TW202228648A - 諸如高黏度調配物之用於脈絡膜上投與之調配物 - Google Patents
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Abstract
本文提供用於投與至個體眼睛之脈絡膜上腔的醫藥組合物。該等醫藥組合物可包括編碼轉殖基因之重組腺相關病毒(AAV)。本文亦提供藉由向有需要之個體投與治療有效量之該等醫藥組合物來治療或預防該個體之疾病的方法。
Description
人眼係一個高度複雜且高度發達之感覺器官,容易發生許多疾病及病症。世界上約2.85億人有視覺障礙,其中3900萬人視盲且2.46億人患有中度至重度視覺障礙(World Health Organization, 2012, 「Global Data On Visual Impairments 2010」, Geneva : World Health Organization)。導致視盲之一些主要原因為白內障(47%)、青光眼(12%)、年齡相關性黃斑變性(AMD) (9%)及糖尿病性視網膜病變(5%) (World Health Organization, 2007, 「Global Initiative For The Elimination Of Avoidable Blindness: Action Plan 2006-2011」, Geneva: World Health Organization)。
已採用基因療法來治療某些眼部疾病(參見例如國際專利申請案第PCT/US2017/027650號(國際公開案第WO 2017/181021 A1號))。腺相關病毒(AAV)係一種有吸引力的用於基因療法之工具,因為其具有如下特性:非致病性、廣泛的宿主及細胞類型向性感染範圍(包括分裂細胞與非分裂細胞二者)以及建立長期轉殖基因表現之能力(例如Gonçalves, 2005, Virology Journal, 2:43)。
當前用於眼部基因療法之方法(例如藉由玻璃體內或視網膜下投與)係侵入性的,且會遭遇嚴重挫折,諸如白內障、視網膜剝離及感光受體與中央凹視網膜色素上皮(RPE)分離之風險增加。對改善或消除當前眼部基因療法之挫折的療法存在顯著未滿足之醫療需求。
腺相關病毒(AAV)係稱為依賴病毒(
Dependovirus)之細小病毒科(
Parvoviridae)成員,為一種小型無套膜之二十面體病毒,具有約4.7千鹼基(kb)至6 kb之單股線性DNA基因體。非致病性、廣泛的宿主及細胞類型向性感染範圍(包括分裂細胞與非分裂細胞二者)以及建立長期轉殖基因表現之能力的特性使AAV成為一種有吸引力的用於基因療法之工具(例如Gonçalves, 2005, Virology Journal, 2:43)。
正在研究構築體II作為一種藉由注射至脈絡膜上腔中來遞送的治療。脈絡膜上腔(SCS)係介於鞏膜與脈絡膜之間的一個區域,在注射藥物溶液時會擴大(Habot-Wilner, 2019)。當注射之溶液藉由生理過程清除時,SCS空間恢復至其注射前之尺寸。藥物溶液在SCS內擴散且吸收至鄰近組織中。脈絡膜中之毛細血管可滲透低分子量滲透物。本揭示案解決提供如下醫藥組合物之未滿足需求,該醫藥組合物使得在脈絡膜上腔中之滯留時間更長,從而提高功效。
在一態樣中,本文提供一種適合投與至人類個體眼睛之脈絡膜上腔(SCS)之醫藥組合物,其中該醫藥組合物包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之重組腺相關病毒(AAV)載體,且其中在至多約1 s
-1之剪切速率下所量測,該醫藥組合物具有約25 cP至約3×10
6cP之間的黏度。
在一態樣中,本文提供一種適合投與至人類個體眼睛之脈絡膜上腔(SCS)之醫藥組合物,其中該醫藥組合物包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之重組腺相關病毒(AAV)載體,其中該轉殖基因為抗人類血管內皮生長因子(抗VEGF)抗體,且其中在至多約1 s
-1之剪切速率下所量測,該醫藥組合物具有約25 cP至約3×10
6cP之間的黏度。
在一些實施例中,在脈絡膜上投與後之清除時間等於或大於參考醫藥組合物在脈絡膜上投與後之清除時間,其中該參考醫藥組合物包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之重組AAV,其中當將醫藥組合物或參考醫藥組合物投與至脈絡膜上腔時,重組AAV基因體複本之量相同,且其中如在至多約1 s
-1之剪切速率下所量測,參考醫藥組合物具有至多約24 cP之黏度。在一些實施例中,在脈絡膜上投與後之圓周擴散比參考醫藥組合物在脈絡膜上投與後之圓周擴散小,其中該參考醫藥組合物包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之重組AAV,其中當將醫藥組合物或參考醫藥組合物投與至脈絡膜上腔時,重組AAV基因體複本之量相同,且其中如在至多約1 s
-1之剪切速率下所量測,參考醫藥組合物具有至多約24 cP之黏度。在一些實施例中,在脈絡膜上投與後在注射部位之厚度等於或高於在脈絡膜上投與參考醫藥組合物後在注射部位之厚度,其中該參考醫藥組合物包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之重組AAV,其中當將醫藥組合物或參考醫藥組合物投與至脈絡膜上腔時,重組AAV基因體複本之量相同,且其中如在至多約1 s
-1之剪切速率下所量測,參考醫藥組合物具有至多約24 cP之黏度。在一些實施例中,與在脈絡膜上投與參考醫藥組合物後在眼睛中偵測到表現水準之轉殖基因的時段相比在脈絡膜上投與後更長時段在眼睛中偵測到表現水準之轉殖基因,其中該參考醫藥組合物包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之重組AAV,其中當將醫藥組合物或參考醫藥組合物投與至脈絡膜上腔時,重組AAV基因體複本之量相同,且其中如在至多約1 s
-1之剪切速率下所量測,參考醫藥組合物具有至多約24 cP之黏度。在一些實施例中,在脈絡膜上投與後眼睛中轉殖基因之濃度等於或高於在脈絡膜上投與參考醫藥組合物後眼睛中轉殖基因之濃度,其中該參考醫藥組合物包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之重組AAV,其中當將醫藥組合物或參考醫藥組合物投與至脈絡膜上腔時,重組AAV基因體複本之量相同,且其中如在至多約1 s
-1之剪切速率下所量測,參考醫藥組合物具有至多約24 cP之黏度。在一些實施例中,在脈絡膜上投與後在注射部位之轉導率等於或高於在脈絡膜上投與參考醫藥組合物後在注射部位之轉導率,其中該參考醫藥組合物包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之重組AAV,其中當將醫藥組合物或參考醫藥組合物投與至脈絡膜上腔時,重組AAV基因體複本之量相同,且其中如在至多約1 s
-1之剪切速率下所量測,參考醫藥組合物具有至多約24 cP之黏度。
在一些實施例中,在脈絡膜上投與後VEGF誘發之血管舒張及/或血管滲漏之水準等於在脈絡膜上投與參考醫藥組合物後VEGF誘發之血管舒張及/或血管滲漏之水準或與之相比降低,其中該參考醫藥組合物包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之重組AAV,其中當將醫藥組合物或參考醫藥組合物投與至脈絡膜上腔時,重組AAV基因體複本之量相同,且其中如在至多約1 s
-1之剪切速率下所量測,該參考醫藥組合物具有至多約24 cP之黏度。
在一些實施例中,重組AAV為構築體II。在一些實施例中,轉殖基因為抗人類血管內皮生長因子(抗VEGF)抗體。在一些實施例中,重組AAV包含來自選自由以下組成之群的一或多種腺相關病毒血清型之組分:AAV1、AAV2、AAV2tYF、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10、AAV11、AAVrh10、AAV.rh20、AAV.rh39、AAV.Rh74、AAV.RHM4-1、AAV.hu37、AAV.Anc80、AAV.Anc80L65、rAAV.7m8、AAV.PHP.B、AAV.PHP.eB、AAV2.5、AAV2tYF、AAV3B、AAV.LK03、AAV.HSC1、AAV.HSC2、AAV.HSC3、AAV.HSC4、AAV.HSC5、AAV.HSC6、AAV.HSC7、AAV.HSC8、AAV.HSC9、AAV.HSC10、AAV.HSC11、AAV.HSC12、AAV.HSC13、AAV.HSC14、AAV.HSC15及AAV.HSC16。在一些實施例中,重組AAV為AAV8。在一些實施例中,重組AAV為AAV9。
在一些實施例中,如在至多約1 s
-1之剪切速率下所量測,醫藥組合物具有介於約25 cP至約100,000 cP之間、介於約25 cP至約50,000 cP之間、介於約25 cP至約1×10
4cP之間、介於約25 cP至約5,000 cP之間、介於約25 cP至約1×10
3cP之間、介於約100 cP至約100,000 cP之間、介於約100 cP至約1×10
4cP之間、介於約100 cP至約5,000 cP之間、介於約100 cP至約1×10
3cP之間的黏度。在一些實施例中,如在至多約1 s
-1之剪切速率下所量測,醫藥組合物具有至少約100 cP、至少約400 cP、至少約500 cP、至少約900 cP、至少約1000 cP、至少約4000 cP或至少約1×10
6cP之黏度。在一些實施例中,如在至多約1 s
-1之剪切速率下所量測,醫藥組合物具有約4000 cP之黏度。在一些實施例中,如在至多約1 s
-1之剪切速率下所量測,醫藥組合物具有約或大於約500 cP之黏度。
在一些實施例中,醫藥組合物包含蔗糖。在一些實施例中,醫藥組合物不包含蔗糖。在一些實施例中,醫藥組合物包含以下至少一者:蔗糖、4%蔗糖、6%蔗糖、10%蔗糖、2%羧甲基纖維素鈉鹽、1%羧甲基纖維素鈉鹽、羧甲基纖維素(CMC)、0.5% CMC、1% CMC、2% CMC、4% CMC、聚乙烯醇、羥乙基纖維素、羧甲基纖維素鈉鹽及羥丙基甲基纖維素。在一些實施例中,醫藥組合物包含4%蔗糖、6%蔗糖或10%蔗糖。
在一些實施例中,在脈絡膜上投與醫藥組合物後之圓周擴散小至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍、至少5%、至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少100%、至少150%或至少200%、至少250%或至少300%、至少400%或至少500%。在一些實施例中,在脈絡膜上投與醫藥組合物後之清除時間多至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍、至少5%、至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少100%、至少150%或至少200%、至少250%或至少300%、至少400%或至少500%。在一些實施例中,在脈絡膜上投與醫藥組合物後之清除時間為約30分鐘至約20小時、約2小時至約20小時、約30分鐘至約24小時、約1小時至約2小時、約30分鐘至約90天、約30分鐘至約60天、約30分鐘至約30天、約30分鐘至約21天、約30分鐘至約14天、約30分鐘至約7天、約30分鐘至約3天、約30分鐘至約2天、約30分鐘至約1天、約4小時至約90天、約4小時至約60天、約4小時至約30天、約4小時至約21天、約4小時至約14天、約4小時至約7天、約4小時至約3天、約4小時至約2天、約4小時至約1天、約4小時至約8小時、約4小時至約16小時、約4小時至約20小時、約1天至約90天、約1天至約60天、約1天至約30天、約1天至約21天、約1天至約14天、約1天至約7天、約1天至約3天、約2天至約90天、約3天至約90天、約3天至約60天、約3天至約30天、約3天至約21天、約3天至約14天或約3天至約7天。在一些實施例中,在脈絡膜上投與醫藥組合物後之清除時間不早於約30分鐘、1小時、2小時、3小時、4小時、5小時、6小時、7小時、8小時、9小時、10小時、12小時、14小時、16小時、18小時、20小時、22小時、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、23天、25天、27天、30天、35天、40天、50天、55天、60天、65天、70天、75天、80天、85天、90天、95天、100天、120天、140天、160天、180天、200天、220天、240天、260天、280天、300天、320天、340天、360天、380天或400天。在一些實施例中,參考醫藥組合物在脈絡膜上投與後之清除時間為至多約30分鐘、1小時、2小時、3小時、4小時、5小時、6小時、7小時、8小時、9小時、10小時、12小時、14小時、16小時、18小時、20小時、22小時、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天或14天。
在一些實施例中,清除時間係自SCS或自眼睛之清除時間。在一些實施例中,在脈絡膜上投與醫藥組合物後在注射部位之厚度高至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍、至少5%、至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少100%、至少150%或至少200%、至少250%或至少300%、至少400%或至少500%。在一些實施例中,在脈絡膜上投與醫藥組合物後在注射部位之厚度為約500 μm至約3.0 mm、750 μm至約2.8 mm、約750 μm至約2.5 mm、約750 μm至約2 mm或約1 mm至約2 mm。在一些實施例中,在脈絡膜上投與醫藥組合物後在注射部位之厚度為至少約50 μm、100 μm、200 μm、300 μm、400 μm、500 μm、600 μm、700 μm、800 μm、900 μm、1000 μm、1 mm、1.5 mm、2 mm、2.5 mm、3 mm、3.5 mm、4 mm、4.5 mm、5 mm、5.5 mm、6 mm、6.5 mm、7 mm、7.5 mm、8 mm、8.5 mm、9 mm、9.5 mm或10 mm。
在一些實施例中,在脈絡膜上投與參考醫藥組合物後在注射部位之厚度為至多約1 nm、5 nm、10 nm、25 nm、50 nm、100 nm、200 nm、300 nm、400 nm、500 nm、600 nm、700 nm、800 nm、900 nm、1 μm、5 μm、10 μm、15 μm、20 μm、25 μm、30 μm、35 μm、40 μm、50 μm、100 μm、200 μm、300 μm、400 μm、500 μm、600 μm、700 μm、800 μm、900 μm或1000 μm。
在一些實施例中,在脈絡膜上投與醫藥組合物後在注射部位之厚度持續至少兩小時、至少三小時、至少四小時、至少五小時、至少六小時、至少七小時、至少八小時、至少十小時、至少十二小時、至少十八小時、至少二十四小時、至少兩天、至少三天、至少五天、至少十天、至少二十一天、至少一個月、至少六週、至少兩個月、至少三個月、至少4個月、至少5個月、至少6個月、至少9個月、至少一年、至少三年或至少五年。
在一些實施例中,在脈絡膜上投與醫藥組合物後眼睛中轉殖基因之濃度高至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍、至少5%、至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少100%、至少150%或至少200%、至少250%或至少300%、至少400%或至少500%。在一些實施例中,在脈絡膜上投與醫藥組合物後的更長時段長至少1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、23天、25天、27天、30天、35天、40天、50天、55天、60天、65天、70天、75天、80天、85天、90天、95天、100天、120天、140天、160天、180天、200天、220天、240天、260天、280天、300天、320天、340天、360天、380天或400天。
在一些實施例中,在脈絡膜上投與醫藥組合物後在眼睛中偵測到轉殖基因達至少約1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、23天、25天、27天、30天、35天、40天、50天、55天、60天、65天、70天、75天、80天、85天、90天、95天、100天、120天、140天、160天、180天、200天、220天、240天、260天、280天、300天、320天、340天、360天、380天或400天。在一些實施例中,在脈絡膜上投與參考醫藥組合物後在眼睛中偵測到轉殖基因達至多約1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、23天、25天、27天、30天、35天、40天、50天、55天、60天、65天、70天、75天、80天、85天、90天、95天或100天、120天、140天、160天、180天、200天、220天、240天、260天、280天、300天、320天、340天、360天、380天或400天後。
在一些實施例中,在脈絡膜上投與醫藥組合物後VEGF誘發之血管舒張及/或血管滲漏之水準等於在脈絡膜上投與參考醫藥組合物後VEGF誘發之血管舒張及/或血管滲漏之水準或與之相比降低。在一些實施例中,在脈絡膜上投與醫藥組合物後VEGF誘發之血管舒張及/或血管滲漏之水準降低至少約2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍、至少5%、至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少100%、至少150%或至少200%、至少250%或至少300%、至少400%或至少500%。在一些實施例中,在脈絡膜上投與醫藥組合物後在注射部位之轉導率高至少約2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍、至少5%、至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少100%、至少150%或至少200%、至少250%或至少300%、至少400%或至少500%。
在一些實施例中,醫藥組合物中之重組AAV穩定性係參考醫藥組合物中之重組AAV穩定性的至少約50%。在一些實施例中,重組AAV穩定性係藉由重組AAV之感染力確定。在一些實施例中,重組AAV穩定性係藉由重組AAV之聚集水準確定。在一些實施例中,重組AAV穩定性係藉由重組AAV釋放之游離DNA之水準確定。在一些實施例中,與參考醫藥組合物中之游離DNA之水準相比,醫藥組合物包含多約50%、多約25%、多約15%、多約10%、多約5%、多約4%、多約3%、多約2%、多約1%、多約0%、少約1%、少約2%、少約5%、少約7%、少約10%、多約2倍、多約3倍、少約2倍、少約3倍的游離DNA。在一些實施例中,醫藥組合物中之重組AAV的感染力比參考醫藥組合物中之重組AAV之感染力高至少2%、5%、7%、10%、12%、15%、17%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、100%、2倍、3倍、5倍、10倍、100倍或1000倍。在一些實施例中,醫藥組合物之重組AAV聚集比參考醫藥組合物中之重組AAV聚集水準少至少2%、5%、7%、10%、12%、15%、17%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、100%、2倍、3倍、5倍、10倍、100倍或1000倍。
在一些實施例中,轉殖基因係適合治療,或以其他方式改善所關注之疾病、預防所關注之疾病或減緩所關注之疾病之進展的轉殖基因。在一些實施例中,人類個體經診斷患有nAMD (濕性AMD)、乾性AMD、視網膜靜脈阻塞(RVO)、糖尿病性黃斑水腫(DME)或糖尿病性視網膜病變(DR)或巴登氏病(Batten disease)。在一些實施例中,人類個體經診斷患有IVA型黏多醣病(MPS IVA)、I型黏多醣病(MPS I)、II型黏多醣病(MPS II)、家族性高膽固醇血症(FH)、同合子型家族性高膽固醇血症(HoFH)、冠狀動脈疾病、腦血管疾病、杜顯氏肌肉失養症(Duchenne muscular dystrophy)、肢帶肌肉失養症、貝克爾肌肉失養症(Becker muscular dystrophy)及散發性包涵體肌炎或激肽釋放素相關疾病。在一些實施例中,AAV編碼棕櫚醯-蛋白硫酯酶1 (PPT1)或三肽基-肽酶1 (TPP1)。
在一些實施例中,重組AAV基因體複本之量係基於載體基因體濃度。在一些實施例中,重組AAV基因體複本之量係基於每次投與之基因體複本。在一些實施例中,重組AAV基因體複本之量係基於向人類個體投與之總基因體複本。在一些實施例中,每次投與之基因體複本係每次脈絡膜上投與之重組AAV之基因體複本。在一些實施例中,所投與之總基因體複本係經脈絡膜上投與之重組AAV之總基因體複本。在一些實施例中,載體基因體濃度(VGC)為約3×10
9GC/mL、約1×10
10GC/mL、約1.2×10
10GC/mL、約1.6×10
10GC/mL、約4×10
10GC/mL、約6×10
10GC/mL、約2×10
11GC/mL、約2.4×10
11GC/mL、約2.5×10
11GC/mL、約3×10
11GC/mL、約6.2×10
11GC/mL、約1×10
12GC/mL、約2.5×10
12GC/mL、約3×10
12GC/mL、約5×10
12GC/mL、約1.5×10
13GC/mL、約2×10
13GC/mL或約3×10
13GC/mL。在一些實施例中,所投與之總基因體複本為約6.0×10
10個基因體複本、約1.6×10
11個基因體複本、約2.5×10
11個基因體複本、約5.0×10
11個基因體複本、約1.5×10
12個基因體複本、約3×10
12個基因體複本、約1.0×10
12個基因體複本、約2.5×10
12個基因體複本或約3.0×10
13個基因體複本。在一些實施例中,每次投與之基因體複本為約6.0×10
10個基因體複本、約1.6×10
11個基因體複本、約2.5×10
11個基因體複本、約5.0×10
11個基因體複本、約1.5×10
12個基因體複本、約3×10
12個基因體複本、約1.0×10
12個基因體複本、約2.5×10
12個基因體複本或約3.0×10
13個基因體複本。
在一些實施例中,醫藥組合物經投與一次、兩次、三次、四次、五次、六次、七次、八次、九次、十次、十五次、二十次、二十五次或三十次。在一些實施例中,參考醫藥組合物經投與一次、兩次、三次、四次、五次、六次、七次、八次、九次、十次、十五次、二十次、二十五次或三十次。在一些實施例中,一天一次、一天兩次、一天三次、一天四次、一天五次、一天六次或一天七次投與醫藥組合物。在一些實施例中,一天一次、一天兩次、一天三次、一天四次、一天五次、一天六次或一天七次投與參考醫藥組合物。
在一些實施例中,參考醫藥組合物包含DPBS及蔗糖。在一些實施例中,如在至多約1 s
-1之剪切速率下所量測,參考醫藥組合物具有約1 cP之黏度。在一些實施例中,醫藥組合物包含1%高黏度級羧甲基纖維素。在一些實施例中,醫藥組合物包含0.2至15%高黏度級羧甲基纖維素(CMC)、高黏度級CMC、中等黏度級CMC、羥丙基甲基纖維素(HPMC)、HPMC、羥乙基纖維素(HES)、低黏度級CMC及/或泊洛沙姆(poloxamer) 407。在一些實施例中,醫藥組合物之黏度係在0 s
-1之剪切速率下量測。在一些實施例中,參考醫藥組合物之黏度係在0 s
-1之剪切速率下量測。在一些實施例中,醫藥組合物之黏度及參考醫藥組合物之黏度係在相同剪切速率下量測。在一些實施例中,醫藥組合物之黏度係剪切減黏的。
在一些實施例中,如在至少約1,000 s
-1之剪切速率下所量測,醫藥組合物之黏度為約、至多約或至少約0.1 cP、0.2 cP、0.3 cP、0.4 cP、0.5 cP、0.6 cP、0.7 cP、0.8 cP、0.9 cP、1 cP、2 cP、3 cP、4 cP、5 cP、10 cP、20 cP、25 cP、30 cP、35 cP、40 cP、50 cP、60 cP、70 cP、80 cP、90 cP、100 cP、150 cP、200 cP、250 cP、300 cP、350 cP、400 cP、450 cP、500 cP、550 cP、600 cP、650 cP、700 cP、750 cP、800 cP、850 cP、900 cP、950 cP、1000 cP、1500 cP、2000 cP、2500 cP、3000 cP、3500 cP、4000 cP、4500 cP、5000 cP或10000 cP。在一些實施例中,醫藥組合物之黏度係在至少約1,000 s
-1、2,000 s
-1、3,000 s
-1、4,000 s
-1、5,000 s
-1、6,000 s
-1、7,000 s
-1、8,000 s
-1、9,000 s
-1、10,000 s
-1、15,000 s
-1、20,000 s
-1或30,000 s
-1之剪切速率下量測。在一些實施例中,如在約5,000 s
-1之剪切速率下所量測,醫藥組合物之黏度為約或至多約35 cP。在一些實施例中,如在約10,000 s
-1之剪切速率下所量測,醫藥組合物之黏度為約或至多約25 cP。在一些實施例中,如在至多約1 s
-1之剪切速率下所量測,醫藥組合物之黏度為約或至少約500 cP。在一些實施例中,如在至多約1 s
-1之剪切速率下所量測,醫藥組合物之黏度為約或至少約1500 cP。在一些實施例中,如在至少約1000 s
-1之剪切速率下所量測
,醫藥組合物之黏度為約或至多約362 cP
。在一些實施例中,如在至少約1000 s
-1之剪切速率下所量測,參考醫藥組合物之黏度為約或至多約0.1 cP、0.2 cP、0.3 cP、0.4 cP、0.5 cP、0.6 cP、0.7 cP、0.8 cP、0.9 cP、1 cP、1.1 cP、1.2 cP、1.3 cP、1.4 cP、1.5 cP、1.6 cP、1.7 cP、1.8 cP、1.9 cP、2 cP、2.1 cP、2.2 cP、2.3 cP、2.4 cP、2.5 cP、2.6 cP、2.7 cP、2.8 cP、2.9 cP、3 cP、3.1 cP、3.2 cP、3.3 cP、3.4 cP、3.5 cP、3.6 cP、3.7 cP、3.8 cP、3.9 cP、4 cP、4.1 cP、4.2 cP、4.3 cP、4.4 cP、4.5 cP、4.6 cP、4.7 cP、4.8 cP、4.9 cP或5 cP
。在一些實施例中,如在至多約1 s
-1之剪切速率下所量測,參考醫藥組合物之黏度為約或至多約0.1 cP、0.2 cP、0.3 cP、0.4 cP、0.5 cP、0.6 cP、0.7 cP、0.8 cP、0.9 cP、1 cP、1.1 cP、1.2 cP、1.3 cP、1.4 cP、1.5 cP、1.6 cP、1.7 cP、1.8 cP、1.9 cP、2 cP、2.1 cP、2.2 cP、2.3 cP、2.4 cP、2.5 cP、2.6 cP、2.7 cP、2.8 cP、2.9 cP、3 cP、3.1 cP、3.2 cP、3.3 cP、3.4 cP、3.5 cP、3.6 cP、3.7 cP、3.8 cP、3.9 cP、4 cP、4.1 cP、4.2 cP、4.3 cP、4.4 cP、4.5 cP、4.6 cP、4.7 cP、4.8 cP、4.9 cP或5 cP。在一些實施例中,如在至少約1000 s
-1之剪切速率下所量測,醫藥組合物之黏度為約0.5 cP至約400 cP
。
在一些實施例中,醫藥組合物包含經改良之杜貝爾寇磷酸鹽緩衝鹽水溶液(modified Dulbecco’s phosphate-buffered saline solution),及視情況選用之界面活性劑。在一些實施例中,界面活性劑為泊洛沙姆188、聚山梨醇酯20及/或聚山梨醇酯80。在一些實施例中,醫藥組合物包含氯化鉀、磷酸二氫鉀、氯化鈉、無水磷酸氫二鈉、蔗糖及視情況選用之界面活性劑。在一些實施例中,醫藥組合物包含0.2 mg/mL氯化鉀、0.2 mg/mL磷酸二氫鉀、5.84 mg/mL氯化鈉、1.15 mg/mL無水磷酸氫二鈉、40.0 mg/mL (4% w/v)蔗糖及視情況選用之界面活性劑。在一些實施例中,醫藥組合物包含氯化鉀;磷酸二氫鉀;氯化鈉;無水磷酸氫二鈉;蔗糖;視情況選用之一或多種界面活性劑,其選自泊洛沙姆188、聚山梨醇酯20及聚山梨醇酯80;及視情況選用之一或多種黏度調節劑,其選自高黏度級CMC、中等黏度級CMC、低黏度級CMC、羥丙基甲基纖維素(HPMC)、羥乙基纖維素(HES)及泊洛沙姆407。在一些實施例中,醫藥組合物包含氯化鉀;磷酸二氫鉀;氯化鈉;無水磷酸氫二鈉;蔗糖;視情況選用之一或多種界面活性劑,其選自泊洛沙姆188、聚山梨醇酯20及聚山梨醇酯80;及視情況選用之一或多種黏度調節劑,其選自0.5%高黏度級CMC、1%高黏度級CMC、0.5%中等黏度級CMC、低黏度級CMC、0.5%羥丙基甲基纖維素(HPMC)、0.2% HPMC、2%羥乙基纖維素(HES)及15%泊洛沙姆407。在一些實施例中,醫藥組合物包含氯化鉀;磷酸二氫鉀;氯化鈉;無水磷酸氫二鈉;蔗糖;一或多種界面活性劑,其選自泊洛沙姆188、聚山梨醇酯20及聚山梨醇酯80;及一或多種多醣,其選自CMC、HPMC及HES。在一些實施例中,醫藥組合物包含0.2 mg/mL氯化鉀、0.2 mg/mL磷酸二氫鉀、5.84 mg/mL氯化鈉、1.15 mg/mL無水磷酸氫二鈉、40.0 mg/mL (4% w/v)蔗糖、0.001% (0.01 mg/mL)泊洛沙姆188及1%高黏度級羧甲基纖維素(CMC)。在一些實施例中,醫藥組合物係儲存在約室溫、20℃、4℃或-80℃下。在一些實施例中,醫藥組合物在投與至人類個體之前經儲存。
2.1 說明性實施例1. 一種適合投與至人類個體眼睛之脈絡膜上腔(SCS)之醫藥組合物,其中該醫藥組合物包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之重組腺相關病毒(AAV)載體,且其中如在至多約1 s
-1之剪切速率下所量測,該醫藥組合物具有介於約25 cP至約3×10
6cP之間的黏度。
2. 一種適合投與至人類個體眼睛之脈絡膜上腔(SCS)之醫藥組合物,其中該醫藥組合物包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之重組腺相關病毒(AAV)載體,其中該轉殖基因為抗人類血管內皮生長因子(抗VEGF)抗體,且其中如在至多約1 s
-1之剪切速率下所量測,該醫藥組合物具有介於約25 cP至約3×10
6cP之間的黏度。
3. 段落1或2之醫藥組合物,其中在脈絡膜上投與後之清除時間等於或大於參考醫藥組合物在脈絡膜上投與後之清除時間,其中該參考醫藥組合物包括包含編碼該轉殖基因之該表現卡匣之該重組AAV,其中當將該醫藥組合物或該參考醫藥組合物投與至脈絡膜上腔時,重組AAV基因體複本之量相同,且其中如在至多約1 s
-1之剪切速率下所量測,該參考醫藥組合物具有至多約24 cP之黏度。
4. 段落1或2之醫藥組合物,其中在脈絡膜上投與後之圓周擴散比參考醫藥組合物在脈絡膜上投與後之圓周擴散小,其中該參考醫藥組合物包括包含編碼該轉殖基因之該表現卡匣之該重組AAV,其中當將該醫藥組合物或該參考醫藥組合物投與至脈絡膜上腔時,重組AAV基因體複本之量相同,且其中如在至多約1 s
-1之剪切速率下所量測,該參考醫藥組合物具有至多約24 cP之黏度。
5. 段落1或2之醫藥組合物,其中在脈絡膜上投與後在注射部位之厚度等於或高於在脈絡膜上投與參考醫藥組合物後在注射部位之厚度,其中該參考醫藥組合物包括包含編碼該轉殖基因之該表現卡匣之該重組AAV,其中當將該醫藥組合物或該參考醫藥組合物投與至脈絡膜上腔時,重組AAV基因體複本之量相同,且其中如在至多約1 s
-1之剪切速率下所量測,該參考醫藥組合物具有至多約24 cP之黏度。
6. 段落1或2之醫藥組合物,其中與在脈絡膜上投與參考醫藥組合物後在該眼睛中偵測到該轉殖基因之表現水準的時段相比,在脈絡膜上投與後更長時段在該眼睛中偵測到該轉殖基因之表現水準,其中該參考醫藥組合物包括包含編碼該轉殖基因之該表現卡匣之該重組AAV,其中當將該醫藥組合物或該參考醫藥組合物投與至脈絡膜上腔時,重組AAV基因體複本之量相同,且其中如在至多約1 s
-1之剪切速率下所量測,該參考醫藥組合物具有至多約24 cP之黏度。
7. 段落1或2之醫藥組合物,其中在脈絡膜上投與後該眼睛中該轉殖基因之濃度等於或高於在脈絡膜上投與參考醫藥組合物後該眼睛中該轉殖基因之濃度,其中該參考醫藥組合物包括包含編碼該轉殖基因之該表現卡匣之該重組AAV,其中當將該醫藥組合物或該參考醫藥組合物投與至脈絡膜上腔時,重組AAV基因體複本之量相同,且其中如在至多約1 s
-1之剪切速率下所量測,該參考醫藥組合物具有至多約24 cP之黏度。
8. 段落1或2之醫藥組合物,其中在脈絡膜上投與後在注射部位之轉導率等於或高於在脈絡膜上投與參考醫藥組合物後在注射部位之轉導率,其中該參考醫藥組合物包括包含編碼該轉殖基因之該表現卡匣之該重組AAV,其中當將該醫藥組合物或該參考醫藥組合物投與至脈絡膜上腔時,重組AAV基因體複本之量相同,且其中如在至多約1 s
-1之剪切速率下所量測,該參考醫藥組合物具有至多約24 cP之黏度。
9. 段落2之醫藥組合物,其中在脈絡膜上投與後VEGF誘發之血管舒張及/或血管滲漏之水準等於在脈絡膜上投與參考醫藥組合物後VEGF誘發之血管舒張及/或血管滲漏之水準或與之相比降低,其中該參考醫藥組合物包括包含編碼該轉殖基因之該表現卡匣之該重組AAV,其中當將該醫藥組合物或該參考醫藥組合物投與至脈絡膜上腔時,重組AAV基因體複本之量相同,且其中如在至多約1 s
-1之剪切速率下所量測,該參考醫藥組合物具有至多約24 cP之黏度。
10. 段落1至9中任一段之醫藥組合物,其中該重組AAV為構築體II。
11. 段落1、3至8及10中任一段之醫藥組合物,其中該轉殖基因為抗人類血管內皮生長因子(抗VEGF)抗體。
12. 段落1至11中任一段之醫藥組合物,其中該重組AAV包含來自選自由以下組成之群的一或多種腺相關病毒血清型之組分:AAV1、AAV2、AAV2tYF、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10、AAV11、AAVrh10、AAV.rh20、AAV.rh39、AAV.Rh74、AAV.RHM4-1、AAV.hu37、AAV.Anc80、AAV.Anc80L65、rAAV.7m8、AAV.PHP.B、AAV.PHP.eB、AAV2.5、AAV2tYF、AAV3B、AAV.LK03、AAV.HSC1、AAV.HSC2、AAV.HSC3、AAV.HSC4、AAV.HSC5、AAV.HSC6、AAV.HSC7、AAV.HSC8、AAV.HSC9、AAV.HSC10、AAV.HSC11、AAV.HSC12、AAV.HSC13、AAV.HSC14、AAV.HSC15及AAV.HSC16。
13. 段落1至12中任一段之醫藥組合物,其中該重組AAV為AAV8。
14. 段落1至9及11至12中任一段之醫藥組合物,其中該重組AAV為AAV9。
15. 段落1至14中任一段之醫藥組合物,其中如在至多約1 s
-1之剪切速率下所量測,該醫藥組合物具有介於約25 cP至約100,000 cP之間、介於約25 cP至約50,000 cP之間、介於約25 cP至約1×10
4cP之間、介於約25 cP至約5,000 cP之間、介於約25 cP至約1×10
3cP之間、介於約100 cP至約100,000 cP之間、介於約100 cP至約1×10
4cP之間、介於約100 cP至約5,000 cP之間、介於約100 cP至約1×10
3cP之間的黏度。
16. 段落1至15中任一段之醫藥組合物,其中如在至多約1 s
-1之剪切速率下所量測,該醫藥組合物具有至少約100 cP、至少約400 cP、至少約500 cP、至少約900 cP、至少約1000 cP、至少約4000 cP或至少約1×10
6cP之黏度。
17. 段落1至16中任一段之醫藥組合物,其中如在至多約1 s
-1之剪切速率下所量測,該醫藥組合物具有約或大於約500 cP之黏度。
18. 段落1至17中任一段之醫藥組合物,其中該醫藥組合物包含蔗糖。
19. 段落1至17中任一段之醫藥組合物,其中該醫藥組合物不包含蔗糖。
20. 段落1至19中任一段之醫藥組合物,其中該醫藥組合物包含以下至少一者:蔗糖、4%蔗糖、6%蔗糖、10%蔗糖、2%羧甲基纖維素鈉鹽、1%羧甲基纖維素鈉鹽、羧甲基纖維素(CMC)、0.5% CMC、1% CMC、2% CMC、4% CMC、聚乙烯醇、羥乙基纖維素、羧甲基纖維素鈉鹽及羥丙基甲基纖維素。
21. 段落1至18及20中任一段之醫藥組合物,其中該醫藥組合物包含4%蔗糖、6%蔗糖或10%蔗糖。
22. 段落4及10至21中任一段之醫藥組合物,其中在脈絡膜上投與該醫藥組合物後之該圓周擴散小至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍、至少5%、至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少100%、至少150%或至少200%、至少250%或至少300%、至少400%或至少500%。
23. 段落3及10至22中任一段之醫藥組合物,其中在脈絡膜上投與該醫藥組合物後之該清除時間多至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍、至少5%、至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少100%、至少150%或至少200%、至少250%或至少300%、至少400%或至少500%。
24. 段落1至23中任一段之醫藥組合物,其中在脈絡膜上投與該醫藥組合物後之該清除時間為約30分鐘至約20小時、約2小時至約20小時、約30分鐘至約24小時、約1小時至約2小時、約30分鐘至約90天、約30分鐘至約60天、約30分鐘至約30天、約30分鐘至約21天、約30分鐘至約14天、約30分鐘至約7天、約30分鐘至約3天、約30分鐘至約2天、約30分鐘至約1天、約4小時至約90天、約4小時至約60天、約4小時至約30天、約4小時至約21天、約4小時至約14天、約4小時至約7天、約4小時至約3天、約4小時至約2天、約4小時至約1天、約4小時至約8小時、約4小時至約16小時、約4小時至約20小時、約1天至約90天、約1天至約60天、約1天至約30天、約1天至約21天、約1天至約14天、約1天至約7天、約1天至約3天、約2天至約90天、約3天至約90天、約3天至約60天、約3天至約30天、約3天至約21天、約3天至約14天或約3天至約7天。
25. 段落1至24中任一段之醫藥組合物,其中在脈絡膜上投與該醫藥組合物後之該清除時間不早於約30分鐘、1小時、2小時、3小時、4小時、5小時、6小時、7小時、8小時、9小時、10小時、12小時、14小時、16小時、18小時、20小時、22小時、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、23天、25天、27天、30天、35天、40天、50天、55天、60天、65天、70天、75天、80天、85天、90天、95天、100天、120天、140天、160天、180天、200天、220天、240天、260天、280天、300天、320天、340天、360天、380天或400天。
26. 段落3至25中任一段之醫藥組合物,其中該參考醫藥組合物在脈絡膜上投與後之該清除時間為至多約30分鐘、1小時、2小時、3小時、4小時、5小時、6小時、7小時、8小時、9小時、10小時、12小時、14小時、16小時、18小時、20小時、22小時、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天或14天。
27. 段落1至26中任一段之醫藥組合物,其中該清除時間係自該SCS或自該眼睛之清除時間。
28. 段落5及10至27中任一段之醫藥組合物,其中在脈絡膜上投與該醫藥組合物後在該注射部位之該厚度高至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍、至少5%、至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少100%、至少150%或至少200%、至少250%或至少300%、至少400%或至少500%。
29. 段落5及10至28中任一段之醫藥組合物,其中在脈絡膜上投與該醫藥組合物後在該注射部位之該厚度為約500 μm至約3.0 mm、750 μm至約2.8 mm、約750 μm至約2.5 mm、約750 μm至約2 mm或約1 mm至約2 mm。
30. 段落5及10至29中任一段之醫藥組合物,其中在脈絡膜上投與該醫藥組合物後在該注射部位之該厚度為至少約50 μm、100 μm、200 μm、300 μm、400 μm、500 μm、600 μm、700 μm、800 μm、900 μm、1000 μm、1 mm、1.5 mm、2 mm、2.5 mm、3 mm、3.5 mm、4 mm、4.5 mm、5 mm、5.5 mm、6 mm、6.5 mm、7 mm、7.5 mm、8 mm、8.5 mm、9 mm、9.5 mm或10 mm。
31. 段落5及10至30中任一段之醫藥組合物,其中在脈絡膜上投與該參考醫藥組合物後在該注射部位之該厚度為至多約1 nm、5 nm、10 nm、25 nm、50 nm、100 nm、200 nm、300 nm、400 nm、500 nm、600 nm、700 nm、800 nm、900 nm、1 μm、5 μm、10 μm、15 μm、20 μm、25 μm、30 μm、35 μm、40 μm、50 μm、100 μm、200 μm、300 μm、400 μm、500 μm、600 μm、700 μm、800 μm、900 μm或1000 μm。
32. 段落5及10至31中任一段之醫藥組合物,其中在脈絡膜上投與該醫藥組合物後在該注射部位之該厚度持續至少兩小時、至少三小時、至少四小時、至少五小時、至少六小時、至少七小時、至少八小時、至少十小時、至少十二小時、至少十八小時、至少二十四小時、至少兩天、至少三天、至少五天、至少十天、至少二十一天、至少一個月、至少六週、至少兩個月、至少三個月、至少4個月、至少5個月、至少6個月、至少9個月、至少一年、至少三年或至少五年。
33. 段落7及10至32中任一段之醫藥組合物,其中在脈絡膜上投與該醫藥組合物後該眼睛中該轉殖基因之濃度高至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍、至少5%、至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少100%、至少150%或至少200%、至少250%或至少300%、至少400%或至少500%。
34. 段落6及10至33中任一段之醫藥組合物,其中在脈絡膜上投與該醫藥組合物後的該更長時段長至少1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、23天、25天、27天、30天、35天、40天、50天、55天、60天、65天、70天、75天、80天、85天、90天、95天、100天、120天、140天、160天、180天、200天、220天、240天、260天、280天、300天、320天、340天、360天、380天或400天。
35. 段落1至34中任一段之醫藥組合物,其中在脈絡膜上投與該醫藥組合物後在該眼睛中偵測到該轉殖基因達至少約1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、23天、25天、27天、30天、35天、40天、50天、55天、60天、65天、70天、75天、80天、85天、90天、95天、100天、120天、140天、160天、180天、200天、220天、240天、260天、280天、300天、320天、340天、360天、380天或400天。
36. 段落3至35中任一段之醫藥組合物,其中在脈絡膜上投與該參考醫藥組合物後在該眼睛中偵測到該轉殖基因達至多約1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、23天、25天、27天、30天、35天、40天、50天、55天、60天、65天、70天、75天、80天、85天、90天、95天或100天、120天、140天、160天、180天、200天、220天、240天、260天、280天、300天、320天、340天、360天、380天或400天後。
37. 段落11之醫藥組合物,其中在脈絡膜上投與該醫藥組合物後VEGF誘發之血管舒張及/或血管滲漏之水準等於在脈絡膜上投與該參考醫藥組合物後VEGF誘發之血管舒張及/或血管滲漏之水準或與之相比降低。
38. 段落9至37中任一段之醫藥組合物,其中在脈絡膜上投與該醫藥組合物後VEGF誘發之血管舒張及/或血管滲漏之該水準降低至少約2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍、至少5%、至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少100%、至少150%或至少200%、至少250%或至少300%、至少400%或至少500%。
