TW202229548A - 具有提高的溫度穩定性的四聚體α/β水解酶變體及其使用和生產方法 - Google Patents
具有提高的溫度穩定性的四聚體α/β水解酶變體及其使用和生產方法 Download PDFInfo
- Publication number
- TW202229548A TW202229548A TW110137505A TW110137505A TW202229548A TW 202229548 A TW202229548 A TW 202229548A TW 110137505 A TW110137505 A TW 110137505A TW 110137505 A TW110137505 A TW 110137505A TW 202229548 A TW202229548 A TW 202229548A
- Authority
- TW
- Taiwan
- Prior art keywords
- additives
- food
- feed
- forage
- variant
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 42
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 title claims abstract description 8
- MBMQEIFVQACCCH-QBODLPLBSA-N zearalenone Chemical compound O=C1O[C@@H](C)CCCC(=O)CCC\C=C\C2=CC(O)=CC(O)=C21 MBMQEIFVQACCCH-QBODLPLBSA-N 0.000 claims description 147
- MBMQEIFVQACCCH-UHFFFAOYSA-N trans-Zearalenon Natural products O=C1OC(C)CCCC(=O)CCCC=CC2=CC(O)=CC(O)=C21 MBMQEIFVQACCCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 135
- 102200058878 rs121909570 Human genes 0.000 claims description 121
- 239000000654 additive Substances 0.000 claims description 116
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 114
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 109
- 102000004157 Hydrolases Human genes 0.000 claims description 105
- 108090000604 Hydrolases Proteins 0.000 claims description 105
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims description 103
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 85
- 239000004459 forage Substances 0.000 claims description 79
- 235000013305 food Nutrition 0.000 claims description 76
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 claims description 76
- 239000000729 antidote Substances 0.000 claims description 58
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 claims description 44
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 44
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 41
- 235000015872 dietary supplement Nutrition 0.000 claims description 40
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 40
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 40
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 claims description 40
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 claims description 40
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 claims description 40
- 235000013406 prebiotics Nutrition 0.000 claims description 40
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 32
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 claims description 32
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 claims description 31
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 29
- 239000003674 animal food additive Substances 0.000 claims description 24
- 239000002778 food additive Substances 0.000 claims description 24
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 claims description 23
- 239000004460 silage Substances 0.000 claims description 21
- 235000013373 food additive Nutrition 0.000 claims description 20
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 19
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 17
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 16
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 claims description 15
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 claims description 13
- 230000000593 degrading effect Effects 0.000 claims description 13
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 13
- 229940075522 antidotes Drugs 0.000 claims description 12
- 102220196674 rs1057518968 Human genes 0.000 claims description 12
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 11
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 claims description 10
- 238000002844 melting Methods 0.000 claims description 10
- 230000008018 melting Effects 0.000 claims description 10
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims description 9
- 102220480183 Alkaline phosphatase, germ cell type_V58A_mutation Human genes 0.000 claims description 8
- 102220493686 HLA class II histocompatibility antigen, DRB1 beta chain_F69Y_mutation Human genes 0.000 claims description 8
- 102200062280 rs1554898129 Human genes 0.000 claims description 8
- 102200157848 rs2236410 Human genes 0.000 claims description 8
- 102220007879 rs33980500 Human genes 0.000 claims description 8
- 102220278838 rs543852763 Human genes 0.000 claims description 8
- 102220131337 rs886045804 Human genes 0.000 claims description 8
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 6
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 claims description 6
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 5
- 231100000572 poisoning Toxicity 0.000 claims description 5
- 230000000607 poisoning effect Effects 0.000 claims description 5
- 102220479340 Transcription cofactor vestigial-like protein 1_E47S_mutation Human genes 0.000 claims description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 4
- 230000003054 hormonal effect Effects 0.000 claims description 4
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 claims description 4
- 102200079952 rs193302877 Human genes 0.000 claims description 4
- 241000219310 Beta vulgaris subsp. vulgaris Species 0.000 claims description 3
- 240000000111 Saccharum officinarum Species 0.000 claims description 3
- 235000007201 Saccharum officinarum Nutrition 0.000 claims description 3
- 235000021536 Sugar beet Nutrition 0.000 claims description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 3
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 abstract description 4
- 239000000539 dimer Substances 0.000 abstract description 4
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 54
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 31
- 231100000678 Mycotoxin Toxicity 0.000 description 27
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 description 27
- 239000002636 mycotoxin Substances 0.000 description 27
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 24
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 24
- 239000003008 fumonisin Substances 0.000 description 23
- 239000000440 bentonite Substances 0.000 description 22
- 229910000278 bentonite Inorganic materials 0.000 description 22
- SVPXDRXYRYOSEX-UHFFFAOYSA-N bentoquatam Chemical compound O.O=[Si]=O.O=[Al]O[Al]=O SVPXDRXYRYOSEX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 22
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 22
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 21
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 20
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 19
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 description 19
- RWQKHEORZBHNRI-BMIGLBTASA-N ochratoxin A Chemical compound C([C@H](NC(=O)C1=CC(Cl)=C2C[C@H](OC(=O)C2=C1O)C)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 RWQKHEORZBHNRI-BMIGLBTASA-N 0.000 description 18
- 239000000047 product Substances 0.000 description 18
- 108090000371 Esterases Proteins 0.000 description 15
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 15
- DAEYIVCTQUFNTM-UHFFFAOYSA-N ochratoxin B Natural products OC1=C2C(=O)OC(C)CC2=CC=C1C(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 DAEYIVCTQUFNTM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 241001474374 Blennius Species 0.000 description 12
- 239000003463 adsorbent Substances 0.000 description 12
- -1 feed Substances 0.000 description 12
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 12
- 241000208422 Rhododendron Species 0.000 description 11
- 101000693619 Starmerella bombicola Lactone esterase Proteins 0.000 description 10
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 10
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 10
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 9
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 9
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 9
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 9
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 9
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 9
- GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N (±)-α-Tocopherol Chemical compound OC1=C(C)C(C)=C2OC(CCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 229930195730 Aflatoxin Natural products 0.000 description 8
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 8
- ZRWPUFFVAOMMNM-UHFFFAOYSA-N Patulin Chemical compound OC1OCC=C2OC(=O)C=C12 ZRWPUFFVAOMMNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 8
- 239000005409 aflatoxin Substances 0.000 description 8
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 8
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 8
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 8
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 8
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 8
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 8
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 8
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 8
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 8
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 8
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 8
- VYLQGYLYRQKMFU-UHFFFAOYSA-N Ochratoxin A Natural products CC1Cc2c(Cl)cc(CNC(Cc3ccccc3)C(=O)O)cc2C(=O)O1 VYLQGYLYRQKMFU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 7
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 7
- 239000000463 material Substances 0.000 description 7
- 238000011160 research Methods 0.000 description 7
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 7
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 7
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 241000132536 Cirsium Species 0.000 description 6
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- BPZZWRPHVVDAPT-UHFFFAOYSA-N Ochratoxin-A-ethylester Natural products C=1C(Cl)=C2CC(C)OC(=O)C2=C(O)C=1C(=O)NC(C(=O)OCC)CC1=CC=CC=C1 BPZZWRPHVVDAPT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000012131 assay buffer Substances 0.000 description 6
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 6
- RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N imidazole Natural products C1=CNC=N1 RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229910052901 montmorillonite Inorganic materials 0.000 description 6
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 6
- DAEYIVCTQUFNTM-ABAIWWIYSA-N ochratoxin B Chemical compound C([C@H](NC(=O)C1=CC=C2C[C@H](OC(=O)C2=C1O)C)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 DAEYIVCTQUFNTM-ABAIWWIYSA-N 0.000 description 6
- BPZZWRPHVVDAPT-PXAZEXFGSA-N ochratoxin C Chemical compound C([C@@H](C(=O)OCC)NC(=O)C=1C(=C2C(=O)O[C@H](C)CC2=C(Cl)C=1)O)C1=CC=CC=C1 BPZZWRPHVVDAPT-PXAZEXFGSA-N 0.000 description 6
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 6
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 6
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 6
- 239000012224 working solution Substances 0.000 description 6
- 231100000699 Bacterial toxin Toxicity 0.000 description 5
- 240000004670 Glycyrrhiza echinata Species 0.000 description 5
- 235000001453 Glycyrrhiza echinata Nutrition 0.000 description 5
- 235000006200 Glycyrrhiza glabra Nutrition 0.000 description 5
- 235000017382 Glycyrrhiza lepidota Nutrition 0.000 description 5
- 241000235058 Komagataella pastoris Species 0.000 description 5
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 5
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 5
- 231100000742 Plant toxin Toxicity 0.000 description 5
- KEOYKWIOAINZSQ-UHFFFAOYSA-N alpha-Zearalenol Natural products CC1CCCC(O)CCC=CCc2cc(O)cc(O)c2C(=O)O1 KEOYKWIOAINZSQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 5
- 239000000688 bacterial toxin Substances 0.000 description 5
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 5
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 5
- 230000001076 estrogenic effect Effects 0.000 description 5
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 5
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 5
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 5
- 229940010454 licorice Drugs 0.000 description 5
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 5
- 235000012054 meals Nutrition 0.000 description 5
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 5
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 5
- 239000003123 plant toxin Substances 0.000 description 5
- 235000019833 protease Nutrition 0.000 description 5
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 5
- 150000003722 vitamin derivatives Chemical class 0.000 description 5
- XMGQYMWWDOXHJM-JTQLQIEISA-N (+)-α-limonene Chemical compound CC(=C)[C@@H]1CCC(C)=CC1 XMGQYMWWDOXHJM-JTQLQIEISA-N 0.000 description 4
- IBVJWOMJGCHRRW-UHFFFAOYSA-N 3,7,7-Trimethylbicyclo[4.1.0]hept-2-ene Chemical compound C1CC(C)=CC2C(C)(C)C12 IBVJWOMJGCHRRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- WRYLYDPHFGVWKC-UHFFFAOYSA-N 4-terpineol Chemical compound CC(C)C1(O)CCC(C)=CC1 WRYLYDPHFGVWKC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 4
- 108090000087 Carboxypeptidase B Proteins 0.000 description 4
- 102000003670 Carboxypeptidase B Human genes 0.000 description 4
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 4
- 241001657523 Coriobacteriaceae Species 0.000 description 4
- 241000195493 Cryptophyta Species 0.000 description 4
- QUSNBJAOOMFDIB-UHFFFAOYSA-N Ethylamine Chemical compound CCN QUSNBJAOOMFDIB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 4
- 244000246386 Mentha pulegium Species 0.000 description 4
- 235000016257 Mentha pulegium Nutrition 0.000 description 4
- 235000004357 Mentha x piperita Nutrition 0.000 description 4
- BXFOFFBJRFZBQZ-QYWOHJEZSA-N T-2 toxin Chemical compound C([C@@]12[C@]3(C)[C@H](OC(C)=O)[C@@H](O)[C@H]1O[C@H]1[C@]3(COC(C)=O)C[C@@H](C(=C1)C)OC(=O)CC(C)C)O2 BXFOFFBJRFZBQZ-QYWOHJEZSA-N 0.000 description 4
- 108090001109 Thermolysin Proteins 0.000 description 4
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 4
- 229930003427 Vitamin E Natural products 0.000 description 4
- FPQFYIAXQDXNOR-QDKLYSGJSA-N alpha-Zearalenol Chemical compound O=C1O[C@@H](C)CCC[C@H](O)CCC\C=C\C2=CC(O)=CC(O)=C21 FPQFYIAXQDXNOR-QDKLYSGJSA-N 0.000 description 4
- 238000000055 blue native polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 4
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 4
- 238000004422 calculation algorithm Methods 0.000 description 4
- 229930002954 deoxynivalenol Natural products 0.000 description 4
- LINOMUASTDIRTM-QGRHZQQGSA-N deoxynivalenol Chemical compound C([C@@]12[C@@]3(C[C@@H](O)[C@H]1O[C@@H]1C=C(C([C@@H](O)[C@@]13CO)=O)C)C)O2 LINOMUASTDIRTM-QGRHZQQGSA-N 0.000 description 4
- GUJOJGAPFQRJSV-UHFFFAOYSA-N dialuminum;dioxosilane;oxygen(2-);hydrate Chemical compound O.[O-2].[O-2].[O-2].[Al+3].[Al+3].O=[Si]=O.O=[Si]=O.O=[Si]=O.O=[Si]=O GUJOJGAPFQRJSV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 4
- 229960003133 ergot alkaloid Drugs 0.000 description 4
- OFKDAAIKGIBASY-VFGNJEKYSA-N ergotamine Chemical compound C([C@H]1C(=O)N2CCC[C@H]2[C@]2(O)O[C@@](C(N21)=O)(C)NC(=O)[C@H]1CN([C@H]2C(C3=CC=CC4=NC=C([C]34)C2)=C1)C)C1=CC=CC=C1 OFKDAAIKGIBASY-VFGNJEKYSA-N 0.000 description 4
- 229960004943 ergotamine Drugs 0.000 description 4
