TWI685344B

TWI685344B - 海木耳萃取物及其萃取方法

Info

Publication number: TWI685344B
Application number: TW104132787A
Authority: TW
Inventors: 翁韶蓮; 李孟洲; 曾志軒
Original assignee: 國立屏東科技大學
Priority date: 2015-10-06
Filing date: 2015-10-06
Publication date: 2020-02-21
Also published as: TW201713352A

Abstract

一種海木耳萃取物包含一海木耳萃取粉體，而該海木耳萃取粉體萃取自一海木耳藻體，且該海木耳萃取粉體具有亞鐵螯合離子能力、還原能力、超氧陰離子清除能力及DPPH自由基清除能力。一種海木耳萃取物之萃取方法包含：提供一海木耳藻體；將該海木耳藻體進行第一次冷凍乾燥處理，以獲得一凍乾海木耳藻體；將該凍乾海木耳藻體進行粉碎處理，以獲得一海木耳藻粉；將該海木耳藻粉進行熱水萃取處理，以獲得一海木耳萃取液；將該海木耳萃取液進行分離處理，以獲得一清澈萃取液；將該清澈萃取液進行第二次冷凍乾燥處理，以獲得一海木耳萃取物。

Description

海木耳萃取物及其萃取方法

本發明係關於一種海木耳〔Sarcodia sp.〕萃取物及其萃取方法；特別是關於一種以人工培養〔cultured〕海木耳萃取物及其萃取方法。

習用藻類萃取物及其萃取方法，如中華民國專利公告第I484966號之〝海葡萄萃取物的萃取方法及用於製備抑制前列腺癌腫瘤細胞生長之藥物組合物〞發明專利，其揭示一種海葡萄萃取物的萃取方法。將海葡萄經乾燥、粉碎後，以酒精溶劑進行粗萃取，減壓濃縮之後獲得海葡萄粗萃取物。再將該海葡萄粗萃取物溶於乙醇溶液，再與正己烷〔hexane〕進行混合及區分〔partition〕，以獲得乙醇溶液分離物。接著，將該乙醇溶液分離物加入水及乙酸乙酯〔ethyl acetate〕，並進行區分及減壓濃縮，以獲得海葡萄乙酸乙酯分離物。再將該海葡萄乙酸乙酯分離物經管柱層析等步驟後，即獲得海葡萄天然萃取物〔Excaulerpa〕。進一步提供一藥物組合物，其包含該海葡萄天然萃取物有效量，用於抑制前列腺癌腫瘤細胞生長之用途。

事實上，前述第I484966號之該海葡萄天然萃取物及其萃取方法僅單純揭示如何萃取而獲得該海葡萄天然萃取物，並添加於製備抑制前列腺癌腫瘤細胞生長之藥物組合物而已。簡言之，前述第I484966號僅以將該海葡萄天然萃取物的萃取方法無法獲得海木耳之藻體萃取物。

另一習用藻類萃取物及其萃取方法，如中華民國專利公告第I440466號之〝綠藻萃取組合物及其製法〞發明專利，其揭示一種綠藻萃取物及其製造方法。該綠藻萃取物含有活性胜肽與抑制神經傳導物質，可有效抑制血管升壓素-I轉換酶之活性，其可進一步用於開發具調節血壓生理效果之組合物。

事實上，前述第I440466號之該綠藻萃取物及其萃取方法僅單純揭示將該綠藻萃取物用以開發具調節血壓生理效果之組合物而已。簡言之，前述第I440466號僅以將該綠藻萃取物及其萃取方法無法獲得海木耳之藻體萃取物。

另一習用藻類萃取物及其應用，如中華民國專利公開第200716148號之〝海藻萃取物及其應用〞專利申請案，其揭示一種海藻萃取物及其應用。該海藻萃取物為紅藻屬〔Rhodophyceae〕海藻萃取物，其有效增進纖維母細胞活化作用。

事實上，前述第200716148號之該海藻萃取物及其應用僅單純揭示將該紅藻屬海藻萃取物用以增進纖維母細胞活化作用而已。簡言之，前述第200716148號僅以將該海藻萃取物及其應用無法獲得海木耳之藻體萃取物。

