JP2024520522A - ムチン５ＡＣ（ＭＵＣ５ＡＣ）の発現を阻害するためのＲＮＡｉ剤、その組成物、及び使用方法 - Google Patents

ムチン５ＡＣ（ＭＵＣ５ＡＣ）の発現を阻害するためのＲＮＡｉ剤、その組成物、及び使用方法 Download PDF

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Abstract

Figure 2024520522000001
ＲＮＡｉ剤、ＲＮＡｉ剤を含む組成物、及びムチン５ＡＣ（ＭＵＣ５ＡＣ）遺伝子を阻害するための方法が記載される。本明細書に開示されるＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤及びＲＮＡｉ剤コンジュゲートは、ＭＵＣ５ＡＣ遺伝子の発現を阻害する。１つ以上のＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤を含み、任意選択で、１つ以上の追加の治療薬を含む、医薬組成物も記載される。記載されたＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤の肺上皮細胞へのインビボでの送達は、ＭＵＣ５ＡＣ遺伝子発現の阻害及びＭＵＣ５ＡＣ産生の減少をもたらし、これは、重度の喘息及び様々ながんなどの粘膜閉塞性肺疾患を含む様々な疾患の処置のための治療的利益をヒト対象を含む対象に提供することができる。

Description

本出願は、２０２１年５月２８日に出願された米国仮特許出願第６３／１９４，３７０号の優先権を主張し、該米国仮特許出願の内容はその全体が参照により本明細書に組み込まれる。
配列表
本出願は、ＡＳＣＩＩ形式で提出され、かつ、その全体が参照により本明細書に組み込まれる、配列表を含む。ＡＳＣＩＩのコピーは、ＳＥＱＬＩＳＴ＿３０６５９．ｔｘｔという表題を付け、サイズは４６０ｋｂである。
本開示は、ムチン５ＡＣ（「ＭＵＣ５ＡＣ」）遺伝子発現を阻害するためのＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）剤、例えば、二本鎖ＲＮＡｉ剤、ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤を含む組成物、及びその使用方法に関する。
ＭＵＣ５ＡＣは、肺の気道上皮及び他の粘膜組織（例えば、胃腸、泌尿生殖器、眼、及び耳）で発現される、転写調節された分泌ムチンである（Ｌｉｌｌｅｈｏｊ ｅｔ ａｌ，Ｉｎｔ Ｒｅｖ Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ，２０１３）。気道では、ＭＵＣ５ＡＣ及びＭＵＣ５Ｂが主要なゲル形成ムチンである。ＭＵＣ５Ｂは構成的に発現され、粘液線毛体クリアランスに必要である（Ｒｏｙ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ２０１４）。正常な対象は、気管及び近位気道においてＭＵＣ５ＡＣに対するＭＵＣ５Ｂの発現が比較的高く、この比率は遠位気道でさらに増加し、遠位及び終末細気管支ではＭＵＣ５ＡＣの発現がほとんど検出されない（Ｏｋｕｄａ ｅｔ ａｌ．，ＡＪＲＣＣＭ ２０１９）。典型的には気道において低レベルで発現されるＭＵＣ５ＡＣの発現は、炎症促進性メディエーター（例えば、２型サイトカイン：ＩＬ－４、ＩＬ－９、ＩＬ－１７、ＩＬ－２３、及びＩＬ－１３を含む）、有害な吸入物質（タバコの煙、アクロレイン、有毒ガスなど）、ウイルス感染、及びアレルゲンなどの外部からのストレス刺激によって強く誘導され得る。結果として生じる粘液の分泌過多及び過剰濃度は、重度の喘息、並びに嚢胞性線維症（ＣＦ）、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、非ＣＦ気管支拡張症（ＮＣＦＢ）、及び原発性毛様体ジスキネジア（ＰＣＤ）などの他の粘膜閉塞性肺疾患における気道閉塞に関連する一般的な病原機構であると理解されている（Ｂｏｕｃｈｅｒ， ＮＥＪＭ ２０１９）。喘息、ＣＯＰＤ、及びＮＣＦＢ患者では、ＭＵＣ５ＡＣの過剰な発現及び分泌により、気道内腔の狭窄、気道閉塞、及び増悪が引き起こされる（Ｄｕｎｉｃａｎ ｅｔ ａｌ．，ＪＣＩ ２０１７；Ｂｏｎｓｅｒ ｅｔ ａｌ．，ＪＣＩ ２０１６；Ｋｅｓｉｍｅｒ ｅｔ ａｌ．，ＮＥＪＭ ２０１７；Ｒａｍｓｅｙ ｅｔ ａｌ．，ＡＪＲＣＣＭ ２０１９）。ゲノムワイド関連解析（ＧＷＡＳ）により、ＭＵＣ５ＡＣ発現の増加及び中等度から重度の喘息を有する患者に関連する新規なＭＵＣ５ＡＣ対立遺伝子が同定された（Ｓｈｒｉｎｅ ｅｔ ａｌ．，Ｌａｎｃｅｔ Ｒｅｓｐｉｒ Ｍｅｄ ２０１９）。ＭＵＣ５ＡＣ欠損マウスからの実験証拠により、ＭＵＣ５ＡＣ媒性性の気道詰まりが、炎症及び気管支収縮とは無関係に、アレルゲンに対する気道過敏性の主な原因であることが実証された（Ｅｖａｎｓ ｅｔ ａｌ，Ｎａｔ Ｃｏｍｍｕｎ，２０１５）。重度の喘息及び他の粘膜閉塞性肺疾患に対する現在の標準治療には、気管支拡張薬及び抗炎症治療薬（コルチコステロイド及び生物学的製剤など）が含まれるが、現在利用可能な処置は病原となるムチンの過剰発現及び分泌過多に直接対処するものではない。粘液の分泌過多及び閉塞を直接的に処置する代替アプローチが必要である。
ＭＵＣ５ＡＣ発現の増加は、悪性腫瘍、例えば、肺腺癌、膵臓がん、唾液腺癌、乳がん、胆管癌、卵巣がん、及び他の腫瘍でも観察されており（Ｋｒｉｓｈｎ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ ２０１８）、腫瘍細胞の遊走及び浸潤性と関連していることが指摘されている。ＭＵＣ５ＡＣ及び他のムチン遺伝子における機能喪失型変異は腫瘍細胞では有意に過少発現されており、これは、ムチンの過剰発現が腫瘍を免疫細胞による認識から防護している可能性があることを示唆している（Ｇｏｒｌｏｖ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ２０１９）。腫瘍ＭＵＣ５ＡＣの過剰発現は、肺腺癌患者における進行及び生存率の低さと関連している（Ｂａｕｅｒ ｅｔ ａｌ．，ＪＣＩ Ｉｎｓｉｇｈｔ ２０１８）。ＭＵＣ５ＡＣの過剰発現はまた、アレルギー性鼻炎、慢性副鼻腔炎、中耳炎、バレット食道、膵炎、及び炎症性腸疾患を含む他の多くの状態と関連している（Ｋｒｉｓｈｎ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ ２０１８）。
治療薬又は医薬としての使用を含む、ＭＵＣ５ＡＣ遺伝子の発現を選択的かつ効率的に阻害することができる新規なＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）剤（ＲＮＡｉ剤、ＲＮＡｉトリガー、又はトリガーと称される）、例えば、二本鎖ＲＮＡｉ剤に対する必要性が存在する。さらに、粘液分泌過多及び閉塞に関連する疾患又は障害（本明細書では「粘膜閉塞性」肺疾患及び障害と称する）、例えば、嚢胞性線維症（ＣＦ）、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、非嚢胞性線維症性気管支拡張症（ＮＣＦＢ）、原発性線毛運動不全症（ＰＣＤ）、及び喘息、並びに／又はＭＵＣ５ＡＣ遺伝子発現及び／若しくはＭＵＣ５ＡＣタンパク質レベルの低下によって少なくとも部分的に媒介され得る疾患若しくは障害の処置のための新規なＭＵＣ５ＡＣ特異的ＲＮＡｉ剤の組成物の必要性が存在する。
本明細書に開示されるＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤のヌクレオチド配列及び化学修飾、並びにＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤をインビボで選択的かつ効率的に送達するのに好適な特定の特異的標的リガンドとのそれらの組み合わせは、当該技術分野で既知のものとは異なる。本明細書に開示されるＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤は、ＭＵＣ５ＡＣ遺伝子の発現の非常に強力かつ効率的な阻害を提供し、疾患及び障害の処置のための治療薬としての使用に好適な配列を有する。
一般に、本開示は、ＭＵＣ５ＡＣ遺伝子特異的ＲＮＡｉ剤、ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤を含む組成物、並びに本明細書に記載されるＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤及びＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤を含む組成物を使用してインビトロ及び／又はインビボでＭＵＣ５ＡＣ遺伝子の発現を阻害する方法を特徴とする。本明細書に記載されるＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤は、ＭＵＣ５ＡＣ遺伝子の発現を選択的かつ効率的に減少させることができ、それによりＭＵＣ５ＡＣタンパク質の発現を減少させることができ、これは、例えば、肺における粘膜閉塞の減少などの治療利益をもたらすことができる。
記載されたＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤は、粘膜閉塞性肺疾患（喘息、ＣＦ、ＣＯＰＤ、ＮＣＦＢ、ＰＣＤなど）、アレルギー性気管支肺アスペルギルス症、間質性肺疾患、がん（肺腺癌、膵臓がん、唾液腺癌、乳がん、胆管癌、卵巣がん、及び他の腫瘍）、呼吸器感染症（呼吸器多核体ウイルス、インフルエンザ、ライノウイルスなど）、中耳炎、炎症性腸疾患、胆石症、アレルギー性鼻炎、慢性副鼻腔炎、及び鼻ポリープ症を含むがこれらに限定されない、症状及び疾患の治療的処置（予防的（preventative）処置又は予防的（prophylactic）処置を含む）のための方法において使用することができる。
一態様では、本開示は、ＭＵＣ５ＡＣ遺伝子の発現を阻害するためのＲＮＡｉ剤を特徴とし、ＲＮＡｉ剤は、センス鎖（パッセンジャー鎖とも称される）及びアンチセンス鎖（ガイド鎖とも称される）を含む。センス鎖及びアンチセンス鎖は、互いに、部分的に、実質的に、又は完全に相補的であり得る。本明細書に記載されるＲＮＡｉ剤センス鎖の長さは各々、１５～４９ヌクレオチド長であり得る。本明細書に記載されるＲＮＡｉ剤アンチセンス鎖の長さは各々、１８～４９ヌクレオチド長であり得る。いくつかの実施形態では、センス鎖及びアンチセンス鎖は、独立して、１８～２６ヌクレオチド長である。センス鎖及びアンチセンス鎖は、同じ長さであるか、又は異なる長さであり得る。いくつかの実施形態では、センス鎖及びアンチセンス鎖は、独立して、２１～２６ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態では、センス鎖及びアンチセンス鎖は、独立して、２１～２４ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態では、センス鎖及びアンチセンス鎖は両方とも、２１ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖は、独立して、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、又は３０ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態では、センス鎖は、独立して、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、又は４９ヌクレオチド長である。本明細書に記載されるＲＮＡｉ剤は、ＭＵＣ５ＡＣを発現する細胞に送達された際に、インビボ及び／又はインビトロで１つ以上のＭＵＣ５ＡＣ遺伝子変異体の発現を阻害する。
本明細書に開示されるＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤は、ヒトＭＵＣ５ＡＣ遺伝子（例えば、配列番号１を参照のこと）を標的化する。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤は、表１に開示される配列のいずれかの配列を有するＭＵＣ５ＡＣ遺伝子の一部を標的化する。
別の態様では、本開示は、ＭＵＣ５ＡＣ遺伝子の発現を選択的かつ効率的に減少させることができる開示されたＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤の１つ以上を含む、組成物（医薬組成物を含む）を特徴とする。本明細書に記載される１つ以上のＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤を含む組成物は、ＭＵＣ５ＡＣ遺伝子発現及び／又はＭＵＣ５ＡＣタンパク質レベルに関連する症状及び疾患の処置（予防的処置又は阻害を含む）のために、ヒト又は動物対象などの対象に投与することができる。
ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤において使用することができるＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤のセンス鎖及びアンチセンス鎖の例は、表３、表４、表５、表６、及び表７に提供される。ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤二重鎖の例は、表８Ａ、表８Ｂ、表８Ｃ、表９、表１０Ａ、表１０Ｂ、及び表１１に提供される。本明細書に開示される特定のＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤のセンス鎖及びアンチセンス鎖からなり得るか、又はそれらに含まれ得る、１９ヌクレオチドのコアストレッチ配列の例は、表２に提供される。
別の態様では、本開示は、インビボで哺乳動物などの対象の上皮細胞にＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤を送達する方法を特徴とする。このような方法において使用するための組成物も本明細書に記載される。いくつかの実施形態では、インビボで対象の肺細胞（上皮細胞、マクロファージ、平滑筋、内皮細胞）にＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤を送達するための方法が本明細書に開示される。いくつかの実施形態では、対象は、ヒト対象である。
本明細書に開示される方法には、当該技術分野で既知の任意の好適な手段によって、対象、例えばヒト又は動物対象に１つ以上のＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤を投与することが含まれる。１つ以上のＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤を含む本明細書に開示される医薬組成物は、局所処置又は全身処置が所望されるかに応じて、多くの方法で投与することができる。投与は、例えば、静脈内、動脈内、皮下（subcutaneous）、腹腔内、皮下（subdermal）（例えば、埋め込み型デバイスを介して）、及び実質内投与であり得るが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される医薬組成物は、吸入（乾燥粉末吸入又はエアロゾル吸入など）、鼻腔内投与、気管内投与、又は口腔咽頭吸引投与によって投与される。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤は、肺上皮におけるＭＵＣ５ＡＣ遺伝子の発現を阻害することが望ましく、その投与は吸入による（例えば、定量吸入器などの吸入装置による、又はジェット式若しくは振動メッシュ式ネブライザーなどのネブライザー、又はソフトミスト吸入器による）。
１つ以上のＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤は、当該技術分野で既知の任意のオリゴヌクレオチド送達技術を使用して、標的細胞又は組織に送達することができる。いくつかの実施形態では、ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤は、ＲＮＡｉ剤を標的化基に共有結合させることによって細胞又は組織に送達される。いくつかの実施形態では、標的化基には、インテグリン標的化リガンドなどの細胞受容体リガンドが含まれ得る。インテグリンは、細胞－細胞外マトリックス（ＥＣＭ）の接着を促進する膜貫通受容体のファミリーである。特に、インテグリンアルファ－ｖ－ベータ－６（αｖβ６）は、ＥＣＭタンパク質及びＴＧＦ－ベータ潜在関連ペプチド（ＬＡＰ）の受容体であることが既知である上皮特異的インテグリンであり、様々な細胞及び組織で発現される。インテグリンαｖβ６は、損傷した肺上皮において高度にアップレギュレートされることが既知である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤は、インテグリンαｖβ６に対して親和性を有するインテグリン標的化リガンドに連結される。本明細書で言及する場合、「αｖβ６インテグリン標的化リガンド」は、インテグリンαｖβ６に対して親和性を有する化合物であり、これは、所望の細胞及び／又は組織（すなわち、インテグリンαｖβ６を発現する細胞）に結合するＲＮＡｉ剤の標的化及び送達を促進するためのリガンドとして利用することができる。いくつかの実施形態では、複数のαｖβ６インテグリン標的化リガンド又は一群のαｖβ６インテグリン標的化リガンドがＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤に連結される。いくつかの実施形態では、ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤－αｖβ６インテグリン標的化リガンドコンジュゲートは、受容体媒介エンドサイトーシス又は他の手段のいずれかにより、肺上皮細胞によって選択的に内在化される。
αｖβ６インテグリン標的化リガンドを含む、ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤を送達するのに有用な標的化基の例は、例えば、国際特許出願公開第ＷＯ２０１８／０８５４１５号及び国際特許出願公開第ＷＯ２０１９／０８９７６５号に開示されており、それらの各々の内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
標的化基は、ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤のセンス鎖又はアンチセンス鎖の３’末端又は５’末端に連結させることができる。いくつかの実施形態では、標的化基は、センス鎖の３’末端又は５’末端に連結される。いくつかの実施形態では、標的化基は、センス鎖の５’末端に結合される。いくつかの実施形態では、標的化基は、ＲＮＡｉ剤のセンス鎖及び／又はアンチセンス鎖のヌクレオチドに内部的に連結される。いくつかの実施形態では、標的化基は、リンカーを介してＲＮＡｉ剤に連結される。
別の態様では、本開示は、表８Ａ、表８Ｂ、表８Ｃ、表９、表１０Ａ、表１０Ｂ、及び表１１に開示される二重鎖構造を有する１つ以上のＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤を含む組成物を特徴とする。
ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤の使用は、ＭＵＣ５ＡＣ遺伝子発現の減少及び／又はＭＵＣ５ＡＣタンパク質レベルの低下が治療利益をもたらすことができる疾患又は障害の治療的処置（予防的処置を含む）のための方法を提供する。本明細書に開示されるＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤は、粘膜閉塞性肺疾患（喘息、ＣＦ、ＣＯＰＤ、ＮＣＦＢ、ＰＣＤなど）、アレルギー性気管支肺アスペルギルス症、間質性肺疾患、がん（肺腺癌、膵臓がん、唾液腺癌、乳がん、胆管癌、卵巣がん、及び他の腫瘍）、呼吸器感染症（呼吸器多核体ウイルス、インフルエンザ、ライノウイルスなど）、中耳炎、炎症性腸疾患、胆石症、アレルギー性鼻炎、慢性副鼻腔炎、及び鼻ポリープ症を含む、様々な疾患の処置に使用することができる。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤は、重度の喘息又はＣＯＰＤなどの粘膜閉塞性肺疾患を処置するために使用することができる。ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤はさらに、例えば、様々ながんを処置するために使用することができる。このような処置方法には、望ましいレベルを超えてＭＵＣ５ＡＣ遺伝子発現及び／又はＭＵＣ５ＡＣタンパク質レベルが上昇又は増強されたヒト又は動物にＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤を投与することが含まれる。
本明細書に記載される一態様は、
（ｉ）ＭＵＣ５ＡＣ遺伝子転写産物（配列番号１）の連続するヌクレオチドの対応するストレッチと少なくとも部分的に相補的なヌクレオチド配列を含む、１８～４９ヌクレオチド長であるアンチセンス鎖、及び
（ｉｉ）アンチセンス鎖と少なくとも部分的に相補的であるヌクレオチド配列を含むセンス鎖
を含む、ＭＵＣ５ＡＣ遺伝子の発現を阻害するためのＲＮＡｉ剤であり、ＲＮＡｉ剤センス鎖は、任意選択で、標的化リガンドにさらに連結され、ＲＮＡｉ剤は、ＭＵＣ５ＡＣ遺伝子の発現を阻害することができる。
本明細書に記載される別の態様は、
（ｉ）表３に提供される配列のいずれか１つと０又は１ヌクレオチド異なる少なくとも１７個の連続するヌクレオチドを含むアンチセンス鎖、及び
（ｉｉ）アンチセンス鎖と少なくとも部分的に相補的であるヌクレオチド配列を含むセンス鎖
を含む、ＭＵＣ５ＡＣ遺伝子の発現を阻害するためのＲＮＡｉ剤であり、ＲＮＡｉ剤センス鎖は、任意選択で、標的化リガンドにさらに連結され、ＲＮＡｉ剤は、ＭＵＣ５ＡＣ遺伝子の発現を阻害することができる。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’→３’）ＵＵＧＵＡＧＵＡＧＵＣＧＣＡＧＡＡＣＡＧＣ（配列番号１５２５）と０又は１核酸塩基異なる配列からなるか、それから本質的になるか、又はそれを含むアンチセンス鎖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’→３’）ＵＵＧＵＡＧＵＡＧＵＣＧＣＡＧＡＡＣＡＧＣ（配列番号１５２５）と１以下のヌクレオチド異なるヌクレオチド配列からなるか、それから本質的になるか、又はそれを含むアンチセンス鎖を含み、ヌクレオチドの全て又は実質的に全てが、修飾ヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’→３’）ＵＵＧＵＡＧＵＡＧＵＣＧＣＡＧＡＡＣＡＧＣ（配列番号１５２５）と０又は１核酸塩基異なる核酸塩基配列からなるか、それから本質的になるか、又はそれを含むアンチセンス鎖を含み、配列番号１５２５は、アンチセンス鎖の１～２１位（５’→３’）に位置する。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’→３’）ｃＰｒｐｕｓＵｆｓｇｓＵｆａＧｆｕＡｆｇＵｆｃＧｆｃＡｆｇＡｆａＣｆａＧｆｓｃ（配列番号１１２７）と１以下のヌクレオチド異なる修飾ヌクレオチド配列からなるか、それから本質的になるか、又はそれを含むアンチセンス鎖を含み、式中、ａ、ｃ、ｇ、及びｕは、２’－Ｏ－メチルアデノシン、シチジン、グアノシン、及びウリジンをそれぞれ表し、Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、及びＵｆは、２’－フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン、及びウリジンをそれぞれ表し、ｃＰｒｐｕは、５’－シクロプロピルホスホネート－２’－Ｏ－メチルウリジンを表し、ｓは、ホスホロチオエート結合を表し、センス鎖は、アンチセンス鎖と少なくとも実質的に相補的である。当業者が明確に理解するように、本明細書に開示される修飾ヌクレオチド配列中に示されるホスホロチオエート結合の含入により、オリゴヌクレオチド中に典型的に存在するホスホジエステル結合が置き換えられる（例えば、全てのヌクレオシド間結合を示す図３Ａ～３Ｊを参照のこと）。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’－３’）ｃＰｒｐｕｓＵｆｓｇｓＵｆａＧｆｕＡｆｇＵｆｃＧｆｃＡｆｇＡｆａＣｆａＧｆｓｃ（配列番号１１２７）からなるか、それから本質的になるか、又はそれを含むアンチセンス鎖を含み、式中、ａ、ｃ、ｇ、及びｕは、２’－Ｏ－メチルアデノシン、シチジン、グアノシン、及びウリジンをそれぞれ表し、Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、及びＵｆは、２’－フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン、及びウリジンをそれぞれ表し、ｃＰｒｐｕは、５’－シクロプロピルホスホネート－２’－Ｏ－メチルウリジンを表し、ｓは、ホスホロチオエート結合を表し、センス鎖は、アンチセンス鎖と少なくとも実質的に相補的である。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’→３’）ｕｓＵｆｓｇｓＵｆａＧｆｕＡｆｇＵｆｃＧｆｃＡｆｇＡｆａＣｆａＧｆｓｃ（配列番号１０６５）と１以下のヌクレオチド異なる修飾ヌクレオチド配列からなるか、それから本質的になるか、又はそれを含むアンチセンス鎖を含み、式中、ａ、ｃ、ｇ、及びｕは、２’－Ｏ－メチルアデノシン、シチジン、グアノシン、及びウリジンをそれぞれ表し、Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、及びＵｆは、２’－フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン、及びウリジンをそれぞれ表し、ｓは、ホスホロチオエート結合を表し、センス鎖は、アンチセンス鎖と少なくとも実質的に相補的である。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’－３’）ｕｓＵｆｓｇｓＵｆａＧｆｕＡｆｇＵｆｃＧｆｃＡｆｇＡｆａＣｆａＧｆｓｃ（配列番号１０６５）からなるか、それから本質的になるか、又はそれを含むアンチセンス鎖を含み、式中、ａ、ｃ、ｇ、及びｕは、２’－Ｏ－メチルアデノシン、シチジン、グアノシン、及びウリジンをそれぞれ表し、Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、及びＵｆは、２’－フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン、及びウリジンをそれぞれ表し、ｓは、ホスホロチオエート結合を表し、センス鎖は、アンチセンス鎖と少なくとも実質的に相補的である。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’→３’）ＵＵＣＵＵＧＵＵＣＡＧＧＣＡＡＡＵＣＡＧＣ（配列番号１５３５）と０又は１核酸塩基異なる核酸塩基配列からなるか、それから本質的になるか、又はそれを含むアンチセンス鎖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’→３’）ＵＵＣＵＵＧＵＵＣＡＧＧＣＡＡＡＵＣＡＧＣ（配列番号１５３５）と１以下のヌクレオチド異なるヌクレオチド配列からなるか、それから本質的になるか、又はそれを含むアンチセンス鎖を含み、ヌクレオチドの全て又は実質的に全ては、修飾ヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’→３’）ＵＵＣＵＵＧＵＵＣＡＧＧＣＡＡＡＵＣＡＧＣ（配列番号１５３５）と０又は１核酸塩基異なる核酸塩基配列からなるか、それから本質的になるか、又はそれを含むアンチセンス鎖を含み、配列番号１５３５は、アンチセンス鎖の１～２１位（５’→３’）に位置する。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’→３’）ｕｓＵｆｓｃｓｕｕｇｕｕｃａｇＧｆｃＡｆａＡｆｕｃａｇｓｃ（配列番号１１６６）と１以下のヌクレオチド異なる修飾ヌクレオチド配列からなるか、それから本質的になるか、又はそれを含むアンチセンス鎖を含み、式中、ａ、ｃ、ｇ、及びｕは、２’－Ｏ－メチルアデノシン、シチジン、グアノシン、及びウリジンをそれぞれ表し、Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、及びＵｆは、２’－フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン、及びウリジンをそれぞれ表し、ｓは、ホスホロチオエート結合を表し、センス鎖は、アンチセンス鎖と少なくとも実質的に相補的である。当業者が明確に理解するように、本明細書に開示される修飾ヌクレオチド配列中に示されるホスホロチオエート結合の含入により、オリゴヌクレオチド中に典型的に存在するホスホジエステル結合が置き換えられる（例えば、全てのヌクレオシド間結合を示す図３Ａ～３Ｊを参照のこと）。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’－３’）ｕｓＵｆｓｃｓｕｕｇｕｕｃａｇＧｆｃＡｆａＡｆｕｃａｇｓｃ（配列番号１１６６）からなるか、それから本質的になるか、又はそれを含むアンチセンス鎖を含み、式中、ａ、ｃ、ｇ、及びｕは、２’－Ｏ－メチルアデノシン、シチジン、グアノシン、及びウリジンをそれぞれ表し、Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、及びＵｆは、２’－フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン、及びウリジンをそれぞれ表し、ｓは、ホスホロチオエート結合を表し、センス鎖は、アンチセンス鎖と少なくとも実質的に相補的である。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’→３’）ｃＰｒｐｕＵｆｃｕｕｇｕｕｃａｇＧｆｃＡｆａＡｆｕｃａｇｓｃ（配列番号１１９１）と１以下のヌクレオチド異なる修飾ヌクレオチド配列からなるか、それから本質的になるか、又はそれを含むアンチセンス鎖を含み、式中、ａ、ｃ、ｇ、及びｕは、２’－Ｏ－メチルアデノシン、シチジン、グアノシン、及びウリジンをそれぞれ表し、Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、及びＵｆは、２’－フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン、及びウリジンをそれぞれ表し、ｃＰｒｐｕは、５’－シクロプロピルホスホネート－２’－Ｏ－メチルウリジンを表し、ｓは、ホスホロチオエート結合を表し、センス鎖は、アンチセンス鎖と少なくとも実質的に相補的である。当業者が明確に理解するように、本明細書に開示される修飾ヌクレオチド配列中に示されるホスホロチオエート結合の含入により、オリゴヌクレオチド中に典型的に存在するホスホジエステル結合が置き換えられる（例えば、全てのヌクレオシド間結合を示す図３Ａ～３Ｊを参照のこと）。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤は、ヌクレオチド配列（５’－３’）ｃＰｒｐｕＵｆｃｕｕｇｕｕｃａｇＧｆｃＡｆａＡｆｕｃａｇｓｃ（配列番号１１９１）からなるか、それから本質的になるか、又はそれを含むアンチセンス鎖を含み、式中、ａ、ｃ、ｇ、及びｕは、２’－Ｏ－メチルアデノシン、シチジン、グアノシン、及びウリジンをそれぞれ表し、Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、及びＵｆは、２’－フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン、及びウリジンをそれぞれ表し、ｃＰｒｐｕは、５’－シクロプロピルホスホネート－２’－Ｏ－メチルウリジンを表し、ｓは、ホスホロチオエート結合を表し、センス鎖は、アンチセンス鎖と少なくとも実質的に相補的である。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤は、以下のヌクレオチド配列（５’→３’）：
ＵＵＧＵＡＧＵＡＧＵＣＧＣＡＧＡＡＣＡＧＣ（配列番号１５２５）；又は
ＵＵＣＵＵＧＵＵＣＡＧＧＣＡＡＡＵＣＡＧＣ（配列番号１５３５）
のうちの１つと０又は１ヌクレオチド異なるヌクレオチド配列からなるか、それから本質的になるか、又はそれを含むアンチセンス鎖を含み、ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤は、アンチセンス鎖と少なくとも部分的に相補的であるセンス鎖をさらに含み、アンチセンス鎖及びセンス鎖の両方のヌクレオチドの全て又は実質的に全ては、修飾ヌクレオチドである。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤は、以下のヌクレオチド配列（５’→３’）
ＵＵＧＵＡＧＵＡＧＵＣＧＣＡＧＡＡＣＡＧＣ（配列番号１５２５）；又は
ＵＵＣＵＵＧＵＵＣＡＧＧＣＡＡＡＵＣＡＧＣ（配列番号１５３５）
のうちの１つと０又は１ヌクレオチド異なるヌクレオチド配列からなるか、それから本質的になるか、又はそれを含むアンチセンス鎖を含み、ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤は、アンチセンス鎖と少なくとも部分的に相補的であるセンス鎖をさらに含み、アンチセンス鎖及びセンス鎖の両方のヌクレオチドの全て又は実質的に全ては、修飾ヌクレオチドであり、センス鎖は、ヌクレオチド配列の３’末端及び５’末端において逆位脱塩基残基をさらに含み、センス鎖はまた、５’末端に共有結合した標的化リガンドを含み、標的化リガンドは、インテグリン受容体に対して親和性を有する化合物を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤は、以下のヌクレオチド配列（５’→３’）：
ＵＵＧＵＡＧＵＡＧＵＣＧＣＡＧＡＡＣＡＧＣ（配列番号１５２５）；又は
ＵＵＣＵＵＧＵＵＣＡＧＧＣＡＡＡＵＣＡＧＣ（配列番号１５３５）
のうちの１つと０又は１ヌクレオチド異なるヌクレオチド配列からなるか、それから本質的になるか、又はそれを含むアンチセンス鎖を含み、ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤は、アンチセンス鎖と少なくとも部分的に相補的であるセンス鎖をさらに含み、アンチセンス鎖及びセンス鎖の両方のヌクレオチドの全て又は実質的に全ては、修飾ヌクレオチドであり、センス鎖は、ヌクレオチド配列の３’末端及び５’末端において逆位脱塩基残基をさらに含み、センス鎖はまた、５’末端に共有結合した標的化リガンドを含み、標的化リガンドは、インテグリン受容体に対して親和性を有する化合物を含み、それぞれのアンチセンス鎖配列は、アンチセンス鎖の１～２１位に位置する。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤は、アンチセンス鎖及びセンス鎖を含み、アンチセンス鎖及びセンス鎖は、以下のヌクレオチド配列（５’→３’）対：
ＵＵＧＵＡＧＵＡＧＵＣＧＣＡＧＡＡＣＡＧＣ（配列番号１５２５）及び
ＧＣＵＧＵＵＣＵＧＣＧＡＣＵＡＣＵＡＣＡＡ（配列番号１６１７）；又は
ＵＵＣＵＵＧＵＵＣＡＧＧＣＡＡＡＵＣＡＧＣ（配列番号１５３５）及び
ＧＣＵＧＡＵＵＵＧＣＣＵＧＡＡＣＡＡＧＡＡ（配列番号１６３２）
のうちの１つと０又は１ヌクレオチド異なるヌクレオチド配列からなるか、それから本質的になるか、又はそれを含み、あるいは、アンチセンス鎖及びセンス鎖の両方のヌクレオチドの全て又は実質的に全ては、修飾ヌクレオチドである。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤は、アンチセンス鎖及びセンス鎖を含み、アンチセンス鎖及びセンス鎖は、以下のヌクレオチド配列（５’→３’）対：
ＵＵＧＵＡＧＵＡＧＵＣＧＣＡＧＡＡＣＡＧＣ（配列番号１５２５）及び
ＧＣＵＧＵＵＣＵＧＣＧＡＣＵＡＣＵＡＣＡＡ（配列番号１６１７）；又は
ＵＵＣＵＵＧＵＵＣＡＧＧＣＡＡＡＵＣＡＧＣ（配列番号１５３５）及び
ＧＣＵＧＡＵＵＵＧＣＣＵＧＡＡＣＡＡＧＡＡ（配列番号１６３２）
のうちの１つと０又は１ヌクレオチド異なるヌクレオチド配列からなるか、それから本質的になるか、又はそれを含み、あるいは、アンチセンス鎖及びセンス鎖の両方のヌクレオチドの全て又は実質的に全ては、修飾ヌクレオチドであり、センス鎖は、ヌクレオチド配列の３’末端及び５’末端において逆位脱塩基残基をさらに含み、センス鎖はまた、５’末端に共有結合した標的化リガンドを含み、標的化リガンドは、インテグリン受容体に対して親和性を有する化合物を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤は、以下のヌクレオチド配列（５’→３’）：
ｃＰｒｐｕｓＵｆｓｇｓＵｆａＧｆｕＡｆｇＵｆｃＧｆｃＡｆｇＡｆａＣｆａＧｆｓｃ（配列番号１１２７）；
ｕｓＵｆｓｇｓＵｆａＧｆｕＡｆｇＵｆｃＧｆｃＡｆｇＡｆａＣｆａＧｆｓｃ（配列番号１０６５）；
ｕｓＵｆｓｃｓｕｕｇｕｕｃａｇＧｆｃＡｆａＡｆｕｃａｇｓｃ（配列番号１１６６）；
ｃＰｒｐｕＵｆｃｕｕｇｕｕｃａｇＧｆｃＡｆａＡｆｕｃａｇｓｃ（配列番号１１９１）
のうちの１つと０又は１ヌクレオチド異なる修飾ヌクレオチド配列からなるか、それから本質的になるか、又はそれを含むアンチセンス鎖を含み、式中、ａ、ｃ、ｇ、及びｕは、２’－Ｏ－メチルアデノシン、シチジン、グアノシン、及びウリジンをそれぞれ表し、Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、及びＵｆは、２’－フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン、及びウリジンをそれぞれ表し、ｃＰｒｐｕは、５’－シクロプロピルホスホネート－２’－Ｏ－メチルウリジンを表し、ｓは、ホスホロチオエート結合を表し、ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤は、アンチセンス鎖と少なくとも部分的に相補的であるセンス鎖をさらに含み、センス鎖のヌクレオチドの全て又は実質的に全ては、修飾ヌクレオチドである。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤は、以下のヌクレオチド配列（５’→３’）：
ｃＰｒｐｕｓＵｆｓｇｓＵｆａＧｆｕＡｆｇＵｆｃＧｆｃＡｆｇＡｆａＣｆａＧｆｓｃ（配列番号１１２７）；
ｕｓＵｆｓｇｓＵｆａＧｆｕＡｆｇＵｆｃＧｆｃＡｆｇＡｆａＣｆａＧｆｓｃ（配列番号１０６５）；
ｕｓＵｆｓｃｓｕｕｇｕｕｃａｇＧｆｃＡｆａＡｆｕｃａｇｓｃ（配列番号１１６６）；
ｃＰｒｐｕＵｆｃｕｕｇｕｕｃａｇＧｆｃＡｆａＡｆｕｃａｇｓｃ（配列番号１１９１）
のうちの１つと０又は１ヌクレオチド異なる修飾ヌクレオチド配列からなるか、それから本質的になるか、又はそれを含むアンチセンス鎖を含み、ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤は、アンチセンス鎖と少なくとも部分的に相補的であるセンス鎖をさらに含み、センス鎖のヌクレオチドの全て又は実質的に全ては、修飾ヌクレオチドであり、アンチセンス鎖及びセンス鎖の両方のヌクレオチドの全て又は実質的に全ては、修飾ヌクレオチドであり、センス鎖は、ヌクレオチド配列の３’末端及び５’末端において逆位脱塩基残基をさらに含み、センス鎖はまた、５’末端に共有結合した標的化リガンドを含み、標的化リガンドは、インテグリン受容体に対して親和性を有する化合物を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤は、以下のヌクレオチド配列対（５’→３’）：
ｃＰｒｐｕｓＵｆｓｇｓＵｆａＧｆｕＡｆｇＵｆｃＧｆｃＡｆｇＡｆａＣｆａＧｆｓｃ（配列番号１１２７）及び
ｇｓｃｕｇｕｕｃｕＧｆＣｆＧｆａｃｕａｃｕａｃａａ（配列番号１２６５）；
ｕｓＵｆｓｇｓＵｆａＧｆｕＡｆｇＵｆｃＧｆｃＡｆｇＡｆａＣｆａＧｆｓｃ（配列番号１０６５）及び
ｇｓｃｕｇｕｕｃｕＧｆＣｆＧｆａｃｕａｃｕａｃａａ（配列番号１２６５）；
ｕｓＵｆｓｃｓｕｕｇｕｕｃａｇＧｆｃＡｆａＡｆｕｃａｇｓｃ（配列番号１１６６）及び
ｇｓｃｕｇａｕＵｆｕＧｆｃＣｆｕｇａａｃａａｇａａ（配列番号１３１５）；並びに
