TW202328450A

TW202328450A - Agt抑制劑及其用途

Info

Publication number: TW202328450A
Application number: TW111139707A
Authority: TW
Inventors: 坤元崔; 王聖軍; 陳清燕
Original assignee: 大陸商厦門甘寶利生物醫藥有限公司
Priority date: 2021-10-20
Filing date: 2022-10-19
Publication date: 2023-07-16
Also published as: CN113862268A; WO2023066236A1; CA3235994A1

Abstract

本申請涉及一種RNAi劑或其藥學上可接受的鹽，所述RNAi劑的結構中含有載體結構和干擾核酸。本申請還涉及使用所述RNAi劑以抑制AGT基因表達的方法及預防與治療AGT相關疾病的方法。

Description

AGT抑制劑及其用途

本申請涉及生物醫藥領域，具體的涉及一種抑制AGT基因表達的RNAi劑及其應用。

RNAi

RNAi(RNA干擾)於1998年，由安德魯·法厄(Andrew Z. Fire)等在秀麗隱桿線蟲中進行反義RNA抑制實驗時發現，並將這一過程稱為RNAi。這一發現被《Science》雜誌評為2001年的十大科學進展之一，並名列2002年十大科學進展之首。自此以後，以RNAi為作用機理的siRNA作為潛在的基因治療藥物得到人們廣泛的關注，2006年，安德魯·法厄與克雷格·梅洛(Craig C. Mello)由於在RNAi機制研究中的貢獻獲得諾貝爾生理或醫學獎。RNAi 是在許多生物中，包括動物、植物和真菌，都可由雙鏈RNA(dsRNA)觸發的，在RNAi過程中，一種稱為“Dicer”的核酸內切酶將長鏈dsRNA切割或“切丁”成21~25個核苷酸長的小片段。這些小片段，被稱為小干擾RNA (siRNA)，其中的反義鏈(Guide strand)被加載到Argonaute蛋白(AGO2)上。AGO2加載發生在RISC-loading複合物中，這是一個三元複合物，由Argonaute蛋白、Dicer和dsRNA結合蛋白(簡稱為TRBP)組成。在裝載過程中，正義鏈(Passenger strand )鏈被AGO2裂解並排出。然後，AGO2使用反義鏈與包含完全互補序列的mRNA結合，然後催化這些mRNA的切割，致使mRNA分裂喪失轉譯模板的作用，進而阻止相關蛋白質的合成。切割後，被切割的mRNA被釋放，加載著反義鏈的RISC-loading複合物被循環用於另一輪的切割。

據統計，在人體內的疾病相關蛋白中，大約超過80%的蛋白質不能被目前常規的小分子藥物以及生物大分子製劑所靶向，屬不可成藥蛋白。旨在通過基因的表達、沉默等功能治療疾病的基因治療被業界認為是繼化學小分子藥物、生物大分子藥物之後的第三代治療藥物，這種療法在基因水平上實現對疾病的治療，不受不可成藥蛋白的制約。作為基因治療中RNAi技術最主流的類型，RNAi技術是從mRNA的水平對疾病進行治療，相比化學小分子藥物及生物大分子藥物在蛋白質水平的治療具有更高的效率。利用RNAi技術，可以根據特定基因序列，設計出特異性高、抑制效果好的siRNA的正義鏈和反義鏈序列，通過固相合成這些單鏈序列，然後正義鏈與反義鏈在特定的退火緩衝液中按照鹼基配對原則配對成siRNA，最後通過載體系統輸送到體內相應靶點，降解目標mRNA，破壞目標mRNA作為轉譯模板的功能，從而阻止相關蛋白的合成。

siRNA的遞送系統

siRNA在血液和組織中不穩定，容易被核酸酶降解，為了提高siRNA的穩定性，可以通過對siRNA的正義鏈和/或反義鏈修飾，但這些化學修飾只提供有限的免受核酸酶降解的保護作用並且可能最終影響siRNA的活性。因此，還需要相應的傳遞系統來保障siRNA安全高效的穿過細胞膜。由於siRNA分子質量較大，且帶有大量負電荷，而且具有高水溶解性，所以自身無法順利穿越細胞膜到達細胞內。

脂質體基本結構是由親水核和磷脂雙分子層構成，具備類似生物膜的磷脂雙分子層，擁有很高的生物相容性，所以脂質體一度成為最受歡迎、應用最廣泛的siRNA載體。脂質體介導的siRNA遞送主要將siRNA包裹到脂質體內，保護siRNA不被核酸酶降解，提高siRNA的通過細胞膜障礙的效率，從而促進細胞的吸收。例如陰離子脂質體、pH敏感性脂質體、免疫脂質體、膜融合脂質體(fusogenic liposome)和陽離子脂質等等，儘管取得了一定的進展，但脂質體本身容易引發炎症反應，給藥前必須使用多種抗組織胺和激素類如西替利嗪和地塞米松類等藥物，以減少可能發生的急性炎症反應，因此在實際臨床應用中並不適合所有治療領域，尤其像慢性B型肝炎這一類治療週期長的疾病，長期使用可能產生的積蓄毒性是潛在的安全隱患，因此需要一種更安全有效的載體系統來遞送siRNA。

肝臟中去唾液酸糖蛋白受體(ASGPR)，是肝細胞特異性表達的受體，是一種高效的內吞型受體。由於體內生理情況下各種糖蛋白在酶或酸水解唾液酸後，暴露出的次末端是半乳糖殘基，所以ASGPR特異性結合的糖為半乳糖基，故又稱半乳糖特異性受體。半乳糖、半乳糖胺、N-乙醯半乳糖胺等單糖和多糖分子都對ASGPR有高親和性。ASGPR主要生理功能是介導血液中去唾液酸糖蛋白、脂蛋白等物質的清除，且與病毒性肝炎、肝硬化、肝癌等肝臟疾病的發生發展有著密切聯繫。ASGPR這一特性的發現，對肝源性疾病的診斷及治療起著重要作用(Ashwell G、Harford J，Carbohydrate specific Receptors of the Liver，Ann Rev Biochem 1982 51:531-554)。結構中含有半乳糖或半乳糖胺及其衍生物的肝源性疾病治療藥物可以特異性地與ASGPR親和，從而具有主動肝靶向性，不需要其它的載體系統來輸送。

血管收縮素原（AGT）與高血壓

血壓是指循環系統中血液對血管壁的壓力。血壓主要是由於動物心臟的跳動。在每次心跳期間，血壓在最大(收縮期)血壓(SBP)和最小(舒張期)血壓(DBP)之間變化。平均動脈壓(MAP)是心跳週期期間的平均動脈壓。血壓可以通過血壓計(即血壓測量計)測量。靜息時的正常血壓在100-140mmHg收縮期和60-90mmHg舒張期的範圍內，並且通常表示為收縮壓(最高讀數)/舒張壓(最低讀數)mmHg。

在未使用降血壓藥物的情況下,收縮壓(SBP)≥140 mmHg 和(或)舒張壓(DBP)≥90 mmHg，定義為高血壓。根據血壓升高水平，將高血壓分為1級、2級和3級。根據血壓水平、心血管危險因素、標靶器官損害、臨床併發症和糖尿病進行心血管風險分層,分為低危、中危、高危和很高危4個層次。血壓分類和定義如下：

分類	SBP（mmHg）	DBP（mmHg）
正常血壓	＜120和	＜80
正常高值	120~139和（或）	80~89
高血壓	≥140和（或）	≥90
1級高血壓（輕度）	140~159和（或）	90~99
2級高血壓（中度）	160~179和（或）	100~109
3級高血壓（重度）	≥180和（或）	≥110
單純收縮期高血壓	≥140和	＜90

根據病症起因，高血壓還可分為原發性高血壓以及繼發性高血壓。原發性高血壓是多種因素導致的高血壓，或者是由不明原因導致的高血壓，有遺傳、地域或者是水鈉瀦留、交感興奮、RAS激活等各種各樣的原因，所以原發性高血壓只能夠控制，不能夠根治。繼發性高血壓是指由某種疾病所導致血壓增高，高血壓是原發疾病的臨床症狀之一，占95%。一般繼發性高血壓常見於腎性高血壓、腎動脈狹窄、原發性高醛固酮症、嗜鉻細胞瘤、多發性大動脈炎等等。

血壓水平與心腦血管病發病和死亡風險之間存在密切的因果關係。有研究發現，基線血壓從115/75 mmHg 到185/115 mmHg，平均隨訪12 年,結果發現診室SBP或DBP與中風、冠心病事件、心血管病死亡的風險呈連續、獨立、直接的正相關關係。SBP每升高20 mmHg 或DBP 每升高10 mmHg，心、腦血管病發生的風險倍增，其中心衰竭和中風是與血壓水平關聯最密切的兩種併發症，同時也發現末期腎臟疾病(ESRD) 的發生率也明顯增加。在重度高血壓，ESRD發生率是正常血壓者的11倍以上,即使血壓在正常高值水平也達1.9倍。因此高血壓治療的根本目標是通過降低血壓，有效預防或延遲中風、心肌梗塞、心衰竭、腎功能不全等併發症發生有效控制高血壓的疾病進程，預防高血壓急症、亞急症等重症高血壓發生。

“腎素-血管收縮素-醛固酮系統”，英文縮寫為RAAS或者RAS（腎素-血管收縮素系統）是人體內對心血管功能有調節作用的系統，受交感神經系統領導，分泌產生的血管收縮素具有收縮血管的作用。RAS途徑的過度刺激或活動是高血壓形成的原因之一。

血管收縮素原(AGT)，是serpin家族的成員，也被稱為SERPINA8，由AGT基因編碼，是RAS所有血管收縮素肽的唯一前體。人AGT有485個氨基酸，其中包括一個33個氨基酸的信號肽，主要在肝臟中產生，並且釋放到體循環中，期間腎素將其轉化為血管收縮素I。隨後通過血管收縮素轉化酶(ACE)將血管收縮素I轉化成血管收縮素II。血管收縮素Ⅰ能刺激腎上腺髓質分泌腎上腺素，但直接收縮血管的作用不明顯；血管收縮素Ⅱ能使全身小動脈收縮而升高血壓，此外，還可促進腎上腺皮質分泌醛固酮，醛固酮作用於腎小管，起保鈉、保水、排鉀作用，從而引起血量增多，血壓升高。作用機制如圖10所示。

臨床一線的降血壓藥主要有五大類，通常使用的降血壓藥分為五大類，一般用字母ABCD來表示，A包括血管收縮素轉換酶抑制劑ACEI（如普利類藥物）和血管收縮素II拮抗劑ARB（如沙坦類藥物）、B是是指β1-受體阻斷劑（如洛爾類藥物）、C是指二氫吡啶鈣通道拮抗劑（如地平類藥物）、D是指利尿劑（如噻嗪類藥物）。這五類降血壓藥的作用機制不完全一樣，根據患者的不同年齡不同血壓水平臨床上對於血壓的控制，首先採用一個藥物，如果一個藥物對血壓的控制效果欠佳，則聯合使用兩個，甚至三個降血壓藥。如果三個降血壓藥都無法將血壓控制到正常範圍，則稱之為難治型高血壓。難治性高血壓是高血壓治療中一個比較常見的臨床問題，也是治療方面的棘手的問題。

當前臨床常用的這五類藥物都需要長期每天不間斷的用藥，有些患者的依從性差，其中的副作用是導致依從性差的主要原因，ACEI類和ARB類都可引起乾咳和水腫，嚴重可導致腎功能不全；CB類藥副作用可見為心跳加速、臉紅、頭疼、腳腫；B類還可導致乏力，對血糖、血脂代謝影響；D類藥可導致身體發軟、抽筋，嚴重可導致痛風。

因此，本領域中存在不同於現有臨床藥物的新的作用機理的、副作用少的有更有效治療的需要。

本申請提供了一種AGT RNAi劑，其通過特異性的干擾AGT基因的mRNA，破壞其作為轉譯模板的功能，阻止血管收縮素原AGT蛋白的表達，從而可以預防和/或治療與RAS途徑相關的疾病，如高血壓，包括“非頑固性高血壓”和“頑固性高血壓”。

本申請的RNAi劑可以由正義鏈和反義鏈通過鹼基配對形成，正義鏈和反義鏈彼此之間至少80%鹼基互補，且部分或全部核苷酸糖基2’位可以是氟或甲氧基，末端可以至少有連續3個核苷酸之間的磷酸酯被硫代。

本申請的RNAi劑的結構中還可以含有使所述RNAi劑具有肝靶向特異性的結構5’MVIP和3'MVIP，其中5’MVIP可以偶聯在所述RNAi劑正義鏈和/或反義鏈5’末端，3’MVIP可以偶聯在所述RNAi劑反義鏈和/或正義鏈3’末端，5’MVIP和3’MVIP都可以包含有（肝靶向特異性）靶向單元X、支鏈L、接頭B和連接鏈D，5’MVIP還可以包含與所述RNAi劑正義鏈或反義鏈5’末端連接的轉接點R ₁，3’MVIP還可以包含與所述RNAi劑正義鏈或反義鏈3’末端連接的轉接點R ₂，所述靶向單元X、支鏈L、接頭B和連接鏈D在5’MVIP與3’MVIP各自的內部或5’MVIP與3’MVIP之間可以相同，也可以不同。通過體內外藥效實驗證明，這種RNAi劑直接降解AGT mRNA，持續高效地抑制AGT基因表達，可用於治療或/和預防AGT基因介導的疾病，如高血壓。

一方面，本申請提供一種RNAi劑或其藥學上可接受的鹽，所述RNAi劑的結構中含有載體結構和干擾核酸，其結構如式IIIa、IIIb或IIIc所示： (IIIa) (IIIb) (IIIc)

其中，

所述干擾核酸靶向AGT基因，其包括反義鏈和正義鏈；

所述載體結構包括5’MVIP（5’MultiValent Import Platform）和/或3’MVIP（3’ MultiValent Import Platform）；

所述5’MVIP由轉接點R ₁、連接鏈D、接頭B、支鏈L和肝靶向特異性配體X組成，所述3’MVIP由轉接點R ₂、連接鏈D、接頭B、支鏈L和肝靶向特異性配體X組成，所述5’MVIP通過轉接點R ₁與正義鏈5’端或反義鏈5’端連接，所述3’MVIP通過轉接點R ₂與正義鏈3’端或反義鏈3’端連接，n和m各自獨立地為0-4的任意整數。

在某些實施方式中，其中所述干擾核酸用於抑制AGT基因表達，

在某些實施方式中，其中所述干擾核酸包括siRNA或miRNA。

在某些實施方式中，其中所述且n+m=2-6的整數，優選n+m=2、3或4，更優選為4。

在某些實施方式中，所述5’MVIP選自表10中5’MVIP01至5’MVIP22中的任一個，和/或所述3’MVIP選自表11中3’MVIP01至3’MVIP27的任一個。

在某些實施方式中，其中所述正義鏈與SEQ ID NO: 1、SEQ ID NO: 7、SEQ ID NO: 8、SEQ ID NO: 10、SEQ ID NO: 11、SEQ ID NO: 12、SEQ ID NO: 17和SEQ ID NO: 18中任意一個或與其相差不超過3個核苷酸的序列具有基本上同源性。

在某些實施方式中，所述反義鏈包含以下的核苷酸序列：SEQ ID NO: 19、SEQ ID NO: 25、SEQ ID NO: 26、SEQ ID NO: 28、SEQ ID NO: 29、SEQ ID NO: 30、SEQ ID NO: 35和SEQ ID NO: 36中任意一個或與其相差不超過3個核苷酸的序列。

在某些實施方式中，其中所述正義鏈包含SEQ ID NO: 37、SEQ ID NO: 43、SEQ ID NO: 44、SEQ ID NO: 46、SEQ ID NO: 47、SEQ ID NO: 48、SEQ ID NO: 53和SEQ ID NO: 54中任意一個或與其相差不超過3個核苷酸的序列，且所述反義鏈包含SEQ ID NO: 55、SEQ ID NO: 61、SEQ ID NO: 62、SEQ ID NO: 64、SEQ ID NO: 65、SEQ ID NO: 66、SEQ ID NO: 71和SEQ ID NO: 72中任意一個或與其相差不超過3個核苷酸的序列。

在某些實施方式中，其中所述干擾核酸包括Kylo-09-DS01，Kylo-09-DS07，Kylo-09-DS08，Kylo-09-DS10，Kylo-09-DS11，Kylo-09-DS12，Kylo-09-DS17，Kylo-09-DS18，Kylo-09-DS37~ Kylo-09-DS54中任意任一種或多種。

在某些實施方式中，所述的RNAi劑或其藥學上可接受的鹽包括表18中Kylo-09-DS122，Kylo-09-DS131至Kylo-09-DS147中的任一種或多種。

在某些實施方式中，所述的RNAi劑或其藥學上可接受的鹽包括表19中Kylo-09-DS122，Kylo-09-DS131，Kylo-09-DS141，Kylo-09-DS142和Kylo-09-DS147中的任一種或多種。

另一方面，本申請提供了一種抑制AGT基因表達的RNAi劑或其藥學上可接受的鹽，其包含反義鏈，其中所述反義鏈包含至少12個與選自以下序列相應位置的核苷酸基本上互補的連續核苷酸或與其相差不超過3個核苷酸的序列：AGT mRNA NM_001382817.3中起始位置為1854-1874、1907-1927、1895-1915、1352-1372、1903-1923、2019-2039、1853-1873和1818-1838 的至少連續12個核苷酸或與其相差不超過3個核苷酸的序列或NM_001384479.1中起始位置為1822-1842、1875-1895、1863-1883、1320-1340、1871-1891、1987-2007、1821-1841和1786-1806的至少連續12個核苷酸或與其相差不超過3個核苷酸的序列。

在某些實施方式中，所述RNAi劑包括單鏈或雙鏈核酸分子。

在某些實施方式中，所述RNAi劑包括siRNA或miRNA。

在某些實施方式中，所述的抑制AGT基因表達的RNAi劑或其藥學上可接受的鹽還包含正義鏈，其中所述反義鏈和正義鏈形成的互補區，所述互補區包括至少12個連續核苷酸。

在某些實施方式中，其中所述正義鏈和/或反義鏈上的一個或多個核苷酸被修飾以形成修飾的核苷酸。

在某些實施方式中，所述的抑制AGT基因表達的RNAi劑或其藥學上可接受的鹽還包含配體，所述配體通過載體結構偶聯於正義鏈和/或反義鏈。

另一方面，本申請提供了一種細胞，其包含前述的RNAi劑或其藥學上可接受的鹽，或者前述的抑制AGT基因表達的RNAi劑或其藥學上可接受的鹽。

另一方面，本申請提供了一種藥物組合物，其包含前述的RNAi劑或其藥學上可接受的鹽，或者前述的抑制AGT基因表達的RNAi劑或其藥學上可接受的鹽，以及任選地藥學上可接受的賦形劑、載體和/或稀釋劑。

另一方面，本申請提供了一種減少細胞或組織中AGT mRNA或蛋白質表達的方法，其包括使細胞或組織與有效量的前述的RNAi劑或其藥學上可接受的鹽、前述的抑制AGT基因表達的RNAi劑或其藥學上可接受的鹽，和/或前述的藥物組合物接觸。

另一方面，本申請提供了前述的RNAi劑或其藥學上可接受的鹽、前述的抑制AGT基因表達的RNAi劑或其藥學上可接受的鹽，或前述的藥物組合物在製備藥物中的用途，所述藥物用於預防和/或治療疾病或病症或者降低疾病或病症的風險。

另一方面，本申請提供了一種預防和/或治療疾病或病症的方法，所述方法包括向有此需要的受試者施用有效量的前述的RNAi劑或其藥學上可接受的鹽、前述的抑制AGT基因表達的RNAi劑或其藥學上可接受的鹽，和/或前述的藥物組合物。

另一方面，本申請提供了一種藥盒，其包含前述的RNAi劑或其藥學上可接受的鹽、前述的抑制AGT基因表達的RNAi劑或其藥學上可接受的鹽，或前述的藥物組合物。

本申請的AGT RNAi劑通過干擾AGT mRNA，破壞其作為轉譯模板的功能，調整體循環中AGT蛋白(RAS所有血管收縮素的唯一前體)的表達水平，從基因層面和從RAS系統的源頭上進行血壓的調控，供了一種全新的治療模式來對抗各類高血壓，包括抗原發性和繼發性的，也包括其中的頑固性高血壓(TRH)，使那些抗頑固性高血壓(TRH)或射血分數降低的慢性心衰竭患者有藥可用。本申請的AGT RNAi劑還具有獨特的長效性，存在一季度或半年給藥一次的可能，具有當前小分子高血壓治療藥無可比擬的優勢。

本領域技術人員能夠從下文的詳細描述中容易地洞察到本申請的其它方面和優勢。下文的詳細描述中僅顯示和描述了本申請的示例性實施方式。如本領域技術人員將認識到的，本申請的內容使得本領域技術人員能夠對所公開的具體實施方式進行改動而不脫離本申請所涉及發明的精神和範圍。相應地，本申請的附圖和說明書中的描述僅僅是示例性的，而非為限制性的。

以下由特定的具體實施例說明本申請發明的實施方式，熟悉此技術的人士可由本說明書所公開的內容容易地瞭解本申請發明的其他優點及效果。

術語定義

在本申請中，術語“血管收縮素原”可以與術語“AGT”交換使用，AGT mRNA序列的實例容易利用已公開的數據庫取得，例如，GenBank、UniProt、OMIM和獼猴(Macaca)基因組計劃網站。術語“AGT”包括人類AGT，其mRNA序列可見於例如，GenBank NM_001382817.3或GenBank NM_001384479.1；食蟹猴AGT，其氨基酸與完整編碼序列可見於，例如，GenBank登錄號GI：90075391(AB170313 .1)；小鼠(Mus musculus)AGT，其氨基酸與完整編碼序列可見於例如，GenBank登錄號GI：113461997(NM_007428 .3) ；及大鼠AGT (Rattus norvegicus) AGT，其氨基酸與完整編碼序列可見於例如，GenBank登錄號GI：51036672(NM_134432)。本文所用術語“AGT”亦指AGT基因的天然存在的DNA序列變異，如AGT基因中的單核苷酸多態性(SNP)。

在本申請中，術語“iRNA”、“RNAi劑”、“iRNA劑”、“RNA干擾劑”可交換使用，通常指包含如本文術語所定義的RNA的藥劑，且其可通過RNA誘導沉默複合物(RISC)途徑介導RNA轉錄物的靶向切割。iRNA經由稱為RNA干擾(RNAi)的過程指導mRNA的序列特異性降解。iRNA調控(例如，抑制)AGT基因在細胞(例如，受試者如哺乳動物受試者中的細胞)中的表達。

在某些實施方式中，RNAi劑可為引入細胞或生物體中來抑制靶mRNA的單鏈siRNA(ssRNAi)。單鏈RNAi劑結合RISC內切核酸酶Argonaute 2，其然後切割靶mRNA。單鏈siRNA一般為15至30個核苷酸且經化學修飾。單鏈siRNA的設計和測試說明於美國專利號8,101,348及Lima等人(2012)Cell 150：883-894中，其各自的完整內容以引用的方式併入本文中。本文所述的任何反義核苷酸序列均可用作本文所述的或通過Lima等人(2012)Cell 150：883-894中說明的方法進行化學修飾的單鏈siRNA。

在某些實施方式中，本申請所使用的“iRNA”是雙鏈RNA，且本文中稱為“雙鏈RNAi劑”、“雙鏈RNA(dsRNA)分子”、“dsRNA劑”或“dsRNA”。術語“dsRNA”指核糖核酸分子的複合物，其具有包含兩個反向平行且基本上互補的核酸鏈的雙鏈體結構，稱為具有相對於靶RNA(即AGT基因)的“正義”和“反義”取向。在本申請的一些實施方式中，雙鏈RNA(dsRNA)通過轉錄後基因沉默機制(本文中稱為RNA干擾或RNAi)觸發靶RNA(例如，mRNA)的降解。

雙鏈體結構可為容許所需的靶RNA通過RISC途徑的特異性降解的任何長度，且可在約19至36鹼基對的長度範圍內，例如，約19-30鹼基對的長度，例如，約19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35或36鹼基對的長度。上述範圍與長度中間的範圍與長度也包括為本申請的部分。在某些實施方式中，本申請的iRNA劑為各鏈包含15-23個核苷酸的dsRNA，其與靶RNA序列(例如，AGT基因)相互作用以指導靶RNA的切割。在某些實施方式中，本申請的iRNA為24-30個核苷酸的dsRNA，其與靶RNA序列(例如，AGT靶mRNA序列)相互作用以指導靶RNA的切割。

通常，dsRNA分子的各鏈的大多數核苷酸為核糖核苷酸，但如本文詳細說明的，各鏈或兩條鏈也可包括一個或多個非核糖核苷酸，例如，去氧核糖核苷酸或修飾的核苷酸。此外，本說明書所用“iRNA”可包括具有化學修飾的核糖核苷酸；iRNA可在多個核苷酸處包括實質修飾。本文所用術語“修飾的核苷酸”意指獨立地具有修飾的糖部分、修飾的核苷酸間連接或修飾的核鹼基，或其任何組合的核苷酸。因此，術語“修飾的核苷酸”涵蓋對核苷酸間連接、糖部分或核鹼基的例如官能團或原子的置換、添加或移除。適用於本申請藥劑的修飾包括本文所公開或本領域已知的所有類型的修飾。

在本申請中，術語“核酸”和“多核苷酸”可互換使用，並指任何長度的核苷酸(去氧核糖核苷酸或者核糖核苷酸或者其類似物)的聚合形式。多核苷酸可以具有任何三維結構並且可以執行任何功能。以下是多核苷酸的非限制性實例：基因或基因片段(例如探針、引子、EST或SAGE標籤)、外顯子、內含子、信使RNA(mRNA)、轉移RNA、核糖體RNA、核酶、cDNA、重組多核苷酸、分支的多核苷酸、質粒、載體、任何序列的分離的DNA、任何序列的分離的RNA、核酸探針、siRNA、miRNA、shRNA、RNAi試劑和引子。多核苷酸可以在一個或多個鹼基、糖和/或磷酸酯處以本申請所述或本領域已知的任何各種修飾或取代進行修飾或取代。多核苷酸可以包含修飾的核苷酸，例如甲基化的核苷酸和核苷酸類似物。如果存在，可以在聚合物組裝之前或之後對核苷酸結構進行修飾。核苷酸序列可以被非核苷酸組分阻斷。多聚核苷酸可以在聚合後修飾，例如通過與標記組分偶聯。該術語可以是雙鏈和單鏈分子。除非另有說明或要求，否則本申請作為多核苷酸的任何實施方式包括雙鏈形式和已知或據預測構成雙鏈形式的兩種互補單鏈形式中的每一種。

在本申請中，術語“靶核酸”或“靶序列”通常指在AGT基因轉錄期間所形成mRNA分子的核苷酸序列的連續部分，包括作為主要轉錄產物的RNA加工產物的mRNA。序列的靶部分應至少足夠長以作為在AGT基因轉錄期間形成的mRNA分子的核苷酸序列的該部分位置處或附近iRNA指導的切割的底物。在一個實施方式中，該靶序列在AGT的蛋白質編碼區內。靶序列可為約19-36個核苷酸的長度，例如，優選約19-30個核苷酸的長度。上述範圍和長度中間的範圍和長度也包括為本申請的部分。

在本申請中，術語“核苷酸序列”通常是指一連串或一定順序的核鹼基、核苷酸和/或核苷，無論是經修飾還是未修飾，使用標準核苷酸命名和本申請所述的經修飾的核苷酸的符號表用一連串字母描述。

在本申請中，術語“寡核苷酸”通常是指由多個核苷酸殘基(去氧核糖核苷酸或核糖核苷酸，或其相關的結構變體或合成類似物)通過磷酸二酯鍵(或其相關的結構變體或合成類似物)連接組成的聚合物。因此，雖然術語“寡核苷酸”一般指其中核苷酸殘基和它們之間的連接是天然產生的核苷酸聚合物，但應理解，該術語的範圍也包括各種類似物，包括但不限於：肽核酸(PNA)、氨基磷酸酯、硫代磷酸酯、甲基磷酸酯、2-O-甲基核糖核酸等。該分子的確切大小可取決於具體應用。寡核苷酸一般長度較短，通常約有10-30個核苷酸殘基，但該術語也可指任何長度的分子，儘管術語“多核苷酸”或“核酸”一般用於較大的寡核苷酸。

