CN112168846A - 植物乳杆菌tci378菌株及其代谢产物用于减脂的应用 - Google Patents

植物乳杆菌tci378菌株及其代谢产物用于减脂的应用 Download PDF

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CN112168846A CN201910816104.2A CN201910816104A CN112168846A CN 112168846 A CN112168846 A CN 112168846A CN 201910816104 A CN201910816104 A CN 201910816104A CN 112168846 A CN112168846 A CN 112168846A
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Abstract

本发明涉及微生物领域，尤其是植物乳杆菌TCI378菌株及其代谢产物用于减脂的应用。本发明公开了一种植物乳杆菌的代谢产物，包含选自于由下列所组成的群组中的化合物：色胺酸基焦麸酰胺、1‑甲基‑1,2,3,4‑四氢‑β‑咔啉‑3‑羧酸、3‑苯乳酸(如式III所示)、或其任意组合物。本发明还公开了所述植物乳杆菌用于制备减脂组合物或减脂药品得到用途。所述植物乳杆菌以及其代谢产物具有抑制脂肪细胞中脂肪的堆积，而能够有效减少细胞中脂肪的含量，达到减少脂肪与肥胖的目标。

Description

植物乳杆菌TCI378菌株及其代谢产物用于减脂的应用
技术领域
本发明涉及微生物领域，尤其是植物乳杆菌TCI378菌株及其代谢产物用于减脂的应用。
背景技术
世界卫生组织(World Health Organization,WHO)以「传染病」形容快速蔓延的肥胖，并称其为「全球肥胖症」(Globesity)。
因此，肥胖是现代社会中最重大的疾病之一，造成肥胖的最主要原因是过度摄取脂肪。肥胖除了造成外表的缺憾，形成心理与社交的障碍，影响工作能力之外，在生理上也容易形成许多病征，包括水肿、心脏肥大、脂肪肝、胆肝泌尿系结石、肌肉骨骼诸痛症、妇科乳房或子宫肿瘤、高尿酸症(痛风)、高血脂症、狭心症、糖尿病、高血压、中风等。其中，恶性肿瘤、心脏疾病、脑血管疾病、糖尿病、慢性下呼吸道疾病、高血压、慢性肝病及肝硬化、慢性肾脏病等八项死因皆与肥胖有关，因此维持健康体重与正常的体脂量成为现代人必须努力的目标。
然而，目前治疗肥胖最有效的方法为手术治疗，另外合法药物(目前只有罗氏鲜)、运动、热量控制、及低卡代餐等亦被证实是有效的方式。然而，除了手术治疗之外，大部份的病患使用其他方法减肥，大多在减重治疗结束后便会失去戒心而复胖，如此一瘦一胖的现象(溜溜球效应)而对身体的伤害更大。
综上所述，因应现代人因生活及饮食习惯改变所面临的肥胖及因肥胖造成的整体健康问题，且基于现代人生活水平提高且对于保健概念提高，研发一种能有效减少身体脂肪含量的有效成分的组合物，着实有其必要性。
发明内容
缘此，本发明的一目的在提供一种植物乳杆菌的代谢产物，包含一选自于由下列所组成的群组中的化合物：色胺酸基焦麸酰胺(Pyroglutamyl-tryptophan)、1-甲基-1,2,3,4-四氢-β-咔啉-3-羧酸(1-Methyl-1,2,3,4-tetrahydro-β-carboline-3-carboxylicacid)、3-苯乳酸(3-Phenyllactic acid)、或其任意组合物。
本发明的又一目的在提供一种如前所述的植物乳杆菌的代谢产物用于制备一减脂组合物的用途。
本发明的另一目的在提供一种医药组成物用于制备一减脂医药品的用途，其中该医药组成物包含一选自于由下列所组成的群组中的化合物：色胺酸基焦麸酰胺、1-甲基-1,2,3,4-四氢-β-咔啉-3-羧酸、3-苯乳酸、或其任意组合，以及一医药上可接受的载剂。
在本发明的一实施例中，该植物乳杆菌的寄存编号是DSM32451；且该植物乳杆菌的代谢产物是该植物乳杆菌的分泌物，包含培养该植物乳杆菌的培养液；该植物乳杆菌的代谢产物包含由该植物乳杆菌的代谢产物以甲醇萃取而得的一萃取物，且该植物乳杆菌的代谢产物包含一选自于由下列所组成的群组中的化合物：色胺酸基焦麸酰胺、1-甲基-1,2,3,4-四氢-β-咔啉-3-羧酸、3-苯乳酸、或其任意组合物；其中该植物乳杆菌的代谢产物的浓度至少为1ppm。