ｃＰｒｐｕＵｆｃｕｕｇｕｕｃａｇＧｆｃＡｆａＡｆｕｃａｇｓｃ（配列番号１１９１）及び
ｇｓｃｕｇａｕＵｆｕＧｆｃＣｆｕｇａａｃａａｇａａ（配列番号１３１５）
のうちの１つからなるか、それから本質的になるか、又はそれを含むアンチセンス鎖及びセンス鎖を含み、式中、ａ、ｃ、ｇ、及びｕは、２’－Ｏ－メチルアデノシン、シチジン、グアノシン、及びウリジンをそれぞれ表し、Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、及びＵｆは、２’－フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン、及びウリジンをそれぞれ表し、ｃＰｒｐｕは、５’－シクロプロピルホスホネート－２’－Ｏ－メチルウリジンを表し、ｓは、ホスホロチオエート結合を表し、センス鎖はまた、インテグリン受容体に対して親和性を有する標的化リガンドを含み、標的化リガンドは、センス鎖の５’末端において任意選択で結合される。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤は、以下の配列対（５’－３’）：
ｃＰｒｐｕｓＵｆｓｇｓＵｆａＧｆｕＡｆｇＵｆｃＧｆｃＡｆｇＡｆａＣｆａＧｆｓｃ（配列番号１１２７）及び
Ｔｒｉ－ＳＭ６．１－ａｖｂ６－（ＴＡ１４）ｇｓｃｕｇｕｕｃｕＧｆＣｆＧｆａｃｕａｃｕａｃａａｓ（ｉｎｖＡｂ）（配列番号１４９１）；
ｕｓＵｆｓｇｓＵｆａＧｆｕＡｆｇＵｆｃＧｆｃＡｆｇＡｆａＣｆａＧｆｓｃ（配列番号１０６５）及び
Ｔｒｉ－ＳＭ６．１－ａｖｂ６－（ＴＡ１４）ｇｓｃｕｇｕｕｃｕＧｆＣｆＧｆａｃｕａｃｕａｃａａｓ（ｉｎｖＡｂ）（配列番号１４９１）；
ｕｓＵｆｓｃｓｕｕｇｕｕｃａｇＧｆｃＡｆａＡｆｕｃａｇｓｃ（配列番号１１６６）及び
Ｔｒｉ－ＳＭ６．１－ａｖｂ６－（ＴＡ１４）ｇｓｃｕｇａｕＵｆｕＧｆｃＣｆｕｇａａｃａａｇａａｓ（ｉｎｖＡｂ）（配列番号１５１３）；
ｃＰｒｐｕＵｆｃｕｕｇｕｕｃａｇＧｆｃＡｆａＡｆｕｃａｇｓｃ（配列番号１１９１）及び
Ｔｒｉ－ＳＭ６．１－ａｖｂ６－（ＴＡ１４）ｇｓｃｕｇａｕＵｆｕＧｆｃＣｆｕｇａａｃａａｇａａｓ（ｉｎｖＡｂ）（配列番号１５１３）；
のうちの１つと０又は１ヌクレオチド異なる修飾ヌクレオチド配列からなるか、それから本質的になるか、又はそれを含むアンチセンス鎖及びセンス鎖を含み、式中、ａ、ｃ、ｇ、及びｕは、２’－Ｏ－メチルアデノシン、シチジン、グアノシン、及びウリジンをそれぞれ表し、Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、及びＵｆは、２’－フルオロアデノシン、シチジン、グアノシン、及びウリジンをそれぞれ表し、ｃＰｒｐｕは、５’－シクロプロピルホスホネート－２’－Ｏ－メチルウリジンを表し、Ｔｒｉ－ＳＭ６．１－αｖβ６－（ＴＡ１４）は、図１に示される化学構造を有する三座αｖβ６上皮細胞標的化リガンドを表し、（ｉｎｖＡｂ）は、逆位脱塩基デオキシリボヌクレオチドを表し（表１１も参照のこと）、ｓは、ホスホロチオエート結合を表す。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤は、（５’→３’）：
ＵＵＧＵＡＧＵＡＧＵＣＧＣＡＧＡＡＣＡ（配列番号７９）；及び
ＵＵＣＵＵＧＵＵＣＡＧＧＣＡＡＡＵＣＡ（配列番号８３）
からなる群から選択されるヌクレオチド配列と０又は１核酸塩基異なる核酸塩基配列を含むアンチセンス鎖を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤は、（５’→３’）：
ＵＵＧＵＡＧＵＡＧＵＣＧＣＡＧＡＡＣＡ（配列番号７９）；及び
ＵＵＣＵＵＧＵＵＣＡＧＧＣＡＡＡＵＣＡ（配列番号８３）
からなる群から選択されるヌクレオチド配列と０又は１核酸塩基異なる核酸塩基配列を含むアンチセンス鎖を含み、ヌクレオチドの全て又は実質的に全ては、修飾ヌクレオチドである。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤は、（５’→３’）：
ＵＵＧＵＡＧＵＡＧＵＣＧＣＡＧＡＡＣＡ（配列番号７９）；及び
ＵＵＣＵＵＧＵＵＣＡＧＧＣＡＡＡＵＣＡ（配列番号８３）
からなる群から選択されるヌクレオチド配列と０又は１核酸塩基異なる核酸塩基配列を含むアンチセンス鎖を含み、ヌクレオチドの全て又は実質的に全ては、修飾ヌクレオチドであり、配列番号７９及び配列番号８３はそれぞれ、アンチセンス鎖のヌクレオチド１～１９位（５’→３’）に位置する。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤は、（５’→３’）：
ＵＵＧＵＡＧＵＡＧＵＣＧＣＡＧＡＡＣＡ（配列番号７９）及び
ＵＧＵＵＣＵＧＣＧＡＣＵＡＣＵＡＣＡＡ（配列番号５６８）；又は
ＵＵＣＵＵＧＵＵＣＡＧＧＣＡＡＡＵＣＡ（配列番号８３）及び
ＵＧＡＵＵＵＧＣＣＵＧＡＡＣＡＡＧＡＡ（配列番号５７２）
からなる群から選択されるヌクレオチド配列対と０又は１核酸塩基異なる核酸塩基配列をそれぞれが含むアンチセンス鎖及びセンス鎖を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤は、（５’→３’）：
ＵＵＧＵＡＧＵＡＧＵＣＧＣＡＧＡＡＣＡ（配列番号７９）及び
ＵＧＵＵＣＵＧＣＧＡＣＵＡＣＵＡＣＡＡ（配列番号５６８）；又は
ＵＵＣＵＵＧＵＵＣＡＧＧＣＡＡＡＵＣＡ（配列番号８３）及び
ＵＧＡＵＵＵＧＣＣＵＧＡＡＣＡＡＧＡＡ（配列番号５７２）
からなる群から選択されるヌクレオチド配列対と０又は１核酸塩基異なる核酸塩基配列をそれぞれが含むアンチセンス鎖及びセンス鎖を含み、ヌクレオチドの全て又は実質的に全ては、修飾ヌクレオチドである。
定義
本明細書で使用する場合、「オリゴヌクレオチド」及び「ポリヌクレオチド」という用語は、各々が独立して修飾されているか又は非修飾であり得る、連結されたヌクレオシドのポリマーを意味する。
本明細書で使用する場合、「ＲＮＡｉ剤」（「ＲＮＡｉトリガー」とも称される）は、配列特異的な様式で標的化メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）転写物の翻訳を分解又は阻害する（例えば、好適な条件下で分解又は阻害する）ことができるＲＮＡ又はＲＮＡ様（例えば、化学修飾されたＲＮＡ）オリゴヌクレオチド分子を含む組成物を意味する。本明細書で使用する場合、ＲＮＡｉ剤は、ＲＮＡ干渉機構（すなわち、哺乳動物細胞のＲＮＡ干渉経路機構（ＲＮＡ誘導サイレンシング複合体若しくはＲＩＳＣ）との相互作用によりＲＮＡ干渉を誘導すること）を通じて、又は任意の代替的な作用機序若しくは経路によって作用し得る。ＲＮＡｉ剤は、この用語が本明細書で使用される場合、主にＲＮＡ干渉機構を通じて作用すると考えられるが、開示されたＲＮＡｉ剤は、任意の特定の経路若しくは作用機構に拘束されず、又はそれに限定されない。本明細書に開示されるＲＮＡｉ剤は、センス鎖及びアンチセンス鎖から構成され、低分子（又は短鎖）干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、短鎖ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、及びダイサー基質を含むが、これらに限定されない。本明細書に記載されるＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、標的化されるｍＲＮＡ（すなわち、ＭＵＣ５ＡＣ ｍＲＮＡ）と少なくとも部分的に相補的である。ＲＮＡｉ剤は、１つ以上の修飾ヌクレオチド及び／又は１つ以上の非ホスホジエステル結合を含むことができる。
本明細書で使用する場合、所定の遺伝子の発現に言及する場合の「サイレンスする（silence）」、「減少する」、「阻害する」、「ダウンレギュレートする」、又は「ノックダウンする」という用語は、遺伝子が転写される細胞、細胞群、組織、器官、又は対象における、遺伝子から転写されるＲＮＡのレベル、又はｍＲＮＡから翻訳されるポリペプチド、タンパク質、若しくはタンパク質サブユニットのレベルによって測定される遺伝子の発現が、細胞、細胞群、組織、器官、又は対象を本明細書に記載のＲＮＡｉ剤で処置した場合にそのように処置されていない又は処置されていない第２の細胞、細胞群、組織、器官、又は対象と比較して減少することを意味する。
本明細書で使用する場合、「配列」及び「ヌクレオチド配列」という用語は、標準的命名法を使用して一連の文字で記載される核酸塩基又はヌクレオチドの連続又は順序を意味する。別途指示がない限り、ヌクレオチド配列は、５’から３’の方向で左から右に記述される。
本明細書で使用する場合、「塩基」、「ヌクレオチド塩基」、又は「核酸塩基」は、ヌクレオチドの構成要素である複素環式ピリミジン又はプリン化合物であり、主要なプリン塩基であるアデニン及びグアニン、並びに主要なピリミジン塩基であるシトシン、チミン、及びウラシルを含む。核酸塩基は、限定されないが、ユニバーサル塩基、疎水性塩基、無差別塩基（promiscuous bases）、サイズ拡大塩基（size-expanded bases）、及びフッ素化塩基を含むようにさらに修飾されてもよい（例えば、Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ ｉｎ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ， Ｈｅｒｄｅｗｉｊｎ，Ｐ．ｅｄ．Ｗｉｌｅｙ－ＶＣＨ，２００８を参照のこと）。このような修飾核酸塩基（修飾核酸塩基を含むホスホルアミダイト化合物を含む）の合成は、当該技術分野で既知である。
本明細書で使用する場合、「ヌクレオチド」という用語は、当該技術分野で一般に理解されているのと同じ意味を有する。したがって、本明細書で使用される「ヌクレオチド」という用語は、糖部分、塩基部分、及びリン酸又はホスホロチオエートヌクレオシド間結合基などの共有結合した基（連結基）を含むグリコシドを指し、ＤＮＡ若しくはＲＮＡなどの天然に存在するヌクレオチド、並びに、本明細書ではヌクレオチド類似体又は修飾ヌクレオチドとも称される、修飾された糖及び／若しくは塩基部分を含む非天然ヌクレオチドを包含する。単一のヌクレオチドは、本明細書ではモノマー又は単位と称されてもよい。
本明細書で使用する場合、別途指示がない限り、「相補的」という用語は、第２の核酸塩基又はヌクレオチド配列（例えば、ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖又は一本鎖アンチセンスオリゴヌクレオチド）に関連する第１の核酸塩基又はヌクレオチド配列（例えば、ＲＮＡｉ剤のセンス鎖又は標的化ｍＲＮＡ）を記載するために使用される場合、第１のヌクレオチド配列を含むオリゴヌクレオチド又はポリヌクレオチドが、特定の標準的条件下で第２のヌクレオチド配列を含むオリゴヌクレオチドとハイブリダイズして（哺乳動物の生理学的条件（又は他の好適なインビボ若しくはインビトロ条件）下で塩基対水素結合を形成して）、二重鎖又は二重らせん構造を形成する能力を意味する。当業者は、ハイブリダイゼーション試験に最も適切な条件のセットを選択することができるであろう。相補的配列には、ワトソン・クリック塩基対又は非ワトソン・クリック塩基対が含まれ、少なくとも上記のハイブリダイゼーション要件が満たされる限りにおいて天然の又は修飾されたヌクレオチド又はヌクレオチド模倣物が含まれる。配列の同一性又は相補性は、修飾とは無関係である。例えば、本明細書で定義されるａ及びＡｆは、Ｕ（又はＴ）に相補的であり、同一性又は相補性を決定する目的ではＡと同一である。
本明細書で使用する場合、「完全に相補的（perfectly complementary）」又は「完全に相補的（fully complementary）」は、核酸塩基又はヌクレオチド配列分子のハイブリダイズした対において、第１のオリゴヌクレオチドの連続する配列中の塩基の全て（１００％）が、第２のオリゴヌクレオチドの連続する配列中の同じ数の塩基とハイブリダイズすることを意味する。連続する配列は、第１又は第２のヌクレオチド配列の全部又は一部を含んでもよい。
本明細書で使用する場合、「部分的に相補的」とは、核酸塩基又はヌクレオチド配列分子のハイブリダイズした対において、第１のオリゴヌクレオチドの連続する配列中の塩基の全てではないが少なくとも７０％が、第２のオリゴヌクレオチドの連続する配列中の同じ数の塩基とハイブリダイズすることを意味する。連続配列は、第１又は第２のヌクレオチド配列の全部又は一部を含んでもよい。
本明細書で使用する場合、「実質的に相補的」とは、核酸塩基又はヌクレオチド配列分子のハイブリダイズした対において、第１のオリゴヌクレオチドの連続する配列中の塩基の全てではないが少なくとも８５％が、第２のオリゴヌクレオチドの連続する配列中の同じ数の塩基とハイブリダイズすることを意味する。連続配列は、第１又は第２のヌクレオチド配列の全部又は一部を含んでもよい。
本明細書で使用する場合、「相補的」、「完全に相補的」、「部分的に相補的」、及び「実質的に相補的」という用語は、ＲＮＡｉ剤のセンス鎖とアンチセンス鎖との間又はＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖とＭＵＣ５ＡＣ ｍＲＮＡのセンス鎖との間で一致する核酸塩基又はヌクレオチドに関して使用される。
本明細書で使用する場合、核酸配列に適用される「実質的に同一」又は「実質的同一性」という用語は、ヌクレオチド配列（又はヌクレオチド配列の一部）が、参照配列と比較して、少なくとも約８５％以上の配列同一性、例えば、少なくとも９０％、少なくとも９５％、又は少なくとも９９％の同一性を有することを意味する。配列同一性のパーセンテージは、最適にアラインされた２つの配列を比較ウィンドウにわたって比較することによって決定される。パーセンテージは、同じ種類の核酸塩基が両方の配列中に存在する位置の数を決定して一致する位置の数を得て、一致する位置の数を比較ウィンドウ中の位置の総数で除算し、結果に１００を乗算して配列同一性のパーセンテージを得る。本明細書に開示される発明は、本明細書に開示されるものと実質的に同一のヌクレオチド配列を包含する。
本明細書で使用する場合、「処置する」、「処置」などの用語は、対象における疾患の１つ以上の症状の数、重症度、及び／又は頻度を軽減又は緩和するために採られる方法又はステップを意味する。本明細書で使用する場合、「処置する」及び「処置」には、対象における疾患の１つ以上の症状の予防、管理、予防的処置、並びに／又は数、重症度、及び／若しくは頻度の抑制若しくは軽減が含まれてもよい。
本明細書で使用する場合、「細胞に導入する」という語句は、ＲＮＡｉ剤に言及する場合、ＲＮＡｉ剤を細胞に機能的に送達することを意味する。「機能的送達」という語句は、ＲＮＡｉ剤が予想される生物学的活性を有すること、例えば、遺伝子発現の配列特異的阻害を有することを可能にする様式で、ＲＮＡｉ剤を細胞に送達することを意味する。
別途明記しない限り、本明細書で使用される
という記号の使用は、本明細書に記載される発明の範囲に従って、任意の基がそれに連結されてもよいことを意味する。
本明細書で使用する場合、「異性体」という用語は、同一の分子式を有するが、その原子の性質若しくは結合順序、又は空間における原子の配置が異なる化合物を指す。空間における原子の配置が異なる異性体は「立体異性体」と称される。互いに鏡像ではない立体異性体は「ジアステレオ異性体」と称され、重ね合わせられない鏡像である立体異性体は「エナンチオマー」と称されるか、又は光学異性体と称される場合もある。４つの同一ではない置換基に結合した炭素原子は「キラル中心」と称される。
本明細書で使用する場合、構造において特定の立体配座を有することが別途具体的に特定されない限り、不斉中心が存在し、したがって、エナンチオマー、ジアステレオマー、又は他の立体異性体配置を生じる各構造について、本明細書に開示される各構造は、光学的に純粋な異性体及びラセミ体を含むそのような可能な全ての異性体を表すことを意図している。例えば、本明細書に開示される構造は、ジアステレオマーの混合物及び単一の立体異性体を包含することが意図される。
本願の特許請求の範囲で使用する場合、「からなる」という語句は、特許請求の範囲で特定されていない任意の要素、ステップ、又は成分を除外する。本願の特許請求の範囲で使用する場合、「から本質的になる」という表現は、特定の材料又はステップ及び特許請求の範囲に記載の発明の基本的かつ新規な特徴に実質的に影響を与えないものに特許請求の範囲を限定する。
当業者は、本明細書に開示される化合物及び組成物は、化合物又は組成物が置かれる環境に応じて、プロトン化又は脱プロトン化された状態の特定の原子（例えば、Ｎ、Ｏ、又はＳ原子）を有してもよいことを容易に理解及び認識するであろう。したがって、本明細書で使用する場合、本明細書に開示される構造は、例えばＯＨ、ＳＨ、又はＮＨなどの特定の官能基がプロトン化又は脱プロトン化されていてもよいことを企図している。当業者に容易に理解されるように、本明細書の開示は、環境（ｐＨなど）に基づくプロトン化の状態に関係なく、開示される化合物及び組成物を網羅することを意図する。同様に、不安定なプロトン又は塩基性原子を有する本明細書に記載される化合物が対応する化合物の塩の形態を表すことを理解する必要もある。本明細書に記載される化合物は、遊離酸、遊離塩基、又は塩の形態であってもよい。本明細書に記載される化合物の薬学的に許容される塩は、本発明の範囲内であると理解する必要がある。
本明細書で使用する場合、「連結」又は「結合」という用語は、２つの化合物間又は分子間の接続を指す場合、２つの化合物又は分子が共有結合によって繋がれていることを意味する。別途示されない限り、本明細書で使用される「連結した」及び「結合した」という用語は、介在する原子又は原子団を伴う又は伴わない第１の化合物と第２の化合物との間の接続を指してもよい。
本明細書で使用する場合、「含む」という用語は、本明細書では「含むがそれに限定されない」という語句を意味するために使用され、これと交換可能に使用される。「又は」という用語は、本明細書では、文脈で別途明確に指示しない限り、「及び／又は」という用語を意味するために使用され、これと交換可能に使用される。
別途定義されない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、当業者によって一般に理解されるのと同じ意味を有する。本明細書に記載されるものと同様又は同等の方法及び材料を本発明の実施又は試験に使用することができるが、好適な方法及び材料を以下に記載する。本明細書で言及される全ての刊行物、特許出願、特許、及び他の参考文献は、その全体が参照により組み込まれる。矛盾がある場合には、定義を含む本明細書が優先される。さらに、材料、方法、及び実施例は、単なる例示であり、限定することを意図していない。
値が明示的に記載されている場合、記載された値とほぼ同じ数量又は量である値も本開示の範囲内であることを理解する必要がある。組み合わせが開示されている場合、その組み合わせの要素の各サブコンビネーションも具体的に開示され、本開示の範囲内にある。反対に、異なる要素又は要素群が個別に開示されている場合、それらの組み合わせも開示されている。任意の開示要素が複数の代替物を有するものとして開示されている場合、各代替物が単独で又は他の代替物との任意の組み合わせで除外された開示の例も本明細書に開示されている。２つ以上の開示要素はそのような除外を有することができ、そのような除外を有する要素の全ての組み合わせが本明細書に開示されている。
本発明の他の目的、特徴、態様、及び利点は、以下の詳細な説明、添付の図面、及び特許請求の範囲から明らかになるであろう。
本明細書においてＴｒｉ－ＳＭ６．１－αｖβ６－（ＴＡ１４）と称する、三座αｖβ６上皮細胞標的化リガンドの化学構造図。 本明細書においてαｖβ６－ｐｅｐ１と称する、ペプチドαｖβ６上皮細胞標的化リガンドの化学構造図。 図３Ａ～３Ｊでは以下の略語を使用する：ａ、ｃ、ｇ、ｉ、及びｕは、２’－Ｏ－メチル修飾ヌクレオチドである；Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、及びＵｆは、２’－フルオロ修飾ヌクレオチドである；ｏは、ホスホジエステル結合である；ｓは、ホスホロチオエート結合である；ｉｎｖＡｂは、逆位脱塩基残基である（例えば、表１１を参照のこと）；ｃＰｒｐｕは、５’－シクロプロピルホスホネート－２’－Ｏ－メチルウリジン修飾ヌクレオチドである（例えば、表１１を参照のこと）；Ｔｒｉ－ＳＭ６．１－αｖβ６－（ＴＡ１４）は、図１に示される構造を有する三座αｖβ６上皮細胞標的リガンドである；（ＴｒｉＡｌｋ１４）は、その後の標的化リガンドへのカップリングに好適である表１１に示す連結基である（本明細書の実施例１も参照のこと）。図３Ａ：センス鎖の５’末端において連結された三座αｖβ６上皮細胞標的リガンドを有する、ＡＣ０００４３７の構造を有するＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤結合体（例えば、表９、１０、及び１１を参照のこと）の修飾されたセンス鎖及びアンチセンス鎖の概略図。図３Ｂ：センス鎖の５’末端において連結された三座αｖβ６上皮細胞標的リガンドを有する、ＡＣ０００４８０の構造を有するＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤結合体（例えば、表９、１０、及び１１を参照のこと）の修飾されたセンス鎖及びアンチセンス鎖の概略図。図３Ｃ：センス鎖の５’末端において連結された三座αｖβ６上皮細胞標的リガンドを有する、ＡＣ０００４８２の構造を有するＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤結合体（例えば、表９、１０、及び１１を参照のこと）の修飾されたセンス鎖及びアンチセンス鎖の概略図。 図３Ａ～３Ｊでは以下の略語を使用する：ａ、ｃ、ｇ、ｉ、及びｕは、２’－Ｏ－メチル修飾ヌクレオチドである；Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、及びＵｆは、２’－フルオロ修飾ヌクレオチドである；ｏは、ホスホジエステル結合である；ｓは、ホスホロチオエート結合である；ｉｎｖＡｂは、逆位脱塩基残基である（例えば、表１１を参照のこと）；ｃＰｒｐｕは、５’－シクロプロピルホスホネート－２’－Ｏ－メチルウリジン修飾ヌクレオチドである（例えば、表１１を参照のこと）；Ｔｒｉ－ＳＭ６．１－αｖβ６－（ＴＡ１４）は、図１に示される構造を有する三座αｖβ６上皮細胞標的リガンドである；（ＴｒｉＡｌｋ１４）は、その後の標的化リガンドへのカップリングに好適である表１１に示す連結基である（本明細書の実施例１も参照のこと）。図３Ｄ：センス鎖の５’末端において連結された三座αｖβ６上皮細胞標的リガンドを有する、ＡＣ００１３０５の構造を有するＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤結合体（例えば、表９、１０、及び１１を参照のこと）の修飾されたセンス鎖及びアンチセンス鎖の概略図。図３Ｅ：センス鎖の５’末端において連結された三座αｖβ６上皮細胞標的リガンドを有する、ＡＣ００１３０６の構造を有するＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤コンジュゲート（例えば、表９、１０、及び１１を参照のこと）の修飾されたセンス鎖及びアンチセンス鎖の概略図。 図３Ａ～３Ｊでは以下の略語を使用する：ａ、ｃ、ｇ、ｉ、及びｕは、２’－Ｏ－メチル修飾ヌクレオチドである；Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、及びＵｆは、２’－フルオロ修飾ヌクレオチドである；ｏは、ホスホジエステル結合である；ｓは、ホスホロチオエート結合である；ｉｎｖＡｂは、逆位脱塩基残基である（例えば、表１１を参照のこと）；ｃＰｒｐｕは、５’－シクロプロピルホスホネート－２’－Ｏ－メチルウリジン修飾ヌクレオチドである（例えば、表１１を参照のこと）；Ｔｒｉ－ＳＭ６．１－αｖβ６－（ＴＡ１４）は、図１に示される構造を有する三座αｖβ６上皮細胞標的リガンドである；（ＴｒｉＡｌｋ１４）は、その後の標的化リガンドへのカップリングに好適である表１１に示す連結基である（本明細書の実施例１も参照のこと）。図３Ｆ：センス鎖の５’末端において（ＴｒｉＡｌｋ１４）リンカーを有する、ＡＤ０８０８９の構造を有するＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤二重鎖（例えば、表８及び１０を参照のこと）の修飾されたセンス鎖及びアンチセンス鎖の概略図。図３Ｇ：センス鎖の５’末端において（ＴｒｉＡｌｋ１４）リンカーを有する、ＡＤ０８１７４の構造を有する、ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤二重鎖（例えば、表８及び１０を参照のこと）の修飾されたセンス鎖及びアンチセンス鎖の概略図。図３Ｈ：センス鎖の５’末端において（ＴｒｉＡｌｋ１４）リンカーを有する、ＡＤ０８１７３の構造を有する、ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤二重鎖（例えば、表８及び１０を参照のこと）の修飾されたセンス鎖及びアンチセンス鎖の概略図。 図３Ａ～３Ｊでは以下の略語を使用する：ａ、ｃ、ｇ、ｉ、及びｕは、２’－Ｏ－メチル修飾ヌクレオチドである；Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、及びＵｆは、２’－フルオロ修飾ヌクレオチドである；ｏは、ホスホジエステル結合である；ｓは、ホスホロチオエート結合である；ｉｎｖＡｂは、逆位脱塩基残基である（例えば、表１１を参照のこと）；ｃＰｒｐｕは、５’－シクロプロピルホスホネート－２’－Ｏ－メチルウリジン修飾ヌクレオチドである（例えば、表１１を参照のこと）；Ｔｒｉ－ＳＭ６．１－αｖβ６－（ＴＡ１４）は、図１に示される構造を有する三座αｖβ６上皮細胞標的リガンドである；（ＴｒｉＡｌｋ１４）は、その後の標的化リガンドへのカップリングに好適である表１１に示す連結基である（本明細書の実施例１も参照のこと）。図３Ｉ：センス鎖の５’末端において（ＴｒｉＡｌｋ１４）リンカーを有する、ＡＤ０９２４０の構造を有する、ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤二重鎖（例えば、表８及び１０を参照のこと）の修飾されたセンス鎖及びアンチセンス鎖の概略図。図３Ｊ：センス鎖の５’末端において（ＴｒｉＡｌｋ１４）リンカーを有する、ＡＤ０９２４１の構造を有するＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤二重鎖（例えば、表８及び１０を参照のこと）の修飾されたセンス鎖及びアンチセンス鎖の概略図。
（発明の詳細な説明）
ＲＮＡｉ剤
ＭＵＣ５ＡＣ遺伝子の発現を阻害するためのＲＮＡｉ剤（本明細書ではＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤又はＭＵＣ５Ａ ＣＲＮＡｉトリガーと称する）が本明細書に記載される。本明細書に開示される各ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤は、センス鎖及びアンチセンス鎖を含む。センス鎖は、１５～４９ヌクレオチド長であり得る。アンチセンス鎖は、１８～４９ヌクレオチド長であり得る。センス鎖及びアンチセンス鎖は、同じ長さであってもよいし、又は異なる長さであってもよい。いくつかの実施形態では、センス鎖及びアンチセンス鎖は、それぞれ独立して、１８～２７ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態では、センス鎖及びアンチセンス鎖は両方とも、各々、２１～２６ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態では、センス鎖及びアンチセンス鎖は、各々、２１～２４ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態では、センス鎖及びアンチセンス鎖は、各々独立して、１９～２１ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態では、センス鎖は、約１９ヌクレオチド長であり、アンチセンス鎖は、約２１ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態では、センス鎖は、約２１ヌクレオチド長であり、アンチセンス鎖は、約２３ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態では、センス鎖は、２３ヌクレオチド長であり、アンチセンス鎖は、２１ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態では、センス鎖及びアンチセンス鎖は両方とも、各々、２１ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態では、ＲＮＡｉ剤アンチセンス鎖は、各々独立して、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、又は３０ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態では、ＲＮＡｉ剤センス鎖は、各々独立して、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、又は４９ヌクレオチド長である。センス鎖及びアンチセンス鎖はアニーリングされて二重鎖を形成し、いくつかの実施形態では、二本鎖ＲＮＡｉ剤は、約１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、又は２４ヌクレオチドの二重鎖長を有する。
ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤の形成に使用されるヌクレオチド配列の例は、表２、表３、表４、表５、表６、表７、及び表１１に提供される。ＲＮＡｉ剤二重鎖の例は、表２、表３、表４、表５、表６、及び表７のセンス鎖及びアンチセンス鎖の配列を含み、表８Ａ、表８Ｂ、表８Ｃ、表９、表１０Ａ、表１０Ｂ、及び表１１に示されている。
いくつかの実施形態では、センス鎖とアンチセンス鎖との間の完全な、実質的な、又は部分的な相補性の領域は、１５～２６（例えば、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、又は２６）ヌクレオチド長であり、アンチセンス鎖の５’末端又はその近くに存在する（例えば、この領域は、完全に、実質的に、又は部分的に相補的ではないアンチセンス鎖の５’末端から０、１、２、３、又は４ヌクレオチド離れていてもよい）。
本明細書に記載されるＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤のセンス鎖は、ＭＵＣ５ＡＣ ｍＲＮＡ中の同数のヌクレオチドのコアストレッチ配列（本明細書では「コアストレッチ」又は「コア配列」とも称される）に対して少なくとも８５％の同一性を有する少なくとも１５個の連続するヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、センス鎖コアストレッチ配列は、アンチセンス鎖コアストレッチ配列に対して１００％（完全に）相補的又は少なくとも約８５％（実質的に）相補的であり、したがって、センス鎖コアストレッチ配列は、典型的には、ＭＵＣ５ＡＣ ｍＲＮＡ標的に存在する同じ長さのヌクレオチド配列（例えば、標的配列と称されることもある）と完全に同一であるか、又は少なくとも約８５％同一である。いくつかの実施形態では、このセンス鎖コアストレッチは、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、又は２４ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態では、このセンス鎖コアストレッチは、１７ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態では、このセンス鎖コアストレッチは、１９ヌクレオチド長である。
本明細書に記載されるＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、ＭＵＣ５ＡＣ ｍＲＮＡ中の同数のヌクレオチドのコアストレッチに対して及び対応するセンス鎖中の同数のヌクレオチドのコアストレッチに対して少なくとも８５％の相補性を有する少なくとも１８個の連続するヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖コアストレッチは、ＭＵＣ５ＡＣ ｍＲＮＡ標的に存在する同じ長さのヌクレオチド配列（例えば、標的配列）に対して１００％（完全に）相補的であるか、又は少なくとも約８５％（実質的に）相補的である。いくつかの実施形態では、このアンチセンス鎖コアストレッチは、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、又は２４ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態では、このアンチセンス鎖コアストレッチは、１９ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態では、このアンチセンス鎖コアストレッチは、１７ヌクレオチド長である。いくつかの実施形態では、このアンチセンス鎖コアストレッチは、２１ヌクレオチド長である。センス鎖コアストレッチ配列は、対応するアンチセンスコアストレッチ配列と同じ長さであり得、又は異なる長さであり得る。
ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤のセンス鎖とアンチセンス鎖はアニールして、二重鎖を形成する。ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤のセンス鎖及びアンチセンス鎖は、互いに部分的に、実質的に、又は完全に相補的であり得る。相補的二重鎖領域内では、センス鎖コアストレッチ配列は、アンチセンス鎖コアストレッチ配列に対して少なくとも８５％相補的又は１００％相補的である。いくつかの実施形態では、センス鎖コアストレッチ配列は、アンチセンス鎖コアストレッチ配列の対応する１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、又は２４ヌクレオチドの配列に対して少なくとも８５％又は１００％相補的である、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、少なくとも２２、又は少なくとも２３ヌクレオチドを含む（すなわち、ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤のセンス及びアンチセンスコアストレッチ配列は、少なくとも８５％塩基対形成するか又は１００％塩基対形成する、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０、少なくとも２１、少なくとも２２、少なくとも２３、又は少なくとも２４ヌクレオチドの領域を有する）。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、表２、表３、又は表１１のアンチセンス鎖配列のいずれかと０、１、２、又は３ヌクレオチド異なる。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤のセンス鎖は、表２、表４、表５、表６、表７、又は表１１のセンス鎖配列のいずれかと０、１、２、又は３ヌクレオチド異なる。
いくつかの実施形態では、センス鎖及び／又はアンチセンス鎖は、任意選択で、かつ、独立して、コアストレッチ配列の３’末端、５’末端、又はその両方において追加の１、２、３、４、５、又は６ヌクレオチド（伸長）を含むことができる。アンチセンス鎖の追加のヌクレオチドは、存在する場合、ＭＵＣ５ＡＣ ｍＲＮＡ中の対応する配列と相補的であってもよいし、又は相補的でなくてもよい。センス鎖の追加のヌクレオチドは、存在する場合、ＭＵＣ５ＡＣ ｍＲＮＡ中の対応する配列と同一であってもよいし、又は同一でなくてもよい。アンチセンス鎖の追加のヌクレオチドは、存在する場合、対応するセンス鎖の追加のヌクレオチド（存在する場合）に対して相補的であってもよいし、又は相補的でなくてもよい。
本明細書で使用する場合、伸長は、センス鎖コアストレッチ配列及び／又はアンチセンス鎖コアストレッチ配列の５’及び／又は３’末端において１、２、３、４、５、又は６ヌクレオチドを含む。センス鎖上の伸長ヌクレオチドは、対応するアンチセンス鎖中のコアストレッチ配列ヌクレオチド又は伸長ヌクレオチドのいずれかのヌクレオチドに相補的であってもよいし、又は相補的でなくてもよい。反対に、アンチセンス鎖上の伸長ヌクレオチドは、対応するセンス鎖中のコアストレッチヌクレオチド又は伸長ヌクレオチドのいずれかのヌクレオチドに相補的であってもよいし、又は相補的でなくてもよい。いくつかの実施形態では、ＲＮＡｉ剤のセンス鎖及びアンチセンス鎖の両方は、３’伸長及び５’伸長を含む。いくつかの実施形態では、一方の鎖の１つ以上の３’伸長ヌクレオチドは、他方の鎖の１つ以上の５’伸長ヌクレオチドと塩基対を形成する。他の実施形態では、一方の鎖の１つ以上の３’伸長ヌクレオチドは、他方の鎖の１つ以上の５’伸長ヌクレオチドと塩基対形成しない。いくつかの実施形態では、ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤は、３’伸長を有するアンチセンス鎖及び５’伸長を有するセンス鎖を有する。いくつかの実施形態では、伸長ヌクレオチドは、対形成しておらず、オーバーハングを形成している。本明細書で使用する場合、「オーバーハング」は、本明細書に開示されるＲＮＡｉ剤のハイブリダイズ部分又は二本鎖部分の一部を形成しない、センス鎖又はアンチセンス鎖のいずれかの末端に位置する１つ以上の対形成していないヌクレオチドの伸長又はストレッチを指す。
いくつかの実施形態では、ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤は、１、２、３、４、５、又は６ヌクレオチド長の３’伸長を有するアンチセンス鎖を含む。他の実施形態では、ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤は、１、２、又は３ヌクレオチド長の３’伸長を有するアンチセンス鎖を含む。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖伸長ヌクレオチドの１つ以上は、対応するＭＵＣ５ＡＣ ｍＲＮＡ配列に相補的なヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖伸長ヌクレオチドの１つ以上は、対応するＭＵＣ５ＡＣ ｍＲＮＡ配列に相補的ではないヌクレオチドを含む。
いくつかの実施形態では、ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤は、１、２、３、４、又は５ヌクレオチド長の３’伸長を有するセンス鎖を含む。いくつかの実施形態では、センス鎖伸長ヌクレオチドの１つ以上は、アデノシン、ウラシル、若しくはチミジンヌクレオチド、ＡＴジヌクレオチド、又はＭＵＣ５ＡＣ ｍＲＮＡ配列中のヌクレオチドに対応するか若しくは同一であるヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、３’センス鎖伸長は、以下の配列：Ｔ、ＵＴ、ＴＴ、ＵＵ、ＵＵＴ、ＴＴＴ、又はＴＴＴＴ（各々、５’から３’に列挙される）のうちの１つを含むか、又はそれからなるが、これらに限定されない。
センス鎖は、３’伸長及び／又は５’伸長を有することができる。いくつかの実施形態では、ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤は、１、２、３、４、５、又は６ヌクレオチド長の５’伸長を有するセンス鎖を含む。いくつかの実施形態では、センス鎖伸長ヌクレオチドの１つ以上は、ＭＵＣ５ＡＣ ｍＲＮＡ配列中のヌクレオチドに対応するか又は同一であるヌクレオチドを含む。
ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤の形成に使用される配列の例は、表２、表３、表４、表５、表６、表７、及び表１１に提供される。いくつかの実施形態では、ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、表２、表３、又は表１１の配列のいずれかの配列を含む。特定の実施形態では、ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、表３の修飾配列のいずれか１つを含むか、又はそれらからなる。いくつかの実施形態では、ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、表２、表３、又は表１１の配列のいずれかの１～１７、２～１７、１～１８、２～１８、１～１９、２～１９、１～２０、２～２０、１～２１、又は２～２１のヌクレオチド配列（５’末端→３’末端）を含む。いくつかの実施形態では、ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤のセンス鎖は、表２、表４、表５、表６、又は表７の配列のいずれかの配列を含む。いくつかの実施形態では、ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤のセンス鎖は、表２、表４、表５、表６、又は表７の配列のいずれかの配列の１～１８、１～１９、１～２０、１～２１、２～１９、２～２０、２～２１、３～２０、３～２１、又は４～２１のヌクレオチド配列（５’末端→３’末端）を含む。特定の実施形態では、ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤のセンス鎖は、表４、表５、表６、表７、又は表１１の修飾配列のいずれか１つの修飾配列を含むか、又はそれからなる。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＲＮＡｉ剤のセンス鎖及びアンチセンス鎖は、同じ数のヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＲＮＡｉ剤のセンス鎖及びアンチセンス鎖は、異なる数のヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、ＲＮＡｉ剤のセンス鎖５’末端及びアンチセンス鎖３’末端は、平滑末端を形成する。いくつかの実施形態では、ＲＮＡｉ剤のセンス鎖３’末端及びアンチセンス鎖５’末端は、平滑末端を形成する。いくつかの実施形態では、ＲＮＡｉ剤の両末端は、平滑末端を形成する。いくつかの実施形態では、ＲＮＡｉ剤のどちらの末端も平滑末端ではない。本明細書で使用する場合、「平滑末端」とは、アニーリングされた２つの鎖の末端ヌクレオチドが相補的である（相補的塩基対を形成する）二本鎖ＲＮＡｉ剤の末端を指す。
いくつかの実施形態では、ＲＮＡｉ剤のセンス鎖５’末端及びアンチセンス鎖３’末端は、フレイド（frayed）末端を形成する。いくつかの実施形態では、ＲＮＡｉ剤のセンス鎖３’末端及びアンチセンス鎖５’末端は、フレイド末端を形成する。いくつかの実施形態では、ＲＮＡｉ剤の両端は、フレイド末端を形成する。いくつかの実施形態では、ＲＮＡｉ剤のいずれの末端もフレイド末端ではない。本明細書で使用する場合、フレイド末端は、アニーリングされた２つの鎖の末端ヌクレオチドが対形成しているが（すなわち、オーバーハングを形成していないが）相補的ではない（すなわち、非相補的な対を形成している）、二本鎖ＲＮＡｉ剤の末端を指す。いくつかの実施形態では、二本鎖ＲＮＡｉ剤の一方の鎖の末端における１つ以上の対形成していないヌクレオチドがオーバーハングを形成している。対形成していないヌクレオチドは、センス鎖上又はアンチセンス鎖上にあり、３’又は５’オーバーハングを形成してもよい。いくつかの実施形態では、ＲＮＡｉ剤は、平滑末端及びフレイド末端、平滑末端及び５’オーバーハング末端、平滑末端及び３’オーバーハング末端、フレイド末端及び５’オーバーハング末端、フレイド末端及び３’オーバーハング末端、２つの５’オーバーハング末端、２つの３’オーバーハング末端、５’オーバーハング末端及び３’オーバーハング末端、２つのフレイド末端、又は２つの平滑末端を含む。典型的には、オーバーハングは、存在する場合、センス鎖、アンチセンス鎖、又はセンス鎖及びアンチセンス鎖の両方の３’末端に位置する。
本明細書に開示されるＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤はまた、１つ以上の修飾ヌクレオチドから構成されてもよい。いくつかの実施形態では、ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤のセンス鎖の実質的に全てのヌクレオチド及びアンチセンス鎖の実質的に全てのヌクレオチドは、修飾ヌクレオチドである。本明細書に開示されるＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤は、１つ以上の修飾ヌクレオシド間結合、例えば、１つ以上のホスホロチオエート結合又はホスホロジチオエート結合をさらに含んでもよい。いくつかの実施形態では、ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤は、１つ以上の修飾ヌクレオチド及び１つ以上の修飾ヌクレオシド間結合を含む。いくつかの実施形態では、２’修飾ヌクレオチドは、修飾ヌクレオシド間結合を用いて組み合わされている。
いくつかの実施形態では、ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤は、塩、混合塩、又は遊離酸として調製又は提供される。いくつかの実施形態では、ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤は、薬学的に許容される塩として調製される。いくつかの実施形態では、ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤は、薬学的に許容されるナトリウム塩として調製される。当該技術分野で周知であるそのような形態は、本明細書に開示される発明の範囲内にある。
修飾ヌクレオチド
修飾ヌクレオチドは、様々なオリゴヌクレオチド構築物において使用した場合、細胞において化合物の活性を維持することができると同時に、これらの化合物の血清安定性を増加させることができ、オリゴヌクレオチド構築物を投与した際、ヒトにおけるインターフェロン活性の活性化の可能性を最小限に抑えることもできる。
いくつかの実施形態では、ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤は、１つ以上の修飾ヌクレオチドを含む。本明細書で使用する場合、「修飾ヌクレオチド」は、リボヌクレオチド（２’－ヒドロキシルヌクレオチド）以外のヌクレオチドである。いくつかの実施形態では、少なくとも５０％（例えば、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％）、又は１００％）のヌクレオチドが、修飾ヌクレオチドである。本明細書で使用する場合、修飾ヌクレオチドには、デオキシリボヌクレオチド、ヌクレオチド模倣物、脱塩基ヌクレオチド、２’修飾ヌクレオチド、逆位ヌクレオチド、修飾核酸塩基含有ヌクレオチド、架橋ヌクレオチド、ペプチド核酸（ＰＮＡ）、２’，３’－セコヌクレオチド模倣物（非ロックド核酸塩基類似体）、ロックドヌクレオチド、３’－Ｏ－メトキシ（２’ヌクレオシド間結合）ヌクレオチド、２’－Ｆ－アラビノヌクレオチド、５’－Ｍｅ、２’－フルオロヌクレオチド、モルホリノヌクレオチド、ビニルホスホネートデオキシリボヌクレオチド、ビニルホスホネート含有ヌクレオチド、及びシクロプロピルホスホネート含有ヌクレオチドが含まれ得るが、これらに限定されない。２’－修飾ヌクレオチド（すなわち、５員環の糖の２’位におけるヒドロキシル基以外の基を有するヌクレオチド）には、２’－Ｏ－メチルヌクレオチド（２’－メトキシヌクレオチドとも称される）、２’－フルオロヌクレオチド（本明細書では２’－デオキシ－２’－フルオロヌクレオチドとも称される）、２’－デオキシヌクレオチド、２’－メトキシエチル（２’－Ｏ－２－メトキシルエチル）ヌクレオチド（２’－ＭＯＥとも称される）、２’－アミノヌクレオチド、及び２’－アルキルヌクレオチドが含まれるが、これらに限定されない。所与の化合物中の全ての位置を均一に修飾する必要はない。反対に、２つ以上の修飾を単一のＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤に組み込むことができ、又はその単一のヌクレオチドにも組み込むことができる。ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤のセンス鎖及びアンチセンス鎖は、当該技術分野で既知の方法によって合成及び／又は修飾することができる。あるヌクレオチドでの修飾は、別のヌクレオチドでの修飾とは独立している。
修飾核酸塩基には、合成及び天然核酸塩基、例えば、５－置換ピリミジン、６－アザピリミジン、Ｎ－２、Ｎ－６、及びＯ－６置換プリン（例えば、２－アミノプロピルアデニン、５－プロピニルウラシル、又は５－プロピニルシトシン）、５－メチルシトシン（５－ｍｅ－Ｃ）、５－ヒドロキシメチルシトシン、イノシン、キサンチン、ヒポキサンチン、２－アミノアデニン、アデニン及びグアニンの６－アルキル（例えば、６－メチル、６－エチル、６－イソプロピル、又は６－ｎ－ブチル）誘導体、アデニン及びグアニンの２－アルキル（例えば、２－メチル、２－エチル、２－イソプロピル、又は２－ｎ－ブチル）誘導体及び他のアルキル誘導体、２－チオウラシル、２－チオチミン、２－チオシトシン、５－ハロウラシル、シトシン、５－プロピニルウラシル、５－プロピニルシトシン、６－アゾウラシル、６－アゾシトシン、６－アゾチミン、５－ウラシル（擬ウラシル）、４－チオウラシル、８－ハロ、８－アミノ、８－スルフヒドリル、８－チオアルキル、８－ヒドロキシル、及び他の８－置換アデニン及びグアニン、５－ハロ（例えば、５－ブロモ）、５－トリフルオロメチル、及び他の５－置換ウラシル及びシトシン、７－メチルグアニン及び７－メチルアデニン、８－アザグアニン及び８－アザアデニン、７－デアザグアニン、７－デアザアデニン、３－デアザグアニン、並びに３－デアザアデニンが含まれる。
いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖の５’及び／又は３’末端は、「脱塩基部位」又は「脱塩基ヌクレオチド」とも称され得る、脱塩基残基（Ａｂ）を含むことができる。脱塩基残基（Ａｂ）は、糖部分の１位における核酸塩基を欠くヌクレオチド又はヌクレオシドである（例えば、米国特許第５，９９８，２０３号を参照のこと）。いくつかの実施形態では、脱塩基残基は、ヌクレオチド配列において内部に位置することができる。いくつかの実施形態では、Ａｂ又はＡｂＡｂがアンチセンス鎖の３’末端に付加され得る。いくつかの実施形態では、センス鎖の５’末端は、１つ以上の追加の脱塩基残基（例えば、（Ａｂ）又は（ＡｂＡｂ））を含むことができる。いくつかの実施形態では、ＵＵＡｂ、ＵＡｂ、又はＡｂがセンス鎖の３’末端に付加される。いくつかの実施形態では、脱塩基（デオキシリボース）残基は、リビトール（脱塩基リボース）残基で置き換えられ得る。
いくつかの実施形態では、ＲＮＡｉ剤のヌクレオチドの全て又は実質的に全てが修飾ヌクレオチドである。本明細書で使用する場合、存在するヌクレオチドの実質的に全てが修飾ヌクレオチドであるＲＮＡｉ剤は、リボヌクレオチド（すなわち非修飾）であるセンス鎖及びアンチセンス鎖の両方において４個以下（すなわち、０、１、２、３、又は４個）のヌクレオチドを有するＲＮＡｉ剤である。本明細書で使用する場合、存在するヌクレオチドの実質的に全てが修飾ヌクレオチドであるセンス鎖は、非修飾リボヌクレオチドであるセンス鎖中に２個以下（すなわち、０、１、又は２個）のヌクレオチドを有するセンス鎖である。本明細書で使用する場合、存在するヌクレオチドの実質的に全てが修飾ヌクレオチドであるアンチセンスセンス鎖は、非修飾リボヌクレオチドであるアンチセンス鎖中に２個以下（すなわち、０、１、又は２個）のヌクレオチドを有するアンチセンス鎖である。いくつかの実施形態では、ＲＮＡｉ剤の１つ以上のヌクレオチドは、非修飾リボヌクレオチドである。特定の修飾ヌクレオチドの化学構造が本明細書の表１２に示される。
修飾ヌクレオシド間結合
いくつかの実施形態では、ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤の１つ以上のヌクレオチドは、非標準的な連結又は骨格（すなわち、修飾ヌクレオシド間結合又は修飾骨格）によって連結される。修飾ヌクレオシド間結合又は修飾骨格には、ホスホロチオエート基（本明細書では小文字の「ｓ」で表される）、キラルホスホロチオエート、チオホスフェート、ホスホロジチオエート、ホスホトリエステル、アミノアルキルホスホトリエステル、アルキルホスホネート（例えば、メチルホスホネート又は３’－アルキレンホスホネート）、キラルホスホネート、ホスフィネート、ホスホルアミデート（例えば、３’－アミノホスホルアミデート、アミノアルキルホスホルアミデート、又はチオノホスホルアミデート）、チオノアルキルホスホネート、チオノアルキルホスホトリエステル、モルホリノ結合、通常の３’－５’連結を有するボラノホスフェート、ボラノホスフェートの２’－５’連結類似体、又はヌクレオシド単位の隣接する対が３’－５’から５’－３’若しくは２’－５’から５’－２’へと連結されている反転極性を有するボラノホスフェートが含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、修飾ヌクレオシド間結合又は修飾骨格は、リン原子を欠いている。リン原子を欠く修飾ヌクレオシド間結合には、短鎖アルキル若しくはシクロアルキル糖間結合、混合ヘテロ原子及びアルキル若しくはシクロアルキル糖間結合、又は１つ以上の短鎖ヘテロ原子若しくは複素環式糖間結合が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、修飾ヌクレオシド間骨格には、シロキサン骨格、スルフィド骨格、スルホキシド骨格、スルホン骨格、ホルムアセチル及びチオホルムアセチル骨格、メチレンホルムアセチル及びチオホルムアセチル骨格、アルケン含有骨格、スルファメート骨格、メチレンイミノ及びメチレンヒドラジノ骨格、スルホネート及びスルホンアミド骨格、アミド骨格、並びに混合Ｎ、Ｏ、Ｓ、及びＣＨ２要素を有する他の骨格が含まれるが、これらに限定されない。
いくつかの実施形態では、ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤のセンス鎖は、１、２、３、４、５、若しくは６つのホスホロチオエート結合を含むことができ、ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、１、２、３、４、５、若しくは６つのホスホロチオエート結合を含むことができ、又はセンス鎖及びアンチセンス鎖の両方が、独立して、１、２、３、４、５、又は６つのホスホロチオエート結合を含むことができる。いくつかの実施形態では、ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤のセンス鎖は、１、２、３、又は４つのホスホロチオエート結合を含むことができ、ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、１、２、３、又は４つのホスホロチオエート結合を含むことができ、又はセンス鎖及びアンチセンス鎖の両方が、独立して、１、２、３、又は４つのホスホロチオエート結合を含むことができる。
いくつかの実施形態では、ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤のセンス鎖は、少なくとも２つのホスホロチオエートヌクレオシド間結合を含む。いくつかの実施形態では、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合は、センス鎖の３’末端から１～３位のヌクレオチド間にある。いくつかの実施形態では、１つのホスホロチオエートヌクレオシド間結合がセンス鎖ヌクレオチド配列の５’末端にあり、別のホスホロチオエート結合がセンス鎖ヌクレオチド配列の３’末端にある。いくつかの実施形態では、２つのホスホロチオエートヌクレオシド間結合がセンス鎖の５’末端に位置し、別のホスホロチオエート結合がセンス鎖の３’末端にある。いくつかの実施形態では、センス鎖は、ヌクレオチド間にホスホロチオエートヌクレオシド間結合を含まないが、５’末端及び３’末端の両方の末端ヌクレオチドと任意選択で存在する逆位脱塩基残基末端キャップとの間に１、２、又は３つのホスホロチオエート結合を含む。いくつかの実施形態では、標的化リガンドは、ホスホロチオエート結合を介してセンス鎖に結合される。
いくつかの実施形態では、ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、４つのホスホロチオエートヌクレオシド間結合を含む。いくつかの実施形態では、４つのホスホロチオエートヌクレオシド間結合は、アンチセンス鎖の５’末端から１～３位のヌクレオチド間及び５’末端から１９～２１、２０～２２、２１～２３、２２～２４、２３～２５、又は２４～２６位のヌクレオチド間にある。いくつかの実施形態では、３つのホスホロチオエートヌクレオシド間結合は、アンチセンス鎖の５’末端から１～４位の間に位置し、４番目のホスホロチオエートヌクレオシド間結合は、アンチセンス鎖の５’末端から２０～２１位の間に位置する。いくつかの実施形態では、ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤は、アンチセンス鎖中に少なくとも３つ又は４つのホスホロチオエートヌクレオシド間結合を含む。
キャッピング残基又は部分
いくつかの実施形態では、センス鎖は、１つ以上のキャッピング残基又は部分（当該技術分野では「キャップ」、「末端キャップ」、又は「キャッピング残基」とも称される場合がある）を含んでもよい。本明細書で使用する場合、「キャッピング残基」は、本明細書に開示されるＲＮＡｉ剤のヌクレオチド配列の１つ以上の末端に組み込むことができる非ヌクレオチド化合物又は他の部分である。キャッピング残基は、いくつかの場合では、例えばエキソヌクレアーゼ分解に対する保護などの特定の有益な特性をＲＮＡｉ剤に提供することができる。いくつかの実施形態では、逆位脱塩基残基（ｉｎｖＡｂ）（当該技術分野では「逆位脱塩基部位」とも称される）がキャッピング残基として付加される（表１２を参照のこと）（例えば、Ｆ．Ｃｚａｕｄｅｒｎａ，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，２００３，３１（１１），２７０５－１６を参照のこと）。キャッピング残基は当該技術分野では一般的に既知であり、これには、例えば、逆位脱塩基残基、並びに末端Ｃ３Ｈ７（プロピル）、Ｃ６Ｈ１３（ヘキシル）、又はＣ１２Ｈ２５（ドデシル）基などの炭素鎖が含まれる。いくつかの実施形態では、キャッピング残基は、センス鎖の５’末端、３’末端、又は５’末端及び３’末端の両方に存在する。いくつかの実施形態では、センス鎖の５’末端及び／又は３’末端は、キャッピング残基として２つ以上の逆位脱塩基デオキシリボース部分を含んでもよい。
いくつかの実施形態では、１つ以上の逆位脱塩基残基（ｉｎｖＡｂ）がセンス鎖の３’末端に付加される。いくつかの実施形態では、１つ以上の逆位脱塩基残基（ｉｎｖＡｂ）がセンス鎖の５’末端に付加される。いくつかの実施形態では、１つ以上の逆位脱塩基残基又は逆位脱塩基部位が、標的化リガンドとＲＮＡｉ剤のセンス鎖のヌクレオチド配列との間に挿入される。いくつかの実施形態では、ＲＮＡｉ剤のセンス鎖の末端又は末端付近に１つ以上の逆位脱塩基残基又は逆位脱塩基部位を含めることにより、ＲＮＡｉ剤の活性又は他の所望の特性の増強が可能になる。
いくつかの実施形態では、１つ以上の逆位脱塩基残基（ｉｎｖＡｂ）がセンス鎖の５’末端に付加される。いくつかの実施形態では、１つ以上の逆位脱塩基残基が標的化リガンドとＲＮＡｉ剤のセンス鎖のヌクレオチド配列との間に挿入され得る。逆位脱塩基残基は、リン酸、ホスホロチオエート（例えば、本明細書では（ｉｎｖＡｂ）として示される））、又は他のヌクレオシド間結合を介して結合されてもよい。いくつかの実施形態では、ＲＮＡｉ剤のセンス鎖の末端又は末端付近に１つ以上の逆位脱塩基残基を含めることにより、ＲＮＡｉ剤の活性又は他の所望の特性の増強が可能になり得る。いくつかの実施形態では、逆位脱塩基（デオキシリボース）残基は、逆位リビトール（脱塩基リボース）残基で置き換えられ得る。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖コアストレッチ配列の３’末端又はアンチセンス鎖配列の３’末端は、逆位脱塩基残基を含んでもよい。逆位脱塩基デオキシリボース残基の化学構造は、以下の表１２に示される。
ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤
本明細書に開示されるＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤は、ＭＵＣ５ＡＣ遺伝子（例えば、配列番号１（ＮＭ＿００１３０４３５９．２））の特定の位置を標的化するように設計される。本明細書で定義されるように、アンチセンス鎖配列は、アンチセンス鎖の５’末端核酸塩基が遺伝子との塩基対形成時に遺伝子上の位置から（３’末端に向かって）１９ヌクレオチド下流の位置にアラインされたときに、遺伝子上の所与の位置のＭＵＣ５ＡＣ遺伝子を標的化するように設計される。例えば、本明細書の表１及び２に例示されるように、３５３５位のＭＵＣ５ＡＣ遺伝子を標的化するように設計されたアンチセンス鎖配列は、遺伝子との塩基対形成時にアンチセンス鎖の５’末端核酸塩基がＭＵＣ５ＡＣ遺伝子の３５５３位とアラインすることを必要とする。
本明細書で提供されるように、ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤は、少なくとも１６個の連続するヌクレオチドのコアストレッチ配列にわたってアンチセンス鎖と遺伝子との少なくとも８５％の相補性（例えば、少なくとも８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、又は１００％の相補性）があることを条件として、アンチセンス鎖の１位（５’→３’）の核酸塩基が遺伝子と相補的であることを必要としない。例えば、ＭＵＣ５ＡＣ遺伝子の３５３５位を標的化するように設計された本明細書に開示されるＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤の場合では、ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖の５’末端核酸塩基は遺伝子の３５５３位とアラインする必要があるが、少なくとも１６個の連続するヌクレオチドのコアストレッチ配列にわたってアンチセンス鎖と遺伝子との少なくとも８５％の相補性（例えば、少なくとも８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、又は１００％相補性）があることを条件として、アンチセンス鎖の５’末端核酸塩基はＭＵＣ５ＡＣ遺伝子の３５５３位と相補的である必要はない。特に、本明細書に開示される様々な例によって示されるように、ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖による遺伝子の結合特異的部位（例えば、ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤が３５３５位、４９９３位、１５０５１位、又は他の位置のＭＵＣ５ＡＣ遺伝子を標的化するように設計されているかどうか）は、ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤によって達成される阻害レベルにとって重要な要素である（Ｋａｍｏｌａ ｅｔ ａｌ．，Ｔｈｅ ｓｉＲＮＡ Ｎｏｎ－ｓｅｅｄ Ｒｅｇｉｏｎ ａｎｄ Ｉｔｓ Ｔａｒｇｅｔ Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ａｒｅ Ａｕｘｉｌｉａｒｙ Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｎｔｓ ｏｆ Ｏｆｆ－Ｔａｒｇｅｔ Ｅｆｆｅｃｔｓ，ＰＬＯＳ Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ，１１（１２），Ｆｉｇｕｒｅ １（２０１５）も参照のこと）。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤は、表１に示されるＭＵＣ５ＡＣ配列の位置又はその近くのＭＵＣ５ＡＣ遺伝子を標的化する。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、表１に開示される標的ＭＵＣ５ＡＣ １９ｍｅｒ配列に完全に、実質的に、又は少なくとも部分的に相補的なコアストレッチ配列を含む。
ホモ・サピエンス・ムチン５ＡＣ、オリゴマー粘液／ゲル形成（ＭＵＣ５ＡＣ）遺伝子転写物、ＧｅｎＢａｎｋＮＭ＿００１３０４３５９．２（配列番号１）（１７，４４８塩基）：
1 ctcagaggct gctgagggac agggcactct tccccgccgt ccacacaatg agtgttggcc
61 ggaggaagct ggccctgctc tgggccctgg ctctcgctct ggcctgcacc cggcatacag
121 gccatgccca ggatggctcc tccgaatcca gctacaagca ccaccctgcc ctctctccta
181 tcgcccgggg gcccagcggg gtcccgctcc gtggggcgac tgtcttccca tctctgagga
241 ccatccctgt ggtacgagcc tccaacccgg cgcacaacgg gcgggtgtgc agcacctggg
301 gcagcttcca ctacaagacc ttcgacggcg acgtcttccg cttccccggc ctctgcaact
361 acgtgttctc cgagcactgc ggtgccgcct acgaggattt taacatccag ctacgccgca
421 gccaggagtc agcggccccc acgctgagca gggtcctcat gaaggtggat ggcgtggtca
481 tccagctgac caagggctcc gtcctggtca acggccaccc ggtcctgctg cccttcagcc
541 agtctggggt cctcattcag cagagcagca gctacaccaa ggtggaggcc aggctgggcc
601 ttgtcctcat gtggaaccac gatgacagcc tgctgctgga gctggacacc aaatacgcca
661 acaagacctg tgggctctgt ggggacttca acgggatgcc cgtggtcagc gagctcctct
721 cccacaacac caagctgaca cccatggaat tcgggaacct gcagaagatg gacgacccca
781 cggaccagtg tcaggaccct gtccctgaac ccccgaggaa ctgctccact ggctttggca
841 tctgtgagga gctcctgcac ggccagctgt tctctggctg cgtggccctg gtggacgtcg
901 gcagctacct ggaggcttgc aggcaagacc tctgcttctg tgaagacacc gacctgctca
961 gctgcgtctg ccacaccctt gccgagtact cccggcagtg cacccatgca ggggggttgc
1021 cccaggactg gcggggccct gacttctgcc cccagaagtg ccccaacaac atgcagtacc
1081 acgagtgccg ctccccctgc gcagacacct gctccaacca ggagcactcc cgggcctgtg
1141 aggaccactg tgtggccggc tgcttctgcc ctgaggggac ggtgcttgac gacatcggcc
1201 agaccggctg tgtccctgtg tcaaagtgtg cctgcgtcta caacggggct gcctatgccc
1261 caggggccac ctactccaca gactgcacca actgcacctg ctccggaggc cggtggagct
1321 gccaggaggt tccatgcccg ggtacctgct ctgtgcttgg aggtgcccac ttctcaacgt
1381 ttgacgggaa gcaatacacg gtgcacggcg actgcagcta tgtgctgacc aagccctgtg
1441 acagcagtgc cttcactgta ctggctgagc tgcgcaggtg cgggctgacg gacagcgaga
1501 cctgcctgaa gagcgtgaca ctgagcctgg atggggcgca gacggtggtg gtgatcaagg
1561 ccagtgggga agtgttcctg aaccagatct acacccagct gcccatctct gcagccaacg
1621 tcaccatctt cagaccctca accttcttca tcatcgccca gaccagcctg ggcctgcagc
1681 tgaacctgca gctggtgccc accatgcagc tgttcatgca gctggcgccc aagctccgtg
1741 ggcagacctg cggtctctgt gggaacttca acagcatcca ggccgatgac ttccggaccc
1801 tcagtggggt ggtggaggcc accgctgcgg ccttcttcaa caccttcaag acccaggccg
1861 cctgccccaa catcaggaac agcttcgagg acccctgctc tctgagcgtg gagaatgaga
1921 agtatgctca gcactggtgc tcgcagctga ccgatgccga cggccccttc ggccggtgcc
1981 atgctgccgt gaagccggga acctactact cgaactgcat gtttgacacc tgcaactgtg
2041 agcggagcga ggactgcctg tgcgccgcgc tgtcctccta cgtgcacgcc tgtgccgcca
2101 agggcgtgca gctcggcggc tggagggacg gcgtctgcac gaagcctatg accacttgcc
2161 ccaagtcaat gacgtaccac taccatgtca gcacctgcca gcccacctgc cgctccctga
2221 gcgaggggga catcacctgc agtgttggct tcatccccgt ggatggctgc atctgtccca
2281 agggcacctt cctggacgac acgggcaagt gtgtgcaggc cagcaactgt ccctgctacc
2341 acagaggctc catgatcccc aatggggagt cggtgcacga cagcggggct atctgcacct
2401 gcacacatgg gaagctgagc tgcatcggag gccaagcccc cgccccagtg tgtgctgcgc
2461 ccatggtgtt ctttgactgc cgaaatgcca cgcccgggga cacaggggct ggctgtcaga
2521 agagctgcca cacactggac atgacctgtt acagccccca gtgtgtgcct ggctgcgtgt
2581 gccccgacgg gctggtggcg gacggcgagg gcggctgcat cactgcggag gactgcccct
2641 gcgtgcacaa tgaggccagc taccgggccg gccagaccat ccgggtgggc tgcaacacct
2701 gcacctgtga cagcaggatg tggcggtgca cagatgaccc ctgcctggcc acctgcgccg
2761 tgtacgggga cggccactac ctcaccttcg acggacagag ctacagcttc aacggagact
2821 gcgagtacac gctggtgcag aaccactgtg gcgggaaaga cagcacccag gactcctttc
2881 gtgttgtcac cgagaacgtc ccctgcggca ccacagggac cacctgctcc aaggccatca
2941 agattttcct ggggggcttc gagctgaagc taagccatgg gaaggtggag gtgatcggga
3001 cggacgagag ccaggaggtg ccatacacca tccggcagat gggcatctac ctggtggtgg
3061 acaccgacat tggcctggtg ctgctgtggg acaagaagac cagcatcttc atcaacctca
3121 gccccgagtt caagggcagg gtctgcggcc tgtgtgggaa cttcgacgac atcgccgtta
3181 atgactttgc cacgcggagc cggtctgtgg tgggggacgt gctggagttt gggaacagct
3241 ggaagctctc cccctcctgc ccagatgccc tggcgcccaa ggacccctgc acggccaacc
3301 ccttccgcaa gtcctgggcc cagaagcagt gcagcatcct ccacggcccc accttcgccg
3361 cctgccacgc acacgtggag ccggccaggt actacgaggc ctgcgtgaac gacgcgtgcg
3421 cctgcgactc cgggggtgac tgcgagtgct tctgcacggc tgtggccgcc tacgcccagg
3481 cctgccatga agtaggcctg tgtgtgtcct ggcggacccc gagcatctgc cctctgttct
3541 gcgactacta caaccccgaa ggccagtgcg agtggcacta ccagccctgc ggggtgccct
3601 gcctgcgcac ctgccggaac ccccgtggag actgcctgcg ggacgtccgg ggcctggaag
3661 gctgctaccc caagtgccca ccagaggctc ccatctttga tgaggacaag atgcagtgtg
3721 tggccacctg cccaaccccg cctctgccac cacggtgcca cgtccatggg aagtcctacc
3781 ggccaggtgc agtggtgccc tcggacaaga actgccagtc ctgcctttgt acggagcgcg
3841 gcgtggagtg cacctacaaa gctgaggcct gtgtctgcac ctacaatgga cagcgcttcc
3901 acccagggga cgtcatctac cacacgacgg atggcacggg tggctgcatc tccgcccgct
3961 gcggggccaa cggcaccatt gagaggaggg tctacccctg cagccccacc acccctgtcc
4021 ccccaaccac cttctccttc tccacacccc cgcttgtcgt gagctccacg cacaccccca
4081 gcaatggccc aagcagcgcg cacacaggcc ctccgagcag cgcctggccc accacagcag
4141 gcacttctcc caggacgagg ctgcccacag cctctgcctc actgccgccg gtctgtgggg
4201 aaaagtgcct gtggtcgcca tggatggatg tcagccgccc tggacggggc acggacagcg
4261 gtgacttcga cacactggag aacctccgcg cccatgggta ccgggtgtgc gaatcaccca
4321 ggtcggtgga gtgccgagct gaggacgccc ccggagtgcc gctccgagcc ctggggcagc
4381 gtgtgcagtg cagcccggat gtggggctga cctgtcgtaa cagggagcag gcatcggggc
4441 tctgctacaa ctaccagatc agggtccagt gctgcacgcc cctaccctgc tccacctcta
4501 gcagtccagc ccagaccact cctccaacta cctccaagac cactgaaacc cgggcctcag
4561 gctcctcagc tcccagcagc acacctggca ccgtgtctct ctctacagcc aggacgacac
4621 ctgccccagg taccgctacc tctgtcaaaa aaactttctc aactcccagc cctccgccag
4681 tgccggcaac atcaacatca tccatgtcga ccacggcccc ggggacctct gtggtctcca
4741 gcaagcccac ccccacggag cccagcacat cctcctgcct gcaggagctt tgcacctgga
4801 ccgagtggat cgatggcagc taccctgctc ctggaataaa tggtggagat tttgacacat
4861 ttcaaaattt gagagacgaa ggatacacat tctgtgaaag tcctcgaagc gtgcagtgcc
4921 gggcagagag cttccccaac acgccgctgg cagacctggg gcaggacgtc atctgcagcc
4981 acacagaggg gctgatttgc ctgaacaaga accagctccc acccatctgc tacaactatg
5041 agatccgcat ccagtgttgc gagacggtga acgtgtgcag agacatcacc agactgccaa
5101 agaccgtcgc aacgacacgg ccgactccac atccaaccgg agctcagacc cagaccacct
5161 tcaccacaca catgccctcg gcctccacag agcaacccac ggcaacctcc aggggtgggc
5221 ccacagcaac cagcgtcaca cagggcaccc acaccacact agtcaccaga aactgtcatc
5281 cccggtgcac ctggacaaag tggttcgacg tggacttccc gtcccccgga ccccatggtg
5341 gagacaagga aacctacaac aacatcatca ggagtgggga aaaaatctgc cgccgacctg
5401 aggagatcac caggctccag tgccgagcca agagccaccc agaggtgagc atcgaacacc
5461 tgggccaggt ggtgcagtgc agccgggaag agggcctggt gtgccggaac caggaccagc
5521 agggaccctt caagatgtgc ctcaactacg aggtgcgtgt gctctgctgc gagaccccca
5581 gaggctgcca catgacctcc acacctggct ccacctctag cagtccagcc cagaccactc
5641 cttcaacaac ctccaagacc actgaaaccc aggcctcagg ctcctcagcc cccagcagca
5701 cacctggcac cgtgtctctc tctacagcca ggacgacacc tgccccaggt accgctacct
5761 ctgtcaaaaa aactttctca actcccagcc ctccgccagt gccggcaaca tcaacatcat
5821 ccatgtcgac cacggccccg gggacctctg tggtctccag caagcccacc cccacggagc
5881 ccagcacatc ctcctgcctg caggagcttt gcacctggac cgagtggatt gatggcagct
5941 accctgctcc tggaataaat ggtggagatt ttgacacatt tcaaaatttg agagacgaag