在某些實施方式中，寡核苷酸包含一個或多個未修飾的核糖核苷(RNA)和/或未修飾的去氧核糖核苷(DNA)和/或一個或多個修飾核苷。術語“修飾寡核苷酸”通常意指包含至少一個修飾核苷和/或至少一個修飾的核苷間鍵聯的寡核苷酸。

在本申請中，術語“修飾的核苷”通常意指與天然存在的RNA或DNA核苷相比包含至少一個化學修飾的核苷。修飾的核苷包含修飾的糖部分和/或修飾的核鹼基。

在本申請中，術語“核鹼基”通常意指雜環嘧啶或嘌呤化合物，它是所有核酸的組分且包括腺嘌呤(A)、鳥嘌呤(G)、胞嘧啶(C)、胸腺嘧啶(T)和尿嘧啶(U)。核苷酸可包括經修飾的核苷酸或核苷酸模擬物、無鹼基位點(Ab或X)或替代物替代部分。如本申請所使用，“核鹼基序列”通常意指不依賴於任何糖、鍵聯或核鹼基修飾的連續核鹼基的順序。術語“未修飾的核鹼基”或“天然存在的核鹼基”通常意指RNA或DNA的天然存在的雜環核鹼基：嘌呤鹼基腺嘌呤(A)和鳥嘌呤(G)；以及嘧啶鹼基胸腺嘧啶(T)、胞嘧啶(C)(包括5-甲基C)和尿嘧啶(U)。“修飾的核鹼基”通常意指並非天然存在的核鹼基的任何核鹼基。

在本申請中，術語“糖部分”通常意指核苷的天然存在的糖部分或修飾的糖部分。術語“天然存在的糖部分”通常意指如在天然存在的RNA中發現的呋喃核糖基或如在天然存在的DNA中發現的去氧呋喃核糖基。“修飾的糖部分”意指取代的糖部分或糖替代物。

在本申請中，術語“核苷間鍵聯”通常意指寡核苷酸中相鄰核苷之間的共價鍵聯。“天然存在的核苷間鍵聯”意指3’至5’磷酸二酯鍵聯。“修飾的核苷間鍵聯”意指除了天然存在的核苷間鍵聯之外的任何核苷間鍵聯。

在本申請中，術語“反義寡核苷酸”是指單鏈寡核苷酸分子，其具有與靶核酸(例如，目標基因組序列，mRNA前體，或mRNA分子)的相應片段互補的核鹼基序列。在某些實施方案中，反義寡核苷酸的長度為12至30個核鹼基。在某些實施方案中，反義寡核苷酸是具有與靶核酸（如AGT多核苷酸）序列互補的核苷酸序列的未經修飾或經修飾的核酸。

在本申請中，術語“反義鏈”通常是指RNAi劑(例如dsRNA)的包括與靶序列實質上互補的區域的鏈。在本文中使用時，術語“互補性區域”通常指反義鏈上與本申請定義的序列(例如靶序列)實質上互補的區域。當互補性區域與靶序列不完全互補時，錯配可以在分子的內部或末端區域。通常，最被容許的錯配在末端區域，例如，在5’末端和/或3’末端的5、4、3或2個核苷酸內。

在本申請中，術語“正義鏈”(S)通常是指RNAi劑的這樣一條鏈，所述鏈包括與作為在此定義的術語反義鏈的區域基本互補的區域。“正義”鏈有時被稱為“有義”鏈，“過客”鏈或“反引導”鏈。借助它們的序列，反義鏈靶向所希望的mRNA，同時正義鏈靶向不同靶標。因此，如果反義鏈被摻入RISC中，則正確的靶標被靶向。正義鏈的摻入可以導致脫靶效應。這些脫靶效應可以通過在正義鏈上使用修飾或使用5’端帽加以限制。

在本申請中，術語“互補”當用於描述就第二核苷酸序列(如RNAi劑反義鏈)而言的第一核苷酸序列(如RNAi劑正義鏈或AGT mRNA)時是指包含第一核苷酸序列的寡核苷酸或多核苷酸在一定條件下與包含第二核苷酸序列的寡核苷酸或多核苷酸雜交(形成鹼基對氫鍵)並形成雙鏈體或雙螺旋結構的能力。互補序列包括華生-克里克鹼基對(Watson-Crick base pairs)或非華生-克里克鹼基對，並且包括天然或經修飾的核苷酸或核苷酸模擬物，只要以上關於它們的雜交能力而言的需求得以實現。“互補”不必需在每個核苷上均具有核鹼基互補性。相反，可以容忍一些錯配。

在本申請中，術語“完全互補”通常意指第一多核苷酸的連續序列中的全部(100％)鹼基將與第二多核苷酸的連續序列中的相同數目的鹼基雜交。連續序列可以包含第一或第二核苷酸序列的全部或一部分。如本申請所用，“部分互補”通常意指在雜交的核鹼基序列對中，第一多核苷酸的連續序列中至少約70％的鹼基將與第二多核苷酸的連續序列中相同數目的鹼基雜交。如本申請所用，“基本上互補”通常意指在雜交的核鹼基序列對中，第一多核苷酸的連續序列中至少約90％的鹼基將與第二多核苷酸的連續序列中相同數目的鹼基雜交。如本申請所用的術語“互補”、“完全互補”和“基本上互補”可以就在RNAi劑的正義鏈與反義鏈之間或者在RNAi劑的反義鏈與AGT mRNA的序列之間的鹼基匹配而言使用。序列同一性或互補性不依賴於修飾。為了測定同一性或互補性的目的，例如，a和Af與U(或T)互補並且與A同一。

在本申請中，術語“同源的”或“同源性”通常是指已經與參考核酸序列的相同核苷酸匹配的主題核酸序列的核苷酸的數量，通常通過序列分析程序(例如，Karlin和Altschul, 1990, PNAS 87:2264-2268；Karlin和Altschul, 1993, PNAS 90:5873-5877)，或通過目視檢查確定。如本文所使用的，術語“完全同源性”或“完全同源的”一般是指在參考序列和主題核酸序列之間的完全(100％)同源性或“同一性”。如本文所使用的，術語“基本上同源的”或“基本上同源性”一般是指主題序列與參考序列中相同核苷酸位置的核苷酸共有至少50％(例如，至少55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％)的同源的核苷酸。

在本申請中，術語“配體”通常是指能夠共價地或以其它化學方式與生物活性物質（如寡核苷酸）結合的任何化合物或分子。在某些實施方式中，配體能夠與另一種化合物例如受體直接或間接地相互作用，與配體相互作用的受體可以存在於細胞表面上，或可替代地可以是細胞內和/或細胞間受體，配體與受體的相互作用可以導致生化反應，或可以僅僅是物理相互作用或結合。

在本申請中，術語“誘導”、“抑制”、“加強”、“升高”、“增加”、“減少”、“降低”等通常表示兩個狀態之間的定量差異。例如，“有效抑制AGT的活性或表達的量”意指處理樣品中AGT的活性或表達的水平將低於未處理樣品中AGT活性或表達的水平。所述術語例如適用於表達水平和活性水平。術語“減少”和“降低”可互換使用並且通常表示小於原來的任何變化。“減少”和“降低”是相對的術語，需要在測量前和測量後間進行比較。“減少”和“降低”包括完全耗竭。

在某些實施方式中，術語“降低”可以通過本領域已知標準方法(諸如本申請中描述的那些)檢測的，基因、基因產物例如蛋白質或生物標誌物在第一樣品中的表達水平/量與相應基因、基因產品例如蛋白質或生物標誌物在第二樣品中的表達水平/量相比約5％、10％、20％、25％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、85％、90％、95％、或100％的總體降低。在某些實施方式中，術語“降低”指第一樣品中基因或生物標誌物的表達水平/量的降低，其中該降低是第二樣品中相應基因或生物標誌物的表達水平/量的至少約0.9倍、0.8倍、0.7倍、0.6倍、0.5倍、0.4倍、0.3倍、0.2倍、0.1倍、0.05倍、或0.01倍。在某些實施方式中，第一樣品是自受試者獲得的樣品，而第二樣品是參照樣品。

在本申請中，術語“表達”通常意指基因最終產生蛋白質的過程。表達包括但不限於轉錄、轉錄後修飾(例如，剪接、聚腺苷酸化、添加5’-帽)以及轉譯。

在本申請中，術語“藥學上可接受的”通常是指不干擾活性成分生物學活性的有效性的一種或多種無毒物質。這類製劑通常可含有鹽、賦形劑、緩衝劑、防腐劑、相容性載體和任選的其它治療劑。這類藥學上可接受的製劑通常也可包含適合給予人的相容性固體或液體填料、稀釋劑或包囊材料。用於醫藥時，鹽應該是藥學上可接受的鹽，但可方便地使用非藥學上可接受的鹽來製備藥學上可接受的鹽，不能將它們排除在本申請範圍以外。這類藥理學和藥學上可接受的鹽包括但不限於由以下酸製備的鹽：氫氯酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、磷酸、馬來酸、乙酸、水楊酸、檸檬酸、硼酸、甲酸、丙二酸、琥珀酸等。藥學上可接受的鹽也可製備成鹼金屬鹽或鹼土金屬鹽，如鈉鹽、鉀鹽或鈣鹽。

在本申請中，術語“脂質奈米顆粒”或“LNP”通常指包含包封藥理活性分子(如核酸分子，例如，iRNA或iRNA從其轉錄的質粒)的脂質層的囊泡。LNP描述於例如，中國專利號CN103189057B中，其完整內容以引用方式併入本文中。

在本申請中，術語“預防和/或治療”不僅包括預防和/或治療疾病，還通常包括預防疾病的發作，減緩或逆轉疾病的進展，預防或減緩與疾病相關的一種或多種症狀的發作，減少和/或減輕與疾病相關的一種或多種症狀，降低疾病和/或與其相關的任何症狀的嚴重程度和/或持續時間和/或預防疾病和/或與其相關的任何症狀的嚴重程度的進一步增加，預防、減少或逆轉由疾病引起的任何生理損傷，以及通常對正在治療的患者有益的任何藥理學作用。本申請的RNAi劑或藥物組合物形成可行的治療劑不需要實現完全治癒或根除疾病的任何症狀或表現。如在相關領域中所認識到的，用作治療劑的藥物可降低給定疾病狀態的嚴重程度，但不需要消除疾病的每種表現才能被認為是有用治療劑。類似地，預防性施用的治療構成可行的預防劑不需要完全有效地預防病症的發作。簡單地在受試者中減少疾病的影響(例如，通過減少其症狀的數量或嚴重程度，或通過提高另一種治療的有效性，或通過產生另一種有益效果)，或減少疾病發生或惡化的可能性就足夠了。

在本申請中，術語“疾病”或“病症”可以互換使用，通常是指受試者與正常狀態的任意偏離，例如身體或某些器官的狀態的任何變化，妨礙或擾亂了功能的履行，和/或在患病或與其接觸的人中引起症狀例如不適、機能障礙、痛苦或甚至死亡。疾病或病症還可以稱為失調(distemper)、不適(ailing)、小病(ailment)、疾病(malady)、紊亂(disorder)、疾病(sickness)、生病(illness)、身體不適(complaint)、inderdisposion或affectation。

在本申請中，術語“血管收縮素原相關疾病”或“AGT相關疾病”通常是指因腎素-血管收縮素-醛固酮系統(RAAS)活化導致或與其相關的疾病或障礙，或其症狀或進展響應於RAAS失活的疾病或障礙。術語“血管收縮素原相關疾病”包括因AGT表達降低而受益的疾病、障礙或病症。這類疾病通常與高的血壓相關。血管收縮素原相關疾病的非限制實例包括高血壓，例如，臨界性高血壓(也稱為高血壓前期)、原發性高血壓(也稱為本態性高血壓或特發性高血壓)、繼發性高血壓(也稱為非本態性高血壓)、孤立性收縮期或舒張期高血壓、妊娠相關高血壓(例如，子癇前症、子癇症和產後子癇前症)、糖尿病性高血壓、頑固性高血壓、難治性高血壓、陣發性高血壓、腎血管性高血壓(也稱為腎高血壓)、戈德布拉特氏高血壓、眼高壓、青光眼、肺動脈高血壓、門靜脈高血壓、系統性靜脈高血壓、收縮期高血壓、不穩定性高血壓；高血壓性心臟病、高血壓性腎病、動脈粥狀硬化、動脈硬化、血管病變(包括外周血管疾病)、糖尿病性腎病、糖尿病性視網膜病、慢性心衰竭、心肌病、糖尿病性心肌病、腎小球硬化症、主動脈縮窄、主動脈瘤、心室纖維化、睡眠呼吸中止、心衰竭(例如，左心室收縮功能障礙)、心肌梗塞、心絞痛、中風、腎疾病(例如，慢性腎臟病或糖尿病性腎病變，任選地在妊娠的情況中)、腎衰竭(例如，慢性腎衰竭)和全身性硬化(例如，硬皮症腎危機)。在某些實施方式中，AGT相關疾病包括宮內發育遲緩(IUGR)或胎兒生長受限。在某些實施方式中，AGT相關障礙也包括肥胖、肝脂肪變性/脂肪肝，例如，非酒精性脂肪性肝炎(NASH)及非酒精性脂肪肝病(NAFLD)、葡萄糖耐受不良、2型糖尿病(非胰島素依賴型糖尿病)和代謝綜合症。在某些實施方式中，高血壓包括與低的血漿腎素活性或血漿腎素濃度相關的高血壓。

本申請中，術語“施用”通常是指通過任意引入或遞送途徑將本申請藥物製劑引入受試者的身體中。可以採用本領域技術人員已知的用於使細胞、器官或組織與所述藥物接觸的任何方法。所述施用可以包括而不限於靜脈內、動脈內、鼻內、腹內、肌內、皮下透皮或口服。每日劑量可以劃分成一個、兩個或更多個合適形式的劑量以在某個時間段期間的一個、兩個或更多個時間施用。

在本申請中，術語“接觸”通常是指兩種兩個或更多個不同類型的物質以任何順序、任何方式以及任何時長接觸在一起。接觸可以發生在體內(in vivo)、間接體內(ex vivo)或體外(in vitro)。在某些實施方式中，可以是指使本申請的RNAi劑或組合物直接接觸細胞或組織。在另一些實施方式中，該術語是指使本申請的RNAi劑或組合物間接接觸細胞或組織。例如，本申請的方法包括其中受試者接觸本申請的RNAi劑或組合物，然後RNAi劑或組合物通過擴散或本領域已知的任何其他主動運輸或被動運輸過程(化合物通過該過程在體內循環)接觸細胞或組織的方法。

在本申請中，術語“有效量”或“有效劑量”通常是指足以實現或至少部分實現所需效果的量。藥物或治療劑的“治療有效量”或“治療有效劑量”通常是當單獨使用或與另一種治療劑組合使用時促進疾病消退(這通過疾病症狀嚴重程度的降低、疾病無症狀期的頻度和持續時間的增加、或者由於罹患疾病而引起的損害或殘疾的預防來證明)的任何藥物量。藥物的“預防有效量”或“預防有效劑量”通常是指當單獨或與另一種治療劑組合給有疾病發展或疾病復發的風險的受試者施用時抑制疾病的發展或復發的藥物量。可以使用本領域技術人員已知的多種方法對治療劑或預防劑促進疾病消退或抑制疾病發展或復發的能力進行評估，比如在處於臨床試驗期間的人類受試者中、在動物模型系統中預測對人類的功效、或者通過在體外測定中測定藥劑的活性。在某些實施方式中，“有效量”是指產生預期藥理學、治療性或預防性結果的RNAi劑的量。

在本申請中，術語“受試者”通常是指需要診斷、預後、改善、預防和/或治療疾病的人或非人動物（包括哺乳動物），諸如人、非人靈長類動物(猿、長臂猿、大猩猩、黑猩猩、猩猩、獼猴)、家畜(狗和貓)、農場動物(家禽如雞和鴨、馬、牛、山羊、綿羊、豬)和實驗動物(小鼠、大鼠、兔、豚鼠)。人受試者包括胎兒、新生兒、嬰兒、青少年和成人受試者。受試者包括動物疾病模型。

在本申請中，術語“包括”、“包含”、“具有”、“可以”、“含有”及其變體通常旨在是開放式過渡性短語、術語或詞語，其不排除額外行為或結構的可能性。術語“由……組成”通常表示不能存在別的組分(或同樣地，特徵、整數、步驟、等)。除非上下文另有明確規定，單數形式如英文的“a”，“an”，“the”，中文的“一個”、“一種”和“所述/該”一般包括所指代事物的複數形式。

在本申請中，術語“約”通常意指大約(approximately)、在......的附近(intheregionof)、粗略地(roughly)、或左右(around)。當術語“約”當用於指涉數值範圍時，截值或特定數值用於指示所載明的數值可與該列舉數值有多達10％的差異。因此，術語“約”可用於涵蓋自特定值±10％或更少的變異、±5％或更少的變異、±1％或更少的變異、±0.5％或更少的變異、或±0.1％或更少的變異。

應理解，數字或一系列數字之前的術語“至少”包括與該術語“至少”相鄰的數字，及邏輯上包括在內的所有後續數字或整數，如從上下文中明確的。例如，核酸分子中的核苷酸數目必需為整數。例如，“21個核苷酸的核酸分子中的至少19個核苷酸”意指19、20或21個核苷酸具有所指示的性質。當“至少”出現在一系列數字或範圍之前時，應理解“至少”可修飾該系列或範圍中每一個數字。

應理解本文中採用的“不超過”或“低於”指與該短語相鄰且邏輯上較低的值或整數，如從上下文邏輯而言，至零。例如，具有“不超過3個核苷酸”的突出端的雙鏈體具有3、2、1或0個核苷酸的突出端。當“不超過”出現在一系列數字或範圍之前時，應理解，“不超過”可修飾該系列或範圍內每個數字。本文所採用範圍同時包括上限與下限。

發明詳述

RNAi劑

一方面，本申請提供抑制AGT基因表達的RNAi劑。

在某些的實施方式中，RNAi劑包括用於抑制在細胞中，如受試者(例如，哺乳動物，如易於發生AGT相關障礙例如高血壓的人)的細胞中，AGT基因的表達的單鏈寡核苷酸或雙鏈核糖核酸(dsRNA)分子。其中，該dsRNA包括反義鏈，其具有與在AGT基因的表達中所形成mRNA的至少一部分互補的互補區。該互補區為約12-30個核苷酸長度(例如，約30、29、28、27、26、25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13或12個核苷酸長度)。

dsRNA包括兩個RNA鏈，其可在dsRNA使用的條件下互補並雜交形成雙鏈體結構（互補區）。dsRNA的一條鏈(反義鏈)包括與靶序列基本上互補且通常完全互補的互補區。靶序列可源自AGT基因表達期間形成mRNA的序列。另一條鏈(正義鏈)包括與反義鏈互補的區域，使得在合適條件下組合時，兩條鏈可雜交並形成雙鏈體結構。通常，雙鏈體結構的長度為12至30個鹼基對。類似地，與靶序列的互補區的長度為12至30個核苷酸。

在某些實施方式中，dsRNA為約19至約23個核苷酸長度，或約24至約30個核苷酸長度。通常，dsRNA的長度足以用作Dicer酶的底物。例如，本領域公知，長度大於約21-23個核苷酸的dsRNA可用作Dicer的底物。本領域技術人員也瞭解，被靶向切割的RNA的區域通常為較大RNA分子(通常mRNA分子)的部分。靶的“一部分”為mRNA靶的連續核苷酸，其長度足以允許其為RNAi指導切割(即經由RISC途徑的切割)的底物。

本領域技術人員也應理解，雙鏈體區為dsRNA的主要功能部分，例如，約19至約30鹼基對的雙鏈體區，例如，約19-30、19-29、19-28、19-27、19-26、19-25、19-24、19-23、19-22、19-21、19-20鹼基對。因此在一個實施方式中，為了達到成為靶向所需RNA進行切割的功能性雙鏈體(例如，15-30鹼基對)的程度，具有超過30鹼基對的雙鏈體區的RNA分子或RNA分子的複合物為dsRNA。

在一個方面中，本申請的RNAi劑或其藥學上可接受的鹽，其包含反義鏈，其中所述反義鏈包含至少12個與選自以下序列相應位置的核苷酸基本上互補的連續核苷酸或與其相差不超過3個核苷酸的序列：AGT mRNA NM_001382817.3中起始位置為1854-1874、1907-1927、1895-1915、1352-1372、1903-1923、2019-2039、1853-1873和1818-1838 的至少連續12個核苷酸或與其相差不超過3個核苷酸的序列或NM_001384479.1中起始位置為1822-1842、1875-1895、1863-1883、1320-1340、1871-1891、1987-2007、1821-1841和1786-1806的至少連續12個核苷酸或與其相差不超過3個核苷酸的序列。

在某些實施方式中，其中所述反義鏈和正義鏈形成的雙鏈體結構（互補區），所述互補區包括至少12、13、14、15、16、17、18、19、20或21個連續核苷酸。

在某些實施方式中，所述RNAi劑的正義鏈與表1中的靶序列具有基本上同源性。

表1 靶序列

SEQ ID NO.	單鏈代碼	靶序列5'→3'	NM_001382817.3中的範圍	NM_001384479.1中的範圍
1	S1	gcttgtttgtgaaacaaaaaa	1854-1874	1822-1842
2	S2	cccttgtgttagtaataaacg	2103-2123	2171-2191
3	S3	gttttaaaattaaagtataca	1904-1924	1876-1896
4	S4	gggttttaaaattaaagtata	1906-1926	1874-1894
5	S5	gcttgtgatttttgaacaata	2023-2043	1990-2010
6	S6	aattgggttttaaaattaaag	1902-1922	1870-1890
7	S7	ggttttaaaattaaagtatac	1907-1927	1875-1895
8	S8	gaacaaaaattgggttttaaa	1895-1915	1863-1883
9	S9	ggtgctagtcgctgcaaaact	336-356	304-324
10	S10	gcattttttttgagcttgaag	1352-1372	1320-1340
11	S11	attgggttttaaaattaaagt	1903-1923	1871-1891
12	S12	gatgcttgtgatttttgaaca	2019-2039	1987-2007
13	S13	gagtctacccaacagcttaac	1393-1403	1361-1381
14	S14	cgaccagcttgtttgtgaaac	1848-1868	1816-1836
15	S15	ggagtgacatccaggacaact	1037-1057	1005-1025
16	S16	ccgtgtagtgtctgtaatacc	1983-2003	1951-1971
17	S17	agcttgtttgtgaaacaaaaa	1853-1873	1821-1841
18	S18	cgggactactgttccaaaaag	1818-1838	1786-1806

其中，g=鳥苷酸，a=腺苷酸，t=胸腺苷酸，c=胞苷酸。

表2 反義鏈序列

SEQ ID NO.	單鏈代碼	反義鏈序列5'→3'
19	AS1	uuuuguuucacaaacaagcun
20	AS2	uuuauuacuaacacaagggan
21	AS3	uauacuuuaauuuuaaaaccn
22	AS4	uacuuuaauuuuaaaacccan
23	AS5	uuguucaaaaaucacaagcan
24	AS6	uuaauuuuaaaacccaauuun
25	AS7	auacuuuaauuuuaaaacccn
26	AS8	uaaaacccaauuuuuguucun
27	AS9	uuuugcagcgacuagcaccan
28	AS10	ucaagcucaaaaaaaaugcun
29	AS11	uuuaauuuuaaaacccaauun
30	AS12	uucaaaaaucacaagcaucun
31	AS13	uaagcuguuggguagacucun
32	AS14	uucacaaacaagcuggucggn
33	AS15	uuguccuggaugucacuccan
34	AS16	uauuacagacacuacacggan
35	AS17	uuuguuucacaaacaagcugn
36	AS18	uuuuggaacaguagucccgcn

其中n為a或u或g或c，g=鳥苷酸，a=腺苷酸，u=尿苷酸，c=胞苷酸。

在一些篩選實施方案中，所述的RNAi劑的正義鏈和反義鏈選自表3中序列或與表3中的各序列相差一個、兩個或三個核苷酸。

表3 篩選RNAi劑序列

SEQ ID NO.	單鏈代碼	正義鏈序列5'→3'	SEQ ID NO.	單鏈代碼	反義鏈序列5'→3'	雙鏈代碼
37	S19	gcuuguuugugaaacaaaaaa	55	AS19	uuuuguuucacaaacaagcug	Kylo-09-DS01
38	S20	cccuuguguuaguaauaaacg	56	AS20	uuuauuacuaacacaagggag	Kylo-09-DS02
39	S21	guuuuaaaauuaaaguauaca	57	AS21	uauacuuuaauuuuaaaaccc	Kylo-09-DS03
40	S22	ggguuuuaaaauuaaaguaua	58	AS22	uacuuuaauuuuaaaacccaa	Kylo-09-DS04
41	S23	gcuugugauuuuugaacaaua	59	AS23	uuguucaaaaaucacaagcau	Kylo-09-DS05
42	S24	aauuggguuuuaaaauuaaag	60	AS24	uuaauuuuaaaacccaauuuu	Kylo-09-DS06
43	S25	gguuuuaaaauuaaaguauac	61	AS25	auacuuuaauuuuaaaaccca	Kylo-09-DS07
44	S26	gaacaaaaauuggguuuuaaa	62	AS26	uaaaacccaauuuuuguucuc	Kylo-09-DS08
45	S27	ggugcuagucgcugcaaaacu	63	AS27	uuuugcagcgacuagcaccag	Kylo-09-DS09
46	S28	gcauuuuuuuugagcuugaag	64	AS28	ucaagcucaaaaaaaaugcug	Kylo-09-DS10
47	S29	auuggguuuuaaaauuaaagu	65	AS29	uuuaauuuuaaaacccaauuu	Kylo-09-DS11
48	S30	gaugcuugugauuuuugaaca	66	AS30	uucaaaaaucacaagcaucug	Kylo-09-DS12
49	S31	gagucuacccaacagcuuaac	67	AS31	uaagcuguuggguagacucug	Kylo-09-DS13
50	S32	cgaccagcuuguuugugaaac	68	AS32	uucacaaacaagcuggucggu	Kylo-09-DS14
51	S33	ggagugacauccaggacaacu	69	AS33	uuguccuggaugucacuccag	Kylo-09-DS15
52	S34	ccguguagugucuguaauacc	70	AS34	uauuacagacacuacacggag	Kylo-09-DS16
53	S35	agcuuguuugugaaacaaaaa	71	AS35	uuuguuucacaaacaagcugg	Kylo-09-DS17
54	S36	cgggacuacuguuccaaaaag	72	AS36	uuuuggaacaguagucccgcg	Kylo-09-DS18

其中，g=鳥苷酸，a=腺苷酸，u=尿苷酸，c=胞苷酸。

應理解，雖然表3中的序列未說明為修飾或偶聯的序列，但本申請的iRNA(例如，dsRNA)的RNA可包含表3所示的任何一個序列、或經修飾的表4、5或6的序列、或偶聯的表13、14、16或17的序列。換言之，本申請涵蓋如本文所述的未修飾的、未偶聯的、修飾的或偶聯的dsRNA。

在一些實施方案中，所述的RNAi劑可以通過脂質體-核酸奈米顆粒的方式加藥到細胞系中進行序列篩選。專利US9233971B2，US9080186B2，CN102985548B和CN103189057B有關脂質化合物及脂質體-核酸奈米顆粒製備的方法全文引入本說明書。

在一些實施方案中，其中所述的脂質化合物中的兩性脂質優選大環脂類化合物D1C1，T1C1，T1C6，T4C4，B2C1，B2C6，B2C7 和M10C1。

本領域技術人員公知，具有約20至23鹼基對，例如，21鹼基對的雙鏈體結構的dsRNA已經被認為能特別有效地誘導RNA干擾(Elbashir等人，EMBO 2001，20：6877-6888)。然而，其他人已發現更短或更長的RNA雙鏈體結構也有效(Chu和Rana(2007)RNA14：1714-1719；Kim等人(2005)Nat Biotech 23：222-226)。可以合理地預期，由表1、2和3中一個序列在一端或兩端減去或增加幾個核苷酸的雙鏈體與所述dsRNA相比可以類似地有效。因此，具有源自表1、2和3中一個序列的至少18、19、20、21或更多個連續核苷酸的序列且在抑制AGT基因表達的能力方面與包含全序列的dsRNA的差異不超過約5、10、15、20、25或30％的抑制的dsRNA均包括在本申請範圍內。

