JP7241207B2

JP7241207B2 - Ｔｉｇｉｔおよびｐｄ－１／ｔｉｇｉｔ結合分子

Info

Publication number: JP7241207B2
Application number: JP2021569860A
Authority: JP
Inventors: フェン，イーチン; クマール，ナレシュ; デイビッドパンクック，ジェイムズ; マリートゥルーラー，ステファニー; ジャオ，ヤン
Original assignee: イーライリリーアンドカンパニー
Priority date: 2019-05-29
Filing date: 2020-05-22
Publication date: 2023-03-16
Anticipated expiration: 2040-05-22
Also published as: AR118980A1; TWI760751B; AU2020283817A1; CN113939536B; MA56029A; ECSP21085693A; BR112021021795A2; DOP2021000241A; EP3976652A1; CL2021003039A1; WO2020242919A1; CN113939536A; JP2023071889A; JP2022533457A; CR20210573A; EA202192796A1; JOP20210314A1; SG11202112725XA; CO2021015610A2; IL287765A

Description

発明の詳細な説明

本発明は、医薬の分野に属する。特に、本発明は、ヒトＴＩＧＩＴに拮抗する、またはヒトＴＩＧＩＴとＰＤ－１の両方に拮抗する新規ポリペプチド分子、およびそのようなポリペプチド分子を含む組成物、ならびに固形腫瘍の治療のためにそのようなポリペプチド分子を単独でまたは化学療法および他のがん治療と組み合わせて使用する方法に関する。

免疫チェックポイントは、適応免疫応答の調節において重要な役割を果たす、複数の共阻害および共刺激受容体を含む免疫細胞（例えば、Ｔ細胞および樹状細胞）上で発現される膜タンパク質の群である。チェックポイントには、ヒトプログラム細胞死リガンド（ＰＤ－１）（ＮＣＢＩＮＰ＿００５００９．２）ならびにＩｇおよびＩＴＩＭドメインを有するヒトＴ細胞免疫受容体（ＴＩＧＩＴ）（ＮＣＢＩＮＰ＿７７６１６０．２）が含まれる。

ＰＤ－１と、そのリガンドであるプログラム細胞死リガンド１（ＰＤ－Ｌ１）およびプログラム細胞死リガンド２（ＰＤ－Ｌ２）との間の相互作用は、腫瘍免疫回避および腫瘍微小環境で発生する免疫抑制において重要な役割を果たすことが示されている阻害シグナルを提供する。抗ＰＤ－１抗体および／または抗ＰＤ－Ｌ１抗体によるＰＤ－１阻害シグナル伝達の遮断は、臨床的に検証されており、特定のがんの治療に有意な臨床的進歩をもたらしているが、応答しないか、再発するか、ＰＤ－１もしくはＰＤ－Ｌ１抗体治療に対する耐性を獲得するか、または他の方法で治療に不耐性となるかのいずれかである、多くの患者が存在する。

ＴＩＧＩＴは、ＰＤ－１のように、活性化および枯渇したＴ細胞に発現する共抑制受容体である。ＴＩＧＩＴは腫瘍細胞上のポリオウイルス受容体（ＰＶＲ、ＣＤ１５５としても知られている）に結合し、腫瘍細胞への逆シグナル伝達を可能にし、Ｔ細胞抑制サイトカインの分泌をもたらす。ＣＤ１５５はＴＩＧＩＴの主要なリガンドと考えられているが、ＴＩＧＩＴはＣＤ１１２およびＣＤ１１３とも相互作用する可能性がある（Ｂｌａｋｅｅｔａｌ．，ＣｌｉｎＣａｎｃｅｒＲｅｓ；２０１６；２２（２１）：５１８２－５１８８）。抑制性免疫チェックポイント受容体としてのＴＩＧＩＴの役割が研究されている。ＴＩＧＩＴはＣＤ２２６／ＴＩＧＩＴ経路の一部であり、ＴＩＧＩＴはＣＤ１５５への結合について共刺激免疫受容体であるＣＤ２２６と競合するだけでなく、細胞膜内のＣＤ２２６と直接相互作用し、ＣＤ２２６のホモ二量体化をブロックする。（Ｂｌａｋｅｅｔａｌ．，Ｓ，ＣｌｉｎＣａｎｃｅｒＲｅｓ；２０１６；２２（２１）：５１８２－５１８８、Ｊｏｈｎｓｔｏｎｅｔａｌ．，ＣａｎｃｅｒＣｅｌｌ２０１４；２６：９２３－９３７、Ｍａｈｎｋｅｅｔａｌ，ＪｏｕｒｎａｌｏｆＩｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｖｅＤｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ２０１６；１３６：９－１１）。

抗ＴＩＧＩＴ抗体は、ＵＳ２０１６／０３５５５８９、ＵＳ２０１７／１４３８２５、ＵＳ２０１７／０８８６１３、ＵＳ２０１６／３７６３６５、ＵＳ２０１８／１６９２３８、ＵＳ２０１６／１７６９６３、およびＵＳ２０１９／１００５９１に開示されているものを含め、当該技術分野で知られている。ただし、抗ヒトＴＩＧＩＴ抗体は、単独でまたは抗ヒトＰＤ－Ｌ１もしくは抗ヒトＰＤ－１抗体と組み合わせて、ヒトでの治療的使用について規制当局の承認を受けていない。さらに、ＴＩＧＩＴとＰＤ－１またはＴＩＧＩＴとＰＤ－Ｌ１を標的とする二重特異性抗体は、ヒトでの治療的使用について規制当局の承認を受けていない。したがって、免疫チェックポイント経路を標的とする追加の治療に対する必要性が存在する。

したがって、本発明は、新規の抗ヒトＴＩＧＩＴ抗体および新規の抗ヒトＴＩＧＩＴ／抗ヒトＰＤ－１二重特異性抗体に関する。さらに、他の抗ヒトＴＩＧＩＴ抗体とは異なり、本発明の抗体は、エフェクター機能ヌルであり、すなわち、Ｆｃ受容体結合を最小化するように操作される。したがって、他の抗ヒトＴＩＧＩＴ抗体とは異なり、本発明の抗体は、Ｔ制御性細胞の枯渇および免疫応答の有害事象に寄与する可能性のある天然のヒトＩｇＧ１フレームワークを含まない。さらに、本発明の抗ヒトＴＩＧＩＴ／抗ヒトＰＤ－１二重特異性抗体は、異なるタイプの軽鎖を含み、抗ヒトＴＩＧＩＴアーム軽鎖はカッパー軽鎖であり、抗ヒトＰＤ－１軽鎖はラムダ軽鎖であり、軽鎖－軽鎖二量体化の可能性を低下させることにより、ヘテロマブ二重特異性抗体の形成を促進する。

二重特異性分子の調製は、一般に、予測できない試みであることが知られている。例えば、２本の重鎖と２本の軽鎖を共発現させてＩｇＧ二重特異性抗体を生成すると、抗体Ｆａｂ内でのアセンブリミスや不要な副産物、アメヘテロ二量体相互作用がもたらされる可能性がある（ＬｅｗｉｓＳＭｅｔａｌ．，ＮａｔｕｒｅＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ２０１４；３２：１９１－２０２、Ｌｅａｖｅｒ－ＦａｙＡ，ｅｔａｌ．，Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ２０１６；２４：６４１－６５１）。したがって、本発明は、Ｆｃ受容体結合を最小化し、酸化を最小化し、ヘテロマブ組織化を促進し、ならびにヒトＴＩＧＩＴ／ＰＤ－１およびカニクイザルＴＩＧＩＴ／ＰＤ－１と交差反応性であり、確立された腫瘍モデルでインビボでの有効性を示す、抗ヒトＴＩＧＩＴ／抗ヒトＰＤ－１二重特異性分子を提供する。

驚くべきことに、本発明の抗ヒトＴＩＧＩＴ／抗ヒトＰＤ－１二重特異性抗体は、抗ヒトＰＤ－１および抗ヒトＴＩＧＩＴ抗体併用療法と比較した場合、有意なインビボ抗腫瘍効果を示す。さらに驚くべきことに、本発明の二重特異性抗体による治療は、ＣＤ２２６＋ＣＤ８Ｔ細胞およびＣＤ２２６＋ＮＫ細胞の両方のパーセンテージの増加をもたらし、これは、観察された有意なインビボ有効性に寄与し得る。

本発明はまた、配列番号１～６の重および軽相補性決定領域（ＣＤＲ）アミノ酸配列を含む、ヒトＴＩＧＩＴ（配列番号３１）またはヒトＴＩＧＩＴ細胞外ドメイン、例えば、配列番号３２（表１を参照されたい）に結合しているポリペプチド分子を提供する。一実施形態では、ポリペプチドは、配列番号７～１２のＣＤＲアミノ酸配列をさらに含み、ポリペプチド分子はまた、ヒトＰＤ－１（配列番号２９）、またはＰＤ－１細胞外ドメイン、例えば、配列番号３０に結合している。

一実施形態では、ポリペプチド分子は、ｓｃＦｖ分子である。別の実施形態では、ポリペプチド分子は、多特異性ｓｃＦｖ分子である。別の実施形態では、多特異性ｓｃＦｖ分子は、二重特異性ｓｃＦｖ分子である。

一実施形態では、ポリペプチド分子は、それぞれ、配列番号１～３のアミノ酸配列を有する３つのＨＣＤＲと、それぞれ、配列番号４～６のアミノ酸配列を有する３つのＬＣＤＲとを含む、抗体、またはそのヒトＴＩＧＩＴ結合フラグメントである。別の実施形態では、ポリペプチド分子は、抗体である。別の実施形態では、抗体は、単一特異性抗体である。別の実施形態では、抗体は、多特異性抗体である。別の実施形態では、抗体は、ヒトＰＤ－１にも結合する二重特異性抗体である。

別の実施形態では、ポリペプチド分子は、抗体、または配列番号１３のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域および配列番号１４のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域を含むそのＴＩＧＩＴ結合フラグメントである。別の実施形態では、ポリペプチド分子は、配列番号２１のアミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号２２のアミノ酸配列を有する軽鎖と、を含む抗体である。

別の実施形態では、抗体またはそのヒトＴＩＧＩＴ結合フラグメントはまた、ヒトＰＤ－１（配列番号３１）、またはヒトＴＩＧＩＴ細胞外ドメイン、例えば、配列番号３２、およびヒトＰＤ－１（配列番号２９）、またはヒトＰＤ－１細胞外ドメイン、例えば、配列番号３０に結合し、さらに、それぞれ、配列番号７～９のアミノ酸配列を有する３つのＨＣＤＲ、および配列番号１０～１２のアミノ酸配列を有する３つのＬＣＤＲをさらに含む。

別の実施形態では、ポリペプチド分子は、配列番号１３のアミノ酸配列を有する第１の重鎖可変領域と、配列番号１４のアミノ酸配列を有する第１の軽鎖可変領域と、配列番号１７のアミノ酸配列を有する第２の重鎖可変領域と、配列番号１８のアミノ酸配列を有する第２の軽鎖可変領域と、含む、抗体、またはそのヒトＴＩＧＩＴおよびヒトＰＤ－１結合フラグメントである。

別の実施形態では、ポリペプチド分子は、配列番号２１のアミノ酸配列を有する第１の重鎖と、配列番号２２のアミノ酸配列を有する第１の軽鎖と、配列番号２３のアミノ酸配列を有する第２の重鎖と、配列番号２４のアミノ酸配列を有する第２の軽鎖と、を含む、抗体である。

本発明はまた、本発明のポリペプチド分子を発現することができる哺乳動物細胞を提供する。

本発明はまた、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３および配列番号２４のアミノ酸配列のうちの１つ以上をコードするポリヌクレオチドを含むＤＮＡ分子を提供する。本発明はまた、ポリヌクレオチドが、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７および配列番号２８のＤＮＡ配列のうちの１つ以上を含む、請求項１７に記載のＤＮＡ分子を提供する。

本発明はまた、本発明のＤＮＡ分子を含む哺乳動物細胞を提供する。本発明はまた、本発明の哺乳動物細胞を培養することと、ポリペプチド分子を回収することと、を含む、抗体を産生するためのプロセスを提供する。本発明はまた、この方法によって産生されるポリペプチド分子を提供する。

本発明は、本発明のポリペプチド分子と、許容可能な担体、希釈剤または賦形剤と、を含む、医薬組成物を提供する。

本発明はまた、固形腫瘍がんの治療を必要とするヒト患者に、有効量の本発明のポリペプチド分子を投与することを含む、固形腫瘍がんを治療する方法を提供する。一実施形態では、固形腫瘍がんは、肺がん、乳がん、頭頸部がん、黒色腫、肝臓がん、結腸直腸がん、膵臓がん、胃がん、腎臓がん、前立腺がん、卵巣がん、子宮内膜がん、または肝細胞がんである。別の実施形態では、肺がんは、非小細胞肺がんまたは小細胞肺がんである。別の実施形態では、乳がんは、トリプルネガティブ乳がんである。別の実施形態では、ポリペプチド分子は、電離放射線との同時の、別個の、または連続的な組み合わせで投与される。別の実施形態では、ポリペプチド分子は、１つ以上の化学療法剤との同時の、別個の、または連続的な組み合わせで投与される。

本発明はまた、療法に使用するための本発明のポリペプチド分子を提供する。一実施形態では、この使用は、固形腫瘍がんの治療における使用である。別の実施形態では、固形腫瘍がんは、肺がん、乳がん、頭頸部がん、黒色腫、肝臓がん、結腸直腸がん、膵臓がん、胃がん、腎臓がん、前立腺がん、卵巣がん、子宮内膜がん、または肝細胞がんである。別の実施形態では、肺がんは、非小細胞肺がんまたは小細胞肺がんである。別の実施形態では、乳がんは、トリプルネガティブ乳がんである。別の実施形態では、ポリペプチド分子は、電離放射線との同時の、別個の、または連続的な組み合わせで投与される。別の実施形態では、ポリペプチド分子は、１つ以上の化学療法剤との同時の、別個の、または連続的な組み合わせで投与される。

本発明はまた、固形腫瘍がんを治療するための医薬品の製造における本発明のポリペプチド分子の使用を提供する。一実施形態では、この使用は、固形腫瘍がんの治療における使用である。別の実施形態では、固形腫瘍がんは、肺がん、乳がん、頭頸部がん、黒色腫、肝臓がん、結腸直腸がん、膵臓がん、胃がん、腎臓がん、前立腺がん、卵巣がん、子宮内膜がん、または肝細胞がんである。別の実施形態では、肺がんは、非小細胞肺がんまたは小細胞肺がんである。別の実施形態では、乳がんは、トリプルネガティブ乳がんである。別の実施形態では、ポリペプチド分子は、電離放射線との同時の、別個の、または連続的な組み合わせで投与される。別の実施形態では、ポリペプチド分子は、１つ以上の化学療法剤との同時の、別個の、または連続的な組み合わせで投与される。

一実施形態では、本発明の抗体は、二重特異性抗体である。本発明の二重特異性抗体は、２つの異なる重鎖のヘテロ二量体対合を好み、ホモ二量体の形成を嫌うように設計される。好ましくは、本明細書に記載の二重特異性抗体は、ヒトＩｇＧ１に由来するＦｃ部分を含有する。ヒトＩｇＧ１は、Ｆｃガンマ受容体（ＦｃγＲ）ファミリーのタンパク質およびＣ１ｑに結合することが既知である。ＦｃγＲまたはＣ１ｑに結合するＩｇＧ１はそれぞれ、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）および補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を誘導する。したがって、好ましくは、本明細書に記載の抗体は、ＦｃγＲおよびＣ１ｑへの抗体の結合を低減するように操作されたヒトＩｇＧ１である。好ましくは、ＥＵ番号付けにおけるＬ２３４Ａ位、Ｌ２３５ＡおよびＬ３２９Ａ位のアミノ酸置換がＣＨ２領域に導入されて、ＦｃγＲおよびＣ１ｑへの抗体の結合を低減させる。任意で、ＥＵ番号付けにおけるＮ２９７Ｑ位のアミノ酸置換を導入して、抗体のＡＤＣＣおよびＣＤＣ活性をさらに低減する。