- XCGSFFUVFURLIX-UHFFFAOYSA-N ergotaminine Natural products C1=C(C=2C=CC=C3NC=C(C=23)C2)C2N(C)CC1C(=O)NC(C(N12)=O)(C)OC1(O)C1CCCN1C(=O)C2CC1=CC=CC=C1 XCGSFFUVFURLIX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 description 4
- WIGCFUFOHFEKBI-UHFFFAOYSA-N gamma-tocopherol Natural products CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCC1CCC2C(C)C(O)C(C)C(C)C2O1 WIGCFUFOHFEKBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 4
- 235000001050 hortel pimenta Nutrition 0.000 description 4
- NLYAJNPCOHFWQQ-UHFFFAOYSA-N kaolin Chemical compound O.O.O=[Al]O[Si](=O)O[Si](=O)O[Al]=O NLYAJNPCOHFWQQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- CDOSHBSSFJOMGT-UHFFFAOYSA-N linalool Chemical compound CC(C)=CCCC(C)(O)C=C CDOSHBSSFJOMGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 4
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 4
- OSWPMRLSEDHDFF-UHFFFAOYSA-N methyl salicylate Chemical compound COC(=O)C1=CC=CC=C1O OSWPMRLSEDHDFF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- PNKLMTPXERFKEN-ZIOSACBISA-N mycotoxin ht 2 Chemical compound C([C@]12[C@]3(C)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O[C@H]1[C@]3(COC(C)=O)C[C@@H](C(=C1)C)OC(=O)CC(C)C)O2 PNKLMTPXERFKEN-ZIOSACBISA-N 0.000 description 4
- 230000008569 process Effects 0.000 description 4
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 4
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 4
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 4
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 4
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 4
- 229930013292 trichothecene Natural products 0.000 description 4
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 235000019165 vitamin E Nutrition 0.000 description 4
- 229940046009 vitamin E Drugs 0.000 description 4
- 239000011709 vitamin E Substances 0.000 description 4
- LINOMUASTDIRTM-UHFFFAOYSA-N vomitoxin hydrate Natural products OCC12C(O)C(=O)C(C)=CC1OC1C(O)CC2(C)C11CO1 LINOMUASTDIRTM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 4
- NPNUFJAVOOONJE-ZIAGYGMSSA-N β-(E)-Caryophyllene Chemical compound C1CC(C)=CCCC(=C)[C@H]2CC(C)(C)[C@@H]21 NPNUFJAVOOONJE-ZIAGYGMSSA-N 0.000 description 4
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 3
- 241001198387 Escherichia coli BL21(DE3) Species 0.000 description 3
- 241000186394 Eubacterium Species 0.000 description 3
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 3
- 239000005909 Kieselgur Substances 0.000 description 3
- 241001099156 Komagataella phaffii Species 0.000 description 3
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 3
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 3
- 241000235648 Pichia Species 0.000 description 3
- 208000005374 Poisoning Diseases 0.000 description 3
- 101710180958 Putative aminoacrylate hydrolase RutD Proteins 0.000 description 3
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- CQIUKKVOEOPUDV-IYSWYEEDSA-N antimycin Chemical compound OC1=C(C(O)=O)C(=O)C(C)=C2[C@H](C)[C@@H](C)OC=C21 CQIUKKVOEOPUDV-IYSWYEEDSA-N 0.000 description 3
- GYSCAQFHASJXRS-FFCOJMSVSA-N beauvericin Chemical compound C([C@H]1C(=O)O[C@@H](C(N(C)[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)O[C@@H](C(=O)N(C)[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)O[C@@H](C(=O)N1C)C(C)C)C(C)C)=O)C(C)C)C1=CC=CC=C1 GYSCAQFHASJXRS-FFCOJMSVSA-N 0.000 description 3
- GYSCAQFHASJXRS-UHFFFAOYSA-N beauvericin Natural products CN1C(=O)C(C(C)C)OC(=O)C(CC=2C=CC=CC=2)N(C)C(=O)C(C(C)C)OC(=O)C(CC=2C=CC=CC=2)N(C)C(=O)C(C(C)C)OC(=O)C1CC1=CC=CC=C1 GYSCAQFHASJXRS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010079684 beauvericin Proteins 0.000 description 3
- FPQFYIAXQDXNOR-PMRAARRBSA-N beta-Zearalenol Chemical compound O=C1O[C@@H](C)CCC[C@@H](O)CCC\C=C\C2=CC(O)=CC(O)=C21 FPQFYIAXQDXNOR-PMRAARRBSA-N 0.000 description 3
- 230000008033 biological extinction Effects 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- CQIUKKVOEOPUDV-UHFFFAOYSA-N citrinine Natural products OC1=C(C(O)=O)C(=O)C(C)=C2C(C)C(C)OC=C21 CQIUKKVOEOPUDV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 3
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 3
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 description 3
- 241000894007 species Species 0.000 description 3
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 3
- LZAJKCZTKKKZNT-PMNGPLLRSA-N trichothecene Chemical compound C12([C@@]3(CC[C@H]2OC2C=C(CCC23C)C)C)CO1 LZAJKCZTKKKZNT-PMNGPLLRSA-N 0.000 description 3
- NFLGAXVYCFJBMK-IUCAKERBSA-N (-)-isomenthone Chemical compound CC(C)[C@@H]1CC[C@H](C)CC1=O NFLGAXVYCFJBMK-IUCAKERBSA-N 0.000 description 2
- 239000001490 (3R)-3,7-dimethylocta-1,6-dien-3-ol Substances 0.000 description 2
- DSSYKIVIOFKYAU-XCBNKYQSSA-N (R)-camphor Chemical compound C1C[C@@]2(C)C(=O)C[C@@H]1C2(C)C DSSYKIVIOFKYAU-XCBNKYQSSA-N 0.000 description 2
- CDOSHBSSFJOMGT-JTQLQIEISA-N (R)-linalool Natural products CC(C)=CCC[C@@](C)(O)C=C CDOSHBSSFJOMGT-JTQLQIEISA-N 0.000 description 2
- WUOACPNHFRMFPN-SECBINFHSA-N (S)-(-)-alpha-terpineol Chemical compound CC1=CC[C@@H](C(C)(C)O)CC1 WUOACPNHFRMFPN-SECBINFHSA-N 0.000 description 2
- 239000001278 2-(5-ethenyl-5-methyloxolan-2-yl)propan-2-ol Substances 0.000 description 2
- IBVJWOMJGCHRRW-DTWKUNHWSA-N 2-Carene Natural products C1CC(C)=C[C@H]2C(C)(C)[C@@H]12 IBVJWOMJGCHRRW-DTWKUNHWSA-N 0.000 description 2
- WRYLYDPHFGVWKC-SNVBAGLBSA-N 4-Terpineol Natural products CC(C)[C@]1(O)CCC(C)=CC1 WRYLYDPHFGVWKC-SNVBAGLBSA-N 0.000 description 2
- FPQFYIAXQDXNOR-UHFFFAOYSA-N 7beta-trans-zearalenol Natural products O=C1OC(C)CCCC(O)CCCC=CC2=CC(O)=CC(O)=C21 FPQFYIAXQDXNOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 240000002234 Allium sativum Species 0.000 description 2
- 239000005995 Aluminium silicate Substances 0.000 description 2
- 241001504907 Apiotrichum Species 0.000 description 2
- 241000228212 Aspergillus Species 0.000 description 2
- 108010075254 C-Peptide Proteins 0.000 description 2
- 108010006303 Carboxypeptidases Proteins 0.000 description 2
- 102000005367 Carboxypeptidases Human genes 0.000 description 2
- 102000000496 Carboxypeptidases A Human genes 0.000 description 2
- 108010080937 Carboxypeptidases A Proteins 0.000 description 2
- 206010007269 Carcinogenicity Diseases 0.000 description 2
- 239000005973 Carvone Substances 0.000 description 2
- 241000723346 Cinnamomum camphora Species 0.000 description 2
- 244000223760 Cinnamomum zeylanicum Species 0.000 description 2
- 241000207199 Citrus Species 0.000 description 2
- 235000005979 Citrus limon Nutrition 0.000 description 2
- 244000131522 Citrus pyriformis Species 0.000 description 2
- 244000018436 Coriandrum sativum Species 0.000 description 2
- 235000002787 Coriandrum sativum Nutrition 0.000 description 2
- 235000007129 Cuminum cyminum Nutrition 0.000 description 2
- 244000304337 Cuminum cyminum Species 0.000 description 2
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091029865 Exogenous DNA Proteins 0.000 description 2
- 240000006927 Foeniculum vulgare Species 0.000 description 2
- 235000004204 Foeniculum vulgare Nutrition 0.000 description 2
- 206010017533 Fungal infection Diseases 0.000 description 2
- 241000223218 Fusarium Species 0.000 description 2
- 240000001238 Gaultheria procumbens Species 0.000 description 2
- 235000007297 Gaultheria procumbens Nutrition 0.000 description 2
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 2
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 2
- 101000983271 Homo sapiens Xaa-Arg dipeptidase Proteins 0.000 description 2
- 235000008227 Illicium verum Nutrition 0.000 description 2
- 240000007232 Illicium verum Species 0.000 description 2
- 241001099157 Komagataella Species 0.000 description 2
- 235000013628 Lantana involucrata Nutrition 0.000 description 2
- 240000005183 Lantana involucrata Species 0.000 description 2
- BRHDDEIRQPDPMG-UHFFFAOYSA-N Linalyl oxide Chemical compound CC(C)(O)C1CCC(C)(C=C)O1 BRHDDEIRQPDPMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 229920000057 Mannan Polymers 0.000 description 2
- 235000006677 Monarda citriodora ssp. austromontana Nutrition 0.000 description 2
- 208000031888 Mycoses Diseases 0.000 description 2
- 206010028520 Mycotoxicosis Diseases 0.000 description 2
- 231100000006 Mycotoxicosis Toxicity 0.000 description 2
- TVZHDVCTOCZDNE-UHFFFAOYSA-N Neosolaniol Natural products CC(=O)OCC12CC(O)C(C)=CC1OC1C(O)C(OC(C)=O)C2(C)C11CO1 TVZHDVCTOCZDNE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010067572 Oestrogenic effect Diseases 0.000 description 2
- 235000011203 Origanum Nutrition 0.000 description 2
- 240000000783 Origanum majorana Species 0.000 description 2
- 241000242594 Platyhelminthes Species 0.000 description 2
- 241000320380 Silybum Species 0.000 description 2
- 235000010841 Silybum marianum Nutrition 0.000 description 2
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 2
- 244000223014 Syzygium aromaticum Species 0.000 description 2
- 235000016639 Syzygium aromaticum Nutrition 0.000 description 2
- 235000007303 Thymus vulgaris Nutrition 0.000 description 2
- 240000002657 Thymus vulgaris Species 0.000 description 2
- 241000223259 Trichoderma Species 0.000 description 2
- 102100026867 Xaa-Arg dipeptidase Human genes 0.000 description 2
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 2
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 2
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 2
- 229910021536 Zeolite Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000001261 affinity purification Methods 0.000 description 2
- OVKDFILSBMEKLT-UHFFFAOYSA-N alpha-Terpineol Natural products CC(=C)C1(O)CCC(C)=CC1 OVKDFILSBMEKLT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940088601 alpha-terpineol Drugs 0.000 description 2
- 235000012211 aluminium silicate Nutrition 0.000 description 2
- NPNUFJAVOOONJE-UHFFFAOYSA-N beta-cariophyllene Natural products C1CC(C)=CCCC(=C)C2CC(C)(C)C21 NPNUFJAVOOONJE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 2
- 229930008380 camphor Natural products 0.000 description 2
- 229960000846 camphor Drugs 0.000 description 2
- 125000002915 carbonyl group Chemical group [*:2]C([*:1])=O 0.000 description 2
- 230000007670 carcinogenicity Effects 0.000 description 2
- 231100000260 carcinogenicity Toxicity 0.000 description 2
- NPNUFJAVOOONJE-UONOGXRCSA-N caryophyllene Natural products C1CC(C)=CCCC(=C)[C@@H]2CC(C)(C)[C@@H]21 NPNUFJAVOOONJE-UONOGXRCSA-N 0.000 description 2
- NVEQFIOZRFFVFW-RGCMKSIDSA-N caryophyllene oxide Chemical compound C=C1CC[C@H]2O[C@]2(C)CC[C@H]2C(C)(C)C[C@@H]21 NVEQFIOZRFFVFW-RGCMKSIDSA-N 0.000 description 2
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 2
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 2
- 229910001919 chlorite Inorganic materials 0.000 description 2
- 229910052619 chlorite group Inorganic materials 0.000 description 2
- QBWCMBCROVPCKQ-UHFFFAOYSA-N chlorous acid Chemical compound OCl=O QBWCMBCROVPCKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000017803 cinnamon Nutrition 0.000 description 2
- 235000020971 citrus fruits Nutrition 0.000 description 2
- 239000002734 clay mineral Substances 0.000 description 2
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 2
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 2
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 2
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 2
- HNPSIPDUKPIQMN-UHFFFAOYSA-N dioxosilane;oxo(oxoalumanyloxy)alumane Chemical compound O=[Si]=O.O=[Al]O[Al]=O HNPSIPDUKPIQMN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012738 dissolution medium Substances 0.000 description 2
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 2
- 125000004185 ester group Chemical group 0.000 description 2
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 2
- RRAFCDWBNXTKKO-UHFFFAOYSA-N eugenol Chemical compound COC1=CC(CC=C)=CC=C1O RRAFCDWBNXTKKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000004611 garlic Nutrition 0.000 description 2
- 229910052900 illite Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 2
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- NFLGAXVYCFJBMK-UHFFFAOYSA-N isomenthone Natural products CC(C)C1CCC(C)CC1=O NFLGAXVYCFJBMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052622 kaolinite Inorganic materials 0.000 description 2
- 229930007744 linalool Natural products 0.000 description 2
- 244000144972 livestock Species 0.000 description 2
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 2
- TVZHDVCTOCZDNE-WVJYZQHISA-N neosolaniol Chemical compound C([C@@]12[C@]3(C)[C@H](OC(C)=O)[C@@H](O)[C@H]1O[C@@H]1C=C(C)[C@@H](O)C[C@@]13COC(=O)C)O2 TVZHDVCTOCZDNE-WVJYZQHISA-N 0.000 description 2
- VGIBGUSAECPPNB-UHFFFAOYSA-L nonaaluminum;magnesium;tripotassium;1,3-dioxido-2,4,5-trioxa-1,3-disilabicyclo[1.1.1]pentane;iron(2+);oxygen(2-);fluoride;hydroxide Chemical compound [OH-].[O-2].[O-2].[O-2].[O-2].[O-2].[F-].[Mg+2].[Al+3].[Al+3].[Al+3].[Al+3].[Al+3].[Al+3].[Al+3].[Al+3].[Al+3].[K+].[K+].[K+].[Fe+2].O1[Si]2([O-])O[Si]1([O-])O2.O1[Si]2([O-])O[Si]1([O-])O2.O1[Si]2([O-])O[Si]1([O-])O2.O1[Si]2([O-])O[Si]1([O-])O2.O1[Si]2([O-])O[Si]1([O-])O2.O1[Si]2([O-])O[Si]1([O-])O2.O1[Si]2([O-])O[Si]1([O-])O2 VGIBGUSAECPPNB-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 2
- HFPZCAJZSCWRBC-UHFFFAOYSA-N p-cymene Chemical compound CC(C)C1=CC=C(C)C=C1 HFPZCAJZSCWRBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 2
- 239000000419 plant extract Substances 0.000 description 2
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 2
- 230000004481 post-translational protein modification Effects 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 239000012723 sample buffer Substances 0.000 description 2
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 2
- 235000019333 sodium laurylsulphate Nutrition 0.000 description 2
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 2
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- RWVGQQGBQSJDQV-UHFFFAOYSA-M sodium;3-[[4-[(e)-[4-(4-ethoxyanilino)phenyl]-[4-[ethyl-[(3-sulfonatophenyl)methyl]azaniumylidene]-2-methylcyclohexa-2,5-dien-1-ylidene]methyl]-n-ethyl-3-methylanilino]methyl]benzenesulfonate Chemical compound [Na+].C1=CC(OCC)=CC=C1NC1=CC=C(C(=C2C(=CC(C=C2)=[N+](CC)CC=2C=C(C=CC=2)S([O-])(=O)=O)C)C=2C(=CC(=CC=2)N(CC)CC=2C=C(C=CC=2)S([O-])(=O)=O)C)C=C1 RWVGQQGBQSJDQV-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 2
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 2
- MGSRCZKZVOBKFT-UHFFFAOYSA-N thymol Chemical compound CC(C)C1=CC=C(C)C=C1O MGSRCZKZVOBKFT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000001585 thymus vulgaris Substances 0.000 description 2
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N toluene Substances CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 2
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 2
- 239000013638 trimer Substances 0.000 description 2
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 239000000273 veterinary drug Substances 0.000 description 2
- 235000019155 vitamin A Nutrition 0.000 description 2
- 239000011719 vitamin A Substances 0.000 description 2
- 239000000341 volatile oil Substances 0.000 description 2
- 239000010457 zeolite Substances 0.000 description 2
