TW202321230A - 用作ａｔｒ激酶抑制劑的化合物 - Google Patents
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Abstract
本發明涉及一種如式I所示的ATR激酶抑制劑及其製備方法和應用。式
I所示的化合物對ATR具有很高的抑制活性，同時具有優異的藥效、體外/體內藥代動力學性質和安全性，臨床應用前景高。
Description
本公開屬於藥物化學領域，特別是涉及一種ATR激酶抑制劑及其製備方法和應用。
ATR(Ataxia-telangiectasia and Rad3 related)是ATM Rad3相關蛋白激酶，與ATM(Ataxia-telangiectasia mutated，毛細血管擴張性共濟失調突變)，DNA-PKcs(DNA-dependent protein kinase catalytic subunit,DNA依賴蛋白激酶催化亞基)同屬於PI3KKs(Phosphoinositide 3 kinase-related protein kinases，磷酸肌醇3激酶相關蛋白激酶)激酶家族。
受外界壓力或機體內部環境影響，細胞發生DNA損傷尤其是DNA單鏈或雙鏈斷裂(Double Strand Breaks,DSB)和複製應激，在正常細胞中，為維持基因組穩定，DNA損傷會被DNA損傷反應(DNA-damage response,DDR)因數迅速識別，從而啟動細胞週期檢查點並直接進行DNA修復。根據損傷的類型，涉及不同的DNA修復途徑，它們共同形成了一個高度複雜的、相互作用的針對基因毒性損傷的防禦機制。
ATM和ATR都是由DNA損傷和DNA複製應激啟動的，但它們的DNA損傷特異性及功能各不相同，ATM主要由雙鏈DNA斷裂啟動，而ATR對廣泛的DNA損傷做出反應，包括DSB和各種干擾複製的DNA損傷。兩者協同作用發出
DNA損傷的信號並調節下游過程。然而，許多種癌細胞在其一些DNA修復過程(如ATM信號傳導)存在缺陷，從而對其剩餘的完整DNA修復蛋白(如ATR)表現出更大依賴性。在ATM缺陷的癌細胞中，抑制ATR能夠有效抑制癌細胞生長，起到合成致死治療癌症的作用。
合成致死性是指，在功能類似或代償的一對基因中，單個基因失活的發生對於細胞存活是可以容忍的，而多個基因同時破壞導致細胞死亡。相較於傳統的放療化療等其他癌症治療方法，基於合成致死的治療策略有3個優勢：首先，ATM是癌症中最常見的異常基因之一，據COSMIC資料庫記錄，在腫瘤和血液惡性腫瘤中觀察到了167種不同的ATM體細胞突變(不包括未知來源的變體)，因此基於合成致死的治療策略可對抗大多數癌症突變；其次，可根據基因突變的高選擇性簡單地識別出對應患者；最後，與化療藥物聯合用藥可以提高其療效並降低劑量、避免或減輕不良反應。
處於臨床前和臨床研究階段的ATR激酶抑制劑包括WO2010071837A1公開的Berzosertib(VX-970)、Ceralaserti(AZD6738)、Elimusertib(BAY-1895344)、ART0380、RP-3500、VX-803以及M1774。其中，VX-970正針對抗前列腺癌、小細胞肺癌、卵巢癌、尿路上皮癌和非小細胞肺癌等適應症進行I/II或II期臨床測試。AZD6738針對乳腺癌、頭頸部鱗狀細胞癌、胃癌及非小細胞肺癌的臨床治療已進入II期。ART0380治療卵巢癌、RP-3500治療實體瘤、VX-803治療乳腺癌正在I/II期臨床階段。BAY-1895344治療淋巴瘤及實體瘤，M1774治療實體瘤處於臨床I期。
以上臨床試驗已顯示ATR功能的破壞在無論有無DNA損傷劑的存在下都促進癌細胞死亡。這表明ATR激酶抑制劑作為單一藥劑或作為放療或遺傳毒性化療增敏劑都可能是有效的。
現有技術公開的化合物對ATR雖然有抑制活性，但其細胞毒性高，體內PK暴露量低。因此，仍需開發更多的細胞毒性低，暴露量高的ATR高抑制活性的抑制劑。
為了解決上述技術問題，本公開提供了以下技術方案：
一種式I所示的化合物或其藥學上可接受的鹽、酯、異構體、溶劑化物、前藥或同位素標記物，所述式I化合物的結構式為：
其中：
環A、環B和環C分別為6至10元芳基或5至10元雜芳基；
R1包含係選自氫、氘、氰基、鹵素、以及取代或未取代的羥基、氨基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、3至7元環烷基、3至7元雜環基、胍基、脲基、醯氨基、氨基磺醯胺基、磺醯氨基和HN-C(=NH)-C1-6烷基所組成的群組；
R2和R5包含係選自氫、氘、鹵素、C1-6烷基、氨基和C1-6烷氧基所組成的群組；
或者R1和R2與它們所連接的原子一起形成包含1至3個包含係選自氧、氮和硫原子的5至6元雜芳基或雜環基，所述5至6元雜芳基或雜環基的環上有0或1個亞甲基可任意被-C(=O)-或-C(=NR7)-替代所組成的群組；
若存在，每一個R3各自獨立地包含係選自氫、氘、鹵素、C1-6烷基所組成的群組和被包含係選自氰基、氨基、羥基、鹵素、C1-6烷基和C1-6烷氧基的取代基所取代的C1-6烷基所組成的群組；
R4包含係選自氫、氘、C1-6烷基、3至7元環烷基、3至7元雜環基、C1-6烷基氨基和(C1-3烷基)2氨基所組成的群組；
或者R4和R5與它們所連接的原子一起形成包含1至3個包含係選自氧、氮和硫的5至7元雜環基所組成的群組，所述5至7元雜環基任選地被包含係選自氘、羥基、C1-6烷基、鹵素、C1-6烷氧基和C1-6烷基氨基的取代基所取代所組成的群組；環上有1至3個亞甲基可任意被-SO2-、-SO(=NR7)-、-SO2NH-、-CO-、-C(=O)NH-、C1-6烷基氨基或3至6元環烷基氨基替代；所述C1-6烷基氨基或者3至6元環烷基氨基，其中有0至2個亞甲基可以任意被氧、氮、硫或C1-3烷基氨基所替代；
若存在，每一個R6各自獨立地包含係選自氫、氘、鹵素、氨基、C1-6烷氧基、C1-6烷基所組成的群組和被包含係選自氰基、氨基、羥基、鹵素、C1-6烷基和C1-6烷氧基的取代基所取代的C1-6烷基所組成的群組；
Q1包含係選自C1-6亞烷基、-CO-、氨基、-SO-、-SO2-、-C(=NR7)-和3至7元雜環基，其中C1-6亞烷基中的0至4個亞甲基可任意被氨基、-CO-、-SO-、-SO2或-C(=NR7)-替代所組成的群組；
Q2包含係選自-SO2-、SO、-SO(=NR7)-、-SO2NR7-和-CO-所組成的群組；
每一個R7各自獨立地包含係選自氫、氘、C1-6烷基、氰基、3至7元環烷基、3至7元雜環基、C1-6烷氧基、C1-6烷基氨基所組成的群組和被包含係選自氰基、氨基、羥基、鹵素、C1-6烷基和C1-6烷氧基的取代基所取代的C1-6烷基、3至7元環烷基和3至7元雜環基所組成的群組；且
n1、n2和n3各自為0至2的任一整數。
本公開提供的氨基吡嗪類化合物，其對ATR具有很高的抑制活性，同時具有優異的藥效、體外/體內藥代動力學性質和安全性，臨床應用前景高。
圖1 不同給藥組給藥後小鼠體重變化圖；
圖2 不同給藥組給藥後小鼠瘤體積變化(絕對值)圖；
圖3 不同給藥組給藥後小鼠瘤體積變化(百分比)圖。
為使本公開的技術方案和有益效果能夠更加明顯易懂，下面通過列舉具體實施例的方式進行詳細說明。除非另有定義，本公開所使用的技術和科學技術名詞與本申請所屬的技術領域中的技術和科學技術名詞的含義相同。
本公開一方面提供式I所示的化合物或其藥學上可接受的鹽、酯、異構體、溶劑化物、前藥或同位素標記物，所述式I化合物的結構式為：
其中：
環A、環B和環C分別為6至10元芳基或5至10元雜芳基；
R1包含係選自氫、氘、氰基、鹵素、以及取代或未取代的羥基、氨基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、3至7元環烷基、3至7元雜環基、胍基、脲基、醯氨基、氨基磺醯胺基、磺醯氨基和HN-C(=NH)-C1-6烷基所組成的群組；
R2和R5包含係選自氫、氘、鹵素、C1-6烷基、氨基和C1-6烷氧基所組成的群組；
或者R1和R2與它們所連接的原子一起形成包含1至3個包含係選自氧、氮和硫原子的5至6元雜芳基或雜環基，所述5至6元雜芳基或雜環基的環上有0或1個亞甲基可任意被-C(=O)-或-C(=NR7)-替代所組成的群組；
若存在，每一個R3各自獨立地包含係選自氫、氘、鹵素、C1-6烷基所組成的群組和被包含係選自氰基、氨基、羥基、鹵素、C1-6烷基和C1-6烷氧基的取代基所取代的C1-6烷基所組成的群組；
R4包含係選自氫、氘、C1-6烷基、3至7元環烷基、3至7元雜環基、C1-6烷基氨基和(C1-3烷基)2氨基所組成的群組；
或者R4和R5與它們所連接的原子一起形成包含1至3個包含係選自氧、氮和硫的5至7元雜環基所組成的群組，所述5至7元雜環基任選地被包含係選自氘、羥基、C1-6烷基、鹵素、C1-6烷氧基和C1-6烷基氨基的取代基所取代所組成的群組；環上有1至3個亞甲基可任意被-SO2-、-SO(=NR7)-、-SO2NH-、-CO-、-C(=O)NH-、C1-6
烷基氨基或3至6元環烷基氨基替代；所述C1-6烷基氨基或者3至6元環烷基氨基，其中有0至2個亞甲基可以任意被氧、氮、硫或C1-3烷基氨基所替代；
若存在，每一個R6各自獨立地包含係選自氫、氘、鹵素、氨基、C1-6烷氧基、C1-6烷基所組成的群組和被包含係選自氰基、氨基、羥基、鹵素、C1-6烷基和C1-6烷氧基的取代基所取代的C1-6烷基所組成的群組；
Q1包含係選自C1-6亞烷基、-CO-、氨基、-SO-、-SO2-、-C(=NR7)-和3至7元雜環基，其中C1-6亞烷基中的0至4個亞甲基可任意被氨基、-CO-、-SO-、-SO2或-C(=NR7)-替代所組成的群組；
Q2包含係選自-SO2-、SO、-SO(=NR7)-、-SO2NR7-和-CO-所組成的群組；
每一個R7各自獨立地包含係選自氫、氘、C1-6烷基、氰基、3至7元環烷基、3至7元雜環基、C1-6烷氧基、C1-6烷基氨基所組成的群組和被包含係選自氰基、氨基、羥基、鹵素、C1-6烷基和C1-6烷氧基的取代基所取代的C1-6烷基、3至7元環烷基和3至7元雜環基所組成的群組；且
n1、n2和n3各自為0至2的任一整數。
在某些實施方案中，所述的式I所示的化合物或其藥學上可接受的鹽、酯、異構體、溶劑化物、前藥或同位素標記物，其中n1為0或者1；n2為1或者2，且n3優選為0或1。
在某些實施方案中，所述的式I所示的化合物或其藥學上可接受的鹽、酯、異構體、溶劑化物、前藥或同位素標記物，其中n1為0或1。
在某些實施方案中，所述的式I所示的化合物或其藥學上可接受的鹽、酯、異構體、溶劑化物、前藥或同位素標記物，其中n2為0或1。
在某些實施方案中，所述的式I所示的化合物或其藥學上可接受的鹽、酯、異構體、溶劑化物、前藥或同位素標記物，其中n3為0或1。
在某些實施方案中，所述的式I所示的化合物或其藥學上可接受的鹽、酯、異構體、溶劑化物、前藥或同位素標記物，其中n1為0或1；n2為0或1；且n3為0或1。
在某些實施方案中，所述的式I所示的化合物或其藥學上可接受的鹽、酯、異構體、溶劑化物、前藥或同位素標記物，其中所述環A和環B包含係選自苯基和5至6元雜芳基所組成的群組；優選地，所述環A和環B包含係選自苯基和6元雜芳基所組成的群組；更優選地，所述環A和環B包含係選自苯基和吡啶基所組成的群組，最優選地，所述環A和環B包含係選自苯基所組成的群組。
在某些實施方案中，所述的式I所示的化合物或其藥學上可接受的鹽、酯、異構體、溶劑化物、前藥或同位素標記物，其中所述環C為5至6元雜芳基；優選地，所述環C為5元雜芳基；更優選地，所述環C包含係選自異噁唑、噁二唑和噻二唑所組成的群組；最優選地，所述環C包含係選自異噁唑和噁二唑所組成的群組。在某些實施方案中，所述的式I所示的化合物或其藥學上可接受的鹽、酯、異構體、溶劑化物、前藥或同位素標記物，其為式I-a
所示的化合物或其藥學上可接受的鹽、酯、異構
體、溶劑化物、前藥或同位素標記物，其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、Q1、Q2、n1、n2和n3如式I中所定義。
在某些實施方案中，所述的式I所示的化合物或其藥學上可接受的鹽、酯、異構體、溶劑化物、前藥或同位素標記物，其為式I-b所示的化合物或其藥學上可接受的鹽、酯、異構體、溶劑化物、前藥或同位素標記物：
其中：
環C為5元雜芳基；
L為CR10aR11a或NR14a；
n4a為0、1或2；
R9a包含係選自氧和NR7所組成的群組；
R10a和R11a各自獨立地包含係選自氫、氘、C1-6烷基、C1-6烷氧基和C1-6烷基氨基所組成的群組；或者R10和R11與它們所連接的原子一起形成3至7元環烷基或包含1或2個包含係選自氧、氮和硫的3至7元雜環基所組成的群組；
R12a和R13a各自獨立地包含係選自氫、氘、鹵素、羥基、C1-6烷基、C1-6烷氧基和C1-6烷基氨基所組成的群組；或者R12a和R13a形成=O；
R14a包含係選自氫、氘、取代或未取代的C1-6烷基、C1-6烷氧基、3至7元環烷基和3至7元雜環基所組成的群組，所述取代是被包含係選自鹵素、羥基、氨基、C1-6烷基氨基和(C1-6烷基)2氨基的取代基所取代所組成的群組；
R1、R2、R3、R6、R7、Q1、n1、n2和n3如式I中所定義。
在某些實施方案中，所述的式I或式I-b所示的化合物或其藥學上可接受的鹽、酯、異構體、溶劑化物、前藥或同位素標記物，其為式I-b-1或式I-b-2所示的化合物或其藥學上可接受的鹽、酯、異構體、溶劑化物、前藥或同位素標記物：
其中：
環C、R1、R2、R3、R6、R7、Q1、n1、n2、n3、L、n4a、R9a和R12a如式I-b中所定義。
在某些實施方案中，所述的式I、式I-b、式I-b-1或式I-b-2所示的化合物或其藥學上可接受的鹽、酯、異構體、溶劑化物、前藥或同位素標記物，其中所述環C為5至6元雜芳基；優選地，所述環C為5元雜芳基；更優選地，所述環C包含係選自異噁唑、噁二唑和噻二唑所組成的群組；最優選地，所述環C包含係選自異噁唑和噁二唑所組成的群組。
在某些實施方案中，所述的式I、式I-b、式I-b-1或式I-b-2所示的化合物或其藥學上可接受的鹽、酯、異構體、溶劑化物、前藥或同位素標記物，其中所
述環C包含係選自
、
、
和
所組成的群組；優
選為
或
。
在某些實施方案中，式I-b、式I-b-1或式I-b-2所示的化合物或其藥學上可接受的鹽、酯、異構體、溶劑化物、前藥或同位素標記物，其中n4a為0或1；優選地，n4a為0。
在某些實施方案中，所述的式I-b、式I-b-1或式I-b-2所示的化合物或其藥學上可接受的鹽、酯、異構體、溶劑化物、前藥或同位素標記物，其中R9a包含係選自氧和NH所組成的群組；優選地，R9a包含係選自氧所組成的群組。
在某些實施方案中，所述的式I-b、式I-b-1或式I-b-2所示的化合物或其藥學上可接受的鹽、酯、異構體、溶劑化物、前藥或同位素標記物，其中L為CR10aR11a，R10a和R11a各自獨立地包含係選自氫、氘、C1-6烷基和C1-6烷氧基所組成的群組；優選地，L為CR10aR11a，R10a和R11a各自獨立地包含係選自氫和C1-6烷基所組成的群組；更優選地，L為CR10aR11a，R10a和R11a均為C1-6烷基；最優選地，L為CR10aR11a，R10a和R11a均為甲基。
在某些實施方案中，所述的式I-b、式I-b-1或式I-b-2所示的化合物或其藥學上可接受的鹽、酯、異構體、溶劑化物、前藥或同位素標記物，其中R10a和R11a與它們所連接的原子一起形成3至7元環烷基或包含1或2個包含係選自氧、氮和硫的3至7元雜環基所組成的群組；所述3至7元環烷基為環丙烷基。
在某些實施方案中，所述的式I-b、式I-b-1或式I-b-2所示的化合物或其藥學上可接受的鹽、酯、異構體、溶劑化物、前藥或同位素標記物，其中R12a和R13a各自獨立地包含係選自氫、氘、鹵素、羥基、C1-6烷基、C1-6烷氧基所組成的群組；優選地，R12a和R13a各自獨立地包含係選自氫、氘、鹵素、羥基和C1-6烷基所組成的群組；更優選地，R12a和R13a各自獨立地包含係選自氫、氘、甲基、氟和羥基所組成的群組；進一步優選地，R12a和R13a各自獨立地包含係選自氫和氟所組成的群組；最優選地，R12a為氫，且R13a為氟。
在某些實施方案中，所述的式I-b、式I-b-1或式I-b-2所示的化合物或其藥學上可接受的鹽、酯、異構體、溶劑化物、前藥或同位素標記物，其中R14a包含
係選自氫、甲基、乙基、異丙基、環丙基、羥乙基和
所組成的群組。
在某些實施方案中，所述的式I-b所示的化合物或其藥學上可接受的
鹽、酯、異構體、溶劑化物、前藥或同位素標記物，其中
為
，R10a、R11a、R12a和R13a如式I-b中所定義；優選地，
為
，R10a、R11a和R12a如式I-b中所定義；更優選地，
為
或
；最優選地，
為
。
在某些實施方案中，所述的式I-b-1所示的化合物或其藥學上可接受的
鹽、酯、異構體、溶劑化物、前藥或同位素標記物，其中
為
，R10a、R11a和R12a如式I-b-1中所定義；優選地，
為
在某些實施方案中，所述的式I-b-2所示的化合物或其藥學上可接受的
鹽、酯、異構體、溶劑化物、前藥或同位素標記物，其中
為
，R10a、R11a和R12a如式I-b-2中所定義；優選地，
為
在某些實施方案中，所述的式I、式I-a、式I-b、式I-b-1或式I-b-2所示的化合物或其藥學上可接受的鹽、酯、異構體、溶劑化物、前藥或同位素標記物，其中R1包含係選自氫、氘、氰基、鹵素、以及取代或未取代的羥基、氨基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、3至7元環烷基、3至7元雜環基、胍基、脲基、醯氨基、氨基磺醯胺基、磺醯氨基和HN-C(=NH)-C1-6烷基所組成的群組；所述取代是被包含係選自C1-6烷基或3至7元環烷基的取代基所取代所組成的群組；優選地，R1包含係選自氫、取代或未取代的氨基、C1-6烷基、胍基、脲基、3至7元雜環基、氨基磺醯胺基和HN-C(=NH)-C1-6烷基所組成的群組；所述取代是被包含係選自C1-6烷基或3至7元環烷基的取代基所取代所組成的群組；更優選地，R1包含係選自氫、甲基、乙基、
在某些實施方案中，所述的式I、式I-a、式I-b、式I-b-1或式I-b-2所示的化合物或其藥學上可接受的鹽、酯、異構體、溶劑化物、前藥或同位素標記物，其中R2和R5各自獨立地包含係選自氫、氘、鹵素和C1-6烷基所組成的群組；優選地，R2和R5各自獨立地為氫或氘。
在某些實施方案中，所述的式I、式I-a、式I-b、式I-b-1或式I-b-2所示的化合物或其藥學上可接受的鹽、酯、異構體、溶劑化物、前藥或同位素標記物，其中R1和R2與它們所連接的原子一起形成包含1至3個包含係選自氧、氮和硫原子的5至6元雜芳基或雜環基，所述5至6元雜環基的環上有0或1個亞甲基可任意被-C(=O)-或-C(=NR7)-替代所組成的群組；所述5至6元雜芳基或者5至6元雜環基為下列結構的任一種：
其中：R8包含係選自氫、氘、C1-6烷基和3至7元環烷基所組成的群組；優選地，R8為氫。
在某些實施方案中，所述的式I、式I-a、式I-b、式I-b-1或式I-b-2所示的化合物或其藥學上可接受的鹽、酯、異構體、溶劑化物、前藥或同位素標記物，其中R3為鹵素或鹵素取代的C1-6烷基，優選為F或CF3。
在某些實施方案中，所述的式I、式I-a、式I-b、式I-b-1或式I-b-2所示的化合物或其藥學上可接受的鹽、酯、異構體、溶劑化物、前藥或同位素標記物，其中R3包含係選自氫原子、鹵素、C1-6烷基和鹵素取代的C1-6烷基所組成的群組；優選地，R3包含係選自氫原子、鹵素和鹵素取代的C1-6烷基所組成的群組；更優選地，R3包含係選自氫原子、F和CF3所組成的群組。
在某些實施方案中，所述的式I或式I-a所示的化合物或其藥學上可接受的鹽、酯、異構體、溶劑化物、前藥或同位素標記物，其中R4包含係選自C1-6烷基、3至7元環烷基、C1-6烷基氨基和(C1-3烷基)2氨基所組成的群組；優選地，R4為甲基或下列結構的任一種：
在某些實施方案中，所述的式I或式I-a所示的化合物或其藥學上可接受的鹽、酯、異構體、溶劑化物、前藥或同位素標記物，其中R4和R5與它們所連接的原子一起形成包含1至3個包含係選自氧、氮和硫的5至7元雜環基，所述5至7元雜環基優選為下列結構的任一種：
n4包含係選自0到2的整數所組成的群組；
R9包含係選自氧和NR7所組成的群組；
R10和R11各自獨立地包含係選自氫、氘、C1-6烷基、C1-6烷氧基和C1-6烷基氨基所組成的群組；或者R10和R11與它們所連接的原子一起形成3至7元環烷基或包含1或2個包含係選自氧、氮和硫的3至7元雜環基所組成的群組；
R12和R13各自獨立地包含係選自氫、氘、鹵素、羥基、C1-6烷基、C1-6烷氧基和C1-6烷基氨基所組成的群組；或者R12和R13形成=O；
R14包含係選自氫、氘、取代或未取代的C1-6烷基、C1-6烷氧基、3至7元環烷基和3至7元雜環基所組成的群組，所述取代是被包含係選自鹵素、羥基、氨基、C1-6烷基氨基和(C1-6烷基)2氨基的取代基所取代所組成的群組；
R7如式I中所定義。
在某些實施方案中，所述的式I、式I-a、式I-b、式I-b-1或式I-b-2所示的化合物或其藥學上可接受的鹽、酯、異構體、溶劑化物、前藥或同位素標記物，其中每一個R6各自獨立地包含係選自氫、氘和氟所組成的群組。
在某些實施方案中，所述的式I、式I-a、式I-b、式I-b-1或式I-b-2所示的化合物或其藥學上可接受的鹽、酯、異構體、溶劑化物、前藥或同位素標記物，
其中Q1包含係選自C1-6亞烷基、-CO-、氨基、-SO-、-SO2-、-C(=NR7)-或為下列結構的任一種：
在某些實施方案中，所述的式I或式I-a所示的化合物或其藥學上可接受的鹽、酯、異構體、溶劑化物、前藥或同位素標記物，其中Q2包含係選自-SO2-、-SO(=NH)-、-SO(=NMe)-和-CO-所組成的群組。
在某些實施方案中，所述的式I、式I-a、式I-b、式I-b-1或式I-b-2所示的化合物或其藥學上可接受的鹽、酯、異構體、溶劑化物、前藥或同位素標記物，其中每一個R7獨立地包含係選自氫、氘、甲基和氰基所組成的群組；優選地，每一個R7獨立地包含係選自氫和甲基所組成的群組。
在某些實施方案中，所述的式II-a或式II-b中n4為0或1。
在某些實施方案中，所述的式II-a、式II-b或II-c中R9包含係選自氧和NH所組成的群組。
在某些實施方案中，所述的式II-a中R10和R11各自獨立地包含係選自氫、氘、C1-6烷基和C1-6烷氧基所組成的群組；優選地，R10和R11各自獨立地包含係選自氫和C1-6烷基所組成的群組；更優選地，R10和R11各自獨立地包含係選自氫和甲基所組成的群組。
在某些實施方案中，所述的式II-a中R10和R11與它們所連接的原子一起形成3至7元環烷基或包含1或2個包含係選自氧、氮和硫的3至7元雜環基所組成的群組；所述3至7元環烷基為環丙烷基。
在某些實施方案中，所述的式II-a中R12和R13各自獨立地包含係選自氫、氘、鹵素、羥基、C1-6烷基、C1-6烷氧基所組成的群組；優選地，R12和R13各自獨立地包含係選自氫、氘、鹵素、羥基和C1-6烷基所組成的群組；更優選地，R12和R13各自獨立地包含係選自氫、氘、甲基、氟和羥基所組成的群組；進一步優選地，R12和R13各自獨立地包含係選自氫和氟所組成的群組；最優選地，R12為氫，且R13為氟。
在某些實施方案中，所述的式II-b中R14包含係選自氫、甲基、乙基、
異丙基、環丙基、羥乙基和
所組成的群組。
表A 本公開的典型化合物包括但不限於：
表B 本公開的化合物包括但不限於：
本公開還提供了一種式I所示化合物的製備方法，
路線1：
路線2：
在某些實施方式中，步驟S1是在雙三氟乙醯碘苯存在下發生反應。
在某些實施方式中，步驟S2是在雙聯頻哪醇硼酸酯存在下發生反應。
在某些實施方式中，步驟S2是在鹼存在下發生反應。
在某些實施方式中，步驟S2中所述鹼包含係選自無機鹼和有機鹼所組成的群組。
在某些實施方式中，步驟S2中所述無機鹼包含係選自氫化鈉、磷酸鉀、醋酸鉀、碳酸鈉、碳酸鉀、碳酸銫、氫氧化鈉、氫氧化鋰和氫氧化鉀中的一種或多種所組成的群組。
在某些實施方式中，步驟S2中所述有機鹼包含係選自三乙胺、吡啶、N,N-二異丙基乙胺、正丁基鋰、二異丙基氨基鋰、醋酸鈉、醋酸鉀、叔丁醇鈉、叔丁醇鉀和1,8-二氮雜二環十一碳-7-烯中的一種或多種所組成的群組。
在某些實施方式中，步驟S2是在[1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯化鈀存在下發生反應。
在某些實施方式中，步驟S3是在鹼存在下發生反應。
在某些實施方式中，步驟S3中所述鹼包含係選自無機鹼和有機鹼所組成的群組。
在某些實施方式中，步驟S3中所述無機鹼包含係選自氫化鈉、磷酸鉀、醋酸鉀、碳酸鈉、碳酸鉀、碳酸銫、氫氧化鈉、氫氧化鋰和氫氧化鉀中的一種或多種所組成的群組。
在某些實施方式中，步驟S3中所述有機鹼包含係選自三乙胺、吡啶、N,N-二異丙基乙胺、正丁基鋰、二異丙基氨基鋰、醋酸鈉、醋酸鉀、叔丁醇鈉、叔丁醇鉀和1,8-二氮雜二環十一碳-7-烯中的一種或多種所組成的群組。
在某些實施方式中，步驟S3是在[1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯化鈀存在下發生反應。
在某些實施方式中，步驟S4是在酸存在下發生反應。
在某些實施方式中，步驟S4中所述酸包含係選自鹽酸、硫酸、甲酸、乙酸、三氟乙酸中的一種或多種所組成的群組。
在某些實施方式中，當所述式a、b、c、d、I化合物中R1基團中存在氨基時，所述方法還包括對所述氨基上保護基和脫保護基的步驟。
在某些實施方式中，所述保護基包含係選自Boc和Cbz所組成的群組。
路線3：
路線4：
路線5：
在某些實施方式中，步驟S1是在水合肼存在下發生反應。
在某些實施方式中，步驟S2是在鹼存在下發生反應。
在某些實施方式中，步驟S2中所述鹼包含係選自無機鹼和有機鹼所組成的群組。
在某些實施方式中，步驟S2中所述無機鹼包含係選自氫化鈉、磷酸鉀、醋酸鉀、碳酸鈉、碳酸鉀、碳酸銫、氫氧化鈉、氫氧化鋰和氫氧化鉀中的一種或多種所組成的群組。
在某些實施方式中，步驟S2中所述有機鹼包含係選自三乙胺、吡啶、N,N-二異丙基乙胺、正丁基鋰、二異丙基氨基鋰、醋酸鈉、醋酸鉀、叔丁醇鈉、叔丁醇鉀和1,8-二氮雜二環十一碳-7-烯中的一種或多種所組成的群組。
在某些實施方式中，步驟S2是在O-(7-氮雜苯並三氮唑-1-基)-N,N,N’,N’-四甲基脲六氟磷酸酯存在下發生反應。
在某些實施方式中，步驟S3是在鹼存在下發生反應。
在某些實施方式中，步驟S3中所述鹼包含係選自無機鹼和有機鹼所組成的群組。
在某些實施方式中，步驟S3中所述無機鹼包含係選自氫化鈉、磷酸鉀、醋酸鉀、碳酸鈉、碳酸鉀、碳酸銫、氫氧化鈉、氫氧化鋰和氫氧化鉀中的一種或多種所組成的群組。
在某些實施方式中，步驟S3中所述有機鹼包含係選自三乙胺、吡啶、二異丙基乙胺、正丁基鋰、二異丙基氨基鋰、醋酸鈉、醋酸鉀、叔丁醇鈉、叔丁醇鉀和1,8-二氮雜二環十一碳-7-烯中的一種或多種所組成的群組。
在某些實施方式中，步驟S3是在二溴三苯基膦存在下發生反應。
在某些實施方式中，步驟S4是在鹼存在下發生反應。
在某些實施方式中，步驟S4中所述鹼包含係選自無機鹼和有機鹼所組成的群組。
在某些實施方式中，步驟S4中所述無機鹼包含係選自氫化鈉、磷酸鉀、醋酸鉀、碳酸鈉、碳酸鉀、碳酸銫、氫氧化鈉、氫氧化鋰和氫氧化鉀中的一種或多種所組成的群組。
在某些實施方式中，步驟S4中所述有機鹼包含係選自三乙胺、吡啶、N,N-二異丙基乙胺、正丁基鋰、二異丙基氨基鋰、醋酸鈉、醋酸鉀、叔丁醇鈉、叔丁醇鉀和1,8-二氮雜二環十一碳-7-烯中的一種或多種所組成的群組。
在某些實施方式中，步驟S4是在[1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯化鈀存在下發生反應。
在某些實施方式中，當所述式c、d、I化合物中R1基團中存在氨基時，所述方法還包括對所述氨基上保護基和脫保護基的步驟。
在某些實施方式中，所述保護基包含係選自Boc和Cbz所組成的群組。
本公開還提供了一種藥物組合物，所述藥物組合物含有治療有效量的本公開式I、式I-a、式I-b、式I-b-1、式I-b-2或表A或表B所示的化合物或其藥學上可接受的鹽、酯、異構體、溶劑化物、前藥或同位素標記物，以及一種或多種藥學上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑。
在某些實施方式中，本公開所述的藥物組合物的單位劑量為0.001mg-1000mg。
在某些實施方式中，基於組合物的總重量，所述的藥物組合物含有0.01%-99.99%的本公開式I、式I-a、式I-b、式I-b-1、式I-b-2或表A或表B所示的化合物或其藥學上可接受的鹽、酯、異構體、溶劑化物、前藥或同位素標記物。在某些實施方式中，所述的藥物組合物含有0.1%-99.9%的本公開式I、式I-a、式I-b、式I-b-1、式I-b-2或表A或表B所示的化合物或其藥學上可接受的鹽、酯、異構體、溶劑化物、前藥或同位素標記物。在某些實施方式中，所述的藥物組合物含有0.5%-99.5%的本公開式I、式I-a、式I-b、式I-b-1、式I-b-2或表A或表B所示的化合物或其藥學上可接受的鹽、酯、異構體、溶劑化物、前藥或同位素標記物。在某些實施方式中，
所述的藥物組合物含有1%-99%的本公開式I、式I-a、式I-b或表A或表B所示的化合物或其藥學上可接受的鹽、酯、異構體、溶劑化物、前藥或同位素標記物。在某些實施方式中，所述的藥物組合物含有2%-98%的本公開式I、式I-a、式I-b、式I-b-1、式I-b-2或表A或表B所示的化合物或其藥學上可接受的鹽、酯、異構體、溶劑化物、前藥或同位素標記物。
在某些實施方式中，基於組合物的總重量，本公開所述的藥物組合物含有0.01%-99.99%的藥學上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑。在某些實施方式中，本公開所述的藥物組合物含有0.1%-99.9%的藥學上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑。在某些實施方式中，本公開所述的藥物組合物含有0.5%-99.5%的藥學上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑。在某些實施方式中，本公開所述的藥物組合物含有1%-99%的藥學上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑。在某些實施方式中，本公開所述的藥物組合物含有2%-98%的藥學上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑。
本公開所涉及的式I、式I-a、式I-b、式I-b-1、式I-b-2或表A或表B所示的化合物或其藥學上可接受的鹽、酯、異構體、溶劑化物、前藥或同位素標記物及包含其的混合物、組合物等，可以經任一給藥途徑給予到生物體內。給藥途徑可以是口服給藥、靜脈注射、肌肉注射、皮下注射、直腸給藥、陰道給藥、舌下含化、鼻腔吸入、口腔吸入、滴眼、也可局部或全身經皮給藥。
本公開所涉及的式I、式I-a、式I-b、式I-b-1、式I-b-2或表A或表B所示的化合物或其藥學上可接受的鹽、酯、異構體、溶劑化物、前藥或同位素標記物及包含其的混合物、組合物等，可以配製成單一劑量，其中含有本發明的活性化合物以及載體、賦形劑等，給藥劑型可以是片劑、膠囊劑、注射劑、顆粒劑、粉劑、栓劑、丸劑、乳膏劑、糊劑、凝膠劑、散劑、口服溶液、吸入劑、混懸劑、幹懸劑、貼劑和洗劑等。這些劑型中可以含有藥物製劑常用的成分，例如稀釋劑、吸收劑、
潤濕劑、粘合劑、崩解劑、著色劑、pH調節劑、抗氧劑、抑菌劑等滲調節劑和抗粘劑等。
上述各類劑型的合適配方可從公開途徑獲得，例如Remington：The Science and Practice of Pharmacy，第21版；Lippincott Williams & Wilkins於2006年出版和Rowe,Raymond C.Handbook of Pharmaceutical Excipients,Chicago,Pharmaceutical Press於2005年出版，因此本領域的技術人員可以容易的製備。
根據不同個體所患疾病的性質、強度、患者的年齡、性別、體重和給藥途徑等因素，可以選擇不同的給藥劑量，本公開的化合物的給藥劑量可以為每日0.01至500mg/kg，優選每日劑量為1-100mg/kg，可單次或多次給藥。
本公開還提供了一種式I、式I-a、式I-b、式I-b-1、式I-b-2或表A或表B所示的化合物或其藥學上可接受的鹽、酯、異構體、溶劑化物、前藥或同位素標記物或或包含其的藥物組合物，其中所述同位素包含係選自2H、3H、13C、14C、15N、17O、18O、31P、32P、35S、18F和36Cl所組成的群組，優選地，所述同位素為2H。
本公開還提供了一種式I、式I-b、式I-b-1或式I-b-2所示的化合物或其藥學上可接受的鹽、酯、異構體、溶劑化物、前藥或同位素標記物或或包含其的藥物組合物，其中環C被同位素取代，所述同位素包含係選自2H、3H、13C、14C、15N、17O、18O、31P、32P、35S、18F和36Cl所組成的群組，優選地，所述同位素為2H。
本公開還提供了一種式I、式I-a、式I-b、式I-b-1、式I-b-2或表A或表B所示的化合物或其藥學上可接受的鹽、酯、異構體、溶劑化物、前藥或同位素標記物或或包含其的藥物組合物在製備用於抑制ATR激酶的藥物中的應用。
本公開還提供了一種式I、式I-a、式I-b、式I-b-1、式I-b-2或表A或表B所示的化合物或其藥學上可接受的鹽、酯、異構體、溶劑化物、前藥或同位素標記
物或包含其的藥物組合物在製備用於預防和/或治療ATR激酶介導的疾病或病症的藥物中的應用。
