TW202228649A - 諸如形成聚集體之調配物之用於脈絡膜上投與之調配物 - Google Patents

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Abstract

本文提供用於投與至個體眼睛之脈絡膜上腔的醫藥組合物。該等醫藥組合物可包括編碼轉殖基因之重組腺相關病毒(AAV)。本文亦提供藉由向有需要之個體投與治療有效量之該等醫藥組合物來治療或預防該個體之疾病的方法。

Description

諸如形成聚集體之調配物之用於脈絡膜上投與之調配物
人眼係一個高度複雜且高度發達之感覺器官，容易發生許多疾病及病症。世界上約2.85億人有視覺障礙，其中3900萬人視盲且2.46億人患有中度至重度視覺障礙(World Health Organization, 2012, 「Global Data On Visual Impairments 2010」, Geneva : World Health Organization)。導致視盲之一些主要原因為白內障(47%)、青光眼(12%)、年齡相關性黃斑變性(AMD) (9%)及糖尿病性視網膜病變(5%) (World Health Organization, 2007, 「Global Initiative For The Elimination Of Avoidable Blindness: Action Plan 2006-2011」, Geneva: World Health Organization)。
已採用基因療法來治療某些眼部疾病(參見例如國際專利申請案第PCT/US2017/027650號(國際公開案第WO 2017/181021 A1號))。腺相關病毒(AAV)係一種有吸引力的用於基因療法之工具，因為其具有如下特性：非致病性、廣泛的宿主及細胞類型向性感染範圍(包括分裂細胞與非分裂細胞二者)以及建立長期轉殖基因表現之能力(例如Gonçalves, 2005, Virology Journal, 2:43)。
當前用於眼部基因療法之方法(例如藉由玻璃體內或視網膜下投與)係侵入性的，且會遭遇嚴重挫折，諸如白內障、視網膜剝離及感光受體與中央凹視網膜色素上皮(RPE)分離之風險增加。對改善或消除當前眼部基因療法之挫折的療法存在顯著未滿足之醫療需求。
腺相關病毒(AAV)係稱為依賴病毒( Dependovirus)之細小病毒科( Parvoviridae)成員，為一種小型無套膜之二十面體病毒，具有約4.7千鹼基(kb)至6 kb之單股線性DNA基因體。非致病性、廣泛的宿主及細胞類型向性感染範圍(包括分裂細胞與非分裂細胞二者)以及建立長期轉殖基因表現之能力的特性使AAV成為一種有吸引力的用於基因療法之工具(例如Gonçalves, 2005, Virology Journal, 2:43)。
正在研究構築體II作為一種藉由注射至脈絡膜上腔中來遞送的治療。脈絡膜上腔(SCS)係介於鞏膜與脈絡膜之間的一個區域，在注射藥物溶液時會擴大(Habot-Wilner, 2019)。當注射之溶液藉由生理過程清除時，SCS空間恢復至其注射前之尺寸。藥物溶液在SCS內擴散且吸收至鄰近組織中。脈絡膜中之毛細血管可滲透低分子量滲透物。本揭示案解決提供如下醫藥組合物之未滿足需求，該醫藥組合物使得在脈絡膜上腔中之滯留時間更長，從而提高功效。
在一態樣中，本文提供一種適合投與至人類個體眼睛之脈絡膜上腔(SCS)之醫藥組合物，其中該醫藥組合物包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之重組腺相關病毒(AAV)載體，且其中在脈絡膜上投與之前該醫藥組合物包含至多約200 mM之離子強度。
在一態樣中，本文提供一種適合投與至人類個體眼睛之脈絡膜上腔(SCS)之醫藥組合物，其中該醫藥組合物包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之重組腺相關病毒(AAV)載體，且其中在脈絡膜上投與之前該醫藥組合物包含至少約3%之聚集重組AAV。
在一態樣中，本文提供一種適合投與至人類個體眼睛之脈絡膜上腔(SCS)之醫藥組合物，其中該醫藥組合物包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之重組腺相關病毒(AAV)載體，其中該轉殖基因為抗人類血管內皮生長因子(抗VEGF)抗體，且其中在脈絡膜上投與之前該醫藥組合物包含至多約200 mM之離子強度。
在一態樣中，本文提供一種適合投與至人類個體眼睛之脈絡膜上腔(SCS)之醫藥組合物，其中該醫藥組合物包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之重組腺相關病毒(AAV)載體，其中該轉殖基因為抗人類血管內皮生長因子(抗VEGF)抗體，且其中在脈絡膜上投與之前該醫藥組合物包含至少約3%之聚集重組AAV。
在一些實施例中，在脈絡膜上投與醫藥組合物後之清除時間等於或大於在脈絡膜上投與參考醫藥組合物後之清除時間，其中該參考醫藥組合物包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之重組AAV，其中當將醫藥組合物或參考醫藥組合物投與至脈絡膜上腔時，重組AAV基因體複本之量相同，且其中醫藥組合物與參考醫藥組合物相比具有更低之離子強度及/或更高水準之聚集重組AAV。在一些實施例中，在脈絡膜上投與醫藥組合物後之圓周擴散比在脈絡膜上投與參考醫藥組合物後之圓周擴散小，其中該參考醫藥組合物包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之重組AAV，其中當將醫藥組合物或參考醫藥組合物投與至脈絡膜上腔時，重組AAV基因體複本之量相同，且其中醫藥組合物與參考醫藥組合物相比具有更低之離子強度及/或更高水準之聚集重組AAV。在一些實施例中，在脈絡膜上投與醫藥組合物後在注射部位之厚度等於或高於在脈絡膜上投與參考醫藥組合物後在注射部位之厚度，其中該參考醫藥組合物包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之重組AAV，其中當將醫藥組合物或參考醫藥組合物投與至脈絡膜上腔時，重組AAV基因體複本之量相同，且其中醫藥組合物與參考醫藥組合物相比具有更低之離子強度及/或更高水準之聚集重組AAV。在一些實施例中，與在脈絡膜上投與參考醫藥組合物後在眼睛中偵測到表現水準之轉殖基因的時段相比在脈絡膜上投與醫藥組合物後更長時段在眼睛中偵測到表現水準之轉殖基因，其中該參考醫藥組合物包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之重組AAV，其中當將醫藥組合物或參考醫藥組合物投與至脈絡膜上腔時，重組AAV基因體複本之量相同，且其中醫藥組合物與參考醫藥組合物相比具有更低之離子強度及/或更高水準之聚集重組AAV。在一些實施例中，在脈絡膜上投與醫藥組合物後眼睛中轉殖基因之濃度等於或高於在脈絡膜上投與參考醫藥組合物後眼睛中轉殖基因之濃度，其中該參考醫藥組合物包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之重組AAV，其中當將醫藥組合物或參考醫藥組合物投與至脈絡膜上腔時，重組AAV基因體複本之量相同，且其中醫藥組合物與參考醫藥組合物相比具有更低之離子強度及/或更高水準之聚集重組AAV。在一些實施例中，在脈絡膜上投與後在注射部位之轉導率等於或高於在脈絡膜上投與參考醫藥組合物後在注射部位之轉導率，其中該參考醫藥組合物包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之重組AAV，其中當將醫藥組合物或參考醫藥組合物投與至脈絡膜上腔時，重組AAV基因體複本之量相同，且其中醫藥組合物與參考醫藥組合物相比具有更低之離子強度及/或更高水準之聚集重組AAV。
在一些實施例中，在脈絡膜上投與醫藥組合物後VEGF誘發之血管舒張及/或血管滲漏之水準等於在脈絡膜上投與參考醫藥組合物後VEGF誘發之血管舒張及/或血管滲漏之水準或與之相比降低，其中該參考醫藥組合物包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之重組AAV，其中當將醫藥組合物或參考醫藥組合物投與至脈絡膜上腔時，重組AAV基因體複本之量相同，且其中醫藥組合物與參考醫藥組合物相比具有更低之離子強度及/或更高水準之聚集重組AAV。
在一些實施例中，重組AAV為構築體II。在一些實施例中，轉殖基因為抗人類血管內皮生長因子(抗VEGF)抗體。在一些實施例中，重組AAV包含來自選自由以下組成之群的一或多種腺相關病毒血清型之組分：AAV1、AAV2、AAV2tYF、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10、AAV11、AAVrh10、AAV.rh20、AAV.rh39、AAV.Rh74、AAV.RHM4-1、AAV.hu37、AAV.Anc80、AAV.Anc80L65、rAAV.7m8、AAV.PHP.B、AAV.PHP.eB、AAV2.5、AAV2tYF、AAV3B、AAV.LK03、AAV.HSC1、AAV.HSC2、AAV.HSC3、AAV.HSC4、AAV.HSC5、AAV.HSC6、AAV.HSC7、AAV.HSC8、AAV.HSC9、AAV.HSC10、AAV.HSC11、AAV.HSC12、AAV.HSC13、AAV.HSC14、AAV.HSC15及AAV.HSC16。在一些實施例中，重組AAV為AAV8。在一些實施例中，其中重組AAV為AAV9。在一些實施例中，醫藥組合物之離子強度為約或至多約5 mM、10 mM、15 mM、20 mM、25 mM、30 mM、35 mM、40 mM、45 mM、50 mM、55 mM、60 mM、65 mM、70 mM、75 mM、80 mM、85 mM、90 mM、95 mM、100 mM、105 mM、110 mM、115 mM、120 mM、125 mM、130 mM、135 mM、140 mM、145 mM、150 mM、155 mM、160 mM、165 mM、170 mM、175 mM、180 mM、185 mM、190 mM、195 mM、200 mM。在一些實施例中，醫藥組合物包含至少約或約3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%、21%、22%、23%、24%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%或95%之聚集重組AAV。
在一些實施例中，醫藥組合物之離子強度為約或至多約40 mM。在一些實施例中，醫藥組合物之離子強度為約或至多約135 mM。在一些實施例中，醫藥組合物之離子強度為約或至多約20 mM。在一些實施例中，醫藥組合物之聚集重組AAV直徑為約或至少約10 nm、15 nm、20 nm、25 nm、26 nm、27 nm、28 nm、29 nm、30 nm、31 nm、32 nm、33 nm、34 nm、35 nm、36 nm、37 nm、38 nm、39 nm、40 nm、45 nm、50 nm、55 nm、60 nm、65 nm、70 nm、75 nm、80 nm、85 nm、90 nm、95 nm或約或至少約100 nm。
在一些實施例中，醫藥組合物之平均重組AAV直徑比參考醫藥組合物中之平均重組AAV直徑高至少2倍、高至少3倍、高至少4倍、高至少5倍、高至少6倍、高至少7倍、高至少8倍、高至少9倍、高至少10倍、高至少15倍、高至少20倍、高至少50倍、高至少100倍、高至少5%、高至少10%、高至少15%、高至少20%、高至少25%、高至少30%、高至少35%、高至少40%、至少45%、高至少50%、高至少55%、高至少60%、高至少65%、高至少70%、高至少75%、高至少80%、高至少85%、高至少90%、高至少95%、高至少100%、高至少150%或高至少200%、高至少250%或至少300%、高至少400%或高至少500%。在一些實施例中，在脈絡膜上投與醫藥組合物後之圓周擴散小至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍、至少5%、至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少100%、至少150%或至少200%、至少250%或至少300%、至少400%或至少500%。在一些實施例中，在脈絡膜上投與醫藥組合物後之清除時間多至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍、至少5%、至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少100%、至少150%或至少200%、至少250%或至少300%、至少400%或至少500%。
在一些實施例中，在脈絡膜上投與醫藥組合物後之清除時間為約30分鐘至約20小時、約2小時至約20小時、約30分鐘至約24小時、約1小時至約2小時、約30分鐘至約90天、約30分鐘至約60天、約30分鐘至約30天、約30分鐘至約21天、約30分鐘至約14天、約30分鐘至約7天、約30分鐘至約3天、約30分鐘至約2天、約30分鐘至約1天、約4小時至約90天、約4小時至約60天、約4小時至約30天、約4小時至約21天、約4小時至約14天、約4小時至約7天、約4小時至約3天、約4小時至約2天、約4小時至約1天、約4小時至約8小時、約4小時至約16小時、約4小時至約20小時、約1天至約90天、約1天至約60天、約1天至約30天、約1天至約21天、約1天至約14天、約1天至約7天、約1天至約3天、約2天至約90天、約3天至約90天、約3天至約60天、約3天至約30天、約3天至約21天、約3天至約14天或約3天至約7天。
在一些實施例中，在脈絡膜上投與醫藥組合物後之清除時間不早於約30分鐘、1小時、2小時、3小時、4小時、5小時、6小時、7小時、8小時、9小時、10小時、12小時、14小時、16小時、18小時、20小時、22小時、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、23天、25天、27天、30天、35天、40天、50天、55天、60天、65天、70天、75天、80天、85天、90天、95天、100天、120天、140天、160天、180天、200天、220天、240天、260天、280天、300天、320天、340天、360天、380天或400天。在一些實施例中，在脈絡膜上投與參考醫藥組合物後之清除時間為至多約1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天或14天。在一些實施例中，清除時間係自SCS或自眼睛之清除時間。在一些實施例中，在脈絡膜上投與醫藥組合物後在注射部位之厚度高至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍、至少5%、至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少100%、至少150%或至少200%、至少250%或至少300%、至少400%或至少500%。
在一些實施例中，在脈絡膜上投與醫藥組合物後在注射部位之厚度為約500 μm至約3.0 mm、750 μm至約2.8 mm、約750 μm至約2.5 mm、約750 μm至約2 mm或約1 mm至約2 mm。在一些實施例中，在脈絡膜上投與醫藥組合物後在注射部位之厚度為至少約50 μm、100 μm、200 μm、300 μm、400 μm、500 μm、600 μm、700 μm、800 μm、900 μm、1000 μm、1 mm、1.5 mm、2 mm、2.5 mm、3 mm、3.5 mm、4 mm、4.5 mm、5 mm、5.5 mm、6 mm、6.5 mm、7 mm、7.5 mm、8 mm、8.5 mm、9 mm、9.5 mm或10 mm。在一些實施例中，在脈絡膜上投與參考醫藥組合物後在注射部位之厚度為至多約1 nm、5 nm、10 nm、25 nm、50 nm、100 nm、200 nm、300 nm、400 nm、500 nm、600 nm、700 nm、800 nm、900 nm、1 μm、5 μm、10 μm、15 μm、20 μm、25 μm、30 μm、35 μm、40 μm、50 μm、100 μm、200 μm、300 μm、400 μm、500 μm、600 μm、700 μm、800 μm、900 μm或1000 μm。
在一些實施例中，在脈絡膜上投與醫藥組合物後在注射部位之厚度持續至少兩小時、至少三小時、至少四小時、至少五小時、至少六小時、至少七小時、至少八小時、至少十小時、至少十二小時、至少十八小時、至少二十四小時、至少兩天、至少三天、至少五天、至少十天、至少二十一天、至少一個月、至少六週、至少兩個月、至少三個月、至少4個月、至少5個月、至少6個月、至少9個月、至少一年、至少三年或至少五年。
在一些實施例中，在脈絡膜上投與醫藥組合物後眼睛中轉殖基因之濃度高至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍、至少5%、至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少100%、至少150%或至少200%、至少250%或至少300%、至少400%或至少500%。
在一些實施例中，在脈絡膜上投與醫藥組合物後的更長時段長至少30分鐘、1小時、2小時、3小時、4小時、5小時、6小時、7小時、8小時、9小時、10小時、12小時、14小時、16小時、18小時、20小時、22小時、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、23天、25天、27天、30天、35天、40天、50天、55天、60天、65天、70天、75天、80天、85天、90天、95天、100天、120天、140天、160天、180天、200天、220天、240天、260天、280天、300天、320天、340天、360天、380天或400天。在一些實施例中，在脈絡膜上投與醫藥組合物後在眼睛中偵測到轉殖基因達至少約30分鐘、1小時、2小時、3小時、4小時、5小時、6小時、7小時、8小時、9小時、10小時、12小時、14小時、16小時、18小時、20小時、22小時、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、23天、25天、27天、30天、35天、40天、50天、55天、60天、65天、70天、75天、80天、85天、90天、95天、100天、120天、140天、160天、180天、200天、220天、240天、260天、280天、300天、320天、340天、360天、380天或400天。在一些實施例中，在脈絡膜上投與參考醫藥組合物後在眼睛中偵測到轉殖基因達至多約30分鐘、1小時、2小時、3小時、4小時、5小時、6小時、7小時、8小時、9小時、10小時、12小時、14小時、16小時、18小時、20小時、22小時、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、23天、25天、27天、30天、35天、40天、50天、55天、60天、65天、70天、75天、80天、85天、90天、95天或100天、120天、140天、160天、180天、200天、220天、240天、260天、280天、300天、320天、340天、360天、380天或400天後。
在一些實施例中，在脈絡膜上投與醫藥組合物後VEGF誘發之血管舒張及/或血管滲漏之水準等於在脈絡膜上投與參考醫藥組合物後VEGF誘發之血管舒張及/或血管滲漏之水準或與之相比降低。在一些實施例中，在脈絡膜上投與醫藥組合物後VEGF誘發之血管舒張及/或血管滲漏之水準降低至少約2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍、至少5%、至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少100%、至少150%或至少200%、至少250%或至少300%、至少400%或至少500%。
在一些實施例中，在脈絡膜上投與醫藥組合物後在注射部位之轉導率高至少約2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍、至少5%、至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少100%、至少150%或至少200%、至少250%或至少300%、至少400%或至少500%。
在一些實施例中，醫藥組合物中之重組AAV穩定性係參考醫藥組合物中之重組AAV穩定性的至少約50%。在一些實施例中，重組AAV穩定性係藉由重組AAV之感染力確定。在一些實施例中，重組AAV穩定性係藉由重組AAV釋放之游離DNA之水準確定。在一些實施例中，與參考醫藥組合物中之游離DNA之水準相比，醫藥組合物包含多至少約50%、多約25%、多約15%、多約10%、多約5%、多約4%、多約3%、多約2%、多約1%、多約0%、少約1%、少約2%、少約5%、少約7%、少約10%、多約2倍、多約3倍、少約2倍、少約3倍的游離DNA。在一些實施例中，醫藥組合物中之重組AAV的感染力比參考醫藥組合物中之重組AAV之感染力低約50%、約相同或高至少約2%、5%、7%、10%、12%、15%、17%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、100%、2倍、3倍、5倍、10倍、100倍或1000倍。
在一些實施例中，轉殖基因係適合治療，或以其他方式改善所關注之疾病、預防所關注之疾病或減緩所關注之疾病之進展的轉殖基因。在一些實施例中，人類個體經診斷患有nAMD (濕性AMD)、乾性AMD、視網膜靜脈阻塞(RVO)、糖尿病性黃斑水腫(DME)或糖尿病性視網膜病變(DR)或巴登氏病(Batten disease)。在一些實施例中，人類個體經診斷患有IVA型黏多醣病(MPS IVA)、I型黏多醣病(MPS I)、II型黏多醣病(MPS II)、家族性高膽固醇血症(FH)、同合子型家族性高膽固醇血症(HoFH)、冠狀動脈疾病、腦血管疾病、杜顯氏肌肉失養症(Duchenne muscular dystrophy)、肢帶肌肉失養症、貝克爾肌肉失養症(Becker muscular dystrophy)及散發性包涵體肌炎或激肽釋放素相關疾病。在一些實施例中，AAV編碼棕櫚醯-蛋白硫酯酶1 (PPT1)或三肽基-肽酶1 (TPP1)。
在一些實施例中，重組AAV基因體複本之量係基於載體基因體濃度。在一些實施例中，重組AAV基因體複本之量係基於每次投與之基因體複本。在一些實施例中，重組AAV基因體複本之量係基於向人類個體投與之總基因體複本。在一些實施例中，每次投與之基因體複本係每次脈絡膜上投與之重組AAV之基因體複本。在一些實施例中，所投與之總基因體複本係經脈絡膜上投與之重組AAV之總基因體複本。
在一些實施例中，載體基因體濃度(VGC)為約3×10 9GC/mL、約1×10 10GC/mL、約1.2×10 10GC/mL、約1.6×10 10GC/mL、約4×10 10GC/mL、約6×10 10GC/mL、約2×10 11GC/mL、約2.4×10 11GC/mL、約2.5×10 11GC/mL、約3×10 11GC/mL、約6.2×10 11GC/mL、約1×10 12GC/mL、約2.5×10 12GC/mL、約3×10 12GC/mL、約5×10 12GC/mL、約1.5×10 13GC/mL、約2×10 13GC/mL或約3×10 13GC/mL。在一些實施例中，所投與之總基因體複本為約6.0×10 10個基因體複本、約1.6×10 11個基因體複本、約2.5×10 11個基因體複本、約5.0×10 11個基因體複本、約1.5×10 12個基因體複本、約3×10 12個基因體複本、約1.0×10 12個基因體複本、約2.5×10 12個基因體複本或約3.0×10 13個基因體複本。在一些實施例中，每次投與之基因體複本為約6.0×10 10個基因體複本、約1.6×10 11個基因體複本、約2.5×10 11個基因體複本、約5.0×10 11個基因體複本、約3×10 12個基因體複本、約1.0×10 12個基因體複本、約1.5×10 12個基因體複本、約2.5×10 12個基因體複本或約3.0×10 13個基因體複本。
在一些實施例中，醫藥組合物經投與一次、兩次、三次、四次、五次、六次、七次、八次、九次、十次、十五次、二十次、二十五次或三十次。在一些實施例中，參考醫藥組合物經投與一次、兩次、三次、四次、五次、六次、七次、八次、九次、十次、十五次、二十次、二十五次或三十次。在一些實施例中，一天一次、一天兩次、一天三次、一天四次、一天五次、一天六次或一天七次投與醫藥組合物。在一些實施例中，一天一次、一天兩次、一天三次、一天四次、一天五次、一天六次或一天七次投與參考醫藥組合物。在一些實施例中，參考醫藥組合物包含DPBS及蔗糖。
在一態樣中，本文提供一種製備醫藥組合物之方法，其包括：(i)製備包含磷酸鹽緩衝鹽水、蔗糖及包含編碼轉殖基因之表現卡匣之重組腺相關病毒(AAV)載體的組合物；及(ii)將包含磷酸鹽緩衝鹽水及蔗糖之溶液混合至該組合物，其中該醫藥組合物與該組合物相比具有較低之離子強度及/或較高水準之聚集重組AAV。
在一態樣中，本文提供一種製備醫藥組合物之方法，其包括將包含磷酸鹽緩衝鹽水及蔗糖之溶液混合至組合物，其中該組合物包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之重組腺相關病毒(AAV)載體，且其中該醫藥組合物與該組合物相比具有較低之離子強度及/或較高水準之聚集重組AAV。
在一態樣中，本文提供一種套組，其包含：(i)包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之重組腺相關病毒(AAV)載體的組合物；及(ii)包含磷酸鹽緩衝鹽水及蔗糖之溶液。在一些實施例中，該套組進一步包含關於該組合物與該溶液混合之說明書。在一些實施例中，該等說明書包含關於該溶液與該組合物混合以獲得醫藥組合物之說明書。
在一些實施例中，組合物包含磷酸鹽緩衝鹽水及蔗糖。在一些實施例中，組合物包含4%蔗糖。在一些實施例中，溶液包含10%蔗糖。在一些實施例中，醫藥組合物具有約或至多約135 mM之離子強度。在一些實施例中，醫藥組合物具有約或至多約40 mM之離子強度。在一些實施例中，醫藥組合物具有約或至多約20 mM之離子強度。在一些實施例中，醫藥組合物具有與該組合物實質上相同之滲壓性或滲透壓。在一些實施例中，醫藥組合物中之至少一些聚集重組AAV在醫藥組合物投與至人類個體眼睛之脈絡膜上腔後崩解。在一些實施例中，在脈絡膜上投與醫藥組合物後重組AAV之聚集倒轉成未聚集之AAV或單體。在一些實施例中，組合物包含氯化鉀、磷酸二氫鉀、氯化鈉、無水磷酸氫二鈉、蔗糖及視情況選用之界面活性劑。在一些實施例中，組合物包含經改良之杜貝爾寇磷酸鹽緩衝鹽水溶液(modified Dulbecco’s phosphate-buffered saline solution)及視情況選用之界面活性劑。在一些實施例中，組合物包含0.2 mg/mL氯化鉀、0.2 mg/mL磷酸二氫鉀、5.84 mg/mL氯化鈉、1.15 mg/mL無水磷酸氫二鈉、40.0 mg/mL (4% w/v)蔗糖及界面活性劑。在一些實施例中，溶液包含磷酸鹽緩衝之氯化鈉及蔗糖。
在一些實施例中，將溶液與組合物混合使組合物稀釋約或至少約2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍或10倍。在一些實施例中，將溶液與組合物混合在醫藥組合物投與至人類個體眼睛之脈絡膜上腔的同一天進行。在一些實施例中，將溶液與組合物混合在醫藥組合物投與至人類個體眼睛之脈絡膜上腔的24小時內進行。
在一些實施例中，醫藥組合物在投與至人類個體之前儲存。在一些實施例中，醫藥組合物儲存在約室溫、20℃、4℃或-80℃下。在一些實施例中，重組AAV包含來自AAV8之組分且醫藥組合物具有介於約30 mM至約60 mM之間的離子強度。在一些實施例中，重組AAV包含來自AAV9之組分且醫藥組合物具有介於約15 mM至約30 mM之間的離子強度。在一些實施例中，重組AAV包含來自之組分AAV2且醫藥組合物具有介於約100 mM至約200 mM之間的離子強度。在一些實施例中，醫藥組合物包含經改良之杜貝爾寇磷酸鹽緩衝鹽水溶液及視情況選用之界面活性劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含氯化鉀、磷酸二氫鉀、氯化鈉、無水磷酸氫二鈉、蔗糖及視情況選用之界面活性劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含0.2 mg/mL氯化鉀、0.2 mg/mL磷酸二氫鉀、5.84 mg/mL氯化鈉、1.15 mg/mL無水磷酸氫二鈉、40.0 mg/mL (4% w/v)蔗糖及視情況選用之界面活性劑。 2.1 說明性實施例1. 一種適合投與至人類個體眼睛之脈絡膜上腔(SCS)之醫藥組合物，其中該醫藥組合物包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之重組腺相關病毒(AAV)載體，且其中在脈絡膜上投與之前該醫藥組合物包含至多約200 mM之離子強度。 2. 一種適合投與至人類個體眼睛之脈絡膜上腔(SCS)之醫藥組合物，其中該醫藥組合物包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之重組腺相關病毒(AAV)載體，且其中在脈絡膜上投與之前該醫藥組合物包含至少約3%之聚集重組AAV。 3. 一種適合投與至人類個體眼睛之脈絡膜上腔(SCS)之醫藥組合物，其中該醫藥組合物包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之重組腺相關病毒(AAV)載體，其中該轉殖基因為抗人類血管內皮生長因子(抗VEGF)抗體，且其中在脈絡膜上投與之前該醫藥組合物包含至多約200 mM之離子強度。 4. 一種適合投與至人類個體眼睛之脈絡膜上腔(SCS)之醫藥組合物，其中該醫藥組合物包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之重組腺相關病毒(AAV)載體，其中該轉殖基因為抗人類血管內皮生長因子(抗VEGF)抗體，且其中在脈絡膜上投與之前該醫藥組合物包含至少約3%之聚集重組AAV。 5. 段落1至4中任一段之醫藥組合物，其中在脈絡膜上投與該醫藥組合物後之清除時間等於或大於在脈絡膜上投與參考醫藥組合物後之清除時間，其中該參考醫藥組合物包括包含編碼該轉殖基因之該表現卡匣之該重組AAV，其中當將該醫藥組合物或該參考醫藥組合物投與至脈絡膜上腔時，重組AAV基因體複本之量相同，且其中該醫藥組合物與該參考醫藥組合物相比具有更低之離子強度及/或更高水準之聚集重組AAV。 6. 段落1至4中任一段之醫藥組合物，其中在脈絡膜上投與該醫藥組合物後之圓周擴散比在脈絡膜上投與參考醫藥組合物後之圓周擴散小，其中該參考醫藥組合物包括包含編碼該轉殖基因之該表現卡匣之該重組AAV，其中當將該醫藥組合物或該參考醫藥組合物投與至脈絡膜上腔時，重組AAV基因體複本之量相同，且其中該醫藥組合物與該參考醫藥組合物相比具有更低之離子強度及/或更高水準之聚集重組AAV。 7. 段落1至4中任一段之醫藥組合物，其中在脈絡膜上投與該醫藥組合物後在注射部位之厚度等於或高於在脈絡膜上投與參考醫藥組合物後在注射部位之厚度，其中該參考醫藥組合物包括包含編碼該轉殖基因之該表現卡匣之該重組AAV，其中當將該醫藥組合物或該參考醫藥組合物投與至脈絡膜上腔時，重組AAV基因體複本之量相同，且其中該醫藥組合物與該參考醫藥組合物相比具有更低之離子強度及/或更高水準之聚集重組AAV。 8. 段落1至4中任一段之醫藥組合物，其中與在脈絡膜上投與參考醫藥組合物後在該眼睛中偵測到該轉殖基因之表現水準的時段相比，在脈絡膜上投與該醫藥組合物後更長時段在該眼睛中偵測到該轉殖基因之表現水準，其中該參考醫藥組合物包括包含編碼該轉殖基因之該表現卡匣之該重組AAV，其中當將該醫藥組合物或該參考醫藥組合物投與至脈絡膜上腔時，重組AAV基因體複本之量相同，且其中該醫藥組合物與該參考醫藥組合物相比具有更低之離子強度及/或更高水準之聚集重組AAV。 9. 段落1至4中任一段之醫藥組合物，其中在脈絡膜上投與該醫藥組合物後該眼睛中該轉殖基因之濃度等於或高於在脈絡膜上投與參考醫藥組合物後該眼睛中該轉殖基因之濃度，其中該參考醫藥組合物包括包含編碼該轉殖基因之該表現卡匣之該重組AAV，其中當將該醫藥組合物或該參考醫藥組合物投與至脈絡膜上腔時，重組AAV基因體複本之量相同，且其中該醫藥組合物與該參考醫藥組合物相比具有更低之離子強度及/或更高水準之聚集重組AAV。 10. 段落1至4中任一段之醫藥組合物，其中在脈絡膜上投與後在注射部位之轉導率等於或高於在脈絡膜上投與參考醫藥組合物後在注射部位之轉導率，其中該參考醫藥組合物包括包含編碼該轉殖基因之該表現卡匣之該重組AAV，其中當將該醫藥組合物或該參考醫藥組合物投與至脈絡膜上腔時，重組AAV基因體複本之量相同，且其中該醫藥組合物與該參考醫藥組合物相比具有更低之離子強度及/或更高水準之聚集重組AAV。 11. 段落3至4中任一段之醫藥組合物，其中在脈絡膜上投與該醫藥組合物後VEGF誘發之血管舒張及/或血管滲漏之水準等於在脈絡膜上投與參考醫藥組合物後VEGF誘發之血管舒張及/或血管滲漏之水準或與之相比降低，其中該參考醫藥組合物包括包含編碼該轉殖基因之該表現卡匣之該重組AAV，其中當將該醫藥組合物或該參考醫藥組合物投與至脈絡膜上腔時，重組AAV基因體複本之量相同，且其中該醫藥組合物與該參考醫藥組合物相比具有更低之離子強度及/或更高水準之聚集重組AAV。 12. 段落1至11中任一段之醫藥組合物，其中該重組AAV為構築體II。 13. 段落1、2、5至10及12中任一段之醫藥組合物，其中該轉殖基因為抗人類血管內皮生長因子(抗VEGF)抗體。 14. 段落1至13中任一段之醫藥組合物，其中該重組AAV包含來自選自由以下組成之群的一或多種腺相關病毒血清型之組分：AAV1、AAV2、AAV2tYF、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10、AAV11、AAVrh10、AAV.rh20、AAV.rh39、AAV.Rh74、AAV.RHM4-1、AAV.hu37、AAV.Anc80、AAV.Anc80L65、rAAV.7m8、AAV.PHP.B、AAV.PHP.eB、AAV2.5、AAV2tYF、AAV3B、AAV.LK03、AAV.HSC1、AAV.HSC2、AAV.HSC3、AAV.HSC4、AAV.HSC5、AAV.HSC6、AAV.HSC7、AAV.HSC8、AAV.HSC9、AAV.HSC10、AAV.HSC11、AAV.HSC12、AAV.HSC13、AAV.HSC14、AAV.HSC15及AAV.HSC16。 15. 段落1至14中任一段之醫藥組合物，其中該重組AAV為AAV8。 16. 段落1、2、5至10及12至14中任一段之醫藥組合物，其中該重組AAV為AAV9。 17. 段落1至16中任一段之醫藥組合物，其中該醫藥組合物具有約或至多約5 mM、10 mM、15 mM、20 mM、25 mM、30 mM、35 mM、40 mM、45 mM、50 mM、55 mM、60 mM、65 mM、70 mM、75 mM、80 mM、85 mM、90 mM、95 mM、100 mM、105 mM、110 mM、115 mM、120 mM、125 mM、130 mM、135 mM、140 mM、145 mM、150 mM、155 mM、160 mM、165 mM、170 mM、175 mM、180 mM、185 mM、190 mM、195 mM、200 mM之離子強度。 18. 段落1至17中任一段之醫藥組合物，其中該醫藥組合物包含至少約或約3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%、21%、22%、23%、24%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%或95%聚集重組AAV。 19. 段落1至18中任一段之醫藥組合物，其中該醫藥組合物具有約或至多約40 mM之離子強度。 20. 段落1至18中任一段之醫藥組合物，其中該醫藥組合物具有約或至多約135 mM之離子強度。 21. 段落1至18中任一段之醫藥組合物，其中該醫藥組合物具有約或至多約20 mM之離子強度。 22. 段落1至21中任一段之醫藥組合物，其中該醫藥組合物具有約或至少約10 nm、15 nm、20 nm、25 nm、26 nm、27 nm、28 nm、29 nm、30 nm、31 nm、32 nm、33 nm、34 nm、35 nm、36 nm、37 nm、38 nm、39 nm、40 nm、45 nm、50 nm、55 nm、60 nm、65 nm、70 nm、75 nm、80 nm、85 nm、90 nm、95 nm或約或至少約100 nm之平均重組AAV直徑。 23. 段落5至22中任一段之醫藥組合物，其中該醫藥組合物之平均重組AAV直徑比該參考醫藥組合物中之平均重組AAV直徑高至少2倍、高至少3倍、高至少4倍、高至少5倍、高至少6倍、高至少7倍、高至少8倍、高至少9倍、高至少10倍、高至少15倍、高至少20倍、高至少50倍、高至少100倍、高至少5%、高至少10%、高至少15%、高至少20%、高至少25%、高至少30%、高至少35%、至少40%、高至少45%、高至少50%、高至少55%、高至少60%、高至少65%、高至少70%、高至少75%、高至少80%、高至少85%、高至少90%、高至少95%、高至少100%、高至少150%或高至少200%、高至少250%或至少300%、高至少400%或高至少500%。 24. 段落6及12至23中任一段之醫藥組合物，其中在脈絡膜上投與該醫藥組合物後之該圓周擴散小至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍、至少5%、至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少100%、至少150%或至少200%、至少250%或至少300%、至少400%或至少500%。 25. 段落5及12至24中任一段之醫藥組合物，其中在脈絡膜上投與該醫藥組合物後之清除時間多至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍、至少5%、至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少100%、至少150%或至少200%、至少250%或至少300%、至少400%或至少500%。 26. 段落1至25中任一段之醫藥組合物，其中在脈絡膜上投與該醫藥組合物後之清除時間為約30分鐘至約20小時、約2小時至約20小時、約30分鐘至約24小時、約1小時至約2小時、約30分鐘至約90天、約30分鐘至約60天、約30分鐘至約30天、約30分鐘至約21天、約30分鐘至約14天、約30分鐘至約7天、約30分鐘至約3天、約30分鐘至約2天、約30分鐘至約1天、約4小時至約90天、約4小時至約60天、約4小時至約30天、約4小時至約21天、約4小時至約14天、約4小時至約7天、約4小時至約3天、約4小時至約2天、約4小時至約1天、約4小時至約8小時、約4小時至約16小時、約4小時至約20小時、約1天至約90天、約1天至約60天、約1天至約30天、約1天至約21天、約1天至約14天、約1天至約7天、約1天至約3天、約2天至約90天、約3天至約90天、約3天至約60天、約3天至約30天、約3天至約21天、約3天至約14天或約3天至約7天。 27. 段落1至26中任一段之醫藥組合物，其中在脈絡膜上投與該醫藥組合物後之清除時間不早於約30分鐘、1小時、2小時、3小時、4小時、5小時、6小時、7小時、8小時、9小時、10小時、12小時、14小時、16小時、18小時、20小時、22小時、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、23天、25天、27天、30天、35天、40天、50天、55天、60天、65天、70天、75天、80天、85天、90天、95天、100天、120天、140天、160天、180天、200天、220天、240天、260天、280天、300天、320天、340天、360天、380天或400天。 28. 段落5至27中任一段之醫藥組合物，其中在脈絡膜上投與該參考醫藥組合物後之清除時間為至多約1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天或14天。 29. 段落1至28中任一段之醫藥組合物，其中清除時間係自該SCS或自該眼睛之清除時間。 30. 段落7及12至29中任一段之醫藥組合物，其中在脈絡膜上投與該醫藥組合物後在該注射部位之該厚度高至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍、至少5%、至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少100%、至少150%或至少200%、至少250%或至少300%、至少400%或至少500%。 31. 段落1至30中任一段之醫藥組合物，其中在脈絡膜上投與該醫藥組合物後在該注射部位之該厚度為約500 μm至約3.0 mm、750 μm至約2.8 mm、約750 μm至約2.5 mm、約750 μm至約2 mm或約1 mm至約2 mm。 32. 段落1至31中任一段之醫藥組合物，其中在脈絡膜上投與該醫藥組合物後在該注射部位之該厚度為至少約50 μm、100 μm、200 μm、300 μm、400 μm、500 μm、600 μm、700 μm、800 μm、900 μm、1000 μm、1 mm、1.5 mm、2 mm、2.5 mm、3 mm、3.5 mm、4 mm、4.5 mm、5 mm、5.5 mm、6 mm、6.5 mm、7 mm、7.5 mm、8 mm、8.5 mm、9 mm、9.5 mm或10 mm。 33. 段落7及12至32中任一段之醫藥組合物，其中在脈絡膜上投與該參考醫藥組合物後在該注射部位之該厚度為至多約1 nm、5 nm、10 nm、25 nm、50 nm、100 nm、200 nm、300 nm、400 nm、500 nm、600 nm、700 nm、800 nm、900 nm、1 μm、5 μm、10 μm、15 μm、20 μm、25 μm、30 μm、35 μm、40 μm、50 μm、100 μm、200 μm、300 μm、400 μm、500 μm、600 μm、700 μm、800 μm、900 μm或1000 μm。 34. 段落1至33中任一段之醫藥組合物，其中在脈絡膜上投與該醫藥組合物後在該注射部位之該厚度持續至少兩小時、至少三小時、至少四小時、至少五小時、至少六小時、至少七小時、至少八小時、至少十小時、至少十二小時、至少十八小時、至少二十四小時、至少兩天、至少三天、至少五天、至少十天、至少二十一天、至少一個月、至少六週、至少兩個月、至少三個月、至少4個月、至少5個月、至少6個月、至少9個月、至少一年、至少三年或至少五年。 35. 段落9及12至34中任一段之醫藥組合物，其中在脈絡膜上投與該醫藥組合物後該眼睛中該轉殖基因之濃度高至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍、至少5%、至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少100%、至少150%或至少200%、至少250%或至少300%、至少400%或至少500%。 36. 段落8及12至35中任一段之醫藥組合物，其中在脈絡膜上投與該醫藥組合物後的該更長時段長至少30分鐘、1小時、2小時、3小時、4小時、5小時、6小時、7小時、8小時、9小時、10小時、12小時、14小時、16小時、18小時、20小時、22小時、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、23天、25天、27天、30天、35天、40天、50天、55天、60天、65天、70天、75天、80天、85天、90天、95天、100天、120天、140天、160天、180天、200天、220天、240天、260天、280天、300天、320天、340天、360天、380天或400天。 37. 段落1至36中任一段之醫藥組合物，其中在脈絡膜上投與該醫藥組合物後在該眼睛中偵測到該轉殖基因達至少約30分鐘、1小時、2小時、3小時、4小時、5小時、6小時、7小時、8小時、9小時、10小時、12小時、14小時、16小時、18小時、20小時、22小時、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、23天、25天、27天、30天、35天、40天、50天、55天、60天、65天、70天、75天、80天、85天、90天、95天、100天、120天、140天、160天、180天、200天、220天、240天、260天、280天、300天、320天、340天、360天、380天或400天。 38. 段落5至37中任一段之醫藥組合物，其中在脈絡膜上投與該參考醫藥組合物後在該眼睛中偵測到該轉殖基因達至多約30分鐘、1小時、2小時、3小時、4小時、5小時、6小時、7小時、8小時、9小時、10小時、12小時、14小時、16小時、18小時、20小時、22小時、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、23天、25天、27天、30天、35天、40天、50天、55天、60天、65天、70天、75天、80天、85天、90天、95天或100天、120天、140天、160天、180天、200天、220天、240天、260天、280天、300天、320天、340天、360天、380天或400天後。 39. 段落13之醫藥組合物，其中在脈絡膜上投與該醫藥組合物後VEGF誘發之血管舒張及/或血管滲漏之水準等於在脈絡膜上投與該參考醫藥組合物後VEGF誘發之血管舒張及/或血管滲漏之水準或與之相比降低。 40. 段落11及13至39中任一段之醫藥組合物，其中在脈絡膜上投與該醫藥組合物後VEGF誘發之血管舒張及/或血管滲漏之該水準降低至少約2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍、至少5%、至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少100%、至少150%或至少200%、至少250%或至少300%、至少400%或至少500%。 41. 段落10及12至40中任一段之醫藥組合物，其中在脈絡膜上投與該醫藥組合物後在該注射部位之轉導率高至少約2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍、至少5%、至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少100%、至少150%或至少200%、至少250%或至少300%、至少400%或至少500%。 42. 段落1至41中任一段之醫藥組合物，其中該醫藥組合物中之重組AAV穩定性係該參考醫藥組合物中之重組AAV穩定性的至少約50%。 43. 段落42之醫藥組合物，其中重組AAV穩定性係藉由該重組AAV之感染力確定。 44. 段落42之醫藥組合物，其中重組AAV穩定性係藉由該重組AAV釋放之游離DNA之水準確定。 45. 段落44之醫藥組合物，其中與該參考醫藥組合物中之游離DNA之水準相比，該醫藥組合物包含多至少約50%、多約25%、多約15%、多約10%、多約5%、多約4%、多約3%、多約2%、多約1%、多約0%、少約1%、少約2%、少約5%、少約7%、少約10%、多約2倍、多約3倍、少約2倍、少約3倍之游離DNA。 46. 段落43之醫藥組合物，其中該醫藥組合物中之該重組AAV之感染力比該參考醫藥組合物中之該重組AAV之該感染力低約50%，約相同，或高至少約2%、5%、7%、10%、12%、15%、17%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、100%、2倍、3倍、5倍、10倍、100倍或1000倍。 47. 段落1至46中任一段之醫藥組合物，其中該轉殖基因係適合治療所關注之疾病，或以其他方式改善所關注之疾病、預防所關注之疾病或減緩所關注之疾病之進展的轉殖基因。 48. 段落1至47中任一段之醫藥組合物，其中該人類個體經診斷患有nAMD (濕性AMD)、乾性AMD、視網膜靜脈阻塞(RVO)、糖尿病性黃斑水腫(DME)或糖尿病性視網膜病變(DR)或巴登氏病。 49. 段落1至47中任一段之醫藥組合物，其中該人類個體經診斷患有IVA型黏多醣病(MPS IVA)、I型黏多醣病(MPS I)、II型黏多醣病(MPS II)、家族性高膽固醇血症(FH)、同合子型家族性高膽固醇血症(HoFH)、冠狀動脈疾病、腦血管疾病、杜顯氏肌肉失養症、肢帶肌肉失養症、貝克爾肌肉失養症及散發性包涵體肌炎或激肽釋放素相關疾病。 50. 段落1至2、5至10及12至49中任一段之醫藥組合物，其中該AAV編碼棕櫚醯-蛋白硫酯酶1 (PPT1)或三肽基-肽酶1 (TPP1)。 51. 段落5至50中任一段之醫藥組合物，其中該等重組AAV基因體複本之量係基於載體基因體濃度。 52. 段落5至50中任一段之醫藥組合物，其中該等重組AAV基因體複本之量係基於每次投與之基因體複本。 53. 段落5至50中任一段之醫藥組合物，其中該等重組AAV基因體複本之量係基於向該人類個體投與之總基因體複本。 54. 段落52之醫藥組合物，其中每次投與之該等基因體複本係每次脈絡膜上投與之該重組AAV之基因體複本。 55. 段落53之醫藥組合物，其中所投與之該等總基因體複本係經脈絡膜上投與之該重組AAV之總基因體複本。 56. 段落51之醫藥組合物，其中該載體基因體濃度(VGC)為約3×10 9GC/mL、約1×10 10GC/mL、約1.2×10 10GC/mL、約1.6×10 10GC/mL、約4×10 10GC/mL、約6×10 10GC/mL、約2×10 11GC/mL、約2.4×10 11GC/mL、約2.5×10 11GC/mL、約3×10 11GC/mL、約6.2×10 11GC/mL、約1×10 12GC/mL、約2.5×10 12GC/mL、約3×10 12GC/mL、約5×10 12GC/mL、約1.5×10 13GC/mL、約2×10 13GC/mL或約3×10 13GC/mL。 57. 段落53及55中任一段之醫藥組合物，其中所投與之該總基因體複本為約6.0×10 10個基因體複本、約1.6×10 11個基因體複本、約2.5×10 11個基因體複本、約5.0×10 11個基因體複本、約3×10 12個基因體複本、約1.0×10 12個基因體複本、約1.5×10 12個基因體複本、約2.5×10 12個基因體複本或約3.0×10 13個基因體複本。 58. 段落52及54中任一段之醫藥組合物，其中每次投與之該基因體複本為約6.0×10 10個基因體複本、約1.6×10 11個基因體複本、約2.5×10 11個基因體複本、約5.0×10 11個基因體複本、約3×10 12個基因體複本、約1.0×10 12個基因體複本、約1.5×10 12個基因體複本、約2.5×10 12個基因體複本或約3.0×10 13個基因體複本。 59. 段落1至58中任一段之醫藥組合物，其中該醫藥組合物經投與一次、兩次、三次、四次、五次、六次、七次、八次、九次、十次、十五次、二十次、二十五次或三十次。 60. 段落5至59中任一段之醫藥組合物，其中該參考醫藥組合物經投與一次、兩次、三次、四次、五次、六次、七次、八次、九次、十次、十五次、二十次、二十五次或三十次。 61. 段落1至60中任一段之醫藥組合物，其中一天一次、一天兩次、一天三次、一天四次、一天五次、一天六次或一天七次投與該醫藥組合物。 62. 段落5至60中任一段之醫藥組合物，其中一天一次、一天兩次、一天三次、一天四次、一天五次、一天六次或一天七次投與該參考醫藥組合物。 63. 段落1至62中任一段之醫藥組合物，其中該參考醫藥組合物包含DPBS及蔗糖。 64. 一種製備醫藥組合物之方法，其包括： (i) 製備包含磷酸鹽緩衝鹽水、蔗糖及包含編碼轉殖基因之表現卡匣之重組腺相關病毒(AAV)載體的組合物；及 (ii) 將包含磷酸鹽緩衝鹽水及蔗糖之溶液混合至該組合物， 其中該醫藥組合物與該組合物相比具有較低之離子強度及/或較高水準之聚集重組AAV。 65. 一種製備醫藥組合物之方法，其包括將包含磷酸鹽緩衝鹽水及蔗糖之溶液混合至組合物，其中該組合物包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之重組腺相關病毒(AAV)載體，且其中該醫藥組合物與該組合物相比具有較低之離子強度及/或較高水準之聚集重組AAV。 66. 一種套組，其包含： (i) 包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之重組腺相關病毒(AAV)載體的組合物；及 (ii) 包含磷酸鹽緩衝鹽水及蔗糖之溶液。 67. 段落66之套組，其中該套組進一步包含關於該組合物與該溶液混合之說明書。 68. 段落65之方法或段落66之套組，其中該組合物包含磷酸鹽緩衝鹽水及蔗糖。 69. 段落64及68中任一段之方法，或段落66及68中任一段之套組，其中該組合物包含4%蔗糖。 70. 段落64、65、68及69中任一段之方法，或段落66至69中任一段之套組，其中該溶液包含10%蔗糖。 71. 段落64、65及68至70中任一段之方法，或段落1至63中任一段之醫藥組合物，其中該醫藥組合物具有約或至多約135 mM之離子強度。 72. 段落64、65及68至71中任一段之方法，或段落1至63中任一段之醫藥組合物，其中該醫藥組合物具有約或至多約40 mM之離子強度。 73. 段落64、65及68至72中任一段之方法，或段落1至63中任一段之醫藥組合物，其中該醫藥組合物具有約或至多約20 mM之離子強度。 74. 段落64、65及68至73中任一段之方法，或段落1至63中任一段之醫藥組合物，其中該醫藥組合物具有與該組合物實質上相同之滲壓性或滲透壓。 75. 段落64、65及68至74中任一段之方法，或段落1至63中任一段之醫藥組合物，其中在該醫藥組合物投與至人類個體眼睛之脈絡膜上腔後該醫藥組合物中之該聚集重組AAV中的至少一些崩解。 76. 段落64、65及68至75中任一段之方法，或段落1至63中任一段之醫藥組合物，其中在脈絡膜上投與該醫藥組合物後該重組AAV之聚集倒轉成未聚集之AAV或單體。 77. 段落64、65及68至76中任一段之方法，或段落66至69中任一段之套組，其中該組合物包含氯化鉀、磷酸二氫鉀、氯化鈉、無水磷酸氫二鈉、蔗糖及視情況選用之界面活性劑。 78. 段落64、65及68至77中任一段之方法，或段落66至69及77中任一段之套組，其中該組合物包含經改良之杜貝爾寇磷酸鹽緩衝鹽水溶液及視情況選用之界面活性劑。 79. 段落64、65及68至78中任一段之方法，或段落66至69及77至78中任一段之套組，其中該組合物包含0.2 mg/mL氯化鉀、0.2 mg/mL磷酸二氫鉀、5.84 mg/mL氯化鈉、1.15 mg/mL無水磷酸氫二鈉、40.0 mg/mL (4% w/v)蔗糖及界面活性劑。 80. 段落64、65及68至79中任一段之方法，或段落66至69及77至79中任一段之套組，其中該溶液包含磷酸鹽緩衝之氯化鈉及蔗糖。 81. 段落67之套組，其中該等說明書包含關於該溶液與該組合物混合以獲得醫藥組合物之說明書。 82. 段落64、65及68至80中任一段之方法，或段落81之套組，其中該將該溶液與該組合物混合使該組合物稀釋約或至少約2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍或10倍。 83. 段落64、65、68至80及82中任一段之方法，或段落81至82中任一段之套組，其中該將該溶液與該組合物混合在該醫藥組合物投與至人類個體眼睛之脈絡膜上腔的同一天進行。 84. 段落64、65、68至80及82至83中任一段之方法，或段落81至83中任一段之套組，其中該將該溶液與該組合物混合在該醫藥組合物投與至人類個體眼睛之脈絡膜上腔的24小時內進行。 85. 段落64、65、68至80及82至84中任一段之方法，或段落81至84中任一段之套組，或段落1至63及71至76中任一段之醫藥組合物，其中該醫藥組合物在投與至人類個體之前儲存。 86. 段落64、65、68至80及82至85中任一段之方法，或段落81至85中任一段之套組，或段落1至63、71至76及85中任一段之醫藥組合物，其中該醫藥組合物儲存在約室溫、20℃、4℃或-80℃下。 87. 段落64、65、68至80及82至86中任一段之方法，或段落81至86中任一段之套組，或段落1至63、71至76及85至86中任一段之醫藥組合物，其中該醫藥組合物包含約1.0 × 10 12至約3.0 × 10 12基因體複本之該重組AAV。 88. 段落64、65、68至80及82至87中任一段之方法，或段落81至87中任一段之套組，其中該重組AAV包含來自選自以下之一或多種腺相關病毒血清型之組分：AAV1、AAV2、AAV2tYF、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10、AAV11、AAVrh10、AAV.rh20、AAV.rh39、AAV.Rh74、AAV.RHM4-1、AAV.hu37、AAV.Anc80、AAV.Anc80L65、rAAV.7m8、AAV.PHP.B、AAV.PHP.eB、AAV2.5、AAV2tYF、AAV3B、AAV.LK03、AAV.HSC1、AAV.HSC2、AAV.HSC3、AAV.HSC4、AAV.HSC5、AAV.HSC6、AAV.HSC7、AAV.HSC8、AAV.HSC9、AAV.HSC10、AAV.HSC11、AAV.HSC12、AAV.HSC13、AAV.HSC14、AAV.HSC15及AAV.HSC16。 89. 段落64、65、68至80及82至88中任一段之方法，或段落81至88中任一段之套組，或段落1至63、71至76及85至87中任一段之醫藥組合物，其中該重組AAV包含來自AAV8之組分且該醫藥組合物具有介於約30 mM至約60 mM之間的離子強度。 90. 段落64、65、68至80及82至88中任一段之方法，或段落81至88中任一段之套組，或段落1至63、71至76及85至87中任一段之醫藥組合物，其中該重組AAV包含來自AAV9之組分且該醫藥組合物具有介於約15 mM至約30 mM之間的離子強度。 91. 段落64、65、68至80及82至88中任一段之方法，或段落81至88中任一段之套組，或段落1至63、71至76及85至87中任一段之醫藥組合物，其中該重組AAV包含來自AAV2之組分且該醫藥組合物具有介於約100 mM至約200 mM之間的離子強度。 92. 段落1至63、71-76及85至91中任一段之醫藥組合物，其中該醫藥組合物包含經改良之杜貝爾寇磷酸鹽緩衝鹽水溶液及視情況選用之界面活性劑。 93. 段落1至63、71-76及85至92中任一段之醫藥組合物，其中該醫藥組合物包含氯化鉀、磷酸二氫鉀、氯化鈉、無水磷酸氫二鈉、蔗糖及視情況選用之界面活性劑。 94. 段落1至63、71至76及85至93中任一段之醫藥組合物，其中該醫藥組合物包含0.2 mg/mL氯化鉀、0.2 mg/mL磷酸二氫鉀、5.84 mg/mL氯化鈉、1.15 mg/mL無水磷酸氫二鈉、40.0 mg/mL (4% w/v)蔗糖及視情況用之界面活性劑。
優先權
本申請案主張於2020年10月7日申請之美國序列號63/088,828及於2021年2月9日申請之美國序列號63/147,538的優先權權益，各以引用之方式整體併入本文中。 關於以電子方式提交之序列表的參考
本申請案以引用之方式併入序列表，該序列表係以標題為「12656-142-036_Sequence_Listing.txt」之文本文件形式與本申請案一起提交，該文本文件於2021年10月1日創建且大小為107,057位元組。
本文提供適合投與至個體眼睛脈絡膜上腔(SCS)之醫藥組合物，該等醫藥組合物包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之重組腺相關病毒(AAV)載體。個體可為經診斷患有部分4.5中描述之多種疾病中之一種的個體。AAV載體描述於部分4.4中且此類載體之劑量描述於部分4.3中。在一些實施例中，部分4.1中提供之醫藥組合物經調配以使得其具有部分4.2中之描述之一或多種功能特性。在某些實施例中，本文提供之醫藥組合物具有多個優點，例如清除時間增加或減慢(部分4.2.1)；圓周擴散減少(部分4.2.2)；增加SCS厚度(部分4.2.3)；血管舒張及/或血管滲漏減少(部分4.2.4)；增加AAV水準及注射部位之轉導率(感染率) (部分4.2.5)；及在SCS中投與醫藥組合物後轉殖基因之濃度增加。不受理論束縛，可使用如部分4.1中揭示之包含聚集病毒載體之調配物來實現該等功能特性。本文亦提供可用於相關研究之分析法(部分4.6)。 4.1 醫藥組合物之調配
本揭示案提供一種適合脈絡膜上投與之醫藥組合物，其包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之重組腺相關病毒(AAV)載體。在一些實施例中，使用具有不同AAV聚集水準之若干種醫藥組合物(例如，經稀釋之調配物或較低離子強度之調配物)來投與編碼轉殖基因之AAV。
在一些實施例中，醫藥組合物比可比較之醫藥組合物(參考醫藥組合物) AAV聚集水準高。在一些實施例中，醫藥組合物及參考醫藥組合物包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之重組腺相關病毒(AAV)載體。在一些實施例中，醫藥組合物及參考醫藥組合物具有相同載體基因體濃度。在一些實施例中，醫藥組合物及參考醫藥組合物具有相同量之基因體複本。在一些實施例中，醫藥組合物及參考醫藥組合物各自使用相同量之基因體複本投與至個體。在一些實施例中，醫藥組合物之聚集病毒載體百分比高於對照物之病毒載體聚集百分比。在一些實施例中，醫藥組合物之聚集病毒載體百分比高於通常用於視網膜下注射之溶液之聚集病毒載體百分比。在一些實施例中，參考醫藥組合物之病毒載體聚集少於醫藥組合物。在一些實施例中，參考醫藥組合物具有與醫藥組合物相同或相似之病毒載體聚集百分比。在一些實施例中，參考醫藥組合物為對照溶液(例如，DPBS、PBS、水或HBSS)。在一些實施例中，參考醫藥組合物包含對照溶液(例如，DPBS、PBS、水或HBSS)中之AAV。在一些實施例中，參考醫藥組合物包含蔗糖。在一些實施例中，參考醫藥組合物為常用於AAV視網膜下注射之醫藥組合物。
在一些實施例中，包含AAV之醫藥組合物經稀釋以便醫藥組合物中之AAV形成AAV之群集或聚集。在一些實施例中，醫藥組合物用適合提供含有較低離子強度及鹽含量之AAV溶液的任何溶液稀釋。在一些實施例中，醫藥組合物用適合降低醫藥組合物之離子強度的任何溶液稀釋。在一些實施例中，醫藥組合物用具有降低之離子型賦形劑氯化鈉以誘導AAV群集之溶液稀釋。在一些實施例中，醫藥組合物用含有降低之離子型賦形劑及/或增加之非離子型賦形劑之溶液稀釋。在一些實施例中，醫藥組合物用含有降低之離子型賦形劑氯化鈉及增加之非離子型賦形劑蔗糖之溶液稀釋。在一些實施例中，醫藥組合物用磷酸鹽緩衝之10%蔗糖溶液稀釋。在一些實施例中，醫藥組合物用包含變化非離子型賦形劑水準(例如，4%蔗糖、6%蔗糖、8%蔗糖、10%蔗糖、15%蔗糖或20%蔗糖)之溶液稀釋。在一些實施例中，醫藥組合物用包含4%蔗糖、6%蔗糖或10%蔗糖之溶液稀釋。在一些實施例中，醫藥組合物用包含變化離子型賦形劑水準之溶液(例如，含有與醫藥組合物中之氯化鈉濃度相比降低之氯化鈉濃度的溶液)稀釋。在一些實施例中，醫藥組合物在稀釋前後具有相同滲壓性/滲透壓。在一些實施例中，醫藥組合物具有與參考醫藥組合物或對照物相同之滲壓性/滲透壓。在一些實施例中，醫藥組合物具有比參考醫藥組合物或對照物高的滲壓性/滲透壓。在一些實施例中，醫藥組合物具有比參考醫藥組合物或對照物低的滲壓性/滲透壓。在一些實施例中，醫藥組合物具有等於或大於240 mOsm/kg之滲壓性/滲透壓。在一些實施例中，醫藥組合物或參考醫藥組合物具有至少240 mOsm/kg之滲壓性/滲透壓。
在一些實施例中，醫藥組合物(例如，經稀釋之調配物或較低離子強度調配物)在投與(例如，脈絡膜上投與)前稀釋。在一些實施例中，醫藥組合物在與投與(例如，脈絡膜上投與)相同之日稀釋。在一些實施例中，醫藥組合物在投與(例如，脈絡膜上投與)前約20小時或約24小時稀釋。在一些實施例中，醫藥組合物在投與前約5分鐘、10分鐘、15分鐘、30分鐘、45分鐘、1小時、1.5小時、2小時、2.5小時、3小時、3.5小時、4小時、4.5小時、5小時、5.5小時、6小時、6.5小時、7小時、7.5小時、8小時、8.5小時、9小時、9.5小時、10小時、10.5小時、11小時、12小時、13小時、14小時、15小時、16小時、17小時、18小時、19小時、20小時、21小時、22小時、23小時、24小時、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、兩週、三週、四週、兩個月、三個月、四個月、五個月、六個月、七個月、八個月、九個月、十個月、十一個月、十二個月、兩年、三年、四年、五年、十年、十五年、二十年(或更久)稀釋。在一些實施例中，醫藥組合物在投與前至多約1小時、2小時、3小時、4小時、5小時、6小時、7小時、8小時、9小時、10小時、11小時、12小時、13小時、14小時、15小時、16小時、17小時、18小時、19小時、20小時、21小時、22小時、23小時、24小時、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、兩週、三週、四週、兩個月、三個月、四個月、五個月、六個月、七個月、八個月、九個月、十個月、十一個月、十二個月、兩年、三年、四年、五年、十年、十五年、二十年(或更久)稀釋。
在一些實施例中，醫藥組合物經稀釋且保持在室溫下(例如，在稀釋之後或在投與之前)。在一些實施例中，醫藥組合物經稀釋且在稀釋之後保持在約20℃下。在一些實施例中，醫藥組合物經稀釋且在稀釋之後保持在約25℃下。在一些實施例中，醫藥組合物經稀釋且在稀釋之後保持在4℃下。在一些實施例中，醫藥組合物經稀釋且在稀釋之後保持在-20℃下。在一些實施例中，醫藥組合物經稀釋且在稀釋之後保持在-80℃下。在一些實施例中，醫藥組合物經稀釋且在稀釋之後速凍。在一些實施例中，未經稀釋之醫藥組合物、參考醫藥組合物、經稀釋之醫藥組合物及/或經稀釋之參考醫藥組合物適合長期儲存(例如，在適當溫度下)。在一些實施例中，長期儲存為約或至少約1個月、2個月、3個月、6個月、9個月、1年、2年、3年、4年、5年或長於5年。
在一些實施例中，醫藥組合物(例如，經稀釋之醫藥組合物)或經稀釋之參考醫藥組合物之離子強度(或含有之離子型賦形劑濃度)為約或至多約5 mM、10 mM、15 mM、20 mM、25 mM、30 mM、35 mM、40 mM、45 mM、50 mM、55 mM、60 mM、65 mM、70 mM、75 mM、80 mM、85 mM、90 mM、95 mM、100 mM、105 mM、110 mM、115 mM、120 mM、125 mM、130 mM、135 mM、140 mM、145 mM、150 mM、155 mM、160 mM、165 mM、170 mM、175 mM、180 mM、185 mM、190 mM、195 mM、200 mM、205 mM、210 mM、215 mM、220 mM、225 mM、230 mM、235 mM、240 mM、245 mM、250 mM、255 mM、260 mM、265 mM、270 mM、275 mM、280 mM、285 mM、290 mM、295 mM、300 mM、350 mM、400 mM、450 mM、500 mM、550 mM、600 mM、650 mM、700 mM、800 mM、900 mM或至多約1000 mM。在一些實施例中，醫藥組合物(例如，經稀釋之醫藥組合物)或經稀釋之參考醫藥組合物之離子強度(或含有之離子型賦形劑濃度)為約或至多約15 mM、20 mM、40 mM、60 mM、80 mM、100 mM、130 mM、150 mM、175 mM、200 mM或300 mM。在一些實施例中，醫藥組合物(例如，經稀釋之醫藥組合物)或經稀釋之參考醫藥組合物之離子強度(或含有之離子型賦形劑濃度)在約5 mM至約140 mM、約15 mM至約150 mM、約5 mM至約65 mM、約5 mM至約200 mM、約15 mM至約134 mM、約10 mM至約200 mM、約20 mM至約45 mM、約15 mM至約300 mM、約5 mM至約600 mM、約15 mM至約600 mM、約10 mM至約550 mM或約15 mM至約70 mM範圍內。在一些實施例中，或經稀釋之參考醫藥組合物之離子強度(或含有之離子型賦形劑濃度)為至多約40 mM。在一些實施例中，醫藥組合物(例如，經稀釋之醫藥組合物)或經稀釋之參考醫藥組合物之離子強度(或含有之離子型賦形劑濃度)為至多約20 mM。在一些實施例中，醫藥組合物(例如，經稀釋之醫藥組合物)或經稀釋之參考醫藥組合物之離子強度(或含有之離子型賦形劑濃度)為至多約100 mM。在一些實施例中，醫藥組合物(例如，經稀釋之醫藥組合物)或經稀釋之參考醫藥組合物之離子強度(或含有之離子型賦形劑濃度)為至多約200 mM。在一些實施例中，參考醫藥組合物或未經稀釋之醫藥組合物之離子強度為至少約或約80 mM、100 mM、120 mM、150 mM、200 mM或高於200 mM。
在一些實施例中，醫藥組合物(例如，經稀釋之醫藥組合物)具有比稀釋之前未經稀釋之醫藥組合物低的離子強度。在一些實施例中，醫藥組合物稀釋約或至多約兩倍、三倍、四倍、五倍、六倍、七倍、八倍、九倍、十倍、十五倍、二十倍、三十倍、四十倍、五十倍或一百倍。在一些實施例中，醫藥組合物(例如，經稀釋之醫藥組合物)或經稀釋之參考醫藥組合物的離子強度低於誘導病毒載體群集所需之離子強度(例如，群集閾值)。在一些實施例中，醫藥組合物(例如，經稀釋之醫藥組合物)或經稀釋之參考醫藥組合物的離子強度低於AAV群集之離子強度。在一些實施例中，醫藥組合物(例如，經稀釋之醫藥組合物)或經稀釋之參考醫藥組合物的離子強度比AAV群集之離子強度低兩倍。在一些實施例中，測定病毒載體之群集閾值。在一些實施例中，群集閾值藉由部分4.6中揭示之任何合適方法或任何合適分析法來測定。在一些實施例中，AAV8之群集閾值與約60 mM之離子強度相關。在一些實施例中，醫藥組合物(例如，經稀釋之醫藥組合物)之離子強度為群集閾值之離子強度的約一半(例如，30 mM)。在一些實施例中，醫藥組合物(例如，經稀釋之醫藥組合物)之離子強度為約或至多約30 mM。在一些實施例中，醫藥組合物(例如，經稀釋之醫藥組合物)之離子強度為群集閾值之離子強度的約三分之二(例如，40 mM)。在一些實施例中，醫藥組合物(例如，經稀釋之醫藥組合物)之離子強度為約或至多約40 mM。在一些實施例中，AAV9之群集閾值與約30 mM之離子強度相關。在一些實施例中，AAV2之群集閾值與約200 mM之離子強度相關。在一些實施例中，醫藥組合物(例如，經稀釋之醫藥組合物)之離子強度為群集閾值之離子強度的約一半(例如，15 mM或100 mM)。在一些實施例中，醫藥組合物(例如，經稀釋之醫藥組合物)之離子強度為群集閾值之離子強度的約三分之二(例如，20 mM或134 mM)。在一些實施例中，醫藥組合物(例如，經稀釋之醫藥組合物)之離子強度為約或至多約20 mM。在一些實施例中，醫藥組合物(例如，經稀釋之醫藥組合物)之離子強度為約或至多約134 mM。在一些實施例中，醫藥組合物(例如，經稀釋之醫藥組合物)之離子強度為群集閾值之離子強度的約四分之三。在一些實施例中，醫藥組合物(例如，經稀釋之醫藥組合物)之離子強度為群集閾值之離子強度的約五分之二。
在一些實施例中，醫藥組合物(例如，經稀釋之醫藥組合物)或經稀釋之參考醫藥組合物之離子強度為群集閾值之離子強度的約或至多2%、5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%或95%。
在一些實施例中，醫藥組合物(例如，經稀釋之醫藥組合物)或經稀釋之參考醫藥組合物之鹽濃度(例如氯化鈉)為約或至多約5 mM、10 mM、15 mM、20 mM、25 mM、30 mM、35 mM、40 mM、45 mM、50 mM、55 mM、60 mM、65 mM、70 mM、75 mM、80 mM、85 mM、90 mM、95 mM、100 mM、105 mM、110 mM、115 mM、120 mM、125 mM、130 mM、135 mM、140 mM、145 mM、150 mM、155 mM、160 mM、165 mM、170 mM、175 mM、180 mM、185 mM、190 mM、195 mM、200 mM、205 mM、210 mM、215 mM、220 mM、225 mM、230 mM、235 mM、240 mM、245 mM、250 mM、255 mM、260 mM、265 mM、270 mM、275 mM、280 mM、285 mM、290 mM、295 mM、300 mM、350 mM、400 mM、450 mM、500 mM、550 mM、600 mM、650 mM、700 mM、800 mM、900 mM或至多約1000 mM。在一些實施例中，醫藥組合物(例如，經稀釋之醫藥組合物)或經稀釋之參考醫藥組合物之鹽濃度(例如氯化鈉)為約或至多約5 mM、10 mM、15 mM、20 mM、25 mM、30 mM、35 mM、40 mM、45 mM、50 mM、55 mM、60 mM、65 mM、70 mM、75 mM、80 mM、85 mM、90 mM、95 mM、100 mM、200 mM或300 mM。在一些實施例中，醫藥組合物(例如，經稀釋之醫藥組合物)或經稀釋之參考醫藥組合物之鹽濃度(例如氯化鈉)為約或至多約10 mM、20 mM、40 mM、60 mM、100 mM或150 mM。在一些實施例中，參考醫藥組合物或未經稀釋之醫藥組合物之鹽(例如氯化鈉)濃度為約或至少約80 mM、100 mM、120 mM 150 mM、175 mM、200 mM或更高。
在一些實施例中，醫藥組合物(例如，經稀釋之醫藥組合物)或經稀釋之參考醫藥組合物之滲壓性/滲透壓為至少約240 mOsm/kg。在一些實施例中，醫藥組合物(例如，經稀釋之醫藥組合物)或經稀釋之參考醫藥組合物之滲壓性/滲透壓為至少約100 mOsm/kg、150 mOsm/kg、160 mOsm/kg、170 mOsm/kg、180 mOsm/kg、190 mOsm/kg、200 mOsm/kg、210 mOsm/kg、220 mOsm/kg、230 mOsm/kg、240 mOsm/kg、250 mOsm/kg、260 mOsm/kg、270 mOsm/kg、280 mOsm/kg、290 mOsm/kg、300 mOsm/kg、310 mOsm/kg、320 mOsm/kg、340 mOsm/kg、350 mOsm/kg、360 mOsm/kg、370 mOsm/kg、380 mOsm/kg、390 mOsm/kg、400 mOsm/kg、450 mOsm/kg、500 mOsm/kg、550 mOsm/kg、600 mOsm/kg、650 mOsm/kg或700 mOsm/kg。在一些實施例中，醫藥組合物(例如，經稀釋之醫藥組合物)或經稀釋之參考醫藥組合物之滲壓性/滲透壓為至少約240 mOsm/kg至約600 mOsm/kg、240 mOsm/kg至約350 mOsm/kg、至少約220 mOsm/kg至約400 mOsm/kg、或至少約200 mOsm/kg至約500 mOsm/kg。在一些實施例中，醫藥組合物(例如，經稀釋之醫藥組合物)或經稀釋之參考醫藥組合物之滲壓性/滲透壓介於約240 mOsm/kg至約600 mOsm/kg之間。
在一些實施例中，醫藥組合物(例如，經稀釋之醫藥組合物)或經稀釋之參考醫藥組合物包含至少一些聚集之病毒載體。在一些實施例中，醫藥組合物(例如，經稀釋之醫藥組合物)或經稀釋之參考醫藥組合物包含約或至少約1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%、21%、22%、23%、24%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%或95%聚集之病毒載體(例如，聚集AAV)。在一些實施例中，醫藥組合物(例如，經稀釋之醫藥組合物)或經稀釋之參考醫藥組合物包含約1%至約20%、1%至約10%、1%至約50%、3%至約95%、3%至約90%、3%至約80%、3%至約70%、3%至約60%、3%至約50%、3%至約40%、3%至約30%、3%至約20%、3%至約15%、3%至約10%、5%至約95%、5%至約90%、5%至約80%、5%至約70%、5%至約60%、5%至約50%、5%至約40%、5%至約30%、5%至約20%、5%至約15%、5%至約10%、10%至約95%、10%至約90%、10%至約80%、10%至約70%、10%至約60%、10%至約50%、10%至約40%、10%至約30%、10%至約20%、10%至約15%、15%至約95%、15%至約90%、15%至約80%、15%至約70%、15%至約60%、15%至約50%、15%至約40%、15%至約30%、15%至約20%、20%至約95%、20%至約90%、20%至約80%、20%至約70%、20%至約60%、20%至約50%、20%至約40%、20%至約30%、30%至約95%、30%至約90%、30%至約80%、30%至約70%、30%至約60%、30%至約50%、30%至約40%、40%至約95%、40%至約90%、40%至約80%、40%至約70%、40%至約60%或40%至約50%聚集之病毒載體(例如，聚集AAV)。
在一些實施例中，醫藥組合物(例如，經稀釋之醫藥組合物)或經稀釋之參考醫藥組合物的聚集之病毒載體(例如，聚集AAV)比對照溶液或在稀釋之前的醫藥組合物或在稀釋之前的參考醫藥組合物多至少2倍、多至少3倍、多至少4倍、多至少5倍、多至少6倍、多至少7倍、多至少8倍、多至少9倍、多至少10倍、多至少15倍、多至少20倍、多至少50倍、多至少100倍、多至少5%、多至少10%、多至少15%、多至少20%、多至少25%、多至少30%、多至少35%、至少40%、多至少45%、多至少50%、多至少55%、多至少60%、多至少65%、多至少70%、多至少75%、多至少80%、多至少85%、多至少90%、至少95%多、多至少100%、多至少150%或多至少200%、多至少250%或至少300%、多至少400%或多至少500%。