- NOOLISFMXDJSKH-KXUCPTDWSA-N (-)-Menthol Chemical compound CC(C)[C@@H]1CC[C@@H](C)C[C@H]1O NOOLISFMXDJSKH-KXUCPTDWSA-N 0.000 description 1
- FAMPSKZZVDUYOS-OWEBEESNSA-N (1e,4z,8e)-2,6,6,9-tetramethylcycloundeca-1,4,8-triene Chemical compound C\C1=C/CC(C)(C)\C=C/C\C(C)=C\CC1 FAMPSKZZVDUYOS-OWEBEESNSA-N 0.000 description 1
- NMPHXGOYUUBGIK-POGJTHQKSA-N (2s)-2-[(5-chloro-8-hydroxy-3-methyl-1-oxo-3,4-dihydroisochromene-7-carbonyl)amino]-3-(4-hydroxyphenyl)propanoic acid Chemical compound C([C@H](NC(=O)C1=CC(Cl)=C2CC(OC(=O)C2=C1O)C)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 NMPHXGOYUUBGIK-POGJTHQKSA-N 0.000 description 1
- UHPMCKVQTMMPCG-UHFFFAOYSA-N 5,8-dihydroxy-2-methoxy-6-methyl-7-(2-oxopropyl)naphthalene-1,4-dione Chemical compound CC1=C(CC(C)=O)C(O)=C2C(=O)C(OC)=CC(=O)C2=C1O UHPMCKVQTMMPCG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NVEQFIOZRFFVFW-UHFFFAOYSA-N 9-epi-beta-caryophyllene oxide Natural products C=C1CCC2OC2(C)CCC2C(C)(C)CC21 NVEQFIOZRFFVFW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010000234 Abortion spontaneous Diseases 0.000 description 1
- WQVFQXXBNHHPLX-ZKWXMUAHSA-N Ala-Ala-His Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](Cc1cnc[nH]1)C(O)=O WQVFQXXBNHHPLX-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 1
- YYSWCHMLFJLLBJ-ZLUOBGJFSA-N Ala-Ala-Ser Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O YYSWCHMLFJLLBJ-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- YYAVDNKUWLAFCV-ACZMJKKPSA-N Ala-Ser-Gln Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O YYAVDNKUWLAFCV-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- 108090000915 Aminopeptidases Proteins 0.000 description 1
- 102000004400 Aminopeptidases Human genes 0.000 description 1
- BHSYMWWMVRPCPA-CYDGBPFRSA-N Arg-Arg-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N BHSYMWWMVRPCPA-CYDGBPFRSA-N 0.000 description 1
- PTVGLOCPAVYPFG-CIUDSAMLSA-N Arg-Gln-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O PTVGLOCPAVYPFG-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- PTNFNTOBUDWHNZ-GUBZILKMSA-N Asn-Arg-Met Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O PTNFNTOBUDWHNZ-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- MECFLTFREHAZLH-ACZMJKKPSA-N Asn-Glu-Cys Chemical compound C(CC(=O)O)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N MECFLTFREHAZLH-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- KHCNTVRVAYCPQE-CIUDSAMLSA-N Asn-Lys-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O KHCNTVRVAYCPQE-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 description 1
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 102100034279 Calcium-binding mitochondrial carrier protein Aralar2 Human genes 0.000 description 1
- 239000004215 Carbon black (E152) Substances 0.000 description 1
- 208000034628 Celiac artery compression syndrome Diseases 0.000 description 1
- NPBVQXIMTZKSBA-UHFFFAOYSA-N Chavibetol Natural products COC1=CC=C(CC=C)C=C1O NPBVQXIMTZKSBA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020004638 Circular DNA Proteins 0.000 description 1
- 241000219109 Citrullus Species 0.000 description 1
- LAQCZBYXNRANFU-WQOXNDGTSA-N Crotocin Chemical compound C([C@@]12[C@@]3(C)[C@@]4(C)[C@H]5O[C@H]5C(C)=C[C@H]4O[C@@H]1C[C@H]3OC(=O)\C=C/C)O2 LAQCZBYXNRANFU-WQOXNDGTSA-N 0.000 description 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 1
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 1
- 208000012239 Developmental disease Diseases 0.000 description 1
- AUGQEEXBDZWUJY-ZLJUKNTDSA-N Diacetoxyscirpenol Chemical compound C([C@]12[C@]3(C)[C@H](OC(C)=O)[C@@H](O)[C@H]1O[C@@H]1C=C(C)CC[C@@]13COC(=O)C)O2 AUGQEEXBDZWUJY-ZLJUKNTDSA-N 0.000 description 1
- AUGQEEXBDZWUJY-UHFFFAOYSA-N Diacetoxyscirpenol Natural products CC(=O)OCC12CCC(C)=CC1OC1C(O)C(OC(C)=O)C2(C)C11CO1 AUGQEEXBDZWUJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 241001267419 Eubacterium sp. Species 0.000 description 1
- 239000005770 Eugenol Substances 0.000 description 1
- WQWMZOIPXWSZNE-WDSKDSINSA-N Gln-Asp-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)NCC(O)=O WQWMZOIPXWSZNE-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- YYOBUPFZLKQUAX-FXQIFTODSA-N Glu-Asn-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O YYOBUPFZLKQUAX-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- 101001062093 Homo sapiens RNA-binding protein 15 Proteins 0.000 description 1
- IOVUXUSIGXCREV-DKIMLUQUSA-N Ile-Leu-Phe Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 IOVUXUSIGXCREV-DKIMLUQUSA-N 0.000 description 1
- UWBDLNOCIDGPQE-GUBZILKMSA-N Ile-Lys Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN UWBDLNOCIDGPQE-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- IPFKIGNDTUOFAF-CYDGBPFRSA-N Ile-Val-Arg Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N IPFKIGNDTUOFAF-CYDGBPFRSA-N 0.000 description 1
- 241000421270 Komagataella phaffii CBS 7435 Species 0.000 description 1
- 241001506991 Komagataella phaffii GS115 Species 0.000 description 1
- 241000446619 Komagataella phaffii JC308 Species 0.000 description 1
- 241000824268 Kuma Species 0.000 description 1
- LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N L-norleucine Chemical compound CCCC[C@H]([NH3+])C([O-])=O LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- 241000186660 Lactobacillus Species 0.000 description 1
- 235000010663 Lavandula angustifolia Nutrition 0.000 description 1
- 244000178870 Lavandula angustifolia Species 0.000 description 1
- LCPYQJIKPJDLLB-UWVGGRQHSA-N Leu-Leu Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(C)C LCPYQJIKPJDLLB-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- 241001625930 Luria Species 0.000 description 1
- 241000235395 Mucor Species 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 206010029155 Nephropathy toxic Diseases 0.000 description 1
- ITCSWEBPTQLQKN-UHFFFAOYSA-N Nivalenol Natural products CC1=CC2OC3C(O)C(O)C(C2(CO)CC1=O)C34CO4 ITCSWEBPTQLQKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UKOTXHQERFPCBU-YQPARWETSA-N Nivalenol Chemical compound C([C@]12[C@@]3([C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O[C@@H]1C=C(C([C@@H](O)[C@@]13CO)=O)C)C)O2 UKOTXHQERFPCBU-YQPARWETSA-N 0.000 description 1
- KIQUCMUULDXTAZ-HJOGWXRNSA-N Phe-Tyr-Tyr Chemical compound N[C@@H](Cc1ccccc1)C(=O)N[C@@H](Cc1ccc(O)cc1)C(=O)N[C@@H](Cc1ccc(O)cc1)C(O)=O KIQUCMUULDXTAZ-HJOGWXRNSA-N 0.000 description 1
- 229920002584 Polyethylene Glycol 6000 Polymers 0.000 description 1
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 1
- UVMRYBDEERADNV-UHFFFAOYSA-N Pseudoeugenol Natural products COC1=CC(C(C)=C)=CC=C1O UVMRYBDEERADNV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100029244 RNA-binding protein 15 Human genes 0.000 description 1
- 238000011529 RT qPCR Methods 0.000 description 1
- NSFWWJIQIKBZMJ-YKNYLIOZSA-N Roridin A Chemical compound C([C@]12[C@]3(C)[C@H]4C[C@H]1O[C@@H]1C=C(C)CC[C@@]13COC(=O)[C@@H](O)[C@H](C)CCO[C@H](\C=C\C=C/C(=O)O4)[C@H](O)C)O2 NSFWWJIQIKBZMJ-YKNYLIOZSA-N 0.000 description 1
- 241000235344 Saccharomycetaceae Species 0.000 description 1
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 1
- QMCDMHWAKMUGJE-IHRRRGAJSA-N Ser-Phe-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O QMCDMHWAKMUGJE-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- DKGRNFUXVTYRAS-UBHSHLNASA-N Ser-Ser-Trp Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(O)=O DKGRNFUXVTYRAS-UBHSHLNASA-N 0.000 description 1
- 235000019764 Soybean Meal Nutrition 0.000 description 1
- 241000191940 Staphylococcus Species 0.000 description 1
- 241000187747 Streptomyces Species 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 206010043275 Teratogenicity Diseases 0.000 description 1
- COYHRQWNJDJCNA-NUJDXYNKSA-N Thr-Thr-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O COYHRQWNJDJCNA-NUJDXYNKSA-N 0.000 description 1
- 239000005844 Thymol Substances 0.000 description 1
- 241000223230 Trichosporon Species 0.000 description 1
- 235000001484 Trigonella foenum graecum Nutrition 0.000 description 1
- 244000250129 Trigonella foenum graecum Species 0.000 description 1
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 description 1
- 244000098338 Triticum aestivum Species 0.000 description 1
- KHPLUFDSWGDRHD-SLFFLAALSA-N Tyr-Tyr-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CC2=CC=C(C=C2)O)NC(=O)[C@H](CC3=CC=C(C=C3)O)N)C(=O)O KHPLUFDSWGDRHD-SLFFLAALSA-N 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- APJDQUGPCJRQRJ-LBPRGKRZSA-N Zearalanone Chemical compound O=C1O[C@@H](C)CCCC(=O)CCCCCC2=CC(O)=CC(O)=C21 APJDQUGPCJRQRJ-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 1
- 229920002494 Zein Polymers 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 230000021736 acetylation Effects 0.000 description 1
- 238000006640 acetylation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 239000002154 agricultural waste Substances 0.000 description 1
- FAMPSKZZVDUYOS-UHFFFAOYSA-N alpha-Caryophyllene Natural products CC1=CCC(C)(C)C=CCC(C)=CCC1 FAMPSKZZVDUYOS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 235000013405 beer Nutrition 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 239000012148 binding buffer Substances 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 229910052797 bismuth Inorganic materials 0.000 description 1
- JCXGWMGPZLAOME-UHFFFAOYSA-N bismuth atom Chemical compound [Bi] JCXGWMGPZLAOME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 235000008429 bread Nutrition 0.000 description 1
- UDSAIICHUKSCKT-UHFFFAOYSA-N bromophenol blue Chemical compound C1=C(Br)C(O)=C(Br)C=C1C1(C=2C=C(Br)C(O)=C(Br)C=2)C2=CC=CC=C2S(=O)(=O)O1 UDSAIICHUKSCKT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- HHTWOMMSBMNRKP-UHFFFAOYSA-N carvacrol Natural products CC(=C)C1=CC=C(C)C(O)=C1 HHTWOMMSBMNRKP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RECUKUPTGUEGMW-UHFFFAOYSA-N carvacrol Chemical compound CC(C)C1=CC=C(C)C(O)=C1 RECUKUPTGUEGMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000007746 carvacrol Nutrition 0.000 description 1
- RSYBQKUNBFFNDO-UHFFFAOYSA-N caryophyllene oxide Natural products CC1(C)CC2C(=C)CCC3OC3(C)CCC12C RSYBQKUNBFFNDO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 description 1
- 108010084210 citrin Proteins 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 238000004590 computer program Methods 0.000 description 1
- LAQCZBYXNRANFU-VQRCBPKLSA-N crotocin Natural products CC=C/C(=O)O[C@@H]1C[C@H]2O[C@@H]3C=C(C)[C@@H]4O[C@@H]4[C@]3(C)[C@]1(C)[C@@]25CO5 LAQCZBYXNRANFU-VQRCBPKLSA-N 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 229930007927 cymene Natural products 0.000 description 1
- 238000006114 decarboxylation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 1
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 1
- 239000005547 deoxyribonucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000002637 deoxyribonucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 238000009795 derivation Methods 0.000 description 1
- 238000001784 detoxification Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 1
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 239000012149 elution buffer Substances 0.000 description 1
- 229940011871 estrogen Drugs 0.000 description 1
- 239000000262 estrogen Substances 0.000 description 1
- 102000015694 estrogen receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010038795 estrogen receptors Proteins 0.000 description 1
- 229960002217 eugenol Drugs 0.000 description 1
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 235000013312 flour Nutrition 0.000 description 1
- 238000001917 fluorescence detection Methods 0.000 description 1
- 239000000417 fungicide Substances 0.000 description 1
- 210000001156 gastric mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 229930182470 glycoside Natural products 0.000 description 1
- 150000002338 glycosides Chemical class 0.000 description 1
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 1
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 1
- 208000037824 growth disorder Diseases 0.000 description 1
- 230000009931 harmful effect Effects 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 231100000003 human carcinogen Toxicity 0.000 description 1
- QBNFBHXQESNSNP-UHFFFAOYSA-N humulene Natural products CC1=CC=CC(C)(C)CC=C(/C)CCC1 QBNFBHXQESNSNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930195733 hydrocarbon Natural products 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-M hydrogensulfate Chemical compound OS([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000005661 hydrophobic surface Effects 0.000 description 1
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 description 1
- 230000007688 immunotoxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000386 immunotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 239000003262 industrial enzyme Substances 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002919 insect venom Substances 0.000 description 1
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- WYXXLXHHWYNKJF-UHFFFAOYSA-N isocarvacrol Natural products CC(C)C1=CC=C(O)C(C)=C1 WYXXLXHHWYNKJF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 1
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 1
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 1
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 1
- 229940039696 lactobacillus Drugs 0.000 description 1
- 239000001102 lavandula vera Substances 0.000 description 1
- 235000018219 lavender Nutrition 0.000 description 1
- 108010091798 leucylleucine Proteins 0.000 description 1
- 229940069445 licorice extract Drugs 0.000 description 1
- 239000003120 macrolide antibiotic agent Substances 0.000 description 1
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 229940041616 menthol Drugs 0.000 description 1
- 230000037353 metabolic pathway Effects 0.000 description 1
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 1
- 229960001047 methyl salicylate Drugs 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- 210000002200 mouth mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 210000004877 mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 238000000569 multi-angle light scattering Methods 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 231100000417 nephrotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000007694 nephrotoxicity Effects 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 229930183344 ochratoxin Natural products 0.000 description 1
- 238000006384 oligomerization reaction Methods 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 229960005190 phenylalanine Drugs 0.000 description 1
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 1
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 1
- 229940093429 polyethylene glycol 6000 Drugs 0.000 description 1
- 229920001470 polyketone Polymers 0.000 description 1
- 230000001124 posttranscriptional effect Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 210000001236 prokaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 1
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 235000021067 refined food Nutrition 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 108020004418 ribosomal RNA Proteins 0.000 description 1
