TW202031257A - 乳酸菌的代謝產物及其用於護肺的用途 - Google Patents

乳酸菌的代謝產物及其用於護肺的用途 Download PDF

Info

Publication number
TW202031257A
TW202031257A TW108106353A TW108106353A TW202031257A TW 202031257 A TW202031257 A TW 202031257A TW 108106353 A TW108106353 A TW 108106353A TW 108106353 A TW108106353 A TW 108106353A TW 202031257 A TW202031257 A TW 202031257A
Authority
TW
Taiwan
Prior art keywords
lactic acid
acid bacteria
carboline
tetrahydro
metabolite
Prior art date
Application number
TW108106353A
Other languages
English (en)
Other versions
TWI692359B (zh
Inventor
林詠翔
Original Assignee
大江生醫股份有限公司
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 大江生醫股份有限公司 filed Critical 大江生醫股份有限公司
Priority to TW108106353A priority Critical patent/TWI692359B/zh
Priority to CN201910361199.3A priority patent/CN111603467A/zh
Application granted granted Critical
Publication of TWI692359B publication Critical patent/TWI692359B/zh
Publication of TW202031257A publication Critical patent/TW202031257A/zh

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/4353—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
    • A61K31/437—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems the heterocyclic ring system containing a five-membered ring having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. indolizine, beta-carboline
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D471/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00
    • C07D471/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D471/04—Ortho-condensed systems

