TW202110884A - Tigit及pd-1/tigit-結合分子 - Google Patents
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Abstract
本發明係關於結合至人類TIGIT之多肽分子、及結合至人類PD-1與人類TIGIT之多肽分子,且該等多肽分子可單獨及與化學療法及/或電離輻射組合用於治療實體腫瘤。
Description
本發明係關於醫學領域。具體而言,本發明係關於拮抗人類TIGIT或拮抗人類TIGIT及人類PD-1之新穎多肽分子、包含該等多肽分子之組合物、及單獨或與化學療法及其他癌症治療劑組合使用該等多肽分子治療實體腫瘤的方法。
免疫檢查點係在免疫細胞(例如,T細胞及樹突細胞)上表現之一組膜蛋白,包括多種共抑制及共刺激受體,其在適應性免疫反應之調控中起重要作用。檢查點包括人類程式性細胞死亡配體(PD-1) (NCBI NP_005009.2)及具有Ig及ITIM結構域之人類T細胞免疫受體(TIGIT) (NCBI NP_776160.2)。
PD-1與其配體(即,程式性細胞死亡配體1 (PD-L1)及程式性細胞死亡配體2 (PD-L2))之間之相互作用提供抑制信號,已經顯示其在腫瘤微環境中發生之腫瘤免疫逃逸及免疫抑制中起重要作用。儘管用抗PD-1抗體及/或抗PD-L1抗體阻斷PD-1抑制性信號傳導在臨床上得到驗證且已導致某些癌症治療之顯著臨床進展,但仍有許多患者對PD-1或PD-L1抗體治療無反應、復發、獲得抗性或以其他方式對治療不耐受。
TIGIT類似PD-1係在活化及耗盡T細胞上所表現之共抑制受體。TIGIT結合至腫瘤細胞上之脊髓灰白質炎病毒受體(PVR,亦稱為CD155),且使得能夠反向信號傳導至腫瘤細胞,從而導致T細胞阻抑性細胞介素之分泌。儘管CD155被認為係TIGIT之主要配體,但TIGIT亦可與CD112及CD113相互作用(Blake等人,Clin Cancer Res
;2016
;22(21): 5182-5188)。已研究TIGIT作為抑制性免疫檢查點受體之作用。TIGIT係CD226/TIGIT路徑之一部分,其中TIGIT不僅與CD226 (一種共刺激免疫受體)競爭結合至CD155,且亦與細胞膜中之CD226直接相互作用,且阻斷CD226同二聚化。(Blake等人,S,Clin Cancer Res
;2016
;22(21): 5182-5188;Johnston等人,Cancer Cell 2014
;26: 923-937;Mahnke等人,Journal of Investigative Dermatology 2016
;136: 9-11)。
抗TIGIT抗體為業內已知,包括揭示於US 2016/0355589、US 2017/143825、US 2017/088613、US 2016/376365、US 2018/169238、US 2016/176963及US 2019/100591中之彼等。然而,無抗人類TIGIT抗體已獲得監管批准以單獨或與抗人類PD-L1或抗人類PD-1抗體組合用於在人類中之治療用途。此外,無靶向TIGIT及PD-1或TIGIT及PD-L1之雙特異性抗體已獲得監管批准用於在人類中之治療用途。因此,存在對靶向免疫檢查點路徑之額外治療之需要。
因此,本發明係關於新穎抗人類TIGIT抗體及新穎抗人類TIGIT/抗人類PD-1雙特異性抗體。此外,與其他抗人類TIGIT抗體不同,本發明抗體之效應物功能係無效的,亦即,經工程化以使Fc受體結合最小化。因此,與其他抗人類TIGIT抗體不同,本發明之抗體不含可促進T調控細胞耗竭及免疫反應不良事件之天然人類IgG1框架。此外,本發明之抗人類TIGIT/抗人類PD-1雙特異性抗體含有不同類型之輕鏈,其中抗人類TIGIT臂輕鏈係κ輕鏈且抗人類PD-1輕鏈係λ輕鏈,其藉由降低輕鏈-輕鏈二聚化之潛能促進異單抗(heteromab)雙特異性抗體形成。
雙特異性分子之製備通常已知係不可預測之努力。舉例而言,共表現兩條重鏈及兩條輕鏈以產生IgG雙特異性抗體可導致一些錯配及不想要之副產物、抗體Fab內之異源二聚體相互作用(Lewis SM等人,Nature Biotechnology 2014
;32: 191-202;Leaver-Fay A等人,Structure 2016
;24: 641-651)。因此,本發明提供抗人類TIGIT/抗人類PD-1雙特異性分子,其使Fc受體結合最小化、使氧化最小化、促進異單抗裝配且與人類TIGIT/PD-1及食蟹猴TIGIT/PD-1交叉反應,且在確立之腫瘤模型中展現活體內效能。
令人類驚訝地,當與抗人類PD-1及抗人類TIGIT抗體組合療法比較時,本發明之抗人類TIGIT/抗人類PD-1雙特異性抗體展現顯著活體內抗腫瘤效能。更令人類驚訝地,用本發明之雙特異性抗體治療導致CD226+ CD8T細胞及CD226+ NK細胞之百分比增加,此可促進觀察到之顯著活體內效能。
本發明亦提供結合至人類TIGIT (SEQ ID NO:31)或人類TIGIT細胞外結構域(例如SEQ ID NO: 32)之多肽分子,其包含SEQ ID NO:1-6之重及輕互補決定區(CDR)胺基酸序列(參見表1)。在一個實施例中,多肽進一步包含SEQ ID NO: 7-12之CDR胺基酸序列,其中多肽分子亦結合至人類PD-1 (SEQ ID NO: 29)或PD-1細胞外結構域,例如SEQ ID NO: 30。
在一個實施例中,多肽分子係scFv分子。在另一實施例中,多肽分子係多特異性scFv分子。在另一實施例中,多特異性scFv分子係雙特異性scFv分子。
在一個實施例中,多肽分子係抗體或其人類TIGIT-結合片段,其包含三個分別具有SEQ ID NO: 1-3之胺基酸序列的HCDR及三個分別具有SEQ ID NO: 4-6之胺基酸序列的LCDR。在另一實施例中,多肽分子係抗體。在另一實施例中,抗體係單特異性抗體。在另一實施例中,抗體係多特異性抗體。在另一實施例中,抗體係亦結合至人類PD-1之雙特異性抗體。
在另一實施例中,多肽分子係抗體或其人類TIGIT-結合片段,其包含具有SEQ ID NO: 13之胺基酸序列的重鏈可變區及具有SEQ ID NO: 14之胺基酸序列的輕鏈可變區。在另一實施例中,多肽分子係包含具有SEQ ID NO: 21之胺基酸序列之重鏈及具有SEQ ID NO: 22之胺基酸序列之輕鏈的抗體。
在另一實施例中,抗體或其人類TIGIT-結合片段亦結合至人類PD-1 (SEQ ID NO: 31)或人類TIGIT細胞外結構域(例如SEQ ID NO: 32)及人類PD-1 (SEQ ID NO: 29)或人類PD-1細胞外結構域(例如SEQ IDNO: 30),且進一步包含三個分別具有SEQ ID NO: 7-9之胺基酸序列的HCDR及三個分別具有SEQ ID NO: 10-12之胺基酸序列的LCDR。
在另一實施例中,多肽分子係抗體或其人類TIGIT及人類PD-1結合片段,其包含:具有SEQ ID NO: 13之胺基酸序列的第一重鏈可變區;具有SEQ ID NO: 14之胺基酸序列的第一輕鏈可變區;具有SEQ ID NO: 17之胺基酸序列的第二重鏈可變區;及具有SEQ ID NO: 18之胺基酸序列的第二輕鏈可變區。
在另一實施例中,多肽分子係包含以下之抗體:具有SEQ ID NO:21之胺基酸序列的第一重鏈;具有SEQ ID NO:22之胺基酸序列的第一輕鏈;具有SEQ ID NO:23之胺基酸序列的第二重鏈;及具有SEQ ID NO:24之胺基酸序列的第二輕鏈。
本發明亦提供能夠表現本發明之多肽分子的哺乳動物細胞。
本發明亦提供DNA分子,其包含編碼SEQ ID NO:21、SEQ ID NO: 22、SEQ ID NO: 23及SEQ ID NO: 24之胺基酸序列中之一或多者的多核苷酸。本發明亦提供技術方案17之DNA分子,其中多核苷酸包含SEQ ID NO:25、SEQ ID NO: 26、SEQ ID NO: 27及SEQ ID NO: 28之DNA序列中之一或多者。
本發明亦提供包含本發明之DNA分子的哺乳動物細胞。本發明亦提供產生抗體之方法,其包含培養本發明之哺乳動物細胞及回收多肽分子。本發明亦提供藉由該方法產生之多肽分子。
本發明亦提供醫藥組合物,其包含本發明之多肽分子及可接受之載劑、稀釋劑或賦形劑。
本發明亦提供治療實體腫瘤癌之方法,其包含向有需要之人類患者投與有效量之本發明之多肽分子。在一個實施例中,實體腫瘤癌係肺癌、乳癌、頭頸癌、黑色素瘤、肝癌、結腸直腸癌、胰臟癌、胃癌、腎癌、前列腺癌、卵巢癌、子宮內膜癌或肝細胞癌。在另一實施例中,肺癌係非小細胞肺癌或小細胞肺癌。在另一實施例中,乳癌係三陰性乳癌。在另一實施例中,多肽分子與電離輻射同時、分開或依序組合投與。在另一實施例中,多肽分子與一或多種化學治療劑同時、分開或依序組合投與。
本發明亦提供本發明之多肽分子,其用於療法中。在一個實施例中,該用途係用於治療實體腫瘤癌。在另一實施例中,實體腫瘤癌係肺癌、乳癌、頭頸癌、黑色素瘤、肝癌、結腸直腸癌、胰臟癌、胃癌、腎癌、前列腺癌、卵巢癌、子宮內膜癌或肝細胞癌。在另一實施例中,肺癌係非小細胞肺癌或小細胞肺癌。在另一實施例中,乳癌係三陰性乳癌。在另一實施例中,多肽分子與電離輻射同時、分開或依序組合投與。在另一實施例中,多肽分子與一或多種化學治療劑同時、分開或依序組合投與。
本發明亦提供本發明之多肽分子之用途,其用於製造用於治療實體腫瘤癌之藥劑。在一個實施例中,該用途係用於治療實體腫瘤癌。在另一實施例中,實體腫瘤癌係肺癌、乳癌、頭頸癌、黑色素瘤、肝癌、結腸直腸癌、胰臟癌、胃癌、腎癌、前列腺癌、卵巢癌、子宮內膜癌或肝細胞癌。在另一實施例中,肺癌係非小細胞肺癌或小細胞肺癌。在另一實施例中,乳癌係三陰性乳癌。在另一實施例中,多肽分子與電離輻射同時、分開或依序組合投與。在另一實施例中,多肽分子與一或多種化學治療劑同時、分開或依序組合投與。
在一個實施例中,本發明之抗體係雙特異性抗體。本發明之雙特異性抗體經設計以有利於兩條不同重鏈之異二聚體配對,而不利於同二聚體之形成。較佳地,本文所述雙特異性抗體含有源自人類IgG1之Fc部分。已知人類IgG1結合至Fc-γ受體(FcγR)家族之蛋白質以及C1q。IgG1與FcγR或C1q之結合分別誘導抗體依賴性細胞毒性(ADCC)及補體依賴性細胞毒性(CDC)。因此,較佳地,本文所述抗體係經工程化以降低抗體與FcγR以及C1q之結合的人類IgG1。較佳地,將EU編號中位置L234A、L235A及P329A之胺基酸取代引入CH2區中,以降低抗體與FcγR及C1q之結合。視情況,引入EU編號中位置N297Q之胺基酸取代以進一步降低抗體之ADCC及CDC活性。
使用與North等人J. Mol. Biol. 2011 ;
406: 228-256之方法一致之注釋規則注釋本文闡述序列之每一抗體中之框架及CDR序列。
本發明亦提供結合至人類TIGIT (SEQ ID NO:31)、或TIGIT細胞外結構域(例如SEQ ID NO: 32)之抗體,其包含:
a) 重鏈,其包含具有SEQ ID NO:1之胺基酸序列的HCDR1、具有SEQ ID NO:2之胺基酸序列的HCDR2及具有SEQ ID NO:3之胺基酸序列的HCDR3;及
b) 輕鏈,其包含具有SEQ ID NO:4之胺基酸序列的LCDR1、具有SEQ ID NO:5之胺基酸序列的LCDR2及具有SEQ ID NO:6之胺基酸序列的LCDR3。
本發明亦提供抗體,其包含:
a) 具有SEQ ID NO:13之胺基酸序列的重鏈可變區;及
b) 具有SEQ ID NO:14之胺基酸序列的輕鏈可變區。
本發明亦提供抗體,其包含:
a) 具有SEQ ID NO:21之胺基酸序列的重鏈;及
b) 具有SEQ ID NO:22之胺基酸序列的輕鏈。
在一個實施例中,抗體之重鏈與抗體之輕鏈形成至少一個二硫鍵,且抗體之兩條重鏈形成至少一個二硫鍵。
在另一實施例中,抗體係經工程化以降低抗體與Fc γ受體之結合的人類IgG1。
本發明亦提供DNA分子,其包含編碼具有SEQ ID NO:21之胺基酸序列及SEQ ID NO:22之胺基酸序列之至少一種多肽的多核苷酸。在較佳實施例中,DNA分子包括包含SEQ ID NO: 25及SEQ ID NO: 26中之至少一者的多核苷酸。
本發明亦提供包含DNA分子之哺乳動物細胞,該DNA分子包含編碼具有SEQ ID NO:21之胺基酸序列及SEQ ID NO:22之胺基酸序列之至少一種多肽的多核苷酸。
本發明亦提供產生抗體之方法,其包含培養能夠表現抗體之哺乳動物細胞及回收抗體,該抗體包含:
a) 重鏈,其包含具有SEQ ID NO:1之胺基酸序列的HCDR1、具有SEQ ID NO:2之胺基酸序列的HCDR2及具有SEQ ID NO:3之胺基酸序列的HCDR3;及
b) 輕鏈,其包含具有SEQ ID NO:4之胺基酸序列的LCDR1、具有SEQ ID NO:5之胺基酸序列的LCDR2及具有SEQ ID NO:6之胺基酸序列的LCDR3。
在一個實施例中,抗體之重鏈與抗體之輕鏈形成至少一個二硫鍵,且抗體之兩條重鏈形成至少一個二硫鍵。
本發明亦提供產生抗體之方法,其包含培養能夠表現抗體之哺乳動物細胞及回收抗體,該抗體包含:
a) 具有SEQ ID NO:13之胺基酸序列的重鏈可變區;及
b) 具有SEQ ID NO:14之胺基酸序列的輕鏈可變區。
本發明亦提供產生抗體之方法,其包含培養能夠表現抗體之哺乳動物細胞及回收抗體,該抗體包含:
a) 具有SEQ ID NO:21之胺基酸序列的重鏈;及
b) 具有SEQ ID NO:22之胺基酸序列的輕鏈。
本發明亦提供產生抗體之方法,其包含培養能夠表現抗體之哺乳動物細胞及回收抗體;其中該抗體係經工程化以降低抗體與Fc γ受體之結合的人類IgG1。
本發明亦提供藉由包含以下之方法產生的抗體:培養能夠表現抗體之哺乳動物細胞及回收抗體,該抗體包含:
a) 重鏈,其包含具有SEQ ID NO:1之胺基酸序列的HCDR1、具有SEQ ID NO:2之胺基酸序列的HCDR2及具有SEQ ID NO:3之胺基酸序列的HCDR3;及
b) 輕鏈,其包含具有SEQ ID NO:4之胺基酸序列的LCDR1、具有SEQ ID NO:5之胺基酸序列的LCDR2及具有SEQ ID NO:6之胺基酸序列的LCDR3。