- IMUQLZLGWJSVMV-UOBFQKKOSA-N roridin A Natural products CC(O)C1OCCC(C)C(O)C(=O)OCC2CC(=CC3OC4CC(OC(=O)C=C/C=C/1)C(C)(C23)C45CO5)C IMUQLZLGWJSVMV-UOBFQKKOSA-N 0.000 description 1
- 239000012146 running buffer Substances 0.000 description 1
- MUACSCLQRGEGOE-JOBFPFSDSA-N satratoxin H Natural products CC(O)C12OCCC(=C/C(=O)OCC34CCC(=CC3OC5CC(OC(=O)C=C/C=C/1)C4(C)C56CO6)C)C2O MUACSCLQRGEGOE-JOBFPFSDSA-N 0.000 description 1
- MUACSCLQRGEGOE-RXLTUBJDSA-N satratoxin h Chemical compound C([C@@]12[C@]3(C)[C@H]4C[C@H]1O[C@@H]1C=C(C)CC[C@@]13COC(=O)C=C1CCO[C@@](/C=C/C=C/C(=O)O4)(C1O)[C@@H](O)C)O2 MUACSCLQRGEGOE-RXLTUBJDSA-N 0.000 description 1
- 229930000044 secondary metabolite Natural products 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 1
- 238000001542 size-exclusion chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 1
- 238000000527 sonication Methods 0.000 description 1
- 239000004455 soybean meal Substances 0.000 description 1
- 208000000995 spontaneous abortion Diseases 0.000 description 1
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 1
- 230000003637 steroidlike Effects 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 230000036435 stunted growth Effects 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 231100000211 teratogenicity Toxicity 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 238000002849 thermal shift Methods 0.000 description 1
- 229960000790 thymol Drugs 0.000 description 1
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 1
- 238000010361 transduction Methods 0.000 description 1
- 230000026683 transduction Effects 0.000 description 1
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 1
- 150000003327 trichothecene derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 235000001019 trigonella foenum-graecum Nutrition 0.000 description 1
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 1
- 235000015099 wheat brans Nutrition 0.000 description 1
- 238000002424 x-ray crystallography Methods 0.000 description 1
- 239000005019 zein Substances 0.000 description 1
- 229940093612 zein Drugs 0.000 description 1
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/16—Hydrolases (3) acting on ester bonds (3.1)
- C12N9/18—Carboxylic ester hydrolases (3.1.1)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K10/00—Animal feeding-stuffs
- A23K10/10—Animal feeding-stuffs obtained by microbiological or biochemical processes
- A23K10/14—Pretreatment of feeding-stuffs with enzymes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K20/00—Accessory food factors for animal feeding-stuffs
- A23K20/10—Organic substances
- A23K20/189—Enzymes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L29/00—Foods or foodstuffs containing additives; Preparation or treatment thereof
- A23L29/06—Enzymes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L5/00—Preparation or treatment of foods or foodstuffs, in general; Food or foodstuffs obtained thereby; Materials therefor
- A23L5/20—Removal of unwanted matter, e.g. deodorisation or detoxification
- A23L5/25—Removal of unwanted matter, e.g. deodorisation or detoxification using enzymes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
- A61K38/46—Hydrolases (3)
- A61K38/465—Hydrolases (3) acting on ester bonds (3.1), e.g. lipases, ribonucleases
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
- C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
- C12N15/8242—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with non-agronomic quality (output) traits, e.g. for industrial processing; Value added, non-agronomic traits
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
- C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
- C12N15/8261—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield
- C12N15/8271—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance
- C12N15/8279—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance for biotic stress resistance, pathogen resistance, disease resistance
- C12N15/8282—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance for biotic stress resistance, pathogen resistance, disease resistance for fungal resistance
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02E—REDUCTION OF GREENHOUSE GAS [GHG] EMISSIONS, RELATED TO ENERGY GENERATION, TRANSMISSION OR DISTRIBUTION
- Y02E50/00—Technologies for the production of fuel of non-fossil origin
- Y02E50/30—Fuel from waste, e.g. synthetic alcohol or diesel
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P60/00—Technologies relating to agriculture, livestock or agroalimentary industries
- Y02P60/80—Food processing, e.g. use of renewable energies or variable speed drives in handling, conveying or stacking
- Y02P60/87—Re-use of by-products of food processing for fodder production
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Husbandry (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Physiology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Abstract
本發明涉及相比於親代α/β水解酶而言性能得到改進的α/β水解酶變體，例如具有提高的溫度穩定性，本發明還涉及使用和生產該變體的方法，包括指導由同源二聚體向同源四聚體的四級結構形成的方法。
Description
本發明涉及與SEQ ID NO: 1的親代α/β水解酶相比性能得到改進的α/β水解酶變體，例如具有提高的溫度穩定性，本發明還涉及編碼該變體的多核苷酸、使用和生產該變體的方法，包括指導由同源二聚體到同源四聚體的四級結構形成的方法。尤其，本發明涉及使用該變體降解玉米赤黴烯酮（ZEN）的方法。
真菌毒素是絲狀真菌產生的次級代謝產物。真菌毒素的一種重要的代表物是玉米赤黴烯酮（ZEN），其以前被稱為F-2毒素，由多種鐮刀菌產生，在世界各地都能找到。這些真菌感染栽培植物，尤其是諸如各種穀物，其中，真菌感染通常發生於收穫之前，那時真菌生長和/或真菌毒素的產生可在存儲之前發生，或者，真菌感染甚至可以發生於收穫之後，在存儲之前或在不恰當的存儲條件下。聯合國糧農組織（FAO）已估計，全世界25%的農產品受真菌污染，造成嚴重經濟損失。在一項歷時8年的國際研究中，從2004年1月到2011年12月對總計19757份樣本進行了分析；它們中的72%對至少一種真菌檢測為陽性，39%被發現受到污染，37%對ZEN檢測為陽性（Schatzmayr和Streit (2013) ‘Global occurrence of mycotoxins in the food and feed chain: Facts and figures.’ World Mycotoxin Journal 6(3):213-222）。在世界所有地區和檢測的全部類型的穀物和飼料作物諸如玉米、大豆粉、小麥、麥麩、DDGS（幹酒糟及可溶物）中以及在成品動物飼料混合物中都已經發現了ZEN，發生率達到100%。
ZEN結合至雌激素受體並且會造成激素紊亂，ZEN在口服之後會立即被吸收並被動物轉化為兩種立體異構代謝產物α-玉米赤黴烯醇(α-ZEL) 和/或 β-玉米赤黴烯醇(β-ZEL)。例如，α-ZEL，並且α-玉米赤黴醇(α-ZAL) 和/或玉米赤黴酮(ZAN)，比ZEN具有更強的雌激素效應。雖然共軛ZEN衍生物的雌激素活性比ZEN本身低，但是ZEN在消化道中會從這些共軛ZEN衍生物再次釋放，從而恢復其完整的雌激素活性。
ZEN具有高達20000 mg/kg體重的經口LD50，亞急性和/或亞慢性毒性作用諸如致畸作用、致癌作用、雌激素效應和免疫抑制作用會在長時間接觸的動物或人中發生。被ZEN污染的飼料會在哺乳動物中引起發育障礙。豬，特別是小豬，對ZEN極其敏感。飼料中超過0.5 ppm的ZEN濃度會引起發育障礙，超過1.5 ppm的濃度會在豬中引起高雌激素。在牛中，濃度是12 ppm的ZEN會造成自然流產。
由於ZEN通過粘膜（尤其是通過胃粘膜以及口腔粘膜）能被快速吸收，因此立即定量失活是必須的。口服施用之後30分鐘，能夠在血液中檢測到ZEN。由於ZEN的有害作用，歐盟給出了食品中ZEN的限制上限以及動物飼料產品中ZEN上限的推薦值（EC No. 1881/2006）。
降低食物和動物飼料產品中ZEN的主要策略是例如通過保持“良好的農作實踐”來限制真菌生長。這包括保證種子不受昆蟲和真菌的侵害或及時從田地移除農業廢棄物在內的很多措施。此外，田地中的真菌生長能夠通過使用殺真菌劑來降低。在收穫之後，應當在殘餘濕度低於15%和低溫條件下儲存收穫的物料以便防治真菌生長。同樣地，應當在深加工之前去除真菌感染的物料。儘管有這麼多的預防措施，但是，在2004至2011年間，甚至在農業標準最高的地區諸如北美和中歐，仍然發現有高達37%的檢測玉米樣本被ZEN污染（Schatzmayr和Streit (2013)）。
另一種有關的黴菌毒素是赭麯黴毒素A（OTA；也可稱作N-{[(3R)-5-氯代-8-羥基-3-甲基-1-氧代-3,4-二氫-1H-2-苯並吡喃-7-基] 羰基}-L-苯丙氨酸，(−)-N-((5-氯代-8-羥基-3-甲基-1-氧代-7-異苯並二氫吡喃基) 羰基)-3-苯丙氨酸，(2S)-2-{[(3R)-5-氯代-8-羥基-3-甲基-1-氧代-3,4-二氫-1H-2-苯並吡喃-7-羰基]氨基}-3-苯丙酸，(R)-N-((5-氯代-3,4-二氫-8-羥基-3-甲基-1-氧代-1H-2-苯並吡喃-7-基)羰基)苯丙氨酸，N-(((3R)-5-氯代-8-羥基-3-甲基-1-氧代-7-異苯並二氫吡喃基)羰基)-3-苯基-L-丙氨酸，N-[(3R)-5-氯代-8-羥基-3-甲基-1-氧代-3,4-二氫-1H-2-苯並吡喃-7-羰基]-L-苯丙氨酸，N-{[(3R)-5-氯代-8-羥基-3-甲基-1-氧代-3,4-二氫-1H-異苯並吡喃-7-基] 羰基}-L-苯丙氨酸），CAS號是303-47-9，它由真菌大量產生並且是包括赭麯黴毒素B、赭麯黴毒素C等在內的赭麯黴毒素組中毒性最強的成員。尤其，由於其對人類和動物產生的嚴重不良影響，包括腎毒性、免疫毒性和致癌性（Carballo et al., 2019; Malier et al., 2016），OTA受到食品和飼料安全方面的密切關注。在這方面，國際癌症研究機構（IARC）已經將OTA歸類於2B組的可能的人類致癌物（IARC, 2012）。
為了解決上述問題和缺陷，需要研發在較高溫度能夠除去ZEN毒性並且適合用作食物或飼料添加劑或者食物或飼料產品的α/β-水解酶變體。
鑒於上述現有技術，作出本發明。因此，本發明的目的是尤其可以表述為提供除去ZEN毒性的改進的方式和方法（例如，除其他外，提供還能夠除去其它有關的黴菌毒素的組合物）。
本申請在下文描述的基礎上通過提供變體、組合物和方法來滿足該需求，以申請專利範圍為特徵並通過所附實施例和附圖來描述。
本發明涉及親代α/β水解酶的變體，該變體包括在對應於如下位置的一個或多個位置處的置換：SEQ ID NO: 1（較佳使用SEQ ID NO: 1的編號）的167, 168, 174, 218, 155, 175, 179, 182, 183, 186, 187, 268, 306, 10, 17, 28, 39, 47, 50, 57, 58, 59, 63, 65, 69, 126, 139, 225, 230, 245, 251, 281, 287, 289, 293和304，其中所述變體具有α/β水解酶活性，並且，其中該變體是與SEQ ID NO: 1的多肽具有至少71%（較佳：至少72%,至少73%,至少74%,至少75%,至少76%,至少77%,至少78%,至少79%,至少80%,至少81%,至少82%,至少83%,至少84%,至少85%,至少86%,至少87%,至少88%,至少89%,至少90%,至少91%,至少92%,至少93%,至少94%,至少95%,至少95.5%,至少96%,至少96.5%,至少97%,至少97.5%,至少98%,至少98.5%,至少99%, 或至少99.5%）但小於100% 序列同一性的多肽，該變體具有與親代α/β水解酶相比得以提高的溫度穩定性。
本發明還涉及降解玉米赤黴烯酮（zearalenone）和/或其衍生物的方法，包括：(a)提供如下物質的一種或多種：本發明的變體和/或親代α/β水解酶，較佳與SEQ ID NO: 1的多肽具有至少95%序列同一性的所述親代α/β水解酶；(b)使(a)的一種或多種多肽與玉米赤黴烯酮和/或其衍生物進行接觸（例如，形成酶-底物混合物）。
本申請通過提供下文描述的變體和組合物滿足了該需求，以申請專利範圍為特徵，並通過所附實施例和附圖加以說明。
序列表概述
SEQ ID NO: 1是親代α/β水解酶胺基酸序列。
SEQ ID NO: 2-35是變體α/β水解酶胺基酸序列。
SEQ ID NO: 36是共同胺基酸基序1。
SEQ ID NO: 37是共同胺基酸基序2。
SEQ ID NO: 38是共同胺基酸基序3。
SEQ ID NO: 39是共同胺基酸基序4。
定義
如本文所述的“EC編號”（酶學委員會編號）可用於指根據2020年2月26日發佈的酶命名數據庫的酶活性（例如，可從https://enzyme.expasy.org/獲得）。EC編號指的是NC-IUBMB的酶命名法1992（學術出版社，聖地亞哥，加利福尼亞州），包括了分別發表於如下刊物的增刊1-5：Eur. J. Biochem. 1994, 223, 1-5; Eur. J. Biochem. 1995, 232, 1-6; Eur. J. Biochem. 1996, 237, 1-5; Eur. J. Biochem. 1997, 250, 1-6; and Eur. J. Biochem. 1999, 264, 610-650。
如本文所述，可參考UniProtKB登記號（http://www.uniprot.org/，可獲得自2020年12月2日公佈的UniProtKB版2020_06）
術語“多肽”在本文中與術語“蛋白質”等同使用。蛋白質（包括其片段，較佳生物活性片段，和肽，通常小於30個胺基酸）包括通過共價肽鍵彼此連接的一個或多個胺基酸（結果是得到一連串的胺基酸）。如本文使用的術語“多肽”描述了一組分子，這組分子例如由超過30個胺基酸組成。多肽可以進一步形成多聚體，例如二聚體、三聚體和更高級的低聚物，即，由超過一個多肽分子組成。形成這樣的二聚體、三聚體等的多肽分子可以是相同的或不同的。因此，這樣的多聚體的相應高階結構被稱為同源二聚體或異源二聚體、同源三聚體或異源三聚體等。異源多聚體的一個例子是抗體分子，在其天然存在的形式中，它是由兩個相同的輕肽鏈和兩個相同的重肽鏈組成。術語“多肽”和“蛋白質”還指天然修飾的多肽/蛋白質，其中修飾是由例如翻譯後修飾（例如糖基化、乙醯化、磷酸化等）造成的。這樣的修飾在本領域中是已知的。
序列同一 性：兩個胺基酸序列之間或兩個核苷酸序列之間的關聯性由參數“序列同一性”來描述。就本發明而言，使用Needleman-Wunsch算法（Needleman和Wunsch, 1970, J. Mol. Biol. 48: 443-453）來確定兩個胺基酸序列之間的序列同一性，在EMBOSS軟件包（EMBOSS: 歐洲分子生物學開放軟件包, Rice et al., 2000, Trends Genet. 16: 276-277）（較佳5.0.0或更高的版本）的Needle程序中實施Needleman-Wunsch算法。使用的參數可以是缺口開放罰分10、缺口延伸罰分0.5和EBLOSUM62（BLOSUM62的EMBOSS版本）取代矩陣。標記為“最長同一性”（“longest identity”）的Needle輸出（使用非-簡單（no-brief）選項得到）用作同一性百分比並按照如下公式計算：
（相同殘基×100）/（比對的長度 - 比對中缺口的總數）。
可選地，使用的參數可以是缺口開放罰分10、缺口延伸罰分0.5和EDNAFULL（NCBI NUC4.4的EMBOSS版本）取代矩陣。標記為“最長同一性”的Needle輸出（使用非-簡單選項得到）用作同一性百分比並按照如下公式計算：
（相同脫氧核糖核苷酸×100）/（比對的長度 - 比對中缺口的總數）。
表現：術語“表現”包括產生變體（多肽）涉及的任何步驟，包括但不限於，轉錄、轉錄後修飾、翻譯、翻譯後修飾和分泌。
表現載體：術語“表現載體”指的是線性或環狀DNA分子，其包括編碼變體（多肽）的多核苷酸並可操作地連接於提供其表現的調控序列。
片段：術語“片段”指的是在成熟多肽的氨基和/或羧基端缺少一個或多個（例如，幾個）胺基酸的多肽；其中，片段仍具有本文描述的活性（例如α/β水解酶活性，例如具有將ZEN水解為HZEN的活性）。
如本文使用的術語“EC:3.1.1.-”意思是“玉米赤黴烯酮水解酶”（也被稱為“玉米赤黴烯酮內酯酶”），例如，能夠將ZEN水解為HZEN的酶。
宿主細胞：術語“宿主細胞”指的是具有包括本發明多核苷酸的核酸構建體或表現載體，對轉化、轉染、轉導等敏感的任何細胞類型。術語“宿主細胞”包含親代細胞的任何後代，該後代因為複製過程中發生的突變而與親代細胞不相同。
核酸構建體：術語“核酸構建體”指的是單鏈或雙鏈的核酸分子，其與天然存在的基因分離，或者以自然界中不存在的方式或合成的方式將其修飾為含有核酸片段，其包括一個或多個調控序列。
可操作地連接：術語“可操作地連接”指的是如下構型：在該構型中，調控序列位於相對於多核苷酸編碼序列的合適位置，如此，調控序列指導編碼序列的表現。
調控序列：如本文使用的術語“調控序列”（“control sequences”）指的是編碼本發明的變體（多核苷酸）的多核苷酸進行表現所必需的核酸序列。每個調控序列對於編碼變體的多核苷酸來說可以是天然的（即來自相同基因）或外源的（即來自不同基因），或者，彼此是天然的或外源的。這樣的調控序列，包括但不限於，前導序列、聚腺苷酸化序列、前肽序列、啟動子、信號肽序列和轉錄終止子。至少，調控序列包括啟動子以及轉錄和翻譯終止信號。為了引入促進調控序列與本發明多核苷酸編碼區域進行連接的特定限制性位點，向調控序列提供接頭（linker）。
如本文使用，術語“對應於”指的是序列特定胺基酸的測定方法，其中參考了特定胺基酸序列（例如US2020071638）。例如，就本發明而言，當參考特定胺基酸位置時，本領域技術人員能夠將另一胺基酸序列與所述參考的胺基酸序列進行比對，以便確定哪個特定胺基酸在所述另一胺基酸序列中是有意義的。另一α/β水解酶中對應胺基酸殘基的識別可以使用幾種計算機程序通過多個多肽序列的比對來確定，前述計算機程序包括但不限於MUSCLE（基於對數期望的多序列比較；3.5或更高版本；Edgar, 2004, Nucleic Acids Research 32: 1792-1797）、MAFFT（6.857或更高版本；Katoh and Kuma, 2002, Nucleic Acids Research 30: 3059-3066; Katoh et al., 2005, Nucleic Acids Research 33: 51 1-518; Katoh and Toh, 2007, Bioinformatics 23: 372-374; Katoh et al., 2009, Methods in Molecular Biology 537: 39-64; Katoh and Toh, 2010, Bioinformatics 26: 1899-1900）和使用ClustalW的EMBOSS EMMA（1.83或更高版本；Thompson et al., 1994, Nucleic Acids Research 22: 4673-4680），分別使用它們各自的罰分參數。
就本發明而言，SEQ ID NO: 1公開的成熟多肽用於確定另一α/β水解酶中對應胺基酸殘基。另一α/β水解酶的胺基酸序列與SEQ ID NO: 1公開的成熟多肽進行比對，基於比對，使用Needleman-Wunsch 算法（Needleman and Wunsch, 1970, J. Mol. Biol. 48: 443-453）來確定與SEQ ID NO: 1公開的成熟多肽中任何胺基酸殘基相對應的胺基酸位置編號，前述Needleman-Wunsch 算法使用EMBOSS軟件包（較佳5.0.0或更高版本）的Needle程序來實施（EMBOSS：歐洲分子生物學開放軟件包，Rice et al., 2000, Trends Genet. 16: 276-277）。使用的參數是缺口開放罰分10、缺口延伸罰分0.5和EBLOSUM62（BLOSUM62的EMBOSS版本）取代矩陣。
根據本發明使用的術語“位置”指的是本文描述的胺基酸序列中的胺基酸的位置。在本文中，術語“對應”可包括一個位置不僅取決於前面的核苷酸/胺基酸的編號。
如本文使用，“沉默”突變的意思是核酸序列中堿基置換，其不改變核酸序列編碼的胺基酸序列。“保守或等效”置換（或突變）是指如下面表1中“典型置換”所列舉的置換。如本文使用的“高度保守”置換在下面表1中標題“較佳的置換”下顯示。
表1. 胺基酸置換
| 原始的 | 典型置換 | 較佳的置換 |
| Ala (A) | val; leu; ile | val |
| Arg (R) | lys; gln; asn | lys |
| Asn (N) | gln; his; asp, lys; arg | gln |
| Asp (D) | glu; asn | glu |
| Cys (C) | ser; ala | ser |
| Gln (Q) | asn; glu | asn |
| Glu (E) | asp; gln | asp |
| Gly (G) | ala | ala |
| His (H) | asn; gln; lys; arg | arg |
| Ile (I) | leu; val; met; ala; phe; | leu |
| Leu (L) | norleucine; ile; val; met; ala; | ile |
| Lys (K) | arg; gln; asn | arg |
| Met (M) | leu; phe; ile | leu |
| Phe (F) | leu; val; ile; ala; tyr | tyr |
| Pro (P) | ala | ala |
| Ser (S) | thr | thr |
| Thr (T) | ser | ser |
| Trp (W) | tyr; phe | tyr |
| Tyr (Y) | trp; phe; thr; ser | phe |
| Val (V) | ile; leu; met; phe; ala; | leu |
變體：術語“變體”指的是具有本文描述的比活力（specific activity）的多肽，其在一個或多個（例如，幾個）位置包括改變，即置換、插入和/或缺失。置換的意思是佔據一個位置的胺基酸被不同的胺基酸所取代；缺失的意思是佔據一個位置的胺基酸被去掉；插入的意思是緊接著佔據一個位置的胺基酸再增加一個胺基酸。
在描述本發明的變體中，為了便於參考而調整下述命名法。採用了公認的lUPAC單字母或三字母胺基酸縮寫。
置換。對於胺基酸置換，使用下述命名法：原始胺基酸，位置，置換的胺基酸。因此，將位置167的Asn (N)被Thr (T)置換表示為“N167T”或“Asn167Thr”。多個突變可以使用附加標記（“+”）或（“，”）來分開，例如，“N167T+F168Y+S174C+F218Y”或“N167T, F168Y, S174C, F218Y”，表示給定位置的多個置換。在本申請的實施例中，多個突變可以使用逗號來分開，例如，N167T, F168Y, S174C, F218Y。此外，本文使用的“X”或“Xaa”可以意指任何胺基酸（例如，如上面表1所描述）。因此，本文使用的“X167T”意思是位置167的任何胺基酸被T (Thr)置換。假使原始胺基酸殘基可以是任何胺基酸殘基，也可使用簡寫來只表明位置和置換的胺基酸。因此，在標明置換時可以省略“X”或“Xaa”，例如，“167T”名稱可用來表示位置167的任何胺基酸被T (Thr)置換。此外，本文使用的“X167G,A,S,C,U,I,L,V,T”意思是位置167的任何胺基酸被G, A, S, C, U, I, L, V或T的任一個置換。假使置換胺基酸殘基可以是任何胺基酸殘基，也可使用簡寫來隻表明原始胺基酸及其位置，例如“N167”。
如本文使用，術語“轉基因的”指的是基因組通過引入外源遺傳物質或額外拷貝的自體遺傳物質（例如，通過轉化或重組（例如，US7410800B2））而被改變的生物體。轉基因生物可以是植物、哺乳動物、真菌、細菌或病毒。如本文使用，“轉基因植物、種子或花粉粒”指的是植物、種子或花粉粒，或者由其衍生的任何下一代的後代植物、種子或花粉粒，其中，植物、種子或花粉粒或者其後代包含引入的外源性DNA，該外源性DNA是相同品種的非轉基因植物、種子或花粉粒中最初並不存在的。此外，轉基因植物、種子或花粉粒可包含被改造的植物中原有的序列，但是其中，外源性DNA已經被改變，以便改變編碼序列的表現水平或模式。
術語“回收變體”指的是例如通過親和純化從細菌裂解物中純化變體。
術語“食品”指的是具有食用價值的物質。
術語“草料”（fodder）指的是喂給家畜的物質。
術語“飼料”（feed）指的是用作牲畜的食品的物質。
術語“添加劑”指的是例如以少量加入到其它產品或物質中以便影響期望的性質和/或特性的化合物或物質。
術語“益生元”指的是能夠誘導有益微生物生長和/或活性的化合物或物質。
術語“解毒劑”指的是能夠降低和/或抑制毒性的化合物或物質。
術語“營養補充劑”指的是能夠補足膳食營養含量的化合物或物質，例如，維生素和礦物質。
術語“中間物”指的是在獲得本發明的最終產品的過程中（例如，在過程的中間階段）產生的化合物或物質，例如，本發明的食品、草料、飼料、添加劑（例如，食品添加劑、草料添加劑或飼料添加劑）、解毒劑、營養補充劑或益生元。
術語“藻類物質”（phycophytic substance）指的是來源於海藻物種的物質。
胺基酸基序：如本文使用的術語“胺基酸基序”或“基序”指的是多肽的特別限定的胺基酸片段（stretch）。因此，本發明的胺基酸基序指的是給定多肽中胺基酸的短序列。
如本文使用的術語“OTA衍生物”指的是具有如下化學結構的化合物或物質：
在OTA衍生物的分子結構中，R1、R2和R3可以是任何原子或原子基團。尤其，R1選自H和OH構成的組，R2選自H和CH2-CH3構成的組，R3選自H和Cl構成的組。OTA衍生物可以是：赭麯黴毒素B，其中R1 是H、R2是H且R3是H；赭麯黴毒素C，R1是H、R2是CH2-CH3且R3是Cl；或者，赭麯黴毒素TA，R1是OH、R2是H且R3是Cl。尤其，術語“OTA衍生物”指的是從赭麯黴毒素B和赭麯黴毒素C構成的組選出的化合物或物質。
必須注意的是，如本文使用，除非在文中有明確的指出，否則單數形式“一個”（a）、“一種”（an）和“該”（the）包括複數引用。因此，例如，對“一種試劑”的引用包括一種或多種此類的不同試劑，對“該方法”的引用包括對本領域技術人員已知的等同步驟和方法的引用，本領域技術人員能夠對本文描述的方法進行修改或替代。
除非指出，否則，在一系列要素之前的術語“至少”應理解為指的是該系列中的每個元素。本領域技術人員將意識到或者能夠僅使用常規實驗來確定與本文描述的發明的實施方案等同的眾多方案。這些等同方案也旨在包括在本發明中。
不管在本文中哪裡使用，術語“和/或”包括“和”、“或”和“與所述術語有關的要素的全部或者任何其它組合”。
如本文使用的術語“約”或“大約”意思是給定數值或範圍的20%以內、較佳10%以內且更較佳5%以內。
在整個說明書中以及所附的申請專利範圍中，除非上下文中有要求，否則，詞語“包括”（comprise）以及其變型諸如“包含”（comprises）和“含有”（comprising），將被理解為意指包括規定的整數或步驟或者整數或步驟的組，但是不排除其它任何整數或步驟或者整數或步驟的組。當在本文中使用時，術語“含有”（comprising）可被術語“包括”（containing）或“包含”（including）代替，或者，有時候在本文中使用時，可被術語“具有”（having）代替。
當在本文中使用時，“由...組成”排除請求項的要件中沒有指明的任何要件、步驟或成分。當在本文中使用時，“主要由...組成”並不排除對請求項的基本的和新穎的特徵不產生實質影響的材料或步驟。
在本文的每個例子中，術語“包括”、“主要由...組成”和“由...組成”中的任何一個可以被其它兩個術語中的任一個所代替。
SEQ ID NO: 1的野生型親代α/β水解酶能夠將ZEN降解為無毒的HZEN，其顯示低熔點（Tm =50°C）並且具有二聚同源二聚體四級結構。由於在工業酶產品的生產和應用中高的酶穩定性是關鍵點，因此需要進一步研發改良的α/β水解酶變體，其能夠在較高溫度解毒ZEN並且特別適合用作食物或飼料添加劑或者食物或飼料產品。
在本發明的過程中，在具有SEQ ID NO: 1、指導由同源二聚體向同源四聚體的四級結構形成且因此尤其增強了溫度穩定性的親代α/β水解酶中識別出特定的胺基酸置換。因此，本發明涉及本文描述的用於降解玉米赤黴烯酮（ZEN）的改良水解酶變體的用途。