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本發明提供一種乳酸菌的代謝產物及其用於護肺的用途。

Description

乳酸菌的代謝產物及其用於護肺的用途
本發明是有關於一種乳酸菌的代謝產物及其用於護肺的用途。
肺損傷，主要指肺組織的損傷，包括：胸部嚴重外傷、吸入對肺有害的物質(例如有毒氣體、胃內容物及海水)、嚴重的肺部感染等各種致傷因素所造成的肺組織損傷，導致肺臟結構完整性的破壞或功能障礙。
此外，近年來空氣汙染越來越嚴重，當天空霧茫茫的時候，常常就是空氣中含有大量粉塵的時候，粉塵可分為大顆粒及極細微顆粒等不同級別，當吸入粉塵時會有兩種結果，大的可以隨著咳痰而被帶出體外。而極細懸浮微粒PM2.5就是過敏原的一種，只是這種過敏原比花粉塵蟎更小，會被呼吸道吞噬細胞所吞噬，在呼吸道沉積下來藉由身體的循環分布到全身，也就是說細小的PM2.5的粉塵要藉由身體排出來，幾乎不可能。PM2.5可以穿過肺泡，帶著毒素循環全身，到處刺激血管壁，容易產生血栓，增加心肺疾病死亡的風險，當身體循環出現氣血瘀滯，連帶著也有可能造成腦部的血管病變引起失智症。因此，本領域的研究人員開始積極研發可以護肺的醫藥品，保護人體健康需求。
然而，目前所使用的護肺醫藥品大多由化學成分所製成，長期使用不但對人體健康有害無益，且這些產品往往價格昂貴，並非為一般使用者所能負擔。為了解決上述問題，本領域的技術人員亟需研發出具有護肺功效之新穎醫藥品以造福有此需求的廣大族群。
有鑑於此，本發明之目的為提供一種乳酸菌的代謝產物，包含一選自於由下列所組成之群組中的化合物：1,2,3,4-四氫-β-咔啉-3-甲酸(1,2,3,4-tetrahydro-β-carboline-3-carboxylic acid)、酒渣鹼(flazin)，及其任意組合。
在本發明的一實施例中，該乳酸菌是瑞士乳酸菌(Lactobacillus helveticus)，其寄存編號係BCRC910846。
本發明之另一目的為提供一種乳酸菌的代謝產物用於製備一護肺之醫藥品的用途，其中該乳酸菌的代謝產物是藉由一包含下列步驟之方法而製得：以一培養基對該乳酸菌進行培養而得到一乳酸菌的培養物，然後對該乳酸菌的培養物進行離心並收集上清液而得到該乳酸菌的代謝產物。
在本發明的一實施例中，該乳酸菌是瑞士乳酸菌(Lactobacillus helveticus)，其寄存編號係BCRC910846。
在本發明的一實施例中，該乳酸菌的代謝產物包含由該乳酸菌的代謝產物以一溶劑萃取而得之萃取物，該溶劑係為水、乙酸乙酯、或正丁醇。
在本發明的一實施例中，該乳酸菌的代謝產物包含一乳酸菌的正丁醇層萃取物。
在本發明的一實施例中，該乳酸菌的代謝產物包含一選自於由下列所組成之群組中的化合物：1,2,3,4-四氫-β-咔啉-3-甲酸(1,2,3,4-tetrahydro-β-carboline-3-carboxylic acid)、酒渣鹼(flazin)，及其任意組合。
在本發明的一實施例中，該1,2,3,4-四氫-β-咔啉-3-甲酸(1,2,3,4-tetrahydro-β-carboline-3-carboxylic acid)、該酒渣鹼(flazin)或其任意組合是由該乳酸菌的正丁醇層萃取物分離純化而得。
在本發明的一實施例中，該護肺是治療肺上皮細胞損傷。
本發明之另一目的為提供一種醫藥組成物用於製備一護肺之醫藥品的用途，其中該醫藥組成物包含一有效劑量之1,2,3,4-四氫-β-咔啉-3-甲酸(1,2,3,4-tetrahydro-β-carboline-3-carboxylic acid)、酒渣鹼(flazin)，或其任意組合，以及一醫藥上可接受的載劑。
在本發明的一實施例中，該1,2,3,4-四氫-β-咔啉-3-甲酸(1,2,3,4-tetrahydro-β-carboline-3-carboxylic acid)或該酒渣鹼(flazin)是由一乳酸菌的代謝產物分離純化而得。
在本發明的一實施例中，該乳酸菌是瑞士乳酸菌(Lactobacillus helveticus)，其寄存編號係BCRC910846。
在本發明的一實施例中，該乳酸菌的代謝產物包含一乳酸菌的正丁醇層萃取物，該1,2,3,4-四氫-β-咔啉-3-甲酸(1,2,3,4-tetrahydro-β-carboline-3-carboxylic acid)或該酒渣鹼(flazin)是由該乳酸菌的正丁醇層萃取物分離純化而得。
在本發明的一實施例中，該護肺是治療肺上皮細胞損傷。
綜上所述，本發明乳酸菌的代謝產物之功效在於：可藉由治療肺上皮細胞損傷達到護肺之功效。
以下將進一步說明本發明的實施方式，下述所列舉的實施例係用以闡明本發明，並非用以限定本發明之範圍，任何熟習此技藝者，在不脫離本發明之精神和範圍內，當可做些許更動與潤飾，因此本發明之保護範圍當視後附之申請專利範圍所界定者為準。
