CN108379302B - 双裂海木耳乙酸乙酯提取物在制备抗炎镇痛药物中的用途 - Google Patents
双裂海木耳乙酸乙酯提取物在制备抗炎镇痛药物中的用途 Download PDFInfo
- Publication number
- CN108379302B CN108379302B CN201710899587.8A CN201710899587A CN108379302B CN 108379302 B CN108379302 B CN 108379302B CN 201710899587 A CN201710899587 A CN 201710899587A CN 108379302 B CN108379302 B CN 108379302B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- ethyl acetate
- carrageenan
- inflammatory
- acetate extract
- induced
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 239000002024 ethyl acetate extract Substances 0.000 title claims abstract description 42
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 title claims abstract description 28
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 8
- 241000541656 Carex marina Species 0.000 title claims description 4
- 229940035676 analgesics Drugs 0.000 title abstract description 5
- 239000000730 antalgic agent Substances 0.000 title abstract description 5
- 229940124599 anti-inflammatory drug Drugs 0.000 title description 4
- 241001506047 Tremella Species 0.000 claims abstract description 28
- 230000000202 analgesic effect Effects 0.000 claims abstract description 10
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 6
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 30
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- 240000005710 Auricularia polytricha Species 0.000 claims description 17
- 235000000024 Auricularia polytricha Nutrition 0.000 claims description 17
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 claims description 10
- 238000002791 soaking Methods 0.000 claims description 10
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 239000000287 crude extract Substances 0.000 claims description 6
- IDGUHHHQCWSQLU-UHFFFAOYSA-N ethanol;hydrate Chemical compound O.CCO IDGUHHHQCWSQLU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 238000005192 partition Methods 0.000 claims description 5
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 5
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 3
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 3
- 238000000227 grinding Methods 0.000 claims description 3
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 abstract description 14
- 208000002193 Pain Diseases 0.000 abstract description 14
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 abstract description 14
- 230000036407 pain Effects 0.000 abstract description 13
- 238000011161 development Methods 0.000 abstract description 7
- 229940079593 drug Drugs 0.000 abstract description 4
- 235000013305 food Nutrition 0.000 abstract description 3
- 235000013376 functional food Nutrition 0.000 abstract description 2
- UHVMMEOXYDMDKI-JKYCWFKZSA-L zinc;1-(5-cyanopyridin-2-yl)-3-[(1s,2s)-2-(6-fluoro-2-hydroxy-3-propanoylphenyl)cyclopropyl]urea;diacetate Chemical compound [Zn+2].CC([O-])=O.CC([O-])=O.CCC(=O)C1=CC=C(F)C([C@H]2[C@H](C2)NC(=O)NC=2N=CC(=CC=2)C#N)=C1O UHVMMEOXYDMDKI-JKYCWFKZSA-L 0.000 description 74
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 70
- 229920001525 carrageenan Polymers 0.000 description 67
- 239000000679 carrageenan Substances 0.000 description 67
- 229940113118 carrageenan Drugs 0.000 description 67
- 235000010418 carrageenan Nutrition 0.000 description 67
- 102000011779 Nitric Oxide Synthase Type II Human genes 0.000 description 39
- 108010076864 Nitric Oxide Synthase Type II Proteins 0.000 description 39
- 210000002683 foot Anatomy 0.000 description 38
- 102000003896 Myeloperoxidases Human genes 0.000 description 37
- 108090000235 Myeloperoxidases Proteins 0.000 description 37
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 37
- 102000003777 Interleukin-1 beta Human genes 0.000 description 28
- 108090000193 Interleukin-1 beta Proteins 0.000 description 28
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 26
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 26
- LOGFVTREOLYCPF-KXNHARMFSA-N (2s,3r)-2-[[(2r)-1-[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-3-hydroxybutanoic acid Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H]1CCCN1C(=O)[C@@H](N)CCCCN LOGFVTREOLYCPF-KXNHARMFSA-N 0.000 description 25
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 22
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 21
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 19
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 description 19
- CGIGDMFJXJATDK-UHFFFAOYSA-N indomethacin Chemical compound CC1=C(CC(O)=O)C2=CC(OC)=CC=C2N1C(=O)C1=CC=C(Cl)C=C1 CGIGDMFJXJATDK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 16
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 16
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 15
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 14
