洗滌，用硫酸鎂乾燥，過濾，減壓濃縮，得到殘渣。殘留物經過柱分離(矽膠，0-10%梯度的乙酸乙酯/石油醚)得到黃色固體叔-丁基 N-[8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-2-羥基-1,7-萘啶-6-基]氨基甲酯(301 mg，0.78 mmol，收率64.0 %)。LCMS (ESI): [M+H] +=381.1。
第三步：叔-丁基 N-[8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-2-羥基-1,7-萘啶-6-基]氨基甲酯(300 mg，0.78 mmol)的二氯甲烷(6 mL)溶液中加入三氟乙酸(1 mL)。將混合物在25°C攪拌2小時。反應液用碳酸氫鈉(5 mL)淬滅，用二氯甲烷(10 mLx2)萃取，有機層用飽和食鹽水(10 mLx2)洗滌，用硫酸鎂乾燥，過濾，減壓濃縮，得到黃色固體6-氨基-8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-1,7-萘啶-2-醇(452 mg，粗品)。LCMS (ESI): [M+H] +=281.0。
第四步：向6-氨基-8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-1,7-萘啶-2-醇(450 mg，1.60 mmol)的四氫呋喃(10 mL)溶液中加入2-{6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基}-4-碘苯甲醯氯化(723 mg，1.92 mmol)和N,N-二異丙基乙胺(635 mg，4.81 mmol)。將混合物在25°C攪拌16小時。將反應液冷卻至室溫，用水(10 mL)和乙酸乙酯(10 mL x 2)進行萃取，合併有機相，用飽和食鹽水(10 mL x 2)洗滌，再用無水硫酸鎂乾燥，過濾，濾液旋乾得殘餘物。殘留物用快速柱色譜純化(矽膠，0-10%梯度的乙酸乙酯/石油醚)得到黃色固體6-(2-{6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基}-4-碘苯甲醯氨基)-8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-1,7-萘啶-2-基 2-{6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基}-4-碘苯酸鹽 (200 mg，0.21 mmol，收率13.0 %)。LCMS (ESI): [M+H] +=959.0。
第五步：向6-(2-{6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基}-4-碘苯甲醯氨基)-8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-1,7-萘啶-2-基 2-{6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基}-4-碘苯酸鹽(200 mg，0.20 mmol)的四氫呋喃(2 mL)和水(2 mL)溶液中加入氫氧化鈉(25.3 mg，0.60 mmol)。將混合物在25°C攪拌16小時。將反應液用水(10 mL)和乙酸乙酯(10 mL x 2)進行萃取，合併有機相，用飽和食鹽水(10 mL x 2)洗滌，再用無水硫酸鎂乾燥，過濾，濾液旋乾得黃色固體2-{6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基}-N-[8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-2-羥基-1,7-萘啶-6-基]-4-碘苯甲醯胺 (120 mg，0.19 mmol，收率93.8 %)。LCMS (ESI): [M+H] +=620.1。
第六步：向2-羥基乙磺醯胺(48.5 mg，0.38 mmol)、反式-N,N-二甲基-1,2-環己二胺(27.8 mg，0.19 mmol)、磷酸鉀(164 mg，0.77 mmol)的N,N-二甲基甲醯胺(3 mL)溶液中加入碘化亞銅(36.9 mg，0.19 mmol)。將混合物在50°C攪拌5分鐘。然後將 2-{6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基}-N-[8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-2-羥基-1,7-萘啶-6-基]-4-碘苯甲醯胺在50°C加入到反應混合物中，將混合物在氮氣的保護下加熱至100°C攪拌4小時。向反應液中加入水(20 mL)，用乙酸乙酯(20 mL x 2)萃取。合併有機相，用氨水(20 mL x 2)洗滌，用無水硫酸鎂乾燥，過濾，濾液旋乾得殘餘物。殘留物用製備型HPLC(C18，26-66%梯度的水(甲酸)/乙腈)純化，得到白色固體化合物2-{6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基}-N-[8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-2-羥基-1,7-萘啶-6-基]-4-(2-羥基乙磺醯氨基)苯甲醯胺(23 mg，0.03 mmol，收率19.2 %)。LCMS (ESI): [M+H] +=632.5。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 13.15 (s, 1H), 11.53 - 10.45 (m, 1H), 10.16 (s, 1H), 8.12 (s, 1H), 8.01 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 7.90 (d, J= 9.6 Hz, 1H), 7.19 (d, J= 1.6 Hz, 1H), 7.06 (dd, J= 1.6, 8.8 Hz, 1H), 6.69 (d, J= 9.6 Hz, 1H), 5.30 - 4.75 (m, 1H), 3.69 (br t, J= 6.4 Hz, 2H), 3.29 - 3.27 (m, 2H), 3.22 - 3.16 (m, 4H), 2.94 - 2.82 (m, 4H), 2.27 - 2.16 (m, 4H), 1.98 - 1.42 (m, 4H), 0.31 (s, 4H)。
實施例55：N-(1-(4,4-二氟呱啶-1-基)異喹啉-3-基)-4-(2-羥乙基)磺醯胺基)-2-(6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲醯胺的合成
實施例55參照實施例3的類似合成路線製備得到的： LCMS (ESI)m/z: [M+H] += 600.4。 1H-NMR (400 MHz, DMSO) δ 13.14 (s, 1H), 10.21 (s, 1H), 8.27 (s, 1H), 8.09 (dd, J= 18.6, 8.4 Hz, 2H), 7.85 (d, J= 8.2 Hz, 1H), 7.66 (ddd, J= 8.0, 6.8, 1.2 Hz, 1H), 7.47 (ddd, J= 8.4, 6.8, 1.2 Hz, 1H), 7.29 (d, J= 2.4 Hz, 1H), 7.15 (dd, J= 8.8, 2.0 Hz, 1H), 4.95 (s, 1H), 3.77 (s, 2H), 3.51 (t, J= 5.6 Hz, 4H), 3.37 (t, J= 6.4 Hz, 2H), 3.00 (s, 4H), 2.34 – 2.23 (m, 4H), 2.08 – 1.54 (m, 5H), 1.24 (s, 1H), 0.40 (s, 4H)。
實施例56：N-(1-(4,4-二氟呱啶-1-基)-2,7-萘啶-3-基)-4-(2-羥乙基)磺醯胺)-2-(6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲醯胺
第一步：4-甲基煙腈(5.00 g，42.32 mmol)、草酸二乙酯(9.37 g，63.48 mmol)加到甲苯(50 mL)中，反應液25°C攪拌5分鐘。叔丁醇鉀(19.18 g，169.30 mmol)分3次加到半小時內加入反應液，反應液25 °C攪拌48小時。反應液抽濾，濾得固體溶於水(2L)中，1M鹽酸將反應液調至pH=3，所得溶液25°C繼續攪拌24小時。溶液用二氯甲烷(300 mL x 4)萃取，有機相合併，無水硫酸鈉乾燥，濃縮得粗品。粗品加入三氯氧磷(10 mL)中，反應液95°C攪拌2小時。反應液濃縮，粗品攪拌下緩慢加入冰水(100 mL)中，所得溶液用碳酸氫鈉固體調至pH=7，二氯甲烷(100 mL x 3)萃取，有機相合併，無水硫酸鈉乾燥，濃縮得粗品。粗品快速柱色譜(矽膠，0-10%梯度的乙酸乙酯/石油醚)純化得白色固體1-氯-2,7-萘啶-3-羧酸乙酯(2.40 g，37%)。LCMS (ESI): [M+H] +=237.1、239.1。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 9.73 (d, J= 1.0 Hz, 1H), 8.99 (d, J= 5.6 Hz, 1H), 8.72 (d, J= 0.9 Hz, 1H), 8.23 (dd, J= 5.7, 1.1 Hz, 1H), 4.43 (q, J= 7.1 Hz, 2H), 1.39 (t, J= 7.1 Hz, 3H)。
第二步：1-氯-2,7-萘啶-3-羧酸乙酯(2.40 g，10.14 mmol)、4,4-二氟呱啶鹽酸鹽(1.94 g，12.17 mmol)、碳酸鉀(5.00 g，35.49 mmol)加到N-甲基吡咯烷酮(5 mL)中，反應液95°C攪拌24小時。反應液倒入飽和氯化銨溶液(50 mL)中，乙酸乙酯(50 mL x 3)萃取，有機相合併，飽和氯化鈉溶液(30 mL x 3)水洗，無水硫酸鈉乾燥，濃縮得粗品。粗品快速柱色譜(矽膠，0-10%梯度的乙酸乙酯/石油醚)純化得淡黃色固體1-(4,4-二氟呱啶-1-基)-2,7-萘啶-3-羧酸乙酯(2.20 g，68%)。LCMS (ESI): [M+H] +=322.2。
第三步：1-(4,4-二氟呱啶-1-基)-2,7-萘啶-3-羧酸乙酯(1.00 g，3.11 mmol)加到100 mL密封管中，7 M氨甲醇溶液(5 mL)加入反應管，反應管密封，85°C攪拌16小時。待反應液冷卻至室溫後，反應液濃縮得淡黃色固體1-(4,4-二氟呱啶-1-基)-2,7-萘啶-3-甲醯胺(850 mg，93%)。LCMS (ESI): [M+H] +=293.1。
第四步：1-(4,4-二氟呱啶-1-基)-2,7-萘啶-3-甲醯胺(600 mg，2.05 mmol)加到1,4-二氧六環(60 mL)中，氫氧化鉀(291 mg，5.13 mmol)加到反應液。反應液25°C攪拌5分鐘，8%次氯酸鈉水溶液(4.25 g)滴加至反應液。反應液室溫攪拌6小時。飽和硫代硫酸鈉水溶液(30 mL)加入反應液，室溫攪拌15分鐘，乙酸乙酯(30 mL x 3)萃取，有機相合併，無水硫酸鈉乾燥，濃縮得粗品。粗品快速柱色譜(矽膠，10-33%梯度的乙酸乙酯/二氯甲烷)得黃色固體1-(4,4-二氟呱啶-1-基)-2,7-萘啶-3-胺(420 mg，77%)。LCMS (ESI): [M+H] +=265.1。
第五步：1-(4,4-二氟呱啶-1-基)-2,7-萘啶-3-胺(420 mg，1.59 mmol)、2-氟-4-碘苯甲酸(635 mg， 2.38 mmol)、N,N-二異丙基乙胺(1.05 g，7.95 mmol)和1-丙基磷酸酐(50%乙酸乙酯溶液，3.03 g，4.77 mmol)加到乙腈(5 mL)中，反應液85°C攪拌16小時。反應液倒入水(30 mL)中，乙酸乙酯(30 mLx3)萃取，有機相合併，無水硫酸鈉乾燥，濃縮得粗品。粗品快速柱色譜純化(矽膠，30-50%梯度的乙酸乙酯/石油醚)得淡黃色固體N-(1-(4,4-二氟呱啶-1-基)-2,7-萘啶-3-基)-2-氟-4-碘苯甲醯胺(560 mg，69%)。LCMS (ESI): [M+H] +=513.1。
第六步：N-(1-(4,4-二氟呱啶-1-基)-2,7-萘啶-3-基)-2-氟-4-碘苯甲醯胺(190mg，0.37 mmol)、6-氮雜-螺[2.5]辛烷鹽酸鹽(83 mg，0.56 mmol)、碳酸鉀(131 mg，0.93 mmol)加到甲苯(5 mL)中，反應液130°C攪拌16小時。反應液倒入飽和氯化銨水溶液(30 mL)中，乙酸乙酯(30 mL x 3)萃取，有機相合併，無水硫酸鈉乾燥，濃縮得粗品。粗品快速柱色譜純化(矽膠，20-50%梯度的乙酸乙酯/二氯甲烷)得淡黃色固體N-(1-(4,4-二氟呱啶-1-基)-2,7-萘啶-3-基)-4-碘-2-(6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲醯胺(200 mg，89%)。LCMS (ESI): [M+H] +=604.3。
第七步：N-(1-(4,4-二氟呱啶-1-基)-2,7-萘啶-3-基)-4-碘-2-(6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲醯胺(200 mg，0.33 mmol)、2-羥基乙磺醯胺(63 mg，0.50 mmol)、碘化亞銅(64 mg，0.33 mmol)、(1S,2S)-(+)-N,N'-二甲基-1,2-環己二胺(48 mg，0.33 mmol)、磷酸鉀(179 mg，0.83 mmol)加到N,N-二甲基甲醯胺(2 mL)中，氮氣置換，反應液115°C攪拌4小時。反應液倒入飽和氯化銨水溶液(30 mL)中，乙酸乙酯(30 mL x 3)萃取，有機相合併，飽和氯化鈉水溶液(30 mL x 3)洗，有機相無水硫酸鈉乾燥，濃縮得粗品。粗品快速柱色譜(矽膠，10-50%梯度的乙酸乙酯/二氯甲烷)得白色固體N-(1-(4,4-二氟呱啶-1-基)-2,7-萘啶-3-基)-4-(2-羥乙基)磺醯胺)-2-(6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲醯胺(93 mg，47%)。
LCMS (ESI): [M+H] +=601.4。 1HNMR(400MHz, DMSO-d 6) δ13.32 (s, 1H),10.49(s, 1H), 9.33 (s, 1H), 8.53 (d, J= 5.8 Hz, 1H), 8.18 (s, 1H), 8.10 (d, J= 8.6 Hz, 1H), 7.72 (d, J= 5.8 Hz, 1H), 7.30 (d, J= 2.2 Hz, 1H), 7.15 (dd, J= 8.6, 2.1 Hz, 1H), 5.76 (s, 1H), 3.77 (t, J= 6.4 Hz, 2H), 3.65 (dd, J= 7.2, 4.2 Hz, 4H), 3.40–3.32 (m, 2H), 3.00 (t, J= 5.3 Hz, 4H), 2.29 (tt, J= 14.3, 5.6 Hz, 4H), 1.89 (d, J= 84.2 Hz, 4H), 0.41 (s, 4H)。
實施例57：N-(5-(4,4-二氟呱啶-1-基)-1,6-萘啶-7-基)-4-(2-羥乙基)磺胺基)-2-(6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲醯胺
實施例57參照實施例3的類似合成路線製備得到的： LCMS (ESI): [M+H] += 601.3。 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 13.29 (s, 1H), 10.24 (s, 1H), 8.95 (d, J= 4.0 Hz, 1H), 8.44 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 8.32 (s, 1H), 8.13 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 7.44 (dd, J= 8.4, 4.4 Hz, 1H), 7.30 (s, 1H), 7.15 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 5.16 – 4.84 (m, 1H), 3.77 (q, J= 6.0 Hz, 2H), 3.56 (t, J= 5.6 Hz, 4H), 3.17 (s, 2H), 3.01 (s, 4H), 2.47-2.10 (m, 4H), 1.78 (s, 4H), 0.41 (s, 4H)。
實施例58：N-(8-(4,4-二氟呱啶-1-基)吡啶[3,4-d]嘧啶-6-基)-4-((2-羥乙基)磺醯胺)-2-(6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-甲基)苯甲醯胺
實施例58參照實施例3的類似合成路線製備得到的： LCMS (ESI): [M+H] += 602.10。 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 12.99 (s, 1H), 9.30 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 9.14 (s, 1H), 8.28 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 8.20 (s, 1H), 7.35 (d, J= 7.2 Hz, 1H), 7.11 (s, 2H), 5.46 – 5.29 (m, 1H), 4.30 (t, J= 6.0 Hz, 4H), 4.15 (t, J= 5.2 Hz, 2H), 3.35 (t, J= 5.2 Hz, 2H), 3.11 (s, 4H), 2.21 (dd, J= 12.8, 6.8 Hz, 4H), 1.43 (s, 4H), 0.44 (s, 4H)。
實施例59：N-(5-(4，4-二氟呱啶-1-基)吡啶並[3，4-b]吡嗪-7-基)-4-(2-羥乙基)磺醯胺基)-2-(6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲醯胺
實施例59參照實施例3的類似合成路線製備得到的： LCMS（ESI）m/z: [M+H] += 602.4。 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 13.07 (s, 1H), 10.24 (s, 1H), 8.93 (d, J= 1.6 Hz, 1H), 8.69 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 8.17 – 8.08 (m, 2H), 7.30 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 7.15 (d, J= 8.4, 2.1 Hz, 1H), 4.95 (s, 1H), 4.25-4.21 (m, 4H), 3.78 (t, J= 5.6 Hz, 2H), 3.37 (t, J= 6.4 Hz, 2H), 3.06-2.96 (m, 4H), 2.22 – 2.15 (m, 4H), 1.77-1.73 (m, 4H), 0.41 (s, 4H)。
實施例60：N-(8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-3-甲氧基吡啶並[3,4-c]噠嗪-6-基)-4-(2-羥基乙基磺醯氨基)-2-(6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲醯胺
第一步：向叔-丁基乙基丙二酸酯(21.8 g，116 mmol)的N,N-二甲基甲醯胺 (220 mL) 的溶液中加入鈉氫 (4.25 g，106 mmol，60% 純度)。將混合物在0°C下攪拌1小時，然後將甲基 4,6-二氯噠嗪-3-甲酸基酯(20.0 g，96.6 mmol) 在0°C加入到反應混合物中，將混合物在氮氣的保護下25°C攪拌16小時。反應液緩慢倒入水(50 mL)中，用乙酸乙酯(100 mL x 2)萃取，用硫酸鎂乾燥，過濾，減壓濃縮，得到殘渣。殘留物經過柱分離(矽膠，0-15%梯度的乙酸乙酯/石油醚)得到黃色油狀物1-叔-丁基 3-乙基 2-(6-氯-3-(甲酯基)噠嗪-4-基)丙二酸酯(32.0 g， 89.2 mmol，收率92.3 %)。LCMS (ESI): [M+H] +=359.1。
第二步：向 1-叔-丁基 3-乙基 2-(6-氯-3-(甲酯基)噠嗪-4-基)丙二酸酯(32.0 g，89.2 mmol)的二氯甲烷 (320 mL)溶液中加入三氟乙酸(160 mL) 將混合物在25°C攪拌16小時。反應液用飽和的碳酸氫鈉調節pH至7，用二氯甲烷(500 mL x 2)萃取，有機層用飽和食鹽水(500 mL x 2)洗滌，用硫酸鎂乾燥，過濾，減壓濃縮，得到白色固體甲基 6-氯-4-(2-乙氧基-2-氧亞基乙基)噠嗪-3-甲酸基酯(22.0 g，85.1 mmol，收率95.4 %)。LCMS (ESI): [M+H] +=259.0。
第三步：將 甲基 6-氯-4-(2-乙氧基-2-氧亞基乙基)噠嗪-3-甲酸基酯(20.0 g，77.3 mmol)溶於氨甲醇溶液(200 mL)中。將混合物在90°C下攪拌16小時。將反應液濃縮旋乾得到黃色固體銨 3-氯-6-羥基吡啶並[3,4-c]噠嗪-8-醇負離子(15.0 g，75.9 mmol，收率98.2 %)。LCMS (ESI): [M+H] +=198.0。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 10.67 - 9.72 (m, 1H), 7.64 - 6.86 (m, 4H), 6.81 (s, 1H), 4.65 (s, 1H)。
第四步：向銨 3-氯-6-羥基吡啶並[3,4-c]噠嗪-8-醇負離子(7.50 g，38.0 mmol) 的三氯氧磷(150 mL)的溶液中加入N,N-二異丙基乙胺 (10.0 g，75.9 mol)將混合物在100°C下攪拌6小時。反應液減壓濃縮，得到殘渣。殘留物經過柱分離(矽膠，0-15%梯度的乙酸乙酯/石油醚)得到3,6,8-三氯吡啶並[3,4-c]噠嗪(6.50 g，27.7 mmol，收率73.0 %)。LCMS (ESI): [M+H] +=233.9。
第五步：向 3,6,8-三氯吡啶並[3,4-c]噠嗪 (6.50 g，27.7 mmol)的叔丁醇 (130 mL)的溶液中加入4,4-二氟呱啶(4.37 g，27.7 mmol)和 N,N-二異丙基乙胺 (36.6 g，277 mol)。將混合物在100°C下攪拌16小時。反應液用水(100 mL)稀釋，用乙酸乙酯(100 mL x 2)萃取，有機層用飽和食鹽水(100 mL x 2)洗滌，用硫酸鎂乾燥，過濾，減壓濃縮，得到殘渣。殘留物經過柱分離(矽膠，0-20%梯度的乙酸乙酯/石油醚)得到黃色固體 3,6-二氯-8-(4,4-二氟呱啶-1-基)吡啶並[3,4-c]噠嗪 (6.10 g， 19.1 mmol，收率69.0 %)。LCMS (ESI): [M+H] +=319.0。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 8.21 (s, 1H), 7.10 (s, 1H), 4.40 - 4.30 (m, 4H), 2.27 - 2.14 (m, 4H)。
第六步：將 3,6-二氯-8-(4,4-二氟呱啶-1-基)吡啶並[3,4-c]噠嗪 (150 mg，0.47 mmol)溶於甲醇鈉 (3 mL) 的溶液中。將混合物在25°C下攪拌16小時。反應液倒入冰水(10 mL)中，用乙酸乙酯(10 mL x 3)萃取，有機層用飽和食鹽水(10 mL x 2)洗滌，用硫酸鎂乾燥，過濾，減壓濃縮，得到黃色固體6-氯-8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-3-甲氧基吡啶並[3,4-c]噠嗪 (125 mg，0.39 mmol，收率84.5 %)。LCMS (ESI): [M+H] +=315.0。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 7.37 (s, 1H), 7.04 (s, 1H), 4.47 - 4.34 (m, 4H), 4.16 (s, 3H), 2.25 - 2.15 (m, 4H)。
第七步：向 6-氯-8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-3-甲氧基吡啶並[3,4-c]噠嗪(100 mg，0.31 mmol)的二氧六環(2 mL)溶液中加入碳酸銫(311 mg，0.95 mmol)、氯(2-二環己基膦基-2,4,6-三異丙基-1,1-聯苯基)[2-(2-氨基-1,1-聯苯)]鈀(II) (29.1 mg， 0.03 mmol)、5-雙二苯基膦-99-二甲基氧雜氧雜蒽雜蒽(36.7 mg，0.06 mmol)和二苯甲酮亞胺(70.5 mg，0.38 mmol)。將混合物用氮氣置換三次，在100°C攪拌16小時。將反應液冷卻至室溫，用水(10 mL)和乙酸乙酯(10 mL x 2)進行萃取，合併有機相，用飽和食鹽水(10 mL x 2)洗滌，再用無水硫酸鎂乾燥，過濾，濾液旋乾得殘餘物。殘留物用快速柱色譜純化(矽膠，0-15%梯度的乙酸乙酯/石油醚)得到白色固體8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-N-(二苯亞甲基)-3-甲氧基吡啶並[3,4-c]噠嗪-6-胺(110 mg，0.24 mmol，收率75.3 %)。LCMS (ESI): [M+H] +=460.2。
第八步：向 8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-N-(二苯亞甲基)-3-甲氧基吡啶並[3,4-c]噠嗪-6-胺(100 mg，0.22 mmol)的甲醇 (2 mL)的溶液中加入醋酸鈉 (53.6 mg，0.65 mmol)和鹽酸羥胺(30.3 mg，0.44 mol)。將混合物在25°C下攪拌2小時。反應液用水(10 mL)稀釋，用乙酸乙酯(10 mL x 2)萃取，有機層用飽和食鹽水(10 mL x 2)洗滌，用硫酸鎂乾燥，過濾，減壓濃縮，得到殘渣。殘留物經過柱分離(矽膠，0-10%梯度的乙酸乙酯/石油醚)得到黃色固體 8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-3-甲氧基吡啶並[3,4-c]噠嗪-6-胺(50.0 mg，0.17 mmol，收率77.8 %)。LCMS (ESI): [M+H] +=296.1。
第九步：向8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-3-甲氧基吡啶並[3,4-c]噠嗪-6-胺(45 mg，0.15 mmol)和 4-碘-2-(6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲醯氯化 (68.7 mg，0.18 mmol) 的四氫呋喃(2 mL)溶液中加入N,N-二異丙基乙胺(60.3 mg，0.46 mmol)和叔丁醇鉀(0.45 mL，0.18 mmol，1M)的四氫呋喃溶液，將混合物在25°C攪拌16小時。將反應液冷卻至室溫，用水(10 mL)和乙酸乙酯(10 mL x 2)進行萃取，合併有機相，用飽和食鹽水(10 mL x 2)洗滌，再用無水硫酸鎂乾燥，過濾，濾液旋乾得殘餘物。殘留物用快速柱色譜純化(矽膠，0-10%梯度的乙酸乙酯/石油醚)得到黃色固體N-(8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-3-甲氧基吡啶並[3,4-c]噠嗪-6-基)-4-碘-2-(6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲醯胺 (80.0 mg，0.124 mmol，收率82.7 %)。LCMS (ESI): [M+H] +=635.1。
第十步：向2-羥基乙磺醯胺(31.6 mg，0.25 mmol)、肌氨酸(11.2 mg，0.13 mmol)、磷酸鉀(109 mg，0.50 mmol)的N,N-二甲基甲醯胺(2 mL)溶液中加入碘化亞銅(12.3 mg，0.06 mmol)。將混合物在50°C攪拌5分鐘。然後將 N-(8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-3-甲氧基吡啶並[3,4-c]噠嗪-6-基)-4-碘-2-(6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲醯胺(80 mg，0.13 mmol)在50°C加入到反應混合物中，將混合物在氮氣的保護下加熱至100°C攪拌16小時。將反應液冷卻至室溫，用水(20 mL)和乙酸乙酯(20 mL x 2)進行萃取，合併有機相，用氨水(20 mL x 2)洗滌，再用無水硫酸鎂乾燥，過濾，濾液旋乾得殘餘物。殘留物製備型HPLC (C18，42-82%梯度的水(甲酸)/乙腈)純化，得到黃色固體N-(8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-3-甲氧基吡啶並[3,4-c]噠嗪-6-基)-4-(2-羥基乙基磺醯氨基)-2-(6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲醯胺 (31.0 mg，0.05 mmol，收率38.9 %)。LCMS (ESI): [M+H] +=632.5。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 12.99 (s, 1H), 10.26 (s, 1H), 8.09 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 7.87 (d, J= 1.2 Hz, 1H), 7.39 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 7.29 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 7.15 (dd, J= 2.0, 8.4 Hz, 1H), 4.97 (br t, J= 5.6 Hz, 1H), 4.50 - 4.28 (m, 4H), 4.14 (s, 3H), 3.85 - 3.67 (m, 2H), 3.45 - 3.37 (m, 2H), 3.12 - 2.91 (m, 4H), 2.30 - 2.12 (m, 4H), 2.02 - 1.47 (m, 4H), 0.41 (s, 4H)。
實施例61：2-{6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基}-N-[8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-3-羥基吡啶並[3,4-c]噠嗪-6-基]-4-(2-羥基乙磺醯氨基)苯甲醯胺
第一步：向1-{3,6-二氯吡啶並[3,4-c]噠嗪-8-基}-4,4-二氟呱啶(600 mg，1.88 mmol)的四氫呋喃(6 mL)溶液中加入甲醇鈉甲醇溶液(6 mL，5.4 M)。混合物在25 °C下攪拌2小時。將反應液倒入冰水(20 mL)中，用乙酸乙酯(20 mL x 3)萃取。合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液旋乾得到黃色固體1-{6-氯-3-甲氧基吡啶並[3,4-c]噠嗪-8-基}-4,4-二氟呱啶(250 mg，0.79 mmol，收率42%)。LCMS (ESI): [M+H] += 315.0。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 7.37 (s, 1H), 7.04 (s, 1H), 4.46 - 4.27 (m, 4H), 4.16 (s, 3H), 2.26 - 2.12 (m, 4H)。