本明細書で配列が示される抗体の各々におけるフレームワークおよびＣＤＲ配列は、Ｎｏｒｔｈ，ｅｔａｌ．．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２０１１：４０６：２２８－２５６の方法と一致する注釈規則を使用して注釈が付けられている。

本発明はまた、
ａ）配列番号１のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１と、配列番号２のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２と、配列番号３のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３と、を含む重鎖と、
ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１と、配列番号５のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２と、配列番号６のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３を含むＨＣＶＲと、を含む軽鎖と、を含む、ヒトＴＩＧＩＴ（配列番号３１）、またはＴＩＧＩＴ細胞外ドメイン、例えば、配列番号３２に結合する抗体を提供する。

本発明はまた、
ａ）配列番号１３のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、
ｂ）配列番号１４のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域と、を含む、抗体を提供する。

本発明はまた、
ａ）配列番号２１のアミノ酸配列を有する重鎖と、
ｂ）配列番号２２のアミノ酸配列を有する軽鎖と、を含む、抗体を提供する。

一実施形態では、抗体の重鎖は、抗体の軽鎖と少なくとも１つのジスルフィド結合を形成し、抗体の２つの重鎖は、少なくとも１つのジスルフィド結合を形成する。

別の実施形態では、抗体は、Ｆｃガンマ受容体への抗体の結合を低減するように操作されたヒトＩｇＧ１である。

本発明はまた、配列番号２１のアミノ酸配列および配列番号２２のアミノ酸配列を有する少なくとも１つのポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含むＤＮＡ分子を提供する。好ましい実施形態では、ＤＮＡ分子は、配列番号２５および配列番号２６のうちの少なくとも１つを含むポリヌクレオチドを含む。

本発明はまた、配列番号２１のアミノ酸配列および配列番号２２のアミノ酸配列を有する少なくとも１つのポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含むＤＮＡ分子を含む哺乳動物細胞を提供する。

本発明はまた、抗体を発現し、抗体を回収することができる哺乳動物細胞を培養することを含む、抗体を産生するためのプロセスであって、抗体が、
ａ）配列番号１のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１と、配列番号２のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２と、配列番号３のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３と、を含む、重鎖と、
ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１と、配列番号５のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２と、配列番号６のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３と、を含む、軽鎖と、を含む、プロセスを提供する。

本発明はまた、抗体を発現し、抗体を回収することができる哺乳類細胞を培養することを含む、抗体を産生するためのプロセスであって、
ａ）配列番号１３のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、
ｂ）配列番号１４のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域と、を含む、プロセスを提供する。

本発明はまた、抗体を発現し、抗体を回収することができる哺乳類細胞を培養することを含む、抗体を産生するためのプロセスであって、抗体が、
ａ）配列番号２１のアミノ酸配列を有する重鎖と、
ｂ）配列番号２２のアミノ酸配列を有する軽鎖と、を含む、プロセスを提供する。

本発明はまた、抗体を回収することができる哺乳動物細胞を培養することを含む、抗体を産生するためのプロセスであって、抗体が、Ｆｃガンマ受容体への抗体の結合を低減するように操作されたヒトＩｇＧ１である、プロセスを提供する。

本発明はまた、抗体を発現し、抗体を回収することができる哺乳動物細胞を培養することを含むプロセスによって産生される抗体であって、抗体が、
ａ）配列番号１のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１と、配列番号２のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２と、配列番号３のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３と、を含む、重鎖と、
ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１と、配列番号５のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２と、配列番号６のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３と、を含む、軽鎖と、を含む、抗体を提供する。

本発明はまた、抗体を発現し、抗体を回収することができる哺乳動物細胞を培養することを含むプロセスによって産生される抗体であって、
ａ）配列番号１３のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、
ｂ）配列番号１４のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域と、を含む、抗体を提供する。

本発明はまた、抗体を発現し、抗体を回収することができる哺乳類細胞を培養することを含むプロセスによって産生される抗体であって、
ａ）配列番号２１のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、
ｂ）配列番号２２のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域と、を含む、抗体を提供する。

本発明はまた、抗体であって、ヒトＴＩＧＩＴ（配列番号３１）、またはヒトＴＩＧＩＴ細胞外ドメイン、例えば、配列番号３２に結合し、
ａ）配列番号１のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１と、配列番号２のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２と、配列番号３のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３と、を含む、重鎖と、
ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１と、配列番号５のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２と、配列番号６のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３と、を含む、軽鎖と、を含む、抗体と、
許容可能な担体、希釈剤、または賦形剤と、を含む、医薬組成物を提供する。

本発明はまた、
ａ）配列番号１３のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、
ｂ）配列番号１４のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域と、を含む、抗体と、
許容可能な担体、希釈剤、または賦形剤と、を含む、医薬組成物を提供する。

本発明はまた、
ａ）配列番号２１のアミノ酸配列を有する重鎖と、
ｂ）配列番号２２のアミノ酸配列を有する軽鎖と、を含む、抗体と、
許容可能な担体、希釈剤、または賦形剤と、を含む、医薬組成物を提供する。

一実施形態では、抗体が、Ｆｃガンマ受容体への抗体の結合を低減するように操作されたヒトＩｇＧ１である。

本発明はまた、がんの治療を必要とするヒト患者に、有効量の抗体を投与することを含む、がんを治療する方法であって、抗体が、ヒトＴＩＧＩＴ（配列番号３１）、またはヒトＴＩＧＩＴ細胞外ドメイン、例えば、配列番号３２ヒトＴＩＧＩＴ細胞外ドメインに結合し、
ａ）配列番号１のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１と、配列番号２のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２と、配列番号３のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３と、を含む重鎖と、
ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１と、配列番号５のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２と、配列番号６のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３と、を含む軽鎖と、を含む、方法を提供する。

本発明はまた、がんの治療を必要とするヒト患者に、有効量の抗体を投与することを含む、がんを治療する方法であって、抗体が、
ａ）配列番号１３のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、
ｂ）配列番号１４のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域と、を含む、方法を提供する。

本発明はまた、がんの治療を必要とするヒト患者に、有効量の抗体を投与することを含む、がんを治療する方法であって、抗体が、
ａ）配列番号２１のアミノ酸配列を有する重鎖と、
ｂ）配列番号２２のアミノ酸配列を有する軽鎖と、を含む、方法を提供する。

一実施形態では、抗体は、Ｆｃガンマ受容体への抗体の結合を低減するように操作されたヒトＩｇＧ１である。

本発明はまた、治療の方法および使用のための方法を提供する。

本発明はまた、がんの治療を必要とするヒト患者に、有効量の本明細書に記載の抗体を投与することを含む、がんを治療する方法であって、がんが、肺がん、乳がん、頭頸部がん、黒色腫、肝臓がん、結腸直腸がん、膵臓がん、胃がん、腎臓がん、前立腺がん、卵巣がん、子宮内膜がん、または肝細胞がんである、方法を提供する。

本発明はまた、がんの治療を必要とするヒト患者に、有効量の本明細書に記載の抗体を投与することを含む、がんを治療する方法であって、がんが、非小細胞肺がん、または小細胞肺がんである、方法を提供する。本発明はさらに、がんの治療を必要とするヒト患者に、有効量の本明細書に記載の抗体を投与することを含む、がんを治療する方法であって、抗体が、トリプルネガティブ乳がんである、方法を提供する。

本発明はまた、がんの治療を必要とするヒト患者に、有効量の本明細書に記載の抗体を投与することを含む、がんを治療する方法であって、抗体が、電離放射線との組み合わせで投与される、方法を提供する。

本発明はまた、がんの治療を必要とするヒト患者に、有効量の本明細書に記載の抗体を投与することを含む、がんを治療する方法であって、抗体が、１つ以上の化学療法剤との組み合わせで投与される、方法を提供する。

本発明はまた、がんの治療を必要とするヒト患者に、有効量の本明細書に記載の抗体を投与することを含む、がんを治療する方法であって、抗体が、電離放射線または１つ以上の化学療法剤との組み合わせで投与される、方法を提供する。

一実施形態では、本発明は、がんを治療する方法であって、有効量の本明細書に開示される二重特異性抗体を１つ以上の抗腫瘍薬と、同時の、別個の、または連続的な組み合わせで投与することを含む、方法を提供する。抗腫瘍薬の非限定的な例としては、ラムシルマブ、ネシツムマブ、オララツマブ、ゲムシタビン、ペメトレキセド、ガルニセルチブ、アベマシクリブ、シスプラチン、カルボプラチン、ダカルバジン、リポソームドキソルビシン、ドセタキセル、シクロホスファミドおよびドキソルビシン、ナベルビン、エリブリン、パクリタキセル、注射懸濁液のためのパクリタキセルタンパク質結合粒子、イクサベピロン、カペシタビン、ＦＯＬＦＯＸ（ロイコボリン、フルオロウラシル、およびオキサリプラチン）、ＦＯＬＦＩＲＩ（ロイコボリン、フルオロウラシル、およびイリノテカン）、セツキシマブ、ＥＧＦＲ阻害薬、Ｒａｆ阻害剤、Ｂ－Ｒａｆ阻害剤、ＣＤＫ４／６阻害剤、ＣＤＫ７阻害剤、イドレアミン２，３－ジオキシゲナーゼ阻害剤、ＴＧＦβ阻害剤、ＴＧＦβ受容体阻害剤、ＩＬ－１０、ならびにペグ化ＩＬ－１０（例えば、ペギロデカキン）が挙げられる。

本発明はまた、がんの治療に使用するための抗体であって、抗体が、ヒトＴＩＧＩＴ（配列番号３１）、またはヒトＴＩＧＩＴ細胞外ドメイン、例えば、配列番号３２に結合し、
ａ）配列番号１のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１と、配列番号２のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２と、配列番号３のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３と、を含む重鎖と、
ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１と、配列番号５のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２と、配列番号６のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３と、を含む軽鎖と、を含む、抗体を提供する。

本発明はまた、がんの治療に使用するための抗体であって、
ａ）配列番号１３のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、
ｂ）配列番号１４のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域と、を含む、抗体を提供する。

本発明はまた、がんの治療に使用するための抗体であって、
ａ）配列番号２１のアミノ酸配列を有する重鎖と、
ｂ）配列番号２２のアミノ酸配列を有する軽鎖と、を含む、抗体を提供する。

本発明はまた、がんの治療に使用するための抗体であって、がんが肺がん、乳がん、頭頸部がん、黒色腫、肝臓がん、結腸直腸がん、膵臓がん、胃がん、腎臓がん、前立腺がん、卵巣がん、子宮内膜がん、または肝細胞がんである、抗体を提供する。本発明はさらに、肺がんの治療に使用するための抗体であって、肺がんが非小細胞肺がんまたは小細胞肺がんである、抗体を提供する。本発明はまた、乳がんの治療に使用するための抗体であって、乳がんがトリプルネガティブ乳がんである、抗体を提供する。

一実施形態では、抗体は、電離放射線との同時の、別個の、または連続的な組み合わせで投与される。別の実施形態では、抗体は、１つ以上の化学療法剤との同時の、別個の、または連続的な組み合わせで投与される。別の実施形態では、抗体は、電離放射線および１つ以上の化学療法剤との同時の、別個の、または連続的な組み合わせで投与される。

本発明はまた、がんの治療に使用するための抗体であって、ヒトＴＩＧＩＴ（配列番号３１）、またはヒトＴＩＧＩＴ細胞外ドメイン、例えば、配列番号３２に結合し、
ａ）配列番号１のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１と、配列番号２のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２と、配列番号３のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３と、を含む、重鎖と、
ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１と、配列番号５のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２と、配列番号６のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３と、を含む、軽鎖と、を含む、抗体と、
許容可能な担体、希釈剤、または賦形剤と、を含む、医薬組成物を提供する。

本発明はまた、がんの治療に使用するための抗体であって、
ａ）配列番号１３のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、
ｂ）配列番号１４のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域と、を含む、抗体と、
許容可能な担体、希釈剤、または賦形剤と、を含む、医薬組成物を提供する。

本発明はまた、がんの治療に使用するための抗体であって、
ａ）配列番号２１のアミノ酸配列を有する重鎖と、
ｂ）配列番号２２のアミノ酸配列を有する軽鎖と、を含む、抗体と、
許容可能な担体、希釈剤、または賦形剤と、を含む、医薬組成物を提供する。

本発明はまた、がんの治療に使用するための抗体を含む医薬組成物であって、がんが、肺がん、乳がん、頭頸部がん、黒色腫、肝臓がん、結腸直腸がん、膵臓がん、胃がん、腎臓がん、前立腺がん、卵巣がん、子宮内膜がん、または肝細胞がんである、医薬組成物を提供する。本発明はさらに、肺がんの治療に使用するための抗体を含む医薬組成物であって、肺がんが、非小細胞肺がんまたは小細胞肺がんである、医薬組成物を提供する。本発明はさらに、乳がんの治療に使用するための抗体を含む医薬組成物であって、乳がんが、トリプルネガティブ乳がんである、医薬組成物を提供する。

一実施形態では、組成物は、電離放射線との同時の、別個の、または連続的な組み合わせで投与される。別の実施形態では、医薬組成物は、１つ以上の化学療法剤との同時の、別個の、または連続的な組み合わせで投与される。別の実施形態では、医薬組成物は、電離放射線および１つ以上の化学療法剤との同時の、別個の、または連続的な組み合わせで投与される。

本発明はまた、がんを治療するための医薬品の製造における本発明の抗体の使用であって、抗体が、ヒトＴＩＧＩＴ（配列番号３１）、またはヒトＴＩＧＩＴ細胞外ドメイン、例えば、配列番号３２に結合し、
ａ）配列番号１のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１と、配列番号２のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２と、配列番号３のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３と、を含む重鎖と、
ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１と、配列番号５のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２と、配列番号６のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３と、を含む軽鎖と、を含む、使用を提供する。

本発明はまた、がんを治療するための医薬品の製造における本発明の抗体の使用であって、
ａ）配列番号１３のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、
ｂ）配列番号１４のアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域と、を含む使用を提供する。

本発明はまた、がんを治療するための医薬品の製造における本発明の抗体の使用であって、
ａ）配列番号２１のアミノ酸配列を有する重鎖と、
ｂ）配列番号２２のアミノ酸配列を有する軽鎖と、を含む使用を提供する。

本発明はまた、がんを治療するための医薬品の製造における本発明の抗体の使用であって、がんが肺がん、乳がん、頭頸部がん、黒色腫、肝臓がん、結腸直腸がん、膵臓がん、胃がん、腎臓がん、前立腺がん、卵巣がん、子宮内膜がん、または肝細胞がんである、使用を提供する。本発明はさらに、肺がんを治療するための医薬品の製造における本発明の抗体の使用であって、肺がんが非小細胞肺がんまたは小細胞肺がんである、使用を提供する。本発明はさらに、乳がんを治療するための医薬品の製造における本発明の抗体の使用であって、乳がんがトリプルネガティブ乳がんである、使用を提供する。

本明細書に記載の治療方法に言及する実施形態では、そのような実施形態はまた、その治療に使用するための、または代替的にその治療に使用するための医薬品の製造に使用するための、さらなる実施形態でもある。

有用な化学療法剤の非限定的な例としては、５－フルオロウラシル、ヒドロキシウレア、ゲムシタビン、ペメトレキセド、メトトレキサート、ドキソルビシン、エトポシド、カルボプラチン、シスプラチン、シクロホスファミド、メルファラン、ダカルバジン、タキソール、カンプトテシン、ＦＯＬＦＩＲＩ、ＦＯＬＦＯＸ、ドセタキセル、ダウノルビシン、パクリタキセル、オキサリプラチン、およびそれらの組み合わせが挙げられる。

