TW202216189A - 日本腦炎預防劑及日本腦炎疫苗劑 - Google Patents
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Abstract
本發明之課題為提供一種即使以比皮下注射日本腦炎疫苗之投予量還低的投予量、或比皮下注射日本腦炎疫苗之投予次數還少的投予次數,亦可對於人類賦予充分的免疫之日本腦炎預防劑及日本腦炎疫苗劑。如根據本發明,則可提供一種包含微針陣列的日本腦炎預防劑,該微針陣列具有片部、與存在於片部之上面的複數針部,且上述針部內包或擔持不活化日本腦炎病毒。
Description
本發明有關於一種包含微針陣列的日本腦炎預防劑及日本腦炎疫苗劑,該微針陣列內包或擔持不活化日本腦炎病毒。
作為用以投予適量的藥物且達成充分的藥效之藥物的投予方法,如下方法正受到注目:一種將藥物不伴隨痛苦地注入皮膚內的方法,其係使用形成有含藥物之高長寬比的微針(針部)之微針陣列,且藉由微針來貫穿角質障壁層。例如,已報告以具有活體內溶解性之物質作為基材的自我溶解型微針陣列。可於自我溶解型微針陣列中,使其基材保有藥物,且於微針被插入皮膚之際基材自我溶解,藉此而將藥物投予至皮膚內。
專利文獻1中記載一種微針裝置,係具備基板、被配置在基板上的微針、以及於微針上形成的塗布層之微針裝置,微針的長度為300~500μm,且微針以28~80根/cm
2的密度被配置在基板上,而塗布層含有生理活性物質。專利文獻1中記載塗布層含有日本腦炎疫苗之微針裝置對動物的皮膚刺激性。
專利文獻2中記載一種微針陣列,係具有片部、與存在於片部之上面的複數針部之微針陣列,其中針部含有電中性的水溶性高分子及雙醣類之中的至少一種、日本腦炎疫苗、及電中性的界面活性劑,片部含有電中性的水溶性高分子及雙醣類之中的至少一種。
[先前技術文獻]
[專利文獻]
[專利文獻1]國際公開WO2018/155431
[專利文獻2]國際公開WO2019/225650
[發明欲解決之課題]
專利文獻1中並無有關於對人類投予之際的中和抗體價或皮膚刺激性之記載。非專利文獻1中並未顯示在微針與肌肉內注射之間有中和抗體價及陽轉率之顯著差異,而且亦無有關於日本腦炎疫苗之記載。
市售的皮下注射日本腦炎疫苗係作為初次免疫而必須以1~4週的間隔接種2次,且進一步於初次免疫後經過了1年的時期進行追加免疫,以合計3次的接種而完成基礎免疫。所以,需要大量的日本腦炎疫苗。但是,相較於一般的醫藥品而需要許多時間來生產的疫苗,也有因意外而供給不足之情形。
本發明以提供一種日本腦炎預防劑及日本腦炎疫苗劑作為應解決之課題,其係即使以比皮下注射日本腦炎疫苗之投予量還低的投予量、或比皮下注射日本腦炎疫苗之投予次數還少的投予次數,亦可對於人類賦予充分的免疫。
[用以解決課題之手段]
本發明人等為了解決上述課題而專心致力研討的結果發現:藉由使用具有片部、與內包或擔持不活化日本腦炎病毒之複數針部的微針陣列,而就不活化日本腦炎病毒之投予量而言,即使於皮下注射日本腦炎疫苗之投予量的1/4量下,作為對人類之初次免疫而會以1次的投予顯示與皮下注射2次投予之情形同等的陽轉率,於皮下注射日本腦炎疫苗之投予量的1/10量下,亦以2次的投予顯示與皮下注射之情形同等的陽轉率。本發明係基於此等見解而完成者。
亦即,如根據本發明,則可提供以下的發明。
(1)一種日本腦炎預防劑,其包含微針陣列,該微針陣列具有片部、與存在於片部之上面的複數針部,且上述針部內包或擔持不活化日本腦炎病毒。
(2)如(1)所記載之日本腦炎預防劑,其係以0.01μg~2.5μg/次的用量來投予不活化日本腦炎病毒。
(3)如(1)或(2)所記載之日本腦炎預防劑,其投予次數為1次或2次。
(4)如(1)至(3)中任一者記載的日本腦炎預防劑,其係以0.01μg~0.22μg/次的用量來投予不活化日本腦炎病毒2次。
(5)如(1)至(3)中任一者記載的日本腦炎預防劑,其係以0.23μg~1μg/次的用量來投予不活化日本腦炎病毒1次或2次。
(6)如(1)至(5)中任一者記載的日本腦炎預防劑,其中微針陣列為自我溶解型,且針部內包不活化日本腦炎病毒。
(7)如(1)至(6)中任一者記載的日本腦炎預防劑,其中針部含有水溶性高分子及雙醣類之中的至少一種、不活化日本腦炎病毒、及界面活性劑,且片部含有水溶性高分子及雙醣類之中的至少一種。
(8)如(1)至(7)中任一者記載的日本腦炎預防劑,其初次投予2週後的中和抗體價為1.0以上;其中,使藉由階段性地稀釋自日本腦炎預防劑的投予起2週後的對象所採集之血清而得到的20μL血清樣品、與80pfu的日本腦炎病毒,於37℃及5%CO
2下進行反應1.5小時,且使反應後的混合液25μL感染2.0×10
4個細胞的Vero細胞而於37℃及5%CO
2下培養6天,此時,以50%以上抑制了日本腦炎病毒所致細胞病變效應(cytopathic effect)之血清的最大稀釋倍數的常用對數作為中和抗體價。
(9)一種日本腦炎疫苗劑,其包含微針陣列,該微針陣列具有片部、與存在於片部之上面的複數針部,且上述針部內包或擔持不活化日本腦炎病毒。
(10)如(9)所記載之日本腦炎疫苗劑,其係以0.01μg~2.5μg/次的用量來投予不活化日本腦炎病毒。
(11)如(9)或(10)所記載之日本腦炎疫苗劑,其投予次數為1次或2次。
(12)如(9)至(11)中任一者記載的日本腦炎疫苗劑,其係以0.01μg~0.22μg/次的用量來投予不活化日本腦炎病毒2次。
(13)如(9)至(11)中任一者記載的日本腦炎疫苗劑,其係以0.23μg~1μg/次的用量來投予不活化日本腦炎病毒1次或2次。
(14)如(9)至(13)中任一者記載的日本腦炎疫苗劑,其中微針陣列為自我溶解型,且針部內包不活化日本腦炎病毒。
(15)如(9)至(14)中任一者記載的日本腦炎疫苗劑,其中針部含有水溶性高分子及雙醣類之中的至少一種、不活化日本腦炎病毒、及界面活性劑,且片部含有水溶性高分子及雙醣類之中的至少一種。
(16)如(9)至(15) 中任一者記載的日本腦炎疫苗劑,其初次投予2週後的中和抗體價為1.0以上;其中,使藉由階段性地稀釋自日本腦炎疫苗劑的投予起2週後的對象所採集之血清而得到的20μL血清樣品、與80pfu的日本腦炎病毒,於37℃及5%CO
2下進行反應1.5小時,且使反應後的混合液25μL感染2.0×10
4個細胞的Vero細胞而於37℃及5%CO
2下培養6天,此時,以50%以上抑制了日本腦炎病毒所致細胞病變效應之血清的最大稀釋倍數的常用對數作為中和抗體價。
(A)一種日本腦炎的預防方法,其包含將微針陣列投予至對象,該微針陣列具有片部、與存在於片部之上面的複數針部,且上述針部內包或擔持不活化日本腦炎病毒。
(B)一種賦予對日本腦炎之免疫的方法,其包含將微針陣列投予至對象,該微針陣列具有片部、與存在於片部之上面的複數針部,且上述針部內包或擔持不活化日本腦炎病毒。
(C)一種微針陣列,其用以於用以預防日本腦炎的處置中使用,該微針陣列具有片部、與存在於片部之上面的複數針部,上述針部內包或擔持不活化日本腦炎病毒。
(D)一種微針陣列,其用以於用以賦予對日本腦炎之免疫的處置中使用,該微針陣列具有片部、與存在於片部之上面的複數針部,且上述針部內包或擔持不活化日本腦炎病毒。
(E)一種微針陣列的用途,係用以製造日本腦炎預防劑,該微針陣列具有片部、與存在於片部之上面的複數針部,且上述針部內包或擔持不活化日本腦炎病毒。
(F)一種微針陣列的用途,係用以製造日本腦炎疫苗劑,該微針陣列具有片部、與存在於片部之上面的複數針部,且上述針部內包或擔持不活化日本腦炎病毒。
[發明之效果]
如根據本發明,則即使以比皮下注射日本腦炎疫苗之投予量還低的投予量、或比皮下注射日本腦炎疫苗之投予次數還少的投予次數,亦可對於人類賦予充分的免疫。
[用以實施發明的形態]
以下,針對本發明之實施形態詳細地進行說明。
於本說明書中,所謂「含有不活化日本腦炎病毒」,意指於對體表進行穿刺之際,含有可發揮日本腦炎疫苗效果之量的不活化日本腦炎病毒。所謂「不含有不活化日本腦炎病毒」,意指未含有可發揮日本腦炎疫苗效果之量的不活化日本腦炎病毒,不活化日本腦炎病毒之量的範圍包含完全不含有不活化日本腦炎病毒之情形至無法發揮效果之量為止的範圍。
於本說明書中,製劑中的不活化日本腦炎病毒之量意指作為蛋白質含量而含有之量。
本發明有關於一種包含微針陣列的日本腦炎預防劑及日本腦炎疫苗劑,該微針陣列具有片部、與存在於片部之上面的複數針部,且上述針部內包或擔持不活化日本腦炎病毒。