此外，表1、2和3提供的RNA識別了在AGT轉錄物中易發生RISC介導的切割的位點。因此，本申請的進一步包含靶向這類位點之一內的iRNA。如果iRNA促進轉錄物在該特定位點內任何位置的切割，則如本文所用iRNA被稱為靶向RNA轉錄物的該特定位點內，這種iRNA通常包括來自表1、2和3中提供的一個序列的至少約12、13、14、15、16、17、18或19個連續核苷酸。

本申請所述dsRNA可進一步包括一個或多個單鏈核苷酸突出端，例如，1、2、3或4個核苷酸。具有至少一個核苷酸突出端的dsRNA可以具有比其平端的對應物優異的抑制性質。核苷酸突出端可包含核苷酸/核苷類似物或其組成，包括去氧核苷酸/核苷。該突出端可在正義鏈、反義鏈或其任何組合上。此外，突出端的核苷酸可存在於dsRNA的反義或正義鏈的5’-端、3’-端或兩端。該突出端可由一條鏈長於另一條鏈所造成，或由相同長度的兩條鏈交錯造成。該突出端可與靶mRNA形成錯配或其可與所靶向的基因序列互補或可為另一個序列。

dsRNA也可以只含有單一突出端，其可以增強RNAi劑的干擾活性，而不影響其整體穩定性。例如，單鏈突出端可以位於正義鏈的3’-端，或可選地，在反義鏈的3’-端。RNAi劑還可以具有平端，位於反義鏈的5’-端(或正義鏈的3’-端)，反之亦然。通常，RNAi劑的反義鏈在3’-端具有核苷酸突出端，而5’-端是平端。儘管不希望受到理論的束縛，反義鏈的5’-端的不對稱平端和反義鏈的3’-端突出端有利於引導鏈載入RISC過程中。

在某些實施方式中，突出端存在於正義鏈、反義鏈或兩條鏈的3’-端。在某些實施方式中，此3’-突出端存在於反義鏈中。在某些實施方式中，此3’-突出端存在於正義鏈中。

在某些實施方式中，所述dsRNA是21個核苷酸長的雙端平端體。

在某些實施方式中，所述dsRNA具有21個核苷酸長度，且正義鏈和反義鏈在3’端均具有2個核苷酸的突出端。

修飾的RNAi劑

為了增強本申請所述的RNAi劑在體內的穩定性，在不影響其活性甚至增強其活性的情況下，可以對上述RNAi劑的正義鏈和反義鏈進行修飾，其中的核苷酸可以有修飾基團，可以整條鏈或者部分修飾。在某些實施方式中，其中所述正義鏈和/或反義鏈上的一個或多個核苷酸被修飾以形成修飾的核苷酸。

在某些實施方式中，本申請的RNAi劑(例如，dsRNA)的RNA未修飾，且不包含例如，本領域已知及本文所述的化學修飾或偶聯。在其他實施方式中，本申請的RNAi劑(例如，dsRNA)的RNA經化學修飾以加強穩定性或其他有利特性。本申請的其他實施方式中，本申請的RNAi劑的所有核苷酸或基本上所有核苷酸被修飾，即RNAi劑的鏈存在不超過5、4、3、2或1個未修飾的核苷酸。

如本申請所述的核酸可採用本領域上公知的方法合成和/或修飾，如那些描述於“Current protocols in nucleic acid chemistry”，Beaucage，S.L.等人(編輯)，JohnWiley＆Sons，Inc.，New York，NY，USA中的，其以引用方式併入本文中。修飾包括例如，末端修飾，例如，5’-端修飾(磷酸化、偶聯、反向連接)或3’-端修飾(偶聯、DNA核苷酸、反向連接等)；鹼基修飾，例如，使用穩定化鹼基、失穩鹼基或用與擴異展的伴體庫鹼基配對的鹼基替代、移除鹼基(無鹼基核苷酸)或偶聯鹼基；糖修飾(例如，2’-位或4’-位)或糖的替代；或主鏈修飾，包括磷酸二酯連接的修飾或替換。在本申請提供的RNAi劑中，所述RNAi劑的正義鏈和反義鏈均不需要均勻修飾，可在其單個核苷酸中摻入一種或一種以上的修飾。

在某些實施方式中，其中所述修飾的核苷酸選自：去氧核糖核苷酸、核苷酸模擬物、去鹼基核苷酸、2’-修飾核苷酸、3’至3’連接(倒置)核苷酸、含非天然鹼基的核苷酸、橋接核苷酸、肽核酸(PNA)、解鎖的核鹼基類似物、鎖定核苷酸、3’-O-甲氧基(2’核苷間連接)核苷酸、2’-F-阿拉伯糖核苷酸、5’-Me/2’-氟代核苷酸、嗎啉代核苷酸、乙烯基磷酸酯去氧核糖核苷酸、含乙烯基磷酸酯的核苷酸和含環丙基磷酸酯的核苷酸。

在某些實施方式中，其中所述2’-修飾核苷酸包括：2’-O-甲基核苷酸、2’-去氧-2’-氟核苷酸、2’-去氧核苷酸、2’-甲氧基乙基核苷酸、2’-氨基核苷酸和/或2’-烷基核苷酸。

在某些實施方式中，其中所述反義鏈5’末端開始的第7、12、14位核苷酸糖基2’位至少一個是氟。例如，其中所述反義鏈5’末端開始的第7、12、14位核苷酸糖基2’位均是氟。

在某些實施方式中，其中所述反義鏈除了5’末端開始的第7、12、14位核苷酸之外，其餘的核苷酸糖基的2’位至少一個是甲氧基。

在某些實施方式中，其中所述正義鏈5’末端開始的第5、7、8、9位核苷酸糖基2’位至少一個是氟。例如，所述正義鏈5’末端開始的第5、7、8、9位核苷酸糖基2’位均是氟。

在某些實施方式中，其中所述正義鏈除了5’末端開始的第5、7、8、9位核苷酸之外，其餘的核苷酸糖基的2’位的至少一個是甲氧基。

例如，所述正義鏈或反義鏈的部分或全部核苷酸糖基2’位的-OH可以被取代，其中，所述取代基團為氟或甲氧基，優選從正義鏈5’末端開始的第5、7、8、9位的核苷酸2’位是氟和從反義鏈的5’末端開始的第7、12、14位核苷酸2’位是氟，其餘的核苷酸2’位均是甲氧基。

例如，所述反義鏈5’末端開始的第7、12、14位核苷酸糖基2’位均是氟，其餘的核苷酸糖基的2’位均是甲氧基。

例如，所述正義鏈5’末端開始的第5、7、8、9位核苷酸糖基2’位均是氟，其餘的核苷酸糖基的2’位均是甲氧基。

在某些實施方式中，其中所述正義鏈和/或反義鏈的核苷酸之間存在至少連續兩個硫代磷酸酯鍵。

在某些實施方式中，其中所述正義鏈末端和/或反義鏈末端的3個連續的核苷酸之間存在至少連續兩個硫代磷酸酯鍵。

例如，其中所述正義鏈和反義鏈的5’端和3’端的3個連續的核苷酸之間存在至少連續兩個硫代磷酸酯鍵。

又例如，從正義鏈5’末端開始的第5、7、8、9位的核苷酸2’位是氟和從反義鏈的5’末端開始的第7、12、14位核苷酸2’位是氟，其餘的核苷酸2’位均是甲氧基，且所述正義鏈和反義鏈的5’端和3’端的3個連續的核苷酸之間存在至少連續兩個硫代磷酸酯鍵。

在一些篩選實施方案中，所述的RNAi劑的正義鏈和反義鏈選自表4中序列或與表4中的各序列相差一個、兩個或三個核苷酸。

表4 篩選RNA抑制劑序列

SEQ ID NO.	單鏈代碼	正義鏈序列5'→3'	SEQ ID NO.	單鏈代碼	反義鏈序列5'→3'	雙鏈代碼
73	S37	GcuuGuuuGuGAAACAAAAAA	91	AS37	UUUuGUUUcAcAAAcAAGCuG	Kylo-09-DS19
74	S38	cccuuGuGuuAGuAAuAAAcG	92	AS38	UUuAUuACuAAcACAAGGGAG	Kylo-09-DS20
75	S39	GuuuuAAAAuuAAAGuAuAcA	93	AS39	uAuACUUUAAUUUUAAAACCC	Kylo-09-DS21
76	S40	GGGuuuuAAAAuuAAAGuAuA	94	AS40	uACUUuAAUUUuAAAACCCAA	Kylo-09-DS22
77	S41	GCuuGuGAuuuuuGAACAAuA	95	AS41	UuGUUcAAAAAUcAcAAGcAU	Kylo-09-DS23
78	S42	AAuuGGGuuuuAAAAuuAAAG	96	AS42	UuAAUUUuAAAACCcAAUUUU	Kylo-09-DS24
79	S43	GGuuuuAAAAuuAAAGuAuAc	97	AS43	AuACUUuAAUUUuAAAACCCA	Kylo-09-DS25
80	S44	GAAcAAAAAuuGGGuuuuAAA	98	AS44	uAAAACCcAAUUUUuGUUCUC	Kylo-09-DS26
81	S45	GGuGcuAGucGcuGcAAAAcu	99	AS45	UUUuGcAGCGACuAGcACcAG	Kylo-09-DS27
82	S46	GcAuuuuuuuuGAGcuuGAAG	100	AS46	UcAAGCUcAAAAAAAAuGCuG	Kylo-09-DS28
83	S47	AuuGGGuuuuAAAAuuAAAGu	101	AS47	UUuAAUUUuAAAACCcAAUUU	Kylo-09-DS29
84	S48	GAuGcuuGuGAuuuuuGAAcA	102	AS48	UUcAAAAAuCAcAAGcAUCuG	Kylo-09-DS30
85	S49	GAGucuAcccAAcAGcUUAAc	103	AS49	UAAGCUGUUGGGUAGACUCUG	Kylo-09-DS31
86	S50	cGAccAGcuuGuuuGuGAAAc	104	AS50	UUcAcAAAcAAGCUGGUCGGU	Kylo-09-DS32
87	S51	GGAGuGAcAuccAGGAcAAcu	105	AS51	UuGUCCuGGAuGUCACUCCAG	Kylo-09-DS33
88	S52	ccGuGuAGuGuCuGuAAuAcc	106	AS52	uAUuAcAGACACuAcACGGAG	Kylo-09-DS34
89	S53	AGcuuGuuuGuGAAAcAAAAA	107	AS53	UUuGUUUcAcAAACAAGCuGG	Kylo-09-DS35
90	S54	cGGGAcuAcuGuuccAAAAAG	108	AS54	UUUuGGAAcAGuAGUCCCGCG	Kylo-09-DS36

其中，G=2’-甲氧基鳥苷酸，A=2’-甲氧基腺苷酸，U=2’-甲氧基尿苷酸，C=2’-甲氧基胞苷酸；u=尿苷酸，c=胞苷酸。

在一些實施例方案中，在所述RNAi劑中的反義鏈選自下列表5中的序列。從反義鏈5’末端開始的第7、12、14位的核苷酸2’位是氟，其餘的核苷酸2’位是甲氧基，且所述反義鏈的末端至少有3個相鄰核苷酸之間的磷酸酯鍵可以硫代。

表5 反義鏈的修飾序列

SEQ ID NO.	單鏈代碼	反義鏈序列5'→3'
109	AS55	UsUsUUGUfUUCACfAAfACAAGCsUsG
110	AS56	UsUsUAUUfACUAAfCAfCAAGGGsAsG
111	AS57	UsAsUACUfUUAAUfUUfUAAAACsCsC
112	AS58	UsAsCUUUfAAUUUfUAfAAACCCsAsA
113	AS59	UsUsGUUCfAAAAAfUCfACAAGCsAsU
114	AS60	UsUsAAUUfUUAAAfACfCCAAUUsUsU
115	AS61	AsUsACUUfUAAUUfUUfAAAACCsCsA
116	AS62	UsAsAAACfCCAAUfUUfUUGUUCsUsC
117	AS63	UsUsUUGCfAGCGAfCUfAGCACCsAsG
118	AS64	UsCsAAGCfUCAAAfAAfAAAUGCsUsG
119	AS65	UsUsUAAUfUUUAAfAAfCCCAAUsUsU
120	AS66	UsUsCAAAfAAUCAfCAfAGCAUCsUsG
121	AS67	UsAsAGCUfGUUGGfGUfAGACUCsUsG
122	AS68	UsUsCACAfAACAAfGCfUGGUCGsGsU
123	AS69	UsUsGUCCfUGGAUfGUfCACUCCsAsG
124	AS70	UsAsUUACfAGACAfCUfACACGGsAsG
125	AS71	UsUsUGUUfUCACAfAAfCAAGCUsGsG
126	AS72	UsUsUUGGfAACAGfUAfGUCCCGsCsG
127	AS73	AsAsGAAGfUUGGCfCAfGCAUsCsC
128	AS74	UsAsUACGfGAAGCfCCfAAGAsAsG
129	AS75	CsUsGUGCfAUGCCfAUfAUAUsAsC
130	AS76	CsAsUGGAfCCACGfCCfCCAUsAsG
131	AS77	AsAsAGACfAGCCGfUUfGGGGsAsG
132	AS78	UsCsUUGUfCCACCfCAfGAACsUsC
133	AS79	AsGsACCCfUCCACfCUfUGUCsCsA
134	AS80	AsGsUGAGfACCCUfCCfACCUsUsG
135	AS81	AsAsAGUGfAGACCfCUfCCACsCsU
136	AS82	GsUsUGAGfGGAGUfUUfUGCUsGsG
137	AS83	AsGsUUGAfGGGAGfUUfUUGCsUsG
138	AS84	UsCsCAGUfUGAGGfGAfGUUUsUsG
139	AS85	UsCsUUCAfUCCAGfUUfGAGGsGsA
140	AS86	UsUsCUUCfAUCCAfGUfUGAGsGsG
141	AS87	AsGsUUUCfUUCAUfCCfAGUUsGsA
142	AS88	UsUsGCUCfAAUUUfUUfGCAGsGsU
143	AS89	CsAsUUGCfUCAAUfUUfUUGCsAsG
144	AS90	UsCsAUUGfCUCAAfUUfUUUGsCsA
145	AS91	GsUsCAUUfGCUCAfAUfUUUUsGsC
146	AS92	UsGsUGGGfCUCUCfUCfUCAUsCsC
147	AS93	UsUsGAUCfAUACAfCAfGCAAsAsC
148	AS94	UsUsUGAUfCAUACfACfAGCAsAsA
149	AS95	AsAsAGGUfGGGAGfACfUGGGsGsG
150	AS96	CsAsUUAGfAAGAAfAAfGGUGsGsG
151	AS97	UsCsAUUAfGAAGAfAAfAGGUsGsG
152	AS98	CsUsCAUUfAGAAGfAAfAAGGsUsG
153	AS99	UsCsGGUUfGGAAUfUCfUUUUsUsG
154	AS100	AsAsACAAfGCUGGfUCfGGUUsGsG
155	AS101	UsCsACAAfACAAGfCUfGGUCsGsG
156	AS102	UsUsCACAfAACAAfGCfUGGUsCsG
157	AS103	UsUsUCACfAAACAfAGfCUGGsUsC
158	AS104	UsUsUUGUfUUCACfAAfACAAsGsC
159	AS105	UsUsUUUGfUUUCAfCAfAACAsAsG
160	AS106	UsUsUUUUfGUUUCfACfAAACsAsA
161	AS107	AsCsUUUUfUUGUUfUCfACAAsAsC
162	AS108	AsCsACUUfUUUUGfUUfUCACsAsA
163	AS109	AsAsAAGGfGAACAfCUfUUUUsUsG
164	AS110	UsCsUCAAfCUUGAfAAfAGGGsAsA
165	AS111	UsGsUUCUfCAACUfUGfAAAAsGsG
166	AS112	AsAsCCCAfAUUUUfUGfUUCUsCsA
167	AS113	UsAsAAACfCCAAUfUUfUUGUsUsC
168	AS114	UsUsUUAAfAACCCfAAfUUUUsUsG
169	AS115	AsUsUCAAfGACACfUAfAAUAsCsA
170	AS116	UsCsUUACfAUUCAfAGfACACsUsA
171	AS117	UsCsAUGUfUCUUAfCAfUUCAsAsG
172	AS118	GsUsCAUGfUUCUUfACfAUUCsAsA
173	AS119	AsUsCUGUfGGAAAfAAfACUAsAsG
174	AS120	AsAsAUCAfCAAGCfAUfCUGUsGsG
175	AS121	AsAsAAAUfCACAAfGCfAUCUsGsU
176	AS122	CsGsGACAfAAUCAfGCfGAUGUsGsU
177	AS123	CsCsAAAAfAGAAUfUCfCAAUUsGsA
178	AS124	AsCsCGACfCAGCUfUGfUUUGUsGsA
179	AS125	AsGsCGCGfGGACUfACfUGUUCsCsA
180	AS126	GsCsGCGGfGACUAfCUfGUUCCsAsA
181	AS127	AsAsCCGAfCCAGCfUUfGUUUGsUsG
182	AS128	UsGsUUCCfCUUUUfCAfAGUUGsAsG
183	AS129	UsCsCCUUfUUCAAfGUfUGAGAsAsC
184	AS130	UsAsUACUfCUCAUfUGfUGGAUGsAsC

其中，G=2’-O-甲基鳥苷酸，A=2’-O-甲基腺苷酸，U=2’-O-甲基尿苷酸，C=2’-O-甲基胞苷酸；fG=2’-氟鳥苷酸，fA=2’-氟腺苷酸，fU=2’-氟尿苷酸，fC=2’-氟胞苷酸；Gs=2'-O-甲基-3’-硫代鳥苷酸、As=2'-O-甲基-3'-硫代腺甘酸、Us=2'-O-甲基-3'-硫代尿甘酸、Cs=2'-O-甲基-3'-硫代胞苷酸。

在一些實施例方案中，在所述RNAi劑中的正義鏈選自下列表6中的序列。從正義鏈5’末端開始的第5、7、8、9位的核苷酸2’位是氟，其餘的核苷酸2’位是甲氧基，且所述反義鏈的末端至少有3個相鄰核苷酸之間的磷酸酯鍵可以硫代。

表6 正義鏈修飾序列

SEQ ID NO.	單鏈代碼	正義鏈序列5'→3'
185	S55	GsCsUUfGUfUfUfGUGAAACAAAAsAsA
186	S56	CsCsCUfUGfUfGfUUAGUAAUAAAsCsG
187	S57	GsUsUUfUAfAfAfAUUAAAGUAUAsCsA
188	S58	GsGsGUfUUfUfAfAAAUUAAAGUAsUsA
189	S59	GsCsUUfGUfGfAfUUUUUGAACAAsUsA
190	S60	AsAsUUfGGfGfUfUUUAAAAUUAAsAsG
191	S61	GsGsUUfUUfAfAfAAUUAAAGUAUsAsC
192	S62	GsAsACfAAfAfAfAUUGGGUUUUAsAsA
193	S63	GsGsUGfCUfAfGfUCGCUGCAAAAsCsU
194	S64	GsCsAUfUUfUfUfUUUGAGCUUGAsAsG
195	S65	AsUsUGfGGfUfUfUUAAAAUUAAAsGsU
196	S66	GsAsUGfCUfUfGfUGAUUUUUGAAsCsA
197	S67	GsAsGUfCUfAfCfCCAACAGCUUAsAsC
198	S68	CsGsACfCAfGfCfUUGUUUGUGAAsAsC
199	S69	GsGsAGfUGfAfCfAUCCAGGACAAsCsU
200	S70	CsCsGUfGUfAfGfUGUCUGUAAUAsCsC
201	S71	AsGsCUfUGfUfUfUGUGAAACAAAsAsA
202	S72	CsGsGGfACfUfAfCUGUUCCAAAAsAsG
203	S73	GsGsAUfGCfUfGfGCCAACUUCsUsU
204	S74	CsUsUCfUUfGfGfGCUUCCGUAsUsA
205	S75	GsUsAUfAUfAfUfGGCAUGCACsAsG
206	S76	CsUsAUfGGfGfGfCGUGGUCCAsUsG
207	S77	CsUsCCfCCfAfAfCGGCUGUCUsUsU
208	S78	GsCsUGfUGfAfCfAGGAUGGAAsGsA
209	S79	UsGsGAfCAfAfGfGUGGAGGGUsCsU
210	S80	CsAsAGfGUfGfGfAGGGUCUCAsCsU
211	S81	AsGsGUfGGfAfGfGGUCUCACUsUsU
212	S82	CsCsAGfCAfAfAfACUCCCUCAsAsC
213	S83	CsAsGCfAAfAfAfCUCCCUCAAsCsU
214	S84	CsAsAAfACfUfCfCCUCAACUGsGsA
215	S85	UsCsCCfUCfAfAfCUGGAUGAAsGsA
216	S86	CsCsCUfCAfAfCfUGGAUGAAGsAsA
217	S87	UsCsAAfCUfGfGfAUGAAGAAAsCsU
218	S88	AsCsCUfGCfAfAfAAAUUGAGCsAsA
219	S89	CsUsGCfAAfAfAfAUUGAGCAAsUsG
220	S90	UsGsCAfAAfAfAfUUGAGCAAUsGsA
221	S91	GsCsAAfAAfAfUfUGAGCAAUGsAsC
222	S92	GsGsAUfGAfGfAfGAGAGCCCAsCsA
223	S93	GsUsUUfGCfUfGfUGUAUGAUCsAsA
224	S94	UsUsUGfCUfGfUfGUAUGAUCAsAsA
225	S95	CsCsCCfCAfGfUfCUCCCACCUsUsU
226	S96	CsCsCAfCCfUfUfUUCUUCUAAsUsG
227	S97	CsCsACfCUfUfUfUCUUCUAAUsGsA
228	S98	CsAsCCfUUfUfUfCUUCUAAUGsAsG
229	S99	CsAsAAfAAfGfAfAUUCCAACCsGsA
230	S100	CsCsAAfCCfGfAfCCAGCUUGUsUsU
231	S101	CsCsGAfCCfAfGfCUUGUUUGUsGsA
232	S102	CsGsACfCAfGfCfUUGUUUGUGsAsA
233	S103	GsAsCCfAGfCfUfUGUUUGUGAsAsA
234	S104	GsCsUUfGUfUfUfGUGAAACAAsAsA
235	S105	CsUsUGfUUfUfGfUGAAACAAAsAsA
236	S106	UsUsGUfUUfGfUfGAAACAAAAsAsA
237	S107	GsUsUUfGUfGfAfAACAAAAAAsGsU
238	S108	UsUsGUfGAfAfAfCAAAAAAGUsGsU
239	S109	CsAsAAfAAfAfGfUGUUCCCUUsUsU
240	S110	UsUsCCfCUfUfUfUCAAGUUGAsGsA
241	S111	CsCsUUfUUfCfAfAGUUGAGAAsCsA
242	S112	UsGsAGfAAfCfAfAAAAUUGGGsUsU
243	S113	GsAsACfAAfAfAfAUUGGGUUUsUsA
244	S114	CsAsAAfAAfUfUfGGGUUUUAAsAsA
245	S115	UsGsUAfUUfUfAfGUGUCUUGAsAsU
246	S116	UsAsGUfGUfCfUfUGAAUGUAAsGsA
247	S117	CsUsUGfAAfUfGfUAAGAACAUsGsA
248	S118	UsUsGAfAUfGfUfAAGAACAUGsAsC
249	S119	CsUsUAfGUfUfUfUUUCCACAGsAsU
250	S120	CsCsACfAGfAfUfGCUUGUGAUsUsU
251	S121	AsCsAGfAUfGfCfUUGUGAUUUsUsU
252	S122	AsCsACfAUfCfGfCUGAUUUGUCsCsG
253	S123	UsCsGGfUUfGfGfAAUUCUUUUUsGsG
254	S124	UsCsACfAAfAfCfAAGCUGGUCGsGsU
255	S125	UsGsGAfACfAfGfUAGUCCCGCGsCsU
256	S126	UsUsGGfAAfCfAfGUAGUCCCGCsGsC
257	S127	CsAsCAfAAfCfAfAGCUGGUCGGsUsU
258	S128	CsUsCAfACfUfUfGAAAAGGGAAsCsA
259	S129	GsUsUCfUCfAfAfCUUGAAAAGGsGsA
260	S130	GsUsCAfUCfCfAfCAAUGAGAGUAsCsA

在某些實施方案中，本申請所述的RNAi劑的正義鏈與表6中的各序列相差一個、兩個或三個核苷酸。

在某些實施方案中，所述RNAi劑中正義鏈與反義鏈的組合選自表7。

表7 RNAi劑

正義鏈代碼	反義鏈代碼	雙鏈代碼
S55	AS55	Kylo-09-DS37
S56	AS56	Kylo-09-DS38
S57	AS57	Kylo-09-DS39
S58	AS58	Kylo-09-DS40
S59	AS59	Kylo-09-DS41
S60	AS60	Kylo-09-DS42
S61	AS61	Kylo-09-DS43
S62	AS62	Kylo-09-DS44
S63	AS63	Kylo-09-DS45
S64	AS64	Kylo-09-DS46
S65	AS65	Kylo-09-DS47
S66	AS66	Kylo-09-DS48
S67	AS67	Kylo-09-DS49
S68	AS68	Kylo-09-DS50
S69	AS69	Kylo-09-DS51
S70	AS70	Kylo-09-DS52
S71	AS71	Kylo-09-DS53
S72	AS72	Kylo-09-DS54
S73	AS73	Kylo-09-DS55
S74	AS74	Kylo-09-DS56
S75	AS75	Kylo-09-DS57
S76	AS76	Kylo-09-DS58
S77	AS77	Kylo-09-DS59
S78	AS78	Kylo-09-DS60
S79	AS79	Kylo-09-DS61
S80	AS80	Kylo-09-DS62
S81	AS81	Kylo-09-DS63
S82	AS82	Kylo-09-DS64
S83	AS83	Kylo-09-DS65
S84	AS84	Kylo-09-DS66
S85	AS85	Kylo-09-DS67
S86	AS86	Kylo-09-DS68
S87	AS87	Kylo-09-DS69
S88	AS88	Kylo-09-DS70
S89	AS89	Kylo-09-DS71
S90	AS90	Kylo-09-DS72
S91	AS91	Kylo-09-DS73
S92	AS92	Kylo-09-DS74
S93	AS93	Kylo-09-DS75
S94	AS94	Kylo-09-DS76
S95	AS95	Kylo-09-DS77
S96	AS96	Kylo-09-DS78
S97	AS97	Kylo-09-DS79
S98	AS98	Kylo-09-DS80
S99	AS99	Kylo-09-DS81
S100	AS100	Kylo-09-DS82
S101	AS101	Kylo-09-DS83
S102	AS102	Kylo-09-DS84
S103	AS103	Kylo-09-DS85
S104	AS104	Kylo-09-DS86
S105	AS105	Kylo-09-DS87
S106	AS106	Kylo-09-DS88
S107	AS107	Kylo-09-DS89
S108	AS108	Kylo-09-DS90
S109	AS109	Kylo-09-DS91
S110	AS110	Kylo-09-DS92
S111	AS111	Kylo-09-DS93
S112	AS112	Kylo-09-DS94
S113	AS113	Kylo-09-DS95
S114	AS114	Kylo-09-DS96
S115	AS115	Kylo-09-DS97
S116	AS116	Kylo-09-DS98
S117	AS117	Kylo-09-DS99
S118	AS118	Kylo-09-DS100
S119	AS119	Kylo-09-DS101
S120	AS120	Kylo-09-DS102
S121	AS121	Kylo-09-DS103
S122	AS122	Kylo-09-DS104
S123	AS123	Kylo-09-DS105
S124	AS124	Kylo-09-DS106
S125	AS125	Kylo-09-DS107
S126	AS126	Kylo-09-DS108
S127	AS127	Kylo-09-DS109
S128	AS128	Kylo-09-DS110
S129	AS129	Kylo-09-DS111
S130	AS130	Kylo-09-DS112