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 14
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 14
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 14
- 238000000034 method Methods 0.000 description 13
- 208000004454 Hyperalgesia Diseases 0.000 description 12
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 12
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 10
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 10
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 10
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 10
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 10
- 230000000770 proinflammatory effect Effects 0.000 description 10
- 108010037462 Cyclooxygenase 2 Proteins 0.000 description 9
- 102100038280 Prostaglandin G/H synthase 2 Human genes 0.000 description 9
- 230000001760 anti-analgesic effect Effects 0.000 description 9
- 229960000905 indomethacin Drugs 0.000 description 9
- 230000028709 inflammatory response Effects 0.000 description 9
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 9
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 8
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 8
- 230000005965 immune activity Effects 0.000 description 7
- 206010065390 Inflammatory pain Diseases 0.000 description 6
- MWUXSHHQAYIFBG-UHFFFAOYSA-N Nitric oxide Chemical compound O=[N] MWUXSHHQAYIFBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 6
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 6
- 238000011160 research Methods 0.000 description 6
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 5
- 102000008299 Nitric Oxide Synthase Human genes 0.000 description 5
- 108010021487 Nitric Oxide Synthase Proteins 0.000 description 5
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 5
- 230000006399 behavior Effects 0.000 description 5
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 5
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 5
- 229930014626 natural product Natural products 0.000 description 5
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 5
- 241000195493 Cryptophyta Species 0.000 description 4
- 241000206572 Rhodophyta Species 0.000 description 4
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 4
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 4
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 4
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 4
- 230000036542 oxidative stress Effects 0.000 description 4
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 3
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 3
- 208000035154 Hyperesthesia Diseases 0.000 description 3
- PLXBWHJQWKZRKG-UHFFFAOYSA-N Resazurin Chemical compound C1=CC(=O)C=C2OC3=CC(O)=CC=C3[N+]([O-])=C21 PLXBWHJQWKZRKG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 239000000469 ethanolic extract Substances 0.000 description 3
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 3
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 3
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 3
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 3
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 3
- 230000004044 response Effects 0.000 description 3
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 102000007469 Actins Human genes 0.000 description 2
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 2
- 241001474374 Blennius Species 0.000 description 2
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 2
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N Haematoxylin Chemical compound C12=CC(O)=C(O)C=C2CC2(O)C1C1=CC=C(O)C(O)=C1OC2 WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NTYJJOPFIAHURM-UHFFFAOYSA-N Histamine Chemical compound NCCC1=CN=CN1 NTYJJOPFIAHURM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000012404 In vitro experiment Methods 0.000 description 2
- 229940119568 Inducible nitric oxide synthase inhibitor Drugs 0.000 description 2
- PIWKPBJCKXDKJR-UHFFFAOYSA-N Isoflurane Chemical compound FC(F)OC(Cl)C(F)(F)F PIWKPBJCKXDKJR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 206010030113 Oedema Diseases 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 description 2
- LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-N Pyruvic acid Chemical compound CC(=O)C(O)=O LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000251555 Tunicata Species 0.000 description 2
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 description 2
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 2
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 2
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000000975 bioactive effect Effects 0.000 description 2
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 2
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 2