另一習用藻類萃取物及其應用，如中華民國專利公開第201330779號之〝一種紅藻萃取物的製造方法及其應用〞專利申請案，其揭示一種紅藻萃取物的製造方法及其應用。該紅藻萃取物的製造方法包含：(a)提供一紅藻，並使其形成一紅藻細末，其中該紅藻細末顆粒大小為0.5至1mm；(b)加工該紅藻細末，使其形成一紅藻水萃取溶液；及(c)離心該紅藻水萃取溶液，使其細末沉澱，並將其上層懸浮溶液取出進行冷凍濃縮，以獲得一紅藻萃取物；其中硫酸多醣含量佔該紅藻萃取物之總量的55%以上，且當該紅藻萃取物予以加入一餌料時，可用以提高甲殼類的免疫能力。

事實上，前述第201330779號之該紅藻萃取物及其應用僅單純揭示將該紅藻萃取物用以加入一餌料而提高甲殼類的免疫能力而已。簡言之，前述第201330779號僅以將該紅藻萃取物及其應用無法獲得海木耳之藻體萃取物。

另一習用藻類萃取物及其應用，如中華民國專利公開第201043239號之〝一種經分離的肽及其製備方法與應用〞專利申請案，其揭示一種小球藻屬藻類〔algae of Chlorella genus〕萃取物及其應用。該小球藻屬藻類萃取物分離獲得肽，其具有血管緊縮素I-轉化酵素〔angiotensin I-converting enzyme〕抑制活性、抗氧化活性、抗發炎活性以及抑制癌細胞增生的活性。

事實上，前述第201043239號之該小球藻屬藻類萃取物及其應用僅單純揭示將該小球藻屬藻類萃取物用以血管緊縮素I-轉化酵素抑制活性、抗氧化活性、抗發炎活性及抑制癌細胞增生的活性而已。簡言之，前述第201043239號僅以將該小球藻屬藻類萃取物及其應用無法獲得海木耳之藻體萃取物。

顯然，習用藻類萃取物及其萃取方法在萃取上仍需要進一步改善其前述特性的技術問題。因此，習用藻類萃取物及其萃取方法必然存在進一步改善的需求。前述技術專利及專利申請案之說明僅為本發明技術背景之參考及說明目前技術發展狀態而已，其並非用以限制本發明之範圍。

有鑑於此，本發明為了滿足上述需求，其提供一種海木耳萃取物及其萃取方法，其中該海木耳萃取物包含一海木耳萃取粉體，而該海木耳萃取粉體萃取自一海木耳藻體，且該海木耳萃取粉體具有亞鐵螯合離子能力、還原能力、超氧陰離子清除能力及DPPH自由基清除能力，以改善習用藻類萃取物之應用問題。

本發明較佳實施例之主要目的係提供一種海木耳萃取物及其萃取方法，其中該海木耳萃取物包含一海木耳萃取粉體，而該海木耳萃取粉體萃取自一海木耳藻體，且該海木耳萃取粉體具有亞鐵螯合離子能力、還原能力、超氧陰離子清除能力及DPPH自由基清除能力，以達成提升海木耳經濟價值之目的。

為了達成上述目的，本發明較佳實施例之海木耳萃取物之萃取方法包含：提供一海木耳藻體；將該海木耳藻體進行第一次冷凍乾燥處理，以獲得一凍乾海木耳藻體；將該凍乾海木耳藻體進行粉碎處理，以獲得一海木耳藻粉；將該海木耳藻粉進行熱水萃取處理，以獲得一海木耳萃取液；將該海木耳萃取液進行分離處理，以獲得一清澈萃取液；將該清澈萃取液進行第二次冷凍乾燥處理，以獲得一海木耳萃取物。

本發明較佳實施例將該海木耳萃取物添加於一加工產品。

本發明較佳實施例之該海木耳萃取液之分離處理採用離心式處理。

本發明較佳實施例之該清澈萃取液為一上層清澈萃取液。

本發明較佳實施例之該海木耳藻體為一人工養殖海木耳藻體。

為了達成上述目的，本發明較佳實施例之海木耳萃取物，其包含一海木耳萃取粉體，而該海木耳萃取粉體萃取自一海木耳藻體，且該海木耳萃取粉體具有亞鐵螯合離子能力、還原能力、超氧陰離子清除能力及DPPH自由基清除能力。

