TWI815387B - 麒麟果發酵物用於製備改善皮膚狀態組合物的用途 - Google Patents
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Abstract
一種麒麟果發酵物用於製備改善皮膚狀態組合物的用途，其中麒麟果發酵物係將麒麟果的水萃取物經由酵母菌、乳酸桿菌及醋酸菌發酵而製得。
Description
本發明是關於麒麟果發酵物，特別是關於麒麟果發酵物用於製備改善皮膚狀態的組合物的用途。
麒麟果是仙人掌科（
Cactaceae）的一種巨型仙人掌「霸王花」的果實，學名為
Hylocereus megalanthus，又名燕窩果、黃龍果。
麒麟果的外觀為黃色皮，內部果肉為白色，並且果肉之中散佈有黑色種子。相較於其他火龍果品種而言，其果實尺吋較小，黑色種子尺吋較大。
又由於相較於其他火龍果品種，麒麟果的果實長得非常慢，從開花至結出果實需要的時間約一般火龍果的3~5倍久，故而農民種植意願較低。
為了進一步提升麒麟果的價值，發明人繼續研究開發麒麟果相關產品及其用途。
有鑑於此，本發明提供一種麒麟果發酵物的用途，其是用於製備改善皮膚狀態的組合物，且麒麟果發酵物是由麒麟果的水萃取物經由酵母菌、乳酸桿菌及醋酸菌依序發酵而製得。
在一實施例中，麒麟果發酵物中至少包括肌醇、苯乳酸、酪醇及4-羥苯乳酸。
在一實施例中，麒麟果發酵物可以抑制MITF基因及/或MC1R基因的表現量。
在一實施例中，麒麟果發酵物可以抑制前列腺素誘發的黑色素形成量。
在一實施例中，麒麟果發酵物可以減少光照誘發的黑色素沉澱量，其中所述光照係為藍光或紫外光UVA。
在一實施例中，麒麟果發酵物可以減少血液中醣化終產物含量。
在一實施例中，麒麟果發酵物可以減少皮膚表面斑紋量。
在一實施例中，麒麟果發酵物可以減少皮膚表面UV斑紋量。
在一實施例中，麒麟果發酵物可以減少皮膚表面黑色素指數以達到提升膚色亮白的功效。
在一實施例中，麒麟果發酵物可以減少皮膚表面紋理及皺紋。
在一實施例中，麒麟果發酵物的有效用量為6mL/天。
綜上所述，根據本發明任一實施例的麒麟果發酵物，其可用於製備改善皮膚狀態的組合物。換言之，前述之組合物在有效用量為6mL/天下具有下列一種或多種功能：抑制MITF基因及/或MC1R基因的表現量、抑制前列腺素誘發的黑色素形成量、減少光照誘發的黑色素沉澱量、減少血液中醣化終產物含量、減少皮膚表面斑紋量、減少皮膚表面UV斑紋量、減少皮膚表面黑色素指數以達到提升膚色亮白的功效、減少皮膚表面紋理及皺紋等。
關於本文中所使用之濃度符號「%」通常是指重量百分濃度，而濃度符號「vol%」通常是指體積百分濃度。
關於本文中所使用之「麒麟果」是指麒麟果的果實，學名為
Hylocereus megalanthus。
在一些實施例中，麒麟果發酵物是由麒麟果的水萃取物經由酵母菌、乳酸桿菌及醋酸菌依序發酵而製得。
在一些實施例中，麒麟果為全果實，全果實包括果皮、果肉及種子。在一些實施例中，麒麟果採用產地為秘魯的麒麟果全果實。
在一些實施例中，麒麟果可包含原始、經乾燥、冷凍或以其他物理方式加工以利於處理之全果實，可進一步包含完整、剁碎、切丁、碾磨、研磨或以其他方式經加工以影響原物料之大小及實體完整性之果實。
在一些實施例中，水萃取物是以麒麟果與水依1：15的比例提取而得。在一些實施例中，水萃取物是以麒麟果與水同時進行混合打碎後提取而得。在一實施例中，水萃取物是以麒麟果與水混加打碎後再加熱至95℃持續60分鐘提取而得。在一實施例中，水萃取物是以麒麟果與水混加打碎後添加10%的葡萄糖後，再加熱至95±5℃持續60分鐘提取而得。在一實施例中，水萃取物的白利糖度大於或等於9.0 Brix°。
在一些實施例中，水萃取物降溫後依序加入酵母菌、乳酸桿菌及醋酸菌進行三階段發酵而製得麒麟果發酵物。在一些實施例中，水萃取物不另濾除其內部的固形物（即麒麟果）直接加入菌種進行發酵，以利用菌種進一步提取固形物中的活性成分。
在一實施例中，酵母菌可以是啤酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)。舉例而言，採用寄存編號BCRC20271 (國際寄存編號ATCC26602)菌株的啤酒酵母或其他市售啤酒酵母。
在一實施例中，乳酸菌可以是為胚芽乳酸桿菌(Lactobacillus plantarum)或植物乳桿菌。舉例而言，採用寄存編號BCRC910760(國際寄存DSM32451)菌株的胚芽乳酸桿菌TCI378。
在一實施例中，採用寄存編號BCRC11688(國際寄存ATCC15973)菌株的醋酸菌
Acetobacter aceti。
在一些實施例中，三階段發酵程序為水萃取物內加入0.05wt%~0.15wt%的酵母菌並且於室溫下靜置發酵24小時形成初發酵液，而後加入0.025%~0.01wt%的乳酸桿菌並且於室溫下靜置發酵24小時形成次發酵液，最後再加入4%~6wt%的醋酸菌並且於室溫下靜置發酵120小時後形成植物發酵原液。在一些實施例中，水萃取物內加入0.1wt%的酵母菌並且於室溫下靜置發酵24小時形成初發酵液，而後加入0.05wt%的乳酸桿菌並且於室溫下靜置發酵24小時形成次發酵液，最後再加入5wt%的醋酸菌並且於室溫下靜置發酵120小時後形成植物發酵原液。
於此，酵母菌、乳酸桿菌、醋酸菌之發酵順序無法前後對調或調整。透過先添加酵母菌可以使水萃取物發酵以產生酒精，酒精有利提取出麒麟果內不同的有效成份。再透過添加乳酸桿菌可以使得初發酵物內的葡萄糖被進一步消耗而降低糖度並且產生乳酸，以降低PH值，較低的PH值有利於進一步提取麒麟果內其他不同有效成分。最後，透過添加醋酸菌可以使得次發酵物內的酒精被消耗，並且再進一步再降低葡萄糖的含量。
在一些實施例中，完成三階段發酵程序後再以篩網過篩以製得濾液。在一些實施例中，過篩後的濾液再進行減壓濃縮以製得濃縮液，減壓濃縮可以協助去除殘餘的酒精以確保濃縮液內酒精的殘留。於此，減壓濃縮於55~65℃下進行。
在一些實施例中，減壓濃縮後再加水調整回原始減壓濃縮前的總重以製得原始麒麟果發酵物。在一些實施例中，加水調整後再添加60%的異麥芽寡糖以製得麒麟果發酵物。在一些實施例中，原始麒麟果發酵物添加異麥芽寡糖至pH值達到3.4±1以及白利糖度38±2 Brix°以製得麒麟果發酵物。