本公開還提供了一種式I、式I-a、式I-b、式I-b-1、式I-b-2或表A或表B所示的化合物或其藥學上可接受的鹽、酯、異構體、溶劑化物、前藥或同位素標記物或包含其的藥物組合物在製備用於預防和/或治療ATR激酶介導的疾病或病症的藥物中的應用；其中所述的疾病或病症為過度或異常細胞增殖的疾病、障礙和病症；優選地，所述疾病、障礙和病症包含係選自癌症和骨髓增殖性疾病所組成的群組；更優選地，所述癌症包含係選自皮膚癌、膀胱癌、卵巢癌、乳腺癌、胃癌、前列腺癌、結直腸癌、肺癌、骨癌、腦癌、食管癌、舌癌、胃癌、腎癌、宮頸癌、子宮內膜癌、睾丸癌、泌尿癌、黑素癌、鱗狀細胞癌、膠質瘤、腦膜瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、急性淋巴性白血病、慢性淋巴性白血病、急性骨髓性白血病、慢性粒細胞白血病、成人T細胞白血病淋巴瘤、肝癌、支氣管癌、多發性骨髓瘤、基底細胞瘤和精原細胞瘤所組成的群組；其中，所述的結直腸癌優選為結腸癌和直腸癌；所述的腎癌優選為腎實質癌；所述的膠質瘤優選為星形細胞瘤；所述的肝癌優選為肝細胞癌；所述的肺癌優選為小細胞肺癌或非小細胞肺癌；所述的肉瘤優選包含係選自橫紋肌肉瘤、軟骨肉瘤、肌肉瘤和纖維肉瘤所組成的群組。
本公開還提供了一種式I、式I-a、式I-b、式I-b-1、式I-b-2或表A或表B所示的化合物或其藥學上可接受的鹽、酯、異構體、溶劑化物、前藥或同位素標記物或包含其的藥物組合物，其用作藥物。
本公開還提供了一種式I、式I-a、式I-b、式I-b-1、式I-b-2或表A或表B所示的化合物或其藥學上可接受的鹽、酯、異構體、溶劑化物、前藥或同位素標記物或包含其的藥物組合物，其用作ATR激酶抑制劑。
本公開還提供了一種式I、式I-a、式I-b、式I-b-1、式I-b-2或表A或表B所示的化合物或其藥學上可接受的鹽、酯、異構體、溶劑化物、前藥或同位素標記物或包含其的藥物組合物，其用作預防和/或治療ATR激酶介導的疾病或病症。
本公開還提供了一種式I、式I-a、式I-b、式I-b-1、式I-b-2或表A或表B所示的化合物或其藥學上可接受的鹽、酯、異構體、溶劑化物、前藥或同位素標記物或包含其的藥物組合物，其用作預防和/或治療ATR激酶介導的疾病或病症；其中所述的疾病或病症為過度或異常細胞增殖的疾病、障礙和病症；優選地，所述疾病、障礙和病症包含係選自癌症和骨髓增殖性疾病所組成的群組；更優選地，所述癌症包含係選自皮膚癌、膀胱癌、卵巢癌、乳腺癌、胃癌、前列腺癌、結直腸癌、肺癌、骨癌、腦癌、食管癌、舌癌、胃癌、腎癌、宮頸癌、子宮內膜癌、睾丸癌、泌尿癌、黑素癌、鱗狀細胞癌、膠質瘤、腦膜瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、急性淋巴性白血病、慢性淋巴性白血病、急性骨髓性白血病、慢性粒細胞白血病、成人T細胞白血病淋巴瘤、肝癌、支氣管癌、多發性骨髓瘤、基底細胞瘤和精原細胞瘤；其中，所述的結直腸癌優選為結腸癌和直腸癌所組成的群組；所述的腎癌優選為腎實質癌；所述的膠質瘤優選為星形細胞瘤；所述的肝癌優選為肝細胞癌；所述的肺癌優選為小細胞肺癌或非小細胞肺癌；所述的肉瘤優選包含係選自橫紋肌肉瘤、軟骨肉瘤、肌肉瘤和纖維肉瘤所組成的群組。
本公開還提供了一種抑制ATR激酶的方法，其包括給予所需患者治療有效量的式I、式I-a、式I-b、式I-b-1、式I-b-2或表A或表B所示的化合物或其藥學上可接受的鹽、酯、異構體、溶劑化物、前藥或同位素標記物或包括其的藥物組合物。
本公開還提供了一種預防和/或治療ATR激酶介導的疾病或病症的方法，其包括給予所需患者治療有效量的式I、式I-a、式I-b、式I-b-1、式I-b-2或表A或
表B所示的化合物或其藥學上可接受的鹽、酯、異構體、溶劑化物、前藥或同位素標記物或包括其的藥物組合物。
本公開還提供了一種預防和/或治療ATR激酶介導的疾病或病症的方法，其包括給予所需患者治療有效量的式I、式I-a、式I-b、式I-b-1、式I-b-2或表A或表B所示的化合物或其藥學上可接受的鹽、酯、異構體、溶劑化物、前藥或同位素標記物或包括其的藥物組合物；其中所述的疾病或病症為過度或異常細胞增殖的疾病、障礙和病症；優選地，所述疾病、障礙和病症包含係選自癌症和骨髓增殖性疾病所組成的群組；更優選地，所述癌症包含係選自皮膚癌、膀胱癌、卵巢癌、乳腺癌、胃癌、前列腺癌、結直腸癌、肺癌、骨癌、腦癌、食管癌、舌癌、胃癌、腎癌、宮頸癌、子宮內膜癌、睾丸癌、泌尿癌、黑素癌、鱗狀細胞癌、膠質瘤、腦膜瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、急性淋巴性白血病、慢性淋巴性白血病、急性骨髓性白血病、慢性粒細胞白血病、成人T細胞白血病淋巴瘤、肝癌、支氣管癌、多發性骨髓瘤、基底細胞瘤和精原細胞瘤所組成的群組；其中，所述的結直腸癌優選為結腸癌和直腸癌；所述的腎癌優選為腎實質癌；所述的膠質瘤優選為星形細胞瘤；所述的肝癌優選為肝細胞癌；所述的肺癌優選為小細胞肺癌或非小細胞肺癌；所述的肉瘤優選包含係選自橫紋肌肉瘤、軟骨肉瘤、肌肉瘤和纖維肉瘤所組成的群組。
本公開進一步提供了一種治療ATR激酶介導的疾病的方法，所述哺乳動物可為人，或可為非人哺乳動物，用於治療目的，包括給哺乳動物施用本公開式I、式I-a、式I-b、式I-b-1、式I-b-2或表A或表B所示的化合物或其藥學上可接受的鹽、酯、異構體、溶劑化物、前藥或同位素標記物或包括其的藥物組合物。
技術名詞解釋
除非有相反陳述，在說明書和權利要求書中使用的技術名詞具有下述含義。
技術名詞“C1-6烷基”單獨或者以組合方式表示包含1-6個，特別是1-4個碳原子的飽和直鏈或支鏈的烷基，包括甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、仲丁基、異丁基、叔丁基、正戊基、2-戊基、3-戊基、2-甲基-2-丁基、3-甲基-2-丁基、3-甲基-1-丁基、2-甲基-1-丁基、正己基、2-己基、3-己基、2-甲基-2-戊基、3-甲基-2-戊基、4-甲基-2-戊基、3-甲基-3-戊基、2-甲基-3-戊基、2,3-二甲基-2-丁基、3,3,-二甲基-2-丁基等。優選地，“C1-6烷基”是甲基、乙基、異丙基、叔丁基中的任一種。烷基可以是取代的或非取代的，當被取代時，取代基可以在任何可使用的連接點上被取代，所述取代基優選為一個或多個以下基團，其獨立地包含係選自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、鹵素、巰基、羥基、硝基、氰基、環烷基、雜環基、芳基、雜芳基、環烷氧基、雜環烷氧基、環烷硫基、雜環烷硫基、側氧基(oxo)、羧基或羧酸酯基所組成的群組。
技術名詞“C1-6亞烷基”指飽和的直鏈或支鏈脂肪族烴基，其具有2個從母體烷的相同碳原子或兩個不同的碳原子上除去兩個氫原子所衍生的殘基，其為含有1至6個碳原子的亞烷基。亞烷基的非限制性實例包括但不限於亞甲基(-CH2-)、1,1-伸乙基(-CH(CH3)-)、1,2-伸乙基(-CH2CH2)-、1,1-伸丙基(-CH(CH2CH3)-)、1,2-伸丙基(-CH2CH(CH3)-)、1,3-伸丙基(-CH2CH2CH2-)、1,4-伸丁基(-CH2CH2CH2CH2-)等。亞烷基可以是取代的或非取代的，當被取代時，取代基可以在任何可使用的連接點上被取代。
技術名詞“3至7元環烷基”指飽和或部分不飽和單環或多環環狀烴取代基，其表示具有3到7個，特別是3-6個碳原子的飽和環烷基，包括環丙基、環丁基、環戊基、環己基、環庚基等。特別的“C3-7環烷基”是環丙基、環戊基、環己基等。
技術名詞“C1-6烷基氨基”單獨或者以組合方式表示如上所定義的氨基基團，其中氨基基團的氫原子被至少一個C1-6烷基所取代，其中“C1-6烷基”表示如以上所定義，相應地，“C1-6烷基氨基”包括甲基氨基，乙基氨基，丙基氨基，異丙基氨基，正丁基氨基，異丁基氨基，2-丁基氨基，叔丁基氨基，正戊基氨基、2-戊基氨基、3-戊基氨基、2-甲基-2-丁基氨基、3-甲基-2-丁基氨基、3-甲基-1-丁基氨基、2-甲基-1-丁基氨基、正己基氨基、2-己基氨基、3-己基氨基、2-甲基-2-戊基氨基、3-甲基-2-戊基氨基、4-甲基-2-戊基氨基、3-甲基-3-戊基氨基、2-甲基-3-戊基氨基、2,3-二甲基-2-丁基氨基、3,3-二甲基-2-丁基氨基等。特別的“C1-6烷基氨基”是甲基氨基、乙基氨基、異丙基氨基、叔丁基氨基等。
技術名詞“C1-6烷氧基”單獨或者以組合方式表示基團C1-6烷基-O-，其中“C1-6烷基”表示如以上所定義。
技術名詞“雜環基”指由碳原子與氮、氧或硫等雜原子組成的飽和或部分不飽和(包含1或2個雙鍵)的非芳香環狀基團，此環狀基團可以是單環或雙環基團，在本發明中，雜環基中雜原子個數優選1、2、3或4，雜環基中的氮、碳或硫原子可任選地被氧化。“雜環基”上的氫原子獨立任選地被一個或多個本發明所描述的取代基所取代。“雜環基”可以通過環上任意的環原子連結到母體分子上。
技術名詞“3至7元雜環基”是指單環雜環基中包含3至7個碳原子和雜原子；例如氮丙啶基、氮雜環丁基、氧雜環丁基、吡咯烷基、四氫呋喃基、四氫噻吩基、呱啶基、嗎啉基、硫代嗎啉基、四氫吡喃基、1,1-二氧硫代嗎啉基。
技術名詞“3至7元環烷基氨基”表示單獨或者以組合方式表示如上所定義的氨基基團，其中氨基基團的氫原子被至少一個C3-7環烷基所取代，“C3-7環烷基”表示如以上所定義。
技術名詞“3至7元雜環基氨基”表示單獨或者以組合方式表示如上所定義的氨基基團，其中氨基基團的氫原子被至少一個3至7元雜環基所取代，“3至7元雜環基”表示如以上所定義。
技術名詞“芳基”表示任何穩定的6至10元單環或雙環芳香族基團，包括苯基、萘基、四氫萘基、2,3-二氫化茚基或聯苯基等。
技術名詞“雜芳基”表示環上的碳原子被至少一個包含係選自硫、氧或氮的雜原子置換形成的芳香環基團，此芳香環基團可以是5-7元單環或7-12雙環基團所組成的群組。在本發明中，雜環基中雜原子個數優選1、2、3或4，例如噻吩基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、噠嗪基、吡咯基、吡唑基、噻唑基、1,2,3-三唑基、1,2,4-三唑基、咪唑基、四氮唑基、異噻唑基、噁唑基、異噁唑基、噻二唑基、噁二唑基、萘基、苯並噻吩基、吲哚基、苯並咪唑基、苯並噻唑基、苯並呋喃基、喹啉基、異喹啉基、喹唑啉基等。
技術名詞“芳基C1-6烷基”表示C1-6烷基基團被一個或多個芳基基團所取代，芳基和C1-6烷基表示如以上所定義。
技術名詞“雜芳基C1-6烷基”表示C1-6烷基基團被一個或多個雜芳基基團所取代，雜芳基和C1-6烷基表示如以上所定義。
技術名詞“氨基”單獨或者以組合方式表示伯氨(一級胺)基(-
NH2)，仲氨(二級胺)基(-NH-)或叔氨(三級胺)基(
)。
技術名詞“鹵素”單獨或者以組合方式表示氟，氯，溴或碘。特別的是氟，氯或溴。
技術名詞“氰基”單獨或組合的是指基團-CN。
技術名詞“羧基”單獨或組合的是指基團-COOH。
技術名詞“羥基”單獨或組合的是指基團-OH。
技術名詞“胍基”單獨或組合的是指基團-NH-C(=NH)-NH2。
技術名詞“尿素基”單獨或組合的是指基團-NH-C(=O)-NH2。
技術名詞“醯氨基”單獨或組合的是指基團-C(=O)-NH2。
技術名詞“取代的”指基團中的一個或多個氫原子，優選為最多5個，更優選為1~3個氫原子彼此獨立地被相應數目的取代基取代。不言而喻，取代基僅處在它們的可能的化學位置，本領域技術人員能夠在不付出過多努力的情況下確定(通過實驗或理論)可能或不可能的取代。例如，具有游離氫的氨基或羥基與具有不飽和(如烯屬)鍵的碳原子結合時可能是不穩定的。
技術名詞“替代”是指某一個基團被另一個基團完全替換，如亞甲基被雜原子如氧原子或氮原子替代等。
本公開所述化合物的化學結構中，鍵“
”並未指定構型，即鍵“
”可以為“
”或“
”，或者同時包含“
”和“
”兩種構型。鍵“
”表示單一構型，為“
”或“
”。本公開所述化合物的化學結構中，鍵“
”並未指定構型，即可以為Z構型或E構型，或者同時包含兩種構型。
技術名詞“異構體”包含所有的同分異構形式包括對映異構體、非對映異構體和幾何異構體包括順反異構體。因此，本發明中所設計的化合物的單個立體化學異構體或其對映異構體、非對映異構體、或幾何異構體(或順反異構體)的混合物都屬於本發明的範圍。
技術名詞“同位素標記物”，可以將同位素引入本發明涉及的任一化合物中，引入的同位素可以是2H，3H，13C，14C，15N，17O，18O，31P，32P，35S，18F，36Cl，優選地，引入的同位素可以是2H，3H，13C，14C，更優選地，引入的同位素是2H，具體的同位素衍生物可以通過常規技術製備。
技術名詞“藥學上可接受的鹽”表示本發明的化合物以它們的藥用鹽的形式存在，包括酸加成鹽和鹼加成鹽。藥學上可接受的鹽在S.M.Berge在J.Pharmaceutical Sciences(66卷：1-19頁，1977年)中描述的pharmaceutically salts中有所描述。在本發明中，藥學上可接受的無毒的酸加成鹽表示本發明中的化合物與有機或無機酸形成的鹽，有機或無機酸包括但不限於鹽酸、硫酸、氫溴酸、氫碘酸、磷酸、硝酸、高氯酸、乙酸、草酸、馬來酸、富馬酸、酒石酸、苯磺酸、甲磺酸、水楊酸、琥珀酸、檸檬酸、乳酸、丙酸、苯甲酸、對甲苯磺酸和蘋果酸等。藥學上可接受的無毒的鹼加成鹽表示本發明中的化合物與有機或無機鹼所形成的鹽，包括但不限於鹼金屬鹽，例如鋰，鈉或鉀鹽；鹼土金屬鹽，例如鈣或鎂鹽；有機鹼鹽，例如通過與含N基團的有機鹼形成的銨鹽或N+(C1-6烷基)4鹽。
以上對本發明的涉及的技術名詞進行了定義，本領域技術人員還可以結合現有技術對以上技術名詞進行理解，以下基於本發明的內容以及對技術名詞的定義進一步進行描述。
以下結合實施例進一步描述本公開所述的化合物、可藥用鹽的製備，但這些實施例並非限制本公開中的範圍。
本公開中實施例中未注明具體條件的實驗方法，通常按照常規條件，或按照原料或商品製造廠商所建議的條件。未注明具體來源的試劑，為市場購買的常規試劑。
本發明中使用的縮寫如下：
CDCl3：氘代氯仿
dioxane：1,4-二氧六環
CO2：二氧化碳
conc.H2SO4：濃硫酸
DCM：二氯甲烷
DME：乙二醇二甲醚
DMF：N,N-二甲基甲醯胺
DMSO：二甲亞碸
DMSO-d 6：氘代二甲亞碸
EtOH：乙醇
EtONa：乙醇鈉
FeCl3：三氯化鐵
g：公克
HCOOH：甲酸
Hz：赫茲
h：小時
IC50：半最大抑制濃度
MeOH：甲醇
mg：毫克
mL：毫升
mmol：毫摩爾
MHz：兆赫茲
NaBH3CN：氰基硼氫化鈉
NaOH：氫氧化鈉
NH4OAc：醋酸銨
NMR：核磁共振
M：摩爾濃度
Oxalyl chloride：草醯氯
PBS：磷酸緩衝鹽溶液
PdCl2(dppf)：[1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯化鈀
TCQ：四氯苯醌
TLC：薄層色譜
TsNHNH2：對甲基苯磺醯肼
uM：微摩爾/升
μg：微克
μL：微升
δ：化學位移
以下描述本發明實施例中通用試驗條件：
首先，實施例中的反應一般在氮氣保護下進行。
進一步地，中間體和最終產物通過色譜柱、製備色譜板和ISCO快速製備色譜系統分離純化。色譜柱使用矽膠填充，矽膠(300-400目)由上海泰坦科技股份有限公司生產，製備色譜板由煙臺江友矽膠開發有限公司生產，ISCO所用色譜柱(細微性40-63μm，60Å)由常州三泰科技有限公司生產。
進一步地，LC-MS液質聯用色譜儀使用Waters公司ACQUITY Arc配備QDa Detector。使用Waters XBridge C18色譜柱(規格2.1×50mm，3.5μm)。質譜(MS)採用ESI源，僅指示母體分子的分子量M，通常彙報[M+H]+。注射體積是通過樣品濃度來確定；流速為：1.2mL/min；HPLC的峰值是通過在220nm和254nm處的UV-Vis波長來記錄讀取的。流動相為0.01%甲酸的超純水溶液(流動相A)和0.01%甲酸的乙腈溶液(流動相B)。梯度洗脫條件如下表C和表D所示：
表C：梯度洗脫條件1
表D：梯度洗脫條件2
進一步地，NMR譜圖採用Varian 400MHz核磁共振譜儀獲得資料，常以CDCl3，DMSO-d 6作為溶劑，以ppm報告化學位移。各種峰的描述如下：s(單峰)，d(雙峰)，t(三重峰)，q(四重峰)，m(多重峰)，dd(雙二重峰)。偶合常數使用Hz表示。
實施例1
1-(4-(5-(3-氨基-6-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)異噁唑-3-基)苄基)胍二鹽酸鹽1
第一步
(E)-4-((羥基亞胺)甲基)苯甲腈1a
室溫下，向4-氰基-苯甲醛(5g，38.13mmol)在四氫呋喃(30mL)和水(3mL)的混合溶液中加入羥胺鹽酸鹽(3.18g，45.75mmol)。將反應混合物在室溫(~20℃)下攪拌16小時後。向反應體系中加入水(40mL)，有機相分離出，水相用乙酸乙酯(30mL)萃取三次，合併的有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮得到黃色固體(E)-4-((羥基亞胺)甲基)苯甲腈1a(4.5g)，為粗產品並在未經進一步純化下直接用於下一步驟。
第二步
叔丁基(5-溴-3-(3-(4-氰基苯基)異噁唑-5-基)吡嗪-2-基)(叔丁氧羰基)氨基甲酸酯1b
向叔丁基(5-溴-3-乙炔基-2-吡嗪基)(叔丁氧羰基)氨基甲酸酯(0.5g，1.26mmol)的甲醇(12mL)和水(2.4mL)的混合溶液中依次加入(E)-4-((羥基亞胺)甲基)苯甲腈1a(0.27g，1.88mmol)和雙三氟乙醯碘苯(0.81g，1.88mmol)，在室溫下攪拌過夜。向反應液中加入乙酸乙酯(40mL)和水(40mL)。有機相接著用水(20mL)洗三遍。有機相分離出並用無水硫酸鈉乾燥，過濾後濃縮並柱層析分離得到叔丁基(5-溴-3-(3-(4-氰基苯基)異噁唑-5-基)吡嗪-2-基)(叔丁氧羰基)氨基甲酸酯1b(0.45g)。
第三步
叔丁基(叔丁氧羰基)(3-(3-(4-氰基苯基)異噁唑-5-基)-5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯1c
氮氣保護下，向叔丁基(5-溴-3-(3-(4-氰基苯基)異噁唑-5-基)吡嗪-2-基)(叔丁氧羰基)氨基甲酸酯1b(1.5g，3.39mmol)的1,4-二氧六環(15mL)和水(1.5mL)混合溶液中，室溫下依次加入4-異丙基磺醯基苯硼酸(0.77g，3.39mmol)，碳酸鉀(0.94g，6.78mmol)和[1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯化鈀(0.5g，0.678mmol)。置換氮氣三次後，反應液在95℃下攪拌三個小時。冷卻至室溫後，向反應液中加入乙酸乙酯(40mL)和水(40mL)。混合溶液用矽藻土過濾，所得溶液分液，水相用乙酸乙酯(20mL)萃取三次，合併的有機相濃縮並柱層析分離得到叔丁基(叔丁氧羰基)(3-(3-(4-氰基苯基)異噁唑-5-基)-5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯1c(0.6g)。
第四步
叔丁基(3-(3-(4-(胺甲基)苯基)異噁唑-5-基)-5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)(叔丁氧羰基)氨基甲酸酯1d
向叔丁基(叔丁氧羰基)(3-(3-(4-氰基苯基)異噁唑-5-基)-5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯1c(540mg，0.99mmol)的甲醇(15mL)溶液中，室溫下依次加入六水合氯化鎳(705mg，2.97mmol)和硼氫化鈉(112mg，2.97mmol)。反應液室溫下攪拌1個小時之後，用氯化銨(2mL)淬滅。再加入乙酸乙酯(40mL)和飽和的碳酸氫鈉水溶液(40mL)。混合溶液用矽藻土過濾後，濾液倒入分液漏斗。水相用乙酸乙酯(40mL)萃取三次，合併的有機相濃縮並柱層
析分離得到叔丁基(3-(3-(4-(胺甲基)苯基)異噁唑-5-基)-5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)(叔丁氧羰基)氨基甲酸酯1d(300mg)。
第五步
叔丁基(叔丁氧羰基)(3-(3-(4-(胍基亞甲基)苯基)異噁唑-5-基)-5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯1e
向叔丁基(3-(3-(4-(胺甲基)苯基)異噁唑-5-基)-5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)(叔丁氧羰基)氨基甲酸酯1d(36mg，0.053mmol)的乙腈(3mL)溶液中，依次加入1H-吡唑-1-甲脒鹽酸(7.5mg，0.051mmol)和N,N-二異丙基乙胺(10μL)。室溫下攪拌16個小時。向反應液中加入乙酸乙酯(20mL)和水(20mL)，所得溶液分液，水相用乙酸乙酯(20mL)萃取三次，合併的有機相濃縮並經柱層析色譜分離得到叔丁基(叔丁氧羰基)(3-(3-(4-(胍基亞甲基)苯基)異噁唑-5-基)-5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯1e(27mg)。
第六步
1-(4-(5-(3-氨基-6-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)異噁唑-3-基)苄基)胍二鹽酸鹽1
向叔丁基(叔丁氧羰基)(3-(3-(4-(胍基亞甲基)苯基)異噁唑-5-基)-5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯1e(27mg，0.04mmol)的乙酸乙酯(2mL)溶液中，加入鹽酸乙酸乙酯混合溶液(4M，2mL)。反應液室溫下攪拌1個小時後，反應液濃縮得到黃色固體1-(4-(5-(3-氨基-6-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)異噁唑-3-基)苄基)胍二鹽酸鹽1(22mg)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)：δ 8.94(s,1 H),8.38-8.36(m,2 H),8.05-8.03(m,2 H),7.94-7.92(m,2 H),7.80(s,1 H),7.53-7.51(m,2 H),7.48(brs,3 H),7.35(brs,2 H),7.22(brs,3 H),4.52-4.50(m,2 H),3.49-3.42(m,1 H),1.20-1.18(m,6 H)。
MS實測值(ESI+)[(M+H)+]：492。
實施例2
(4-(5-氨基-6-(3-(4-((甲基氨基)甲基)苯基)異噁唑-5-基)吡嗪-2-基)苯基)(亞氨基)(異丙基)-λ6-亞碸2
第二步
(4-(丙基-2-亞磺醯亞氨基)苯基)硼酸2a
向4-(異丙基硫代)苯基硼酸(2.20g，11.22mmol)的乙醇(50mL)溶液中，加入碘苯二乙酸酯(10.84g，33.66mmol)和乙酸胺(3.46g，44.88mmol)。反應液加熱到75℃並攪拌4個小時後，向反應溶液中加入乙酸乙酯(50mL)和水(50mL)。水相濃縮成固體，再向固體中加入乙酸乙酯(50mL)和甲醇(30mL)，攪拌0.5小時過濾，濾液濃縮得到黑色油狀物(4-(丙基-2-亞磺醯亞氨基)苯基)硼酸2a(1.3g)，為粗產品並在未經進一步純化下直接用於下一步驟。
第二步
1-(4-(二乙氧甲基)苯基)-N-甲基亞甲基胺2b
向對苯二甲醛縮二乙醛(2g，9.60mmol)的甲醇(10mL)溶液中，依次加入三乙胺(1.6mL)和甲胺鹽酸鹽(0.78g，11.52mmol)。反應液室溫攪拌0.5小時後，再加入硼氫化鈉(0.58g，15.37mmol)。反應液再繼續室溫攪拌1個小時。冰水(0.1mL)加入淬滅反應，然後再加入乙酸乙酯(50mL)和水(50mL)。分液後的水相再用乙酸乙酯(20mL)萃取三次，合併的有機相濃縮並柱層析分離得到1-(4-(二乙氧甲基)苯基)-N-甲基亞甲基胺2b(2.78g)。
第三步
叔丁基(4-(二乙氧甲基)苄基)(亞甲基)氨基甲酸酯2c
向1-(4-(二乙氧甲基)苯基)-N-甲基亞甲基胺2b(2.78g，9.58mmol)的二氯甲烷(20mL)溶液中，依次加入三乙胺(2.91g，28.75mmol)和二叔丁基二碳酸酯(6.27g，28.75mmol)。反應液室溫下攪拌4個小時。水(20mL)加入反應液。分液後水相用二氯甲烷(20mL)萃取三次。合併的有機相濃縮並柱層析分離得到叔丁基(4-(二乙氧甲基)苄基)(亞甲基)氨基甲酸酯2c(2.9g)。
第四步
叔丁基(E)-(4-((羥基亞胺)甲基)苄基)(甲基)氨基甲酸酯2d
將叔丁基(4-(二乙氧甲基)苄基)(亞甲基)氨基甲酸酯2c(2.9g，8.97mmol)，羥胺鹽酸鹽(0.75g，10.76mmol)按照類似於實施例1第一步的方法製備得到黃色油狀物叔丁基(E)-(4-((羥基亞胺)甲基)苄基)(甲基)氨基甲酸酯2d(1.8g)。
第五步
叔丁基(5-溴-3-(3-(4-(((叔丁氧羰基)(甲基)氨基)甲基)苯基)異噁唑-5-基)吡嗪-2-基)(叔丁氧羰基)氨基甲酸酯2e
將叔丁基(E)-(4-((羥基亞胺)甲基)苄基)(甲基)氨基甲酸酯2d(500mg，1.88mmol)，(E)-4-((異亞硝基)甲基)苯甲腈(500mg，1.26mmol)和雙三氟乙醯碘苯(810mg，1.88mmol)按照類似於實施例1第二步的方法製備得到叔丁基(5-溴-3-(3-(4-(((叔丁氧羰基)(甲基)氨基)甲基)苯基)異噁唑-5-基)吡嗪-2-基)(叔丁氧羰基)氨基甲酸酯2e(680mg)。
第六步
叔丁基(叔丁氧羰基)(3-(3-(4-(((叔丁氧羰基)(甲基)氨基)甲基)苯基)異噁唑-5-基)-5-(4-(丙基-2-基亞磺醯亞氨基)苯基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯2f
將叔丁基(5-溴-3-(3-(4-(((叔丁氧羰基)(甲基)氨基)甲基)苯基)異噁唑-5-基)吡嗪-2-基)(叔丁氧羰基)氨基甲酸酯2e(100mg，0.151mmol)和(4-(丙基-2-基-亞磺醯亞氨基)苯基)硼酸(68mg，0.302mmol)，碳酸鉀(42mg，0.302mmol)和[1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯化鈀(22mg，0.03mmol)按照類似於實施例1第三步的方法製備得到黃色固體叔丁基(叔丁氧羰基)(3-(3-(4-(((叔丁氧羰基)(甲基)氨基)甲基)苯基)異噁唑-5-基)-5-(4-(丙基-2-基亞磺醯亞氨基)苯基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯2f(65mg)。
第七步
(4-(5-氨基-6-(3-(4-((甲基氨基)(甲基)苯基)異噁唑-5-基)吡嗪-2-基)苯基)(亞氨基)(異丙基)-λ6-亞碸2
向叔丁基(叔丁氧羰基)(3-(3-(4-(((叔丁氧羰基)(甲基)氨基)甲基)苯基)異噁唑-5-基)-5-(4-(丙基-2-基亞磺醯亞氨基)苯基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯2f(35mg，0.046mmol)的乙酸乙酯(2mL)溶液中，加入鹽酸乙酸乙酯混合溶液(4M，2mL)。反應液室溫下攪拌1個小時後，反應液濃縮後加入乙酸乙酯(20mL)和飽和的碳酸氫鈉水溶液(20mL)，分液後有機相用水(20mL)洗一遍後，有機相濃縮並經柱層析色譜分離得到(4-(5-氨基-6-(3-(4-((甲基氨基)亞甲基)苯基)異噁唑-5-基)吡嗪-2-基)苯基)(亞氨基)(異丙基)-λ6-亞碸2(14.5mg)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)：δ9.29(s,2 H),8.93(s,1 H),8.33-8.31(m,2 H),8.11-8.09(m,2 H),7.95-7.92(m,2 H),7.84(s,1 H),7.74-7.72(m,2 H),7.23-7.17(m,2 H),4.20(s,2 H),3.30-3.24(m,1 H),2.58(s,3 H),1.17-1.15(m,6 H)。
MS實測值(ESI+)[(M+H)+]：463。
實施例3
3-(3-(1H-苯並[d][1,2,3]三氮唑-5-基)異噁唑-5-基)-5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-胺3
第一步
1H-苯並[d][1,2,3]三氮唑-5-甲腈3a
向3,4-二氨基苯甲腈(1.0g，7.51mmol)的醋酸(15mL)溶液中，加入亞硝酸鈉水溶液(0.62g亞硝酸鈉溶於15mL水)。反應液室溫下攪拌2個小時。加入乙酸乙酯(40mL)和水溶液(20mL)。分液後，有機相濃縮得到白色固體1H-苯並[d][1,2,3]三氮唑-5-甲腈3a(0.8g)，為粗產品並在未經進一步純化下直接用於下一步驟。
第二步
叔丁基-5-氰基-1H-苯並[d][1,2,3]三氮唑-1-氨基甲酸酯3b
將1H-苯並[d][1,2,3]三氮唑-5-甲腈3a(0.8g，5.55mmol)，三乙胺(2.27mL)和二叔丁基二碳酸酯(3.63g，16.65mmol)按照類似於實施例2第三步的方法製備得到叔丁基-5-氰基-1H-苯並[d][1,2,3]三氮唑-1-氨基甲酸酯3b(1.23g)。
第三步
1H-苯並[d][1,2,3]三氮唑-5-甲醛3c
-40℃下，向叔丁基-5-氰基-1H-苯並[d][1,2,3]三氮唑-1-氨基甲酸酯3b(1.23g，5.04mmol)的甲苯(10mL)溶液中，緩慢加入DABAL-H(12mL，1M in PhMe)。反應液-40oC下攪拌3個小時。加入L-酒石酸水溶液(1mL，1M)淬滅。乙酸乙酯(20mL)加入，體系過濾，濾液用水(20mL)和飽和食鹽水(20mL)洗滌。有機相濃縮得到1H-苯並[d][1,2,3]三氮唑-5-甲醛3c(160mg)，為粗產品並在未經進一步純化下直接用於下一步驟。
第四步
叔丁基-5-甲醯基-1H-苯並[d][1,2,3]三氮唑-1-氨基甲酸酯3d
將1H-苯並[d][1,2,3]三氮唑-5-甲醛3c(0.16g，1.09mmol)，三乙胺(0.44mL)和二叔丁基二碳酸酯(0.72g，3.26mmol)按照類似於實施例2第三步的方法製備得到叔丁基-5-甲醯基-1H-苯並[d][1,2,3]三氮唑-1-氨基甲酸酯3d(140mg)。
第五步
叔丁基(E)-5-((羥基亞胺)亞甲基)-1H-苯並[d][1,2,3]三氮唑-1-羧酸酯3e
將叔丁基-5-甲醯基-1H-苯並[d][1,2,3]三氮唑-1-氨基甲酸酯3d(0.14g，0.566mmol)，羥胺鹽酸鹽(0.048g，0.68mmol)按照類似於實施例1第一步的方法製備得到黃色油狀物叔丁基(E)-5-((羥基亞胺)亞甲基)-1H-苯並[d][1,2,3]三氮唑-1-羧酸酯3e(75mg)。
第六步
叔丁基5-(5-(6-溴-3-(N,N-二(叔丁氧羰基)氨基)吡嗪-2-基)異噁唑-3-基)-1H-苯並[d][1,2,3]三氮唑-1-羧酸酯3f
將叔丁基(E)-5-((羥基亞胺)亞甲基)-1H-苯並[d][1,2,3]三氮唑-1-羧酸酯3e(75mg，0.282mmol)，(E)-4-((異亞硝基)甲基)苯甲腈(75mg，0.188mmol)和雙三氟乙醯碘苯(121mg，0.282mmol)按照類似於實施例1第二步的方法製備得到
黃色固體叔丁基5-(5-(6-溴-3-(N,N-二(叔丁氧羰基)氨基)吡嗪-2-基)異噁唑-3-基)-1H-苯並[d][1,2,3]三氮唑-1-羧酸酯3f(30mg)。
第七步
叔丁基(3-(3-(1H-苯並[d][1,2,3]三氮唑-5-基)異噁唑-5-基)-5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯3g
將叔丁基5-(5-(6-溴-3-(N,N-二(叔丁氧羰基)氨基)吡嗪-2-基)異噁唑-3-基)-1H-苯並[d][1,2,3]三氮唑-1-羧酸酯3f(30mg，0.045mmol)和4-異丙基磺醯基苯硼酸(10mg，0.045mmol)，碳酸鉀(13mg，0.09mmol)和[1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯化鈀(7mg，0.009mmol)按照類似於實施例1第三步的方法製備得到黃色固體叔丁基(3-(3-(1H-苯並[d][1,2,3]三氮唑-5-基)異噁唑-5-基)-5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯3g(15mg)。
第八步
3-(3-(1H-苯並[d][1,2,3]三氮唑-5-基)異噁唑-5-基)-5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-胺3
將叔丁基(3-(3-(1H-苯並[d][1,2,3]三氮唑-5-基)異噁唑-5-基)-5-(4-(異丙基碸基)苯基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯3g(15mg，0.027mmol)和鹽酸乙酸乙酯(2mL，4M)按照類似於實施例2第七步的方法製備得到黃色固體3-(3-(1H-苯並[d][1,2,3]三氮唑-5-基)異噁唑-5-基)-5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-胺3(6.9mg)。
1H NMR(DMSO-d 6,400MHz)：δ 8.96(s,1 H),8.65(brs,1 H),8.41-8.39(m,2 H),8.13-8.08(m,2 H),8.00(s,1 H),7.95-7.93(m,2 H),7.25-7.24(m,3 H),3.50-3.43(m,1 H),1.20-1.18(m,6 H)。
MS實測值(ESI+)[(M+H)+]：462。
實施例4
1-(4-(5-(3-氨基-6-(4-異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)異噁唑-3-基)-3-氟苄基)胍二鹽酸鹽4
第一步
(E)-3-氟-4-((羥基亞胺)亞甲基)苯甲腈4a