本発明の抗体、またはそれを含む薬学的組成物は、非経口経路によって投与され得、この非限定的な例は、静脈内投与である。本発明の抗体は、単独で薬学的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤と一緒に単回用量または複数回用量でヒト患者に投与され得る。本発明の薬学的組成物は、当該技術分野で既知の方法によって調製することができる（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：ＴｈｅＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＰｒａｃｔｉｃｅｏｆＰｈａｒｍａｃｙ，２２^ｎｄｅｄ．（２０１２），Ａ．Ｌｏｙｄｅｔａｌ．，ＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＰｒｅｓｓ）。

一実施形態では、本発明のポリペプチド分子は、無菌である。別の実施形態では、本発明のポリペプチド分子は、実質的に純粋である。別の実施形態では、本発明のポリペプチド分子は、実質的に純粋かつ無菌である。

本発明の二重特異性抗体は、抗体の各アームが、一部には２つの異なる重鎖および２つの異なる軽鎖により、その同種抗原に対する選択的な一価の結合を示すという点で、ヘテロ二量体である。本発明では、二重特異性抗体の一方のアームは、ヒトＰＤ－１（配列番号２９）、またはヒトＰＤ－１細胞外ドメイン（ＥＣＤ）、例えば、ＥＣＤ－Ｈｉｓ発現産物（配列番号３０）に結合し、一方、他方のアームは、ヒトＴＩＧＩＴ（配列番号３１）、またはＴＩＧＩＴＥＣＤ、例えば、ＥＣＤ－Ｈｉｓ発現産物（配列番号３２）に結合する。好ましい実施形態では、抗体の一方のアームはヒトＰＤ－１（配列番号２９）に拮抗し、他方のアームはヒトＴＩＧＩＴ（配列番号３１）に拮抗する。

本発明はまた、ヒトＰＤ－１（配列番号２９）、またはＰＤ－１細胞外ドメイン、例えば、配列番号３０に結合し、かつヒトＴＩＧＩＴ（配列番号３１）、またはＴＩＧＩＴ細胞外ドメイン、例えば、配列番号３２に結合する抗体であって、
ａ）配列番号１のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１と、配列番号２のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２と、配列番号３のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３と、を含む第１の重鎖と、
ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１と、配列番号５のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２と、配列番号６のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３と、を含む第１の軽鎖と、
ｃ）配列番号７のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１と、配列番号８のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２と、配列番号９のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３と、を含む第２の重鎖と、
ｄ）配列番号１０のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１と、配列番号１１のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２と、配列番号１２のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３と、を含む第２の軽鎖と、を含む、抗体を提供する。

本発明はまた、
ａ）配列番号１３のアミノ酸配列を有する第１の重鎖可変領域と、
ｂ）配列番号１４のアミノ酸配列を有する第１の軽鎖可変領域と、
ｃ）配列番号１７のアミノ酸配列を有する第２の重鎖可変領域と、
ｄ）配列番号１８のアミノ酸配列を有する第２の軽鎖可変領域と、を含む抗体を提供する。

本発明はまた、
ａ）配列番号２１のアミノ酸配列を有する第１の重鎖と、
ｂ）配列番号２２のアミノ酸配列を有する第１の軽鎖と、
ｃ）配列番号２３のアミノ酸配列を有する第２の重鎖と、
ｄ）配列番号２４のアミノ酸配列を有する第２の軽鎖と、を含む抗体を提供する。

本発明はまた、
ａ）配列番号２１のアミノ酸配列を有する第１の重鎖と、
ｂ）配列番号２２のアミノ酸配列を有する第１の軽鎖と、
ｃ）配列番号２３のアミノ酸配列を有する第２の重鎖と、
ｄ）配列番号２４のアミノ酸配列を有する第２の軽鎖と、を含む抗体（本明細書では抗体Ａと呼ばれる）を提供する。

一実施形態では、抗体の第１の重鎖は、抗体の第１の軽鎖と少なくとも１つのジスルフィド結合を形成し、抗体の第２の重鎖は、抗体の第２の軽鎖と少なくとも１つのジスルフィド結合を形成し、抗体の第１の重鎖は、抗体の第２の重鎖と少なくとも１つのジスルフィド結合を形成する。

本発明はまた、配列番号２１のアミノ酸配列、配列番号２２のアミノ酸配列、配列番号２３のアミノ酸配列、および配列番号２４のアミノ酸配列を有する少なくとも１つのポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含むＤＮＡ分子を提供する。好ましい実施形態では、ＤＮＡ分子は、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７および配列番号２８のうちの少なくとも１つを含むポリヌクレオチドを含む。

本発明はまた、配列番号２１のアミノ酸配列、配列番号２２のアミノ酸配列、配列番号２３のアミノ酸配列、および配列番号２４のアミノ酸配列を有する少なくとも１つのポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含むＤＮＡ分子を含む哺乳動物細胞を提供する。

本発明はまた、抗体を発現し、抗体を回収することができる哺乳動物細胞を培養することを含む抗体を産生するためのプロセスであって、抗体が、
ａ）配列番号１のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１と、配列番号２のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２と、配列番号３のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３と、を含む第１の重鎖と、
ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１と、配列番号５のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２と、配列番号６のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３と、を含む第１の軽鎖と、
ｃ）配列番号７のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１と、配列番号８のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２と、配列番号９のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３と、を含む第２の重鎖と、
ｄ）配列番号１０のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１と、配列番号１１のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２と、配列番号１２のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３と、を含む第２の軽鎖と、を含む、プロセスを提供する。

一実施形態では、抗体の第１の重鎖が、抗体の第１の軽鎖と少なくとも１つのジスルフィド結合を形成し、抗体の第２の重鎖が、抗体の第２の軽鎖と少なくとも１つのジスルフィド結合を形成し、抗体の第１の重鎖が、抗体の第２の重鎖と少なくとも１つのジスルフィド結合を形成する。

本発明はまた、抗体を発現し、抗体を回収することができる哺乳動物細胞を培養することを含む抗体を産生するためのプロセスであって、抗体が、
ａ）配列番号１３のアミノ酸配列を有する第１の重鎖可変領域と、
ｂ）配列番号１４のアミノ酸配列を有する第１の軽鎖可変領域と、
ｃ）配列番号１７のアミノ酸配列を有する第２の重鎖可変領域と、
ｄ）配列番号１８のアミノ酸配列を有する第２の軽鎖可変領域と、を含むプロセスを提供する。

本発明はまた、抗体を発現し、抗体を回収することができる哺乳動物細胞を培養することを含む抗体を産生するためのプロセスであって、抗体が、
ａ）配列番号２１のアミノ酸配列を有する第１の重鎖と、
ｂ）配列番号２２のアミノ酸配列を有する第１の軽鎖と、
ｃ）配列番号２３のアミノ酸配列を有する第２の重鎖と、
ｄ）配列番号２４のアミノ酸配列を有する第２の軽鎖と、を含むプロセスを提供する。

本発明はまた、抗体を回収することができる哺乳動物細胞を培養することを含む抗体を産生するためのプロセスであって、抗体が、Ｆｃガンマ受容体への抗体の結合を低減するように操作されたヒトＩｇＧ１である、プロセスを提供する。

本発明はまた、抗体を発現し、抗体を回収することができる哺乳動物細胞を培養することを含むプロセスによって産生される抗体であって、抗体が、
ａ）配列番号１のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１と、配列番号２のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２と、配列番号３のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３と、を含む第１の重鎖と、
ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１と、配列番号５のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２と、配列番号６のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３と、を含む第１の軽鎖と、
ｃ）配列番号７のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１と、配列番号８のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２と、配列番号９のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３と、を含む第２の重鎖と、
ｄ）配列番号１０のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１と、配列番号１１のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２と、配列番号１２のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３と、を含む第２の軽鎖と、を含む、プロセスを提供する。

本発明はまた、抗体を発現し、抗体を回収することができる哺乳動物細胞を培養することを含むプロセスによって産生される抗体であって、
ａ）配列番号１３のアミノ酸配列を有する第１の重鎖可変領域と、
ｂ）配列番号１４のアミノ酸配列を有する第１の軽鎖可変領域と、
ｃ）配列番号１７のアミノ酸配列を有する第２の重鎖可変領域と、
ｄ）配列番号１８のアミノ酸配列を有する第２の軽鎖可変領域と、を含む抗体を提供する。

本発明はまた、抗体を発現し、抗体を回収することができる哺乳動物細胞を培養することを含むプロセスによって産生される抗体であって、
ａ）配列番号２１のアミノ酸配列を有する第１の重鎖と、
ｂ）配列番号２２のアミノ酸配列を有する第１の軽鎖と、
ｃ）配列番号２３のアミノ酸配列を有する第２の重鎖と、
ｄ）配列番号２４のアミノ酸配列を有する第２の軽鎖と、を含む抗体を提供する。

本発明はまた、抗体であって、ヒトＰＤ－１（配列番号２９）、またはヒトＰＤ－１細胞外ドメイン、例えば、配列番号３０に結合し、かつヒトＴＩＧＩＴ（配列番号３１）、またはヒトＴＩＧＩＴ細胞外ドメイン、例えば、配列番号３２に結合し、
ａ）配列番号１のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１と、配列番号２のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２と、配列番号３のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３と、を含む、第１の重鎖と、
ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１と、配列番号５のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２と、配列番号６のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３と、を含む、第１の軽鎖と、
ｃ）配列番号７のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１と、配列番号８のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２と、配列番号９のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３と、を含む、第２の重鎖と、
ｄ）配列番号１０のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１と、配列番号１１のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２と、配列番号１２のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３と、を含む、第２の軽鎖と、を含む、抗体と、
許容可能な担体、希釈剤、または賦形剤と、を含む、医薬組成物を提供する。

本発明はまた、
ａ）配列番号１３のアミノ酸配列を有する第１の重鎖可変領域と、
ｂ）配列番号１４のアミノ酸配列を有する第１の軽鎖可変領域と、
ｃ）配列番号１７のアミノ酸配列を有する第２の重鎖可変領域と、
ｄ）配列番号１８のアミノ酸配列を有する第２の軽鎖可変領域と、を含む、抗体と、
許容可能な担体、希釈剤、または賦形剤と、を含む、医薬組成物を提供する。

本発明はまた、
ａ）配列番号２１のアミノ酸配列を有する第１の重鎖と、
ｂ）配列番号２２のアミノ酸配列を有する第１の軽鎖と、
ｃ）配列番号２３のアミノ酸配列を有する第２の重鎖と、
ｄ）配列番号２４のアミノ酸配列を有する第２の軽鎖と、を含む、抗体と、
許容可能な担体、希釈剤、または賦形剤と、を含む、医薬組成物を提供する。

一実施形態では、抗体が、Ｆｃガンマ受容体への抗体の結合を低減させるように操作されたヒトＩｇＧ１である。

本発明はまた、がんの治療を必要とするヒト患者に、有効量の抗体を投与することを含む、がんを治療する方法であって、抗体が、ヒトＰＤ－１（配列番号２９）、またはヒトＰＤ－１細胞外ドメイン、例えば、配列番号３０に結合し、かつヒトＴＩＧＩＴ（配列番号３１）、またはヒトＴＩＧＩＴ細胞外ドメイン、例えば、配列番号３２に結合し、
ａ）配列番号１のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１と、配列番号２のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２と、配列番号３のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３と、を含む第１の重鎖と、
ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１と、配列番号５のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２と、配列番号６のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３と、を含む第１の軽鎖と、
ｃ）配列番号７のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１と、配列番号８のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２と、配列番号９のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３と、を含む第２の重鎖と、
ｄ）配列番号１０のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１と、配列番号１１のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２と、配列番号１２のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３と、を含む第２の軽鎖と、を含む、方法を提供する。

本発明はまた、がんの治療を必要とするヒト患者に、有効量の抗体を投与することを含む、がんを治療する方法であって、抗体が、
ａ）配列番号１３のアミノ酸配列を有する第１の重鎖可変領域と、
ｂ）配列番号１４のアミノ酸配列を有する第１の軽鎖可変領域と、
ｃ）配列番号１７のアミノ酸配列を有する第２の重鎖可変領域と、
ｄ）配列番号１８のアミノ酸配列を有する第２の軽鎖可変領域と、を含む、方法を提供する。

本発明はまた、がんの治療を必要とするヒト患者に、有効量の抗体を投与することを含む、がんを治療する方法であって、抗体が、
ａ）配列番号２１のアミノ酸配列を有する第１の重鎖と、
ｂ）配列番号２２のアミノ酸配列を有する第１の軽鎖と、
ｃ）配列番号２３のアミノ酸配列を有する第２の重鎖と、
ｄ）配列番号２４のアミノ酸配列を有する第２の軽鎖と、を含む、方法を提供する。

本発明はまた、がんの治療に使用するための抗体であって、抗体が、ヒトＰＤ－１（配列番号２９）、またはヒトＰＤ－１細胞外ドメイン、例えば、配列番号３０に結合し、かつヒトＴＩＧＩＴ（配列番号３１）、またはヒトＴＩＧＩＴ細胞外ドメイン、例えば、配列番号３２に結合し、
ａ）配列番号１のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１と、配列番号２のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２と、配列番号３のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３と、を含む第１の重鎖と、
ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１と、配列番号５のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２と、配列番号６のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３と、を含む第１の軽鎖と、
ｃ）配列番号７のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１と、配列番号８のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２と、配列番号９のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３と、を含む第２の重鎖と、
ｄ）配列番号１０のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１と、配列番号１１のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２と、配列番号１２のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３と、を含む第２の軽鎖と、を含む、抗体を提供する。

本発明はまた、がんの治療に使用するための抗体であって、
ａ）配列番号１３のアミノ酸配列を有する第１の重鎖可変領域と、
ｂ）配列番号１４のアミノ酸配列を有する第１の軽鎖可変領域と、
ｃ）配列番号１７のアミノ酸配列を有する第２の重鎖可変領域と、
ｄ）配列番号１８のアミノ酸配列を有する第２の軽鎖可変領域と、を含む、抗体を提供する。

本発明はまた、がんの治療に使用するための抗体であって、
ａ）配列番号２１のアミノ酸配列を有する第１の重鎖と、
ｂ）配列番号２２のアミノ酸配列を有する第１の軽鎖と、
ｃ）配列番号２３のアミノ酸配列を有する第２の重鎖と、
ｄ）配列番号２４のアミノ酸配列を有する第２の軽鎖と、を含む、抗体を提供する。

本発明はまた、がんの治療に使用するための抗体であって、がんが、肺がん、乳がん、頭頸部がん、黒色腫、肝臓がん、結腸直腸がん、膵臓がん、胃がん、腎臓がん、前立腺がん、卵巣がん、子宮内膜がん、または肝細胞がんである、抗体を提供する。本発明はさらに、肺がんの治療に使用するための抗体であって、肺がんが、非小細胞肺がんまたは小細胞肺がんである、抗体を提供する。本発明はまた、乳がんの治療に使用するための抗体であって、乳がんが、トリプルネガティブ乳がんである、抗体を提供する。

本発明はまた、がんの治療に使用するための抗体であって、ヒトＰＤ－１（配列番号２９）、またはヒトＰＤ－１細胞外ドメイン、例えば、配列番号３０に結合し、かつヒトＴＩＧＩＴ（配列番号３１）、またはヒトＴＩＧＩＴ細胞外ドメイン、例えば、配列番号３２に結合し、
ａ）配列番号１のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１と、配列番号２のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２と、配列番号３のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３と、を含む、第１の重鎖と、
ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１と、配列番号５のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２と、配列番号６のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３と、を含む、第１の軽鎖と、
ｃ）配列番号７のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１と、配列番号８のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２と、配列番号９のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３と、を含む、第２の重鎖と、
ｄ）配列番号１０のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１と、配列番号１１のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２と、配列番号１２のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３と、を含む、第２の軽鎖と、を含む、抗体と、
許容可能な担体、希釈剤、または賦形剤と、を含む、医薬組成物を提供する。

本発明はまた、がんの治療に使用するための抗体であって、
ａ）配列番号１３のアミノ酸配列を有する第１の重鎖可変領域と、
ｂ）配列番号１４のアミノ酸配列を有する第１の軽鎖可変領域と、
ｃ）配列番号１７のアミノ酸配列を有する第２の重鎖可変領域と、
ｄ）配列番号１８のアミノ酸配列を有する第２の軽鎖可変領域と、を含む、抗体と、
許容可能な担体、希釈剤、または賦形剤と、を含む、医薬組成物を提供する。