第二步：向1-{6-氯-3-甲氧基吡啶並[3,4-c]噠嗪-8-基}-4,4-二氟呱啶(250 mg，0.79 mmol)的二氧六環(5 mL)溶液中加入二苯甲酮亞胺(151 mg，0.83 mmol)、碳酸銫(528 mg，1.59 mmol)、4,5-雙(二苯基磷)-9,9-二甲基氧雜蒽(93.8 mg，0.16 mmol)和三(二亞苄基丙酮)二鈀(74.2 mg，0.08 mmol)。反應液用氮氣置換三次，並在氮氣氛圍下加熱至100 °C攪拌16小時。將反應液冷卻至室溫，用水(20 mL)和乙酸乙酯(20 mL x 3)進行萃取，合併有機相，用飽和食鹽水(20 mL)洗滌，再用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液旋乾得殘餘物。殘留物用快速柱色譜純化(矽膠，0-9%梯度的四氫呋喃/石油醚)得到黃色固體N-[8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-3-甲氧基吡啶並[3,4-c]噠嗪-6-基]-1,1-二苯基甲亞胺(230 mg，0.50 mmol，收率63%)。LCMS (ESI): [M+H] += 460.2。
第三步：向N-[8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-3-甲氧基吡啶並[3,4-c]噠嗪-6-基]-1,1-二苯基甲亞胺(210 mg，0.46 mmol)的甲醇(4 mL)溶液中加入乙酸鈉(112 mg，1.37 mmol)和鹽酸羥胺(63.7 mg，0.91 mmol)。將混合物在25 °C下攪拌2小時。將反應液倒入冰水(20 mL)中，用乙酸乙酯(20 mL x 3)萃取。合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液旋乾得殘餘物。殘留物用快速柱色譜純化(矽膠，0-12%梯度的四氫呋喃/石油醚)得到黃色固體8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-3-甲氧基吡啶並[3,4-c]噠嗪-6-胺(130 mg，0.44 mmol，收率96%)。LCMS (ESI): [M+H] += 296.0。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 6.77 (s, 1H), 6.42 (br s, 2H), 5.70 (s, 1H), 4.29 - 4.18 (m, 4H), 4.02 (s, 3H), 2.21 - 2.04 (m, 4H)。
第四步：向8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-3-甲氧基吡啶並[3,4-c]噠嗪-6-胺(100 mg，0.34 mmol)和2-(6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基)-4-碘苯甲醯氯(165 mg，0.44 mmol)的四氫呋喃(2 mL)溶液中加入叔丁醇鉀(1.02 mL，1M)的四氫呋喃溶液和N,N-二異丙基乙胺(134 mg，1.02 mmol)。混合物在25 °C攪拌16小時。反應液用水(20 mL)和乙酸乙酯(20 mL x 3)萃取。合併有機相，飽和食鹽水洗滌(20 mL)，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液旋乾得殘餘物。殘留物用快速柱色譜純化(矽膠，0-10%梯度的乙酸乙酯/石油醚)得到黃色固體2-{6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基}-N-[8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-3-甲氧基吡啶並[3,4-c]噠嗪-6-基]-4-碘苯甲醯胺(110 mg，0.17 mmol，收率51%)。LCMS (ESI): [M+H] += 635.1。
第五步：向2-{6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基}-N-[8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-3-甲氧基吡啶並[3,4-c]噠嗪-6-基]-4-碘苯甲醯胺(110 mg，0.17 mmol)的N,N-二甲基甲醯胺(5.00 mL)溶液中加入吡啶鹽酸鹽(200 mg，1.73 mmol)。將混合物在120 °C下攪拌16小時。將反應液冷卻至室溫，用水(20 mL)和乙酸乙酯(20 mL x 3)萃取。合併有機相，飽和食鹽水洗滌(20 mL)，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液旋乾得殘餘物。殘留物用快速柱色譜純化(矽膠，0-7%梯度的甲醇/二氯甲烷)得到橙色固體2-{6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基}-N-[8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-3-羥基吡啶並[3,4-c]噠嗪-6-基]-4-碘苯甲醯胺(100 mg，0.16 mmol，收率93%)。LCMS (ESI): [M+H] += 621.4。
第六步：向2-羥基乙磺醯胺(21.0 mg，0.17 mmol)和(1R,2R)-(-)-N,N-二甲基環己烷-1,2-二胺(18.5 mg，0.13 mmol)的N,N-二甲基甲醯胺(2 mL)溶液中加入碘化亞銅(12.5 mg，0.06 mmol)和磷酸鉀(112 mg，0.52 mmol)。將混合物加熱至50 °C攪拌5分鐘。並將2-{6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基}-N-[8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-3-羥基吡啶並[3,4-c]噠嗪-6-基]-4-碘苯甲醯胺(80.0 mg，0.13 mmol)加入到混合物中，然後在氮氣的保護下加熱至100 °C攪拌16小時。將反應液冷卻至室溫，用水(20 mL)和乙酸乙酯(20 mL x 3)萃取。合併有機相，飽和食鹽水洗滌(20 mL)，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液旋乾得殘餘物。殘留物用製備型HPLC (C18，22-62%梯度的水(甲酸)/乙腈)純化，得到橙色固體2-{6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基}-N-[8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-3-羥基吡啶並[3,4-c]噠嗪-6-基]-4-(2-羥基乙磺醯氨基)苯甲醯胺(2.50 mg，0.005 mmol，收率3%)。LCMS (ESI): [M+H] += 618.4。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 13.82 (s, 1H), 12.81 (s, 1H), 10.27 (s, 1H), 8.05 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 7.52 (s, 1H), 7.24 (s, 1H), 7.11 (br d, J= 8.8 Hz, 1H), 6.79 (s, 1H), 5.01 (s, 1H), 4.18 (br s, 4H), 3.76 (t, J= 6.4 Hz, 2H), 3.31 - 3.30 (m, 2H), 2.98 (br s, 4H), 2.22 - 2.11 (m, 4H), 1.88 - 1.55 (m, 4H), 0.40 (s, 4H)。
實施例62：N-[3-氨基-8-(4,4-二氟呱啶-1-基)吡啶並[3,4-c]噠嗪-6-基]-2-{6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基}-4-(2-羥基乙磺醯氨基)苯甲醯胺
實施例62參照實施例3的類似合成路線製備得到的： LCMS (ESI): [M+H] +=617.3， 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 12.80 (s, 1H), 10.94 - 9.71 (m, 1H), 8.07 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.63 (s, 1H), 7.27 (d, J= 1.6 Hz, 1H), 7.13 (dd, J= 1.8, 8.8 Hz, 1H), 6.71 (s, 2H), 6.62 (s, 1H), 5.32 - 4.67 (m, 1H), 4.30 (br s, 4H), 3.76 (t, J= 6.4 Hz, 2H), 3.52 - 3.41 (m, 2H), 2.99 (br s, 4H), 2.24 - 2.10 (m, 4H), 1.92 - 1.49 (m, 4H), 0.41 (s, 4H)。
實施例63：N-(8-(4,4-二氟呱啶-1-基)喹啉-6-基)-4-((2-羥乙基)磺胺基)-2-(6-氮雜螺環[2.5]辛烷-6-醯基)苯甲醯胺
第一步：在氮氣氣氛下，將4,5-雙二苯基膦-9,9-二甲基氧雜蒽(420 mg，0.711 mmol)和三(二亞苄基丙酮)二鈀(665 mg，0.81 mmol)加入含有8-溴-6-硝基喹啉(1.8 g，7.11 mmol)、4,4-二氟呱啶鹽酸鹽(1.7g，10.67 mmol)、碳酸銫(9.9 g，29.64 mmol)和二氧六環(20 mL)的混合溶液中，將所得混合物在120°C下攪拌12小時，將反應液倒入水中(50 ml)並用乙酸乙酯(50 ml x 3)萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾並濃縮後經柱層析純化(矽膠，0-50%梯度的乙酸乙酯/石油醚)純化，得到化合物8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-6-硝基喹啉(1.4 g，4.77 mmol，收率：67%)，為黃色固體。LCMS (ESI): [M+H] += 294.1。
第二步：含有8-(4,4-二氟丙呱啶)-6-硝基喹啉(500 mg，1.70 mmol)、鐵粉(962 mg，17.05 mmol)、氯化銨(921 mg，17.05 mmol)、乙醇(10 mL)和水(2 mL)的混合溶液在60°C下攪拌1小時，反應液趁熱過濾，將濾液倒入水中(30 mL)，並用乙酸乙酯(30 mL)萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾並濃縮，得到化合物8-(4,4-二氟呱啶-1-基)喹啉-6-胺(420 mg，1.60 mmol，收率：93.6%)，為黃色固體。LCMS (ESI): [M+H] += 264.2。
第三步：將2-(6-氮雜螺環[2.5]辛烷-6-基)-4-溴苯甲醯氯(599 mg，1.82 mmol)加入到含有8-(4,4-二氟呱啶基)-6-喹啉胺(400 mg，1.52 mmol)、N,N-二異丙基乙胺(601 mg，4.56 mmol)和四氫呋喃(10 mL)的混合溶液中，所得混合物在20°C下攪拌1小時，將反應液倒入水中(30 mL)並用乙酸乙酯(30mL x 3)提取，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾並濃縮後經柱層析純化(矽膠，0-50%梯度的乙酸乙酯/石油醚)純化，得到化合物4-溴-N-(8-(4,4-二氟呱啶-1-基)喹啉-6-基)-2-(6-氮雜螺環[2.5]辛烷-6-醯基)苯甲醯胺(700 mg， 1.26 mmol，收率：83%)。LCMS (ESI): [M+H] += 555.3。
第四步：氮氣氛圍下，將2-二-叔丁膦基-2',4',6'-三異丙基聯苯(23 mg，0.054 mmol)和三(二亞苄基丙酮)二鈀(50 mg，0.054 mmol)加入到含有[2-(6-氮雜螺環[2.5]辛烷-6-基)-4-溴苯基]-N-[8-(4.4-二氟丙呱啶基) (6-喹啉基)]羧醯胺(300 mg，0.54 mmol)、2-羥基乙磺醯醯胺(83 mg，0.648 mmol)、磷酸鉀(351 mg，1.62 mmol)和二氧六環(5 mL)的混合溶液中，將所得混合物在100°C下攪拌12小時，將反應液倒入水中(30 mL)並用乙酸乙酯(30 mL x 3)萃取，有機層相用無水硫酸鈉乾燥，過濾並濃縮後經柱層析純化(矽膠，0-50%梯度的乙酸乙酯/石油醚)純化，得到化合物N-(8-(4,4-二氟呱啶-1-基)喹啉-6-基)-4-((2-羥乙基)磺胺基)-2-(6-氮雜螺環[2.5]辛烷-6-醯基)苯甲醯胺(115.74 mg， 0.19 mmol，收率：35.7%)，為白色固體。LCMS (ESI): [M+H/2] += 300.8。 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 11.95 (s, 1H), 10.12 (s, 1H), 8.76 (dd, J= 4.0, 2.0 Hz, 1H), 8.30 – 8.20 (m, 2H), 7.87 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.48 (dd, J= 8.4, 4.0 Hz, 1H), 7.33 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 7.19 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 7.07 (dd, J= 8.4, 2.0 Hz, 1H), 4.97 (s, 1H), 3.76 (d, J= 6.8 Hz, 2H), 3.54 (t, J= 5.6 Hz, 4H), 3.36 (d, J= 6.4 Hz, 2H), 3.00 (t, J= 5.2 Hz, 4H), 2.30 – 2.17 (m, 4H), 1.67 – 1.51 (m, 4H), 0.35 (s, 4H)。
實施例64： N-(8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-2-甲基喹啉-6-基)-4-(2-羥乙基)磺醯胺)-2-(6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲醯胺
第一步：4-溴-2-氟-1-硝基苯(10.00 g， 45.45 mmol)、4,4-二氟呱啶鹽酸鹽(8.59 g，54.55 mmol)、碳酸鉀(19.23 g，136.36 mmol)加到N,N-二甲基甲醯胺(100 mL)中，反應液120°C攪拌6小時。反應液抽濾，濾液倒入飽和氯化銨溶液(200 mL)中，乙酸乙酯(100 mL x 3)萃取，有機相合併，飽和氯化鈉溶液(100 mL x 3)洗，無水硫酸鈉乾燥，濃縮得粗品。粗品快速柱色譜純化(矽膠，0-20%梯度的乙酸乙酯/石油醚)得黃色固體1-(5-溴-2-硝基苯基)-4,4-二氟呱啶(22.00g，75%)。LCMS (ESI): [M+H] +=321.0。
第二步：1-(5-溴-2-硝基苯基)-4,4-二氟呱啶(4.00 g，12.46 mmol)、鐵粉(3.51 g， 62.28 mmol)、氯化銨(1.01 g，18.69 mmol)加到水(4 mL)、乙醇(20 mL)、四氫呋喃(20 mL)中，反應液85°C攪拌16小時。反應液抽濾，濾液倒入水(50 mL)中，乙酸乙酯(50 mL x 3)萃取，有機相合併，無水硫酸鈉乾燥，濃縮得粗品。粗品快速柱色譜純化(矽膠，10-15%梯度的乙酸乙酯/石油醚)得黃色固體4-溴-2-(4,4-二氟呱啶-1-基)苯胺(3.50 g，96%)。LCMS (ESI): [M+H] +=291.0。
第三步：4-溴-2-(4,4-二氟呱啶-1-基)苯胺(3.50 g，12.02 mmol)、巴豆醛(4.26 g，60.11 mmol)加到鹽酸(6 M，20 mL)中，反應液100°C回流攪拌16小時。反應液緩慢倒入水(100 mL)中，用氫氧化鈉固體調pH至7，乙酸乙酯(50 mLx3)萃取，有機相合併，無水硫酸鈉乾燥，濃縮得粗品。粗品快速柱色譜純化(矽膠，0-10%梯度的乙酸乙酯/石油醚)得淡黃色固體6-溴-8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-2-甲基喹啉(1.20 g，29%)。LCMS (ESI): [M+H] +=341.0。
第四步：6-溴-8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-2-甲基喹啉(1.10 g，3.22 mmol)、氨基甲酸叔丁酯(572 mg，4.84 mmol)、4,5-雙二苯基膦-9,9-二甲基氧雜蒽(190 mg，0.32 mmol)、三(二亞苄基丙酮)二鈀(301 mg，0.32 mmol)、碳酸銫(2.14 g，6.45 mmol)加到1,4-二氧六環(10 mL)中，反應液100°C攪拌16小時。反應液抽濾，濾液倒入水(50 mL)中，乙酸乙酯(30 mL x 3)萃取，有機相合併，無水硫酸鈉乾燥，濃縮得粗品。粗品加到二氯甲烷(10 mL)中，三氟乙酸(5 mL)加入反應液，反應液50°C攪拌2小時。反應液緩慢倒入水(50 mL)中，用碳酸氫鈉固體將pH調至7，乙酸乙酯(50 mLx3)萃取，有機相合併，無水硫酸鈉乾燥，濃縮得粗品。粗品快速柱色譜純化(矽膠，10-25%梯度的乙酸乙酯/二氯甲烷)得棕色固體8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-2-甲基喹啉-6-胺(450mg，50%)。LCMS (ESI): [M+H] +=278.2。
第五步：8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-2-甲基喹啉-6-胺(200 mg，0.72 mmol)、N,N-二異丙基乙胺(285 mg，2.16 mmol)加到四氫呋喃(10 mL)中，4-溴-2-(6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲醯氯(355 mg，1.08 mmol)加入反應液，反應液25°C攪拌2小時。反應液倒入飽和氯化銨水溶液(30 mL)中，乙酸乙酯(30 mL x 3)萃取，有機相合併，無水硫酸鈉乾燥，濃縮得粗品。粗品快速柱色譜純化(矽膠，10-25%梯度的乙酸乙酯/二氯甲烷)得淡黃色固體4-溴-N-(8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-2-甲基喹啉-6-基)-2-(6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲醯胺(300 mg，73%)。LCMS (ESI): [M+H] +=569.3。
第六步：4-溴-N-(8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-2-甲基喹啉-6-基)-2-(6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲醯胺(300 mg，0.53 mmol)、2-羥基乙磺醯胺(101 mg，0.79 mmol)、碘化亞銅(102 mg，0.53 mmol)、(1S,2S)-(+)-N,N'-二甲基-1,2-環己二胺(113 mg，0.79 mmol)、磷酸鉀(342 mg，1.58 mmol)加到N,N-二甲基甲醯胺(4 mL)中，氮氣置換，反應液115°C攪拌4小時。反應液倒入飽和氯化銨水溶液(30 mL)中，乙酸乙酯(30 mL x 3)萃取，有機相合併，飽和氯化鈉水溶液(30 mL x 3)洗，有機相無水硫酸鈉乾燥，濃縮得粗品。粗品快速柱色譜純化(矽膠，30-50%梯度的乙酸乙酯/二氯甲烷)得N-(8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-2-甲基喹啉-6-基)-4-(2-羥乙基)磺醯胺)-2-(6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲醯胺(165mg，51%)。
LCMS (ESI): [M+H] +=614.4。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 11.92 (s, 1H), 10.11 (s, 1H), 8.17 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 8.13 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.87 (d, J= 8.5 Hz, 1H), 7.37 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.29 (d, J= 2.2 Hz, 1H), 7.19 (d, J= 2.1 Hz, 1H), 7.07 (dd, J= 8.5, 2.1 Hz, 1H), 4.96 (s, 1H), 3.77 (q, J= 5.6, 5.0 Hz, 2H), 3.53 (t, J= 5.5 Hz, 4H), 3.36 (d, J= 6.5 Hz, 2H), 3.00 (t, J= 5.2 Hz, 4H), 2.64 (s, 3H), 2.30 – 2.19 (m, 4H), 1.59 (t, J= 5.0 Hz, 4H), 0.35 (s, 4H)。
實施例65：N-(8-(4，4-二氟呱啶-1-基)-2-甲氧基喹啉-6-基)-4-(2-羥乙基磺醯胺)-2-(6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲醯胺
實施例65參照實施例3的類似合成路線製備得到的： LCMS (ESI): [M+1] += 630.3。 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 11.89 (s, 1H), 10.06 (s, 1H), 8.18 – 8.11 (m, 2H), 7.86 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.32 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 7.19 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 7.06 (dd, J= 8.4, 2.0 Hz, 1H), 6.99 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 5.04 (s, 1H), 3.98 (s, 3H), 3.77 (t, J= 6.4 Hz, 2H), 3.49 (t, J= 5.6 Hz, 4H), 3.35 (d, J= 6.4 Hz, 2H), 3.00 (t, J= 5.2 Hz, 4H), 2.26 (td, J= 14.4, 13.0, 6.9 Hz, 4H), 1.59 (t, J= 5.2 Hz, 4H), 0.36 (s, 4H)。
實施例66：N-(8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-2-羥基喹啉-6-基)-4-(2-羥乙基)磺醯胺)-2-(6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲醯胺
第一步：向4-溴-N-(8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-2-甲氧基喹啉-6-基)-2-(6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲醯胺(200 mg，0.34 mmol)的四氫呋喃(4 mL)的溶液中加入吡啶鹽酸鹽(276 mg，2.39 mmol)溶液，混合物於105°C下攪拌8小時。待有固體化合物析出後停止攪拌，加水(8 mL)稀釋，過濾固體，濾餅用甲醇(1 mL)淋洗，收集濾餅，乾燥得白色固體2-(6-氮雜螺[2.5]辛-6-基)-4-溴苯基]-N-[8-(4，4-二氟呱啶基)-2-羥基(6-喹啉基)]甲醯胺(150 mg，77%)。LCMS (ESI): [M+H] += 571.3。 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 11.30 (s, 1H), 10.61 (s, 1H), 8.02 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 7.96 – 7.92 (m, 1H), 7.71 – 7.64 (m, 2H), 7.44 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 7.38 (dd, J= 8.4, 1.9 Hz, 1H), 6.55 (d, J= 9.6 Hz, 1H), 3.03 (t, J= 5.2 Hz, 4H), 2.89 (s, 6H), 2.73 (s, 2H), 1.49 (t, J= 5.2 Hz, 4H), 0.31 (s, 4H)。
第二步：將 2-(6-氮雜螺[2.5]辛-6-基)-4-溴苯基]-N-[8-(4，4-二氟呱啶基)-2-羥基(6-喹啉基)]甲醯胺(100 mg，0.17 mmol)、2-羥基乙磺醯胺(44 mg，0.30 mmol)、碘化亞銅(34 mg，0.17 mmol)、磷酸鉀(150 mg，0.70 mmol)、N,N’-二甲基-1,2-環己二胺(100 mg，0.70 mmol)依次加至N,N-二甲基甲醯胺(3 mL)中，氮氣置換三次，反應混合物在110°C下加熱攪拌2 小時。反應液用水(25 mL)淬滅，乙酸乙酯(25 mL x 3)萃取，合併有機相，飽和氯化鈉水溶液(50 mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，粗產物用製備液相(C18，30-55%梯度的乙腈/水)純化後得到白色固體N-(8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-2-羥基喹啉-6-基)-4-(2-羥乙基)磺醯胺)-2-(6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲醯胺(32 mg，29%)。LCMS (ESI): [M+1] += 616。 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 11.73 (s, 1H), 10.60 (s, 1H), 9.76 (s, 1H), 8.03 (d, J= 2.1 Hz, 1H), 7.93 (d, J= 9.6 Hz, 1H), 7.81 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.67 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 7.15 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 7.02 (dd, J= 8.4, 2.1 Hz, 1H), 6.55 (d, J= 9.6 Hz, 1H), 5.07 (s, 1H), 3.76 (t, J= 6.4 Hz, 2H), 3.30 (d, J= 6.4 Hz, 2H), 3.08 – 2.80 (m, 8H), 2.01 (s, 4H), 1.55 (t, J= 5.2 Hz, 4H), 0.34 (s, 4H)。
實施例67： N-(2-氨基-8-(4,4-二氟呱啶-1-基)喹啉-6-基)-4-(2-羥乙基)磺醯胺)-2-(6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲醯胺
第一步：8-溴喹啉-2(1H)-酮(5.00 g，22.32 mmol)加到濃硫酸(20 mL)中，反應液冰浴下攪拌15分鐘。濃硝酸(65%，12 mL)緩慢滴加到反應液，反應液溫度維持在5°C以下。滴加完後，反應液轉移至25°C，攪拌16小時。反應液緩慢倒入冰水(200 mL)中，劇烈攪拌，抽濾。濾得固體用水(200 mL)，飽和碳酸氫鈉溶液(200 mL)，水(200 mL)洗，乾燥得粗品淡黃色固體8-溴-6-硝基喹啉-2(1H)-酮(純度50%，5.77g，47%)。LCMS(ESI): [M+H] +=269.0、271.0。
第二步：8-溴-6-硝基喹啉-2(1H)-酮(純度50%，5.70 g，10.59 mmol)加到三氯氧磷(10 mL)中，反應液90°C攪拌4小時。反應液緩慢倒入冰水(200 mL)中，攪拌後，用飽和碳酸氫鈉溶液調至pH=7，乙酸乙酯(50 mL x 3)萃取，有機相合併，無水硫酸鈉乾燥，濃縮得粗品。粗品快速柱色譜純化(矽膠，0-10%梯度的乙酸乙酯/石油醚)得淡黃色固體8-溴-2-氯-6-硝基喹啉(2.60 g，73%)。LCMS(ESI): [M+H] +=286.9。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 9.15 (d, J= 2.5 Hz, 1H), 8.83 (d, J= 8.6 Hz, 1H), 8.80 (d, J= 2.5 Hz, 1H), 7.91 (d, J= 8.6 Hz, 1H)。
第三步：8-溴-2-氯-6-硝基喹啉(2.60 g，9.04 mmol)、4-甲氧基苄胺(1.88 g，13.56 mmol)、碳酸銫(4.51 g，13.56 mmol)加到N,N-二甲基甲醯胺(5 mL)中，反應液95°C攪拌16小時。反應液倒入飽和氯化銨水溶液(50 mL)中，乙酸乙酯(50 mL x 3)萃取，有機相合併，飽和氯化鈉溶液(30 mL x 3)洗，無水硫酸鈉乾燥，濃縮得粗品。粗品快速柱色譜純化(矽膠，0-15%梯度的乙酸乙酯/石油醚)得棕色固體8-溴-N-(4-甲氧基苄基)-6-硝基喹啉-2-胺(2.90 g，83%)。LCMS(ESI): [M+H] +=388.0。
第四步：8-溴-N-(4-甲氧基苄基)-6-硝基喹啉-2-胺(2.90 g，7.47 mmol)、4,4-二氟呱啶鹽酸鹽(1.78 g，11.20 mmol)、碳酸銫(7.45 g，22.41 mmol)、甲磺酸(2-二環己基膦基-2',6'-二異丙氧基-1,1'-聯苯基)(2-氨基-1,1'-聯苯-2-基)鈀(II)(319 mg，0.37 mmol)加到1,4-二氧六環(10 mL)中，氮氣置換，反應液100°C攪拌16小時。反應液倒入飽和氯化銨水溶液(50 mL)中，乙酸乙酯(50 mL x 3)萃取，有機相合併，無水硫酸鈉乾燥，濃縮得粗品。粗品快速柱色譜純化(矽膠，10-25%梯度的乙酸乙酯/石油醚)得紅色固體8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-N-(4-甲氧基苄基)-6-硝基喹啉-2-胺(1.70 g，53%)。LCMS(ESI): [M+H] +=429.3。