S130 AS130 Kylo-09-DS112

與載體偶聯的RNAi劑

本申請RNAi劑的另方面涉及將干擾核酸與載體偶聯的方式，以增強RNAi劑的穩定性、活性、細胞分佈或細胞攝取。

在某些實施方式中，通過在載體中引入靶組織受體的配體，以改變RNAi劑的分佈、靶向或穩定性。例如，與不存在配體的物種相比，專屬性的配體可以提供針對所選靶(例如分子、細胞或細胞類型、隔室(例如細胞或器官隔室、身體組織、器官或區域))的增強的親和力。

配體可以包括天然存在的物質，如蛋白質(例如人血清白蛋白(HSA)、低密度脂蛋白(LDL)或球蛋白)；碳水化合物(例如葡聚糖、茁黴多糖、殼糖、殼聚糖、菊糖、環糊精、N-乙醯葡糖胺、N-乙醯半乳糖胺或透明質酸)；或脂質。配體也可以是重組或合成分子，如合成聚合物，例如合成的聚氨基酸。

配體也可以包括靶向基團，例如與指定的細胞類型如腎細胞結合的細胞或組織靶向劑，例如凝集素、糖蛋白、脂質或蛋白質，例如抗體。靶向基團可以是促甲狀腺激素、黑皮質素、凝集素、糖蛋白、表面活性蛋白質A、黏蛋白碳水化合物、多價乳糖、多價半乳糖、N-乙醯基-半乳糖胺、N-乙醯基-葡糖胺多價甘露糖、多價岩藻糖、糖基化聚氨基酸、多價半乳糖、轉鐵蛋白、雙磷酸鹽、聚谷氨酸、聚天冬氨酸、脂質、膽固醇、類固醇、膽酸、葉酸、維生素B12、維生素A、生物素、或RGD肽或RGD肽模擬物。在某些實施方式中，該配體為多價半乳糖，例如，N-乙醯基-半乳糖胺。

本申請RNAi劑所包含的正義鏈和反義鏈可以通過固相合成的公知技術方便且常規地製備。可另外地或替代地使用本領域中已知的用於這類合成的任何其他方法，如液相合成或發酵。使用相似的技術來製備其他寡核苷酸(如硫代磷酸酯和烷基化衍生物)也是已知的。

在某些實施方式中，除了可商購以及寡核苷酸合成中常規使用的標準核苷亞磷醯胺單體以及非標準核苷亞磷醯胺單體之外，本申請的寡核苷酸或連接的核苷酸可以通過自動合成儀使用衍生自載體-核苷亞磷醯胺單體的亞磷醯胺法合成。

在某些實施方式中，本發明所述配體綴合的方式通過載體結構偶聯於反義鏈的5’末端和/或3’末端，和/或正義鏈的5’末端和/或3’末端。

例如，所述載體結構可以偶聯於正義鏈的5’末端和/或3’末端；或所述載體結構可以偶聯於反義鏈的5’末端且所述載體結構偶聯於正義鏈的3’末端；或所述載體結構可以偶聯於反義鏈的3’末端，且所述配體偶聯於正義鏈的5’末端；或所述載體結構偶聯於正義鏈的5’末端和3’末端。

在某些實施方式中，其中所述載體結構包括5’MVIP和3’MVIP，其中，所述5’MVIP偶聯在所述正義鏈和/或反義鏈5’末端，所述3’MVIP偶聯在所述反義鏈和/或正義鏈3’末端，所述5’MVIP的結構如式I所示，所述3’MVIP結構如式II所示，， I ， II

其中，

X為靶向特異性配體；

L為支鏈；

B為接頭；

D為連接鏈；

R ₁和R ₂為轉接點；

所述5’MVIP通過轉接點R ₁與正義鏈5’端或反義鏈5’端連接，所述3’MVIP通過轉接點R ₂與正義鏈3’端或反義鏈3’端連接，n和m各自獨立地為0-4的任意整數。

在某些實施方式中，其中所述X為組織的特異性靶向配體

在某些實施方式中，其中所述的X肝靶向特異性配體。

在某些實施方式中，其中所述R ₁或R ₂與所述正義鏈或反義鏈的連接通過磷酸酯或經修飾的磷酸酯，優選地通過磷酸酯或硫代磷酸酯相連接。

在某些實施方式中，m或n可以為0，即不存在3’MVIP或5’MVIP。

在某些實施方案中，當n=0(即不存在5’MVIP)時，所述3’MVIP的結構可以為：

在某些實施方案中，當n=1時，所述3’MVIP的結構可以為：

在某些實施方案中，當n=2時，所述3’MVIP的結構可以為：

在某些實施方案中，當n=3時，所述3’MVIP的結構可以為：

在某些實施方案中，當n=4時，所述3’MVIP的結構可以為：

在某些實施方案中，所述的n是指同時放在所述RNAi劑的正義鏈和反義鏈5’末端5'MVIP中n之和，所述的m是指同時放在所述RNAi劑的正義鏈和反義鏈3’末端3'MVIP中m之和。

在某些實施方案中，所述R ₁和R ₂結構中帶有-NH-、-S-和/或-O-，R ₁和R ₂通過結構中-NH-、-S-或-O-分別與連接鏈D以及正義鏈和/或反義鏈5’末端和3’末端相連，R ₁和R ₂相同或不相同。

在某些實施方案中，所述R ₁和R ₂是任選直鏈，或帶有醯胺基、羧基或烷基類支鏈的直鏈或者環狀結構，所述環狀結構包括飽和或不飽和的脂肪族碳環基，或者含有硫、氧或氮原子的五元或六元雜環基或芳香烴基。

在某些實施方案中，所述R ₁和/或R ₂為-E ₁(CH ₂)xCH ₂E ₂-，其中x為3-12的任意整數，基團E ₁和E ₂可以分別為-NH-、-S-或-O-。

在某些實施方案中，所述R ₁和/或R ₂為-E ₁(CH ₂)x1CH(OH)(CH ₂)x2E ₂-，其中x1或x2各自獨立地為3-10的任意整數，E ₁和E ₂可以分別為-NH-、-S-或-O-。

在某些實施方案中，所述R ₁為含有N、S或O的雜環或碳環結構：

在某些實施方式中，所述轉接點R ₁為-NH(CH ₂)xCH ₂O-，其中x為3-12的任意整數，優選為4-6的任意整數，可以通過以下兩種亞磷醯胺單體引入：

i．其中的一個-O-或-S-用於R ₁亞磷醯胺單體的合成，通過固相合成的方法接入RNAi劑正義鏈或反義鏈的5’端。結構中-NH-、-S-或-O-用於與5'MVIP中的連接鏈D連接，從而在RNAi劑正義鏈或反義鏈的5’端引入肝靶向特異性配體X。引入到RNAi劑正義鏈或反義鏈5’端的單體示例性結構如下：

在某些實施方案中，優選以下結構：

ii. R ₁結構中-NH-、-S-或-O-先與連接鏈D連接，另外一個-NH-、-S-或-O-用於5'MVIP亞磷醯胺單體的合成中與亞磷醯胺成酯，正義鏈或反義鏈5’MVIP亞磷醯胺單體結構示例如下：

在某些實施方案中，正義鏈或反義鏈5’MVIP亞磷醯胺單體優選以下結構：

當通式中n為1-4時，上述的單體中接頭B部分分別支化1至4次，以獲得對應的單體化合物，借助上述的單體化合物，肝靶向特異性配體X通過固相合成被引入到正義鏈或反義鏈5’末端。

在某些實施方案中，轉接點R ₁為-NH(CH ₂)xCH ₂O-，其中x可以是3-12的整數，優選為4-6的整數。

在某些實施方案中，5'MVIP亞磷醯胺單體結構選自如下結構中：

在某些實施方式中，所述R ₂為含有N、S或O的雜環或碳環結構：

在某些實施方式，所述R ₂為-NH(CH ₂)x1CH(OH)(CH ₂)x2CH ₂O-，其中x1為1-4的任意整數，x2為0-4的任意整數。

本申請所述的R ₂是通過丁二酸酐與R ₂結構中-NH-、-S-或-O-成酯或醯胺的同時，又與空白Solid Support中-NH-進行偶聯，形成3'MVIP solid spport，再通過亞磷醯胺固相合成法，將3’MVIP引入到正義鏈或反義鏈的3’末端。

在某些實施方案中，R ₂結構中的雜環為吡咯環或呱啶環，其通過環中的氮雜原子與3'MVIP的連接鏈D連接，3'MVIP solid spport示例性結構如下：

當通式中m為1-4時，上述的單體中接頭B部分分別支化1至4次，以獲得對應的Solid Support。

在某些實施方案中，R ₂為-B ₄(CH ₂)x1CH(OH)(CH ₂)x2CH ₂B ₅-，其中x1為1-4的整數，x2為0-4的整數，B ₄和B ₅分別為-NH-、-S-或-O-。

在某些實施方案中，R ₂為-NHCH ₂CH(OH)CH ₂O-。引入3’MVIP solid spport示例性結構如下：

在某些實施方案中，3’MVIP solid support結構如下：

在某些實施方式中，所述肝靶向特異性配體X選自用於增強肝細胞對RNAi劑的攝取的結構，可以是脂質、類固醇、維生素、糖、蛋白質、肽、多胺及肽模擬結構。在本申請提供的RNAi劑中，引入所述RNAi劑正義鏈或反義鏈末端的肝靶向特異性配體X可以相同，也可以不同，例如在特性上，有些可以是增強肝靶向性，有些可以是所述RNAi劑在體內藥物動力學的調節結構，有些可以是具有體內溶解活性的結構。在某些實施方案中，所述肝靶向特異性配體X選自以下結構中的一種或多種單糖及其衍生物。

在某些實施方式中，所述單糖選自以下結構中的一種或多種：甘露糖、半乳糖、D-阿拉伯糖、葡萄糖、果糖、木糖、葡萄糖胺、核糖。所述單糖衍生物選自甘露糖衍生物、半乳糖衍生物、葡萄糖衍生物、核糖衍生物以及其他衍生物。

在某些實施方式中，所述靶向單元X選自半乳糖、半乳糖胺、N-乙醯半乳糖胺及其衍生物，其結構通式如下：

其中，W ₁為氫或羥基保護基，可以相同也可以不同；W為-OH、-NHCOOH或-NHCO(CH ₂)qCH ₃，其中q為0-4的整數；W ₂為-NH-、O、S或C。

在某些實施方式中，所述靶向單元X為N-乙醯半乳糖胺及其衍生物。

在某些實施方式中，所述靶向單元X選自以下結構：

其中，W選自-OH、-NHCOOH或-NHCO(CH ₂)qCH ₃中的一種或兩種，其中q為0-4的整數。

在某些實施方案中，所述肝靶向特異性配體X在同一個5'MVIP或3'MVIP結構中可以相同，也可以不同。

在某些實施方案中，5'MVIP與3'MVIP彼此之間的X可以相同，也可以不同。

在某些實施方式中，所述L是含有-NH-、-C(=O)-、-O-、-S-、醯胺基、磷醯基、硫代磷醯基、C4-C10脂肪族碳環基、苯基或者這些基團的組合的C4-C18直鏈。

在某些實施方式中，所述L還帶有羥乙基或羧酸類的側鏈。

在某些實施方式中，所述L為含醯胺基或六元脂肪族碳環基的C ₇-C ₁₈直鏈。

在某些實施方式中，所述L選自如下結構中的一種或多種：

其中，r1是1-12的任意整數，r2為0-20的任意整數，Z為H、烷基或醯胺基。

在某些實施方式中，所述B的結構與能引入的X的數量有關，所述B中含-NH-、C、O、S、醯胺基、磷醯基、硫代磷醯基，當n或m為1時，其為一條直鏈，當n或m為2、3或4時，其分叉的次數分別為2、3或4。

在某些實施方式中，所述B選自以下結構：

其中，A1和A2各自獨立地是C、O、S、-NH-、羰基、醯胺基、磷醯基或硫代磷醯基，r為0-4的整數。

在某些實施方式中，所述B選自以下結構：

其中，r為0-4的任意整數。

在某些實施方式中，所述B選自以下結構：

在某些實施方式中，所述D是含有-NH-、C=O、O、S、醯胺基、磷醯基、硫代磷醯基、芳香烴基、C ₄-C ₁₀脂肪族碳環基、含1-3個氮的五元或六元雜環基或者這些基團的組合的C ₃-C ₁₈直鏈。

在某些實施方式中，所述D還帶有羥甲基、甲基叔丁基、甲基苯酚基、C ₅-C ₆脂肪環基的側鏈。

在某些實施方式中，，所述D為含兩個C=O、六元脂肪族碳環基或苯基的C ₃-C ₁₀直鏈。

在某些實施方式中，所述D為含兩個C=O的C ₃-C ₁₀直鏈。

在某些實施方式中，所述D選自以下結構：

其中，每個p各自獨立地為1-20的任意整數；s為2-13的整數；Z ₁和Z ₂為相同或者不同的取代基團。

在某些實施方式中，所述D選自以下結構：

在某些實施方式中，所述5’MVIP結構中的和3’MVIP結構中的選自以下結構中的一種或多種：

在某些實施方式中，所述X、L、D、及B在5’MVIP與3’MVIP各自的內部或5’MVIP與3’MVIP之間相同或不同。

在某些實施方案中，所述5’MVIP結構中的選自表8中所示的結構：

表8 5’MVIP的結構

序號	代碼	結構式
1	5'YICdd-01
2	5'YICd-01
3	5'YICc-01
4	5'YICa-01
5	5'YICa-02
6	5'YICa-03
7	5'YICa-04
8	5'YICa-05
9	5'ERCa-01
10	5'ERCa-02
11	5'ERCa-03
12	5'ERCa-04
13	5'ERCa-05
14	5'ERCdd-01
15	5'ERCd-01
16	5'ERCc-01
17	5'SANCdd-01
18	5'SANCd-01
19	5'SANCc-01
20	5'SANCa-01
21	5'SANCa-02
22	5'SANCa-03

在某些實施方案中，5’MVIP也可以不存在，這時候m可以為2-4的整數。

在某些實施方案中，所述3’MVIP結構中的選自表9中所示的結構：

表9 3’MVIP的結構

序號	代碼	結構
1	3'SANCdd-01
2	3'SANCd-01
3	3'SANCc-01
4	3'SANCa-01
5	3'SANCa-02
6	3'SANCa-03
7	3'ERCdd-01
8	3'ERCd-01
9	3'ERCc-01
10	3'ERCa-01
11	3'ERCa-02
12	3'ERCa-03
13	3'ERCa-04
14	3'ERCa-05
15	3'YICa-01
16	3'YICa-02
17	3'YICa-03
18	3'YICa-04
19	3'YICa-05
20	3'YICdd-01
21	3'YICd-01
22	3'YICc-01

在某些實施方案中，5’MVIP配體結構中的與R ₁的組合如表10所示。

表10 5’MVIP中與R ₁的組合

序號	代碼	R ₁	5'MVIP代碼
1	5'YICd-01	-NH(CH ₂) ₆O-	5'MVIP01
2	5'YICc-01	-NH(CH ₂) ₆O-	5'MVIP02
3	5'YICa-01	-O(CH ₂) ₆O-	5'MVIP03
4	5'YICa-02	-O(CH ₂) ₆O-	5'MVIP04
5	5'YICa-03	-S(CH ₂) ₆O-	5'MVIP05
6	5'YICa-04	-NH(CH ₂) ₆S-	5'MVIP06
7	5'YICa-05	-NH(CH ₂) ₈O-	5'MVIP07
8	5'YICr-06	-NH(CH ₂) ₈O-	5'MVIP08
9	5'ERCd-01	-NH(CH ₂) ₆O-	5'MVIP09
10	5'ERCc-01	-NH(CH ₂) ₆O-	5'MVIP10
11	5'ERCa-01	-NH(CH ₂) ₅CH(CH ₂CH ₃)O-	5'MVIP11
12	5'ERCa-02	-O(CH ₂) ₆O-	5'MVIP12
13	5'ERCa-03	-S(CH ₂) ₆O-	5'MVIP13
14	5'ERCa-04	-O(CH ₂) ₆O-	5'MVIP14
15	5'ERCa-05	-O(CH ₂) ₆O-	5'MVIP15
16	5'ERCr-06	-S(CH ₂) ₄CH(CH ₃)O-	5'MVIP16
17	5'SANCd-01	-NH(CH ₂) ₆O-	5'MVIP17
18	5'SANCc-01	-NH(CH ₂) ₆O-	5'MVIP18
19	5'ERCd-01		5'MVIP19
20	5'ERCd-01		5'MVIP20
21	5'YICd-01		5'MVIP21
22	5'SANCd-01		5'MVIP22

在某些實施方案中，3’MVIP可以不存在，這時候n可以是2-4。

在某些實施方案中，3’MVIP配體結構中的與R ₂組合如表11所示。

表11 3’MVIP的與R ₂組合

序號	代碼	R ₂	3'MVIP代碼
1	3'YICd-01		3'MVIP01
2	3'YICc-01		3'MVIP02
3	3'YICa-01		3'MVIP03
4	3'YICa-02		3'MVIP04
5	3'YICa-03		3'MVIP05
6	3'YICa-04		3'MVIP06
7	3'YICa-05		3'MVIP07
8	3'YICr-06		3'MVIP08
9	3'ERCd-01		3'MVIP09
10	3'ERCc-01		3'MVIP10
11	3'ERCa-01		3'MVIP11
12	3'ERCa-02		3'MVIP12
13	3'ERCa-03		3'MVIP13
14	3'ERCa-04		3'MVIP14
15	3'ERCa-05		3'MVIP15
16	3'ERCr-06		3'MVIP16
17	3'SANCd-01		3'MVIP17
18	3'SANCc-01		3'MVIP18
19	3'SANCa-01		3'MVIP19
20	3'ERCd-01		3'MVIP20
21	3'ERCd-01		3'MVIP21
22	3'ERCd-01		3'MVIP22
23	3'ERCd-01		3'MVIP23
24	3'ERCd-01		3'MVIP24
25	3'ERCd-01		3'MVIP25
26	3'ERCd-01		3'MVIP26
27	3'ERCd-01		3'MVIP27

在某些實施方式中，所述5’MVIP選自表10中5’MVIP01至5’MVIP22中的任一個。

在某些實施方式中，所述5’MVIP選自： 5’MVIP01 5’MVIP09

在某些實施方式中，所述3’MVIP選自表11中3’MVIP01至3’MVIP27的任一個。

在某些實施方式中，所述3’MVIP選自： 3’MVIP01 3’MVIP09 3’MVIP17

在某些實施方案中，選擇表12中不同5'MVIP和3'MVIP組合接入RNAi劑的正義鏈和或反義鏈的不同位置，包括末端及序列的中間位置，考察對AGT mRNA表達水平的影響。

表12 5'MVIP與3'MVIP的組合

序號	5’MVIP代碼	5’MVIP結構	3’MVIP代碼	3’MVIP結構
1	5’MVIP01		3’MVIP17
2	5’MVIP09		3’MVIP09
3	5’MVIP17		3’MVIP01
4	5’MVIP01		3’MVIP01
5	5’MVIP01		3’MVIP09
6	5’MVIP09		3’MVIP01

例如，可以將表5中的反義鏈序列的3’末端與載體結構3'MVIP09偶聯。示例性的，所述RNAi劑中的反義鏈可以選自下列表13中的序列。

表13 與3’MVIP偶聯的反義鏈

單鏈代碼	反義鏈序列5'→3'
AS131	UsUsUUGUfUUCACfAAfACAAGCsUsG-3'MVIP09
AS132	UsUsUAUUfACUAAfCAfCAAGGGsAsG-3'MVIP09
AS133	UsAsUACUfUUAAUfUUfUAAAACsCsC-3'MVIP09
AS134	UsAsCUUUfAAUUUfUAfAAACCCsAsA-3'MVIP09
AS135	UsUsGUUCfAAAAAfUCfACAAGCsAsU-3'MVIP09
AS136	UsUsAAUUfUUAAAfACfCCAAUUsUsU-3'MVIP09
AS137	AsUsACUUfUAAUUfUUfAAAACCsCsA-3'MVIP09
AS138	UsAsAAACfCCAAUfUUfUUGUUCsUsC-3'MVIP09
AS139	UsUsUUGCfAGCGAfCUfAGCACCsAsG-3'MVIP09
AS140	UsCsAAGCfUCAAAfAAfAAAUGCsUsG-3'MVIP09
AS141	UsUsUAAUfUUUAAfAAfCCCAAUsUsU-3'MVIP09
AS142	UsUsCAAAfAAUCAfCAfAGCAUCsUsG-3'MVIP09
AS143	UsAsAGCUfGUUGGfGUfAGACUCsUsG-3'MVIP09
AS144	UsUsCACAfAACAAfGCfUGGUCGsGsU-3'MVIP09
AS145	UsUsGUCCfUGGAUfGUfCACUCCsAsG-3'MVIP09
AS146	UsAsUUACfAGACAfCUfACACGGsAsG-3'MVIP09
AS147	UsUsUGUUfUCACAfAAfCAAGCUsGsG-3'MVIP09
AS148	UsUsUUGGfAACAGfUAfGUCCCGsCsG-3'MVIP09
AS149	AsAsGAAGfUUGGCfCAfGCAUsCsC-3'MVIP09
AS150	UsAsUACGfGAAGCfCCfAAGAsAsG-3'MVIP09
AS151	CsUsGUGCfAUGCCfAUfAUAUsAsC-3'MVIP09
AS152	CsAsUGGAfCCACGfCCfCCAUsAsG-3'MVIP09
AS153	AsAsAGACfAGCCGfUUfGGGGsAsG-3'MVIP09
AS154	UsCsUUGUfCCACCfCAfGAACsUsC-3'MVIP09
AS155	AsGsACCCfUCCACfCUfUGUCsCsA-3'MVIP09
AS156	AsGsUGAGfACCCUfCCfACCUsUsG-3'MVIP09
AS157	AsAsAGUGfAGACCfCUfCCACsCsU-3'MVIP09
AS158	GsUsUGAGfGGAGUfUUfUGCUsGsG-3'MVIP09
AS159	AsGsUUGAfGGGAGfUUfUUGCsUsG-3'MVIP09
AS160	UsCsCAGUfUGAGGfGAfGUUUsUsG-3'MVIP09
AS161	UsCsUUCAfUCCAGfUUfGAGGsGsA-3'MVIP09
AS162	UsUsCUUCfAUCCAfGUfUGAGsGsG-3'MVIP09
AS163	AsGsUUUCfUUCAUfCCfAGUUsGsA-3'MVIP09
AS164	UsUsGCUCfAAUUUfUUfGCAGsGsU-3'MVIP09
AS165	CsAsUUGCfUCAAUfUUfUUGCsAsG-3'MVIP09
AS166	UsCsAUUGfCUCAAfUUfUUUGsCsA-3'MVIP09
AS167	GsUsCAUUfGCUCAfAUfUUUUsGsC-3'MVIP09
AS168	UsGsUGGGfCUCUCfUCfUCAUsCsC-3'MVIP09
AS169	UsUsGAUCfAUACAfCAfGCAAsAsC-3'MVIP09
AS170	UsUsUGAUfCAUACfACfAGCAsAsA-3'MVIP09
AS171	AsAsAGGUfGGGAGfACfUGGGsGsG-3'MVIP09
AS172	CsAsUUAGfAAGAAfAAfGGUGsGsG-3'MVIP09
AS173	UsCsAUUAfGAAGAfAAfAGGUsGsG-3'MVIP09
AS174	CsUsCAUUfAGAAGfAAfAAGGsUsG-3'MVIP09
AS175	UsCsGGUUfGGAAUfUCfUUUUsUsG-3'MVIP09
AS176	AsAsACAAfGCUGGfUCfGGUUsGsG-3'MVIP09
AS177	UsCsACAAfACAAGfCUfGGUCsGsG-3'MVIP09
AS178	UsUsCACAfAACAAfGCfUGGUsCsG-3'MVIP09
AS179	UsUsUCACfAAACAfAGfCUGGsUsC-3'MVIP09
AS180	UsUsUUGUfUUCACfAAfACAAsGsC-3'MVIP09
AS181	UsUsUUUGfUUUCAfCAfAACAsAsG-3'MVIP09
AS182	UsUsUUUUfGUUUCfACfAAACsAsA-3'MVIP09
AS183	AsCsUUUUfUUGUUfUCfACAAsAsC-3'MVIP09
AS184	AsCsACUUfUUUUGfUUfUCACsAsA-3'MVIP09
AS185	AsAsAAGGfGAACAfCUfUUUUsUsG-3'MVIP09
AS186	UsCsUCAAfCUUGAfAAfAGGGsAsA-3'MVIP09
AS187	UsGsUUCUfCAACUfUGfAAAAsGsG-3'MVIP09
AS188	AsAsCCCAfAUUUUfUGfUUCUsCsA-3'MVIP09
AS189	UsAsAAACfCCAAUfUUfUUGUsUsC-3'MVIP09
AS190	UsUsUUAAfAACCCfAAfUUUUsUsG-3'MVIP09
AS191	AsUsUCAAfGACACfUAfAAUAsCsA-3'MVIP09
AS192	UsCsUUACfAUUCAfAGfACACsUsA-3'MVIP09
AS193	UsCsAUGUfUCUUAfCAfUUCAsAsG-3'MVIP09
AS194	GsUsCAUGfUUCUUfACfAUUCsAsA-3'MVIP09
AS195	AsUsCUGUfGGAAAfAAfACUAsAsG-3'MVIP09
AS196	AsAsAUCAfCAAGCfAUfCUGUsGsG-3'MVIP09
AS197	AsAsAAAUfCACAAfGCfAUCUsGsU-3'MVIP09
AS198	CsGsGACAfAAUCAfGCfGAUGUsGsU-3'MVIP09
AS199	CsCsAAAAfAGAAUfUCfCAAUUsGsA-3'MVIP09
AS200	AsCsCGACfCAGCUfUGfUUUGUsGsA-3'MVIP09
AS201	AsGsCGCGfGGACUfACfUGUUCsCsA-3'MVIP09
AS202	GsCsGCGGfGACUAfCUfGUUCCsAsA-3'MVIP09
AS203	AsAsCCGAfCCAGCfUUfGUUUGsUsG-3'MVIP09
AS204	UsGsUUCCfCUUUUfCAfAGUUGsAsG-3'MVIP09
AS205	UsCsCCUUfUUCAAfGUfUGAGAsAsC-3'MVIP09
AS206	UsAsUACUfCUCAUfUGfUGGAUGsAsC-3'MVIP09