在一個實施例中,抗體之重鏈與抗體之輕鏈形成至少一個二硫鍵,且抗體之兩條重鏈形成至少一個二硫鍵。
本發明亦提供藉由包含以下之方法產生的抗體:培養能夠表現抗體之哺乳動物細胞及回收抗體,該抗體包含:
a) 具有SEQ ID NO:13之胺基酸序列的重鏈可變區;
b) 具有SEQ ID NO:14之胺基酸序列的輕鏈可變區。
本發明亦提供藉由包含以下之方法產生的抗體:培養能夠表現抗體之哺乳動物細胞及回收抗體,該抗體包含:
a) 具有SEQ ID NO:21之胺基酸序列的重鏈;
b) 具有SEQ ID NO:22之胺基酸序列的輕鏈。
本發明亦提供醫藥組合物,其包含抗體,其中該抗體結合至人類TIGIT (SEQ ID NO:31)或人類TIGIT細胞外結構域(例如SEQ ID NO: 32),該抗體包含:
a) 重鏈,其包含具有SEQ ID NO:1之胺基酸序列的HCDR1、具有SEQ ID NO:2之胺基酸序列的HCDR2及具有SEQ ID NO:3之胺基酸序列的HCDR3;及
b) 輕鏈,其包含具有SEQ ID NO:4之胺基酸序列的LCDR1、具有SEQ ID NO:5之胺基酸序列的LCDR2及具有SEQ ID NO:6之胺基酸序列的LCDR3,
及可接受之載劑、稀釋劑或賦形劑。
在一個實施例中,抗體之重鏈與抗體之輕鏈形成至少一個二硫鍵,且抗體之兩條重鏈形成至少一個二硫鍵。
本發明亦提供醫藥組合物,其包含抗體,該抗體包含:
a) 具有SEQ ID NO:13之胺基酸序列的重鏈可變區;
b) 具有SEQ ID NO:14之胺基酸序列的輕鏈可變區,
及可接受之載劑、稀釋劑或賦形劑。
本發明亦提供醫藥組合物,其包含抗體,該抗體包含:
a) 具有SEQ ID NO:21之胺基酸序列的重鏈;
b) 具有SEQ ID NO:22之胺基酸序列的輕鏈,
及可接受之載劑、稀釋劑或賦形劑。
在一個實施例中,抗體係經工程化以降低抗體與Fc γ受體之結合的人類IgG1。
本發明亦提供治療癌症之方法,其包含向有需要之人類患者投與有效量之抗體,其中該抗體結合至人類TIGIT (SEQ ID NO:31)或人類TIGIT細胞外結構域(例如SEQ ID NO: 32),該抗體包含:
a) 重鏈,其包含具有SEQ ID NO:1之胺基酸序列的HCDR1、具有SEQ ID NO:2之胺基酸序列的HCDR2及具有SEQ ID NO:3之胺基酸序列的HCDR3;及
b) 輕鏈,其包含具有SEQ ID NO:4之胺基酸序列的LCDR1、具有SEQ ID NO:5之胺基酸序列的LCDR2及具有SEQ ID NO:6之胺基酸序列的LCDR3。
在一個實施例中,抗體之重鏈與抗體之輕鏈形成至少一個二硫鍵,且抗體之兩條重鏈形成至少一個二硫鍵。
本發明亦提供治療癌症之方法,其包含向有需要之人類患者投與有效量之抗體,該抗體包含:
a) 具有SEQ ID NO:13之胺基酸序列的重鏈可變區;及
b) 具有SEQ ID NO:14之胺基酸序列的輕鏈可變區。
本發明亦提供治療癌症之方法,其包含向有需要之人類患者投與有效量之抗體,該抗體包含:
a) 具有SEQ ID NO:21之胺基酸序列的重鏈;
b) 具有SEQ ID NO:22之胺基酸序列的輕鏈。
在一個實施例中,抗體係經工程化以降低抗體與Fc γ受體之結合的人類IgG1。
本發明亦提供治療方法及使用方法。
本發明亦提供治療癌症之方法,其包含向有需要之人類患者投與有效量之本文所述抗體,其中癌症係肺癌、乳癌、頭頸癌、黑色素瘤、肝癌、結腸直腸癌、胰臟癌、胃癌、腎癌、前列腺癌、卵巢癌、子宮內膜癌或肝細胞癌。
本發明亦提供治療癌症之方法,其包含向有需要之人類患者投與有效量之本文所述抗體,其中癌症係非小細胞肺癌或小細胞肺癌。本發明進一步提供治療癌症之方法,其包含向有需要之人類患者投與有效量之本文所述抗體,其中癌症係三陰性乳癌。
本發明亦提供治療癌症之方法,其包含向有需要之人類患者投與有效量之本文所述抗體,其中抗體與電離輻射組合投與。
本發明亦提供治療癌症之方法,其包含向有需要之人類患者投與有效量之本文所述抗體,其中抗體與一或多種化學治療劑組合投與。
本發明亦提供治療癌症之方法,其包含向有需要之人類患者投與有效量之本文所述抗體,其中抗體與電離輻射及一或多種化學治療劑組合投與。
在一個實施例中,本發明亦提供治療癌症之方法,其包含與一或多種抗腫瘤劑同時、分開或依序組合投與有效量之本文揭示之雙特異性抗體。抗腫瘤劑之非限制性實例包括雷莫蘆單抗(ramucirumab)、奈昔木單抗(necitumumab)、奧拉妥單抗(olaratumab)、吉西他濱(gemcitabine)、培美曲塞(pemetrexed)、加魯尼色替(galunisertib)、阿貝西利(abemaciclib)、順鉑(cisplatin)、卡鉑(carboplatin)、達卡巴嗪(dacarbazine)、脂質體多柔比星(liposomal doxorubicin)、多西他賽(docetaxel)、環磷醯胺(cyclophosphamide)及多柔比星(doxorubicin)、溫諾平(navelbine)、埃雷布林(eribulin)、太平洋紫杉醇(paclitaxel)、用於可注射懸浮液之太平洋紫杉醇蛋白結合之粒子、伊沙匹隆(ixabepilone)、卡培他濱(capecitabine)、FOLFOX (甲醯四氫葉酸(leucovorin)、氟尿嘧啶(fluorouracil)及奧沙利鉑(oxaliplatin))、FOLFIRI (甲醯四氫葉酸、氟尿嘧啶及伊立替康(irinotecan))、西妥昔單抗(cetuximab)、EGFR抑制劑、Raf抑制劑、B-Raf抑制劑、CDK4/6抑制劑、CDK7抑制劑、吲哚胺2,3-雙加氧酶抑制劑、TGFβ抑制劑、TGFβ受體抑制劑、IL-10及聚乙二醇化IL-10 (例如派吉帶卡因(pegilodecakin))。
本發明亦提供用於治療癌症之抗體,其中該抗體結合至人類TIGIT (SEQ ID NO:31)或人類TIGIT細胞外結構域(例如SEQ ID NO: 32),該抗體包含:
a) 重鏈,其包含具有SEQ ID NO:1之胺基酸序列的HCDR1、具有SEQ ID NO:2之胺基酸序列的HCDR2及具有SEQ ID NO:3之胺基酸序列的HCDR3;及
b) 輕鏈,其包含具有SEQ ID NO:4之胺基酸序列的LCDR1、具有SEQ ID NO:5之胺基酸序列的LCDR2及具有SEQ ID NO:6之胺基酸序列的LCDR3。
在一個實施例中,抗體之重鏈與抗體之輕鏈形成至少一個二硫鍵,且抗體之兩條重鏈形成至少一個二硫鍵。
本發明亦提供用於治療癌症之抗體,其包含:
a) 具有SEQ ID NO:13之胺基酸序列的重鏈可變區;及
b) 具有SEQ ID NO:14之胺基酸序列的輕鏈可變區。
本發明亦提供用於治療癌症之抗體,其包含:
a) 具有SEQ ID NO:21之胺基酸序列的重鏈;及
b) 具有SEQ ID NO:22之胺基酸序列的輕鏈。
在一個實施例中,抗體係經工程化以降低抗體與Fc γ受體之結合的人類IgG1。
本發明亦提供用於治療癌症之抗體,其中癌症係肺癌、乳癌、頭頸癌、黑色素瘤、肝癌、結腸直腸癌、胰臟癌、胃癌、腎癌、前列腺癌、卵巢癌、子宮內膜癌或肝細胞癌。本發明進一步提供用於治療肺癌之抗體,其中肺癌係非小細胞肺癌或小細胞肺癌。本發明亦提供用於治療乳癌之抗體,其中乳癌係三陰性乳癌。
在一個實施例中,抗體與電離輻射同時、分開或依序組合投與。在另一實施例中,抗體與一或多種化學治療劑同時、分開或依序組合投與。在另一實施例中,抗體與電離輻射及一或多種化學治療劑同時、分開或依序組合投與。
本發明亦提供醫藥組合物,其包含用於治療癌症之抗體,其中該抗體結合至人類TIGIT (SEQ ID NO:31)或人類TIGIT細胞外結構域(例如SEQ ID NO: 32),該抗體包含:
a) 重鏈,其包含具有SEQ ID NO:1之胺基酸序列的HCDR1、具有SEQ ID NO:2之胺基酸序列的HCDR2及具有SEQ ID NO:3之胺基酸序列的HCDR3;及
b) 輕鏈,其包含具有SEQ ID NO:4之胺基酸序列的LCDR1、具有SEQ ID NO:5之胺基酸序列的LCDR2及具有SEQ ID NO:6之胺基酸序列的LCDR3,
及可接受之載劑、稀釋劑或賦形劑。
在一個實施例中,抗體之重鏈與抗體之輕鏈形成至少一個二硫鍵,且抗體之兩條重鏈形成至少一個二硫鍵。
本發明亦提供醫藥組合物,其包含用於治療癌症之抗體,該抗體包含:
a) 具有SEQ ID NO:13之胺基酸序列的重鏈可變區;及
b) 具有SEQ ID NO:14之胺基酸序列的輕鏈可變區,
及可接受之載劑、稀釋劑或賦形劑。
本發明亦提供醫藥組合物,其包含用於治療癌症之抗體,該抗體包含:
a) 具有SEQ ID NO:21之胺基酸序列的重鏈;及
b) 具有SEQ ID NO:22之胺基酸序列的輕鏈,
及可接受之載劑、稀釋劑或賦形劑。
在一個實施例中,抗體係經工程化以降低抗體與Fc γ受體之結合的人類IgG1。
本發明亦提供醫藥組合物,其包含用於治療癌症之抗體,其中該癌症係肺癌、乳癌、頭頸癌、黑色素瘤、肝癌、結腸直腸癌、胰臟癌、胃癌、腎癌、前列腺癌、卵巢癌、子宮內膜癌或肝細胞癌。本發明進一步提供醫藥組合物,其包含用於治療肺癌之抗體,其中肺癌係非小細胞肺癌或小細胞肺癌。本發明進一步提供醫藥組合物,其包含用於治療乳癌之抗體,其中乳癌係三陰性乳癌。
在一個實施例中,該組合物與電離輻射同時、分開或依序組合投與。在另一實施例中,醫藥組合物與一或多種化學治療劑同時、分開或依序組合投與。在另一實施例中,醫藥組合物與電離輻射及一或多種化學治療劑同時、分開或依序組合投與。
本發明亦提供本發明之抗體之用途,其用於製造用於治療癌症之藥劑,其中該抗體結合至人類TIGIT (SEQ ID NO:31)或人類TIGIT細胞外結構域(例如SEQ ID NO: 32),該抗體包含:
a) 重鏈,其包含具有SEQ ID NO:1之胺基酸序列的HCDR1、具有SEQ ID NO:2之胺基酸序列的HCDR2及具有SEQ ID NO:3之胺基酸序列的HCDR3;及
b) 輕鏈,其包含具有SEQ ID NO:4之胺基酸序列的LCDR1、具有SEQ ID NO:5之胺基酸序列的LCDR2及具有SEQ ID NO:6之胺基酸序列的LCDR3。
在一個實施例中,抗體之重鏈與抗體之輕鏈形成至少一個二硫鍵,且抗體之兩條重鏈形成至少一個二硫鍵。
本發明亦提供本發明之抗體之用途,其用於製造用於治療癌症之藥劑,該抗體包含:
a) 具有SEQ ID NO:13之胺基酸序列的重鏈可變區;及
b) 具有SEQ ID NO:14之胺基酸序列的輕鏈可變區。
本發明亦提供本發明之抗體之用途,其用於製造用於治療癌症之藥劑,該抗體包含:
a) 具有SEQ ID NO:21之胺基酸序列的重鏈;及
b) 具有SEQ ID NO:22之胺基酸序列的輕鏈。
在一個實施例中,抗體係經工程化以降低抗體與Fc γ受體之結合的人類IgG1。
本發明亦提供本發明之抗體之用途,其用於製造用於治療癌症之藥劑,其中該癌症係肺癌、乳癌、頭頸癌、黑色素瘤、肝癌、結腸直腸癌、胰臟癌、胃癌、腎癌、前列腺癌、卵巢癌、子宮內膜癌或肝細胞癌。本發明進一步提供本發明之抗體之用途,其用於製造用於治療肺癌之藥劑,其中肺癌係非小細胞肺癌或小細胞肺癌。本發明進一步提供本發明之抗體之用途,其用於製造用於治療乳癌之藥劑,其中乳癌係三陰性乳癌。
在一個實施例中,抗體與電離輻射同時、分開或依序組合投與。在另一實施例中,抗體與一或多種化學治療劑同時、分開或依序組合投與。在另一實施例中,抗體與電離輻射及一或多種化學治療劑同時、分開或依序組合投與。
在係指如本文所述之治療方法之實施例中,該等實施例亦係用於該治療或另一選擇為用於製造用於該治療之藥劑的其他實施例。
有用化學治療劑之非限制性實例包括5-氟尿嘧啶、羥基脲、吉西他濱、培美曲塞、胺甲喋呤(methotrexate)、多柔比星、依託泊苷(etoposide)、卡鉑、順鉑、環磷醯胺、美法侖(melphalan)、達卡巴嗪、紫杉醇(taxol)、喜樹鹼(camptothecin)、FOLFIRI、FOLFOX、多西他賽、道諾黴素(daunorubicin)、太平洋紫杉醇、奧沙利鉑及其組合。
本發明之抗體或包含其之醫藥組合物可藉由非經腸途徑(其係靜脈內投與之非限制性實例)來投與。可單獨將本發明之抗體與醫藥上可接受之載劑、稀釋劑或賦形劑以單一或多個劑量投與人類患者。本發明之醫藥組合物可藉由業內已知之方法製備(例如,Remington: The Science and Practice of Pharmacy
, 第22版(2012), A. Loyd等人,Pharmaceutical Press)。
在一個實施例中,本發明之多肽分子係無菌的。在另一實施例中,本發明之多肽分子係實質上純的。在另一實施例中,本發明之多肽分子係實質上純且無菌的。
本發明之雙特異性抗體係異二聚體,其中部分由於兩條不同重鏈及兩條不同輕鏈,抗體之每一臂展現與其同源抗原選擇性單價結合。在本發明中,雙特異性抗體之一個臂結合人類PD-1 (SEQ ID NO:29)或人類PD-1細胞外結構域(ECD) (例如,ECD-His表現產物(SEQ ID NO: 30)),而另一臂結合人類TIGIT (SEQ ID NO:31)或TIGIT ECD (例如,ECD-His表現產物(SEQ ID NO: 32))。在較佳實施例中,抗體之一個臂拮抗人類PD-1 (SEQ ID NO:29),且另一臂拮抗人類TIGIT (SEQ ID NO:31)。
本發明亦提供抗體,其結合至人類PD-1 (SEQ ID NO:29)或PD-1細胞外結構域(例如SEQ ID NO: 30),且結合至人類TIGIT (SEQ ID NO:31)或TIGIT細胞外結構域(例如SEQ ID NO: 32),該抗體包含:
a) 第一重鏈,其包含具有SEQ ID NO:1之胺基酸序列的HCDR1、具有SEQ ID NO:2之胺基酸序列的HCDR2及具有SEQ ID NO:3之胺基酸序列的HCDR3;
b) 第一輕鏈,其包含具有SEQ ID NO:4之胺基酸序列的LCDR1、具有SEQ ID NO:5之胺基酸序列的LCDR2及具有SEQ ID NO:6之胺基酸序列的LCDR3;
c) 第二重鏈,其包含具有SEQ ID NO:7之胺基酸序列的HCDR1、具有SEQ ID NO:8之胺基酸序列的HCDR2及具有SEQ ID NO:9之胺基酸序列的HCDR3;及