39. 段落8及10至38中任一段之醫藥組合物,其中在脈絡膜上投與該醫藥組合物後在該注射部位之該轉導率高至少約2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍、至少5%、至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少100%、至少150%或至少200%、至少250%或至少300%、至少400%或至少500%。
40. 段落1至39中任一段之醫藥組合物,其中該醫藥組合物中之重組AAV穩定性係該參考醫藥組合物中之重組AAV穩定性的至少約50%。
41. 段落40之醫藥組合物,其中重組AAV穩定性係藉由該重組AAV之感染力確定。
42. 段落40之醫藥組合物,其中重組AAV穩定性係藉由該重組AAV之聚集水準確定。
43. 段落40之醫藥組合物,其中重組AAV穩定性係藉由該重組AAV釋放之游離DNA之水準確定。
44. 段落43之醫藥組合物,其中與該參考醫藥組合物中之游離DNA之水準相比,該醫藥組合物包含多約50%、多約25%、多約15%、多約10%、多約5%、多約4%、多約3%、多約2%、多約1%、多約0%、少約1%、少約2%、少約5%、少約7%、少約10%、多約2倍、多約3倍、少約2倍、少約3倍之游離DNA。
45. 段落41之醫藥組合物,其中該醫藥組合物中之該重組AAV之感染力比該參考醫藥組合物中之該重組AAV之該感染力高至少2%、5%、7%、10%、12%、15%、17%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、100%、2倍、3倍、5倍、10倍、100倍或1000倍。
46. 段落42之醫藥組合物,其中該醫藥組合物之重組AAV聚集比該參考醫藥組合物中之重組AAV聚集水準少至少2%、5%、7%、10%、12%、15%、17%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、100%、2倍、3倍、5倍、10倍、100倍或1000倍。
47. 段落1至46中任一段之醫藥組合物,其中該轉殖基因係適合治療所關注之疾病,或以其他方式改善所關注之疾病、預防所關注之疾病或減緩所關注之疾病之進展的轉殖基因。
48. 段落1至47中任一段之醫藥組合物,其中該人類個體經診斷患有nAMD (濕性AMD)、乾性AMD、視網膜靜脈阻塞(RVO)、糖尿病性黃斑水腫(DME)或糖尿病性視網膜病變(DR)或巴登氏病。
49. 段落1至47中任一段之醫藥組合物,其中該人類個體經診斷患有IVA型黏多醣病(MPS IVA)、I型黏多醣病(MPS I)、II型黏多醣病(MPS II)、家族性高膽固醇血症(FH)、同合子型家族性高膽固醇血症(HoFH)、冠狀動脈疾病、腦血管疾病、杜顯氏肌肉失養症、肢帶肌肉失養症、貝克爾肌肉失養症及散發性包涵體肌炎或激肽釋放素相關疾病。
50. 段落1、3至8及10至49中任一段之醫藥組合物,其中該AAV編碼棕櫚醯-蛋白硫酯酶1 (PPT1)或三肽基-肽酶1 (TPP1)。
51. 段落3至50中任一段之醫藥組合物,其中該等重組AAV基因體複本之量係基於載體基因體濃度。
52. 段落3至50中任一段之醫藥組合物,其中該等重組AAV基因體複本之量係基於每次投與之基因體複本。
53. 段落3至50中任一段之醫藥組合物,其中該等重組AAV基因體複本之量係基於向該人類個體投與之總基因體複本。
54. 段落52之醫藥組合物,其中每次投與之該等基因體複本係每次脈絡膜上投與之該重組AAV之基因體複本。
55. 段落53之醫藥組合物,其中所投與之該等總基因體複本係經脈絡膜上投與之該重組AAV之總基因體複本。
56. 段落51之醫藥組合物,其中該載體基因體濃度(VGC)為約3×10
9GC/mL、約1×10
10GC/mL、約1.2×10
10GC/mL、約1.6×10
10GC/mL、約4×10
10GC/mL、約6×10
10GC/mL、約2×10
11GC/mL、約2.4×10
11GC/mL、約2.5×10
11GC/mL、約3×10
11GC/mL、約6.2×10
11GC/mL、約1×10
12GC/mL、約2.5×10
12GC/mL、約3×10
12GC/mL、約5×10
12GC/mL、約1.5×10
13GC/mL、約2×10
13GC/mL或約3×10
13GC/mL。
57. 段落53及55中任一段之醫藥組合物,其中所投與之基因體複本之總數為約6.0×10
10個基因體複本、約1.6×10
11個基因體複本、約2.5×10
11個基因體複本、約5.0×10
11個基因體複本、約3×10
12個基因體複本、約1.0×10
12個基因體複本、約1.5×10
12個基因體複本、約2.5×10
12個基因體複本或約3.0×10
13個基因體複本。
58. 段落52及54中任一段之醫藥組合物,其中每次投與之基因體複本之總數為約6.0×10
10個基因體複本、約1.6×10
11個基因體複本、約2.5×10
11個基因體複本、約5.0×10
11個基因體複本、約3×10
12個基因體複本、約1.0×10
12個基因體複本、約1.5×10
12個基因體複本、約2.5×10
12個基因體複本或約3.0×10
13個基因體複本。
59. 段落1至58中任一段之醫藥組合物,其中該醫藥組合物經投與一次、兩次、三次、四次、五次、六次、七次、八次、九次、十次、十五次、二十次、二十五次或三十次。
60. 段落3至59中任一段之醫藥組合物,其中該參考醫藥組合物經投與一次、兩次、三次、四次、五次、六次、七次、八次、九次、十次、十五次、二十次、二十五次或三十次。
61. 段落1至60中任一段之醫藥組合物,其中一天一次、一天兩次、一天三次、一天四次、一天五次、一天六次或一天七次投與該醫藥組合物。
62. 段落3至60中任一段之醫藥組合物,其中一天一次、一天兩次、一天三次、一天四次、一天五次、一天六次或一天七次投與該參考醫藥組合物。
63. 段落1至60中任一段之醫藥組合物,其中該參考醫藥組合物包含DPBS及蔗糖。
64. 段落3至60中任一段之醫藥組合物,其中如在至多約1 s
-1之剪切速率下所量測,該參考醫藥組合物具有約1 cP之黏度。
65. 段落1至64中任一段之醫藥組合物,其中該醫藥組合物包含0.2至15%高黏度級羧甲基纖維素(CMC)、高黏度級CMC、中等黏度級CMC、羥丙基甲基纖維素(HPMC)、HPMC、羥乙基纖維素(HES)、低黏度級CMC及/或泊洛沙姆407。
66. 段落1至65中任一段之醫藥組合物,其中該醫藥組合物之黏度係在0 s
-1之剪切速率下量測。
67. 段落3至66中任一段之醫藥組合物,其中該參考醫藥組合物之黏度係在0 s
-1之剪切速率下量測。
68. 段落1至67中任一段之醫藥組合物,其中該醫藥組合物之黏度及該參考醫藥組合物之黏度係在相同剪切速率下量測。
69. 段落1至68中任一段之醫藥組合物,其中該醫藥組合物之黏度係剪切減黏的。
70. 段落1至69中任一段之醫藥組合物,其中如在至少約1,000 s
-1之剪切速率下所量測,該醫藥組合物之黏度為約、至多約或至少約0.1 cP、0.2 cP、0.3 cP、0.4 cP、0.5 cP、0.6 cP、0.7 cP、0.8 cP、0.9 cP、1 cP、2 cP、3 cP、4 cP、5 cP、10 cP、20 cP、25 cP、30 cP、35 cP、40 cP、50 cP、60 cP、70 cP、80 cP、90 cP、100 cP、150 cP、200 cP、250 cP、300 cP、350 cP、400 cP、450 cP、500 cP、550 cP、600 cP、650 cP、700 cP、750 cP、800 cP、850 cP、900 cP、950 cP、1000 cP、1500 cP、2000 cP、2500 cP、3000 cP、3500 cP、4000 cP、4500 cP、5000 cP或10000 cP。
71. 段落70之醫藥組合物,其中該醫藥組合物之黏度係在至少約1,000 s
-1、2,000 s
-1、3,000 s
-1、4,000 s
-1、5,000 s
-1、6,000 s
-1、7,000 s
-1、8,000 s
-1、9,000 s
-1、10,000 s
-1、15,000 s
-1、20,000 s
-1或30,000 s
-1之剪切速率下量測。
72. 段落1至71中任一段之醫藥組合物,其中如在約5,000 s
-1之剪切速率下所量測,該醫藥組合物之黏度為約或至多約35 cP。
73. 段落1至71中任一段之醫藥組合物,其中如在約10,000 s
-1之剪切速率下所量測,該醫藥組合物之黏度為約或至多約25 cP。
74. 段落1至71中任一段之醫藥組合物,其中如在至多約1 s
-1之剪切速率下所量測,該醫藥組合物之黏度為約或至少約500 cP。
75. 段落1至71中任一段之醫藥組合物,其中如在至多約1 s
-1之剪切速率下所量測,該醫藥組合物之黏度為約或至少約1500 cP。
76. 段落1至71中任一段之醫藥組合物,其中如在至少約1000 s
-1之剪切速率下所量測,該醫藥組合物之黏度為約或至多約362 cP。
77. 段落3至76中任一段之醫藥組合物,其中如在至少約1000 s
-1之剪切速率下所量測,該參考醫藥組合物之黏度為約或至多約0.1 cP、0.2 cP、0.3 cP、0.4 cP、0.5 cP、0.6 cP、0.7 cP、0.8 cP、0.9 cP、1 cP、1.1 cP、1.2 cP、1.3 cP、1.4 cP、1.5 cP、1.6 cP、1.7 cP、1.8 cP、1.9 cP、2 cP、2.1 cP、2.2 cP、2.3 cP、2.4 cP、2.5 cP、2.6 cP、2.7 cP、2.8 cP、2.9 cP、3 cP、3.1 cP、3.2 cP、3.3 cP、3.4 cP、3.5 cP、3.6 cP、3.7 cP、3.8 cP、3.9 cP、4 cP、4.1 cP、4.2 cP、4.3 cP、4.4 cP、4.5 cP、4.6 cP、4.7 cP、4.8 cP、4.9 cP或5 cP。
78. 段落3至77中任一段之醫藥組合物,其中如在至多約1 s
-1之剪切速率下所量測,該參考醫藥組合物之黏度為約或至多約0.1 cP、0.2 cP、0.3 cP、0.4 cP、0.5 cP、0.6 cP、0.7 cP、0.8 cP、0.9 cP、1 cP、1.1 cP、1.2 cP、1.3 cP、1.4 cP、1.5 cP、1.6 cP、1.7 cP、1.8 cP、1.9 cP、2 cP、2.1 cP、2.2 cP、2.3 cP、2.4 cP、2.5 cP、2.6 cP、2.7 cP、2.8 cP、2.9 cP、3 cP、3.1 cP、3.2 cP、3.3 cP、3.4 cP、3.5 cP、3.6 cP、3.7 cP、3.8 cP、3.9 cP、4 cP、4.1 cP、4.2 cP、4.3 cP、4.4 cP、4.5 cP、4.6 cP、4.7 cP、4.8 cP、4.9 cP或5 cP。
79. 段落1至78中任一段之醫藥組合物,其中如在至少約1000 s
-1之剪切速率下所量測,該醫藥組合物之黏度為約0.5 cP至約400 cP。
80. 段落1至79中任一段之醫藥組合物,其中該醫藥組合物包含經改良之杜貝爾寇磷酸鹽緩衝鹽水溶液及視情況選用之界面活性劑。
81. 段落1至80中任一段之醫藥組合物,其中該醫藥組合物包含氯化鉀;磷酸二氫鉀;氯化鈉;無水磷酸氫二鈉;蔗糖;及視情況選用之一或多種界面活性劑,其選自泊洛沙姆188、聚山梨醇酯20及聚山梨醇酯80。
82. 段落1至81中任一段之醫藥組合物,其中該醫藥組合物包含0.2 mg/mL氯化鉀、0.2 mg/mL磷酸二氫鉀、5.84 mg/mL氯化鈉、1.15 mg/mL無水磷酸氫二鈉、40.0 mg/mL (4% w/v)蔗糖及視情況選用之界面活性劑。
83. 段落1至82中任一段之醫藥組合物,其中該醫藥組合物包含氯化鉀;磷酸二氫鉀;氯化鈉;無水磷酸氫二鈉;蔗糖;視情況選用之一或多種界面活性劑,其選自泊洛沙姆188、聚山梨醇酯20及聚山梨醇酯80;及視情況選用之一或多種黏度調節劑,其選自高黏度級CMC、中等黏度級CMC、低黏度級CMC、羥丙基甲基纖維素(HPMC)、羥乙基纖維素(HES)及泊洛沙姆407。
84. 段落1至83中任一段之醫藥組合物,其中該醫藥組合物包含氯化鉀;磷酸二氫鉀;氯化鈉;無水磷酸氫二鈉;蔗糖;視情況選用之一或多種界面活性劑,其選自泊洛沙姆188、聚山梨醇酯20及聚山梨醇酯80;及視情況選用之一或多種黏度調節劑,其選自0.5%高黏度級CMC、1%高黏度級CMC、0.5%中等黏度級CMC、低黏度級CMC、0.5%羥丙基甲基纖維素(HPMC)、0.2% HPMC、2%羥乙基纖維素(HES)及15%泊洛沙姆407。
85. 段落1至84中任一段之醫藥組合物,其中該醫藥組合物包含氯化鉀;磷酸二氫鉀;氯化鈉;無水磷酸氫二鈉;蔗糖;一或多種界面活性劑,其選自泊洛沙姆188、聚山梨醇酯20及聚山梨醇酯80;及一或多種多醣,其選自CMC、HPMC及HES。
86. 段落1至85中任一段之醫藥組合物,其中該醫藥組合物包含0.2 mg/mL氯化鉀、0.2 mg/mL磷酸二氫鉀、5.84 mg/mL氯化鈉、1.15 mg/mL無水磷酸氫二鈉、40.0 mg/mL (4% w/v)蔗糖、0.001% (0.01 mg/mL)泊洛沙姆188及1%高黏度級羧甲基纖維素(CMC)。
87. 段落1至86中任一段之醫藥組合物,其中該醫藥組合物係儲存在約室溫、20℃、4℃或-80℃下。
88. 段落1至87中任一段之醫藥組合物,其中該醫藥組合物在投與至人類個體之前經儲存。
優先權
本申請案主張於2020年10月7日申請之美國序列號63/088,826及於2021年2月9日申請之美國序列號63/147,527的優先權權益,各以引用之方式整體併入本文中。
關於以電子方式提交之序列表的參考
本申請案以引用之方式併入序列表,該序列表係以標題為「12656-141-036_Sequence_Listing.txt」之文本文件形式與本申請案一起提交,該文本文件於2021年10月1日創建且大小為107,047位元組。
本文提供適合投與至個體眼睛脈絡膜上腔(SCS)之醫藥組合物,該等醫藥組合物包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之重組腺相關病毒(AAV)載體。個體可為經診斷患有部分4.5中描述之多種疾病中之一種的個體。AAV載體描述於部分4.4中且此類載體之劑量描述於部分4.3中。在一些實施例中,部分4.1中提供之醫藥組合物經調配以使得其具有部分4.2中之描述之一或多種功能特性。在某些實施例中,本文提供之醫藥組合物具有多個優點,例如清除時間增加或減慢(部分4.2.1);圓周擴散減少(部分4.2.2);增加SCS厚度(部分4.2.3);血管舒張及/或血管滲漏減少(部分4.2.4);增加AAV水準及增加注射部位之轉導率(部分4.2.5);及在SCS中投與醫藥組合物後轉殖基因之濃度增加。不受理論束縛,可使用如部分4.1中揭示之高黏度調配物來實現該等功能特性。本文亦提供可用於相關研究之分析法(部分4.6)。
4.1 醫藥組合物之調配
本揭示案提供一種適合脈絡膜上投與之醫藥組合物,其包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之重組腺相關病毒(AAV)載體。在一些實施例中,使用具有不同黏度值之若干種醫藥組合物(例如,液體調配物)來投與編碼轉殖基因之AAV。
在一些實施例中,醫藥組合物比可比較之醫藥組合物(參考醫藥組合物)黏度大。在一些實施例中,醫藥組合物及參考醫藥組合物包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之重組腺相關病毒(AAV)載體。在一些實施例中,醫藥組合物及參考醫藥組合物具有相同載體基因體濃度。在一些實施例中,醫藥組合物及參考醫藥組合物具有相同量之基因體複本。在一些實施例中,醫藥組合物之黏度高於水之黏度。在一些實施例中,醫藥組合物之黏度高於對照物之黏度。在一些實施例中,醫藥組合物之黏度高於通常用於視網膜下注射之溶液之黏度。在一些實施例中,醫藥組合物之黏度高於PBS或dPBS之黏度。在一些實施例中,醫藥組合物之黏度高於漢克平衡鹽溶液(Hank’s Balanced Salt Solution,HBSS)之黏度。在一些實施例中,參考醫藥組合物具有比醫藥組合物低之黏度。在一些實施例中,參考醫藥組合物具有與醫藥組合物相同或相似之黏度。在一些實施例中,參考醫藥組合物為對照溶液(例如,PBS、水或HBSS)。在一些實施例中,參考醫藥組合物包含蔗糖。在一些實施例中,參考醫藥組合物為常用於AAV視網膜下注射之醫藥組合物。
在一些實施例中,醫藥組合物之特徵在於低剪切黏度之增加(大幅增加) (例如,在或小於1 s
-1下量測,或外推之零速率黏度高達10,000 cP)。在一些實施例中,醫藥組合物之特徵在於高剪切黏度之增加(小幅增加) (例如,定義為約1000/s至約5000/s之剪切速率或外推至10,000/s或20,000/s,小於約500、400、300、200、100、90、80、70、60、50、40、30、20或10 cP)。在一些實施例中,如在至少約1,000 s
-1之剪切速率下所量測,醫藥組合物之黏度為約、至多約或至少約5 cP、10 cP、20 cP、25 cP、30 cP、35 cP、40 cP、50 cP、60 cP、70 cP、80 cP、90 cP、100 cP、110 cP、120 cP、125 cP、130 cP、135 cP、140 cP、150 cP、160 cP、170 cP、180 cP、190 cP、200 cP、210 cP、220 cP、225 cP、230 cP、235 cP、240 cP、250 cP、260 cP、270 cP、280 cP、290 cP、300 cP、310 cP、320 cP、325 cP、330 cP、335 cP、340 cP、350 cP、360 cP、370 cP、380 cP、390 cP、400 cP、410 cP、420 cP、425 cP、430 cP、435 cP、440 cP、450 cP、460 cP、470 cP、480 cP、490 cP、500 cP、550 cP、600 cP、650 cP、700 cP、750 cP、800 cP、850 cP、900 cP、950 cP、1000 cP、1500 cP、2000 cP、2500 cP、3000 cP、3500 cP、4000 cP、4500 cP、5000 cP或10000 cP。在一些實施例中,剪切速率為至少約1,000 s
-1、2,000 s
-1、3,000 s
-1、4,000 s
-1、5,000 s
-1、6,000 s
-1、7,000 s
-1、8,000 s
-1、9,000 s
-1、10,000 s
-1、15,000 s
-1、20,000 s
-1或30,000 s
-1。在一些實施例中,如在至少約1,000 s
-1(例如,1,000 s
-1、2,000 s
-1、5,000 s
-1、10,000 s
-1或20,000 s
-1)之剪切速率下所量測,醫藥組合物之黏度為約0.1 cP至約2 cP、約0.1 cP至約5 cp、約0.1 cP至約10 cP、約0.1 cP至約1.5 cP、約5 cP至約150 cP、約5 cP至約500 cP、約5 cP至約300 cP、約20 cP至約40 cP、約15 cP至約200 cP、約15 cP至約50 cP、約20 cP至約200 cP、約20 cP至約400 cP、約30 cP至約40 cP、約30 cP至約500 cP、約30 cP至約1000 cP、約20 cP至約1000 cP。在一些實施例中,如在約5,000 s
-1之剪切速率下所量測,醫藥組合物之黏度為約或至多約34 cP。在一些實施例中,如在或外推至約10,000 s
-1之剪切速率下所量測,醫藥組合物之黏度為約或至多約24 cP。在一些實施例中,在約或超過約2,000 s
-1之剪切速率下醫藥組合物具有約或至多約365 cP之黏度(例如,在約或超過約2,100 s
-1之剪切速率下約或小於約362 cP)。在一些實施例中,在約或超過約10,000 s
-1之剪切速率下醫藥組合物具有約或至多約35 cP之黏度(例如,在約16,000 s
-1之剪切速率下約或小於約34 cP)。在一些實施例中,在高剪切(例如,至少約1,000 s
-1或約2,000 s
-1至約20,000 s
-1之剪切速率)下脈絡膜上投與醫藥組合物。在一些實施例中,在至少約1,000 s
-1之剪切速率(例如,約5,000 s
-1)下醫藥組合物具有約或小於約105 cP之黏度,且視情況引起約或小於約43 PSI之壓力。在一些實施例中,在至少約1,000 s
-1(例如,約2,100 s
-1)之剪切速率下醫藥組合物具有約或小於約365 cP之黏度,且視情況引起約或小於約43 PSI之壓力。在一些實施例中,在至少約1,000 s
-1(例如,約6,300 s
-1)之剪切速率下醫藥組合物具有約或小於約121 cP之黏度,且視情況引起約或小於約43 PSI之壓力。在一些實施例中,在至少約1,000 s
-1(例如,約16,000 s
-1)之剪切速率下醫藥組合物具有約或小於約35 cP之黏度,且視情況引起約或小於約43 PSI之壓力。在一些實施例中,在至少約1 s
-1之剪切速率下醫藥組合物具有約或超過約500 cP之黏度。在一些實施例中,在至多約1 s
-1之剪切速率下醫藥組合物具有約或至少約1500 cP之黏度。在一些實施例中,在至少約1000 s
-1之剪切速率下醫藥組合物具有約或至多約362 cP之黏度。在一些實施例中,在至少約1,000 s
-1之剪切速率下醫藥組合物具有介於約0.1 cP至約400 cP之間的黏度。在一些實施例中,在至少約1 s
-1之剪切速率下參考醫藥組合物具有約0.5 cP至約10 cP之黏度。在一些實施例中,在至少約1,000 s
-1之剪切速率下參考醫藥組合物具有約0.5 cP至約10 cP之黏度。在一些實施例中,參考醫藥組合物非剪切減黏的或為輕微剪切減黏的。在一些實施例中,醫藥組合物係剪切減黏的。
在一些實施例中,例如在零、0.001、0.01、0.1或1 s
− 1之剪切速率下或在約或至多約1 s
− 1之剪切速率下醫藥組合物具有約、至少約或至多約2 cP、3 cP、4 cP、5 cP、10 cP、15 cP、20 cP、25 cP、30 cP、35 cP、40 cP、45 cP、50 cP、60 cP、70 cP、80 cP、90 cP、100 cP、150 cP、200 cP、250 cP、300 cP、350 cP、400 cP、450 cP、500 cP、550 cP、600 cP、650 cP、700 cP、800 cP、900 cP、1000 cP、1,500 cP、2,000 cP、3,000 cP、4,000 cP、5,000 cP、6,000 cP、7,000 cP、8,000 c、9,000 cP、10,000 cP、12,000 cP或15,000 cP之黏度。在一些實施例中,剪切速率為約或小於約100 s
-1、50 s
-1、10 s
-1、1 s
-1、0.1 s
-1、0.01 s
-1、0.001 s
-1或0.0001 s
-1。在一些實施例中,醫藥組合物之黏度或參考醫藥組合物為在例如約或小於約100 s
-1、50 s
-1、10 s
-1、1 s
-1、0.01 s
-1、0.001 s
-1或0.0001 s
-1之剪切速率下本文揭示之任何黏度。在一些實施例中,醫藥組合物或參考醫藥組合物在注射期間經歷剪切減黏。
在一些實施例中,如在至少約1000 s
-1之剪切速率下所量測,參考醫藥組合物具有約或至多約0.1 cP、0.2 cP、0.3 cP、0.4 cP、0.5 cP、0.6 cP、0.7 cP、0.8 cP、0.9 cP、1 cP、1.1 cP、1.2 cP、1.3 cP、1.4 cP、1.5 cP、1.6 cP、1.7 cP、1.8 cP、1.9 cP、2 cP、2.1 cP、2.2 cP、2.3 cP、2.4 cP、2.5 cP、2.6 cP、2.7 cP、2.8 cP、2.9 cP、3 cP、3.1 cP、3.2 cP、3.3 cP、3.4 cP、3.5 cP、3.6 cP、3.7 cP、3.8 cP、3.9 cP、4 cP、4.1 cP、4.2 cP、4.3 cP、4.4 cP、4.5 cP、4.6 cP、4.7 cP、4.8 cP、4.9 cP或5 cP之黏度。在一些實施例中,如在至多約1 s
-1之剪切速率下所量測,參考醫藥組合物具有約或至多約0.1 cP、0.2 cP、0.3 cP、0.4 cP、0.5 cP、0.6 cP、0.7 cP、0.8 cP、0.9 cP、1 cP、1.1 cP、1.2 cP、1.3 cP、1.4 cP、1.5 cP、1.6 cP、1.7 cP、1.8 cP、1.9 cP、2 cP、2.1 cP、2.2 cP、2.3 cP、2.4 cP、2.5 cP、2.6 cP、2.7 cP、2.8 cP、2.9 cP、3 cP、3.1 cP、3.2 cP、3.3 cP、3.4 cP、3.5 cP、3.6 cP、3.7 cP、3.8 cP、3.9 cP、4 cP、4.1 cP、4.2 cP、4.3 cP、4.4 cP、4.5 cP、4.6 cP、4.7 cP、4.8 cP、4.9 cP或5 cP之黏度。
在一些實施例中,醫藥組合物(例如,液體調配物)之黏度(低剪切黏度,例如約或至多約1 s
-1或外推之零速率)或剪切黏度為約或至少約5 cP、約或至少約10 cP、約或至少約15 cP、約或至少約20 cP、約或至少約25 cP、約或至少約30 cP、約或至少約35 cP、約或至少約40 cP、約或至少約45 cP、約或至少約50 cP、約或至少約60 cP、約或至少約70 cP、約或至少約80 cP、約或至少約90 cP、100 cP、約或至少約115 cP、約或至少約120 cP、約或至少約125 cP、約或至少約130 cP、約或至少約135 cP、約或至少約140 cP、約或至少約145 cP、約或至少約150 cP、約或至少約160 cP、約或至少約170 cP、約或至少約180 cP、約或至少約190 cP、約或至少約200 cP、約或至少約300 cP、約或至少約400 cP、約或至少約500 cP、約或至少約600 cP、約或至少約700 cP、約或至少約800 cP、約或至少約900 cP、約或至少約1000 cP、約或至少約1500 cP、約或至少約2000 cP、約或至少約2500 cP、約或至少約3000 cP、約或至少約3500 cP、約或至少約4000 cP、約或至少約4500 cP、約或至少約5000 cP、約或至少約5500 cP、約或至少約6000 cP、約或至少約6500 cP、約或至少約7000 cP、約或至少約7500 cP、約或至少約8000 cP、約或至少約9000 cP、約或至少約10000 cP、約或至少約1×10
3cP、約或至少約3×10
3cP、約或至少約1×10
4cP、約或至少約3×10
4cP、約或至少約1×10
5cP、約或至少約1.7×10
5cP、約或至少約3×10
5cP、約或至少約1×10
6cP、約或至少約3×10
6cP、約或至少約1×10
7cP、約或至少約3×10
7cP、約或至少約1×10
8cP、或約或至少約3×10
8cP (例如,如在至多約1s
-1之剪切速率下所量測)。在一些實施例中,黏度介於約25 cP至約1×10
6cP之間、介於約25 cP至約1×10
4cP之間、介於約25 cP至約5,000 cP之間、介於約25 cP至約1×10
3cP之間、介於約100 cP至約1×10
6cP之間、介於約100 cP至約1×10
4cP之間、介於約100 cP至約5,000 cP之間、介於約100 cP至約1×10
3cP之間。在一些實施例中,黏度介於約25 cP至約3×10
6cP之間、介於約10 cP至約3×10
8cP之間、介於約50 cP至約5000 cP之間、介於約10 cP至約15000 cP之間、介於約25 cP至約1500 cP之間、介於約50 cP至約1500 cP之間、介於約25 cP至約3×10
4cP之間。在一些實施例中,醫藥組合物具有至少介於約25 cP至約3×10
6cP之間、至少介於約10 cP至約3×10
8cP之間、至少介於約50 cP至約5000 cP之間、至少介於約10 cP至約15000 cP之間、至少介於約25 cP至約1500 cP之間、至少介於約50 cP至約1500 cP或至少介於約之間25 cP至約3×10
4cP之間的黏度。在一些實施例中,可比較之醫藥組合物或參考醫藥組合物或對照物具有約或至多約0.1 cP、約或至多約0.2 cP、約或至多約0.3 cP、約或至多約0.4 cP、約或至多約0.5 cP、約或至多約0.6 cP、約或至多約0.7 cP、約或至多約0.8 cP、約或至多約0.9 cP、約或至多約1 cP、約或至多約1.1 cP、約或至多約1.2 cP、約或至多約1.3 cP、約或至多約1.4 cP、約或至多約1.5 cP、約或至多約1.6 cP、約或至多約1.7 cP、約或至多約1.8 cP、約或至多約1.9 cP、約或至多約2 cP、約或至多約3 cP、約或至多約4 cP、約或至多約5 cP、約或至多約6 cP、約或至多約7 cP、約或至多約8 cP、約或至多約9 cP、約或至多約10 cP、約或至多約15 cP、約或至多約20 cP、約或至多約25 cP、約或至多約30 cP、約或至多約35 cP、約或至多約40 cP、約或至多約45 cP、約或至多約50 cP、約或至多約55 cP、約或至多約60 cP、約或至多約65 cP、約或至多約70 cP、約或至多約75 cP、約或至多約80 cP、約或至多約85 cP、約或至多約90 cP、約或至多約95 cP、約或至多約100 cP、約或至多約200 cP、約或至多約300 cP、約或至多約400 cP、或約或至多約500 cP之黏度(例如,如在至多約1s
-1之剪切速率下所量測)。在一些實施例中,可比較之醫藥組合物或參考醫藥組合物或對照物具有約或至多約0.1 cP、0.2 cP、0.3 cP、0.4 cP、0.5 cP、1 cP、1.3 cP、1.5 cP、2 cP、3 cP、5 cP或10 cP之黏度(例如,在至少約1000 s
− 1之剪切速率下)。在一些實施例中,可比較之醫藥組合物或參考醫藥組合物或對照物具有約或至多約2 cP之黏度(例如,在至少約1000 s
− 1之剪切速率下)。在一些實施例中,可比較之醫藥組合物或參考醫藥組合物或對照物具有約或至多約1.5 cP之黏度(例如,在至少約1000 s
− 1之剪切速率下)。在一些實施例中,可比較之醫藥組合物或參考醫藥組合物或對照物具有約1.3 cP之黏度(例如,在至多約1 s
− 1之剪切速率下)。在一些實施例中,可比較之醫藥組合物或參考醫藥組合物或對照物具有介於約0.1 cP至約3 cP之間、約0.1 cP至約2 cP、0.1 cP至約1.5 cP、0.1 cP至約5 cP、1 cP至約20 cP、介於約1 cP至約24 cP之間、介於約1 cP至約25 cP之間、介於約1 cP至約10 cP之間、介於約1 cP至約50 cP之間、介於約1 cP至約100 cP之間、介於約5 cP至約50 cP之間、介於約1 cP至約5 cP之間或介於約1 cP至約200 cP之間的黏度。在一些實施例中,參考醫藥組合物具有約1 cP或小於約1 cP之黏度(例如,在至多約1 s
− 1之剪切速率下)。在一些實施例中,參考醫藥組合物具有小於約1 cP之黏度(例如,在至少約1000 s
− 1之剪切速率下)。因為黏度視剪切速率而定,醫藥組合物(例如,液體調配物)之「低剪切或零速率黏度」為在剪切速率0.01 s
− 1至1 s
− 1之間的任何點處之黏度。在一些實施例中,黏度單位可定義為cP或mPas。在一些情況下,cP與mPas可互換使用。
在一些實施例中,醫藥組合物(例如,液體調配物)之黏度(或在零或1 s
-1下之剪切黏度)為至少約10 cP、或至少約100 cP、或至少約1000 cP、或至少約10,000 cP、或至少約70,000 cP、或至多約200,000 cP、或至多約250,000 cP、或至多約300,000 cP或更多。在一些實施例中,剪切速率為0.1/秒之剪切速率。在一些實施例中,調配物之特徵在於至少300,000 mPas之零剪切黏度。在一些實施例中,醫藥組合物之特徵在於在1000 s
− 1剪切速率下不超過約400 mPas之黏度。在一些實施例中,在約25℃下在約0.1/秒之剪切速率下醫藥組合物可具有介於約130,000 cP與約300,000 cP之間的黏度。在一些實施例中,在零或1 s
− 1下之黏度比在至少1000 s
− 1(例如,1,000 s
-1、2,000 s
-1、5,000 s
-1、10,000 s
-1或20,000 s
-1)之剪切速率下之黏度小至少約2、3、5、10或20 (或超過20)倍。在一些實施例中,在100 s
− 1下之黏度比在5 s
− 1之剪切速率下小至少約2、3、5、10或甚至20倍或更多倍。在一些實施例中,剪切減黏開始時之應力稱為屈服應力。在一些實施例中,在醫藥組合物開始容易流動之前需要一定剪切應力(力)。此臨界剪切應力通常稱為屈服應力。屈服應力可自用應力控制流變儀量測之穩態流動曲線確定。當將黏度繪製為施加之剪切應力之函數時,在超過臨界剪切應力後可看到黏度急劇下降。在一些實施例中,屈服應力為約、至少約或至多約0.0001 Pa、0.0005 Pa、0.001 Pa、0.005 Pa、0.01 Pa、0.05 Pa、0.1 Pa、0.5 Pa、1 Pa、2 Pa、3 Pa、5 Pa、10 Pa、15 Pa、20 Pa、25 Pa、30 Pa、35 Pa、40 Pa、45 Pa、50 Pa、55 Pa、60 Pa、65 Pa、70 Pa、75 Pa、80 Pa、85 Pa、90 Pa、100 Pa、110 Pa、120 Pa、130 Pa、140 Pa、150 Pa、200 Pa、250 Pa、300 Pa、350 Pa、400 PA、450 Pa、500 Pa或超過500 Pa。
在一些實施例中,與低黏度調配物或具有較低黏度之調配物相比,相對高黏度之醫藥組合物在注射後在SCS中(或在眼睛中)保留更長時段(在不同時間點量測)。在一些實施例中,較高黏度之醫藥組合物擴大SCS或注射部位之厚度(例如,與低黏度調配物或具有較低黏度之調配物相比)(參見部分4.2.3)。
在一些實施例中,醫藥組合物(例如,液體調配物)之黏度足以使注射部位之至少一部分(例如SCS)擴大至至少500 μm或約500 μm至約3 mm,長達投與後至少兩小時。在一些實施例中,醫藥組合物(例如,液體調配物)之黏度足以使注射部位(例如SCS)擴大至約750 μm至約2.8 mm、約750 μm至約2.5 mm、約750 μm至約2 mm或約1 mm至約2 mm之厚度。在一些實施例中,醫藥組合物之黏度(例如,液體調配物)足以使注射部位(例如SCS)擴大至約500 μm至約3.0 mm之厚度,長達投與後至少兩小時、至少三小時、至少四小時、至少五小時、至少六小時、至少七小時、至少八小時、至少十小時、至少十二小時、至少十八小時、至少二十四小時、至少兩天、至少三天、至少五天、至少十天、至少二十一天、至少一個月、至少六週、至少兩個月、至少三個月、至少4個月、至少5個月、至少6個月、至少9個月、至少一年、至少三年或至少五年。在一些實施例中,醫藥組合物之黏度(例如,液體調配物)足以使注射部位(例如SCS)擴大至約1 mm至約3 mm之厚度,長達投與後至少兩小時、至少三小時、至少四小時、至少五小時、至少六小時、至少七小時、至少八小時、至少十小時、至少十二小時、至少十八小時或至少二十四小時。在一些實施例中,醫藥組合物之黏度(例如,液體調配物)足以使注射部位(例如SCS)擴大至約1 mm至約2 mm之厚度,長達投與後至少兩小時、至少三小時、至少四小時、至少五小時、至少六小時、至少七小時、至少八小時、至少十小時、至少十二小時、至少十八小時、至少二十四小時、至少兩天、至少三天、至少五天、至少十天、至少二十一天、至少一個月、至少六週、至少兩個月、至少三個月、至少4個月、至少5個月、至少6個月、至少9個月、至少一年、至少三年或至少五年。在一些實施例中,醫藥組合物之黏度(例如,液體調配物)足以使注射部位(例如SCS)擴大至約2 mm至約3 mm之厚度,長達投與後至少兩小時、至少三小時、至少四小時、至少五小時、至少六小時、至少七小時、至少八小時、至少十小時、至少十二小時、至少十八小時、至少二十四小時、至少兩天、至少三天、至少五天、至少十天、至少二十一天、至少一個月、至少六週、至少兩個月、至少三個月、至少4個月、至少5個月、至少6個月、至少9個月、至少一年、至少三年或至少五年。在一些實施例中,醫藥組合物之黏度(例如,液體調配物)足以無限期地使注射部位(例如SCS)擴大至約750 μm至約2.8 mm、約750 μm至約2.5 mm、約750 μm至約2 mm或約1 mm至約2 mm之厚度。可實現無限期,至少部分係因為醫藥組合物(例如,液體調配物)在注射部位(例如,SCS)之穩定性。
在一些實施例中,黏度足以使注射部位(例如SCS)擴大至至少500 μm或約500 μm至約3 mm之厚度的醫藥組合物(例如,液體調配物)具有比水之黏度 (亦即約1 cP)大的黏度。在一些實施例中,醫藥組合物(例如,液體調配物)具有足以使注射部位(例如SCS)擴大至至少約50 μm、100 μm、200 μm、300 μm、400 μm、500 μm、600 μm、700 μm、800 μm、900 μm、1000 μm、1 mm、1.5 mm、2 mm、2.5 mm、3 mm、3.5 mm、4 mm、4.5 mm、5 mm、5.5 mm、6 mm、6.5 mm、7 mm、7.5 mm、8 mm、8.5 mm、9 mm、9.5 mm、10 mm或大於10 mm之厚度的黏度。在一些實施例中,參考醫藥組合物具有足以使注射部位擴大至至多約1 nm、5 nm、10 nm、25 nm、50 nm、100 nm、200 nm、300 nm、400 nm、500 nm、600 nm、700 nm、800 nm、900 nm、1 μm、5 μm、10 μm、15 μm、20 μm、25 μm、30 μm、35 μm、40 μm、50 μm、100 μm、200 μm、300 μm、400 μm、500 μm、600 μm、700 μm、800 μm、900 μm、1000 μm、1 mm、1.5 mm、2 mm、2.5 mm、3 mm、3.5 mm、4 mm、4.5 mm、5 mm、5.5 mm、6 mm、6.5 mm、7 mm、7.5 mm、8 mm、8.5 mm、9 mm、9.5 mm或10 mm之厚度的黏度。
在一些實施例中,黏度足以使注射部位(例如SCS)擴大至至少500 μm或約500 μm至約3 mm之厚度的醫藥組合物(例如,液體調配物)包括多醣。參見例如部分4.1.1中描述之多醣。
本文亦提供使用本文揭示之醫藥組合物治療部分4.5中描述之疾病(例如眼部疾病)的方法。在一些實施例中,治療眼部疾病之方法包括向個體(例如,人類)投與有效量之醫藥組合物(例如,包含編碼轉殖基因之表現卡匣之重組腺相關病毒(AAV)載體)。在一些實施例中,醫藥組合物投與個體眼睛之脈絡膜上腔(SCS)中。在一些實施例中,投與至SCS時足以引發治療反應之醫藥組合物之有效量小於視網膜下投與時足以引發治療反應之醫藥組合物之有效量。在一些實施例中,投與至SCS時足以引發治療反應之醫藥組合物之有效量小於玻璃體內投與時足以引發治療反應之醫藥組合物之有效量。在一些實施例中,投與至SCS時醫藥組合物之載體基因體濃度與經由視網膜下投與或藉經由玻璃體內投與時相同。在一些實施例中,投與至SCS時醫藥組合物之基因體複本之量與經由視網膜下投與或藉經由玻璃體內投與時相同。在一些實施例中,投與至SCS時足以在個體中引發治療反應之醫藥組合物之有效量低於足以在個體中引發治療反應之參考醫藥組合物之有效量。在一些實施例中,投與至SCS時足以引發治療反應之醫藥組合物之有效量小於視網膜下投與時足以引發治療反應之參考醫藥組合物之有效量。在一些實施例中,投與至SCS時足以引發治療反應之醫藥組合物之有效量為小於玻璃體內投與時足以引發治療反應之參考醫藥組合物之有效量。在一些實施例中,醫藥組合物及參考醫藥組合物具有相同載體基因體濃度。在一些實施例中,醫藥組合物及參考醫藥組合物具有相同量之基因體複本。在一些實施例中,醫藥組合物具有比參考醫藥組合物之黏度高的黏度。
在一些實施例中,醫藥組合物實質上位於插入部位附近(參見部分4.2.1及部分4.2.2)。在一些實施例中,與在視網膜下或玻璃體內投與醫藥組合物時相比,在SCS中投與醫藥組合物時,醫藥組合物引起更高水準之轉殖基因表現(濃度) (參見部分4.2.6)。在一些實施例中,與在視網膜下、玻璃體內或SCS中投與參考醫藥組合物時相比,在SCS中投與醫藥組合物時,醫藥組合物引起更高水準之轉殖基因表現(濃度) (參見部分4.2.6)。在一些實施例中,與在視網膜下或玻璃體內投與醫藥組合物時相比,在SCS中投與醫藥組合物時,醫藥組合物引起更高水準之AAV (參見部分4.2.5)。在一些實施例中,與在視網膜下、玻璃體內或SCS中投與參考醫藥組合物時相比,在SCS中投與醫藥組合物時,醫藥組合物引起更高水準之AAV (參見部分4.2.5)。在一些實施例中,與在視網膜下或玻璃體內投與醫藥組合物時相比,在SCS中投與醫藥組合物時,醫藥組合物在注射部位引起更高轉導率(或感染率) (參見部分4.2.5)。在一些實施例中,與在視網膜下、玻璃體內或SCS中投與參考醫藥組合物時相比,在SCS中投與醫藥組合物時,醫藥組合物在注射部位引起更高轉導率(或感染率) (參見部分4.2.5)。在一些實施例中,與在視網膜下或玻璃體內投與醫藥組合物時相比,在SCS中投與醫藥組合物時,醫藥組合物引起血管舒張及/或血管滲漏減少(參見部分4.2.4)。在一些實施例中,與在視網膜下、玻璃體內或SCS中投與參考醫藥組合物時相比,在SCS中投與醫藥組合物時,醫藥組合物引起血管舒張及/或血管滲漏減少(參見部分4.2.4)。在一些實施例中,參考醫藥組合物包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之重組腺相關病毒(AAV)載體。在一些實施例中,醫藥組合物具有比參考醫藥組合物高之黏度。在一些實施例中,醫藥組合物及參考醫藥組合物具有相同載體基因體濃度。在一些實施例中,醫藥組合物及參考醫藥組合物具有相同量之基因體複本。 4.1.1 黏度控制
在一些實施例中,黏度誘導組分以增加醫藥組合物(例如,液體調配物)之黏度之量存在。在一些實施例中,將調配物之黏度增加至遠超過水之黏度的值,例如在0.1/秒至1/秒之剪切速率下至少約100 cP,使得調配物可高度有效地置放,例如注射至個體眼睛之SCS中。在一些實施例中,調配物之相對高黏度增強此類調配物將治療組分(例如,包括包含轉殖基因之表現卡匣之AAV)在調配物中長時間保持在基本上均勻之懸浮液中的能力,且亦可有助於調配物之儲存穩定性。
在一些實施例中,使用低黏度醫藥組合物(例如,液體調配物)來投與編碼轉殖基因之AAV。在一些實施例中,使用具有中等黏度之醫藥組合物(例如,液體調配物)來投與編碼轉殖基因之AAV。在一些實施例中,使用高黏度醫藥組合物(例如,液體調配物)來投與編碼轉殖基因之AAV。在一些實施例中,使用黏度與對照溶液相比或與PBS相比或與常用於視網膜下注射之醫藥組合物(例如,液體調配物)相比更高的醫藥組合物(例如,液體調配物)來投與編碼轉殖基因之AAV。具有低黏度且可用於本揭示案之醫藥組合物中之溶液之非限制性實例包括含有蔗糖(例如,100 mM NaCl及4%蔗糖、6%蔗糖或10%蔗糖(約1.3 cP之黏度))、PEG3350、葡聚糖40k、PEG12000及/或羧甲基纖維素鈉鹽(10-50 cP之黏度;2% H
2O,25℃)之溶液。具有中等黏度且可用於本揭示案之醫藥組合物中之溶液之非限制性實例包括羧甲基纖維素鈉鹽(2% = 400-800 cP)、聚乙烯醇26-88 (4% = 25 cP) (亦即,Mowiol®)及/或羥乙基纖維素(100 cP NF之黏度) (亦即,羥乙基澱粉)。具有高或非常高黏度且可用於本揭示案之醫藥組合物中之溶液之非限制性實例包括羧甲基纖維素鈉鹽(1500-3000 cP之高黏度) (1% H
2O,25℃)、羥丙基甲基纖維素(羥丙甲纖維素) (4000 mPas之高黏度,2910型)及/或聚乙烯吡咯啶酮(聚維酮K-90) (M.W.約360,000 K-90;非常高黏度)。
在一些實施例中,醫藥組合物(例如,液體調配物)包含多醣。在一些實施例中,醫藥組合物(例如,液體調配物)包含羧甲基纖維素鈉鹽。在一些實施例中,醫藥組合物(例如,液體調配物)包含羧甲基纖維素鈉鹽(10-50 cP之黏度;2% H
2O,25℃)。在一些實施例中,醫藥組合物(例如,液體調配物)包含羧甲基纖維素鈉鹽(2% = 400-800 cP)。在一些實施例中,醫藥組合物(例如,液體調配物)包含羥乙基纖維素(100 cP NF之黏度) (亦即,羥乙基澱粉)。在一些實施例中,醫藥組合物(例如,液體調配物)包含羧甲基纖維素鈉鹽(1500-3000 cP之高黏度) (1% H
2O,25℃)。在一些實施例中,醫藥組合物(例如,液體調配物)包含羥丙基甲基纖維素(羥丙甲纖維素) (4000 mPas之高黏度,2910型)。