第五步：8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-N-(4-甲氧基苄基)-6-硝基喹啉-2-胺(800 mg，1.87 mmol)、鐵粉(527 mg，9.34 mmol)、氯化銨(151 mg， 2.80 mmol)加到水(1 mL)、乙醇(5 mL)、四氫呋喃(5 mL)溶液中，反應液90°C反應16小時。反應液抽濾，濾液濃縮，倒入水(30 mL)中，乙酸乙酯(30 mL x 3)萃取，有機相合併，無水硫酸鈉乾燥，濃縮得粗品8-(4,4-二氟呱啶-1-基)- N2-(4-甲氧基苄基)喹啉-2,6-二胺(700 mg，94%)。LCMS(ESI): [M+H] +=399.3。
第六步：8-(4,4-二氟呱啶-1-基)- N2-(4-甲氧基苄基)喹啉-2,6-二胺(700 mg，1.76 mmol)加到三氟乙酸(4 mL)中，反應液50°C攪拌16小時。反應液緩慢倒入飽和氯化銨溶液(50 mL)中，二氯甲烷(30 mL x 3)萃取，有機相合併，無水硫酸鈉乾燥，濃縮得粗品。粗品快速柱色譜純化(矽膠， 0-10%梯度的甲醇/二氯甲烷)得8-(4,4-二氟呱啶-1-基)喹啉-2,6-二胺(220 mg，45%)。LCMS(ESI): [M+H] +=279.1。
第七步：8-(4,4-二氟呱啶-1-基)喹啉-2,6-二胺(140 mg，0.50 mmol)、N,N-二異丙基乙胺(133 mg，1.01 mmol)加到四氫呋喃(2 mL)中，反應液25°C攪拌10分鐘，4-溴-2-(6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲醯氯(174 mg，0.53 mmol)加到反應液，反應液25°C攪拌2小時。反應液倒入飽和氯化銨溶液(30 mL)中，二氯甲烷(30 mL x 3)萃取，有機相合併，無水硫酸鈉乾燥，濃縮得粗品。粗品快速柱色譜純化(矽膠， 0-10%梯度的甲醇/二氯甲烷)得棕色固體N-(2-氨基-8-(4,4-二氟呱啶-1-基)喹啉-6-基)-4-溴-2-(6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲醯胺(140 mg，49%)。LCMS(ESI): [M+H] +=570.3。
第八步：N-(2-氨基-8-(4,4-二氟呱啶-1-基)喹啉-6-基)-4-溴-2-(6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲醯胺(140 mg，0.25 mmol)、磷酸鉀(159 mg，0.74 mmol)、碘化亞銅(48 mg，0.25 mmol)、(1S,2S)-(+)-N,N'-二甲基-1,2-環己二胺(35 mg，0.25 mmol)、2-羥基乙磺醯胺(47 mg，0.37mmol)加到N,N-二甲基甲醯胺(1 mL)中，氮氣置換，反應液110°C攪拌16小時。反應液倒入飽和氯化銨溶液(30 mL)中，乙酸乙酯(30 mL x 3)萃取，有機相合併，飽和氯化鈉溶液(30 mL x 3)洗，無水硫酸鈉乾燥，濃縮得粗品。粗品快速柱色譜純化(C18，10-40%梯度的乙腈/水)得淡黃色固體N-(2-氨基-8-(4,4-二氟呱啶-1-基)喹啉-6-基)-4-(2-羥乙基)磺醯胺)-2-(6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲醯胺(27 mg，18%)。LCMS(ESI): [M+H] +=615.4。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 11.81 (d, J= 4.2 Hz, 1H), 10.09 (s,1H), 7.94 (q, J= 2.1 Hz, 1H), 7.85 (ddd, J= 18.0, 8.7, 4.3 Hz, 2H), 7.18 (dt, J= 6.0, 2.9 Hz, 2H), 7.06 (dq, J= 7.3, 2.1 Hz, 1H), 6.75 (dd, J= 8.8, 4.2 Hz, 1H), 6.25 (s, 2H), 4.98 (s, 1H), 3.77 (q, J= 5.9 Hz, 2H), 3.46 – 3.40 (m, 6H), 2.99 (q, J= 4.9 Hz, 4H), 2.23 (t, J= 10.4 Hz, 4H), 1.59 (d, J= 6.6 Hz, 4H), 0.36 (d, J= 4.2 Hz, 4H)。
實施例68：N-(2-氰基-8-(4,4-二氟呱啶-1-基)喹啉-6-基)-4-((2-羥乙基)磺醯胺基)-2-(6-氮雜螺[2.5]辛-6-基)苯甲醯胺
實施例68參照實施例3的類似合成路線製備得到的： LCMS (ESI): [M+H] +=625.4， 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 12.01 (s, 1H), 10.13 (s, 1H), 8.52 (d, J= 8.6 Hz, 1H), 8.34 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 7.95 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.84 (d, J= 8.5 Hz, 1H), 7.43 (d, J= 2.2 Hz, 1H), 7.18 (d, J= 2.1 Hz, 1H), 7.06 (dd, J= 8.5, 2.1 Hz, 1H), 4.97 (s, 1H), 3.77 (s, 2H), 3.55 (d, J= 6.2 Hz, 4H), 3.36(m, 2H), 3.00 (t, J= 5.2 Hz, 4H), 2.23 (d, J= 15.1 Hz, 4H), 1.56 (s, 4H), 0.34 (s, 4H)。
實施例69：(2-(6-氮雜螺環[2.5]辛烷-6-基)-4-{[(2-羥乙基)磺醯基]胺基}苯基)-N-[8-(4,4-二氟呱啶基)-2-(三氟甲基)(6-喹啉基)]甲醯胺
實施例69參照實施例3的類似合成路線製備得到的： LCMS (ESI): [M+H] +=668.4， 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 11.99 (s, 1H), 10.13 (s, 1H), 8.57 (d, J= 8.6 Hz, 1H), 8.35 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 7.87 (dd, J= 13.1, 8.5 Hz, 2H), 7.43 (d, J= 2.1 Hz, 1H), 7.19 (d, J= 2.1 Hz, 1H), 7.06 (dd, J= 8.5, 2.1 Hz, 1H), 4.97 (s, 1H), 3.77 (t, J= 5.1 Hz, 2H), 3.58 (t, J= 5.5 Hz, 4H), 3.35 (t, J= 6.6 Hz, 2H), 3.00 (t, J= 5.2 Hz, 4H), 2.25 (dt, J= 14.4, 8.5 Hz, 4H), 1.57 (s, 4H), 0.35 (s, 4H)。
實施例70：N-(8-(4,4-二氟呱啶-1-基)喹啉-6-基-7-d)-4-((2-羥基乙基)磺醯氨基)-2-(6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲醯胺
實施例70參照實施例3的類似合成路線製備得到的： LCMS (ESI): [M+H] += 601.2； 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 11.95 (s, 1H), 10.53 - 9.68 (m, 1H), 8.75 (dd, J= 1.2, 4.0 Hz, 1H), 8.35 - 8.16 (m, 2H), 7.87 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 7.47 (dd, J= 4.0, 8.0 Hz, 1H), 7.19 (s, 1H), 7.07 (dd, J= 1.6, 8.4 Hz, 1H), 5.16 - 4.76 (m, 1H), 3.77 (t, J= 6.4 Hz, 2H), 3.57 - 3.49 (m, 4H), 3.35 (br t, J= 6.4 Hz, 2H), 3.00 (br t, J= 4.4 Hz, 4H), 2.31 - 2.16 (m, 4H), 1.63 - 1.53 (m, 4H), 0.35 (s, 4H)。
實施例71：N-(8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-7-氟喹啉-6-基)-4-((2-羥乙基)磺醯胺基)-2-(6-氮雜螺環[2.5]辛烷-6-基]苯甲醯胺
實施例71參照實施例3的類似合成路線製備得到的： LCMS (ESI): [M+H] += 618.4。 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12.48 (d, J= 2.7 Hz, 1H), 10.22 (s, 1H), 8.82 (dd, J= 4.2, 1.7 Hz, 1H), 8.74 (d, J= 7.9 Hz, 1H), 8.32 (dd, J= 8.4, 1.7 Hz, 1H), 8.05 (d, J= 8.5 Hz, 1H), 7.49 (dd, J= 8.3, 4.2 Hz, 1H), 7.31 (d, J= 2.2 Hz, 1H), 7.14 (dd, J= 8.6, 2.1 Hz, 1H), 4.95 (t, J= 5.7 Hz, 1H), 3.77 (q, J= 5.8 Hz, 2H), 3.58 (t, J= 5.6 Hz, 4H), 3.38 (t, J= 6.5 Hz, 2H), 2.99 (t, J= 5.3 Hz, 4H), 2.19 (tt, J= 14.1, 5.6 Hz, 4H), 1.60 (s, 4H), 0.38 (s, 4H)。
實施例72：N-(8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-7-(三氟甲基)喹啉-6-基)-4-((2-羥乙基)磺醯胺基)-2-(6-氮雜螺環[2.5]辛烷-6-基)
實施例72參照實施例3的類似合成路線製備得到的： LCMS (ESI): [M+H] +=668.4。 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12.00 (s, 1H), 10.18 (s, 1H), 9.02 (dd, J= 4.1, 1.7 Hz, 1H), 8.47 (dd, J= 8.5, 1.7 Hz, 1H), 8.30 (s, 1H), 7.98 (d, J= 8.5 Hz, 1H), 7.68 (dd, J= 8.4, 4.1 Hz, 1H), 7.27 (d, J= 2.1 Hz, 1H), 7.10 (dd, J= 8.6, 2.1 Hz, 1H), 4.95 (s, 1H), 4.18 – 3.96 (m, 2H), 3.78 (s, 2H), 3.37 (t, J= 6.5 Hz, 2H), 3.02 (t, J= 5.4 Hz, 6H), 2.08 (d, J= 35.4 Hz, 4H), 1.48 (s, 4H), 0.33 (s, 4H)。
實施例73：N-(7-氯-8-(4,4-二氟呱啶-1-基)喹啉-6-基)-4-((2-羥乙基)磺醯胺基)-2-(6-氮雜螺[2.5]辛-6-基)苯甲醯胺
實施例73參照實施例3的類似合成路線製備得到的： LCMS (ESI): [M+H] += 634.6； 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 11.66 (s, 1H), 10.20 (s, 1H), 8.90 – 8.83 (m, 1H), 8.78 (s, 1H), 8.38 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.96 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.54 (dd, J= 8.3, 4.1 Hz, 1H), 7.26 (d, J= 2.1 Hz, 1H), 7.09 (dd, J= 8.4, 2.0 Hz, 1H), 4.96 (t, J= 5.6 Hz, 1H), 3.98 -3.62 (m, 4H), 3.47 - 3.30 (m, 4H), 3.04 (t, J= 5.2 Hz, 4H), 2.27 - 2.03 (m, 4H), 1.65 - 1.47 (m, 4H), 0.34 (s, 4H)。
實施例74：N-(7-氰基-8-(4,4-二氟呱啶-1-基)喹啉-6-基)-4-((2-羥乙基)磺醯胺基)-2-(6-氮雜螺[2.5]辛-6-基)苯甲醯胺
實施例74參照實施例3的類似合成路線製備得到的：  LCMS (ESI): [M+H] += 625.4； 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 11.71 (s, 1H), 10.19 (s, 1H), 8.91 (dd, J= 4.0, 1.6 Hz, 1H), 8.40 (dd, J= 8.4, 2.0 Hz, 1H), 8.26 (s, 1H), 7.92 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.64 (dd, J= 8.4, 4.0 Hz, 1H), 7.24 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 7.08 (dd, J= 8.4, 2.0 Hz, 1H), 4.96 (d, J= 5.6 Hz, 1H), 3.79-3.62 (m, 6H), 3.38 (t, J= 6.4 Hz, 2H), 3.04 (t, J= 5.2 Hz, 4H), 2.28-2.14 (m, 4H), 1.58-1.47 (m, 4H), 0.34 (s, 4H)。
實施例75：N-(8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-7-氟-2-甲基喹啉-6-基)-4-((2-羥乙基)磺醯胺基)-2-(6-氮雜螺環[2.5]辛烷-6-基)苯甲醯胺
實施例75參照實施例3的類似合成路線製備得到的： LCMS (ESI): [M+H] +=632.4。 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12.40 (d, J= 2.5 Hz, 1H), 10.21 (s, 1H), 8.66 (d, J= 7.9 Hz, 1H), 8.19 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 8.04 (d, J= 8.6 Hz, 1H), 7.37 (d, J= 8.3 Hz, 1H), 7.30 (d, J= 2.1 Hz, 1H), 7.14 (dd, J= 8.6, 2.1 Hz, 1H), 4.95 (s, 1H), 3.77 (t, J= 6.5 Hz, 2H), 3.57 (t, J= 5.9 Hz, 4H), 3.37 (t, J= 6.5 Hz, 2H), 2.99 (t, J= 5.2 Hz, 4H), 2.66 (s, 3H), 2.20 (tt, J= 14.3, 5.6 Hz, 4H), 1.60 (s, 4H), 0.38 (s, 4H)。
實施例76：N-(8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-7-氟-2-羥基喹啉-6-基)-4-((2-羥乙基)磺醯胺基)-2-(6-氮雜螺[2.5]辛-6-基)苯甲醯胺
第一步：含有3-氟-2-碘-1-硝基苯(25.00 g，93.63 mmol)、鐵粉(10.00 g，177.90 mmol)、氯化銨(9.60 g，177.90 mmol)、乙醇(100 mL)和水(20 mL)的溶液在60°C下攪拌1小時，反應液趁熱過濾後濃縮，然後用乙酸乙酯(100 mL x 3)萃取，有機層用無水硫酸鈉乾燥，過濾並濃縮後經柱層析(矽膠，0-50%梯度的乙酸乙酯/石油醚)純化，得到化合物3-氟-2-碘代苯胺(22.00 g，92.82 mmol，收率：99.1%)，為白色固體。LCMS (ESI): [M+H] += 238.0。
第二步：將N-溴代丁二醯亞胺(16.50 g，92.82 mmol)加入到含有3-氟-2-碘代苯胺(22.00 g，92.82 mmol)和N,N-二甲基甲醯胺(200 mL)的溶液中，反應液20°C下攪拌1小時，將反應液倒入水中(300 mL)並用乙酸乙酯(100 mL x 3)萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾並濃縮後經柱層析(矽膠，0-20%梯度的乙酸乙酯/石油醚)純化，得到化合物4-溴-3-氟-2-碘苯胺(21.50 g，68.06 mmol，收率：73.3%)，為灰色固體。LCMS (ESI): [M+H] += 317.9。
第三步：向含有4-溴-3-氟-2-碘苯胺(21.00 g，66.48 mmol)、N,N-二異丙基乙胺(26.30 g，199.42 mmol)和四氫呋喃(210 mL)的溶液中加入3-乙氧基丙烯醯氯(9.00 g，66.48 mmol)，反應液在20°C下攪拌12小時，將反應混合物倒入水中(100 mL)並用乙酸乙酯(100 mL x 3)萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾並濃縮後經柱層析(矽膠，0-50%梯度的乙酸乙酯/石油醚)純化，得到化合物(E)-N-(4-溴-3-氟-2-碘苯基)-3-乙氧基丙烯醯胺(15.00 g， 36.23 mmol，收率：54.5%)，為黃色固體。LCMS (ESI): [M+H] += 416.1。
第四步：含有(2E)-N-(4-溴-2-氟-2-碘代苯基)-3-甲氧基丙基-2-烯醯胺(15.00 g，36.23 mmol)和濃硫酸(100 mL)的溶液在20°C下攪拌12小時，將反應混合物倒入冰水中並過濾，得到化合物6-溴-7-氟-8-碘喹啉-2(1H)-酮(12.00 g，32.61 mmol，收率:90.0%)，為黃色固體。LCMS (ESI): [M+H] += 369.9。
第五步：含有6-溴-7-氟-8-碘喹啉-2(1H)-酮(12.00 g，32.61 mmol)和三氯氧磷(80 mL)的反應液在25°C下攪拌2 小時，反應液濃縮後倒入水中(30 mL)並過濾，得到化合物6-溴-2-氯-7-氟-8-碘喹啉(9.00 g，23.29 mmol，收率: 71.4%)，為黃色固體。LCMS (ESI): [M+H] += 385.9。
第六步：含有6-溴-2-氯-7-氟-8-碘喹啉(1.00 g，2.59 mmol)、甲醇鈉(30%)(2.30 g，12.94 mmol)和甲醇(10 mL)的反應液在20°C下攪拌12小時，將反應液倒入水中(30 mL)並用乙酸乙酯(30 mL x 3)萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾並濃縮後經柱層析(矽膠，0-20%梯度的乙酸乙酯/石油醚)純化，得到化合物6-溴-7-氟-8-碘-2-甲氧基喹啉(800 mg，2.09 mmol，收率: 80.9%)，為黃色固體。LCMS (ESI): [M+H] += 383.9。
第七步：在氮氣氣氛下，將4,5-雙二苯基膦-9,9-二甲基氧雜蒽(124 mg，0.21 mmol)和三(二亞苄基丙酮)二鈀(196 mg，0.21 mmol)加入到含有6-溴-7-氟-8-碘-2-甲氧基喹啉(800 mg，2.09 mmol)、4,4-二氟呱啶鹽酸鹽(367 mg，2.30 mmol)、碳酸銫(2.10 g，6.28 mmol)和1,4-二氧六環(10 mL)的混合溶液中，反應液在100°C下攪拌12小時，將反應混合物倒入水中(30mL)並用乙酸乙酯(30mL x 3)萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾並濃縮後經柱層析(矽膠，0-20%梯度的乙酸乙酯/石油醚)純化，得到化合物6-溴-8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-7-氟-2-甲氧基喹啉(600 mg，1.60 mmol，收率：76.4%)，為黃色固體。LCMS (ESI): [M+H] += 377.1。
第八步：在氮氣氣氛下，將4,5-雙二苯基膦-9,9-二甲基氧雜蒽(94 mg，0.16 mmol)和三(二亞苄基丙酮)二鈀(149 mg，0.16 mmol)加入到含有6-溴-8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-7-氟-2-甲氧基喹啉(600 mg，1.60 mmol)、氨基甲酸叔丁酯(227 mg，1.92 mmol)、碳酸銫(1.60 g，4.80 mmol)和1,4-二氧六環(10 mL)的溶液中，反應液在100°C下攪拌12小時，將反應液倒入水中(30 mL)，並用乙酸乙酯(30mL x 3)萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾並濃縮後經柱層析(矽膠，0-20%梯度的乙酸乙酯/石油醚)純化，得到化合物N-[8-(4,4-二氟呱啶基)-7-氟-2-甲氧基(6-喹啉基)](叔丁氧基)甲醯胺(400 mg，0.97 mmol，收率：60.8%)，為黃色固體。LCMS (ESI): [M+H] += 412.3。
第九步：含有N-[8-(4,4-二氟呱啶基)-7-氟-2-甲氧基(6-喹啉基)](叔丁氧基)甲醯胺(400 mg，0.97 mmol)和三氟乙酸(2 mL)的反應液在20°C下攪拌1小時，反應液濃縮後，加入飽和碳酸氫鈉水溶液將反應液將pH調節至接近8，然後用乙酸乙酯(30 mL x 3)萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾並濃縮後得到化合物8-(4,4-二氟呱啶基)-7-氟-2-甲氧基-6-喹啉胺(300 mg，粗品)，為黃色固體。LCMS (ESI): [M+H] += 312.1。
第十步：將2-(6-氮雜螺[2.5]辛-6-基)-4-溴苯甲醯氯(380 mg，1.16 mmol)加到含有8-(4,4-二氟呱啶基)-7-氟-2-甲氧基-6-喹啉胺(300 mg，0.96 mmol)、N,N-二異丙基乙胺(635 mg，4.82 mmol)和四氫呋喃(5 mL)的溶液中，反應液在20°C下攪拌12小時，將反應液倒入水中(30 mL)並用乙酸乙酯(30 mL x 3)萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾並濃縮後經柱層析(矽膠，0-20%梯度的乙酸乙酯/石油醚)純化得到化合物[2-(6-氮雜螺[2.5]辛-6-基)-4-溴苯基]-N-[8-(4,4-二氟呱啶基)-7-氟-2-甲氧基(6-喹啉基)]甲醯胺(260 mg，0.43 mmol，收率：44.7%)，為黃色固體。LCMS (ESI): [M+H] += 603.3。
第十一步：含有[2-(6-氮雜螺[2.5]辛-6-基)-4-溴苯基]-N-[8-(4,4-二氟呱啶基)-7-氟-2-甲氧基(6-喹啉基)]甲醯胺(200 mg，0.33 mmol)、鹽酸吡啶(391 mg，3.31 mmol)和N,N-二甲基甲醯胺(5 mL)的溶液在100°C下攪拌12小時，反應液過濾得到化合物4-溴-N-(8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-7-氟-2-羥基喹啉-6-基)-2-(6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲醯胺(140 mg，0.24 mmol，收率：71.7%)，為白色固體。LCMS (ESI): [M+H] += 589.1。
第十二步：含有[2-(6-氮雜螺[2.5]辛-6-基)-4-溴苯基]-N-[8-(4,4-二氟呱啶基)-7-氟-2-羥基(6-喹啉基)]甲醯胺(140 mg，0.24 mmol)、2-羥基乙磺醯胺(45 mg，0.36 mmol)、磷酸鉀(154 mg, 0.71 mmol)、碘化亞銅(46 mg，0.24 mmol)、反式-N，N'-二甲基環己烷-1,2-二胺(34 mg，0.24 mmol)和1,4-二氧六環(5 mL)的反應液在氮氣氛圍下100°C攪拌12小時，將反應液倒入水中(20 mL)並用乙酸乙酯(20mL x 3)萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾並濃縮後經快速色譜柱純化(C18，0-100%梯度的乙腈/水)，得到化合物N-(8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-7-氟-2-羥基喹啉-6-基)-4-((2-羥乙基)磺醯胺基)-2-(6-氮雜螺[2.5]辛-6-基)苯甲醯胺(22.2 mg，0.035 mmol，收率：14.8%)，為白色固體。LCMS (ESI): [M+H] += 634.4， 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12.30 (s, 1H), 10.90 (s, 1H), 8.62 (s, 1H), 8.04 – 7.97 (m, 1H), 7.95 (d, J= 9.6 Hz, 1H), 7.26-6.98 (m, 2H), 7.08 (s, 1H), 6.52 (d, J= 9.6 Hz, 1H), 3.76 (t, J= 6.0 Hz, 2H), 3.23-2.97 (m, 4H), 2.87-2.76 (m, 4H), 2.72-2.58 (m, 2H), 2.06 – 1.97 (m, 4H), 1.57 (s, 4H), 0.37 (s, 4H)。
實施例77： N-(8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-7-氟-2-甲氧基喹啉-6-基)-4-((2-羥乙基)磺醯胺基)-2-(6-氮雜螺[2.5]辛-6-基)苯甲醯胺
第一步：含有[2-(6-氮雜螺[2.5]辛-6-基)-4-溴苯基]-N-[8-(4,4-二氟呱啶基)-7-氟-2-甲氧基(6-喹啉基)]甲醯胺(40 mg，0.07 mmol)、2-羥基乙磺醯胺(13 mg，0.10 mmol)，磷酸鉀(43 mg，0.20 mmol)、碘化亞銅(13 mg，0.066 mmol)、反式-N,N'-二甲基環己烷-1,2-二胺(10 mg，0.066 mmol)和1,4-二氧六環(5 mL)的反應液在氮氣氛圍下攪拌12小時，將反應液倒入水中(20 mL)並用乙酸乙酯(20mL x 3)萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾並濃縮後快速柱色譜純化(C18，0-100%梯度的乙腈/水)，得到化合物N-(8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-7-氟-2-甲氧基喹啉-6-基)-4-((2-羥乙基)磺醯胺基)-2-(6-氮雜螺[2.5]辛-6-基)苯甲醯胺(4.0 mg，6.2 umol，收率：9.3%)，為白色固體。LCMS (ESI): [M+H] += 648.4； 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12.38 – 12.32 (m, 1H), 10.21 (s, 1H), 8.67 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 8.23 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 8.05 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.31 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 7.15 (dd, J= 8.4, 2.0 Hz, 1H), 7.01 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 4.99 (s, 1H), 4.02 (s, 3H), 3.79 (t, J= 6.4 Hz, 2H), 3.58 (t, J= 5.6 Hz, 4H), 3.37 (s, 2H), 3.01 (t, J= 5.2 Hz, 4H), 2.26-2.15 (m, 4H), 1.61 (s, 4H), 0.40 (s, 4H)。
實施例78：N-(2-氨基-8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-7-氟喹啉-6-基)-4-((2-羥乙基)磺醯胺基)-2-(6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲醯胺
第一步：含有6-溴-2-氯-7-氟-8-碘喹啉(1.00 g，2.59 mmol)、對甲氧基苄胺(2.30 g，12.94 mmol)、N,N-二異丙基乙胺(3.10 g，23.29 mmol)和乙腈(30 mL)的反應液在60°C下攪拌12小時，將反應液倒入水中(20 mL)並用乙酸乙酯(20 mL x 3)萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾並濃縮後經柱層析(矽膠，0-50%梯度的乙酸乙酯/石油醚)純化，得到化合物6-溴-7-氟-8-碘-N-(4-甲氧基苄基)喹啉-2-胺(1.20 g，2.46 mmol，收率：31.7%)，為黃色固體。LCMS (ESI): [M+H] += 487.0。
第二步：在氮氣氣氛下，將4,5-雙二苯基膦-9,9-二甲基氧雜蒽(145 mg，0.25 mmol)和三(二亞苄基丙酮)二鈀(230 mg，0.25 mmol)加入到含有6-溴-7-氟-8-碘-N-(4-甲氧基苄基)喹啉-2-胺(1.20 g，2.46 mmol)、4,4-二氟呱啶鹽酸鹽(431 mg，2.71 mmol)、碳酸銫(2.50 g，7.39 mmol)和1,4-二氧六環(20 mL)的混合溶液中，反應液在100°C下攪拌12小時，將反應混合物倒入水中(30 mL)並用乙酸乙酯(30 mL x 3)萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾並濃縮後經柱層析(矽膠，0-40%梯度的乙酸乙酯/石油醚)純化，得到化合物6-溴-8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-7-氟-N-(4-甲氧基苄基)喹啉-2-胺(400 mg，0.83 mmol，收率: 33.8%)，為黃色固體。LCMS (ESI): [M+H] += 480.2。
第三步：在氮氣氣氛下，將4,5-雙二苯基膦-9,9-二甲基氧雜蒽(43 mg，0.073 mmol)和三(二亞苄基丙酮)二鈀(68 mg，0.073 mmol)加入到含有6-溴-8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-7-氟-N-(4-甲氧基苄基)喹啉-2-胺(350 mg，0.73 mmol)、氨基甲酸叔丁酯(103 mg，0.87 mmol)、碳酸銫(727 mg，2.19 mmol)和1,4-二氧六環(5 mL)的溶液中，反應液在100°C下攪拌12小時，將反應液倒入水中(30 mL)，並用乙酸乙酯(30mL x 3)萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾並濃縮後經柱層析(矽膠，0-20%梯度的乙酸乙酯/石油醚)純化，得到化合物叔丁基(8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-7-氟-2-((4-甲氧基苄基)氨基)喹啉-6-基)氨基甲酸酯(240 mg，0.46 mmol，收率：63.8%)，為黃色固體。LCMS (ESI): [M+H] += 517.3。
