TW202304490A

TW202304490A - 一種海木耳萃取物及其用途

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Publication number: TW202304490A
Application number: TW110127728A
Authority: TW
Inventors: 溫志宏; 張誌益; 陳佩津; 馮健瑋
Original assignee: 國立中山大學
Priority date: 2021-07-28
Filing date: 2021-07-28
Publication date: 2023-02-01
Also published as: CN115671147B; CN115671147A; JP7336656B2; JP2023145593A; JP2023020827A; TWI780840B

Abstract

本發明提供一種組合物用於製備提供神經保護、促進骨質生成以及治療過敏性皮膚炎之藥物的用途，其中該組合物包含一海木耳萃取物。

Description

一種海木耳萃取物及其用途

本發明係關於一種海木耳萃取物之新穎用途，尤其係關於該海木耳萃取物用於製備提供神經保護、促進骨質生成以及治療過敏性皮膚炎之藥物的用途。

海木耳主要分布在印度洋及西太平洋區域。海木耳為海洋大型異營性(heterotroph)藻類，因為微量營養素含量高，因此在日本又叫做長壽菜，在歐美稱海木耳為海洋蔬菜之首。目前，海木耳的用途多以直接食用或食品添加物。雖然食用海木耳的歷史悠久，但它的功效相關研究極少。

骨骼是組成脊椎動物內骨骼的堅硬器官，其包含礦物質化的骨骼組織、骨髓、骨膜、神經、血管和軟骨等軟組織以及少數的骨骼細胞。骨骼的缺損或缺陷可能肇因於先天性缺陷或後天引起之疾病、衰老或創傷。較小的骨缺損雖可自行癒合，但是較大的骨缺損或者較小骨骼上的骨缺損將難以完全癒合，將需要透過骨移植(包括自體骨移植、同種異體骨移植和異種骨移植)、人工骨(包括骨水泥和生物陶瓷)、組織工程骨或骨搬運技術等手術進行治療。因此，在面對各種不同成因的骨質疾病(例如骨質疏鬆症、骨缺損或骨折疾病等)時，需投予不同藥物或實施手術。

另外，隨著全球人口老化，神經退化性疾病患者的數量持續增加，導致越來越多年長者的認知、記憶、及運動能力受損。據報導，世界衛生組織預測影響運動功能的神經退化性疾病將成為未來二十年內流行病死因的第二名。因此，開發對此類疾病的治療方法成為近代生物醫學重點研究項目之一。由於多數神經退化性疾病的致病機制尚未明確，目前缺少有效治療這類疾病的方法，可用的治療僅限於症狀管理及阻止疾病進展。

而異位性皮膚炎是一種免疫及發炎高度相關的慢性疾病。異位性皮膚炎為伴隨有發癢之發炎皮膚病，並且其為慢性疾病並且其通常在嬰兒期開始。異位性皮膚炎具有不斷發癢作為主要症狀，並且具有沒有特定原因的反覆康復及惡化之性質。儘管最近對於異位性皮膚炎進行了許多研究，但是直到現在異位性皮膚炎之病因還不清楚。

而海藻所純化出來的天然化合物已經證實具有許多生物活性，例如：抗凝血、抗病毒、抗氧化、抗過敏、抗癌、抗發炎以及抗肥胖等活性。故海藻中的海木耳也極具研發之潛力，其在醫療應用上仍有許多研發的空間。

本發明是將海木耳進行乾燥後，再對其用酒精進行萃取，以得一酒精萃取物；再將該酒精萃取物浸泡於水中，使其懸浮後；再利用乙酸乙酯進行分配萃取，最後從乙酸乙酯層中獲得一海木耳乙酸乙酯萃取物EE。

在神經保護實驗中，該海木耳乙酸乙酯萃取物EE可提高被6-羥基多巴胺(6-OHDA)所傷害的SH-SY5Y神經細胞之存活率。同時，該海木耳乙酸乙酯萃取物EE對於有類帕金森氏症行為的斑馬魚可改善其游泳能力。此結果顯示該海木耳乙酸乙酯萃取物EE具有神經保護作用，並能改善神經退化性疾病的病徵。

在骨質生成的實驗中，該海木耳乙酸乙酯萃取物EE促進斑馬魚的骨節數目增加。同時，該海木耳乙酸乙酯萃取物能提高大鼠的顱骨缺損處的復原率。此結果顯示該海木耳乙酸乙酯萃取物EE能促進骨質生成，來用於治療骨缺損。

在異位性皮膚炎的實驗中，該海木耳乙酸乙酯萃取物EE能改善小鼠的異位性皮膚炎的症狀，例如紅斑、浮腫、脫皮及乾燥等病徵。同時，該海木耳乙酸乙酯萃取物EE能降低因異位性皮膚炎而上升的IgE表現量。另外，由於異位性皮膚炎會使脾臟和淋巴結腫大，但再給予該海木耳乙酸乙酯萃取物EE後，能改善脾臟和淋巴結腫大的情況。此結果顯示該海木耳乙酸乙酯萃取物EE能治療異位性皮膚炎。

本文中的用語「一」或「一種」係用以敘述本發明之元件及成分。此術語僅為了敘述方便及給予本發明之基本觀念。此敘述應被理解為包括一種或至少一種，且除非明顯地另有所指，表示單數時亦包括複數。於申請專利範圍中和「包含」一詞一起使用時，該用語「一」可意謂一個或超過一個。

本文在申請專利範圍中所使用之術語「或」意指「及/或」，除非有明確表示要僅意指另一個選擇，或除非其他的選擇互相排斥。

本發明提供一種海木耳萃取物的製備方法，其包含步驟如下：(a)用一醇類溶劑對一海木耳進行萃取，得一海木耳醇類萃取物，其中該醇類溶劑為甲醇或乙醇；以及(b)用一有機溶液或超臨界萃取對該海木耳醇類萃取物進行分配萃取，俾以形成一有機溶劑層以及一水性層，繼而收取該有機溶劑層，以得該海木耳萃取物，其中該有機溶液為一有機溶劑或是一水與有機溶劑的混合液，該機溶劑為乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸丁酯、己烷、庚烷、辛烷、壬烷、甲醚、乙醚、二氯甲烷、氯仿或四氯化碳。

於一具體實施例中，該海木耳為雙裂海木耳(Sarcodia ceylanica)。

於一具體實施例中，該醇類溶劑為乙醇。於一較佳具體實施例中，該海木耳醇類萃取物為一海木耳乙醇萃取物。

於另一具體實施例中，該有機溶劑為乙酸乙酯。於一較佳具體實施例中，該海木耳萃取物為一海木耳乙酸乙酯萃取物。

於一具體實施例中，該方法包含一步驟(a1)，於該步驟(a)前，其中該步驟(a1)包含將該海木耳進行乾燥。於一較佳具體實施例中，該海木耳於溫度20-70℃下進行乾燥。於一更佳具體實施例中，該海木耳於溫度40-60℃下進行乾燥。於另一具體實施例中，該海木耳於50℃下進行乾燥。