在一些實施例中，病毒載體之分子直徑(例如，病毒載體聚集水準)藉由任何合適方法或任何合適分析法(參見部分4.6)來測定。在一些實施例中，量測病毒載體之分子直徑以確定病毒載體聚集(例如，AAV聚集)之量。在一些實施例中，醫藥組合物(例如，經稀釋之醫藥組合物)中或經稀釋之參考醫藥組合物中病毒載體之分子直徑高於在稀釋之前的醫藥組合物中或對照溶液中或在稀釋之前的參考醫藥組合物中的病毒載體之分子直徑。在一些實施例中，醫藥組合物(例如，經稀釋之醫藥組合物)包含之病毒載體的(例如，平均)直徑比對照溶液中或在稀釋之前的醫藥組合物中或參考醫藥組合物中之病毒載體的直徑高至少2倍、高至少3倍、高至少4倍、高至少5倍、高至少6倍、高至少7倍、高至少8倍、高至少9倍、高至少10倍、高至少15倍、高至少20倍、高至少50倍、高至少100倍、高至少5%、高至少10%、高至少15%、高至少20%、高至少25%、高至少30%、高至少35%、至少40%、高至少45%、高至少50%、高至少55%、高至少60%、高至少65%、高至少70%、高至少75%、高至少80%、高至少85%、高至少90%、高至少95%、高至少100%、高至少150%或高至少200%、高至少250%或至少300%、高至少400%或高至少500%。在一些實施例中，醫藥組合物(例如，經稀釋之醫藥組合物)或經稀釋之參考醫藥組合物包含之病毒載體的(例如，平均)直徑為約或至少約10 nm、15 nm、20 nm、25 nm、26 nm、27 nm、28 nm、29 nm、30 nm、31 nm、32 nm、33 nm、34 nm、35 nm、36 nm、37 nm、38 nm、39 nm、40 nm、45 nm、50 nm、55 nm、60 nm、65 nm、70 nm、75 nm、80 nm、85 nm、90 nm、95 nm、100 nm、125 nm、150 nm、175 nm、200 nm、225 nm、250 nm、275 nm、300 nm、325 nm、350 nm、375 nm、400 nm、450 nm、500 nm或超過500 nm。在一些實施例中，在稀釋之前的醫藥組合物或在稀釋之前的參考醫藥組合物或對照物包含之病毒載體的(例如，平均)直徑為約或至多約5 nm、10 nm、15 nm、20 nm、25 nm、26 nm、27 nm、28 nm、29 nm、30 nm、31 nm、32 nm、33 nm、34 nm、35 nm、36 nm、37 nm、38 nm、39 nm、40 nm、45 nm、50 nm、55 nm、60 nm、65 nm、70 nm、75 nm、80 nm、85 nm、90 nm、95 nm或100 nm。在一些實施例中，在稀釋之前的醫藥組合物或在稀釋之前的參考醫藥組合物或對照物包含之病毒載體的(例如，平均)直徑為約或至多25 nm、30 nm、35 nm或40 nm。
在一些實施例中，在稀釋醫藥組合物後30分鐘、1小時、2小時、3小時、4小時、5小時、6小時、7小時、8小時、9小時、10小時、15小時、20小時、24小時、一天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、兩週、三週、四週、2個月、3個月、4個月、5個月、6個月、1年、2年、5年或超過5年量測病毒載體之分子直徑或聚集水準。在一些實施例中，在投與(例如，脈絡膜上投與)前量測病毒載體之分子直徑或聚集水準。在一些實施例中，在即將投與(例如，脈絡膜上投與)時量測病毒載體之分子直徑或聚集水準。在一些實施例中，在投與醫藥組合物(例如，經稀釋之醫藥組合物)、經稀釋之參考醫藥組合物、未經稀釋之醫藥組合物、未經稀釋之參考醫藥組合物或對照物(例如，脈絡膜上投與)前30分鐘、1小時、2小時、3小時、4小時、5小時、6小時、7小時、8小時、9小時、10小時、15小時、20小時、24小時或2天量測病毒載體之分子直徑或聚集水準。在一些實施例中，在長期儲存(例如，儲存在25℃、20℃、4℃、-80℃下)後量測病毒載體之分子直徑或聚集水準。在一些實施例中，在速凍的經稀釋之醫藥組合物解凍之後量測病毒載體之分子直徑或聚集水準。
在一些實施例中，經稀釋之醫藥組合物、未經稀釋之醫藥組合物、參考醫藥組合物或對照物具有相同載體基因體濃度。在一些實施例中，經稀釋之醫藥組合物、未經稀釋之醫藥組合物、參考醫藥組合物或對照物具有相同量之基因體複本。在一些實施例中，醫藥組合物(例如，經稀釋之醫藥組合物)具有與未經稀釋之醫藥組合物(或與對照物或參考醫藥組合物)至少相同的載體基因體濃度。在一些實施例中，醫藥組合物(例如，經稀釋之醫藥組合物)具有與未經稀釋之醫藥組合物(或與對照物或參考醫藥組合物)至少相同量之基因體複本。在一些實施例中，醫藥組合物(例如，經稀釋之醫藥組合物)具有與未經稀釋之醫藥組合物(或與對照物或參考醫藥組合物)至少相同的病毒載體效力(例如，AAV活體外效力)。
在一些實施例中，在投與(例如，脈絡膜上投與)後醫藥組合物(例如，經稀釋之醫藥組合物)之離子強度增加。在一些實施例中，在投與後病毒載體聚集水準(群集)降低。在一些實施例中，與包含病毒載體但無病毒載體聚集之溶液相比或與包含病毒載體的具有減少量之病毒載體聚集之溶液相比，在投與之前醫藥組合物中之病毒載體聚集(群集)允許病毒載體或活性成分更長時間地保持在注射部位。在一些實施例中，在投與之前醫藥組合物中之病毒載體聚集(群集)引起在投與後在注射部位之厚度與在投與包含病毒載體但無病毒載體聚集之溶液後或在投與包含病毒載體的具有減少量之病毒載體聚集之溶液後獲得的在注射部位之厚度相比增加。在一些實施例中，在投與之前醫藥組合物中之病毒載體聚集(群集)引起在投與後在注射部位之圓周擴散小於在投與包含病毒載體但無病毒載體聚集之溶液後或在投與包含病毒載體的具有減少量之病毒載體聚集之溶液後獲得的在注射部位之圓周擴散。在一些實施例中，在投與之前醫藥組合物中之病毒載體聚集(群集)引起在投與後在注射部位之清除時間高於在投與包含病毒載體但無病毒載體聚集之溶液後或在投與包含病毒載體的具有減少量之病毒載體聚集之溶液後獲得的在注射部位之清除時間。在一些實施例中，在投與之前醫藥組合物中之病毒載體聚集(群集)引起在投與後舒張及/或血管滲漏水準與在投與包含病毒載體但無病毒載體聚集之溶液後或在投與包含病毒載體的具有減少量之病毒載體聚集之溶液後獲得的舒張及/或血管滲漏水準相比降低。在一些實施例中，在投與之前醫藥組合物中之病毒載體聚集(群集)引起在投與後在注射部位之轉導率(感染率)高於在投與包含病毒載體但無病毒載體聚集之溶液後或在投與包含病毒載體的具有減少量之病毒載體聚集之溶液後獲得的在注射部位之轉導率(感染率)。在一些實施例中，在投與之前醫藥組合物中之病毒載體聚集(群集)引起在投與後在注射部位之AAV水準高於在投與包含病毒載體但無病毒載體聚集之溶液後或在投與包含病毒載體的具有減少量之病毒載體聚集之溶液後獲得的在注射部位之AAV水準。在一些實施例中，在投與之前醫藥組合物中之病毒載體聚集(群集)引起在投與後眼睛中之轉殖基因表現水準高於在投與包含病毒載體但無病毒載體聚集之溶液後或在投與包含病毒載體的具有減少量之病毒載體聚集之溶液後獲得的眼睛中之轉殖基因表現水準。在一些實施例中，經稀釋之醫藥組合物係指與參考醫藥組合物相比具有較低之離子強度及/或較低之鹽濃度之醫藥組合物。在一些實施例中，經稀釋之醫藥組合物係指包含至多約200 mM之離子強度的醫藥組合物。在一些實施例中，經稀釋之醫藥組合物係指包含至少約3%病毒載體聚集(例如，AAV聚集)之醫藥組合物。
在一些實施例中，醫藥組合物(例如，經稀釋之醫藥組合物)之病毒載體聚集之量足以使注射部位之至少一部分(例如SCS)擴大至至少500 μm或約500 μm至約3 mm，長達投與後至少兩小時。在一些實施例中，醫藥組合物(例如，經稀釋之醫藥組合物)之病毒載體聚集(例如，AAV聚集)之量足以使注射部位(例如SCS)擴大至約750 μm至約2.8 mm、約750 μm至約2.5 mm、約750 μm至約2 mm或約1 mm至約2 mm之厚度。在一些實施例中，醫藥組合物(例如，經稀釋之醫藥組合物)之病毒載體聚集(例如，AAV聚集)之量足以使注射部位(例如SCS)擴大至約500 μm至約3.0 mm之厚度，長達投與後至少兩小時、至少三小時、至少四小時、至少五小時、至少六小時、至少七小時、至少八小時、至少十小時、至少十二小時、至少十八小時、至少二十四小時、至少兩天、至少三天、至少五天、至少十天、至少二十一天、至少一個月、至少六週、至少兩個月、至少三個月、至少4個月、至少5個月、至少6個月、至少9個月、至少一年、至少三年或至少五年。在一些實施例中，醫藥組合物(例如，經稀釋之醫藥組合物)之病毒載體聚集(例如，AAV聚集)之量足以使注射部位(例如SCS)擴大至約1 mm至約3 mm之厚度，長達投與後至少兩小時、至少三小時、至少四小時、至少五小時、至少六小時、至少七小時、至少八小時、至少十小時、至少十二小時、至少十八小時或至少二十四小時。在一些實施例中，醫藥組合物(例如，經稀釋之醫藥組合物)之病毒載體聚集(例如，AAV聚集)之量足以使注射部位(例如SCS)擴大至約1 mm至約2 mm之厚度，長達投與後至少兩小時、至少三小時、至少四小時、至少五小時、至少六小時、至少七小時、至少八小時、至少十小時、至少十二小時、至少十八小時、至少二十四小時、至少兩天、至少三天、至少五天、至少十天、至少二十一天、至少一個月、至少六週、至少兩個月、至少三個月、至少4個月、至少5個月、至少6個月、至少9個月、至少一年、至少三年或至少五年。在一些實施例中，醫藥組合物(例如，經稀釋之醫藥組合物)之病毒載體聚集(例如，AAV聚集)之量足以使注射部位(例如SCS)擴大至約2 mm至約3 mm之厚度，長達投與後至少兩小時、至少三小時、至少四小時、至少五小時、至少六小時、至少七小時、至少八小時、至少十小時、至少十二小時、至少十八小時、至少二十四小時、至少兩天、至少三天、至少五天、至少十天、至少二十一天、至少一個月、至少六週、至少兩個月、至少三個月、至少4個月、至少5個月、至少6個月、至少9個月、至少一年、至少三年或至少五年。在一些實施例中，醫藥組合物(例如，經稀釋之醫藥組合物)之病毒載體聚集(例如，AAV聚集)之量足以無限期地使注射部位(例如SCS)擴大至約750 μm至約2.8 mm、約750 μm至約2.5 mm、約750 μm至約2 mm或約1 mm至約2 mm之厚度。可實現無限期，至少部分係因為醫藥組合物(例如，經稀釋之醫藥組合物)在注射部位(例如，SCS)之穩定性。
在一些實施例中，醫藥組合物(例如，經稀釋之醫藥組合物)之病毒載體聚集(例如，AAV聚集)之量足以使注射部位(例如SCS)擴大至至少500 μm或約500 μm至約3 mm之厚度。在一些實施例中，醫藥組合物(例如，經稀釋之醫藥組合物)之病毒載體聚集(例如，AAV聚集)之量足以使注射部位(例如SCS)擴大至至少約50 μm、100 μm、200 μm、300 μm、400 μm、500 μm、600 μm、700 μm、800 μm、900 μm、1000 μm、1 mm、1.5 mm、2 mm、2.5 mm、3 mm、3.5 mm、4 mm、4.5 mm、5 mm、5.5 mm、6 mm、6.5 mm、7 mm、7.5 mm、8 mm、8.5 mm、9 mm、9.5 mm、10 mm或大於10 mm之厚度。在一些實施例中，參考醫藥組合物或未稀釋之醫藥組合物能夠使注射部位擴大至至多約1 nm、5 nm、10 nm、25 nm、50 nm、100 nm、200 nm、300 nm、400 nm、500 nm、600 nm、700 nm、800 nm、900 nm、1 μm、5 μm、10 μm、15 μm、20 μm、25 μm、30 μm、35 μm、40 μm、50 μm、100 μm、200 μm、300 μm、400 μm、500 μm、600 μm、700 μm、800 μm、900 μm、1000 μm、1 mm、1.5 mm、2 mm、2.5 mm、3 mm、3.5 mm、4 mm、4.5 mm、5 mm、5.5 mm、6 mm、6.5 mm、7 mm、7.5 mm、8 mm、8.5 mm、9 mm、9.5 mm或10 mm之厚度。
本文亦提供使用本文揭示之醫藥組合物(例如，經稀釋之醫藥組合物)治療部分4.5中描述之疾病(例如眼部疾病)的方法。在一些實施例中，治療眼部疾病之方法包括向個體(例如，人類)投與有效量之醫藥組合物(例如，包含編碼轉殖基因之表現卡匣之重組腺相關病毒(AAV)載體)。在一些實施例中，醫藥組合物投與個體眼睛之脈絡膜上腔(SCS)中。在一些實施例中，投與至SCS時足以引發治療反應之醫藥組合物之有效量小於視網膜下投與時足以引發治療反應之醫藥組合物之有效量。在一些實施例中，投與至SCS時足以引發治療反應之醫藥組合物之有效量小於玻璃體內投與時足以引發治療反應之醫藥組合物之有效量。在一些實施例中，投與至SCS時醫藥組合物之載體基因體濃度與經由視網膜下投與或經由玻璃體內投與時相同。在一些實施例中，投與至SCS時醫藥組合物之基因體複本之量與經由視網膜下投與或經由玻璃體內投與時相同。在一些實施例中，投與至SCS時足以在個體中引發治療反應之醫藥組合物之有效量低於足以在個體中引發治療反應之參考醫藥組合物之有效量。在一些實施例中，參考醫藥組合物為稀釋之前的醫藥組合物。在一些實施例中，參考醫藥組合物之離子強度高於醫藥組合物。在一些實施例中，醫藥組合物之病毒載體聚集(例如，AAV聚集)水準高於參考醫藥組合物。在一些實施例中，投與至SCS時足以引發治療反應之醫藥組合物之有效量小於視網膜下投與時足以引發治療反應之參考醫藥組合物之有效量。在一些實施例中，投與至SCS時足以引發治療反應之醫藥組合物之有效量為小於玻璃體內投與時足以引發治療反應之參考醫藥組合物之有效量。在一些實施例中，醫藥組合物及參考醫藥組合物具有相同載體基因體濃度。在一些實施例中，醫藥組合物及參考醫藥組合物具有相同量之基因體複本。
本文亦提供製備醫藥組合物之方法。在一些實施例中，製備醫藥組合物之方法包括製備包含磷酸鹽緩衝鹽水、蔗糖及治療有效量之包含編碼轉殖基因之表現卡匣之重組腺相關病毒(AAV)載體的組合物(例如，參考醫藥組合物)。在一些實施例中，製備醫藥組合物之方法包括將包含磷酸鹽緩衝鹽水及蔗糖之溶液混合至包含AAV之組合物。在一些實施例中，醫藥組合物與該組合物(或參考醫藥組合物)相比具有較低之離子強度及/或較高水準之聚集重組AAV。在一些實施例中，醫藥組合物具有約或至多約135 mM之離子強度。在一些實施例中，醫藥組合物具有約或至多約40 mM之離子強度。在一些實施例中，醫藥組合物具有約或至多約20 mM之離子強度。在一些實施例中，醫藥組合物具有與該組合物實質上相同之滲壓性或滲透壓。
本文提供製備醫藥組合物之方法，其包括將包含磷酸鹽緩衝鹽水及蔗糖之溶液混合至組合物(例如，具有包含編碼轉殖基因之表現卡匣之重組腺相關病毒(AAV)載體的組合物)。在一些實施例中，醫藥組合物與該組合物相比具有較低之離子強度及/或較高水準之聚集重組AAV。在一些實施例中，醫藥組合物具有約或至多約135 mM之離子強度。在一些實施例中，醫藥組合物具有約或至多約40 mM之離子強度。在一些實施例中，醫藥組合物具有約或至多約20 mM之離子強度。在一些實施例中，醫藥組合物具有與該組合物實質上相同之滲壓性或滲透壓。
本文亦提供用於製備醫藥組合物之套組。在一些實施例中，套組包括(i)包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之重組腺相關病毒(AAV)載體的組合物；及(ii)包含磷酸鹽緩衝鹽水及蔗糖之溶液。在一些實施例中，套組可包括關於該組合物與該溶液混合之說明書。在一些實施例中，該等說明書包括關於該溶液與該組合物混合以獲得醫藥組合物之說明書。在一些實施例中，組合物包含磷酸鹽緩衝鹽水及蔗糖。在一些實施例中，組合物包含4%蔗糖。在一些實施例中，溶液包含10%蔗糖。在一些實施例中，醫藥組合物具有約或至多約135 mM之離子強度。在一些實施例中，醫藥組合物具有約或至多約40 mM之離子強度。在一些實施例中，醫藥組合物具有約或至多約20 mM之離子強度。在一些實施例中，醫藥組合物具有與該組合物實質上相同之滲壓性或滲透壓。
在一些實施例中，本揭示案之方法或醫藥組合物或套組中的任一者引起在醫藥組合物投與至人類個體眼睛之脈絡膜上腔後醫藥組合物中之至少一些聚集重組AAV崩解。在一些實施例中，在脈絡膜上投與醫藥組合物至人類個體後重組AAV之聚集能夠倒轉。在一些實施例中，一旦注射在人類SCS中聚集重組AAV即變成單體或變得較少聚集。在一些實施例中，組合物包含氯化鉀、磷酸二氫鉀、氯化鈉、無水磷酸氫二鈉、蔗糖及視情況選用之界面活性劑。在一些實施例中，組合物包含經改良之杜貝爾寇磷酸鹽緩衝鹽水溶液及視情況選用之界面活性劑。在一些實施例中，組合物包含0.2 mg/mL氯化鉀、0.2 mg/mL磷酸二氫鉀、5.84 mg/mL氯化鈉、1.15 mg/mL無水磷酸氫二鈉、40.0 mg/mL (4% w/v)蔗糖及界面活性劑。在一些實施例中，溶液包含磷酸鹽緩衝之氯化鈉及蔗糖。在一些實施例中，將溶液與組合物混合使組合物稀釋約或至少約2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍或10倍。在一些實施例中，將溶液與組合物混合在醫藥組合物投與至人類個體眼睛之脈絡膜上腔的同一天進行。在一些實施例中，將溶液與組合物混合在醫藥組合物投與至人類個體眼睛之脈絡膜上腔的24小時內進行。在一些實施例中，醫藥組合物包括約1.0 × 10 12至約3.0 × 10 12基因體複本之重組AAV。在一些實施例中，重組AAV包括來自AAV8之組分且醫藥組合物具有介於約30 mM至約60 mM之間的離子強度。在一些實施例中，重組AAV包括來自AAV9之組分且醫藥組合物具有介於約15 mM至約30 mM之間的離子強度。在一些實施例中，重組AAV包括來自AAV2之組分且醫藥組合物具有介於約100 mM至約200 mM之間的離子強度。
在一些實施例中，醫藥組合物實質上位於插入部位附近(參見部分4.2.1及部分4.2.2)。在一些實施例中，與在視網膜下或玻璃體內投與醫藥組合物時相比，在SCS中投與醫藥組合物時，醫藥組合物引起更高水準之轉殖基因表現(濃度) (參見部分4.2.6)。在一些實施例中，與在視網膜下、玻璃體內或SCS中投與參考醫藥組合物時相比，在SCS中投與醫藥組合物時，醫藥組合物引起更高水準之轉殖基因表現(濃度) (參見部分4.2.6)。在一些實施例中，與在視網膜下或玻璃體內投與醫藥組合物時相比，在SCS中投與醫藥組合物時，醫藥組合物引起更高水準之AAV (參見部分4.2.5)。在一些實施例中，與在視網膜下、玻璃體內或SCS中投與參考醫藥組合物時相比，在SCS中投與醫藥組合物時，醫藥組合物引起更高水準之AAV (參見部分4.2.5)。在一些實施例中，與在視網膜下或玻璃體內投與醫藥組合物時相比，在SCS中投與醫藥組合物時，醫藥組合物在注射部位引起更高轉導率(感染率) (參見部分4.2.5)。在一些實施例中，與在視網膜下、玻璃體內或SCS中投與參考醫藥組合物時相比，在SCS中投與醫藥組合物時，醫藥組合物在注射部位引起更高轉導率(感染率) (參見部分4.2.5)。在一些實施例中，與在視網膜下或玻璃體內投與醫藥組合物時相比，在SCS中投與醫藥組合物時，醫藥組合物引起血管舒張及/或血管滲漏減少(參見部分4.2.4)。在一些實施例中，與在視網膜下、玻璃體內或SCS中投與參考醫藥組合物時相比，在SCS中投與醫藥組合物時，醫藥組合物引起血管舒張及/或血管滲漏減少(參見部分4.2.4)。在一些實施例中，參考醫藥組合物包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之重組腺相關病毒(AAV)載體。在一些實施例中，醫藥組合物具有比參考醫藥組合物高之AAV聚集水準。在一些實施例中，醫藥組合物及參考醫藥組合物具有相同載體基因體濃度。在一些實施例中，醫藥組合物及參考醫藥組合物具有相同量之基因體複本。  4.1.1 離子強度之稀釋
在一些實施例中，醫藥組合物用含有較低離子強度之溶液稀釋以降低醫藥組合物之離子強度。在一些實施例中，醫藥組合物在投與前稀釋。在一些實施例中，醫藥組合物經稀釋且儲存。在一些實施例中，與醫藥組合物相比含有較低離子強度之溶液添加至醫藥組合物，提供包含未經稀釋之醫藥組合物之5%、10%、15%、20%、25%、30%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%或95%離子強度(例如，稀釋兩倍、三倍、四倍、八倍或十倍)的醫藥組合物。在一些實施例中，醫藥組合物用磷酸鹽緩衝之10%蔗糖溶液稀釋。在一些實施例中，醫藥組合物包含具有4%蔗糖之經改良之DPBS。在一些實施例中，醫藥組合物包含泊洛沙姆(例如P188)。
在一些實施例中，含有較低離子強度且用於稀釋醫藥組合物之溶液包含與未經稀釋之醫藥組合物相比較低之量或濃度之鹽。鹽之實例包括但不限於氯化鈉、硫酸鈉及硫酸銨。
在一些實施例中，含有較低離子強度且用於稀釋之溶液包含未經稀釋之醫藥組合物中鹽濃度之約或至多約1%、5%、10%、15%、20%、25%、30%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%或95%。在一些實施例中，含有較低離子強度且用於稀釋之溶液不包含鹽。在一些實施例中，用於稀釋之溶液(例如，含有較低離子強度之溶液)包含約或至多約0 mM、1 mM、2 mM、3 mM、4 mM、5 mM、6 mM、7 mM、8 mM、9 mM、10 mM、15 mM、20 mM、25 mM、30 mM、35 mM、40 mM、45 mM、50 mM、55 mM、60 mM、65 mM、70 mM 75 mM、80 mM、85 mM、90 mM、95 mM、100 mM、110 mM、115 mM、120 mM、125 mM、130 mM、135 mM、140 mM、145 mM、150 mM、155 mM、160 mM、165 mM、170 mM 175 mM、180 mM、185 mM、190 mM、195 mM、200 mM、250 mM、300 mM、350 mM、400 mM、450 mM、500 mM、550 mM或600 mM鹽(例如，NaCl)。在一些實施例中，用於稀釋之溶液(例如，含有較低離子強度之溶液)不包含鹽。在一些實施例中，用於稀釋之溶液(例如，含有較低離子強度之溶液)之鹽濃度為約0 mM至約30 mM、0 mM至約25 mM、0 mM至約100 mM、0 mM至約50 mM、0 mM至約200 mM、5 mM至約100 mM、10 mM至約30 mM、10 mM至約40 mM、10 mM至約50 mM、10 mM至約60 mM、10 mM至約100 mM、5 mM至約50 mM、5 mM至約30 mM、1 mM至約100 mM、1 mM至約40 mM或1 mM至約30 mM、1 mM至約200 mM、1 mM至約600 mM或1 mM至約300 mM。在一些實施例中，用於稀釋之溶液(例如，含有較低離子強度之溶液)包含約或至多約10 mM鹽。在一些實施例中，用於稀釋之溶液(例如，含有較低離子強度之溶液)包含約或至多約100 mM鹽。在一些實施例中，用於稀釋之溶液(例如，含有較低離子強度之溶液)包含約或至多約200 mM鹽。在一些實施例中，含有較低離子強度且用於稀釋之溶液包含蔗糖。在一些實施例中，含有較低離子強度且用於稀釋之溶液包含4%、6%、8%、10%、15%、20%、25%、30% (或更高)蔗糖。在一些實施例中，用於稀釋之溶液(例如，含有較低離子強度之溶液)包含4%蔗糖。在一些實施例中，用於稀釋之溶液包含6%蔗糖。在一些實施例中，用於稀釋之溶液包含10%蔗糖。
在一些實施例中，用於稀釋之溶液(例如，含有較低離子強度之溶液)具有約或至多約0 mM、1 mM、2 mM、3 mM、4 mM、5 mM、6 mM、7 mM、8 mM、9 mM、10 mM、15 mM、20 mM、25 mM、30 mM、35 mM、40 mM、45 mM、50 mM、55 mM、60 mM、65 mM、70 mM 75 mM、80 mM、85 mM、90 mM、95 mM、100 mM、110 mM、115 mM、120 mM、125 mM、130 mM、135 mM、140 mM、145 mM、150 mM、155 mM、160 mM、165 mM、170 mM 175 mM、180 mM、185 mM、190 mM、195 mM、200 mM、250 mM、300 mM、350 mM、400 mM、450 mM、500 mM、550 mM或600 mM之離子強度。在一些實施例中，用於稀釋之溶液(例如，含有較低離子強度之溶液)具有約或至多約25 mM之離子強度。在一些實施例中，用於稀釋之溶液(例如，含有較低離子強度之溶液)具有約或至多約50 mM之離子強度。在一些實施例中，用於稀釋之溶液(例如，含有較低離子強度之溶液)具有約或至多約15 mM之離子強度。在一些實施例中，用於稀釋之溶液(例如，含有較低離子強度之溶液)具有約或至多約80 mM之離子強度。在一些實施例中，用於稀釋之溶液(例如，含有較低離子強度之溶液)具有約或至多約100 mM之離子強度。在一些實施例中，用於稀釋之溶液(例如，含有較低離子強度之溶液)具有約5 mM至約100 mM、10 mM至約30 mM、10 mM至約40 mM、10 mM至約50 mM、10 mM至約60 mM、10 mM至約100 mM、5 mM至約50 mM、5 mM至約30 mM、1 mM至約100 mM、1 mM至約40 mM或1 mM至約30 mM、1 mM至約200 mM、1 mM至約600 mM或1 mM至約300 mM之離子強度。
在一些實施例中，低離子強度醫藥組合物用於投與編碼轉殖基因之AAV。在一些實施例中，與參考相比具有降低之離子強度之醫藥組合物(例如，經稀釋之液體調配物)用於投與編碼轉殖基因之AAV。在一些實施例中，低鹽醫藥組合物(例如，經稀釋之液體調配物)用於投與編碼轉殖基因之AAV。在一些實施例中，與對照溶液相比或與參考醫藥組合物相比或與PBS相比或與常用於視網膜下注射之醫藥組合物相比具有較低鹽濃度之醫藥組合物用於投與編碼轉殖基因之AAV。
在一些實施例中，可用於製備鹽之化合物之實例包括(但不限於)鋁、乙酸鹽、麩胺酸鹽、黏液酸鹽、精胺酸、天冬胺酸鹽、羥乙酸鹽、萘磺酸鹽、苄星(benzathine)、苯磺酸鹽(benzenesulfonate)、對羥乙醯氨基苯胂酸鹽、硝酸鹽、鈣、苯甲酸鹽、己酸鹽、辛酸鹽、氯普魯卡因(chloroprocaine)、苯磺酸鹽(besylate)、己基間苯二酚鹽、油酸鹽、膽鹼、碳酸氫鹽、海巴明(hydrabamine)、雙羥萘酸鹽、二乙醇胺、酒石酸氫鹽、羥基萘甲酸鹽、泛酸鹽、乙醇胺、溴化物、碘化物、磷酸鹽、乙二胺、右旋樟腦磺酸鹽、羥乙基磺酸鹽、聚半乳糖醛酸鹽、組胺酸、碳酸鹽、羥乙基磺酸鹽、丙酸鹽、鋰、氯化物、乳酸鹽、水楊酸鹽、離胺酸、檸檬酸鹽、乳糖醛酸鹽、硬脂酸鹽、鎂、癸酸鹽、蘋果酸鹽、鹼式乙酸鹽、葡甲胺、依地酸鹽(edetate)、順丁烯二酸鹽、丁二酸鹽、鉀、依託酸鹽(estolate)、扁桃酸鹽、硫酸鹽、普魯卡因、乙磺酸鹽(esylate)、甲磺酸鹽、酒石酸鹽、鈉、反丁烯二酸鹽、溴甲烷、茶氯酸鹽、三甲胺、葡庚糖酸鹽、甲基硝酸鹽、甲苯磺酸鹽、鋅、葡糖酸鹽、甲基硫酸鹽及三乙基碘。
在一些實施例中，溶液中或待用於醫藥組合物中之鹽包括但不限於氟化鈉、氯化鈉、溴化鈉、碘化鈉、硫酸鈉、碳酸氫鈉、碳酸鈉、胺基鈉(NaNH 2)或適合醫藥組合物之任何鹽。 4.1.2 調配物之其他組分
在一些實施例中，本揭示案提供一種醫藥組合物(例如，經稀釋之調配物或較低離子強度之調配物)，其包含重組腺相關病毒(AAV)及以下至少一者：磷酸二氫鉀、氯化鈉、無水磷酸氫二鈉、蔗糖及界面活性劑。在一些實施例中，醫藥組合物(例如，經稀釋之調配物或較低離子強度之調配物)不包含蔗糖。
在一些實施例中，本揭示案提供一種醫藥組合物，其包含重組腺相關病毒(AAV)及以下至少一者：離子鹽賦形劑或緩衝劑、蔗糖及界面活性劑。在一些實施例中，離子鹽賦形劑或緩衝劑可為一或多種來自由以下組成之群的組分：磷酸二氫鉀、磷酸鉀、氯化鈉、無水磷酸氫二鈉、六水磷酸鈉、一水合磷酸二氫鈉、胺丁三醇、三(羥甲基)胺基甲烷鹽酸鹽(Tris-HCl)、胺基酸、組胺酸、組胺酸鹽酸鹽(組胺酸-HCl)、琥珀酸鈉、檸檬酸鈉、乙酸鈉及(4-(2-羥乙基)-1-哌嗪乙磺酸) (HEPES)、硫酸鈉、硫酸鎂、氯化鎂6-水合物、硫酸鈣、氯化鉀、氯化鈣及檸檬酸鈣。在一些實施例中，界面活性劑可為一或多種來自由以下組成之群的組分：泊洛沙姆188、聚山梨醇酯20及聚山梨醇酯80。
在某些實施例中，醫藥組合物具有約60 mM至約115 mM之離子強度。在某些實施例中，醫藥組合物具有約60 mM至約100 mM之離子強度。在某些實施例中，醫藥組合物具有約65 mM至約95 mM之離子強度。在某些實施例中，醫藥組合物具有約70 mM至約90 mM之離子強度。在某些實施例中，醫藥組合物具有約75 mM至約85 mM之離子強度。
在某些實施例中，醫藥組合物具有約30 mM至約100 mM之離子強度。在某些實施例中，醫藥組合物具有約35 mM至約95 mM之離子強度。在某些實施例中，醫藥組合物具有約40 mM至約90 mM之離子強度。在某些實施例中，醫藥組合物具有約45 mM至約85 mM之離子強度。在某些實施例中，醫藥組合物具有約50 mM至約80 mM之離子強度。在某些實施例中，醫藥組合物具有約55 mM至約75 mM之離子強度。在某些實施例中，醫藥組合物具有約60 mM至約70 mM之離子強度。
在某些實施例中，醫藥組合物包含氯化鉀(例如，濃度為0.2 g/L)。在某些實施例中，醫藥組合物包含磷酸二氫鉀(例如，濃度為0.2 g/L)。在某些實施例中，醫藥組合物包含氯化鈉(例如，濃度為5.84 g/L)。在某些實施例中，醫藥組合物包含無水磷酸氫二鈉(例如，濃度為1.15 g/L)。在某些實施例中，醫藥組合物包含氯化鉀、磷酸二氫鉀、氯化鈉及無水磷酸氫二鈉。
在一些實施例中，參考醫藥組合物包含與醫藥組合物相同之組分。在一些實施例中，參考醫藥組合物包含與醫藥組合物相同之組分但具有比醫藥組合物低之離子強度。在一些實施例中，除影響或增加組合物或溶液之離子強度之一或多種組分外，參考醫藥組合物包含與醫藥組合物相同之組分。
在某些實施例中，醫藥組合物包含濃度為10% (重量/體積，30 g/L)至18% (重量/體積，180 g/L)之蔗糖。在某些實施例中，醫藥組合物包含濃度為4% (重量/體積，40 g/L)之蔗糖。
在某些實施例中，醫藥組合物包含濃度為0.001% (重量/體積，0.01 g/L)之泊洛沙姆188。在某些實施例中，醫藥組合物包含濃度為0.0005% (重量/體積，0.005 g/L)至0.05% (重量/體積，0.5 g/L)之泊洛沙姆188。在某些實施例中，醫藥組合物包含濃度為0.001% (重量/體積，0.01 g/L)之泊洛沙姆188。在某些實施例中，醫藥組合物包含濃度為0.0005% (重量/體積，0.05 g/L)至0.05% (重量/體積，0.5 g/L)之聚山梨醇酯20。在某些實施例中，醫藥組合物包含濃度為0.0005% (重量/體積，0.05 g/L)至0.05% (重量/體積，0.5 g/L)之聚山梨醇酯80。
在某些實施例中，醫藥組合物之pH值為約7.4。在某些實施例中，醫藥組合物之pH值為約6.0至9.0。在某些實施例中，醫藥組合物之pH值為7.4。在某些實施例中，醫藥組合物之pH值為6.0至9.0。
在某些實施例中，醫藥組合物在疏水塗層玻璃小瓶中。在某些實施例中，醫藥組合物在環烯烴聚合物(COP)小瓶中。在某些實施例中，醫藥組合物在Daikyo Crystal Zenith® (CZ)小瓶中。在某些實施例中，醫藥組合物在TopLyo塗層小瓶中。
在某些實施例中，本文揭示一種醫藥組合物，其包含重組AAV及以下至少一者：(a)氯化鉀濃度為0.2 g/L、(b)磷酸二氫鉀濃度為0.2 g/L、(c)氯化鈉濃度為5.84 g/L、(d)無水磷酸氫二鈉濃度為1.15 g/L、(e)蔗糖濃度為4%重量/體積(40 g/L)、(f)泊洛沙姆188濃度為0.001%重量/體積(0.01 g/L)及(g)水，且其中重組AAV為AAV8。在一些實施例中，醫藥組合物不包含蔗糖。
在一些實施例中，醫藥組合物包含(a)編碼抗人類血管內皮生長因子(hVEGF)抗體之構築體II及以下至少一者：(b)濃度為0.2 g/L之氯化鉀、(c)濃度為0.2 g/L之磷酸二氫鉀、(d)濃度為5.84 g/L之氯化鈉、(e)濃度為1.15 g/L之無水磷酸氫二鈉、(f)濃度為4%重量/體積(40 g/L)之蔗糖、(g)濃度為0.001%重量/體積(0.01 g/L)之泊洛沙姆188及(h)水，且其中該抗hVEGF抗體包含：包含SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:4之胺基酸序列之重鏈，及包含SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:3之胺基酸序列之輕鏈。在一些實施例中，醫藥組合物不包含蔗糖。
在一些實施例中，醫藥組合物包含(a)編碼三肽基-肽酶1之AAV8或AAV9及以下至少一者：(b)濃度為0.2 g/L之氯化鉀、(c)濃度為0.2 g/L之磷酸二氫鉀、(d)濃度為5.84 g/L之氯化鈉、(e)濃度為1.15 g/L之無水磷酸氫二鈉、(f)濃度為4%重量/體積(40 g/L)之蔗糖、(g)濃度為0.001%重量/體積(0.01 g/L)之泊洛沙姆188及(h)水。在一些實施例中，醫藥組合物不包含蔗糖。在一些實施例中，醫藥組合物中之AAV聚集水準影響與巴登蛋白(Batten)-CLN2相關之視力喪失。
在一些實施例中，醫藥組合物具有適合脈絡膜上注射(例如，經由脈絡膜上藥物遞送裝置，例如具有微針之微注射器)之所需黏度、密度及/或滲透壓。在一些實施例中，醫藥組合物為液體組合物。在一些實施例中，醫藥組合物為冷凍組合物。在一些實施例中，醫藥組合物為來自本文揭示之液體組合物之凍乾組合物。在一些實施例中，醫藥組合物為復原之凍乾調配物。
在一些實施例中，醫藥組合物為包含介於約1%與約7%之間的殘餘水分含量之凍乾組合物。在一些實施例中，醫藥組合物為包含介於約2%與約6%之間的殘餘水分含量之凍乾組合物。在一些實施例中，醫藥組合物為包含介於約10%與約4%之間的殘餘水分含量之凍乾組合物。在一些實施例中，醫藥組合物為包含約5%之殘餘水分含量之凍乾組合物。
在某些實施例中，醫藥組合物具有200 mOsm/L至660 mOsm/L之滲透壓範圍。在某些實施例中，醫藥組合物具有約、至少約或至多約以下之滲透壓：200 mOsm/L、250 mOsm/L、300 mOsm/L、350 mOsm/L、400 mOsm/L、450 mOsm/L、500 mOsm/L、550 mOsm/L、600 mOsm/L、650 mOsm/L或660 mOsm/L。
在某些實施例中，基因療法構築體呈AAV載體活性成分在調配物緩衝液中之冷凍無菌單次使用溶液供應。在一具體實施例中，適合脈絡膜上投與之醫藥組合物包含重組(例如rHuGlyFabVEGFi)載體在調配物緩衝液中之懸浮液，該調配物緩衝液包含生理學相容之水性緩衝液、界面活性劑及視情況選用之賦形劑。在一些實施例中，構築體在杜貝爾寇磷酸鹽緩衝鹽水及0.001%泊洛沙姆188 pH = 7.4中調配。  4.2 功能特性 4.2.1 清除時間
本揭示案提供一種引起自SCS之清除時間延遲之醫藥組合物(例如，包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之AAV的經稀釋之調配物或較低離子強度之調配物)。在一些實施例中，與包含較低聚集AAV水準或基本上不包含聚集AAV或不包含聚集之醫藥組合物相比，包含聚集AAV或包含較高聚集AAV水準之醫藥組合物引起自SCS之清除時間延遲。在一些實施例中，與包含較低聚集AAV水準或基本上不包含聚集AAV或不包含聚集之醫藥組合物相比，包含聚集AAV或包含較高聚集AAV水準之醫藥組合物引起自眼睛之清除時間延遲。在一些實施例中，醫藥組合物之聚集AAV超過通常用於視網膜下注射之參考組合物。在一些實施例中，在醫藥組合物投與至SCS之後醫藥組合物之清除時間等於或高於參考醫藥組合物之清除時間在視網膜下或玻璃體內投與參考醫藥組合物之後。在一些實施例中，在醫藥組合物投與至SCS之後醫藥組合物之清除時間等於或高於在參考醫藥組合物投與至SCS之後參考醫藥組合物之清除時間。在一些實施例中，醫藥組合物之聚集AAV超過參考醫藥組合物中之聚集AAV水準。
在一些實施例中，醫藥組合物(例如，包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之AAV的經稀釋之調配物或低離子強度之調配物)引起約30分鐘至約20小時、約2小時至約20小時、約30分鐘至約24小時、約1小時至約2小時、約30分鐘至約90天、約30分鐘至約60天、約30分鐘至約30天、約30分鐘至約21天、約30分鐘至約14天、約30分鐘至約7天、約30分鐘至約3天、約30分鐘至約2天、約30分鐘至約1天、約4小時至約90天、約4小時至約60天、約4小時至約30天、約4小時至約21天、約4小時至約14天、約4小時至約7天、約4小時至約3天、約4小時至約2天、約4小時至約1天、約4小時至約8小時、約4小時至約16小時、約4小時至約20小時、約1天至約90天、約1天至約60天、約1天至約30天、約1天至約21天、約1天至約14天、約1天至約7天、約1天至約3天、約2天至約90天、約3天至約90天、約3天至約60天、約3天至約30天、約3天至約21天、約3天至約14天或約3天至約7天的自SCS之清除時間。在一些實施例中，自SCS之清除時間為約3天至約365天、約3天至約300天、約3天至約200天、約3天至約150天、約3天至約125天、約7天至約365天、約7天至約300天、約7天至約200天、約7天至約150天、約7天至約125天。「自SCS之清除時間」係實質上所有之醫藥組合物、藥劑或AAV排出SCS所需之時間。在一些實施例中，「自SCS之清除時間」係藉由任何標準方法(例如部分4.6及部分5中描述之彼等方法)均未在SCS中偵測到醫藥組合物、藥劑或AAV所需的時間。在一些實施例中，「自SCS之清除時間」係如藉由任何標準方法(例如部分4.6及部分5中描述之彼等方法)所偵測，醫藥組合物、藥劑或AAV以至多約2%或至多約5%之量存在於SCS中時。
在一些實施例中，醫藥組合物(例如，包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之AAV的經稀釋之調配物或低離子強度之調配物)引起約30分鐘至約20小時、約2小時至約20小時、約30分鐘至約24小時、約1小時至約2小時、約30分鐘至約90天、約30分鐘至約60天、約30分鐘至約30天、約30分鐘至約21天、約30分鐘至約14天、約30分鐘至約7天、約30分鐘至約3天、約30分鐘至約2天、約30分鐘至約1天、約4小時至約90天、約4小時至約60天、約4小時至約30天、約4小時至約21天、約4小時至約14天、約4小時至約7天、約4小時至約3天、約4小時至約2天、約4小時至約1天、約4小時至約8小時、約4小時至約16小時、約4小時至約20小時、約1天至約90天、約1天至約60天、約1天至約30天、約1天至約21天、約1天至約14天、約1天至約7天、約1天至約3天、約2天至約90天、約3天至約90天、約3天至約60天、約3天至約30天、約3天至約21天、約3天至約14天或約3天至約7天的自眼睛之清除時間。在一些實施例中，自眼睛之清除時間為約3天至約365天、約3天至約300天、約3天至約200天、約3天至約150天、約3天至約125天、約7天至約365天、約7天至約300天、約7天至約200天、約7天至約150天、約7天至約125天。「自眼睛之清除時間」係實質上所有之醫藥組合物、藥劑或AAV排出眼睛所需之時間。在一些實施例中，「自眼睛之清除時間」係藉由任何方法(例如部分4.6及部分5中描述之彼等方法)均未偵測到醫藥組合物、藥劑或AAV所需的時間。在一些實施例中，「自眼睛之清除時間」係如藉由任何標準方法(例如部分4.6及部分5中描述之彼等方法)所偵測，醫藥組合物、藥劑或AAV以至多約2%或至多約5%之量存在於眼睛中時。
在一些實施例中，清除時間不早於(例如，自SCS或眼睛之清除時間在以下時間之前未發生過)在投與醫藥組合物(例如，液體調配物)之後約30分鐘、1小時、2小時、3小時、4小時、5小時、6小時、7小時、8小時、9小時、10小時、12小時、14小時、16小時、18小時、20小時、22小時、24小時、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、23天、25天、27天、30天、35天、40天、50天、55天、60天、65天、70天、75天、80天、85天、90天、95天、100天、120天、140天、160天、180天、200天、220天、240天、260天、280天、300天、320天、340天、360天、380天或400天。在一些實施例中，清除時間為在投與醫藥組合物(例如，經稀釋之調配物或低離子強度之調配物)之後約30分鐘、1小時、2小時、3小時、4小時、5小時、6小時、7小時、8小時、9小時、10小時、12小時、14小時、16小時、18小時、20小時、22小時、24小時、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、23天、25天、27天、30天、35天、40天、50天、55天、60天、65天、70天、75天、80天、85天、90天、95天、100天、120天、140天、160天、180天、200天、220天、240天、260天、280天、300天、320天、340天、360天、380天或400天。
在一些實施例中，包含AAV聚集或較高AAV聚集水準之醫藥組合物(例如，包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之AAV的經稀釋之調配物或低離子強度之調配物)引起清除時間比當使用不包含AAV聚集或包含較低AAV聚集水準之醫藥組合物(參考醫藥組合物)來投與包含編碼轉殖基因之表現卡匣之AAV (例如經由視網膜下投與、玻璃體內投與或投與至SCS)時多至少2倍、多至少3倍、多至少4倍、多至少5倍、多至少6倍、多至少7倍、多至少8倍、多至少9倍、多至少10倍、多至少15倍、多至少20倍、多至少50倍、多至少100倍、多至少5%、多至少10%、多至少15%、多至少20%、多至少25%、多至少30%、多至少35%、至少40%、多至少45%、多至少50%、多至少55%、多至少60%、多至少65%、多至少70%、多至少75%、多至少80%、多至少85%、多至少90%、多至少95%、多至少100%、多至少150%或多至少200%、多至少250%或至少300%、多至少400%或多至少500%。
在一些實施例中，包含AAV聚集或較高AAV聚集水準之醫藥組合物(例如，包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之AAV的經稀釋之調配物或低離子強度之調配物)引起清除時間比當藉由脈絡膜上投與使用例如不包含AAV聚集或包含較低AAV聚集水準之醫藥組合物(參考醫藥組合物)來投與包含編碼轉殖基因之表現卡匣之AAV時多至少2倍、多至少3倍、多至少4倍、多至少5倍、多至少6倍、多至少7倍、多至少8倍、多至少9倍、多至少10倍、多至少15倍、多至少20倍、多至少50倍、多至少100倍、多至少5%、多至少10%、多至少15%、多至少20%、多至少25%、多至少30%、多至少35%、至少40%、多至少45%、多至少50%、多至少55%、多至少60%、多至少65%、多至少70%、多至少75%、多至少80%、多至少85%、多至少90%、多至少95%、多至少100%、多至少150%或多至少200%、多至少250%或至少300%、多至少400%或多至少500%。
在一些實施例中，包含AAV聚集或較高AAV聚集水準之醫藥組合物(例如，包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之AAV的經稀釋之調配物或低離子強度之調配物)引起清除時間比當藉由視網膜下投與或藉由玻璃體內投與例如使用例如不包含AAV聚集或包含較低AAV聚集水準之醫藥組合物(參考醫藥組合物)來投與包含編碼轉殖基因之表現卡匣之AAV時多至少2倍、多至少3倍、多至少4倍、多至少5倍、多至少6倍、多至少7倍、多至少8倍、多至少9倍、多至少10倍、多至少15倍、多至少20倍、多至少50倍、多至少100倍、多至少5%、多至少10%、多至少15%、多至少20%、多至少25%、多至少30%、多至少35%、至少40%、多至少45%、多至少50%、多至少55%、多至少60%、多至少65%、多至少70%、多至少75%、多至少80%、多至少85%、多至少90%、多至少95%、多至少100%、多至少150%或多至少200%、多至少250%或至少300%、多至少400%或多至少500%。
在一些實施例中，包含AAV聚集或AAV聚集水準高於參考之醫藥組合物(例如，包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之AAV的經稀釋之調配物或低離子強度之調配物)之脈絡膜上投與引起清除時間比當經由視網膜下投與或經由玻璃體內投與例如使用相同醫藥組合物來投與包含編碼轉殖基因之表現卡匣之AAV時多至少2倍、多至少3倍、多至少4倍、多至少5倍、多至少6倍、多至少7倍、多至少8倍、多至少9倍、多至少10倍、多至少15倍、多至少20倍、多至少50倍、多至少100倍、多至少5%、多至少10%、多至少15%、多至少20%、多至少25%、多至少30%、多至少35%、至少40%、多至少45%、多至少50%、多至少55%、多至少60%、多至少65%、多至少70%、多至少75%、多至少80%、多至少85%、多至少90%、多至少95%、多至少100%、多至少150%或多至少200%、多至少250%或至少300%、多至少400%或多至少500%。
在一些實施例中，藉由脈絡膜上注射投與之包含聚集AAV之醫藥組合物(例如，包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之AAV的醫藥組合物)的清除時間大於經由視網膜下投與或經由玻璃體內投與來投與之相同醫藥組合物的清除時間。在一些實施例中，藉由脈絡膜上注射投與包含聚集AAV之醫藥組合物(例如，包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之AAV的醫藥組合物)後的清除時間大於藉由脈絡膜上注射投與不包含AAV聚集或包含較低AAV聚集水準之可比較之醫藥組合物(例如參考醫藥組合物)後的清除時間。在一些實施例中，包含聚集AAV之醫藥組合物(例如，包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之AAV的醫藥組合物)在脈絡膜上注射後的清除時間大於包含較低AAV聚集水準(或無可偵測之AAV聚集)之可比較之醫藥組合物在視網膜下投與或經由玻璃體內投與後的清除時間。在一些實施例中，藉由脈絡膜上注射投與之包含聚集AAV之醫藥組合物(例如，包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之AAV的醫藥組合物)的清除時間大於經由視網膜下投與或經由玻璃體內投與來投與的包含較低AAV聚集水準(或無可偵測之AAV聚集)之可比較之醫藥組合物。
在一些實施例中，包含聚集AAV之醫藥組合物(例如，包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之AAV的醫藥組合物)在脈絡膜上投與後的清除時間比相同醫藥組合物在視網膜下投與或玻璃體內投與後的清除時間多至少30分鐘、1小時、2小時、3小時、4小時、5小時、6小時、7小時、8小時、9小時、10小時、12小時、14小時、16小時、18小時、20小時、22小時、24小時、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、23天、25天、27天、30天、35天、40天、50天、55天、60天、65天、70天、75天、80天、85天、90天、95天、100天、120天、140天、160天、180天、200天、220天、240天、260天、280天、300天、320天、340天、360天、380天或400天。
在一些實施例中，包含聚集AAV之醫藥組合物(例如，包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之AAV的醫藥組合物)在脈絡膜上投與後的清除時間比藉由脈絡膜上注射投與包含較少聚集AAV或不包含可偵測之聚集AAV的可比較之醫藥組合物後的清除時間多至少30分鐘、1小時、2小時、3小時、4小時、5小時、6小時、7小時、8小時、9小時、10小時、12小時、14小時、16小時、18小時、20小時、22小時、24小時、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、23天、25天、27天、30天、35天、40天、50天、55天、60天、65天、70天、75天、80天、85天、90天、95天、100天、120天、140天、160天、180天、200天、220天、240天、260天、280天、300天、320天、340天、360天、380天或400天。
在一些實施例中，包含聚集AAV之醫藥組合物(例如，包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之AAV的醫藥組合物)在脈絡膜上投與後的清除時間比藉由視網膜下投與或玻璃體內投與來投與包含較少聚集AAV或不包含可偵測之聚集AAV的可比較之醫藥組合物後的清除時間多至少30分鐘、1小時、2小時、3小時、4小時、5小時、6小時、7小時、8小時、9小時、10小時、12小時、14小時、16小時、18小時、20小時、22小時、24小時、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、23天、25天、27天、30天、35天、40天、50天、55天、60天、65天、70天、75天、80天、85天、90天、95天、100天、120天、140天、160天、180天、200天、220天、240天、260天、280天、300天、320天、340天、360天、380天或400天。
在一些實施例中，經由玻璃體內注射或經由視網膜下注射投與之醫藥組合物的清除時間為投與後至多約30分鐘、1小時、2小時、3小時、4小時、5小時、6小時、7小時、8小時、9小時、10小時、12小時、14小時、16小時、18小時、20小時、22小時、24小時、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、23天、25天、27天、30天、35天、40天、50天、55天、60天、65天、70天、75天、80天、85天、90天、95天、100天、120天、140天、160天、180天、200天、220天、240天、260天、280天、300天、320天、340天、360天、380天或至多約400天。
在一些實施例中，藉由玻璃體內注射、視網膜下注射或注射至SCS投與之參考醫藥組合物的清除時間為投與後至多約30分鐘、1小時、2小時、3小時、4小時、5小時、6小時、7小時、8小時、9小時、10小時、12小時、14小時、16小時、18小時、20小時、22小時、24小時、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、23天、25天、27天、30天、35天、40天、50天、55天、60天、65天、70天、75天、80天、85天、90天、95天、100天、120天、140天、160天、180天、200天、220天、240天、260天、280天、300天、320天、340天、360天、380天或至多約400天。
在一些實施例中，清除時間係自眼睛之清除時間。在一些實施例中，清除時間係自SCS之清除時間。在一些實施例中，清除時間係自注射部位之清除時間。 4.2.2 圓周擴散
在一些實施例中，醫藥組合物(例如，經稀釋之調配物或較低離子強度之調配物)定位於注射部位。在一些實施例中，醫藥組合物(例如，經稀釋之調配物或較低離子強度之調配物)定位於注射部位之時段比包含較少AVV聚集或不包含可偵測之AAV聚集之參考醫藥組合物長。在一些實施例中，當在SCS中注射時醫藥組合物(例如，經稀釋之調配物或較低離子強度之調配物)定位於注射部位之時段比當藉由視網膜下注射或玻璃體內注射投與醫藥組合物時長。醫藥組合物可具有不同的病毒載體聚集水準。在一些實施例中，包含聚集AAV之醫藥組合物保持定位於SCS中之時段比包含較少AVV聚集或不包含可偵測之AAV聚集之醫藥組合物(例如，參考醫藥組合物)長。
在一些實施例中，定位可藉由評估圓周擴散(例如，2D圓周擴散)來確定。在一些實施例中，包含聚集AAV之醫藥組合物(例如，包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之AAV的經稀釋之調配物或較低離子強度之調配物)引起圓周擴散比當使用參考醫藥組合物(例如，包含較少AVV聚集或不包含可偵測之AAV聚集水準)來投與包含編碼轉殖基因之表現卡匣之AAV (例如，藉由脈絡膜上注射、藉由視網膜下注射或藉由玻璃體內注射)時少至少2倍、少至少3倍、少至少4倍、少至少5倍、少至少6倍、少至少7倍、少至少8倍、少至少9倍、少至少10倍、少至少15倍、少至少20倍、少至少50倍、少至少100倍、少至少5%、少至少10%、少至少15%、少至少20%、少至少25%、少至少30%、少至少35%、至少40%、少至少45%、少至少50%、少至少55%、少至少60%、少至少65%、少至少70%、少至少75%、少至少80%、少至少85%、少至少90%、少至少95%、少至少100%、少至少150%或少至少200%、少至少250%或至少300%、少至少400%或少至少500%。
在一些實施例中，包含聚集AAV之醫藥組合物(例如，包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之AAV的經稀釋之調配物或較低離子強度之調配物)之脈絡膜上投與引起圓周擴散比當藉由脈絡膜上投與、藉由視網膜下投與或藉由玻璃體內投與例如使用參考醫藥組合物(例如，包含較少AVV聚集或不包含可偵測之AAV聚集水準)來投與包含編碼轉殖基因之表現卡匣之AAV時少至少2倍、少至少3倍、少至少4倍、少至少5倍、少至少6倍、少至少7倍、少至少8倍、少至少9倍、少至少10倍、少至少15倍、少至少20倍、少至少50倍、少至少100倍、少至少5%、少至少10%、少至少15%、少至少20%、少至少25%、少至少30%、少至少35%、至少40%、少至少45%、少至少50%、少至少55%、少至少60%、少至少65%、少至少70%、少至少75%、少至少80%、少至少85%、少至少90%、少至少95%、少至少100%、少至少150%或少至少200%、少至少250%或至少300%、少至少400%或少至少500%。
在一些實施例中，包含聚集AAV之醫藥組合物(例如，包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之AAV的經稀釋之調配物或較低離子強度之調配物)之脈絡膜上投與引起圓周擴散比當藉由視網膜下投與或藉由玻璃體內投與例如使用相同醫藥組合物來投與包含編碼轉殖基因之表現卡匣之AAV時少至少2倍、少至少3倍、少至少4倍、少至少5倍、少至少6倍、少至少7倍、少至少8倍、少至少9倍、少至少10倍、少至少15倍、少至少20倍、少至少50倍、少至少100倍、少至少5%、少至少10%、少至少15%、少至少20%、少至少25%、少至少30%、少至少35%、至少40%、少至少45%、少至少50%、少至少55%、少至少60%、少至少65%、少至少70%、少至少75%、少至少80%、少至少85%、少至少90%、少至少95%、少至少100%、少至少150%或少至少200%、少至少250%或至少300%、少至少400%或少至少500%。
在一些實施例中，圓周擴散可在投與醫藥組合物或參考醫藥組合物後30分鐘、1小時、2小時、3小時、4小時、5小時、6小時、7小時、8小時、9小時、10小時、12小時、14小時、16小時、18小時、20小時、22小時、24小時、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、23天、25天、27天、30天、35天、40天、50天、55天、60天、65天、70天、75天、80天、85天、90天、95天、100天、120天、140天、160天、180天、200天、220天、240天、260天、280天、300天、320天、340天、360天、380天或400天測定。 4.2.3 SCS厚度
在一些實施例中，可藉由在向個體投與醫藥組合物(例如，經稀釋之調配物或較低離子強度之調配物)之後評估SCS厚度來確定定位。在一些實施例中，在將醫藥組合物(例如，經稀釋之調配物或較低離子強度之調配物)注射在SCS中之後，醫藥組合物(例如，經稀釋之調配物或較低離子強度之調配物)增加SCS之厚度。在一些實施例中，將包含聚集AAV之醫藥組合物(例如，經稀釋之調配物或較低離子強度之調配物)輸注至SCS中可使SCS厚度擴大至超過將參考醫藥組合物(例如，包含較低AVV聚集水準或不包含可偵測之AAV聚集)輸注至SCS中時所達到之SCS厚度。在一些實施例中，用包含聚集AAV之醫藥組合物(例如，經稀釋之調配物或較低離子強度之調配物)增加SCS厚度可使得接近SCS容易，從而容易或允許在SCS中處置裝置。在一些實施例中，擴大SCS厚度允許醫藥組合物(例如，經稀釋之調配物或較低離子強度之調配物)及/或編碼轉殖基因之AAV在注射部位(定位)保持更長時段。在一些實施例中，與參考醫藥組合物相比，包含聚集AAV之醫藥組合物在更長時段內增加注射部位或附近之厚度。在一些實施例中，與包含較少AVV聚集或不包含可偵測之AAV聚集水準之醫藥組合物相比，包含聚集AAV之醫藥組合物在更長時段內增加注射部位或附近之厚度。在一些實施例中，在醫藥組合物投與至SCS之後在注射部位之厚度等於或高於在視網膜下或玻璃體內投與參考醫藥組合物之後參考醫藥組合物在注射部位之厚度。在一些實施例中，在醫藥組合物投與至SCS之後醫藥組合物在注射部位之厚度等於或高於在參考醫藥組合物投與至SCS之後參考醫藥組合物在注射部位之厚度。
在一些實施例中，包含聚集AAV之醫藥組合物(例如，包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之AAV的經稀釋之調配物或較低離子強度之調配物)之脈絡膜上投與引起SCS厚度之增加比當藉由脈絡膜上投與例如使用參考醫藥組合物(包含較低AVV聚集水準或不包含可偵測之AAV聚集)來投與包含編碼轉殖基因之表現卡匣之AAV時大至少2倍、大至少3倍、大至少4倍、大至少5倍、大至少6倍、大至少7倍、大至少8倍、大至少9倍、大至少10倍、大至少15倍、大至少20倍、大至少50倍、大至少100倍、大至少5%、大至少10%、大至少15%、大至少20%、大至少25%、大至少30%、大至少35%、至少40%、大至少45%、大至少50%、大至少55%、大至少60%、大至少65%、大至少70%、大至少75%、大至少80%、大至少85%、大至少90%、大至少95%、大至少100%、大至少150%或大至少200%、大至少250%或至少300%、大至少400%或大至少500%。
在一些實施例中，包含AAV聚集之醫藥組合物(例如，包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之AAV的經稀釋之調配物或較低離子強度之調配物)之脈絡膜上投與引起注射部位或附近之厚度之增加比當藉由視網膜下投與或藉由玻璃體內投與例如使用參考醫藥組合物(包含較低AVV聚集水準或不包含可偵測之AAV聚集)來投與包含編碼轉殖基因之表現卡匣之AAV時大至少2倍、大至少3倍、大至少4倍、大至少5倍、大至少6倍、大至少7倍、大至少8倍、大至少9倍、大至少10倍、大至少15倍、大至少20倍、大至少50倍、大至少100倍、大至少5%、大至少10%、大至少15%、大至少20%、大至少25%、大至少30%、大至少35%、至少40%、大至少45%、大至少50%、大至少55%、大至少60%、大至少65%、大至少70%、大至少75%、大至少80%、大至少85%、大至少90%、大至少95%、大至少100%、大至少150%或大至少200%、大至少250%或至少300%、大至少400%或大至少500%。
在一些實施例中，包含AAV聚集之醫藥組合物(例如，包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之AAV的經稀釋之調配物或較低離子強度之調配物)之脈絡膜上投與引起注射部位或附近之厚度之增加比當藉由視網膜下投與或藉由玻璃體內投與例如使用相同醫藥組合物來投與包含編碼轉殖基因之表現卡匣之AAV時大至少2倍、大至少3倍、大至少4倍、大至少5倍、大至少6倍、大至少7倍、大至少8倍、大至少9倍、大至少10倍、大至少15倍、大至少20倍、大至少50倍、大至少100倍、大至少5%、大至少10%、大至少15%、大至少20%、大至少25%、大至少30%、大至少35%、至少40%、大至少45%、大至少50%、大至少55%、大至少60%、大至少65%、大至少70%、大至少75%、大至少80%、大至少85%、大至少90%、大至少95%、大至少100%、大至少150%或大至少200%、大至少250%或至少300%、大至少400%或大至少500%。
在一些實施例中，在藉由脈絡膜上注射投與包含聚集AAV之醫藥組合物(例如，包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之AAV的醫藥組合物)之後在注射部位所獲得之厚度大於在藉由脈絡膜上注射投與參考醫藥組合物之後。在一些實施例中，在藉由脈絡膜上注射投與包含聚集AAV之醫藥組合物(例如，包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之AAV的醫藥組合物)之後在注射部位所獲得之厚度大於在藉由視網膜下注射或藉由玻璃體內注射投與參考醫藥組合物之後。在一些實施例中，在藉由脈絡膜上注射投與包含聚集AAV之醫藥組合物(例如，包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之AAV的醫藥組合物)之後在注射部位所獲得之厚度大於在藉由視網膜下投與或藉由玻璃體內投與來投與相同醫藥組合物之後。
在一些實施例中，注射部位或附近之厚度(例如，SCS處或附近之厚度)可在投與醫藥組合物或參考醫藥組合物之後30分鐘、1小時、2小時、3小時、4小時、5小時、6小時、7小時、8小時、9小時、10小時、12小時、14小時、16小時、18小時、20小時、22小時、24小時、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、23天、25天、27天、30天、35天、40天、50天、55天、60天、65天、70天、75天、80天、85天、90天、95天、100天、120天、140天、160天、180天、200天、220天、240天、260天、280天、300天、320天、340天、360天、380天或400天測定。 4.2.4 血管舒張及血管滲漏
在一些實施例中，在醫藥組合物(包含聚集AAV)投與至SCS之後VEGF誘發之血管舒張及/或血管滲漏之水準等於或小於在視網膜下或玻璃體內投與參考醫藥組合物之後VEGF誘發之血管舒張及/或血管滲漏之水準。在一些實施例中，在醫藥組合物投與至SCS之後VEGF誘發之血管舒張及/或血管滲漏之水準等於或低於在參考醫藥組合物投與至SCS之後VEGF誘發之血管舒張及/或血管滲漏之水準。在一些實施例中，醫藥組合物(例如，包含編碼轉殖基因之表現卡匣之AAV的經稀釋之調配物或較低離子強度之調配物)引起在相同醫藥組合物投與至SCS之後VEGF誘發之血管舒張及/或血管滲漏之水準與在經由視網膜下投與或經由玻璃體內投與來投與醫藥組合物之後相比減少。在一些實施例中，醫藥組合物(例如，經稀釋之調配物或較低離子強度之調配物)引起在醫藥組合物投與至SCS之後VEGF誘發之血管舒張及/或血管滲漏之水準與在經由視網膜下投與、經由玻璃體內投與或投與至SCS投與可參考醫藥組合物之後相比減少。在一些實施例中，VEGF誘發之血管舒張及/或血管滲漏降低至少約2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍、至少5%、至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少100%、至少150%或至少200%、至少250%或至少300%、至少400%或至少500%。在一些實施例中，轉殖基因為抗人類血管內皮生長因子(抗VEGF)抗體。
在一些實施例中，VEGF誘發之血管舒張及/或血管滲漏在投與後約30分鐘、1小時、2小時、4小時、6小時、8小時、10小時、12小時、14小時、15小時、18小時、20小時、22小時、24小時、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、23天、25天、27天、30天、35天、40天、50天、55天、60天、65天、70天、75天、80天、85天、90天、95天、100天、120天、140天、160天、180天、200天、220天、240天、260天、280天、300天、320天、340天、360天、380天或至多約400天測定。 4.2.5 注射部位之轉導率(感染率)
在一些實施例中，在SCS中投與醫藥組合物之後在注射部位之轉導率(感染率)等於或高於在經由視網膜下投與或經由靜脈內投與來投與相同醫藥組合物之後在注射部位之轉導率(感染率)。在一些實施例中，在SCS中投與醫藥組合物之後在注射部位之轉導率(感染率)等於或高於在經由視網膜下或靜脈內投與或投與至SCS投與參考醫藥組合物之後在注射部位之轉導率(感染率)。在一些實施例中，醫藥組合物具有比參考醫藥組合物高之AAV聚集水準。在一些實施例中，醫藥組合物及參考醫藥組合物具有相同載體基因體濃度。在一些實施例中，醫藥組合物及參考醫藥組合物具有相同量之基因體複本。在一些實施例中，在醫藥組合物投與至SCS之後注射部位之轉導率(感染率)比在經由視網膜下或經由玻璃體內投與來投與相同醫藥組合物之後在注射部位之轉導率(感染率)增加至少約2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍、至少5%、至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少100%、至少150%或至少200%、至少250%或至少300%、至少400%或至少500%。在一些實施例中，在醫藥組合物投與至SCS之後注射部位之轉導率(感染率)比在參考醫藥組合物投與至SCS或經由視網膜下或經由玻璃體內投與來投與之後在注射部位之轉導率(感染率)增加至少約2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍、至少5%、至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少100%、至少150%或至少200%、至少250%或至少300%、至少400%或至少500%。在一些實施例中，醫藥組合物具有比參考醫藥組合物高之AAV聚集水準。
在一些實施例中，在經脈絡膜上投與醫藥組合物之後在注射部位之AAV水準等於或高於在經由視網膜下投與或經由靜脈內投與來投與相同醫藥組合物之後在注射部位之AAV水準。在一些實施例中，在經脈絡膜上投與醫藥組合物之後在注射部位之AAV水準等於或高於在經由視網膜下或靜脈內投與或投與至SCS投與參考醫藥組合物之後在注射部位之AAV水準。在一些實施例中，醫藥組合物具有比參考醫藥組合物高之AAV聚集水準。在一些實施例中，醫藥組合物及參考醫藥組合物具有相同載體基因體濃度。在一些實施例中，醫藥組合物及參考醫藥組合物具有相同量之基因體複本。在一些實施例中，在注射部位之AAV水準的增加係增加至少約2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍、至少5%、至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少100%、至少150%或至少200%、至少250%或至少300%、至少400%或至少500%。
在一些實施例中，在醫藥組合物投與至SCS之後注射部位之AAV水準比在經由視網膜下或經由玻璃體內投與來投與相同醫藥組合物之後注射部位之AAV水準增加至少約2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍、至少5%、至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少100%、至少150%或至少200%、至少250%或至少300%、至少400%或至少500%。在一些實施例中，在醫藥組合物投與至SCS之後注射部位之AAV水準比在參考醫藥組合物投與至SCS或經由視網膜下或經由玻璃體內投與來投與之後注射部位之AAV水準增加至少約2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍、至少5%、至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少100%、至少150%或至少200%、至少250%或至少300%、至少400%或至少500%。在一些實施例中，醫藥組合物具有比參考醫藥組合物高之AAV聚集水準。
在一些實施例中，AAV水準或轉導率(感染率)在投與後約30分鐘、1小時、2小時、4小時、6小時、8小時、10小時、12小時、14小時、15小時、18小時、20小時、22小時、24小時、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、23天、25天、27天、30天、35天、40天、50天、55天、60天、65天、70天、75天、80天、85天、90天、95天、100天、120天、140天、160天、180天、200天、220天、240天、260天、280天、300天、320天、340天、360天、380天或至多約400天測定。 4.2.6 轉殖基因表現
在一些實施例中，在SCS中注射醫藥組合物之後轉殖基因產物之濃度至少等於或高於在SCS中注射參考醫藥組合物之後。在一些實施例中，在SCS中注射醫藥組合物之後轉殖基因產物之濃度至少等於或高於在藉由視網膜下注射或藉由玻璃體內注射來注射參考醫藥組合物之後。在一些實施例中，在SCS中注射醫藥組合物之後轉殖基因產物之濃度至少等於或高於在藉由視網膜下注射或藉由玻璃體內注射來注射相同醫藥組合物之後。
在一些實施例中，與在SCS中注射參考醫藥組合物之後相比，在SCS中注射醫藥組合物之後更長時段在眼睛(例如，玻璃狀液)中偵測到轉殖基因產物(例如，轉殖基因產物之濃度)。在一些實施例中，與在藉由視網膜下注射或藉由玻璃體內投與注射參考醫藥組合物之後相比，在SCS中注射醫藥組合物之後更長時段在眼睛(例如，玻璃狀液)中偵測到轉殖基因產物(例如，轉殖基因產物之濃度)。在一些實施例中，與在藉由視網膜下注射或藉由玻璃體內注射來注射相同醫藥組合物之後相比，在SCS中注射醫藥組合物之後更長時段在眼睛(例如，玻璃狀液)中偵測到轉殖基因產物(例如，轉殖基因產物之濃度)。
在一些實施例中，更長時段長至少約30分鐘、1小時、2小時、3小時、4小時、5小時、6小時、7小時、8小時、9小時、10小時、12小時、14小時、16小時、18小時、20小時、22小時、24小時、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、23天、25天、27天、30天、35天、40天、50天、55天、60天、65天、70天、75天、80天、85天、90天、95天、100天、120天、140天、160天、180天、200天、220天、240天、260天、280天、300天、320天、340天、360天、380天或400天。在一些實施例中，更長時段長約30分鐘、1小時、2小時、3小時、4小時、5小時、6小時、7小時、8小時、9小時、10小時、12小時、14小時、16小時、18小時、20小時、22小時、24小時、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、23天、25天、27天、30天、35天、40天、50天、55天、60天、65天、70天、75天、80天、85天、90天、95天、100天、120天、140天、160天、180天、200天、220天、240天、260天、280天、300天、320天、340天、360天、380天或400天。
在一些實施例中，在SCS中投與醫藥組合物之後在投與後至少約30分鐘、1小時、2小時、3小時、4小時、5小時、6小時、7小時、8小時、9小時、10小時、12小時、14小時、16小時、18小時、20小時、22小時、24小時、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、23天、25天、27天、30天、35天、40天、50天、55天、60天、65天、70天、75天、80天、85天、90天、95天、100天、120天、140天、160天、180天、200天、220天、240天、260天、280天、300天、320天、340天、360天、380天或400天的時段內在眼睛(例如，玻璃狀液)中偵測到轉殖基因。
在一些實施例中，在投與後至多約30分鐘、1小時、2小時、3小時、4小時、5小時、6小時、7小時、8小時、9小時、10小時、12小時、14小時、16小時、18小時、20小時、22小時、24小時、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、23天、25天、27天、30天、35天、40天、50天、55天、60天、65天、70天、75天、80天、85天、90天、95天或100天的時段內在眼睛(例如，玻璃狀液)中偵測到轉殖基因(例如，在經由視網膜下投與或經由玻璃體內投與或投與至SCS投與參考醫藥組合物之後；或在經由視網膜下或經由玻璃體內投與來投與醫藥組合物之後)。
在一些實施例中，眼睛(例如，玻璃狀液)中之轉殖基因產物之濃度可在投與醫藥組合物或參考醫藥組合物之後30分鐘、1小時、2小時、3小時、4小時、5小時、6小時、7小時、8小時、9小時、10小時、12小時、14小時、16小時、18小時、20小時、22小時、24小時、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、23天、25天、27天、30天、35天、40天、50天、55天、60天、65天、70天、75天、80天、85天、90天、95天、100天、120天、140天、160天、180天、200天、220天、240天、260天、280天、300天、320天、340天、360天、380天或400天測定。
在一些實施例中，醫藥組合物(例如，包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之AAV的經稀釋之調配物或較低離子強度之調配物)之脈絡膜上投與引起轉殖基因之濃度比藉由脈絡膜上投與例如使用參考醫藥組合物來投與包含編碼轉殖基因之表現卡匣之AAV時高，大至少2倍、大至少3倍、大至少4倍、大至少5倍、大至少6倍、大至少7倍、大至少8倍、大至少9倍、大至少10倍、大至少15倍、大至少20倍、大至少50倍、大至少100倍、大至少5%、大至少10%、大至少15%、大至少20%、大至少25%、大至少30%、大至少35%、至少40%、大至少45%、大至少50%、大至少55%、大至少60%、大至少65%、大至少70%、大至少75%、大至少80%、大至少85%、大至少90%、大至少95%、大至少100%、大至少150%或大至少200%、大至少250%或至少300%、大至少400%或大至少500%。
在一些實施例中，醫藥組合物(例如，包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之AAV的經稀釋之調配物或較低離子強度之調配物)之脈絡膜上投與引起轉殖基因之濃度比藉由視網膜下投與或藉由玻璃體內投與例如使用參考醫藥組合物(包含較低AVV聚集水準或不包含可偵測之AAV聚集)來投與包含編碼轉殖基因之表現卡匣之AAV時高，大至少2倍、大至少3倍、大至少4倍、大至少5倍、大至少6倍、大至少7倍、大至少8倍、大至少9倍、大至少10倍、大至少15倍、大至少20倍、大至少50倍、大至少100倍、大至少5%、大至少10%、大至少15%、大至少20%、大至少25%、大至少30%、大至少35%、至少40%、大至少45%、大至少50%、大至少55%、大至少60%、大至少65%、大至少70%、大至少75%、大至少80%、大至少85%、大至少90%、大至少95%、大至少100%、大至少150%或大至少200%、大至少250%或至少300%、大至少400%或大至少500%。
在一些實施例中，醫藥組合物(例如，包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之AAV的經稀釋之調配物或較低離子強度之調配物)之脈絡膜上投與引起轉殖基因之濃度比經由視網膜下投與或經由玻璃體內投與來投與相同醫藥組合物時高，大至少2倍、大至少3倍、大至少4倍、大至少5倍、大至少6倍、大至少7倍、大至少8倍、大至少9倍、大至少10倍、大至少15倍、大至少20倍、大至少50倍、大至少100倍、大至少5%、大至少10%、大至少15%、大至少20%、大至少25%、大至少30%、大至少35%、至少40%、大至少45%、大至少50%、大至少55%、大至少60%、大至少65%、大至少70%、大至少75%、大至少80%、大至少85%、大至少90%、大至少95%、大至少100%、大至少150%或大至少200%、大至少250%或至少300%、大至少400%或大至少500%。
在一些實施例中，在藉由脈絡膜上注射投與醫藥組合物(例如，包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之AAV的醫藥組合物)之後轉殖基因之濃度大於在藉由脈絡膜上注射投與參考醫藥組合物之後。在一些實施例中，在藉由脈絡膜上注射投與醫藥組合物(例如，包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之AAV的醫藥組合物)之後轉殖基因之濃度大於在藉由視網膜下投與或經由玻璃體內投與來投與參考醫藥組合物之後。  4.2.7 其他功能特性
在一些實施例中，本文所述之醫藥組合物具有適合脈絡膜上注射之期望AAV聚集水準。在一些實施例中，醫藥組合物中之重組AAV至少與參考醫藥組合物(或可比較之醫藥組合物)中之重組AAV一樣穩定。在一些實施例中，醫藥組合物中之重組AAV至少有參考醫藥組合物(或可比較之醫藥組合物)中之重組AAV 50%穩定。在一些實施例中，醫藥組合物中之重組AAV具有至少與參考醫藥組合物中之重組AAV相同或可比較之感染力水準。在一些實施例中，醫藥組合物中之重組AAV具有至少與參考醫藥組合物中之重組AAV相同或可比較之游離DNA水準。在一些實施例中，醫藥組合物中之重組AAV具有至少與參考醫藥組合物中之重組AAV相同或可比較之活體外相對效力(IVRP)。在一些實施例中，醫藥組合物中之重組AAV具有至少與參考醫藥組合物中之重組AAV相同或可比較之尺寸水準變化。
在某些實施例中，醫藥組合物中之重組AAV面對凍/融循環比參考醫藥組合物中之相同重組AAV穩定至少2%、5%、7%、10%、12%、15%、17%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、100%、2倍、3倍、5倍、10倍、100倍或1000倍。在一些實施例中，醫藥組合物中之重組AAV面對凍/融循環之穩定性至少為參考醫藥組合物中之相同重組AAV的約50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%。在某些實施例中，重組AAV之穩定性係藉由部分4.6及部分5中揭示之分析法來測定。