d) 第二輕鏈,其包含具有SEQ ID NO:10之胺基酸序列的LCDR1、具有SEQ ID NO:11之胺基酸序列的LCDR2及具有SEQ ID NO:12之胺基酸序列的LCDR3。
本發明亦提供抗體,其包含:
a) 具有SEQ ID NO:13之胺基酸序列的第一重鏈可變區;
b) 具有SEQ ID NO:14之胺基酸序列的第一輕鏈可變區;
c) 具有SEQ ID NO:17之胺基酸序列的第二重鏈可變區;及
d) 具有SEQ ID NO:18之胺基酸序列的第二輕鏈可變區。
本發明亦提供抗體,其包含:
a) 具有SEQ ID NO:21之胺基酸序列的第一重鏈;
b) 具有SEQ ID NO:22之胺基酸序列的第一輕鏈;
c) 具有SEQ ID NO:23之胺基酸序列的第二重鏈;及
d) 具有SEQ ID NO:24之胺基酸序列的第二輕鏈。
本發明亦提供具有以下之抗體(本文中稱為抗體A):
a) 具有SEQ ID NO:21之胺基酸序列的第一重鏈;
b) 具有SEQ ID NO:22之胺基酸序列的第一輕鏈;
c) 具有SEQ ID NO:23之胺基酸序列的第二重鏈;及
d) 具有SEQ ID NO:24之胺基酸序列的第二輕鏈。
在一個實施例中,抗體之第一重鏈與抗體之第一輕鏈形成至少一個二硫鍵,抗體之第二重鏈與抗體之第二輕鏈形成至少一個二硫鍵,且抗體之第一重鏈與抗體之第二重鏈形成至少一個二硫鍵。
在另一實施例中,抗體係經工程化以降低抗體與Fc γ受體之結合的人類IgG1。
本發明亦提供DNA分子,其包含編碼具有SEQ ID NO:21之胺基酸序列、SEQ ID NO:22之胺基酸序列、SEQ ID NO:23之胺基酸序列及SEQ ID NO:24之胺基酸序列之至少一種多肽的多核苷酸。在較佳實施例中,DNA分子包含多核苷酸,其包含SEQ ID NO: 25、SEQ ID NO: 26、SEQ ID NO: 27及SEQ ID NO: 28中之至少一者。
本發明亦提供包含DNA分子之哺乳動物細胞,該DNA分子包含編碼具有SEQ ID NO:21之胺基酸序列、SEQ ID NO:22之胺基酸序列、SEQ ID NO:23之胺基酸序列及SEQ ID NO:24之胺基酸序列之至少一種多肽的多核苷酸。
本發明亦提供產生抗體之方法,其包含培養能夠表現抗體之哺乳動物細胞及回收抗體,該抗體包含:
a) 第一重鏈,其包含具有SEQ ID NO:1之胺基酸序列的HCDR1、具有SEQ ID NO:2之胺基酸序列的HCDR2及具有SEQ ID NO:3之胺基酸序列的HCDR3;
b) 第一輕鏈,其包含具有SEQ ID NO:4之胺基酸序列的LCDR1、具有SEQ ID NO:5之胺基酸序列的LCDR2及具有SEQ ID NO:6之胺基酸序列的LCDR3;
c) 第二重鏈,其包含具有SEQ ID NO:7之胺基酸序列的HCDR1、具有SEQ ID NO:8之胺基酸序列的HCDR2及具有SEQ ID NO:9之胺基酸序列的HCDR3;及
d) 第二輕鏈,其包含具有SEQ ID NO:10之胺基酸序列的LCDR1、具有SEQ ID NO:11之胺基酸序列的LCDR2及具有SEQ ID NO:12之胺基酸序列的LCDR3。
在一個實施例中,抗體之第一重鏈與抗體之第一輕鏈形成至少一個二硫鍵,抗體之第二重鏈與抗體之第二輕鏈形成至少一個二硫鍵,且抗體之第一重鏈與抗體之第二重鏈形成至少一個二硫鍵。
本發明亦提供產生抗體之方法,其包含培養能夠表現抗體之哺乳動物細胞及回收抗體,該抗體包含:
a) 具有SEQ ID NO:13之胺基酸序列的第一重鏈可變區;
b) 具有SEQ ID NO:14之胺基酸序列的第一輕鏈可變區;
c) 具有SEQ ID NO:17之胺基酸序列的第二重鏈可變區;及
d) 具有SEQ ID NO:18之胺基酸序列的第二輕鏈可變區。
本發明亦提供產生抗體之方法,其包含培養能夠表現抗體之哺乳動物細胞及回收抗體,該抗體包含:
a) 具有SEQ ID NO:21之胺基酸序列的第一重鏈;
b) 具有SEQ ID NO:22之胺基酸序列的第一輕鏈;
c) 具有SEQ ID NO:23之胺基酸序列的第二重鏈;及
d) 具有SEQ ID NO:24之胺基酸序列的第二輕鏈。
本發明亦提供產生抗體之方法,其包含培養能夠表現抗體之哺乳動物細胞及回收抗體;其中該抗體係經工程化以降低抗體與Fc γ受體之結合的人類IgG1。
本發明亦提供藉由包含以下之方法產生的抗體:培養能夠表現抗體之哺乳動物細胞及回收抗體,該抗體包含:
a) 第一重鏈,其包含具有SEQ ID NO:1之胺基酸序列的HCDR1、具有SEQ ID NO:2之胺基酸序列的HCDR2及具有SEQ ID NO:3之胺基酸序列的HCDR3;
b) 第一輕鏈,其包含具有SEQ ID NO:4之胺基酸序列的LCDR1、具有SEQ ID NO:5之胺基酸序列的LCDR2及具有SEQ ID NO:6之胺基酸序列的LCDR3;
c) 第二重鏈,其包含具有SEQ ID NO:7之胺基酸序列的HCDR1、具有SEQ ID NO:8之胺基酸序列的HCDR2及具有SEQ ID NO:9之胺基酸序列的HCDR3;及
d) 第二輕鏈,其包含具有SEQ ID NO:10之胺基酸序列的LCDR1、具有SEQ ID NO:11之胺基酸序列的LCDR2及具有SEQ ID NO:12之胺基酸序列的LCDR3。
在一個實施例中,抗體之第一重鏈與抗體之第一輕鏈形成至少一個二硫鍵,抗體之第二重鏈與抗體之第二輕鏈形成至少一個二硫鍵,且抗體之第一重鏈與抗體之第二重鏈形成至少一個二硫鍵。
本發明亦提供藉由包含以下之方法產生的抗體:培養能夠表現抗體之哺乳動物細胞及回收抗體,該抗體包含:
a) 具有SEQ ID NO:13之胺基酸序列的第一重鏈可變區;
b) 具有SEQ ID NO:14之胺基酸序列的第一輕鏈可變區;
c) 具有SEQ ID NO:17之胺基酸序列的第二重鏈可變區;及
d) 具有SEQ ID NO:18之胺基酸序列的第二輕鏈可變區。
本發明亦提供藉由包含以下之方法產生的抗體:培養能夠表現抗體之哺乳動物細胞及回收抗體,該抗體包含:
a) 具有SEQ ID NO:21之胺基酸序列的第一重鏈;
b) 具有SEQ ID NO:22之胺基酸序列的第一輕鏈;
c) 具有SEQ ID NO:23之胺基酸序列的第二重鏈;及
d) 具有SEQ ID NO:24之胺基酸序列的第二輕鏈。
本發明亦提供醫藥組合物,其包含抗體,其中該抗體結合至人類PD-1 (SEQ ID NO:29)或人類PD-1細胞外結構域(例如SEQ ID NO: 30),且結合至人類TIGIT (SEQ ID NO:31)或人類TIGIT細胞外結構域(例如SEQ ID NO: 32),該抗體包含:
a) 第一重鏈,其包含具有SEQ ID NO:1之胺基酸序列的HCDR1、具有SEQ ID NO:2之胺基酸序列的HCDR2及具有SEQ ID NO:3之胺基酸序列的HCDR3;
b) 第一輕鏈,其包含具有SEQ ID NO:4之胺基酸序列的LCDR1、具有SEQ ID NO:5之胺基酸序列的LCDR2及具有SEQ ID NO:6之胺基酸序列的LCDR3;
c) 第二重鏈,其包含具有SEQ ID NO:7之胺基酸序列的HCDR1、具有SEQ ID NO:8之胺基酸序列的HCDR2及具有SEQ ID NO:9之胺基酸序列的HCDR3;及
d) 第二輕鏈,其包含具有SEQ ID NO:10之胺基酸序列的LCDR1、具有SEQ ID NO:11之胺基酸序列的LCDR2及具有SEQ ID NO:12之胺基酸序列的LCDR3,
及可接受之載劑、稀釋劑或賦形劑。
在一個實施例中,抗體之第一重鏈與抗體之第一輕鏈形成至少一個二硫鍵,抗體之第二重鏈與抗體之第二輕鏈形成至少一個二硫鍵,且抗體之第一重鏈與抗體之第二重鏈形成至少一個二硫鍵。
本發明亦提供醫藥組合物,其包含抗體,該抗體包含:
a) 具有SEQ ID NO:13之胺基酸序列的第一重鏈可變區;
b) 具有SEQ ID NO:14之胺基酸序列的第一輕鏈可變區;
c) 具有SEQ ID NO:17之胺基酸序列的第二重鏈可變區;及
d) 具有SEQ ID NO:18之胺基酸序列的第二輕鏈可變區,
及可接受之載劑、稀釋劑或賦形劑。
本發明亦提供醫藥組合物,其包含抗體,該抗體包含:
a) 具有SEQ ID NO:21之胺基酸序列的第一重鏈;
b) 具有SEQ ID NO:22之胺基酸序列的第一輕鏈;
c) 具有SEQ ID NO:23之胺基酸序列的第二重鏈;及
d) 具有SEQ ID NO:24之胺基酸序列的第二輕鏈,
及可接受之載劑、稀釋劑或賦形劑。
在一個實施例中,抗體係經工程化以降低抗體與Fc γ受體之結合的人類IgG1。
本發明亦提供治療癌症之方法,其包含向有需要之人類患者投與有效量之抗體,其中該抗體結合至人類PD-1 (SEQ ID NO:29)或人類PD-1細胞外結構域(例如SEQ ID NO: 30),且結合至人類TIGIT (SEQ ID NO:31)或人類TIGIT細胞外結構域(例如SEQ ID NO: 32),該抗體包含:
a) 第一重鏈,其包含具有SEQ ID NO:1之胺基酸序列的HCDR1、具有SEQ ID NO:2之胺基酸序列的HCDR2及具有SEQ ID NO:3之胺基酸序列的HCDR3;
b) 第一輕鏈,其包含具有SEQ ID NO:4之胺基酸序列的LCDR1、具有SEQ ID NO:5之胺基酸序列的LCDR2及具有SEQ ID NO:6之胺基酸序列的LCDR3;
c) 第二重鏈,其包含具有SEQ ID NO:7之胺基酸序列的HCDR1、具有SEQ ID NO:8之胺基酸序列的HCDR2及具有SEQ ID NO:9之胺基酸序列的HCDR3;及
d) 第二輕鏈,其包含具有SEQ ID NO:10之胺基酸序列的LCDR1、具有SEQ ID NO:11之胺基酸序列的LCDR2及具有SEQ ID NO:12之胺基酸序列的LCDR3。
在一個實施例中,抗體之第一重鏈與抗體之第一輕鏈形成至少一個二硫鍵,抗體之第二重鏈與抗體之第二輕鏈形成至少一個二硫鍵,且抗體之第一重鏈與抗體之第二重鏈形成至少一個二硫鍵。
本發明亦提供治療癌症之方法,其包含向有需要之人類患者投與有效量之抗體,該抗體包含:
a) 具有SEQ ID NO:13之胺基酸序列的第一重鏈可變區;
b) 具有SEQ ID NO:14之胺基酸序列的第一輕鏈可變區;
c) 具有SEQ ID NO:17之胺基酸序列的第二重鏈可變區;及
d) 具有SEQ ID NO:18之胺基酸序列的第二輕鏈可變區。
本發明亦提供治療癌症之方法,其包含向有需要之人類患者投與有效量之抗體,該抗體包含:
a) 具有SEQ ID NO:21之胺基酸序列的第一重鏈;
b) 具有SEQ ID NO:22之胺基酸序列的第一輕鏈;
c) 具有SEQ ID NO:23之胺基酸序列的第二重鏈;及
d) 具有SEQ ID NO:24之胺基酸序列的第二輕鏈。
本發明亦提供治療方法及使用方法。
在一個實施例中,抗體係經工程化以降低抗體與Fc γ受體之結合的人類IgG1。
本發明亦提供治療癌症之方法,其包含向有需要之人類患者投與有效量之本文所述抗體,其中癌症係肺癌、乳癌、頭頸癌、黑色素瘤、肝癌、結腸直腸癌、胰臟癌、胃癌、腎癌、前列腺癌、卵巢癌、子宮內膜癌或肝細胞癌。
本發明亦提供治療癌症之方法,其包含向有需要之人類患者投與有效量之本文所述抗體,其中癌症係非小細胞肺癌或小細胞肺癌。本發明進一步提供治療癌症之方法,其包含向有需要之人類患者投與有效量之本文所述抗體,其中癌症係三陰性乳癌。
本發明亦提供治療癌症之方法,其包含向有需要之人類患者投與有效量之本文所述抗體,其中抗體與電離輻射組合投與。
本發明亦提供治療癌症之方法,其包含向有需要之人類患者投與有效量之本文所述抗體,其中抗體與一或多種化學治療劑組合投與。
本發明亦提供治療癌症之方法,其包含向有需要之人類患者投與有效量之本文所述抗體,其中抗體與電離輻射及一或多種化學治療劑組合投與。
在一個實施例中,本發明亦提供治療癌症之方法,其包含與一或多種抗腫瘤劑同時、分開或依序組合投與有效量之本文揭示之雙特異性抗體。抗腫瘤劑之非限制性實例包括雷莫蘆單抗、奈昔木單抗、奧拉妥單抗、吉西他濱、培美曲塞、加魯尼色替、阿貝西利、順鉑、卡鉑、達卡巴嗪、脂質體多柔比星、多西他賽、環磷醯胺及多柔比星、溫諾平、埃雷布林、太平洋紫杉醇、用於可注射懸浮液之太平洋紫杉醇蛋白結合之粒子、伊沙匹隆、卡培他濱、FOLFOX (甲醯四氫葉酸、氟尿嘧啶及奧沙利鉑)、FOLFIRI (甲醯四氫葉酸、氟尿嘧啶及伊立替康)、西妥昔單抗、EGFR抑制劑、Raf抑制劑、B-Raf抑制劑、CDK4/6抑制劑、CDK7抑制劑、吲哚胺2,3-雙加氧酶抑制劑、TGFβ抑制劑、TGFβ受體抑制劑、IL-10及聚乙二醇化IL-10 (例如派吉帶卡因)。
本發明亦提供用於治療癌症之抗體,其中該抗體結合至人類PD-1 (SEQ ID NO:29)或人類PD-1細胞外結構域(例如SEQ ID NO: 30),且結合至人類TIGIT (SEQ ID NO:31)或人類TIGIT細胞外結構域(例如SEQ ID NO: 32),該抗體包含:
a) 第一重鏈,其包含具有SEQ ID NO:1之胺基酸序列的HCDR1、具有SEQ ID NO:2之胺基酸序列的HCDR2及具有SEQ ID NO:3之胺基酸序列的HCDR3;
b) 第一輕鏈,其包含具有SEQ ID NO:4之胺基酸序列的LCDR1、具有SEQ ID NO:5之胺基酸序列的LCDR2及具有SEQ ID NO:6之胺基酸序列的LCDR3;
c) 第二重鏈,其包含具有SEQ ID NO:7之胺基酸序列的HCDR1、具有SEQ ID NO:8之胺基酸序列的HCDR2及具有SEQ ID NO:9之胺基酸序列的HCDR3;及
d) 第二輕鏈,其包含具有SEQ ID NO:10之胺基酸序列的LCDR1、具有SEQ ID NO:11之胺基酸序列的LCDR2及具有SEQ ID NO:12之胺基酸序列的LCDR3。
在一個實施例中,抗體之第一重鏈與抗體之第一輕鏈形成至少一個二硫鍵,抗體之第二重鏈與抗體之第二輕鏈形成至少一個二硫鍵,且抗體之第一重鏈與抗體之第二重鏈形成至少一個二硫鍵。
本發明亦提供用於治療癌症之抗體,其包含:
a) 具有SEQ ID NO:13之胺基酸序列的第一重鏈可變區;
b) 具有SEQ ID NO:14之胺基酸序列的第一輕鏈可變區;