於一具體實施例中，該海木耳的乾燥時間為12-48小時。於一較佳具體實施例中，該海木耳的乾燥時間為16-32小時。於一較佳具體實施例中，該海木耳的乾燥時間為20-24小時。

根據本發明，該海木耳經過乾燥後，再用一定網目(mesh)孔徑大小之篩網進行過濾，而過濾後再用乙醇進行萃取。於一具體實施例中，該方法包含一步驟(a2)，於該步驟(a)前，其中該步驟(a2)包含用一30-70網目孔徑之篩網對該海木耳進行過濾。於一較佳具體實施例中，該方法包含一步驟(a2)，於該步驟(a)前，其中該步驟(a2)包含用一40-60網目孔徑之篩網對該海木耳進行過濾。於一更佳具體實施例中，該方法包含一步驟(a2)，於該步驟(a)前，其中該步驟(a2)包含用一50網目孔徑之篩網對該海木耳進行過濾。

於另一具體實施例中，該海木耳於室溫下用醇類溶劑進行萃取。於一較佳具體實施例中，在步驟(a)中，該海木耳用醇類溶劑浸泡萃取三次，而合併三次的浸泡液經過濾及減壓濃縮後，得該海木耳醇類萃取物。

於一具體實施例中，在步驟(b)中，用該有機溶液來對該海木耳醇類萃取物進行分配萃取，俾以形成一有機溶劑層以及一水性層，繼而收取該有機溶劑層，以得該海木耳萃取物。於一較佳具體實施例中，在步驟(b)中，用該有機溶液來對該海木耳醇類萃取物進行分配萃取，且分配萃取操作重複進行三次，俾以形成一有機溶劑層以及一水性層，繼而收取該有機溶劑層，以得該海木耳萃取物。

於另一具體實施例中，該步驟(b)進一步包含一步驟(b1)，於有機溶液萃取前，其中該步驟(b1)包含將該海木耳醇類萃取物浸泡於水中，得一海木耳水性溶液。於一較佳具體實施例中，該步驟(b1)包含將該海木耳醇類萃取物浸泡於水，以使該海木耳醇類萃取物懸浮於水中。當執行步驟(b1)後，在原先步驟(b)中，就會用該有機溶劑來對步驟(b1)所得到的海木耳水性溶液進行分配萃取，而不需要用該水與有機溶劑的混合液，俾以形成一有機溶劑層以及一水性層，繼而收取該有機溶劑層，以得該海木耳萃取物。於另一具體實施例中，在步驟(b)中，用該有機溶劑來對步驟(b1)所得到的海木耳水性溶液進行分配萃取，俾以形成一有機溶劑層以及一水性層，繼而收取該有機溶劑層，以得該海木耳萃取物。於一較佳具體實施例中，在步驟(b)中，用該有機溶劑來對步驟(b1)所得到的海木耳水性溶液進行分配萃取，且分配萃取操作重複進行三次，俾以形成一有機溶劑層以及一水性層，繼而收取該有機溶劑層，以得該海木耳萃取物。

當執行步驟(b1)後，在原先步驟(b)中，就會用該超臨界萃取來對步驟(b1)所得到的海木耳水性溶液進行分配萃取。於一具體實施例中，在步驟(b)中，用該超臨界萃取來對步驟(b1)所得到的海木耳水性溶液進行分配萃取，俾以形成一有機溶劑層以及一水性層，繼而收取該有機溶劑層，以得該海木耳萃取物。於另一具體實施例中，該超臨界萃取為CO₂超臨界萃取。根據本發明，CO₂超臨界萃取分離天然物營養成分之製程，主要係利用超臨界狀態之二氧化碳流體於高壓、低溫條件下自天然物萃取出營養成分。於一具體實施例中，該CO₂超臨界萃取條件為CO₂：99%乙醇溶液之流速比=10mL/min：1mL/min；臨界壓力範圍為150-400巴(bar)；以及臨界溫度範圍為20-60℃。於一較佳具體實施例中，該CO₂超臨界萃取條件為CO₂：95%乙醇溶液之流速比=10mL/min：1mL/min；臨界壓力為250巴(bar)；以及臨界溫度為40℃。由於經過CO₂超臨界萃取後，同樣會分成留在CO₂超臨界萃取反應槽裡的原料(水性層)跟萃取出來的物質(有機溶劑層)，收取該有機溶劑層，以得該海木耳萃取物。於另一具體實施例中，在步驟(b)中，對該海木耳醇類萃取物用CO₂超臨界萃取，以得該海木耳萃取物。

於另一具體實施例中，該海木耳萃取物的成分包含膽固醇(cholesterol)、硬脂酸(stearic acid)、硬脂酸甲酯(methyl stearate)、甘油硬脂酸酯(glyceryl stearate)、(2S)-1-O-棕櫚醯基-3-O-β-D-吡喃半乳糖甘油((2S)-1-O-palmitoyl-3-O-β-D-galactopyranosylglycerol)、(2S)1,2-雙-O-油醯基-3-O-β-D-吡喃半乳糖甘油((2S)1,2-di-O-oleoyl-3-O-β-D-galactopyranosylglycerol)、13²-羥基-(13²S)-脫鎂葉綠素a(13²-Hydroxy-(13²S)-phaeophytin a)和13²-羥基-(13²R)-脫鎂葉綠素a(13²-Hydroxy-(13²R)-phaeophytin a)。於一具體實施例中，該海木耳萃取物的成分不包含多醣。

本發明另提供一種組合物用於製備提供神經保護的藥物之用途，其中該組合物包含一海木耳萃取物，其中該海木耳萃取物的製備方法包含步驟如下：(a)用一醇類溶劑對一海木耳進行萃取，得一海木耳醇類萃取物，其中該醇類溶劑為甲醇或乙醇。

於一具體實施例中，該步驟(a)之該海木耳係經清洗、乾燥及/或粉碎處理。

於另一具體實施例中，該海木耳萃取物的製備方法進一步包含一步驟(b)，其在步驟(a)之後，包含用一有機溶液或超臨界萃取對該海木耳醇類萃取物進行分配萃取，俾以形成一有機溶劑層以及一水性層，繼而收取該有機溶劑層，以得該海木耳萃取物，其中該有機溶液為一有機溶劑或是一水與有機溶劑的混合液，該機溶劑為乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸丁酯、己烷、庚烷、辛烷、壬烷、甲醚、乙醚、二氯甲烷、氯仿或四氯化碳。

於一具體實施例中，該海木耳萃取物的製備方法進一步包含一步驟(b1)，於該有機溶液萃取前，其中該步驟(b1)包含將該海木耳醇類萃取物浸泡於水中，得一海木耳水性溶液。於一較佳具體實施例中，在步驟(b)中，用該有機溶劑來對步驟(b1)所得到的海木耳水性溶液進行分配萃取，俾以形成一有機溶劑層以及一水性層，繼而收取該有機溶劑層，以得該海木耳萃取物。