圖1是本發明乳酸菌的代謝產物在護肺上的功效之數據圖，其中“**”表示與對照組比較，p<0.01；“***”表示與對照組比較，p<0.001。
圖2是化合物TCI-TCI357-01的核磁共振氫光譜圖。
圖3是化合物TCI-TCI357-01的核磁共振碳光譜圖。
圖4是化合物TCI-TCI357-01的關聯性磁振頻譜圖。
圖5是化合物TCI-TCI357-01的異核單量子相關光譜圖。
圖6是化合物TCI-TCI357-01的異核多重鍵相關光譜圖。
圖7是化合物TCI-TCI357-01的質譜圖。
圖8是化合物TCI-TCI357-02的質譜圖。
圖9是化合物TCI-TCI357-02的核磁共振氫光譜圖。
圖10是化合物TCI-TCI357-02的核磁共振碳光譜圖。
圖11是化合物TCI-TCI357-02的關聯性磁振頻譜圖。
圖12是化合物TCI-TCI357-02的異核單量子相關光譜圖。
圖13是化合物TCI-TCI357-02的異核多重鍵相關光譜圖。
圖14是乳酸菌的正丁醇層萃取物(下半部)與培養基空白液之正丁醇層萃取物(上半部)的HPLC指紋圖譜。
圖15是本發明乳酸菌的代謝化合物在護肺上的功效之數據圖，其中“**”表示與對照組比較，p<0.01。
定義
本文中所使用數值為近似值，所有實驗數據皆表示在20%的範圍內，較佳為在10%的範圍內，最佳為在5%的範圍內。
使用Excel軟體進行統計分析。數據以平均值±標準差(SD)表示，個此之間的差異以學生t檢驗(student's t-test)分析。
益生菌株(probiotic或probiotic bacteria)係為一微生物，其菌體、混合菌株、萃取物或代謝產物對於宿主本身係具有正面影響，通常源自於人體內、有益於腸道健康的活菌，亦可指外來補充、對身體可能有益的某些微生物，其中該益生菌株的代謝產物係為該益生菌株之分泌物，包含培養該菌的培養液。
依據本發明，以管柱層析法(Column chromatography)及薄層層析法(Thin layer chromatography,TLC)自本發明之瑞士乳酸桿菌TCI357之代謝產物的正丁醇萃取物中，所純化出之二種化合物，將於本文分別命名為TCI-TCI357-01及TCI-TCI357-02。
依據本發明，1,2,3,4-四氫-β-咔啉-3-甲酸(1,2,3,4-tetrahydro-β-carboline-3-carboxylic acid)，本文代號為TCI-TCI357-01，具有下列化學式(I)：
Figure 108106353-A0101-12-0005-3
依據本發明，酒渣鹼(flazin)，本文代號為TCI-TCI357-02，具有下列化學式(II)：
Figure 108106353-A0101-12-0005-2
如本文中所使用的，用語“培育(cultivation)”以及“培養(culturing)”可交換地使用。
如本文中所使用的，用語“代謝產物(metabolite)”意指由本發明的乳酸菌所包含的萃取物及所產生的化合物及醫藥上可接受之形式的化合物之代謝衍生物。
依據本發明，瑞士乳酸菌(Lactobacillus helveticus)是革蘭氏陽性細菌中的一種，為益生菌，其呈長桿狀，無鞭毛，無芽孢，菌落圓形，乳白色，邊緣整齊，兼性厭氧。
如本文中所使用的，用語「瑞士乳酸菌(Lactobacillus helveticus)」意欲涵蓋那些為熟習此項技術人士可易於獲得的瑞士乳酸菌(例如，可購自於國內或國外寄存機構者)，或者利用本技藝中所慣用的微生物分離方法而從天然來源中所分離純化出的瑞士乳酸菌菌株。
依據本發明，醫藥品可利用熟習此技藝者所詳知的技術而被製造成一適合於非經腸道地(parenterally)或口服地(orally)投藥的劑型(dosage form)，這包括，但不限於：注射品(injection)[例如，無菌的水性溶液(sterile aqueous solution)或分散液(dispersion)]、無菌的粉末(sterile powder)、錠劑(tablet)、片劑(troche)、口含錠(lozenge)、丸劑(pill)、膠囊(capsule)、分散性粉末(dispersible powder)或細顆粒(granule)、溶液、懸浮液(suspension)、乳劑(emulsion)、糖漿(syrup)、酏劑(elixir)、濃漿(slurry)以及類似之物。
依據本發明的醫藥品可以一選自於由下列所構成的群組中的非經腸道途徑(parenteral routes)來投藥：腹膜內注射(intraperitoneal injection)、皮下注射(subcutaneous injection)、肌肉內注射(intramuscular injection)以及靜脈內注射(intravenous injection)。
