TW202239423A - 麒麟果發酵物用於製備改善新陳代謝狀態組合物的用途 - Google Patents

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Abstract

一種麒麟果發酵物用於製備改善新陳代謝狀態組合物的用途，其中麒麟果發酵物係將麒麟果的果實的水萃物經由酵母菌、乳酸桿菌及醋酸菌發酵而製得。

Description

麒麟果發酵物用於製備改善新陳代謝狀態組合物的用途
本發明是關於麒麟果發酵物，特別是關於麒麟果發酵物用於製備改善新陳代謝狀態的組合物的用途。
麒麟果是仙人掌科（ Cactaceae）的一種巨型仙人掌「霸王花」的果實，學名為 Hylocereus megalanthus，又名燕窩果、黃龍果。
麒麟果的外觀為黃色皮，內部果肉為白色，並且果肉之中散佈有黑色種子。相較於其他火龍果品種而言，其果實尺吋較小，黑色種子尺吋較大。
又由於相較於其他火龍果品種，麒麟果的果實長得非常慢，從開花至結出果實需要的時間約一般火龍果的3~5倍久，故而農民種植意願較低。
因為現代人生活作息與飲食與往日不同，常造成新陳代謝症候的狀態產生不平衡，亦稱為新陳代謝症侯群。所謂新陳代謝症候群是指腰圍過粗、血壓過高、血糖過高、三酸甘油脂過高或高密度膽固醇過高等五項狀態中符合三項或以上的群體。其中，肥胖者比一般體重者罹患新陳代謝症候高出三倍。
為了進一步提升麒麟果的價值，發明人繼續研究開發麒麟果相關產品及其用途。
有鑑於此，本發明提供一種麒麟果發酵物的用途，其是用於製備改善新陳代謝狀態的組合物，且麒麟果發酵物是由麒麟果的果實水萃取物經由酵母菌、乳酸桿菌及醋酸菌依序發酵而製得。
在一實施例中，麒麟果發酵物中至少包括肌醇、苯乳酸、酪醇及4-羥苯乳酸。在一實施例中，麒麟果發酵物中至少包括890ppm的肌醇。
在一實施例中，麒麟果發酵物可以抑制Naa10p基因的表現量。
在一實施例中，麒麟果發酵物可以提升棕色脂肪細胞內粒腺體活性。在一實施例中，麒麟果發酵物可以提升骨骼肌細胞內粒腺體活性。
在一實施例中，麒麟果發酵物可以促進骨骼肌細胞增生。
在一實施例中，麒麟果發酵物可以降低胰島素阻抗。
在一實施例中，麒麟果發酵物可以降低血液中醣化終產物含量、三酸甘油脂含量、血管硬化指數及肝損傷指標其中至少一種或其組合。
在一實施例中，麒麟果發酵物的有效用量為6mL/天。
綜上所述，根據本發明任一實施例的麒麟果發酵物，其可用於製備改善新陳代謝狀態的組合物。換言之，前述之組合物在有效用量為6mL/天下具有下列一種或多種功能：抑制Naa10p基因的表現量、提升棕色脂肪細胞內粒腺體活性、提升骨骼肌細胞內粒腺體活性、促進骨骼肌細胞增生、降低胰島素阻抗、降低血液中醣化終產物含量、降低三酸甘油脂含量、降低血管硬化指數及降低肝損傷指標等。
關於本文中所使用之濃度符號「%」及「wt%」通常是指重量百分濃度，而濃度符號「vol%」通常是指體積百分濃度。
關於本文中所使用之「麒麟果」是指麒麟果的果實，學名為 Hylocereus megalanthus。
在一些實施例中，麒麟果發酵物是由麒麟果的水萃取物經由酵母菌、乳酸桿菌及醋酸菌依序發酵而製得。
在一些實施例中，麒麟果為全果實，全果實包括果皮、果肉及種子。在一些實施例中，麒麟果採用產地為秘魯的麒麟果全果實。
在一些實施例中，麒麟果可包含原始、經乾燥、冷凍或以其他物理方式加工以利於處理之全果實，可進一步包含完整、剁碎、切丁、碾磨、研磨或以其他方式經加工以影響原物料之大小及實體完整性之果實。
在一些實施例中，水萃取物是以麒麟果與水依1：15的比例提取而得。在一些實施例中，水萃取物是以麒麟果與水同時進行混合打碎後提取而得。在一實施例中，水萃取物是以麒麟果與水混加打碎後再加熱至95℃持續60分鐘提取而得。在一實施例中，水萃取物是以麒麟果與水混加打碎後添加10%的葡萄糖後，再加熱至95±5℃持續60分鐘提取而得。在一實施例中，水萃取物的白利糖度大於或等於9.0 Brix°。
在一些實施例中，水萃取物降溫後依序加入酵母菌、乳酸桿菌及醋酸菌進行三階段發酵而製得麒麟果發酵物。在一些實施例中，水萃取物不另濾除其內部的固形物（即麒麟果）直接加入菌種進行發酵，以利用菌種進一步提取固形物中的活性成分。
在一實施例中，酵母菌可以是啤酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)。舉例而言，採用寄存編號BCRC20271 (國際寄存編號ATCC26602)菌株的啤酒酵母或其他市售啤酒酵母。
在一實施例中，乳酸菌可以是為胚芽乳酸桿菌(Lactobacillus plantarum)或植物乳桿菌。舉例而言，採用寄存編號BCRC910760(國際寄存DSM32451)菌株的胚芽乳酸桿菌TCI378。
在一實施例中，採用寄存編號BCRC11688(國際寄存ATCC15973)菌株的醋酸菌 Acetobacter aceti。
在一些實施例中，三階段發酵程序為水萃取物內加入0.05wt%~0.15wt%的酵母菌並且於室溫下靜置發酵24小時形成初發酵液，而後加入0.025%~0.01wt%的乳酸桿菌並且於室溫下靜置發酵24小時形成次發酵液，最後再加入4%~6wt%的醋酸菌並且於室溫下靜置發酵120小時後形成植物發酵原液。在一些實施例中，水萃取物內加入0.1wt%的酵母菌並且於室溫下靜置發酵24小時形成初發酵液，而後加入0.05wt%的乳酸桿菌並且於室溫下靜置發酵24小時形成次發酵液，最後再加入5wt%的醋酸菌並且於室溫下靜置發酵120小時後形成植物發酵原液。
於此，酵母菌、乳酸桿菌、醋酸菌之發酵順序無法前後對調或調整。透過先添加酵母菌可以使水萃取物發酵以產生酒精，酒精有利提取出麒麟果內不同的有效成份。再透過添加乳酸桿菌可以使得初發酵物內的葡萄糖被進一步消耗而降低糖度並且產生乳酸，以降低PH值，較低的PH值有利於進一步提取麒麟果內其他不同有效成分。最後，透過添加醋酸菌可以使得次發酵物內的酒精被消耗，並且再進一步再降低葡萄糖的含量。