在一些實施例中，以植物發酵原液為麒麟果發酵物。在一些實施例中，以濾液為麒麟果發酵物。在一些實施例中，以濃縮液為麒麟果發酵物。在一些實施例中，以原始麒麟果發酵物為麒麟果發酵物。
在一些實施例中，本發明提供一種麒麟果發酵物的用途，其是用於製備改善皮膚狀態的組合物。
在一些實施例中，麒麟果發酵物中至少包括肌醇、苯乳酸、酪醇及4-羥苯乳酸。
在一些實施例中，麒麟果發酵物可以抑制MITF基因及/或MC1R基因的表現量。研究顯示光線會刺激皮膚細胞分泌黑色素細胞刺激素(α-MSH)，黑色素細胞刺激素與黑色素細胞上的受體MC1R結合後對啟動MITF轉錄因子最終合成黑色素，而造成皮膚外觀的暗沉。故而，抑制MITF基因及/或MC1R基因的表現量可以達到皮膚亮白的效果。
在一些實施例中，改善皮膚狀態是經由抑制前列腺素誘發的黑色素形成量、減少光照誘發的黑色素沉澱量、減少血液中醣化終產物含量、減少皮膚表面斑紋量、減少皮膚表面UV斑紋量、減少皮膚表面黑色素指數、減少皮膚表面紋理及皺紋等上述至少一種功效，以達到改善皮膚狀態的功效。
在一實施例中，改善皮膚狀態的組合物為食品、飲品或營養補充劑，且麒麟果發酵物有效劑量為6 mL/日。換言之，食用、飲品或營養補充劑包含特定含量的麒麟果發酵物。在一些實施例中，食品可為一般食品、保健食品、膳食補充品或食品添加物（food additive）。
上述保健食品(food for special health use, FoSHU)也可稱為功能(性)食品(functional food)，是指加工成使得供給營養之外而且有效地表現出生物體調節功能的高效果的食品。在此“功能(性)”是指對人體的結構和功能調節營養素或者對生理學作用等保健用途獲得有用的效果。本發明的食品可以通過本領域常用的方法製備，在上述製備時，可以通過添加本領域通常添加的原料和成分來製備。另外，上述食品的劑型只要被認為是食品的劑型就可以不受限制地製備。本發明的食品用組合物可以以多種形式的劑型製備，並且與一般藥品不同，以食品為原料，因而具有沒有因長期服用藥品而可能產生的副作用等的優點，具有優異的可攜帶性使得本發明的食品可以作為用於增強免疫增強效果的輔助劑來攝入。
在一些實施例中，前述之食品可利用熟習此技藝者所詳知的技術而被製造成適合於口服的劑型。在一些實施例中，一般食品可為但不限於：飲料（beverages）、發酵食品（fermented foods）、烘培產品（bakery products）或調味料。
上述組合物可以進一步包含生理學上可接受的載體，並且載體的種類沒有特別限制，並且可以使用本技術領域中常用的任何載體。
另外，上述組合物可以包含通常用於食品中而可提高氣味、味道、視覺等的附加成分。例如，可以包含0.1-5重量%的維生素A、C、D、E、B1、B2、B6、B12、菸鹼酸(niacin)、生物素(biotin)、葉酸(folate)、泛酸(panthotenic acid)等。另外，可以包含鋅(Zn)、鐵(Fe)、鈣(Ca)、鉻(Cr)、鎂(Mg)、錳(Mn)、銅(Cu)、鉻(Cr)等的礦物質。另外，可以包含賴氨酸、色氨酸、半胱氨酸、纈氨酸等的氨基酸。
另外，上述組合物可以包含氧化防止劑(丁基羥基茴香醚(BHA)、丁基羥基甲苯(BHT)等)、著色劑(焦油色素等)、香料(香蘭素、內酯類等)、成色劑(亞硝酸鈉、亞硝酸鈉等)、防腐劑(山梨酸鉀、苯甲酸鈉、水楊酸、脫氫乙酸鈉等)、漂白劑(亞硫酸鈉)、調味料(MSG谷氨酸鈉等)、甜味料(甘素(dulcin)、甜蜜素(cyclamate)、糖精(saccharin)、鈉等)、膨脹劑(明礬、D-酒石酸氫鉀等)、強化劑、乳化劑、增稠劑(糊料)、皮膜劑、膠基礎劑、泡沫抑制劑、溶劑、改良劑等的食品添加物(food additives)。上述添加物可以根據食品的種類擇一或多進行添加以適當的量。
在一些實施例中，能藉由習知方法於原料製備時添加任一實施例的麒麟果發酵物（即作為食品添加物），或是於食品的製作過程中添加任一實施例的麒麟果發酵物（即作為食品添加物），而與任一種可食性材料配製成供人類與非人類動物攝食的食用產品。
在一些實施例中，前述之組合物可為醫藥品。換言之，此醫藥品包含有有效含量的麒麟果發酵物。
在一些實施例中，前述之醫藥品可利用熟習此技藝者所詳知的技術而被製造成一適合於經腸道或口服的投藥劑型。這些投藥劑型包括，但不限於：錠劑（tablet）、片劑（troche）、口含錠（lozenge）、丸劑（pill）、膠囊（capsule）、分散性粉末（dispersible powder）或細顆粒（granule）、溶液、懸浮液（suspension）、乳劑（emulsion）、糖漿（syrup）、酏劑（elixir）、濃漿（slurry）以及類似之物。
在一些實施例中，前述之醫藥品可利用熟習此技藝者所詳知的技術而被製造成一適合於非經腸道地（parenterally）或局部地（topically）投藥的劑型，這些投藥劑型包括，但不限於：注射品（injection）、無菌的粉末（sterile powder）、外部製劑（external preparation）以及類似之物。在一些實施例中，該醫藥品可以一選自於由下列所構成之群組中的非經腸道途徑（parenteral routes）來投藥：皮下注射（subcutaneous injection）、表皮內注射（intraepidermal injection）、皮內注射（intradermal injection）以及病灶內注射（intralesional injection）。
在一些實施例中，醫藥品可進一步包含有被廣泛地使用於藥物製造技術之醫藥上可接受的載劑（pharmaceutically acceptable carrier）。例如，醫藥上可接受的載劑可包含下列的試劑中一種或多種：溶劑（solvent）、緩衝液（buffer）、乳化劑（emulsifier）、懸浮劑（suspending agent）、分解劑（decomposer）、崩解劑（disintegrating agent）、分散劑（dispersing agent）、黏結劑（binding agent）、賦形劑（excipient）、安定劑（stabilizing agent）、螯合劑（chelating agent）、稀釋劑（diluent）、膠凝劑（gelling agent）、防腐劑（preservative）、潤濕劑（wetting agent）、潤滑劑（lubricant）、吸收延遲劑（absorption delaying agent）、脂質體（liposome）以及類似之物。有關這些試劑的選用與數量是落在熟習此項技術之人士的專業素養與例行技術範疇內。