在一些實施例中,以醫藥組合物(例如,液體調配物)之重量計,醫藥組合物(例如,液體調配物)包括濃度為以重量計約0.2%至約50%之多醣。在一些實施例中,以醫藥組合物(例如,液體調配物)之重量計,醫藥組合物(例如,液體調配物)包括濃度為以重量計約0.5%至約2%之多醣。在一些實施例中,以醫藥組合物(例如,液體調配物)之重量計,醫藥組合物(例如,液體調配物)包括濃度為以重量計約0.2%至約40%之多醣。在一些實施例中,以醫藥組合物(例如,液體調配物)之重量計,醫藥組合物(例如,液體調配物)包括濃度為以重量計約0.2%至約30%之多醣。在一些實施例中,以醫藥組合物(例如,液體調配物)之重量計,醫藥組合物(例如,液體調配物)包括濃度為以重量計約0.2%至約20%之多醣。在一些實施例中,以醫藥組合物(例如,液體調配物)之重量計,醫藥組合物(例如,液體調配物)包括濃度為以重量計約0.2%至約10%之多醣。在一些實施例中,以醫藥組合物(例如,液體調配物)之重量計,醫藥組合物(例如,液體調配物)包括濃度為以重量計約0.2%至約5%之多醣。多醣可選自任何生物相容性多醣,諸如羧甲基纖維素、葡聚醣、透明質酸、硫酸軟骨素或其組合。在一些實施例中,表現出非牛頓剪切減黏行為之醫藥組合物(例如,液體調配物)係合乎需要的,因為在經由針輸注期間在高剪切下黏度較低。醫藥組合物(例如,液體調配物)亦可包括濃度足以將一或多種眼液之一部分吸入注射部位(例如SCS)之添加劑。將一或多種眼液吸入注射部位(例如SCS)可能有助於擴大注射部位(例如SCS)。在一些實施例中,一或多種添加劑包括多醣。在一些實施例中,黏度誘導組分以調配物之約0.5%或約1.0%至約5%或約10%或約20% (w/v)範圍內之量存在。
在一些實施例中,使用黏度誘導劑(例如黏度調節劑)來增加醫藥組合物(例如,液體調配物)之黏度。黏度誘導組分之實例包括但不限於透明質酸、卡波姆(carbomer)、聚丙烯酸、纖維素衍生物、聚卡波非(polycarbophil)、聚乙烯吡咯啶酮、明膠、糊精、多醣、聚丙烯醯胺、聚乙烯醇、聚乙酸乙烯酯、其衍生物及其混合物。
在一些實施例中,醫藥組合物包括聚合物組分。聚合物組分包括可用於哺乳動物體內之任何聚合物材料,無論源自天然來源抑或合成。可用於調配物中之聚合物材料之實例包括基於碳水化合物之聚合物,諸如甲基纖維素、羧甲基纖維素、羥甲基纖維素、羥丙基纖維素、羥乙基纖維素、乙基纖維素、糊精、環糊精、海藻酸鹽、透明質酸及幾丁聚糖;基於蛋白質之聚合物,諸如明膠、膠原蛋白及糖蛋白;及羥基酸聚酯,諸如生物可蝕性聚丙交酯-共乙交酯(PLGA)、聚乳酸(PLA)、聚乙交酯、聚羥基丁酸、聚己內酯、聚戊內酯、聚磷腈及聚原酸酯。聚合物亦可在調配物中交聯、摻合或用作共聚物。其他聚合物載劑包括白蛋白、聚酐、聚乙二醇、聚乙烯基聚甲基丙烯酸羥烷基酯、吡咯啶酮及聚乙烯醇。
可用於醫藥組合物中之非侵蝕性聚合物之一些實例包括聚矽氧、聚碳酸酯、聚氯乙烯、聚醯胺、聚碸、聚乙酸乙烯酯、聚氨酯、乙酸乙烯乙酯衍生物、丙烯酸樹脂、交聯聚乙烯醇及交聯聚乙烯吡咯啶酮、聚苯乙烯及醋酸纖維素衍生物。
在一些實施例中,黏度誘導組分之分子量在至多約200萬道爾頓(Dalton) (例如約10,000道爾頓)或更少至約200萬道爾頓或更多之範圍內。在一些實施例中,黏度誘導組分之分子量在約100,000道爾頓或約200,000道爾頓至約100萬道爾頓或約150萬道爾頓之範圍內。在一些實施例中,黏度誘導組分為聚合物透明質酸鹽組分,例如金屬透明質酸鹽組分,諸如鹼金屬透明質酸鹽、鹼土金屬透明質酸鹽及其混合物、透明質酸鈉及其混合物。在一些實施例中,此類透明質酸鹽組分之分子量在約50,000道爾頓或約100,000道爾頓至約130萬道爾頓或約200萬道爾頓之範圍內。
4.1.2 調配物之其他組分
在一些實施例中,本揭示案提供一種醫藥組合物(例如,液體調配物),其包含重組腺相關病毒(AAV)及以下至少一者:磷酸二氫鉀、氯化鈉、無水磷酸氫二鈉、蔗糖及界面活性劑。在一些實施例中,醫藥組合物(例如,液體調配物)不包含蔗糖。
在一些實施例中,本揭示案提供一種醫藥組合物,其包含重組腺相關病毒(AAV)及以下至少一者:離子鹽賦形劑或緩衝劑、蔗糖及界面活性劑。在一些實施例中,離子鹽賦形劑或緩衝劑可為一或多種來自由以下組成之群的組分:磷酸二氫鉀、磷酸鉀、氯化鈉、無水磷酸氫二鈉、六水磷酸鈉、一水合磷酸二氫鈉、胺丁三醇、三(羥甲基)胺基甲烷鹽酸鹽(Tris-HCl)、胺基酸、組胺酸、組胺酸鹽酸鹽(組胺酸-HCl)、琥珀酸鈉、檸檬酸鈉、乙酸鈉及(4-(2-羥乙基)-1-哌嗪乙磺酸) (HEPES)、硫酸鈉、硫酸鎂、氯化鎂6-水合物、硫酸鈣、氯化鉀、氯化鈣及檸檬酸鈣。在一些實施例中,界面活性劑可為一或多種來自由以下組成之群的組分:泊洛沙姆188、聚山梨醇酯20及聚山梨醇酯80。在一些實施例中,本揭示案提供一種醫藥組合物,其包含重組腺相關病毒(AAV)及一或多種黏度調節劑。黏度調節劑之實例包括但不限於高黏度級羧甲基纖維素(CMC)、中等黏度級CMC、低黏度級CMC、羥丙基甲基纖維素(HPMC)、羥乙基纖維素(HES)及泊洛沙姆407。在一些實施例中,本揭示案提供一種醫藥組合物,其包含重組腺相關病毒(AAV)及一或多種多醣,包括但不限於纖維素或澱粉之任何衍生物,諸如CMC、HPMC及HES。在一些實施例中,本揭示案提供一種醫藥組合物,其包含0.2至15%高黏度級羧甲基纖維素(CMC)、高黏度級CMC、中等黏度級CMC、羥丙基甲基纖維素(HPMC)、HPMC、羥乙基纖維素(HES)、低黏度級CMC及/或泊洛沙姆407。在一些實施例中,本揭示案提供一種醫藥組合物,其包含0.2至10%高黏度級羧甲基纖維素(CMC)、高黏度級CMC、中等黏度級CMC、羥丙基甲基纖維素(HPMC)、HPMC、羥乙基纖維素(HES)或低黏度級CMC及15%泊洛沙姆407。
在某些實施例中,醫藥組合物具有約60 mM至約115 mM之離子強度。在某些實施例中,醫藥組合物具有約60 mM至約100 mM之離子強度。在某些實施例中,醫藥組合物具有約65 mM至約95 mM之離子強度。在某些實施例中,醫藥組合物具有約70 mM至約90 mM之離子強度。在某些實施例中,醫藥組合物具有約75 mM至約85 mM之離子強度。
在某些實施例中,醫藥組合物具有約30 mM至約100 mM之離子強度。在某些實施例中,醫藥組合物具有約35 mM至約95 mM之離子強度。在某些實施例中,醫藥組合物具有約40 mM至約90 mM之離子強度。在某些實施例中,醫藥組合物具有約45 mM至約85 mM之離子強度。在某些實施例中,醫藥組合物具有約50 mM至約80 mM之離子強度。在某些實施例中,醫藥組合物具有約55 mM至約75 mM之離子強度。在某些實施例中,醫藥組合物具有約60 mM至約70 mM之離子強度。
在某些實施例中,醫藥組合物包含氯化鉀(例如,濃度為0.2 g/L)。在某些實施例中,醫藥組合物包含磷酸二氫鉀(例如,濃度為0.2 g/L)。在某些實施例中,醫藥組合物包含氯化鈉(例如,濃度為5.84 g/L)。在某些實施例中,醫藥組合物包含無水磷酸氫二鈉(例如,濃度為1.15 g/L)。在某些實施例中,醫藥組合物包含氯化鉀、磷酸二氫鉀、氯化鈉及無水磷酸氫二鈉。
在一些實施例中,參考醫藥組合物包含與醫藥組合物相同之組分。在一些實施例中,參考醫藥組合物包含與醫藥組合物相同之組分但具有比醫藥組合物低之黏度值。在一些實施例中,除影響或增加組合物或溶液之黏度之一或多種組分外,參考醫藥組合物包含與醫藥組合物相同之組分。
在某些實施例中,醫藥組合物包含濃度為3% (重量/體積,30 g/L)至18% (重量/體積,180 g/L)之蔗糖。在某些實施例中,醫藥組合物包含濃度為4% (重量/體積,40 g/L)之蔗糖。
在某些實施例中,醫藥組合物包含濃度為0.001% (重量/體積,0.01 g/L)之泊洛沙姆188。在某些實施例中,醫藥組合物包含濃度為0.0005% (重量/體積,0.005 g/L)至0.05% (重量/體積,0.5 g/L)之泊洛沙姆188。在某些實施例中,醫藥組合物包含濃度為0.001% (重量/體積,0.01 g/L)之泊洛沙姆188。在某些實施例中,醫藥組合物包含濃度為0.0005% (重量/體積,0.05 g/L)至0.05% (重量/體積,0.5 g/L)之聚山梨醇酯20。在某些實施例中,醫藥組合物包含濃度為0.0005% (重量/體積,0.05 g/L)至0.05% (重量/體積,0.5 g/L)之聚山梨醇酯80。
在某些實施例中,醫藥組合物之pH值為約7.4。在某些實施例中,醫藥組合物之pH值為約6.0至9.0。在某些實施例中,醫藥組合物之pH值為7.4。在某些實施例中,醫藥組合物之pH值為6.0至9.0。
在某些實施例中,醫藥組合物在疏水塗層玻璃小瓶中。在某些實施例中,醫藥組合物在環烯烴聚合物(COP)小瓶中。在某些實施例中,醫藥組合物在Daikyo Crystal Zenith® (CZ)小瓶中。在某些實施例中,醫藥組合物在TopLyo塗層小瓶中。
在某些實施例中,本文揭示一種醫藥組合物,其包含重組AAV及以下至少一者:(a)氯化鉀濃度為0.2 g/L、(b)磷酸二氫鉀濃度為0.2 g/L、(c)氯化鈉濃度為5.84 g/L、(d)無水磷酸氫二鈉濃度為1.15 g/L、(e)蔗糖濃度為4%重量/體積(40 g/L)、(f)泊洛沙姆188濃度為0.001%重量/體積(0.01 g/L)及(g)水,且其中重組AAV為AAV8。在一些實施例中,醫藥組合物不包含蔗糖。
在一些實施例中,醫藥組合物包含(a)編碼抗人類血管內皮生長因子(hVEGF)抗體之構築體II及以下至少一者:(b)濃度為0.2 g/L之氯化鉀、(c)濃度為0.2 g/L之磷酸二氫鉀、(d)濃度為5.84 g/L之氯化鈉、(e)濃度為1.15 g/L之無水磷酸氫二鈉、(f)濃度為4%重量/體積(40 g/L)之蔗糖、(g)濃度為0.001%重量/體積(0.01 g/L)之泊洛沙姆188及(h)水,且其中該抗hVEGF抗體包含:包含SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:4之胺基酸序列之重鏈,及包含SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:3之胺基酸序列之輕鏈。在一些實施例中,醫藥組合物不包含蔗糖。
在一些實施例中,醫藥組合物包含(a)編碼三肽基-肽酶1之AAV8或AAV9及以下至少一者:(b)濃度為0.2 g/L之氯化鉀、(c)濃度為0.2 g/L之磷酸二氫鉀、(d)濃度為5.84 g/L之氯化鈉、(e)濃度為1.15 g/L之無水磷酸氫二鈉、(f)濃度為4%重量/體積(40 g/L)之蔗糖、(g)濃度為0.001%重量/體積(0.01 g/L)之泊洛沙姆188及(h)水。在一些實施例中,醫藥組合物不包含蔗糖。在一些實施例中,醫藥組合物之黏度影響與巴登蛋白(Batten)-CLN2相關之視力喪失。
在一些實施例中,醫藥組合物具有適合脈絡膜上注射(例如,經由脈絡膜上藥物遞送裝置,例如具有微針之微注射器)之所需黏度、密度及/或滲透壓。在一些實施例中,醫藥組合物為液體組合物。在一些實施例中,醫藥組合物為冷凍組合物。在一些實施例中,醫藥組合物為來自本文揭示之液體組合物之凍乾組合物。在一些實施例中,醫藥組合物為復原之凍乾調配物。
在一些實施例中,醫藥組合物為包含介於約1%與約7%之間的殘餘水分含量之凍乾組合物。在一些實施例中,醫藥組合物為包含介於約2%與約6%之間的殘餘水分含量之凍乾組合物。在一些實施例中,醫藥組合物為包含介於約3%與約4%之間的殘餘水分含量之凍乾組合物。在一些實施例中,醫藥組合物為包含約5%之殘餘水分含量之凍乾組合物。
在某些實施例中,醫藥組合物具有200 mOsm/L至660 mOsm/L之滲透壓範圍。在某些實施例中,醫藥組合物具有約、至少約或至多約以下之滲透壓:200 mOsm/L、250 mOsm/L、300 mOsm/L、350 mOsm/L、400 mOsm/L、450 mOsm/L、500 mOsm/L、550 mOsm/L、600 mOsm/L、650 mOsm/L或660 mOsm/L。
在某些實施例中,基因療法構築體呈AAV載體活性成分在調配物緩衝液中之冷凍無菌單次使用溶液供應。在一具體實施例中,適合視網膜下投與之醫藥組合物包含重組(例如rHuGlyFabVEGFi)載體在調配物緩衝液中之懸浮液,該調配物緩衝液包含生理學相容之水性緩衝液、界面活性劑及視情況選用之賦形劑。在一些實施例中,構築體在杜貝爾寇磷酸鹽緩衝鹽水及0.001%泊洛沙姆188 pH = 7.4中調配。 4.2 功能特性
4.2.1 清除時間
本揭示案提供一種引起自SCS之清除時間延遲之醫藥組合物(例如,包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之AAV的液體調配物)。在一些實施例中,與非黏性或低黏度醫藥組合物相比,黏性(或較高黏性)醫藥組合物引起自SCS之清除時間延遲。在一些實施例中,與非黏性或低黏度醫藥組合物相比,黏性(或較高黏性)醫藥組合物引起自眼睛之清除時間延遲。在一些實施例中,與較低黏性醫藥組合物相比,較高黏性醫藥組合物引起自眼睛之清除時間延遲。在一些實施例中,較高黏性醫藥組合物之黏度高於水之黏度。在一些實施例中,較高黏性醫藥組合物之黏度高於通常用於視網膜下注射之溶液之黏度。在一些實施例中,在醫藥組合物投與至SCS之後醫藥組合物之清除時間等於或高於參考醫藥組合物之清除時間在視網膜下或玻璃體內投與參考醫藥組合物之後。在一些實施例中,在醫藥組合物投與至SCS之後醫藥組合物之清除時間等於或高於在參考醫藥組合物投與至SCS之後參考醫藥組合物之清除時間。
在一些實施例中,醫藥組合物(例如,包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之AAV的液體調配物)引起約30分鐘至約20小時、約2小時至約20小時、約30分鐘至約24小時、約1小時至約2小時、約30分鐘至約90天、約30分鐘至約60天、約30分鐘至約30天、約30分鐘至約21天、約30分鐘至約14天、約30分鐘至約7天、約30分鐘至約3天、約30分鐘至約2天、約30分鐘至約1天、約4小時至約90天、約4小時至約60天、約4小時至約30天、約4小時至約21天、約4小時至約14天、約4小時至約7天、約4小時至約3天、約4小時至約2天、約4小時至約1天、約4小時至約8小時、約4小時至約16小時、約4小時至約20小時、約1天至約90天、約1天至約60天、約1天至約30天、約1天至約21天、約1天至約14天、約1天至約7天、約1天至約3天、約2天至約90天、約3天至約90天、約3天至約60天、約3天至約30天、約3天至約21天、約3天至約14天或約3天至約7天的自SCS之清除時間。在一些實施例中,自SCS之清除時間為約3天至約365天、約3天至約300天、約3天至約200天、約3天至約150天、約3天至約125天、約7天至約365天、約7天至約300天、約7天至約200天、約7天至約150天、約7天至約125天。「自SCS之清除時間」係實質上所有之醫藥組合物、藥劑或AAV排出SCS所需之時間。在一些實施例中,「自SCS之清除時間」係藉由任何標準方法(例如部分4.6及部分5中描述之彼等方法)均未在SCS中偵測到醫藥組合物、藥劑或AAV所需的時間。在一些實施例中,「自SCS之清除時間」係如藉由任何標準方法(例如部分4.6及部分5中描述之彼等方法)所偵測,醫藥組合物、藥劑或AAV以至多約2%或至多約5%之量存在於SCS中時。
在一些實施例中,醫藥組合物(例如,包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之AAV的液體調配物)引起約30分鐘至約20小時、約2小時至約20小時、約30分鐘至約24小時、約1小時至約2小時、約30分鐘至約90天、約30分鐘至約60天、約30分鐘至約30天、約30分鐘至約21天、約30分鐘至約14天、約30分鐘至約7天、約30分鐘至約3天、約30分鐘至約2天、約30分鐘至約1天、約4小時至約90天、約4小時至約60天、約4小時至約30天、約4小時至約21天、約4小時至約14天、約4小時至約7天、約4小時至約3天、約4小時至約2天、約4小時至約1天、約4小時至約8小時、約4小時至約16小時、約4小時至約20小時、約1天至約90天、約1天至約60天、約1天至約30天、約1天至約21天、約1天至約14天、約1天至約7天、約1天至約3天、約2天至約90天、約3天至約90天、約3天至約60天、約3天至約30天、約3天至約21天、約3天至約14天或約3天至約7天的自眼睛之清除時間。在一些實施例中,自眼睛之清除時間為約3天至約365天、約3天至約300天、約3天至約200天、約3天至約150天、約3天至約125天、約7天至約365天、約7天至約300天、約7天至約200天、約7天至約150天、約7天至約125天。「自眼睛之清除時間」係實質上所有之醫藥組合物、藥劑或AAV排出眼睛所需之時間。在一些實施例中,「自眼睛之清除時間」係藉由任何方法(例如部分4.6及部分5中描述之彼等方法)均未偵測到醫藥組合物、藥劑或AAV所需的時間。在一些實施例中,「自眼睛之清除時間」係如藉由任何標準方法(例如部分4.6及部分5中描述之彼等方法)所偵測,醫藥組合物、藥劑或AAV以至多約2%或至多約5%之量存在於眼睛中時。
在一些實施例中,清除時間不早於(例如,自SCS或眼睛之清除時間在以下時間之前未發生過)在投與醫藥組合物(例如,液體調配物)之後約30分鐘、1小時、2小時、3小時、4小時、5小時、6小時、7小時、8小時、9小時、10小時、12小時、14小時、16小時、18小時、20小時、22小時、24小時、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、23天、25天、27天、30天、35天、40天、50天、55天、60天、65天、70天、75天、80天、85天、90天、95天、100天、120天、140天、160天、180天、200天、220天、240天、260天、280天、300天、320天、340天、360天、380天或400天。在一些實施例中,清除時間為在投與醫藥組合物(例如,液體調配物)之後約30分鐘、1小時、2小時、3小時、4小時、5小時、6小時、7小時、8小時、9小時、10小時、12小時、14小時、16小時、18小時、20小時、22小時、24小時、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、23天、25天、27天、30天、35天、40天、50天、55天、60天、65天、70天、75天、80天、85天、90天、95天、100天、120天、140天、160天、180天、200天、220天、240天、260天、280天、300天、320天、340天、360天、380天或400天。
在一些實施例中,較高黏性醫藥組合物(例如,包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之AAV的液體調配物)引起清除時間比當使用較低黏性醫藥組合物(參考醫藥組合物)來投與包含編碼轉殖基因之表現卡匣之AAV (例如,經由視網膜下投與、玻璃體內投與或投與至SCS)時多至少2倍、多至少3倍、多至少4倍、多至少5倍、多至少6倍、多至少7倍、多至少8倍、多至少9倍、多至少10倍、多至少15倍、多至少20倍、多至少50倍、多至少100倍、多至少5%、多至少10%、多至少15%、多至少20%、多至少25%、多至少30%、多至少35%、多至少40%、至少45%、多至少50%、多至少55%、多至少60%、多至少65%、多至少70%、多至少75%、多至少80%、多至少85%、多至少90%、多至少95%、多至少100%、多至少150%或多至少200%、多至少250%或至少300%、多至少400%或多至少500%。
在一些實施例中,較高黏性醫藥組合物(例如,包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之AAV的液體調配物)之脈絡膜上投與引起清除時間比當藉由脈絡膜上投與例如使用較低黏性醫藥組合物(參考醫藥組合物)來投與包含編碼轉殖基因之表現卡匣之AAV時多至少2倍、多至少3倍、多至少4倍、多至少5倍、多至少6倍、多至少7倍、多至少8倍、多至少9倍、多至少10倍、多至少15倍、多至少20倍、多至少50倍、多至少100倍、多至少5%、多至少10%、多至少15%、多至少20%、多至少25%、多至少30%、多至少35%、多至少40%、至少45%、多至少50%、多至少55%、多至少60%、多至少65%、多至少70%、多至少75%、多至少80%、多至少85%、多至少90%、多至少95%、多至少100%、多至少150%或多至少200%、多至少250%或至少300%、多至少400%或多至少500%。
在一些實施例中,較高黏性醫藥組合物(例如,包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之AAV的液體調配物)之脈絡膜上投與引起清除時間比當藉由視網膜下投與或藉由玻璃體內投與例如使用較低黏性醫藥組合物來投與包含編碼轉殖基因之表現卡匣之AAV時多至少2倍、多至少3倍、多至少4倍、多至少5倍、多至少6倍、多至少7倍、多至少8倍、多至少9倍、多至少10倍、多至少15倍、多至少20倍、多至少50倍、多至少100倍、多至少5%、多至少10%、多至少15%、多至少20%、多至少25%、多至少30%、多至少35%、多至少40%、至少45%、多至少50%、多至少55%、多至少60%、多至少65%、多至少70%、多至少75%、多至少80%、多至少85%、多至少90%、多至少95%、多至少100%、多至少150%或多至少200%、多至少250%或至少300%、多至少400%或多至少500%。
在一些實施例中,黏性(例如,相對黏稠、中等至超高黏度、或黏性超過水、或黏性超過對照溶液、或黏性超過常用於視網膜下投與之溶液)醫藥組合物(例如,包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之AAV的液體調配物)之脈絡膜上投與引起清除時間比當經由視網膜下投與或經由玻璃體內投與例如使用相同醫藥組合物來投與包含編碼轉殖基因之表現卡匣之AAV時多至少2倍、多至少3倍、多至少4倍、多至少5倍、多至少6倍、多至少7倍、多至少8倍、多至少9倍、多至少10倍、多至少15倍、多至少20倍、多至少50倍、多至少100倍、多至少5%、多至少10%、多至少15%、多至少20%、多至少25%、多至少30%、多至少35%、多至少40%、至少45%、多至少50%、多至少55%、多至少60%、多至少65%、多至少70%、多至少75%、多至少80%、多至少85%、多至少90%、多至少95%、多至少100%、多至少150%或多至少200%、多至少250%或至少300%、多至少400%或多至少500%。
在一些實施例中,藉由脈絡膜上注射投與之相對黏性醫藥組合物(例如,包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之AAV的醫藥組合物)的清除時間大於經由視網膜下投與或經由玻璃體內投與來投與之相同醫藥組合物的清除時間。在一些實施例中,藉由脈絡膜上注射投與之較高黏性醫藥組合物(例如,包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之AAV的醫藥組合物)的清除時間大於藉由脈絡膜上注射投與之可比較之較低黏性醫藥組合物。在一些實施例中,藉由脈絡膜上注射投與之較高黏性醫藥組合物(例如,包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之AAV的醫藥組合物)的清除時間大於經由視網膜下投與或經由玻璃體內投與來投與之可比較之較低黏性醫藥組合物。在一些實施例中,藉由脈絡膜上注射投與之黏性醫藥組合物(例如,包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之AAV的醫藥組合物)的清除時間大於經由視網膜下投與或經由玻璃體內投與來投與之可比較之黏性醫藥組合物。
在一些實施例中,藉由脈絡膜上注射投與之黏性醫藥組合物(例如,包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之AAV的醫藥組合物)的清除時間比經由視網膜下投與或經由玻璃體內投與來投與之相同醫藥組合物多至少30分鐘、1小時、2小時、3小時、4小時、5小時、6小時、7小時、8小時、9小時、10小時、12小時、14小時、16小時、18小時、20小時、22小時、24小時、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、23天、25天、27天、30天、35天、40天、50天、55天、60天、65天、70天、75天、80天、85天、90天、95天、100天、120天、140天、160天、180天、200天、220天、240天、260天、280天、300天、320天、340天、360天、380天或400天。
在一些實施例中,藉由脈絡膜上注射投與之較高黏性醫藥組合物(例如,包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之AAV的醫藥組合物)的清除時間比藉由脈絡膜上注射投與之可比較之較低黏性醫藥組合物(參考醫藥組合物)多至少30分鐘、1小時、2小時、3小時、4小時、5小時、6小時、7小時、8小時、9小時、10小時、12小時、14小時、16小時、18小時、20小時、22小時、24小時、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、23天、25天、27天、30天、35天、40天、50天、55天、60天、65天、70天、75天、80天、85天、90天、95天、100天、120天、140天、160天、180天、200天、220天、240天、260天、280天、300天、320天、340天、360天、380天或400天。
在一些實施例中,藉由脈絡膜上注射投與之較高黏性醫藥組合物(例如,包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之AAV的醫藥組合物)的清除時間比經由視網膜下投與或經由玻璃體內投與來投與之可比較之較低黏性醫藥組合物多至少30分鐘、1小時、2小時、3小時、4小時、5小時、6小時、7小時、8小時、9小時、10小時、12小時、14小時、16小時、18小時、20小時、22小時、24小時、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、23天、25天、27天、30天、35天、40天、50天、55天、60天、65天、70天、75天、80天、85天、90天、95天、100天、120天、140天、160天、180天、200天、220天、240天、260天、280天、300天、320天、340天、360天、380天或400天。
在一些實施例中,經由玻璃體內注射或經由視網膜下注射投與之醫藥組合物的清除時間為投與後至多約30分鐘、1小時、2小時、3小時、4小時、5小時、6小時、7小時、8小時、9小時、10小時、12小時、14小時、16小時、18小時、20小時、22小時、24小時、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、23天、25天、27天、30天、35天、40天、50天、55天、60天、65天、70天、75天、80天、85天、90天、95天、100天、120天、140天、160天、180天、200天、220天、240天、260天、280天、300天、320天、340天、360天、380天或至多約400天。
在一些實施例中,藉由玻璃體內注射、視網膜下注射或注射至SCS投與之參考醫藥組合物的清除時間為投與後至多約30分鐘、1小時、2小時、3小時、4小時、5小時、6小時、7小時、8小時、9小時、10小時、12小時、14小時、16小時、18小時、20小時、22小時、24小時、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、23天、25天、27天、30天、35天、40天、50天、55天、60天、65天、70天、75天、80天、85天、90天、95天、100天、120天、140天、160天、180天、200天、220天、240天、260天、280天、300天、320天、340天、360天、380天或至多約400天。
在一些實施例中,清除時間係自眼睛之清除時間。在一些實施例中,清除時間係自SCS之清除時間。在一些實施例中,清除時間係自注射部位之清除時間。 4.2.2 圓周擴散
在一些實施例中,醫藥組合物(例如,液體調配物)定位於注射部位。在一些實施例中,醫藥組合物(例如,液體調配物)定位於注射部位之時段比可比較之較低黏性醫藥組合物長。在一些實施例中,當在SCS中注射時醫藥組合物(例如,液體調配物)定位於注射部位之時段比當藉由視網膜下注射或玻璃體內注射投與醫藥組合物時長。醫藥組合物可具有不同黏度值。在一些實施例中,黏性(或較高黏性)醫藥組合物保持定位於SCS中之時段比非黏性或低黏度醫藥組合物長。
在一些實施例中,定位可藉由評估圓周擴散(例如,2D圓周擴散)來確定。在一些實施例中,較高黏性醫藥組合物(例如,包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之AAV的液體調配物)引起圓周擴散比當使用較低黏性醫藥組合物來投與包含編碼轉殖基因之表現卡匣之AAV (例如,藉由脈絡膜上注射、藉由視網膜下注射或藉由玻璃體內注射)時少至少2倍、少至少3倍、少至少4倍、少至少5倍、少至少6倍、少至少7倍、少至少8倍、少至少9倍、少至少10倍、少至少15倍、少至少20倍、少至少50倍、少至少100倍、少至少5%、少至少10%、少至少15%、少至少20%、少至少25%、少至少30%、少至少35%、少至少40%、至少45%、少至少50%、少至少55%、少至少60%、少至少65%、少至少70%、少至少75%、少至少80%、少至少85%、少至少90%、少至少95%、少至少100%、少至少150%或少至少200%、少至少250%或至少300%、少至少400%或少至少500%。
在一些實施例中,較高黏性醫藥組合物(例如,包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之AAV的液體調配物)之脈絡膜上投與引起圓周擴散比當藉由脈絡膜上投與、藉由視網膜下投與或藉由玻璃體內投與例如使用較低黏性醫藥組合物來投與包含編碼轉殖基因之表現卡匣之AAV時少至少2倍、少至少3倍、少至少4倍、少至少5倍、少至少6倍、少至少7倍、少至少8倍、少至少9倍、少至少10倍、少至少15倍、少至少20倍、少至少50倍、少至少100倍、少至少5%、少至少10%、少至少15%、少至少20%、少至少25%、少至少30%、少至少35%、少至少40%、至少45%、少至少50%、少至少55%、少至少60%、少至少65%、少至少70%、少至少75%、少至少80%、少至少85%、少至少90%、少至少95%、少至少100%、少至少150%或少至少200%、少至少250%或至少300%、少至少400%或少至少500%。
在一些實施例中,黏性(例如,相對黏稠、中等至超高黏度、或黏性超過水、或黏性超過對照溶液、或黏性超過常用於視網膜下投與之溶液)醫藥組合物(例如,包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之AAV的液體調配物)之脈絡膜上投與引起圓周擴散比當藉由視網膜下投與或藉由玻璃體內投與例如使用相同醫藥組合物來投與包含編碼轉殖基因之表現卡匣之AAV時少至少2倍、少至少3倍、少至少4倍、少至少5倍、少至少6倍、少至少7倍、少至少8倍、少至少9倍、少至少10倍、少至少15倍、少至少20倍、少至少50倍、少至少100倍、少至少5%、少至少10%、少至少15%、少至少20%、少至少25%、少至少30%、少至少35%、少至少40%、至少45%、少至少50%、少至少55%、少至少60%、少至少65%、少至少70%、少至少75%、少至少80%、少至少85%、少至少90%、少至少95%、少至少100%、少至少150%或少至少200%、少至少250%或至少300%、少至少400%或少至少500%。
在一些實施例中,圓周擴散可在投與醫藥組合物或參考醫藥組合物後30分鐘、1小時、2小時、3小時、4小時、5小時、6小時、7小時、8小時、9小時、10小時、12小時、14小時、16小時、18小時、20小時、22小時、24小時、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、23天、25天、27天、30天、35天、40天、50天、55天、60天、65天、70天、75天、80天、85天、90天、95天、100天、120天、140天、160天、180天、200天、220天、240天、260天、280天、300天、320天、340天、360天、380天或400天測定。
4.2.3 SCS厚度
在一些實施例中,可藉由在向個體投與醫藥組合物(例如,液體調配物)之後評估SCS厚度來確定定位。在一些實施例中,在將醫藥組合物(例如,液體調配物)注射在SCS中之後,醫藥組合物(例如,液體調配物)增加SCS之厚度。在一些實施例中,SCS擴大以適應低黏度醫藥組合物(例如,液體調配物)之輸注。在一些實施例中,更大體積之低黏度醫藥組合物(例如,液體調配物)之輸注不會引起SCS之進一步擴大。在一些實施例中,藉由增加流體在SCS中之擴散面積而非進一步擴大SCS來適應更大體積之低黏度流體調配物。在一些實施例中,將黏性醫藥組合物(例如,液體調配物)輸注至SCS中可使SCS厚度擴大至超過將低黏度醫藥組合物(例如,液體調配物)輸注至SCS中時所達到之SCS厚度。在一些實施例中,用黏性醫藥組合物(例如,液體調配物)增加SCS厚度可使得接近SCS容易,從而容易或允許在SCS中處置裝置。在一些實施例中,擴大SCS厚度允許醫藥組合物(例如,液體調配物)及/或編碼轉殖基因之AAV在注射部位(定位)保持更長時段。在一些實施例中,與非黏性或低黏度醫藥組合物相比,黏性醫藥組合物在更長時段內增加注射部位或附近之厚度。在一些實施例中,與較低黏性醫藥組合物相比,較高黏性醫藥組合物在更長時段內增加注射部位或附近之厚度。在一些實施例中,在醫藥組合物投與至SCS之後在注射部位之厚度等於或高於在視網膜下或玻璃體內投與參考醫藥組合物之後參考醫藥組合物在注射部位之厚度。在一些實施例中,在醫藥組合物投與至SCS之後醫藥組合物在注射部位之厚度等於或高於在參考醫藥組合物投與至SCS之後參考醫藥組合物在注射部位之厚度。
在一些實施例中,黏性(例如,相對黏稠、中等至超高黏度、或黏性超過水、或黏性超過對照溶液、或黏性超過常用於視網膜下投與之溶液)醫藥組合物(例如,包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之AAV的液體調配物)之脈絡膜上投與引起SCS厚度之增加比當藉由脈絡膜上投與例如使用較低黏性醫藥組合物來投與包含編碼轉殖基因之表現卡匣之AAV時大至少2倍、大至少3倍、大至少4倍、大至少5倍、大至少6倍、大至少7倍、大至少8倍、大至少9倍、大至少10倍、大至少15倍、大至少20倍、大至少50倍、大至少100倍、大至少5%、大至少10%、大至少15%、大至少20%、大至少25%、大至少30%、大至少35%、大至少40%、至少45%、大至少50%、大至少55%、大至少60%、大至少65%、大至少70%、大至少75%、大至少80%、大至少85%、大至少90%、大至少95%、大至少100%、大至少150%或大至少200%、大至少250%或至少300%、大至少400%或大至少500%。
在一些實施例中,較高黏性醫藥組合物(例如,包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之AAV的液體調配物)之脈絡膜上投與引起注射部位或附近之厚度之增加比當藉由視網膜下投與或藉由玻璃體內投與例如使用較低黏性醫藥組合物來投與包含編碼轉殖基因之表現卡匣之AAV時大至少2倍、大至少3倍、大至少4倍、大至少5倍、大至少6倍、大至少7倍、大至少8倍、大至少9倍、大至少10倍、大至少15倍、大至少20倍、大至少50倍、大至少100倍、大至少5%、大至少10%、大至少15%、大至少20%、大至少25%、大至少30%、大至少35%、大至少40%、至少45%、大至少50%、大至少55%、大至少60%、大至少65%、大至少70%、大至少75%、大至少80%、大至少85%、大至少90%、大至少95%、大至少100%、大至少150%或大至少200%、大至少250%或至少300%、大至少400%或大至少500%。
在一些實施例中,黏性(例如,相對黏稠、中等至超高黏度、或黏性超過水、或黏性超過對照溶液、或黏性超過常用於視網膜下投與之溶液)醫藥組合物(例如,包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之AAV的液體調配物)之脈絡膜上投與引起注射部位或附近之厚度之增加比當藉由視網膜下投與或藉由玻璃體內投與例如使用相同醫藥組合物來投與包含編碼轉殖基因之表現卡匣之AAV時大至少2倍、大至少3倍、大至少4倍、大至少5倍、大至少6倍、大至少7倍、大至少8倍、大至少9倍、大至少10倍、大至少15倍、大至少20倍、大至少50倍、大至少100倍、大至少5%、大至少10%、大至少15%、大至少20%、大至少25%、大至少30%、大至少35%、大至少40%、至少45%、大至少50%、大至少55%、大至少60%、大至少65%、大至少70%、大至少75%、大至少80%、大至少85%、大至少90%、大至少95%、大至少100%、大至少150%或大至少200%、大至少250%或至少300%、大至少400%或大至少500%。
在一些實施例中,在藉由脈絡膜上注射投與較高黏性醫藥組合物(例如,包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之AAV的醫藥組合物)之後在注射部位所獲得之厚度大於在藉由脈絡膜上注射投與可比較之較低黏性醫藥組合物之後。在一些實施例中,在藉由脈絡膜上注射投與較高黏性醫藥組合物(例如,包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之AAV的醫藥組合物)之後在注射部位所獲得之厚度大於在藉由視網膜下注射或藉由玻璃體內注射投與可比較之較低黏性醫藥組合物之後。在一些實施例中,在藉由脈絡膜上注射投與黏性醫藥組合物(例如,包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之AAV的醫藥組合物)之後在注射部位所獲得之厚度大於在藉由視網膜下投與或藉由玻璃體內投與來投與相同醫藥組合物之後。
在一些實施例中,注射部位或附近之厚度(例如,SCS處或附近之厚度)可在投與醫藥組合物或參考醫藥組合物之後30分鐘、1小時、2小時、3小時、4小時、5小時、6小時、7小時、8小時、9小時、10小時、12小時、14小時、16小時、18小時、20小時、22小時、24小時、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、23天、25天、27天、30天、35天、40天、50天、55天、60天、65天、70天、75天、80天、85天、90天、95天、100天、120天、140天、160天、180天、200天、220天、240天、260天、280天、300天、320天、340天、360天、380天或400天測定。
4.2.4 血管舒張及血管滲漏
在一些實施例中,在醫藥組合物投與至SCS之後VEGF誘發之血管舒張及/或血管滲漏之水準等於或小於在視網膜下或玻璃體內投與參考醫藥組合物之後VEGF誘發之血管舒張及/或血管滲漏之水準。在一些實施例中,在醫藥組合物投與至SCS之後VEGF誘發之血管舒張及/或血管滲漏之水準等於或低於在參考醫藥組合物投與至SCS之後VEGF誘發之血管舒張及/或血管滲漏之水準。在一些實施例中,醫藥組合物(例如,包含編碼轉殖基因之表現卡匣之AAV的液體調配物)引起在相同醫藥組合物投與至SCS之後VEGF誘發之血管舒張及/或血管滲漏之水準與在經由視網膜下投與或經由玻璃體內投與來投與醫藥組合物之後相比減少。在一些實施例中,醫藥組合物(例如,液體調配物)引起在醫藥組合物投與至SCS之後VEGF誘發之血管舒張及/或血管滲漏之水準與在經由視網膜下投與、經由玻璃體內投與或投與至SCS投與可比較之(較低黏性)醫藥組合物之後相比減少。在一些實施例中,VEGF誘發之血管舒張及/或血管滲漏降低至少約2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍、至少5%、至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少100%、至少150%或至少200%、至少250%或至少300%、至少400%或至少500%。在一些實施例中,轉殖基因為抗人類血管內皮生長因子(抗VEGF)抗體。
在一些實施例中,VEGF誘發之血管舒張及/或血管滲漏在投與後約30分鐘、1小時、2小時、4小時、6小時、8小時、10小時、12小時、14小時、15小時、18小時、20小時、22小時、24小時、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、23天、25天、27天、30天、35天、40天、50天、55天、60天、65天、70天、75天、80天、85天、90天、95天、100天、120天、140天、160天、180天、200天、220天、240天、260天、280天、300天、320天、340天、360天、380天或至多約400天測定。
4.2.5 注射部位之轉導率(或感染率)
在一些實施例中,在SCS中投與醫藥組合物之後在注射部位之轉導率(或感染率)等於或高於在經由視網膜下投與或經由靜脈內投與來投與相同醫藥組合物之後在注射部位之轉導率(或感染率)。在一些實施例中,在SCS中投與醫藥組合物之後在注射部位之轉導率(或感染率)等於或高於在經由視網膜下或靜脈內投與或投與至SCS投與可比較之(例如,較低黏性)醫藥組合物(參考醫藥組合物)之後在注射部位之轉導率(或感染率)。在一些實施例中,醫藥組合物具有比參考醫藥組合物(可比較之較低黏性醫藥組合物)高之黏度。在一些實施例中,醫藥組合物及參考醫藥組合物具有相同載體基因體濃度。在一些實施例中,醫藥組合物及參考醫藥組合物具有相同量之基因體複本。在一些實施例中,在注射部位之轉導率(或感染率)的增加係增加至少約2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍、至少5%、至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少100%、至少150%或至少200%、至少250%或至少300%、至少400%或至少500%
在一些實施例中,在經脈絡膜上投與醫藥組合物之後在注射部位之AAV水準等於或高於在經由視網膜下投與或經由靜脈內投與來投與相同醫藥組合物之後在注射部位之AAV水準。在一些實施例中,在經脈絡膜上投與醫藥組合物之後在注射部位之AAV水準等於或高於在經由視網膜下或靜脈內投與或投與至SCS投與可比較之(例如,較低黏性)醫藥組合物之後在注射部位之AAV水準。在一些實施例中,醫藥組合物具有比參考醫藥組合物高的黏度。在一些實施例中,醫藥組合物及參考醫藥組合物(可比較之較低黏性醫藥組合物)具有相同載體基因體濃度。在一些實施例中,醫藥組合物及參考醫藥組合物具有相同量之基因體複本。在一些實施例中,在注射部位之AAV水準的增加係增加至少約2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍、至少5%、至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少100%、至少150%或至少200%、至少250%或至少300%、至少400%或至少500%。
在一些實施例中,AAV水準或轉導率(或感染率)在投與後約30分鐘、1小時、2小時、4小時、6小時、8小時、10小時、12小時、14小時、15小時、18小時、20小時、22小時、24小時、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、23天、25天、27天、30天、35天、40天、50天、55天、60天、65天、70天、75天、80天、85天、90天、95天、100天、120天、140天、160天、180天、200天、220天、240天、260天、280天、300天、320天、340天、360天、380天或至多約400天測定。
4.2.6 轉殖基因表現
在一些實施例中,在SCS中注射醫藥組合物之後轉殖基因產物之濃度至少等於或高於在SCS中注射參考(較低黏性)醫藥組合物之後。在一些實施例中,在SCS中注射醫藥組合物之後轉殖基因產物之濃度至少等於或高於在藉由視網膜下注射或藉由玻璃體內注射來注射參考(較低黏性)醫藥組合物之後。在一些實施例中,在SCS中注射醫藥組合物之後轉殖基因產物之濃度至少等於或高於在藉由視網膜下注射或藉由玻璃體內注射來注射相同醫藥組合物之後。
在一些實施例中,與在SCS中注射可比較之(較低黏性)醫藥組合物之後相比,在SCS中注射醫藥組合物之後更長時段在眼睛(例如,玻璃狀液)中偵測到轉殖基因產物(例如,轉殖基因產物之濃度)。在一些實施例中,與在藉由視網膜下注射或藉由玻璃體內投與注射參考(較低黏性)醫藥組合物之後相比,在SCS中注射醫藥組合物之後更長時段在眼睛(例如,玻璃狀液)中偵測到轉殖基因產物(例如,轉殖基因產物之濃度)。在一些實施例中,與在藉由視網膜下注射或藉由玻璃體內注射來注射相同(或相似黏度)醫藥組合物之後相比,在SCS中注射醫藥組合物之後更長時段在眼睛(例如,玻璃狀液)中偵測到轉殖基因產物(例如,轉殖基因產物之濃度)。