依據本發明的醫藥品可包含有一被廣泛地使用於藥物製造技術之醫藥上可接受的載劑。例如，該醫藥上可接受的載劑可包含一或多種選自於由下列所構成之群組中的試劑：溶劑(solvent)、乳化劑(emulsifier)、懸浮劑(suspending agent)、分解劑(decomposer)、黏結劑(binding agent)、賦形劑(excipient)、安定劑(stabilizing agent)、螯合劑(chelating agent)、稀釋劑(diluent)、膠凝劑(gelling agent)、防腐劑(preservative)、潤滑劑(lubricant)、吸收延遲劑(absorption delaying agent)、脂質體(liposome)以及類似之物。有關這些試劑的選用與數量是落在熟習此項技術之人士的專業素養與例行技術範疇內。
依據本發明，該醫藥上可接受的載劑包含有一選自於由下列所構成之群組中的溶劑：水、生理鹽水(normal saline)、磷酸鹽緩衝生理鹽水(phosphate buffered saline,PBS)、含糖溶液、含有醇的水性溶液(aqueous solution containing alcohol)，以及它們的組合。
實施例1. 乳酸菌的代謝產物之製備及乳酸菌的代謝產物在護肺上的效用評估 1.1 乳酸菌的代謝產物之製備
首先，將瑞士乳酸菌(Lactobacillus helveticus)TCI357(於民國107年8月15日寄存於食品工業發展研究所，寄存編號BCRC910846)菌種保存管經一 次活化後，以百分之一的植菌量培養在MRS培養基並於37℃培養18小時。接著，將菌液以5,000rpm離心20分鐘，然後收集上清液，取此上清液作為分析樣品。
之後，取5L之瑞士乳酸菌(Lactobacillus helveticus)TCI357上清液並使用乙酸乙酯(ethyl acetate)與上清液等比例1：1(v/v)的液相分配處理共3次，合併萃取液經減壓濃縮乾燥，共得到8.28g的乳酸菌的乙酸乙酯層萃取物。接著，取其餘的水層萃取物並使用正丁醇(n-butanol)與水等比例1：1(v/v)的液相分配處理共3次，合併萃取液經減壓濃縮乾燥，共得到18.20g的乳酸菌的正丁醇層萃取物及255.0g的乳酸菌的水層萃取物。之後，將乳酸菌的上清液、乙酸乙酯層萃取物、正丁醇層萃取物及水層萃取物使用作為分析樣品並進行下面修復肺上皮細胞損傷的功效試驗。
1.2 乳酸菌的代謝產物在護肺上的效用評估
首先，將肺上皮細胞株BEAS-2b(ATCC,CRL-9609)培養於支氣管上皮細胞基礎培養基(Bronchial epithelial cell basal Medium,BEBM)(Lonza)中。於24孔培養盤(GeneDireX)的每孔中加入培養基，使每孔具有1.5 x 105個BEAS-2b細胞，然後在37℃下培養隔夜。
之後，使用200μL的吸管尖(pipette tip)於細胞單層(cell monolayer)創造傷口，然後移除培養基並以PBS清洗。接著，將各分析樣品合併添加無血清培養基，然後以顯微鏡(ZEISS)及相機觀察及記錄。之後，將BEAS-2b細胞分成5組，其中包括4個實驗組(亦即實驗組1~4)以及1個對照組。將1%乳酸菌的上清液添加至實驗組1的細胞中，將1%乳酸菌的乙酸乙酯層萃取物添加至實驗組2的細胞中，將1%乳酸菌的正丁醇層萃取物添加至實驗組3的細胞中，及將1%乳酸菌的水層萃取物添加至實驗組4的細胞中。至於對照組的細胞則不做任何處理。
在處理分析樣品及移除培養基後，各組細胞在37℃及5% CO2中培養16小時，然後觀察及記錄影像，並使用Image J軟體分析影像。本實施例的結果顯示於圖1。
圖1是本發明乳酸菌的代謝產物在護肺上的功效之數據圖。由圖1可見，與對照組相較之下，實驗組1~4的劃痕損傷修復活性比例有顯著的提升。 其中，乳酸菌的正丁醇層萃取物(實驗組3)比對照組高出116.7%的修復肺上皮細胞損傷功效。本實施例的結果顯示，本發明乳酸菌的代謝產物可藉由治療肺上皮細胞損傷達到護肺的功效。
實施例2. 乳酸菌的代謝化合物之純化及乳酸菌的代謝化合物在護肺上的效用評估 2.1 乳酸菌的代謝化合物之純化