- 238000013461 design Methods 0.000 description 2
- 235000015872 dietary supplement Nutrition 0.000 description 2
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 2
- 210000000548 hind-foot Anatomy 0.000 description 2
- 238000007489 histopathology method Methods 0.000 description 2
- 238000003125 immunofluorescent labeling Methods 0.000 description 2
- 238000011532 immunohistochemical staining Methods 0.000 description 2
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 2
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- 229960002725 isoflurane Drugs 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 238000001543 one-way ANOVA Methods 0.000 description 2
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 2
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 2
- 230000010412 perfusion Effects 0.000 description 2
- 210000000680 phagosome Anatomy 0.000 description 2
- OQUKIQWCVTZJAF-UHFFFAOYSA-N phenol;sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O.OC1=CC=CC=C1 OQUKIQWCVTZJAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 2
- PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N rhodamine B Chemical compound [Cl-].C=12C=CC(=[N+](CC)CC)C=C2OC2=CC(N(CC)CC)=CC=C2C=1C1=CC=CC=C1C(O)=O PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QZAYGJVTTNCVMB-UHFFFAOYSA-N serotonin Chemical compound C1=C(O)C=C2C(CCN)=CNC2=C1 QZAYGJVTTNCVMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 239000012103 Alexa Fluor 488 Substances 0.000 description 1
- 235000000023 Auricularia auricula Nutrition 0.000 description 1
- 241001149430 Auricularia auricula-judae Species 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 102400000967 Bradykinin Human genes 0.000 description 1
- 101800004538 Bradykinin Proteins 0.000 description 1
- 208000024172 Cardiovascular disease Diseases 0.000 description 1
- 241000195628 Chlorophyta Species 0.000 description 1
- 208000017667 Chronic Disease Diseases 0.000 description 1
- 208000000094 Chronic Pain Diseases 0.000 description 1
- 241000700108 Ctenophora <comb jellyfish phylum> Species 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 206010012335 Dependence Diseases 0.000 description 1
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- 241000258955 Echinodermata Species 0.000 description 1
- 241000206671 Gelidium amansii Species 0.000 description 1
- 241001428242 Gelidium serrulatum Species 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 108010043121 Green Fluorescent Proteins Proteins 0.000 description 1
- QXZGBUJJYSLZLT-UHFFFAOYSA-N H-Arg-Pro-Pro-Gly-Phe-Ser-Pro-Phe-Arg-OH Natural products NC(N)=NCCCC(N)C(=O)N1CCCC1C(=O)N1C(C(=O)NCC(=O)NC(CC=2C=CC=CC=2)C(=O)NC(CO)C(=O)N2C(CCC2)C(=O)NC(CC=2C=CC=CC=2)C(=O)NC(CCCN=C(N)N)C(O)=O)CCC1 QXZGBUJJYSLZLT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000168525 Haematococcus Species 0.000 description 1
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101001076407 Homo sapiens Interleukin-1 receptor antagonist protein Proteins 0.000 description 1
- 229940119178 Interleukin 1 receptor antagonist Drugs 0.000 description 1
- 102000000589 Interleukin-1 Human genes 0.000 description 1
- 108010002352 Interleukin-1 Proteins 0.000 description 1
- 102000051628 Interleukin-1 receptor antagonist Human genes 0.000 description 1
- 102000015696 Interleukins Human genes 0.000 description 1
- 108010063738 Interleukins Proteins 0.000 description 1
- 102000009571 Macrophage Inflammatory Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010009474 Macrophage Inflammatory Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 102100029438 Nitric oxide synthase, inducible Human genes 0.000 description 1
- 101710089543 Nitric oxide synthase, inducible Proteins 0.000 description 1
- 239000002033 PVDF binder Substances 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 241000199919 Phaeophyceae Species 0.000 description 1
- 206010057249 Phagocytosis Diseases 0.000 description 1
- 241000700157 Rattus norvegicus Species 0.000 description 1
- 206010040070 Septic Shock Diseases 0.000 description 1
- FZWLAAWBMGSTSO-UHFFFAOYSA-N Thiazole Chemical compound C1=CSC=N1 FZWLAAWBMGSTSO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 1
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000036592 analgesia Effects 0.000 description 1
- 238000000540 analysis of variance Methods 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000003178 anti-diabetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 239000006286 aqueous extract Substances 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 230000003542 behavioural effect Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 238000004820 blood count Methods 0.000 description 1