ZEN（CAS註冊號#17924-92-4，(4S,12E)-16,18-二羥基-4-甲基-3-氧雜雙環[12.4.0] 十八碳-1(14),12,15,17-四烯-2,8-二酮）是具有如下結構式的非甾體雌激素大環內酯，通過聚酮代謝途徑合成：
然而，多種ZEN衍生物也會發生在自然界中，可通過ZEN的酶修飾或化學修飾來形成。例子包括糖苷ZEN綴合物（conjugate）或者包含硫酸鹽的那些，由真菌、植物或哺乳動物代謝以及人類或動物體等中形成的ZEN代謝物來形成。下面將ZEN衍生物理解為自然發生的或者通過化學合成或生物化學合成來合成的ZEN綴合物或ZEN代謝物，尤其是，α-玉米赤黴烯醇（α-ZEL；CAS註冊號# 36455-72-8；(2E,7R,11S)-7,15,17-三羥基-11-甲基-12-氧雜雙環[12.4.0]- 十八碳-1(18),2,14,16-四烯-13-酮），β-玉米赤黴烯醇（β- ZEL；CAS註冊號#71030-11-0；(2E,7S,11S)-7,15,17-三羥基-11-甲基-12-氧雜雙環[12.4.0] 十八碳-1(18),2,14,16-四烯-13-酮），α-玉米赤黴醇（α-ZAL；CAS註冊號# 26538-44-3；(7R,11S)-7,15,17-三羥基-11-甲基-12-氧雜雙環[12.4.0] 十八碳-1(18),14,16-三烯-13-酮），β-玉米赤黴醇（β- ZAL；CAS註冊號# 42422-68-4；(7S,11S)-7,15,17-三羥基-11-甲基-12-氧雜雙環[12.4.0]-十八碳-1(14),15,17-三烯-13-酮），玉米赤黴烯酮14-硫酸鹽（Z14S；[(2E,11S)-15-羥基-11-甲基-7,13-二氧-12-氧雜雙環[12.4.0] 十八碳-1(18),2,14,16-四烯-17-yl]硫酸氫鹽），玉米赤黴烯酮-14-糖苷（Z14G；(2E,11S)-15-羥基-11-甲基-17-[(3R,4S,5S,6R)-3,4,5-三羥基-6-(羥甲基)- 四氫吡喃-2-基]氧-12-氧雜雙環[12.4.0] 十八碳1(18)2,14,16-四烯-7,13-二酮），以及玉米赤黴酮（ZAN；CAS註冊號# 5975-78-0；(11S)-15,17-二羥基-11-甲基-12-氧雜雙環-[12.4.0] 十八碳-1(18),14,16-三烯-7,13-二酮）。
ZEN以及ZEN衍生物尤其是α-ZEL、β-ZEL、Z14S、α-ZAL、β-ZAL、Z14G和ZAN也可在加工的食物或動物飼料產品中檢測到，諸如麵包或啤酒，原因在於它們高度的化學和物理穩定性。
序列號是1至35的任何多肽都能成功水解ZEN或ZEN衍生物。認為，ZEN或其衍生物的水解按照以下反應機理在酯基處發生：
ZEN水解形成無毒的水解玉米赤黴烯酮(HZEN)和/或水解ZEN衍生物可以利用本發明的α/β-水解酶來發生。HZEN進一步脫羧得到脫羧水解ZEN (DHZEN)和/或脫羧水解ZEN衍生物被認為是自發的。
本文描述的α/β-水解酶和變體能夠並適合降解ZEN。例如，α/β-水解酶能夠適合於ZEN和/或其衍生物的酯基的無輔因子水解切割（例如，水解依賴於H
2O）。
可以按照如下方法來測量ZEN降解：製備玉米赤黴烯酮降解分析緩衝液(118.5 mM NaCl, 8.55 mM 醋酸, 14.9 mM 醋酸鹽, 0.1 mg/ml BSA, pH 5.0, (Jantratid, E., Janssen, N., Reppas, C. & Dressman, J. B. (2008): Dissolution media simulating conditions in the proximal human gastrointestinal tract: An update. Pharmaceutical Research 25 (7): 1663-1576), 含有0.1 mg/ml牛血清白蛋白和0.52 ppm玉米赤黴烯酮作為底物)，在37.0℃預熱，將960µl試樣的分析緩衝液轉移至96深井板的反應管中。用活動蓋密封該板，37.0℃保存在DWP-熱振動篩中直至玉米赤黴烯酮降解分析開始。使用純化的玉米赤黴烯酮-切割多肽通過在樣本緩衝液（Teorell Stenhagen緩衝液pH 7.5, 含有0.1 mg/ml牛血清白蛋白）中稀釋至比最終玉米赤黴烯酮降解實驗中分析的濃度高25倍來製備酶工作液，玉米赤黴烯酮-切割多肽的濃度可在給定條件下有效降解玉米赤黴烯酮。為了開始玉米赤黴烯酮降解分析，將40.0 µl酶工作液加入到含有960.0 µl分析緩衝液的試管中，從而在分析反應中實現0.5 ppm的最終ZEN濃度。加入pH 7.5的酶工作液不會改變pH 5.0的玉米赤黴烯酮降解反應。37.0℃，持續振動的DWP-熱振動篩中孵育玉米赤黴烯酮降解反應。玉米赤黴烯酮降解反應開始之後立即用吸管頭再懸浮混合，將120.0 µl的0.0 h樣本轉移至新的PCR板的管中，用管帽密封。在幾個時間點（例如5.0, 10.0, 20.0, 30.0, 45.0, 60.0, 90.0分鐘）之後從玉米赤黴烯酮降解反應取出額外樣本。一旦從降解反應中取出樣本，就通過在99.0℃在熱塊（thermo-block）（例如，Thermal Shake lite, 460-029, VWR）孵育10.0分鐘來熱滅活該樣本中的玉米赤黴烯酮切割多肽。隨後，對管離心（3.0分鐘，室溫，2500 x g），將90.0 µl上清液轉移至有邊緣的PCR板（例如，twin.tec®PCR板，0030128648，Eppendorf AG），其用熱封膜（例如，熱封膜，0030127838, Eppendof AG）封閉。這些樣本板儲存在4.0℃，直至HPLC-FLD測量。按照Vekiru et al. (Vekiru et al. (2016) ‘Isolation and characterization of enzymatic zearalenone hydrolysis reaction products’ World Mycotoxin Journal 9:353-363)描述的改進的HPLC-FLD方法測量玉米赤黴烯酮濃度。278.0 nm消光和465.0 nm發射，在HPLC-FLD上進行分析。當在40.0℃在Kinetex 5µm EVO C18 100 A 50.0 x 2.1 mm柱（00B-4633-AN, Phenomenex Inc.）上完成分離時，玉米赤黴烯酮的保留時間是1.8分鐘，前述分離採用了如下方法：使用溶劑A（95.0 %乙腈 + 4.9 %水 + 0.1 %甲酸）和溶劑B（5.0 %乙腈+ 94.9 % 水 + 0.1 %甲酸），梯度：0.0-0.5分鐘10 % 相B, 0.5-2.0 分鐘線性增加至50.0 %相B，然後在0.1分鐘內減至10 % 相B，持續進行，總運行時間2.3分鐘。流速設置為1.5 ml/min，進樣體積是5.0 μl。對各種分析採用了類似的採集設置。基於玉米赤黴烯酮外標物的校準，對玉米赤黴烯酮進行定量。所取反應樣品的玉米赤黴烯酮濃度（µM）對取樣時間點作圖。線性玉米赤黴烯酮降解隨時間的斜率以酶促反應體積中每分鐘減少的μmol玉米赤黴烯酮計算。考慮到純化的玉米赤黴烯酮-切割多肽的可能的稀釋並將這些合適的稀釋因素包括在計算中，計算以每分鐘每mg純化的酶降解的µmol玉米赤黴烯酮（µmol ZEN/min/mg）表示的酵素比活性（specific enzymatic activity）。
在本文中，應注意，術語“單位”（unit）或“U”指的是測量酶的催化活性，定義為在設定條件下每分鐘發生反應或切割的底物（在本發明中即玉米赤黴烯酮）的微摩爾（µmol）數。利用酶或多肽溶液的“活性”定義了酶或多肽溶液的酶濃度，表示為溶液的單位每毫升（U/ml）或單位每升（U/l）。
在一些實施方案中，本發明提供了親代α/β水解酶的變體，該變體包括在對應於如下位置的一個或多個位置的置換：SEQ ID NO: 1（較佳使用SEQ ID NO: 1的編號）的167, 168, 174, 218, 155, 175, 179, 182, 183, 186, 187, 268, 306, 10, 17, 28, 39, 47, 50, 57, 58, 59, 63, 65, 69, 126, 139, 225, 230, 245, 251, 281, 287, 289, 293和304，其中，所述變體具有α/β水解酶活性，並且其中，該變體是與SEQ ID NO: 1的多肽具有至少71%（較佳：至少72%, 至少73%, 至少74%, 至少75%, 至少76%, 至少77%, 至少78%, 至少79%, 至少80%, 至少81%, 至少82%, 至少83%, 至少84%, 至少85%, 至少86%,至少87%, 至少88%, 至少 89%, 至少90%, 至少91%, 至少92%, 至少93%, 至少94%, 至少95%, 至少95.5%, 至少96%, 至少96.5%, 至少97%, 至少97.5%, 至少98%, 至少98.5%, 至少99%, 或至少99.5%）但小於100%序列同一性的多肽，較佳地，所述變體具有水解酶EC: 3.1.1.-活性。
在其它實施方案中，本發明的變體具有如下一種或多種特性：(i)相對於親代α/β水解酶得到改進的性質，其中所述改進的性質包括提高的溫度穩定性，較佳地，相比於SEQ ID NO: 1，提高的溫度穩定性；(ii)能夠四聚體化，較佳地，具有四聚體四級結構，進一步較佳地，所述四聚體化是同源四聚體化；(iii)具有大於50℃的熔點(Tm)，較佳地，所述Tm範圍是大約51℃至大約70℃；(iv)能夠降解玉米赤黴烯酮和/或其衍生物；(v)具有至少一個（較佳至少兩個，更較佳至少三個，最較佳至少四個）胺基酸基序，所述胺基酸基序與從如下選出的胺基酸序列具有至少80%（較佳至少83%，更較佳至少90%）序列同一性：(a) SEQ ID NO: 36 (QVDLGEX
1X
2MN)，其中，X
1是V 或I, 較佳 V，並且其中，X
2是V 或T, 較佳 V；(b) SEQ ID NO: 37 (EYDPEWX
3RX
4FX
5EGTV)，其中，X
3是G或A, 較佳A，並且其中，X
4是A或V, 較佳A，並且其中，X
5是F或Y；(c) SEQ ID NO: 38 (MLX
6QVKTPX
7LX
8THH)，其中，X
6是S或G, 較佳S，並且其中，X
7是I或V, 較佳 I，並且其中，X
8是 I或L, 較佳 I；和(d) SEQ ID NO: 39 (PAX
9LLX
10PEQTGSWWSYEX
11X
12X
13GLLX
14EX
15FHVX
16AVDX
17RGQGRSX
18WTPX
19RYSLDNFGNDLVRFIX
20LVX
21KRPVX
22VX
23GNSSGGX
24LAAWLSAYX
25MPGQX
26RX
27X
28LCEDX
29X
30FFASELVPAX
31GHSVX
32QX
33AGPX
34FELX
35R)，其中，X
9是V或L, 較佳L，並且其中，X
10是L或I, 較佳L，並且其中，X
11是P或E, 較佳P，並且其中，X
12是V或 A, 較佳V，並且其中，X
13是I或M, 較佳I，並且其中，X
14是A或S, 較佳A，並且其中，X
15是S, N或H, 較佳S，並且其中，X
16是F或Y, 較佳 F，並且其中，X
17是I或L, 較佳I，並且其中，X
18是T或 S, 較佳T，並且其中，X
19是K或R, 較佳 K，並且其中，X
20是S, A或N, 較佳S，並且其中，X
21是V或I, 較佳V，並且其中，X
22是I或V, 較佳 I，並且其中，X
23是S或A, 較佳S，並且其中，X
24是V或L, 較佳 V，並且其中，X
25是A或 S, 較佳A，並且其中，X
26是I或L, 較佳I，並且其中，X
27是A或G, 較佳A，並且其中，X
28是A 或V, 較佳A，並且其中，X
29是T, A或P, 較佳T，並且其中，X
30是P或A, 較佳P，並且其中，X
31是Y或H, 較佳H，並且其中，X
32是L或R, 較佳R，並且其中，X
33是A或G, 較佳A，並且其中，X
34是A或V, 較佳A，並且其中，X
35是Y或F, 較佳Y。
在其它實施方案中，本發明的變體包括如下置換的一種或多種，或其等效（例如保守性）胺基酸置換（例如，如本文表1所述）：
或其等同的（例如，保守）胺基酸置換（例如，在此表1描述者）。
| X167T, X168Y, X174C, X218Y; |
| X167T; |
| X167S; |
| X167A; |
| X167C; |
| X167L; |
| X167T, X174T; |
| X167T, X174C; |
| X155K, X167T, X174C, X175A; |
| X155K, X167T, X174C, X175T; |
| X167S, X174C; |
| X167T, X174C, X218Y; |
| X167T, X168Y, X174C; |
| X167T, X168Y, X174C, X179E, X182C, X183R, X186R, X187R, X218Y; |
| X167T, X168Y, X174C, X179E, X182C, X183R, X186R, X187R, X218Y, X268L, X306I; |
| X10N, X167T, X168Y, X174C, X179E, X182C, X183R, X186R, X187R, X218Y; |
| X17Y, X59M, X167T, X168Y, X174C, X179E, X182C, X183R, X186R, X187R, X218Y; |
| X28T, X167T, X168Y, X174C, X179E, X182C, X183R, X186R, X187R, X218Y; |
| X39R, X167T, X168Y, X174C, X179E, X182C, X183R, X186R, X187R, X218Y; |
| X47S, X50E, X167T, X168Y, X174C, X179E, X182C, X183R, X186R, X187R, X218Y; |
| X57E, X58A, X59M, X167T, X168Y, X174C, X179E, X182C, X183R, X186R, X187R, X218Y; |
| X63S, X65H, X167T, X168Y, X174C, X179E, X182C, X183R, X186R, X187R, X218Y; |
| X69Y, X167T, X168Y, X174C, X179E, X182C, X183R, X186R, X187R, X218Y; |
| X126S, X167T, X168Y, X174C, X179E, X182C, X183R, X186R, X187R, X218Y; |
| X139P X167T, X168Y, X174C, X179E, X182C, X183R, X186R, X187R, X218Y; |
| X167T, X168Y, X174C, X179E, X182C, X183R, X186R, X187R, X218Y, X225S; |
| X167T, X168Y, X174C, X179E, X182C, X183R, X186R, X187R, X218Y X230R; |
| X167T, X168Y, X174C, X179E, X182C, X183R, X186R, X187R, X218Y, X245V; |
| X167T, X168Y, X174C, X179E, X182C, X183R, X186R, X187R, X218Y, X251E; |
| X167T, X168Y, X174C, X179E, X182C, X183R, X186R, X187R, X218Y, X281E; |
| X167T, X168Y, X174C, X179E, X182C, X183R, X186R, X187R, X218Y, X287T, X289S; |
| X167T, X168Y, X174C, X179E, X182C, X183R, X186R, X187R, X218Y, X293S; |
| X167T, X168Y, X174C, X179E, X182C, X183R, X186R, X187R, X218Y, X304R; |
| X10N, X17Y, X28T, X39R, X57E, X58A, X59M, X63S, X65H, X69Y, X126S, X139P, X167T, X168Y, X174C, X179E, X182C, X183R, X186R, X187R, X218Y, X225S, X230R, X281E, X287T, X289S, X293S, X304R; |
| X155R, X167T, X168Y, X174C, X175V, X179E, X182C, X183R, X186R, X187R, X189H, X190S, X192V, X202V, X216V, X218Y, X287T, X289S; |
| X155R, X167T, X168Y, X174C, X175V, X218Y; |
| X155R, X167T, X168Y, X174C, X175V; |
| X155R, X167T, X174C, X175V, X218Y; |
| X155R, X167T, X168Y, X174C, X175V, X179E, X182C, X183R, X186R, X187R, X218Y; |
| X155R, X167T, X168Y, X174C, X175V, X189H, X190S, X192V, X218Y; |
| X155R, X167T, X168Y, X174C, X175V, X179E, X182C, X183R, X186R, X187R, X189H, X190S, X192V, X218Y; |
| X155R, X167T, X168Y, X174C, X175V, X179E, X182C, X183R, X186R, X187R, X202V, X218Y; |
| X155R, X167T, X168Y, X174C, X175V, X179E, X182C, X183R, X186R, X187R, X202V, X218Y, X268L, X306I; |
| X34V, X100N, X140A, X155R, X167T, X168Y, X174C, X175V, X179E, X182C, X183R, X186R, X187R, X202V, X218Y, X225N, X266R, X268L, X269Q, X306I; |
| X155R, X167T, X168Y, X174C, X175V, X179E, X182C, X183R, X186R, X187R, X218Y, X287S, X289S; |
| X155R, X167T, X168Y, X174C, X175V, X179E, X182C, X183R, X186R, X187R, X202V, X218Y, X287S, X289S; |
| X155R, X167T, X168Y, X174C, X175V, X179E, X182C, X183R, X186R, X187R, X202V, X218Y, X268L, X287S, X289S, X306I; |
| X34V, X100N, X140A, X155R, X167T, X168Y, X174C, X175V, X179E, X182C, X183R, X186R, X187R, X202V, X218Y, X225N, X266R, X268L, X269Q, X287S, X289S, X306I; |
在其它實施方案中，本發明的親代α/β水解酶（較佳具有EC:3.1.1.-水解酶活性）選自如下多肽構成的組：(i) 與SEQ ID NO: 1的多肽具有至少60%（較佳地，至少81 %,至少82%,至少83%,至少84%,至少85%,至少86%,至少87%,至少88%,至少89%,至少90%,至少91 %,至少92%,至少93%,至少94%,至少95%,至少95.5%,至少96%,至少96.5%,至少97%,至少97.5%,至少98%,至少98.5%,至少99%, 或至少99.5%, 或100%）序列同一性的多肽；(ii) SEQ ID NO: 1的多肽的片段，其中所述片段具有α/β水解酶活性，較佳EC:3.1.1.- 水解酶活性。
在其它實施方案中，本發明的變體(i)包括從如下置換構成的組中選出的置換或者由如下置換構成的組中選出的置換所構成：
和/或 (ii) 選自SEQ ID NO: 2-35構成的組。
| N167T, F168Y, S174C, F218Y; |
| N167T; |
| N167S; |
| N167A; |
| N167C; |
| N167L; |
| N167T, S174T; |
| N167T, S174C; |
| R155K, N167T, S174C, V175A; |
| R155K, N167T, S174C, V175T; |
| N167S, S174C; |
| N167T, S174C, F218Y; |
| N167T, F168Y, S174C; |
| N167T, F168Y, S174C, D179E, A182C, A183R, K186R, A187R, F218Y; |
| N167T, F168Y, S174C, D179E, A182C, A183R, K186R, A187R, F218Y, Q268L, V306I; |
| D10N, N167T, F168Y, S174C, D179E, A182C, A183R, K186R, A187R, F218Y; |
| F17Y, I59M, N167T, F168Y, S174C, D179E, A182C, A183R, K186R, A187R, F218Y; |
| V28T, N167T, F168Y, S174C, D179E, A182C, A183R, K186R, A187R, F218Y; |
| H39R, N167T, F168Y, S174C, D179E, A182C, A183R, K186R, A187R, F218Y; |
| E47S, G50E, N167T, F168Y, S174C, D179E, A182C, A183R, K186R, A187R, F218Y; |
| P57E, V58A, I59M, N167T, F168Y, S174C, D179E, A182C, A183R, K186R, A187R, F218Y; |
| A63S, S65H, N167T, F168Y, S174C, D179E, A182C, A183R, K186R, A187R, F218Y; |
| F69Y, N167T, F168Y, S174C, D179E, A182C, A183R, K186R, A187R, F218Y; |
| A126S, N167T, F168Y, S174C, D179E, A182C, A183R, K186R, A187R, F218Y; |
| T139P N167T, F168Y, S174C, D179E, A182C, A183R, K186R, A187R, F218Y; |
| N167T, F168Y, S174C, D179E, A182C, A183R, K186R, A187R, F218Y, H225S; |
| N167T, F168Y, S174C, D179E, A182C, A183R, K186R, A187R, F218Y, L230R; |
| N167T, F168Y, S174C, D179E, A182C, A183R, K186R, A187R, F218Y, A245V; |
| N167T, F168Y, S174C, D179E, A182C, A183R, K186R, A187R, F218Y, H251E; |
| N167T, F168Y, S174C, D179E, A182C, A183R, K186R, A187R, F218Y, A281E; |
| N167T, F168Y, S174C, D179E, A182C, A183R, K186R, A187R, F218Y, L287T, M289S; |
| N167T, F168Y, S174C, D179E, A182C, A183R, K186R, A187R, F218Y, S293S; |
| N167T, F168Y, S174C, D179E, A182C, A183R, K186R, A187R, F218Y, S304R; |
| D10N, F17Y, V28T, H39R, P57E, V58A, I59M, A63S, S65H, F69Y, A126S, T139P, N167T, F168Y, S174C, D179E, A182C, A183R, K186R, A187R, F218Y, H225S, L230R, A281E, L287T, M289S, F293S, S304R; |
在其它實施方案中，本發明提供了獲得親代α/β水解酶的變體（較佳具有EC:3.1.1.-水解酶活性）和/或提高所述親代α/β水解酶的穩定性的方法，所述方法包括：在與SEQ ID NO: 1的位置167, 168, 174, 218, 155, 175, 179, 182, 183, 186, 187, 268, 306, 10, 17, 28, 39, 47, 50, 57, 58, 59, 63, 65, 69, 126, 139, 225, 230, 245, 251, 281, 287, 289, 293和304（較佳使用SEQ ID NO: 1的編號）相對應的一個或多個位置處，向親代α/β水解酶引入置換，其中，變體具有α/β水解酶活性；和，回收變體；較佳地，所述親代α/β水解酶是依據前述任一請求項，進一步較佳地，所述親代α/β水解酶與SEQ ID NO: 1的多肽具有至少95%序列同一性。
在其它實施方案中，本發明涉及編碼本發明的變體的多核苷酸。在其它實施方案中，本發明涉及包括本發明的多核苷酸的核酸構建體。在其它實施方案中，本發明涉及包括本發明的多核苷酸的核酸構建體。在其它實施方案中，本發明涉及重組宿主細胞，其包括如下至少一者：(i) 本發明的變體和/或親代α/β水解酶；(ii) 本發明的多核苷酸；(iii) 本發明的核酸構建體；和/或，(iv) 本發明的表現載體。
因此，本發明還涉及編碼本文描述的α/β水解酶變體的核酸分子。核酸可被引入或插入表現載體。術語“表現載體”指的是能夠在體內或體外表現基因的核酸分子構建體。尤其，它可以包括DNA構建體，該DNA構建體適合將多肽-編碼核苷酸序列轉入宿主細胞（例如重組宿主細胞）以便整合至基因組或游離於染色體外空間，並且在細胞內表現多肽-編碼核苷酸序列，並且可選地，將多肽運輸至細胞外。如本文描述的表現載體可在宿主細胞中表現。術語“宿主細胞”指的是含有待表現核苷酸序列或表現載體的所有細胞，其能夠產生根據本發明的酶或多肽。尤其，這指的是原核細胞和/或真核細胞，較佳地，畢赤酵母、大腸桿菌、枯草芽孢桿菌、鏈黴菌、漢遜酵母、木黴菌、乳酸菌、曲黴菌、植物細胞和/或芽孢桿菌的孢子、木黴或麯黴。本文使用的名稱畢赤酵母（
P. pastoris）與名稱畢赤酵母（
Komagataella pastoris）意思相同，畢赤酵母（
P. pastoris）是較舊名稱，畢赤酵母（
K. pastoris）是較新的系統名稱（Yamada et al. (1995) ‘The Phylogenetic Relationships of Methanol-assimilating Yeasts Based on the Partial Sequences of 18S and 26S Ribosomal RNAs: The Proposal of
KomagataellaGen. Nov. (Saccharomycetaceae)’ Bioscience, Biotechnology and Biochemistry, Vol. 59, issue 3, pp. 439-444）。尤其，畢赤酵母（
Komagataella pastoris）的種最近已經重新界定為是法夫駒形氏酵母（
Komagataella phaffii）（Kurtzman (2009) “Biotechnological strains of Komagataella (Pichia) pastoris are Komagataella phaffii as determined from multigene sequence analysis.” J Ind Microbiol Biotechnol. 36(11):1435-8）。本文使用的法夫駒形氏酵母（
Komagataella phaffii）例如涉及菌株
Komagataella phaffiiCBS 7435、
Komagataella phaffiiGS115或
Komagataella phaffiiJC308。
在其它實施方案中，本發明涉及轉基因植物、轉基因種子或轉基因花粉粒，其包括如下的一種或多種（較佳多個）：(i) 本發明的變體和/或親代α/β水解酶；(ii) 本發明的多核苷酸；(iii) 本發明的核酸構建體；(iv) 本發明的表現載體；和/或(v) 本發明的重組宿主細胞。
在其它實施方案中，本發明涉及食品、中間食品；草料、中間草料；飼料、中間飼料；添加劑（較佳地，食品添加劑、草料添加劑或飼料添加劑）、中間添加劑（較佳地，食品中間添加劑、草料中間添加劑或飼料中間添加劑）；解毒劑、中間解毒劑；營養補充劑、中間營養補充劑；益生元、中間益生元、青儲飼料接種菌；解毒藥；獸用組合物；藥物組合物，和/或其混合物，它們包括如下的一種或多種：(i) 本發明的變體和/或親代α/β水解酶；較佳地，所述親代α/β水解酶與SEQ ID NO: 1的多肽具有至少95%的序列同一性；(ii) 本發明的多核苷酸；(iii) 本發明的核酸構建體；(iv) 本發明的表現載體；(v) 本發明的重組宿主細胞；(vi) 本發明的轉基因植物、轉基因種子和/或轉基因花粉粒。
在其它實施方案中，本發明涉及組合物或試劑盒，其包括如下的一種或多種：(i) 本發明的變體和/或親代α/β水解酶；較佳地，所述親代α/β水解酶與SEQ ID NO: 1的多肽具有至少95%的序列同一性；(ii) 本發明的多核苷酸；(iii) 本發明的核酸構建體；(iv) 本發明的表現載體；(v) 本發明的重組宿主細胞；(vi) 本發明的轉基因植物、轉基因種子和/或轉基因花粉粒；和/或(vii) 本發明的食品、中間食品；草料、中間草料；飼料、中間飼料；添加劑（較佳地，食品添加劑、草料添加劑或飼料添加劑）、中間添加劑（較佳地，食品中間添加劑、草料中間添加劑或飼料中間添加劑）；解毒劑、中間解毒劑；營養補充劑、中間營養補充劑；益生元、中間益生元、青儲飼料接種菌；解毒藥；獸用組合物；藥物組合物，和/或其混合物。
因此，本發明還涉及包括本文描述的α/β水解酶變體的組合物。較佳地，組合物可以是食物或飼料添加劑或者食物或飼料產品。製備這些食物組合物和/或飼料組合物的方法對本領域技術人員來說是已知的，尤其是在WO 99/35240中被描述。
在其它實施方案中，本發明的組合物或試劑盒還包括營養學上可接受的載體（例如水）和/或本發明的親代α/β水解酶，較佳地，所述親代α/β水解酶與SEQ ID NO: 1的多肽具有至少95%的序列同一性。
在一些其它實施方案中，本發明的組合物或試劑盒還包括如下的一種或多種：
(i)能夠去除OTA和/或至少一種OTA衍生物（例如赭麯黴毒素B和/或赭麯黴毒素C）的毒性的一種或多種其它多肽，進一步較佳地，所述一種或多種其它多肽屬M20肽酶氨基醯化酶1-樣蛋白2-樣氨基水解酶亞家族（例如，M20肽酶ACY1L2氨基水解酶亞家族，例如，根據保守結構域數據庫（例如https://www.ncbi.nlm.nih.gov/Structure/cdd/cddsrv.cgi?uid=cd05672）標識符是cd05672，和/或，具有氨肽酶活性（例如EC 3.4.11.10），和/或，包括羧肽酶活性（例如羧肽酶A和/或B活性，例如分別具有EC 3.4.17.1和/或EC 3.4.17.2），和/或，嗜熱菌蛋白酶活性（例如具有EC 3.4.24.27））；
(ii)能夠去除一種或多種黴菌毒素（例如，ZEN和/或單端孢真菌毒素諸如脫氧雪腐鐮刀菌烯醇（deoxynivalenol）、瓜萎鐮菌醇（nivalenol）、新茄病鐮刀菌烯醇（neosolaniol）、毛黴素（trichotecin）、扁蟲毒素（crotocin）、杆孢菌素A（roridin A）、葡萄穗黴毒素H（satratoxin H）、雙乙酸基草鐮刀菌醇（diacetoxyscirpenol）、HT-2毒素或T-2毒素；黃麴黴毒素，諸如黃麴黴毒素B1、B2、G1或G2；伏馬毒素，諸如伏馬毒素B1、B2、B3或B4；多肽黴菌毒素，諸如白僵菌素或恩鐮孢菌素；玉米赤黴烯酮；桔黴素；展青黴素；麥角生物鹼，諸如麥角胺）和/或一種或多種植物源-和/或細菌源-毒素（例如內毒素等）的毒性的一種或多種其它多肽，尤其，所述一種或多種其它多肽能夠去除一種或多種其它黴菌毒素和/或一種或多種植物源-和/或細菌源-毒素，例如，伏馬毒素酯酶（例如，如WO 2016/134387 A1所公開的）和/或玉米赤黴烯酮內酯酶（例如，如WO 2020/025580 A1所公開的）和/或麥角肽水解酶（例如，如WO 2014/056006 A1所公開的）；
(iii)一種或多種有機吸附劑（例如，活的、滅活的、凍幹的、休眠的和/或死的完整酵母，或者酵母衍生產品諸如酵母細胞壁，或者酵母寡聚體諸如甘露聚糖）和/或一種或多種無機吸附劑（例如，矽藻土和/或粘土礦物諸如高嶺土或高嶺石，蒙脫石諸如蒙脫土、伊利石或綠泥石；尤其，膨潤土）；
(iv)能夠去除一種或多種其它黴菌毒素（例如，單端孢真菌毒素諸如脫氧雪腐鐮刀菌烯醇、瓜萎鐮菌醇、新茄病鐮刀菌烯醇、毛黴素、扁蟲毒素、杆孢菌素A、葡萄穗黴毒素H、雙乙酸基草鐮刀菌醇、HT-2毒素或T-2毒素；黃麴黴毒素，諸如黃麴黴毒素B1、B2、G1或G2；伏馬毒素，諸如伏馬毒素B1、B2、B3或B4；多肽黴菌毒素，諸如白僵菌素或恩鐮孢菌素；玉米赤黴烯酮；桔黴素；展青黴素；麥角生物鹼，諸如麥角胺）和/或一種或多種植物源-和/或細菌源-毒素（例如內毒素等）的毒性的一種或多種活的、滅活的、凍幹的和/或休眠的微生物，尤其，所述微生物選自如下構成的組：毛孢子菌屬和Apiotrichum屬（例如，如WO 03/053161 A1公開的）和紅蝽菌科（例如，如EP 3 501 526 A1公開的）；
(v)一種或多種植物產品（例如，海藻，較佳海藻粉（seaweed meal）；和/或，藻類，較佳海藻粉（algae meal）；和/或，薊，較佳薊籽；和/或，甘草製劑，較佳甘草粉和/或甘草提取物，例如，如WO 2018/121881 A1所公開）；