在某些實施例中，醫藥組合物中之重組AAV表現出比參考醫藥組合物中之相同重組AAV多至少2%、5%、7%、10%、12%、15%、17%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、100%、2倍、3倍、5倍、10倍、100倍或1000倍之感染力。在一些實施例中，醫藥組合物中之重組AAV具有參考醫藥組合物中之相同重組AAV之感染力的至少約50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%。在某些實施例中，重組AAV之病毒感染力係藉由本揭示案中揭示之分析法來測定。在某些實施例中，重組AAV之尺寸係藉由部分4.6及部分5中揭示之分析法來測定。在某些實施例中，在凍/融循環之前或之後量測尺寸。
在某些實施例中，醫藥組合物中之重組AAV在一段時間內(例如，當在-20℃下或在37℃下儲存時)，例如至少約或約1週、約2週、約3週、約4週、約1個月、約2個月、約3個月、約4個月、約5個月、約6個月、約7個月、約8個月、約9個月、約10個月、約11個月、12個月、約15個月、約18個月、約24個月、約2年、約3年、約4年，比參考醫藥組合物中之相同重組AAV穩定至少2%、5%、7%、10%、12%、15%、17%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、100%、2倍、3倍、5倍、10倍、100倍或1000倍。在一些實施例中，醫藥組合物中之重組AAV在一段時間內之穩定性至少為參考醫藥組合物中之相同重組AAV的約50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%。在某些實施例中，重組AAV在一段時間內之穩定性係藉由本揭示案中揭示之分析法來測定。在某些實施例中，重組AAV在一段時間內之穩定性係藉由部分4.6及部分5中揭示之分析法來測定。
在某些實施例中，醫藥組合物中之重組AAV的活體外相對效力(IVRP)比參考醫藥組合物中之相同重組AAV高至少2%、5%、7%、10%、12%、15%、17%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、100%、2倍、3倍、5倍、10倍、100倍或1000 (例如，當在-20℃下或在37℃下儲存時)。在一些實施例中，醫藥組合物中之重組AAV具有與參考醫藥組合物中之相同重組AAV約相同的活體外相對效力(IVRP)。在一些實施例中，醫藥組合物中之重組AAV具有參考醫藥組合物中之相同重組AAV的約50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%活體外相對效力(IVRP)。在某些實施例中，重組AAV之活體外相對效力(IVRP)係藉由本揭示案中揭示之分析法來測定。在某些實施例中，在凍/融循環之前或之後量測活體外相對效力(IVRP)。在某些實施例中，重組AAV之活體外相對效力(IVRP)係藉由部分4.6中揭示之分析法來測定。
在某些實施例中，醫藥組合物中之重組AAV具有比參考醫藥組合物中之相同重組AAV少至少2%、5%、7%、10%、12%、15%、17%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、100%、2倍、3倍、5倍、10倍、100倍或1000倍的游離DNA。在一些實施例中，醫藥組合物中之重組AAV具有與參考醫藥組合物中之相同重組AAV約相同量之游離DNA。在一些實施例中，醫藥組合物中之重組AAV具有的游離DNA之量約不超過參考醫藥組合物中之相同重組AAV的兩倍。在一些實施例中，醫藥組合物中之重組AAV具有的游離DNA之量為參考醫藥組合物中之相同重組AAV的約50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%。在一些實施例中，醫藥組合物中之重組AAV具有比參考醫藥組合物中之相同重組AAV多至少約50%、多約25%、多約15%、多約10%、多約5%、多約4%、多約3%、多約2%、多約1%、多約0%、少約1%、少約2%、少約5%、少約7%、少約10%、多約2倍、多約3倍、少約2倍或少約3倍的游離DNA。在某些實施例中，重組AAV之游離DNA係藉由部分4.6及部分5中揭示之分析法來測定。
在某些實施例中，醫藥組合物中之重組AAV在一段時間內(例如，當在-20℃下或在37℃下儲存時)，例如至少約或約1週、約2週、約3週、約4週、約1個月、約2個月、約3個月、約4個月、約5個月、約6個月、約7個月、約8個月、約9個月、約10個月、約11個月、約12個月、約15個月、約18個月、約24個月、約2年、約3年及約4年具有至多20%、15%、10%、8%、5%、4%、10%、2%或1%之尺寸變化。在某些實施例中，重組AAV之尺寸係藉由本揭示案中揭示之分析法來測定。在某些實施例中，在凍/融循環之前或之後量測尺寸。在某些實施例中，重組AAV之尺寸係藉由部分4.6中揭示之分析法來測定。
在某些實施例中，醫藥組合物中之重組AAV比參考醫藥組合物中之相同重組AAV穩定至少2%、5%、7%、10%、12%、15%、17%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、100%、2倍、3倍、5倍、10倍、100倍或1000倍(例如，當在-20℃下或在37℃下儲存時)。在一些實施例中，醫藥組合物中之重組AAV與參考醫藥組合物中之相同重組AAV約一樣穩定(例如，當在-20℃下或在37℃下儲存時)。在一些實施例中，醫藥組合物中之重組AAV的穩定性係參考醫藥組合物中之相同重組AAV的至少約50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或99% (例如，當在-20℃下或在37℃下儲存時)。在某些實施例中，重組AAV之穩定性係藉由部分4.6中揭示之分析法來測定。
在某些實施例中，如例如藉由部分4.6或中揭示之分析法所測定，本文提供之醫藥組合物能夠儲存1個月、2個月、3個月、4個月、5個月、6個月、7個月、8個月、9個月、10個月、12個月、13個月、14個月、15個月、16個月、17個月、18個月、19個月、20個月、21個月、22個月、23個月或24個月，不喪失穩定性。在某些實施例中，本文提供之醫藥組合物能夠在4℃下儲存1個月、2個月、3個月、4個月、5個月、6個月、7個月、8個月、9個月、10個月、12個月、13個月、14個月、15個月、16個月、17個月、18個月、19個月、20個月、21個月、22個月、23個月或24個月，不喪失穩定性。在某些實施例中，本文提供之醫藥組合物能夠在≤60℃下儲存1個月、2個月、3個月、4個月、5個月、6個月、7個月、8個月、9個月、10個月、12個月、13個月、14個月、15個月、16個月、17個月、18個月、19個月、20個月、21個月、22個月、23個月或24個月，不喪失穩定性。在某些實施例中，本文提供之醫藥組合物能夠在-80℃下儲存1個月、2個月、3個月、4個月、5個月、6個月、7個月、8個月、9個月、10個月、12個月、13個月、14個月、15個月、16個月、17個月、18個月、19個月、20個月、21個月、22個月、23個月或24個月，不喪失穩定性。在某些實施例中，本文提供之醫藥組合物能夠在-20℃下儲存1個月、2個月、3個月、4個月、5個月、6個月、7個月、8個月、9個月、10個月或12個月之後在4℃下儲存1個月、2個月、3個月、4個月、5個月、6個月、7個月、8個月、9個月、10個月、12個月、13個月、14個月、15個月、16個月、17個月、18個月、19個月、20個月、21個月、22個月、23個月或24個月，不喪失穩定性。
在某些實施例中，如例如藉由部分4.6或中揭示之分析法所測定，本文提供之醫藥組合物能夠首先在-80℃下儲存1個月、2個月、3個月、4個月、5個月、6個月、7個月、8個月、9個月、10個月、12個月、13個月、14個月、15個月、16個月、17個月、18個月、19個月、20個月、21個月、22個月、23個月或24個月，接著解凍且在解凍後，在2-10℃、4-8℃、2℃、3℃、4℃、5℃、6℃、7℃、8℃或9℃下再儲存1個月、2個月、3個月、4個月、5個月、6個月、7個月、8個月、9個月、10個月或12個月，不喪失穩定性。在某些實施例中，如例如藉由部分4.6或5中揭示之分析法所測定，本文提供之醫藥組合物能夠首先在-80℃下儲存1個月、2個月、3個月、4個月、5個月、6個月、7個月、8個月、9個月、10個月、12個月、13個月、14個月、15個月、16個月、17個月、18個月、19個月、20個月、21個月、22個月、23個月或24個月，接著解凍且在解凍後，在約4℃下再儲存1個月、2個月、3個月、4個月、5個月、6個月、7個月、8個月、9個月、10個月或12個月，不喪失穩定性。在某些實施例中，如例如藉由部分4.6或5中揭示之分析法所測定，本文提供之醫藥組合物能夠首先在≤60℃下儲存1個月、2個月、3個月、4個月、5個月、6個月、7個月、8個月、9個月、10個月、12個月、13個月、14個月、15個月、16個月、17個月、18個月、19個月、20個月、21個月、22個月、23個月或24個月，接著解凍且在解凍後，在約4℃下再儲存1個月、2個月、3個月、4個月、5個月、6個月、7個月、8個月、9個月、10個月或12個月，不喪失穩定性。
可藉由量測視力喪失、感染、炎症及其他安全事件(包括視網膜剝離)之徵象來監測本文提供之方法或醫藥組合物之效果。在一些實施例中，使用具有不同AAV聚集水準之不同醫藥組合物(例如，經稀釋之調配物或較低離子強度之調配物)在SCS中遞送載體。在一些實施例中，使用包含聚集AAV之醫藥組合物(例如，經稀釋之調配物或較低離子強度之調配物)遞送之載體比使用參考醫藥組合物遞送之載體(例如，當在SCS中投與時)更有效。在一些實施例中，與使用包含較低聚集AAV水準或不包含可偵測水準之聚集AAV之調配物遞送之載體相比，使用包含聚集AAV之調配物遞送之載體改善視力。
本文提供之方法或醫藥組合物之效果亦可藉由美國國家眼科研究所視覺功能問卷(National Eye Institute Visual Functioning Questionnaire)、羅氏評分版本(Rasch-scored version) (NEI-VFQ-28-R) (綜合評分；活動限制領域評分；及社會情感功能領域評分)自基線之變化來量測。在一些實施例中，本文提供之方法之效果亦可藉由美國國家眼科研究所視覺功能問卷25項版本(NEI-VFQ-25)(綜合評分及心理健康分量表評分)自基線之變化來量測。在一些實施例中，本文提供之方法之效果亦可藉由黃斑疾病治療滿意度問卷(MacTSQ) (綜合評分；安全性、功效及不適領域評分；以及資訊提供及便利性領域評分)從基線之變化來量測。
在具體實施例中，本文所述之方法或載體(載體調配物)之功效反映在約4週、12週、6個月、12個月、24個月、36個月或其他所需時間點之視力改善。在一個具體實施例中，視力改善之特徵在於BCVA增加，例如增加1個字母、2個字母、3個字母、4個字母、5個字母、6個字母、7個字母、8個字母、9個字母、10個字母、11個字母或12個字母或更多。在一個具體實施例中，視力改善之特徵在於視覺敏銳度自基線增加5%、10%、15%、20%、30%、40%、50%或更多。
在具體實施例中，治療後眼睛無炎症或治療後眼睛幾乎無炎症(例如，炎症水準自基線增加10%、5%、2%、1%或更少)。 4.3 劑量及投藥模式
在一態樣中，本文提供一種用於治療眼病之脈絡膜上投與方法，其包括向需要治療之人類個體之眼中之脈絡膜上腔投與重組病毒載體，該重組病毒載體包含編碼治療產物之核苷酸序列，以使得治療產物表現且治療眼病。在某些實施例中，投與步驟係藉由使用脈絡膜上藥物遞送裝置將重組病毒載體注射至脈絡膜上腔中。在某些實施例中，脈絡膜上藥物遞送裝置為微注射器。在一些實施例中，本文提供之醫藥組合物適合藉由一種、兩種或更多種投藥途徑投與(例如，適合脈絡膜上及視網膜下投與)。
在某些實施例中，醫藥組合物(或參考醫藥組合物)之載體基因體濃度(VGC)為約3×10 9GC/mL、約1×10 10GC/mL、約1.2×10 10GC/mL、約1.6×10 10GC/mL、約4×10 10GC/mL、約6×10 10GC/mL、約2×10 11GC/mL、約2.4×10 11GC/mL、約2.5×10 11GC/mL、約3×10 11GC/mL、約3.2×10 11GC/mL、約6.2×10 11GC/mL、約6.5×10 11GC/mL、約1×10 12GC/mL、約2.5×10 12GC/mL、約3×10 12GC/mL、約5×10 12GC/mL、約1.5×10 13GC/mL、約2×10 13GC/mL或約3×10 13GC/mL。
在某些實施例中，醫藥組合物(或參考醫藥組合物)之載體基因體濃度(VGC)為約3×10 9GC/mL、4×10 9GC/mL、5×10 9GC/mL、6×10 9GC/mL、7×10 9GC/mL、8×10 9GC/mL、9×10 9GC/mL、約1×10 10GC/mL、約2×10 10GC/mL、約3×10 10GC/mL、約4×10 10GC/mL、約5×10 10GC/mL、約6×10 10GC/mL、約7×10 10GC/mL、約8×10 10GC/mL、約9×10 10GC/mL、約1×10 11GC/mL、約2×10 11GC/mL、約3×10 11GC/mL、約4×10 11GC/mL、約5×10 11GC/mL、約6×10 11GC/mL、約7×10 11GC/mL、約8×10 11GC/mL、約9×10 11GC/mL、約1×10 12GC/mL、約2×10 12GC/mL、約3×10 12GC/mL、約4×10 12GC/mL、約5×10 12GC/mL、約6×10 12GC/mL、約7×10 12GC/mL、約8×10 12GC/mL、約9×10 12GC/mL、約1×10 13GC/mL、約1.5×10 13GC/mL、約2×10 13GC/mL、約3×10 13GC/mL。
在一些實施例中，醫藥組合物(例如，經稀釋之調配物或較低離子強度之調配物)之體積為能夠減小使鞏膜與脈絡膜分離之最小力的任何體積。在一些實施例中，醫藥組合物(例如，經稀釋之調配物或較低離子強度之調配物)之體積為約50 μL至約1000 μL、50 μL至約500 μL、50 μL至約400 μL、50 μL至約350 μL、50 μL至約300 μL、約50 μL至約275 μL、約50 μL至約250 μL、約50 μL至約225 μL、約50 μL至約200 μL、約50 μL至約175 μL、約50 μL至約150 μL、約60 μL至約140 μL、約70 μL至約130 μL、約80 μL至約120 μL、約90 μL至約110 μL或約100 μL。
在一些實施例中，脈絡膜上藥物遞送裝置為具有1毫米30規格針之注射器。在一些實施例中，注射器具有更大周長(例如，29規格針)。在使用此裝置進行注射期間，針刺入鞏膜底部，且含有藥物之流體進入脈絡膜上腔，導致脈絡膜上腔擴大。因此，在注射過程中會有觸覺及視覺反饋。注射後，流體向後流動且主要在脈絡膜及視網膜中吸收。此導致所有視網膜細胞層及脈絡膜細胞產生轉殖基因蛋白。使用此種類型之設備及程序可實現快速簡便之辦公室程序，併發症風險低。
在一些實施例中，基於醫藥組合物(例如，經稀釋之調配物或較低離子強度之調配物)之AAV聚集水準來選擇微針或注射器。在一些實施例中，基於當投與醫藥組合物(例如，經稀釋之調配物或較低離子強度之調配物)時在眼睛中(例如，在SCS中)產生之壓力來選擇微針。例如，具有較高AAV聚集水準之醫藥組合物(例如，經稀釋之調配物或較低離子強度之調配物)可受益於使用更寬之注射用微針。在一些實施例中，與使用較窄微針時獲得之壓力相比，當使用較寬微針時，SCS中之壓力較低。在一些實施例中，使用10規格針、11規格針、12規格針、13規格針、14規格針、15規格針、16規格針、17規格針、18規格針、19規格針、20規格針、21規格針、22規格針、23規格針、24規格針、25規格針、26規格針、27規格針、28規格針、29規格針、30規格針、31規格針、32規格針、33規格針或34規格針。在一些實施例中，使用27規格針。在一些實施例中，使用28規格針。在一些實施例中，使用29規格針。在一些實施例中，使用30規格針。在一些實施例中，使用31規格針。在一些實施例中，使用小於27規格針之規格。在一些實施例中，使用大於27規格針之規格。在一些實施例中，使用小於30規格針之規格。在一些實施例中，使用高於30規格針之規格。
在一些實施例中，投與醫藥組合物期間之壓力為約10 PSI、15 PSI、20 PSI、25 PSI、30 PSI、35 PSI、40 PSI、45 PSI、50 PSI、55 PSI、60 PSI、65 PSI、70 PSI、75 PSI、80 PSI、85 PSI、90 PSI、95 PSI、100 PSI、150 PSI或200 PSI。在一些實施例中，投與醫藥組合物期間之壓力不大於約10 PSI、15 PSI、20 PSI、25 PSI、30 PSI、35 PSI、40 PSI、45 PSI、50 PSI、55 PSI、60 PSI、65 PSI、70 PSI、75 PSI、80 PSI、85 PSI、90 PSI、95 PSI、100 PSI、150 PSI或200 PSI。在一些實施例中，投與醫藥組合物期間打開SCS之壓力不大於約10 PSI、15 PSI、20 PSI、25 PSI、30 PSI、35 PSI、40 PSI、45 PSI、50 PSI、55 PSI、60 PSI、65 PSI、70 PSI、75 PSI、80 PSI、85 PSI、90 PSI、95 PSI、100 PSI、150 PSI或200 PSI。在一些實施例中，投與醫藥組合物期間之壓力(或打開SCS所需之壓力)介於20 PSI與50 PSI、20 PSI與75 PSI、20 PSI與40 PSI、10 PSI與40 PSI、10 PSI與100 PSI或10 PSI與80 PSI之間。在一些實施例中，壓力隨著注射速率之降低(例如，壓力自4秒注射速率降低至10秒注射速率)而降低。在一些實施例中，壓力隨著針尺寸增加而降低。在一些實施例中，壓力隨著AAV聚集水準增加而增加。
希望劑量將轉殖基因產物之濃度維持在眼睛(例如，玻璃狀液)中至少0.330 µg/mL或水狀液(眼睛前房)中0.110 µg/mL之Cmin持續三個月；此後，應維持轉殖基因產物之玻璃體Cmin濃度範圍為1.70至6.60 µg/mL，及/或水狀液Cmin濃度範圍為0.567至2.20 µg/mL。然而，因為轉殖基因產物係連續產生的(在組成型啟動子之控制下或在使用缺氧誘導型啟動子時由缺氧條件誘導)，所以可有效維持較低濃度。可在自體液、眼液、玻璃狀液或前房收集之患者流體樣本中直接量測轉殖基因濃度，或者藉由量測患者之轉殖基因產物血清濃度來估計及/或監測——對轉殖基因產物之全身比玻璃體暴露比率為約1:90,000。(例如參見vitreous humor and serum concentrations of ranibizumab, Xu L等人報導, 2013, Invest. Opthal. Vis. Sci. 54: 1616-1624, 第1621頁及第1623頁表5，其以引用方式整體併入本文)。
在某些實施例中，劑量藉由每毫升基因體複本數(GC/mL)或投與至患者眼睛(例如，脈絡膜上)之基因體複本數來量測。在一些實施例中，投與2.4×10 11GC/mL至1×10 13GC/mL，投與2.4×10 11GC/mL至5×10 11GC/mL，投與5×10 11GC/mL至1×10 12GC/mL，投與1×10 12GC/mL至5×10 12GC/mL或投與5×10 12GC/mL至1×10 13GC/mL。在一些實施例中，投與1.5×10 13GC/mL至3×10 13GC/mL。在一些實施例中，投與約2.4×10 11GC/mL、約5×10 11GC/mL、約1×10 12GC/mL、約2.5×10 12GC/mL、約5×10 12GC/mL、約1×10 13GC/mL或約1.5×10 13GC/mL。在一些實施例中，投與1×10 9至1×10 12個基因體複本。在一些實施例中，投與3×10 9至2.5×10 11個基因體複本。在具體實施例中，投與1×10 9至2.5×10 11個基因體複本。在具體實施例中，投與1×10 9至1×10 11個基因體複本。在具體實施例中，投與1×10 9至5×10 9基因體複本。在具體實施例中，投與6×10 9至3×10 10個基因體複本。在具體實施例中，投與4×10 10至1×10 11個基因體複本。在具體實施例中，投與2×10 11至1×10 12個基因體複本。在一具體實施例中，投與約3×10 9基因體複本(其對應於250 μl體積中約1.2×10 10GC/mL)。在另一具體實施例中，投與約1×10 10個基因體複本(其對應於250 μl體積中約4×10 10GC/mL)。在另一具體實施例中，投與約6×10 10個基因體複本(其對應於250 μl體積中約2.4×10 11GC/mL)。在另一具體實施例中，投與約6.4×10 10個基因體複本(其對應於200 μl體積中約3.2×10 11GC/mL)。在另一具體實施例中，投與約1.3×10 11個基因體複本(其對應於200 μl體積中約6.5×10 11GC/mL)。在另一具體實施例中，投與約2.5×10 11個基因體複本(其對應於100 μl體積中約2.5×10 12GC/mL)。在另一具體實施例中，投與約5×10 11個基因體複本(其對應於200 μl體積中約5×10 12GC/mL)。在另一具體實施例中，投與約1.5×10 12個基因體複本(其對應於100 μl體積中約1.5×10 13GC/mL)。在一些實施例中，每隻眼睛或每劑或每種投藥途徑投與約6.4×10 10個基因體複本。在一些實施例中，約6.4×10 10基因體複本為所投與之基因體複本之總數。在一些實施例中，每隻眼睛或每劑或每種投藥途徑投與約1.3×10 11個基因體複本。在一些實施例中，約1.3×10 11個基因體複本為所投與之基因體複本之總數。在一些實施例中，每隻眼睛或每劑或每種投藥途徑投與約2.5×10 11個基因體複本。在一些實施例中，約2.5×10 11個基因體複本為所投與之基因體複本之總數。在一些實施例中，每隻眼睛或每劑或每種投藥途徑投與約5×10 11個基因體複本。在一些實施例中，約5×10 11個基因體複本為所投與之基因體複本之總數。在一些實施例中，每隻眼睛或每劑或每種投藥途徑投與約1.5×10 12個基因體複本。在一些實施例中，約1.5×10 12個基因體複本為所投與之基因體複本之總數。在一些實施例中，每隻眼睛或每劑或每種投藥途徑投與約3×10 12個基因體複本。在一些實施例中，約3×10 12個基因體複本為所投與之基因體複本之總數。在另一具體實施例中，投與約1.6×10 11個基因體複本(其對應於250 μl體積中約6.2×10 11GC/mL)。在另一具體實施例中，投與約1.55×10 11個基因體複本(其對應於250 μl體積中約6.2×10 11GC/mL)。在另一具體實施例中，投與約1.6×10 11個基因體複本(其對應於250 μl體積中約6.4×10 11GC/mL)。在另一具體實施例中，投與約2.5×10 11個基因體複本(其對應於250 μl體積中約1.0×10 12)。
在某些實施例中，每次投與或每隻眼睛投與約6.0×10 10個基因體複本。在某些實施例中，每次投與或每隻眼睛投與約6.4×10 10個基因體複本。在某些實施例中，每次投與或每隻眼睛投與約1.3×10 11個基因體複本。在某些實施例中，每次投與或每隻眼睛投與約1.6×10 11個基因體複本。在某些實施例中，每次投與或每隻眼睛投與約2.5×10 11個基因體複本。在某些實施例中，每次投與或每隻眼睛投與約5.0×10 11個基因體複本。在某些實施例中，每次投與或每隻眼睛投與約3×10 12個基因體複本。在某些實施例中，每次投與或每隻眼睛投與約1.0×10 12GC/mL。在某些實施例中，每次投與或每隻眼睛投與約2.5×10 12GC/mL。在某些實施例中，每次投與或每隻眼睛投與約3.0×10 13個基因體複本。在某些實施例中，每次投與或每隻眼睛投與至多3.0×10 13個基因體複本。
在某些實施例中，藉由脈絡膜上注射每次投與或每隻眼睛投與約2.5×10 11個基因體複本。在某些實施例中，藉由脈絡膜上注射每次投與或每隻眼睛投與約5.0×10 11個基因體複本。在某些實施例中，藉由脈絡膜上注射每次投與或每隻眼睛投與約1.5×10 12個基因體複本。在某些實施例中，藉由脈絡膜上注射每次投與或每隻眼睛投與約3×10 12個基因體複本。在某些實施例中，藉由單次脈絡膜上注射每隻眼睛投與約2.5×10 11個基因體複本。在某些實施例中，藉由雙重脈絡膜上注射每次投與或每隻眼睛投與約5.0×10 11個基因體複本。在某些實施例中，藉由脈絡膜上注射每次投與或每隻眼睛投與約3.0×10 13個基因體複本。在某些實施例中，藉由脈絡膜上注射每次投與或每隻眼睛投與至多3.0×10 13個基因體複本。在某些實施例中，藉由單次脈絡膜上注射每隻眼睛投與100 μl體積中約2.5×10 12GC/mL。在某些實施例中，藉由雙重脈絡膜上注射每隻眼睛投與約2.5×10 12GC/mL，其中每次注射在100 μl體積中。在某些實施例中，藉由單次脈絡膜上注射每隻眼睛投與100 μl體積中約1.5×10 13GC/mL。
在一些實施例中，向人類個體(例如，脈絡膜上、視網膜下或玻璃體內)投與醫藥組合物或參考醫藥組合物一次、兩次、三次、四次、五次、六次、七次、八次、九次、十次、十五次、二十次、二十五次或三十次。在一些實施例中，一天一次、一天兩次、一天三次、一天四次、一天五次、一天六次或一天七次向人類個體投與醫藥組合物或參考醫藥組合物。在一些實施例中，每次投與投與相同量之AAV基因體複本。舉例而言，經脈絡膜上、視網膜下或玻璃體內投與相同基因體複本。在一些實施例中，投與相同總量之AAV基因體複本。舉例而言，無論總投藥次數如何，經脈絡膜上、視網膜下或玻璃體內投與相同總量之AAV基因體複本(例如，若視網膜下投與進行一次，且脈絡膜上投與進行兩次，則一次視網膜下投與中之基因組複本與兩次脈絡膜上組合投與中之基因組複本相同)。
如本文所用且除非另有說明，否則術語「約」意謂在給定值或範圍之正負10%以內。 4.4 構築體及調配物
在一些實施例中，本文提供之重組載體包含按以下順序之以下元件：a)組成型或缺氧誘導型啟動子序列，及b)編碼轉殖基因(例如治療產物)之序列。在某些實施例中，本文提供之重組載體包含按以下順序之以下元件：a)第一ITR序列、b)第一連接子序列、c)組成型或缺氧誘導型啟動子序列、d)第二連接子序列、e)內含子序列、f)第三連接子序列、g)第一UTR序列、h)編碼轉殖基因之序列(例如，抗VEGF抗原結合片段部分)、i)第二UTR序列、j)第四連接子序列、k)聚A序列、l)第五連接子序列及m)第二ITR序列。
在某些實施例中，本文提供之重組載體包含按以下順序之以下元件：a)第一ITR序列、b)第一連接子序列、c)組成型或缺氧誘導型啟動子序列、d)第二連接子序列、e)內含子序列、f)第三連接子序列、g)第一UTR序列、h)編碼轉殖基因之序列(例如，抗VEGF抗原結合片段部分)、i)第二UTR序列、j)第四連接子序列、k)聚A序列、l)第五連接子序列及m)第二ITR序列，其中該轉殖基因包含VEGF之單肽(SEQ ID NO: 5)，且其中該轉殖基因編碼由可裂解F/F2A序列分開之輕鏈及重鏈序列。
在一些實施例中，本文提供之AAV (AAV病毒載體)包含按以下順序之以下元件：a)組成型或缺氧誘導型啟動子序列，及b)編碼轉殖基因之序列(例如，抗VEGF抗原結合片段部分)。在一些實施例中，轉殖基因為針對VEGF之完全人類轉譯後修飾(HuPTM)抗體。在一些實施例中，針對VEGF之完全人類轉譯後修飾抗體為針對VEGF之單株抗體(mAb)之完全人類轉譯後修飾抗原結合片段(「HuPTMFabVEGFi」)。在一些實施例中，HuPTMFabVEGFi為抗VEGF mAb之完全人類糖基化抗原結合片段(「HuGlyFabVEGFi」)。在替代實施例中，可使用全長mAb。在一些實施例中，用於遞送轉殖基因之AAV應對人類視網膜細胞或感光受體細胞具有向性。此類AAV可包括非複製性重組腺相關病毒載體(「rAAV」)，尤其較佳為攜帶AAV8殼體之彼等載體。在一具體實施例中，本文所述之病毒載體或其他DNA表現構築體為構築體I，其中該構築體I包含以下組分：(1)位於表現卡匣側面之AAV8反向末端重複序列；(2)控制元件，其包括a) CB7啟動子，包含CMV強化子/雞β-肌動蛋白啟動子，b)雞β-肌動蛋白內含子，及c)兔β-球蛋白聚A信號；及(3)編碼抗VEGF抗原結合片段之重鏈及輕鏈的核酸序列，由自裂解弗林蛋白酶(F)/F2A連接子分開，確保表現等量之重鏈及輕鏈多肽。在一些實施例中，病毒載體包含信號肽。在一些實施例中，信號肽為MYRMQLLLLIALSLALVTNS (SEQ ID NO: 55)。在一些實施例中，信號肽源自於IL-2信號序列。在一些實施例中，病毒載體包含來自表1中揭示之任何信號肽之信號肽，諸如MNFLLSWVHW SLALLLYLHH AKWSQA (VEGF-A信號肽) (SEQ ID NO: 5)；MERAAPSRRV PLPLLLLGGL ALLAAGVDA (腓骨蛋白-1信號肽) (SEQ ID NO: 6)；MAPLRPLLIL ALLAWVALA (玻連蛋白信號肽) (SEQ ID NO: 7)；MRLLAKIICLMLWAICVA (補體因子H信號肽) (SEQ ID NO: 8)；MRLLAFLSLL ALVLQETGT (視蛋白信號肽) (SEQ ID NO: 9)；MKWVTFISLLFLFSSAYS (白蛋白信號肽) (SEQ ID NO: 22)；MAFLWLLSCWALLGTTFG (胰凝乳蛋白酶原信號肽) (SEQ ID NO: 23)；MYRMQLLSCIALILALVTNS (介白素-2信號肽) (SEQ ID NO: 24)；MNLLLILTFVAAAVA (胰蛋白酶原-2信號肽) (SEQ ID NO: 25)；或MYRMQLLLLIALSLALVTNS (突變介白素-2信號肽) (SEQ ID NO: 55)。在另一具體實施例中，本文所述之病毒載體或其他DNA表現構築體為構築體II，其中該構築體II包含以下組分：(1)位於表現卡匣側面之AAV2反向末端重複序列；(2)控制元件，其包括a) CB7啟動子，包含CMV強化子/雞β-肌動蛋白啟動子，b)雞β-肌動蛋白內含子，及c)兔β-球蛋白聚A信號；及(3)編碼抗VEGF抗原結合片段之重鏈及輕鏈的核酸序列，由自裂解弗林蛋白酶(F)/F2A連接子分開，確保表現等量之重鏈及輕鏈多肽。在一些實施例中，抗hVEGF抗體包含：重鏈，其包含SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:4之胺基酸序列；及輕鏈，其包含SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:3之胺基酸序列。
在一些實施例中，病毒載體或其他適合包裝在AAV殼體中之表現構築體包含(1)位於表現卡匣側面之AAV反向末端重複序列(ITR)；(2)調節控制元件，其基本上由一或多種強化子及/或啟動子、d)聚A信號及e)視情況內含子組成；及(3)提供(例如，編碼)所關注之一或多種RNA或蛋白質產物的轉殖基因。
在一些態樣中，本揭示案提供一種供使用之核酸，其中該核酸編碼與本文所述之啟動子或強化子-啟動子可操作地連接之治療產物。
在一些態樣中，本揭示案提供一種供使用之核酸，其中該核酸編碼與啟動子可操作地連接的HuPTMFabVEGFi，例如HuGlyFabVEGFi，該啟動子選自由以下組成之群：CB7啟動子(雞β-肌動蛋白啟動子及CMV強化子)、巨細胞病毒(CMV)啟動子、勞斯肉瘤病毒(Rous sarcoma virus，RSV)啟動子、MMT啟動子、EF-1α啟動子、UB6啟動子、雞β-肌動蛋白啟動子、CAG啟動子、RPE65啟動子及視蛋白啟動子。在一具體實施例中，HuPTMFabVEGFi與CB7啟動子可操作地連接。
在某些實施例中，本文提供包含一或多種核酸(例如多核苷酸)之重組載體。核酸可包括DNA、RNA或DNA與RNA之組合。在某些實施例中，DNA包含一或多種選自由以下組成之群的序列：啟動子序列、編碼所關注之治療產物(轉殖基因，例如抗VEGF抗原結合片段)之序列、未轉譯區及終止序列。在某些實施例中，本文提供之重組載體包含與編碼所關注之治療產物之序列可操作連接之啟動子。
在某些實施例中，本文揭示之核酸(例如，多核苷酸)及核酸序列可例如經由熟習所屬領域技術者已知之任何密碼子優化技術進行密碼子優化(參見例如Quax等人, 2015, Mol Cell 59:149-161之評述)。
在某些實施例中，本文提供之重組載體包含編碼所關注之治療產物(例如轉殖基因，例如抗VEGF抗原結合片段部分)之經修飾之mRNA。在某些實施例中，本文提供編碼抗VEGF抗原結合片段部分之經修飾之mRNA。在某些實施例中，本文提供之重組載體包含編碼治療產物之核苷酸序列，該治療產物為shRNA、siRNA或miRNA。
在某些實施例中，本文提供之載體包含調節蛋白質遞送之組分。在某些實施例中，本文提供之病毒載體包含一或多種信號肽。信號肽之實例包括但不限於VEGF-A信號肽(SEQ ID NO: 5)、腓骨蛋白-1信號肽(SEQ ID NO: 6)、玻連蛋白信號肽(SEQ ID NO: 7)、補體因子H信號肽(SEQ ID NO: 8)、視蛋白信號肽(SEQ ID NO: 9)、白蛋白信號肽(SEQ ID NO: 22)、胰凝乳蛋白酶原信號肽(SEQ ID NO: 23)、介白素-2信號肽(SEQ ID NO: 24)及胰蛋白酶原-2信號肽(SEQ ID NO: 25)、突變介白素-2信號肽(SEQ ID NO: 55)。  (a) 病毒載體
在一些實施例中，本文提供之病毒載體係基於AAV之病毒載體。在較佳實施例中，本文提供之病毒載體係基於AAV8之病毒載體。在某些實施例中，本文提供之基於AAV8之病毒載體保留對視網膜細胞之向性。在某些實施例中，本文提供之基於AAV之載體編碼AAV rep基因(複製所需)及/或AAV cap基因(殼蛋白合成所需)。已鑑別出多種AAV血清型。在某些實施例中，本文提供之基於AAV之載體包含來自一或多種AAV血清型之組分。在某些實施例中，本文提供之基於AAV之載體包含來自以下一或多種之殼體組分：AAV1、AAV2、AAV2tYF、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10、AAV11、AAVrh10、AAV.rh20、AAV.rh39、AAV.Rh74、AAV.RHM4-1、AAV.hu37、AAV.Anc80、AAV.Anc80L65、rAAV.7m8、AAV.PHP.B、AAV.PHP.eB、AAV2.5、AAV2tYF、AAV3B、AAV.LK03、AAV.HSC1、AAV.HSC2、AAV.HSC3、AAV.HSC4、AAV.HSC5、AAV.HSC6、AAV.HSC7、AAV.HSC8、AAV.HSC9、AAV.HSC10、AAV.HSC11、AAV.HSC12、AAV.HSC13、AAV.HSC14、AAV.HSC15及AAV.HSC16。在較佳實施例中，本文提供之基於AAV之載體包含來自AAV8、AAV9、AAV10、AAV11或AAVrh10血清型中之一或多種之組分。在某些實施例中，本文提供之重組病毒載體經改變，使得其在人類中係複製缺陷的。在某些實施例中，重組病毒載體為雜合載體，例如置於「無助」腺病毒載體中之AAV載體。在某些實施例中，本文提供包含來自第一病毒之病毒殼體及來自第二病毒之病毒包膜蛋白之重組病毒載體。在具體實施例中，第二病毒為水泡性口炎病毒(VSV)。在更具體之實施例中，包膜蛋白為VSV-G蛋白。
在特定實施例中，提供AAV8載體，其包含：病毒基因體，其包含用於表現轉殖基因之表現卡匣，該表現卡匣處於調節元件控制下且兩側為ITR；及病毒殼體，其具有AAV8殼蛋白之胺基酸序列或與AAV8殼蛋白之胺基酸序列(SEQ ID NO: 48)至少95%、96%、97%、98%、99%或99.9%一致，同時保留AAV8殼體之生物功能。在某些實施例中，經編碼之AAV8殼體具有SEQ ID NO: 48之序列，具有1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、10個、11個、12個、13個、14個、15個、16個、17個、18個、19個、20個、21個、22個、23個、24個、25個、26個、27個、28個、29個或30個胺基酸取代且保留AAV8殼體之生物功能。
在某些實施例中，在本文所述之方法中使用之AAV為Anc80或Anc80L65，如Zinn等人, 2015, Cell Rep. 12(6): 1056-1068 (其以引用之方式整體併入)中所述。在某些實施例中，在本文所述之方法中使用之AAV包含以下胺基酸插入之一：LGETTRP或LALGETTRP，如美國專利第9,193,956號、第9458517號及第9,587,282號及美國專利申請公開案第2016/0376323號(各以引用之方式整體併入本文中)中所述。在某些實施例中，在本文所述之方法中使用之AAV為AAV.7m8，如美國專利第9,193,956號、第9,458,517號及第9,587,282號及美國專利申請公開案第2016/0376323號(各以引用之方式整體併入本文中)中所述。在某些實施例中，在本文所述之方法中使用之AAV為美國專利第9,585,971號中揭示之任何AAV，諸如AAV.PHP.B。在某些實施例中，在本文所述之方法中使用之AAV為以下專利及專利申請案(各以引用之方式整體併入本文中)中之任一者中揭示的AAV：美國專利第7,906,111號、第8,524,446號、第8,999,678號、第8,628,966號、第8,927,514號、第8,734,809號、第US 9,284,357號、第9,409,953號、第9,169,299號、第9,193,956號、第9458517號及第9,587,282號；美國專利申請公開案第2015/0374803號、第2015/0126588號、第2017/0067908號、第2013/0224836號、第2016/0215024號、第2017/0051257號；及國際專利申請案第PCT/US2015/034799號、第PCT/EP2015/053335號。
本文所述之某些方法中使用基於AAV8之病毒載體。基於AAV之病毒載體之核酸序列及製造重組AAV及AAV殼體之方法在例如美國專利第7,282,199 B2號、美國專利第7,790,449 B2號、美國專利第8,318,480 B2號、美國專利第8,962,332 B2號及國際專利申請案第PCT/EP2014/076466號(各以引用之方式整體併入本文中)中教示。在一態樣中，本文提供編碼轉殖基因(例如，抗VEGF抗原結合片段)之基於AAV (例如，AAV8)之病毒載體。在具體實施例中，本文提供編碼抗VEGF抗原結合片段之基於AAV8之病毒載體。在更具體之實施例中，本文提供編碼蘭尼單抗(ranibizumab)之基於AAV8之病毒載體。
在某些實施例中，可使用單股AAV (ssAAV) (同上述)。在某些實施例中，可使用自互補型載體，例如scAAV (參見例如Wu, 2007, Human Gene Therapy, 18(2):171-82；McCarty等人, 2001, Gene Therapy, 第8卷, 第16期, 第1248-1254頁；及美國專利第6,596,535號；第7,125,717號；及第7,456,683號(各以引用之方式整體併入本文中))。
在某些實施例中，本文所述之方法中使用之病毒載體係基於腺病毒之病毒載體。重組腺病毒載體可用於轉移抗VEGF抗原結合片段。重組腺病毒可為第一代載體，具有E1缺失、具有或不具有E3缺失，且表現卡匣插入至任一缺失區域中。重組腺病毒可為第二代載體，其含有E2及E4區域之全部或部分缺失。輔助病毒依賴型腺病毒僅保留腺病毒反向末端重複序列及包裝信號(φ)。轉殖基因插入在包裝信號與3'ITR之間，有或無填充序列，以保持基因體接近大約36 kb之野生型大小。產生腺病毒載體之示例性方案可見於Alba等人, 2005, 「Gutless adenovirus: last generation adenovirus for gene therapy」, Gene Therapy 12:S18-S27 (其以引用之方式整體併入本文中)。
在一具體實施例中，用於本文所述之方法中之載體係編碼抗VEGF抗原結合片段(例如蘭尼單抗)之載體，使得在將載體引入相關細胞(例如，活體內或活體外視網膜細胞)後，細胞表現抗VEGF抗原結合片段之糖基化及或酪胺酸硫酸化變異體。在一具體實施例中，表現之抗VEGF抗原結合片段包含糖基化及/或酪胺酸硫酸化模式。 (b) 治療產物或轉殖基因
治療產物可例如為治療性蛋白質(例如抗體)、治療性RNA (例如shRNA、siRNA及miRNA)或治療性適體。
在某些實施例中，本揭示案提供一種醫藥組合物，其包含編碼轉殖基因之重組AAV。在一些實施例中，本文提供編碼抗VEGF Fab或抗VEGF抗體之rAAV病毒載體。在一些實施例中，本文提供編碼抗VEGF Fab或抗VEGF抗體之基於rAAV8之病毒載體。在一些實施例中，本文提供編碼蘭尼單抗之基於rAAV8之病毒載體。在一些實施例中，本文提供編碼艾杜糖醛酸酶(IDUA)之rAAV病毒載體。在一些實施例中，本文提供編碼IDUA之基於rAAV9之病毒載體。在一些實施例中，本文提供編碼艾杜糖2-硫酸酯酶(IDS)之rAAV病毒載體。在一些實施例中，本文提供編碼IDS之基於rAAV9之病毒載體。在一些實施例中，本文提供編碼低密度脂蛋白受體(LDLR)之rAAV病毒載體。在一些實施例中，本文提供編碼LDLR之基於rAAV8之病毒載體。在一些實施例中，本文提供編碼三肽基肽酶1 (TPP1)蛋白之rAAV病毒載體。在一些實施例中，本文提供編碼TPP1之基於rAAV9之病毒載體。在一些實施例中，本文提供編碼微小抗肌萎縮蛋白之rAAV病毒載體。在一些實施例中，本文提供編碼微小抗肌萎縮蛋白之基於rAAV8之病毒載體。在一些實施例中，本文提供編碼微小抗肌萎縮蛋白之基於rAAV9之病毒載體。在一些實施例中，本文提供編碼抗激肽釋放素(抗pKal)蛋白之rAAV病毒載體。在一些實施例中，本文提供編碼拉那魯單抗(lanadelumab) Fab或全長抗體之基於rAAV8或基於rAAV9之病毒載體。在一些實施例中，本文提供編碼人類-α-肌聚糖-γ-肌聚糖之rAAV病毒載體。在一些實施例中，本文提供編碼人卵泡抑素344之rAAV病毒載體。在一些實施例中，本文提供編碼人類-α-肌聚糖-γ-肌聚糖之rAAV病毒載體。在一些實施例中，本文提供編碼CLN2之rAAV病毒載體。在一些實施例中，本文提供編碼CLN3之rAAV病毒載體。在一些實施例中，本文提供編碼CLN6之rAAV病毒載體。在一些實施例中，本文提供編碼人類-α-肌聚糖-γ-肌聚糖之基於rAAV8或基於rAAV9之病毒載體。在一些實施例中，本文提供編碼人卵泡抑素344之基於rAAV8或基於rAAV9之病毒載體。在一些實施例中，本文提供編碼人類-α-肌聚糖-γ-肌聚糖之基於rAAV8或基於rAAV9之病毒載體。在一些實施例中，本文提供編碼CLN2之基於rAAV8或基於rAAV9之病毒載體。在一些實施例中，本文提供編碼CLN3之基於rAAV8或基於rAAV9之病毒載體。在一些實施例中，本文提供編碼CLN6之基於rAAV8或基於rAAV9之病毒載體。
在某些實施例中，治療產物(例如，轉殖基因)為：(1)抗人類血管內皮生長因子(hVEGF)抗體或適體；(2)抗hVEGF抗原結合片段；(3)抗hVEGF抗原結合片段為Fab、F(ab’)2或單鏈可變片段(scFv)；(4)棕櫚醯-蛋白硫酯酶1 (PPT1)；(5)三肽基-肽酶1 (TPP1)；(6)巴登蛋白(Battenin) (CLN3)；及(7) CLN6跨膜ER蛋白(CLN6)。
在某些實施例中，本揭示案提供一種醫藥組合物，其包含編碼轉殖基因之重組AAV。在一些實施例中，本文提供編碼抗VEGF Fab或抗VEGF抗體之rAAV病毒載體。在一些實施例中，本文提供編碼抗VEGF Fab或抗VEGF抗體之基於rAAV8之病毒載體。在更多實施例中，本文提供編碼蘭尼單抗之基於rAAV8之病毒載體。在一些實施例中，本文提供編碼艾杜糖醛酸酶(IDUA)之rAAV病毒載體。在一些實施例中，本文提供編碼IDUA之基於rAAV9之病毒載體。在一些實施例中，本文提供編碼艾杜糖2-硫酸酯酶(IDS)之rAAV病毒載體。在一些實施例中，本文提供編碼IDS之基於rAAV9之病毒載體。在一些實施例中，本文提供編碼低密度脂蛋白受體(LDLR)之rAAV病毒載體。在一些實施例中，本文提供編碼LDLR之基於rAAV8之病毒載體。在一些實施例中，本文提供編碼三肽基肽酶1 (TPP1)蛋白之rAAV病毒載體。在一些實施例中，本文提供編碼TPP1之基於rAAV9之病毒載體。在一些實施例中，本文提供編碼微小抗肌萎縮蛋白之rAAV病毒載體。在一些實施例中，本文提供編碼微小抗肌萎縮蛋白之基於rAAV8之病毒載體。在一些實施例中，本文提供編碼微小抗肌萎縮蛋白之基於rAAV9之病毒載體。在一些實施例中，本文提供編碼抗激肽釋放素(抗pKal)蛋白之rAAV病毒載體。在一些實施例中，本文提供編碼拉那魯單抗Fab或全長抗體之基於rAAV8或基於rAAV9之病毒載體。在一些實施例中，本文提供編碼人類-α-肌聚糖-γ-肌聚糖之rAAV病毒載體。在一些實施例中，本文提供編碼人卵泡抑素344之rAAV病毒載體。在一些實施例中，本文提供編碼人類-α-肌聚糖-γ-肌聚糖之rAAV病毒載體。在一些實施例中，本文提供編碼CLN2之rAAV病毒載體。在一些實施例中，本文提供編碼CLN3之rAAV病毒載體。在一些實施例中，本文提供編碼CLN6之rAAV病毒載體。在一些實施例中，本文提供編碼人類-α-肌聚糖-γ-肌聚糖之基於rAAV8或基於rAAV9之病毒載體。在一些實施例中，本文提供編碼人卵泡抑素344之基於rAAV8或基於rAAV9之病毒載體。在一些實施例中，本文提供編碼人類-α-肌聚糖-γ-肌聚糖之基於rAAV8或基於rAAV9之病毒載體。在一些實施例中，本文提供編碼CLN2之基於rAAV8或基於rAAV9之病毒載體。在一些實施例中，本文提供編碼CLN3之基於rAAV8或基於rAAV9之病毒載體。在一些實施例中，本文提供編碼CLN6之基於rAAV8或基於rAAV9之病毒載體。
在某些實施例中，本文提供之載體可用於：(1)與巴登蛋白-CLN1相關之眼部病變且治療產物為棕櫚醯-蛋白硫酯酶1 (PPT1)；(2)與巴登蛋白-CLN2相關之眼部病變且治療產物為三肽基-肽酶1 (TPP1)；(3)與巴登蛋白-CLN3相關之眼部病變且治療產物為巴登蛋白(CLN3)；(4)與巴登蛋白-CLN6相關之眼部病變且治療產物為CLN6跨膜ER蛋白(CLN6)；(5)與巴登蛋白-CLN7相關之眼部病變且治療產物為含主要協同轉運蛋白超家族結構域蛋白8 (MFSD8)；及(6)與巴登蛋白-CLN1相關之眼部病變且治療產物為棕櫚醯-蛋白硫酯酶1 (PPT1)。
在一些實施例中，由轉殖基因編碼之HuPTMFabVEGFi，例如HuGlyFabVEGFi可包括但不限於結合VEGF之抗體之抗原結合片段，諸如貝伐單抗(bevacizumab)；抗VEGF Fab部分，諸如蘭尼單抗；或經工程改造以在Fab結構域上含有額外糖基化位點之此類貝伐單抗或蘭尼單抗Fab部分(例如，參見Courtois等人, 2016, mAbs 8: 99-112，其中關於在全長抗體之Fab結構域上高糖基化之貝伐單抗衍生物之描述以引用之方式整體併入本文中)。
在某些實施例中，本文提供之載體編碼抗VEGF抗原結合片段轉殖基因。在具體實施例中，抗VEGF抗原結合片段轉殖基因在視網膜細胞中表現由適當表現控制元件控制：在某些實施例中，抗VEGF抗原結合片段轉殖基因包含輕鏈及重鏈cDNA序列(分別SEQ ID No: 10及11)之貝伐單抗Fab部分。在某些實施例中，抗VEGF抗原結合片段轉殖基因包含蘭尼單抗輕鏈及重鏈cDNA序列(分別SEQ ID No: 12及13)。在某些實施例中，抗VEGF抗原結合片段轉殖基因編碼包含分別SEQ ID NO: 3及4之輕鏈及重鏈的貝伐單抗Fab。在某些實施例中，抗VEGF抗原結合片段轉殖基因編碼包含輕鏈之抗原結合片段，該輕鏈包含與SEQ ID NO: 3中所示之序列至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、910%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致的胺基酸序列。在某些實施例中，抗VEGF抗原結合片段轉殖基因編碼包含重鏈之抗原結合片段，該重鏈包含與SEQ ID NO: 4中所示之序列至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、910%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致的胺基酸序列。在某些實施例中，抗VEGF抗原結合片段轉殖基因編碼抗原結合片段，該抗原結合片段包含：輕鏈，該輕鏈包含與SEQ ID NO: 3中所示之序列至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、910%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致的胺基酸序列；及重鏈，該重鏈包含與SEQ ID NO: 4中所示之序列至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、910%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致的胺基酸序列。在某些實施例中，抗VEGF抗原結合片段轉殖基因編碼包含分別SEQ ID NO: 1及2之輕鏈及重鏈的高糖基化蘭尼單抗。在某些實施例中，抗VEGF抗原結合片段轉殖基因編碼包含輕鏈之抗原結合片段，該輕鏈包含與SEQ ID NO: 1中所示之序列至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、910%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致的胺基酸序列。在某些實施例中，抗VEGF抗原結合片段轉殖基因編碼包含重鏈之抗原結合片段，該重鏈包含與SEQ ID NO: 2中所示之序列至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、910%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致的胺基酸序列。在某些實施例中，抗VEGF抗原結合片段轉殖基因編碼包含抗原結合片段，該抗原結合片段包含：輕鏈，該輕鏈包含與SEQ ID NO: 1中所示之序列至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、910%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致的胺基酸序列；及重鏈，該重鏈包含與SEQ ID NO: 2中所示之序列至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、910%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致的胺基酸序列。
在某些實施例中，抗VEGF抗原結合片段轉殖基因編碼高糖基化貝伐單抗Fab，其包含SEQ ID NO: 3及4之輕鏈及重鏈，具有一或多個以下突變：L118N (重鏈)、E195N (輕鏈)或Q160N或Q160S (輕鏈)。在某些實施例中，抗VEGF抗原結合片段轉殖基因編碼高糖基化蘭尼單抗，其包含SEQ ID NO: 1及2之輕鏈及重鏈，具有一或多個以下突變：L118N (重鏈)、E195N (輕鏈)或Q160N或Q160S (輕鏈)。抗原結合片段轉殖基因cDNA之序列可見於例如表1中。在某些實施例中，抗原結合片段轉殖基因cDNA之序列藉由用一或多種信號序列替換SEQ ID NO: 10及11或SEQ ID NO: 12及13之信號序列來獲得。
在某些實施例中，抗VEGF抗原結合片段轉殖基因編碼抗原結合片段且包含六個貝伐單抗CDR之核苷酸序列。在某些實施例中，抗VEGF抗原結合片段轉殖基因編碼抗原結合片段且包含六個蘭尼單抗CDR之核苷酸序列。在某些實施例中，抗VEGF抗原結合片段轉殖基因編碼包括包含蘭尼單抗之重鏈CDR 1-3 (SEQ ID NO: 20、18及21)之重鏈可變區的抗原結合片段。在某些實施例中，抗VEGF抗原結合片段轉殖基因編碼包括包含蘭尼單抗之輕鏈CDR 1-3 (SEQ ID NO: 14-16)之輕鏈可變區的抗原結合片段。在某些實施例中，抗VEGF抗原結合片段轉殖基因編碼包括包含貝伐單抗之重鏈CDR 1-3 (SEQ ID NO: 17-19)之重鏈可變區的抗原結合片段。在某些實施例中，抗VEGF抗原結合片段轉殖基因編碼包括包含貝伐單抗之輕鏈CDR 1-3 (SEQ ID NO: 14-16)之輕鏈可變區的抗原結合片段。在某些實施例中，抗VEGF抗原結合片段轉殖基因編碼包括包含蘭尼單抗之重鏈CDR 1-3 (SEQ ID NO: 20、18及21)之重鏈可變區及包含蘭尼單抗之輕鏈CDR 1-3 (SEQ ID NO: 14-16)之輕鏈可變區的抗原結合片段。在某些實施例中，抗VEGF抗原結合片段轉殖基因編碼包括包含貝伐單抗之重鏈CDR 1-3 (SEQ ID NO: 17-19)之重鏈可變區及包含貝伐單抗之輕鏈CDR 1-3 (SEQ ID NO: 14-16)之輕鏈可變區的抗原結合片段。
在某些實施例中，抗VEGF抗原結合片段轉殖基因編碼包括包含SEQ ID NO: 14-16之輕鏈CDR 1-3之輕鏈可變區的抗原結合片段，其中輕鏈CDR3之第二個胺基酸殘基(亦即，QQYSTVPWTF (SEQ ID NO. 16)中之第二個Q)不攜帶以下化學修飾中之一或多者：氧化、乙醯化、脫醯胺及焦麩胺酸化(pyro Glu)。在一具體實施例中，抗VEGF抗原結合片段轉殖基因編碼包括包含SEQ ID NO: 14-16之輕鏈CDR 1-3之輕鏈可變區的抗原結合片段，其中輕鏈CDR1之第八個及第十一個胺基酸殘基(亦即，SASQDISNYLN (SEQ ID NO. 14)中之兩個N各自攜帶以下化學修飾中之一或多者：氧化、乙醯化、脫醯胺及焦麩胺酸化(pyro Glu)，且輕鏈CDR3之第二個胺基酸殘基(亦即，QQYSTVPWTF (SEQ ID NO. 16)中之第二個Q)不攜帶以下化學修飾中之一或多者：氧化、乙醯化、脫醯胺及焦麩胺酸化(pyro Glu)。在一具體實施例中，抗VEGF抗原結合片段轉殖基因編碼包括包含SEQ ID NO: 14-16之輕鏈CDR 1-3之輕鏈可變區的抗原結合片段，其中輕鏈CDR3之第二個胺基酸殘基(亦即，QQYSTVPWTF (SEQ ID NO. 16)中之第二個Q)未乙醯化。在一具體實施例中，抗VEGF抗原結合片段轉殖基因編碼包括包含SEQ ID NO: 14-16之輕鏈CDR 1-3之輕鏈可變區的抗原結合片段，其中輕鏈CDR1之第八個及第十一個胺基酸殘基(亦即，SASQDISNYLN (SEQ ID NO. 14)中之兩個N各自攜帶以下化學修飾中之一或多者：氧化、乙醯化、脫醯胺及焦麩胺酸化(pyro Glu)，且輕鏈CDR3之第二個胺基酸殘基(亦即，QQYSTVPWTF (SEQ ID NO. 16)中之第二個Q)未乙醯化。在一較佳實施例中，本文所述之化學修飾或化學修飾之缺乏(視情況而定)係藉由質譜法來測定。
在某些實施例中，抗VEGF抗原結合片段轉殖基因編碼包括包含SEQ ID NO: 20、18及21之重鏈CDR 1-3之重鏈可變區的抗原結合片段，其中重鏈CDR1之最後一個胺基酸殘基(亦即，GYDFTHYGMN (SEQ ID NO. 20)中之N)不攜帶以下化學修飾中之一或多者：氧化、乙醯化、脫醯胺及焦麩胺酸化(pyro Glu)。在一具體實施例中，抗VEGF抗原結合片段轉殖基因編碼包括包含SEQ ID NO: 20、18及21之重鏈CDR 1-3之重鏈可變區的抗原結合片段，其中重鏈CDR1之第九個胺基酸殘基(亦即，GYDFTHYGMN (SEQ ID NO. 20)中之M)攜帶以下化學修飾中之一或多者：乙醯化、脫醯胺及焦麩胺酸化(pyro Glu)，重鏈CDR2之第三個胺基酸殘基(亦即，WINTYTGEPTYAADFKR (SEQ ID NO. 18)中之N攜帶以下化學修飾中之一或多者：乙醯化、脫醯胺及焦麩胺酸化(pyro Glu)，且重鏈CDR1之最後一個胺基酸殘基(亦即，GYDFTHYGMN (SEQ ID NO. 20)中之N)不攜帶以下化學修飾中之一或多者：氧化、乙醯化、脫醯胺及焦麩胺酸化(pyro Glu)。在一具體實施例中，抗VEGF抗原結合片段轉殖基因編碼包括包含SEQ ID NO: 20、18及21之重鏈CDR 1-3之重鏈可變區的抗原結合片段，其中重鏈CDR1之最後一個胺基酸殘基(亦即，GYDFTHYGMN (SEQ ID NO. 20)中之N)未乙醯化。在一具體實施例中，抗VEGF抗原結合片段轉殖基因編碼包括包含SEQ ID NO: 20、18及21之重鏈CDR 1-3之重鏈可變區的抗原結合片段，其中重鏈CDR1之第九個胺基酸殘基(亦即，GYDFTHYGMN (SEQ ID NO. 20)中之M)攜帶以下化學修飾中之一或多者：乙醯化、脫醯胺及焦麩胺酸化(pyro Glu)，重鏈CDR2之第三個胺基酸殘基(亦即，WINTYTGEPTYAADFKR (SEQ ID NO. 18)中之N攜帶以下化學修飾中之一或多者：乙醯化、脫醯胺及焦麩胺酸化(pyro Glu)，且重鏈CDR1之最後一個胺基酸殘基(亦即，GYDFTHYGMN (SEQ ID NO. 20)中之N)未乙醯化。在一較佳實施例中，本文所述之化學修飾或化學修飾之缺乏(視情況而定)係藉由質譜法來測定。
在某些實施例中，抗VEGF抗原結合片段轉殖基因編碼包括包含SEQ ID NO: 14-16之輕鏈CDR 1-3之輕鏈可變區及包含SEQ ID NO: 20、18及21之重鏈CDR 1-3之重鏈可變區的抗原結合片段，其中輕鏈CDR3之第二個胺基酸殘基(亦即，QQYSTVPWTF (SEQ ID NO. 16)中之第二個Q)不攜帶以下化學修飾中之一或多者：氧化、乙醯化、脫醯胺及焦麩胺酸化(pyro Glu)，且其中重鏈CDR1之最後一個胺基酸殘基(亦即，GYDFTHYGMN (SEQ ID NO. 20)中之N)不攜帶以下化學修飾中之一或多者：氧化、乙醯化、脫醯胺及焦麩胺酸化(pyro Glu)。在一具體實施例中，抗VEGF抗原結合片段轉殖基因編碼包括包含SEQ ID NO: 14-16之輕鏈CDR 1-3之輕鏈可變區及包含SEQ ID NO: 20、18及21之重鏈CDR 1-3之重鏈可變區的抗原結合片段，其中：(1)重鏈CDR1之第九個胺基酸殘基(亦即，GYDFTHYGMN (SEQ ID NO. 20)中之M)攜帶以下化學修飾中之一或多者：乙醯化、脫醯胺及焦麩胺酸化(pyro Glu)，重鏈CDR2之第三個胺基酸殘基(亦即，WINTYTGEPTYAADFKR (SEQ ID NO. 18)中之N攜帶以下化學修飾中之一或多者：乙醯化、脫醯胺及焦麩胺酸化(pyro Glu)，且重鏈CDR1之最後一個胺基酸殘基(亦即，GYDFTHYGMN (SEQ ID NO. 20)中之N)不攜帶以下化學修飾中之一或多者：氧化、乙醯化、脫醯胺及焦麩胺酸化(pyro Glu)；及(2)輕鏈CDR1之第八個及第十一個胺基酸殘基(亦即，SASQDISNYLN (SEQ ID NO. 14)中之兩個N各自攜帶以下化學修飾中之一或多者：氧化、乙醯化、脫醯胺及焦麩胺酸化(pyro Glu)，且輕鏈CDR3之第二個胺基酸殘基(亦即，QQYSTVPWTF (SEQ ID NO. 16)中之第二個Q)不攜帶以下化學修飾中之一或多者：氧化、乙醯化、脫醯胺及焦麩胺酸化(pyro Glu)。在一具體實施例中，抗VEGF抗原結合片段轉殖基因編碼包括包含SEQ ID NO: 14-16之輕鏈CDR 1-3之輕鏈可變區及包含SEQ ID NO: 20、18及21之重鏈CDR 1-3之重鏈可變區的抗原結合片段，其中輕鏈CDR3之第二個胺基酸殘基(亦即，QQYSTVPWTF (SEQ ID NO. 16)中之第二個Q)未乙醯化，且其中重鏈CDR1之最後一個胺基酸殘基(亦即，GYDFTHYGMN (SEQ ID NO. 20)中之N)未乙醯化。在一具體實施例中，抗原結合片段包含SEQ ID NO. 20之重鏈CDR1，其中：(1)重鏈CDR1之第九個胺基酸殘基(亦即，GYDFTHYGMN (SEQ ID NO. 20)中之M)攜帶以下化學修飾中之一或多者：乙醯化、脫醯胺及焦麩胺酸化(pyro Glu)，重鏈CDR2之第三個胺基酸殘基(亦即，WINTYTGEPTYAADFKR (SEQ ID NO. 18)中之N攜帶以下化學修飾中之一或多者：乙醯化、脫醯胺及焦麩胺酸化(pyro Glu)，且重鏈CDR1之最後一個胺基酸殘基(亦即，GYDFTHYGMN (SEQ ID NO. 20)中之N)未乙醯化；及(2)輕鏈CDR1之第八個及第十一個胺基酸殘基(亦即，SASQDISNYLN (SEQ ID NO. 14)中之兩個N各自攜帶以下化學修飾中之一或多者：氧化、乙醯化、脫醯胺及焦麩胺酸化(pyro Glu)，且輕鏈CDR3之第二個胺基酸殘基(亦即，QQYSTVPWTF (SEQ ID NO. 16)中之第二個Q)未乙醯化。在一較佳實施例中，本文所述之化學修飾或化學修飾之缺乏(視情況而定)係藉由質譜法來測定。
在某些態樣中，本文亦提供包含SEQ ID NO: 14-16之輕鏈CDR 1-3及SEQ ID NO: 20、18及21之重鏈CDR 1-3的抗VEGF抗原結合片段，及編碼此類抗VEGF抗原結合片段之轉殖基因，其中輕鏈CDR3之第二個胺基酸殘基(亦即，QQYSTVPWTF (SEQ ID NO. 16)中之第二個Q)不攜帶以下化學修飾中之一或多者：氧化、乙醯化、脫醯胺及焦麩胺酸化(pyro Glu)。在一具體實施例中，抗原結合片段包含SEQ ID NO: 14-16之輕鏈CDR 1-3及SEQ ID NO: 20、18及21之重鏈CDR 1-3，其中輕鏈CDR1之第八個及第十一個胺基酸殘基(亦即，SASQDISNYLN (SEQ ID NO. 14)中之兩個N各自攜帶以下化學修飾中之一或多者：氧化、乙醯化、脫醯胺及焦麩胺酸化(pyro Glu)，且輕鏈CDR3之第二個胺基酸殘基(亦即，QQYSTVPWTF (SEQ ID NO. 16)中之第二個Q)不攜帶以下化學修飾中之一或多者：氧化、乙醯化、脫醯胺及焦麩胺酸化(pyro Glu)。在一具體實施例中，抗原結合片段包含SEQ ID NO: 14-16之輕鏈CDR 1-3及SEQ ID NO: 20、18及21之重鏈CDR 1-3，其中輕鏈CDR3之第二個胺基酸殘基(亦即，QQYSTVPWTF (SEQ ID NO. 16)中之第二個Q)未乙醯化。在一具體實施例中，抗原結合片段包含SEQ ID NO: 14-16之輕鏈CDR 1-3及SEQ ID NO: 20、18及21之重鏈CDR 1-3，其中輕鏈CDR1之第八個及第十一個胺基酸殘基(亦即，SASQDISNYLN (SEQ ID NO. 14)中之兩個N各自攜帶以下化學修飾中之一或多者：氧化、乙醯化、脫醯胺及焦麩胺酸化(pyro Glu)，且輕鏈CDR3之第二個胺基酸殘基(亦即，QQYSTVPWTF (SEQ ID NO. 16)中之第二個Q)未乙醯化。本文提供之抗VEGF抗原結合片段及轉殖基因可用於根據本發明之任何方法中。在一較佳實施例中，本文所述之化學修飾或化學修飾之缺乏(視情況而定)係藉由質譜法來測定。
在某些態樣中，本文亦提供包含SEQ ID NO: 14-16之輕鏈CDR 1-3及SEQ ID NO: 20、18及21之重鏈CDR 1-3的抗VEGF抗原結合片段，及編碼此類抗VEGF抗原結合片段之轉殖基因，其中重鏈CDR1之最後一個胺基酸殘基(亦即，GYDFTHYGMN (SEQ ID NO. 20)中之N)不攜帶以下化學修飾中之一或多者：氧化、乙醯化、脫醯胺及焦麩胺酸化(pyro Glu)。在一具體實施例中，抗原結合片段包含SEQ ID NO: 14-16之輕鏈CDR 1-3及SEQ ID NO: 20、18及21之重鏈CDR 1-3，其中重鏈CDR1之第九個胺基酸殘基(亦即，GYDFTHYGMN (SEQ ID NO. 20)中之M)攜帶以下化學修飾中之一或多者：乙醯化、脫醯胺及焦麩胺酸化(pyro Glu)，重鏈CDR2之第三個胺基酸殘基(亦即，WINTYTGEPTYAADFKR (SEQ ID NO. 18)中之N攜帶以下化學修飾中之一或多者：乙醯化、脫醯胺及焦麩胺酸化(pyro Glu)，且重鏈CDR1之最後一個胺基酸殘基(亦即，GYDFTHYGMN (SEQ ID NO. 20)中之N)不攜帶以下化學修飾中之一或多者：氧化、乙醯化、脫醯胺及焦麩胺酸化(pyro Glu)。在一具體實施例中，抗原結合片段包含SEQ ID NO: 14-16之輕鏈CDR 1-3及SEQ ID NO: 20、18及21之重鏈CDR 1-3，其中重鏈CDR1之最後一個胺基酸殘基(亦即，GYDFTHYGMN (SEQ ID NO. 20)中之N)未乙醯化。在一具體實施例中，抗原結合片段包含SEQ ID NO: 14-16之輕鏈CDR 1-3及SEQ ID NO: 20、18及21之重鏈CDR 1-3，其中重鏈CDR1之第九個胺基酸殘基(亦即，GYDFTHYGMN (SEQ ID NO. 20)中之M)攜帶以下化學修飾中之一或多者：乙醯化、脫醯胺及焦麩胺酸化(pyro Glu)，重鏈CDR2之第三個胺基酸殘基(亦即，WINTYTGEPTYAADFKR (SEQ ID NO. 18)中之N攜帶以下化學修飾中之一或多者：乙醯化、脫醯胺及焦麩胺酸化(pyro Glu)，且重鏈CDR1之最後一個胺基酸殘基(亦即，GYDFTHYGMN (SEQ ID NO. 20)中之N)未乙醯化。本文提供之抗VEGF抗原結合片段及轉殖基因可用於根據本發明之任何方法中。在一較佳實施例中，本文所述之化學修飾或化學修飾之缺乏(視情況而定)係藉由質譜法來測定。
在某些態樣中，本文亦提供包含SEQ ID NO: 14-16之輕鏈CDR 1-3及SEQ ID NO: 20、18及21之重鏈CDR 1-3的抗VEGF抗原結合片段，及編碼此類抗VEGF抗原結合片段之轉殖基因，其中重鏈CDR1之最後一個胺基酸殘基(亦即，GYDFTHYGMN (SEQ ID NO. 20)中之N)不攜帶以下化學修飾中之一或多者：氧化、乙醯化、脫醯胺及焦麩胺酸化(pyro Glu)，且輕鏈CDR3之第二個胺基酸殘基(亦即，QQYSTVPWTF (SEQ ID NO. 16)中之第二個Q)不攜帶以下化學修飾中之一或多者：氧化、乙醯化、脫醯胺及焦麩胺酸化(pyro Glu)。在一具體實施例中，抗原結合片段包含SEQ ID NO: 14-16之輕鏈CDR 1-3及SEQ ID NO: 20、18及21之重鏈CDR 1-3，其中：(1)重鏈CDR1之第九個胺基酸殘基(亦即，GYDFTHYGMN (SEQ ID NO. 20)中之M)攜帶以下化學修飾中之一或多者：乙醯化、脫醯胺及焦麩胺酸化(pyro Glu)，重鏈CDR2之第三個胺基酸殘基(亦即，WINTYTGEPTYAADFKR (SEQ ID NO. 18)中之N攜帶以下化學修飾中之一或多者：乙醯化、脫醯胺及焦麩胺酸化(pyro Glu)，且重鏈CDR1之最後一個胺基酸殘基(亦即，GYDFTHYGMN(SEQ ID NO. 20)中之N)不攜帶以下化學修飾中之一或多者：氧化、乙醯化、脫醯胺及焦麩胺酸化(pyro Glu)；及(2)輕鏈CDR1之第八個及第十一個胺基酸殘基(亦即，SASQDISNYLN (SEQ ID NO. 14)中之兩個N各自攜帶以下化學修飾中之一或多者：氧化、乙醯化、脫醯胺及焦麩胺酸化(pyro Glu)，且輕鏈CDR3之第二個胺基酸殘基(亦即，QQYSTVPWTF (SEQ ID NO. 16)中之第二個Q)不攜帶以下化學修飾中之一或多者：氧化、乙醯化、脫醯胺及焦麩胺酸化(pyro Glu)。在一具體實施例中，抗原結合片段包含SEQ ID NO: 14-16之輕鏈CDR 1-3及SEQ ID NO: 20、18及21之重鏈CDR 1-3，其中重鏈CDR1之最後一個胺基酸殘基(亦即，GYDFTHYGMN (SEQ ID NO. 20)中之N)未乙醯化，且輕鏈CDR3之第二個胺基酸殘基(亦即，QQYSTVPWTF (SEQ ID NO. 16)中之第二個Q)未乙醯化。在一具體實施例中，抗原結合片段包含SEQ ID NO: 14-16之輕鏈CDR 1-3及SEQ ID NO: 20、18及21之重鏈CDR 1-3，其中：(1)重鏈CDR1之第九個胺基酸殘基(亦即，GYDFTHYGMN (SEQ ID NO. 20)中之M)攜帶以下化學修飾中之一或多者：乙醯化、脫醯胺及焦麩胺酸化(pyro Glu)，重鏈CDR2之第三個胺基酸殘基(亦即，WINTYTGEPTYAADFKR (SEQ ID NO. 18)中之N攜帶以下化學修飾中之一或多者：乙醯化、脫醯胺及焦麩胺酸化(pyro Glu)，且重鏈CDR1之最後一個胺基酸殘基(亦即，GYDFTHYGMN (SEQ ID NO. 20)中之N)未乙醯化；及(2)輕鏈CDR1之第八個及第十一個胺基酸殘基(亦即，SASQDISNYLN (SEQ ID NO. 14)中之兩個N各自攜帶以下化學修飾中之一或多者：氧化、乙醯化、脫醯胺及焦麩胺酸化(pyro Glu)，且輕鏈CDR3之第二個胺基酸殘基(亦即，QQYSTVPWTF (SEQ ID NO. 16)中之第二個Q)未乙醯化。本文提供之抗VEGF抗原結合片段及轉殖基因可用於根據本發明之任何方法中。在一較佳實施例中，本文所述之化學修飾或化學修飾之缺乏(視情況而定)係藉由質譜法來測定。 表 1 . 示例性序列
SEQ ID NO: 描述 序列
1 蘭尼單抗Fab胺基酸序列(輕鏈) DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCSASQDISNYLNWYQQKPGKAPKVLIYFTSSLH SGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYSTVPWTFGQGTKVEIKRTV AAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTE QDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
2 蘭尼單抗Fab胺基酸序列(重鏈) EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYDFTHYGMNWVRQAPGKGLEWVGWINTYT GEPTYAADFKRRFTFSLDTSKSTAYLQMNSLRAEDTAVYYCAKYPYYYGTSHWYF DVWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWN SGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKK VEPKSCDKTHL
3 貝伐單抗Fab胺基酸序列(輕鏈) DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCSASQDISNYLNWYQQKPGKAPKVLIYFTSSLH SGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYSTVPWTFGQGTKVEIKRTV AAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTE QDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
4 貝伐單抗Fab胺基酸序列(重鏈) EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYTFTNYGMNWVRQAPGKGLEWVGWINTYT GEPTYAADFKRRFTFSLDTSKSTAYLQMNSLRAEDTAVYYCAKYPHYYGSSHWYF DVWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWN SGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKK VEPKSCDKTHL
5 VEGF-A信號肽 MNFLLSWVHW SLALLLYLHH AKWSQA
6 腓骨蛋白-1信號肽 MERAAPSRRV PLPLLLLGGL ALLAAGVDA
7 玻連蛋白信號肽 MAPLRPLLIL ALLAWVALA
8 補體因子H信號肽 MRLLAKIICLMLWAICVA
9 視蛋白信號肽 MRLLAFLSLL ALVLQETGT
10 貝伐單抗cDNA (輕鏈)
Figure 02_image001
11 貝伐單抗cDNA (重鏈)
Figure 02_image003
12 蘭尼單抗cDNA (包含信號序列之輕鏈)
Figure 02_image005
13 蘭尼單抗cDNA (包含信號序列之重鏈)
Figure 02_image007
14 貝伐單抗及蘭尼單抗輕鏈CDR1 SASQDISNYLN
15 貝伐單抗及蘭尼單抗輕鏈CDR2 FTSSLHS
16 貝伐單抗及蘭尼單抗輕鏈CDR3 QQYSTVPWT
17 貝伐單抗重鏈CDR1 GYTFTNYGMN
18 貝伐單抗及蘭尼單抗重鏈CDR2 WINTYTGEPTYAADFKR
19 貝伐單抗重鏈CDR3 YPHYYGSSHWYFDV
20 蘭尼單抗重鏈CDR1 GYDFTHYGMN
21 蘭尼單抗重鏈CDR3 YPYYYGTSHWYFDV
22 白蛋白信號肽 MKWVTFISLLFLFSSAYS
23 胰凝乳蛋白酶原信號肽 MAFLWLLSCWALLGTTFG
24 介白素-2信號肽 MYRMQLLSCIALILALVTNS
25 胰蛋白酶原-2信號肽 MNLLLILTFVAAAVA
26 F2A位點 LLNFDLLKLAGDVESNPGP
27 T2A位點 (GSG)EGRGSLLTCGDVEENPGP
28 P2A位點 (GSG)ATNFSLLKQAGDVEENPGP
29 E2A位點 (GSG)QCTNYALLKLAGDVESNPGP
30 F2A位點 (GSG)VKQTLNFDLLKLAGDVESNPGP
31 弗林蛋白酶連接子 RKRR
32 弗林蛋白酶連接子 RRRR
33 弗林蛋白酶連接子 RRKR
34 弗林蛋白酶連接子 RKKR
35 弗林蛋白酶連接子 R-X-K/R-R
36 弗林蛋白酶連接子 RXKR
37 弗林蛋白酶連接子 RXRR
38 蘭尼單抗Fab胺基酸序列(輕鏈) MDIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCSASQDISNYLNWYQQKPGKAPKVLIYFTSSLHSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYSTVPWTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
39 蘭尼單抗Fab胺基酸序列(重鏈) MEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYDFTHYGMNWVRQAPGKGLEWVGWINTYTGEPTYAADFKRRFTFSLDTSKSTAYLQMNSLRAEDTAVYYCAKYPYYYGTSHWYFDVWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHLRKRR
40 蘭尼單抗Fab胺基酸序列(重鏈) MEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYDFTHYGMNWVRQAPGKGLEWVGWINTYTGEPTYAADFKRRFTFSLDTSKSTAYLQMNSLRAEDTAVYYCAKYPYYYGTSHWYFDVWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHL
41 AAV1 MAADGYLPDWLEDNLSEGIREWWDLKPGAPKPKANQQKQDDGRGLVLPGYKYLGPFNGLDKGEPVNAADAAALEHDKAYDQQLKAGDNPYLRYNHADAEFQERLQEDTSFGGNLGRAVFQAKKRVLEPLGLVEEGAKTAPGKKRPVEQSPQEPDSSSGIGKTGQQPAKKRLNFGQTGDSESVPDPQPLGEPPATPAAVGPTTMASGGGAPMADNNEGADGVGNASGNWHCDSTWLGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISSASTGASNDNHYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKRLNFKLFNIQVKEVTTNDGVTTIANNLTSTVQVFSDSEYQLPYVLGSAHQGCLPPFPADVFMIPQYGYLTLNNGSQAVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFTFSYTFEEVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLNRTQNQSGSAQNKDLLFSRGSPAGMSVQPKNWLPGPCYRQQRVSKTKTDNNNSNFTWTGASKYNLNGRESIINPGTAMASHKDDEDKFFPMSGVMIFGKESAGASNTALDNVMITDEEEIKATNPVATERFGTVAVNFQSSSTDPATGDVHAMGALPGMVWQDRDVYLQGPIWAKIPHTDGHFHPSPLMGGFGLKNPPPQILIKNTPVPANPPAEFSATKFASFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEVQYTSNYAKSANVDFTVDNNGLYTEPRPIGTRYLTRPL
42 AAV2 MAADGYLPDWLEDTLSEGIRQWWKLKPGPPPPKPAERHKDDSRGLVLPGYKYLGPFNGLDKGEPVNEADAAALEHDKAYDRQLDSGDNPYLKYNHADAEFQERLKEDTSFGGNLGRAVFQAKKRVLEPLGLVEEPVKTAPGKKRPVEHSPVEPDSSSGTGKAGQQPARKRLNFGQTGDADSVPDPQPLGQPPAAPSGLGTNTMATGSGAPMADNNEGADGVGNSSGNWHCDSTWMGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISSQSGASNDNHYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKRLNFKLFNIQVKEVTQNDGTTTIANNLTSTVQVFTDSEYQLPYVLGSAHQGCLPPFPADVFMVPQYGYLTLNNGSQAVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFTFSYTFEDVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLSRTNTPSGTTTQSRLQFSQAGASDIRDQSRNWLPGPCYRQQRVSKTSADNNNSEYSWTGATKYHLNGRDSLVNPGPAMASHKDDEEKFFPQSGVLIFGKQGSEKTNVDIEKVMITDEEEIRTTNPVATEQYGSVSTNLQRGNRQAATADVNTQGVLPGMVWQDRDVYLQGPIWAKIPHTDGHFHPSPLMGGFGLKHPPPQILIKNTPVPANPSTTFSAAKFASFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEIQYTSNYNKSVNVDFTVDTNGVYSEPRPIGTRYLTRNL