在某些實施方案中，本申請所述的RNAi劑的反義鏈與表13中的各序列相差一個、兩個或三個核苷酸。

例如，可以將表6中的正義鏈序列的5’末端與載體結構5'MVIP09偶聯。示例性的，所述RNAi劑中的正義鏈可以選自下列表14中的序列。

表14 與5’MVIP偶聯的正義鏈

單鏈代碼	正義鏈序列5'→3'
S131	5'MVIP09-GsCsUUfGUfUfUfGUGAAACAAAAsAsA
S132	5'MVIP09-CsCsCUfUGfUfGfUUAGUAAUAAAsCsG
S133	5'MVIP09-GsUsUUfUAfAfAfAUUAAAGUAUAsCsA
S134	5'MVIP09-GsGsGUfUUfUfAfAAAUUAAAGUAsUsA
S135	5'MVIP09-GsCsUUfGUfGfAfUUUUUGAACAAsUsA
S136	5'MVIP09-AsAsUUfGGfGfUfUUUAAAAUUAAsAsG
S137	5'MVIP09-GsGsUUfUUfAfAfAAUUAAAGUAUsAsC
S138	5'MVIP09-GsAsACfAAfAfAfAUUGGGUUUUAsAsA
S139	5'MVIP09-GsGsUGfCUfAfGfUCGCUGCAAAAsCsU
S140	5'MVIP09-GsCsAUfUUfUfUfUUUGAGCUUGAsAsG
S141	5'MVIP09-AsUsUGfGGfUfUfUUAAAAUUAAAsGsU
S142	5'MVIP09-GsAsUGfCUfUfGfUGAUUUUUGAAsCsA
S143	5'MVIP09-GsAsGUfCUfAfCfCCAACAGCUUAsAsC
S144	5'MVIP09-CsGsACfCAfGfCfUUGUUUGUGAAsAsC
S145	5'MVIP09-GsGsAGfUGfAfCfAUCCAGGACAAsCsU
S146	5'MVIP09-CsCsGUfGUfAfGfUGUCUGUAAUAsCsC
S147	5'MVIP09-AsGsCUfUGfUfUfUGUGAAACAAAsAsA
S148	5'MVIP09-CsGsGGfACfUfAfCUGUUCCAAAAsAsG
S149	5'MVIP09-GsGsAUfGCfUfGfGCCAACUUCsUsU
S150	5'MVIP09-CsUsUCfUUfGfGfGCUUCCGUAsUsA
S151	5'MVIP09-GsUsAUfAUfAfUfGGCAUGCACsAsG
S152	5'MVIP09-CsUsAUfGGfGfGfCGUGGUCCAsUsG
S153	5'MVIP09-CsUsCCfCCfAfAfCGGCUGUCUsUsU
S154	5'MVIP09-GsCsUGfUGfAfCfAGGAUGGAAsGsA
S155	5'MVIP09-UsGsGAfCAfAfGfGUGGAGGGUsCsU
S156	5'MVIP09-CsAsAGfGUfGfGfAGGGUCUCAsCsU
S157	5'MVIP09-AsGsGUfGGfAfGfGGUCUCACUsUsU
S158	5'MVIP09-CsCsAGfCAfAfAfACUCCCUCAsAsC
S159	5'MVIP09-CsAsGCfAAfAfAfCUCCCUCAAsCsU
S160	5'MVIP09-CsAsAAfACfUfCfCCUCAACUGsGsA
S161	5'MVIP09-UsCsCCfUCfAfAfCUGGAUGAAsGsA
S162	5'MVIP09-CsCsCUfCAfAfCfUGGAUGAAGsAsA
S163	5'MVIP09-UsCsAAfCUfGfGfAUGAAGAAAsCsU
S164	5'MVIP09-AsCsCUfGCfAfAfAAAUUGAGCsAsA
S165	5'MVIP09-CsUsGCfAAfAfAfAUUGAGCAAsUsG
S166	5'MVIP09-UsGsCAfAAfAfAfUUGAGCAAUsGsA
S167	5'MVIP09-GsCsAAfAAfAfUfUGAGCAAUGsAsC
S168	5'MVIP09-GsGsAUfGAfGfAfGAGAGCCCAsCsA
S169	5'MVIP09-GsUsUUfGCfUfGfUGUAUGAUCsAsA
S170	5'MVIP09-UsUsUGfCUfGfUfGUAUGAUCAsAsA
S171	5'MVIP09-CsCsCCfCAfGfUfCUCCCACCUsUsU
S172	5'MVIP09-CsCsCAfCCfUfUfUUCUUCUAAsUsG
S173	5'MVIP09-CsCsACfCUfUfUfUCUUCUAAUsGsA
S174	5'MVIP09-CsAsCCfUUfUfUfCUUCUAAUGsAsG
S175	5'MVIP09-CsAsAAfAAfGfAfAUUCCAACCsGsA
S176	5'MVIP09-CsCsAAfCCfGfAfCCAGCUUGUsUsU
S177	5'MVIP09-CsCsGAfCCfAfGfCUUGUUUGUsGsA
S178	5'MVIP09-CsGsACfCAfGfCfUUGUUUGUGsAsA
S179	5'MVIP09-GsAsCCfAGfCfUfUGUUUGUGAsAsA
S180	5'MVIP09-GsCsUUfGUfUfUfGUGAAACAAsAsA
S181	5'MVIP09-CsUsUGfUUfUfGfUGAAACAAAsAsA
S182	5'MVIP09-UsUsGUfUUfGfUfGAAACAAAAsAsA
S183	5'MVIP09-GsUsUUfGUfGfAfAACAAAAAAsGsU
S184	5'MVIP09-UsUsGUfGAfAfAfCAAAAAAGUsGsU
S185	5'MVIP09-CsAsAAfAAfAfGfUGUUCCCUUsUsU
S186	5'MVIP09-UsUsCCfCUfUfUfUCAAGUUGAsGsA
S187	5'MVIP09-CsCsUUfUUfCfAfAGUUGAGAAsCsA
S188	5'MVIP09-UsGsAGfAAfCfAfAAAAUUGGGsUsU
S189	5'MVIP09-GsAsACfAAfAfAfAUUGGGUUUsUsA
S190	5'MVIP09-CsAsAAfAAfUfUfGGGUUUUAAsAsA
S191	5'MVIP09-UsGsUAfUUfUfAfGUGUCUUGAsAsU
S192	5'MVIP09-UsAsGUfGUfCfUfUGAAUGUAAsGsA
S193	5'MVIP09-CsUsUGfAAfUfGfUAAGAACAUsGsA
S194	5'MVIP09-UsUsGAfAUfGfUfAAGAACAUGsAsC
S195	5'MVIP09-CsUsUAfGUfUfUfUUUCCACAGsAsU
S196	5'MVIP09-CsCsACfAGfAfUfGCUUGUGAUsUsU
S197	5'MVIP09-AsCsAGfAUfGfCfUUGUGAUUUsUsU
S198	5'MVIP09-AsCsACfAUfCfGfCUGAUUUGUCsCsG
S199	5'MVIP09-UsCsGGfUUfGfGfAAUUCUUUUUsGsG
S200	5'MVIP09-UsCsACfAAfAfCfAAGCUGGUCGsGsU
S201	5'MVIP09-UsGsGAfACfAfGfUAGUCCCGCGsCsU
S202	5'MVIP09-UsUsGGfAAfCfAfGUAGUCCCGCsGsC
S203	5'MVIP09-CsAsCAfAAfCfAfAGCUGGUCGGsUsU
S204	5'MVIP09-CsUsCAfACfUfUfGAAAAGGGAAsCsA
S205	5'MVIP09-GsUsUCfUCfAfAfCUUGAAAAGGsGsA
S206	5'MVIP09-GsUsCAfUCfCfAfCAAUGAGAGUAsCsA

在某些實施方案中，本申請所述的RNAi劑的正義鏈與表14中的各序列相差一個、兩個或三個核苷酸。

AGT主要表達在肝臟，其表達僅限於人類和非靈長類動物。在一些體內實施方案中，猴是臨床前研究首選模型。在一些體內試驗實施方案中，所述的RNAi劑選自表15中的序列。

表15 含5’MVIP09/3’MVIP09組合的RNAi劑

單鏈代碼	正義鏈序列5'→3'	單鏈代碼	反義鏈序列5'→3'	雙鏈代碼
S131	5'MVIP09-GsCsUUfGUfUfUfGUGAAACAAAAsAsA	AS131	UsUsUUGUfUUCACfAAfACAAGCsUsG-3'MVIP09	Kylo-09-DS113
S132	5'MVIP09-CsCsCUfUGfUfGfUUAGUAAUAAAsCsG	AS132	UsUsUAUUfACUAAfCAfCAAGGGsAsG-3'MVIP09	Kylo-09-DS114
S133	5'MVIP09-GsUsUUfUAfAfAfAUUAAAGUAUAsCsA	AS133	UsAsUACUfUUAAUfUUfUAAAACsCsC-3'MVIP09	Kylo-09-DS115
S134	5'MVIP09-GsGsGUfUUfUfAfAAAUUAAAGUAsUsA	AS134	UsAsCUUUfAAUUUfUAfAAACCCsAsA-3'MVIP09	Kylo-09-DS116
S135	5'MVIP09-GsCsUUfGUfGfAfUUUUUGAACAAsUsA	AS135	UsUsGUUCfAAAAAfUCfACAAGCsAsU-3'MVIP09	Kylo-09-DS117
S136	5'MVIP09-AsAsUUfGGfGfUfUUUAAAAUUAAsAsG	AS136	UsUsAAUUfUUAAAfACfCCAAUUsUsU-3'MVIP09	Kylo-09-DS118
S137	5'MVIP09-GsGsUUfUUfAfAfAAUUAAAGUAUsAsC	AS137	AsUsACUUfUAAUUfUUfAAAACCsCsA-3'MVIP09	Kylo-09-DS119
S138	5'MVIP09-GsAsACfAAfAfAfAUUGGGUUUUAsAsA	AS138	UsAsAAACfCCAAUfUUfUUGUUCsUsC-3'MVIP09	Kylo-09-DS120
S139	5'MVIP09-GsGsUGfCUfAfGfUCGCUGCAAAAsCsU	AS139	UsUsUUGCfAGCGAfCUfAGCACCsAsG -3'MVIP09	Kylo-09-DS121
S140	5'MVIP09-GsCsAUfUUfUfUfUUUGAGCUUGAsAsG	AS140	UsCsAAGCfUCAAAfAAfAAAUGCsUsG-3'MVIP09	Kylo-09-DS122
S141	5'MVIP09-AsUsUGfGGfUfUfUUAAAAUUAAAsGsU	AS141	UsUsUAAUfUUUAAfAAfCCCAAUsUsU-3'MVIP09	Kylo-09-DS123
S142	5'MVIP09-GsAsUGfCUfUfGfUGAUUUUUGAAsCsA	AS142	UsUsCAAAfAAUCAfCAfAGCAUCsUsG-3'MVIP09	Kylo-09-DS124
S143	5'MVIP09-GsAsGUfCUfAfCfCCAACAGCUUAsAsC	AS143	UsAsAGCUfGUUGGfGUfAGACUCsUsG-3'MVIP09	Kylo-09-DS125
S144	5'MVIP09-CsGsACfCAfGfCfUUGUUUGUGAAsAsC	AS144	UsUsCACAfAACAAfGCfUGGUCGsGsU-3'MVIP09	Kylo-09-DS126
S145	5'MVIP09-GsGsAGfUGfAfCfAUCCAGGACAAsCsU	AS145	UsUsGUCCfUGGAUfGUfCACUCCsAsG-3'MVIP09	Kylo-09-DS127
S146	5'MVIP09-CsCsGUfGUfAfGfUGUCUGUAAUAsCsC	AS146	UsAsUUACfAGACAfCUfACACGGsAsG-3'MVIP09	Kylo-09-DS128
S147	5'MVIP09-AsGsCUfUGfUfUfUGUGAAACAAAsAsA	AS147	UsUsUGUUfUCACAfAAfCAAGCUsGsG-3'MVIP09	Kylo-09-DS129
S148	5'MVIP09-CsGsGGfACfUfAfCUGUUCCAAAAsAsG	AS148	UsUsUUGGfAACAGfUAfGUCCCGsCsG-3'MVIP09	Kylo-09-DS130

在某些實施方案中，本申請所述的RNAi劑的正義鏈和反義鏈與表15中的各序列相差一個、兩個或三個核苷酸。

在某些實施方案中，所述RNAi劑的反義鏈UsCsAAGCfUCAAAfAAfAAAUGCsUsG（SEQ ID NO: 118）的5'末端和/或3'端與不同結構的5'MVIP和/或3'MVIP連接，所述反義鏈選自下表16：

表16 5'MVIP和/或3'MVIP偶聯的反義鏈

單鏈代碼	反義鏈序列5'→3'
AS140	UsCsAAGCfUCAAAfAAfAAAUGCsUsG-3'MVIP09
AS207	5' MVIP17-UsCsAAGCfUCAAAfAAfAAAUGCsUsG
AS208	UsCsAAGCfUCAAAfAAfAAAUGCsUsG -3' MVIP01
AS209	UsCsAAGCfUCAAAfAAfAAAUGCsUsG -3' MVIP17
AS210	5' MVIP01-UsCsAAGCfUCAAAfAAfAAAUGCsUsG -3' MVIP01
AS211	5' MVIP09-UsCsAAGCfUCAAAfAAfAAAUGCsUsG -3' MVIP09
AS212	5' MVIP17-UsCsAAGCfUCAAAfAAfAAAUGCsUsG -3' MVIP17
AS213	5' MVIP01-UsCsAAGCfUCAAAfAAfAAAUGCsUsG -3' MVIP17
AS214	5' MVIP17-UsCsAAGCfUCAAAfAAfAAAUGCsUsG -3' MVIP01
AS215	5' MVIP01-UsCsAAGCfUCAAAfAAfAAAUGCsUsG -3' MVIP09
AS216	5' MVIP09-UsCsAAGCfUCAAAfAAfAAAUGCsUsG -3' MVIP01
AS217	5' MVIP09-UsCsAAGCfUCAAAfAAfAAAUGCsUsG -3' MVIP17
AS218	5' MVIP17-UsCsAAGCfUCAAAfAAfAAAUGCsUsG -3' MVIP09
AS219	5' MVIP12-UsCsAAGCfUCAAAfAAfAAAUGCsUsG
AS220	UsCsAAGCfUCAAAfAAfAAAUGCsUsG-3' MVIP19
AS221	5'MVIP16- UsCsAAGCfUCAAAfAAfAAAUGCsUsG -3'MVIP16
AS222	UsCsAAGCfUCAAAfAAfAAAUGCsUsG-3' MVIP17
AS223	UsCsAAGCfUCAAAfAAfAAAUGCsUsG-3' MVIP18
AS224	5' MVIP03-UsCsAAGCfUCAAAfAAfAAAUGCsUsG
AS225	5' MVIP08-UsCsAAGCfUCAAAfAAfAAAUGCsUsG
AS226	5'MVIP16-UsCsAAGCfUCAAAfAAfAAAUGCsUsG
AS227	5'MVIP13-UsCsAAGCfUCAAAfAAfAAAUGCsUsG-3'MVIP06
AS228	5'MVIP04-UsCsAAGCfUCAAAfAAfAAAUGCsUsG-3'MVIP06
AS229	5' MVIP11-UsCsAAGCfUCAAAfAAfAAAUGCsUsG
AS230	5' MVIP11-UsCsAAGCfUCAAAfAAfAAAUGCsUsG-3' MVIP14
AS231	5' MVIP15-UsCsAAGCfUCAAAfAAfAAAUGCsUsG
AS232	5' MVIP02-UsCsAAGCfUCAAAfAAfAAAUGCsUsG
AS233	5' MVIP05-UsCsAAGCfUCAAAfAAfAAAUGCsUsG
AS234	5' MVIP06-UsCsAAGCfUCAAAfAAfAAAUGCsUsG
AS235	5' MVIP07-UsCsAAGCfUCAAAfAAfAAAUGCsUsG
AS236	5' MVIP10- UsCsAAGCfUCAAAfAAfAAAUGCsUsG
AS237	5' MVIP14- UsCsAAGCfUCAAAfAAfAAAUGCsUsG
AS238	5' MVIP18- UsCsAAGCfUCAAAfAAfAAAUGCsUsG
AS239	UsCsAAGCfUCAAAfAAfAAAUGCsUsG -3' MVIP02
AS240	UsCsAAGCfUCAAAfAAfAAAUGCsUsG-3' MVIP03
AS241	UsCsAAGCfUCAAAfAAfAAAUGCsUsG -3' MVIP04
AS242	5' MVIP04-UsCsAAGCfUCAAAfAAfAAAUGCsUsG-3' MVIP04
AS243	5' MVIP03-UsCsAAGCfUCAAAfAAfAAAUGCsUsG -3' MVIP19
AS244	5' MVIP18- UsCsAAGCfUCAAAfAAfAAAUGCsUsG-3' MVIP18
AS245	5' MVIP08- UsCsAAGCfUCAAAfAAfAAAUGCsUsG-3' MVIP18
AS246	UsCsAAGCfUCAAAfAAfAAAUGCsUsG -3' MVIP05
AS247	UsCsAAGCfUCAAAfAAfAAAUGCsUsG -3' MVIP07
AS248	UsCsAAGCfUCAAAfAAfAAAUGCsUsG -3' MVIP10
AS249	UsCsAAGCfUCAAAfAAfAAAUGCsUsG -3' MVIP11
AS250	5' MVIP11- UsCsAAGCfUCAAAfAAfAAAUGCsUsG-3' MVIP11
AS251	5' MVIP15- UsCsAAGCfUCAAAfAAfAAAUGCsUsG-3' MVIP15
AS252	UsCsAAGCfUCAAAfAAfAAAUGCsUsG -3' MVIP06
AS253	UsCsAAGCfUCAAAfAAfAAAUGCsUsG -3' MVIP08
AS254	UsCsAAGCfUCAAAfAAfAAAUGCsUsG -3' MVIP12
AS255	UsCsAAGCfUCAAAfAAfAAAUGCsUsG -3' MVIP13
AS256	UsCsAAGCfUCAAAfAAfAAAUGCsUsG -3' MVIP14
AS257	UsCsAAGCfUCAAAfAAfAAAUGCsUsG -3' MVIP15
AS258	UsCsAAGCfUCAAAfAAfAAAUGCsUsG -3' MVIP16
AS259	UsCsAAGCfUCAAAfAAfAAAUGCsUsG -3' MVIP24
AS260	UsCsAAGCfUCAAAfAAfAAAUGCsUsG -3' MVIP27
AS261	5' MVIP19-UsCsAAGCfUCAAAfAAfAAAUGCsUsG
AS262	5' MVIP20-UsCsAAGCfUCAAAfAAfAAAUGCsUsG
AS263	5' MVIP21-UsCsAAGCfUCAAAfAAfAAAUGCsUsG
AS264	5' MVIP22-UsCsAAGCfUCAAAfAAfAAAUGCsUsG
AS265	5' MVIP01-UsCsAAGCfUCAAAfAAfAAAUGCsUsG
AS266	5' MVIP09-UsCsAAGCfUCAAAfAAfAAAUGCsUsG

在某些實施方案中，本申請所述的RNAi劑的反義鏈與表16中的各序列相差一個、兩個或三個核苷酸。

在某些實施方案中，所述RNAi劑的正義鏈GsCsAUfUUfUfUfUUUGAGCUUGAsAsG （SEQ ID NO: 194）的5'末端和/或3'端與不同結構的5'MVIP和/或3'MVIP連接，所述正義鏈選自下表17。

表17 5'MVIP和/或3'MVIP偶聯的正義鏈

單鏈代碼	正義鏈序列5'→3'
S140	5'MVIP09-GsCsAUfUUfUfUfUUUGAGCUUGAsAsG
S207	GsCsAUfUUfUfUfUUUGAGCUUGAsAsG - 3'MVIP17
S208	GsCsAUfUUfUfUfUUUGAGCUUGAsAsG -3'MVIP09
S209	GsCsAUfUUfUfUfUUUGAGCUUGAsAsG-3'MVIP01
S210	5'MVIP17- GsCsAUfUUfUfUfUUUGAGCUUGAsAsG
S211	5'MVIP01- GsCsAUfUUfUfUfUUUGAGCUUGAsAsG
S212	5'MVIP01-GsCsAUfUUfUfUfUUUGAGCUUGAsAsG -3'MVIP01
S213	5'MVIP09-GsCsAUfUUfUfUfUUUGAGCUUGAsAsG -3'MVIP09
S214	5'MVIP17-GsCsAUfUUfUfUfUUUGAGCUUGAsAsG -3'MVIP17
S215	5'MVIP01-GsCsAUfUUfUfUfUUUGAGCUUGAsAsG -3'MVIP17
S216	5'MVIP17-GsCsAUfUUfUfUfUUUGAGCUUGAsAsG -3'MVIP01
S217	5'MVIP01-GsCsAUfUUfUfUfUUUGAGCUUGAsAsG -3'MVIP09
S218	5'MVIP09-GsCsAUfUUfUfUfUUUGAGCUUGAsAsG -3'MVIP01
S219	5'MVIP09-GsCsAUfUUfUfUfUUUGAGCUUGAsAsG -3'MVIP17
S220	5'MVIP17-GsCsAUfUUfUfUfUUUGAGCUUGAsAsG -3'MVIP09
S221	5'MVIP12-GsCsAUfUUfUfUfUUUGAGCUUGAsAsG
S222	GsCsAUfUUfUfUfUUUGAGCUUGAsAsG -3'MVIP19
S223	5'MVIP16-GsCsAUfUUfUfUfUUUGAGCUUGAsAsG -3'MVIP16
S224	GsCsAUfUUfUfUfUUUGAGCUUGAsAsG -3'MVIP17
S225	GsCsAUfUUfUfUfUUUGAGCUUGAsAsG -3'MVIP18
S226	5' MVIP03-GsCsAUfUUfUfUfUUUGAGCUUGAsAsG
S227	5' MVIP08-GsCsAUfUUfUfUfUUUGAGCUUGAsAsG
S228	5' MVIP16-GsCsAUfUUfUfUfUUUGAGCUUGAsAsG
S229	5'MVIP13-GsCsAUfUUfUfUfUUUGAGCUUGAsAsG -3'MVIP06
S230	5'MVIP04-GsCsAUfUUfUfUfUUUGAGCUUGAsAsG -3'MVIP06
S231	5'MVIP11-GsCsAUfUUfUfUfUUUGAGCUUGAsAsG
S232	5'MVIP11-GsCsAUfUUfUfUfUUUGAGCUUGAsAsG -3'MVIP14
S233	5'MVIP15-GsCsAUfUUfUfUfUUUGAGCUUGAsAsG
S234	5'MVIP02-GsCsAUfUUfUfUfUUUGAGCUUGAsAsG
S235	5'MVIP05-GsCsAUfUUfUfUfUUUGAGCUUGAsAsG
S236	5'MVIP06-GsCsAUfUUfUfUfUUUGAGCUUGAsAsG
S237	5'MVIP07-GsCsAUfUUfUfUfUUUGAGCUUGAsAsG
S238	5'MVIP10-GsCsAUfUUfUfUfUUUGAGCUUGAsAsG
S239	5'MVIP14-GsCsAUfUUfUfUfUUUGAGCUUGAsAsG
S240	5'MVIP18-GsCsAUfUUfUfUfUUUGAGCUUGAsAsG
S241	GsCsAUfUUfUfUfUUUGAGCUUGAsAsG -3' MVIP02
S242	GsCsAUfUUfUfUfUUUGAGCUUGAsAsG -3' MVIP03
S243	GsCsAUfUUfUfUfUUUGAGCUUGAsAsG -3' MVIP04
S244	5' MVIP04-GsCsAUfUUfUfUfUUUGAGCUUGAsAsG -3' MVIP04
S245	5' MVIP03-GsCsAUfUUfUfUfUUUGAGCUUGAsAsG -3' MVIP19
S246	5' MVIP18-GsCsAUfUUfUfUfUUUGAGCUUGAsAsG -3' MVIP18
S247	5' MVIP08-GsCsAUfUUfUfUfUUUGAGCUUGAsAsG -3' MVIP18
S248	GsCsAUfUUfUfUfUUUGAGCUUGAsAsG -3' MVIP05
S249	GsCsAUfUUfUfUfUUUGAGCUUGAsAsG -3' MVIP07
S250	GsCsAUfUUfUfUfUUUGAGCUUGAsAsG -3' MVIP10
S251	GsCsAUfUUfUfUfUUUGAGCUUGAsAsG -3' MVIP11
S252	5' MVIP11-GsCsAUfUUfUfUfUUUGAGCUUGAsAsG -3' MVIP11
S253	5' MVIP15-GsCsAUfUUfUfUfUUUGAGCUUGAsAsG -3' MVIP15
S254	GsCsAUfUUfUfUfUUUGAGCUUGAsAsG -3' MVIP06
S255	GsCsAUfUUfUfUfUUUGAGCUUGAsAsG -3' MVIP08
S256	GsCsAUfUUfUfUfUUUGAGCUUGAsAsG -3' MVIP12
S257	GsCsAUfUUfUfUfUUUGAGCUUGAsAsG -3' MVIP13
S258	GsCsAUfUUfUfUfUUUGAGCUUGAsAsG -3' MVIP14
S259	GsCsAUfUUfUfUfUUUGAGCUUGAsAsG -3' MVIP15
S260	GsCsAUfUUfUfUfUUUGAGCUUGAsAsG -3' MVIP16
S261	5' MVIP19-GsCsAUfUUfUfUfUUUGAGCUUGAsAsG
S262	5' MVIP20--GsCsAUfUUfUfUfUUUGAGCUUGAsAsG
S263	5' MVIP21--GsCsAUfUUfUfUfUUUGAGCUUGAsAsG
S264	5' MVIP22--GsCsAUfUUfUfUfUUUGAGCUUGAsAsG

在某些實施方案中，本申請所述的RNAi劑的正義鏈與表17中的各序列相差一個、兩個或三個核苷酸。

在某些實施方案中，本申請所述的RNAi劑是由表17的正義鏈或與這些正義鏈相差一個、兩個或三個核苷酸的序列和表16中的反義鏈或與這些反義鏈一個、兩個或三個核苷酸的序列隨機配對形成的。

在某些實施方案中，本申請所述的RNAi劑是由表16中反義鏈和表17中正義鏈配對退火合成，見表18。這些RNAi劑中的n+m分別為2，3，4，5和6。5’MVIP和/或3’MVIP偶聯的位置包括反義鏈的5’末端和/或3’末端、正義鏈的5’末端和/或3’末端、反義鏈的5’末端和正義鏈的3’末端、正義鏈的5’末端和3’末端。其中n+m=2,3,4,5和6。

表18 含有5’MVIP和3’MVIP 組合的RNAi劑

單鏈代碼	載體結構	單鏈代碼	載體結構	雙鏈代碼	n+m	載體結構與siRNA偶聯位置(S:AS)
S211	5'MVIP01	AS208	3' MVIP01	Kylo-09-DS131	2	n:m
S263	5'MVIP21	AS208	3' MVIP01	Kylo-09-DS132	2	n:m
S211	5'MVIP01	AS247	3' MVIP07	Kylo-09-DS133	2	n:m
S212	5'MVIP01/3'MVIP01	AS64	/	Kylo-09-DS134	2	nm:/
S209	3'MVIP01	AS265	5'MVIP01	Kylo-09-DS135	2	m:n
S249	3' MVIP07	AS263	5'MVIP21	Kylo-09-DS136	2	m:n
S211	5'MVIP01	AS140	3'MVIP09	Kylo-09-DS137	3	n:m
S227	5' MVIP08	AS257	3'MVIP15	Kylo-09-DS138	3	n:m
S140	5'MVIP09	AS208	3' MVIP01	Kylo-09-DS139	3	n:m
S261	5' MVIP19	AS247	3' MVIP07	Kylo-09-DS140	3	n:m
S217	5'MVIP01/3'MVIP09	AS64	/	Kylo-09-DS141	3	nm:/
S218	5'MVIP09/3'MVIP01	AS64	/	Kylo-09-DS142	3	nm:/
S208	3'MVIP09	AS265	5'MVIP01	Kylo-09-DS143	3	m:n
S251	3'MVIP11	AS234	5'MVIP06	Kylo-09-DS144	3	m:n
S209	3'MVIP01	AS262	5' MVIP20	Kylo-09-DS145	3	m:n
S249	3' MVIP07	AS261	5' MVIP19	Kylo-09-DS146	3	m:n
S211	5'MVIP01	AS209	3' MVIP17	Kylo-09-DS147	4	n:m
S263	5' MVIP21	AS209	3' MVIP17	Kylo-09-DS148	4	n:m
S210	5'MVIP17	AS208	3' MVIP01	Kylo-09-DS149	4	n:m
S264	5' MVIP22	AS247	3' MVIP07	Kylo-09-DS150	4	n:m
S140	5'MVIP09	AS140	3'MVIP09	Kylo-09-DS122	4	n:m
S262	5' MVIP20	AS248	3' MVIP10	Kylo-09-DS151	4	n:m
S261	5' MVIP19	AS257	3'MVIP15	Kylo-09-DS152	4	n:m
S238	5' MVIP10	AS254	3'MVIP12	Kylo-09-DS153	4	n:m
S213	5'MVIP09/3'MVIP09	AS64	/	Kylo-09-DS154	4	nm:/
S208	3'MVIP09	AS266	5' MVIP09	Kylo-09-DS155	4	m:n
S250	3'MVIP10	AS262	5' MVIP20	Kylo-09-DS156	4	m:n
S209	3'MVIP01	AS207	5' MVIP17	Kylo-09-DS157	4	m:n
S241	3'MVIP02	AS238	5' MVIP18	Kylo-09-DS158	4	m:n
S207	3'MVIP17	AS265	5' MVIP01	Kylo-09-DS159	4	m:n
S225	3'MVIP18	AS263	5' MVIP21	Kylo-09-DS160	4	m:n
S140	5'MVIP09	AS209	3' MVIP17	Kylo-09-DS161	5	n:m
S262	5'MVIP20	AS220	3' MVIP19	Kylo-09-DS162	5	n:m
S210	5'MVIP17	AS140	3'MVIP09	Kylo-09-DS163	5	n:m
S264	5'MVIP22	AS249	3'MVIP11	Kylo-09-DS164	5	n:m
S219	5'MVIP09/3'MVIP17	AS64	/	Kylo-09-DS165	5	nm:/
S220	5'MVIP17/3'MVIP09	AS64	/	Kylo-09-DS166	5	nm:/
S207	3'MVIP17	AS262	5' MVIP20	Kylo-09-DS167	5	m:n
S222	3'MVIP19	AS226	5' MVIP16	Kylo-09-DS168	5	m:n
S208	3'MVIP09	AS207	5' MVIP17	Kylo-09-DS169	5	m:n
S259	3' MVIP15	AS207	5' MVIP17	Kylo-09-DS170	5	m:n
S210	5'MVIP17	AS209	3' MVIP17	Kylo-09-DS171	6	n:m
S264	5' MVIP22	AS220	3' MVIP19	Kylo-09-DS172	6	n:m
S214	5'MVIP17/3'MVIP17	AS64	/	Kylo-09-DS173	6	nm:/
S207	3'MVIP17	AS207	5' MVIP17	Kylo-09-DS174	6	m:n
S225	3'MVIP18	AS264	5' MVIP22	Kylo-09-DS175	6	m:n