本発明はまた、がんの治療に使用するための抗体であって、抗体が、
ａ）配列番号２１のアミノ酸配列を有する第１の重鎖と、
ｂ）配列番号２２のアミノ酸配列を有する第１の軽鎖と、
ｃ）配列番号２３のアミノ酸配列を有する第２の重鎖と、
ｄ）配列番号２４のアミノ酸配列を有する第２の軽鎖と、を含む、抗体と、
許容可能な担体、希釈剤、または賦形剤と、を含む、医薬組成物を提供する。

本発明はまた、がんを治療するための薬剤の製造における本発明の抗体の使用であって、抗体が、ヒトＰＤ－１（配列番号２９）、またはヒトＰＤ－１細胞外ドメイン、例えば、配列番号３０に結合し、かつヒトＴＩＧＩＴ（配列番号３１）、またはヒトＴＩＧＩＴ細胞外ドメイン、例えば、配列番号３２に結合し、
ａ）配列番号１のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１と、配列番号２のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２と、配列番号３のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３と、を含む第１の重鎖と、
ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１と、配列番号５のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２と、配列番号６のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３と、を含む第１の軽鎖と、
ｃ）配列番号７のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１と、配列番号８のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２と、配列番号９のアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３と、を含む第２の重鎖と、
ｄ）配列番号１０のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１と、配列番号１１のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２と、配列番号１２のアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３と、を含む第２の軽鎖と、を含む、使用を提供する。

本発明はまた、がんを治療するための医薬品の製造における本発明の抗体の使用であって、
ａ）配列番号１３のアミノ酸配列を有する第１の重鎖可変領域と、
ｂ）配列番号１４のアミノ酸配列を有する第１の軽鎖可変領域と、
ｃ）配列番号１７のアミノ酸配列を有する第２の重鎖可変領域と、
ｄ）配列番号１８のアミノ酸配列を有する第２の軽鎖可変領域と、を含む、抗体の使用を提供する。

本発明はまた、がんを治療するための医薬品の製造における本発明の抗体の使用であって、
ａ）配列番号２１のアミノ酸配列を有する第１の重鎖と、
ｂ）配列番号２２のアミノ酸配列を有する第１の軽鎖と、
ｃ）配列番号２３のアミノ酸配列を有する第２の重鎖と、
ｄ）配列番号２４のアミノ酸配列を有する第２の軽鎖と、を含む、抗体の使用を提供する。

本発明はまた、がんを治療するための医薬品の製造における本発明の抗体の使用であって、がんが、肺がん、乳がん、頭頸部がん、黒色腫、肝臓がん、結腸直腸がん、膵臓がん、胃がん、腎臓がん、前立腺がん、卵巣がん、子宮内膜がん、または肝細胞がんである、使用を提供する。本発明はさらに、肺がんを治療するための医薬品の製造における本発明の抗体の使用であって、肺がんが、非小細胞肺がんまたは小細胞肺がんである、使用を提供する。本発明はさらに、乳がんを治療するための医薬品の製造における本発明の抗体の使用であって、乳がんが、トリプルネガティブ乳がんである、使用を提供する。

本発明のポリペプチド分子を投与するための投薬計画は、最適な所望の反応（例えば、治療効果）を提供するように調整され得る。

一実施形態では、本発明のポリペプチド分子がヒトＴＩＧＩＴに結合する場合、または、それはヒトＴＩＧＩＴに拮抗する。別の実施形態では、本発明のポリペプチド分子がヒトＰＤ－１に結合する場合、それはヒトＰＤ－１に拮抗する。本明細書で使用される場合、「アンタゴナイズする」という用語は、関心対象の生物学的活性を遮断、妨害、抑制、または低減する行為を指す。この関連で、本発明のポリペプチド分子、例えば、抗体は、ヒトＰＤ－１に結合し、ヒトＰＤ－Ｌ１のヒトＰＤ－１への結合を遮断することによってヒトＰＤ－１に拮抗し、ヒトＴＩＧＩＴに結合し、ヒトＴＩＧＩＴのＣＤ１５５および／またはＣＤ１１２への結合を遮断することによってヒトＴＩＧＩＴに拮抗する。

本明細書で使用される「抗体」という用語は、タンパク質、ペプチド、またはポリペプチドなどの標的を認識して結合する重鎖および軽鎖を有する単量体または二量体免疫グロブリン分子を指す。一実施形態では、抗体は、標的に特異的に結合する。各重鎖は、Ｎ末端ＨＣＶＲ（重鎖可変領域）およびＨＣＣＲ（重鎖定常領域）からなる。各軽鎖は、Ｎ末端ＬＣＶＲ（軽鎖可変領域）およびＬＣＣＲ（軽鎖定常領域）からなる。重鎖の定常領域は、ＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３ドメインを含有する。

「抗体フラグメント」という用語は、インタクトな抗体が結合する標的に結合する能力を保持する抗体のフラグメントである。一実施形態では、抗体フラグメントは、標的に特異的に結合する。別の実施形態では、抗体フラグメントは、インタクトな抗体のＨＣＤＲ１～３およびＬＤＣＲ１～３を含む。別の実施形態では、抗体フラグメントは、インタクトな抗体のＨＣＶＲおよびＬＣＶＲを含む。

本明細書で特に示されない限り、「ＴＩＧＩＴ」はヒトＴＩＧＩＴを指し、「ＰＤ－１」はヒトＰＤ－１を指す。

本明細書で使用される「結合」という用語は、２つの分子、例えば、本発明のポリペプチド分子とＴＩＧＩＴ、ＰＤ－１、またはＴＩＧＩＴおよびＰＤ－１との間の分子相互作用を指す。「単一特異的結合」という用語は、１つの標的、例えば、ヒトＴＩＧＩＴまたはヒトＰＤ－１への結合を指す。「二重特異性結合」という用語は、ヒトＴＩＧＩＴおよびヒトＰＤ－１への結合を指す。「多特異性結合」という用語は、ヒトＴＩＧＩＴ、ヒトＰＤ－１、および１つまたは２つの他の標的への結合を指す。

「選択的に結合する」または「特異的に結合する」という用語は、本発明のポリペプチド分子が、ヒトＴＩＧＩＴ、またはＰＤ－１、またはヒトＴＩＧＩＴとヒトＰＤ－１に、他の物質よりもより頻繁に、より迅速に、より長い持続時間で、より大きな親和性で、または上記のいくつかの組み合わせで相互作用することを意味する。一実施形態では、「特異的に結合する」は、本発明のポリペプチド分子が、約０．１ｍＭ以下のＫ_ＤでヒトＴＩＧＩＴ、またはヒトＰＤ－１、またはヒトＴＩＧＩＴおよびヒトＰＤ－１に結合することを意味する。別の実施形態では、「特異的に結合する」は、本発明のポリペプチド分子が、約０．０１ｍＭ以下のＫ_ＤでヒトＴＩＧＩＴ、またはヒトＰＤ－１、またはヒトＴＩＧＩＴおよびヒトＰＤ－１に結合することを意味する。別の実施形態では、「特異的に結合する」は、本発明のポリペプチド分子が、約０．００１ｍＭ以下のＫ_ＤでヒトＴＩＧＩＴ、またはヒトＰＤ－１、またはヒトＴＩＧＩＴおよびヒトＰＤ－１に結合することを意味する。別の実施形態では、「特異的に結合する」は、本発明のポリペプチド分子が、約０．０００１ｍＭ以下のＫ_ＤでヒトＴＩＧＩＴ、またはヒトＰＤ－１、またはヒトＴＩＧＩＴおよびヒトＰＤ－１に結合することを意味する。別の実施形態では、本発明の結合ポリペプチド分子は、Ｋ_Ｄを有するヒトＴＩＧＩＴに結合し、これは、ポリペプチド分子がヒトＰＤ－１に結合するＫ_Ｄとは異なっている。別の実施形態では、ポリペプチド分子は、それがヒトヒトＰＤ－１に結合するよりも約１０倍強くヒトＴＩＧＩＴに結合する。

一実施形態では、本明細書で使用される「ポリペプチド分子」という用語は、アミノ酸残基のポリマーを含む分子を指す。別の実施形態では、ポリペプチド分子は、アミノ酸残基のポリマーからなる。

一実施形態では、ポリペプチド分子は、ヒトＴＩＧＩＴ、またはヒトＰＤ－１、またはヒトＴＩＧＩＴおよびヒトＰＤ－１に結合するｓｃＦｖ分子である。別の実施形態では、ｓｃＦｖ分子は、ヒトＴＩＧＩＴ、またはヒトＰＤ－１、またはヒトＴＩＧＩＴおよびヒトＰＤ－１に特異的に結合する。ｓｃＦｖ分子は、単一特異性（ヒトＴＩＧＩＴまたはヒトＰＤ－１に結合する）、二重特異性（ヒトＴＩＧＩＴおよびヒトＰＤ－１に結合する）、または多特異性（ヒトＰＤ－１、ヒトＴＩＧＩＴおよび／または別の標的に結合する）であり得る。

一実施形態では、ポリペプチド分子は、ヒトＴＩＧＩＴ、またはヒトＰＤ－１、またはヒトヒトＴＩＧＩＴおよびヒトＰＤ－１に結合する抗体である。別の実施形態では、抗体は、ヒトＴＩＧＩＴ、またはヒトＰＤ－１、またはヒトＴＩＧＩＴおよびヒトＰＤ－１に特異的に結合する。抗体は、単一特異性（ヒトＴＩＧＩＴまたはヒトＰＤ－１に結合する）、二重特異性（ヒトＴＩＧＩＴおよびヒトＰＤ－１に結合する）、または多特異性（ヒトＰＤ－１、ヒトＴＩＧＩＴおよび１つまたは２つの他の標的に結合する）であり得る。

一実施形態では、ポリペプチド分子は、ヒトＴＩＧＩＴ、またはヒトＰＤ－１、またはヒトＴＩＧＩＴおよびヒトＰＤ－１に結合する抗体フラグメントである。別の実施形態では、抗体フラグメントは、ヒトＴＩＧＩＴ、またはヒトＰＤ－１、またはヒトＴＩＧＩＴおよびヒトＰＤ－１に特異的に結合する。抗体フラグメントは、単一特異性（ヒトＴＩＧＩＴまたはヒトＰＤ－１に結合する）、二重特異性（ヒトＴＩＧＩＴおよびヒトＰＤ－１に結合する）、または多特異性（ヒトＰＤ－１、ヒトＴＩＧＩＴ、および１つまたは２つの他の標的に結合する）であり得る。

本明細書で使用される「実質的に純粋な」という用語は、少なくとも５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％汚染物質が含まれていない材料、例えば、本発明のポリペプチド分子を指す。

「ＴＩＧＩＴ」の同義語は、ＷＵＣＡＭ、Ｖｓｔｍ３、およびＶＳＩＧ９である。

「ＣＤ１５５」の同義語は、ポリオウイルス受容体、ＰＶＲ、Ｎｅｃｌ－５、ＮＥＣＬ５、Ｔａｇｅ４、ＨＶＥＤ、およびＰＶＳである。

「ＣＤ１１２」の同義語は、ネクチン細胞接着分子２、ネクチン－２、ＮＥＣＴＩＮ２、ＰＲＲ－２、ＰＶＲＬ２、ＰＶＲＲ２、およびＨＶＥＢである。

「ＣＤ２２６」の同義語は、ＤＮＡＸアクセサリー分子－１、ＤＮＡＭ－１、ＤＮＡＭ１、ＰＴＡ１、およびＴＬｉＳＡ１である。

「治療すること」（または「治療する」または「治療」）という用語は、既存の症状、障害、状態、または疾患の進行または重症度を遅延、妨害、抑制、緩和、停止、低減、または反転させることを指す。

「有効量」という用語は、研究者、医師、または他の臨床医によって求められている組織、系、動物、哺乳動物、またはヒトに対する生物学的もしくは医学的応答または所望の治療効果を誘発する、本発明の抗体を含む本発明のポリペプチド分子または薬学的組成物の量を意味する。ポリペプチド分子の有効量は、個体の病状、年齢、性別、および体重、ならびに個体における所望の応答を誘発するポリペプチド分子の能力などの因子に応じて変動し得る。有効量はまた、抗体の任意の毒性効果または有害効果よりも治療的に有益な効果が上回る量である。

ＨＣＶＲ領域をコードする単離ＤＮＡは、ＨＣＶＲをコードするＤＮＡを、重鎖定常領域をコードする別のＤＮＡ分子に作動可能に連結することによって、完全長重鎖遺伝子に変換され得る。ヒトおよび他の哺乳動物の重鎖定常領域遺伝子の配列は、当該技術分野において既知である。これらの領域を包含するＤＮＡフラグメントは、例えば、標準的なＰＣＲ増幅によって取得され得る。

ＬＣＶＲ領域をコードする単離ＤＮＡ分子は、ＬＣＶＲをコードするＤＮＡを、軽鎖定常領域をコードする別のＤＮＡ分子に作動可能に連結することによって、完全長軽鎖遺伝子に変換され得る。ヒトおよび他の哺乳動物の軽鎖定常領域遺伝子の配列は、当該技術分野において既知である。これらの領域を包含するＤＮＡフラグメントは、標準的なＰＣＲ増幅によって取得され得る。

本明細書で使用される場合、「ＣＤＲ」という用語は、抗体相補性決定領域を指し、「ＨＣＤＲ」という用語は、抗体重鎖ＣＤＲを指し、「ＬＣＤＲ」という用語は、抗体軽鎖ＣＤＲを指す。本発明の目的のために、ＮｏｒｔｈＣＤＲ定義を使用する。ＮｏｒｔｈＣＤＲの定義（Ｎｏｒｔｈｅｔａｌ．，“ＡＮｅｗＣｌｕｓｔｅｒｉｎｇｏｆＡｎｔｉｂｏｄｙＣＤＲＬｏｏｐＣｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ”，ＪｏｕｒｎａｌｏｆＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ，４０６，２２８－２５６（２０１１））は、多数の結晶構造を有する親和性伝搬クラスター化（ａｆｆｉｎｉｔｙｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎｃｌｕｓｔｅｒｉｎｇ）に基づいている。

本明細書で使用される場合、「修飾ヒトＩｇＧ１」という用語は、少なくとも１つのヒトＦｃガンマ受容体へのヒトＩｇＧ１の結合を低減するように操作されたヒトＩｇＧ１を意味する。典型的には、これは、Ｆｃガンマ受容体、例えば、Ｐ３２９Ａ、Ｌ２３４ＡおよびＬ２３５Ａ変異への抗体の結合の低減につながる残基を変異させることによって実施される。

「固形腫瘍」という用語は、血液、リンパ管、または骨髄ではない組織における腫瘍を指す。

インビトロでＴＩＧＩＴ活性をアッセイするための方法は、当業者に知られている（例えば、Ｈｅｅｔａｌ．，ＣａｎｃｅｒＲｅｓ２０１７；７７：６３７５－６３８８、Ｙｕｅｔａｌ．，ＮａｔｕｒｅＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ２００９；１０（１）：４８－５７、Ｊｏｈｎｓｔｏｎｅｔａｌ．，ＣａｎｃｅｒＣｅｌｌ２０１４；２６：９２３－９３７、Ｓｔａｎｉｅｔｓｋｙａ，ｅｔａｌ．，ＰＮＡＳ２００９；１０６（４２）：１７８５８－１７８６３、Ｌｏｚａｎｏｅｔａｌ．，ＪＩｍｍｕｎｏｌ．２０１２；１８８（８）：３８６９－３８７５）。