如根據本發明,則相較於皮下注射日本腦炎疫苗,可使不活化日本腦炎病毒之初次免疫中的投予次數降低,可減少不活化日本腦炎病毒之每1次的用量,進一步可得到與皮下注射相比為同等以上的中和抗體價。
所謂日本腦炎預防劑,意指為了日本腦炎的預防而使用的醫藥。
所謂日本腦炎疫苗劑,意指含有不活化日本腦炎病毒作為有效成分之疫苗,且為了賦予對日本腦炎之免疫而使用的醫藥。
[日本腦炎預防劑及日本腦炎疫苗劑的投予]
於以人類為對象而投予本發明之日本腦炎預防劑及日本腦炎疫苗劑之情形,較佳為以0.01μg~2.5μg/次的用量來投予不活化日本腦炎病毒,更佳為以0.01μg~2μg/次的用量來投予,進一步較佳為以0.01μg~1μg/次的用量來投予。
本發明之日本腦炎預防劑及日本腦炎疫苗劑之投予次數並未被特別限定,但較佳為1次或2次。
於以人類為對象而投予本發明之日本腦炎預防劑及日本腦炎疫苗劑之情形,較佳為例如以0.01μg~0.22μg/次的用量來投予不活化日本腦炎病毒2次、或以0.23μg~1μg/次的用量來投予不活化日本腦炎病毒1次或2次。
使用本發明之日本腦炎預防劑或日本腦炎疫苗劑之情形,初次投予2週後的中和抗體價較佳為1.0以上,更佳為1.1以上,進一步較佳為1.2以上。初次投予2週後的中和抗體價亦可為1.5以上、1.8以上、2.0以上、或2.4以上。
本發明之日本腦炎預防劑或日本腦炎疫苗劑,可以初次投予2週後的中和抗體價成為如1.0以上(或者亦可為1.1以上、1.2以上、1.5以上、1.8以上、2.0以上、或2.4以上)的用量來使用。所謂中和抗體價,係藉由以下的方法所測定者。使藉由階段性地稀釋自日本腦炎預防劑或日本腦炎疫苗劑的投予起2週後的對象所採集之血清而得到的20μL血清樣品、與80pfu的日本腦炎病毒,於37℃及5%CO
2下進行反應1.5小時。使反應後的混合液25μL感染2.0×10
4個細胞的Vero細胞而於37℃及5%CO
2下進行6天培養。以於上述培養之際,50%以上抑制了日本腦炎病毒所致細胞病變效應之血清的最大稀釋倍數的常用對數作為中和抗體價。
[微針陣列的構成]
本發明中之微針陣列,係具有片部、與存在於片部之上面的複數針部之微針陣列,且針部內包或擔持不活化日本腦炎病毒。於本發明中,所謂複數意指1個以上。
微針陣列係複數針部於片部之上面側被配置為陣列狀。針部較佳為被配置在片部之上面側。針部亦可直接被配置在片部之上面,或針部亦可被配置在經配置於片部之上面的構件(較佳為具有錐台部之形狀的構件)之上面。
就微針陣列而言,可舉出以下的樣態。
在第一樣態,針部內包不活化日本腦炎病毒,且於針部被插入皮膚之際,針部溶解而可將不活化日本腦炎病毒投予至皮膚內(以下,有時稱為自我溶解型微針陣列)。
在第二樣態,於針部的表面具有經塗布或擔持之不活化日本腦炎病毒,且於針部被插入皮膚之際,針部在活體內並不溶解,而可將在針部的表面之不活化日本腦炎病毒投予至皮膚內(以下,有時稱為塗布型微針陣列)。
較佳為:微針陣列為自我溶解型,且針部內包不活化日本腦炎病毒。
[自我溶解型微針陣列]
針部的高度(長度),係以從針部的尖端往錐台部或片部(錐台部不存在之情形)垂下之垂線的長度來表示。針部的高度(長度)並未被特別限定,但較佳為50μm以上3000μm以下,更佳為100μm以上1500μm以下,進一步較佳為100μm以上1000μm以下。若針部的長度為50μm以上,則可進行不活化日本腦炎病毒的經皮投予,又藉由使針部的長度為3000μm以下,而會防止針部接觸神經所致疼痛的發生,又可避免出血,所以為較佳。
針部係較佳為每1個微針陣列配置有1~2000根,更佳為配置有3~1000根,進一步較佳為配置有5~500根。每1個微針陣列包含2根針部之情形,針部的間隔係以從針部的尖端往錐台部或片部(錐台部不存在之情形)垂下之垂線的末端之間的距離來表示。每1個微針包含3根以上的針部之情形,所配列之針部的間隔係於全部針部中對於各自最鄰近的針部求出從尖端往錐台部或片部(錐台部不存在之情形)垂下之垂線的末端之間的距離,且以其平均值來表示。針部的間隔較佳為0.1mm以上10mm以下,更佳為0.2mm以上5mm以下,進一步較佳為0.3mm以上3mm以下。
針部含有不活化日本腦炎病毒。針部較佳為進一步含有水溶性高分子及雙醣類之中的至少一種,更佳為進一步含有電中性的水溶性高分子及雙醣類之中的至少一種。針部係因應需要而含有界面活性劑(較佳為電中性的界面活性劑)。
針部含有不活化日本腦炎病毒。可使用例如:將日本腦炎病毒由Vero細胞(源自非洲綠猴腎臟的細胞株)之培養液所調製的福馬林不活化病毒調配物;由感染日本腦炎病毒之小鼠的腦所調製的福馬林不活化病毒調配物等。
針部整體中之不活化日本腦炎病毒的含量並未被特別限定,但就質量%而言,相對於針部的固體成分質量,較佳為0.0001~10質量%,更佳為0.0001~1質量%,特佳為0.0001~0.5質量%。
針部整體中之不活化日本腦炎病毒的含量,若調整每1片微針陣列之不活化日本腦炎病毒的含量,使其適合本發明的用量用法即可。就每1片微針陣列之不活化日本腦炎病毒的含量而言,並未被特別限定,但作為蛋白質含量,較佳為0.01~2.5μg,更佳為0.01~2μg。
針部較佳為含有界面活性劑(較佳為電中性的界面活性劑,更佳為非離子性界面活性劑)。作為界面活性劑,可舉出例如蔗糖脂肪酸酯等之糖醇脂肪酸酯、山梨醇酐脂肪酸酯、甘油脂肪酸酯、聚甘油脂肪酸酯、丙二醇脂肪酸酯、聚氧乙烯山梨醇酐脂肪酸酯、聚氧乙烯甘油脂肪酸酯、聚乙二醇脂肪酸酯、聚氧乙烯/聚氧丙烯共聚聚合物、聚氧乙烯蓖麻油、聚氧乙烯硬化蓖麻油、辛基苯酚乙氧基化物(octylphenol ethoxylate)等。上述之中,又特佳為山梨醇酐脂肪酸酯、聚氧乙烯/聚氧丙烯共聚聚合物、或聚氧乙烯硬化蓖麻油。就界面活性劑而言,亦可使用Tween(註冊商標)80、Pluronic(註冊商標)F-68、HCO-60、Triton(註冊商標)-X等之市售品。
界面活性劑的添加量並未被特別限定,但較佳為每1片微針陣列(面積為1cm
2)0.01μg以上,更佳為0.1μg以上。
就針部所含的水溶性高分子而言,並未被特別限定,但可舉出多醣類、聚乙烯吡咯啶酮、聚氧乙烯聚氧丙烯二醇、聚乙二醇、聚乙烯醇。就上述多醣類而言,可舉出例如普魯蘭多糖(pullulan)、右旋糖聚糖(dextran)、糊精、纖維素衍生物(例如,羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素等之將纖維素部分改質的水溶性纖維素衍生物)、羥乙基澱粉、阿拉伯膠等。上述成分可單獨使用1種,亦可作成2種以上的混合物來使用。水溶性高分子較佳為可在活體內溶解之物質(活體溶解性物質),以使針部即使殘留於皮膚內亦不對人體造成妨礙。
上述之中,針部所含的水溶性高分子又較佳為選自包含羥乙基澱粉、右旋糖聚糖、聚乙烯吡咯啶酮、聚氧乙烯聚氧丙烯二醇、聚乙二醇及聚乙烯醇之群組的至少1種,特佳為羥乙基澱粉。進一步為了於與不活化日本腦炎病毒之混合時不易凝聚,更佳為不帶電荷之多醣類。針部所含的水溶性高分子可以與片部所含的水溶性高分子相同,亦可不同。
針部所含的水溶性高分子的重量(質量)平均分子量,係較佳為5000以上100,000以下,更佳為10,000以上100,000以下,進一步較佳為30,000以上90,000以下。
於針部(尤其是針部尖端區域)亦可含有雙醣類,就雙醣類而言,可舉出蔗糖、乳果糖、乳糖、麥芽糖、海藻糖或纖維雙糖等,特佳為蔗糖。
針部的總固體成分較佳為50質量%以上為水溶性高分子或雙醣類。針部的總固體成分更佳為55質量%以上,進一步較佳為60質量%以上,特佳為65質量%以上。
上限並未被特別限定,但較佳為針部的總固體成分的99質量%以下為水溶性高分子或雙醣類,更佳為針部的總固體成分的95質量%以下為水溶性高分子或雙醣類,進一步較佳為針部的總固體成分的90質量%以下為水溶性高分子或雙醣類。
針部的總固體成分的50質量%以上為水溶性高分子或雙醣類之情形,可達成良好的穿刺性及良好的藥效。
針部的總固體成分中之水溶性高分子或雙醣類的比率可藉由以下的方法來測定,但並未被特別限定。就測定方法而言,例如可將所製作之微針陣列的針部切斷,使針部溶解於緩衝液(磷酸緩衝生理食鹽水(PBS)等適於溶解構成針部之水溶性高分子的緩衝液)中,以高效能液相層析法來測定溶液中的水溶性高分子或雙醣類之量。
片部係用以支持針部的基座。片部具有如圖1~圖8所示片部116之平面狀的形狀。所謂片部之上面,係指複數針部於面上被配置為陣列狀之面。
