本發明的許多實施例在整個本說明書中得以詳述且為所屬領域的技術讀者顯而易見。本發明不應解釋為限制於所載明的實施例中的任一個，且申請專利範圍為實施例。應瞭解，為清楚起見而在單獨實施例的上下文中所描述的本公開的某些特徵也可組合提供於單一實施例中。相反地，為簡潔起見而描述於單個實施例的上下文中的本公開的各種特徵還可分開地或以任何合適的子組合形式提供。
本文公開了一種式
(I)
化合物：
其中：
R1
選自氫、C
1-6
烷基、C
1-6
烷氧基、
N
-C
1-6
烷基胺基、
N,N
-(C
1-6
烷基)
2
胺基、碳環基和雜環基；其中R
1
可任選地由一個或多個R
5
取代；
R2
選自鹵基、C
1-3
烷基、C
1-3
烷氧基、碳環基和雜環基；或在相同原子或相鄰原子上的兩個R
2
可與其所連接的原子一起形成3-7元環；
k
是0-4；
R3
選自鹵基、C
1-3
烷基和C
1-3
烷氧基；
n
是0-4；
R4
選自鹵基、C
1-3
烷基和C
1-3
烷氧基；
m
是0-5；
A
是=N-或=C(R
6
)-；
R5
選自鹵基、羥基、C
1-6
烷氧基、胺基、
N
-C
1-6
烷基胺基、
N,N
-(C
1-6
烷基)
2
胺基、碳環基和雜環基；其中R
5
可獨立地任選地由一個或多個R
7
取代；
R6
選自氫和鹵基；
R7
選自鹵基、羥基、胺基、C
1-3
烷基和C
1-3
烷氧基；
或其藥學上可接受的鹽。
在一個實施例中，R
1
選自氫和C
1-6
烷基；其中R
1
可任選地由一個R
5
取代；其中R
5
選自羥基、C
1-6
烷氧基、
N,N
-(C
1-6
烷基)
2
胺基和雜環基。
在一個實施例中，R
1
選自氫和C
1-3
烷基；其中R
1
可任選地由一個R
5
取代；其中R
5
選自羥基、C
1-3
烷氧基、
N,N
-(C
1-2
烷基)
2
胺基和氮雜環丁烷基。
在一個實施例中，R
1
選自氫、甲基、羥基甲基、甲氧基甲基、
N,N
-二甲基胺基甲基和氮雜環丁烷-1-基甲基。
在一個實施例中，R
1
是羥基甲基。
在一個實施例中，R
2
選自鹵基或C
1-3
烷氧基。
在一個實施例中，R
2
選自氟或甲氧基。
在一個實施例中，或在相同原子或相鄰原子上的兩個R
2
可與其所連接的原子一起形成3-7元環。
在一個實施例中，或在相同原子上的兩個R
2
可與其所連接的原子一起形成3-7元環。
在一個實施例中，或在相鄰原子上的兩個R
2
可與其所連接的原子一起形成3-7元環。
在一個實施例中，k是0。
在一個實施例中，k是1。
在一個實施例中，k是2。
在一個實施例中，k是3。
在一個實施例中，k是4。
在一個實施例中，R
3
是鹵基。
在一個實施例中，R
3
是氟。
在一個實施例中，n是0-2。
在一個實施例中，n是0。
在一個實施例中，n是1。
在一個實施例中，n是2。
在一個實施例中，n是3。
在一個實施例中，n是4。
在一個實施例中，R
4
是鹵基。
在一個實施例中，R
4
是氟。
在一個實施例中，m是0-2。
在一個實施例中，m是0。
在一個實施例中，m是1。
在一個實施例中，m是2。
在一個實施例中，m是3。
在一個實施例中，m是4。
在一個實施例中，m是5。
在一個實施例中，A是=N-或=C(H)-。
在一個實施例中，A是=N-。
在一個實施例中，A是=C(R
6
)-。
在一個實施例中，A是=C(H)-。
式
(I)
化合物(當R1≠氫時)含有兩個手性中心(標記有“*”)：
這些手性中心可以“反式”構型形式存在(意指噁烷環上的兩個取代基指向噁烷環的相對面)；且以“順式”構型形式存在(意指噁烷環上的兩個取代基指向噁烷環的同一面)。下文中的結構
( IA )
和
(IB)
顯示式
(I)
化合物的順式異構體，下文中的結構
(IC)
和
(ID)
顯示式
(I)
化合物的反式異構體。
在本發明的一個方面中，式
(I)
化合物是式
(I)
的反式化合物。
在本發明的一個方面中，式
(I)
化合物是式
(I)
的順式化合物。
在本發明的一個方面中，式
(I)
化合物是式
(IA)
化合物：
在本發明的一個方面中，式
(I)
化合物是式
(IB)
化合物：
在本發明的一個方面中，式
(I)
化合物是式
(IC)
化合物：
在本發明的一個方面中，式
(I)
化合物是式
(ID)
化合物：
在本發明的一個方面中，式
(I)
化合物選自：
(5-(8-胺基-1-(4-苯氧基苯基)咪唑[1,5-a]吡嗪-3-基)四氫-2H-吡喃-2-基)甲醇；
(5-(8-胺基-1-(2-氟-4-苯氧基苯基)咪唑[1,5-a]吡嗪-3-基)四氫-2H-吡喃-2-基)甲醇；
(5-(8-胺基-1-(2,3-二氟-4-苯氧基苯基)咪唑[1,5-a]吡嗪-3-基)四氫-2H-吡喃-2-基)甲醇；
(5-(8-胺基-1-(4-(2,3-二氟苯氧基)苯基)咪唑[1,5-a]吡嗪-3-基)四氫-2H-吡喃-2-基)甲醇；
(5-(4-胺基-5-(2-氟-4-苯氧基苯基)咪唑[5,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)四氫-2H-吡喃-2-基)甲醇；
(5-(4-胺基-5-(2-氟-4-苯氧基苯基)咪唑[5,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)四氫-2H-吡喃-2-基)甲醇；
(5-(4-胺基-5-(2,3-二氟-4-苯氧基苯基)咪唑[5,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)四氫-2H-吡喃-2-基)甲醇；
(5-(4-胺基-5-(4-(2,3-二氟苯氧基)苯基)咪唑[5,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)四氫-2H-吡喃-2-基)甲醇；
3-(6-((二甲基胺基)甲基)四氫-2H-吡喃-3-基)-1-(2-氟-4-苯氧基苯基)咪唑[1,5-a]吡嗪-8-胺；
7-(6-((二甲基胺基)甲基)四氫-2H-吡喃-3-基)-5-(2-氟-4-苯氧基苯基)咪唑[5,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺；
7-(6-(氮雜環丁烷-1-基甲基)四氫-2H-吡喃-3-基)-5-(2-氟-4-苯氧基苯基)咪唑[5,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺；
5-(2-氟-4-苯氧基苯基)-7-(6-(甲氧基甲基)四氫-2H-吡喃-3-基)咪唑[5,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺；
5-(2-氟-4-苯氧基苯基)-7-(四氫-2H-吡喃-3-基)咪唑[5,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺；和
5-(2-氟-4-苯氧基苯基)-7-(6-甲基四氫-2H-吡喃-3-基)咪唑[5,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺。
在本發明的一個方面中，式
(I)
化合物選自：
(5-(8-胺基-1-(4-苯氧基苯基)咪唑[1,5-a]吡嗪-3-基)四氫-2H-吡喃-2-基)甲醇；
(5-(8-胺基-1-(2-氟-4-苯氧基苯基)咪唑[1,5-a]吡嗪-3-基)四氫-2H-吡喃-2-基)甲醇；
(5-(8-胺基-1-(2,3-二氟-4-苯氧基苯基)咪唑[1,5-a]吡嗪-3-基)四氫-2H-吡喃-2-基)甲醇；
(5-(8-胺基-1-(4-(2,3-二氟苯氧基)苯基)咪唑[1,5-a]吡嗪-3-基)四氫-2H-吡喃-2-基)甲醇；
(5-(4-胺基-5-(2-氟-4-苯氧基苯基)咪唑[5,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)四氫-2H-吡喃-2-基)甲醇；
(5-(4-胺基-5-(2-氟-4-苯氧基苯基)咪唑[5,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)四氫-2H-吡喃-2-基)甲醇；
(5-(4-胺基-5-(2,3-二氟-4-苯氧基苯基)咪唑[5,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)四氫-2H-吡喃-2-基)甲醇；
(5-(4-胺基-5-(4-(2,3-二氟苯氧基)苯基)咪唑[5,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)四氫-2H-吡喃-2-基)甲醇；
3-(6-((二甲基胺基)甲基)四氫-2H-吡喃-3-基)-1-(2-氟-4-苯氧基苯基)咪唑[1,5-a]吡嗪-8-胺；
7-(6-((二甲基胺基)甲基)四氫-2H-吡喃-3-基)-5-(2-氟-4-苯氧基苯基)咪唑[5,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺；
7-(6-(氮雜環丁烷-1-基甲基)四氫-2H-吡喃-3-基)-5-(2-氟-4-苯氧基苯基)咪唑[5,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺；
5-(2-氟-4-苯氧基苯基)-7-(6-(甲氧基甲基)四氫-2H-吡喃-3-基)咪唑[5,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺；
5-(2-氟-4-苯氧基苯基)-7-(四氫-2H-吡喃-3-基)咪唑[5,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺；和
5-(2-氟-4-苯氧基苯基)-7-(6-甲基四氫-2H-吡喃-3-基)咪唑[5,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺；
或其藥學上可接受的鹽。
在本發明的一個方面中，式
(I)
化合物選自：
((2R,5R)-5-(8-胺基-1-(4-苯氧基苯基)咪唑[1,5-a]吡嗪-3-基)四氫-2H-吡喃-2-基)甲醇；
((2R,5R)-5-(8-胺基-1-(2-氟-4-苯氧基苯基)咪唑[1,5-a]吡嗪-3-基)四氫-2H-吡喃-2-基)甲醇；
((2R,5R)-5-(8-胺基-1-(2,3-二氟-4-苯氧基苯基)咪唑[1,5-a]吡嗪-3-基)四氫-2H-吡喃-2-基)甲醇；
((2R,5R)-5-(8-胺基-1-(4-(2,3-二氟苯氧基)苯基)咪唑[1,5-a]吡嗪-3-基)四氫-2H-吡喃-2-基)甲醇；
((2R,5R)-5-(4-胺基-5-(2-氟-4-苯氧基苯基)咪唑[5,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)四氫-2H-吡喃-2-基)甲醇；
((2R,5R)-5-(4-胺基-5-(2-氟-4-苯氧基苯基)咪唑[5,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)四氫-2H-吡喃-2-基)甲醇；
((2R,5R)-5-(4-胺基-5-(2,3-二氟-4-苯氧基苯基)咪唑[5,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)四氫-2H-吡喃-2-基)甲醇；
((2R,5R)-5-(4-胺基-5-(4-(2,3-二氟苯氧基)苯基)咪唑[5,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)四氫-2H-吡喃-2-基)甲醇；
3-((3R,6R)-6-((二甲基胺基)甲基)四氫-2H-吡喃-3-基)-1-(2-氟-4-苯氧基苯基)咪唑[1,5-a]吡嗪-8-胺；
7-((3R,6R)-6-((二甲基胺基)甲基)四氫-2H-吡喃-3-基)-5-(2-氟-4-苯氧基苯基)咪唑[5,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺；
7-((3R,6R)-6-(氮雜環丁烷-1-基甲基)四氫-2H-吡喃-3-基)-5-(2-氟-4-苯氧基苯基)咪唑[5,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺；
5-(2-氟-4-苯氧基苯基)-7-((3R,6R)-6-(甲氧基甲基)四氫-2H-吡喃-3-基)咪唑[5,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺；
(R)-5-(2-氟-4-苯氧基苯基)-7-(四氫-2H-吡喃-3-基)咪唑[5,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺；和
5-(2-氟-4-苯氧基苯基)-7-((3R,6R)-6-甲基四氫-2H-吡喃-3-基)咪唑[5,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺；
或其藥學上可接受的鹽。
在本發明的一個方面中，式
(I)
化合物選自：
((2S,5S)-5-(8-胺基-1-(4-苯氧基苯基)咪唑[1,5-a]吡嗪-3-基)四氫-2H-吡喃-2-基)甲醇；
((2S,5S)-5-(8-胺基-1-(2-氟-4-苯氧基苯基)咪唑[1,5-a]吡嗪-3-基)四氫-2H-吡喃-2-基)甲醇；
((2S,5S)-5-(8-胺基-1-(2,3-二氟-4-苯氧基苯基)咪唑[1,5-a]吡嗪-3-基)四氫-2H-吡喃-2-基)甲醇；
((2S,5S)-5-(8-胺基-1-(4-(2,3-二氟苯氧基)苯基)咪唑[1,5-a]吡嗪-3-基)四氫-2H-吡喃-2-基)甲醇；
((2S,5S)-5-(4-胺基-5-(2-氟-4-苯氧基苯基)咪唑[5,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)四氫-2H-吡喃-2-基)甲醇；
((2S,5S)-5-(4-胺基-5-(2-氟-4-苯氧基苯基)咪唑[5,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)四氫-2H-吡喃-2-基)甲醇；
((2S,5S)-5-(4-胺基-5-(2,3-二氟-4-苯氧基苯基)咪唑[5,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)四氫-2H-吡喃-2-基)甲醇；
((2S,5S)-5-(4-胺基-5-(4-(2,3-二氟苯氧基)苯基)咪唑[5,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)四氫-2H-吡喃-2-基)甲醇；
3-((3S,6S)-6-((二甲基胺基)甲基)四氫-2H-吡喃-3-基)-1-(2-氟-4-苯氧基苯基)咪唑[1,5-a]吡嗪-8-胺；
7-((3S,6S)-6-((二甲基胺基)甲基)四氫-2H-吡喃-3-基)-5-(2-氟-4-苯氧基苯基)咪唑[5,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺；
7-((3S,6S)-6-(氮雜環丁烷-1-基甲基)四氫-2H-吡喃-3-基)-5-(2-氟-4-苯氧基苯基)咪唑[5,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺；
5-(2-氟-4-苯氧基苯基)-7-((3S,6S)-6-(甲氧基甲基)四氫-2H-吡喃-3-基)咪唑[5,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺；
(S)-5-(2-氟-4-苯氧基苯基)-7-(四氫-2H-吡喃-3-基)咪唑[5,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺；和
5-(2-氟-4-苯氧基苯基)-7-((3S,6S)-6-甲基四氫-2H-吡喃-3-基)咪唑[5,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺；
或其藥學上可接受的鹽。
在本發明的一個方面中，式
(I)
化合物選自：
((2S,5R)-5-(8-胺基-1-(4-苯氧基苯基)咪唑[1,5-a]吡嗪-3-基)四氫-2H-吡喃-2-基)甲醇；
((2S,5R)-5-(8-胺基-1-(2-氟-4-苯氧基苯基)咪唑[1,5-a]吡嗪-3-基)四氫-2H-吡喃-2-基)甲醇；
((2S,5R)-5-(8-胺基-1-(2,3-二氟-4-苯氧基苯基)咪唑[1,5-a]吡嗪-3-基)四氫-2H-吡喃-2-基)甲醇；
((2S,5R)-5-(8-胺基-1-(4-(2,3-二氟苯氧基)苯基)咪唑[1,5-a]吡嗪-3-基)四氫-2H-吡喃-2-基)甲醇；
((2S,5R)-5-(4-胺基-5-(2-氟-4-苯氧基苯基)咪唑[5,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)四氫-2H-吡喃-2-基)甲醇；
((2S,5R)-5-(4-胺基-5-(2-氟-4-苯氧基苯基)咪唑[5,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)四氫-2H-吡喃-2-基)甲醇；
((2S,5R)-5-(4-胺基-5-(2,3-二氟-4-苯氧基苯基)咪唑[5,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)四氫-2H-吡喃-2-基)甲醇；
((2S,5R)-5-(4-胺基-5-(4-(2,3-二氟苯氧基)苯基)咪唑[5,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)四氫-2H-吡喃-2-基)甲醇；
3-((3S,6R)-6-((二甲基胺基)甲基)四氫-2H-吡喃-3-基)-1-(2-氟-4-苯氧基苯基)咪唑[1,5-a]吡嗪-8-胺；
7-((3S,6R)-6-((二甲基胺基)甲基)四氫-2H-吡喃-3-基)-5-(2-氟-4-苯氧基苯基)咪唑[5,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺；
7-((3S,6R)-6-(氮雜環丁烷-1-基甲基)四氫-2H-吡喃-3-基)-5-(2-氟-4-苯氧基苯基)咪唑[5,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺；
5-(2-氟-4-苯氧基苯基)-7-((3S,6R)-6-(甲氧基甲基)四氫-2H-吡喃-3-基)咪唑[5,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺；和
5-(2-氟-4-苯氧基苯基)-7-((3S,6R)-6-甲基四氫-2H-吡喃-3-基)咪唑[5,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺；
或其藥學上可接受的鹽。
在本發明的一個方面中，式
(I)
化合物選自：
((2R,5S)-5-(8-胺基-1-(4-苯氧基苯基)咪唑[1,5-a]吡嗪-3-基)四氫-2H-吡喃-2-基)甲醇；
((2R,5S)-5-(8-胺基-1-(2-氟-4-苯氧基苯基)咪唑[1,5-a]吡嗪-3-基)四氫-2H-吡喃-2-基)甲醇；
((2R,5S)-5-(8-胺基-1-(2,3-二氟-4-苯氧基苯基)咪唑[1,5-a]吡嗪-3-基)四氫-2H-吡喃-2-基)甲醇；
((2R,5S)-5-(8-胺基-1-(4-(2,3-二氟苯氧基)苯基)咪唑[1,5-a]吡嗪-3-基)四氫-2H-吡喃-2-基)甲醇；
((2R,5S)-5-(4-胺基-5-(2-氟-4-苯氧基苯基)咪唑[5,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)四氫-2H-吡喃-2-基)甲醇；
((2R,5S)-5-(4-胺基-5-(2-氟-4-苯氧基苯基)咪唑[5,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)四氫-2H-吡喃-2-基)甲醇；
((2R,5S)-5-(4-胺基-5-(2,3-二氟-4-苯氧基苯基)咪唑[5,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)四氫-2H-吡喃-2-基)甲醇；
((2R,5S)-5-(4-胺基-5-(4-(2,3-二氟苯氧基)苯基)咪唑[5,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)四氫-2H-吡喃-2-基)甲醇；
3-((3R,6S)-6-((二甲基胺基)甲基)四氫-2H-吡喃-3-基)-1-(2-氟-4-苯氧基苯基)咪唑[1,5-a]吡嗪-8-胺；
7-((3R,6S)-6-((二甲基胺基)甲基)四氫-2H-吡喃-3-基)-5-(2-氟-4-苯氧基苯基)咪唑[5,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺；
7-((3R,6S)-6-(氮雜環丁烷-1-基甲基)四氫-2H-吡喃-3-基)-5-(2-氟-4-苯氧基苯基)咪唑[5,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺；
5-(2-氟-4-苯氧基苯基)-7-((3R,6S)-6-(甲氧基甲基)四氫-2H-吡喃-3-基)咪唑[5,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺；和
5-(2-氟-4-苯氧基苯基)-7-((3R,6S)-6-甲基四氫-2H-吡喃-3-基)咪唑[5,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺；
或其藥學上可接受的鹽。
在本發明的一個方面中，提供本文所公開的任何式
(I)
化合物。
在本發明的一個方面中，提供本文所公開的任何式
(I)
化合物或其藥學上可接受的鹽。
在本發明的一個方面中，提供用於製備如本文所公開的式
(I)
化合物的合成中間物。
在本發明的一個方面中，提供用於製備如本文所公開的式
(I)
化合物或其藥學上可接受的鹽的合成中間物。
在本公開的多處，描述了連接取代基。在結構明確需要連接基團的情況下，關於該基團所列舉的馬庫什變數(Markush variable)應理解為連接基團。舉例來說，如果結構需要連接基團且該變數的馬庫什基團定義列舉“烷基”，那麼應理解，所述“烷基”表示連接亞烷基。
如本文所使用，當提到化學基團時，術語“被取代”意指所述化學基團具有一個或多個被去除且由取代基置換的氫原子。如本文所使用，術語“取代基”具有所屬領域中已知的普通含義且是指共價連接到母體基團或在適當時與所述母體基團稠合的化學部分。如本文所使用，術語“任選地被取代”或“任選地被…取代”意指化學基團可不具有取代基(即，未被取代)或可具有一個或多個取代基(即，被取代)。應理解，在給定原子處的取代受價數限制。
如本文所使用，術語“C
i-j
”表示碳原子數的範圍，其中i和j為整數，且碳原子數的範圍包含端點(即i和j)和介於其間的每個整數點，且其中j大於i。舉例來說，C
1-6