在一些實施例中，醫藥上可接受的載劑包含有一選自於由下列所構成之群組中的溶劑：水、生理鹽水（normal saline）、磷酸鹽緩衝生理鹽水（phosphate buffered saline, PBS）、含有醇的水性溶液（aqueous solution containing alcohol）。
例一：麒麟果發酵物的製備
原料：麒麟果(學名：
Hylocereus megalanthus)的果實，係採用產地為秘魯的風乾麒麟果的全果實。
接著，將麒麟果及水依1：15的比例混合攪打成為水萃取物01，並加入相對於水萃取物的總重為10%的葡萄糖，以形成待發酵基液。於此，待發酵基液的白利糖度大於9。
將待發酵基液加熱至95℃，並於加熱達到95℃後持續加熱60分鐘以得到水萃取物02。並且，水萃取物02的溫度降溫至小於38℃後，即進行後續發酵程序。
於水萃取物02中加入0.1wt%的啤酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）並靜置培養24小時以形成初發酵液。於此，啤酒酵母是採用寄存編號BCRC20271的啤酒酵母。
接下來於初發酵液內添加0.05wt%的胚芽乳酸菌（Lactobacillus plantarum）並靜置培養24小時以形成次發酵液。於此，胚芽乳酸菌採用寄存編號BCRC 910760的TCI378菌株。
接著，在次發酵液內加入5wt%的醋酸菌靜置發酵120小時以形成植物發酵原液。於此，醋酸菌是採用寄存編號BCRC11688的醋酸菌。植物發酵原液的白利糖度小於3，且其酸鹼值（pH值）為3.4±1。
將植物發酵原液以孔徑200目數的篩網進行過濾得到過濾液，將過濾液於60℃下及150巴下進行減壓濃縮程序得到濃縮液，濃縮液後再加水調整回原始減壓濃縮前的總重得到原始麒麟果發酵物，添加相對於原始麒麟果發酵物為60%的異麥芽寡糖後以得到麒麟果發酵物。
例二：
MITF
基因及
MC1R
基因表現量實驗
材料：
實驗細胞株：採用人類黑色素瘤細胞（Human Melanoma cell line）。採購自ATCC，型號A375.S2, ATCC® CRL-1872。
培養基：採用為非必須胺基酸MEM培養液(MEM-Non-Essential Amino Acids)。採購自Gibco公司，美國。並添加1 mM的丙酮酸鈉(Sodium pyruvate , Gibco)以及10%胎牛血清(Fetal bovine serum , Gibco)。
試劑：RNA萃取試劑套組（購自Geneaid公司，台灣，Lot No. FC24015-G）、KAPA CYBR FAST qPCR試劑組(購自KAPA Biosystems)。
反轉錄酶：採用SuperScript® III Reverse Transcriptase品牌Invitrogen公司，美國。
檢測儀器：ABI StepOnePlus
TM即時PCR系統（Real-Time PCR system，購自Thermo Fisher Scientific公司，美國）。
測試流程：
首先，取6孔培養盤將每孔接種1×10
5個細胞及2mL的培養基並於二氧化碳箱於37℃下培養24小時。將培養完成的細胞分為三組：實驗組、空白與對照組。
空白組：僅添加培養基，然後在37℃下培養6小時。
對照組：添加0.25%vol例一製得的水萃取物02，然後在37℃下培養6小時。
實驗組：添加0.25%vol例一製得的麒麟果發酵物，然後在37℃下培養6小時。
將培養後的實驗組及空白組的細胞去除上清液之後，以1X DPBS緩衝液清洗一次，再加入0.6mL的RB Buffer(附於RNA萃取試劑套組)以裂解細胞膜形成細胞裂解溶液。
接著，使用RNA萃取試劑套組分別收集三組細胞裂解溶液內之RNA。接著，每組取1000奈克（ng）所萃取出的RNA為模板，藉由SuperScript
®III反轉錄酶 （購自Invitrogene公司，美國）以引子黏合進行反轉錄作用產生相應之cDNA。後續利用ABI StepOnePlusTM Real-Time PCR system （Thermo Fisher Scientific公司，美國），以及KAPA SYBR FAST qPCR Kits將三組反轉錄後產物分別以下表一之組合引子進行定量即時反轉錄聚合酶連鎖反應 （quantitative real-time reverse transcription polymerase chain reaction） 以觀察空白組、對照組及實驗組的基因的表現量。定量即時反轉錄聚合酶連鎖反應的儀器設定條件為95°C反應1 秒，60°C反應20秒，總共40個迴圈，並使用2-ΔCt方法進行基因表達的相對定量。於此，藉由cDNA進行定量即時反轉錄聚合酶連鎖反應可間接定量各基因的mRNA表現量，進而推斷各基因編碼的蛋白質的表現量，如圖1所示。
表一
| 目標基因 | 引子名稱 | 序列編號 | 序列 | 長度 |
| MITF | MITF-F | SEQID NO:1 | GGTCC AAGTC CCAAG CAGTG | 20 |
| MITF -R | SEQID NO:2 | GCGTA GCAAG ATGCG TGATG | 20 | |
| MC1R | MC1R-F | SEQID NO:3 | GAGTA GCACC TGGGG TGAAC | 20 |
| MC1R -R | SEQID NO:4 | AGGGC ATCTC ACTCC AGACT | 20 |