片部的面積並未被特別限定,但較佳為0.005~1000mm
2,更佳為0.05~500mm
2,進一步較佳為0.1~400mm
2。
片部的厚度,係以與錐台部或針部相接之面、和相反側之面之間的距離來表示。片部的厚度較佳為1μm以上2000μm以下,更佳為3μm以上1500μm以下,進一步較佳為5μm以上1000μm以下。
片部較佳為含有水溶性高分子及雙醣類之中的至少一種,更佳為含有電中性的水溶性高分子及雙醣類之中的至少一種。於片部亦可含有上述以外的添加物(例如,帶有電荷之水溶性高分子等)。再者,於片部較佳為不含有不活化日本腦炎病毒。
片部所含的水溶性高分子並未被特別限定,但可舉出多醣類、聚乙烯吡咯啶酮、聚氧乙烯聚氧丙烯二醇、聚乙二醇、聚乙烯醇。上述多醣類,係可舉出例如普魯蘭多糖、右旋糖聚糖、糊精、纖維素衍生物(例如,羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素等之將纖維素部分改質的水溶性纖維素衍生物)、羥乙基澱粉、阿拉伯膠等。上述成分可單獨使用1種,亦可作成2種以上的混合物來使用。
上述之中,作為片部所含的水溶性高分子,又較佳為選自包含羥乙基澱粉、右旋糖聚糖、聚乙烯吡咯啶酮、聚氧乙烯聚氧丙烯二醇、聚乙二醇及聚乙烯醇之群組的至少1種,特佳為羥乙基澱粉。
片部所含的水溶性高分子的重量(質量)平均分子量,係較佳為5000以上100,000以下,更佳為10,000以上100,000以下,進一步較佳為30,000以上90,000以下。
片部可含有雙醣類。雙醣類可舉出蔗糖、乳果糖、乳糖、麥芽糖、海藻糖或纖維雙糖等,特佳為蔗糖。
特佳為使用針部含有水溶性高分子及雙醣類之中的至少一種、不活化日本腦炎病毒、及界面活性劑,且片部含有水溶性高分子及雙醣類之中的至少一種的微針陣列。
微針陣列係由在片部之上面側被配置為陣列狀的複數針部所構成。針部為具有尖端的凸狀結構物,並不被限定為具有銳利尖端的針形狀,尖端亦可為前端並不尖銳之形狀。
針部的形狀並未被特別限定,可舉出圓錐狀、多角錐狀(四角錐狀等)、或紡錘狀等。例如,可為具有如圖1~圖8所示針部112之形狀,且針部整體的形狀為圓錐狀或多角錐狀(四角錐狀等),亦可為使針部側面的傾斜(角度)連續地變化之結構。又,亦可採用針部側面的傾斜(角度)非連續地變化之二層或其以上的多層結構。
將微針陣列應用於皮膚之情形,較佳為使針部被插入皮膚,且片部之上面或其一部分與皮膚鄰接。
於片部與複數針部之間具有複數錐台部之情形,針部係被配置在經配置於片部之上面的錐台部之上面。在此樣態,係較佳為:針部的尖端區域含有水溶性高分子及雙醣類之中的至少一種及不活化日本腦炎病毒,且錐台部及片部含有水溶性高分子及雙醣類之中的至少一種。針部及片部所含的水溶性高分子可相同,亦可為不同者。
將錐台部(但是,於錐台部不存在之情形則為針部)與片部之界面稱為基底部。1個針部的基底中之最遠的點間的距離係較佳為50μm以上2000μm以下,更佳為100μm以上1500μm以下,進一步較佳為200μm以上1000μm以下。
[塗布型微針陣列]
於塗布型微針陣列中,針部的高度(長度)、針部的根數、針部的間隔、針部整體中之不活化日本腦炎病毒的含量、每1片微針陣列之不活化日本腦炎病毒的含量、片部的面積、片部的厚度、針部的形狀、錐台部的有無等,係可與自我溶解型微針陣列同樣地設定。
作為塗布型微針陣列之針部及片部的材料,亦可使用與自我溶解型微針陣列相同的材料,但較佳為由無機材料及樹脂材料之至少一個所構成。作為無機材料,可舉出聚矽氧、二氧化矽、陶瓷、不銹鋼、鐵、鋁、鈦、鎳、鉬、鉻、鈷、銅、鉛、鈮、鉭、鋯、錫、金、銀等之金屬、及彼等的合金。又,作為樹脂材料,可舉出聚乳酸、聚甘醇酸(polyglycolide)、聚乳酸-co-聚甘醇酸、普魯蘭多糖、己內酯、聚胺甲酸酯、聚酐等之生物可分解(biodegradable)聚合物;聚碳酸酯、聚甲基丙烯酸、乙烯-醋酸乙烯酯、聚四氟乙烯、丙烯腈-丁二烯-苯乙烯共聚物、環烯烴聚合物(COP)、環烯烴共聚物(COC)等之不可分解(nondegradable)聚合物等。
亦可實施表面容易濕潤的表面處理,使可將不活化日本腦炎病毒薄薄地塗布至針部的表面。使潤濕性增高的處理,可舉出例如使表面變粗的處理、電漿處理等。
[微針陣列之較佳形態]
以下按照附加的圖式針對本發明之較佳形態進行說明,但本發明並不被限定於此。
圖1~圖8呈示微針陣列之部分擴大圖的微針110。微針陣列係藉由於片部116的表面形成有複數個針部112而構成(於圖中,係表示於片部116上僅1個針部112、或者1個錐台部113與1個針部112,且將此稱為微針110)。針部112係由片部116的表面朝向針部112變細地被形成。針部112若是朝頂部方向作為整體而變細地突出,則其形狀並不被限定,例如亦可被形成為不同角數的其他角錐、或圓錐。
於圖1A中,針部112具有圓錐狀的形狀,於圖1B中,針部112具有四角錐狀的形狀。於圖1C中,H表示針部112的高度,W表示針部112的直徑(寬度),T表示片部116的高度(厚度)。
圖2及圖3呈示具有於片部116的表面形成有錐台部113及針部112之別的形狀的微針110。於圖2中,錐台部113具有圓錐台的形狀,針部112具有圓錐的形狀。又,於圖3中,錐台部113具有四角錐台的形狀,針部112具有四角錐的形狀。但是,針部的形狀並不被限定為此等形狀。
圖4為圖2及圖3所示微針110之截面圖。於圖4中,H表示針部112的高度,W表示基底部的直徑(寬度),T表示片部116的高度(厚度)。
比起圖1C之微針110的形狀,微針陣列較佳為作成圖4之微針110的形狀。藉由採用這樣的結構,而針部整體的體積變大,且於微針陣列製造時,可使更多的不活化日本腦炎病毒集中在針部的上端。
圖5及圖6呈示具有其他別的形狀的微針110。
圖5所示針部第1層112A具有圓錐狀的形狀,針部第2層112B具有圓柱狀的形狀。圖6所示針部第1層112A具有四角錐狀的形狀,針部第2層112B具有四角柱狀的形狀。但是,針部的形狀並不被限定為此等形狀。
針部112之頂部之尖端的形狀若能夠將皮膚穿刺而於角質層設下貫穿孔,則並未被特別限定。針部112之頂部21可不是完全的頂點,亦可具有能夠將皮膚穿刺之程度的曲面或平面。
圖7為圖5及圖6所示微針110之截面圖。於圖7中,H表示針部112的高度,W表示基底部的直徑(寬度),T表示片部116的高度(厚度)。
圖8為針部112之側面的傾斜(角度)連續地變化之別的形狀的微針之截面圖。於圖8中,H表示針部112的高度、T表示片部116的高度(厚度)。
於微針陣列中,針部較佳為於橫列以每1mm約0.1~10根的間隔來配置。微針陣列更佳為每1cm
2有1~10000根微針。藉由使微針的密度為1根/cm
2以上,而可效率良好地將皮膚穿孔,又藉由使微針的密度為10000根/cm
2以下,而微針陣列能夠充分地穿刺。針部的密度係較佳為10~5000根/cm
2,進一步較佳為25~1000根/cm
2,特佳為25~400根/cm
2。
微針陣列可以與乾燥劑一起被密封保存之形態來供給。就乾燥劑而言,可使用習知的乾燥劑(例如矽膠、生石灰、氯化鈣、矽鋁、片狀乾燥劑等)。
[自我溶解型微針陣列的製造方法]
自我溶解型微針陣列可依據例如日本特開2013-153866號公報或國際公開WO2014/077242號公報所記載之方法,而藉由以下的方法來製造。
就自我溶解型微針陣列的製造方法而言,並未被特別限定,但較佳為藉由包含以下步驟的製造方法獲得:(1)模具的製造步驟;(2)調製含有水溶性高分子及雙醣類的至少一種、不活化日本腦炎病毒之溶液的步驟;(3)將(2)中所得之溶液填充至模具,且形成針部尖端區域的步驟;(4)將含有水溶性高分子及雙醣類的至少一種之溶液填充至模具,且形成針部之殘餘部、(期望的錐台部)、及片部的步驟;(5)從模具剝離的步驟。
(模具的製作)
圖9A至9C為模具(型)的製作之步驟圖。如圖9A所示地,先製作用以製作模具的原版。此原版11的製作方法有2種類。
第1種方法係將光阻劑塗布至Si基板上之後,進行曝光、顯影。然後,藉由進行利用RIE(反應性離子蝕刻(reactive ion etching))等之蝕刻,而於原版11的表面製作圓錐之形狀部(凸部)12的陣列。此外,於進行RIE等之蝕刻而於原版11的表面使圓錐之形狀部形成之際,能夠藉由一邊使Si基板旋轉一邊進行自斜方向的蝕刻,而形成圓錐的形狀。第2種方法,係有藉由在Ni等之金屬基板使用 金剛石鑽頭等之切削工具的加工,而於原版11的表面形成四角錐等之形狀部12的陣列之方法。