在某些實施方案中，本申請所述的RNAi劑或其藥學上可接受的鹽優選以鈉鹽和三乙胺鹽或其它可藥用鹽的形式製備或合成。

在某些實施方案中，所述RNAi劑或其藥學上可接受的鹽更優選為其鈉鹽或三乙胺鹽。

藥物組合物

本申請也包括包含本申請的RNAi劑或其藥學上可接受的鹽的藥物組合物。

在一個實施方式中，本文提供包含本文所述的RNAi劑和藥學上可接受的藥用佐劑的藥物組合物。包含RNAi劑的藥物組合物可用於預防和/或治療AGT相關障礙，例如，高血壓。這類藥物組合物依據遞送模式配製。一個實例方案為配製用於以腸胃外遞送全身性施用的組合物，例如，皮下(SC)、肌內(IM)或靜脈內(IV)遞送。本申請的藥物組合物可以足以抑制AGT基因表達的劑量施用。

藥學上可接受的“佐劑”或“賦形劑”是用於遞送一種或多種核酸至動物的藥學上可接受的溶劑、懸浮劑或任何其他藥學上惰性的媒介物。賦形劑可為液體或固體，並考慮計劃的施用方式進行選擇，以在與核酸及給定藥物組合物中的其他組分組合時提供所需的體積、稠度等。RNAi劑可以靶向特定組織(例如，肝細胞)的方式遞送。

在某些實施方式中，所述的藥物組合物，其還包含遞送媒介物(如奈米顆粒、樹狀聚合物、聚合物、脂質體或陽離子遞送系統)，

在某些實施方式中，其中所述遞送媒介物包括脂質體。

在某些實施方式中，其中所述遞送媒介物包括奈米脂質，其能夠與核酸分子形成脂質體-核酸奈米顆粒。

在某些實施方式中，所述遞送媒介物包括兩性脂質化合物M10C1。

本申請的藥物組合物包括(但不限於)溶液、乳液和包含脂質體的製劑。這些組合物可由多種組分產生，包括(但不限於)預形成液體、自乳化固體和自乳化半固體。製劑包括靶向肝臟的那些。可以單位劑型方便地存在的本申請藥物製劑可依據製藥業公知的常規技術製備。這類技術包括將活性成分與藥用佐劑或賦形劑結合的步驟。

用途

另一方面，本申請提供一種減少細胞或組織中AGT mRNA或蛋白質表達的方法，其包括使細胞或組織與有效量的前述的抑制AGT基因表達的RNAi劑或其藥學上可接受的鹽，和/或前述的藥物組合物接觸。

適合使用本申請方法處理的細胞可為任何表達AGT基因的細胞，例如，肝臟細胞、腦細胞、膽囊細胞、心臟細胞或腎臟細胞，但優選為肝臟細胞。適合用於本申請方法的細胞可為哺乳動物細胞，當與表達AGT基因的細胞接觸時，RNAi劑抑制AGT基因(例如，人類、靈長類、非靈長類或大鼠AGT基因)的表達至少約50％，例如可通過PCR或基於分支DNA(bDNA)的方法，或由基於蛋白質的方法，如免疫螢光分析法，西方墨點法或流式細胞分析技術測定的。

在某些實施方式中，其中所述組織是肝臟組織。

在某些實施方式中，其中所述細胞和組織是離體的。

在某些實施方式中，其中所述細胞和組織在受試者體內。

本文所用術語“抑制”可與“減少”、“降低”、“沉默”、“下調”、“壓制”及其他類似術語交換使用，且包括任何抑制水平。AGT基因的表達可依據與AGT基因表達相關的任何變量的水平或水平變化來評價，例如，AGT mRNA水平或AGT蛋白水平。這一水平可在單個細胞中或細胞群中(包括例如，源自受試者的樣品)中分析。可通過與AGT表達相關的一種或多種變量與對照水平比較的絕對或相對水平的下降來評價抑制。對照水平可為本領域上採用的任何類型的對照水平，例如，給藥前基線水平或從未處理或接受對照(如例如，僅緩衝劑對照或無活性劑對照)處理的類似受試者、細胞或樣本測得的水平。

AGT基因表達的抑制可通過其中AGT基因被轉錄且已處理(例如，通過一個或多個細胞與本申請的RNAi劑接觸，或通過施用本申請的RNAi劑於其中存在該細胞的受試者)使得抑制AGT基因表達的第一細胞或細胞群(這類細胞可例如存在於源自受試者的樣品中)表達的mRNA量與基本上與該第一細胞或細胞群相同但未如此處理的第二細胞或細胞群(未用RNAi劑處理或未用靶向目的基因的RNAi劑處理的對照細胞)相比的降低來表現。在優選的實施方式中，抑制通過實施例2提供的方法使用siRNA合適的濃度在高表達AGT 的細胞系中評價，並將被干預細胞中的mRNA水平表示為非干預對照細胞中mRNA水平的百分比。

在其他實施方式中，AGT基因表達的抑制可通過功能上與AGT基因表達相關的參數的降低來評價，例如，受試者血液或血清中的AGT蛋白水平。AGT基因沉默可在任何表達AGT的細胞(內源性或來自表達構築體的外源性)中且通過本領域已知的任何分析法測定。

AGT蛋白質表達的抑制可由細胞或細胞群或受試者樣品表達的AGT蛋白水平(例如，源自受試者的血液樣品中的蛋白質水平)的降低來表現。如上所述，對於mRNA抑制的評價，處理細胞或細胞群的蛋白質表達水平的抑制可類似地表示為對照細胞或細胞群的蛋白質水平的百分比，或受試者樣品(例如，血液或其衍生的血清)中的蛋白質水平的變化。

可用於評價AGT基因抑制的對照組細胞、細胞群或受試者樣品包括未與本申請RNAi劑接觸的細胞、細胞群或受試者樣品。例如，對照細胞、細胞群或受試者樣品可源自於用RNAi劑治療前的單個受試者(例如，人類或動物受試者)或適當匹配的群體對照。

細胞或細胞群表達的AGT mRNA水平可採用本領域已知用於評價mRNA表達的任何方法測定。例如，qRT-PCR，評價基因表達的降低。可通過本領域中已知的任何方法，例如，ELISA，評價蛋白質產生的降低。在某些實施方式中，穿刺肝臟活檢樣品用作監測AGT基因或蛋白質表達降低的組織材料。其他實施方式中，血液樣品用作監測AGT蛋白質表達降低的受試者樣品。

另一方面，本申請提供前述的抑制AGT基因表達的RNAi劑或其藥學上可接受的鹽，或前述的藥物組合物在製備藥物中的用途，所述藥物用於預防和/或治療疾病或病症或者降低疾病或病症的風險。

在某些實施方式中，其中所述疾病或病症包括與AGT相關的疾病或病症。

在某些實施方式中，其中所述疾病或病症選自：高血壓病、高血壓、臨界性高血壓、原發性高血壓、繼發性高血壓、孤立性收縮期或舒張期高血壓、妊娠相關高血壓、糖尿病性高血壓、頑固性高血壓、難治性高血壓、陣發性高血壓、腎血管性高血壓、戈德布拉特氏高血壓、低血漿腎素活性或血漿腎素濃度相關的高血壓、眼高血壓、青光眼、肺動脈高血壓、門靜脈高血壓、系統性靜脈高血壓、收縮期高血壓、不穩定性高血壓；高血壓性心臟病、高血壓性腎病、動脈粥狀硬化、動脈硬化、血管病變、糖尿病性腎病、糖尿病性視網膜病、慢性心衰竭、心肌病、糖尿病性心肌病、腎小球硬化症、主動脈縮窄、主動脈瘤、心室纖維化、心衰竭、心肌梗塞、心絞痛、中風、腎疾病、腎衰竭、系統性硬化症、宮內發育遲緩(IUGR)、胎兒生長受限、肥胖、肝脂肪變性/脂肪肝、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、非酒精性脂肪肝病(NAFLD)；葡萄糖耐受不良、2型糖尿病(非胰島素依賴型糖尿病)和代謝綜合症。

另一方面，本申請提供一種預防和/或治療疾病或病症的方法，所述方法包括向有此需要的受試者施用有效量的前述的抑制AGT基因表達的RNAi劑或其藥學上可接受的鹽，和/或前述的藥物組合物。

本申請的體內方法可包括對受試者施用包含RNAi劑的組合物，其中該RNAi劑包括與接受施用RNAi劑的哺乳動物的AGT基因的RNA轉錄物的至少一部分互補的核苷酸序列。組合物可採用本領域已知的任何方式施用，包括(但不限於)：經口、腹膜內或腸胃外途徑，包括顱內(例如，腦室內、腦實質內和鞘內)、靜脈內、肌內、皮下、透皮、氣管(氣霧劑)、經鼻、直腸和局部(包括頰內及舌下)施用。在某些實施方式中，組合物通過靜脈內輸注或注射施用。在某些實施方式中，組合物通過皮下注射施用。在某些實施方式中，該組合物通過肌內注射施用。

本申請的RNAi劑還可作為“游離RNAi劑”施用。游離RNAi劑是在沒有藥物組合物的存在下施用。裸RNAi劑可在合適緩衝液中。緩衝液可包含乙酸鹽、檸檬酸鹽、醇溶穀蛋白、碳酸鹽或磷酸鹽，或其任何組合。在一個實施方式中，緩衝液為磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)。可以調整包含RNAi劑的緩衝液的pH和滲透壓，以便適合施用於受試者。

或者，本申請的RNAi劑可作為藥物組合物施用，如脂質體製劑。

本申請的藥物組合物可以足以抑制AGT基因表達的劑量施用。通常，本申請的RNAi劑的合適劑量在每天每千克接受者體重約0.001至約200.0mg的範圍內，通常在每天每千克體重約1至50mg的範圍內。通常，本申請的RNAi劑的合適劑量在約0.1mg/kg至約5.0mg/kg的範圍內，例如約0.3mg/kg至約3.0mg/kg的範圍內。

在一個實施方式中，該方法包括施用本文所述的組合物，使得降低靶AGT基因表達，如每劑約1、2、3、4、5、6、1-6、1-3或3-6個月。在某些實施方式中，該組合物每3-6個月施用一次。

在某些實施方式中，在初始治療方案後，以較少的頻率施用治療。重複劑量方案可包括規律地施用治療量的RNAi劑，如每月一次至一年一次。在某些實施方式中，RNAi劑約每月一次至約每三個月一次施用，或約每三個月一次至約每六個月一次施用。

在初始治療方案後，可以較低的頻率施用治療。可依據疾病嚴重性確定治療持續時間。

在其他實施方式中，單一劑量的藥物組合物可以為長效的，使得劑量以不超過1、2、3或4個月的間隔施用。在本申請的一些實施方式中，本申請的藥物組合物的單一劑量約每月施用一次。在本申請的其他實施方式中，本申請藥物組合物的單一劑量按季(即約每3個月)施用。在本申請的其他實施方式中，本申請藥物組合物的單一劑量每年施用2次(即約每6個月一次)。

本領域技術人員應理解，某些因素可影響有效治療受試者所需的劑量和施用時間，包括(但不限於)：受試者中存在的突變、之前的治療、受試者的一般健康或年齡和存在的其他疾病。此外，按照需要以預防和/或治療有效量的組合物治療受試者可包括單次治療或一系列治療。

在某些實施方式中，其進一步包括測定來自所述受試者的樣品中的AGT水平。

例如，其進一步包括測定來自所述受試者血液樣品、血清樣品或尿液樣品中的AGT蛋白質水平。

在某些實施方式中，其進一步包括對所述受試者施用用於治療高血壓的另外的治療劑。

例如，其中該另外的治療劑可以選自：利尿劑、血管收縮素轉化酶(ACE)抑制劑、血管收縮素II受體拮抗劑、β-受體阻斷劑、血管擴張劑、鈣通道阻滯劑、醛固酮拮抗劑、α2-激動劑、腎素抑制劑、α-腎上腺素性阻斷劑、外周作用腎上腺素能劑、選擇性D1受體部分激動劑、非選擇性α-腎上腺素能拮抗劑、合成的甾體抗鹽皮質激素劑、血管收縮素受體-腦啡肽酶抑制劑(ARNi)、沙庫比曲/纈沙坦；或內皮素受體拮抗劑(ERA)、西他生坦、安貝生坦、阿曲生坦、BQ-123、齊泊騰坦、波生坦、馬昔騰坦和替唑生坦；上述任何治療劑的組合；及配製成藥劑組合的高血壓治療劑。

在某些實施方式中，其中該另外的治療劑包括血管收縮素II受體拮抗劑。

例如，其中該血管收縮素II受體拮抗劑可以選自：氯沙坦、纈沙坦、奧美沙坦、依普沙坦和阿齊沙坦。

另一方面，本申請提供一種細胞其包含前述的抑制AGT基因表達的RNAi劑或其藥學上可接受的鹽。

另一方面，本申請提供一種藥盒，其包含前述的抑制AGT基因表達的RNAi劑或其藥學上可接受的鹽，或前所述的藥物組合物。

具體地，本申請還公開了以下實施方式：

1. 一種RNAi劑或其藥學上可接受的鹽，所述RNAi劑的結構中含有載體結構和干擾核酸，其結構如式IIIa、IIIb或IIIc所示： (IIIa) (IIIb) (IIIc)

其中，

所述干擾核酸靶向AGT基因，其包括反義鏈和正義鏈；

所述載體結構包括5’MVIP（5’MultiValent Import Platform）和3’MVIP（3’ MultiValent Import Platform）；

根據實施方式1所述的RNAi劑或其藥學上可接受的鹽，其中所述干擾核酸包括siRNA或miRNA。

根據實施方式1-2中任一項所述的RNAi劑或其藥學上可接受的鹽，其中所述且n+m=2-6的整數，優選n+m=2、3或4，更優選為4。

根據實施方式1-3中任一項所述的RNAi劑或其藥學上可接受的鹽，所述R ₁為含有N、S或O的雜環或碳環結構：

或者，所述R ₁為-NH(CH ₂) _xCH ₂O-，其中x為3-12的任意整數，優選為4-6的任意整數。

根據實施方式1-4中任一項所述的RNAi劑或其藥學上可接受的鹽，所述R ₂為含有N、S或O的雜環或碳環結構：

或者，所述R ₂為-NH(CH ₂)x ₁CH(OH)(CH ₂)x ₂CH ₂O-，其中x1為1-4的任意整數，x2為0-4的任意整數。

根據實施方式1-5中任一項所述的RNAi劑或其藥學上可接受的鹽，所述X選自用於增強肝細胞對RNAi劑的攝取的結構。

根據實施方式1-6中任一項所述的RNAi劑或其藥學上可接受的鹽，所述X選自單糖及其衍生物。

根據實施方式1-7中任一項所述的RNAi劑或其藥學上可接受的鹽，所述X為N-乙醯半乳糖胺及其衍生物。

根據實施方式1-8中任一項所述的RNAi劑或其藥學上可接受的鹽，所述X選自以下結構：

根據實施方式1-9中任一項所述的RNAi劑或其藥學上可接受的鹽，所述L選自如下結構中的一種或多種：

根據實施方式1-10中任一項所述的RNAi劑或其藥學上可接受的鹽，所述B選自以下結構：

其中，A ₁和A ₂各自獨立地是C、O、S、-NH-、羰基、醯胺基、磷醯基或硫代磷醯基，r為0-4的整數。

根據實施方式1-11中任一項所述的RNAi劑或其藥學上可接受的鹽，所述D選自以下結構：

根據實施方式1-12中任一項所述的RNAi劑或其藥學上可接受的鹽，所述5’MVIP結構中的和3’MVIP結構中的選自以下結構中的一種或多種：

根據實施方式1-13中任一項所述的RNAi劑或其藥學上可接受的鹽，所述X、L、D及B在5’MVIP與3’MVIP各自的內部或5’MVIP與3’MVIP之間相同或不同。

根據實施方式1-14中任一項所述的RNAi劑或其藥學上可接受的鹽，所述5’MVIP選自表10中5’MVIP01至5’MVIP22中的任一個。

根據實施方式1-15中任一項所述的RNAi劑或其藥學上可接受的鹽，所述3’MVIP選自表11中3’MVIP01至3’MVIP27的任一個。

根據實施方式1-16中任一項所述的RNAi劑或其藥學上可接受的鹽，其中正義鏈5’MVIP和反義鏈3’MVIP的組合為5’MVIP01/3’MVIP01、5’MVIP01/3’MVIP17或5’MVIP09/3’MVIP09；或者正義鏈5’MVIP和正義鏈3’MVIP的組合為5’MVIP01/3’MVIP09或5’MVIP09/3’MVIP01。

根據實施方式1-17中任一項所述的RNAi劑或其藥學上可接受的鹽，其中所述反義鏈和正義鏈形成的互補區，所述互補區包括至少12個連續核苷酸，其中所述正義鏈包含AGT mRNA NM_001382817.3中起始位置為1854-1874、1907-1927、1895-1915、1352-1372、1903-1923、2019-2039、1853-1873和1818-1838的至少連續12個核苷酸或與其相差不超過3個核苷酸的序列或NM_001384479.1中起始位置為1822-1842、1875-1895、1863-1883、1320-1340、1871-1891、1987-2007、1821-1841和1786-1806的至少連續12個核苷酸或與其相差不超過3個核苷酸的序列。

根據實施方式1-18中任一項所述的RNAi劑或其藥學上可接受的鹽，其中所述正義鏈和反義鏈之間至少有約80%的鹼基互補。

根據實施方式1-19中任一項所述的RNAi劑或其藥學上可接受的鹽，其中所述正義鏈和反義鏈各自獨立地為15-30個核苷酸，優選17-25個核苷酸，更優選19-23個核苷酸。

根據實施方式1-20中任一項所述的RNAi劑或其藥學上可接受的鹽，其中所述正義鏈與SEQ ID NO: 1、SEQ ID NO: 7、SEQ ID NO: 8、SEQ ID NO: 10、SEQ ID NO: 11、SEQ ID NO: 12、SEQ ID NO: 17和SEQ ID NO: 18中任意一個或與其相差不超過3個核苷酸的序列具有基本上同源性。

根據實施方式1-21中任一項所述的RNAi劑或其藥學上可接受的鹽，其中所述反義鏈包含SEQ ID NO: 19、SEQ ID NO: 25、SEQ ID NO: 26、SEQ ID NO: 28、SEQ ID NO: 29、SEQ ID NO: 30、SEQ ID NO: 35和SEQ ID NO: 36中任意一個或與其相差不超過3個核苷酸的序列。

根據實施方式1-22中任一項所述的RNAi劑或其藥學上可接受的鹽，其中所述正義鏈包含SEQ ID NO: 37、SEQ ID NO: 43、SEQ ID NO: 44、SEQ ID NO: 46、SEQ ID NO: 47、SEQ ID NO: 48、SEQ ID NO: 53和SEQ ID NO: 54中任意一個或與其相差不超過3個核苷酸的序列。

根據實施方式1-23中任一項所述的RNAi劑或其藥學上可接受的鹽，其中所述反義鏈包含SEQ ID NO: 55、SEQ ID NO: 61、SEQ ID NO: 62、SEQ ID NO: 64、SEQ ID NO: 65、SEQ ID NO: 66、SEQ ID NO: 71和SEQ ID NO: 72中任意一個或與其相差不超過3個核苷酸的序列。

根據實施方式1-24中任一項所述的RNAi劑或其藥學上可接受的鹽，其中所述正義鏈和/或反義鏈上的一個或多個核苷酸被修飾以形成修飾的核苷酸。

根據實施方式25所述的RNAi劑或其藥學上可接受的鹽，其中所述修飾的核苷酸選自：去氧核糖核苷酸、核苷酸模擬物、去鹼基核苷酸、2’-修飾核苷酸、3’至3’連接(倒置)核苷酸、含非天然鹼基的核苷酸、橋接核苷酸、肽核酸(PNA)、解鎖的核鹼基類似物、鎖定核苷酸、3’-O-甲氧基(2’核苷間連接)核苷酸、2’-氟-阿拉伯糖核苷酸、5’-甲基/2’-氟代核苷酸、嗎啉代核苷酸、乙烯基磷酸酯去氧核糖核苷酸、含乙烯基磷酸酯的核苷酸和含環丙基磷酸酯的核苷酸。

根據實施方式1-26中任一項所述的RNAi劑或其藥學上可接受的鹽，其中所述正義鏈和反義鏈的部分或全部核苷酸糖基2’位是氟或甲氧基。

根據實施方式1-27中任一項所述的RNAi劑或其藥學上可接受的鹽，其中所述正義鏈末端和/或反義鏈末端的3個連續的核苷酸之間存在至少連續兩個硫代磷酸酯鍵。

根據實施方式1-28中任一項所述的RNAi劑或其藥學上可接受的鹽，其中所述反義鏈5’末端開始的第7、12、14位核苷酸糖基2’位是氟，反義鏈其餘的核苷酸糖基的2’位是甲氧基，且所述反義鏈末端的3個連續的核苷酸之間存在至少連續兩個硫代磷酸酯鍵；所述正義鏈5’末端開始的第5、7、8、9位核苷酸糖基2’位是氟，正義鏈其餘的核苷酸糖基的2’位是甲氧基；且所述正義鏈末端的3個連續的核苷酸之間存在至少連續兩個硫代磷酸酯鍵。

根據實施方式1-29中任一項所述的RNAi劑或其藥學上可接受的鹽，其中所述反義鏈包含SEQ ID NO: 109、SEQ ID NO: 115、SEQ ID NO: 116、SEQ ID NO: 118、SEQ ID NO: 119、SEQ ID NO: 120、SEQ ID NO: 125和SEQ ID NO: 126中任意一個或與其相差不超過3個核苷酸的序列。

根據實施方式1-30中任一項所述的RNAi劑或其藥學上可接受的鹽，其中所述正義鏈包含SEQ ID NO: 185、SEQ ID NO: 191、SEQ ID NO: 192、SEQ ID NO: 194、SEQ ID NO: 195、SEQ ID NO: 196、SEQ ID NO: 201和SEQ ID NO: 202中任意一個或與其相差不超過3個核苷酸的序列。

根據實施方式1-31中任一項所述的RNAi劑或其藥學上可接受的鹽，其中所述干擾核酸包括Kylo-09-DS01至Kylo-09-DS112中任意一個。

一種抑制AGT基因表達的RNAi劑或其藥學上可接受的鹽，其包含反義鏈，其中所述反義鏈包含至少12個與選自以下序列相應位置的核苷酸基本上互補的連續核苷酸或與其相差不超過3個核苷酸的序列：AGT mRNA NM_001382817.3中起始位置為1854-1874、1907-1927、1895-1915、1352-1372、1903-1923、2019-2039、1853-1873和1818-1838 的至少連續12個核苷酸或與其相差不超過3個核苷酸的序列或NM_001384479.1中起始位置為1822-1842、1875-1895、1863-1883、1320-1340、1871-1891、1987-2007、1821-1841和1786-1806的至少連續12個核苷酸或與其相差不超過3個核苷酸的序列。

根據實施方式33所述的抑制AGT基因表達的RNAi劑或其藥學上可接受的鹽，其中所述反義鏈長度為15-30個核苷酸，優選17-25個核苷酸，更優選19-23個核苷酸。

根據實施方式33-34中任一項所述的抑制AGT基因表達的RNAi劑或其藥學上可接受的鹽，其中所述反義鏈包含以下的核苷酸序列：SEQ ID NO: 19、SEQ ID NO: 25、SEQ ID NO: 26、SEQ ID NO: 28、SEQ ID NO: 29、SEQ ID NO: 30、SEQ ID NO: 35和SEQ ID NO: 36中任意一個或與其相差不超過3個核苷酸的序列。

根據實施方式33-35中任一項所述的抑制AGT基因表達的RNAi劑或其藥學上可接受的鹽，所述RNAi劑包括單鏈或雙鏈核酸分子。

根據實施方式33-36中任一項所述的抑制AGT基因表達的RNAi劑或其藥學上可接受的鹽，所述RNAi劑包括siRNA或miRNA。

根據實施方式33-37中任一項所述的抑制AGT基因表達的RNAi劑或其藥學上可接受的鹽，其還包含正義鏈，其中所述反義鏈和正義鏈形成的互補區，所述互補區包括至少12個連續核苷酸。

根據實施方式33-38中任一項所述的抑制AGT基因表達的RNAi劑或其藥學上可接受的鹽，其中所述互補區包含12-25個連續核苷酸鹼基對。

根據實施方式33-39中任一項所述的抑制AGT基因表達的RNAi劑或其藥學上可接受的鹽，其中所述正義鏈和反義鏈之間至少有約80%的鹼基互補。

根據實施方式33-40中任一項所述的抑制AGT基因表達的RNAi劑或其藥學上可接受的鹽，其中所述正義鏈包含AGT mRNA NM_001382817.3中起始位置為1854-1874、1907-1927、1895-1915、1352-1372、1903-1923、2019-2039、1853-1873和1818-1838 的至少連續12個核苷酸或與其相差不超過3個核苷酸的序列或NM_001384479.1中起始位置為1822-1842、1875-1895、1863-1883、1320-1340、1871-1891、1987-2007、1821-1841和1786-1806的至少連續12個核苷酸或與其相差不超過3個核苷酸的序列。

根據實施方式33-41中任一項所述的抑制AGT基因表達的RNAi劑或其藥學上可接受的鹽，其中所述正義鏈長度為15-30個核苷酸，優選17-25個核苷酸，更優選19-23個核苷酸。

根據實施方式33-43中任一項所述的抑制AGT基因表達的RNAi劑或其藥學上可接受的鹽，其中所述正義鏈與 SEQ ID NO: 1、SEQ ID NO: 7、SEQ ID NO: 8、SEQ ID NO: 10、SEQ ID NO: 11、SEQ ID NO: 12、SEQ ID NO: 17和SEQ ID NO: 18中任意一個或與其相差不超過3個核苷酸的序列具有基本上同源性。

根據實施方式33-43中任一項所述的抑制AGT基因表達的RNAi劑或其藥學上可接受的鹽，其中所述正義鏈與SEQ ID NO: 1、SEQ ID NO: 7、SEQ ID NO: 8、SEQ ID NO: 10、SEQ ID NO: 11、SEQ ID NO: 12、SEQ ID NO: 17和SEQ ID NO: 18中任意一個或與其相差不超過3個核苷酸的序列具有基本上同源性，且所述反義鏈包含SEQ ID NO: 19、SEQ ID NO: 25、SEQ ID NO: 26、SEQ ID NO: 28、SEQ ID NO: 29、SEQ ID NO: 30、SEQ ID NO: 35和SEQ ID NO: 36中任意一個或與其相差不超過3個核苷酸的序列。

根據實施方式33-44中任一項所述的抑制AGT基因表達的RNAi劑或其藥學上可接受的鹽，其中所述反義鏈包含SEQ ID NO: 55、SEQ ID NO: 61、SEQ ID NO: 62、SEQ ID NO: 64、SEQ ID NO: 65、SEQ ID NO: 66、SEQ ID NO: 71和SEQ ID NO: 72中任意一個或與其相差不超過3個核苷酸的序列。