本發明較佳實施例之該海木耳萃取物添加於一加工產品。

本發明較佳實施例之該加工產品為一飲料、一調味醬、一調味粉、一藥物或一美妝保養品。

本發明較佳實施例之該美妝保養品包含一肌膚調理用品。

1‧‧‧原料

2‧‧‧海木耳萃取物

3‧‧‧加工產品

100‧‧‧加工設備

第1圖：本發明較佳實施例之海木耳萃取物之萃取方法之流程示意圖。

第2圖：本發明較佳實施例之海木耳萃取物之亞鐵離子螯合能力測定〔控制組為乙二胺四乙酸〕結果之示意圖。

第3圖：本發明較佳實施例之海木耳萃取物之還原能力測定〔控制組為維他命C〕結果之示意圖。

第4圖：本發明較佳實施例之海木耳萃取物之超氧陰離子清除能力測定〔控制組為維他命C〕結果之示意圖。

第5圖：本發明較佳實施例之海木耳萃取物之之DPPH自由基清除能力測定〔控制組為維他命C〕結果之示意圖。

第6圖：本發明較佳實施例之海木耳萃取物添加於產品作業之流程示意圖。

為了充分瞭解本發明，於下文將舉例較佳實施例並配合所附圖式作詳細說明，且其並非用以限定本發明。

本發明較佳實施例之海木耳萃取物及其萃取方法適用於各種藻類萃取物及其萃取方法，但其並非用以限定本發明之範圍。再者，本發明較佳實施例之海木耳之萃取物添加於各種加工品，例如：飲料、調味醬、調味粉、健康食品、保健用品、藥物或美妝保養品，但其並非用以限定本發明之範圍，但其並非用以限定本發明之範圍。

本發明選擇採用海木耳〔Sarcodia suieae〕為可食用之海藻，為台灣海域特有品種，其藻體呈暗紅色、厚革質，且具有不規則叉狀分歧，其藻體展開約5至15公分。原由小琉球地區居民於海邊採集海木耳，並川燙後即可直接食用。本發明較佳實施例以人工養殖海木耳，並將其萃取物添加於各種加工產品。

第1圖揭示本發明較佳實施例之海木耳萃取物之萃取方法之流程示意圖。請參照第1圖所示，本發明較佳實施例之海木耳萃取物之萃取方法包含步驟S1：首先，以適當方式提供一海木耳藻體，且該海木耳藻體經由rbcL〔ribulose-1,5-bisphosphate carboxylase/oxygenase large subunit〕鑑定其DNA序列，如【序列表】所示。本發明選取新鮮健康之海木耳以紙巾與拭淨紙擦拭多餘的水分。舉例而言，選取將適當重量〔例如：約5g〕濕重藻體，並置入1L燒杯內。該海木耳藻體為一人工養殖海木耳藻體。

舉例而言，海木耳之藻體經挑選及清洗處理後，將海木耳養殖於室外藻類養殖場之玻璃纖維桶〔例如：200cm×100cm×100cm〕。養殖水溫使用恆溫控制設備，而將水溫控制在25±3℃，另在培養桶內加裝打氣管，且打氣量以能使藻體滾動為較佳。將海水鹽度維持32±3ppt，並添加微量元素培養液。在養殖過程中，維持藻類的適當養殖密度，使藻體成長不會受到影響。

舉例而言，本發明利用一過濾設備〔例如：濾徑為5μm〕過濾天然海水，並將其鹽度調整為30‰。為確保海水中微量元素足夠，添加1ml無氮之PES培養液，並添加營養鹽，其濃度為NH⁴⁺/PO₄ ^3-(64μM/4μM)。將海水溫度設定為25℃，光照強度55μmol photons m^-2 s^-1，光照週期12小時〔12日：12暗〕。

請再參照第1圖所示，本發明較佳實施例之海木耳萃取物之萃取方法包含步驟S2：接著，將該海木耳藻體利用一冷凍乾燥設備以一預定溫度〔例如：-50℃或其它操作溫度〕進行第一次冷凍乾燥處理，以獲得一凍乾海木耳藻體。舉例而言，將收集的海木耳利用蒸餾水清洗刷掉藻體表面上的雜質後，以冷凍乾燥的方式去除其水分。