c) 具有SEQ ID NO:17之胺基酸序列的第二重鏈可變區;及
d) 具有SEQ ID NO:18之胺基酸序列的第二輕鏈可變區。
本發明亦提供用於治療癌症之抗體,其包含:
a) 具有SEQ ID NO:21之胺基酸序列的第一重鏈;
b) 具有SEQ ID NO:22之胺基酸序列的第一輕鏈;
c) 具有SEQ ID NO:23之胺基酸序列的第二重鏈;及
d) 具有SEQ ID NO:24之胺基酸序列的第二輕鏈。
在一個實施例中,抗體係經工程化以降低抗體與Fc γ受體之結合的人類IgG1。
本發明亦提供用於治療癌症之抗體,其中癌症係肺癌、乳癌、頭頸癌、黑色素瘤、肝癌、結腸直腸癌、胰臟癌、胃癌、腎癌、前列腺癌、卵巢癌、子宮內膜癌或肝細胞癌。本發明進一步提供用於治療肺癌之抗體,其中肺癌係非小細胞肺癌或小細胞肺癌。本發明亦提供用於治療乳癌之抗體,其中乳癌係三陰性乳癌。
在一個實施例中,抗體與電離輻射同時、分開或依序組合投與。在另一實施例中,抗體與一或多種化學治療劑同時、分開或依序組合投與。在另一實施例中,抗體與電離輻射及一或多種化學治療劑同時、分開或依序組合投與。
本發明亦提供醫藥組合物,其包含用於治療癌症之抗體,其中該抗體結合至人類PD-1 (SEQ ID NO:29)或人類PD-1細胞外結構域(例如SEQ ID NO: 30),且結合至人類TIGIT (SEQ ID NO:31)或人類TIGIT細胞外結構域(例如SEQ ID NO: 32),該抗體包含:
a) 第一重鏈,其包含具有SEQ ID NO:1之胺基酸序列的HCDR1、具有SEQ ID NO:2之胺基酸序列的HCDR2及具有SEQ ID NO:3之胺基酸序列的HCDR3;
b) 第一輕鏈,其包含具有SEQ ID NO:4之胺基酸序列的LCDR1、具有SEQ ID NO:5之胺基酸序列的LCDR2及具有SEQ ID NO:6之胺基酸序列的LCDR3;
c) 第二重鏈,其包含具有SEQ ID NO:7之胺基酸序列的HCDR1、具有SEQ ID NO:8之胺基酸序列的HCDR2及具有SEQ ID NO:9之胺基酸序列的HCDR3;及
d) 第二輕鏈,其包含具有SEQ ID NO:10之胺基酸序列的LCDR1、具有SEQ ID NO:11之胺基酸序列的LCDR2及具有SEQ ID NO:12之胺基酸序列的LCDR3,
及可接受之載劑、稀釋劑或賦形劑。
在一個實施例中,抗體之第一重鏈與抗體之第一輕鏈形成至少一個二硫鍵,抗體之第二重鏈與抗體之第二輕鏈形成至少一個二硫鍵,且抗體之第一重鏈與抗體之第二重鏈形成至少一個二硫鍵。
本發明亦提供醫藥組合物,其包含用於治療癌症之抗體,該抗體包含:
a) 具有SEQ ID NO:13之胺基酸序列的第一重鏈可變區;
b) 具有SEQ ID NO:14之胺基酸序列的第一輕鏈可變區;
c) 具有SEQ ID NO:17之胺基酸序列的第二重鏈可變區;及
d) 具有SEQ ID NO:18之胺基酸序列的第二輕鏈可變區,
及可接受之載劑、稀釋劑或賦形劑。
本發明亦提供醫藥組合物,其包含用於治療癌症之抗體,該抗體包含:
a) 具有SEQ ID NO:21之胺基酸序列的第一重鏈;
b) 具有SEQ ID NO:22之胺基酸序列的第一輕鏈;
c) 具有SEQ ID NO:23之胺基酸序列的第二重鏈;及
d) 具有SEQ ID NO:24之胺基酸序列的第二輕鏈,
及可接受之載劑、稀釋劑或賦形劑。
在一個實施例中,抗體係經工程化以降低抗體與Fc γ受體之結合的人類IgG1。
本發明亦提供醫藥組合物,其包含用於治療癌症之抗體,其中該癌症係肺癌、乳癌、頭頸癌、黑色素瘤、肝癌、結腸直腸癌、胰臟癌、胃癌、腎癌、前列腺癌、卵巢癌、子宮內膜癌或肝細胞癌。本發明進一步提供醫藥組合物,其包含用於治療肺癌之抗體,其中肺癌係非小細胞肺癌或小細胞肺癌。本發明進一步提供醫藥組合物,其包含用於治療乳癌之抗體,其中乳癌係三陰性乳癌。
在一個實施例中,該組合物與電離輻射同時、分開或依序組合投與。在另一實施例中,醫藥組合物與一或多種化學治療劑同時、分開或依序組合投與。在另一實施例中,醫藥組合物與電離輻射及一或多種化學治療劑同時、分開或依序組合投與。
本發明亦提供本發明之抗體之用途,其用於製造用於治療癌症之藥劑,其中該抗體結合至人類PD-1 (SEQ ID NO:29)或人類PD-1細胞外結構域(例如SEQ ID NO: 30),且結合至人類TIGIT (SEQ ID NO:31)或人類TIGIT細胞外結構域(例如SEQ ID NO: 32),該抗體包含:
a) 第一重鏈,其包含具有SEQ ID NO:1之胺基酸序列的HCDR1、具有SEQ ID NO:2之胺基酸序列的HCDR2及具有SEQ ID NO:3之胺基酸序列的HCDR3;
b) 第一輕鏈,其包含具有SEQ ID NO:4之胺基酸序列的LCDR1、具有SEQ ID NO:5之胺基酸序列的LCDR2及具有SEQ ID NO:6之胺基酸序列的LCDR3;
c) 第二重鏈,其包含具有SEQ ID NO:7之胺基酸序列的HCDR1、具有SEQ ID NO:8之胺基酸序列的HCDR2及具有SEQ ID NO:9之胺基酸序列的HCDR3;及
d) 第二輕鏈,其包含具有SEQ ID NO:10之胺基酸序列的LCDR1、具有SEQ ID NO:11之胺基酸序列的LCDR2及具有SEQ ID NO:12之胺基酸序列的LCDR3。
在一個實施例中,抗體之第一重鏈與抗體之第一輕鏈形成至少一個二硫鍵,抗體之第二重鏈與抗體之第二輕鏈形成至少一個二硫鍵,且抗體之第一重鏈與抗體之第二重鏈形成至少一個二硫鍵。
本發明亦提供本發明之抗體之用途,其用於製造用於治療癌症之藥劑,該抗體包含:
a) 具有SEQ ID NO:13之胺基酸序列的第一重鏈可變區;
b) 具有SEQ ID NO:14之胺基酸序列的第一輕鏈可變區;
c) 具有SEQ ID NO:17之胺基酸序列的第二重鏈可變區;及
d) 具有SEQ ID NO:18之胺基酸序列的第二輕鏈可變區。
本發明亦提供本發明之抗體之用途,其用於製造用於治療癌症之藥劑,該抗體包含:
a) 具有SEQ ID NO:21之胺基酸序列的第一重鏈;
b) 具有SEQ ID NO:22之胺基酸序列的第一輕鏈;
c) 具有SEQ ID NO:23之胺基酸序列的第二重鏈;及
d) 具有SEQ ID NO:24之胺基酸序列的第二輕鏈。
在一個實施例中,抗體係經工程化以降低抗體與Fc γ受體之結合的人類IgG1。
本發明亦提供本發明之抗體之用途,其用於製造用於治療癌症之藥劑,其中該癌症係肺癌、乳癌、頭頸癌、黑色素瘤、肝癌、結腸直腸癌、胰臟癌、胃癌、腎癌、前列腺癌、卵巢癌、子宮內膜癌或肝細胞癌。本發明進一步提供本發明之抗體之用途,其用於製造用於治療肺癌之藥劑,其中肺癌係非小細胞肺癌或小細胞肺癌。本發明進一步提供本發明之抗體之用途,其用於製造用於治療乳癌之藥劑,其中乳癌係三陰性乳癌。
在一個實施例中,抗體與電離輻射同時、分開或依序組合投與。在另一實施例中,抗體與一或多種化學治療劑同時、分開或依序組合投與。在另一實施例中,抗體與電離輻射及一或多種化學治療劑同時、分開或依序組合投與。
在係指如本文所述之治療方法之實施例中,該等實施例亦係用於該治療或另一選擇為用於製造用於該治療之藥劑的其他實施例。
有用之化學治療劑之非限制性實例包括5-氟尿嘧啶、羥基脲、吉西他濱、培美曲塞、胺甲喋呤、多柔比星、依託泊苷、卡鉑、順鉑、環磷醯胺、美法侖、達卡巴嗪、紫杉醇、喜樹鹼、FOLFIRI、FOLFOX、多西他賽、道諾黴素、太平洋紫杉醇、奧沙利鉑及其組合。
本發明之抗體或包含其之醫藥組合物可藉由非經腸途徑(其係靜脈內投與之非限制性實例)投與。可單獨將本發明之抗體與醫藥上可接受之載劑、稀釋劑或賦形劑以單一或多個劑量投與人類患者。本發明之醫藥組合物可藉由業內已知之方法製備(例如,Remington: The Science and Practice of Pharmacy
, 第22版(2012), A. Loyd等人,Pharmaceutical Press)。
在一個實施例中,本發明之多肽分子係無菌的。在另一實施例中,本發明之多肽分子係實質上純的。在另一實施例中,本發明之多肽分子係實質上純且無菌的。
可調整投與本發明之多肽分子之劑量方案以提供最佳期望反應(例如治療效應)。
在一個實施例中,當本發明之多肽分子結合至人類TIGIT時,其拮抗人類TIGIT。在另一實施例中,當本發明之多肽分子結合至人類PD-1時,其拮抗人類PD-1。如本文所用術語「拮抗」係指阻斷、中斷、抑制或降低感情線之生物活性的作用。就此而言,本發明之多肽分子(例如抗體)藉由結合至人類PD-1並阻斷人類PD-L1與人類PD-1之結合而拮抗人類PD-1,且藉由結合至人類TIGIT並阻斷人類TIGIT與CD155及或與CD112之結合而拮抗人類TIGIT。
如本文所用術語「抗體」係指具有識別並結合靶標(例如蛋白質、肽或多肽)之重鏈及輕鏈之單體或二聚體免疫球蛋白分子。在一個實施例中,抗體特異性結合至靶標。每條重鏈由N-末端HCVR (重鏈可變區)及HCCR (重鏈恆定區)構成。每條輕鏈由N-末端LCVR (輕鏈可變區)及LCCR (輕鏈恆定區)構成。重鏈之恆定區含有CH1、CH2及CH3結構域。
術語「抗體片段」係保留結合至完整抗體所結合之靶標之能力的抗體片段。在一個實施例中,抗體片段特異性結合至靶標。在另一實施例中,抗體片段包含完整抗體之HCDR 1-3及LCDR 1-3。在另一實施例中,抗體片段包含完整抗體之HCVR及LCVR。
除非本文另有指示,否則「TIGIT」係指人類TIGIT,且「PD-1」係指人類PD-1。
如本文所用術語「結合」係指兩個分子(例如本發明之多肽分子與TIGIT、PD-1或TIGIT及PD-1)之間之分子相互作用。術語「單特異性結合」係指與一個靶標(例如人類TIGIT或人類PD-1)結合。術語「雙特異性結合」係指與人類TIGIT及人類PD-1結合。術語「多特異性結合」係指與人類TIGIT、人類PD-1及一個或兩個其他靶標結合。
術語「選擇性結合」或「特異性結合」意指本發明之多肽分子比其他物質更頻繁、更快速、持續時間更長、以親和力更大、或以上述之一些組合與人類TIGIT或與PD-1或與人類TIGIT及人類PD-1相互作用。在一個實施例中,「特異性結合」意指本發明之多肽分子以約0.1 mM或更小之KD
結合至人類TIGIT、或人類PD-1、或人類TIGIT及人類PD-1。在另一實施例中,「特異性結合」意指本發明之多肽分子以約0.01 mM或更小之KD
結合至人類TIGIT、或人類PD-1、或人類TIGIT及人類PD-1。在另一實施例中,「特異性結合」意指本發明之多肽分子以約0.001 mM或更小之KD
結合至人類TIGIT、或人類PD-1、或人類TIGIT及人類PD-1。在另一實施例中,「特異性結合」意指本發明之多肽分子以約0.0001 mM或更小之KD
結合至人類TIGIT、或人類PD-1、或人類TIGIT及人類PD-1。在另一實施例中,本發明之多肽分子以不同於該多肽分子結合至人類PD-1之KD
的KD
結合至人類TIGIT。在另一實施例中,多肽分子結合至人類TIGIT比其結合至人類PD-1之緊密程度高約10倍。
在一個實施例中,如本文所用術語「多肽分子」係指包含胺基酸殘基之聚合物之分子。在另一實施例中,多肽分子由胺基酸殘基之聚合物組成。
在一個實施例中,多肽分子係結合至人類TIGIT、或人類PD-1、或人類TIGIT及人類PD-1之scFv分子。在另一實施例中,scFv分子特異性結合至人類TIGIT、或人類PD-1、或人類TIGIT及人類PD-1。scFv分子可為單特異性的(結合至人類TIGIT或人類PD-1)、雙特異性的(結合至人類TIGIT及人類PD-1)或多特異性的(結合至人類PD-1、人類TIGIT及/或另一靶標)。
在一個實施例中,多肽分子係結合至人類TIGIT、或人類PD-1、或人類TIGIT及人類PD-1之抗體。在另一實施例中,抗體特異性結合至人類TIGIT、或人類PD-1、或人類TIGIT及人類PD-1。抗體可為單特異性的(結合至人類TIGIT或人類PD-1)、雙特異性的(結合至人類TIGIT及人類PD-1)或多特異性的(結合至人類PD-1、人類TIGIT及一個或兩個其他靶標)。
在一個實施例中,多肽分子係結合至人類TIGIT、或人類PD-1、或人類TIGIT及人類PD-1之抗體片段。在另一實施例中,抗體片段特異性結合至人類TIGIT、或人類PD-1、或人類TIGIT及人類PD-1。抗體片段可為單特異性的(結合至人類TIGIT或人類PD-1)、雙特異性的(結合至人類TIGIT及人類PD-1)或多特異性的(結合至人類PD-1、人類TIGIT及一個或兩個其他靶標)。
本專利申請案主張於35 U.S.C. §119(e)下於2019年5月29日提出申請之美國臨時申請案第62/853,816號的權益;該申請案之揭示內容以引用方式併入本文中。
如本文所用術語「實質上純」係指至少50%、60%、70%、80%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%不含污染物之材料,例如本發明之多肽分子。
「TIGIT」之同義詞係WUCAM、Vstm3及VSIG9。
「CD155」之同義詞係脊髓灰白質炎病毒受體、PVR、Necl-5、NECL5、Tage4、HVED及PVS。
「CD112」之同義詞係連接素細胞黏著分子2、連接素-2、連接素2、PRR-2、PVRL2、PVRR2及HVEB。
「CD226」之同義詞係DNAX輔助分子-1、DNAM-1、DNAM1、PTA1及TLiSA1。
術語「治療(treating或treat或treatment)」係指減緩、中斷、阻止、緩解、停止、減輕或逆轉現有症狀、病症、病況或疾病之進展或嚴重程度。
術語「有效量」意指本發明之多肽分子或包含本發明之抗體之醫藥組合物針對組織、系統、動物、哺乳動物或人類誘發研究者、醫師或其他臨床醫師所尋求之生物或醫學反應或期望治療效應的量。多肽分子之有效量可根據以下因素變化:例如個體之疾病狀態、年齡、性別及重量及多肽分子誘發個體中之期望反應之能力。有效量亦為抗體之治療有益效應勝過其任何毒性或有害效應之量。
可藉由使編碼HCVR之DNA可操作地連接至另一編碼重鏈恆定區之DNA分子來將編碼HCVR區之經分離DNA分子轉化成全長重鏈基因。業內已知人類以及其他哺乳動物重鏈恆定區基因之序列。可(例如)藉由標準PCR擴增獲得涵蓋該等區之DNA片段。