接著,進行模具的製作。具體而言,如圖9B所示地,由原版11來製作模具13。就方法而言,有以下的4個方法。
第1種方法,係對原版11灌注將於PDMS(聚二甲基矽氧烷,例如Dow Corning Corp.製的SYLGARD 184(註冊商標))添加硬化劑而成的聚矽氧樹脂,於以100℃加熱處理且硬化之後,由原版11來剝離之方法。第2種方法,係對原版11灌注藉由照射紫外線而硬化之UV(紫外線)硬化樹脂,於在氮氣環境中照射紫外線之後,由原版11來剝離之方法。第3種方法,係對已塗布剝離劑的原版11灌注使聚苯乙烯或PMMA(聚甲基丙烯酸甲酯)等之塑料樹脂溶解於有機溶劑而成的溶液,於藉由進行乾燥而使有機溶劑揮發而使其硬化之後,由原版11來剝離之方法。第4種方法,係藉由Ni電鑄而製成反轉物之方法。
藉此,製作針狀凹部15經以2維配列進行配列而成的模具13,該針狀凹部15為原版11之圓錐形或角錐形的反轉形狀。於圖9C呈示如此進行所製作的模具13。
圖10係呈示其他較佳模具13之樣態者。針狀凹部15具備從模具13的表面對深度方向變窄之錐體狀的入口部15A、與於深度方向漸尖的尖端凹部15B。藉由使入口部15A成為錐體形狀,而容易將溶液填充至針狀凹部15。
圖11係呈示在進行微針陣列的製造上為更佳模具複合體18之樣態者。圖11中,(A)部表示模具複合體18。圖11中,(B)部為(A)部之中,被圓框住之部分的擴大圖。
如圖11之(A)部所示地,模具複合體18係具備:於針狀凹部15的尖端(底)形成有空氣排出孔15C之模具13;及被貼合在模具13的背面,且以氣體會透過但液體不會透過之材料形成的透氣片19。空氣排出孔15C被形成為貫穿模具13的背面的貫穿孔。此處,所謂模具13的背面係指形成有空氣排出孔15C之側的面。藉此,針狀凹部15的尖端係透過空氣排出孔15C、及透氣片19而與大氣連通。
藉由使用這樣的模具複合體18,而可不使被填充至針狀凹部15的溶液透過,且從針狀凹部15僅趕出存在於針狀凹部15的空氣。藉此,將針狀凹部15的形狀轉印到高分子的轉印性變得良好,可形成更尖銳的針部。
就空氣排出孔15C之徑D(直徑)而言,較佳為1~50μm的範圍。空氣排出孔15C之徑D小於1μm之情形,無法充分地盡到作為空氣排出孔的效用。又,空氣排出孔15C之徑D超過50μm之情形,會損及所成形的微針之尖端部的尖銳性。
就以氣體會透過但液體不會透過之材料所形成的透氣片19而言,可適當地使用例如透氣性膜(Sumitomo Electric Industries, Ltd.製,POREFLON(註冊商標),FP-010)。
就模具13所使用的材料而言,可使用彈性素材或金屬製素材,較佳為彈性素材,進一步較佳為透氣性高的素材。為透氣性之代表的透氧性,係較佳為1×10
-12(mL/s・m
2・Pa)以上,進一步較佳為1×10
-10
(mL/s・m
2・Pa)以上。再者,1mL為10
-6m
3。藉由使透氣性為上述範圍,而可從模側趕出存在於模具13之凹部的空氣,可製造缺陷少的微針陣列。作為這樣的材料,具體而言,可舉出使聚矽氧樹脂(例如Dow Corning Corp.製的SYLGARD 184(註冊商標)、Shin-Etsu Chemical Co., Ltd.的KE-1310ST(料號))、紫外線硬化樹脂、塑料樹脂(例如聚苯乙烯、PMMA(聚甲基丙烯酸甲酯))熔融、或溶解於溶劑而成者等。此等之中,聚矽氧橡膠系的素材又由於對於藉由反覆加壓的轉印有耐久性,且與素材之剝離性良好,因此較佳。又,就金屬製素材而言,可舉出Ni、Cu、Cr、Mo、W、Ir、Tr、Fe、Co、MgO、Ti、Zr、Hf、V、Nb、Ta、α-氧化鋁、氧化鋯、不銹鋼(例如,Böhler-Uddeholm公司(Bohler-Uddeholm KK)的Stavax材料(STAVAX)(商標))等或其合金。就框14的材質而言,可使用與模具13的材質同樣的材質之物。
(溶液)
於本發明中,較佳為準備:
(i)用以形成為針部之一部分的針部尖端區域之溶液,其含有水溶性高分子及雙醣類之中的至少一種、不活化日本腦炎病毒、及界面活性劑;以及
(ii)用以形成針部之中的針部尖端區域以外的針部根基區域與片部(或針部之中的針部尖端區域以外的針部根基區域、錐台部、及片部)之溶液,其含有水溶性高分子及雙醣類之中的至少一種。
水溶性高分子、雙醣類、及界面活性劑的種類係如以上本說明書所述。
上述溶液中之水溶性高分子或雙醣類的濃度,亦因所使用之物質的種類而有所不同,但一般而言,較佳為 1~50質量%。又,溶解所使用的溶媒即使為水以外,亦若為具有揮發性之物即可,可使用甲基乙基酮(MEK)、醇等。
(針部尖端區域的形成)
如圖12A所示地,具有經2維配列之針狀凹部15的模具13被配置在基座20之上。於模具13,係形成有經5×5的2維配列之2組複數針狀凹部15。準備供液裝置36,其具有收容含不活化日本腦炎病毒之溶液22的槽30、槽所接續的配管32、及配管32之尖端所接續的管嘴34。再者,本例中,係例示針狀凹部15以5×5被2維配列之情形,但針狀凹部15之個數並不被限定為5×5,若為以M×N(M及N各自獨立地表示1以上之任意的整數,較佳為2~30,更佳為3~25,進一步較佳為3~20)被2維配列即可。
圖13呈示管嘴之尖端部的概略斜視圖。如圖13所示地,於管嘴34之尖端,係具備為平坦面的唇部34A及狹縫形狀的開口部34B。藉由狹縫形狀的開口部34B,而例如能夠對於構成1列的複數針狀凹部15同時地填充含不活化日本腦炎病毒之溶液22。開口部34B的大小(長度與寬度),係因應於一次所應填充之針狀凹部15的數量而適當選擇。藉由使開口部34B的長度增長,而可於一次對於更多的針狀凹部15填充含不活化日本腦炎病毒之溶液22。藉此,能夠使生產性提升。
就管嘴34所使用的材料而言,可使用彈性素材或金屬製素材。可舉出例如,Teflon(註冊商標)、不銹鋼(SUS(鋼使用不銹鋼(Steel Use Stainless)))、鈦等。
如圖12B所示地,管嘴34的開口部34B係於針狀凹部15之上進行位置調整。管嘴34的唇部34A與模具13的表面接觸。含不活化日本腦炎病毒之溶液22由供液裝置36被供給至模具13,且含不活化日本腦炎病毒之溶液22由管嘴34的開口部34B被填充至針狀凹部15。本實施形態中,含不活化日本腦炎病毒之溶液22被同時地填充至構成1列的複數針狀凹部15。但是,並不被限定於此,也可以一個一個地填充至針狀凹部15之方式進行。
模具13由具有透氣性的素材所構成之情形,藉由自模具13的背面進行抽吸,而可抽吸含不活化日本腦炎病毒之溶液22,可促進含不活化日本腦炎病毒之溶液22往針狀凹部15內的填充。
參照圖12B,而接著填充步驟,如圖12C所示地,一邊使管嘴34的唇部34A與模具13的表面接觸,一邊於開口部34B的長度方向與垂直方向相對地移動供液裝置36,將管嘴34移動至尚未填充含不活化日本腦炎病毒之溶液22的針狀凹部15。管嘴34的開口部34B進行位置調整至針狀凹部15之上。本實施之形態中,係以使管嘴34移動之例進行說明,但亦可使模具13移動。
由於使管嘴34的唇部34A與模具13的表面接觸而移動,因此管嘴34可刮取殘餘在模具13的針狀凹部15以外的表面的含不活化日本腦炎病毒之溶液22。可以使含不活化日本腦炎病毒之溶液22不殘餘在模具13的針狀凹部15以外。
為了減少對模具13的損害、與儘可能地抑制模具13的壓縮所致變形,移動之際的管嘴34對模具13的按壓壓力較佳為儘量小。又,為了使含不活化日本腦炎病毒之溶液22不殘餘在模具13的針狀凹部15以外,而希望模具13或管嘴34的至少一者為可撓性之會彈性變形的素材。
藉由反覆進行圖12B之填充步驟、與圖12C之移動步驟,含不活化日本腦炎病毒之溶液22被填充至經5×5的2維配列之針狀凹部15。若含不活化日本腦炎病毒之溶液22被填充至經5×5的2維配列之針狀凹部15,則將供液裝置36移動至相鄰之經5×5的2維配列之針狀凹部15,反覆進行圖12B之填充步驟、與圖12C之移動步驟。含不活化日本腦炎病毒之溶液22亦被填充至相鄰之經5×5的2維配列之針狀凹部15。
關於上述填充步驟與移動步驟,可為(1)一邊移動管嘴34且一邊將含有不活化日本腦炎病毒之水溶液22填充至針狀凹部15之樣態,亦可為(2)於管嘴34的移動中,將管嘴34暫時靜止在針狀凹部15之上而填充含不活化日本腦炎病毒之溶液22,且於填充後再度移動管嘴34之樣態。填充步驟與移動步驟之間,管嘴34的唇部34A接觸模具13的表面。