6001 gatacacatt ctgtgaaagt cctcgaagcg tgcagtgccg ggcagagagc ttccccaaca
6061 cgccgctggc agacctgggg caggacgtca tctgcagcca cacagagggg ctgatttgcc
6121 tgaacaagaa ccagctccca cccatctgct acaactatga gatccgcatc cagtgttgcg
6181 agacggtgaa cgtgtgcaga gacatcacca gaccgccaaa gaccgtcgca acgacacggc
6241 cgactccaca tccaaccgga gctcagaccc agaccacctt caccacacac atgccctcgg
6301 cctccacaga gcaacccacg gcaacctcca ggggtgggcc cacagcaacc agcgtcacac
6361 agggcaccca caccacacca gtcaccagaa actgtcatcc ccggtgcacc tggacaacgt
6421 ggttcgacgt ggacttcccg tcccccggac cccatggtgg agacaaggaa acctacaaca
6481 acatcatcag gagtggggaa aaaatctgcc gccgacctga ggagatcacc aggctccagt
6541 gccgagccaa gagccaccca gaggtgagca tcgaacacct gggccaggtg gtgcagtgca
6601 gccgggaaga gggcctggtg tgccggaacc aggaccagca gggacccttc aagatgtgcc
6661 tcaactacga ggtgcgtgtg ctctgctgcg agacccccaa aggctgcccc gtgacctcca
6721 cacctgtgac agctcctagc acccctagtg ggagagccac cagcccaact cagagcacct
6781 cctcttggca gaaatccagg acaaccactt tggtgacaac cagcacaacc tccactccac
6841 agaccagtac aacctatgcc catacaacca gcacaacctc tgctcctaca gccagaacaa
6901 cctctgctcc tacaaccaga acaacctctg cctctccagc cagcacaacc tctggtcctg
6961 gaaatactcc cagccctgtt cctaccacca gcacaatctc tgctcctaca actagcataa
7021 cctctgcccc tacaaccagc acaacctctg cccctacaag cagcacaacc tctggtcctg
7081 gaactactcc cagccctgtt cctaccacca gcataacctc tgcccctaca accagcacaa
7141 cctctgctcc tacaaccagc acaacctctg cccgtacaag cagcacaacc tctgccacta
7201 ccaccagcag aatctctggt cctgaaacta ctcccagccc tgttcctacc accagcacaa
7261 cctctgccac tacaaccagc acaacctcag ctcctacaac cagcacaacc tctgccccta
7321 caagcagcac aacctccagt ccacagacca gcacaacctc ggctcctaca accagcacaa
7381 cttctggtcc tggaactacc ccaagccctg ttcccacgac cagcacaacc tctgccccta
7441 caacaagaac aacttctgct cctaaaagca gcacaacctc tgccgctaca accagcacaa
7501 cctctggtcc tgaaactact cctagacctg ttcctaccac cagcacaacc tcttctccta
7561 caaccagcac aacctctgct cctacaacca gcacaacctc tgcttctaca accagcacaa
7621 cctctggtgc tggaactact cccagccctg ttcccaccac cagcacaacc tctgctccta
7681 caaccagcac aacctctgcc cctataagca gcacaacctc tgccactaca accagcacaa
7741 cctctggtcc tggaactact cccagccctg ttcctaccac gagcacaacc tctgctccta
7801 caaccagcac aacctctggt cctggaacta ctcccagtgc tgttcccacc accagcataa
7861 cctctgcacc tacaaccagc acaaactctg cccctataag cagcacaacc tctgccacta
7921 caaccagcag aatctctggt cctgaaacta ctcccagccc tgttcctacc gccagcacaa
7981 cctctgcttc tacaactagc acaacctctg gtcctggaac tactcccagc cctgttccta
8041 ccaccagcac aatctctgtt cctaccacca gcacaacttc tgcttctaca accagcacaa
8101 cctctgcttc tacaaccagc acaacctctg gtcctggaac tactcccagc cctgttccca
8161 ccaccagcac aacctctgct cccacaacaa gcacaacctc tgcccctaca accagcacaa
8221 tctcggcccc aacaaccagc acaacctctg ccactacaac cagcacgacc tctgctccta
8281 cacccagaag aacctcagcc cctacaacca gcacaatctc tgcctctacc accagcacaa
8341 cctctgcgac tacaaccagc acaacctctg ctactacaac cagcacaatc tctgccccta
8401 caaccagcac aactttgtct cctacaacca gcacaacctc tactactata accagcacaa
8461 cttctgcccc tataagcagc acaacttcca caccacagac cagcacaact tcggctccta
8521 caaccagcac aacttctggt cctggaacta cttcaagccc tgttcccacc accagcacaa
8581 cctctgcccc tacaaccagc acaacctctg cccctacaac cagaacaacc tctgtcccta
8641 caagcagcac aacctccact gctacaacca gcacaacctc tggccctgga actactccca
8701 gccctgttcc caccaccagt acaacctctg ctcctacaac cagaacaacc tctgctccta
8761 caaccagcac aacctctgcc cctacaacca gcacaacctc tgcccctaca agcagcacaa
8821 cctcagctac tacaaccagc acaatctctg ttcctacaac cagcacaact tctgttcctg
8881 gaactactcc cagccctgtt cctaccacca gcacaatctc tgttcctacc accagcacaa
8941 cttctgcttc tacaaccagc acaacctctg gtcctggaac tactcccagc cctgttccca
9001 ccaccagcac aacctctgct cccacaacaa gcacaacctc tgcccctaca accagcacaa
9061 tctcggcccc aacaaccagc acaccctctg cccctacaac cagcacaacc ttagctccta
9121 caaccagcac aacctctgcc cctacaacca gcacaacctc tacccctaca agcagcacaa
9181 cctcctctcc acagaccagc acaacctcgg cttctaccac cagcataact tctggtcctg
9241 gaactacccc aagccctgtt cccaccacca gcacaacctc tgctcctaca accagcacaa
9301 cctctgccgc tacaaccagc acaatctcgg ccccaacaac cagcacaacg tctgctccta
9361 caaccagcac aacctctgcc tctacagcca gcaaaacctc tggtcttgga actactccca
9421 gccctattcc taccaccagc acaacctctc ctcctacaac cagcacaact tctgcctcta
9481 cagccagcaa aacctctggt cctggaacca ctcccagccc tgttcccacc accagcacaa
9541 tctttgctcc tagaaccagc accacttctg cctctacaac cagcacaacc cctggtcctg
9601 gaaccactcc cagccccgtt cccaccacca gcacagcctc tgtttcaaag accagcacaa
9661 gccatgtttc catatccaag acaacccact cccaaccagt caccagagac tgtcatctcc
9721 ggtgcacctg gaccaagtgg tttgacatag acttcccatc ccctggaccc cacggcgggg
9781 acaaggaaac ctacaacaac atcatcagga gtggggaaaa aatctgccgc cgacctgagg
9841 agatcaccag gctccagtgc cgagccgaga gccacccgga ggtgagcatt gaacacctgg
9901 gccaggtggt gcagtgcagc cgtgaagagg gcctggtgtg ccggaaccag gaccagcagg
9961 gacccttcaa gatgtgcctc aactacgagg tgcgtgtgct ctgctgcgag acccctaaag
10021 gttgccccgt gacctccaca cctgtgacag ctcctagcac ccctagtggg agagccacca
10081 gcccaactca gagcacttcc tcttggcaga aatccaggac aaccactttg gtgacaacca
10141 gcacaacctc cactccacag accagcacaa cctctgctcc tacaaccagc acaacctctg
10201 ctcccacaac cagcacaact tctgccccta caaccagcac aacctccact ccacagacca
10261 gcatatcctc tgcccctaca agcagcacaa cctcggctcc tacaagcagc acaatctctg
10321 ctcgtacaac cagcataatc tctgccccta caaccagcac aacctcttcc cctacaacca
10381 gcacaacctc tgctactaca accagcacaa cctctgcccc tacaagcagc acaacctcca
10441 ctccacagac cagcaaaacc tcagctgcta caagcagcac aacctccggt tctggaacta
10501 ctcccagccc tgttaccacc accagcacag cctctgtttc aaagaccagc acaagccatg
10561 tttctgtatc caagacaacc cactcccaac cagtcaccag agactgtcat ccccggtgca
10621 cctggaccaa atggtttgat gtggactttc catcccctgg accccacggt ggggacaagg
10681 aaacctacaa caacatcatc aggagtgggg aaaaaatctg ccgccgacct gaggagatca
10741 ccaggctcca gtgccgagcc aagagccacc cggaggtgag catcgaacac ctgggccagg
10801 tggtgcagtg cagccgcgaa gagggcctgg tgtgccggaa ccaggaccag cagggaccct
10861 tcaagatgtg cctcaactac gaggtgcgtg tgctttgctg cgagaccccc aaaggctgcc
10921 ccgtgacctc cacatctgtg acagctccta gcacccctag tgggagagcc accagcccaa
10981 ctcagagcac ctcctcttgg cagaaatcca ggacaaccac tttggtgaca agcagcataa
11041 cctccactac acagaccagc acaacctctg cccctacaac tagcacaacc cctgcttcta
11101 tacccagcac aacctctgcc ccaacaacca gcacaacctc tgctcccaca acgagcacaa
11161 cttctgcccc tacaaccagc acaacctcca ctccacagac caccacatcc tctgccccta
11221 caagcagcac aacctcggct cctaccacca gcacaatctc tgcccctaca accagcacaa
11281 tctctgcccc tacaaccagc acaacctctg ctcccacagc cagcacaacg tcagctccta
11341 cgagcacttc ctcggctcct acaaccaaca caacctctgc ccctacaact agcactacct
11401 ctgctcccat aaccagcaca atctctgccc ctacaaccag cacaacctcc actccacaga
11461 ccagcacaat ctcttcccct acaaccagca caacctccac tccgcagacc agcacaacct
11521 cttcccctac aactagcaca acctcagctc ctacaaccag cacaacttct gcccctacaa
11581 ccagcacaac ctccactcca cagaccagca tatcctctgc ccctacaagc agcacaacct
11641 ctgctcctac agccagcaca atctctgccc ctacaaccag cacaacctct ttccatacaa
11701 ccagcacaac ctctccccct acaagcagca caagctccac tccacagacc agcaaaacct
11761 cagctgctac aagcagcaca acctccggtt ctggaactac tcccagcccc gttcccacca
11821 ccagcacagc ctctgtttca aagaccagca caagccatgt ttctgtatcc aagacaaccc
11881 actcccaacc agtcaccaga gactgtcatc cccggtgcac ctggaccaag tggtttgacg
11941 tggactttcc atcccctgga ccccacggtg gggacaagga aacctacaac aacatcatca
12001 ggagtgggga aaaaatctgc cgccgacctg aggagatcac caggctccag tgccgagccg
12061 agagccaccc ggaggtgagc atcgaacacc tgggccaggt ggtgcagtgc agccgggaag
12121 agggcctggt gtgccggaac caggaccagc agggaccctt caagatgtgc ctcaactacg
12181 aggtgcgtgt gctctgctgc gagaccccca aaggctgccc cgtgacctcc acacctgtga
12241 cagctcctag cacccctagt gggagagcca ccagcccaac tcagagcact tcctcttggc
12301 agaaatccag gacaaccact ttggtgacaa ccagcacaac ctccactcca cagaccagca
12361 caacctctgc ccctacaacc agcacaatcc ctgcttctac acccagcaca acctctgccc
12421 ctacaaccag cacaacctct gcccctacaa ccagcacgac ctcagctcct acacacagaa
12481 cgacttctgg tcctacaacc agcacaacct tggctcctac aaccagcaca acctctgctc
12541 caacaaccag cacaaactct gctcctacaa ccagcacaat ctctgcctct acaaccagca
12601 caatctctgc ccctacaacc agcacaatct cttcccctac aagcagcaca acctccactc
12661 cacagaccag caaaacctca gctgctacaa gcagcacaac ctccggttct ggaactactc
12721 caagccctgt tcccaccacc agcacaacct ctgcctctac aaccagcaca acttctgctc
12781 ctacaaccag cacaacctct ggtcctggaa ctactccaag ccctgttccc agcaccagta
12841 caacctctgc tgctacaacc agcacaacct ctgctcctac aaccagaaca acatctgctc
12901 ctacaagcag catgacctct ggtcctggaa ctactcccag ccctgttccc accaccagca
12961 caacctctgc tcctacaact agcacaacct ctggtcctgg aactactccc agccctgttc
13021 ccaccaccag cacaacctct gctcctataa ccagcacaac ctctggtcct ggaagtactc
13081 ccagccctgt tcccaccacc agcacaacct ctgctcctac aaccagcaca acctctgcct
13141 ctacagccag cacaacctct ggtcctggaa ctactcccag ccctgttccc accaccagca
13201 caacctctgc tcctacaacc agaacaacct ctgcctctac agccagcaca acctctggtc
13261 ctggaagtac tcccagccct gttcccacca ccagcacaac ctctgctcct acaaccagaa
13321 caacccctgc ctctacagcc agcacaacct ctggtcctgg aactactccc agccctgttc
13381 ccaccacaag cacaacctct gcttctacaa ccagcacaat ctctctccct acaaccagca
13441 caacctctgc tcctataacc agcatgacct ctggtcctgg aactactccc agccctgttc
13501 ccaccaccag cacaacctct gctcctacaa ccagcacaac ctctgcctct acagccagca
13561 caacctctgg tcctggaact actcccagcc ctgttcccac caccagcaca acctctgctc
13621 ctacaaccag cacaacctct gcctctacag ccagcacaac ctctggtcct ggaacttctc
13681 tcagccctgt tcccaccacg agcacaacct ctgctcctac aactagcaca acctctggtc
13741 ctggaactac tcccagccct gttcccacca ccagcacaac ctctgctcct acaaccagca
13801 cgacctctgg tcctggaact actcccagcc ccgttcccac caccagcaca acccctgttt
13861 caaagaccag cacaagccat ctttctgtat ccaagacaac ccactcccaa ccagtcacca
13921 gtgactgtca tcctctgtgc gcctggacaa agtggttcga cgtggacttc ccatcccctg
13981 gaccccacgg cggggacaag gaaacctaca acaacatcat caggagtggg gaaaaaatct
14041 gccgccgacc tgaggagatc accaggctcc agtgccgagc cgagagccac ccggaggtga
14101 acattgaaca cctgggtcag gtggtgcagt gcagccgtga agagggcctg gtgtgccgga
14161 accaggacca gcagggaccc ttcaagatgt gcctcaacta cgaggtgcgc gtgctctgct
14221 gcgagacccc cagaggctgc ccggtgacct ctgtgacccc atatgggact tctcctacca
14281 atgctctgta tccttccctg tctacttcca tggtatccgc ctccgtggca tccacctctg
14341 tggcatccag ctctgtggca tccagctctg tggcttactc cacccaaacc tgcttctgca
14401 acgtggctga ccggctctac cctgcaggat ccaccatata ccgccacaga gacctcgctg
14461 gccattgcta ttatgccctg tgtagccagg actgccaagt ggtcagaggg gttgacagtg
14521 actgtccgtc caccacgctg cctcctgccc cagccacgtc cccttcaata tccacctccg
14581 agcccgtcac tgagctggga tgcccaaatg cggttccccc cagaaagaaa ggtgagacct
14641 gggccacacc caactgctcc gaggccacct gtgagggcaa caacgtcatc tccctgcgcc
14701 cgcgcacgtg cccgagggtg gagaagccca cttgtgccaa cggctacccg gctgtgaagg
14761 tggctgacca agatggctgc tgccatcact accagtgcca gtgtgtgtgc agcggctggg
14821 gtgaccccca ctacatcacc ttcgacggca cctactacac cttcctggac aactgcacgt
14881 acgtgctggt gcagcagatt gtgcccgtgt atggccactt ccgcgtgctc gtcgacaact
14941 acttctgcgg tgcggaggac gggctctcct gcccgaggtc catcatcctg gagtaccacc
15001 aggaccgcgt ggtgctgacc cgcaagccag tccacggggt gatgacaaac gagatcatct
15061 tcaacaacaa ggtggtcagc cccggcttcc ggaaaaacgg catcgtggtc tcgcgcatcg
15121 gcgtcaagat gtacgcgacc atcccggagc tgggagtcca ggtcatgttc tccggcctca
15181 tcttctccgt ggaggtgccc ttcagcaagt ttgccaacaa caccgagggc cagtgcggca
15241 cttgcaccaa cgacaggaag gatgagtgcc gcacgcctag ggggacggtg gtcgcttcct
15301 gctccgagat gtccggcctc tggaacgtga gcatacccga ccagccagcc tgccaccggc
15361 ctcacccgac gcccaccacg gtcgggccca ccacagttgg gtctaccacg gtcgggccca
15421 ccacagttgg gtctaccacg gtcgggccca ccacaccgcc tgctccgtgc ctgccatcac
15481 ccatctgcca gctgattctg agcaaggtct ttgagccgtg ccacactgtg atccccccac
15541 tgctgttcta tgagggctgc gtctttgacc ggtgccacat gacggacctg gatgtggtgt
15601 gctccagcct ggagctgtac gcggcactct gtgcgtccca cgacatctgc atcgattgga
15661 gaggccggac cggccacatg tgcccattca cctgcccagc cgacaaggtg taccagccct
15721 gcggcccgag caacccctcc tactgctacg ggaatgacag cgccagcctc ggggctctgc
15781 cggaggccgg ccccatcacc gaaggctgct tctgtccgga gggcatgacc ctcttcagca
15841 ccagtgccca agtctgcgtg cccacgggct gccccaggtg tctggggccc cacggagagc
15901 cggtgaaggt gggccacacc gtcggcatgg actgccagga gtgcacgtgt gaggcggcca
15961 cgtggacgct gacctgccga cccaagctct gcccgctgcc ccctgcctgc cccctgcccg
16021 gcttcgtgcc tgtgcctgca gccccacagg ccggccagtg ctgcccccag tacagctgcg
16081 cctgcaacac cagccgctgc cccgcgcccg tgggctgtcc tgagggcgcc cgcgcgatcc
16141 cgacctacca ggagggggcc tgctgcccag tccaaaactg cagctggaca gtgtgcagca
16201 tcaacgggac cctgtaccag cccggcgccg tggtctcctc gagcctgtgc gaaacctgca
16261 ggtgtgagct gccgggtggc cccccatcgg acgcgtttgt ggtcagctgt gagacccaga
16321 tctgcaacac acactgccct gtgggcttcg agtaccagga gcagagcggg cagtgctgtg
16381 gcacctgtgt gcaggtcgcc tgtgtcacca acaccagcaa gagccccgcc cacctcttct
16441 accccggcga gacctggtca gacgcaggga accactgtgt gacccaccag tgtgagaagc
16501 accaggatgg gctcgtggtg gtcaccacga agaaggcgtg ccccccgctc agctgttctc
16561 tggacgaggc ccgcatgagc aaggacggct gctgccgctt ctgcccgccg cccccgcccc
16621 cgtaccagaa ccagtcgacc tgtgctgtgt accataggag cctgatcatc cagcagcagg
16681 gctgcagctc ctcggagccc gtgcgcctgg cttactgccg ggggaactgt ggggacagct
16741 cttccatgta ctcgctcgag ggcaacacgg tggagcacag gtgccagtgc tgccaggagc
16801 tgcggacctc gctgaggaat gtgaccctgc actgcaccga cggctccagc cgggccttca
16861 gctacaccga ggtggaagag tgcggctgca tgggccggcg gtgccctgcg ccgggcgaca
16921 cccagcactc ggaggaggcg gaacccgagc ccagccagga ggcagagagt gggagctggg
16981 agagaggcgt cccagtgtcc cccatgcact gaccagcact gccgccctcc tgacctccaa
17041 ggagaacctc ccatatgtcc tctgagctcg gcttccaagg ccagtggaac ttgtgcccct
17101 gtccaggcgg ctgcagcttt gaacacactg tccacgcccg ctttcttgtg gagggtgtgg
17161 gctatgggtc acctgctgcc tggaggaggg gcccttaccc accccgcctg cagccacctc
17221 tcaggaccag ccccggggct ggccgagctc ctctggccat gcatccagcc tgctgttctg
17281 gggacgtgag catcacctga gggtctcagg aatgacgctt ggacatggtg atcagctgcc
17341 tggtggctgc aggaggaaga acctcactcc tacctcagcc ctcagcctgc gctcccctcc
17401 tcagtacacg gccaatctgt tgcataaata cacttgagca ttttgcaa
いくつかの実施形態では、ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤はアンチセンス鎖を含み、アンチセンス鎖の１９位（５’→３’）は表１に開示される１９ｍｅｒ標的配列の１位と塩基対を形成することができる。いくつかの実施形態では、ＭＵＣ５ＡＣ剤はアンチセンス鎖を含み、アンチセンス鎖の１位（５’→３’）は表１に開示される１９ｍｅｒ標的配列の１９位と塩基対を形成することができる。
いくつかの実施形態では、ＭＵＣ５ＡＣ剤はアンチセンス鎖を含み、アンチセンス鎖の２位（５’→３’）は表１に開示される１９ｍｅｒ標的配列の１８位と塩基対を形成することができる。いくつかの実施形態では、ＭＵＣ５ＡＣ剤はアンチセンス鎖を含み、アンチセンス鎖（３’←５’）の２～１８位は表１に開示される１９ｍｅｒ標的配列の１８～２位に位置するそれぞれの相補的な塩基の各々と塩基対を形成することができる。
本明細書に開示されるＲＮＡｉ剤の場合、アンチセンス鎖（５’末端→３’末端）の１位のヌクレオチドは、ＭＵＣ５ＡＣ遺伝子に対して完全に相補的であり得、又はＭＵＣ５ＡＣ遺伝子に対して非相補的であり得る。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖（５’末端→３’末端）の１位のヌクレオチドは、Ｕ、Ａ、又はｄＴである。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖（５’末端→３’末端）の１位のヌクレオチドは、センス鎖とＡ：Ｕ又はＵ：Ａ塩基対を形成する。
いくつかの実施形態では、ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、表２、表３、又は表１１のアンチセンス鎖配列のいずれかの２～１８又は２～１９のヌクレオチド配列（５’末端→３’末端）を含む。いくつかの実施形態では、ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉのセンス鎖は、表２、表４、表５、表６、又は表７のセンス鎖配列のいずれかの１～１７、１～１８、又は２～１８のヌクレオチド配列（５’末端→３’末端）を含む。
いくつかの実施形態では、ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤は、（ｉ）表２又は表３のアンチセンス鎖配列のいずれかの１～１８、１～１９、又は２～１９のヌクレオチド配列（５’末端→３’末端）を含むアンチセンス鎖、及び（ｉｉ）表２、表４、表５、表６、又は表７のセンス鎖配列のいずれかの２～１９、１～１９、１～１８、又は２～１８のヌクレオチド配列（５’末端→３’末端）を含むセンス鎖から構成される。
いくつかの実施形態では、ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤は、以下の表２に示されるコア１９ｍｅｒヌクレオチド配列を含む。
表２のヌクレオチド配列を含むか又はそれからなるＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤のセンス鎖及びアンチセンス鎖は、修飾ヌクレオチド又は非修飾ヌクレオチドであり得る。いくつかの実施形態では、表２のヌクレオチド配列のいずれかを含むか又はそれからなるセンス鎖配列及びアンチセンス鎖配列を有するＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤は、全て又は実質的に全て修飾ヌクレオチドである。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、表２のアンチセンス鎖配列のいずれかと０、１、２、又は３ヌクレオチド異なる少なくとも１５個の連続するヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤のセンス鎖は、表２のセンス鎖配列のいずれかと０、１、２、又は３ヌクレオチド異なる少なくとも１５個の連続するヌクレオチドを含む。
本明細書で使用する場合、表２に開示される配列中に列挙される各Ｎは、任意かつ全ての核酸塩基（修飾ヌクレオチド及び非修飾ヌクレオチドの両方に見出されるものを含む）から独立して選択され得る。いくつかの実施形態では、表２に開示される配列中に列挙されるＮヌクレオチドは、他の鎖上の対応する位置におけるＮヌクレオチドに相補的な核酸塩基を有する。いくつかの実施形態では、表２に開示される配列中に列挙されるＮヌクレオチドは、他の鎖上の対応する位置におけるＮヌクレオチドに相補的ではない核酸塩基を有する。いくつかの実施形態では、表２に開示される配列中に列挙されるＮヌクレオチドは、他の鎖上の対応する位置におけるＮヌクレオチドと同じ核酸塩基を有する。いくつかの実施形態では、表２に開示される配列中に列挙されるＮヌクレオチドは、他の鎖上の対応する位置におけるＮヌクレオチドとは異なる核酸塩基を有する。
特定の修飾されたＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤センス鎖及びアンチセンス鎖は、表３、表４、表５、表６、表７、及び表１１に提供される。特定の修飾されたＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤アンチセンス鎖及びそれらの基礎となる非修飾核酸塩基配列は、表３に示される。特定の修飾されたＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤センス鎖及びそれらの基礎となる非修飾核酸塩基配列は、表４、表５、及び表６に示される。ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤の形成において、上記の表３、表４、表５、表６、及び表７、並びに表２に列挙される基礎となる各塩基配列における各ヌクレオチドは、修飾ヌクレオチドであり得る。
本明細書に記載されるＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤は、アンチセンス鎖をセンス鎖とアニーリングすることによって形成される。表２、表４、表５、表６、表７、又は表１１に列挙された配列を含むセンス鎖は、２つの配列が連続する１６、１７、１８、１９、２０、又は２１ヌクレオチドの配列にわたって少なくとも８５％相補性の領域を有することを条件として、表２、表３、又は表１１に列挙される配列を含む任意のアンチセンス鎖にハイブリダイズすることができる。
いくつかの実施形態では、ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、表２又は表３の配列のいずれかのヌクレオチド配列を含む。
いくつかの実施形態では、ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤は、表２、表３、表４、表５、表６、表７、又は表１１のいずれかのヌクレオチド配列を含む。
修飾ヌクレオチドを含むアンチセンス鎖の例は、表３に提供される。修飾ヌクレオチドを含むセンス鎖の例は、表４、５、及び６に示される。
表３、表４、表５、表６、表７、及び表１１で使用する場合、修飾ヌクレオチド、標的化基、及び連結基を示すために以下の表記が使用される。
Ａ＝アデノシン－３’－リン酸
Ｃ＝シチジン－３’－リン酸
Ｇ＝グアノシン－３’－リン酸
Ｕ＝ウリジン－３’－リン酸
Ｉ＝イノシン－３’－リン酸
ａ＝２’－Ｏ－メチルアデノシン－３’－リン酸
ａｓ＝２’－Ｏ－メチルアデノシン－３’－ホスホロチオエート
ｃ＝２’－Ｏ－メチルシチジン－３’－リン酸
ｃｓ＝２’－Ｏ－メチルシチジン－３’－ホスホロチオエート
ｇ＝２’－Ｏ－メチルグアノシン－３’－リン酸
ｇｓ＝２’－Ｏ－メチルグアノシン－３’－ホスホロチオエート
ｉ＝２’－Ｏ－メチルイノシン－３’－リン酸
ｉｓ＝２’－Ｏ－メチルイノシン－３’－ホスホロチオエート
ｔ＝２’－Ｏ－メチル－５－メチルウリジン－３’－リン酸
ｔｓ＝２’－Ｏ－メチル－５－メチルウリジン－３’－ホスホロチオエート
ｕ＝２’－Ｏ－メチルウリジン－３’－リン酸
ｕｓ＝２’－Ｏ－メチルウリジン－３’－ホスホロチオエート
Ａｆ＝２’－フルオロアデノシン－３’－リン酸
Ａｆｓ＝２’－フルオロアデノシン－３’－ホスホロチオエート
Ｃｆ＝２’－フルオロシチジン－３’－リン酸
Ｃｆｓ＝２’－フルオロシチジン－３’－ホスホロチオエート
Ｇｆ＝２’－フルログアノシン－３’－リン酸
Ｇｆｓ＝２’－フルログアノシン－３’－ホスホロチオエート
Ｔｆ＝２’－フルオロ－５’－メチルウリジン－３’－リン酸
Ｔｆｓ＝２’－フルオロ－５’－メチルウリジン－３’－ホスホロチオエート
Ｕｆ＝２’－フルオロウリジン－３’－リン酸
Ｕｆｓ＝２’－フルオロウリジン－３’－ホスホロチオエート
ｄＴ＝２’－デオキシチミジン－３’－リン酸
ＡＵＮＡ＝２’，３’－セコ－アデノシン－３’－リン酸
ＡＵＮＡＳ＝２’，３’－セコ－アデノシン－３’－ホスホロチオエート
ＣＵＮＡ＝２’，３’－セコ－シチジン－３’－リン酸
ＣＵＮＡＳ＝２’，３’－セコ－シチジン－３’－ホスホロチオエート
ＧＵＮＡ＝２’，３’－セコ－グアノシン－３’－リン酸
ＧＵＮＡ＝２’，３’－セコ－グアノシン－３’－ホスホロチオエート
ＵＵＮＡ＝２’，３’－セコ－ウリジン－３’－リン酸
ＵＵＮＡＳ＝２’，３’－セコ－ウリジン－３’－ホスホロチオエート
ａ＿２Ｎ＝表１２を参照のこと
ａ＿２Ｎｓ＝表１２を参照のこと
（ｉｎｖＡｂ）＝逆位脱塩基デオキシリボヌクレオチド－５’－リン酸、表１２を参照のこと
（ｉｎｖＡｂ）ｓ＝逆位脱塩基デオキシリボヌクレオチド－５’－ホスホロチオエート、表１２を参照のこと
ｓ＝ホスホロチオエート結合
ｐ＝末端リン酸（合成）
ｖｐｄＮ＝ビニルホスホネートデオキシリボヌクレオチド
ｃＰｒｐａ＝５’－シクロプロピルホスホネート－２’－Ｏ－メチルアデノシン－３’－リン酸（表１２を参照のこと）
ｃＰｒｐａｓ＝５’－シクロプロピルホスホネート－２’－Ｏ－メチルアデノシン－３’－ホスホロチオエート（表１２を参照のこと）