インビトロでＰＤ－１活性をアッセイするための方法は、当業者に知られている（例えば、Ｃａｒｐｅｎｉｔｏｅｔａｌ．，ＪＩｍｍｕｎｏｔｈｅｒＣａｎｃｅｒ２０１８；６（１）：３１、Ｇｈｏｓｈｅｔａｌ．，ＭｏｌＣａｎｃｅｒＴｈｅｒ．２０１９；１８（３）：６３２－６４１、Ｓｔｅｗａｒｔｅｔａｌ．，ＣａｎｃｅｒＩｍｍｕｎｏｌＲｅｓ．２０１５；３（９）：１０５２－６２、Ｍａｕｔｅｅｔａｌ．，ＰＮＡＳ２０１５；１１２（４７）：Ｅ６５０６－１４）。

固形腫瘍のインビボネズミモデルは、当業者によく知られており、本明細書に示され、開示されており、例えば、ＳａｎｍａｍｅｄＭＦ，ｅｔａｌ．，Ａｎｎ．Ｏｎｃｏｌ．２０１６；２７：１１９０－１１９８、ＭａｎｎｉｎｇＨＣ，ｅｔａｌ．，Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ２０１６；５７（Ｓｕｐｐｌ．１）：６０Ｓ－６８Ｓ；ＴｅｉｃｈＢＡ．ＣａｎｃｅｒＴｈｅｒ．２００６；５：２４３５、ＲｏｎｇｖａｕｘＡ，ｅｔａｌ．，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１３；３１：６３５－７４、ＳｔｙｌｌｉＳＳ，ｅｔａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ２０１５；６１９－２６、ＯｈＴ，ｅｔａｌ．，Ｊ．Ｔｒａｎｓｌ．Ｍｅｄ．２０１４；１２：１０７－１１７、Ｎｅｗｃｏｍｂ，ＥＷ，ｅｔａｌ．，ＲａｄｉａｔｉｏｎＲｅｓ．２０１０；１７３：４２６－４３２、ＳｏｎｇＹ，ｅｔａｌ．，ＰｒｏｃＮａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ２０１３；１１０：１７９３３－８、およびＲｕｔｔｅｒＥＭ，ｅｔａｌ．，ＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃＲｅｐｏｒｔｓ２０１７；７：ＤＯＩ：１０．１０３８／ｓ４１５９８－０１７－０２４６２－０が挙げられる。

本発明のＤＮＡ分子は、本発明の抗体中のポリペプチドのうちの少なくとも１つのアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードする非天然ポリヌクレオチド配列を含む、ＤＮＡ分子である。

本発明のポリヌクレオチドは、配列が発現制御配列に作動可能に連結された後に宿主細胞において発現され得る。発現ベクターは、典型的には、エピソーム、または宿主染色体ＤＮＡの一体化した部分のいずれかとして、宿主生物中で複製可能である。一般的に、発現ベクターは、所望のＤＮＡ配列で形質転換されたそれらの細胞の検出を可能にするために、選択マーカー、例えば、テトラサイクリン、ネオマイシン、およびジヒドロ葉酸レダクターゼを含有する。

関心対象のポリヌクレオチド配列（例えば、ポリペプチド分子のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドおよび発現制御配列）を含む発現ベクターは、宿主細胞のタイプによって異なる既知の方法によって宿主細胞に導入され得る。

本発明のポリペプチド分子は、哺乳類宿主細胞で容易に産生することができ、この非限定的な例には、ＣＨＯ、ＮＳ０、ＨＥＫ２９３、またはＣＯＳ細胞が挙げられる。宿主細胞は、当該技術分野において既知の技術を使用して培養され得る。

タンパク質精製の様々な方法を用いて、本発明の抗体を精製することができ、そのような方法は、当該技術分野において既知であり、例えば、Ｄｅｕｔｓｃｈｅｒ，ＭｅｔｈｏｄｓｉｎＥｎｚｙｍｏｌｏｇｙ１８２：８３－８９（１９９０）、およびＳｃｏｐｅｓ，ＰｒｏｔｅｉｎＰｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ：ＰｒｉｎｃｉｐｌｅｓａｎｄＰｒａｃｔｉｃｅ，３ｒｄＥｄｉｔｉｏｎ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ，ＮＹ（１９９４）に記載される。

本明細書で参照される配列は、表１に列記される配列識別番号に従って番号付けされる。

抗体Ａの発現および精製
本発明の抗体は、本質的に以下のように発現され、精製され得る。最適な所定の重鎖：軽鎖ベクター比率を使用して抗体を分泌するための発現系、または重鎖および軽鎖の両方をコードする単一のベクター系で、ＨＥＫ２９３またはＣＨＯなどの適切な宿主細胞を、一過的にまたは安定的にトランスフェクトする。本発明の抗体Ａは、配列番号２１のアミノ酸配列を有する第１の重鎖、配列番号２２のアミノ酸配列を有する第１の軽鎖、配列番号２３のアミノ酸配列を有する第２の重鎖、および配列番号２４のアミノ酸配列を有する第２の軽鎖をコードする１つ以上のＤＮＡ分子を使用して抗体を分泌するための発現系で一過的にまたは安定的にトランスフェクトされ得る。

抗体は、多くの一般的に使用される技術のうちの１つを使用して精製され得る。例えば、培地は、リン酸緩衝生理食塩水（ｐＨ７．４）のような適合緩衝液で平衡化された、ＭａｂＳｅｌｅｃｔカラム（ＧＥＨｅａｌｔｈｃａｒｅ）、またはＫａｐｐａＳｅｌｅｃｔカラム（ＧＥＨｅａｌｔｈｃａｒｅ）に簡便に適用され得る。カラムは、非特異的結合成分を除去するために洗浄され得る。結合抗体は、例えば、ｐＨ勾配（２０ｍＭのトリス緩衝液（ｐＨ７．０）から１０ｍＭのクエン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ３．０）、またはリン酸緩衝生理食塩水（ｐＨ７．４）から１００ｍＭのグリシン緩衝液（ｐＨ３．０）など）によって溶出され得る。抗体画分は、紫外線吸光度またはＳＤＳ－ＰＡＧＥなどによって検出され得、次いで、プールされてもよい。意図する使用に応じて、さらなる精製は任意である。精製抗体は、一般的な技術を使用して濃縮および／または滅菌濾過され得る。可溶性凝集体および多量体は、サイズ排除、疎水性相互作用、イオン交換、マルチモーダル、またはヒドロキシアパタイトクロマトグラフィーを含む一般的な技術によって効果的に除去され得る。精製抗体は、－７０℃で直ちに凍結され得るか、または凍結乾燥され得る。

抗体Ａは、ヒトＰＤ－１およびヒトＴＩＧＩＴに結合する。
Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）Ｔ２００（ＧＥＨｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）を使用して、３７℃での表面プラズモン共鳴により、可溶性ヒトＰＤ－１細胞外ドメイン（ＥＣＤ）（ＳｉｎｏＢｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ、カタログ番号１０３７７－Ｈ０８Ｈ）およびヒトＴＩＧＩＴ－ＥＣＤへの抗体Ａの結合速度および親和性を測定する。サンプルを、ＨＢＳ－ＥＰ＋（１０ｍＭのＨＥＰＥＳ、１５０ｍＭのＮａＣｌ、０．０５％Ｔｗｅｅｎ－２０、ｐＨ７．６）泳動用緩衝液（Ｔｅｋｎｏｖａカタログ番号Ｈ８０２２）で希釈する。ＰｒｏｔｅｉｎＡＣＭ５Ｓシリーズセンサーチップ（ＧＥＨｅａｌｔｈｃａｒｅ、カタログ番号２９１２７５５５）をＧＥＨｅａｌｔｈｃａｒｅから購入した。

結合を抗体捕捉法によって多サイクル速度論を使用して評価した。各サイクルを、タンパク質Ａチップへの抗体捕捉の場合に１０μＬ／分の流速、ならびに分析物会合および解離の場合に１００μＬ／分の流速で、３７℃で実施した。各サイクルは、以下のステップ：フローセル上の５０ＲＵのＲｍａｘ値を標的とするＨＢＳ－ＥＰ＋への２μｇ／ｍＬでの抗体Ａの注入、ＨＢＳ－ＥＰ＋への分析物の１８０秒間または２００秒間の注入（それぞれ、ＰＤ－１－ＥＣＤ－Ｈｉｓ（ヒトＰＤ１－ＥＣＤ－ｈｉｓ（ＳｉｎｏＢｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ、カタログ番号１０３７７－Ｈ０８Ｈ）およびヒトＴＩＧＩＴ－ＥＣＤ－Ｈｉｓ（配列番号３２）の２倍段階希釈による１０００ｎＭ～１．９５ｎＭの濃度範囲）後に６００秒間の解離相、ならびに１０μＬ／分の流速を利用する、５μＬの１０ｍＭ塩酸グリシン（ｐＨ１．５）を使用した、３０秒間の接触時間にわたる再生からなる。すべての分析物濃度を、単量体分子量（ＭＷ）値を利用して決定した。ヒトＰＤ－１－ＥＣＤの会合速度（ｋ_ｏｎ）および解離速度（ｋ_ｏｆｆ）を、０ｎＭブランク減算に加えてフローセル１の参照減算による二重参照を使用して評価し、ＢＩＡｅｖａｌｕａｔｉｏｎソフトウェアバージョン４．１で「１：１（ラングミュア）結合」モデルに当てはめた。解離定数（Ｋ_Ｄ）を、関係Ｋ_Ｄ＝Ｋ_ｏｆｆ／Ｋ_ｏｎに従って結合速度から算出した。化学量論＝［ＲＵ_ｍａｘ／ＲＵ_捕捉］／［ＭＷ_分析物／ＭＷ_抗体］（式中、ＭＷ_抗体Ａは１５０ｋＤａである。）値を、平均±標準偏差として報告する。

本質的に上記のように実施された実験において、表２の結果は、抗体ＡがヒトＰＤ－１－ＥＣＤ、ヒトＴＩＧＩＴ－ＥＣＤ、カニクイザルＰＤ－１、およびカニクイザルＴＩＧＩＴに結合することを示す。

抗体Ａは細胞ベースのアッセイでヒトＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１活性に拮抗する。
ヒトＰＤ－Ｌ１へのヒトＰＤ－１結合によって媒介される活性に拮抗する抗体Ａの能力を、ＮＦＡＴ－Ｌｕｃレポーターアッセイを使用して試験する。簡潔には、ヒトＰＤ－Ｌ１および人工細胞表面Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）活性化因子を発現するＣＨＯ－Ｋ１細胞（ＰｒｏｍｅｇａＣＳ１８７１０８、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１遮断アッセイ系の一部、伝搬モデルＣＳ１８７１０９）を、抗原提示細胞として使用する。ヒトＴＩＧＩＴを、ヒトＰＤ－１およびＮＦＡＴ－Ｌｕｃ２レポーターを発現するジャーカット細胞（ＧｌｏＲｅｓｐｏｎｓｅＮＦＡＴ－ｌｕｃ２／ＰＤ－１ジャーカット、ＰｒｏｍｅｇａＣＳ１８７１０２、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１遮断アッセイ系の一部、伝搬モデルＣＳ１８７１０９）へのレトロウイルス移入によって導入する。ＣＨＯ－Ｋ１＋ＰＤ－Ｌ１＋ＰＶＲ＋ＴＣＲ活性化因子細胞（７～９継代）をトリプシンで剥離し、１００ｕｌの成長培地中、白色不透明の９６ウェル組織培養プレート（Ｃｏｓｔａｒ３５－３２９６）に４０，０００細胞／ウェルで播種する。ＣＨＯ－Ｋ１＋ＰＤ－Ｌ１＋ＴＣＲ活性化因子成長培地は、１０％限定ＦＢＳ（ＨｙＣｌｏｎｅＳＨ３００７０．０３）を有するハムのＦ－１２培地（ＣｏｒｎｉｎｇＣｅｌｌｇｒｏ１０－０８０－ＣＶ）、２００μｇ／ｍｌのハイグロマイシンＢ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ１０６８７－０１０）、および２５０μｇ／ｍｌのＧ４１８（Ｇｅｎｅｔｉｃｉｎ、Ｃｏｒｎｉｎｇ３０－２３４－ＣＩ）からなる。細胞を、３７℃、５％ＣＯ_２、および９５％ＲＨで一晩成長させる。翌日、表３に示される抗体を、２ｍＭのＬ－グルタミンを有するＲＰＭＩ１６４０および２％限定ＦＢＳ（ＨｙＣｌｏｎｅＳＨ３００７０．０３）を有する１０ｍＭのＨＥＰＥＳ（Ｇｉｂｃｏ２２４００）中、２倍の作業濃度で調製する。

ＰＤ－１、ヒトＴＩＧＩＴ、およびＮＦＡＴ－Ｌｕｃ２レポーターを発現するジャーカット細胞を、２ｍＭのＬ－グルタミンおよび１０ｍＭのＨＥＰＥＳ（Ｇｉｂｃｏ）、１０％限定ＦＢＳ（ＨｙＣｌｏｎｅ）、１００μｇ／ｍｌのハイグロマイシンＢ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）、５００μｇ／ｍｌのＧ４１８（Ｇｅｎｅｔｉｃｉｎ、Ｃｏｒｎｉｎｇ）、および１μｇ／ｍｌのピューロマイシン（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ５４０４１１、滅菌水中）を有するＲＰＭＩ１６４０中で伝搬する。５～７継代の間のＪｕｒｋａｔ細胞を遠心分離し、１．２５×１０^６細胞／ｍＬの濃度でＲＰＭＩ／２％限定ＦＢＳ中に再懸濁する。９６ウェルプレート中のＣＨＯ＋ＰＤ－Ｌ１＋ＰＶＲ＋ＴＣＲ活性化因子細胞の単層から９５μｌの培地を慎重に取り除く。上記で調製した４０μｌの２倍濃度抗体（培地単独対照を含む）を、表３に示すように各処理に対して三連で添加する。次いで、１ウェル当たり４０μｌの再懸濁したジャーカット＋ＰＤ－１＋ＴＩＧＩＴ＋ＮＦＡＴ－Ｌｕｃ２細胞を添加する（５０，０００個の細胞／ウェル）。アッセイプレートを３７℃、５％ＣＯ_２、９５％ＲＨで６時間インキュベートする。インキュベーションの最後に、プレートを室温（ＲＴ）で５～１０分間平衡化する。８０μＬ／ウェルの再構成したＢｉｏ－Ｇｌｏ（商標）ルシフェラーゼ基質（ＰｒｏｍｅｇａＧ７９４０）を添加し、プレートをさらに室温で５～１０分間インキュベートする。プレートを、ＥｎＶｉｓｉｏｎＭａｎａｇｅｒソフトウェアｖ．１．１３．３００９．１４０９、超高感度モード、および０．２秒間の積分時間で、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒＥｎｖｉｓｉｏｎ多重モードリーダーで読み取る。各プレート内で、発光値（相対光単位（ＲＬＵ））を、培地単独で処理した細胞から取得した値に正規化する（誘導倍率＝ＲＬＵ処理／ＲＬＵ培地単独対照）。ＥＣ_５０値を、ＧｒａｐｈＰａｄＰｒｉｓｍ７ソフトウェアを使用して算出する。

本質的に上記のように実施された実験において、表３の結果は、抗体Ａおよび抗ヒトＰＤ－１－ＩｇＧ４－ＰＡＡのＥＣ_５０値がそれぞれ１．８３８ｎＭおよび１．２２６ｎＭであり、抗体Ａが細胞ベースのアッセイでヒトＰＤ－１に結合し、かつヒトＰＤ－１／ヒトＰＤ－Ｌ１結合に拮抗することを示す。