圖14為將含不活化日本腦炎病毒之溶液22填充至針狀凹部15時之管嘴34之尖端與模具13的部分擴大圖。如圖15所示地,可藉由對管嘴34內施加加壓力P1,而促進往針狀凹部15內填充含不活化日本腦炎病毒之溶液22。進而較佳為:將往針狀凹部15內填充含不活化日本腦炎病毒之溶液22之際,使管嘴34接觸模具13的表面之按壓力P2,設為管嘴34內之加壓力P1以上。可藉由設為按壓力P2≧加壓力P1,而抑制含不活化日本腦炎病毒之溶液22從針狀凹部15漏出至模具13的表面。
圖15係管嘴34移動中的管嘴34之尖端與模具13的部分擴大圖。較佳為:將相對於模具13而相對地移動管嘴34之際,使管嘴34接觸模具13的表面之按壓力P3,設為小於使填充中的管嘴34接觸模具13的表面之按壓力P2。這是為了減少對模具13的損害,且抑制模具13的壓縮所致變形。
若對以5×5構成的複數針狀凹部15的填充結束,則管嘴34往相鄰之以5×5構成的複數針狀凹部15移動。關於供液,較佳為往相鄰之以5×5構成的複數針狀凹部15移動之際,停止含不活化日本腦炎病毒之溶液22的供給。從第5列的針狀凹部15到下一個第1列的針狀凹部15為止有距離。若其間於管嘴34移動中,持續供給含不活化日本腦炎病毒之溶液22,則會有管嘴34內的液壓變得過高之情形。其結果,會有含不活化日本腦炎病毒之溶液22從管嘴34流出到模具13的針狀凹部15以外之情形,為了抑制此,若於檢測管嘴34內的液壓且判定液壓變得過高之際,較佳為停止含不活化日本腦炎病毒之溶液22的供給。
再者,於上述中,係說明了使用具有管嘴的分注器(dispenser)來供給含不活化日本腦炎病毒之溶液的方法,但於利用分注器之塗布以外,亦可應用利用棒塗布、旋轉塗布、噴霧等之塗布等。
於本發明中,較佳為將含不活化日本腦炎病毒之溶液供給至針狀凹部之後,實施乾燥處理。
較佳為微針陣列可藉由以下步驟來製造:藉由乾燥經填充含不活化日本腦炎病毒之溶液的針部形成用模具,而形成針部的一部分之步驟;及於上述所形成之針部的一部分之上面,填充含有水溶性高分子及雙醣類之中的至少一種之溶液而進行乾燥之步驟。
就乾燥經填充含不活化日本腦炎病毒之溶液的針部形成用模具之際的條件而言,較佳為:乾燥開始後經過30分鐘至300分鐘以後,上述溶液的含水率到達20%以下之條件。
特佳為:上述乾燥可進行控制,而使其保持在不活化日本腦炎病毒不失效的溫度以下,且乾燥開始後經過60分鐘以上以後,溶液的含水率到達20%以下。
就上述之乾燥速度的控制方法而言,可採取例如溫度、濕度、乾燥風量、容器的使用、容器的容積及/或形狀等、能夠延緩乾燥之任意的手段。
乾燥較佳為可在以下狀態進行:將經填充含不活化日本腦炎病毒之溶液的針部形成用模具,蓋上容器之狀態或收容於容器之狀態。
乾燥之際的溫度較佳為1~45℃,更佳為1~40℃。
乾燥之際的相對濕度較佳為10~95%,更佳為20~95%,進一步較佳為30~95%。
(片部的形成)
針對形成片部之步驟,說明幾個樣態。
關於形成片部之步驟,針對第1樣態,參照圖16A至圖16D而進行說明。將含不活化日本腦炎病毒之溶液22由管嘴34填充至模具13的針狀凹部15。接著,如圖16B所示地,藉由使含不活化日本腦炎病毒之溶液22乾燥固化,而於針狀凹部15內形成含有不活化日本腦炎病毒之層120。接著,如圖16C所示地,將含有水溶性高分子及雙醣類之中的至少一種之溶液24,藉由分注器而塗布至形成有含有不活化日本腦炎病毒之層120的模具13。於利用分注器之塗布以外,亦可應用利用棒塗布、旋轉塗布、噴霧等之塗布等。由於含有不活化日本腦炎病毒之層120被固化,因而可抑制不活化日本腦炎病毒擴散至上述溶液24。接著,如圖17D所示地,藉由使上述溶液24乾燥固化,而形成由複數的針部112、錐台部113及、片部116所構成的微針陣列1。
於第1樣態中,為了促進含不活化日本腦炎病毒之溶液22、及含有水溶性高分子及雙醣類之中的至少一種之溶液24對針狀凹部15內的填充,較佳為進行從模具13的表面之加壓、及從模具13的背面之減壓抽吸。
接著,針對第2樣態,參照圖17A至17C進行說明。如圖17A所示地,將含不活化日本腦炎病毒之溶液22由管嘴34填充至模具13的針狀凹部15。接著,與圖16B同樣地,藉由使含不活化日本腦炎病毒之溶液22乾燥固化,而於針狀凹部15內形成含有不活化日本腦炎病毒之層120。接著,如圖17B所示地,將含有水溶性高分子及雙醣類之中的至少一種之溶液24,塗布至別的支撐體29之上。支撐體29並不被限定,但可使用例如聚乙烯、聚對苯二甲酸乙二酯、聚碳酸酯、聚丙烯、丙烯酸樹脂、三醋酸纖維素、玻璃等。接著,如圖17C所示地,將於支撐體29之上形成的上述溶液24,重疊在於針狀凹部15形成有含有不活化日本腦炎病毒之層120的模具13上。藉此,使上述溶液24填充至針狀凹部15的內部。由於含有不活化日本腦炎病毒之層被固化,因而可抑制不活化日本腦炎病毒擴散至上述溶液24。接著,藉由使上述溶液24乾燥固化,而形成由複數的針部112、錐台部113及片部116所構成的微針陣列。
於第2樣態中,為了促進含有水溶性高分子及雙醣類之中的至少一種之溶液24對針狀凹部15內的填充,亦較佳為進行從模具13的表面之加壓及從模具13的背面之減壓抽吸。
作為使含有水溶性高分子及雙醣類之中的至少一種之溶液24乾燥的方法,若為使溶液中的溶媒揮發的步驟即可。其方法並非特別限定者,可使用例如加熱、送風、減壓等之方法。乾燥處理可以於1~50℃、1~72小時之條件進行。於送風之情形,可舉出吹送0.1~10m/秒的溫風之方法。乾燥溫度,係較佳為不使含不活化日本腦炎病毒之溶液22內的不活化日本腦炎病毒熱降解的溫度。
(剝離)
將微針陣列從模具13剝離的方法並未被特別限定。較佳為於剝離之際,針部不會彎曲或折斷。具體而言,可如圖18所示地,使經形成黏著性的黏著層之片狀的基材40附著於微針陣列之上以後,以從端部掀起基材40的方式進行剝離。但是,以此方法,則會有針部彎曲的可能性。所以,可應用如圖19所示地,將吸盤(不圖示)設置於微針陣列之上的基材40,一邊以空氣抽吸且一邊垂直地拉起之方法。再者,亦可使用支撐體29作為基材40。
圖20呈示從模具13被剝離的微針陣列2。微針陣列2係由基材40、於基材40之上形成的針部112、錐台部113及片部116所構成。針部112係至少於尖端具有圓錐形狀或多角錐形狀,但針部112並不被限定為此形狀。
[塗布型微針陣列的製造方法]
塗布型微針陣列的製造方法,若能夠於片部上形成針部,則並未被特別限定,但較佳為藉由包含(1)製造微針陣列的步驟、(2)調製含不活化日本腦炎病毒之溶液的步驟、(3)將含不活化日本腦炎病毒之溶液塗布至微針陣列的步驟之製造方法獲得。
作為製造塗布型微針陣列的方法,亦可同樣地使用自我溶解型微針的製造方法。具體而言,係於自我溶解型微針的製造方法中省略以下步驟來製造:(2)調製含有水溶性高分子及雙醣類的至少一種、不活化日本腦炎病毒之溶液的步驟;及(3)將(2)中所得之溶液填充至模具,且形成針部尖端區域的步驟。將含不活化日本腦炎病毒之溶液塗布至所製造的自我溶解型微針陣列即可。
作為製造塗布型微針陣列的方法,可因應材料而使用各種習知技術來製造。可藉由例如射出成形、擠製成形、壓印、熱壓紋、或澆鑄等之成形技術來形成微針陣列。可藉由例如形成微針陣列的原版,且製作使原版的凹凸反轉之凹版,將熱塑性樹脂填充至凹版,來形成由熱塑性樹脂所構成的微針陣列。或亦可使用光蝕刻法、利用3D列印的造形方法、濕蝕刻法、乾蝕刻法、噴砂法、雷射加工法、精密機械加工技術來形成微針。又,亦可組合複數種成形技術及精密機械加工技術來形成微針陣列。
調製含不活化日本腦炎病毒之溶液的步驟中,係可使用即使微量殘留亦對人體少危害的水、如乙醇、異丙醇、二乙二醇、甘油之醇系等之水性溶媒作為溶媒。作為其他溶媒,可混合脂肪族烴系、如甲苯之芳香族烴系、鹵烴系、如醋酸乙酯、醋酸丙酯之酯系、腈系、醯胺系等之1種或2種以上而使用。溶液中,為了於針部表面塗布或擔持藥劑,較佳為混合高分子化合物及/或低分子化合物。可舉出例如聚環氧乙烷(polyethylene oxide)、羥丙基纖維素、聚羥丙基甲基纖維素等之纖維素系、右旋糖聚糖、聚乙二醇、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯啶酮、普魯蘭多糖、玻尿酸等之高分子化合物、氯化鈉等之鹽類或葡萄糖等之醣類等之低分子化合物。特佳為羥丙基纖維素、右旋糖聚糖、聚乙二醇、聚乙烯吡咯啶酮、普魯蘭多糖、玻尿酸等。