在一些實施例中，完成三階段發酵程序後再以篩網過篩以製得濾液。在一些實施例中，過篩後的濾液再進行減壓濃縮以製得濃縮液，減壓濃縮可以協助去除殘餘的酒精以確保濃縮液內酒精的殘留。於此，減壓濃縮於55~65℃下進行。
在一些實施例中，減壓濃縮後再加水調整回原始減壓濃縮前的總重以製得原始麒麟果發酵物。在一些實施例中，加水調整後再添加60%的異麥芽寡糖以製得麒麟果發酵物。在一些實施例中，原始麒麟果發酵物添加異麥芽寡糖至pH值達到3.4±1以及白利糖度38±2 Brix°以製得麒麟果發酵物。
在一些實施例中，以植物發酵原液為麒麟果發酵物。在一些實施例中，以濾液為麒麟果發酵物。在一些實施例中，以濃縮液為麒麟果發酵物。在一些實施例中，以原始麒麟果發酵物為麒麟果發酵物。
在一些實施例中，本發明提供一種麒麟果發酵物的用途，其是用於製備改善新陳代謝狀態的組合物。
在一些實施例中，麒麟果發酵物中至少包括肌醇、苯乳酸、酪醇及4-羥苯乳酸。在一些實施例中，麒麟果發酵物中至少包括890ppm的該肌醇。
在一些實施例中，麒麟果發酵物可以抑制Naa10p基因的表現量。研究顯示肥胖症與Naa10p基因的表達過量有關，意即藉由抑制脂肪組織中的Naa10p酶活性可以有效抑制體重過重，而降低罹患新陳代謝症候的機率。
在一些實施例中，改善新陳代謝狀態是經由提升棕色脂肪細胞內粒腺體活性、提升骨骼肌細胞內粒腺體活性、促進骨骼肌細胞增生、降低胰島素阻抗、降低血液中醣化終產物含量、三酸甘油脂含量、血管硬化指數及肝損傷指標等上述至少一種功效，以達到改善新陳代謝狀態的功效。
在一實施例中，改善皮膚狀態的組合物為食品、飲品或營養補充劑，且麒麟果發酵物有效劑量為6 mL/日。換言之，食用、飲品或營養補充劑包含特定含量的麒麟果發酵物。在一些實施例中，食品可為一般食品、保健食品、膳食補充品或食品添加物（food additive）。
上述保健食品(food for special health use, FoSHU)也可稱為功能(性)食品(functional food)，是指加工成使得供給營養之外而且有效地表現出生物體調節功能的高效果的食品。在此“功能(性)”是指對人體的結構和功能調節營養素或者對生理學作用等保健用途獲得有用的效果。本發明的食品可以通過本領域常用的方法製備，在上述製備時，可以通過添加本領域通常添加的原料和成分來製備。另外，上述食品的劑型只要被認為是食品的劑型就可以不受限制地製備。本發明的食品用組合物可以以多種形式的劑型製備，並且與一般藥品不同，以食品為原料，因而具有沒有因長期服用藥品而可能產生的副作用等的優點，具有優異的可攜帶性使得本發明的食品可以作為用於增強免疫增強效果的輔助劑來攝入。
在一些實施例中，前述之食品可利用熟習此技藝者所詳知的技術而被製造成適合於口服的劑型。在一些實施例中，一般食品可為但不限於：飲料（beverages）、發酵食品（fermented foods）、烘培產品（bakery products）或調味料。
上述組合物可以進一步包含生理學上可接受的載體，並且載體的種類沒有特別限制，並且可以使用本技術領域中常用的任何載體。
另外，上述組合物可以包含通常用於食品中而可提高氣味、味道、視覺等的附加成分。例如，可以包含0.1-5重量%的維生素A、C、D、E、B1、B2、B6、B12、菸鹼酸(niacin)、生物素(biotin)、葉酸(folate)、泛酸(panthotenic acid)等。另外，可以包含鋅(Zn)、鐵(Fe)、鈣(Ca)、鉻(Cr)、鎂(Mg)、錳(Mn)、銅(Cu)、鉻(Cr)等的礦物質。另外，可以包含賴氨酸、色氨酸、半胱氨酸、纈氨酸等的氨基酸。
另外，上述組合物可以包含氧化防止劑(丁基羥基茴香醚(BHA)、丁基羥基甲苯(BHT)等)、著色劑(焦油色素等)、香料(香蘭素、內酯類等)、成色劑(亞硝酸鈉、亞硝酸鈉等)、防腐劑(山梨酸鉀、苯甲酸鈉、水楊酸、脫氫乙酸鈉等)、漂白劑(亞硫酸鈉)、調味料(MSG谷氨酸鈉等)、甜味料(甘素(dulcin)、甜蜜素(cyclamate)、糖精(saccharin)、鈉等)、膨脹劑(明礬、D-酒石酸氫鉀等)、強化劑、乳化劑、增稠劑(糊料)、皮膜劑、膠基礎劑、泡沫抑制劑、溶劑、改良劑等的食品添加物(food additives)。上述添加物可以根據食品的種類擇一或多進行添加以適當的量。
在一些實施例中，能藉由習知方法於原料製備時添加任一實施例的麒麟果發酵物（即作為食品添加物），或是於食品的製作過程中添加任一實施例的麒麟果發酵物（即作為食品添加物），而與任一種可食性材料配製成供人類與非人類動物攝食的食用產品。
在一些實施例中，前述之組合物可為醫藥品。換言之，此醫藥品包含有有效含量的麒麟果發酵物。
在一些實施例中，前述之醫藥品可利用熟習此技藝者所詳知的技術而被製造成一適合於經腸道或口服的投藥劑型。這些投藥劑型包括，但不限於：錠劑（tablet）、片劑（troche）、口含錠（lozenge）、丸劑（pill）、膠囊（capsule）、分散性粉末（dispersible powder）或細顆粒（granule）、溶液、懸浮液（suspension）、乳劑（emulsion）、糖漿（syrup）、酏劑（elixir）、濃漿（slurry）以及類似之物。
在一些實施例中，前述之醫藥品可利用熟習此技藝者所詳知的技術而被製造成一適合於非經腸道地（parenterally）或局部地（topically）投藥的劑型，這些投藥劑型包括，但不限於：注射品（injection）、無菌的粉末（sterile powder）、外部製劑（external preparation）以及類似之物。在一些實施例中，該醫藥品可以一選自於由下列所構成之群組中的非經腸道途徑（parenteral routes）來投藥：皮下注射（subcutaneous injection）、表皮內注射（intraepidermal injection）、皮內注射（intradermal injection）以及病灶內注射（intralesional injection）。