ｃＰｒｐｕ＝５’－シクロプロピルホスホネート－２’－Ｏ－メチルウリジン－３’－リン酸（表１２を参照のこと）
ｃＰｒｐｕｓ＝５’－シクロプロピルホスホネート－２’－Ｏ－メチルウリジン－３’－ホスホロチオエート（表１２を参照のこと）
（Ａｌｋ－ＳＳ－Ｃ６）＝表１２を参照のこと
（Ｃ６－ＳＳ－Ａｌｋ）＝表１２を参照のこと
（Ｃ６－ＳＳ－Ｃ６）＝表１２を参照のこと
（６－ＳＳ－６）＝表１２を参照のこと
（Ｃ６－ＳＳ－Ａｌｋ－Ｍｅ）＝表１２を参照のこと
（ＮＨ２－Ｃ６）＝表１２を参照のこと
（ＴｒｉＡｌｋ１４）＝表１２を参照のこと
（ＴｒｉＡｌｋ１４）ｓ＝表１２を参照のこと
－Ｃ６－＝表１２を参照のこと
－Ｃ６ｓ－＝表１２を参照のこと
－Ｌ６－Ｃ６－＝表１２を参照のこと
－Ｌ６－Ｃ６ｓ－＝表１２を参照のこと
－Ａｌｋ－ｃｙＨｅｘ－＝表１２を参照のこと
－Ａｌｋ－ｃｙＨｅｘｓ－＝表１２を参照のこと
（ＴＡ１４）＝表１２を参照のこと（結合後の（ＴｒｉＡｌｋ１４）の構造）
（ＴＡ１４）ｓ＝表１２を参照のこと（結合後の（ＴｒｉＡｌｋ１４）ｓの構造）
当業者が容易に理解できるように、配列によって（例えば、ホスホロチオエート結合「ｓ」などによって）別段の指示がない限り、ヌクレオチドモノマーは、オリゴヌクレオチド中に存在する場合、５’－３’－ホスホジエステル結合によって相互に連結される。当業者が明確に理解するように、本明細書に開示される修飾ヌクレオチド配列中に示されるようにホスホロチオエート結合を含めることによって、オリゴヌクレオチドに典型的に存在するホスホジエステル結合が置き換えられる。さらに、所与のオリゴヌクレオチド配列の３’末端における末端ヌクレオチドが、典型的には、エキソビボでリン酸部分の代わりに所与のモノマーのそれぞれの３’位におけるヒドロキシル（－ＯＨ）基を有することを当業者は容易に理解するであろう。さらに、本明細書に開示される実施形態では、それぞれの鎖５’→３’を見た場合、デオキシリボースの３’位がそれぞれの鎖の先行するモノマー（preceding monomer）の３’末端において連結されるように逆位脱塩基残基が挿入される（例えば、表１２を参照のこと）。さらに、当業者が容易に理解及び認識するように、本明細書に示されるホスホロチオエートの化学構造は典型的には硫黄原子上の陰イオンを示し、本明細書に開示される発明は全てのホスホロチオエート互変異性体（例えば、硫黄原子が二重結合を有し、かつ、陰イオンが酸素原子上にある場合）を包含する。本明細書において特に別段の指示がない限り、本明細書に開示されるＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤及びＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤の組成物を説明する場合には、当業者のそのような理解が使用される。
本明細書に開示されるＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤で使用される標的化基及び連結基の特定の例は、以下の表１２に提供される化学構造に含まれる。本明細書に開示される各センス鎖及び／又はアンチセンス鎖は、配列の５’末端及び／又は３’末端に結合された本明細書に列挙される任意の標的化基又は連結基、並びに配列の５’及び／又は３’末端に結合された他の標的化基又は連結基を有することができる。
＊＊上記の表4の構築物の場合、キャッピング部分、例えば、(InvAb)又はs(InvAb)など、又はコンジュゲートは、典型的には、示された各修飾センス鎖配列の3’末端に位置する(例えば、以下の表5を参照のこと)。
本明細書に開示されるＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤は、アンチセンス鎖をセンス鎖とアニーリングすることによって形成される。表２、表４、表５、表６、又は表７に列挙される配列を含むセンス鎖は、２つの配列が連続する１６、１７、１８、１９、２０、又は２１ヌクレオチドの配列にわたって少なくとも８５％の相補性の領域を有することを条件として、表２又は表３に列挙される配列を含む任意のアンチセンス鎖とハイブリダイズすることができる。
上記の表５に示すように、特定の例示的なＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤ヌクレオチド配列は、センス鎖の５’末端及び３’末端の一方又は両方において反応性連結基をさらに含むことが示されている。例えば、上記の表５に示されているＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤のセンス鎖配列の多くは、ヌクレオチド配列の５’末端において（ＴｒｉＡｌｋ１４）連結基を有する。特定の実施形態では、（ＮＨ２－Ｃ６）連結基又は（６－ＳＳ－６）若しくは（Ｃ６－ＳＳ－Ｃ６）連結基などの他の連結基が同様に又は代わりに存在してもよい。このような反応性連結基は、本明細書に開示されるＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤への標的化リガンド、標的化基、及び／又はＰＫ／ＰＤモジュレーターの連結を促進するように配置される。連結反応又は結合反応は、当該技術分野で周知であり、２つの分子間又は反応物間の共有結合の形成をもたらす。本発明の範囲で使用するのに好適な結合反応には、アミドカップリング反応、マイケル付加反応、ヒドラゾン形成反応、逆要請型ディールス・アルダー環化付加反応、オキシムライゲーション、及び銅（Ｉ）触媒又はひずみ促進型アジド－アルキン環化付加反応が含まれるが、これらに限定されない。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される実施例及び図に示されるインテグリン標的化リガンドなどの標的化リガンドは、テトラフルオロフェニル（ＴＦＰ）エステルなどの活性化エステルとして合成することができ、これを反応性アミノ基（例えば、ＮＨ２－Ｃ６）によって置換して、標的化リガンドを本明細書に開示されるＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤に結合させることができる。いくつかの実施形態では、標的化リガンドはアジドとして合成され、これを例えば銅（Ｉ）触媒又はひずみ促進型アジド－アルキン付加環化反応を介してプロパルギル（例えば、ＴｒｉＡｌｋ１４）又はＤＢＣＯ基に結合することができる。
さらに、ヌクレオチド配列は、センス鎖の３’末端にｄＴヌクレオチドを用いて合成し、続いて（３’→５’）リンカー（Ｃ６－ＳＳ－Ｃ６など）を用いて合成することできる。いくつかの実施形態では、リンカーは、例えばＰＫ／ＰＤモジュレーター又は１つ以上の標的化リガンドなどの追加の成分への結合を促進することができる。次いで、Ｃ６－ＳＳ－Ｃ６のジスルフィド結合を還元して、分子からｄＴを除去し、次いで、これにより、所望のＰＫ／ＰＤモジュレーターの結合を促進することができる。したがって、末端ｄＴヌクレオチドは、完全に結合した構築物の一部ではない。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、表３又は表１１のアンチセンス鎖配列のいずれかと０、１、２、又は３ヌクレオチド異なる。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤のセンス鎖は、表４、表５、表６、表７、又は表１１のセンス鎖配列のいずれかと０、１、２、又は３ヌクレオチド異なる。
いくつかの実施形態では、ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、表２又は表３の配列のいずれかのヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、表２、表３、又は表１１の配列のいずれかの１～１７、２～１７、１～１８、２～１８、１～１９、２～１９、１～２０、２～２０、１～２１、２～２１、１～２２、２～２２、１～２３、２～２３、１～２４、又は２～２４のヌクレオチド配列（５’末端→３’末端）を含む。特定の実施形態では、ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、表３又は表１１の修飾配列のいずれか１つの修飾配列を含むか、又はそれからなる。
いくつかの実施形態では、ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤のセンス鎖は、表２又は表４の配列のいずれかのヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤のセンス鎖は、表２、表４、表５、表６、表７、又は表１１の配列のいずれかの１～１７、２～１７、３～１７、４～１７、１～１８、２～１８、３～１８、４～１８、１～１９、２～１９、３～１９、４～１９、１～２０、２～２０、３～２０、４～２０、１～２１、２～２１、３～２１、４～２１、１～２２、２～２２、３～２２、４～２２、１～２３、２～２３、３～２３、４～２３、１～２４、２～２４、３～２４、又は４～２４のヌクレオチド配列（５’末端→３’末端）を含む。特定の実施形態では、ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤のセンス鎖は、表３又は表１１の修飾配列のいずれか１つの修飾配列を含むか、又はそれからなる。
本明細書に開示されるＲＮＡｉ剤では、アンチセンス鎖（５’末端→３’末端）の１位のヌクレオチドは、ＭＵＣ５ＡＣ遺伝子と完全に相補的であり得、又はＭＵＣ５ＡＣ遺伝子と非相補的であり得る。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖（５’末端→３’末端）の１位のヌクレオチドは、Ｕ、Ａ、又はｄＴ（あるいはＵ、Ａ、又はｄＴの修飾型）である。いくつかの実施形態では、アンチセンス鎖（５’末端→３’末端）の１位のヌクレオチドは、センス鎖とＡ：Ｕ又はＵ：Ａ塩基対を形成する
いくつかの実施形態では、ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤のアンチセンス鎖は、表２、表３、又は表１１のアンチセンス鎖配列のいずれかの２～１８又は２～１９のヌクレオチド配列（５’末端→３’末端）を含む。いくつかの実施形態では、ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉのセンス鎖は、表２、表４、表５、表６、表７、又は表１１のセンス鎖配列のいずれかの１～１７又は１～１８のヌクレオチド配列（５’末端→３’末端）を含む。
いくつかの実施形態では、ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤は、（ｉ）表２、表３、又は表１１のアンチセンス鎖配列のいずれかの２～１８又は２～１９のヌクレオチド配列（５’末端→３’末端）を含むアンチセンス鎖、及び（ｉｉ）表２、表４、表５、表６、表７、又は表１１のセンス鎖配列のいずれかの１～１７又は１～１８のヌクレオチド配列（５’末端→３’末端）を含むセンス鎖配を含む。
表２又は表４に列挙された配列を含むセンス鎖は、２つの配列が連続する１６、１７、１８、１９、２０、又は ２１ ヌクレオチドの配列にわたって少なくとも８５％の相補性を有する領域を有することを条件として、表２又は表３に列挙された配列を含む任意のアンチセンス鎖とハイブリダイズすることができる。いくつかの実施形態では、ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤は、表４、表５、表６、表７、又は表１１の修飾配列のいずれかの修飾配列からなるセンス鎖、及び表３又は表１１の修飾配列のいずれかの修飾配列からなるアンチセンス鎖を有する。特定の代表的な配列対は、表８Ａ、表８Ｂ、表８Ｃ、表９、表１０Ａ、及び表１０Ｂに示される二重鎖ＩＤ番号によって例示される。
いくつかの実施形態では、ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤は、本明細書に提示される二重鎖ＩＤ番号のいずれか１つによって表される二重鎖を含むか、それからなるか、又はそれから本質的になる。いくつかの実施形態では、ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤は、本明細書に提示される二重鎖ＩＤ番号のいずれかからなる。いくつかの実施形態では、ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤は、本明細書に提示される二重鎖ＩＤ番号のいずれかのセンス鎖及びアンチセンス鎖ヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤は、本明細書に提示される二重鎖ＩＤ番号のいずれかのセンス鎖及びアンチセンス鎖ヌクレオチド配列並びに標的化基、連結基、及び／又は他の非ヌクレオチド基を含み、標的化基、連結基、及び／又は他の非ヌクレオチド基は、センス鎖又はアンチセンス鎖に共有結合している（すなわち、コンジュゲートしている）。いくつかの実施形態では、ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤は、本明細書に提示される二重鎖ＩＤ番号のいずれかのセンス鎖及びアンチセンス鎖修飾ヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤は、本明細書に提示される二重鎖ＩＤ番号のいずれかのセンス鎖及びアンチセンス鎖修飾ヌクレオチド配列並びに標的化基、連結基、及び／又は他の非ヌクレオチド基を含み、標的化基、連結基、及び／又は他の非ヌクレオチド基は、センス鎖又はアンチセンス鎖に共有結合している。
いくつかの実施形態では、ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤は、表２、表８Ａ、表８Ｂ、表８Ｃ、表９、表１０Ａ、表１０Ｂ、又は表１１のアンチセンス鎖／センス鎖二重鎖のいずれかのヌクレオチド配列を有するアンチセンス鎖及びセンス鎖を含み、かつ、標的化基を含む。いくつかの実施形態では、ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤は、表２、表８Ａ、表８Ｂ、表８Ｃ、表９、表１０Ａ、表１０Ｂ、又は表１１のアンチセンス鎖／センス鎖二重鎖のいずれかのヌクレオチド配列を有するアンチセンス鎖及びセンス鎖を含み、かつ、１つ以上のαｖβ６インテグリン標的化リガンドを含む。
いくつかの実施形態では、ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤は、表２、表８Ａ、表８Ｂ、表８Ｃ、表９、表１０Ａ、表１０Ｂ、又は表１１のアンチセンス鎖／センス鎖二重鎖のいずれかのヌクレオチド配列を有するアンチセンス鎖及びセンス鎖を含み、かつ、インテグリン標的化リガンドである標的化基を含む。いくつかの実施形態では、ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤は、表２、表８Ａ、表８Ｂ、表８Ｃ、表９、表１０Ａ、表１０Ｂ、又は表１１のアンチセンス鎖／センス鎖二重鎖のいずれかのヌクレオチド配列を有するアンチセンス鎖及びセンス鎖を含み、かつ、１つ以上のαｖβ６インテグリン標的化リガンド又は一群のαｖβ６インテグリン標的化リガンド（例えば、三座αｖβ６インテグリン標的化リガンド）を含む。
いくつかの実施形態では、ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤は、表８Ａ、表８Ｂ、表８Ｃ、９、表１０Ａ、表１０Ｂ、及び表１１のアンチセンス鎖／センス鎖二重鎖のいずれかの修飾ヌクレオチド配列を有するアンチセンス鎖及びセンス鎖を含む。
いくつかの実施形態では、ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤は、表８Ａ、表８Ｂ、表８Ｃ、表９、表１０Ａ、表１０Ｂ、及び表１１のアンチセンス鎖／センス鎖二重鎖のいずれかの修飾ヌクレオチド配列を有するアンチセンス鎖及びセンス鎖を含み、かつ、インテグリン標的化リガンドを含む。
いくつかの実施形態では、ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤は、表８Ａ、表８Ｂ、表８Ｃ、表９、表１０Ａ、表１０Ｂ、及び表１１の二重鎖のいずれかを含むか、それらからなるか、又は本質的にそれらからなる。
いくつかの実施形態では、ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤は、塩、混合塩、又は遊離酸として調製又は提供される。いくつかの実施形態では、ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤は、薬学的に許容される塩として調製又は提供される。いくつかの実施形態では、ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤は、薬学的に許容されるナトリウム塩又はカリウム塩として調製又は提供される。本明細書に記載されるＲＮＡｉ剤は、ＭＵＣ５ＡＣ遺伝子を発現する細胞に送達された際にインビボ及び／又はインビトロで１つ以上のＭＵＣ５ＡＣ遺伝子の発現を阻害又はノックダウンする。
標的化基、連結基、薬物動態／薬力学（ＰＫ／ＰＤ）モジュレーター、及び送達ビヒクル
いくつかの実施形態では、ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤は、標的化基、連結基、薬物動態／薬力学（ＰＫ／ＰＤ）モジュレーター、送達ポリマー、又は送達ビヒクルを含むがこれらに限定されない、1つ以上の非ヌクレオチド基を含むか、又は結合される。非ヌクレオチド基は、ＲＮＡｉ剤の標的化、送達、又は結合を増強することができる。非ヌクレオチド基は、センス鎖及び／又はアンチセンス鎖のいずれかの３’末端及び／又は５’末端に共有結合することができる。いくつかの実施形態では、ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤は、センス鎖の３’末端及び／又は５’末端に連結された非ヌクレオチド基を含む。いくつかの実施形態では、非ヌクレオチド基は、ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤のセンス鎖の５’末端に連結される。非ヌクレオチド基は、リンカー／連結基を介して直接的又は間接的にＲＮＡｉ剤に連結することができる。いくつかの実施形態では、非ヌクレオチド基は、不安定な、切断可能な、又は可逆的な結合又はリンカーを介してＲＮＡｉ剤に連結される。
いくつかの実施形態では、非ヌクレオチド基は、ＲＮＡｉ剤又はこれが結合するコンジュゲートの薬物動態特性又は生体内分布特性を増強して、コンジュゲートの細胞又は組織特異的分布及び細胞特異的取り込みを改善する。いくつかの実施形態では、非ヌクレオチド基は、ＲＮＡｉ剤のエンドサイトーシスを増強する。
標的化基又は標的化部分は、コンジュゲート又はそれらが結合するＲＮＡｉ剤の薬物動態特性又は生体内分布特性を増強し、コンジュゲート又はＲＮＡｉ剤の細胞特異的（いくつかの場合では器官特異的を含む）分布及び細胞特異的（又は器官特異的）取り込みを改善する。標的化基は、一価、二価、三価、四価であるか、又はそれが指向される標的に対してより高い価数を有することができる。代表的な標的化基には、細胞表面分子に対して親和性を有する化合物、細胞受容体リガンド、ハプテン、抗体、モノクローナル抗体、抗体断片、及び細胞表面分子に対して親和性を有する抗体模倣物が含まれるが、限定されない。いくつかの実施形態では、標的化基は、ＰＥＧリンカーなどのリンカー、又はいくつかの場合ではリンカーとして機能することができる１つ、２つ、若しくは３つの脱塩基及び／若しくはリビトール（脱塩基リボース）残基を使用して、ＲＮＡｉ剤に連結される。
標的化基は、リンカーを用いて又は用いずに、表２、表３、表４、表５、表６、表７、及び表１１に開示されるセンス鎖及び／又はアンチセンス鎖のいずれかの５’末端又は３’末端に結合させることができる。リンカーは、標的化基とともに又は標的化基なしで、表２、表３、表４、表５、表６、表７、及び表１１に開示されるセンス鎖及び／又はアンチセンス鎖のいずれかの５’末端又は３’末端に結合させることができる。
本明細書に記載されるＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤は、５’末端及び／又は３’末端においてアミノ基（本明細書ではアミンとも称される）などの反応性基を有するように合成することができる。その後、反応性基を使用し、当該技術分野で典型的な方法を使用して標的化部分を結合することができる。
例えば、いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤は、ＲＮＡｉ剤のセンス鎖の５’末端においてＮＨ２－Ｃ６基を有するように合成することができる。その後、末端アミノ基を反応させて、例えばαｖβ６インテグリン標的化リガンドを含む基とコンジュゲートを形成することができる。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤は、ＲＮＡｉ剤のセンス鎖の５’末端において１つ以上のアルキン基を有するように合成される。その後、末端アルキン基を反応させて、例えばαｖβ６インテグリン標的化リガンドを含む基とコンジュゲートを形成することができる。
いくつかの実施形態では、標的化基は、インテグリン標的化リガンドを含む。いくつかの実施形態では、インテグリン標的化リガンドは、αｖβ６インテグリン標的化リガンドである。αｖβ６インテグリン標的化リガンドの使用によって、それぞれの表面上にαｖβ６を有する細胞に対する細胞特異的標的化が促進され、インテグリン標的化リガンドの結合によって、それが結合しているＲＮＡｉ剤などの治療薬を肺上皮細胞及び腎上皮細胞を含む上皮細胞などの細胞に侵入することを促進することできる。インテグリン標的化リガンドは、単量体若しくは一価（例えば、単一のインテグリン標的化部分を有する）又は多量体若しくは多価（例えば、複数のインテグリン標的化部分を有する）であり得る。標的化基は、当該技術分野で既知の方法を使用して、ＲＮＡｉオリゴヌクレオチドの３’末端及び／又は５’末端に結合させることができる。αｖβ６インテグリン標的化リガンドなどの標的化基の調製は、例えば、国際特許出願公開第ＷＯ２０１８／０８５４１５号及び国際特許出願公開第ＷＯ２０１９／０８９７６５号に記載されており、それらの各々の内容はその全体が本明細書に組み込まれる。
いくつかの実施形態では、標的化基は、追加のリンカーを使用せずにＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤に連結される。いくつかの実施形態では、標的化基は、ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤への連結を促進するために容易に提示されるリンカーを有するように設計される。いくつかの実施形態では、２つ以上のＲＮＡｉ剤が組成物中に含まれる場合、２つ以上のＲＮＡｉ剤が同じリンカーを使用してそれぞれの標的化基に連結され得る。いくつかの実施形態では、２つ以上のＲＮＡｉ剤が組成物中に含まれる場合、２つ以上のＲＮＡｉ剤が異なるリンカーを使用してそれぞれの標的化基に連結される。
いくつかの実施形態では、連結基がＲＮＡｉ剤に結合される。連結基は、薬剤と標的化基、薬物動態モジュレーター、送達ポリマー、又は送達ビヒクルとの共有結合を促進する。連結基は、ＲＮＡｉ剤のセンス鎖又はアンチセンス鎖の３’末端及び／又は５’末端に連結され得る。いくつかの実施形態では、連結基は、ＲＮＡｉ剤のセンス鎖に連結される。いくつかの実施形態では、連結基は、ＲＮＡｉ剤センス鎖の５’末端又は３’末端に結合される。いくつかの実施形態では、連結基は、ＲＮＡｉ剤センス鎖の５’末端に結合される。連結基の例には、Ｃ６－ＳＳ－Ｃ６、６－ＳＳ－６、反応性基、例えば、第一級アミン（例えば、ＮＨ２－Ｃ６）、並びにアルキン、アルキル基、脱塩基残基／ヌクレオチド、アミノ酸、トリアルキン官能化基、リビトール、及び／又はＰＥＧ基が含まれるが、これらに限定されない。特定の連結基の例は表１２に示される。
リンカー又は連結基は、１つ以上の共有結合を介して、ある化学基（ＲＮＡｉ剤など）又は目的のセグメントを別の化学基（標的化基、薬物動態モジュレーター、若しくは送達ポリマーなど）又は目的のセグメントに連結する２つの原子間の接続である。不安定な連結には、不安定な結合が含まれる。連結は、２つの結合している原子間の距離を増加させるスペーサーを任意選択で含むことができる。スペーサーは、連結に柔軟性及び／又は長さをさらに加えることができる。スペーサーには、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アリール基、アラルキル基、アラルケニル基、及びアラルキニル基（それらの各々は、１つ以上のヘテロ原子、複素環、アミノ酸、ヌクレオチド、及び糖が含むことができる）が含まれるが、これらに限定されない。スペーサー基は当該技術分野で周知であり、上記の列挙は記載の範囲を限定することを意味するものではない。いくつかの実施形態では、ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）部分、又はコレステロール若しくはパルミトイル基などの１２個以上の炭素原子を有する疎水性基に結合される。
いくつかの実施形態では、ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤は、１つ以上の薬物動態／薬力学（ＰＫ／ＰＤ）モジュレーターに連結される。ＰＫ／ＰＤモジュレーターは、細胞受容体結合の改善、細胞取り込みの改善、及び／又は他の手段により、結合された薬物の循環時間を延長し、及び／又はＲＮＡｉ剤の活性を増加させることができる。ＲＮＡｉ剤との使用に好適な様々なＰＫ／ＰＤモジュレーターは、当該技術分野で既知である。いくつかの実施形態では、ＰＫ／ＰＤモジュレーターは、コレステロール又はコレステリル誘導体であり得、又はいくつかの状況では、ＰＫ／ＰＤモジュレーターは、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アリール基、アラルキル基、アラルケニル基、又はアラルキニル基から構成することができ、それらの各々は、直鎖状、分枝鎖状、環状、及び／又は置換若しくは非置換であってもよい。いくつかの実施形態では、これらの部分の結合位置は、センス鎖の５’末端若しくは３’末端にあるか、センス鎖の任意の所与のヌクレオチドのリボース環の２’位にあるか、及び／又はセンス鎖の任意の位置におけるリン酸又はホスホロチオエート骨格に結合している。
表２、表３、表４、表５、表６、表７、及び表１１に列挙されるＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤のヌクレオチド配列のいずれかは、修飾又は非修飾にかかわらず、３’及び／又は５’標的化基、連結基、及び／又はＰＫ／ＰＤモジュレーターを含むことができる。あるいは、３’又は５’標的化基、連結基、及び／又はＰＫ／ＰＤモジュレーターを含む、表３、表４、表５、表６、表７、及び表１１に列挙されるか又は本明細書に別途記載されるＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤のヌクレオチド配列のいずれかは、３’若しくは５’標的化基、連結基、若しくはＰＫ／ＰＤモジュレーターを含まないか、又は表１２に記載されたものを含む、異なる３’若しくは５’標的化基、連結基、若しくは薬物動態モジュレーターを含むことができる。表８Ａ、表８Ｂ、表８Ｃ、表９、表１０Ａ、表１０Ｂ、及び表１１に列挙されるＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤二重鎖のいずれかは、修飾又は非修飾にかかわらず、表１１に示すものを含むがこれらに限定されない標的化基又は連結基をさらに含むことができ、標的化基又は連結基は、ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤二本鎖のセンス鎖又はアンチセンス鎖のいずれかの３’末端又は５’末端に結合させることができる。
特定の修飾ヌクレオチド、キャッピング部分、及び連結基の例は、表１２に提供される。
は接続点を示す。
あるいは、当該技術分野で既知の他の連結基を使用してもよい。多くの場合では、連結基は、市販されているか、あるいは、市販のヌクレオチドホスホルアミダイトに組み込まれている（例えば、国際特許出願公開第ＷＯ２０１９／１６１２１３号を参照のこと（これはその全体が参照により本明細書に組み込まれる））。
いくつかの実施形態では、ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤は、標的化リガンド又は薬物動態／薬力学（ＰＫ／ＰＤ）モジュレーターに結合されずに送達される（「裸（naked）」又は「裸のＲＮＡｉ剤」と称される）。
いくつかの実施形態では、ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤は、選択された細胞又は組織、例えば、生体内の上皮細胞へのＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤のインビボでの送達を促進するために、標的化基、連結基、ＰＫモジュレーター、及び／又は別の非ヌクレオチド基に結合される。いくつかの実施形態では、ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤は、インテグリン標的化リガンドを含む標的化基に結合される。いくつかの実施形態では、インテグリン標的化リガンドは、αｖβ６インテグリン標的化リガンドである。いくつかの実施形態では、標的化基には、１つ以上のαｖβ６インテグリン標的化リガンドが含まれる。
いくつかの実施形態では、送達ビヒクルを使用して、ＲＮＡｉ剤を細胞又は組織に送達することができる。送達ビヒクルは、細胞又は組織へのＲＮＡｉ剤の送達を改善する化合物である。送達ビヒクルには、ポリマー、例えば、両親媒性ポリマー、膜活性ポリマー、ペプチド、メリチンペプチド、メリチン様ペプチド（ＭＬＰ）、脂質、可逆的に修飾されたポリマー若しくはペプチド、又は可逆的に修飾された膜活性ポリアミンが含まれるか、又はそれらからなり得るが、これらに限定されない。
いくつかの実施形態では、ＲＮＡｉ剤は、脂質、ナノ粒子、ポリマー、リポソーム、ミセル、ＤＰＣ、又は核酸送達のために当該技術分野で利用可能な他の送達システムと組み合わせることができる。ＲＮＡｉ剤はまた、イオントフォレシスにより、又はヒドロゲル、シクロデキストリン、生分解性ナノカプセル、生体接着性ミクロスフェア、若しくはタンパク質ベクターなどの当該技術分野で利用可能な他の送達ビヒクル若しくはシステムへの組み込みにより、標的化基、脂質（コレステリル及びコレステリル誘導体を含むがこれらに限定されない）に化学的に結合させ、ナノ粒子、リポソーム、ミセル中にカプセル化し、ポリマー又はＤＰＣに結合させることができる（例えば、ＷＯ２０００／０５３７２２、ＷＯ２００８／０２２３０９、ＷＯ２０１１／１０４１６９、及びＷＯ２０１２／０８３１８５、ＷＯ２０１３／０３２８２９、ＷＯ２０１３／１５８１４１を参照のこと（これらの各々は、参照により本明細書に組み込まれる））。いくつかの実施形態では、ＲＮＡｉ剤は、肺上皮細胞に対して親和性を有する抗体に結合させることができる。いくつかの実施形態では、ＲＮＡｉ剤は、肺上皮細胞又は肺上皮細胞上に存在する受容体に対して親和性を有する標的化リガンドに連結させることができる。
医薬組成物及び製剤
本明細書に開示されるＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤は、医薬組成物又は製剤（本明細書では「医薬」とも称される）として調製することができる。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、少なくとも１つのＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤を含む。これらの医薬組成物は、標的細胞、細胞群、組織、又は生物におけるＭＵＣ５ＡＣ ｍＲＮＡの発現の阻害に特に有用である。医薬組成物は、標的ｍＲＮＡのレベルの低下又は標的遺伝子の発現の阻害から恩恵を受ける疾患、障害、又は症状を有する対象を処置するために使用することができる。医薬組成物は、標的ｍＲＮＡのレベルの低下又は標的遺伝子の発現の阻害から恩恵を受ける疾患又は障害を発症するリスクのある対象を処置するために使用することができる。一実施形態では、この方法は、本明細書に記載される標的化リガンドに連結されたＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤を処置される対象に投与することを含む。いくつかの実施形態では、１つ以上の薬学的に許容される賦形剤（ビヒクル、担体、希釈剤、及び／又は送達ポリマーを含む）がＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤を含む医薬組成物に添加され、それによりヒトを含む対象へのインビボ送達に好適な医薬製剤又は医薬が形成される。
ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤を含む医薬組成物及び本明細書に開示される方法は、治療有効量の本明細書に記載されるＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤を対象に投与し、それにより対象におけるＭＵＣ５ＡＣ ｍＲＮＡの発現を阻害することを含む、細胞、細胞群、細胞群、組織、器官、又は対象における標的ｍＲＮＡのレベルを低下させる。いくつかの実施形態では、対象は、ＭＵＣ５ＡＣ発現の減少によって少なくとも部分的に媒介され得る疾患又は障害を有すると以前に同定又は診断されている。いくつかの実施形態では、対象は、喘息、ＣＦ、ＣＯＰＤ、ＮＣＦＢ、ＰＣＤなどの１つ以上の粘膜閉塞性肺疾患を有すると以前に診断されている。いくつかの実施形態では、粘膜閉塞性肺疾患は、重度の喘息である。
いくつかの実施形態では、対象は、間質性肺炎、がん（肺腺癌、膵臓がん、唾液腺癌、乳がん、胆管癌、卵巣がん、及び他の腫瘍など）、呼吸器感染症（呼吸器合胞体ウイルス、インフルエンザ、及びライノウイルスなど）、中耳炎、炎症性腸疾患、胆石症、アレルギー性鼻炎、慢性副鼻腔炎、又は鼻ポリープ症を有すると以前に診断されている。
本開示の実施形態には、ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤をインビボで肺上皮細胞に送達するための医薬組成物が含まれる。このような医薬組成物には、例えば、インテグリン標的化リガンドを含む標的化基に結合されたＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤が含まれ得る。いくつかの実施形態では、インテグリン標的化リガンドは、αｖβ６インテグリンリガンドから構成される。
いくつかの実施形態では、ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤を含む記載された医薬組成物は、ＭＵＣ５ＡＣの発現の阻害から恩恵を受ける対象における臨床症状を処置又は管理するために使用される。いくつかの実施形態では、治療有効量又は予防有効量の１つ以上の医薬組成物がそのような処置を必要とする対象に投与される。いくつかの実施形態では、開示されたＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤のいずれかの投与は、対象における疾患の症状の数、重症度、及び／又は頻度を減少するために使用することができる。
いくつかの実施形態では、記載されたＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤は、任意選択で、１つ以上の追加の（すなわち、第２、第３などの）治療薬と組み合わされる。第２の治療薬は、別のＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤（例えば、ＭＵＣ５ＡＣ遺伝子内の異なる配列を標的化するＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤）であり得る。いくつかの実施形態では、第２の治療薬は、ＭＵＣ５ＡＣ遺伝子を標的化するＲＮＡｉ剤であり得る。追加の治療薬はまた、小分子薬、抗体、抗体断片、及び／又はアプタマーであり得る。ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤は、１つ以上の追加の治療薬とともに又はなしで、１つ以上の賦形剤と組み合わせて医薬組成物を形成することができる。
ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤を含む、記載された医薬組成物は、ＭＵＣ５ＡＣ ｍＲＮＡの発現の低下又は阻害から恩恵を受ける疾患又は障害を有する対象における少なくとも１つの症状を処置するために使用することができる。いくつかの実施形態では、対象に、治療有効量の、ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤を含む１つ以上の医薬組成物が投与され、それにより症状を処置する。他の実施形態では、対象に予防有効量の１つ以上のＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤が投与され、それにより少なくとも１つの症状を予防又は阻害する。
いくつかの実施形態では、記載されたＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤の１つ以上が、薬学的に許容される担体又は希釈剤中で、哺乳動物に投与される。いくつかの実施形態では、哺乳動物は、ヒトである。
投与経路は、ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤が身体と接触する経路である。一般に、哺乳動物の処置のために薬物、オリゴヌクレオチド、及び核酸を投与する方法は当該技術分野で周知であり、本明細書に記載される組成物の投与に適用することができる。本明細書に開示されるＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤は、特定の経路に合わせて適切に作製された調製物において任意の好適な経路を介して投与することができる。したがって、いくつかの実施形態では、本明細書に記載される医薬組成物は、吸入、鼻腔内投与、気管内投与、又は口腔咽頭吸引投与により投与される。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、注射により、例えば、静脈内、筋肉内、皮内、皮下、関節内、眼内、若しくは腹腔内で、又は局所的に投与することができる。
本明細書に記載されるＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤を含む医薬組成物は、当該技術分野で既知のオリゴヌクレオチド送達技術を使用して、細胞、細胞群、組織、又は対象に送達することができる。一般に、核酸分子を（インビトロ又はインビボで）送達するための当該技術分野で認識されている任意の好適な方法を本明細書に記載される組成物での使用に適合させることができる。例えば、送達は、局所投与（例えば、直接注射、埋め込み、又は局所投与）、全身投与、あるいは皮下、静脈内、腹腔内、若しくは頭蓋内（例えば、脳室内、実質内、及び髄腔内）を含む非経口経路、筋肉内、経皮、気道（エアロゾル）、経鼻、経口、直腸、又は局所（口腔及び舌下を含む）投与によるものであり得る。いくつかの実施形態では、組成物は、吸入、鼻腔内投与、口腔咽頭吸引投与、又は気管内投与により投与される。例えば、いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤は、肺上皮におけるＭＵＣ５ＡＣ遺伝子の発現を阻害することが所望され、そのためには、吸入による投与（例えば、定量吸入器などの吸入装置、又はジェット式若しくは振動メッシュ式ネブライザーなどのネブライザー、又はソフトミスト吸入器による）が特に好適かつ有利である。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載される医薬組成物は、１つ以上の薬学的に許容される賦形剤を含む。本明細書に記載される医薬組成物は、対象に投与するために製剤化される。