在本发明的又一实施例中，该色胺酸基焦麸酰胺、1-甲基-1,2,3,4-四氢-β-咔啉-3-羧酸、或3-苯乳酸是由如前所述的植物乳杆菌的代谢产物分离纯化而得；且该色胺酸基焦麸酰胺、1-甲基-1,2,3,4-四氢-β-咔啉-3-羧酸、或3-苯乳酸的浓度至少为10μg/mL。
在本发明的另一实施例中，该减脂是抑制脂肪细胞中脂肪的堆积，以减少脂肪细胞中脂肪的含量。
本发明的植物乳杆菌或其代谢产物有效抑制脂肪细胞中脂肪的堆积，并减少细胞中脂肪的含量；其中该植物乳杆菌8的代谢产物的甲醇萃取物中含有色胺酸基焦麸酰胺、1-甲基-1,2,3,4-四氢-β-咔啉-3-羧酸、及3-苯乳酸的效性成分，亦能有效抑制脂肪细胞中脂肪的堆积，并减少细胞中脂肪的含量。因此，本发明的植物乳杆菌、其代谢产物、以及纯化自其代谢产物的色胺酸基焦麸酰胺、1-甲基-1,2,3,4-四氢-β-咔啉-3-羧酸、及3-苯乳酸可用于制备减脂的组合物的用途，该组合物该组合物是一医药品、或一食品，可藉由口服等方式给予一个体。
以下将配合图式进一步说明本发明的实施方式，下述所列举的实施例是用以阐明本发明，并非用以限定本发明的范围，任何熟习此技艺者，在不脱离本发明的精神和范围内，当可做些许更动与润饰，因此本发明的保护范围当视后附的申请专利范围所界定者为准。
附图说明
图1是本发明的一实施例的植物乳杆菌TCI378代谢产物中所纯化TCI378-1的核磁共振氢光谱图；
图2是本发明的一实施例的植物乳杆菌TCI378代谢产物中所纯化TCI378-1的质谱图；
图3是本发明的一实施例的植物乳杆菌TCI378代谢产物中所纯化TCI378-2的核磁共振氢光谱图；
图4是本发明的一实施例的植物乳杆菌TCI378代谢产物中所纯化TCI378-2的质谱图；
图5是本发明的一实施例的植物乳杆菌TCI378代谢产物中所纯化TCI378-3的核磁共振氢光谱图；
图6是为本发明的一实施例的植物乳杆菌TCI378代谢产物中所纯化TCI378-3的质谱图；
图7是本发明的一实施例的植物乳杆菌TCI378代谢产物中所纯化TCI378-1、TCI378-2、及TCI378-3于抑制脂肪堆积的直方图，*p值<0.05。
具体实施方式
本文中所使用数值为近似值，所有实验数据皆表示在20％的范围内，较佳为在10％的范围内，最佳为在5％的范围内。
使用Excel软件进行统计分析。数据以平均值±标准偏差(SD)表示，个组之间的差异以学生t检验(student's t-test)分析。
定义
本发明的植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)是一种能减脂的益生菌株(Probiotic bacteria)。本发明是一新颖的植物乳杆菌，本文命名为TCI378，于2017年3月13日保藏于DSMZ-德国微生物保藏中心(German Collection of Microorganisms andCell Cultures，DSMZ)，地址为德国布伦瑞克市38124因霍芬大街7B，寄存编号为DSM32451，本发明经由体外实验证实本发明的植物乳酸杆菌TCI378、其代谢产物、以及自该代谢产物中纯化出的化合物色胺酸基焦麸酰胺(Pyroglutamyl-tryptophan)、1-甲基-1,2,3,4-四氢-β-咔啉-3-羧酸(1-Methyl-1,2,3,4-tetrahydro-β-carboline-3-carboxylic acid)、及3-苯乳酸(3-Phenyllactic acid)可抑制脂肪细胞中脂肪的堆积。显示本发明的植物乳杆菌TCI378及其代谢产物可用于制备减脂的组合物的用途，且该组合物是一医药品、或一食品，可藉由口服等方式给予一个体。
益生菌株(probiotic或probiotic bacteria)为一微生物，其菌体、混合菌株、萃取物或代谢产物对于宿主本身是具有正面影响，通常源自于人体内、有益于肠道健康的活菌，亦可指外来补充、对身体可能有益的某些微生物，其中该益生菌株的代谢产物是该益生菌株的分泌物，包含培养该菌的培养液。