向4-氰基-2-氟甲醛(2.0g，13.41mmol)的甲醇(30mL)和水(3mL)的混合溶液中加入羥胺鹽酸鹽(1.86g，26.82mmol)和碳酸鉀(1.85g，13.41mmol)。將反應混合物在75℃下攪拌3小時後。向反應體系中加入乙酸乙酯(40mL)和水(40mL)，有機相分離出，水相用乙酸乙酯(30mL)萃取三次，合併的有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮得到白色固體(E)-3-氟-4-((羥基亞胺)亞甲基)苯甲腈4a(2.1g)，為粗產品並在未經進一步純化下直接用於下一步驟。
第二步
叔丁基(叔丁氧羰基)(5-溴-3-(3-(4-氰基-2-氟苯基)異噁唑-5-基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯4b
將(E)-3-氟-4-((羥基亞胺)亞甲基)苯甲腈4a(300mg，1.88mmol)，叔丁基(5-溴-3-乙炔基-2-吡嗪基)(叔丁氧羰基)氨基甲酸酯(500mg，1.26mmol)和雙三氟乙醯碘苯(0.81g，1.88mmol)按照類似於實施例1第二步的方法製備得到黃色固體叔丁基(叔丁氧羰基)(5-溴-3-(3-(4-氰基-2-氟苯基)異噁唑-5-基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯4b(450mg)。
第三步
叔丁基(叔丁氧羰基)(3-(3-(4-氰基-2氟苯基)異噁唑-5-基)-5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯4c
將叔丁基(叔丁氧羰基)(5-溴-3-(3-(4-氰基-2-氟苯基)異噁唑-5-基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯4b(450mg，0.803mmol)，4-異丙基磺醯基苯硼酸(183mg，0.803mmol)，碳酸鉀(222mg，1.61mmol)和[1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯化鈀(117mg，0.16mmol)按照類似於實施例1第三步的方法製備得到淡黃色固體叔丁基(叔丁氧羰基)(3-(3-(4-氰基-2氟苯基)異噁唑-5-基)-5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯4c(230mg)。
第四步
叔丁基(3-(3-(4-(胺甲基)-2-氟苯基)異噁唑-5-基)-5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)(叔丁氧羰基)氨基甲酸酯4d
將叔丁基(叔丁氧羰基)(3-(3-(4-氰基-2氟苯基)異噁唑-5-基)-5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯4c(100mg，0.177mmol)，六水合氯化鎳
(127mg，0.532mmol)和硼氫化鈉(20mg，0.532mmol)按照類似於實施例1第四步的方法製備得到淡黃色油狀物叔丁基(3-(3-(4-(胺甲基)-2-氟苯基)異噁唑-5-基)-5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)(叔丁氧羰基)氨基甲酸酯4d(28mg)。
第五步
叔丁基(叔丁氧羰基)(3-(3-(2-氟-4-(胍基亞甲基)苯基)異噁唑-5-基)-5-(4-(異丙基碸基)苯基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯4e
將叔丁基(3-(3-(4-(胺甲基)-2-氟苯基)異噁唑-5-基)-5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)(叔丁氧羰基)氨基甲酸酯4d(28mg，0.05mmol)，1H-吡唑-1-甲脒鹽酸(7mg，0.05mmol)和N,N-二異丙基乙胺(10μL)按照類似於實施例1第五步的方法製備得到淡黃色油狀叔丁基(叔丁氧羰基)(3-(3-(2-氟-4-(胍基亞甲基)苯基)異噁唑-5-基)-5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯4e(15mg)。
第六步
1-(4-(5-(3-氨基-6-(4-異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)異噁唑-3-基)-3-氟苄基)胍二鹽酸鹽4
將叔丁基(叔丁氧羰基)(3-(3-(2-氟-4-(胍基亞甲基)苯基)異噁唑-5-基)-5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯4e(15mg，0.025mmol)和鹽酸乙酸乙酯混合溶液(4M，2mL)按照類似於實施例1第六步的方法製備得到黃色固體1-(4-(5-(3-氨基-6-(4-異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)異噁唑-3-基)-3-氟苄基)胍二鹽酸鹽4(9.3mg)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)：δ 8.95(s,1 H),8.50-8.47(m,1 H),8.37-8.35(m,2 H),8.06-8.02(m,1 H),7.94-7.92(m,2 H),7.61-7.60(m,1 H),7.47(brs,
3 H),7.34(brs,3 H),7.21(s,3 H),4.55-4.53(m,2 H),3.49-3.42(m,1 H),1.19-1.17(m,6 H)。
MS實測值(ESI+)[(M+H)+]：510。
實施例5
1-(4-(5-(3-氨基-6-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)異噁唑-3-基)苄基)-3-環丙基脲5
第一步
叔丁基(叔丁氧羰基)(5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)-3-(3-(4-(((苯氧羰基)氨基)亞甲基)苯基)異噁唑-5-基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯5a
向叔丁基(3-(3-(4-(胺甲基)苯基)異噁唑-5-基)-5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)(叔丁氧羰基)氨基甲酸酯1d(200mg，0.364mmol)的二氯甲烷(20mL)溶液中加入三乙胺(0.15mL)和氯甲酸苯酯(114mg，0.728mmol)，將混合物在25℃攪拌2小時。將混合物濃縮並柱層析純化得到黃色油狀物叔丁基(叔丁氧羰基)(5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)-3-(3-(4-(((苯氧羰基)氨基)亞甲基)苯基)異噁唑-5-基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯5a(152mg)。
第二步
叔丁基(叔丁氧羰基)(3-(3-(4-((3-環丙基脲基)甲基)苯基)異噁唑-5-基)-5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯5b
向叔丁基(叔丁氧羰基)(5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)-3-(3-(4-(((苯氧羰基)氨基)亞甲基)苯基)異噁唑-5-基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯5a(13mg，0.019mmol)的乙腈(3mL)溶液中加入環丙胺(22mg)，將混合物在70℃攪拌2小時。向反應溶液中加入乙酸乙酯(20mL)和水(20mL)，分液後的水相再用乙酸乙酯(20mL)萃取三次，合併的有機相濃縮並柱層析分離得到白色固體叔丁基(叔丁氧羰基)(3-(3-(4-((3-環丙基脲基)亞甲基)苯基)異噁唑-5-基)-5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯5b(10mg)。
第三步
1-(4-(5-(3-氨基-6-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)異噁唑-3-基)苄基)-3-環丙基脲5
將叔丁基(叔丁氧羰基)(3-(3-(4-((3-環丙基脲基)亞甲基)苯基)異噁唑-5-基)-5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯5b(10mg，0.015mmol)和鹽酸乙酸乙酯混合溶液(4M，2mL)按照類似於實施例2第七步的方法製備得到黃色固體1-(4-(5-(3-氨基-6-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)異噁唑-3-基)苄基)-3-環丙基脲5。
1H NMR(DMSO-d 6,400MHz)：δ 8.93(s,1 H),8.38-8.36(m,2 H),7.97-7.92(m,4 H),7.75(s,1 H),7.45-7.43(m,2 H),7.17(s,2 H),6.49-6.48(m,1 H),
6.26(s,1 H),4.31-4.30(m,2 H),3.49-3.42(m,1 H),2.47-2.44(m,1 H),1.20-1.18(m,6 H),0.62-0.58(m,2 H),0.38-0.37(m,2 H)。
MS實測值(ESI+)[(M+H)+]：533。
實施例6
1-(4-(5-(3-氨基-6-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)異噁唑-3-基)苄基)-3-乙基脲6
第一步
叔丁基(叔丁氧羰基)(3-(3-(4-((3-乙基脲基)亞甲基)苯基)異噁唑-5-基)-5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯6a
將叔丁基(叔丁氧羰基)(5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)-3-(3-(4-(((苯氧羰基)氨基)亞甲基)苯基)異噁唑-5-基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯5a(22mg，0.03mmol)，三乙胺(4.5μL)和乙基鹽酸鹽(27mg，0.3mmol)按照類似於實施例5第二步的方法製備得到白色固體叔丁基(叔丁氧羰基)(3-(3-(4-((3-乙基脲基)亞甲基)苯基)異噁唑-5-基)-5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯6a(7mg)。
第二步
1-(4-(5-(3-氨基-6-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)異噁唑-3-基)苄基)-3-乙基脲6
將叔丁基(叔丁氧羰基)(3-(3-(4-((3-乙基脲基)亞甲基)苯基)異噁唑-5-基)-5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯6a(7mg，0.01mmol)和鹽酸乙酸乙酯混合溶液(4M，2mL)按照類似於實施例2第七步的方法製備得到黃色固體1-(4-(5-(3-氨基-6-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)異噁唑-3-基)苄基)-3-乙基脲6(1.6mg)。
1H NMR(DMSO-d 6,400MHz)：δ 8.93(s,1 H),8.38-8.36(m,2 H),7.97-7.92(m,4 H),7.75(s,1 H),7.44-7.42(m,2 H),7.17(s,2 H),6.40-6.37(m,1 H),5.95-5.92(m,1 H),4.29-4.28(m,2 H),3.49-3.42(m,1 H),3.08-3.02(m,2 H),1.20-1.18(m,6 H),1.03-1.00(m,3 H)。
MS實測值(ESI+)[(M+H)+]：521。
實施例7
1-(4-(5-(3-氨基-6-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)異噁唑-3-基)苄基)-3-甲基脲7
第一步
叔丁基(叔丁氧羰基)(3-(3-(4-((3-甲基脲基)亞甲基)苯基)異噁唑-5-基)-5-(4-(異丙基碸基)苯基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯7a
將叔丁基(叔丁氧羰基)(5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)-3-(3-(4-(((苯氧羰基)氨基)亞甲基)苯基)異噁唑-5-基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯5a(15mg，0.02mmol)，三乙胺(3μL)和甲基鹽酸鹽(15mg，0.2mmol)按照類似於實施例5第二步的方法製備得到白色固體叔丁基(叔丁氧羰基)(3-(3-(4-((3-甲基脲基)亞甲基)苯基)異噁唑-5-基)-5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯7a(11mg)。
第二步
1-(4-(5-(3-氨基-6-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)異噁唑-3-基)苄基)-3-甲基脲7
將叔丁基(叔丁氧羰基)(3-(3-(4-((3-甲基脲基)亞甲基)苯基)異噁唑-5-基)-5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯7a(11mg，0.018mmol)和鹽酸乙酸乙酯混合溶液(4M，2mL)按照類似於實施例2第七步的方法製備得到黃色固體1-(4-(5-(3-氨基-6-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)異噁唑-3-基)苄基)-3-甲基脲7(6.3mg)。
1H NMR(DMSO-d 6,400MHz)：δ 8.93(s,1 H),8.38-8.36(m,2 H),7.97-7.92(m,4 H),7.75(s,1 H),7.44-7.42(m,2 H),7.16(s,2 H),6.49-6.46(m,1 H),5.87-5.86(m,1 H),4.29-4.27(m,2 H),3.47-3.44(m,1 H),2.59-2.58(m,3 H),1.20-1.18(m,6 H)。
MS實測值(ESI+)[(M+H)+]：507。
實施例8
3-(3-(4-((氨基磺醯基)氨基亞甲基)苯基)異噁唑-5-基)-5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-胺8
第一步
叔丁基(叔丁氧羰基)(3-(3-(4-(((N-(叔丁氧羰基)氨基磺醯基)氨基)亞甲基)苯基)異噁唑-5-基)-5-(4-(異丙基碸基)苯基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯8a
將叔丁基(3-(3-(4-(胺甲基)苯基)異噁唑-5-基)-5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)(叔丁氧羰基)氨基甲酸酯1d(30mg，0.05mmol)，三乙胺(20μL)和氯磺醯氨基甲酯叔丁基(24mg，0.1mmol)按照類似於實施例5第一步的方法製備得到淡黃色固體叔丁基(叔丁氧羰基)(3-(3-(4-(((N-(叔丁氧羰基)氨基磺醯基)氨基)亞甲基)苯基)異噁唑-5-基)-5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯8a(13mg)。
第二步
3-(3-(4-((氨基磺醯基)氨基亞甲基)苯基)異噁唑-5-基)-5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-胺8
將叔丁基(叔丁氧羰基)(3-(3-(4-(((N-(叔丁氧羰基)氨基磺醯基)氨基)亞甲基)苯基)異噁唑-5-基)-5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯8a(13mg，0.02mmol)和鹽酸乙酸乙酯混合溶液(4M，2mL)按照類似於實施例2第七步的方法製備得到黃色固體3-(3-(4-((氨基磺醯基)氨基亞甲基)苯基)異噁唑-5-基)-5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-胺8(6.2mg)。
1H NMR：δ(DMSO-d 6,400MHz)8.93(s,1 H),8.39-8.36(m,2 H),7.99-7.92(m,4 H),7.78(s,1 H),7.56-7.54(m,2 H),7.17-7.13(m,3 H),6.66(s,2 H),4.18-4.16(m,2 H),3.47-3.44(m,1 H),1.20-1.18(m,6 H)。
MS實測值(ESI+)[(M+H)+]：529。
實施例9
1-(4-(5-(3-氨基-6-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)異噁唑-3-基)苄基)-3-脲9
第一步
叔丁基(叔丁氧羰基)(5-(4-(異丙基碸基)苯基)-3-(3-(4-(脲基亞甲基)苯基)異噁唑-5-基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯9a
將叔丁基(叔丁氧羰基)(5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)-3-(3-(4-(((苯氧羰基)氨基)亞甲基)苯基)異噁唑-5-基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯5a(22mg，0.03mmol)，氨甲醇(2mL，7M)按照類似於實施例5第二步的方法製備得到白色固體叔丁基(叔丁氧羰基)(5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)-3-(3-(4-(脲基亞甲基)苯基)異噁唑-5-基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯9a(16mg)。
第二步
1-(4-(5-(3-氨基-6-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)異噁唑-3-基)苄基)-3-脲9
將叔丁基(叔丁氧羰基)(5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)-3-(3-(4-(脲基亞甲基)苯基)異噁唑-5-基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯9a(16mg，0.03mmol)和HCl的乙酸乙酯溶液(4M，2mL)按照類似於實施例2第七步的方法製備得到黃色固體1-(4-(5-(3-氨基-6-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)異噁唑-3-基)苄基)-3-脲9(5.7mg)。
1H NMR(DMSO-d 6,400MHz)：δ 8.94(s,1 H),8.39-8.37(m,2 H),7.98-7.92(m,4 H),7.77(s,1 H),7.44-7.42(m,2 H),7.20(s,2 H),6.54-6.51(m,1 H),5.59(s,2 H),4.27-4.25(m,2 H),3.49-3.46(m,1 H),1.19-1.18(m,6 H)。
MS實測值(ESI+)[(M+H)+]：493。
實施例10
4-(5-氨基-6-(3-(4-(胍甲基)苯基)異噁唑-5-基)吡嗪-2-基)-N,N-二甲基苯磺醯胺二鹽酸鹽10
第一步
叔丁基(叔丁氧羰基)(3-(3-(4-氰基苯基)異噁唑-5-基)-5-(4-(N,N-二甲基氨基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯10a
氮氣保護下，向叔丁基(5-溴-3-(3-(4-氰基苯基)5-異噁唑基)2-吡嗪基(叔丁氧羰基)氨基甲酸酯(200mg，0.37mmol)的1,4-二氧六環(3mL)和水(0.6mL)混合溶液中，室溫(
20℃)下依次加入4-異丙基磺醯基苯硼酸(127mg，0.41mmol)，碳酸鉀(102mg，0.74mmol)和[1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯化鈀(27
mg，0.037mmol)。置換氮氣三次後，反應液在95℃下攪拌三個小時。冷卻至室溫後，向反應液中加入乙酸乙酯(10mL)和水(5mL)。混合溶液用矽藻土過濾，所得溶液分液，水相用乙酸乙酯(10mL)萃取三次，合併的有機相濃縮並柱層析分離得到叔丁基(叔丁氧羰基)(3-(3-(4-氰基苯基)異噁唑-5-基)-5-(4-(N,N-二甲基氨基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯10a(205mg)。
第二步
叔丁基(3-(3-(4-(氨基甲基)苯基)異噁唑-5-基)-5-(4-(N,N-二甲基氨基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)(叔丁氧羰基)氨基甲酸酯10b
叔丁基(叔丁氧羰基)(3-(3-(4-氰基苯基)異噁唑-5-基)-5-(4-(N,N-二甲基氨基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯10a(205mg，0.32mmol)的甲醇(3mL)溶液中，室溫下依次加入六水合氯化鎳(228mg，0.96mmol)和硼氫化鈉(36mg，0.96mmol)。反應液室溫下攪拌1個小時之後，用氯化銨飽和水溶液(2mL)淬滅。再加入乙酸乙酯(10mL)和飽和的碳酸氫鈉水溶液(10mL)。混合溶液用矽藻土過濾後，濾液倒入分液漏斗。水相用乙酸乙酯(10mL)萃取三次，合併的有機相濃縮並柱層析分離得到叔丁基(3-(3-(4-(氨基甲基)苯基)異噁唑-5-基)-5-(4-(N,N-二甲基氨基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)(叔丁氧羰基)氨基甲酸酯10b(33mg)。
第三步
叔丁基(叔丁氧羰基)(5-(4-(N,N-二甲基氨基磺醯基)苯基)-3-(3-(4-(胍甲基)苯基)異噁唑-5-基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯10c
向叔丁基(3-(3-(4-(氨基甲基)苯基)異噁唑-5-基)-5-(4-(N,N-二甲基氨基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)(叔丁氧羰基)氨基甲酸酯10b(33mg，0.050mmol)的乙腈(2mL)溶液中，依次加入1H-吡唑-1-甲脒鹽酸(7.3mg，0.050mmol)和N,N-二異丙基乙胺(10uL)。室溫(
20℃)下攪拌16個小時。向反應液中加入乙酸乙酯(10mL)和水(10mL)，所得溶液分液，水相用乙酸乙酯(10mL)萃取三次，合併的有機相濃縮並經柱層析色譜分離得到叔丁基(叔丁氧羰基)(5-(4-(N,N-二甲基氨基磺醯基)苯基)-3-(3-(4-(胍甲基)苯基)異噁唑-5-基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯10c(29mg)。
第四步
4-(5-氨基-6-(3-(4-(胍甲基)苯基)異噁唑-5-基)吡嗪-2-基)-N,N-二甲基苯磺醯胺二鹽酸鹽10
向叔丁基(叔丁氧羰基)(5-(4-(N,N-二甲基氨基磺醯基)苯基)-3-(3-(4-(胍甲基)苯基)異噁唑-5-基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯10c(29mg，0.04mmol)的乙酸乙酯(2mL)溶液中，加入鹽酸乙酸乙酯混合溶液(4M，2mL)。反應液室溫下攪拌1個小時後，反應液濃縮得到黃色固體4-(5-氨基-6-(3-(4-(胍甲基)苯基)異噁唑-5-基)吡嗪-2-基)-N,N-二甲基苯磺醯胺二鹽酸鹽10(12.4mg)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)：δ 8.96(s,1 H),8.40-8.38(m,2 H),8.36-8.33(m,1 H),8.08-8.06(m,2 H),7.87-7.85(m,2 H),7.82(s,1 H),7.55-7.53(m,2 H),7.44(brs,2 H),7.31(brs,2 H),7.18(brs,3 H),4.53-4.52(m,2 H),2.68(s,6 H)。
MS實測值(ESI+)[(M+H)+]：493。
實施例11
1-(4-(5-(3-氨基-6-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)異噁唑-3-基)-3,5-二氟苄基)胍二鹽酸鹽11
第一步
叔丁基(叔丁氧基羰基)(3-乙炔基-5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯11a
在氮氣保護下，向4-異丙基磺醯基苯硼酸(500mg，2.19mmol)的1，4-二氧六環(5mL)和水(1mL)混合溶液中，在室溫(~20℃)下，依次加入N-(5-溴-3-乙炔基吡嗪-2-基)-N-[(叔丁氧基)羰基]氨基甲酸叔丁酯(582mg，1.46mmol)，碳酸鉀(606mg，4.38mmol)和[1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯化鈀(107mg，0.15mmol)。置換氮氣三次後，反應液在55℃下攪拌兩個小時。冷卻至室溫後，向反應液中加入乙酸乙酯(40mL)和水(40mL)。混合溶液用矽藻土過濾，所得溶液分液，水相用乙酸乙酯(20mL)萃取三次，合併的有機相濃縮並柱層析分離得到叔丁基(叔丁氧基羰基)(3-乙炔基-5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯11a(433mg)。
第二步
(E)-3,5-二氟-4-((羥基亞氨基)甲基)苯甲腈11b
室溫下，向3,5-二氟-4-甲醯基苯甲腈(1g，5.98mmol)在四氫呋喃(10mL)和水(1mL)的混合溶液中加入羥胺鹽酸鹽(499mg，7.18mmol)。將反應混合物在室溫(~20℃)下攪拌16小時後。向反應體系中加入水(60mL)，有機相分離出，水相用乙酸乙酯(20mL)萃取三次，合併的有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮得到白色固體(E)-3,5-二氟-4-((羥基亞氨基)甲基)苯甲腈11b(433mg)，為粗產品並在未經進一步純化下直接用於下一步驟。
第三步
叔丁基(3-(3-(4-氰基-2,6-二氟苯基)異噁唑-5-基)-5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯11c
向(E)-3,5-二氟-4-((羥基亞氨基)甲基)苯甲腈11b(80mg，0.44mmol)的甲醇(5mL)和水(1mL)的混合溶液中依次加入叔丁基(叔丁氧基羰基)(3-乙炔基-5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯11a(147mg，0.29mL)和雙三氟乙醯碘苯(189mg，0.44mmol)，在室溫(~20℃)下攪拌過夜。向反應液中加入乙酸乙酯(40mL)和水(40mL)。有機相接著用水(20mL)洗三遍。有機相分離出並用無水硫酸鈉乾燥，過濾後濃縮並柱層析分離得到叔丁基(3-(3-(4-氰基-2,6-二氟苯基)異噁唑-5-基)-5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯11c(177mg)。
第四步
叔丁基(3-(3-(4-(氨基甲基)-2,6-二氟苯基)異噁唑-5-基)-5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯11d
向叔丁基(3-(3-(4-氰基-2,6-二氟苯基)異噁唑-5-基)-5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯11c(177mg，0.26mmol)的甲醇(2mL)溶液中，室溫下依次加入六水合氯化鎳(185mg，0.78mmol)和硼氫化鈉(29mg，0.78mmol)。反應液室溫下攪拌1個小時之後，用氯化銨(2mL)淬滅。再加入乙酸乙酯(40mL)和飽和的碳酸氫鈉水溶液(40mL)。混合溶液用矽藻土過濾後，濾液倒入分液漏斗。水相用乙酸乙酯(40mL)萃取三次，合併的有機相濃縮並柱層析分離得到叔丁基(3-(3-(4-(氨基甲基)-2,6-二氟苯基)異噁唑-5-基)-5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯11d(25mg)。
第五步
叔丁基(3-(3-(2,6-二氟-4-(胍甲基)苯基)異噁唑-5-基)-5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯11e
向叔丁基(3-(3-(4-(氨基甲基)-2,6-二氟苯基)異噁唑-5-基)-5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯11d(25mg，0.042mmol)的乙腈(2mL)溶液中，依次加入1H-吡唑-1-甲脒鹽酸(6.3mg，0.043mmol)和N,N-二異丙基乙胺(6mg，0.045mmol)。室溫(~20℃)下攪拌16個小時。向反應液中加入乙酸乙酯(20mL)和水(20mL)，所得溶液分液，水相用乙酸乙酯(20mL)萃取三次，合併的有機相濃縮並經柱層析色譜分離得到叔丁基(3-(3-(2,6-二氟-4-(胍甲基)苯基)異噁唑-5-基)-5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯11e(20mg)。
第六步
1-(4-(5-(3-氨基-6-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)異噁唑-3-基)-3,5-二氟苄基)胍二鹽酸鹽11
向叔丁基(3-(3-(2,6-二氟-4-(胍甲基)苯基)異噁唑-5-基)-5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯11e(20mg，0.032mmol)的乙酸乙酯(2mL)溶液中，加入鹽酸乙酸乙酯混合溶液(4M，2mL)。反應液室溫下攪拌1個小時後，反應液濃縮得到黃色固體1-(4-(5-(3-氨基-6-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)異噁唑-3-基)-3,5-二氟苄基)胍二鹽酸鹽11(13mg)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)：δ 8.96(s,1 H),8.43-8.40(m,1 H),8.36-8.34(m,2 H),7.93-7.91(m,2 H),7.52(s,1 H),7.38(s,2 H),7.32-7.30(m,2 H),7.25(s,2 H),7.22(s,1 H),7.13(s,2 H),4.55-4.54(m,2 H),3.48-3.45(m,1 H),1.19-1.17(m,6 H)。
MS實測值(ESI+)[(M+H)+]：528。
實施例12
1-(4-(5-(3-氨基-6-(4-(N,S-二甲基磺醯亞氨基)苯基)吡嗪-2-基)異噁唑-3-基)苄基)胍二鹽酸鹽12
第一步
(4-溴苯基)(甲基)(甲基亞氨基)-λ6-磺胺酮12a
將氫化納(60%，於礦物油中，154mg，3.84mmol)添加至於N,N-二甲基甲醯胺(3mL)中的(4-溴苯基)(亞氨基)(甲基)-λ6-磺胺酮(300mg，1.28mmol)中且將所得混合物在室溫下攪拌5min。添加碘甲烷(0.4mL，6.41mmol)並
將反應混合物攪拌過夜。在真空中濃縮混合物，用水稀釋，並用乙酸乙酯萃取。用鹽水洗滌合併萃取物，經MgSO4乾燥，並在真空中濃縮。通過矽膠色譜純化殘留物得(4-溴苯基)(甲基)(甲基亞氨基)-λ6-磺胺酮12a(330mg)。
第二步
(4-(N,S-二甲基亞磺醯基)苯基)硼酸12b
在氮氣保護下，將(4-溴苯基)(甲基)(甲基亞氨基)-λ6-磺胺酮12a(230mg，0.93mmol)、4,4,4,4,5,5,5,5-八甲基-2,2-雙(1,3,2-二氧雜硼烷)(353mg，1.39mmol)、乙酸鉀(273mg，2.78mmol)及[1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯化鈀(68mg，0.09mmol)溶於無水1,4-二氧六環(4mL)溶液中。置換三次氮氣後，反應液在90℃下攪拌兩個小時。冷卻至室溫後，向反應液中加入乙酸乙酯(40mL)和水(40mL)。混合溶液用矽藻土過濾，所得溶液分液，水相用乙酸乙酯(20mL)萃取三次，合併的有機相濃縮並柱層析分離得到(4-(N,S-二甲基亞磺醯基)苯基)硼酸12b(197mg)。
第三步
叔丁基(叔丁氧羰基)(3-(3-(4-氰基苯基)異惡唑-5-基)-5-(4-(N,S-二甲基磺醯亞氨基)苯基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯12c
在氮氣保護下，將(4-(N,S-二甲基亞磺醯基)苯基)硼酸12b(197mg，0.93mmol)、叔丁基N-{5-溴-3-[3-(4-氰基苯基)-1,2-噁唑-5-基]吡嗪-2-基}-N-[(叔丁氧基)羰基]氨基甲酸酯(300mg，0.55mmol)、碳酸鉀(299mg，1.66mmol)及