可藉由使編碼LCVR之DNA可操作地連接至另一編碼輕鏈恆定區之DNA分子來將編碼LCVR區之經分離DNA分子轉化成全長輕鏈基因。業內已知人類以及其他哺乳動物輕鏈恆定區基因之序列。可藉由標準PCR擴增獲得涵蓋該等區之DNA片段。
如本文所用術語「CDR」係指抗體互補決定區,術語「HCDR」係指抗體重鏈CDR,且術語「LCDR」係指抗體輕鏈CDR。出於本發明之目的,使用North CDR定義。North CDR定義(North等人,「A New Clustering of Antibody CDR Loop Conformations」, Journal of Molecular Biology, 406, 228-256 (2011))係基於使用大量晶體結構之親和力傳播聚類。
本文所用術語「經修飾之人類IgG1」意指經工程化以降低人類IgG1與至少一種人類Fcγ受體之結合的人類IgG1。通常,此係藉由使殘基突變從而導致抗體與Fcγ受體之結合減少來實施,例如P329A、L234A及L235A突變。
術語「實體腫瘤」係指不為血液、淋巴或骨髓之組織中之腫瘤。
用於活體外分析TIGIT活性之方法為熟習此項技術者所知,例如於以下中:He等人,Cancer Res 2017
;77: 6375-6388;Yu等人,Nature Immunology 2009
;10(1): 48-57;Johnston等人,Cancer Cell 2014
;26: 923-937;Stanietskya,等人,PNAS 2009
;106(42): 17858-17863;Lozano等人,J Immunol. 2012
;188(8): 3869-3875。
用於活體外分析PD-1活性之方法為熟習此項技術者所知,例如於以下中:Carpenito等人,J Immunother Cancer 2018
;6(1):31;Ghosh等人,Mol Cancer Ther. 2019
;18(3):632-641;Stewart等人,Cancer Immunol Res. 2015
;3(9):1052-62;Maute等人,PNAS 2015
;112(47): E6506-14。
實體腫瘤之活體內鼠類模型為熟習此項技術者所知,如本文所示,且如以下中所揭示:例如Sanmamed MF等人,Ann. Oncol. 2016
;27: 1190-1198;Manning HC等人,J. Nucl. Med 2016
;57(增刊1): 60S-68S;Teich BA. Cancer Ther. 2006
;5: 2435;Rongvaux A等人,Ann. Rev. Immunol. 2013
;31: 635-74;Stylli SS等人,J. Clin. Neurosci 2015
;619-26;Oh T等人,J. Transl. Med. 2014
;12: 107-117;Newcomb, EW等人,Radiation Res. 2010
;173: 426-432;Song Y等人,Proc Natl. Acad. Sci. USA 2013
;110: 17933-8;及Rutter EM,等人,Scientific Reports 2017
;7: DOI:10.1038/s41598-017-02462-0。
本發明之DNA分子係包含非天然多核苷酸序列之DNA分子,該非天然多核苷酸序列編碼具有本發明抗體中之至少一種多肽之胺基酸序列之多肽。
本發明之多核苷酸可在將序列可操作地連接至表現控制序列之後在宿主細胞中表現。表現載體通常可在宿主生物體中作為游離基因體或作為宿主染色體DNA之整合部分而複製。通常,表現載體含有選擇標記物(例如四環素(tetracycline)、新黴素(neomycin)及二氫葉酸還原酶)以允許檢測彼等經期望DNA序列轉變之細胞。
可藉由已知方法將含有感興趣之多核苷酸序列(例如編碼多肽分子之多肽之多核苷酸及表現控制序列)之表現載體轉移至宿主細胞中,該等方法端視宿主細胞之類型而有所變化。
本發明之多肽分子可在哺乳動物宿主細胞(其非限制性實例包括CHO、NS0、HEK293或COS細胞中)容易地產生。可使用業內已知之技術培養宿主細胞。
可採用各種蛋白質純化方法來純化本發明之抗體,且該等方法為業內已知且闡述於以下中:例如Deutscher,Methods in Enzymology
182: 83-89 (1990)及Scopes,Protein Purification: Principles and Practice
, 第3版, Springer, NY (1994)。
本文提及之序列根據表1中列出之序列標識符編號來編號。
HCCR:重鏈恆定區;LCCR:輕鏈恆定區;
HCVR:重鏈可變區;LCVR:輕鏈可變區;
ECD:細胞外結構域
表1. 序列標識符編號 | ||
抗人類 TIGIT臂 | 抗人類 PD-1臂 | |
HCDR1 | 1 | 7 |
HCDR2 | 2 | 8 |
HCDR3 | 3 | 9 |
LCDR1 | 4 | 10 |
LCDR2 | 5 | 11 |
LCDR3 | 6 | 12 |
HCVR | 13 | 17 |
LCVR | 14 | 18 |
HCCR | 15 | 19 |
LCCR | 16 | 20 |
重鏈 | 21 | 23 |
輕鏈 | 22 | 24 |
DNA重鏈 | 25 | 27 |
DNA輕鏈 | 26 | 28 |
人類PD-1 | 29 | |
人類PD-1 ECD-His | 30 | |
人類TIGIT | 31 | |
人類TIGIT ECD-His | 32 |
實例 抗體 A 表現及純化
本發明之抗體基本上如下表現及純化。適當宿主細胞(例如HEK293或CHO)可利用使用最佳預定重鏈:輕鏈載體比率的用於分泌抗體之表現系統或編碼重鏈及輕鏈二者之單一載體細胞瞬時或穩定轉染。本發明之抗體A可利用使用用於分泌抗體之表現系統或編碼具有SEQ ID NO: 21之胺基酸序列之第一重鏈、具有SEQ ID NO: 22之胺基酸序列之第一輕鏈、具有SEQ ID NO: 23之胺基酸序列之第二重鏈及具有SEQ ID NO: 24之胺基酸序列之第二輕鏈的一或多個DNA分子瞬時或穩定轉染。
可使用許多常用技術之一純化抗體。舉例而言,可便捷地將介質施加至MabSelect管柱(GE Healthcare)或KappaSelect管柱(GE Healthcare),該管柱已經相容緩衝液(例如磷酸鹽緩衝鹽水(pH7.4))平衡。可洗滌管柱以去除非特異性結合組分。例如,可藉由pH梯度(例如20 mM Tris緩衝液pH 7.0對10 mM檸檬酸鈉緩衝液pH 3.0、或磷酸鹽緩衝鹽水pH 7.4對100 mM甘胺酸緩衝液pH 3.0)溶析結合之抗體。抗體級分可藉由(例如) UV吸收或SDS-PAGE檢測,且然後可彙集。根據預期用途,進一步純化係可選的。可使用常用技術濃縮及/或無菌過濾純化之抗體。可溶性聚集體及多聚體可藉由常用技術有效去除,該等技術包括粒徑篩析、疏水相互作用、離子交換、多模式或羥基磷灰石層析。純化之抗體可於-70℃下立即冷凍或可凍乾。
抗體 A 結合至人類 PD-1 及人類 TIGIT
使用Biacore® T200 (GE Healthcare, Piscataway, NJ)於37℃下藉由表面電漿共振量測抗體A與可溶性人類PD-1細胞外結構域(ECD) (Sino Biologicals, 目錄號10377-H08H)及人類TIGIT-ECD之結合動力學及親和力。將樣品稀釋於HBS-EP+ (10 mM HEPES、150 mM NaCl、0.05% Tween-20,pH 7.6)運行緩衝液(Teknova目錄號H8022)中。蛋白質A CM5 S系列感測器晶片(GE Healthcare目錄號29127555)係購自GE Healthcare。
藉由抗體捕獲方法使用多循環動力學評估結合。每一循環在37℃下以10 μL/min之流速實施以將抗體捕獲至蛋白A晶片及以100 μL/min之流速實施用於分析物締合及解離。每一循環由以下步驟組成:在流動槽上注射2 μg/mL之HBS-EP+中之抗體A (以50 RU之Rmax值為目標)、注射180或200秒之HBS-EP+中之分析物(分別對於PD-1-ECD-His (人類PD1-ECD-His (Sino Biologicals,目錄:10377-H08H)及人類TIGIT-ECD-His (SEQ ID NO: 32),藉由兩倍系列稀釋,濃度範圍為1000 nM至1.95 nM),之後600秒解離期,並使用5 μL之10 mM甘胺酸鹽酸鹽(pH 1.5)在30秒接觸時間內利用10 μL/min流速再生。利用單體分子量(MW)值測定所有分析物濃度。使用雙重參照藉由流動池1參照扣除以及0nM空白扣除來評估人類PD-1-ECD之締合速率(kon
)及解離速率(koff
),且在BIA評估軟體版本4.1中擬合至「1:1 (Langmuir)結合」模型。解離常數(KD
)係根據關係KD
= Koff
/Kon
自結合動力學計算。化學計量 = [RUmax
/ RU捕獲
] / [MW分析物
/ MW抗體
],其中MW抗體 A
係150 kDa。值報告為平均值± 標準偏差。
在基本上如上所述實施之實驗中,表2中之結果展現抗體A結合至人類PD-1-ECD、人類TIGIT-ECD、食蟹猴PD-1及食蟹猴TIGIT。表 2
物種 | 締合速率 (kon ) (M-1 s-1 ) (± SE) | 解離速率 (koff ) (s-1 ) (± SE) | 親和力 (KD ) (M)a (± SE) | 化學計量 (± SE) |
人類 PD-1 ECD (n=3) | 2.0 ± 0.2 × 105 | 5.0 ± 0.7 × 10-4 | 2.43 ± 0.04 × 10-9 | 1.29 ± 0.02 |
食蟹猴 PD-1 (n=3) | 1.8 ± 0.2 × 105 | 4.5± 0.7 × 10-4 | 2.43 ± 0.14 × 10-9 | 1.08 ± 0.01 |
人類 TIGIT ECD (n=3) | 1.6 ± 0.3 × 106 | 4.2± 1.2 × 10-4 | 0.25 ± 0.04 × 10-9 | 0.837 ± 0.003 |
食蟹猴 TIGIT (n=3) | 2.9 ± 0.4 × 106 | 1.1± 0.1 × 10-3 | 0.36 ± 0.01 × 10-9 | 0.90 ± 0.01 |
抗體 A 在基於細胞之分析中拮抗人類 PD-1/PD-L1 活性。
使用NFAT-Luc報導基因分析測試抗體A拮抗由與人類PD-L1結合之人類PD-1介導之活性的能力。簡言之,使用表現人類PD-L1及人工細胞表面T細胞受體(TCR)活化劑之CHO-K1細胞(Promega CS187108,PD-1/PD-L1阻斷分析系統之一部分,繁殖模型CS187109)作為抗原呈遞細胞。藉由反轉錄病毒轉移將人類TIGIT引入表現人類PD-1及NFAT-Luc2報導基因之Jurkat細胞(GloResponse NFAT-luc2/PD-1 Jurkat,Promega CS187102,PD-1/PD-L1阻斷測定系統之一部分,繁殖模型CS187109)。將CHO-K1+PD-L1+PVR+TCR活化劑細胞(第7-9代)用胰蛋白酶脫離,且以40,000個細胞/孔接種於白色不透明96孔組織培養板(Costar 35-3296)之100 μL生長培養基中。CHO-K1+PD-L1+TCR活化劑生長培養基由具有10%確定之FBS (HyClone SH30070.03)、200 μG/mL潮黴素B (Thermo Fisher 10687-010)及250 μG/mL G418 (建那黴素(Geneticin),Corning 30-234-CI)之哈姆氏(Ham’s) F-12培養基(Corning Cellgro10-080-CV)組成。使細胞於37℃、5% CO2
及95% RH下生長過夜。第二天,在具有2 mM L-麩醯胺酸及10 mM HEPES (Gibco 22400)與2%確定之FBS (HyClone SH30070.03)之RPMI 1640中以2倍工作濃度製備如表3中所示之抗體。
使表現人類PD-1、人類TIGIT及NFAT-Luc2報導基因之Jurkat細胞在具有2 mM L-麩醯胺酸及10 mM HEPES (Gibco)、10%確定之FBS (HyClone)、100 µg/ml潮黴素B (Thermo Fisher)、500 µg/mL G418 (建那黴素,Corning)及1 µg/mL嘌呤黴素(Calbiochem 540411,於無菌水中)之RPMI 1640中繁殖。將5-7代之間之Jurkat細胞離心,且以1.25 × 106
個細胞/mL之濃度重懸於RPMI/2%確定之FBS中。自96孔板中之CHO+PD-L1+PVR+TCR活化劑細胞之單層中小心地去除95 μL培養基。如表3中所指示,每次處理一式三份地添加40 μl如上製備之2倍濃度之抗體(包括僅培養基對照)。然後每孔添加40 μl重懸之Jurkat+PD-1+TIGIT+NFAT-Luc2細胞(50,000個細胞/孔)。將分析板在37℃、5% CO2
、95% RH下培育6 hr。在培育結束時,將板於室溫(RT)下平衡5至10分鐘。添加80 μL/孔之重構Bio-Glo™螢光素酶受質(Promega G7940),且將板進一步在RT下培育5-10分鐘。在Perkin Elmer Envision多模式讀數器上以EnVision Manager軟體v.1.13.3009.1409、超靈敏模式及0.2秒積分時間讀板。在每一板內,將發光值(相對光單位(RLU))正規化為自僅用培養基處理之細胞獲得之值(誘導倍數= RLU處理/RLU僅培養基對照)。使用GraphPad Prism7軟體計算EC50
值。
在基本上如上所述實施之實驗中,表3中之結果展現,抗體A及抗人類PD-1-IgG4-PAA之EC50
值分別為1.838 nM及1.226 nM,且在基於細胞之分析中,抗體A結合並拮抗人類PD-1/人類PD-L1結合。表 3
抗體 A | 抗人類 TIGIT-hIgG1-EN | 抗人類 PD-1-IgG4-PAA | hIgG1-EN | |