於此，使用 2-ΔΔCT方法測定目標基因的相對表現量。所謂相對表現量定義為一目標基因相對於控制組之相應基因的RNA表現量的倍數。該方法以GAPDH基因的循環閾值(CT)作為內部對照之參考基因的循環閾值，按照以下公式計算倍數變化： ΔCT=實驗組或控制組的目標基因的CT - 內部對照的CT ΔΔCT = 實驗組的ΔCT - 控制組的ΔCT 倍數變化 = 2‐ΔΔCt平均值。
所得結果利用Excel軟體進行student t-test以決定兩個樣本群體之間是否在統計上具有顯著差異，如圖1所示，其中「*」代表p值小於0.05，「**」代表p值小於0.01，以及「***」代表p值小於0.001。當「*」越多時，代表統計上相對於空白組的差異越顯著。其中「#」代表p值小於0.05，「##」代表p值小於0.01，以及「###」代表p值小於0.001。當「#」越多時，代表統計上相對於對照組的差異越顯著。
參考圖1。將空白組的MITF基因的表現量視為1時，對照組相對於空白組的MITF基因的表現量為0.62，而實驗組相對於空白組的MITF基因的表現量為0.71，也就是說，相較於空白組，對照組及實驗組的MITF基因的表現量顯著地的被抑制。
續參考圖1。將空白組的MC1R基因的表現量視為1時，對照組相對於空白組的MC1R基因的表現量為1.23，而實驗組相對於空白組的MC1R基因的表現量為0.54，也就是說，相較於空白組，對照組並無抑制MC1R基因的表現量的功效，而實驗組的MC1R基因的表現量則顯著地的被抑制。
可知，麒麟果發酵物能夠有效的抑制黑色素生成。麒麟果發酵物相對於水萃取物更能夠有效的抑制黑色素生成。
例三：抑制前列腺素以促進美白實驗
經由UV照射會刺激角質細胞合成前列腺素(prostaglandin, PGE2)，而刺激角質細胞產生發炎反應而誘發黑色素細胞的酪胺酸酶活化，進而生成黑色素。
材料：
實驗細胞株：採用人類原發性表皮角質細胞（Human Primary Keratinocyte）。編號PCS 200-011。
培養基：採用Keratinocyte-SFM培養基。採購自Gibco公司，美國，型號Gat.17005042。
試劑：磷酸鹽緩衝溶液（購自Gibco公司，型號Gat.14200-075）、前列腺素E2 ELISA試劑組(購自ABCAM，型號Cat. Ab133021)。
反轉錄酶：採用SuperScript® III Reverse Transcriptase品牌Invitrogen公司，美國。
檢測儀器：ELISA reader（購自Bio Tek公司）微盤分析儀（購自Bio Tek公司）。
測試流程：
首先，取24孔培養盤將每孔接種2×10
4個細胞於37℃下培養24小時。將培養完成的細胞分為三組：實驗組、空白與對照組。
空白組：僅添加培養基，並於37℃下培養3小時後，靜置於暗處，意即不進行UVB的照射。
對照組：僅添加培養基，並於37℃下培養3小時，再以800 mJ 能量的UVB對細胞進行照射13.33分鐘。
實驗組：添加0.25%vol例一製得的麒麟果發酵物，並於37℃下培養3小時，以800 mJ 能量的UVB對細胞進行照射13.33分鐘。
將照射後各組的上清液100µL，使用前列腺素E2 ELISA試劑組評估HPEK分泌的前列腺素濃度。
所得結果利用Excel軟體進行student t-test以決定兩個樣本群體之間是否在統計上具有顯著差異，如圖2所示，其中「*」代表p值小於0.05，「**」代表p值小於0.01，以及「***」代表p值小於0.001。當「*」越多時，代表統計上相對於對照組的差異越顯著。其中「#」代表p值小於0.05，「##」代表p值小於0.01，以及「###」代表p值小於0.001。當「#」越多時，代表統計上相對於空白組的差異越顯著。
參考圖2。將空白組所測得的前列腺素濃度視為100%時，對照組相對於空白組的前列腺素濃度為248.7%，而實驗組相對於空白組的前列腺素濃度為153.1%。相較於空白組而言，經UVB照射過的對照組和實驗組都可明顯觀察到前列腺素濃度的提升，尤其是對照組提升了接近1.5倍，也就是說，一般角質細胞在UVB的照射下會產生大量的前列腺素。進一步可觀察到，相較於對照組，同樣在UVB的照射情況下，實驗組的前列腺素濃度顯著地的被抑制。
可知，麒麟果發酵物能夠有效的抑制受紫外線照射後產生的發炎狀況及黑色素生成。
例四：抑制光照所致黑色素生成實驗
本測試採用UVA照射及藍光照射分別進行測試，以觀察不同光線種類對黑色素生成的影響。
材料：
實驗細胞株：採用黑色素瘤細胞B16F10。採購自ATCC，型號CRL：6475。
培養基：採用為DMEM培養基(Dulbecco’s modified Eagle’s medium, 採購自Gibco公司，美國)為基底，並添加1%的青霉素/鏈霉素(Penicillin-streptomycin 採購自Gibco公司)以及10%胎牛血清(Fetal bovine serum , Gibco)。
試劑：磷酸鹽緩衝液(採購自Gibco公司，型號Cat.14200-075)、1N的氫氧化鈉(NaOH)。
相關儀器設備：微盤分析儀（購自Bio Tek公司）、紫外線箱(Ultravioler radiation chamber, Vilber) 、藍光設備（購自Bio Tek公司）。
測試流程：
首先，取6孔培養盤將每孔接種1.5×10
5個細胞於37℃下培養24小時。將培養完成的細胞分為六組：實驗組A、實驗組B、空白組與對照組A、對照組B。
空白組：僅添加2mL的DMEM培養基，並於37℃下培養30分鐘後，最後於在37℃下培養48小時。
對照組A：並於37℃下培養30分鐘後，以13 mJ/cm
2的UVA對細胞進行照射21.66分鐘，最後於在37℃下培養48小時。
實驗組A：額外添加0.25%vol例一製得的麒麟果發酵物，並於37℃下培養30分鐘後，以13 mJ/cm
2的UVA對細胞進行照射21.66分鐘，最後於在37℃下培養48小時。
對照組B：並於37℃下培養30分鐘後，以400~500nm的藍光對細胞進行照射4小時，最後於在37℃下培養48小時。
實驗組B：額外添加0.25%vol例一製得的麒麟果發酵物，並於37℃下培養30分鐘後，以400~500nm的藍光對細胞進行照射4小時，最後於在37℃下培養48小時。