在一些實施例中,更長時段長至少30分鐘、1小時、2小時、3小時、4小時、5小時、6小時、7小時、8小時、9小時、10小時、12小時、14小時、16小時、18小時、20小時、22小時、24小時、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、23天、25天、27天、30天、35天、40天、50天、55天、60天、65天、70天、75天、80天、85天、90天、95天、100天、120天、140天、160天、180天、200天、220天、240天、260天、280天、300天、320天、340天、360天、380天或400天。在一些實施例中,更長時段長約30分鐘、1小時、2小時、3小時、4小時、5小時、6小時、7小時、8小時、9小時、10小時、12小時、14小時、16小時、18小時、20小時、22小時、24小時、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、23天、25天、27天、30天、35天、40天、50天、55天、60天、65天、70天、75天、80天、85天、90天、95天、100天、120天、140天、160天、180天、200天、220天、240天、260天、280天、300天、320天、340天、360天、380天或400天。
在一些實施例中,在SCS中投與醫藥組合物之後在投與後至少約或約30分鐘、1小時、2小時、3小時、4小時、5小時、6小時、7小時、8小時、9小時、10小時、12小時、14小時、16小時、18小時、20小時、22小時、24小時、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、23天、25天、27天、30天、35天、40天、50天、55天、60天、65天、70天、75天、80天、85天、90天、95天、100天、120天、140天、160天、180天、200天、220天、240天、260天、280天、300天、320天、340天、360天、380天或400天的時段內在眼睛(例如,玻璃狀液)中偵測到轉殖基因。
在一些實施例中,在投與後至多約30分鐘、1小時、2小時、3小時、4小時、5小時、6小時、7小時、8小時、9小時、10小時、12小時、14小時、16小時、18小時、20小時、22小時、24小時、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、23天、25天、27天、30天、35天、40天、50天、55天、60天、65天、70天、75天、80天、85天、90天、95天或100天的時段內在眼睛(例如,玻璃狀液)中偵測到轉殖基因(例如,在經由視網膜下投與或經由玻璃體內投與或投與至SCS投與參考醫藥組合物之後;或在經由視網膜下或經由玻璃體內投與來投與醫藥組合物之後)。
在一些實施例中,眼睛(例如,玻璃狀液)中之轉殖基因產物之濃度可在投與醫藥組合物或參考醫藥組合物之後約30分鐘、1小時、2小時、3小時、4小時、5小時、6小時、7小時、8小時、9小時、10小時、12小時、14小時、16小時、18小時、20小時、22小時、24小時、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、23天、25天、27天、30天、35天、40天、50天、55天、60天、65天、70天、75天、80天、85天、90天、95天、100天、120天、140天、160天、180天、200天、220天、240天、260天、280天、300天、320天、340天、360天、380天或400天測定。
在一些實施例中,黏性(例如,相對黏稠、中等至超高黏度、或黏性超過水、或黏性超過對照溶液、或黏性超過常用於視網膜下投與之溶液)醫藥組合物(例如,包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之AAV的液體調配物)之脈絡膜上投與引起轉殖基因之濃度比在藉由脈絡膜上投與例如使用可比較之較低黏性醫藥組合物(參考醫藥組合物)來投與包含編碼轉殖基因之表現卡匣之AAV之後高,大至少2倍、大至少3倍、大至少4倍、大至少5倍、大至少6倍、大至少7倍、大至少8倍、大至少9倍、大至少10倍、大至少15倍、大至少20倍、大至少50倍、大至少100倍、大至少5%、大至少10%、大至少15%、大至少20%、大至少25%、大至少30%、大至少35%、大至少40%、至少45%、大至少50%、大至少55%、大至少60%、大至少65%、大至少70%、大至少75%、大至少80%、大至少85%、大至少90%、大至少95%、大至少100%、大至少150%或大至少200%、大至少250%或至少300%、大至少400%或大至少500%。
在一些實施例中,較高黏性醫藥組合物(例如,包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之AAV的液體調配物)之脈絡膜上投與引起轉殖基因之濃度比藉由視網膜下投與或藉由玻璃體內投與例如使用可比較之較低黏性醫藥組合物(參考醫藥組合物)來投與包含編碼轉殖基因之表現卡匣之AAV時高,大至少2倍、大至少3倍、大至少4倍、大至少5倍、大至少6倍、大至少7倍、大至少8倍、大至少9倍、大至少10倍、大至少15倍、大至少20倍、大至少50倍、大至少100倍、大至少5%、大至少10%、大至少15%、大至少20%、大至少25%、大至少30%、大至少35%、大至少40%、至少45%、大至少50%、大至少55%、大至少60%、大至少65%、大至少70%、大至少75%、大至少80%、大至少85%、大至少90%、大至少95%、大至少100%、大至少150%或大至少200%、大至少250%或至少300%、大至少400%或大至少500%。
在一些實施例中,黏性(例如,相對黏稠、中等至超高黏度、或黏性超過水、或黏性超過對照溶液、或黏性超過常用於視網膜下投與之溶液)醫藥組合物(例如,包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之AAV的液體調配物)之脈絡膜上投與引起轉殖基因之濃度比經由視網膜下投與或經由玻璃體內投與來投與相同醫藥組合物時高,大至少2倍、大至少3倍、大至少4倍、大至少5倍、大至少6倍、大至少7倍、大至少8倍、大至少9倍、大至少10倍、大至少15倍、大至少20倍、大至少50倍、大至少100倍、大至少5%、大至少10%、大至少15%、大至少20%、大至少25%、大至少30%、大至少35%、大至少40%、至少45%、大至少50%、大至少55%、大至少60%、大至少65%、大至少70%、大至少75%、大至少80%、大至少85%、大至少90%、大至少95%、大至少100%、大至少150%或大至少200%、大至少250%或至少300%、大至少400%或大至少500%。
在一些實施例中,在藉由脈絡膜上注射投與較高黏性醫藥組合物(例如,包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之AAV的醫藥組合物)之後轉殖基因之濃度大於在藉由脈絡膜上注射投與可比較之較低黏性醫藥組合物之後。在一些實施例中,在藉由脈絡膜上注射投與較高黏性醫藥組合物(例如,包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之AAV的醫藥組合物)之後轉殖基因之濃度大於在藉由視網膜下投與或經由玻璃體內投與來投與可比較之較低黏性醫藥組合物。在一些實施例中,在藉由脈絡膜上注射投與黏性醫藥組合物(例如,包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之AAV的醫藥組合物)之後轉殖基因之濃度大於在藉由視網膜下投與或經由玻璃體內投與投與相同醫藥組合物之後。 4.2.7 其他功能特性
在一些實施例中,本文所述之醫藥組合物具有適合脈絡膜上注射之所需黏度。在一些實施例中,醫藥組合物中之重組AAV至少與參考醫藥組合物(可比較之醫藥組合物)中之重組AAV一樣穩定。在一些實施例中,醫藥組合物中之重組AAV至少有參考醫藥組合物(可比較之醫藥組合物)中之重組AAV 50%穩定。在一些實施例中,醫藥組合物中之重組AAV具有至少與參考醫藥組合物中之重組AAV相同或可比較之聚集水準。在一些實施例中,醫藥組合物中之重組AAV具有至少與參考醫藥組合物中之重組AAV相同或可比較之感染力水準。在一些實施例中,醫藥組合物中之重組AAV具有至少與參考醫藥組合物中之重組AAV相同或可比較之游離DNA水準。在一些實施例中,醫藥組合物中之重組AAV具有至少與參考醫藥組合物中之重組AAV相同或可比較之活體外相對效力(IVRP)。在一些實施例中,醫藥組合物中之重組AAV具有至少與參考醫藥組合物中之重組AAV相同或可比較之尺寸水準變化。
在某些實施例中,醫藥組合物中之重組AAV面對凍/融循環比參考醫藥組合物中之相同重組AAV穩定至少2%、5%、7%、10%、12%、15%、17%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、100%、2倍、3倍、5倍、10倍、100倍或1000倍。在一些實施例中,醫藥組合物中之重組AAV面對凍/融循環之穩定性至少為參考醫藥組合物中之相同重組AAV的約50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%。在某些實施例中,重組AAV之穩定性係藉由部分4.6及部分5中揭示之分析法來測定。
在某些實施例中,醫藥組合物中之重組AAV表現出比參考醫藥組合物中之相同重組AAV多至少2%、5%、7%、10%、12%、15%、17%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、100%、2倍、3倍、5倍、10倍、100倍或1000倍之感染力。在一些實施例中,醫藥組合物中之重組AAV具有參考醫藥組合物中之相同重組AAV之感染力的至少約50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%。在某些實施例中,重組AAV之病毒感染力係藉由本揭示案中揭示之分析法來測定。在某些實施例中,重組AAV之尺寸係藉由部分4.6及部分5中揭示之分析法來測定。在某些實施例中,在凍/融循環之前或之後量測尺寸。
在某些實施例中,醫藥組合物中之重組AAV表現出比參考醫藥組合物中之相同重組AAV少至少2%、5%、7%、10%、12%、15%、17%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、100%、2倍、3倍、5倍、10倍、100倍或1000倍之聚集。在一些實施例中,醫藥組合物中之重組AAV在一段時間內之穩定性至少為參考醫藥組合物中之相同重組AAV的約50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%。在某些實施例中,重組AAV之聚集係藉由本揭示案中揭示之分析法來測定。在某些實施例中,在凍/融循環之前或之後量測聚集。在某些實施例中,重組AAV之聚集係藉由部分4.6中揭示之分析法來測定。
在某些實施例中,醫藥組合物中之重組AAV在一段時間內(例如,當在-20℃下或在37℃下儲存時),例如至少約或約1週、約2週、約3週、約4週、約1個月、約2個月、約3個月、約4個月、約5個月、約6個月、約7個月、約8個月、約9個月、約10個月、約11個月、12個月、約15個月、約18個月、約24個月、約2年、約3年、約4年,比參考醫藥組合物中之相同重組AAV穩定至少2%、5%、7%、10%、12%、15%、17%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、100%、2倍、3倍、5倍、10倍、100倍或1000倍。在一些實施例中,醫藥組合物中之重組AAV在一段時間內之穩定性至少為參考醫藥組合物中之相同重組AAV的約50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%。在某些實施例中,重組AAV在一段時間內之穩定性係藉由本揭示案中揭示之分析法來測定。在某些實施例中,重組AAV在一段時間內之穩定性係藉由部分4.6及部分5中揭示之分析法來測定。
在某些實施例中,醫藥組合物中之重組AAV的活體外相對效力(IVRP)比參考醫藥組合物中之相同重組AAV高至少2%、5%、7%、10%、12%、15%、17%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、100%、2倍、3倍、5倍、10倍、100倍或1000 (例如,當在-20℃下或在37℃下儲存時)。在一些實施例中,醫藥組合物中之重組AAV具有與參考醫藥組合物中之相同重組AAV約相同的活體外相對效力(IVRP)。在一些實施例中,醫藥組合物中之重組AAV具有參考醫藥組合物中之相同重組AAV的約50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%活體外相對效力(IVRP)。在某些實施例中,重組AAV之活體外相對效力(IVRP)係藉由本揭示案中揭示之分析法來測定。在某些實施例中,在凍/融循環之前或之後量測活體外相對效力(IVRP)。在某些實施例中,重組AAV之活體外相對效力(IVRP)係藉由部分4.6中揭示之分析法來測定。
在某些實施例中,醫藥組合物中之重組AAV具有比參考醫藥組合物中之相同重組AAV少至少2%、5%、7%、10%、12%、15%、17%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、100%、2倍、3倍、5倍、10倍、100倍或1000倍的游離DNA。在一些實施例中,醫藥組合物中之重組AAV具有與參考醫藥組合物中之相同重組AAV約相同量之游離DNA。在一些實施例中,醫藥組合物中之重組AAV具有的游離DNA之量約不超過參考醫藥組合物中之相同重組AAV的兩倍。在一些實施例中,醫藥組合物中之重組AAV具有的游離DNA之量為參考醫藥組合物中之相同重組AAV的約50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%。在一些實施例中,醫藥組合物中之重組AAV具有比參考醫藥組合物中之相同重組AAV多至少約50%、多約25%、多約15%、多約10%、多約5%、多約4%、多約3%、多約2%、多約1%、多約0%、少約1%、少約2%、少約5%、少約7%、少約10%、多約2倍、多約3倍、少約2倍或少約3倍的游離DNA。在某些實施例中,重組AAV之游離DNA係藉由部分4.6及部分5中揭示之分析法來測定。
在某些實施例中,醫藥組合物中之重組AAV在一段時間內(例如,當在-20℃下或在37℃下儲存時),例如至少約或約1週、約2週、約3週、約4週、約1個月、約2個月、約3個月、約4個月、約5個月、約6個月、約7個月、約8個月、約9個月、約10個月、約11個月、約12個月、約15個月、約18個月、約24個月、約2年、約3年及約4年具有至多20%、15%、10%、8%、5%、4%、3%、2%或1%之尺寸變化。在某些實施例中,重組AAV之尺寸係藉由本揭示案中揭示之分析法來測定。在某些實施例中,在凍/融循環之前或之後量測尺寸。在某些實施例中,重組AAV之尺寸係藉由部分4.6中揭示之分析法來測定。
在某些實施例中,醫藥組合物中之重組AAV比參考醫藥組合物中之相同重組AAV穩定至少2%、5%、7%、10%、12%、15%、17%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、100%、2倍、3倍、5倍、10倍、100倍或1000倍(例如,當在-20℃下或在37℃下儲存時)。在一些實施例中,醫藥組合物中之重組AAV與參考醫藥組合物中之相同重組AAV約一樣穩定(例如,當在-20℃下或在37℃下儲存時)。在一些實施例中,醫藥組合物中之重組AAV的穩定性係參考醫藥組合物中之相同重組AAV的至少約50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或99% (例如,當在-20℃下或在37℃下儲存時)。在某些實施例中,重組AAV之穩定性係藉由部分4.6中揭示之分析法來測定。
在某些實施例中,如例如藉由部分4.6或中揭示之分析法所測定,本文提供之醫藥組合物能夠儲存1個月、2個月、3個月、4個月、5個月、6個月、7個月、8個月、9個月、10個月、12個月、13個月、14個月、15個月、16個月、17個月、18個月、19個月、20個月、21個月、22個月、23個月或24個月,不喪失穩定性。在某些實施例中,本文提供之醫藥組合物能夠在4℃下儲存1個月、2個月、3個月、4個月、5個月、6個月、7個月、8個月、9個月、10個月、12個月、13個月、14個月、15個月、16個月、17個月、18個月、19個月、20個月、21個月、22個月、23個月或24個月,不喪失穩定性。在某些實施例中,本文提供之醫藥組合物能夠在≤60℃下儲存1個月、2個月、3個月、4個月、5個月、6個月、7個月、8個月、9個月、10個月、12個月、13個月、14個月、15個月、16個月、17個月、18個月、19個月、20個月、21個月、22個月、23個月或24個月,不喪失穩定性。在某些實施例中,本文提供之醫藥組合物能夠在-80℃下儲存1個月、2個月、3個月、4個月、5個月、6個月、7個月、8個月、9個月、10個月、12個月、13個月、14個月、15個月、16個月、17個月、18個月、19個月、20個月、21個月、22個月、23個月或24個月,不喪失穩定性。在某些實施例中,本文提供之醫藥組合物能夠在-20℃下儲存1個月、2個月、3個月、4個月、5個月、6個月、7個月、8個月、9個月、10個月或12個月之後在4℃下儲存1個月、2個月、3個月、4個月、5個月、6個月、7個月、8個月、9個月、10個月、12個月、13個月、14個月、15個月、16個月、17個月、18個月、19個月、20個月、21個月、22個月、23個月或24個月,不喪失穩定性。
在某些實施例中,如例如藉由部分4.6或中揭示之分析法所測定,本文提供之醫藥組合物能夠首先在-80℃下儲存1個月、2個月、3個月、4個月、5個月、6個月、7個月、8個月、9個月、10個月、12個月、13個月、14個月、15個月、16個月、17個月、18個月、19個月、20個月、21個月、22個月、23個月或24個月,接著解凍且在解凍後,在2-10℃、4-8℃、2℃、3℃、4℃、5℃、6℃、7℃、8℃或9℃下再儲存1個月、2個月、3個月、4個月、5個月、6個月、7個月、8個月、9個月、10個月或12個月,不喪失穩定性。在某些實施例中,如例如藉由部分4.6或5中揭示之分析法所測定,本文提供之醫藥組合物能夠首先在-80℃下儲存1個月、2個月、3個月、4個月、5個月、6個月、7個月、8個月、9個月、10個月、12個月、13個月、14個月、15個月、16個月、17個月、18個月、19個月、20個月、21個月、22個月、23個月或24個月,接著解凍且在解凍後,在約4℃下再儲存1個月、2個月、3個月、4個月、5個月、6個月、7個月、8個月、9個月、10個月或12個月,不喪失穩定性。在某些實施例中,如例如藉由部分4.6或5中揭示之分析法所測定,本文提供之醫藥組合物能夠首先在≤60℃下儲存1個月、2個月、3個月、4個月、5個月、6個月、7個月、8個月、9個月、10個月、12個月、13個月、14個月、15個月、16個月、17個月、18個月、19個月、20個月、21個月、22個月、23個月或24個月,接著解凍且在解凍後,在約4℃ 下再儲存1個月、2個月、3個月、4個月、5個月、6個月、7個月、8個月、9個月、10個月或12個月,不喪失穩定性。
可藉由量測視力喪失、感染、炎症及其他安全事件(包括視網膜剝離)之徵象來監測本文提供之方法或醫藥組合物之效果。在一些實施例中,使用具有不同黏度(例如,從低黏度至極高黏度)之不同醫藥組合物(例如,液體調配物)在SCS中遞送載體。在一些實施例中,使用中等至高黏度醫藥組合物(例如,液體調配物)遞送之載體比使用低黏度醫藥組合物(例如,液體調配物)遞送之載體(例如,當在SCS中投與時)更有效。在一些實施例中,與使用低黏度調配物遞送之載體相比,使用中等至高黏度調配物遞送之載體改善視力。
本文提供之方法或醫藥組合物之效果亦可藉由美國國家眼科研究所視覺功能問卷(National Eye Institute Visual Functioning Questionnaire)、羅氏評分版本(Rasch-scored version) (NEI-VFQ-28-R) (綜合評分;活動限制領域評分;及社會情感功能領域評分)自基線之變化來量測。在一些實施例中,本文提供之方法之效果亦可藉由美國國家眼科研究所視覺功能問卷25項版本(NEI-VFQ-25)(綜合評分及心理健康分量表評分)自基線之變化來量測。在一些實施例中,本文提供之方法之效果亦可藉由黃斑疾病治療滿意度問卷(MacTSQ) (綜合評分;安全性、功效及不適領域評分;以及資訊提供及便利性領域評分)從基線之變化來量測。
在具體實施例中,本文所述之方法或載體(載體調配物)之功效反映在約4週、12週、6個月、12個月、24個月、36個月或其他所需時間點之視力改善。在一個具體實施例中,視力改善之特徵在於BCVA增加,例如增加1個字母、2個字母、3個字母、4個字母、5個字母、6個字母、7個字母、8個字母、9個字母、10個字母、11個字母或12個字母或更多。在一個具體實施例中,視力改善之特徵在於視覺敏銳度自基線增加5%、10%、15%、20%、30%、40%、50%或更多。
在具體實施例中,治療後眼睛無炎症或治療後眼睛幾乎無炎症(例如,炎症水準自基線增加10%、5%、2%、1%或更少)。
4.3 劑量及投藥模式
在一態樣中,本文提供一種用於治療眼病之脈絡膜上投與方法,其包括向需要治療之人類個體之眼中之脈絡膜上腔投與重組病毒載體,該重組病毒載體包含編碼治療產物之核苷酸序列,以使得治療產物表現且治療眼病。在某些實施例中,投與步驟係藉由使用脈絡膜上藥物遞送裝置將重組病毒載體注射至脈絡膜上腔中。在某些實施例中,脈絡膜上藥物遞送裝置為微注射器。在一些實施例中,本文提供之醫藥組合物或參考醫藥組合物適合藉由一種、兩種或更多種投藥途徑投與(例如,適合脈絡膜上及視網膜下投與)。
在某些實施例中,醫藥組合物(或參考醫藥組合物)之載體基因體濃度(VGC)為約3×10
9GC/mL、約1×10
10GC/mL、約1.2×10
10GC/mL、約1.6×10
10GC/mL、約4×10
10GC/mL、約6×10
10GC/mL、約2×10
11GC/mL、約2.4×10
11GC/mL、約2.5×10
11GC/mL、約3×10
11GC/mL、約3.2×10
11GC/mL、約6.2×10
11GC/mL、約6.5×10
11GC/mL、約1×10
12GC/mL、約2.5×10
12GC/mL、約3×10
12GC/mL、約5×10
12GC/mL、約1.5×10
13GC/mL、約2×10
13GC/mL或約3×10
13GC/mL。
在某些實施例中,醫藥組合物(或參考醫藥組合物)之載體基因體濃度(VGC)為約3×10
9GC/mL、4×10
9GC/mL、5×10
9GC/mL、6×10
9GC/mL、7×10
9GC/mL、8×10
9GC/mL、9×10
9GC/mL、約1×10
10GC/mL、約2×10
10GC/mL、約3×10
10GC/mL、約4×10
10GC/mL、約5×10
10GC/mL、約6×10
10GC/mL、約7×10
10GC/mL、約8×10
10GC/mL、約9×10
10GC/mL、約1×10
11GC/mL、約2×10
11GC/mL、約3×10
11GC/mL、約4×10
11GC/mL、約5×10
11GC/mL、約6×10
11GC/mL、約7×10
11GC/mL、約8×10
11GC/mL、約9×10
11GC/mL、約1×10
12GC/mL、約2×10
12GC/mL、約3×10
12GC/mL、約4×10
12GC/mL、約5×10
12GC/mL、約6×10
12GC/mL、約7×10
12GC/mL、約8×10
12GC/mL、約9×10
12GC/mL、約1×10
13GC/mL、約1.5×10
13GC/mL、約2×10
13GC/mL、約3×10
13GC/mL。
在一些實施例中,醫藥組合物(例如,液體調配物)之體積為能夠減小使鞏膜與脈絡膜分離之最小力的任何體積。在一些實施例中,醫藥組合物(例如,液體調配物)之體積為約50 μL至約1000 μL、50 μL至約500 μL、50 μL至約400 μL、50 μL至約350 μL、50 μL至約300 μL、約50 μL至約275 μL、約50 μL至約250 μL、約50 μL至約225 μL、約50 μL至約200 μL、約50 μL至約175 μL、約50 μL至約150 μL、約60 μL至約140 μL、約70 μL至約130 μL、約80 μL至約120 μL、約90 μL至約110 μL或約100 μL。
在一些實施例中,脈絡膜上藥物遞送裝置為具有1毫米30規格針之注射器。在一些實施例中,注射器具有更大周長(例如,29規格針)。在使用此裝置進行注射期間,針刺入鞏膜底部,且含有藥物之流體進入脈絡膜上腔,導致脈絡膜上腔擴大。因此,在注射過程中會有觸覺及視覺反饋。注射後,流體向後流動且主要在脈絡膜及視網膜中吸收。此導致所有視網膜細胞層及脈絡膜細胞產生轉殖基因蛋白。使用此種類型之設備及程序可實現快速簡便之辦公室程序,併發症風險低。
在一些實施例中,基於醫藥組合物(例如,液體調配物)之黏度來選擇微針或注射器。在一些實施例中,基於當投與醫藥組合物(例如,液體調配物)時在眼睛中(例如,在SCS中)產生之壓力來選擇微針。例如,具有中等或高黏度之醫藥組合物(例如,液體調配物)可受益於使用更寬之注射用微針。在一些實施例中,與使用較窄微針時獲得之壓力相比,當使用較寬微針時,SCS中之壓力較低。在一些實施例中,使用10規格針、11規格針、12規格針、13規格針、14規格針、15規格針、16規格針、17規格針、18規格針、19規格針、20規格針、21規格針、22規格針、23規格針、24規格針、25規格針、26規格針、27規格針、28規格針、29規格針、30規格針、31規格針、32規格針、33規格針或34規格針。在一些實施例中,使用27規格針。在一些實施例中,使用28規格針。在一些實施例中,使用29規格針。在一些實施例中,使用30規格針。在一些實施例中,使用31規格針。在一些實施例中,使用小於27規格針之規格。在一些實施例中,使用大於27規格針之規格。在一些實施例中,使用小於30規格針之規格。在一些實施例中,使用高於30規格針之規格。
在一些實施例中,投與醫藥組合物期間之壓力為約10 PSI、15 PSI、20 PSI、25 PSI、30 PSI、35 PSI、40 PSI、45 PSI、50 PSI、55 PSI、60 PSI、65 PSI、70 PSI、75 PSI、80 PSI、85 PSI、90 PSI、95 PSI、100 PSI、150 PSI或200 PSI。在一些實施例中,投與醫藥組合物期間之壓力不大於約10 PSI、15 PSI、20 PSI、25 PSI、30 PSI、35 PSI、40 PSI、45 PSI、50 PSI、55 PSI、60 PSI、65 PSI、70 PSI、75 PSI、80 PSI、85 PSI、90 PSI、95 PSI、100 PSI、150 PSI或200 PSI。在一些實施例中,投與醫藥組合物期間打開SCS之壓力不大於約10 PSI、15 PSI、20 PSI、25 PSI、30 PSI、35 PSI、40 PSI、45 PSI、50 PSI、55 PSI、60 PSI、65 PSI、70 PSI、75 PSI、80 PSI、85 PSI、90 PSI、95 PSI、100 PSI、150 PSI或200 PSI。在一些實施例中,投與醫藥組合物期間之壓力(或打開SCS所需之壓力)介於20 PSI與50 PSI、20 PSI與75 PSI、20 PSI與40 PSI、10 PSI與40 PSI、10 PSI與100 PSI或10 PSI與80 PSI之間。在一些實施例中,壓力隨著注射速率之降低(例如,壓力自4秒注射速率降低至10秒注射速率)而降低。在一些實施例中,壓力隨著針尺寸增加而降低。在一些實施例中,壓力隨著黏度增加而增加。
希望劑量將轉殖基因產物之濃度維持在眼睛(例如,玻璃狀液)中至少0.330 µg/mL或水狀液(眼睛前房)中0.110 µg/mL之Cmin持續三個月;此後,應維持轉殖基因產物之玻璃體Cmin濃度範圍為1.70至6.60 µg/mL,及/或水狀液Cmin濃度範圍為0.567至2.20 µg/mL。然而,因為轉殖基因產物係連續產生的(在組成型啟動子之控制下或在使用缺氧誘導型啟動子時由缺氧條件誘導),所以可有效維持較低濃度。可在自體液、眼液、玻璃狀液或前房收集之患者流體樣本中直接量測轉殖基因濃度,或者藉由量測患者之轉殖基因產物血清濃度來估計及/或監測——對轉殖基因產物之全身比玻璃體暴露比率為約1:90,000。(例如參見vitreous humor and serum concentrations of ranibizumab, Xu L等人報導, 2013, Invest. Opthal. Vis. Sci. 54: 1616-1624, 第1621頁及第1623頁表5,其以引用方式整體併入本文)。
在某些實施例中,劑量藉由每毫升基因體複本數(GC/mL)或投與至患者眼睛(例如,脈絡膜上)之基因體複本數來量測。在一些實施例中,投與2.4×10
11GC/mL至1×10
13GC/mL,投與2.4×10
11GC/mL至5×10
11GC/mL,投與5×10
11GC/mL至1×10
12GC/mL,投與1×10
12GC/mL至5×10
12GC/mL或投與5×10
12GC/mL至1×10
13GC/mL。在一些實施例中,投與1.5×10
13GC/mL至3×10
13GC/mL。在一些實施例中,投與約2.4×10
11GC/mL、約5×10
11GC/mL、約1×10
12GC/mL、約2.5×10
12GC/mL、約5×10
12GC/mL、約1×10
13GC/mL或約1.5×10
13GC/mL。在一些實施例中,投與1×10
9至1×10
12個基因體複本。在一些實施例中,投與3×10
9至2.5×10
11個基因體複本。在具體實施例中,投與1×10
9至2.5×10
11個基因體複本。在具體實施例中,投與1×10
9至1×10
11個基因體複本。在具體實施例中,投與1×10
9至5×10
9基因體複本。在具體實施例中,投與6×10
9至3×10
10個基因體複本。在具體實施例中,投與4×10
10至1×10
11個基因體複本。在具體實施例中,投與2×10
11至1.5×10
12個基因體複本。在一具體實施例中,投與約3×10
9基因體複本(其對應於250 μl體積中約1.2×10
10GC/mL)。在其他具體實施例中,投與約1×10
10個基因體複本(其對應於250 μl體積中約4×10
10GC/mL)。在其他具體實施例中,投與約6×10
10個基因體複本(其對應於250 μl體積中約2.4×10
11GC/mL)。在其他具體實施例中,投與約6.4×10
10個基因體複本(其對應於200 μl體積中約3.2×10
11GC/mL)。在其他具體實施例中,投與約1.3×10
11個基因體複本(其對應於200 μl體積中約6.5×10
11GC/mL)。在一些實施例中,每隻眼睛或每劑或每種投藥途徑投與約6.4×10
10個基因體複本。在一些實施例中,約6.4×10
10基因體複本為所投與之基因體複本之總數。在一些實施例中,每隻眼睛或每劑或每種投藥途徑投與約1.3×10
11個基因體複本。在一些實施例中,約1.3×10
11個基因體複本為所投與之基因體複本之總數。在一些實施例中,每隻眼睛或每劑或每種投藥途徑投與約2.5×10
11個基因體複本。在一些實施例中,約2.5×10
11個基因體複本為所投與之基因體複本之總數。在一些實施例中,每隻眼睛或每劑或每種投藥途徑投與約5×10
11個基因體複本。在一些實施例中,約5×10
11個基因體複本為所投與之基因體複本之總數。在一些實施例中,每隻眼睛或每劑或每種投藥途徑投與約3×10
12個基因體複本。在一些實施例中,約3×10
12個基因體複本為所投與之基因體複本之總數。在其他具體實施例中,投與約1.6×10
11個基因體複本(其對應於250 μl體積中約6.2×10
11GC/mL)。在其他具體實施例中,投與約1.55×10
11個基因體複本(其對應於250 μl體積中約6.2×10
11GC/mL)。在其他具體實施例中,約1.6×10
11個基因體複本投與(其對應於250 μl體積中約6.4×10
11GC/mL)。在其他具體實施例中,投與約2.5×10
11個基因體複本(其對應於250 μl體積中約1.0×10
12)。在其他具體實施例中,投與約2.5×10
11個基因體複本(其對應於100 μl體積中約2.5×10
12GC/mL)。在其他具體實施例中,投與約5×10
11個基因體複本(其對應於200 μl體積中約5×10
12GC/mL)。在其他具體實施例中,投與約1.5×10
12個基因體複本(其對應於100 μl體積中約1.5×10
13GC/mL)。
在某些實施例中,每次投與或每隻眼睛投與約6.0×10
10個基因體複本。在某些實施例中,每次投與或每隻眼睛投與約6.4×10
10個基因體複本。在某些實施例中,每次投與或每隻眼睛投與約1.3×10
11個基因體複本。在某些實施例中,每次投與或每隻眼睛投與約1.6×10
11個基因體複本。在某些實施例中,每次投與或每隻眼睛投與約2.5×10
11個基因體複本。在某些實施例中,每次投與或每隻眼睛投與約5.0×10
11個基因體複本。在一些實施例中,每隻眼睛或每劑或每種投藥途徑投與約1.5×10
12個基因體複本。在一些實施例中,約1.5×10
12個基因體複本為所投與之基因體複本之總數。在某些實施例中,每次投與或每隻眼睛投與約3×10
12個基因體複本。在某些實施例中,每次投與或每隻眼睛投與約1.0×10
12GC/mL。在某些實施例中,每次投與或每隻眼睛投與約2.5×10
12GC/mL。在某些實施例中,每次投與或每隻眼睛投與約3.0×10
13個基因體複本。在某些實施例中,每次投與或每隻眼睛投與至多3.0×10
13個基因體複本。
在某些實施例中,藉由脈絡膜上注射每次投與或每隻眼睛投與約2.5×10
11個基因體複本。在某些實施例中,藉由脈絡膜上注射每次投與或每隻眼睛投與約5.0×10
11個基因體複本。在某些實施例中,藉由脈絡膜上注射每次投與或每隻眼睛投與約1.5×10
12個基因體複本。在某些實施例中,藉由脈絡膜上注射每次投與或每隻眼睛投與約3×10
12個基因體複本。在某些實施例中,藉由單次脈絡膜上注射每隻眼睛投與約2.5×10
11個基因體複本。在某些實施例中,藉由雙重脈絡膜上注射每次投與或每隻眼睛投與約5.0×10
11個基因體複本。在某些實施例中,藉由脈絡膜上注射每次投與或每隻眼睛投與約3.0×10
13個基因體複本。在某些實施例中,藉由脈絡膜上注射每次投與或每隻眼睛投與至多3.0×10
13個基因體複本。在某些實施例中,藉由單次脈絡膜上注射每隻眼睛投與100 μl體積中約2.5×10
12GC/mL。在某些實施例中,藉由雙重脈絡膜上注射每隻眼睛投與約2.5×10
12GC/mL,其中每次注射在100 μl體積中。在某些實施例中,藉由單次脈絡膜上注射每隻眼睛投與100 μl體積中約1.5×10
13GC/mL。
在一些實施例中,向人類個體(例如,脈絡膜上、視網膜下或玻璃體內)投與醫藥組合物或參考醫藥組合物一次、兩次、三次、四次、五次、六次、七次、八次、九次、十次、十五次、二十次、二十五次或三十次。在一些實施例中,一天一次、一天兩次、一天三次、一天四次、一天五次、一天六次或一天七次向人類個體投與醫藥組合物或參考醫藥組合物。在一些實施例中,每次投與投與相同量之AAV基因體複本。舉例而言,經脈絡膜上、視網膜下或玻璃體內投與相同基因體複本。在一些實施例中,投與相同總量之AAV基因體複本。舉例而言,無論總投藥次數如何,經脈絡膜上、視網膜下或玻璃體內投與相同總量之AAV基因體複本(例如,若視網膜下投與進行一次,且脈絡膜上投與進行兩次,則一次視網膜下投與中之基因組複本與兩次脈絡膜上組合投與中之基因組複本相同)。
如本文所用且除非另有說明,否則術語「約」意謂在給定值或範圍之正負10%以內
4.4 構築體及調配物
在一些實施例中,本文提供之重組載體包含按以下順序之以下元件:a)組成型或缺氧誘導型啟動子序列,及b)編碼轉殖基因(例如治療產物)之序列。在某些實施例中,本文提供之重組載體包含按以下順序之以下元件:a)第一ITR序列、b)第一連接子序列、c)組成型或缺氧誘導型啟動子序列、d)第二連接子序列、e)內含子序列、f)第三連接子序列、g)第一UTR序列、h)編碼轉殖基因之序列(例如,抗VEGF抗原結合片段部分)、i)第二UTR序列、j)第四連接子序列、k)聚A序列、l)第五連接子序列及m)第二ITR序列。
在某些實施例中,本文提供之重組載體包含按以下順序之以下元件:a)第一ITR序列、b)第一連接子序列、c)組成型或缺氧誘導型啟動子序列、d)第二連接子序列、e)內含子序列、f)第三連接子序列、g)第一UTR序列、h)編碼轉殖基因之序列(例如,抗VEGF抗原結合片段部分)、i)第二UTR序列、j)第四連接子序列、k)聚A序列、l)第五連接子序列及m)第二ITR序列,其中該轉殖基因包含VEGF之單肽(SEQ ID NO: 5),且其中該轉殖基因編碼由可裂解F/F2A序列分開之輕鏈及重鏈序列。
在一些實施例中,本文提供之AAV (AAV病毒載體)包含按以下順序之以下元件:a)組成型或缺氧誘導型啟動子序列,及b)編碼轉殖基因之序列(例如,抗VEGF抗原結合片段部分)。在一些實施例中,轉殖基因為針對VEGF之完全人類轉譯後修飾(HuPTM)抗體。在一些實施例中,針對VEGF之完全人類轉譯後修飾抗體為針對VEGF之單株抗體(mAb)之完全人類轉譯後修飾抗原結合片段(「HuPTMFabVEGFi」)。在一些實施例中,HuPTMFabVEGFi為抗VEGF mAb之完全人類糖基化抗原結合片段 (「HuGlyFabVEGFi」)。在替代實施例中,可使用全長mAb。在一些實施例中,用於遞送轉殖基因之AAV應對人類視網膜細胞或感光受體細胞具有向性。此類AAV可包括非複製性重組腺相關病毒載體(「rAAV」),尤其較佳為攜帶AAV8殼體之彼等載體。在一具體實施例中,本文所述之病毒載體或其他DNA表現構築體為構築體I,其中該構築體I包含以下組分:(1)位於表現卡匣側面之AAV8反向末端重複序列;(2)控制元件,其包括a) CB7啟動子,包含CMV強化子/雞β-肌動蛋白啟動子,b)雞β-肌動蛋白內含子,及c)兔β-球蛋白聚A信號;及(3)編碼抗VEGF抗原結合片段之重鏈及輕鏈的核酸序列,由自裂解弗林蛋白酶(F)/F2A連接子分開,確保表現等量之重鏈及輕鏈多肽。在一些實施例中,病毒載體包含信號肽。在一些實施例中,信號肽為MYRMQLLLLIALSLALVTNS (SEQ ID NO: 55)。在一些實施例中,信號肽源自於IL-2信號序列。在一些實施例中,病毒載體包含來自表1中揭示之任何信號肽之信號肽,諸如MNFLLSWVHW SLALLLYLHH AKWSQA (VEGF-A信號肽) (SEQ ID NO: 5);MERAAPSRRV PLPLLLLGGL ALLAAGVDA (腓骨蛋白-1信號肽) (SEQ ID NO: 6);MAPLRPLLIL ALLAWVALA (玻連蛋白信號肽) (SEQ ID NO: 7);MRLLAKIICLMLWAICVA (補體因子H信號肽) (SEQ ID NO: 8);MRLLAFLSLL ALVLQETGT (視蛋白信號肽) (SEQ ID NO: 9);MKWVTFISLLFLFSSAYS (白蛋白信號肽) (SEQ ID NO: 22);MAFLWLLSCWALLGTTFG (胰凝乳蛋白酶原信號肽) (SEQ ID NO: 23);MYRMQLLSCIALILALVTNS (介白素-2信號肽) (SEQ ID NO: 24);MNLLLILTFVAAAVA (胰蛋白酶原-2信號肽) (SEQ ID NO: 25);或MYRMQLLLLIALSLALVTNS (突變介白素-2信號肽) (SEQ ID NO: 55)。在其他具體實施例中,本文所述之病毒載體或其他DNA表現構築體為構築體II,其中該構築體II包含以下組分:(1)位於表現卡匣側面之AAV2反向末端重複序列;(2)控制元件,其包括 a) CB7啟動子,包含CMV強化子/雞β-肌動蛋白啟動子,b)雞β-肌動蛋白內含子,及c)兔β-球蛋白聚A信號;及(3)編碼抗VEGF抗原結合片段之重鏈及輕鏈的核酸序列,由自裂解弗林蛋白酶(F)/F2A連接子分開,確保表現等量之重鏈及輕鏈多肽。在一些實施例中,抗hVEGF抗體包含:重鏈,其包含SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:4之胺基酸序列;及輕鏈,其包含SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:3之胺基酸序列。
在一些實施例中,病毒載體或其他適合包裝在AAV殼體中之表現構築體包含(1)位於表現卡匣側面之AAV反向末端重複序列(ITR);(2)調節控制元件,其基本上由一或多種強化子及/或啟動子、d)聚A信號及e)視情況內含子組成;及(3)提供(例如,編碼)所關注之一或多種RNA或蛋白質產物的轉殖基因。
在一些態樣中,本揭示案提供一種供使用之核酸,其中該核酸編碼與本文所述之啟動子或強化子-啟動子可操作地連接之治療產物。
在一些態樣中,本揭示案提供一種供使用之核酸,其中該核酸編碼與啟動子可操作地連接的HuPTMFabVEGFi,例如HuGlyFabVEGFi,該啟動子選自由以下組成之群:CB7啟動子(雞β-肌動蛋白啟動子及CMV強化子)、巨細胞病毒(CMV)啟動子、勞斯肉瘤病毒(Rous sarcoma virus,RSV)啟動子、MMT啟動子、EF-1α啟動子、UB6啟動子、雞β-肌動蛋白啟動子、CAG啟動子、RPE65啟動子及視蛋白啟動子。在一具體實施例中,HuPTMFabVEGFi與CB7啟動子可操作地連接。
在某些實施例中,本文提供包含一或多種核酸(例如多核苷酸)之重組載體。核酸可包括DNA、RNA或DNA與RNA之組合。在某些實施例中,DNA包含一或多種選自由以下組成之群的序列:啟動子序列、編碼所關注之治療產物(轉殖基因,例如抗VEGF抗原結合片段)之序列、未轉譯區及終止序列。在某些實施例中,本文提供之重組載體包含與編碼所關注之治療產物之序列可操作連接之啟動子。
在某些實施例中,本文揭示之核酸(例如,多核苷酸)及核酸序列可例如經由熟習所屬領域技術者已知之任何密碼子優化技術進行密碼子優化(參見例如Quax等人, 2015, Mol Cell 59:149-161之評述)。
在某些實施例中,本文提供之重組載體包含編碼所關注之治療產物(例如轉殖基因,例如抗VEGF抗原結合片段部分)之經修飾之mRNA。在某些實施例中,本文提供編碼抗VEGF抗原結合片段部分之經修飾之mRNA。在某些實施例中,本文提供之重組載體包含編碼治療產物之核苷酸序列,該治療產物為shRNA、siRNA或miRNA。
在某些實施例中,本文提供之載體包含調節蛋白質遞送之組分。在某些實施例中,本文提供之病毒載體包含一或多種信號肽。信號肽之實例包括但不限於VEGF-A信號肽(SEQ ID NO: 5)、腓骨蛋白-1信號肽(SEQ ID NO: 6)、玻連蛋白信號肽(SEQ ID NO: 7)、補體因子H信號肽(SEQ ID NO: 8)、視蛋白信號肽(SEQ ID NO: 9)、白蛋白信號肽(SEQ ID NO: 22)、胰凝乳蛋白酶原信號肽(SEQ ID NO: 23)、介白素-2信號肽(SEQ ID NO: 24)及胰蛋白酶原-2信號肽(SEQ ID NO: 25)、突變介白素-2信號肽(SEQ ID NO: 55)。 (a) 病毒載體
在一些實施例中,本文提供之病毒載體係基於AAV之病毒載體。在較佳實施例中,本文提供之病毒載體係基於AAV8之病毒載體。在某些實施例中,本文提供之基於AAV8之病毒載體保留對視網膜細胞之向性。在某些實施例中,本文提供之基於AAV之載體編碼AAV rep基因(複製所需)及/或AAV cap基因(殼蛋白合成所需)。已鑑別出多種AAV血清型。在某些實施例中,本文提供之基於AAV之載體包含來自一或多種AAV血清型之組分。在某些實施例中,本文提供之基於AAV之載體包含來自以下一或多種之殼體組分:AAV1、AAV2、AAV2tYF、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10、AAV11、AAVrh10、AAV.rh20、AAV.rh39、AAV.Rh74、AAV.RHM4-1、AAV.hu37、AAV.Anc80、AAV.Anc80L65、rAAV.7m8、AAV.PHP.B、AAV.PHP.eB、AAV2.5、AAV2tYF、AAV3B、AAV.LK03、AAV.HSC1、AAV.HSC2、AAV.HSC3、AAV.HSC4、AAV.HSC5、AAV.HSC6、AAV.HSC7、AAV.HSC8、AAV.HSC9、AAV.HSC10、AAV.HSC11、AAV.HSC12、AAV.HSC13、AAV.HSC14、AAV.HSC15及AAV.HSC16。在較佳實施例中,本文提供之基於AAV之載體包含來自AAV8、AAV9、AAV10、AAV11或AAVrh10血清型中之一或多種之組分。在某些實施例中,本文提供之重組病毒載體經改變,使得其在人類中係複製缺陷的。在某些實施例中,重組病毒載體為雜合載體,例如置於「無助」腺病毒載體中之AAV載體。在某些實施例中,本文提供包含來自第一病毒之病毒殼體及來自第二病毒之病毒包膜蛋白之重組病毒載體。在具體實施例中,第二病毒為水泡性口炎病毒(VSV)。在更具體之實施例中,包膜蛋白為VSV-G蛋白。
在特定實施例中,提供AAV8載體,其包含:病毒基因體,其包含用於表現轉殖基因之表現卡匣,該表現卡匣處於調節元件控制下且兩側為ITR;及病毒殼體,其具有AAV8殼蛋白之胺基酸序列或與AAV8殼蛋白之胺基酸序列(SEQ ID NO: 48)至少95%、96%、97%、98%、99%或99.9%一致,同時保留AAV8殼體之生物功能。在某些實施例中,經編碼之AAV8殼體具有SEQ ID NO: 48之序列,具有1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、10個、11個、12個、13個、14個、15個、16個、17個、18個、19個、20個、21個、22個、23個、24個、25個、26個、27個、28個、29個或30個胺基酸取代且保留AAV8殼體之生物功能。