第四步：含有叔丁基(8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-7-氟-2-((4-甲氧基苄基)氨基)喹啉-6-基)氨基甲酸酯(240 mg，0.46 mmol)和三氟乙酸(2 mL)的反應液在20°C下攪拌1小時，反應液濃縮後，加入飽和碳酸氫鈉水溶液將反應液將pH調節至接近8，然後用乙酸乙酯(30 mL x 3)萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾並濃縮後得到化合物8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-7-氟喹啉-2,6-二胺(140 mg，粗品)，為黃色固體。LCMS (ESI): [M+H] += 297.1。
第五步：將2-(6-氮雜螺[2.5]辛-6-基)-4-溴苯甲醯氯(186 mg，0.57 mmol)加到含有8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-7-氟喹啉-2,6-二胺(140 mg，0.47 mmol)、N,N-二異丙基乙胺(312 mg，2.36 mmol)和四氫呋喃(5 mL)的溶液中，反應液在20°C下攪拌12小時，將反應液倒入水中(30 mL)並用乙酸乙酯(30 mL x 3)萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾並濃縮後經柱層析(矽膠，0-100%梯度的乙酸乙酯/石油醚)純化得到化合物N-(2-氨基-8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-7-氟喹啉-6-基)-4-溴-2-(6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲醯胺(80 mg，0.14 mmol，收率：28.8%)，為黃色固體。LCMS (ESI): [M+H] += 590.3。
第六步：含有N-(2-氨基-8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-7-氟喹啉-6-基)-4-溴-2-(6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲醯胺(80 mg，0.14 mmol)、2-羥基乙磺醯胺(26 mg，0.20 mmol)、磷酸鉀(88 mg, 0.41 mmol)、碘化亞銅(26 mg, 0.14 mmol)、反式-N,N'-二甲基環己烷-1,2-二胺(20 mg，0.14 mmol)和1,4-二氧六環(5 mL)的反應液在氮氣氛圍下100攝氏度攪拌12小時，將反應液倒入水中(20 mL)並用乙酸乙酯(20mL x 3)萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾並濃縮後經快速柱色譜純化(C18，0-100%梯度的乙腈/水)，得到化合物N-(2-氨基-8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-7-氟喹啉-6-基)-4-((2-羥乙基)磺醯胺基)-2-(6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲醯胺(3.60 mg，5.7 umol，收率：4.2%)，為黃色固體。LCMS (ESI): [M+H] += 633.4， 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12.19 (s, 1H), 10.21 (s, 1H), 8.43 (s, 1H), 8.01 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.29 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 7.13 (dd, J= 8.4, 2.0 Hz, 1H), 6.76 (s, 3H), 6.40 (s, 1H), 4.94 (t, J= 5.6 Hz, 1H), 3.78 – 3.76 (m, 2H), 3.32-3.27(m, 4H), 3.15 (t, J= 6.8 Hz, 2H), 2.97 (d, J= 5.6 Hz, 4H), 2.17 (s, 4H), 1.58 (s, 4H), 0.37 (s, 4H)。
實施例79：N-(8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-7-氟-2-(甲基氨基)喹啉-6-基)-4-((2-羥乙基)磺醯胺基)-2-(6-氮雜螺[2.5]辛-6-基)苯甲醯胺
實施例79參照實施例3的類似合成路線製備得到的： LCMS (ESI): [M+H] += 647.4； 1HNMR (400MHz, DMSO) δ 12.10 (s, 1H), 10.16 (s, 1H), 8.40 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 8.00 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.80 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 7.27 (d, J= 2.4 Hz, 1H), 7.11 (dd, J= 8.4, 2.0 Hz, 1H), 7.06 (d, J= 4.8 Hz, 1H), 6.71 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 4.94 (t, J= 5.6 Hz, 1H), 3.76 (q, J= 6.4 Hz, 2H), 3.54 (d, J= 5.6 Hz, 4H), 3.36 (d, J= 6.4 Hz, 2H), 2.98 (d, J= 5.2 Hz, 4H), 2.91 (d, J= 4.8 Hz, 3H), 2.16 (q, J= 15.2, 13.6 Hz, 4H), 1.58 (s, 4H), 0.37 (s, 4H)。
實施例80：N-(8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-7-氟喹啉-6-基)-6-((2-羥乙基)磺醯胺基)-4-(6-氮雜螺[2.5]辛-6-基)煙醯胺
實施例80參照實施例3的類似合成路線製備得到的： LCMS (ESI): [M+H] += 619.4， 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 10.69 (s, 1H), 8.84 (dd, J= 4.0, 1.6 Hz, 1H), 8.43 (d, J= 7.6 Hz, 1H), 8.38 – 8.30 (m, 1H), 8.23 (s, 1H), 7.50 (dd, J= 8.4, 4.0 Hz, 1H), 6.66 (s, 1H), 3.78 (t, J= 6.8 Hz, 2H), 3.55 (t, J= 5.6 Hz, 4H), 3.42 (s, 2H), 3.23 – 3.05 (m, 4H), 2.26 – 2.08 (m, 4H), 1.52 – 1.44 (m, 4H), 0.34 (s, 4H)。
實施例81：N-(8-(4,4-二氟呱啶-1-基)異喹啉-6-基)-4-(2-羥乙基磺醯胺基)-2-(6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲醯胺
實施例81參照實施例3的類似合成路線製備得到的： LCMS (ESI): [M+H] += 600.4， 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 11.96 (s, 1H), 10.18 (s, 1H), 9.18 (s, 1H), 8.26 (d, J= 5.8 Hz, 1H), 8.11 (d, J= 1.6 Hz, 1H), 7.68 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.56 (d, J= 5.6 Hz, 1H), 7.22 (d, J= 1.8 Hz, 1H), 6.99 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 6.86 (dd, J= 8.4, 2.1 Hz, 1H), 5.28 – 4.88 (m, 1H), 3.60 (t, J= 6.4 Hz, 2H), 3.17 (s, 2H), 3.10 (dd, J= 26.0, 6.2 Hz, 4H), 2.83 (t, J= 5.2 Hz, 4H), 2.15 (tt, J= 13.6, 11.6, 5.4 Hz, 4H), 1.41 (t, J= 5.2 Hz, 4H), 0.18 (s, 4H)。
實施例82：2-{6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基}-N-[8-(4,4-二氟呱啶-1-基)噌啉-6-基]-4-(2-羥基乙磺醯氨基)苯甲醯胺
實施例82參照實施例3的類似合成路線製備得到的： LCMS (ESI): [M+H] += 601.2， 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 12.06 (s, 1H), 10.15 (s, 1H), 9.24 (br s, 1H), 8.24 (s, 1H), 8.12 (br s, 1H), 7.84 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.35 (s, 1H), 7.18 (s, 1H), 7.06 (dd, J= 1.6, 8.4 Hz, 1H), 5.53 - 4.23 (m, 1H), 3.77 (t, J= 6.4 Hz, 2H), 3.72 - 3.64 (m, 4H), 3.42 - 3.39 (m, 2H), 3.07 - 2.94 (m, 4H), 2.33 - 2.22 (m, 4H), 1.64 - 1.52 (m, 4H), 0.35 (s, 4H)。
實施例83：N-(8-(4,4-二氟呱啶-1-基) 喹喔啉-6-基)-4-((2-羥乙基)磺醯胺基)-2-(6-氮雜螺環[2.5]辛烷-6-基)苯甲醯胺
實施例83參照實施例3的類似合成路線製備得到的： LCMS (ESI): [M+H] +=601.4。 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 12.95 (s, 1H), 8.80 (d, J= 1.9 Hz, 1H), 8.69 (d, J= 1.9 Hz, 1H), 8.21 (d, J= 8.6 Hz, 1H), 7.98 (d, J= 2.1 Hz, 1H), 7.91 (d, J= 2.2 Hz, 1H), 7.39 (d, J= 2.2 Hz, 1H), 7.15 (dd, J= 8.6, 2.1 Hz, 1H), 4.02 (t, J= 5.6 Hz, 2H), 3.59 (t, J= 5.7 Hz, 4H), 3.33 (s, 2H), 3.11 (t, J= 5.4 Hz, 4H), 2.31 (tt, J= 12.9, 5.5 Hz, 4H), 1.71 (s, 4H), 0.45 (s, 4H)。
實施例84：N-(2-氨基-8-(4,4-二氟呱啶-1-基)喹唑啉-6-基)-4-((2-羥乙基)磺醯胺基)-2-(6-氮雜螺[2.5]辛-6-基)苯甲醯胺
第一步：3-氟-2-硝基苯甲醛(5.00 g，28.68 mmol)、乙二醇(2.68 g，43.01 mmol)和對甲苯磺酸一水合物(278 mg，1.43 mmol)加到甲苯(40mL)中，反應液100°C攪拌4小時。反應液倒入水(50 mL)中，乙酸乙酯(50 mL x 3)萃取，有機相合併，無水硫酸鈉乾燥，濃縮得粗品。粗品快速柱色譜(矽膠，10-25%梯度得乙酸乙酯/石油醚)得2-(3-氟-2-硝基苯基)-1,3-二氧戊環(6.40 g，粗品)，為淡黃色油狀液體。LCMS (ESI): [M+H] +=214.1。
第二步：2-(3-氟-2-硝基苯基)-1,3-二氧戊環(5.10 g，23.93 mmol)、4,4-二氟呱啶鹽酸鹽(5.71 g，35.89 mmol)、碳酸鉀(8.43 g，59.81 mmol)加到二甲基亞碸(40 mL)中，反應液130°C攪拌16小時。反應液倒入水(50 mL)中，乙酸乙酯(50 mL x 3)萃取，有機相合併，飽和氯化鈉溶液(30 mL x 3)洗，無水硫酸鈉乾燥，濃縮得1-(3-(1,3-二氧戊環-2-基)-2-硝基苯基)-4,4-二氟呱啶(6.00 g，粗品)。LCMS (ESI): [M+H] +=315.2。
第三步：1-(3-(1,3-二氧戊環-2-基)-2-硝基苯基)-4,4-二氟呱啶(5.00 g，15.91 mmol)、氯化銨(1.72 g，31.82 mmol)、鐵粉(4.49 g，79.54 mmol)加到四氫呋喃(20 mL)、乙醇(20 mL)、水(5 mL)中，反應液升溫至80°C反應16小時。反應液抽濾，濾液倒入水(30 mL)中，乙酸乙酯(30 mL x 3)萃取，有機相合併，無水硫酸鈉乾燥，濃縮得粗品。粗品快速柱色譜(矽膠，0-9%梯度得乙酸乙酯/石油醚)得2-氨基-3-(4,4-二氟呱啶-1-基)苯甲醛(2.10 g，8.75 mmol，收率：54.9%)，為黃色固體。LCMS (ESI): [M+H] +=241.1。
第四步：2-氨基-3-(4,4-二氟呱啶-1-基)苯甲醛(1.80 g，7.49 mmol)，加到N,N-二甲基甲醯胺(15 mL)中，N-溴代丁二醯亞胺(1.47 g，8.24 mmol)加入反應液，反應液20°C攪拌小時。反應液倒入水(30 mL)中，乙酸乙酯(30 mL x 3)萃取，有機相合併，飽和氯化鈉水溶液(30 mL x 3)洗，無水硫酸鈉乾燥，濃縮，得粗品。粗品快速柱色譜(矽膠，0-9%梯度得乙酸乙酯/石油醚)得2-氨基-5-溴-3-(4,4-二氟呱啶-1-基)苯甲醛(1.60 g，5.01 mmol，收率：66.9%)，為黃色固體。LCMS (ESI): [M+H] +=319.1。
第五步：2-氨基-5-溴-3-(4,4-二氟呱啶-1-基)苯甲醛(1.60 g，5.01 mmol)、碳酸胍(9.12 g，50.13 mmol)加到N,N-二甲基乙醯胺(10 mL)中，反應液升溫至130°C攪拌2小時。反應液冷卻至室溫後，倒入水(30 mL)中，抽濾，濾得固體乾燥得6-溴-8-(4,4-二氟呱啶-1-基)喹唑啉-2-胺(1.60 g，4.66 mmol，收率：93.0%)，為黃色固體。LCMS (ESI): [M+H] +=343.1； 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 9.82 (s, 1H), 7.59 (d, J= 2.2 Hz, 1H), 7.30 (d, J= 2.3 Hz, 1H), 6.98 (s, 2H), 2.91 (s, 4H), 2.29 – 2.06 (m, 4H)。
第六步：6-溴-8-(4,4-二氟呱啶-1-基)喹唑啉-2-胺(1.45 g，4.22 mmol)、二碳酸二叔丁酯(4.61 g，21.13 mmol)、4-二甲氨基吡啶(105 mg，0.85 mmol)、三乙胺(2.18 g，21.13 mmol)加到二氯甲烷(20 mL)中，反應液50°C攪拌4小時。反應液倒入水(30 mL)中，二氯甲烷(30 mL x 3)萃取，有機相合併，無水硫酸鈉乾燥，濃縮得粗品。粗品快速柱色譜(矽膠，0-9%梯度得乙酸乙酯/石油醚)得叔丁基(6-溴-8-(4,4-二氟呱啶-1-基)喹唑啉-2-基)(叔丁氧基羰基)氨基甲酸酯(1.72 g，3.16 mmol，收率：74.9%)，為淡黃色固體。LCMS (ESI): [M+H] +=369.1； 1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 9.22 (s, 1H), 7.64 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 7.28 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 3.54 (t, J= 5.5 Hz, 4H), 2.24 (tt, J= 13.2, 5.3 Hz, 4H), 1.50 (s, 18H)。
第七步：氮氣氛圍下，叔丁基(6-溴-8-(4,4-二氟呱啶-1-基)喹唑啉-2-基)(叔丁氧基羰基)氨基甲酸酯(1.00 g，1.84 mmol)、氨基甲酸叔丁酯(653 mg，5.52 mmol)、甲烷磺酸[9,9-二甲基-4,5-雙(二苯基膦)氧雜蒽] [2'-氨基-1,1'-聯苯]鈀(II)二氯甲烷加合物(178 mg，0.18 mmol)、碳酸銫(1.23 g，3.68 mmol)加到1,4-二氧六環(10 mL)中，氮氣置換後，反應液升溫至110°C攪拌3小時。反應液倒入水(30 mL)中，乙酸乙酯(30 mL x 3)萃取，有機相合併，無水硫酸鈉乾燥，濃縮得粗品。粗品快速柱色譜(矽膠，10-25%梯度得乙酸乙酯/石油醚)得叔丁基(叔丁氧基羰基)(6-(叔丁氧基羰基)氨基)-8-(4,4-二氟呱啶-1-基)喹唑啉-2-基)氨基甲酸酯(800 mg，1.38 mmol，收率：75.0%)，為黃色固體。LCMS (ESI): [M+H] +=580.6。
第八步：叔丁基(叔丁氧基羰基)(6-(叔丁氧基羰基)氨基)-8-(4,4-二氟呱啶-1-基)喹唑啉-2-基)氨基甲酸酯(1.00 g，1.72 mmol)加到二氯甲烷(5 mL)和三氟乙酸(5 mL)混合溶液中，反應液25°C攪拌4小時。反應液濃縮得粗品，粗品用飽和碳酸氫鈉水溶液調至pH=7，二氯甲烷(20 mL x 3)萃取，有機相合併，無水硫酸鈉乾燥，濃縮得8-(4,4-二氟呱啶-1-基)喹唑啉-2,6-二胺(200 mg，0.72 mmol，收率：41.5%)，為綠色固體。LCMS (ESI): [M+H] +=280.4； 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 8.73 (s, 1H), 6.66 (d, J= 2.3 Hz, 1H), 6.37 (d, J= 2.2 Hz, 1H), 6.14 (s, 2H), 5.05 (s, 2H), 3.34 (s, 4H), 2.17 (td, J= 14.1, 13.5, 6.4 Hz, 4H)。
第九步：8-(4,4-二氟呱啶-1-基)喹唑啉-2,6-二胺(200 mg，0.72 mmol)、N,N-二異丙基乙胺(236 mg，1.79 mmol)、4-溴-2-(6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲醯氯(471 mg，1.43 mmol)加到二氯甲烷(5 mL)中，反應液25°C攪拌2小時。反應液倒入水(20 mL)中，二氯甲烷(20 mL x 3)萃取，有機相合併，無水硫酸鈉乾燥，濃縮得粗品。粗品快速柱色譜(矽膠，25-50%梯度得乙酸乙酯/二氯甲烷)得N-(2-氨基-8-(4,4-二氟呱啶-1-基)喹唑啉-6-基)-4-溴-2-(6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲醯胺(190 mg，0.33mmol，收率：46.4%)，為藍綠色固體。LCMS (ESI): [M+H] +=573.3。
第十步：氮氣氛圍下，N-(2-氨基-8-(4,4-二氟呱啶-1-基)喹唑啉-6-基)-4-溴-2-(6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲醯胺(60 mg，0.10 mmol)、2-羥基乙磺醯胺(27 mg，0.21 mmol)、磷酸鉀(91 mg，0.42 mmol)、碘化亞銅(41 mg，0.21 mmol)、(1S,2S)-(+)-N,N'-二甲基-1,2-環己二胺(60 mg，0.42 mmol)加到N.N-二甲基甲醯胺(1 mL)中，氮氣置換，反應液115°C攪拌2小時。反應液抽濾，濾液倒入飽和氯化銨溶液(30 mL)中，乙酸乙酯(30 mL x 3)萃取，有機相合併，飽和氯化鈉溶液(30 mL x 3)洗，無水硫酸鈉乾燥，濃縮得粗品。粗品快速柱色譜(C18，25-45%梯度得乙腈/水)得N-(2-氨基-8-(4,4-二氟呱啶-1-基)喹唑啉-6-基)-4-((2-羥乙基)磺醯胺基)-2-(6-氮雜螺[2.5]辛-6-基)苯甲醯胺(15 mg，0.105 mmol，收率：23.2%)，為灰綠色固體。LCMS (ESI): [M+H] +=616.6； 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 11.89 (s, 1H), 9.02 (s, 1H), 8.08 (s, 1H), 7.85 (d, J= 7.2 Hz, 1H), 7.14 (d, J= 95.5 Hz, 3H), 6.64 (s, 2H), 3.75 (d, J= 6.0 Hz, 2H), 3.45 (d, J= 5.5 Hz, 6H), 2.98 (t, J= 5.0 Hz, 4H), 2.21 (dd, J= 16.6, 10.2 Hz, 4H), 1.58 (s, 4H), 0.35 (s, 4H)。
實施例85：N-(8-(4，4-二氟呱啶-1-基)-3-(二甲基磷醯基)喹啉-6-基)-4-(2-羥乙基磺醯胺基)-2-(6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲醯胺
第一步：向濃硫酸(20 mL)和水(15 mL)的混合溶液中加入甘油(63.00 g，684.17 mmol) ，將混合物加熱至100°C攪拌15分鐘。將混合物冷卻到40°C後，向該混合液中加入4-溴-2-氟苯胺(10.00 g，52.63 mmol)和3-硝基苯磺酸鈉鹽(11.96 g，52.63 mmol)，將混合物加熱至100°C攪拌15小時。待反應結束後將反應混合物加入水(100 mL)，用乙酸乙酯(100 mL x 3)萃取。合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液旋乾得殘餘物。殘留物用快速柱色譜純化(矽膠，0-25%梯度的乙酸乙酯/石油醚)得到黃色固體6-溴-8-氟喹啉(10.00 g，44.25 mmol，收率：84.0%)。LCMS (ESI): [M+H] += 226.0。
第二步：向6-溴-8-氟喹啉(8.00 g，35.39 mmol)的醋酸(80 mL)的溶液中加入N-碘代琥珀醯亞胺(11.94 g，53.08 mmol)，將混合物加熱至120°C攪拌36小時。待反應完成後，反應液倒入飽和碳酸氫鈉水溶液(200 mL)，並用乙酸乙酯(200 mL x 3)萃取，合併有機相，飽和氯化鈉水溶液(100 mL)洗滌有機層，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，粗品用快速柱色譜純化(矽膠，0-20%梯度的乙酸乙酯/石油醚)得到黃色固體6-溴-8-氟-3-碘喹啉(4.20 g，11.93 mmol，收率：33.7%)。LCMS (ESI): [M+H] += 351.9； 1HNMR (400 MHz, DMSO) δ 9.12 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 8.92 (t, J= 1.7 Hz, 1H), 8.07 (t, J= 1.6 Hz, 1H), 7.92 (dd, J= 10.2, 2.1 Hz, 1H)。
第三步：向6-溴-8-氟-3-碘喹啉(4.00 g，11.36 mmol)和4,4-二氟呱啶鹽酸鹽 (2.71 g， 17.05 mmol) 的N,N-二甲基甲醯胺(40 mL)的溶液中加入碳酸鉀(4.81 g，34.09 mmol)，混合物於100°C攪拌24小時。待反應完成後，向反應混合物中加入水(40 mL)，用乙酸乙酯(100 mL x 3)萃取，合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液旋乾得殘餘物。殘留物用快速柱色譜純化(矽膠，0-50%梯度的乙酸乙酯/石油醚)得到黃色固體8-(4,4-二氟呱啶基)-6-溴-3-碘喹啉(4.20 g，9.27 mmol，收率：81.6%)。LCMS (ESI): [M+H] += 453.0。
第四步：在氮氣氣氛下，向8-(4,4-二氟呱啶基)-6-溴-3-碘喹啉(2.00 g，4.41 mmol)和二甲基氧化膦(344 mg，4.41 mmol)的乙醇(20 mL)的溶液中加入，三苯基膦(231 mg，0.88 mmol)、醋酸鈀(101 mg，0.44 mmol)和三乙胺(1367 mg，13.24 mmol)溶液，混合物於80°C攪拌6小時。待反應完成後，向反應混合物中加入水(40 mL)，用二氯甲烷(50 mL x 3)萃取。合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液旋乾得殘餘物。殘留物用快速柱色譜純化(矽膠，0-20%梯度的甲醇/二氯甲烷)得到黃色固體6-溴-8-(4，4-二氟呱啶-1-基)喹啉-3-基)二甲基氧化膦(1.10 g，2.73 mmol，收率：61.8%)。LCMS (ESI): [M+H] += 403.1； 1HNMR (400 MHz, DMSO) δ 9.16 (dd, J= 4.2, 2.0 Hz, 1H), 8.71 (dd, J= 12.5, 2.1 Hz, 1H), 7.94 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 7.34 (d, J= 2.1 Hz, 1H), 3.53 (t, J= 5.7 Hz, 4H), 2.20 (td, J= 14.0, 6.9 Hz, 4H), 1.80 (d, J= 13.6 Hz, 6H)。
第五步：在氮氣氣氛下，將6-溴-8-(4，4-二氟呱啶-1-基)喹啉-3-基)二甲基氧化膦(1.00 g，2.48 mmol)、氨基甲酸叔丁酯(435 mg，3.72 mmol)、三(二亞苄基丙酮)二鈀 (227 mg，0.25 mmol)、4,5-雙二苯基膦-9,9-二甲基氧雜蒽(287 mg，0.50 mmol)、碳酸銫(2.42 g，7.44 mmol)，放入瓶中，1,4-二氧六環(10 mL)加入反應瓶，混合物在110°C下攪拌8小時。反應結束後降溫至室溫，混合物加水稀釋(30 mL)，用乙酸乙酯(50 mL×3)萃取，有機相加無水硫酸鈉乾燥，過濾，然後濃縮並通過矽膠柱層析(矽膠，0-10%梯度的甲醇/二氯甲烷)純化得(8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-3-(二甲基磷醯基)喹啉-6-基)氨基甲酸叔丁酯(600 mg，1.36 mmol，收率：55.0%)，為黃色固體。LCMS (ESI): [M+H] += 440.3。
第六步：將(8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-3-(二甲基磷醯基)喹啉-6-基)氨基甲酸叔丁酯(500 mg，1.13 mmol)溶解在二氯甲烷(5 mL)中，滴加三氟乙酸(2.5 mL)中，反應混合物在25°C下攪拌5小時。減壓除去溶劑，將殘渣溶解在水(10 mL)中，然後用飽和碳酸氫鈉水溶液(40 mL)將水層調節至pH = 8，並用二氯甲烷(50 mL×3)萃取，合併有機相，飽和氯化鈉水溶液(50 mL)洗滌有機層，無水硫酸鈉乾燥，減壓濃縮，得到綠色固體6-氨基-8-(4，4-二氟呱啶-1-基)喹啉-3-基)二甲基氧化膦(400 mg，1.17 mmol，收率：93.2%)。LCMS (ESI): [M+H] += 340.2。
第七步：向6-氨基-8-(4,4-二氟呱啶-1-基)喹啉-3-基)二甲基氧化膦(400 mg，1.17 mmol)和2-(6-氮雜螺[2.5]辛-6-基)-4-溴苯甲酸 (402 mg，1.30 mmol) 的二氯甲烷(8 mL)的溶液中加入N,N,N′,N′-四甲基-O-(7-氮雜苯並三唑-1-基)六氟磷酸脲(686 mg，1.77 mmol)和N,N-二異丙基乙胺(466 mg，3.54 mmol)，混合物於100°C攪拌24小時。待反應完成後，向反應混合物中加入水(10 mL)，用二氯甲烷(20 mL x 3)萃取。合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液旋乾得殘餘物。殘留物用快速柱色譜純化(矽膠，0-20%梯度的甲醇/二氯甲烷)得到黃色固體4-溴-N-(8-(4，4-二氟呱啶-1-基)-3-(二甲基磷醯基)喹啉-6-基)-2-(6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲醯胺(500 mg，0.792 mmol，收率：67.2%)。LCMS (ESI): [M+H] += 631.3。
第八步：在氮氣氣氛下，將2-羥乙烷磺醯胺 (61 mg，0.47 mmol)、碘化亞銅(61 mg，0.32 mmol)、磷酸鉀(274 mg，1.27 mmol)和反式-N，N'-二甲基環己烷-1,2-二胺 (91 mg，0.63 mmol)放入瓶中，N,N-二甲基甲醯胺(4 mL)加入反應瓶，混合物在50°C下攪拌0.5小時，再將4-溴-N-(8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-3-(二甲基磷醯基)喹啉-6-基)-2-(6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲醯胺(200 mg，0.32 mmol)加入瓶中，混合物在50°C下攪拌5分鐘後。將反應體系升高溫度至120°C攪拌5小時。反應結束後將體系降溫室後，將反應液倒入水(10 mL)中，用二氯甲烷(30 mL×3)萃取，有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾並濃縮後製備HPLC純化(C18，0-100%梯度的乙腈/水)，得到化合物固體N-(8-(4，4-二氟呱啶-1-基)-3-(二甲基磷醯基)喹啉-6-基)-4-(2-羥乙基磺醯胺基)-2-(6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲醯胺 (105 mg，0.15 mmol，收率：49.0%)，為白色固體。LCMS(ESI)m/z: [M+H] +=676.4； 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 11.94 (s, 1H), 10.12 (s, 1H), 9.02 (dd, J= 4.3, 2.0 Hz, 1H), 8.64 (dd, J= 12.7, 2.0 Hz, 1H), 8.29 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 7.86 (d, J= 8.5 Hz, 1H), 7.50 (d, J= 2.2 Hz, 1H), 7.19 (d, J= 2.1 Hz, 1H), 7.06 (dd, J= 8.5, 2.0 Hz, 1H), 4.97 (s, 1H), 3.77 (ddt, J= 8.0, 6.1, 2.0 Hz, 2H), 3.55 (t, J= 5.6 Hz, 4H), 3.35 (t, J= 6.7 Hz, 2H), 3.01 (t, J= 5.3 Hz, 4H), 2.24 (s, 4H), 1.80 (d, J= 13.5 Hz, 6H), 1.58 (s, 4H), 0.35 (s, 4H)。
實施例86：乙基6-(2-{6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基}-4-(2-羥基乙磺醯氨基)苯甲醯氨基)-8-(4,4-二氟呱啶-1-基)喹啉-3-甲酸基酯