後續，將各組去除培養基後以PBS緩衝液沖洗二次，使用胰蛋白酶處理5分鐘後，收集懸浮的細胞並進行離心(400xg/5分鐘)使細胞沉澱。再次以PBS緩衝液沖洗二次，添加120µL的PBS緩衝液使細胞懸浮成為細胞溶液。接著，將細胞溶液於液態氮中冷凍10分鐘，在於室溫下靜置解凍30分鐘，待完全解凍之後進行離心(12000xg/30分鐘)，離心後去除上清液並混入120µL的氫氧化鈉，混合後在60℃下乾浴1小時。最後，取100µL的細胞溶液至96孔盤中測量其OD值(450nm)。
其計算公式採用黑色素含量（%）=（O.D樣品/對照）×100%。並且以空白組為100%的基準進行換算。
所得結果利用Excel軟體進行student t-test以決定兩個樣本群體之間是否在統計上具有顯著差異，如圖3及圖4所示，其中「*」代表p值小於0.05，「**」代表p值小於0.01，以及「***」代表p值小於0.001。當「*」越多時，代表統計上相對於對照組的差異越顯著。其中「#」代表p值小於0.05，「##」代表p值小於0.01，以及「###」代表p值小於0.001。當「#」越多時，代表統計上相對於空白組的差異越顯著。
參考圖3。將空白組所測得的黑色素含量視為100%時，對照組A相對於空白組的黑色素含量為140.52%，而實驗組A相對於空白組的黑色素含量為105.32%。意即相較於空白組而言，經UVA照射過的對照組A和實驗組A都觀察到黑色素含量的提升，但是未經麒麟果發酵物處理的對照組A提升了接近40%，也就是說，細胞在UVA的照射下會產生大量的黑色素。進一步可觀察到，相較於對照組A，同樣在UVA的照射情況下，實驗組A的黑色素含量顯著地的被抑制，比對照組A的黑色素含量減少35.2%。
參考圖4。將空白組所測得的黑色素含量視為100%時，對照組B相對於空白組的黑色素含量為131%，而實驗組B相對於空白組的黑色素含量為93.38%。意即相較於空白組而言，經藍光照射過的對照組B明顯觀察到黑色素含量的提升，提升了接近30%，也就是說，細胞在藍光的照射下會產生大量的黑色素。進一步可觀察到，相較於對照組B，同樣在藍光的照射情況下，實驗組B的黑色素含量顯著地的被抑制，比對照組B的黑色素含量減少37.62%，甚至比空白組的黑色素含量更低。
由此可知，麒麟果發酵物能夠有效的抑制受紫外線或藍光照射後產生的黑色素生成。
例五：麒麟果發酵物的人體試驗
受試者：7位受試者（年齡介於25到75的成年人）。
測試項目及儀器：
1、肌膚斑點量(Spots)：使用美國Canfield Scientific所販售之VISIA高階數位膚質檢測儀進行檢測，透過高解析度之相機鏡頭對同一受試者在飲用前與飲用後的面部肌膚進行拍攝，藉由標準白光照射下偵測皮膚陰影的變化，即可偵測斑點位置並得到對應的數值。
2、肌膚UV斑點量(UV Spots)：使用美國Canfield Scientific所販售之VISIA高階數位膚質檢測儀進行檢測，透過高解析度之相機鏡頭對同一受試者在飲用前與飲用後的面部肌膚進行拍攝，在UV光照射下，紫外線可被黑色素吸收而偵測到肉眼不可見的表皮層黑色素斑(即UV斑點)，即可偵測斑點位置並得到對應的數值。
3、黑色素指數(Melanin index%)：使用義大利Callegari Srl所販售之Soft Plus檢測儀進行檢測，採用專屬探頭通過測定特定波長的光照於皮膚後所反射的量來定量計算得到黑色素指數，意即黑色素指數愈高代表皮膚中黑色素含量愈多。
4、肌膚皺紋量(Wrinkles)：使用美國Canfield Scientific所販售之VISIA高階數位膚質檢測儀進行檢測，透過高解析度之相機鏡頭對同一受試者在飲用前與飲用後的面部肌膚進行拍攝，藉由標準白光照射、偵測皮膚陰影的變化，即可偵測紋理位置並得到一數值，可代表皮膚的平滑程度。
5、肌膚紋理(Texture)：使用美國Canfield Scientific所販售之VISIA高階數位膚質檢測儀對受試者的面部肌膚進行檢測。其原理乃以可見光拍攝高解析度之肌膚影像，並以內建軟體根據皮膚的凹陷與凸起進行粗糙度分析。測量數值越高，說明皮膚越粗糙。
6、血液樣本委由立人醫事檢驗所進行相關檢測血液中醣化終產物AGEs含量。
測試方式：
令7位受試者每日飲用6mL例一所製得的麒麟果發酵物，並連續飲用8周。於飲用前（即第0周，又稱對照組）及飲用8周後（即第8周，又稱為實驗組），分別使用上述儀器設備測定各受試者的面部肌膚狀況，並且抽取各受試者飲用前及飲用後的血液樣本進行檢測。
於此，於飲用前、後進行儀器檢測時，受試者所在的測試區域的溫度與濕度為一致，以減少外界的溫濕度等因素會對皮膚所造成的影響。
其中，各組之間的統計學顯著差異是藉由學生t-試驗來統計分析。在如圖6到圖10中，其中「*」代表p值小於0.05，「**」代表p值小於0.01，以及「***」代表p值小於0.001。當「*」越多時，代表統計上相對於對照組的差異越顯著。
需要特別說明的是，圖6到10圖中顯示的係以相對倍率呈現，即將對照組的定量結果視為100%來將實驗組的定量結果換算成相對於實驗組的表現量。
測試結果：
請參考圖5，經過八周的每日飲用麒麟果發酵物後，7位受試者中有5位受試者的血液中醣化終產物AGEs含量明顯減少，意即受試者改善人數比例達71.4%。7位受試者的平均血液中醣化終產物AGEs含量由2.7 U/mL下降為2.0 U/mL。意即，每日飲用6mL麒麟果發酵物可以有效降低人體血液中的醣化終產物，具有明顯的抗醣化效果。
請參閱圖6，經過八周的每日飲用麒麟果發酵物後，7位受試者的平均面部皮膚斑點數量由100%下降到91.8%。意即，每日飲用6mL麒麟果發酵物可以有效減少皮膚斑點數量。
請參閱圖7，經過八周的每日飲用麒麟果發酵物後，7位受試者的平均面部皮膚UV斑點數量與圖6的可見皮膚斑點相同可以由100%下降到91.8%。意即，每日飲用6mL麒麟果發酵物可以有效減少皮膚UV斑點數量。
請參閱圖8，經過八周的每日飲用麒麟果發酵物後，7位受試者的面部皮膚黑色素指數由100%下降到94.8%。意即，每日飲用6mL麒麟果發酵物可以有效減少皮膚黑色素含量。
請參閱圖9，經過八周的每日飲用麒麟果發酵物後，7位受試者的面部肌膚紋理由100%下降到88.1%。意即，每日飲用6mL麒麟果發酵物可以有效減少皮膚紋理，使得皮膚更為光滑。