表示一到六個碳原子的範圍，包含一個碳原子、兩個碳原子、三個碳原子、四個碳原子、五個碳原子和六個碳原子。在一些實施例中，術語“C
1-6
”表示1到6個、特別是1到5個、特別是1到4個、特別是1到3個或特別是1到2個碳原子。
如本文所使用，無論作為另一術語的部分或獨立地使用，術語“烷基”是指飽和烴鏈。上文所提及的烴鏈可以是直鏈或分支鏈。術語“C
i-j
烷基”是指具有i到j個碳原子的烷基。C
1-6
烷基的實例包含(但不限於)甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、叔丁基、異丁基、仲丁基；高級同系物，如2-甲基-1-丁基、正戊基、3-戊基、正己基、1,2,2-三甲基丁基等。“C
1-3
烷基”的實例為甲基、乙基、丙基和異丙基。
如本文所使用，術語“鹵基”和“鹵素”是指選自氟、氯、溴和碘的原子。
如本文所使用，無論作為另一術語的部分或獨立地使用，術語“烷氧基”是指式-O-烷基的基團。術語“C
i-j
烷氧基”意指烷氧基基團的烷基部分具有i到j個碳原子。烷氧基基團的實例包含(但不限於)甲氧基、乙氧基、丙氧基(例如，正丙氧基和異丙氧基)、叔丁氧基等。“C
1-6
烷氧基”的實例為甲氧基、乙氧基和丙氧基。“C
1-3
烷氧基”的實例為甲氧基、乙氧基和丙氧基。
“
N
-(C
1-6
烷基)胺基”的實例為甲胺基和乙胺基。“
N,N
-(C
1-6
烷基)
2
胺基”的實例為
N,N-
二甲基胺基、
N,N
-二乙基胺基和
N
-乙基-
N
-甲基胺基。
如本文所使用，無論作為另一術語的部分或獨立地使用，術語“碳環基”是指其中所有環原子是碳且其含有至少三個成環碳原子的飽和單環。在一些實施例中，碳環基可含有3到7個成環碳原子或3到6個成環碳原子。在一些實施例中，環-CH
2
-基團可由環-C(O)-基團置換。碳環基的實例包含(但不限於)環丙基、環丁基、環戊基、環己基和環庚基。
如本文所使用，術語“雜環基”是指單環、飽和碳環基基團，其中一個或多個(例如，1、2或3個)環原子由雜原子置換，所述雜原子包含(但不限於)氧、硫、氮、磷等。在一些實施例中，環-CH
2
-基團可由環-C(O)-基團置換。在一些實施例中，環硫原子可任選地被氧化以形成S-氧化物。在一些實施例中，雜環基是碳連接的。在一些實施例中，雜環基是氮連接的。示例性雜環基基團包含(但不限於)氮雜環丁烷基、呱啶基(piperidyl)、吡咯烷基、四氫呋喃基、呱啶基(piperidinyl)、呱嗪基、嗎啉基等。
在一個實施例中，在相同原子上的兩個R
2
與其所連接的原子一起形成3-7元環。生成物“螺環”具有通過一個單一的共有原子連接的兩個環(其中的一個是式
(I)
的噁烷)。非噁烷環可以是3-7元碳環基環或3-7元雜環環。在相同原子上的兩個R
2
與其所連接的原子一起形成3-7元環(用式
(I)
的噁烷描繪)的實例包含：
(其中“
”描繪與分子的其餘部分的連接)。
在一個實施例中，在相鄰原子上的兩個R
2
與其所連接的原子一起形成3-7元環。生成物“稠環”具有共用兩個相鄰原子的兩個環(其中的一個是式
(I)
的噁烷)。非噁烷環可以是3-7元碳環基環或3-7元雜環環。或在相鄰原子上的兩個R
2
一起形成3-7元環(用式
(I)
的噁烷描繪)的實例包含：
(其中“
”描繪與分子的其餘部分的連接)。
除非另外說明，否則本公開的“化合物”意圖涵蓋所描繪的結構的所有立體異構體、幾何異構體和互變異構體。
術語“立體異構體”是指不對稱化合物(例如，具有一個或多個不對稱取代的碳原子或“不對稱中心”的那些化合物)的各種立體異構構型(例如，對映異構體、非對映異構體和外消旋體)中的任一種。含有不對稱中心的本公開化合物可以光學活性(對映異構體或非對映異構體)或光學失活(外消旋)形式分離。術語“對映異構體”包含不互為可重疊鏡像的立體異構體對。一對對映異構體的1:1混合物是“外消旋混合物”。術語“非對映異構體(diastereomer/
diastereoisomer)包含具有至少兩個不對稱原子但不互為鏡像的立體異構體。含有一個或多個不對稱中心的某些化合物可產生對映異構體、非對映異構體或其它立體異構形式，其可根據卡恩-英格爾-普雷洛格(Cahn-Ingold-Prelog) R-S系統根據絕對構型在每個不對稱中心處定義為(R)-或(S)-。絕對構型未知的拆分的化合物可在不對稱中心處使用術語“或”來指定。關於如何自外消旋混合物製備光學活性形式的方法是所屬領域中已知的，如通過HPLC拆分或立體選擇性合成。
術語“幾何異構體”或“順式和反式異構體”是指具有相同式，但其官能團在三維空間中旋轉到不同定向的化合物。
術語“互變異構體”包含處於具有相同式和總電荷的化合物的異構質子化狀態的質子轉移互變異構體。質子轉移互變異構體的實例包含(但不限於)酮-烯醇對、醯胺-亞胺酸對、內醯胺-內醯亞胺對、烯胺-亞胺對以及環狀形式，在環狀形式中，質子可佔用雜環系統的兩個或更多個位置，例如1H-咪唑和3H-咪唑、1H-1,2,4-三唑、2H-1,2,4-三唑和4H-1,2,4-三唑、1H-異吲哚和2H-異吲哚，以及1H-吡唑和2H-吡唑。互變異構體可處於平衡狀態或通過適當取代而空間鎖定成一種形式。除非另外說明，否則通過名稱或結構識別為一種特定互變異構形式的本公開化合物意圖包含其它互變異構形式。
本公開的“化合物”還意圖涵蓋化合物中原子的所有同位素。原子的同位素包含具有相同原子數但質量數不同的原子。舉例來說，除非另外說明，否則本公開的“化合物”中的氫、碳、氮、氧、磷、硫、氟、氯、溴或碘意指還包含其同位素，如(但不限於)：
1
H、
2
H、
3
H、
11
C、
12
C、
13
C、
14
C、
14
N、
15
N、
16
O、
17
O、
18
O、
31
P、
32
P、
32
S、
33
S、
34
S、
36
S、
17
F、
19
F、
35
Cl、
37
Cl、
79
Br、
81
Br、
127
I和
131
I。在一些實施例中，氫包含氕、氘和氚。在一些實施例中，氫是指氕。在一些實施例中，氫是指氘。在一些實施例中，氫是指氚。在一些實施例中，術語“由氘取代”或“氘取代的”是指用氘置換化學基團中的氫的其它同功異型物(例如，氕)。在一些實施例中，碳包含
12
C和
13
C。
還應理解，本公開的“化合物”可呈溶劑化形式以及非溶劑化形式(例如水合形式、固體形式)存在，且本公開意圖涵蓋所有這類溶劑化和非溶劑化形式。
應進一步理解，本公開的“化合物”可以藥學上可接受的鹽形式存在。
如本文所使用，術語“藥學上可接受的”是指在合理醫學判斷的範圍內，適用於與人類和動物的組織接觸而無過度毒性、刺激、過敏反應或其它問題或併發症，與合理的效益/風險比相稱的那些化合物、材料、組合物和/或劑型。在一些實施例中，藥學上可接受的化合物、材料、組合物和/或劑型是指由管理機構(如美國食品和藥物管理局(U.S. Food and Drug Administration)、中國國家食品藥品監督管理總局(China Food and Drug Administration)或歐洲藥物管理局(European Medicines Agency))批准或公認藥典(如美國藥典(U.S.Pharmacopoeia)、中國藥典(China Pharmacopoeia)或歐洲藥典(European Pharmacopoeia))中所列出的用於動物且特別是人類的那些化合物、材料、組合物和/或劑型。
如本文所使用，“藥學上可接受的鹽”是指本公開的化合物的衍生物，其中母體化合物通過將現有酸性部分(例如，羧基等)或鹼性部分(例如，胺、鹼金屬等)轉化為其鹽形式而改性。在許多情況下，本公開化合物能夠憑藉胺基和/或羧基基團或其類似基團的存在而形成酸和/或鹼鹽。且藥學上可接受的鹽為保留母體化合物的生物有效性和特性，通常不會在生物學上或其它方面不合需要的酸和/或鹼鹽。合適的本公開化合物的藥學上可接受的鹽包含例如酸加成鹽，其可衍生自例如無機酸(例如，鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等)或有機酸(例如，甲酸、乙酸、丙酸、乙醇酸、草酸、順丁烯二酸、丙二酸、琥珀酸、反丁烯二酸、酒石酸、苯均三酸、檸檬酸、乳酸、苯乙酸、苯甲酸、扁桃酸、甲烷磺酸、萘二磺酸、乙烷磺酸、甲苯磺酸、三氟乙酸、水楊酸、磺基水楊酸等)。
合適的本公開化合物的藥學上可接受的鹽還包含例如鹼加成鹽，其可以衍生自例如無機鹼(例如，週期表的第I列到第XII列的金屬(如鈣、鎂、鐵、銀、鋅、銅等)的鈉鹽、鉀鹽、銨鹽和氫氧化物、碳酸鹽、碳酸氫鹽)或有機鹼(例如伯胺、仲胺和叔胺、被取代的胺(包含天然存在的被取代的胺)、環胺、鹼性離子交換樹脂等)。某些有機胺包含(但不限於)異丙胺、苯乍生(benzathine)、膽酸鹽、二乙醇胺、二乙胺、賴胺酸、葡甲胺、呱嗪和緩血酸胺。熟練的技術人員應瞭解，除了實例中所示以外，添加用於形成酸/鹼加成鹽的酸或鹼也是可能的。其它合適的鹽的列表可見於例如《雷明頓氏藥物科學(Remington's
Pharmaceutical Sciences)》, 第20版, 馬克出版公司(Mack Publishing Company), 賓夕法尼亞州伊斯頓(Easton, Pa.), (1985)；和Stahl和Wermuth的《藥用鹽手冊：特性、選擇和使用(Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use)》(德國魏因海姆的威立德國化學學會出版社(Wiley-VCH, Weinheim, Germany), 2002)中。
我們已發現，本發明中所定義的化合物或其藥學上可接受的鹽是有效的BTK抑制劑，且可用於在需要這類治療的溫血動物中產生BTK抑制作用。因此，預期本發明的化合物適用於治療單獨或部分地由BTK介導的疾病或醫學病況。
因此，預期本發明的化合物適用於治療免疫病症、癌症、心血管疾病、病毒感染、代謝/內分泌功能障礙和神經障礙、過敏性病症、自身免疫疾病和發炎性疾病，包含蕁麻疹/舍葛籣綜合征、類風濕性關節炎、骨質疏鬆症、血管炎、特發性血小板減少性紫癜(ITP)、重症肌無力、過敏性鼻炎、哮喘、多發性硬化症和系統性紅斑狼瘡。
由於其的BTK抑制劑特性，預期本發明的化合物具有廣泛範圍的抗癌特性，已在人類癌症(包含(但不限於)B細胞惡性腫瘤)中觀察到BTK介導的生長。具體來說，預期本發明的這類化合物適用於治療淋巴瘤和白血病。更具體地說，預期本發明的這類化合物或其藥學上可接受的鹽適用於治療小淋巴細胞性淋巴瘤(SLL)、濾泡性淋巴瘤、裡希特氏轉化(Richter's transformation)、套細胞淋巴瘤、慢性淋巴細胞性白血病(CLL)、瓦爾登斯特倫巨球蛋白血症、非霍奇金淋巴瘤、原發性中樞神經系統淋巴瘤、繼發性中樞神經系統淋巴瘤或彌漫性大B細胞淋巴瘤。具體來說，本發明的化合物適用於治療已轉移到大腦的彌漫性大B細胞淋巴瘤、原發性中樞神經系統淋巴瘤或繼發性中樞神經系統淋巴瘤。具體來說，本發明的化合物適用於治療慢性淋巴細胞性白血病。具體來說，本發明的化合物適用於慢性淋巴細胞性白血病的第二線治療。具體來說，本發明的化合物適用於慢性淋巴細胞性白血病的第一線治療。具體來說，本發明的化合物適用於治療彌漫性大B細胞淋巴瘤。具體來說，本發明的化合物適用於治療原發性中樞神經系統淋巴瘤。
在一些實施例中，本公開的化合物或其藥學上可接受的鹽在早期階段、積極進展、轉移性和/或耐藥性癌症中具有抗癌活性。在提到癌症的一些實施例中，癌症是局部晚期癌症。在提到癌症的一些實施例中，癌症是局部晚期和/或轉移性癌症。在提到癌症的一些實施例中，癌症是轉移性癌症。在提到癌症的一些實施例中，癌症是侵入性癌症。在提到癌症的一些實施例中，癌症是依魯替尼抗性癌症(ibrutinib resistant cancer)。
在提及BTK抑制的本發明的一個實施例中，這是指野生型BTK和具有C481突變(例如，C481S、C481Y、C481R或C481F突變)的BTK。
在提及BTK抑制的本發明的一個實施例中，這是指野生型BTK。
在提及BTK抑制的本發明的一個實施例中，這是指具有C481突變的BTK。
在提及BTK抑制的本發明的一個實施例中，這是指具有C481S突變的BTK。
在提及BTK抑制的本發明的一個實施例中，這是指具有C481Y突變的BTK。
在提及BTK抑制的本發明的一個實施例中，這是指具有C481R突變的BTK。
在提及BTK抑制的本發明的一個實施例中，這是指具有C481F突變的BTK。
藥學組合物、劑量和投藥
本公開提供藥學組合物，其包括至少一種本公開化合物，或其藥學上可接受的鹽。在一些實施例中，藥學組合物包括超過一種本公開化合物，或其藥學上可接受的鹽。在一些實施例中，藥學組合物包括一種或多種本公開化合物，或其藥學上可接受的鹽，和藥學上可接受的載劑。
一般來說，藥學上可接受的載劑是所屬領域中的常規藥用載劑，其可以藥學領域中眾所周知的方式製備。在一些實施例中，本公開的化合物或其藥學上可接受的鹽可與藥學上可接受的載劑混合以製備藥學組合物。
藥學組合物的形式取決於多種標準，包含(但不限於)投藥途徑、疾病程度或待投予的劑量。藥學組合物可配製成口服、鼻用、經直腸、經皮、靜脈內或肌肉內投藥。根據所需的投藥途徑，藥學組合物可以配製成片劑、膠囊、丸劑、粉劑、顆粒劑、藥囊、扁囊劑、口含片、懸浮液、乳液、溶液、糖漿、氣霧劑(呈固體形式或在液體介質中)、噴霧劑、軟膏、糊漿、乳膏、洗劑、凝膠、貼片、吸入劑或栓劑形式
在某些實施例中，藥學組合物包括約1 mg到約500 mg的本公開化合物或其藥學上可接受的鹽，具體來說1 mg到約200 mg。也可一天一次、一天兩次、一天三次或甚至一天四次投予藥學組合物。然而，日劑量將必須根據所治療宿主、特定投藥途徑和所治療疾病的嚴重程度而變化。因此，最優劑量可由治療任何特定患者的醫師來確定。
如本文所提供的化合物或其藥學上可接受的鹽的治療有效量將取決於所屬領域中已知的各種因素，如體重、年齡、既往病史、當前藥物、個體的健康狀態和交叉反應、過敏、敏感和不良副作用的可能性，以及投藥途徑和疾病發展程度。如由這些和其它情況或要求所指示，所屬領域的一般技術人員(例如，醫生或獸醫)可按比例減少或增加劑量。
在本發明的另一方面中，提供一種藥學組合物，其包括如本文所定義的式
(I)
化合物或其藥學上可接受的鹽，以及藥學上可接受的稀釋劑或載劑。
在本發明的另一方面中，提供一種藥學組合物，其包括如本文所定義的式
(I)
化合物或其藥學上可接受的鹽，以及藥學上可接受的稀釋劑或載劑，以用於在例如人的溫血動物中產生BTK抑制作用。
在本發明的另一方面中，提供一種藥學組合物，其包括如本文所定義的式
(I)
化合物或其藥學上可接受的鹽，以及藥學上可接受的稀釋劑或載劑，以用於在例如人的溫血動物中產生抗癌作用。
在本發明的另一方面中，提供一種藥學組合物，其包括如本文所定義的式
(I)
化合物或其藥學上可接受的鹽，以及藥學上可接受的稀釋劑或載劑，以用於治療例如人的溫血動物中的小淋巴細胞性淋巴瘤(SLL)、濾泡性淋巴瘤、裡希特氏轉化、套細胞淋巴瘤、慢性淋巴細胞性白血病(CLL)、瓦爾登斯特倫巨球蛋白血症、非霍奇金淋巴瘤、原發性中樞神經系統淋巴瘤、繼發性中樞神經系統淋巴瘤或彌漫性大B細胞淋巴瘤。
在本發明的另一方面中，提供一種藥學組合物，其包括如本文所定義的式
(I)
化合物或其藥學上可接受的鹽，以及藥學上可接受的稀釋劑或載劑，以用於治療已轉移到大腦的彌漫性大B細胞淋巴瘤、原發性中樞神經系統淋巴瘤或繼發性中樞神經系統淋巴瘤。
組合
在一些實施例中，藥學組合物包括一種或多種本公開化合物或其藥學上可接受的鹽作為第一活性成分，且進一步包括第二活性成分。第二活性成分可以是所屬領域中已知的任何抗腫瘤劑，例如PI3K抑制劑、抗CD20抗體、抗PD-1/L1抗體和用於非霍奇金淋巴瘤的其它批准的藥物或藥物組合。第二活性成分抗腫瘤劑的代表性實例包含(但不限於)艾德昔布(idelalisib)、杜韋利昔布(duvelisib)、奧必珠單抗(obinutuzumab)、奧法木單抗(ofatumumab)、利妥昔單抗(rituximab)、阿侖單抗(alemtuzumab)、博萊黴素(bleomycin)、本妥昔單抗(brentuximab)、維多汀(vedotin)、卡莫司汀(carmustine)、環磷醯胺、苯丁酸氮芥(
chlorambucil)、達卡巴嗪(dacarbazine)、地塞米松(
dexamethasone)、多柔比星(doxorubicin)、洛莫司汀(
lomustine)、氮芥(mechlorethamine)、丙卡巴肼(
procarbazine)、強的松(prednisone)、苯達莫司汀(
bendamustine)、維奈妥拉(venetoclax)、強的松、CVP(C-化療藥物環磷醯胺、V-化療藥物長春新鹼(Vincristine)和P-類固醇潑尼松龍(Prednisolone)的組合治療)、米哚妥林(midostaurin)和長春鹼(vinblastine)。
在此，當使用術語“組合”時，應理解，這是指同時、分開或依序投藥。在本公開的一個方面中，“組合”是指同時投藥。在本公開的另一方面中，“組合”是指分開投藥。在本公開的又一方面中，“組合”是指依序投藥。當依續或分開投藥時，延遲投予第二組分不應使得失去組合的有益作用。
因此，在本公開的另一方面中，提供一種如本文所定義的式
(I)
化合物或其藥學上可接受的鹽，以及選自本文上文所列舉的抗腫瘤劑的抗腫瘤劑。
因此，在本公開的另一方面中，提供一種如本文所定義的式
(I)
化合物或其藥學上可接受的鹽，以及選自本文上文所列舉的抗腫瘤劑的抗腫瘤劑，以用於產生抗癌作用。
因此，在本公開的另一方面中，提供一種如本文所定義的式
(I)
化合物或其藥學上可接受的鹽，以及選自本文上文所列舉的抗腫瘤劑的抗腫瘤劑，以用於治療小淋巴細胞性淋巴瘤(SLL)、濾泡性淋巴瘤、裡希特氏轉化、套細胞淋巴瘤、慢性淋巴細胞性白血病(CLL)、瓦爾登斯特倫巨球蛋白血症、非霍奇金淋巴瘤、原發性中樞神經系統淋巴瘤、繼發性中樞神經系統淋巴瘤或彌漫性大B細胞淋巴瘤。
因此，在本公開的另一方面中，提供一種如本文所定義的式
(I)
化合物或其藥學上可接受的鹽，以及選自本文上文所列舉的抗腫瘤劑的抗腫瘤劑，以用於治療已轉移到大腦的彌漫性大B細胞淋巴瘤、原發性中樞神經系統淋巴瘤或繼發性中樞神經系統淋巴瘤。
根據本公開的這個方面，提供一種適合用於治療癌症的組合，其包括如本文所定義的式
(I)
化合物或其藥學上可接受的鹽，和上文所列舉的抗腫瘤劑中的任一種。
根據本公開的另一方面，提供一種藥學組合物，其包括如本文所定義的式
(I)
化合物或其藥學上可接受的鹽，以及選自本文上文所列舉的抗腫瘤劑的抗腫瘤劑，以及藥學上可接受的稀釋劑或載劑。
根據本公開的另一方面，提供一種藥學組合物，其包括如本文所定義的式
(I)
化合物或其藥學上可接受的鹽，以及選自本文上文所列舉的抗腫瘤劑的抗腫瘤劑，以及藥學上可接受的稀釋劑或載劑，用於產生抗癌作用。
根據本公開的另一方面，提供一種藥學組合物，其包括如本文所定義的式
(I)
化合物或其藥學上可接受的鹽，以及選自本文上文所列舉的抗腫瘤劑的抗腫瘤劑，以及藥學上可接受的稀釋劑或載劑，以用於治療小淋巴細胞性淋巴瘤(SLL)、濾泡性淋巴瘤、裡希特氏轉化、套細胞淋巴瘤、慢性淋巴細胞性白血病(CLL)、瓦爾登斯特倫巨球蛋白血症、非霍奇金淋巴瘤、原發性中樞神經系統淋巴瘤、繼發性中樞神經系統淋巴瘤或彌漫性大B細胞淋巴瘤。
根據本公開的另一方面，提供一種藥學組合物，其包括如本文所定義的式
(I)
化合物或其藥學上可接受的鹽，以及選自本文上文所列舉的抗腫瘤劑的抗腫瘤劑，以及藥學上可接受的稀釋劑或載劑，以用於治療已轉移到大腦的彌漫性大B細胞淋巴瘤、原發性中樞神經系統淋巴瘤或繼發性中樞神經系統淋巴瘤。
根據本公開的另一方面，提供一種試劑盒，其包括如本文所定義的式
(I)
化合物或其藥學上可接受的鹽，以及選自本文上文所列舉的抗腫瘤劑的抗腫瘤劑。
根據本公開的另一方面，提供一種試劑盒，其包括：
a)如本文所定義的式
(I)
化合物或其藥學上可接受的鹽，其呈第一單位劑型；
b)選自本文上文所列舉的抗腫瘤劑的抗腫瘤劑；其呈第二單位劑型；和
c)容器裝置，其用於容納所述第一和第二劑型。
藥理學工具
除了其在治療醫學中之用途以外，式
(I)
化合物或其藥學上可接受的鹽還適用作開發和標準化體外和體內測試系統的藥理學工具，以用於評估BTK抑制在如貓、狗、兔、猴、大鼠和小鼠的實驗動物中的作用，作為尋找新治療劑的部分。
治療方法
根據本發明的另一個方面，提供一種如本文所定義的式
(I)
化合物或其藥學上可接受的鹽，其用於通過療法對人體或動物體進行治療的方法中。
根據本發明的這一方面的另一特徵，提供一種在例如人的溫血動物中產生BTK抑制作用的方法，其包括向所述動物投予有效量的如本文所定義的式
(I)
化合物或其藥學上可接受的鹽。
根據本發明的這一方面的另一特徵，提供一種治療例如人的溫血動物的癌症的方法，其包括向所述動物投予有效量的如本文所定義的式
(I)
化合物或其藥學上可接受的鹽。
根據本發明的這一方面的額外特徵，提供一種治療例如人的溫血動物的小淋巴細胞性淋巴瘤(SLL)、濾泡性淋巴瘤、裡希特氏轉化、套細胞淋巴瘤、慢性淋巴細胞性白血病(CLL)、瓦爾登斯特倫巨球蛋白血症、非霍奇金淋巴瘤、原發性中樞神經系統淋巴瘤、繼發性中樞神經系統淋巴瘤或彌漫性大B細胞淋巴瘤的方法，所述方法包括向所述動物投予有效量的如本文所定義的式
(I)
化合物或其藥學上可接受的鹽。
根據本發明的這一方面的額外特徵，提供一種治療例如人的溫血動物的已轉移到大腦的彌漫性大B細胞淋巴瘤、原發性中樞神經系統淋巴瘤或繼發性中樞神經系統淋巴瘤的方法，所述方法包括向所述動物投予有效量的如本文所定義的式
(I)
化合物或其藥學上可接受的鹽。
如本文所使用，術語“治療(treatment/treat)”是指逆轉、減輕如本文所描述的疾病或病症或其一種或多種症狀，延遲其發作，或抑制其進展。在一些實施例中，治療可在已出現一種或多種症狀之後進行。在其它實施例中，治療可在不存在症狀的情況下進行。舉例來說，可在症狀發作之前對易感個體進行治療(例如，依據症狀病史和/或依據遺傳學或其它易感性因素)。治療還可在症狀已消退之後繼續，例如以存在或延遲其復發。
本公開還提供一種篩選適合於用如本文所定義的式
(I)
化合物或其藥學上可接受的鹽治療患者的方法。方法包含對來自患者的腫瘤樣本進行測序且檢測BTK的積累或BTK突變的存在。
根據本公開的這一方面的另一特徵，提供一種治療如人類的溫血動物的癌症的方法，其包括(1)確定溫血動物是否患有易於接受BTK抑制的癌症，和(2)如果是，那麼向所述動物投予有效量的如本文所定義的式
(I)
化合物或其藥學上可接受的鹽。
化合物的用途
在某些實施例中，本公開提供本公開的化合物、其藥學上可接受的鹽或藥學組合物的用途，其用於製造用於治療BTK介導的或依賴性疾病或病況的藥物。
因此，根據本發明的這一方面，提供一種如本文所定義的式
(I)
化合物或其藥學上可接受的鹽，其用作藥物。
因此，根據本發明的這一方面，提供如本文所定義的式
(I)
化合物或其藥學上可接受的鹽作為藥物的用途。
因此，根據本發明的這一方面，提供一種如本文所定義的式
(I)
化合物或其藥學上可接受的鹽，其用於療法中。
根據本發明的另一方面，提供如本文所定義的式
(I)
化合物或其藥學上可接受的鹽的用途，其用於製造用於在例如人的溫血動物中產生BTK抑制作用的藥物。
根據本發明的這一方面，提供如本文所定義的式
(I)
化合物或其藥學上可接受的鹽的用途，其用於製造用於在例如人的溫血動物中產生抗癌作用的藥物。
根據本發明的另一特徵，提供如本文所定義的式
(I)
化合物或其藥學上可接受的鹽的用途，其用於製造用於治療以下疾病的藥物：小淋巴細胞性淋巴瘤(SLL)、濾泡性淋巴瘤、裡希特氏轉化、套細胞淋巴瘤、慢性淋巴細胞性白血病(CLL)、瓦爾登斯特倫巨球蛋白血症、非霍奇金淋巴瘤、原發性中樞神經系統淋巴瘤、繼發性中樞神經系統淋巴瘤或彌漫性大B細胞淋巴瘤。