第一步：將2-氨基-5-溴-3-氟苯甲酸 (5.00 g，21.3 mmol)溶於四氫呋喃 (50.0 mL)中，氮氣氛圍下0 °C加入硼烷四氫呋喃 (64.1 mL，64.1 mmol)，20-40 °C攪拌48小時。0 °C下使用甲醇(100 mL)淬滅反應，反應液減壓濃縮。殘留物用快速柱色譜純化 (矽膠，0-10%梯度的四氫呋喃/石油醚)得到白色固體 (2-氨基-5-溴-3-氟苯基)甲醇 (4.48 g，14.9 mmol，收率：70.0%)。LCMS (ESI): [M+H] += 221.9； 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 7.19 (dd, J= 2.4, 10.8 Hz, 1H), 7.13 (s, 1H), 5.27 (t, J= 5.6 Hz, 1H), 5.07 (br s, 2H), 4.41 (d, J= 5.6 Hz, 2H)。
第二步：將 (2-氨基-5-溴-3-氟苯基)甲醇 (4.28 g，19.4 mmol)溶於1，2-二氯乙烷 (84.0 mL)中，加入二氧化錳 (19.7 g，194 mmol)，25°C攪拌16小時。反應液過濾減壓濃縮後得到棕色固體2-氨基-5-溴-3-氟苯(甲)醛 (4.00 g，16.5 mmol，收率：85.0%)。LCMS (ESI): [M+H] += 220.0; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 9.85 (s, 1H), 7.67 (br s, 1H), 7.58 (br d, J= 10.8 Hz, 1H), 7.14 (br s, 2H)。
第三步：將2-氨基-5-溴-3-氟苯(甲)醛 (4.00 g，18.3 mmol)和乙基丙-2-炔酯 (2.16 g，22.0 mmol)溶於乙醇 (80.0 mL)中，加入L-脯氨酸 (1.07 g，9.17 mmol)，80 °C 攪拌16小時。反應液加入水 (100 mL)，使用乙酸乙酯 (200 mL x 2)萃取，有機相乾燥過濾濃縮，殘留物用快速柱色譜純化 (矽膠，0-9%梯度的四氫呋喃/石油醚)得到橙色固體乙基6-溴-8-氟喹啉-3-甲酸基酯 (4.77 g，14.3 mmol，收率：78.0%)。LCMS (ESI): [M+H] += 297.9； 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 9.31 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 8.99 - 8.96 (m, 1H), 8.36 - 8.32 (m, 1H), 8.01 (dd, J= 2.0, 10.0 Hz, 1H), 4.43 (q, J= 7.2 Hz, 2H), 1.39 (t, J= 7.2 Hz, 3H)。
第四步：將乙基6-溴-8-氟喹啉-3-甲酸基酯 (4.67 g，15.6 mmol)溶於N-甲基吡咯烷酮 (90.0 mL)中，加入鹽酸4,4-二氟呱啶 (3.21 g，20.3 mmol)和碳酸鉀 (6.50 g，47.0 mmol)，140 °C攪拌16小時。反應液加入水 (200 mL)，使用乙酸乙酯 (200 mL x 2)萃取，有機相乾燥過濾濃縮，殘留物用快速柱色譜純化 (矽膠，0-5%梯度的四氫呋喃/石油醚)得到黃色固體乙基6-溴-8-(4,4-二氟呱啶-1-基)喹啉-3-甲酸基酯 (2.50 g，5.95 mmol，收率：38.0%)。LCMS (ESI): [M+H] += 399.0； 1H NMR (400 MHz, CHLOROFORM-d) δ ppm 9.33 (d, J= 1.6 Hz, 1H), 8.60 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 7.63 (d, J= 1.6 Hz, 1H), 7.21 (d, J= 1.6 Hz, 1H), 4.40 (q, J= 7.2 Hz, 2H), 3.46 (br t, J= 4.8 Hz, 4H), 2.34 - 2.13 (m, 4H), 1.38 (t, J= 7.2 Hz, 3H)。
第五步：將乙基6-溴-8-(4,4-二氟呱啶-1-基)喹啉-3-甲酸基酯 (2.68 g，8.17 mmol)和二苯基甲亞胺 (1.78 g，9.80 mmol)溶於二氧六環 (50.0 mL)中，加入碳酸銫 (7.98 g，24.5 mmol)和4,5-雙 (二苯基膦)-9,9-二甲基雜蒽 (0.95 g，1.63 mmol)和三 (二亞苄基丙酮)二鈀 (0.75 g，0.82 mmol)，氮氣氛圍下80 °C攪拌16小時。反應液加入水 (100 mL)，使用乙酸乙酯 (200 mL x 2)萃取，有機相乾燥過濾濃縮，殘留物用快速柱色譜純化 (矽膠，0-9%梯度的四氫呋喃/石油醚)得到黃色固體乙基 8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-6-[(二苯甲基負離子烯)氨基]喹啉-3-甲酸基酯 (3.20 g，6.28 mmol，收率：77.0%)。LCMS (ESI): [M+H] += 429.1； 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 8.89 - 8.56 (m, 1H), 8.07 (br d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.72 (br d, J= 7.2 Hz, 2H), 7.56 (br d, J= 7.2 Hz, 1H), 7.53 - 7.47 (m, 2H), 7.39 (dd, J= 4.0, 8.0 Hz, 1H), 7.34 - 7.27 (m, 3H), 7.27 - 7.19 (m, 2H), 6.85 (s, 1H), 3.31 - 3.25 (m, 4H), 2.18 - 2.02 (m, 4H)。
第六步：將乙基 8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-6-[(二苯甲基負離子烯)氨基]喹啉-3-甲酸基酯 (3.10 g，6.21 mmol)溶於乙醇 (60.0 mL)中，加入乙酸鈉 (1.53 g，18.6 mmol)和鹽酸羥胺 (0.86 g，12.4 mmol)，25 °C攪拌2小時。反應液加入水 (100 mL)，使用乙酸乙酯 (200 mL x 2)萃取，有機相乾燥過濾濃縮，殘留物用快速柱色譜純化 (矽膠，0-27%梯度的四氫呋喃/石油醚)得到黃色固體乙基6-氨基-8-(4,4-二氟呱啶-1-基)喹啉-3-甲酸基酯 (1.70 g，4.90 mmol，收率：79.0%)。LCMS (ESI): [M+H] += 336.1； 1H NMR (400 MHz, CHLOROFORM-d) δ ppm 9.16 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 8.53 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 6.76 - 6.63 (m, 2H), 4.46 (q, J= 7.2 Hz, 2H), 4.01 (br s, 2H), 3.49 (br t, J= 5.6 Hz, 4H), 2.39 - 2.26 (m, 4H), 1.48 - 1.43 (m, 3H)。
第七步： 將乙基6-氨基-8-(4,4-二氟呱啶-1-基)喹啉-3-甲酸基酯 (1.70 g，5.07 mmol)溶於四氫呋喃 (34.0 mL)中，加入二異丙基乙胺 (6.55 g，50.6 mmol)，加入4-碘-2-(6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲醯氯化 (2.86 g，7.60 mmol)，25 °C攪拌16小時。反應液加入水 (100 mL)，使用乙酸乙酯 (200 mL x 2)萃取，有機相乾燥過濾濃縮，殘留物用快速柱色譜純化 (矽膠，0-17%梯度的四氫呋喃/石油醚)得到黃色固體乙基6-(2-{6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基}-4-碘苯甲醯氨基)-8-(4,4-二氟呱啶-1-基)喹啉-3-甲酸基酯 (3.50 g，4.46 mmol，收率：88.0%)。LCMS (ESI): [M+H] += 675.1； 1H NMR (400 MHz, CHLOROFORM-d) δ ppm 12.93 (s, 1H), 9.34 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 8.79 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 8.21 (d, J= 1.6 Hz, 1H), 8.03 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 7.74 - 7.68 (m, 2H), 7.57 (d, J= 1.6 Hz, 1H), 4.49 (q, J= 7.2 Hz, 2H), 3.64 - 3.54 (m, 4H), 3.14 (br t, J= 5.2 Hz, 4H), 2.42 - 2.29 (m, 4H), 1.87 - 1.60 (m, 4H), 1.48 (t, J= 6.8 Hz, 3H), 0.49 (s, 4H)。
第八步：將乙基6-(2-{6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基}-4-碘苯甲醯氨基)-8-(4,4-二氟呱啶-1-基)喹啉-3-甲酸基酯 (600 mg，0.89 mmol)和2-羥基乙磺醯胺 (144 mg，1.16 mmol)溶於N,N-二甲基甲醯胺 (6.00 mL)中，加入磷酸鉀 (566 mg，2.67 mmol)和 (1R,2R)-N1,N2-二甲基環己烷-1,2-二胺 (127 mg，0.89 mmol)和碘化亞銅 (169 mg，0.89 mmol)，N 2氛圍下100 °C攪拌4小時。反應液加入水 (50.0 mL+0.50 mL 氨水)，使用乙酸乙酯 (100 mL x 2)萃取，有機相乾燥過濾濃縮，1/3殘留物用製備型HPLC (C18，32%-72%梯度的水 (氨水+碳酸氫銨)/乙腈)純化，純化得到白色固體乙基6-(2-{6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基}-4-(2-羥基乙磺醯氨基)苯甲醯氨基)-8-(4,4-二氟呱啶-1-基)喹啉-3-甲酸基酯 (24.19 mg，0.04 mmol，收率：6.00%)。LCMS (ESI): [M+H] += 672.3； 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 12.01 (s, 1H), 10.62 - 9.65 (m, 1H), 9.16 (d, J= 2.4 Hz, 1H), 8.83 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 8.34 (d, J= 1.6 Hz, 1H), 7.88 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 7.53 (d, J= 1.6 Hz, 1H), 7.20 (d, J= 1.6 Hz, 1H), 7.07 (dd, J= 2.0, 8.4 Hz, 1H), 5.38 - 4.72 (m, 1H), 4.42 (q, J= 7.2 Hz, 2H), 3.78 (t, J= 6.4 Hz, 2H), 3.62-3.48 (m, 4H), 3.35 (t, J= 6.4 Hz, 2H), 3.01 (br t, J= 4.4 Hz, 4H), 2.32 - 2.15 (m, 4H), 1.65-1.50 (m, 4H), 1.40 (t, J= 7.2 Hz, 3H), 0.36 (s, 4H)。
實施例87：6-(2-{6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基}-4-(2-羥基乙磺醯氨基)苯甲醯氨基)-8-(4,4-二氟呱啶-1-基)喹啉-3-羧酸
第一步：將乙基6-(2-{6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基}-4-碘苯甲醯氨基)-8-(4,4-二氟呱啶-1-基)喹啉-3-甲酸基酯 (600 mg，0.89 mmol)和2-羥基乙磺醯胺 (144 mg，1.16 mmol)溶於N,N-二甲基甲醯胺 (6.00 mL)中，加入磷酸鉀 (566 mg，2.67 mmol)和 (1R,2R)-N1,N2-二甲基環己烷-1,2-二胺 (127 mg，0.89 mmol)和碘化亞銅 (169 mg，0.89 mmol)，N 2氛圍下100 °C攪拌4小時。反應液加入水 (50.0 mL+0.50 mL 氨水)，使用乙酸乙酯 (100 mL x 2)萃取，有機相乾燥過濾濃縮，2/3殘留物用快速柱色譜純化 (矽膠，0-17%梯度的四氫呋喃/石油醚)得到黃色固體乙基6-(2-{6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基}-4-(2-羥基乙磺醯氨基)苯甲醯氨基)-8-(4,4-二氟呱啶-1-基)喹啉-3-甲酸基酯 (270 mg，0.39 mmol，收率：66.0%)。LCMS (ESI): [M+H] += 672.1。
第二步：將乙基6-(2-{6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基}-4-(2-羥基乙磺醯氨基)苯甲醯氨基)-8-(4,4-二氟呱啶-1-基)喹啉-3-甲酸基酯 (220 mg，0.33 mmol)溶於乙醇 (2.00 mL)中，加入溶於純水 (2.00 mL)的一水合氫氧化鋰 (41.2 mg，0.98 mmol)，50 °C攪拌16小時。反應液加入水 (10.0 mL)，使用稀鹽酸調節pH至4，使用乙酸乙酯 (50.0 mL x 2)萃取，有機相乾燥過濾濃縮，殘留物用製備型HPLC (C18，24%-64%梯度的水 (甲酸)/乙腈)純化，純化得到黃色固體6-(2-{6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基}-4-(2-羥基乙磺醯氨基)苯甲醯氨基)-8-(4,4-二氟呱啶-1-基)喹啉-3-羧酸 (172 mg，0.27 mmol，收率：82.0%)。LCMS (ESI): [M+H] += 644.3； 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 14.08 - 12.87 (m, 1H), 12.01 (s, 1H), 10.14 (br s, 1H), 9.14 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 8.77 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 8.30 (s, 1H), 7.88 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.51 (s, 1H), 7.19 (d, J= 1.6 Hz, 1H), 7.07 (dd, J= 1.6, 8.4 Hz, 1H), 4.97 (br s, 1H), 3.77 (br t, J= 6.4 Hz, 2H), 3.59-3.49 (m, 4H), 3.40-3.35 (m, 2H), 3.00 (br d, J= 4.4 Hz, 4H), 2.32 - 2.15 (m, 4H), 1.68 - 1.50 (m, 4H), 0.35 (s, 4H)。
實施例88：6-(2-{6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基}-4-(2-羥基乙磺醯氨基)苯甲醯氨基)-8-(4,4-二氟呱啶-1-基)喹啉-3-甲醯胺
第一步：將乙基 6-(2-{6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基}-4-碘苯甲醯氨基)-8-(4,4-二氟呱啶-1-基)喹啉-3-甲酸基酯 (220 mg，0.33 mmol)溶於乙醇 (2.00 mL)中，加入溶於純水 (2.00 mL)的一水合氫氧化鋰 (37.3 mg，0.89 mmol)，70 °C攪拌16小時。反應液加入水 (5.00 mL)，使用稀鹽酸(1 M)調節pH至4，使用乙酸乙酯 (20.0 mL x 2)萃取，有機相乾燥過濾濃縮，殘留物用快速柱色譜純化 (矽膠，0-20-100%梯度的四氫呋喃/石油醚)得到黃色固體6-(2-{6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基}-4-碘苯甲醯氨基)-8-(4,4-二氟呱啶-1-基)喹啉-3-羧酸 (140 mg，0.19 mmol，收率：66.0%)。LCMS (ESI): [M+H] += 647.1。
第二步：將6-(2-{6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基}-4-碘苯甲醯氨基)-8-(4,4-二氟呱啶-1-基)喹啉-3-羧酸 (170 mg，0.26 mmol)溶於N,N-二甲基甲醯胺 (4.00 mL)中，加入1-羥基-1H-苯並三唑銨鹽 (240 mg，1.58 mmol)和N,N-二異丙基乙胺 (271 mg，2.10 mmol)、O-(7-氮雜苯並三氮唑-1-基)-N,N,N,N-四甲基脲六氟膦鹽 (299 mg, 0.79 mmol)，25 °C攪拌2小時。反應液加入水 (10.0 mL)，使用乙酸乙酯 (50 mL x 2)萃取，有機相乾燥過濾濃縮，殘留物用快速柱色譜純化 (矽膠，0-43%梯度的四氫呋喃/石油醚)得到黃色油狀6-(2-{6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基}-4-碘苯甲醯氨基)-8-(4,4-二氟呱啶-1-基)喹啉-3-甲醯胺 (100 mg，0.16 mmol，收率：44.0%)。LCMS (ESI): [M+H] += 646.1； 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 11.70 (s, 2H), 9.14 (s, 1H), 8.72 (s, 1H), 8.33 - 8.16 (m, 2H), 7.68 (br s, 1H), 7.65 (s, 1H), 7.59 (br d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.46 (s, 1H), 3.54 (br s, 4H), 3.05 (br s, 4H), 2.30 - 2.20 (m, 4H), 1.56 - 1.49 (m, 4H), 0.32 (s, 4H)。
第三步：將6-(2-{6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基}-4-碘苯甲醯氨基)-8-(4,4-二氟呱啶-1-基)喹啉-3-甲醯胺 (90.0 mg，0.14 mmol)和2-羥基乙磺醯胺 (22.6 mg，0.18 mmol)溶於N,N-二甲基甲醯胺 (3.60 mL)中，加入磷酸鉀 (88.7 mg，0.42 mmol)和 (1R,2R)-N1,N2-二甲基環己烷-1,2-二胺 (20.0 mg，0.14 mmol)和碘化亞銅 (26.5 mg，0.14 mmol)，氮氣氛圍下100 °C攪拌4小時。反應液加入水 (50.0 mL+0.50 mL 氨水)，使用乙酸乙酯 (100 mL x 2)萃取，有機相乾燥過濾濃縮，殘留物用製備型HPLC (C18，14%-54%梯度的水 (氨水+碳酸氫銨)/乙腈)純化，純化得到白色固體6-(2-{6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基}-4-(2-羥基乙磺醯氨基)苯甲醯氨基)-8-(4,4-二氟呱啶-1-基)喹啉-3-甲醯胺 (33.18 mg，0.05 mmol，收率：37.0%)。LCMS (ESI): [M+H] += 643.3； 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 12.51 (s, 1H), 9.12 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 8.69 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 8.33 - 8.18 (m, 2H), 7.82 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.66 (s, 1H), 7.42 (s, 1H), 7.03 (d, J= 1.6 Hz, 1H), 6.89 (dd, J= 1.6, 8.4 Hz, 1H), 6.10 - 5.77 (m, 2H), 3.74 (t, J= 6.4 Hz, 2H), 3.55 (br s, 4H), 3.15 (t, J= 6.8 Hz, 2H), 3.00 (br t, J= 4.4 Hz, 4H), 2.31 - 2.18 (m, 4H), 1.68 - 1.58 (m, 4H), 0.38 (s, 4H)。
實施例89：N-[2-胺基-8-(4,4-二氟呱啶基)-3-甲基(6-喹啉基)](2-(6-氮雜螺環[2.5]辛烷-6-基)-4-{[(2-羥乙基)磺醯基]胺基}苯基)甲醯胺
第一步： 25°C下，將三氟乙酸加到2-胺基-5-溴苯甲醛 (5.00 g，24.97 mmol)、碘代丁二醯亞胺(6.72 g，30.04 mmol) 的乙腈(50 mL)溶液中，所得的反應混合物在25°C下攪拌2小時。將反應混合物用乙酸乙酯(100 mL)稀釋、用飽和食鹽水(50 mL x 3)洗滌。有機相經過濃縮、乾燥、過濾、濃縮得殘餘物，經快速柱層析(矽膠，0-30%梯度的乙酸乙酯/石油醚)得到2-胺基-5-溴-3-碘苯甲醛(6.00 g，18.46 mmol，收率：73.6%)，為紫色固體。LCMS (ESI): [M+H] +=325.9， 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 9.70 (s, 1H), 8.03 (d, J= 2.3 Hz, 1H), 7.89 (d, J= 2.3 Hz, 1H), 7.15 (s, 2H)。
第二步：0°C下，將氫化鈉(480 mg，12.13 mmol，60%在礦物油中)加到 2-(磷酸二乙氧羰基)丙腈(2.10 g，11.00 mmol) 的四氫呋喃 (40 mL)溶液中，所得反應混合物在25°C下攪拌30分鐘，然後加入2-胺基-5-溴-3-碘苯甲醛(2.50 g，7.73 mmol) 的四氫呋喃(10 mL)溶液中。反應混合物在25°C下攪拌3小時。反應體系用飽和氯化銨溶液(100 mL)淬滅，用乙酸乙酯(200 mL x 2)萃取。有機相用無水硫酸鈉乾燥、過濾、濃縮得粗品經快速柱層析 (矽膠，0-30%梯度的乙酸乙酯/石油醚) 得(2E)-3-(2-胺基-5-溴-3-碘苯基)-2-甲基丙-2-烯腈(2.90 g，7.99mmol，收率：72.7%)為黃色固體。LCMS (ESI): [M+H] +=363.0。
第三步：25°C，將叔丁醇鉀(1.81 g，15.98 mmol) 加到(2E)-3-(2-胺基-5-溴-3-碘苯基)-2-甲基丙-2-烯腈(2.90 g，7.99 mmol) 的四氫呋喃(50 mL)溶液中，所得反應混合物在50°C下攪拌16小時。將反應混合物用乙酸乙酯(100 mL)稀釋、用飽和食鹽水(50 mL x 3)洗滌。有機相用無水硫酸鈉乾燥、過濾、濃縮得殘餘物，殘餘物經快速柱層析純化(矽膠，0-30%梯度的乙酸乙酯/石油醚) 得6-溴-8-碘-3-甲基-2-喹啉胺(1.80 g，4.96 mmol，收率：62.1%)為淡褐色固體。LCMS (ESI): [M+H] +=363.0。
第四步：25°C下，將胺基甲酸叔丁酯(1.92 g，8.82 mmol)加到6-溴-8-碘-3-甲基-2-喹啉胺(1.60 g，4.41 mmol)、4-二甲氨基吡啶(110 mg，0.88 mmol)、N,N-二異丙基乙胺(1.16 mL，8.81 mmol)的二氯甲烷(20 mL)溶液中。所得反應混合物在50°C下攪拌3小時。將反應混合物濃縮得殘餘物經快速柱層析純化(矽膠，0-10%梯度的乙酸乙酯/石油醚)得叔丁基(6-溴-8-碘-3-甲基喹啉-2-基) (叔丁氧基羰基)胺基甲酸酯(2.00 g，3.55 mmol，收率：80.6%)為淡黃色固體。LCMS (ESI): [M+H] +=565.1。 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 8.45 (d, J= 2.1 Hz, 1H), 8.30 (t, J= 1.9 Hz, 2H), 2.35 (d, J= 1.0 Hz, 3H), 1.37 (s, 18H)。
第五步：25°C下，將1,4-二氧六環(10 mL)加到叔丁基(6-溴-8-碘-3-甲基喹啉-2-基) (叔丁氧基羰基)胺基甲酸酯(1.00 g，1.77 mmol)、4,4-二氟呱啶鹽酸鹽(0.31 g，1.95 mmol)、三(二亞苄基丙酮)二鈀(170 mg，0.18 mmol)、1,1'-聯萘-2,2'-雙二苯膦(210 mg，0.36 mmol)和碳酸銫(1.77 g，5.33 mmol)的混合物中，用氮氣鼓氣5分鐘，所得反應混合物在100°C下攪拌5小時。將反應混合物過濾，濾液用乙酸乙酯(30 mL)洗滌，濾液用飽和氯化鈉溶液(15 mL x 3)洗滌。有機相用無水硫酸鈉乾燥、過濾、濃縮得殘餘物，殘餘物經快速柱層析純化(矽膠，0-20%梯度的乙酸乙酯/石油醚)得叔丁基 (6-溴-8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-3-甲基喹啉-2-基)(叔丁氧基) 胺甲酸酯(800 mg，1.44 mmol，收率:81.0%)，為淡黃色油狀物。LCMS (ESI): [M+H] +=558.3。
第六步：25°C下，將1,4-二氧六環(10 mL)加到叔丁基(6-溴-8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-3-甲基喹啉-2-基)(叔丁氧基) 胺基甲酸酯(1.50 g，3.29 mmol)、胺基甲酸叔丁酯(580 mg，4.93 mmol)、三(二亞苄基丙酮)二鈀(310 mg，0.33 mmol)、1,1'-聯萘-2,2'-雙二苯膦(390 mg，0.66 mmol)和碳酸銫(3.28 g，9.86 mmol)的混合物中，用氮氣鼓氣5分鐘，所得反應混合物在100°C下攪拌3小時。將反應混合物過濾，濾餅用乙酸乙酯(30 mL)洗滌，濾液用飽和氯化鈉溶液(15 mL x 3)洗滌。有機相用無水硫酸鈉乾燥、過濾、濃縮得殘餘物，殘餘物經快速柱層析純化(矽膠，0-40%梯度的乙酸乙酯/石油醚) 得叔丁基(叔丁氧羰基)(6-((叔丁氧羰基)胺基)-8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-3-甲基喹啉-2-基) 胺基甲酸酯 (650 mg，1.31 mmol，收率：40.2%)，為淡黃色固體。LCMS (ESI): [M+H] +=593.5。 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 9.61 (s, 1H), 8.14 (s, 1H), 7.74 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 7.31 (d, J= 2.1 Hz, 1H), 3.45 (t, J= 5.6 Hz, 4H), 2.32 (s, 3H), 2.28 – 2.15 (m, 4H), 1.57 (s, 9H), 1.44 (s, 18H)。
第七步：25°C下，將三氟乙酸(0.50 mL)加到N-{8-(4,4-二氟呱啶基)-6-[(叔丁氧基) 羰基胺基]-3-甲基(2-喹啉基)}(叔丁氧基)甲醯胺(50.00 mg，0.08 mmol)的二氯甲烷(1 mL)溶液中，反應混合物在25°C下攪拌3小時。反應液經濃縮得殘餘物， 殘餘物用乙酸乙酯(10 mL)稀釋，用飽和碳酸氫鈉溶液洗(10 mL x 2)。有機相用無水硫酸鈉乾燥、過濾、濃縮得8-(4,4-二氟呱啶基)-3-甲基喹啉-2,6-二胺(44 mg，粗品)為褐色固體，不需純化用於下一步。LCMS (ESI): [M+H] +=293.2。
第八步：20°C下，將N,N-二異丙基乙胺(300 ul，1.64 mmol)加到2-(6-氮雜螺環[2.5]辛烷-6-基)-4-溴苯甲醯氯(580 mg，1.70 mmol)和8-(4,4-二氟呱啶基)-3-甲基喹啉-2,6-胺 (160 mg，0.55 mmol)的四氫呋喃(5 mL)溶液中，所得反應混合物在20°C下攪拌1小時。反應液用乙酸乙酯(10 mL)稀釋，用飽和氯化鈉溶液(10 mL x 3)稀釋。有機相用無水硫酸鈉乾燥、過濾、濃縮得粗品N-[2-胺基-8-(4,4-二氟呱啶基)-3-甲基(6-喹啉基)][2-(6-氮雜螺環[2.5]辛烷-6-基)-4-溴苯基]甲醯胺(70 mg，0.12 mmol，收率：21.7%)，為淡褐色固體。LCMS (ESI): [M+H] +=586.3。
第九步：25°C下，將1,4-二氧六環(2 mL)加到N-[2-胺基-8-(4,4-二氟呱啶基)-3-甲基(6-喹啉基)][2-(6-氮雜螺環[2.5]辛烷-6-基)-4-溴苯基]甲醯胺(60 mg，0.10 mmol)、2-羥乙基磺醯胺(26 mg， 0.21 mmol)、三(二亞苄基丙酮)二鈀(9 mg，0.01 mmol)、2-二叔丁基膦-2',4',6'-三異丙基聯苯(9 mg，0.02 mmol)和磷酸鉀(67 mg，0.15 mmol)的混合物中，用氮氣鼓氣1分鐘，所得反應混合物在100°C下攪拌6小時。反應混合物經柱層析純化(矽膠，50%梯度的乙酸乙酯/石油醚，5-15%梯度的甲醇/二氯甲烷，含3%的氨水)得粗產物，用乙酸乙酯(20 mL)稀釋，經水洗(20 mL x 2)，乾燥、過濾、濃縮得N-[2-胺基-8-(4,4-二氟呱啶基)-3-甲基(6-喹啉基)](2-(6-氮雜螺環[2.5]辛烷-6-基)-4-{[(2-羥乙基)磺醯基]胺基}苯基)甲醯胺(34 mg，0.054 mmol，收率：54.0%)，為淡黃色固體。LCMS (ESI): [M+H] +=629.4， 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 11.83 (s, 1H), 10.05 (s, 1H), 7.91 – 7.84 (m, 2H), 7.65 (s, 1H), 7.18 (d, J= 2.1 Hz, 1H), 7.14 (d, J= 2.2 Hz, 1H), 7.05 (dd, J= 8.5, 2.0 Hz, 1H), 6.05 (s, 2H), 4.95 (s, 1H), 3.76 (t, J= 6.5 Hz, 2H), 3.43 (t, J= 5.4 Hz, 4H), 3.34 (d, J= 6.8 Hz, 2H), 2.99 (t, J= 5.3 Hz, 4H), 2.21 (s, 7H), 1.60 (s, 4H), 0.36 (s, 4H)。
實施例90：2-{6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基}-N-[8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-7-氟-3-甲基喹啉-6-基]-4-(2-羥基乙磺醯氨基)苯甲醯胺