[1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯化鈀(41mg，0.06mmol)溶於1,4-二氧六環(4mL)和水(1mL)的混合溶液中。置換三次氮氣後，反應液在90℃下攪拌兩個小時。冷卻至室溫後，向反應液中加入乙酸乙酯(40mL)和水(40mL)。混合溶液用矽藻土過濾，所得溶液分液，水相用乙酸乙酯(20mL)萃取三次，合併的有機相濃縮並柱層析分離得到叔丁基(叔丁氧羰基)(3-(3-(4-氰基苯基)異惡唑-5-基)-5-(4-(N,S-二甲基磺醯亞氨基)苯基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯12c(145mg)。
第四步
叔丁基(叔丁氧羰基)(3-(3-(4-(氨基甲基)苯基)異惡唑-5-基)-5-(4-(N,S-二甲基磺醯亞氨基)苯基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯12d
向叔丁基(叔丁氧羰基)(3-(3-(4-氰基苯基)異惡唑-5-基)-5-(4-(N,S-二甲基磺醯亞氨基)苯基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯12c(145mg，0.23mmol)的甲醇(2mL)溶液中，室溫下依次加入六水合氯化鎳(164mg，0.69mmol)和硼氫化鈉(26mg，0.69mmol)。反應液室溫下攪拌1個小時之後，用氯化銨飽和水溶液(2mL)淬滅。再加入乙酸乙酯(40mL)和飽和的碳酸氫鈉水溶液(40mL)。混合溶液用矽藻土過濾後，濾液倒入分液漏斗。水相用乙酸乙酯(40mL)萃取三次，合併的有機相濃縮並柱層析分離得到叔丁基(叔丁氧羰基)(3-(3-(4-(氨基甲基)苯基)異惡唑-5-基)-5-(4-(N,S-二甲基磺醯亞氨基)苯基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯12d(15mg)。
第五步
叔丁基(叔丁氧羰基)(5-(4-(N,S-二甲基磺醯亞氨基)苯基)-3-(3-(4-(胍基甲基)苯基)異惡唑-5-基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯12e
將叔丁基(叔丁氧羰基)(3-(3-(4-(氨基甲基)苯基)異惡唑-5-基)-5-(4-(N,S-二甲基磺醯亞氨基)苯基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯12d(15mg，23.63μmol)的乙腈(1mL)溶液中，依次加入1H-吡唑-1-甲脒鹽酸(7mg，47.26μmol)和N,N-二異丙基乙胺(9mg，70.89μmol)。室溫(~20℃)下攪拌16個小時。向反應液中加入乙酸乙酯(20mL)和水(20mL)，所得溶液分液，水相用乙酸乙酯(20mL)萃取三次，合併的有機相濃縮並經柱層析色譜分離得到叔丁基(叔丁氧羰基)(5-(4-(N,S-二甲基磺醯亞氨基)苯基)-3-(3-(4-(胍基甲基)苯基)異惡唑-5-基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯12e(15mg)。
第六步
1-(4-(5-(3-氨基-6-(4-(N,S-二甲基磺醯亞氨基)苯基)吡嗪-2-基)異噁唑-3-基)苄基)胍二鹽酸鹽12
向叔丁基(叔丁氧羰基)(5-(4-(N,S-二甲基磺醯亞氨基)苯基)-3-(3-(4-(胍基甲基)苯基)異惡唑-5-基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯12e(15mg，22.16μmol)的乙酸乙酯(2mL)溶液中，加入HCl的乙酸乙酯溶液(4M，2mL)。反應液室溫下攪拌1個小時後，反應液濃縮得到黃色固體1-(4-(5-(3-氨基-6-(4-(N,S-二甲基磺醯亞氨基)苯基)吡嗪-2-基)異噁唑-3-基)苄基)胍二鹽酸鹽12(11mg)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)：δ 9.01(s,1 H),8.50-8.48(m,2 H),8.30-8.27(m,1 H),8.13-8.11(m,2 H),8.05-8.03(m,1 H),7.81(s,1 H),7.52-7.51(m,2 H),7.37(s,2 H),7.24(s,2 H),7.12(s,2 H),4.50-4.48(m,2 H),3.93-3.92(m,2 H),2.66(s,3 H),1.23(s,3 H)。
MS實測值(ESI+)[(M+H)+]：477。
實施例13
1-(4-(5-(3-氨基-6-(4-(N-甲基丙烷-2-基磺醯亞氨基)苯基)吡嗪-2-基)異噁唑-3-基)苄基)胍二鹽酸鹽13
第一步
(4-溴苯基)(亞氨基)(異丙基)-λ6-磺胺酮13a
室溫下，向(4-溴苯基)(異丙基)磺胺(1g，4.33mmol)在乙醇(10mL)溶液中加入碘苯二乙酸(4.18g，12.98mmol)和醋酸銨(1.34g，17.30mmol)。將反應混合物在室溫(~20℃)下攪拌3小時後。向反應體系中加入水(60mL)，有機相分離出，水相用乙酸乙酯(20mL)萃取三次，合併的有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮並柱層析分離得到(4-溴苯基)(亞氨基)(異丙基)-λ6-磺胺酮13a(1.07g)。
第二步
(4-溴苯基)(異丙基)(甲基亞氨基)-λ6-磺胺酮13b
將氫化納(60%，於礦物油中，229mg，5.72mmol)添加至於N,N-二甲基甲醯胺(5mL)中的(4-溴苯基)(亞氨基)(異丙基)-λ6-磺胺酮13a(500mg，1.91
mmol)中且將所得混合物在室溫下攪拌5分鐘。添加碘甲烷(0.6mL，9.54mmol)並將反應混合物攪拌過夜。在真空中濃縮混合物，用水稀釋，並用乙酸乙酯萃取。用鹽水洗滌合併萃取物，經MgSO4乾燥，並在真空中濃縮。粗品通過矽膠色譜純化得(4-溴苯基)(異丙基)(甲基亞氨基)-λ6-磺胺酮13b(490mg)。
第三步
(4-(N-甲基丙烷-2-基磺醯亞氨基)苯基)硼酸13c
在氮氣保護下，將(4-溴苯基)(異丙基)(甲基亞氨基)-λ6-磺胺酮13b(250mg，0.91mmol)、4,4,4,4,5,5,5,5-八甲基-2,2-雙(1,3,2-二氧雜硼烷)(345mg，1.36mmol)、乙酸鉀(267mg，2.72mmol)及[1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯化鈀(66mg，0.09mmol)溶於無水1,4-二氧六環(4mL)溶液中。置換三次氮氣後，反應液在90℃下攪拌兩個小時。冷卻至室溫後，向反應液中加入乙酸乙酯(40mL)和水(40mL)。混合溶液用矽藻土過濾，所得溶液分液，水相用乙酸乙酯(20mL)萃取三次，合併的有機相濃縮並柱層析分離得到(4-(N-甲基丙烷-2-基磺醯亞氨基)苯基)硼酸13c(218mg)。
第四步
叔丁基(叔丁氧羰基)(3-(3-(4-氰基苯基)異惡唑-5-基)-5-(4-(N-甲基丙基-2-基磺醯亞氨基)苯基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯13d
在氮氣保護下，將(4-(N-甲基丙烷-2-基磺醯亞氨基)苯基)硼酸13c(218mg，0.91mmol)、叔丁基(5-溴-3-(3-(4-氰基苯基)異噁唑-5-基)吡嗪-2-基)(叔
丁氧羰基)氨基甲酸酯1b(300mg，0.55mmol)、碳酸鉀(229mg，1.66mmol)及[1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯化鈀(40mg，0.06mmol)溶於1,4-二氧六環(4mL)和水(1mL)的混合溶液中。置換三次氮氣後，反應液在90℃下攪拌兩個小時。冷卻至室溫後，向反應液中加入乙酸乙酯(40mL)和水(40mL)。混合溶液用矽藻土過濾，所得溶液分液，水相用乙酸乙酯(20mL)萃取三次，合併的有機相濃縮並柱層析分離得到叔丁基(叔丁氧羰基)(3-(3-(4-氰基苯基)異惡唑-5-基)-5-(4-(N-甲基丙基-2-基磺醯亞氨基)苯基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯13d(180mg)。
第五步
叔丁基(叔丁氧羰基)(3-(3-(4-(氨基甲基)苯基)異惡唑-5-基)-5-(4-(N-甲基丙基-2-基磺醯亞氨基)苯基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯13e
向叔丁基(叔丁氧羰基)(3-(3-(4-氰基苯基)異惡唑-5-基)-5-(4-(N-甲基丙基-2-基磺醯亞氨基)苯基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯13d(180mg，0.27mmol)的甲醇(2mL)溶液中，室溫下依次加入六水合氯化鎳(195mg，0.82mmol)和硼氫化鈉(31mg，0.82mmol)。反應液室溫下攪拌1個小時之後，用氯化銨飽和水溶液(2mL)淬滅。再加入乙酸乙酯(40mL)和飽和的碳酸氫鈉水溶液(40mL)。混合溶液用矽藻土過濾後，濾液倒入分液漏斗。水相用乙酸乙酯(40mL)萃取三次，合併的有機相濃縮並柱層析分離得到叔丁基(叔丁氧羰基)(3-(3-(4-(氨基甲基)苯基)異惡唑-5-基)-5-(4-(N-甲基丙基-2-基磺醯亞氨基)苯基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯13e(16mg)。
第六步
叔丁基(叔丁氧羰基)(3-(3-(4-(胍基甲基)苯基)異惡唑-5-基)-5-(4-(N-甲基丙基-2-基磺醯亞氨基)苯基)-吡嗪-2-基)氨基甲酸酯13f
將叔丁基(叔丁氧羰基)(3-(3-(4-(氨基甲基)苯基)異惡唑-5-基)-5-(4-(N-甲基丙基-2-基磺醯亞氨基)苯基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯13e(16mg，24.14μmol)的乙腈(1mL)溶液中，依次加入1H-吡唑-1-甲脒鹽酸(7mg，48.28μmol)和N,N-二異丙基乙胺(9mg，72.42μmol)。室溫(~20℃)下攪拌16個小時。向反應液中加入乙酸乙酯(20mL)和水(20mL)，所得溶液分液，水相用乙酸乙酯(20mL)萃取三次，合併的有機相濃縮並經柱層析色譜分離得到叔丁基(叔丁氧羰基)(3-(3-(4-(胍基甲基)苯基)異惡唑-5-基)-5-(4-(N-甲基丙基-2-基磺醯亞氨基)苯基)-吡嗪-2-基)氨基甲酸酯13f(13mg)。
第七步
1-(4-(5-(3-氨基-6-(4-(N-甲基丙烷-2-基磺醯亞氨基)苯基)吡嗪-2-基)異噁唑-3-基)苄基)胍二鹽酸鹽13
向叔丁基(叔丁氧羰基)(3-(3-(4-(胍基甲基)苯基)異惡唑-5-基)-5-(4-(N-甲基丙基-2-基磺醯亞氨基)苯基)-吡嗪-2-基)氨基甲酸酯13f(13mg，18.44μmol)的乙酸乙酯(2mL)溶液中，加入鹽酸乙酸乙酯混合溶液(4M，2mL)。反應液室溫下攪拌1個小時後，反應液濃縮得到黃色固體1-(4-(5-(3-氨基-6-(4-(N-甲基丙烷-2-基磺醯亞氨基)苯基)吡嗪-2-基)異噁唑-3-基)苄基)胍二鹽酸鹽13(8mg)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)：δ 9.00(s,1 H),8.52-8.50(m,2 H),8.34-8.31(m,1 H),8.05-8.03(m,4 H),7.82(s,1 H),7.52-7.50(m,2 H),7.40(s,2 H),
7.27(s,2 H),7.14(s,2 H),4.50-4.49(m,2 H),4.28(s,1 H),3.93(s,1 H),2.67(s,3 H),1.45-1.44(m,3 H),1.26-1.25(m,3 H)。
MS實測值(ESI+)[(M+H)+]：505。
實施例14
1-(4-(5-(3-氨基-6-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)異噁唑-3-基)苯基)-3-甲基脲14
第一步
(E)-4-硝基苯甲醛肟14a
室溫下，向4-硝基苯甲醛(2g，13.24mmol)在四氫呋喃(30mL)的溶液中加入羥胺鹽酸鹽(1.02g，15.89mmol)。將反應混合物在室溫(
20℃)下攪拌16小時後。向反應體系中加入水(40mL)，有機相分離出，水相用乙酸乙酯(30mL)萃取三次，合併的有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮得到黃色固體(E)-4-硝基苯甲醛肟14a(2.2g)，為粗產品並在未經進一步純化下直接用於下一步驟。
第二步
叔丁基(5-溴-3-(3-(4-硝基苯基)異噁唑-5-基)吡嗪-2-基)(叔丁氧羰基)氨基甲酸酯14b
向叔丁基(5-溴-3-乙炔基-2-吡嗪基)(叔丁氧羰基)氨基甲酸酯(0.48g，1.20mmol)的甲醇(18mL)和水(3.6mL)的混合溶液中依次加入(E)-4-硝基苯甲醛肟14a(0.3g，1.81mmol)和雙三氟乙醯碘苯(0.78g，1.81mmol)，在室溫下攪拌過夜。向反應液中加入乙酸乙酯(40mL)和水(40mL)。有機相接著用水(20mL)洗三遍。有機相分離出並用無水硫酸鈉乾燥，過濾後濃縮並柱層析分離得到叔丁基(5-溴-3-(3-(4-硝基苯基)異噁唑-5-基)吡嗪-2-基)(叔丁氧羰基)氨基甲酸酯14b(0.41g)。
第三步
叔丁基(叔丁氧羰基)(5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)-3-(3-(4-硝基苯基)異噁唑-5-基)-吡嗪-2-基)氨基甲酸酯14c
氮氣保護下，向叔丁基(5-溴-3-(3-(4-硝基苯基)異噁唑-5-基)吡嗪-2-基)(叔丁氧羰基)氨基甲酸酯14b(0.37g，0.66mmol)的1,4-二氧六環(15mL)和水(1.5mL)混合溶液中，室溫下依次4-異丙基磺醯基苯硼酸(0.17g，0.73mmol)，碳酸鉀(0.18g，1.32mmol)和[1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯化鈀(0.10g，0.13mmol)。置換氮氣三次後，反應液在95℃下攪拌三個小時。冷卻至室溫後，向反應液中加入乙酸乙酯(40mL)和水(40mL)。混合溶液用矽藻土過濾，所得溶液分液，水相用乙酸乙酯(20mL)萃取三次，合併的有機相濃縮並柱層析分離得到叔丁基(叔丁氧羰基)(5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)-3-(3-(4-硝基苯基)異噁唑-5-基)-吡嗪-2-基)氨基甲酸酯14c(0.17g)。
第四步
叔丁基(3-(3-(4-氨基苯基)異噁唑-5-基)-5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)(叔丁氧羰基)氨基甲酸酯14d
向叔丁基(叔丁氧羰基)(3-(3-(4-硝基苯基)5-異噁唑基)-5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯14c(130mg，0.20mmol)的醋酸(8mL)溶液中，室溫下加入還原鐵粉(109mg，2.0mmol)。反應液室溫下攪拌16個小時之後，用乙酸乙酯(40mL)稀釋，混合液用矽藻土過濾，用碳酸氫鈉水溶液(40mL)水洗至中性後倒入分液漏斗。水相用乙酸乙酯(40mL)萃取三次，合併的有機相濃縮並柱層析分離得到叔丁基(3-(3-(4-氨基苯基)異噁唑-5-基)-5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)(叔丁氧羰基)氨基甲酸酯14d(100mg)。
第五步
叔丁基(叔丁氧羰基)(5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)-3-(3-(4-((苯氧羰基)氨基)苯基)異噁唑-5-基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯14e
向叔丁基(3-(3-(4-氨基苯基)異噁唑-5-基)-5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)(叔丁氧羰基)氨基甲酸酯14d(27mg，0.042mmol)的二氯甲烷(2mL)溶液中加入三乙胺(0.017mL)和氯甲酸苯酯(7.3mg，0.047mmol)，將混合物在25℃攪拌2小時。將混合物濃縮並薄層層析純化得到黃色油狀物叔丁基(叔丁氧羰基)(5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)-3-(3-(4-((苯氧羰基)氨基)苯基)異噁唑-5-基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯14e(20mg)。
第六步
叔丁基(叔丁氧羰基)(5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)-3-(3-(4-(3-甲基脲基)苯基)異噁唑-5-基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯14f
向叔丁基(叔丁氧羰基)(5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)-3-(3-(4-((苯氧羰基)氨基)苯基)異噁唑-5-基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯14e(20mg，0.026mmol)的乙腈(3mL)溶液中加入甲胺鹽酸鹽(4mg，0.052mmol)，將混合物在50℃攪拌2小時。向反應溶液中加入乙酸乙酯(10mL)和水(10mL)，分液後的水相再用乙酸乙酯(20mL)萃取三次，合併的有機相濃縮並柱層析分離得到白色固體叔丁基(叔丁氧羰基)(5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)-3-(3-(4-(3-甲基脲基)苯基)異噁唑-5-基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯14f(12mg)。
第七步
1-(4-(5-(3-氨基-6-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)異噁唑-3-基)苯基)-3-甲基脲14
將叔丁基(叔丁氧羰基)(5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)-3-(3-(4-(3-甲基脲基)苯基)異噁唑-5-基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯14f(12mg，0.015mmol)和HCl的乙酸乙酯溶液(4M，2mL)，反應液室溫下攪拌1個小時後，濃縮，加入乙酸乙酯(20mL)和飽和的碳酸氫鈉水溶液(20mL)，分液後有機相用水(20mL)洗一遍後，有機相濃縮並經柱層析色譜分離得到黃色固體1-(4-(5-(3-氨基-6-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)異噁唑-3-基)苯基)-3-甲基脲14(6.7mg)。
1H NMR(DMSO-d 6,400MHz)：δ 8.93(s,1 H),8.82(s,1 H),8.38-8.36(m,2 H),7.94-7.92(m,2 H),7.88-7.86(m,2 H),7.69(s,1 H),7.59-7.57(m,2 H),
7.17(s,2 H),6.13-6.11(m,1 H),3.48-3.44(m,1 H),2.67-2.66(m,3 H),1.20-1.18(m,6 H)。
MS實測值(ESI+)[(M+H)+]：493。
實施例15
1-(4-(5-(3-氨基-6-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)異噁唑-3-基)苯基)脲15
第一步
叔丁基(叔丁氧羰基)(5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)-3-(3-(4-脲基苯基)異噁唑-5-基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯15a
將叔丁基(叔丁氧羰基)(5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)-3-(3-(4-((苯氧羰基)氨基)苯基)異噁唑-5-基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯14e(20mg，0.026mmol)溶入氨甲醇溶液(7M，3mL)溶液中，將混合物在50℃攪拌2小時。向反應溶液中加入乙酸乙酯(10mL)和水(10mL)，分液後的水相再用乙酸乙酯(20mL)萃取三次，合併的有機相濃縮並柱層析分離得到白色固體叔丁基(叔丁氧羰基)(5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)-3-(3-(4-脲基苯基)異噁唑-5-基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯15a(12mg)。
第二步
1-(4-(5-(3-氨基-6-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)異噁唑-3-基)苯基)脲15
將叔丁基(叔丁氧羰基)(5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)-3-(3-(4-脲基苯基)異噁唑-5-基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯15a(12mg，0.015mmol)和HCl的乙酸乙酯溶液(4M，2mL)，反應液室溫下攪拌1個小時後，濃縮，加入乙酸乙酯(20mL)和飽和的碳酸氫鈉水溶液(20mL)，分液後有機相用水(20mL)洗一遍後，有機相濃縮並經柱層析色譜分離得到黃色固體1-(4-(5-(3-氨基-6-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)異噁唑-3-基)苯基)脲15。
1H NMR(DMSO-d 6,400MHz)：δ 8.92(s,1 H),8.86(s,1 H),8.38-8.36(m,2 H),7.94-7.92(m,2 H),7.88-7.86(m,2 H),7.68(s,1 H),7.59-7.57(m,2 H),7.15(s,2 H),6.97(m,2 H),3.48-3.44(m,1 H),1.20-1.18(m,6 H)。
MS實測值(ESI+)[(M+H)+]：479。
實施例16
1-(4-(5-(3-氨基-6-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)異噁唑-3-基)苯基)胍16
向叔丁基(3-(3-(4-氨基苯基)異噁唑-5-基)-5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)(叔丁氧羰基)氨基甲酸酯14d(50mg，0.079mmol)的鹽酸二氧六環(4M，3mL)溶液中加入單氰胺(10mg，0.14mmol)，將混合物在80℃攪拌2小時。待反應冷卻至室溫後向反應溶液中加入乙酸乙酯(20mL)和碳酸氫鈉水溶液(10mL)，分液後的水相再用乙酸乙酯(20mL)萃取三次，合併的有機相濃縮並柱層析分離得到白色固體1-(4-(5-(3-氨基-6-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)異噁唑-3-基)苯基)胍16(18.3mg)。
1H NMR(DMSO-d 6,400MHz)：δ 8.95(s,1 H),8.39-8.37(m,2 H),8.10-8.07(m,2 H),7.95-7.93(m,2 H),7.82(s,1 H),7.71(m,3 H),7.44-7.42(m,2 H),7.19(s,2 H),5.40(s,2 H),3.50-3.43(m,1 H),1.20-1.18(m,6 H)。
MS實測值(ESI+)[(M+H)+]：478。
實施例17
1-(4-(5-(3-氨基-6-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)異噁唑-3-基)苯基)-3-甲基胍二鹽酸鹽17
第一步
叔丁基(叔丁氧羰基)(5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)-3-(3-(4-異硫氰酸根苯基)異噁唑-5-基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯17a
向叔丁基(3-(3-(4-氨基苯基)異噁唑-5-基)-5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)(叔丁氧羰基)氨基甲酸酯14d(110mg，0.21mmol)的二氯甲烷(4mL)溶液中加入氫氧化鈉水溶液(1M，0.6mL)和硫代氯甲酸苯酯(43mg，0.25mmol)，將混合物在25℃攪拌2小時。向反應溶液中加入二氯甲烷(20mL)和水溶液(10mL)，分液後的水相再用二氯甲烷(10mL)萃取三次，合併的有機相濃縮並柱層析分離得到黃色油狀物叔丁基(叔丁氧羰基)(5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)-3-(3-(4-異硫氰酸根苯基)異噁唑-5-基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯17a(70mg)。
第二步
叔丁基(叔丁氧羰基)(5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)-3-(3-(4-(3-甲基硫脲基)苯基)異噁唑-5-基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯17b
向叔丁基(叔丁氧羰基)(5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)-3-(3-(4-異硫氰酸根苯基)異噁唑-5-基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯17a(200mg，0.42mmol)的乙腈(5mL)中加入甲胺鹽酸鹽(28mg，0.42mmol)，反應液50℃攪拌1個小時後，加入乙酸乙酯(20mL)和水(20mL)，分液後有機相用水(20mL)洗一遍後，有機相濃縮並經柱層析色譜分離得到黃色固體叔丁基(叔丁氧羰基)(5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)-3-(3-(4-(3-甲基硫脲基)苯基)異噁唑-5-基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯17b(150mg)。
第三步
叔丁基(叔丁氧羰基)(5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)-3-(3-(4-(3-甲基胍基)苯基)異噁唑-5-基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯17c
叔丁基(叔丁氧羰基)(5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)-3-(3-(4-(3-甲基硫脲基)苯基)異噁唑-5-基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯17b(26mg，0.04mmol)的乙腈(1.5mL)和氨水(1.5mL)反應液中加入2-碘醯基苯甲酸(13mg，0.05mmol)，反應液50℃攪拌1個小時後，加入乙酸乙酯(20mL)和水(20mL)，分液後有機相用水(20mL)洗一遍後，有機相濃縮並經柱層析色譜分離得到黃色固體叔丁基(叔丁氧羰基)(5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)-3-(3-(4-(3-甲基胍基)苯基)異噁唑-5-基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯17c(5mg)。
第四步
1-(4-(5-(3-氨基-6-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)異噁唑-3-基)苯基)-3-甲基胍二鹽酸鹽17
叔丁基(叔丁氧羰基)(5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)-3-(3-(4-(3-甲基胍基)苯基)異噁唑-5-基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯17c(5mg，0.007mmol)和鹽酸乙酸乙酯混合溶液(4M，2mL)反應液室溫下攪拌1個小時後，反應液濃縮得到1-(4-(5-(3-氨基-6-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)異噁唑-3-基)苯基)-3-甲基胍二鹽酸鹽17(1.7mg)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)：δ 8.98(s,1 H),8.42-8.40(m,2 H),8.12-8.10(m,2 H),8.02-8.00(m,2 H),7.86(s,1 H),7.46-7.44(m,2 H),3.51-3.48(m,1 H),2.89-2.88(m,3 H),1.22-1.21(m,6 H)。
MS實測值(ESI+)[(M+H)+]：492。
實施例18
1-(4-(5-(3-氨基-6-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)異噁唑-3-基)苯基)-3-乙基胍二鹽酸鹽18
第一步
叔丁基(叔丁氧羰基)(3-(3-(4-(3-乙基硫脲基)苯基)異噁唑-5-基)-5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)-吡嗪-2-基)氨基甲酸酯18a
向叔丁基(叔丁氧羰基)(5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)-3-(3-(4-異硫氰酸根苯基)異噁唑-5-基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯17a(120mg，0.42mmol)的乙腈(5mL)中加入乙胺鹽酸鹽(25mg，0.13mmol)和三乙胺(63mg，0.62mmol)，反應液50℃攪拌1個小時後，加入乙酸乙酯(20mL)和水(20mL)，分液後有機相用水(20mL)洗一遍後，有機相濃縮並經柱層析色譜分離得到黃色固體叔丁基(叔丁氧羰基)(3-(3-(4-(3-乙基硫脲基)苯基)異噁唑-5-基)-5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)-吡嗪-2-基)氨基甲酸酯18a(100mg)。
第二步
叔丁基(叔丁氧羰基)(3-(3-(4-(3-乙基胍基)苯基)異噁唑-5-基)(5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)-吡嗪-2-基)氨基甲酸酯18b
叔丁基(叔丁氧羰基)(3-(3-(4-(3-乙基硫脲基)苯基)異噁唑-5-基)-5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)-吡嗪-2-基)氨基甲酸酯18a(100mg，0.16mmol)的乙腈(2mL)和氨水(2mL)反應液中加入2-碘醯基苯甲酸(50mg，0.18mmol)，反應液50℃攪拌1個小時後，加入乙酸乙酯(20mL)和水(20mL)，分液後有機相用水(20mL)洗一遍後，有機相濃縮並經柱層析色譜分離得到黃色固體叔丁基(叔丁氧羰基)(3-(3-(4-(3-乙基胍基)苯基)異噁唑-5-基)(5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)-吡嗪-2-基)氨基甲酸酯18b(5mg)。
第三步
1-(4-(5-(3-氨基-6-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)異噁唑-3-基)苯基)-3-乙基胍二鹽酸鹽18
叔丁基(叔丁氧羰基)(3-(3-(4-(3-乙基胍基)苯基)異噁唑-5-基)(5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)-吡嗪-2-基)氨基甲酸酯18b(45mg，0.063mmol)和鹽酸乙酸乙酯混合溶液(4M，2mL)反應液室溫下攪拌1個小時後，反應液濃縮得到黃色固體1-(4-(5-(3-氨基-6-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)異噁唑-3-基)苯基)-3-乙基胍二鹽酸鹽18(34.5mg)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)：δ 9.94(s,1 H),8.96(s,1 H),8.39-8.37(m,2 H),8.17-8.15(m,1 H),8.09-8.07(m,2 H),7.95-7.93(m,2 H)7.83(s,1 H),7.42-7.40(m,2 H),3.50-3.45(m,1 H),3.33-2.29(m,2 H),1.20-1.15(m,9 H)。