抗体Ａは細胞ベースのアッセイでヒトＴＩＧＩＴに拮抗する。
ヒトＰＤ－１およびＴＩＧＩＴの両方が、活性化された腫瘍浸潤リンパ球中で発現または共発現される。ヒトＴＩＧＩＴ媒介性活性に拮抗する抗体Ａの能力は、ヒトＰＤ－１（９，０００ＰＤ－１受容体／細胞）およびヒトＴＩＧＩＴ（５，５００ＴＩＧＩＴ受容体／細胞）を共発現するように設計されたジャーカットＮＦＡＴ－Ｌｕｃレポーターアッセイで試験される。簡潔には、表４に示される抗体を、ジャーカット＋ヒトＴＩＧＩＴ＋ヒトＰＤ－１＋ＮＦＡＴ－Ｌｕｃ細胞と６時間インキュベートする。Ｂｉｏ－Ｇｌｏルシフェラーゼ基質を添加し、インキュベーションの最後に発光を読み取る。データ（誘導倍率＝ＲＬＵ処理／ＲＬＵ培地単独対照）を、１処理当たり３連のウェルの平均として表４に表す。

本質的に上記のように実施された実験において、表４の結果は、抗体Ａが細胞ベースのアッセイでヒトＴＩＧＩＴに結合し、かつそれに拮抗することを示す。

抗体Ａは細胞ベースのアッセイでＰＤ－１およびＴＩＧＩＴに同時に結合する。
ＰＤ－１およびＴＩＧＩＴ受容体を、それぞれ、ＰｒｏｌｉｎｋおよびＥｎｚｙｍｅＡｃｔｉｖａｔｏｒで標識し、２９３細胞で共発現する。抗体ＡがヒトＰＤ－１およびヒトＴＩＧＩＴ受容体に結合すると、それらの受容体が近接し、基質を加水分解して化学発光シグナルを生成する活性β－ガラクトシダーゼ酵素の再構成を可能にする。

本質的に上記のように実施された実験において、表５の結果は、抗体ＡがヒトＰＤ－１およびヒトＴＩＧＩＴ受容体と同時に物理的に結合することを示す。対照ＩｇＧ１または抗ヒトＴＩＧＩＴおよび抗ヒトＰＤ－１抗体、または抗ヒトＴＩＧＩＴと抗ヒトＰＤ１抗体との組み合わせでは効果は見られない。

抗体Ａは混合白血球中でＴ細胞活性化を誘導する（ＭＬＲ反応）。
抗体ＡのヒトＰＤ－１遮断機能をヒトアロＭＬＲアッセイで調べる。ヒトＰＢＭＣを、凍結（ＡｌｌＣｅｌｌｓ）または血漿交換に供した新鮮な全血（ＩｎｄｉａｎａＢｌｏｏｄＣｅｎｔｅｒ）から取得し、Ｆｉｃｏｌｌ－ＰａｑｕｅＰＬＵＳ（ＧＥＨｅａｌｔｈｃａｒｅ）密度勾配で分離する。ＣＤ１４^＋単球を、ＨｕｍａｎＭｏｎｏｃｙｔｅＩｓｏｌａｔｉｏｎＫｉｔＩＩまたはＣＤ１４Ｍｉｃｒｏｂｅａｄｓ（ＭｉｌｔｅｎｙｉＢｉｏｔｅｃ）およびＡｕｔｏＭＡＣＳＰｒｏ分離機（ＭｉｌｔｅｎｙｉＢｉｏｔｅｃ）を使用して単離する。１，０００ＩＵ／ｍＬのｈＧＭ－ＣＳＦ（Ｒ＆Ｄ、２１５－ＧＭ－０５０、またはＳａｎｏｆｉ、Ｌｅｕｋｉｎｅ、サルグラモスチム、ＮＤＣ００２４－５８４３－０１）および５００ＩＵ／ｍＬのｈＩＬ－４（Ｒ＆Ｄ、２０４－ＩＬ－０５０、または別の供給源）の存在下、１０％ＦＢＳを含有する完全ＲＰＭＩ－１６４０培地中で単球を２日間（表６）培養することによって、未熟樹状細胞（ＤＣ）を生成する。ＣＤ４^＋Ｔ細胞を、ヒトＣＤ４^＋Ｔ細胞単離キット（ＭｉｌｔｅｎｙｉＢｉｏｔｅｃ）を使用して、異なる健康なドナー（ＡｌｌＣｅｌｌｓまたはＩｎｄｉａｎａＢｌｏｏｄＣｅｎｔｅｒ）の新鮮なヒトＰＢＭＣから精製する。次いで、異なるドナー由来の２つのタイプの細胞を、１ウェル当たり５×１０^４～１×１０^５個のＣＤ４^＋Ｔ細胞および５×１０^３個の未熟ＤＣを含有する完全ＡＩＭ－Ｖ培地（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）中、９６ウェルＶ底プレート内で混合する。表６に示される抗体を段階希釈し、１００ｕＬ／ウェルで三連でプレートに添加する。プレートを５％ＣＯ_２中３７℃で４日間インキュベートする。上清を回収し、製造元の指示に従ってヒトＩＦＮ－γ ＥＬＩＳＡ（Ｒ＆ＤＳｙｓｔｅｍｓ、ＳＩＦ５０、またはＤＹ２８５）に供する。抗体を、９つの異なるドナー対にわたって試験する。ＥＣ５０値を、ＧｒａｐｈＰａｄＰｒｉｓｍソフトウェア（ＧｒａｐｈＰａｄＳｏｆｔｗａｒｅ）によって、３つのＴ：ＤＣドナー対からのデータを使用して算出する。

本質的に上記のように実施された実験において、表６の結果は、驚くべきことに、抗体Ａが、ＩｇＧ１対照と比較したＩＦＮγレベルの最大倍率増加によって測定される、抗ＰＤ－１抗体単独または抗ヒトＰＤ－１＋抗ヒトＴＩＧＩＴ組み合わせと比較して増強されたヒトＰＤ－１遮断活性を呈することを示す。

抗体Ａは破傷風リコールアッセイでＴ細胞活性化を誘導する。
破傷風トキソイドレスポンダー由来の凍結ＰＢＭＣを温かい完全ＡＩＭ－Ｖ培地で解凍し、２４時間静置する。静置後、細胞を３０ミクロンのフィルターに通して、大きい破片および凝集体を取り除く。細胞を計数し、完全ＡＩＭ－Ｖ培地中２．５×１０^６細胞／ｍＬに再懸濁し、２００μＬのＵ底９６ウェルプレート中に５×１０^５細胞／ウェルで播種する。表７に示される抗体を２０ｕｇ／ｍｌで添加し、１：３に段階希釈する。細胞を４ｎｇ／ｍＬの破傷風トキソイドで刺激し、３７℃で４８時間インキュベートする。次いで、上清中のＩＦＮγレベルをＭＳＤキット（ＭｅｓｏｓｃａｌｅＤｉｓｃｏｖｅｒｙ）で定量化する。

本質的に上記のように実施された実験において、表表７および表８の結果は、抗体Ａ（表７）、または抗ヒトＰＤ－１＋抗ヒトＴＩＧＩＴ組み合わせ（表８）の添加がＩＦＮγ放出によって測定される用量依存的な様式でＴ細胞活性化を増強することを示す。

抗体ＡはヒトＴ細胞を移植したＨＣＣ８２７ＮＳＧ腫瘍異種移植モデルで抗腫瘍効果を示す。
０日目に、１０×１０^６個のＨＣＣ８２７細胞を０．２ｍＬのマトリゲル溶液中に再懸濁し、ヒトＴ細胞を移植した雌ＮＯＤ／ＳＣＩＤガンマ（ＮＳＧ）マウス（ＪａｃｋｓｏｎＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）の右側腹部に皮下移植する。４０日目に、マウスをｎ＝８で無作為化し、処理群毎に週１回１０ｍｇ／ｋｇで４週間にわたって腹腔内（ｉｐ）投与する。処理群には、対照ＩｇＧ、抗体Ａ、抗ヒトＰＤ－１－ｈＩｇＧ４－ＰＡＡ、抗ヒトＴＩＧＩＴ－ｈＩｇＧ１－ＥＮ、および抗ヒトＰＤ－１－ｈＩｇＧ４－ＰＡＡ＋抗ヒトＴＩＧＩＴ－ｈＩｇＧ１－ＥＮ抗体が含まれる。抗体Ａも１ｍｇ／ｋｇおよび３ｍｇ／ｋｇで４週間にわたって毎週投与する。体重および腫瘍体積を週に２回測定する。腫瘍体積（ｍｍ^３）をπ／６×長さ×幅^２によって算出し、Ｔ／Ｃ％を幾何平均値の１００×ΔＴ／ΔＣ（ΔＴ＞０の場合）によって算出する。統計分析を、ＳＡＳソフトウェアの手順を使用して実施する。

本質的に上記のように実施された実験において、表９の結果は、１ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、または１０ｍｇ／ｋｇで投与した抗体Ａが対照ＩｇＧ処理群と比較してヒトＴ細胞移植マウスの腫瘍増殖を有意に阻害することを示す（それぞれ、ｐ＜０．００１）。驚くべきことに、３つすべての用量で、抗体Ａは、抗ヒトＰＤ－１＋抗ヒトＴＩＧＩＴ組み合わせ処理群と比較して統計的に有意な有効性も示す（それぞれ、ｐ＜０．００１およびｐ＜０．３３４）。

抗体Ａは、ＨＣＣ８２７ＮＳＣＬＣＣＤ３４ＮＳＧ腫瘍異種移植モデルにおいて抗腫瘍効果ならびにＣＤ２２６＋ＣＤ８Ｔ細胞およびＣＤ２２６＋ＮＫ細胞の増加を示す。
０日目に、１０×１０^６個のＨＣＣ８２７を、ＣＤ３４＋造血幹細胞を移植した雌ＮＯＤ／ＳＣＩＤガンマ（ＮＳＧ）マウス（ＪａｃｋｓｏｎＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）の右側腹部に皮下移植する。２１日目に、マウスを１群当たりｎ＝８で無作為化し、処理群毎に週１回１０ｍｇ／ｋｇで４週間にわたって腹腔内（ｉｐ）投与する。処理群には、対照ＩｇＧ、抗体Ａ、抗ヒトＰＤ－１－ｈＩｇＧ４－ＰＡＡ、抗ヒトＴＩＧＩＴ－ｈＩｇＧ１－ＥＮ、および抗ヒトＰＤ－１－ｈＩｇＧ４－ＰＡＡ＋抗ヒトＴＩＧＩＴ－ｈＩｇＧ１－ＥＮ抗体が含まれる。体重および腫瘍体積を週に２回測定する。腫瘍体積（ｍｍ^３）をπ／６×長さ×幅^２によって算出し、Ｔ／Ｃ％を幾何平均値の１００×ΔＴ／ΔＣ（ΔＴ＞０の場合）によって算出する。統計分析を、ＳＡＳソフトウェアのＭＩＸＥＤ手順を使用して実施する。

本質的に上記のように実施された実験において、表１０の結果は、１０ｍｇ／ｋｇで投与した抗体Ａが対照ＩｇＧ処理群と比較してヒトＣＤ３４＋造血幹細胞移植マウスの腫瘍増殖を有意に阻害することを示す（ｐ＜０．００１）。驚くべきことに、抗体Ａは、抗ヒトＰＤ－１＋抗ヒトＴＩＧＩＴ組み合わせ処理群と比較して有意な抗腫瘍効果も示す（それぞれ、ｐ＜０．００１およびｐ＜０．００６）。

研究終了時に、腫瘍を収集し、単一細胞懸濁液中で処理する。腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）を３００ｕｌのＦＡＣＳ緩衝液中の抗体で染色する。フローデータを、ＬＳＲＦｏｒｔｅｓｓａＸ２０を使用して取得し、ＦｌｏｗＪｏ１０を使用して分析する。ＣＤ２２６＋ＣＤ８Ｔ細胞を、各マウスのＴＩＬ中の総ＣＤ８Ｔ細胞数（ＣＤ８＋ＣＤ３＋ＣＤ４５＋生リンパ球）の％として表１１に示す。ＣＤ２２６＋ＮＫ細胞を、各マウスのＴＩＬ中の総ＮＫ細胞数（ＣＤ５６＋ＣＤ３－ＣＤ４５＋生リンパ球）の％として表１１に示す。

本質的に上記のように実施された実験において、表１１および表１２の結果は、抗体Ａで処理したマウスがＣＤ２２６＋ＣＤ８Ｔ細胞およびＣＤ２２６＋ＮＫ細胞のパーセンテージの増加を呈した一方で、抗ヒトＰＤ－１で処理したマウスがＣＤ２２６＋ＮＫ細胞の増加のみを示すことを示す。ＣＤ２２６シグナル伝達が抗腫瘍活性に重要であることが示されているため、抗体Ａで処理した群のＣＤ８細胞集団およびＮＫ細胞集団の両方におけるＣＤ２２６＋細胞の増加は、細胞傷害性の増強の可能性を示す可能性があり、これは本研究で観察された抗体Ａの腫瘍活性に寄与する可能性がある。

最終投与の６日後、抗ヒトＰＤ－１－ｈＩｇＧ４－ＰＡＡ、抗ヒトＴＩＧＩＴ－ｈＩｇＧ１－ＥＮ、および抗体Ａの血清レベルをＥＬＩＳＡで分析する。組換えヒトＰＤ－１－ｈｉｓ（Ｒ＆ＤＳｙｓｔｅｍｓ、カタログ番号８９８６－ＰＤ）および組換えヒトＴＩＧＩＴ－ｈｉｓ（Ｒ＆ＤＳｙｓｔｅｍｓ、カタログ番号９５２５－ＴＧ）を、それぞれ、ＰＤ－１およびＴＩＧＩＴ捕捉ＥＬＩＳＡに使用する。マウス抗ヒトＩｇＧＦｃＨＲＰ（ＳｏｕｔｈｅｒｎＢｉｏｔｅｃｈ／９０４０－０５）を検出に使用する。

本質的に上記のように実施された実験において、表１３の結果は、ヒトＰＤ－１およびヒトＴＩＧＩＴの両方の抗原捕捉ＥＬＩＳＡによって測定された抗体Ａ血清レベルが同等であることを示し、それゆえに、抗体のインビボ安定性を示唆する。