(vi)一種或多種調味化合物（例如，植物提取物，例如來自牛至、百里香、冬青、香菜、墨角蘭、薄荷、胡椒薄荷、茴香、柑橘、檸檬、小茴香、八角茴香、丁香、肉桂和/或大蒜；和/或，精油，諸如D-檸檬烯、γ-萜烯、對傘花烴（p-cymene）、2-蒈烯、氧化芳樟醇、異薄荷酮（isomenthone）、樟腦、芳樟醇、松油烯-4-醇、2-異丙基-1-甲氧基-4-甲苯、L-薄荷醇、乙胺、α-松油醇、β-石竹烯、D-香芹酮、水楊酸甲酯、α-石竹烯、薰衣草乙酸酯、氧化石竹烯、丁香酚百里香酚和/或香芹酚）；
(vii)一種或多種維生素（例如，維生素A、D、E、K、C、B1、B2、B3、B4、B5、B6、B7、B8、B9和/或B12；尤其是維生素E）。
在特別的實施方案中，本發明的組合物或試劑盒還包括如下的一種或多種：膨潤土、伏馬毒素酯酶和/或玉米赤黴烯酮內酯酶，能夠去除一種或多種黴菌毒素的毒性的紅蝽菌科微生物（例如，選自紅蝽菌科的微生物，例如https://lpsn.dsmz.de/family/coriobacteriaceae）、矽藻土、酵母（尤其是滅活酵母）、海藻粉、薊籽、和一種或多種調味化合物。
在一些其它實施方案中，本發明的組合物（例如，如下表2列出的典型組合物1-24）或試劑盒（對應於下表2列出的典型組合物1-24）包括一種或多種（例如，除根據本發明的至少一種多肽之外）的其它組分。這樣的其它典型組合物或試劑盒在下表2中明確公開，其描述了本發明的實施方案。
表2.本發明的包括一種或多種其它組分的典型組合物或試劑盒。
| 組合物編號 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 |
| 根據本發明的任何變體或多肽(例如, SEQ ID NOs: 2-35) | 是 | 是 | 是 | 是 | 是 | 是 |
| 能夠去除一種或多種其它黴菌-/植物-/細菌-毒素的毒性的任何合適的多肽 | 例如，伏馬毒素酯酶, 例如，具有 EC:3.1.1.87酶活性， 例如，UniProtKB - D2D3B6，和/或，其變體 | 例如，伏馬毒素酯酶, 例如，具有 EC:3.1.1.87酶活性， 例如， UniProtKB - D2D3B6，和/或，其變體 | ||||
| 任何合適的有機吸附劑 | 例如，灭活酵母 | 例如， 干酵母 | 例如， 酵母 | |||
| 任何合適的無機吸附劑 | 例如，膨潤土 | 例如，沸石 | 例如，膨润土-蒙脱石 | 例如，膨润土 | 例如，膨润土 | 例如，膨润土 |
| 能夠去除一種或多種其它黴菌毒素的毒性的任何合適的微生物 | 例如， 红蝽菌科（Corio-bacteriaceae ） | 例如， 红蝽菌科 | 例如， 红蝽菌科 | |||
| 任何合適的植物產品 | 例如，海藻粉 | 例如，薊籽（ thistle seed） | ||||
| 任何合適的維生素 | 例如，維生素E | |||||
| 任何合適的調味化合物 | 是 | |||||
| 組合物編號 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 |
| 根據本發明的任何變體或多肽（例如，SEQ ID NOs: 2-35） | 是 | 是 | 是 | 是 | 是 | 是 |
| 能夠去除一種或多種其它黴菌-/植物-/細菌-毒素的毒性的任何合適的多肽 | 例如，伏馬毒素酯酶, 例如，具有EC:3.1.1.87酶活性, 例如，UniProtKB - D2D3B6，和/或，其變體 | 例如，伏馬毒素酯酶, 例如，具有EC:3.1.1.87酶活性, 例如，UniProtKB - D2D3B6，和/或，其變體 | 例如，伏馬毒素酯酶, 例如，具有EC:3.1.1.87酶活性, 例如，UniProtKB - D2D3B6，和/或，其變體 | 例如，伏馬毒素酯酶, 例如，具有 EC:3.1.1.87酶活性, 例如，UniProtKB - D2D3B6，和/或，其變體 | ||
| 任何合適的有機吸附劑 | 例如，灭活酵母 | 例如，釀酒酵母 | ||||
| 任何合適的無機吸附劑 | 例如，膨潤土 | 例如，膨潤土 | 例如，膨潤土 | 例如，膨潤土 | 例如，膨潤土 | 例如，膨潤土 |
| 能夠去除一種或多種其它黴菌毒素的毒性的任何合適的微生物 | 例如，真桿菌屬（Eubacterium sp. ） | 例如， 红蝽菌科 | 例如， 真桿菌屬 | 例如， 红蝽菌科 | ||
| 任何合適的植物產品 | 例如，海藻提取物 | 例如，海藻粉, 奶蓟 | 例如，藻類物質 | |||
| 任何合適的維生素 | ||||||
| 任何合適的調味化合物 | ||||||
| 組合物編號 | 13 | 14 | 15 | 16 | 17 | 18 |
| 根據本發明的任何變體或多肽（例如，SEQ ID NOs: 2-35） | 是 | 是 | 是 | 是 | 是 | 是 |
| 能夠去除一種或多種其它黴菌-/植物-/細菌-毒素的毒性的任何合適的多肽 | 例如，伏馬毒素酯酶, 例如，具有EC:3.1.1.87酶活性, 例如，UniProtKB - D2D3B6，和/或，其變體，玉米赤黴烯酮內酯酶，例如，UniProtKB - Q8NKB0和/或，其變體 | 例如，伏馬毒素酯酶, 例如，具有EC:3.1.1.87酶活性, 例如，UniProtKB - D2D3B6和/或，其變體，玉米赤黴烯酮內酯酶，例如，UniProtKB - Q8NKB0和/或，其變體 | ||||
| 任何合適的有機吸附劑 | 例如，灭活酵母 | 例如，乾酵母 | 例如，酵母 | |||
| 任何合適的無機吸附劑 | 例如，膨潤土 | 例如，沸石 | 例如，膨润土-蒙脱石 | 例如，膨潤土 | 例如，膨潤土 | 例如，膨潤土 |
| 能夠去除一種或多種其它黴菌毒素的毒性的任何合適的微生物 | 例如，红蝽菌科 | 例如，红蝽菌科 | 例如，红蝽菌科 | |||
| 任何合適的植物產品 | 例如，海藻粉 | |||||
| 任何合適的維生素 | 例如，維生素E | |||||
| 任何合適的調味化合物 | 是 | |||||
| 組合物編號 | 19 | 20 | 21 | 22 | 23 | 24 |
| 根據本發明的任何變體或多肽（例如，SEQ ID NOs: 2-35） | 是 | 是 | 是 | 是 | 是 | 是 |
| 能夠去除一種或多種其它黴菌-/植物-/細菌-毒素的毒性的任何合適的多肽 | 伏馬毒素酯酶, 例如，具有EC:3.1.1.87酶活性，例如，UniProtKB - D2D3B6，和/或，其變體，玉米赤霉烯酮内酯酶，例如，UniProtKB - Q8NKB0，和/或，其變體 | 伏馬毒素酯酶, 例如，具有EC:3.1.1.87酶活性，例如，UniProtKB - D2D3B6，和/或，其變體，玉米赤霉烯酮内酯酶，例如，UniProtKB - Q8NKB0，和/或，其變體 | 伏馬毒素酯酶, 例如，具有EC:3.1.1.87酶活性, 例如，UniProtKB - D2D3B6，和/或，其變體，玉米赤霉烯酮内酯酶，例如，UniProtKB - Q8NKB0，和/或，其變體 | 伏馬毒素酯酶, 例如，具有EC:3.1.1.87酶活性,例如，UniProtKB - D2D3B6，和/或，其變體，玉米赤霉烯酮内酯酶，例如，UniProtKB - Q8NKB0，和/或，其變體 | ||
| 任何合適的有機吸附劑 | 例如，灭活酵母 | 例如，釀酒酵母 | ||||
| 任何合適的無機吸附劑 | 例如，膨潤土 | 例如，膨潤土 | 例如，膨潤土 | 例如，膨潤土 | 例如，膨潤土 | 例如，膨潤土 |
| 能夠去除一種或多種其它黴菌毒素的毒性的任何合適的維生素 | 例如，真桿菌屬 | 例如，红蝽菌科 | 例如，真桿菌屬 | 例如，红蝽菌科 | ||
| 任何合適的植物產品 | 例如，海藻提取物 | 例如，海藻粉, 奶蓟 | 例如，藻類物質 | |||
| 任何合適的維生素 | ||||||
| 任何合適的調味化合物 |
在其它實施方案中，本發明的變體、親代α/β水解酶、多核苷酸、核酸構建體、表現載體、重組宿主細胞、轉基因植物、轉基因種子、轉基因花粉粒、食品、中間食品；草料、中間草料；飼料、中間飼料；添加劑（較佳地，食品添加劑、草料添加劑或飼料添加劑）、中間添加劑（較佳地，食品中間添加劑、草料中間添加劑或飼料中間添加劑）；解毒劑、中間解毒劑；營養補充劑、中間營養補充劑；益生元、中間益生元、青儲飼料接種菌；解毒藥；獸用組合物；藥物組合物和/或其混合物、組合物和/或試劑盒，適合用作藥物和/或用於治療中，較佳地，在疾病的預防或治療中使用，進一步較佳地，所述親代α/β水解酶與SEQ ID NO: 1的多肽具有至少95%的序列同一性。
在其它實施方案中，本發明的變體、親代α/β水解酶、多核苷酸、核酸構建體、表現載體、重組宿主細胞、轉基因植物、轉基因種子、轉基因花粉粒、食品、中間食品；草料、中間草料；飼料、中間飼料；添加劑（較佳地，食品添加劑、草料添加劑或飼料添加劑）、中間添加劑（較佳地，食品中間添加劑、草料中間添加劑或飼料中間添加劑）；解毒劑、中間解毒劑；營養補充劑、中間營養補充劑；益生元、中間益生元、青儲飼料接種菌；解毒藥；獸用組合物；藥物組合物和/或其混合物、組合物和/或試劑盒，適合用於預防和/或治療黴菌中毒，較佳地，適合用於預防和/或治療玉米赤黴烯酮或其衍生物引起的激素紊亂。
在其它實施方案中，本發明涉及本發明的變體、親代α/β水解酶、多核苷酸、核酸構建體、表現載體、重組宿主細胞、轉基因植物、轉基因種子、轉基因花粉粒、食品、中間食品；草料、中間草料；飼料、中間飼料；添加劑（較佳地，食品添加劑、草料添加劑或飼料添加劑）、中間添加劑（較佳地，食品中間添加劑、草料中間添加劑或飼料中間添加劑）；解毒劑、中間解毒劑；營養補充劑、中間營養補充劑；益生元、中間益生元、青儲飼料接種菌；解毒藥；獸用組合物；藥物組合物和/或其混合物用於或用作如下一種或多種：(i) 玉米赤黴烯酮和/或其衍生物的降解；(ii) 食物、食品、中間食品；草料、中間草料；飼料、中間飼料；添加劑（較佳地，食品添加劑、草料添加劑或飼料添加劑）、中間添加劑（較佳地，食品中間添加劑、草料中間添加劑或飼料中間添加劑）；解毒劑、中間解毒劑；營養補充劑、中間營養補充劑；益生元、中間益生元、青儲飼料接種菌；解毒藥；獸用組合物；藥物組合物；(iii) 如下一種或多種的製造/生產：食品、中間食品；草料、中間草料；飼料、中間飼料；添加劑（較佳地，食品添加劑、草料添加劑或飼料添加劑）、中間添加劑（較佳地，食品中間添加劑、草料中間添加劑或飼料中間添加劑）；解毒劑、中間解毒劑；營養補充劑、中間營養補充劑；益生元、中間益生元、青儲飼料接種菌；解毒藥；獸用組合物；藥物組合物和/或其混合物；(iv) 青儲飼料、沼氣、生物乙醇或糖的製造/生產，較佳由甘蔗或甜菜製造/生產；(v) 黴菌中毒的預防和/或治療。
在其它實施方案中，本發明提供了降解玉米赤黴烯酮和/或其衍生物的方法，包括：(a) 提供如下的一種或多種：(i) 本發明的變體和/或親代α/β水解酶，較佳地，所述親代α/β水解酶與SEQ ID NO: 1的多肽具有至少95%的序列同一性；(ii) 本發明的多核苷酸；(iii) 本發明的核酸構建體；(iv) 本發明的表現載體；(v) 本發明的重組宿主細胞；(vi) 本發明的轉基因植物、轉基因種子和/或轉基因花粉粒；(vii) 本發明的食品、中間食品；草料、中間草料；飼料、中間飼料；添加劑（較佳地，食品添加劑、草料添加劑或飼料添加劑）、中間添加劑（較佳地，食品中間添加劑、草料中間添加劑或飼料中間添加劑）；解毒劑、中間解毒劑；營養補充劑、中間營養補充劑；益生元、中間益生元、青儲飼料接種菌；解毒藥；獸用組合物；藥物組合物和/或其混合物；和/或(vii) 本發明的組合物或試劑盒；(b)使來自(a)的一種或多種物質接觸玉米赤黴烯酮和/或其衍生物（例如，形成酶-底物混合物）。
應當理解的是，本發明不限於本文描述的特定方法、過程和試劑等，其可以改變。本文使用的專業術語目的僅在於描述特定的實施方案，並不旨在限制本發明的保護範圍，本發明的保護範圍僅由申請專利範圍界定。
本說明書全文所引用的出版物和專利（包括所有專利、專利申請、科技出版物、製造商說明書、使用說明等），不管是在上文中還是在後面，都通過引用將其整體合併入本文中。本文中的沒有內容被解釋為承認本發明由於在先發明而無權提前披露。在一定程度上，通過引用包括的材料與本說明書存在矛盾或不一致，本說明書將取代任何此類材料。
本發明的特徵還在於如下項：
1. 一種親代α/β水解酶的變體，所述變體包括對應於如下位置的一個或多個位置處的置換：SEQ ID NO: 1（較佳使用SEQ ID NO: 1的編號）167, 168, 174, 218, 155, 175, 179, 182, 183, 186, 187, 268, 306, 10, 17, 28, 39, 47, 50, 57, 58, 59, 63, 65, 69, 126, 139, 225, 230, 245, 251, 281, 287, 289, 293和304，其中所述變體具有α/β水解酶活性（例如玉米赤黴烯酮水解酶），並且，其中所述變體是與SEQ ID NO: 1的多肽具有至少71%（較佳：至少72%,至少73%,至少74%,至少75%,至少76%,至少77%,至少78%,至少79%,至少80%,至少81%,至少82%,至少83%,至少84%,至少85%,至少86%,至少87%,至少88%,至少89%,至少90%,至少91%,至少92%,至少93%,至少94%,至少95%,至少95.5%,至少96%,至少96.5%,至少97%,至少97.5%,至少98%,至少98.5%,至少99%, 或至少99.5%）但小於100%序列同一性的多肽，較佳地，所述變體具有水解酶EC: 3.1.1.-活性。
2. 根據前述任一項所述的變體，其中所述變體具有如下一種或多種特性：
i) 相對於親代α/β水解酶的改進的性質，其中所述改進的性質包括提高的溫度穩定性，較佳是相比於SEQ ID NO: 1的提高的溫度穩定性；
ii) 所述變體能夠四聚體化，較佳具有四聚體四級結構，進一步較佳地，所述四聚體化是同源四聚體化；
iii) 熔點（Tm）大於50℃，較佳地，所述Tm的範圍是大約51℃至大約70℃；
iv) 能夠降解玉米赤黴烯酮和/或其衍生物；
v) 包括與選自如下的胺基酸序列具有至少80%（較佳至少83%、更較佳至少90%）序列同一性的至少一個（較佳至少兩個、更較佳至少三個、最較佳至少四個）胺基酸基序：
a) QVDLGEX
1X
2MN (SEQ ID NO: 36)，其中X
1是V或I，較佳V，並且，其中X
2是V或T，較佳V；
b) EYDPEWX
3RX
4FX
5EGTV (SEQ ID NO: 37)，其中X
3是G或A，較佳A，並且，其中X
4是A或V，較佳A，並且，其中X
5是F或Y；
c) MLX
6QVKTPX
7LX
8THH (SEQ ID NO: 38)，其中X
6是S或G，較佳S，並且，其中X
7是I或V，較佳I，並且，其中X
8是I或L，較佳I；
d) PAX
9LLX
10PEQTGSWWSYEX
11X
12X
13GLLX
14EX
15FHVX
16AVDX
17RGQGRSX
18WTPX
19RYSLDNFGNDLVRFIX
20LVX
21KRPVX
22VX
23GNSSGGX
24LAAWLSAYX
25MPGQX
26RX
27X
28LCEDX
29X
30FFASELVPAX
31GHSVX
32QX
33AGPX
34FELX
35R (SEQ ID NO: 39)其中X
9是V或L，較佳L，並且，其中X
10是L或I，較佳L，並且，其中X
11是P或E，較佳P，並且，其中X
12是V或A，較佳V，並且，其中X
13是I或M，較佳I，並且，其中X
14是A或S，較佳A，並且，其中X
15是S、N或H，較佳S，並且，其中X
16是F或Y，較佳F，並且，其中X
17是I或L，較佳I，並且，其中X
18是T或S，較佳T，並且，其中X
19是K或R，較佳K，並且，其中X
20是S、A或N，較佳S，並且，其中X
21是V或I，較佳V，並且，其中X
22是I或V，較佳I，並且，其中X
23是S或A，較佳S，並且，其中X
24是V或L，較佳V，並且，其中X
25是A或S，較佳A，並且，其中X
26是I或L，較佳I，並且，其中X
27是A或G，較佳A，並且，其中X
28是A或V，較佳A，並且，其中X
29是T、A或P，較佳T，並且，其中X
30是P或A，較佳P，並且，其中X
31是Y或H，較佳H，並且，其中X
32是L或R，較佳R，並且，其中X
33是A或G，較佳A，並且，其中X
34是A或V，較佳A，並且，其中X
35是Y或F，較佳Y。
3. 根據前述任一項所述的變體，其中置換的數目是1-30，較佳1-20和1-10，諸如1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9或10個置換。
4. 根據前述任一項所述的變體，其中所述變體包括對應於SEQ ID NO: 1如下位置的一個或多個位置處的置換（例如，下表的各行代表根據本發明的特徵的單個典型組合，例如，特定實施方案的變體）：
5. 根據前述任一項所述的變體，其中所述變體包括如下置換的一個或多個（例如，下表的各行代表根據本發明的特徵的單個典型組合，例如，特定實施方案的變體）或者其等效胺基酸置換：
6. 根據前述任一項所述的變體，其中所述變體包括如下置換的一種或多種：
X167G,A,S,C,U,I,L,V,T;
X174G,A,S,C,U,I,L,V,T;
X155R,H,K;
X175G,A,S,C,U,V,T;
X218Y,F,H; 和/或
X168Y,F,H
7. 根據前述任一項所述的變體，其中所述親代α/β水解酶，較佳具有EC:3.1.1.-水解酶活性，選自如下肽構成的組：
i) 與SEQ ID NO: 1的多肽具有至少60%（較佳至少81 %, 至少82%, 至少83%, 至少84%, 至少85%, 至少86%, 至少87%, 至少88%, 至少89%, 至少90%, 至少91 %, 至少92%, 至少93%, 至少94%, 至少95%, 至少95.5%, 至少96%, 至少96.5%, 至少97%, 至少97.5%, 至少98%, 至少98.5%, 至少99%, 或至少99.5%, 或100%）序列同一性的多肽；
ii) SEQ ID NO: 1的多肽的片段，其中所述片段具有α/β水解酶活性，較佳EC:3.1.1.-水解酶活性。
8. 根據前述任一項所述的變體，其中所述親代α/β水解酶包括SEQ ID NO: 1的多肽或由SEQ ID NO: 1的多肽組成。
9. 根據前述任一項所述的變體，其中所述變體：
i) 包括從如下置換構成的組中選出的置換或者由從如下置換構成的組中選出的置換所組成（例如，下表的各行代表根據本發明的特徵的單個典型組合，例如，特定實施方案的變體）：
和/或
ii) 選自SEQ ID NOs: 2-35構成的組。
10. 一種獲得親代α/β水解酶的變體（所述變體較佳具有EC:3.1.1.-水解酶活性）和/或提高所述親代α/β水解酶的穩定性的方法，所述方法包括：在與SEQ ID NO: 1（較佳使用SEQ ID NO: 1的編號）的位置167, 168, 174, 218, 155, 175, 179, 182, 183, 186, 187, 268, 306, 10, 17, 28, 39, 47, 50, 57, 58, 59, 63, 65, 69, 126, 139, 225, 230, 245, 251, 281, 287, 289, 293和304對應的一個或多個位置處向親代α/β水解酶引入置換，其中所述變體具有α/β水解酶活性；和，回收所述變體（例如從裂解物回收，例如採用親和純化的方法）；較佳地，所述親代α/β水解酶如前述任一項所述，進一步較佳地，所述親代α/β水解酶與SEQ ID NO: 1具有至少95%序列同一性。
11. 根據前述任一項所述的方法，其中所述變體是與SEQ ID NO: 1的多肽具有至少71%（較佳：至少72%, 至少73%, 至少74%, 至少75%, 至少76%, 至少77%, 至少78%, 至少79%, 至少80%, 至少81%, 至少82%, 至少83%, 至少84%, 至少85%, 至少86%, 至少87%, 至少88%, 至少89%, 至少90%, 至少91%, 至少92%, 至少93%, 至少94%, 至少95%, 至少95.5%, 至少96%, 至少96.5%, 至少97%, 至少97.5%, 至少98%, 至少98.5%, 至少99%, 或至少99.5%）但小於100%序列同一性的多肽。
12. 一種編碼前述任一項所述變體的多核苷酸。
13. 一種包括前述任一項所述多核苷酸的核酸構建體。
14. 一種包括前述任一項所述多核苷酸和/或核酸構建體的表現載體。
15. 一種宿主細胞，包括如下至少一種：i) 根據前述任一項所述的變體和/或親代α/β水解酶；ii) 根據前述任一項所述的多核苷酸；iii) 根據前述任一項所述的核酸構建體；和/或iv) 根據前述任一項所述的表現載體。
16. 根據前述任一項所述的宿主細胞，其中所述宿主細胞是重組宿主細胞，較佳是分離的重組宿主細胞。
17. 根據前述任一項所述的宿主細胞，其中所述宿主細胞選自細菌細胞、酵母細胞、哺乳動物細胞、昆蟲細胞和植物細胞，較佳地，選自細菌細胞和酵母細胞。
18. 一種轉基因植物、轉基因種子或轉基因花粉粒，包括如下的一種或多種（較佳多種）：
i) 前述任一項所述的變體和/或親代α/β水解酶；
ii) 前述任一項所述的多核苷酸；
iii) 前述任一項所述的核酸構建體和/或表現載體；和/或
iv) 前述任一項所述的重組宿主細胞。
19. 根據前述任一項所述的轉基因植物、轉基因種子或轉基因花粉粒，其能夠生產根據前述任一項所述的一種或多種變體，較佳地，對所述轉基因植物、轉基因種子或轉基因花粉粒進行基因修飾以便生產前述任一項所述的一種或多種變體。
20. 根據前述任一項所述的轉基因植物、轉基因種子或轉基因花粉粒，其中所述轉基因植物、轉基因種子或轉基因花粉粒是所述(ii)和/或(iii)的純合子。
21. 一種生產前述任一項所述變體的方法，包括：(i)在適合所述變體表現的條件下培養根據前述任一項所述的宿主細胞；和(ii)回收所述變體。
22. 採用前述任一項所述方法獲得的變體。
23. 前述任一項所述變體和/或親代α/β水解酶在如下一種或多種中的用途：
i) 降解玉米赤黴烯酮或其衍生物；
ii) 食物、食品、中間食品；草料、中間草料；飼料、中間飼料；添加劑（較佳地，食品添加劑、草料添加劑或飼料添加劑）、中間添加劑（較佳地，食品中間添加劑、草料中間添加劑或飼料中間添加劑）；解毒劑、中間解毒劑；營養補充劑、中間營養補充劑；益生元、中間益生元、青儲飼料接種菌；解毒藥；獸用組合物；藥物組合物；
iii) 如下一種或多種的製造/生產：食品、中間食品；草料、中間草料；飼料、中間飼料；添加劑（較佳地，食品添加劑、草料添加劑或飼料添加劑）、中間添加劑（較佳地，食品中間添加劑、草料中間添加劑或飼料中間添加劑）；解毒劑、中間解毒劑；營養補充劑、中間營養補充劑；益生元、中間益生元、青儲飼料接種菌；解毒藥；獸用組合物；藥物組合物，和/或其混合物；
iv) 青儲飼料、沼氣、生物乙醇或糖的製造/生產，較佳由甘蔗或甜菜製造/生產；
v) 黴菌中毒的預防或治療。
24. 一種組合物或試劑盒，包括如下的一種或多種：
(i) 前述任一項所述的變體和/或親代α/β水解酶，較佳地，所述親代α/β水解酶與SEQ ID NO: 1的多肽具有至少95%的序列同一性；
(ii) 前述任一項所述的多核苷酸；
(iii) 前述任一項所述的核酸構建體；
(iv) 前述求任一項所述的表現載體；
(v) 前述任一項所述的宿主細胞。
25. 根據前述任一項所述的組合物或試劑盒，其中所述組合物或試劑盒是獸藥組合物、藥物組合物或試劑盒。
26. 根據前述任一項所述的組合物或試劑盒，進一步包括獸藥組合物、藥學上可接受的載體。
27. 根據前述任一項所述的組合物或試劑盒，其中所述組合物或試劑盒是食品或飼料添加劑，或者食品或飼料產品。
28. 根據前述任一項所述的組合物或試劑盒，進一步包括營養學上可接受的載體和/或前述任一項所述的親代α/β水解酶，較佳地，所述親代α/β水解酶與SEQ ID NO: 1的多肽具有至少95%序列同一性。
29. 根據前述任一項所述的組合物或試劑盒，進一步包括如下一種或多種（例如，如本文表2所示）：能夠去除赭麯黴毒素A(OTA)和/或至少一種OTA衍生物（例如赭麯黴毒素B和/或赭麯黴毒素C）的毒性（例如修飾和/或水解）和/或結合赭麯黴毒素A(OTA)和/或至少一種OTA衍生物（例如赭麯黴毒素B和/或赭麯黴毒素C）的一種或多種其它多肽，所述一種或多種其它多肽屬M20肽酶氨基醯化酶1-樣蛋白2-樣氨基水解酶亞家族（例如，M20肽酶ACY1L2氨基水解酶亞家族，例如，根據保守結構域數據庫（例如https://www.ncbi.nlm.nih.gov/Structure/cdd/cddsrv.cgi?uid=cd05672）標識符是cd05672，和/或，具有氨肽酶活性（例如EC 3.4.11.10），和/或，包括羧肽酶活性（例如羧肽酶A和/或B活性，例如分別具有EC 3.4.17.1和/或EC 3.4.17.2），和/或，嗜熱菌蛋白酶活性（例如具有EC 3.4.24.27））；(ii) 能夠去除一種或多種黴菌毒素（例如，ZEN）和/或一種或多種植物源-和/或細菌源-毒素（例如，單端孢真菌毒素諸如脫氧雪腐鐮刀菌烯醇、瓜萎鐮菌醇、新茄病鐮刀菌烯醇、毛黴素、扁蟲毒素、杆孢菌素A、葡萄穗黴毒素H、雙乙酸基草鐮刀菌醇、HT-2毒素或T-2毒素；黃麴黴毒素，諸如黃麴黴毒素B1、B2、G1或G2；伏馬毒素，諸如伏馬毒素B1、B2、B3或B4；多肽黴菌毒素，諸如白僵菌素或恩鐮孢菌素；玉米赤黴烯酮；桔黴素；展青黴素；麥角生物鹼，諸如麥角胺）和/或一種或多種植物源-和/或細菌源-毒素（例如內毒素等）的毒性的一種或多種其它多肽，尤其，所述一種或多種其它多肽能夠去除一種或多種其它黴菌毒素和/或一種或多種植物源-和/或細菌源-毒素，例如，伏馬毒素酯酶（例如，如WO 2016/134387 A1所公開的）和/或玉米赤黴烯酮內酯酶（例如，如WO 2020/025580 A1所公開的）和/或麥角肽水解酶（例如，如WO 2014/056006 A1所公開的）；(iii) 一種或多種有機吸附劑（例如，活的/滅活的/凍幹的/休眠的/死的完整酵母，或者酵母衍生產品諸如酵母細胞壁，或者酵母寡聚體諸如甘露聚糖）和/或無機吸附劑（例如，矽藻土和/或粘土礦物諸如高嶺土或高嶺石，蒙脫石諸如蒙脫土、伊利石或綠泥石；尤其，膨潤土）；(iv) 能夠去除一種或多種其它黴菌毒素（例如，單端孢真菌毒素諸如脫氧雪腐鐮刀菌烯醇、瓜萎鐮菌醇、新茄病鐮刀菌烯醇、毛黴素、扁蟲毒素、杆孢菌素A、葡萄穗黴毒素H、雙乙酸基草鐮刀菌醇、HT-2毒素或T-2毒素；黃麴黴毒素，諸如黃麴黴毒素B1、B2、G1或G2；伏馬毒素，諸如伏馬毒素B1、B2、B3或B4；多肽黴菌毒素，諸如白僵菌素或恩鐮孢菌素；玉米赤黴烯酮；桔黴素；展青黴素；麥角生物鹼，諸如麥角胺）和/或一種或多種植物源-和/或細菌源-毒素（例如內毒素等）的毒性的一種或多種活的、滅活的、凍幹的和/或休眠的微生物，尤其，所述微生物是如下的一員：毛孢子菌屬和Apiotrichum屬（例如，如WO 03/053161 A1公開的）或者紅蝽菌科（例如，如EP 3 501 526 A1公開的）；(v) 一種或多種植物產品（例如，海藻，較佳海藻粉（seaweed meal）；和/或，藻類，較佳海藻粉（algae meal）；和/或，薊，較佳薊籽；和/或，甘草製劑，較佳甘草粉和/或甘草提取物，例如，如WO 2018/121881 A1所公開）；(vi) 一種或多種調味化合物（例如，植物提取物，例如來自牛至、百里香、冬青、香菜、墨角蘭、薄荷、胡椒薄荷、茴香、柑橘、檸檬、小茴香、八角茴香、丁香、肉桂和/或大蒜；和/或，精油，諸如D-檸檬烯、γ-萜烯、對傘花烴、2-蒈烯、氧化芳樟醇、異薄荷酮（isomenthone）、樟腦、芳樟醇、松油烯-4-醇、2-異丙基-1-甲氧基-4-甲苯、L-薄荷醇、乙胺、α-松油醇、β-石竹烯、D-香芹酮、水楊酸甲酯、α-石竹烯、薰衣草乙酸酯、氧化石竹烯、丁香酚百里香酚和/或香芹酚）；(vii) 一種或多種維生素（例如，維生素A、D、E、K、C、B1、B2、B3、B4、B5、B6、B7、B8、B9和/或B12；尤其是維生素E）。
30. 前述任一項所述的變體、親代α/β水解酶、多核苷酸、核酸構建體、表現載體、宿主細胞、轉基因植物、轉基因種子、轉基因花粉粒、組合物或試劑盒用作藥物（例如，獸藥用途和/或藥物用途，例如用於動物和/或人）和/或用於治療的用途，較佳地，用於預防或治療疾病，進一步較佳地，所述親代α/β水解酶與SEQ ID NO: 1具有至少95%序列一致性。
31. 變體、親代α/β水解酶、多核苷酸、核酸構建體、表現載體、宿主細胞、轉基因植物、轉基因種子、轉基因花粉粒、組合物或試劑盒，用於預防或治療黴菌中毒，較佳由玉米赤黴烯酮或其衍生物引發的激素紊亂。
32. 一種預防或治療黴菌中毒的方法，該方法包括：向存在風險或有需要的受試者施用如下的一種或多種：前述任一項所述的變體、親代α/β水解酶、多核苷酸、核酸構建體、表現載體、宿主細胞、轉基因植物、轉基因種子、轉基因花粉粒、組合物或試劑盒。
33. 根據前述任一項所述的方法或用途，其中以治療有效量施用所述變體、親代α/β水解酶、多核苷酸、核酸構建體、表現載體、宿主細胞、轉基因植物、轉基因種子、轉基因花粉粒、組合物或試劑盒。
34. 一種食品、中間食品；草料、中間草料；飼料、中間飼料；添加劑（較佳地，食品添加劑、草料添加劑或飼料添加劑），中間添加劑（較佳地，食品中間添加劑、草料中間添加劑或飼料中間添加劑）；解毒劑，中間解毒劑；營養補充劑、中間營養補充劑；益生元、中間益生元、青儲飼料接種菌；解毒藥；獸用組合物；藥物組合物，和/或其混合物，它們包括如下的一種或多種：前述任一項所述的變體、親代α/β水解酶、多核苷酸、核酸構建體、表現載體、宿主細胞、轉基因植物、轉基因種子、轉基因花粉粒、組合物或試劑盒，較佳地，所述親代α/β水解酶與SEQ ID NO: 1的多肽具有至少95%序列同一性。
35. 一種降解玉米赤黴烯酮或其衍生物的方法，包括：
i) 提供前述任一項所述的一種或多種變體，和/或，較佳地前述任一項所述的一種或多種親代α/β水解酶，較佳地，所述親代α/β水解酶與SEQ ID NO: 1的多肽具有至少95%序列同一性；
ii) 使一種或多種變體和/或親代接觸玉米赤黴烯酮或其衍生物（例如形成酶-底物混合物）。
36. 根據前述任一項所述的降解玉米赤黴烯酮或其衍生物的方法，其中，當底物濃度是0.5 ppm且pH是5.0時，變體和/或親代α/β水解酶的比活力至少是0.6 µmol/min/mg（例如，至少0.7, 至少0.8, 至少0.9, 至少1.0, 至少1.1, 至少1.2, 至少1.3或至少1.4），較佳地，變體的比活力至少是1.35 µmol/min/mg（諸如1.39或1.57）。
| N167, F168, S174, F218; |
| N167; |
| N167, S174; |
| R155, N167, S174, V175; |
| N167, S174; |
| N167, S174, F218; |
| N167, F168, S174; |
| N167, F168, S174, D179, A182, A183, K186, A187, F218; |
| N167, F168, S174, D179, A182, A183, K186, A187, F218, Q268, V306; |
| D10, N167, F168, S174, D179, A182, A183, K186, A187, F218; |
| F17, I59, N167, F168, S174, D179, A182, A183, K186, A187, F218; |
| V28, N167, F168, S174, D179, A182, A183, K186, A187, F218; |
| H39, N167, F168, S174, D179, A182, A183, K186, A187, F218; |
| E47, G50, N167, F168, S174, D179, A182, A183, K186, A187, F218; |
| P57, V58, I59, N167, F168, S174, D179, A182, A183, K186, A187, F218; |
| A63, S65, N167, F168, S174, D179, A182, A183, K186, A187, F218; |
| F69, N167, F168, S174, D179, A182, A183, K186, A187, F218; |
| A126, N167, F168, S174, D179, A182, A183, K186, A187, F218; |
| T139 N167, F168, S174, D179, A182, A183, K186, A187, F218; |
| N167, F168, S174, D179, A182, A183, K186, A187, F218, H225; |
| N167, F168, S174, D179, A182, A183, K186, A187, F218, L230; |
| N167, F168, S174, D179, A182, A183, K186, A187, F218, A245; |
| N167, F168, S174, D179, A182, A183, K186, A187, F218, H251; |
| N167, F168, S174, D179, A182, A183, K186, A187, F218, A281; |
| N167, F168, S174, D179, A182, A183, K186, A187, F218, L287, M289; |
| N167, F168, S174, D179, A182, A183, K186, A187, F218, S293; |
| N167, F168, S174, D179, A182, A183, K186, A187, F218, S304; |
| D10, F17, V28, H39, P57, V58, I59, A63, S65, F69, A126, T139, N167, F168, S174, D179, A182, A183, K186, A187, F218, H225, L230, A281, L287, M289, F293, S304; |
| X167T, X168Y, X174C, X218Y; |
| X167T; |
| X167S; |
| X167A; |
| X167C; |
| X167L; |
| X167T, X174T; |
| X167T, X174C; |
| X155K, X167T, X174C, X175A; |
| X155K, X167T, X174C, X175T; |
| X167S, X174C; |
| X167T, X174C, X218Y; |
| X167T, X168Y, X174C; |