根據本發明的另一特徵，提供如本文所定義的式
(I)
化合物或其藥學上可接受的鹽的用途，其用於製造用於治療以下疾病的藥物：已轉移到大腦的彌漫性大B細胞淋巴瘤、原發性中樞神經系統淋巴瘤或繼發性中樞神經系統淋巴瘤。
根據本發明的另一方面，提供如本文所定義的式
(I)
化合物或其藥學上可接受的鹽的用途，其用於在例如人的溫血動物中產生BTK抑制作用。
根據本發明的這一方面，提供如本文所定義的式
(I)
化合物或其藥學上可接受的鹽的用途，其用於在例如人的溫血動物中產生抗癌作用。
根據本發明的另一特徵，提供一種如本文所定義的式
(I)
化合物或其藥學上可接受的鹽，其用於治療小淋巴細胞性淋巴瘤(SLL)、濾泡性淋巴瘤、裡希特氏轉化、套細胞淋巴瘤、慢性淋巴細胞性白血病(CLL)、瓦爾登斯特倫巨球蛋白血症、非霍奇金淋巴瘤、原發性中樞神經系統淋巴瘤、繼發性中樞神經系統淋巴瘤或彌漫性大B細胞淋巴瘤。
根據本發明的另一特徵，提供一種如本文所定義的式
(I)
化合物或其藥學上可接受的鹽，其用於治療已轉移到大腦的彌漫性大B細胞淋巴瘤、原發性中樞神經系統淋巴瘤或繼發性中樞神經系統淋巴瘤。
在上文藥學組合物、方法、用途和藥物製造特徵中，本文所描述的本公開化合物的替代和優選實施例也適用。
實例
通用實驗 縮寫
在實例中的合成流程中說明本文所提供的化合物(包含其藥學上可接受的鹽)的合成。本文所提供的化合物可使用任何已知的有機合成技術製備且可根據多種可能的合成途徑中的任一種合成，且因此，這些流程只是說明性的且不打算限制可用於製備本文所提供的化合物的其它可能的方法。另外，方法中的步驟是為了更好地說明且可在適當時改變。出於研究和可能提交給管理機構的目的來合成實例中的化合物的實施例。
用於製備本公開化合物的反應可在合適的溶劑中進行，所述溶劑可由有機合成領域的技術人員容易地選擇。合適的溶劑可在進行反應的溫度下，例如可在範圍介於溶劑的冷凍溫度到溶劑的沸騰溫度的溫度下基本上對起始材料(反應物)、中間物或產物不具有反應性。指定反應可在一種溶劑或超過一種溶劑的混合物中進行。取決於特定反應步驟，用於特定反應步驟的合適溶劑可由熟練技術人員選擇。
本公開的化合物的製備可涉及各種化學基團的保護和脫保護。對於保護和脫保護的需求，和適當保護基的選擇可由所屬領域的技術人員容易地確定。保護基的化學性質可見於例如T. W. Greene和P. G. M. Wuts,《有機合成中的保護基(Protective Groups in Organic Synthesis)》, 第3版, 威利父子公司(Wiley & Sons, Inc.), 紐約(New York) (1999)，其以全文引用的方式併入本文中。
可根據所屬領域中已知的任何合適方法監測反應。舉例來說，可通過光譜手段，如核磁共振光譜(例如，
1
H或
13
C)、紅外光譜、分光光度法(例如，UV-可見光)、質譜，或通過色譜法，如高壓液相色譜(HPLC)、液相色譜-質譜(LCMS)或薄層色譜(TLC)來監測產物形成。所屬領域的技術人員可通過多種方法來純化化合物，包含高效液相色譜(HPLC)(“《製備型LC-MS純化：改善的化合物特異性方法優化(Preparative LC-MS Purification：Improved Compound Specific Method Optimization)》”, Karl F. Blom, Brian Glass, Richard Sparks, Andrew P. Combs,《組合化學雜誌(J. Combi. Chem.)》, 2004, 6(6), 874-883，其以全文引用的方式併入本文中)、超臨界流體色譜(SFC)和正相二氧化矽色譜。
通過核磁共振(NMR)或/和液相色譜-質譜(LC-MS)來表徵實例中的化合物的結構。NMR化學位移(
δ
)以10
-6
(ppm)為單位給出。在Bruker AVANCE NMR(400 MHz)分光儀上使用ICON-NMR(在TopSpin程式控制下)，或在Varian 400MR NMR或Varian VNMR400 NMR(400 MHz)分光儀上(在VnmrJ程式控制下)使用四甲基矽烷作為內標在二甲亞碸-
d6
(DMSO-
d6
)或CDCl
3
或CD
3
OD或D
2
O或丙酮-
d6
或CD
3
CN(來自奧德里奇(Aldrich)或劍橋同位素實驗室公司(Cambridge Isotope Lab., Inc.))中記錄
1
H-NMR光譜。
使用Shimadzu 2010質譜儀或Agilent 6110A MSD或1969A TOF質譜儀，使用電噴霧、化學和電子碰撞電離方法由一系列儀器進行MS測量。用於本發明中的詳細方法包含：
LC-MS 方法 A
：10-80AB_7min_220&254_Shimadzu.lcm
流動相：1.5 mL/4 L TFA/水(溶劑A)和0.75 mL/4 L TFA/乙腈(溶劑B)，歷經6分鐘使用10%-80%(溶劑B)洗脫梯度且以0.8 mL/min的流速在80%下保持0.5分鐘；
柱：Xtimate C18 2.1*30mm，3μm；
波長：UV 220nm，254nm；
柱溫：50℃；
MS電離：ESI
LC-MS 方法 B
：10-80AB_4min_220&254_Shimadzu.lcm
流動相：1.5 mL/4 L TFA/水(溶劑A)和0.75 mL/4 L TFA/乙腈(溶劑B)，歷經3分鐘使用10%-80%(溶劑B)洗脫梯度且以0.8 mL/min的流速在80%下保持0.5分鐘；
柱：Xtimate C18 2.1*30mm，3μm；
波長：UV 220nm，254nm；
柱溫：50℃；
MS電離：ESI
LC-MS 方法 C
：10-80CD_7min_220&254_Agilent.lcm
流動相：0.2 mL/1L NH
3
.H
2
O/水(溶劑A)和乙腈(溶劑B)，歷經6分鐘使用10%-80%(溶劑B)洗脫梯度且以0.8 mL/min的流速在80%下保持0.5分鐘；
柱：Xbrige Shield RP-18，5μm，2.1*50mm；
波長：UV 220nm和254nm；
柱溫：30℃；
MS電離：ESI
在Shimadzu LC-20A系統或Shimadzu LC-2010HT系列，或Agilent 1200 LC或Agilent 1100系列上，使用Ultimate XB-C18柱(3.0*50mm，3μm或3.0*150mm，3μm)，或
Xbridge shieldRP18柱(5μm，50mm*2.1mm)，或Xtimate C18柱(3μm，2.1*30mm)，或MERCK RP18 2.5-2 mm等進行高效液相色譜(HPLC)測量。用於本發明中的詳細方法包含：
HPLC 方法 A
：10-80AB_8min.met
流動相：2.75 mL/4 L TFA/水(溶劑A)和2.5 mL/4L TFA/乙腈(溶劑B)，歷經6分鐘使用10%-80%(溶劑B)洗脫梯度且以1.2 mL/min的流速在80%下保持2分鐘；
柱：Ultimate C18 3.0*50mm，3μm
波長：UV220nm，215nm，254nm；
柱溫：40℃；
HPLC 方法 B
：10-80CD_8min.met
流動相：2.0 mL/4 L NH
3
H
2
O/水(溶劑A)和乙腈(溶劑B)，歷經4分鐘使用10%-80%(溶劑B)洗脫梯度且以1.2 mL/min的流速在80%下保持2分鐘；
柱：Xbrige Shield RP-18，2.1*50mm，5μm；
波長：UV 220nm，215nm，254nm；
柱溫：40℃；
在Agilent 1260系列或Waters UPCC系列，或Shimadzu LC-20AB系列上，使用ChiralPak AD-3柱(3μm，150×4.6mm)，或Chiralcel OJ-3柱(3μm，150×4.6mm)，或Chiralpak IG-3柱(3μm，50mm*4.6mm)等進行超臨界流體色譜(SFC)測量。用於本發明中的詳細方法包含：
SFC 方法 A ：
流動相：A：CO
2
，B：乙醇(0.05% DEA)，梯度：在5.5min內5%到40%的B且保持40%持續3 min，接著5%的B持續1.5 min，流速：2.5 mL/min；
柱：ChiralPak AD-3 150×4.6mm I.D.，3μm；
柱溫：40℃；
背壓：100巴。
SFC 方法 B ：
流動相：A：CO
2
，B：甲醇(0.05% DEA)，梯度：在5 min內5%到40%的B和在0.5min內40%到5%的B，保持5%的B持續1.5 min，流速：2.5mL/min
柱：Chiralcel OJ-3 150×4.6mm I.D.，3μm；
柱溫：35℃；
ABPR：1500psi。
SFC 方法 C ：
流動相：A：CO
2
，B：甲醇(0.05% DEA)，等度：40% B，流速：4 mL/min；
柱：Chiralpak IG-3 50mm×4.6mm I.D.，3μm；
柱溫：35℃；
ABPR：1500psi。
使用Yantai Huanghai HSGF254矽膠或Anhui Liang
Chen Gui Yuan板進行薄層色譜。用於薄層色譜(TLC)的矽膠板是0.15mm~0.2mm。通過TLC分離且純化產物所使用的矽膠板是0.4mm~0.5mm。
純化色譜柱使用矽膠作為載體(100~200、200~300或300~400目，由煙臺黃海公司(Yantai Huanghai co.)或安徽梁晨歸元公司(Anhui Liang Chen Gui Yuan co.)等製造)，或快速柱(二氧化矽-CS快速柱40-60μm，或反相C18柱20-35μm，由艾傑爾科技公司(Agela Technologies)等製造)或Teledyne ISCO combi-flash或Biotage快速系統中的艾傑爾科技公司的快速柱二氧化矽-CS(40-60μm)或C18柱(20-40μm)。柱的大小根據化合物的量進行調整。
本公開的已知起始材料可通過使用或根據所屬領域中已知的方法合成，或可購自阿法埃莎公司(Alfa Aesar)、梯希愛(TCI)、奧德里奇、上海畢得醫藥科技有限公司(Bepharm)和上海思闊化學科技有限公司(Scochem)(或南京藥石科技股份有限公司(PharmaBlock)、畢得醫藥(Bide)、阿美特克(Amatek)、倍達醫藥科技有限公司(Stru Chem)、福斯特醫藥公司(Firster Pharmaceutical)、泰坦科技(Titan)(阿達瑪斯(Adamas))等)。
除非另外說明，否則反應都在氬氣或氮氣氣氛下進行。氬氣或氮氣氣氛是指反應燒瓶連接到體積為約1L的氬氣或氮氣氣球。氫化通常在壓力下進行。除非另外說明，否則實例中的反應溫度為環境溫度，其為10℃~30℃。
通過TLC或/和LC-MS監測反應進展。用於反應的洗脫劑系統包含二氯甲烷-甲醇系統和石油醚-乙酸乙酯系統。根據化合物的不同極性調整溶劑的體積比。
用於純化化合物的柱色譜的洗脫系統和TLC的洗脫劑系統包含二氯甲烷-甲醇系統和石油醚-乙酸乙酯系統。根據化合物的不同極性調整溶劑的體積比。可添加少量鹼性或酸性藥劑(0.1%~1%)，如甲酸、或乙酸、或TFA或胺水以進行調節。
本發明的化合物 | 化合物編號 | 化合物結構和名稱 |
| 1 | |
| (5-(8-胺基-1-(4-苯氧基苯基)咪唑[1,5-a]吡嗪-3-基)四氫-2H-吡喃-2-基)甲醇 |
| 2 | |
| (5-(8-胺基-1-(2-氟-4-苯氧基苯基)咪唑[1,5-a]吡嗪-3-基)四氫-2H-吡喃-2-基)甲醇 |
| 3 | |
| (5-(8-胺基-1-(2-氟-4-苯氧基苯基)咪唑[1,5-a]吡嗪-3-基)四氫-2H-吡喃-2-基)甲醇 |
| 4 | |
| (5-(8-胺基-1-(2,3-二氟-4-苯氧基苯基)咪唑[1,5-a]吡嗪-3-基)四氫-2H-吡喃-2-基)甲醇 |
| 5 | |
| (5-(8-胺基-1-(2,3-二氟-4-苯氧基苯基)咪唑[1,5-a]吡嗪-3-基)四氫-2H-吡喃-2-基)甲醇 |
| 6 | |
| (5-(8-胺基-1-(4-(2,3-二氟苯氧基)苯基)咪唑[1,5-a]吡嗪-3-基)四氫-2H-吡喃-2-基)甲醇 |
| 7 | |
| (5-(8-胺基-1-(4-(2,3-二氟苯氧基)苯基)咪唑[1,5-a]吡嗪-3-基)四氫-2H-吡喃-2-基)甲醇 |
| 8 | |
| (5-(4-胺基-5-(2-氟-4-苯氧基苯基)咪唑[5,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)四氫-2H-吡喃-2-基)甲醇 |
| 9 | |
| (5-(4-胺基-5-(2-氟-4-苯氧基苯基)咪唑[5,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)四氫-2H-吡喃-2-基)甲醇 |
| 10 | |
| (5-(4-胺基-5-(2-氟-4-苯氧基苯基)咪唑[5,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)四氫-2H-吡喃-2-基)甲醇 |
| 11 | |
| (5-(4-胺基-5-(2-氟-4-苯氧基苯基)咪唑[5,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)四氫-2H-吡喃-2-基)甲醇 |
| 12 | |
| (5-(4-胺基-5-(2,3-二氟-4-苯氧基苯基)咪唑[5,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)四氫-2H-吡喃-2-基)甲醇 |
| 13 | |
| (5-(4-胺基-5-(2,3-二氟-4-苯氧基苯基)咪唑[5,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)四氫-2H-吡喃-2-基)甲醇 |
| 14 | |
| (5-(4-胺基-5-(4-(2,3-二氟苯氧基)苯基)咪唑[5,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)四氫-2H-吡喃-2-基)甲醇 |
| 15 | |
| (5-(4-胺基-5-(4-(2,3-二氟苯氧基)苯基)咪唑[5,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)四氫-2H-吡喃-2-基)甲醇 |
| 16 | |
| 3-(6-((二甲基胺基)甲基)四氫-2H-吡喃-3-基)-1-(2-氟-4-苯氧基苯基)咪唑[1,5-a]吡嗪-8-胺 |
| 17 | |
| 3-(6-((二甲基胺基)甲基)四氫-2H-吡喃-3-基)-1-(2-氟-4-苯氧基苯基)咪唑[1,5-a]吡嗪-8-胺 |
| 18 | |
| 7-(6-((二甲基胺基)甲基)四氫-2H-吡喃-3-基)-5-(2-氟-4-苯氧基苯基)咪唑[5,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺 |
| 19 | |
| 7-(6-((二甲基胺基)甲基)四氫-2H-吡喃-3-基)-5-(2-氟-4-苯氧基苯基)咪唑[5,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺 |
| 20 | |
| 7-(6-(氮雜環丁烷-1-基甲基)四氫-2H-吡喃-3-基)-5-(2-氟-4-苯氧基苯基)咪唑[5,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺 |
| 21 | |
| 7-(6-(氮雜環丁烷-1-基甲基)四氫-2H-吡喃-3-基)-5-(2-氟-4-苯氧基苯基)咪唑[5,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺 |
| 22 | |
| 5-(2-氟-4-苯氧基苯基)-7-(6-(甲氧基甲基)四氫-2H-吡喃-3-基)咪唑[5,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺 |
| 23 | |
| 5-(2-氟-4-苯氧基苯基)-7-(6-(甲氧基甲基)四氫-2H-吡喃-3-基)咪唑[5,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺 |
| 24 | |
| 5-(2-氟-4-苯氧基苯基)-7-(四氫-2H-吡喃-3-基)咪唑[5,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺 |
| 25 | |
| 5-(2-氟-4-苯氧基苯基)-7-(四氫-2H-吡喃-3-基)咪唑[5,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺 |
| 26 | |
| 5-(2-氟-4-苯氧基苯基)-7-(6-甲基四氫-2H-吡喃-3-基)咪唑[5,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺 |
| 27 | |
| 5-(2-氟-4-苯氧基苯基)-7-(6-甲基四氫-2H-吡喃-3-基)咪唑[5,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺 |
表 1 ： 本發明的化合物 合成方法
可根據以下兩種合成方法來製備本發明的化合物。
方法 A 化合物 2A ： 5-(((3- 氯吡嗪 -2- 基 ) 甲基 ) 胺基甲醯基 ) 四氫 -2H- 吡喃 -2- 甲酸乙酯
向6-(乙氧基羰基)四氫-2H-吡喃-3-甲酸(參見WO2019001420A1)(5.90 g，29.17 mmol)和化合物
1A
(5.25 g，29.17 mmol)於二氯甲烷(150 mL)中的混合物中添加HATU(16.64 g，43.76 mmol)和DIEA(11.31 g，87.51 mmol)。將混合物在室溫(18-22℃)下攪拌12小時。將反應物濃縮且用水(100 mL)稀釋，用乙酸乙酯(200 mL*3)萃取。將合併的有機層用鹽水(200 mL*4)洗滌，用無水硫酸鈉乾燥，過濾且濃縮以得到粗產物。通過矽膠柱色譜(2.5-3.5%甲醇/二氯甲烷)來純化粗產物以得到呈黃色油狀物的化合物
2A
(9.0 g，產率94.0%)。
LCMS: tR=在5-95AB_1.5min_220&254_Shimadzu.lcm色譜(Agilent Pursult 5 C18 20*2.0mm)中為0.689 min, MS (ESI) m/z = 328.2 [M+H]
+ 化合物 3A ： 5-(8- 氯咪唑並 [1,5-a] 吡嗪 -3- 基 ) 四氫 -2H- 吡喃 -2- 甲酸乙酯
向化合物
2A
(9.0 g，27.46 mmol)和DMF(600 μL)於MeCN(150 mL)中的混合物中添加POCl
3
(21.05 g，137.30 mmol)。將混合物在70℃下攪拌1小時。將反應物濃縮且用水(50 mL)和飽和NaHCO
3
(50 mL)洗滌，用乙酸乙酯(100 mL*3)萃取。將合併的有機層用鹽水(200 mL)洗滌，用無水硫酸鈉乾燥，過濾且濃縮以得到粗產物。通過矽膠柱色譜(52~62%乙酸乙酯/石油醚)來純化粗產物以得到呈黃色油狀物的化合物
3A
(3.5 g，產率41.2%)。
LCMS:
t
R
=在5-95AB_1.5min_220&254_Shimadzu.lcm色譜(Agilent Pursult 5 C18 20*2.0mm)中為0.742 min, MS (ESI) m/z = 310.2 [M+H]
+ 1 H NMR
(400MHz, CDCl
3
):
δ = 7.80 (d,
J
= 0.4 Hz, 1H), 7.70-7.64 (m, 1H), 7.37 (d,
J
= 4.8 Hz, 0.3H), 7.35 (d,
J
= 4.8 Hz, 0.7H), 4.44 (t,
J
= 4.4 Hz, 0.7H), 4.30-4.25 (m, 2H), 4.23-4.14 (m, 1H), 4.00 (dd,
J
= 3.2, 12.0 Hz, 1H), 3.79 (t,
J
= 11.2 Hz, 0.4H), 3.42-3.19 (m, 1H), 2.47-2.37 (m, 0.8H), 2.29-2.06 (m, 3H), 1.91-1.77 (m, 0.4H), 1.35-1.31 (m, 3H)。
化合物 4A ： (5-(8- 氯咪唑並 [1,5-a] 吡嗪 -3- 基 ) 四氫 -2H- 吡喃 -2- 基 ) 甲醇
在0℃下，向LiAlH
4
(860 mg，22.60 mmol)於THF(20 mL)中的混合物中添加含化合物
3A
(3.5 g，11.30 mmol)的THF(20 mL)。將混合物在0℃下攪拌1小時。將反應物用水(860 μL)、15% NaOH(860 μL)和水(2580 μL)淬滅。將混合物用無水硫酸鈉乾燥且在室溫下攪拌0.5小時，過濾且濃縮以得到呈黃色固體狀的化合物
4A
(2.7 g，產率89.4%)。
LCMS:
t
R
=在5-95AB_1.5min_220&254_Shimadzu.lcm色譜(Agilent Pursult 5 C18 20*2.0mm)中為0.635 min, MS (ESI) m/z = 267.8 [M+H]
+ 化合物 5A ： (5-(1- 溴 -8- 氯咪唑並 [1,5-a] 吡嗪 -3- 基 ) 四氫 -2H- 吡喃 -2- 基 ) 甲醇
向化合物
4A
(2.7 g，10.11 mmol)於MeCN(100 mL)中的混合物中添加NBS(2.34 g，13.14 mmol)。將混合物在室溫(16-20℃)下攪拌1小時。將反應物濃縮以得到粗產物，所述粗產物通過矽膠柱色譜純化(2.2%甲醇/二氯甲烷)以得到呈黃色固體狀的化合物
5A
(2.5 g，產率71.63%)。
LCMS:
t
R
=在5-95AB_1.5min_220&254_Shimadzu.lcm色譜(Agilent Pursult 5 C18 20*2.0mm)中為0.717 min, MS (ESI) m/z = 347.8 [M+H]
+ 化合物 6A ： (5-(8- 胺基 -1- 溴咪唑並 [1,5-a] 吡嗪 -3- 基 ) 四氫 -2H- 吡喃 -2- 基 ) 甲醇
向化合物
5A
(2.5 g，7.21 mmol)於IPA(15 mL)中的混合物中添加NH
3
∙H
2
O(15 mL)。在100 mL密封試管中將混合物在100℃下攪拌12小時。將反應物濃縮以得到呈黃色油狀物的化合物
6A
(2.4 g，純度98.0%)。
LCMS:
t
R
=在10-80AB_3min_220&254_Shimadzu.lcm色譜(Xtimate C18 2.1*30mm)中為0.436 min, MS (ESI) m/z = 327.1 [M+H]
+ 化合物 7A ： (5-(8- 胺基 -1-(2- 氟 -4- 苯氧基苯基 ) 咪唑 [1,5-a] 吡嗪 -3- 基 ) 四氫 -2H- 吡喃 -2- 基 ) 甲醇
在氮氣下，向化合物
6A