アミノ酸およびヌクレオチド配列
配列番号１（ＴＩＧＩＴＨＣＤＲ１アミノ酸配列）
ＡＡＳＧＦＤＦＳＳＹＧＶＰ
配列番号２（ＴＩＧＩＴＨＣＤＲ２アミノ酸配列）
ＹＩＤＰＩＦＧＰＴＹＹＡＤＥＶＫＧ
配列番号３（ＴＩＧＩＴＨＣＤＲ３アミノ酸配列）
ＡＲＤＹＳＹＧＹＡＹＡＬＤＩ
配列番号４（ＴＩＧＩＴＬＣＤＲ１アミノ酸配列）
ＱＡＳＱＲＩＳＰＹＬＡ
配列番号５（ＴＩＧＩＴＬＣＤＲ２アミノ酸配列）
ＳＲＡＳＫＬＡＳ
配列番号６（ＴＩＧＩＴＬＣＤＲ３アミノ酸配列）
ＱＳＹＹＶＨＴＳＳＧＹＡ
配列番号７（ＰＤ－１ＨＣＤＲ１アミノ酸配列）
ＫＡＳＧＧＴＦＳＳＹＡＩＳ
配列番号８（ＰＤ－１ＨＣＤＲ２アミノ酸配列）
ＬＩＩＰＳＦＤＴＡＧＹＡＱＫＦＱＧ
配列番号９（ＰＤ－１ＨＣＤＲ３アミノ酸配列）
ＡＲＡＥＨＳＳＴＧＴＦＤＹ
配列番号１０（ＰＤ－１ＬＣＤＲ１アミノ酸配列）
ＲＡＳＱＧＩＳＳＷＬＡ
配列番号１１（ＰＤ－１ＬＣＤＲ２アミノ酸配列）
ＳＡＡＳＳＬＱＳ
配列番号１２（ＰＤ－１ＬＣＤＲ３アミノ酸配列）
ＱＱＡＮＨＬＰＦＴ
配列番号１３（ＴＩＧＩＴＨＣＶＲアミノ酸配列）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＤＦＳＳＹＧＶＰＷＶＲＫＡＰＧＫＧＬＥＷＶＧＹＩＤＰＩＦＧＰＴＹＹＡＤＥＶＫＧＲＦＴＩＳＡＤＤＳＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＫＴＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＹＳＹＧＹＡＹＡＬＤＩＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号１４（ＴＩＧＩＴＬＣＶＲアミノ酸配列）
ＲＩＶＭＴＱＴＰＬＳＬＳＶＴＰＧＱＰＡＳＩＳＣＱＡＳＱＲＩＳＰＹＬＡＷＹＬＤＫＰＧＱＰＰＱＬＬＩＳＲＡＳＫＬＡＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＱＳＹＹＶＨＴＳＳＧＹＡＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ
配列番号１５（ＴＩＧＩＴＨＣＣＲアミノ酸配列）
ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＡＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＥＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＡＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＧＤＭＴＫＮＱＶＱＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＡＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
配列番号１６（ＴＩＧＩＴＬＣＣＲアミノ酸配列）
ＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＫＱＬＫＳＧＴＡＲＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
配列番号１７（ＰＤ－１ＨＣＶＲアミノ酸配列）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＧＴＦＳＳＹＡＩＳＷＶＲＹＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＬＩＩＰＳＦＤＴＡＧＹＡＱＫＦＱＧＲＶＡＩＴＶＤＥＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＡＥＨＳＳＴＧＴＦＤＹＷＧＲＧＴＬＶＴＶＳＳ
配列番号１８（ＰＤ－１ＬＣＶＲアミノ酸配列）
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＶＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＳＳＷＬＡＷＹＱＲＫＰＧＤＡＰＫＬＬＩＳＡＡＳＳＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＡＮＨＬＰＦＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ
配列番号１９（ＰＤ－１ＨＣＣＲアミノ酸配列）
ＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＡＴＧＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＡＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＳＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＭＣＬＶＹＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＶＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
配列番号２０（ＰＤ－１ＬＣＣＲアミノ酸配列）
ＧＱＰＫＡＡＰＳＶＴＬＦＰＰＳＳＥＥＬＱＡＮＫＡＴＬＶＣＹＩＳＤＦＹＰＧＡＶＴＶＡＷＫＡＤＳＳＰＶＫＡＧＶＥＴＴＴＰＳＫＱＳＮＮＫＹＡＡＷＳＹＬＳＬＴＰＥＱＷＫＳＨＲＳＹＳＣＱＶＴＨＥＧＳＴＶＥＫＴＶＡＰＴＥＣ
配列番号２１（ＴＩＧＩＴＨＣアミノ酸配列）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＤＦＳＳＹＧＶＰＷＶＲＫＡＰＧＫＧＬＥＷＶＧＹＩＤＰＩＦＧＰＴＹＹＡＤＥＶＫＧＲＦＴＩＳＡＤＤＳＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＫＴＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＹＳＹＧＹＡＹＡＬＤＩＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＡＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＥＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＡＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＧＤＭＴＫＮＱＶＱＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＡＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
配列番号２２（ＴＩＧＩＴＬＣアミノ酸）
ＲＩＶＭＴＱＴＰＬＳＬＳＶＴＰＧＱＰＡＳＩＳＣＱＡＳＱＲＩＳＰＹＬＡＷＹＬＤＫＰＧＱＰＰＱＬＬＩＳＲＡＳＫＬＡＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＱＳＹＹＶＨＴＳＳＧＹＡＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＫＱＬＫＳＧＴＡＲＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ
配列番号２３（ＰＤ－１ＨＣアミノ酸配列）
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＧＴＦＳＳＹＡＩＳＷＶＲＹＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＬＩＩＰＳＦＤＴＡＧＹＡＱＫＦＱＧＲＶＡＩＴＶＤＥＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＡＥＨＳＳＴＧＴＦＤＹＷＧＲＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＡＴＧＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＡＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＳＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＭＣＬＶＹＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＶＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
配列番号２４（ＰＤ－１ＬＣアミノ酸配列）
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＶＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＳＳＷＬＡＷＹＱＲＫＰＧＤＡＰＫＬＬＩＳＡＡＳＳＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＡＮＨＬＰＦＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＧＱＰＫＡＡＰＳＶＴＬＦＰＰＳＳＥＥＬＱＡＮＫＡＴＬＶＣＹＩＳＤＦＹＰＧＡＶＴＶＡＷＫＡＤＳＳＰＶＫＡＧＶＥＴＴＴＰＳＫＱＳＮＮＫＹＡＡＷＳＹＬＳＬＴＰＥＱＷＫＳＨＲＳＹＳＣＱＶＴＨＥＧＳＴＶＥＫＴＶＡＰＴＥＣ
配列番号２５（ＴＩＧＩＴＨＣＤＮＡ配列）
ＡＴＧＧＡＧＡＣＧＧＡＣＡＣＴＣＴＧＣＴＣＣＴＧＴＧＧＧＴＧＣＴＣＣＴＧＣＴＴＴＧＧＧＴＡＣＣＧＧＧＴＴＣＡＡＣＧＧＧＡＧＡＧＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＧＡＧＴＣＴＧＧＧＧＧＡＧＧＣＴＴＧＧＴＣＣＡＧＣＣＴＧＧＡＧＧＧＴＣＣＣＴＧＡＧＡＣＴＣＴＣＣＴＧＴＧＣＴＧＣＴＴＣＴＧＧＡＴＴＣＧＡＣＴＴＣＡＧＴＡＧＴＴＡＴＧＧＡＧＴＧＣＣＣＴＧＧＧＴＣＣＧＣＡＡＧＧＣＴＣＣＡＧＧＧＡＡＧＧＧＧＣＴＧＧＡＧＴＧＧＧＴＴＧＧＣＴＡＣＡＴＴＧＡＴＣＣＴＡＴＴＴＴＴＧＧＴＣＣＣＡＣＡＴＡＣＴＡＣＧＣＡＧＡＣＧＡＧＧＴＧＡＡＧＧＧＣＡＧＡＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＣＡＧＣＴＧＡＴＧＡＴＴＣＡＡＡＧＡＡＣＴＣＡＣＴＧＴＡＴＣＴＧＣＡＡＡＴＧＡＡＣＡＧＣＣＴＧＡＡＡＡＣＣＧＡＧＧＡＣＡＣＧＧＣＣＧＴＧＴＡＴＴＡＣＴＧＴＧＣＧＡＧＡＧＡＣＴＡＴＡＧＴＴＡＴＧＧＴＴＡＴＧＣＴＴＡＴＧＣＴＣＴＣＧＡＣＡＴＣＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＡＡＣＣＣＴＧＧＴＣＡＣＣＧＴＣＴＣＣＴＣＡＧＣＴＡＧＣＡＣＣＡＡＧＧＧＣＣＣＡＴＣＧＧＴＣＴＴＣＣＣＣＣＴＧＧＣＡＣＣＣＴＣＣＴＣＣＡＡＧＡＧＣＡＣＣＴＣＴＧＧＧＧＧＣＡＣＡＧＣＧＧＣＣＣＴＧＧＧＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＧＣＣＧＡＣＴＡＣＴＴＣＣＣＣＧＡＡＣＣＧＧＴＧＡＣＧＧＴＧＴＣＧＴＧＧＡＡＣＴＣＡＧＧＣＧＣＣＣＴＧＡＣＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＡＣＡＣＣＴＴＣＣＣＧＧＣＴＧＴＣＣＴＡＣＡＧＴＣＣＴＣＡＧＧＡＣＴＣＴＡＣＴＣＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＧＴＧＡＣＣＧＴＧＣＣＣＴＣＣＡＧＣＡＧＣＴＴＧＧＧＣＡＣＣＣＡＧＡＣＣＴＡＣＡＴＣＴＧＣＡＡＣＧＴＧＡＡＴＣＡＣＡＡＧＣＣＣＡＧＣＡＡＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＧＡＧＡＧＡＧＴＴＧＡＧＣＣＣＡＡＡＴＣＴＴＧＴＧＡＣＡＡＡＡＣＴＣＡＣＡＣＡＴＧＣＣＣＡＣＣＧＴＧＣＣＣＡＧＣＡＣＣＴＧＡＡＧＣＣＧＣＡＧＧＧＧＧＡＣＣＧＴＣＡＧＴＣＴＴＣＣＴＣＴＴＣＣＣＣＣＣＡＡＡＡＣＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＣＣＴＣＡＴＧＡＴＣＴＣＣＣＧＧＡＣＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＣＡＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＣＧＴＧＡＧＣＣＡＣＧＡＡＧＡＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＡＧＴＴＣＡＡＣＴＧＧＴＡＴＧＴＧＧＡＣＧＧＣＧＴＧＧＡＧＧＴＧＣＡＴＡＡＴＧＣＣＡＡＧＡＣＡＡＡＧＣＣＧＣＧＧＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＡＣＡＡＣＡＧＣＡＣＧＴＡＣＣＧＴＧＴＧＧＴＣＡＧＣＧＴＣＣＴＣＡＣＣＧＴＣＣＴＧＣＡＣＣＡＡＧＡＣＴＧＧＣＴＧＡＡＴＧＧＣＡＡＧＧＡＧＴＡＣＡＡＧＴＧＣＡＡＧＧＴＣＴＣＣＡＡＣＡＡＡＧＣＣＣＴＣＧＣＣＧＣＣＣＣＣＡＴＣＧＡＧＡＡＡＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＡＧＣＣＡＡＡＧＧＧＣＡＧＣＣＣＣＧＡＧＡＡＣＣＡＣＡＧＧＴＧＴＡＣＡＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＡＴＣＣＣＧＧＧＧＧＧＡＣＡＴＧＡＣＣＡＡＧＡＡＣＣＡＡＧＴＣＣＡＧＣＴＧＡＣＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＡＧＧＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＣＧＡＣＡＴＣＧＣＣＧＴＧＧＡＧＴＧＧＧＡＧＡＧＣＡＡＴＧＧＧＣＡＧＣＣＧＧＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＣＣＡＣＧＣＣＴＣＣＣＧＴＧＣＴＧＧＡＣＴＣＣＧＡＣＧＧＣＴＣＣＴＴＣＴＴＣＣＴＣＧＣＴＴＣＣＡＡＧＣＴＣＡＣＣＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＣＡＧＧＴＧＧＣＡＧＣＡＧＧＧＧＡＡＣＧＴＣＴＴＣＴＣＡＴＧＣＴＣＣＧＴＧＡＴＧＣＡＴＧＡＧＧＣＴＣＴＧＣＡＣＡＡＣＣＡＣＴＡＣＡＣＧＣＡＧＡＡＧＡＧＣＣＴＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＣＣＧＧＧＣＡＡＡ
配列番号２６（ＴＩＧＩＴＬＣＤＮＡ配列）
ＡＴＧＧＡＡＡＣＴＧＡＣＡＣＣＣＴＧＣＴＧＣＴＣＴＧＧＧＴＡＣＴＧＣＴＣＣＴＴＴＧＧＧＴＴＣＣＴＧＧＧＡＧＣＡＣＡＧＧＣＣＧＧＡＴＴＧＴＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＡＣＴＣＣＡＣＴＣＴＣＴＣＴＧＴＣＣＧＴＣＡＣＣＣＣＴＧＧＡＣＡＧＣＣＧＧＣＣＴＣＣＡＴＣＴＣＣＴＧＣＣＡＧＧＣＣＡＧＴＣＡＧＡＧＡＡＴＴＡＧＴＣＣＣＴＡＣＴＴＡＧＣＣＴＧＧＴＡＣＣＴＧＧＡＣＡＡＧＣＣＡＧＧＣＣＡＧＣＣＴＣＣＡＣＡＧＣＴＣＣＴＧＡＴＣＴＣＣＣＧＧＧＣＡＴＣＣＡＡＡＣＴＧＧＣＡＴＣＴＧＧＡＧＴＧＣＣＡＧＡＴＡＧＧＴＴＣＡＧＴＧＧＣＡＧＣＧＧＧＴＣＡＧＧＧＡＣＡＧＡＴＴＴＣＡＣＡＣＴＧＡＡＡＡＴＣＡＧＣＣＧＧＧＴＧＧＡＧＧＣＴＧＡＧＧＡＴＧＴＴＧＧＧＧＴＴＴＡＴＴＡＣＴＧＣＣＡＡＡＧＴＴＡＴＴＡＴＧＴＴＣＡＣＡＣＴＡＧＴＡＧＴＧＧＴＴＡＴＧＣＴＴＴＣＧＧＣＧＧＡＧＧＧＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＧＡＴＣＡＡＡＣＧＧＡＣＣＧＴＧＧＣＴＧＣＡＣＣＡＴＣＴＧＴＣＴＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣＧＣＣＡＴＣＴＧＡＴＡＡＧＣＡＧＴＴＧＡＡＡＴＣＴＧＧＡＡＣＴＧＣＣＡＧＡＧＴＴＧＴＧＴＧＣＣＴＧＣＴＧＡＡＴＡＡＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＡＧＡＧＧＣＣＡＡＡＧＴＡＣＡＧＴＧＧＡＡＧＧＴＧＧＡＴＡＡＣＧＣＣＣＴＣＣＡＡＴＣＧＧＧＴＡＡＣＴＣＣＣＡＧＧＡＧＡＧＴＧＴＣＡＣＡＧＡＧＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＧＧＡＣＡＧＣＡＣＣＴＡＣＡＧＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＡＣＣＣＴＧＡＣＧＣＴＧＡＧＣＡＡＡＧＣＡＧＡＣＴＡＣＧＡＧＡＡＡＣＡＣＡＡＡＧＴＣＴＡＣＧＣＣＴＧＣＧＡＡＧＴＣＡＣＴＣＡＴＣＡＧＧＧＣＣＴＧＡＧＣＴＣＧＣＣＣＧＴＣＡＣＡＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＣＡＧＧＧＧＡＧＡＧＴＧＣ
配列番号２７（ＰＤ－１ＨＣＤＮＡ配列）
ＡＴＧＧＡＡＡＣＣＧＡＴＡＣＧＣＴＣＣＴＧＣＴＧＴＧＧＧＴＴＣＴＣＣＴＣＴＴＧＴＧＧＧＴＣＣＣＣＧＧＣＴＣＴＡＣＣＧＧＧＣＡＧＧＴＣＣＡＧＣＴＣＧＴＧＣＡＧＡＧＴＧＧＣＧＣＣＧＡＧＧＴＣＡＡＡＡＡＡＣＣＣＧＧＴＴＣＡＡＧＣＧＴＧＡＡＧＧＴＧＴＣＴＴＧＴＡＡＡＧＣＡＴＣＴＧＧＡＧＧＡＡＣＣＴＴＴＡＧＴＴＣＣＴＡＣＧＣＣＡＴＴＡＧＴＴＧＧＧＴＧＡＧＧＴＡＣＧＣＴＣＣＣＧＧＣＣＡＧＧＧＣＴＴＧＧＡＡＴＧＧＡＴＧＧＧＴＴＴＧＡＴＴＡＴＴＣＣＣＡＧＣＴＴＴＧＡＴＡＣＡＧＣＴＧＧＡＴＡＣＧＣＧＣＡＧＡＡＧＴＴＣＣＡＧＧＧＡＣＧＣＧＴＧＧＣＣＡＴＣＡＣＣＧＴＧＧＡＴＧＡＡＡＧＣＡＣＴＴＣＡＡＣＴＧＣＣＴＡＣＡＴＧＧＡＡＣＴＧＴＣＡＴＣＣＴＴＧＡＧＡＡＧＣＧＡＧＧＡＴＡＣＴＧＣＴＧＴＴＴＡＣＴＡＣＴＧＣＧＣＴＡＧＧＧＣＡＧＡＧＣＡＣＴＣＣＴＣＣＡＣＣＧＧＧＡＣＣＴＴＣＧＡＣＴＡＴＴＧＧＧＧＴＣＧＡＧＧＴＡＣＴＣＴＣＧＴＧＡＣＣＧＴＧＡＧＣＡＧＣＧＣＴＡＧＣＡＣＣＡＡＧＧＧＣＣＣＡＴＣＧＧＴＣＴＴＣＣＣＣＣＴＧＧＣＡＣＣＣＴＣＣＴＣＣＡＡＧＡＧＣＡＣＣＴＣＴＧＧＧＧＧＣＡＣＡＧＣＧＧＣＣＣＴＧＧＧＣＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＡＣＴＡＣＴＴＣＣＣＣＧＡＡＣＣＧＧＴＧＡＣＧＧＴＧＴＣＧＴＧＧＡＡＣＴＣＡＧＧＣＧＣＣＣＴＧＡＣＣＡＧＣＧＧＣＧＴＧＧＣＣＡＣＣＧＧＣＣＣＧＧＣＴＧＴＣＣＴＡＣＡＧＴＣＣＴＣＡＧＧＡＣＴＣＴＡＣＴＣＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＧＴＧＡＣＣＧＴＧＣＣＣＴＣＣＡＧＣＡＧＣＴＴＧＧＧＣＡＣＣＣＡＧＡＣＣＴＡＣＡＴＣＴＧＣＡＡＣＧＴＧＡＡＴＣＡＣＡＡＧＣＣＣＡＧＣＡＡＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＡＧＴＴＧＡＧＣＣＣＡＡＡＴＣＴＴＧＴＧＡＣＡＡＡＡＣＴＣＡＣＡＣＡＴＧＣＣＣＡＣＣＧＴＧＣＣＣＡＧＣＡＣＣＴＧＡＡＧＣＣＧＣＡＧＧＧＧＧＡＣＣＧＴＣＡＧＴＣＴＴＣＣＴＣＴＴＣＣＣＣＣＣＡＡＡＡＣＣＣＡＡＧＧＡＣＡＣＣＣＴＣＡＴＧＡＴＣＴＣＣＣＧＧＡＣＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＣＡＴＧＣＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＣＧＴＧＡＧＣＣＡＣＧＡＡＧＡＣＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＡＧＴＴＣＡＡＣＴＧＧＴＡＴＧＴＧＧＡＣＧＧＣＧＴＧＧＡＧＧＴＧＣＡＴＡＡＴＧＣＣＡＡＧＡＣＡＡＡＧＣＣＧＣＧＧＧＡＧＧＡＧＣＡＧＴＡＣＡＡＣＡＧＣＡＣＧＴＡＣＣＧＴＧＴＧＧＴＣＡＧＣＧＴＣＣＴＣＡＣＣＧＴＣＣＴＧＣＡＣＣＡＡＧＡＣＴＧＧＣＴＧＡＡＴＧＧＣＡＡＧＧＡＧＴＡＣＡＡＧＴＧＣＡＡＧＧＴＣＴＣＣＡＡＣＡＡＡＧＣＣＣＴＣＧＣＣＧＣＣＣＣＣＡＴＣＧＡＧＡＡＡＡＣＣＡＴＣＴＣＣＡＡＡＧＣＣＡＡＡＧＧＧＣＡＧＣＣＣＣＧＡＧＡＡＣＣＡＣＡＧＧＴＧＴＣＣＡＣＣＣＴＧＣＣＣＣＣＡＴＣＣＣＧＧＧＡＧＧＡＧＡＴＧＡＣＣＡＡＧＡＡＣＣＡＡＧＴＣＡＧＣＣＴＧＡＴＧＴＧＣＣＴＧＧＴＣＴＡＴＧＧＣＴＴＣＴＡＴＣＣＣＡＧＣＧＡＣＡＴＣＧＣＣＧＴＧＧＡＧＴＧＧＧＡＧＡＧＣＡＡＴＧＧＧＣＡＧＣＣＧＧＡＧＡＡＣＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＣＣＡＣＧＣＣＴＣＣＣＧＴＧＣＴＧＧＡＣＴＣＣＧＡＣＧＧＣＴＣＣＴＴＣＴＴＣＣＴＣＴＡＴＴＣＣＧＴＧＣＴＣＡＣＣＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＧＣＡＧＧＴＧＧＣＡＧＣＡＧＧＧＧＡＡＣＧＴＣＴＴＣＴＣＡＴＧＣＴＣＣＧＴＧＡＴＧＣＡＴＧＡＧＧＣＴＣＴＧＣＡＣＡＡＣＣＡＣＴＡＣＡＣＧＣＡＧＡＡＧＡＧＣＣＴＣＴＣＣＣＴＧＴＣＴＣＣＧＧＧＣＡＡＡ
配列番号２８（ＰＤ－１ＬＣＤＮＡ配列）
ＡＴＧＧＡＧＡＣＡＧＡＣＡＣＡＣＴＣＣＴＧＣＴＡＴＧＧＧＴＡＣＴＧＣＴＧＣＴＣＴＧＧＧＴＴＣＣＡＧＧＡＴＣＣＡＣＴＧＧＴＧＡＣＡＴＣＣＡＧＡＴＧＡＣＡＣＡＧＴＣＡＣＣＴＴＣＡＡＧＣＧＴＣＴＣＣＧＣＣＴＣＣＧＴＧＧＧＡＧＡＣＡＧＧＧＴＴＡＣＴＡＴＴＡＣＡＴＧＴＡＧＧＧＣＣＡＧＣＣＡＧＧＧＧＡＴＣＴＣＴＴＣＡＴＧＧＣＴＧＧＣＧＴＧＧＴＡＣＣＡＡＣＧＧＡＡＧＣＣＡＧＧＣＧＡＣＧＣＣＣＣＣＡＡＧＣＴＣＣＴＴＡＴＣＴＣＣＧＣＴＧＣＣＴＣＣＴＣＴＣＴＧＣＡＧＴＣＣＧＧＡＧＴＴＣＣＣＴＣＣＣＧＣＴＴＣＡＧＣＧＧＴＡＧＣＧＧＧＴＣＡＧＧＣＡＣＴＧＡＣＴＴＣＡＣＣＣＴＴＡＣＡＡＴＣＴＣＴＴＣＴＣＴＧＣＡＡＣＣＴＧＡＧＧＡＣＴＴＣＧＣＣＡＣＡＴＡＴＴＡＴＴＧＣＣＡＧＣＡＧＧＣＡＡＡＣＣＡＴＴＴＧＣＣＡＴＴＴＡＣＴＴＴＴＧＧＣＧＧＡＧＧＴＡＣＴＡＡＧＧＴＴＧＡＧＡＴＴＡＡＡＧＧＣＣＡＧＣＣＴＡＡＡＧＣＴＧＣＣＣＣＴＡＧＣＧＴＴＡＣＣＣＴＴＴＴＣＣＣＡＣＣＧＡＧＣＴＣＣＧＡＧＧＡＧＣＴＧＣＡＧＧＣＣＡＡＴＡＡＡＧＣＡＡＣＣＴＴＧＧＴＣＴＧＣＴＡＣＡＴＡＴＣＡＧＡＴＴＴＴＴＡＣＣＣＴＧＧＣＧＣＣＧＴＧＡＣＣＧＴＡＧＣＡＴＧＧＡＡＡＧＣＴＧＡＴＴＣＡＴＣＣＣＣＴＧＴＧＡＡＧＧＣＣＧＧＴＧＴＴＧＡＡＡＣＴＡＣＡＡＣＣＣＣＴＴＣＣＡＡＡＣＡＡＴＣＴＡＡＣＡＡＴＡＡＡＴＡＣＧＣＧＧＣＡＴＧＧＴＣＣＴＡＣＣＴＧＴＣＣＴＴＧＡＣＡＣＣＣＧＡＧＣＡＧＴＧＧＡＡＡＴＣＴＣＡＣＡＧＡＴＣＴＴＡＣＡＧＣＴＧＣＣＡＧＧＴＣＡＣＣＣＡＣＧＡＧＧＧＧＡＧＣＡＣＴＧＴＧＧＡＧＡＡＧＡＣＣＧＴＣＧＣＧＣＣＣＡＣＴＧＡＧＴＧＣ
配列番号２９（ヒトＰＤ－１アミノ酸配列）
ＭＱＩＰＱＡＰＷＰＶＶＷＡＶＬＱＬＧＷＲＰＧＷＦＬＤＳＰＤＲＰＷＮＰＰＴＦＳＰＡＬＬＶＶＴＥＧＤＮＡＴＦＴＣＳＦＳＮＴＳＥＳＦＶＬＮＷＹＲＭＳＰＳＮＱＴＤＫＬＡＡＦＰＥＤＲＳＱＰＧＱＤＣＲＦＲＶＴＱＬＰＮＧＲＤＦＨＭＳＶＶＲＡＲＲＮＤＳＧＴＹＬＣＧＡＩＳＬＡＰＫＡＱＩＫＥＳＬＲＡＥＬＲＶＴＥＲＲＡＥＶＰＴＡＨＰＳＰＳＰＲＰＡＧＱＦＱＴＬＶＶＧＶＶＧＧＬＬＧＳＬＶＬＬＶＷＶＬＡＶＩＣＳＲＡＡＲＧＴＩＧＡＲＲＴＧＱＰＬＫＥＤＰＳＡＶＰＶＦＳＶＤＹＧＥＬＤＦＱＷＲＥＫＴＰＥＰＰＶＰＣＶＰＥＱＴＥＹＡＴＩＶＦＰＳＧＭＧＴＳＳＰＡＲＲＧＳＡＤＧＰＲＳＡＱＰＬＲＰＥＤＧＨＣＳＷＰＬ
配列番号３０（ヒトＰＤ－１ＥＣＤ－Ｈｉｓアミノ酸配列）
ＬＤＳＰＤＲＰＷＮＰＰＴＦＳＰＡＬＬＶＶＴＥＧＤＮＡＴＦＴＣＳＦＳＮＴＳＥＳＦＶＬＮＷＹＲＭＳＰＳＮＱＴＤＫＬＡＡＦＰＥＤＲＳＱＰＧＱＤＣＲＦＲＶＴＱＬＰＮＧＲＤＦＨＭＳＶＶＲＡＲＲＮＤＳＧＴＹＬＣＧＡＩＳＬＡＰＫＡＱＩＫＥＳＬＲＡＥＬＲＶＴＥＲＲＡＥＶＰＴＡＨＰＳＰＳＰＲＰＡＧＱＦＱＨＨＨＨＨＨ
配列番号３１（ヒトＴＩＧＩＴアミノ酸配列）
ＭＲＷＣＬＬＬＩＷＡＱＧＬＲＱＡＰＬＡＳＧＭＭＴＧＴＩＥＴＴＧＮＩＳＡＥＫＧＧＳＩＩＬＱＣＨＬＳＳＴＴＡＱＶＴＱＶＮＷＥＱＱＤＱＬＬＡＩＣＮＡＤＬＧＷＨＩＳＰＳＦＫＤＲＶＡＰＧＰＧＬＧＬＴＬＱＳＬＴＶＮＤＴＧＥＹＦＣＩＹＨＴＹＰＤＧＴＹＴＧＲＩＦＬＥＶＬＥＳＳＶＡＥＨＧＡＲＦＱＩＰＬＬＧＡＭＡＡＴＬＶＶＩＣＴＡＶＩＶＶＶＡＬＴＲＫＫＫＡＬＲＩＨＳＶＥＧＤＬＲＲＫＳＡＧＱＥＥＷＳＰＳＡＰＳＰＰＧＳＣＶＱＡＥＡＡＰＡＧＬＣＧＥＱＲＧＥＤＣＡＥＬＨＤＹＦＮＶＬＳＹＲＳＬＧＮＣＳＦＦＴＥＴＧ
配列番号３２（ヒトＴＩＧＩＴＥＣＤ－Ｈｉｓアミノ酸配列）
ＨＨＨＨＨＨＧＧＧＧＳＭＭＴＧＴＩＥＴＴＧＮＩＳＡＥＫＧＧＳＩＩＬＱＣＨＬＳＳＴＴＡＱＶＴＱＶＮＷＥＱＱＤＱＬＬＡＩＣＮＡＤＬＧＷＨＩＳＰＳＦＫＤＲＶＡＰＧＰＧＬＧＬＴＬＱＳＬＴＶＮＤＴＧＥＹＦＣＩＹＨＴＹＰＤＧＴＹＴＧＲＩＦＬＥＶＬＥＳＳＶＡＥＨＧＡＲＦＱＩＰＧＧＧＧＳＨＨＨＨＨＨ