EC50 (nM) | 1.838 | 0.6664 | 1.226 | > 171 |
最大倍數變化 ( 於 171 nM 下 ) | 2.21 | 1.7 | 1.84 | 1.08 |
抗體 A 在基於細胞之分析中拮抗人類 TIGIT
人類PD-1及TIGIT二者在活化之腫瘤浸潤淋巴球中表現或共表現。在經工程化以共表現人類PD-1 (9,000個PD-1受體/細胞)及人類TIGIT (5,500個TIGIT受體/細胞)之Jurkat NFAT-Luc報導基因分析中測試抗體A拮抗人類TIGIT介導之活性之能力。簡言之,將表4所示之抗體與Jurkat+人類TIGIT+人類PD-1+NFAT-Luc細胞一起培育6小時。添加Bio-Glo螢光素酶受質,且在培育結束時讀取發光。數據(誘導倍數= RLU處理/RLU僅培養基對照)表示為表4中每個處理之三份孔之平均值。
在基本上如上所述實施之實驗中,表4中之結果展現在基於細胞之分析中,抗體A結合並拮抗人類TIGIT。表 4
抗體 A | 抗人類 PD-1-hIgG4-PAA | 抗人類 TIGIT- hIgG1-EN | hIgG1-EN | |
EC50 (nM) | 7.869 | > 171 | 0.1806 | > 171 |
最大倍數變化 ( 於 171 nM 下 ) | 1.95 | 1.22 | 1.64 | 1.1 |
在基於細胞之分析中 , 抗體 A 同時結合 PD-1 及 TIGIT
PD-1及TIGIT受體分別用Prolink及酶活化劑標記,且在293細胞中共表現。在抗體A與人類PD-1及人類TIGIT受體結合時,使受體緊密接近,使得能夠重建活性β-半乳糖苷酶,其水解受質以產生化學發光信號。
在基本上如上所述實施之實驗中,表5中之結果展現,抗體A同時與人類PD-1及人類TIGIT受體物理嚙合。利用對照IgG1或抗人類TIGIT及抗人類PD-1抗體或抗人類TIGIT及抗人類PD1抗體之組合未觀察到效應。表 5
物種 | 抗體 A | 抗人類 PD-1-hIgG4-PAA | 抗人類 PD-1-hIgG4-PAA + 抗 TIGIT-hIgG1-EN | hIgG1-EN |
EC50 (nM) | 0.4307 | >200 | >200 | >200 |
抗體 A 在混合白血球反應 (MLR 反應 ) 中誘導 T 細胞活化
在人類同種MLR分析中檢查抗體A之人類PD-1阻斷功能。人類PBMC係冷凍獲得(AllCells)或自經受血漿置換術之新鮮全血獲得(Indiana Blood Center),且在Ficoll-Paque PLUS (GE Healthcare)密度梯度上分離。用人類單核球分離套組II或CD14微珠粒(Miltenyi Biotec)及AutoMACS Pro分離器(Miltenyi Biotec)分離CD14+
單核球。藉由將單核球在1,000 IU/mL hGM-CSF (R & D;215-GM-050,或Sanofi;Leukine,沙格司亭(sargramostim);NDC 0024-5843-01)及500 IU/mL hIL-4 (R&D;204-IL-050,或另一來源)存在下在含有10% FBS之完全RPMI-1640培養基中培養2天生成不成熟樹突細胞(DC) (表6)。使用人類CD4+
T細胞分離套組(Miltenyi Biotec)自不同健康供體(AllCells或Indiana Blood Center)之新鮮人類PBMC純化CD4+
T細胞。然後將來自不同供體之兩種類型之細胞在96孔V-底板中在每孔含有5×104
至1×105
個CD4+
T細胞及5×103
個不成熟DC之完全AIM-V培養基(Thermo Fisher Scientific)中混合。將表6中所示之抗體連續稀釋,且以100 uL/孔一式三份添加至板。將板於37℃下在5% CO2
中培育4天。收穫上清液,且根據製造商之說明書經受人類IFN-γ ELISA (R & D Systems;SIF50或DY285)。在九個不同之供體對之間測試抗體。利用GraphPad Prism軟體(GraphPad Software)使用來自三個T:DC供體對之數據計算EC50值。
在基本如上所述實施之實驗中,表6中之結果令人驚訝地展現,當與單獨抗PD-1抗體或與抗人類PD-1+抗人類TIGIT組合相比時,抗體A展示增強之人類PD-1阻斷活性,如藉由相對於IgG1對照之IFNγ含量之最大倍數增加所量測。表 6
Abs | 抗體 A | 抗人類 PD-1-hIgG4-PAA | 抗人類 TIGIT- hIgG1-EN | 抗人類 PD-1-hIgG4-PAA + 抗人類 TIGIT- hIgG1-EN |
EC50 (nM) | 9.07 | 0.016 | 24.41 | 0.062 |
IFN γ 最大倍數增加 | 12.27 | 3.85 | 2.83 | 5.64 |
抗體 A 在破傷風回憶分析中誘導 T 細胞活化
用溫熱之完全AIM-V培養基解凍來自破傷風類毒素反應者之冷凍PBMC,並靜置24小時。靜止後,使細胞通過30微米過濾器以去除大碎片及聚集體。計數細胞並在完全AIM-V培養基中重懸至2.5×106
個細胞/mL,並以200 uL以5×105
個細胞/孔接種於U形底96孔板中。以20ug/ml添加如表7中所示之抗體,並以1:3連續稀釋。用4 ng/mL破傷風類毒素刺激細胞,並在37℃下培育48小時。然後用MSD套組(Mesoscale Discovery)定量上清液中之IFNγ含量。
在基本上如上所述實施之實驗中,表7及表8中之結果展現,添加抗體A (表7)或抗人類PD-1+抗人類TIGIT組合(表8)以劑量依賴性方式增強T細胞活化,如藉由IFNγ釋放所量測。表 7
表 8
抗體 ug/ml | 抗體 A 處理細胞 IFNγ 含量 | 抗體 A 平均值 | 抗體 A SD | ||
20 | 4890.53 | 927.51 | 3601.64 | 3139.89 | 2021.46 |
6.67 | 4400.90 | 2865.88 | 2901.18 | 3389.32 | 876.23 |
2.22 | 3801.46 | 2733.48 | 2775.13 | 3103.36 | 604.93 |
0.74 | 1717.98 | 7374.75 | 2090.72 | 3727.82 | 3163.83 |
0.25 | 1224.61 | 1771.20 | 2698.75 | 1898.19 | 745.23 |
0.08 | 1394.55 | 684.00 | 1493.15 | 1190.56 | 441.46 |
抗體 ug/ml | 抗人類 PD-1-hIgG5-PAA + 抗人類 TIGIT hIgG1-EN 處理細胞 IFNγ 含量 | 抗人類 PD-1-hIgG4-PAA + 抗人類 TIGIT hIgG1-EN 平均值 | 抗人類 PD-1-hIgG4-PAA + 抗人類 TIGIT hIgG1-EN SD | ||
20 | 3404.44 | 5641.61 | 4724.52 | 4590.19 | 1124.61 |
6.67 | 1286.80 | 2718.54 | 2783.72 | 2263.02 | 846.06 |
2.22 | 2022.00 | 4312.19 | 14129.19 | 6821.13 | 6431.73 |
0.74 | 1259.72 | 1401.27 | 2815.09 | 1825.36 | 860.05 |
0.25 | 488.85 | 1132.18 | 2171.95 | 1264.33 | 849.30 |
0.08 | 839.55 | 1235.07 | 792.87 | 955.83 | 242.95 |
抗體 A 在移植有人類 T 細胞之 HCC827 NSG 腫瘤異種移植物模型中展現抗腫瘤效能。
在第0天,將10×106
個HCC827細胞重懸於0.2 mL基質膠溶液中,並皮下植入移植有人類T細胞之雌性NOD/SCIDγ (NSG)小鼠(Jackson Laboratories)之右脅中。在第40天,以n =8隨機化小鼠,且每個治療組以10 mg/kg每週腹膜內(ip)投用一次,持續4週。治療組包括對照IgG、抗體A、抗人類PD-1-hIgG4-PAA、抗人類TIGIT-hIgG1-EN及抗人類PD-1-hIgG4-PAA +抗人類TIGIT-hIgG1-EN抗體。抗體A亦以1 mg/kg及3 mg/kg每週投用,持續4週。每週兩次量測體重及腫瘤體積。腫瘤體積(mm3
)計算為π/6 * 長度 * 寬度2
且% T/C計算為100 ×ΔT /ΔC,條件係幾何平均值之ΔT > 0。使用SAS軟體中之程序實施統計分析。
在基本上如上所述實施之實驗中,表9中之結果展現,相對於對照IgG處理組,以1 mg/kg、3 mg/kg或10 mg/kg投用之抗體A顯著抑制人類T細胞植入之小鼠中之腫瘤生長(分別p < .001)。令人驚訝地,當與抗人類PD-1 + 抗人類TIGIT組合治療組相比時,所有3個劑量之抗體A亦展現統計學顯著之效能,其中分別p < .001及p < .334。表 9
NA=不適用
異種移植物 | 腫瘤體積之 p- 值 | % T/C | |
對照 IgG 10 mg/kg | 未植入之HCC827 | p = .174 | 122.9 |
對照 IgG 10 mg/kg | HCC827 | NA | NA |
抗人類 PD-1-hIgG4-PAA 10 mg/kg | HCC827 | p = .872 | 97.3 |
抗人類 Tigit-hIgG1-EN 10 mg/kg | HCC827 | p < .001 | 28.4 |
抗人類 PD-1-IgG4-PAA + 抗人類 TIGIT hIgG1-EN 各自 10 mg/kg | HCC827 | p = .334 | 85.8 |
抗體 A 1 mg/kg | HCC827 | p < .001 | 28.4 |
抗體 A 3 mg/kg | HCC827 | p < .001 | 25.3 |
抗體 A 10 mg/kg | HCC827 | p < .001 | 24 |
抗體
A
在
HCC827 NSCLC CD34 NSG
腫瘤異種移植模型中展現抗腫瘤效能及增加之
CD226+ CD8T
細胞及
CD226+ NK
細胞。
在第0天,將10×106
個HCC827皮下植入移植有CD34+ 造血幹細胞之雌性NOD/SCIDγ (NSG)小鼠(Jackson Laboratories)之右脅中。在第21天,以n =8/組隨機化小鼠,且每個治療組以10 mg/kg每週腹膜內(ip)投用一次,持續4週。治療組包括對照IgG、抗體A、抗人類PD-1-hIgG4-PAA、抗人類TIGIT-hIgG1-EN及抗人類PD-1-hIgG4-PAA +抗人類TIGIT-hIgG1-EN抗體。每週兩次量測體重及腫瘤體積。腫瘤體積(mm3
)計算為π/6 * 長度 * 寬度2
且% T/C計算為100 × ΔT /ΔC,條件係幾何平均值之ΔT > 0。使用SAS軟體中之MIXED程序實施統計分析。
在基本上如上所述實施之實驗中,表10中之結果展現,相對於對照IgG處理組,以10 mg/kg投用之抗體A顯著抑制人類CD34+造血幹細胞植入之小鼠中之腫瘤生長(p < .001)。令人驚訝地,當與抗人類PD-1 + 抗人類TIGIT組合治療組相比時,抗體A亦展現顯著抗腫瘤效能,其中分別p < .001及p < .006。表 10
NA =不適用
異種移植物 | 腫瘤體積之 p- 值 | % T/C | |
對照 IgG 10 mg/kg | 未植入之HCC827 | p < 0.001 | 5874.0 |
對照 IgG 10 mg/kg | HCC827 +CD34 | NA | NA |
抗人類 PD-1-hIgG4-PAA 10 mg/kg | HCC827 +CD34 | p = 0.047 | 74.6 |
抗人類 TIGIT hIgG1-EN 10 mg/kg | HCC827 +CD34 | p = 0.040 | 136.5 |
抗人類 PD-1-hIgG4-PAA + 抗人類 TIGIT- hIgG1-EN 各自 10 mg/kg | HCC827 +CD34 | p = 0.006 | 64.6 |
抗體 A 10 mg/kg | HCC827 +CD34 | p < 0.001 | 53.7 |
在研究結束時,收集腫瘤並處理成單細胞懸浮液。用300 ul FACS緩衝液中之抗體對腫瘤浸潤淋巴球(TIL)進行染色。使用LSRFortessa X20獲取流動數據,且使用FlowJo 10分析。CD226+ CD8T細胞在表11中顯示為每一小鼠之TIL中總CD8T細胞(CD8+CD3+CD45+ 活淋巴球)之%。CD226+ NK細胞在表11中顯示為每一小鼠之TIL中總NK細胞(CD56+CD3-CD45+活淋巴球)之%。
在基本上如上所述實施之實驗中,表11及表12中之結果展現,抗體A處理之小鼠展示CD226+ CD8T細胞及CD226+ NK細胞百分比增加,而抗人類PD-1處理之小鼠僅顯示CD226+ NK細胞增加。由於已顯示CD226信號傳導對抗腫瘤活性至關重要,故抗體A處理組中CD8及NK細胞群體中CD226+細胞之增加可指示增強之細胞毒性的潛能,此可有助於研究中觀察到之抗體A之抗腫瘤活性。表 11 - % CD226 陽性 CD8 T 細胞
表 12 - % CD226 陽性 NK 細胞
IgG | 抗人類 PD-1-hIgG4-PAA | 抗人類 TIGIT-hIgG1-EN | 抗人類 PD-1-hIgG4-PAA + 抗人類 TIGIT- hIgG1-EN | 抗體 A | |
N 1 | 21.4 | 37.5 | 32.1 | 40 | 56.9 |
N 2 | 23.9 | 82.2 | 53.6 | 20.9 | 64.3 |
N 3 | 30.2 | 50 | 47 | 17.7 | 60 |
N 4 | 33 | 60.3 | 22.1 | 57.1 | 50 |
N 5 | 26.6 | 31.5 | 15 | 36 | 28.6 |
N 6 | 59.3 | 40.6 | 48.5 | 75 | 50 |