於另一具體實施例中，該海木耳為雙裂海木耳(Sarcodia ceylanica)。

根據本發明，該海木耳萃取物可用於提供神經保護作用，即意指預防或減少神經細胞(包括神經元和神經膠細胞)死亡或損傷的能力，或是挽救神經細胞或使神經細胞復甦或復原的能力，例如在大腦、中樞神經系統或周邊神經系統之病理或有害的條件下。神經保護作用包括神經細胞的再生，即疾病或外傷後一群神經細胞的再生長。神經保護作用係在神經系統中用來防止於急性疾病(如腦中風、腦部或神經系統損傷/創傷、腦缺氧、脊髓損傷或周邊神經損傷)後或慢性神經退化性疾病(如帕金森氏症、阿茲海默症或多發性硬化症)所引起的大腦/神經元損傷或退化的機制及策略。神經保護作用的目標在於限制神經系統損傷後的神經功能障礙/死亡並試圖在大腦中保持盡可能高度完整的細胞相互作用以使神經功能不受干擾。藉由提供神經保護作用，該海木耳萃取物可用來治療神經元損傷(如腦中風，尤其是缺血性中風、腦損傷、腦缺氧、脊髓損傷或周邊神經損傷)及治療或預防神經退化性疾病。因此，在一具體實施例中，本發明係關於使用該海木耳萃取物作為製備用於神經細胞保護及/或再生之藥物中的活性成分。

於一具體實施例中，該神經保護包含抑制或預防神經細胞凋亡。於一較佳具體實施例中，該海木耳萃取物能抑制或預防神經細胞凋亡。

因此，本發明發現該海木耳萃取物在提供神經保護作用上有一些有益的作用和功能，使得該海木耳萃取物可以用來治療神經元或腦損傷以及治療或預防神經退化性疾病，其中該神經退化性疾病包括急性或慢性神經退化性疾病。

本文中所使用之術語「神經退化性疾病」也用來描述一種由中樞神經系統的損害所引起之急性、漸進性或慢性疾病，且該損害根據本發明可透過該海木耳萃取物的治療來減少及/或減輕。術語「急性神經退化性疾病」意指突然發生的疾病或病症，其導致相關的神經元死亡或損傷。作為示例的急性神經退化性疾病包括腦血管供血不足(cerebrovascular insufficiency)、局灶性或瀰漫性腦外傷、脊髓損傷、大腦缺血或梗塞(包括栓塞性阻塞(emolic occlusion)及血栓性阻塞(thrombotic occlusion)、週產期之缺氧缺血腦病變(perinatal hypoxic-ischemia)、新生兒缺氧缺血性腦病(neonatal hypoxia-ischaemic encephalopathy)、新生兒周產期窒息(perinatal asphyxia)、心臟驟停(cardiac arrest)、顱內出血(intracranial hemorrhage)、蜘蛛膜下腔出血(subarachnoid hemorrhage)、中風及創傷性腦損傷(traumatic brain injury)。

另外，可利用本發明的該海木耳萃取物所治療的神經退化性疾病範例包括但不限於肌肉萎縮性脊髓側索硬化症、帕金森氏症、阿茲海默症、亨汀頓氏舞蹈症、額顳葉失智症、脊髓小腦萎縮症、第三型小腦脊髓幹運動失調症候群(Machado-Joseph disease，MJD)、齒狀紅核蒼白球肌萎縮症(dentatorubral pallidoluysian atrophy，DRPLA)、脊髓延髓性肌肉萎縮症(spinal and bulbar muscular atrophy，SBMA)或X染色體脆折症運動失調症候群(fragile X-associated tremor and ataxia syndrome，FXTAS)。

於一具體實施例中，該海木耳萃取物提供神經保護作用以預防或治療神經退化性疾病。於一較佳具體實施例中，該神經退化性疾病包含肌肉萎縮性脊髓側索硬化症、帕金森氏症、阿茲海默症、亨汀頓氏舞蹈症、額顳葉失智症、脊髓小腦萎縮症、第三型小腦脊髓幹運動失調症候群、齒狀紅核蒼白球肌萎縮症、脊髓延髓性肌肉萎縮症或X染色體脆折症運動失調症候群。於一更佳具體實施例中，該神經退化性疾病包含帕金森氏症。

如本文所使用的，術語「治療」是指緩解症狀或併發症；延緩疾病、病症或病情的進展；減輕或緩解症狀和併發症；及/或治癒或消除疾病、病症或病情。

如本文中所使用，術語「預防」係指預防疾病或病症或其一或多種症狀之發作、復發或擴散。在某些實施例中，該等術語係指在症狀發作之前，在有或沒有一或多種其他額外活性劑之情形中，利用本文所提供之藥物治療特定而言處於本文所提供之疾病或病症之風險之個體，或向其施予本文所提供之藥物。

本發明進一步提供一種組合物用於製備預防或治療神經退化性疾病的藥物之用途，其中該組合物包含一海木耳萃取物，其中該海木耳萃取物的製備方法包含步驟如下：(a)用一醇類溶劑對一海木耳進行萃取，得一海木耳醇類萃取物，其中該醇類溶劑為甲醇或乙醇。

於一具體實施例中，該海木耳萃取物的製備方法進一步包含一步驟(b1)，於該有機溶液萃取前，其中該步驟(b1)包含將該海木耳醇類萃取物浸泡於水中，得一海木耳水性溶液。於一較佳具體實施例中，在步驟(b)中，用該有機溶劑來對步驟(b1)所得到的海木耳水性溶液進行分配萃取，俾以形成一有機溶劑層以及一水性層，繼而收取該有機溶劑層，以得該海木耳萃取物。。

於另一具體實施例中，該海木耳為雙裂海木耳(Sarcodia ceylanica)。

於一具體實施例中，該神經退化性疾病包含肌肉萎縮性脊髓側索硬化症、帕金森氏症、阿茲海默症、亨汀頓氏舞蹈症、額顳葉失智症、脊髓小腦萎縮症、第三型小腦脊髓幹運動失調症候群、齒狀紅核蒼白球肌萎縮症、脊髓延髓性肌肉萎縮症或X染色體脆折症運動失調症候群。於一較佳具體實施例中，該神經退化性疾病包含帕金森氏症。

本發明另提供一種組合物用於製備促進骨質生成的藥物之用途，其中該組合物包含一海木耳萃取物，其中該海木耳萃取物的製備方法包含步驟如下：(a)用一醇類溶劑對一海木耳進行萃取，得一海木耳醇類萃取物，其中該醇類溶劑為甲醇或乙醇。

如本文所使用，術語「骨質生成」是指自未分化的幹細胞和成骨細胞系增殖為成骨細胞和骨組織(例如，新骨基質的合成與積存)。成骨也指祖細胞(progenitor)或前體細胞(precursor cell)分化或轉分化為骨細胞(即，成骨細胞)。祖細胞或前體細胞可以是多能幹細胞，包括，例如，間質幹細胞。祖細胞或前體細胞可為預定形成骨細胞系的細胞(例如，預成骨細胞(pre-osteoblast cells))或未預定形成成骨細胞系的細胞(例如，前脂肪細胞或成肌細胞(myoblast))。

