TW202005649A - 減脂之益生菌株及其組合物與用途 - Google Patents

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Abstract

本發明提供一種減脂之益生菌株及其組合物與用途，該益生菌係為植物乳桿菌TCI378(BCRC910760)，其本身以及其代謝產物具有抑制脂肪細胞中脂肪的堆積，而能夠有效減少細胞中脂肪的含量，達到減少脂肪與肥胖的目標。其中本發明之植物乳桿菌TCI378的代謝產物具有色胺酸基焦麩醯胺、1-甲基-1,2,3,4-四氫-β-咔啉-3-羧酸、及/或3-苯乳酸之效性成分。

Description

減脂之益生菌株及其組合物與用途
本發明係關於一減脂之益生菌株及其組合物與用途，尤其是一種植物乳桿菌TCI378或其代謝產物用於製備抑制脂肪細胞中脂肪的堆積，並減少細胞中脂肪的含量之組合物的用途，其中該植物乳桿菌TCI378的代謝產物含有色胺酸基焦麩醯胺(Pyroglutamyl-tryptophan)、1-甲基-1,2,3,4-四氫-β-咔啉-3-羧酸(1-Methyl-1,2,3,4-tetrahydro-β-carboline-3-carboxylic acid)、及/或3-苯乳酸(3-Phenyllactic acid)之效性成分。
世界衛生組織(World Health Organization,WHO)以「傳染病」形容快速蔓延的肥胖，並稱其為「全球肥胖症」(Globesity)。依據世界衛生組織統計，全球20強國中的美國，超過8成的成年男性、7成7的成年女性過重(BMI超過25)，而韓國男女過重與肥胖比例超過5成。隨著飲食習慣改變及生活品質改善，台灣的肥胖盛行率逐年上升，依據衛生福利部國民健康署所公布之「2013-2014年國民營養健康狀況變遷調查」，其中成人過重或肥胖盛行率43%，而男性與女性比率分別為48.9%和38.3%。也就是說，台灣人中平均每兩個男性就有一個過重或肥胖，平均女性則兩至三個就有一個過重或肥胖。
因此，肥胖係現代社會中最重大的疾病之一，肥胖最主要係因為過度得攝取脂肪。肥胖除了造成外表的缺憾，亦會形成心理與社交的障礙，並進一步影響工作能力之外，在生理上也容易形成許多病徵，包括水腫、心臟肥 大、脂肪肝、膽肝泌尿系結石、肌肉骨骼諸痛症、婦科乳房或子宮腫瘤、高尿酸症(痛風)、高血脂症、狹心症、糖尿病、高血壓、中風等。其中，國人十大死亡原因中，惡性腫瘤、心臟疾病、腦血管疾病、糖尿病、慢性下呼吸道疾病、高血壓、慢性肝病及肝硬化、慢性腎臟病等八項死因皆與肥胖有關，因此維持健康體重與正常的體脂量成為現代人必須努力的目標。
然而，目前治療肥胖最有效的方法為手術治療，另外合法藥物(目前只有羅氏鮮)、運動、熱量控制、及低卡代餐等亦被證實是有效的方式。然而，除了手術治療之外，大部份的病患使用其他方法減肥，大多在減重治療結束後便會失去戒心而復胖，如此一瘦一胖的現象(溜溜球效應)而對身體的傷害更大。
綜上所述，因應現代人因生活及飲食習慣改變所面臨的肥胖及因肥胖造成之整體健康問題，且基於現代人生活水平提高且對於保健概念提高，研發一種能有效減少身體脂肪含量之有效成分的組合物，著實有其必要性。
緣此，本發明之一目的在提供一種乳桿菌的代謝產物，包含一選自於由下列所組成之群組中的化合物：色胺酸基焦麩醯胺(Pyroglutamyl-tryptophan)、1-甲基-1,2,3,4-四氫-β-咔啉-3-羧酸(1-Methyl-1,2,3,4-tetrahydro-β-carboline-3-carboxylic acid)、3-苯乳酸(3-Phenyllactic acid)、或其任意組合物。
本發明之又一目的在提供一種如前所述之乳桿菌的代謝產物用於製備一減脂組合物的用途。
本發明之另一目的在提供一種醫藥組成物用於製備一減脂醫藥品的用途，其中該醫藥組成物包含一選自於由下列所組成之群組中的化合物：色胺酸基焦麩醯胺、1-甲基-1,2,3,4-四氫-β-咔啉-3-羧酸、3-苯乳酸、或其任意組合，以及一醫藥上可接受的載劑。