N 7 | 45.4 | 32.1 | 35.1 | 57.5 | 60 |
N 8 | 45.1 | 56.2 | 19.9 | 23 | |
平均值 | 35.6 | 48.8 | 34.2 | 40.9 | 52.8 |
SE | 4.6 | 6.1 | 5.1 | 7.3 | 4.5 |
p 值對 IgG | NA | p = .107 | p = .837 | p = .551 | p = .020 |
IgG | 抗人類 PD-1-hIgG4-PAA | 抗人類 TIGIT-hIgG1-EN | 抗 PD-1-hIgG4-PAA + 抗人類 TIGIT- hIgG1-EN | 抗體 A | |
N 1 | 40 | 53.1 | 47.2 | 60.9 | 49.1 |
N 2 | 49.9 | 61 | 60.3 | 22.1 | 62.7 |
N 3 | 45.2 | 59.8 | 50.3 | 54.2 | 66.7 |
N 4 | 57 | 49.7 | 41.5 | 60 | 72 |
N 5 | 57.1 | 57.7 | 33.9 | 61.8 | 72.2 |
N 6 | 49.5 | 49.6 | 58.1 | 71.6 | 88.4 |
N 7 | 46.1 | 54.3 | 56.3 | 68.4 | 89.4 |
N 8 | 49.8 | 63.6 | 29.3 | 56.6 | |
平均值 | 49.3 | 56.1 | 47.1 | 57.0 | 71.5 |
SE | 2.0 | 1.9 | 4.0 | 5.4 | 5.4 |
p 值對 IgG | NA | p = .028 | p = .633 | p = .206 | p = .0013 |
最後一個劑量後6天,經由ELISA分析抗人類PD-1-hIgG4-PAA、抗人類TIGIT-hIgG1-EN及抗體A之血清含量。分別使用重組人類PD-1-his (R&D Systems,目錄:8986-PD)及重組人類TIGIT-his (R&D Systems,目錄:9525-TG)進行PD-1及TIGIT捕獲ELISA。使用小鼠抗人類IgG Fc HRP (Southern Biotech/9040-05)進行檢測。
在基本上如上所述實施之實驗中,表13中之結果展現,如藉由人類PD-1及人類TIGIT抗原捕獲ELISA量測之抗體A血清含量係相當的,因此表明抗體之活體內穩定性。表 13
治療組 ( 分析物 ) | 抗體血清含量 (ng/mL) |
抗人類PD-1-hIgG4-PAA (PD-1) | 137,242 |
抗人類PD-1-hIgG4-PAA (PD-1) | 214,785 |
抗人類PD-1-hIgG4-PAA (PD-1) | 260,079 |
抗人類PD-1-hIgG4-PAA (PD-1) | 271,484 |
抗人類PD-1-hIgG4-PAA (PD-1) | 179,951 |
抗人類PD-1-hIgG4-PAA (PD-1) | 144,798 |
抗人類PD-1-hIgG4-PAA (PD-1) | 148762 |
抗人類PD-1-hIgG4-PAA (PD-1) | 207223 |
平均值 | 195541 |
SD | 51885 |
抗人類TIGIT-hIgG1-EN (TIGIT) | 69087 |
抗人類TIGIT-hIgG1-EN (TIGIT) | 90291 |
抗人類TIGIT-hIgG1-EN (TIGIT) | 94828 |
抗人類TIGIT-hIgG1-EN (TIGIT) | 97295 |
抗人類TIGIT-hIgG1-EN (TIGIT) | 91847 |
抗人類TIGIT-hIgG1-EN (TIGIT) | 55174 |
抗人類TIGIT-hIgG1-EN (TIGIT) | 52438 |
抗人類TIGIT-hIgG1-EN (TIGIT) | 87853 |
平均值 | 79852 |
SD | 18212 |
抗體A (PD-1) | 96794 |
抗體A (PD-1) | 135103 |
抗體A (PD-1) | 152474 |
抗體A (PD-1) | 144320 |
抗體A (PD-1) | 107847 |
抗體A (PD-1) | 116441 |
抗體A (PD-1) | 160017 |
抗體A (PD-1) | 169076 |
平均值 | 135259 |
SD | 25967 |
抗體A (TIGIT) | 92771 |
抗體A (TIGIT) | 99719 |
抗體A (TIGIT) | 101530 |
抗體A (TIGIT) | 87067 |
抗體A (TIGIT) | 66332 |
抗體A (TIGIT) | 85640 |
抗體A (TIGIT) | 89285 |
抗體A (TIGIT) | 139837 |
平均值 | 95272 |
SD | 20992 |
胺基酸及核苷酸序列
SEQ ID NO: 1 (TIGIT HCDR1胺基酸序列)
AASGFDFSSYGVP
SEQ ID NO: 2 (TIGIT HCDR2胺基酸序列)
YIDPIFGPTYYADEVKG
SEQ ID NO: 3 (TIGIT HCDR3胺基酸序列)
ARDYSYGYAYALDI
SEQ ID NO: 4 (TIGIT LCDR1胺基酸序列)
QASQRISPYLA
SEQ ID NO: 5 (TIGIT LCDR2胺基酸序列)
SRASKLAS
SEQ ID NO: 6 (TIGIT LCDR3胺基酸序列)
QSYYVHTSSGYA
SEQ ID NO: 7 (PD-1 HCDR1胺基酸序列)
KASGGTFSSYAIS
SEQ ID NO: 8 (PD-1 HCDR2胺基酸序列)
LIIPSFDTAGYAQKFQG
SEQ ID NO: 9 (PD-1 HCDR3胺基酸序列)
ARAEHSSTGTFDY
SEQ ID NO: 10 (PD-1 LCDR1胺基酸序列)
RASQGISSWLA
SEQ ID NO: 11 (PD-1 LCDR2胺基酸序列)
SAASSLQS
SEQ ID NO: 12 (PD-1 LCDR3胺基酸序列)
QQANHLPFT
SEQ ID NO: 13 (TIGIT HCVR胺基酸序列)
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFDFSSYGVPWVRKAPGKGLEWVGYIDPIFGPTYYADEVKGRFTISADDSKNSLYLQMNSLKTEDTAVYYCARDYSYGYAYALDIWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO: 14 (TIGIT LCVR胺基酸序列)
RIVMTQTPLSLSVTPGQPASISCQASQRISPYLAWYLDKPGQPPQLLISRASKLASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCQSYYVHTSSGYAFGGGTKVEIK
SEQ ID NO: 15 (TIGIT HCCR胺基酸序列)
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVADYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDERVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALAAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRGDMTKNQVQLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLASKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID NO: 16 (TIGIT LCCR胺基酸序列)
RTVAAPSVFIFPPSDKQLKSGTARVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
SEQ ID NO: 17 (PD-1 HCVR胺基酸序列)
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRYAPGQGLEWMGLIIPSFDTAGYAQKFQGRVAITVDESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARAEHSSTGTFDYWGRGTLVTVSS
SEQ ID NO: 18 (PD-1 LCVR胺基酸序列)
DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGISSWLAWYQRKPGDAPKLLISAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQANHLPFTFGGGTKVEIK
SEQ ID NO: 19 (PD-1 HCCR胺基酸序列)
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVATGPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALAAPIEKTISKAKGQPREPQVSTLPPSREEMTKNQVSLMCLVYGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSVLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID NO: 20 (PD-1 LCCR胺基酸序列)
GQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCYISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAAWSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTEC
SEQ ID NO: 21 (TIGIT HC胺基酸序列)
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFDFSSYGVPWVRKAPGKGLEWVGYIDPIFGPTYYADEVKGRFTISADDSKNSLYLQMNSLKTEDTAVYYCARDYSYGYAYALDIWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVADYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDERVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALAAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRGDMTKNQVQLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLASKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID NO: 22 (TIGIT LC胺基酸)
RIVMTQTPLSLSVTPGQPASISCQASQRISPYLAWYLDKPGQPPQLLISRASKLASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCQSYYVHTSSGYAFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDKQLKSGTARVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
SEQ ID NO: 23 (PD-1 HC胺基酸序列)
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRYAPGQGLEWMGLIIPSFDTAGYAQKFQGRVAITVDESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARAEHSSTGTFDYWGRGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVATGPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALAAPIEKTISKAKGQPREPQVSTLPPSREEMTKNQVSLMCLVYGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSVLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID NO: 24 (PD-1 LC胺基酸序列)
DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGISSWLAWYQRKPGDAPKLLISAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQANHLPFTFGGGTKVEIKGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCYISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAAWSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTEC
SEQ ID NO: 25 (TIGIT HC DNA序列)