請再參照第1圖所示，本發明較佳實施例之海木耳萃取物之萃取方法包含步驟S3：接著，將該凍乾海木耳藻體進行粉碎處理，以獲得一海木耳藻粉。舉例而言，利用一粉碎機〔blender〕或其它具攪拌功能之裝置〔攪拌機，stirrer〕進行適當充份粉碎攪拌，以獲得該海木耳藻粉。

請再參照第1圖所示，本發明較佳實施例之海木耳萃取物之萃取方法包含步驟S4：接著，將該海木耳藻粉進行熱水萃取處理，以獲得一海木耳萃取液。舉例而言，選取適量〔例如：4g〕的藻體粉末放入250ml的三角錐瓶，並加入100ml的去離子水〔DI water〕。放入往覆式震盪恆溫水槽以一預定溫度〔例如：95℃〕進行一預定時間〔例如：5小時〕的熱萃取。

請再參照第1圖所示，本發明較佳實施例之海木耳萃取物之萃取方法包含步驟S5：接著，將該海木耳萃取液進行分離處理，以獲得一清澈萃取液。舉例而言，利用一離心機以適當轉速進行離心處理一預定時間〔例如：15分鐘〕。在離心處理完成後，由一上層清澈萃取液即可獲得該清澈萃取液。

請再參照第1圖所示，本發明較佳實施例之海木耳萃取物之萃取方法包含步驟S6：接著，將該清澈萃取液利用一冷凍乾燥設備以一預定溫度〔例如：-50℃或其它操作溫度〕進行第二次冷凍乾燥處理，以獲得一海木耳萃取物。舉例而言，將該海木耳萃取物〔例如：粗萃取1mg〕溶於1ml之去離子水中，以便獲得後續檢測用萃取液。

第2圖揭示本發明較佳實施例之海木耳萃取物之亞鐵離子螯合能力測定〔控制組為乙二胺四乙酸〕結果之示意圖。亞鐵離子螯合能力係藉由Fe²⁺與ferrozine所產生的複合物，在562nm有強的吸光值。若Fe²⁺被螯合時，其複合物的生成量會減少。因此，在562nm的吸光值便降低，利用該特性判定樣品萃取物對Fe²⁺的螯合能力。

本發明將海木耳萃取物溶於去離子水形成萃取液，並選取萃取液0.05mL，再加入0.18mL的甲醇及0.05mL之2mM的FeCl₂均勻混合20秒。接著，再加入0.01mL的5mM ferrozine混合。將一混合海木耳萃取液於室溫下靜置一預定時間〔例如：10分鐘〕。在將該混合海木耳萃取液靜置完畢後，再利用分光光度計〔spectrophotometer，選擇廠牌Hitachi的型號U-2000〕以波長562nm量測其吸光值。

本發明採用計算公式如下：亞鐵離子螯合能力(%)=[1-(樣品反應後於562nm吸光值/控制組於562nm吸光值)]×100。

請參照第2圖所示，選擇EDTA〔1mg/ml〕為比較組，其亞鐵離子螯合能力為98.00±0.04%。相對的，本發明海木耳萃取物〔1mg/ml〕之亞鐵離子螯合能力為92.19±0.92%。在亞鐵離子螯合能力測定上海木耳萃取物與標準品EDTA非常接近，因此其具有高度的亞鐵離子螯合能力。

第3圖揭示本發明較佳實施例之海木耳萃取物之還原能力測定〔控制組為維他命C〕結果之示意圖。本發明之還原能力的測定係利用普魯士藍〔prussian blue；K₃Fe[Fe(CN)₆]〕的生成量作為待測樣品還原過氧化物的能力，進而分析樣品的抗氧化性效果。其原理係藉由赤血鹽〔potassium ferricyanide，PFC；KFe(CN)₆〕還原成黃血鹽〔K₄Fe(CN)₆〕，而黃血鹽再與三價鐵離子作用形成普魯士藍，並以分光光度計在655nm下測普魯士藍的含量，以得到樣品的還原能力，且其吸光值愈高表示樣品還原能力愈強。