依据本发明，以管柱层析法(Column chromatography)及薄层层析法(Thin layerchromatography,TLC)自本发明的植物乳酸杆菌TCI378的代谢产物中，所纯化出的三种化合物，分别为色胺酸基焦麸酰胺(Pyroglutamyl-tryptophan)、1-甲基-1,2,3,4-四氢-β-咔啉-3-羧酸(1-Methyl-1,2,3,4-tetrahydro-β-carboline-3-carboxylic acid)、及3-苯乳酸(3-Phenyllactic acid)，并将于本文分别命名为TCI378-1、TCI378-2、及TCI378-3。
依据本发明，有关细菌培养的操作程序与参数条件等是落在熟习此项技术的人士的专业素养与例行技术范畴内。
如本文中所使用的，用语「代谢产物」意为培养细菌时，经该细菌代谢后所分泌至细菌培养液中的物质，包含培养该菌的培养液。
依据本发明，医药品可利用熟习此技艺者所详知的技术而被制造成一适合于非经肠地道(parenterally)或局部地(topically)投药的剂型，这包括，但不限于：注射品(injection)[例如，无菌的水性溶液(sterile aqueous solution)或分散液(dispersion)]、无菌的粉末(sterile powder)、外部制剂(external preparation)以及类似物。
依据本发明，医药品可进一步包含有一被广泛地使用于药物制造技术的医药上可接受的载剂(pharmaceutically acceptable carrier)。例如，该医药上可接受的载剂可包含一或多种选自于下列的试剂：溶剂(solvent)、缓冲液(buffer)、乳化剂(emulsifier)、悬浮剂(suspending agent)、分解剂(decomposer)、崩解剂(disintegrating agent)、分散剂(dispersing agent)、黏结剂(binding agent)、赋形剂(excipient)、安定剂(stabilizingagent)、螯合剂(chelating agent)、稀释剂(diluent)、胶凝剂(gelling agent)、防腐剂(preservative)、润湿剂(wetting agent)、润滑剂(lubricant)、吸收延迟剂(absorptiondelaying agent)、脂质体(liposome)以及类似物。有关这些试剂的选用与数量是落在熟习此项技术的人士的专业素养与例行技术范畴内。
依据本发明，该医药上可接受的载剂包含有一选自于由下列所构成的群组中的溶剂：水、生理盐水(normal saline)、磷酸盐缓冲生理盐水(phosphate buffered saline,PBS)、含有醇的水性溶液(aqueous solution containing alcohol)以及它们的组合。
依据本发明，该医药品可以一选自于由下列所构成的群组中的非经肠道途径(parenteral routes)来投药：皮下注射(subcutaneous injection)、表皮内注射(intraepidermal injection)、皮内注射(intradermal injection)以及病灶内注射(intralesional injection)。
依据本发明，医药品可利用熟习此技艺者所详知的技术而被制造成一适合于局部地施用于皮肤上的外部制剂(external preparation)，这包括，但不限于：乳剂(emulsion)、凝胶(gel)、软膏(ointment)、乳霜(cream)、贴片(patch)、擦剂(liniment)、粉末(powder)、气溶胶(aerosol)、喷雾(spray)、乳液(lotion)、乳浆(serum)、糊剂(paste)、泡沫(foam)、滴剂(drop)、悬浮液(suspension)、油膏(salve)以及绷带(bandage)。
依据本发明，该外部制剂是藉由将本发明的医药品与一为熟习此项技艺者所详知的基底(base)相混合而被制备。