43 AAV3-3 MAADGYLPDWLEDNLSEGIREWWALKPGVPQPKANQQHQDNRRGLVLPGYKYLGPGNGLDKGEPVNEADAAALEHDKAYDQQLKAGDNPYLKYNHADAEFQERLQEDTSFGGNLGRAVFQAKKRILEPLGLVEEAAKTAPGKKGAVDQSPQEPDSSSGVGKSGKQPARKRLNFGQTGDSESVPDPQPLGEPPAAPTSLGSNTMASGGGAPMADNNEGADGVGNSSGNWHCDSQWLGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISSQSGASNDNHYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKKLSFKLFNIQVRGVTQNDGTTTIANNLTSTVQVFTDSEYQLPYVLGSAHQGCLPPFPADVFMVPQYGYLTLNNGSQAVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFQFSYTFEDVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLNRTQGTTSGTTNQSRLLFSQAGPQSMSLQARNWLPGPCYRQQRLSKTANDNNNSNFPWTAASKYHLNGRDSLVNPGPAMASHKDDEEKFFPMHGNLIFGKEGTTASNAELDNVMITDEEEIRTTNPVATEQYGTVANNLQSSNTAPTTGTVNHQGALPGMVWQDRDVYLQGPIWAKIPHTDGHFHPSPLMGGFGLKHPPPQIMIKNTPVPANPPTTFSPAKFASFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEIQYTSNYNKSVNVDFTVDTNGVYSEPRPIGTRYLTRNL
44 AAV4-4 MTDGYLPDWLEDNLSEGVREWWALQPGAPKPKANQQHQDNARGLVLPGYKYLGPGNGLDKGEPVNAADAAALEHDKAYDQQLKAGDNPYLKYNHADAEFQQRLQGDTSFGGNLGRAVFQAKKRVLEPLGLVEQAGETAPGKKRPLIESPQQPDSSTGIGKKGKQPAKKKLVFEDETGAGDGPPEGSTSGAMSDDSEMRAAAGGAAVEGGQGADGVGNASGDWHCDSTWSEGHVTTTSTRTWVLPTYNNHLYKRLGESLQSNTYNGFSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGMRPKAMRVKIFNIQVKEVTTSNGETTVANNLTSTVQIFADSSYELPYVMDAGQEGSLPPFPNDVFMVPQYGYCGLVTGNTSQQQTDRNAFYCLEYFPSQMLRTGNNFEITYSFEKVPFHSMYAHSQSLDRLMNPLIDQYLWGLQSTTTGTTLNAGTATTNFTKLRPTNFSNFKKNWLPGPSIKQQGFSKTANQNYKIPATGSDSLIKYETHSTLDGRWSALTPGPPMATAGPADSKFSNSQLIFAGPKQNGNTATVPGTLIFTSEEELAATNATDTDMWGNLPGGDQSNSNLPTVDRLTALGAVPGMVWQNRDIYYQGPIWAKIPHTDGHFHPSPLIGGFGLKHPPPQIFIKNTPVPANPATTFSSTPVNSFITQYSTGQVSVQIDWEIQKERSKRWNPEVQFTSNYGQQNSLLWAPDAAGKYTEPRAIGTRYLTHHL
45 AAV5 MSFVDHPPDWLEEVGEGLREFLGLEAGPPKPKPNQQHQDQARGLVLPGYNYLGPGNGLDRGEPVNRADEVAREHDISYNEQLEAGDNPYLKYNHADAEFQEKLADDTSFGGNLGKAVFQAKKRVLEPFGLVEEGAKTAPTGKRIDDHFPKRKKARTEEDSKPSTSSDAEAGPSGSQQLQIPAQPASSLGADTMSAGGGGPLGDNNQGADGVGNASGDWHCDSTWMGDRVVTKSTRTWVLPSYNNHQYREIKSGSVDGSNANAYFGYSTPWGYFDFNRFHSHWSPRDWQRLINNYWGFRPRSLRVKIFNIQVKEVTVQDSTTTIANNLTSTVQVFTDDDYQLPYVVGNGTEGCLPAFPPQVFTLPQYGYATLNRDNTENPTERSSFFCLEYFPSKMLRTGNNFEFTYNFEEVPFHSSFAPSQNLFKLANPLVDQYLYRFVSTNNTGGVQFNKNLAGRYANTYKNWFPGPMGRTQGWNLGSGVNRASVSAFATTNRMELEGASYQVPPQPNGMTNNLQGSNTYALENTMIFNSQPANPGTTATYLEGNMLITSESETQPVNRVAYNVGGQMATNNQSSTTAPATGTYNLQEIVPGSVWMERDVYLQGPIWAKIPETGAHFHPSPAMGGFGLKHPPPMMLIKNTPVPGNITSFSDVPVSSFITQYSTGQVTVEMEWELKKENSKRWNPEIQYTNNYNDPQFVDFAPDSTGEYRTTRPIGTRYLTRPL
46 AAV6 MAADGYLPDWLEDNLSEGIREWWDLKPGAPKPKANQQKQDDGRGLVLPGYKYLGPFNGLDKGEPVNAADAAALEHDKAYDQQLKAGDNPYLRYNHADAEFQERLQEDTSFGGNLGRAVFQAKKRVLEPFGLVEEGAKTAPGKKRPVEQSPQEPDSSSGIGKTGQQPAKKRLNFGQTGDSESVPDPQPLGEPPATPAAVGPTTMASGGGAPMADNNEGADGVGNASGNWHCDSTWLGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISSASTGASNDNHYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKRLNFKLFNIQVKEVTTNDGVTTIANNLTSTVQVFSDSEYQLPYVLGSAHQGCLPPFPADVFMIPQYGYLTLNNGSQAVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFTFSYTFEDVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLNRTQNQSGSAQNKDLLFSRGSPAGMSVQPKNWLPGPCYRQQRVSKTKTDNNNSNFTWTGASKYNLNGRESIINPGTAMASHKDDKDKFFPMSGVMIFGKESAGASNTALDNVMITDEEEIKATNPVATERFGTVAVNLQSSSTDPATGDVHVMGALPGMVWQDRDVYLQGPIWAKIPHTDGHFHPSPLMGGFGLKHPPPQILIKNTPVPANPPAEFSATKFASFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEVQYTSNYAKSANVDFTVDNNGLYTEPRPIGTRYLTRPL
47 AAV7 MAADGYLPDWLEDNLSEGIREWWDLKPGAPKPKANQQKQDNGRGLVLPGYKYLGPFNGLDKGEPVNAADAAALEHDKAYDQQLKAGDNPYLRYNHADAEFQERLQEDTSFGGNLGRAVFQAKKRVLEPLGLVEEGAKTAPAKKRPVEPSPQRSPDSSTGIGKKGQQPARKRLNFGQTGDSESVPDPQPLGEPPAAPSSVGSGTVAAGGGAPMADNNEGADGVGNASGNWHCDSTWLGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISSETAGSTNDNTYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKKLRFKLFNIQVKEVTTNDGVTTIANNLTSTIQVFSDSEYQLPYVLGSAHQGCLPPFPADVFMIPQYGYLTLNNGSQSVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFEFSYSFEDVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLARTQSNPGGTAGNRELQFYQGGPSTMAEQAKNWLPGPCFRQQRVSKTLDQNNNSNFAWTGATKYHLNGRNSLVNPGVAMATHKDDEDRFFPSSGVLIFGKTGATNKTTLENVLMTNEEEIRPTNPVATEEYGIVSSNLQAANTAAQTQVVNNQGALPGMVWQNRDVYLQGPIWAKIPHTDGNFHPSPLMGGFGLKHPPPQILIKNTPVPANPPEVFTPAKFASFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEIQYTSNFEKQTGVDFAVDSQGVYSEPRPIGTRYLTRNL
48 AAV8 MAADGYLPDWLEDNLSEGIREWWALKPGAPKPKANQQKQDDGRGLVLPGYKYLGPFNGLDKGEPVNAADAAALEHDKAYDQQLQAGDNPYLRYNHADAEFQERLQEDTSFGGNLGRAVFQAKKRVLEPLGLVEEGAKTAPGKKRPVEPSPQRSPDSSTGIGKKGQQPARKRLNFGQTGDSESVPDPQPLGEPPAAPSGVGPNTMAAGGGAPMADNNEGADGVGSSSGNWHCDSTWLGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISNGTSGGATNDNTYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKRLSFKLFNIQVKEVTQNEGTKTIANNLTSTIQVFTDSEYQLPYVLGSAHQGCLPPFPADVFMIPQYGYLTLNNGSQAVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFQFTYTFEDVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLSRTQTTGGTANTQTLGFSQGGPNTMANQAKNWLPGPCYRQQRVSTTTGQNNNSNFAWTAGTKYHLNGRNSLANPGIAMATHKDDEERFFPSNGILIFGKQNAARDNADYSDVMLTSEEEIKTTNPVATEEYGIVADNLQQQNTAPQIGTVNSQGALPGMVWQNRDVYLQGPIWAKIPHTDGNFHPSPLMGGFGLKHPPPQILIKNTPVPADPPTTFNQSKLNSFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEIQYTSNYYKSTSVDFAVNTEGVYSEPRPIGTRYLTRNL
49 hu31 MAADGYLPDWLEDTLSEGIRQWWKLKPGPPPPKPAERHKDDSRGLVLPGYKYLGPGNGLDKGEPVNAADAAALEHDKAYDQQLKAGDNPYLKYNHADAEFQERLKEDTSFGGNLGRAVFQAKKRLLEPLGLVEEAAKTAPGKKRPVEQSPQEPDSSAGIGKSGSQPAKKKLNFGQTGDTESVPDPQPIGEPPAAPSGVGSLTMASGGGAPVADNNEGADGVGSSSGNWHCDSQWLGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISNSTSGGSSNDNAYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKRLNFKLFNIQVKEVTDNNGVKTIANNLTSTVQVFTDSDYQLPYVLGSAHEGCLPPFPADVFMIPQYGYLTLNDGGQAVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFQFSYEFENVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLSKTINGSGQNQQTLKFSVAGPSNMAVQGRNYIPGPSYRQQRVSTTVTQNNNSEFAWPGASSWALNGRNSLMNPGPAMASHKEGEDRFFPLSGSLIFGKQGTGRDNVDADKVMITNEEEIKTTNPVATESYGQVATNHQSAQAQAQTGWVQNQGILPGMVWQDRDVYLQGPIWAKIPHTDGNFHPSPLMGGFGMKHPPPQILIKNTPVPADPPTAFNKDKLNSFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEIQYTSNYYKSNNVEFAVSTEGVYSEPRPIGTRYLTRNL
50 hu32 MAADGYLPDWLEDTLSEGIRQWWKLKPGPPPPKPAERHKDDSRGLVLPGYKYLGPGNGLDKGEPVNAADAAALEHDKAYDQQLKAGDNPYLKYNHADAEFQERLKEDTSFGGNLGRAVFQAKKRLLEPLGLVEEAAKTAPGKKRPVEQSPQEPDSSAGIGKSGSQPAKKKLNFGQTGDTESVPDPQPIGEPPAAPSGVGSLTMASGGGAPVADNNEGADGVGSSSGNWHCDSQWLGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISNSTSGGSSNDNAYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKRLNFKLFNIQVKEVTDNNGVKTIANNLTSTVQVFTDSDYQLPYVLGSAHEGCLPPFPADVFMIPQYGYLTLNDGSQAVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFQFSYEFENVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLSKTINGSGQNQQTLKFSVAGPSNMAVQGRNYIPGPSYRQQRVSTTVTQNNNSEFAWPGASSWALNGRNSLMNPGPAMASHKEGEDRFFPLSGSLIFGKQGTGRDNVDADKVMITNEEEIKTTNPVATESYGQVATNHQSAQAQAQTGWVQNQGILPGMVWQDRDVYLQGPIWAKIPHTDGNFHPSPLMGGFGMKHPPPQILIKNTPVPADPPTAFNKDKLNSFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEIQYTSNYYKSNNVEFAVNTEGVYSEPRPIGTRYLTRNL
51 AAV9 MAADGYLPDWLEDNLSEGIREWWALKPGAPQPKANQQHQDNARGLVLPGYKYLGPGNGLDKGEPVNAADAAALEHDKAYDQQLKAGDNPYLKYNHADAEFQERLKEDTSFGGNLGRAVFQAKKRLLEPLGLVEEAAKTAPGKKRPVEQSPQEPDSSAGIGKSGAQPAKKRLNFGQTGDTESVPDPQPIGEPPAAPSGVGSLTMASGGGAPVADNNEGADGVGSSSGNWHCDSQWLGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISNSTSGGSSNDNAYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKRLNFKLFNIQVKEVTDNNGVKTIANNLTSTVQVFTDSDYQLPYVLGSAHEGCLPPFPADVFMIPQYGYLTLNDGSQAVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFQFSYEFENVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLSKTINGSGQNQQTLKFSVAGPSNMAVQGRNYIPGPSYRQQRVSTTVTQNNNSEFAWPGASSWALNGRNSLMNPGPAMASHKEGEDRFFPLSGSLIFGKQGTGRDNVDADKVMITNEEEIKTTNPVATESYGQVATNHQSAQAQAQTGWVQNQGILPGMVWQDRDVYLQGPIWAKIPHTDGNFHPSPLMGGFGMKHPPPQILIKNTPVPADPPTAFNKDKLNSFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEIQYTSNYYKSNNVEFAVNTEGVYSEPRPIGTRYLTRNL
52 血管內皮生長因子(vegf) Caa44447.1 MNFLLSWVHWSLALLLYLHHAKWSQAAPMAEGGGQNHHEVVKFMDVYQRSYCHPIETLVDIFQEYPDEIEYIFKPSCVPLMRCGGCCNDEGLECVPTEESNITMQIMRIKPHQGQHIGEMSFLQHNKCECRPKKDRARQENPCGPCSERRKHLFVQDPQTCKCSCKNTDSRCKARQLELNERTCRCDKPRR
53 棕櫚醯-蛋白硫酯酶1 (ppt1) Aah08426.1 MASPGCLWLLAVALLPWTCASRALQHLDPPAPLPLVIWHGMGDSCCNPLSMGAIKKMVEKKIPGIYVLSLEIGKTLMEDVENSFFLNVNSQVTTVCQALAKDPKLQQGYNAMGFSQGGQFLRAVAQRCPSPPMINLISVGGQHQGVFGLPRCPGESSHICDFIRKTLNAGAYSKVVQERLVQAEYWHDPIKEDVYRNHSIFLADINQERGINESYKKNLMALKKFVMVKFLNDSIVDPVDSEWFGFYRSGQAKETIPLQETSLYTQDRLGLKEMDNAGQLVFLATEGDHLQLSEEWFYAHIIPFLG
54 三肽基-肽酶1 (tpp1) Np_000382.3 MGLQACLLGLFALILSGKCSYSPEPDQRRTLPPGWVSLGRADPEEELSLTFALRQQNVERLSELVQAVSDPSSPQYGKYLTLENVADLVRPSPLTLHTVQKWLLAAGAQKCHSVITQDFLTCWLSIRQAELLLPGAEFHHYVGGPTETHVVRSPHPYQLPQALAPHVDFVGGLHRFPPTSSLRQRPEPQVTGTVGLHLGVTPSVIRKRYNLTSQDVGSGTSNNSQACAQFLEQYFHDSDLAQFMRLFGGNFAHQASVARVVGQQGRGRAGIEASLDVQYLMSAGANISTWVYSSPGRHEGQEPFLQWLMLLSNESALPHVHTVSYGDDEDSLSSAYIQRVNTELMKAAARGLTLLFASGDSGAGCWSVSGRHQFRPTFPASSPYVTTVGGTSFQEPFLITNEIVDYISGGGFSNVFPRPSYQEEAVTKFLSSSPHLPPSSYFNASGRAYPDVAALSDGYWVVSNRVPIPWVSGTSASTPVFGGILSLINEHRILSGRPPLGFLNPRLYQQHGAGLFDVTRGCHESCLDEEVEGQGFCSGPGWDPVTGWGTPNFPALLKTLLNP
55 突變介白素-2信號肽 MYRMQLLLLIALSLALVTNS
4.5 疾病
本文提供之醫藥組合物或參考醫藥組合物(例如，部分4.1)可投與至經診斷患有nAMD (濕性AMD)、乾性AMD、視網膜靜脈阻塞(RVO)、糖尿病性黃斑水腫(DME)、糖尿病性視網膜病變(DR)或巴登氏病之個體。
在一些實施例中，本文揭示治療經診斷患有nAMD (濕性AMD)、乾性AMD、視網膜靜脈阻塞(RVO)、糖尿病性黃斑水腫(DME)、糖尿病性視網膜病變(DR)或巴登蛋白之個體的方法，該等方法向個體投與治療有效量之醫藥組合物藉由脈絡膜上注射(例如，經由脈絡膜上藥物遞送裝置，諸如具有微針之微注射器)。
在一些實施例中，經由脈絡膜上投與向患者投與一種醫藥組合物，其含有包含0.2 mg/mL氯化鉀、0.2 mg/mL磷酸二氫鉀、5.84 mg/mL氯化鈉、1.15 mg/mL無水磷酸氫二鈉、40.0 mg/mL、4% w/v蔗糖及視情況選用之界面活性劑之醫藥組合物的約2.5×10 11GC/眼、約5×10 11GC/眼或約1.5×10 12GC/眼之構築體II。在一些實施例中，患者具有糖尿病性視網膜病變。
在一些實施例中，經由脈絡膜上投與向患者投與一種醫藥組合物，其含有包含10% w/v蔗糖之醫藥組合物的約2.5×10 11GC/眼、約5×10 11GC/眼或約1.5×10 12GC/眼之構築體II。在一些實施例中，患者具有糖尿病性視網膜病變。在一些實施例中，醫藥組合物之滲壓性/滲透壓等於或大於240 mOsm/kg。
在一些態樣中，本文描述適合治療經診斷患有IVA型黏多醣病(MPS IVA)、I型黏多醣病(MPS I)、II型黏多醣病(MPS II)、家族性高膽固醇血症(FH)、同合子型家族性高膽固醇血症(HoFH)、冠狀動脈疾病、腦血管疾病、杜顯氏肌肉失養症、肢帶肌肉失養症、貝克爾肌肉失養症及散發性包涵體肌炎或激肽釋放素相關疾病之個體的醫藥組合物或治療方法，該等方法包括向個體投與治療有效量之醫藥組合物。在一些實施例中，醫藥組合物在SCS中投與。
在一些實施例中，本文提供之醫藥組合物或參考醫藥組合物(例如，部分4.1)可投與至經診斷患有以下疾病之個體：(1)巴登蛋白-CLN2且治療產物為三肽基-肽酶1 (TPP1)；(2)阿瑟氏第1型(Usher’s-Type 1)且治療產物為肌凝蛋白VIIA (MYO7A)；(3)阿瑟氏第1型且治療產物為鈣黏蛋白相關23 (CDH23)；(4)阿瑟氏第2型且治療產物為原鈣黏蛋白相關15 (PCDH15)；(5)阿瑟氏第2型且治療產物為阿瑟蛋白(Usherin) (USH2A)；(6)阿瑟氏第3型且治療產物為克萊蛋白1 (Clarin 1) (CLRN1)；(7)斯特格氏病(Stargardt's)且治療產物為ATP結合卡匣亞家族A成員4 (ABCA4)；(8)斯特格氏病且治療產物為ELOVL脂肪酸延長酶4 (ELOVL4)；(9)紅綠色盲且治療產物為L視蛋白(OPN1LW)；(10)紅綠色盲且治療產物為M視蛋白(OPN1MW)；(11)藍色視錐全色盲且治療產物為M視蛋白(OPN1MW)；(12)萊伯先天性黑朦(Leber congenital amaurosis)-1 (LCA 1)且治療產物為視網膜鳥苷酸環化酶2D (GUCY2D)；(13)萊伯先天性黑朦-2 (LCA 2)且治療產物為類視色素異構水解酶RPE65 (RPE65)；(14)萊伯先天性黑朦-4 (LCA 4)且治療產物為芳基烴受體相互作用蛋白樣1 (AIPL1)；(15)萊伯先天性黑朦-7 (LCA 7)且治療產物為視錐-視杆同源盒(CRX)；(16)萊伯先天性黑朦-8 (LCA 8)且治療產物為克魯蛋白細胞極性複合體組分1 (Crumbs Cell Polarity Complex Component 1，CRB1)；(17)萊伯先天性黑朦-9 (LCA 9)且治療產物為煙鹼醯胺核苷酸腺苷酸轉移酶1 (NMNAT1)；(18)萊伯先天性黑朦-10 (LCA 10)且治療產物為中心體蛋白290 (CEP290)；(19)萊伯先天性黑朦-11 (LCA 11)且治療產物為肌苷單磷酸去氫酶1 (IMPDH1)；(20)萊伯先天性黑朦-15 (LCA 15)且治療產物為矮胖樣蛋白1 (Tubby Like Protein 1，TULP1)；(21) LHON且治療產物為粒線體編碼之NADH去氫酶4 (MT-ND4)；(22) LHON且治療產物為粒線體編碼之NADH去氫酶6 (MT-ND6)；(23)無脈絡膜且治療產物為Rab護衛蛋白1 (CHM)；(24) X性聯視網膜劈裂症(XLRS)且治療產物為視網膜劈裂蛋白(RS1)；(25)巴德-畢德氏症候群(Bardet-Biedl syndrome) 1且治療產物為巴德-畢德氏症候群1 (BBS1)；(26)巴德-畢德氏症候群6且治療產物為麥庫西克-考夫曼症候群(McKusick-Kaufman Syndrome，MKKS)；(27)巴德-畢德氏症候群10且治療產物為巴德-畢德氏症候群10 (BBS10)；(28)錐體營養不良且治療產物為鳥苷酸環化酶活化因子1A (GUCA1A)；(29)視神經萎縮且治療產物為OPA1粒線體發動蛋白樣GTP酶(OPA1)；(30)色素性視網膜炎1且治療產物為RP1軸絲微管相關(RP1)；(31)色素性視網膜炎2且治療產物為RP2 ARL3 GTP酶活化因子(RP2)；(32)色素性視網膜炎7且治療產物為外周蛋白2 (PRPH2)；(33)色素性視網膜炎11且治療產物為前mRNA加工因子31(PRPF31)；(34)色素性視網膜炎13且治療產物為前mRNA加工因子8 (PRPF8)；(35)色素性視網膜炎37且治療產物為核受體亞家族2組E成員3 (NR2E3)；(36)色素性視網膜炎38且治療產物為MER原癌基因酪胺酸激酶(MERTK)；(37)色素性視網膜炎40且治療產物為磷酸二酯酶6B (PDE6B)；(38)色素性視網膜炎41且治療產物為Prominin 1 (PROM1)；(39)色素性視網膜炎56且治療產物為光間受體基質蛋白多醣2 (IMPG2)；(40)色素性視網膜炎62且治療產物為男性生殖細胞相關激酶(MAK)；(41)色素性視網膜炎80且治療產物為細胞纖毛內轉運蛋白140 (IFT140)；或(42)貝斯特氏病(Best disease)且治療產物為斑萎蛋白1 (Bestrophin 1，BEST1)。 4.6 分析法
技術人員可使用本文所述之分析法及/或所屬領域已知之技術來研究本文所述之組合物及方法，例如測試本文提供之調配物。如部分5中所詳述，本文亦提供以下分析法。  4.6.1 超音波B掃描
可使用高頻超音波(U/S)探針(UBM Plus；Accutome, Malvern, PA, USA)，藉由在注射AAV聚集水準在一定範圍內變化之不同體積之後在離體動物眼睛中生成SCS之2D橫截面影像來測定SCS厚度。可注射不同量之AAV聚集。U/S探針蓋(Clearscan；Eye-Surgical-Instruments, Plymouth, MN)可附接至UBM Plus以促進U/S影像擷取。可使用U/S探針來獲取眼睛周圍之矢狀視圖(例如，八個矢狀視圖)。可對U/S B掃描執行後處理以找到自外鞏膜至內視網膜之厚度，例如鞏膜突後方1、5及9 mm。可計算每隻眼睛之平均值、中位數及標準偏差。  4.6.2 基於液體體積量測SCS厚度
可使用3D冷凍重建成像來量測SCS厚度。將注射例如含有紅色螢光粒子之25 μL至500 μL之動物眼睛在注射後幾分鐘(例如3-5分鐘)冷凍，且準備進行冷凍切片。使用數位相機，藉由在低溫恒溫器下對樣品進行切片，每300 μm可獲得組織冷凍塊之一張紅色螢光影像。分析由紅色螢光影像組成之影像堆以測定SCS厚度。  4.6.3 基於調配物量測SCS厚度
在將AAV黏度水準在一定範圍內變化之醫藥組合物注射至動物SCS中之後，可使用U/S B掃描來測定SCS厚度。可使用高頻超音波B掃描來確定SCS塌陷率。可獲取平坦部之八個矢狀視圖：(a)鼻上，注射部位上方；(b)上方；(c)鼻；(d)顳上；(e)顳；(f)顳下；(g)下方；及(h)鼻下。
可對U/S視圖執行離線後處理以量測SCS厚度。U/S探針之最小軸向解析度為15 μm。對於各U/S視圖，可建立一條線段，其在鞏膜突後5 mm處且與鞏膜垂直。一條線可自鞏膜外表面開始，且在視網膜內表面結束。在量測中可包括鞏膜及脈絡膜視網膜以確保線垂直。接著藉由自所量測之線長度減去組織厚度來計算SCS厚度。進行曲線擬合以確定SCS塌陷率。
可使用U/S B掃描隨著時間之推移在多個位置測定SCS厚度，且可計算SCS塌陷率。可藉由隨著時間之推移(例如，在多個時間點)在活體內拍攝動物眼睛中之螢光眼底影像直到不再偵測到螢光，發現所注射之螢光材料自SCS之大致清除時間。 4.6.4 藉由眼底成像之SCS清除動力學
為研究AAV聚集對在SCS中之運動的影響，可將AAV聚集水準在一定範圍內變化且含有螢光素之不同醫藥組合物注射至SCS中。可藉由隨著時間之推移在活體內拍攝動物眼睛中之螢光眼底影像來發現所注射之螢光材料自SCS之大致清除率或清除時間。在一些情況下，清除率可藉由確定總清除時間及清除時間常數( t 清除)來確定，該清除時間常數係使用自總螢光信號隨時間之正規化濃度推導之曲線擬合計算的。可在每次成像期之前投與托吡卡胺(tropicamide)及去羥腎上腺素(Akorn, Lake Forest, IL)之局部滴眼液以使眼睛擴張。可使用RetCam II (Clarity Medical Systems, Pleasanton, CA)獲取影像，其帶有130°鏡頭附件及內置螢光素血管攝影模組。可在RetCam II之藍光輸出設置為0.0009、1.6及2.4 W/m 2下拍攝多張影像。為嘗試捕捉眼球之整個內表面，可捕捉九個影像：中央、鼻上、上方、顳上、顳、顳下、下方、鼻下及鼻。此允許成像至遠周邊。可在注射後即刻、1小時、12小時中每3小時及注射後每兩天進行成像。總清除時間可定義為在注射後藉由目視觀測無法偵測到螢光之第一個時間點，針對所有注射之眼睛來確定。螢光素異硫氰酸酯結合之AAV (FITC-AAV)或FITC結合之AAV殼蛋白特異性單株抗體可用於類似實驗中，以追蹤AAV粒子在SCS中之運動及清除。AAV之螢光標記方法係所屬領域中已知的(Shi等人, Sci. Adv.2020; 6 : eaaz3621；及Tsui, T. Y.等人, Hepatology42, 335-342 (2005))。可購得識別許多AAV血清型之抗體(FITC結合)。 4.6.5 平面安裝(Flat Mount)以表徵2D圓周擴散
將含有螢光素或螢光標記之AAV的本揭示案之醫藥組合物注射至SCS中。在SCS注射及冷凍之後，可準備好眼睛以評估粒子及螢光素之2D擴散。自角膜緣至後極切開冷凍之眼睛以產生等距之鞏膜瓣。將所得到之鞏膜瓣張開，且取出冷凍之玻璃狀液、晶狀體及水狀液。
可使用帶有100 mm鏡頭(Canon)之數位SLR相機(Canon 60D；Canon, Melville, N.Y.)來獲取明場及螢光影像。相機參數保持不變。為獲得螢光素擴散之面積，可將綠色光學帶通濾波器(520±10 nm；Edmunds Optics, Barrington, N.J.)置放在鏡頭上，且可用一盞燈利用多色LED燈泡(S系列RGB MR16/E26. HitLights, Baton Rouge, La.)之紫色背景來照亮樣品。為目測紅色螢光粒子之位置，可在鏡頭上置放一個紅色濾光片(610±10 nm；Edmunds Optics)，且可用同一盞燈切換至綠光來照亮樣品。可使用ImageJ (National Institutes of Health, Bethesda, Md.)針對每隻眼睛計算超過閾值之綠色及紅色螢光面積。可基於背景信號之目視檢查手動設置閾值。 4.6.6 眼內壓量測
可使用壓力量測系統在SCS注射後量測SCS中之壓力。動物可藉由皮下注射氯胺酮(ketamine)/賽拉嗪(xylazine)混合液進行終末麻醉。在SCS注射(N=4)後，可每隔幾分鐘量測一次SCS中之壓力。對壓力進行監測，直到其達到注射前之原始基線值(亦即約15 mmHg)。量測後，藉由靜脈注射致死劑量之戊巴比妥(pentobarbital)對動物實施安樂死。可在動物死後進行第二組SCS注射。在死後量測中，僅在進行注射之組織空間(亦即SCS)中量測壓力。  4.6.7 溫度應力分析法
可在37℃下以1.0×10 12GC/mL進行4天之溫度應力發展穩定性研究，以評估本文提供之調配物之相對穩定性。
可用於評估穩定性之分析包括但不限於活體外相對效力(IVRP)、載體基因體濃度(VGC，藉由ddPCR)、藉由染料螢光之游離DNA、動態光散射、外觀及pH值。可進行歷時12個月之長期發展穩定性研究，以證明在本文提供之調配物中在-80℃ (≤-60℃)及-20℃ (-25℃至-15℃)下活體外相對效力及其他品質之維持。 4.6.8 活體外相對效力(IVRP)分析法
為將ddPCR GC力價與基因表現相關聯，可進行一項活體外生物分析，該生物分析係藉由轉導HEK293細胞且分析細胞培養上清液之抗VEGF Fab蛋白水準來進行。將HEK293細胞塗鋪至三個經聚-D-離胺酸包被之96孔組織培養盤上隔夜。然後將細胞用野生型人類Ad5病毒預感染，接著用AAV載體參考標準及測試物品之三種獨立製備之連續稀釋液進行轉導，其中每種製劑塗鋪至單獨板上不同位置處。在轉導後第三天，自培養盤中收集細胞培養基且經由ELISA量測結合VEGF之Fab蛋白水準。對於ELISA，將用VEGF包被之96孔ELISA盤封閉，然後與所收集之細胞培養基一起培育以捕獲由HEK293細胞產生之抗VEGF Fab。使用Fab特異性抗人類IgG抗體來偵測捕獲VEGF之Fab蛋白。在洗滌之後，添加辣根過氧化酶(HRP)受質溶液，使其顯色，用終止緩衝液終止，且在盤式讀取儀中讀取培養盤。將HRP產物之吸光度或OD相對於對數稀釋作圖，且在通過平行相似性測試(parallelism similarity test)後使用四參數邏輯回歸模型進行擬合，使用如下公式計算各測試物品相對於同一培養盤上之參考標準的相對效力：EC50參考÷EC50測試物品。測試物品之效力報導為參考標準效力之百分比，由三個培養盤之加權平均值計算出。
為將ddPCR GC力價與功能基因表現相關聯，可進行一項活體外生物分析，該生物分析係藉由轉導HEK293細胞且分析轉殖基因(例如酶)活性來進行。將HEK293細胞塗鋪至三個96孔組織培養盤上隔夜。然後將細胞用野生型人類腺病毒血清型5病毒預感染，接著用酶參考標準及測試物品之三種獨立製備之連續稀釋液進行轉導，其中每種製劑塗鋪至單獨板上不同位置處。在轉導後第二天，使細胞溶解，用低pH值處理以活化酶，且使用肽受質分析酶活性，該肽受質在由轉殖基因(酶)裂解時產生增加之螢光信號。將螢光或RFU相對於對數稀釋作圖，且在通過平行相似性測試後使用四參數邏輯回歸模型進行擬合，使用如下公式計算各測試物品相對於同一培養盤上之參考標準的相對效力：EC50參考÷EC50測試物品。測試物品之效力報導為參考標準效力之百分比，由三個培養盤之加權平均值計算出。  4.6.9 載體基因體濃度分析法
亦可使用ddPCR評估載體基因體濃度(GC)。在注射後之不同時間點，處死若干隻小鼠，且對眼組織進行總DNA提取及載體複本數之ddPCR分析。在連續時間點在不同組織切片中鑑定之每公克組織之載體基因體(轉殖基因)複本將揭露AAV在眼睛中之擴散。
使用DNeasy Blood & Tissue套組自所收集之眼組織切片中提取總DNA，且使用Nanodrop分光光度計重新量測DNA濃度。為確定組織切片中之載體複本數，使用Naica Crystal Digital PCR系統(Stilla technologies)進行數位PCR。這裡應用兩種顏色多路複用系統來同時量測轉殖基因AAV及內源控制基因。簡而言之，轉殖基因探針可用FAM (6-羧基螢光素)染料標記，而內源對照探針可用VIC螢光染料標記。每個二倍體細胞特定組織切片中遞送載體之複本數如下計算：(載體複本數)/(內源對照)×2。特定細胞類型(諸如RPE細胞)中之載體複本可能揭露持續遞送至視網膜。 4.6.10 使用染料螢光分析進行游離DNA分析法
可藉由與DNA結合之SYBR® Gold核酸凝膠染料(『SYBR Gold dye』)之螢光來測定游離DNA。可使用微定量盤式讀取儀量測螢光且用DNA標準進行定量。結果可以ng/µL為單位報導。
可使用兩種方法來估計總DNA，以便將量測之游離DNA (以ng/µL為單位)轉換為游離DNA之百分比。在第一種方法中，使用藉由紫外-可見光譜法測定之GC/mL (OD)估計樣品中之總DNA，其中M為DNA之分子量，且1E6為單位轉換因子： 估計之總DNA (ng/µL) = 1E6 × GC/mL (OD) × M (g/mol)/6.02E23
在第二種方法中，可在0.05%泊洛沙姆188下將樣品加熱至85℃，保持20分鐘，且可使用藉由SYBR Gold染料分析法在加熱樣品中量測之實際DNA作為總數。因此，假設所有DNA皆回收且定量。對於趨勢分析，既可使用原始ng/µL，亦可使用由一致方法確定之百分比。 4.6.11 粒徑排阻層析法(SEC)
可使用Sepax SRT SEC-1000 Peek管柱(PN 215950P-4630，SN: 8A11982，LN: BT090，5 µm 1000A，4.6×300 mm)，在Waters Acquity Arc設備ID 0447 (C3PO)上利用25 mm光程流通池執行SEC。移動相可為例如20 mM磷酸鈉、300 mM NaCl、0.005%泊洛沙姆188 pH 6.5，流速為0.35毫升/分鐘，歷時20分鐘，管柱處於環境溫度下。可在214 nm、260 nm及280 nm下使用2點/秒採樣速率及1.2 nm解析度利用25點平均平滑進行資料收集。理想目標負載可為1.5E11 GC。樣品可注射50 µL，約為理想目標之1/3，或注射5 µL。 4.6.12 動態光散射(DLS)分析法
可在Wyatt DynaProIII上使用Corning 3540 384孔盤及30 µL樣品體積進行動態光散射(DLS)。每個重複可收集各歷時10 s之10次採集，且每個樣品可有3次重複量測。可根據樣品中使用之溶劑設置溶劑，例如dPBS中AAV載體之『PBS』。不符合資料品質標準(基線、SOS、雜訊、擬合)之結果可經『標記』且自分析中排除。 4.6.13 黏度量測
可使用所屬領域中已知之方法量測黏度，例如在2019年出版之美國藥典(United States Pharmacopeia，USP)及其先前版本(藉由引用之方式整體併入本文中)中提供之方法。使用毛細管黏度計，使用USP ＜911＞中描述之方法量測低剪切下之黏度。
可使用錐板式旋轉流變儀測定黏度與剪切速率之關係。美國藥典(USP) USP ＜1911＞中描述流變測定法之量測，且USP＜912＞中描述旋轉黏度測定法。旋轉流變黏度量測係用AR-G2流變儀收集的，該流變儀配備有帕耳帖(Peltier)溫度控制板及60 mm 1°角鋁錐附件(TA Instruments, New Castle, DE)。可在＜0.3 s -1開始上升至5000 s -1之範圍內進行黏度與剪切速率掃描，每十個收集5個點。在20℃下收集黏度與剪切速率之關係。10,000及20,000 s -1下之黏度係自資料中推斷出來。在一些情況下，可在零、0.1 s -1、1 s -1、1000 s -1、5000 s -1、10,000 s -1、20,000 s -1或超過20,000 s -1下量測醫藥組合物或參考醫藥組合物之黏度。 4.6.14 病毒感染力分析法
可使用如François等人, Molecular Therapy Methods & Clinical Development (2018) 第10卷, 第223-236頁(以引用之方式整體併入本文中)中所述之TCID 50感染力價分析。可使用如2018年10月15日申請之臨時申請案62/745859中所述之相對感染力分析  4.6.15 微差掃描螢光法
蛋白質及由蛋白質組成之病毒殼體之熱穩定性可藉由微差掃描螢光法(DSF)來確定。DSF量測蛋白質之固有色胺酸及酪胺酸發射作為溫度之函數。Trp及Tyr殘基之局部環境隨著蛋白質之未摺疊而發生變化，從而引起螢光大量增加。使50%蛋白質未摺疊之溫度定義為『熔融』溫度(T m)。USP ＜853＞及USP ＜1853＞中描述螢光光譜法。
DSF資料可使用Promethius NTPlex Nano DSF儀器(NanoTemper technologies, Munich, Germany)收集。在20℃下可將樣品裝載至毛細管池中，且溫度以1℃/min之速率上升至95℃。可使用350 nm (未摺疊)及330 nm (未摺疊)下發射之信號輸出比來確定T m。 4.6.16 注射壓力量測
使用流動篩網及流體感測器(Flow Screen and Fluid Sensor) (Viscotec America, Kennesaw, GA)或帶有單次使用壓力感測器S-N-000之PressureMAT-DPG (PendoTECH, Princeton, NJ)量測注射壓力。
藉由手動或使用Legato-100注射泵(Kd Scientific, Holliston, MA)施加一致流速來進行空氣注射。為注射至去核豬眼中，將眼睛安裝在Mandell眼睛支架(Mastel)上，且施加吸力以調節眼睛之眼內壓。 4.6.17 參考組合物
本文提供之組合物之AAV聚集水準可藉由將組合物與參考醫藥組合物進行比較來評估。在一些實施例中，參考醫藥組合物為包含磷酸鹽緩衝鹽水中與評估之組合物濃度相同之相同重組AAV的醫藥組合物。在一些實施例中，參考醫藥組合物為包含具有0.001%泊洛沙姆188之pH 7.4杜貝爾寇磷酸鹽緩衝鹽水中與評估之組合物濃度相同之相同重組AAV的醫藥組合物。在一些實施例中，參考醫藥組合物為包含具有4%蔗糖及0.001%泊洛沙姆188之pH 7.4杜貝爾寇磷酸鹽緩衝鹽水中與評估之組合物濃度相同之相同重組AAV的醫藥組合物。在一些實施例中，參考醫藥組合物為包含磷酸鹽緩衝之10%蔗糖稀釋劑中與評估之組合物濃度相同之相同重組AAV的醫藥組合物。在一些實施例中，參考醫藥組合物為包含具有4%蔗糖之經改良之DPBS調配物中與評估之組合物濃度相同之相同重組AAV的醫藥組合物。在一些實施例中，參考醫藥組合物為包含具有0.001% P188之DPBS鹽水溶液中與評估之組合物濃度相同之相同重組AAV的醫藥組合物。  5. 實例
本部分(亦即，部分5)中之實例係作為說明來提供的，而非限制。 5.1 實例1：適於誘發AAV群集之稀釋劑的製備
將具有蔗糖之經改良之DPBS的含有包含編碼轉殖基因之表現卡匣之重組腺相關病毒(AAV)載體(例如AAV8-抗VEGFfab或構築體II) (表2)的溶液用磷酸鹽緩衝之10%蔗糖稀釋劑(表3)稀釋以獲得較低離子強度溶液。磷酸鹽緩衝之10%蔗糖稀釋劑具有與經改良之DPBS相同的賦形劑及緩衝能力但具有減少之離子型賦形劑氯化鈉及增加之非離子型賦形劑蔗糖，以降低離子強度，同時維持滲壓性/滲透壓在期望範圍內(等於或大於240 mOsm/kg)。表4中展示具有蔗糖及磷酸鹽緩衝之10%蔗糖稀釋劑的經改良之DPBS之性質的總結。 表 2 ：具有蔗糖之經改良之 DPBS 調配物
成分 功能 品質標準 濃度(mg/mL) 濃度(mM或%) 質量分數(g/kg) b 供應商及部件號 化學式 分子量(g/mol)
構築體II API 內部 基於劑量水準變化 - - - - -
氯化鈉 緩衝劑 USP、Ph.Eur、BP、JPE 5.84 100 mM 5.736 Avantor，3627 NaCl 58.440
氯化鉀 USP、BP、Ph.Eur、JPE 0.201 2.70 mM 0.198 Avantor，3045 KCl 74.5513
無水磷酸氫二鈉 USP、Ph.Eur、JPE 1.15 8.10 mM 1.129 Avantor，3804 Na 2HPO 4 141.960
磷酸二氫鉀 NF、BP、Ph.Eur 0.200 1.47 mM 0.196 Avantor，3248 KH 2PO 4 136.086
蔗糖 冷凍保護劑 USP、NF、Ph.Eur、BP、JPE 40.0 117 mM 39.26 Pfanstiehl，S-124-2-MC C 12H 22O 11 342.3
泊洛沙姆188 界面活性劑 a NF、Ph.Eur、JPE 0.010 0.001% 0.1 mL/kg 10%原液 BASF，50424596 HO(C 3H 6O) a(C 2H 4O) b(C 3H 6O) aH 7680至9510
水 水性媒劑 WFI 大約971 mg/mL 大約54 M 足量至1 kg (需要大約953 g/kg) 變化 H 2O 18.0153
a. 外加0.1 mL/L = 0.1 mL/kg 10%原液P188。可使用來自Spectrum之NF級Pluronic® F-68 (泊洛沙姆188)及來自BASF之Kolliphor® P188 BIO。 b. 1 kg溶液之體積大約為982 mL (1 kg/1.0188 kg/L = 982 mL) 表 3 ：磷酸鹽緩衝之 10% 蔗糖稀釋劑
成分 功能 品質標準 濃度(g/L) 濃度(mM或%) 供應商及部件號 化學式 分子量(g/mol)
氯化鉀 緩衝劑 USP、BP、Ph.Eur、JPE 0.201 2.70 mM Avantor，3045 KCl 74.5513
無水磷酸氫二鈉 USP、Ph.Eur、JPE 1.15 8.10 mM Avantor，3804 Na2HPO4 141.960
磷酸二氫鉀 NF、BP、Ph.Eur 0.200 1.47 mM Avantor，3248 KH2PO4 136.086
蔗糖 滲壓劑 USP、NF、Ph.Eur、BP、JPE 100.0 292 mM Pfanstiehl，S-124-2-MC C12H22O11 342.3
泊洛沙姆188 界面活性劑 a NF、Ph.Eur、JPE 0.010 0.001% BASF，50424596 HO(C3H6O)a (C2H4O)b(C3H6O)aH 7680至9510
水 水性媒劑 WFI QS至1L Varies H2O 18.0153
a. 外加0.1 mL/L = 0.1 mL/kg 10%原液P188。可使用來自Spectrum之NF級Pluronic® F-68 (泊洛沙姆188)及來自BASF之Kolliphor® P188 BIO。 表 4 ：具有蔗糖之經改良之 DPBS 調配物緩衝液、磷酸鹽緩衝之 10% 蔗糖稀釋劑及具有 0.001% 泊洛沙姆 188 之 DPBS 鹽水溶液的特性
緩衝液 蔗糖(%) NaCl水準(mM) 離子強度(mM) 典型滲透壓(mOsm/kg)
具有蔗糖之經改良之DPBS調配物 4 100 125.5 345
磷酸鹽緩衝之10%蔗糖稀釋劑 10 0 25.5 354
具有0.001% P188之DPBS鹽水溶液 0 137 162.5 290
5.2 實例2：AAV群集
在本實驗中，使用含有包含編碼轉殖基因之表現卡匣之重組腺相關病毒(AAV)載體的對照溶液。簡言之，將具有蔗糖之經改良之DPBS的含有包含編碼轉殖基因之表現卡匣之重組腺相關病毒(AAV)載體(例如AAV8-抗VEGFfab或構築體II) (表2)的溶液用磷酸鹽緩衝之10%蔗糖稀釋劑(表3)稀釋以獲得含有較低離子強度及含鹽量之AAV溶液(圖1)。稀釋產生稀釋兩倍、四倍或八倍之AAV溶液。
接著量測對照溶液中及兩倍、四倍或八倍稀釋溶液中之AAV分子直徑(nm)。本實驗顯示，隨著離子強度降低，AAV分子直徑(nm)增加(圖4及圖5)。此結果與AAV隨著AAV溶液之離子強度降低而聚集的實情相關(圖3A-3B)。本實驗顯示，含有包含編碼轉殖基因之表現卡匣之重組腺相關病毒(AAV)載體的液體醫藥組合物可在降低之離子型賦形劑氯化鈉溶液存在下稀釋以誘發AAV群集(圖2及圖3A-3B)。群集物在25℃下穩定至少21小時。表5顯示稀釋至＜25 mM氯化鈉(等於＜51 mM離子強度)誘發AAV群集，平均(直徑)尺寸增加為2.6 nm，且稀釋至12.5 mM氯化鈉(等於＜38 mM離子強度)引起甚至更大之AAV群集，且平均尺寸增加為6.5 nm (參見表5中之樣品A4及A5)。
此外，本實驗顯示AAV之分子直徑及聚集係可逆的。在約21小時之後，將含有NaCl之溶液(例如1莫耳鹽水倒轉溶液，圖4)添加至AAV對照溶液及兩倍、四倍或八倍稀釋溶液中，以獲得等於或大於150 mM之離子強度(圖6)。在添加NaCl之後約5小時監測AAV群集之倒轉。資料顯示，在NaCl溶液添加至AAV對照溶液及兩倍、四倍及八倍稀釋溶液之後離子強度立即增加(在5分鐘內) (圖4)。顯示AAV群集因離子強度增加而可逆(圖4及圖6)。因此，AAV殼之結構與功能未因誘發之群集而不可逆地改變。資料顯示，基於離子強度，AAV聚集為可逆的，且脈絡膜上投與含有聚集AAV之溶液可引起AAV一旦與體液(例如眼內液或SCS流體)接觸就變成不聚集或較少聚集。
含有群集AAV之溶液可投與至受試者眼睛中之脈絡膜上腔，引起在注射部位之定位時間增加(圖1)，從而減緩清除速率及總清除時間。脈絡膜上腔中活體內藥團/氣泡溶液組成交換之實際速率可延遲，以使得群集物在注射部位之滯留時間延長，因此增加功效。含有群集AAV之溶液的投與可減緩AAV自SCS清除之時間，且增加AAV保留在注射部位之持續時間。AAV之聚集體允許在一段時間內AAV粒子在SCS中持續釋放。 表 5 ：藉由用 磷酸鹽緩衝之 10% 蔗糖 稀釋劑稀釋 (2 倍至 8 倍 ) 至 較低離子強度 及鹽誘發之群集的影響
樣品 稀釋因子 NaCl水準(mM) 離子強度(mM) 平均累積量直徑(nm) a
A2 (對照物) 1 100 125.5 28.0
A3 2 50 75.5 27.9
A4 4 25 50.5 30.6
A5 8 12.5 38.0 34.5
a. 報導在誘發群集後2.1小時的平均直徑 5.3 實例3：優化活體外研究
藉由累積量動態光散射(DLS)測定具有蔗糖之經改良之DPBS中包含編碼轉殖基因之表現卡匣之重組腺相關病毒(AAV)載體(例如AAV8-抗VEGFfab或構築體II)及十倍稀釋溶液之AAV的加權平均視直徑(圖7)。藉由添加磷酸鹽緩衝之10%蔗糖稀釋劑稀釋具有蔗糖之經改良之DPBS中AAV之溶液(表4)。在向十倍稀釋溶液外加NaCl (例如藉由添加具有0.001% P188之DPBS鹽水倒轉溶液至十倍稀釋溶液)之後本實驗亦測試加權平均視直徑(表4及圖7)。
接著在25℃下評估群集物尺寸，歷時45分鐘，以模擬劑量製備程序(例如脈絡膜上投與)。將溫度增加至37℃以模擬給藥之後的溫度增加(例如與體溫相關)且監測群集物尺寸，總時間為87分鐘。表6中展示樣品之鹽(氯化鈉)水準、離子強度、滲透壓、平均累積量直徑、藉由ddPCR之載體基因組濃度及活體外效力的影響。本實驗顯示，與對照具有蔗糖之經改良之DPBS中的AAV相比十倍稀釋溶液(用磷酸鹽緩衝之10%蔗糖稀釋劑稀釋)中AAV之直徑增加約5 nm (比較表6中樣品1及樣品2之平均累積量直徑)。此AAV直徑增加可影響AAV在脈絡膜上投與之後在注射部位之滯留時間，因此增強治療功效。如藉由滲透壓量測之十倍稀釋溶液之滲壓性為357 mOsm/kg且在給與脈絡膜上腔之可接受範圍內(240＜滲透壓＜600 mOsm/kg)(參考表6中之樣品2)。本實驗顯示，在十倍稀釋溶液(用磷酸鹽緩衝之10%蔗糖稀釋劑稀釋)與對照具有蔗糖之經改良之DPBS之間未觀測到載體基因組濃度有顯著損失(比較表6中樣品1及樣品2之載體基因組濃度)。此外，預期樣品之間效力無顯著損失(資料未示)。此資料與先前公開之文獻(Wright等人, 2005)矛盾，該文獻預測AAV之聚集或群集降低AAV效力。
此實驗顯示AAV群集不影響效力之實情並不意外。本實驗顯示，在短時間內誘發之AAV群集係可逆的，因此未引起效力不可逆之損失。因此，可在脈絡膜上投與之前不久稀釋AAV溶液以誘發群集(圖1)。舉例而言，可在與脈絡膜上投與相同之日稀釋AAV溶液以誘發AAV群集(或在脈絡膜上投與前約21小時)。可替代地，含有群集AAV之稀釋溶液可儲存(例如速凍或在室溫下，或在20℃下，或在4℃下，或在-80℃下)備用。
在一些情況下，開業醫師在一個小瓶中提供AAV溶液且在另一個小瓶中提供稀釋劑溶液。接著開業醫師可藉由添加指定體積之稀釋劑至AAV溶液(例如以獲得十倍稀釋)來製備劑量。舉例而言，50 μL 3×10 13GC/mL AAV溶液可用450 μL磷酸鹽緩衝之10%蔗糖稀釋劑稀釋十倍至3×10 12GC/mL以誘發群集，且接著可將100 μL十倍稀釋之AAV溶液投與至脈絡膜上腔，每只眼睛之總劑量為3×10 11GC。最終劑量製備體積及劑量可基於臨床前及臨床研究變化。可替代地，含有聚集AAV之經稀釋之AAV溶液(例如十倍稀釋)可提供於一個小瓶中，供開業醫師直接使用。這樣，開業醫師無需在使用前將AAV溶液與稀釋劑混合。 表 6 ：藉由用 磷酸鹽緩衝之 10% 蔗糖 稀釋劑稀釋十倍至 較低離子強度 及鹽最佳誘發之群集的影響
樣品號 描述 NaCl水準(mM) 離子強度(mM) 滲透壓 (mOsm/kg) 平均累積量直徑(nm) a 藉由ddPCR之載體基因體濃度 (GC/mL) 活體外效力(%)
1 具有蔗糖之經改良之DPBS中的對照物 100 125.5 339 27.4 2.95×10 13 資料未示
2 對照樣品1經磷酸鹽緩衝之10%蔗糖之1/10稀釋液 10 35.5 357 32.4 2.99×10 12 資料未示
3 經誘發之群集樣品2經鹽水(具有0.001% P188之DPBS) 1/2稀釋液 73.5 99 317 27.0 1.52×10 12 資料未示
a. 在誘發群集之後長達87分鐘的平均直徑，包括25℃下45分鐘，接著剩餘42分鐘，溫度增加至37℃。
可以類似方式，針對其他AAV (例如AAV2及AAV9)優化AAV群集、稀釋劑離子強度及稀釋比率之閾值。舉例而言，AAV8之防止群集之閾值為約60 mM離子強度。本實驗顯示，藉由用磷酸鹽緩衝之蔗糖(離子強度= 26 mM)稀釋(10倍)具有蔗糖之經改良之DPBS (離子強度= 126 mM)中的AAV，以實現約36 mM之離子強度(防止AAV群集所需之閾值離子強度(亦即60 mM)的約一半至三分之二)，可實現合適的誘發群集之劑量製備。對於AAV9，誘發群集之穩固目標可為防止群集之AAV9 30 mM閾值之一半至三分之二，其為約15 mM至20 mM離子強度。因此，對於AAV9，可期望離子強度低於AAV8。一種實現此之方式係降低磷酸鹽緩衝之10%蔗糖稀釋劑的緩衝劑含量達5倍，以使離子強度自26 mM減少至5.2 mM。因此，用5.2 mM離子強度稀釋劑對AAV溶液(離子強度= 126 mM)進行十倍稀釋可產生總離子強度為約17 mM之溶液，其低於所需要之群集閾值。類似地，AAV2群集可藉由降低其離子強度來實現。假定AAV2調配成介於200 mM至600 mM之間的離子強度，用磷酸鹽緩衝之10%蔗糖進行十倍稀釋產生介於43 mM與83 mM之間的離子強度，其顯著低於群集閾值。
不同稀釋比率及/或不同稀釋劑可用於實現所需臨床群集劑量製備(例如特定群集閾值之約一半至三分之二的離子強度)。對於AAV8，群集閾值為約60 mM，因此溶液目標＜40 mM可用於誘發群集。對於AAV9，閾值為約30 mM，因此溶液目標＜20 mM離子強度可用於誘發群集。對於AAV2，群集閾值為200 mM，因此溶液目標＜133 mM可用於誘發群集。 5.4 實例4：在患有新生血管性年齡相關之黃斑變性(nAMD)之個體的脈絡膜上腔中投與的基因療法 5.4.1 研究簡要總結：
本實例涉及針對新生血管性(濕性)年齡相關之黃斑變性(nAMD)患者之基因療法治療。在本實例中，使用具有不同AAV聚集水準之不同溶液或具有不同離子強度(在低離子強度至非常高離子強度範圍)之不同溶液向nAMD患者投與構築體II或攜帶可溶性抗VEGF Fab蛋白編碼序列之複製缺陷型腺相關病毒載體8 (AAV8)。基因療法治療之目標係藉由最少之干預/侵入性程序減緩或阻止視網膜變性之進展且減緩或預防視力喪失。當前抗VEGF療法已顯著改變濕性AMD之治療前景，由於其能夠防止大多數患者中視力喪失之進展，因此成為治療標準。然而，此等療法需要終生進行眼內注射，頻率通常為每4至12週重複一次，以維持療效。由於治療之負擔，在治療頻率降低下，隨著時間之推移，患者之視力常會下降。正開發脈絡膜上腔中之基因療法作為濕性AMD或任何其他眼部疾病之潛在一次性治療。
研究詳細描述：此劑量遞增研究經設計以評估構築體II或AAV8-抗VEGF-ab基因療法在患有nAMD之個體中的功效、安全性及耐受性。功效係研究之主要重點。在整個研究過程中，評估個體中構築體II或AAV8-抗-VEGF-ab之安全性及耐受性。大約40名符合納入/排除標準之個體隨機分至兩個劑量隊列中之一者中。一些個體接受蘭尼單抗(LUCENTIS®)作為對照治療，一些接受經由一次脈絡膜上腔(SCS)注射遞送之構築體II或AAV8-抗VEGF-ab，且一些接受經由兩次脈絡膜上腔(SCS)注射遞送之構築體II或AAV8-抗VEGF-ab。本實例亦可用於遞送存在於具有不同AAV聚集水準或具有不同離子強度或鹽含量之不同溶液中之基因療法。例如，一些溶液可具有AAV聚集，而其他溶液不具有可偵測水準之AAV聚集。亦可分析構築體II或AAV8-抗VEGF-ab (或任何其他基因療法)之功效、安全性及耐受性與遞送溶液之AAV聚集或離子強度之相關性。
本研究之主要結果量測係在40週時間框內，每個月評估構築體II或AAV8-抗VEGF-ab與蘭尼單抗相比最佳矯正視覺敏銳度(BCVA)之平均變化。使用之量表係糖尿病性視網膜病變早期治療研究(ETDRS)字母評分，範圍為0-100 (評分愈高視力愈佳)。
本研究之次要結果量測包括：1)藉由偵測52週時間框內眼部及非眼部不良事件(AE)及嚴重不良事件(SAE)之發生率，評估構築體II或AAV8-抗VEGF-ab之安全性及耐受性；2)在52週時間框內，藉由基於第40週及第52週螢光素血管攝影(FA)，分析脈絡膜血管新生(CNV)病變大小及滲漏面積自基線之平均變化，評估構築體II或AAV8-抗VEGF-ab對CNV病變生長及滲漏之影響；3)在52週時間框內，藉由分析至第52週BCVA自基線之平均變化，評估構築體II或AAV8-抗VEGF-ab對BCVA之影響；4)在52週時間框內，藉由如光譜域光學同調斷層掃描(SD-OCT)所量測，分析至第40週及第52週CRT自基線之平均變化，評估構築體II或AAV8-抗VEGF-ab對中央視網膜厚度(CRT)之影響；及5)評估在52週時間框內，接受構築體II或AAV8-抗VEGF-ab治療之參與者是否需要補充抗血管內皮生長因子(VEGF)療法(例如，藉由檢查至第40週及第52週之年度補充抗VEGF注射率)。 5.4.2 資格標準：
以下資格標準適用於本研究： 最低年齡：50歲 最高年齡：89歲 性別：全部 基於性別：否 接受健康志願者：否 5.4.3 納入標準：
50歲≤患者≤89歲，且研究眼睛中診斷為繼發於年齡相關之黃斑變性(AMD)之中央凹下CNV。
參與者必須對抗VEGF療法已顯示有意義之反應。 5.4.4 排除標準：
研究眼睛中有繼發於AMD以外之任何原因之CNV或黃斑水腫。
研究眼睛中央凹下纖維化或萎縮。
個體先前曾接受過玻璃體切除術。
研究者認為可能會限制研究眼睛視覺敏銳度(VA)改善之任何狀況。
研究眼睛中有活動性視網膜剝離或視網膜剝離歷史。
研究眼睛中有不受控制之青光眼。
接受過任何基因療法。
任何妨礙目測研究眼睛中之眼底或VA改善的疾患，例如白內障、玻璃體混濁、纖維化、萎縮或中央凹中心之視網膜上皮撕裂。
研究眼睛有眼內手術史。
在第2次訪視後30天內收到任何研究用產品。
進入研究後6個月內發生心肌梗塞、腦血管意外或暫時性腦缺血。 5.5 實例5：動物模型中AAV (例如AAV8-抗VEGFfab)之脈絡膜上注射與視網膜下注射之比較 5.5.1 研究簡要總結
進行以下研究以比較藉由脈絡膜上與視網膜下注射含有AAV (例如，攜帶可溶性抗VEGF Fab蛋白編碼序列之複製缺陷型腺相關病毒載體8 (AAV8))之各種醫藥組合物(例如，經稀釋之調配物或較低離子強度之調配物)所實現的表現。本實驗亦用於確定與藉由視網膜下注射或藉由脈絡膜上注射來遞送在不具有AAV聚集或具有常用離子強度及鹽含量之溶液中之AAV相比，在具有聚集AAV或具有低離子強度或鹽含量之溶液中之AAV (例如，AAV8-抗VEGFfab)的脈絡膜上注射是否可減少眼睛中VEGF誘發之滲漏及血管新生且增加抗VEGF。測試若干種含有不同AAV聚集水準或不同離子強度或不同鹽濃度之醫藥組合物(例如，經稀釋之調配物或較低離子強度之調配物)。
結果表明，溶液之AAV聚集水準或離子強度或鹽含量影響在脈絡膜上或視網膜下注射AAV-抗VEGFfab之眼睛中偵測到的抗VEGFfab，影響視網膜與脈絡膜中抗VEGF蛋白之分佈，且影響中和VEGF誘發之滲漏及血管新生。藉由ELISA量測抗VEGFfab蛋白之濃度，以證明當溶液注射在SCS中(脈絡膜上注射)時，與在參考溶液(例如DPBS或常用於AAV視網膜下注射之溶液)存在下遞送之AAV-抗VEGFfab相比，在包含聚集AAV或較低離子強度或較低鹽濃度之溶液(與PBS相比或與通常用於AAV視網膜下注射之溶液相比或與參考相比)存在下遞送之AAV-抗VEGFfab引起在眼睛中偵測到更高水準之抗VEGFfab。本實驗亦表明，當經由脈絡膜上注射來注射含有AAV-抗VEGFfab且包含聚集AAV或較低離子強度或較低鹽濃度之溶液時，與參考溶液(例如常用於AAV視網膜下注射之溶液或不包含聚集AAV或無可偵測之AAV聚集水準之溶液)中AAV-抗VEGFfab之視網膜下注射相比，在眼睛中偵測到更高水準之抗VEGFfab。本實驗亦表明，當經由脈絡膜上注射來注射含有AAV-抗VEGFfab且具有聚集AAV或較低離子濃度或較低鹽濃度之醫藥組合物時，與藉由視網膜下注射投與相同醫藥組合物時相比，在眼睛中偵測到更高水準之抗VEGFfab。相同濃度之病毒基因體用於SCS及視網膜下投與。相同量之基因體複本可用於SCS及視網膜下投與。
藉由ELISA量測玻璃體樣品中之白蛋白來評估血管滲漏，以證明與視網膜下注射含有AAV-抗VEGFfab之相同溶液相比，脈絡膜上注射含有AAV-抗VEGFfab且包含聚集AAV之溶液在中和VEGF誘發之滲漏及血管新生方面更有效。 5.5.2 方法
動物(例如，挪威棕鼠(Norway Brown rat))在一隻眼睛中接受脈絡膜上或視網膜下注射例如含有每隻眼睛2.85×10 10個基因體複本(GC) (濃度為4×10 10GC/ml) AAV8-CB7-抗VEGFfab之3 μl，及在另一隻眼睛中接受脈絡膜上或視網膜下注射含有7.2×10 8GC AAV8-CB7-GFP之3 μl。幾週(例如，2週)後，將VEGF(例如，200 ng)注射至眼睛中。在動物子集中，注射不同量之VEGF (例如100 ng)。 5.5.3 結果
在注射VEGF後24小時拍攝之眼底照片(例如在2週時)顯示注射AAV8-抗VEGFfab之眼睛中視網膜及視網膜血管口徑正常，而注射AAV8-GFP之眼睛顯示血管擴張、有水腫跡象、視盤邊緣模糊及乳白色視網膜。
藉由ELISA量測玻璃體樣品中之白蛋白來評估血管滲漏。與使用相同濃度之病毒基因體或相同數目之基因體複本經由視網膜下投與來注射相同醫藥組合物時相比，在SCS中注射含有AAV8-抗VEGFfab且包含聚集AAV之溶液之眼睛中偵測到更高水準之抗VEGFfab。此外，與在SCS中注射或經由視網膜下遞送注射含有AAV8-抗VEGFfab之參考溶液(例如，通常用於AAV視網膜下注射之溶液)相比，在SCS中注射含有AAV8-抗VEGFfab且包含聚集AAV之溶液之眼睛中偵測到更高水準之抗VEGFfab。與使用參考溶液(例如，通常用於AAV視網膜下注射之溶液)在SCS中或經由視網膜下遞送來注射AAV時，當使用且包含聚集AAV之溶液在SCS中注射AAV時，AAV抗VEGFfab保持在注射部位(較少擴散)且更多地定位。 5.6 實例6：液體調配物對脈絡膜上腔(SCS)厚度之影響
在活體動物(例如兔、小鼠或猴)中量測隨著時間之推移液體調配物對SCS厚度及SCS塌陷率之影響。使用具有不同AAV聚集水準或離子強度或鹽濃度之不同溶液。在本揭示案中揭示可用於本實驗之溶液之實例。藉由例如使用超音波成像(參見部分4.6)計算各種醫藥組合物(例如，經稀釋之調配物或較低離子強度之調配物)在注射部位之初始SCS厚度。SCS厚度(例如，在注射前及注射後量測之SCS厚度)視溶液之AAV聚集水準而定。可在不同時間點量測，諸如在注射前及注射後之不同時間點SCS厚度。舉例而言，與參考溶液或包含較少量之AAV聚集之溶液相比，包含AAV聚集之溶液顯示出更高之SCS厚度。亦在眼睛中之不同位置隨著時間之推移量測SCS厚度。溶液之AAV聚集水準隨著時間之推移影響SCS之厚度。舉例而言，即使隨著時間之推移量測，包含聚集AAV之溶液亦增加注射部位附近之SCS厚度，而當使用參考溶液時，注射部位之SCS厚度隨著時間之推移而減小。當使用PBS或參考溶液時，注射部位之SCS厚度隨著時間之推移而減少，隨之伴有SCS中相鄰部位之SCS厚度增加。溶液之AAV聚集水準或離子強度或鹽濃度影響SCS厚度之持續時間及SCS厚度之定位。溶液之AAV聚集或離子強度或鹽濃度亦影響溶液自SCS中清除所花費之時間。例如，與參考溶液相比，具有AAV聚集之溶液在SCS中(或在眼睛中)保持更長時段。  5.7 實例7：進行超音波成像以確定脈絡膜上腔(SCS)厚度
使用高頻超音波(U/S)探針(例如UBM Plus；Accutome, Malvern, PA)產生離體眼睛(例如動物眼睛)中SCS之2D橫截面影像(參見部分4.6)。在眼睛注射溶液後產生橫截面影像。溶液之AAV聚集、離子強度、鹽濃度及體積可在一定範圍內變化不同。例如，體積可在1 µL至500 µL範圍內。在一些情況下，體積可小於1 µL或大於500 µL。溶液可為水溶液(例如水)、PBS、漢克平衡鹽溶液(HBSS)、DPBS或本揭示案之任何其他溶液。溶液可進一步包括染料(例如螢光染料、紅色螢光、藍色螢光、藍色染料或任何其他染料)。溶液亦可包括可與本揭示案一起使用之任何組合物、藥物、試劑或病毒(例如AAV)。U/S探針蓋(例如Clearscan；Eye-Surgical-Instruments, Plymouth, MN)附接至UBM Plus以促進U/S影像擷取。注射後幾分鐘，使用U/S探針來獲取眼睛周圍之矢狀視圖(例如，在位置12、1.5、3、4.5、6、7.5、9及10.5點鐘)。對U/S B掃描執行後處理以找到自外鞏膜至內視網膜之厚度(例如在1 mm、5 mm及9 mm)。計算每隻眼睛之平均值、中位數及標準偏差。超音波B掃描中SCS厚度之計算可藉由例如自外鞏膜至內視網膜找到一條垂直於鞏膜及脈絡膜之線段進行。結膜排除在量測之外。找到組織厚度且減去組織厚度，得到SCS厚度。  5.8 實例8：藉由脈絡膜上注射治療巴登蛋白-CLN1或CLN2相關之視力喪失
向出現巴登蛋白-CLN1相關之視力喪失之個體投與編碼棕櫚醯-蛋白硫酯酶1之AAV8或AAV9，其劑量足以持續三個月在眼睛(例如，玻璃狀液)中產生治療有效濃度之轉殖基因產物。向出現巴登蛋白-CLN2相關之視力喪失之個體投與編碼三肽基-肽酶1之AAV8或AAV9，其劑量足以持續三個月在眼睛(例如，玻璃狀液)中產生治療有效濃度之轉殖基因產物。藉由向脈絡膜上腔投與來進行投與。使用具有不同AAV聚集水準之若干種醫藥組合物(例如，經稀釋之調配物或較低離子強度之調配物)。醫藥組合物(例如，經稀釋之調配物或較低離子強度之調配物)之AAV聚集水準、離子強度或鹽濃度影響巴登蛋白-CLN2或CLN1相關之視力喪失及治療功效。在治療之後，對個體中巴登蛋白-CLN2相關之視力喪失之改善進行評估。在治療之後，對個體中巴登蛋白-CLN1相關之視力喪失之改善進行評估。當使用包含聚集AAV之醫藥組合物時在SCS中投與AAV之個體顯示巴登蛋白-CLN1或CLN2相關之視力喪失之改善比藉由視網膜下注射來投與相同醫藥組合物之個體更佳。當使用包含聚集AAV之醫藥組合物時在SCS中投與AAV之個體顯示巴登蛋白-CLN1或CLN2相關之視力喪失之改善比藉由視網膜下注射、藉由玻璃體內投與或投與至SCS來投與參考醫藥組合物之個體更佳。
藉由一或多種視覺敏銳度篩選來量測本文提供之方法對視覺缺陷之影響，包括視動性眼球震顫(OKN)。OKN視覺敏銳度篩選使用OKN無意識反射之原理，客觀地評估患者之眼睛是否能跟隨移動之目標。計算該治療前後OKN篩選結果之變化百分比。 5.9 實例9：使用紅外線熱像儀監測人類患者中之注射
向出現濕性AMD之個體投與編碼蘭尼單抗Fab之AAV8 (例如藉由視網膜下投與、脈絡膜上投與或玻璃體內投與)，其劑量足以持續三個月在眼睛(例如，玻璃狀液)中產生Cmin為至少0.330 µg/mL之濃度的轉殖基因產物。可藉由脈絡膜上投與，使用具有不同AAV聚集水準之若干種醫藥組合物(例如，經稀釋之調配物或較低離子強度之調配物)投與編碼蘭尼單抗Fab之AAV8。與藉由脈絡膜上投與、視網膜下投與或玻璃體內投與在參考溶液中投與編碼蘭尼單抗Fab之AAV8之個體相比，在包含聚集AAV之溶液(與參考溶液相比或與通常用於AAV視網膜下注射之溶液相比)中投與編碼蘭尼單抗Fab之AAV8之個體顯示更高濃度之轉殖基因(例如，如在投與後1週、2週、3週、4週、8週或12週時量測)。可在投與編碼蘭尼單抗Fab之AAV8後的任何時間量測轉殖基因之濃度。舉例而言，如在投與AAV後1週、4週、2個月或3個月時量測，與使用參考溶液在SCS中或經由視網膜下或經由玻璃體內投與來投與AAV8之個體相比，使用包含聚集AAV之溶液在SCS中投與AAV8之個體在眼睛中顯示更高濃度之轉殖基因。類似地，與經由視網膜下投與來投與相同醫藥組合物之個體相比，使用包含聚集AAV之溶液在SCS中投與AAV8之個體顯示更高濃度之轉殖基因。本實驗中使用之所有溶液皆具有相同量之基因體複本。
使用FLIR T530紅外線熱像儀在程序過程中評估注射，且可在注射後進行評估，以確認投藥成功完成或投藥錯誤。或者，使用FLIR T420、FLIR T440、Fluke Ti400或FLIRE60紅外線熱像儀。在治療之後，臨床評價個體之臨床效果征像以及濕性AMD之徵象及症狀的改善。  5.10 實例10：調配物A及調配物B中之組分
本實例展示調配物A (具有0.001%泊洛沙姆188之杜貝爾寇磷酸鹽緩衝鹽水，pH 7.4)之調配物A，儲存在≤ - 60℃下；及調配物B (『具有4%蔗糖及0.001%泊洛沙姆188之經改良之杜貝爾寇磷酸鹽緩衝鹽水，pH 7.4』)，儲存在-20℃下。表7中提供兩種調配物之比較及影響分析。調配物B具有改善之儲存可行性，在儲存2年後迄今為止未觀測到對AAV產品之影響。測試具有不同AAV聚集水準或離子強度或鹽濃度之其他醫藥組合物(例如，經稀釋之調配物或較低離子強度之調配物)。本揭示案之醫藥組合物可包括例如來自調配物B之一或多種組分。本揭示案之醫藥組合物(例如，具有AAV聚集)具有改善之儲存可行性，對AAV產品無影響(例如，儲存2年後)。 表 7 ： 調配物 A 及 B.
製程位點 / 階段 調配物 A 調配物 B
調配物緩衝液 具有0.001%泊洛沙姆188之DPBS，pH 7.4。 組成： 0.2 mg/mL氯化鉀、0.2 mg/mL磷酸二氫鉀、8.1 mg/mL氯化鈉、1.15 mg/mL無水磷酸氫二鈉、0.001% (0.01 mg/mL)泊洛沙姆188，pH 7.4 『具有4%蔗糖及0.001%泊洛沙姆188之經改良之DPBS，pH 7.4』。 『具有4%蔗糖及0.001%泊洛沙姆188之經改良之DPBS，pH 7.4』調配物具有4% w/v蔗糖及較低氯化鈉水準(自137 mM降低至100 mM)以補償滲壓性。其他調配物賦形劑及水準一致。 組成：0.2 mg/mL氯化鉀、0.2 mg/mL磷酸二氫鉀、5.84 mg/mL氯化鈉、1.15 mg/mL無水磷酸氫二鈉、40.0 mg/mL (4% w/v)蔗糖、0.001% (0.01 mg/mL)泊洛沙姆188，pH 7.4
FDP 長期冷凍儲存溫度 ≤ -60˚C -20℃
調配物B (具有蔗糖之經改良之DPBS)包括0.2 mg/mL氯化鉀、0.2 mg/mL磷酸二氫鉀、5.84 mg/mL氯化鈉、1.15 mg/mL無水磷酸氫二鈉、40.0 mg/mL (4% w/v)蔗糖、0.001% (0.01 mg/mL)泊洛沙姆188，pH 7.4 (表8)。以莫耳單位計，調配物B 包括 2.70 mM氯化鉀、1.47 mM磷酸二氫鉀、100 mM氯化鈉、8.1 mM無水磷酸氫二鈉、117 mM蔗糖，0.001% (0.01 mg/mL)泊洛沙姆188，pH 7.4。調配物B之密度可為1.0188 g/mL；調配物B之滲透壓可為約345 (331-354)。 表 8 ：以構築體 II 作為活性醫藥成分 (API) 之調配物 B.
成分 功能 品質標準 濃度(mg/mL) 濃度(mM 或%) 質量分數(g/kg) b 供應商及部件號 化學式 分子量(g/mol)
構築體II API 內部 因劑量水準而異 - - - - -
氯化鈉 緩衝劑 USP、Ph.Eur、BP、JPE 5.84 100 mM 5.736 Avantor，3627 NaCl 58.440
氯化鉀 USP、BP、Ph.Eur、JPE 0.201 2.70 mM 0.198 Avantor，3045 KCl 74.5513
無水磷酸氫二鈉 USP、Ph.Eur、JPE 1.15 8.10 mM 1.129 Avantor，3804 Na 2HPO 4 141.960
磷酸二氫鉀 NF、BP、Ph.Eur 0.200 1.47 mM 0.196 Avantor，3248 KH 2PO 4 136.086
蔗糖 冷凍保護劑 USP、NF、Ph.Eur、BP、JPE 40.0 117 mM 39.26 Pfanstiehl，S-124-2-MC C12H22O11 342.3
泊洛沙姆188 界面活性劑 a NF、Ph.Eur、JPE 0.010 0.001% 0.1 mL/kg 10%儲備液 BASF，50424596 HO(C 3H 6O) a(C 2H 4O) b(C 3H 6O) aH 7680至9510
水 水性媒劑 WFI 約971 mg/mL 約54 M 足量至1 kg (需要大約953 g/kg) 變化 H 2O 18.0153
a. 外加0.1 mL/L = 0.1 mL/kg 10%儲備液P188。可使用來自Spectrum之NF級Pluronic® F-68 (泊洛沙姆188)及來自BASF之Kolliphor® P188 BIO。 b. 1 kg溶液之體積為約982 mL (1 kg/1.0188 kg/L = 982 mL) 5.11 實例11：調配物A及調配物B在長期穩定性方面之比較
本實例展示調配物A及調配物B在長期穩定性方面之比較。調配物A及B在-80℃下具有相似之長期冷凍穩定性，且調配物B在-20℃下亦穩定。『具有4%蔗糖之經改良之dPBS』調配物B在-20℃及-80℃下維持效力12個月。測試具有不同AAV聚集水準之其他醫藥組合物(例如，經稀釋之調配物或較低離子強度之調配物)。本揭示案之醫藥組合物(例如，包含聚集AAV)在-20℃及-80℃下穩定。包含AAV聚集之醫藥組合物在-20℃及-80℃下維持效力12個月。本揭示案之醫藥組合物(例如，包含聚集AAV)可包括例如來自調配物B之一或多種組分。  5.12 實例12：調配物A及調配物C活體外效力之比較
本實例展示調配物A及調配物C在長期穩定性方面之比較。調配物C為『具有蔗糖之經改良之dPBS』的變異體，具有60 mM NaCl及6%蔗糖。調配物C包括0.2 mg/mL氯化鉀、0.2 mg/mL磷酸二氫鉀、3.50 mg/mL氯化鈉、1.15 mg/mL無水磷酸氫二鈉、60.0 mg/mL (6% w/v)蔗糖、0.001% (0.01 mg/mL)泊洛沙姆188，pH 7.4。
調配物C在-20℃下穩定2年。參考調配物A (dPBS)在-20℃下不穩定。調配物B及C在-20℃下可能具有可比較且優良之長期穩定性。測試具有不同AAV聚集水準之其他醫藥組合物(例如，經稀釋之調配物或較低離子強度之調配物)。本揭示案之醫藥組合物(例如，包含AAV聚集)可包括例如來自調配物B或調配物C之一或多種組分。本揭示案之醫藥組合物(例如，包含AAV聚集)在-20℃下穩定2年。 5.13 實例13：使用不同脈絡膜上調配物在食蟹獼猴中之藥效學、生物分佈及耐受性研究
本研究之目的係評估包含AAV8-抗VEGF-ab之不同調配物在藉由脈絡膜上注射單劑量投與至食蟹獼猴時之生物分佈、藥效學(轉殖基因濃度)及耐受性。在給藥之後，觀測動物給藥後至少4週。一組亦投與高容量調配物。一些調配物具有不同AAV聚集水準，在低聚集至高聚集範圍內。一些調配物具有不同離子強度水準，在低離子強度至高離子強度範圍內。舉例而言，調配物1具有低AAV聚集水準，調配物2具有中等AAV聚集水準，且調配物3具有高AAV聚集水準。表9中展示組分配及劑量水準。測試物品為AAV8-抗VEGF-ab。對照物品為安慰劑。調配物及對照物可儲存在-60℃與-80℃之間的冷凍機中，且在使用當日在室溫下解凍，或若在調配物當日使用，則儲存在室溫下，或儲存在2℃與8℃之間的冰箱中。適應症為慢性視網膜疾患，包括濕性AMD及糖尿病性視網膜病變。 表 9 ：組分配及劑量水準
組 劑量方案左眼 劑量方案右眼 劑量水準 b (GC/ 眼 ) 給藥濃度 (GC/mL) 動物數目 ( 雌性 )
對照物1 a 對照物品1 對照物品1 0 0 41
對照物2 對照物品2 對照物品2 0 0 1
對照物3 對照物品3 對照物品3 0 0 1
調配物1 測試物品1 測試物品1 3×10 11 3×10 12 4
調配物2 測試物品2 測試物品2 3×10 11 3×10 12 4
調配物3 測試物品3 測試物品3 3×10 11 3×10 12 4
高容量調配物 測試物品1、2或3 測試物品1、2或3 3×10 11 1.5×10 12 4
GC =基因體複本 a 第1組將僅投與對照物品。 b 劑量水準係基於調配物1-3之100 μL/眼之劑量體積，以及高容量調配物組之200 μL/眼之劑量體積。每隻眼睛注射兩次。 c 在給藥期第29天處死所有動物。
在動物供應商處進行抗體預篩選：經由股靜脈自每隻動物中收集約90隻雌猴之血液(至少1 mL)，且置於不含抗凝劑之試管中。根據需要，可使用另一條靜脈進行收集。基於預篩選結果選擇動物作為研究候選者。使血液在室溫下凝結且在1小時內離心以獲得血清。將血清分成2個等分試樣且置於冷凍瓶中，且維持在乾冰上，然後儲存於大約-70℃下。將樣品在乾冰上運輸隔夜以進行分析。然後藉由任何可接受之方法分析樣品之抗AAV8中和抗體(NAb)。基於抗AAV8 Nab結果選擇用於運輸之動物。