本發明將海木耳萃取物溶於去離子水形成萃取液，並選取萃取液0.2mL，再加入0.2mL 0.2M磷酸鹽緩衝溶液〔pH 7.2〕及1%鉀鐵氰化物。將一混合海木耳萃取液放入至熱浴機，以一預定溫度〔例如：50℃〕混合一預定時間〔例如：20分鐘〕。接著，將該混合海木耳萃取液再加入0.2mL 10%三氯乙酸進行混合。最後，再將0.125mL的混合海木耳萃取液加入0.125mL的蒸餾水，再加入0.02mL 1% FeCl₃〔nacalai tesque〕。利用分光光度計以波長655nm量測其吸光值，且其量測吸光值越強，表示還原能力越強。

本發明採用計算公式如下：還原能力(%)=(樣品反應後於655nm吸光值/控制組於655nm吸光值)×100。

請參照第3圖所示，在控制組選擇為維他命C 下，本發明海木耳萃取物〔1mg/ml〕之還原能力為69.44±3.53%。在還原能力測定上本發明海木耳萃取物具標準品維他命C一半以上的還原能力，其顯示海木耳萃取物有高度的還原能力。

第4圖揭示本發明較佳實施例之海木耳萃取物之超氧陰離子清除能力測定〔控制組為維他命C〕結果之示意圖。在超氧陰離子清除能力測定上，在非酵素系統中，利用PMS〔phenazine methosulfate〕及β-NADH〔β-nicotinamide adenine dinucleotide〕作用生成超氧陰離子，而超氧陰離子進一步將NBT〔nitro blue tetrazolium〕還原成diformazan，該化合物在560nm下有最大的吸光值。因此，可藉由量測在波長560nm下的吸光值，即可獲得樣品清除超氧陰離子的能力，且其吸光值愈低，表示樣品清除超氧陰離子的能力愈強。

本發明將海木耳萃取物溶於去離子水形成萃取液，選取萃取液1mL加入各1mL的120μM PMS、936μM NADH、300μM NBT進行混合。將一混合海木耳萃取液在室溫下靜置一預定時間〔例如：5分鐘〕。接著，利用分光光度計以波長560nm量測其吸光值。其中120μM PMS、936μM NADH、300μM NBT皆溶於磷酸鹽緩衝溶液〔例如：0.1M,pH7.4〕中。

本發明採用計算公式如下：超氧陰離子清除能力(%)=[1-(樣品反應後於562nm吸光值/控制組於562nm吸光值)]×100。

請參照第4圖所示，選擇維他命C〔1mg/ml〕為比較組，其超氧陰離子清除能力為95.01±0.15%。相對的，本發明海木耳萃取物〔1mg/ml〕之超氧陰離子清除能力為85.85±1.09%。在超氧陰離子清除能力測定上本發明海木耳萃取物與標準品維他命C非常接近，因此其具有高度的超氧陰離子清除能力。

第5圖揭示本發明較佳實施例之海木耳萃取物之DPPH自由基清除能力測定〔控制組為維他命C〕結果之示意圖。DPPH自由基清除能力係利用樣品之抗氧化供氫能力進行評估。DPPH在甲醇溶液下於波長517nm具有吸光值。若抗氧化劑被還原時，則其吸光值會降低。因此，其吸光值越低，表示清除DPPH自由基清除能力越強。

本發明將2ml的樣本〔可溶於甲醇中〕溶液加入2ml 0.16×10^-3mol/L的DPPH甲醇溶液。將一混合海木耳萃取液於振盪機混合一預定時間〔例如：1分鐘〕，並於室溫下置於暗室中一預定時間〔例如：30分鐘〕。接著，利用利用分光光度計設定波長為517nm測定其吸光值。

本發明採用計算公式如下：DPPH自由基清除能力(%)=[1-(樣品反應後於517nm吸光值/控制組於517nm吸光值)]×100。

請參照第5圖所示，選擇維他命C〔0.0001mg/ml〕為比較組，其DPPH自由基清除能力為37.45±0.65%。相對的，本發明海木耳萃取物〔1mg/ml〕之DPPH自由基清除能力仍為23.10±0.78%。由以上實驗數據顯示，本發明較佳實施例之海木耳萃取物具有高度的抗氧化能力，且抗氧化活性穩定，可大幅提升海藻自身價值，具有高度的應用潛力。