因此，本發明的該海木耳萃取物可用於治療骨疾病。該骨疾病包括但不限於骨質疏鬆、骨缺損或骨折疾病。骨質疏鬆是一種疾病，特徵是每單位體積的骨質量淨流失。此種骨質量流失及所導致的骨折的後果是骨架的破壞，以提供身體足夠的結構支撐，低骨量和骨組織的結構退化導致骨脆性和增加髖關節、脊椎和手腕的骨折。骨質疏鬆依照發生原因分為原發性骨質疏鬆症及續發性骨質疏鬆症。在原發性骨質疏鬆症的分子機制中，成骨細胞的細胞核因子κB(kappa B)配位體的接受器活化素(RANKL)和蝕骨細胞表面上的細胞核因子κB的接受器活化素(RANK)結合而活化蝕骨細胞，刺激蝕骨細胞的分化及活性，促進骨質疏鬆症的發生。此外，停經婦女體內雌激素急遽減少，也促進蝕骨細胞的活性，易造成骨質疏鬆症及骨折。續發性骨質疏鬆症則是由於長期服用藥物、生活習慣不良、內分泌失調及其他疾病(例如類風濕性關節炎、糖尿病、中風、帕金森氏症及癌症骨轉移)所引起。另外，骨缺損是指骨形成對骨吸收的比例失衡，如此，個體會呈現低於期待的骨骼，或個體的骨骼會比預期的較不完整。骨缺損也可由骨折、從手術介入或從牙齒或牙周疾病而導致。骨癒合包括但不限於修復骨缺損，如骨缺損發生於：例如，封閉、開放和未癒合性骨折。

於一具體實施例中，該海木耳萃取物促進骨質生成以預防或治療骨疾病。於一較佳具體實施例中，該骨疾病包含骨質疏鬆、骨缺損或骨折疾病。於一更佳具體實施例中，該骨疾病包含骨缺損。

本發明進一步提供一種組合物用於製備預防或治療骨疾病的藥物之用途，其中該組合物包含一海木耳萃取物，其中該海木耳萃取物的製備方法包含步驟如下：(a)用一醇類溶劑對一海木耳進行萃取，得一海木耳醇類萃取物，其中該醇類溶劑為甲醇或乙醇。

根據本發明，該海木耳萃取物能增加骨質量或促進骨生長及修復來治療骨疾病。於一具體實施例中，該骨疾病包含骨質疏鬆、骨缺損或骨折疾病。於一較佳具體實施例中，該骨疾病包含骨缺損。

本發明另提供一種組合物用於製備治療過敏性皮膚炎的藥物之用途，其中該組合物包含一海木耳萃取物，其中該海木耳萃取物的製備方法包含步驟如下：(a)用一醇類溶劑對一海木耳進行萃取，得一海木耳醇類萃取物，其中該醇類溶劑為甲醇或乙醇。

如本文所使用，術語「過敏性皮膚炎」係指以過敏反應為要因的皮膚疾病的總稱，慢性的發癢及臉、頸、肘及/或膝之發疹為特徵。就過敏性皮膚炎而言，可列舉例如，接觸性皮膚炎、異位性皮膚炎等。「接觸性皮膚炎」係指由於外來性之抗原與皮膚接觸所致的發病的濕疹性之炎症性疾病，可列舉例如，過敏性接觸皮膚炎、光接觸皮膚炎、全身性接觸皮膚炎和接觸蕁麻疹。又，就抗原而言，可列舉例如，金屬過敏原(鈷、鎳等)、植物過敏原(漆樹、櫻草等)和食物過敏原(芒果、銀杏等)。「異位性皮膚炎(atopic dermatitis，AD)」係指許多患者具有異位性傾向的皮膚疾病。重複地惡化、緩解之左右對稱的全身性濕疹為特徵，可列舉例如，瀰漫性神經皮膚炎、異位性濕疹、異位性神經皮膚炎、貝尼耶癢疹(Besnier prurigo)、急性嬰兒濕疹、屈曲部濕疹、四肢兒童濕疹、兒童異位性濕疹、兒童乾燥型濕疹、兒童濕疹、成人異位性皮膚炎、內因性濕疹、兒童皮膚炎和慢性兒童濕疹。

於一具體實施例中，該過敏性皮膚炎包含一接觸性皮膚炎或一異位性皮膚炎。於一較佳具體實施例中，該過敏性皮膚炎包含一異位性皮膚炎。於一更佳具體實施例中，該異位性皮膚炎包含瀰漫性神經皮膚炎、異位性濕疹、異位性神經皮膚炎、貝尼耶癢疹、急性嬰兒濕疹、屈曲部濕疹、四肢兒童濕疹、兒童異位性濕疹、兒童乾燥型濕疹、兒童濕疹、成人異位性皮膚炎、內因性濕疹、兒童皮膚炎或慢性兒童濕疹。

於另一具體實施例中，該藥物抑制異位性皮膚炎的病徵，其包含紅斑、浮腫、脫皮或皮膚乾燥。

於一具體實施例中，該藥物降低因該異位性皮膚炎所造成IgE表現量上升的情況。

於另一具體實施例中，該藥物改善因該異位性皮膚炎所造成脾臟或淋巴結腫大的情況。

於一具體實施例中，該藥物進一步包含一醫藥上可接受的載體(pharmaceutically acceptable carrier)。如本文所使用，術語「醫藥上可接受的載體」為透過特定組合施用及特定方法施用組合物所決定。如本文所用「載體」一詞包含但不局限任何及所有溶劑、分散介質、載具、包衣、稀釋劑、抗細菌和抗真菌劑等滲透和吸收延遲劑、緩衝劑、載體溶液、懸浮液或膠體等。用於藥物活性物質的這些介質和試劑在本領域中是公知的。除非任何常規介質或試劑與活性成分不相容，其用於治療的組合就需要被考慮。補充的活性成分也可摻入組合物中。術語「醫藥上可接受的」係指分子實體和組合物施用於受試者時不產生過敏或類似的不良反應。以蛋白質作為活性物質的水組合物製備在本領域中是習知的。通常，此組合物被製備為液體溶液、錠劑、膠囊或懸浮液注射劑；亦可製備為可用於注射劑之可溶解或懸浮液之固體形式。於另一具體實施例中，該醫藥上可接受的載體包含一皮膚學上可容許之介質。「皮膚學上可容許之介質」係指在生物學上適切的物質，如鹽類、酯類及/或醯胺類之成份。也就是說這物質，其與所選擇之有效成份一起用時，在個體投與時不會引起不期望之生物學作用。另外，與含其之藥劑組成份中之任何成份都不會發生有害之交互作用之物質。同樣地，文中的「皮膚學上可容許的鹽」，或「皮膚學上可容許的酯」為在生物學上適切之鹽或酯。

根據本發明，該組合物(包含該海木耳萃取物)及醫藥上可接受的載體的配製可能經由無菌的水溶液或分散體、水懸浮液、油乳化液、油包乳化液中的水、特定點的乳化液、長停留乳化液、黏性乳化液、微乳液、奈米乳液、微脂粒、微粒、微球、奈米球、奈米顆粒、微汞及數種可持續釋放的天然或合成聚合物。醫藥上可接受的載體及該海木耳萃取物也可配置成氣霧劑、片劑、丸劑、膠囊、無菌粉末、栓劑、洗劑、霜劑、軟膏劑、糊劑、凝膠、水凝膠，或其他可用於組合物輸送的製劑。