劑量投與：動物禁食隔夜且在脈絡膜上注射之前用氯胺酮及右美托咪啶(dexmedetomidine)麻醉。簡而言之，在5至10秒內向每隻眼睛(距角膜緣3至4 mm之間)投與100 μL單次脈絡膜上注射(或注射2次，每次50 μL)。對於高容量調配物，每隻眼睛投與200 μL。調配物係用Clearside SCS微注射器投與。微針尺寸可視調配物之黏度而變。在一些情況下，使用30規格微針。右眼注射在顳上象限(亦即10點鐘與11點鐘位置之間)進行。左眼注射在顳上象限(亦即1點鐘與2點鐘位置之間)進行。在注射之後，針在眼中保持約5秒後拔出。拔出微針後，將棉頭塗抹器(劑量擦拭物)置放在注射部位約10秒。給藥後在每隻眼睛中滴注局部抗生素(例如Tobrex®或適當替代品)。每次給藥時間記錄為每次注射完成時之時間。右眼先給藥，然後為左眼。
眼科程序：進行眼科檢查(例如，在投與後第4天、第8天、第15天及第29天)。用裂隙燈生物顯微鏡及間接檢眼鏡檢查動物。使用裂隙燈生物顯微鏡檢查雙眼之附件及前部。使用間接檢眼鏡檢查雙眼之眼底(若可見)。在用間接檢眼鏡檢查之前，用散瞳劑(如1%托吡醯胺(tropicamide))散瞳。在投與當天(給藥前10分鐘內)且例如在第4天、第8天、第15天及第29天量測眼內壓。可使用回彈眼壓計(TonoVet)評估眼壓。第4週左右進行眼部攝影。使用數位眼底相機拍攝照片。對每隻眼睛拍攝彩色照片，包括後極之立體照片及兩個中間周邊視野(顳側及鼻側)之非立體照片。亦拍攝周邊照片。此外，使用靛青綠(indocyanine green)進行自發螢光成像以記錄劑量之擴散(例如，在第一天及第二天)。
抗 AAV8 中和抗體分析：將在不同時間點(例如，投與前、投與當天及投與後數天)自股靜脈採集之每隻動物之血液樣品保持在室溫下且使其凝結至少30分鐘，然後離心。將樣品在收集後1小時內離心，且收穫血清。收穫後，將樣品置於乾冰上直至儲存在-60℃與-80℃之間。然後使用合格中和抗體分析對AAV8抗體進行血清分析。
抗 AAV8- 抗 VEGF-ab 轉殖基因產物抗體分析：如上文所討論採集血液樣品且使用本揭示案之任何分析法或任何可接受之分析法分析血清樣品中針對AAV8-抗VEGF-ab之抗體。對於AAV8-抗VEGF-ab轉殖基因分析，如上所述，在投與前至少兩週、第15天及動物處死當天(第29天)採集血液樣品。在劑量投與之前自前房收集50 μL。可在終末屍檢時收集來自水狀液及玻璃狀液之樣品。可在給藥前、第15天及屍檢之前收集血清樣品。然後藉由本揭示案之任何分析法或任何適用之分析法或方法分析樣品(例如，轉殖基因濃度)。
水狀液收集：在投與前至少2週、第15天及處死動物當天，自每隻眼睛中取出約50 μL。將每隻眼睛之水狀液樣品置於具有Watson條碼標簽之單獨試管中，在液氮中快速冷凍，且置於乾冰上直至儲存在-60℃與-80℃之間。
水狀液穿刺後用藥方案：此治療方案之目的係提供與水狀液收集程序相關之姑息治療。收集日之後的治療目的係提供對不良事件(例如不適)之適當緩解。測試動物之眼痛及副作用。 表 10 ：用藥方案
天 藥物 ( 劑量水準 ) 給藥途徑 時間間隔
取樣日 氟尼辛葡甲胺(Flunixin meglumine) (2mg/kg) IM 為進行收集而進行鎮靜之前
取樣日 丁丙諾啡(Buprenorphine) (0.05 mg/kg) IM 自麻醉中恢復後；5至7小時後，且至少16小時後(自第一次注射開始)
取樣日 1%硫酸阿托品(Atropine sulfate)溶液 a 局部 收集程序後
取樣日 Neo-Poly-Dex軟膏 b 局部 收集程序後
取樣後1天 1%硫酸阿托品溶液 a 局部 一次
取樣後1天 Neo-Poly-Dex軟膏 b 局部 BID
取樣後2天 1%硫酸阿托品溶液 a 局部 一次
取樣後2天 Neo-Poly-Dex軟膏 b 局部 BID
BID = 每天兩次(至少間隔6小時)；IM = 肌肉內注射 a 將1至2滴溶液施加至每隻供收集樣品之眼睛上。 b 將大約0.25吋條施加至每隻供收集樣品之眼睛。
研究終止：將動物用戊巴比妥鈉麻醉且在第29天放血。
水狀液及玻璃狀液之屍檢收集：分別自水狀液及玻璃狀液中取出每隻眼睛最多50 μL及每隻眼睛最多100 μL。放血後，摘除眼睛且自每隻眼睛收集水狀液及玻璃狀液樣品。將玻璃狀液樣品分成2個大致相等之等分試樣，且水狀液樣品作為一個等分試樣儲存。每次收集之後，動物右眼注射經改良之戴維森固定液(modified Davidson’s fixative)直至腫脹。眼睛在經改良之戴維森固定液中儲存48至96小時，然後轉移至10%中性緩衝福馬林(formalin)中。將樣品快速冷凍且儲存在-60℃與-80℃之間。分析水狀液及玻璃狀液樣品之轉殖基因濃度。
用於生物分佈之眼組織收集：放血後，將來自不同調配物組之所有動物之左眼及兩隻動物(視存活而定)之右眼摘除且收集組織。將組織收集至帶有Watson條碼標簽之單獨管中。收集之組織包括具有視網膜色素上皮之脈絡膜、角膜、虹膜睫狀體、視交叉、視神經、視網膜、鞏膜及後眼杯。眼睛分成四個大致相等之象限(包括給藥部位區域之顳上、鼻上、顳下及包括給藥部位區域之鼻下)。自各象限像限，使用8 mm生檢穿孔器採集一個樣品。樣品儲存在-60℃與-80℃之間。使用qPCR或qRT-PCR方法分析樣品中之載體DNA或RNA。
用於生物分佈之非眼組織收集：自以下中收集約5 mm×5 mm×5 mm之兩個樣品：右腦半球(例如，小腦(外側)、小腦(背側)、額葉皮質(布洛曼氏分區(Brodmann area) 4)、額葉皮質(布洛曼氏分區6)、枕葉皮質(皮質表面)、枕葉皮質(實質))、卵巢、心臟、腎臟、淚腺(左)、肝臟(左外側葉)、肺(左尾葉)、淋巴結(腮腺)、淋巴結(下頜)、腦垂體、唾液腺(下頜)、脾、胸腺、背根神經節(頸椎，左)、背根神經節(腰椎，左)及背根神經節(胸椎，左)。將樣品儲存在-60℃與-80℃之間。
組織學：將動物之右眼及右視神經以標稱5 μm切片，且用蘇木精(hematoxylin)及伊紅(eosin)染色。將眼組織切片以方便檢查中央凹、注射部位區域、黃斑、視盤及視神經。單一垂直切片係穿過下顱頂之近似中心獲取。此產生一張載玻片/塊/眼睛(每隻眼睛總共三張載玻片)。此外，可自選定之顯微載玻片準備數位掃描(虛擬載玻片)。
資料評估及統計分析：統計資料分析係使用平均值及標準偏差計算。計算絕對體重、體重變化及眼內壓量測之平均值及標準偏差。 等效物
儘管參考本發明之具體實施例對本發明進行詳細描述，但應理解，在功能上等效之變體亦在本發明之範疇內。實際上，根據前面之描述及附圖，除了在本文中展示及描述之內容之外，對本發明之各種修改對於所屬領域技術人員而言將變得顯而易見。此類修改旨在落入所附申請專利範圍之範疇內。所屬領域技術人員將認識到或能夠僅使用常規實驗即可確定本文描述之本發明之具體實施例的許多等效物。此類等效物旨在涵蓋於以下申請專利範圍中。
在本說明書中提到之所有公開案、專利及專利申請案皆以引用之方式併入本說明書中，其引用程度如同具體且個別地指出各個別公開案、專利或專利申請案以引用之方式整體併入本文中一般。
圖 1.使用低鹽及/或低離子強度稀釋劑誘發之AAV殼群集之概述。 圖 2.展示離子強度及鹽濃度對AAV直徑之影響的圖。 圖 3A-3B.離子強度及鹽濃度對AAV直徑之影響的電子顯微術視覺表示。圖3A展示對照或參考醫藥組合物中之AAV。圖3A展示在參考醫藥組合物中AAV不聚集。圖3B展示低離子強度溶液(與參考醫藥組合物相比包含較低離子強度之醫藥組合物)中之AAV聚集。 圖 4.展示如自稀釋時間至稀釋後約21小時所量測，在25℃下在含有不同離子強度及鹽量之溶液中AAV群集之平均視直徑的圖。對照物包含具有4%蔗糖之經改良之DPBS中的重組AAV。兩倍、四倍及八倍稀釋液包含用不同量之磷酸鹽緩衝之10%蔗糖稀釋劑稀釋的具有4%蔗糖之經改良之DPBS中的重組AAV以獲得兩倍、四倍及八倍稀釋液。群集物在25℃下穩定至少21小時。在約21.8小時，外加氯化鈉以獲得具有至少75 mM鹽水准之溶液，其將群集物倒轉回單體。 圖 5.展示重組AAV之累積量動態光散射(DLS)強度加權平均視直徑的圖。圖5展示直至約21.8小時，在對照物中，在低離子強度磷酸鹽緩衝之10%蔗糖稀釋劑中的兩倍、四倍及八倍稀釋液中來自圖4之初始誘發之AAV群集資料(參考圖4)。 圖 6.展示重組AAV之累積量動態光散射(DLS)強度加權平均視直徑的圖。圖6展示在磷酸鹽緩衝之10%蔗糖稀釋劑中的兩倍、四倍及八倍稀釋液中誘發之群集的倒轉。誘發之群集的倒轉係藉由在約21.8小時向AAV外加鹽實現的(參考圖4)。 圖 7.展示具有4%蔗糖之經改良之DPBS調配物中，在藉由用磷酸鹽緩衝之10%蔗糖稀釋劑稀釋製備的誘發群集之低鹽溶液(十倍稀釋)中及在添加鹽下倒轉群集之後重組AAV之累積量直徑的圖。該圖亦展示在樣品加熱至37℃之後群集繼續存在。 

          <![CDATA[<110>  美商銳進科斯生物股份有限公司(REGENXBIO Inc.)]]>
          <![CDATA[<120>  諸如形成聚集體之調配物之用於脈絡膜上投與之調配物]]>
          <![CDATA[<130>  12656-142-888]]>
          <![CDATA[<140>  TW 110137246]]>
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          <![CDATA[<170>  PatentIn version 3.5]]>
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          Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 
          1               5                   10                  15      
          Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr 
                      20                  25                  30          
          Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Val Leu Ile 
                  35                  40                  45              
          Tyr Phe Thr Ser Ser Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 
              50                  55                  60                  
          Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Thr Val Pro Trp 
                          85                  90                  95      
          Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 
                      100                 105                 110         
          Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 
                  115                 120                 125             
          Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 
              130                 135                 140                 
          Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 
          145                 150                 155                 160 
          Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 
                          165                 170                 175     
          Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 
                      180                 185                 190         
          Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 
                  195                 200                 205             
          Phe Asn Arg Gly Glu Cys 
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          <![CDATA[<210>  2]]>
          <![CDATA[<211>  231]]>
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          <![CDATA[<400>  2]]>
          Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Asp Phe Thr His Tyr 
                      20                  25                  30          
          Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Ala Asp Phe 
              50                  55                  60                  
          Lys Arg Arg Phe Thr Phe Ser Leu Asp Thr Ser Lys Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Lys Tyr Pro Tyr Tyr Tyr Gly Thr Ser His Trp Tyr Phe Asp Val 
                      100                 105                 110         
          Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly 
                  115                 120                 125             
          Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly 
              130                 135                 140                 
          Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val 
          145                 150                 155                 160 
          Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe 
                          165                 170                 175     
          Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val 
                      180                 185                 190         
          Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val 
                  195                 200                 205             
          Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys 
              210                 215                 220                 
          Ser Cys Asp Lys Thr His Leu 
          225                 230     
          <![CDATA[<210>  3]]>
          <![CDATA[<211>  214]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  貝伐單抗 Fab胺基酸序列-輕鏈]]>
          <![CDATA[<400>  3]]>
          Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 
          1               5                   10                  15      
          Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr 
                      20                  25                  30          
          Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Val Leu Ile 
                  35                  40                  45              
          Tyr Phe Thr Ser Ser Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 
              50                  55                  60                  
          Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Thr Val Pro Trp 
                          85                  90                  95      
          Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 
                      100                 105                 110         
          Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 
                  115                 120                 125             
          Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 
              130                 135                 140                 
          Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 
          145                 150                 155                 160 
          Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 
                          165                 170                 175     
          Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 
                      180                 185                 190         
          Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 
                  195                 200                 205             
          Phe Asn Arg Gly Glu Cys 
              210                 
          <![CDATA[<210>  4]]>
          <![CDATA[<211>  231]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  貝伐單抗 Fab胺基酸序列-重鏈]]>
          <![CDATA[<400>  4]]>
          Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 
                      20                  25                  30          
          Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Ala Asp Phe 
              50                  55                  60                  
          Lys Arg Arg Phe Thr Phe Ser Leu Asp Thr Ser Lys Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Lys Tyr Pro His Tyr Tyr Gly Ser Ser His Trp Tyr Phe Asp Val 
                      100                 105                 110         
          Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly 
                  115                 120                 125             
          Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly 
              130                 135                 140                 
          Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val 
          145                 150                 155                 160 
          Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe 
                          165                 170                 175     
          Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val 
                      180                 185                 190         
          Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val 
                  195                 200                 205             
          Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys 
              210                 215                 220                 
          Ser Cys Asp Lys Thr His Leu 
          225                 230     
          <![CDATA[<210>  5]]>
          <![CDATA[<211>  26]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  VEGF-A信號肽]]>
          <![CDATA[<400>  5]]>
          Met Asn Phe Leu Leu Ser Trp Val His Trp Ser Leu Ala Leu Leu Leu 
          1               5                   10                  15      
          Tyr Leu His His Ala Lys Trp Ser Gln Ala 
                      20                  25      
          <![CDATA[<210>  6]]>
          <![CDATA[<211>  29]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  腓骨蛋白-1信號肽]]>
          <![CDATA[<400>  6]]>
          Met Glu Arg Ala Ala Pro Ser Arg Arg Val Pro Leu Pro Leu Leu Leu 
          1               5                   10                  15      
          Leu Gly Gly Leu Ala Leu Leu Ala Ala Gly Val Asp Ala 
                      20                  25                  
          <![CDATA[<210>  7]]>
          <![CDATA[<211>  19]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  玻連蛋白信號肽]]>
          <![CDATA[<400>  7]]>
          Met Ala Pro Leu Arg Pro Leu Leu Ile Leu Ala Leu Leu Ala Trp Val 
          1               5                   10                  15      
          Ala Leu Ala 
          <![CDATA[<210>  8]]>
          <![CDATA[<211>  18]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  補體因子H信號肽]]>
          <![CDATA[<400>  8]]>
          Met Arg Leu Leu Ala Lys Ile Ile Cys Leu Met Leu Trp Ala Ile Cys 
          1               5                   10                  15      
          Val Ala 
          <![CDATA[<210>  9]]>
          <![CDATA[<211>  19]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  視蛋白信號肽]]>
          <![CDATA[<400>  9]]>
          Met Arg Leu Leu Ala Phe Leu Ser Leu Leu Ala Leu Val Leu Gln Glu 
          1               5                   10                  15      
          Thr Gly Thr 
          <![CDATA[<210>  10]]>
          <![CDATA[<211>  728]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  貝伐單抗 cDNA-輕鏈]]>
          <![CDATA[<400>  10]]>
          gctagcgcca ccatgggctg gtcctgcatc atcctgttcc tggtggccac cgccaccggc       60
          gtgcactccg acatccagat gacccagtcc ccctcctccc tgtccgcctc cgtgggcgac      120
          cgggtgacca tcacctgctc cgcctcccag gacatctcca actacctgaa ctggtaccag      180
          cagaagcccg gcaaggcccc caaggtgctg atctacttca cctcctccct gcactccggc      240
          gtgccctccc ggttctccgg ctccggctcc ggcaccgact tcaccctgac catctcctcc      300
          ctgcagcccg aggacttcgc cacctactac tgccagcagt actccaccgt gccctggacc      360
          ttcggccagg gcaccaaggt ggagatcaag cggaccgtgg ccgccccctc cgtgttcatc      420
          ttccccccct ccgacgagca gctgaagtcc ggcaccgcct ccgtggtgtg cctgctgaac      480
          aacttctacc cccgggaggc caaggtgcag tggaaggtgg acaacgccct gcagtccggc      540
          aactcccagg agtccgtgac cgagcaggac tccaaggact ccacctactc cctgtcctcc      600
          accctgaccc tgtccaaggc cgactacgag aagcacaagg tgtacgcctg cgaggtgacc      660
          caccagggcc tgtcctcccc cgtgaccaag tccttcaacc ggggcgagtg ctgagcggcc      720
          gcctcgag                                                               728
          <![CDATA[<210>  11]]>
          <![CDATA[<211>  1440]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  貝伐單抗 cDNA-重鏈]]>
          <![CDATA[<400>  11]]>
          gctagcgcca ccatgggctg gtcctgcatc atcctgttcc tggtggccac cgccaccggc       60
          gtgcactccg aggtgcagct ggtggagtcc ggcggcggcc tggtgcagcc cggcggctcc      120
          ctgcggctgt cctgcgccgc ctccggctac accttcacca actacggcat gaactgggtg      180
          cggcaggccc ccggcaaggg cctggagtgg gtgggctgga tcaacaccta caccggcgag      240
          cccacctacg ccgccgactt caagcggcgg ttcaccttct ccctggacac ctccaagtcc      300
          accgcctacc tgcagatgaa ctccctgcgg gccgaggaca ccgccgtgta ctactgcgcc      360
          aagtaccccc actactacgg ctcctcccac tggtacttcg acgtgtgggg ccagggcacc      420
          ctggtgaccg tgtcctccgc ctccaccaag ggcccctccg tgttccccct ggccccctcc      480
          tccaagtcca cctccggcgg caccgccgcc ctgggctgcc tggtgaagga ctacttcccc      540
          gagcccgtga ccgtgtcctg gaactccggc gccctgacct ccggcgtgca caccttcccc      600
          gccgtgctgc agtcctccgg cctgtactcc ctgtcctccg tggtgaccgt gccctcctcc      660
          tccctgggca cccagaccta catctgcaac gtgaaccaca agccctccaa caccaaggtg      720
          gacaagaagg tggagcccaa gtcctgcgac aagacccaca cctgcccccc ctgccccgcc      780
          cccgagctgc tgggcggccc ctccgtgttc ctgttccccc ccaagcccaa ggacaccctg      840
          atgatctccc ggacccccga ggtgacctgc gtggtggtgg acgtgtccca cgaggacccc      900
          gaggtgaagt tcaactggta cgtggacggc gtggaggtgc acaacgccaa gaccaagccc      960
          cgggaggagc agtacaactc cacctaccgg gtggtgtccg tgctgaccgt gctgcaccag     1020
          gactggctga acggcaagga gtacaagtgc aaggtgtcca acaaggccct gcccgccccc     1080
          atcgagaaga ccatctccaa ggccaagggc cagccccggg agccccaggt gtacaccctg     1140
          cccccctccc gggaggagat gaccaagaac caggtgtccc tgacctgcct ggtgaagggc     1200
          ttctacccct ccgacatcgc cgtggagtgg gagtccaacg gccagcccga gaacaactac     1260
          aagaccaccc cccccgtgct ggactccgac ggctccttct tcctgtactc caagctgacc     1320
          gtggacaagt cccggtggca gcagggcaac gtgttctcct gctccgtgat gcacgaggcc     1380
          ctgcacaacc actacaccca gaagtccctg tccctgtccc ccggcaagtg agcggccgcc     1440
          <![CDATA[<210>  12]]>
          <![CDATA[<211>  733]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  蘭尼單抗cDNA (包含信號序列之輕鏈)]]>
          <![CDATA[<400>  12]]>
          gagctccatg gagtttttca aaaagacggc acttgccgca ctggttatgg gttttagtgg       60
          tgcagcattg gccgatatcc agctgaccca gagcccgagc agcctgagcg caagcgttgg      120
          tgatcgtgtt accattacct gtagcgcaag ccaggatatt agcaattatc tgaattggta      180
          tcagcagaaa ccgggtaaag caccgaaagt tctgatttat tttaccagca gcctgcatag      240
          cggtgttccg agccgtttta gcggtagcgg tagtggcacc gattttaccc tgaccattag      300
          cagcctgcag ccggaagatt ttgcaaccta ttattgtcag cagtatagca ccgttccgtg      360
          gacctttggt cagggcacca aagttgaaat taaacgtacc gttgcagcac cgagcgtttt      420
          tatttttccg cctagtgatg aacagctgaa aagcggcacc gcaagcgttg tttgtctgct      480
          gaataatttt tatccgcgtg aagcaaaagt gcagtggaaa gttgataatg cactgcagag      540
          cggtaatagc caagaaagcg ttaccgaaca ggatagcaaa gatagcacct atagcctgag      600
          cagcaccctg accctgagca aagcagatta tgaaaaacac aaagtgtatg cctgcgaagt      660
          tacccatcag ggtctgagca gtccggttac caaaagtttt aatcgtggcg aatgctaata      720
          gaagcttggt acc                                                         733
          <![CDATA[<210>  13]]>
          <![CDATA[<211>  779]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  蘭尼單抗cDNA (包含信號序列之重鏈)]]>
          <![CDATA[<400>  13]]>
          gagctcatat gaaatacctg ctgccgaccg ctgctgctgg tctgctgctc ctcgctgccc       60
          agccggcgat ggccgaagtt cagctggttg aaagcggtgg tggtctggtt cagcctggtg      120
          gtagcctgcg tctgagctgt gcagcaagcg gttatgattt tacccattat ggtatgaatt      180
          gggttcgtca ggcaccgggt aaaggtctgg aatgggttgg ttggattaat acctataccg      240
          gtgaaccgac ctatgcagca gattttaaac gtcgttttac ctttagcctg gataccagca      300
          aaagcaccgc atatctgcag atgaatagcc tgcgtgcaga agataccgca gtttattatt      360
          gtgccaaata tccgtattac tatggcacca gccactggta tttcgatgtt tggggtcagg      420
          gcaccctggt taccgttagc agcgcaagca ccaaaggtcc gagcgttttt ccgctggcac      480
          cgagcagcaa aagtaccagc ggtggcacag cagcactggg ttgtctggtt aaagattatt      540
          ttccggaacc ggttaccgtg agctggaata gcggtgcact gaccagcggt gttcatacct      600
          ttccggcagt tctgcagagc agcggtctgt atagcctgag cagcgttgtt accgttccga      660
          gcagcagcct gggcacccag acctatattt gtaatgttaa tcataaaccg agcaatacca      720
          aagtggataa aaaagttgag ccgaaaagct gcgataaaac ccatctgtaa tagggtacc       779
          <![CDATA[<210>  14]]>
          <![CDATA[<211>  11]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  貝伐單抗及蘭尼單抗輕鏈CDR1]]>
          <![CDATA[<400>  14]]>
          Ser Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr Leu Asn 
          1               5                   10      
          <![CDATA[<210>  15]]>
          <![CDATA[<211>  7]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  貝伐單抗及蘭尼單抗輕鏈CDR2]]>
          <![CDATA[<400>  15]]>
          Phe Thr Ser Ser Leu His Ser 
          1               5           
          <![CDATA[<210>  16]]>
          <![CDATA[<211>  9]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  貝伐單抗及蘭尼單抗輕鏈CDR3]]>
          <![CDATA[<400>  16]]>
          Gln Gln Tyr Ser Thr Val Pro Trp Thr 
          1               5                   
          <![CDATA[<210>  17]]>
          <![CDATA[<211>  10]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  貝伐單抗重鏈CDR1]]>
          <![CDATA[<400>  17]]>
          Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr Gly Met Asn 
          1               5                   10  
          <![CDATA[<210>  18]]>
          <![CDATA[<211>  17]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  貝伐單抗重鏈CDR2]]>
          <![CDATA[<400>  18]]>
          Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Ala Asp Phe Lys 
          1               5                   10                  15      
          Arg 
          <![CDATA[<210>  19]]>
          <![CDATA[<211>  14]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  貝伐單抗重鏈CDR3]]>
          <![CDATA[<400>  19]]>
          Tyr Pro His Tyr Tyr Gly Ser Ser His Trp Tyr Phe Asp Val 
          1               5                   10                  
          <![CDATA[<210>  20]]>
          <![CDATA[<211>  10]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  蘭尼單抗重鏈CDR1]]>
          <![CDATA[<400>  20]]>
          Gly Tyr Asp Phe Thr His Tyr Gly Met Asn 
          1               5                   10  
          <![CDATA[<210>  21]]>
          <![CDATA[<211>  14]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  蘭尼單抗重鏈CDR3]]>
          <![CDATA[<400>  21]]>
          Tyr Pro Tyr Tyr Tyr Gly Thr Ser His Trp Tyr Phe Asp Val 
          1               5                   10                  
          <![CDATA[<210>  22]]>
          <![CDATA[<211>  18]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  白蛋白信號肽]]>
          <![CDATA[<400>  22]]>
          Met Lys Trp Val Thr Phe Ile Ser Leu Leu Phe Leu Phe Ser Ser Ala 
          1               5                   10                  15      
          Tyr Ser 
          <![CDATA[<210>  23]]>
          <![CDATA[<211>  18]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  胰凝乳蛋白酶原信號肽]]>
          <![CDATA[<400>  23]]>
          Met Ala Phe Leu Trp Leu Leu Ser Cys Trp Ala Leu Leu Gly Thr Thr 
          1               5                   10                  15      
          Phe Gly 
          <![CDATA[<210>  24]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  介白素-2信號肽]]>
          <![CDATA[<400>  24]]>
          Met Tyr Arg Met Gln Leu Leu Ser Cys Ile Ala Leu Ile Leu Ala Leu 
          1               5                   10                  15      
          Val Thr Asn Ser 
                      20  
          <![CDATA[<210>  25]]>
          <![CDATA[<211>  15]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  胰蛋白酶原-2信號肽]]>
          <![CDATA[<400>  25]]>
          Met Asn Leu Leu Leu Ile Leu Thr Phe Val Ala Ala Ala Val Ala 
          1               5                   10                  15  
          <![CDATA[<210>  26]]>
          <![CDATA[<211>  19]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  F2A位點]]>
          <![CDATA[<400>  26]]>
          Leu Leu Asn Phe Asp Leu Leu Lys Leu Ala Gly Asp Val Glu Ser Asn 
          1               5                   10                  15      
          Pro Gly Pro 
          <![CDATA[<210>  27]]>
          <![CDATA[<211>  21]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  連接子T2A]]>
          <![CDATA[<400>  27]]>
          Gly Ser Gly Glu Gly Arg Gly Ser Leu Leu Thr Cys Gly Asp Val Glu 
          1               5                   10                  15      
          Glu Asn Pro Gly Pro 
                      20      
          <![CDATA[<210>  28]]>
          <![CDATA[<211>  22]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  連接子P2A]]>
          <![CDATA[<400>  28]]>
          Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val 
          1               5                   10                  15      
          Glu Glu Asn Pro Gly Pro 
                      20          
          <![CDATA[<210>  29]]>
          <![CDATA[<211>  23]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  連接子E2A]]>
          <![CDATA[<400>  29]]>
          Gly Ser Gly Gln Cys Thr Asn Tyr Ala Leu Leu Lys Leu Ala Gly Asp 
          1               5                   10                  15      
          Val Glu Ser Asn Pro Gly Pro 
                      20              
          <![CDATA[<210>  30]]>
          <![CDATA[<211>  25]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  連接子F2A]]>
          <![CDATA[<400>  30]]>
          Gly Ser Gly Val Lys Gln Thr Leu Asn Phe Asp Leu Leu Lys Leu Ala 
          1               5                   10                  15      
          Gly Asp Val Glu Ser Asn Pro Gly Pro 
                      20                  25  
          <![CDATA[<210>  31]]>
          <![CDATA[<211>  4]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  弗林蛋白酶連接子]]>
          <![CDATA[<400>  31]]>
          Arg Lys Arg Arg 
          1               
          <![CDATA[<210>  32]]>
          <![CDATA[<211>  4]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  弗林蛋白酶連接子]]>
          <![CDATA[<400>  32]]>
          Arg Arg Arg Arg 
          1               
          <![CDATA[<210>  33]]>
          <![CDATA[<211>  4]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  弗林蛋白酶連接子]]>
          <![CDATA[<400>  33]]>
          Arg Arg Lys Arg 
          1               
          <![CDATA[<210>  34]]>
          <![CDATA[<211>  4]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  弗林蛋白酶連接子]]>
          <![CDATA[<400>  34]]>
          Arg Lys Lys Arg 
          1               
          <![CDATA[<210>  35]]>
          <![CDATA[<211>  4]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  弗林蛋白酶連接子]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  MISC_FEATURE]]>
          <![CDATA[<222>  (2)..(2)]]>
          <![CDATA[<223>  X = 任何胺基酸]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  MISC_FEATURE]]>
          <![CDATA[<222>  (3)..(3)]]>
          <![CDATA[<223>  X = Lys或Arg]]>
          <![CDATA[<400>  35]]>
          Arg Xaa Xaa Arg 
          1               
          <![CDATA[<210>  36]]>
          <![CDATA[<211>  4]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  弗林蛋白酶連接子]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  MISC_FEATURE]]>
          <![CDATA[<222>  (2)..(2)]]>
          <![CDATA[<223>  X = 任何胺基酸]]>
          <![CDATA[<400>  36]]>
          Arg Xaa Lys Arg 
          1               
          <![CDATA[<210>  37]]>
          <![CDATA[<211>  4]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  弗林蛋白酶連接子]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  MISC_FEATURE]]>
          <![CDATA[<222>  (2)..(2)]]>
          <![CDATA[<223>  X = 任何胺基酸]]>
          <![CDATA[<400>  37]]>
          Arg Xaa Arg Arg 
          1               
          <![CDATA[<210>  38]]>
          <![CDATA[<211>  215]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  蘭尼單抗Fab胺基酸序列-輕鏈]]>
          <![CDATA[<400>  38]]>
          Met Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val 
          1               5                   10                  15      
          Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn 
                      20                  25                  30          
          Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Val Leu 
                  35                  40                  45              
          Ile Tyr Phe Thr Ser Ser Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser 
              50                  55                  60                  
          Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln 
          65                  70                  75                  80  
          Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Thr Val Pro 
                          85                  90                  95      
          Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala 
                      100                 105                 110         
          Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser 
                  115                 120                 125             
          Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu 
              130                 135                 140                 
          Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser 
          145                 150                 155                 160 
          Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu 
                          165                 170                 175     
          Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val 
                      180                 185                 190         
          Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys 
                  195                 200                 205             
          Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 
              210                 215 
          <![CDATA[<210>  39]]>
          <![CDATA[<211>  236]]>
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          <![CDATA[<223>  蘭尼單抗Fab胺基酸序列-重鏈]]>
          <![CDATA[<400>  39]]>
          Met Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly 
          1               5                   10                  15      
          Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Asp Phe Thr His 
                      20                  25                  30          
          Tyr Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 
                  35                  40                  45              
          Val Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Ala Asp 
              50                  55                  60                  
          Phe Lys Arg Arg Phe Thr Phe Ser Leu Asp Thr Ser Lys Ser Thr Ala 
          65                  70                  75                  80  
          Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr 
                          85                  90                  95      
          Cys Ala Lys Tyr Pro Tyr Tyr Tyr Gly Thr Ser His Trp Tyr Phe Asp 
                      100                 105                 110         
          Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys 
                  115                 120                 125             
          Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly 
              130                 135                 140                 
          Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro 
          145                 150                 155                 160 
          Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr 
                          165                 170                 175     
          Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val 
                      180                 185                 190         
          Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn 
                  195                 200                 205             
          Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro 
              210                 215                 220                 
          Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Leu Arg Lys Arg Arg 
          225                 230                 235     
          <![CDATA[<210>  40]]>
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          <![CDATA[<223>  蘭尼單抗Fab胺基酸序列-重鏈]]>
          <![CDATA[<400>  40]]>
          Met Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly 
          1               5                   10                  15      
          Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Asp Phe Thr His 
                      20                  25                  30          
          Tyr Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 
                  35                  40                  45              
          Val Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Ala Asp 
              50                  55                  60                  
          Phe Lys Arg Arg Phe Thr Phe Ser Leu Asp Thr Ser Lys Ser Thr Ala 
          65                  70                  75                  80  
          Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr 
                          85                  90                  95      
          Cys Ala Lys Tyr Pro Tyr Tyr Tyr Gly Thr Ser His Trp Tyr Phe Asp 
                      100                 105                 110         
          Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys 
                  115                 120                 125             
          Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly 
              130                 135                 140                 
          Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro 
          145                 150                 155                 160 
          Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr 
                          165                 170                 175     
          Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val 
                      180                 185                 190         
          Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn 
                  195                 200                 205             
          Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro 
              210                 215                 220                 
          Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Leu 
          225                 230         
          <![CDATA[<210>  41]]>
          <![CDATA[<211>  736]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  AAV1]]>
          <![CDATA[<400>  41]]>
          Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Asn Leu Ser 
          1               5                   10                  15      
          Glu Gly Ile Arg Glu Trp Trp Asp Leu Lys Pro Gly Ala Pro Lys Pro 
                      20                  25                  30          
          Lys Ala Asn Gln Gln Lys Gln Asp Asp Gly Arg Gly Leu Val Leu Pro 
                  35                  40                  45              
          Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro 
              50                  55                  60                  
          Val Asn Ala Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp 
          65                  70                  75                  80  
          Gln Gln Leu Lys Ala Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Arg Tyr Asn His Ala 
                          85                  90                  95      
          Asp Ala Glu Phe Gln Glu Arg Leu Gln Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly 