在本發明之一實施例中，該乳桿菌係為一植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum)，其寄存編號係BCRC910760；且該乳酸菌的代謝產物係為該乳酸菌之分泌物，包含培養該乳酸菌的培養液；該乳桿菌的代謝產物包含由該乳桿菌的代謝產物以甲醇萃取而得之一萃取物，且該乳桿菌的代謝產物包含一選自於由下列所組成之群組中的化合物：色胺酸基焦麩醯胺、1-甲基-1,2,3,4-四氫-β-咔啉-3-羧酸、3-苯乳酸、或其任意組合物；其中該乳桿菌的代謝產物之濃度至少為1ppm。
在本發明之又一實施例中，該色胺酸基焦麩醯胺、1-甲基-1,2,3,4-四氫-β-咔啉-3-羧酸、或3-苯乳酸是由如前所述之乳桿菌的代謝產物分離純化而得；且該色胺酸基焦麩醯胺、1-甲基-1,2,3,4-四氫-β-咔啉-3-羧酸、或3-苯乳酸之濃度至少為10μg/mL。
在本發明之另一實施例中，該減脂係抑制脂肪細胞中脂肪的堆積，以減少脂肪細胞中脂肪的含量。
本發明之植物乳桿菌TCI378或其代謝產物有效抑制脂肪細胞中脂肪的堆積，並減少細胞中脂肪的含量；其中該植物乳桿菌TCI378之代謝產物的甲醇萃取物中含有色胺酸基焦麩醯胺、1-甲基-1,2,3,4-四氫-β-咔啉-3-羧酸、及3-苯乳酸的效性成分，亦能有效抑制脂肪細胞中脂肪的堆積，並減少細胞中脂肪的含量。因此，本發明之植物乳桿菌TCI378、其代謝產物、以及純化自其代謝產物之色胺酸基焦麩醯胺、1-甲基-1,2,3,4-四氫-β-咔啉-3-羧酸、及3-苯乳酸可用於製備減脂之組合物的用途，該組合物該組合物是一醫藥品、或一食品，可藉由口服等方式給予一個體。
以下將配合圖式進一步說明本發明的實施方式，下述所列舉的實施例係用以闡明本發明，並非用以限定本發明之範圍，任何熟習此技藝者，在不脫離本發明之精神和範圍內，當可做些許更動與潤飾，因此本發明之保護範圍當視後附之申請專利範圍所界定者為準。
圖1係為本發明之一實施例的植物乳桿菌TCI378代謝產物中所純化TCI378-1的核磁共振氫光譜圖。
圖2係為本發明之一實施例的植物乳桿菌TCI378代謝產物中所純化TCI378-1的質譜圖。
圖3係為本發明之一實施例的植物乳桿菌TCI378代謝產物中所純化TCI378-2的核磁共振氫光譜圖。
圖4係為本發明之一實施例的植物乳桿菌TCI378代謝產物中所純化TCI378-2的質譜圖。
圖5係為本發明之一實施例的植物乳桿菌TCI378代謝產物中所純化TCI378-3的核磁共振氫光譜圖。
圖6係為本發明之一實施例的植物乳桿菌TCI378代謝產物中所純化TCI378-3的質譜圖。
圖7係為本發明之一實施例的植物乳桿菌TCI378代謝產物中所純化TCI378-1、TCI378-2、及TCI378-3於抑制脂肪堆積之長條圖。*p值<0.05。
本文中所使用數值為近似值，所有實驗數據皆表示在20%的範圍內，較佳為在10%的範圍內，最佳為在5%的範圍內。
使用Excel軟體進行統計分析。數據以平均值±標準差(SD)表示，個組之間的差異以學生t檢驗(student's t-test)分析。
定義
本發明之植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum)是一種能減脂的益生菌株(Probiotic bacteria)。本發明係一新穎之植物乳桿菌，本文命名為 TCI378，於民國106年01月13日寄存於食品工業發展研究所，寄存編號BCRC910760，該菌株已於中華民國專利公告號第TWI645854B號完成專利寄存，本發明經由體外實驗證實本發明之植物乳酸桿菌TCI378、其代謝產物、以及自該代謝產物中純化出之化合物色胺酸基焦麩醯胺(Pyroglutamyl-tryptophan)、1-甲基-1,2,3,4-四氫-β-咔啉-3-羧酸(1-Methyl-1,2,3,4-tetrahydro-β-carboline-3-carboxylic acid)、及3-苯乳酸(3-Phenyllactic acid)可抑制脂肪細胞中脂肪的堆積。顯示本發明之植物乳桿菌TCI378及其代謝產物可用於製備減脂之組合物的用途，且該組合物係一醫藥品、或一食品，可藉由口服等方式給予一個體。
益生菌株(probiotic或probiotic bacteria)係為一微生物，其菌體、混合菌株、萃取物或代謝產物對於宿主本身係具有正面影響，通常源自於人體內、有益於腸道健康的活菌，亦可指外來補充、對身體可能有益的某些微生物，其中該益生菌株的代謝產物係該益生菌株之分泌物，包含培養該菌的培養液。
依據本發明，以管柱層析法(Column chromatography)及薄層層析法(Thin layer chromatography,TLC)自本發明之植物乳酸桿菌TCI378之代謝產物中，所純化出之三種化合物，分別為色胺酸基焦麩醯胺(Pyroglutamyl-tryptophan)、1-甲基-1,2,3,4-四氫-β-咔啉-3-羧酸(1-Methyl-1,2,3,4-tetrahydro-β-carboline-3-carboxylic acid)、及3-苯乳酸(3-Phenyllactic acid)，並將於本文分別命名為TCI378-1、TCI378-2、及TCI378-3。
依據本發明，有關細菌培養的操作程序與參數條件等是落在熟習此項技術之人士的專業素養與例行技術範疇內。
如本文中所使用的，用語「代謝產物」意為培養細菌時，經該細菌代謝後所分泌至細菌培養液中之物質，包含培養該菌的培養液。
依據本發明，醫藥品可利用熟習此技藝者所詳知的技術而被製造成一適合於非經腸道地(parenterally)或局部地(topically)投藥的劑型，這包括，但不限於：注射品(injection)[例如，無菌的水性溶液(sterile aqueous solution)或分散液(dispersion)]、無菌的粉末(sterile powder)、外部製劑(external preparation)以及類似之物。
依據本發明，醫藥品可進一步包含有一被廣泛地使用於藥物製造技術之醫藥上可接受的載劑(pharmaceutically acceptable carrier)。例如，該醫藥上可接受的載劑可包含一或多種選自於下列的試劑：溶劑(solvent)、緩衝液(buffer)、乳化劑(emulsifier)、懸浮劑(suspending agent)、分解劑(decomposer)、崩解劑(disintegrating agent)、分散劑(dispersing agent)、黏結劑(binding agent)、賦形劑(excipient)、安定劑(stabilizing agent)、螯合劑(chelating agent)、稀釋劑(diluent)、膠凝劑(gelling agent)、防腐劑(preservative)、潤濕劑(wetting agent)、潤滑劑(lubricant)、吸收延遲劑(absorption delaying agent)、脂質體(liposome)以及類似之物。有關這些試劑的選用與數量是落在熟習此項技術之人士的專業素養與例行技術範疇內。
依據本發明，該醫藥上可接受的載劑包含有一選自於由下列所構成之群組中的溶劑：水、生理鹽水(normal saline)、磷酸鹽緩衝生理鹽水(phosphate buffered saline,PBS)、含有醇的水性溶液(aqueous solution containing alcohol)以及它們的組合。
依據本發明，該醫藥品可以一選自於由下列所構成之群組中的非經腸道途徑(parenteral routes)來投藥：皮下注射(subcutaneous injection)、表皮內注射(intraepidermal injection)、皮內注射(intradermal injection)以及病灶內注射(intralesional injection)。
依據本發明，醫藥品可利用熟習此技藝者所詳知的技術而被製造成一適合於局部地施用於皮膚上的外部製劑(external preparation)，這包括，但 不限於：乳劑(emulsion)、凝膠(gel)、軟膏(ointment)、乳霜(cream)、貼片(patch)、擦劑(liniment)、粉末(powder)、氣溶膠(aerosol)、噴霧(spray)、乳液(lotion)、乳漿(serum)、糊劑(paste)、泡沫(foam)、滴劑(drop)、懸浮液(suspension)、油膏(salve)以及繃帶(bandage)。
依據本發明，該外部製劑是藉由將本發明的醫藥品與一為熟習此項技藝者所詳知的基底(base)相混合而被製備。
依據本發明，該基底可包含有一或多種選自於下列的添加劑(additives)：水、醇(alcohols)、甘醇(glycol)、碳氫化合物(hydrocarbons)[諸如石油膠(petroleum,jelly)以及白凡士林(white petrolatum,)]、蠟(wax)[諸如石蠟(paraffin)以及黃蠟(yellow wax)]、保存劑(preserving agents)、抗氧化劑(antioxidants)、界面活性劑(surfactants)、吸收增強劑(absorption enhancers)、安定劑(stabilizing agents)、膠凝劑(gelling agents)[諸如卡波普®974P(carbopol®974P)、微結晶纖維素(microcrystalline cellulose)以及羧基甲基纖維素(carboxymethylcellulose)]、活性劑(active agents)、保濕劑(humectants)、氣味吸收劑(odor absorbers)、香料(fragrances)、pH調整劑(pH adjusting agents)、螯合劑(chelating agents)、乳化劑(emulsifiers)、閉塞劑(occlusive agents)、軟化劑(emollients)、增稠劑(thickeners)、助溶劑(solubilizing agents)、滲透增強劑(penetration enhancers)、抗刺激劑(anti-irritants)、著色劑(colorants)以及推進劑(propellants)等。有關這些添加劑的選用與數量是落在熟習此項技術之人士的專業素養與例行技術範疇內。
依據本發明，食品產品可被當作食品添加物(food additive)，藉由習知方法於原料製備時添加，或是於食品的製作過程中添加，而與任一種可食性材料配製成供人類與非人類動物攝食的食品產品。
依據本發明，食品產品的種類包括但不限於：飲料(beverages)、發酵食品(fermented foods)、烘培產品(bakery products)、健康食品(health foods)以及膳食補充品(dietary supplements)。
化學分析材料
化合物的分離係以甲醇(Methanol)、乙腈(Acetonitrile)為溶劑。化合物化學結構分析係以氘代甲醇d 4 (氘化程度99.5%)為溶劑，該些材料皆係購自台灣默克公司。
化學分析儀器
化合物的分離係利用管柱層析法(Column chromatography)及薄層層析法(Thin layer chromatography,TLC)。中壓液相層析(Medium pressure liquid chromatography,MPLC)系統係為CombiFlash® Rf+(Teledyne ISCO,Lincoln,NE)；管柱係選用自Sephadex LH-20(Pharmacia,Piscataway,NJ,USA)、Diaion HP-20(Mitsubishi Chemical Co.,Japan)、Silica gel 0.040-0.023mm及LiChroprep® RP-18(0.040-0.023mm)(Merck,EMD Millopore Co.,Germany)。高效液相層析儀(High Performance Liquid Chromatography,HPLC)係Agilent 1200系列：脫氣裝置係Agilent真空儲氣裝置1322A；沖提溶劑輸送係Agilent四元幫浦G1311A；可變波長偵測器係(Multiple Wavelength Detector,MWD)Agilent G1314B；光二極體陣列偵測器(Diode Array Detector,DAD)係Agilent 1260 Infinity DAD VL G1315D，偵測波長為210nm，280nm，320nm，365nm(Agilent Germany)。管柱係Luna® 5μm C18(2)100Å(250 x 10mm,Phenomenex,USA)。薄層層析片係Silica gel 60 F254(0.25mm；Merck,EMD Millopore Co.,Germany)或RP-18 F254-S(0.25mm；Merck,EMD Millopore Co.,Germany)之鋁片
化合物的化學結構係以質譜法(Mass spectrometry,MS)及核磁共振光譜法(Nuclear magnetic resonance spectrometry,NMR)進行分析。質譜儀 (Mass Spectrometer,MS)係串聯質譜-二維離子阱串聯傅立葉轉換質譜及ESI-MS/MS：使用Bruker amaZon SL system測定，單位為m/z。核磁共振光譜儀(Nuclear Magnetic Resonance Spectrometer,NMR)，1D與2D光譜使用Ascend 400MHz(Bruker Co.,Germany)，以δ表示化學位移(Chemical shift)，單位為ppm。其中，Rotary vacuum evaporator為迴旋濃縮機，用於去除溶劑，型號及來源為Laborota 4000,Heidolph instruments GmbH & Co.KG Germany。
依據本發明，有關混合物之化學分離及化學結構分析的操作程序與參數條件等是落在熟習此項技術之人士的專業素養與例行技術範疇內。
本發明提供一種植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum)TCI378、其代謝產物或純化自其代謝產物之色胺酸基焦麩醯胺(Pyroglutamyl-tryptophan)、1-甲基-1,2,3,4-四氫-β-咔啉-3-羧酸(1-Methyl-1,2,3,4-tetrahydro-β-carboline-3-carboxylic acid)、或3-苯乳酸(3-Phenyllactic acid)用於製備減脂之組合物的用途，本發明植物乳桿菌代謝產物係取植物乳桿菌TCI378之培養液所獲得，其中含有活性成分色胺酸基焦麩醯胺、1-甲基-1,2,3,4-四氫-β-咔啉-3-羧酸、及3-苯乳酸，該植物乳桿菌TCI378、其代謝產物、及純化自其代謝產物之色胺酸基焦麩醯胺、1-甲基-1,2,3,4-四氫-β-咔啉-3-羧酸、與3-苯乳酸可用於抑制脂肪細胞中脂肪的堆積。
同時，本發明用於減脂之組合物，亦可包含一有效量之植物乳桿菌TCI378、其代謝產物、純化自其代謝產物之色胺酸基焦麩醯胺、1-甲基-1,2,3,4-四氫-β-咔啉-3-羧酸、或3-苯乳酸，以及一醫藥上可接受之載體，該組合物係一醫藥品、或一食品。
以下將詳細說明本發明之植物乳桿菌TCI378代謝產物之詳細製備方法、從本發明之植物乳桿菌TCI378的代謝產物中分離出活性物質色胺酸基焦麩醯胺、1-甲基-1,2,3,4-四氫-β-咔啉-3-羧酸、及3-苯乳酸之詳細方法、以及該些活性成分於脂肪細胞中抑制脂肪堆積之功效測試。以證實本發明之植物乳 桿菌TCI378、其代謝產物、以及純化自其代謝產物之色胺酸基焦麩醯胺、1-甲基-1,2,3,4-四氫-β-咔啉-3-羧酸、及3-苯乳酸具有抑制脂肪細胞中脂肪的堆積的功效，而能用於製備減脂之組合物。
實施例1 本發明之植物乳桿菌TCI378代謝產物的製備方法
在本發明實施例中，將植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum)TCI378之冷凍保存菌種經一次培養以活化後，以百分之一的植菌量培養在MRS(de Man,Rogosa and Sharpe,BD DifcoTM Lactobacilli MRS Broth)培養基中，優選為於10mL之MRS中加入0.1mL之經活化菌種，於37℃培養18小時後，將該培養菌液以5000rpm離心10分鐘後，蒐集該上清液即為本發明之植物乳桿菌TCI378的代謝產物。
實施例2 本發明之植物乳桿菌TCI378的代謝產物中活性成分之分析
本發明之一實施例為分析本發明之植物乳桿菌TCI378的代謝產物中之活性成分。功效化合物分離純化過程中，分層、次分層、與次次分層之選擇係依據生物活性導引分離方法(Bioassay guided fractionation)(結果未顯示)。首先，將10公升前述本發明之植物乳桿菌TCI378的代謝產物以減壓迴旋濃縮機除去大部分水，得2公升的濃縮液，後將該濃縮液以大孔樹脂Diaion HP-20進行管柱層析(70cm x 7cm)，其中沖提梯度為100%水、20%甲醇水溶液、40%甲醇水溶液、60%甲醇水溶液、及100%甲醇，共得到5個分層。隨後由分層3進行RP-C18快速管柱層析，線性梯度由20%甲醇至100%甲醇，再經薄層色層分析得到8個次分層。取次分層7以Sephadex LH-20凝膠進行管柱層析，隨後經薄層色層分析得到8個次次分層，由次次分層7經RP-HPLC純化(甲醇/水=2/3)，得到化合物TCI-378-1、及TCI-378-2；並由次次分層5經RP-HPLC純化(甲醇/水=2/3)，得到化合物TCI-378-3。
TCI378-1經氫-核磁共振(圖1)、碳13-核磁共振(結果未顯示)、HSQC共振(結果未顯示)、HMBC共振(結果未顯示)、COSY共振(結果未顯示)及電噴灑離子化質譜(負離子模式)(圖2)分析其化學結構後，確認其為色胺酸基焦麩醯胺(Pyroglutamyl-tryptophan)，為天然界首次得到此已知化合物。
TCI378-2經氫-核磁共振(圖3)及電噴灑離子化質譜(負離子模式)(圖4)分析其化學結構後，確認其為1-甲基-1,2,3,4-四氫-β-咔啉-3-羧酸(1-Methyl-1,2,3,4-tetrahydro-β-carboline-3-carboxylic acid)，為已知化合物。
TCI378-3經經氫-核磁共振(圖5)、碳13-核磁共振(結果未顯示)、HSQC共振(結果未顯示)、HMBC共振(結果未顯示)、COSY共振(結果未顯示)及電噴灑離子化質譜(負離子模式)(圖6)分析其化學結構後，確認其為3-苯乳酸(3-Phenyllactic acid)為已知化合物。
藉由質譜儀與核磁共振光譜儀等分析確定化合物TCI378-1、TCI378-2、及TCI378-3的化學結構，其名稱及結構式如下表1所示。
Figure 108123306-A0101-12-0011-2
Figure 108123306-A0101-12-0012-3
實施例3 本發明之植物乳桿菌TCI378的代謝產物中TCI378-1、TCI378-2、及TCI378-3於抑制脂肪堆積之功效
本實施例以小鼠骨髓基質細胞OP9細胞進行本發明之植物乳桿菌TCI378的代謝產物中TCI378-1、TCI378-2、及TCI378-3於抑制脂肪堆積之功效測試。該小鼠骨髓基質細胞係購自美國典型培養物保藏中心(美國)，編號CRL-2749TM。該細胞於分化前係培養於前脂肪細胞擴增培養液(Pre-adipocyte Expansion Medium)，其中包含90%之MEMAM(Minimum Essential Medium Alpha Medium，購自Gibco，美國，FBS：Cat#10437-028)細胞培養液、20%之胎牛血清(Fetal Bovine Serum，購自Gibco，美國)，且加入0.1%之青黴素/鏈黴素(Penicillin-streptomycin，購自Gibco，美國)；並使用分化培養液(Differentiation Medium)使小鼠骨髓基質細胞進行分化，其中包含90%之MEMAM細胞培養液、20%之胎牛血清，且加入0.1%之青黴素/鏈黴素。細胞中的脂質以油紅O染色試劑(購自Sigma，美國，編號O0625)，其中以100%之異丙醇配置3mg/mL的油紅O儲備溶液，並將儲備溶液以ddH2O配置成60%的作用溶液。
為證實本發明之植物乳桿菌TCI378的代謝產物中TCI378-1、TCI378-2、及TCI378-3具有抑制脂肪堆積的功效，首先將小鼠骨髓基質細胞分化成脂肪細胞，將8x104個小鼠骨髓基質細胞培養於含有0.5μL上述前脂肪細胞擴增培養液之24孔培養盤中，於37℃下培養7天，且期間每3天更換一次新鮮之上述分化培養液，7天後以顯微鏡觀察脂滴的形成，確保細胞已完全分化，接著將細胞分成以下四組：(1)僅含細胞培養液之控制組、(2)加入10μg/mL之TCI378-1的實驗組、(3)加入10μg/mL之TCI378-2的實驗組、及(4)加入10μg/mL 之TCI378-3的實驗組，並於37℃培養7-10天，且同樣每3天更換一次新鮮之分化培養液。
接著，使用油紅O將細胞內的脂質染色，以評估本發明之植物乳桿菌TCI378的代謝產物中活性成分是否確實能減少脂肪堆積，首先將培養基輕輕地取出，並以1mL之磷酸鹽緩衝溶液(Phosphate buffered saline,PBS)清洗細胞兩次，再加入1mL之10%甲醛(購自Echo chemical，台灣，Cat.TG1794-4-0000-72NI)並於室溫下反應30分鐘以固定細胞，接著移除甲醛後以1mL之PBS輕輕地清洗細胞兩次，接著於每孔細胞內加入1mL之60%異丙醇(購自Echo chemical，台灣，PH-3101)反應1分鐘後，移除異丙醇後加入1mL之油紅O作用溶液，於室溫下反應1小時，接著移除油紅O溶液並迅速地以1mL之60%異丙醇進行脫色5秒鐘，再使用顯微鏡拍照並進行量化。接著，加入100%異丙醇於染色之細胞中，並置於振盪器上反應10分鐘以溶解染劑，接著取100μL至96孔培養盤中，以測量ELISA讀數器讀取各組之OD510nm讀值，以量化油紅O。再利用Excel軟體進行student t-test以決定兩個樣本群體之間是否在統計上具有顯著差異(*p值<0.05；**p值<0.01；***p值<0.001)。
測試本發明之植物乳桿菌TCI378代謝產物中所純化TCI378-1、TCI378-2、及TCI378-3抑制脂肪堆積之結果如圖7所示。經本發明之TCI378-1處理後，相較於控制組顯著地減少了約11.5%之細胞脂肪堆積；經本發明之TCI378-2處理後，相較於控制組顯著地減少了約12.4%之細胞脂肪堆積經本發明之TCI378-3處理後，相較於控制組顯著地減少了約21.5%之細胞脂肪堆積，此結果顯示本發明之植物乳桿菌TCI378的代謝產物中TCI378-1、TCI378-2、及TCI378-3能有效抑制脂肪細胞中脂肪的堆積，並減少細胞中脂肪的含量。
綜上所述，本發明之植物乳桿菌TCI378或其代謝產物有效抑制脂肪細胞中脂肪的堆積，並減少細胞中脂肪的含量；其中該植物乳桿菌TCI378之代謝產物的甲醇萃取物中含有色胺酸基焦麩醯胺、1-甲基-1,2,3,4-四氫-β-咔 啉-3-羧酸、及3-苯乳酸的效性成分，亦能有效抑制脂肪細胞中脂肪的堆積，並減少細胞中脂肪的含量。因此，本發明之植物乳桿菌TCI378、其代謝產物、以及純化自其代謝產物之色胺酸基焦麩醯胺、1-甲基-1,2,3,4-四氫-β-咔啉-3-羧酸、及3-苯乳酸可用於製備減脂之組合物的用途，該組合物該組合物是一醫藥品、或一食品，可藉由口服等方式給予一個體。
Figure 108123306-A0101-11-0002-1

Claims (10)

  1. 一種乳桿菌的代謝產物，包含一選自於由下列所組成之群組中的化合物：色胺酸基焦麩醯胺(Pyroglutamyl-tryptophan)、1-甲基-1,2,3,4-四氫-β-咔啉-3-羧酸(1-Methyl-1,2,3,4-tetrahydro-β-carboline-3-carboxylic acid)、3-苯乳酸(3-Phenyllactic acid)、或其任意組合物。
  2. 如申請專利範圍第1項之乳桿菌的代謝產物，其中該乳桿菌係為一植物乳桿菌( Lactobacillus plantarum)，其寄存編號係BCRC910760。
  3. 一種如申請專利範圍第1項所述之乳桿菌的代謝產物用於製備一減脂組合物的用途。
  4. 如申請專利範圍第3項所述之用途，其中該乳桿菌的代謝產物之濃度至少為1ppm。
  5. 如申請專利範圍第3項所述之用途，其中該乳酸菌的代謝產物係為該乳酸菌之分泌物，包含培養該乳酸菌的培養液。
  6. 如申請專利範圍第3項所述之用途，其中該乳桿菌的代謝產物包含由該乳桿菌的代謝產物以甲醇萃取而得之一萃取物。
  7. 如申請專利範圍第3項所述之用途，其中該乳桿菌的代謝產物包含一選自於由下列所組成之群組中的化合物：色胺酸基焦麩醯胺、1-甲基-1,2,3,4-四氫-β-咔啉-3-羧酸、3-苯乳酸、或其任意組合物。
  8. 一種醫藥組成物用於製備一減脂醫藥品的用途，其中該醫藥組成物包含一選自於由下列所組成之群組中的化合物：色胺酸基焦麩醯胺、1-甲基-1,2,3,4-四氫-β-咔啉-3-羧酸、3-苯乳酸、或其任意組合，以及一醫藥上可接受的載劑。
  9. 如申請專利範圍第8項所述之用途，其中該色胺酸基焦麩醯胺、1-甲基-1,2,3,4-四氫-β-咔啉-3-羧酸、或3-苯乳酸之濃度至少為10μg/mL。
  10. 如申請專利範圍第3項或第8項所述之用途，其中該減脂係抑制脂肪細胞中脂肪的堆積，以減少脂肪細胞中脂肪的含量。
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