另外，本發明所稱之組合物包含施予於局部和區域作用的組合物。本文所用的術語「局部」涉及使用本文所述的組合物摻入合適的藥用載體中且施塗在皮膚的部位，例如過敏性皮膚炎的患部，以實施局部作用。因此，此類局部用該組合物包含其中透過與待處理皮膚表面直接接觸來自外部施塗之化合物的那些藥物形式。用於此目的的常規藥物形式包含軟膏劑、抹劑、乳膏、洗髮劑、乳液、糊劑、凝膠、噴劑、氣溶膠等，並且可以根據待治療的身體部位以貼片或浸潰敷料形式施用。術語「軟膏劑」包含具有油性基質、水溶性基質和乳液型基質的製劑(包含乳膏)，所述基質如凡士林、羊毛脂、聚乙二醇類以及這些組合的混合物。

本發明的藥物可進一步包含一醫藥上可接受的載體，在本發明相關領域下習知的治療方式中可透過許多不同途徑施予於一個體。在一些實施例中，該組合物(包含該海木耳萃取物)及醫藥上可接受的載體會經由外用、靜脈、肌肉、皮下、局部、口服或吸入施予。該藥物將會透過消化及循環系統被傳遞到目標處。

於另一具體實施例中，該個體為動物，較佳為哺乳類，更佳為人類。

本文中「有效劑量」一詞為一治療劑量可在特定條件下可預防、降低、阻止或逆轉一個體的一症狀的發展，或部分、完全舒緩該個體開始接受治療時於特別情況下已存在的症狀。本領域中之熟習技藝人士亦可輕易地測定在施予該海木耳萃取物至一個體時適當的劑量用法。例如，該海木耳萃取物可投予至該個體一次或兩次。當一劑量用法包含多次施予時，可瞭解到投予至該個體的該海木耳萃取物的有效劑量可包含全部劑量用法期間投予的產物總量。

因此，本發明的該海木耳萃取物用於神經保護、促進骨質生成以及治療過敏性皮膚炎的有效劑量都會有所不同。

在提供神經保護方面，於一具體實施例中，該海木耳萃取物的有效劑量範圍為0.2mg/公斤體重至200mg/公斤體重。於一較佳具體實施例中，該海木耳萃取物的有效劑量範圍為1mg/公斤體重至100mg/公斤體重。於一更佳具體實施例中，該海木耳萃取物的有效劑量範圍為2mg/公斤體重至20mg/公斤體重。

關於神經保護的有效劑量，於另一具體實施例中，該海木耳萃取物的有效劑量範圍為0.5ng/ml至50μg/ml。於一較佳具體實施例中，該海木耳萃取物的有效劑量範圍為1ng/ml至5μg/ml。於一更佳具體實施例中，該海木耳萃取物的有效劑量範圍為5ng/ml至500ng/ml。

在促進骨質生成方面，於一具體實施例中，該海木耳萃取物的有效劑量範圍為0.2毫克/公斤體重至100毫克/公斤體重。於一較佳具體實施例中，該海木耳萃取物的有效劑量範圍為1毫克/公斤體重至50毫克/公斤體重。於一更佳具體實施例中，該海木耳萃取物的有效劑量範圍為2毫克/公斤體重至10毫克/公斤體重。

在治療過敏性皮膚炎方面，於一具體實施例中，該海木耳萃取物的有效劑量範圍為0.05至20mg/ml。於一較佳具體實施例中，該海木耳萃取物的有效劑量範圍為0.1至10mg/ml。於一更佳具體實施例中，該海木耳萃取物的有效劑量範圍為0.5至2mg/ml。

圖1為海木耳的萃取流程圖。

圖2為海木耳乙酸乙酯萃取物EE對神經細胞的保護作用。以6-羥基多巴胺(6-OHDA)傷害SH-SY5Y神經細胞後，加入不同濃度的海木耳乙酸乙酯萃取物EE，測量其細胞存活率，以觀察神經保護之效果。海木耳乙酸乙酯萃取物EE在濃度0.5-500ng/ml下，均提高各組的細胞存活率，證明海木耳乙酸乙酯萃取物EE具有神經保護之效果。各組別與6-OHDA組別進行統計分析，達到顯著性差異者(P<0.05)，以*表示。

圖3為海木耳乙酸乙酯萃取物EE對活體神經的保護作用。圖3A顯示各組斑馬魚在單位時間內游動的路徑。圖3B顯示斑馬魚游動速率，控制組速率為2.47±0.26mm/s，6-OHDA組速率下降至0.21±0.11mm/s，加入濃度0.5及5μg/ml的海木耳乙酸乙酯萃取物EE，斑馬魚游動速率回升至2.03±0.65及1.24±0.28mm/s。圖3C顯示斑馬魚單位時間內游動的總距離，控制組游動距離為741.09±77.04mm，6-OHDA組游動距離下降至63.00±32.19mm，加入濃度0.5及5μg/ml的海木耳乙酸乙酯萃取物EE，斑馬魚游動距離回升至609.03±196.17及371.52±82.77mm。

圖4為海木耳乙酸乙酯萃取物EE對骨質生成的影響。圖4A為控制組，圖4B至圖4E分別為給予不同劑量的海木耳乙酸乙酯萃取物EE(0.05-50μg/ml)的組別。圖4F則為各組斑馬魚的硬骨節數的定量統計結果。各組斑馬魚在受精後第7天計算硬骨節數，加入海木耳乙酸乙酯萃取物EE 0.5μg/ml，有顯著增加骨節發育之情形，且海木耳乙酸乙酯萃取物未引起斑馬魚發育異常的情形，初步顯示海木耳乙酸乙酯萃取物沒有胚胎發育毒性。*：P<0.05，與控制組比較。

圖5為不同濃度的海木耳乙酸乙酯萃取物EE對大鼠頭顱缺損的療效之頭顱外觀比較圖。

圖6為以X光機所拍攝出來之海木耳乙酸乙酯萃取物EE對大鼠顱骨缺損的療效之比較圖。圖6A顯示各組別的大鼠顱骨缺損情況的X光圖。圖6B顯示各組別的大鼠顱骨的復原率。

圖7為海木耳乙酸乙酯萃取物EE對患有異位性皮膚炎之小鼠的皮膚外觀的影響。圖7A顯示利用DNCB誘發異位性皮膚炎，待小鼠皮膚顯現異位性皮膚炎症狀後，開始每日塗抹藥物；分別在治療的第1、7、12天拍攝DNCB誘發異位性皮膚炎小鼠之皮膚外觀，比例尺=1cm。結果顯示相較於AD組，EEL組(低劑量組)及EEH(高劑量組)組均具有減緩異位性皮膚炎症狀之功效，表皮的浮腫、發紅、乾燥及結痂等現象均獲得紓解。圖7B顯示海木耳乙酸乙酯萃取物EE舒緩AD症狀之臨床皮膚炎評分。以臨床皮膚炎評分評估EE舒緩AD症狀。利用四個皮膚表面症狀來評估皮膚炎的嚴重性：紅斑/出血、浮腫、脫皮/糜爛、乾燥。依據每種症狀的嚴重程度個別給予0-3分，分數越多越嚴重。皮膚炎總分為上述4種分數之總和，最高分數為12。分數越高及代表皮膚炎的嚴重程度越嚴重。數據呈現平均值±平均值標準誤差(mean±SEM)。與AD組相較達到顯著性差異者(P<0.05)，以*表示；與ADV組相較達到顯著性差異者，以#表示。