請參閱圖10，經過八周的每日飲用麒麟果發酵物後，7位受試者的面部肌膚皺紋數量由100%下降到93.8%。意即，每日飲用6mL麒麟果發酵物可以有效減少皮膚上的皺紋，使得外觀更為年輕。
例六：麒麟果發酵物成分分析
天然植物的萃取物通常包含多種成分，非屬純物質。因不同的生物活性物質在不同的溶劑中溶解度具有差異性，本試驗利用相互不相溶的溶劑，將麒麟果發酵物中的某一特定成分轉移到另一溶劑中。
儀器設備與材料：
1、核磁共振光譜儀（Nuclear Magnetic Resonance Spectrometer, NMR）。1D與2D光譜使用Ascend 400 MHz, Bruker Co., Germany，以δ表示化學位移（chemical shift），單位為 ppm。
2、高解析液相層析質譜儀：串連超高效液相層析儀 (Ultimate 3000 HPLC)與高解析度軌道式離子阱質譜儀(Q-EXACTIVE System with Ion Max Source)測定，單位為 m/z。
3、中壓液相層析儀（Medium pressure liquid chromatography, MPLC）: CombiFlash® Rf+, Teledyne ISCO, Lincoln, NE。
4、高效能液相層析儀 （High Performance Liquid Chromatography, HPLC）：高效液相層析儀（High Performance Liquid Chromatography, HPLC）係Agilent 1200系列：脫氣裝置係Agilent 真空脫氣裝置 1322A；沖提溶劑輸送係Agilent四元幫浦G1311A；可變波長偵測器係（Multiple Wavelength Detector, MWD）Agilent G1314B；光二極體陣列偵測器（Diode Array Detector, DAD）係Agilent 1260 Infinity DAD VL G1315D，偵測波長為210 nm，280 nm，320 nm，365 nm （Agilent Germany）。
5、分析管柱: Luna®5μm C18（2） 100 Å （250 x 10 mm, Phenomenex, USA）。
6、管柱層析 （Column Chromatography）依填充材料分為：大孔樹脂管柱層析Diaion HP-20 （Mitsubishi Chemical Co., Japan）、正相矽膠管柱層析Merck Kieselgel 60 （40-63 um, Art. 9385）、逆相矽膠管柱層析Merck LiChroprep® RP-18 （40-63 um, Art. 0250）。
7、薄層色層分析 （Thin-Layer Chromatography）採用TLC aluminium sheets （Silica gel 60 F254, 0.25 mm, Merck, Germany）及TLC aluminium sheets （RP-18 F254-S , 0.25 mm, Merck, Germany）。
8、紫外光燈 （UV Lamp）: UVP UVGL-25，波長為 254 nm及365 nm。
9、採用溶劑（solvent）及其來源說明：正丁醇（n-butanol）、正己烷（n-hexane）、乙酸乙酯（ethyl acetate）、丙酮 （acetone）、甲醇 （methanol）、乙醇 （ethanol）、乙腈 （acetonitrile）（採購至默克台灣）、氯仿-d
1（deuteration degree 99.5%）、甲醇-d
4（deuteration degree 99.5%）、重水deuterium oxide（deuteration degree ＞ 99.8％）、Dimethyl sulfoxide-d6 （deuteration degree ＞ 99.9%）（默克台灣）。
測試流程：
首先，取麒麟果發酵物10公升（L）經由正丁醇與水等體積比液相分配的方式進行分離，分別取得正丁醇層萃取液與第一水層萃取液。其中，將正丁醇層萃取液經減壓濃縮乾燥可得正丁醇層萃取物（BuF）21.3克。將第一水層萃取液經減壓濃縮乾燥可得第一水層萃取物（WF）213.5克。
再取第一水層萃取物100克（g）以大孔樹樹管柱層析進行初步分離，依序以純水、純水-甲醇等體積比、甲醇為沖提液進行沖提後，首先以純水沖提時間120分鐘，流速每分鐘30毫升，取得WF1分離部，再以純水-甲醇等體積比沖提時間90分鐘，流速每分鐘30毫升，取得WF2分離部，再以甲醇沖提時間90分鐘，流速每分鐘30毫升，取得WF3分離部。
將WF1分離部以中壓液相層析儀(逆向)進行分離，沖提液由水至甲醇進行線性沖提，沖提時間100分鐘，流速每分鐘10毫升。後續利用薄層色層分析，合併相似結果的沖提物，得到5個次分離部，分別為WF1-1次分離部、WF1-2次分離部、WF1-3次分離部、WF1-4次分離部及WF1-5次分離部。
其中，WF1-1次分離部經由正相矽膠管柱層析(乙酸乙酯/甲醇=1/1)進行純化，得到生物活性物質TCI-GHU-01。將生物活性物質TCI-GHU-01經氫-核磁共振光譜分析鑑定得到生物活性物質TCI-GHU-01的指紋圖譜，如圖11所示。並分析其化學結構後，確認生物活性物質TCI-GHU-01為肌醇(myo-Inositol)，其結構如下所示：
其中，WF1-2次分離部經由中壓液相層析儀(逆向) (甲醇/水=3/17)進行純化，得到生物活性物質TCI-GHU-04。將生物活性物質TCI-GHU-04經氫-核磁共振光譜分析鑑定得到生物活性物質TCI-GHU-04的指紋圖譜，如圖12所示。並分析其化學結構後，確認生物活性物質TCI-GHU-04為4-羥基-3-苯乳酸(4-Hydroxy-3-phenyllactic acid)，其結構如下所示：
其中，WF1-3次分離部經由中壓液相層析儀(逆向)(甲醇/水=1/4)進行純化，得到生物活性物質TCI-GHU-03。將生物活性物質TCI-GHU-03經氫-核磁共振光譜分析鑑定得到生物活性物質TCI-GHU-03的指紋圖譜，如圖13所示。並分析其化學結構後，確認生物活性物質TCI-GHU-03為酪醇(Tyrosol)，其結構如下所示：