(500 mg，1.31 mmol，純度97.99%)和(2-氟-4-苯氧基苯基)硼酸(450 mg，1.95 mmol)於1,4-二噁烷(15 mL)/H
2
O(5 mL)中的混合物中添加Pd(dppf)Cl
2
.CH
2
Cl
2
(32 mg，0.04 mmol)和K
2
CO
3
(375 mg，2.62 mmol)。將混合物在氮氣下在100℃下攪拌12小時。將反應物用水(20 mL)稀釋，用乙酸乙酯(50 mL*3)萃取。將合併的有機層用鹽水(100 mL)洗滌，用無水硫酸鈉乾燥，過濾且濃縮以得到粗產物。通過矽膠柱色譜(2.2%甲醇/二氯甲烷)來純化粗產物以得到呈黃色固體狀的化合物
7A
(順式/反式外消旋物的混合物)(150 mg，產率26.4%)。
LCMS:
t
R
=在5-95AB_1.5min_220&254_Shimadzu.lcm色譜(Agilent Pursult 5 C18 20*2.0mm)中為0.723 min, MS (ESI) m/z = 435.1 [M+H]
+ 2- 氟 -4- 苯氧基苯基 ) 硼酸 ：
在室溫(25-30℃)下，添加化合物
1a
(10 g，52.35
mmol)於CH
2
Cl
2
(480 mL)、PhB(OH)
2
(12.8 g，104.71 mmol)、Cu(OAc)
2
(9.5 g，52.35 mmol)、NEt
3
(21 mL，151.05 mmol)和4Å Ms(5 g)中的混合物。將混合物在空氣下在室溫(25-30℃)下攪拌16小時。通過矽藻土墊過濾混合物。在真空中濃縮濾液以得到粗產物，所述粗產物通過矽膠柱色譜(石油醚)純化以獲得呈無色油狀物的化合物
2a
(11.3 g，產率80.8%)。
1 H NMR
(400MHz, CDCl
3
): δ = 7.47 (t,
J
= 8.4 Hz, 1H), 7.42-7.36 (m, 2H), 7.19 (t,
J
= 8.4 Hz, 1H), 7.05 (d,
J
= 8.0 Hz, 2H), 6.78 (dd,
J
= 10.0, 2.8 Hz, 1H), 6.71 (dd,
J
= 8.8, 2.0 Hz, 1H)。
在-65℃下，向-65℃下的化合物
2a
(11.3 g，42.30 mmol)於THF(150 mL)中的溶液中添加n-BuLi(19 mL，46.53 mmol，2.5 N於正己烷中)。將混合物在-65℃下攪拌0.5小時。接著在-65℃下添加B(O
i
-Pr)
3
(9.5 g，50.76 mmol)。將混合物在-65℃下攪拌2小時。將混合物用飽和氯化銨溶液(50 mL)淬滅，用乙酸乙酯(50 mL*3)萃取，用鹽水(100 mL*2)洗滌。將合併的有機層用無水硫酸鈉乾燥，過濾且濃縮以得到粗產物，將所述粗產物用石油醚(100 mL)研磨，過濾且將濾餅濃縮以得到呈黃色油狀物的2-氟-4-苯氧基苯基)硼酸(4.3 g)。將濾液濃縮且通過矽膠柱色譜(0~20%乙酸乙酯/石油醚)純化以得到呈黃色油狀物的2-氟-4-苯氧基苯基)硼酸(3 g)。
1 H NMR
(400MHz, DMSO-
d6
): δ = 8.10 (s, 2H), 7.58 (t,
J
= 8.0 Hz, 1H), 7.47-7.41 (m, 2H), 7.22 (t,
J
= 7.6 Hz, 1H), 7.09 (d,
J
= 7.6 Hz, 2H), 6.78-6.68 (m, 2H)。
反式異構體 1 ， 化合物 2 ： 反式 -(5-(8- 胺基 -1-(2- 氟 -4- 苯氧基苯基 ) 咪唑 [1,5-a] 吡嗪 -3- 基 ) 四氫 -2H- 吡喃 -2- 基 ) 甲醇 反式異構體 2 ， 化合物 3 ： 反式 -(5-(8- 胺基 -1-(2- 氟 -4- 苯氧基苯基 ) 咪唑 [1,5-a] 吡嗪 -3- 基 ) 四氫 -2H- 吡喃 -2- 基 ) 甲醇
將混合物
7A
(150 mg，0.35 mmol)通過手性SFC(柱：DAICEL CHIRALPAK AD-H)(250mm
*
30mm，10μm)，條件：0.1% NH
3
.H
2
O/EtOH，40%，流速80 mL/min)來純化。將含有所需化合物的級分濃縮，用H
2
O(10 mL)和CH
3
CN (10 mL)稀釋，凍幹以得到呈白色固體狀的化合物2(34.8 mg，產率23.2%)和呈白色固體狀的化合物3(29.4 mg，19.6%)。未收集到兩種順式對映異構體。
化合物 2
的光譜：
LCMS t
R
=在10-80AB_7min_220&254_ Shimadzu.lcm色譜(Xtimate C18 2.1*30mm)中為2.037 min, MS (ESI) m/z = 435.3 [M+H]
+
。
HPLC t
R
=在10-80AB_8min.met (HPLC-BJ Ultimate 3.0*50mm 3μm)中為3.03 min。
SFC t
R
=6.119 min，光學純度：96.3%。方法注釋：柱：ChiralPak AD-3 150×4.6mm I.D.，3μm，流動相：A：CO
2
，B：乙醇(0.05% DEA)，梯度：在5.5min內5%到40%的B且保持40%持續3 min，接著5%的B持續1.5 min，流速：2.5 mL/min，柱溫：40℃，背壓：100巴。
1 HNMR
(400MHz, CD
3
OD)
δ
= 7.63 (d,
J
= 5.2 Hz, 1H), 7.54-7.36 (m, 3H), 7.27-7.18 (m, 1H), 7.14 (dd,
J
= 8.8, 0.8 Hz, 2H), 7.02 (d,
J
= 4.8 Hz, 1H), 6.98-6.82 (m, 2H), 4.23-4.07 (m, 1H), 3.75 (t,
J
= 11.2 Hz, 1H), 3.62-3.51 (m, 3H), 3.46-3.36 (m, 1H), 2.25-2.15 (m, 1H), 2.13-1.96 (m, 1H), 1.79 (d,
J
= 13.6 Hz, 1H), 1.66-1.49 (m, 1H)。
19 FNMR
(CD
3
OD) δ = -112.240
化合物 3
的光譜：
LCMS
t
R
=在10-80AB_7min_220&254_Shimadzu.lcm色譜(Xtimate C18 2.1*30mm)中為2.030 min, MS (ESI) m/z = 435.3 [M+H]
+
。
HPLC
t
R
=在10-80AB_8min.met(HPLC-BJ Ultimate 3.0*50mm 3μm)中為3.02 min。
SFC
t
R
=7.334，光學純度：92.7%。方法注釋：柱：ChiralPak AD-3 150×4.6mm I.D.，3μm，流動相：A：CO
2
，B：乙醇(0.05% DEA)，梯度：在5.5min內5%到40%的B且保持40%持續3 min，接著5%的B持續1.5 min，流速：2.5 mL/min，柱溫：40℃，背壓：100巴。
1 H NMR
(400MHz, CD
3
OD) δ =7.65 (d,
J
= 5.2 Hz, 1H), 7.52-7.37 (m, 3H), 7.29-7.21 (m, 1H), 7.20-7.11 (m, 2H), 7.04 (d,
J
= 4.8 Hz, 1H), 6.99-6.84 (m, 2H), 4.24-4.13 (m, 1H), 3.77 (t,
J
= 11.2 Hz, 1H), 3.62-3.51 (m, 3H), 3.48-3.77 (m, 1H), 2.31-2.17 (m, 1H), 2.15-2.01 (m, 1H), 1.91-1.74 (m, 1H), 1.69-1.51 (m, 1H)。
19 F NMR
(400MHz, CD
3
OD) δ = -112.258。
根據方法A合成以下化合物：
方法 B 化合物 2B ： 5-(((3- 胺基 -5- 羥基 -1,2,4- 三嗪 -6- 基 ) 甲基 ) 胺基甲醯基 ) 四氫 -2H- 吡喃 -2- 甲酸乙酯
向四氫-2H-吡喃-2,5-二甲酸5-(2,5-二氧代吡咯烷-1-基)酯2-乙酯(20 g粗產物，60.88 mmol)於乙腈(30 mL)中的混合物中添加化合物
1B
(13 g，60.88 mmol)和三乙胺(25 mL，182.6 mmol)。將混合物在50℃下攪拌16小時。將混合物濃縮以得到呈棕色固體狀的化合物
2B
(35 g粗產物)。
LCMS:
t
R
=在5-95AB_1.5min_220&254_Shimadzu.lcm色譜(Merck RP18 25-3mm)中為0.582 min, MS (ESI) m/z = 325.9 [M+H]
+ 四氫 -2H- 吡喃 -2,5- 二甲酸 5-(2,5- 二氧代吡咯烷 -1- 基 ) 酯 2- 乙酯：
向6-(乙氧基羰基)四氫-2H-吡喃-3-甲酸(1.4 g，6.92 mmol)於CH
2
Cl
2
(30 mL)中的溶液中添加1-羥基吡咯烷-2,5-二酮(877 mg，7.61 mmol)和EDCI(1.6 g，8.30 mmol)。將混合物在22-26℃下攪拌1.5小時將混合物用二氯甲烷(30 mL)稀釋，用鹽水(50 mL × 3)洗滌。將有機層用無水硫酸鈉乾燥，過濾且濃縮以得到直接使用的呈無色油狀物的四氫-2H-吡喃-2,5-二甲酸5-(2,5-二氧代吡咯烷-1-基)酯2-乙酯。
化合物 3B ： 5-(2- 胺基 -4- 羥基咪唑並 [5,1-f][1,2,4] 三嗪 -7- 基 ) 四氫 -2H- 吡喃 -2- 甲酸乙酯
向化合物
2B
(35 g粗產物，60.88 mmol)於乙腈(300 mL)中的溶液中添加氧氯化磷(23 mL，243.52 mmol)。接著將混合物在70℃下攪拌16小時。濃縮混合物，將殘餘物用二氯甲烷(150 mL)稀釋，倒入冷卻的飽和碳酸氫鈉溶液(300 mL)中達pH =8，用二氯甲烷/甲醇(10:1，200 mL*4)萃取，隨後用IPA/CHCl
3
(150 mL*4)萃取。將合併的有機層用無水硫酸鈉乾燥，過濾且濃縮以得到呈黑色油狀物的化合物
3B
(45 g粗產物)。
LCMS:
t
R
=在5-95AB_1.5min_220&254_Shimadzu.lcm色譜(Merck RP18 25-3mm)中為0.13 min, MS (ESI) m/z = 308.0 [M+H]
+ 化合物 4B ： 5-(2- 胺基 -5- 溴 -4- 羥基咪唑並 [5,1-f][1,2,4] 三嗪 -7- 基 ) 四氫 -2H- 吡喃 -2- 甲酸乙酯
向化合物
3B
(45 g粗產物，60.88 mmol)於
N,N
-二甲基甲醯胺(200 mL)中的溶液中添加NBS(11.8 g，66.96 mmol)。將混合物在室溫(16-21℃)下攪拌0.5小時。將混合物倒入水(300 mL)中，用乙酸乙酯(300 mL *4)萃取，用鹽水(500 mL*4)洗滌。將合併的有機層用無水硫酸鈉乾燥，過濾且濃縮以得到呈黑色油狀物的化合物
4B
(19 g粗產物)。
LCMS:
t
R
=在5-95AB_1min_220&254_Agilent色譜(Agilent Poroshell 120 EC-C18 2.7μm 3.0*30mm)中為0.602 min, MS (ESI) m/z = 388.0 [M+H+2]
+
(溴化物同位素)。
化合物 5B ： 5-(5- 溴 -4- 羥基咪唑並 [5,1-f][1,2,4] 三嗪 -7- 基 ) 四氫 -2H- 吡喃 -2- 甲酸乙酯
在0-5℃下，向化合物
4B
(19 g不純，49.19 mmol)於四氫呋喃(300 mL)中的溶液中添加亞硝酸叔丁酯(12 mL，98.39 mmol)，且將混合物在室溫(16-21℃)下攪拌16小時。將混合物與另一批次(化合物
4B
的7.2 g粗產物)合併，且濃縮得到粗物質，所述粗物質通過矽膠柱色譜(0~60%乙酸乙酯/石油醚)純化以得到呈黃色固體狀的化合物
5B
(14.3 g，5個步驟的產率為44%)。
LCMS:
t
R
=在5-95AB_1.5min_220&254_Shimadzu.lcm色譜(Agilent Pursult 5 C18 20*2.0mm)中為0.753 min, MS (ESI) m/z = 370.9 [M+H]
+ 1 H NMR (
400MHz, CD
3
OD
)
:
δ = 7.74 (s, 0.3H), 7.72 (s, 0.5H), 4.37 (t,
J
= 4.8 Hz, 0.7H), 4.29-4.16 (m, 3H), 4.12 (dd,
J
= 11.6, 2.0 Hz, 0.3H), 3.92 (dd,
J
= 11.6, 4.0 Hz, 0.7H), 3.70 (t,
J
= 11.2 Hz, 0.4H), 3.57-3.45 (m, 1H), 2.35-1.92 (m, 4H), , 1.33-1.27 (m, 3H)。
化合物 6B ： 5-(4- 胺基 -5- 溴咪唑並 [5,1-f][1,2,4] 三嗪 -7- 基 ) 四氫 -2H- 吡喃 -2- 甲酸乙酯
在低於10℃下，向1,2,4-三唑(28 g，404.1 mmol)於乙腈(200 mL)中的溶液中添加POCl
3
(12.5 mL，134.7 mol)，隨後添加三甲胺(56 mL，404.1 mmol)。將混合物在10℃下攪拌20 min，添加化合物
5B
(5 g，13.47 mmol)，且將反應混合物在90℃下攪拌1.5小時。將混合物冷卻到10℃，添加胺水(30 mL，28%)，保持溫度低於20℃，且在10℃下攪拌0.5小時。進行相同規模的另一批次。將混合物合並且用水(200 mL)稀釋並用乙酸乙酯(500 mL*3)萃取，用鹽水(500 mL*3)洗滌，用無水硫酸鈉乾燥，過濾且在真空中濃縮，所述混合物通過矽膠柱色譜(2~4%甲醇/二氯甲烷)純化以得到呈黃色固體狀的化合物
6B
(9 g，產率90%)。
LCMS:
t
R
=在\5-95AB_1min_220&254_安捷倫色譜(Agilent Poroshell 120 EC-C18 2.7μm 3.0*30mm)中為0.614 min, MS (ESI) m/z = 372.0 [M+H+2]
+
(溴化物同位素)。
1 H NMR
(400MHz, CD
3
OD):
δ = 7.81 (s, 0.3H), 7.79 (s, 0.6H), 4.36 (t,
J
= 5.2 Hz, 0.6H), 4.29-4.19 (m, 3H), 4.12 (dd,
J
= 11.6, 2.0 Hz, 0.3H), 3.93 (dd,
J
= 11.6, 4.0 Hz, 0.7H), 3.71 (t,
J
= 11.2 Hz, 0.3H), 3.63-3.48 (m, 1H), 2.35-2.20 (m, 1H), 2.17-1.94 (m, 2.7H), 1.79-1.68 (m, 0.3H), 1.34-1.26 (m, 3H)。
化合物 7B ： (5-(4- 胺基 -5- 溴咪唑並 [5,1-f][1,2,4] 三嗪 -7- 基 ) 四氫 -2H- 吡喃 -2- 基 ) 甲醇
向在0-5℃下冷卻的化合物
6B
(6.1 g，16.48 mmol)於四氫呋喃(120 mL)中的溶液中添加LiAlH
4
(1.20 g，32.95 mmol)，保持溫度低於10℃。將混合物在0-10℃下攪拌1.5小時。在0-5℃下，向混合物中添加25 g的Na
2
SO
4
∙10H
2
O且攪拌2小時並過濾。用二氯甲烷/甲醇(100 mL的10:1混合物)使濾餅懸浮兩次且過濾。將合併的濾液在真空中濃縮，通過二氧化矽柱色譜(0~10%甲醇/二氯甲烷)來純化殘餘物以得到呈白色固體狀化合物
7B
(3.9 g，產率72%)和呈黃色固體狀的0.6 g脫溴副產物。
LCMS:
t
R
=在\0-60AB_7min_220&254_Shimadzu.lcm色譜(Xtimate C18 2.1*30mm, 3μm)中為1.958和2.016 min, MS (ESI) m/z = 328.1 [M+H]
+
。
1 H NMR (
400MHz, 甲醇-
d4 )
:
δ = 7.80 (s, 0.3H), 7.78 (s, 0.6H), 4.47 (dt,
J
= 10.0, 2.0 Hz, 0.6H), 4.20-4.13 (m, 0.3H), 3.84 (dd,
J
= 11.6, 3.2 Hz, 0.6H), 3.64 (t,
J
= 10.8 Hz, 0.4H), 3.60-3.38 (m, 4H), 2.45-2.36 (m, 0.6H), 2.22-2.13 (m, 0.3H), 2.09-1.96 (m, 1H), 1.93-1.73 (m, 1H), 1.62-1.45 (m, 1H)。
化合物 8B ： (5-(4- 胺基 -5-(2- 氟 -4- 苯氧基苯基 ) 咪唑 [5,1-f][1,2,4] 三嗪 -7- 基 ) 四氫 -2H- 吡喃 -2- 基 ) 甲醇
將化合物
7B
(106 mg，0.457 mmol)、
Pd(dppf)Cl
2
∙CH
2
Cl
2
(25 mg，0.0304 mmol)和碳酸鉀(84 mg，0.608 mmol)放置在反應管中並用氮氣吹掃3次，且添加含(2-氟-4-苯氧基苯基)硼酸(100 mg，0.304 mmol)的1,4-二噁烷(3 mL)和水(1 mL)。將所得混合物在100℃下在氮氣下攪拌2小時。濃縮混合物以獲得粗產物，所述粗產物通過矽膠柱色譜(0~100%乙酸乙酯/石油醚)純化以得到呈黃色油狀物的化合物
8B
(80 mg不純，反式/順式外消旋體的混合物)。
LCMS:
t
R
=在10-80AB_7min_220&254_Shimadzu.lcm色譜(Xtimate C18 2.1*30mm)中為2.274 min & 2.340 min, MS (ESI) m/z = 436.2 [M+H]
+
。
SFC
：t
R
=4.171 min、4.286 min、4.454 min和5.581 min。方法：柱：Chiralcel OJ-3 150×4.6mm I.D., 3μm流動相：A：CO
2
，B：甲醇，梯度：在5 min內5%到40%的B和在0.5 min內40%到5%的B，保持5%的B持續1.5 min，流速：2.5 mL/min，柱溫：35℃，ABPR：1500psi。
順式異構體 1 ， 化合物 8 ： 順式 -(5-(4- 胺基 -5-(2- 氟 -4- 苯氧基苯基 ) 咪唑 [5,1-f][1,2,4] 三嗪 -7- 基 ) 四氫 -2H- 吡喃 -2- 基 ) 甲醇 順式異構體 2 ， 化合物 9 ： 順式 -(5-(4- 胺基 -5-(2- 氟 -4- 苯氧基苯基 ) 咪唑 [5,1-f][1,2,4] 三嗪 -7- 基 ) 四氫 -2H- 吡喃 -2- 基 ) 甲醇 反式異構體 1 ， 化合物 10 ： 反式 -(5-(4- 胺基 -5-(2- 氟 -4- 苯氧基苯基 ) 咪唑 [5,1-f][1,2,4] 三嗪 -7- 基 ) 四氫 -2H- 吡喃 -2- 基 ) 甲醇 反式異構體 2 ， 化合物 11 ： 反式 -(5-(4- 胺基 -5-(2- 氟 -4- 苯氧基苯基 ) 咪唑 [5,1-f][1,2,4] 三嗪 -7- 基 ) 四氫 -2H- 吡喃 -2- 基 ) 甲醇
化合物
8B
(80 mg)通過製備型SFC(柱：DAICEL
CHIRALCEL OJ-H(250mm*30mm，5μm)；條件：30% MeOH(0.1% NH
3
H
2
O)/CO
2
；流速：60 mL/min)進一步分離以得到6.8mg不純的
化合物 11
，其通過製備型HPLC(柱：Welch Xtimate C18 100*40mm*3μm，條件：25-55%(A：水(0.225%FA)，B：CH
3
CN)，流速：25 mL/min)進一步純化以得到呈白色固體狀的
化合物 11
(1.7 mg，2個步驟的產率為1%)。在SFC之後，其他三個峰的混合物(40 mg)通過手性SFC(柱：DAICEL CHIRALPAK IG(250mm*30mm，10μm)；條件：55% MeOH(0.1% NH
3
H
2
O)/CO
2
；流速：80 mL/min)進一步純化以得到呈白色固體狀的
化合物 8
(8.6 mg，2個步驟的產率為6.4%)、呈白色固體狀的
化合物 9
(6.7 mg，2個步驟的產率為5%)和呈白色固體狀的
化合物 10
(5.4 mg，2個步驟的產率為4%)。
化合物 8 的光譜 ： LCMS:
t
R
=在10-80AB_7min_220&254_Shimadzu.lcm色譜(Xtimate C18 2.1*30mm)中為2.356 min, MS (ESI) m/z = 436.2 [M+H]
+
。
HPLC:
t
R
=在10-80CD_8min.met.色譜(XBridge Shield RP 18 2.1*50mm 5μm)中為3.00 min。
1 H NMR
(400MHz, CD
3
OD):
δ = 7.84 (s, 1H), 7.54 (t,
J
= 8.4 Hz, 1H), 7.47-7.41 (m, 2H), 7.26-7.20 (m, 1H), 7.17-7.12 (m, 2H), 6.94 (dd,
J
= 8.0, 2.0 Hz, 1H), 6.88 (dd,
J
= 10.8, 2.4 Hz, 1H), 4.56-4.51 (m, 1H), 3.89 (dd,
J
= 11.6, 3.6 Hz, 1H), 3.65-3.48 (m, 4H), 2.51-2.42 (m, 1H), 2.12-2.02 (m, 1H), 1.99-1.85 (m, 1H), 1.64-1.55 (m, 1H)。
SFC:
t
R
=4.059 min, 光學純度99.94%。
方法：柱：Chiralcel OJ-3 150×4.6mm I.D.，3μm流動相：A：CO
2
，B：甲醇(0.05% DEA)，梯度：在5 min內5%到40%的B和在0.5min內40%到5%的B，保持5%的B持續1.5 min，流速：2.5mL/min，柱溫：35℃，ABPR：1500psi。
化合物 9 的光譜 ： LCMS:
t
R
=在10-80AB_7min_220&254_Shimadzu.lcm色譜(Xtimate C18 2.1*30mm)中為2.340 min, MS (ESI) m/z = 436.3 [M+H]+。
HPLC:
t
R
=在10-80CD_8min.met.色譜(XBridge Shield RP 18 2.1*50mm 5μm)中為2.99 min。
1 H NMR
(400MHz, CD
3
OD):
δ = 7.84 (s, 1H), 7.53 (t,
J
= 8.4 Hz, 1H), 7.47-7.41 (m, 2H), 7.25-7.19 (m, 1H), 7.17-7.12 (m, 2H), 6.94 (dd,
J
= 8.4, 2.0 Hz, 1H), 6.87 (dd,
J
= 11.2, 2.4 Hz, 1H), 4.56-4.50 (m, 1H), 3.88 (dd,
J
= 12.0, 3.6 Hz, 1H), 3.65-3.48 (m, 4H), 2.50-2.41 (m, 1H), 2.12-2.02 (m, 1H), 1.97-1.86 (m, 1H), 1.64-1.55 (m, 1H)。