ATGGAGACGGACACTCTGCTCCTGTGGGTGCTCCTGCTTTGGGTACCGGGTTCAACGGGAGAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCCAGCCTGGAGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCTGCTTCTGGATTCGACTTCAGTAGTTATGGAGTGCCCTGGGTCCGCAAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTTGGCTACATTGATCCTATTTTTGGTCCCACATACTACGCAGACGAGGTGAAGGGCAGATTCACCATCTCAGCTGATGATTCAAAGAACTCACTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAAAACCGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGACTATAGTTATGGTTATGCTTATGCTCTCGACATCTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAGCTAGCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCGCCGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACGAGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAAGCCGCAGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTATGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAAGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCGCCGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGGGGACATGACCAAGAACCAAGTCCAGCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCGCTTCCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGCAAA
SEQ ID NO: 26 (TIGIT LC DNA序列)
ATGGAAACTGACACCCTGCTGCTCTGGGTACTGCTCCTTTGGGTTCCTGGGAGCACAGGCCGGATTGTGATGACCCAGACTCCACTCTCTCTGTCCGTCACCCCTGGACAGCCGGCCTCCATCTCCTGCCAGGCCAGTCAGAGAATTAGTCCCTACTTAGCCTGGTACCTGGACAAGCCAGGCCAGCCTCCACAGCTCCTGATCTCCCGGGCATCCAAACTGGCATCTGGAGTGCCAGATAGGTTCAGTGGCAGCGGGTCAGGGACAGATTTCACACTGAAAATCAGCCGGGTGGAGGCTGAGGATGTTGGGGTTTATTACTGCCAAAGTTATTATGTTCACACTAGTAGTGGTTATGCTTTCGGCGGAGGGACCAAGGTGGAGATCAAACGGACCGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATAAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCAGAGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACTCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGC
SEQ ID NO: 27 (PD-1 HC DNA序列)
ATGGAAACCGATACGCTCCTGCTGTGGGTTCTCCTCTTGTGGGTCCCCGGCTCTACCGGGCAGGTCCAGCTCGTGCAGAGTGGCGCCGAGGTCAAAAAACCCGGTTCAAGCGTGAAGGTGTCTTGTAAAGCATCTGGAGGAACCTTTAGTTCCTACGCCATTAGTTGGGTGAGGTACGCTCCCGGCCAGGGCTTGGAATGGATGGGTTTGATTATTCCCAGCTTTGATACAGCTGGATACGCGCAGAAGTTCCAGGGACGCGTGGCCATCACCGTGGATGAAAGCACTTCAACTGCCTACATGGAACTGTCATCCTTGAGAAGCGAGGATACTGCTGTTTACTACTGCGCTAGGGCAGAGCACTCCTCCACCGGGACCTTCGACTATTGGGGTCGAGGTACTCTCGTGACCGTGAGCAGCGCTAGCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACGGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGGCCACCGGCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAAGCCGCAGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTATGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAAGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCGCCGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTCCACCCTGCCCCCATCCCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAAGTCAGCCTGATGTGCCTGGTCTATGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATTCCGTGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGCAAA
SEQ ID NO: 28 (PD-1 LC DNA序列)
ATGGAGACAGACACACTCCTGCTATGGGTACTGCTGCTCTGGGTTCCAGGATCCACTGGTGACATCCAGATGACACAGTCACCTTCAAGCGTCTCCGCCTCCGTGGGAGACAGGGTTACTATTACATGTAGGGCCAGCCAGGGGATCTCTTCATGGCTGGCGTGGTACCAACGGAAGCCAGGCGACGCCCCCAAGCTCCTTATCTCCGCTGCCTCCTCTCTGCAGTCCGGAGTTCCCTCCCGCTTCAGCGGTAGCGGGTCAGGCACTGACTTCACCCTTACAATCTCTTCTCTGCAACCTGAGGACTTCGCCACATATTATTGCCAGCAGGCAAACCATTTGCCATTTACTTTTGGCGGAGGTACTAAGGTTGAGATTAAAGGCCAGCCTAAAGCTGCCCCTAGCGTTACCCTTTTCCCACCGAGCTCCGAGGAGCTGCAGGCCAATAAAGCAACCTTGGTCTGCTACATATCAGATTTTTACCCTGGCGCCGTGACCGTAGCATGGAAAGCTGATTCATCCCCTGTGAAGGCCGGTGTTGAAACTACAACCCCTTCCAAACAATCTAACAATAAATACGCGGCATGGTCCTACCTGTCCTTGACACCCGAGCAGTGGAAATCTCACAGATCTTACAGCTGCCAGGTCACCCACGAGGGGAGCACTGTGGAGAAGACCGTCGCGCCCACTGAGTGC
SEQ ID NO: 29 (人類PD-1胺基酸序列)
MQIPQAPWPVVWAVLQLGWRPGWFLDSPDRPWNPPTFSPALLVVTEGDNATFTCSFSNTSESFVLNWYRMSPSNQTDKLAAFPEDRSQPGQDCRFRVTQLPNGRDFHMSVVRARRNDSGTYLCGAISLAPKAQIKESLRAELRVTERRAEVPTAHPSPSPRPAGQFQTLVVGVVGGLLGSLVLLVWVLAVICSRAARGTIGARRTGQPLKEDPSAVPVFSVDYGELDFQWREKTPEPPVPCVPEQTEYATIVFPSGMGTSSPARRGSADGPRSAQPLRPEDGHCSWPL
SEQ ID NO: 30 (人類PD-1 ECD-His胺基酸序列)
LDSPDRPWNPPTFSPALLVVTEGDNATFTCSFSNTSESFVLNWYRMSPSNQTDKLAAFPEDRSQPGQDCRFRVTQLPNGRDFHMSVVRARRNDSGTYLCGAISLAPKAQIKESLRAELRVTERRAEVPTAHPSPSPRPAGQFQHHHHHH
SEQ ID NO: 31 (人類TIGIT胺基酸序列)
MRWCLLLIWAQGLRQAPLASGMMTGTIETTGNISAEKGGSIILQCHLSSTTAQVTQVNWEQQDQLLAICNADLGWHISPSFKDRVAPGPGLGLTLQSLTVNDTGEYFCIYHTYPDGTYTGRIFLEVLESSVAEHGARFQIPLLGAMAATLVVICTAVIVVVALTRKKKALRIHSVEGDLRRKSAGQEEWSPSAPSPPGSCVQAEAAPAGLCGEQRGEDCAELHDYFNVLSYRSLGNCSFFTETG
SEQ ID NO: 32 (人類TIGIT ECD-His胺基酸序列)
HHHHHHGGGGSMMTGTIETTGNISAEKGGSIILQCHLSSTTAQVTQVNWEQQDQLLAICNADLGWHISPSFKDRVAPGPGLGLTLQSLTVNDTGEYFCIYHTYPDGTYTGRIFLEVLESSVAEHGARFQIPGGGGSHHHHHH
Claims (29)
- 一種結合至人類TIGIT (SEQ ID NO:31)之多肽分子,其包含SEQ ID NO:1至6之胺基酸序列。
- 如請求項1之多肽分子,其進一步包含SEQ ID NO: 7至12之胺基酸序列,其中該多肽分子亦結合至人類PD-1 (SEQ ID NO: 29)。
- 如請求項1或2之多肽分子,其中該多肽分子係scFv分子。
- 如請求項3之多肽分子,其中該scFv分子係多特異性scFv分子。
- 如請求項4之多肽分子,其中該多特異性scFv分子係雙特異性scFv分子。
- 如請求項1之多肽分子,其中該多肽分子係抗體或其TIGIT-結合片段。
- 如請求項6之多肽分子,其中該多肽分子係抗體。
- 如請求項7之多肽分子,其中該抗體係單特異性抗體。
- 如請求項7之多肽分子,其中該多肽分子係多特異性抗體。
- 如請求項9之多肽分子,其中該多肽分子係雙特異性抗體。
- 如請求項6至10中任一項之多肽分子,其中該多肽分子係包含具有SEQ ID NO: 13之胺基酸序列之重鏈可變區及具有SEQ ID NO: 14之胺基酸序列之輕鏈可變區的抗體或其TIGIT-結合片段。
- 如請求項6至10中任一項之多肽分子,其中該多肽分子係包含具有SEQ ID NO: 21之胺基酸序列之重鏈及具有SEQ ID NO: 22之胺基酸序列之輕鏈的抗體。
- 如請求項6至10中任一項之多肽分子,其中該抗體或其TIGIT-結合片段亦結合至人類PD-1 (SEQ ID NO: 29)且進一步包含SEQ ID NO: 7至12之胺基酸序列。
- 如請求項13之多肽分子,其中該多肽分子係抗體或其人類TIGIT及人類PD-1結合片段,其包含: a) 具有SEQ ID NO:13之胺基酸序列的第一重鏈可變區; b) 具有SEQ ID NO:14之胺基酸序列的第一輕鏈可變區; c) 具有SEQ ID NO:17之胺基酸序列的第二重鏈可變區;及 d) 具有SEQ ID NO:18之胺基酸序列的第二輕鏈可變區。
- 如請求項14之多肽分子,其中該多肽分子係包含以下之抗體: a) 具有SEQ ID NO:21之胺基酸序列的第一重鏈; b) 具有SEQ ID NO:22之胺基酸序列的第一輕鏈; c) 具有SEQ ID NO:23之胺基酸序列的第二重鏈;及 d) 具有SEQ ID NO:24之胺基酸序列的第二輕鏈。
- 一種哺乳動物細胞,其能夠表現如請求項1至15中任一項之多肽分子。
- 一種DNA分子,其包含編碼SEQ ID NO:21、SEQ ID NO: 22、SEQ ID NO: 23及SEQ ID NO: 24之胺基酸序列中之一或多者的多核苷酸。
- 如請求項17之DNA分子,其中該多核苷酸包含SEQ ID NO:25、SEQ ID NO: 26、 SEQ ID NO: 27及SEQ ID NO: 28之DNA序列中之一或多者。
- 一種哺乳動物細胞,其包含如請求項17或18之DNA分子。
- 一種用於產生抗體之方法,其包含培養如請求項16或19之哺乳動物細胞及回收多肽分子。
- 一種藉由如請求項20之方法產生之多肽分子。
- 一種醫藥組合物,其包含如請求項1至15或21中任一項之多肽分子及可接受之載劑、稀釋劑或賦形劑。
- 一種如請求項1至15或21中任一項之多肽分子的用途,其用於製造用於治療實體腫瘤癌之藥劑。
- 如請求項23之用途,其中該癌症係肺癌、乳癌、頭頸癌、黑色素瘤、肝癌、結腸直腸癌、胰臟癌、胃癌、腎癌、前列腺癌、卵巢癌、子宮內膜癌或肝細胞癌。
- 如請求項24之用途,其中該肺癌係非小細胞肺癌。
- 如請求項24之用途,其中該肺癌係小細胞肺癌。
- 如請求項24之用途,其中該乳癌係三陰性乳癌。
- 如請求項23至27中任一項之用途,其中該多肽分子與電離輻射同時、分開或依序組合投與。
- 如請求項23至27中任一項之用途,其中該多肽分子與一或多種化學治療劑同時、分開或依序組合投與。
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