本明細書で使用する場合、医薬組成物又は薬剤は、薬理学的有効量の少なくとも１つの記載された治療用化合物及び１つ以上の薬学的に許容される賦形剤を含む。薬学的に許容される賦形剤（賦形剤）は、薬物送達システムに意図的に含まれる医薬品活性成分（ＡＰＩ、治療用製品、例えばＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤）以外の物質である。賦形剤は、意図された用量において治療効果を発揮しないか、又は治療効果を発揮することを意図していない。賦形剤は、ａ）製造中の薬物送達システムの処理を助けるため、ｂ）ＡＰＩの安定性、バイオアベイラビリティー、若しくは患者の受容性を保護し、サポートし、若しくは増強するため、ｃ）製品の識別を助けるため、及び／又はｄ）保存中又は使用中のＡＰＩ送達の全体的な安全性、有効性の任意の特性を増強するように機能することができる。薬学的に許容される賦形剤は、不活性物質であってもよいし、又はそうでなくてもよい。
賦形剤には、吸収促進剤、付着防止剤、消泡剤、酸化防止剤、連結剤、緩衝剤、担体、コーティング剤、着色料、送達促進剤、送達ポリマー、界面活性剤（detergents）、デキストラン、デキストロース、希釈剤、崩壊剤、乳化剤、増量剤、充填剤、香味剤、流動促進剤、保湿剤、潤滑剤、油、ポリマー、防腐剤、生理食塩水、塩、溶剤、糖類、界面活性剤（surfactants）、懸濁化剤、徐放性マトリックス、甘味剤、増粘剤、等張化剤、ビヒクル、撥水剤、及び湿潤剤が含まれるが、これらに限定されない。
注射可能な使用に好適な医薬組成物には、滅菌水溶液（水溶性の場合）又は分散液、及び滅菌注射可能溶液又は分散液を即時調製するための滅菌粉末が含まれる。静脈内投与の場合、好適な担体には、生理食塩水、静菌水、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ（登録商標）ＥＬＴＭ（ＢＡＳＦ，Ｐａｒｓｉｐｐａｎｙ，ＮＪ）、又はリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）が含まれる。製造及び保存条件下で安定である必要があり、細菌及び真菌などの微生物の汚染作用に対して保護されている必要がある。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、及び液体ポリエチレングリコール）、及びそれらの好適な混合物を含む、溶媒又は分散媒であり得る。適切な流動性を、例えば、レシチンなどのコーティングの使用により、分散液の場合には必要な粒子サイズの維持により、及び界面活性剤の使用により維持することができる。多くの場合、等張剤、例えば、糖、マンニトール、ソルビトールなどの多価アルコール、及び塩化ナトリウムを組成物中に含めることが好ましい。注射可能な組成物の持続的な吸収は、吸収を遅らせる薬剤、例えば、モノステアリン酸アルミニウム及びゼラチンを組成物中に含めることによって付与することができる。
無菌注射液は、必要に応じて、上記に挙げた成分の１つ又は組み合わせとともに、必要な量の活性化合物を適切な溶媒に組み込み、続いて、濾過滅菌することにより調製することができる。一般に、分散液は、活性化合物を塩基性分散媒及び上記に挙げたもののうちの必要な他の成分を含む滅菌ビヒクルに組み込むことによって調製される。滅菌注射可能溶液を調製するための滅菌粉末の場合、調製方法には真空乾燥及び凍結乾燥が含まれ、これらは、活性成分及び事前に滅菌濾過した溶液からの任意の追加の所望の成分の粉末を生成する。
関節内投与に好適な製剤は、微結晶の形態であり得る薬物の滅菌水性調製物の形態、例えば、水性微結晶懸濁液の形態であり得る。リポソーム製剤又は生分解性ポリマー系はまた、関節内投与用及び眼科投与用の両方で薬物を投与するために使用することができる。
吸入投与に好適な製剤は、所望の量の活性化合物を適切な溶媒に組み込み、続いて、滅菌濾過することによって調製することができる。一般に、吸入投与用の製剤は、生理的ｐＨの滅菌溶液であり、低い粘度（＜５ｃＰ）を有する。張度のバランスをとるために塩を製剤に添加してもよい。いくつかの場合では、活性化合物の溶解度を高め、エアロゾル特性を改善するために、界面活性剤又は共溶媒を添加することができる。いくつかの場合では、噴霧された液滴のサイズ及び分布を確保するために、賦形剤を追加して粘度を制御することができる。
いくつかの実施形態では、吸入投与に好適な本明細書に開示されるＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤を含む医薬製剤は、注射用水（滅菌水）、等張生理食塩水（０．９％生理食塩水）、又は水性リン酸ナトリウム緩衝液（例えば、水中の０．５ｍＭリン酸一水素ナトリウム、０．５ｍＭリン酸二ナトリウムで製剤化されたＭＵＣ５Ａ ＣＲＮＡｉ剤）中で調製することができる。
活性化合物は、インプラント及びマイクロカプセル化送達システムを含む放出制御製剤など、身体からの急速な除去から化合物を保護する担体とともに調製することができる。エチレン酢酸ビニル、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、及びポリ乳酸などの生分解性、生体適合性ポリマーを使用することができる。このような製剤の調製方法は、当業者には明らかであろう。リポソーム懸濁液はまた、薬学的に許容される担体として使用することができる。これらは、例えば米国特許第４，５２２，８１１号に記載される、当業者に既知の方法に従って調製することができる。
ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤は、投与の容易性及び投与量の均一性のために、単位剤形（dosage unit form）で組成物中に製剤化することができる。単位剤形とは、処置対象のための単位投与量として適した物理的に別個の単位を指し、各単位は、必要な薬学的担体と関連して所望の治療効果を生じるように計算された所定量の活性化合物を含む。本開示の単位剤形の仕様は、活性化合物の固有の特性及び達成される治療効果、並びに、個体の処置のためにそのような活性化合物を配合することの技術分野に固有の制限によって決定され、それらに直接依存する。
医薬組成物は、医薬組成物中に一般的に見出される他の追加成分を含むことができる。このような追加成分には、鎮痒薬、収斂薬、局所麻酔薬、又は抗炎症薬（例えば、抗ヒスタミン薬、ジフェンヒドラミンなど）が含まれるが、これらに限定されない。本明細書で定義されるＲＮＡｉ剤を発現するか又はそれを含む細胞、組織、又は単離された器官が「医薬組成物」として使用されてもよいことが企図される。本明細書で使用する場合、「薬理学的有効量」、「治療有効量」、又は単に「有効量」とは、薬理学的結果、治療結果、又は予防結果をもたらすためのＲＮＡｉ剤の量を指す。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される方法は、本明細書に開示されるＲＮＡｉ剤の投与に加えて、第２の治療薬又は処置を施すステップをさらに含む。いくつかの実施形態では、第２の治療薬は、別のＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤（例えば、ＭＵＣ５ＡＣ標的内の異なる配列を標的化するＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤）である。他の実施形態では、第２の治療薬は、小分子薬、抗体、抗体断片、及び／又はアプタマーであり得る。
いくつかの実施形態では、異なる配列を有する少なくとも２つのＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤の組み合わせ又はカクテルを含む組成物が本明細書に記載される。いくつかの実施形態では、２つ以上のＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤は各々、別々にかつ独立して、標的化基に連結される。いくつかの実施形態では、２つ以上のＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤は各々、インテグリン標的化リガンドを含むか又はそれからなる標的化基に連結される。いくつかの実施形態では、２つ以上のＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤は各々、αｖβ６インテグリン標的化リガンドを含むか又はそれからなる標的化基に連結される。
ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤を肺上皮細胞に送達するための組成物が本明細書に記載される。さらに、腎上皮細胞及び／又はＧＩ若しくは生殖管の上皮細胞及び／又は眼の表面上皮細胞を含む細胞にインビボでＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤を送達するための組成物が、本明細書に一般的に記載される。
一般に、本明細書に開示されるＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤の有効量は、体重１ｋｇ当たり約０．０００１～約２０ｍｇの肺沈着用量の範囲内、例えば、体重１ｋｇ当たり約０．００１～約５ｍｇの肺沈着用量の範囲内である。いくつかの実施形態では、ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤の有効量は、体重１ｋｇ当たり約０．０１ｍｇ～約３．０ｍｇの肺沈着用量の範囲内である。いくつかの実施形態では、ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤の有効量は、体重１ｋｇ当たり約０．０３ｍｇ～約２．０ｍｇの肺沈着用量の範囲内である。いくつかの実施形態では、ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤の有効量は、体重１ｋｇ当たり約０．０１～約１．０ｍｇの肺沈着用量の範囲内である。いくつかの実施形態では、ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤の有効量は、体重１ｋｇ当たり約０．２５～約１．０ｍｇの肺沈着用量の範囲内である。いくつかの実施形態では、ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤の有効量は、体重１ｋｇ当たり約０．２５ｍｇの肺沈着用量の範囲内である。いくつかの実施形態では、ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤の有効量は、体重１ｋｇ当たり約０．５０ｍｇの肺沈着用量の範囲内である。いくつかの実施形態では、ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤の有効量は、体重１ｋｇ当たり約１．０ｍｇの肺沈着用量の範囲内である。肺沈着用量（ＰＤＤ）の計算は、当該技術分野で既知の方法に従って行われる（Ｗｏｌｆｆ Ｒ．Ｋ．， Ｄｏｒａｔｏ Ｍ．Ａ．， Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｉｃ Ｔｅｓｔｉｎｇ ｏｆ Ｉｎｈａｌｅｄ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ａｅｒｏｓｏｌｓ， Ｃｒｉｔ Ｒｅｖ Ｔｏｘｉｃｏｌ．， １９９３； ２３（４）：３４３－３６９； Ｔｅｐｐｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｊ． Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ， ２０１６， ｖｏｌ． ３５（４）：３７６－３９２を参照のこと）。特にヒト対象について当該技術分野で周知である同等の及び代替的に許容可能な用量計算方法は、呼吸に適した送達用量（respirable delivered dose）（ＲＤＤ）を決定することである。ＲＤＤは、肺への浸透に好適なサイズの液滴に含まれる薬物の量を指す。一般に、本明細書に開示されるＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤の有効量は、体重１ｋｇ当たり約０．００１～約５ｍｇの呼吸に適した送達用量（ＲＤＤ）の範囲内である。
臨床応用に関して、ヒト対象においてそのようなＲＤＤを生じるために必要である、選択された送達装置（ネブライザーなど）に充填することが必要なＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤の量は、使用される送達装置に依る（例えば、 Ｈａｔｌｅｙ ＲＨＭ，Ｂｙｒｎｅ ＳＭ，Ｖａｒｉａｂｉｌｉｔｙ ｉｎ ｄｅｌｉｖｅｒｅｄ ｄｏｓｅ ａｎｄ ｒｅｓｐｉｒａｂｌｅ ｄｅｌｉｖｅｒｅｄ ｄｏｓｅ ｆｒｏｍ ｎｅｂｕｌｉｚｅｒｓ： ａｒｅ ｃｕｒｒｅｎｔ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ ｔｅｓｔｉｎｇ ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ ｓｕｆｆｉｃｉｅｎｔ ｔｏ ｐｒｏｄｕｃｅ ｍｅａｎｉｎｇｆｕｌ ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ？，Ｍｅｄ Ｄｅｖｉｃｅｓ，２０１７，１０：１７－２８を参照のこと）。いくつかの効率の低いネブライザーの場合、例えば、ＲＤＤは、ネブライザーに充填される用量の約１５％～２５％である。例えば、他のより効率的な装置の場合、ＲＤＤは、ネブライザーに充填される用量の約５０％、約６０％、又はさらに６０％超である。いくつかの実施形態では、例えば、約５ｍｇ、約１０μｍ、約２０ｍｇ、約２５ｍｇ、約５０ｍｇ、約７５ｍｇ、約１００ｍｇ、約１５０ｍｇ、約２００ｍｇ、約２５０ｍｇ、又は約３００ｍｇのＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤の固定用量を、選択されたそれぞれの装置に充填することができ、これは、１用量当たり約０．００１～約５ｍｇ／体重ｋｇのＲＤＤを生じる。投与されることが所望されるか又は必要とされる量はまた、患者の全体的な健康状態、送達される化合物の相対的な生物学的有効性、薬物の製剤化、製剤中の賦形剤の存在及び種類、及び投与経路などの変動要因に依るであろう。投与される初期用量は、所望の血中レベル又は組織レベルに迅速に達成するために上記の上限レベルを超えて増加させることができ、あるいは、初期用量は最適値未満であり得ることも理解されるべきである。様々な実施形態では、用量は、毎日、毎週、隔週、３週ごと、月に１回、四半期に１回（すなわち、３ヶ月ごとに１回）、又は６ヶ月ごとに１回投与されてもよい。様々な実施形態では、用量は、上記で提供された範囲内に含まれる他の間隔で投与されてもよい。
疾患の処置のため、又は疾患の処置のための薬剤若しくは組成物の形成のために、ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤を含む本明細書に記載される医薬組成物は、賦形剤、又は第２若しくは他のＲＮＡｉ剤、小分子薬、抗体、抗体断片、ペプチド、及び／若しくはアプタマーを含むがこれらに限定されない、第２の治療薬若しくは処置と組み合わせることができる。
記載されたＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤は、薬学的に許容される賦形剤又は助剤に添加される場合、キット、容器、パック、又はディスペンサー中にパッケージングすることができる。本明細書に記載される医薬組成物は、乾燥粉末又はエアロゾル吸入器、他の定量吸入器、ネブライザー、プレフィルドシリンジ、又はバイアル中にパッケージングすることができる。
処置方法及びＭＵＣ５ＡＣ発現の阻害方法
本明細書に開示されるＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤は、ＲＮＡｉ剤の投与から恩恵を受ける疾患又は障害を有する対象（例えば、ヒト又は他の哺乳動物）を処置するために使用することができる。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＲＮＡｉ剤は、ＭＵＣ５ＡＣ ｍＲＮＡの発現の減少及び／若しくは阻害並びに／又はＭＵＣ５ＡＣ受容体レベルの低下から恩恵を受ける対象（例えば、ヒト）を処置するために使用することができる。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＲＮＡｉ剤は、粘膜閉塞性肺疾患（喘息、ＣＦ、ＣＯＰＤ、ＮＣＦＢ、ＰＣＤなど）、アレルギー性気管支肺アスペルギルス症、間質性肺疾患、がん（肺腺癌、膵臓がん、唾液腺癌、乳がん、胆管癌、卵巣がん、及び他の腫瘍など）、呼吸器感染症（呼吸器合胞体ウイルス、インフルエンザ、ライノウイルスなど）、中耳炎、炎症性腸疾患、胆石症、アレルギー性鼻炎、慢性副鼻腔炎、及び鼻ポリープ症を含むがこれらに限定されない、ＭＵＣ５ＡＣ受容体の減少から恩恵を受ける疾患又は障害を有する対象（例えば、ヒト）を処置するために使用することができる。いくつかの実施形態では、肺疾患は、重度の喘息である。対象の処置には、治療的処置及び／又は予防的処置が含まれ得る。対象には、治療有効量の本明細書に記載される任意の１つ以上のＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤が投与される。対象は、ヒト、患者、又はヒト患者であり得る。対象は、成人、青年、小児、又は幼児であり得る。本明細書に記載される医薬組成物の投与は、ヒト又は動物に行うことができる。
膜ＭＵＣ５ＡＣ活性の増加は、粘膜閉塞組織を促進することが既知である。いくつかの実施形態では、記載されたＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤は、対象においてＭＵＣ５ＡＣレベルの低下によって少なくとも部分的に媒介される少なくとも１つの症状を処置するために使用される。対象に、治療有効量の記載されたＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤のいずれか１つ以上が投与される。いくつかの実施形態では、対象に、予防有効量の記載されたＲＮＡｉ剤のいずれか１つ以上が投与され、それにより少なくとも１つの症状を予防又は阻害することによって対象を処置する。
特定の実施形態では、本開示は、処置を必要とする患者において、ＭＵＣ５ＡＣ遺伝子発現によって少なくとも部分的に媒介される疾患、障害、状態、又は病理学的状態を処置するための方法であって、本明細書に記載されるＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤のいずれかを患者に投与することを含む、方法を提供する。
いくつかの実施形態では、ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤は、対象における臨床症状又は病理学的状態を処置又は管理するために使用され、臨床症状又は病理学的状態は、ＭＵＣ５ＡＣ発現の減少によって少なくとも部分的に媒介される。対象に、治療有効量の本明細書に記載されるＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤又はＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤含有組成物の１つ以上が投与される。いくつかの実施形態では、方法は、本明細書に記載されるＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤を含む組成物を処置される対象に投与することを含む。
さらなる態様では、本開示は、ＭＵＣ５ＡＣ受容体レベルの低下によって対処され得る疾患又は症状を処置するための方法（予防的又は防止的処置を含む）であって、それを必要とする対象に、表２、表３、又は表１１のいずれかの配列を含むアンチセンス鎖を含むＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤を投与することを含む、方法を特徴とする。このような方法で使用するための組成物も本明細書に記載される。
記載されたＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤及び／又はＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤を含む組成物は、ＭＵＣ５ＡＣタンパク質又はＭＵＣ５ＡＣ遺伝子発現の増強又は上昇によって引き起こされる疾患又は症状の治療的処置のための方法に使用することができる。このような方法には、本明細書に記載されるＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤を対象、例えば、ヒト又は動物対象に投与することが含まれる。
別の態様では、本開示は、ＭＵＣ５ＡＣ発現によって少なくとも部分的に媒介される病理学的状態（症状又は疾患など）を処置する（予防的処置を含む）ための方法であって、治療有効量の、表２、表３、又は表１１の配列のいずれかの配列を含むアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を対象に投与するステップを含む、方法を提供する。
いくつかの実施形態では、ＭＵＣ５ＡＣ遺伝子の発現を阻害するための方法であって、表２、表３、又は表１１の配列のいずれかの配列を含むアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を細胞に投与することを含む、方法が本明細書に開示される。
いくつかの実施形態では、ＭＵＣ５ＡＣ発現によって少なくとも部分的に媒介される病理学的状態を処置する（予防的処置を含む）ための方法であって、治療有効量の、表２、表４、表５、表６、表７、又は表１１の配列のいずれかの配列を含むセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を対象に投与することを含む、方法が本明細書に開示される。
いくつかの実施形態では、ＭＵＣ５ＡＣ遺伝子の発現を阻害するための方法であって、表２、表４、表５、表６、表７、又は表１１の配列のいずれかの配列を含むセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を細胞に投与することを含む、方法が本明細書に開示される。
いくつかの実施形態では、ＭＵＣ５ＡＣ発現によって少なくとも部分的に媒介される病理学的状態を処置する（予防的処置を含む）ための方法であって、治療有効量の、表４、表５、表６、表７、又は表１１の配列のいずれかの配列を含むセンス鎖及び表３又は表１１の配列のいずれかの配列を含むアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を対象に投与することを含む、方法が本明細書に開示される。
いくつかの実施形態では、ＭＵＣ５ＡＣ遺伝子の発現を阻害するための方法であって、表４、表５、表６、表７、又は表１１の配列のいずれかの配列を含むセンス鎖及び表３又は表１１の配列のいずれかの配列を含むアンチセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤を細胞に投与することを含む、方法が本明細書に開示される。
いくつかの実施形態では、ＭＵＣ５ＡＣ遺伝子の発現を阻害する方法であって、表４、表５、表６、表７、又は表１１の配列のいずれかの核酸塩基配列からなるセンス鎖及び表３又は表１１の配列のいずれかの核酸塩基配列からなるアンチセンス鎖を含むＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤を対象に投与することを含む、方法が本明細書に開示される。他の実施形態では、ＭＵＣ５ＡＣ遺伝子の発現を阻害する方法であって、表４、表５、表６、表７、又は表１１の修飾配列のいずれかの修飾配列からなるセンス鎖及び表３又は表１１の修飾配列のいずれかの修飾配列からなるアンチセンス鎖を含むＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤を対象に投与することを含む、方法が本明細書に開示される。
いくつかの実施形態では、細胞におけるＭＵＣ５ＡＣ遺伝子の発現を阻害するための方法であって、表８Ａ、８Ｂ、８Ｃ、９、１０Ａ、１０Ｂ、及び１１に示される二重鎖のうちの１つの二重鎖構造を含む１つ以上のＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤を投与することを含む、方法が本明細書に開示される。
いくつかの実施形態では、記載されたＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤が投与される対象の特定の肺上皮細胞におけるＭＵＣ５ＡＣタンパク質及び／又はＭＵＣ５ＡＣ ｍＲＮＡの分量又は量は、ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤が投与される前の対象又はＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤を受けていない対象と比較して、少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は９９％超減少する。いくつかの実施形態では、記載されたＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤が投与される対象の特定の上皮細胞におけるＭＵＣ５ＡＣタンパク質レベルは、ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤が投与される前の対象又はＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤を受けていない対象と比較して、少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は９９％超低下する。対象における遺伝子発現レベル、タンパク質レベル、及び／又はｍＲＮＡレベルは、対象の細胞、細胞群、及び／又は組織において低下し得る。いくつかの実施形態では、記載されたＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤が投与された対象における特定の上皮細胞におけるＭＵＣ５ＡＣ ｍＲＮＡレベルは、ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤が投与される前の対象又はＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤を受けていない対象と比較して、少なくとも約３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、又は９８％低下する。
ＭＵＣ５ＡＣ ｍＲＮＡ及びＭＵＣ５ＡＣタンパク質レベルの低下は、当該技術分野で既知の任意の方法によって評価することができる。ＭＵＣ５ＡＣ ｍＲＮＡ及び／又はＭＵＣ５ＡＣタンパク質レベルの低下又は減少は、本明細書では纏めて、ＭＵＣ５ＡＣ遺伝子発現の減少、低下、又は阻害と称される。本明細書に示される実施例は、ＭＵＣ５ＡＣの阻害を評価するための既知の方法を例示する。
細胞、組織、器官、及び非ヒト生物
本明細書に記載されるＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤の少なくとも１つを含む細胞、組織、器官、及び非ヒト生物が企図される。細胞、組織、器官、又は非ヒト生物は、ＲＮＡｉ剤を細胞、組織、器官、又は非ヒト生物に送達することによって作製される。
追加の例示的な実施形態
ここでは、開示された技術の特定の追加の例示的な実施形態が提供される。これらの実施形態は単なる例示であり、本開示又は本明細書に添付される特許請求の範囲の範囲を限定するものではない。
実施形態１．ムチン５ＡＣ遺伝子の発現を阻害するためのＲＮＡｉ剤であって、
表２又は表３に提供される配列のいずれか１つと０又は１ヌクレオチド異なる少なくとも１７個の連続するヌクレオチドを含むアンチセンス鎖、及び
前記アンチセンス鎖と少なくとも部分的に相補的なヌクレオチド配列を含むセンス鎖
を含む、ＲＮＡｉ剤。
実施形態２．前記アンチセンス鎖が、表２又は表３に提供される配列のいずれか１つのヌクレオチド２～１８を含む、実施形態１に記載のＲＮＡｉ剤。
実施形態３．前記センス鎖が、表２又は表４に提供される配列のいずれか１つと０又は１ヌクレオチド異なる少なくとも１７個の連続するヌクレオチドのヌクレオチド配列を含み、前記センス鎖が、前記アンチセンス鎖と前記１７個の連続するヌクレオチドにわたって少なくとも８５％の相補性を有する領域を有する、実施形態１又は２に記載のＲＮＡｉ剤。
実施形態４．前記ＲＮＡｉ剤の少なくとも１つのヌクレオチドが、修飾ヌクレオチドであるか、又は修飾ヌクレオシド間結合を含む、実施形態１～３のいずれか一項に記載のＲＮＡｉ剤。
実施形態５．前記ヌクレオチドの全て又は実質的に全てが、修飾ヌクレオチドである、実施形態１～４のいずれか一項に記載のＲＮＡｉ剤。
実施形態６．前記修飾ヌクレオチドが、２’－Ｏ－メチルヌクレオチド、２’－フルオロヌクレオチド、２’－デオキシヌクレオチド、２’，３’－セコヌクレオチド模倣体、ロックドヌクレオチド、２’－Ｆ－アラビノヌクレオチド、２’－メトキシエチルヌクレオチド、脱塩基ヌクレオチド、リビトール、逆方向ヌクレオチド、逆方向２’－Ｏ－メチルヌクレオチド、逆方向２’－デオキシヌクレオチド、２’－アミノ修飾ヌクレオチド、２’－アルキル修飾ヌクレオチド、モルホリノヌクレオチド、ホスホン酸ビニル含有ヌクレオチド、ホスホン酸シクロプロピル含有ヌクレオチド、及び３’－Ｏ－メチルヌクレオチドからなる群から選択される、実施形態４又は５に記載のＲＮＡｉ剤。
実施形態７．前記ヌクレオチドの全て又は実質的に全てが、２’－Ｏ－メチルヌクレオチド、２’－フルオロヌクレオチド、又はそれらの組み合わせで修飾されている、実施形態５に記載のＲＮＡｉ剤。
実施形態８．前記アンチセンス鎖が、表３又は表１１に提供される前記修飾アンチセンス鎖配列のいずれか１つのヌクレオチド配列を含む、実施形態１～７のいずれか一項に記載のＲＮＡｉ剤。
実施形態９．前記センス鎖が、表４又は表１１に提供される修飾センス鎖配列のいずれか１つのヌクレオチド配列を含む、実施形態１～８のいずれか一項に記載のＲＮＡｉ剤。
実施形態１０．前記アンチセンス鎖が、表３又は表１１に提供される修飾アンチセンス鎖配列のいずれか１つのヌクレオチド配列を含み、前記センス鎖が、表４又は表１１に提供される修飾センス鎖配列のいずれか１つのヌクレオチド配列を含む、実施形態１に記載のＲＮＡｉ剤。
実施形態１１．前記センス鎖が、１８～３０ヌクレオチド長であり、前記アンチセンス鎖が、１８～３０ヌクレオチド長である、実施形態１～１０のいずれか一項に記載のＲＮＡｉ剤。
実施形態１２．前記センス鎖及び前記アンチセンス鎖がそれぞれ、１８ヌクレオチド及び２７ヌクレオチド長である、実施形態１１に記載のＲＮＡｉ剤。
実施形態１３．前記センス鎖及び前記アンチセンス鎖がそれぞれ、１８ヌクレオチド及び２４ヌクレオチド長である、実施形態１２に記載のＲＮＡｉ剤。
実施形態１４．前記センス鎖及び前記アンチセンス鎖がそれぞれ、２１ヌクレオチド長である、実施形態１３に記載のＲＮＡｉ剤。
実施形態１５．前記ＲＮＡｉ剤が２つの平滑末端を有する、実施形態１４に記載のＲＮＡｉ剤。
実施形態１６．前記センス鎖が、１つ又は２つの末端キャップを含む、実施形態１～１５のいずれか一項に記載のＲＮＡｉ剤。
実施形態１７．前記センス鎖が、１つ又は２つの逆位脱塩基残基を含む、実施形態１～１６のいずれか一項に記載のＲＮＡｉ剤。
実施形態１８．前記ＲＮＡｉ剤が、表８Ａ、表８Ｂ、表８Ｃ、表９、表１０Ａ、又は表１０Ｂの二本鎖のうちのいずれか１つの構造を有する二本鎖を形成するセンス鎖及びアンチセンス鎖からなる、実施形態１に記載のＲＮＡｉ剤。
実施形態１９．前記ヌクレオチドの全て又は実質的に全てが修飾ヌクレオチドである、実施形態１８に記載のＲＮＡｉ剤。
実施形態２０．前記アンチセンス鎖が、以下のヌクレオチド配列（５’→３’）：
ＵＵＧＵＡＧＵＡＧＵＣＧＣＡＧＡＡＣＡ（配列番号７９）；又は
ＵＵＣＵＵＧＵＵＣＡＧＧＣＡＡＡＵＣＡ（配列番号８３）
のうちの１つと０又は１ヌクレオチド異なるヌクレオチド配列からなるか、それから本質的になるか、又はそれを含む、実施形態１に記載のＲＮＡｉ剤。
実施形態２１．前記アンチセンス鎖が、以下のヌクレオチド配列（５’→３’）：
ＵＵＧＵＡＧＵＡＧＵＣＧＣＡＧＡＡＣＡＧＣ（配列番号１５２５）；又は
ＵＵＣＵＵＧＵＵＣＡＧＧＣＡＡＡＵＣＡＧＣ（配列番号１５３５）
のうちの１つと０又は１ヌクレオチド異なるヌクレオチド配列からなるか、それから本質的になるか、又はそれを含む、実施形態１に記載のＲＮＡｉ剤。
実施形態２２．前記センス鎖が、以下のヌクレオチド配列（５’→３’）：
ＵＧＵＵＣＵＧＣＧＡＣＵＡＣＵＡＣＡＡ（配列番号５６８）；又は
ＵＧＡＵＵＵＧＣＣＵＧＡＡＣＡＡＧＡＡ（配列番号５７２）
のうちの１つと０又は１ヌクレオチド異なるヌクレオチド配列からなるか、それから本質的になるか、又はそれを含む、実施形態１に記載のＲＮＡｉ剤。
実施形態２３．前記ヌクレオチドの全て又は実質的に全てが、修飾ヌクレオチドである、実施形態２０、２１、又は２２に記載のＲＮＡｉ剤。
実施形態２４．前記アンチセンス鎖が、以下のヌクレオチド配列（５’→３’）：
ｃＰｒｐｕｓＵｆｓｇｓＵｆａＧｆｕＡｆｇＵｆｃＧｆｃＡｆｇＡｆａＣｆａＧｆｓｃ（配列番号１１２７）；
ｕｓＵｆｓｇｓＵｆａＧｆｕＡｆｇＵｆｃＧｆｃＡｆｇＡｆａＣｆａＧｆｓｃ（配列番号１０６５）；
ｕｓＵｆｓｃｓｕｕｇｕｕｃａｇＧｆｃＡｆａＡｆｕｃａｇｓｃ（配列番号１１６６）；又は
ｃＰｒｐｕＵｆｃｕｕｇｕｕｃａｇＧｆｃＡｆａＡｆｕｃａｇｓｃ（配列番号１１９１）；
のうちのいずれか１つと０又は１ヌクレオチド異なる修飾ヌクレオチド配列を含むか、それからなるか、又はそれから本質的になり、
式中、ａ、ｃ、ｇ、及びｕが、それぞれ、２’－Ｏ－メチルアデノシン、２’－Ｏ－メチルシチジン、２’－Ｏ－メチルグアノシン、及び２’－Ｏ－メチルウリジンを表し、Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、及びＵｆが、それぞれ、２’－フルオロアデノシン、２’－フルオロシチジン、２’－フルオログアノシン、及び２’－フルオロウリジンを表し、ｃＰｒｐｕが、５’－シクロプロピルホスホネート－２’－Ｏ－メチルウリジンを表し、ｓが、ホスホロチオエート結合を表し、前記センス鎖上の前記ヌクレオチドの全て又は実質的に全てが、修飾ヌクレオチドである、実施形態１に記載のＲＮＡｉ剤。
実施形態２５．前記センス鎖が、以下のヌクレオチド配列（５’→３’）：
ｇｓｃｕｇｕｕｃｕＧｆＣｆＧｆａｃｕａｃｕａｃａａ（配列番号１２６５）；又は
ｇｓｃｕｇａｕＵｆｕＧｆｃＣｆｕｇａａｃａａｇａａ（配列番号１３１５）；
のうちのいずれか１つと０又は１ヌクレオチド異なる修飾ヌクレオチド配列を含むか、それからなるか、又はそれから本質的になり、
式中、ａ、ｃ、ｇ、及びｕが、それぞれ、２’－Ｏ－メチルアデノシン、２’－Ｏ－メチルシチジン、２’－Ｏ－メチルグアノシン、及び２’－Ｏ－メチルウリジンを表し、Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、及びＵｆが、それぞれ、２’－フルオロアデノシン、２’－フルオロシチジン、２’－フルオログアノシン、及び２’－フルオロウリジンを表し、ｓが、ホスホロチオエート結合を表し、前記アンチセンス鎖上の前記ヌクレオチドの全て又は実質的に全てが、修飾ヌクレオチドである、実施形態１に記載のＲＮＡｉ剤。
実施形態２６．前記センス鎖が、前記ヌクレオチド配列の３’末端、前記ヌクレオチド配列の５’末端、又はその両方において逆位脱塩基残基をさらに含む、実施形態２０～２５のいずれか一項に記載のＲＮＡｉ剤。
実施形態２７．前記ＲＮＡｉ剤が、標的化リガンドに連結されている、実施形態１～２６のいずれか一項に記載のＲＮＡｉ剤。
実施形態２８．前記標的化リガンドが、上皮細胞上に発現される細胞受容体に対して親和性を有する、実施形態２７に記載のＲＮＡｉ剤。
実施形態２９．前記標的化リガンドが、インテグリン標的化リガンドを含む、実施形態２８に記載のＲＮＡｉ剤。
実施形態３０．前記インテグリン標的化リガンドが、αｖβ６インテグリン標的化リガンドである、実施形態２９に記載のＲＮＡｉ剤。
実施形態３１．前記標的化リガンドが、以下の構造：
若しくはその薬学的に許容される塩、又は
若しくはその薬学的に許容される塩を含み、
が、前記ＲＮＡｉ剤への結合点を示す、実施形態３０に記載のＲＮＡｉ剤。
実施形態３２．前記ＲＮＡｉ剤が、以下の構造：

又はその薬学的に許容される塩を有する標的化リガンドに結合し、
が、前記ＲＮＡｉ剤への結合点を示す、実施形態２７～３０のいずれか一項に記載のＲＮＡｉ剤。
実施形態３３．前記標的化リガンドが、以下の構造：
又はその薬学的に許容される塩を有し、
が、前記ＲＮＡｉ剤への結合点を示す、実施形態２７～３０のいずれか一項に記載のＲＮＡｉ剤：
実施形態３４．前記標的化リガンドが、前記センス鎖に結合している、実施形態２７～３３のいずれか一項に記載のＲＮＡｉ剤。
実施形態３５．前記標的化リガンドが、前記センス鎖の５’末端に結合している、実施形態３４に記載のＲＮＡｉ剤。
実施形態３６．実施形態１～３５のいずれか一項に記載のＲＮＡｉ剤を含む組成物であって、薬学的に許容される賦形剤をさらに含む、組成物。
実施形態３７．ムチン５ＡＣ遺伝子の発現を阻害することができる第２のＲＮＡｉ剤をさらに含む、実施形態３６に記載の組成物。
実施形態３８．１つ以上の追加の治療薬をさらに含む、実施形態３６又は３７に記載の組成物。
実施形態３９．吸入による投与のために製剤化される、実施形態３６～３８のいずれか一項に記載の組成物。
実施形態４０．定量吸入器、ジェット式ネブライザー、振動メッシュ式ネブライザー、又はソフトミスト吸入器によって送達される、実施形態３９に記載の組成物。
実施形態４１．前記ＲＮＡｉ剤が、ナトリウム塩である、実施形態３６～４０のいずれか一項に記載の組成物。
実施形態４２．前記薬学的に許容される賦形剤が、注射用の水である、実施形態３６～４１のいずれか一項に記載の組成物。
実施形態４３．前記薬学的に許容される賦形剤が、等張生理食塩水である、実施形態３６～４２のいずれか一項に記載の組成物。
実施形態４４．細胞におけるＭＵＣ５ＡＣ遺伝子の発現を阻害するための方法であって、有効量の実施形態１～３５のいずれか一項に記載のＲＮＡｉ剤又は実施形態３６～４３のいずれか一項に記載の組成物を細胞に導入することを含む、方法。
実施形態４５．前記細胞が、対象体内にある、実施形態４４に記載の方法。
実施形態４６．前記対象が、ヒト対象である、実施形態４５に記載の方法。
実施形態４７．前記ＲＮＡｉ剤の投与後、前記ムチン５ＡＣ遺伝子発現が少なくとも約３０％阻害される、実施形態４４～４６のいずれか一項に記載の方法。
実施形態４８．ＭＵＣ５ＡＣタンパク質レベルに関連する１つ以上の症状又は疾患を処置する方法であって、それを必要とするヒト対象に、治療有効量の実施形態３６～４３のいずれか一項に記載の組成物を投与することを含む、方法。
実施形態４９．前記疾患が、粘膜閉塞性肺疾患である、実施形態４８に記載の方法。
実施形態５０．前記粘膜閉塞性肺疾患が、喘息（重度の喘息を含む）、嚢胞性線維症（ＣＦ）、気管支拡張症（ＮＣＦＢ）、又は慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）である、実施形態４９に記載の方法。
実施形態５１．前記疾患が、喘息（重度の喘息を含む）である、実施形態５０に記載の方法。
実施形態５２．前記疾患が、がんである、実施形態４８に記載の方法。
実施形態５３．前記がんが、肺腺癌、膵臓がん、唾液腺癌、乳がん、胆管癌、又は卵巣がんである、実施形態５２に記載の方法。
実施形態５４．前記ＲＮＡｉ剤が、前記対象の体重１ｋｇ当たり約０．０１ｍｇ～約５．０ｍｇの肺沈着用量（ＰＤＤ）で投与される、実施形態４４～５３のいずれか一項に記載の方法。
実施形態５５．前記ＲＮＡｉ剤が、前記対象の体重１ｋｇ当たり約０．１ｍｇ～約２．０ｍｇの肺沈着用量（ＰＤＤ）で投与される、実施形態４４～５３のいずれか一項に記載の方法。
実施形態５６．前記ＲＮＡｉ剤が、前記対象の体重１ｋｇ当たり約０．０１ｍｇ～約５．０ｍｇの吸入送達用量（ＲＤＤ）で投与される、実施形態４４～５３のいずれか一項に記載の方法。
実施形態５７．前記ＲＮＡｉ剤が、前記対象の体重１ｋｇ当たり約０．１ｍｇ～約２．０ｍｇの吸入送達用量（ＲＤＤ）で投与される、実施形態４４～５３のいずれか一項に記載の方法。
実施形態５８．前記ＲＮＡｉ剤が、２回以上の用量で投与される、実施形態４４～５７のいずれか一項に記載の方法。
実施形態５９．ムチン５ＡＣタンパク質レベルによって少なくとも部分的に媒介される疾患、障害、又は症状の処置のための、実施形態１～３５のいずれか一項に記載のＲＮＡｉ剤の使用。
実施形態６０．ムチン５ＡＣ遺伝子発現によって少なくとも部分的に媒介される疾患、障害、又は症状の処置のための、実施形態３６～４３のいずれか一項に記載の組成物の使用。