在某些實施例中,在本文所述之方法中使用之AAV為Anc80或Anc80L65,如Zinn等人, 2015, Cell Rep. 12(6): 1056-1068 (其以引用之方式整體併入)中所述。在某些實施例中,在本文所述之方法中使用之AAV包含以下胺基酸插入之一:LGETTRP或LALGETTRP,如美國專利第9,193,956號、第9458517號及第9,587,282號及美國專利申請公開案第2016/0376323號(各以引用之方式整體併入本文中)中所述。在某些實施例中,在本文所述之方法中使用之AAV為AAV.7m8,如美國專利第9,193,956號、第9,458,517號及第9,587,282號及美國專利申請公開案第2016/0376323號(各以引用之方式整體併入本文中)中所述。在某些實施例中,在本文所述之方法中使用之AAV為美國專利第9,585,971號中揭示之任何AAV,諸如AAV.PHP.B。在某些實施例中,在本文所述之方法中使用之AAV為以下專利及專利申請案(各以引用之方式整體併入本文中)中之任一者中揭示的AAV:美國專利第7,906,111號、第8,524,446號、第8,999,678號、第8,628,966號、第8,927,514號、第8,734,809號、第US 9,284,357號、第9,409,953號、第9,169,299號、第9,193,956號、第9458517號及第9,587,282號;美國專利申請公開案第2015/0374803號、第2015/0126588號、第2017/0067908號、第2013/0224836號、第2016/0215024號、第2017/0051257號;及國際專利申請案第PCT/US2015/034799號、第PCT/EP2015/053335號。
本文所述之某些方法中使用基於AAV8之病毒載體。基於AAV之病毒載體之核酸序列及製造重組AAV及AAV殼體之方法在例如美國專利第7,282,199 B2號、美國專利第7,790,449 B2號、美國專利第8,318,480 B2號、美國專利第8,962,332 B2號及國際專利申請案第PCT/EP2014/076466號(各以引用之方式整體併入本文中)中教示。在一態樣中,本文提供編碼轉殖基因(例如,抗VEGF抗原結合片段)之基於AAV (例如,AAV8)之病毒載體。在具體實施例中,本文提供編碼抗VEGF抗原結合片段之基於AAV8之病毒載體。在更具體之實施例中,本文提供編碼蘭尼單抗(ranibizumab)之基於AAV8之病毒載體。
在某些實施例中,可使用單股AAV (ssAAV) (同上述)。在某些實施例中,可使用自互補型載體,例如scAAV (參見例如Wu, 2007, Human Gene Therapy, 18(2):171-82;McCarty等人, 2001, Gene Therapy, 第8卷, 第16期, 第1248-1254頁;及美國專利第6,596,535號;第7,125,717號;及第7,456,683號(各以引用之方式整體併入本文中))。
在某些實施例中,本文所述之方法中使用之病毒載體係基於腺病毒之病毒載體。重組腺病毒載體可用於轉移抗VEGF抗原結合片段。重組腺病毒可為第一代載體,具有E1缺失、具有或不具有E3缺失,且表現卡匣插入至任一缺失區域中。重組腺病毒可為第二代載體,其含有E2及E4區域之全部或部分缺失。輔助病毒依賴型腺病毒僅保留腺病毒反向末端重複序列及包裝信號(φ)。轉殖基因插入在包裝信號與3'ITR之間,有或無填充序列,以保持基因體接近大約36 kb之野生型大小。產生腺病毒載體之示例性方案可見於Alba等人, 2005, 「Gutless adenovirus: last generation adenovirus for gene therapy」, Gene Therapy 12:S18-S27 (其以引用之方式整體併入本文中)。
在一具體實施例中,用於本文所述之方法中之載體係編碼抗VEGF抗原結合片段(例如蘭尼單抗)之載體,使得在將載體引入相關細胞(例如,活體內或活體外視網膜細胞)後,細胞表現抗VEGF抗原結合片段之糖基化及或酪胺酸硫酸化變異體。在一具體實施例中,表現之抗VEGF抗原結合片段包含糖基化及/或酪胺酸硫酸化模式。
(b) 治療產物或轉殖基因
治療產物可例如為治療性蛋白質(例如抗體)、治療性RNA (例如shRNA、siRNA及miRNA)或治療性適體。
在某些實施例中,本揭示案提供一種醫藥組合物,其包含編碼轉殖基因之重組AAV。在一些實施例中,本文提供編碼抗VEGF Fab或抗VEGF抗體之rAAV病毒載體。在一些實施例中,本文提供編碼抗VEGF Fab或抗VEGF抗體之基於rAAV8之病毒載體。在一些實施例中,本文提供編碼蘭尼單抗之基於rAAV8之病毒載體。在一些實施例中,本文提供編碼艾杜糖醛酸酶(IDUA)之rAAV病毒載體。在一些實施例中,本文提供編碼IDUA之基於rAAV9之病毒載體。在一些實施例中,本文提供編碼艾杜糖2-硫酸酯酶(IDS)之rAAV病毒載體。在一些實施例中,本文提供編碼IDS之基於rAAV9之病毒載體。在一些實施例中,本文提供編碼低密度脂蛋白受體(LDLR)之rAAV病毒載體。在一些實施例中,本文提供編碼LDLR之基於rAAV8之病毒載體。在一些實施例中,本文提供編碼三肽基肽酶1 (TPP1)蛋白之rAAV病毒載體。在一些實施例中,本文提供編碼TPP1之基於rAAV9之病毒載體。在一些實施例中,本文提供編碼微小抗肌萎縮蛋白之rAAV病毒載體。在一些實施例中,本文提供編碼微小抗肌萎縮蛋白之基於rAAV8之病毒載體。在一些實施例中,本文提供編碼微小抗肌萎縮蛋白之基於rAAV9之病毒載體。在一些實施例中,本文提供編碼抗激肽釋放素 (抗pKal)蛋白之rAAV病毒載體。在一些實施例中,本文提供編碼拉那魯單抗(lanadelumab) Fab或全長抗體之基於rAAV8或基於rAAV9之病毒載體。在一些實施例中,本文提供編碼人類-α-肌聚糖-γ-肌聚糖之rAAV病毒載體。在一些實施例中,本文提供編碼人卵泡抑素344之rAAV病毒載體。在一些實施例中,本文提供編碼人類-α-肌聚糖-γ-肌聚糖之rAAV病毒載體。在一些實施例中,本文提供編碼CLN2之rAAV病毒載體。在一些實施例中,本文提供編碼CLN3之rAAV病毒載體。在一些實施例中,本文提供編碼CLN6之rAAV病毒載體。在一些實施例中,本文提供編碼人類-α-肌聚糖-γ-肌聚糖之基於rAAV8或基於rAAV9之病毒載體。在一些實施例中,本文提供編碼人卵泡抑素344之基於rAAV8或基於rAAV9之病毒載體。在一些實施例中,本文提供編碼人類-α-肌聚糖-γ-肌聚糖之基於rAAV8或基於rAAV9之病毒載體。在一些實施例中,本文提供編碼CLN2之基於rAAV8或基於rAAV9之病毒載體。在一些實施例中,本文提供編碼CLN3之基於rAAV8或基於rAAV9之病毒載體。在一些實施例中,本文提供編碼CLN6之基於rAAV8或基於rAAV9之病毒載體。
在某些實施例中,治療產物(例如,轉殖基因)為:(1)抗人類血管內皮生長因子(hVEGF)抗體或適體;(2)抗hVEGF抗原結合片段;(3)抗hVEGF抗原結合片段為Fab、F(ab’)2或單鏈可變片段(scFv);(4)棕櫚醯-蛋白硫酯酶1 (PPT1);(5)三肽基-肽酶1 (TPP1);(6)巴登蛋白(Battenin) (CLN3);及(7) CLN6跨膜ER蛋白(CLN6)。
在某些實施例中,本揭示案提供一種醫藥組合物,其包含編碼轉殖基因之重組AAV。在一些實施例中,本文提供編碼抗VEGF Fab或抗VEGF抗體之rAAV病毒載體。在一些實施例中,本文提供編碼抗VEGF Fab或抗VEGF抗體之基於rAAV8之病毒載體。在更多實施例中,本文提供編碼蘭尼單抗之基於rAAV8之病毒載體。在一些實施例中,本文提供編碼艾杜糖醛酸酶 (IDUA)之rAAV病毒載體。在一些實施例中,本文提供編碼IDUA之基於rAAV9之病毒載體。在一些實施例中,本文提供編碼艾杜糖2-硫酸酯酶(IDS)之rAAV病毒載體。在一些實施例中,本文提供編碼IDS之基於rAAV9之病毒載體。在一些實施例中,本文提供編碼低密度脂蛋白受體(LDLR)之rAAV病毒載體。在一些實施例中,本文提供編碼LDLR之基於rAAV8之病毒載體。在一些實施例中,本文提供編碼三肽基肽酶1 (TPP1)蛋白之rAAV病毒載體。在一些實施例中,本文提供編碼TPP1之基於rAAV9之病毒載體。在一些實施例中,本文提供編碼微小抗肌萎縮蛋白之rAAV病毒載體。在一些實施例中,本文提供編碼微小抗肌萎縮蛋白之基於rAAV8之病毒載體。在一些實施例中,本文提供編碼微小抗肌萎縮蛋白之基於rAAV9之病毒載體。在一些實施例中,本文提供編碼抗激肽釋放素(抗pKal) 蛋白之rAAV病毒載體。在一些實施例中,本文提供編碼拉那魯單抗Fab或全長抗體之基於rAAV8或基於rAAV9之病毒載體。在一些實施例中,本文提供編碼人類-α-肌聚糖-γ-肌聚糖之rAAV病毒載體。在一些實施例中,本文提供編碼人卵泡抑素344之rAAV病毒載體。在一些實施例中,本文提供編碼人類-α-肌聚糖-γ-肌聚糖之rAAV病毒載體。在一些實施例中,本文提供編碼CLN2之rAAV病毒載體。在一些實施例中,本文提供編碼CLN3之rAAV病毒載體。在一些實施例中,本文提供編碼CLN6之rAAV病毒載體。在一些實施例中,本文提供編碼人類-α-肌聚糖-γ-肌聚糖之基於rAAV8或基於rAAV9之病毒載體。在一些實施例中,本文提供編碼人卵泡抑素344之基於rAAV8或基於rAAV9之病毒載體。在一些實施例中,本文提供編碼人類-α-肌聚糖-γ-肌聚糖之基於rAAV8或基於rAAV9之病毒載體。在一些實施例中,本文提供編碼CLN2之基於rAAV8或基於rAAV9之病毒載體。在一些實施例中,本文提供編碼CLN3之基於rAAV8或基於rAAV9之病毒載體。在一些實施例中,本文提供編碼CLN6之基於rAAV8或基於rAAV9之病毒載體。
在某些實施例中,本文提供之載體可用於:(1)與巴登蛋白-CLN1相關之眼部病變且治療產物為棕櫚醯-蛋白硫酯酶1 (PPT1);(2)與巴登蛋白-CLN2相關之眼部病變且治療產物為三肽基-肽酶1 (TPP1);(3)與巴登蛋白-CLN3相關之眼部病變且治療產物為巴登蛋白(CLN3);(4)與巴登蛋白-CLN6相關之眼部病變且治療產物為CLN6跨膜ER蛋白(CLN6);(5)與巴登蛋白-CLN7相關之眼部病變且治療產物為含主要協同轉運蛋白超家族結構域蛋白8 (MFSD8);及(6)與巴登蛋白-CLN1相關之眼部病變且治療產物為棕櫚醯-蛋白硫酯酶1 (PPT1)。
在一些實施例中,由轉殖基因編碼之HuPTMFabVEGFi,例如HuGlyFabVEGFi可包括但不限於結合VEGF之抗體之抗原結合片段,諸如貝伐單抗(bevacizumab);抗VEGF Fab部分,諸如蘭尼單抗;或經工程改造以在Fab結構域上含有額外糖基化位點之此類貝伐單抗或蘭尼單抗Fab部分(例如,參見Courtois等人, 2016, mAbs 8: 99-112,其中關於在全長抗體之Fab結構域上高糖基化之貝伐單抗衍生物之描述以引用之方式整體併入本文中)。
在某些實施例中,本文提供之載體編碼抗VEGF抗原結合片段轉殖基因。在具體實施例中,抗VEGF抗原結合片段轉殖基因在視網膜細胞中表現由適當表現控制元件控制:在某些實施例中,抗VEGF抗原結合片段轉殖基因包含輕鏈及重鏈cDNA序列(分別SEQ ID No: 10及11)之貝伐單抗Fab部分。在某些實施例中,抗VEGF抗原結合片段轉殖基因包含蘭尼單抗輕鏈及重鏈cDNA序列(分別SEQ ID No: 12及13)。在某些實施例中,抗VEGF抗原結合片段轉殖基因編碼包含分別SEQ ID NO: 3及4之輕鏈及重鏈的貝伐單抗Fab。在某些實施例中,抗VEGF抗原結合片段轉殖基因編碼包含輕鏈之抗原結合片段,該輕鏈包含與SEQ ID NO: 3中所示之序列至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致的胺基酸序列。在某些實施例中,抗VEGF抗原結合片段轉殖基因編碼包含重鏈之抗原結合片段,該重鏈包含與SEQ ID NO: 4中所示之序列至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致的胺基酸序列。在某些實施例中,抗VEGF抗原結合片段轉殖基因編碼抗原結合片段,該抗原結合片段包含:輕鏈,該輕鏈包含與SEQ ID NO: 3中所示之序列至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致的胺基酸序列;及重鏈,該重鏈包含與SEQ ID NO: 4中所示之序列至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致的胺基酸序列。在某些實施例中,抗VEGF抗原結合片段轉殖基因編碼包含分別SEQ ID NO: 1及2之輕鏈及重鏈的高糖基化蘭尼單抗。在某些實施例中,抗VEGF抗原結合片段轉殖基因編碼包含輕鏈之抗原結合片段,該輕鏈包含與SEQ ID NO: 1中所示之序列至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致的胺基酸序列。在某些實施例中,抗VEGF抗原結合片段轉殖基因編碼包含重鏈之抗原結合片段,該重鏈包含與SEQ ID NO: 2中所示之序列至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致的胺基酸序列。在某些實施例中,抗VEGF抗原結合片段轉殖基因編碼包含抗原結合片段,該抗原結合片段包含:輕鏈,該輕鏈包含與SEQ ID NO: 1中所示之序列至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致的胺基酸序列;及重鏈,該重鏈包含與SEQ ID NO: 2中所示之序列至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致的胺基酸序列。
在某些實施例中,抗VEGF抗原結合片段轉殖基因編碼高糖基化貝伐單抗Fab,其包含SEQ ID NO: 3及4之輕鏈及重鏈,具有一或多個以下突變:L118N (重鏈)、E195N (輕鏈)或Q160N或Q160S (輕鏈)。在某些實施例中,抗VEGF抗原結合片段轉殖基因編碼高糖基化蘭尼單抗,其包含SEQ ID NO: 1及2之輕鏈及重鏈,具有一或多個以下突變:L118N (重鏈)、E195N (輕鏈)或Q160N或Q160S (輕鏈)。抗原結合片段轉殖基因cDNA之序列可見於例如表1中。在某些實施例中,抗原結合片段轉殖基因cDNA之序列藉由用一或多種信號序列替換SEQ ID NO: 10及11或SEQ ID NO: 12及13之信號序列來獲得。
在某些實施例中,抗VEGF抗原結合片段轉殖基因編碼抗原結合片段且包含六個貝伐單抗CDR之核苷酸序列。在某些實施例中,抗VEGF抗原結合片段轉殖基因編碼抗原結合片段且包含六個蘭尼單抗CDR之核苷酸序列。在某些實施例中,抗VEGF抗原結合片段轉殖基因編碼包括包含蘭尼單抗之重鏈CDR 1-3 (SEQ ID NO: 20、18及21)之重鏈可變區的抗原結合片段。在某些實施例中,抗VEGF抗原結合片段轉殖基因編碼包括包含蘭尼單抗之輕鏈CDR 1-3 (SEQ ID NO: 14-16)之輕鏈可變區的抗原結合片段。在某些實施例中,抗VEGF抗原結合片段轉殖基因編碼包括包含貝伐單抗之重鏈CDR 1-3 (SEQ ID NO: 17-19)之重鏈可變區的抗原結合片段。在某些實施例中,抗VEGF抗原結合片段轉殖基因編碼包括包含貝伐單抗之輕鏈CDR 1-3 (SEQ ID NO: 14-16)之輕鏈可變區的抗原結合片段。在某些實施例中,抗VEGF抗原結合片段轉殖基因編碼包括包含蘭尼單抗之重鏈CDR 1-3 (SEQ ID NO: 20、18及21)之重鏈可變區及包含蘭尼單抗之輕鏈CDR 1-3 (SEQ ID NO: 14-16)之輕鏈可變區的抗原結合片段。在某些實施例中,抗VEGF抗原結合片段轉殖基因編碼包括包含貝伐單抗之重鏈CDR 1-3 (SEQ ID NO: 17-19)之重鏈可變區及包含貝伐單抗之輕鏈CDR 1-3 (SEQ ID NO: 14-16)之輕鏈可變區的抗原結合片段。
在某些實施例中,抗VEGF抗原結合片段轉殖基因編碼包括包含SEQ ID NO: 14-16之輕鏈CDR 1-3之輕鏈可變區的抗原結合片段,其中輕鏈CDR3之第二個胺基酸殘基(亦即,QQYSTVPWTF (SEQ ID NO. 16)中之第二個Q)不攜帶以下化學修飾中之一或多者:氧化、乙醯化、脫醯胺及焦麩胺酸化(pyro Glu)。在一具體實施例中,抗VEGF抗原結合片段轉殖基因編碼包括包含SEQ ID NO: 14-16之輕鏈CDR 1-3之輕鏈可變區的抗原結合片段,其中輕鏈CDR1之第八個及第十一個胺基酸殘基(亦即,SASQDISNYLN (SEQ ID NO. 14)中之兩個N各自攜帶以下化學修飾中之一或多者:氧化、乙醯化、脫醯胺及焦麩胺酸化(pyro Glu),且輕鏈CDR3之第二個胺基酸殘基(亦即,QQYSTVPWTF (SEQ ID NO. 16)中之第二個Q)不攜帶以下化學修飾中之一或多者:氧化、乙醯化、脫醯胺及焦麩胺酸化(pyro Glu)。在一具體實施例中,抗VEGF抗原結合片段轉殖基因編碼包括包含SEQ ID NO: 14-16之輕鏈CDR 1-3之輕鏈可變區的抗原結合片段,其中輕鏈CDR3之第二個胺基酸殘基(亦即,QQYSTVPWTF (SEQ ID NO. 16)中之第二個Q)未乙醯化。在一具體實施例中,抗VEGF抗原結合片段轉殖基因編碼包括包含SEQ ID NO: 14-16之輕鏈CDR 1-3之輕鏈可變區的抗原結合片段,其中輕鏈CDR1之第八個及第十一個胺基酸殘基(亦即,SASQDISNYLN (SEQ ID NO. 14)中之兩個N各自攜帶以下化學修飾中之一或多者:氧化、乙醯化、脫醯胺及焦麩胺酸化(pyro Glu),且輕鏈CDR3之第二個胺基酸殘基(亦即,QQYSTVPWTF (SEQ ID NO. 16)中之第二個Q)未乙醯化。在一較佳實施例中,本文所述之化學修飾或化學修飾之缺乏(視情況而定)係藉由質譜法來測定。
在某些實施例中,抗VEGF抗原結合片段轉殖基因編碼包括包含SEQ ID NO: 20、18及21之重鏈CDR 1-3之重鏈可變區的抗原結合片段,其中重鏈CDR1之最後一個胺基酸殘基(亦即,GYDFTHYGMN (SEQ ID NO. 20)中之N)不攜帶以下化學修飾中之一或多者:氧化、乙醯化、脫醯胺及焦麩胺酸化(pyro Glu)。在一具體實施例中,抗VEGF抗原結合片段轉殖基因編碼包括包含SEQ ID NO: 20、18及21之重鏈CDR 1-3之重鏈可變區的抗原結合片段,其中重鏈CDR1之第九個胺基酸殘基(亦即,GYDFTHYGMN (SEQ ID NO. 20)中之M)攜帶以下化學修飾中之一或多者:乙醯化、脫醯胺及焦麩胺酸化(pyro Glu),重鏈CDR2之第三個胺基酸殘基(亦即,WINTYTGEPTYAADFKR (SEQ ID NO. 18)中之N攜帶以下化學修飾中之一或多者:乙醯化、脫醯胺及焦麩胺酸化(pyro Glu),且重鏈CDR1之最後一個胺基酸殘基(亦即,GYDFTHYGMN (SEQ ID NO. 20)中之N)不攜帶以下化學修飾中之一或多者:氧化、乙醯化、脫醯胺及焦麩胺酸化(pyro Glu)。在一具體實施例中,抗VEGF抗原結合片段轉殖基因編碼包括包含SEQ ID NO: 20、18及21之重鏈CDR 1-3之重鏈可變區的抗原結合片段,其中重鏈CDR1之最後一個胺基酸殘基(亦即,GYDFTHYGMN (SEQ ID NO. 20)中之N)未乙醯化。在一具體實施例中,抗VEGF抗原結合片段轉殖基因編碼包括包含SEQ ID NO: 20、18及21之重鏈CDR 1-3之重鏈可變區的抗原結合片段,其中重鏈CDR1之第九個胺基酸殘基(亦即,GYDFTHYGMN (SEQ ID NO. 20)中之M)攜帶以下化學修飾中之一或多者:乙醯化、脫醯胺及焦麩胺酸化(pyro Glu),重鏈CDR2之第三個胺基酸殘基(亦即,WINTYTGEPTYAADFKR (SEQ ID NO. 18)中之N攜帶以下化學修飾中之一或多者:乙醯化、脫醯胺及焦麩胺酸化(pyro Glu),且重鏈CDR1之最後一個胺基酸殘基(亦即,GYDFTHYGMN (SEQ ID NO. 20)中之N)未乙醯化。在一較佳實施例中,本文所述之化學修飾或化學修飾之缺乏(視情況而定)係藉由質譜法來測定。
在某些實施例中,抗VEGF抗原結合片段轉殖基因編碼包括包含SEQ ID NO: 14-16之輕鏈CDR 1-3之輕鏈可變區及包含SEQ ID NO: 20、18及21之重鏈CDR 1-3之重鏈可變區的抗原結合片段,其中輕鏈CDR3之第二個胺基酸殘基(亦即,QQYSTVPWTF (SEQ ID NO. 16)中之第二個Q)不攜帶以下化學修飾中之一或多者:氧化、乙醯化、脫醯胺及焦麩胺酸化(pyro Glu),且其中重鏈CDR1之最後一個胺基酸殘基(亦即,GYDFTHYGMN (SEQ ID NO. 20)中之N)不攜帶以下化學修飾中之一或多者:氧化、乙醯化、脫醯胺及焦麩胺酸化(pyro Glu)。在一具體實施例中,抗VEGF抗原結合片段轉殖基因編碼包括包含SEQ ID NO: 14-16之輕鏈CDR 1-3之輕鏈可變區及包含SEQ ID NO: 20、18及21之重鏈CDR 1-3之重鏈可變區的抗原結合片段,其中:(1)重鏈CDR1之第九個胺基酸殘基(亦即,GYDFTHYGMN (SEQ ID NO. 20)中之M)攜帶以下化學修飾中之一或多者:乙醯化、脫醯胺及焦麩胺酸化(pyro Glu),重鏈CDR2之第三個胺基酸殘基(亦即,WINTYTGEPTYAADFKR (SEQ ID NO. 18)中之N攜帶以下化學修飾中之一或多者:乙醯化、脫醯胺及焦麩胺酸化(pyro Glu),且重鏈CDR1之最後一個胺基酸殘基(亦即,GYDFTHYGMN (SEQ ID NO. 20)中之N)不攜帶以下化學修飾中之一或多者:氧化、乙醯化、脫醯胺及焦麩胺酸化(pyro Glu);及(2)輕鏈CDR1之第八個及第十一個胺基酸殘基(亦即,SASQDISNYLN (SEQ ID NO. 14)中之兩個N各自攜帶以下化學修飾中之一或多者:氧化、乙醯化、脫醯胺及焦麩胺酸化(pyro Glu),且輕鏈CDR3之第二個胺基酸殘基(亦即,QQYSTVPWTF (SEQ ID NO. 16)中之第二個Q)不攜帶以下化學修飾中之一或多者:氧化、乙醯化、脫醯胺及焦麩胺酸化(pyro Glu)。在一具體實施例中,抗VEGF抗原結合片段轉殖基因編碼包括包含SEQ ID NO: 14-16之輕鏈CDR 1-3之輕鏈可變區及包含SEQ ID NO: 20、18及21之重鏈CDR 1-3之重鏈可變區的抗原結合片段,其中輕鏈CDR3之第二個胺基酸殘基(亦即,QQYSTVPWTF (SEQ ID NO. 16)中之第二個Q)未乙醯化,且其中重鏈CDR1之最後一個胺基酸殘基(亦即,GYDFTHYGMN (SEQ ID NO. 20)中之N)未乙醯化。在一具體實施例中,抗原結合片段包含SEQ ID NO. 20之重鏈CDR1,其中:(1)重鏈CDR1之第九個胺基酸殘基(亦即,GYDFTHYGMN (SEQ ID NO. 20)中之M)攜帶以下化學修飾中之一或多者:乙醯化、脫醯胺及焦麩胺酸化(pyro Glu),重鏈CDR2之第三個胺基酸殘基(亦即,WINTYTGEPTYAADFKR (SEQ ID NO. 18)中之N攜帶以下化學修飾中之一或多者:乙醯化、脫醯胺及焦麩胺酸化(pyro Glu),且重鏈CDR1之最後一個胺基酸殘基(亦即,GYDFTHYGMN (SEQ ID NO. 20)中之N)未乙醯化;及(2)輕鏈CDR1之第八個及第十一個胺基酸殘基(亦即,SASQDISNYLN (SEQ ID NO. 14)中之兩個N各自攜帶以下化學修飾中之一或多者:氧化、乙醯化、脫醯胺及焦麩胺酸化(pyro Glu),且輕鏈CDR3之第二個胺基酸殘基(亦即,QQYSTVPWTF (SEQ ID NO. 16)中之第二個Q)未乙醯化。在一較佳實施例中,本文所述之化學修飾或化學修飾之缺乏(視情況而定)係藉由質譜法來測定。
在某些態樣中,本文亦提供包含SEQ ID NO: 14-16之輕鏈CDR 1-3及SEQ ID NO: 20、18及21之重鏈CDR 1-3的抗VEGF抗原結合片段,及編碼此類抗VEGF抗原結合片段之轉殖基因,其中輕鏈CDR3之第二個胺基酸殘基(亦即,QQYSTVPWTF (SEQ ID NO. 16)中之第二個Q)不攜帶以下化學修飾中之一或多者:氧化、乙醯化、脫醯胺及焦麩胺酸化(pyro Glu)。在一具體實施例中,抗原結合片段包含SEQ ID NO: 14-16之輕鏈CDR 1-3及SEQ ID NO: 20、18及21之重鏈CDR 1-3,其中輕鏈CDR1之第八個及第十一個胺基酸殘基(亦即,SASQDISNYLN (SEQ ID NO. 14)中之兩個N各自攜帶以下化學修飾中之一或多者:氧化、乙醯化、脫醯胺及焦麩胺酸化(pyro Glu),且輕鏈CDR3之第二個胺基酸殘基(亦即,QQYSTVPWTF (SEQ ID NO. 16)中之第二個Q)不攜帶以下化學修飾中之一或多者:氧化、乙醯化、脫醯胺及焦麩胺酸化(pyro Glu)。在一具體實施例中,抗原結合片段包含SEQ ID NO: 14-16之輕鏈CDR 1-3及SEQ ID NO: 20、18及21之重鏈CDR 1-3,其中輕鏈CDR3之第二個胺基酸殘基(亦即,QQYSTVPWTF (SEQ ID NO. 16)中之第二個Q)未乙醯化。在一具體實施例中,抗原結合片段包含SEQ ID NO: 14-16之輕鏈CDR 1-3及SEQ ID NO: 20、18及21之重鏈CDR 1-3,其中輕鏈CDR1之第八個及第十一個胺基酸殘基(亦即,SASQDISNYLN (SEQ ID NO. 14)中之兩個N各自攜帶以下化學修飾中之一或多者:氧化、乙醯化、脫醯胺及焦麩胺酸化(pyro Glu),且輕鏈CDR3之第二個胺基酸殘基(亦即,QQYSTVPWTF (SEQ ID NO. 16)中之第二個Q)未乙醯化。本文提供之抗VEGF抗原結合片段及轉殖基因可用於根據本發明之任何方法中。在一較佳實施例中,本文所述之化學修飾或化學修飾之缺乏(視情況而定)係藉由質譜法來測定。
在某些態樣中,本文亦提供包含SEQ ID NO: 14-16之輕鏈CDR 1-3及SEQ ID NO: 20、18及21之重鏈CDR 1-3的抗VEGF抗原結合片段,及編碼此類抗VEGF抗原結合片段之轉殖基因,其中重鏈CDR1之最後一個胺基酸殘基(亦即,GYDFTHYGMN (SEQ ID NO. 20)中之N)不攜帶以下化學修飾中之一或多者:氧化、乙醯化、脫醯胺及焦麩胺酸化(pyro Glu)。在一具體實施例中,抗原結合片段包含SEQ ID NO: 14-16之輕鏈CDR 1-3及SEQ ID NO: 20、18及21之重鏈CDR 1-3,其中重鏈CDR1之第九個胺基酸殘基(亦即,GYDFTHYGMN (SEQ ID NO. 20)中之M)攜帶以下化學修飾中之一或多者:乙醯化、脫醯胺及焦麩胺酸化(pyro Glu),重鏈CDR2之第三個胺基酸殘基(亦即,WINTYTGEPTYAADFKR (SEQ ID NO. 18)中之N攜帶以下化學修飾中之一或多者:乙醯化、脫醯胺及焦麩胺酸化(pyro Glu),且重鏈CDR1之最後一個胺基酸殘基(亦即,GYDFTHYGMN (SEQ ID NO. 20)中之N)不攜帶以下化學修飾中之一或多者:氧化、乙醯化、脫醯胺及焦麩胺酸化(pyro Glu)。在一具體實施例中,抗原結合片段包含SEQ ID NO: 14-16之輕鏈CDR 1-3及SEQ ID NO: 20、18及21之重鏈CDR 1-3,其中重鏈CDR1之最後一個胺基酸殘基(亦即,GYDFTHYGMN (SEQ ID NO. 20)中之N)未乙醯化。在一具體實施例中,抗原結合片段包含SEQ ID NO: 14-16之輕鏈CDR 1-3及SEQ ID NO: 20、18及21之重鏈CDR 1-3,其中重鏈CDR1之第九個胺基酸殘基(亦即,GYDFTHYGMN (SEQ ID NO. 20)中之M)攜帶以下化學修飾中之一或多者:乙醯化、脫醯胺及焦麩胺酸化(pyro Glu),重鏈CDR2之第三個胺基酸殘基(亦即,WINTYTGEPTYAADFKR (SEQ ID NO. 18)中之N攜帶以下化學修飾中之一或多者:乙醯化、脫醯胺及焦麩胺酸化(pyro Glu),且重鏈CDR1之最後一個胺基酸殘基(亦即,GYDFTHYGMN (SEQ ID NO. 20)中之N)未乙醯化。本文提供之抗VEGF抗原結合片段及轉殖基因可用於根據本發明之任何方法中。在一較佳實施例中,本文所述之化學修飾或化學修飾之缺乏(視情況而定)係藉由質譜法來測定。
在某些態樣中,本文亦提供包含SEQ ID NO: 14-16之輕鏈CDR 1-3及SEQ ID NO: 20、18及21之重鏈CDR 1-3的抗VEGF抗原結合片段,及編碼此類抗VEGF抗原結合片段之轉殖基因,其中重鏈CDR1之最後一個胺基酸殘基(亦即,GYDFTHYGMN (SEQ ID NO. 20)中之N)不攜帶以下化學修飾中之一或多者:氧化、乙醯化、脫醯胺及焦麩胺酸化(pyro Glu),且輕鏈CDR3之第二個胺基酸殘基(亦即,QQYSTVPWTF (SEQ ID NO. 16)中之第二個Q)不攜帶以下化學修飾中之一或多者:氧化、乙醯化、脫醯胺及焦麩胺酸化(pyro Glu)。在一具體實施例中,抗原結合片段包含SEQ ID NO: 14-16之輕鏈CDR 1-3及SEQ ID NO: 20、18及21之重鏈CDR 1-3,其中:(1)重鏈CDR1之第九個胺基酸殘基(亦即,GYDFTHYGMN (SEQ ID NO. 20)中之M)攜帶以下化學修飾中之一或多者:乙醯化、脫醯胺及焦麩胺酸化(pyro Glu),重鏈CDR2之第三個胺基酸殘基(亦即,WINTYTGEPTYAADFKR (SEQ ID NO. 18)中之N攜帶以下化學修飾中之一或多者:乙醯化、脫醯胺及焦麩胺酸化(pyro Glu),且重鏈CDR1之最後一個胺基酸殘基(亦即,GYDFTHYGMN (SEQ ID NO. 20)中之N)不攜帶以下化學修飾中之一或多者:氧化、乙醯化、脫醯胺及焦麩胺酸化(pyro Glu);及(2)輕鏈CDR1之第八個及第十一個胺基酸殘基(亦即,SASQDISNYLN (SEQ ID NO. 14)中之兩個N各自攜帶以下化學修飾中之一或多者:氧化、乙醯化、脫醯胺及焦麩胺酸化(pyro Glu),且輕鏈CDR3之第二個胺基酸殘基(亦即,QQYSTVPWTF (SEQ ID NO. 16)中之第二個Q)不攜帶以下化學修飾中之一或多者:氧化、乙醯化、脫醯胺及焦麩胺酸化(pyro Glu)。在一具體實施例中,抗原結合片段包含SEQ ID NO: 14-16之輕鏈CDR 1-3及SEQ ID NO: 20、18及21之重鏈CDR 1-3,其中重鏈CDR1之最後一個胺基酸殘基(亦即,GYDFTHYGMN (SEQ ID NO. 20)中之N)未乙醯化,且輕鏈CDR3之第二個胺基酸殘基(亦即,QQYSTVPWTF (SEQ ID NO. 16)中之第二個Q)未乙醯化。在一具體實施例中,抗原結合片段包含SEQ ID NO: 14-16之輕鏈CDR 1-3及SEQ ID NO: 20、18及21之重鏈CDR 1-3,其中:(1)重鏈CDR1之第九個胺基酸殘基(亦即,GYDFTHYGMN (SEQ ID NO. 20)中之M)攜帶以下化學修飾中之一或多者:乙醯化、脫醯胺及焦麩胺酸化(pyro Glu),重鏈CDR2之第三個胺基酸殘基(亦即,WINTYTGEPTYAADFKR (SEQ ID NO. 18)中之N攜帶以下化學修飾中之一或多者:乙醯化、脫醯胺及焦麩胺酸化(pyro Glu),且重鏈CDR1之最後一個胺基酸殘基(亦即,GYDFTHYGMN (SEQ ID NO. 20)中之N)未乙醯化;及(2)輕鏈CDR1之第八個及第十一個胺基酸殘基(亦即,SASQDISNYLN (SEQ ID NO. 14)中之兩個N各自攜帶以下化學修飾中之一或多者:氧化、乙醯化、脫醯胺及焦麩胺酸化(pyro Glu),且輕鏈CDR3之第二個胺基酸殘基(亦即,QQYSTVPWTF (SEQ ID NO. 16)中之第二個Q)未乙醯化。本文提供之抗VEGF抗原結合片段及轉殖基因可用於根據本發明之任何方法中。在一較佳實施例中,本文所述之化學修飾或化學修飾之缺乏(視情況而定)係藉由質譜法來測定。
表 1 :示例性序列
4.5 疾病
SEQ ID NO: | 描述 | 序列 |
1 | 蘭尼單抗Fab胺基酸序列(輕鏈) | DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCSASQDISNYLNWYQQKPGKAPKVLIYFTSSLH SGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYSTVPWTFGQGTKVEIKRTV AAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTE QDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC |
2 | 蘭尼單抗Fab胺基酸序列(重鏈) | EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYDFTHYGMNWVRQAPGKGLEWVGWINTYT GEPTYAADFKRRFTFSLDTSKSTAYLQMNSLRAEDTAVYYCAKYPYYYGTSHWYF DVWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWN SGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKK VEPKSCDKTHL |
3 | 貝伐單抗Fab胺基酸序列(輕鏈) | DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCSASQDISNYLNWYQQKPGKAPKVLIYFTSSLH SGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYSTVPWTFGQGTKVEIKRTV AAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTE QDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC |
4 | 貝伐單抗Fab胺基酸序列(重鏈) | EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYTFTNYGMNWVRQAPGKGLEWVGWINTYT GEPTYAADFKRRFTFSLDTSKSTAYLQMNSLRAEDTAVYYCAKYPHYYGSSHWYF DVWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWN SGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKK VEPKSCDKTHL |
5 | VEGF-A信號肽 | MNFLLSWVHW SLALLLYLHH AKWSQA |
6 | 腓骨蛋白-1信號肽 | MERAAPSRRV PLPLLLLGGL ALLAAGVDA |
7 | 玻連蛋白信號肽 | MAPLRPLLIL ALLAWVALA |
8 | 補體因子H信號肽 | MRLLAKIICLMLWAICVA |
9 | 視蛋白信號肽 | MRLLAFLSLL ALVLQETGT |
10 | 貝伐單抗cDNA (輕鏈) | |
11 | 貝伐單抗cDNA (重鏈) | |
12 | 蘭尼單抗cDNA (包含信號序列之輕鏈) | |
13 | 蘭尼單抗cDNA (包含信號序列之重鏈) | |
14 | 貝伐單抗及蘭尼單抗輕鏈CDR1 | SASQDISNYLN |
15 | 貝伐單抗及蘭尼單抗輕鏈CDR2 | FTSSLHS |
16 | 貝伐單抗及蘭尼單抗輕鏈CDR3 | QQYSTVPWT |
17 | 貝伐單抗重鏈CDR1 | GYTFTNYGMN |
18 | 貝伐單抗及蘭尼單抗重鏈CDR2 | WINTYTGEPTYAADFKR |
19 | 貝伐單抗重鏈CDR3 | YPHYYGSSHWYFDV |
20 | 蘭尼單抗重鏈CDR1 | GYDFTHYGMN |
21 | 蘭尼單抗重鏈CDR3 | YPYYYGTSHWYFDV |
22 | 白蛋白信號肽 | MKWVTFISLLFLFSSAYS |
23 | 胰凝乳蛋白酶原信號肽 | MAFLWLLSCWALLGTTFG |
24 | 介白素-2信號肽 | MYRMQLLSCIALILALVTNS |
25 | 胰蛋白酶原-2信號肽 | MNLLLILTFVAAAVA |
26 | F2A位點 | LLNFDLLKLAGDVESNPGP |
27 | T2A位點 | (GSG)EGRGSLLTCGDVEENPGP |
28 | P2A位點 | (GSG)ATNFSLLKQAGDVEENPGP |
29 | E2A位點 | (GSG)QCTNYALLKLAGDVESNPGP |
30 | F2A位點 | (GSG)VKQTLNFDLLKLAGDVESNPGP |
31 | 弗林蛋白酶連接子 | RKRR |
32 | 弗林蛋白酶連接子 | RRRR |
33 | 弗林蛋白酶連接子 | RRKR |
34 | 弗林蛋白酶連接子 | RKKR |
35 | 弗林蛋白酶連接子 | R-X-K/R-R |
36 | 弗林蛋白酶連接子 | RXKR |
37 | 弗林蛋白酶連接子 | RXRR |
38 | 蘭尼單抗Fab胺基酸序列(輕鏈) | MDIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCSASQDISNYLNWYQQKPGKAPKVLIYFTSSLHSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYSTVPWTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC |
39 | 蘭尼單抗Fab胺基酸序列(重鏈) | MEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYDFTHYGMNWVRQAPGKGLEWVGWINTYTGEPTYAADFKRRFTFSLDTSKSTAYLQMNSLRAEDTAVYYCAKYPYYYGTSHWYFDVWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHLRKRR |
40 | 蘭尼單抗Fab胺基酸序列(重鏈) | MEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYDFTHYGMNWVRQAPGKGLEWVGWINTYTGEPTYAADFKRRFTFSLDTSKSTAYLQMNSLRAEDTAVYYCAKYPYYYGTSHWYFDVWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHL |
41 | AAV1 | MAADGYLPDWLEDNLSEGIREWWDLKPGAPKPKANQQKQDDGRGLVLPGYKYLGPFNGLDKGEPVNAADAAALEHDKAYDQQLKAGDNPYLRYNHADAEFQERLQEDTSFGGNLGRAVFQAKKRVLEPLGLVEEGAKTAPGKKRPVEQSPQEPDSSSGIGKTGQQPAKKRLNFGQTGDSESVPDPQPLGEPPATPAAVGPTTMASGGGAPMADNNEGADGVGNASGNWHCDSTWLGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISSASTGASNDNHYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKRLNFKLFNIQVKEVTTNDGVTTIANNLTSTVQVFSDSEYQLPYVLGSAHQGCLPPFPADVFMIPQYGYLTLNNGSQAVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFTFSYTFEEVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLNRTQNQSGSAQNKDLLFSRGSPAGMSVQPKNWLPGPCYRQQRVSKTKTDNNNSNFTWTGASKYNLNGRESIINPGTAMASHKDDEDKFFPMSGVMIFGKESAGASNTALDNVMITDEEEIKATNPVATERFGTVAVNFQSSSTDPATGDVHAMGALPGMVWQDRDVYLQGPIWAKIPHTDGHFHPSPLMGGFGLKNPPPQILIKNTPVPANPPAEFSATKFASFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEVQYTSNYAKSANVDFTVDNNGLYTEPRPIGTRYLTRPL |
42 | AAV2 | MAADGYLPDWLEDTLSEGIRQWWKLKPGPPPPKPAERHKDDSRGLVLPGYKYLGPFNGLDKGEPVNEADAAALEHDKAYDRQLDSGDNPYLKYNHADAEFQERLKEDTSFGGNLGRAVFQAKKRVLEPLGLVEEPVKTAPGKKRPVEHSPVEPDSSSGTGKAGQQPARKRLNFGQTGDADSVPDPQPLGQPPAAPSGLGTNTMATGSGAPMADNNEGADGVGNSSGNWHCDSTWMGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISSQSGASNDNHYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKRLNFKLFNIQVKEVTQNDGTTTIANNLTSTVQVFTDSEYQLPYVLGSAHQGCLPPFPADVFMVPQYGYLTLNNGSQAVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFTFSYTFEDVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLSRTNTPSGTTTQSRLQFSQAGASDIRDQSRNWLPGPCYRQQRVSKTSADNNNSEYSWTGATKYHLNGRDSLVNPGPAMASHKDDEEKFFPQSGVLIFGKQGSEKTNVDIEKVMITDEEEIRTTNPVATEQYGSVSTNLQRGNRQAATADVNTQGVLPGMVWQDRDVYLQGPIWAKIPHTDGHFHPSPLMGGFGLKHPPPQILIKNTPVPANPSTTFSAAKFASFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEIQYTSNYNKSVNVDFTVDTNGVYSEPRPIGTRYLTRNL |
43 | AAV3-3 | MAADGYLPDWLEDNLSEGIREWWALKPGVPQPKANQQHQDNRRGLVLPGYKYLGPGNGLDKGEPVNEADAAALEHDKAYDQQLKAGDNPYLKYNHADAEFQERLQEDTSFGGNLGRAVFQAKKRILEPLGLVEEAAKTAPGKKGAVDQSPQEPDSSSGVGKSGKQPARKRLNFGQTGDSESVPDPQPLGEPPAAPTSLGSNTMASGGGAPMADNNEGADGVGNSSGNWHCDSQWLGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISSQSGASNDNHYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKKLSFKLFNIQVRGVTQNDGTTTIANNLTSTVQVFTDSEYQLPYVLGSAHQGCLPPFPADVFMVPQYGYLTLNNGSQAVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFQFSYTFEDVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLNRTQGTTSGTTNQSRLLFSQAGPQSMSLQARNWLPGPCYRQQRLSKTANDNNNSNFPWTAASKYHLNGRDSLVNPGPAMASHKDDEEKFFPMHGNLIFGKEGTTASNAELDNVMITDEEEIRTTNPVATEQYGTVANNLQSSNTAPTTGTVNHQGALPGMVWQDRDVYLQGPIWAKIPHTDGHFHPSPLMGGFGLKHPPPQIMIKNTPVPANPPTTFSPAKFASFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEIQYTSNYNKSVNVDFTVDTNGVYSEPRPIGTRYLTRNL |