首先，依據生物活性導引分離方法(bioassay guided fractionation)，將18.2g之乳酸菌的正丁醇層萃取物以Diaion HP-20作為層析材料，水及甲醇作為沖提液，矽膠管柱層析方法(column chromatography)(填充材料包括Sephadex LH-20(Amersham Biosciences)、Diaion HP-20(Mitsubishi Chemical Co.，日本)、Merck Kieselgel 60(40-63μm,Art.9385)、及Merck LiChroprep® RP-18(40-63μm,Art.0250))分離得到3個劃分層(F 1~F 3)。接著，將第二個劃分層(F 2)以矽膠管柱層析，二氯甲烷及甲醇作為沖提液(9：1)分離得到7個次劃分層(F 2-1~F 2-7)。之後，將次劃分層F 2-7以矽膠管柱層析，二氯甲烷及甲醇作為沖提液(4：1)，分離得到20.0mg之化合物TCI-TCI357-01。此外，將第三個劃分層(F 3)以矽膠管柱層析，二氯甲烷及甲醇漸增極性梯度為沖提液，分離得到七個次劃分層(F 3-1~F 3-7)，其中次劃分層F 3-5以高效能液相層析法(high performance liquid chromatography,HPLC)(幫浦系統：Hitachi L-2310 series pump；偵測器：Hitachi L-2420 UV-VIS detector，偵測波長為200~380nm；資處軟體：D-2000 Elite軟體；分析管柱：Discovery® HS C18(SUPELCO,250 x 4.6mm,5μm)及Mightysil RP-18 GP 250(Kanto,250 x 4.6mm,5μm)；半製備管柱：Discovery® HS C18(SUPELCO,250 x 10.0mm,5μm)；製備級管柱：Discovery® HS C18(SUPELCO,250 x 21.0mm,5μm))進行純化，水及甲醇作為沖提液(3：7)，分離得到5.2mg之化合物TCI-TCI357-02。
化合物TCI-TCI357-01為一白色粉末化合物，接著，將化合物TCI-TCI357-01經由核磁共振光譜儀(nuclear magnetic resonance spectrometer,NMR)(1D與2D光譜使用400MHz Varian 400 FT-NMR；以δ表示化學位移(chemical shift)，單位為ppm；以四甲基矽烷(tetramethylsilane,TMS；δ=0)作為 內部標準品；偶合常數(J)以Hz為單位，並以s表單峰(singlet)，d表二重峰(doublet)，t表三重峰(triplet)，q表四重峰(quartet)，p表五重峰，m表多重峰(multiplet)，brs表寬峰)分析。圖2是化合物TCI-TCI357-01的核磁共振氫光譜圖，由圖2可見，化合物TCI-TCI357-01有一個ABCD系統的芳香環質子吸收訊號δ H 7.40(1H,d,J=8.0Hz)、δ H 7.30(1H,d,J=8.0Hz)、δ H 7.03(1H,t,J=8.0Hz)δ H 6.95(1H,t,J=8.0Hz)，以及與異原子相接的CH2吸收訊號δ H 4.15(2H,d,J=15.6Hz)。
圖3是化合物TCI-TCI357-01的核磁共振碳光譜圖，由圖3可見，化合物TCI-TCI357-01具有12個碳訊號，包含1個羰基的吸收訊號。化合物TCI-TCI357-01的關聯性磁振頻譜圖(Correlation Spectroscopy,COSY)顯示於圖4。化合物TCI-TCI357-01的異核單量子相關光譜圖(heteronuclear single quantum correlation,HSQC)顯示於圖5。化合物TCI-TCI357-01的異核多重鍵相關光譜圖(heteronuclear multiple bond correlation,HMBC)顯示於圖6。接著，將化合物TCI-TCI357-01經由質譜儀(mass spectrometer,MS)(串聯質譜-二維離子阱串聯傅立葉轉換質譜及ESI-MS/MS：使用Bruker amaZon SL system and Thermo Orbitrap Elite system測定，單位為m/z)分析(質譜圖顯示於圖7)，再比對其光譜資料，確定化合物TCI-TCI357-01為1,2,3,4-四氫-β-咔啉-3-甲酸(1,2,3,4-tetrahydro-β-carboline-3-carboxylic acid)。
化合物TCI-TCI357-02為一黃色粉末化合物，接著，將化合物TCI-TCI357-02經由質譜儀(串聯質譜-二維離子阱串聯傅立葉轉換質譜及ESI-MS/MS：使用Bruker amaZon SL system and Thermo Orbitrap Elite system測定，單位為m/z)分析。圖8是化合物TCI-TCI357-02的質譜圖。由圖8可見，一分子離子峰為331[M+Na]+，推測化合物TCI-TCI357-02分子量為308。接著，將化合物TCI-TCI357-02經由核磁共振光譜儀(1D與2D光譜使用400MHz Varian 400 FT-NMR；以δ表示化學位移(chemical shift)，單位為ppm；以四甲基矽烷(tetramethylsilane,TMS；δ=0)作為內部標準品；偶合常數(J)以Hz為單位，並以s表單峰(singlet)，d表二重峰(doublet)，t表三重峰(triplet)，q表四重峰(quartet)，p表五重峰，m表多重峰(multiplet)，brs表寬峰)分析。