圖8為海木耳乙酸乙酯萃取物EE對血清中IgE的影響。動物犧牲前採集血液，檢測血清中IgE。DNCB誘發AD造成IgE上升，塗抹海木耳乙酸乙酯萃取物EE後，IgE均下降。數據呈現平均值±平均值標準誤差(mean±SEM)。與AD組相較達到顯著性差異者(P<0.05)，以*表示；與ADV組相較達到顯著性差異者，以#表示。

圖9為海木耳乙酸乙酯萃取物EE對因DNCB誘發而腫大的脾臟重量的影響。動物犧牲時採集脾臟組織，拍照並秤重。DNCB誘發異位性皮膚炎造成脾臟組織腫大，塗抹海木耳乙酸乙酯萃取物EE後，脾臟重量均下降。比例尺=1cm。數據呈現平均值±平均值標準誤差(mean±SEM)。與AD組相較達到顯著性差異者(P<0.05)，以*表示；與ADV組相較達顯著性差異者，以#表示。

圖10為海木耳乙酸乙酯萃取物EE對因DNCB誘發而腫大的淋巴結重量的影響。動物犧牲時採集淋巴結組織，拍照並秤重。DNCB誘發異位性皮膚炎造成淋巴結組織腫大，塗抹海木耳萃取物EE後，淋巴結重量均下降。比例尺=0.5cm。數據呈現平均值±平均值標準誤差 (mean±SEM)。與AD組相較達到顯著性差異者(P<0.05)，以*表示；與ADV組相較達到顯著性差異者，以#表示。

本發明包括但不限於上述與下開之說明。實施方法則如下範例所示。

養殖型海木耳之萃取

本發明使用的是人工養殖之雙裂海木耳(Sarcodia ceylanica)。

將海木耳在50℃的條件下烘乾24小時，獲得乾燥海木耳。將10.8kg乾燥海木耳粉碎，經50網目(mesh)篩網過濾，並於室溫下以95%酒精溶液浸泡萃取三次，合併三次的浸泡液經過濾及減壓濃縮後，可獲得370.5g海木耳酒精粗萃物。將上述海木耳粗萃物加入1L的水，使呈懸浮狀，再加入1L乙酸乙酯進行分配萃取，重複上述分配萃取三次，俾以形成一乙酸乙酯層以及一水性層，繼而收取該乙酸乙酯層，以獲得乙酸乙酯萃取物EE(83.2g)。整個海木耳的萃取流程如圖1所示。

另外，上述萃取步驟中，該酒精溶液可用甲醇溶液進行替換。同時，用乙酸乙酯進行萃取的步驟可改用其他有機溶劑進行替換，例如使用乙酸丙酯、乙酸丁酯、己烷、庚烷、辛烷、壬烷、甲醚、乙醚、二氯甲烷、氯仿或四氯化碳溶劑進行分配萃取或超臨界萃取(如CO₂超臨界萃取)，都可以得到與EE相同成分之萃取物。

另外，水可與乙酸乙酯或其他有機溶劑混合成一有機溶液，來直接對該海木耳酒精粗萃物進行萃取，故無需將水和有機溶劑分開成兩個步驟分別進行萃取。此外，也可將該海木耳酒精粗萃物直接用乙酸乙酯或其他有機溶劑進行萃取，無須先浸泡於水此一步驟。上述步驟的變動最終都可以得到與EE相同成分之萃取物。

上述CO₂超臨界萃取條件為CO₂：95%乙醇溶液之流速比=10mL/min：1mL/min；臨界壓力為250巴(bar)；以及臨界溫度為40℃。

同時，本發明使用酚-硫酸法測量EE的多醣含量，結果顯示EE不含多醣成分。因此，先以酒精浸泡海木耳的萃取方法，多醣成份不會溶出，故海木耳酒精粗萃物就無多醣成分。另外，本發明也對海木耳乙酸乙酯萃取物EE進行成分分析，該分析結果如表1所示。

表1、海木耳乙酸乙酯萃取物EE的成分分析

實驗方法

(1)評估EE的神經保護作用

(a)神經細胞測試

將SH-SY5Y細胞以2×10⁴個細胞的密度培養於96孔細胞培養盤中，置入細胞培養箱中培養，待細胞完全貼附後，以各種不同濃度的海木耳乙酸乙酯萃取物EE的溶液預先處理1小時，而後加入6-羥基多巴胺(6-Hydroxydopamine，6-OHDA)處理15小時，加入10%的阿爾瑪藍(alamar blue)，繼續培養3小時，然後用酵素免疫分析儀測量吸光值，測量細胞存活率。以6-OHDA對神經細胞所產生的毒性，藉以分析海木耳萃取液是否對6-OHDA處理過的神經細胞具有保護作用。

(b)活體神經測試

將6-OHDA溶於2%新鮮的L-抗壞血酸(L-Ascorbic acid)，配製成500mM的原液放入1.5mL棕色微量離心管，並分裝成10μl一管備用。欲加藥時，將配置好的藥品依實驗設計之濃度溶於同比例的漢克緩衝液(Hank’s buffer)，並在24孔培養盤中加入前述1mL藥物和1mL含稚魚的漢克緩衝液。稚魚給予6-OHDA的時間從受精後48小時到120小時。除了控制組別完全不加入任何藥品，每次實驗均有溶劑組做對照用。透過分析斑馬魚之行動能力測試得到魚體在不同水層停留時間、游行速度和游動距離等參數，以評估海木耳萃取液之治療效果。

(2)評估EE對骨質形成的影響

(a)斑馬魚的骨頭生長測試

利用活體系統測試海木耳萃取液的溶液對於骨質再生之促進作用。分析海木耳萃取液對於骨頭與骨質上的相關疾病(如：骨質疏鬆等)的效果。利用鈣黃綠素(Calcein)螢光染劑針對骨頭中的硬骨部分做作專一性染色方式，結合斑馬魚胚胎發育模式，分析活性物質對於骨頭生長上的作用，並使用分析軟體以數據化方呈現物質對骨頭生長的作用。取受精後48小時的斑馬魚稚魚，加入不同濃度的海木耳萃取液，每日觀察魚體之脊椎關節，觀察後繼續飼養。將斑馬魚以2g/L鈣黃綠素溶液(pH=7.8)染色10分鐘後，以清水潤洗，洗去多餘的染劑。再以MS-222麻醉，置於1%甲基纖維(Methyl Cellulose)固定魚體，利用螢光顯微鏡下檢視魚體的脊椎骨骼，並將骨骼的節數加以統計分析。