實施例90參照實施例3的類似合成路線製備得到的： LCMS (ESI): [M+H] += 632.3； 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 10.06 (br s, 1H), 8.91 (d, J= 3.6 Hz, 1H), 7.52 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.48 (d, J= 3.6 Hz, 1H), 7.14 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 7.03 (dd, J= 1.6, 8.4 Hz, 1H), 5.40 - 4.58 (m, 1H), 3.78 (t, J= 6.4 Hz, 2H), 3.65 - 3.50 (m, 4H), 3.42 - 3.33 (m, 2H), 2.66 (br d, J= 4.8 Hz, 4H), 2.42 (s, 3H), 2.20 - 2.04 (m, 4H), 1.35 - 1.15 (m, 4H), 0.24 (s, 4H)。
實施例91：N-[3-氨基-8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-7-氟喹啉-6-基]-2-{6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基}-4-(2-羥基乙磺醯氨基)苯甲醯胺
第一步：將6-溴-8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-7-氟-3-碘喹啉 (1.50 g，3.18 mmol)和氨基甲酸叔丁酯 (0.17 g，1.45 mmol)溶於二氧六環 (30.0 mL)中，加入碳酸銫 (1.59 g，4.87 mmol)和4,5-雙 (二苯基膦)-9,9-二甲基雜蒽 (0.19 g，0.32 mmol)和三 (二亞苄基丙酮)二鈀 (0.15 g，0.16 mmol)，氮氣氛圍下80 °C攪拌16小時。反應液加入水 (100 mL)稀釋，使用乙酸乙酯400 mL (200 mL x 2)萃取，有機相乾燥過濾濃縮，殘留物用快速柱色譜純化 (矽膠，0-6%梯度的四氫呋喃/石油醚)得到黃色固體叔丁基 N-[6-溴-8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-7-氟喹啉-3-基]氨基甲酯 (0.60 g，1.23 mmol，收率：76.0%)。LCMS (ESI): [M+H] += 462.0； 1H NMR (400 MHz, CHLOROFORM-d) δ ppm 8.54 (br s, 1H), 8.28 (br s, 1H), 7.58 (br d, J= 6.4 Hz, 1H), 6.64 (br s, 1H), 3.51 (br s, 4H), 2.20 - 2.08 (m, 4H), 1.49 (s, 9H)。
第二步：將叔丁基 N-[6-溴-8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-7-氟喹啉-3-基]氨基甲酯 (580 mg，1.26 mmol)和二苯基甲亞胺 (274 mg，1.51 mmol)溶於二氧六環 (15.0 mL)中，加入碳酸銫 (1.23 g，3.78 mmol)和4,5-雙 (二苯基膦)-9,9-二甲基雜蒽 (145 mg，0.25 mmol)和三 (二亞苄基丙酮)二鈀 (0.15 g，0.16 mmol)，氮氣氛圍下80 °C攪拌16小時。反應液加入水 (50.0 mL)稀釋，使用乙酸乙酯200 mL (100 mL x 2)萃取，有機相乾燥過濾濃縮，殘留物用快速柱色譜純化 (矽膠，0-8%梯度的四氫呋喃/石油醚)得到黃色固體叔丁基 N-[8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-6-[(二苯甲基負離子烯)氨基]-7-氟喹啉-3-基]氨基甲酯 (800 mg，1.20 mmol，收率：95.0%)。LCMS (ESI): [M+H] += 562.0； 1H NMR (400 MHz, CHLOROFORM-d) δ ppm 8.43 (d, J= 2.4 Hz, 1H), 8.25 (br s, 1H), 7.85 - 7.77 (m, 2H), 7.60 (br d, J= 6.8 Hz, 1H), 7.53 - 7.50 (m, 1H), 7.47 - 7.44 (m, 2H), 7.23 (br d, J= 6.4 Hz, 2H), 7.20 - 7.15 (m, 2H), 6.77 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 6.71 (s, 1H), 3.40 (br d, J= 4.4 Hz, 4H), 2.21 - 2.09 (m, 4H), 1.62 - 1.50 (m, 9H)。
第三步：將叔丁基 N-[8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-6-[(二苯甲基負離子烯)氨基]-7-氟喹啉-3-基]氨基甲酯 (780 mg，1.39 mmol)溶於甲醇 (16.0 mL)中，加入乙酸鈉 (342 mg，4.17 mmol)、鹽酸羥胺 (193 mg，2.78 mmol)，20 °C攪拌2小時。反應液加入水 (50.0 mL)，使用乙酸乙酯 (100 mL x 2)萃取，有機相乾燥過濾濃縮，殘留物用快速柱色譜純化 (矽膠，0-18%梯度的四氫呋喃/石油醚)得到黃色固體叔丁基 N-[6-氨基-8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-7-氟喹啉-3-基]氨基甲酯 (0.78 g，0.92 mmol，收率：66.0%)。LCMS (ESI): [M+H] += 397.1； 1H NMR (400 MHz, CHLOROFORM-d) δ ppm 8.36 (d, J= 2.4 Hz, 1H), 8.22 (br s, 1H), 6.66 (br d, J= 8.8 Hz, 2H), 4.04 (s, 2H), 3.58 (br t, J= 4.4 Hz, 4H), 2.29 - 2.16 (m, 4H), 1.57 (s, 9H)。
第四步：將叔丁基 N-[6-氨基-8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-7-氟喹啉-3-基]氨基甲酯 (340 mg，0.86 mmol)溶於四氫呋喃 (15.0 mL)中，加入二異丙基乙胺 (332 mg，2.57 mmol)，加入4-碘-2-(6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲醯氯化 (690 mg，1.29 mmol)，20 °C 攪拌16小時。反應液加入水 (50.0 mL)，使用乙酸乙酯 (100 mL x 2)萃取，有機相乾燥過濾濃縮，殘留物用快速柱色譜純化 (矽膠，0-12%梯度的四氫呋喃/石油醚)得到黃色固體叔丁基 N-[6-(2-{6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基}-4-碘苯甲醯氨基)-8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-7-氟喹啉-3-基]氨基甲酯 (340 mg，0.41 mmol，收率：48.0%)。LCMS (ESI): [M+H] += 736.1； 1H NMR (400 MHz, CHLOROFORM-d) δ ppm 12.40 (br s, 1H), 8.74 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 8.65 (br d, J= 2.4 Hz, 1H), 8.31 (br s, 1H), 7.97 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.69 (s, 1H), 7.66 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 6.65 (br s, 1H), 3.63 (br s, 4H), 3.08 (br t, J= 4.8 Hz, 4H), 2.30 - 2.19 (m, 4H), 1.70 - 1.60 (m, 4H), 1.57 (s, 9H), 0.41 (s, 4H)。
第五步：將叔丁基 N-[6-(2-{6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基}-4-碘苯甲醯氨基)-8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-7-氟喹啉-3-基]氨基甲酯 (300 mg，0.41 mmol)和2-羥基乙磺醯胺 (102 mg，0.82 mmol)溶於N,N-二甲基甲醯胺 (15.0 mL)中，加入磷酸鉀 (259 mg，1.22 mmol)和 (1R,2R)-N1,N2-二甲基環己烷-1,2-二胺 (58.6 mg，0.41 mmol)和碘化亞銅 (77.6 mg，0.41 mmol)，100 °C攪拌16小時。反應液加入水50 mL (0.5 mL氨水)，使用乙酸乙酯 (200 mL x 2)萃取，有機相乾燥過濾濃縮，殘留物用快速柱色譜純化 (矽膠，0-37%梯度的四氫呋喃/石油醚)得到黃色固體純化得到黃色固體叔丁基 N-[6-(2-{6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基}-4-(2-羥基乙磺醯氨基)苯甲醯氨基)-8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-7-氟喹啉-3-基]氨基甲酯(300 mg，0.36 mmol，收率：89.0%)。LCMS (ESI): [M+H] += 733.2； 1H NMR (400 MHz, CHLOROFORM-d) δ ppm 12.44 (br d, J= 2.0 Hz, 1H), 8.71 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 8.67 (d, J= 2.4 Hz, 1H), 8.28 (br s, 1H), 8.19 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 8.03 (s, 1H), 7.62 (br s, 1H), 7.35 (d, J= 1.6 Hz, 1H), 7.07 (dd, J= 2.0, 8.4 Hz, 1H), 6.82 (s, 1H), 4.14 (br t, J= 4.8 Hz, 2H), 3.66 - 3.58 (m, 4H), 3.36 (t, J= 5.6 Hz, 2H), 3.06 (br t, J= 4.8 Hz, 4H), 2.28 - 2.16 (m, 4H), 1.72 - 1.59 (m, 4H), 1.57 (s, 9H), 0.39 (s, 4H)。
第六步：將叔丁基 N-[6-(2-{6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基}-4-(2-羥基乙磺醯氨基)苯甲醯氨基)-8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-7-氟喹啉-3-基]氨基甲酯 (260 mg，0.35 mmol)溶於二氯甲烷 (2.40 mL)和三氟乙酸 (0.60 mL)中，20 °C攪拌1小時。反應液使用飽和碳酸氫鈉溶液50 mL淬滅，使用乙酸乙酯 (100 mL x 2)萃取，有機相乾燥過濾濃縮，殘留物用製備型HPLC (C18，12%-52%梯度的水 (甲酸)/乙腈)純化，得到黃色固體N-[3-氨基-8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-7-氟喹啉-6-基]-2-{6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基}-4-(2-羥基乙磺醯氨基)苯甲醯胺 (132 mg，0.21 mmol，收率：59.0%)。LCMS (ESI): [M+H] += 633.3； 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 12.29 (br s, 1H), 11.13 - 9.36 (m, 1H), 8.48 - 8.28 (m, 2H), 8.15 (s, 1H), 8.03 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 7.28 (s, 1H), 7.13 (br d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.08 (br d, J= 2.0 Hz, 1H), 5.60 (br s, 2H), 5.27 - 4.55 (m, 1H), 3.77 (br t, J= 6.4 Hz, 2H), 3.56 - 3.48 (m, 4H), 3.37 (br t, J= 6.4 Hz, 2H), 2.98 (br s, 4H), 2.25 - 2.07 (m, 4H), 1.65 - 1.50 (m, 4H), 0.37 (s, 4H)。
實施例92：N-(4-(4,4-二氟呱啶-1-基)-1,5-萘啶-2-基)-4-(2-羥基乙基磺醯氨基)-2-(6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲醯胺
第一步：向甲基3-氨基甲基吡啶酯(3.00 g，53.7 mmol)和吡啶(4.92 g，59.1 mmol)的四氫呋喃(30 mL)溶液中加入乙基3-氯-3-氧亞基丙酯(3.56 g，23.6 mmol)。將混合物在60°C攪拌16小時。向反應混合物中加入水(60 mL)，用乙酸乙酯(60 mL x 2)萃取。合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液旋乾得殘餘物。殘留物用快速柱色譜純化(矽膠，0-30%梯度的乙酸乙酯/石油醚)得到黃色固體甲基 3-(3-乙氧基-3-氧亞基丙醯氨基)甲基吡啶酯(1.50 g，5.63 mmol，收率：28.5%)。LCMS (ESI): [M+H] +=266.9。
第二步：將甲基 3-(3-乙氧基-3-氧亞基丙醯氨基)甲基吡啶酯(1.00 g，3.75 mmol)的乙醇鈉(1.91 g，5.63 mmol)溶液加熱至70°C攪拌2小時。將混合物濃縮旋乾，得到黃色固體乙基 2,4-二氧亞基-1,2,3,4-四氫-1,5-萘啶-3-甲酸基酯(1.40 g，粗品)。LCMS (ESI): [M+H] += 234.9。
第三步：將乙基 2,4-二氧亞基-1,2,3,4-四氫-1,5-萘啶-3-甲酸基酯(1.00 g，4.85 mmol)的鹽酸(20 mL，30%)溶液加熱至90°C攪拌2小時。將反應液冷卻至室溫，將反應液過濾，固體收集旋乾得到黃色固體1,5-萘啶-2,4(1H,3H)-二酮(0.50 g，3.08 mmol，收率：63%)。LCMS (ESI): [M+H] += 162.8。
第四步：將1,5-萘啶-2,4(1H,3H)-二酮(7.00 g，5.76 mmol)的三氯氧磷(80 mL)溶液加熱至120°C攪拌16小時。將反應液濃縮旋乾得殘餘物。將殘餘物倒入水(100 mL)中，用乙酸乙酯(100 mL x 3)萃取。合併有機相，用無水硫酸鎂乾燥，過濾，濾液旋乾得殘餘物2,4-二氯-1,5-萘啶 (2.60 g，12.9 mmol，收率：30%)。LCMS (ESI): [M+H] += 198.9。
第五步：向2,4-二氯-1,5-萘啶(2.50 g，12.5 mmol)和N,N-二異丙基乙胺(4.96 g，37.7 mmol)的二甲基亞碸(50 mL)的溶液中加入鹽酸4,4-二氟呱啶(2.18 g，13.8 mmol)。將混合物加熱至100°C攪拌16小時。向反應液中加入水(100 mL)，用乙酸乙酯(100 mL x 2)萃取。合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液旋乾得殘餘物。殘留物用快速柱色譜純化(矽膠，0-20%梯度的乙酸乙酯/石油醚)得到黃色固體2-氯-4-(4,4-二氟呱啶-1-基)-1,5-萘啶和4-氯-2-(4,4-二氟呱啶-1-基)-1,5-萘啶的混合物(2.80 g，9.86 mmol，收率：78%)。LCMS (ESI): [M+H] += 283.9。
第六步：向2-氯-4-(4,4-二氟呱啶-1-基)-1,5-萘啶和4-氯-2-(4,4-二氟呱啶-1-基)-1,5-萘啶的混合物(3.20 g，11.3 mmol)、二苯基甲亞胺(2.50 g，13.5 mmol)和碳酸銫(10.3 g，31.7 mmol)的二氧六環(60 mL)的溶液中加入4,5-雙(二苯基膦)-9,9-二甲基氧雜蒽(1.30 g，2.25 mmol)和三(二亞苄基丙酮)二鈀(1.03 g，1.12 mmol)。將混合物在氮氣的保護下加熱至100°C攪拌16小時。向反應液中加入水(100 mL)，用乙酸乙酯(100 mL x 2)萃取。合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液旋乾得殘餘物。殘留物用快速柱色譜純化(矽膠，0-15%梯度的乙酸乙酯/石油醚)得到黃色固體4-(4,4-二氟呱啶-1-基)-N-(二苯亞甲基)-1,5-萘啶-2-胺(3.40 g，7.93 mmol，收率：70%)。LCMS (ESI): [M+H] += 429.3。
第七步：向4-(4,4-二氟呱啶-1-基)-N-(二苯亞甲基)-1,5-萘啶-2-胺(3.40 g，7.93 mmol)的二氧六環(34 mL)溶液中加入鹽酸二氧六環(34 mL，4M)。將混合物在25°C攪拌16小時。然後將反應液過濾，固體濃縮旋乾得到4-(4,4-二氟呱啶-1-基)-1,5-萘啶-2-胺(2.20 g，7.48 mmol，收率：94.4%)。LCMS (ESI): [M+H] += 265.1。
第八步：向4-(4,4-二氟呱啶-1-基)-1,5-萘啶-2-胺(0.50 g，1.89 mmol)、4-碘-2-(6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲醯氯化(852 mg，2.27 mmol)的四氫呋喃(10 mL)溶液中加入叔丁醇鉀的四氫呋喃溶液(5.67 mL，5.67 mmol，1 mol/L)和N,N-二異丙基乙胺(748 mg，5.67 mmol)。將反應混合物在25°C攪拌16小時。向反應混合物中加入水(50 mL)，用乙酸乙酯(50 mL x 2)萃取，合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液旋乾得殘餘物。殘留物用快速柱色譜純化(矽膠，0-5%梯度的乙酸乙酯/石油醚)得到黃色固體N-(4-(4,4-二氟呱啶-1-基)-1,5-萘啶-2-基)-4-碘-2-(6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲醯胺(519 mg，0.87mmol，收率：46.1%)。LCMS (ESI): [M+H] += 604.2。
第九步：向2-羥基乙磺醯胺(207 mg，1.65 mmol)、2-(甲基氨基)乙酸(73.8 mg，0.82 mmol)、磷酸鉀(717 mg，3.31 mmol)的N,N-二甲基甲醯胺(10 mL)溶液中加入碘化亞銅(80.5 mg，0.41 mmol)。將混合物在50°C攪拌5分鐘。然後將N-(4-(4,4-二氟呱啶-1-基)-1,5-萘啶-2-基)-4-碘-2-(6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲醯胺(500 mg，0.83 mmol)在50°C加入到反應混合物中，將混合物在氮氣的保護下加熱至100°C攪拌16小時。向反應液中加入水(10 mL)，用乙酸乙酯(10 mL x 2)萃取。合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液旋乾得殘餘物。殘留物用製備型HPLC (C18，36-76%梯度的水(甲酸)/乙腈)純化，得到黃色固體化合物N-(4-(4,4-二氟呱啶-1-基)-1,5-萘啶-2-基)-4-(2-羥基乙基磺醯氨基)-2-(6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲醯胺(188 mg，0.31 mmol，收率：37.7%)。LCMS (ESI): [M+H] += 601.3。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 13.16 (s, 1H), 10.25 (s, 1H), 8.76 (dd, J= 1.6, 4.0 Hz, 1H), 8.21 (s, 1H), 8.09 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 8.03 (dd, J= 1.2, 8.4 Hz, 1H), 7.69 (dd, J= 4.0, 8.4 Hz, 1H), 7.30 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 7.14 (dd, J= 2.0, 8.4 Hz, 1H), 5.09 - 4.82 (m, 1H), 3.92 - 3.83 (m, 4H), 3.78 (br t, J= 6.4 Hz, 2H), 3.38 (br t, J= 6.4 Hz, 2H), 3.08 - 2.95 (m, 4H), 2.31 - 2.14 (m, 4H), 1.96 - 1.50 (m, 4H), 0.41 (s, 4H)。
實施例93：N-(2-(4,4-二氟呱啶-1-基)-1,5-萘啶-4-基)-4-(2-羥基乙基磺醯氨基)-2-(6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲醯胺
實施例93參照實施例3的合成路線製備得到：LCMS (ESI): [M+H] += 601.3。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 12.90 (s, 1H), 10.52 - 9.97 (m, 1H), 8.68 (s, 1H), 8.61 (dd, J= 1.6, 4.4 Hz, 1H), 8.03 - 7.97 (m, 2H), 7.69 (dd, J= 4.0, 8.4 Hz, 1H), 7.27 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 7.09 (dd, J= 2.0, 8.4 Hz, 1H), 5.10 - 4.81 (m, 1H), 3.96 - 3.82 (m, 4H), 3.77 (t, J= 6.4 Hz, 2H), 3.38 (t, J= 6.4 Hz, 2H), 3.13 - 2.93 (m, 4H), 2.20 - 1.99 (m, 4H), 1.90 - 1.43 (m, 4H), 0.30 (s, 4H)。
實施例94：N-[2-氨基-4-(4,4-二氟呱啶-1-基)-5-氟-1,3-苯並噻唑-6-基]-2-{6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基}-4-[(2R)-1-羥基丙烷-2-磺醯氨基]苯甲醯胺
實施例95：N-[2-氨基-4-(4,4-二氟呱啶-1-基)-5-氟-1,3-苯並噻唑-6-基]-2-{6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基}-4-[(2S)-1-羥基丙烷-2-磺醯氨基]苯甲醯胺
第一步：向1-溴-2,3-二氟-4-硝基苯 (10.0 g，42.0 mmol)、4,4-二氟呱啶鹽酸鹽(7.28 g，46.2 mmol)的二甲基亞碸(200 mL)的溶液中加入碳酸鉀(17.8 g，126 mmol)。將混合物在氮氣保護下加熱到100°C攪拌16小時。向反應液中加入水(200 mL)，用乙酸乙酯(200 mL x 3)萃取。合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液旋乾得到黃色固體1-(3-溴-2-氟-6-硝基苯基)-4,4-二氟呱啶 (12.0 g，35.3 mmol，收率：84%)。LCMS (ESI): [M+H] +=338.9； 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 7.72 - 7.61 (m, 2H), 3.16 (br t, J= 5.3 Hz, 4H), 2.16 - 2.01 (m, 4H)。
第二步：向1-(3-溴-2-氟-6-硝基苯基)-4,4-二氟呱啶 (12.0 g，35.4 mmol)和氯化銨(7.64 g，141 mmol)的甲醇(240 mL)和水(80 mL)的溶液中分批加入鐵粉(13.3 g，236 mmol)。將混合物在氮氣保護下加熱到60°C攪拌16小時。將反應液過濾。向濾液中加入水(160 mL)，用乙酸乙酯(200 mL x 3)萃取。合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液旋乾得到黃色固體4-溴-2-(4,4-二氟呱啶-1-基)-3-氟苯胺 (10.8 g，34.9 mmol，收率：98.7%)。LCMS (ESI): [M+H] +=308.9； 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 7.09 (br t, J= 8.0 Hz, 1H), 6.47 (br d, J= 8.8 Hz, 1H), 5.54 (br s, 2H), 3.13 - 2.90 (m, 4H), 2.27 - 1.98 (m, 4H)。
第三步：向4-溴-2-(4,4-二氟呱啶-1-基)-3-氟苯胺(10.0 g，32.3 mmol)的醋酸(200 mL)溶液中加入硫氰酸鉀(15.7 g，161 mmol)。然後將液溴(5.17 g，32.3 mmol)加入到反應液中。將混合物在氮氣保護下在25°C攪拌16小時。將反應液過濾，用四氫呋喃(100 mLx5)洗滌濾餅，向濾液中加入水(100 mL)，用氨水調節pH值至10，用乙酸乙酯(200 mL x 3)萃取。合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液旋乾得殘餘物。殘留物用快速柱色譜純化(矽膠，0-30%梯度的四氫呋喃/石油醚)得到黃色固體6-溴-4-(4,4-二氟呱啶-1-基)-5-氟-1,3-苯並噻唑-2-胺 (5.00 g，13.5 mmol，收率：42%)。LCMS (ESI): [M+H] +=367.8； 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ 11.47 - 9.30 (m, 2H), 7.84 (br d, J= 5.8 Hz, 1H), 3.36 - 3.27 (m, 4H), 2.19 - 2.05 (m, 4H)。
第四步：向6-溴-4-(4,4-二氟呱啶-1-基)-5-氟-1,3-苯並噻唑-2-胺 (1.00 g，2.73 mmol)、二-叔-丁基二碳酸鹽(1.79 g，8.19 mmol)的二氯甲烷(20.0 mL)的溶液中加入三乙胺(846 mg，8.19 mmol)和4-二甲氨基吡啶(34.0 mg，0.27 mmol)。將混合物在25°C攪拌16小時。向反應液中加入水(20 mL)，用乙酸乙酯(20 mL x 3)萃取。合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液旋乾殘留物用快速矽膠層析法(矽膠，0-8%梯度的乙酸乙酯/石油醚)得到黃色油狀物叔-丁基 N-[6-溴-4-(4,4-二氟呱啶-1-基)-5-氟-1,3-苯並噻唑-2-基]氨基甲酯(490 mg，1.04 mmol，收率：38%)。LCMS (ESI): [M+H] +=465.9； 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 11.86 (s, 1H), 7.93 (d, J= 6.4 Hz, 1H), 3.44 (br t, J= 5.2 Hz, 4H), 2.18 - 2.01 (m, 4H), 1.50 (s, 9H)。
第五步：向叔-丁基 N-[6-溴-4-(4,4-二氟呱啶-1-基)-5-氟-1,3-苯並噻唑-2-基]氨基甲酯(480 mg，1.03 mmol)、二苯基甲亞胺(280 mg，1.54 mmol)和碳酸銫(1027 mg，3.09 mmol)的二氧六環(20.0 mL)溶液中加入4,5-雙(二苯基膦)-9,9-二甲基氧雜蒽(60.1 mg，0.10 mmol)、(2-氨基-1,1-聯苯-2-基)鈀(II) (96.2 mg，0.10 mmol)，混合物用氮氣置換3次，在氮氣下保護下將混合物加熱至100°C攪拌12小時。反應液用水(5 mL)稀釋，用二氯甲烷(15 mL x 2)萃取，有機層用飽和食鹽水(20 mL)洗滌，用硫酸鎂乾燥，過濾，減壓濃縮，得到殘渣。殘留物用快速矽膠層析法(矽膠，0-6%梯度的乙酸乙酯/石油醚)得到黃色固體叔-丁基 N-[6-溴-4-(4,4-二氟呱啶-1-基)-5-氟-1,3-苯並噻唑-2-基]氨基甲酯(260 mg，0.46 mmol，收率：45%)。LCMS (ESI): [M+H] +=567.1； 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 11.61 (br s, 1H), 7.71 - 7.65 (m, 2H), 7.60 - 7.54 (m, 1H), 7.52 - 7.46 (m, 2H), 7.34 - 7.32 (m, 2H), 7.16 (dd, J= 2.8, 6.4 Hz, 2H), 6.99 (d, J= 7.2 Hz, 1H), 3.27 (br t, J= 5.6 Hz, 4H), 2.10 - 2.00 (m, 4H), 1.48 (s, 9H)。
第六步：叔-丁基 (4-(4,4-二氟呱啶-1-基)-6-((二苯亞甲基)氨基)-5-氟苯並[d]噻唑-2-基)氨基甲酯(240 mg，0.42 mmol)和甲醇(2.00 mL)的混合溶液中加入鹽酸羥胺(59.0 mg，0.85 mmol)和醋酸鈉(104 mg，1.27 mmol)。將混合液在25°C下攪拌1小時。反應液用水(5 mL)稀釋，用二氯甲烷(15 mL x 2)萃取，有機層用飽和食鹽水(20 mL)洗滌，用硫酸鎂乾燥，過濾，減壓濃縮，得到殘渣。殘留物用快速柱色譜純化(矽膠，0-50%梯度的乙酸乙酯/石油醚)得到黃色固體叔-丁基 N-[6-氨基-4-(4,4-二氟呱啶-1-基)-5-氟-1,3-苯並噻唑-2-基]氨基甲酯(120 mg，0.30 mmol，收率：70%)。LCMS (ESI): [M+H] +=403.0。
第七步：向叔-丁基 N-[6-氨基-4-(4,4-二氟呱啶-1-基)-5-氟-1,3-苯並噻唑-2-基]氨基甲酯(120 mg，0.30 mmol)和4-碘-2-(6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲醯氯化(168 mg，0.45 mmol)的四氫呋喃(4.00 mL)溶液中加入N,N-二異丙基乙胺(118 mg，0.89 mmol)。將混合物在25°C下攪拌16小時。反應液用水(5 mL)稀釋，用二氯甲烷(15 mL x 2)萃取，有機層用飽和食鹽水(20 mL)洗滌，用硫酸鎂乾燥，過濾，減壓濃縮。殘留物用快速柱色譜純化(矽膠，0-10%梯度的乙酸乙酯/石油醚)得得到黃色固體叔-丁基 N-[6-(2-{6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基}-4-碘苯甲醯氨基)-4-(4,4-二氟呱啶-1-基)-5-氟-1,3-苯並噻唑-2-基]氨基甲酯(80 mg，0.10 mmol，收率：36%)。LCMS (ESI): [M+H] +=742.2。