在一些實施例中，醫藥品可進一步包含有被廣泛地使用於藥物製造技術之醫藥上可接受的載劑（pharmaceutically acceptable carrier）。例如，醫藥上可接受的載劑可包含下列的試劑中一種或多種：溶劑（solvent）、緩衝液（buffer）、乳化劑（emulsifier）、懸浮劑（suspending agent）、分解劑（decomposer）、崩解劑（disintegrating agent）、分散劑（dispersing agent）、黏結劑（binding agent）、賦形劑（excipient）、安定劑（stabilizing agent）、螯合劑（chelating agent）、稀釋劑（diluent）、膠凝劑（gelling agent）、防腐劑（preservative）、潤濕劑（wetting agent）、潤滑劑（lubricant）、吸收延遲劑（absorption delaying agent）、脂質體（liposome）以及類似之物。有關這些試劑的選用與數量是落在熟習此項技術之人士的專業素養與例行技術範疇內。
在一些實施例中，醫藥上可接受的載劑包含有一選自於由下列所構成之群組中的溶劑：水、生理鹽水（normal saline）、磷酸鹽緩衝生理鹽水（phosphate buffered saline, PBS）、含有醇的水性溶液（aqueous solution containing alcohol）。
例一：麒麟果發酵物的製備
原料：麒麟果(學名： Hylocereus megalanthus)的果實，係採用產地為秘魯的風乾麒麟果的全果實。
接著，將麒麟果及水依1：15的比例混合攪打成為水萃取物01，並加入相對於水萃取物的總重為10%的葡萄糖，以形成待發酵基液。於此，待發酵基液的白利糖度大於9。
將待發酵基液加熱至95℃，並於加熱達到95℃後持續加熱60分鐘以得到水萃取物02。並且，水萃取物02的溫度降溫至小於38℃後，即進行後續發酵程序。
於水萃取物02中加入0.1wt%的啤酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）並靜置培養24小時以形成初發酵液。於此，啤酒酵母是採用寄存編號BCRC20271的啤酒酵母。
接下來於初發酵液內添加0.05wt%的胚芽乳酸菌（Lactobacillus plantarum）並靜置培養24小時以形成次發酵液。於此，胚芽乳酸菌採用寄存編號BCRC 910760的TCI378菌株。
接著，在次發酵液內加入5wt%的醋酸菌靜置發酵120小時以形成植物發酵原液。於此，醋酸菌是採用寄存編號BCRC11688的醋酸菌。植物發酵原液的白利糖度小於3，且其酸鹼值（pH值）為3.4±1。
將植物發酵原液以孔徑200目數的篩網進行過濾得到過濾液，將過濾液於60℃下及150巴下進行減壓濃縮程序得到濃縮液，濃縮液後再加水調整回原始減壓濃縮前的總重得到原始麒麟果發酵物，添加相對於原始麒麟果發酵物為60%的異麥芽寡糖後以得到麒麟果發酵物。
例二： Naa10p 基因表現量實驗
材料：
實驗細胞株：採用小鼠骨髓基質細胞（後續簡稱OP9細胞），OP9細胞購自美國典型培養物保存中心（American Type Culture Collection，ATCC ®）之OP9細胞株（ATCC CRL-2749™）。
培養基01(前脂肪細胞擴增培養基)： Alpha 培養基 (採購自Gibco公司)並混合20%的胎牛血清(採購自Gibco公司)及1%青黴素-鏈黴素 (採購自Gibco公司)。
培養基02(分化培養基)：Alpha 培養基 (採購自Gibco公司)並混合20% 胎牛血清 (採購自Gibco公司)及1% 青黴素-鏈黴素 (採購自Gibco公司)。
試劑：RNA萃取試劑套組（購自Geneaid公司，台灣，Lot No. FC24015-G）、KAPA CYBR FAST qPCR試劑組(購自KAPA Biosystems)。
反轉錄酶：採用SuperScript® III Reverse Transcriptase品牌Invitrogen公司，美國。
檢測儀器：ABI StepOnePlus TM即時PCR系統（Real-Time PCR system，購自Thermo Fisher Scientific公司，美國）。
測試流程：
首先，取24孔培養盤將每孔接種8×10 4個細胞及500µL的培養基01並於二氧化碳箱於37℃下培養7天，期間每三天更換一次培養基01。7天後以顯微鏡觀察細胞內油滴的形成狀態，確保細胞已完成分化後將分化完成的細胞分為三組：實驗組、空白與對照組。其中，每組別進行三重複並取其平均值為結果。
空白組：僅添加培養基，然後在37℃下培養6小時。
對照組：添加例一製得的水萃取物02(濃度0.25 vol%)，然後在37℃下培養6小時。
實驗組：添加例一製得的麒麟果發酵物(濃度0.25 vol%)，然後在37℃下培養6小時。
將培養後的實驗組及空白組的細胞去除上清液之後，以1X DPBS緩衝液清洗一次，再加入0.6mL的RB Buffer(附於RNA萃取試劑套組)以裂解細胞膜形成細胞裂解溶液。
接著，使用RNA萃取試劑套組分別收集三組細胞裂解溶液內之RNA。接著，每組取1000奈克（ng）所萃取出的RNA為模板，藉由SuperScript ®III反轉錄酶 （購自Invitrogene公司，美國）以引子黏合進行反轉錄作用產生相應之cDNA。後續利用ABI StepOnePlusTM Real-Time PCR system （Thermo Fisher Scientific公司，美國），以及KAPA SYBR FAST qPCR Kits將三組反轉錄後產物分別以下表一之組合引子進行定量即時反轉錄聚合酶連鎖反應 （quantitative real-time reverse transcription polymerase chain reaction） 以觀察空白組、對照組及實驗組的基因的表現量。定量即時反轉錄聚合酶連鎖反應的儀器設定條件為95°C反應1 秒，60°C反應20秒，總共40個迴圈，並使用2-ΔCt方法進行基因表達的相對定量。於此，藉由cDNA進行定量即時反轉錄聚合酶連鎖反應可間接定量各基因的mRNA表現量，進而推斷各基因編碼的蛋白質的表現量，如圖1所示。