其中，WF1-4次分離部經由逆向HPLC(甲醇/水=3/7)進行純化，得到生物活性物質TCI-GHU-02。將生物活性物質TCI-GHU-02經氫-核磁共振光譜分析鑑定得到生物活性物質TCI-GHU-02的指紋圖譜，如圖14所示。並分析其化學結構後，確認生物活性物質TCI-GHU-02為3-苯乳酸(3-Phenyllactic acid)，其結構如下所示：
例七：麒麟果發酵物總多酚含量實驗
材料：福林酚試劑(Folin-Ciocalteu's phenol reagent，購自Merck，料號：1.09001.0100)、沒食子酸(Gallic acid，購自Sigma，料號：G7384)、無水碳酸鈉(Sodium carbonate anhydrous，購自Sigma，料號：31432)。
測試流程：秤取10.0mg的沒食子酸置於10mL容量瓶中，然後以水定量至10mL，以得到沒食子酸的儲備溶液(stock solution)。將沒食子酸的儲備溶液稀釋10倍，即100μL沒食子酸的儲備溶液加900μL的水，以得到100μg/mL沒食子酸的初始溶液(即含1000ppm的沒食子酸)。然後，依據下表二配置0μg/mL、20μg/mL、40μg/mL、60μg/mL、80μg/mL、及100μg/mL之沒食子酸的標準溶液，並分別取100μL之各濃度的標準溶液至玻璃試管中。加入500μL之福林酚試劑至各玻璃試管內與標準溶液混合均勻並靜置3分鐘後，再加入400μL之7.5%碳酸鈉混合均勻後反應30分鐘以得到標準反應溶液。取200μL之標準反應溶液至96孔板中，並測量其在750nm下之吸光值，以獲得標準曲線。
表二
| 標準濃度(μg/mL) | 0 | 20 | 40 | 60 | 80 | 100 |
| 初始溶液 | 0μl | 20μl | 40μl | 60μl | 80μl | 100μl |
| 水 | 100μl | 80μl | 60μl | 40μl | 20μl | 0μl |
準備待測樣本。其中，實驗組樣本是以例一的麒麟果發酵物。對照組01樣本是例一製得的水萃取物02。對照組02樣本是依例一水萃取物02相同製法，將原料改為白火龍果果實(學名
Hylocereus undatus)。對照組03樣本是依例一水萃取物02相同製法，將原料改為紅火龍果果實(學名
Hylocereus polyrhizus)。
將各組樣本以水稀釋20倍後各取100μL到玻璃試管中。接著，加入500μL之福林酚試劑至玻璃試管中與樣本混合均勻並靜置3分鐘後，再加入400μL之7.5%碳酸鈉混合均勻後反應30分鐘以得到待測反應溶液。將裝有待測反應溶液的玻璃試管進行震盪以確保無氣泡後，取200μL之待測反應溶液至96孔板中，並測量待測反應溶液於750nm下之吸光值，接著，各樣本對應的待測反應溶液的吸光值先除以樣本的糖度，再利用標準曲線以內插法換算成總多酚含量。上述實驗步驟各進行三重複。
如圖15所示，對照組01的總多酚含量為20μg/mL、對照組02的總多酚含量為62.5μg/mL、對照組03的總多酚含量為68.3μg/mL及實驗組的總多酚含量為121μg/mL。與全部對照組相較之下，實驗組的總多酚含量有顯著的提升。尤其是相較於對照組01，實驗組的總多酚含量相較於未發酵前提升了六倍。於此，可推斷出麒麟果水萃取物透過微生物發酵後會大量釋出總多酚，並能提升抗氧化活性，可有效減少自由基累積並降低發炎反應。
例八：麒麟果發酵物與水萃取物含量實驗
於此，利用高效液相色譜法（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）來對例一所製得的麒麟果發酵物與例一所製得的水萃取物02中的生物活性物質進行定量與定性的分析。
測試流程：
使用的溶劑為甲醇與水，並在甲醇與水各自添加0.1%甲酸，設定流速為1ml/min，設定沖提條件為0分鐘時甲醇：水為2：98，10分鐘時甲醇：水為2：98，40分鐘時甲醇：水為70：30，50分鐘時甲醇：水為100：0，60分鐘時甲醇：水為100：0。
測試結果：
同時參考圖16及圖17。圖16為水萃取物02的指紋圖譜。圖17為麒麟果發酵物的指紋圖譜。在圖17中，在時間為16分鐘附近解析出生物活性物質TCI-GHU-01的波峰，在時間為18到20分鐘附近依序解析出生物活性物質TCI-GHU-04、生物活性物質TCI-GHU-03及生物活性物質TCI-GHU-02的波峰。
然而，在圖16中並未見對應的波峰。換言之，當水萃取物經過三階段發酵程序而形成麒麟果發酵物，其對應的成分比例產生變化。
例九：抑制光照所致黑色素生成實驗
本測試採用UVA照射分別對例六所分離出來的四個主要生物活性物質進行測試，以觀察各生物活性物質分別對黑色素生成的影響。
材料：同例四所揭示。
培養基：同例四所揭示。
試劑：同例四所揭示。
相關儀器設備：同例四所揭示。
測試流程：
首先，取6孔培養盤將每孔接種1.5×10
5個細胞於37℃下培養24小時。將培養完成的細胞分為六組：空白組、對照組、實驗組1、實驗組2、實驗組3及實驗組4。
空白組：僅添加2mL的DMEM培養基，並於37℃下培養30分鐘後，最後於在37℃下培養48小時。
對照組：僅添加2mL的DMEM培養基，並於37℃下培養30分鐘後，以13 mJ/cm
2的UVA對細胞進行照射21.66分鐘，最後於在37℃下培養48小時。
實驗組1：額外添加0.25%vol例六所分離的生物活性物質TCI-GHU-01，並於37℃下培養30分鐘後，以13 mJ/cm
2的UVA對細胞進行照射21.66分鐘，最後於在37℃下培養48小時。
實驗組2：額外添加0.25%vol例六所分離的生物活性物質TCI-GHU-02，並於37℃下培養30分鐘後，以13 mJ/cm
2的UVA對細胞進行照射21.66分鐘，最後於在37℃下培養48小時。
實驗組3：額外添加0.25%vol例六所分離的生物活性物質TCI-GHU-03，並於37℃下培養30分鐘後，以13 mJ/cm
2的UVA對細胞進行照射21.66分鐘，最後於在37℃下培養48小時。
實驗組4：額外添加0.25%vol例六所分離的生物活性物質TCI-GHU-04，並於37℃下培養30分鐘後，以13 mJ/cm