MS實測值(ESI+)[(M+H)+]：506。
實施例19
1-(6-(5-(3-氨基-6-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)異噁唑-3-基)吡啶-3-基)-3-甲基胍二鹽酸鹽19
第一步
(E)-5-硝基吡啶甲醛肟19a
室溫下，向5-硝基吡啶甲醛(1g,6.57mmol)在四氫呋喃(15mL)的溶液中加入羥胺鹽酸鹽(0.55g,7.89mmol)。將反應混合物在室溫下攪拌16小時後。向反應體系中加入水(40mL)，有機相分離出，水相用乙酸乙酯(30mL)萃取三次，合併的有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮得到黃色固體(E)-5-硝基吡啶甲醛肟19a(1.1g)，為粗產品並在未經進一步純化下直接用於下一步驟。
第二步
叔丁基(5-溴-3-(3-(5-硝基吡啶-2-基)異噁唑-5-基)吡嗪-2-基)(叔丁氧羰基)氨基甲酸酯19b
向叔丁基(5-溴-3-乙炔基-2-吡嗪基)(叔丁氧羰基)氨基甲酸酯(0.80g，1.99mmol)的甲醇(18mL)和水(3.6mL)的混合溶液中依次加入(E)-5-硝基苯甲醛肟19a(0.50g，2.99mmol)和雙三氟乙醯碘苯(1.29g，2.99mmol)，在室溫下攪拌過夜。向反應液中加入乙酸乙酯(40mL)和水(40mL)。有機相接著用水(20mL)洗三遍。有機相分離出並用無水硫酸鈉乾燥，過濾後濃縮並柱層析分離得到叔丁基(5-溴-3-(3-(5-硝基吡啶-2-基)異噁唑-5-基)吡嗪-2-基)(叔丁氧羰基)氨基甲酸酯19b(0.20g)。
第三步
叔丁基(叔丁氧羰基)(5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)-3-(3-(5-硝基吡啶-2-基)異噁唑-5-基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯19c
氮氣保護下，向叔丁基(5-溴-3-(3-(5-硝基吡啶-2-基)異噁唑-5-基)吡嗪-2-基)(叔丁氧羰基)氨基甲酸酯19b(0.20g，0.36mmol)的1,4-二氧六環(15mL)和水(1.5mL)混合溶液中，室溫(~20℃)下依次4-異丙基磺醯基苯硼酸(0.082g，0.36mmol)，碳酸鉀(0.15g，1.07mmol)和[1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯化鈀(0.05g，0.071mmol)。置換氮氣三次後，反應液在95℃下攪拌三個小時。冷卻至室溫後，向反應液中加入乙酸乙酯(40mL)和水(40mL)。混合溶液用矽藻土過
濾，所得溶液分液，水相用乙酸乙酯(20mL)萃取三次，合併的有機相濃縮並柱層析分離得到叔丁基(叔丁氧羰基)(5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)-3-(3-(5-硝基吡啶-2-基)異噁唑-5-基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯19c(0.12g)。
第四步
叔丁基(3-(3-(5-氨基吡啶-2-基)異噁唑-5-基)-5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)(叔丁氧羰基)氨基甲酸酯19d
向叔丁基(叔丁氧羰基)(5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)-3-(3-(5-硝基吡啶-2-基)異噁唑-5-基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯19c(120mg，0.20mmol)的醋酸(8mL)溶液中，室溫下加入還原鐵粉(109mg，2.0mmol)。反應液室溫下攪拌16個小時之後，用乙酸乙酯(40mL)稀釋，混合液用矽藻土過濾，用碳酸氫鈉水溶液(40mL)水洗至中性後倒入分液漏斗。水相用乙酸乙酯(40mL)萃取三次，合併的有機相濃縮並柱層析分離得到叔丁基(3-(3-(5-氨基吡啶-2-基)異噁唑-5-基)-5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)(叔丁氧羰基)氨基甲酸酯19d(75mg)。
第五步
叔丁基(叔丁氧羰基)(5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)-3-(3-(5-異硫氰酸吡啶-2-基)異噁唑-5-基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯19e
向叔丁基(3-(3-(5-硝基吡啶-2-基)異噁唑-5-基)-5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)(叔丁氧羰基)氨基甲酸酯19d(75mg，0.11mmol)的二氯甲烷(4mL)溶液中加入氫氧化鈉水溶液(1M，0.35mL)和硫代氯甲酸苯酯(23mg，
0.13mmol)，將混合物在25℃攪拌2小時。向反應溶液中加入二氯甲烷(20mL)和水溶液(10mL)，分液後的水相再用二氯甲烷(10mL)萃取三次，合併的有機相濃縮並柱層析分離得到黃色油狀物叔丁基(叔丁氧羰基)(5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)-3-(3-(5-異硫氰酸吡啶-2-基)異噁唑-5-基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯19e(53mg)。
第六步
叔丁基(叔丁氧羰基)(5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)-3-(3-(5-(3-甲基硫脲基)吡啶-2-基)異噁唑-5-基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯19f
向叔丁基(叔丁氧羰基)(5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)-3-(3-(5-異硫氰酸吡啶-2-基)異噁唑-5-基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯19e(45mg，0.078mmol)的乙腈(5mL)中加入甲胺鹽酸鹽(8mg，0.12mmol)和三乙胺(24mg，0.23mmol)，反應液50℃攪拌1個小時後，加入乙酸乙酯(20mL)和水(20mL)，分液後有機相用水(20mL)洗一遍後，有機相濃縮並經柱層析色譜分離得到黃色固體叔丁基(叔丁氧羰基)(5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)-3-(3-(5-(3-甲基硫脲基)吡啶-2-基)異噁唑-5-基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯19f(38mg)。
第七步
叔丁基(叔丁氧羰基)(5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)-3-(3-(5-(3-甲基胍基)吡啶-2-基)異噁唑-5-基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯19g
叔丁基(叔丁氧羰基)(5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)-3-(3-(5-(3-甲基硫脲基)吡啶-2-基)異噁唑-5-基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯19f(38mg，0.075mmol)的乙腈
(1.5mL)和氨水(1.5mL)反應液中加入2-碘醯基苯甲酸(25mg，0.089mmol)，反應液50℃攪拌1個小時後，加入乙酸乙酯(20mL)和水(20mL)，分液後有機相用水(20mL)洗一遍後，有機相濃縮並經柱層析色譜分離得到黃色固體叔丁基(叔丁氧羰基)(5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)-3-(3-(5-(3-甲基胍基)吡啶-2-基)異噁唑-5-基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯19g(15mg)。
第八步
1-(6-(5-(3-氨基-6-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)異噁唑-3-基)吡啶-3-基)-3-甲基胍二鹽酸鹽19
叔丁基(叔丁氧羰基)(5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)-3-(3-(5-(3-甲基胍基)吡啶-2-基)異噁唑-5-基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯19g(15mg，0.021mmol)和鹽酸乙酸乙酯混合溶液(4M，2mL)反應液室溫下攪拌1個小時後，反應液濃縮得到黃色固1-(6-(5-(3-氨基-6-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)異噁唑-3-基)吡啶-3-基)-3-甲基胍二鹽酸鹽19(11.7mg)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)：δ 10.13(s,1 H),8.96(s,1 H),8.68(m,1 H),8.39-8.37(m,2 H),8.21-8.17(m,2 H),7.95-7.93(m,2 H),7.90-7.87(m,2 H),7.71(s,1 H),3.49-3.45(m,1 H),2.87(m,3 H),1.20-1.18(m,6 H)。
MS實測值(ESI+)[(M+H)+]：493。
實施例20
1-(4-(5-(3-氨基-6-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)異噁唑-3-基)-3-氟苯基)-3-甲基胍二鹽酸鹽20
第一步
(E)-2-氟-4-硝基苯甲醛肟20a
室溫下向2-氟-4-硝基苯甲醛(0.5g,2.96mmol)在四氫呋喃(8mL)的溶液中加入羥胺鹽酸鹽(0.25g,3.55mmol)。將反應混合物在室溫(~20℃)下攪拌16小時後。向反應體系中加入水(40mL)，有機相分離出，水相用乙酸乙酯(30mL)萃取三次，合併的有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮得到黃色固體(E)-2-氟-4-硝基苯甲醛肟20a(0.7g)，為粗產品並在未經進一步純化下直接用於下一步驟。
第二步
叔丁基(5-溴-3-(3-(2-氟-4-硝基苯基)異噁唑-5-基)吡嗪-2-基)(叔丁氧羰基)氨基甲酸酯20b
向叔丁基(5-溴-3-乙炔基-2-吡嗪基)(叔丁氧羰基)氨基甲酸酯(0.85g，2.14mmol)的甲醇(18mL)和水(3.6mL)的混合溶液中依次加入(E)-2-氟-4-硝基苯甲醛肟20a(0.59g，3.21mmol)和雙三氟乙醯碘苯(1.38g，3.21mmol)，在室溫下攪拌過夜。向反應液中加入乙酸乙酯(40mL)和水(40mL)。有機相接著用水(20mL)洗三遍。有機相分離出並用無水硫酸鈉乾燥，過濾後濃縮並柱層析分離得到叔丁基(5-溴-3-(3-(2-氟-4-硝基苯基)異噁唑-5-基)吡嗪-2-基)(叔丁氧羰基)氨基甲酸酯20b(0.72g)。
第三步
叔丁基(叔丁氧羰基)(3-(3-(2-氟-4-硝基苯基)異噁唑-5-基)-5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯20c
氮氣保護下，向叔丁基(叔丁氧羰基)(5-溴-3-(3-(2-氟-4-硝基苯基)異噁唑-5-基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯20b(0.30g，0.52mmol)的1,4-二氧六環(15mL)和水(1.5mL)混合溶液中，室溫(~20℃)下依次4-異丙基磺醯基苯硼酸(0.12g，0.52mmol)，碳酸鉀(0.22g，1.55mmol)和[1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯化鈀(0.076g，0.01mmol)。置換氮氣三次後，反應液在95℃下攪拌三個小時。冷卻至室溫後，向反應液中加入乙酸乙酯(40mL)和水(40mL)。混合溶液用矽藻土過濾，所得溶液分液，水相用乙酸乙酯(20mL)萃取三次，合併的有機相濃縮並柱層析分離得到叔丁基(叔丁氧羰基)(3-(3-(2-氟-4-硝基苯基)異噁唑-5-基)-5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯20c(0.13g)。
第四步
叔丁基(叔丁氧羰基)(3-(3-(4-氨基-2-氟苯基)異噁唑-5-基)-5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯20d
向叔丁基(叔丁氧羰基)(3-(3-(2-氟-4-硝基苯基)異噁唑-5-基)-5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯20c(130mg，0.19mmol)的醋酸(8mL)溶液中，室溫下加入還原鐵粉(106mg，1.9mmol)。反應液室溫下攪拌16個小時之後，用乙酸乙酯(40mL)稀釋，混合液用矽藻土過濾，用碳酸氫鈉水溶液(40mL)水洗至中性後倒入分液漏斗。水相用乙酸乙酯(40mL)萃取三次，合併的有
機相濃縮並柱層析分離得到叔丁基(叔丁氧羰基)(3-(3-(4-氨基-2-氟苯基)異噁唑-5-基)-5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯20d(85mg)。
第五步
叔丁基(叔丁氧羰基)(3-(3-(2-氟-4-異硫氰酸根苯基)異噁唑-5-基)-(5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)-吡嗪-2-基)氨基甲酸酯20e
向叔丁基(叔丁氧羰基)(3-(3-(4-氨基-2-氟苯基)異噁唑-5-基)-5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯20d(75mg，0.11mmol)的二氯甲烷(4mL)溶液中加入氫氧化鈉水溶液(1M，0.35mL)和硫代氯甲酸苯酯(23mg，0.13mmol)，將混合物在25℃攪拌2小時。向反應溶液中加入二氯甲烷(20mL)和水溶液(10mL)，分液後的水相再用二氯甲烷(10mL)萃取三次，合併的有機相濃縮並柱層析分離得到黃色油狀物叔丁基(叔丁氧羰基)(3-(3-(2-氟-4-異硫氰酸根苯基)異噁唑-5-基)-(5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)-吡嗪-2-基)氨基甲酸酯20e(56mg)。
第六步
叔丁基(叔丁氧羰基)(3-(3-(2-氟-4-(3-甲基硫脲基)苯基)異噁唑-5-基)-5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯20f
叔丁基(叔丁氧羰基)(3-(3-(2-氟-4-異硫氰酸根苯基)異噁唑-5-基)-(5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)-吡嗪-2-基)氨基甲酸酯20e(56mg，0.078mmol)的乙腈(5mL)中加入甲胺鹽酸鹽(8mg,0.12mmol)和三乙胺(24mg,0.23mmol)，反應液50℃攪拌1個小時後，加入乙酸乙酯(20mL)和水(20mL)，分液後有機相用水
(20mL)洗一遍後，有機相濃縮並經柱層析色譜分離得到黃色固體叔丁基(叔丁氧羰基)(3-(3-(2-氟-4-(3-甲基硫脲基)苯基)異噁唑-5-基)-5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯20f(38mg)。
第七步
叔丁基(叔丁氧羰基)(3-(3-(2-氟-4-(3-甲基胍基)苯基)異噁唑-5-基)-5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯20g
向叔丁基(叔丁氧羰基)(3-(3-(2-氟-4-(3-甲基硫脲基)苯基)異噁唑-5-基)-5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯20f(38mg，0.075mmol)的乙腈(1.5mL)和氨水(1.5mL)反應液中加入2-碘醯基苯甲酸(25mg，0.089mmol)，反應液50℃攪拌1個小時後，加入乙酸乙酯(20mL)和水(20mL)，分液後有機相用水(20mL)洗一遍後，有機相濃縮並經柱層析色譜分離得到黃色固體叔丁基(叔丁氧羰基)(3-(3-(2-氟-4-(3-甲基胍基)苯基)異噁唑-5-基)-5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯20g(28mg)。
第八步
1-(4-(5-(3-氨基-6-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)異噁唑-3-基)-3-氟苯基)-3-甲基胍二鹽酸鹽20
叔丁基(叔丁氧羰基)(3-(3-(2-氟-4-(3-甲基胍基)苯基)異噁唑-5-基)-5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯20g(28mg，0.039mmol)和鹽酸乙酸乙酯混合溶液(4M，2mL)反應液室溫下攪拌1個小時後，反應液濃縮得到黃色固體1-(4-(5-(3-氨基-6-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)異噁唑-3-基)-3-氟苯基)-3-甲基胍二鹽酸鹽20(19.1mg)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)：δ 10.16(s,1 H),8.99(s,1 H),8.40-8.38(m,2 H),8.23-8.22(m,1 H),8.11-8.07(m,2 H),7.98-7.96(m,2 H),7.63-7.62(m,1 H)，7.42-7.39(m,1 H),7.29-7.26(m,2 H),3.52-3.46(m,1 H),2.91-2.89(m,3 H),1.23-1.21(m,6 H)。
MS實測值(ESI+)[(M+H)+]：510。
實施例21
5-(5-(3-氨基-6-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)異噁唑-3-基)-1,3-二氫-2H-苯並[d]咪唑-2-酮21
第一步
(E)-2-側氧-2,3-二氫-1H-苯並[d]咪唑-5-甲醛肟21a
室溫下向2-側氧-2,3-二氫-苯並咪唑-5-甲醛(0.7g，4.31mmol)在四氫呋喃(16mL)的溶液中加入羥胺鹽酸鹽(0.36g，5.18mmol)。將反應混合物在室溫(~20℃)下攪拌16小時後。向反應體系中加入水(40mL)，有機相分離出，水相用乙酸乙酯(30mL)萃取三次，合併的有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮得到黃色固體(E)-2-側氧-2,3-二氫-1H-苯並[d]咪唑-5-甲醛肟21a為粗產品並在未經進一步純化下直接用於下一步驟。
第二步
叔丁基(5-溴-3-(3-(2-側氧-2,3-二氫-1H-苯並[d]咪唑-5-基)異噁唑-5-基)吡嗪-2-基)(叔丁氧羰基)氨基甲酸酯21b
向叔丁基(5-溴-3-乙炔基-2-吡嗪基)(叔丁氧羰基)氨基甲酸酯(1.05g，2.14mmol)的甲醇(25mL)和水(5mL)的混合溶液中依次加入(E)-2-側氧-2,3-二氫-1H-苯並[d]咪唑-5-甲醛肟21a(0.7g，3.95mmol)和雙三氟乙醯碘苯(1.7g，3.95mmol)，在室溫(約20℃)下攪拌過夜。向反應液中加入乙酸乙酯(40mL)和水(40mL)。有機相接著用水(20mL)洗三遍。有機相分離出並用無水硫酸鈉乾燥，過濾後濃縮並柱層析分離得到叔丁基(5-溴-3-(3-(2-側氧-2,3-二氫-1H-苯並[d]咪唑-5-基)異噁唑-5-基)吡嗪-2-基)(叔丁氧羰基)氨基甲酸酯21b(0.33g)。
第三步
叔丁基(叔丁氧羰基)(5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)-3-(3-(2-側氧-2,3-二氫-1H-苯並[d]咪唑-5-基)異噁唑-5-基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯21c
氮氣保護下，向叔丁基(5-溴-3-(3-(2-側氧-2,3-二氫-1H-苯並[d]咪唑-5-基)異噁唑-5-基)吡嗪-2-基)(叔丁氧羰基)氨基甲酸酯21b(0.150，0.26mmol)的1,4-二氧六環(7mL)和水(1.4mL)混合溶液中，室溫下依次4-異丙基磺醯基苯硼酸(0.066g，0.29mmol)，碳酸鉀(0.073g，0.52mmol)和[1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯化鈀(0.038g，0.05mmol)。置換氮氣三次後，反應液在95℃下攪拌三個小時。冷卻至室溫後，向反應液中加入乙酸乙酯(40mL)和水(40mL)。混合溶液用矽藻土過濾，所得溶液分液，水相用乙酸乙酯(20mL)萃取三次，合併的有機
相濃縮並柱層析分離得到叔丁基(叔丁氧羰基)(5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)-3-(3-(2-側氧-2,3-二氫-1H-苯並[d]咪唑-5-基)異噁唑-5-基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯21c(0.06g)。
第四步
5-(5-(3-氨基-6-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)異噁唑-3-基)-1,3-二氫-2H-苯並[d]咪唑-2-酮21
叔丁基(叔丁氧羰基)(5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)-3-(3-(2-側氧-2,3-二氫-1H-苯並[d]咪唑-5-基)異噁唑-5-基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯21c(60mg，0.13mmol)和HCl的乙酸乙酯溶液(4M，2mL)反應液室溫下攪拌1個小時後，反應液用乙酸乙酯(400mL)稀釋，碳酸氫鈉飽和溶液洗至中性，合併並乾燥有機相，濃縮得到黃色固體5-(5-(3-氨基-6-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)異噁唑-3-基)-1,3-二氫-2H-苯並[d]咪唑-2-酮21(39.4mg)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)：δ 8.92(s,1 H),8.38-8.36(m,2 H),7.94-7.92(m,2 H),7.70(s,1 H),7.62-7.60(m,1 H),7.53(s,1 H),7.15(s,2 H),7.07-7.05(m,1 H),3.52-3.46(m,1 H),1.20-1.18(m,6 H)。
MS實測值(ESI+)[(M+H)+]：477。
實施例22
5-(5-(3-氨基-6-(4-(丙烷-2-基磺醯亞氨基)苯基)吡嗪-2-基)異噁唑-3-基)-1,3-二氫-苯並咪唑-2-酮二鹽酸鹽22
第一步
叔丁基(叔丁氧羰基)(3-(3-(2-側氧-2,3-二氫-1H-苯並[d]咪唑-5-基)異噁唑-5-基)-5-(4-(丙-2-基亞磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯22a
氮氣保護下，向叔丁基(5-溴-3-(3-(2-側氧-2,3-二氫-1H-苯並[d]咪唑-5-基)異噁唑-5-基)吡嗪-2-基)(叔丁氧羰基)氨基甲酸酯21b(0.150，0.26mmol)的1,4-二氧六環(7mL)和水(1.4mL)混合溶液中，室溫(~20℃)下依次(4-(丙-2-基磺醯亞胺醯基)苯基)硼酸(0.120g，0.52mmol)，碳酸鉀(0.11g，0.79mmol)和[1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯化鈀(0.038g，0.05mmol)。置換氮氣三次後，反應液在95℃下攪拌三個小時。冷卻至室溫後，向反應液中加入乙酸乙酯(40mL)和水(40mL)。混合溶液用矽藻土過濾，所得溶液分液，水相用乙酸乙酯(20mL)萃取三次，合併的有機相濃縮並柱層析分離得到叔丁基(叔丁氧羰基)(3-(3-(2-側氧-2,3-二氫-1H-苯並[d]咪唑-5-基)異噁唑-5-基)-5-(4-(丙-2-基亞磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯22a(0.07g)。
第二步
5-(5-(3-氨基-6-(4-(丙烷-2-基磺醯亞氨基)苯基)吡嗪-2-基)異噁唑-3-基)-1,3-二氫-苯並咪唑-2-酮二鹽酸鹽22
叔丁基(叔丁氧羰基)(3-(3-(2-側氧-2,3-二氫-1H-苯並[d]咪唑-5-基)異噁唑-5-基)-5-(4-(丙-2-基亞磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯22a(70mg，0.18mmol)和鹽酸乙酸乙酯混合溶液(4M，2mL)反應液室溫下攪拌1個小時後，濃縮得到黃色固體5-(5-(3-氨基-6-(4-(丙烷-2-基磺醯亞氨基)苯基)吡嗪-2-基)異噁唑-3-基)-1,3-二氫-苯並咪唑-2-酮二鹽酸鹽22(48.1mg)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)：δ 10.97-10.95(m,2 H),9.04(s,1 H),8.55-8.53(m,2 H),8.15-8.13(m,2 H),7.78(s,1 H),7.67-7.65(m,1 H),7.57(s,1 H),7.13-7.11(m,2 H),4.25-4.18(m,1 H),1.44-1.42(m,3H),1.33-1.31(m,3H)。
MS實測值(ESI+)[(M+H)+]：476。
實施例23
1-(4-(5-(3-氨基-6-(4-(環丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)異噁唑-3-基)苄基)胍二鹽酸鹽23
第一步
(4-(環丙基磺醯基)苯基)硼酸23a
向1-溴-4-(環丙基磺醯基)苯(500mg，2.03mmol)的N,N-二甲基甲醯胺(12mL)混合溶液中，室溫下依次加入雙聯頻那醇硼酸酯(775mg，3.05mmol)，醋酸鉀(497mg，0.51mmol)和[1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯化鈀(150mg，0.20mmol)。置換氮氣三次後，反應液在95℃下攪拌三個小時。冷卻至室溫後，向反應液中加入乙酸乙酯(40mL)和水(40mL)。混合溶液用矽藻土過濾，所得溶液分液，水相用乙酸乙酯(20mL)萃取三次，合併的有機相濃縮得到(4-(環丙基磺醯基)苯基)硼酸23a(800mg)為粗產品並在未經進一步純化下直接用於下一步驟。
第二步
叔丁基(叔丁氧羰基)(3-(3-(4-氰基苯基)異噁唑-5-基)-5-(4-(環丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯23b
氮氣保護下，向叔丁基(5-溴-3-(3-(4-氰基苯基)異噁唑-5-基)吡嗪-2-基)(叔丁氧羰基)氨基甲酸酯1b(0.6g，1.11mmol)的1,4-二氧六環(15mL)和水(1.5mL)混合溶液中，室溫下依次加入(4-(環丙基磺醯基)苯基)硼酸23a(0.31g，1.33mmol)，碳酸鉀(0.44g，3.33mmol)和[1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯化鈀(0.16g，0.22mmol)。置換氮氣三次後，反應液在95℃下攪拌三個小時。冷卻至室溫後，向反應液中加入乙酸乙酯(40mL)和水(40mL)。混合溶液用矽藻土過濾，所得溶液分液，水相用乙酸乙酯(20mL)萃取三次，合併的有機相濃縮並柱層析分離得到叔丁基(叔丁氧羰基)(3-(3-(4-氰基苯基)異噁唑-5-基)-5-(4-(環丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯23b(0.13g)。
第三步
叔丁基(3-(3-(4-氨基苯基)異噁唑-5-基)-5-(4-(環丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)(叔丁氧羰基)氨基甲酸酯23c
向叔丁基(叔丁氧羰基)(3-(3-(4-氰基苯基)異噁唑-5-基)-5-(4-(環丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯23b(125mg，0.20mmol)的甲醇(5mL)溶液中，室溫下依次加入六水合氯化鎳(142mg，0.60mmol)和硼氫化鈉(23mg，0.60mmol)。反應液室溫下攪拌1個小時之後，用氯化銨(2mL)淬滅。再加入乙酸乙酯(40mL)和飽和的碳酸氫鈉水溶液(40mL)。混合溶液用矽藻土過濾後，濾液
倒入分液漏斗。水相用乙酸乙酯(40mL)萃取三次，合併的有機相濃縮並柱層析分離得到製備叔丁基(3-(3-(4-氨基苯基)異噁唑-5-基)-5-(4-(環丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)(叔丁氧羰基)氨基甲酸酯23c(21mg)。
第四步
叔丁基(叔丁氧羰基)(5-(4-(環丙基磺醯基)苯基)-3-(3-(4-(胍基甲基)苯基)異噁唑-5-基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯23d
向叔丁基(3-(3-(4-氨基苯基)異噁唑-5-基)-5-(4-(環丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)(叔丁氧羰基)氨基甲酸酯23c(21mg，0.034mmol)的乙腈(3mL)溶液中，依次加入1H-吡唑-1-甲脒鹽酸(6mg，0.038mmol)和N,N-二異丙基乙胺(8μL)。室溫下攪拌16個小時。向反應液中加入乙酸乙酯(20mL)和水(20mL)，所得溶液分液，水相用乙酸乙酯(20mL)萃取三次，合併的有機相濃縮並經柱層析色譜分離得到叔丁基(叔丁氧羰基)(5-(4-(環丙基磺醯基)苯基)-3-(3-(4-(胍基甲基)苯基)異噁唑-5-基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯23d(6mg)。
第五步
1-(4-(5-(3-氨基-6-(4-(環丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)異噁唑-3-基)苄基)胍二鹽酸鹽23
向叔丁基(叔丁氧羰基)(5-(4-(環丙基磺醯基)苯基)-3-(3-(4-(胍基甲基)苯基)異噁唑-5-基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯23d(6mg，0.01mmol)的乙酸乙酯(2mL)溶液中，加入鹽酸乙酸乙酯混合溶液(4M，2mL)。反應液室溫下攪拌1個小時後，反應液濃縮得到黃色固體1-(4-(5-(3-氨基-6-(4-(環丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)異噁唑-3-基)苄基)胍二鹽酸鹽23(3mg)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)：δ 8.96(s,1 H),8.39-8.37(m,2 H),8.22-8.20(m,1 H),8.09-8.07(m,2 H),8.02-7.99(m,2 H),7.82(s,1 H),7.54-7.52(m,2 H),7.35(s,2 H),7.22(s,3 H),7.10(s,2 H),4.52-4.51(m,2 H),2.97-2.91(m,1 H),1.40-1.37(m,2 H),1.32-1.29(m,2 H)。
MS實測值(ESI+)[(M+H)+]：490。
實施例24
1-(4-(5-(3-氨基-6-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)異噁唑-3-基)-2-氟苄基)胍二鹽酸鹽24
第一步
(E)-2-氟-4-((羥基亞氨基)甲基)苄腈24a
室溫下，向2-氟-4-甲醯基苄腈(500mg，3.36mmol)的四氫呋喃(30mL)溶液中加入羥胺鹽酸鹽(466mg，6.71mmol)。將反應混合物在室溫下攪拌16小時後。向反應體系中加入水(40mL)，有機相分離出，水相用乙酸乙酯(30mL)萃取三次，合併的有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮得到黃色固體(E)-2-氟-4-((羥基亞氨基)甲基)苄腈24a(430mg)，為粗產品並在未經進一步純化下直接用於下一步驟。
第二步