44 | AAV4-4 | MTDGYLPDWLEDNLSEGVREWWALQPGAPKPKANQQHQDNARGLVLPGYKYLGPGNGLDKGEPVNAADAAALEHDKAYDQQLKAGDNPYLKYNHADAEFQQRLQGDTSFGGNLGRAVFQAKKRVLEPLGLVEQAGETAPGKKRPLIESPQQPDSSTGIGKKGKQPAKKKLVFEDETGAGDGPPEGSTSGAMSDDSEMRAAAGGAAVEGGQGADGVGNASGDWHCDSTWSEGHVTTTSTRTWVLPTYNNHLYKRLGESLQSNTYNGFSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGMRPKAMRVKIFNIQVKEVTTSNGETTVANNLTSTVQIFADSSYELPYVMDAGQEGSLPPFPNDVFMVPQYGYCGLVTGNTSQQQTDRNAFYCLEYFPSQMLRTGNNFEITYSFEKVPFHSMYAHSQSLDRLMNPLIDQYLWGLQSTTTGTTLNAGTATTNFTKLRPTNFSNFKKNWLPGPSIKQQGFSKTANQNYKIPATGSDSLIKYETHSTLDGRWSALTPGPPMATAGPADSKFSNSQLIFAGPKQNGNTATVPGTLIFTSEEELAATNATDTDMWGNLPGGDQSNSNLPTVDRLTALGAVPGMVWQNRDIYYQGPIWAKIPHTDGHFHPSPLIGGFGLKHPPPQIFIKNTPVPANPATTFSSTPVNSFITQYSTGQVSVQIDWEIQKERSKRWNPEVQFTSNYGQQNSLLWAPDAAGKYTEPRAIGTRYLTHHL |
45 | AAV5 | MSFVDHPPDWLEEVGEGLREFLGLEAGPPKPKPNQQHQDQARGLVLPGYNYLGPGNGLDRGEPVNRADEVAREHDISYNEQLEAGDNPYLKYNHADAEFQEKLADDTSFGGNLGKAVFQAKKRVLEPFGLVEEGAKTAPTGKRIDDHFPKRKKARTEEDSKPSTSSDAEAGPSGSQQLQIPAQPASSLGADTMSAGGGGPLGDNNQGADGVGNASGDWHCDSTWMGDRVVTKSTRTWVLPSYNNHQYREIKSGSVDGSNANAYFGYSTPWGYFDFNRFHSHWSPRDWQRLINNYWGFRPRSLRVKIFNIQVKEVTVQDSTTTIANNLTSTVQVFTDDDYQLPYVVGNGTEGCLPAFPPQVFTLPQYGYATLNRDNTENPTERSSFFCLEYFPSKMLRTGNNFEFTYNFEEVPFHSSFAPSQNLFKLANPLVDQYLYRFVSTNNTGGVQFNKNLAGRYANTYKNWFPGPMGRTQGWNLGSGVNRASVSAFATTNRMELEGASYQVPPQPNGMTNNLQGSNTYALENTMIFNSQPANPGTTATYLEGNMLITSESETQPVNRVAYNVGGQMATNNQSSTTAPATGTYNLQEIVPGSVWMERDVYLQGPIWAKIPETGAHFHPSPAMGGFGLKHPPPMMLIKNTPVPGNITSFSDVPVSSFITQYSTGQVTVEMEWELKKENSKRWNPEIQYTNNYNDPQFVDFAPDSTGEYRTTRPIGTRYLTRPL |
46 | AAV6 | MAADGYLPDWLEDNLSEGIREWWDLKPGAPKPKANQQKQDDGRGLVLPGYKYLGPFNGLDKGEPVNAADAAALEHDKAYDQQLKAGDNPYLRYNHADAEFQERLQEDTSFGGNLGRAVFQAKKRVLEPFGLVEEGAKTAPGKKRPVEQSPQEPDSSSGIGKTGQQPAKKRLNFGQTGDSESVPDPQPLGEPPATPAAVGPTTMASGGGAPMADNNEGADGVGNASGNWHCDSTWLGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISSASTGASNDNHYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKRLNFKLFNIQVKEVTTNDGVTTIANNLTSTVQVFSDSEYQLPYVLGSAHQGCLPPFPADVFMIPQYGYLTLNNGSQAVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFTFSYTFEDVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLNRTQNQSGSAQNKDLLFSRGSPAGMSVQPKNWLPGPCYRQQRVSKTKTDNNNSNFTWTGASKYNLNGRESIINPGTAMASHKDDKDKFFPMSGVMIFGKESAGASNTALDNVMITDEEEIKATNPVATERFGTVAVNLQSSSTDPATGDVHVMGALPGMVWQDRDVYLQGPIWAKIPHTDGHFHPSPLMGGFGLKHPPPQILIKNTPVPANPPAEFSATKFASFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEVQYTSNYAKSANVDFTVDNNGLYTEPRPIGTRYLTRPL |
47 | AAV7 | MAADGYLPDWLEDNLSEGIREWWDLKPGAPKPKANQQKQDNGRGLVLPGYKYLGPFNGLDKGEPVNAADAAALEHDKAYDQQLKAGDNPYLRYNHADAEFQERLQEDTSFGGNLGRAVFQAKKRVLEPLGLVEEGAKTAPAKKRPVEPSPQRSPDSSTGIGKKGQQPARKRLNFGQTGDSESVPDPQPLGEPPAAPSSVGSGTVAAGGGAPMADNNEGADGVGNASGNWHCDSTWLGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISSETAGSTNDNTYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKKLRFKLFNIQVKEVTTNDGVTTIANNLTSTIQVFSDSEYQLPYVLGSAHQGCLPPFPADVFMIPQYGYLTLNNGSQSVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFEFSYSFEDVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLARTQSNPGGTAGNRELQFYQGGPSTMAEQAKNWLPGPCFRQQRVSKTLDQNNNSNFAWTGATKYHLNGRNSLVNPGVAMATHKDDEDRFFPSSGVLIFGKTGATNKTTLENVLMTNEEEIRPTNPVATEEYGIVSSNLQAANTAAQTQVVNNQGALPGMVWQNRDVYLQGPIWAKIPHTDGNFHPSPLMGGFGLKHPPPQILIKNTPVPANPPEVFTPAKFASFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEIQYTSNFEKQTGVDFAVDSQGVYSEPRPIGTRYLTRNL |
48 | AAV8 | MAADGYLPDWLEDNLSEGIREWWALKPGAPKPKANQQKQDDGRGLVLPGYKYLGPFNGLDKGEPVNAADAAALEHDKAYDQQLQAGDNPYLRYNHADAEFQERLQEDTSFGGNLGRAVFQAKKRVLEPLGLVEEGAKTAPGKKRPVEPSPQRSPDSSTGIGKKGQQPARKRLNFGQTGDSESVPDPQPLGEPPAAPSGVGPNTMAAGGGAPMADNNEGADGVGSSSGNWHCDSTWLGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISNGTSGGATNDNTYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKRLSFKLFNIQVKEVTQNEGTKTIANNLTSTIQVFTDSEYQLPYVLGSAHQGCLPPFPADVFMIPQYGYLTLNNGSQAVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFQFTYTFEDVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLSRTQTTGGTANTQTLGFSQGGPNTMANQAKNWLPGPCYRQQRVSTTTGQNNNSNFAWTAGTKYHLNGRNSLANPGIAMATHKDDEERFFPSNGILIFGKQNAARDNADYSDVMLTSEEEIKTTNPVATEEYGIVADNLQQQNTAPQIGTVNSQGALPGMVWQNRDVYLQGPIWAKIPHTDGNFHPSPLMGGFGLKHPPPQILIKNTPVPADPPTTFNQSKLNSFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEIQYTSNYYKSTSVDFAVNTEGVYSEPRPIGTRYLTRNL |
49 | hu31 | MAADGYLPDWLEDTLSEGIRQWWKLKPGPPPPKPAERHKDDSRGLVLPGYKYLGPGNGLDKGEPVNAADAAALEHDKAYDQQLKAGDNPYLKYNHADAEFQERLKEDTSFGGNLGRAVFQAKKRLLEPLGLVEEAAKTAPGKKRPVEQSPQEPDSSAGIGKSGSQPAKKKLNFGQTGDTESVPDPQPIGEPPAAPSGVGSLTMASGGGAPVADNNEGADGVGSSSGNWHCDSQWLGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISNSTSGGSSNDNAYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKRLNFKLFNIQVKEVTDNNGVKTIANNLTSTVQVFTDSDYQLPYVLGSAHEGCLPPFPADVFMIPQYGYLTLNDGGQAVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFQFSYEFENVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLSKTINGSGQNQQTLKFSVAGPSNMAVQGRNYIPGPSYRQQRVSTTVTQNNNSEFAWPGASSWALNGRNSLMNPGPAMASHKEGEDRFFPLSGSLIFGKQGTGRDNVDADKVMITNEEEIKTTNPVATESYGQVATNHQSAQAQAQTGWVQNQGILPGMVWQDRDVYLQGPIWAKIPHTDGNFHPSPLMGGFGMKHPPPQILIKNTPVPADPPTAFNKDKLNSFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEIQYTSNYYKSNNVEFAVSTEGVYSEPRPIGTRYLTRNL |
50 | hu32 | MAADGYLPDWLEDTLSEGIRQWWKLKPGPPPPKPAERHKDDSRGLVLPGYKYLGPGNGLDKGEPVNAADAAALEHDKAYDQQLKAGDNPYLKYNHADAEFQERLKEDTSFGGNLGRAVFQAKKRLLEPLGLVEEAAKTAPGKKRPVEQSPQEPDSSAGIGKSGSQPAKKKLNFGQTGDTESVPDPQPIGEPPAAPSGVGSLTMASGGGAPVADNNEGADGVGSSSGNWHCDSQWLGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISNSTSGGSSNDNAYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKRLNFKLFNIQVKEVTDNNGVKTIANNLTSTVQVFTDSDYQLPYVLGSAHEGCLPPFPADVFMIPQYGYLTLNDGSQAVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFQFSYEFENVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLSKTINGSGQNQQTLKFSVAGPSNMAVQGRNYIPGPSYRQQRVSTTVTQNNNSEFAWPGASSWALNGRNSLMNPGPAMASHKEGEDRFFPLSGSLIFGKQGTGRDNVDADKVMITNEEEIKTTNPVATESYGQVATNHQSAQAQAQTGWVQNQGILPGMVWQDRDVYLQGPIWAKIPHTDGNFHPSPLMGGFGMKHPPPQILIKNTPVPADPPTAFNKDKLNSFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEIQYTSNYYKSNNVEFAVNTEGVYSEPRPIGTRYLTRNL |
51 | AAV9 | MAADGYLPDWLEDNLSEGIREWWALKPGAPQPKANQQHQDNARGLVLPGYKYLGPGNGLDKGEPVNAADAAALEHDKAYDQQLKAGDNPYLKYNHADAEFQERLKEDTSFGGNLGRAVFQAKKRLLEPLGLVEEAAKTAPGKKRPVEQSPQEPDSSAGIGKSGAQPAKKRLNFGQTGDTESVPDPQPIGEPPAAPSGVGSLTMASGGGAPVADNNEGADGVGSSSGNWHCDSQWLGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISNSTSGGSSNDNAYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKRLNFKLFNIQVKEVTDNNGVKTIANNLTSTVQVFTDSDYQLPYVLGSAHEGCLPPFPADVFMIPQYGYLTLNDGSQAVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFQFSYEFENVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLSKTINGSGQNQQTLKFSVAGPSNMAVQGRNYIPGPSYRQQRVSTTVTQNNNSEFAWPGASSWALNGRNSLMNPGPAMASHKEGEDRFFPLSGSLIFGKQGTGRDNVDADKVMITNEEEIKTTNPVATESYGQVATNHQSAQAQAQTGWVQNQGILPGMVWQDRDVYLQGPIWAKIPHTDGNFHPSPLMGGFGMKHPPPQILIKNTPVPADPPTAFNKDKLNSFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEIQYTSNYYKSNNVEFAVNTEGVYSEPRPIGTRYLTRNL |
52 | 血管內皮生長因子(vegf) Caa44447.1 | MNFLLSWVHWSLALLLYLHHAKWSQAAPMAEGGGQNHHEVVKFMDVYQRSYCHPIETLVDIFQEYPDEIEYIFKPSCVPLMRCGGCCNDEGLECVPTEESNITMQIMRIKPHQGQHIGEMSFLQHNKCECRPKKDRARQENPCGPCSERRKHLFVQDPQTCKCSCKNTDSRCKARQLELNERTCRCDKPRR |
53 | 棕櫚醯-蛋白硫酯酶1 (ppt1) Aah08426.1 | MASPGCLWLLAVALLPWTCASRALQHLDPPAPLPLVIWHGMGDSCCNPLSMGAIKKMVEKKIPGIYVLSLEIGKTLMEDVENSFFLNVNSQVTTVCQALAKDPKLQQGYNAMGFSQGGQFLRAVAQRCPSPPMINLISVGGQHQGVFGLPRCPGESSHICDFIRKTLNAGAYSKVVQERLVQAEYWHDPIKEDVYRNHSIFLADINQERGINESYKKNLMALKKFVMVKFLNDSIVDPVDSEWFGFYRSGQAKETIPLQETSLYTQDRLGLKEMDNAGQLVFLATEGDHLQLSEEWFYAHIIPFLG |
54 | 三肽基-肽酶1 (tpp1) Np_000382.3 | MGLQACLLGLFALILSGKCSYSPEPDQRRTLPPGWVSLGRADPEEELSLTFALRQQNVERLSELVQAVSDPSSPQYGKYLTLENVADLVRPSPLTLHTVQKWLLAAGAQKCHSVITQDFLTCWLSIRQAELLLPGAEFHHYVGGPTETHVVRSPHPYQLPQALAPHVDFVGGLHRFPPTSSLRQRPEPQVTGTVGLHLGVTPSVIRKRYNLTSQDVGSGTSNNSQACAQFLEQYFHDSDLAQFMRLFGGNFAHQASVARVVGQQGRGRAGIEASLDVQYLMSAGANISTWVYSSPGRHEGQEPFLQWLMLLSNESALPHVHTVSYGDDEDSLSSAYIQRVNTELMKAAARGLTLLFASGDSGAGCWSVSGRHQFRPTFPASSPYVTTVGGTSFQEPFLITNEIVDYISGGGFSNVFPRPSYQEEAVTKFLSSSPHLPPSSYFNASGRAYPDVAALSDGYWVVSNRVPIPWVSGTSASTPVFGGILSLINEHRILSGRPPLGFLNPRLYQQHGAGLFDVTRGCHESCLDEEVEGQGFCSGPGWDPVTGWGTPNFPALLKTLLNP |
55 | 突變介白素-2信號肽 | MYRMQLLLLIALSLALVTNS |
本文提供之醫藥組合物或參考醫藥組合物(例如,部分4.1)可投與至經診斷患有nAMD (濕性AMD)、乾性AMD、視網膜靜脈阻塞(RVO)、糖尿病性黃斑水腫(DME)、糖尿病性視網膜病變(DR)或巴登氏病之個體。
在一些實施例中,本文揭示治療經診斷患有nAMD (濕性AMD)、乾性AMD、視網膜靜脈阻塞(RVO)、糖尿病性黃斑水腫(DME)、糖尿病性視網膜病變(DR)或巴登蛋白之個體的方法,該等方法向個體投與治療有效量之醫藥組合物藉由脈絡膜上注射(例如,經由脈絡膜上藥物遞送裝置,諸如具有微針之微注射器)。
在一些實施例中,經由脈絡膜上投與向患者投與一種醫藥組合物,其含有包含0.2 mg/mL氯化鉀、0.2 mg/mL磷酸二氫鉀、5.84 mg/mL氯化鈉、1.15 mg/mL無水磷酸氫二鈉、40.0 mg/mL、4% w/v蔗糖及視情況選用之界面活性劑之醫藥組合物的約2.5×10
11GC/眼、約5×10
11GC/眼或約1.5×10
12GC/眼之構築體II。在一些實施例中,患者具有糖尿病性視網膜病變。
在一些實施例中,經由脈絡膜上投與向患者投與一種醫藥組合物,其含有包含10% w/v蔗糖之醫藥組合物的約2.5×10
11GC/眼、約5×10
11GC/眼或約1.5×10
12GC/眼之構築體II。在一些實施例中,患者具有糖尿病性視網膜病變。在一些實施例中,醫藥組合物之滲壓性/滲透壓等於或大於240 mOsm/kg。
在一些態樣中,本文描述適合治療經診斷患有IVA型黏多醣病(MPS IVA)、I型黏多醣病(MPS I)、II型黏多醣病(MPS II)、家族性高膽固醇血症(FH)、同合子型家族性高膽固醇血症(HoFH)、冠狀動脈疾病、腦血管疾病、杜顯氏肌肉失養症、肢帶肌肉失養症、貝克爾肌肉失養症及散發性包涵體肌炎或激肽釋放素相關疾病之個體的醫藥組合物或治療方法,該等方法包括向個體投與治療有效量之醫藥組合物。在一些實施例中,醫藥組合物在SCS中投與。
在一些實施例中,本文提供之醫藥組合物或參考醫藥組合物(例如,部分4.1)可投與至經診斷患有以下疾病之個體:(1)巴登蛋白-CLN2且治療產物為三肽基-肽酶1 (TPP1);(2)阿瑟氏第1型(Usher’s-Type 1)且治療產物為肌凝蛋白VIIA (MYO7A);(3) 阿瑟氏第1型且治療產物為鈣黏蛋白相關23 (CDH23);(4)阿瑟氏第2型且治療產物為原鈣黏蛋白相關15 (PCDH15);(5)阿瑟氏第2型且治療產物為阿瑟蛋白(Usherin) (USH2A);(6)阿瑟氏第3型且治療產物為克萊蛋白1 (Clarin 1) (CLRN1);(7)斯特格氏病(Stargardt's)且治療產物為ATP結合卡匣亞家族A成員4 (ABCA4);(8)斯特格氏病且治療產物為ELOVL脂肪酸延長酶4 (ELOVL4);(9)紅綠色盲且治療產物為L視蛋白(OPN1LW);(10)紅綠色盲且治療產物為M視蛋白(OPN1MW);(11)藍色視錐全色盲且治療產物為M視蛋白(OPN1MW);(12)萊伯先天性黑朦(Leber congenital amaurosis)-1 (LCA 1)且治療產物為視網膜鳥苷酸環化酶2D (GUCY2D);(13)萊伯先天性黑朦-2 (LCA 2)且治療產物為類視色素異構水解酶RPE65 (RPE65);(14)萊伯先天性黑朦-4 (LCA 4)且治療產物為芳基烴受體相互作用蛋白樣1 (AIPL1);(15)萊伯先天性黑朦-7 (LCA 7)且治療產物為視錐-視杆同源盒(CRX);(16)萊伯先天性黑朦-8 (LCA 8)且治療產物為克魯蛋白細胞極性複合體組分1 (Crumbs Cell Polarity Complex Component 1,CRB1);(17)萊伯先天性黑朦-9 (LCA 9)且治療產物為煙鹼醯胺核苷酸腺苷酸轉移酶1 (NMNAT1);(18)萊伯先天性黑朦-10 (LCA 10)且治療產物為中心體蛋白290 (CEP290);(19)萊伯先天性黑朦-11 (LCA 11)且治療產物為肌苷單磷酸去氫酶1 (IMPDH1);(20)萊伯先天性黑朦-15 (LCA 15)且治療產物為矮胖樣蛋白1 (Tubby Like Protein 1,TULP1);(21) LHON且治療產物為粒線體編碼之NADH去氫酶4 (MT-ND4);(22) LHON且治療產物為粒線體編碼之NADH去氫酶6 (MT-ND6);(23)無脈絡膜且治療產物為Rab護衛蛋白1 (CHM);(24) X性聯視網膜劈裂症(XLRS)且治療產物為視網膜劈裂蛋白(RS1);(25)巴德-畢德氏症候群(Bardet-Biedl syndrome) 1且治療產物為巴德-畢德氏症候群1 (BBS1);(26)巴德-畢德氏症候群6且治療產物為麥庫西克-考夫曼症候群(McKusick-Kaufman Syndrome,MKKS);(27)巴德-畢德氏症候群10且治療產物為巴德-畢德氏症候群10 (BBS10);(28)錐體營養不良且治療產物為鳥苷酸環化酶活化因子1A (GUCA1A);(29)視神經萎縮且治療產物為OPA1粒線體發動蛋白樣GTP酶(OPA1);(30)色素性視網膜炎1且治療產物為RP1軸絲微管相關(RP1);(31)色素性視網膜炎2且治療產物為RP2 ARL3 GTP酶活化因子(RP2);(32)色素性視網膜炎7且治療產物為外周蛋白2 (PRPH2);(33)色素性視網膜炎11且治療產物為前mRNA加工因子31(PRPF31);(34)色素性視網膜炎13且治療產物為前mRNA加工因子8 (PRPF8);(35)色素性視網膜炎37且治療產物為核受體亞家族2組E成員3 (NR2E3);(36)色素性視網膜炎38且治療產物為MER原癌基因酪胺酸激酶(MERTK);(37)色素性視網膜炎40且治療產物為磷酸二酯酶6B (PDE6B);(38)色素性視網膜炎41且治療產物為Prominin 1 (PROM1);(39)色素性視網膜炎56且治療產物為光間受體基質蛋白多醣2 (IMPG2);(40)色素性視網膜炎62且治療產物為男性生殖細胞相關激酶(MAK);(41)色素性視網膜炎80且治療產物為細胞纖毛內轉運蛋白140 (IFT140);或(42)貝斯特氏病(Best disease)且治療產物為斑萎蛋白1 (Bestrophin 1,BEST1)。
4.6 分析法
技術人員可使用本文所述之分析法及/或所屬領域已知之技術來研究本文所述之組合物及方法,例如測試本文提供之調配物。如部分5中所詳述,本文亦提供以下分析法。 4.6.1 超音波B掃描
可使用高頻超音波(U/S)探針(UBM Plus;Accutome, Malvern, PA, USA),藉由在注射黏度在一定範圍內變化之不同體積(例如25 μL至500 μL,範圍為低黏度至高黏度)之後在離體動物眼睛中生成SCS之2D橫截面影像來測定SCS厚度。U/S探針蓋(Clearscan;Eye-Surgical-Instruments, Plymouth, MN)可附接至UBM Plus以促進U/S影像擷取。可使用U/S探針來獲取眼睛周圍之矢狀視圖(例如,八個矢狀視圖)。可對U/S B掃描執行後處理以找到自外鞏膜至內視網膜之厚度,例如鞏膜突後方1、5及9 mm。可計算每隻眼睛之平均值、中位數及標準偏差。 4.6.2 基於液體體積量測SCS厚度
可使用3D冷凍重建成像來量測SCS厚度。將注射例如含有紅色螢光粒子之25 μL至500 μL之動物眼睛在注射後幾分鐘(例如3-5分鐘)冷凍,且準備進行冷凍切片。使用數位相機,藉由在低溫恒溫器下對樣品進行切片,每300 μm可獲得組織冷凍塊之一張紅色螢光影像。分析由紅色螢光影像組成之影像堆以測定SCS厚度。 4.6.3 基於調配物量測SCS厚度
在將黏度在一定範圍內變化之醫藥組合物注射至動物SCS中之後,可使用U/S B掃描來測定SCS厚度。可使用高頻超音波B掃描來確定SCS塌陷率。可獲取平坦部之八個矢狀視圖:(a)鼻上,注射部位上方;(b)上方;(c)鼻;(d)顳上;(e)顳;(f)顳下;(g)下方;及(h)鼻下。
可對U/S視圖執行離線後處理以量測SCS厚度。U/S探針之最小軸向解析度為15 μm。對於各U/S視圖,可建立一條線段,其在鞏膜突後5 mm處且與鞏膜垂直。一條線可自鞏膜外表面開始,且在視網膜內表面結束。在量測中可包括鞏膜及脈絡膜視網膜以確保線垂直。接著藉由自所量測之線長度減去組織厚度來計算SCS厚度。進行曲線擬合以確定SCS塌陷率。
可使用U/S B掃描隨著時間之推移在多個位置測定SCS厚度,且可計算SCS塌陷率。可藉由隨著時間之推移在活體內拍攝動物眼睛中之螢光眼底影像直到不再偵測到螢光,發現所注射之螢光材料自SCS之大致清除速率。
4.6.4 藉由眼底成像之SCS清除動力學
為研究AAV聚集對在SCS中之運動的影響,可將AAV聚集水準在一定範圍內變化且含有螢光素之不同醫藥組合物注射至SCS中。可藉由隨著時間之推移在活體內拍攝動物眼睛中之螢光眼底影像來發現所注射之螢光材料自SCS之大致清除率或清除時間。在一些情況下,清除率可藉由確定總清除時間及清除時間常數(
t 清除)來確定,該清除時間常數係使用自總螢光信號隨時間之正規化濃度推導之曲線擬合計算的。可在每次成像期之前投與托吡卡胺(tropicamide)及去羥腎上腺素(Akorn, Lake Forest, IL)之局部滴眼液以使眼睛擴張。可使用RetCam II (Clarity Medical Systems, Pleasanton, CA)獲取影像,其帶有130°鏡頭附件及內置螢光素血管攝影模組。可在RetCam II之藍光輸出設置為0.0009、1.6及2.4 W/m
2下拍攝多張影像。為嘗試捕捉眼球之整個內表面,可捕捉九個影像:中央、鼻上、上方、顳上、顳、顳下、下方、鼻下及鼻。此允許成像至遠周邊。可在注射後即刻、1小時、12小時中每3小時及注射後每兩天進行成像。總清除時間可定義為在注射後藉由目視觀測無法偵測到螢光之第一個時間點,針對所有注射之眼睛來確定。螢光素異硫氰酸酯結合之AAV (FITC-AAV)或FITC結合之AAV殼蛋白特異性單株抗體可用於類似實驗中,以追蹤AAV粒子在SCS中之運動及清除。AAV之螢光標記方法係所屬領域中已知的(Shi等人,
Sci. Adv.2020; 6 : eaaz3621;及Tsui, T. Y.等人,
Hepatology42, 335-342 (2005))。可購得識別許多AAV血清型之抗體(FITC結合)。
4.6.5 平面安裝(Flat Mount)以表徵2D圓周擴散
將含有螢光素或螢光標記之AAV的本揭示案之醫藥組合物注射至SCS中。在SCS注射及冷凍之後,可準備好眼睛以評估粒子及螢光素之2D擴散。自角膜緣至後極切開冷凍之眼睛以產生等距之鞏膜瓣。將所得到之鞏膜瓣張開,且取出冷凍之玻璃狀液、晶狀體及水狀液。
可使用帶有100 mm鏡頭(Canon)之數位SLR相機(Canon 60D;Canon, Melville, N.Y.)來獲取明場及螢光影像。相機參數保持不變。為獲得螢光素擴散之面積,可將綠色光學帶通濾波器(520±10 nm;Edmunds Optics, Barrington, N.J.)置放在鏡頭上,且可用一盞燈利用多色LED燈泡(S系列RGB MR16/E26. HitLights, Baton Rouge, La.)之紫色背景來照亮樣品。為目測紅色螢光粒子之位置,可在鏡頭上置放一個紅色濾光片(610±10 nm;Edmunds Optics),且可用同一盞燈切換至綠光來照亮樣品。可使用ImageJ (National Institutes of Health, Bethesda, Md.)針對每隻眼睛計算超過閾值之綠色及紅色螢光面積。可基於背景信號之目視檢查手動設置閾值。
4.6.6 眼內壓量測
可使用壓力量測系統在SCS注射後量測SCS中之壓力。動物可藉由皮下注射氯胺酮(ketamine)/賽拉嗪(xylazine)混合液進行終末麻醉。在SCS注射(N=4)後,可每隔幾分鐘量測一次SCS中之壓力。對壓力進行監測,直到其達到注射前之原始基線值(亦即約15 mmHg)。量測後,藉由靜脈注射致死劑量之戊巴比妥(pentobarbital)對動物實施安樂死。可在動物死後進行第二組SCS注射。在死後量測中,僅在進行注射之組織空間(亦即SCS)中量測壓力。 4.6.7 溫度應力分析法
可在37℃下以1.0×10
12GC/mL進行4天之溫度應力發展穩定性研究,以評估本文提供之調配物之相對穩定性。
可用於評估穩定性之分析包括但不限於活體外相對效力(IVRP)、載體基因體濃度(VGC,藉由ddPCR)、藉由染料螢光之游離DNA、動態光散射、外觀及pH值。可進行歷時12個月之長期發展穩定性研究,以證明在本文提供之調配物中在-80℃ (≤-60℃)及-20℃ (-25℃至-15℃)下活體外相對效力及其他品質之維持。
4.6.8 活體外相對效力(IVRP)分析法
為將ddPCR GC力價與基因表現相關聯,可進行一項活體外生物分析,該生物分析係藉由轉導HEK293細胞且分析細胞培養上清液之抗VEGF Fab蛋白水準來進行。將HEK293細胞塗鋪至三個經聚-D-離胺酸包被之96孔組織培養盤上隔夜。然後將細胞用野生型人類Ad5病毒預感染,接著用AAV載體參考標準及測試物品之三種獨立製備之連續稀釋液進行轉導,其中每種製劑塗鋪至單獨板上不同位置處。在轉導後第三天,自培養盤中收集細胞培養基且經由ELISA量測結合VEGF之Fab蛋白水準。對於ELISA,將用VEGF包被之96孔ELISA盤封閉,然後與所收集之細胞培養基一起培育以捕獲由HEK293細胞產生之抗VEGF Fab。使用Fab特異性抗人類IgG抗體來偵測捕獲VEGF之Fab蛋白。在洗滌之後,添加辣根過氧化酶(HRP)受質溶液,使其顯色,用終止緩衝液終止,且在盤式讀取儀中讀取培養盤。將HRP產物之吸光度或OD相對於對數稀釋作圖,且在通過平行相似性測試(parallelism similarity test)後使用四參數邏輯回歸模型進行擬合,使用如下公式計算各測試物品相對於同一培養盤上之參考標準的相對效力:EC50參考÷EC50測試物品。測試物品之效力報導為參考標準效力之百分比,由三個培養盤之加權平均值計算出。
為將ddPCR GC力價與功能基因表現相關聯,可進行一項活體外生物分析,該生物分析係藉由轉導HEK293細胞且分析轉殖基因(例如酶)活性來進行。將HEK293細胞塗鋪至三個96孔組織培養盤上隔夜。然後將細胞用野生型人類腺病毒血清型5病毒預感染,接著用酶參考標準及測試物品之三種獨立製備之連續稀釋液進行轉導,其中每種製劑塗鋪至單獨板上不同位置處。在轉導後第二天,使細胞溶解,用低pH值處理以活化酶,且使用肽受質分析酶活性,該肽受質在由轉殖基因(酶)裂解時產生增加之螢光信號。將螢光或RFU相對於對數稀釋作圖,且在通過平行相似性測試後使用四參數邏輯回歸模型進行擬合,使用如下公式計算各測試物品相對於同一培養盤上之參考標準的相對效力:EC50參考÷EC50測試物品。測試物品之效力報導為參考標準效力之百分比,由三個培養盤之加權平均值計算出。 4.6.9 載體基因體濃度分析法
亦可使用ddPCR評估載體基因體濃度(GC)。在注射後之不同時間點,處死若干隻小鼠,且對眼組織進行總DNA提取及載體複本數之ddPCR分析。在連續時間點在不同組織切片中鑑定之每公克組織之載體基因體(轉殖基因)複本將揭露AAV在眼睛中之擴散。
使用DNeasy Blood & Tissue套組自所收集之眼組織切片中提取總DNA,且使用Nanodrop分光光度計重新量測DNA濃度。為確定組織切片中之載體複本數,使用Naica Crystal Digital PCR系統(Stilla technologies)進行數位PCR。這裡應用兩種顏色多路複用系統來同時量測轉殖基因AAV及內源控制基因。簡而言之,轉殖基因探針可用FAM (6-羧基螢光素)染料標記,而內源對照探針可用VIC螢光染料標記。每個二倍體細胞特定組織切片中遞送載體之複本數如下計算:(載體複本數)/(內源對照)×2。特定細胞類型(諸如RPE細胞)中之載體複本可能揭露持續遞送至視網膜。
4.6.10 使用染料螢光分析進行游離DNA分析法
可藉由與DNA結合之SYBR® Gold核酸凝膠染料(『SYBR Gold dye』)之螢光來測定游離DNA。可使用微定量盤式讀取儀量測螢光且用DNA標準進行定量。結果可以ng/µL為單位報導。
可使用兩種方法來估計總DNA,以便將量測之游離DNA (以ng/µL為單位)轉換為游離DNA之百分比。在第一種方法中,使用藉由紫外-可見光譜法測定之GC/mL (OD)估計樣品中之總DNA,其中M為DNA之分子量,且1E6為單位轉換因子:
估計之總DNA (ng/µL) = 1E6 × GC/mL (OD) × M (g/mol)/6.02E23
在第二種方法中,可在0.05%泊洛沙姆188下將樣品加熱至85℃,保持20分鐘,且可使用藉由SYBR Gold染料分析法在加熱樣品中量測之實際DNA作為總數。因此,假設所有DNA皆回收且定量。對於趨勢分析,既可使用原始ng/µL,亦可使用由一致方法確定之百分比。
4.6.11 粒徑排阻層析法(SEC)
可使用Sepax SRT SEC-1000 Peek管柱(PN 215950P-4630,SN: 8A11982,LN: BT090,5 µm 1000A,4.6×300 mm),在Waters Acquity Arc設備ID 0447 (C3PO)上利用25 mm光程流通池執行SEC。移動相可為例如20 mM磷酸鈉、300 mM NaCl、0.005%泊洛沙姆188 pH 6.5,流速為0.35毫升/分鐘,歷時20分鐘,管柱處於環境溫度下。可在214 nm、260 nm及280 nm下使用2點/秒採樣速率及1.2 nm解析度利用25點平均平滑進行資料收集。理想目標負載可為1.5E11 GC。樣品可注射50 µL,約為理想目標之1/3,或注射5 µL。
4.6.12 動態光散射(DLS)分析法
可在Wyatt DynaProIII上使用Corning 3540 384孔盤及30 µL樣品體積進行動態光散射(DLS)。每個重複可收集各歷時10 s之10次採集,且每個樣品可有3次重複量測。可根據樣品中使用之溶劑設置溶劑,例如dPBS中AAV載體之『PBS』。不符合資料品質標準(基線、SOS、雜訊、擬合)之結果可經『標記』且自分析中排除。
4.6.13 黏度量測
可使用所屬領域中已知之方法量測黏度,例如在2019年出版之美國藥典(United States Pharmacopeia,USP)及其先前版本(藉由引用之方式整體併入本文中)中提供之方法。使用毛細管黏度計,使用USP <911>中描述之方法量測低剪切下之黏度。
使用錐板式旋轉流變儀測定黏度與剪切速率之關係。美國藥典(USP) USP <1911>中描述流變測定法之量測,且USP<912>中描述旋轉黏度測定法。旋轉流變黏度量測係用AR-G2流變儀收集的,該流變儀配備有帕耳帖(Peltier)溫度控制板及60 mm 1°角鋁錐附件(TA Instruments, New Castle, DE)。在<0.3 s
-1開始上升至5000 s
-1之範圍內進行黏度與剪切速率掃描,每十個收集5個點。在20℃下收集黏度與剪切速率之關係。10,000及20,000 s
-1下之黏度係自資料中推斷出來。在一些情況下,可在零、0.1 s
-1、1 s
-1、1000 s
-1、5000 s
-1、10,000 s
-1、20,000 s
-1或超過20,000 s
-1下量測醫藥組合物或參考醫藥組合物之黏度。
4.6.14 病毒感染力分析法
可使用如François等人, Molecular Therapy Methods & Clinical Development (2018) 第10卷, 第223-236頁(以引用之方式整體併入本文中)中所述之TCID
50感染力價分析。可使用如2018年10月15日申請之臨時申請案62/745859中所述之相對感染力分析 4.6.15 微差掃描螢光法
蛋白質及由蛋白質組成之病毒殼體之熱穩定性可藉由微差掃描螢光法(DSF)來確定。DSF量測蛋白質之固有色胺酸及酪胺酸發射作為溫度之函數。Trp及Tyr殘基之局部環境隨著蛋白質之未摺疊而發生變化,從而引起螢光大量增加。使50%蛋白質未摺疊之溫度定義為『熔融』溫度(T
m)。USP <853>及USP <1853>中描述螢光光譜法。
DSF資料係使用Promethius NTPlex Nano DSF儀器(NanoTemper technologies, Munich, Germany)收集的。在20℃下將樣品裝載至毛細管池中,且溫度以1℃/min之速率上升至95℃。使用350 nm (未摺疊)及330 nm (未摺疊)下發射之信號輸出比來確定T
m4.6.16 注射壓力量測
使用流動篩網及流體感測器(Flow Screen and Fluid Sensor) (Viscotec America, Kennesaw, GA)或帶有單次使用壓力感測器S-N-000之PressureMAT-DPG (PendoTECH, Princeton, NJ)量測注射壓力。
藉由手動或使用Legato-100注射泵(Kd Scientific, Holliston, MA)施加一致流速來進行空氣注射。為注射至去核豬眼中,將眼睛安裝在Mandell眼睛支架(Mastel)上,且施加吸力以調節眼睛之眼內壓。
4.6.17 參考組合物
本文提供之組合物之黏度可藉由將組合物與參考醫藥組合物進行比較來評估。在一些實施例中,參考醫藥組合物為包含與在磷酸鹽緩衝鹽水中評估之組合物濃度相同之相同重組AAV的醫藥組合物。在一些實施例中,參考醫藥組合物為包含與在具有0.001%泊洛沙姆188之pH 7.4杜貝爾寇磷酸鹽緩衝鹽水中評估之組合物濃度相同之相同重組AAV的醫藥組合物。在一些實施例中,參考醫藥組合物為包含與在具有4%蔗糖及0.001%泊洛沙姆188之pH 7.4杜貝爾寇磷酸鹽緩衝鹽水中評估之組合物濃度相同之相同重組AAV的醫藥組合物。 5. 實例
本部分(亦即,部分5)中之實例係作為說明來提供的,而非限制。
5.1 實例1:用於脈絡膜上遞送之黏度調配物之優化
在本實驗中,針對向脈絡膜上腔之投與來評估含有AAV8-抗VEGF-ab (例如,AAV8-抗VEGFfab)之溶液。脈絡膜上腔(SCS)係介於鞏膜與脈絡膜之間的一個區域,在注射藥物溶液時會擴大(Habot-Wilner, 2019)。當注射之溶液藉由生理過程清除時,SCS空間恢復至其注射前之尺寸。藥物溶液在SCS內擴散且吸收至鄰近組織中。脈絡膜中之毛細血管可滲透低分子量滲透物。將具有不同黏度水準之不同溶液注射在脈絡膜上腔,以基於溶液在SCS中之滯留時間來評估功效。
在本實驗中,藉由將AAV調配成具有高黏度(剪切減黏,注射時具有較低黏度)之最終調配物來實現更長之滯留時間。與較低黏度調配物相比,使用高黏度調配物(剪切減黏)將AAV注射在SCS中時,定位增加,且清除時間增加。此定位及清除時間增加表明功效增強。注射時導致較低黏度之剪切減黏行為允許與針尺寸(例如,29或30規格針)、標準聚合物注射器壓力定額限制以及適合醫師注射於人類眼睛中之足夠低之壓力相容的較低注射壓力。
5.1.1 初始設計參數概述:
將黏性調配物遞送至脈絡膜上腔具有其他投藥途徑沒有之設計參數及限制。由於眼睛係一個關鍵器官,所以注射至眼睛係一項敏感注射程序。將藥物注射至眼睛中時,針規格不能太高,以避免疼痛、組織損傷或炎症。例如,在某些情況下,可選擇30規格,而在其他情況下,選擇29規格。相比之下,18或21規格針可用於周圍靜脈常規注射,且皮下投藥可使用29至27規格針。此等區域中之組織損傷或暫時性炎症不如眼睛關鍵。因此,藉由其他投藥途徑注射黏性調配物較少受到針規格之限制。
如哈庚-帕穗方程式(Hagen-Poiseuille equation)中所示,注射壓力與針內徑(ID)之4次方成反比,且與調配物黏度成正比。哈庚-帕穗方程式由∆P= (8μLQ)/(πR
4)表示。壓力視黏度(µ)、針長度(L)、體積流速(Q)及針內徑(R)而定。因此,針規格嚴重限制脈絡膜上注射。若不考慮其他因素,合乎邏輯之方法係使藉由注射至脈絡膜上腔遞送之調配物黏度降至最低。然而,與此態樣相反,本揭示案希望具有非常高黏度之調配物,以便將遞送之劑量定位至脈絡膜上腔更長時間。此等因素直接對立之事實導致特別需要用於脈絡膜上遞送之剪切減黏調配物,同時使由注射引起之潛在炎症減至最少。
在本實驗中,針對脈絡膜上注射,測試具有可接受黏度且適合使用常用或合理可用之注射器組件進行注射之不同調配物(亦即基於注射器壓力定額限制或針規格偏好之注射壓力限制)。在應用針規格限制之情況下,為平衡用於注射之低黏度與用於定位之高黏度,設計參數存在衝突。在某些情況下,所需之針尺寸可為30或29規格尺寸。規格尺寸會影響注射過程中之壓力。在一些情況下,注射壓力與行業標準組件及關於該等組件之規範(例如,ISO)對應。表2總結出設計參數。
表 2 :設計參數
5.2 實例2:溶液在脈絡膜上腔(SCS)中之分佈視溶液黏度而定
參數 | 目標 | 基本原理 |
賦形劑安全性 | 賦形劑安全,且以前曾用於非經腸投藥,且最適合用於遞送至眼睛 | 安全性 |
載體之穩定性 | 載體穩定且保留效力 | 需要穩定性以確保功效 |
注射時間 | 較佳(在一些情況下):10 s 範圍:5 s至30 s | 臨床投藥目標 |
投與組件 | 較佳(在一些情況下):CLSD 30 Ga (160 µm ID)針 範圍:29或30 Ga ETW針(ID = 220或ID = 240 µm)或CLSD 30 Ga ETW (220 µm ID)針及標準塑膠注射器 | 臨床投藥要求及使用標準組件之能力 |
注射壓力 | 較佳(在一些情況下) ≤ 43 PSI 範圍 ≤ 65 PSI 極限 ≤ 100 PSI | 注射器壓力定額之較佳值係基於ISO 7886-1: 2017,及低/容易注射壓力及力。 65 PSI之範圍係基於實驗室注射可行性實驗期間所需之力的人為因素/感覺 |
注射剪切速率下之黏度 | 較佳(在一些情況下):考慮注射剪切速率下之剪切減黏,在室溫下為34 mPas 範圍:考慮注射剪切速率下之剪切減黏,在室溫下為103 mPas、121 mPas及高達362 mPas (cP) | 較佳(在一些情況下):當使用CLSD 30 Ga (160 µm ID)針及注射10 s時注射壓力目標高達43 PSI。 範圍:使用CLSD 30 Ga ETW (220 µm ID)針進行注射之注射壓力目標,壓力目標高達43 PSI及10 s注射。或者,當使用CLSD 30 Ga (160 µm ID)針或CLSD 30 Ga ETW (220 µm ID)針時注射壓力目標高達65 PSI,或對於30 s注射,使用43 PSI之注射壓力目標。 |
低剪切下黏度(1 s -1) | 較佳(在一些情況下):≥ 高剪切下黏度10倍或最大化 範圍:≥ 高剪切下黏度5倍 | 低剪切下之較高黏度將使得劑量更大程度定位 |
在本實驗中,具有不同黏度之溶液注射至離體眼睛中,以分析流體黏度對溶液在SCS中之定位及擴散之影響。在離體之不同眼睛中注射三種不同溶液:1)含有水及藍色染料之溶液;2)含有1%中等黏度級羧甲基纖維素(CMC)及藍色染料之溶液;3)含有1%中等CMC及螢光染料之溶液。CMC溶液在亦含有0.2 mg/mL氯化鉀、0.2 mg/mL磷酸二氫鉀、5.84 mg/mL氯化鈉、1.15 mg/mL無水磷酸氫二鈉、40.0 mg/mL (4% w/v)蔗糖及0.001% (0.01 mg/mL)泊洛沙姆188之pH 7.4溶液中製備。在注射後不同時間點目視分析眼睛。本實驗表明,流體黏度對溶液在SCS中之擴散有顯著影響。舉例而言,與含有1% CMC之溶液相比,含有水及藍色染料之溶液的圓周擴散更大(圖1A-1C)。與含有水之溶液相比,當眼睛注射含有1% CMC之溶液時,藍色染料及螢光染料明顯更多地定位於眼睛中(SCS中)(圖1A-1C)。本實驗表明,當將具有所需流體黏度之溶液注射在SCS中時,所關注之藥劑(例如,AAV、藥物或組合物)可在最低程度擴散下定位在SCS中。