| X167T, X168Y, X174C, X179E, X182C, X183R, X186R, X187R, X218Y; |
| X167T, X168Y, X174C, X179E, X182C, X183R, X186R, X187R, X218Y, X268L, X306I; |
| X10N, X167T, X168Y, X174C, X179E, X182C, X183R, X186R, X187R, X218Y; |
| X17Y, X59M, X167T, X168Y, X174C, X179E, X182C, X183R, X186R, X187R, X218Y; |
| X28T, X167T, X168Y, X174C, X179E, X182C, X183R, X186R, X187R, X218Y; |
| X39R, X167T, X168Y, X174C, X179E, X182C, X183R, X186R, X187R, X218Y; |
| X47S, X50E, X167T, X168Y, X174C, X179E, X182C, X183R, X186R, X187R, X218Y; |
| X57E, X58A, X59M, X167T, X168Y, X174C, X179E, X182C, X183R, X186R, X187R, X218Y; |
| X63S, X65H, X167T, X168Y, X174C, X179E, X182C, X183R, X186R, X187R, X218Y; |
| X69Y, X167T, X168Y, X174C, X179E, X182C, X183R, X186R, X187R, X218Y; |
| X126S, X167T, X168Y, X174C, X179E, X182C, X183R, X186R, X187R, X218Y; |
| X139P X167T, X168Y, X174C, X179E, X182C, X183R, X186R, X187R, X218Y; |
| X167T, X168Y, X174C, X179E, X182C, X183R, X186R, X187R, X218Y, X225S; |
| X167T, X168Y, X174C, X179E, X182C, X183R, X186R, X187R, X218Y X230R; |
| X167T, X168Y, X174C, X179E, X182C, X183R, X186R, X187R, X218Y, X245V; |
| X167T, X168Y, X174C, X179E, X182C, X183R, X186R, X187R, X218Y, X251E; |
| X167T, X168Y, X174C, X179E, X182C, X183R, X186R, X187R, X218Y, X281E; |
| X167T, X168Y, X174C, X179E, X182C, X183R, X186R, X187R, X218Y, X287T, X289S; |
| X167T, X168Y, X174C, X179E, X182C, X183R, X186R, X187R, X218Y, X293S; |
| X167T, X168Y, X174C, X179E, X182C, X183R, X186R, X187R, X218Y, X304R; |
| X10N, X17Y, X28T, X39R, X57E, X58A, X59M, X63S, X65H, X69Y, X126S, X139P, X167T, X168Y, X174C, X179E, X182C, X183R, X186R, X187R, X218Y, X225S, X230R, X281E, X287T, X289S, X293S, X304R; |
| X155R, X167T, X168Y, X174C, X175V, X179E, X182C, X183R, X186R, X187R, X189H, X190S, X192V, X202V, X216V, X218Y, X287T, X289S; |
| X155R, X167T, X168Y, X174C, X175V, X218Y; |
| X155R, X167T, X168Y, X174C, X175V; |
| X155R, X167T, X174C, X175V, X218Y; |
| X155R, X167T, X168Y, X174C, X175V, X179E, X182C, X183R, X186R, X187R, X218Y; |
| X155R, X167T, X168Y, X174C, X175V, X189H, X190S, X192V, X218Y; |
| X155R, X167T, X168Y, X174C, X175V, X179E, X182C, X183R, X186R, X187R, X189H, X190S, X192V, X218Y; |
| X155R, X167T, X168Y, X174C, X175V, X179E, X182C, X183R, X186R, X187R, X202V, X218Y; |
| X155R, X167T, X168Y, X174C, X175V, X179E, X182C, X183R, X186R, X187R, X202V, X218Y, X268L, X306I; |
| X34V, X100N, X140A, X155R, X167T, X168Y, X174C, X175V, X179E, X182C, X183R, X186R, X187R, X202V, X218Y, X225N, X266R, X268L, X269Q, X306I; |
| X155R, X167T, X168Y, X174C, X175V, X179E, X182C, X183R, X186R, X187R, X218Y, X287S, X289S; |
| X155R, X167T, X168Y, X174C, X175V, X179E, X182C, X183R, X186R, X187R, X202V, X218Y, X287S, X289S; |
| X155R, X167T, X168Y, X174C, X175V, X179E, X182C, X183R, X186R, X187R, X202V, X218Y, X268L, X287S, X289S, X306I; |
| X34V, X100N, X140A, X155R, X167T, X168Y, X174C, X175V, X179E, X182C, X183R, X186R, X187R, X202V, X218Y, X225N, X266R, X268L, X269Q, X287S, X289S, X306I; |
| N167T, F168Y, S174C, F218Y; |
| N167T; |
| N167S; |
| N167A; |
| N167C; |
| N167L; |
| N167T, S174T; |
| N167T, S174C; |
| R155K, N167T, S174C, V175A; |
| R155K, N167T, S174C, V175T; |
| N167S, S174C; |
| N167T, S174C, F218Y; |
| N167T, F168Y, S174C; |
| N167T, F168Y, S174C, D179E, A182C, A183R, K186R, A187R, F218Y; |
| N167T, F168Y, S174C, D179E, A182C, A183R, K186R, A187R, F218Y, Q268L, V306I; |
| D10N, N167T, F168Y, S174C, D179E, A182C, A183R, K186R, A187R, F218Y; |
| F17Y, I59M, N167T, F168Y, S174C, D179E, A182C, A183R, K186R, A187R, F218Y; |
| V28T, N167T, F168Y, S174C, D179E, A182C, A183R, K186R, A187R, F218Y; |
| H39R, N167T, F168Y, S174C, D179E, A182C, A183R, K186R, A187R, F218Y; |
| E47S, G50E, N167T, F168Y, S174C, D179E, A182C, A183R, K186R, A187R, F218Y; |
| P57E, V58A, I59M, N167T, F168Y, S174C, D179E, A182C, A183R, K186R, A187R, F218Y; |
| A63S, S65H, N167T, F168Y, S174C, D179E, A182C, A183R, K186R, A187R, F218Y; |
| F69Y, N167T, F168Y, S174C, D179E, A182C, A183R, K186R, A187R, F218Y; |
| A126S, N167T, F168Y, S174C, D179E, A182C, A183R, K186R, A187R, F218Y; |
| T139P N167T, F168Y, S174C, D179E, A182C, A183R, K186R, A187R, F218Y; |
| N167T, F168Y, S174C, D179E, A182C, A183R, K186R, A187R, F218Y, H225S; |
| N167T, F168Y, S174C, D179E, A182C, A183R, K186R, A187R, F218Y L230R; |
| N167T, F168Y, S174C, D179E, A182C, A183R, K186R, A187R, F218Y, A245V; |
| N167T, F168Y, S174C, D179E, A182C, A183R, K186R, A187R, F218Y, H251E; |
| N167T, F168Y, S174C, D179E, A182C, A183R, K186R, A187R, F218Y, A281E; |
| N167T, F168Y, S174C, D179E, A182C, A183R, K186R, A187R, F218Y, L287T, M289S; |
| N167T, F168Y, S174C, D179E, A182C, A183R, K186R, A187R, F218Y, S293S; |
| N167T, F168Y, S174C, D179E, A182C, A183R, K186R, A187R, F218Y, S304R; |
| D10N, F17Y, V28T, H39R, P57E, V58A, I59M, A63S, S65H, F69Y, A126S, T139P, N167T, F168Y, S174C, D179E, A182C, A183R, K186R, A187R, F218Y, H225S, L230R, A281E, L287T, M289S, F293S, S304R; |
本發明通過以下實施例來進一步說明，但不限於實施例或實施例的任何特定實施方式。
本發明的實施例
實施例
1
：編碼玉米赤黴烯酮
-
切割多肽的多核苷酸的修飾、克隆、表現和玉米赤黴烯酮
-
切割多肽的純化
按照核苷酸序列合成完整的玉米赤黴烯酮-切割多肽基因（包括多肽C-末端融合的6x組氨酸標簽），隨後由上市公司（例如Twist Bioscience）將其整合入表現載體。
用包含完整的玉米赤黴烯酮-切割多肽基因的表現載體轉化感受態
E. coliBL21 (DE3)。通過表現載體的抗生素耐藥性來篩選轉化子。任何其它合適的宿主細胞也都可以用於本工作中。
為了製備感受態
E. coliBL21 (DE3)，將細胞接種於LB培養基（例如，Luria/Miller, 顆粒狀, 6673, Carl Roth GmbH+CoKG, 25.0 g/L）並在37.0℃持續震盪過夜生長。在LB培養基中接種過夜培養物作為主要培養物，在37.0℃持續震盪生長直至OD
600是0.65。在收穫之前15.0分鐘，將主要培養物冷卻至4.0℃，只要有可能或另有說明，在隨後的所有步驟中，在4.0℃保存細胞。在4.0℃，2000.0×g進行10分鐘，收穫細胞。按照每100.0ml主要培養物使用5.0ml TSS緩衝液（LB培養基，10.0 %聚乙二醇-6000, 5.0 %二甲亞碸, 20.0 mM氯化鎂）重懸細胞顆粒。
對於感受態
E. coliBL21 (DE3)的轉化，使用5×KCM緩衝液（500.0 mM氯化鉀, 150.0 mM氯化鈣, 250.0 mM氯化鎂）1:1.25稀釋感受態細胞溶液。向50.0 µl製備的細胞溶液提供5.0 µl包含完整的玉米赤黴烯酮-切割多肽基因的表現載體，4.0℃孵育10.0分鐘。42.0℃熱擊1.5分鐘，隨後在4.0℃孵育1.0分鐘。37.0℃，細胞在1.0 ml LB培養基中再生1.5小時。將100.0 µl細胞接種於具有抗生素（例如，卡那黴素50.0 µg/ml）的900.0 µl LB培養基中，37.0℃持續震盪過夜培養。
使用市售自誘導培養基由陽性轉化子細胞內表現完整的玉米赤黴烯酮-切割多肽基因。
將500.0 µl過夜培養物接種於盛裝在50.0 ml反應管中的9.5 ml含有抗生素（例如，卡那黴素50.0 µg/ml）的自誘導培養基（例如Novagen Overnight Express
TMInstant TB Medium, 71491, Sigma-Aldrich Handels GmbH）中，用密封膜（例如Breathe.Easier密封膜, Z763624, Sigma-Aldrich Handels GmbH）覆蓋，以實現高氣體交換率。37.0℃持續震盪孵育表現培養物24.0小時。室溫，2000.0×g進行10分鐘，收穫細胞。
通過超聲處理來裂解表現步驟收穫的細胞。利用6x組氨酸標簽親和純化從清除的裂解物獲得玉米赤黴烯酮-切割多肽。通過SDS-PAGE分析來確認分子量和純度。通過NanoDrop
TM分析來測定玉米赤黴烯酮-切割多肽的濃度。
在4.0℃，將收穫的細胞重懸於2.0 ml結合緩衝液（20.0 mM磷酸鈉, 500.0 mM氯化鈉, 60.0 mM咪唑, pH 7.4）。在超聲波儀上處理懸浮液直至細胞在4.0℃完全裂解（例如，Q700-220 + Q4579, 振幅50.0 – 處理時間8.0分鐘 – 脈衝 20.0秒 – 暫停40.0 秒, QSonica L.L.C）。
4.0℃，2000.0×g離心15分鐘來使裂解物澄清。按照製造商規程，將1.4ml上清液在HIS-Spin trap柱（例如，HIS-Spin Trap, 28-4013-53, GE Healthcare GmbH）上進行純化。玉米赤黴烯酮-切割多肽在400.0 µl洗脫緩衝液（20.0 mM磷酸鈉, 500.0 mM氯化鈉, 500.0 mM咪唑, pH 7.4）中進行洗脫，該製劑用於研究酶學特性。
為了確認純化的玉米赤黴烯酮-切割多肽的分子量和純度，洗脫物的稀釋液中加入加樣染料（例如，2×加樣染料: 0.125 M三羥甲基氨基甲烷/鹽酸pH 6.8, 20.0 %甘油, 4.0 %十二烷基硫酸鈉, 0.02 %溴酚藍, 2 % β-巰基乙醇）、煮沸並在12.0%聚丙烯醯胺凝膠（例如，Mini-PROTEAN® Tetra Cell System, 1658004EDU + 12% Mini-PROTEAN® TGX
TMPrecast Protein Gels, 4561043EDU, Bio-Rad Laboratories GmbH）（10×運行緩衝液: 0.125 M三羥甲基氨基甲烷, 1.25 M甘氨酸, 0.5 %十二烷基硫酸鈉, 200 V, 40 分鐘）上分離。肽的條帶通過考馬斯亮藍染色而可視化並與標準肽標記物進行比較。
為了測定純化的玉米赤黴烯酮-切割多肽的濃度，檢測280.0 nm處的吸光度（例如，NanoDrop
TMOne, ND-ONE-W, Thermo Fisher Scientific Inc.），按照Lambert-Beer法則計算濃度。
酶低聚度（
degree of enzyme oligomerisation
）的分析（
Blue-Native-PAGE – BN-PAGE
）
通過Blue-Native-PAGE對單個純化的玉米赤黴烯酮-切割多肽之間的天然分子量（寡聚構象）進行比較。洗脫物採用非變性加樣染料（例如，2×加樣染料：0.126 M三羥甲基氨基甲烷/鹽酸 pH 6.8，20.0 % 甘油, 4.0%考馬斯藍G-250）稀釋，並在自然條件下在4-15%聚丙烯醯胺凝膠上分離（例如，Mini-PROTEAN® Tetra Cell System, 1658004EDU + 4-15 % Mini-PROTEAN® TGX
TMPrecast Protein Gels, 4561083EDU, Bio-Rad Laboratories GmbH）（5×陽極緩衝液: 0.125 M三羥甲基氨基甲烷, 0.960 M甘氨酸, 1×陰極緩衝液: 陽極緩衝液+ 0.02 % 考馬斯藍G250; 200 V, 40分鐘）。通過考馬斯染色可以看見肽的條帶。採用尺寸排除色譜法、SEC-MALS或X-射線晶體衍射來測定選擇的玉米赤黴烯酮-切割多肽的寡聚狀態。同源二聚體（例如SEQ ID NO. 1）在BN-PAGE凝膠基質上遷移得較快，而同源四聚體（例如SEQ ID NO. 2-35）以較高程度保留在凝膠基質。依據同源二聚體肽和同源四聚體肽來確定玉米赤黴烯酮-切割多肽的寡聚構象。
玉米赤黴烯酮 - 切割多肽熔點（ Tm ）的測定：使用熱位移分析，基於蛋白質變性過程中染料SYPRO Orange的熒光性，測定純化的玉米赤黴烯酮-切割多肽的熔點。雖然水會淬滅它的熒光，但是，與變性蛋白質上未折疊的疏水錶面相結合會引起熒光增加。
在pH7.5的Teorell Stenhagen緩衝液（Östling and Virtama, Acta Physiologica Scandinavica, 1946, 11:4, 289-293）中將純化的純化的玉米赤黴烯酮-切割多肽稀釋至0.2 mg/ml。Sypro Orange 5000×儲備液（Sypro Orange, S5692, Sigma-Aldrich Handels GmbH）1:100稀釋於pH7.5的Teorell Stenhagen緩衝液。在使用適合熒光檢測的透明熱封膜密封的96-孔PCR-板中，15.0 µl稀釋的玉米赤黴烯酮-切割多肽中加入3.0 µl稀釋的Sypro Orange溶液和12.0 µl pH7.5的Teorell Stenhagen緩衝液。採用在20分鐘內20.0℃至95.0℃的線性增加溫度在qPCR-循環儀上測量熔解曲線，每條測量曲線147個測量點（460.0 nm消光，550.0 nm發射）（例如，Mastercycler qPCR ep realplex 2s, 6300000604, Eppendorf AG）。熒光信號拐點處（換言之，熒光信號增加率最高的溫度處）測定熔點。147個測量點的熒光強度相對溫度梯度繪圖。按照兩個隨後測量點的d熒光信號/d溫度，計算每147個測量點的微分。計算的dF/dT最高值的溫度是一階導數的極大值，表示拐點且因此是玉米赤黴烯酮-切割多肽的熔點。
表
3.
玉米赤黴烯酮
-
切割多肽的熔點（
Tm
）
| SEQ ID NO. | 相比於SEQ ID NO: 1的胺基酸置換 | 寡聚構象 | Tm (°C) |
| 1 | - | 二聚體 | 50.0 |
| 2 | N167T, F168Y, S174C, F218Y | 四聚體 | 54.0 |
| 3 | N167T | 四聚體 | 53.1 |
| 4 | N167S | 四聚體 | 53.0 |
| 5 | N167A | 四聚體 | 52.2 |
| 6 | N167C | 四聚體 | 52.9 |
| 7 | N167L | 四聚體 | 52.3 |
| 8 | N167T, S174T | 四聚體 | 53.5 |
| 9 | N167T, S174C | 四聚體 | 53.8 |
| 10 | R155K, N167T, S174C, V175A | 四聚體 | 53.9 |
| 11 | R155K, N167T, S174C, V175T | 四聚體 | 53.8 |
| 12 | N167S, S174C | 四聚體 | 54.2 |
| 13 | N167T, S174C, F218Y | 四聚體 | 54.3 |
| 14 | N167T, F168Y, S174C | 四聚體 | 54.3 |
| 15 | N167T, F168Y, S174C, D179E, A182C, A183R, K186R, A187R, F218Y | 四聚體 | 65.2 |
| 16 | N167T, F168Y, S174C, D179E, A182C, A183R, K186R, A187R, F218Y, Q268L, V306I | 四聚體 | 63.2 |
| 17 | D10N, N167T, F168Y, S174C, D179E, A182C, A183R, K186R, A187R, F218Y | 四聚體 | 64.2 |
| 18 | F17Y, I59M, N167T, F168Y, S174C, D179E, A182C, A183R, K186R, A187R, F218Y | 四聚體 | 64.2 |
| 19 | V28T, N167T, F168Y, S174C, D179E, A182C, A183R, K186R, A187R, F218Y | 四聚體 | 65.8 |
| 20 | H39R, N167T, F168Y, S174C, D179E, A182C, A183R, K186R, A187R, F218Y | 四聚體 | 64.7 |
| 21 | E47S, G50E, N167T, F168Y, S174C, D179E, A182C, A183R, K186R, A187R, F218Y | 四聚體 | 59.6 |
| 22 | P57E, V58A, I59M, N167T, F168Y, S174C, D179E, A182C, A183R, K186R, A187R, F218Y | 四聚體 | 63.2 |
| 23 | A63S, S65H, N167T, F168Y, S174C, D179E, A182C, A183R, K186R, A187R, F218Y | 四聚體 | 65.3 |
| 24 | F69Y, N167T, F168Y, S174C, D179E, A182C, A183R, K186R, A187R, F218Y | 四聚體 | 64.2 |
| 25 | A126S, N167T, F168Y, S174C, D179E, A182C, A183R, K186R, A187R, F218Y | 四聚體 | 64.7 |
| 26 | T139P N167T, F168Y, S174C, D179E, A182C, A183R, K186R, A187R, F218Y | 四聚體 | 67.8 |
| 27 | N167T, F168Y, S174C, D179E, A182C, A183R, K186R, A187R, F218Y, H225S | 四聚體 | 64.2 |
| 28 | N167T, F168Y, S174C, D179E, A182C, A183R, K186R, A187R, F218Y L230R | 四聚體 | 69.8 |
| 29 | N167T, F168Y, S174C, D179E, A182C, A183R, K186R, A187R, F218Y, A245V | 四聚體 | 62.7 |
| 30 | N167T, F168Y, S174C, D179E, A182C, A183R, K186R, A187R, F218Y, H251E | 四聚體 | 66.8 |
| 31 | N167T, F168Y, S174C, D179E, A182C, A183R, K186R, A187R, F218Y, A281E | 四聚體 | 65.3 |
| 32 | N167T, F168Y, S174C, D179E, A182C, A183R, K186R, A187R, F218Y, L287T, M289S | 四聚體 | 64.7 |
| 33 | N167T, F168Y, S174C, D179E, A182C, A183R, K186R, A187R, F218Y, S293S | 四聚體 | 63.2 |
| 34 | N167T, F168Y, S174C, D179E, A182C, A183R, K186R, A187R, F218Y, S304R | 四聚體 | 64.7 |
| 35 | D10N, F17Y, V28T, H39R, P57E, V58A, I59M, A63S, S65H, F69Y, A126S, T139P, N167T, F168Y, S174C, D179E, A182C, A183R, K186R, A187R, F218Y, H225S, L230R, A281E, L287T, M289S, F293S, S304R | 四聚體 | 65.8 |
比活力的測定
製備玉米赤黴烯酮降解分析緩衝液（118.5 mM NaCl, 8.55 mM 醋酸, 14.9 mM 醋酸鹽, 0.1 mg/ml BSA, pH 5.0, (Jantratid, E., Janssen, N., Reppas, C. & Dressman, J. B. (2008): Dissolution media simulating conditions in the proximal human gastrointestinal tract: An update. Pharmaceutical Research 25 (7): 1663-1576), 含有0.1 mg/ml牛血清白蛋白和0.52 ppm 玉米赤黴烯酮作為底物），在37.0℃預熱，將960µl試樣的分析緩衝液轉移至96深井板的反應管中。用活動蓋密封該板，37.0℃保存在DWP-熱振動篩中直至玉米赤黴烯酮降解分析開始。
使用純化的玉米赤黴烯酮-切割多肽通過在樣本緩衝液（Teorell Stenhagen緩衝液pH 7.5, 含有0.1 mg/ml牛血清白蛋白）中稀釋至比最終玉米赤黴烯酮降解實驗中分析的濃度高25倍來製備酶工作液，玉米赤黴烯酮-切割多肽的濃度可在給定條件下有效降解玉米赤黴烯酮。
為了開始玉米赤黴烯酮降解實驗，將40.0 µl酶工作液加入到含有960.0 µl分析緩衝液的試管中，從而在分析反應中實現0.5 ppm的最終ZEN濃度。加入pH 7.5的酶工作液不會改變pH 5.0的玉米赤黴烯酮降解反應。
在DWP-熱振動篩中在37.0℃持續震盪條件下孵育玉米赤黴烯酮降解反應。玉米赤黴烯酮降解反應開始之後，立即用吸管頭再懸浮混合，將120.0 µl的0.0 h樣本轉移至新的PCR板的管中，用管帽密封。在幾個時間點（例如5.0, 10.0, 20.0, 30.0, 45.0, 60.0, 90.0分鐘）之後從玉米赤黴烯酮降解反應取出額外樣本。一旦從降解反應中取出樣本，就通過在99.0℃在熱塊（thermo-block）（例如，Thermal Shake lite, 460-029, VWR）孵育10.0分鐘來熱滅活該樣本中的玉米赤黴烯酮切割多肽。隨後，對管離心（3.0分鐘，室溫，2500 x g），將90.0 µl上清液轉移至有邊緣的PCR板（例如，twin.tec®PCR板，0030128648, Eppendorf AG），其用熱封膜（例如，熱封膜，0030127838, Eppendof AG）封閉。這些樣本板儲存在4.0℃，直至HPLC-FLD測量。按照Vekiru et al. (Vekiru et al. (2016) ‘Isolation and characterization of enzymatic zearalenone hydrolysis reaction products’ World Mycotoxin Journal 9:353-363)描述的改進的HPLC-FLD方法測量玉米赤黴烯酮濃度。
278.0 nm消光和465.0 nm發射的HPLC-FLD上進行分析。當在40.0℃在Kinetex 5µm EVO C18 100 A 50.0 x 2.1 mm柱(00B-4633-AN, Phenomenex Inc.)上完成分離時，玉米赤黴烯酮的保留時間是1.8分鐘，前述分離採用了如下方法：使用溶劑A（95.0 %乙腈 + 4.9 %水 + 0.1 %甲酸）和溶劑B（5.0 %乙腈+ 94.9 % 水 + 0.1 %甲酸），梯度：0.0-0.5分鐘10 % 相B, 0.5-2.0 分鐘線性增加至50.0 %相B，然後在0.1分鐘內減至10 % 相B，持續進行，總運行時間2.3分鐘。流速設置為1.5 ml/min，進樣體積是5.0 μl。對各種分析採用了類似的採集設置。
基於玉米赤黴烯酮外標物的校準，對玉米赤黴烯酮進行定量。所取反應樣品的玉米赤黴烯酮濃度（µM）對取樣時間點作圖。線性玉米赤黴烯酮降解隨時間的斜率以酶促反應體積中每分鐘減少的μmol玉米赤黴烯酮計算。考慮到純化的玉米赤黴烯酮-切割多肽的可能的稀釋並將這些合適的稀釋因素包括在計算中，計算以每分鐘每mg純化的酶降解的µmol玉米赤黴烯酮（µmol ZEN/min/mg）表示的酵素比活性（specific enzymatic activity）。
表
4
：
pH5.0
時的酵素比活性
| 酶鑒定 | 比活力(µmol ZEN/min/mg) |
| 現有技術比較序列1 | 0.00 |
| 現有技術比較序列2 | 0.00 |
| 本發明的SEQ ID NO. 1 | 1.57 |
| 本發明的SEQ ID NO. 28 | 1.39 |
本領域技術人員將容易理解，本發明適於實現所述目的並獲得所述目的和優點以及其中固有的那些目的和優點。此外，對本領域技術人員來說顯而易見的是，在不脫離本發明的範圍和精神的情況下，可以對本文公開的發明進行不同的替換和修改。本文所述的組合物、方法、過程、處理、分子和特定化合物目前是代表某些實施方案，是示例性的，不旨在限制本發明的範圍。對於本領域技術人員來說，在本發明的精神範圍內所包含的變化和其他用途將由申請專利範圍的範圍限定。本說明書中對先前發佈的文件的列出或討論不一定被視為承認該文件是現有技術的一部分或是公知常識。
本文示例性描述的發明可以在沒有任何元素或要素、限制或限定的情況下被合適地實踐，而本發明未在本文中具體披露。因此，例如，術語“包含”、“包括”、“含有”等應擴展性的解讀，而非限制性的。此外，本文中使用的術語和表述已被用作描述術語而非限制術語，並且，使用此類術語和表述時，無意排除所示和描述的特徵或其部分的任何等價物，但是，應當認識到，在所要求保護的發明的範圍內可以進行各種修改。因此，應當理解，儘管已經通過示例性實施方案和可選特徵具體地公開了本發明，但是本領域技術人員可以求助於對本文所體現的發明的修改和變化，並且，這種修改和變化被認為在本發明的範圍內。
本文已經對本發明進行了廣泛地和一般地描述。落入一般性公開內的每種較窄的種類和亞組也構成本發明的部分。這包括對本發明的一般性描述，限制條款或負面限制是從屬中去除任何主題，而不管離體物質在本文中是否進行了明確列舉。所有文獻，包括專利申請和科學出版物，都通過引用整體包括在本文中。
其他實施方案在以下申請專利範圍中。此外，當以馬庫什群組來描述本發明的特徵或方面時，本領域技術人員將意識到，本發明因此還以馬庫什群組的任何單個成員或亞組成員來描述。
無
無
無
Claims (18)
- 一種親代α/β水解酶的變體，所述變體包括對應於如下位置的一個或多個位置處的置換：SEQ ID NO: 1（較佳使用SEQ ID NO: 1的編號）167、168、174、218、155、175、179、182、183、186、187、268、306、10、17、28、39、47、50、57、58、59、63、65、69、126、139、225、230、245、251、281、287、289、293和304，其中所述變體具有α/β水解酶活性，並且，其中所述變體是與SEQ ID NO: 1的多肽具有至少71%（較佳：至少72%、至少73%、至少74%、至少75%、至少76%、至少77%、至少78%、至少79%、至少80%、至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少95.5%、至少96%、至少96.5%、至少97%、至少97.5%、至少98%、至少98.5%、至少99%或至少99.5%）但小於100%序列同一性的多肽，較佳地，所述變體具有水解酶EC: 3.1.1.-活性。。
- 根據前述請求項中任一項所述的變體，其中所述變體具有如下一種或多種特性： i) 相對於親代α/β水解酶的改進的性質，其中所述改進的性質包括提高的溫度穩定性，較佳是相比於SEQ ID NO: 1的提高的溫度穩定性；所述變體能夠四聚體化，較佳具有四聚體四級結構，進一步較佳地，所述四聚體化是同源四聚體化； ii) 熔點（Tm）大於50℃，較佳地，所述Tm的範圍是大約51℃至大約70℃； iii) 能夠降解玉米赤黴烯酮和/或其衍生物； iv) 包括與選自如下的胺基酸序列具有至少80%（較佳至少83%、更較佳至少90%）序列同一性的至少一個（較佳至少兩個、更較佳至少三個、最較佳至少四個）胺基酸基序： a) SEQ ID NO: 36（QVDLGEX 1X 2MN），其中X 1是V或I，較佳V，並且，其中X 2是V或T，較佳V； b) SEQ ID NO: 37（EYDPEWX 3RX 4FX 5EGTV），其中X 3是G或A，較佳A，並且，其中X 4是A或V，較佳A，並且，其中X 5是F或Y； c) SEQ ID NO: 38（MLX 6QVKTPX 7LX 8THH），其中X 6是S或G，較佳S，並且，其中X 7是I或V，較佳I，並且，其中X 8是I或L，較佳I； d) SEQ ID NO: 39 （PAX 9LLX 10PEQTGSWWSYEX 11X 12X 13GLLX 14EX 15FHVX 16AVDX 17RGQGRSX 18WTPX 19RYSLDNFGNDLVRFIX 20LVX 21KRPVX 22VX 23GNSSGGX 24LAAWLSAYX 25MPGQX 26RX 27X 28LCEDX 29X 30FFASELVPAX 31GHSVX 32QX 33AGPX 34FELX 35R）其中X 9是V或L，較佳L，並且，其中X 10是L或I，較佳L，並且，其中X 11是P或E，較佳P，並且，其中X 12是V或A，較佳V，並且，其中X 13是I或M，較佳I，並且，其中X 14是A或S，較佳A，並且，其中X 15是S、N或H，較佳S，並且，其中X 16是F或Y，較佳F，並且，其中X 17是I或L，較佳I，並且，其中X 18是T或S，較佳T，並且，其中X 19是K或R，較佳K，並且，其中X 20是S、A或N，較佳S，並且，其中X 21是V或I，較佳V，並且，其中X 22是I或V，較佳I，並且，其中X 23是S或A，較佳S，並且，其中X 24是V或L，較佳V，並且，其中X 25是A或S，較佳A，並且，其中X 26是I或L，較佳I，並且，其中X 27是A或G，較佳A，並且，其中X 28是A或V，較佳A，並且，其中X 29是T、A或P，較佳T，並且，其中X 30是P或A，較佳P，並且，其中X 31是Y或H，較佳H，並且，其中X 32是L或R，較佳R，並且，其中X 33是A或G，較佳A，並且，其中X 34是A或V，較佳A，並且，其中X 35是Y或F，較佳Y。