SFC:
t
R
=4.161 min, 光學純度100%。
方法：柱：Chiralcel OJ-3 150×4.6mm I.D.，3μm流動相：A：CO
2
，B：甲醇(0.05% DEA)，梯度：在5 min內5%到40%的B和在0.5min內40%到5%的B，保持5%的B持續1.5 min，流速：2.5mL/min，柱溫：35℃，ABPR：1500psi。
化合物 10 的光譜 ： LCMS:
t
R
=在10-80AB_7min_220&254_Shimadzu.lcm色譜(Xtimate C18 2.1*30mm)中為2.410 min, MS (ESI) m/z = 436.3 [M+H]
+
。
HPLC:
t
R
=在10-80CD_8min.met.色譜(XBridge Shield RP 18 2.1*50mm 5μm)中為2.98 min。
1 H NMR
(400MHz, CD
3
OD):
δ = 7.86 (s, 1H), 7.50 (t,
J
= 8.4 Hz, 1H), 7.47-7.41 (m, 2H), 7.26-7.20 (m, 1H), 7.17-7.12 (m, 2H), 6.94 (dd,
J
= 8.4, 2.4 Hz, 1H), 6.88 (dd,
J
= 10.8, 2.4 Hz, 1H), 4.24-4.18 (m, 1H), 3.75 (t,
J
= 11.2 Hz, 1H), 3.68-3.48 (m, 4H), 2.27-2.19 (m, 1H), 2.16-2.04 (m, 1H), 1.84-1.76 (m, 1H), 1.59-1.47 (m, 1H)。
SFC:
t
R
=4.405 min, 光學純度99.83%。
方法：柱：Chiralcel OJ-3 150×4.6mm I.D.，3μm流動相：A：CO
2
，B：甲醇(0.05% DEA)，梯度：在5 min內5%到40%的B和在0.5min內40%到5%的B，保持5%的B持續1.5 min，流速：2.5mL/min，柱溫：35℃，ABPR：1500psi。
化合物 11 的光譜 ： LCMS:
t
R
=在10-80AB_7min_220&254_Shimadzu.lcm色譜(Xtimate C18 2.1*30mm)中為2.365 min, MS (ESI) m/z = 436.2 [M+H]
+
。
HPLC:
t
R
=在10-80CD_8min.met.色譜(XBridge Shield RP 18 2.1*50mm 5μm)中為3.05 min。
1 H NMR
(400MHz, CD
3
OD):
δ = 7.86 (s, 1H), 7.50 (t,
J
= 8.4 Hz, 1H), 7.47-7.41 (m, 2H), 7.26-7.21 (m, 1H), 7.17-7.12 (m, 2H), 6.94 (dd,
J
= 8.4, 2.4 Hz, 1H), 6.88 (dd,
J
= 10.8, 2.4 Hz, 1H), 4.24-4.18 (m, 1H), 3.75 (t,
J
= 10.8 Hz, 1H), 3.68-3.47 (m, 4H), 2.26-2.18 (m, 1H), 2.16-2.04 (m, 1H), 1.84-1.76 (m, 1H), 1.59-1.47 (m, 1H)。
SFC:
t
R
=5.802 min, 光學純度100%。
方法：柱：Chiralcel OJ-3 150×4.6mm I.D.，3μm流動相：A：CO
2
，B：甲醇(0.05% DEA)，梯度：在5 min內5%到40%的B和在0.5min內40%到5%的B，保持5%的B持續1.5 min，流速：2.5mL/min，柱溫：35℃，ABPR：1500psi。
根據方法B合成以下化合物：
生物資料 BTK WT 和 BTK C481S HTRF 激酶分析
重組BTK野生型(BTK WT)購自賽默飛世爾(Thermo fisher)。重組BTK(C481S)購自新格諾康(SignalChem)。使用均相時間分辨螢光方法(Homogenous Time Resolved Fluorescence approach)評定化合物對BTK和BTK(C481S)的抑制效力。
簡單來說，在室溫下，在存在或不存在化合物的情況下將重組激酶預培育30分鐘。通過添加ATP和底物肽來引發反應，在反應中，所述底物肽可通過激酶磷酸化。在120分鐘培育之後，通過添加含有EDTA的檢測劑混合物來停止反應。分別在615nm和665 nm處測量螢光，其中激發波長為320 nm。665 nm/615 nm的計算信號比與激酶活性成正比。使用利用XL-fit的四參數邏輯擬合來計算對相應激酶產生50%抑制的化合物的濃度(IC50)。
TMD8 細胞系 p-BTK Elisa 分析
將TMD-8細胞以30000個細胞/孔的密度接種在具有含有1.5%胎牛血清的RPMI1640培養基的96孔板中。將測試化合物添加到細胞中且將細胞在37℃，5% CO
2
下培育0.5小時。接著將過釩酸鹽溶液添加到細胞中以使最終濃度為100µM，且將細胞在37℃，5% CO
2
下培育另外1小時。在化合物處理之後，細胞裂解且按照準確遵循PathScan® Phospho-Btk(Tyr223)夾心ELISA試劑盒(#23843)的程式檢測p-BTK信號。在設定為450 nm波長的Multiscan光譜讀取器上讀取板。在GraphPad Prism軟體中處理這些資料。
HEK293-BTK(WT) 和 HEK293-BTK(C481S)
通過使用QuikChange II XL定點突變誘發試劑盒進行突變誘發來產生含有C481S突變的BTK的全長cDNA。通過測序證實突變的BTK cDNA。接著將BTK(WT)、BTK-C481S的cDNA克隆到PLVX-Puro慢病毒載體中。通過用慢病毒載體轉染和封裝混合物來將慢病毒封裝在293T細胞中。將BTK(WT)、BTK-C481S慢病毒轉染到HEK293細胞中。在2µg/mL的嘌呤黴素中選擇轉染的細胞。穩定的多克隆細胞系通過WB證實且用於進一步研究。將HEK293-BTK(WT)、HEK293-BTK(C481S)細胞在具有10% FBS (Gibco；10099)和1µg/mL嘌呤黴素的DMEM(Gibco；12430)中培養。使所有細胞保持在37℃的具有5% CO
2
的含濕氣培育箱中。
將HEK293-BTK(WT)和HEK293-BTK(C481S)細胞以
5000個細胞/孔的密度接種在具有含有1.5%胎牛血清的RPMI1640培養基的96孔板中。將測試化合物添加到細胞中且將細胞在37℃，5% CO
2
下培育1.5小時。在化合物處理之後，細胞裂解且按照準確遵循PathScan® Phospho-Btk(Tyr223)夾心ELISA試劑盒(#23843)的程式檢測p-BTK信號。在設定為450 nm波長的Multiscan光譜讀取器上讀取板。在GraphPad Prism軟體中處理資料。
TMD-8 抗增殖分析
TMD-8細胞在含有10%胎牛血清的RPMI1640培養基中製備，且以每孔1500個細胞接種在384孔板中。將細胞在37℃，5% CO
2
下培育整夜。在培育之後，將具有不同濃度的化合物添加到分析板中且在37℃，5% CO
2
下將細胞培育另外72小時。在72小時培育之後，將15 μL的CellTiter 96® AQueous單溶液試劑添加到每個孔中且將板在室溫下培育30 min。使用CellTiter-Glo(Promega，USA)測定細胞成活力。根據製造商的說明書進行CellTiter-Glo分析，且在多標籤讀取器(Envision，PerkinElmer，USA)中測定螢光。在XLfit軟體中處理資料。
體外大鼠 / 人類肝細胞清除率分析
雄性大鼠肝細胞和混合性別的人類肝細胞獲自商業供應商(例如，BioreclamationIVT)且在使用前存儲在-150℃下。在DMSO中製備測試化合物的10 mM儲備溶液。將解凍培養基和補充培育培養基(無血清)放置於37℃水浴中，在使用前持續至少15分鐘。通過合併198 μL乙腈和2 μL的10 mM儲備溶液將儲備溶液稀釋到100 μM。
從存儲中去除冷凍保存的肝細胞的小瓶，確保所述小瓶保持處於低溫溫度。將小瓶在平緩振盪下在37℃水浴中解凍。將小瓶保持在水浴中，直到所有冰晶都溶解且不再可見。將小瓶用70%乙醇噴灑，隨後將其轉移到生物安全櫃中。且接著將內容物倒入到50 mL解凍培養基錐形管中。將小瓶在室溫下以100 g離心10分鐘。抽吸出解凍培養基且將肝細胞再懸浮於無血清培育培養基中，以得到約1.5×10
6
個細胞/毫升。
使用台盼藍拒染法(Trypan Blue exclusion)對細胞成活力和密度進行計數，且接著用無血清培育培養基稀釋細胞以達到1×10
6
個活細胞/毫升的工作細胞密度。將1×10
6
個活細胞/毫升的一部分肝細胞煮沸10 min，隨後添加到板中作為陰性對照以消除酶活性，使得應當觀察到極少或未觀察到底物轉換。使用失活的肝細胞以製備陰性樣本，其用於排除由化學物質本身的不穩定性引起的誤導因素。
將247.5 μL肝細胞的等分試樣分配到96孔未塗布板的每個孔中。將板放置於定軌振盪器上的培育箱中持續約10分鐘。將2.5 μL的100 μM測試化合物的等分試樣添加到未塗布的96孔板的相應孔中以起始反應。一式兩份地進行這種分析。在定軌振盪器上的培育箱中培育板，持續設計的時間點。在5、15、30、45、60、80和100分鐘的時間點處，轉移20 μL的內容物且與6體積(120 μL)的含內標的冷乙腈混合以終止反應。將樣本以4000 g離心20分鐘且100 μL的上清液的等分試樣用於LC-MS/MS分析以測量測試化合物。
基於從其初始濃度測定化合物消失的消除半衰期(T1/2)來估計體外肝細胞清除率。計算每種化合物(測試或對照)與IS的峰面積比。繪製Ln(對照%)相對於培育時間(min)的曲線，且計算線性擬合線的斜率。藥物消除速率常數k(min
-1
)、T1/2(min)和體外固有清除率
CL
int
(μL/min/E6)是根據以下等式計算：
k = -斜率
T
1/2
= 0.693/k
CL
int
= k/Chep
其中Chep(細胞×μL
-1
)是培育系統中的細胞濃度。
用於 Log D 測定 的 程式
將10 μL的每個盒的工作溶液依序放置於相應的96孔擱架位置(Log D板)中。將500 μL的飽和辛醇添加到以上無蓋Log D板的每個小瓶中，接著添加500 μL的飽和磷酸鹽緩衝液。用模制的PTFE/SIL 96孔板蓋密封。
將Log D板轉移到Eppendorf Thermomixer Comfort板振盪儀且在25℃，2,000 rpm下振盪2小時。
將樣本在25℃下以4,000 rpm離心30分鐘以分離各相。移液器和注射器分別用於從辛醇和緩衝液相吸取約100 μL到新的96孔板。
將5 μL的辛醇樣本轉移到新96孔板，隨後添加495 μL的H
2
O和含內標的乙腈的混合物(1:1)作為100倍辛醇樣本。以1,000 rpm渦旋5分鐘。
將50 μL的100倍樣本轉移到新96孔板，隨後添加450 μL的H
2
O和含內標的乙腈的混合物(1:1)作為1,000倍辛醇樣本。以1,000 rpm渦旋5分鐘。
用H
2
O和含內標的乙腈的混合物(1:1)將1,000倍辛醇樣本連續稀釋為10,000、100,000和1,000,000倍。
將50 μL的緩衝液樣本轉移到新96孔板，隨後添加450 μL的H
2
O和含內標的乙腈的混合物(1:1)作為10倍緩衝液樣本。以1,000 rpm渦旋5分鐘。
用H
2
O和含內標的乙腈的混合物(1:1)將10倍緩衝液樣本連續稀釋為100、1,000和10,000倍。通過LC/MS/MS分析評估樣本。一式一份地測試所有化合物。
使用Microsoft Excel進行所有計算。通過LC/MS/MS評估測試化合物在辛醇/緩衝溶液中的濃度。如下計算測試化合物的Log D值：
DF意指稀釋係數。
通過使用平衡透析在人類血漿中進行蛋白質結合測量的程式
通過添加3 μL的每個盒的工作溶液而將597 μL空白血漿添加到新塑膠板或獨立塑膠管的每個小瓶中，以1,000 rpm渦旋5分鐘。有機溶劑的最終體積%為0.5%且測試化合物的最終濃度為5 μM。緊接著將50 μL的加標血漿懸浮液轉移到96孔板以充當T=0對照樣本。與培育之後的樣本相同地處理所述樣本。將所有其餘的加標血漿在研究的持續時間內放置於培育箱中。
將插入物開口端朝上地放置於底板的孔中。將500 μL的磷酸鹽緩衝液(pH 7.4)添加到緩衝液室中，其由白色圓圈指示。將300 μL的加標血漿樣本添加到樣本室中，其由紅色圓圈指示。用透氣蓋覆蓋單元且在37℃下在CO
2
培育箱中的定軌振盪器上以300 rpm與5% CO
2
一起培育18小時。在培育結束時，去除蓋且分別將50 μL的透析後樣本從緩衝液室和血漿室吸取到獨立的96孔板中以用於分析。
同時，將塑膠板或獨立塑膠管中其餘的加標血漿樣本在37℃下在CO
2
培育箱中與5% CO
2
一起培育18小時。在T=18小時處，將50 μL的原始加標血漿懸浮液轉移到96孔板中以用於分析。
將50 μL的人類血漿添加到緩衝液樣本中，且將相等體積的PBS添加到收集的血漿樣本中。將板以1,000 rpm渦旋2分鐘且添加400 μL的含有適當內標(IS)的乙腈以使蛋白質沉澱且釋放化合物。以1,000 rpm渦旋10分鐘。以4,000 rpm離心30分鐘。將250 μL的上清液轉移到新的96孔板中且再次離心(4,000 rpm，30分鐘)。接著將100 μL的上清液轉移到新的96孔板中以用於分析。將100 μL的蒸餾水添加到每個樣本中且以1,000 rpm渦旋5分鐘以通過LC-MS/MS進行分析。所有化合物在人類血漿中以5 μM一式一份地測試。
使用Microsoft Excel進行所有計算。
如下計算測試化合物的未結合百分比、結合百分比和回收百分比：
結果 大鼠中的短期口服吸收 (SOA) 分析。
短期口服吸收(Short oral absorption；SOA)模型是用於鑒定化合物的腦滲透的體內篩選模型。為評估化合物穿過大鼠的血腦屏障的可能性，通過AUC
大腦
/AUC
血漿
測量總大腦與血漿比(K
p, 大腦
)。分別通過口服投藥後可用時間點處的AUC
CSF
/AUC
血漿
或CSF與血漿比的平均值來確定CSF與血漿比(K
p,CSF
)。在單獨的研究中，通過體外血漿和大腦結合分析來測定生物基質中的游離部分。K
p,uu, 大腦
和K
p,uu,CSF
通過以下等式計算：(1)K
p,uu, 大 腦
=
K
p, 大腦
×f
u, 大腦
/f
u, 血漿
；(2)K
p,uu,CSF
= K
p,CSF
/f
u, 血漿
。
和其藥學上可接受的鹽，和其作為BTK抑制劑的用途，特別是在療法中的用途。
其中：R1
選自氫、C1-6
烷基、C1-6
烷氧基、N
-C1-6
烷基胺基、N,N
-(C1-6
烷基)2
胺基、碳環基和雜環基；其中R1
可任選地由一個或多個R5
取代；R2
選自鹵基、C1-3
烷基、C1-3
烷氧基、碳環基和雜環基；或在相同原子或相鄰原子上的兩個R2
可與其所連接的原子一起形成3-7元環；k
是0-4；R3
選自鹵基、C1-3
烷基和C1-3
烷氧基；n
是0-4；R4
選自鹵基、C1-3
烷基和C1-3
烷氧基；m
是0-5；A
是=N-或=C(R6
)-；R5
選自鹵基、羥基、C1-6
烷氧基、胺基、N
-C1-6
烷基胺基、N,N
-(C1-6
烷基)2
胺基、碳環基和雜環基；其中R5
可獨立地任選地由一個或多個R7
取代；R6
選自氫和鹵基；R7
選自鹵基、羥基、胺基、C1-3
烷基和C1-3
烷氧基；
或其藥學上可接受的鹽。
在一個實施例中，R1
選自氫和C1-6
烷基；其中R1
可任選地由一個R5
取代；其中R5
選自羥基、C1-6
烷氧基、N,N
-(C1-6
烷基)2
胺基和雜環基。
在一個實施例中，R1
選自氫和C1-3
烷基；其中R1
可任選地由一個R5
取代；其中R5
選自羥基、C1-3
烷氧基、N,N
-(C1-2
烷基)2
胺基和氮雜環丁烷基。
在一個實施例中，R1
選自氫、甲基、羥基甲基、甲氧基甲基、N,N
-二甲基胺基甲基和氮雜環丁烷-1-基甲基。
在一個實施例中，R1
是羥基甲基。
在一個實施例中，R2
選自鹵基或C1-3
烷氧基。
在一個實施例中，R2
選自氟或甲氧基。
在一個實施例中，或在相同原子或相鄰原子上的兩個R2
可與其所連接的原子一起形成3-7元環。
在一個實施例中，或在相同原子上的兩個R2
可與其所連接的原子一起形成3-7元環。
在一個實施例中，或在相鄰原子上的兩個R2
可與其所連接的原子一起形成3-7元環。
在一個實施例中，k是0。
在一個實施例中，k是1。
在一個實施例中，k是2。
在一個實施例中，k是3。
在一個實施例中，k是4。
在一個實施例中，R3
是鹵基。
在一個實施例中，R3
是氟。
在一個實施例中，n是0-2。
在一個實施例中，n是0。
在一個實施例中，n是1。
在一個實施例中，n是2。
在一個實施例中，n是3。
在一個實施例中，n是4。
在一個實施例中，R4
是鹵基。
在一個實施例中，R4
是氟。
在一個實施例中，m是0-2。
在一個實施例中，m是0。
在一個實施例中，m是1。
在一個實施例中，m是2。
在一個實施例中，m是3。
在一個實施例中，m是4。
在一個實施例中，m是5。
在一個實施例中，A是=N-或=C(H)-。
在一個實施例中，A是=N-。
在一個實施例中，A是=C(R6
)-。
在一個實施例中，A是=C(H)-。
式(I)
化合物(當R1≠氫時)含有兩個手性中心(標記有“*”)：
這些手性中心可以“反式”構型形式存在(意指噁烷環上的兩個取代基指向噁烷環的相對面)；且以“順式”構型形式存在(意指噁烷環上的兩個取代基指向噁烷環的同一面)。下文中的結構( IA )
和(IB)
顯示式(I)
化合物的順式異構體，下文中的結構(IC)
和(ID)
顯示式(I)
化合物的反式異構體。
在本發明的一個方面中，式(I)
化合物是式(I)
的反式化合物。
在本發明的一個方面中，式(I)
化合物是式(I)
的順式化合物。
在本發明的一個方面中，式(I)
化合物是式(IA)
化合物：
在本發明的一個方面中，式(I)
化合物是式(IB)
化合物：
在本發明的一個方面中，式(I)
化合物是式(IC)
化合物：
在本發明的一個方面中，式(I)
化合物是式(ID)
化合物：
在本發明的一個方面中，式(I)
化合物選自：
(5-(8-胺基-1-(4-苯氧基苯基)咪唑[1,5-a]吡嗪-3-基)四氫-2H-吡喃-2-基)甲醇；
(5-(8-胺基-1-(2-氟-4-苯氧基苯基)咪唑[1,5-a]吡嗪-3-基)四氫-2H-吡喃-2-基)甲醇；
(5-(8-胺基-1-(2,3-二氟-4-苯氧基苯基)咪唑[1,5-a]吡嗪-3-基)四氫-2H-吡喃-2-基)甲醇；
(5-(8-胺基-1-(4-(2,3-二氟苯氧基)苯基)咪唑[1,5-a]吡嗪-3-基)四氫-2H-吡喃-2-基)甲醇；
(5-(4-胺基-5-(2-氟-4-苯氧基苯基)咪唑[5,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)四氫-2H-吡喃-2-基)甲醇；
(5-(4-胺基-5-(2-氟-4-苯氧基苯基)咪唑[5,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)四氫-2H-吡喃-2-基)甲醇；
(5-(4-胺基-5-(2,3-二氟-4-苯氧基苯基)咪唑[5,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)四氫-2H-吡喃-2-基)甲醇；
(5-(4-胺基-5-(4-(2,3-二氟苯氧基)苯基)咪唑[5,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)四氫-2H-吡喃-2-基)甲醇；
3-(6-((二甲基胺基)甲基)四氫-2H-吡喃-3-基)-1-(2-氟-4-苯氧基苯基)咪唑[1,5-a]吡嗪-8-胺；
7-(6-((二甲基胺基)甲基)四氫-2H-吡喃-3-基)-5-(2-氟-4-苯氧基苯基)咪唑[5,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺；
7-(6-(氮雜環丁烷-1-基甲基)四氫-2H-吡喃-3-基)-5-(2-氟-4-苯氧基苯基)咪唑[5,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺；
5-(2-氟-4-苯氧基苯基)-7-(6-(甲氧基甲基)四氫-2H-吡喃-3-基)咪唑[5,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺；
5-(2-氟-4-苯氧基苯基)-7-(四氫-2H-吡喃-3-基)咪唑[5,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺；和
5-(2-氟-4-苯氧基苯基)-7-(6-甲基四氫-2H-吡喃-3-基)咪唑[5,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺。
在本發明的一個方面中，式(I)
化合物選自：
(5-(8-胺基-1-(4-苯氧基苯基)咪唑[1,5-a]吡嗪-3-基)四氫-2H-吡喃-2-基)甲醇；
(5-(8-胺基-1-(2-氟-4-苯氧基苯基)咪唑[1,5-a]吡嗪-3-基)四氫-2H-吡喃-2-基)甲醇；
(5-(8-胺基-1-(2,3-二氟-4-苯氧基苯基)咪唑[1,5-a]吡嗪-3-基)四氫-2H-吡喃-2-基)甲醇；
(5-(8-胺基-1-(4-(2,3-二氟苯氧基)苯基)咪唑[1,5-a]吡嗪-3-基)四氫-2H-吡喃-2-基)甲醇；
(5-(4-胺基-5-(2-氟-4-苯氧基苯基)咪唑[5,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)四氫-2H-吡喃-2-基)甲醇；
(5-(4-胺基-5-(2-氟-4-苯氧基苯基)咪唑[5,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)四氫-2H-吡喃-2-基)甲醇；
(5-(4-胺基-5-(2,3-二氟-4-苯氧基苯基)咪唑[5,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)四氫-2H-吡喃-2-基)甲醇；
(5-(4-胺基-5-(4-(2,3-二氟苯氧基)苯基)咪唑[5,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)四氫-2H-吡喃-2-基)甲醇；
3-(6-((二甲基胺基)甲基)四氫-2H-吡喃-3-基)-1-(2-氟-4-苯氧基苯基)咪唑[1,5-a]吡嗪-8-胺；
7-(6-((二甲基胺基)甲基)四氫-2H-吡喃-3-基)-5-(2-氟-4-苯氧基苯基)咪唑[5,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺；
7-(6-(氮雜環丁烷-1-基甲基)四氫-2H-吡喃-3-基)-5-(2-氟-4-苯氧基苯基)咪唑[5,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺；