実施形態６１．ムチン５ＡＣ遺伝子発現によって少なくとも部分的に媒介される疾患、障害、又は症状の処置のための医薬の製造のための、実施形態３６～４３のいずれか一項に記載の組成物の使用。
実施形態６２．前記疾患が、喘息（重度の喘息を含む）である、実施形態５９～６１のいずれか一項に記載の使用。
実施形態６３．センス鎖とアンチセンス鎖とをアニーリングして二本鎖リボ核酸分子を形成することを含む、実施形態１～３５のいずれか一項に記載のＲＮＡｉ剤を製造する方法。
実施形態６４．前記センス鎖が、標的化リガンドを含む、実施形態６３に記載の方法。
実施形態６５．標的化リガンドを前記センス鎖に結合させることを含む、実施形態６４に記載の方法。
実施形態６６．ムチン５ＡＣ遺伝子の発現を阻害するためのＲＮＡｉ剤であって、
表２、表３、又は表１１に提供される配列のいずれか１つと０、１、２、又は３ヌクレオチド異なる少なくとも１５個の連続するヌクレオチドを含むアンチセンス鎖、及び
アンチセンス鎖と少なくとも部分的に相補的であるヌクレオチド配列を含むセンス鎖
を含む、ＲＮＡｉ剤。
実施形態６７．ムチン５ＡＣ（ＭＵＣ５ＡＣ）遺伝子の発現を阻害するためのＲＮＡｉ剤であって、
表２又は表３に開示される配列のいずれか１つと０、１、２、又は３ヌクレオチド異なる少なくとも１５個の連続するヌクレオチドを含むアンチセンス鎖、及び
アンチセンス鎖と少なくとも部分的に相補的であるヌクレオチド配列を含むセンス鎖
を含む、ＲＮＡｉ剤。
実施形態６８．ムチン５ＡＣ（ＭＵＣ５ＡＣ）遺伝子の発現を阻害するためのＲＮＡｉ剤であって、
配列番号１のヌクレオチドの同じ長さのストレッチと０、１、２、又は３ヌクレオチド異なる少なくとも１５個の連続するヌクレオチドを含むセンス鎖、及び
センス鎖と少なくとも部分的に相補的であるヌクレオチド配列を含むアンチセンス鎖
を含む、ＲＮＡｉ剤。
実施形態６９．表１の標的ヌクレオチド配列のいずれかと相補的である、０、１、２、又は３ヌクレオチド異なる少なくとも１５個の連続するヌクレオチドを有するアンチセンスヌクレオチド配列を含む、ＭＵＣ５ＡＣ遺伝子の阻害剤。
実施形態７０．（ｉ）表２、表３、又は表１１のヌクレオチド配列のいずれかと０、１、２、又は３ヌクレオチド異なる少なくとも１５個の連続するヌクレオチドを有するヌクレオチド配列を含むアンチセンス鎖、及び（ｉｉ）アンチセンス鎖と少なくとも部分的に相補的なセンス鎖を含む、ＲＮＡｉ剤。
実施形態７１．（ｉ）表２、表３、又は表１１のアンチセンス鎖ヌクレオチド配列のいずれかからのヌクレオチド配列を含むか、それからなるか、又はそれから本質的になるアンチセンス鎖、及び（ｉｉ）表２、表４、表５、表６、表７、又は表１１のセンス鎖ヌクレオチド配列のいずれかからのヌクレオチド配列を含むか、それからなるか、又はそれから本質的になるセンス鎖を含む、ＲＮＡｉ剤。
実施形態７２．アニールして二重鎖を形成するアンチセンス鎖及びセンス鎖を含むＲＮＡｉ剤であって、二重鎖が、表８Ａ、表８Ｂ、表８Ｃ、表９、表１０、又は表１１に記載の二重鎖のいずれかの構造を有する、ＲＮＡｉ剤。
実施形態７３．ムチン５ＡＣ遺伝子の発現を阻害するためのＲＮＡｉ剤であって、
表２又は表３に提供される配列のいずれか１つと０又は１ヌクレオチド異なる少なくとも１７個の連続するヌクレオチドを含むアンチセンス鎖、及び
アンチセンス鎖と少なくとも部分的に相補的であるヌクレオチド配列を含むセンス鎖
を含み、
任意選択で、センス鎖及びアンチセンス鎖のヌクレオチドの全て又は実質的に全てが、修飾ヌクレオチドであり、センス鎖が、任意選択で標的化リガンドに連結されている、ＲＮＡｉ剤。
上記で提供される実施形態及び特徴物を以下の非限定的な実施例によって例示する。
実施例１．ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤の合成
本明細書に開示されるＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤二重鎖を以下に従って合成した。
Ａ．合成。ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤のセンス鎖及びアンチセンス鎖をオリゴヌクレオチド合成に使用される固相上のホスホルアミダイト技術に従って合成した。スケールに応じて、ＭｅｒＭａｄｅ９６Ｅ（登録商標）（Ｂｉｏａｕｔｏｍａｔｉｏｎ）、ＭｅｒＭａｄｅｌ２（登録商標）（Ｂｉｏａｕｔｏｍａｔｉｏｎ）、又はＯＰ Ｐｉｌｏｔ１００（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用した。制御細孔ガラス（ＣＰＧ、５００Ａ又は６００Ａ、Ｐｒｉｍｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（Ａｓｔｏｎ、ＰＡ、ＵＳＡ）から入手）で作られた固体支持体上で合成を行った。全てのＲＮＡ及び２’－修飾ＲＮＡホスホルアミダイトは、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ，ＷＩ，ＵＳＡ）から購入した。具体的に、使用した２’－Ｏ－メチルホスホルアミダイトは、以下のものを含んだ：（５’－Ｏ－ジメトキシトリチル－Ｎ６－（ベンゾイル）－２’－Ｏ－メチル－アデノシン－３’－Ｏ－（２－シアノエチル－）Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルアミノ）ホスホルアミダイト、５’－Ｏ－ジメトキシ－トリチル－Ｎ４－（アセチル）－２’－Ｏ－メチル－シチジン－３’－Ｏ－（２－シアノエチル－Ｎ，Ｎ－ジイソプロピル－アミノ）ホスホルアミダイト、（５’－Ｏ－ジメトキシトリチル－Ｎ２－（イソブチリル）－２’－Ｏ－メチル－グアノシン－３’－Ｏ－（２－シアノエチル－Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルアミノ）ホスホルアミダイト、及び５’－Ｏ－ジメトキシトリチル－２’－Ｏ－メチル－ウリジン－３’－Ｏ－（２－シアノエチル－Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルアミノ）ホスホルアミダイト。２’－デオキシ－２’－フルオロ－ホスホルアミダイトは、２’－Ｏ－メチルＲＮＡアミダイトと同じ保護基を有した。５’－ジメトキシトリチル－２’－Ｏ－メチル－イノシン－３’－Ｏ－（２－シアノエチル－Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルアミノ）ホスホロアミダイトは、Ｇｌｅｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ（Ｖｉｒｇｉｎｉａ）から購入した。逆位脱塩基（３’－Ｏ－ジメトキシトリチル－２’－デオキシリボース－５’－Ｏ－（２－シアノエチル－Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルアミノ）ホスホルアミダイト）は、ＣｈｅｍＧｅｎｅｓ（Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＭＡ，ＵＳＡ）から購入した。以下のＵＮＡホスホルアミダイトを使用した：５’－（４，４’－ジメトキシトリチル）－Ｎ６－（ベンゾイル）－２’，３’－セコ－アデノシン、２’－ベンゾイル－３’－［（２－シアノエチル）－（Ｎ，Ｎ－ジイソプロピル）］－ホスホルアミダイト、５’－（４，４’－ジメトキシトリチル）－Ｎ－アセチル－２’，３’－セコ－シトシン、２’－ベンゾイル－３’－［（２－シアノエチル））－（Ｎ，Ｎ－ジイソプロピル）］－ホスホルアミダイト、５’－（４，４’－ジメトキシトリチル）－Ｎ－イソブチリル－２’，３’－セコ－グアノシン、２’－ベンゾイル－３’－［（２－シアノエチル）－（Ｎ，Ｎ－ジイソプロピル）］－ホスホルアミダイト、及び５’－（４，４’－ジメトキシ－トリチル）－２’，３’－セコ－ウリジン、２’－ベンゾイル－３’－［（２－シアノエチル）－（Ｎ，Ｎ－ジイソプロピル）］－ホスホロアミダイト。ＴＦＡアミノリンクホスホルアミダイトも商業的に購入した（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）。リンカーＬ６は、プロパルギル－ＰＥＧ５－ＮＨＳとしてＢｒｏａｄＰｈａｒｍから購入し（カタログ番号ＢＰ－２０９０７）、標準的なカップリング条件を使用してアミノリンクホスホルアミダイトからのＮＨ２－Ｃ６基にカップリングして、－Ｌ６－Ｃ６－を形成した。リンカー－Ａｌｋ－ｃｙＨｅｘ－を形成するために、プロパルギル含有化合物ホスホルアミダイト化合物として、リンカーＡｌｋ－ｃｙＨｅｘも同様にＬｕｍｉｐｒｏｂｅから商業的に購入した（アルキンホスホルアミダイト、５’末端）。各場合において、本明細書に記載される条件を使用して、ホスホロチオエート結合を指定した通りに導入した。シクロプロピルホスホネートホスホルアミダイトを国際特許出願公開第ＷＯ２０１７／２１４１１２号に従って合成した（Ａｌｔｅｎｈｏｆｅｒ ｅｔ．ａｌ．，Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ（Ｒｏｙａｌ Ｓｏｃ．Ｃｈｅｍ．），５７（５５）：６８０８－６８１１（２０２１））。
トリアルキン含有ホスホルアミダイトを無水ジクロロメタン又は無水アセトニトリル（５０ｍＭ）に溶解し、他の全てのアミダイトを無水アセトニトリル（５０ｍＭ）に溶解し、モレキュラーシーブ（３Å）を添加した。５－ベンジルチオ－１Ｈ－テトラゾール（ＢＴＴ、アセトニトリル中２５０ｍＭ）又は５－エチルチオ－１Ｈ－テトラゾール（ＥＴＴ、アセトニトリル中２５０ｍＭ）を活性剤溶液として使用した。カップリング時間は、１０分（ＲＮＡ）、９０秒（２’Ｏ－Ｍｅ）、及び６０秒（２’Ｆ）であった。ホスホロチオエート結合を導入するために、無水アセトニトリル中の３－フェニル１，２，４－ジチアゾリン－５－オン（ＰＯＳ、ＰｏｌｙＯｒｇ，Ｉｎｃ．（Ｌｅｏｍｉｎｓｔｅｒ，ＭＡ，ＵＳＡ）から入手）の１００ｍＭ溶液を使用した。
あるいは、合成後に、トリアルキン部分を導入した（以下のセクションＥを参照のこと）。この経路の場合、センス鎖を一級アミンを含む５’末端及び／又は３’末端ヌクレオチドで官能化した。ＴＦＡアミノリンクホスホルアミダイトを無水アセトニトリル（５０ｍＭ）に溶解し、モレキュラーシーブ（３Å）を添加した。５－ベンジルチオ－１Ｈ－テトラゾール（ＢＴＴ、アセトニトリル中２５０ｍＭ）又は５－エチルチオ－１Ｈ－テトラゾール（ＥＴＴ、アセトニトリル中２５０ｍＭ）を活性剤溶液として使用した。カップリング時間は、１０分（ＲＮＡ）、９０秒（２’Ｏ－Ｍｅ）、及び６０秒（２’Ｆ）であった。ホスホロチオエート結合を導入するために、無水アセトニトリル中の３－フェニル１，２，４－ジチアゾリン－５－オン（ＰＯＳ，ＰｏｌｙＯｒｇ，Ｉｎｃ．（Ｌｅｏｍｉｎｓｔｅｒ，ＭＡ，ＵＳＡ）から入手）の１００ｍＭ溶液を使用した。
Ｂ．支持体結合オリゴマーの切断及び脱保護。固相合成の終了後、乾燥した固体支持体を、水中４０重量％メチルアミンの１：１体積の溶液及び２８％～３１％水酸化アンモニウム溶液（Ａｌｄｒｉｃｈ）で３０℃で１．５時間処理した。溶液を蒸発させ、固体残渣を水中で再構成した（以下を参照のこと）。
Ｃ．精製。ＴＳＫｇｅｌ ＳｕｐｅｒＱ－５ＰＷ １３ｍｍカラム及びＳｈｉｍａｄｚｕ ＬＣ－８システムを使用する陰イオン交換ＨＰＬＣによって、粗オリゴマーを精製した。緩衝液Ａは、２０ｍＭトリス、５ｍＭ ＥＤＴＡ（ｐＨ９．０）であり、かつ、２０％アセトニトリルを含み、緩衝液Ｂは、１．５Ｍ塩化ナトリウムを添加した緩衝液Ａと同じであった。２６０ｎｍでのＵＶトレースを記録した。適切な画分をプールし、次いで、１００ｍＭ重炭酸アンモニウム（ｐＨ６．７）及び２０％アセトニトリル又は濾過水のランニングバッファーを用いて、ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－２５微粒子を充填したＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ ＸＫ １６／４０カラムを使用するサイズ排除ＨＰＬＣに供した。あるいは、プールした画分を脱塩し、タンジェンタルフロー濾過によって適切な緩衝液又は溶媒系に交換した。
Ｄ．アニーリング。１×ＰＢＳ（リン酸緩衝生理食塩水、１×、Ｃｏｒｎｉｎｇ、Ｃｅｌｌｇｒｏ）中で等モルのＲＮＡ溶液（センス及びアンチセンス）を混合することによって相補鎖を混合し、ＲＮＡｉ剤を形成した。一部のＲＮＡｉ試薬を凍結乾燥し、－１５～－２５℃で保存した。１ｃＰＢＳ中の溶液の吸光度をＵＶ－Ｖｉｓ分光計で測定することによって、二重鎖の濃度を決定した。次いで、２６０ｎｍでの溶液の吸光度に変換係数（０．０５０ｍｇ／（ｍＬ－ｃｍ））及び希釈係数を掛けて、二重鎖の濃度を決定した。
Ｅ．トリアルキンリンカーの結合。いくつかの実施形態では、トリアルキンリンカーは、ホスホルアミダイトとして樹脂上でＲＮＡｉ剤のセンス鎖に結合される（例示のトリアルキンリンカーホスホルアミダイトの合成については実施例１Ｇを参照のこと、及びホスホルアミダイトの結合については実施例１Ａを参照のこと）。他の実施形態では、トリアルキンリンカーは、以下に記載するように、樹脂からの切断後にセンス鎖に結合されてもよい：アニーリングの前又は後のいずれかで、いくつかの実施形態では、５’又は３’アミン官能化センス鎖をトリアルキンリンカーに結合させる。本明細書に開示される構築物の形成に使用することができるトリアルキンリンカー構造の例は、以下の通りである。
トリアルキンリンカーをアニーリングされた二本鎖に結合させるために、アミン官能化二重鎖を９０％ＤＭＳＯ／１０％Ｈ２Ｏに約５０～７０ｍｇ／ｍＬで溶解した。４０当量のトリエチルアミンを添加し、続いて３当量のトリアルキン－ＰＮＰを添加した。完了したら、コンジュゲートを１×リン酸緩衝食塩水／アセトニトリル（１：１４の比）の溶媒系中で２回沈殿させ、乾燥させた。
Ｆ．標的化リガンドＳＭ６．１の合成
（（Ｓ）－３－（４－（４－（（１４－アジド－３，６，９，１２－テトラオキサテトラデシル）オキシ）ナフタレン－１－イル）フェニル）－３－（２－（４－（（４－メチルピリジン－２－イル）アミノ）ブタンアミド）アセトアミド）プロパン酸）
化合物５（ｔｅｒｔ－ブチル（４－メチルピリジン－２－イル）カルバメート）（０．５０１ｇ、２．４０６ｍｍｏｌ、１当量）をＤＭＦ（１７ｍＬ）に溶解した。混合物にＮａＨ（０．１１６ｍｇ、３．０１ｍｍｏｌ、１．２５当量、油中６０％分散液）を添加した。混合物を１０分間撹拌した後、化合物２０（４－ブロモ酪酸エチル（０．７４５ｇ、３．８２ｍｍｏｌ、０．５４７ｍＬ））（Ｓｉｇｍａ１６７１１８）を添加した。３時間後、反応物をエタノール（１８ｍＬ）でクエンチし、濃縮した。濃縮物をＤＣＭ（５０ｍＬ）に溶解し、飽和ＮａＣｌ水溶液（１×５０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。生成物をＤＣＭ中０～５％メタノールの勾配でのシリカカラムで精製した。
化合物２１（０．８０ｇ、２．３７８ｍｍｏｌ）を１００ｍＬのアセトン：０．１Ｍ ＮａＯＨ［１：１］に溶解した。反応をＴＬＣ（ヘキサン中の５％酢酸エチル）によって監視した。有機物を濃縮して除去し、残渣を０．３Ｍクエン酸（４０ｍＬ）でｐＨ３～４に酸性化した。生成物をＤＣＭ（３×７５ｍＬ）で抽出した。有機物をプールし、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。生成物をさらに精製せずに使用した。
無水ＤＭＦ（１０ｍＬ）中の化合物２２（１．１ｇ、３．９５ｍｍｏｌ、１当量）、化合物４５（５９５ｍｇ、４．７４ｍｍｏｌ、１．２当量）、及びＴＢＴＵ（１．５２ｇ、４．７４ｍｍｏｌ、１．２当量）の溶液に、ジイソプロピルエチルアミン（２．０６ｍＬ、１１．８５ｍｍｏｌ、３当量）を０℃で添加した。反応混合物を室温に温め、３時間撹拌した。反応を飽和ＮａＨＣＯ３溶液（１０ｍＬ）によってクエンチした。水相を酢酸エチル（３×１０ｍＬ）で抽出し、有機相を合わせ、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮した。固定相としてシリカゲルを使用するＣｏｍｂｉＦｌａｓｈ（登録商標）によって、生成物を分離した。ＬＣ－ＭＳ：計算値［Ｍ＋Ｈ］＋３６６．２０、実測値３６７。
無水ＤＭＦ（１０ｍＬ）中の化合物６１（２ｇ、８．９６ｍｍｏｌ、１当量）及び化合物６２（２．１３ｍＬ、１７．９３ｍｍｏｌ、２当量）の溶液に、Ｋ２ＣＯ３（２．４８ｇ、１７．９３ｍｍｏｌ、２当量）を０℃で添加した。反応混合物を室温に温め、一晩撹拌した。反応物を水（１０ｍＬ）によってクエンチした。水相を酢酸エチル（３×１０ｍＬ）で抽出し、有機相を合わせ、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮した。固定相としてシリカゲルを使用するＣｏｍｂｉＦｌａｓｈ（登録商標）によって、生成物を分離した。
ＴＨＦ（５ｍＬ）及びH２Ｏ（５ｍＬ）中の化合物６０（１．７７ｇ、４．８４ｍｍｏｌ、１当量）の溶液に、水酸化リチウム一水和物（０．６１ｇ、１４．５３ｍｍｏｌ、３当量）を何回かに分けて０℃で添加した。反応混合物を室温に温めた。室温で３時間攪拌後、反応混合物をＨＣｌ（６Ｎ）によってｐＨ３．０に酸性化した。水相を酢酸エチル（３×２０ｍＬ）で抽出し、有機層を合わせ、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮した。ＬＣ－ＭＳ：計算値［Ｍ＋Ｈ］＋３５２．１８、実測値３５２。
無水ＴＨＦ（２０ｍＬ）中の化合物６３（１．８８ｇ、６．０ｍｍｏｌ、１．０当量）の溶液に、ヘキサン中のｎ－ＢｕＬｉ（３．６ｍＬ、９．０ｍｍｏｌ、１．５当量）を－７８℃で滴加した。反応物を－７８℃でさらに１時間維持した。次いで、ホウ酸トリイソプロピル（２．０８ｍＬ、９．０ｍｍｏｌ、１．５当量）を混合物に－７８℃で添加した。次いで、反応物を室温に温め、さらに１時間撹拌した。反応を飽和ＮH４Ｃｌ溶液（２０ｍＬ）によってクエンチし、ｐＨを３に調整した。水相をＥｔＯＡｃ（３×２０ｍＬ）で抽出し、有機相を合わせ、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮した。
化合物１２（３００ｍｇ、０．８３７ｍｍｏｌ、１．０当量）、化合物６５（３４９ｍｇ、１．２５６ｍｍｏｌ、１．５当量）、ＸＰｈｏｓ ＰｄＧ２（１３ｍｇ、０．０１６７ｍｍｏｌ、０．０２当量）、及びＫ３ＰＯ４（３５５ｍｇ、１．６７５ｍｍｏｌ、２．０当量）を丸底フラスコ中で混合した。フラスコをスクリューキャップセプタムで密閉し、次いで排気し、窒素を再充填した（このプロセスを合計３回繰り返した）。次いで、シリンジにより、ＴＨＦ（８ｍＬ）及び水（２ｍＬ）を添加した。混合物を窒素で２０分間バブリングし、反応物を室温で一晩維持した。反応物を水（１０ｍＬ）でクエンチし、水相を酢酸エチル（３×１０ｍＬ）で抽出した。有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮し、固定相としてシリカゲルを使用するＣｏｍｂｉＦｌａｓｈ（登録商標）により精製し、ヘキサン中の１５％ＥｔＯＡｃで溶出した。ＬＣ－ＭＳ：計算値［Ｍ＋Ｈ］＋５１２．２４、実測値５１２．５６。
化合物６６（８５８ｍｇ、１．６７７ｍｍｏｌ、１．０当量）を氷浴によって冷却した。ジオキサン中のＨＣｌ（８．４ｍＬ、３３．５４ｍｍｏｌ、２０当量）をフラスコに添加した。反応物を室温に温め、さらに１時間撹拌した。溶媒をロータリーエバポレーターによって除去し、生成物をさらに精製せずに直接使用した。ＬＣ－ＭＳ：計算値［Ｍ＋Ｈ］＋４１２．１８、実測値４１２．４６。
無水ＤＭＦ（１５ｍＬ）中の化合物６４（５００ｍｇ、１．４２３ｍｍｏｌ、１当量）、化合物６７（６６９ｍｇ、１．４９４ｍｍｏｌ、１．０５当量）、及びＴＢＴＵ（５４８ｍｇ、０．４９２ｍｍｏｌ、１．２当量）の溶液に、ジイソプロピルエチルアミン（０．７４４ｍＬ、４．２６８ｍｍｏｌ、３当量）を０℃で添加した。反応混合物を室温に温め、さらに１時間撹拌した。反応物を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（１０ｍＬ）によってクエンチし、生成物を酢酸エチル（３×２０ｍＬ）で抽出した。有機相を合わせ、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮した。生成物を固定相としてシリカゲルを使用するＣｏｍｂｉＦｌａｓｈ（登録商標）によって精製し、ＤＣＭ中の３～４％メタノールで溶出した。収率は９６．２３％であった。ＬＣ－ＭＳ：計算値［Ｍ＋Ｈ］＋７４５．３５、実測値７４６．０８。
酢酸エチル（１０ｍＬ）中の化合物６８（１．０２ｇ、１．３６９ｍｍｏｌ、１当量）の溶液に、１０％Ｐｄ／Ｃ（０．１５ｇ、５０％Ｈ２Ｏ）を室温で添加した。反応混合物を室温に温め、反応をＬＣ－ＭＳによって監視した。反応物を室温で一晩維持した。固体をセライト（登録商標）を通して濾過し、溶媒をロータリーエバポレーターによって除去した。生成物をさらに精製せずに直接使用した。ＬＣ－ＭＳ：［Ｍ＋Ｈ］＋６５５．３１、実測値６５５．８７。
無水ＤＭＦ（２ｍＬ）中の化合物６９（１００ｍｇ、０．１５２ｍｍｏｌ、１当量）及びアジド－ＰＥＧ５－ＯＴｓ（１２８ｍｇ、０．３０５ｍｍｏｌ、２当量）の溶液に、Ｋ２ＣＯ３（４２ｍｇ、０．３０５ｍｍｏｌ、２当量）を０℃で添加した。反応混合物を８０℃で６時間撹拌した。反応物を飽和ＮａＨＣＯ３溶液によってクエンチし、水層を酢酸エチル（３×１０ｍＬ）で抽出した。有機相を合わせ、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮した。ＬＣ－ＭＳ：計算値［Ｍ＋Ｈ］＋９００．４０、実測値９０１．４６。
ＴＨＦ（２ｍＬ）及び水（２ｍＬ）中の化合物７２（５９ｍｇ、０．０６５６ｍｍｏｌ、１．０当量）の溶液に、水酸化リチウム（５ｍｇ、０．１９７ｍｍｏｌ、３．０当量）を室温で添加した。混合物を室温でさらに１時間撹拌した。ｐＨをＨＣｌ（６Ｎ）によって３．０に調整し、水相をＥｔＯＡｃ（３×１０ｍＬ）で抽出した。有機相を合わせ、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濃縮した。ＴＦＡ（０．５ｍＬ）及びＤＣＭ（０．５ｍＬ）を残渣に添加し、混合物を室温でさらに３時間撹拌した。溶媒をロータリーエバポレーターによって除去した。ＬＣ－ＭＳ：計算値［Ｍ＋Ｈ］＋７８６．３７、実測値７８６．９５。
Ｇ．ＴｒｉＡｌｋ１４の合成
上記の表１２に示されるＴｒｉＡｌｋ１４及び（ＴｒｉＡｌｋ１４）ｓは、以下に示す合成経路を使用して合成されてもよい。標準的なオリゴヌクレオチド合成技術を使用して、化合物１４をホスホルアミダイトとしてセンス鎖に付加してもよく、又はアミドカップリング反応において、化合物２２をアミンを含むセンス鎖に結合させてもよい。
３Ｌのジャケット付き反応器に、５００ｍＬのＤＣＭ及び４（７５．０ｇ、０．１６ｍｏｌ）を添加した。反応物の内部温度を０℃に冷却し、ＴＢＴＵ（１７０．０ｇ、０．５３ｍｏｌ）を添加した。次いで、内部温度を５℃未満に保ちながら、懸濁液をアミン５（７５．５ｇ、０．５３ｍｏｌ）で滴下処理した。次いで、内部温度を５℃未満に保ちながら、反応物をＤＩＰＥＡ（７２．３ｇ、０．５６ｍｏｌ）でゆっくり処理した。添加が完了した後、反応物を１時間にわたって２３℃まで温め、３時間攪拌した。３つ全ての試薬の１０％分解促進剤充填物（kicker charge）を添加し、さらに３時間撹拌した。１％未満の４が残存したときに反応が完了したとみなした。反応混合物を飽和塩化アンモニウム溶液（２×５００ｍＬ）で洗浄し、飽和重炭酸ナトリウム溶液（５００ｍＬ）で１回洗浄した。次いで、有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮して油状物にした。粗油状物の質量は１８８ｇであり、ＱＮＭＲにより７２％の６を含んでいた。粗油状物を次の工程で用いた。Ｃ４６Ｈ６０Ｎ４Ｏ１１の計算質量＝８４５．０ｍ／ｚ、実測値［Ｍ＋Ｈ］＝８４６．０。
７２重量％の化合物６を含む１２１．２ｇの粗油状物（８６．０ｇ、０．１０ｍｏｌ）をＤＭＦ（３４４ｍＬ）に溶解し、内部温度を２３℃未満に保ちながらＴＥＡ（８６ｍＬ、２０ｖ／ｖ％）で処理した。Ｆｍｏｃ－アミン６の消費に対するジベンゾフルベン（ＤＢＦ）の形成をＨＰＬＣ法１（図２）によって監視し、反応が１０時間以内に完了した。この溶液に無水グルタル酸（１２．８ｇ、０．１１ｍｏｌ）を添加して、中間体アミン７が２時間以内に化合物８に変換された。完了したら、ＤＭＦ及びＴＥＡを減圧下、３０℃で除去し、１００ｇの粗油状物を得た。化合物７は水への溶解度が高いため、水系のワークアップを使用することができず、クロマトグラフィーがＤＢＦ、ＴＭＵ、及び無水グルタル酸を除去する唯一の方法である。粗油状物（７５ｇ）をＴｅｌｅｄｙｎｅ ＩＳＣＯ Ｃｏｍｂｉ－ｆｌａｓｈ（登録商標）精製システムで３回に分けて精製した。粗油状物（２５ｇ）を３３０ｇシリカカラムに充填し、０～２０％メタノール／ＤＣＭで３０分間にわたって溶出して、４２ｇの化合物８を得た（３つの工程で収率５４％）。Ｃ３６Ｈ５５Ｎ４Ｏ１２＝の計算質量＝７３６．４ｍ／ｚ。実測値［Ｍ＋Ｈ］＝７３７．０。
化合物８（４２．０ｇ、０．０５７ｍｏｌ）を使用前に１０体積のアセトニトリルで共ストリッピングして、クロマトグラフィー溶媒から任意の残留メタノールを除去した。油状物をＤＭＦ（２１０ｍＬ）に再溶解し、０℃に冷却した。溶液を４－ニトロフェノール（８．７ｇ、０．０６３ｍｏｌ）で処理し、続いてＥＤＣ塩酸塩（１２．０ｇ、０．０６３ｍｏｌ）で処理し、１０時間以内に完了に達することが見出された。溶液を０℃に冷却し、内部温度を１５℃未満に保ちながら、１０体積の酢酸エチルを添加し、続いて１０体積の飽和塩化アンモニウム溶液を添加した。層を分離させ、酢酸エチル層を食塩水で洗浄した。合わせた水層を５体積の酢酸エチルで２回抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮して油状物とした。粗油状物（５５ｇ）をＴｅｌｅｄｙｎｅ ＩＳＣＯ Ｃｏｍｂｉ－Ｆｌａｓｈ（登録商標）精製システムで３回に分けて精製した。粗油状物（２５ｇ）を３３０ｇのシリカカラムに充填し、０～１０％メタノール／ＤＣＭから３０分間にわたって溶出し、２２ｇの純粋な９（化合物２２）を得た（収率５０％）。Ｃ４２Ｈ５９Ｎ５Ｏ１４の計算質量＝８５７．４ｍ／ｚ、実測値［Ｍ＋Ｈ］＝８５８．０。
ジクロロメタン（３体積）中のエステル９（４９．０ｇ、５７．１ミリｍｏｌ）及び６－アミノ－１－ヘキサノール（７．３６ｇ、６．２８ミリｍｏｌ）の溶液を、トリエチルアミン（１１．５６ｇ、１１１．４ミリｍｏｌ）で滴下処理した。ＨＰＬＣ法１で化合物９の消失を観察することによって反応を監視し、１０分で完了することが見出された。粗反応混合物を５体積のジクロロメタンで希釈し、飽和塩化アンモニウム（５体積）及び食塩水（５体積）で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮して油状物とした。粗油状物を、３３０ｇのシリカカラムを使用するＴｅｌｅｄｙｎｅＩＳＣＯＣｏｍｂｉ－ｆｌａｓｈ（登録商標）精製システムで精製した。４－ニトロフェノールを１００％酢酸エチルで溶出し、２０％メタノール／ＤＣＭを使用してカラムから１０をフラッシュし、無色の油状物を得た（３９ｇ、収率８１％）。Ｃ４２Ｈ６９Ｎ５Ｏ１２の計算質量＝８３６．０ｍ／ｚ。実測値［Ｍ＋Ｈ］＝８３７．０。
アルコール１０を１０体積のアセトニトリルで２回共ストリッピングして、クロマトグラフィー溶媒から任意の残留メタノールを除去し、乾燥ジクロロメタン（ＫＦ＜６０ｐｐｍ）でもう１回共ストリッピングして、微量の水を除去した。アルコール１０（２．３０ｇ、２．８ｍｍｏｌ）を５体積の乾燥ジクロロメタン（ＫＦ＜５０ｐｐｍ）に溶解し、ジイソプロピルアンモニウムテトラゾリド（１８８ｍｇ、１．１ｍｍｏｌ）で処理した。溶液を０℃に冷却し、２－シアノエチルＮ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトライソプロピルホスホルアミダイト（１．００ｇ、３．３ｍｍｏｌ）で滴下処理した。溶液を氷浴から取り出し、２０℃で撹拌した。反応は３～６時間以内に完了することが見出された。反応混合物を０℃に冷却し、１０体積の飽和重炭酸アンモニウム／食塩水の１：１溶液で処理し、次いで１分間にわたって周囲温度に温め、２０℃でさらに３分間撹拌した。二相混合物を分液漏斗に移し、１０体積のジクロロメタンを添加した。有機層を分離し、１０体積の飽和重炭酸ナトリウム溶液で洗浄して、未反応の二リン試薬を加水分解した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮して油状物とし、３．０８ｇの９４重量％の化合物１４を得た。Ｃ５１Ｈ８６Ｎ７Ｏ１３Ｐの計算質量＝１０３５．６ｍ／ｚ、実測値［Ｍ＋Ｈ］＝１０３６。
Ｈ．標的化リガンドの結合。アニーリングの前又は後のいずれかで、５’又は３’三座アルキン官能化センス鎖を標的化リガンドに結合する。以下の例では、アニーリングされた二重鎖への標的化リガンドの結合について説明する。０．５Ｍトリス（３－ヒドロキシプロピルトリアゾリルメチル）アミン（ＴＨＰＴＡ）のストック溶液、０．５Ｍ硫酸銅（ＩＩ）五水和物（Ｃｕ（ＩＩ）ＳＯ４・５Ｈ２Ｏ）、及び２Ｍアスコルビン酸ナトリウム溶液を脱イオン水中で調製する。ＤＭＳＯ中の標的化リガンドの７５ｍｇ／ｍＬ溶液を作製した。トリアルキン官能化二重鎖（３ｍｇ、７５μＬ、脱イオン水中４０ｍｇ／ｍＬ、約１５，０００ｇ／ｍｏｌ）を含む１．５ｍＬ遠心管中に、２５μＬの１Ｍ Ｈｅｐｅｓ（ｐＨ８．５）緩衝液を添加する。ボルテックスした後、３５μＬのＤＭＳＯを添加し、溶液をボルテックスした。標的化リガンドを反応物に添加し（６当量／二重鎖、２当量／アルキン、約１５μＬ）、溶液をボルテックスした。ｐＨ紙を使用してｐＨを検査し、約ｐＨ８であることを確認した。別の１．５ｍＬ遠心管中で、５０μＬの０．５Ｍ ＴＨＰＴＡを１０μＬの０．５Ｍ Ｃｕ（ＩＩ）ＳＯ４・５Ｈ２Ｏと混合し、ボルテックスし、室温で５分間インキュベートした。５分後、ＴＨＰＴＡ／Ｃｕ溶液（７．２μＬ、６当量、５：１ ＴＨＰＴＡ：Ｃｕ）を反応バイアルに添加し、ボルテックスした。その直後、２Ｍアスコルビン酸塩（５μＬ、二重鎖あたり５０当量、アルキンあたり１６．７）を反応バイアルに添加し、ボルテックスした。反応が完了したら（典型的には、０．５～１時間で完了）、反応物を非変性陰イオン交換クロマトグラフィーによって直ちに精製した。
実施例２．ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤のインビトロ試験
上記の表８Ｃに示される特定の化学修飾された候補配列二重鎖（表３に示されるアンチセンス鎖配列、並びに、表６に示されるセンス鎖のヌクレオチド及び末端キャップ部分を有する）をインビトロで試験した。ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤を実施例１に記載の手順に従って調製した。
インビトロでのＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤の評価をヒト肺上皮細胞株であるＡ５４９細胞のトランスフェクションによって行った。細胞を９６ウェル形式で１ウェルあたり約７，５００細胞でプレーティングし、ＬｉｐｏＦｅｃｔａｍｉ ＲＮＡｉＭａｘ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）トランスフェクション試薬を使用して、表１２に示される各ＲＮＡｉ剤二重鎖を３つの濃度（１０ｎＭ、１ｎＭ、及び０．１ｎＭ）でトランスフェクトした。表１２に示されるように、ＭＵＣ５ＡＣ ｍＲＮＡの発現レベルを内因性対照と比較することにより、各ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤の相対発現をｑＲＴ－ＰＣＲによって決定し、未処理のＡ５４９細胞に対して正規化した（ＡＡＣＴ分析）。
以下の表１２は調べた配列のＡＤ二重鎖の数を列挙し、括弧内にはその特定のＲＮＡｉ剤によって標的化される遺伝子の位置が示される。したがって、例えば、二重鎖ＩＤ ＡＤ０８１０１の場合、１ｎＭでの平均相対発現０．３７７は、６２．３％のＭＵＣ５ＡＣ遺伝子ノックダウンを示し、０．１ｎＭでの平均相対発現は、未処理ウェル（偽対照）に対して正規化された５３．０％（０．４７０）の阻害を示す。
実施例３．ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤のインビトロ試験
上記の表８Ｃに示される特定の化学修飾された候補配列二重鎖（表３に示されるアンチセンス鎖配列、並びに、表６に示されるセンス鎖のヌクレオチド及び末端キャップ部分を有する）をインビトロで試験した。ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤を実施例１に記載の手順に従って調製した。
インビトロでのＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤の評価をヒト肺上皮細胞株であるＡ５４９細胞のトランスフェクションによって行った。細胞を９６ウェル形式で１ウェルあたり約７，５００細胞でプレーティングし、ＬｉｐｏＦｅｃｔａｍｉ ＲＮＡｉ Ｍａｘ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）トランスフェクション試薬を使用して、表１２に示される各ＲＮＡｉ剤二重鎖を３つの濃度（１０ｎＭ、１ｎＭ、及び０．１ｎＭ）でトランスフェクトした。表１２に示されるように、ＭＵＣ５ＡＣ ｍＲＮＡの発現レベルを内因性対照と比較することにより、各ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤の相対発現をｑＲＴ－ＰＣＲによって決定し、未処理のＡ５４９細胞に対して正規化した（ＡＡＣＴ分析）。
以下の表１２は調べた配列のＡＤ二重鎖の数を列挙し、括弧内にはその特定のＲＮＡｉ剤によって標的化される遺伝子の位置が示される。したがって、例えば、二重鎖ＩＤＡＤ０８１０１の場合、１ｎＭでの平均相対発現０．３７７は、６２．３％のＭＵＣ５ＡＣ遺伝子ノックダウンを示し、０．１ｎＭでの平均相対発現は、未処理ウェル（偽対照）に対して正規化された５３．０％（０．４７０）の阻害を示す。
実施例４．イエダニ（ＨＤＭ）誘発アレルギー性喘息モデル
特定のＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤のインビボでの特性を研究するために、イエダニ（ＨＤＭ）誘発アレルギー性喘息マウスモデルを使用した。マウスＭｕｃ５ａｃ発現を誘導するために、雌Ｂａｌｂ／ｃマウス（６～８週齢）に、ピペットを使用して、２５μＬの等張生理食塩水中の商業的に入手した５０μｇのイエダニタンパク質を連続５日間にわたって鼻腔内投与した。５回目の毎日の投与から７２時間後、マウスを安楽死させ、ｍＲＮＡ発現分析のために肺全体を採取した。非チャレンジのナイーブマウスと比較して、ＨＤＭチャレンジマウスにおけるマウスＭｕｃ５ａｃ ｍＲＮＡの相対発現が約１００倍増加することを示す。
実施例５．ＨＤＭモデルにおけるＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤のインビボ気管内投与
上記実施例４に記載のＨＤＭ誘発アレルギー性喘息マウスモデルを使用した。以下の表１５は投与群を示している。
上記の表１５に示されるように、群１のマウスは全体を通して処置しなかった。群３、５、６、７、及び８のマウスについては、研究１、３、５、及び８日目に、雌Ｂａｌｂ／ｃマウスに、等張生理食塩水又は表１５に記載の等張生理食塩水中に配合された５．０ｍｇ／ｋｇのそれぞれのＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤の気管内（ＩＴ）投与に好適なマイクロスプレー装置（Ｐｅｎｎ Ｃｅｎｔｕｒｙ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，ＰＡ）により、５０マイクロリットルの単回用量を投与した。
表１５に示されるように、各ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤（群６、７、及び８）をセンス鎖の５’末端において三座小分子αｖβ６上皮細胞標的化リガンド（Ｔｒｉ－ＳＭ６．１、図１を参照のこと）に結合した。
ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤ＡＤ０７７２０及びＡＤ０７７１９（群７及び８）の化学的に修飾された配列は、表７Ｂ（二重鎖を示す）、表３（それぞれのアンチセンス鎖を示す）、及び表５（リンカーを有するが三座小分子αｖβ６上皮細胞標的化リガンド（Ｔｒｉ－ＳＭ６．１）を有さないそれぞれのセンス鎖を示す）に示される。
ＡＤ０７０２２は、ヒトＭＵＣ５ＡＣ遺伝子と相同性を有さないマウス特異的配列を有し、以下のように化学修飾した。
Ｔｒｉ－ＳＭ６．１－αｖβ６－ＡＤ０７０２２
修飾センス鎖（５’→３’）：
Ｔｒｉ－ＳＭ６．１－αｖβ６－（ＴＡ１４）ｃｓｃａｕａｃａｇＣｆＡｆＧｆｕａｃａｇｕｕａｃａｓ（ｉｎｖＡｂ）（配列番号１７１４）
修飾アンチセンス鎖（５’→３’）：
ｃＰｒｐｕｓＧｆｓｕｓＡｆａＣｆｕＧｆｕＡｆｃＵｆｇＣｆｕＧｆｕＡｆｕＧｆｓｇ（配列番号１７１３）
８～１２日目の各々で、群２～８のマウスに、ピペットを使用して、２５マイクロリットルの等張生理食塩水（群２及び３）又は等張生理食塩水中に配合された５０マイクログラムのイエダニ（表１５ではＨＤＭと称される）を単回用量で鼻腔内（ＩＮ）投与した。
研究１５日目にマウスを犠牲死させ、収集及びホモジナイゼーション後に全ＲＮＡを両肺から単離した。マウスＭｕｃ５ａｃ ｍＲＮＡ発現をプローブベースの定量的ＰＣＲによって定量化し、マウスベータアクチン発現に対して正規化し、ビヒクル対照群の割合として表した（幾何平均、＋／－９５％信頼区間）。
データを非処置群（群１）に対して正規化した。上記の表１６のデータに示されるように、ＨＤＭマウスモデルは、ＨＤＭへの曝露後のＭＵＣ５ＡＣ発現の増加の促進に関して予想通りに機能した。データは、各々がＭＵＣ５ＡＣ遺伝子の１９２１位を標的化するヌクレオチド配列を有し、かつ、ヒト及びマウス遺伝子転写産物の両方と相同性を有する群７及び８が、ＲＮＡｉ剤を用いない群４及び５のＨＤＭモデルマウスと比較して、ＭＵＣ５ＡＣタンパク質の非常に最小限の減少しかもたらさなかったことを示しており、このことは、これらの特異的ＲＮＡｉ剤の最小限の阻害のみを示している。あるいは、ＡＤ０７０２２のマウス特異的ＲＮＡｉ剤（群６）は、ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤を用いずにＨＤＭを投与した群と比較して、Ｍｕｃ５ａｃマウスｍＲＮＡレベルの大幅な減少（わずか１３．４４４）を示した。
実施例６．ＨＤＭモデルにおけるＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤のインビボ気管内投与
上記の実施例４に記載のＨＤＭ誘発アレルギー性喘息マウスモデルを使用した。以下の表１７は投与群を示す。
群１～１０のマウスについては、研究１、３、５、及び８日目に、雌Ｂａｌｂ／ｃマウスに、等張生理食塩水又は表１７に記載の等張生理食塩水中に配合された５．０ｍｇ／ｋｇのそれぞれのＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤の気管内（ＩＴ）投与に好適なマイクロスプレー装置（Ｐｅｎｎ Ｃｅｎｔｕｒｙ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，ＰＡ）により、５０マイクロリットルの単回用量を投与した。群１１のマウスについては、ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤を１日目及び８日目にのみ投与した。
表１７に示されるように、各ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤（群３～１１）をＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤のセンス鎖の５’末端において三座小分子αｖβ６上皮細胞標的化リガンド（Ｔｒｉ－ＳＭ６．１、図１を参照のこと）に結合した。ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤ＡＤ０８０８３、ＡＤ０８０８４、ＡＤ０８０８５、ＡＤ０８０８６、ＡＤ０８０８７、ＡＤ０８０８８、及びＡＤ０８０８９（群４～１０）の化学的に修飾された配列は、表７Ｂ（二重鎖を示す）、表３（それぞれのアンチセンス鎖を示す）、及び表５（リンカーを有するが三座小分子αｖβ６上皮細胞標的化リガンド（Ｔｒｉ－ＳＭ６．１）を有さないそれぞれのセンス鎖を示す）に示される。