根據實施方式33-45中任一項所述的抑制AGT基因表達的RNAi劑或其藥學上可接受的鹽，其中所述正義鏈包含SEQ ID NO: 37、SEQ ID NO: 43、SEQ ID NO: 44、SEQ ID NO: 46、SEQ ID NO: 47、SEQ ID NO: 48、SEQ ID NO: 53和SEQ ID NO: 54中任意一個或與其相差不超過3個核苷酸的序列。

根據實施方式33-46中任一項所述的抑制AGT基因表達的RNAi劑或其藥學上可接受的鹽，其中所述反義鏈包含SEQ ID NO: 55、SEQ ID NO: 61、SEQ ID NO: 62、SEQ ID NO: 64、SEQ ID NO: 65、SEQ ID NO: 66、SEQ ID NO: 71和SEQ ID NO: 72中任意一個或與其相差不超過3個核苷酸的序列，且所述正義鏈包含SEQ ID NO: 37、SEQ ID NO: 43、SEQ ID NO: 44、SEQ ID NO: 46、SEQ ID NO: 47、SEQ ID NO: 48、SEQ ID NO: 53和SEQ ID NO: 54中任意一個或與其相差不超過3個核苷酸的序列。

根據實施方式33-47中任一項所述的抑制AGT基因表達的RNAi劑或其藥學上可接受的鹽，其中所述正義鏈和/或反義鏈上的一個或多個核苷酸被修飾以形成修飾的核苷酸。

根據實施方式48所述的抑制AGT基因表達的RNAi劑或其藥學上可接受的鹽，其中所述修飾的核苷酸選自：去氧核糖核苷酸、核苷酸模擬物、去鹼基核苷酸、2’-修飾核苷酸、3’至3’連接(倒置)核苷酸、含非天然鹼基的核苷酸、橋接核苷酸、肽核酸(PNA)、解鎖的核鹼基類似物、鎖定核苷酸、3’-O-甲氧基(2’核苷間連接)核苷酸、2’-氟-阿拉伯糖核苷酸、5’-甲基/2’-氟代核苷酸、嗎啉代核苷酸、乙烯基磷酸酯去氧核糖核苷酸、含乙烯基磷酸酯的核苷酸和含環丙基磷酸酯的核苷酸。

根據實施方式49所述的抑制AGT基因表達的RNAi劑或其藥學上可接受的鹽，其中所述2’-修飾核苷酸包括：2’-O-甲基核苷酸、2’-去氧-2’-氟核苷酸、2’-去氧核苷酸、2’-甲氧基乙基核苷酸、2’-氨基核苷酸和/或2’-烷基核苷酸。

根據實施方式33-50中任一項所述的抑制AGT基因表達的RNAi劑或其藥學上可接受的鹽，其中所述正義鏈和反義鏈的部分或全部核苷酸糖基2’位取代基團為氟或甲氧基。

根據實施方式33-51中任一項所述的抑制AGT基因表達的RNAi劑或其藥學上可接受的鹽，其中所述正義鏈末端和/或反義鏈末端的3個連續的核苷酸之間存在至少連續兩個硫代磷酸酯鍵。

根據實施方式33-52中任一項所述的抑制AGT基因表達的RNAi劑或其藥學上可接受的鹽，其中所述反義鏈5’末端開始的第7、12、14位核苷酸糖基2’位是氟，反義鏈其餘的核苷酸糖基的2’位是甲氧基，且所述反義鏈末端的3個連續的核苷酸之間存在至少連續兩個硫代磷酸酯鍵；所述正義鏈5’末端開始的第5、7、8、9位核苷酸糖基2’位是氟，正義鏈其餘的核苷酸糖基的2’位是甲氧基；且所述正義鏈末端的3個連續的核苷酸之間存在至少連續兩個硫代磷酸酯鍵。

根據實施方式33-53中任一項所述的抑制AGT基因表達的RNAi劑或其藥學上可接受的鹽，其中所述反義鏈包含SEQ ID NO: 109、SEQ ID NO: 115、SEQ ID NO: 116、SEQ ID NO: 118、SEQ ID NO: 119、SEQ ID NO: 120、SEQ ID NO: 125和SEQ ID NO: 126中任意一個或與其相差不超過3個核苷酸的序列。

根據實施方式33-54中任一項所述的抑制AGT基因表達的RNAi劑或其藥學上可接受的鹽，其中所述正義鏈包含SEQ ID NO: 185、SEQ ID NO: 191、SEQ ID NO: 192、SEQ ID NO: 194、SEQ ID NO: 195、SEQ ID NO: 196、SEQ ID NO: 201和SEQ ID NO: 202中任意一個或與其相差不超過3個核苷酸的序列。

根據實施方式33-55中任一項所述的抑制AGT基因表達的RNAi劑或其藥學上可接受的鹽，其中所述干擾核酸包括Kylo-09-DS01，Kylo-09-DS07，Kylo-09-DS08，Kylo-09-DS10，Kylo-09-DS11，Kylo-09-DS12，Kylo-09-DS17，Kylo-09-DS18，Kylo-09-DS37~Kylo-09-DS54中任意任一種或多種。

根據實施方式33-56中任一項所述的抑制AGT基因表達的RNAi劑或其藥學上可接受的鹽，還包含配體，所述配體通過載體結構偶聯於正義鏈和/或反義鏈。

根據實施方式33-57中任一項所述的抑制AGT基因表達的RNAi劑或其藥學上可接受的鹽，所述配體包含靶向配體。

根據實施方式33-58中任一項所述的抑制AGT基因表達的RNAi劑或其藥學上可接受的鹽，其中所述靶向配體通過載體結構偶聯於反義鏈的5’末端和/或3’末端。

根據實施方式33-59中任一項所述的抑制AGT基因表達的RNAi劑或其藥學上可接受的鹽，其中所述載體結構合於正義鏈的5’末端和/或3’末端。

根據實施方式57-60中任一項所述的抑制AGT基因表達的RNAi劑或其藥學上可接受的鹽，其中所述載體結構包括5’MVIP和3’MVIP，其中，所述5’MVIP偶聯在所述正義鏈和/或反義鏈5’末端，所述3’MVIP偶聯在所述反義鏈和/或正義鏈3’末端，所述5’MVIP的結構如式I所示，所述3’MVIP結構如式II所示， I II

其中，

X為靶向特異性配體；

L為支鏈；

B為接頭；

D為連接鏈；

R ₁和R ₂為轉接點；

根據實施方式61所述的抑制AGT基因表達的RNAi劑或其藥學上可接受的鹽，其中所述且n+m=2-6的整數，優選n+m=2、3或4，更優選為4。

根據實施方式61-62中任一項所述的抑制AGT基因表達的RNAi劑或其藥學上可接受的鹽，其中所述R ₁或R ₂與所述正義鏈或反義鏈通過磷酸酯或經修飾的磷酸酯，優選地通過磷酸酯或硫代磷酸酯相連接。

根據實施方式61-63中任一項所述的抑制AGT基因表達的RNAi劑或其藥學上可接受的鹽，所述R ₁為含有N、S或O的雜環或碳環結構：

或者，所述R ₁為-NH(CH ₂)xCH ₂O-，其中x為3-12的任意整數，優選為4-6的任意整數。

根據實施方式61-64中任一項所述的抑制AGT基因表達的RNAi劑或其藥學上可接受的鹽，所述R ₂為含有N、S或O的雜環或碳環結構：

根據實施方式61-65中任一項所述的抑制AGT基因表達的RNAi劑或其藥學上可接受的鹽，所述X為靶向配體選自用於增強肝細胞對RNAi劑的攝取的結構。

根據實施方式61-66中任一項所述的抑制AGT基因表達的RNAi劑或其藥學上可接受的鹽，所述X選自單糖及其衍生物。

根據實施方式61-67中任一項所述的抑制AGT基因表達的RNAi劑或其藥學上可接受的鹽，所述X選自半乳糖、半乳糖胺、N-乙醯半乳糖胺及其衍生物。

根據實施方式61-68中任一項所述的抑制AGT基因表達的RNAi劑或其藥學上可接受的鹽，所述X為N-乙醯半乳糖胺及其衍生物。

根據實施方式61-69中任一項所述的抑制AGT基因表達的RNAi劑或其藥學上可接受的鹽，所述X選自以下結構：

根據實施方式61-70中任一項所述的抑制AGT基因表達的RNAi劑或其藥學上可接受的鹽，所述L選自如下結構中的一種或多種：

根據實施方式61-71中任一項所述的抑制AGT基因表達的RNAi劑或其藥學上可接受的鹽，所述B選自以下結構：

根據實施方式61-72中任一項所述的抑制AGT基因表達的RNAi劑或其藥學上可接受的鹽，所述D選自以下結構：

根據實施方式61-73中任一項所述的抑制AGT基因表達的RNAi劑或其藥學上可接受的鹽，所述5’MVIP結構中的和3’MVIP結構中的選自以下結構中的一種或多種：

根據實施方式61-74中任一項所述的抑制AGT基因表達的RNAi劑或其藥學上可接受的鹽，所述X、L、D、及B在5’MVIP與3’MVIP各自的內部或5’MVIP與3’MVIP之間相同或不同。

根據實施方式61-75中任一項所述的抑制AGT基因表達的RNAi劑或其藥學上可接受的鹽，所述5’MVIP選自表10中5’MVIP01至5’MVIP22中的任一個。

根據實施方式61-76中任一項所述的抑制AGT基因表達的RNAi劑或其藥學上可接受的鹽，所述3’MVIP選自表11中3’MVIP01至3’MVIP27的任一個。

根據實施方式61-77中任一項所述的抑制AGT基因表達的RNAi劑或其藥學上可接受的鹽，所述正義鏈5’MVIP和反義鏈3’MVIP的組合為5’MVIP01/3’MVIP01、5’MVIP01/3’MVIP17或5’MVIP09/3’MVIP09；或者所述正義鏈5’MVIP和正義鏈3’MVIP的組合為5’MVIP01/3’MVIP09或5’MVIP09/3’MVIP01。

根據實施方式33-78中任一項所述的抑制AGT基因表達的RNAi劑或其藥學上可接受的鹽，所述反義鏈包括AS131、AS137、AS138、AS140、AS141、AS142、AS147和AS148的任一種或多種。

根據實施方式33-79中任一項所述的抑制AGT基因表達的RNAi劑或其藥學上可接受的鹽，所述正義鏈包括S131、S137、S138、S140、S141、S142、S147和S148中的任一種或多種。

根據實施方式33-80中任一項所述的抑制AGT基因表達的RNAi劑或其藥學上可接受的鹽，所述RNAi劑或其藥學上可接受的鹽為表15中Kylo-09-DS113、Kylo-09-DS119、Kylo-09-DS120、Kylo-09-DS122、Kylo-09-DS123、Kylo-09-DS124、Kylo-09-DS129和Kylo-09-DS130中的任一種或多種。

根據實施方式33-81中任一項所述的抑制AGT基因表達的RNAi劑或其藥學上可接受的鹽，所述反義鏈選自AS140、AS207~ AS266中的任一種或多種。

根據實施方式33-82中任一項所述的抑制AGT基因表達的RNAi劑或其藥學上可接受的鹽，所述正義鏈選自S140、S207~ S264中的任一種或多種。

根據實施方式33-83中任一項所述的抑制AGT基因表達的RNAi劑或其藥學上可接受的鹽，所述反義鏈選自AS140、AS207SEQ ID NO: 413~ AS266中的任一種或多種，且所述正義鏈選自S140、S207~ S264中的任一種或多種。

根據實施方式33-84中任一項所述的抑制AGT基因表達的RNAi劑或其藥學上可接受的鹽，包括表18中Kylo-09-DS122，Kylo-09-DS131，Kylo-09-DS141，Kylo-09-DS142和Kylo-09-DS147中的任一種或多種。

細胞，其包含實施方式1-32中任一項所述的RNAi劑或其藥學上可接受的鹽，或者實施方式33-85中任一項所述的抑制AGT基因表達的RNAi劑或其藥學上可接受的鹽。

藥物組合物，其包含實施方式1-32中任一項所述的RNAi劑或其藥學上可接受的鹽，或者實施方式33-85中任一項所述的抑制AGT基因表達的RNAi劑或其藥學上可接受的鹽，以及任選地藥學上可接受的賦形劑、載體和/或稀釋劑。

根據權要求87所述的藥物組合物，其還包含遞送媒介物。

根據權要求88所述的藥物組合物，其中所述遞送媒介物包括脂質體。

根據權要求89所述的藥物組合物，其中所述遞送媒介物包括奈米脂質。

一種減少細胞或組織中AGT mRNA或蛋白質表達的方法，其包括使細胞或組織與有效量的實施方式1-32中任一項所述的RNAi劑或其藥學上可接受的鹽、實施方式33-85中任一項所述的抑制AGT基因表達的RNAi劑或其藥學上可接受的鹽，和/或實施方式87-90中任一項所述的藥物組合物接觸。

根據實施方式91所述的方法，其中所述細胞是肝細胞。

根據實施方式91所述的方法，其中所述組織是肝臟組織。

根據實施方式91所述的方法，其中所述細胞和組織是離體的。

根據實施方式91所述的方法，其中所述細胞和組織在受試者體內。

實施方式1-32中任一項所述的RNAi劑或其藥學上可接受的鹽、實施方式33-85中任一項所述的抑制AGT基因表達的RNAi劑或其藥學上可接受的鹽，或實施方式87-90中任一項所述的藥物組合物在製備藥物中的用途，所述藥物用於預防和/或治療疾病或病症或者降低疾病或病症的風險。

根據實施方式96所述的用途，其中所述疾病或病症包括與AGT相關的疾病或病症。

根據實施方式96所述的用途，其中所述疾病或病症選自：高血壓病、高血壓、臨界性高血壓、原發性高血壓、繼發性高血壓、孤立性收縮期或舒張期高血壓、妊娠相關高血壓、糖尿病性高血壓、頑固性高血壓、難治性高血壓、陣發性高血壓、腎血管性高血壓、Goldblatt氏高血壓、低血漿腎素活性或血漿腎素濃度相關的高血壓、眼高血壓、青光眼、肺動脈高血壓、門靜脈高血壓、系統性靜脈高血壓、收縮期高血壓、不穩定性高血壓；高血壓性心臟病、高血壓性腎病、動脈粥狀硬化、動脈硬化、血管病變、糖尿病性腎病、糖尿病性視網膜病、慢性心衰竭、心肌病、糖尿病性心肌病、腎小球硬化症、主動脈縮窄、主動脈瘤、心室纖維化、心衰竭、心肌梗塞、心絞痛、中風、腎疾病、腎衰竭、系統性硬化症、子宮內胎兒生長遲滯(IUGR)、胎兒生長受限、肥胖、肝脂肪變性/脂肪肝、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、非酒精性脂肪肝病(NAFLD)；葡萄糖耐受不良、2型糖尿病(非胰島素依賴型糖尿病)和代謝綜合症。

一種預防和/或治療疾病或病症的方法，所述方法包括向有此需要的受試者施用有效量的實施方式1-32中任一項所述的RNAi劑或其藥學上可接受的鹽、實施方式33-85中任一項所述的抑制AGT基因表達的RNAi劑或其藥學上可接受的鹽，和/或實施方式87-90中任一項所述的藥物組合物。

根據實施方式99所述的方法，其中所述施用包括經皮下方式、靜脈內方式、口服、經直腸或腹膜內施加途徑向受試者施用。

根據實施方式99所述的方法，其中所述的RNAi劑、抑制AGT基因表達的RNAi劑或藥物組合物以約0.01mg/kg至約50mg/kg的劑量施用於所述受試者。

根據實施方式99所述的方法，其進一步包括測定來自所述受試者的樣品中的AGT水平。

根據實施方式99所述的方法，其中所述受試者樣品中的AGT水平為血液樣品、血清樣品或尿液樣品中的AGT蛋白質水平。

根據實施方式99所述的方法，其進一步包括對所述受試者施用用於治療高血壓的另外的治療劑。

根據實施方式104所述的方法，其中該另外的治療劑選自：利尿劑、血管收縮素轉化酶(ACE)抑制劑、血管收縮素II受體拮抗劑、β-受體阻斷劑、血管擴張劑、鈣通道阻滯劑、醛固酮拮抗劑、α2-激動劑、腎素抑制劑、α-腎上腺素性阻斷劑、外周作用腎上腺素能劑、選擇性D1受體部分激動劑、非選擇性α-腎上腺素能拮抗劑、合成的甾體抗鹽皮質激素劑、血管收縮素受體-腦啡肽酶抑制劑(ARNi)、沙庫比曲/纈沙坦；或內皮素受體拮抗劑(ERA)、西他生坦、安貝生坦、阿曲生坦、BQ-123、齊泊騰坦、波生坦、馬昔騰坦和替唑生坦；上述任何治療劑的組合；及配製成藥劑組合的高血壓治療劑。

根據實施方式104所述的方法，其中該另外的治療劑包括血管收縮素II受體拮抗劑。

根據實施方式106所述的方法，其中該血管收縮素II受體拮抗劑選自：氯沙坦、纈沙坦、奧美沙坦、依普沙坦和阿齊沙坦。

藥盒，其包含實施方式1-32中任一項所述的RNAi劑或其藥學上可接受的鹽、實施方式33-85中任一項所述的抑制AGT基因表達的RNAi劑或其藥學上可接受的鹽，或實施方式87-90中任一項所述的藥物組合物。

不欲被任何理論所限，下文中的實施例僅僅是為了闡釋本申請的RNAi劑、製備方法和用途等，而不用於限制本申請發明的範圍。

實施例

說明：

DMSO的中文名稱為二甲基亞碸；

DMF的中文名稱為N,N-二甲基甲醯胺；

HOBt的中文名稱為1-羥基苯並三氮唑；

HBTU的中文名稱為O-苯並三氮唑-四甲基脲六氟磷酸酯；

DIPEA(DIEA)的中文名稱為N,N-二異丙基乙胺；

DCM的中文名稱為二氯甲烷；

DMAP的中文名稱為4-二甲氨基吡啶；

DMT-CL的中文名稱為4,4'-二甲氧基三苯基氯甲烷；

MEOH的中文名稱為甲醇；

TBTU的中文名稱為O-苯並三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲四氟硼酸；

的名稱為固相載體，如大孔氨甲基樹脂(Resin)。

實施例1 合成siRNA的固相亞磷醯胺法

根據標準的固相亞磷醯胺法合成表1中的正義鏈和表2中的反義鏈，正義鏈與對應的反義鏈互補退火得到siRNA。

固相亞磷醯胺法基本步驟包括：

1)脫保護：脫掉起始單體Solid Support羥基保護基(DMTr)；

2)偶聯：加上第一個亞磷醯胺單體，通過3’至5’方向發生偶聯反應；

3)氧化：將所得的核苷亞磷酸酯氧化成更穩定的核苷磷酸酯(即三價磷氧化成五價磷)；

4)封閉：將前步驟失敗核苷酸序列5’-OH加冒封死，使其不再進一步參與反應；重複上述步驟，直至最後一個亞磷醯胺單體的接入；然後用甲胺水溶液和氨水裂解Solid Support與起始單體之間酯鍵，並將所得核苷酸序列上的各個鹼基與磷酸上的保護基脫掉；經HPLC分離純化後，過濾除菌，凍乾得到相應的正義鏈或反義鏈。

退火工藝描述：

將正義鏈和反義鏈凍乾粉分別復溶、等摩爾混合，加入注射用水適量，投入適量的TRIS緩衝溶液。輕晃約1～2min，使溶液混合均勻。將水浴鍋升溫至92℃～95℃。將上述反應液置水浴鍋中加熱3min～5min, 輕晃使溶液受熱均勻。自然冷卻至室溫。得到無色或微黃色透明液體，取樣送檢，測濃度。本申請所述的RNAi劑是通過固相亞磷醯胺法得到各自的正義鏈和反義鏈，正義鏈與對應的反義鏈互補退火得到終產品。

實施例2 RNAi劑體外抑制AGT基因表達試驗

取按實施例1所述的方法製備得到的 RNAi劑（表3中的Kylo-09-DS01~ Kylo-09-DS18）。將RNAi劑水溶液和DOTMA的有機溶液混合形成不溶於水的沉澱，沉澱分離乾燥後溶於氯仿，進一步和其他脂質氯仿溶液混合，其他脂質包括M10C1和PEG600-膽固醇。混合物真空離心蒸發乾燥過夜，得到奈米脂質包裹的RNAi劑，其中DOTMA、M10C1和PEG600-膽固醇與RNAi劑的重量配比為1~1.6，1.5~2.5和2.5~3.5。

含10%胎牛血清的DMEM配製相應濃度的奈米脂質包裹的RNAi劑（表3中RNAi劑： Kylo-09-DS01~ Kylo-09-DS18）樣品溶液。以105細胞密度接種Hep3B細胞，10%胎牛血清DMEM培養基，37℃，5%CO2，培養24h後，加不同濃度（10nM、1nM、0.1nM）的樣品干預，孵育72h後，收集細胞樣品，往收集完畢的細胞樣品中加入1 ml Ezol 裂解液，漩渦震盪混勻。加入0.2 ml三氯甲烷，劇烈搖動10 s，室溫放置1分鐘。4℃，12,000 x g離心15 min。將上清水相轉移至另一新的無RNA酶離心管中，並加入等體積的100%乙醇。吸取全部樣品，加入帶有2 ml收集管的mini-spin離心柱。8,000 x g，室溫離心15 s，棄盡流動液。將剩餘的樣品轉移至離心柱，重複上一步驟。往離心柱中加入700 μl WB，輕蓋蓋子，8,000×g，室溫離心15秒，棄盡流動液，重複上一步驟，用500μl WB洗滌離心柱兩次。通過QRT-PCR測定AGT mRNA水平。與未干預的Hep3B細胞上清對比，標定樣品干預組的AGT mRNA相對百分率。所得試驗結果見下表19和圖1A。

表19 RNAi干預後Hep3B細胞中AGT mRNA的水平

RNAi劑	Hep3B細胞中mRNA水平（%）（相對於未干預細胞）
10nM平均	1nM平均	0.1nM平均
Kylo-09-DS01	7.1	27.4	37.1
Kylo-09-DS02	35.5	45.2	122.1
Kylo-09-DS03	22.6	78.5	115.4
Kylo-09-DS04	13.8	65.4	86.1
Kylo-09-DS05	52.7	67.3	101.0
Kylo-09-DS06	23.1	85.7	74.3
Kylo-09-DS07	10.0	35.2	58.1
Kylo-09-DS08	6.2	40.9	54.5
Kylo-09-DS09	20.0	71.1	70.8
Kylo-09-DS10	7.4	19.2	33.4
Kylo-09-DS11	4.9	31.3	42.5
Kylo-09-DS12	3.0	20.9	30.3
Kylo-09-DS13	34.5	55.4	64.4
Kylo-09-DS14	16.2	78.3	90.5
Kylo-09-DS15	36.1	67.0	185.1
Kylo-09-DS16	71.9	66.6	91.3
Kylo-09-DS17	2.9	30.5	48.0
Kylo-09-DS18	3.6	32.9	42.5

所得試驗結果顯示，由表1正義鏈和表2反義鏈退火形成表3中RNAi劑，在不同濃度下對Hep3B細胞中AGTmRNA表達水平都呈現出不同程度的抑制效果，其中Kylo-09-DS01，Kylo-09-DS07，Kylo-09-DS08，Kylo-09-DS10，Kylo-09-DS11，Kylo-09-DS12，Kylo-09-DS17和Kylo-09-DS18對Hep3B細胞中AGTmRNA表達水平的抑制呈現明顯的劑量依耐性，其分別對應的正義鏈序列為SEQ ID NO.37，43，44，46，47，48，53和54及對應的反義鏈序列SEQ ID NO.55，61，62，64，65，66，71和72。

將篩選出來的Kylo-09-DS01，Kylo-09-DS07，Kylo-09-DS08，Kylo-09-DS10，Kylo-09-DS11，Kylo-09-DS12，Kylo-09-DS17和Kylo-09-DS18參照Hep 3B細胞實驗操作，考察RNAi劑不同濃度（10nM、0.1nM）對HepG 2細胞的干預效果，通過QRT-PCR測定AGT mRNA水平。與未干預的HepG 2細胞上清對比，標定樣品干預組的AGT mRNA相對百分率。所得試驗結果見下表20和圖1B。

表20 RNAi干預後HepG 2細胞中AGT mRNA水平

RNAi劑	Hep G2細胞中mRNA水平（%）（相對於未干預細胞）
10nM平均	10nM SD	0.1nM平均	0.1nM SD
Kylo-09-DS01	6.9	0.9	40.9	8.7
Kylo-09-DS07	9.7	1.1	55.7	11.2
Kylo-09-DS08	6.8	2.2	56.8	7.9
Kylo-09-DS10	3.8	3.9	31.0	3.5
Kylo-09-DS11	4.1	1.3	50.9	8.5
Kylo-09-DS12	6.8	1.8	35.1	7.9
Kylo-09-DS17	3.4	0.6	46.8	13.5
Kylo-09-DS18	4.1	1.5	45.5	10.8

實施例3 修飾的siRNA在血漿中穩定性研究

本實施例所涉及的RNAi劑選自表7，母鏈為實施例2優選出來的序列（正義鏈序列為SEQ ID NO.37，43，44，46，47，48，53和54及對應的反義鏈序列SEQ ID NO.55，61，62，64，65，66，71和72）。從反義鏈5’末端開始的第7、12、14位的核苷酸2’位是氟和從其餘的核苷酸為2’位是甲氧基，且所述反義鏈的末端至少有3個相鄰核苷酸之間的磷酸酯鍵可以硫代，從正義鏈5’末端開始的第5、7、8、9位的核苷酸2’位是氟和從其餘的核苷酸為2’位是甲氧基，且所述反義鏈的末端至少有3個相鄰核苷酸之間的磷酸酯鍵可以硫代。

本實施例目的是驗證上述的修飾方式可以增強RNAi劑在人血清中的穩定性，試驗結果見表21和圖2。

其中，圖2顯示的是RNAi Kylo-09-DS46與其母鏈Kylo-09-DS10不同時段的穩定性檢測的HPLC圖。

表21 RNAi劑在人血清中不同時長，全長雙鏈相對0h的峰面積比%。

RNAi劑	相對0h的峰面積比%	結果
0h	3h	6h	-
Kylo-09-DS01	100.0	85.0	61.6	-	3h穩定
Kylo-09-DS07	100.0	84.3	59.9	-	3h不穩定
Kylo-09-DS08	100.0	80.4	56.3	-	3h不穩定
Kylo-09-DS10	100.0	98.8	65.9	-	3h穩定
Kylo-09-DS11	100.0	90.5	63.4	-	3h穩定
Kylo-09-DS12	100.0	82.3	52.1	-	3h不穩定
Kylo-09-DS17	100.0	80.5	49.9	-	3h不穩定
Kylo-09-DS18	100.0	81.9	46.6	-	3h不穩定
RNAi劑	0h	24h	48h	72h	結果
Kylo-09-DS37	100.0	100.6	84.3	64.8	24 h穩定
Kylo-09-DS43	100.0	99.9	85.1	61.3	48h穩定
Kylo-09-DS44	100.0	98.5	81.0	60.1	24h穩定
Kylo-09-DS46	100.0	100.1	100.3	76.7	48h穩定
Kylo-09-DS47	100.0	99.5	83.8	63.1	24h穩定
Kylo-09-DS48	100.0	99.7	81.3	59.8	24h穩定
Kylo-09-DS53	100.0	100.3	84.9	62.5	24h穩定
Kylo-09-DS54	100.0	100.4	85.4	60.0	48h穩定

上述試驗結果顯示，與各自未修飾的母鏈反義鏈5’末端開始的第7、12、14位的核苷酸2’位是氟和從其餘的核苷酸為2’位是甲氧基，且所述反義鏈的末端至少有3個相鄰核苷酸之間的磷酸酯鍵可以硫代，從正義鏈5’末端開始的第5、7、8、9位的核苷酸2’位是氟和從其餘的核苷酸為2’位是甲氧基，且所述反義鏈的末端至少有3個相鄰核苷酸之間的磷酸酯鍵可以硫代的修飾方式可以有效增強RNAi劑在人血清中穩定性，增強的效果存在序列的特異性，不同的序列穩定性的增強效果不同。