在將含不活化日本腦炎病毒之溶液塗布至微針陣列的步驟,可使用:藉由透過管嘴等將溶液吐出而塗布至針部的噴墨法、透過管嘴等將溶液塗布至針部的分注器法、浸漬針部而使溶液附著的浸漬法(浸浴法(Dipping method))等。此等方法之中,為了將不活化日本腦炎病毒集中地塗布至針部尖端區域,浸漬法係有效。
在浸漬法,係使針部的頂部朝向下方而浸漬於溶液中。然後,將針部從溶液拉起,使溶液的溶媒蒸發,藉此而於針部表面形成含有不活化日本腦炎病毒之層。可藉由調節使針部浸漬的深度、時間等,而調整不活化日本腦炎病毒的塗布量。
[微針陣列的投予及微針陣列的用途]
本發明進一步有關於一種日本腦炎的預防方法,其包含將微針陣列投予至對象,該微針陣列係具有片部、與存在於片部之上面的複數針部,且上述針部內包或擔持不活化日本腦炎病毒之微針陣列(以下稱微針陣列)。
本發明進一步有關於一種賦予對日本腦炎之免疫的方法,其包含將微針陣列投予至對象。
微針陣列的投予對象並未被特別限定,但較佳為哺乳動物,更佳為人類。
微針陣列之較佳形態、微針陣列之較佳投予量係如以上本說明書中所述。
微針陣列的投予,亦可使用敷貼器來進行。敷貼器並未被特別限定,但可使用例如日本特開2018-191783、日本特開2019-097885號公報等所記載之形態者。
本發明進一步有關於用以於用以預防日本腦炎的處置中使用的上述微針陣列、以及用以於用以賦予對日本腦炎之免疫的處置中使用的上述微針陣列。
本發明進一步有關於用以製造日本腦炎預防劑之上述微針陣列的用途、以及用以製造日本腦炎疫苗劑之上述微針陣列的用途。
微針陣列之較佳形態係如以上本說明書中所述。
於以下舉出本發明之實施例,進一步具體地說明本發明。再者,以下的實施例所示材料、使用量、比例、處理內容、處理程序等,只要不脫離本發明之宗旨,則可適當變更。所以,本發明之範圍不應藉由以下所示具體例而被限定地解釋。
[實施例]
實施例中的代號意義如下。
HES:羥乙基澱粉70000(Fresenius Kabi股份有限公司)(重量平均分子量為70000)
DEX:右旋糖聚糖70000(Meito Sangyo Co.,Ltd.)(重量平均分子量為70000)
CS:硫酸軟骨素鈉(Maruha Nichiro Corporation)(重量平均分子量為90000)
Suc:精製白糖(蔗糖)(FUJIFILM Wako Pure Chemical Corporation)
GluNa:L-麩胺酸鈉(FUJIFILM Wako Pure Chemical Corporation)
Tw:Tween 80(Seppic)
EMEM:伊格爾氏(Eagle's)最低必需培養基
FBS:胎牛血清
CPE:細胞病變效應
MNA-H:微針日本腦炎疫苗高用量
MNA-L:微針日本腦炎疫苗低用量
SC:皮下注射日本腦炎疫苗
ICDRG:國際接觸性皮膚炎研究小組(International Contact Dermatitis Research Group)
IgG:免疫球蛋白G
BSA:牛血清白蛋白
PBS:磷酸緩衝食鹽水
DPBS:杜氏(Dulbecco's)磷酸緩衝食鹽水
Tris:三羥甲基胺基甲烷
HRP:辣根過氧化酶
TMB:四甲基聯苯胺
HIV:人類免疫不全病毒
HBs:B型肝炎病毒表面抗原
HCV:C型肝炎病毒
TP:梅毒螺旋體
HTLV-1:人類T細胞白血病病毒1型
<微針陣列的製造>
(模具的製造)
於一邊40mm之平滑Ni板的表面,將如圖21所示之於底面為500μm的直徑D1且150μm的高度H1之圓錐台50上形成有300μm的直徑D2且500μm的高度H2之圓錐52的針狀結構之形狀部12,以1000μm的節距L1以2維正方配列100根針而研磨加工為四角形狀,藉此而製作原版11。於此原版11之上,將聚矽氧橡膠(Dow Corning Corp.製SILASTIC MDX4-4210)以0.6mm的厚度來形成膜,且以使原版11的圓錐尖端部50μm從膜面突出之狀態進行熱硬化並剝離。藉此,製作具有約30μm之直徑的貫穿孔的聚矽氧橡膠之反轉物。作為模具,而使用將此聚矽氧橡膠反轉物之於中央部形成有經10列×10行的2維配列之針狀凹部的一邊30mm之平面部外經切下之物。將針狀凹部的開口部較廣之一面作為模具的表面,將具有30μm之直徑的貫穿孔(空氣排出孔)之面作為模具的背面。
(含有不活化日本腦炎病毒之水溶液(亦稱為I液)的調製)
以離心超過濾法濃縮日本腦炎疫苗原液(由The Research Foundation for Microbial Diseases of Osaka University提供)之後,與水溶性高分子、精製白糖(蔗糖)(FUJIFILM Wako Pure Chemical Corporation)、L-麩胺酸鈉(FUJIFILM Wako Pure Chemical Corporation)、界面活性劑混合。各成分的使用量係呈示於表1及表4。再者,表1及表4中的各成分之量為每1片微針陣列之量。1片微針陣列的面積為1cm
2。
(形成片部之溶液(亦稱為II液)的調製)
將羥乙基澱粉70000(HES,Fresenius Kabi股份有限公司) 溶解於水中,調製HES的56質量%水溶液。使用量係呈示於表1。
又,將DEX及CS以比率(質量比)7:3來溶解於水中,調製DEX及CS的水溶液。使用量係呈示於表4。
再者,表1及表4中的各成分之量為每1片微針陣列之量。1片微針陣列的面積為1cm
2。
(含不活化日本腦炎病毒之溶液的填充及乾燥)
使用圖22所示填充裝置。填充裝置係具備:控制模具與管嘴之相對位置座標的X軸驅動部61及Z軸驅動部62;可裝配管嘴63的供液裝置64(Musashi Engineering, Inc.製超微量定量分注器SMP-III);固定模具69的抽吸台65;測定模具表面形狀的雷射位移計66(Panasonic Corporation製HL-C201A);測定管嘴推入壓力的測力計67(KYOWA ELECTRONIC INSTRUMENTS CO., LTD.製LCX-A-500N);及根據表面形狀及按壓壓力之測定值數據來控制Z軸的控制機構68。
於水平的抽吸台上放置一邊15mm的透氣性膜(Sumitomo Electric Industries, Ltd.製,POREFLON(註冊商標),FP-010),於其上設置模具使表面在上方。由模具背面方向以計示壓90kPa的抽吸壓進行減壓,而將透氣性膜與模具固定於真空台。
準備如圖13所示形狀之SUS製(不銹鋼)的管嘴,於長度20mm、寬度2mm的唇部的中央形成長度12mm、寬度0.2mm之狹縫狀的開口部。於供液裝置接續此管嘴。於供液裝置與管嘴內部裝填3mL之含不活化日本腦炎病毒之溶液。調整管嘴,使開口部與以於模具的表面形成的複數針狀凹部所構成之第1列為平行。對於第1列,而於與第2列相反方向在隔開2mm的間隔之位置,以1.372×10
4Pa(0.14kgf/cm
2)的壓力將管嘴對模具按壓。以按壓著管嘴的狀態,控制Z軸使按壓壓力的變動落在±0.490×10
4Pa(0.05kgf/cm
2),同時一邊使其以0.5mm/秒於開口部的長度方向與垂直方向移動,並一邊以供液裝置於20秒鐘以0.15μL/秒從開口部放出含不活化日本腦炎病毒之溶液。通過經2維配列之複數針狀凹部的孔圖案,在隔開2mm間隔之位置停止管嘴的移動,且使管嘴從模具離開。
將經填充含不活化日本腦炎病毒之溶液的模具,在23℃、45%的環境下收納於蓋(箱)內,且進行乾燥。此時,含不活化日本腦炎病毒之溶液被徐緩地乾燥,且於經過180分鐘以上之後,含水率成為20%以下。而且,乾燥的手段並不被限定為蓋,亦可使用溫濕度控制或風量控制等之其他手段。
(片部的形成及乾燥)
就形成片部的支撐體而言,係使用將聚對苯二甲酸乙二酯(PET)片(175μm)進行親水化電漿處理而成者,該處理使用除雲劑(cloud remover)(Victor jvc公司)而利用以下條件(使用氣體:O
2、氣體壓力:13Pa、高周波(RF)電力:100W、照射時間:3分鐘、O
2流量:SV250、目標真空度(CCG):2.0×10
-4Pa)進行。於經實施處理的PET上,將形成片部之溶液以75μm的膜厚塗布表面及背面。在另一方面,將經填充含不活化日本腦炎病毒之溶液的模具抽吸固定於抽吸台。將經塗布形成片部之溶液的PET的表面側,面對於模具表面地進行配置,進一步將PET與模具間的空隙、還有與PET的模具相反側的空間進行2分鐘減壓。減壓後,藉由僅對與PET的模具相反側的空間釋放大氣壓,而貼合經塗布形成片部之溶液的PET與模具。維持接觸狀態10分鐘之後,使PET與模具貼合而成為一體之物在23℃、45%(相對濕度)的環境下進行乾燥。