第八步：向乙基 2-氨磺醯丙酯(307 mg，1.69 mmol)、反式-N,N-二甲基-1,2-環己二胺(187 mg，1.30 mmol)、磷酸鉀 (832 mg，3.90 mmol)的N,N-二甲基甲醯胺(20 mL)溶液中加入碘化亞銅(249 mg，1.30 mmol)。將混合物在50°C攪拌5分鐘。然後將叔-丁基 N-[6-(2-{6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基}-4-碘苯甲醯氨基)-4-(4,4-二氟呱啶-1-基)-5-氟-1,3-苯並噻唑-2-基]氨基甲酯(1100 mg，1.30 mmol)在50°C加入到反應混合物中，將混合物在氮氣的保護下加熱至100°C攪拌4小時。向反應液中加入水(50 mL)，用乙酸乙酯(50 mL x 2)萃取。合併有機相，用無水硫酸鎂乾燥，過濾，濾液濃縮。殘留物用快速柱色譜純化(矽膠，0-30%梯度的乙酸乙酯/石油醚)得到黃色固體化合物乙基 2-[(3-{6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基}-4-[(2-{[(叔-丁氧基)羰基]氨基}-4-(4,4-二氟呱啶-1-基)-5-氟-1,3-苯並噻唑-6-基)氨基羰基]苯基)氨磺醯]丙酯(1100 mg，粗品)。LCMS (ESI): [M+H] +=795.2。
第九步：向三氟乙酸(5.00 mL)和二氯甲烷(20.0mL)的混合溶液中加入乙基 2-[(3-{6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基}-4-[(2-{[(叔-丁氧基)羰基]氨基}-4-(4,4-二氟呱啶-1-基)-5-氟-1,3-苯並噻唑-6-基)氨基羰基]苯基)氨磺醯]丙酯(1000 mg，1.12 mmol)。將混合液在25°C下攪拌4小時。向反應液中加入飽和的碳酸氫鈉水溶液(20 mL)，用二氯甲烷(20mL x 2)萃取。合併有機相，用無水硫酸鎂乾燥，過濾，濾液旋乾得到白色固體乙基 2-[(4-{[2-氨基-4-(4,4-二氟呱啶-1-基)-5-氟-1,3-苯並噻唑-6-基]氨基羰基}-3-{6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基}苯基)氨磺醯]丙酯(700 mg，1.01 mmol，收率：90.2 %)。LCMS (ESI): [M+H] +=695.2。
第十步：將乙基 2-[(4-{[2-氨基-4-(4,4-二氟呱啶-1-基)-5-氟-1,3-苯並噻唑-6-基]氨基羰基}-3-{6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基}苯基)氨磺醯]丙酯(700 mg，1.01 mmol)加入至四氫呋喃(14 mL)溶液中，在25°C下分批加入四氫鋁鋰(54.0 mg，1.51 mmol)，混合物在25°C攪拌1小時。向反應液中依次加入水(0.05 mL)、15%氫氧化鈉水溶液(0.05 mL)淬滅和水(0.1 mL)過濾，濾液旋乾得殘餘物。殘留物用快速柱色譜純化(矽膠，0-30%梯度的四氫呋喃/石油醚)得到黃色固體化合物，再經過SFC (IG，體系：二氧化碳/乙醇(0.1%的氨水))分離得到白色固體化合物N-[2-氨基-4-(4,4-二氟呱啶-1-基)-5-氟-1,3-苯並噻唑-6-基]-2-{6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基}-4-[(2R)-1-羥基丙烷-2-磺醯氨基]苯甲醯胺(103 mg，0.15 mmol，收率：15.6%)和N-[2-氨基-4-(4,4-二氟呱啶-1-基)-5-氟-1,3-苯並噻唑-6-基]-2-{6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基}-4-[(2S)-1-羥基丙烷-2-磺醯氨基]苯甲醯胺(142 mg，0.22 mmol，收率：21.5%)。
實施例94：LCMS (ESI): [M+H] += 653.2； 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 12.01 (s, 1H), 10.37 - 9.92 (m, 1H), 8.37 (d, J= 6.8 Hz, 1H), 7.97 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.52 (s, 2H), 7.28 (d, J= 1.6 Hz, 1H), 7.12 (dd, J= 1.6, 8.8 Hz, 1H), 5.24 - 4.84 (m, 1H), 3.85 (dd, J= 4.4, 10.8 Hz, 1H), 3.49 (br dd, J= 8.0, 10.8 Hz, 1H), 3.41 (br t, J= 5.2 Hz, 4H), 3.28 - 3.22 (m, 1H), 3.06 - 2.84 (m, 4H), 2.20 - 2.03 (m, 4H), 1.72 - 1.43 (m, 4H), 1.30 (d, J= 6.8 Hz, 3H), 0.37 (s, 4H)。
實施例95：LCMS (ESI): [M+H] += 653.3； 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 12.01 (s, 1H), 10.38 - 9.92 (m, 1H), 8.37 (d, J= 6.8 Hz, 1H), 7.97 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.52 (s, 2H), 7.28 (d, J= 1.6 Hz, 1H), 7.12 (dd, J= 1.6, 8.8 Hz, 1H), 5.23 - 4.92 (m, 1H), 3.85 (dd, J= 4.4, 10.8 Hz, 1H), 3.49 (dd, J= 8.0, 10.8 Hz, 1H), 3.41 (br t, J= 5.2 Hz, 4H), 3.29 - 3.25 (m, 1H), 3.08 - 2.79 (m, 4H), 2.19 - 2.04 (m, 4H), 1.68 - 1.44 (m, 4H), 1.30 (d, J= 6.8 Hz, 3H), 0.37 (s, 4H)。
實施例96： 2-{6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基}-N-[8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-1,7-萘啶-6-基]-4-[(2R)-1-羥基丙烷-2-磺醯氨基]苯甲醯胺
實施例97： 2-{6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基}-N-[8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-1,7-萘啶-6-基]-4-[(2S)-1-羥基丙烷-2-磺醯氨基]苯甲醯胺
第一步：8-溴-1,7-萘啶-6-胺(4.50 g，20.08 mmol)、4,4-二氟呱啶鹽酸鹽(3.84 g，24.10 mmol)和碳酸銫(13.36 g，40.17 mmol)的N,N-二甲基甲醯胺(50.00 mL) 溶液在100°C下攪拌5小時。將反應混合物過濾，濾餅用乙酸乙酯(200 mL)洗滌，有機相經過濃縮得8-(4,4-二氟呱啶基)吡啶基[2,3-c]吡啶-6-基胺(4.00 g，15.10 mmol，收率：75.1%)，為黃色油狀物。LCMS (ESI): [M+H] +=265.2； 1HNMR (400 MHz, DMSO) δ 8.34 (dd, J= 4.0, 1.7 Hz, 1H), 7.79 (dd, J= 8.5, 1.7 Hz, 1H), 7.32 (dd, J= 8.4, 4.0 Hz, 1H), 6.04 (s, 1H), 5.75 (s, 2H), 4.05 (dt, J= 6.7, 2.5 Hz, 4H), 2.09 (tt, J= 14.3, 5.6 Hz, 4H)。
第二步：20°C下，向4-溴-2-氟苯甲酸 (2.60 g， 11.87 mmol)、8-(4,4-二氟呱啶基)吡啶基[2,3-c]吡啶-6-基胺 (3.73 g，13.98 mmol) 的N,N-二甲基甲醯胺(10.00 mL) 溶液中加入1-丙基磷酸環酐(726 mg，1.14 mmol)和N,N-二異丙基乙胺(180 mg，1.37 mmol)。所得反應混合物在70°C下攪拌16小時。將反應混合物倒入水中，用乙酸乙酯 (100 mL x 2)萃取，有機相用水(100 mL x 2)，飽和氯化鈉溶液(100 mL)洗滌。有機相經過濃縮、乾燥、過濾、濃縮得殘餘物，經快速柱層析純化(矽膠，0-30%梯度的乙酸乙酯/石油醚)得N-[8-(4,4-二氟呱啶基)吡啶基[3,2-d] 吡啶-6-基](2-氟-4-碘苯基)羧酸胺(2.60 g，5.07 mmol，收率：43.5%)，為黃色固體。LCMS (ESI): [M+H] +=513.2。
第三步：20°C下，N-[8-(4,4-二氟呱啶基)吡啶基[3,2-d]吡啶-6-基](2-氟-4-碘苯基)羧酸胺(1.30 g，2.54 mmol)和6-氮雜螺環[2.5]辛烷鹽酸鹽(760 mg，5.08 mmol)的二甲基亞碸(15 mL)溶液中加入碳酸鉀(1.43 g，10.15 mmol)，反應混合物在130°C下攪拌7小時。將反應混合物過濾，濾餅用乙酸乙酯(50 mL)洗滌。有機相呈渾濁狀，經過濾、乾燥得[2-(6-氮雜螺環[2.5]辛烷-6-基)-4-碘苯基]-N-[8-(4,4-二氟呱啶基)吡啶基[3,2-d]吡啶-6-基]羧酸胺(990 mg，1.64 mmol，收率：64.6%)，為黃色固體。LCMS (ESI): [M+H] +=604.3； 1HNMR (400 MHz, DMSO) δ 12.92 (s, 1H), 8.73 (dd, J= 4.1, 1.7 Hz, 1H), 8.26 (dd, J= 8.5, 1.8 Hz, 1H), 8.10 (s, 1H), 7.88 (d, J= 8.3 Hz, 1H), 7.82 (d, J= 1.7 Hz, 1H), 7.74 (dd, J= 8.3, 1.6 Hz, 1H), 7.62 (dd, J= 8.3, 4.1 Hz, 1H), 4.20 (t, J= 5.8 Hz, 4H), 3.05 (t, J= 5.3 Hz, 4H), 2.16 (dq, J= 13.8, 7.1, 5.8 Hz, 4H), 1.83 – 1.60 (m, 4H), 0.40 (s, 4H)。
第四步：20°C下，向[2-(6-氮雜螺環[2.5]辛烷-6-基)-4-碘苯基]-N-[8-(4,4-二氟呱啶基)吡啶基[3,2-d]吡啶-6-基]羧酸胺(800 mg，1.33 mmol)、2-胺基磺醯基丙酸乙酯(720.70 mg， 3.98 mmol)、磷酸鉀(861 mg， 3.98 mmol)的N,N-二甲基甲醯胺(12 mL)溶液中加入碘化亞銅(257 mg，1.32 mmol)、(1R,2R)-(-)-N,N'-二甲基-1,2-環己二胺(190 mg, 1.32 mmol)，用氮氣鼓氣2分鐘，所得反應混合物在100°C下攪拌6小時。將反應混合物倒入水(50 mL)中，用乙酸乙酯 (30 mL x 3)萃取，有機相經無水硫酸鈉乾燥、過濾、濃縮得殘餘物，經快速柱層析純化(二氧化矽，30-60%梯度的乙酸乙酯/石油醚)得乙基2-{[(3-(6-氮雜螺環[2.5]辛烷-6-基)-4-{N-[8-(4,4-二氟呱啶基)吡啶基[3,2-d]吡啶-6-基]胺基甲醯基}苯基)胺基] 磺醯基}丙酸酯 (730 mg，1.11 mmol，收率：84%)，為黃色固體。LCMS (ESI): [M+H] +=657.4； 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12.87 (s, 1H), 10.66 (s, 1H), 8.72 (dd, J= 4.1, 1.7 Hz, 1H), 8.24 (dd, J= 8.5, 1.8 Hz, 1H), 8.12 (d, J= 8.8 Hz, 2H), 7.61 (dd, J= 8.4, 4.1 Hz, 1H), 7.32 (d, J= 2.2 Hz, 1H), 7.20 – 7.09 (m, 2H), 4.32 (q, J= 7.0 Hz, 1H), 4.19 (q, J= 4.9, 4.1 Hz, 4H), 4.12 – 4.05 (m, 2H), 3.01 (t, J= 5.2 Hz, 4H), 2.17 (td, J= 13.9, 6.4 Hz, 4H), 1.67 (s, 3H), 1.51 – 1.43 (m, 4H), 1.16 (d, J= 7.1 Hz, 3H), 0.41 (s, 4H)。
第五步：0°C下，向乙基2-{[(3-(6-氮雜螺環[2.5]辛烷-6-基)-4-{N-[8-(4,4-二氟呱啶基)吡啶基[3,2-d]吡啶-6-基]胺基甲醯基}苯基)胺基] 磺醯基}丙酸酯(700 mg，1.06 mmol)的四氫呋喃(10 mL)溶液中加入氫化鋁鋰(114 mg，3.20 mmol)，反應液在0°C下攪拌1.5小時。向反應也中加入乙酸乙酯(50 mL)和飽和氯化銨溶液(50 mL)。反應混合物在室溫下攪拌3小時。有機相經乾燥、過濾、濃縮得殘餘物，經快速柱層析純化(二氧化矽，0-5%梯度的甲醇/二氯甲烷) 得產物330 mg，為黃色固體，其中產物100 mg經製備級HPLC純化(C18，40-90%梯度的乙腈/水)，得氮-(8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-1,7-萘吡啶-6-基)-4-((2-羥乙基-1-甲基乙基)磺醯胺基)-2-(6-氮雜螺環[2.5]辛烷-6-基)苯甲醯胺(45 mg，0.073 mmol，收率7%)，為淡黃色固體。LCMS (ESI): [M+H] +=615.4； 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12.90 (s, 1H), 10.23 (s, 1H), 8.74 (dd, J= 4.1, 1.7 Hz, 1H), 8.26 (dd, J= 8.5, 1.7 Hz, 1H), 8.12 (d, J= 8.1 Hz, 2H), 7.64 (dd, J= 8.3, 4.1 Hz, 1H), 7.33 (d, J= 2.1 Hz, 1H), 7.18 (dd, J= 8.6, 2.1 Hz, 1H), 5.05 (s, 1H), 4.22 (t, J= 5.8 Hz, 4H), 3.87 (dd, J= 11.1, 4.4 Hz, 1H), 3.52 (dd, J= 11.1, 7.6 Hz, 1H), 3.30 (dt, J= 7.3, 3.6 Hz, 1H), 3.03 (d, J= 5.4 Hz, 4H), 2.19 (dq, J= 13.8, 6.7, 5.6 Hz, 4H), 1.78 (s, 4H), 1.32 (d, J= 6.9 Hz, 3H), 0.43 (s, 4H)。
第六步：將化合物2-{6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基}-N-[8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-1,7-萘啶-6-基]-4-(1-羥基丙烷-2-磺醯氨基)苯甲醯胺(230 mg，0.37 mmol)經過SFC (IG，體系：二氧化碳/乙醇(0.1%的氨水))分離得到黃色固體化合物2-{6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基}-N-[8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-1,7-萘啶-6-基]-4-[(2R)-1-羥基丙烷-2-磺醯氨基]苯甲醯胺(100 mg，0.16 mmol，收率：43.5%)和2-{6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基}-N-[8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-1,7-萘啶-6-基]-4-[(2S)-1-羥基丙烷-2-磺醯氨基]苯甲醯胺(100 mg，0.16 mmol，收率：43.5%)。
實施例96：LCMS (ESI): [M+H] += 615.1； 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 12.88 (s, 1H), 10.54 - 9.91 (m, 1H), 8.72 (dd, J= 1.6, 4.0 Hz, 1H), 8.24 (dd, J= 1.6, 8.4 Hz, 1H), 8.15 - 8.05 (m, 2H), 7.61 (dd, J= 4.0, 8.4 Hz, 1H), 7.30 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 7.16 (dd, J= 2.0, 8.8 Hz, 1H), 5.30 - 4.71 (m, 1H), 4.20 (br t, J= 5.2 Hz, 4H), 3.85 (dd, J= 4.4, 11.2 Hz, 1H), 3.49 (dd, J= 7.6, 11.2 Hz, 1H), 3.30 - 3.24 (m, 1H), 3.00 (br s, 4H), 2.27 - 2.11 (m, 4H), 2.05 - 1.39 (m, 4H), 1.30 (d, J= 6.8 Hz, 3H), 0.41 (s, 4H)。
實施例97：LCMS (ESI): [M+H] += 603.1； 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 12.88 (s, 1H), 10.50 - 9.92 (m, 1H), 8.72 (dd, J= 1.6, 4.0 Hz, 1H), 8.24 (dd, J= 1.6, 8.4 Hz, 1H), 8.15 - 8.05 (m, 2H), 7.61 (dd, J= 4.0, 8.4 Hz, 1H), 7.30 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 7.15 (dd, J= 2.0, 8.8 Hz, 1H), 5.23 - 4.78 (m, 1H), 4.20 (br t, J= 5.2 Hz, 4H), 3.84 (dd, J= 4.4, 11.2 Hz, 1H), 3.49 (dd, J= 7.6, 11.2 Hz, 1H), 3.29 - 3.21 (m, 1H), 3.00 (br s, 4H), 2.27 - 2.11 (m, 4H), 2.05 - 1.39 (m, 4H), 1.30 (d, J= 6.8 Hz, 3H), 0.41 (s, 4H)。
實施例98：2-{6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基}-N-[8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-7-氟喹啉-6-基]-4-[(2R)-1-羥基丙烷-2-磺醯氨基]苯甲醯胺
實施例99： 2-{6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基}-N-[8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-7-氟喹啉-6-基]-4-[(2S)-1-羥基丙烷-2-磺醯氨基]苯甲醯胺
第一步：向乙基 2-氨磺醯丙酯(190 mg1.05 mmol)、反式-N,N-二甲基-1,2-環己二胺(100 mg，0.70 mmol)、磷酸鉀(454 mg，2.10 mmol)的N,N-二甲基甲醯胺(5.0 mL)溶液中加入碘化亞銅(13.6 mg，0.07 mmol)。將混合物在50°C攪拌5分鐘。然後將2-{6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基}-N-[8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-7-氟喹啉-6-基]-4-碘苯甲醯胺(434 mg，0.70 mmol)在50°C加入到反應混合物中，將混合物在氮氣的保護下加熱至100°C攪拌4小時。向反應液中加入水(10 mL)，用乙酸乙酯(10 mL x 2)萃取。合併有機相，用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液旋乾得殘餘物。殘留物用快速柱色譜純化(矽膠，0-33%梯度的乙酸乙酯/石油醚)得到白色固體乙基 2-[(3-{6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基}-4-{[8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-7-氟喹啉-6-基]氨基羰基}苯基)氨磺醯]丙酯(280 mg，0.412 mmol，收率：56%)。LCMS (ESI): [M+H] += 674.2； 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 12.55 - 12.38 (m, 1H), 10.77 - 10.55 (m, 1H), 8.86 - 8.78 (m, 1H), 8.76 - 8.67 (m, 1H), 8.42 - 8.27 (m, 1H), 8.12 - 8.01 (m, 1H), 7.54 - 7.42 (m, 1H), 7.37 - 7.26 (m, 1H), 7.21 - 7.08 (m, 1H), 4.08 (br dd, J= 4.4, 7.1 Hz, 2H), 3.67 - 3.51 (m, 5H), 3.11 - 2.92 (m, 4H), 2.24 - 2.11 (m, 4H), 1.68 - 1.54 (m, 4H), 1.51 - 1.45 (m, 3H), 1.19 - 1.08 (m, 3H), 0.48 - 0.25 (m, 4H)。
第二步：將乙基 2-[(3-{6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基}-4-{[8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-7-氟喹啉-6-基]氨基羰基}苯基)氨磺醯]丙酯(400.00 mg，0.63 mmol)加入至四氫呋喃(5 mL)溶液中，在0°C下分批加入四氫鋁鋰(33.91 mg，0.95 mmol)，混合物在0°C攪拌1小時。反應液用水(0.05 mL)和10%氫氧化鈉水溶液(0.10 mL)淬滅，過濾，濾液旋乾得殘餘物。殘餘物用製備型HPLC (C18，34-74%梯度的水(甲酸)/乙腈)純化，通過手性SFC(IG，體系：二氧化碳/甲醇(0.1%的氨水))拆分，得到白色固體化合物2-{6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基}-N-[8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-7-氟喹啉-6-基]-4-[(2R)-1-羥基丙烷-2-磺醯氨基]苯甲醯胺(61.7 mg，0.095 mmol，收率：15%)和2-{6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基}-N-[8-(4,4-二氟呱啶-1-基)-7-氟喹啉-6-基]-4-[(2R)-1-羥基丙烷-2-磺醯氨基]苯甲醯胺(69.7 mg，0.12mmol，收率：17%)。
實施例98： LCMS (ESI): [M+H] += 632.3； 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 12.52 (br s, 1H), 8.82 (dd, J= 1.6, 4.0 Hz, 1H), 8.75 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 8.33 (dd, J= 1.6, 8.4 Hz, 1H), 8.01 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.49 (dd, J= 4.2, 8.4 Hz, 1H), 7.27 (br s, 1H), 7.11 (br d, J= 8.4 Hz, 1H), 3.90 - 3.78 (m, 1H), 3.58 (br d, J= 4.4 Hz, 4H), 3.53 - 3.46 (m, 1H), 3.28 - 3.21 (m, 1H), 2.98 (br t, J= 4.8 Hz, 4H), 2.25 - 2.13 (m, 4H), 1.67 - 1.51 (m, 4H), 1.29 (d, J= 6.8 Hz, 3H), 0.38 (s, 4H)。
實施例99： LCMS (ESI): [M+H] += 632.7； 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ = 12.74 - 12.41 (m, 1H), 8.86 - 8.79 (m, 1H), 8.78 - 8.71 (m, 1H), 8.32 (dd, J= 1.6, 8.4 Hz, 1H), 7.99 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 7.49 (dd, J= 4.0, 8.4Hz, 1H), 7.23 (s, 1H), 7.06 (br d, J= 8.4 Hz, 1H), 3.89 - 3.77 (m, 1H), 3.66 - 3.54 (m, 4H), 3.52 - 3.45 (m, 1H), 3.26 - 3.16 (m, 1H), 3.08 - 2.88 (m, 4H), 2.30 - 2.13 (m, 4H), 1.73 - 1.50 (m, 4H), 1.32 - 1.25 (m, 3H), 0.47 - 0.28 (m, 4H)。
實施例100：N-(2-{6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基}-4-(2-羥基乙磺醯氨基)苯基)-8-(4,4-二氟呱啶-1-基)喹啉-6-甲醯胺
第一步：向6-溴-8-(4,4-二氟呱啶-1-基)喹啉(3.00 g，9.17 mmol)和三乙胺(2.78 g，27.5 mmol)的甲醇(60 mL)的溶液中加入1,1-二(叔丁基磷)二茂鐵氯化鈀(0.69 g，0.92 mmol)，將反應混合物在室溫下用氬氣置換三次，然後再用一氧化碳置換三次，最後反應液在一氧化碳(50 psi)的氛圍下80°C攪拌12小時。將反應混合物加入水(200 mL)中，用乙酸乙酯(300 mL x 2)萃取。合併有機相，用飽和食鹽水(200 mL)洗一遍，有機相合併用無水硫酸鎂乾燥，過濾，濾液旋乾得殘餘物。殘留物用快速柱色譜純化(矽膠，0-33%梯度的乙酸乙酯/石油醚)得到白色固體甲基8-(4,4-二氟呱啶-1-基)喹啉-6-甲酸基酯(2.60 g，8.53 mmol，收率：93%)。LCMS (ESI): [M+H] += 307.1。
第二步：向8-(4,4-二氟呱啶-1-基)喹啉-6-甲酸基酯(1.00 g，3.26 mmol)的甲醇(10 mL)、四氫呋喃(5 mL)和水(5 mL)的混合溶液中加入氫氧化鈉(400 mg，9.79 mmol)，將反應混合物在80°C攪拌2小時。將反應混合物中的甲醇和四氫呋喃旋掉，剩下的水相用一摩爾每升的鹽酸水溶液調節pH到3左右。溶液中有白色固體析出，過濾收集白色固體，油泵拉乾得到純的白色固體產物8-(4,4-二氟呱啶-1-基)喹啉-6-羧酸(0.90，3.06 mmol，收率：94%)。LCMS (ESI): [M+H] += 293.0。
第三步：向8-(4,4-二氟呱啶-1-基)喹啉-6-羧酸(350 mg，1.20 mmol)的N,N-二甲基甲醯胺(7 mL)的溶液中加入2-{6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基}-4-溴苯胺(370 mg，1.32 mmol)和N,N-二異丙基乙胺(464 mg，3.59 mmol)，最後把O-(7-氮雜苯並三氮唑-1-基)-N,N,N,N-四甲基脲六氟膦鹽(592 mg，1.56 mmol)加入反應瓶中，將反應混合物在80°C攪拌12小時。將反應混合物加入水(20 mL)中，用乙酸乙酯(30 mL x 3)萃取。合併有機相，用飽和食鹽水(30 mL)洗一遍，有機相合併用無水硫酸鎂乾燥，過濾，濾液旋乾得殘餘物。殘留物用乙酸乙酯(20 mL)稀釋，再用石油醚緩慢滴定，直到白色固體析出，將白色固體過濾收集得到期望產物N-(2-{6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基}-4-溴苯基)-8-(4,4-二氟呱啶-1-基)喹啉-6-甲醯胺(150 mg，0.28 mmol，收率：23%)。LCMS (ESI): [M+H] += 556.6。
第四步：將2-羥基乙基磺醯氨(50.7 mg，0.41 mmol)和(1R,2R)-N1,N2-二甲基環己烷-1,2-二胺(38.8 mg，0.27 mmol)加入至N,N-二甲基甲醯胺(3.00 mL)中，在25°C下加入碘化亞銅(26.0 mg，0.14 mmol)和磷酸鉀(223 mg，1.08 mmol)，並在50°C攪拌5分鐘。隨後將N-(2-{6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基}-4-溴苯基)-8-(4,4-二氟呱啶-1-基)喹啉-6-甲醯胺(150 mg，0.27 mmol)一次加入，將混合物在氮氣的保護下加熱至90°C攪拌4小時。向反應混合物中加入氨水(5 mL)和水(15 mL)，用乙酸乙酯(20 mL x 3)萃取。合併有機相，用飽和食鹽水(20 mL)洗一遍，有機相合併用無水硫酸鎂乾燥，過濾，濾液旋乾得殘餘物。殘留物用製備型HPLC (C18，36-76%梯度的水(甲酸)/乙腈)純化，得到黃色固體化合物N-(2-{6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基}-4-(2-羥基乙磺醯氨基)苯基)-8-(4,4-二氟呱啶-1-基)喹啉-6-甲醯胺(80 mg，0.20 mmol，收率：49%)。LCMS (ESI): [M+H] += 661.2， 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 9.68 (d, J= 11.6 Hz, 2H), 9.00 (dd, J= 1.6, 4.0Hz, 1H), 8.50 (dd, J= 1.2, 8.4 Hz, 1H), 8.22 (s, 1H), 8.01 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 7.73 - 7.61 (m, 2H), 7.14 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 7.00 (dd, J= 2.4, 8.8 Hz, 1H), 4.92 (s, 1H), 3.76 (t, J= 6.8 Hz, 2H), 3.58 (br s, 4H), 3.25 (br t, J= 6.8 Hz, 2H), 2.88 (br d, J= 4.8 Hz, 4H), 2.32 - 2.21 (m, 4H), 1.53 (br s, 4H), 0.34 (s, 4H)。