5-(2-氟-4-苯氧基苯基)-7-(6-(甲氧基甲基)四氫-2H-吡喃-3-基)咪唑[5,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺；
5-(2-氟-4-苯氧基苯基)-7-(四氫-2H-吡喃-3-基)咪唑[5,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺；和
5-(2-氟-4-苯氧基苯基)-7-(6-甲基四氫-2H-吡喃-3-基)咪唑[5,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺；
或其藥學上可接受的鹽。
在本發明的一個方面中，式(I)
化合物選自：
((2R,5R)-5-(8-胺基-1-(4-苯氧基苯基)咪唑[1,5-a]吡嗪-3-基)四氫-2H-吡喃-2-基)甲醇；
((2R,5R)-5-(8-胺基-1-(2-氟-4-苯氧基苯基)咪唑[1,5-a]吡嗪-3-基)四氫-2H-吡喃-2-基)甲醇；
((2R,5R)-5-(8-胺基-1-(2,3-二氟-4-苯氧基苯基)咪唑[1,5-a]吡嗪-3-基)四氫-2H-吡喃-2-基)甲醇；
((2R,5R)-5-(8-胺基-1-(4-(2,3-二氟苯氧基)苯基)咪唑[1,5-a]吡嗪-3-基)四氫-2H-吡喃-2-基)甲醇；
((2R,5R)-5-(4-胺基-5-(2-氟-4-苯氧基苯基)咪唑[5,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)四氫-2H-吡喃-2-基)甲醇；
((2R,5R)-5-(4-胺基-5-(2-氟-4-苯氧基苯基)咪唑[5,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)四氫-2H-吡喃-2-基)甲醇；
((2R,5R)-5-(4-胺基-5-(2,3-二氟-4-苯氧基苯基)咪唑[5,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)四氫-2H-吡喃-2-基)甲醇；
((2R,5R)-5-(4-胺基-5-(4-(2,3-二氟苯氧基)苯基)咪唑[5,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)四氫-2H-吡喃-2-基)甲醇；
3-((3R,6R)-6-((二甲基胺基)甲基)四氫-2H-吡喃-3-基)-1-(2-氟-4-苯氧基苯基)咪唑[1,5-a]吡嗪-8-胺；
7-((3R,6R)-6-((二甲基胺基)甲基)四氫-2H-吡喃-3-基)-5-(2-氟-4-苯氧基苯基)咪唑[5,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺；
7-((3R,6R)-6-(氮雜環丁烷-1-基甲基)四氫-2H-吡喃-3-基)-5-(2-氟-4-苯氧基苯基)咪唑[5,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺；
5-(2-氟-4-苯氧基苯基)-7-((3R,6R)-6-(甲氧基甲基)四氫-2H-吡喃-3-基)咪唑[5,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺；
(R)-5-(2-氟-4-苯氧基苯基)-7-(四氫-2H-吡喃-3-基)咪唑[5,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺；和
5-(2-氟-4-苯氧基苯基)-7-((3R,6R)-6-甲基四氫-2H-吡喃-3-基)咪唑[5,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺；
或其藥學上可接受的鹽。
在本發明的一個方面中，式(I)
化合物選自：
((2S,5S)-5-(8-胺基-1-(4-苯氧基苯基)咪唑[1,5-a]吡嗪-3-基)四氫-2H-吡喃-2-基)甲醇；
((2S,5S)-5-(8-胺基-1-(2-氟-4-苯氧基苯基)咪唑[1,5-a]吡嗪-3-基)四氫-2H-吡喃-2-基)甲醇；
((2S,5S)-5-(8-胺基-1-(2,3-二氟-4-苯氧基苯基)咪唑[1,5-a]吡嗪-3-基)四氫-2H-吡喃-2-基)甲醇；
((2S,5S)-5-(8-胺基-1-(4-(2,3-二氟苯氧基)苯基)咪唑[1,5-a]吡嗪-3-基)四氫-2H-吡喃-2-基)甲醇；
((2S,5S)-5-(4-胺基-5-(2-氟-4-苯氧基苯基)咪唑[5,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)四氫-2H-吡喃-2-基)甲醇；
((2S,5S)-5-(4-胺基-5-(2-氟-4-苯氧基苯基)咪唑[5,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)四氫-2H-吡喃-2-基)甲醇；
((2S,5S)-5-(4-胺基-5-(2,3-二氟-4-苯氧基苯基)咪唑[5,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)四氫-2H-吡喃-2-基)甲醇；
((2S,5S)-5-(4-胺基-5-(4-(2,3-二氟苯氧基)苯基)咪唑[5,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)四氫-2H-吡喃-2-基)甲醇；
3-((3S,6S)-6-((二甲基胺基)甲基)四氫-2H-吡喃-3-基)-1-(2-氟-4-苯氧基苯基)咪唑[1,5-a]吡嗪-8-胺；
7-((3S,6S)-6-((二甲基胺基)甲基)四氫-2H-吡喃-3-基)-5-(2-氟-4-苯氧基苯基)咪唑[5,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺；
7-((3S,6S)-6-(氮雜環丁烷-1-基甲基)四氫-2H-吡喃-3-基)-5-(2-氟-4-苯氧基苯基)咪唑[5,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺；
5-(2-氟-4-苯氧基苯基)-7-((3S,6S)-6-(甲氧基甲基)四氫-2H-吡喃-3-基)咪唑[5,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺；
(S)-5-(2-氟-4-苯氧基苯基)-7-(四氫-2H-吡喃-3-基)咪唑[5,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺；和
5-(2-氟-4-苯氧基苯基)-7-((3S,6S)-6-甲基四氫-2H-吡喃-3-基)咪唑[5,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺；
或其藥學上可接受的鹽。
在本發明的一個方面中，式(I)
化合物選自：
((2S,5R)-5-(8-胺基-1-(4-苯氧基苯基)咪唑[1,5-a]吡嗪-3-基)四氫-2H-吡喃-2-基)甲醇；
((2S,5R)-5-(8-胺基-1-(2-氟-4-苯氧基苯基)咪唑[1,5-a]吡嗪-3-基)四氫-2H-吡喃-2-基)甲醇；
((2S,5R)-5-(8-胺基-1-(2,3-二氟-4-苯氧基苯基)咪唑[1,5-a]吡嗪-3-基)四氫-2H-吡喃-2-基)甲醇；
((2S,5R)-5-(8-胺基-1-(4-(2,3-二氟苯氧基)苯基)咪唑[1,5-a]吡嗪-3-基)四氫-2H-吡喃-2-基)甲醇；
((2S,5R)-5-(4-胺基-5-(2-氟-4-苯氧基苯基)咪唑[5,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)四氫-2H-吡喃-2-基)甲醇；
((2S,5R)-5-(4-胺基-5-(2-氟-4-苯氧基苯基)咪唑[5,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)四氫-2H-吡喃-2-基)甲醇；
((2S,5R)-5-(4-胺基-5-(2,3-二氟-4-苯氧基苯基)咪唑[5,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)四氫-2H-吡喃-2-基)甲醇；
((2S,5R)-5-(4-胺基-5-(4-(2,3-二氟苯氧基)苯基)咪唑[5,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)四氫-2H-吡喃-2-基)甲醇；
3-((3S,6R)-6-((二甲基胺基)甲基)四氫-2H-吡喃-3-基)-1-(2-氟-4-苯氧基苯基)咪唑[1,5-a]吡嗪-8-胺；
7-((3S,6R)-6-((二甲基胺基)甲基)四氫-2H-吡喃-3-基)-5-(2-氟-4-苯氧基苯基)咪唑[5,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺；
7-((3S,6R)-6-(氮雜環丁烷-1-基甲基)四氫-2H-吡喃-3-基)-5-(2-氟-4-苯氧基苯基)咪唑[5,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺；
5-(2-氟-4-苯氧基苯基)-7-((3S,6R)-6-(甲氧基甲基)四氫-2H-吡喃-3-基)咪唑[5,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺；和
5-(2-氟-4-苯氧基苯基)-7-((3S,6R)-6-甲基四氫-2H-吡喃-3-基)咪唑[5,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺；
或其藥學上可接受的鹽。
在本發明的一個方面中，式(I)
化合物選自：
((2R,5S)-5-(8-胺基-1-(4-苯氧基苯基)咪唑[1,5-a]吡嗪-3-基)四氫-2H-吡喃-2-基)甲醇；
((2R,5S)-5-(8-胺基-1-(2-氟-4-苯氧基苯基)咪唑[1,5-a]吡嗪-3-基)四氫-2H-吡喃-2-基)甲醇；
((2R,5S)-5-(8-胺基-1-(2,3-二氟-4-苯氧基苯基)咪唑[1,5-a]吡嗪-3-基)四氫-2H-吡喃-2-基)甲醇；
((2R,5S)-5-(8-胺基-1-(4-(2,3-二氟苯氧基)苯基)咪唑[1,5-a]吡嗪-3-基)四氫-2H-吡喃-2-基)甲醇；
((2R,5S)-5-(4-胺基-5-(2-氟-4-苯氧基苯基)咪唑[5,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)四氫-2H-吡喃-2-基)甲醇；
((2R,5S)-5-(4-胺基-5-(2-氟-4-苯氧基苯基)咪唑[5,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)四氫-2H-吡喃-2-基)甲醇；
((2R,5S)-5-(4-胺基-5-(2,3-二氟-4-苯氧基苯基)咪唑[5,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)四氫-2H-吡喃-2-基)甲醇；
((2R,5S)-5-(4-胺基-5-(4-(2,3-二氟苯氧基)苯基)咪唑[5,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)四氫-2H-吡喃-2-基)甲醇；
3-((3R,6S)-6-((二甲基胺基)甲基)四氫-2H-吡喃-3-基)-1-(2-氟-4-苯氧基苯基)咪唑[1,5-a]吡嗪-8-胺；
7-((3R,6S)-6-((二甲基胺基)甲基)四氫-2H-吡喃-3-基)-5-(2-氟-4-苯氧基苯基)咪唑[5,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺；
7-((3R,6S)-6-(氮雜環丁烷-1-基甲基)四氫-2H-吡喃-3-基)-5-(2-氟-4-苯氧基苯基)咪唑[5,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺；
5-(2-氟-4-苯氧基苯基)-7-((3R,6S)-6-(甲氧基甲基)四氫-2H-吡喃-3-基)咪唑[5,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺；和
5-(2-氟-4-苯氧基苯基)-7-((3R,6S)-6-甲基四氫-2H-吡喃-3-基)咪唑[5,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺；
或其藥學上可接受的鹽。
在本發明的一個方面中，提供本文所公開的任何式(I)
化合物。
在本發明的一個方面中，提供本文所公開的任何式(I)
化合物或其藥學上可接受的鹽。
在本發明的一個方面中，提供用於製備如本文所公開的式(I)
化合物的合成中間物。
在本發明的一個方面中，提供用於製備如本文所公開的式(I)
化合物或其藥學上可接受的鹽的合成中間物。
在本公開的多處，描述了連接取代基。在結構明確需要連接基團的情況下，關於該基團所列舉的馬庫什變數(Markush variable)應理解為連接基團。舉例來說，如果結構需要連接基團且該變數的馬庫什基團定義列舉“烷基”，那麼應理解，所述“烷基”表示連接亞烷基。
如本文所使用，當提到化學基團時，術語“被取代”意指所述化學基團具有一個或多個被去除且由取代基置換的氫原子。如本文所使用，術語“取代基”具有所屬領域中已知的普通含義且是指共價連接到母體基團或在適當時與所述母體基團稠合的化學部分。如本文所使用，術語“任選地被取代”或“任選地被…取代”意指化學基團可不具有取代基(即，未被取代)或可具有一個或多個取代基(即，被取代)。應理解，在給定原子處的取代受價數限制。
如本文所使用，術語“Ci-j
”表示碳原子數的範圍，其中i和j為整數，且碳原子數的範圍包含端點(即i和j)和介於其間的每個整數點，且其中j大於i。舉例來說，C1-6
表示一到六個碳原子的範圍，包含一個碳原子、兩個碳原子、三個碳原子、四個碳原子、五個碳原子和六個碳原子。在一些實施例中，術語“C1-6
”表示1到6個、特別是1到5個、特別是1到4個、特別是1到3個或特別是1到2個碳原子。
如本文所使用，無論作為另一術語的部分或獨立地使用，術語“烷基”是指飽和烴鏈。上文所提及的烴鏈可以是直鏈或分支鏈。術語“Ci-j
烷基”是指具有i到j個碳原子的烷基。C1-6
烷基的實例包含(但不限於)甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、叔丁基、異丁基、仲丁基；高級同系物，如2-甲基-1-丁基、正戊基、3-戊基、正己基、1,2,2-三甲基丁基等。“C1-3
烷基”的實例為甲基、乙基、丙基和異丙基。
如本文所使用，術語“鹵基”和“鹵素”是指選自氟、氯、溴和碘的原子。
如本文所使用，無論作為另一術語的部分或獨立地使用，術語“烷氧基”是指式-O-烷基的基團。術語“Ci-j
烷氧基”意指烷氧基基團的烷基部分具有i到j個碳原子。烷氧基基團的實例包含(但不限於)甲氧基、乙氧基、丙氧基(例如，正丙氧基和異丙氧基)、叔丁氧基等。“C1-6
烷氧基”的實例為甲氧基、乙氧基和丙氧基。“C1-3
烷氧基”的實例為甲氧基、乙氧基和丙氧基。
“N
-(C1-6
烷基)胺基”的實例為甲胺基和乙胺基。“N,N
-(C1-6
烷基)2
胺基”的實例為N,N-
二甲基胺基、N,N
-二乙基胺基和N
-乙基-N
-甲基胺基。
如本文所使用，無論作為另一術語的部分或獨立地使用，術語“碳環基”是指其中所有環原子是碳且其含有至少三個成環碳原子的飽和單環。在一些實施例中，碳環基可含有3到7個成環碳原子或3到6個成環碳原子。在一些實施例中，環-CH2
-基團可由環-C(O)-基團置換。碳環基的實例包含(但不限於)環丙基、環丁基、環戊基、環己基和環庚基。
如本文所使用，術語“雜環基”是指單環、飽和碳環基基團，其中一個或多個(例如，1、2或3個)環原子由雜原子置換，所述雜原子包含(但不限於)氧、硫、氮、磷等。在一些實施例中，環-CH2
-基團可由環-C(O)-基團置換。在一些實施例中，環硫原子可任選地被氧化以形成S-氧化物。在一些實施例中，雜環基是碳連接的。在一些實施例中，雜環基是氮連接的。示例性雜環基基團包含(但不限於)氮雜環丁烷基、呱啶基(piperidyl)、吡咯烷基、四氫呋喃基、呱啶基(piperidinyl)、呱嗪基、嗎啉基等。
在一個實施例中，在相同原子上的兩個R2
與其所連接的原子一起形成3-7元環。生成物“螺環”具有通過一個單一的共有原子連接的兩個環(其中的一個是式(I)
的噁烷)。非噁烷環可以是3-7元碳環基環或3-7元雜環環。在相同原子上的兩個R2
與其所連接的原子一起形成3-7元環(用式(I)
的噁烷描繪)的實例包含：
(其中“
”描繪與分子的其餘部分的連接)。
在一個實施例中，在相鄰原子上的兩個R2
與其所連接的原子一起形成3-7元環。生成物“稠環”具有共用兩個相鄰原子的兩個環(其中的一個是式(I)
的噁烷)。非噁烷環可以是3-7元碳環基環或3-7元雜環環。或在相鄰原子上的兩個R2
一起形成3-7元環(用式(I)
的噁烷描繪)的實例包含：
(其中“
在實例中的合成流程中說明本文所提供的化合物(包含其藥學上可接受的鹽)的合成。本文所提供的化合物可使用任何已知的有機合成技術製備且可根據多種可能的合成途徑中的任一種合成，且因此，這些流程只是說明性的且不打算限制可用於製備本文所提供的化合物的其它可能的方法。另外，方法中的步驟是為了更好地說明且可在適當時改變。出於研究和可能提交給管理機構的目的來合成實例中的化合物的實施例。
用於製備本公開化合物的反應可在合適的溶劑中進行，所述溶劑可由有機合成領域的技術人員容易地選擇。合適的溶劑可在進行反應的溫度下，例如可在範圍介於溶劑的冷凍溫度到溶劑的沸騰溫度的溫度下基本上對起始材料(反應物)、中間物或產物不具有反應性。指定反應可在一種溶劑或超過一種溶劑的混合物中進行。取決於特定反應步驟，用於特定反應步驟的合適溶劑可由熟練技術人員選擇。
本公開的化合物的製備可涉及各種化學基團的保護和脫保護。對於保護和脫保護的需求，和適當保護基的選擇可由所屬領域的技術人員容易地確定。保護基的化學性質可見於例如T. W. Greene和P. G. M. Wuts,《有機合成中的保護基(Protective Groups in Organic Synthesis)》, 第3版, 威利父子公司(Wiley & Sons, Inc.), 紐約(New York) (1999)，其以全文引用的方式併入本文中。
可根據所屬領域中已知的任何合適方法監測反應。舉例來說，可通過光譜手段，如核磁共振光譜(例如，1
H或13
C)、紅外光譜、分光光度法(例如，UV-可見光)、質譜，或通過色譜法，如高壓液相色譜(HPLC)、液相色譜-質譜(LCMS)或薄層色譜(TLC)來監測產物形成。所屬領域的技術人員可通過多種方法來純化化合物，包含高效液相色譜(HPLC)(“《製備型LC-MS純化：改善的化合物特異性方法優化(Preparative LC-MS Purification：Improved Compound Specific Method Optimization)》”, Karl F. Blom, Brian Glass, Richard Sparks, Andrew P. Combs,《組合化學雜誌(J. Combi. Chem.)》, 2004, 6(6), 874-883，其以全文引用的方式併入本文中)、超臨界流體色譜(SFC)和正相二氧化矽色譜。
通過核磁共振(NMR)或/和液相色譜-質譜(LC-MS)來表徵實例中的化合物的結構。NMR化學位移(δ
)以10-6
(ppm)為單位給出。在Bruker AVANCE NMR(400 MHz)分光儀上使用ICON-NMR(在TopSpin程式控制下)，或在Varian 400MR NMR或Varian VNMR400 NMR(400 MHz)分光儀上(在VnmrJ程式控制下)使用四甲基矽烷作為內標在二甲亞碸-d6
(DMSO-d6
)或CDCl3
或CD3
OD或D2
O或丙酮-d6
或CD3
CN(來自奧德里奇(Aldrich)或劍橋同位素實驗室公司(Cambridge Isotope Lab., Inc.))中記錄1
H-NMR光譜。
使用Shimadzu 2010質譜儀或Agilent 6110A MSD或1969A TOF質譜儀，使用電噴霧、化學和電子碰撞電離方法由一系列儀器進行MS測量。用於本發明中的詳細方法包含：LC-MS 方法 A
：10-80AB_7min_220&254_Shimadzu.lcm
流動相：1.5 mL/4 L TFA/水(溶劑A)和0.75 mL/4 L TFA/乙腈(溶劑B)，歷經6分鐘使用10%-80%(溶劑B)洗脫梯度且以0.8 mL/min的流速在80%下保持0.5分鐘；
柱：Xtimate C18 2.1*30mm，3μm；
波長：UV 220nm，254nm；
柱溫：50℃；
MS電離：ESILC-MS 方法 B
：10-80AB_4min_220&254_Shimadzu.lcm
流動相：1.5 mL/4 L TFA/水(溶劑A)和0.75 mL/4 L TFA/乙腈(溶劑B)，歷經3分鐘使用10%-80%(溶劑B)洗脫梯度且以0.8 mL/min的流速在80%下保持0.5分鐘；
柱：Xtimate C18 2.1*30mm，3μm；
波長：UV 220nm，254nm；
柱溫：50℃；
MS電離：ESILC-MS 方法 C
：10-80CD_7min_220&254_Agilent.lcm
流動相：0.2 mL/1L NH3
.H2
O/水(溶劑A)和乙腈(溶劑B)，歷經6分鐘使用10%-80%(溶劑B)洗脫梯度且以0.8 mL/min的流速在80%下保持0.5分鐘；
柱：Xbrige Shield RP-18，5μm，2.1*50mm；
波長：UV 220nm和254nm；
柱溫：30℃；
MS電離：ESI
在Shimadzu LC-20A系統或Shimadzu LC-2010HT系列，或Agilent 1200 LC或Agilent 1100系列上，使用Ultimate XB-C18柱(3.0*50mm，3μm或3.0*150mm，3μm)，或
Xbridge shieldRP18柱(5μm，50mm*2.1mm)，或Xtimate C18柱(3μm，2.1*30mm)，或MERCK RP18 2.5-2 mm等進行高效液相色譜(HPLC)測量。用於本發明中的詳細方法包含：HPLC 方法 A
：10-80AB_8min.met
流動相：2.75 mL/4 L TFA/水(溶劑A)和2.5 mL/4L TFA/乙腈(溶劑B)，歷經6分鐘使用10%-80%(溶劑B)洗脫梯度且以1.2 mL/min的流速在80%下保持2分鐘；
柱：Ultimate C18 3.0*50mm，3μm
波長：UV220nm，215nm，254nm；
柱溫：40℃；HPLC 方法 B
：10-80CD_8min.met
流動相：2.0 mL/4 L NH3
H2
O/水(溶劑A)和乙腈(溶劑B)，歷經4分鐘使用10%-80%(溶劑B)洗脫梯度且以1.2 mL/min的流速在80%下保持2分鐘；
柱：Xbrige Shield RP-18，2.1*50mm，5μm；
波長：UV 220nm，215nm，254nm；
柱溫：40℃；