叔丁基(5-溴-3-(3-(4-氰基-3-氟苯基)異噁唑-5-基)吡嗪-2-基)(叔丁氧羰基)氨基甲酸酯24b
向叔丁基(5-溴-3-乙炔基-2-吡嗪基)(叔丁氧羰基)氨基甲酸酯(0.4g，4.88mmol)的甲醇(12mL)和水(2.4mL)的混合溶液中依次加入(E)-2-氟-4-((羥基亞氨基)甲基)苄腈24a(0.65g，3.25mmol)和雙三氟乙醯碘苯(1.05g，4.88mmol)，在室溫下攪拌過夜。向反應液中加入乙酸乙酯(40mL)和水(40mL)。有機相接著用水(20mL)洗三遍。有機相分離出並用無水硫酸鈉乾燥，過濾後濃縮並柱層析分離得到叔丁基(5-溴-3-(3-(4-氰基-3-氟苯基)異噁唑-5-基)吡嗪-2-基)(叔丁氧羰基)氨基甲酸酯24b(0.24g)。
第三步
叔丁基(叔丁氧羰基)(3-(3-(4-氰基-3-氟苯基)異噁唑-5-基)-5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯24c
氮氣保護下，向叔丁基(5-溴-3-(3-(4-氰基-3-氟苯基)異噁唑-5-基)吡嗪-2-基)(叔丁氧羰基)氨基甲酸酯24b(0.2g，0.36mmol)的1,4-二氧六環(15mL)和水(1.5mL)混合溶液中，室溫下依次加入4-異丙基磺醯基苯硼酸(0.80g，0.36mmol)，碳酸鉀(0.15g，1.08mmol)和[1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯化鈀(0.052g，0.072mmol)。置換氮氣三次後，反應液在95℃下攪拌三個小時。冷卻至室溫後，向反應液中加入乙酸乙酯(40mL)和水(40mL)。混合溶液用矽藻土過濾，所得溶液分液，水相用乙酸乙酯(20mL)萃取三次，合併的有機相濃縮並柱
層析分離得到叔丁基(叔丁氧羰基)(3-(3-(4-氰基-3-氟苯基)異噁唑-5-基)-5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯24c(0.11g)。
第四步
叔丁基(3-(3-(4-(氨基甲基)-3-氟苯基)異噁唑-5-基)-5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)(叔丁氧羰基)氨基甲酸酯24d
向叔丁基(叔丁氧羰基)(3-(3-(4-氰基-3-氟苯基)異噁唑-5-基)-5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯24c(107mg，0.16mmol)的甲醇(5mL)溶液中，室溫下依次加入六水合氯化鎳(115mg，0.48mmol)和硼氫化鈉(19mg，0.48mmol)。反應液室溫下攪拌1個小時之後，用氯化銨(2mL)淬滅。再加入乙酸乙酯(40mL)和飽和的碳酸氫鈉水溶液(40mL)。混合溶液用矽藻土過濾後，濾液倒入分液漏斗。水相用乙酸乙酯(40mL)萃取三次，合併的有機相濃縮並柱層析分離得到叔丁基(3-(3-(4-(氨基甲基)-3-氟苯基)異噁唑-5-基)-5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)(叔丁氧羰基)氨基甲酸酯24d(26mg)。
第五步
叔丁基(叔丁氧羰基)(3-(3-(3-氟-4-(胍甲基)苯基)異噁唑-5-基)-5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯24e
向叔丁基(3-(3-(4-(氨基甲基)-3-氟苯基)異噁唑-5-基)-5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)(叔丁氧羰基)氨基甲酸酯24d(26mg，0.046mmol)的乙腈(3mL)溶液中，依次加入1H-吡唑-1-甲脒鹽酸(7mg，0.046mmol)和N,N-二異丙基
乙胺(9μL)。室溫(~20℃)下攪拌16個小時。向反應液中加入乙酸乙酯(20mL)和水(20mL)，所得溶液分液，水相用乙酸乙酯(20mL)萃取三次，合併的有機相濃縮並經柱層析色譜分離得到叔丁基(叔丁氧羰基)(3-(3-(3-氟-4-(胍甲基)苯基)異噁唑-5-基)-5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯24e(12mg)。
第六步
1-(4-(5-(3-氨基-6-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)異噁唑-3-基)-2-氟苄基)胍二鹽酸鹽24
向叔丁基(叔丁氧羰基)(3-(3-(3-氟-4-(胍甲基)苯基)異噁唑-5-基)-5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯24e(12mg，0.02mmol)的乙酸乙酯(2mL)溶液中，加入HCl的乙酸乙酯溶液(4M，2mL)。反應液室溫下攪拌1個小時後，反應液濃縮得到黃色固體1-(4-(5-(3-氨基-6-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)異噁唑-3-基)-2-氟苄基)胍二鹽酸鹽24(8mg)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)：δ 8.99(s,1 H),8.42-8.40(m,2 H),8.06(s,1 H),7.98-7.94(m,4 H),7.93-7.90(m,1 H),7.60-7.56(m,1 H),7.25(s,2 H),4.57-4.56(m,2 H),3.54-3.48(m,1 H),1.23-1.21(m,6 H)。
MS實測值(ESI+)[(M+H)+]：510。
實施例25
4-(5-氨基-6-(3-(4-(胍甲基)苯基)異噁唑-5-基)吡嗪-2-基)-N,N-二甲基苯甲醯胺二鹽酸鹽25
第一步
叔丁基(叔丁氧羰基)(3-(3-(4-氰基苯基)異噁唑-5-基)-5-(4-(二甲基氨甲醯)苯基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯25a
氮氣保護下，向叔丁基(5-溴-3-(3-(4-氰基苯基)異噁唑-5-基)吡嗪-2-基)(叔丁氧羰基)氨基甲酸酯1b(0.4g，0.74mmol)的1,4-二氧六環(10mL)和水(2mL)混合溶液中，室溫下依次加入N,N-二甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧苯甲醛-2-基)苯甲醯胺(0.24g，0.89mmol)，碳酸鉀(0.30g，2.22mmol)和[1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯化鈀(0.10g，0.15mmol)。置換氮氣三次後，反應液在95℃下攪拌三個小時。冷卻至室溫後，向反應液中加入乙酸乙酯(40mL)和水(40mL)。混合溶液用矽藻土過濾，所得溶液分液，水相用乙酸乙酯(20mL)萃取三次，合併的有機相濃縮並柱層析分離得到叔丁基(叔丁氧羰基)(3-(3-(4-氰基苯基)異噁唑-5-基)-5-(4-(二甲基氨甲醯)苯基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯25a(0.16g)。
第二步
叔丁基(3-(3-(4-(氨基甲基)苯基)異噁唑-5-基)-5-(4-(二甲基氨基甲醯)苯基)吡嗪-2-基)(叔丁氧羰基)氨基甲酸酯25b
向叔丁基(叔丁氧羰基)(3-(3-(4-氰基苯基)異噁唑-5-基)-5-(4-(二甲基氨甲醯)苯基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯25a(160mg，0.26mmol)的甲醇(5mL)溶液中，室溫下依次加入六水合氯化鎳(187mg，0.79mmol)和硼氫化鈉(30mg，0.79mmol)。反應液室溫下攪拌1個小時之後，用氯化銨(2mL)淬滅。再加入乙酸乙
酯(40mL)和飽和的碳酸氫鈉水溶液(40mL)。混合溶液用矽藻土過濾後，濾液倒入分液漏斗。水相用乙酸乙酯(40mL)萃取三次，合併的有機相濃縮並柱層析分離得到叔丁基(3-(3-(4-(氨基甲基)苯基)異噁唑-5-基)-5-(4-(二甲基氨基甲醯)苯基)吡嗪-2-基)(叔丁氧羰基)氨基甲酸酯25b(21mg)。
第三步
叔丁基(叔丁氧羰基)(5-(4-(二甲基氨甲醯基)苯基)-3-(3-(4-(胍甲基)苯基)異噁唑-5-基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯25c
叔丁基(3-(3-(4-(氨基甲基)苯基)異噁唑-5-基)-5-(4-(二甲基氨基甲醯)苯基)吡嗪-2-基)(叔丁氧羰基)氨基甲酸酯25b(21mg，0.034mmol)的乙腈(3mL)溶液中，依次加入1H-吡唑-1-甲脒鹽酸(6mg，0.038mmol)和N,N-二異丙基乙胺(8μL)。室溫(~20℃)下攪拌16個小時。向反應液中加入乙酸乙酯(20mL)和水(20mL)，所得溶液分液，水相用乙酸乙酯(20mL)萃取三次，合併的有機相濃縮並經柱層析色譜分離得到叔丁基(叔丁氧羰基)(5-(4-(二甲基氨甲醯基)苯基)-3-(3-(4-(胍甲基)苯基)異噁唑-5-基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯25c(15mg)。
第四步
4-(5-氨基-6-(3-(4-(胍甲基)苯基)異噁唑-5-基)吡嗪-2-基)-N,N-二甲基苯甲醯胺二鹽酸鹽25
叔丁基(叔丁氧羰基)(5-(4-(二甲基氨甲醯基)苯基)-3-(3-(4-(胍甲基)苯基)異噁唑-5-基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯25c(15mg，0.03mmol)的乙酸乙酯(2mL)溶液中，加入HCl的乙酸乙酯溶液(4M，2mL)。反應液室溫下攪拌1個小時
後，反應液濃縮得到黃色固體4-(5-氨基-6-(3-(4-(胍甲基)苯基)異噁唑-5-基)吡嗪-2-基)-N,N-二甲基苯甲醯胺二鹽酸鹽25(5mg)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)：δ 8.87(s,1 H),8.25-8.23(m,1 H),8.21-8.15(m,2 H),8.06-8.04(m,2 H),7.77(s,1 H),7.53-7.49(m,4 H),7.36(s,3 H),7.23(s,2 H),7.11(s,2 H),4.50-4.48(m,2 H),3.00-2.97(m,6 H)。
MS實測值(ESI+)[(M+H)+]：457。
實施例26
4-(5-(3-氨基-6-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)異噁唑-3-基)-N-氨基甲醯苯甲醯胺二鹽酸鹽26
第一步
(E)-4-((羥亞胺)甲基)苯甲酸甲酯26a
室溫下，向4-甲醯基苯甲酸甲酯(1g，6.10mmol)在四氫呋喃(30mL)的溶液中加入羥胺鹽酸鹽(0.51g，7.31mmol)。將反應混合物在室溫下攪拌16小時後。向反應體系中加入水(40mL)，有機相分離出，水相用乙酸乙酯(30mL)萃取三次，合併的有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮得到黃色固體(E)-4-((羥亞胺)甲基)苯甲酸甲酯26a(1.2g)為粗產品並在未經進一步純化下直接用於下一步驟。
第二步
4-(5-(3-(二(叔丁氧羰基)氨基)-6-溴-吡嗪-2-基)異噁唑-3-基)苯甲酸甲酯26b
向叔丁基(5-溴-3-乙炔基-2-吡嗪基)(叔丁氧羰基)氨基甲酸酯(0.89g，2.23mmol)的甲醇(12mL)和水(2.4mL)的混合溶液中依次加入(E)-4-((羥亞胺)甲基)苯甲酸甲酯26a(0.60g，3.35mmol)和雙三氟乙醯碘苯(1.44g，3.35mmol)，在室溫下攪拌過夜。向反應液中加入乙酸乙酯(40mL)和水(40mL)。有機相接著用水(20mL)洗三遍。有機相分離出並用無水硫酸鈉乾燥，過濾後濃縮並柱層析分離得到4-(5-(3-(二(叔丁氧羰基)氨基)-6-溴-吡嗪-2-基)異噁唑-3-基)苯甲酸甲酯26b(0.96g)。
第三步
4-(5-(3-((叔丁氧羰基)氨基)-6-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)異噁唑-3-基)苯甲酸甲酯26c
氮氣保護下，向4-(5-(6-溴-3-(N,N-二(叔丁氧羰基)氨基)吡嗪-2-基)異噁唑-3-基)苯甲酸甲酯26b(0.4g，0.70mmol)的1,4-二氧六環(15mL)和水(1.5mL)混合溶液中，室溫(~20℃)下依次4-異丙基磺醯基苯硼酸(0.16g，0.70mmol)，碳酸鉀(0.29g，2.10mmol)和[1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯化鈀(0.10g，0.14mmol)。置換氮氣三次後，反應液在95℃下攪拌三個小時。冷卻至室溫後，向反應液中加入乙酸乙酯(40mL)和水(40mL)。混合溶液用矽藻土過濾，所得溶液分液，水相用乙酸乙酯(20mL)萃取三次，合併的有機相濃縮並柱層析分
離得到4-(5-(3-((叔丁氧羰基)氨基)-6-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)異噁唑-3-基)苯甲酸甲酯26c(0.33g)。
第四步
4-(5-(3-((叔丁氧羰基)氨基)-6-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)異噁唑-3-基)苯甲酸26d
向4-(5-(3-((叔丁氧羰基)氨基)-6-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)異噁唑-3-基)苯甲酸甲酯26c(150mg，0.26mmol)的甲醇(5mL)溶液中，室溫下加入氫氧化鋰(33mg，0.78mmol)。反應液室溫下攪拌1個小時之後，用鹽酸水溶液(1M)調至酸性，再加入乙酸乙酯(20mL)萃取三次，合併的有機相濃縮得到4-(5-(3-((叔丁氧羰基)氨基)-6-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)異噁唑-3-基)苯甲酸26d(150mg)為粗產品並在未經進一步純化下直接用於下一步驟。
第五步
叔丁基(3-(3-(4-(脒基氨甲醯基)苯基)異噁唑-5-基)-5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯26e
向4-(5-(3-((叔丁氧羰基)氨基)-6-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)異噁唑-3-基)苯甲酸26d(75mg，0.013mmol)的N-甲基吡咯烷酮(3mL)溶液中，加入2-氯-1-甲基碘化吡啶鎓(45mg，0.17mmol)並在50℃下攪拌1個小時，然後依次加入1-(叔丁氧羰基)胍(28mg，0.17mmol)和N,N-二異丙基乙胺(66uL)。室溫
下攪拌16個小時。向反應液中加入乙酸乙酯(20mL)和水(20mL)，所得溶液分液，水相用乙酸乙酯(20mL)萃取三次，合併的有機相濃縮並經柱層析色譜分離得到叔丁基(3-(3-(4-(脒基氨甲醯基)苯基)異噁唑-5-基)-5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯26e(60mg)。
第六步
4-(5-(3-氨基-6-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)異噁唑-3-基)-N-脒基苯甲醯胺二鹽酸鹽26
向叔丁基(3-(3-(4-(脒基氨甲醯基)苯基)異噁唑-5-基)-5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯26e(60mg，0.10mmol)的乙酸乙酯(2mL)溶液中，加入鹽酸乙酸乙酯混合溶液(4M，2mL)。反應液室溫下攪拌1個小時後，反應液濃縮得到黃色固體4-(5-(3-氨基-6-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)異噁唑-3-基)-N-脒基苯甲醯胺二鹽酸鹽26(45mg)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)：δ 12.12(s,1 H),8.96(s,1 H),8.73(s,2 H),8.56(s,2 H),8.39-8.37(m,2 H),8.34-8.32(m,2 H),8.26-8.24(m,2 H),7.95-7.93(m,3 H),7.23(s,1 H),3.50-3.43(m,1 H),1.23-1.21(m,6 H)。
MS實測值(ESI+)[(M+H)+]：506。
實施例27
1-(4-(5-(3-氨基)-6-(1,1-二氧基-2,3-二氫苯並[b]噻吩-5-基)吡嗪-2-基)異噁唑-3-基)苄基)胍二鹽酸鹽27
第一步
5-溴苯並[b]噻吩1,1-二氧化物27a
室溫下，向5-溴苯並噻吩(1g，4.72mmol)在二氯甲烷(20mL)的溶液中加入間氯過氧苯甲酸(2.4g，14.16mmol)。將反應混合物在室溫下攪拌6小時後。向反應體系中加入過量飽和亞硫酸鈉水溶液淬滅(40mL)，有機相分離出，水相用二氯甲烷(30mL)萃取三次，合併的有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮並柱層析得到白色固體5-溴苯並[b]噻吩1,1-二氧化物27a(0.97g)。
第二步
5-溴-2,3-二氫苯並[b]噻吩1,1-二氧化物27b
室溫下，向5-溴苯並[b]噻吩1,1-二氧化物27a(0.5g，2.05mmol)在乙醇(8mL)的溶液中加入硼氫化鈉(0.12g，3.07mmol)。將反應混合物在室溫(~20℃)下攪拌6小時後。向反應體系中加入飽和氯化銨水溶液淬滅(4mL)後加入乙酸乙酯(40mL)和水(40mL)，有機相分離出，水相用乙酸乙酯(30mL)萃取三次，合併的有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮得到白色固體5-溴-2,3-二氫苯並[b]噻吩1,1-二氧化物27b(0.50g)為粗產品並在未經進一步純化下直接用於下一步驟。
第三步
(1,1-二氧基-2,3-二氫苯並[b]噻吩-5-基)硼酸27c
向5-溴-2,3-二氫苯並[b]噻吩1,1-二氧化物27b(500mg，2.03mmol)的N,N-二甲基甲醯胺(12mL)混合溶液中，室溫下依次加入雙聯頻那醇硼酸酯(775mg，3.05mmol)，醋酸鉀(497mg，0.51mmol)和[1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯化鈀(150mg，0.20mmol)。置換氮氣三次後，反應液在80℃下攪拌三個小時。冷卻至室溫後，向反應液中加入乙酸乙酯(40mL)和水(40mL)。混合溶液用矽藻土過濾，所得溶液分液，水相用乙酸乙酯(20mL)萃取三次，合併的有機相濃縮得到(1,1-二氧基-2,3-二氫苯並[b]噻吩-5-基)硼酸27c(800mg)為粗產品並在未經進一步純化下直接用於下一步驟。
第四步
叔丁基(叔丁氧羰基)(3-(3-(4-氰基苯基)異噁唑-5-基)-5-(1,1-二氧基-2,3-二氫苯並噻吩-5-基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯27d
氮氣保護下，向叔丁基(5-溴-3-(3-(4-氰基苯基)異噁唑-5-基)吡嗪-2-基)(叔丁氧羰基)氨基甲酸酯1b(0.6g，1.11mmol)的1,4-二氧六環(15mL)和水(1.5mL)混合溶液中，室溫(~20℃)下依次(1,1-二氧基-2,3-二氫苯並噻吩-5-基)硼酸27c(0.65g，2.22mmol)，碳酸鉀(0.44g，3.33mmol)和[1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯化鈀(0.16g，0.22mmol)。置換氮氣三次後，反應液在95℃下攪拌三個小時。冷卻至室溫後，向反應液中加入乙酸乙酯(40mL)和水(40mL)。混合溶液用矽藻土過濾，所得溶液分液，水相用乙酸乙酯(20mL)萃取三次，合併的有機相濃縮並柱層析分離得到叔丁基(叔丁氧羰基)(3-(3-(4-氰基苯基)異噁唑-5-基)-5-(1,1-二氧基-2,3-二氫苯並噻吩-5-基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯27d(0.25g)。
第五步
叔丁基(叔丁氧羰基)(3-(3-(4-(氨基甲基)苯基)異噁唑-5-基)-5-(1,1-二氧基-2,3-二氫苯並噻吩-5-基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯27e
向叔丁基(叔丁氧羰基)(3-(3-(4-氰基苯基)異噁唑-5-基)-5-(1,1-二氧基-2,3-二氫苯並噻吩-5-基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯27d(250mg，0.40mmol)的甲醇(5mL)溶液中，室溫下依次加入六水合氯化鎳(284mg，1.20mmol)和硼氫化鈉(23mg，1.2mmol)。反應液室溫下攪拌1個小時之後，用氯化銨飽和水溶液(2mL)淬滅。再加入乙酸乙酯(40mL)和飽和的碳酸氫鈉水溶液(40mL)。混合溶液用矽藻土過濾後，濾液倒入分液漏斗。水相用乙酸乙酯(40mL)萃取三次，合併的有機相濃縮並柱層析分離得到叔丁基(叔丁氧羰基)(3-(3-(4-(氨基甲基)苯基)異噁唑-5-基)-5-(1,1-二氧基-2,3-二氫苯並噻吩-5-基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯27e(62mg)。
第六步
叔丁基(叔丁氧羰基)(5-(1,1-二氧基-2,3-二氫苯並[b]噻吩-5-基)-3-(3-(4-(胍甲基)苯基)異噁唑-5-基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯27f
向叔丁基(叔丁氧羰基)(3-(3-(4-(氨基甲基)苯基)異噁唑-5-基)-5-(1,1-二氧基-2,3-二氫苯並噻吩-5-基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯27e(62mg，0.10mmol)的乙腈(3mL)溶液中，依次加入1H-吡唑-1-甲脒鹽酸(17mg，0.11mmol)和N,N-二異丙基乙胺(32μL)。室溫下攪拌16個小時。向反應液中加入乙酸乙酯(20mL)和水(20mL)，所得溶液分液，水相用乙酸乙酯(20mL)萃取三次，合併的有機相濃
縮並經柱層析色譜分離得到叔丁基(叔丁氧羰基)(5-(1,1-二氧基-2,3-二氫苯並[b]噻吩-5-基)-3-(3-(4-(胍甲基)苯基)異噁唑-5-基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯27f(25mg)。
第七步
1-(4-(5-(3-氨基)-6-(1,1-二氧基-2,3-二氫苯並[b]噻吩-5-基)吡嗪-2-基)異噁唑-3-基)苄基)胍二鹽酸鹽27
向叔丁基(叔丁氧羰基)(5-(1,1-二氧基-2,3-二氫苯並[b]噻吩-5-基)-3-(3-(4-(胍甲基)苯基)異噁唑-5-基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯27f(25mg，0.037mmol)的乙酸乙酯(2mL)溶液中，加入HCl的乙酸乙酯溶液(4M，2mL)。反應液室溫下攪拌1個小時後，反應液濃縮得到黃色固體1-(4-(5-(3-氨基)-6-(1,1-二氧基-2,3-二氫苯並[b]噻吩-5-基)吡嗪-2-基)異噁唑-3-基)苄基)胍二鹽酸鹽27(14mg)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)：δ 8.92(s,1 H),8.27-8.25(m,2 H),8.19-8.16(m,1 H),8.06-8.04(m,2 H),7.84-7.82(m,1 H),7.79(s,1 H),7.51-7.49(m,2 H),7.32(m,1 H),7.19-7.17(m,3 H),7.06(s,1 H),4.50-4.48(m,2 H),3.67-3.63(m,2 H),3.46-3.43(m,2 H)。
MS實測值(ESI+)[(M+H)+]：476。
實施例28
N-(4-(5-(3-氨基-6-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)異噁唑-3-基)苄基)乙脒二鹽酸鹽28
第一步
(E)-4-(溴甲基)苯甲醛肟28a
將4-(溴甲基)苯甲醛(500mg，2.51mmol)和羥胺鹽酸鹽(346.7mg，5.02mmol)按照類似於實施例1第一步的方法製備得白色固體(E)-4-(溴甲基)苯甲醛肟28a(500mg)。
第二步
叔丁基(5-溴-3-(3-(4-溴甲基苯基)異噁唑-5-基)吡嗪-2-基)(叔丁氧羰基)氨基甲酸酯28b
將叔丁基(5-溴-3-乙炔基-吡嗪-2-基)(叔丁氧羰基)氨基甲酸酯(0.5g，1.26mmol)和(E)-4-(溴甲基)苯甲醛肟28a(0.40g，1.88mmol)按照類似於實施例1第二步的方法製備得到叔丁基(5-溴-3-(3-(4-溴甲基苯基)異噁唑-5-基)吡嗪-2-基)(叔丁氧羰基)氨基甲酸酯28b(350mg)。
第三步
叔丁基(3-(3-(4-乙脒基甲基苯基)異噁唑-5-基)-5-溴吡嗪-2-基)(叔丁氧羰基)氨基甲酸酯28c
室溫下，向叔丁基(5-溴-3-(3-(4-溴甲基苯基)異噁唑-5-基)吡嗪-2-基)(叔丁氧羰基)氨基甲酸酯28b(3ml)溶液中加入乙脒鹽酸鹽(46.4mg，0.49mmol)，碳酸鉀(113.8mg，0.83mmol)和碘化鉀(54.8mg，0.33mmol)，反應液在室溫下攪拌3小時，向反應液中加入乙酸乙酯(40mL)和水(40mL)。有機
相接著用水(20mL)洗三遍。有機相分離出並用無水硫酸鈉乾燥，過濾後濃縮並柱層析分離得到叔丁基(3-(3-(4-乙脒基甲基苯基)異噁唑-5-基)-5-溴吡嗪-2-基)(叔丁氧羰基)氨基甲酸酯28c(60mg)。
第四步
叔丁基(3-(3-(4-乙脒基甲基苯基)異噁唑-5-基)-5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)(叔丁氧羰基)氨基甲酸酯28d
將叔丁基(3-(3-(4-乙脒基甲基苯基)異噁唑-5-基)-5-溴吡嗪-2-基)(叔丁氧羰基)氨基甲酸酯28c(60mg，0.10mmol)和4-異丙基磺醯基苯硼酸(35.1mg，0.15mmol)按照類似於實施例1第三步的方法製備得到叔丁基(3-(3-(4-乙脒基甲基苯基)異噁唑-5-基)-5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)(叔丁氧羰基)氨基甲酸酯28d(8mg)。
第五步
N-(4-(5-(3-氨基-6-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)異噁唑-3-基)苄基)乙脒二鹽酸鹽28
將叔丁基(3-(3-(4-乙脒基甲基苯基)異噁唑-5-基)-5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)(叔丁氧羰基)氨基甲酸酯28d(8mg，0.011mmol)按照類似於實施例1第三步的方法製備得到黃色固體N-(4-(5-(3-氨基-6-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)異噁唑-3-基)苄基)乙脒二鹽酸鹽28(4mg)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)：δ 10.18(br.s,1 H),9.45(s,1 H),9.01(s,1 H),8.98(s,1 H),8.42-8.40(m,2 H),8.09-8.07(m,2 H),7.97-7.95(m,2 H),7.85(s,
1 H),7.62-7.60(m,2 H),7.48(brs,3 H),7.35(brs,3 H),7.22(brs,2 H),4.63-4.62(m,2 H),3.49-3.42(m,1 H),2.29(s,3 H),1.23-1.21(m,2 H)。
MS實測值(ESI+)[(M+H)+]：491。
實施例29
N-(4-(5-(3-氨基-6-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)異噁唑-3-基)苯基)乙醯亞胺二鹽酸鹽29
第一步
(E)-4-碘苯甲醛肟29a
將4-碘苯甲醛(500mg,2.16mmol)和羥胺鹽酸鹽(223.6mg,3.24mmol)按照類似於實施例1第一步的方法製備得到白色固體(E)-4-碘苯甲醛肟29a(400mg)。
第二步
叔丁基(5-溴-3-(3-(4-碘苯基)異噁唑-5-基)吡嗪-2-基)(叔丁氧羰基)氨基甲酸酯29b
將叔丁基(5-溴-3-乙炔基-吡嗪-2-基)(叔丁氧羰基)氨基甲酸酯(500mg，1.26mmol)和(E)-4-碘苯甲醛肟29a(463.6mg，1.88mmol)按照類似於實施
例1第二步的方法製備得到叔丁基(5-溴-3-(3-(4-碘苯基)異噁唑-5-基)吡嗪-2-基)(叔丁氧羰基)氨基甲酸酯29b(400mg)。
第三步
叔丁基(叔丁氧羰基)(3-(3-(4-碘苯基)異噁唑-5-基)-5-(4-(異丙基碸基)苯基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯29c
氮氣保護下，將叔丁基(5-溴-3-(3-(4-碘苯基)異噁唑-5-基)吡嗪-2-基)(叔丁氧羰基)氨基甲酸酯29b(400.0mg，0.62mmol)和4-異丙基磺醯基苯硼酸(169.6mg，0.74mmol)按照類似於實施例1第三步的方法製備得到叔丁基(叔丁氧羰基)(3-(3-(4-碘苯基)異噁唑-5-基)-5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯29c(90mg)。
第四步
叔丁基(3-(3-(4-乙醯亞氨基苯基)異噁唑-5-基)-5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)(叔丁氧羰基)氨基甲酸酯29d
氮氣保護下，向叔丁基(叔丁氧羰基)(3-(3-(4-碘苯基)異噁唑-5-基)-5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯29c(50.0mg，0.067mmol)的叔丁醇(2ml)溶液中依次加入乙脒鹽酸鹽(12.6mg，0.13mmol)，叔丁醇鈉(19.3mmol，0.20mmol)，2-(二環己基膦)-3,6-二甲氧基-2'-4'-6'-三-I-丙基-11'-聯苯(7.2mg,0.013mmol)和氯(2-二環己基膦基-3,6-二甲氧基-2',4',6'-三異丙基-1,1'-聯苯)[2-(2-氨基乙基苯基)]鈀(II)(9.7mg，0.013mmol)。反應液在95℃下攪拌五個小時。冷卻至
室溫後，向反應液中加入乙酸乙酯(40mL)和水(40mL)。混合溶液用矽藻土過濾，所得溶液分液，水相用乙酸乙酯(20mL)萃取三次，合併的有機相濃縮並柱層析分離得到叔丁基(3-(3-(4-乙醯亞氨基苯基)異噁唑-5-基)-5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)(叔丁氧羰基)氨基甲酸酯29d(8mg)。
第五步
N-(4-(5-(3-氨基-6-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)異噁唑-3-基)苯基)乙醯亞胺二鹽酸鹽29
將叔丁基(3-(3-(4-乙醯亞氨基苯基)異噁唑-5-基)-5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)(叔丁氧羰基)氨基甲酸酯29d(8mg，0.012mmol)按照類似於實施例1第六步的方法製備得到N-(4-(5-(3-氨基-6-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)異噁唑-3-基)苯基)乙醯亞胺二鹽酸鹽29(4mg)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ11.66(s,1 H),9.7(br.s,1 H),8.99(s,1 H),8.78(s,1 H),8.42-8.40(m,2 H),8.22-8.20(m,2 H),7.98-7.96(m,2 H),7.90(s,1 H),7.57-7.55(m,2 H),7.27-7.20(m,2 H),3.56-3.53(m,1 H),2.42(s,3 H),1.23-1.21(m,6 H)。
MS實測值(ESI+)[(M+H)+]：477。
實施例30
1-(4-(5-(3-氨基-6-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)異噁唑-3-基)-3-(三氟甲基)苄基)胍二鹽酸鹽30
第一步
4-甲醯基-3-(三氟甲基)苯甲腈30a
氮氣保護下，向4-溴-2-(三氟甲基)苯甲醛(2g，7.96mmol)的DMF(15ml)溶液中依次加入氰化鋅(1.0g，8.8mmol)和四(三苯基膦)鈀(459.7mg，0.40mmol)，反應液在90℃下攪拌四個小時。冷卻至室溫後，反應液濃縮，然後向反應液中加入乙酸乙酯(50mL)和水(50mL)，所得溶液分液，水相用乙酸乙酯(30mL)萃取兩次，合併的有機相濃縮並柱層析分離得到4-甲醯基-3-(三氟甲基)苯甲腈30a(1.1g)。
第二步
(E)-4-((羥基亞氨基)甲基)-3-(三氟甲基)苯甲腈30b