- 239000001045 blue dye Substances 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- QXZGBUJJYSLZLT-FDISYFBBSA-N bradykinin Chemical compound NC(=N)NCCC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N1[C@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)CCC1 QXZGBUJJYSLZLT-FDISYFBBSA-N 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 1
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 238000003570 cell viability assay Methods 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 230000004186 co-expression Effects 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 230000002380 cytological effect Effects 0.000 description 1
- 230000001461 cytolytic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N dexamethasone Chemical compound C1CC2=CC(=O)C=C[C@]2(C)[C@]2(F)[C@@H]1[C@@H]1C[C@@H](C)[C@@](C(=O)CO)(O)[C@@]1(C)C[C@@H]2O UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N 0.000 description 1
- 229960003957 dexamethasone Drugs 0.000 description 1
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 230000003467 diminishing effect Effects 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 1
- 210000005069 ears Anatomy 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N eosin Chemical compound [Na+].OC(=O)C1=CC=CC=C1C1=C2C=C(Br)C(=O)C(Br)=C2OC2=C(Br)C(O)=C(Br)C=C21 YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002481 ethanol extraction Methods 0.000 description 1
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 1
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 1
- 238000012757 fluorescence staining Methods 0.000 description 1
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 238000007490 hematoxylin and eosin (H&E) staining Methods 0.000 description 1
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 1
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 1
- 229960001340 histamine Drugs 0.000 description 1
- 210000003630 histaminocyte Anatomy 0.000 description 1
- QWPPOHNGKGFGJK-UHFFFAOYSA-N hypochlorous acid Chemical compound ClO QWPPOHNGKGFGJK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010191 image analysis Methods 0.000 description 1
- 230000036737 immune function Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 238000012151 immunohistochemical method Methods 0.000 description 1
- 230000007365 immunoregulation Effects 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 239000003407 interleukin 1 receptor blocking agent Substances 0.000 description 1
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 229940126619 mouse monoclonal antibody Drugs 0.000 description 1
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 description 1
- 208000004296 neuralgia Diseases 0.000 description 1
- 230000002981 neuropathic effect Effects 0.000 description 1
- 208000021722 neuropathic pain Diseases 0.000 description 1
- 239000002547 new drug Substances 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 1
- 239000007800 oxidant agent Substances 0.000 description 1
- 230000004792 oxidative damage Effects 0.000 description 1
- 229940094443 oxytocics prostaglandins Drugs 0.000 description 1
- 230000000242 pagocytic effect Effects 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 1
- 230000008782 phagocytosis Effects 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 229920002981 polyvinylidene fluoride Polymers 0.000 description 1
- 239000011164 primary particle Substances 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 150000003180 prostaglandins Chemical class 0.000 description 1
- 238000002731 protein assay Methods 0.000 description 1
- 229940107700 pyruvic acid Drugs 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 230000011514 reflex Effects 0.000 description 1
- 108091006091 regulatory enzymes Proteins 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 239000012723 sample buffer Substances 0.000 description 1
- 230000001953 sensory effect Effects 0.000 description 1
- 230000036303 septic shock Effects 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 238000004904 shortening Methods 0.000 description 1
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 description 1
- FGFFSZMRJVXHPL-UHFFFAOYSA-N sodium;2-(trimethylazaniumyl)acetate Chemical compound [Na].C[N+](C)(C)CC([O-])=O FGFFSZMRJVXHPL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 230000035882 stress Effects 0.000 description 1
- 230000002459 sustained effect Effects 0.000 description 1
- 125000003831 tetrazolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 230000008536 thermal pain sensitivity Effects 0.000 description 1
- 239000005028 tinplate Substances 0.000 description 1
- UFTFJSFQGQCHQW-UHFFFAOYSA-N triformin Chemical compound O=COCC(OC=O)COC=O UFTFJSFQGQCHQW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000008728 vascular permeability Effects 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