表一
目標基因 引子名稱 序列編號 序列 長度
Naa10p Naa10p-F SEQID NO:1 CAGCACTGCAACCTTCTCTG 20
Naa10p-R SEQID NO:2 CACATCGTCTGGGTCCTCTT 20
於此，使用 2-ΔΔCT方法測定目標基因的相對表現量。所謂相對表現量定義為一目標基因相對於控制組之相應基因的RNA表現量的倍數。該方法以GAPDH基因的循環閾值(CT)作為內部對照之參考基因的循環閾值，按照以下公式計算倍數變化： ΔCT=實驗組或控制組的目標基因的CT - 內部對照的CT ΔΔCT = 實驗組的ΔCT - 控制組的ΔCT 倍數變化 = 2‐ΔΔCt平均值。
所得結果利用Excel軟體進行student t-test以決定兩個樣本群體之間是否在統計上具有顯著差異，如圖1所示，其中「*」代表p值小於0.05，「**」代表p值小於0.01，以及「***」代表p值小於0.001。當「*」越多時，代表統計上相對於空白組的差異越顯著。其中「#」代表p值小於0.05，「##」代表p值小於0.01，以及「###」代表p值小於0.001。當「#」越多時，代表統計上相對於對照組的差異越顯著。
參考圖1。將空白組的Naa10p基因的表現量視為1時，對照組相對於空白組的Naa10p基因的表現量為2.78，而實驗組相對於空白組的Naa10p基因的表現量為0.59，也就是說，相較於空白組，對照組反而促進了Naa10p基因的表現量，而實驗組的Naa10p基因的表現量則顯著地的被抑制。
可知，麒麟果發酵物能夠有效的抑制Naa10p基因的表現量，而降低罹患新陳代謝症候的機率。麒麟果發酵物相對於水萃取物能夠顯著有效的抑制Naa10p基因的表現量。
例三：骨骼肌細胞內粒腺體活性實驗
粒腺體是細胞進行氧化代謝與提供能量的重要胞器，粒腺體活性愈高代表細胞新陳代謝效率愈佳。
材料：
實驗細胞株：採用小鼠肌母細胞C2C12（後續簡稱C2C12細胞），C2C12細胞購自美國典型培養物保存中心（American Type Culture Collection，ATCC ®）之C2C12細胞株（ATCC CRL-1772™）。
培養基：採用Dulbecco’s modified Eagle’s medium培養基，採購自Gibco公司，美國，型號Gat.11965-092。添加10%胎牛血清，採購自Gibco公司，美國，型號Gat.10437-028。添加1%抗生素，採購自Gibco公司，美國，型號Gat.15240-062。
試劑：10倍DPBS緩衝液（購自Gibco公司，型號Gat.14200-075）、台盼藍死細胞染色劑(購自Lonza，型號Cat. 17-942E)、胰蛋白酶：10X Trypsin-EDTA（購自Gibco）、MitoScreen 流式細胞儀粒腺體膜電位檢測試劑盒（BD；Cat. BDB551302）包括：JC-1 染料，10X Assay 緩衝液。
測試流程：
首先，取6孔培養盤將每孔接種1×10 5個細胞於37℃下培養24小時。將培養完成的細胞分為三組：實驗組、空白與對照組。
空白組：僅添加培養基，並於37℃下培養24小時。
對照組：額外添加例一製得的水萃取物02(濃度0.5vol%)，並於37℃下培養24小時。
實驗組：額外添加例一製得的麒麟果發酵物(濃度0.5vol%)，並於37℃下培養24小時。
移除培養盤中的實驗培養基並以1 mL的1X PBS溶液潤洗2次。再將200 μL胰蛋白酶加至每孔中並在暗處反應5分鐘。完成反應後，添加細胞培養基終止反應。將各孔中之細胞與細胞培養基收集至個別對應的1.5 mL離心管內，並將含有細胞與細胞培養基之離心管以400 xg離心5分鐘。於離心後移除上清液，再以1X DPBS溶液沖洗細胞後，將含有細胞的離心管以400 xg再次離心5分鐘。於再次離心後移除各離心管中的上清液並加入100 μL的JC-1工作試劑至各離心管並在避光處理下靜置15分鐘。15分鐘後，將各離心管以400 xg離心5分鐘。於離心後，移除各離心管中的上清液，再以以1X的Assay 緩衝液溶液沖洗細胞再以400 xg離心5分鐘，此步驟重複二次。於第二次離心後，移除各離心管中的上清液、以200 μL的1X DPBS溶液(添加2%FBS)回溶各離心管中以重新懸浮細胞，以得到待測細胞液。最後，以流式細胞儀量測各孔的待檢測細胞液的螢光訊號(激發光：488 nm；散射光：527 nm & 590 nm)，換算出細胞粒線體的膜電位，以進行粒線體活性分析。
參考圖2。將空白組所測得的粒腺體活性視為100%時，對照組相對於空白組的粒腺體活性為110.54%，而實驗組相對於空白組的粒腺體活性為190.23%。相較於空白組而言，對照組可觀察到粒腺體活性微幅提升，但並未達到統計學上的顯著差異。進一步可觀察到，不論相較於空白組或對照組，實驗組的粒腺體活性顯著地的提升達80%以上。
可知，麒麟果發酵物能夠有效提升骨骼肌細胞的粒腺體活性，從而提升肌肉的新陳代謝效率。
例四：棕色脂肪細胞粒腺體活性實驗
棕色脂肪含有高密度的粒腺體，研究認為其能幫助由脂肪轉化為能量。本次實驗針對棕色脂肪細胞進行染色，以觀察其內粒腺體活性。
材料：
實驗細胞株：採用小鼠骨髓基質細胞（後續簡稱OP9細胞），OP9細胞購自美國典型培養物保存中心（American Type Culture Collection，ATCC ®）之OP9細胞株（ATCC CRL-2749™）。
培養基01(前脂肪細胞擴增培養基)： Alpha 培養基 (採購自Gibco公司)並混合20%的胎牛血清(採購自Gibco公司)及1%青黴素-鏈黴素 (採購自Gibco公司)。
培養基02(分化培養基)： Alpha 培養基 (採購自Gibco公司)並混合20% 胎牛血清 (採購自Gibco公司)及1% 青黴素-鏈黴素 (採購自Gibco公司)。