將4-甲醯基-3-(三氟甲基)苯甲腈30a(500mg，2.5mmol)和羥胺鹽酸鹽(223.6mg，3.24mmol)按照類似於實施例1第一步的方法製備得到白色固體(E)-4-((羥基亞氨基)甲基)-3-(三氟甲基)苯甲腈30b(400mg)。
第三步
叔丁基(5-溴-3-(3-(2-三氟甲基-4-氰基苯基)異噁唑-5-基)吡嗪-2-基)(叔丁氧羰基)氨基甲酸酯30c
將叔丁基(5-溴-3-乙炔基-吡嗪-2-基)(叔丁氧羰基)氨基甲酸酯(500mg，1.26mmol)和(E)-4-((羥基亞氨基)甲基)-3-(三氟甲基)苯甲腈30b(400mg，1.87
mmol)按照類似於實施例1第二步的方法製備得到叔丁基(5-溴-3-(3-(2-三氟甲基-4-氰基苯基)異噁唑-5-基)吡嗪-2-基)(叔丁氧羰基)氨基甲酸酯30c(300mg)。
第四步
叔丁基(叔丁氧羰基)(3-(3-(4-氰基-2-(三氟甲基)苯基)異噁唑-5-基)-5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯30d
氮氣保護下，將叔丁基(5-溴-3-(3-(2-三氟甲基-4-氰基苯基)異噁唑-5-基)吡嗪-2-基)(叔丁氧羰基)氨基甲酸酯30c(300.0mg，0.49mmol)和4-異丙基磺醯基苯硼酸(169.6mg，0.74mmol)按照類似於實施例1第三步的方法製備得到叔丁基(叔丁氧羰基)(3-(3-(4-氰基-2-(三氟甲基)苯基)異噁唑-5-基)-5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯30d(100mg)。
第五步
叔丁基(3-(3-(4-氨甲基-2-(三氟甲基)苯基)異噁唑-5-基)-5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)(叔丁氧羰基)氨基甲酸酯30e
將叔丁基(叔丁氧羰基)(3-(3-(4-氰基-2-(三氟甲基)苯基)異噁唑-5-基)-5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯30d(100mg，0.14mmol)按照類似於實施例1第四步的方法製備得到叔丁基(3-(3-(4-氨甲基-2-(三氟甲基)苯基)異噁唑-5-基)-5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)(叔丁氧羰基)氨基甲酸酯30e(10mg)。
第六步
叔丁基(叔丁氧羰基)(3-(3-(4-(胍基亞甲基)-2-(三氟甲基)苯基)異噁唑-5-基)-5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯30f
將叔丁基(3-(3-(4-氨甲基-2-(三氟甲基)苯基)異噁唑-5-基)-5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)(叔丁氧羰基)氨基甲酸酯30e(10mg，0.014mmol)和1H-吡唑-1-甲脒鹽酸(7.5mg，0.051mmol)按照類似於實施例1第五步的方法製備得到叔丁基(叔丁氧羰基)(3-(3-(4-(胍基亞甲基)-2-(三氟甲基)苯基)異噁唑-5-基)-5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯30f(5mg)。
第七步
1-(4-(5-(3-氨基-6-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)異噁唑-3-基)-3-(三氟甲基)苄基)胍二鹽酸鹽30
將叔丁基(叔丁氧羰基)(3-(3-(4-(胍基亞甲基)-2-(三氟甲基)苯基)異噁唑-5-基)-5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯30f(5mg，0.006mmol)按照類似於實施例1第六步的方法製備得到1-(4-(5-(3-氨基-6-(4-(異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)異噁唑-3-基)-3-(三氟甲基)苄基)胍二鹽酸鹽30(2mg)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)：δ 8.96(s,1 H),8.36-8.34(m,2 H),8.30-8.27(m,1 H),8.18-8.16(m,1 H),7.98-7.97(m,1 H),7.94-7.92(m,2 H),7.87-7.85(m,1 H),7.79-7.77(m,1 H),7.45(s,1 H),7.32(s,1 H),7.19(s,1 H),7.06(s,1 H),4.61-4.59(m,1 H),3.55-3.53(m,1 H),1.19-1.17(m,6 H)。
MS實測值(ESI+)[(M+H)+]：560。
實施例31
5-(5-(3-氨基-6-(4-異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)異噁唑-3-基)-異吲哚基-1-酮31
第一步
(E)-1-氧雜異吲哚基-5-甲醛肟31a
向1-氧雜異吲哚基-5-甲醛(0.1g，0.62mmol)和羥胺鹽酸鹽(0.052g，0.74mmol)按照類似於實施例1第一步的方法製備得到白色固體(E)-1-氧雜異吲哚基-5-甲醛肟31a(0.175g)，為粗產品並在未經進一步純化下直接用於下一步驟。
第二步
叔丁基(5-溴-3-(3-(1-氧雜異吲哚-5-基)異噁唑-5-基)吡嗪-2-基)(叔丁氧羰基)氨基甲酸酯31b
將(E)-1-氧雜異吲哚基-5-甲醛肟31a(175mg，0.62mmol)，二(叔丁基)(5-溴-3-乙炔基-2-吡嗪基)氨基甲酸酯(160mg，0.401mmol)和雙三氟乙醯碘苯(0.26g，0.62mmol)按照類似於實施例1第二步的方法製備得到黃色固體叔丁基(5-溴-3-(3-(1-氧雜異吲哚-5-基)異噁唑-5-基)吡嗪-2-基)(叔丁氧羰基)氨基甲酸酯31b(120mg)。
第三步
叔丁基(叔丁氧羰基)(5-(4-(異丙基碸基)苯基)-3-(3-(1-氧雜異吲哚-5-基)異噁唑-5-基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯31c
將叔丁基(5-溴-3-(3-(1-氧雜異吲哚-5-基)異噁唑-5-基)吡嗪-2-基)(叔丁氧羰基)氨基甲酸酯31b(120mg，0.209mmol)，4-異丙基磺醯基苯硼酸(48mg，0.209mmol)，碳酸鉀(58mg，0.418mmol)和[1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯化鈀(31mg，0.042mmol)按照類似於實施例1第三步的方法製備得到淡黃色固體叔丁基(叔丁氧羰基)(5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)-3-(3-(1-氧雜異吲哚-5-基)異噁唑-5-基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯31c(90mg)。
第四步
5-(5-(3-氨基-6-(4-異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)異噁唑-3-基)-異吲哚基-1-酮31
將叔丁基(叔丁氧羰基)(5-(4-(異丙基磺醯基)苯基)-3-(3-(1-氧雜異吲哚-5-基)異噁唑-5-基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯31c(90mg，0.156mmol)和鹽酸乙酸乙酯混合溶液(4M，2mL)按照類似於實施例1第六步的方法製備得到黃色固體5-(5-(3-氨基-6-(4-異丙基磺醯基)苯基)吡嗪-2-基)異噁唑-3-基)-異吲哚基-1-酮31(24.7mg)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)：δ 8.95(s,1 H),8.72(s,1 H),8.39-8.37(m,2 H),8.24(s,1 H),8.15-8.13(m,1 H),7.95-7.93(m,2 H),7.88-7.84(m,2 H),7.20(s,2 H),4.50(s,2 H),3.49-3.43(m,1 H),1.20-1.19(m,6 H)。
MS實測值(ESI+)[(M+H)+]：476。
實施例32
5-(5-氨基-6-(3-(4-((甲基氨基)甲基)苯基)異惡唑-5-基)吡嗪-2-基)-3-氟-2,2-二甲基-2,3-二氫苯並[b]噻吩1,1-二氧化物32
第一步
甲基-2-((4-溴苯基)硫基)乙酸酯32a
室溫下，向4-溴苯硫酚(5.88g，31.10mmol)在四氫呋喃(50mL)的溶液中加入溴乙酸甲酯(7.14g，46.65mmol)和三乙胺(6.29g，62.20mmol)。將反應混合物加熱至70攝氏度下攪拌3小時後。向反應體系中加入水(100mL)和乙酸乙酯(100mL)，有機相分離出，水相用乙酸乙酯(50mL)萃取三次，合併的有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮並柱層析得到白色固體甲基-2-((4-溴苯基)硫基)乙酸酯32a(8.6g)。
第二步
2-((4-溴苯基)硫基)乙酸32b
室溫下，向甲基-2-((4-溴苯基)硫基)乙酸酯32a(8.12g，31.10mmol)在甲醇(60mL)和水(20mL)混合溶液中加入氫氧化鈉(2.49g，62.19mmol)。將反應混合物在室溫(~20℃)下攪拌12小時後。向反應體系中加入水(300mL)後，用2M鹽酸水溶液調節pH至5~6，再加入乙酸乙酯(300mL)，有機
相分離出，水相用乙酸乙酯(100mL)萃取三次，合併的有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮得到白色固體2-((4-溴苯基)硫基)乙酸32b(6.3g)為粗產品並在未經進一步純化下直接用於下一步驟。
第三步
5-溴苯並[b]噻吩-3(2H)-酮32c
將2-((4-溴苯基)硫基)乙酸(3.0g，12.14mmol)溶於三氟甲磺酸(15mL)，反應液在80℃下攪拌0.5小時後。冷卻至室溫後，將反應液滴入冰水中，然後加入乙酸乙酯(100mL)，有機相用飽和的碳酸氫鈉水溶液(30mL)洗滌三次。所得的有機相濃縮並柱層析得到黃色固體5-溴苯並[b]噻吩-3(2H)-酮32c(1.5g)。
第四步
5-溴苯並[b]噻吩-3(2H)-酮-1,1-二氧化物32d
將5-溴苯並[b]噻吩-3(2H)-酮32c(1.5g，6.55mmol)和間氯過氧苯甲酸(3.39g，19.64mmol)按照類似於實施例27第一步的方法製備得到黃色固體5-溴苯並[b]噻吩-3(2H)-酮-1,1-二氧化物32d(1.4g)。
第五步
5-溴-2,2-二甲基-苯並[b]噻吩-3(2H)-酮-1,1-二氧化物32e
向5-溴苯並[b]噻吩-3(2H)-酮-1,1-二氧化物32d(400mg，1.53mmol)的四氫呋喃(12mL)溶液中，室溫下依次加入1,5-二氮雜雙環[4.3.0]壬-5-烯(950mg，7.66mmol)和碘甲烷(2.17g，15.32mmol)。反應液加熱至70攝氏度下攪拌3個小時之後，加入乙酸乙酯(50mL)和水(50mL)，分出有機相，水相用乙酸乙酯(40mL)萃取三次，合併的有機相濃縮並柱層析分離得到白色固體5-溴-2,2-二甲基-苯並[b]噻吩-3(2H)-酮-1,1-二氧化物32e(380mg)。
第六步
5-溴-3-羥基-2,2-二甲基-2,3-二氫苯並[b]噻吩-1,1-二氧化物32f
向5-溴-2,2-二甲基-苯並[b]噻吩-3(2H)-酮-1,1-二氧化物32e(210mg，0.73mmol)的甲醇(5mL)溶液中，加入硼氫化鈉(137mg，3.63mmol)。室溫下攪拌1個小時。反應液用水淬滅(1mL)後，再加入乙酸乙酯(20mL)和水(20mL)，所得溶液分液，水相用乙酸乙酯(20mL)萃取三次，合併的有機相濃縮並經柱層析色譜分離得到白色固體5-溴-3-羥基-2,2-二甲基-2,3-二氫苯並[b]噻吩-1,1-二氧化物32f(150mg)。
第七步
5-溴-3-氟-2,2-二甲基-2,3-二氫苯並[b]噻吩-1,1-二氧化物32g
零攝氏度下，向5-溴-3-羥基-2,2-二甲基-2,3-二氫苯並[b]噻吩-1,1-二氧化物32f(150mg，0.51mmol)的二氯甲烷(5mL)溶液中，加入二乙氨基三氟化硫(250mg，1.55mmol)。室溫下攪拌1個小時。反應液用水淬滅(1mL)後，再加入二氯甲烷(20mL)和水(20mL)，所得溶液分液，水相用二氯甲烷(20mL)萃取三次，合併的有機相濃縮並經柱層析色譜分離得到白色固體5-溴-3-氟-2,2-二甲基-2,3-二氫苯並[b]噻吩-1,1-二氧化物32g(120mg)。
第八步
3-氟-2,2-二甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜環戊硼烷-2-基)-2,3-二氫苯並[b]噻吩-1,1-二氧化物32h
將5-溴-3-氟-2,2-二甲基-2,3-二氫苯並[b]噻吩-1,1-二氧化物32g(120mg，0.409mmol)，聯硼酸頻那醇酯(208mg，0.82mmol)，醋酸鉀(80mg，0.82mmol)和[1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯化鈀(60mg，0.082mmol)按照類似於實施例27第三步的方法製備得到3-氟-2,2-二甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜環戊硼烷-2-基)-2,3-二氫苯並[b]噻吩-1,1-二氧化物32h(230mg)為粗產品並在未經進一步純化下直接用於下一步驟。
第九步
叔丁基(叔丁氧羰基)(3-(3-(4-(((叔丁氧羰基)氨基)甲基)苯基)異噁唑-5-基)-5-(3-氟-2,2-二甲基-1,1-二氧化-2,3-二氫苯並[b]噻吩-5-基)吡嗪-2-基)氨基酸甲酯32i
將3-氟-2,2-二甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜環戊硼烷-2-基)-2,3-二氫苯並[b]噻吩-1,1-二氧化物32h(270mg，0.409mmol)，3-氟-2,2-二甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜環戊硼烷-2-基)-2,3-二氫苯並[b]噻吩-1,1-二氧化物(140mg，0.408mmol)，碳酸鉀(113mg，0.82mmol)和[1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯化鈀(60mg，0.082mmol)按照類似於實施例27第四步的方法製備得到叔丁基(叔丁氧羰基)(3-(3-(4-(((叔丁氧羰基)氨基)甲基)苯基)異噁唑-5-基)-5-(3-氟-2,2-二甲基-1,1-二氧化-2,3-二氫苯並[b]噻吩-5-基)吡嗪-2-基)氨基酸甲酯32i(130mg)。
第十步
5-(5-氨基-6-(3-(4-((甲基氨基)甲基)苯基)異惡唑-5-基)吡嗪-2-基)-3-氟-2,2-二甲基-2,3-二氫苯並[b]噻吩1,1-二氧化物32
將叔丁基(叔丁氧羰基)(3-(3-(4-(((叔丁氧羰基)氨基)甲基)苯基)異噁唑-5-基)-5-(3-氟-2,2-二甲基-1,1-二氧化-2,3-二氫苯並[b]噻吩-5-基)吡嗪-2-基)氨基酸甲酯32i(130mg，0.163mmol)和鹽酸乙酸乙酯混合溶液(4M，2mL)按照類似於實施例1第六步的方法製備得到黃色固體5-(5-氨基-6-(3-(4-((甲基氨基)甲基)苯基)異惡唑-5-基)吡嗪-2-基)-3-氟-2,2-二甲基-2,3-二氫苯並[b]噻吩1,1-二氧化物32(57.2mg)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)：δ 8.99(s,1 H),8.53-8.51(m,2 H),8.02-7.98(m,3 H),7.79(s,1 H),7.56-7.54(m,2 H),7.22(s,2 H),6.06(s,0.5 H),5.93(s,0.5 H),3.82(s,2 H),2.36(s,3 H),1.50-1.49(m,3 H),1.37(s,3 H)。
MS實測值(ESI+)[(M+H)+]：494。
實施例33-1或實施例33-2
(R)-5-(5-氨基-6-(5-(4-((甲基氨基)亞甲基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-基)吡嗪-2-基)-3-氟-2,2-二甲基-2,3-二氫苯並[b]噻吩1,1-二氧化物33-1
或
(S)-5-(5-氨基-6-(5-(4-((甲基氨基)亞甲基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-基)吡嗪-2-基)-3-氟-2,2-二甲基-2,3-二氫苯並[b]噻吩1,1-二氧化物33-2
第一步
(R)-5-溴-3-氟-2,2-二甲基-2,3-二氫苯並[b]噻吩-1,1-二氧化物33a-1
或
(S)-5-溴-3-氟-2,2-二甲基-2,3-二氫苯並[b]噻吩-1,1-二氧化物33a-2
將5-溴-3-氟-2,2-二甲基-2,3-二氫苯並[b]噻吩-1,1-二氧化物32g(300mg，1.02mmol)經過SFC(儀器：SHIMADZU LC-30AD，柱：DAICEL AD-H，4.6mmI.D.*250mmL 5μm，流動相：CO2/MeOH[0.1%NH3(7M Solution in
MeOH)]=60/40，流速：2.5mL/min，波長：UV 214nM/254nM，溫度：40℃)拆分得到33a-1或33a-2(144mg，保留時間：3.812min)。
第二步
(R)-3-氟-2,2-二甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜環戊硼烷-2-基)-2,3-二氫苯並[b]噻吩-1,1-二氧化物33b-1
或
(S)-3-氟-2,2-二甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜環戊硼烷-2-基)-2,3-二氫苯並[b]噻吩-1,1-二氧化物33b-2
將33a-1或33a-2(85mg，0.289mmol，保留時間：3.812min)，聯硼酸頻那醇酯(147mg，0.58mmol)，醋酸鉀(57mg，0.58mmol)和[1,1'-雙(二苯基膦)二茂鐵]二氯化鈀(42mg，0.058mmol)按照類似於實施例27第三步的方法製備得到33b-1或33b-2(150mg)為粗產品並在未經進一步純化下直接用於下一步驟。
第三步
3-氨基-6-溴吡嗪基-2-醯基肼33c
室溫下，向3-氨基-6-溴吡嗪基-2-羧酸甲酯(3.0g,12.93mmol)在乙醇(15mL)的溶液中加入水合肼(1.88mL，38.79mmol)。將反應混合物加熱至
80攝氏度下攪拌2小時後，反應液冷卻後並濃縮並柱層析得到淡黃色油狀物3-氨基-6-溴吡嗪基-2-醯基肼33c(2.7g)。
第四步
叔丁基(4-(2-(3-氨基-6-溴吡嗪-2-羧基)肼-1-羧基)苄基)(甲基)氨基甲酸酯33d
室溫下，向4-(((叔-丁氧羰基)(甲基)氨基)甲基)苯甲酸(500mg，1.88mmol)在N,N-二甲基甲醯胺(10mL)的溶液中加入3-氨基-6-溴吡嗪基-2-醯基肼33c(525mg，2.26mmol)，三乙胺(0.57mL，4.15mmol)和O-(7-氮雜苯並三氮唑-1-基)-N,N,N’,N’-四甲基脲六氟磷酸酯(726mg，2.26mmol)。反應混合物在室溫下攪拌16小時後，向反應體系中加入水(50mL)和乙酸乙酯(50mL)，有機相分離出，水相用乙酸乙酯(50mL)萃取三次，合併的有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮並柱層析得到黃色油狀物叔丁基(4-(2-(3-氨基-6-溴吡嗪-2-羧基)肼-1-羧基)苄基)(甲基)氨基甲酸酯33d(800mg)。
第五步
叔丁基(4-(5-(3-氨基-6-溴吡嗪-2-基)-1,3,4-噁二唑-2-基)苄基)(甲基)氨基甲酸酯33e
室溫下，向叔丁基(4-(2-(3-氨基-6-溴吡嗪-2-羧基)肼-1-羧基)苄基)(甲基)氨基甲酸酯33d(800mg，1.67mmol)在無水乙腈(10mL)的溶液中加入二異
丙基乙胺(0.87mL，5.01mmol)。二溴三苯基膦(915mg，2.17mmol)緩慢加入混合反應液中後，在室溫下攪拌16小時。向反應體系中加入水(50mL)和乙酸乙酯(50mL)，有機相分離出，水相用乙酸乙酯(50mL)萃取三次，合併的有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮並柱層析得到白色固體叔丁基(4-(5-(3-氨基-6-溴吡嗪-2-基)-1,3,4-噁二唑-2-基)苄基)(甲基)氨基甲酸酯33e(330mg)。
第六步
叔丁基(R)-(4-(5-(3-氨基-6-(3-氟-2,2-二甲基-1,1-二氧-2,3-二氫苯並[b]噻吩-5-基)吡嗪-2-基)-1,3,4-噁二唑-2-基)苄基)(甲基)氨基甲酸酯33f-1
或
叔丁基(S)-(4-(5-(3-氨基-6-(3-氟-2,2-二甲基-1,1-二氧-2,3-二氫苯並[b]噻吩-5-基)吡嗪-2-基)-1,3,4-噁二唑-2-基)苄基)(甲基)氨基甲酸酯33f-2
將叔丁基(4-(5-(3-氨基-6-溴吡嗪-2-基)-1,3,4-噁二唑-2-基)苄基)(甲基)氨基甲酸酯33e(130mg，0.282mmol)，33b-1或33b-2(96mg，0.281mmol)，碳酸鉀(78mg，0.563mmol)和[1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯化鈀(42mg，0.056mmol)按照類似於實施例27第四步的方法製備得到標題產物33f-1或33f-2(100mg)。
第七步
(R)-5-(5-氨基-6-(5-(4-((甲基氨基)亞甲基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-基)吡嗪-2-基)-3-氟-2,2-二甲基-2,3-二氫苯並[b]噻吩1,1-二氧化物33-1
或
(S)-5-(5-氨基-6-(5-(4-((甲基氨基)亞甲基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-基)吡嗪-2-基)-3-氟-2,2-二甲基-2,3-二氫苯並[b]噻吩1,1-二氧化物33-2
將化合物33f-1或33f-2(100mg，0.168mmol)和鹽酸乙酸乙酯混合溶液(4M，2mL)按照類似於實施例1第六步的方法製備得到黃色固體標題產物33-1或33-2(51.2mg)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)：δ 9.12(s,1 H),8.56-8.53(m,2 H),8.24-8.21(m,2 H),8.07-8.05(m,1 H),7.78-7.76(m,2 H),6.11(s,0.5 H),5.98(s,0.5 H),4.16(s,2 H),2.54(s,3 H),1.51-1.50(m,3 H),1.38(s,3 H)。
MS實測值(ESI+)[(M+H)+]：495。
實施例34
5-(5-氨基-6-(5-(4-((甲基氨基)甲基)苯基)異噁唑-3-基)吡嗪-2-基)-3-氟-2,2-二甲基-2,3-二氫苯並[b]噻吩1,1-二氧化物34
第一步
(E)-3-氨基-6-溴吡嗪-2-甲醛肟34a
室溫下，向3-氨基-6-溴吡嗪-2-甲醛(200mg，1.00mmol)在四氫呋喃(4mL)的溶液中加入羥胺鹽酸鹽(138mg，2.00mmol)。將反應混合物在室溫下攪拌4小時後。向反應體系中加入水(10mL)，有機相分離出，水相用乙酸乙酯(10mL)萃取三次，合併的有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮得到白
色固體(E)-3-氨基-6-溴吡嗪-2-甲醛肟34a(230mg)，為粗產品並在未經進一步純化下直接用於下一步驟。
第二步
1-(4-乙炔基苯基)-N-甲基甲胺34b
室溫下，向4-乙炔基苯甲醛(1g，7.69mmol)在甲醇(10mL)的加入甲氨鹽酸鹽(572mg，8.46mmol)，氰基硼氫化鈉(966mg，15.38mmol)和乙酸(50mg，0.77mmol)。反應混合物在室溫下攪拌4小時後，向反應體系中加入水(50mL)和乙酸乙酯(50mL)，有機相分離出，水相用乙酸乙酯(50mL)萃取三次，合併的有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮並柱層析得到無色油狀物1-(4-乙炔基苯基)-N-甲基甲胺34b(500mg)。
第三步
(4-乙炔基苄基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯34c
室溫下，向1-(4-乙炔基苯基)-N-甲基甲胺34b(500mg，2.04mmol)在二氯甲烷(13mL)的溶液中加入三乙胺(413mg，4.08mmol)，二碳酸二叔丁酯(668mg，3.06mmol)。反應混合物在室溫下攪拌4小時後，向反應體系中加入水(50mL)和二氯甲烷(50mL)，有機相分離出，水相用乙酸乙酯(50mL)萃取三次，合併的有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮並柱層析得到無色油狀物(4-乙炔基苄基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯34c(550mg)。
第四步
叔丁基(4-(3-(3-氨基-6-溴吡嗪-2-基)異噁唑-5-基)苄基)(甲基)氨基甲酸酯34d
向(4-乙炔基苄基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯34c(0.48g，1.20mmol)的甲醇(10mL)和水(2mL)的混合溶液中依次加入(E)-3-氨基-6-溴吡嗪-2-甲醛肟(0.135g，0.63mmol)和雙三氟乙醯碘苯(0.404g，0.94mmol)，在室溫下攪拌過夜。向反應液中加入乙酸乙酯(40mL)和水(40mL)。有機相用水(20mL)洗三遍。有機相分離出並用無水硫酸鈉乾燥，過濾後濃縮並柱層析分離得到叔丁基(4-(3-(3-氨基-6-溴吡嗪-2-基)異噁唑-5-基)苄基)(甲基)氨基甲酸酯34d(0.10g)。
第五步
叔丁基(4-(3-(3-氨基-6-(3-氟-2,2-二甲基-1,1-二氧基-2,3-二氫苯並[b]噻吩-5-基)吡嗪-2-基)異噁唑-5-基)苄基)(甲基)氨基甲酸酯34e
將叔丁基(4-(3-(3-氨基-6-溴吡嗪-2-基)異噁唑-5-基)苄基)(甲基)氨基甲酸酯34d(100mg，0.169mmol)，3-氟-2,2-二甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜環戊硼烷-2-基)-2,3-二氫苯並[b]噻吩-1,1-二氧化物32h(57mg，0.169mmol)，碳酸鉀(69mg，0.507mmol)和[1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯化鈀(12mg，0.017mmol)按照類似於實施例27步第四步的方法製備得到叔丁基(4-(3-(3-氨基-6-(3-氟-
2,2-二甲基-1,1-二氧基-2,3-二氫苯並[b]噻吩-5-基)吡嗪-2-基)異噁唑-5-基)苄基)(甲基)氨基甲酸酯34e(80mg)。
第五步
5-(5-氨基-6-(5-(4-((甲基氨基)甲基)苯基)異噁唑-3-基)吡嗪-2-基)-3-氟-2,2-二甲基-2,3-二氫苯並[b]噻吩1,1-二氧化物34
將叔丁基(4-(3-(3-氨基-6-(3-氟-2,2-二甲基-1,1-二氧基-2,3-二氫苯並[b]噻吩-5-基)吡嗪-2-基)異噁唑-5-基)苄基)(甲基)氨基甲酸酯34e(80mg，0.134mmol)和鹽酸乙酸乙酯混合溶液(4M，2mL)按照類似於實施例1第六步的方法製備得到黃色固體5-(5-氨基-6-(5-(4-((甲基氨基)甲基)苯基)異噁唑-3-基)吡嗪-2-基)-3-氟-2,2-二甲基-2,3-二氫苯並[b]噻吩1,1-二氧化物34(31.7mg)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)：δ 9.12(s,1 H),8.63-8.59(m,2 H),8.02-8.00(m,3 H),7.87(s,1 H),7.57-7.55(m,2 H),6.04(s,0.5 H),5.91(s,0.5 H),3.78(s,2 H),2.32(s,3 H),1.51-1.50(m,3 H),1.38(s,3 H)。
MS實測值(ESI+)[(M+H)+]：494。
實施例35-1或實施例35-2
(R)-5-(5-氨基-6-(3-(4-((甲基氨基)甲基)苯基)異噁唑-5-基)吡嗪-2-基)-3-氟-2,2-二甲基-2,3-二氫苯並[b]噻吩1,1-二氧化物35-1
或
(S)-5-(5-氨基-6-(3-(4-((甲基氨基)甲基)苯基)異噁唑-5-基)吡嗪-2-基)-3-氟-2,2-二甲基-2,3-二氫苯並[b]噻吩1,1-二氧化物35-2
第一步
(5-(雙(叔丁氧基羰基)氨基)-6-(3-(4-(((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)甲基)苯基)異噁唑-5-基)吡嗪-2-基)硼酸35a
室溫下，向叔丁基(5-溴-3-(3-(4-(((叔丁氧羰基)(甲基)氨基)甲基)苯基)異噁唑-5-基)吡嗪-2-基)(叔丁氧羰基)氨基甲酸酯2e(220mg，0.33mmol)的乙二醇二甲醚溶液(2mL)的溶液中加入雙聯頻哪醇硼酸酯(101mg，0.40mmol)，醋酸鉀(98mg，1.00mmol)和[1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯化鈀(24mg，0.03mmol)。將反應混合物在氮氣保護下60℃攪拌3h後，向反應體系中加入水(10mL)，有機相分離出，水相用乙酸乙酯(10mL)萃取三次，合併的有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮得到黑色油狀物(5-(雙(叔丁氧基羰基)氨基)-6-(3-(4-(((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)甲基)苯基)異噁唑-5-基)吡嗪-2-基)硼酸35a(230mg)，為粗產品並在未經進一步純化下直接用於下一步驟。
第二步
叔丁基(R)-(叔丁氧基羰基)(3-(3-(4-(((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)甲基)苯基)異噁唑-5-基)-5-(3-氟-2,2-二甲基-1,1-二氧化-2,3-二氫苯並[b]噻吩-5-基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯35b-1
或
叔丁基(S)-(叔丁氧基羰基)(3-(3-(4-(((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)甲基)苯基)異噁唑-5-基)-5-(3-氟-2,2-二甲基-1,1-二氧化-2,3-二氫苯並[b]噻吩-5-基)吡嗪-2-基)氨基甲酸酯35b-2
室溫下，向(5-(雙(叔丁氧基羰基)氨基)-6-(3-(4-(((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)甲基)苯基)異噁唑-5-基)吡嗪-2-基)硼酸35a(213.7mg，0.34mmol)的1,4二氧六環(3mL)和水(0.6mL)溶液中加入化合物33a-1或33a-2(100mg，0.34mmol)，碳酸鉀(94.3mg，0.68mmol)和[1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯化鈀(25mg，0.03mmol)。將反應混合物在氮氣保護和60攝氏度下攪拌3h後，向反應體系中加入水(20mL)和乙酸乙酯(20mL)，有機相分離出，水相用乙酸乙酯(20mL)萃取三次，合併的有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮並柱層析得到棕色油狀物35b-1或35b-2(120mg)
第三步
(R)-5-(5-氨基-6-(3-(4-((甲基氨基)甲基)苯基)異噁唑-5-基)吡嗪-2-基)-3-氟-2,2-二甲基-2,3-二氫苯並[b]噻吩1,1-二氧化物35-1
或
(S)-5-(5-氨基-6-(3-(4-((甲基氨基)甲基)苯基)異噁唑-5-基)吡嗪-2-基)-3-氟-2,2-二甲基-2,3-二氫苯並[b]噻吩1,1-二氧化物35-2
將化合物35b-1或35b-2(120mg，0.15mmol)和鹽酸乙酸乙酯混合溶液(4M，2mL)按照類似於實施例1第六步的方法製備得到黃色固體標題產物35-1或35-2。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)：δ 8.99(s,1 H),8.54-8.51(m,2 H),8.03-7.96(m,3 H),7.79(s,1 H),7.50(m,2 H),7.24(s,2 H)6.06(s,0.5 H),5.93(s,0.5 H),5.75(s,1 H),3.73(s,2 H),2.30(s,3 H),1.50-1.49(m,3 H),1.37(s,3 H)。
MS實測值(ESI+)[(M+H)+]：494。
實施例36