                      100                 105                 110         
          Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gln Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro 
                  115                 120                 125             
          Leu Gly Leu Val Glu Glu Gly Ala Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg 
              130                 135                 140                 
          Pro Val Glu Gln Ser Pro Gln Glu Pro Asp Ser Ser Ser Gly Ile Gly 
          145                 150                 155                 160 
          Lys Thr Gly Gln Gln Pro Ala Lys Lys Arg Leu Asn Phe Gly Gln Thr 
                          165                 170                 175     
          Gly Asp Ser Glu Ser Val Pro Asp Pro Gln Pro Leu Gly Glu Pro Pro 
                      180                 185                 190         
          Ala Thr Pro Ala Ala Val Gly Pro Thr Thr Met Ala Ser Gly Gly Gly 
                  195                 200                 205             
          Ala Pro Met Ala Asp Asn Asn Glu Gly Ala Asp Gly Val Gly Asn Ala 
              210                 215                 220                 
          Ser Gly Asn Trp His Cys Asp Ser Thr Trp Leu Gly Asp Arg Val Ile 
          225                 230                 235                 240 
          Thr Thr Ser Thr Arg Thr Trp Ala Leu Pro Thr Tyr Asn Asn His Leu 
                          245                 250                 255     
          Tyr Lys Gln Ile Ser Ser Ala Ser Thr Gly Ala Ser Asn Asp Asn His 
                      260                 265                 270         
          Tyr Phe Gly Tyr Ser Thr Pro Trp Gly Tyr Phe Asp Phe Asn Arg Phe 
                  275                 280                 285             
          His Cys His Phe Ser Pro Arg Asp Trp Gln Arg Leu Ile Asn Asn Asn 
              290                 295                 300                 
          Trp Gly Phe Arg Pro Lys Arg Leu Asn Phe Lys Leu Phe Asn Ile Gln 
          305                 310                 315                 320 
          Val Lys Glu Val Thr Thr Asn Asp Gly Val Thr Thr Ile Ala Asn Asn 
                          325                 330                 335     
          Leu Thr Ser Thr Val Gln Val Phe Ser Asp Ser Glu Tyr Gln Leu Pro 
                      340                 345                 350         
          Tyr Val Leu Gly Ser Ala His Gln Gly Cys Leu Pro Pro Phe Pro Ala 
                  355                 360                 365             
          Asp Val Phe Met Ile Pro Gln Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu Asn Asn Gly 
              370                 375                 380                 
          Ser Gln Ala Val Gly Arg Ser Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr Phe Pro 
          385                 390                 395                 400 
          Ser Gln Met Leu Arg Thr Gly Asn Asn Phe Thr Phe Ser Tyr Thr Phe 
                          405                 410                 415     
          Glu Glu Val Pro Phe His Ser Ser Tyr Ala His Ser Gln Ser Leu Asp 
                      420                 425                 430         
          Arg Leu Met Asn Pro Leu Ile Asp Gln Tyr Leu Tyr Tyr Leu Asn Arg 
                  435                 440                 445             
          Thr Gln Asn Gln Ser Gly Ser Ala Gln Asn Lys Asp Leu Leu Phe Ser 
              450                 455                 460                 
          Arg Gly Ser Pro Ala Gly Met Ser Val Gln Pro Lys Asn Trp Leu Pro 
          465                 470                 475                 480 
          Gly Pro Cys Tyr Arg Gln Gln Arg Val Ser Lys Thr Lys Thr Asp Asn 
                          485                 490                 495     
          Asn Asn Ser Asn Phe Thr Trp Thr Gly Ala Ser Lys Tyr Asn Leu Asn 
                      500                 505                 510         
          Gly Arg Glu Ser Ile Ile Asn Pro Gly Thr Ala Met Ala Ser His Lys 
                  515                 520                 525             
          Asp Asp Glu Asp Lys Phe Phe Pro Met Ser Gly Val Met Ile Phe Gly 
              530                 535                 540                 
          Lys Glu Ser Ala Gly Ala Ser Asn Thr Ala Leu Asp Asn Val Met Ile 
          545                 550                 555                 560 
          Thr Asp Glu Glu Glu Ile Lys Ala Thr Asn Pro Val Ala Thr Glu Arg 
                          565                 570                 575     
          Phe Gly Thr Val Ala Val Asn Phe Gln Ser Ser Ser Thr Asp Pro Ala 
                      580                 585                 590         
          Thr Gly Asp Val His Ala Met Gly Ala Leu Pro Gly Met Val Trp Gln 
                  595                 600                 605             
          Asp Arg Asp Val Tyr Leu Gln Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile Pro His 
              610                 615                 620                 
          Thr Asp Gly His Phe His Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe Gly Leu 
          625                 630                 635                 640 
          Lys Asn Pro Pro Pro Gln Ile Leu Ile Lys Asn Thr Pro Val Pro Ala 
                          645                 650                 655     
          Asn Pro Pro Ala Glu Phe Ser Ala Thr Lys Phe Ala Ser Phe Ile Thr 
                      660                 665                 670         
          Gln Tyr Ser Thr Gly Gln Val Ser Val Glu Ile Glu Trp Glu Leu Gln 
                  675                 680                 685             
          Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Val Gln Tyr Thr Ser Asn 
              690                 695                 700                 
          Tyr Ala Lys Ser Ala Asn Val Asp Phe Thr Val Asp Asn Asn Gly Leu 
          705                 710                 715                 720 
          Tyr Thr Glu Pro Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg Pro Leu 
                          725                 730                 735     
          <![CDATA[<210>  42]]>
          <![CDATA[<211>  735]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  AAV2]]>
          <![CDATA[<400>  42]]>
          Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Thr Leu Ser 
          1               5                   10                  15      
          Glu Gly Ile Arg Gln Trp Trp Lys Leu Lys Pro Gly Pro Pro Pro Pro 
                      20                  25                  30          
          Lys Pro Ala Glu Arg His Lys Asp Asp Ser Arg Gly Leu Val Leu Pro 
                  35                  40                  45              
          Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro 
              50                  55                  60                  
          Val Asn Glu Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp 
          65                  70                  75                  80  
          Arg Gln Leu Asp Ser Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Lys Tyr Asn His Ala 
                          85                  90                  95      
          Asp Ala Glu Phe Gln Glu Arg Leu Lys Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly 
                      100                 105                 110         
          Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gln Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro 
                  115                 120                 125             
          Leu Gly Leu Val Glu Glu Pro Val Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg 
              130                 135                 140                 
          Pro Val Glu His Ser Pro Val Glu Pro Asp Ser Ser Ser Gly Thr Gly 
          145                 150                 155                 160 
          Lys Ala Gly Gln Gln Pro Ala Arg Lys Arg Leu Asn Phe Gly Gln Thr 
                          165                 170                 175     
          Gly Asp Ala Asp Ser Val Pro Asp Pro Gln Pro Leu Gly Gln Pro Pro 
                      180                 185                 190         
          Ala Ala Pro Ser Gly Leu Gly Thr Asn Thr Met Ala Thr Gly Ser Gly 
                  195                 200                 205             
          Ala Pro Met Ala Asp Asn Asn Glu Gly Ala Asp Gly Val Gly Asn Ser 
              210                 215                 220                 
          Ser Gly Asn Trp His Cys Asp Ser Thr Trp Met Gly Asp Arg Val Ile 
          225                 230                 235                 240 
          Thr Thr Ser Thr Arg Thr Trp Ala Leu Pro Thr Tyr Asn Asn His Leu 
                          245                 250                 255     
          Tyr Lys Gln Ile Ser Ser Gln Ser Gly Ala Ser Asn Asp Asn His Tyr 
                      260                 265                 270         
          Phe Gly Tyr Ser Thr Pro Trp Gly Tyr Phe Asp Phe Asn Arg Phe His 
                  275                 280                 285             
          Cys His Phe Ser Pro Arg Asp Trp Gln Arg Leu Ile Asn Asn Asn Trp 
              290                 295                 300                 
          Gly Phe Arg Pro Lys Arg Leu Asn Phe Lys Leu Phe Asn Ile Gln Val 
          305                 310                 315                 320 
          Lys Glu Val Thr Gln Asn Asp Gly Thr Thr Thr Ile Ala Asn Asn Leu 
                          325                 330                 335     
          Thr Ser Thr Val Gln Val Phe Thr Asp Ser Glu Tyr Gln Leu Pro Tyr 
                      340                 345                 350         
          Val Leu Gly Ser Ala His Gln Gly Cys Leu Pro Pro Phe Pro Ala Asp 
                  355                 360                 365             
          Val Phe Met Val Pro Gln Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu Asn Asn Gly Ser 
              370                 375                 380                 
          Gln Ala Val Gly Arg Ser Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr Phe Pro Ser 
          385                 390                 395                 400 
          Gln Met Leu Arg Thr Gly Asn Asn Phe Thr Phe Ser Tyr Thr Phe Glu 
                          405                 410                 415     
          Asp Val Pro Phe His Ser Ser Tyr Ala His Ser Gln Ser Leu Asp Arg 
                      420                 425                 430         
          Leu Met Asn Pro Leu Ile Asp Gln Tyr Leu Tyr Tyr Leu Ser Arg Thr 
                  435                 440                 445             
          Asn Thr Pro Ser Gly Thr Thr Thr Gln Ser Arg Leu Gln Phe Ser Gln 
              450                 455                 460                 
          Ala Gly Ala Ser Asp Ile Arg Asp Gln Ser Arg Asn Trp Leu Pro Gly 
          465                 470                 475                 480 
          Pro Cys Tyr Arg Gln Gln Arg Val Ser Lys Thr Ser Ala Asp Asn Asn 
                          485                 490                 495     
          Asn Ser Glu Tyr Ser Trp Thr Gly Ala Thr Lys Tyr His Leu Asn Gly 
                      500                 505                 510         
          Arg Asp Ser Leu Val Asn Pro Gly Pro Ala Met Ala Ser His Lys Asp 
                  515                 520                 525             
          Asp Glu Glu Lys Phe Phe Pro Gln Ser Gly Val Leu Ile Phe Gly Lys 
              530                 535                 540                 
          Gln Gly Ser Glu Lys Thr Asn Val Asp Ile Glu Lys Val Met Ile Thr 
          545                 550                 555                 560 
          Asp Glu Glu Glu Ile Arg Thr Thr Asn Pro Val Ala Thr Glu Gln Tyr 
                          565                 570                 575     
          Gly Ser Val Ser Thr Asn Leu Gln Arg Gly Asn Arg Gln Ala Ala Thr 
                      580                 585                 590         
          Ala Asp Val Asn Thr Gln Gly Val Leu Pro Gly Met Val Trp Gln Asp 
                  595                 600                 605             
          Arg Asp Val Tyr Leu Gln Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile Pro His Thr 
              610                 615                 620                 
          Asp Gly His Phe His Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe Gly Leu Lys 
          625                 630                 635                 640 
          His Pro Pro Pro Gln Ile Leu Ile Lys Asn Thr Pro Val Pro Ala Asn 
                          645                 650                 655     
          Pro Ser Thr Thr Phe Ser Ala Ala Lys Phe Ala Ser Phe Ile Thr Gln 
                      660                 665                 670         
          Tyr Ser Thr Gly Gln Val Ser Val Glu Ile Glu Trp Glu Leu Gln Lys 
                  675                 680                 685             
          Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Ile Gln Tyr Thr Ser Asn Tyr 
              690                 695                 700                 
          Asn Lys Ser Val Asn Val Asp Phe Thr Val Asp Thr Asn Gly Val Tyr 
          705                 710                 715                 720 
          Ser Glu Pro Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg Asn Leu 
                          725                 730                 735 
          <![CDATA[<210>  43]]>
          <![CDATA[<211>  736]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  AAV3-3]]>
          <![CDATA[<400>  43]]>
          Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Asn Leu Ser 
          1               5                   10                  15      
          Glu Gly Ile Arg Glu Trp Trp Ala Leu Lys Pro Gly Val Pro Gln Pro 
                      20                  25                  30          
          Lys Ala Asn Gln Gln His Gln Asp Asn Arg Arg Gly Leu Val Leu Pro 
                  35                  40                  45              
          Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Gly Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro 
              50                  55                  60                  
          Val Asn Glu Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp 
          65                  70                  75                  80  
          Gln Gln Leu Lys Ala Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Lys Tyr Asn His Ala 
                          85                  90                  95      
          Asp Ala Glu Phe Gln Glu Arg Leu Gln Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly 
                      100                 105                 110         
          Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gln Ala Lys Lys Arg Ile Leu Glu Pro 
                  115                 120                 125             
          Leu Gly Leu Val Glu Glu Ala Ala Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Gly 
              130                 135                 140                 
          Ala Val Asp Gln Ser Pro Gln Glu Pro Asp Ser Ser Ser Gly Val Gly 
          145                 150                 155                 160 
          Lys Ser Gly Lys Gln Pro Ala Arg Lys Arg Leu Asn Phe Gly Gln Thr 
                          165                 170                 175     
          Gly Asp Ser Glu Ser Val Pro Asp Pro Gln Pro Leu Gly Glu Pro Pro 
                      180                 185                 190         
          Ala Ala Pro Thr Ser Leu Gly Ser Asn Thr Met Ala Ser Gly Gly Gly 
                  195                 200                 205             
          Ala Pro Met Ala Asp Asn Asn Glu Gly Ala Asp Gly Val Gly Asn Ser 
              210                 215                 220                 
          Ser Gly Asn Trp His Cys Asp Ser Gln Trp Leu Gly Asp Arg Val Ile 
          225                 230                 235                 240 
          Thr Thr Ser Thr Arg Thr Trp Ala Leu Pro Thr Tyr Asn Asn His Leu 
                          245                 250                 255     
          Tyr Lys Gln Ile Ser Ser Gln Ser Gly Ala Ser Asn Asp Asn His Tyr 
                      260                 265                 270         
          Phe Gly Tyr Ser Thr Pro Trp Gly Tyr Phe Asp Phe Asn Arg Phe His 
                  275                 280                 285             
          Cys His Phe Ser Pro Arg Asp Trp Gln Arg Leu Ile Asn Asn Asn Trp 
              290                 295                 300                 
          Gly Phe Arg Pro Lys Lys Leu Ser Phe Lys Leu Phe Asn Ile Gln Val 
          305                 310                 315                 320 
          Arg Gly Val Thr Gln Asn Asp Gly Thr Thr Thr Ile Ala Asn Asn Leu 
                          325                 330                 335     
          Thr Ser Thr Val Gln Val Phe Thr Asp Ser Glu Tyr Gln Leu Pro Tyr 
                      340                 345                 350         
          Val Leu Gly Ser Ala His Gln Gly Cys Leu Pro Pro Phe Pro Ala Asp 
                  355                 360                 365             
          Val Phe Met Val Pro Gln Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu Asn Asn Gly Ser 
              370                 375                 380                 
          Gln Ala Val Gly Arg Ser Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr Phe Pro Ser 
          385                 390                 395                 400 
          Gln Met Leu Arg Thr Gly Asn Asn Phe Gln Phe Ser Tyr Thr Phe Glu 
                          405                 410                 415     
          Asp Val Pro Phe His Ser Ser Tyr Ala His Ser Gln Ser Leu Asp Arg 
                      420                 425                 430         
          Leu Met Asn Pro Leu Ile Asp Gln Tyr Leu Tyr Tyr Leu Asn Arg Thr 
                  435                 440                 445             
          Gln Gly Thr Thr Ser Gly Thr Thr Asn Gln Ser Arg Leu Leu Phe Ser 
              450                 455                 460                 
          Gln Ala Gly Pro Gln Ser Met Ser Leu Gln Ala Arg Asn Trp Leu Pro 
          465                 470                 475                 480 
          Gly Pro Cys Tyr Arg Gln Gln Arg Leu Ser Lys Thr Ala Asn Asp Asn 
                          485                 490                 495     
          Asn Asn Ser Asn Phe Pro Trp Thr Ala Ala Ser Lys Tyr His Leu Asn 
                      500                 505                 510         
          Gly Arg Asp Ser Leu Val Asn Pro Gly Pro Ala Met Ala Ser His Lys 
                  515                 520                 525             
          Asp Asp Glu Glu Lys Phe Phe Pro Met His Gly Asn Leu Ile Phe Gly 
              530                 535                 540                 
          Lys Glu Gly Thr Thr Ala Ser Asn Ala Glu Leu Asp Asn Val Met Ile 
          545                 550                 555                 560 
          Thr Asp Glu Glu Glu Ile Arg Thr Thr Asn Pro Val Ala Thr Glu Gln 
                          565                 570                 575     
          Tyr Gly Thr Val Ala Asn Asn Leu Gln Ser Ser Asn Thr Ala Pro Thr 
                      580                 585                 590         
          Thr Gly Thr Val Asn His Gln Gly Ala Leu Pro Gly Met Val Trp Gln 
                  595                 600                 605             
          Asp Arg Asp Val Tyr Leu Gln Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile Pro His 
              610                 615                 620                 
          Thr Asp Gly His Phe His Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe Gly Leu 
          625                 630                 635                 640 
          Lys His Pro Pro Pro Gln Ile Met Ile Lys Asn Thr Pro Val Pro Ala 
                          645                 650                 655     
          Asn Pro Pro Thr Thr Phe Ser Pro Ala Lys Phe Ala Ser Phe Ile Thr 
                      660                 665                 670         
          Gln Tyr Ser Thr Gly Gln Val Ser Val Glu Ile Glu Trp Glu Leu Gln 
                  675                 680                 685             
          Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Ile Gln Tyr Thr Ser Asn 
              690                 695                 700                 
          Tyr Asn Lys Ser Val Asn Val Asp Phe Thr Val Asp Thr Asn Gly Val 
          705                 710                 715                 720 
          Tyr Ser Glu Pro Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg Asn Leu 
                          725                 730                 735     
          <![CDATA[<210>  44]]>
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          <![CDATA[<212>  PRT]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  AAV4-4]]>
          <![CDATA[<400>  44]]>
          Met Thr Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Asn Leu Ser Glu 
          1               5                   10                  15      
          Gly Val Arg Glu Trp Trp Ala Leu Gln Pro Gly Ala Pro Lys Pro Lys 
                      20                  25                  30          
          Ala Asn Gln Gln His Gln Asp Asn Ala Arg Gly Leu Val Leu Pro Gly 
                  35                  40                  45              
          Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Gly Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro Val 
              50                  55                  60                  
          Asn Ala Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp Gln 
          65                  70                  75                  80  
          Gln Leu Lys Ala Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Lys Tyr Asn His Ala Asp 
                          85                  90                  95      
          Ala Glu Phe Gln Gln Arg Leu Gln Gly Asp Thr Ser Phe Gly Gly Asn 
                      100                 105                 110         
          Leu Gly Arg Ala Val Phe Gln Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro Leu 
                  115                 120                 125             
          Gly Leu Val Glu Gln Ala Gly Glu Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg Pro 
              130                 135                 140                 
          Leu Ile Glu Ser Pro Gln Gln Pro Asp Ser Ser Thr Gly Ile Gly Lys 
          145                 150                 155                 160 
          Lys Gly Lys Gln Pro Ala Lys Lys Lys Leu Val Phe Glu Asp Glu Thr 
                          165                 170                 175     
          Gly Ala Gly Asp Gly Pro Pro Glu Gly Ser Thr Ser Gly Ala Met Ser 
                      180                 185                 190         
          Asp Asp Ser Glu Met Arg Ala Ala Ala Gly Gly Ala Ala Val Glu Gly 
                  195                 200                 205             
          Gly Gln Gly Ala Asp Gly Val Gly Asn Ala Ser Gly Asp Trp His Cys 
              210                 215                 220                 
          Asp Ser Thr Trp Ser Glu Gly His Val Thr Thr Thr Ser Thr Arg Thr 
          225                 230                 235                 240 
          Trp Val Leu Pro Thr Tyr Asn Asn His Leu Tyr Lys Arg Leu Gly Glu 
                          245                 250                 255     
          Ser Leu Gln Ser Asn Thr Tyr Asn Gly Phe Ser Thr Pro Trp Gly Tyr 
                      260                 265                 270         
          Phe Asp Phe Asn Arg Phe His Cys His Phe Ser Pro Arg Asp Trp Gln 
                  275                 280                 285             
          Arg Leu Ile Asn Asn Asn Trp Gly Met Arg Pro Lys Ala Met Arg Val 
              290                 295                 300                 
          Lys Ile Phe Asn Ile Gln Val Lys Glu Val Thr Thr Ser Asn Gly Glu 
          305                 310                 315                 320 
          Thr Thr Val Ala Asn Asn Leu Thr Ser Thr Val Gln Ile Phe Ala Asp 
                          325                 330                 335     
          Ser Ser Tyr Glu Leu Pro Tyr Val Met Asp Ala Gly Gln Glu Gly Ser 
                      340                 345                 350         
          Leu Pro Pro Phe Pro Asn Asp Val Phe Met Val Pro Gln Tyr Gly Tyr 
                  355                 360                 365             
          Cys Gly Leu Val Thr Gly Asn Thr Ser Gln Gln Gln Thr Asp Arg Asn 
              370                 375                 380                 
          Ala Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr Phe Pro Ser Gln Met Leu Arg Thr Gly 
          385                 390                 395                 400 
          Asn Asn Phe Glu Ile Thr Tyr Ser Phe Glu Lys Val Pro Phe His Ser 
                          405                 410                 415     
          Met Tyr Ala His Ser Gln Ser Leu Asp Arg Leu Met Asn Pro Leu Ile 
                      420                 425                 430         
          Asp Gln Tyr Leu Trp Gly Leu Gln Ser Thr Thr Thr Gly Thr Thr Leu 
                  435                 440                 445             
          Asn Ala Gly Thr Ala Thr Thr Asn Phe Thr Lys Leu Arg Pro Thr Asn 
              450                 455                 460                 
          Phe Ser Asn Phe Lys Lys Asn Trp Leu Pro Gly Pro Ser Ile Lys Gln 
          465                 470                 475                 480 
          Gln Gly Phe Ser Lys Thr Ala Asn Gln Asn Tyr Lys Ile Pro Ala Thr 
                          485                 490                 495     
          Gly Ser Asp Ser Leu Ile Lys Tyr Glu Thr His Ser Thr Leu Asp Gly 
                      500                 505                 510         
          Arg Trp Ser Ala Leu Thr Pro Gly Pro Pro Met Ala Thr Ala Gly Pro 
                  515                 520                 525             
          Ala Asp Ser Lys Phe Ser Asn Ser Gln Leu Ile Phe Ala Gly Pro Lys 
              530                 535                 540                 
          Gln Asn Gly Asn Thr Ala Thr Val Pro Gly Thr Leu Ile Phe Thr Ser 
          545                 550                 555                 560 
          Glu Glu Glu Leu Ala Ala Thr Asn Ala Thr Asp Thr Asp Met Trp Gly 
                          565                 570                 575     
          Asn Leu Pro Gly Gly Asp Gln Ser Asn Ser Asn Leu Pro Thr Val Asp 
                      580                 585                 590         
          Arg Leu Thr Ala Leu Gly Ala Val Pro Gly Met Val Trp Gln Asn Arg 
                  595                 600                 605             
          Asp Ile Tyr Tyr Gln Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile Pro His Thr Asp 
              610                 615                 620                 
          Gly His Phe His Pro Ser Pro Leu Ile Gly Gly Phe Gly Leu Lys His 
          625                 630                 635                 640 
          Pro Pro Pro Gln Ile Phe Ile Lys Asn Thr Pro Val Pro Ala Asn Pro 
                          645                 650                 655     
          Ala Thr Thr Phe Ser Ser Thr Pro Val Asn Ser Phe Ile Thr Gln Tyr 
                      660                 665                 670         
          Ser Thr Gly Gln Val Ser Val Gln Ile Asp Trp Glu Ile Gln Lys Glu 
                  675                 680                 685             
          Arg Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Val Gln Phe Thr Ser Asn Tyr Gly 
              690                 695                 700                 
          Gln Gln Asn Ser Leu Leu Trp Ala Pro Asp Ala Ala Gly Lys Tyr Thr 
          705                 710                 715                 720 
          Glu Pro Arg Ala Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr His His Leu 
                          725                 730                 
          <![CDATA[<210>  45]]>
          <![CDATA[<211>  724]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  AAV5]]>
          <![CDATA[<400>  45]]>
          Met Ser Phe Val Asp His Pro Pro Asp Trp Leu Glu Glu Val Gly Glu 
          1               5                   10                  15      
          Gly Leu Arg Glu Phe Leu Gly Leu Glu Ala Gly Pro Pro Lys Pro Lys 
                      20                  25                  30          
          Pro Asn Gln Gln His Gln Asp Gln Ala Arg Gly Leu Val Leu Pro Gly 
                  35                  40                  45              
          Tyr Asn Tyr Leu Gly Pro Gly Asn Gly Leu Asp Arg Gly Glu Pro Val 
              50                  55                  60                  
          Asn Arg Ala Asp Glu Val Ala Arg Glu His Asp Ile Ser Tyr Asn Glu 
          65                  70                  75                  80  
          Gln Leu Glu Ala Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Lys Tyr Asn His Ala Asp 
                          85                  90                  95      
          Ala Glu Phe Gln Glu Lys Leu Ala Asp Asp Thr Ser Phe Gly Gly Asn 
                      100                 105                 110         
          Leu Gly Lys Ala Val Phe Gln Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro Phe 
                  115                 120                 125             
          Gly Leu Val Glu Glu Gly Ala Lys Thr Ala Pro Thr Gly Lys Arg Ile 
              130                 135                 140                 
          Asp Asp His Phe Pro Lys Arg Lys Lys Ala Arg Thr Glu Glu Asp Ser 
          145                 150                 155                 160 
          Lys Pro Ser Thr Ser Ser Asp Ala Glu Ala Gly Pro Ser Gly Ser Gln 
                          165                 170                 175     
          Gln Leu Gln Ile Pro Ala Gln Pro Ala Ser Ser Leu Gly Ala Asp Thr 
                      180                 185                 190         
          Met Ser Ala Gly Gly Gly Gly Pro Leu Gly Asp Asn Asn Gln Gly Ala 
                  195                 200                 205             
          Asp Gly Val Gly Asn Ala Ser Gly Asp Trp His Cys Asp Ser Thr Trp 
              210                 215                 220                 
          Met Gly Asp Arg Val Val Thr Lys Ser Thr Arg Thr Trp Val Leu Pro 
          225                 230                 235                 240 
          Ser Tyr Asn Asn His Gln Tyr Arg Glu Ile Lys Ser Gly Ser Val Asp 
                          245                 250                 255     
          Gly Ser Asn Ala Asn Ala Tyr Phe Gly Tyr Ser Thr Pro Trp Gly Tyr 
                      260                 265                 270         
          Phe Asp Phe Asn Arg Phe His Ser His Trp Ser Pro Arg Asp Trp Gln 
                  275                 280                 285             
          Arg Leu Ile Asn Asn Tyr Trp Gly Phe Arg Pro Arg Ser Leu Arg Val 
              290                 295                 300                 
          Lys Ile Phe Asn Ile Gln Val Lys Glu Val Thr Val Gln Asp Ser Thr 
          305                 310                 315                 320 
          Thr Thr Ile Ala Asn Asn Leu Thr Ser Thr Val Gln Val Phe Thr Asp 
                          325                 330                 335     
          Asp Asp Tyr Gln Leu Pro Tyr Val Val Gly Asn Gly Thr Glu Gly Cys 
                      340                 345                 350         
          Leu Pro Ala Phe Pro Pro Gln Val Phe Thr Leu Pro Gln Tyr Gly Tyr 
                  355                 360                 365             
          Ala Thr Leu Asn Arg Asp Asn Thr Glu Asn Pro Thr Glu Arg Ser Ser 
              370                 375                 380                 
          Phe Phe Cys Leu Glu Tyr Phe Pro Ser Lys Met Leu Arg Thr Gly Asn 
          385                 390                 395                 400 
          Asn Phe Glu Phe Thr Tyr Asn Phe Glu Glu Val Pro Phe His Ser Ser 
                          405                 410                 415     
          Phe Ala Pro Ser Gln Asn Leu Phe Lys Leu Ala Asn Pro Leu Val Asp 
                      420                 425                 430         
          Gln Tyr Leu Tyr Arg Phe Val Ser Thr Asn Asn Thr Gly Gly Val Gln 
                  435                 440                 445             
          Phe Asn Lys Asn Leu Ala Gly Arg Tyr Ala Asn Thr Tyr Lys Asn Trp 
              450                 455                 460                 
          Phe Pro Gly Pro Met Gly Arg Thr Gln Gly Trp Asn Leu Gly Ser Gly 
          465                 470                 475                 480 
          Val Asn Arg Ala Ser Val Ser Ala Phe Ala Thr Thr Asn Arg Met Glu 
                          485                 490                 495     
          Leu Glu Gly Ala Ser Tyr Gln Val Pro Pro Gln Pro Asn Gly Met Thr 
                      500                 505                 510         
          Asn Asn Leu Gln Gly Ser Asn Thr Tyr Ala Leu Glu Asn Thr Met Ile 
                  515                 520                 525             
          Phe Asn Ser Gln Pro Ala Asn Pro Gly Thr Thr Ala Thr Tyr Leu Glu 
              530                 535                 540                 
          Gly Asn Met Leu Ile Thr Ser Glu Ser Glu Thr Gln Pro Val Asn Arg 
          545                 550                 555                 560 
          Val Ala Tyr Asn Val Gly Gly Gln Met Ala Thr Asn Asn Gln Ser Ser 
                          565                 570                 575     
          Thr Thr Ala Pro Ala Thr Gly Thr Tyr Asn Leu Gln Glu Ile Val Pro 
                      580                 585                 590         
          Gly Ser Val Trp Met Glu Arg Asp Val Tyr Leu Gln Gly Pro Ile Trp 
                  595                 600                 605             
          Ala Lys Ile Pro Glu Thr Gly Ala His Phe His Pro Ser Pro Ala Met 
              610                 615                 620                 
          Gly Gly Phe Gly Leu Lys His Pro Pro Pro Met Met Leu Ile Lys Asn 
          625                 630                 635                 640 
          Thr Pro Val Pro Gly Asn Ile Thr Ser Phe Ser Asp Val Pro Val Ser 
                          645                 650                 655     
          Ser Phe Ile Thr Gln Tyr Ser Thr Gly Gln Val Thr Val Glu Met Glu 
                      660                 665                 670         
          Trp Glu Leu Lys Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Ile Gln 