實施例101：N-(2-氨基-4-(4,4-二氟呱啶-1-基)-5-氟苯並[d]噻唑-6-基)-4-((2-羥基-1-甲基乙基)磺醯氨基)-2-(螺[2.5]辛-5-烯-6-基)苯甲醯胺
第一步：向叔-丁基 N-[6-氨基-4-(4,4-二氟呱啶-1-基)-5-氟-1,3-苯並噻唑-2-基]-N-[(叔-丁氧基)羰基]氨基甲酯(772 mg，1.54 mmol)的四氫呋喃 (10 mL)的溶液中加入4-溴-2-{螺[2.5]辛-5-烯-6-基}苯甲醯氯(500 mg，1.54 mmol)和N,N-二異丙基乙胺(595 mg，4.61 mmol)，將反應混合物在25°C攪拌12小時。將反應混合物加入水(60 mL)中，用乙酸乙酯(60 mL x 3)萃取。合併有機相，用飽和食鹽水(40 mL)洗一遍，有機相合併用無水硫酸鎂乾燥，過濾，濾液旋乾得殘餘物。殘留物用快速柱色譜純化(矽膠，0-2%梯度的四氫呋喃/石油醚)得到黃色固體叔-丁基 N-[6-(4-溴-2-{螺[2.5]辛-5-烯-6-基}苯甲醯氨基)-4-(4,4-二氟呱啶-1-基)-5-氟-1,3-苯並噻唑-2-基]-N-[(叔-丁氧基)羰基]氨基甲酯(0.58 g，0.74 mmol，收率：48%)。LCMS (ESI): [M+H] += 793.1； 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 9.96 (s, 1H), 8.07 (d, J= 6.4 Hz, 1H), 7.57 (dd, J= 1.6, 8.4 Hz, 1H), 7.50 (d, J= 1.2 Hz, 1H), 7.42 (s, 1H), 5.79 (br s, 1H), 3.40 (br d, J= 5.2 Hz, 4H), 2.39 (br s, 2H), 2.18 - 2.02 (m, 4H), 1.97 (br s, 2H), 1.55 (s, 18H), 1.42 (br t, J= 6.0 Hz, 2H), 0.32 - 0.11 (m, 4H)。
第二步：向叔-丁基 N-[6-(4-溴-2-{螺[2.5]辛-5-烯-6-基}苯甲醯氨基)-4-(4,4-二氟呱啶-1-基)-5-氟-1,3-苯並噻唑-2-基]-N-[(叔-丁氧基)羰基]氨基甲酯(500 mg，0.63 mmol)和乙基 2-氨磺醯丙酯(172 mg，0.95 mmol)的二氧六環(10 mL)溶液中加入2-二叔丁基膦-2',4',6'-三異丙基聯苯(53.6 mg，0.13 mmol)、磷酸鉀(410 mg，1.89 mmol)和三(二亞苄基丙酮)二鈀(59.1 mg，0.06 mmol)。反應液用氮氣置換三次，並在氮氣氛圍下加熱至80°C攪拌4小時。將反應液冷卻至室溫，用水50 mL)和乙酸乙酯(80 mL x 3)萃取。合併有機相，飽和食鹽水洗滌(50 mL)，用無水硫酸鎂乾燥，過濾，濾液旋乾得殘餘物。殘留物用快速柱色譜純化(矽膠，0-18%梯度的四氫呋喃/石油醚)得到黃色固體乙基 2-({4-[(2-{二[(叔-丁氧基)羰基]氨基}-4-(4,4-二氟呱啶-1-基)-5-氟-1,3-苯並噻唑-6-基)氨基羰基]-3-{螺[2.5]辛-5-烯-6-基}苯基}氨磺醯)丙酯(400 mg，0.45 mmol，收率：71%)。LCMS (ESI): [M+H] += 892.2。
第三步：將乙基 2-({4-[(2-{二[(叔-丁氧基)羰基]氨基}-4-(4,4-二氟呱啶-1-基)-5-氟-1,3-苯並噻唑-6-基)氨基羰基]-3-{螺[2.5]辛-5-烯-6-基}苯基}氨磺醯)丙酯(0.40 g，0.45 mmol)的二氯甲烷溶液(10 mL)中加入三氟乙酸(2 mL)。混合物在25°C下攪拌2小時。將反應液倒入水(40 mL)中，加入10%的碳酸氫鈉水溶液(50 mL)調pH至7，再用乙酸乙酯(100 mL x 3)萃取。合併有機相，用無水硫酸鎂乾燥，過濾，濾液旋乾得到黃色粗品固體乙基 2-(N-(4-((2-氨基-4-(4,4-二氟呱啶-1-基)-5-氟苯並[d]噻唑-6-基)氨基羰基)-3-(螺[2.5]辛-5-烯-6-基)苯基)氨磺醯)丙酯(0.37 g，0.43 mmol，收率：95%)。LCMS (ESI): [M+H] += 692.2。
第四步：乙基 2-(N-(4-((2-氨基-4-(4,4-二氟呱啶-1-基)-5-氟苯並[d]噻唑-6-基)氨基羰基)-3-(螺[2.5]辛-5-烯-6-基)苯基)氨磺醯)丙酯 (350 mg，0.51 mmol)加入至四氫呋喃(8 mL)溶液中，在0°C下分批加入四氫鋁鋰(36.1 mg，1.01 mmol)，混合物在0-25°C攪拌1小時。反應液用水(0.05 mL)和10%氫氧化鈉水溶液(0.1 mL)淬滅，過濾，濾液旋乾得殘餘物。殘餘物先用製備型HPLC (C18，24-64%梯度的水(氨水和碳酸氫銨)/乙腈)純化得到白色固體化合物N-(2-氨基-4-(4,4-二氟呱啶-1-基)-5-氟苯並[d]噻唑-6-基)-4-((2-羥基-1-甲基乙基)磺醯氨基)-2-(螺[2.5]辛-5-烯-6-基)苯甲醯胺(60 mg，0.09 mmol，收率：18%)。LCMS (ESI): [M+H] += 650.1； 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 10.18 - 9.80 (m, 1H), 9.52 (s, 1H), 7.70 (d, J= 6.8 Hz, 1H), 7.55 (s, 2H), 7.45 (d, J= 8.4 z, 1H), 7.19 (dd, J= 2.0, 8.4 Hz, 1H), 7.09 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 5.75 (br s, 1H), 5.25 - 4.74 (m, 1H), 3.85 (dd, J= 4.4, 11.2 Hz, 1H), 3.46 (dd, J= 8.0, 10.8 Hz, 1H), 3.39 - 3.34 (m, 4H), 3.20 (dt, J= 4.4, 7.2 Hz, 1H), 2.33 (br s, 2H), 2.18 - 2.03 (m, 4H), 1.99 (br s, 2H), 1.42 (br t, J= 5.6 Hz, 2H), 1.29 (d, J= 6.8 Hz, 3H), 0.37 - 0.17 (m, 4H)。
實施例102：2-{6-氮雜螺[2.5]辛烷-6-基}-N-[8-((3R,5R)-3,5-二甲基嗎啉)-1,7-萘啶-6-基]-4-[1-羥基丙烷-2-磺醯氨基]苯甲醯胺
實施例102參照實施例 94的類似合成路線製備得到的；LCMS (ESI): [M+H] += 609.3； 1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 12.97 (s, 1H), 10.21 (s, 1H), 8.77 (dd, J= 4.1, 1.7 Hz, 1H), 8.34-8.24 (m, 2H), 8.10 (d, J= 8.6 Hz, 1H), 7.64 (dd, J= 8.4, 4.1 Hz, 1H), 7.31 (d, J= 2.2 Hz, 1H), 7.17 (dd, J= 8.6, 2.2 Hz, 1H), 5.02 (s, 1H), 4.44 (s, 2H), 3.96 (dd, J= 11.1, 3.4 Hz, 2H), 3.85 (dd, J= 11.3, 4.3 Hz, 1H), 3.62-3.46 (m, 3H), 3.29 (t, J= 7.9 Hz, 1H), 3.02 (d, J= 29.5 Hz, 4H), 2.11-1.38 (m, 4H), 1.30 (dd, J= 6.8, 1.7 Hz, 3H), 0.98 (d, J= 6.2 Hz, 6H), 0.42 (s, 4H)。
效果實施例1：酶學活性檢測實驗
材料：人源KIF18A (氨基酸序列1-417)，購於上海維亞生物科技有限公司；ADP-Glo TM蛋白激酶試劑盒購自美國普洛麥格公司；微管蛋白購自美國Cytoskeleton公司；384孔檢測板以及多功能酶標儀Envision購自美國珀金埃爾默公司。
酶學活性檢測：使用DMSO將化合物粉末溶解成10 mM的儲存液；在微孔板中對化合物進行梯度稀釋，並使其最終濃度為0-10 μM之間。然後依次在微孔板中加入微管蛋白、化合物、ATP、以及KIF18A蛋白各2.5 μL，並在室溫反應120分鐘。酶反應終濃度為微管60 μg/mL、ATP 25 μM、KIF18A蛋白2.5 nM。酶反應結束後，每孔加入10 μl ADP-GLO反應試劑，常溫孵育30分鐘。之後，每孔再加入20 μl 檢測試劑，常溫避光孵育30分鐘。最後使用珀金埃爾默Envision進行化學發光檢測。
表1：本發明化合物的酶學活性生物資料
實施例 KIF18A_nM 實施例 KIF18A_nM 實施例 KIF18A_nM
1 190 35 29 69 1034
2 251 36 39 70 43
3 68 37 121 71 128
4 29 38 131 72 ＞3000
5 28 39 38 73 ＞3000
6 241 40 32 74 ＞3000
7 100 41 38 75 387
8 280 42 213 76 46
9 49 43 28.7 77 848
10 2755 44 105 78 193
11 191 45 28 79 943
12 80 46 39 80 9
13 27 47 39 81 35
14 32 48 108 82 33
15 205 49 1220 83 27
16 29 50 1490 84 40
17 28 51 455 85 ＞3000
18 12 52 149 86 223
19 13 53 94 87 10
20 218 54 27 88 41
21 38 55 250 89 179
22 1936 56 34 90 341
23 42 57 77 91 173
24 7 58 32 92 2258
25 5 59 38 93 ＞3000
26 31 60 66 94 255
27 13 61 15 95 242
28 46 62 28 96 153
29 28 63 35 97 153
30 27 64 116 98 166
31 71 65 232 99 174
32 8 66 23 100 24
33 1637 67 53 101 139
34 63 68 306 102 150
效果實施例2：細胞増殖活性檢測實驗
材料與細胞： OVCAR3細胞購於南京科佰生物科技有限公司。RPMI-1640培養基、胎牛血清、CyQUANT Direct Cell Proliferation Assay試劑盒購於美國賽默飛公司； 96孔細胞培養板購於美國康寧公司。
細胞培養：用含10%胎牛血清的RPMI-1640培養液對OVCAR3細胞進行培養，並放置在 37°C、5% CO 2的培養箱中。處於對數生長期細胞方可用於實驗。
細胞増殖活性檢測：
將OVCAR3細胞接種於96孔細胞培養板，每孔90 μl，置於37°C、5%CO 2的培養箱中培養過夜。使用DMSO將化合物粉末溶解成10 mM的儲存液；在微孔板中對化合物進行梯度稀釋，並使其最終濃度為0-10 μM之間。每孔加入10 μL含化合物的細胞培養液，使最終的DMSO含量為0.2%。細胞板置於37°C、5% CO 2的培養箱中培養3天。每孔加入100 μl的CyQUANT檢測試劑，37°C反應60分鐘，並使用珀金埃爾默公司的Envision進行螢光檢測。
表2：本發明化合物的OVCAR-3 細胞活性生物資料
實施例 OVCAR-3 _IC50_nM 實施例 OVCAR-3 _IC50_nM 實施例 OVCAR-3 _IC50_nM
1 1027 34 166 67 7
2 899 35 27 68 119
3 566 36 64 69 1038
4 1348 37 121 70 9
5 6 38 NT 71 18
6 1485 39 15 72 ＞3000
7 ＞10000 40 12 73 1028
8 ＞3000 41 4 74 1526
9 55 42 7 75 83
10 614 43 7 76 34
11 28 44 21 77 745
12 80 45 18 78 12
13 9 46 12 79 47
14 9 47 48 80 18
15 71 48 236 81 18
16 33 49 1342 82 13
17 20 50 NT 83 15
18 16 51 385 84 11
19 18 52 83 86 34
20 18 53 4 87 ＞3000
21 358 54 6 88 154
22 NT 55 112 89 32
23 ＞10000 56 12 90 96
24 20 57 NT 91 13
25 46 58 12 92 NT
26 592 59 14 93 NT
27 23 60 18 94 5.9
28 26 61 74 95 4.7
29 13 62 13 96 11.3
30 7 63 11 97 13.9
31 8 64 76 98 17
32 347 65 420 99 17
33 NT 66 35 100 11
NT表示沒有測試
效果實施例3：CyQuant細胞増殖活性檢測實驗
材料與細胞： HT29細胞購於南京科佰生物；RPMI-1640培養基購於ThermoFisher公司（美國）；胎牛血清購於ThermoFisher公司（美國）； Trypsin-EDTA (0.25%)購於ThermoFisher公司（美國）；DMSO購於SIGMA公司（美國）；96孔板購於ThermoFisher公司（美國）；CyQuant試劑購於ThermoFisher公司（美國）。
細胞培養： HT29細胞用含10%胎牛血清的RPMI-1640培養基於37°C、5% CO 2條件下培養。處於對數生長期細胞方可用於實驗。
細胞増殖活性檢測：利用CyQuant試劑檢測化合物對HT29細胞的增殖抑制活性。調整細胞密度，每孔100 μl接種96孔板（HT29為2000/孔），置於37 °C、5% CO 2條件下培養過夜。加入各目的濃度化合物（起始濃度3000 nΜ，3倍稀釋，9個濃度梯度），DMSO含量為0.2%。細胞板置於37 °C、5% CO 2條件下孵育3天。加入CyQuant試劑孵育1小時，Envision讀板，利用XLFIT計算IC 50。
表3：本發明化合物的HT-29細胞活性生物資料
實施例 HT29 _IC50_nM 實施例 HT29 _IC50_nM 實施例 HT29 _IC50_nM
1 NT 36 62 71 17
2 NT 37 25 72 ＞3000
3 NT 38 126 73 1411
4 2016 39 18 74 1793
5 7 40 10 75 44
6 NT 41 4 76 31
7 ＞10,000 42 17 77 NT
8 ＞3000 43 17 78 11
9 37 44 26 79 55
10 1267 45 31 80 20
11 28 46 14 81 8
12 102 47 40 82 14
13 13 48 360 83 NT
14 17 49 1426 84 25
15 97 50 NT 85 NT
16 56 51 387 86 56
17 30 52 92 87 ＞3,000
18 35 53 6 88 425
19 28 54 18 89 32
20 23 55 89 90 106
21 NT 56 13 91 16
22 NT 57 NT 92 NT
23 NT 58 17 93 NT
24 26 59 22 94 NT
25 84 60 13 95 NT
26 ＞3000 61 111 96 17
27 33 62 12 97 17
28 9 63 15 98 21
29 11 64 82 99 22
30 10 65 372 100 12
31 9 66 80
32 927 67 13
33 NT 68 100
34 446 69 1106
35 57 70 16
NT表示沒有測試
效果實施例4：人源代肝細胞的細胞毒性實驗測試。
材料：一個供體將用於細胞毒性測試，人源代肝細胞的資訊見下表。
供體 種族 來源
1 高加索人 BioIVT
註：可能使用其他人種的肝細胞，具體資訊將在試驗報告中體現。 1)  CellTiter-Glo Luminescent Cell Viability Assay System 發光細胞活力測定系統購自Promega (Madison, WI)。
儀器：
儀器 供應商 Cat# or Model
96孔板 Corning 354407
離心機 Eppendorf 5804R&5810R
二氧化碳培養箱 Thermo Scientific 371
細胞計數儀 Nexcelom Bioscience LLC Cellmeter K2
振盪器 IKA MS3 BASIC
酶標儀 TECAN INFINITE 200 PRO
實驗設計：
將以下介質在水浴中加熱至37°C: 根據下表配製肝細胞復蘇培養基、接種培養基和孵育培養基。 復蘇培養基
試劑 初始濃度 終濃度 體積
Williams’ Medium E - - 31.2 mL
Isotonic Percoll - 30% 13.5 mL
DPBS（10×） - - 1.5 mL
GlutaMAX™-1（100×） 200 mM/100× 2 mM 500 μL
HEPES 1 M 15 mM 750 μL
FBS - 5% 2.5 mL
人重組胰島素 4 mg/mL 4 μg/mL 50 μL
地塞米松 10 mM 1 μM 5 μL
接種培養基
試劑 初始濃度 終濃度 體積
Williams’ Medium E - - 45.7 mL
FBS - 5% 2.5 mL
地塞米松 10 mM 1 μM 5 μL
青鏈黴素混合溶液 青黴素：10000 u/mL 鏈黴素：10000 μg/mL 青黴素：100 u/mL 鏈黴素：100 μg/mL 500 μL
人重組胰島素 4 mg/mL 4 μg/mL 50 μL
GlutaMAX™-1（100×） 200 mM/100× 2 mM 500 μL
HEPES 1 M 15 mM 750 μL
孵育培養基
試劑 初始濃度 終濃度 體積
Williams’ Medium E - - 48 mL
地塞米松 10mM 0.1 μM 0.5 μL
ITS（100×） - - 500 μL
青鏈黴素混合溶液 青黴素：10000 u/mL 鏈黴素：10000 μg/mL 青黴素：50 u/mL 鏈黴素：50 μg/mL 250 μL
GlutaMAX™-1（100×） 200 mM/100× 2 mM 500 μL
HEPES 1 M 15 mM 750 μL
1)  取一管超低溫保存的肝細胞，確保肝細胞在復蘇之前仍處於低溫冰凍狀態。將肝細胞迅速置於37°C水浴中並輕搖直至所有冰晶全部分散，噴灑75%乙醇後轉移至生物安全櫃中。 2)  將肝細胞小管的內容物（1 mL，約5 × 10 6個細胞）傾入盛有50 mL復蘇培養基的50 mL離心管中，將其於100 g離心10分鐘。離心後，吸出復蘇培養基並加入足量接種培養基得到細胞密度約1.0 × 10 6cells/mL的細胞混懸液。用Cellometer®細胞計數儀對肝細胞進行計數及確定活細胞密度，肝細胞成活率必須大於80%，用接種培養基將細胞密度調整為0.2 × 10 6cells/mL，接種於collagen I包被的96孔板中，每孔100 µL。將培養板置於5%的CO 2培養箱中，95%相對濕度，37°C培養4–6小時。 3)  在DMSO中配製200X的試驗化合物原液(可根據溶解度降低試驗化合物的原液濃度)。DMSO終濃度為0.5%。 4)  將2.5 μL待測化合物原液加入497.5 μL的肝細胞培養培養基中，在無菌的96孔板上配製工作液。 5)  將肝細胞培養液從細胞板上取下，在相應的孔中加入125 μL的工作液，每孔重複三次。在37°C、 5% CO 2下孵育板72小時。每處理24小時後，用肝細胞培養基新稀釋的試驗化合物和陽性對照化合物更換細胞板中的培養基。將細胞板放回培養箱 直接向96孔板中每個孔加入50 µL的CellTiter-Glo試劑。在室溫下用搖板器搖10分鐘。10分鐘後，取100 µL以上孵育液至新的白色平底不透明96孔板上，記錄螢光。
數據分析：
所有計算均使用Microsoft Excel進行。
測試化合物的存活率可以用下式計算：
將% Vehicle與被試化合物的濃度進行擬合，然後使用GraphPad Prism5.0將資料擬合為變斜率的s型劑量-回應曲線。根據曲線計算該化合物的IC 50，公式如下：Y=Bottom + (Top-Bottom)/(1+10 ^((LogIC50-X)*HillSlope))。
效果實施例5：人源代肝細胞微球模型實驗測試
細胞：供體信息：男性，高加索人，36歲（Lot No. NFX, BioIVT）
儀器：
儀器 品牌 貨號/型號
96孔超低吸附培養板 Corning 4515
離心機 Eppendorf 5804R
細胞培養箱 Thermo Scientific 371
細胞計數儀 Invitrogen Countess II
震盪器 IKA MS 3
酶標儀 Tecan Infinite M200
細胞接種和培養： 1)  取一管超低溫保存的肝細胞，確保肝細胞在復蘇之前處於低溫冰凍狀態。將肝細胞迅速置於37°C水浴中並輕搖直至所有的冰晶全部散開，噴灑70%乙醇後轉移至生物安全櫃中。 2)  將肝細胞小管的內容物傾入盛有50mL復蘇培養基的50mL離心管中，將其於100g離心3分鐘。離心後，吸出復蘇培養基並加入足量孵育培養基得到細胞密度約為1.0 x10 6cells/mL細胞混懸液。 3)  用Cellometer Vision 對肝細胞進行計數及確定活細胞密度，肝細胞成活率必須大於80%，用接種培養基將細胞密度調整為4000個/孔，每孔接種100µL。 4)  放入細胞培養箱中，恆溫37 °C孵育7-9天直至微球形成。
化合物的準備及給藥： 1)  使用細胞培養基對化合物，按照三倍稀釋法進行稀釋，稀釋梯度如下表。對照化合物的最大濃度是200 μM，測試化合物最大濃度（依據客戶要求）為5 μM，DMSO的最終濃度為0.1%。 2)  在微球形成後，進行給藥。每次給藥前需將細胞培養板孔中的培養基吸乾，並加入100μL的化合物工作液。每三天給藥一次，直至成球後的第十四天。
試驗指標檢測： 1)  培養14天後，從培養箱中取出細胞培養板，取80μL上清檢測白蛋白和乳酸脫氫酶的含量。 2)  CellTiter-Fluor™ Cell Viability試劑盒室溫下解凍，將10μL GF-AFC底物加入到10mL2×工作液中，並補充等體積的PBS稀釋成1×工作液。 3)  細胞培養板每孔中加入100μL工作液，並在37 °C孵育30 分鐘後，吸取上清80μL至96孔黑板中，於激發波長400 nm和發射波長505 nm處檢測吸光度。
數據分析： 1)  細胞存活百分比（% Vehicle）使用以下公式進行計算： 2)  使用GraphPad Prism 8.0.2計算IC 50，軟體運算公式如下： Y=Bottom + (Top-Bottom)/(1+10 ^((LogIC50-X)*HillSlope))
無
無。

Claims (21)

  1. 一種具有式(I)結構的化合物或其藥學上可接受的鹽、立體異構體、同位素異構體、前藥、水合物或溶劑合物： 式(I) 其中，W 1表示CR W1或N； 其中，W 2表示CR W2或N； 其中，Z表示-CR TR T'或-NR SR S'； 其中，R T和R T'與與之共同相連的C原子一起形成具有選自以下結構的環： ； 其中，R S和R S'與與之共同相連的N原子一起形成具有選自以下結構的環： ； 其中，Y 1、Y 2、Y 3各自獨立地表示-(CR aR b) o-(NR a) p-(CR a'R b') q-； 其中，A、B各自獨立地表示-(CR aR b) m-； 其中，L 1表示-C(O)NH-、-HNC(O)-、5-6元雜芳基、 、 、 、 、 、 ； 其中，L 2表示不存在、-C 1-C 6亞烷基-、-NR a-、-NR a(C 1-C 6亞烷基)-、-C(O)NR a(C 1-C 6亞烷基)-、-O-、-O-( C 1-C 6亞烷基)、-S-、-S(O)-、-S(O) 2-、-S(O) 2NR a-或者-S(O)(NR a)-； 其中，R 1表示L 3-R 3； 其中，R 2表示氫、鹵素、氰基、硝基、羥基C 1-C 6烷基、C 1-C 6烷基、C 3-C 8環烷基、鹵代C 1-C 6烷基、-OR a、-SO 3R a、-SR a、-SF 5、-S(O)R a、-O-鹵代C 1-C 6烷基或-NR aR b； 其中，L 3表示不存在、C 1-C 6亞烷基、-NR a-、-NR aSO 2-、-SO 2NR a-、-S(=O)(NR a)-、-P(O)(OR a) 2、-NR aP(O)(OR a) 2或-NR aP(O)(R a) 2； 其中，R 3表示不存在、氫或者被0-3個選自鹵素、-OR a、-NR aR b、氰基、-O-鹵代C 1-C 6烷基取代的C 1-C 6烷基或C 3-C 6環烷基； 其中，R W1和R W2各自獨立地表示氫、鹵素、氰基、硝基、羥基C 1-C 6烷基、C 1-C 6烷基、C 3-C 8環烷基、鹵代C 1-C 6烷基、-OR a、-SO 3R a、-S(O)R a、-O-鹵代C 1-C 6烷基、-SR a、-SF 5或-NR aR b； 其中，Cy 1表示具有以下結構基團： ， 並且所述的Cy 1還可以任意地被0-3個選自以下取代基的基團所取代：鹵素、C 1-C 6烷基、鹵代C 1-C 6烷基、羥基C 1-C 6烷基、OR a、-O-鹵代C 1-C 6烷基、5-6元雜芳基、苯基、-SR a、-SF 5、氰基、硝基、-NR aR b、-NR aC(O)R b、-C(O)NR aR b、-OC(O)R a、-C(O)R a、-P(O)R aR b、-C(O)OR a、-S(O)R a、-S(O) 2R a和-S(O) 2NR aR b； 其中，Cy 2表示3-12元飽和或不飽和的單環或者雙環，該環中可以任意地含有0-3個選自O、N和S的雜原子，並且所述的Cy 2還可以任意地被0-3個選自以下取代基的基團所取代：鹵素、C 1-C 6烷基、鹵代C 1-C 6烷基、羥基C 1-C 6烷基、-OR a、-O-鹵代C 1-C 6烷基、-SR a、-SF 5、氰基、硝基、-NR aR b、-NR aC(O)R b、-C(O)NR aR b、-OC(O)R a、-C(O)OR a、-S(O)R a、-S(O) 2R a和-S(O) 2NR aR b； 其中，R a、R b、R a'、R b'各自獨立地表示氫、鹵素、C 1-C 6烷基、C 3-C 6環烷基、鹵代C 1-C 6烷基或羥基C 1-C 6烷基；或者R a、R b一起與與之相連的原子形成3-6元飽和或不飽和環，該環中可以任意地含有0-2個選自O、S和N的雜原子；或者R a'、R b'一起與與之相連的原子形成3-6元飽和或不飽和環，該環中可以任意地含有0-2個選自O、S和N的雜原子； 其中，虛線表示單鍵或雙鍵； 其中，m、o、p、q表示0-3的整數。
  2. 如請求項1所述的化合物或其藥學上可接受的鹽、立體異構體、同位素異構體、前藥、水合物或溶劑合物，其中，W 1表示CH或N。
  3. 如請求項1或2所述的化合物或其藥學上可接受的鹽、立體異構體、同位素異構體、前藥、水合物或溶劑合物，其中，W 2表示CH或N。
  4. 如請求項1-3任意一項所述的化合物或其藥學上可接受的鹽、立體異構體、同位素異構體、前藥、水合物或溶劑合物，其中，L 3表示-NR aSO 2-、-SO 2NR a-或-S(=O)(NR a)-。
  5. 如請求項1-4任意一項所述的化合物或其藥學上可接受的鹽、立體異構體、同位素異構體、前藥、水合物或溶劑合物，其中， L 3表示-NR aSO 2-。
  6. 如請求項1-5任意一項所述的化合物或其藥學上可接受的鹽、立體異構體、同位素異構體、前藥、水合物或溶劑合物，其中，R 3表示氫或者被0-3個選自鹵素、-OR a、-NR aR b、氰基和-O-鹵代C 1-C 6烷基之基團取代的C 1-C 6烷基或C 3-C 6環烷基。
  7. 如請求項1-6任意一項所述的化合物或其藥學上可接受的鹽、立體異構體、同位素異構體、前藥、水合物或溶劑合物，其中，R 3表示被0-3個選自鹵素、-OR a、-NR aR b、氰基和-O-鹵代C 1-C 6烷基之基團取代的C 1-C 6烷基。
  8. 如請求項1-7任意一項所述的化合物或其藥學上可接受的鹽、立體異構體、同位素異構體、前藥、水合物或溶劑合物，其中，Z表示-NR SR S'。
  9. 如請求項1-8任意一項所述的化合物或其藥學上可接受的鹽、立體異構體、同位素異構體、前藥、水合物或溶劑合物，其中，Z表示： ； 其中，R a、R b各自獨立地表示氫、C 1-C 6烷基、C 3-C 6環烷基、鹵代C 1-C 6烷基或羥基C 1-C 6烷基；或者R a、R b一起與與之相連的原子形成3-6元飽和或不飽和環，該環中可以任意地含有0-2個選自O、S和N的雜原子。
  10. 如請求項1-9任意一項所述的化合物或其藥學上可接受的鹽、立體異構體、同位素異構體、前藥、水合物或溶劑合物，其中，Z表示： ，其中，R a、R b各自獨立地表示氫、C 1-C 6烷基、C 3-C 6環烷基、鹵代C 1-C 6烷基或羥基C 1-C 6烷基；或者R a、R b一起與與之相連的原子形成3-6元飽和或不飽和環，該環中可以任意地含有0-2個選自O、S和N的雜原子。
  11. 如請求項1-10任意一項所述的化合物或其藥學上可接受的鹽、立體異構體、同位素異構體、前藥、水合物或溶劑合物，其中，Z表示： 。
  12. 如請求項1-11任意一項所述的化合物或其藥學上可接受的鹽、立體異構體、同位素異構體、前藥、水合物或溶劑合物，其中，L 1表示-C(O)NH-、-HNC(O)-、5-6元雜芳基、 、 、 、 、 、 。
  13. 如請求項1-12任意一項所述的化合物或其藥學上可接受的鹽、立體異構體、同位素異構體、前藥、水合物或溶劑合物，其中，L 1表示-C(O)NH-。
  14. 如請求項13所述的化合物或其藥學上可接受的鹽、立體異構體、同位素異構體、前藥、水合物或溶劑合物，其中，Cy 1表示以下基團： 。
  15. 如請求項1-14任意一項所述的化合物或其藥學上可接受的鹽、立體異構體、同位素異構體、前藥、水合物或溶劑合物，其中，L 1表示：-C(O)NH-、-HNC(O)-、5-6元雜芳基、 、 、 、 、 、 。
  16. 如請求項15所述的化合物或其藥學上可接受的鹽、立體異構體、同位素異構體、前藥、水合物或溶劑合物，其中，L 1表示以下任意基團之一： 。
  17. 如請求項1-16任意一項所述的化合物或其藥學上可接受的鹽、立體異構體、同位素異構體、前藥、水合物或溶劑合物，其中L 2表示不存在、-C 1-C 6亞烷基-或-NH-。
  18. 如請求項1-17任意一項所述的化合物或其藥學上可接受的鹽、立體異構體、同位素異構體、前藥、水合物或溶劑合物，其中，L 2表示不存在。
  19. 如請求項1-18任意一項所述的化合物或其藥學上可接受的鹽、立體異構體、同位素異構體、前藥、水合物或溶劑合物，其中，Cy 2表示飽和，部分飽和或不飽和的3-、4-、5-、6-、7-元單環，或3-、4-、5-、6-、7-元並環，且含有0~3個N雜原子和0~2個O或S雜原子，同時單環或並環被0-3個選自以下取代基：鹵素、氰基、硝基、羥基C 1-C 6烷基、C 1-C 6烷基、C 3-C 8環烷基、鹵代C 1-C 6烷基、-OR a、-SO 3R a、-S(O)R a、-O鹵代C 1-C 6烷基、-SR a、-SF 5或NR aR b取代的嗎啉基、呱啶基、氮雜環丁烷基、吡咯烷基、環丙基、環丁基、環戊基、環己基、呱嗪基或四氫呋喃基，其中，R a、R b各自獨立地表示氫、鹵素、C 1-C 6烷基、C 3-C 8環烷基、鹵代C 1-C 6烷基或羥基C 1-C 6烷基；或者R a、R b一起與與之相連的原子形成3-6元環，該環中含有0-2個選自O、N和S的雜原子。
  20. 如請求項1-19任意一項所述的化合物或其藥學上可接受的鹽、立體異構體、同位素異構體、前藥、水合物或溶劑合物，其中，Cy 2表示： 。
  21. 一種化合物，具有以下結構： 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102
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