5-(5-氨基-6-(5-(4-((1-甲基呱啶-4-基)氨基)甲基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-基)吡嗪-2-基)-3-氟-2,2-二甲基-2,3-二氫苯並[b]噻吩1,1-二氧化物36
第一步
5-溴-3-(5-(4-(溴甲基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-基)吡嗪-2-胺36a
室溫下，向3-氨基-6-溴吡嗪-2-碳醯肼(1.294g，5.58mmol)的乙腈(20mL)中，加入4-(溴甲基)苯甲酸(1.20g，5.58mmol)和二溴三苯基膦(10.0g，22.321mmol)，在氮氣保護下於25攝氏度下攪拌1小時後緩慢滴加二異丙基乙基胺(2.884g，22.321mmol)，滴畢，於30℃攪拌12h。反應結束後，加入水(100mL)和乙酸乙酯(100mL)，有機相分離出，水相用乙酸乙酯(50mL)萃取三次，合併的有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮並柱層析得到黃色固體5-溴-3-(5-(4-(溴甲基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-基)吡嗪-2-胺36a(1.10g)。
第二步
5-溴-3-(5-(4-(((1-甲基呱啶-4-基)氨基)甲基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-基)吡嗪-2-胺36b
室溫下，5-溴-3-(5-(4-(溴甲基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-基)吡嗪-2-胺36a(500mg，1.22mmol)，1-甲基呱啶-4-胺(167mg，1.46mmol)和碳酸鈉(387mg，3.65mmol)溶於四氫呋喃(10mL)中，混合液加熱至60攝氏度攪拌3h後，加入水(50mL)和乙酸乙酯(50mL)，有機相分離出，水相用乙酸乙酯(50mL)萃取三次，合併的有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮並柱層析得到黃色固體5-溴-3-(5-(4-(((1-甲基呱啶-4-基)氨基)甲基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-基)吡嗪-2-胺36b(300mg)。
第三步
5-(5-氨基-6-(5-(4-((1-甲基呱啶-4-基)氨基)甲基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-基)吡嗪-2-基)-3-氟-2,2-二甲基-2,3-二氫苯並[b]噻吩1,1-二氧化物36
將5-溴-3-(5-(4-(((1-甲基呱啶-4-基)氨基)甲基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-基)吡嗪-2-胺36b(120mg，0.27mmol)，1-甲基呱啶-4-胺，3-氟-2,2-二甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜環戊硼烷-2-基)-2,3-二氫苯並[b]噻吩-1,1-二氧化物32h(96mg，0.28mmol)，碳酸鉀(112mg，0.81mmol)和[1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯化鈀(20mg，0.03mmol)按照類似於實施例27第四步的方法製備得到5-(5-氨基-6-(5-(4-((1-甲基呱啶-4-基)氨基)甲基)苯基)-1,3,4-噁二唑-2-基)吡嗪-2-基)-3-氟-2,2-二甲基-2,3-二氫苯並[b]噻吩1,1-二氧化物36(18.68mg)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)：δ 9.10(s,1 H),8.55-8.52(m,2 H),8.10-8.04(m,3 H),7.65-7.63(m,2 H),6.11(s,0.5 H),5.98(s,0.5 H),3.84(s,2 H),2.70-2.67(m,3 H),2.34-2.32(m,2 H),2.15(s,3 H),1.83-1.87(m,4 H),1.50(m,3 H),1.38(s,3 H)。
MS實測值(ESI+)[(M+H)+]：578。
實施例37
5-(5-氨基-6-(5-(4-((甲基氨基)甲基)苯基)-1,3,4-噻二唑-2-基)吡嗪-2-基)-3-氟-2,2-二甲基-2,3-二氫苯並[b]噻吩1,1-二氧化物37
第一步
(4-(肼羰基)苄基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯37a
室溫下，向4-(((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)甲基)苯甲酸甲酯(3.0g，10.75mmol)在乙醇(15mL)的溶液中加入水合肼(1.57mL，32.24mmol)。將反應混合物加熱至80攝氏度下攪拌2小時後，反應液冷卻後濃縮並柱層析得到淡黃色油狀物(4-(肼羰基)苄基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯37a(2.7g)。
第二步
2-(4-(((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)甲基)苯甲醯基)肼-1-羧酸叔丁酯37b
室溫下將(4-(肼羰基)苄基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯37a(2.5g，8.9mmol)溶於二氯甲烷(20mL)中，在氮氣保護室溫條件下，滴加二碳酸二叔丁酯(3.85g，17.83mmol)，滴畢攪拌12h。反應結束後向反應體系中加入水(20mL)和乙酸乙酯(20mL)，有機相分離出，水相用乙酸乙酯(50mL)萃取三次，合併的有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮並柱層析得到無色油狀物2-(4-(((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)甲基)苯甲醯基)肼-1-羧酸叔丁酯37b(2.5g)。
第三步
2-(4-(((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)甲基)苯基硫代羰基)肼-1-羧酸叔丁酯37c
在零攝氏度下，將2-(4-(((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)甲基)苯甲醯基)肼-1-羧酸叔丁酯37b(2.5g，6.25mmol)和勞森試劑(10.1g，25.12mmol)溶於甲苯(15mL)中，在氮氣保護下於100℃攪拌12h。反應結束後向體系中加入水(10mL)淬滅，加入水(50mL)和乙酸乙酯(50mL)，有機相分離出，水相用乙酸乙酯(50mL)萃取三次，合併的有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮並柱層析得到黃色固體2-(4-(((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)甲基)苯基硫代羰基)肼-1-羧酸叔丁酯37c(2g)。
第四步
4-((甲氨基)甲基)苯並硫代醯肼37d
室溫下將2-(4-(((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)甲基)苯基硫代羰基)肼-1-羧酸叔丁酯37c(2.0g，5.031mmol)溶於MeOH(10mL)中，加入鹽酸乙酸乙酯混合溶液(4M，2mL)，將反應液在氮氣保護下於25攝氏度攪拌2h，反應結束後將反應液減壓濃縮得到黃色油狀物叔丁基4-((甲氨基)甲基)苯並硫代醯肼37d粗品(650mg)直接用於下一步反應。
第五步
5-溴-3-(5-(4-((甲基氨基)甲基)苯基)-1,3,4-噻二唑-2-基)吡嗪-2-胺37e
室溫下，向4-((甲氨基)甲基)苯並硫代醯肼37d(500mg，2.56mmol)的無水乙腈(10mL)的溶液中加入二異丙基乙胺(1.985g，15.36mmol)。二溴三苯基膦(4.860g，10.24mmol)緩慢加入混合反應液中後，在室溫下攪拌48小時。向反應體系中加入水(50mL)和乙酸乙酯(50mL)，有機相分離出，水相用乙酸乙酯(50mL)萃取三次，合併的有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮並柱層析得到黃色固體5-溴-3-(5-(4-((甲基氨基)甲基)苯基)-1,3,4-噻二唑-2-基)吡嗪-2-胺37e(200mg)。
第六步
5-(5-氨基-6-(5-(4-((甲基氨基)甲基)苯基)-1,3,4-噻二唑-2-基)吡嗪-2-基)-3-氟-2,2-二甲基-2,3-二氫苯並[b]噻吩1,1-二氧化物37
將5-溴-3-(5-(4-((甲基氨基)甲基)苯基)-1,3,4-噻二唑-2-基)吡嗪-2-胺37e(200mg，0.53mmol)3-氟-2,2-二甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜環戊硼烷-2-基)-2,3-二氫苯並[b]噻吩-1,1-二氧化物32h(216mg，0.64mmol)，碳酸鈉(168mg，1.59mmol)和四(三苯基膦)鈀(61mg，0.053mmol)，混合物在微波150℃下
反應30min。反應結束後，旋幹，經柱層析純化得到黃色固體5-(5-氨基-6-(5-(4-((甲基氨基)甲基)苯基)-1,3,4-噻二唑-2-基)吡嗪-2-基)-3-氟-2,2-二甲基-2,3-二氫苯並[b]噻吩1,1-二氧化物37(20.26mg)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)：δ 9.06(s,1 H),8.48-8.45(m,2 H),8.07-8.05(m,5 H),7.56-7.54(m,2 H),6.09(s,0.5 H),5.96(s,0.5 H),3.77(s,2 H),2.34(s,3 H),1.50-1.49(m,3 H),1.38(s,3 H)。
MS實測值(ESI+)[(M+H)+]：511。
實施例38-1或實施例38-2
(R)-5-(5-氨基-6-(3-(4-((甲基氨基)甲基)苯基)異噁唑-5-基-4-氘)吡嗪-2-基)-3-氟-2,2-二甲基-2,3-二氫苯並[b]噻吩1,1-二氧化物38-1
或
(S)-5-(5-氨基-6-(3-(4-((甲基氨基)甲基)苯基)異噁唑-5-基-4-氘)吡嗪-2-基)-3-氟-2,2-二甲基-2,3-二氫苯並[b]噻吩1,1-二氧化物38-2
第一步
(5-溴-3-(氘代乙炔基)吡嗪-2-基)氨基甲酸叔丁酯38a
將叔丁基(5-溴-3-乙炔基-2-吡嗪基)(叔丁氧羰基)氨基甲酸酯(1g，3.3mmol)溶於氘代甲醇溶液(10mL)中，混合液在氮氣保護下加熱至70℃攪拌48小時。反應結束後，將反應液直接旋幹得到粗棕色固體(5-溴-3-(氘代乙炔基)吡嗪-
2-基)氨基甲酸叔丁酯38a(0.7g)，為粗產品並在未經進一步純化下直接用於下一步驟。
第二步
(4-(5-(6-溴-3-((叔丁氧基羰基)氨基)吡嗪-2-基)異噁唑-3-基-4-氘)苄基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯38b
向(5-溴-3-(氘代乙炔基)吡嗪-2-基)氨基甲酸叔丁酯38a(500mg，1.25mmol)的甲醇(12mL)和水(2.4mL)的混合溶液中依次加入(E)-(4-((羥基亞氨基)甲基)苄基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯(332mg，1.25mmol)和雙三氟乙醯碘苯(646.3mg，1.50mmol)，在室溫下攪拌過夜。向反應液中加入乙酸乙酯(40mL)和水(40mL)。有機相用水(20mL)洗三遍。有機相分離出並用無水硫酸鈉乾燥，過濾後濃縮並柱層析分離得到(4-(5-(6-溴-3-((叔丁氧基羰基)氨基)吡嗪-2-基)異噁唑-3-基-4-氘)苄基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯38b(800mg)。
第三步
叔丁基(4-(5-(3-((叔丁氧羰基)氨基)-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧苯甲醛-2-基)吡嗪-2-基)異噁唑-3-基-4-氘)苄基)(甲基)氨基甲酸酯38c
室溫下，向(4-(5-(6-溴-3-((叔丁氧基羰基)氨基)吡嗪-2-基)異噁唑-3-基-4-氘)苄基)(甲基)氨基甲酸叔丁酯38b(100mg，0.18mmol)的乙二醇二甲醚溶液(2mL)的溶液中加入雙聯頻哪醇硼酸酯(54mg，0.21mmol)，醋酸鉀(52mg，0.53
mmol)和[1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯化鈀(13mg，0.02mmol)。將反應混合物在氮氣保護下60攝氏度下攪拌3h後，向反應體系中加入水(10mL)，有機相分離出，水相用乙酸乙酯(10mL)萃取三次，合併的有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮得到黑色油狀物叔丁基(4-(5-(3-((叔丁氧羰基)氨基)-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧苯甲醛-2-基)吡嗪-2-基)異噁唑-3-基-4-氘)苄基)(甲基)氨基甲酸酯38c(180mg)為粗產品並在未經進一步純化下直接用於下一步驟。
第四步
叔丁基(R)-(4-(5-(3-((叔丁氧羰基)氨基)-6-(3-氟-2,2-二甲基-1,1-二氧基-2,3-二氫苯並【b】噻吩-5-基)吡嗪-2-基)異噁唑-3-基-4-氘)苄基(甲基)氨基甲酸酯38d-1
或
叔丁基(S)-(4-(5-(3-((叔丁氧羰基)氨基)-6-(3-氟-2,2-二甲基-1,1-二氧基-2,3-二氫苯並【b】噻吩-5-基)吡嗪-2-基)異噁唑-3-基-4-氘)苄基(甲基)氨基甲酸酯38d-2
向叔丁基(4-(5-(3-((叔丁氧羰基)氨基)-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧苯甲醛-2-基)吡嗪-2-基)異噁唑-3-基-4-氘)苄基)(甲基)氨基甲酸酯38c(180mg，0.34mmol)的1,4二氧六環(3mL)和水(0.6mL)溶液中加入33a-1或33a-2(105mg，0.36mmol)，碳酸鉀(142mg，1.02mmol)和[1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯化鈀(25mg，0.03mmol)。將反應混合物在氮氣保護下100攝氏度下攪拌3h後，向反應體系中加入水(20mL)和乙酸乙酯(20mL)，有機相分離出，水相用乙酸乙酯
(20mL)萃取三次，合併的有機相用無水硫酸鈉乾燥，過濾，濾液減壓濃縮並柱層析得到棕色油狀物38d-1或38d-2(120mg)。
第五步
(R)-5-(5-氨基-6-(3-(4-((甲基氨基)甲基)苯基)異噁唑-5-基-4-氘)吡嗪-2-基)-3-氟-2,2-二甲基-2,3-二氫苯並[b]噻吩1,1-二氧化物38-1
或
(S)-5-(5-氨基-6-(3-(4-((甲基氨基)甲基)苯基)異噁唑-5-基-4-氘)吡嗪-2-基)-3-氟-2,2-二甲基-2,3-二氫苯並[b]噻吩1,1-二氧化物38-2
將化合物38d-1或38d-2(120mg，0.17mmol)和鹽酸乙酸乙酯混合溶液(4M，2mL)按照類似於實施例1第六步的方法製備得到黃色固體標題化合物38-1或38-1(66.12mg)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)：δ 8.99(s,1 H),8.53-8.51(m,2 H),8.01-7.99(m,3 H),7.56-7.54(m,2 H),7.24(s,2 H),6.06(s,0.5 H),5.93(s,0.5 H),3.84(s,2 H),2.37(s,3 H),1.50-1.49(m,3 H),1.37(s,3 H)。
MS實測值(ESI+)[(M+H)+]：495。
生物學評價
以下具體描述了生物學實施資料，以進一步闡述本公開技術方案。
測試例1：ATR酶活性抑制試驗
使用HTRF(均相時間分辨螢光，Homogeneous Time-Resolved Fluorescence)試驗篩選化合物抑制ATR激酶的能力。在反應體系中，ATR將底物p53磷酸化後加入anti-phospho-p53-Eu作為能量供體能與p53上的磷酸化位點特異性結合，加入anti-GST-d2作為能量受體與p53上攜帶的GST標籤特異性結合。使用一定波
長的鐳射(340nm)激發能量供體能發射出615nm波長的發射光，供體與受體之間發生能量轉移，使得能量受體發射出665nm波長的發射光。使用讀板機對兩個發射光進行檢測並求出665nm與615nm兩種信號的比值，通過作圖和計算即可求出待測樣品的IC50。
配置實驗所需的各類緩衝液體系：
配置含25mM HEPES(Gibco,Cat # 15630-080)，5mM DTT(Sigma,Cat # D0632-10G)，10mM MnCl2(Sigma,Cat # 7773-01-5)，5mM DTT(Sigma,Cat # D0632-10G)，1mg/mL BSA(Sigma,Cat # B2064-50G)，0.01% Brij35(Sigma,Cat # 9002-92-0)，1% Glycerol(Sigma,Cat # G5516-500ML)以及H2O的ATR反應緩衝液。使用配置好的ATR緩衝液將全長的ATR酶(eurofins,Cat #14-953M)稀釋至60nM。
製備含80nM p53(eurofins,Cat # 14-952M)以及300nM ATP(Sigma,Cat # R0441)的反應底物。
製備檢測液：HTRF detection buffer(Cisbio,Cat #62SDBRDF)將anti-phospho-p53-Eu cryptate(Cisbio,Cat # 61P08KA)和anti-GST-d2(Cisbio,Cat # 61GSTDLB)各稀釋至1unit。
粉末狀化合物以10mM的母液濃度溶解於DMSO。待測化合物從1μM終濃度開始用DMSO三倍稀釋10個濃度後加入384孔板中，每孔10.05μL(含0.498%DMSO)。相應每孔加入5μLATR，25℃孵育10分鐘後，加入5μL反應底物。25℃孵育90分鐘後加入10μL檢測液(Detection solution)。反應過夜，在Envision 2104 Multilabel Reader上讀取665/615nm資料，通過XLfit軟體四參數羅吉斯回歸方程作出化合物抑制曲線，計算化合物抑制率。
下表1顯示了本申請中公開的化合物對ATR酶的相對抑制值：
表1化合物對ATR酶的相對抑制值
結論：分析以上實例資料，我們的化合物對ATR的抑制能力與VX-970持平或者更優。
測試例2：NCI-H23皮下移植瘤模型測試化合物的體內藥效學作用
一、實驗方法：
1、細胞培養：人肺癌NCI-H23細胞(ATCC，貨號：CRL-5800)體外單層培養，培養條件為RPMI 1640培養基中加10%胎牛血清，1%青黴素/鏈黴素/兩性黴素B，37℃ 5% CO2孵箱培養。一周兩次用胰酶-EDTA進行常規消化處理傳代。當細胞飽和度為80%-90%，數量到達要求時，收取細胞，計數，接種。
2、動物：CB.17/SCID小鼠，雌性，6-8周齡，體重18-22克。共需84只。由北京維通利華實驗動物技術有限公司或同等資質供應商提供。
3、測試化合物資訊如下表2所示：
表2：測試化合物資訊
4、腫瘤接種：將0.2mL(10×106個)NCI-H23細胞(加基質膠，體積比為1：1)皮下接種於每只小鼠的右後背，腫瘤平均體積達到約200mm3時開始分組給藥。實驗分組和給藥方案見下表3。給藥前稱重動物，測量瘤體積。根據瘤體積隨機分組(隨機區組設計)。
表3：動物實驗分組和給藥
二、實驗指標：
1、實驗指標是考察腫瘤生長是否被抑制、延緩或治癒。每週三次用遊標卡尺測量腫瘤直徑。
2、腫瘤體積的計算公式為：V=0.5a×b2，a和b分別表示腫瘤的長徑和短徑。
3、化合物的抑瘤療效用TGI(%)和Tumor change(%)評價。
4、TGI(%)，反映腫瘤生長抑制率。TGI(%)的計算：TGI(%)=[1-(某處理組給藥結束時平均瘤體積-該處理組開始給藥時平均瘤體積)/(溶劑對照組治療結束時平均瘤體積-溶劑對照組開始治療時平均瘤體積)]×100%。TGI(%)：大於100，給藥後小鼠腫瘤不在增長，有抑制。
5、Tumor change(%)的計算：Tumor change(%)=(某處理組給藥結束時平均瘤體積-該處理組開始給藥時平均瘤體積)/該處理組開始給藥時平均瘤體積×100%。Tumor change(%)：小於0，給藥後小鼠腫瘤不在增長，有抑制。
6、資料分析：T檢驗用於兩組間比較。p<0.05認為有顯著性差異。
三、實驗結果：
給藥後，Cisplatin+VX-970組、Cisplatin+實施例33-1或33-2組和Cisplatin+實施例38-1或38-2組小鼠體重具有下降，但各組間體重下降無差異，如圖1
所示(注：圖1中下方黑色箭頭ATR激酶抑制劑給藥，上方灰色箭頭順鉑給藥)。給藥後，各組瘤體積與給藥前相比均有下降趨勢，如圖2和圖3所示，與Cisplatin+VX-970組相比，Cisplatin+實施例33-1或33-2組和Cisplatin+實施例38-1或38-2組瘤體積下降更明顯，T檢驗，p<0.05，說明實施例33-1或33-2和實施例38-1或38-2分別與Cisplatin聯合用藥後，抑制腫瘤生長的效果比VX-970聯合Cisplatin用藥更佳。
給藥後14天，Cisplatin+VX-970組為Tumor change(%)為-12%，TGI(%)為128%；Cisplatin+實施例33-1或33-2組Tumor change(%)為-66%，TGI(%)為245%；Cisplatin+實施例38-1或38-2組Tumor change(%)為-29%，TGI(%)為159%(表4)。
表4 TGI(%)和Tumor change(%)
應當理解，以上實施例均為示例性的，不用於包含權利要求所包含的所有可能的實施方式。在不脫離本公開的範圍的情況下，還可以在以上實施例的基礎上做出各種變形和改變。同樣的，也可以對以上實施例的各個技術特徵進行任意組合，以形成可能沒有被明確描述的本公開的另外的實施例。因此，上述實施例僅表達了本公開的幾種實施方式，不對本公開專利的保護範圍進行限制。
Claims (27)
- 一種式I所示的化合物或其藥學上可接受的鹽、酯、異構體、溶劑化物、前藥或同位素標記物，所述式I化合物的結構式為：
其中：環A、環B和環C分別為6至10元芳基或5至10元雜芳基；R1包含係選自氫、氘、氰基、鹵素、以及取代或未取代的羥基、氨基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、3至7元環烷基、3至7元雜環基、胍基、脲基、醯氨基、氨基磺醯胺基、磺醯氨基和HN-C(=NH)-C1-6烷基；R2和R5包含係選自氫、氘、鹵素、C1-6烷基、氨基和C1-6烷氧基所組成的群組；或者R1和R2與它們所連接的原子一起形成包含1至3個包含係選自氧、氮和硫原子的5至6元雜芳基或雜環基，所述5至6元雜芳基或雜環基的環上有0或1個亞甲基可任意被-C(=O)-或-C(=NR7)-替代所組成的群組；若存在，每一個R3各自獨立地包含係選自氫、氘、鹵素、C1-6烷基所組成的群組和被包含係選自氰基、氨基、羥基、鹵素、C1-6烷基和C1-6烷氧基的取代基所取代的C1-6烷基所組成的群組；R4包含係選自氫、氘、C1-6烷基、3至7元環烷基、3至7元雜環基、C1-6烷基氨基和(C1-3烷基)2氨基所組成的群組；或者R4和R5與它們所連接的原子一起形成包含1至3個包含係選自氧、氮和硫的5至7元雜環基所組成的群組，所述5至7元雜環基任選地被包含係選自氘、羥基、C1-6烷基、鹵素、C1-6烷氧基和C1-6烷基氨基的取代基所取代所組成的群組；環上有1至3個亞甲基可任意被-SO2-、-SO(=NR7)-、-SO2NH-、-CO-、-C(=O)NH-、C1-6烷基氨基或3至6元環烷基氨基替代；所述C1-6烷基氨基或者3至6元環烷基氨基，其中有0至2個亞甲基可以任意被氧、氮、硫或C1-3烷基氨基所替代；若存在，每一個R6各自獨立地包含係選自氫、氘、鹵素、氨基、C1-6烷氧基、C1-6烷基所組成的群組和被包含係選自氰基、氨基、羥基、鹵素、C1-6烷基和C1-6烷氧基的取代基所取代的C1-6烷基所組成的群組；Q1包含係選自C1-6亞烷基、-CO-、氨基、-SO-、-SO2-、-C(=NR7)-和3至7元雜環基，其中C1-6亞烷基中的0至4個亞甲基可任意被氨基、-CO-、-SO-、-SO2或-C(=NR7)-替代所組成的群組；Q2包含係選自-SO2-、SO、-SO(=NR7)-、-SO2NR7-和-CO-所組成的群組；每一個R7各自獨立地包含係選自氫、氘、C1-6烷基、氰基、3至7元環烷基、3至7元雜環基、C1-6烷氧基、C1-6烷基氨基所組成的群組和被包含係選自氰基、氨基、羥基、鹵素、C1-6烷基和C1-6烷氧基的取代基所取代的C1-6烷基、3至7元環烷基和3至7元雜環基所組成的群組；且n1、n2和n3各自為0至2的任一整數。 - 如權利要求1所述的化合物或其藥學上可接受的鹽、酯、異構體、溶劑化物、前藥或同位素標記物，其特徵在於，n1為0或1；n2為1或2；且n3優選為0或1。
- 如權利要求1或2所述的化合物或其藥學上可接受的鹽、酯、異構體、溶劑化物、前藥或同位素標記物，其特徵在於，所述環A和環B包含係選自苯基和吡啶基所組成的群組，優包含係選自苯基所組成的群組；優選地，所述環C包含係選自異噁唑、噁二唑和噻二唑所組成的群組，優包含係選自異噁唑和噁二唑所組成的群組。
- 如權利要求1至3中任一項所述的化合物或其藥學上可接受的鹽、酯、異構體、溶劑化物、前藥或同位素標記物，其特徵在於，所述式I化 合物為，其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、 Q1、Q2、n1、n2和n3如權利要求1中所定義。
- 如權利要求1至4中任一項所述的化合物或其藥學上可接受的鹽、酯、異構體、溶劑化物、前藥或同位素標記物，其特徵在於，R1包含係選自氫、氘、氰基、鹵素、以及取代或未取代的羥基、氨基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、3至7元環烷基、3至7元雜環基、胍基、脲基、醯氨基、氨基磺醯胺基、磺醯氨基和HN-C(=NH)-C1-6烷基所組成的群組；所述取代是被包含係選自C1-6烷基或3至7元環烷基的取代基所取代所組成的群組。
- 如權利要求1至5中任一項所述的化合物或其藥學上可接受的鹽、酯、異構體、溶劑化物、前藥或同位素標記物，其特徵在於，R2和R5各自獨立地為氫或氘。
- 如權利要求1至4中任一項所述的化合物或其藥學上可接受的鹽、酯、異構體、溶劑化物、前藥或同位素標記物，其特徵在於，R1和R2與它們所連接的原子一起形成包含1至3個包含係選自氧、氮和硫原子的5至6元雜芳基或雜環基，所述5至6元雜環基的環上有0或1個亞甲基可任意被-C(=O)-或-C(=NR7)-替代所組成的群組；所述5至6元雜芳基或5至6元雜環基為下列結構的任一種：
R8包含係選自氫、氘、C1-6烷基和3至7元環烷基所組成的群組。 - 如權利要求1至7中任一項所述的化合物或其藥學上可接受的鹽、酯、異構體、溶劑化物、前藥或同位素標記物，其特徵在於，R3為鹵素或鹵素取代的C1-6烷基，優選為F或CF3。
- 如權利要求1至8中任一項所述的化合物或其藥學上可接受的鹽、酯、異構體、溶劑化物、前藥或同位素標記物，其特徵在於，R4為甲基或下列結構的任一種：
- 如權利要求1至8中任一項所述的化合物或其藥學上可接受的鹽、酯、異構體、溶劑化物、前藥或同位素標記物，其特徵在於，R4和R5與它們所連接的原子一起形成包含1至3個包含係選自氧、氮和硫的5至7元雜環基，所述5至7元雜環基優選為下列結構的任一種：、
和
所組成的群組；
n4包含係選自0到2的整數所組成的群組；R9包含係選自氧和NR7所組成的群組；R10和R11各自獨立地包含係選自氫、氘、C1-6烷基、C1-6烷氧基和C1-6烷基氨基所組成的群組；或者R10和R11與它們所連接的原子一起形成3至7元環烷基或包含1或2個包含係選自氧、氮和硫的3至7元雜環基所組成的群組；R12和R13各自獨立地包含係選自氫、氘、鹵素、羥基、C1-6烷基、C1-6烷氧基和C1-6烷基氨基所組成的群組；或者R12和R13形成=O；R14包含係選自氫、氘、取代或未取代的C1-6烷基、C1-6烷氧基、3至7元環烷基和3至7元雜環基所組成的群組，所述取代是被包含係選自鹵素、羥基、氨基、C1-6烷基氨基和(C1-6烷基)2氨基的取代基所取代所組成的群組；R7如權利要求1中所定義。 - 如權利要求1至10中任一項所述的化合物或其藥學上可接受的鹽、酯、異構體、溶劑化物、前藥或同位素標記物，其特徵在於，每一個R6各自獨立地包含係選自氫、氘和氟所組成的群組。
- 如權利要求1至11中任一項所述的化合物或其藥學上可接受的鹽、酯、異構體、溶劑化物、前藥或同位素標記物，其特徵在於，Q1包含係選自C1-6亞烷基、-CO-、氨基、-SO-、-SO2-、-C(=NR7)-或為下列結構的任一種：
、
和
所組成的群組。
- 如權利要求1至9、11和12中任一項所述的化合物或其藥學上可接受的鹽、酯、異構體、溶劑化物、前藥或同位素標記物，其特徵在於，Q2包含係選自-SO2-、-SO(=NH)-、-SO(=NMe)-和-CO-所組成的群組。
- 如權利要求1至13中任一項所述的化合物或其藥學上可接受的鹽、酯、異構體、溶劑化物、前藥或同位素標記物，其特徵在於，每一個R7獨立地包含係選自氫、氘、甲基和氰基所組成的群組。
- 如權利要求10至12和14中任一項所述的化合物或其藥學上可接受的鹽、酯、異構體、溶劑化物、前藥或同位素標記物，其特徵在於，n4為0或1。
- 如權利要求10至12、14和15中任一項所述的化合物或其藥學上可接受的鹽、酯、異構體、溶劑化物、前藥或同位素標記物，其特徵在於，R9包含係選自氧和NH所組成的群組。
- 如權利要求10至12、14至16中任一項所述的化合物或其藥學上可接受的鹽、酯、異構體、溶劑化物、前藥或同位素標記物，其特徵在於，R10和R11各自獨立地選氫和甲基。
- 如權利要求10至12、14至16中任一項所述的化合物或其藥學上可接受的鹽、酯、異構體、溶劑化物、前藥或同位素標記物，其特徵在於，R10和R11與它們所連接的原子一起形成3至7元環烷基或包含1或2個包含係選自氧、氮和硫的3至7元雜環基所組成的群組；所述3至7元環烷基為環丙烷基。
- 如權利要求10至12、14至18中任一項所述的化合物或其藥學上可接受的鹽、酯、異構體、溶劑化物、前藥或同位素標記物，其特徵在於，R12和R13各自獨立地包含係選自氫、氘、甲基、氟和羥基所組成的群組。
- 如權利要求10至12、15和16中任一項所述的化合物或其藥學上可接受的鹽、酯、異構體、溶劑化物、前藥或同位素標記物，其特徵在於，R14包含係選自氫、甲基、乙基、異丙基、環丙基、羥乙基和所組 成的群組。
- 一種化合物或其藥學上可接受的鹽、酯、異構體、溶劑化物、前藥或同位素標記物，所述化合物包含係選自：
、
和
所組成的 群組。
- 一種化合物或其酯、異構體、溶劑化物、前藥或同位素標記物，所述化合物包含係選自：
所組成的群組。
- 如權利要求1至22中任一項所述的化合物或其藥學上可接受的鹽、酯、異構體、溶劑化物、前藥或同位素標記物，其特徵在於，所述同位素包含係選自2H、3H、13C、14C、15N、17O、18O、31P、32P、35S、18F和36Cl所組成的群組，優選地，所述同位素為2H。
- 一種藥物組合物，所述藥物組合物含有治療有效量的如權利要求1至23中任一項所述的式I所示的化合物或其藥學上可接受的鹽、酯、異構體、溶劑化物、前藥或同位素標記物，以及一種或多種藥學上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑。
- 如權利要求1至23中任一項所述的化合物或其藥學上可接受的鹽、酯、異構體、溶劑化物、前藥或同位素標記物，或者如權利要求24所述的藥物組合物，其在製備用於抑制ATR激酶的藥物中的應用。
- 如權利要求1至23中任一項所述的化合物或其藥學上可接受的鹽、酯、異構體、溶劑化物、前藥或同位素標記物，或者如權利要求24所述的藥物組合物，在製備用於預防和/或治療ATR激酶介導的疾病或病症的藥物中的應用。
- 如權利要求26所述的應用，其中所述的疾病或病症為過度或異常細胞增殖的疾病、障礙和病症；地，所述疾病、障礙和病症包含係選自癌症和骨髓增殖性疾病所組成的群組；更優選地，所述癌症包含係選自皮膚癌、膀胱癌、卵巢癌、乳腺癌、胃癌、前列腺癌、結直腸癌、肺癌、骨癌、腦癌、食管癌、舌癌、胃癌、腎癌、宮頸癌、子宮內膜癌、睾丸癌、泌尿癌、黑素癌、鱗狀細胞癌、膠質瘤、腦膜瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴 瘤、急性淋巴性白血病、慢性淋巴性白血病、急性骨髓性白血病、慢性粒細胞白血病、成人T細胞白血病淋巴瘤、肝癌、支氣管癌、多發性骨髓瘤、基底細胞瘤和精原細胞瘤所組成的群組；其中，所述的結直腸癌優選為結腸癌和直腸癌；所述的腎癌優選為腎實質癌；所述的膠質瘤優選為星形細胞瘤；所述的肝癌優選為肝細胞癌；所述的肺癌優選為小細胞肺癌或非小細胞肺癌；所述的肉瘤優選包含係選自橫紋肌肉瘤、軟骨肉瘤、肌肉瘤和纖維肉瘤所組成的群組。
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