顯然，本發明較佳實施例之海木耳萃取物包含一海木耳萃取粉體，而該海木耳萃取粉體萃取自一海木耳藻體，且該海木耳萃取粉體具有亞鐵螯合離子能力〔ferrous ion chelating activity〕、還原能力〔reducing power〕、超氧陰離子清除能力〔superoxide anion radical scavenging activity〕及DPPH自由基清除能力〔DPPH superoxide anion radical scavenging activity〕。一般而言，野外採集海藻之重金屬含量不易控制，且自然海域水質狀況及海藻生長實況亦不易控制。本發明採用以全程人工養殖的方法，可控制海木耳的成長速率及藻體成分。

第6圖揭示本發明較佳實施例之海木耳萃取物添加於產品作業之流程示意圖。請參照第6圖所示，本發明較佳實施例將一原料1及一海木耳萃取物2以適當比例於一加工設備100製成一加工產品3。該加工產品3選擇為一飲料、一調味醬、一調味粉、一健康食品、一保健用品、一藥物或一美妝保養品。舉例而言，該藥物包含減緩過敏及改善代謝症候群之藥物。該美妝保養品包含肌膚調理用品〔例如：面膜、乳霜或精華液〕。

前述較佳實施例僅舉例說明本發明及其技術特徵，該實施例之技術仍可適當進行各種實質等效修飾及/或替換方式予以實施；因此，本發明之權利範圍須視後附申請專利範圍所界定之範圍為準。本案著作權限制使用於中華民國專利申請用途。

<110> 國立屏東科技大學

<120> 海木耳萃取物及其萃取方法

<140>

<141>

<211> 851核甘酸

<212> DNA

<213> 海木耳之序列

<400>

1‧‧‧原料

2‧‧‧海木耳萃取物

3‧‧‧加工產品

100‧‧‧加工設備

Claims

一種海木耳萃取物之萃取方法，其包含：提供一海木耳藻體，而該海木耳藻體為一人工養殖海木耳藻體，且採用將水溫控制在25±3℃及將海水鹽度維持32±3ppt，且該海木耳藻體具有SEQ ID No.1之序列；將該海木耳藻體進行第一次冷凍乾燥處理，以獲得一凍乾海木耳藻體；將該凍乾海木耳藻體進行粉碎處理，以獲得一海木耳藻粉；將該海木耳藻粉進行熱水萃取處理，以獲得一海木耳萃取液；將該海木耳萃取液進行分離處理，以獲得一清澈萃取液；及將該清澈萃取液進行第二次冷凍乾燥處理，以獲得一海木耳萃取物。
依申請專利範圍第1項所述之海木耳萃取物之萃取方法，其中將該海木耳萃取物添加於一加工產品。
依申請專利範圍第1項所述之海木耳萃取物之萃取方法，其中該海木耳萃取液之分離處理採用離心式處理。
依申請專利範圍第1項所述之海木耳萃取物之萃取方法，其中該清澈萃取液為一上層清澈萃取液。
依申請專利範圍第1項所述之海木耳萃取物之萃取方法，其中該人工養殖海木耳藻體採用打氣方式進行養殖。
依申請專利範圍第1項所述之海木耳萃取物之萃取方法製得一種海木耳萃取物，其包含一海木耳萃取粉體，而該海木耳萃取粉體萃取自一海木耳藻體，而該海木耳藻體為一人工養殖海木耳藻體，且採用將水溫控制在25±3℃及將海水鹽度維持32±3ppt，且該海木耳藻體具有SEQ ID No.1之序列。
依申請專利範圍第6項所述之海木耳萃取物，其中該人工養殖海木耳藻體採用打氣方式進行養殖。
依申請專利範圍第6項所述之海木耳萃取物，其中該海木耳萃取物添加於一加工產品。
依申請專利範圍第8項所述之海木耳萃取物，其中該加工產品為一飲料、一調味醬、一調味粉、一藥物或一美妝保養品。
依申請專利範圍第6項所述之海木耳萃取物，其中該美妝保養品包含一肌膚調理用品。