圖9是化合物TCI-TCI357-02的核磁共振氫光譜圖，由圖9可見，化合物TCI-TCI357-02有一組ABCD芳香環質 子吸收訊號δ H 8.40(1H,d,J=8.0Hz)、δ H 7.78(1H,d,J=8.0Hz)、δ H 7.62(1H,t,J=8.0Hz)及δ H 7.32(1H,t,J=8.0Hz)、一組芳香環質子互相耦合訊號δ H 7.39(1H,d,J=3.2Hz)、δ H 6.59(1H,d,J=3.2Hz)、一組芳香環單峰質子吸收訊號δ H 8.81(1H,s)以及一組與異原子相接的單峰質子CH2吸收訊號δ H 4.65(1H,s)。
圖10是化合物TCI-TCI357-02的核磁共振碳光譜圖，由圖10可見，化合物TCI-TCI357-02共有17個碳，包含一個羰基吸收訊號。化合物TCI-TCI357-02的關聯性磁振頻譜圖(Correlation Spectroscopy,COSY)顯示於圖11。化合物TCI-TCI357-02的異核單量子相關光譜圖(heteronuclear single quantum correlation,HSQC)顯示於圖12。化合物TCI-TCI357-02的異核多重鍵相關光譜圖(heteronuclear multiple bond correlation,HMBC)顯示於圖13。經比對後，確定化合物TCI-TCI357-02為酒渣鹼(flazin)。
接著，將乳酸菌的正丁醇層萃取物、培養基空白液之正丁醇層萃取物及化合物TCI-TCI357-01與TCI-TCI357-02依照HPLC之條件建立其指紋圖譜，比較乳酸菌的正丁醇層萃取物與培養基空白液之正丁醇層萃取物的差異。將樣品濃度配製為50mg/mL，取樣20μL，其中使用內徑(I.D.)為10毫米、長度(L)為250毫米且顆粒大小為5微米之ODS管柱，偵測波長為280nm。乳酸菌的正丁醇層萃取物之HPLC條件係以十八烷基矽烷(Octadecylsilyl,Mightysil RP-18 GP 250)日本關東化學公司管柱(250×10mm,5μm,1.0mL/min)，流動相組成為甲醇(Methanol)與水之溶液。HPLC沖提條件顯示於表1。
Figure 108106353-A0101-12-0010-4
圖14是乳酸菌的正丁醇層萃取物(下半部)與培養基空白液之正丁醇層萃取物(上半部)的HPLC指紋圖譜。由圖14可見，空白培養液中皆無 TCI-TCI357-01與TCI-TCI357-02化合物存在，此兩個化合物只出現在有接種瑞士乳酸菌TCI357的培養液中，HPLC指紋圖譜證明此兩個化合物為瑞士乳酸菌TCI357所產生的二次代謝產物，需透過瑞士乳酸菌TCI357培養過後才生成之代謝物。
2.2 乳酸菌的代謝化合物在護肺上的效用評估
首先，將肺上皮細胞株BEAS-2b(ATCC,CRL-9609)培養於支氣管上皮細胞基礎培養基(Bronchial epithelial cell basal Medium,BEBM)(Lonza)中。於24孔培養盤(GeneDireX)的每孔中加入培養基，使每孔具有1.5 x 105個BEAS-2b細胞，然後在37℃下培養隔夜。
之後，使用200μL的吸管尖於細胞單層創造傷口，然後移除培養基並以PBS清洗。接著，將各分析樣品合併添加無血清培養基，然後以顯微鏡(ZEISS)及相機觀察及記錄。之後，將BEAS-2b細胞分成2組，其中包括1個實驗組以及1個對照組。將1%化合物TCI-TCI357-01添加至實驗組的細胞中，至於對照組的細胞則不做任何處理。
在處理分析樣品及移除培養基後，各組細胞在37℃及5% CO2中培養16小時，然後觀察及記錄影像，並使用Image J軟體分析影像。本實施例的結果顯示於圖15。
圖15是本發明乳酸菌的代謝化合物在護肺上的功效之數據圖。由圖15可見，與對照組相較之下，實驗組的劃痕損傷修復活性比例有顯著的提升。其中，化合物TCI-TCI357-01比對照組高出38%的修復肺上皮細胞損傷功效。本實施例的結果顯示，本發明乳酸菌的代謝化合物可藉由治療肺上皮細胞損傷達到護肺的功效。
綜上所述，本發明乳酸菌的代謝產物及其代謝化合物(包括1,2,3,4-四氫-β-咔啉-3-甲酸及酒渣鹼)可藉由治療肺上皮細胞損傷達到護肺之功效。
以上所述僅為舉例性，而非為限制性者。任何未脫離本發明之精神與範疇，而對其進行之等效修改或變更，均應包含於後附之申請專利範圍中。
【生物材料寄存】
食品工業發展研究所(台灣)；民國107年8月15日；編號BCRC910846。
Figure 108106353-A0101-11-0002-1