試劑：10倍DPBS緩衝液（購自Gibco公司，型號Gat.14200-075）、台盼藍死細胞染色劑(購自Lonza，型號Cat. 17-942E)、胰蛋白酶：10X Trypsin-EDTA（購自Gibco）、MitoScreen 流式細胞儀粒腺體膜電位檢測試劑盒（BD；Cat. BDB551302）包括：JC-1 染料，10X Assay 緩衝液。
測試流程：
首先，取24孔培養盤將每孔接種2×10 4個細胞於37℃下培養1~2週，期間每三天更換一次培養基01。再以顯微鏡觀察細胞內油滴的形成狀態，油滴產生以及聚集，確保細胞已完成分化後將分化完成的細胞分為二組：實驗組與空白組。
空白組：僅添加培養基，然後在37℃下培養24小時。
實驗組：添加例一製得的麒麟果發酵物(濃度0.25 vol%)，然後在37℃下培養24小時。
移除培養盤中的實驗培養基並以1 mL的1X PBS溶液潤洗2次。再將200 μL胰蛋白酶加至每孔中並反應5分鐘。完成反應後，添加細胞培養基終止反應。將各孔中之細胞與細胞培養基收集至個別對應的1.5 mL離心管內，並將含有細胞與細胞培養基之離心管以400 xg離心5分鐘。於離心後移除上清液，再以1X DPBS溶液沖洗細胞後，將含有細胞的離心管以400 xg再次離心5分鐘。於再次離心後移除各離心管中的上清液並加入100 μL的JC-1工作試劑至各離心管並在避光處理下靜置15分鐘。15分鐘後，將各離心管以400 xg離心5分鐘。於離心後，移除各離心管中的上清液，再以以1X的Assay 緩衝液溶液沖洗細胞再以400 xg離心5分鐘，此步驟重複二次。於第二次離心後，移除各離心管中的上清液、以200 μL的1X DPBS溶液(添加2%FBS)回溶各離心管中以重新懸浮細胞，以得到待測細胞液。最後，以攝影機拍攝待檢測細胞液的螢光訊號圖片，以觀察粒線體活性。
參考圖3。圖片中，明顯集中呈圓形或橢圓(藍色)光點為細胞核，分散於細胞核週邊無具體形狀的(螢光綠色)小光點則為活性的粒線體，意即小光點愈多則粒線體活性愈高。其中，空白組明顯可見細胞核週圍僅有數量不多的小光點，可知其粒腺體活性較低。進一步可觀察到，相較於空白組，實驗組的細胞核週圍環繞數量眾多的小光點，可知粒腺體活性顯著較空白組更高。
可知，麒麟果發酵物能夠有效提升棕色脂肪細胞的粒腺體活性，從而提升脂肪的新陳代謝效率。
例五：麒麟果發酵物的人體試驗
受試者：7位受試者（年齡介於25到75的成年人）。
測試項目：採取受試者的血液樣本委由立人醫事檢驗所進行血液中醣化終產物AGEs含量、胰島素阻抗檢測、三酸甘油脂含量、極低密度脂蛋白膽固醇含量VLDL、血管硬化指數及肝損傷指標ALT。
測試方式：
令7位受試者每日飲用6mL例一所製得的麒麟果發酵物，並連續飲用8周。於飲用前（即第0周，又稱對照組）及飲用8周後（即第8周，又稱為實驗組），分別抽取各受試者飲用前及飲用後的血液樣本進行檢測。
其中，各組之間的統計學顯著差異是藉由學生t-試驗來統計分析。在如圖5到圖10中，其中「*」代表p值小於0.05，「**」代表p值小於0.01，以及「***」代表p值小於0.001。當「*」越多時，代表統計上相對於對照組的差異越顯著。
測試結果：
請參考圖4，經過八周的每日飲用麒麟果發酵物後，7位受試者中有5位受試者的血液中醣化終產物AGEs含量明顯減少，意即受試者改善人數比例達71.4%。7位受試者的平均血液中醣化終產物AGEs含量由2.7 U/mL下降為2.0 U/mL。意即，每日飲用6mL麒麟果發酵物可以有效降低人體血液中的醣化終產物，具有明顯的抗醣化效果。
請參閱圖5，經過八周的每日飲用麒麟果發酵物後，7位受試者的胰島素阻抗值由2.08下降到1.47。意即，每日飲用6mL麒麟果發酵物可以有效降低胰島素阻抗達29.3%。
請參閱圖6，7位受試者中有3位本身具有輕微胰島素阻抗症狀，意即該3位受試者的原始胰島素阻抗值大於1.9。受試者的細胞對胰島素的作用不敏感，導致血中的葡萄糖無法進入細胞。一般而言，若胰島素阻抗值越高，罹患糖尿病、心血管疾病之風險則越高。該3位受試者經過八周的每日飲用麒麟果發酵物後，3位受試者的平均胰島素阻抗值由2.99下降到1.54。意即，每日飲用6mL麒麟果發酵物可以使得已有胰島素阻抗過高者大幅有效降低胰島素阻抗達48.5%。
請參考圖7，7位受試者的平均血液中三酸甘油脂含量由109.0 mg/dL下降為81.9 mg/dL。意即，每日飲用6mL麒麟果發酵物可以有效降低人體血液中的三酸甘油脂含量達24.9%。
請參考圖8，7位受試者的平均血液中極低密度脂蛋白膽固醇含量由16.5 mg/dL下降為8.1 mg/dL。意即，每日飲用6mL麒麟果發酵物可以有效降低人體血液中的極低密度脂蛋白膽固醇含量達50.9%。
請參考圖9，7位受試者的平均血液的血管硬化指數由3.3T.CHO/HDL下降為3.0T.CHO/HDL。意即，每日飲用6mL麒麟果發酵物可以有效降低血管硬化指數達9.1%。
請參考圖10，7位受試者的平均血液的肝損傷指標由17.6 IU/L下降為12.7 IU/L。意即，每日飲用6mL麒麟果發酵物可以有效降低血肝損傷指標達27.8%。其中，7位受試者中有6位受試者所測得之肝損傷指標明顯減少，意即受試者改善人數比例達85.7%。
上述醣化終產物AGEs含量、胰島素阻抗檢測、三酸甘油脂含量、極低密度脂蛋白膽固醇含量VLDL、血管硬化指數及肝損傷指標ALT皆為判讀是否為新陳代謝症侯群高危險群的常用指標項目。
例六：麒麟果發酵物成分分析
天然植物的萃取物通常包含多種成分，非屬純物質。因不同的生物活性物質在不同的溶劑中溶解度具有差異性，本試驗利用相互不相溶的溶劑，將麒麟果發酵物中的某一特定成分轉移到另一溶劑中。
儀器設備與材料：
1、核磁共振光譜儀（Nuclear Magnetic Resonance Spectrometer, NMR）。1D與2D光譜使用Ascend 400 MHz, Bruker Co., Germany，以δ表示化學位移（chemical shift），單位為 ppm。
2、高解析液相層析質譜儀：串連超高效液相層析儀 (Ultimate 3000 HPLC)與高解析度軌道式離子阱質譜儀(Q-EXACTIVE System with Ion Max Source)測定，單位為 m/z。