依据本发明，该基底可包含有一或多种选自于下列的添加剂(additives)：水、醇(alcohols)、甘醇(glycol)、碳氢化合物(hydrocarbons)[诸如石油胶(petroleum,jelly)以及白凡士林(white petrolatum,)]、蜡(wax)[诸如石蜡(paraffin)以及黄蜡(yellowwax)]、保存剂(preserving agents)、抗氧化剂(antioxidants)、界面活性剂(surfactants)、吸收增强剂(absorption enhancers)、安定剂(stabilizing agents)、胶凝剂(gelling agents)[诸如
Figure BDA0002186400890000061
974P(
Figure BDA0002186400890000062
974P)、微结晶纤维素(microcrystalline cellulose)以及羧基甲基纤维素(carboxymethylcellulose)]、活性剂(active agents)、保湿剂(humectants)、气味吸收剂(odor absorbers)、香料(fragrances)、pH调整剂(pH adjusting agents)、螯合剂(chelating agents)、乳化剂(emulsifiers)、闭塞剂(occlusive agents)、软化剂(emollients)、增稠剂(thickeners)、助溶剂(solubilizing agents)、渗透增强剂(penetration enhancers)、抗刺激剂(anti-irritants)、着色剂(colorants)以及推进剂(propellants)等。有关这些添加剂的选用与数量是落在熟习此项技术的人士的专业素养与例行技术范畴内。
依据本发明，食品产品可被当作食品添加物(food additive)，藉由习知方法于原料制备时添加，或是于食品的制作过程中添加，而与任一种可食性材料配制成供人类与非人类动物摄食的食品产品。
依据本发明，食品产品的种类包括但不限于：饮料(beverages)、发酵食品(fermented foods)、烘培产品(bakery products)、健康食品(health foods)以及膳食补充品(dietary supplements)。
化学分析材料
化合物的分离是以甲醇(Methanol)、乙腈(Acetonitrile)为溶剂。化合物化学结构分析是以氘代甲醇d4(氘化程度99.5％)为溶剂，该些材料皆是购自中国台湾默克公司。
化学分析仪器
化合物的分离是利用管柱层析法(Column chromatography)及薄层层析法(Thinlayer chromatography,TLC)。中压液相层析(Medium pressure liquid chromatography,MPLC)系统为
Figure BDA0002186400890000063
Rf+(Teledyne ISCO,Lincoln,NE)；管柱是选用自SephadexLH-20(Pharmacia,Piscataway,NJ,USA)、Diaion HP-20(Mitsubishi Chemical Co.,Japan)、Silica gel 0.040-0.023mm及
Figure BDA0002186400890000064
RP-18(0.040-0.023mm)(Merck,EMDMillopore Co.,Germany)。高效液相层析仪(High Performance Liquid Chromatography,HPLC)是Agilent 1200系列：脱气装置是Agilent真空储气装置1322A；冲提溶剂输送是Agilent四元泵G1311A；可变波长侦测器是(Multiple Wavelength Detector,MWD)AgilentG1314B；光二极管数组侦测器(Diode Array Detector,DAD)是Agilent 1260Infinity DADVL G1315D，侦测波长为210nm，280nm，320nm，365nm(Agilent Germany)。管柱是
Figure BDA0002186400890000071
5μmC18(2)
Figure BDA0002186400890000072