Claims (14)

  1. 一種乳酸菌的代謝產物，包含一選自於由下列所組成之群組中的化合物：1,2,3,4-四氫-β-咔啉-3-甲酸(1,2,3,4-tetrahydro-β-carboline-3-carboxylic acid)、酒渣鹼(flazin)，及其任意組合。
  2. 如申請專利範圍第1項所述的乳酸菌的代謝產物，其中該乳酸菌是瑞士乳酸菌(Lactobacillus helveticus)，其寄存編號係BCRC910846。
  3. 一種乳酸菌的代謝產物用於製備一護肺之醫藥品的用途，其中該乳酸菌的代謝產物是藉由一包含下列步驟之方法而製得：以一培養基對該乳酸菌進行培養而得到一乳酸菌的培養物，然後對該乳酸菌的培養物進行離心並收集上清液而得到該乳酸菌的代謝產物。
  4. 如申請專利範圍第3項所述的用途，其中該乳酸菌是瑞士乳酸菌(Lactobacillus helveticus)，其寄存編號係BCRC910846。
  5. 如申請專利範圍第4項所述的用途，其中該乳酸菌的代謝產物包含由該乳酸菌的代謝產物以一溶劑萃取而得之萃取物，該溶劑係為水、乙酸乙酯、或正丁醇。
  6. 如申請專利範圍第5項所述的用途，其中該乳酸菌的代謝產物包含一乳酸菌的正丁醇層萃取物。
  7. 如申請專利範圍第6項所述的用途，其中該乳酸菌的代謝產物包含一選自於由下列所組成之群組中的化合物：1,2,3,4-四氫-β-咔啉-3-甲酸(1,2,3,4-tetrahydro-β-carboline-3-carboxylic acid)、酒渣鹼(flazin)，及其任意組合。
  8. 如申請專利範圍第7項所述的用途，其中該1,2,3,4-四氫-β-咔啉-3-甲酸(1,2,3,4-tetrahydro-β-carboline-3-carboxylic acid)、該酒渣鹼(flazin)或其任意組合是由該乳酸菌的正丁醇層萃取物分離純化而得。
  9. 如申請專利範圍第3項所述的用途，其中該護肺是治療肺上皮細胞損傷。
  10. 一種醫藥組成物用於製備一護肺之醫藥品的用途，其中該醫藥組成物包含一有效劑量之1,2,3,4-四氫-β-咔啉-3-甲酸(1,2,3,4-tetrahydro-β-carboline-3-carboxylic acid)、酒渣鹼(flazin)，或其任意組合，以及一醫藥上可接受的載劑。
  11. 如申請專利範圍第10項所述的用途，其中該1,2,3,4-四氫-β-咔啉-3-甲酸(1,2,3,4-tetrahydro-β-carboline-3-carboxylic acid)或該酒渣鹼(flazin)是由一乳酸菌的代謝產物分離純化而得。
  12. 如申請專利範圍第11項所述的用途，其中該乳酸菌是瑞士乳酸菌(Lactobacillus helveticus)，其寄存編號係BCRC910846。
  13. 如申請專利範圍第12項所述的用途，其中該乳酸菌的代謝產物包含一乳酸菌的正丁醇層萃取物，該1,2,3,4-四氫-β-咔啉-3-甲酸(1,2,3,4-tetrahydro-β-carboline-3-carboxylic acid)或該酒渣鹼(flazin)是由該乳酸菌的正丁醇層萃取物分離純化而得。
  14. 如申請專利範圍第10項所述的用途，其中該護肺是治療肺上皮細胞損傷。
TW108106353A 2019-02-25 2019-02-25 乳酸菌的代謝產物及其用於護肺的用途 TWI692359B (zh)