- 239000002023 wood Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/02—Algae
- A61K36/04—Rhodophycota or rhodophyta (red algae), e.g. Porphyra
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
- A61K2236/30—Extraction of the material
- A61K2236/33—Extraction of the material involving extraction with hydrophilic solvents, e.g. lower alcohols, esters or ketones
- A61K2236/333—Extraction of the material involving extraction with hydrophilic solvents, e.g. lower alcohols, esters or ketones using mixed solvents, e.g. 70% EtOH
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
- A61K2236/30—Extraction of the material
- A61K2236/39—Complex extraction schemes, e.g. fractionation or repeated extraction steps
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
- A61K2236/50—Methods involving additional extraction steps
- A61K2236/51—Concentration or drying of the extract, e.g. Lyophilisation, freeze-drying or spray-drying
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
- A61K2236/50—Methods involving additional extraction steps
- A61K2236/53—Liquid-solid separation, e.g. centrifugation, sedimentation or crystallization
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
- Mycology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Botany (AREA)
- Alternative & Traditional Medicine (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medical Informatics (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
本发明公开了一种双裂海木耳的乙酸乙酯提取物的制备方法，并公开了所制备的双裂海木耳的乙酸乙酯提取物在制备抗炎镇痛药物或抗炎镇痛食品中的用途。本发明制备的双裂海木耳的乙酸乙酯提取物具有很高的发展潜力，可用于制备抗炎镇痛的功能性食品，也可以用于制备抗炎止痛的药物。
Description
技术领域
本发明涉及医药技术领域，具体是双裂海木耳乙酸乙酯提取物在制备抗炎镇痛药物中的用途。
背景技术
海洋天然产物的发展已经大幅增长，并已确认了多达4196个化合物的生物活性。藻类占25％的海洋天然化合物，其余来自腔肠动物、棘皮动物门等。25％海洋天然产物领域的是藻类产品，主要原因是藻类可再生、食用、环保。相对于绿藻和褐藻，红藻生物多样性较高，这使得有更高机会可开发更多种活性物质。例如，先前研究报告也发现，细毛石花菜的半乳糖、从隅江篱的硫酸多糖具有止痛作用。因此，现有技术中已指出红藻具有巨大潜力，可作为新药开发的来源。
因为过度捕捞，近年来双裂海木耳的数量已经减少，并威胁到其生存。目前，对于养殖型双裂海木耳生物活性的相关研究极少。现有技术中，只有两个非SCI期刊论文已经报导关于海木耳的生物活性。先前大鼠的研究结果表明，双裂海木耳的水提取物可以消除自由基，具有抗糖尿病的特性，降低甘油三酸酯水平。双裂海木耳之磷酸盐缓冲液(phosphatebuffered saline,PBS)的提取物，也被发现有抗菌活性。活体试验结果还表明，同属不同种的大型藻锡兰海木耳的水提取物有抗肿瘤活性，以及免疫调节作用。锡兰海木耳的水提取物，也被发现有抗氧化作用。现有技术中，相对于其它红藻，目前关于双裂海木耳之活性物质成份的已知资料非常少，尚未公开关于双裂海木耳的乙酸乙酯提取物(ethyl acetateextract)在抗炎、镇痛方面的研究。
发明内容
本发明的目的在于探讨养殖型大型红藻双裂海木耳之乙酸乙酯提取物的抗炎作用，以解决上述背景技术中提出的问题。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
双裂海木耳的乙酸乙酯提取物的制备方法，步骤如下：
1)将双裂海木耳在50℃的条件下烘干24小时，获得干燥双裂海木耳；
2)将干燥双裂海木耳研末，浸泡在乙醇水溶液中，在室温下进行提取，获得浸泡液；
3)将浸泡液经过过滤、减压浓缩后，获得乙醇粗萃物；
4)将乙醇粗萃物悬浮在水中，并使用乙酸乙酯进行分配分离，且分配分离操作重复进行三次，获得双裂海木耳的乙酸乙酯提取物。
作为本发明进一步的方案：步骤1)中，双裂海木耳为养殖型双裂海木耳。
作为本发明再进一步的方案：步骤2)中，所述乙醇水溶液的乙醇体积浓度为95％。
作为本发明再进一步的方案：步骤4)中，乙酸乙酯的体积用量与水的体积用量相同。
作为本发明再进一步的方案：步骤1)中，双裂海木耳双裂海木耳的用量为干重1kg。
作为本发明再进一步的方案：步骤3)中，所获得的乙醇粗萃物为34.3g。
作为本发明再进一步的方案：步骤4)中，水的加入量为1公升，乙酸乙酯的加入量为1公升。
上述双裂海木耳的乙酸乙酯提取物在制备抗炎镇痛药物中的用途。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
本发明制备的双裂海木耳的乙酸乙酯提取物，能抑制脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)所诱导巨噬细胞所产生的炎性蛋白質诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)，口服双裂海木耳的乙酸乙酯提取物可以减少角叉菜胶(carrageenan)致脚掌肿胀和炎性疼痛，且双裂海木耳的乙酸乙酯提取物可显著抑制角叉菜胶所致的白细胞浸润(leukocyte infiltration)，以及在发炎组织内炎症介质的蛋白质表达。本发明制备的双裂海木耳的乙酸乙酯提取物具有很高的发展潜力，可以用于制备抗炎止痛的药物。
附图说明
图1为不同浓度的双裂海木耳之乙酸乙酯提取物(PD1)对RAW264.7巨噬细胞存活率影响结果图。
图2为PD1对脂多糖所诱导RAW264.7之发炎性蛋白质诱导型一氧化氮合酶的影响结果图。
图3为PD1对脂多糖所诱导RAW264.7之发炎性蛋白质诱导型环氧化酶-2的影响结果图。
图4为PD1对角叉菜胶所致大鼠脚掌肿胀的影响结果图。
图5为随着角叉菜胶注射后的时间点，合并给予PD1大鼠之脚掌体积增加的百分比变化结果图。
图6为将合并给予不同剂量PD1所造成大鼠脚掌肿胀程度对时间点的变化转换为曲线下面积值的示意图。
图7为合并口服PD1或吲哚美辛对角叉菜胶所诱发大鼠热痛敏的止痛效果结果图。
图8为合并口服PD1或吲哚美辛对角叉菜胶所诱发大鼠机械痛敏的止痛效果结果图。
图9为合并注射PD1对角叉菜胶所致大鼠脚掌组织内白细胞浸润的影响结果图。
图10为合并注射PD1对角叉菜胶所致大鼠脚掌组织内白细胞浸润的影响结定量分析图。
图11为PD1对角叉菜胶所诱发大鼠脚掌组织内髓过氧物酶(绿色)、白细胞介素-1β(红色)、诱导型一氧化氮合酶(红色)之免疫活性增加的影响结果图。
图12为PD1对角叉菜胶所诱发大鼠脚掌组织内髓过氧物酶(绿色)免疫活性的定量结果图。
图13为PD1对角叉菜胶所诱发大鼠脚掌组织内白细胞介素-1β(红色)免疫活性的定量结果图。
图14为PD1对角叉菜胶所诱发大鼠脚掌组织内诱导型一氧化氮合酶(红色)免疫活性的定量结果图。
图15为PD1对角叉菜胶所诱导大鼠脚掌组织中白细胞介素-1β(红色)和诱导型一氧化氮合酶(红色)在髓过氧物酶(绿色)上表达的影响结果图。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明的技术方案作进一步详细地说明。
实施例1
双裂海木耳的乙酸乙酯提取物的制备方法，步骤如下：
1)将双裂海木耳在50℃的条件下烘干24小时，获得干燥双裂海木耳，其中，双裂海木耳双裂海木耳的用量为干重1kg，双裂海木耳为养殖型双裂海木耳，来自台湾地区水产试验所；
2)将干燥双裂海木耳研末，浸泡在乙醇水溶液中，在室温下进行提取，获得浸泡液，其中，所述乙醇水溶液的乙醇体积浓度为95％；
3)将浸泡液经过过滤、减压浓缩后，获得乙醇粗萃物，所获得的乙醇粗萃物为34.3g；
4)将乙醇粗萃物悬浮在水中，并使用乙酸乙酯进行分配分离，且分配分离操作重复进行三次，获得双裂海木耳的乙酸乙酯提取物，其中，水的加入量为1公升，乙酸乙酯的加入量为1公升，获得的乙酸乙酯提取物为7.7g。
采用苯酚-硫酸法测定双裂海木耳的乙酸乙酯提取物(PD1)的多糖含量。测量表明，双裂海木耳的乙酸乙酯提取物(PD1)不含有多糖。
参与炎症反应的细胞，会释放各种促炎介质，包括诱导型一氧化氮合酶和白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)等。白细胞介素-1β激活疼痛感觉神经并传输到大脑，从而在病理条件下造成生物的疼痛反应。诱导型一氧化氮合酶主要被表达在巨噬细胞。在发炎反应中，当免疫系统的巨噬细胞被激活时，诱导型一氧化氮合酶的表现量会增加，从而加速一氧化氮的合成，而可能最终导致细胞毒性、感染性休克、癌症和其他严重的疾病。白细胞介素-1β是白细胞介素家族最强的促炎介质。先前的研究表明，注射白细胞介素-1β抑制剂或诱导型一氧化氮合酶抑制剂可以减轻神经病变性大鼠的疼痛。现有技术中指出，诱导型一氧化氮合酶和白细胞介素-1β在炎症反应中具有重要角色，相关抑制物很有潜力可发展为新的抗炎药物。当细胞处于氧化压力高于抗氧化压力的状态时，将进一步促进发炎因子的合成与释放。髓过氧物酶(myeloperoxidase,MPO)常作为氧化压力的标志物，可用于评估物质对于氧化压力的抑制作用。在受损组织中，物质在降低髓过氧物酶之量的效果，反映了它降低氧化压力的能力。同时，髓过氧物酶也是一种白细胞的标记物，因此，髓过氧物酶(myeloperoxidase,MPO)的量可作为分析组织发炎程度的指标。