在Agilent 1260系列或Waters UPCC系列，或Shimadzu LC-20AB系列上，使用ChiralPak AD-3柱(3μm，150×4.6mm)，或Chiralcel OJ-3柱(3μm，150×4.6mm)，或Chiralpak IG-3柱(3μm，50mm*4.6mm)等進行超臨界流體色譜(SFC)測量。用於本發明中的詳細方法包含：SFC 方法 A ：
流動相：A：CO2
，B：乙醇(0.05% DEA)，梯度：在5.5min內5%到40%的B且保持40%持續3 min，接著5%的B持續1.5 min，流速：2.5 mL/min；
柱：ChiralPak AD-3 150×4.6mm I.D.，3μm；
柱溫：40℃；
背壓：100巴。SFC 方法 B ：
流動相：A：CO2
，B：甲醇(0.05% DEA)，梯度：在5 min內5%到40%的B和在0.5min內40%到5%的B，保持5%的B持續1.5 min，流速：2.5mL/min
柱：Chiralcel OJ-3 150×4.6mm I.D.，3μm；
柱溫：35℃；
ABPR：1500psi。SFC 方法 C ：
流動相：A：CO2
，B：甲醇(0.05% DEA)，等度：40% B，流速：4 mL/min；
柱：Chiralpak IG-3 50mm×4.6mm I.D.，3μm；
柱溫：35℃；
ABPR：1500psi。
使用Yantai Huanghai HSGF254矽膠或Anhui Liang
Chen Gui Yuan板進行薄層色譜。用於薄層色譜(TLC)的矽膠板是0.15mm~0.2mm。通過TLC分離且純化產物所使用的矽膠板是0.4mm~0.5mm。
純化色譜柱使用矽膠作為載體(100~200、200~300或300~400目，由煙臺黃海公司(Yantai Huanghai co.)或安徽梁晨歸元公司(Anhui Liang Chen Gui Yuan co.)等製造)，或快速柱(二氧化矽-CS快速柱40-60μm，或反相C18柱20-35μm，由艾傑爾科技公司(Agela Technologies)等製造)或Teledyne ISCO combi-flash或Biotage快速系統中的艾傑爾科技公司的快速柱二氧化矽-CS(40-60μm)或C18柱(20-40μm)。柱的大小根據化合物的量進行調整。
本公開的已知起始材料可通過使用或根據所屬領域中已知的方法合成，或可購自阿法埃莎公司(Alfa Aesar)、梯希愛(TCI)、奧德里奇、上海畢得醫藥科技有限公司(Bepharm)和上海思闊化學科技有限公司(Scochem)(或南京藥石科技股份有限公司(PharmaBlock)、畢得醫藥(Bide)、阿美特克(Amatek)、倍達醫藥科技有限公司(Stru Chem)、福斯特醫藥公司(Firster Pharmaceutical)、泰坦科技(Titan)(阿達瑪斯(Adamas))等)。
除非另外說明，否則反應都在氬氣或氮氣氣氛下進行。氬氣或氮氣氣氛是指反應燒瓶連接到體積為約1L的氬氣或氮氣氣球。氫化通常在壓力下進行。除非另外說明，否則實例中的反應溫度為環境溫度，其為10℃~30℃。
通過TLC或/和LC-MS監測反應進展。用於反應的洗脫劑系統包含二氯甲烷-甲醇系統和石油醚-乙酸乙酯系統。根據化合物的不同極性調整溶劑的體積比。
用於純化化合物的柱色譜的洗脫系統和TLC的洗脫劑系統包含二氯甲烷-甲醇系統和石油醚-乙酸乙酯系統。根據化合物的不同極性調整溶劑的體積比。可添加少量鹼性或酸性藥劑(0.1%~1%)，如甲酸、或乙酸、或TFA或胺水以進行調節。本發明的化合物 
方法 A 化合物 2A ： 5-(((3- 氯吡嗪 -2- 基 ) 甲基 ) 胺基甲醯基 ) 四氫 -2H- 吡喃 -2- 甲酸乙酯 
向6-(乙氧基羰基)四氫-2H-吡喃-3-甲酸(參見WO2019001420A1)(5.90 g，29.17 mmol)和化合物1A
(5.25 g，29.17 mmol)於二氯甲烷(150 mL)中的混合物中添加HATU(16.64 g，43.76 mmol)和DIEA(11.31 g，87.51 mmol)。將混合物在室溫(18-22℃)下攪拌12小時。將反應物濃縮且用水(100 mL)稀釋，用乙酸乙酯(200 mL*3)萃取。將合併的有機層用鹽水(200 mL*4)洗滌，用無水硫酸鈉乾燥，過濾且濃縮以得到粗產物。通過矽膠柱色譜(2.5-3.5%甲醇/二氯甲烷)來純化粗產物以得到呈黃色油狀物的化合物2A
(9.0 g，產率94.0%)。
LCMS: tR=在5-95AB_1.5min_220&254_Shimadzu.lcm色譜(Agilent Pursult 5 C18 20*2.0mm)中為0.689 min, MS (ESI) m/z = 328.2 [M+H]+ 化合物 3A ： 5-(8- 氯咪唑並 [1,5-a] 吡嗪 -3- 基 ) 四氫 -2H- 吡喃 -2- 甲酸乙酯 
向化合物2A
(9.0 g，27.46 mmol)和DMF(600 μL)於MeCN(150 mL)中的混合物中添加POCl3
(21.05 g，137.30 mmol)。將混合物在70℃下攪拌1小時。將反應物濃縮且用水(50 mL)和飽和NaHCO3
(50 mL)洗滌，用乙酸乙酯(100 mL*3)萃取。將合併的有機層用鹽水(200 mL)洗滌，用無水硫酸鈉乾燥，過濾且濃縮以得到粗產物。通過矽膠柱色譜(52~62%乙酸乙酯/石油醚)來純化粗產物以得到呈黃色油狀物的化合物3A
(3.5 g，產率41.2%)。LCMS:
tR
=在5-95AB_1.5min_220&254_Shimadzu.lcm色譜(Agilent Pursult 5 C18 20*2.0mm)中為0.742 min, MS (ESI) m/z = 310.2 [M+H]+ 1 H NMR
(400MHz, CDCl3
):
δ = 7.80 (d,J
= 0.4 Hz, 1H), 7.70-7.64 (m, 1H), 7.37 (d,J
= 4.8 Hz, 0.3H), 7.35 (d,J
= 4.8 Hz, 0.7H), 4.44 (t,J
= 4.4 Hz, 0.7H), 4.30-4.25 (m, 2H), 4.23-4.14 (m, 1H), 4.00 (dd,J
= 3.2, 12.0 Hz, 1H), 3.79 (t,J
= 11.2 Hz, 0.4H), 3.42-3.19 (m, 1H), 2.47-2.37 (m, 0.8H), 2.29-2.06 (m, 3H), 1.91-1.77 (m, 0.4H), 1.35-1.31 (m, 3H)。化合物 4A ： (5-(8- 氯咪唑並 [1,5-a] 吡嗪 -3- 基 ) 四氫 -2H- 吡喃 -2- 基 ) 甲醇 
在0℃下，向LiAlH4
(860 mg，22.60 mmol)於THF(20 mL)中的混合物中添加含化合物3A
(3.5 g，11.30 mmol)的THF(20 mL)。將混合物在0℃下攪拌1小時。將反應物用水(860 μL)、15% NaOH(860 μL)和水(2580 μL)淬滅。將混合物用無水硫酸鈉乾燥且在室溫下攪拌0.5小時，過濾且濃縮以得到呈黃色固體狀的化合物4A
(2.7 g，產率89.4%)。LCMS:
tR
=在5-95AB_1.5min_220&254_Shimadzu.lcm色譜(Agilent Pursult 5 C18 20*2.0mm)中為0.635 min, MS (ESI) m/z = 267.8 [M+H]+ 化合物 5A ： (5-(1- 溴 -8- 氯咪唑並 [1,5-a] 吡嗪 -3- 基 ) 四氫 -2H- 吡喃 -2- 基 ) 甲醇 
向化合物4A
(2.7 g，10.11 mmol)於MeCN(100 mL)中的混合物中添加NBS(2.34 g，13.14 mmol)。將混合物在室溫(16-20℃)下攪拌1小時。將反應物濃縮以得到粗產物，所述粗產物通過矽膠柱色譜純化(2.2%甲醇/二氯甲烷)以得到呈黃色固體狀的化合物5A
(2.5 g，產率71.63%)。LCMS:
tR
=在5-95AB_1.5min_220&254_Shimadzu.lcm色譜(Agilent Pursult 5 C18 20*2.0mm)中為0.717 min, MS (ESI) m/z = 347.8 [M+H]+ 化合物 6A ： (5-(8- 胺基 -1- 溴咪唑並 [1,5-a] 吡嗪 -3- 基 ) 四氫 -2H- 吡喃 -2- 基 ) 甲醇 
向化合物5A
(2.5 g，7.21 mmol)於IPA(15 mL)中的混合物中添加NH3
∙H2
O(15 mL)。在100 mL密封試管中將混合物在100℃下攪拌12小時。將反應物濃縮以得到呈黃色油狀物的化合物6A
(2.4 g，純度98.0%)。LCMS:
tR
=在10-80AB_3min_220&254_Shimadzu.lcm色譜(Xtimate C18 2.1*30mm)中為0.436 min, MS (ESI) m/z = 327.1 [M+H]+ 化合物 7A ： (5-(8- 胺基 -1-(2- 氟 -4- 苯氧基苯基 ) 咪唑 [1,5-a] 吡嗪 -3- 基 ) 四氫 -2H- 吡喃 -2- 基 ) 甲醇 
在氮氣下，向化合物6A
(500 mg，1.31 mmol，純度97.99%)和(2-氟-4-苯氧基苯基)硼酸(450 mg，1.95 mmol)於1,4-二噁烷(15 mL)/H2
O(5 mL)中的混合物中添加Pd(dppf)Cl2
.CH2
Cl2
(32 mg，0.04 mmol)和K2
CO3
(375 mg，2.62 mmol)。將混合物在氮氣下在100℃下攪拌12小時。將反應物用水(20 mL)稀釋，用乙酸乙酯(50 mL*3)萃取。將合併的有機層用鹽水(100 mL)洗滌，用無水硫酸鈉乾燥，過濾且濃縮以得到粗產物。通過矽膠柱色譜(2.2%甲醇/二氯甲烷)來純化粗產物以得到呈黃色固體狀的化合物7A
(順式/反式外消旋物的混合物)(150 mg，產率26.4%)。LCMS:
tR
=在5-95AB_1.5min_220&254_Shimadzu.lcm色譜(Agilent Pursult 5 C18 20*2.0mm)中為0.723 min, MS (ESI) m/z = 435.1 [M+H]+ 2- 氟 -4- 苯氧基苯基 ) 硼酸 ： 
在室溫(25-30℃)下，添加化合物1a
(10 g，52.35
mmol)於CH2
Cl2
(480 mL)、PhB(OH)2
(12.8 g，104.71 mmol)、Cu(OAc)2
(9.5 g，52.35 mmol)、NEt3
(21 mL，151.05 mmol)和4Å Ms(5 g)中的混合物。將混合物在空氣下在室溫(25-30℃)下攪拌16小時。通過矽藻土墊過濾混合物。在真空中濃縮濾液以得到粗產物，所述粗產物通過矽膠柱色譜(石油醚)純化以獲得呈無色油狀物的化合物2a
(11.3 g，產率80.8%)。 1 H NMR
(400MHz, CDCl3
): δ = 7.47 (t,J
= 8.4 Hz, 1H), 7.42-7.36 (m, 2H), 7.19 (t,J
= 8.4 Hz, 1H), 7.05 (d,J
= 8.0 Hz, 2H), 6.78 (dd,J
= 10.0, 2.8 Hz, 1H), 6.71 (dd,J
= 8.8, 2.0 Hz, 1H)。
在-65℃下，向-65℃下的化合物2a
(11.3 g，42.30 mmol)於THF(150 mL)中的溶液中添加n-BuLi(19 mL，46.53 mmol，2.5 N於正己烷中)。將混合物在-65℃下攪拌0.5小時。接著在-65℃下添加B(Oi
-Pr)3
(9.5 g，50.76 mmol)。將混合物在-65℃下攪拌2小時。將混合物用飽和氯化銨溶液(50 mL)淬滅，用乙酸乙酯(50 mL*3)萃取，用鹽水(100 mL*2)洗滌。將合併的有機層用無水硫酸鈉乾燥，過濾且濃縮以得到粗產物，將所述粗產物用石油醚(100 mL)研磨，過濾且將濾餅濃縮以得到呈黃色油狀物的2-氟-4-苯氧基苯基)硼酸(4.3 g)。將濾液濃縮且通過矽膠柱色譜(0~20%乙酸乙酯/石油醚)純化以得到呈黃色油狀物的2-氟-4-苯氧基苯基)硼酸(3 g)。 1 H NMR
(400MHz, DMSO-d6
): δ = 8.10 (s, 2H), 7.58 (t,J
= 8.0 Hz, 1H), 7.47-7.41 (m, 2H), 7.22 (t,J
= 7.6 Hz, 1H), 7.09 (d,J
= 7.6 Hz, 2H), 6.78-6.68 (m, 2H)。反式異構體 1 ， 化合物 2 ： 反式 -(5-(8- 胺基 -1-(2- 氟 -4- 苯氧基苯基 ) 咪唑 [1,5-a] 吡嗪 -3- 基 ) 四氫 -2H- 吡喃 -2- 基 ) 甲醇 反式異構體 2 ， 化合物 3 ： 反式 -(5-(8- 胺基 -1-(2- 氟 -4- 苯氧基苯基 ) 咪唑 [1,5-a] 吡嗪 -3- 基 ) 四氫 -2H- 吡喃 -2- 基 ) 甲醇 
將混合物7A
(150 mg，0.35 mmol)通過手性SFC(柱：DAICEL CHIRALPAK AD-H)(250mm*
30mm，10μm)，條件：0.1% NH3
.H2
O/EtOH，40%，流速80 mL/min)來純化。將含有所需化合物的級分濃縮，用H2
O(10 mL)和CH3
CN (10 mL)稀釋，凍幹以得到呈白色固體狀的化合物2(34.8 mg，產率23.2%)和呈白色固體狀的化合物3(29.4 mg，19.6%)。未收集到兩種順式對映異構體。化合物 2
的光譜：
LCMS tR
=在10-80AB_7min_220&254_ Shimadzu.lcm色譜(Xtimate C18 2.1*30mm)中為2.037 min, MS (ESI) m/z = 435.3 [M+H]+
。
HPLC tR
=在10-80AB_8min.met (HPLC-BJ Ultimate 3.0*50mm 3μm)中為3.03 min。
SFC tR
=6.119 min，光學純度：96.3%。方法注釋：柱：ChiralPak AD-3 150×4.6mm I.D.，3μm，流動相：A：CO2
，B：乙醇(0.05% DEA)，梯度：在5.5min內5%到40%的B且保持40%持續3 min，接著5%的B持續1.5 min，流速：2.5 mL/min，柱溫：40℃，背壓：100巴。 1 HNMR
(400MHz, CD3
OD)δ
= 7.63 (d,J
= 5.2 Hz, 1H), 7.54-7.36 (m, 3H), 7.27-7.18 (m, 1H), 7.14 (dd,J
= 8.8, 0.8 Hz, 2H), 7.02 (d,J
= 4.8 Hz, 1H), 6.98-6.82 (m, 2H), 4.23-4.07 (m, 1H), 3.75 (t,J
= 11.2 Hz, 1H), 3.62-3.51 (m, 3H), 3.46-3.36 (m, 1H), 2.25-2.15 (m, 1H), 2.13-1.96 (m, 1H), 1.79 (d,J
= 13.6 Hz, 1H), 1.66-1.49 (m, 1H)。 19 FNMR
(CD3
OD) δ = -112.240化合物 3
的光譜：LCMS
tR
=在10-80AB_7min_220&254_Shimadzu.lcm色譜(Xtimate C18 2.1*30mm)中為2.030 min, MS (ESI) m/z = 435.3 [M+H]+
。HPLC
tR
=在10-80AB_8min.met(HPLC-BJ Ultimate 3.0*50mm 3μm)中為3.02 min。SFC
tR
=7.334，光學純度：92.7%。方法注釋：柱：ChiralPak AD-3 150×4.6mm I.D.，3μm，流動相：A：CO2
，B：乙醇(0.05% DEA)，梯度：在5.5min內5%到40%的B且保持40%持續3 min，接著5%的B持續1.5 min，流速：2.5 mL/min，柱溫：40℃，背壓：100巴。 1 H NMR
(400MHz, CD3
OD) δ =7.65 (d,J
= 5.2 Hz, 1H), 7.52-7.37 (m, 3H), 7.29-7.21 (m, 1H), 7.20-7.11 (m, 2H), 7.04 (d,J
= 4.8 Hz, 1H), 6.99-6.84 (m, 2H), 4.24-4.13 (m, 1H), 3.77 (t,J
= 11.2 Hz, 1H), 3.62-3.51 (m, 3H), 3.48-3.77 (m, 1H), 2.31-2.17 (m, 1H), 2.15-2.01 (m, 1H), 1.91-1.74 (m, 1H), 1.69-1.51 (m, 1H)。 19 F NMR
(400MHz, CD3
OD) δ = -112.258。
根據方法A合成以下化合物：
方法 B 化合物 2B ： 5-(((3- 胺基 -5- 羥基 -1,2,4- 三嗪 -6- 基 ) 甲基 ) 胺基甲醯基 ) 四氫 -2H- 吡喃 -2- 甲酸乙酯 
向四氫-2H-吡喃-2,5-二甲酸5-(2,5-二氧代吡咯烷-1-基)酯2-乙酯(20 g粗產物，60.88 mmol)於乙腈(30 mL)中的混合物中添加化合物1B
(13 g，60.88 mmol)和三乙胺(25 mL，182.6 mmol)。將混合物在50℃下攪拌16小時。將混合物濃縮以得到呈棕色固體狀的化合物2B
(35 g粗產物)。LCMS:
tR
=在5-95AB_1.5min_220&254_Shimadzu.lcm色譜(Merck RP18 25-3mm)中為0.582 min, MS (ESI) m/z = 325.9 [M+H]+ 四氫 -2H- 吡喃 -2,5- 二甲酸 5-(2,5- 二氧代吡咯烷 -1- 基 ) 酯 2- 乙酯： 
向6-(乙氧基羰基)四氫-2H-吡喃-3-甲酸(1.4 g，6.92 mmol)於CH2
Cl2
(30 mL)中的溶液中添加1-羥基吡咯烷-2,5-二酮(877 mg，7.61 mmol)和EDCI(1.6 g，8.30 mmol)。將混合物在22-26℃下攪拌1.5小時將混合物用二氯甲烷(30 mL)稀釋，用鹽水(50 mL × 3)洗滌。將有機層用無水硫酸鈉乾燥，過濾且濃縮以得到直接使用的呈無色油狀物的四氫-2H-吡喃-2,5-二甲酸5-(2,5-二氧代吡咯烷-1-基)酯2-乙酯。化合物 3B ： 5-(2- 胺基 -4- 羥基咪唑並 [5,1-f][1,2,4] 三嗪 -7- 基 ) 四氫 -2H- 吡喃 -2- 甲酸乙酯 
向化合物2B
(35 g粗產物，60.88 mmol)於乙腈(300 mL)中的溶液中添加氧氯化磷(23 mL，243.52 mmol)。接著將混合物在70℃下攪拌16小時。濃縮混合物，將殘餘物用二氯甲烷(150 mL)稀釋，倒入冷卻的飽和碳酸氫鈉溶液(300 mL)中達pH =8，用二氯甲烷/甲醇(10:1，200 mL*4)萃取，隨後用IPA/CHCl3
(150 mL*4)萃取。將合併的有機層用無水硫酸鈉乾燥，過濾且濃縮以得到呈黑色油狀物的化合物3B
(45 g粗產物)。LCMS:
tR
=在5-95AB_1.5min_220&254_Shimadzu.lcm色譜(Merck RP18 25-3mm)中為0.13 min, MS (ESI) m/z = 308.0 [M+H]+ 化合物 4B ： 5-(2- 胺基 -5- 溴 -4- 羥基咪唑並 [5,1-f][1,2,4] 三嗪 -7- 基 ) 四氫 -2H- 吡喃 -2- 甲酸乙酯 
向化合物3B
(45 g粗產物，60.88 mmol)於N,N
-二甲基甲醯胺(200 mL)中的溶液中添加NBS(11.8 g，66.96 mmol)。將混合物在室溫(16-21℃)下攪拌0.5小時。將混合物倒入水(300 mL)中，用乙酸乙酯(300 mL *4)萃取，用鹽水(500 mL*4)洗滌。將合併的有機層用無水硫酸鈉乾燥，過濾且濃縮以得到呈黑色油狀物的化合物4B
(19 g粗產物)。LCMS:
tR
=在5-95AB_1min_220&254_Agilent色譜(Agilent Poroshell 120 EC-C18 2.7μm 3.0*30mm)中為0.602 min, MS (ESI) m/z = 388.0 [M+H+2]+
(溴化物同位素)。化合物 5B ： 5-(5- 溴 -4- 羥基咪唑並 [5,1-f][1,2,4] 三嗪 -7- 基 ) 四氫 -2H- 吡喃 -2- 甲酸乙酯 
在0-5℃下，向化合物4B
(19 g不純，49.19 mmol)於四氫呋喃(300 mL)中的溶液中添加亞硝酸叔丁酯(12 mL，98.39 mmol)，且將混合物在室溫(16-21℃)下攪拌16小時。將混合物與另一批次(化合物4B
的7.2 g粗產物)合併，且濃縮得到粗物質，所述粗物質通過矽膠柱色譜(0~60%乙酸乙酯/石油醚)純化以得到呈黃色固體狀的化合物5B
(14.3 g，5個步驟的產率為44%)。LCMS:
tR
=在5-95AB_1.5min_220&254_Shimadzu.lcm色譜(Agilent Pursult 5 C18 20*2.0mm)中為0.753 min, MS (ESI) m/z = 370.9 [M+H]+ 1 H NMR (
400MHz, CD3
OD)
:
δ = 7.74 (s, 0.3H), 7.72 (s, 0.5H), 4.37 (t,J
= 4.8 Hz, 0.7H), 4.29-4.16 (m, 3H), 4.12 (dd,J
= 11.6, 2.0 Hz, 0.3H), 3.92 (dd,J
= 11.6, 4.0 Hz, 0.7H), 3.70 (t,J
= 11.2 Hz, 0.4H), 3.57-3.45 (m, 1H), 2.35-1.92 (m, 4H), , 1.33-1.27 (m, 3H)。化合物 6B ： 5-(4- 胺基 -5- 溴咪唑並 [5,1-f][1,2,4] 三嗪 -7- 基 ) 四氫 -2H- 吡喃 -2- 甲酸乙酯 
在低於10℃下，向1,2,4-三唑(28 g，404.1 mmol)於乙腈(200 mL)中的溶液中添加POCl3
(12.5 mL，134.7 mol)，隨後添加三甲胺(56 mL，404.1 mmol)。將混合物在10℃下攪拌20 min，添加化合物5B
(5 g，13.47 mmol)，且將反應混合物在90℃下攪拌1.5小時。將混合物冷卻到10℃，添加胺水(30 mL，28%)，保持溫度低於20℃，且在10℃下攪拌0.5小時。進行相同規模的另一批次。將混合物合並且用水(200 mL)稀釋並用乙酸乙酯(500 mL*3)萃取，用鹽水(500 mL*3)洗滌，用無水硫酸鈉乾燥，過濾且在真空中濃縮，所述混合物通過矽膠柱色譜(2~4%甲醇/二氯甲烷)純化以得到呈黃色固體狀的化合物6B
(9 g，產率90%)。LCMS:
tR
=在\5-95AB_1min_220&254_安捷倫色譜(Agilent Poroshell 120 EC-C18 2.7μm 3.0*30mm)中為0.614 min, MS (ESI) m/z = 372.0 [M+H+2]+
(溴化物同位素)。 1 H NMR
(400MHz, CD3
OD):
δ = 7.81 (s, 0.3H), 7.79 (s, 0.6H), 4.36 (t,J