3、中壓液相層析儀（Medium pressure liquid chromatography, MPLC）: CombiFlash® Rf+, Teledyne ISCO, Lincoln, NE。
4、高效能液相層析儀 （High Performance Liquid Chromatography, HPLC）：高效液相層析儀（High Performance Liquid Chromatography, HPLC）係Agilent 1200系列：脫氣裝置係Agilent 真空脫氣裝置 1322A；沖提溶劑輸送係Agilent四元幫浦G1311A；可變波長偵測器係（Multiple Wavelength Detector, MWD）Agilent G1314B；光二極體陣列偵測器（Diode Array Detector, DAD）係Agilent 1260 Infinity DAD VL G1315D，偵測波長為210 nm，280 nm，320 nm，365 nm （Agilent Germany）。
5、分析管柱: Luna®5μm C18（2） 100 Å （250 x 10 mm, Phenomenex, USA）。
6、管柱層析 （Column Chromatography）依填充材料分為：大孔樹脂管柱層析Diaion HP-20 （Mitsubishi Chemical Co., Japan）、正相矽膠管柱層析Merck Kieselgel 60 （40-63 um, Art. 9385）、逆相矽膠管柱層析Merck LiChroprep® RP-18 （40-63 um, Art. 0250）。
7、薄層色層分析 （Thin-Layer Chromatography）採用TLC aluminium sheets （Silica gel 60 F254, 0.25 mm, Merck, Germany）及TLC aluminium sheets （RP-18 F254-S , 0.25 mm, Merck, Germany）。
8、紫外光燈 （UV Lamp）: UVP UVGL-25，波長為 254 nm及365 nm。
9、採用溶劑（solvent）及其來源說明：正丁醇（n-butanol）、正己烷（n-hexane）、乙酸乙酯（ethyl acetate）、丙酮 （acetone）、甲醇 （methanol）、乙醇 （ethanol）、乙腈 （acetonitrile）（採購至默克台灣）、氯仿-d 1（deuteration degree 99.5%）、甲醇-d 4（deuteration degree 99.5%）、重水deuterium oxide（deuteration degree ＞ 99.8％）、Dimethyl sulfoxide-d6 （deuteration degree ＞ 99.9%）（默克台灣）。
測試流程：
首先，取麒麟果發酵物10公升（L）經由正丁醇與水等體積比液相分配的方式進行分離，分別取得正丁醇層萃取液與第一水層萃取液。其中，將正丁醇層萃取液經減壓濃縮乾燥可得正丁醇層萃取物（BuF）21.3克。將第一水層萃取液經減壓濃縮乾燥可得第一水層萃取物（WF）213.5克。
再取第一水層萃取物100克（g）以大孔樹樹管柱層析進行初步分離，依序以純水、純水-甲醇等體積比、甲醇為沖提液進行沖提後，首先以純水沖提時間120分鐘，流速每分鐘30毫升，取得WF1分離部，再以純水-甲醇等體積比沖提時間90分鐘，流速每分鐘30毫升，取得WF2分離部，再以甲醇沖提時間90分鐘，流速每分鐘30毫升，取得WF3分離部。
將WF1分離部以中壓液相層析儀(逆向)進行分離，沖提液由水至甲醇進行線性沖提，沖提時間100分鐘，流速每分鐘10毫升。後續利用薄層色層分析，合併相似結果的沖提物，得到5個次分離部，分別為WF1-1次分離部、WF1-2次分離部、WF1-3次分離部、WF1-4次分離部及WF1-5次分離部。
其中，WF1-1次分離部經由正相矽膠管柱層析(乙酸乙酯/甲醇=1/1)進行純化，得到生物活性物質TCI-GHU-01。將生物活性物質TCI-GHU-01經氫-核磁共振光譜分析鑑定得到生物活性物質TCI-GHU-01的指紋圖譜，如圖11所示。並分析其化學結構後，確認生物活性物質TCI-GHU-01為肌醇(myo-Inositol)，其結構如下所示：
Figure 02_image001
其中，WF1-2次分離部經由中壓液相層析儀(逆向) (甲醇/水=3/17)進行純化，得到生物活性物質TCI-GHU-04。將生物活性物質TCI-GHU-04經氫-核磁共振光譜分析鑑定得到生物活性物質TCI-GHU-04的指紋圖譜，如圖12所示。並分析其化學結構後，確認生物活性物質TCI-GHU-04為4-羥基-3-苯乳酸(4-Hydroxy-3-phenyllactic acid)，其結構如下所示：
Figure 02_image003
其中，WF1-3次分離部經由中壓液相層析儀(逆向) (甲醇/水=1/4)進行純化，得到生物活性物質TCI-GHU-03。將生物活性物質TCI-GHU-03經氫-核磁共振光譜分析鑑定得到生物活性物質TCI-GHU-03的指紋圖譜，如圖13所示。並分析其化學結構後，確認生物活性物質TCI-GHU-03為酪醇(Tyrosol)，其結構如下所示：
Figure 02_image005
其中，WF1-4次分離部經由逆向HPLC(甲醇/水=3/7)進行純化，得到生物活性物質TCI-GHU-02。將生物活性物質TCI-GHU-02經氫-核磁共振光譜分析鑑定得到生物活性物質TCI-GHU-02的指紋圖譜，如圖14所示。並分析其化學結構後，確認生物活性物質TCI-GHU-02為3-苯乳酸(3-Phenyllactic acid)，其結構如下所示：
Figure 02_image007
例七：麒麟果發酵物總多酚含量實驗
材料：福林酚試劑(Folin-Ciocalteu's phenol reagent，購自Merck，料號：1.09001.0100)、沒食子酸(Gallic acid，購自Sigma，料號：G7384)、無水碳酸鈉(Sodium carbonate anhydrous，購自Sigma，料號：31432)。