2的UVA對細胞進行照射21.66分鐘，最後於在37℃下培養48小時。
後續，將各組去除培養基後以PBS緩衝液沖洗二次，使用胰蛋白酶處理5分鐘後，收集懸浮的細胞並進行離心(400xg/5分鐘)使細胞沉澱。再次以PBS緩衝液沖洗二次，添加120µL的PBS緩衝液使細胞懸浮成為細胞溶液。接著，將細胞溶液於液態氮中冷凍10分鐘，在於室溫下靜置解凍30分鐘，待完全解凍之後進行離心(12000xg/30分鐘)，離心後去除上清液並混入120µL的氫氧化鈉，混合後在60℃下乾浴1小時。最後，取100µL的細胞溶液至96孔盤中測量其OD值(450nm)。
其計算公式採用黑色素含量（%）=（O.D樣品/對照）×100%。並且以空白組為100%的基準進行換算。
所得結果利用Excel軟體進行student t-test以決定兩個樣本群體之間是否在統計上具有顯著差異，如圖18所示，其中「*」代表p值小於0.05，「**」代表p值小於0.01，以及「***」代表p值小於0.001。當「*」越多時，代表統計上相對於空白組的差異越顯著。其中「#」代表p值小於0.05，「##」代表p值小於0.01，以及「###」代表p值小於0.001。當「#」越多時，代表統計上相對於對照組的差異越顯著。
參考圖18。將空白組所測得的黑色素含量視為100%時，對照組相對於空白組的黑色素含量為122.59%。意即相較於空白組而言，經UVA照射過的對照組和實驗組都可明顯觀察到黑色素含量的提升，尤其是對照組提升了接近22.59%，也就是說，細胞在UVA的照射下會產生大量的黑色素。
進一步可觀察到，相較於對照組，同樣在UVA的照射情況下，實驗組1、實驗組2及實驗組3的所產生的黑色素含量皆被抑制，具有抗UVA的效果。
由此可知，麒麟果發酵物具備有能夠有效的抑制紫外線的生物活性物質。
綜上所述，根據本發明任一實施例的麒麟果發酵物，其可用於製備改善皮膚狀態的組合物。換言之，前述之組合物在有效用量為6mL/天下具有下列一種或多種功能：抑制MITF基因及/或MC1R基因的表現量、抑制前列腺素誘發的黑色素形成量、減少光照誘發的黑色素沉澱量、減少血液中醣化終產物含量、減少皮膚表面斑紋量、減少皮膚表面UV斑紋量、減少皮膚表面黑色素指數以達到提升膚色亮白的功效、減少皮膚表面紋理及皺紋等。
雖然本發明的技術內容已經以較佳實施例揭露如上，然其並非用以限定本發明，任何熟習此技藝者，在不脫離本發明之精神所作些許之更動與潤飾，皆應涵蓋於本發明的範疇內，因此本發明之保護範圍當視後附之申請專利範圍所界定者為準。
TCI-GHU-01:生物活性物質TCI-GHU-01
TCI-GHU-02:生物活性物質TCI-GHU-02
TCI-GHU-03:生物活性物質TCI-GHU-03
TCI-GHU-04:生物活性物質TCI-GHU-04
圖1 是麒麟果發酵物促進MITF基因及MC1R基因表現結果圖。
圖2 是麒麟果發酵物抑制前列腺素實驗結果圖。
圖3 是麒麟果發酵物抑制UVA照射下黑色素生成實驗結果圖。
圖4 是麒麟果發酵物抑制藍光照射下黑色素生成實驗結果圖。
圖5 是麒麟果發酵物人體實驗血液中醣化終產物含量實驗結果圖。
圖6 是麒麟果發酵物人體實驗減少皮膚斑點實驗結果圖。
圖7 是麒麟果發酵物人體實驗減少皮膚UV斑點實驗結果圖。
圖8 是麒麟果發酵物人體實驗減少皮膚黑色素指數實驗結果圖。
圖9 是麒麟果發酵物人體實驗肌膚紋理改善實驗結果圖。
圖10 是麒麟果發酵物人體實驗肌膚皺紋改善實驗結果圖。
圖11 是麒麟果發酵物中生物活性物質TCI-GHU-01的指紋圖譜。
圖12 是麒麟果發酵物中生物活性物質TCI-GHU-04的指紋圖譜。
圖13 是麒麟果發酵物中生物活性物質TCI-GHU-03的指紋圖譜。
圖14 是麒麟果發酵物中生物活性物質TCI-GHU-02的指紋圖譜。
圖15 是麒麟果發酵物總多酚含量實驗結果圖。
圖16 是麒麟水萃取物的指紋圖譜。
圖17 是麒麟果發酵物的指紋圖譜。
圖18 是麒麟果發酵物內生物活性物質抑制黑色素生成實驗結果圖。
Claims (11)
- 一種麒麟果發酵物的用途，其是用於製備改善皮膚狀態的組合物，其中該麒麟果發酵物由一麒麟果的水萃取物經0.05wt%~0.15wt%的一啤酒酵母菌、0.025%~0.01wt%的一胚芽乳酸桿菌及4%~6wt%的一醋酸菌依序發酵而製得。
- 如請求項1所述的用途，其中該麒麟果發酵物中至少包括肌醇、苯乳酸、酪醇及4-羥苯乳酸。
- 如請求項1所述的用途，其中該麒麟果發酵物可以抑制MITF基因及/或MC1R基因的表現量。
- 如請求項1所述的用途，其中該麒麟果發酵物可以抑制前列腺素誘發的黑色素形成量。
- 如請求項1所述的用途，其中該麒麟果發酵物可以減少光照誘發的黑色素沉澱量，其中該光照係為藍光或紫外光UVA。
- 如請求項1所述的用途，其中該麒麟果發酵物可以減少血液中醣化終產物含量。
- 如請求項1所述的用途，其中該麒麟果發酵物可以減少皮膚表面斑紋量。
- 如請求項7所述的用途，其中該麒麟果發酵物可以減少皮膚表面UV斑紋量。
- 如請求項1所述的用途，其中該麒麟果發酵物可以減少皮膚表面黑色素指數以達到提升膚色亮白的功效。
- 如請求項1所述的用途，其中該麒麟果發酵物可以減少皮膚表面紋理及皺紋。
- 如請求項6到10其中任一項所述的用途，其中該麒麟果發酵物的有效用量為6mL/天。
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- 2022-03-31 TW TW111112689A patent/TWI815387B/zh active
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
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Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| TW202339781A (zh) | 2023-10-16 |
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