= 5.2 Hz, 0.6H), 4.29-4.19 (m, 3H), 4.12 (dd,J
= 11.6, 2.0 Hz, 0.3H), 3.93 (dd,J
= 11.6, 4.0 Hz, 0.7H), 3.71 (t,J
= 11.2 Hz, 0.3H), 3.63-3.48 (m, 1H), 2.35-2.20 (m, 1H), 2.17-1.94 (m, 2.7H), 1.79-1.68 (m, 0.3H), 1.34-1.26 (m, 3H)。化合物 7B ： (5-(4- 胺基 -5- 溴咪唑並 [5,1-f][1,2,4] 三嗪 -7- 基 ) 四氫 -2H- 吡喃 -2- 基 ) 甲醇 
向在0-5℃下冷卻的化合物6B
(6.1 g，16.48 mmol)於四氫呋喃(120 mL)中的溶液中添加LiAlH4
(1.20 g，32.95 mmol)，保持溫度低於10℃。將混合物在0-10℃下攪拌1.5小時。在0-5℃下，向混合物中添加25 g的Na2
SO4
∙10H2
O且攪拌2小時並過濾。用二氯甲烷/甲醇(100 mL的10:1混合物)使濾餅懸浮兩次且過濾。將合併的濾液在真空中濃縮，通過二氧化矽柱色譜(0~10%甲醇/二氯甲烷)來純化殘餘物以得到呈白色固體狀化合物7B
(3.9 g，產率72%)和呈黃色固體狀的0.6 g脫溴副產物。LCMS:
tR
=在\0-60AB_7min_220&254_Shimadzu.lcm色譜(Xtimate C18 2.1*30mm, 3μm)中為1.958和2.016 min, MS (ESI) m/z = 328.1 [M+H]+
。 1 H NMR (
400MHz, 甲醇-d4 )
:
δ = 7.80 (s, 0.3H), 7.78 (s, 0.6H), 4.47 (dt,J
= 10.0, 2.0 Hz, 0.6H), 4.20-4.13 (m, 0.3H), 3.84 (dd,J
= 11.6, 3.2 Hz, 0.6H), 3.64 (t,J
= 10.8 Hz, 0.4H), 3.60-3.38 (m, 4H), 2.45-2.36 (m, 0.6H), 2.22-2.13 (m, 0.3H), 2.09-1.96 (m, 1H), 1.93-1.73 (m, 1H), 1.62-1.45 (m, 1H)。化合物 8B ： (5-(4- 胺基 -5-(2- 氟 -4- 苯氧基苯基 ) 咪唑 [5,1-f][1,2,4] 三嗪 -7- 基 ) 四氫 -2H- 吡喃 -2- 基 ) 甲醇 
將化合物7B
(106 mg，0.457 mmol)、
Pd(dppf)Cl2
∙CH2
Cl2
(25 mg，0.0304 mmol)和碳酸鉀(84 mg，0.608 mmol)放置在反應管中並用氮氣吹掃3次，且添加含(2-氟-4-苯氧基苯基)硼酸(100 mg，0.304 mmol)的1,4-二噁烷(3 mL)和水(1 mL)。將所得混合物在100℃下在氮氣下攪拌2小時。濃縮混合物以獲得粗產物，所述粗產物通過矽膠柱色譜(0~100%乙酸乙酯/石油醚)純化以得到呈黃色油狀物的化合物8B
(80 mg不純，反式/順式外消旋體的混合物)。LCMS:
tR
=在10-80AB_7min_220&254_Shimadzu.lcm色譜(Xtimate C18 2.1*30mm)中為2.274 min & 2.340 min, MS (ESI) m/z = 436.2 [M+H]+
。SFC
：tR
=4.171 min、4.286 min、4.454 min和5.581 min。方法：柱：Chiralcel OJ-3 150×4.6mm I.D., 3μm流動相：A：CO2
，B：甲醇，梯度：在5 min內5%到40%的B和在0.5 min內40%到5%的B，保持5%的B持續1.5 min，流速：2.5 mL/min，柱溫：35℃，ABPR：1500psi。順式異構體 1 ， 化合物 8 ： 順式 -(5-(4- 胺基 -5-(2- 氟 -4- 苯氧基苯基 ) 咪唑 [5,1-f][1,2,4] 三嗪 -7- 基 ) 四氫 -2H- 吡喃 -2- 基 ) 甲醇 順式異構體 2 ， 化合物 9 ： 順式 -(5-(4- 胺基 -5-(2- 氟 -4- 苯氧基苯基 ) 咪唑 [5,1-f][1,2,4] 三嗪 -7- 基 ) 四氫 -2H- 吡喃 -2- 基 ) 甲醇 反式異構體 1 ， 化合物 10 ： 反式 -(5-(4- 胺基 -5-(2- 氟 -4- 苯氧基苯基 ) 咪唑 [5,1-f][1,2,4] 三嗪 -7- 基 ) 四氫 -2H- 吡喃 -2- 基 ) 甲醇 反式異構體 2 ， 化合物 11 ： 反式 -(5-(4- 胺基 -5-(2- 氟 -4- 苯氧基苯基 ) 咪唑 [5,1-f][1,2,4] 三嗪 -7- 基 ) 四氫 -2H- 吡喃 -2- 基 ) 甲醇 
化合物8B
(80 mg)通過製備型SFC(柱：DAICEL
CHIRALCEL OJ-H(250mm*30mm，5μm)；條件：30% MeOH(0.1% NH3
H2
O)/CO2
；流速：60 mL/min)進一步分離以得到6.8mg不純的化合物 11
，其通過製備型HPLC(柱：Welch Xtimate C18 100*40mm*3μm，條件：25-55%(A：水(0.225%FA)，B：CH3
CN)，流速：25 mL/min)進一步純化以得到呈白色固體狀的化合物 11
(1.7 mg，2個步驟的產率為1%)。在SFC之後，其他三個峰的混合物(40 mg)通過手性SFC(柱：DAICEL CHIRALPAK IG(250mm*30mm，10μm)；條件：55% MeOH(0.1% NH3
H2
O)/CO2
；流速：80 mL/min)進一步純化以得到呈白色固體狀的化合物 8
(8.6 mg，2個步驟的產率為6.4%)、呈白色固體狀的化合物 9
(6.7 mg，2個步驟的產率為5%)和呈白色固體狀的化合物 10
(5.4 mg，2個步驟的產率為4%)。化合物 8 的光譜 ： LCMS:
tR
=在10-80AB_7min_220&254_Shimadzu.lcm色譜(Xtimate C18 2.1*30mm)中為2.356 min, MS (ESI) m/z = 436.2 [M+H]+
。HPLC:
tR
=在10-80CD_8min.met.色譜(XBridge Shield RP 18 2.1*50mm 5μm)中為3.00 min。 1 H NMR
(400MHz, CD3
OD):
δ = 7.84 (s, 1H), 7.54 (t,J
= 8.4 Hz, 1H), 7.47-7.41 (m, 2H), 7.26-7.20 (m, 1H), 7.17-7.12 (m, 2H), 6.94 (dd,J
= 8.0, 2.0 Hz, 1H), 6.88 (dd,J
= 10.8, 2.4 Hz, 1H), 4.56-4.51 (m, 1H), 3.89 (dd,J
= 11.6, 3.6 Hz, 1H), 3.65-3.48 (m, 4H), 2.51-2.42 (m, 1H), 2.12-2.02 (m, 1H), 1.99-1.85 (m, 1H), 1.64-1.55 (m, 1H)。SFC:
tR
=4.059 min, 光學純度99.94%。
方法：柱：Chiralcel OJ-3 150×4.6mm I.D.，3μm流動相：A：CO2
，B：甲醇(0.05% DEA)，梯度：在5 min內5%到40%的B和在0.5min內40%到5%的B，保持5%的B持續1.5 min，流速：2.5mL/min，柱溫：35℃，ABPR：1500psi。化合物 9 的光譜 ： LCMS:
tR
=在10-80AB_7min_220&254_Shimadzu.lcm色譜(Xtimate C18 2.1*30mm)中為2.340 min, MS (ESI) m/z = 436.3 [M+H]+。HPLC:
tR
=在10-80CD_8min.met.色譜(XBridge Shield RP 18 2.1*50mm 5μm)中為2.99 min。 1 H NMR
(400MHz, CD3
OD):
δ = 7.84 (s, 1H), 7.53 (t,J
= 8.4 Hz, 1H), 7.47-7.41 (m, 2H), 7.25-7.19 (m, 1H), 7.17-7.12 (m, 2H), 6.94 (dd,J
= 8.4, 2.0 Hz, 1H), 6.87 (dd,J
= 11.2, 2.4 Hz, 1H), 4.56-4.50 (m, 1H), 3.88 (dd,J
= 12.0, 3.6 Hz, 1H), 3.65-3.48 (m, 4H), 2.50-2.41 (m, 1H), 2.12-2.02 (m, 1H), 1.97-1.86 (m, 1H), 1.64-1.55 (m, 1H)。SFC:
tR
=4.161 min, 光學純度100%。
方法：柱：Chiralcel OJ-3 150×4.6mm I.D.，3μm流動相：A：CO2
，B：甲醇(0.05% DEA)，梯度：在5 min內5%到40%的B和在0.5min內40%到5%的B，保持5%的B持續1.5 min，流速：2.5mL/min，柱溫：35℃，ABPR：1500psi。化合物 10 的光譜 ： LCMS:
tR
=在10-80AB_7min_220&254_Shimadzu.lcm色譜(Xtimate C18 2.1*30mm)中為2.410 min, MS (ESI) m/z = 436.3 [M+H]+
。HPLC:
tR
=在10-80CD_8min.met.色譜(XBridge Shield RP 18 2.1*50mm 5μm)中為2.98 min。 1 H NMR
(400MHz, CD3
OD):
δ = 7.86 (s, 1H), 7.50 (t,J
= 8.4 Hz, 1H), 7.47-7.41 (m, 2H), 7.26-7.20 (m, 1H), 7.17-7.12 (m, 2H), 6.94 (dd,J
= 8.4, 2.4 Hz, 1H), 6.88 (dd,J
= 10.8, 2.4 Hz, 1H), 4.24-4.18 (m, 1H), 3.75 (t,J
= 11.2 Hz, 1H), 3.68-3.48 (m, 4H), 2.27-2.19 (m, 1H), 2.16-2.04 (m, 1H), 1.84-1.76 (m, 1H), 1.59-1.47 (m, 1H)。SFC:
tR
=4.405 min, 光學純度99.83%。
方法：柱：Chiralcel OJ-3 150×4.6mm I.D.，3μm流動相：A：CO2
，B：甲醇(0.05% DEA)，梯度：在5 min內5%到40%的B和在0.5min內40%到5%的B，保持5%的B持續1.5 min，流速：2.5mL/min，柱溫：35℃，ABPR：1500psi。化合物 11 的光譜 ： LCMS:
tR
=在10-80AB_7min_220&254_Shimadzu.lcm色譜(Xtimate C18 2.1*30mm)中為2.365 min, MS (ESI) m/z = 436.2 [M+H]+
。HPLC:
tR
=在10-80CD_8min.met.色譜(XBridge Shield RP 18 2.1*50mm 5μm)中為3.05 min。 1 H NMR
(400MHz, CD3
OD):
δ = 7.86 (s, 1H), 7.50 (t,J
= 8.4 Hz, 1H), 7.47-7.41 (m, 2H), 7.26-7.21 (m, 1H), 7.17-7.12 (m, 2H), 6.94 (dd,J
= 8.4, 2.4 Hz, 1H), 6.88 (dd,J
= 10.8, 2.4 Hz, 1H), 4.24-4.18 (m, 1H), 3.75 (t,J
= 10.8 Hz, 1H), 3.68-3.47 (m, 4H), 2.26-2.18 (m, 1H), 2.16-2.04 (m, 1H), 1.84-1.76 (m, 1H), 1.59-1.47 (m, 1H)。SFC:
tR
=5.802 min, 光學純度100%。
方法：柱：Chiralcel OJ-3 150×4.6mm I.D.，3μm流動相：A：CO2
，B：甲醇(0.05% DEA)，梯度：在5 min內5%到40%的B和在0.5min內40%到5%的B，保持5%的B持續1.5 min，流速：2.5mL/min，柱溫：35℃，ABPR：1500psi。
根據方法B合成以下化合物：
生物資料 BTK WT 和 BTK C481S HTRF 激酶分析
重組BTK野生型(BTK WT)購自賽默飛世爾(Thermo fisher)。重組BTK(C481S)購自新格諾康(SignalChem)。使用均相時間分辨螢光方法(Homogenous Time Resolved Fluorescence approach)評定化合物對BTK和BTK(C481S)的抑制效力。
簡單來說，在室溫下，在存在或不存在化合物的情況下將重組激酶預培育30分鐘。通過添加ATP和底物肽來引發反應，在反應中，所述底物肽可通過激酶磷酸化。在120分鐘培育之後，通過添加含有EDTA的檢測劑混合物來停止反應。分別在615nm和665 nm處測量螢光，其中激發波長為320 nm。665 nm/615 nm的計算信號比與激酶活性成正比。使用利用XL-fit的四參數邏輯擬合來計算對相應激酶產生50%抑制的化合物的濃度(IC50)。
TMD8 細胞系 p-BTK Elisa 分析
將TMD-8細胞以30000個細胞/孔的密度接種在具有含有1.5%胎牛血清的RPMI1640培養基的96孔板中。將測試化合物添加到細胞中且將細胞在37℃，5% CO2
下培育0.5小時。接著將過釩酸鹽溶液添加到細胞中以使最終濃度為100µM，且將細胞在37℃，5% CO2
下培育另外1小時。在化合物處理之後，細胞裂解且按照準確遵循PathScan® Phospho-Btk(Tyr223)夾心ELISA試劑盒(#23843)的程式檢測p-BTK信號。在設定為450 nm波長的Multiscan光譜讀取器上讀取板。在GraphPad Prism軟體中處理這些資料。
HEK293-BTK(WT) 和 HEK293-BTK(C481S)
通過使用QuikChange II XL定點突變誘發試劑盒進行突變誘發來產生含有C481S突變的BTK的全長cDNA。通過測序證實突變的BTK cDNA。接著將BTK(WT)、BTK-C481S的cDNA克隆到PLVX-Puro慢病毒載體中。通過用慢病毒載體轉染和封裝混合物來將慢病毒封裝在293T細胞中。將BTK(WT)、BTK-C481S慢病毒轉染到HEK293細胞中。在2µg/mL的嘌呤黴素中選擇轉染的細胞。穩定的多克隆細胞系通過WB證實且用於進一步研究。將HEK293-BTK(WT)、HEK293-BTK(C481S)細胞在具有10% FBS (Gibco；10099)和1µg/mL嘌呤黴素的DMEM(Gibco；12430)中培養。使所有細胞保持在37℃的具有5% CO2
的含濕氣培育箱中。
將HEK293-BTK(WT)和HEK293-BTK(C481S)細胞以
5000個細胞/孔的密度接種在具有含有1.5%胎牛血清的RPMI1640培養基的96孔板中。將測試化合物添加到細胞中且將細胞在37℃，5% CO2
下培育1.5小時。在化合物處理之後，細胞裂解且按照準確遵循PathScan® Phospho-Btk(Tyr223)夾心ELISA試劑盒(#23843)的程式檢測p-BTK信號。在設定為450 nm波長的Multiscan光譜讀取器上讀取板。在GraphPad Prism軟體中處理資料。
TMD-8 抗增殖分析
TMD-8細胞在含有10%胎牛血清的RPMI1640培養基中製備，且以每孔1500個細胞接種在384孔板中。將細胞在37℃，5% CO2
下培育整夜。在培育之後，將具有不同濃度的化合物添加到分析板中且在37℃，5% CO2
下將細胞培育另外72小時。在72小時培育之後，將15 μL的CellTiter 96® AQueous單溶液試劑添加到每個孔中且將板在室溫下培育30 min。使用CellTiter-Glo(Promega，USA)測定細胞成活力。根據製造商的說明書進行CellTiter-Glo分析，且在多標籤讀取器(Envision，PerkinElmer，USA)中測定螢光。在XLfit軟體中處理資料。
體外大鼠 / 人類肝細胞清除率分析
雄性大鼠肝細胞和混合性別的人類肝細胞獲自商業供應商(例如，BioreclamationIVT)且在使用前存儲在-150℃下。在DMSO中製備測試化合物的10 mM儲備溶液。將解凍培養基和補充培育培養基(無血清)放置於37℃水浴中，在使用前持續至少15分鐘。通過合併198 μL乙腈和2 μL的10 mM儲備溶液將儲備溶液稀釋到100 μM。
從存儲中去除冷凍保存的肝細胞的小瓶，確保所述小瓶保持處於低溫溫度。將小瓶在平緩振盪下在37℃水浴中解凍。將小瓶保持在水浴中，直到所有冰晶都溶解且不再可見。將小瓶用70%乙醇噴灑，隨後將其轉移到生物安全櫃中。且接著將內容物倒入到50 mL解凍培養基錐形管中。將小瓶在室溫下以100 g離心10分鐘。抽吸出解凍培養基且將肝細胞再懸浮於無血清培育培養基中，以得到約1.5×106
個細胞/毫升。
使用台盼藍拒染法(Trypan Blue exclusion)對細胞成活力和密度進行計數，且接著用無血清培育培養基稀釋細胞以達到1×106
個活細胞/毫升的工作細胞密度。將1×106
個活細胞/毫升的一部分肝細胞煮沸10 min，隨後添加到板中作為陰性對照以消除酶活性，使得應當觀察到極少或未觀察到底物轉換。使用失活的肝細胞以製備陰性樣本，其用於排除由化學物質本身的不穩定性引起的誤導因素。
將247.5 μL肝細胞的等分試樣分配到96孔未塗布板的每個孔中。將板放置於定軌振盪器上的培育箱中持續約10分鐘。將2.5 μL的100 μM測試化合物的等分試樣添加到未塗布的96孔板的相應孔中以起始反應。一式兩份地進行這種分析。在定軌振盪器上的培育箱中培育板，持續設計的時間點。在5、15、30、45、60、80和100分鐘的時間點處，轉移20 μL的內容物且與6體積(120 μL)的含內標的冷乙腈混合以終止反應。將樣本以4000 g離心20分鐘且100 μL的上清液的等分試樣用於LC-MS/MS分析以測量測試化合物。
基於從其初始濃度測定化合物消失的消除半衰期(T1/2)來估計體外肝細胞清除率。計算每種化合物(測試或對照)與IS的峰面積比。繪製Ln(對照%)相對於培育時間(min)的曲線，且計算線性擬合線的斜率。藥物消除速率常數k(min-1
)、T1/2(min)和體外固有清除率
CLint
(μL/min/E6)是根據以下等式計算：
k = -斜率
T1/2
= 0.693/k
CLint
= k/Chep
其中Chep(細胞×μL-1
)是培育系統中的細胞濃度。用於 Log D 測定 的 程式
將10 μL的每個盒的工作溶液依序放置於相應的96孔擱架位置(Log D板)中。將500 μL的飽和辛醇添加到以上無蓋Log D板的每個小瓶中，接著添加500 μL的飽和磷酸鹽緩衝液。用模制的PTFE/SIL 96孔板蓋密封。
將Log D板轉移到Eppendorf Thermomixer Comfort板振盪儀且在25℃，2,000 rpm下振盪2小時。
將樣本在25℃下以4,000 rpm離心30分鐘以分離各相。移液器和注射器分別用於從辛醇和緩衝液相吸取約100 μL到新的96孔板。
將5 μL的辛醇樣本轉移到新96孔板，隨後添加495 μL的H2
O和含內標的乙腈的混合物(1:1)作為100倍辛醇樣本。以1,000 rpm渦旋5分鐘。
將50 μL的100倍樣本轉移到新96孔板，隨後添加450 μL的H2
O和含內標的乙腈的混合物(1:1)作為1,000倍辛醇樣本。以1,000 rpm渦旋5分鐘。
用H2
O和含內標的乙腈的混合物(1:1)將1,000倍辛醇樣本連續稀釋為10,000、100,000和1,000,000倍。
將50 μL的緩衝液樣本轉移到新96孔板，隨後添加450 μL的H2
O和含內標的乙腈的混合物(1:1)作為10倍緩衝液樣本。以1,000 rpm渦旋5分鐘。
用H2
O和含內標的乙腈的混合物(1:1)將10倍緩衝液樣本連續稀釋為100、1,000和10,000倍。通過LC/MS/MS分析評估樣本。一式一份地測試所有化合物。
使用Microsoft Excel進行所有計算。通過LC/MS/MS評估測試化合物在辛醇/緩衝溶液中的濃度。如下計算測試化合物的Log D值：
DF意指稀釋係數。通過使用平衡透析在人類血漿中進行蛋白質結合測量的程式
通過添加3 μL的每個盒的工作溶液而將597 μL空白血漿添加到新塑膠板或獨立塑膠管的每個小瓶中，以1,000 rpm渦旋5分鐘。有機溶劑的最終體積%為0.5%且測試化合物的最終濃度為5 μM。緊接著將50 μL的加標血漿懸浮液轉移到96孔板以充當T=0對照樣本。與培育之後的樣本相同地處理所述樣本。將所有其餘的加標血漿在研究的持續時間內放置於培育箱中。
將插入物開口端朝上地放置於底板的孔中。將500 μL的磷酸鹽緩衝液(pH 7.4)添加到緩衝液室中，其由白色圓圈指示。將300 μL的加標血漿樣本添加到樣本室中，其由紅色圓圈指示。用透氣蓋覆蓋單元且在37℃下在CO2
培育箱中的定軌振盪器上以300 rpm與5% CO2
一起培育18小時。在培育結束時，去除蓋且分別將50 μL的透析後樣本從緩衝液室和血漿室吸取到獨立的96孔板中以用於分析。
同時，將塑膠板或獨立塑膠管中其餘的加標血漿樣本在37℃下在CO2
培育箱中與5% CO2
一起培育18小時。在T=18小時處，將50 μL的原始加標血漿懸浮液轉移到96孔板中以用於分析。
將50 μL的人類血漿添加到緩衝液樣本中，且將相等體積的PBS添加到收集的血漿樣本中。將板以1,000 rpm渦旋2分鐘且添加400 μL的含有適當內標(IS)的乙腈以使蛋白質沉澱且釋放化合物。以1,000 rpm渦旋10分鐘。以4,000 rpm離心30分鐘。將250 μL的上清液轉移到新的96孔板中且再次離心(4,000 rpm，30分鐘)。接著將100 μL的上清液轉移到新的96孔板中以用於分析。將100 μL的蒸餾水添加到每個樣本中且以1,000 rpm渦旋5分鐘以通過LC-MS/MS進行分析。所有化合物在人類血漿中以5 μM一式一份地測試。
使用Microsoft Excel進行所有計算。
如下計算測試化合物的未結合百分比、結合百分比和回收百分比：
結果 
大鼠中的短期口服吸收 (SOA) 分析。
短期口服吸收(Short oral absorption；SOA)模型是用於鑒定化合物的腦滲透的體內篩選模型。為評估化合物穿過大鼠的血腦屏障的可能性，通過AUC大腦
/AUC血漿
測量總大腦與血漿比(Kp, 大腦
)。分別通過口服投藥後可用時間點處的AUCCSF
/AUC血漿
或CSF與血漿比的平均值來確定CSF與血漿比(Kp,CSF
)。在單獨的研究中，通過體外血漿和大腦結合分析來測定生物基質中的游離部分。Kp,uu, 大腦
和Kp,uu,CSF
通過以下等式計算：(1)Kp,uu, 大 腦
=
Kp, 大腦
×fu, 大腦
/fu, 血漿
；(2)Kp,uu,CSF
= Kp,CSF
/fu, 血漿
。