ＡＤ０７０２２は、ヒトＭＵＣ５ＡＣ遺伝子と相同性を有さないマウス特異的配列を有し、上記の実施例５に示されるように化学的に修飾した。
８～１２日目の各々で、ピペットを使用して、マウスに、２５マイクロリットルの等張生理食塩水（群２）又は等張生理食塩水中に配合された５０マイクログラムのイエダニ（表１７ではＨＤＭと称される）を単回用量で鼻腔内（ＩＮ）投与した。
研究の１５日目にマウスを犠牲死させ、収集及びホモジナイゼーション後に全ＲＮＡを両肺から単離した。マウスＭｕｃ５ａｃ ｍＲＮＡ発現をプローブベースの定量的ＰＣＲによって定量化し、マウスベータアクチン発現に対して正規化し、ビヒクル対照群の割合として表した（幾何平均、＋／－９５％信頼区間）。
データをＩＴ及びＩＮ生理食塩水のみを投与した群（群１）に対して正規化した。上記の表１８のデータに示されるように、ＨＤＭマウスモデルは、ＨＤＭへの曝露後のＭＵＣ５ＡＣ発現の増加の促進に関して予想通りに機能した。データは、群７及び８（両方とも、ＭＵＣ５ＡＣ遺伝子の９７２９位を標的化するヌクレオチド配列を有し、かつ、ヒト及びマウスの遺伝子転写産物の両方と相同性を有する）が、ＲＮＡｉ剤を用いない群２のＨＤＭモデルマウスと比較して、ＭＵＣ５ＡＣタンパク質の中程度の減少のみをもたらしたことを示しており、このことは、これらの特定のＲＮＡｉ剤についての中程度の量の阻害のみを示している。あるいは、試験した残りのＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤（群４～６では遺伝子位置５０２９を標的化し、群９及び１０では遺伝子位置１５０５２を標的化する）は各々、ＡＤ０７０２２のマウス特異的ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤と同様に、群２と比較して大幅な阻害を示した（群６）。
実施例７．ラットにおけるＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤のインビボ気管内投与
上記の実施例４に記載のＨＤＭ誘発アレルギー性喘息マウスモデルを使用した。以下の表１９は、研究に含まれる特定の投与群を示す：
群１～５のマウスについては、研究１、３、５、及び８日目に、雌Ｂａｌｂ／ｃマウスに、等張生理食塩水又は表１９に記載の等張生理食塩水中に配合された５．０ｍｇ／ｋｇのそれぞれのＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤の気管内（ＩＴ）投与に好適なマイクロスプレー装置（Ｐｅｎｎ Ｃｅｎｔｕｒｙ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，ＰＡ）により、５０マイクロリットルの単回用量を投与した。
表１９に示されるように、各ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤（群３～５）をセンス鎖の５’末端において三座小分子αｖβ６上皮細胞標的化リガンド（Ｔｒｉ－ＳＭ６．１、図１を参照のこと）に結合した。ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤ＡＤ０８１７３及びＡＤ０８１７４（群４及び５）の化学的に修飾された配列は、表７Ｂ（二重鎖を示す）、表３（それぞれのアンチセンス鎖を示す）、及び表５（リンカーを有するが三座小分子αｖβ６上皮細胞標的化リガンド（Ｔｒｉ－ＳＭ６．１）を有さないそれぞれのセンス鎖を示す）に示される。３５３５位を標的化する配列を有する各ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤は、マウス遺伝子からの重要な位置であると理解される部分にミスマッチを有しており、したがって、ミスマッチを考慮すると、ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤は阻害活性を殆ど又は全く示さないことが予想される。
ＡＤ０７０２２は、ヒトＭＵＣ５ＡＣ遺伝子と相同性を有さないマウス特異的配列を有し、上記の実施例５に示されるように化学的に修飾した。
８～１２日目の各々で、マウスに、ピペットを使用して、２５マイクロリットルの等張生理食塩水（群１のみ）又は５０マイクログラムの等張生理食塩水中に配合されたイエダニ（表１９ではＨＤＭと称される）を単回用量で鼻腔内（ＩＮ）投与した。
研究の１５日目にマウスを犠牲死させ、収集及びホモジナイゼーション後に全ＲＮＡを両肺から単離した。マウスＭｕｃ５ａｃ ｍＲＮＡ発現をプローブベースの定量的ＰＣＲによって定量化し、マウスベータアクチン発現に対して正規化し、ビヒクル対照群の割合として表した（幾何平均、＋／－９５％信頼区間）。
データをＩＴ及びＩＮ生理食塩水のみを投与した群（群１）に対して正規化した。上記のように、群４及び５におけるＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤（ヒト遺伝子の３５３５位を標的化する）についてのマウス遺伝子とのミスマッチの性質を考慮すると、最小限の阻害が予想される。上記の表２０のデータに示されるように、ＨＤＭマウスモデルは、群１及び２で示されるようにＨＤＭへの曝露後のＭＵＣ５ＡＣ発現の増加の促進に関して予想通りに機能した。予想外なことに、３５３５位を標的化するＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤は、マウス遺伝子とのミスマッチにもかかわらず、依然として中程度のレベルの阻害を示し、このことは、この位置を標的化するＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤がヒトの処置候補として実現可能であり得ることを示している。
実施例８．ＨＤＭモデルにおけるＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤のインビボ気管内投与
上記の実施例４に記載のＨＤＭ誘発アレルギー性喘息マウスモデルを使用した。以下の表１７は投与群を示す：
雌Ｂａｌｂ／ｃマウスに、等張生理食塩水又は上記の表２１に記載される日付け及び濃度の等張生理食塩水中に配合されたＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤の気管内（ＩＴ）投与に好適なマイクロスプレー装置（Ｐｅｎｎ Ｃｅｎｔｕｒｙ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，ＰＡ）により、５０マイクロリットルの単回用量を投与した。
表２１に示されるように、各ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤（群３～１１）をセンス鎖の５’末端において三座小分子αｖβ６上皮細胞標的化リガンド（図１を参照のこと）に結合した。ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤ＡＤ０８０８９の化学的に修飾された配列は、表７Ｂ（二本鎖を示す）、表３（それぞれのアンチセンス鎖を示す）、及び表５（リンカーを有するが三座小分子αｖβ６上皮細胞標的化リガンドを有さないそれぞれのセンス鎖を示す）に示される。
ＡＤ０７０２２は、ヒトＭＵＣ５ＡＣ遺伝子と相同性を有さないマウス特異的配列を有し、上記の実施例５に示されるように化学的に修飾した。
７～１１日目の各々で、ピペットを使用して、マウスに、２５マイクロリットルの等張生理食塩水（群１）又は等張生理食塩水中に配合された５０マイクログラムのイエダニ（表２１ではＨＤＭと称される）を単回用量で鼻腔内（ＩＮ）投与した。
研究１４日目にマウスを犠牲死させ、収集及びホモジナイゼーション後に全ＲＮＡを両肺から単離した。マウスＭｕｃ５ａｃ ｍＲＮＡ発現をプローブベースの定量的ＰＣＲによって定量化し、マウスベータアクチン発現に対して正規化し、ビヒクル対照群の割合として表した（幾何平均、＋／－９５％信頼区間）。
データをＩＴ及びＩＮ生理食塩水のみを投与した群（群１）に対して正規化した。上記の表２２のデータに示されるように、ＨＤＭマウスモデルは、ＨＤＭへの曝露後のＭＵＣ５ＡＣ発現の増加の促進に関して予想通りに機能した。データは、ＭＵＣ５ＡＣ遺伝子の１５０５２位を標的化するヌクレオチド配列を有し、かつ、ヒト及びマウスの遺伝子転写産物の両方と相同性を有するＡＤ０８０８９が、ＭＵＣ５ＡＣを大幅に阻害し、ＡＤ０７０２２の高活性マウス特異的ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤と概して同等であったことを示している。
実施例９．カニクイザルにおけるＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤のインビボ吸入エアロゾル投与
研究１日目に、雄カニクイザルに、１、８、及び１５日目の各々で、１ｍｇ／ｋｇ肺沈着用量（ＰＤＤ）のＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤ＡＣ００１３０５又はＡＣ００１３０６を単回用量で投与した。振動メッシュ式ネブライザー（Ａｅｒｏｎｅｂ Ｓｏｌｏ）を使用して、気管内挿管された拘束され麻酔されたサルに、エアロゾルを送達した。挿管された動物を、分時換気量を制御するために使用される人工呼吸器に接続した。試験品エアロゾルは、曝露システムとインラインで接続されたＡｅｒｏｎｅｂ Ｓｏｌｏメッシュネブライザーによって生成された。曝露時間は、気管内チューブの端にフィルターを配置し、曝露経過中にエアロゾルを収集することによってシステムの効率を決定するエアロゾル試験から決定された。ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤を、センス鎖の５’末端において三座小分子αｖβ６上皮細胞標的リガンド（図１を参照のこと）に結合し、等張生理食塩水中に配合した。ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤ＡＣ００１３０５及びＡＣ００１３０６の化学的に修飾された配列は、表１１に示される。ＡＣ００１３０５のアンチセンス鎖配列はまた、表３においてＡＭ１２１６５として示され、ＡＣ００１３０６のアンチセンス鎖配列はまた、表３においてＡＭ１２１６６として示されており、これら両方ともＭＵＣ５ＡＣ遺伝子の４９９３位を標的化する。
投与群は以下の表２３に記載される通りであった：
１群当たり２匹のサルに投与した。研究２２日目にサルを犠牲死させ、収集及びホモジナイゼーション後に全ＲＮＡを肺試料から単離した。以下の表２４のデータは、左尾状葉遠位（distal left caudal lobe）からサンプリングされたｍＲＮＡ発現を示す。カニクイザルＭＵＣ５ＡＣ ｍＲＮＡ発現をプローブベースの定量的ＰＣＲによって定量化し、カニクイザルβ－アクチン発現に対して正規化し、ビヒクル対照群の割合として表した（幾何平均、＋／－９５％信頼区間）。
上記の表２４Ａ、表２４Ｂ、及び表２４Ｃに報告されているように、ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤
実施例１０．ヒツジにおけるＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤のエアロゾル投与
吸入された回虫抗原に曝露されたヒツジは、Ａｂｒａｈａｍ ｅｔ．ａｌ．（Ａｍ Ｒｅｖ Ｒｅｓｐｉｒ Ｄｉｓ．，１９８３）によって示されているように、急性期反応（ＡＲ）、後期反応（ＬＲ）、及び気道過敏性（ＡＨＲ）を含むアレルギー性喘息に典型的な反応を示し、このモデルは標準治療によく反応することが示されている（Ｃａｎｉｇａ，ｅｔ．ａｌ．，Ｊ Ｉｎｆｌａｍｍ．，２０１３）。したがって、このモデルは、ＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤で処置した際の気道力学及びＡＨＲに対するヒツジＭｕｃ５ａｃ（ｓＭｕｃ５ａｃ）ｍＲＮＡサイレンシングの影響を決定するために使用され得る。挿管されたヒツジへの試験物の送達、ブタ回虫（Ａｓｃａｒｉｓ ｓｕｕｍ）抗原でのチャレンジ後の肺抵抗（ＲＬ）の変化を検出する気道力学の評価、及び吸入されたカルバコールに対する累積濃度反応曲線を実施することによるＡＨＲ評価を公表された手順に従って行った（Ａｂｒａｈａｍ ｅｔ．ａｌ．，Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ．，１９９４）。
ブタ回虫に対する反応が事前に確立されている回虫感受性の２頭のヒツジに、１、８、１５日目に１ｍｇ／ｋｇ肺沈着用量レベルのＡＣ０００４８０を投与した。ＡＣ０００４８０の化学構造は、例えば表１１に示されており、ＭＵＣ５ＡＣ遺伝子の３５３５位を標的化するように設計されている。２１日目に、ＲＬを１×ＰＢＳ後の値（ＰＣ４００）の４００％に増加させる累積カルバコール濃度（呼気単位、ＢＵ）を決定することにより、ＡＨＲを評価した。２２日目に、ヒツジにブタ回虫抽出物をチャレンジし、チャレンジの８時間後までＲＬを監視した。２３日目に、２１日目と同じ様式でＡＨＲを再度評価した。効果の持続期間を監視するために、ヒツジに５１日目に再びブタ回虫抽出物をチャレンジし、５０日目及び５２日目に分けてＡＨＲを評価した。
表２５に示されるように、ＡＣ０００４８０での処置により、２２日目のチャレンジ時にＡＲ及びＬＲが減弱した。例えば、未処置のヒツジは、ベースラインと比較して６．５時間でＲＬにおいて１２６％の平均ＬＲ増加を示すが、２２日目のチャレンジ時にＡＣ０００４８０で処置したヒツジは、ベースラインと比較して６．５時間でＲＬにおいて５０％のより減弱したＬＲ増加を示す。さらに、２２日目の回虫チャレンジから２４時間後、ＰＣ４００を生ずるのに必要なカルバコール呼気単位の同等の数によって示されるように、ＡＣ０００４８０で処理したヒツジは両方とも回虫誘発性気道過敏性の兆候を示さなかった。対照的に、ＡＣ０００４８０で処置しない対照試験では、ヒツジは回虫チャレンジ後のＰＣ４００を誘発するために約半分の量のカルバコール呼吸単位を必要とし、気道過敏性を示した。
１５日目以降は追加の投与は行わず、ヒツジは、回虫チャレンジの５１日目にベースラインの気道力学及びＡＨＲに戻った。
実施例１１．ヒツジにおけるＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤のエアロゾル投与
上記実施例１０に記載したアレルギー性喘息気道炎症のヒツジモデルを使用した。ブタ回虫チャレンジに対する反応が事前に確立されている３頭の回虫感受性ヒツジに、１、８、１５日目に１ｍｇ／ｋｇ肺沈着用量レベルのＡＣ０００４８２を投与した。ＡＣ０００４８２の化学構造は、例えば表１１に示されており、ＭＵＣ５ＡＣ遺伝子の３５３５位を標的化するように設計されている。２１日目に、ＲＬを１×ＰＢＳ後の値（ＰＣ４００）の４００％に増加させる累積カルバコール濃度（呼気単位、ＢＵ）を決定することにより、ＡＨＲを評価した。２２日目に、ヒツジにブタ回虫抽出物を投与し、投与の８時間後までＲＬを監視した。２３日目に、２１日目と同様にＡＨＲを再度評価した。
表２７に示されるように、ＡＣ０００４８２での処置により、２２日目のチャレンジ時にＡＲは最小限の減弱となったが、ＬＲは強く減弱した。例えば、未処置のヒツジは、ベースラインと比較して６．５時間でＲＬにおいて１２１％の平均ＬＲ増加を示すが、２２日目のチャレンジにおいてＡＣ０００４８２で処置されたヒツジは、ベースラインと比較して６．５時間でＲＬにおいて５６％のより減弱したＬＲ増加を示す。さらに、２２日目の回虫チャレンジから２４時間後、ＰＣ４００を生じるのに必要なカルバコール呼気単位の同等の数によって示されるように、ＡＣ０００４８２で処理した全てのヒツジは回虫誘発性気道過敏性の兆候を示さなかった。対照的に、ＡＣ０００４８２で処置しない対照試験では、ヒツジは回虫チャレンジ後のＰＣ４００を誘発するために約半分の量のカルバコール呼吸単位を必要とし、気道過敏性を示した。
実施例１２．ヒツジにおけるＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤のエアロゾル投与
上記実施例１０に記載したアレルギー性喘息気道炎症のヒツジモデルを使用した。ブタ回虫チャレンジに対する反応が事前に確立されている６頭の回虫感受性ヒツジに、１日目、８日目、及び１５日目に０．５ｍｇ／ｋｇ肺沈着用量レベルのＡＣ０００４８２（ｎ＝３）又は０．２５ｍｇ／ｋｇ肺沈着用量レベルのＡＣ０００４８２のいずれかを投与した。２１日目に、ＲＬを１×ＰＢＳ後の値（ＰＣ４００）の４００％に増加させる累積カルバコール濃度（呼気単位、ＢＵ）を測定することにより、ＡＨＲを評価した。２２日目に、ヒツジにブタ回虫抽出物をチャレンジし、投与から８時間後までＲＬを監視した。２３日目に、２１日目と同様にＡＨＲを再度評価した。
表２９に示されるように、０．５ｍｇ／ｋｇ用量レベルでのＡＣ０００４８２による処置により、２２日目のチャレンジ時にＡＲは最小限の減弱となったが、ＬＲは強く減弱した。例えば、未処置のヒツジは、ベースラインと比較して６．５時間でＲＬにおいて１２５％の平均ＬＲ増加を示すが、２２日目のチャレンジ時にはＡＣ０００４８２で処置されたヒツジは、ベースラインと比較して６．５時間でＲＬにおいて６９％のより減弱したＬＲ増加を示す。さらに、２２日目の回虫チャレンジから２４時間後、ＰＣ４００を生成するのに必要なカルバコール呼吸単位の同様の数によって示されるように、ＡＣ０００４８２で処理した全てのヒツジは回虫誘発性気道過敏性の兆候を示さなかった。対照的に、ＡＣ０００４８２で処置しない対照試験では、ヒツジは回虫後のＰＣ４００チャレンジを誘発するために約半分の量のカルバコール呼吸単位を必要とし、気道過敏性を示した。
表３０に示されるように、０．２５ｍｇ／ｋｇ用量レベルでのＡＣ０００４８２による処置は、２２日目のチャレンジ時にＡＲは最小限の減弱となったが、ＬＲは強く減弱した。例えば、未処置のヒツジは、ベースラインと比較して、６．５時間の時点でＲＬにおいて１２２％の平均ＬＲ増加を示す。ベースラインでは、２２日目のチャレンジにおいてＡＣ０００４８２で処置したヒツジは、ベースラインと比較して、６．５時間のＲＬにおいて８３％のより弱まったＬＲ増加を示した。さらに、２２日目の回虫チャレンジから２４時間後、ＰＣ４００を生じるのに必要なカルバコール呼気単位の同様の数によって示されるように、ＡＣ０００４８２で処理した全てのヒツジは回虫誘発性気道過敏性の兆候を示さなかった。対照的に、ＡＣ０００４８２で処置しない対照試験では、ヒツジは回虫チャレンジ後のＰＣ４００を誘発するために約半分の量のカルバコール呼吸単位を必要とし、気道過敏性を示した。
纏めると、結果は、回虫チャレンジ後の気道力学に対するＡＣ０００４８２処置の用量反応性の影響を示している。結果は、最低用量のＡＣ０００４８２であっても、後期反応に対する影響はチャレンジから２４時間後に気道過敏性を阻止するのに十分に依然として大きいことを示している。
実施例１３．ヒツジにおけるＭＵＣ５ＡＣ ＲＮＡｉ剤のエアロゾル投与
上記の実施例１０に記載したアレルギー性喘息気道炎症のヒツジモデルを使用した。ブタ回虫チャレンジに対する反応が事前に確立されている６頭の回虫感受性ヒツジに、１日目、８日目及び１５日目に、１．０ｍｇ／ｋｇの肺沈着用量レベルのＡＣ０００４８０又は１．０ｍｇ／ｋｇの肺沈着用量の陰性対照ｓｉＲＮＡコンジュゲート（これは、同じ標的化リガンドを含むが、ＲＩＳＣ複合体に充填することができず、したがって、ＲＮＡ干渉遺伝子サイレンシングを媒介することができない）のいずれかを投与した。２１日目に、ＲＬを１×ＰＢＳ後の値（ＰＣ４００）の４００％に増加させる累積カルバコール濃度（呼気単位、ＢＵ）を測定することにより、ＡＨＲを評価した。２２日目に、ヒツジにブタ回虫抽出物をチャレンジし、チャレンジから８時間後までＲＬを監視した。２３日目に、２１日目と同様にＡＨＲを再度評価した。ＡＣ０００４８０を投与されたヒツジは、アレルゲン誘発性後期反応及び気道過敏性を用量依存的に減弱させたが、陰性対照コンジュゲートの同様の曝露は、気道力学のアレルゲン誘発性変化を減弱しなかった。
他の実施形態
本発明をその詳細な説明と併せて説明してきたが、上記の説明は例示を目的とするものであり、添付の特許請求の範囲によって定義される本発明の範囲を限定するものではないことを理解されたい。他の態様、利点、及び修正は、以下の特許請求の範囲内である。

Claims (65)

  1. ムチン５ＡＣ遺伝子の発現を阻害するためのＲＮＡｉ剤であって、
    表２又は表３に提供される配列のいずれか１つと０又は１ヌクレオチド異なる少なくとも１７個の連続するヌクレオチドを含むアンチセンス鎖、及び
    前記アンチセンス鎖と少なくとも部分的に相補的なヌクレオチド配列を含むセンス鎖
    を含む、ＲＮＡｉ剤。
  2. 前記アンチセンス鎖が、表２又は表３に提供される配列のいずれか１つのヌクレオチド２～１８を含む、請求項１に記載のＲＮＡｉ剤。
  3. 前記センス鎖が、表２又は表４に提供される配列のいずれか１つと０又は１ヌクレオチド異なる少なくとも１７個の連続するヌクレオチドのヌクレオチド配列を含み、前記センス鎖が、前記アンチセンス鎖と前記１７個の連続するヌクレオチドにわたって少なくとも８５％の相補性を有する領域を有する、請求項１又は２に記載のＲＮＡｉ剤。
  4. 前記ＲＮＡｉ剤の少なくとも１つのヌクレオチドが、修飾ヌクレオチドであるか、又は修飾ヌクレオシド間結合を含む、請求項１～３のいずれか一項に記載のＲＮＡｉ剤。
  5. 前記ヌクレオチドの全て又は実質的に全てが、修飾ヌクレオチドである、請求項１～４のいずれか一項に記載のＲＮＡｉ剤。
  6. 前記修飾ヌクレオチドが、２’－Ｏ－メチルヌクレオチド、２’－フルオロヌクレオチド、２’－デオキシヌクレオチド、２’，３’－セコヌクレオチド模倣体、ロックドヌクレオチド、２’－Ｆ－アラビノヌクレオチド、２’－メトキシエチルヌクレオチド、脱塩基ヌクレオチド、リビトール、逆方向ヌクレオチド、逆方向２’－Ｏ－メチルヌクレオチド、逆方向２’－デオキシヌクレオチド、２’－アミノ修飾ヌクレオチド、２’－アルキル修飾ヌクレオチド、モルホリノヌクレオチド、ホスホン酸ビニル含有ヌクレオチド、ホスホン酸シクロプロピル含有ヌクレオチド、及び３’－Ｏ－メチルヌクレオチドからなる群から選択される、請求項４又は５に記載のＲＮＡｉ剤。
  7. 前記ヌクレオチドの全て又は実質的に全てが、２’－Ｏ－メチルヌクレオチド、２’－フルオロヌクレオチド、又はそれらの組み合わせで修飾されている、請求項５に記載のＲＮＡｉ剤。
  8. 前記アンチセンス鎖が、表３又は表１１に提供される前記修飾アンチセンス鎖配列のいずれか１つのヌクレオチド配列を含む、請求項１～７のいずれか一項に記載のＲＮＡｉ剤。
  9. 前記センス鎖が、表４又は表１１に提供される修飾センス鎖配列のいずれか１つのヌクレオチド配列を含む、請求項１～８のいずれか一項に記載のＲＮＡｉ剤。
  10. 前記アンチセンス鎖が、表３又は表１１に提供される修飾アンチセンス鎖配列のいずれか１つのヌクレオチド配列を含み、前記センス鎖が、表４又は表１１に提供される修飾センス鎖配列のいずれか１つのヌクレオチド配列を含む、請求項１に記載のＲＮＡｉ剤。
  11. 前記センス鎖が、１８～３０ヌクレオチド長であり、前記アンチセンス鎖が、１８～３０ヌクレオチド長である、請求項１～１０のいずれか一項に記載のＲＮＡｉ剤。
  12. 前記センス鎖及び前記アンチセンス鎖がそれぞれ、１８ヌクレオチド及び２７ヌクレオチド長である、請求項１１に記載のＲＮＡｉ剤。
  13. 前記センス鎖及び前記アンチセンス鎖がそれぞれ、１８ヌクレオチド及び２４ヌクレオチド長である、請求項１２に記載のＲＮＡｉ剤。
  14. 前記センス鎖及び前記アンチセンス鎖がそれぞれ、２１ヌクレオチド長である、請求項１３に記載のＲＮＡｉ剤。
  15. 前記ＲＮＡｉ剤が２つの平滑末端を有する、請求項１４に記載のＲＮＡｉ剤。
  16. 前記センス鎖が、１つ又は２つの末端キャップを含む、請求項１～１５のいずれか一項に記載のＲＮＡｉ剤。
  17. 前記センス鎖が、１つ又は２つの逆位脱塩基残基を含む、請求項１～１６のいずれか一項に記載のＲＮＡｉ剤。
  18. 前記ＲＮＡｉ剤が、表８Ａ、表８Ｂ、表８Ｃ、表９、表１０Ａ、又は表１０Ｂの二本鎖のうちのいずれか１つの構造を有する二本鎖を形成するセンス鎖及びアンチセンス鎖からなる、請求項１に記載のＲＮＡｉ剤。
  19. 前記ヌクレオチドの全て又は実質的に全てが修飾ヌクレオチドである、請求項１８に記載のＲＮＡｉ剤。
  20. 前記アンチセンス鎖が、以下のヌクレオチド配列（５’→３’）：
    ＵＵＧＵＡＧＵＡＧＵＣＧＣＡＧＡＡＣＡ（配列番号７９）；又は
    ＵＵＣＵＵＧＵＵＣＡＧＧＣＡＡＡＵＣＡ（配列番号８３）
    のうちの１つと０又は１ヌクレオチド異なるヌクレオチド配列からなるか、それから本質的になるか、又はそれを含む、請求項１に記載のＲＮＡｉ剤。
  21. 前記アンチセンス鎖が、以下のヌクレオチド配列（５’→３’）：
    ＵＵＧＵＡＧＵＡＧＵＣＧＣＡＧＡＡＣＡＧＣ（配列番号１５２５）；又は
    ＵＵＣＵＵＧＵＵＣＡＧＧＣＡＡＡＵＣＡＧＣ（配列番号１５３５）
    のうちの１つと０又は１ヌクレオチド異なるヌクレオチド配列からなるか、それから本質的になるか、又はそれを含む、請求項１に記載のＲＮＡｉ剤。
  22. 前記センス鎖が、以下のヌクレオチド配列（５’→３’）：
    ＵＧＵＵＣＵＧＣＧＡＣＵＡＣＵＡＣＡＡ（配列番号５６８）；又は
    ＵＧＡＵＵＵＧＣＣＵＧＡＡＣＡＡＧＡＡ（配列番号５７２）
    のうちの１つと０又は１ヌクレオチド異なるヌクレオチド配列からなるか、それから本質的になるか、又はそれを含む、請求項１に記載のＲＮＡｉ剤。
  23. 前記ヌクレオチドの全て又は実質的に全てが、修飾ヌクレオチドである、請求項２０、２１、又は２２に記載のＲＮＡｉ剤。
  24. 前記アンチセンス鎖が、以下のヌクレオチド配列（５’→３’）：
    ｃＰｒｐｕｓＵｆｓｇｓＵｆａＧｆｕＡｆｇＵｆｃＧｆｃＡｆｇＡｆａＣｆａＧｆｓｃ（配列番号１１２７）；
    ｕｓＵｆｓｇｓＵｆａＧｆｕＡｆｇＵｆｃＧｆｃＡｆｇＡｆａＣｆａＧｆｓｃ（配列番号１０６５）；
    ｕｓＵｆｓｃｓｕｕｇｕｕｃａｇＧｆｃＡｆａＡｆｕｃａｇｓｃ（配列番号１１６６）；又は
    ｃＰｒｐｕＵｆｃｕｕｇｕｕｃａｇＧｆｃＡｆａＡｆｕｃａｇｓｃ（配列番号１１９１）；
    のうちのいずれか１つと０又は１ヌクレオチド異なる修飾ヌクレオチド配列を含むか、それからなるか、又はそれから本質的になり、
    式中、ａ、ｃ、ｇ、及びｕが、それぞれ、２’－Ｏ－メチルアデノシン、２’－Ｏ－メチルシチジン、２’－Ｏ－メチルグアノシン、及び２’－Ｏ－メチルウリジンを表し、Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、及びＵｆが、それぞれ、２’－フルオロアデノシン、２’－フルオロシチジン、２’－フルオログアノシン、及び２’－フルオロウリジンを表し、ｃＰｒｐｕが、５’－シクロプロピルホスホネート－２’－Ｏ－メチルウリジンを表し、ｓが、ホスホロチオエート結合を表し、前記センス鎖上の前記ヌクレオチドの全て又は実質的に全てが、修飾ヌクレオチドである、請求項１に記載のＲＮＡｉ剤。
  25. 前記センス鎖が、以下のヌクレオチド配列（５’→３’）：
    ｇｓｃｕｇｕｕｃｕＧｆＣｆＧｆａｃｕａｃｕａｃａａ（配列番号１２６５）；又は
    ｇｓｃｕｇａｕＵｆｕＧｆｃＣｆｕｇａａｃａａｇａａ（配列番号１３１５）；
    のうちのいずれか１つと０又は１ヌクレオチド異なる修飾ヌクレオチド配列を含むか、それからなるか、又はそれから本質的になり、
    式中、ａ、ｃ、ｇ、及びｕが、それぞれ、２’－Ｏ－メチルアデノシン、２’－Ｏ－メチルシチジン、２’－Ｏ－メチルグアノシン、及び２’－Ｏ－メチルウリジンを表し、Ａｆ、Ｃｆ、Ｇｆ、及びＵｆが、それぞれ、２’－フルオロアデノシン、２’－フルオロシチジン、２’－フルオログアノシン、及び２’－フルオロウリジンを表し、ｓが、ホスホロチオエート結合を表し、前記アンチセンス鎖上の前記ヌクレオチドの全て又は実質的に全てが、修飾ヌクレオチドである、請求項１に記載のＲＮＡｉ剤。
  26. 前記センス鎖が、前記ヌクレオチド配列の３’末端、前記ヌクレオチド配列の５’末端、又はその両方において逆位脱塩基残基をさらに含む、請求項２０～２５のいずれか一項に記載のＲＮＡｉ剤。
  27. 前記ＲＮＡｉ剤が、標的化リガンドに連結されている、請求項１～２６のいずれか一項に記載のＲＮＡｉ剤。
  28. 前記標的化リガンドが、上皮細胞上に発現される細胞受容体に対して親和性を有する、請求項２７に記載のＲＮＡｉ剤。
  29. 前記標的化リガンドが、インテグリン標的化リガンドを含む、請求項２８に記載のＲＮＡｉ剤。
  30. 前記インテグリン標的化リガンドが、αｖβ６インテグリン標的化リガンドである、請求項２９に記載のＲＮＡｉ剤。
  31. 前記標的化リガンドが、以下の構造：
    若しくはその薬学的に許容される塩、又は
    若しくはその薬学的に許容される塩を含み、
    が、前記ＲＮＡｉ剤への結合点を示す、請求項３０に記載のＲＮＡｉ剤。
  32. 前記ＲＮＡｉ剤が、以下の構造：
    又はその薬学的に許容される塩を有する標的化リガンドに結合し、
    が、前記ＲＮＡｉ剤への結合点を示す、請求項２７～３０のいずれか一項に記載のＲＮＡｉ剤。
  33. 前記標的化リガンドが、以下の構造：
    又はその薬学的に許容される塩を有し、
    が、前記ＲＮＡｉ剤への結合点を示す、請求項２７～３０のいずれか一項に記載のＲＮＡｉ剤：
  34. 前記標的化リガンドが、前記センス鎖に結合している、請求項２７～３３のいずれか一項に記載のＲＮＡｉ剤。
  35. 前記標的化リガンドが、前記センス鎖の５’末端に結合している、請求項３４に記載のＲＮＡｉ剤。
  36. 請求項１～３５のいずれか一項に記載のＲＮＡｉ剤を含む組成物であって、薬学的に許容される賦形剤をさらに含む、組成物。
  37. ムチン５ＡＣ遺伝子の発現を阻害することができる第２のＲＮＡｉ剤をさらに含む、請求項３６に記載の組成物。
  38. １つ以上の追加の治療薬をさらに含む、請求項３６又は３７に記載の組成物。
  39. 吸入による投与のために製剤化される、請求項３６～３８のいずれか一項に記載の組成物。
  40. 定量吸入器、ジェット式ネブライザー、振動メッシュ式ネブライザー、又はソフトミスト吸入器によって送達される、請求項３９に記載の組成物。
  41. 前記ＲＮＡｉ剤が、ナトリウム塩である、請求項３６～４０のいずれか一項に記載の組成物。
  42. 前記薬学的に許容される賦形剤が、注射用の水である、請求項３６～４１のいずれか一項に記載の組成物。
  43. 前記薬学的に許容される賦形剤が、等張生理食塩水である、請求項３６～４２のいずれか一項に記載の組成物。
  44. 細胞におけるＭＵＣ５ＡＣ遺伝子の発現を阻害するための方法であって、有効量の請求項１～３５のいずれか一項に記載のＲＮＡｉ剤又は請求項３６～４３のいずれか一項に記載の組成物を細胞に導入することを含む、方法。
  45. 前記細胞が、対象体内にある、請求項４４に記載の方法。
  46. 前記対象が、ヒト対象である、請求項４５に記載の方法。
  47. 前記ＲＮＡｉ剤の投与後、前記ムチン５ＡＣ遺伝子発現が少なくとも約３０％阻害される、請求項４４～４６のいずれか一項に記載の方法。
  48. ＭＵＣ５ＡＣタンパク質レベルに関連する１つ以上の症状又は疾患を処置する方法であって、それを必要とするヒト対象に、治療有効量の請求項３６～４３のいずれか一項に記載の組成物を投与することを含む、方法。
  49. 前記疾患が、粘膜閉塞性肺疾患である、請求項４８に記載の方法。
  50. 前記粘膜閉塞性肺疾患が、喘息（重度の喘息を含む）、嚢胞性線維症（ＣＦ）、気管支拡張症（ＮＣＦＢ）、又は慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）である、請求項４９に記載の方法。
  51. 前記疾患が、喘息（重度の喘息を含む）である、請求項５０に記載の方法。
  52. 前記疾患が、がんである、請求項４８に記載の方法。
  53. 前記がんが、肺腺癌、膵臓がん、唾液腺癌、乳がん、胆管癌、又は卵巣がんである、請求項５２に記載の方法。
  54. 前記ＲＮＡｉ剤が、前記対象の体重１ｋｇ当たり約０．０１ｍｇ～約５．０ｍｇの肺沈着用量（ＰＤＤ）で投与される、請求項４４～５３のいずれか一項に記載の方法。
  55. 前記ＲＮＡｉ剤が、前記対象の体重１ｋｇ当たり約０．１ｍｇ～約２．０ｍｇの肺沈着用量（ＰＤＤ）で投与される、請求項４４～５３のいずれか一項に記載の方法。
  56. 前記ＲＮＡｉ剤が、前記対象の体重１ｋｇ当たり約０．０１ｍｇ～約５．０ｍｇの吸入送達用量（ＲＤＤ）で投与される、請求項４４～５３のいずれか一項に記載の方法。
  57. 前記ＲＮＡｉ剤が、前記対象の体重１ｋｇ当たり約０．１ｍｇ～約２．０ｍｇの吸入送達用量（ＲＤＤ）で投与される、請求項４４～５３のいずれか一項に記載の方法。
  58. 前記ＲＮＡｉ剤が、２回以上の用量で投与される、請求項４４～５７のいずれか一項に記載の方法。
  59. ムチン５ＡＣタンパク質レベルによって少なくとも部分的に媒介される疾患、障害、又は症状の処置のための、請求項１～３５のいずれか一項に記載のＲＮＡｉ剤の使用。
  60. ムチン５ＡＣ遺伝子発現によって少なくとも部分的に媒介される疾患、障害、又は症状の処置のための、請求項３６～４３のいずれか一項に記載の組成物の使用。
  61. ムチン５ＡＣ遺伝子発現によって少なくとも部分的に媒介される疾患、障害、又は症状の処置のための医薬の製造のための、請求項３６～４３のいずれか一項に記載の組成物の使用。
  62. 前記疾患が、喘息（重度の喘息を含む）である、請求項５９～６１のいずれか一項に記載の使用。
  63. センス鎖とアンチセンス鎖とをアニーリングして二本鎖リボ核酸分子を形成することを含む、請求項１～３５のいずれか一項に記載のＲＮＡｉ剤を製造する方法。
  64. 前記センス鎖が、標的化リガンドを含む、請求項６３に記載の方法。
  65. 標的化リガンドを前記センス鎖に結合させることを含む、請求項６４に記載の方法。
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Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2024158905A1 (en) * 2023-01-24 2024-08-02 Ohio State Innovation Foundation Muc5ac in pancreatic ductal adenocarcinoma
WO2025128462A1 (en) * 2023-12-12 2025-06-19 Eli Lilly And Company Novel therapeutic delivery moieties and uses thereof

Family Cites Families (20)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5998203A (en) 1996-04-16 1999-12-07 Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. Enzymatic nucleic acids containing 5'-and/or 3'-cap structures
WO2000053722A2 (en) 1999-03-10 2000-09-14 Phogen Limited Delivery of nucleic acids and proteins to cells
US8090542B2 (en) * 2002-11-14 2012-01-03 Dharmacon Inc. Functional and hyperfunctional siRNA
EP2423326B1 (en) 2004-05-07 2014-01-08 Celera Corporation Genetic polymorphism associated with liver fibrosis methods of detection and uses thereof
CN101500548A (zh) 2006-08-18 2009-08-05 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 用于体内递送多核苷酸的多缀合物
EP2377934A4 (en) * 2008-12-12 2012-09-26 Kureha Corp PHARMACEUTICAL COMPOSITION FOR THE TREATMENT OF TUMOR AND ASTHMA
SG183374A1 (en) 2010-02-24 2012-09-27 Arrowhead Res Corp Compositions for targeted delivery of sirna
US9068014B2 (en) 2010-09-23 2015-06-30 Precision Biologics, Inc. Colon and pancreas cancer peptidomimetics
US9920317B2 (en) * 2010-11-12 2018-03-20 The General Hospital Corporation Polycomb-associated non-coding RNAs
US8501930B2 (en) 2010-12-17 2013-08-06 Arrowhead Madison Inc. Peptide-based in vivo siRNA delivery system
HK1199736A1 (en) 2011-08-26 2015-07-17 箭头研究公司 Poly(vinyl ester) polymers for in vivo nucleic acid delivery
WO2013158141A1 (en) 2012-04-18 2013-10-24 Arrowhead Research Corporation Poly(acrylate) polymers for in vivo nucleic acid delivery
US9452228B2 (en) * 2013-04-01 2016-09-27 Immunomedics, Inc. Antibodies reactive with an epitope located in the N-terminal region of MUC5AC comprising cysteine-rich subdomain 2 (Cys2)
CA2948013A1 (en) 2014-06-30 2016-01-07 Immunomedics, Inc. Antibodies reactive with an epitope located in the n-terminal region of muc5ac comprising cysteine-rich subdomain 2 (cys2)
CA3023764A1 (en) 2016-06-06 2017-12-14 Arrowhead Pharmaceuticals, Inc. 5'-cyclo-phosphonate modified nucleotides
JOP20190015A1 (ar) * 2016-08-04 2019-02-04 Arrowhead Pharmaceuticals Inc عوامل (ار ان ايه آي) لعدوى فيروس الالتهاب الكبدي الوبائي ب
JP7291624B2 (ja) 2016-11-01 2023-06-15 アローヘッド ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド アルファ－ｖベータ－６インテグリンリガンド及びその使用
KR102762143B1 (ko) 2017-11-01 2025-02-07 애로우헤드 파마슈티컬스 인코포레이티드 인테그린 리간드 및 그의 용도
JP7420727B2 (ja) 2018-02-17 2024-01-23 アローヘッド ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド トリアルキン結合剤及び使用方法
US11040056B2 (en) * 2018-05-11 2021-06-22 The University Of North Carolina At Chapel Hill Benzimidazoles that enhance the activity of oligonucleotides

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