(剝離步驟)
藉由將經乾燥固化的微針陣列從模具慎重地剝離,而形成內包不活化日本腦炎病毒的微針陣列。本微針由錐台部與針部所構成,而針狀凸部的長度L為約800μm,基底部的寬度:約350μm,錐台部係高度約190μm、上底面直徑約350μm、下底面直徑約700μm的圓錐台結構,針根數109根,針的間隔以約1mm配置。
<試驗1:日本腦炎預防劑的人類臨床試驗>
(實施場所)
北海道大學醫院
(研究設計)
隨機對照、非盲性、現存對照、平行分組對照
(受試者)
20~35歲的不具抗日本腦炎病毒之抗體的健康成人39例
以13例為1組,以集區隨機化隨機分配MNA-H、MNA-L、SC的3組。
排除基準包含以下的狀況:呈現明顯發燒(37.5℃以上);於投予部位有會妨礙投予的皮膚疾病;有免疫不全疾病(愛滋病、原發性免疫不全症等);於過去曾接受日本腦炎疫苗預防接種;於過去曾罹患日本腦炎;曾因其他疫苗接種而呈現嚴重過敏;於過去有痙攣的病史;罹患嚴重急性疾病中;於投予開始前6天以內接受過不活化疫苗的接種;於投予開始前27天以內接受過生疫苗的接種;於投予開始前90天以內接受過輸血或者γ球蛋白製劑的投予;於篩檢時的免疫血清學檢查中日本腦炎病毒中和抗體價為陽性;於篩檢時的感染症檢查中HIV抗原・抗體、HBs抗原、HCV抗體、TP抗體、HTLV-1抗體之任一者為陽性;(於女性)孕婦或有妊娠中的可能性、於本研究期間中希望妊娠、授乳中、於本研究期間中於以子宮內器具或阻隔法(子宮托、保險套)等之機械性避孕器的使用及組合彼等等之方法進行避孕上有困難;醫師判斷不適合參加本研究。
(試驗方法)
MNA-H:含有0.63μg不活化日本腦炎病毒
MNA-L:含有0.25μg不活化日本腦炎病毒
SC:含有2.5μg不活化日本腦炎病毒(JEBIK V,The Research Foundation for Microbial Diseases of Osaka University)
MNA-H組及MNA-L組,係將微針陣列於初次(0週)1片、於3週後1片,使用敷貼器對上臂部進行黏附投予。SC組係將JEBIK V於初次(0週)1次、於3週後1次對上臂部進行皮下注射。
(檢查項目)
作為有效性評價,而於篩檢時、初次投予時(0週)、初次投予2週後、第2次投予時(初次投予3週後)、初次投予6週後、初次投予27週後,進行免疫血清學檢查(中和抗體價測定)。作為安全性評價,而於篩檢時、初次投予時(0週)、初次投予2天後、初次投予2週後、第2次投予時(初次投予3週後)、初次投予6週後、初次投予27週後,進行血液學檢查、生化學檢查及除了前述觀察時期以外,亦於初次投予15週後確認投予部位的自覺及他覺症狀。
(對倫理面的考量)
本臨床研究係受到北海道大學醫院認證臨床研究審查委員會的核准之特定臨床研究,而且於施行時,可於充分地說明研究的內容後,得到利用文書的知情同意而進行。
(安全性)
於本臨床研究中,未觀察到重大副反應(休克、嚴重過敏、急性彌漫性腦脊髓炎、痙攣、血小板減少性紫瘢、腦炎・腦病)。
(有效性評價)
使用以下所示CPE微量盤法,測定受試者的血清中所含的中和抗體。
Vero細胞接種:
使用細胞培養用EMEM培養基(Gibco,+10%FBS,+康黴素),將經胰蛋白酶處理的Vero細胞調整為2.0×10
5個細胞/mL,而將其作為細胞懸浮液。對細胞培養用微量盤(IWAKI 96孔平盤,AGC TECHNO GLASS CO., LTD.)各接種100μL細胞懸浮液,且在CO
2培養箱培養1天(37℃、5%CO
2)。
血清樣品的調製:
受試者的血清係於56℃加熱30分鐘而進行去活化。在血清稀釋用微量盤(IWAKI 96孔圓盤,AGC TECHNO GLASS CO., LTD.)上,使用EMEM培養基(Gibco,+2%FBS)而製作10倍~10240倍的2倍階段稀釋系列,使所有的孔成為20μL。
中和反應:
作為攻擊用病毒(challenge virus),而將使用EMEM培養基(Gibco,+2%FBS)調製成4.0×10
3pfu/mL的日本腦炎病毒北京株(日本國立感染症研究所),對上述血清稀釋用微量盤各加入20μL/孔,在CO
2培養箱進行1.5小時中和反應(37℃、5%CO
2)。
對Vero細胞的感染實驗:
對上述細胞培養用微量盤,各接種25μL/孔之經進行上述中和反應的血清與攻擊用病毒之混合液,且在CO
2培養箱培養6天(37℃、5%CO
2)。
細胞固定及染色:
對上述細胞培養用微量盤各加入40μL/孔之福馬林液,且靜置2小時以上。然後除去福馬林液,以自來水清洗盤後,各添加100μL/孔之0.02%亞甲藍染色液,靜置1小時以上,將細胞予以染色。以50%以上防止了攻擊用病毒所致CPE的上述血清之最大稀釋倍數的常用對數,作為中和抗體價。低於10倍之情形係當成5(常用對數為0.7)。
[表1]
投予組 | Ⅰ液 | Ⅱ液 | ||||
不活化日本腦炎病毒 | Suc | GluNa | Tw | HES | ||
實施例1 | MNA-L | 0.25μg | 750μg | 208μg | 1.7μg | 32000μg |
實施例2 | MNA-H | 0.64μg | 750μg | 208μg | 1.7μg | 32000μg |
(試驗1的結果)
39人的受試者係符合條件且經隨機化。於投予前,SC組、MNA-L組、MNA-H組係任一者皆血清中的中和抗體價為0.7(表2)。將血清中的中和抗體價為1.3以上的受試者當成陽轉,且算出陽轉率。於初次投予2週後,MNA-H組係100%陽轉,但在SC組係陽轉率為46%,在MNA-L組係陽轉率為54%。於初次投予6週後,在全部組得到100%的陽轉率。
[表2]
投予組 | 初次 投予前 | 初次投予 2週後 | 初次投予3週後 (第2次投予前) | 初次投予 6週後 | 初次投予 27週後 | |||||
中和 抗體價 | 中和 抗體價 | 陽轉率 | 中和 抗體價 | 陽轉率 | 中和 抗體價 | 陽轉率 | 中和 抗體價 | 陽轉率 | ||
比較例1 | SC | 0.7 | 1.18 | 46% | 1.25 | 54% | 2.08 | 100% | 1.14 | 46% |
實施例1 | MNA-L | 0.7 | 1.30 | 54% | 1.37 | 69% | 2.04 | 100% | 0.95 | 31% |
實施例2 | MNA-H | 0.7 | 2.36 | 100% | 2.38 | 100% | 2.55 | 100% | 1.60 | 85% |
(於各受試者之不活化日本腦炎病毒之投予量的測定)
將日本腦炎病毒套膜(Envelope)蛋白質特異性IgG抗體(The Research Foundation for Microbial Diseases of Osaka University)以固化緩衝液(0.05mol/L碳酸氫鹽緩衝液) 稀釋為3100倍,對96孔Microlon半量盤之使用的孔各加入該液50μL。將該盤在4℃靜置一晚以上,作為固化盤。
關於檢體,係將於稀釋緩衝液(DPBS+BSA0.1%+Tw0.5%)溶解投予後的微針陣列而成者作為試料溶液。將於218μL之稀釋緩衝液加入30μL之標準抗原(The Research Foundation for Microbial Diseases of Osaka University)而成者作為標準溶液原液,且將使用稀釋緩衝液10倍、16.6倍、50倍、100倍、500倍稀釋標準溶液原液而成者各自作為標準溶液。
以PBS-T(DPBS+0.05%Tween20)清洗固化盤3次。使用12爪微量吸管而自裝有試料溶液及標準溶液的添加用圓底盤對固化盤的相同位置各轉注入100μL,於37℃進行反應60分鐘。反應結束後,以PBS-T清洗固化盤4次,各加入100μL之將HRP標記日本腦炎病毒套膜蛋白質特異性IgG抗體(The Research Foundation for Microbial Diseases of Osaka University)以加入PBS-T使FBS成為10%者稀釋為11000倍之液體,於37℃進行反應60分鐘。反應結束後,以PBS-T清洗盤,對全孔各加入80μL之TMB,進行遮光而於室溫進行反應15分鐘。15分鐘後,對全孔各加入80μL之反應停止液(0.5mol/L H
2SO
4),使用盤讀取儀而測定450nm吸光度(參考620nm)。