为了研究双裂海木耳之乙酸乙酯提取物的抗炎作用，使用脂多糖所导致小鼠巨噬细胞发炎模式作为体外测试平台。在活体大鼠实验中，我们藉由角叉菜胶诱导脚掌肿胀所导致发炎性疼痛，及诱导型一氧化氮合酶、白细胞介素-1β和髓过氧物酶等蛋白质的大量增加，探讨双裂海木耳之乙酸乙酯提取物(PD1)潜在的抗炎作用与止痛效果。
实施例2
通过体外实验评估双裂海木耳之乙酸乙酯提取物(PD1)的抗炎活性。
从美国模式培养物保藏所中获得了小鼠RAW 264.7巨噬细胞(TIB-71；Manassas,VA,USA)。我们利用Dulbecco改良的Eagle培养基，添加10％热灭活胎牛血清、50U/ml青霉素、50μg/mL链霉素，2mM谷氨酰胺、1mM丙酮酸，和4.5g/L的葡萄糖，在37℃的加湿培养箱孵化器(5％二氧化碳:95％空气)培养巨噬细胞。
细胞存活率：利用阿尔玛蓝处理，以测量细胞的存活率。阿尔玛蓝是一种四唑染剂，可藉由活细胞减少的萤光产品，原理类似于细胞存活率实验所使用的噻唑蓝染剂。这种方法已被证实能精确地测量RAW264.7巨噬细胞的存活率。在细胞培养实验中，我们用100％二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)溶解双裂海木耳之乙酸乙酯提取物(PD1)，二甲基亚砜在培养基的最终使用浓度为1％。
体外抗炎试验：将小鼠巨噬细胞RAW 264.7培养在仅含有脂多糖(0.01μg/ml；L2654；Sigma,St.Louis MO,USA)的培养基中16小时，以诱导发炎反应。对于抗炎活性测定，在脂多糖处理的5分钟前，对三个实验组的巨噬细胞分别添加双裂海木耳之乙酸乙酯提取物10μg/ml、20μg/ml和50μg/ml，对正控制组的巨噬细胞添加氟美松(dexamethasone)10μM。然后，用冰冷的磷酸盐缓冲液冲洗巨噬细胞，并在冰冷的裂解缓冲液中裂解巨噬细胞，然后在20000×g、4℃条件下离心巨噬细胞30分钟。用一种改良自Lowry等人的方法，自沉淀物上移出并保留上清液，并以DC蛋白质分析试剂盒测量上清液的蛋白质浓度。我们进行了西方点墨法。在样品中加入等体积的样品缓冲液。置入样品到三甲基甘氨酸-十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶，在150V、90分钟条件下，进行样品的电泳。在125mA、4℃的过夜条件下，在转渍缓冲液中，将样品转渍至聚偏氟乙烯膜。用5％脱脂奶粉在室温下封闭膜50分钟，然后将膜以一级抗体在室温下浸泡180分钟，包括诱导型一氧化氮合酶抗体(1:1000稀释；目录编号6103322；多株抗体；BD Pharmingen,San Diego,CA,USA)和环氧化酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)抗体(1:1000稀释；目录编号160106；多株抗体；CaymanChemical,USA)。利用化学冷光法侦测髓过氧化物酶结合的二级抗体。使用UVP BioChemi成像系统与LabWorks 4.0软件得到图像，以进行相对光密度定量分析。在同一张影像上计算了双裂海木耳之乙酸乙酯提取物合并组或化合物合并组的条带与仅有脂多糖处理组之间的相对变化量。
实验结果分析：
附图1为不同浓度的双裂海木耳之乙酸乙酯提取物对RAW264.7巨噬细胞存活率影响结果图。使用阿尔玛蓝减少试验，我们分析PD1处理24、48小时和72小时后对RAW264.7细胞存活率的影响。结果表明，双裂海木耳之乙酸乙酯提取物(1μg/ml、10μg/ml)并不明显影响细胞存活率。在第24小时，相较于控制组，双裂海木耳之乙酸乙酯提取物(100μg/ml)明显地增加细胞存活率。试验结果指出，除了双裂海木耳之乙酸乙酯提取物(100μg/ml)在第24小时显著地提高RAW264.7细胞存活率，其它组别的细胞存活率并没有受到显著的影响。其中，数据呈现：平均值±平均值标准误差，与控制组比较为P<0.05。
附图2为双裂海木耳之乙酸乙酯提取物对脂多糖所诱导RAW264.7之发炎性蛋白质诱导型一氧化氮合酶的影响结果图。以单独脂多糖组之诱导型一氧化氮合酶的蛋白质表现量视为100％。在10μg/ml、20μg/ml和50μg/ml的双裂海木耳之乙酸乙酯提取物处理后，诱导型一氧化氮合酶之蛋白质表现量则分别成为103.1±11.6％、79.1±3.4％和64.6±5.0％。统计分析显示，双裂海木耳之乙酸乙酯提取物在20μg/ml和50μg/ml浓度可明显抑制脂多糖所诱导RAW264.7细胞的诱导型一氧化氮合酶蛋白质表现量。与脂多糖组相比，在正控制组中，氟美松也会显着地减少诱导型一氧化氮合酶的表达。其中，数据呈现：平均值(mean)±平均值标准误差(standard error of the mean,SEM)，与单独脂多糖组比较为P<0.05。
附图3为双裂海木耳之乙酸乙酯提取物对脂多糖所诱导RAW264.7之发炎性蛋白质诱导型环氧化酶-2的影响结果图。以单独脂多糖组之环氧化酶-2的蛋白质表达量视为100％。统计分析表明，在10μg/ml、20μg/ml和50μg/ml的双裂海木耳之乙酸乙酯提取物处理后，脂多糖所诱导RAW264.7细胞之环氧化酶-2蛋白质的表达，并没有受到明显的抑制作用。我们还观察到双裂海木耳之乙酸乙酯提取物并未造成β-肌动蛋白(β-actin)在组间的显著性差异。其中，数据呈现：平均值±平均值标准误差，与单独脂多糖组比较为P<0.05。
在上述实验过程中，将数据以平均值±平均值标准误差的形式进行呈现，再以单向方差分析对数据进行分析(one-way analysis of variance,ANOVA)，然后采用邓肯方法(Duncan’s method)进行多重比较，并将p<0.05视为有显著性差异。
实施例3
评估双裂海木耳之乙酸乙酯提取物(PD1)的活体抗炎或镇痛作用。
角叉菜胶致大鼠脚掌发炎的活体模式的制备：根据美国生理学会的动物照护和使用指导原则，将饲养Wistar大鼠(体重：250-285g)在控制温度(22℃±1℃)和12h光暗循环的房间。用4％异氟醚在塑料箱内麻醉大鼠后，经由面罩对大鼠给予2.5％异氟醚(在空气/氧气的混合气体)。在对大鼠右后脚进行脚掌内注射1.5％lambda型角叉菜胶的100μL无菌生理食盐水的1个小时前，对大鼠口服2ml的空白溶剂(vehicle；2％二甲基亚砜)、双裂海木耳之乙酸乙酯提取物(20或50mg/kg)，或吲哚美辛(indomethacin；20mg/kg)。
大鼠疼痛行为分析：将大鼠放在高架金属丝网上，藉由测量后脚缩足反射阈值(paw withdrawal threshold；g)以分析机械痛敏(mechanical allodynia)的程度。采用一系列的von Frey单丝纤维组(Stoelting,Wood Dale,IL,USA)对足底中部区域，使用Chaplan的"向上-向下"方法确定最接近疼痛反应阈值的单丝纤维(缩足或舔脚)。我们将热源疼痛测定仪(低强度热源(热光源激发强度为25)，自动停止时间则为30秒；IITC,Woodland Hills,CA,USA)的热光源，置于脚掌底部以测量缩足反射潜伏期(pawwithdrawal latency；秒)，并进而评估热痛敏(thermal hyperalgesia)。
脚掌组织的组织病理学和免疫组织化学染色分析：心脏灌流含肝素(0.2U/mL)的冰冷磷酸盐缓冲液，随后则改用4％多聚甲醛继续灌流，最后用4％多聚甲醛固定脚掌样品2小时。将不同组大鼠的组织置于相同的冷冻包埋剂组织块中，然后用冷冻切片机(MicromHM 550；Thermo Scientific,Waltham,MA,USA)进行组织切片(20μm)，并再使用苏木精和伊红染色。关于免疫组织荧光染色分析，我们用0.1％的曲拉通X-100渗透切片20分钟，再浸泡于4％正常马血清30分钟。然后再另浸泡于分别针对髓过氧物酶(1:200稀释；目录编号ab9535；兔子多株抗体；Abcam,Cambridge,UK)、诱导型一氧化氮合酶(1:200稀释；目录编号sc-7271；小鼠单株抗体；Santa Cruz Biotechnology Inc.,Santa Cruz,CA,USA)或白细胞介素-1□(1:200稀释；目录编号AF-501-NA；山羊多株抗体；R&D systems,Minneapolis,MN,USA)的一级抗体溶液在4℃条件下过夜。我们在室温下将切片浸泡40分钟的二级抗体溶液，包括绿色荧光兔子二级抗体(Alexa Fluor 488；1:400稀释)分别和红色荧光小鼠二级抗体(rhodamine；1:400稀释)或红色荧光山羊二级抗体(rhodamine；1:400稀释)的混合溶液。我们使用显微镜(Leica DM-6000CS；Leica Instruments Inc.,Wetzlar,Germany)，配合光学影像撷取系统(Idea 5MP CMOS；SPOT Imaging Solutions,a division of DiagnosticInstruments,Inc.,Sterling Heights,MI,USA)或荧光影像撷取系统(Xplorer；SPOTImaging Solutions)，分析了每个组织病理学和免疫组织化学染色的脚掌切片。我们利用影像分析系统软件(MetaMorph；Molecular Devices,Downington,PA,USA)，定量分析免疫活性阳性反应面积(immunoreactive-positive area)的像素值，以求得免疫组织荧光染色分析数据。
实验结果分析：
一、口服PD1对角叉菜胶所致大鼠脚掌肿胀的影响
图4为双裂海木耳之乙酸乙酯提取物对角叉菜胶所致大鼠脚掌肿胀的影响结果图。图5为随着角叉菜胶注射后的时间点，合并给予PD1大鼠之脚掌体积增加的百分比变化结果图。图6为将合并给予不同剂量PD1所造成大鼠脚掌肿胀程度对时间点的变化转换为曲线下面积值的示意图。相较于角叉菜胶合并空白溶剂组，PD1组的值较小，则反映出PD1明显有效地抑制角叉菜胶所致大鼠脚掌肿胀。我们选择合并给予吲哚美辛(20mg/kg)作为正控制组。数据呈现：每组6只大鼠的平均值±平均值标准误差。*，与角叉菜胶合并空白溶剂组比较为P<0.05。
在活体抗发炎试验上，我们探讨PD1对角叉菜胶所致大鼠脚掌肿胀的影响。对大鼠脚掌的外观病理现象进行影像纪录(图4)，而图片记录结果表明，注射角叉菜胶导致大鼠脚掌产生了明显的肿胀。合并口服PD1(20或50mg/kg)，则减少大鼠脚掌肿胀。同时，我们使用脚掌容积测量仪测量大鼠脚掌肿胀程度的变化(图5)，并发现角叉菜胶所导致大鼠脚掌肿胀在第9小时达到最明显的程度，随后肿胀情况逐渐消退。PD1(20或50mg/kg)的合并给予，显著抑制角叉菜胶所诱导大鼠脚掌肿胀。与角叉菜胶合并空白溶剂组相比，在正控制组中，吲哚美辛(20mg/kg)的合并给予，也可明显减少大鼠脚掌水肿。将大鼠脚掌水肿程度对时间的变化曲线，换算成曲线下面积值(图6)。结果表明，相较于角叉菜胶合并空白溶剂组，合并给予PD1(20或50mg/kg)可明显减少脚掌肿胀的程度。