Claims

ヒトＴＩＧＩＴ（配列番号３１）及びヒトＰＤ－１（配列番号２９）に結合する、ポリペプチド分子であって、前記ポリペプチド分子が、
ａ）配列番号１３のアミノ酸配列を有する第１の重鎖可変領域と、
ｂ）配列番号１４のアミノ酸配列を有する第１の軽鎖可変領域と、
ｃ）配列番号１７のアミノ酸配列を有する第２の重鎖可変領域と、
ｄ）配列番号１８のアミノ酸配列を有する第２の軽鎖可変領域と、を含むポリペプチド分子。
前記ポリペプチド分子が、
ａ）配列番号２１のアミノ酸配列を有する第１の重鎖と、
ｂ）配列番号２２のアミノ酸配列を有する第１の軽鎖と、
ｃ）配列番号２３のアミノ酸配列を有する第２の重鎖と、
ｄ）配列番号２４のアミノ酸配列を有する第２の軽鎖と、を含む、抗体である、請求項１に記載のポリペプチド分子。
請求項１または２に記載のポリペプチド分子を発現することができる、哺乳動物細胞。
ポリペプチド分子を産生するためのプロセスであって、請求項３に記載の哺乳動物細胞を培養することと、請求項１または２に記載のポリペプチド分子を回収することと、を含む、プロセス。
請求項４に記載の方法によって産生される、ポリペプチド分子。
請求項１、２または５のいずれか一項に記載のポリペプチド分子と、許容される担体、希釈剤、または賦形剤と、を含む、医薬組成物。
請求項１、２または５のいずれか一項に記載のポリペプチド分子を含有する、固形腫瘍がんの治療剤。
前記固形腫瘍がんが、肺がん、乳がん、頭頸部がん、黒色腫、肝臓がん、結腸直腸がん、膵臓がん、胃がん、腎臓がん、前立腺がん、卵巣がん、子宮内膜がん、または肝細胞がんである、請求項７に記載の治療剤。
前記肺がんが、非小細胞肺がんである、請求項８に記載の治療剤。
前記肺がんが、小細胞肺がんである、請求項８に記載の治療剤。
前記乳がんが、トリプルネガティブ乳がんである、請求項８に記載の治療剤。
前記ポリペプチド分子が、電離放射線との同時の、別個の、または連続的な組み合わせで投与される、請求項７～１１のいずれか一項に記載の治療剤。
前記ポリペプチド分子が、１つ以上の化学療法剤との同時の、別個の、または連続的な組み合わせで投与される、請求項７～１２のいずれか一項に記載の治療剤。
固形腫瘍がんを治療するための医薬品の製造における、請求項１、２または５のいずれか一項に記載のポリペプチド分子の使用。
前記がんが、肺がん、乳がん、頭頸部がん、黒色腫、肝臓がん、結腸直腸がん、膵臓がん、胃がん、腎臓がん、前立腺がん、卵巣がん、子宮内膜がん、または肝細胞がんである、請求項１４に記載の使用。
前記肺がんが、非小細胞肺がんである、請求項１５に記載の使用。
前記肺がんが、小細胞肺がんである、請求項１５に記載の使用。
前記乳がんが、トリプルネガティブ乳がんである、請求項１５に記載の使用。
前記ポリペプチド分子が、電離放射線との同時の、別個の、または連続的な組み合わせで投与される、請求項１４～１８のいずれか一項に記載の使用。
前記ポリペプチド分子が、１つ以上の化学療法剤との同時の、別個の、または連続的な組み合わせで投与される、請求項１４～１９のいずれか一項に記載の使用。