於圖23呈示藉由上述而測定了各受試者之不活化日本腦炎病毒之投予量的結果。
<試驗2:日本腦炎預防劑對動物的中和抗體產生試驗>
(對小鼠的疫苗投予試驗)
購入小鼠(Balb/c(CLEA Japan, Inc.),雌,7週齡),進行1週的馴化之後,進行日本腦炎預防劑的投予試驗。作為初次投予,而將經適當稀釋的JEBIK V對小鼠的頸背部進行皮下投予100μL。然後,持續飼育15天,作為第2次投予而微針陣列組係在麻醉下將小鼠的背面除毛之後,在拉伸皮膚的狀態下,穿刺微針陣列(處方係呈示於表4)10分鐘。皮下注射組係將經適當稀釋的JEBIK V對小鼠的頸背部進行皮下投予100μL。所有的試驗係以4隻來實施。
(有效性的評價)
投予後,將進行飼育1週的小鼠在麻醉下開腹,由後主靜脈進行採血。藉由將經室溫下靜置的血液進行離心分離,且採集上清液,而得到血清。以下述手法,測定所得之血清中所含的對日本腦炎病毒特異性的抗體(IgG)之量。
(IgG抗體產生量的測定)
對Microlon盤(平底,96孔)分注25μL/孔之日本腦炎疫苗,以密封狀態於4℃靜置整夜。靜置後,以PBST(Gibco PBS+0.05%Tw)清洗4次。然後,滴入100μL/孔之阻斷液(50mmol/L Tris(pH8.0)+1%BSA),於室溫靜置30分鐘。靜置後,以PBST清洗4次。清洗後,滴入100μL/孔之以稀釋液(50mmol/L Tris(pH8.0)+ 1%BSA+0.05%Tw)稀釋為約10,000倍的樣品,於室溫靜置1小時。靜置後,同樣地以PBST清洗4次。
接著,滴入100μL/孔之經以稀釋液稀釋的HRP標記抗小鼠IgG抗體(500倍),於室溫靜置1小時。靜置後,同樣地以PBST清洗4次。進而作為基質反應,而滴入80μL/孔之TMB,遮光下於室溫靜置15分鐘。然後,滴入80μL/孔之停止液(1mol/L HCl)。
滴入後,藉由測定λ=450nm的吸光度(參考620nm),而以吸光度的大小表示IgG抗體產生量。於表3呈示從4隻小鼠所得到的平均之結果。
[表3]
Ⅰ液 | Ⅱ液 | 抗體產生量 | |||||
第2次 投予方法 | 不活化日本 腦炎病毒 | Suc | HES | GluNa | DEX/CS (7:3) | ||
實施例1 | 微針陣列 | 0.015μg | 3μg | 6μg | 0.3μg | 7290μg | 1.1290 |
實施例2 | 微針陣列 | 0.05μg | 3μg | 6μg | 0.8μg | 7290μg | 1.7990 |
實施例3 | 微針陣列 | 0.15μg | 3μg | 6μg | 2.5μg | 7290μg | 1.4705 |
比較例1 | 皮下注射 | 0.015μg | - | - | 1.2μg | - | 0.5875 |
比較例2 | 皮下注射 | 0.05μg | - | - | 4μg | - | 0.8963 |
比較例3 | 皮下注射 | 0.15μg | - | - | 12μg | - | 0.8073 |
比較例4 | 皮下注射 | 0.5μg | - | - | 40μg | - | 1.6290 |
1:微針陣列
2:微針陣列
11:原版
12:形狀部
13:模具
15:針狀凹部
15A:入口部
15B:尖端凹部
15C:空氣排出孔
18:模具複合體
19:透氣片
20:基座
22:含不活化日本腦炎病毒之溶液
24:含有水溶性高分子及雙醣類之中的至少一種之溶液
29:支撐體
30:槽
32:配管
34:管嘴
34A:唇部
34B:開口部
36:供液裝置
40:基材
50:圓錐台
52:圓錐
61:X軸驅動部
62:Z軸驅動部
63:管嘴
64:供液裝置
65:抽吸台
66:雷射位移計
67:測力計
68:控制機構
69:模具
110:微針
112:針部
112A:針部第1層
112B:針部第2層
113:錐台部
116:片部
120:含有不活化日本腦炎病毒之層
122:不含有不活化日本腦炎病毒之層
D:徑(直徑)
D1:直徑
D2:直徑
H:高度
H1:高度
H2:高度
L10:節距
P1:加壓力
P2:按壓力
P3:按壓力
T:高度(厚度)
W:直徑(寬度)
圖1A為圓錐狀的微針之斜視圖,圖1B為角錐狀的微針之斜視圖,圖1C為圓錐狀及角錐狀的微針之截面圖。
圖2為別的形狀的微針之斜視圖。
圖3為別的形狀的微針之斜視圖。
圖4為圖2、圖3所示微針之截面圖。
圖5為別的形狀的微針之斜視圖。
圖6為別的形狀的微針之斜視圖。
圖7為圖5、圖6所示微針之截面圖。
圖8為針部側面的傾斜(角度)連續地變化之別的形狀的微針之截面圖。
圖9A~C為模具的製造方法之步驟圖。
圖10為模具之擴大圖。
圖11為呈示別的形態的模具之截面圖。
圖12A~C為呈示將含不活化日本腦炎病毒之溶液填充至模具的步驟之概略圖。
圖13為呈示管嘴的尖端之斜視圖。
圖14為填充中的管嘴的尖端與模具之部分擴大圖。
圖15為移動中的管嘴的尖端與模具之部分擴大圖。
圖16A~D為呈示別的微針陣列的形成步驟之說明圖。
圖17A~C為呈示別的微針陣列的形成步驟之說明圖。
圖18為呈示剝離步驟之說明圖。
圖19為呈示別的剝離步驟之說明圖。
圖20為呈示微針陣列之說明圖。
圖21的(A)及(B)為原版之平面圖及側面圖。
圖22為實施例中使用的填充裝置之示意圖。
圖23呈示測定了各受試者之不活化日本腦炎病毒之投予量的結果。
無。
Claims (16)
- 一種日本腦炎預防劑,其包含微針陣列,該微針陣列具有片部、與存在於片部之上面的複數針部,且該針部內包或擔持不活化日本腦炎病毒。
- 如請求項1之日本腦炎預防劑,其係以0.01μg~2.5μg/次的用量來投予不活化日本腦炎病毒。
- 如請求項1或2之日本腦炎預防劑,其投予次數為1次或2次。
- 如請求項1或2之日本腦炎預防劑,其係以0.01μg~0.22μg/次的用量來投予不活化日本腦炎病毒2次。
- 如請求項1或2之日本腦炎預防劑,其係以0.23μg~1μg/次的用量來投予不活化日本腦炎病毒1次或2次。
- 如請求項1或2之日本腦炎預防劑,其中微針陣列為自我溶解型,且針部內包不活化日本腦炎病毒。
- 如請求項1或2之日本腦炎預防劑,其中針部含有水溶性高分子及雙醣類之中的至少一種、不活化日本腦炎病毒、及界面活性劑,且片部含有水溶性高分子及雙醣類之中的至少一種。
- 如請求項1至7中任一項之日本腦炎預防劑,其初次投予2週後的中和抗體價為1.0以上;其中,使藉由階段性地稀釋自日本腦炎預防劑的投予起2週後的對象所採集之血清而得到的20μL血清樣品、與80pfu的日本腦炎病毒,於37℃及5%CO 2下進行反應1.5小時,且使反應後的混合液25μL感染2.0×10 4個細胞的Vero細胞而於37℃及5%CO 2下培養6天,此時,以50%以上抑制了日本腦炎病毒所致細胞病變效應之血清的最大稀釋倍數的常用對數作為中和抗體價。
- 一種日本腦炎疫苗劑,其包含微針陣列,該微針陣列具有片部、與存在於片部之上面的複數針部,且該針部內包或擔持不活化日本腦炎病毒。
- 如請求項9之日本腦炎疫苗劑,其係以0.01μg~2.5μg/次的用量來投予不活化日本腦炎病毒。
- 如請求項9或10之日本腦炎疫苗劑,其投予次數為1次或2次。
- 如請求項9或10之日本腦炎疫苗劑,其係以0.01μg~0.22μg/次的用量來投予不活化日本腦炎病毒2次。
- 如請求項9或10之日本腦炎疫苗劑,其係以0.23μg~1μg/次的用量來投予不活化日本腦炎病毒1次或2次。
- 如請求項9或10之日本腦炎疫苗劑,其中微針陣列為自我溶解型,且針部內包不活化日本腦炎病毒。
- 如請求項9或10之日本腦炎疫苗劑,其中針部含有水溶性高分子及雙醣類之中的至少一種、不活化日本腦炎病毒、及界面活性劑,且片部含有水溶性高分子及雙醣類之中的至少一種。
- 如請求項9或10之日本腦炎疫苗劑,其初次投予2週後的中和抗體價為1.0以上;其中,使藉由階段性地稀釋自日本腦炎疫苗劑的投予起2週後的對象所採集之血清而得到的20μL血清樣品、與80pfu的日本腦炎病毒,於37℃及5%CO 2下進行反應1.5小時,且使反應後的混合液25μL感染2.0×10 4個細胞的Vero細胞而於37℃及5%CO 2下培養6天,此時,以50%以上抑制了日本腦炎病毒所致細胞病變效應之血清的最大稀釋倍數的常用對數作為中和抗體價。
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