Priority Applications (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
TW108106353A TWI692359B (zh) 2019-02-25 2019-02-25 乳酸菌的代謝產物及其用於護肺的用途
CN201910361199.3A CN111603467A (zh) 2019-02-25 2019-04-30 乳酸菌的代谢产物及其用于制备护肺的组合物的用途

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
TW108106353A TWI692359B (zh) 2019-02-25 2019-02-25 乳酸菌的代謝產物及其用於護肺的用途

Publications (2)

Publication Number Publication Date
TWI692359B TWI692359B (zh) 2020-05-01
TW202031257A true TW202031257A (zh) 2020-09-01

Family

ID=71895850

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
TW108106353A TWI692359B (zh) 2019-02-25 2019-02-25 乳酸菌的代謝產物及其用於護肺的用途

Country Status (2)

Country Link
CN (1) CN111603467A (zh)
TW (1) TWI692359B (zh)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2023239842A1 (en) * 2022-06-08 2023-12-14 President And Fellows Of Harvard College Beta carbolines as topical anti-inflammatory agents for application to mucous membranes

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB0623971D0 (en) * 2006-11-30 2007-01-10 Hunter Fleming Ltd Modulation of prostaglandin/cyclooxygenase metabolic pathways
CN101037437A (zh) * 2007-04-12 2007-09-19 中国科学院昆明植物研究所 Flazin类似物及其制备方法与应用
TWI713972B (zh) * 2019-01-14 2020-12-21 大江生醫股份有限公司 改善呼吸道健康之益生菌株及其組合物與用途

Also Published As

Publication number Publication date
CN111603467A (zh) 2020-09-01
TWI692359B (zh) 2020-05-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Ghannoum et al. Correlative relationship between proteinase production, adherence and pathogenicity of various strains of Candida albicans
CN115851500B (zh) 一株植物乳杆菌及其应用
CN106434372B (zh) 珊瑚来源真菌土曲霉菌株c21-10的应用
CN111548954B (zh) 四种蒽醌类化合物及其制备方法和用途
CN117106672A (zh) 一种改善衰老相关的认知障碍的短双歧杆菌及其应用
WO2018112739A1 (zh) 一种假小链状双歧杆菌及其培养方法和应用
CN114956974A (zh) 一类倍半萜聚酮化合物、药物组合物及其用途
TWI692359B (zh) 乳酸菌的代謝產物及其用於護肺的用途
CN111434768B (zh) 用于改善呼吸道健康的益生菌株及其组合物与用途
CN116948901B (zh) 食窦魏斯氏菌d-2胞外多糖在抑制结肠癌细胞中的应用
JPH05123179A (ja) 新規化合物ロイストロダクシン
CN110062806A (zh) 粪厌氧棒杆菌(Anaerostipes caccae)及其应用
CN115518079A (zh) 一种益生菌及其外膜囊泡在制备防治支气管哮喘制剂中的应用
CN114933992A (zh) 一种长双歧杆菌及其复合制剂在缓解溃疡性结肠炎中的应用
CN110049772A (zh) 深圳柯林斯菌(Collinsella shenzhenensis)及其应用
US20100152467A1 (en) Method for producing cercosporamide
KR20110027415A (ko) 쑥을 탄소원으로 생육가능한 미생물 및 그 용도
JP3273948B2 (ja) 生理活性物質ｔｋｒ１７８５類、製造方法及び微生物
CN115137733B (zh) 熊去氧胆酸在制备mcr-3酶抑制剂中的应用
KR102533469B1 (ko) 염증성 장 질환의 예방 또는 치료용 조성물
WO2016052656A1 (ja) 新規化合物、その製造方法、及びその用途
TWI743754B (zh) 提升應用於心血管保健之梔子苷含量的製備方法
CN104341405B (zh) 一种具有抑制Aβ聚集活性的化合物的制备方法与用途
CN112168846A (zh) 植物乳杆菌tci378菌株及其代谢产物用于减脂的应用
CN118703363A (zh) 一株罗伊氏粘液乳杆菌及其在美洲大蠊发酵中的应用