CN115671147A

CN115671147A - 一种海木耳萃取物及其用途

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Publication number: CN115671147A
Application number: CN202111683500.6A
Authority: CN
Inventors: 温志宏; 张志益; 陈佩津; 冯健玮
Original assignee: Sun Yat Sen University Taiwan
Current assignee: Sun Yat Sen University Taiwan
Priority date: 2021-07-28
Filing date: 2021-12-15
Publication date: 2023-02-03
Anticipated expiration: 2041-12-15
Also published as: JP2023145593A; JP7336656B2; JP2023020827A; TW202304490A; TWI780840B; CN115671147B

Abstract

本发明提供一种组合物用在制备提供神经保护、促进骨质生成以及治疗过敏性皮肤炎的药物的用途，其中所述组合物包含海木耳萃取物。

Description

一种海木耳萃取物及其用途

技术领域

本发明是关于一种海木耳萃取物的新颖用途，尤其是关于所述海木耳萃取物用在制备提供神经保护、促进骨质生成以及治疗过敏性皮肤炎的药物的用途。

背景技术

海木耳主要分布在印度洋及西太平洋区域。海木耳为海洋大型异养(heterotroph)藻类，因为微量营养素含量高，因此在日本又叫做长寿菜，在欧美称海木耳为海洋蔬菜之首。目前，海木耳的用途多以直接食用或食品添加物。虽然食用海木耳的历史悠久，但它的功效相关研究极少。

骨骼是组成脊椎动物内骨骼的坚硬器官，其包含矿物质化的骨骼组织、骨髓、骨膜、神经、血管和软骨等软组织以及少数的骨骼细胞。骨骼的缺损或缺陷可能肇因于先天性缺陷或后天引起的疾病、衰老或创伤。较小的骨缺损虽可自行愈合，但是较大的骨缺损或者较小骨骼上的骨缺损将难以完全愈合，将需要通过骨移植(包括自体骨移植、同种异体骨移植和异种骨移植)、人工骨(包括骨水泥和生物陶瓷)、组织工程骨或骨搬运技术等手术进行治疗。因此，在面对各种不同成因的骨质疾病(例如骨质疏松症、骨缺损或骨折疾病等)时，需投予不同药物或实施手术。

另外，随着全球人口老化，神经退化性疾病患者的数量持续增加，导致越来越多年长者的认知、记忆、及运动能力受损。据报导，世界卫生组织预测影响运动功能的神经退化性疾病将成为未来二十年内流行病死因的第二名。因此，开发对此类疾病的治疗方法成为近代生物医学重点研究项目之一。由于多数神经退化性疾病的致病机制尚未明确，目前缺少有效治疗这类疾病的方法，可用的治疗仅限于症状管理及阻止疾病进展。

而异位性皮肤炎是一种免疫及发炎高度相关的慢性疾病。异位性皮肤炎为伴随有发痒的发炎皮肤病，并且其为慢性疾病并且其通常在婴儿期开始。异位性皮肤炎具有不断发痒作为主要症状，并且具有没有特定原因的反复康复及恶化的性质。尽管最近对于异位性皮肤炎进行了许多研究，但是直到现在异位性皮肤炎的病因还不清楚。

而海藻所纯化出来的天然化合物已经证实具有许多生物活性，例如：抗凝血、抗病毒、抗氧化、抗过敏、抗癌、抗发炎以及抗肥胖等活性。故海藻中的海木耳也极具研发的潜力，其在医疗应用上仍有许多研发的空间。

发明内容

本发明是将海木耳进行干燥后，再对其用酒精进行萃取，以得到酒精萃取物；再将所述酒精萃取物浸泡在水中，使其悬浮后；再利用乙酸乙酯进行分配萃取，最后从乙酸乙酯层中获得海木耳乙酸乙酯萃取物EE。

在神经保护实验中，所述海木耳乙酸乙酯萃取物EE可提高被6-羟基多巴胺(6-OHDA)所伤害的SH-SY5Y神经细胞的存活率。同时，所述海木耳乙酸乙酯萃取物EE对于有类帕金森氏症行为的斑马鱼可改善其游泳能力。此结果显示所述海木耳乙酸乙酯萃取物EE具有神经保护作用，并能改善神经退化性疾病的病征。

在骨质生成的实验中，所述海木耳乙酸乙酯萃取物EE促进斑马鱼的骨节数目增加。同时，所述海木耳乙酸乙酯萃取物能提高大鼠的颅骨缺损处的复原率。此结果显示所述海木耳乙酸乙酯萃取物EE能促进骨质生成，来用在治疗骨缺损。

在异位性皮肤炎的实验中，所述海木耳乙酸乙酯萃取物EE能改善小鼠的异位性皮肤炎的症状，例如红斑、浮肿、脱皮及干燥等病征。同时，所述海木耳乙酸乙酯萃取物EE能降低因异位性皮肤炎而上升的IgE表现量。另外，由于异位性皮肤炎会使脾脏和淋巴结肿大，但再给予所述海木耳乙酸乙酯萃取物EE后，能改善脾脏和淋巴结肿大的情况。此结果显示所述海木耳乙酸乙酯萃取物EE能治疗异位性皮肤炎。

本文中的用语“一”或“一种”是用以叙述本发明的元件及成分。此术语仅为了叙述方便及给予本发明的基本观念。此叙述应被理解为包括一种或至少一种，且除非明显地另有所指，表示单数时亦包括复数。在权利要求书中和“包含”一词一起使用时，所述用语“一”可意谓一个或超过一个。

本文在权利要求书中所使用的术语“或”意指“及/或”，除非有明确表示要仅意指另一个选择，或除非其他的选择互相排斥。

本发明提供一种海木耳萃取物的制备方法，其包含步骤如下：(a)用醇类溶剂对海木耳进行萃取，得海木耳醇类萃取物，其中所述醇类溶剂为甲醇或乙醇；以及(b)用有机溶液或超临界萃取对所述海木耳醇类萃取物进行分配萃取，以形成有机溶剂层以及水性层，然后收取所述有机溶剂层，以得到所述海木耳萃取物，其中所述有机溶液为有机溶剂或是水与有机溶剂的混合液，所述有机溶剂为乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸丁酯、己烷、庚烷、辛烷、壬烷、甲醚、乙醚、二氯甲烷、氯仿或四氯化碳。

在一具体实施例中，所述海木耳为双裂海木耳(Sarcodia ceylanica)。

在一具体实施例中，所述醇类溶剂为乙醇。在一较佳具体实施例中，所述海木耳醇类萃取物为海木耳乙醇萃取物。

在另一具体实施例中，所述有机溶剂为乙酸乙酯。在一较佳具体实施例中，所述海木耳萃取物为海木耳乙酸乙酯萃取物。

在一具体实施例中，所述方法包含步骤(a1)，在所述步骤(a)前，其中所述步骤(a1)包含将所述海木耳进行干燥。在一较佳具体实施例中，所述海木耳在温度20–70℃下进行干燥。在一更佳具体实施例中，所述海木耳在温度40–60℃下进行干燥。在另一具体实施例中，所述海木耳在50℃下进行干燥。

在一具体实施例中，所述海木耳的干燥时间为12–48小时。在一较佳具体实施例中，所述海木耳的干燥时间为16–32小时。在一较佳具体实施例中，所述海木耳的干燥时间为20–24小时。

根据本发明，所述海木耳经过干燥后，再用一定网目(mesh)孔径大小的筛网进行过滤，而过滤后再用乙醇进行萃取。在一具体实施例中，所述方法包含步骤(a2)，在所述步骤(a)前，其中所述步骤(a2)包含用30–70网目孔径的筛网对所述海木耳进行过滤。在一较佳具体实施例中，所述方法包含一步骤(a2)，在所述步骤(a)前，其中所述步骤(a2)包含用一40–60网目孔径的筛网对所述海木耳进行过滤。在一更佳具体实施例中，所述方法包含步骤(a2)，在所述步骤(a)前，其中所述步骤(a2)包含用50网目孔径的筛网对所述海木耳进行过滤。

在另一具体实施例中，所述海木耳在室温下用醇类溶剂进行萃取。在一较佳具体实施例中，在步骤(a)中，所述海木耳用醇类溶剂浸泡萃取三次，而合并三次的浸泡液经过滤及减压浓缩后，得所述海木耳醇类萃取物。

在一具体实施例中，在步骤(b)中，用所述有机溶液来对所述海木耳醇类萃取物进行分配萃取，以形成有机溶剂层以及水性层，然后收取所述有机溶剂层，以得到所述海木耳萃取物。在一较佳具体实施例中，在步骤(b)中，用所述有机溶液来对所述海木耳醇类萃取物进行分配萃取，且分配萃取操作重复进行三次，以形成有机溶剂层以及水性层，然后收取所述有机溶剂层，以得到所述海木耳萃取物。

在另一具体实施例中，所述步骤(b)进一步包含步骤(b1)，在有机溶液萃取前，其中所述步骤(b1)包含将所述海木耳醇类萃取物浸泡在水中，得海木耳水性溶液。在一较佳具体实施例中，所述步骤(b1)包含将所述海木耳醇类萃取物浸泡在水，以使所述海木耳醇类萃取物悬浮在水中。当执行步骤(b1)后，在原先步骤(b)中，就会用所述有机溶剂来对步骤(b1)所得到的海木耳水性溶液进行分配萃取，而不需要用所述水与有机溶剂的混合液，以形成有机溶剂层以及水性层，然后收取所述有机溶剂层，以得到所述海木耳萃取物。在另一具体实施例中，在步骤(b)中，用所述有机溶剂来对步骤(b1)所得到的海木耳水性溶液进行分配萃取，以形成有机溶剂层以及水性层，然后收取所述有机溶剂层，以得到所述海木耳萃取物。在一较佳具体实施例中，在步骤(b)中，用所述有机溶剂来对步骤(b1)所得到的海木耳水性溶液进行分配萃取，且分配萃取操作重复进行三次，以形成有机溶剂层以及水性层，然后收取所述有机溶剂层，以得到所述海木耳萃取物。

当执行步骤(b1)后，在原先步骤(b)中，就会用所述超临界萃取来对步骤(b1)所得到的海木耳水性溶液进行分配萃取。在一具体实施例中，在步骤(b)中，用所述超临界萃取来对步骤(b1)所得到的海木耳水性溶液进行分配萃取，以形成有机溶剂层以及水性层，然后收取所述有机溶剂层，以得到所述海木耳萃取物。在另一具体实施例中，所述超临界萃取为CO₂超临界萃取。根据本发明，CO₂超临界萃取分离天然物营养成分的工艺，主要是利用超临界状态的二氧化碳流体在高压、低温条件下自天然物萃取出营养成分。在一具体实施例中，所述CO₂超临界萃取条件为CO₂：99％乙醇溶液的流速比＝10mL/min：1mL/min；临界压力范围为150–400巴(bar)；以及临界温度范围为20–60℃。在一较佳具体实施例中，所述CO₂超临界萃取条件为CO₂：95％乙醇溶液的流速比＝10mL/min：1mL/min；临界压力为250巴(bar)；以及临界温度为40℃。由于经过CO₂超临界萃取后，同样会分成留在CO₂超临界萃取反应槽里的原料(水性层)跟萃取出来的物质(有机溶剂层)，收取所述有机溶剂层，以得到所述海木耳萃取物。在另一具体实施例中，在步骤(b)中，对所述海木耳醇类萃取物用CO₂超临界萃取，以得到所述海木耳萃取物。

在另一具体实施例中，所述海木耳萃取物的成分包含胆固醇(cholesterol)、硬脂酸(stearic acid)、硬脂酸甲酯(methyl stearate)、甘油硬脂酸酯(glyceryl stearate)、(2S)-1-O-棕榈酰基-3-O-β-D-吡喃半乳糖甘油((2S)-1-O-palmitoyl-3-O-β-D-galactopyranosylglycerol)、(2S)1,2-双-O-油酰基-3-O-β-D-吡喃半乳糖甘油((2S)1,2-di-O-oleoyl-3-O-β-D-galactopyranosylglycerol)、13²-羟基-(13²S)-脱镁叶绿素a(13²-Hydroxy-(13²S)-phaeophytin a)和13²-羟基-(13²R)-脱镁叶绿素a(13²-Hydroxy-(13²R)-phaeophytin a)。在一具体实施例中，所述海木耳萃取物的成分不包含多醣。

本发明另提供一种组合物用在制备提供神经保护的药物的用途，其中所述组合物包含海木耳萃取物，其中所述海木耳萃取物的制备方法包含步骤如下：(a)用醇类溶剂对海木耳进行萃取，得海木耳醇类萃取物，其中所述醇类溶剂为甲醇或乙醇。

在一具体实施例中，所述步骤(a)的所述海木耳经清洗、干燥及/或粉碎处理。

在另一具体实施例中，所述海木耳萃取物的制备方法进一步包含步骤(b)，其在步骤(a)之后，包含用有机溶液或超临界萃取对所述海木耳醇类萃取物进行分配萃取，以形成有机溶剂层以及水性层，然后收取所述有机溶剂层，以得到所述海木耳萃取物，其中所述有机溶液为有机溶剂或是水与有机溶剂的混合液，所述有机溶剂为乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸丁酯、己烷、庚烷、辛烷、壬烷、甲醚、乙醚、二氯甲烷、氯仿或四氯化碳。

在一具体实施例中，所述海木耳萃取物的制备方法进一步包含步骤(b1)，在所述有机溶液萃取前，其中所述步骤(b1)包含将所述海木耳醇类萃取物浸泡在水中，得海木耳水性溶液。在较佳具体实施例中，在步骤(b)中，用所述有机溶剂来对步骤(b1)所得到的海木耳水性溶液进行分配萃取，以形成有机溶剂层以及水性层，然后收取所述有机溶剂层，以得到所述海木耳萃取物。

在另一具体实施例中，所述海木耳为双裂海木耳(Sarcodia ceylanica)。

根据本发明，所述海木耳萃取物可用在提供神经保护作用，即意指预防或减少神经细胞(包括神经元和神经胶细胞)死亡或损伤的能力，或是挽救神经细胞或使神经细胞复苏或复原的能力，例如在大脑、中枢神经系统或周边神经系统的病理或有害的条件下。神经保护作用包括神经细胞的再生，即疾病或外伤后一群神经细胞的再生长。神经保护作用系在神经系统中用来防止在急性疾病(如脑中风、脑部或神经系统损伤/创伤、脑缺氧、脊髓损伤或周边神经损伤)后或慢性神经退化性疾病(如帕金森氏症、阿兹海默症或多发性硬化症)所引起的大脑/神经元损伤或退化的机制及策略。神经保护作用的目标在于限制神经系统损伤后的神经功能障碍/死亡并试图在大脑中保持尽可能高度完整的细胞相互作用以使神经功能不受干扰。藉由提供神经保护作用，所述海木耳萃取物可用来治疗神经元损伤(如脑中风，尤其是缺血性中风、脑损伤、脑缺氧、脊髓损伤或周边神经损伤)及治疗或预防神经退化性疾病。因此，在一具体实施例中，本发明是关于使用所述海木耳萃取物作为制备用在神经细胞保护及/或再生的药物中的活性成分。

在一具体实施例中，所述神经保护包含抑制或预防神经细胞凋亡。在一较佳具体实施例中，所述海木耳萃取物能抑制或预防神经细胞凋亡。

因此，本发明发现所述海木耳萃取物在提供神经保护作用上有一些有益的作用和功能，使得所述海木耳萃取物可以用来治疗神经元或脑损伤以及治疗或预防神经退化性疾病，其中所述神经退化性疾病包括急性或慢性神经退化性疾病。

本文中所使用的术语“神经退化性疾病”也用来描述一种由中枢神经系统的损害所引起的急性、渐进性或慢性疾病，且所述损害根据本发明可通过所述海木耳萃取物的治疗来减少及/或减轻。术语“急性神经退化性疾病”意指突然发生的疾病或病症，其导致相关的神经元死亡或损伤。作为示例的急性神经退化性疾病包括脑血管供血不足(cerebrovascular insufficiency)、局灶性或弥漫性脑外伤、脊髓损伤、大脑缺血或梗塞(包括栓塞性阻塞(emolic occlusion)及血栓性阻塞(thrombotic occlusion)、周产期的缺氧缺血脑病变(perinatal hypoxic-ischemia)、新生儿缺氧缺血性脑病(neonatalhypoxia-ischaemic encephalopathy)、新生儿周产期窒息(perinatal asphyxia)、心脏骤停(cardiac arrest)、颅内出血(intracranial hemorrhage)、蜘蛛膜下腔出血(subarachnoid hemorrhage)、中风及创伤性脑损伤(traumatic brain injury)。

另外，可利用本发明的所述海木耳萃取物所治疗的神经退化性疾病范例包括但不限于肌肉萎缩性脊髓侧索硬化症、帕金森氏症、阿兹海默症、亨廷顿氏舞蹈症、额颞叶失智症、脊髓小脑萎缩症、第三型小脑脊髓干运动失调症候群(Machado-Joseph disease，MJD)、齿状红核苍白球肌萎缩症(dentatorubral pallidoluysian atrophy，DRPLA)、脊髓延髓性肌肉萎缩症(spinal and bulbar muscular atrophy，SBMA)或X染色体脆折症运动失调症候群(fragile X-associated tremor and ataxia syndrome，FXTAS)。

在一具体实施例中，所述海木耳萃取物提供神经保护作用以预防或治疗神经退化性疾病。在一较佳具体实施例中，所述神经退化性疾病包含肌肉萎缩性脊髓侧索硬化症、帕金森氏症、阿兹海默症、亨廷顿氏舞蹈症、额颞叶失智症、脊髓小脑萎缩症、第三型小脑脊髓干运动失调症候群、齿状红核苍白球肌萎缩症、脊髓延髓性肌肉萎缩症或X染色体脆折症运动失调症候群。在一更佳具体实施例中，所述神经退化性疾病包含帕金森氏症。

如本文所使用的，术语“治疗”是指缓解症状或并发症；延缓疾病、病症或病情的进展；减轻或缓解症状和并发症；及/或治愈或消除疾病、病症或病情。

如本文中所使用，术语“预防”是指预防疾病或病症或其一或多种症状的发作、复发或扩散。在某些实施例中，所述这些术语是指在症状发作之前，在有或没有一或多种其他额外活性剂的情形中，利用本文所提供的药物治疗特定而言处在本文所提供的疾病或病症的风险的个体，或向其施予本文所提供的药物。

本发明进一步提供一种组合物用在制备预防或治疗神经退化性疾病的药物的用途，其中所述组合物包含海木耳萃取物，其中所述海木耳萃取物的制备方法包含步骤如下：(a)用醇类溶剂对海木耳进行萃取，得海木耳醇类萃取物，其中所述醇类溶剂为甲醇或乙醇。

在一具体实施例中，所述神经退化性疾病包含肌肉萎缩性脊髓侧索硬化症、帕金森氏症、阿兹海默症、亨廷顿氏舞蹈症、额颞叶失智症、脊髓小脑萎缩症、第三型小脑脊髓干运动失调症候群、齿状红核苍白球肌萎缩症、脊髓延髓性肌肉萎缩症或X染色体脆折症运动失调症候群。在一较佳具体实施例中，所述神经退化性疾病包含帕金森氏症。

本发明另提供一种组合物用在制备促进骨质生成的药物的用途，其中所述组合物包含海木耳萃取物，其中所述海木耳萃取物的制备方法包含步骤如下：(a)用醇类溶剂对海木耳进行萃取，得海木耳醇类萃取物，其中所述醇类溶剂为甲醇或乙醇。

如本文所使用，术语“骨质生成”是指自未分化的干细胞和成骨细胞系增殖为成骨细胞和骨组织(例如，新骨基质的合成与积存)。成骨也指祖细胞(progenitor)或前体细胞(precursor cell)分化或转分化为骨细胞(即，成骨细胞)。祖细胞或前体细胞可以是多能干细胞，包括，例如，间质干细胞。祖细胞或前体细胞可为预定形成骨细胞系的细胞(例如，预成骨细胞(pre-osteoblast cells))或未预定形成成骨细胞系的细胞(例如，前脂肪细胞或成肌细胞(myoblast))。

因此，本发明的所述海木耳萃取物可用在治疗骨疾病。所述骨疾病包括但不限于骨质疏松、骨缺损或骨折疾病。骨质疏松是一种疾病，特征是每单位体积的骨质量净流失。此种骨质量流失及所导致的骨折的后果是骨架的破坏，以提供身体足够的结构支撑，低骨量和骨组织的结构退化导致骨脆性和增加髋关节、脊椎和手腕的骨折。骨质疏松依照发生原因分为原发性骨质疏松症及续发性骨质疏松症。在原发性骨质疏松症的分子机制中，成骨细胞的细胞核因子κB(kappa B)配位体的接受器活化素(RANKL)和蚀骨细胞表面上的细胞核因子κB的接受器活化素(RANK)结合而活化蚀骨细胞，刺激蚀骨细胞的分化及活性，促进骨质疏松症的发生。此外，停经妇女体内雌激素急遽减少，也促进蚀骨细胞的活性，易造成骨质疏松症及骨折。续发性骨质疏松症则是由于长期服用药物、生活习惯不良、内分泌失调及其他疾病(例如类风湿性关节炎、糖尿病、中风、帕金森氏症及癌症骨转移)所引起。另外，骨缺损是指骨形成对骨吸收的比例失衡，如此，个体会呈现低于期待的骨骼，或个体的骨骼会比预期的较不完整。骨缺损也可由骨折、从手术介入或从牙齿或牙周疾病而导致。骨愈合包括但不限于修复骨缺损，如骨缺损发生在：例如，封闭、开放和未愈合性骨折。

在一具体实施例中，所述海木耳萃取物促进骨质生成以预防或治疗骨疾病。在一较佳具体实施例中，所述骨疾病包含骨质疏松、骨缺损或骨折疾病。在一更佳具体实施例中，所述骨疾病包含骨缺损。

本发明进一步提供一种组合物用在制备预防或治疗骨疾病的药物的用途，其中所述组合物包含海木耳萃取物，其中所述海木耳萃取物的制备方法包含步骤如下：(a)用醇类溶剂对海木耳进行萃取，得海木耳醇类萃取物，其中所述醇类溶剂为甲醇或乙醇。

根据本发明，所述海木耳萃取物能增加骨质量或促进骨生长及修复来治疗骨疾病。在一具体实施例中，所述骨疾病包含骨质疏松、骨缺损或骨折疾病。在一较佳具体实施例中，所述骨疾病包含骨缺损。

本发明另提供一种组合物用在制备治疗过敏性皮肤炎的药物的用途，其中所述组合物包含海木耳萃取物，其中所述海木耳萃取物的制备方法包含步骤如下：(a)用醇类溶剂对海木耳进行萃取，得海木耳醇类萃取物，其中所述醇类溶剂为甲醇或乙醇。

如本文所使用，术语“过敏性皮肤炎”是指以过敏反应为要因的皮肤疾病的总称，慢性的发痒及脸、颈、肘及/或膝的发疹为特征。就过敏性皮肤炎而言，可列举例如，接触性皮肤炎、异位性皮肤炎等。“接触性皮肤炎”是指由于外来性的抗原与皮肤接触所致的发病的湿疹性的炎症性疾病，可列举例如，过敏性接触皮肤炎、光接触皮肤炎、全身性接触皮肤炎和接触荨麻疹。又，就抗原而言，可列举例如，金属过敏原(钴、镍等)、植物过敏原(漆树、樱草等)和食物过敏原(芒果、银杏等)。“异位性皮肤炎(atopic dermatitis，AD)”是指许多患者具有异位性倾向的皮肤疾病。重复地恶化、缓解的左右对称的全身性湿疹为特征，可列举例如，弥漫性神经皮肤炎、异位性湿疹、异位性神经皮肤炎、贝尼耶痒疹(Besnierprurigo)、急性婴儿湿疹、屈曲部湿疹、四肢儿童湿疹、儿童异位性湿疹、儿童干燥型湿疹、儿童湿疹、成人异位性皮肤炎、内因性湿疹、儿童皮肤炎和慢性儿童湿疹。

在一具体实施例中，所述过敏性皮肤炎包含接触性皮肤炎或异位性皮肤炎。在一较佳具体实施例中，所述过敏性皮肤炎包含异位性皮肤炎。在一更佳具体实施例中，所述异位性皮肤炎包含弥漫性神经皮肤炎、异位性湿疹、异位性神经皮肤炎、贝尼耶痒疹、急性婴儿湿疹、屈曲部湿疹、四肢儿童湿疹、儿童异位性湿疹、儿童干燥型湿疹、儿童湿疹、成人异位性皮肤炎、内因性湿疹、儿童皮肤炎或慢性儿童湿疹。

在另一具体实施例中，所述药物抑制异位性皮肤炎的病征，其包含红斑、浮肿、脱皮或皮肤干燥。

在一具体实施例中，所述药物降低因所述异位性皮肤炎所造成IgE表现量上升的情况。

在另一具体实施例中，所述药物改善因所述异位性皮肤炎所造成脾脏或淋巴结肿大的情况。

在一具体实施例中，所述药物进一步包含医药上可接受的载体(pharmaceutically acceptable carrier)。如本文所使用，术语“医药上可接受的载体”为通过特定组合施用及特定方法施用组合物所决定。如本文所用“载体”一词包含但不局限任何及所有溶剂、分散介质、载具、包衣、稀释剂、抗细菌和抗真菌剂等渗透和吸收延迟剂、缓冲剂、载体溶液、悬浮液或胶体等。用在药物活性物质的这些介质和试剂在本领域中是公知的。除非任何常规介质或试剂与活性成分不相容，其用在治疗的组合就需要被考虑。补充的活性成分也可掺入组合物中。术语“医药上可接受的”是指分子实体和组合物施用在受试者时不产生过敏或类似的不良反应。以蛋白质作为活性物质的水组合物制备在本领域中是习知的。通常，此组合物被制备为液体溶液、锭剂、胶囊或悬浮液注射剂；亦可制备为可用在注射剂的可溶解或悬浮液的固体形式。在另一具体实施例中，所述医药上可接受的载体包含皮肤学上可容许的介质。“皮肤学上可容许的介质”是指在生物学上适切的物质，如盐类、酯类及/或酰胺类的成份。也就是说这物质，其与所选择的有效成份一起用时，在个体投与时不会引起不期望的生物学作用。另外，与含其的药剂组成份中的任何成份都不会发生有害的交互作用的物质。同样地，文中的“皮肤学上可容许的盐”，或“皮肤学上可容许的酯”为在生物学上适切的盐或酯。

根据本发明，所述组合物(包含所述海木耳萃取物)及医药上可接受的载体的配制可能经由无菌的水溶液或分散体、水悬浮液、油乳化液、油包乳化液中的水、特定点的乳化液、长停留乳化液、黏性乳化液、微乳液、纳米乳液、微脂粒、微粒、微球、纳米球、纳米颗粒、微汞及数种可持续释放的天然或合成聚合物。医药上可接受的载体及所述海木耳萃取物也可配置成气雾剂、片剂、丸剂、胶囊、无菌粉末、栓剂、洗剂、霜剂、软膏剂、糊剂、凝胶、水凝胶，或其他可用在组合物输送的制剂。

另外，本发明所称的组合物包含施予到局部和区域作用的组合物。本文所用的术语“局部”涉及使用本文所述的组合物掺入合适的药用载体中且施涂在皮肤的部位，例如过敏性皮肤炎的患部，以实施局部作用。因此，此类局部用所述组合物包含其中通过与待处理皮肤表面直接接触来自外部施涂的化合物的那些药物形式。用在此目的的常规药物形式包含软膏剂、抹剂、乳膏、洗发剂、乳液、糊剂、凝胶、喷剂、气溶胶等，并且可以根据待治疗的身体部位以贴片或浸渍敷料形式施用。术语“软膏剂”包含具有油性基质、水溶性基质和乳液型基质的制剂(包含乳膏)，所述基质如凡士林、羊毛脂、聚乙二醇类以及这些组合的混合物。

本发明的药物可进一步包含医药上可接受的载体，在本发明相关领域下习知的治疗方式中可通过许多不同途径施予给个体。在一些实施例中，所述组合物(包含所述海木耳萃取物)及医药上可接受的载体会经由外用、静脉、肌肉、皮下、局部、口服或吸入施予。所述药物将会通过消化及循环系统被传递到目标处。

在另一具体实施例中，所述个体为动物，较佳为哺乳类，更佳为人类。

本文中“有效剂量”一词为治疗剂量可在特定条件下可预防、降低、阻止或逆转个体的症状的发展，或部分、完全舒缓所述个体开始接受治疗时在特别情况下已存在的症状。本领域中的熟习技艺人士亦可轻易地测定在施予所述海木耳萃取物至个体时适当的剂量用法。例如，所述海木耳萃取物可投予至所述个体一次或两次。当一剂量用法包含多次施予时，可了解到投予至所述个体的所述海木耳萃取物的有效剂量可包含全部剂量用法期间投予的产物总量。

因此，本发明的所述海木耳萃取物用在神经保护、促进骨质生成以及治疗过敏性皮肤炎的有效剂量都会有所不同。

在提供神经保护方面，在一具体实施例中，所述海木耳萃取物的有效剂量范围为0.2mg/公斤体重至200mg/公斤体重。在一较佳具体实施例中，所述海木耳萃取物的有效剂量范围为1mg/公斤体重至100mg/公斤体重。在一更佳具体实施例中，所述海木耳萃取物的有效剂量范围为2mg/公斤体重至20mg/公斤体重。

关在神经保护的有效剂量，在另一具体实施例中，所述海木耳萃取物的有效剂量范围为0.5ng/ml至50μg/ml。在一较佳具体实施例中，所述海木耳萃取物的有效剂量范围为1ng/ml至5μg/ml。在一更佳具体实施例中，所述海木耳萃取物的有效剂量范围为5ng/ml至500ng/ml。

在促进骨质生成方面，在一具体实施例中，所述海木耳萃取物的有效剂量范围为0.2毫克/公斤体重至100毫克/公斤体重。在一较佳具体实施例中，所述海木耳萃取物的有效剂量范围为1毫克/公斤体重至50毫克/公斤体重。在一更佳具体实施例中，所述海木耳萃取物的有效剂量范围为2毫克/公斤体重至10毫克/公斤体重。

在治疗过敏性皮肤炎方面，在一具体实施例中，所述海木耳萃取物的有效剂量范围为0.05至20mg/ml。在一较佳具体实施例中，所述海木耳萃取物的有效剂量范围为0.1至10mg/ml。在一更佳具体实施例中，所述海木耳萃取物的有效剂量范围为0.5至2mg/ml。

附图说明

图1为海木耳的萃取流程图。

图2为海木耳乙酸乙酯萃取物EE对神经细胞的保护作用。SH-SY5Y神经细胞加入不同浓度的海木耳乙酸乙酯萃取物EE后，再以6-羟基多巴胺(6-OHDA)伤害细胞，最后测量其细胞存活率，以观察神经保护的效果。海木耳乙酸乙酯萃取物EE在浓度0.5–500ng/ml下，均提高各组的细胞存活率，证明海木耳乙酸乙酯萃取物EE具有神经保护的效果。各组别与6-OHDA组别进行统计分析，达到显著性差异的(P<0.05)，以*表示。

图3A–3C为海木耳乙酸乙酯萃取物EE对活体神经的保护作用。图3A显示各组斑马鱼在单位时间内游动的路径。图3B显示斑马鱼游动速率，控制组速率为2.47±0.26mm/s，6-OHDA组速率下降至0.21±0.11mm/s，加入浓度0.5及5μg/ml的海木耳乙酸乙酯萃取物EE，斑马鱼游动速率回升至2.03±0.65及1.24±0.28mm/s。图3C显示斑马鱼单位时间内游动的总距离，控制组游动距离为741.09±77.04mm，6-OHDA组游动距离下降至63.00±32.19mm，加入浓度0.5及5μg/ml的海木耳乙酸乙酯萃取物EE，斑马鱼游动距离回升至609.03±196.17及371.52±82.77mm。

图4A–4F为海木耳乙酸乙酯萃取物EE对骨质生成的影响。图4A为控制组，图4B至图4E分别为给予不同剂量的海木耳乙酸乙酯萃取物EE(0.05–50μg/ml)的组别。图4F则为各组斑马鱼的硬骨节数的定量统计结果。各组斑马鱼在受精后第7天计算硬骨节数，加入海木耳乙酸乙酯萃取物EE 0.5μg/ml，有显著增加骨节发育的情形，且海木耳乙酸乙酯萃取物未引起斑马鱼发育异常的情形，初步显示海木耳乙酸乙酯萃取物没有胚胎发育毒性。*：P<0.05，与控制组比较。

图5为不同浓度的海木耳乙酸乙酯萃取物EE对大鼠头颅缺损的疗效的头颅外观比较图。

图6A–6B为以X光机所拍摄出来的海木耳乙酸乙酯萃取物EE对大鼠颅骨缺损的疗效的比较图。图6A显示各组别的大鼠颅骨缺损情况的X光图。图6B显示各组别的大鼠颅骨的复原率。

图7A–7B为海木耳乙酸乙酯萃取物EE对患有异位性皮肤炎的小鼠的皮肤外观的影响。图7A显示利用DNCB诱发异位性皮肤炎，待小鼠皮肤显现异位性皮肤炎症状后，开始每日涂抹药物；分别在治疗的第1、7、12天拍摄DNCB诱发异位性皮肤炎小鼠的皮肤外观，比例尺＝1cm。结果显示相较于AD组，EEL组(低剂量组)及EEH(高剂量组)组均具有减缓异位性皮肤炎症状的功效，表皮的浮肿、发红、干燥及结痂等现象均获得纾解。图7B显示海木耳乙酸乙酯萃取物EE舒缓AD症状的临床皮肤炎评分。以临床皮肤炎评分评估EE舒缓AD症状。利用四个皮肤表面症状来评估皮肤炎的严重性：红斑/出血、浮肿、脱皮/糜烂、干燥。依据每种症状的严重程度个别给予0–3分，分数越多越严重。皮肤炎总分为上述4种分数的总和，最高分数为12。分数越高及代表皮肤炎的严重程度越严重。数据呈现平均值±平均值标准误差(mean±SEM)。与AD组相较达到显著性差异的(P<0.05)，以*表示；与ADV组相较达到显著性差异的，以#表示。

图8为海木耳乙酸乙酯萃取物EE对血清中IgE的影响。动物牺牲前采集血液，检测血清中IgE。DNCB诱发AD造成IgE上升，涂抹海木耳乙酸乙酯萃取物EE后，IgE均下降。数据呈现平均值±平均值标准误差(mean±SEM)。与AD组相较达到显著性差异的(P<0.05)，以*表示；与ADV组相较达到显著性差异的，以#表示。

图9为海木耳乙酸乙酯萃取物EE对因DNCB诱发而肿大的脾脏重量的影响。动物牺牲时采集脾脏组织，拍照并秤重。DNCB诱发异位性皮肤炎造成脾脏组织肿大，涂抹海木耳乙酸乙酯萃取物EE后，脾脏重量均下降。比例尺＝1cm。数据呈现平均值±平均值标准误差(mean±SEM)。与AD组相较达到显著性差异的(P<0.05)，以*表示；与ADV组相较达显著性差异的，以#表示。

图10为海木耳乙酸乙酯萃取物EE对因DNCB诱发而肿大的淋巴结重量的影响。动物牺牲时采集淋巴结组织，拍照并秤重。DNCB诱发异位性皮肤炎造成淋巴结组织肿大，涂抹海木耳萃取物EE后，淋巴结重量均下降。比例尺＝0.5cm。数据呈现平均值±平均值标准误差(mean±SEM)。与AD组相较达到显著性差异的(P<0.05)，以*表示；与ADV组相较达到显著性差异的，以#表示。

具体实施方式

本发明包括但不限于上述与如下的说明。实施方法则如下范例所示。

养殖型海木耳的萃取

本发明使用的是人工养殖的双裂海木耳(Sarcodia ceylanica)。

将海木耳在50℃的条件下烘干24小时，获得干燥海木耳。将10.8kg干燥海木耳粉碎，经50网目(mesh)筛网过滤，并在室温下以95％酒精溶液浸泡萃取三次，合并三次的浸泡液经过滤及减压浓缩后，可获得370.5g海木耳酒精粗萃物。将上述海木耳粗萃物加入1L的水，使呈悬浮状，再加入1L乙酸乙酯进行分配萃取，重复上述分配萃取三次，以形成乙酸乙酯层以及水性层，然后收取所述乙酸乙酯层，以获得乙酸乙酯萃取物EE(83.2g)。整个海木耳的萃取流程如图1所示。

另外，上述萃取步骤中，所述酒精溶液可用甲醇溶液进行替换。同时，用乙酸乙酯进行萃取的步骤可改用其他有机溶剂进行替换，例如使用乙酸丙酯、乙酸丁酯、己烷、庚烷、辛烷、壬烷、甲醚、乙醚、二氯甲烷、氯仿或四氯化碳溶剂进行分配萃取或超临界萃取(如CO₂超临界萃取)，都可以得到与EE相同成分的萃取物。

另外，水可与乙酸乙酯或其他有机溶剂混合成有机溶液，来直接对所述海木耳酒精粗萃物进行萃取，故无需将水和有机溶剂分开成两个步骤分别进行萃取。此外，也可将所述海木耳酒精粗萃物直接用乙酸乙酯或其他有机溶剂进行萃取，无须先浸泡在水此一步骤。上述步骤的变动最终都可以得到与EE相同成分的萃取物。

上述CO₂超临界萃取条件为CO₂：95％乙醇溶液的流速比＝10mL/min：1mL/min；临界压力为250巴(bar)；以及临界温度为40℃。

同时，本发明使用酚－硫酸法测量EE的多醣含量，结果显示EE不含多醣成分。因此，先以酒精浸泡海木耳的萃取方法，多醣成份不会溶出，故海木耳酒精粗萃物就无多醣成分。另外，本发明也对海木耳乙酸乙酯萃取物EE进行成分分析，所述分析结果如表1所示。

表1、海木耳乙酸乙酯萃取物EE的成分分析

实验方法

(1)评估EE的神经保护作用

(a)神经细胞测试

将SH-SY5Y细胞以2×10⁴个细胞的密度培养在96孔细胞培养盘中，置入细胞培养箱中培养，待细胞完全贴附后，以各种不同浓度的海木耳乙酸乙酯萃取物EE的溶液预先处理1小时，而后加入6-羟基多巴胺(6-Hydroxydopamine，6-OHDA)处理15小时，加入10％的阿尔玛蓝(alamar blue)，继续培养3小时，然后用酵素免疫分析仪测量吸光值，测量细胞存活率。以6-OHDA对神经细胞所产生的毒性，借以分析海木耳萃取液是否对6-OHDA处理过的神经细胞具有保护作用。

(b)活体神经测试

将6-OHDA溶于2％新鲜的L-抗坏血酸(L-Ascorbic acid)，配制成500mM的原液放入1.5mL棕色微量离心管，并分装成10μl一管备用。欲加药时，将配置好的药品依实验设计的浓度溶于同比例的汉克缓冲液(Hank’sbuffer)，并在24孔培养盘中加入前述1mL药物和1mL含稚鱼的汉克缓冲液。稚鱼给予6-OHDA的时间从受精后48小时到120小时。除了控制组别完全不加入任何药品，每次实验均有溶剂组做对照用。通过分析斑马鱼的行动能力测试得到鱼体在不同水层停留时间、游行速度和游动距离等参数，以评估海木耳萃取液的治疗效果。

(2)评估EE对骨质形成的影响

(a)斑马鱼的骨头生长测试

利用活体系统测试海木耳萃取液的溶液对于骨质再生的促进作用。分析海木耳萃取液对于骨头与骨质上的相关疾病(如：骨质疏松等)的效果。利用钙黄绿素(Calcein)萤光染剂针对骨头中的硬骨部分做作专一性染色方式，结合斑马鱼胚胎发育模式，分析活性物质对于骨头生长上的作用，并使用分析软件以数据化方式呈现物质对骨头生长的作用。取受精后48小时的斑马鱼稚鱼，加入不同浓度的海木耳萃取液，每日观察鱼体的脊椎关节，观察后继续饲养。将斑马鱼以2g/L钙黄绿素溶液(pH＝7.8)染色10分钟后，以清水润洗，洗去多余的染剂。再以MS-222麻醉，置于1％甲基纤维(Methyl Cellulose)固定鱼体，利用萤光显微镜下检视鱼体的脊椎骨骼，并将骨骼的节数加以统计分析。

(b)大鼠颅骨缺损实验

颅骨缺损手术：

一个小范围的骨缺损在生物体内是可以自然再生的，但是当缺损大小超过生物体所能修复的大小，无法自行痊愈即所谓临界骨缺损(critical sized bone defect)，需靠外加的治疗才可能愈合。不同动物模型及不同部位都影响所需建立的缺损大小。本发明使用的大鼠颅骨缺损模式，首先利用气体麻醉剂异氟醚(isoflourane)进行动物麻醉。对大鼠的头顶剃毛后用优碘和70％酒精消毒手术区域，再注射安比西林(ampicillin)。接着用已灭菌的擦手纸剪一个洞覆盖在大鼠头上，只露出手术区域。在大鼠头的正上方，切开皮肤和骨膜约1.5公分大小。利用骨膜剥离器分开头骨和骨膜。头盖骨上正中央有一条隆起，是为中轴矢状缝，两侧为顶骨，以此矢状缝为中心在正中央以直径4毫米骨环钻锯头制造二个直径4毫米的骨缺损。接着以5-0羊肠线缝合骨膜后再用4-0尼龙线缝合皮肤。手术中动物如果有从麻醉状态中苏醒情形，则以气体麻醉机经由呼吸面罩让动物吸入麻醉气体维持麻醉。在大鼠麻醉的状况下，每周分3次喂食EE，剂量为1.5及7.5mg/kg/周。喂食4周后，进行牺牲，以取得颅骨组织。

大鼠头颅愈合情况的评估方式如下：经由X光机(X-OMAT V；Kodak,Rochester,NY)照相，底片经过自动洗片机显像。影像经由扫瞄转成TIF图档，再将影像转入ImagQuant软件(ImageQuant Version 5.2

1999,Molecular Dynamics)，以利后续分析处理。在ImagQuant软件中选取每一阶阶梯楔(step wedge)以及空白处相等面积的区域，代表X光片上影像的灰阶强度及楔型阶梯厚度之间的相关性。再选取头盖骨区域直径8毫米的圆形区域，以及两侧顶骨中央平坦的区域面积1x 1毫米平方，测量出灰阶强度，代入上述方程式中，以内插法的方式，计算出样本骨密度相对于楔型阶梯的厚度。也就是将头盖骨骨缺损区域的骨密度，定义成楔型阶梯不同厚度所投射出的灰阶影像密度。

(3)评估EE对异位性皮肤炎的影响

本发明使用的实验动物为BALB/c品系小鼠。将小鼠以2.5％异氟醚(isoflurane)麻醉，使用剃毛刀及除毛膏将小鼠背部的毛剃除，以直径1公分的硅胶圈做记号(面积大小为78.5mm2)，两天一次在此范围内滴入26μL的2％用2,4-二硝基氯苯(2,4-dinitirochlorobenzene，DNCB)(Sigma-Aldrich Co.,MO,USA；Cat.No.#138630)，总共8次，以诱发皮肤病变产生。

在DNCB诱发第7天后，每天涂抹100μL媒液(Vehicle)、海木耳萃取物EE或治疗异位性皮肤炎的药物克立硼罗(crisaborole)。实验动物分组如下(每组3只)：(1)控制组：未诱发；(2)AD组：只给予2％DNCB；(3)ADV组：给予2％DNCB和媒液(Vehicle)；(4)EEL组：DNCB诱发后，给予50μg EE/100μL 1％甲基纤维；(5)EEH组：DNCB诱发后，给予200μg EE/100μL 1％甲基纤维；以及(6)Cri组：DNCB诱发后，给予25μg克立硼罗/100μL 1％丙酮醇(acetone-EtOH)。涂抹DNCB后5分钟，待DNCB干燥后，再进行抹药。诱发或抹药前，以数位相机拍照纪录皮肤病征的变化。

在第18天牺牲动物，采血并收集其背部皮肤、脾脏及淋巴结组织。观察脾脏及胯下淋巴结(Subiliac lymph node)大小，并秤重比较。利用四个皮肤表面症状来评估临床皮肤炎的严重性：红斑/出血(erythema/hemorrhage)、浮肿(edema)、脱皮/糜烂(excoriation/erosion)、干燥(dryness)。依据每种症状的严重程度个别给予0–3分：0分为无症状；1分为轻度；2分为中度；3分为重度。皮肤炎总分为上述4种分数的总和，最高分数为12。分数越高即代表皮肤炎的严重程度越严重。

牺牲前，以心脏采血的方式收集小鼠血液至采血管(BD vacutainer-SST,NJ,USA)。而后血液以3000rpm离心10分钟，以获得血清，并将血清保存在-80℃冰箱直至进一步使用。依照制造商的说明书检测血清中的IgE浓度(IgE-ELISA kit,Thermo FisherScientific Inc.,Vienna,Austria)。

若发生发炎或免疫相关的疾病，淋巴结及脾脏会肿大(swell)，因此小鼠牺牲时，收取这两个器官拍照，并秤量其重量。

统计分析

所有实验数据以平均值±平均值标准误差(mean±SEM)方式呈现。多组间数据比较，则利用单因子变异数分析(one-way analysis of variance，ANOVA)进行数据统计分析，并根据邓肯氏方式(Duncan’s Method)进行多重组间差异性比较。当P值小于0.05时，表示组间有显著性差异。

结果

(1)EE对神经的保护作用

SH-SY5Y神经细胞加入不同浓度的海木耳乙酸乙酯萃取物EE后，再以6-羟基多巴胺(6-OHDA)伤害细胞，最后测量其细胞存活率，以观察神经保护的效果。控制组的细胞存活率为100±3.63％，6-OHDA组的细胞存活率下降至0±3.88％，加入浓度0.5–500ng/ml的海木耳乙酸乙酯萃取物EE，均提高各组的细胞存活率，分别为10.72±2.86、33.91±19.67、7.92±1.93及32.69±17.88％(如图2所示)。结果证明海木耳乙酸乙酯萃取物EE具有神经保护的效果。

另外，6-OHDA可诱发斑马鱼产生类帕金森氏症的行为，使斑马鱼不游动，栖息在底部。图3A显示各组斑马鱼在单位时间内游动的路径。图3B显示斑马鱼游动速率，控制组速率为2.47±0.26mm/s，6-OHDA组速率下降至0.21±0.11mm/s，加入浓度0.5及5μg/ml的海木耳乙酸乙酯萃取物EE，斑马鱼游动速率回升至2.03±0.65及1.24±0.28mm/s。图3C显示斑马鱼单位时间内游动的总距离，控制组游动距离为741.09±77.04mm，6-OHDA组游动距离下降至63.00±32.19mm，加入浓度0.5及5μg/ml的海木耳乙酸乙酯萃取物EE，斑马鱼游动距离回升至609.03±196.17及371.52±82.77mm。此结果显示海木耳乙酸乙酯萃取物EE对活体神经具有神经保护作用。

(2)EE对骨质生成的影响

海木耳乙酸乙酯萃取物EE能促进骨质生成。在斑马鱼模式中，控制组稚鱼生成10±0.63骨节，而浓度0.05–50μg/ml的海木耳萃取物EE的组别均使骨节数目增加，分别是13.8±0.80、15.33±0.68、15.00±0.84及15.4±0.68骨节(如图4所示)。

在大鼠颅骨缺损实验中，每周喂食3次EE，剂量为1.5及7.5mg/kg/周。4周后牺牲动物，取得颅骨组织并利用X光机所拍摄出来的图片进行面积定量。图5为不同浓度的海木耳乙酸乙酯萃取物EE对大鼠颅骨缺损的疗效的头颅外观比较图。图6A显示各组别的大鼠颅骨缺损情况的X光图。图6B显示各组别的大鼠颅骨的复原率。此结果显示控制组(媒液)的颅骨复原率为51.90±10.01％，而喂食EE 1.5及7.5mg/kg/周的颅骨复原率分别为97.47±4.86及15.47±15.86％。上述结果显示EE能促进骨质生成。

(3)EE对异位性皮肤炎的疗效

小鼠以DNCB诱发异位性皮肤炎(atopic dermatitis，AD)病征，包含红斑、浮肿、表皮脱落、干燥及苔癣化等现象。在小鼠出现明显的红斑、浮肿、脱皮及干燥等病征后，每日涂抹EE或克立硼罗(crisaborole)，测试EE是否具有治疗异位性皮肤炎的功效。观察及拍照记录小鼠的皮肤外观表征(如图7A所示)，并以临床皮肤炎评分量化EE的治疗效果(如图7B所示)。控制组因缺乏毛发披覆的关系，皮肤表面干燥，因此分数为0.75±0.25。AD组及ADV组的皮肤表面因角质细胞增生，形成一层厚厚的痂皮。随着天数增加，部分痂皮剥落后，可观察到诱发周围的皮肤干燥，而皮肤有皱褶现象；也因为发炎症状，皮肤有红斑及浮肿现象。而角质细胞仍然不断增生，因此皮肤表面仍具有一层痂皮。这两个组别的临床皮肤炎分数相较于控制组显著上升，分别为9.17±0.40及9.50±0.56。随着天数，在涂抹EE及克立硼罗(Cri)的组别，痂皮剥落后，虽然仍可以观察到干燥、红斑及肿胀，但角质细胞增生程度似乎比AD组轻微，因此在动物牺牲前，EEL及EEH组的皮肤炎分数相较于AD组显著下降(4.50±0.76及3.67±0.49)，而Cri组的皮肤炎分数为4.80±0.37，相较于AD组具有统计意义。上述结果显示EE均具有舒缓AD病征的效果。

IgE是临床诊断异位性皮肤炎的指标之一。小鼠牺牲前，收取血清检测IgE的含量，结果如图8所示。控制组血清中的IgE含量为1.71±0.14μg/mL。AD组及ADV组的IgE浓度明显上升(68.89±4.12及68.95±2.60μg/mL)。EEL及EEH组的IgE浓度仅略微下降，分别为59.33±2.11及59.35±2.05μg/mL，但仍具有统计意义，而Cri组的血清IgE含量下降至65.61±1.74μg/mL。涂抹EE能使血清中因异位性皮肤炎而上升的IgE下降。

脾脏重量的结果如图9所示，控制组的脾脏重量为91.08±3.61mg。AD组及ADV组的脾脏明显肿大，是控制组的2.5倍(234.46±6.56及221.14±13.32mg)。EEL及EEH组的脾脏重量显著下降，分别为160.74±9.10及167.41±10.39mg，而Cri组的脾脏重量显著下降为167.46±10.61mg。

淋巴结总重量的结果如图10所示，控制组的两颗淋巴结总重量为4.46±0.29mg。AD组及ADV组的淋巴结明显肿大，是控制组的3倍(12.07±0.33及11.61±0.54mg)。EEL及EEH组的淋巴结重量显著下降，分别为9.10±0.68及6.50±0.59mg，且具有剂量依存(dosedependent)效应，Cri组的淋巴结重量显著下降为9.49±0.81mg。结果显示因异位性皮肤炎所造成发炎或免疫反应而肿大的淋巴结及脾脏，涂抹EE能使抑制前述的现象。

本发明适当地描述可以在本文未具体公开的要件或限制下实施。已被用作描述的术语并不是限制。在使用这些术语和除此之外的任何同等物的表达和描述是没有差别的，但应当认识到本发明内的权利是可能修改的。因此，虽然本发明已说明实施例和其他情况，本文中所公开的内容可以被本领域的技术人员进行修饰和变化，并且这样的修改和变化被认为是在本发明的权利范围之内。

Claims

1.一种组合物用在制备提供神经保护的药物的用途，其中所述组合物包含海木耳萃取物，其中所述海木耳萃取物的制备方法包含步骤如下：(a)用醇类溶剂对海木耳进行萃取，得海木耳醇类萃取物，其中所述醇类溶剂为甲醇或乙醇。

2.如权利要求1所述的用途，其中所述神经保护包含抑制或预防神经细胞凋亡。

3.如权利要求1所述的用途，其中所述海木耳萃取物提供神经保护以预防或治疗神经退化性疾病。

4.如权利要求3所述的用途，其中所述神经退化性疾病包含帕金森氏症。

5.一种组合物用在制备促进骨质生成的药物的用途，其中所述组合物包含海木耳萃取物，其中所述海木耳萃取物的制备方法包含步骤如下：(a)用醇类溶剂对海木耳进行萃取，得海木耳醇类萃取物，其中所述醇类溶剂为甲醇或乙醇。

6.如权利要求5所述的用途，其中所述海木耳萃取物促进骨质生成以预防或治疗骨疾病。

7.如权利要求6所述的用途，其中所述骨疾病包含骨质疏松、骨缺损或骨折疾病。

8.如权利要求7所述的用途，其中所述骨疾病包含骨缺损。

9.一种组合物用在制备治疗过敏性皮肤炎的药物的用途，其中所述组合物包含海木耳萃取物，其中所述海木耳萃取物的制备方法包含步骤如下：(a)用醇类溶剂对海木耳进行萃取，得海木耳醇类萃取物，其中所述醇类溶剂为甲醇或乙醇。

10.如权利要求9所述的用途，其中所述过敏性皮肤炎包含异位性皮肤炎。

11.如权利要求1、5及9中任一所述的用途，其中所述海木耳萃取物的制备方法进一步包含步骤(b)，其在步骤(a)之后，包含用有机溶液或超临界萃取对所述海木耳醇类萃取物进行分配萃取，以形成有机溶剂层以及水性层，然后收取所述有机溶剂层，以得所述海木耳萃取物，其中所述有机溶液为有机溶剂或是水与有机溶剂的混合液，所述有机溶剂为乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸丁酯、己烷、庚烷、辛烷、壬烷、甲醚、乙醚、二氯甲烷、氯仿或四氯化碳。

12.如权利要求1、5及9中任一所述的用途，其中所述醇类溶剂为乙醇。

13.如权利要求11所述的用途，其中所述有机溶剂为乙酸乙酯。