(b)大鼠顱骨缺損實驗

顱骨缺損手術：

一個小範圍的骨缺損在生物體內是可以自然再生的，但是當缺損大小超過生物體所能修復的大小，無法自行痊癒即所謂臨界骨缺損(critical sized bone defect)，需靠外加的治療才可能癒合。不同動物模型及不同部位都影響所需建立的缺損大小。本發明使用之大鼠顱骨缺損模式，首先利用氣體麻醉劑異氟醚(isoflourane)進行動物麻醉。對大鼠的頭頂剃毛後用優碘和70%酒精消毒手術區域，再注射安比西林(ampicillin)。接著用已滅菌的擦手紙剪一個洞覆蓋在大鼠頭上，只露出手術區域。於大鼠頭的正上方，切開皮膚和骨膜約1.5公分大小。利用骨膜剝離器分開頭骨和骨膜。頭蓋骨上正中央有一條隆起，是為中軸矢狀縫，兩側為頂骨，以此矢狀縫為中心在正中央以直徑4毫米骨環鑽鋸頭製造二個直徑4毫米之骨缺損。接著以5-0羊腸線縫合骨膜後再用4-0尼龍線縫合皮膚。手術中動物如果有從麻醉狀態中甦醒情形，則以氣體麻醉機經由呼吸面罩讓動物吸入麻醉氣體維持麻醉。在大鼠麻醉的狀況下，每週分3次餵食EE，劑量為1.5及7.5mg/kg/週。餵食4週後，進行犧牲，以取得顱骨組織。

大鼠頭顱癒合情況的評估方式如下：經由X光機(X-OMAT V；Kodak,Rochester,NY)照相，底片經過自動洗片機顯像。影像經由掃瞄轉成TIF圖檔，再將影像轉入ImagQuant軟體(ImageQuant Version 5.2 Copyright^© 1999,Molecular Dynamics)，以利後續分析處理。在ImagQuant軟體中選取每一階階梯楔(step wedge)以及空白處相等面積的區域，代表X光片上影像的灰階強度及楔型階梯厚度之間的相關性。再選取頭蓋骨區域直徑8毫米的圓形區域，以及兩側頂骨中央平坦的區域面積1 x 1毫米平方，測量出灰階強度，代入上述方程式中，以內插法的方式，計算出樣本骨密度相對於楔型階梯的厚度。也就是將頭蓋骨骨缺損區域的骨密度，定義成楔型階梯不同厚度所投射出的灰階影像密度。

(3)評估EE對異位性皮膚炎的影響

本發明使用的實驗動物為BALB/c品系小鼠。將小鼠以2.5%異氟醚(isoflurane)麻醉，使用剃毛刀及除毛膏將小鼠背部的毛剃除，以直徑1公分的矽膠圈做記號(面積大小為78.5mm²)，兩天一次在此範圍內滴入26μL的2%用2,4-二硝基氯苯(2,4-dinitirochlorobenzene，DNCB)(Sigma-Aldrich Co.,MO,USA；Cat.No.#138630)，總共8次，以誘發皮膚病變產生。

在DNCB誘發第7天後，每天塗抹100μL媒液(Vehicle)、海木耳萃取物EE或治療異位性皮膚炎的藥物克立硼羅(crisaborole)。實驗動物分組如下(每組3隻)：(1)控制組：未誘發；(2)AD組：只給予2% DNCB；(3)ADV組：給予2% DNCB和媒液(Vehicle)；(4)EEL組：DNCB誘發後，給予50μg EE/100μL 1%甲基纖維；(5)EEH組：DNCB誘發後，給予200μg EE/100μL 1%甲基纖維；以及(6)Cri組：DNCB誘發後，給予25μg克立硼羅/100μL 1%丙酮醇(acetone-EtOH)。塗抹DNCB後5分鐘，待DNCB乾燥後，再進行抹藥。誘發或抹藥前，以數位相機拍照紀錄皮膚病徵的變化。

於第18天犧牲動物，採血並收集其背部皮膚、脾臟及淋巴結組織。觀察脾臟及胯下淋巴結(Subiliac lymph node)大小，並秤重比較。利用四個皮膚表面症狀來評估臨床皮膚炎的嚴重性：紅斑/出血(erythema/hemorrhage)、浮腫(edema)、脫皮/糜爛(excoriation/erosion)、乾燥(dryness)。依據每種症狀的嚴重程度個別給予0-3分：0分為無症狀；1分為輕度；2分為中度；3分為重度。皮膚炎總分為上述4種分數之總和，最高分數為12。分數越高即代表皮膚炎的嚴重程度越嚴重。

犧牲前，以心臟採血之方式收集小鼠血液至採血管(BD vacutainer-SST,NJ,USA)。而後血液以3000rpm離心10分鐘，以獲得血清，並將血清保存於-80℃冰箱直至進一步使用。依照製造商的說明書檢測血清中的IgE濃度(IgE-ELISA kit,Thermo Fisher Scientific Inc.,Vienna,Austria)。

若發生發炎或免疫相關之疾病，淋巴結及脾臟會腫大(swell)，因此小鼠犧牲時，收取這兩個器官拍照，並秤量其重量。

統計分析

所有實驗數據以平均值±平均值標準誤差(mean±SEM)方式呈現。多組間數據比較，則利用單因子變異數分析(one-way analysis of variance，ANOVA)進行數據統計分析，並根據鄧肯氏方式(Duncan's Method)進行多重組間差異性比較。當P值小於0.05時，表示組間有顯著性差異。

結果

(1)EE對神經的保護作用

以6-羥基多巴胺(6-OHDA)傷害SH-SY5Y神經細胞後，加入不同濃度的海木耳乙酸乙酯萃取物EE，測量其細胞存活率，以觀察神經保護之效果。控制組之細胞存活率為100±3.63%，6-OHDA組的細胞存活率下降至0±3.88%，加入濃度0.5-500ng/ml的海木耳乙酸乙酯萃取物EE，均提高各組的細胞存活率，分別為10.72±2.86、33.91±19.67、7.92±1.93及32.69±17.88%(如圖2所示)。結果證明海木耳乙酸乙酯萃取物EE具有神經保護之效果。

另外，6-OHDA可誘發斑馬魚產生類帕金森氏症之行為，使斑馬魚不游動，棲息在底部。圖3A顯示各組斑馬魚在單位時間內游動的路徑。圖3B顯示斑馬魚游動速率，控制組速率為2.47±0.26mm/s，6-OHDA組速率下降至0.21±0.11mm/s，加入濃度0.5及5μg/ml的海木耳乙酸乙酯萃取物EE，斑馬魚游動速率回升至2.03±0.65及1.24±0.28mm/s。圖3C顯示斑馬魚單位時間內游動的總距離，控制組游動距離為741.09±77.04mm，6-OHDA組游動距離下降至63.00±32.19mm，加入濃度0.5及5μg/ml的海木耳乙酸乙酯萃取物EE，斑馬魚游動距離回升至609.03±196.17及371.52±82.77mm。此結果顯示海木耳乙酸乙酯萃取物EE對活體神經具有神經保護作用。