5.3 實例3:黏度、注射速率及針規格對注射壓力之影響
在本實驗中,將具有不同黏度之不同溶液注射在若干隻眼睛之SCS中。羥丙甲纖維素溶液在『基』液中製備,該基液亦含有0.2 mg/mL氯化鉀、0.2 mg/mL磷酸二氫鉀、5.84 mg/mL氯化鈉、1.15 mg/mL無水磷酸氫二鈉、40.0 mg/mL (4% w/v)蔗糖及0.001% (0.01 mg/mL)泊洛沙姆188 pH 7.4。使額外賦形劑溶解於此溶液中。簡言之,將含有水之溶液及含有2%羥丙基甲基纖維素(羥丙甲纖維素)之溶液分別注射在不同眼睛中。可藉由使用例如SCS Microinjector
TM(Clearside Biomedical, Alpharetta, GA)在SCS中進行注射。本實驗表明,將溶液注射在SCS中所需之壓力量受溶液黏度影響。例如,發現將水溶液(黏度為約1 cP)注射在SCS中所需之壓力量為約25 PSI,而注射含有2%羥丙甲纖維素之溶液(黏度為約4000 cP)所需之壓力量在約25 PSI至約40 PSI範圍內(圖2A-2B)。此壓力遠低於根據牛頓流體(對比剪切速率,黏度恒定)之行為預測之壓力。本實驗亦表明,剪切減黏對於非常黏稠之溶液係較佳的。對於剪切減黏流體,在低剪切(例如靜態或非常低之流速)下黏度非常高,且隨著剪切速率增加或當流速增加時則降低。注射過程中剪切速率下之較低黏度將經由針注射劑量所需之壓力降低至與所需針及注射器相容之範圍。在注射之後,流體之黏度要高得多(因為流體不再運動),從而減少溶液之擴散且使注射之劑量定位更長時間。
此設計空間研究亦分析注射速率對在SCS中注射不同溶液所需之計算壓力量的影響。對於此設計空間可行性計算,針對在SCS中不同黏度之溶液,經由內徑(ID)為160 µm之30規格(GA)針,計算4秒、6秒、8秒或10秒之注射速率。關於流經針時壓降之哈庚-帕穗方程式由∆P= (8μLQ)/(πR4)表示。壓力視黏度(µ)、針長度(L)、體積流速(Q)及針內徑(R)而定。最慢注射速率(亦即,10秒)導致計算壓力量最小(圖3)。例如,圖3中之數據表明,以10秒速率注射之黏度為10 mPas之溶液產生約12 PSI之壓力,但當以4秒速率注射時為約28 PSI。此計算表明,隨著溶液黏度增加,壓力受注射速率影響更大(圖3)。例如,計算出黏度為30 mPas之溶液在10秒注射速率期間產生約36 PSI之壓力且在4秒注射速率期間產生約96 PSI之壓力(圖3)。在一些情況下,注射時間在5 s至30 s範圍內。在一些情況下,經由脈絡膜上投與使用10 s至15 s之間的注射時間來注射溶液。剪切減黏流體之黏度視剪切速率(γ)而定。因此,預測之注射壓力直接視流速方面之注射速度而定,且亦視流體之剪切減黏黏度行為而定。流體流經針之平均剪切速率可使用<γ >= (8Q)/(3πR
3)計算(Jaspe, J.;Hagen, S. J. Biophys J 2006, 91, 3415-3424)。對於圖3所示之實例,剪切速率在10 s注射之約16,500 s
-1至4 s注射之41,000 s
-1範圍內。對於20 s注射,剪切速率為約8000 s
-1且對於30 s注射為約5000 s
-1。
使用哈庚-帕穗方程式及平均剪切速率方程式,可計算出較佳調配物黏度特性及注射過程中一定壓力限制之範圍。可基於針規格評估壓力之變化(圖4A-4C及圖5)。使用三種不同尺寸之針規格(例如,30規格針、30規格STW針及29規格STW針)注射含有不同黏度水準之溶液。本實驗表明,針規格影響將溶液注射在SCS中所需之壓力。對於30規格針及29規格針(ISO 9626:2016:常規壁,RW;薄壁,TW;特薄壁,ETW;以及超薄壁,UTW,及在設計中或用於開發研究之額外ClearSide (CLSD)針),使用哈庚-帕穗方程式計算以磅/平方吋(PSI)為單位之壓降作為黏度之函數。使用轉換因子PSI = Pa/6894.76轉換成PSI。包括安裝長度在內之總針長為14 mm,注射體積為0.1 mL,注射時間建模為10 s (Q = 0.1 mL/10 = 0.01 mL/s),且考慮之針內徑為:30 Ga/29 Ga (133 µm ID)、30 Ga TW (165 µm ID)、30 Ga ETW/29 Ga TW (190 µm ID)、30 Ga UTW/29 Ga ETW (240 µm ID)、ClearSide (CLSD)品牌30 Ga針(160 µm ID)、CLSD 30 Ga ETW (220 µm ID)、CLSD 29 Ga ETW (240 µm ID)。
圖4A-4C展示壓力對比黏度之計算,且表3展示較佳值(在一些情況下)、目標值及極限值之列表結果。在一些情況下,可藉由使用更大之針或更高壓力之注射器來擴大黏度範圍。
基於該等計算,在室溫下,同時考慮注射剪切速率下之剪切減黏,使用160 µm ID針之較佳(在一些情況下)調配物黏度為34 mPas。對於較慢(30 s)或較高壓力(65 PSI)之注射,160 µm及220 µm內徑針之可接受黏度分別可高達103 mPas及362 mPas。在室溫下,同時考慮注射剪切速率下之剪切減黏,計算出可接受範圍為103 mPas、121 mPas及高達362 mPas (cP)。此基於當使用CLSD 30 Ga (160 µm ID)針及注射10 s時高達43 PSI之較佳注射壓力目標。可接受範圍包括使用CLSD 30 Ga ETW (220 µm ID)針進行注射之注射壓力目標,壓力目標高達43 PSI
及10 s注射。或者,當使用CLSD 30 Ga (160 µm ID)針或CLSD 30 Ga ETW (220 µm ID)針時注射壓力目標高達65 PSI,或對於30 s注射,注射壓力目標為43 PSI。在一些情況下,較佳針為CLSD 30 Ga (160 µm ID針)或CLSD 30 Ga ETW (220 µm ID針)。亦可能選擇其他針,且一些針可能會在注射剪切速率值下產生甚至更寬之黏度(例如,在10秒內注射時,43 PSI時高達約175 mPas,且65 PSI 時高達約250 mPas。
表 3 :基於注射壓力之黏度設計空間
針 | ≤43 PSI ( 希望 ) 之黏度 (mPas) 上限 | 65 PSI ( 目標 ) 之黏度 (mPas) 上限 | 100 PSI ( 極限 ) 之黏度 (mPas) 上限 |
30 Ga/29 Ga (133 μm ID) | 16 | 24 | 38 |
30 Ga TW (165 μm ID) | 38 | 58 | 90 |
30Ga ETW/29 Ga TW (190 μm ID) | 67 | 102 | 157 |
30 Ga UTW/29 Ga ETW (240 μm ID) | 171 | 259 | 400 |
CLSD 30 Ga針(160 μm ID) | 34 | 51 | 79 |
CLSD 30 Ga ETW (220 μm ID) | 121 | 183 | 282 |
CLSD 29 Ga ETW (240 μm ID) | 171 | 259 | 400 |
使用160 µm針進行10 s注射及43 PSI壓力之較佳黏度值:較佳設計係針對使用ID為160 µm之針注射10 s。對於使用160 µm ID針進行10 s注射,在注射剪切速率(計算為約16,000 s-1)下產生43 PSI之壓力的較佳黏度為約34 mPas。
使用220 µm針進行10 s注射及43 PSI壓力之可接受黏度值:對於使用220 µm ID針進行10 s注射,在注射剪切速率(計算為約6,300 s-1)下產生43 PSI之壓力的可接受黏度為約121 mPas。
30 s注射及43 PSI壓力之可接受黏度值範圍:長達30 s之較長注射時間在可接受範圍內。對於使用160 µm ID針進行30 s注射,在注射剪切速率(計算為約5000 s
-1)下產生43 PSI之壓力的可接受黏度為約103 mPas。對於使用220 µm ID針進行30 s注射,在注射剪切速率(計算為約2100 s
-1)下產生43 PSI之壓力的可接受黏度為約362 mPas。
10 s注射及65 PSI壓力之可接受黏度值範圍:高達65 PSI之較高壓力在可接受範圍內。對於使用160 µm ID針進行10 s注射,在注射剪切速率(計算為約16,000 s
-1)下產生65 PSI之壓力的可接受黏度為約51 mPas。對於使用220 µm ID針進行10 s注射,在注射剪切速率(計算為約6,300 s
-1)下產生65 PSI之壓力的可接受黏度為約183 mPas。
此外,對於30規格針及29規格針,使用哈庚-帕穗方程式計算以磅/平方吋(PSI)為單位之壓降作為黏度之函數。更寬直徑之針(例如,29規格STW)引起SCS注射所需之壓力較低。隨著流體黏度之增加,針規格對壓力之影響更加顯著(圖5)。例如,當使用30規格針時,黏度為約30 mPas之流體產生約48 PSI之壓力,而當分別使用30規格STW及29規格針時,觀測到黏度為100 mPas之流體或黏度為150 mPas之流體(此分別對應於3.5倍及5倍之黏度)產生48 PSI壓力(圖5)。因此,較大內徑針規格顯著降低所產生之壓力。
5.4 實例4:針對穩定性對具有不同賦形劑之若干種溶液進行篩選以提高調配物之黏度
對於本實驗,分析黏度在一定範圍內變化之不同溶液。該等溶液在『基』液中製備,該基液亦含有0.2 mg/mL氯化鉀、0.2 mg/mL磷酸二氫鉀、5.84 mg/mL氯化鈉、1.15 mg/mL無水磷酸氫二鈉、40.0 mg/mL (4% w/v)蔗糖及0.001% (0.01 mg/mL)泊洛沙姆188 pH 7.4。使額外黏度調節賦形劑溶解於此溶液中。表4展示使用毛細管黏度計在低剪切下量測之黏度、注射至空氣中之壓力及注射至去核豬眼中之壓力。在本實驗期間,認為PEG3350、葡聚糖40k、PEG12000之低剪切黏度太低,可能無法幫助增加在脈絡膜上腔中之定位,因此認為其不適合。此外,已知PEG在較高濃度下會使AAV沈澱,因此,例如PEG12000不適合。基於黏度及壓力行為,聚乙烯吡咯啶酮似乎不能充分剪切減黏。對聚乙烯吡咯啶酮使用之搜索表明,其主要用作經口遞送之賦形劑,且作為非經腸賦形劑可能存在安全問題,因此亦排除在考慮之外。聚乙烯醇非常難溶解,且有起泡及氣泡之跡象,因此基於製造實用性而排除。進一步研究及分析多醣賦形劑之變體(CMC、羥丙甲纖維素、羥乙基澱粉)以及泊洛沙姆407。
表 4 :用於篩選賦形劑以增加黏度之所量測黏度及注射至空氣或去核豬眼中之壓力
NT = 未測試
5.5 實例5:分析具有不同黏度之若干種溶液的擴散、游離DNA及AAV穩定性
賦形劑 | 濃度(%) | 黏度(mPas) | 注射至空氣中之壓力(PSI) | 注射至去核豬眼中之壓力(PSI) |
水 | 0.0 | 1.00116 | 4.7 | 14 |
具有蔗糖緩衝液對照之經改良之DPBS | 0.0 | 1.33 | 5.0 | NT |
PEG3350,USP | 10.0 | 3.42 | 12.0 | NT |
6.0 | 2.46 | NT | NT | |
3.0 | 1.74 | NT | NT | |
1.5 | 1.52 | NT | NT | |
0.8 | 1.46 | NT | NT | |
葡聚糖40k | 5.0 | 2.59 | 12.3 | NT |
2.5 | 1.91 | 6.7 | NT | |
PEG12000 | 10.0 | 10.94 | 24.0 | NT |
5.0 | 4.70 | 12.7 | NT | |
羧甲基纖維素鈉鹽,10-50 cP (2% H 2O 25℃) USP,低黏度 | 2.0 | 61.77 | 31.0 | NT |
1.0 | 12.29 | 18.3 | NT | |
聚乙烯吡咯啶酮,M.W.為約360,000 K-90 USP,又名聚維酮K-91 | 12.0 | 518.03 | 88.0 | NT |
6.0 | 99.51 | 54.3 | 38 | |
3.0 | 22.36 | 26.7 | NT | |
聚乙烯醇26-88,EMPROVE® exp Ph. Eur.、USP、JPE,(4% = 25 cP),又名Mowiol® | 4.0 | NT | 32.5 | NT |
羥乙基纖維素,100 cP NF,又名『羥乙基澱粉』 | 4.0 | NT | 48.4 | NT |
2.0 | NT | 23.7 | NT | |
羧甲基纖維素鈉鹽,2% = 400-800 cP,USP,中等黏度 | 1.0 | NT | 26.9 | 32 |
0.5 | NT | 18.1 | NT | |
羥丙基甲基纖維素(羥丙甲纖維素),4000 mPa.s USP替代品類型2910 | 2.0 | NT | 27 | 73 |
1.0 | NT | 24.8 | NT | |
0.5 | NT | 15 | 16 | |
0.2 | NT | 11.5 | NT | |
0.1 | NT | 10 | NT | |
泊洛沙姆407 | 15.0 | NT | 50.2 | 45 |
基於自具有不同黏度之六種溶液獲得之資料分析擴散資料、游離DNA之百分比及直徑。對照溶液為具有蔗糖之DPBS。其他五種溶液為0.5%中等羧甲基纖維素(CMC) (2% = 400-800 cP)、0.5%羥丙基甲基纖維素(HPMC)、0.2% HPMC、2%羥乙基纖維素(HES)及1%低CMC。簡言之,AAV (例如,攜帶可溶性抗VEGF Fab蛋白編碼序列之複製缺陷型腺相關病毒載體8 (AAV8))存在於六種溶液中之一者中。圖6展示針對在起始日(T0)及在37℃下四天後獲取之六種溶液中之每一種所獲得的擴散資料。本實驗表明,起始量測(T0)及四天後之量測之間的擴散資料具有可比性(圖6)。本實驗亦證實擴散係數視溶劑黏度而定。圖7展示在T0期間獲得及在37℃下四天後獲得之游離DNA的百分比。圖8展示DLS熱上升(DLS-熔融)表觀直徑,其顯示在約63℃下出現小峰,隨後在約70℃下開始較大熔融,此表明AAV之穩定性。HPMC在55℃下形成凝膠(圖8)。總之,資料表明CMC及HES溶液與AAV相容。
圖9展示具有不同黏度值之溶液的微差掃描螢光法熱上升資料。自上至下(S-0C0V至S-0C12),溶液包括具有蔗糖之DPBS (對照物)、0.5%中等黏度級羧甲基纖維素(CMC)(2% = 400-800 cP (或mPas))、0.5%羥丙基甲基纖維素(HPMC)、0.2% HPMC、2%羥乙基纖維素(HES)及1%低黏度級CMC (2% H
2O 25℃ = 10-50 cP)、15%泊洛沙姆407及0.5%高黏度級羧甲基纖維素(1% H
2O,25℃ = 1500-3000 cP)。上圖:原始熔融曲線信號。中圖:用於鑑別峰之數據導數。底圖:光散射數據以指示聚集或凝膠形成。對於兩種羥丙甲纖維素調配物,在約55℃下觀測到由於模糊凝膠形成而導致之光散射增加。對於所有調配物而言,由上圖中之垂直線及中圖中之峰展示之熔融溫度起始點及中點皆相似,此表明殼體在不同調配物中具有相似熱穩定性。結果總結在表5中。
表 5 :如藉由微差掃描螢光法熔融溫度所量測, AAV 在不同黏性調配物中之穩定性總結
樣品描述 | 樣品 ID | 螢光比 350nm/330nm 信號分析 | |
IP #1 ( 熔融溫度 -T m) ℃ | T 起始 (℃) | ||
對照物 | S-0C0V | 72.40 | 67.84 |
0.5%中等CMC | S-0C0W | 72.06 | 67.49 |
0.5% HPMC | S-0C0X | 72.34 | 67.89 |
0.2% HPMC | S-0C0Y | 72.17 | 67.68 |
2% HES | S-0C0Z | 72.05 | 68.58 |
1%低CMC | S-0C10 | 72.01 | 67.55 |
15% P407 | S-0C11 | 72.30 | 68.17 |
0.5%高CMC | S-0C12 | 71.90 | 67.25 |
使用具有不同黏度之各種溶液,例如本實驗中呈現之溶液進行針對耐受性/安全性、AAV穩定性及其他遞送因素之實驗。含有蔗糖之溶液及本文揭示之大多數溶液未出現挫折。然而,PEG12000溶液會引起沈澱(導致AAV不穩定),聚乙烯吡咯啶酮溶液會導致高注射壓力,很可能因為其不為剪切減黏的或其剪切減黏行為有限,且聚乙烯醇溶液可能難以溶解。 5.6 實例6:先導候選調配物之注射壓力及流變學量測
圖10中展示1%高黏度級羧甲基纖維素調配物之黏度與剪切速率的關係曲線。黏度在約1 s
-1剪切速率下大於2,000 mPas (2 Pas)且在5,000 s
-1下降低至34 mPas之量測值,且推斷在10,000 s
-1剪切速率下低至約24 mPas。與1 s
-1至5000 s
-1之剪切速率下的黏度相比,黏度降低65倍。使用哈庚-帕穗方程式計算或讀取圖3中之計算數據圖,若在8至10 s內注射,此剪切減黏行為允許使用30 Ga針(160 µm ID)以介於40與30 PSI之間的壓力注射1%高黏度級調配物。此完全在注射壓力之可接受範圍內,同時允許調配物在注射後具有非常高黏度。對於ID為220 µm之30 Ga ETW針,10 s注射之平均剪切速率為約10,000 s
-1,20 s 注射為約5000 s
-1。如前所述,在注射剪切速率下,較佳(在一些情況下)最大黏度為34 mPas (使用160 µm ID針)或高達121 mPas (使用220 µm ID針)。
圖11中展示中等黏度級羧甲基纖維素調配物注射至去核豬眼中之壓力。圖12展示高黏度級羧甲基纖維素調配物注射至去核豬眼中之壓力。兩種調配物之注射壓力皆不超過43 PSI。基於圖11中數據之外推,使用圖4A-4C中壓降之計算及圖10中之黏度數據,1%水準之高黏度級羧甲基纖維素調配物似乎適合所需之調配物特性。圖13展示如何以無菌方式製造1%高黏度級羧甲基纖維素調配物。例如,可製備1.11%溶液,藉由高壓釜滅菌(因為黏性溶液之過濾係一個挑戰),然後以9:1之比率加入經調配之AAV中間物,以達到1%羧甲基纖維素之最終濃度。考慮到有實驗室研究表明在滅菌過程中水可能有一定程度之輕微損失(約2-4%損失),可視情況添加水。
5.7 實例7:在患有新生血管性年齡相關之黃斑變性(nAMD)之個體的脈絡膜上腔中投與的基因療法
5.7.1 研究簡要總結:
本實例涉及針對新生血管性(濕性)年齡相關之黃斑變性(nAMD)患者之基因療法治療。在本實例中,使用具有不同黏度值(在低黏度至非常高黏度範圍)之不同溶液向nAMD患者投與構築體II或攜帶可溶性抗VEGF Fab蛋白編碼序列之複製缺陷型腺相關病毒載體8 (AAV8)。基因療法治療之目標係藉由最少之干預/侵入性程序減緩或阻止視網膜變性之進展且減緩或預防視力喪失。當前抗VEGF療法已顯著改變濕性AMD之治療前景,由於其能夠防止大多數患者中視力喪失之進展,因此成為治療標準。然而,此等療法需要終生進行眼內注射,頻率通常為每4至12週重複一次,以維持療效。由於治療之負擔,在治療頻率降低下,隨著時間之推移,患者之視力常會下降。正開發脈絡膜上腔中之基因療法作為濕性AMD或任何其他眼部疾病之潛在一次性治療。
研究詳細描述:此劑量遞增研究經設計以評估構築體II或AAV8-抗VEGF-ab基因療法在患有nAMD之個體中的功效、安全性及耐受性。功效係研究之主要重點。在整個研究過程中,評估個體中構築體II或AAV8-抗-VEGF-ab之安全性及耐受性。大約40名符合納入/排除標準之個體隨機分至兩個劑量隊列中之一者中。一些個體接受蘭尼單抗(LUCENTIS®)作為對照治療,一些接受經由一次脈絡膜上腔(SCS)注射遞送之構築體II或AAV8-抗VEGF-ab,且一些接受經由兩次脈絡膜上腔(SCS)注射遞送之構築體II或AAV8-抗VEGF-ab。本實例亦可用於遞送存在於具有不同黏度水準之不同溶液中之基因療法。例如,一些溶液可具有高黏度,而其他溶液可具有低黏度。構築體II或AAV8-抗VEGF-ab (或任何其他基因療法)之功效、安全性及耐受性亦可與遞送溶液之黏度相關聯進行分析。
本研究之主要結果量測係在40週時間框內,每個月評估構築體II或AAV8-抗VEGF-ab與蘭尼單抗相比最佳矯正視覺敏銳度(BCVA)之平均變化。使用之量表係糖尿病性視網膜病變早期治療研究(ETDRS)字母評分,範圍為0-100 (評分愈高視力愈佳)。
本研究之次要結果量測包括:1)藉由偵測52週時間框內眼部及非眼部不良事件(AE)及嚴重不良事件(SAE)之發生率,評估構築體II或AAV8-抗VEGF-ab之安全性及耐受性;2)在52週時間框內,藉由基於第40週及第52週螢光素血管攝影(FA),分析脈絡膜血管新生(CNV)病變大小及滲漏面積自基線之平均變化,評估構築體II或AAV8-抗VEGF-ab對CNV病變生長及滲漏之影響;3)在52週時間框內,藉由分析至第52週BCVA自基線之平均變化,評估構築體II或AAV8-抗VEGF-ab對BCVA之影響;4)在52週時間框內,藉由如光譜域光學同調斷層掃描(SD-OCT)所量測,分析至第40週及第52週CRT自基線之平均變化,評估構築體II或AAV8-抗VEGF-ab對中央視網膜厚度(CRT)之影響;及5)評估在52週時間框內,接受構築體II或AAV8-抗VEGF-ab治療之參與者是否需要補充抗血管內皮生長因子(VEGF)療法(例如,藉由檢查至第40週及第52週之年度補充抗VEGF注射率)。
5.7.2 資格標準:
以下資格標準適用於本研究:
最低年齡:50歲
最高年齡:89歲
性別:全部
基於性別:否
接受健康志願者:否
5.7.3 納入標準:
50歲≤患者≤89歲,且研究眼睛中診斷為繼發於年齡相關之黃斑變性(AMD)之中央凹下CNV。
參與者必須對抗VEGF療法已顯示有意義之反應。
5.7.4 排除標準:
研究眼睛中有繼發於AMD以外之任何原因之CNV或黃斑水腫。
研究眼睛中央凹下纖維化或萎縮。
個體先前曾接受過玻璃體切除術。
研究者認為可能會限制研究眼睛視覺敏銳度(VA)改善之任何狀況。
研究眼睛中有活動性視網膜剝離或視網膜剝離歷史。
研究眼睛中有不受控制之青光眼。
接受過任何基因療法。
任何妨礙目測研究眼睛中之眼底或VA改善的疾患,例如白內障、玻璃體混濁、纖維化、萎縮或中央凹中心之視網膜上皮撕裂。
研究眼睛有眼內手術史。
在第2次訪視後30天內收到任何研究用產品。
進入研究後6個月內發生心肌梗塞、腦血管意外或暫時性腦缺血。
5.8 實例8:動物模型中AAV (例如AAV8-抗VEGFfab)之脈絡膜上注射與視網膜下注射之比較
5.8.1 研究簡要總結:
進行以下研究以比較藉由脈絡膜上與視網膜下注射含有AAV (例如,攜帶可溶性抗VEGF Fab蛋白編碼序列之複製缺陷型腺相關病毒載體8 (AAV8))之各種醫藥組合物(例如,液體調配物)所實現的表現。本實驗亦用於確定與藉由視網膜下注射或藉由脈絡膜上注射來遞送在低黏度溶液中之AAV相比,在中等至高黏度溶液中之AAV (例如,AAV8-抗VEGFfab)之脈絡膜上注射是否可減少眼睛中VEGF誘發之滲漏及血管新生且增加抗VEGF。測試若干種含有不同黏度水準之醫藥組合物(例如,液體調配物)。
結果表明,溶液黏度影響在脈絡膜上或視網膜下注射AAV-抗VEGFfab之眼睛中偵測到的抗VEGFfab,影響視網膜與脈絡膜中抗VEGF蛋白之分佈,且影響中和VEGF誘發之滲漏及血管新生。藉由ELISA量測抗VEGFfab蛋白之濃度,以證明當溶液注射在SCS中(脈絡膜上注射)時,與在對照溶液(例如PBS、常用於AAV視網膜下注射之溶液、或較低黏性之溶液)存在下遞送之AAV-抗VEGFfab相比,在較高黏性溶液(與PBS相比或與通常用於AAV視網膜下注射之溶液相比)存在下遞送之AAV-抗VEGFfab引起在眼睛中偵測到更高水準之抗VEGFfab。本實驗亦表明,當經由脈絡膜上注射來注射含有AAV-抗VEGFfab之較高黏性溶液時,與對照溶液(例如常用於AAV視網膜下注射之溶液或較低黏性溶液)中AAV-抗VEGFfab之視網膜下注射相比,在眼睛中偵測到更高水準之抗VEGFfab。本實驗亦表明,當經由脈絡膜上注射來注射含有AAV-抗VEGFfab之黏性醫藥組合物時,與藉由視網膜下注射投與相同黏性醫藥組合物時相比,在眼睛中偵測到更高水準之抗VEGFfab。相同濃度之病毒基因體用於SCS及視網膜下投與。
藉由ELISA量測玻璃體樣品中之白蛋白來評估血管滲漏,以證明與視網膜下注射含有AAV-抗VEGFfab之相同黏性溶液相比,脈絡膜上注射含有AAV-抗VEGFfab之黏性溶液在中和VEGF誘發之滲漏及血管新生方面更有效。
5.8.2 方法
動物(例如,挪威棕鼠(Norway Brown rat))在一隻眼睛中接受脈絡膜上或視網膜下注射例如含有每隻眼睛2.85×10
10個基因體複本(GC) (濃度為4×10
10GC/ml) AAV8-CB7-抗VEGFfab之3 μl,及在另一隻眼睛中接受脈絡膜上或視網膜下注射含有7.2×10
8GC AAV8-CB7-GFP之3 μl。幾週(例如,2週)後,將VEGF(例如,200 ng)注射至眼睛中。在動物子集中,注射不同量之VEGF (例如100 ng)。
5.8.3 結果
在注射VEGF後24小時拍攝之眼底照片(例如在2週時)顯示注射AAV8-抗VEGFfab之眼睛中視網膜及視網膜血管口徑正常,而注射AAV8-GFP之眼睛顯示血管擴張、有水腫跡象、視盤邊緣模糊及乳白色視網膜。
藉由ELISA量測玻璃體樣品中之白蛋白來評估血管滲漏。與使用相同濃度之病毒基因體經由視網膜下投與來注射相同醫藥組合物時相比,在SCS中注射含有AAV8-抗VEGFfab之黏性溶液之眼睛中偵測到更高水準之抗VEGFfab。此外,與在SCS中注射或經由視網膜下遞送注射含有AAV8-抗VEGFfab之對照溶液(例如,通常用於AAV視網膜下注射之溶液或較低黏性溶液)相比,在SCS中注射含有AAV8-抗VEGFfab之較高黏性溶液之眼睛中偵測到更高水準之抗VEGFfab。與使用對照溶液(例如,通常用於AAV視網膜下注射之溶液或較低黏性溶液)在SCS中或經由視網膜下遞送來注射AAV時,當使用較高黏性溶液在SCS中注射AAV時,AAV抗VEGFfab保持在注射部位(較少擴散)且更多地定位。
5.9 實例9:液體調配物對脈絡膜上腔(SCS)厚度之影響
在活體動物(例如兔、小鼠或猴)中量測隨著時間之推移液體調配物對SCS厚度及SCS塌陷率之影響。使用具有不同黏度之不同溶液。在本揭示案中,例如在實例1中揭示可用於本實驗之溶液之實例。可在本實驗中使用例如含有不同百分比CMC或HES之溶液。藉由例如使用超音波成像(參見部分4.6)計算各種醫藥組合物(例如,液體調配物)在注射部位之初始SCS厚度。SCS厚度(例如,在注射前及注射後量測之SCS厚度)視溶液黏度而定。可在不同時間點量測,諸如在注射前及注射後之不同時間點SCS厚度。舉例而言,與1% CMC溶液或PBS相比,5% CMC溶液顯示出更高之SCS厚度。亦在眼睛中之不同位置隨著時間之推移量測SCS厚度。溶液黏度隨著時間之推移影響SCS之厚度。舉例而言,即使隨著時間之推移量測,1% CMC溶液亦增加注射部位附近之SCS厚度,而當使用PBS溶液時,注射部位之SCS厚度隨著時間之推移而減小。當使用PBS時,注射部位之SCS厚度隨著時間之推移而減少,隨之伴有SCS中相鄰部位之SCS厚度增加。液體黏度影響SCS厚度之持續時間及SCS厚度之定位。溶液黏度亦影響溶液自SCS中清除所花費之時間。例如,與諸如PBS之低黏度溶液相比,具有1% CMC之溶液在SCS中(或在眼睛中)保持更長時段。 5.10 實例10:進行超音波成像以確定脈絡膜上腔(SCS)厚度
使用高頻超音波(U/S)探針(例如UBM Plus;Accutome, Malvern, PA)產生離體眼睛(例如動物眼睛)中SCS之2D橫截面影像(參見部分4.6)。在眼睛注射溶液後產生橫截面影像。溶液之黏度及體積可在一定範圍內變化不同。例如,體積可在1 µL至500 µL範圍內。在一些情況下,體積可小於1 µL或大於500 µL。溶液可為水溶液(例如水)、PBS、漢克平衡鹽溶液(HBSS)、1%-5% CMC或本揭示案之任何其他溶液。溶液可進一步包括染料(例如螢光染料、紅色螢光、藍色螢光、藍色染料或任何其他染料)。溶液亦可包括可與本揭示案一起使用之任何組合物、藥物、試劑或病毒(例如AAV)。U/S探針蓋(例如Clearscan;Eye-Surgical-Instruments, Plymouth, MN)附接至UBM Plus以促進U/S影像擷取。注射後幾分鐘,使用U/S探針來獲取眼睛周圍之矢狀視圖(例如,在位置12、1.5、3、4.5、6、7.5、9及10.5點鐘)。對U/S B掃描執行後處理以找到自外鞏膜至內視網膜之厚度(例如在1 mm、5 mm及9 mm)。計算每隻眼睛之平均值、中位數及標準偏差。超音波B掃描中SCS厚度之計算可藉由例如自外鞏膜至內視網膜找到一條垂直於鞏膜及脈絡膜之線段進行。結膜排除在量測之外。找到組織厚度且減去組織厚度,得到SCS厚度。 5.11 實例11:藉由脈絡膜上注射治療巴登蛋白-CLN1或CLN2 相關之視力喪失
向出現巴登蛋白-CLN1相關之視力喪失之個體投與編碼棕櫚醯-蛋白硫酯酶1之AAV8或AAV9,其劑量足以持續三個月在眼睛(例如,玻璃狀液)中產生治療有效濃度之轉殖基因產物。向出現巴登蛋白-CLN2相關之視力喪失之個體投與編碼三肽基-肽酶1之AAV8或AAV9,其劑量足以持續三個月在眼睛(例如,玻璃狀液)中產生治療有效濃度之轉殖基因產物。藉由向脈絡膜上腔投與來進行投與。使用具有不同黏度之若干種醫藥組合物(例如,液體調配物)。醫藥組合物(例如,液體調配物)之黏度影響巴登蛋白-CLN2或CLN1相關之視力喪失及治療功效。在治療之後,對個體中巴登蛋白-CLN2相關之視力喪失之改善進行評估。在治療之後,對個體中巴登蛋白-CLN1相關之視力喪失之改善進行評估。當使用黏性醫藥組合物時在SCS中投與AAV之個體顯示巴登蛋白-CLN1或CLN2相關之視力喪失之改善比藉由視網膜下注射來投與相同醫藥組合物之個體更佳。當使用相對黏性醫藥組合物時在SCS中投與AAV之個體顯示巴登蛋白-CLN1或CLN2相關之視力喪失之改善比藉由視網膜下注射來投與參考醫藥組合物之個體更佳。
藉由一或多種視覺敏銳度篩選來量測本文提供之方法對視覺缺陷之影響,包括視動性眼球震顫(OKN)。OKN視覺敏銳度篩選使用OKN無意識反射之原理,客觀地評估患者之眼睛是否能跟隨移動之目標。計算該治療前後OKN篩選結果之變化百分比。
5.12 實例12:使用紅外線熱像儀監測人類患者中之注射
向出現濕性AMD之個體投與編碼蘭尼單抗Fab之AAV8 (例如藉由視網膜下投與、脈絡膜上投與或玻璃體內投與),其劑量足以持續三個月在眼睛(例如,玻璃狀液)中產生Cmin為至少0.330 µg/mL之濃度的轉殖基因產物。可藉由脈絡膜上投與,使用具有不同黏度之若干種醫藥組合物(例如,液體調配物)投與編碼蘭尼單抗Fab之AAV8。與藉由脈絡膜上投與在低黏度溶液(例如PBS、或通常用於AAV視網膜下投與之溶液、或較低黏性溶液)中投與編碼蘭尼單抗Fab之AAV8之個體相比,在中等至高黏度溶液(與PBS相比或與通常用於AAV視網膜下注射之溶液相比)中投與編碼蘭尼單抗Fab之AAV8之個體顯示更高濃度之轉殖基因(例如,如在投與後1週、2週、3週、4週、8週或12週時量測)。可在投與編碼蘭尼單抗Fab之AAV8後的任何時間量測轉殖基因之濃度。舉例而言,如在投與AAV後1週、4週、2個月或3個月時量測,與使用較低黏性溶液在SCS中或藉由視網膜下投與或經由玻璃體內投與投與AAV8之個體相比,使用較高黏性溶液在SCS中投與AAV8之個體在眼睛中顯示更高濃度之轉殖基因。類似地,與經由視網膜下投與或經由玻璃體內投與來投與相同醫藥組合物之個體相比,使用黏性溶液在SCS中投與AAV8之個體顯示更高濃度之轉殖基因。本實驗中使用之所有溶液皆具有相同量之基因體複本。
使用FLIR T530紅外線熱像儀在程序過程中評估注射,且可在注射後進行評估,以確認投藥成功完成或投藥錯誤。或者,使用FLIR T420、FLIR T440、Fluke Ti400或FLIRE60紅外線熱像儀。在治療之後,臨床評價個體之臨床效果征像以及濕性AMD之徵象及症狀的改善。 5.13 實例13:調配物A及調配物B中之組分
本實例展示調配物A (具有0.001%泊洛沙姆188之杜貝爾寇磷酸鹽緩衝鹽水,pH 7.4)之調配物A,儲存在≤ - 60℃下;及調配物B (『具有4%蔗糖及0.001%泊洛沙姆188之經改良之杜貝爾寇磷酸鹽緩衝鹽水,pH 7.4』),儲存在-20℃下。表6中提供兩種調配物之比較及影響分析。調配物B具有改善之儲存可行性,在儲存2年後迄今為止未觀測到對AAV產品之影響。測試具有不同黏度值之其他醫藥組合物(例如,液體調配物)。本揭示案之醫藥組合物(例如,具有中等或高黏度)可包括例如來自調配物B之一或多種組分。本揭示案之醫藥組合物(例如,具有中等或高黏度)具有改善之儲存可行性,對AAV產品無影響(例如,儲存2年後)。
表 6 : 調配物 A 及 B
製程位點 / 階段 | 調配物 A | 調配物 B |
調配物緩衝液 | 具有0.001%泊洛沙姆188之DPBS,pH 7.4。 組成: 0.2 mg/mL氯化鉀、0.2 mg/mL磷酸二氫鉀、8.1 mg/mL氯化鈉、1.15 mg/mL無水磷酸氫二鈉、0.001% (0.01 mg/mL)泊洛沙姆188,pH 7.4 | 『具有4%蔗糖及0.001%泊洛沙姆188之經改良之DPBS,pH 7.4』。 『具有4%蔗糖及0.001%泊洛沙姆188之經改良之DPBS,pH 7.4』調配物具有4% w/v蔗糖及較低氯化鈉水準(自137 mM降低至100 mM)以補償滲壓性。其他調配物賦形劑及水準一致。 組成:0.2 mg/mL氯化鉀、0.2 mg/mL磷酸二氫鉀、5.84 mg/mL氯化鈉、1.15 mg/mL無水磷酸氫二鈉、40.0 mg/mL (4% w/v)蔗糖、0.001% (0.01 mg/mL)泊洛沙姆188,pH 7.4 |
FDP長期冷凍儲存溫度 | ≤ -60˚C | ≤ -20℃ |
調配物B (具有蔗糖之經改良之DPBS)包括0.2 mg/mL氯化鉀、0.2 mg/mL磷酸二氫鉀、5.84 mg/mL氯化鈉、1.15 mg/mL無水磷酸氫二鈉、40.0 mg/mL (4% w/v)蔗糖、0.001% (0.01 mg/mL)泊洛沙姆188,pH 7.4。以莫耳單位計,調配物B 包括 2.70 mM氯化鉀、1.47 mM磷酸二氫鉀、100 mM氯化鈉、8.1 mM無水磷酸氫二鈉、117 mM蔗糖,0.001% (0.01 mg/mL)泊洛沙姆188,pH 7.4。調配物B之密度可為1.0188 g/mL;調配物B之滲透壓可為約345 (331-354)。
表 7 :以構築體 II 作為活性醫藥成分 (API) 之調配物 B
a. 外加0.1 mL/L = 0.1 mL/kg 10%儲備液P188。可使用來自Spectrum之NF級Pluronic® F-68 (泊洛沙姆188)及來自BASF之Kolliphor® P188 BIO。
b. 1 kg溶液之體積為約982 mL (1 kg/1.0188 kg/L = 982 mL)
5.14 實例14:調配物A及調配物B在長期穩定性方面之比較
成分 | 功能 | 品質標準 | 濃度(mg/mL) | 濃度(mM 或%) | 質量分數(g/kg) b | 供應商及部件號 | 化學式 | 分子量(g/mol) |
構築體II | API | 內部 | 因劑量水準而異 | - | - | - | - | - |
氯化鈉 | 緩衝劑 | USP、Ph.Eur、BP、JPE | 5.84 | 100 mM | 5.736 | Avantor,3627 | NaCl | 58.440 |
氯化鉀 | USP、BP、Ph.Eur、JPE | 0.201 | 2.70 mM | 0.198 | Avantor,3045 | KCl | 74.5513 | |
無水磷酸氫二鈉 | USP、Ph.Eur、JPE | 1.15 | 8.10 mM | 1.129 | Avantor,3804 | Na 2HPO 4 | 141.960 | |
磷酸二氫鉀 | NF、BP、Ph.Eur | 0.200 | 1.47 mM | 0.196 | Avantor,3248 | KH 2PO 4 | 136.086 | |
蔗糖 | 冷凍保護劑 | USP、NF、Ph.Eur、BP、JPE | 40.0 | 117 mM | 39.26 | Pfanstiehl,S-124-2-MC | C12H22O11 | 342.3 |
泊洛沙姆188 | 界面活性劑 a | NF、Ph.Eur、JPE | 0.010 | 0.001% | 0.1 mL/kg 10%儲備液 | BASF,50424596 | HO(C 3H 6O) a(C 2H 4O) b(C 3H 6O) aH | 7680至9510 |
水 | 水性媒劑 | WFI | 約971 mg/mL | 約54 M | 足量至1 kg (需要大約953 g/kg) | 變化 | H 2O | 18.0153 |
本實例展示調配物A及調配物B在長期穩定性方面之比較。調配物A及B在-80℃下具有相似之長期冷凍穩定性,且調配物B在-20℃下亦穩定。『具有4%蔗糖之經改良之dPBS』調配物B在-20℃及-80℃下維持效力12個月。測試具有不同黏度值之其他醫藥組合物(例如,液體調配物)。本揭示案之醫藥組合物(例如,具有中等或高黏度)在-20℃及-80℃下穩定。具有中等及高黏度之醫藥組合物在-20℃及-80℃下維持效力12個月。本揭示案之醫藥組合物(例如,具有中等或高黏度)可包括例如來自調配物B之一或多種組分。 5.15 實例15:調配物A及調配物C活體外效力之比較
本實例展示調配物A及調配物C在長期穩定性方面之比較。調配物C為『具有蔗糖之經改良之dPBS』的變異體,具有60 mM NaCl及6%蔗糖。調配物C包括0.2 mg/mL氯化鉀、0.2 mg/mL磷酸二氫鉀、3.50 mg/mL氯化鈉、1.15 mg/mL無水磷酸氫二鈉、60.0 mg/mL (6% w/v)蔗糖、0.001% (0.01 mg/mL)泊洛沙姆188,pH 7.4。
調配物C在-20℃下穩定2年。參考調配物A (dPBS)在-20℃下不穩定。調配物B及C在-20℃下可能具有可比較且優良之長期穩定性。測試具有不同黏度值之其他醫藥組合物(例如,液體調配物)。本揭示案之醫藥組合物(例如,具有中等或高黏度)可包括例如來自調配物B或調配物C之一或多種組分。本揭示案之醫藥組合物(例如,具有中等或高黏度)在-20℃下穩定2年。
5.16 實例16:使用不同脈絡膜上調配物在食蟹獼猴中之藥效學、生物分佈及耐受性研究
本研究之目的係評估包含AAV8-抗VEGF-ab之不同調配物在藉由脈絡膜上注射單劑量投與至食蟹獼猴時之生物分佈、藥效學(轉殖基因濃度)及耐受性。在給藥之後,觀測動物給藥後至少4週。一組亦投與高容量調配物。一些調配物包括不同黏度水準,在低黏度至高黏度範圍內。舉例而言,調配物1具有低黏度,調配物2具有中等黏度,且調配物3具有高黏度。表8中展示組分配及劑量水準。測試物品為AAV8-抗VEGF-ab。對照物品為安慰劑。調配物及對照物可儲存在-60℃與-80℃之間的冷凍機中,且在使用當日在室溫下解凍,或若在調配物當日使用,則儲存在室溫下,或儲存在2℃與8℃之間的冰箱中。適應症為慢性視網膜疾患,包括濕性AMD及糖尿病性視網膜病變。
表 8 :組分配及劑量水準
GC =基因體複本
a 第1組將僅投與對照物品。
b 劑量水準係基於調配物1-3之100 μL/眼之劑量體積,以及高容量調配物組之200 μL/眼之劑量體積。每隻眼睛注射兩次。
c 在給藥期第29天處死所有動物。
組 | 劑量方案左眼 | 劑量方案右眼 | 劑量水準 b (GC/ 眼 ) | 給藥濃度 (GC/mL) | 動物數目 ( 雌性 ) |
對照物1 a | 對照物品1 | 對照物品1 | 0 | 0 | 41 |
對照物2 | 對照物品2 | 對照物品2 | 0 | 0 | 1 |
對照物3 | 對照物品3 | 對照物品3 | 0 | 0 | 1 |
調配物1 | 測試物品1 | 測試物品1 | 3×10 11 | 3×10 12 | 4 |
調配物2 | 測試物品2 | 測試物品2 | 3×10 11 | 3×10 12 | 4 |
調配物3 | 測試物品3 | 測試物品3 | 3×10 11 | 3×10 12 | 4 |
高容量調配物 | 測試物品1、2或3 | 測試物品1、2或3 | 3×10 11 | 1.5×10 12 | 4 |
在動物供應商處進行抗體預篩選:經由股靜脈自每隻動物中收集約90隻雌猴之血液(至少1 mL),且置於不含抗凝劑之試管中。根據需要,可使用另一條靜脈進行收集。基於預篩選結果選擇動物作為研究候選者。使血液在室溫下凝結且在1小時內離心以獲得血清。將血清分成2個等分試樣且置於冷凍瓶中,且維持在乾冰上,然後儲存於大約-70℃下。將樣品在乾冰上運輸隔夜以進行分析。然後藉由任何可接受之方法分析樣品之抗AAV8中和抗體(NAb)。基於抗AAV8 Nab結果選擇用於運輸之動物。
劑量投與:動物禁食隔夜且在脈絡膜上注射之前用氯胺酮及右美托咪啶(dexmedetomidine)麻醉。簡而言之,在5至10秒內向每隻眼睛(距角膜緣3至4 mm之間)投與100 μL單次脈絡膜上注射(或注射2次,每次50 μL)。對於高容量調配物,每隻眼睛投與200 μL。調配物係用Clearside SCS微注射器投與。微針尺寸視調配物之黏度而變。在一些情況下,使用30規格微針。右眼注射在顳上象限(亦即10點鐘與11點鐘位置之間)進行。左眼注射在顳上象限(亦即1點鐘與2點鐘位置之間)進行。在注射之後,針在眼中保持約5秒後拔出。拔出微針後,將棉頭塗抹器(劑量擦拭物)置放在注射部位約10秒。給藥後在每隻眼睛中滴注局部抗生素(例如Tobrex®或適當替代品)。每次給藥時間記錄為每次注射完成時之時間。右眼先給藥,然後為左眼。
眼科程序:進行眼科檢查(例如,在投與後第4天、第8天、第15天及第29天)。用裂隙燈生物顯微鏡及間接檢眼鏡檢查動物。使用裂隙燈生物顯微鏡檢查雙眼之附件及前部。使用間接檢眼鏡檢查雙眼之眼底(若可見)。在用間接檢眼鏡檢查之前,用散瞳劑(如1%托吡醯胺(tropicamide))散瞳。在投與當天(給藥前10分鐘內)且例如在第4天、第8天、第15天及第29天量測眼內壓。可使用回彈眼壓計(TonoVet)評估眼壓。第4週左右進行眼部攝影。使用數位眼底相機拍攝照片。對每隻眼睛拍攝彩色照片,包括後極之立體照片及兩個中間周邊視野(顳側及鼻側)之非立體照片。亦拍攝周邊照片。此外,使用靛青綠(indocyanine green)進行自發螢光成像以記錄劑量之擴散(例如,在第一天及第二天)。
抗 AAV8 中和抗體分析:將在不同時間點(例如,投與前、投與當天及投與後數天)自股靜脈採集之每隻動物之血液樣品保持在室溫下且使其凝結至少30分鐘,然後離心。將樣品在收集後1小時內離心,且收穫血清。收穫後,將樣品置於乾冰上直至儲存在-60℃與-80℃之間。然後使用合格中和抗體分析對AAV8抗體進行血清分析。
抗 AAV8- 抗 VEGF-ab 轉殖基因產物抗體分析:如上文所討論採集血液樣品且使用本揭示案之任何分析法或任何可接受之分析法分析血清樣品中針對AAV8-抗VEGF-ab之抗體。對於AAV8-抗VEGF-ab轉殖基因分析,如上所述,在投與前至少兩週、第15天及動物處死當天(第29天)採集血液樣品。在劑量投與之前自前房收集50 μL。可在終末屍檢時收集來自水狀液及玻璃狀液之樣品。可在給藥前、第15天及屍檢之前收集血清樣品。然後藉由本揭示案之任何分析法或任何適用之分析法或方法分析樣品(例如,轉殖基因濃度)。
水狀液收集:在投與前至少2週、第15天及處死動物當天,自每隻眼睛中取出約50 μL。將每隻眼睛之水狀液樣品置於具有Watson條碼標簽之單獨試管中,在液氮中快速冷凍,且置於乾冰上直至儲存在-60℃與-80℃之間。
水狀液穿刺後用藥方案:此治療方案之目的係提供與水狀液收集程序相關之姑息治療。收集日之後的治療目的係提供對不良事件(例如不適)之適當緩解。測試動物之眼痛及副作用。
表 9 :用藥方案
BID = 每天兩次(至少間隔6小時);IM = 肌肉內注射
a 將1至2滴溶液施加至每隻供收集樣品之眼睛上。
b 將大約0.25吋條施加至每隻供收集樣品之眼睛。
天 | 藥物 ( 劑量水準 ) | 給藥途徑 | 時間間隔 |
取樣日 | 氟尼辛葡甲胺(Flunixin meglumine) (2mg/kg) | IM | 為進行收集而進行鎮靜之前 |
取樣日 | 丁丙諾啡(Buprenorphine) (0.05 mg/kg) | IM | 自麻醉中恢復後;5至7小時後,且至少16小時後(自第一次注射開始) |
取樣日 | 1%硫酸阿托品(Atropine sulfate)溶液 a | 局部 | 收集程序後 |
取樣日 | Neo-Poly-Dex軟膏 b | 局部 | 收集程序後 |
取樣後1天 | 1%硫酸阿托品溶液 a | 局部 | 一次 |
取樣後1天 | Neo-Poly-Dex軟膏 b | 局部 | BID |
取樣後2天 | 1%硫酸阿托品溶液 a | 局部 | 一次 |
取樣後2天 | Neo-Poly-Dex軟膏 b | 局部 | BID |
研究終止:將動物用戊巴比妥鈉麻醉且在第29天放血。
水狀液及玻璃狀液之屍檢收集:分別自水狀液及玻璃狀液中取出每隻眼睛最多50 μL及每隻眼睛最多100 μL。放血後,摘除眼睛且自每隻眼睛收集水狀液及玻璃狀液樣品。將玻璃狀液樣品分成2個大致相等之等分試樣,且水狀液樣品作為一個等分試樣儲存。每次收集之後,動物右眼注射經改良之戴維森固定液(modified Davidson’s fixative)直至腫脹。眼睛在經改良之戴維森固定液中儲存48至96小時,然後轉移至10%中性緩衝福馬林(formalin)中。將樣品快速冷凍且儲存在-60℃與-80℃之間。分析水狀液及玻璃狀液樣品之轉殖基因濃度。
用於生物分佈之眼組織收集:放血後,將來自不同調配物組之所有動物之左眼及兩隻動物(視存活而定)之右眼摘除且收集組織。將組織收集至帶有Watson條碼標簽之單獨管中。收集之組織包括具有視網膜色素上皮之脈絡膜、角膜、虹膜睫狀體、視交叉、視神經、視網膜、鞏膜及後眼杯。眼睛分成四個大致相等之象限(包括給藥部位區域之顳上、鼻上、顳下及包括給藥部位區域之鼻下)。自各象限像限,使用8 mm生檢穿孔器採集一個樣品。樣品儲存在-60℃與-80℃之間。使用qPCR或qRT-PCR方法分析樣品中之載體DNA或RNA。