                  675                 680                 685             
          Tyr Thr Asn Asn Tyr Asn Asp Pro Gln Phe Val Asp Phe Ala Pro Asp 
              690                 695                 700                 
          Ser Thr Gly Glu Tyr Arg Thr Thr Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu 
          705                 710                 715                 720 
          Thr Arg Pro Leu 
          <![CDATA[<210>  46]]>
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          <![CDATA[<223>  AAV6]]>
          <![CDATA[<400>  46]]>
          Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Asn Leu Ser 
          1               5                   10                  15      
          Glu Gly Ile Arg Glu Trp Trp Asp Leu Lys Pro Gly Ala Pro Lys Pro 
                      20                  25                  30          
          Lys Ala Asn Gln Gln Lys Gln Asp Asp Gly Arg Gly Leu Val Leu Pro 
                  35                  40                  45              
          Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro 
              50                  55                  60                  
          Val Asn Ala Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp 
          65                  70                  75                  80  
          Gln Gln Leu Lys Ala Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Arg Tyr Asn His Ala 
                          85                  90                  95      
          Asp Ala Glu Phe Gln Glu Arg Leu Gln Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly 
                      100                 105                 110         
          Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gln Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro 
                  115                 120                 125             
          Phe Gly Leu Val Glu Glu Gly Ala Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg 
              130                 135                 140                 
          Pro Val Glu Gln Ser Pro Gln Glu Pro Asp Ser Ser Ser Gly Ile Gly 
          145                 150                 155                 160 
          Lys Thr Gly Gln Gln Pro Ala Lys Lys Arg Leu Asn Phe Gly Gln Thr 
                          165                 170                 175     
          Gly Asp Ser Glu Ser Val Pro Asp Pro Gln Pro Leu Gly Glu Pro Pro 
                      180                 185                 190         
          Ala Thr Pro Ala Ala Val Gly Pro Thr Thr Met Ala Ser Gly Gly Gly 
                  195                 200                 205             
          Ala Pro Met Ala Asp Asn Asn Glu Gly Ala Asp Gly Val Gly Asn Ala 
              210                 215                 220                 
          Ser Gly Asn Trp His Cys Asp Ser Thr Trp Leu Gly Asp Arg Val Ile 
          225                 230                 235                 240 
          Thr Thr Ser Thr Arg Thr Trp Ala Leu Pro Thr Tyr Asn Asn His Leu 
                          245                 250                 255     
          Tyr Lys Gln Ile Ser Ser Ala Ser Thr Gly Ala Ser Asn Asp Asn His 
                      260                 265                 270         
          Tyr Phe Gly Tyr Ser Thr Pro Trp Gly Tyr Phe Asp Phe Asn Arg Phe 
                  275                 280                 285             
          His Cys His Phe Ser Pro Arg Asp Trp Gln Arg Leu Ile Asn Asn Asn 
              290                 295                 300                 
          Trp Gly Phe Arg Pro Lys Arg Leu Asn Phe Lys Leu Phe Asn Ile Gln 
          305                 310                 315                 320 
          Val Lys Glu Val Thr Thr Asn Asp Gly Val Thr Thr Ile Ala Asn Asn 
                          325                 330                 335     
          Leu Thr Ser Thr Val Gln Val Phe Ser Asp Ser Glu Tyr Gln Leu Pro 
                      340                 345                 350         
          Tyr Val Leu Gly Ser Ala His Gln Gly Cys Leu Pro Pro Phe Pro Ala 
                  355                 360                 365             
          Asp Val Phe Met Ile Pro Gln Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu Asn Asn Gly 
              370                 375                 380                 
          Ser Gln Ala Val Gly Arg Ser Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr Phe Pro 
          385                 390                 395                 400 
          Ser Gln Met Leu Arg Thr Gly Asn Asn Phe Thr Phe Ser Tyr Thr Phe 
                          405                 410                 415     
          Glu Asp Val Pro Phe His Ser Ser Tyr Ala His Ser Gln Ser Leu Asp 
                      420                 425                 430         
          Arg Leu Met Asn Pro Leu Ile Asp Gln Tyr Leu Tyr Tyr Leu Asn Arg 
                  435                 440                 445             
          Thr Gln Asn Gln Ser Gly Ser Ala Gln Asn Lys Asp Leu Leu Phe Ser 
              450                 455                 460                 
          Arg Gly Ser Pro Ala Gly Met Ser Val Gln Pro Lys Asn Trp Leu Pro 
          465                 470                 475                 480 
          Gly Pro Cys Tyr Arg Gln Gln Arg Val Ser Lys Thr Lys Thr Asp Asn 
                          485                 490                 495     
          Asn Asn Ser Asn Phe Thr Trp Thr Gly Ala Ser Lys Tyr Asn Leu Asn 
                      500                 505                 510         
          Gly Arg Glu Ser Ile Ile Asn Pro Gly Thr Ala Met Ala Ser His Lys 
                  515                 520                 525             
          Asp Asp Lys Asp Lys Phe Phe Pro Met Ser Gly Val Met Ile Phe Gly 
              530                 535                 540                 
          Lys Glu Ser Ala Gly Ala Ser Asn Thr Ala Leu Asp Asn Val Met Ile 
          545                 550                 555                 560 
          Thr Asp Glu Glu Glu Ile Lys Ala Thr Asn Pro Val Ala Thr Glu Arg 
                          565                 570                 575     
          Phe Gly Thr Val Ala Val Asn Leu Gln Ser Ser Ser Thr Asp Pro Ala 
                      580                 585                 590         
          Thr Gly Asp Val His Val Met Gly Ala Leu Pro Gly Met Val Trp Gln 
                  595                 600                 605             
          Asp Arg Asp Val Tyr Leu Gln Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile Pro His 
              610                 615                 620                 
          Thr Asp Gly His Phe His Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe Gly Leu 
          625                 630                 635                 640 
          Lys His Pro Pro Pro Gln Ile Leu Ile Lys Asn Thr Pro Val Pro Ala 
                          645                 650                 655     
          Asn Pro Pro Ala Glu Phe Ser Ala Thr Lys Phe Ala Ser Phe Ile Thr 
                      660                 665                 670         
          Gln Tyr Ser Thr Gly Gln Val Ser Val Glu Ile Glu Trp Glu Leu Gln 
                  675                 680                 685             
          Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Val Gln Tyr Thr Ser Asn 
              690                 695                 700                 
          Tyr Ala Lys Ser Ala Asn Val Asp Phe Thr Val Asp Asn Asn Gly Leu 
          705                 710                 715                 720 
          Tyr Thr Glu Pro Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg Pro Leu 
                          725                 730                 735     
          <![CDATA[<210>  47]]>
          <![CDATA[<211>  737]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  AAV7]]>
          <![CDATA[<400>  47]]>
          Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Asn Leu Ser 
          1               5                   10                  15      
          Glu Gly Ile Arg Glu Trp Trp Asp Leu Lys Pro Gly Ala Pro Lys Pro 
                      20                  25                  30          
          Lys Ala Asn Gln Gln Lys Gln Asp Asn Gly Arg Gly Leu Val Leu Pro 
                  35                  40                  45              
          Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro 
              50                  55                  60                  
          Val Asn Ala Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp 
          65                  70                  75                  80  
          Gln Gln Leu Lys Ala Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Arg Tyr Asn His Ala 
                          85                  90                  95      
          Asp Ala Glu Phe Gln Glu Arg Leu Gln Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly 
                      100                 105                 110         
          Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gln Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro 
                  115                 120                 125             
          Leu Gly Leu Val Glu Glu Gly Ala Lys Thr Ala Pro Ala Lys Lys Arg 
              130                 135                 140                 
          Pro Val Glu Pro Ser Pro Gln Arg Ser Pro Asp Ser Ser Thr Gly Ile 
          145                 150                 155                 160 
          Gly Lys Lys Gly Gln Gln Pro Ala Arg Lys Arg Leu Asn Phe Gly Gln 
                          165                 170                 175     
          Thr Gly Asp Ser Glu Ser Val Pro Asp Pro Gln Pro Leu Gly Glu Pro 
                      180                 185                 190         
          Pro Ala Ala Pro Ser Ser Val Gly Ser Gly Thr Val Ala Ala Gly Gly 
                  195                 200                 205             
          Gly Ala Pro Met Ala Asp Asn Asn Glu Gly Ala Asp Gly Val Gly Asn 
              210                 215                 220                 
          Ala Ser Gly Asn Trp His Cys Asp Ser Thr Trp Leu Gly Asp Arg Val 
          225                 230                 235                 240 
          Ile Thr Thr Ser Thr Arg Thr Trp Ala Leu Pro Thr Tyr Asn Asn His 
                          245                 250                 255     
          Leu Tyr Lys Gln Ile Ser Ser Glu Thr Ala Gly Ser Thr Asn Asp Asn 
                      260                 265                 270         
          Thr Tyr Phe Gly Tyr Ser Thr Pro Trp Gly Tyr Phe Asp Phe Asn Arg 
                  275                 280                 285             
          Phe His Cys His Phe Ser Pro Arg Asp Trp Gln Arg Leu Ile Asn Asn 
              290                 295                 300                 
          Asn Trp Gly Phe Arg Pro Lys Lys Leu Arg Phe Lys Leu Phe Asn Ile 
          305                 310                 315                 320 
          Gln Val Lys Glu Val Thr Thr Asn Asp Gly Val Thr Thr Ile Ala Asn 
                          325                 330                 335     
          Asn Leu Thr Ser Thr Ile Gln Val Phe Ser Asp Ser Glu Tyr Gln Leu 
                      340                 345                 350         
          Pro Tyr Val Leu Gly Ser Ala His Gln Gly Cys Leu Pro Pro Phe Pro 
                  355                 360                 365             
          Ala Asp Val Phe Met Ile Pro Gln Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu Asn Asn 
              370                 375                 380                 
          Gly Ser Gln Ser Val Gly Arg Ser Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr Phe 
          385                 390                 395                 400 
          Pro Ser Gln Met Leu Arg Thr Gly Asn Asn Phe Glu Phe Ser Tyr Ser 
                          405                 410                 415     
          Phe Glu Asp Val Pro Phe His Ser Ser Tyr Ala His Ser Gln Ser Leu 
                      420                 425                 430         
          Asp Arg Leu Met Asn Pro Leu Ile Asp Gln Tyr Leu Tyr Tyr Leu Ala 
                  435                 440                 445             
          Arg Thr Gln Ser Asn Pro Gly Gly Thr Ala Gly Asn Arg Glu Leu Gln 
              450                 455                 460                 
          Phe Tyr Gln Gly Gly Pro Ser Thr Met Ala Glu Gln Ala Lys Asn Trp 
          465                 470                 475                 480 
          Leu Pro Gly Pro Cys Phe Arg Gln Gln Arg Val Ser Lys Thr Leu Asp 
                          485                 490                 495     
          Gln Asn Asn Asn Ser Asn Phe Ala Trp Thr Gly Ala Thr Lys Tyr His 
                      500                 505                 510         
          Leu Asn Gly Arg Asn Ser Leu Val Asn Pro Gly Val Ala Met Ala Thr 
                  515                 520                 525             
          His Lys Asp Asp Glu Asp Arg Phe Phe Pro Ser Ser Gly Val Leu Ile 
              530                 535                 540                 
          Phe Gly Lys Thr Gly Ala Thr Asn Lys Thr Thr Leu Glu Asn Val Leu 
          545                 550                 555                 560 
          Met Thr Asn Glu Glu Glu Ile Arg Pro Thr Asn Pro Val Ala Thr Glu 
                          565                 570                 575     
          Glu Tyr Gly Ile Val Ser Ser Asn Leu Gln Ala Ala Asn Thr Ala Ala 
                      580                 585                 590         
          Gln Thr Gln Val Val Asn Asn Gln Gly Ala Leu Pro Gly Met Val Trp 
                  595                 600                 605             
          Gln Asn Arg Asp Val Tyr Leu Gln Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile Pro 
              610                 615                 620                 
          His Thr Asp Gly Asn Phe His Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe Gly 
          625                 630                 635                 640 
          Leu Lys His Pro Pro Pro Gln Ile Leu Ile Lys Asn Thr Pro Val Pro 
                          645                 650                 655     
          Ala Asn Pro Pro Glu Val Phe Thr Pro Ala Lys Phe Ala Ser Phe Ile 
                      660                 665                 670         
          Thr Gln Tyr Ser Thr Gly Gln Val Ser Val Glu Ile Glu Trp Glu Leu 
                  675                 680                 685             
          Gln Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Ile Gln Tyr Thr Ser 
              690                 695                 700                 
          Asn Phe Glu Lys Gln Thr Gly Val Asp Phe Ala Val Asp Ser Gln Gly 
          705                 710                 715                 720 
          Val Tyr Ser Glu Pro Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg Asn 
                          725                 730                 735     
          Leu 
          <![CDATA[<210>  48]]>
          <![CDATA[<211>  738]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
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          <![CDATA[<223>  AAV8]]>
          <![CDATA[<400>  48]]>
          Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Asn Leu Ser 
          1               5                   10                  15      
          Glu Gly Ile Arg Glu Trp Trp Ala Leu Lys Pro Gly Ala Pro Lys Pro 
                      20                  25                  30          
          Lys Ala Asn Gln Gln Lys Gln Asp Asp Gly Arg Gly Leu Val Leu Pro 
                  35                  40                  45              
          Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro 
              50                  55                  60                  
          Val Asn Ala Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp 
          65                  70                  75                  80  
          Gln Gln Leu Gln Ala Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Arg Tyr Asn His Ala 
                          85                  90                  95      
          Asp Ala Glu Phe Gln Glu Arg Leu Gln Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly 
                      100                 105                 110         
          Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gln Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro 
                  115                 120                 125             
          Leu Gly Leu Val Glu Glu Gly Ala Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg 
              130                 135                 140                 
          Pro Val Glu Pro Ser Pro Gln Arg Ser Pro Asp Ser Ser Thr Gly Ile 
          145                 150                 155                 160 
          Gly Lys Lys Gly Gln Gln Pro Ala Arg Lys Arg Leu Asn Phe Gly Gln 
                          165                 170                 175     
          Thr Gly Asp Ser Glu Ser Val Pro Asp Pro Gln Pro Leu Gly Glu Pro 
                      180                 185                 190         
          Pro Ala Ala Pro Ser Gly Val Gly Pro Asn Thr Met Ala Ala Gly Gly 
                  195                 200                 205             
          Gly Ala Pro Met Ala Asp Asn Asn Glu Gly Ala Asp Gly Val Gly Ser 
              210                 215                 220                 
          Ser Ser Gly Asn Trp His Cys Asp Ser Thr Trp Leu Gly Asp Arg Val 
          225                 230                 235                 240 
          Ile Thr Thr Ser Thr Arg Thr Trp Ala Leu Pro Thr Tyr Asn Asn His 
                          245                 250                 255     
          Leu Tyr Lys Gln Ile Ser Asn Gly Thr Ser Gly Gly Ala Thr Asn Asp 
                      260                 265                 270         
          Asn Thr Tyr Phe Gly Tyr Ser Thr Pro Trp Gly Tyr Phe Asp Phe Asn 
                  275                 280                 285             
          Arg Phe His Cys His Phe Ser Pro Arg Asp Trp Gln Arg Leu Ile Asn 
              290                 295                 300                 
          Asn Asn Trp Gly Phe Arg Pro Lys Arg Leu Ser Phe Lys Leu Phe Asn 
          305                 310                 315                 320 
          Ile Gln Val Lys Glu Val Thr Gln Asn Glu Gly Thr Lys Thr Ile Ala 
                          325                 330                 335     
          Asn Asn Leu Thr Ser Thr Ile Gln Val Phe Thr Asp Ser Glu Tyr Gln 
                      340                 345                 350         
          Leu Pro Tyr Val Leu Gly Ser Ala His Gln Gly Cys Leu Pro Pro Phe 
                  355                 360                 365             
          Pro Ala Asp Val Phe Met Ile Pro Gln Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu Asn 
              370                 375                 380                 
          Asn Gly Ser Gln Ala Val Gly Arg Ser Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr 
          385                 390                 395                 400 
          Phe Pro Ser Gln Met Leu Arg Thr Gly Asn Asn Phe Gln Phe Thr Tyr 
                          405                 410                 415     
          Thr Phe Glu Asp Val Pro Phe His Ser Ser Tyr Ala His Ser Gln Ser 
                      420                 425                 430         
          Leu Asp Arg Leu Met Asn Pro Leu Ile Asp Gln Tyr Leu Tyr Tyr Leu 
                  435                 440                 445             
          Ser Arg Thr Gln Thr Thr Gly Gly Thr Ala Asn Thr Gln Thr Leu Gly 
              450                 455                 460                 
          Phe Ser Gln Gly Gly Pro Asn Thr Met Ala Asn Gln Ala Lys Asn Trp 
          465                 470                 475                 480 
          Leu Pro Gly Pro Cys Tyr Arg Gln Gln Arg Val Ser Thr Thr Thr Gly 
                          485                 490                 495     
          Gln Asn Asn Asn Ser Asn Phe Ala Trp Thr Ala Gly Thr Lys Tyr His 
                      500                 505                 510         
          Leu Asn Gly Arg Asn Ser Leu Ala Asn Pro Gly Ile Ala Met Ala Thr 
                  515                 520                 525             
          His Lys Asp Asp Glu Glu Arg Phe Phe Pro Ser Asn Gly Ile Leu Ile 
              530                 535                 540                 
          Phe Gly Lys Gln Asn Ala Ala Arg Asp Asn Ala Asp Tyr Ser Asp Val 
          545                 550                 555                 560 
          Met Leu Thr Ser Glu Glu Glu Ile Lys Thr Thr Asn Pro Val Ala Thr 
                          565                 570                 575     
          Glu Glu Tyr Gly Ile Val Ala Asp Asn Leu Gln Gln Gln Asn Thr Ala 
                      580                 585                 590         
          Pro Gln Ile Gly Thr Val Asn Ser Gln Gly Ala Leu Pro Gly Met Val 
                  595                 600                 605             
          Trp Gln Asn Arg Asp Val Tyr Leu Gln Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile 
              610                 615                 620                 
          Pro His Thr Asp Gly Asn Phe His Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe 
          625                 630                 635                 640 
          Gly Leu Lys His Pro Pro Pro Gln Ile Leu Ile Lys Asn Thr Pro Val 
                          645                 650                 655     
          Pro Ala Asp Pro Pro Thr Thr Phe Asn Gln Ser Lys Leu Asn Ser Phe 
                      660                 665                 670         
          Ile Thr Gln Tyr Ser Thr Gly Gln Val Ser Val Glu Ile Glu Trp Glu 
                  675                 680                 685             
          Leu Gln Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Ile Gln Tyr Thr 
              690                 695                 700                 
          Ser Asn Tyr Tyr Lys Ser Thr Ser Val Asp Phe Ala Val Asn Thr Glu 
          705                 710                 715                 720 
          Gly Val Tyr Ser Glu Pro Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg 
                          725                 730                 735     
          Asn Leu 
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          <![CDATA[<211>  736]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  hu31]]>
          <![CDATA[<400>  49]]>
          Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Thr Leu Ser 
          1               5                   10                  15      
          Glu Gly Ile Arg Gln Trp Trp Lys Leu Lys Pro Gly Pro Pro Pro Pro 
                      20                  25                  30          
          Lys Pro Ala Glu Arg His Lys Asp Asp Ser Arg Gly Leu Val Leu Pro 
                  35                  40                  45              
          Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Gly Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro 
              50                  55                  60                  
          Val Asn Ala Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp 
          65                  70                  75                  80  
          Gln Gln Leu Lys Ala Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Lys Tyr Asn His Ala 
                          85                  90                  95      
          Asp Ala Glu Phe Gln Glu Arg Leu Lys Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly 
                      100                 105                 110         
          Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gln Ala Lys Lys Arg Leu Leu Glu Pro 
                  115                 120                 125             
          Leu Gly Leu Val Glu Glu Ala Ala Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg 
              130                 135                 140                 
          Pro Val Glu Gln Ser Pro Gln Glu Pro Asp Ser Ser Ala Gly Ile Gly 
          145                 150                 155                 160 
          Lys Ser Gly Ser Gln Pro Ala Lys Lys Lys Leu Asn Phe Gly Gln Thr 
                          165                 170                 175     
          Gly Asp Thr Glu Ser Val Pro Asp Pro Gln Pro Ile Gly Glu Pro Pro 
                      180                 185                 190         
          Ala Ala Pro Ser Gly Val Gly Ser Leu Thr Met Ala Ser Gly Gly Gly 
                  195                 200                 205             
          Ala Pro Val Ala Asp Asn Asn Glu Gly Ala Asp Gly Val Gly Ser Ser 
              210                 215                 220                 
          Ser Gly Asn Trp His Cys Asp Ser Gln Trp Leu Gly Asp Arg Val Ile 
          225                 230                 235                 240 
          Thr Thr Ser Thr Arg Thr Trp Ala Leu Pro Thr Tyr Asn Asn His Leu 
                          245                 250                 255     
          Tyr Lys Gln Ile Ser Asn Ser Thr Ser Gly Gly Ser Ser Asn Asp Asn 
                      260                 265                 270         
          Ala Tyr Phe Gly Tyr Ser Thr Pro Trp Gly Tyr Phe Asp Phe Asn Arg 
                  275                 280                 285             
          Phe His Cys His Phe Ser Pro Arg Asp Trp Gln Arg Leu Ile Asn Asn 
              290                 295                 300                 
          Asn Trp Gly Phe Arg Pro Lys Arg Leu Asn Phe Lys Leu Phe Asn Ile 
          305                 310                 315                 320 
          Gln Val Lys Glu Val Thr Asp Asn Asn Gly Val Lys Thr Ile Ala Asn 
                          325                 330                 335     
          Asn Leu Thr Ser Thr Val Gln Val Phe Thr Asp Ser Asp Tyr Gln Leu 
                      340                 345                 350         
          Pro Tyr Val Leu Gly Ser Ala His Glu Gly Cys Leu Pro Pro Phe Pro 
                  355                 360                 365             
          Ala Asp Val Phe Met Ile Pro Gln Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu Asn Asp 
              370                 375                 380                 
          Gly Gly Gln Ala Val Gly Arg Ser Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr Phe 
          385                 390                 395                 400 
          Pro Ser Gln Met Leu Arg Thr Gly Asn Asn Phe Gln Phe Ser Tyr Glu 
                          405                 410                 415     
          Phe Glu Asn Val Pro Phe His Ser Ser Tyr Ala His Ser Gln Ser Leu 
                      420                 425                 430         
          Asp Arg Leu Met Asn Pro Leu Ile Asp Gln Tyr Leu Tyr Tyr Leu Ser 
                  435                 440                 445             
          Lys Thr Ile Asn Gly Ser Gly Gln Asn Gln Gln Thr Leu Lys Phe Ser 
              450                 455                 460                 
          Val Ala Gly Pro Ser Asn Met Ala Val Gln Gly Arg Asn Tyr Ile Pro 
          465                 470                 475                 480 
          Gly Pro Ser Tyr Arg Gln Gln Arg Val Ser Thr Thr Val Thr Gln Asn 
                          485                 490                 495     
          Asn Asn Ser Glu Phe Ala Trp Pro Gly Ala Ser Ser Trp Ala Leu Asn 
                      500                 505                 510         
          Gly Arg Asn Ser Leu Met Asn Pro Gly Pro Ala Met Ala Ser His Lys 
                  515                 520                 525             
          Glu Gly Glu Asp Arg Phe Phe Pro Leu Ser Gly Ser Leu Ile Phe Gly 
              530                 535                 540                 
          Lys Gln Gly Thr Gly Arg Asp Asn Val Asp Ala Asp Lys Val Met Ile 
          545                 550                 555                 560 
          Thr Asn Glu Glu Glu Ile Lys Thr Thr Asn Pro Val Ala Thr Glu Ser 
                          565                 570                 575     
          Tyr Gly Gln Val Ala Thr Asn His Gln Ser Ala Gln Ala Gln Ala Gln 
                      580                 585                 590         
          Thr Gly Trp Val Gln Asn Gln Gly Ile Leu Pro Gly Met Val Trp Gln 
                  595                 600                 605             
          Asp Arg Asp Val Tyr Leu Gln Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile Pro His 
              610                 615                 620                 
          Thr Asp Gly Asn Phe His Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe Gly Met 
          625                 630                 635                 640 
          Lys His Pro Pro Pro Gln Ile Leu Ile Lys Asn Thr Pro Val Pro Ala 
                          645                 650                 655     
          Asp Pro Pro Thr Ala Phe Asn Lys Asp Lys Leu Asn Ser Phe Ile Thr 
                      660                 665                 670         
          Gln Tyr Ser Thr Gly Gln Val Ser Val Glu Ile Glu Trp Glu Leu Gln 
                  675                 680                 685             
          Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Ile Gln Tyr Thr Ser Asn 
              690                 695                 700                 
          Tyr Tyr Lys Ser Asn Asn Val Glu Phe Ala Val Ser Thr Glu Gly Val 
          705                 710                 715                 720 
          Tyr Ser Glu Pro Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg Asn Leu 
                          725                 730                 735     
          <![CDATA[<210>  50]]>
          <![CDATA[<211>  736]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  hu32]]>
          <![CDATA[<400>  50]]>
          Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Thr Leu Ser 
          1               5                   10                  15      
          Glu Gly Ile Arg Gln Trp Trp Lys Leu Lys Pro Gly Pro Pro Pro Pro 
                      20                  25                  30          
          Lys Pro Ala Glu Arg His Lys Asp Asp Ser Arg Gly Leu Val Leu Pro 
                  35                  40                  45              
          Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Gly Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro 
              50                  55                  60                  
          Val Asn Ala Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp 
          65                  70                  75                  80  
          Gln Gln Leu Lys Ala Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Lys Tyr Asn His Ala 
                          85                  90                  95      
          Asp Ala Glu Phe Gln Glu Arg Leu Lys Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly 
                      100                 105                 110         
          Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gln Ala Lys Lys Arg Leu Leu Glu Pro 
                  115                 120                 125             
          Leu Gly Leu Val Glu Glu Ala Ala Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg 
              130                 135                 140                 
          Pro Val Glu Gln Ser Pro Gln Glu Pro Asp Ser Ser Ala Gly Ile Gly 
          145                 150                 155                 160 
          Lys Ser Gly Ser Gln Pro Ala Lys Lys Lys Leu Asn Phe Gly Gln Thr 
                          165                 170                 175     
          Gly Asp Thr Glu Ser Val Pro Asp Pro Gln Pro Ile Gly Glu Pro Pro 
                      180                 185                 190         
          Ala Ala Pro Ser Gly Val Gly Ser Leu Thr Met Ala Ser Gly Gly Gly 
                  195                 200                 205             
          Ala Pro Val Ala Asp Asn Asn Glu Gly Ala Asp Gly Val Gly Ser Ser 
              210                 215                 220                 
          Ser Gly Asn Trp His Cys Asp Ser Gln Trp Leu Gly Asp Arg Val Ile 
          225                 230                 235                 240 
          Thr Thr Ser Thr Arg Thr Trp Ala Leu Pro Thr Tyr Asn Asn His Leu 
                          245                 250                 255     
          Tyr Lys Gln Ile Ser Asn Ser Thr Ser Gly Gly Ser Ser Asn Asp Asn 
                      260                 265                 270         
          Ala Tyr Phe Gly Tyr Ser Thr Pro Trp Gly Tyr Phe Asp Phe Asn Arg 
                  275                 280                 285             
          Phe His Cys His Phe Ser Pro Arg Asp Trp Gln Arg Leu Ile Asn Asn 
              290                 295                 300                 
          Asn Trp Gly Phe Arg Pro Lys Arg Leu Asn Phe Lys Leu Phe Asn Ile 
          305                 310                 315                 320 
          Gln Val Lys Glu Val Thr Asp Asn Asn Gly Val Lys Thr Ile Ala Asn 
                          325                 330                 335     
          Asn Leu Thr Ser Thr Val Gln Val Phe Thr Asp Ser Asp Tyr Gln Leu 
                      340                 345                 350         
          Pro Tyr Val Leu Gly Ser Ala His Glu Gly Cys Leu Pro Pro Phe Pro 
                  355                 360                 365             
          Ala Asp Val Phe Met Ile Pro Gln Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu Asn Asp 
              370                 375                 380                 
          Gly Ser Gln Ala Val Gly Arg Ser Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr Phe 
          385                 390                 395                 400 
          Pro Ser Gln Met Leu Arg Thr Gly Asn Asn Phe Gln Phe Ser Tyr Glu 
                          405                 410                 415     
          Phe Glu Asn Val Pro Phe His Ser Ser Tyr Ala His Ser Gln Ser Leu 
                      420                 425                 430         
          Asp Arg Leu Met Asn Pro Leu Ile Asp Gln Tyr Leu Tyr Tyr Leu Ser 
                  435                 440                 445             
          Lys Thr Ile Asn Gly Ser Gly Gln Asn Gln Gln Thr Leu Lys Phe Ser 
              450                 455                 460                 
          Val Ala Gly Pro Ser Asn Met Ala Val Gln Gly Arg Asn Tyr Ile Pro 
          465                 470                 475                 480 