實施例4 5’MVIP和3’MVIP化合物的合成

當本申請的RNAi劑的正義鏈或反義鏈的3'端偶聯有載體結構3'MVIP時，3'MVIP的solid support作為固相合成的起始單體。當本申請的RNAi劑的正義鏈或反義鏈的5端偶聯有載體結構5'MVIP時，5’MVIP亞磷醯胺單體作為固相合成的最後一個單體。

當本申請的RNAi劑的正義鏈或反義鏈的3'端偶聯有3'MVIP時，3'MVIP的solid support作為固相合成的起始單體，3’MVIP的solid spport通式如下：

m為1-4時，通式中接頭B部分分別支化1至4次，以獲得對應的3’MVIP的Solid Support。

例如，當m為1時，所得的Solid Support作為RNAi劑Kylo-09-DS142（結構式見圖9D）的正義鏈和Kylo-09-DS133反義鏈固相合成的起始單體；當m為2時，所得的Solid Support作為RNAi劑Kylo-09-DS141(結構式見9C)的正義鏈和Kylo-09-DS122的反義鏈的固相合成起始單體；

當m為3時，所得的Solid Support作為RNAi劑Kylo-09-DS147的反義鏈固相合成起始單體。

當本申請的RNAi劑的正義鏈或反義鏈的5'端有5’MVIP時，5’MVIP亞磷醯胺單體是作為正義鏈或反義鏈固相合成的最後一個亞磷醯胺單體。5’MVIP亞磷醯胺單體通式如下：

n為1-4時，通式中接頭B部分分別支化1至4次，以獲得對應的5’MVIP亞磷醯胺單體。

例如，當n為1時，所得的5’MVIP亞磷醯胺單體作為RNAi劑Kylo-09-DS141、 Kylo-09-DS131(結構式見9B)以及 Kylo-09-DS147(結構式見9E)的正義鏈固相合成的最後一個單體；當n等於2時，所得的5’MVIP亞磷醯胺單體作為Kylo-09-DS122(結構式見9A)和 Kylo-09-DS142的正義鏈固相合成的最後一個單體。

當n等於3時，所得的帶3個配體X的5’MVIP亞磷醯胺單體可作為正義鏈或反義鏈固相合成的最後一個單體。

本申請所述的這些RNAi劑的正義鏈和反義鏈在進行亞磷醯胺固相合成之前，需要先化學合成相應的3’MVIP Solid Support和5’MVIP亞磷醯胺單體。

本實施示例性敘述了如下RNAi劑的3’MVIP Solid Support和5’MVIP亞磷醯胺單體化學合成過程，敘述如下：

4.1 3’MVIP的Solid Support的合成

4.1.1 3'MVIP09的Solid Support的合成 3'MVIP09的Solid Support

合成過程描述：

4.1.1.1 ERC-01-c1的合成

稱取2-氨基-1,3-丙二醇（5.0g，54.9mmol）加入DMSO 50mL，氫氧化鈉溶液(1g/mL)5mL，降溫到0℃，滴加丙烯酸叔丁酯（20mL，137.8mol）2小時加完，室溫反應48h，加石油醚(100mL)，飽和食鹽水洗2次，有機層乾燥。過層析柱（洗脫液：乙酸乙酯:石油醚=25%-75%），上柱加0.05%的三乙胺，得無色油狀物6.2g。

4.1.1.2 ERC-01-c2的合成

稱取ERC-01-c1（6.2g，17.9mmol），加二氯甲烷50mL，碳酸鈉溶液（25%）23mL，室溫滴加氯甲酸苄酯（8.2mL，57.4mmol），2小時滴加完，室溫反應過夜，飽和食鹽水洗滌3次，無水硫酸鈉乾燥，蒸乾溶劑，過層析柱（乙酸乙酯:石油醚=5%-30%）得油狀物4.0g。

4.1.1.3 ERC-01-c3的合成

取ERC-01-c2（4.0g，8.3mmol）加甲酸12mL，室溫反應過夜，減壓蒸乾溶劑，得產品2.8g。

4.1.1.4 ERCd-01-c1的合成

將化合物ERC-01-c3(1.11g，3.0mmol)和dlSANC-c4（3.6g，8.04mmol）加到DMF(60 mL)中，然後加入HOBt(2.24g)和HBTU(3.36g)，然後緩慢加入DIEA(4.16mL)。反應液室溫下攪拌反應3小時。然後加入水，水層用二氯甲烷萃取(2x10mL)。合併有機層，然後依次用飽和碳酸氫鈉(80 mL)、水(2x60 mL)、飽和食鹽水(60mL)洗。用無水硫酸鈉乾燥，減壓蒸乾，用矽膠柱層析純化（洗脫液：3-15 % MeOH in DCM）。得淡黃色固3.24g。

4.1.1.5 ERCd-01-c2的合成

ERCd-01-c1(3.24g，2.6mmol）用甲醇(60mL)溶解，加入10%鈀碳(0.3g)，乙酸(2.0mL)。然後常壓下加氫，反應過夜。反應液用矽藻土過濾，濾液減壓蒸乾，得油狀物ERCd-01-c2 2.9g，其高分辨質譜圖見圖3。

4.1.1.6 3’MVIP09-c1的合成

向反應瓶內依次加入SANCd-01-c0（0.824g，1.5mmol）和ERCd-01-c2（1.09g，1.0mmol），再加入10mL的DCM，攪拌溶解，再依次加入TBTU（0.963g）和DIPEA（0.517g），反應過夜，加水，用DCM萃取，有機相再用飽和食鹽水洗滌，乾燥、過濾、濃縮，最後過矽膠柱進行純化，得產品1.3g。

4.1.1.7 3’MVIP09-c2的合成

向反應瓶內依次加入3’MVIP09-c1（1.62g，1µmol）和10mL的DCM，室溫攪拌溶解，再依次加入DMAP（0.366g）和丁二酸酐（0.2g，3µmol），室溫攪拌反應，TLC分析，反應合格濃縮掉DCM，加水，用DCM萃取，有機相再用飽和食鹽水洗滌，有機相經無水硫酸鈉乾燥、過濾、濃縮，最後過矽膠柱進行純化，得到產品為1.55g。

4.1.1.8 3’MVIP09的Solid Support合成

向反應瓶內依次加入3’MVIP09-c2（0.86g，0.5µmol）和10mL DMF，溶解，再依次加入HBTU（0.19g）、DIPEA（0.194g）和大孔氨甲基樹脂（2.0g），搖床24h，過濾，樹脂用10%甲醇/DCM洗滌，再用25%醋酸/吡啶進行封端，取代度150µmol/g。

4.1.2 3'MVIP17的Solid Support的合成 3'MVIP17 Solid Support

4.1.2.1 SANC-01-c1的合成

合成步驟參照4.1.1.1. ERC-01-c1的合成。

4.1.2.2 SANC-01-c2的合成

合成步驟參照4.1.1.2. ERC-01-c2的合成。

4.1.2.3 SANC-01-c3的合成

合成步驟參照4.1.1.3. ERC-01-c3的合成。

4.1.2.4 SANCd-01-c1的合成

合成步驟參照4.1.1.4. ERCd-01-c1的合成。

4.1.2.5 SANCd-01-c2的合成

合成步驟參照4.1.1.5. ERCd-01-c2的合成。

4.1.2.6 3’MVIP17-c1的合成

合成步驟參照4.1.1.6. 3’MVIP09-c1的合成，合成所得3’MVIP17-c1的高分辨質譜圖見圖4。

4.1.2.7 3’MVIP17-c2的合成

合成步驟參照4.1.1.7. 3’MVIP09-c2的合成。

4.1.2.8 3’MVIP17的Solid Support合成

合成步驟參照4.1.1.8 3’MVIP09的Solid Support合成。

4.1.3 3'MVIP01的Solid Support的合成： 3'MVIP01 Solid Support

合成過程描述：

4.1.3.1 3’MVIP01-c1的合成

合成步驟參照4.1.1.6. 3’MVIP09-c1的合成。

4.1.3.2 3’MVIP01-c2的合成

合成步驟參照5.1.1.7. 3’MVIP09-c2的合成。

4.1.3.3 3’MVIP01的Solid Support合成

合成步驟參照4.1.1.8. 3’MVIP09的Solid Support合成。

4.2. 5’MVIP亞磷醯胺單體的合成

4.2.1 當n為2時，所得的5’MVIP亞磷醯胺單體作為Kylo-09-DS122、 Kylo-09-DS142正義鏈固相合成的最後一個單體5’MVIP09亞磷醯胺單體的合成： 5'MVIP09亞磷醯胺單體

4.2.1.1 5’MVIP09-ERCd-PFP-c1的合成

稱量ERCd-01-c2 (2.18g，2.0mmol)溶於DMF(50mL)，加戊二酸單苄酯(0.53g，2.4mmol)、DIPEA(0.78g)與TBTU(0.84g)，室溫攪拌過夜，加水淬滅(50mL)，DCM(30mL*3)萃取，10%檸檬酸(50mL*3)、飽和碳酸氫鈉50mL和吡啶100mL洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，旋蒸，過柱純化得產品5’MVIP09-ERCd-PFP-c1 (2.15g)。

4.2.1.2 5’MVIP09-ERCd-PFP-c2的合成

稱量5’MVIP09-ERCd-PFP-c1 (2.15g，1.66mmol)和10%鈀碳(0.21g)，加甲醇(50mL)，室溫攪拌加氫過夜，反應結束後矽藻土過濾鈀碳，旋蒸得5’MVIP09-ERCd-PFP-c2粗品(1.9g)，其高分辨率質譜圖如圖5所示。

4.2.1.3 5’MVIP09-ERCd-PFP的合成

稱量5’MVIP09-ERCd-PFP-c2 粗品(1.9g，1.58mmol)溶於DCM(60mL)，加DIPEA(1.33g)，冷卻，加三氟乙酸五氟苯酚酯(2.21g，7.9mmol)，室溫攪拌反應2h後旋蒸，再溶於DCM(60mL)，飽和碳酸氫鈉(30mL*3)、10%檸檬酸(30mL*1)、飽和食鹽水(50mL*1)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾，旋蒸得5’MVIP09-ERCd-PFP粗品(2.35g)，抽乾後無純化直接用於下一步反應。

4.2.1.4 5’MVIP09亞磷醯胺單體-c1的合成

5’MVIP09-ERCd-PFP粗品(2.35g，1.58mmol)溶於DCM(60mL)，加DIPEA(0.82g，6.32mmol)、6-氨基-1-己醇(0.37g，3.16mmol)，室溫攪拌反應過夜。加10%檸檬酸(30mL)，DCM(30mL*3)萃取，飽和食鹽水(50mL)洗滌，無水硫酸鈉乾燥，過濾、旋蒸，過柱純化得產品5’MVIP09單體-c1 (1.73g)。

4.2.1.5 5’MVIP09亞磷醯胺單體

稱量5’MVIP09亞磷醯胺單體-c1（1.3g、1.0mmol）溶於乙腈（30mL），加入二異丙胺三氮唑（0.22g），冰浴下滴加雙-（二異丙基氨基）（2-氰基乙氧基）膦（0.36g，1.2mmol），室溫反應4h，HPLC中控，反應合格後，濃縮過柱純化得到產品5’MVIP09單體(1.2g)。

當n為1時，所得的5’MVIP 亞磷醯胺單體作為Kylo-09-DS141、 Kylo-09-DS131、 Kylo-09-DS147的正義鏈固相合成的最後一個單體，代碼為5'MVIP01： 5'MVIP01亞磷醯胺單體

5'MVIP01的亞磷醯胺單體稱量YICd-01-c2 (1.12g，2.0mmol)，剩餘操作參照4.2.1.1.~ 4.2.1.5。

實施例5 5’MVIP09 /3’MVIP 09偶聯不同的siRNA的RNAi劑的合成

表13中反義鏈合成描述：用氬氣吹掃試劑瓶至少2 min。向試劑瓶中依次加入亞磷醯胺單體和乙腈，擰緊瓶蓋後，震盪直至目測固體全溶。然後加入3A分子篩，靜置8 h以上待用。用氬氣吹掃試劑瓶至少2 min。向試劑瓶中依次加入氫化黃原素和乾燥的吡啶，擰緊瓶蓋後，震盪直至目測固體全溶，暫存待用。確認在室溫20~30oC環境條件下進行以下操作:稱取3’MVIP載體, 加入到試劑瓶中，再加入乙腈，震盪混合均勻。將載體轉移至合成柱內，並用乙腈將試劑瓶中殘餘的載體淋洗轉移至合成柱內。淋洗完畢後加乙腈充滿合成柱，記錄使用乙腈的用量。按儀器操作安裝固定合成柱。

將上述配製的單體溶液、CAP A、CAP B、氧化劑、硫代試劑、活化劑、脫帽劑以及乙腈，連接至AKTA PILOT100對應的管路，確保管路插入試劑瓶底。

合成方法設置完畢後，儀器各項工作準備就緒，點擊運行，開始合成。在線觀察記錄每個detritylation峰面積。在合成過程中根據脫保護試劑實際使用量，進行補加操作。

合成結束後，氬氣吹掃合成柱≥2 h，按操作規程卸載合成柱。向合成柱內固相載體轉移至反應瓶，加入甲胺水溶液和氨水，將反應瓶放入振盪器中，35℃，2-3小時。將溶液過濾至圓底燒瓶中，再使用50%乙醇水溶液洗滌殘留固相，再次過濾與之前濾液合併，將圓底燒瓶連接旋轉蒸發儀，設置水溫50℃蒸至無餾出，向圓底燒瓶內加入乙醇，混勻，再次蒸至無餾出，重複操作至瓶底出現白色粉末。將得到的白色粉末配製成溶液，使用反向層析柱進行純化，取樣檢測OD260、純度。將純化的反義鏈溶液分裝於西林瓶中凍乾備用，並將產品密封儲存於-20℃冰箱中。

表14中正義鏈的合成操作同反義鏈，其中裝柱的載體為Universal載體。所得中間體加DIPEA配製成溶液，加入5’MVIP亞磷醯胺單體，混勻，將反應瓶放入振盪器中，35℃，2-3小時。

表15中 RNAi劑的合成退火工藝描述：

取表13中反義鏈，取與表13中反義鏈鹼基配對的表14中反正義鏈，1:1等摩爾混合在反應瓶中，水浴95℃ 5分鐘後，關閉水浴鍋電源，使其自然降溫至40℃以下。向雙鏈溶液中加入3M醋酸鈉水溶液，混合均勻後，再加入適量體積的無水乙醇，混合均勻，將反應液放入-20℃冰箱內45min。冷凍高速離心機設置4℃預製冷，溫度達到後，放入雙鏈溶液，啟動離心機。取出離心後的雙鏈溶液，去除上清液，加入超純水使固體完全溶解，取樣檢測OD260、純度。將純化的雙鏈溶液分裝於西林瓶中凍乾備用，並將產品密封儲存於-20℃冰箱中。

實施例6 5’MVIP09/3’MVIP09偶聯不同siRNA的RNAi劑活性研究

取適齡的雌性AGT 轉基因小鼠用於實驗評估。供試品為表15中 RNAi劑Kylo-09-DS113~Kylo-09-DS130。在Day0分別通過皮下注射給藥3mg/kg；給藥體積為100-200μL。在給藥後第0，7，14，21，28和第35天取血，分離血清，-80℃儲存。用Elisa方法測定血清中hAGT水平，試驗結果見表22和圖6。

表22 轉基因小鼠給藥後血清中hAGT平均水平

RNAi劑	血清中hAGT平均水平(%) （相對於Day 0 ）
Day0	Day7	Day14
Kylo-09-DS113	100.0	30.2	24.0
Kylo-09-DS114	100.0	59.3	55.1
Kylo-09-DS115	100.0	64.2	61.1
Kylo-09-DS116	100.0	69.8	62.2
Kylo-09-DS117	100.0	66.4	51.7
Kylo-09-DS118	100.0	52.8	41.9
Kylo-09-DS119	100.0	19.9	12.3
Kylo-09-DS120	100.0	22.6	16.3
Kylo-09-DS121	100.0	49.8	42.3
Kylo-09-DS122	100.0	19.1	11.5
Kylo-09-DS123	100.0	25.7	20.6
Kylo-09-DS124	100.0	21.3	15.1
Kylo-09-DS125	100.0	51.4	48.9
Kylo-09-DS126	100.0	62.1	57.1
Kylo-09-DS127	100.0	49.8	48.6
Kylo-09-DS128	100.0	68.4	60.5
Kylo-09-DS129	100.0	28.6	20.0
Kylo-09-DS130	100.0	29.3	19.8

結果顯示5’MVIP09/3’MVIP09偶聯的實施例2優選出來的序列（正義鏈序列為SEQ ID NO.37，43，44，46，47，48，53和54及對應的反義鏈序列SEQ ID NO.55，61，62，64，65，66，71和72）所得到的RNAi劑Kylo-09-DS113，119，120，122，123，124，129和130 在體內活性仍舊是顯著且持續性好。本實施例驗證了5’MVIP09/3’MVIP09載體結構可以實現siRNA的安全遞送，且作用效果顯著。

實施例7 不同結構5’MVIP和3’MVIP 偶聯同一種siRNA對RNAi劑的活性影響研究

按照實施例5所述的方法合成表16中的反義鏈和表17中的正義鏈，配對退火合成表18中本實施例供試品RNAi劑Kylo-09-DS122，Kylo-09-DS147~160，Kylo-09-DS161和Kylo-09-171。取適齡的雌性人AGT 轉基因小鼠用於實驗評估。在 Day0 分別通過皮下注射給藥：3mg/kg；給藥體積為 100-200μL。在給藥後14取血，分離血清，用Elisa方法測定血清中hAGT水平，試驗結果見表23及圖7。

表23 轉基因小鼠血清中hAGT平均水平

單鏈代碼	MVIP	單鏈代碼	MVIP	RNAI 劑	Day14 平均水平（%）（相對於Day 0 ）
S211	5'MVIP01	AS209	3' MVIP17	Kylo-09-DS147	33.3
S263	5' MVIP21	AS209	3' MVIP17	Kylo-09-DS148	35.6
S210	5'MVIP17	AS208	3' MVIP01	Kylo-09-DS149	30.5
S264	5' MVIP22	AS247	3' MVIP07	Kylo-09-DS150	31.9
S140	5'MVIP09	AS140	3'MVIP09	Kylo-09-DS122	14.4
S262	5' MVIP20	AS248	3' MVIP10	Kylo-09-DS151	15.8
S261	5' MVIP19	AS257	3'MVIP15	Kylo-09-DS152	19.2
S238	5' MVIP10	AS254	3'MVIP12	Kylo-09-DS153	17.8
S213	5'MVIP09/3'MVIP09	AS64	/	Kylo-09-DS154	28.9
S208	3'MVIP09	AS266	5' MVIP09	Kylo-09-DS155	69.7
S250	3'MVIP10	AS262	5' MVIP20	Kylo-09-DS156	71.5
S209	3'MVIP01	AS207	5' MVIP17	Kylo-09-DS157	86.9
S241	3'MVIP02	AS238	5' MVIP18	Kylo-09-DS158	90.1
S207	3'MVIP17	AS265	5' MVIP01	Kylo-09-DS159	55.4
S225	3'MVIP18	AS263	5' MVIP21	Kylo-09-DS160	32.7
S140	5'MVIP09	AS209	3' MVIP17	Kylo-09-DS161	57.8
S210	5'MVIP17	AS209	3' MVIP17	Kylo-09-DS171	54.3

上述試驗結果顯示，載體結構5’MVIP和/或3’MVIP偶聯的位置包括反義鏈的5’末端和/或3’末端、正義鏈的5’末端和/或3’末端、反義鏈的5’末端和正義鏈的3’末端、正義鏈的5’末端和3’末端，各種載體結構與同一AGT siRNA進行不同位置偶聯，所得的RNAi劑對轉基因小鼠hAGT水平抑制效果呈現出差異性，其中n和m分別為2的5’MVIP09，20，19和10偶聯正義鏈的同時，3’MVIP09，10，15和12分別對應偶聯在反義鏈上，退火配對所得RNAi劑Kylo-09-DS122，151，152和153對轉基因小鼠hAGT抑制效果都優於其它組合；n和m不同，n+m等於4的RNAi劑Kylo-09-DS147，148，149和150 的抑制效果其次。反義鏈5’末端偶聯有載體結構所得到的RNAi劑中， 5’MVIP21與3’MVIP18組合中得到的Kylo-09-DS160抑制效果也達到67.3%。Kylo-09-DS161劑和Kylo-09-DS171雖然n+m分別為5和6，但在抑制效果上並未顯示出支化多的優勢，推測與序列的特異性或引入的載體結構的空間位阻有關。試驗結果顯示，選自表10中的5’MVIP 和/或選自表11中3’MVIP組合成載體結構所得的RNAi劑對轉基因小鼠體內的hAGT表達水平都有一定的抑制效果。

實施例8 5'MVIP09/3'MVIP09組合形成的RNAi劑的在食蟹猴體內藥效探索研究

本實施例的目的是研究不同結構5’MVIP和3’MVIP 偶聯同一種AGT siRNA所得RNAi在食蟹猴體內抑制活性的影響。按實施例6所述的方法製備相應的RNAi劑Kylo-09-DS131、Kylo-09-DS141、Kylo-09-DS142、Kylo-09-DS147或Kylo-09-DS122，選取18只3～5歲雄性洗脫猴適應性飼養結束後根據體重隨機分為對照組（n=3）以及給藥組（n=3）。給藥劑量為3mg/kg，給藥體積3ml/kg。分組給藥當天定義為Day0，在首次給藥後7天、14天、21天、28天、35天、42天和49天採集血液，分離血漿後，用Elisa方法測定血清中AGT水平，試驗結果見表24和圖8。

表24 食蟹猴血清中AGT平均水平

正義鏈代碼	載體結構	反義鏈代碼	載體結構	RNAi劑	AGT 平均水平（%）（相對於Day0 ）
Day0	Day7	Day 14	Day 21	Day 28	Day 35	Day 49
S211	5'MVIP01	AS208	3' MVIP01	Kylo-09-DS131	100.0	28.5	19.2	15.8	18.9	26.1	27.6
S217	5'MVIP01/3'MVIP09	AS64	/	Kylo-09-DS141	100.0	24.9	18.6	14.5	16.5	21.9	22.8
S218	5'MVIP09/3'MVIP01	AS64	/	Kylo-09-DS142	100.0	25.3	18.4	15.6	17.1	19.9	21.6
S211	5'MVIP01	AS209	3' MVIP17	Kylo-09-DS147	100.0	25.9	21.3	16.8	18.4	22.0	23.5
S140	5'MVIP09	AS140	3'MVIP09	Kylo-09-DS122	100.0	23.2	12.1	12.9	15.6	20.2	19.8

實驗結果顯示，正義鏈5’MVIP和反義鏈3’MVIP的組合為5’MVIP01/3’MVIP01、5’MVIP01/3’MVIP17或5’MVIP09/3’MVIP09或正義鏈5’MVIP和正義鏈3’MVIP的組合5’MVIP01/3’MVIP09或5’MVIP09/3’MVIP01的偶聯方式都對食蟹猴體內AGT 水平的抑制都呈現了顯著的效果且持續性好。

無

本申請所涉及的發明的具體特徵如所附權利要求書所顯示。通過參考下文中詳細描述的示例性實施方式和附圖能夠更好地理解本申請所涉及發明的特點和優勢。對附圖簡要說明如下：

圖1A顯示的是本申請實施例2中的RNAi干預後Hep 3B細胞中AGT mRNA水平；

圖1B顯示的是本申請實施例2中的RNAi干預後HepG 2細胞中AGT mRNA水平；

圖2A-2D顯示的是本申請實施例3中RNAi劑不同時段的穩定性檢測的HPLC圖；

圖3顯示的是本申請實施例4.1.1.5中合成的ERCd-01-c2的高分辨質譜圖；

圖4顯示的是本申請實施例4.1.2.6中合成的3’MVIP17-c1的高分辨質譜圖；

圖5顯示的是本申請實施例4.2.1.2中合成的5’MVIP09-ERCd-PFP-c2的高分辨質譜圖；

圖6顯示的是本申請實施例6中的轉基因小鼠給藥後hAGT平均水平；

圖7顯示的是本申請實施例7中的轉基因小鼠給藥後血清中hAGT平均水平。

圖8顯示的是本申請實施例8中的食蟹猴給藥後血清中AGT平均水平。

圖9A-9E顯示的是Kylo-09-DS122，Kylo-09-DS131，Kylo-09-DS141，Kylo-09-DS142和Kylo-09-DS147的結構式。

圖10顯示的是血管收縮素原(AGT)的作用機制。

Claims

一種RNAi劑或其藥學上可接受的鹽，所述RNAi劑的結構中含有載體結構和干擾核酸，其結構如式IIIa、IIIb或IIIc所示： (IIIa) (IIIb) (IIIc) 其中，所述干擾核酸靶向AGT基因，其包括反義鏈和正義鏈；所述載體結構包括5’MVIP（5’MultiValent Import Platform）和/或3’MVIP（3’ MultiValent Import Platform）；所述5’MVIP由轉接點R ₁、連接鏈D、接頭B、支鏈L和肝靶向特異性配體X組成，所述3’MVIP由轉接點R ₂、連接鏈D、接頭B、支鏈L和肝靶向特異性配體X組成，所述5’MVIP通過轉接點R ₁與正義鏈5’端或反義鏈5’端連接，所述3’MVIP通過轉接點R ₂與正義鏈3’端或反義鏈3’端連接，n和m各自獨立地為0-4的任意整數。
如請求項1所述的RNAi劑或其藥學上可接受的鹽，其中所述n+m=2-6的整數，優選n+m=2、3或4，更優選為4。
如請求項1-2中任一項所述的RNAi劑或其藥學上可接受的鹽，所述5’MVIP選自表10中5’MVIP01至5’MVIP22中的任一個，和/或所述3’MVIP選自表11中3’MVIP01至3’MVIP27的任一個。
如請求項1-3中任一項所述的RNAi劑或其藥學上可接受的鹽，其中所述正義鏈與SEQ ID NO: 1、SEQ ID NO: 7、SEQ ID NO: 8、SEQ ID NO: 10、SEQ ID NO: 11、SEQ ID NO: 12、SEQ ID NO: 17和SEQ ID NO: 18中任意一個或與其相差不超過3個核苷酸的序列具有基本上同源性。
如請求項1-4中任一項所述的RNAi劑或其藥學上可接受的鹽，所述反義鏈包含以下的核苷酸序列：SEQ ID NO: 19、SEQ ID NO: 25、SEQ ID NO: 26、SEQ ID NO: 28、SEQ ID NO: 29、SEQ ID NO: 30、SEQ ID NO: 35和SEQ ID NO: 36中任意一個或與其相差不超過3個核苷酸的序列。
如請求項1-5中任一項所述的RNAi劑或其藥學上可接受的鹽，其中所述正義鏈包含SEQ ID NO: 37、SEQ ID NO: 43、SEQ ID NO: 44、SEQ ID NO: 46、SEQ ID NO: 47、SEQ ID NO: 48、SEQ ID NO: 53和SEQ ID NO: 54中任意一個或與其相差不超過3個核苷酸的序列，且所述反義鏈包含SEQ ID NO: 55、SEQ ID NO: 61、SEQ ID NO: 62、SEQ ID NO: 64、SEQ ID NO: 65、SEQ ID NO: 66、SEQ ID NO: 71和SEQ ID NO: 72中任意一個或與其相差不超過3個核苷酸的序列。
如請求項1-6中任一項所述的RNAi劑或其藥學上可接受的鹽，其中所述干擾核酸包括Kylo-09-DS01，Kylo-09-DS07，Kylo-09-DS08，Kylo-09-DS10，Kylo-09-DS11，Kylo-09-DS12，Kylo-09-DS17，Kylo-09-DS18，Kylo-09-DS37~ Kylo-09-DS54中任意任一種或多種。
如請求項1-7中任一項所述的RNAi劑或其藥學上可接受的鹽，其包括表18中Kylo-09-DS122，Kylo-09-DS131至Kylo-09-DS147中的任一種或多種。
藥物組合物，其包含請求項1-8中任一項所述的RNAi劑或其藥學上可接受的鹽，以及任選地藥學上可接受的賦形劑、載體和/或稀釋劑。
請求項1-8中任一項所述的RNAi劑或其藥學上可接受的鹽，或請求項9所述的藥物組合物在製備藥物中的用途，所述藥物用於預防和/或治療疾病或病症或者降低疾病或病症的風險。