測試流程：秤取10.0mg的沒食子酸置於10mL容量瓶中，然後以水定量至10mL，以得到沒食子酸的儲備溶液(stock solution)。將沒食子酸的儲備溶液稀釋10倍，即100μL沒食子酸的儲備溶液加900μL的水，以得到100μg/mL沒食子酸的初始溶液(即含1000ppm的沒食子酸)。然後，依據下表二配置0μg/mL、20μg/mL、40μg/mL、60μg/mL、80μg/mL、及100μg/mL之沒食子酸的標準溶液，並分別取100μL之各濃度的標準溶液至玻璃試管中。加入500μL之福林酚試劑至各玻璃試管內與標準溶液混合均勻並靜置3分鐘後，再加入400μL之7.5%碳酸鈉混合均勻後反應30分鐘以得到標準反應溶液。取200μL之標準反應溶液至96孔板中，並測量其在750nm下之吸光值，以獲得標準曲線。
表二
標準濃度(μg/mL) 0 20 40 60 80 100
初始溶液 0μl 20μl 40μl 60μl 80μl 100μl
水 100μl 80μl 60μl 40μl 20μl 0μl
準備待測樣本。其中，實驗組樣本是以例一的麒麟果發酵物。對照組01樣本是例一製得的水萃取物02。對照組02樣本是依例一水萃取物02相同製法，將原料改為白火龍果果實(學名 Hylocereus undatus)。對照組03樣本是依例一水萃取物02相同製法，將原料改為紅火龍果果實(學名 Hylocereus polyrhizus)。
將各組樣本以水稀釋20倍後各取100μL到玻璃試管中。接著，加入500μL之福林酚試劑至玻璃試管中與樣本混合均勻並靜置3分鐘後，再加入400μL之7.5%碳酸鈉混合均勻後反應30分鐘以得到待測反應溶液。將裝有待測反應溶液的玻璃試管進行震盪以確保無氣泡後，取200μL之待測反應溶液至96孔板中，並測量待測反應溶液於750nm下之吸光值，接著，各樣本對應的待測反應溶液的吸光值先除以樣本的糖度，再利用標準曲線以內插法換算成總多酚含量。上述實驗步驟各進行三重複。
如圖15所示，對照組01的總多酚含量為20μg/mL、對照組02的總多酚含量為62.5μg/mL、對照組03的總多酚含量為68.3μg/mL及實驗組的總多酚含量為121μg/mL。與全部對照組相較之下，實驗組的總多酚含量有顯著的提升。尤其是相較於對照組01，實驗組的總多酚含量相較於未發酵前提升了六倍。於此，可推斷出麒麟果水萃取物透過微生物發酵後會大量釋出總多酚，並能提升抗氧化活性，可有效減少自由基累積並降低發炎反應。
例八：麒麟果發酵物與水萃取物分析實驗
於此，利用高效液相色譜法（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）來對例一所製得的麒麟果發酵物與例一所製得的水萃取物02中的生物活性物質進行定量與定性的分析。
測試流程：
使用的溶劑為甲醇與水，並在甲醇與水各自添加0.1%甲酸，設定流速為1ml/min，設定沖提條件為0分鐘時甲醇：水為2：98，10分鐘時甲醇：水為2：98，40分鐘時甲醇：水為70：30，50分鐘時甲醇：水為100：0，60分鐘時甲醇：水為100：0。
測試結果：
同時參考圖16及圖17。圖16為水萃取物的指紋圖譜。圖17為麒麟果發酵物的指紋圖譜。在圖17中，在時間為16分鐘附近解析出生物活性物質TCI-GHU-01的波峰，在時間為18到20分鐘附近依序解析出生物活性物質TCI-GHU-04、生物活性物質TCI-GHU-03及生物活性物質TCI-GHU-02的波峰。
然而，在圖16中並未見對應的波峰。換言之，當水萃取物經過三階段發酵程序而形成麒麟果發酵物，其對應的成分比例產生變化。
例九：骨骼肌細胞增生試驗
肌肉組織較多的人，其基礎代謝率也會較高。一般而言，1公斤(kg)肌肉的基礎代謝量是13卡(kcal)。也就是說，肌肉若增加1公斤，自動消耗的熱量就會增加13卡。
材料：
實驗細胞株：採用小鼠肌母細胞C2C12（後續簡稱C2C12細胞），C2C12細胞購自美國典型培養物保存中心（American Type Culture Collection，ATCC ®）之C2C12細胞株（ATCC CRL-1772™）。
培養基：採用Dulbecco’s modified Eagle’s medium培養基，採購自Gibco公司，美國，型號Gat.11965-092。添加10%的FBS胎牛血清，採購自Gibco公司，美國，型號Gat.10437-028。添加1%抗生素，採購自Gibco公司，美國，型號Gat.15240-062。
試劑：10倍DPBS緩衝液（購自Gibco公司，型號Gat.14200-075）、台盼藍死細胞染色劑(購自Lonza，型號Cat. 17-942E)、胰蛋白酶：10X Trypsin-EDTA（購自Gibco，型號Cat. 15400-054）、細胞增殖 Click-iT™ Plus EdU 套組 (Invitrogen；Cat.C10632)。
首先，取6孔培養盤將每孔接種1×10 5個細胞於37℃下培養24小時。將培養完成的細胞分為三組：實驗組、空白與對照組。
空白組：僅添加培養基，並於37℃下培養24小時。
對照組：額外另添加10%的FBS胎牛血清，並於37℃下培養24小時，以作為陽性對照組。
實驗組：額外添加例六製得的生物活性物質TCI-GHU-01，添加量為100nM，並於37℃下培養24小時。