用於生物分佈之非眼組織收集:自以下中收集約5 mm×5 mm×5mm之兩個樣品:右腦半球(例如,小腦(外側)、小腦(背側)、額葉皮質(布洛曼氏分區(Brodmann area) 4)、額葉皮質(布洛曼氏分區6)、枕葉皮質(皮質表面)、枕葉皮質(實質))、卵巢、心臟、腎臟、淚腺(左)、肝臟(左外側葉)、肺(左尾葉)、淋巴結(腮腺)、淋巴結(下頜)、腦垂體、唾液腺(下頜)、脾、胸腺、背根神經節(頸椎,左)、背根神經節(腰椎,左)及背根神經節(胸椎,左)。將樣品儲存在-60℃與-80℃之間。
組織學:將動物之右眼及右視神經以標稱5 μm切片,且用蘇木精(hematoxylin)及伊紅(eosin)染色。將眼組織切片以方便檢查中央凹、注射部位區域、黃斑、視盤及視神經。單一垂直切片係穿過下顱頂之近似中心獲取。此產生一張載玻片/塊/眼睛(每隻眼睛總共三張載玻片)。此外,可自選定之顯微載玻片準備數位掃描(虛擬載玻片)。
資料評估及統計分析:統計資料分析係使用平均值及標準偏差計算。計算絕對體重、體重變化及眼內壓量測之平均值及標準偏差。
5.17 實例17:對1%高黏度級羧甲基纖維素調配物之注射性及熱穩定性之評估
評估在『基』液中製備之含有1%高黏度級羧甲基纖維素之調配物的穩定性及注射性,該『基』液亦含有0.2 mg/mL氯化鉀、0.2 mg/mL磷酸二氫鉀、5.84 mg/mL氯化鈉、1.15 mg/mL無水磷酸氫二鈉、40.0 mg/mL (4% w/v)蔗糖及0.001% (0.01 mg/mL)泊洛沙姆188,pH 7.4。圖14展示歷經13秒手動注射及使用控制速率注射泵歷經10秒及15秒之兩次注射的注射壓力與時間之關係曲線。使用Clearside注射器裝置(CLS-HN001)及30規格(160 µm ID,CLS-MN1100)針進行注射。結果表明,獲得之壓力皆大致在較佳(在一些情況下) <43 PSI範圍內。手動注射之最大壓力為42 PSI,歷經15秒之注射泵注射之最大壓力為39 PSI,且歷經10秒之注射泵注射之最大壓力短暫上升至49 PSI (圖14)。認識到手動注射易於注射且順暢。
微差掃描螢光法(DSF)量測蛋白質之固有色胺酸及酪胺酸發射作為溫度之函數。Trp及Tyr殘基之局部環境隨著蛋白質之未摺疊而發生變化,從而引起螢光大量增加。圖15展示與1%羧甲基纖維素調配物相比對照物之微差掃描螢光法熱上升資料。上圖:原始熔融曲線信號。中圖:用於鑑別峰之數據導數。底圖:光散射數據以指示聚集。1%羧甲基纖維素調配物(T
m= 67.52℃)具有與對照物(T
m= 67.10℃)相似之曲線,此表明AAV在此調配物中穩定。
等效物
儘管參考本發明之具體實施例對本發明進行詳細描述,但應理解,在功能上等效之變體亦在本發明之範疇內。實際上,根據前面之描述及附圖,除了在本文中展示及描述之內容之外,對本發明之各種修改對於所屬領域技術人員而言將變得顯而易見。此類修改旨在落入所附申請專利範圍之範疇內。所屬領域技術人員將認識到或能夠僅使用常規實驗即可確定本文描述之本發明之具體實施例的許多等效物。此類等效物旨在涵蓋於以下申請專利範圍中。
在本說明書中提到之所有公開案、專利及專利申請案皆以引用之方式併入本說明書中,其引用程度如同具體且個別地指出各個別公開案、專利或專利申請案以引用之方式整體併入本文中一般。
圖 1A-1C.示出在脈絡膜上投與具有不同黏度值之溶液後離體眼睛中藍色染料或螢光染料之擴散區域。圖1A展示在脈絡膜上投與含有藍色染料之水溶液後藍色染料之擴散區域。圖1B展示在脈絡膜上投與含有藍色染料之1%中等CMC溶液後藍色染料之擴散區域。圖1C展示在脈絡膜上投與含有螢光染料之1%中等CMC溶液後熒色染料之擴散區域。
圖 2A-2B.展示在SCS中注射具有不同黏度值之溶液時所獲得之壓力的圖。圖2A描繪展示當在SCS中注射黏度為約1 cP之水溶液時所獲得之壓力的圖。圖2B描繪展示當在SCS中注射黏度為約4000 cP之2%羥丙甲纖維素(hypromellose)溶液時所獲得之壓力的圖。
圖 3.展示使用30規格針以不同注射速率將具有不同黏度值(mPas)之不同溶液注射在SCS中之計算壓力值(PSI)的圖。
圖 4A-4C.展示在不同30規格及29規格針下計算注射壓力與黏度之函數關係的圖。該等圖縮放至100 PSI (圖4A)、65 PSI (圖4B)或45 PSI (圖4C)之極限。
圖 5.展示使用不同規格尺寸之針將具有不同黏度值(mPas)之不同溶液注射在SCS中之計算壓力值(PSI)的圖:30規格(GA)、30 GA STW及29 GA STW針。
圖 6.展示在具有不同黏度值之溶液下獲得之擴散資料的圖。在起始日(T0)及在37℃下四天後獲得含有AAV (例如,包含編碼轉殖基因之表現卡匣之重組腺相關病毒(AAV)載體)之六種溶液的擴散資料。該等溶液包括含蔗糖之DPBS (對照物)、0.5%中等羧甲基纖維素(CMC)、0.5%羥丙基甲基纖維素(HPMC)、0.2% HPMC、2%羥乙基纖維素(HES)及1%低CMC。
圖 7.展示在具有不同黏度值之溶液下獲得之游離DNA之百分比的圖。在起始日(T0)及在37℃下四天後獲得含有AAV (例如,包含編碼轉殖基因之表現卡匣之重組腺相關病毒(AAV)載體)之六種溶液的游離DNA之百分比。該等溶液為含蔗糖之DPBS (對照物)、0.5%中等羧甲基纖維素(CMC)、0.5%羥丙基甲基纖維素(HPMC)、0.2% HPMC、2%羥乙基纖維素(HES)及1%低CMC。
圖 8.展示在具有不同黏度值之溶液下獲得之DLS熱上升(DLS-熔融)的圖。該等溶液包括含蔗糖之DPBS (對照物)、0.5%中等羧甲基纖維素(CMC)、0.5%羥丙基甲基纖維素(HPMC)、0.2% HPMC、2%羥乙基纖維素(HES)及1%低CMC。
圖 9.展示具有不同黏度值之溶液之微差掃描螢光法熱上升資料的圖。自上至下(S-0C0V至S-0C12),溶液包括含蔗糖之DPBS (對照物)、0.5%中等羧甲基纖維素(CMC)、0.5%羥丙基甲基纖維素(HPMC)、0.2% HPMC、2%羥乙基纖維素(HES)及1%低CMC、15%泊洛沙姆407及0.5%高羧甲基纖維素。上圖:原始熔融曲線信號。中圖:用於鑑別峰之數據導數。底圖:光散射數據以指示聚集或凝膠形成。對於兩種羥丙甲纖維素調配物,在約55℃下觀測到由於模糊凝膠形成而導致之光散射增加。對於所有調配物而言,由上圖中之垂直線及中圖中之峰展示之熔融溫度起始點及中點皆相似,此表明殼體在不同調配物中具有相似熱穩定性。
圖 10.在20℃下1%高黏度級CMC調配物之黏度(Pas)與剪切速率的關係曲線。
圖 11.注射至去核豬眼中之壓力與中等黏度級CMC製劑濃度之關係曲線。
圖 12.注射至去核豬眼中之壓力與高黏度級CMC製劑濃度之關係曲線。
圖 13.用高壓釜滅菌製備臨床藥品之實例。
圖 14.使用Clearside裝置及30規格針(160 µm針)對1%羧甲基纖維素調配物進行注射壓力量測。
圖 15.對照物(S-0DGN)及1%羧甲基纖維素調配物(S-0DGR)之微差掃描螢光測定曲線圖。
<![CDATA[<110> 美商銳進科斯生物股份有限公司(REGENXBIO Inc.)]]> <![CDATA[<120> 諸如高黏度調配物之用於脈絡膜上投與之調配物]]> <![CDATA[<130> 12656-141-888]]> <![CDATA[<140> TW 110137245]]> <![CDATA[<141> 2021-10-06]]> <![CDATA[<150> US 63/088,826]]> <![CDATA[<151> 2020-10-07]]> <![CDATA[<150> US 63/147,527]]> <![CDATA[<151> 2021-02-09]]> <![CDATA[<160> 55 ]]> <![CDATA[<170> PatentIn version 3.5]]> <![CDATA[<210> 1]]> <![CDATA[<211> 214]]> <![CDATA[<212> PRT]]> <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]> <![CDATA[<220>]]> <![CDATA[<223> 蘭尼單抗Fab胺基酸序列-輕鏈]]> <![CDATA[<400> 1]]> Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Val Leu Ile 35 40 45 Tyr Phe Thr Ser Ser Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Thr Val Pro Trp 85 90 95 Thr Phe Gly 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連接子T2A]]> <![CDATA[<400> 27]]> Gly Ser Gly Glu Gly Arg Gly Ser Leu Leu Thr Cys Gly Asp Val Glu 1 5 10 15 Glu Asn Pro Gly Pro 20 <![CDATA[<210> 28]]> <![CDATA[<211> 22]]> <![CDATA[<212> PRT]]> <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]> <![CDATA[<220>]]> <![CDATA[<223> 連接子P2A]]> <![CDATA[<400> 28]]> Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val 1 5 10 15 Glu Glu Asn Pro Gly Pro 20 <![CDATA[<210> 29]]> <![CDATA[<211> 23]]> <![CDATA[<212> PRT]]> <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]> <![CDATA[<220>]]> <![CDATA[<223> 連接子E2A]]> <![CDATA[<400> 29]]> Gly Ser Gly Gln Cys Thr Asn Tyr Ala Leu Leu Lys Leu Ala Gly Asp 1 5 10 15 Val Glu Ser Asn Pro Gly Pro 20 <![CDATA[<210> 30]]> <![CDATA[<211> 25]]> <![CDATA[<212> PRT]]> <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]> <![CDATA[<220>]]> <![CDATA[<223> 連接子F2A]]> <![CDATA[<400> 30]]> Gly Ser Gly Val Lys Gln Thr Leu Asn Phe Asp Leu Leu Lys Leu Ala 1 5 10 15 Gly Asp Val Glu Ser Asn Pro Gly Pro 20 25 <![CDATA[<210> 31]]> <![CDATA[<211> 4]]> <![CDATA[<212> PRT]]> <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]> <![CDATA[<220>]]> <![CDATA[<223> 弗林蛋白酶連接子]]> <![CDATA[<400> 31]]> Arg Lys Arg Arg 1 <![CDATA[<210> 32]]> <![CDATA[<211> 4]]> <![CDATA[<212> PRT]]> <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]> <![CDATA[<220>]]> <![CDATA[<223> 弗林蛋白酶連接子]]> <![CDATA[<400> 32]]> Arg Arg Arg Arg 1 <![CDATA[<210> 33]]> <![CDATA[<211> 4]]> <![CDATA[<212> PRT]]> <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]> <![CDATA[<220>]]> <![CDATA[<223> 弗林蛋白酶連接子]]> <![CDATA[<400> 33]]> Arg Arg Lys Arg 1 <![CDATA[<210> 34]]> <![CDATA[<211> 4]]> <![CDATA[<212> PRT]]> <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]> <![CDATA[<220>]]> <![CDATA[<223> 弗林蛋白酶連接子]]> <![CDATA[<400> 34]]> Arg Lys Lys Arg 1 <![CDATA[<210> 35]]> <![CDATA[<211> 4]]> <![CDATA[<212> PRT]]> <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]> <![CDATA[<220>]]> <![CDATA[<223> 弗林蛋白酶連接子]]> <![CDATA[<220>]]> <![CDATA[<221> MISC_FEATURE]]> <![CDATA[<222> (2)..(2)]]> <![CDATA[<223> X = 任何胺基酸]]> <![CDATA[<220>]]> <![CDATA[<221> MISC_FEATURE]]> <![CDATA[<222> (3)..(3)]]> <![CDATA[<223> X = Lys或Arg]]> <![CDATA[<400> 35]]> Arg Xaa Xaa Arg 1 <![CDATA[<210> 36]]> <![CDATA[<211> 4]]> <![CDATA[<212> PRT]]> <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]> <![CDATA[<220>]]> <![CDATA[<223> 弗林蛋白酶連接子]]> <![CDATA[<220>]]> <![CDATA[<221> MISC_FEATURE]]> <![CDATA[<222> (2)..(2)]]> <![CDATA[<223> X = 任何胺基酸]]> <![CDATA[<400> 36]]> Arg Xaa Lys Arg 1 <![CDATA[<210> 37]]> <![CDATA[<211> 4]]> <![CDATA[<212> PRT]]> <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]> <![CDATA[<220>]]> <![CDATA[<223> 弗林蛋白酶連接子]]> <![CDATA[<220>]]> <![CDATA[<221> MISC_FEATURE]]> <![CDATA[<222> (2)..(2)]]> <![CDATA[<223> X = 任何胺基酸]]> <![CDATA[<400> 37]]> Arg Xaa Arg Arg 1 <![CDATA[<210> 38]]> <![CDATA[<211> 215]]> <![CDATA[<212> PRT]]> <![CDATA[<213> 人工序列(Artificial Sequence)]]> <![CDATA[<220>]]> <![CDATA[<223> 蘭尼單抗Fab胺基酸序列-輕鏈]]> <![CDATA[<400> 38]]> Met Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val 1 5 10 15 Gly Asp 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Claims (88)
- 一種適合投與至人類個體眼睛之脈絡膜上腔(SCS)之醫藥組合物,其中該醫藥組合物包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之重組腺相關病毒(AAV)載體,且其中如在至多約1 s -1之剪切速率下所量測,該醫藥組合物具有介於約25 cP至約3×10 6cP之間的黏度。
- 一種適合投與至人類個體眼睛之脈絡膜上腔(SCS)之醫藥組合物,其中該醫藥組合物包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之重組腺相關病毒(AAV)載體,其中該轉殖基因為抗人類血管內皮生長因子(抗VEGF)抗體,且其中如在至多約1 s -1之剪切速率下所量測,該醫藥組合物具有介於約25 cP至約3×10 6cP之間的黏度。
- 如請求項1或2之醫藥組合物,其中在脈絡膜上投與後之清除時間等於或大於參考醫藥組合物在脈絡膜上投與後之清除時間,其中該參考醫藥組合物包括包含編碼該轉殖基因之該表現卡匣之該重組AAV,其中當將該醫藥組合物或該參考醫藥組合物投與至脈絡膜上腔時,重組AAV基因體複本之量相同,且其中如在至多約1 s -1之剪切速率下所量測,該參考醫藥組合物具有至多約24 cP之黏度。
- 如請求項1或2之醫藥組合物,其中在脈絡膜上投與後之圓周擴散比參考醫藥組合物在脈絡膜上投與後之圓周擴散小,其中該參考醫藥組合物包括包含編碼該轉殖基因之該表現卡匣之該重組AAV,其中當將該醫藥組合物或該參考醫藥組合物投與至脈絡膜上腔時,重組AAV基因體複本之量相同,且其中如在至多約1 s -1之剪切速率下所量測,該參考醫藥組合物具有至多約24 cP之黏度。
- 如請求項1或2之醫藥組合物,其中在脈絡膜上投與後在注射部位之厚度等於或高於在脈絡膜上投與參考醫藥組合物後在注射部位之厚度,其中該參考醫藥組合物包括包含編碼該轉殖基因之該表現卡匣之該重組AAV,其中當將該醫藥組合物或該參考醫藥組合物投與至脈絡膜上腔時,重組AAV基因體複本之量相同,且其中如在至多約1 s -1之剪切速率下所量測,該參考醫藥組合物具有至多約24 cP之黏度。
- 如請求項1或2之醫藥組合物,其中與在脈絡膜上投與參考醫藥組合物後在該眼睛中偵測到該轉殖基因之表現水準的時段相比,在脈絡膜上投與後更長時段在該眼睛中偵測到該轉殖基因之表現水準,其中該參考醫藥組合物包括包含編碼該轉殖基因之該表現卡匣之該重組AAV,其中當將該醫藥組合物或該參考醫藥組合物投與至脈絡膜上腔時,重組AAV基因體複本之量相同,且其中如在至多約1 s -1之剪切速率下所量測,該參考醫藥組合物具有至多約24 cP之黏度。
- 如請求項1或2之醫藥組合物,其中在脈絡膜上投與後該眼睛中該轉殖基因之濃度等於或高於在脈絡膜上投與參考醫藥組合物後該眼睛中該轉殖基因之濃度,其中該參考醫藥組合物包括包含編碼該轉殖基因之該表現卡匣之該重組AAV,其中當將該醫藥組合物或該參考醫藥組合物投與至脈絡膜上腔時,重組AAV基因體複本之量相同,且其中如在至多約1 s -1之剪切速率下所量測,該參考醫藥組合物具有至多約24 cP之黏度。
- 如請求項1或2之醫藥組合物,其中在脈絡膜上投與後在注射部位之轉導率等於或高於在脈絡膜上投與參考醫藥組合物後在注射部位之轉導率,其中該參考醫藥組合物包括包含編碼該轉殖基因之該表現卡匣之該重組AAV,其中當將該醫藥組合物或該參考醫藥組合物投與至脈絡膜上腔時,重組AAV基因體複本之量相同,且其中如在至多約1 s -1之剪切速率下所量測,該參考醫藥組合物具有至多約24 cP之黏度。
- 如請求項2之醫藥組合物,其中在脈絡膜上投與後VEGF誘發之血管舒張及/或血管滲漏之水準等於在脈絡膜上投與參考醫藥組合物後VEGF誘發之血管舒張及/或血管滲漏之水準或與之相比降低,其中該參考醫藥組合物包括包含編碼該轉殖基因之該表現卡匣之該重組AAV,其中當將該醫藥組合物或該參考醫藥組合物投與至脈絡膜上腔時,重組AAV基因體複本之量相同,且其中如在至多約1 s -1之剪切速率下所量測,該參考醫藥組合物具有至多約24 cP之黏度。
- 如請求項1至9中任一項之醫藥組合物,其中該重組AAV為構築體II。
- 如請求項1、3至8及10中任一項之醫藥組合物,其中該轉殖基因為抗人類血管內皮生長因子(抗VEGF)抗體。
- 如請求項1至11中任一項之醫藥組合物,其中該重組AAV包含來自選自由以下組成之群的一或多種腺相關病毒血清型之組分:AAV1、AAV2、AAV2tYF、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10、AAV11、AAVrh10、AAV.rh20、AAV.rh39、AAV.Rh74、AAV.RHM4-1、AAV.hu37、AAV.Anc80、AAV.Anc80L65、rAAV.7m8、AAV.PHP.B、AAV.PHP.eB、AAV2.5、AAV2tYF、AAV3B、AAV.LK03、AAV.HSC1、AAV.HSC2、AAV.HSC3、AAV.HSC4、AAV.HSC5、AAV.HSC6、AAV.HSC7、AAV.HSC8、AAV.HSC9、AAV.HSC10、AAV.HSC11、AAV.HSC12、AAV.HSC13、AAV.HSC14、AAV.HSC15及AAV.HSC16。
- 如請求項1至12中任一項之醫藥組合物,其中該重組AAV為AAV8。
- 如請求項1至9及11至12中任一項之醫藥組合物,其中該重組AAV為AAV9。
- 如請求項1至14中任一項之醫藥組合物,其中如在至多約1 s -1之剪切速率下所量測,該醫藥組合物具有介於約25 cP至約100,000 cP之間、介於約25 cP至約50,000 cP之間、介於約25 cP至約1×10 4cP之間、介於約25 cP至約5,000 cP之間、介於約25 cP至約1×10 3cP之間、介於約100 cP至約100,000 cP之間、介於約100 cP至約1×10 4cP之間、介於約100 cP至約5,000 cP之間、介於約100 cP至約1×10 3cP之間的黏度。
- 如請求項1至15中任一項之醫藥組合物,其中如在至多約1 s -1之剪切速率下所量測,該醫藥組合物具有至少約100 cP、至少約400 cP、至少約500 cP、至少約900 cP、至少約1000 cP、至少約4000 cP或至少約1×10 6cP之黏度。
- 如請求項1至16中任一項之醫藥組合物,其中如在至多約1 s -1之剪切速率下所量測,該醫藥組合物具有約或大於約500 cP之黏度。
- 如請求項1至17中任一項之醫藥組合物,其中該醫藥組合物包含蔗糖。
- 如請求項1至17中任一項之醫藥組合物,其中該醫藥組合物不包含蔗糖。
- 如請求項1至19中任一項之醫藥組合物,其中該醫藥組合物包含以下至少一者:蔗糖、4%蔗糖、6%蔗糖、10%蔗糖、2%羧甲基纖維素鈉鹽、1%羧甲基纖維素鈉鹽、羧甲基纖維素(CMC)、0.5% CMC、1% CMC、2% CMC、4% CMC、聚乙烯醇、羥乙基纖維素、羧甲基纖維素鈉鹽及羥丙基甲基纖維素。
- 如請求項1至18及20中任一項之醫藥組合物,其中該醫藥組合物包含4%蔗糖、6%蔗糖或10%蔗糖。
- 如請求項4及10至21中任一項之醫藥組合物,其中在脈絡膜上投與該醫藥組合物後之該圓周擴散小至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍、至少5%、至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少100%、至少150%或至少200%、至少250%或至少300%、至少400%或至少500%。
- 如請求項3及10至22中任一項之醫藥組合物,其中在脈絡膜上投與該醫藥組合物後之該清除時間多至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍、至少5%、至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少100%、至少150%或至少200%、至少250%或至少300%、至少400%或至少500%。
- 如請求項1至23中任一項之醫藥組合物,其中在脈絡膜上投與該醫藥組合物後之該清除時間為約30分鐘至約20小時、約2小時至約20小時、約30分鐘至約24小時、約1小時至約2小時、約30分鐘至約90天、約30分鐘至約60天、約30分鐘至約30天、約30分鐘至約21天、約30分鐘至約14天、約30分鐘至約7天、約30分鐘至約3天、約30分鐘至約2天、約30分鐘至約1天、約4小時至約90天、約4小時至約60天、約4小時至約30天、約4小時至約21天、約4小時至約14天、約4小時至約7天、約4小時至約3天、約4小時至約2天、約4小時至約1天、約4小時至約8小時、約4小時至約16小時、約4小時至約20小時、約1天至約90天、約1天至約60天、約1天至約30天、約1天至約21天、約1天至約14天、約1天至約7天、約1天至約3天、約2天至約90天、約3天至約90天、約3天至約60天、約3天至約30天、約3天至約21天、約3天至約14天或約3天至約7天。
- 如請求項1至24中任一項之醫藥組合物,其中在脈絡膜上投與該醫藥組合物後之該清除時間不早於約30分鐘、1小時、2小時、3小時、4小時、5小時、6小時、7小時、8小時、9小時、10小時、12小時、14小時、16小時、18小時、20小時、22小時、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、23天、25天、27天、30天、35天、40天、50天、55天、60天、65天、70天、75天、80天、85天、90天、95天、100天、120天、140天、160天、180天、200天、220天、240天、260天、280天、300天、320天、340天、360天、380天或400天。
- 如請求項3至25中任一項之醫藥組合物,其中該參考醫藥組合物在脈絡膜上投與後之該清除時間為至多約30分鐘、1小時、2小時、3小時、4小時、5小時、6小時、7小時、8小時、9小時、10小時、12小時、14小時、16小時、18小時、20小時、22小時、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天或14天。
- 如請求項1至26中任一項之醫藥組合物,其中該清除時間係自該SCS或自該眼睛之清除時間。
- 如請求項5及10至27中任一項之醫藥組合物,其中在脈絡膜上投與該醫藥組合物後在該注射部位之該厚度高至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍、至少5%、至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少100%、至少150%或至少200%、至少250%或至少300%、至少400%或至少500%。
- 如請求項5及10至28中任一項之醫藥組合物,其中在脈絡膜上投與該醫藥組合物後在該注射部位之該厚度為約500 μm至約3.0 mm、750 μm至約2.8 mm、約750 μm至約2.5 mm、約750 μm至約2 mm或約1 mm至約2 mm。
- 如請求項5及10至29中任一項之醫藥組合物,其中在脈絡膜上投與該醫藥組合物後在該注射部位之該厚度為至少約50 μm、100 μm、200 μm、300 μm、400 μm、500 μm、600 μm、700 μm、800 μm、900 μm、1000 μm、1 mm、1.5 mm、2 mm、2.5 mm、3 mm、3.5 mm、4 mm、4.5 mm、5 mm、5.5 mm、6 mm、6.5 mm、7 mm、7.5 mm、8 mm、8.5 mm、9 mm、9.5 mm或10 mm。
- 如請求項5及10至30中任一項之醫藥組合物,其中在脈絡膜上投與該參考醫藥組合物後在該注射部位之該厚度為至多約1 nm、5 nm、10 nm、25 nm、50 nm、100 nm、200 nm、300 nm、400 nm、500 nm、600 nm、700 nm、800 nm、900 nm、1 μm、5 μm、10 μm、15 μm、20 μm、25 μm、30 μm、35 μm、40 μm、50 μm、100 μm、200 μm、300 μm、400 μm、500 μm、600 μm、700 μm、800 μm、900 μm或1000 μm。
- 如請求項5及10至31中任一項之醫藥組合物,其中在脈絡膜上投與該醫藥組合物後在該注射部位之該厚度持續至少兩小時、至少三小時、至少四小時、至少五小時、至少六小時、至少七小時、至少八小時、至少十小時、至少十二小時、至少十八小時、至少二十四小時、至少兩天、至少三天、至少五天、至少十天、至少二十一天、至少一個月、至少六週、至少兩個月、至少三個月、至少4個月、至少5個月、至少6個月、至少9個月、至少一年、至少三年或至少五年。
- 如請求項7及10至32中任一項之醫藥組合物,其中在脈絡膜上投與該醫藥組合物後該眼睛中該轉殖基因之濃度高至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍、至少5%、至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少100%、至少150%或至少200%、至少250%或至少300%、至少400%或至少500%。
- 如請求項6及10至33中任一項之醫藥組合物,其中在脈絡膜上投與該醫藥組合物後的該更長時段長至少1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、23天、25天、27天、30天、35天、40天、50天、55天、60天、65天、70天、75天、80天、85天、90天、95天、100天、120天、140天、160天、180天、200天、220天、240天、260天、280天、300天、320天、340天、360天、380天或400天。
- 如請求項1至34中任一項之醫藥組合物,其中在脈絡膜上投與該醫藥組合物後在該眼睛中偵測到該轉殖基因達至少約1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、23天、25天、27天、30天、35天、40天、50天、55天、60天、65天、70天、75天、80天、85天、90天、95天、100天、120天、140天、160天、180天、200天、220天、240天、260天、280天、300天、320天、340天、360天、380天或400天。
- 如請求項3至35中任一項之醫藥組合物,其中在脈絡膜上投與該參考醫藥組合物後在該眼睛中偵測到該轉殖基因達至多約1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、23天、25天、27天、30天、35天、40天、50天、55天、60天、65天、70天、75天、80天、85天、90天、95天或100天、120天、140天、160天、180天、200天、220天、240天、260天、280天、300天、320天、340天、360天、380天或400天後。
- 如請求項11之醫藥組合物,其中在脈絡膜上投與該醫藥組合物後VEGF誘發之血管舒張及/或血管滲漏之水準等於在脈絡膜上投與該參考醫藥組合物後VEGF誘發之血管舒張及/或血管滲漏之水準或與之相比降低。
- 如請求項9至37中任一項之醫藥組合物,其中在脈絡膜上投與該醫藥組合物後VEGF誘發之血管舒張及/或血管滲漏之該水準降低至少約2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍、至少5%、至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少100%、至少150%或至少200%、至少250%或至少300%、至少400%或至少500%。
- 如請求項8及10至38中任一項之醫藥組合物,其中在脈絡膜上投與該醫藥組合物後在該注射部位之該轉導率高至少約2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍、至少5%、至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少100%、至少150%或至少200%、至少250%或至少300%、至少400%或至少500%。
- 如請求項1至39中任一項之醫藥組合物,其中該醫藥組合物中之重組AAV穩定性係該參考醫藥組合物中之重組AAV穩定性的至少約50%。
- 如請求項40之醫藥組合物,其中重組AAV穩定性係藉由該重組AAV之感染力確定。
- 如請求項40之醫藥組合物,其中重組AAV穩定性係藉由該重組AAV之聚集水準確定。
- 如請求項40之醫藥組合物,其中重組AAV穩定性係藉由該重組AAV釋放之游離DNA之水準確定。
- 如請求項43之醫藥組合物,其中與該參考醫藥組合物中之游離DNA之水準相比,該醫藥組合物包含多約50%、多約25%、多約15%、多約10%、多約5%、多約4%、多約3%、多約2%、多約1%、多約0%、少約1%、少約2%、少約5%、少約7%、少約10%、多約2倍、多約3倍、少約2倍、少約3倍之游離DNA。
- 如請求項41之醫藥組合物,其中該醫藥組合物中之該重組AAV之感染力比該參考醫藥組合物中之該重組AAV之該感染力高至少2%、5%、7%、10%、12%、15%、17%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、100%、2倍、3倍、5倍、10倍、100倍或1000倍。
- 如請求項42之醫藥組合物,其中該醫藥組合物之重組AAV聚集比該參考醫藥組合物中之重組AAV聚集水準少至少2%、5%、7%、10%、12%、15%、17%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、100%、2倍、3倍、5倍、10倍、100倍或1000倍。
- 如請求項1至46中任一項之醫藥組合物,其中該轉殖基因係適合治療所關注之疾病,或以其他方式改善所關注之疾病、預防所關注之疾病或減緩所關注之疾病之進展的轉殖基因。
- 如請求項1至47中任一項之醫藥組合物,其中該人類個體經診斷患有nAMD (濕性AMD)、乾性AMD、視網膜靜脈阻塞(RVO)、糖尿病性黃斑水腫(DME)或糖尿病性視網膜病變(DR)或巴登氏病(Batten disease)。
- 如請求項1至47中任一項之醫藥組合物,其中該人類個體經診斷患有IVA型黏多醣病(MPS IVA)、I型黏多醣病(MPS I)、II型黏多醣病(MPS II)、家族性高膽固醇血症(FH)、同合子型家族性高膽固醇血症(HoFH)、冠狀動脈疾病、腦血管疾病、杜顯氏肌肉失養症(Duchenne muscular dystrophy)、肢帶肌肉失養症、貝克爾肌肉失養症(Becker muscular dystrophy)及散發性包涵體肌炎或激肽釋放素相關疾病。
- 如請求項1、3至8及10至49中任一項之醫藥組合物,其中該AAV編碼棕櫚醯-蛋白硫酯酶1 (PPT1)或三肽基-肽酶1 (TPP1)。
- 如請求項3至50中任一項之醫藥組合物,其中該等重組AAV基因體複本之量係基於載體基因體濃度。
- 如請求項3至50中任一項之醫藥組合物,其中該等重組AAV基因體複本之量係基於每次投與之基因體複本。
- 如請求項3至50中任一項之醫藥組合物,其中該等重組AAV基因體複本之量係基於向該人類個體投與之總基因體複本。
- 如請求項52之醫藥組合物,其中每次投與之該等基因體複本係每次脈絡膜上投與之該重組AAV之基因體複本。
- 如請求項53之醫藥組合物,其中所投與之該等總基因體複本係經脈絡膜上投與之該重組AAV之總基因體複本。
- 如請求項51之醫藥組合物,其中該載體基因體濃度(VGC)為約3×10 9GC/mL、約1×10 10GC/mL、約1.2×10 10GC/mL、約1.6×10 10GC/mL、約4×10 10GC/mL、約6×10 10GC/mL、約2×10 11GC/mL、約2.4×10 11GC/mL、約2.5×10 11GC/mL、約3×10 11GC/mL、約6.2×10 11GC/mL、約1×10 12GC/mL、約2.5×10 12GC/mL、約3×10 12GC/mL、約5×10 12GC/mL、約1.5×10 13GC/mL、約2×10 13GC/mL或約3×10 13GC/mL。
- 如請求項53及55中任一項之醫藥組合物,其中所投與之基因體複本之總數為約6.0×10 10個基因體複本、約1.6×10 11個基因體複本、約2.5×10 11個基因體複本、約5.0×10 11個基因體複本、約3×10 12個基因體複本、約1.0×10 12個基因體複本、約1.5×10 12個基因體複本、約2.5×10 12個基因體複本或約3.0×10 13個基因體複本。
- 如請求項52及54中任一項之醫藥組合物,其中每次投與之基因體複本之總數為約6.0×10 10個基因體複本、約1.6×10 11個基因體複本、約2.5×10 11個基因體複本、約5.0×10 11個基因體複本、約3×10 12個基因體複本、約1.0×10 12個基因體複本、約1.5×10 12個基因體複本、約2.5×10 12個基因體複本或約3.0×10 13個基因體複本。
- 如請求項1至58中任一項之醫藥組合物,其中該醫藥組合物經投與一次、兩次、三次、四次、五次、六次、七次、八次、九次、十次、十五次、二十次、二十五次或三十次。
- 如請求項3至59中任一項之醫藥組合物,其中該參考醫藥組合物經投與一次、兩次、三次、四次、五次、六次、七次、八次、九次、十次、十五次、二十次、二十五次或三十次。
- 如請求項1至60中任一項之醫藥組合物,其中一天一次、一天兩次、一天三次、一天四次、一天五次、一天六次或一天七次投與該醫藥組合物。
- 如請求項3至60中任一項之醫藥組合物,其中一天一次、一天兩次、一天三次、一天四次、一天五次、一天六次或一天七次投與該參考醫藥組合物。
- 如請求項1至60中任一項之醫藥組合物,其中該參考醫藥組合物包含DPBS及蔗糖。
- 如請求項3至60中任一項之醫藥組合物,其中如在至多約1 s -1之剪切速率下所量測,該參考醫藥組合物具有約1 cP之黏度。
- 如請求項1至64中任一項之醫藥組合物,其中該醫藥組合物包含0.2至15%高黏度級羧甲基纖維素(CMC)、高黏度級CMC、中等黏度級CMC、羥丙基甲基纖維素(HPMC)、HPMC、羥乙基纖維素(HES)、低黏度級CMC及/或泊洛沙姆(poloxamer) 407。
- 如請求項1至65中任一項之醫藥組合物,其中該醫藥組合物之黏度係在0 s -1之剪切速率下量測。
- 如請求項3至66中任一項之醫藥組合物,其中該參考醫藥組合物之黏度係在0 s -1之剪切速率下量測。
- 如請求項1至67中任一項之醫藥組合物,其中該醫藥組合物之黏度及該參考醫藥組合物之黏度係在相同剪切速率下量測。
- 如請求項1至68中任一項之醫藥組合物,其中該醫藥組合物之黏度係剪切減黏的。
- 如請求項1至69中任一項之醫藥組合物,其中如在至少約1,000 s -1之剪切速率下所量測,該醫藥組合物之黏度為約、至多約或至少約0.1 cP、0.2 cP、0.3 cP、0.4 cP、0.5 cP、0.6 cP、0.7 cP、0.8 cP、0.9 cP、1 cP、2 cP、3 cP、4 cP、5 cP、10 cP、20 cP、25 cP、30 cP、35 cP、40 cP、50 cP、60 cP、70 cP、80 cP、90 cP、100 cP、150 cP、200 cP、250 cP、300 cP、350 cP、400 cP、450 cP、500 cP、550 cP、600 cP、650 cP、700 cP、750 cP、800 cP、850 cP、900 cP、950 cP、1000 cP、1500 cP、2000 cP、2500 cP、3000 cP、3500 cP、4000 cP、4500 cP、5000 cP或10000 cP。
- 如請求項70之醫藥組合物,其中該醫藥組合物之黏度係在至少約1,000 s -1、2,000 s -1、3,000 s -1、4,000 s -1、5,000 s -1、6,000 s -1、7,000 s -1、8,000 s -1、9,000 s -1、10,000 s -1、15,000 s -1、20,000 s -1或30,000 s -1之剪切速率下量測。
- 如請求項1至71中任一項之醫藥組合物,其中如在約5,000 s -1之剪切速率下所量測,該醫藥組合物之黏度為約或至多約35 cP。
- 如請求項1至71中任一項之醫藥組合物,其中如在約10,000 s -1之剪切速率下所量測,該醫藥組合物之黏度為約或至多約25 cP。
- 如請求項1至71中任一項之醫藥組合物,其中如在至多約1 s -1之剪切速率下所量測,該醫藥組合物之黏度為約或至少約500 cP。
- 如請求項1至71中任一項之醫藥組合物,其中如在至多約1 s -1之剪切速率下所量測,該醫藥組合物之黏度為約或至少約1500 cP。
- 如請求項1至71中任一項之醫藥組合物,其中如在至少約1000 s -1之剪切速率下所量測,該醫藥組合物之黏度為約或至多約362 cP。
- 如請求項3至76中任一項之醫藥組合物,其中如在至少約1000 s -1之剪切速率下所量測,該參考醫藥組合物之黏度為約或至多約0.1 cP、0.2 cP、0.3 cP、0.4 cP、0.5 cP、0.6 cP、0.7 cP、0.8 cP、0.9 cP、1 cP、1.1 cP、1.2 cP、1.3 cP、1.4 cP、1.5 cP、1.6 cP、1.7 cP、1.8 cP、1.9 cP、2 cP、2.1 cP、2.2 cP、2.3 cP、2.4 cP、2.5 cP、2.6 cP、2.7 cP、2.8 cP、2.9 cP、3 cP、3.1 cP、3.2 cP、3.3 cP、3.4 cP、3.5 cP、3.6 cP、3.7 cP、3.8 cP、3.9 cP、4 cP、4.1 cP、4.2 cP、4.3 cP、4.4 cP、4.5 cP、4.6 cP、4.7 cP、4.8 cP、4.9 cP或5 cP。
- 如請求項3至77中任一項之醫藥組合物,其中如在至多約1 s -1之剪切速率下所量測,該參考醫藥組合物之黏度為約或至多約0.1 cP、0.2 cP、0.3 cP、0.4 cP、0.5 cP、0.6 cP、0.7 cP、0.8 cP、0.9 cP、1 cP、1.1 cP、1.2 cP、1.3 cP、1.4 cP、1.5 cP、1.6 cP、1.7 cP、1.8 cP、1.9 cP、2 cP、2.1 cP、2.2 cP、2.3 cP、2.4 cP、2.5 cP、2.6 cP、2.7 cP、2.8 cP、2.9 cP、3 cP、3.1 cP、3.2 cP、3.3 cP、3.4 cP、3.5 cP、3.6 cP、3.7 cP、3.8 cP、3.9 cP、4 cP、4.1 cP、4.2 cP、4.3 cP、4.4 cP、4.5 cP、4.6 cP、4.7 cP、4.8 cP、4.9 cP或5 cP。
- 如請求項1至78中任一項之醫藥組合物,其中如在至少約1000 s -1之剪切速率下所量測,該醫藥組合物之黏度為約0.5 cP至約400 cP。
- 如請求項1至79中任一項之醫藥組合物,其中該醫藥組合物包含經改良之杜貝爾寇磷酸鹽緩衝鹽水溶液(modified Dulbecco’s phosphate-buffered saline solution)及視情況選用之界面活性劑。
- 如請求項1至80中任一項之醫藥組合物,其中該醫藥組合物包含氯化鉀、磷酸二氫鉀、氯化鈉、無水磷酸氫二鈉、蔗糖及視情況選用之一或多種界面活性劑。
- 如請求項1至81中任一項之醫藥組合物,其中該醫藥組合物包含0.2 mg/mL氯化鉀、0.2 mg/mL磷酸二氫鉀、5.84 mg/mL氯化鈉、1.15 mg/mL無水磷酸氫二鈉、40.0 mg/mL (4% w/v)蔗糖及視情況選用之界面活性劑。
- 如請求項1至82中任一項之醫藥組合物,其中該醫藥組合物包含氯化鉀;磷酸二氫鉀;氯化鈉;無水磷酸氫二鈉;蔗糖;一或多種界面活性劑,其選自泊洛沙姆188、聚山梨醇酯20及聚山梨醇酯80;及一或多種黏度調節劑,其選自高黏度級CMC、中等黏度級CMC、低黏度級CMC、羥丙基甲基纖維素(HPMC)、羥乙基纖維素(HES)及泊洛沙姆407。
- 如請求項1至83中任一項之醫藥組合物,其中該醫藥組合物包含氯化鉀;磷酸二氫鉀;氯化鈉;無水磷酸氫二鈉;蔗糖;視情況選用之一或多種界面活性劑,其選自泊洛沙姆188、聚山梨醇酯20及聚山梨醇酯80;及視情況選用之一或多種黏度調節劑,其選自0.5%高黏度級CMC、1%高黏度級CMC、0.5%中等黏度級CMC、低黏度級CMC、0.5%羥丙基甲基纖維素(HPMC)、0.2% HPMC、2%羥乙基纖維素(HES)及15%泊洛沙姆407。
- 如請求項1至84中任一項之醫藥組合物,其中該醫藥組合物包含氯化鉀;磷酸二氫鉀;氯化鈉;無水磷酸氫二鈉;蔗糖;一或多種界面活性劑,其選自泊洛沙姆188、聚山梨醇酯20及聚山梨醇酯80;及一或多種多醣,其選自CMC、HPMC及HES。
- 如請求項1至85中任一項之醫藥組合物,其中該醫藥組合物包含0.2 mg/mL氯化鉀、0.2 mg/mL磷酸二氫鉀、5.84 mg/mL氯化鈉、1.15 mg/mL無水磷酸氫二鈉、40.0 mg/mL (4% w/v)蔗糖、0.001% (0.01 mg/mL)泊洛沙姆188及1%高黏度級羧甲基纖維素(CMC)。
- 如請求項1至86中任一項之醫藥組合物,其中該醫藥組合物係儲存在約室溫、20℃、4℃或-80℃下。
- 如請求項1至87中任一項之醫藥組合物,其中該醫藥組合物在投與至人類個體之前經儲存。
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