- 根據前述請求項中任一項所述的變體，其中所述變體包括如下置換的一種或多種或者其等效的胺基酸置換：
X167T, X168Y, X174C, X218Y; X167T; X167S; X167A; X167C; X167L; X167T, X174T; X167T, X174C; X155K, X167T, X174C, X175A; X155K, X167T, X174C, X175T; X167S, X174C; X167T, X174C, X218Y; X167T, X168Y, X174C; X167T, X168Y, X174C, X179E, X182C, X183R, X186R, X187R, X218Y; X167T, X168Y, X174C, X179E, X182C, X183R, X186R, X187R, X218Y, X268L, X306I; X10N, X167T, X168Y, X174C, X179E, X182C, X183R, X186R, X187R, X218Y; X17Y, X59M, X167T, X168Y, X174C, X179E, X182C, X183R, X186R, X187R, X218Y; X28T, X167T, X168Y, X174C, X179E, X182C, X183R, X186R, X187R, X218Y; X39R, X167T, X168Y, X174C, X179E, X182C, X183R, X186R, X187R, X218Y; X47S, X50E, X167T, X168Y, X174C, X179E, X182C, X183R, X186R, X187R, X218Y; X57E, X58A, X59M, X167T, X168Y, X174C, X179E, X182C, X183R, X186R, X187R, X218Y; X63S, X65H, X167T, X168Y, X174C, X179E, X182C, X183R, X186R, X187R, X218Y; X69Y, X167T, X168Y, X174C, X179E, X182C, X183R, X186R, X187R, X218Y; X126S, X167T, X168Y, X174C, X179E, X182C, X183R, X186R, X187R, X218Y; X139P X167T, X168Y, X174C, X179E, X182C, X183R, X186R, X187R, X218Y; X167T, X168Y, X174C, X179E, X182C, X183R, X186R, X187R, X218Y, X225S; X167T, X168Y, X174C, X179E, X182C, X183R, X186R, X187R, X218Y X230R; X167T, X168Y, X174C, X179E, X182C, X183R, X186R, X187R, X218Y, X245V; X167T, X168Y, X174C, X179E, X182C, X183R, X186R, X187R, X218Y, X251E; X167T, X168Y, X174C, X179E, X182C, X183R, X186R, X187R, X218Y, X281E; X167T, X168Y, X174C, X179E, X182C, X183R, X186R, X187R, X218Y, X287T, X289S; X167T, X168Y, X174C, X179E, X182C, X183R, X186R, X187R, X218Y, X293S; X167T, X168Y, X174C, X179E, X182C, X183R, X186R, X187R, X218Y, X304R; X10N, X17Y, X28T, X39R, X57E, X58A, X59M, X63S, X65H, X69Y, X126S, X139P, X167T, X168Y, X174C, X179E, X182C, X183R, X186R, X187R, X218Y, X225S, X230R, X281E, X287T, X289S, X293S, X304R; X155R, X167T, X168Y, X174C, X175V, X179E, X182C, X183R, X186R, X187R, X189H, X190S, X192V, X202V, X216V, X218Y, X287T, X289S; X155R, X167T, X168Y, X174C, X175V, X218Y; X155R, X167T, X168Y, X174C, X175V; X155R, X167T, X174C, X175V, X218Y; X155R, X167T, X168Y, X174C, X175V, X179E, X182C, X183R, X186R, X187R, X218Y; X155R, X167T, X168Y, X174C, X175V, X189H, X190S, X192V, X218Y; X155R, X167T, X168Y, X174C, X175V, X179E, X182C, X183R, X186R, X187R, X189H, X190S, X192V, X218Y; X155R, X167T, X168Y, X174C, X175V, X179E, X182C, X183R, X186R, X187R, X202V, X218Y; X155R, X167T, X168Y, X174C, X175V, X179E, X182C, X183R, X186R, X187R, X202V, X218Y, X268L, X306I; X34V, X100N, X140A, X155R, X167T, X168Y, X174C, X175V, X179E, X182C, X183R, X186R, X187R, X202V, X218Y, X225N, X266R, X268L, X269Q, X306I; X155R, X167T, X168Y, X174C, X175V, X179E, X182C, X183R, X186R, X187R, X218Y, X287S, X289S; X155R, X167T, X168Y, X174C, X175V, X179E, X182C, X183R, X186R, X187R, X202V, X218Y, X287S, X289S; X155R, X167T, X168Y, X174C, X175V, X179E, X182C, X183R, X186R, X187R, X202V, X218Y, X268L, X287S, X289S, X306I; X34V, X100N, X140A, X155R, X167T, X168Y, X174C, X175V, X179E, X182C, X183R, X186R, X187R, X202V, X218Y, X225N, X266R, X268L, X269Q, X287S, X289S, X306I; - 根據前述請求項中任一項所述的變體，其中所述親代α/β水解酶，較佳具有EC:3.1.1.-水解酶活性，選自如下肽構成的組： i) 與SEQ ID NO: 1的多肽具有至少60%（較佳至少81%、至少82%、至少83%、至少84%、至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91 %、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少95.5%、至少96%、至少96.5%、至少97%、至少97.5%、至少98%、至少98.5%、至少99%或至少99.5%或100%）序列同一性的多肽； ii) SEQ ID NO: 1的多肽的片段，其中所述片段具有α/β水解酶活性，較佳EC:3.1.1.-水解酶活性。
- 根據前述請求項中任一項所述的變體，其中所述變體： i) 包括從如下置換構成的組中選出的置換或者由從如下置換構成的組中選出的置換所組成：
N167T, F168Y, S174C, F218Y; N167T; N167S; N167A; N167C; N167L; N167T, S174T; N167T, S174C; R155K, N167T, S174C, V175A; R155K, N167T, S174C, V175T; N167S, S174C; N167T, S174C, F218Y; N167T, F168Y, S174C; N167T, F168Y, S174C, D179E, A182C, A183R, K186R, A187R, F218Y; N167T, F168Y, S174C, D179E, A182C, A183R, K186R, A187R, F218Y, Q268L, V306I; D10N, N167T, F168Y, S174C, D179E, A182C, A183R, K186R, A187R, F218Y; F17Y, I59M, N167T, F168Y, S174C, D179E, A182C, A183R, K186R, A187R, F218Y; V28T, N167T, F168Y, S174C, D179E, A182C, A183R, K186R, A187R, F218Y; H39R, N167T, F168Y, S174C, D179E, A182C, A183R, K186R, A187R, F218Y; E47S, G50E, N167T, F168Y, S174C, D179E, A182C, A183R, K186R, A187R, F218Y; P57E, V58A, I59M, N167T, F168Y, S174C, D179E, A182C, A183R, K186R, A187R, F218Y; A63S, S65H, N167T, F168Y, S174C, D179E, A182C, A183R, K186R, A187R, F218Y; F69Y, N167T, F168Y, S174C, D179E, A182C, A183R, K186R, A187R, F218Y; A126S, N167T, F168Y, S174C, D179E, A182C, A183R, K186R, A187R, F218Y; T139P N167T, F168Y, S174C, D179E, A182C, A183R, K186R, A187R, F218Y; N167T, F168Y, S174C, D179E, A182C, A183R, K186R, A187R, F218Y, H225S; N167T, F168Y, S174C, D179E, A182C, A183R, K186R, A187R, F218Y L230R; N167T, F168Y, S174C, D179E, A182C, A183R, K186R, A187R, F218Y, A245V; N167T, F168Y, S174C, D179E, A182C, A183R, K186R, A187R, F218Y, H251E; N167T, F168Y, S174C, D179E, A182C, A183R, K186R, A187R, F218Y, A281E; N167T, F168Y, S174C, D179E, A182C, A183R, K186R, A187R, F218Y, L287T, M289S; N167T, F168Y, S174C, D179E, A182C, A183R, K186R, A187R, F218Y, S293S; N167T, F168Y, S174C, D179E, A182C, A183R, K186R, A187R, F218Y, S304R; D10N, F17Y, V28T, H39R, P57E, V58A, I59M, A63S, S65H, F69Y, A126S, T139P, N167T, F168Y, S174C, D179E, A182C, A183R, K186R, A187R, F218Y, H225S, L230R, A281E, L287T, M289S, F293S, S304R; - 一種獲得親代α/β水解酶的變體（所述變體較佳具有EC:3.1.1.-水解酶活性）和/或提高所述親代α/β水解酶的穩定性的方法，所述方法包括：在與SEQ ID NO: 1（較佳使用SEQ ID NO: 1的編號）的位置167、168、174、218、155、175、179、182、183、186、187、268、306、10、17、28、39、47、50、57、58、59、63、65、69、126、139、225、230、245、251、281、287、289、293和304對應的一個或多個位置處向所述親代α/β水解酶引入置換，其中所述變體具有α/β水解酶活性；和，回收所述變體；較佳地，所述親代α/β水解酶如前述權利要求任一項所述，進一步較佳地，所述親代α/β水解酶與SEQ ID NO: 1具有至少95%序列同一性。
- 一種編碼前述請求項中任一項所述變體的多核苷酸。
- 一種包括前述請求項中任一項所述多核苷酸的核酸構建體。
- 一種包括前述請求項中任一項所述多核苷酸和/或核酸構建體的表現載體。
- 一種重組宿主細胞，包括如下至少一種： i) 前述請求項中任一項所述的變體和/或親代α/β水解酶； ii) 前述請求項中任一項所述的多核苷酸； iii) 前述請求項中任一項所述的核酸構建體；和/或 iv) 前述請求項中任一項所述的表現載體。
- 一種轉基因植物、轉基因種子或轉基因花粉粒，包括如下的一種或多種（較佳多種）： i) 前述請求項中任一項所述的變體和/或親代α/β水解酶； ii) 前述請求項中任一項所述的多核苷酸； iii) 前述請求項中任一項所述的核酸構建體； iv) 前述請求項中任一項所述的表現載體；和/或 v) 前述請求項中任一項所述的重組宿主細胞。
- 一種食品、中間食品；草料、中間草料；飼料、中間飼料；添加劑（較佳地，食品添加劑、草料添加劑或飼料添加劑），中間添加劑（較佳地，食品中間添加劑、草料中間添加劑或飼料中間添加劑）；解毒劑，中間解毒劑；營養補充劑、中間營養補充劑；益生元、中間益生元、青儲飼料接種菌；解毒藥；獸用組合物；藥物組合物，和/或其混合物，它們包括如下的一種或多種： i) 前述請求項中任一項所述的變體和/或親代α/β水解酶；較佳地，所述親代α/β水解酶與SEQ ID NO: 1的多肽具有至少95%的序列同一性； ii) 前述請求項中任一項所述的多核苷酸； iii) 前述請求項中任一項所述的核酸構建體； iv) 前述請求項中任一項所述的表現載體； v) 前述請求項中任一項所述的重組宿主細胞； vi) 前述請求項中任一項所述的轉基因植物、轉基因種子和/或轉基因花粉粒。
- 一種組合物或試劑盒，包括如下的一種或多種： i) 前述請求項中任一項所述的變體和/或親代α/β水解酶，較佳地，所述親代α/β水解酶與SEQ ID NO: 1的多肽具有至少95%的序列同一性； ii) 前述請求項中任一項所述的多核苷酸； iii) 前述請求項中任一項所述的核酸構建體； iv) 前述請求項中任一項所述的表現載體； v) 前述請求項中任一項所述的重組宿主細胞； vi) 前述請求項中任一項所述的轉基因植物、轉基因種子或轉基因花粉粒；和/或 vii) 前述請求項中任一項所述的食品、中間食品；草料、中間草料；飼料、中間飼料；添加劑（較佳地，食品添加劑、草料添加劑或飼料添加劑）、中間添加劑（較佳地，食品中間添加劑、草料中間添加劑或飼料中間添加劑）；解毒劑、中間解毒劑；營養補充劑、中間營養補充劑；益生元、中間益生元、青儲飼料接種菌；解毒藥；獸用組合物；藥物組合物，和/或其混合物。
- 根據前述請求項中任一項所述的組合物或試劑盒，進一步包括營養學上可接受的載體和/或前述權利要求任一項所述的親代α/β水解酶，較佳地，所述親代α/β水解酶與SEQ ID NO: 1的多肽具有至少95%的序列同一性。
- 前述請求項中任一項所述的變體、親代α/β水解酶、多核苷酸、核酸構建體、表現載體、重組宿主細胞、轉基因植物、轉基因種子、轉基因花粉粒、食品、中間食品；草料、中間草料；飼料、中間飼料；添加劑（較佳地，食品添加劑、草料添加劑或飼料添加劑）、中間添加劑（較佳地，食品中間添加劑、草料中間添加劑或飼料中間添加劑）；解毒劑、中間解毒劑；營養補充劑、中間營養補充劑；益生元、中間益生元、青儲飼料接種菌；解毒藥；獸用組合物；藥物組合物和/或其混合物、組合物和/或試劑盒，用作藥物和/或用於治療，較佳地，用於疾病的預防或治療，進一步較佳地，所述親代α/β水解酶與SEQ ID NO: 1的多肽具有至少95%的序列同一性。
- 前述請求項中任一項所述的變體、親代α/β水解酶、多核苷酸、核酸構建體、表現載體、重組宿主細胞、轉基因植物、轉基因種子、轉基因花粉粒、食品、中間食品；草料、中間草料；飼料、中間飼料；添加劑（較佳地，食品添加劑、草料添加劑或飼料添加劑）、中間添加劑（較佳地，食品中間添加劑、草料中間添加劑或飼料中間添加劑）；解毒劑、中間解毒劑；營養補充劑、中間營養補充劑；益生元、中間益生元、青儲飼料接種菌；解毒藥；獸用組合物；藥物組合物和/或其混合物、組合物和/或試劑盒，用於預防或治療黴菌中毒，較佳地，適合用於預防或治療玉米赤黴烯酮或其衍生物引起的激素紊亂。
- 前述請求項中任一項所述的變體、親代α/β水解酶、多核苷酸、核酸構建體、表現載體、重組宿主細胞、轉基因植物、轉基因種子、轉基因花粉粒、食品、中間食品；草料、中間草料；飼料、中間飼料；添加劑（較佳地，食品添加劑、草料添加劑或飼料添加劑）、中間添加劑（較佳地，食品中間添加劑、草料中間添加劑或飼料中間添加劑）；解毒劑、中間解毒劑；營養補充劑、中間營養補充劑；益生元、中間益生元、青儲飼料接種菌；解毒藥；獸用組合物；藥物組合物和/或其混合物在如下一種或多種中的用途： i) 玉米赤黴烯酮和/或其衍生物的降解； ii) 食物、食品、中間食品；草料、中間草料；飼料、中間飼料；添加劑（較佳地，食品添加劑、草料添加劑或飼料添加劑）、中間添加劑（較佳地，食品中間添加劑、草料中間添加劑或飼料中間添加劑）；解毒劑、中間解毒劑；營養補充劑、中間營養補充劑；益生元、中間益生元、青儲飼料接種菌；解毒藥；獸用組合物；藥物組合物； iii) 如下一種或多種的製造/生產：食品、中間食品；草料、中間草料；飼料、中間飼料；添加劑（較佳地，食品添加劑、草料添加劑或飼料添加劑）、中間添加劑（較佳地，食品中間添加劑、草料中間添加劑或飼料中間添加劑）；解毒劑、中間解毒劑；營養補充劑、中間營養補充劑；益生元、中間益生元、青儲飼料接種菌；解毒藥；獸用組合物；藥物組合物和/或其混合物； iv) 青儲飼料、沼氣、生物乙醇或糖的製造/生產，較佳由甘蔗或甜菜製造/生產； v) 黴菌中毒的預防或治療。
- 一種降解玉米赤黴烯酮和/或其衍生物的方法，包括： a) 提供如下的一種或多種： i) 前述請求項中任一項所述的變體和/或親代α/β水解酶，較佳地，所述親代α/β水解酶與SEQ ID NO: 1的多肽具有至少95%的序列同一性； ii) 前述請求項中任一項所述的重組宿主細胞； iii) 前述請求項中任一項所述的轉基因植物； iv) 前述請求項中任一項所述的食品、中間食品；草料、中間草料；飼料、中間飼料；添加劑（較佳地，食品添加劑、草料添加劑或飼料添加劑）、中間添加劑（較佳地，食品中間添加劑、草料中間添加劑或飼料中間添加劑）；解毒劑、中間解毒劑；營養補充劑、中間營養補充劑；益生元、中間益生元、青儲飼料接種菌；解毒藥；獸用組合物；藥物組合物和/或其混合物；和/或 v) 前述請求項中任一項所述的組合物或試劑盒； b)使來自(a)的一種或多種物質接觸玉米赤黴烯酮和/或其衍生物。
Applications Claiming Priority (6)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP20200918 | 2020-10-08 | ||
| EP20200918.9 | 2020-10-08 | ||
| PCT/EP2021/056026 WO2022073649A1 (en) | 2020-10-08 | 2021-03-10 | Tetrameric alpha/beta hydrolase variants with increased temperature stability and methods of using and producing thereof |
| WOPCT/EP2021/056026 | 2021-03-10 | ||
| CN202110261775.4A CN114292828A (zh) | 2020-10-08 | 2021-03-10 | 具有提高的温度稳定性的四聚体α/β水解酶变体及其使用和生产方法 |
| CN202110261775.4 | 2021-03-10 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| TW202229548A true TW202229548A (zh) | 2022-08-01 |
Family
ID=72826662
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| TW110137505A TW202229548A (zh) | 2020-10-08 | 2021-10-08 | 具有提高的溫度穩定性的四聚體α/β水解酶變體及其使用和生產方法 |
Country Status (11)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US20230383269A1 (zh) |
| EP (1) | EP4225901A1 (zh) |
| JP (1) | JP2023546075A (zh) |
| CN (1) | CN114292828A (zh) |
| AR (1) | AR123758A1 (zh) |
| AU (1) | AU2021355869A1 (zh) |
| BR (1) | BR112023005032A2 (zh) |
| CA (1) | CA3192454A1 (zh) |
| MX (1) | MX2023003959A (zh) |
| TW (1) | TW202229548A (zh) |
| WO (1) | WO2022073649A1 (zh) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN117757698B (zh) * | 2024-01-25 | 2024-06-11 | 浙江大学 | 一株枯草芽孢杆菌dyf4-3及其在降解多种霉菌毒素中的应用 |
Family Cites Families (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AT406166B (de) | 1997-12-30 | 2000-03-27 | Erber Erich Kg | Mikroorganismus, verfahren zur gewinnung desselben sowie futtermittelzusatz |
| AT413540B (de) | 2001-12-20 | 2006-03-15 | Erber Ag | Mikroorganismus, welcher ochratoxine sowie ochratoxine und zearalenone entgiftet, sowie verfahren und verwendung hiefür |
| WO2004101741A2 (en) | 2003-05-05 | 2004-11-25 | Monsanto Technology, Llc | Transgenic plants with increased glycine-betaine |
| DK2677881T3 (da) * | 2011-02-24 | 2020-07-13 | Erber Ag | Enzymer til behandling af foder |
| AT513473B1 (de) | 2012-10-09 | 2016-01-15 | Erber Ag | Enzyme zur Transformation von Ergopeptinen sowie Verfahren hierfür |
| AT514775B1 (de) * | 2013-08-28 | 2017-11-15 | Erber Ag | Polypeptid zur hydrolytischen Spaltung von Zearalenon und/oder Zearalenon Derivaten, isoliertes Polynukleotid davon sowie Zusatzstoff enthaltend das Polypeptid |
| US10264807B2 (en) | 2015-02-24 | 2019-04-23 | Erber Aktiengesellschaft | Fusarium toxin-cleaving polypeptide variants, additive containing same, use of same, and method for splitting fusarium toxins |
| DK179660B1 (en) | 2016-04-08 | 2019-03-13 | Novozymes A/S | Stabilized Alpha-Amylase Variants and use of the same |
| EP3342416A1 (de) | 2016-12-28 | 2018-07-04 | Erber Aktiengesellschaft | Verwendung von wenigstens einem glycyrrhiza-pflanzenpräparats, eines antidos davon sowie verwendung des antidots |
| EP3501526B1 (en) | 2017-12-22 | 2022-11-02 | DSM Austria GmbH | Use of coriobacteriia to promote gut health |
| BR112021001310A2 (pt) | 2018-07-31 | 2021-04-27 | Erber Aktiengesellschaft | meios e métodos para clivagem de zearalenona |
-
2021
- 2021-03-10 AU AU2021355869A patent/AU2021355869A1/en active Pending
- 2021-03-10 CA CA3192454A patent/CA3192454A1/en active Pending
- 2021-03-10 CN CN202110261775.4A patent/CN114292828A/zh active Pending
- 2021-03-10 US US18/030,883 patent/US20230383269A1/en active Pending
- 2021-03-10 EP EP21716064.7A patent/EP4225901A1/en active Pending
- 2021-03-10 BR BR112023005032A patent/BR112023005032A2/pt unknown
- 2021-03-10 WO PCT/EP2021/056026 patent/WO2022073649A1/en active Application Filing
- 2021-03-10 JP JP2023522499A patent/JP2023546075A/ja active Pending
- 2021-03-10 MX MX2023003959A patent/MX2023003959A/es unknown
- 2021-10-08 TW TW110137505A patent/TW202229548A/zh unknown
- 2021-10-12 AR ARP210102806A patent/AR123758A1/es unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP2023546075A (ja) | 2023-11-01 |
| US20230383269A1 (en) | 2023-11-30 |
| AU2021355869A1 (en) | 2023-05-04 |
| CN114292828A (zh) | 2022-04-08 |
| AU2021355869A9 (en) | 2023-07-06 |
| MX2023003959A (es) | 2023-05-25 |
| EP4225901A1 (en) | 2023-08-16 |
| WO2022073649A1 (en) | 2022-04-14 |
| CA3192454A1 (en) | 2022-04-14 |
| BR112023005032A2 (pt) | 2023-04-18 |
| AR123758A1 (es) | 2023-01-11 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| ES2675026T3 (es) | Polipéptido para la disociación hidrolítica de zearalenona y/o derivados de zearalenona, polinucleótido aislado del mismo, así como un aditivo que contiene un polipéptido, uso del mismo, así como procedimiento | |
| CN108251385B (zh) | 赭曲霉毒素降解酶、编码基因、重组载体、细胞、添加剂及其应用 | |
| JP6506857B2 (ja) | フザリウム毒素切断ポリペプチド変異体、これを含有する添加物、およびこの使用、ならびにフザリウム毒素の切断方法 | |
| JP6646680B2 (ja) | トリコテセン変換アルコールデヒドロゲナーゼの使用、トリコテセンの変換方法およびトリコテセン変換添加物 | |
| PT1448595E (pt) | Polipéptideos antimicrobianos de pseudoplectania nigrella | |
| Xu et al. | Crystal structure of bile salt hydrolase from Lactobacillus salivarius | |
| TW202122578A (zh) | 將基質3-酮-脫氧雪腐鐮刀菌烯醇轉化爲3-epi-脫氧雪腐鐮刀菌烯醇的改良多肽 | |
| TW202229548A (zh) | 具有提高的溫度穩定性的四聚體α/β水解酶變體及其使用和生產方法 | |
| CN108244454B (zh) | 一种复合酶和添加剂及它们的应用以及脱除玉米赤霉烯酮或α-玉米赤霉烯醇的方法 | |
| CN107475222A (zh) | 基因工程改造的耐热人溶菌酶 | |
| JP2020513847A (ja) | クロストリジウムによる対象物の汚染を低減する方法 | |
| TW202328441A (zh) | 赭麯黴毒素ａ的解毒手段和方法 | |
| WO2009124503A1 (zh) | 植物种子胚的蛋白提取物的应用及其组合物 | |
| US20240067950A1 (en) | Means and methods for detoxifying ochratoxin a | |
| CN114933644B (zh) | 一种泥鳅抗菌肽Ma-sHep及其应用 | |
| KR102113588B1 (ko) | 히스티딘-프롤린 반복서열을 갖는 올리고펩타이드의 대량생산 시스템 | |
| KR101520431B1 (ko) | 샤페론 단백질을 포함하는 고온 생장 가능한 재조합 미생물 및 열-쇼크 단백질을 이용한 바이러스의 열안정화 방법 | |
| KR101499813B1 (ko) | 론 단백질을 포함하는 고온 생장 가능한 재조합 미생물 및 열-쇼크 단백질을 이용한 바이러스의 열안정화 방법 | |
| WO2024180045A1 (en) | Means and methods for modifying fumonisins | |
| KR102476601B1 (ko) | 글루텐 불내증 및 관련 질병의 치료 | |
| WO2022115503A1 (en) | Treatment and prevention of coronavirus infection | |
| KR20220082527A (ko) | Vhsv 당단백질을 발현하는 형질전환 미세조류를 유효성분으로 포함하는 vhs의 예방 또는 개선용 사료첨가제 조성물 및 이의 용도 | |
| WO2009138475A1 (en) | Modified endolysin ply511 | |
| Abughren | Examination of Allergenic Properties of Recombinant Banana Glucanase (Musa Acuminata) | |
| BR112017018606B1 (pt) | Uso de álcool desidrogenase transformadora de tricoteceno, processo para transformação de tricotecenos e aditivos de transformação de tricotecenos e seu uso |