接著，依據細胞增殖套組加入指定試劑EdU後接續培養2小時。然後，移除培養基並以0.5%的胰蛋白酶獲取細胞於離心管中，再以1X DPBS溶液沖洗細胞後，將含有細胞的離心管以400 xg再次離心5分鐘。於離心後移除各離心管中的上清液並加入100 μL的細胞增殖套組內的工作試劑(Click-iT™Fixative(Component D))至各離心管並在避光處理下靜置15分鐘。15分鐘後，以1X DPBS溶液沖洗細胞後，再次以400 xg離心5分鐘。於離心後，於離心後移除各離心管中的上清液並加入100 μL的細胞增殖套組內的工作試劑(Click-iT™ Saponin-based permeabilization)至各離心管並在避光處理下靜置15分鐘。於各離心管內添加0.5mL的細胞增殖套組內的反應試劑並在避光處理下靜置30分鐘。以細胞增殖套組內的工作試劑(Click-iT™ Saponin-based permeabilization)清洗細胞並去除上清以，再以500µL工作試劑回溶，以得到待測細胞液。最後，以流式細胞儀量測各孔的待檢測細胞液的螢光訊號(激發光：488 nm；散射光：530/30 nm)，換算出細胞數量。
所得結果利用Excel軟體進行student t-test以決定兩個樣本群體之間是否在統計上具有顯著差異，如圖18所示，其中「*」代表p值小於0.05，「**」代表p值小於0.01，以及「***」代表p值小於0.001。當「*」越多時，代表統計上相對於空白組的差異越顯著。
參考圖18。將空白組所測得的骨骼肌細胞數量視為100%時，對照組相對於空白組的骨骼肌細胞數量為168.7%，而實驗組相對於空白組的骨骼肌細胞數量為148.2%。相較於空白組而言，實驗組具有統計學上的顯著差異。其中，實驗組的骨骼肌細胞數量顯著地的提升達48.2%。
可知，麒麟果發酵物能夠有效促進骨骼肌細胞的生長，從而提升個體的新陳代謝效率。
例十：活性物質對骨骼肌細胞內粒腺體活性實驗
肌肉組織效能愈高則其基礎代謝率也會較高。本次實驗針對骨骼肌細胞進行染色，以觀察其內粒腺體活性。
材料：同上例三所示。
測試流程：
首先，取6孔培養盤將每孔接種1×10 5個細胞於37℃下培養24小時。將培養完成的細胞分為二組：實驗組與空白組。
空白組：僅添加培養基，並於37℃下培養24小時。
實驗組：額外添加例六製得的生物活性物質TCI-GHU-01，添加量為100nM，並於37℃下培養24小時。
後續步驟同上例三所示。最後，以攝影機拍攝待檢測細胞液的螢光訊號圖片，以觀察粒線體活性。
參考圖19。圖片中，明顯集中呈圓形或橢圓暗點為細胞核，分散於細胞核週邊無具體形狀的(螢光紅或綠色)小光點則為活性的粒線體，意即小光點愈密集則粒線體活性愈高。其中，空白組明顯可見細胞核週圍僅有數量不多的小光點，可知其粒腺體活性較低。進一步可觀察到，相較於空白組，實驗組的細胞核週圍環繞數量眾多的小光點，可知粒腺體活性顯著較空白組更高。
綜上所述，根據本發明任一實施例的麒麟果發酵物，其可用於製備改善皮膚狀態的組合物。換言之，前述之組合物在有效用量為6mL/天下具有下列一種或多種功能：抑制Naa10p基因的表現量、提升棕色脂肪細胞內粒腺體活性、提升骨骼肌細胞內粒腺體活性、促進骨骼肌細胞增生、降低胰島素阻抗、降低血液中醣化終產物含量、降低三酸甘油脂含量、降低血管硬化指數及降低肝損傷指標等。
雖然本發明的技術內容已經以較佳實施例揭露如上，然其並非用以限定本發明，任何熟習此技藝者，在不脫離本發明之精神所作些許之更動與潤飾，皆應涵蓋於本發明的範疇內，因此本發明之保護範圍當視後附之申請專利範圍所界定者為準。
TCI-GHU-01:生物活性物質TCI-GHU-01 TCI-GHU-02:生物活性物質TCI-GHU-02 TCI-GHU-03:生物活性物質TCI-GHU-03 TCI-GHU-04:生物活性物質TCI-GHU-04
圖1 是麒麟果發酵物促進Naa10p基因表現結果圖。 圖2 是麒麟果發酵物促進骨骼細胞粒腺體活性實驗結果圖。 圖3 是麒麟果發酵物促進棕色脂肪細胞粒腺體活性實驗結果圖。 圖4 是麒麟果發酵物人體實驗中醣化終產物含量實驗結果圖。 圖5 是麒麟果發酵物人體實驗中胰島素阻抗實驗結果圖。 圖6 是麒麟果發酵物人體實驗中胰島素阻抗實驗結果圖。 圖7 是麒麟果發酵物人體實驗中三酸甘油脂含量實驗結果圖。 圖8是麒麟果發酵物人體實驗中極低密度脂蛋白膽固醇含量實驗結果圖。 圖9 是麒麟果發酵物人體實驗中血管硬化指數實驗結果圖。 圖10 是麒麟果發酵物人體實驗中肝損傷指標實驗結果圖。 圖11 是麒麟果發酵物中生物活性物質TCI-GHU-01的指紋圖譜。 圖12 是麒麟果發酵物中生物活性物質TCI-GHU-04的指紋圖譜。 圖13 是麒麟果發酵物中生物活性物質TCI-GHU-03的指紋圖譜。 圖14 是麒麟果發酵物中生物活性物質TCI-GHU-02的指紋圖譜。 圖15 是麒麟果發酵物總多酚含量實驗結果圖。 圖16 是麒麟水萃取物的指紋圖譜。 圖17 是麒麟發酵物的指紋圖譜。 圖18 是生物活性物質TCI-GHU-01促進骨骼肌細胞增生實驗結果圖。 圖19 是生物活性物質TCI-GHU-01促進骨骼肌細胞粒腺體活性實驗結果圖。
Figure 12_A0101_SEQ_0001
Figure 12_A0101_SEQ_0002

Claims (10)

  1. 一種麒麟果發酵物的用途，其是用於製備改善新陳代謝狀態的組合物，其中該麒麟果發酵物由一麒麟果 Hylocereus megalanthus的果實的水萃取物經一酵母菌、一乳酸桿菌及一醋酸菌依序發酵而製得。
  2. 如請求項1所述的用途，其中該麒麟果發酵物中至少包括肌醇、苯乳酸、酪醇及4-羥苯乳酸。
  3. 如請求項2所述的用途，其中該麒麟果發酵物中至少包括890ppm的該肌醇。
  4. 如請求項1所述的用途，其中該麒麟果發酵物可以抑制Naa10p基因的表現量。
  5. 如請求項1所述的用途，其中該麒麟果發酵物可以提升棕色脂肪細胞內粒腺體活性。
  6. 如請求項1所述的用途，其中該麒麟果發酵物可以提升骨骼肌細胞內粒腺體活性。
  7. 如請求項1所述的用途，其中該麒麟果發酵物可以促進骨骼肌細胞增生。
  8. 如請求項1所述的用途，其中該麒麟果發酵物可以降低胰島素阻抗。
  9. 如請求項8所述的用途，其中該麒麟果發酵物可以降低血液中醣化終產物含量、三酸甘油脂含量、血管硬化指數及肝損傷指標其中至少一種或其組合。
  10. 如請求項8或9所述的用途，其中該麒麟果發酵物的有效用量為6mL/天。
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