(2)EE對骨質生成的影響

海木耳乙酸乙酯萃取物EE能促進骨質生成。在斑馬魚模式中，控制組稚魚生成10±0.63骨節，而濃度0.05-50μg/ml的海木耳萃取物EE的組別均使骨節數目增加，分別是13.8±0.80、15.33±0.68、15.00±0.84及15.4±0.68骨節(如圖4所示)。

在大鼠顱骨缺損實驗中，每週餵食3次EE，劑量為1.5及7.5mg/kg/週。4週後犧牲動物，取得顱骨組織並利用X光機所拍攝出來之圖片進行面積定量。圖5為不同濃度的海木耳乙酸乙酯萃取物EE對大鼠顱骨缺損的療效之頭顱外觀比較圖。圖6A顯示各組別的大鼠顱骨缺損情況的X光圖。圖6B顯示各組別的大鼠顱骨的復原率。此結果顯示控制組(媒液)的顱骨復原率為51.90±10.01%，而餵食EE 1.5及7.5mg/kg/週的顱骨復原率分別為97.47±4.86及15.47±15.86%。上述結果顯示EE能促進骨質生成。

(3)EE對異位性皮膚炎的療效

小鼠以DNCB誘發異位性皮膚炎(atopic dermatitis，AD)病徵，包含紅斑、浮腫、表皮脫落、乾燥及苔癬化等現象。在小鼠出現明顯的紅斑、浮腫、脫皮及乾燥等病徵後，每日塗抹EE或克立硼羅(crisaborole)，測試EE是否具有治療異位性皮膚炎的功效。觀察及拍照記錄小鼠的皮膚外觀表徵(如圖7A所示)，並以臨床皮膚炎評分量化EE的治療效果(如圖7B所示)。控制組因缺乏毛髮披覆的關係，皮膚表面乾燥，因此分數為0.75±0.25。AD組及ADV組的皮膚表面因角質細胞增生，形成一層厚厚的痂皮。隨著天數增加，部分痂皮剝落後，可觀察到誘發周圍的皮膚乾燥，而皮膚有皺褶現象；也因為發炎症狀，皮膚有紅斑及浮腫現象。而角質細胞仍然不斷增生，因此皮膚表面仍具有一層痂皮。這兩個組別的臨床皮膚炎分數相較於控制組顯著上升，分別為9.17±0.40及9.50±0.56。隨著天數，在塗抹EE及克立硼羅(Cri)的組別，痂皮剝落後，雖然仍可以觀察到乾燥、紅斑及腫脹，但角質細胞增生程度似乎比AD組輕微，因此在動物犧牲前，EEL及EEH組的皮膚炎分數相較於AD組顯著下降(4.50±0.76及3.67±0.49)，而Cri組的皮膚炎分數為4.80±0.37，相較於AD組具有統計意義。上述結果顯示EE均具有舒緩AD病徵的效果。

IgE是臨床診斷異位性皮膚炎的指標之一。小鼠犧牲前，收取血清檢測IgE的含量，結果如圖8所示。控制組血清中的IgE含量為1.71±0.14μg/mL。AD組及ADV組的IgE濃度明顯上升(68.89±4.12及68.95±2.60μg/mL)。EEL及EEH組的IgE濃度僅略微下降，分別為59.33±2.11及59.35±2.05μg/mL，但仍具有統計意義，而Cri組的血清IgE含量下降至65.61±1.74μg/mL。塗抹EE能使血清中因異位性皮膚炎而上升的IgE下降。

脾臟重量的結果如圖9所示，控制組的脾臟重量為91.08±3.61mg。AD組及ADV組的脾臟明顯腫大，是控制組的2.5倍(234.46±6.56及221.14±13.32mg)。EEL及EEH組的脾臟重量顯著下降，分別為160.74±9.10及167.41±10.39mg，而Cri組的脾臟重量顯著下降為167.46±10.61mg。

淋巴結總重量的結果如圖10所示，控制組的兩顆淋巴結總重量為4.46±0.29mg。AD組及ADV組的淋巴結明顯腫大，是控制組的3倍(12.07±0.33及11.61±0.54mg)。EEL及EEH組的淋巴結重量顯著下降，分別為9.10±0.68及6.50±0.59mg，且具有劑量依存(dose dependent)效應，Cri組的淋巴結重量顯著下降為9.49±0.81mg。結果顯示因異位性皮膚炎所造成發炎或免疫反應而腫大的淋巴結及脾臟，塗抹EE能使抑制前述的現象。

本發明適當地描述可以在本文未具體公開的要件或限制下實施。已被用作描述的術語並不是限制。在使用這些術語和除此之外的任何同等物的表達和描述是沒有差別的，但應當認識到本發明內的權利是可能修改的。因此，雖然本發明已說明實施例和其他情況，本文中所公開的內容可以被本領域的技術人員進行修飾和變化，並且這樣的修改和變化被認為是在本發明的權利範圍之內。

Claims

一種組合物用於製備提供神經保護的藥物之用途，其中該組合物包含一海木耳萃取物，其中該海木耳萃取物的製備方法包含步驟如下：(a)用一醇類溶劑對一海木耳進行萃取，得一海木耳醇類萃取物，其中該醇類溶劑為甲醇或乙醇。
如請求項1所述的用途，其中該神經保護包含抑制或預防神經細胞凋亡。
如請求項1所述的用途，其中該海木耳萃取物提供神經保護以預防或治療神經退化性疾病。
如請求項3所述的用途，其中該神經退化性疾病包含帕金森氏症。
一種組合物用於製備促進骨質生成的藥物之用途，其中該組合物包含一海木耳萃取物，其中該海木耳萃取物的製備方法包含步驟如下：(a)用一醇類溶劑對一海木耳進行萃取，得一海木耳醇類萃取物，其中該醇類溶劑為甲醇或乙醇。
如請求項5所述的用途，其中該海木耳萃取物促進骨質生成以預防或治療骨疾病。
如請求項6所述的用途，其中該骨疾病包含骨質疏鬆、骨缺損或骨折疾病。
如請求項7所述的用途，其中該骨疾病包含骨缺損。
一種組合物用於製備治療過敏性皮膚炎的藥物之用途，其中該組合物包含一海木耳萃取物，其中該海木耳萃取物的製備方法包含步驟如下：(a)用一醇類溶劑對一海木耳進行萃取，得一海木耳醇類萃取物，其中該醇類溶劑為甲醇或乙醇。
如請求項9所述的用途，其中該過敏性皮膚炎包含一異位性皮膚炎。
如請求項1、5或9中任一項所述的用途，其中該海木耳萃取物的製備方法進一步包含一步驟(b)，其在步驟(a)之後，包含用一有機溶液或超臨界萃取對該海木耳醇類萃取物進行分配萃取，俾以形成一有機溶劑層以及一水性層，繼而收取該有機溶劑層，以得該海木耳萃取物，其中該有機溶液為一有機溶劑或是一水與有機溶劑的混合液，該機溶劑為乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸丁酯、己烷、庚烷、辛烷、壬烷、甲醚、乙醚、二氯甲烷、氯仿或四氯化碳。
如請求項1、5或9中任一項所述的用途，其中該醇類溶劑為乙醇。
如請求項11所述的用途，其中該有機溶劑為乙酸乙酯。