(250x 10mm,Phenomenex,USA)。薄层层析片是Silica gel 60F254(0.25mm；Merck,EMD Millopore Co.,Germany)或RP-18F254-S(0.25mm；Merck,EMD Millopore Co.,Germany)的铝片。
化合物的化学结构是以质谱法(Mass spectrometry,MS)及核磁共振光谱法(Nuclear magnetic resonance spectrometry,NMR)进行分析。质谱仪(MassSpectrometer,MS)是串联质谱-二维离子阱串联傅里叶变换质谱及ESI-MS/MS：使用BrukeramaZon SL system测定，单位为m/z。核磁共振光谱仪(Nuclear Magnetic ResonanceSpectrometer,NMR)，1D与2D光谱使用Ascend 400MHz(Bruker Co.,Germany)，以δ表示化学位移(Chemical shift)，单位为ppm。其中，Rotary vacuum evaporator为回旋浓缩机，用于去除溶剂，型号及来源为Laborota 4000,Heidolph instruments GmbH&Co.KG Germany。
依据本发明，有关混合物的化学分离及化学结构分析的操作程序与参数条件等是落在熟习此项技术的人士的专业素养与例行技术范畴内。
本发明提供一种植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)TCI378、其代谢产物或纯化自其代谢产物的色胺酸基焦麸酰胺(Pyroglutamyl-tryptophan)、1-甲基-1,2,3,4-四氢-β-咔啉-3-羧酸(1-Methyl-1,2,3,4-tetrahydro-β-carboline-3-carboxylic acid)、或3-苯乳酸(3-Phenyllactic acid)用于制备减脂的组合物的用途，本发明植物乳杆菌代谢产物是取植物乳杆菌TCI378的培养液所获得，其中含有活性成分色胺酸基焦麸酰胺、1-甲基-1,2,3,4-四氢-β-咔啉-3-羧酸、及3-苯乳酸，该植物乳杆菌TCI378、其代谢产物、及纯化自其代谢产物的色胺酸基焦麸酰胺、1-甲基-1,2,3,4-四氢-β-咔啉-3-羧酸、与3-苯乳酸可用于抑制脂肪细胞中脂肪的堆积。
同时，本发明用于减脂的组合物，亦可包含一有效量的植物乳杆菌TCI378、其代谢产物、纯化自其代谢产物的色胺酸基焦麸酰胺、1-甲基-1,2,3,4-四氢-β-咔啉-3-羧酸、或3-苯乳酸，以及一医药上可接受的载体，该组合物是一医药品、或一食品。
以下将详细说明本发明的植物乳杆菌TCI378代谢产物的详细制备方法、从本发明的植物乳杆菌TCI378的代谢产物中分离出活性物质色胺酸基焦麸酰胺、1-甲基-1,2,3,4-四氢-β-咔啉-3-羧酸、及3-苯乳酸的详细方法、以及该些活性成分于脂肪细胞中抑制脂肪堆积的功效测试。以证实本发明的植物乳杆菌TCI378、其代谢产物、以及纯化自其代谢产物的色胺酸基焦麸酰胺、1-甲基-1,2,3,4-四氢-β-咔啉-3-羧酸、及3-苯乳酸具有抑制脂肪细胞中脂肪的堆积的功效，而能用于制备减脂的组合物。
实施例1本发明的植物乳杆菌TCI378代谢产物的制备方法
在本发明实施例中，将植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)TCI378的冷冻保存菌种经一次培养以活化后，以百分之一的植菌量培养在MRS(de Man,Rogosa andSharpe,BD DifcoTMLactobacilli MRS Broth)培养基中，优选为于10mL的MRS中加入0.1mL的经活化菌种，于37℃培养18小时后，将该培养菌液以5000rpm离心10分钟后，搜集该上清液即为本发明的植物乳杆菌TCI378的代谢产物。
实施例2本发明的植物乳杆菌TCI378的代谢产物中活性成分的分析
本发明的一实施例为分析本发明的植物乳杆菌TCI378的代谢产物中的活性成分。功效化合物分离纯化过程中，分层、次分层、与次次分层的选择是依据生物活性导引分离方法(Bioassay guided fractionation)(结果未显示)。首先，将10公升前述本发明的植物乳杆菌TCI378的代谢产物以减压回旋浓缩机除去大部分水，得2公升的浓缩液，后将该浓缩液以大孔树脂Diaion HP-20进行管柱层析(70cm x 7cm)，其中冲提梯度为100％水、20％甲醇水溶液、40％甲醇水溶液、60％甲醇水溶液、及100％甲醇，共得到5个分层。随后由分层3进行RP-C18快速管柱层析，线性梯度由20％甲醇至100％甲醇，再经薄层色层分析得到8个次分层。取次分层7以Sephadex LH-20凝胶进行管柱层析，随后经薄层色层分析得到8个次次分层，由次次分层7经RP-HPLC纯化(甲醇/水＝2/3)，得到化合物TCI-378-1、及TCI-378-2；并由次次分层5经RP-HPLC纯化(甲醇/水＝2/3)，得到化合物TCI-378-3。
TCI378-1经氢-核磁共振(图1)、碳13-核磁共振(结果未显示)、HSQC共振(结果未显示)、HMBC共振(结果未显示)、COSY共振(结果未显示)及电喷洒离子化质谱(负离子模式)(图2)分析其化学结构后，确认其为色胺酸基焦麸酰胺(Pyroglutamyl-tryptophan)，为天然界首次得到此已知化合物。
TCI378-2经氢-核磁共振(图3)及电喷洒离子化质谱(负离子模式)(图4)分析其化学结构后，确认其为1-甲基-1,2,3,4-四氢-β-咔啉-3-羧酸(1-Methyl-1,2,3,4-tetrahydro-β-carboline-3-carboxylic acid)，为已知化合物。
TCI378-3经经氢-核磁共振(图5)、碳13-核磁共振(结果未显示)、HSQC共振(结果未显示)、HMBC共振(结果未显示)、COSY共振(结果未显示)及电喷洒离子化质谱(负离子模式)(图6)分析其化学结构后，确认其为3-苯乳酸(3-Phenyllactic acid)为已知化合物。
藉由质谱仪与核磁共振光谱仪等分析确定化合物TCI378-1、TCI378-2、及TCI378-3的化学结构，其名称及结构式如下表1所示。
表1.化合物TCI378-1、TCI378-2、及TCI378-3的化学结构式
Figure BDA0002186400890000091
实施例3本发明的植物乳杆菌TCI378的代谢产物中TCI378-1、TCI378-2、及TCI378-3于抑制脂肪堆积的功效
本实施例以小鼠骨髓基质细胞OP9细胞进行本发明的植物乳杆菌TCI378的代谢产物中TCI378-1、TCI378-2、及TCI378-3于抑制脂肪堆积的功效测试。该小鼠骨髓基质细胞是购自美国典型培养物保藏中心(美国)，编号CRL-2749TM。该细胞于分化前是培养于前脂肪细胞扩增培养液(Pre-adipocyte Expansion Medium)，其中包含90％的MEMAM(MinimumEssential Medium Alpha Medium，购自Gibco，美国，FBS:Cat#10437-028)细胞培养液、20％的胎牛血清(Fetal Bovine Serum，购自Gibco，美国)，且加入0.1％的青霉素/链霉素(Penicillin-streptomycin，购自Gibco，美国)；并使用分化培养液(DifferentiationMedium)使小鼠骨髓基质细胞进行分化，其中包含90％的MEMAM细胞培养液、20％的胎牛血清，且加入0.1％的青霉素/链霉素。细胞中的脂质以油红O染色试剂(购自Sigma，美国，编号O0625)，其中以100％的异丙醇配置3mg/mL的油红O储备溶液，并将储备溶液以ddH2O配置成60％的作用溶液。
为证实本发明的植物乳杆菌TCI378的代谢产物中TCI378-1、TCI378-2、及TCI378-3具有抑制脂肪堆积的功效，首先将小鼠骨髓基质细胞分化成脂肪细胞，将8x104个小鼠骨髓基质细胞培养于含有0.5μL上述前脂肪细胞扩增培养液的24孔培养盘中，于37℃下培养7天，且期间每3天更换一次新鲜的上述分化培养液，7天后以显微镜观察脂滴的形成，确保细胞已完全分化，接着将细胞分成以下四组：(1)仅含细胞培养液的控制组、(2)加入10μg/mL的TCI378-1的实验组、(3)加入10μg/mL的TCI378-2的实验组、及(4)加入10μg/mL的TCI378-3的实验组，并于37℃培养7-10天，且同样每3天更换一次新鲜的分化培养液。