二、PD1对角叉菜胶所诱导发炎性疼痛的影响
图7-8为合并口服PD1或吲哚美辛，对角叉菜胶所诱发大鼠疼痛行为的止痛效果，包括热痛敏(图7)和机械痛敏(图8)。选择将合并给予吲哚美辛(20mg/kg)作为正控制组。数据呈现：每组6只大鼠的平均值±平均值标准误差。*，与角叉菜胶合并空白溶剂组比较为P<0.05。
利用角叉菜胶所诱发大鼠的热痛敏和机械痛敏模式，分析PD1对发炎性疼痛的镇痛作用。研究结果显示，角叉菜胶所引起热痛敏和机械痛敏至少会持续12小时以上。合并给予PD1(20或50mg/kg)可以明显地改善角叉菜胶所诱导热痛敏(图7)和机械痛敏(图8)的情况，而且该止痛效果大约可持续12个小时。选择将合并给予吲哚美辛(20mg/kg)作为正控制组。与角叉菜胶合并空白溶剂组相比，证明PD1能改善大鼠的热痛敏和机械痛敏现象。
三、利用组织病理学分析PD1对角叉菜胶所注射脚掌内白细胞浸润的影响
图9-10为合并注射PD1对角叉菜胶所致大鼠脚掌组织内白细胞浸润的影响。图片显示各组大鼠脚掌组织内白细胞(箭头)的情况，包括控制组(图9A)、角叉菜胶组(图9B)、角叉菜胶合并PD1组(图9C)。并针对各组白细胞数量(图10)进行定量分析。比例尺：(图9A)、(图9A)、(图9A)为150μm；(图9A)插图、(图9A)插图、(图9A)插图为35μm。数据呈现：每组6只大鼠的平均值±平均值标准误差。*，与控制组比较为P<0.05；#，与角叉菜胶合并空白溶剂组比较为P<0.05。
采用苏木精-伊红染色法对大鼠脚掌组织进行组织病理学分析。苏木精-伊红染色结果表明，与对照组(图9A)相比，角叉菜胶会导致大鼠脚掌组织内的白细胞浸润(图9B)。合并注射PD1，可以减少角叉菜胶所致白细胞浸润的程度(图9C)。统计结果(图10)也证明合并口服PD1可以减少角叉菜胶所诱导白细胞数目增加的程度。
四、PD1对角叉菜胶所致大鼠脚掌组织内发炎相关蛋白质表达的影响
图11-14分析PD1对角叉菜胶所诱发大鼠脚掌组织内髓过氧物酶(绿色)、白细胞介素-1β(红色)、诱导型一氧化氮合酶(红色)之免疫活性增加的影响。组别设计包括控制组(图11A、图11D、图11G)、角叉菜胶组(图11B、图11E、图11H)、角叉菜胶合并给予PD1组(图11C、图11F、图11I)。并呈现髓过氧物酶(图12)、白细胞介素-1β(图13)、诱导型一氧化氮合酶(图14)之免疫活性的定量结果。数据呈现：每组6只大鼠的平均值±平均值标准误差。*，与控制组比较为P<0.05；#，与角叉菜胶合并空白溶剂组比较为P<0.05。比例尺：50μm。
用免疫组织化学方法，分析PD1对角叉菜胶所诱发大鼠脚掌组织内髓过氧物酶、白细胞介素-1β、诱导型一氧化氮合酶等蛋白质表达的影响。结果显示，与控制组相比(图11A、图11D、图11G)，角叉菜胶所诱导大鼠脚掌组织中髓过氧物酶、白细胞介素-1β和诱导型一氧化氮合酶的免疫活性明显地增加(图11B、图11E、图11H)。在合并给予PD1组中，髓过氧物酶、白细胞介素-1β和诱导型一氧化氮合酶的免疫活性有显著地降低(图11C、图11F、图11I)。荧光定量结果证明，合并口服PD1显著地抑制角叉菜胶所注射脚掌组织内髓过氧物酶、白细胞介素-1β、诱导型一氧化氮合酶的免疫活性(图12、图13、图14)。以上显示，PD1能抑制角叉菜胶所诱导大鼠脚掌组织的发炎反应。
五、PD1对角叉菜胶所致大鼠脚掌组织内白细胞介素-1β和诱导型一氧化氮合酶在髓过氧物酶阳性反应细胞上表达的影响
图15为PD1对角叉菜胶所诱导大鼠脚掌组织中白细胞介素-1β(红色)和诱导型一氧化氮合酶(红色)在髓过氧物酶阳性反应细胞(绿色)上表达的影响。组别设计包括控制组(图15A、图15D)、角叉菜胶组(图15B、图15E)、角叉菜胶合并给予PD1组(图15C、图15F)。双重免疫荧光染色结果显示，合并给予PD1能明显地抑制角叉菜胶所诱导白细胞介素-1β和诱导型一氧化氮合酶分别与髓过氧物酶的共同表现(co-localization)(箭头)情形。比例尺：50μm。
采用双重免疫组织化学染色，观察PD1对角叉菜胶所诱导大鼠脚掌组织中白细胞介素-1β和诱导型一氧化氮合酶在髓过氧物酶阳性反应细胞上表达的影响。结果显示，控制组之髓过氧物酶和白细胞介素-1β的免疫活性极低图15A)。在角叉菜胶组(图15B)中，我们可以观察到很高量的白细胞介素-1β被表现在髓过氧物酶阳性反应细胞上，而这样的情况则会受到合并口服PD1所抑制(图15C)。在控制组中，诱导型一氧化氮合酶与髓过氧物酶的免疫活性也极低(图15D)。在角叉菜胶组(图15E)中，我们观察到有高量的诱导型一氧化氮合酶被表达在髓过氧物酶阳性反应细胞上，但这种现象则可以受到合并口服PD1所抑制(图15F)。
在上述实验过程中，将数据以平均值±平均值标准误差的形式进行呈现，再以单向方差分析对数据进行分析，然后采用邓肯方法进行多重比较，并将p<0.05视为有显著性差异。
实施例2的体外实验显示，分离自双裂海木耳的PD1在100μg/ml浓度无细胞毒性。在20μg/ml，PD1显著地抑制促炎蛋白质诱导型一氧化氮合酶的表达。实施例3在角叉菜胶所诱导脚掌发炎的结果显示，合并口服PD1能减轻疼痛行为和脚掌肿胀。合并给予PD1可抑制角叉菜胶所致脚掌组织内白细胞浸润等发炎反应，还能减少髓过氧物酶、诱导型一氧化氮合酶和白细胞介素-1β等发炎介质的表达。口服PD1大鼠并未产生明显的外观或行为异常。综上，研究结果证明，PD1具有抗发炎和止痛的效果。
过度表现的诱导型一氧化氮合酶会导致大量一氧化氮的产生，而这将进一步加剧组织的发炎反应。甚至可能进一步导致一系列慢性疾病，如癌症、糖尿病和心血管疾病。为了筛选具有抗发炎活性的生物活性物质，许多研究报告使用了脂多糖所诱导小鼠巨噬细胞株(RAW 264.7)的体外发炎模式。体外实验结果显示，PD1能显著地抑制脂多糖所诱导小鼠巨噬细胞(RAW 264.7细胞)之促炎蛋白质诱导型一氧化氮合酶的大量表现，PD1也被证明对这些细胞发炎反应具有剂量依赖的抑制效果(图2)。但PD1对环氧化酶-2则无明显影响(图3)。已有先前研究指出，诱导型一氧化氮合酶藉由参与调控环氧化酶-2，而在发炎因子中具有关键角色。根据我们的实验结果，我们认为PD1的抗发炎作用，是透过抑制诱导型一氧化氮合酶的蛋白质表达，而不是经由调控环氧化酶-2的蛋白质表达。
在现有天然产物的活体消炎止痛相关研究中，角叉菜胶所致大鼠脚掌肿胀是最被广泛使用于发炎相关研究的实验模式。我们用角叉菜胶诱发大鼠脚掌产生发炎现象，以评估PD1在活体的抗发炎和止痛作用。结果显示，合并口服PD1可以降低角叉菜胶所诱导的脚掌肿胀(图5)，及热痛敏(图7)和机械痛敏(图8)等疼痛行为。因此，基于上述结果，可以证明PD1可以有效地降低角叉菜胶注射大鼠的发炎性疼痛。
在大鼠脚掌注射角叉菜胶后，受损组织能刺激肥大细胞释放缓激肽、5-羟色胺和组织胺，而提高血管通透性。这会导致大鼠脚掌逐渐肿胀，并引起胞噬性发炎反应。此外，受损组织将释放细胞激素，促使白细胞参与胞噬反应，并促进诱导型一氧化氮合酶的表达，从而导致产生大量的促炎介质(如前列腺素)，最终导致发炎性疼痛。先前研究已经证明，对大鼠脚掌注射角叉菜胶会导致脚掌组织的发炎，白细胞聚集在发炎区域而造成细胞浸润。我们在先前研究中也发现，角叉菜胶能诱导大鼠脚掌组织内发生高度的白细胞浸润。在本研究中，我们用苏木精和伊红染色来分析组织切片，观察发炎组织的白细胞浸润情况，而这现象则是可以受到合并口服PD1所抑制(图9)。通过免疫荧光染色分析，我们发现角叉菜胶能诱导大鼠脚掌组织中，诱导型一氧化氮合酶、白细胞介素-1β和髓过氧物酶等促炎性蛋白质的大量表达，而这种现象可以受到合并口服PD1所抑制(图11)。现有研究已经表明，诱导型一氧化氮合酶是发炎反应中最重要的调节酶。当诱导型一氧化氮合酶过度表达，会导致大量一氧化氮产生，而发生严重的发炎和疾病。我们也发现角叉菜胶组大鼠脚掌中有大量的诱导型一氧化氮合酶蛋白质表达。先前研究表明，诱导型一氧化氮合酶在角叉菜胶所诱导发炎反应中具有重要的病理作用。周边给予专一性诱导型一氧化氮合酶抑制剂，可抑制角叉菜胶所诱导的脚掌肿胀和疼痛行为。除了作为促炎介质外，白细胞介素-1β还可以调节免疫功能。对大鼠注射白细胞介素-1受体拮抗剂，能减少神经病变性疼痛的产生。髓过氧物酶也具有促炎作用。综上，诱导型一氧化氮合酶、白细胞介素-1β和髓过氧物酶都在发炎反应中扮演着重要的角色，而我们发现PD1能抑制这三个促炎性蛋白质的表达。
髓过氧物酶主要存在于白细胞的初级颗粒中，并负责初级免疫。当细菌侵入生物体时，白细胞会吞通过吞噬作用吞噬这些细菌，并形成吞噬体，而发生脱颗粒作用。同时，髓过氧物酶将从初级颗粒释放到吞噬体。然后，催化生成次氯酸、酪氨酸自由基和活性氧，这些都是能有效杀死入侵细菌的氧化剂。所以通过测量髓过氧物酶的表达，我们可以评估氧化损伤的程度。此外，目前已经知道髓过氧物酶也是白细胞标记物。我们实验结果发现角叉菜胶组大鼠脚掌组织内，髓过氧物酶之免疫活性有明显增加(图12)，证明确实发生白细胞浸润(图9)。在角叉菜胶大鼠脚掌中，我们观察到诱导型一氧化氮合酶和白细胞介素-1β的大量表达，这两个蛋白质并分别皆与髓过氧物酶有共同表现(图15B与15E)。同时，这些现象也会受到合并口服PD1所抑制(图15C和15F)。本发明确认PD1的抗发炎作用跟下列两个现象有关，包括抑制白细胞的浸润，减少促炎性蛋白质诱导型一氧化氮合酶、白细胞介素-1β在髓过氧物酶阳性反应细胞上的表达。
能否以持续和稳定的方式供应海洋天然产物，往往是能否进行临床前和临床试验的关键因素之一。由于双裂海木耳可以被养殖，所以可以稳定地供应PD1。基于本发明的实验结果，PD1的优点在于，可以口服、低细胞毒性，并具有消炎止痛作用。同时，口服PD1的大鼠，并没有在本实验过程中表现出运动行为或外观上的明显异常。本发明所采用的提取方法，不同于其他大多数多糖的提取方法。一种常用的多糖提取方法是，在0.15N盐酸溶液中浸泡和搅拌海藻粉72小时。从离心机中取出澄清液后，加入乙醇并进行24小时的搅拌，使多糖沉淀，最后通过真空冷却而干燥得到多糖。藉由本发明所使用大型藻类的乙醇提取法，可以确保不会溶出多糖，而使乙醇提取液不含任何多糖。同时，苯酚-硫酸法的试验结果也表明PD1不含多糖。PD1的未来发展方向有三个。首先，在PD1所含可能化合物的结构鉴定，以识别活性成分并促进相关药物的未来发展。患有慢性疼痛的病人不得不忍受长期使用止痛药而导致的严重副作用，或担心成瘾问题。而具有高安全性、可长期服用的抗炎膳食补充剂，已成为缓解疼痛的新方法。一些先前研究已经成功从食物中鉴定生物活性成分，包括抗发炎和止痛成分。双裂海木耳原先只是一般的食品产品，透过我们的研究发现其提取物PD1具有抗炎和止痛作用，而符合抗炎膳食补充剂的特性。第二个方向，为了将PD1开发为功能性食品原料，可继续研究PD1之抗发炎和止痛作用的细胞学机制，并探索PD1对于其他炎性疼痛性疾病的疗效。最后的发展方向，则可以继续探索PD1其他可能的生物活性。预期本发明结果，将有助于其他科学家继续开发双裂海木耳的其它生物医学应用。