          Gly Pro Ser Tyr Arg Gln Gln Arg Val Ser Thr Thr Val Thr Gln Asn 
                          485                 490                 495     
          Asn Asn Ser Glu Phe Ala Trp Pro Gly Ala Ser Ser Trp Ala Leu Asn 
                      500                 505                 510         
          Gly Arg Asn Ser Leu Met Asn Pro Gly Pro Ala Met Ala Ser His Lys 
                  515                 520                 525             
          Glu Gly Glu Asp Arg Phe Phe Pro Leu Ser Gly Ser Leu Ile Phe Gly 
              530                 535                 540                 
          Lys Gln Gly Thr Gly Arg Asp Asn Val Asp Ala Asp Lys Val Met Ile 
          545                 550                 555                 560 
          Thr Asn Glu Glu Glu Ile Lys Thr Thr Asn Pro Val Ala Thr Glu Ser 
                          565                 570                 575     
          Tyr Gly Gln Val Ala Thr Asn His Gln Ser Ala Gln Ala Gln Ala Gln 
                      580                 585                 590         
          Thr Gly Trp Val Gln Asn Gln Gly Ile Leu Pro Gly Met Val Trp Gln 
                  595                 600                 605             
          Asp Arg Asp Val Tyr Leu Gln Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile Pro His 
              610                 615                 620                 
          Thr Asp Gly Asn Phe His Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe Gly Met 
          625                 630                 635                 640 
          Lys His Pro Pro Pro Gln Ile Leu Ile Lys Asn Thr Pro Val Pro Ala 
                          645                 650                 655     
          Asp Pro Pro Thr Ala Phe Asn Lys Asp Lys Leu Asn Ser Phe Ile Thr 
                      660                 665                 670         
          Gln Tyr Ser Thr Gly Gln Val Ser Val Glu Ile Glu Trp Glu Leu Gln 
                  675                 680                 685             
          Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Ile Gln Tyr Thr Ser Asn 
              690                 695                 700                 
          Tyr Tyr Lys Ser Asn Asn Val Glu Phe Ala Val Asn Thr Glu Gly Val 
          705                 710                 715                 720 
          Tyr Ser Glu Pro Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg Asn Leu 
                          725                 730                 735     
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          <![CDATA[<400>  51]]>
          Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Asn Leu Ser 
          1               5                   10                  15      
          Glu Gly Ile Arg Glu Trp Trp Ala Leu Lys Pro Gly Ala Pro Gln Pro 
                      20                  25                  30          
          Lys Ala Asn Gln Gln His Gln Asp Asn Ala Arg Gly Leu Val Leu Pro 
                  35                  40                  45              
          Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Gly Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro 
              50                  55                  60                  
          Val Asn Ala Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp 
          65                  70                  75                  80  
          Gln Gln Leu Lys Ala Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Lys Tyr Asn His Ala 
                          85                  90                  95      
          Asp Ala Glu Phe Gln Glu Arg Leu Lys Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly 
                      100                 105                 110         
          Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gln Ala Lys Lys Arg Leu Leu Glu Pro 
                  115                 120                 125             
          Leu Gly Leu Val Glu Glu Ala Ala Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg 
              130                 135                 140                 
          Pro Val Glu Gln Ser Pro Gln Glu Pro Asp Ser Ser Ala Gly Ile Gly 
          145                 150                 155                 160 
          Lys Ser Gly Ala Gln Pro Ala Lys Lys Arg Leu Asn Phe Gly Gln Thr 
                          165                 170                 175     
          Gly Asp Thr Glu Ser Val Pro Asp Pro Gln Pro Ile Gly Glu Pro Pro 
                      180                 185                 190         
          Ala Ala Pro Ser Gly Val Gly Ser Leu Thr Met Ala Ser Gly Gly Gly 
                  195                 200                 205             
          Ala Pro Val Ala Asp Asn Asn Glu Gly Ala Asp Gly Val Gly Ser Ser 
              210                 215                 220                 
          Ser Gly Asn Trp His Cys Asp Ser Gln Trp Leu Gly Asp Arg Val Ile 
          225                 230                 235                 240 
          Thr Thr Ser Thr Arg Thr Trp Ala Leu Pro Thr Tyr Asn Asn His Leu 
                          245                 250                 255     
          Tyr Lys Gln Ile Ser Asn Ser Thr Ser Gly Gly Ser Ser Asn Asp Asn 
                      260                 265                 270         
          Ala Tyr Phe Gly Tyr Ser Thr Pro Trp Gly Tyr Phe Asp Phe Asn Arg 
                  275                 280                 285             
          Phe His Cys His Phe Ser Pro Arg Asp Trp Gln Arg Leu Ile Asn Asn 
              290                 295                 300                 
          Asn Trp Gly Phe Arg Pro Lys Arg Leu Asn Phe Lys Leu Phe Asn Ile 
          305                 310                 315                 320 
          Gln Val Lys Glu Val Thr Asp Asn Asn Gly Val Lys Thr Ile Ala Asn 
                          325                 330                 335     
          Asn Leu Thr Ser Thr Val Gln Val Phe Thr Asp Ser Asp Tyr Gln Leu 
                      340                 345                 350         
          Pro Tyr Val Leu Gly Ser Ala His Glu Gly Cys Leu Pro Pro Phe Pro 
                  355                 360                 365             
          Ala Asp Val Phe Met Ile Pro Gln Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu Asn Asp 
              370                 375                 380                 
          Gly Ser Gln Ala Val Gly Arg Ser Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr Phe 
          385                 390                 395                 400 
          Pro Ser Gln Met Leu Arg Thr Gly Asn Asn Phe Gln Phe Ser Tyr Glu 
                          405                 410                 415     
          Phe Glu Asn Val Pro Phe His Ser Ser Tyr Ala His Ser Gln Ser Leu 
                      420                 425                 430         
          Asp Arg Leu Met Asn Pro Leu Ile Asp Gln Tyr Leu Tyr Tyr Leu Ser 
                  435                 440                 445             
          Lys Thr Ile Asn Gly Ser Gly Gln Asn Gln Gln Thr Leu Lys Phe Ser 
              450                 455                 460                 
          Val Ala Gly Pro Ser Asn Met Ala Val Gln Gly Arg Asn Tyr Ile Pro 
          465                 470                 475                 480 
          Gly Pro Ser Tyr Arg Gln Gln Arg Val Ser Thr Thr Val Thr Gln Asn 
                          485                 490                 495     
          Asn Asn Ser Glu Phe Ala Trp Pro Gly Ala Ser Ser Trp Ala Leu Asn 
                      500                 505                 510         
          Gly Arg Asn Ser Leu Met Asn Pro Gly Pro Ala Met Ala Ser His Lys 
                  515                 520                 525             
          Glu Gly Glu Asp Arg Phe Phe Pro Leu Ser Gly Ser Leu Ile Phe Gly 
              530                 535                 540                 
          Lys Gln Gly Thr Gly Arg Asp Asn Val Asp Ala Asp Lys Val Met Ile 
          545                 550                 555                 560 
          Thr Asn Glu Glu Glu Ile Lys Thr Thr Asn Pro Val Ala Thr Glu Ser 
                          565                 570                 575     
          Tyr Gly Gln Val Ala Thr Asn His Gln Ser Ala Gln Ala Gln Ala Gln 
                      580                 585                 590         
          Thr Gly Trp Val Gln Asn Gln Gly Ile Leu Pro Gly Met Val Trp Gln 
                  595                 600                 605             
          Asp Arg Asp Val Tyr Leu Gln Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile Pro His 
              610                 615                 620                 
          Thr Asp Gly Asn Phe His Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe Gly Met 
          625                 630                 635                 640 
          Lys His Pro Pro Pro Gln Ile Leu Ile Lys Asn Thr Pro Val Pro Ala 
                          645                 650                 655     
          Asp Pro Pro Thr Ala Phe Asn Lys Asp Lys Leu Asn Ser Phe Ile Thr 
                      660                 665                 670         
          Gln Tyr Ser Thr Gly Gln Val Ser Val Glu Ile Glu Trp Glu Leu Gln 
                  675                 680                 685             
          Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Ile Gln Tyr Thr Ser Asn 
              690                 695                 700                 
          Tyr Tyr Lys Ser Asn Asn Val Glu Phe Ala Val Asn Thr Glu Gly Val 
          705                 710                 715                 720 
          Tyr Ser Glu Pro Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg Asn Leu 
                          725                 730                 735     
          <![CDATA[<210>  52]]>
          <![CDATA[<211>  191]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  血管內皮生長因子(vegf) Caa44447.1]]>
          <![CDATA[<400>  52]]>
          Met Asn Phe Leu Leu Ser Trp Val His Trp Ser Leu Ala Leu Leu Leu 
          1               5                   10                  15      
          Tyr Leu His His Ala Lys Trp Ser Gln Ala Ala Pro Met Ala Glu Gly 
                      20                  25                  30          
          Gly Gly Gln Asn His His Glu Val Val Lys Phe Met Asp Val Tyr Gln 
                  35                  40                  45              
          Arg Ser Tyr Cys His Pro Ile Glu Thr Leu Val Asp Ile Phe Gln Glu 
              50                  55                  60                  
          Tyr Pro Asp Glu Ile Glu Tyr Ile Phe Lys Pro Ser Cys Val Pro Leu 
          65                  70                  75                  80  
          Met Arg Cys Gly Gly Cys Cys Asn Asp Glu Gly Leu Glu Cys Val Pro 
                          85                  90                  95      
          Thr Glu Glu Ser Asn Ile Thr Met Gln Ile Met Arg Ile Lys Pro His 
                      100                 105                 110         
          Gln Gly Gln His Ile Gly Glu Met Ser Phe Leu Gln His Asn Lys Cys 
                  115                 120                 125             
          Glu Cys Arg Pro Lys Lys Asp Arg Ala Arg Gln Glu Asn Pro Cys Gly 
              130                 135                 140                 
          Pro Cys Ser Glu Arg Arg Lys His Leu Phe Val Gln Asp Pro Gln Thr 
          145                 150                 155                 160 
          Cys Lys Cys Ser Cys Lys Asn Thr Asp Ser Arg Cys Lys Ala Arg Gln 
                          165                 170                 175     
          Leu Glu Leu Asn Glu Arg Thr Cys Arg Cys Asp Lys Pro Arg Arg 
                      180                 185                 190     
          <![CDATA[<210>  53]]>
          <![CDATA[<211>  306]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  棕櫚醯-蛋白硫酯酶1 (ppt1) Aah08426.1]]>
          <![CDATA[<400>  53]]>
          Met Ala Ser Pro Gly Cys Leu Trp Leu Leu Ala Val Ala Leu Leu Pro 
          1               5                   10                  15      
          Trp Thr Cys Ala Ser Arg Ala Leu Gln His Leu Asp Pro Pro Ala Pro 
                      20                  25                  30          
          Leu Pro Leu Val Ile Trp His Gly Met Gly Asp Ser Cys Cys Asn Pro 
                  35                  40                  45              
          Leu Ser Met Gly Ala Ile Lys Lys Met Val Glu Lys Lys Ile Pro Gly 
              50                  55                  60                  
          Ile Tyr Val Leu Ser Leu Glu Ile Gly Lys Thr Leu Met Glu Asp Val 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Asn Ser Phe Phe Leu Asn Val Asn Ser Gln Val Thr Thr Val Cys 
                          85                  90                  95      
          Gln Ala Leu Ala Lys Asp Pro Lys Leu Gln Gln Gly Tyr Asn Ala Met 
                      100                 105                 110         
          Gly Phe Ser Gln Gly Gly Gln Phe Leu Arg Ala Val Ala Gln Arg Cys 
                  115                 120                 125             
          Pro Ser Pro Pro Met Ile Asn Leu Ile Ser Val Gly Gly Gln His Gln 
              130                 135                 140                 
          Gly Val Phe Gly Leu Pro Arg Cys Pro Gly Glu Ser Ser His Ile Cys 
          145                 150                 155                 160 
          Asp Phe Ile Arg Lys Thr Leu Asn Ala Gly Ala Tyr Ser Lys Val Val 
                          165                 170                 175     
          Gln Glu Arg Leu Val Gln Ala Glu Tyr Trp His Asp Pro Ile Lys Glu 
                      180                 185                 190         
          Asp Val Tyr Arg Asn His Ser Ile Phe Leu Ala Asp Ile Asn Gln Glu 
                  195                 200                 205             
          Arg Gly Ile Asn Glu Ser Tyr Lys Lys Asn Leu Met Ala Leu Lys Lys 
              210                 215                 220                 
          Phe Val Met Val Lys Phe Leu Asn Asp Ser Ile Val Asp Pro Val Asp 
          225                 230                 235                 240 
          Ser Glu Trp Phe Gly Phe Tyr Arg Ser Gly Gln Ala Lys Glu Thr Ile 
                          245                 250                 255     
          Pro Leu Gln Glu Thr Ser Leu Tyr Thr Gln Asp Arg Leu Gly Leu Lys 
                      260                 265                 270         
          Glu Met Asp Asn Ala Gly Gln Leu Val Phe Leu Ala Thr Glu Gly Asp 
                  275                 280                 285             
          His Leu Gln Leu Ser Glu Glu Trp Phe Tyr Ala His Ile Ile Pro Phe 
              290                 295                 300                 
          Leu Gly 
          305     
          <![CDATA[<210>  54]]>
          <![CDATA[<211>  563]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  三肽基-肽酶1 (tpp1) Np_000382.3]]>
          <![CDATA[<400>  54]]>
          Met Gly Leu Gln Ala Cys Leu Leu Gly Leu Phe Ala Leu Ile Leu Ser 
          1               5                   10                  15      
          Gly Lys Cys Ser Tyr Ser Pro Glu Pro Asp Gln Arg Arg Thr Leu Pro 
                      20                  25                  30          
          Pro Gly Trp Val Ser Leu Gly Arg Ala Asp Pro Glu Glu Glu Leu Ser 
                  35                  40                  45              
          Leu Thr Phe Ala Leu Arg Gln Gln Asn Val Glu Arg Leu Ser Glu Leu 
              50                  55                  60                  
          Val Gln Ala Val Ser Asp Pro Ser Ser Pro Gln Tyr Gly Lys Tyr Leu 
          65                  70                  75                  80  
          Thr Leu Glu Asn Val Ala Asp Leu Val Arg Pro Ser Pro Leu Thr Leu 
                          85                  90                  95      
          His Thr Val Gln Lys Trp Leu Leu Ala Ala Gly Ala Gln Lys Cys His 
                      100                 105                 110         
          Ser Val Ile Thr Gln Asp Phe Leu Thr Cys Trp Leu Ser Ile Arg Gln 
                  115                 120                 125             
          Ala Glu Leu Leu Leu Pro Gly Ala Glu Phe His His Tyr Val Gly Gly 
              130                 135                 140                 
          Pro Thr Glu Thr His Val Val Arg Ser Pro His Pro Tyr Gln Leu Pro 
          145                 150                 155                 160 
          Gln Ala Leu Ala Pro His Val Asp Phe Val Gly Gly Leu His Arg Phe 
                          165                 170                 175     
          Pro Pro Thr Ser Ser Leu Arg Gln Arg Pro Glu Pro Gln Val Thr Gly 
                      180                 185                 190         
          Thr Val Gly Leu His Leu Gly Val Thr Pro Ser Val Ile Arg Lys Arg 
                  195                 200                 205             
          Tyr Asn Leu Thr Ser Gln Asp Val Gly Ser Gly Thr Ser Asn Asn Ser 
              210                 215                 220                 
          Gln Ala Cys Ala Gln Phe Leu Glu Gln Tyr Phe His Asp Ser Asp Leu 
          225                 230                 235                 240 
          Ala Gln Phe Met Arg Leu Phe Gly Gly Asn Phe Ala His Gln Ala Ser 
                          245                 250                 255     
          Val Ala Arg Val Val Gly Gln Gln Gly Arg Gly Arg Ala Gly Ile Glu 
                      260                 265                 270         
          Ala Ser Leu Asp Val Gln Tyr Leu Met Ser Ala Gly Ala Asn Ile Ser 
                  275                 280                 285             
          Thr Trp Val Tyr Ser Ser Pro Gly Arg His Glu Gly Gln Glu Pro Phe 
              290                 295                 300                 
          Leu Gln Trp Leu Met Leu Leu Ser Asn Glu Ser Ala Leu Pro His Val 
          305                 310                 315                 320 
          His Thr Val Ser Tyr Gly Asp Asp Glu Asp Ser Leu Ser Ser Ala Tyr 
                          325                 330                 335     
          Ile Gln Arg Val Asn Thr Glu Leu Met Lys Ala Ala Ala Arg Gly Leu 
                      340                 345                 350         
          Thr Leu Leu Phe Ala Ser Gly Asp Ser Gly Ala Gly Cys Trp Ser Val 
                  355                 360                 365             
          Ser Gly Arg His Gln Phe Arg Pro Thr Phe Pro Ala Ser Ser Pro Tyr 
              370                 375                 380                 
          Val Thr Thr Val Gly Gly Thr Ser Phe Gln Glu Pro Phe Leu Ile Thr 
          385                 390                 395                 400 
          Asn Glu Ile Val Asp Tyr Ile Ser Gly Gly Gly Phe Ser Asn Val Phe 
                          405                 410                 415     
          Pro Arg Pro Ser Tyr Gln Glu Glu Ala Val Thr Lys Phe Leu Ser Ser 
                      420                 425                 430         
          Ser Pro His Leu Pro Pro Ser Ser Tyr Phe Asn Ala Ser Gly Arg Ala 
                  435                 440                 445             
          Tyr Pro Asp Val Ala Ala Leu Ser Asp Gly Tyr Trp Val Val Ser Asn 
              450                 455                 460                 
          Arg Val Pro Ile Pro Trp Val Ser Gly Thr Ser Ala Ser Thr Pro Val 
          465                 470                 475                 480 
          Phe Gly Gly Ile Leu Ser Leu Ile Asn Glu His Arg Ile Leu Ser Gly 
                          485                 490                 495     
          Arg Pro Pro Leu Gly Phe Leu Asn Pro Arg Leu Tyr Gln Gln His Gly 
                      500                 505                 510         
          Ala Gly Leu Phe Asp Val Thr Arg Gly Cys His Glu Ser Cys Leu Asp 
                  515                 520                 525             
          Glu Glu Val Glu Gly Gln Gly Phe Cys Ser Gly Pro Gly Trp Asp Pro 
              530                 535                 540                 
          Val Thr Gly Trp Gly Thr Pro Asn Phe Pro Ala Leu Leu Lys Thr Leu 
          545                 550                 555                 560 
          Leu Asn Pro 
          <![CDATA[<210>  55]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  突變介白素-2信號肽]]>
          <![CDATA[<400>  55]]>
          Met Tyr Arg Met Gln Leu Leu Leu Leu Ile Ala Leu Ser Leu Ala Leu 
          1               5                   10                  15      
          Val Thr Asn Ser 
                      20
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Claims (94)

  1. 一種適合投與至人類個體眼睛之脈絡膜上腔(SCS)之醫藥組合物，其中該醫藥組合物包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之重組腺相關病毒(AAV)載體，且其中在脈絡膜上投與之前該醫藥組合物包含至多約200 mM之離子強度。
  2. 一種適合投與至人類個體眼睛之脈絡膜上腔(SCS)之醫藥組合物，其中該醫藥組合物包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之重組腺相關病毒(AAV)載體，且其中在脈絡膜上投與之前該醫藥組合物包含至少約3%之聚集重組AAV。
  3. 一種適合投與至人類個體眼睛之脈絡膜上腔(SCS)之醫藥組合物，其中該醫藥組合物包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之重組腺相關病毒(AAV)載體，其中該轉殖基因為抗人類血管內皮生長因子(抗VEGF)抗體，且其中在脈絡膜上投與之前該醫藥組合物包含至多約200 mM之離子強度。
  4. 一種適合投與至人類個體眼睛之脈絡膜上腔(SCS)之醫藥組合物，其中該醫藥組合物包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之重組腺相關病毒(AAV)載體，其中該轉殖基因為抗人類血管內皮生長因子(抗VEGF)抗體，且其中在脈絡膜上投與之前該醫藥組合物包含至少約3%之聚集重組AAV。
  5. 如請求項1至4中任一項之醫藥組合物，其中在脈絡膜上投與該醫藥組合物後之清除時間等於或大於在脈絡膜上投與參考醫藥組合物後之清除時間，其中該參考醫藥組合物包括包含編碼該轉殖基因之該表現卡匣之該重組AAV，其中當將該醫藥組合物或該參考醫藥組合物投與至脈絡膜上腔時，重組AAV基因體複本之量相同，且其中該醫藥組合物與該參考醫藥組合物相比具有更低之離子強度及/或更高水準之聚集重組AAV。
  6. 如請求項1至4中任一項之醫藥組合物，其中在脈絡膜上投與該醫藥組合物後之圓周擴散比在脈絡膜上投與參考醫藥組合物後之圓周擴散小，其中該參考醫藥組合物包括包含編碼該轉殖基因之該表現卡匣之該重組AAV，其中當將該醫藥組合物或該參考醫藥組合物投與至脈絡膜上腔時，重組AAV基因體複本之量相同，且其中該醫藥組合物與該參考醫藥組合物相比具有更低之離子強度及/或更高水準之聚集重組AAV。
  7. 如請求項1至4中任一項之醫藥組合物，其中在脈絡膜上投與該醫藥組合物後在注射部位之厚度等於或高於在脈絡膜上投與參考醫藥組合物後在注射部位之厚度，其中該參考醫藥組合物包括包含編碼該轉殖基因之該表現卡匣之該重組AAV，其中當將該醫藥組合物或該參考醫藥組合物投與至脈絡膜上腔時，重組AAV基因體複本之量相同，且其中該醫藥組合物與該參考醫藥組合物相比具有更低之離子強度及/或更高水準之聚集重組AAV。
  8. 如請求項1至4中任一項之醫藥組合物，其中與在脈絡膜上投與參考醫藥組合物後在該眼睛中偵測到該轉殖基因之表現水準的時段相比，在脈絡膜上投與該醫藥組合物後更長時段在該眼睛中偵測到該轉殖基因之表現水準，其中該參考醫藥組合物包括包含編碼該轉殖基因之該表現卡匣之該重組AAV，其中當將該醫藥組合物或該參考醫藥組合物投與至脈絡膜上腔時，重組AAV基因體複本之量相同，且其中該醫藥組合物與該參考醫藥組合物相比具有更低之離子強度及/或更高水準之聚集重組AAV。
  9. 如請求項1至4中任一項之醫藥組合物，其中在脈絡膜上投與該醫藥組合物後該眼睛中該轉殖基因之濃度等於或高於在脈絡膜上投與參考醫藥組合物後該眼睛中該轉殖基因之濃度，其中該參考醫藥組合物包括包含編碼該轉殖基因之該表現卡匣之該重組AAV，其中當將該醫藥組合物或該參考醫藥組合物投與至脈絡膜上腔時，重組AAV基因體複本之量相同，且其中該醫藥組合物與該參考醫藥組合物相比具有更低之離子強度及/或更高水準之聚集重組AAV。
  10. 如請求項1至4中任一項之醫藥組合物，其中在脈絡膜上投與後在注射部位之轉導率等於或高於在脈絡膜上投與參考醫藥組合物後在注射部位之轉導率，其中該參考醫藥組合物包括包含編碼該轉殖基因之該表現卡匣之該重組AAV，其中當將該醫藥組合物或該參考醫藥組合物投與至脈絡膜上腔時，重組AAV基因體複本之量相同，且其中該醫藥組合物與該參考醫藥組合物相比具有更低之離子強度及/或更高水準之聚集重組AAV。
  11. 如請求項3至4中任一項之醫藥組合物，其中在脈絡膜上投與該醫藥組合物後VEGF誘發之血管舒張及/或血管滲漏之水準等於在脈絡膜上投與參考醫藥組合物後VEGF誘發之血管舒張及/或血管滲漏之水準或與之相比降低，其中該參考醫藥組合物包括包含編碼該轉殖基因之該表現卡匣之該重組AAV，其中當將該醫藥組合物或該參考醫藥組合物投與至脈絡膜上腔時，重組AAV基因體複本之量相同，且其中該醫藥組合物與該參考醫藥組合物相比具有更低之離子強度及/或更高水準之聚集重組AAV。
  12. 如請求項1至11中任一項之醫藥組合物，其中該重組AAV為構築體II。
  13. 如請求項1、2、5至10及12中任一項之醫藥組合物，其中該轉殖基因為抗人類血管內皮生長因子(抗VEGF)抗體。
  14. 如請求項1至13中任一項之醫藥組合物，其中該重組AAV包含來自選自由以下組成之群的一或多種腺相關病毒血清型之組分：AAV1、AAV2、AAV2tYF、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10、AAV11、AAVrh10、AAV.rh20、AAV.rh39、AAV.Rh74、AAV.RHM4-1、AAV.hu37、AAV.Anc80、AAV.Anc80L65、rAAV.7m8、AAV.PHP.B、AAV.PHP.eB、AAV2.5、AAV2tYF、AAV3B、AAV.LK03、AAV.HSC1、AAV.HSC2、AAV.HSC3、AAV.HSC4、AAV.HSC5、AAV.HSC6、AAV.HSC7、AAV.HSC8、AAV.HSC9、AAV.HSC10、AAV.HSC11、AAV.HSC12、AAV.HSC13、AAV.HSC14、AAV.HSC15及AAV.HSC16。
  15. 如請求項1至14中任一項之醫藥組合物，其中該重組AAV為AAV8。
  16. 如請求項1、2、5至10及12至14中任一項之醫藥組合物，其中該重組AAV為AAV9。
  17. 如請求項1至16中任一項之醫藥組合物，其中該醫藥組合物具有約或至多約5 mM、10 mM、15 mM、20 mM、25 mM、30 mM、35 mM、40 mM、45 mM、50 mM、55 mM、60 mM、65 mM、70 mM、75 mM、80 mM、85 mM、90 mM、95 mM、100 mM、105 mM、110 mM、115 mM、120 mM、125 mM、130 mM、135 mM、140 mM、145 mM、150 mM、155 mM、160 mM、165 mM、170 mM、175 mM、180 mM、185 mM、190 mM、195 mM、200 mM之離子強度。
  18. 如請求項1至17中任一項之醫藥組合物，其中該醫藥組合物包含至少約或約3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、11%、12%、13%、14%、15%、16%、17%、18%、19%、20%、21%、22%、23%、24%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%或95%聚集重組AAV。
  19. 如請求項1至18中任一項之醫藥組合物，其中該醫藥組合物具有約或至多約40 mM之離子強度。
  20. 如請求項1至18中任一項之醫藥組合物，其中該醫藥組合物具有約或至多約135 mM之離子強度。
  21. 如請求項1至18中任一項之醫藥組合物，其中該醫藥組合物具有約或至多約20 mM之離子強度。
  22. 如請求項1至21中任一項之醫藥組合物，其中該醫藥組合物具有約或至少約10 nm、15 nm、20 nm、25 nm、26 nm、27 nm、28 nm、29 nm、30 nm、31 nm、32 nm、33 nm、34 nm、35 nm、36 nm、37 nm、38 nm、39 nm、40 nm、45 nm、50 nm、55 nm、60 nm、65 nm、70 nm、75 nm、80 nm、85 nm、90 nm、95 nm或約或至少約100 nm之平均重組AAV直徑。
  23. 如請求項5至22中任一項之醫藥組合物，其中該醫藥組合物之平均重組AAV直徑比該參考醫藥組合物中之平均重組AAV直徑高至少2倍、高至少3倍、高至少4倍、高至少5倍、高至少6倍、高至少7倍、高至少8倍、高至少9倍、高至少10倍、高至少15倍、高至少20倍、高至少50倍、高至少100倍、高至少5%、高至少10%、高至少15%、高至少20%、高至少25%、高至少30%、高至少35%、至少40%、高至少45%、高至少50%、高至少55%、高至少60%、高至少65%、高至少70%、高至少75%、高至少80%、高至少85%、高至少90%、高至少95%、高至少100%、高至少150%或高至少200%、高至少250%或至少300%、高至少400%或高至少500%。
  24. 如請求項6及12至23中任一項之醫藥組合物，其中在脈絡膜上投與該醫藥組合物後之該圓周擴散小至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍、至少5%、至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少100%、至少150%或至少200%、至少250%或至少300%、至少400%或至少500%。
  25. 如請求項5及12至24中任一項之醫藥組合物，其中在脈絡膜上投與該醫藥組合物後之清除時間多至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍、至少5%、至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少100%、至少150%或至少200%、至少250%或至少300%、至少400%或至少500%。
  26. 如請求項1至25中任一項之醫藥組合物，其中在脈絡膜上投與該醫藥組合物後之清除時間為約30分鐘至約20小時、約2小時至約20小時、約30分鐘至約24小時、約1小時至約2小時、約30分鐘至約90天、約30分鐘至約60天、約30分鐘至約30天、約30分鐘至約21天、約30分鐘至約14天、約30分鐘至約7天、約30分鐘至約3天、約30分鐘至約2天、約30分鐘至約1天、約4小時至約90天、約4小時至約60天、約4小時至約30天、約4小時至約21天、約4小時至約14天、約4小時至約7天、約4小時至約3天、約4小時至約2天、約4小時至約1天、約4小時至約8小時、約4小時至約16小時、約4小時至約20小時、約1天至約90天、約1天至約60天、約1天至約30天、約1天至約21天、約1天至約14天、約1天至約7天、約1天至約3天、約2天至約90天、約3天至約90天、約3天至約60天、約3天至約30天、約3天至約21天、約3天至約14天或約3天至約7天。
  27. 如請求項1至26中任一項之醫藥組合物，其中在脈絡膜上投與該醫藥組合物後之清除時間不早於約30分鐘、1小時、2小時、3小時、4小時、5小時、6小時、7小時、8小時、9小時、10小時、12小時、14小時、16小時、18小時、20小時、22小時、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、23天、25天、27天、30天、35天、40天、50天、55天、60天、65天、70天、75天、80天、85天、90天、95天、100天、120天、140天、160天、180天、200天、220天、240天、260天、280天、300天、320天、340天、360天、380天或400天。
  28. 如請求項5至27中任一項之醫藥組合物，其中在脈絡膜上投與該參考醫藥組合物後之清除時間為至多約1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天或14天。
  29. 如請求項1至28中任一項之醫藥組合物，其中清除時間係自該SCS或自該眼睛之清除時間。
  30. 如請求項7及12至29中任一項之醫藥組合物，其中在脈絡膜上投與該醫藥組合物後在該注射部位之該厚度高至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍、至少5%、至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少100%、至少150%或至少200%、至少250%或至少300%、至少400%或至少500%。
  31. 如請求項1至30中任一項之醫藥組合物，其中在脈絡膜上投與該醫藥組合物後在該注射部位之該厚度為約500 μm至約3.0 mm、750 μm至約2.8 mm、約750 μm至約2.5 mm、約750 μm至約2 mm或約1 mm至約2 mm。
  32. 如請求項1至31中任一項之醫藥組合物，其中在脈絡膜上投與該醫藥組合物後在該注射部位之該厚度為至少約50 μm、100 μm、200 μm、300 μm、400 μm、500 μm、600 μm、700 μm、800 μm、900 μm、1000 μm、1 mm、1.5 mm、2 mm、2.5 mm、3 mm、3.5 mm、4 mm、4.5 mm、5 mm、5.5 mm、6 mm、6.5 mm、7 mm、7.5 mm、8 mm、8.5 mm、9 mm、9.5 mm或10 mm。
  33. 如請求項7及12至32中任一項之醫藥組合物，其中在脈絡膜上投與該參考醫藥組合物後在該注射部位之該厚度為至多約1 nm、5 nm、10 nm、25 nm、50 nm、100 nm、200 nm、300 nm、400 nm、500 nm、600 nm、700 nm、800 nm、900 nm、1 μm、5 μm、10 μm、15 μm、20 μm、25 μm、30 μm、35 μm、40 μm、50 μm、100 μm、200 μm、300 μm、400 μm、500 μm、600 μm、700 μm、800 μm、900 μm或1000 μm。
  34. 如請求項1至33中任一項之醫藥組合物，其中在脈絡膜上投與該醫藥組合物後在該注射部位之該厚度持續至少兩小時、至少三小時、至少四小時、至少五小時、至少六小時、至少七小時、至少八小時、至少十小時、至少十二小時、至少十八小時、至少二十四小時、至少兩天、至少三天、至少五天、至少十天、至少二十一天、至少一個月、至少六週、至少兩個月、至少三個月、至少4個月、至少5個月、至少6個月、至少9個月、至少一年、至少三年或至少五年。
  35. 如請求項9及12至34中任一項之醫藥組合物，其中在脈絡膜上投與該醫藥組合物後該眼睛中該轉殖基因之濃度高至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍、至少5%、至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少100%、至少150%或至少200%、至少250%或至少300%、至少400%或至少500%。
  36. 如請求項8及12至35中任一項之醫藥組合物，其中在脈絡膜上投與該醫藥組合物後的該更長時段長至少30分鐘、1小時、2小時、3小時、4小時、5小時、6小時、7小時、8小時、9小時、10小時、12小時、14小時、16小時、18小時、20小時、22小時、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、23天、25天、27天、30天、35天、40天、50天、55天、60天、65天、70天、75天、80天、85天、90天、95天、100天、120天、140天、160天、180天、200天、220天、240天、260天、280天、300天、320天、340天、360天、380天或400天。
  37. 如請求項1至36中任一項之醫藥組合物，其中在脈絡膜上投與該醫藥組合物後在該眼睛中偵測到該轉殖基因達至少約30分鐘、1小時、2小時、3小時、4小時、5小時、6小時、7小時、8小時、9小時、10小時、12小時、14小時、16小時、18小時、20小時、22小時、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、23天、25天、27天、30天、35天、40天、50天、55天、60天、65天、70天、75天、80天、85天、90天、95天、100天、120天、140天、160天、180天、200天、220天、240天、260天、280天、300天、320天、340天、360天、380天或400天。
  38. 如請求項5至37中任一項之醫藥組合物，其中在脈絡膜上投與該參考醫藥組合物後在該眼睛中偵測到該轉殖基因達至多約30分鐘、1小時、2小時、3小時、4小時、5小時、6小時、7小時、8小時、9小時、10小時、12小時、14小時、16小時、18小時、20小時、22小時、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、23天、25天、27天、30天、35天、40天、50天、55天、60天、65天、70天、75天、80天、85天、90天、95天或100天、120天、140天、160天、180天、200天、220天、240天、260天、280天、300天、320天、340天、360天、380天或400天後。
  39. 如請求項13之醫藥組合物，其中在脈絡膜上投與該醫藥組合物後VEGF誘發之血管舒張及/或血管滲漏之水準等於在脈絡膜上投與該參考醫藥組合物後VEGF誘發之血管舒張及/或血管滲漏之水準或與之相比降低。
  40. 如請求項11及13至39中任一項之醫藥組合物，其中在脈絡膜上投與該醫藥組合物後VEGF誘發之血管舒張及/或血管滲漏之該水準降低至少約2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍、至少5%、至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少100%、至少150%或至少200%、至少250%或至少300%、至少400%或至少500%。
  41. 如請求項10及12至40中任一項之醫藥組合物，其中在脈絡膜上投與該醫藥組合物後在該注射部位之轉導率高至少約2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍、至少5%、至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少100%、至少150%或至少200%、至少250%或至少300%、至少400%或至少500%。
  42. 如請求項1至41中任一項之醫藥組合物，其中該醫藥組合物中之重組AAV穩定性係該參考醫藥組合物中之重組AAV穩定性的至少約50%。
  43. 如請求項42之醫藥組合物，其中重組AAV穩定性係藉由該重組AAV之感染力確定。
  44. 如請求項42之醫藥組合物，其中重組AAV穩定性係藉由該重組AAV釋放之游離DNA之水準確定。
  45. 如請求項44之醫藥組合物，其中與該參考醫藥組合物中之游離DNA之水準相比，該醫藥組合物包含多至少約50%、多約25%、多約15%、多約10%、多約5%、多約4%、多約3%、多約2%、多約1%、多約0%、少約1%、少約2%、少約5%、少約7%、少約10%、多約2倍、多約3倍、少約2倍、少約3倍之游離DNA。
  46. 如請求項43之醫藥組合物，其中該醫藥組合物中之該重組AAV之感染力比該參考醫藥組合物中之該重組AAV之該感染力低約50%，約相同，或高至少約2%、5%、7%、10%、12%、15%、17%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、100%、2倍、3倍、5倍、10倍、100倍或1000倍。
  47. 如請求項1至46中任一項之醫藥組合物，其中該轉殖基因係適合治療所關注之疾病，或以其他方式改善所關注之疾病、預防所關注之疾病或減緩所關注之疾病之進展的轉殖基因。
  48. 如請求項1至47中任一項之醫藥組合物，其中該人類個體經診斷患有nAMD (濕性AMD)、乾性AMD、視網膜靜脈阻塞(RVO)、糖尿病性黃斑水腫(DME)或糖尿病性視網膜病變(DR)或巴登氏病(Batten disease)。
  49. 如請求項1至47中任一項之醫藥組合物，其中該人類個體經診斷患有IVA型黏多醣病(MPS IVA)、I型黏多醣病(MPS I)、II型黏多醣病(MPS II)、家族性高膽固醇血症(FH)、同合子型家族性高膽固醇血症(HoFH)、冠狀動脈疾病、腦血管疾病、杜顯氏肌肉失養症(Duchenne muscular dystrophy)、肢帶肌肉失養症、貝克爾肌肉失養症(Becker muscular dystrophy)及散發性包涵體肌炎或激肽釋放素相關疾病。
  50. 如請求項1至2、5至10及12至49中任一項之醫藥組合物，其中該AAV編碼棕櫚醯-蛋白硫酯酶1 (PPT1)或三肽基-肽酶1 (TPP1)。
  51. 如請求項5至50中任一項之醫藥組合物，其中該等重組AAV基因體複本之量係基於載體基因體濃度。
  52. 如請求項5至50中任一項之醫藥組合物，其中該等重組AAV基因體複本之量係基於每次投與之基因體複本。
  53. 如請求項5至50中任一項之醫藥組合物，其中該等重組AAV基因體複本之量係基於向該人類個體投與之總基因體複本。
  54. 如請求項52之醫藥組合物，其中每次投與之該等基因體複本係每次脈絡膜上投與之該重組AAV之基因體複本。
  55. 如請求項53之醫藥組合物，其中所投與之該等總基因體複本係經脈絡膜上投與之該重組AAV之總基因體複本。
  56. 如請求項51之醫藥組合物，其中該載體基因體濃度(VGC)為約3×10 9GC/mL、約1×10 10GC/mL、約1.2×10 10GC/mL、約1.6×10 10GC/mL、約4×10 10GC/mL、約6×10 10GC/mL、約2×10 11GC/mL、約2.4×10 11GC/mL、約2.5×10 11GC/mL、約3×10 11GC/mL、約6.2×10 11GC/mL、約1×10 12GC/mL、約2.5×10 12GC/mL、約3×10 12GC/mL、約5×10 12GC/mL、約1.5×10 13GC/mL、約2×10 13GC/mL或約3×10 13GC/mL。
  57. 如請求項53及55中任一項之醫藥組合物，其中所投與之基因體複本之總數為約6.0×10 10個基因體複本、約1.6×10 11個基因體複本、約2.5×10 11個基因體複本、約5.0×10 11個基因體複本、約3×10 12個基因體複本、約1.0×10 12個基因體複本、約1.5×10 12個基因體複本、約2.5×10 12個基因體複本或約3.0×10 13個基因體複本。
  58. 如請求項52及54中任一項之醫藥組合物，其中每次投與之基因體複本之總數為約6.0×10 10個基因體複本、約1.6×10 11個基因體複本、約2.5×10 11個基因體複本、約5.0×10 11個基因體複本、約3×10 12個基因體複本、約1.0×10 12個基因體複本、約1.5×10 12個基因體複本、約2.5×10 12個基因體複本或約3.0×10 13個基因體複本。
  59. 如請求項1至58中任一項之醫藥組合物，其中該醫藥組合物經投與一次、兩次、三次、四次、五次、六次、七次、八次、九次、十次、十五次、二十次、二十五次或三十次。
  60. 如請求項5至59中任一項之醫藥組合物，其中該參考醫藥組合物經投與一次、兩次、三次、四次、五次、六次、七次、八次、九次、十次、十五次、二十次、二十五次或三十次。
  61. 如請求項1至60中任一項之醫藥組合物，其中一天一次、一天兩次、一天三次、一天四次、一天五次、一天六次或一天七次投與該醫藥組合物。
  62. 如請求項5至60中任一項之醫藥組合物，其中一天一次、一天兩次、一天三次、一天四次、一天五次、一天六次或一天七次投與該參考醫藥組合物。
  63. 如請求項1至62中任一項之醫藥組合物，其中該參考醫藥組合物包含DPBS及蔗糖。
  64. 一種製備醫藥組合物之方法，其包括： (i) 製備包含磷酸鹽緩衝鹽水、蔗糖及包含編碼轉殖基因之表現卡匣之重組腺相關病毒(AAV)載體的組合物；及 (ii) 將包含磷酸鹽緩衝鹽水及蔗糖之溶液混合至該組合物， 其中該醫藥組合物與該組合物相比具有較低之離子強度及/或較高水準之聚集重組AAV。
  65. 一種製備醫藥組合物之方法，其包括將包含磷酸鹽緩衝鹽水及蔗糖之溶液混合至組合物，其中該組合物包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之重組腺相關病毒(AAV)載體，且其中該醫藥組合物與該組合物相比具有較低之離子強度及/或較高水準之聚集重組AAV。
  66. 一種套組，其包含：  (i) 包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之重組腺相關病毒(AAV)載體的組合物；及 (ii) 包含磷酸鹽緩衝鹽水及蔗糖之溶液。
  67. 如請求項66之套組，其中該套組進一步包含關於該組合物與該溶液混合之說明書。
  68. 如請求項65之方法或如請求項66之套組，其中該組合物包含磷酸鹽緩衝鹽水及蔗糖。
  69. 如請求項64及68中任一項之方法，或如請求項66及68中任一項之套組，其中該組合物包含4%蔗糖。
  70. 如請求項64、65、68及69中任一項之方法，或如請求項66至69中任一項之套組，其中該溶液包含10%蔗糖。
  71. 如請求項64、65及68至70中任一項之方法，或如請求項1至63中任一項之醫藥組合物，其中該醫藥組合物具有約或至多約135 mM之離子強度。
  72. 如請求項64、65及68至71中任一項之方法，或如請求項1至63中任一項之醫藥組合物，其中該醫藥組合物具有約或至多約40 mM之離子強度。
  73. 如請求項64、65及68至72中任一項之方法，或如請求項1至63中任一項之醫藥組合物，其中該醫藥組合物具有約或至多約20 mM之離子強度。
  74. 如請求項64、65及68至73中任一項之方法，或如請求項1至63中任一項之醫藥組合物，其中該醫藥組合物具有與該組合物實質上相同之滲壓性或滲透壓。
  75. 如請求項64、65及68至74中任一項之方法，或如請求項1至63中任一項之醫藥組合物，其中在該醫藥組合物投與至人類個體眼睛之脈絡膜上腔後該醫藥組合物中之該聚集重組AAV中的至少一些崩解。
  76. 如請求項64、65及68至75中任一項之方法，或如請求項1至63中任一項之醫藥組合物，其中在脈絡膜上投與該醫藥組合物後該重組AAV之聚集倒轉成未聚集之AAV或單體。
  77. 如請求項64、65及68至76中任一項之方法，或如請求項66至69中任一項之套組，其中該組合物包含氯化鉀、磷酸二氫鉀、氯化鈉、無水磷酸氫二鈉、蔗糖及視情況選用之界面活性劑。
  78. 如請求項64、65及68至77中任一項之方法，或如請求項66至69及77中任一項之套組，其中該組合物包含經改良之杜貝爾寇磷酸鹽緩衝鹽水溶液(modified Dulbecco’s phosphate-buffered saline solution)及視情況選用之界面活性劑。
  79. 如請求項64、65及68至78中任一項之方法，或如請求項66至69及77至78中任一項之套組，其中該組合物包含0.2 mg/mL氯化鉀、0.2 mg/mL磷酸二氫鉀、5.84 mg/mL氯化鈉、1.15 mg/mL無水磷酸氫二鈉、40.0 mg/mL (4% w/v)蔗糖及界面活性劑。
  80. 如請求項64、65及68至79中任一項之方法，或如請求項66至69及77至79中任一項之套組，其中該溶液包含磷酸鹽緩衝之氯化鈉及蔗糖。
  81. 如請求項67之套組，其中該等說明書包含關於該溶液與該組合物混合以獲得醫藥組合物之說明書。
  82. 如請求項64、65及68至80中任一項之方法，或如請求項81之套組，其中該將該溶液與該組合物混合使該組合物稀釋約或至少約2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍或10倍。
  83. 如請求項64、65、68至80及82中任一項之方法，或如請求項81至82中任一項之套組，其中該將該溶液與該組合物混合在該醫藥組合物投與至人類個體眼睛之脈絡膜上腔的同一天進行。
  84. 如請求項64、65、68至80及82至83中任一項之方法，或如請求項81至83中任一項之套組，其中該將該溶液與該組合物混合在該醫藥組合物投與至人類個體眼睛之脈絡膜上腔的24小時內進行。
  85. 如請求項64、65、68至80及82至84中任一項之方法，或如請求項81至84中任一項之套組，或如請求項1至63及71至76中任一項之醫藥組合物，其中該醫藥組合物在投與至人類個體之前儲存。
  86. 如請求項64、65、68至80及82至85中任一項之方法，或如請求項81至85中任一項之套組，或如請求項1至63、71至76及85中任一項之醫藥組合物，其中該醫藥組合物儲存在約室溫、20℃、4℃或-80℃下。
  87. 如請求項64、65、68至80及82至86中任一項之方法，或如請求項81至86中任一項之套組，或如請求項1至63、71至76及85至86中任一項之醫藥組合物，其中該醫藥組合物包含約1.0 × 10 12至約3.0 × 10 12基因體複本之該重組AAV。
  88. 如請求項64、65、68至80及82至87中任一項之方法，或如請求項81至87中任一項之套組，其中該重組AAV包含來自選自以下之一或多種腺相關病毒血清型之組分：AAV1、AAV2、AAV2tYF、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10、AAV11、AAVrh10、AAV.rh20、AAV.rh39、AAV.Rh74、AAV.RHM4-1、AAV.hu37、AAV.Anc80、AAV.Anc80L65、rAAV.7m8、AAV.PHP.B、AAV.PHP.eB、AAV2.5、AAV2tYF、AAV3B、AAV.LK03、AAV.HSC1、AAV.HSC2、AAV.HSC3、AAV.HSC4、AAV.HSC5、AAV.HSC6、AAV.HSC7、AAV.HSC8、AAV.HSC9、AAV.HSC10、AAV.HSC11、AAV.HSC12、AAV.HSC13、AAV.HSC14、AAV.HSC15及AAV.HSC16。
  89. 如請求項64、65、68至80及82至88中任一項之方法，或如請求項81至88中任一項之套組，或如請求項1至63、71至76及85至87中任一項之醫藥組合物，其中該重組AAV包含來自AAV8之組分且該醫藥組合物具有介於約30 mM至約60 mM之間的離子強度。
  90. 如請求項64、65、68至80及82至88中任一項之方法，或如請求項81至88中任一項之套組，或如請求項1至63、71至76及85至87中任一項之醫藥組合物，其中該重組AAV包含來自AAV9之組分且該醫藥組合物具有介於約15 mM至約30 mM之間的離子強度。
  91. 如請求項64、65、68至80及82至88中任一項之方法，或如請求項81至88中任一項之套組，或如請求項1至63、71至76及85至87中任一項之醫藥組合物，其中該重組AAV包含來自AAV2之組分且該醫藥組合物具有介於約100 mM至約200 mM之間的離子強度。
  92. 如請求項1至63、71-76及85至91中任一項之醫藥組合物，其中該醫藥組合物包含經改良之杜貝爾寇磷酸鹽緩衝鹽水溶液及視情況選用之界面活性劑。
  93. 如請求項1至63、71-76及85至92中任一項之醫藥組合物，其中該醫藥組合物包含氯化鉀、磷酸二氫鉀、氯化鈉、無水磷酸氫二鈉、蔗糖及視情況選用之界面活性劑。
  94. 如請求項1至63、71至76及85至93中任一項之醫藥組合物，其中該醫藥組合物包含0.2 mg/mL氯化鉀、0.2 mg/mL磷酸二氫鉀、5.84 mg/mL氯化鈉、1.15 mg/mL無水磷酸氫二鈉、40.0 mg/mL (4% w/v)蔗糖及視情況用之界面活性劑。
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