接着，使用油红O将细胞内的脂质染色，以评估本发明的植物乳杆菌TCI378的代谢产物中活性成分是否确实能减少脂肪堆积，首先将培养基轻轻地取出，并以1mL的磷酸盐缓冲溶液(Phosphate buffered saline,PBS)清洗细胞两次，再加入1mL的10％甲醛(购自Echo chemical，台湾，Cat.TG1794-4-0000-72NI)并于室温下反应30分钟以固定细胞，接着移除甲醛后以1mL的PBS轻轻地清洗细胞两次，接着于每孔细胞内加入1mL的60％异丙醇(购自Echo chemical，台湾，PH-3101)反应1分钟后，移除异丙醇后加入1mL的油红O作用溶液，于室温下反应1小时，接着移除油红O溶液并迅速地以1mL的60％异丙醇进行脱色5秒钟，再使用显微镜拍照并进行量化。接着，加入100％异丙醇于染色的细胞中，并置于振荡器上反应10分钟以溶解染剂，接着取100μL至96孔培养盘中，以测量ELISA读数器读取各组的OD510 nm读值，以量化油红O。再利用Excel软件进行student t-test以决定两个样本群体之间是否在统计上具有显著差异(*p值<0.05；**p值<0.01；***p值<0.001)。
测试本发明的植物乳杆菌TCI378代谢产物中所纯化TCI378-1、TCI378-2、及TCI378-3抑制脂肪堆积的结果如图7所示。经本发明的TCI378-1处理后，相较于控制组显著地减少了约11.5％的细胞脂肪堆积；经本发明的TCI378-2处理后，相较于控制组显著地减少了约12.4％的细胞脂肪堆积经本发明的TCI378-3处理后，相较于控制组显著地减少了约21.5％的细胞脂肪堆积，此结果显示本发明的植物乳杆菌TCI378的代谢产物中TCI378-1、TCI378-2、及TCI378-3能有效抑制脂肪细胞中脂肪的堆积，并减少细胞中脂肪的含量。
综上所述，本发明的植物乳杆菌TCI378或其代谢产物有效抑制脂肪细胞中脂肪的堆积，并减少细胞中脂肪的含量；其中该植物乳杆菌TCI378的代谢产物的甲醇萃取物中含有色胺酸基焦麸酰胺、1-甲基-1,2,3,4-四氢-β-咔啉-3-羧酸、及3-苯乳酸的效性成分，亦能有效抑制脂肪细胞中脂肪的堆积，并减少细胞中脂肪的含量。因此，本发明的植物乳杆菌TCI378、其代谢产物、以及纯化自其代谢产物的色胺酸基焦麸酰胺、1-甲基-1,2,3,4-四氢-β-咔啉-3-羧酸、及3-苯乳酸可用于制备减脂的组合物的用途，该组合物该组合物是一医药品、或一食品，可藉由口服等方式给予一个体。

Claims (10)

1.一种植物乳杆菌的代谢产物，包含一选自于由下列所组成的群组中的化合物：色胺酸基焦麸酰胺、1-甲基-1,2,3,4-四氢-β-咔啉-3-羧酸、3-苯乳酸、或其任意组合物。
2.根据权利要求1所述的植物乳杆菌的代谢产物，其特征在于，所述植物乳杆菌的寄存编号是DSM32451。
3.一种权利要求1所述的植物乳杆菌的代谢产物用于制备减脂组合物的用途。
4.根据权利要求3所述的用途，其特征在于，所述植物乳杆菌的代谢产物的浓度至少为1ppm。
5.根据权利要求3所述的用途，其特征在于，所述植物乳杆菌的代谢产物是所述植物乳杆菌的分泌物，包含培养所述植物乳杆菌的培养液。
6.根据权利要求3所述的用途，其特征在于，所述植物乳杆菌的代谢产物包含由所述植物乳杆菌的代谢产物以甲醇萃取而得的一萃取物。
7.根据权利要求3所述的用途，其特征在于，所述植物乳杆菌的代谢产物包含一选自于由下列所组成的群组中的化合物：色胺酸基焦麸酰胺、1-甲基-1,2,3,4-四氢-β-咔啉-3-羧酸、3-苯乳酸、或其任意组合物。
8.一种医药组成物用于制备一减脂医药品的用途，其特征在于，所述医药组成物包含一选自于由下列所组成的群组中的化合物：色胺酸基焦麸酰胺、1-甲基-1,2,3,4-四氢-β-咔啉-3-羧酸、3-苯乳酸、或其任意组合，以及一医药上可接受的载剂。
9.根据权利要求8所述的用途，其特征在于，所述色胺酸基焦麸酰胺、1-甲基-1,2,3,4-四氢-β-咔啉-3-羧酸、或3-苯乳酸的浓度至少为10μg/mL。
10.根据权利要求3或8所述的用途，其特征在于，所述减脂是抑制脂肪细胞中脂肪的堆积，以减少脂肪细胞中脂肪的含量。
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