上面对本发明的较佳实施方式作了详细说明，但是本发明并不限于上述实施方式，在本领域的普通技术人员所具备的知识范围内，还可以在不脱离本发明宗旨的前提下作出各种变化。
Claims (1)
1.双裂海木耳乙酸乙酯提取物在制备抗炎镇痛药物中的用途，双裂海木耳的乙酸乙酯提取物的制备方法，步骤如下：
1)将双裂海木耳在50℃的条件下烘干24小时，获得干燥双裂海木耳；
2)将干燥双裂海木耳研末，浸泡在乙醇水溶液中，乙醇水溶液的乙醇体积浓度为95％，在室温下进行提取，获得浸泡液；
3)将浸泡液经过过滤、减压浓缩后，获得乙醇粗萃物；
4)将乙醇粗萃物悬浮在水中，并使用乙酸乙酯进行分配分离，且分配分离操作重复进行三次，获得双裂海木耳的乙酸乙酯提取物。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201710899587.8A CN108379302B (zh) | 2017-09-28 | 2017-09-28 | 双裂海木耳乙酸乙酯提取物在制备抗炎镇痛药物中的用途 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201710899587.8A CN108379302B (zh) | 2017-09-28 | 2017-09-28 | 双裂海木耳乙酸乙酯提取物在制备抗炎镇痛药物中的用途 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN108379302A CN108379302A (zh) | 2018-08-10 |
| CN108379302B true CN108379302B (zh) | 2021-10-22 |
Family
ID=63075862
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201710899587.8A Active CN108379302B (zh) | 2017-09-28 | 2017-09-28 | 双裂海木耳乙酸乙酯提取物在制备抗炎镇痛药物中的用途 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN108379302B (zh) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| TWI780841B (zh) * | 2021-07-28 | 2022-10-11 | 國立中山大學 | 一種海木耳萃取物及其用途 |
| TWI780840B (zh) * | 2021-07-28 | 2022-10-11 | 國立中山大學 | 一種海木耳萃取物及其用途 |
| TWI796204B (zh) * | 2022-04-18 | 2023-03-11 | 台灣中油股份有限公司 | 海木耳萃取方法、海木耳萃取物及其用途 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH08107732A (ja) * | 1994-10-13 | 1996-04-30 | Toda Constr Co Ltd | 魚介類の養殖方法 |
| CN105079144A (zh) * | 2015-09-13 | 2015-11-25 | 赵东顺 | 一种抗炎镇痛作用的升麻提取物及其制备方法 |
| TW201713352A (zh) * | 2015-10-06 | 2017-04-16 | 國立屏東科技大學 | 海木耳萃取物及其萃取方法 |
-
2017
- 2017-09-28 CN CN201710899587.8A patent/CN108379302B/zh active Active
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH08107732A (ja) * | 1994-10-13 | 1996-04-30 | Toda Constr Co Ltd | 魚介類の養殖方法 |
| CN105079144A (zh) * | 2015-09-13 | 2015-11-25 | 赵东顺 | 一种抗炎镇痛作用的升麻提取物及其制备方法 |
| TW201713352A (zh) * | 2015-10-06 | 2017-04-16 | 國立屏東科技大學 | 海木耳萃取物及其萃取方法 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| Antibiotic activity of lectins from marine algae against marine vibrios;W.-R. Liao等;《J Ind Microbiol Biotechnol》;20030723;第30卷;第433-439页 * |
| 海藻提取物抗炎活性的筛选;牛荣丽等;《海洋与湖沼》;20030331;第34卷(第2期);第150-154页 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN108379302A (zh) | 2018-08-10 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US11291694B2 (en) | Composition for treating or preventing metabolic disease, containing, as active ingredient, extracellular vesicles derived from Akkermansia muciniphila bacteria | |
| RU2710373C2 (ru) | Композиция, включающая экзосому, полученную из стволовых клеток, для индукции адипогенной дифференцировки, регенерации жировой ткани, отбеливания кожи или коррекции морщин | |
| Liao et al. | Myricetin alleviates pathological cardiac hypertrophy via TRAF6/TAK1/MAPK and Nrf2 signaling pathway | |
| Huang et al. | Inhibitory effects of wild bitter melon leaf extract on Propionibacterium acnes-induced skin inflammation in mice and cytokine production in vitro | |
| CN108379302B (zh) | 双裂海木耳乙酸乙酯提取物在制备抗炎镇痛药物中的用途 | |
| Korkmaz-Icöz et al. | Oral treatment with a zinc complex of acetylsalicylic acid prevents diabetic cardiomyopathy in a rat model of type-2 diabetes: activation of the Akt pathway | |
| JP2022095884A (ja) | 単離ミトコンドリアを含む関節リウマチの予防または治療のための医薬組成物 | |
| CN103948575A (zh) | 肉桂醛在制备促血管新生药物中的应用 | |
| Li et al. | Novel thermosensitive hydrogel promotes spinal cord repair by regulating mitochondrial function | |
| CN110693889A (zh) | 一种基于丹参酮ⅱa和葛根素配伍使用的中药组合物和应用 | |
| KR20200116073A (ko) | 폴리펩티드를 함유한 생체 다중효과를 가진 약제학적 조성물 및 그 용도 | |
| EP3733205A1 (en) | Lipocalin-type prostaglandin d2 synthase production accelerating agent | |
| TWI654980B (zh) | 自牛樟芝提取之活性物質樟芝酸k及其用於抗糖尿病、抗高血脂、及降低肝臟脂質的用途 | |
| CN109771411A (zh) | 二氢槲皮素用于制备治疗脂肪肝的药物中的用途 | |
| TWI645855B (zh) | 牛樟芝萃取纯化物之用途 | |
| CN107158026A (zh) | 低酯果胶在防治或辅助治疗糖尿病中的应用 | |
| Liu et al. | 1, 8-Cineole ameliorates diabetic retinopathy by inhibiting retinal pigment epithelium ferroptosis via PPAR-γ/TXNIP pathways | |
| US20220298196A1 (en) | Novel compound derived from watermelon, and composition using same | |
| EP4026550A1 (en) | Composition for preventing or treating salivary gland disesaes using cell-derived vesicle | |
| Al-Romaima et al. | Topical Application of Chinese Formula Yeliangen Promotes Wound Healing in Streptozotocin-Induced Diabetic Rats | |
| CN104582730B (zh) | 一种提高线粒体代谢机能的方法及应用 | |
| Wang et al. | Proteomic Analysis Reveals the Effect of Trichostatin A and Bone Marrow-Derived Dendritic Cells on the Fatty Acid Metabolism of NIH3T3 Cells under Oxygen–Glucose Deprivation Conditions | |
| KR101882575B1 (ko) | 미생물 공서 배양를 통한 천연 발효 추출물을 함유하는 치주질환 예방 또는 개선용 조성물 | |
| CN109481424A (zh) | 异甘草素、药物组合物及其在治疗糖尿病肾病中的应用 | |
| CN109276567B (zh) | 7-羟基香豆素在制备治疗急性肾损伤的药物中的应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |