TW202020450A - 模擬糞便、及使用其之糞便潛血檢查的精確度管理方法 - Google Patents

Abstract

本發明係提供一種模擬糞便，其係包含：基材；血紅蛋白；一種或複數種糖醇；及血紅蛋白片段。本發明係提供一種模擬糞便中的血紅蛋白穩定化方法，其係將含有基材及血紅蛋白之模擬糞便中的血紅蛋白穩定化的方法，其係包含：使模擬糞便含有一種或複數種糖醇及血紅蛋白片段。因為本發明的模擬糞便包含糖醇及血紅蛋白片段，故血紅蛋白顯著地穩定化。又，本發明亦提供一種使用上述模擬糞便的糞便潛血檢查的精確度管理方法。藉由使用上述模擬糞便，能夠使糞便潛血檢查的精確度管理變得容易。

Description

模擬糞便、及使用其之糞便潛血檢查的精確度管理方法

本發明係關於血紅蛋白穩定之模擬糞便。又，本發明亦關於使用上述模擬糞便進行糞便潛血檢查的精確度管理方法以及糞便採集容器的評價方法。

糞便潛血檢查是大腸癌健康檢查的重要篩選檢查。在糞便潛血檢查中，希望從糞便表面的數個位置刮取固定量的試料來使用。因此，已經開發了各種類型的糞便採集容器，包括：定量糞便採集機構，其包括採取器具；懸濁機構，其包括糞便懸濁液；以及過濾機構。藉由使用此等糞便採集容器所獲得之糞便懸濁液的過濾液係能夠應用於自動分析機，故藉由自動化進行糞便潛血檢查之大量處理成為一般化。

儘管糞便潛血檢查很重要，但其尚未進行標準化。雖然正在針對檢查值實施全國的監控(surveillance)(以下亦稱為「調查(survey)」)，但就現狀而言，正使用著液體試料或因應必要而於各個設施使用時所製備之模擬糞便。舉例來說，此係因為糞便檢體中的血紅蛋白等的穩定性極差，且實際上不可能分配及存儲調查用糞便樣本，以及經採集之糞便量存在較大的誤差等。

其中，針對調查用糞便樣本，為了實施大規模的調查且獲得可靠性高的結果，必須使其成分含量穩定且需要能夠大量生產的檢體，但使用天然糞便來製造如此之檢體是不切實際的。針對此點，作為天然糞便的替代，有人提出一種人造模擬糞便，其係將含有血紅蛋白的水溶液添加至米粉、小麥粉、馬鈴薯澱粉、玉米粉或大豆蛋白等的基材中並混合之人造模擬糞便(例如參照專利文獻1、2)。

[先前技術文獻] [專利文獻] [專利文獻1]日本特開第平10-319022號公報 [專利文獻2]日本特開第2003-185654號公報

[發明所欲解決的課題] 然而，即使是專利文獻1或2的模擬糞便，模擬糞便中的血紅蛋白並不可謂充分地穩定，期望著更進一步改善血紅蛋白的穩定性。

因此，本發明之目的係提供一種血紅蛋白穩定化之模擬糞便。又，本發明更進一步之目的係提供使用上述模擬糞便之糞便潛血檢查的精確度管理方法。

[解決課題的手段] 本發明人們為了解決上述課題進行深入探討，結果發現雖然單獨使用糖醇及血紅蛋白片段並不足以產生使血紅蛋白充分穩定的效果，但藉由將它們組合來使用，能夠顯著地使血紅蛋白穩定，最後完成了本發明。 具體而言，本發明係如下所述。

[1]一種模擬糞便，其係包含： 基材；血紅蛋白；一種或複數種糖醇；及血紅蛋白片段。 [2]如前述[1]所述之模擬糞便，其中，前述糖醇係選自由甘油、山梨糖醇、甘露糖醇、赤蘚糖醇及木糖醇所組成之群組中的至少任一種。 [3]如前述[1]或[2]所述之模擬糞便，其中，前述糖醇係包含碳原子數為4以上的糖醇。 [4]如前述[1]~[3]中任一者所述之模擬糞便，其中，前述糖醇的含量為1.5~70質量%。 [5]如前述[1]~[4]中任一者所述之模擬糞便，其中，前述血紅蛋白片段係血紅蛋白的酵素部分分解物。 [6]如前述[1]~[5]中任一者所述之模擬糞便，其中，前述血紅蛋白片段的鐵當量係2~100μg/g。 [7]如前述[1]~[6]中任一者所述之模擬糞便，其中，還包含內部標準物質。 [8]如前述[7]所述之模擬糞便，其中，前述內部標準物質係甘油。 [9]一種模擬糞便中的血紅蛋白穩定化方法，其係將含有基材及血紅蛋白之模擬糞便中的前述血紅蛋白穩定化的方法，其係包含：使前述模擬糞便含有一種或複數種糖醇及血紅蛋白片段。 [10]一種測定方法，其係包含：採取前述[1]~[8]中任一者所記載之模擬糞便；及測定被採取之前述模擬糞便中血紅蛋白的採取量。 [11]一種算出方法，其係包含：基於前述[10]所記載之測定方法所獲得之血紅蛋白的採取量與模擬糞便的採取量，算出前述模擬糞便中血紅蛋白的含量。 [12]一種測定方法，其係包含：採取前述[7]或[8]所記載之模擬糞便；及測定被採取之前述模擬糞便中血紅蛋白的採取量及內部標準物質的採取量。 [13]一種算出方法，其係包含：基於由前述[12]所記載之測定方法所獲得之內部標準物質的採取量，算出模擬糞便的採取量。 [14]一種算出方法，其係包含：基於由前述[12]所記載之測定方法所獲得之血紅蛋白的採取量與由前述[13]所記載之算出方法所獲得之模擬糞便的採取量，算出前述模擬糞便中血紅蛋白的含量。 [15]一種測定方法，其係包含：採取前述[7]或[8]所記載之模擬糞便；及測定被採取之前述模擬糞便中內部標準物質的採取量。 [16]一種算出方法，其係包含：基於由前述[15]所記載之方法所獲得之內部標準物質的採取量，算出模擬糞便的採取量。 [17]一種糞便潛血檢查的精確度管理方法，其係包含：將由前述[11]或[14]所記載之算出方法所獲得之模擬糞便中血紅蛋白的含量作為指標來使用。 [18]一種糞便潛血檢查的精確度管理方法，其係包含：將由前述[13]或[16]所記載之算出方法所獲得之模擬糞便的採取量作為指標來使用。 [19]一種採取糞便之容器的評價方法，其係包含：將由前述[13]或[16]所記載之算出方法所獲得之模擬糞便的採取量作為指標來使用。

[發明的效果] 因為本發明的模擬糞便包含糖醇及血紅蛋白片段，能夠使血紅蛋白顯著地穩定化。又，藉由使用該模擬糞便，能夠使糞便潛血檢查的精確度管理變得容易。

以下，針對本發明的實施形態進行說明。 [模擬糞便] 本發明一實施形態的模擬糞便係包含：基材；血紅蛋白；一種或複數種糖醇；及血紅蛋白片段。

1.基材 基材只要是能夠近似於糞便之物理性質的素材即可，其種類並未特別限定。具體而言，可舉出例如米粉、小麥粉、大麥粉、玉米粉、大豆粉、馬鈴薯粉等穀物粉；小魚粉末、甲殼類粉末、蛋黃粉末等動物性粉末等。此等可單獨使用1種，亦可併用2種以上。

模擬糞便中基材的含量係能夠基於可賦予模擬糞便之物理性質等來適當地決定，舉例來說，基材的含量能夠為25~70質量%，較佳係35~65質量%，更佳係40~60質量%。 又，在本說明書中，被含於模擬糞便之各成分的「含量」係指，相對於模擬糞便的質量之各成分質量的比例。

2.血紅蛋白 用於本實施形態之模擬糞便的血紅蛋白，係能夠與由糞便潛血檢查所檢測之血紅蛋白相同地被檢測。更具體而言，較佳係人的血紅蛋白。 模擬糞便中血紅蛋白的含量，係與在糞便中一般所檢測出來的量相同程度的量即可，舉例來說，能夠例如為1~400μg/g，較佳係10~200μg/g。 藉由採取模擬糞便，並測定含於其之血紅蛋白的質量(採取量)，再藉由除以模擬糞便的質量(採取量)，能夠算出模擬糞便中血紅蛋白的含量。血紅蛋白的採取量係能夠藉由與糞便潛血檢查相同的方法測定，更具體而言，能夠藉由以下方法測定：乳膠凝集反應法、金膠體凝集反應法、免疫色譜法或ELISA法等免疫學的測定法；利用血紅蛋白之過氧化物酶樣活性的化學顯色反應法等。

又，在模擬糞便中檢測到的標誌物(marker)為血紅蛋白；又，除血紅蛋白外，還能夠檢測出以下至少一種的其他標誌物：觸珠蛋白、血紅蛋白-觸珠蛋白複合體、轉鐵蛋白、α-1抗胰蛋白酶、α-2巨球蛋白等的血液蛋白質；鈣衛蛋白等的蛋白質。

3.糖醇 本實施形態的糖醇係與後述之血紅蛋白片段產生協同作用，可使血紅蛋白穩定化。

就能夠使用於本實施形態的糖醇而言，可包含山梨糖醇、甘露糖醇、木糖醇、赤蘚糖醇、甘油等；亦可使用肌醇、槲皮醇(Quercitol)等的環糖醇。 此等糖醇可單獨使用1種，亦可併用2種以上。

從糖醇與血紅蛋白片段產生協同作用並更有效地實現血紅蛋白穩定化之觀點來看，上述糖醇較佳係包含碳原子數為4以上的糖醇，更佳係包含碳原子數為5以上的糖醇。

葡萄糖及果糖係作為醛糖及酮糖等在溶液中形成醛基及酮基的還原糖，葡萄糖及果糖係與模擬糞便中的血紅蛋白反應以修飾蛋白質，並有時修飾血紅蛋白以形成糖化的血紅蛋白。舉例來說，就免疫學的測定法中所使用的抗體種類而言，如果血紅蛋白的表位(epitope)或其附近被還原糖修飾而使結構產生變化，則該抗體無法識別模擬糞便中所含的血紅蛋白，且變得無法進行正確的測定。因此，較佳係使用糖醇。

又，因為藉由添加高濃度糖醇並使水分與糖醇共結晶，特別是共晶點的濃度高於糖，且共晶點溫度低，故即使將模擬糞便儲存在-10℃~0℃的範圍內，冰也難以產生，而容易提供均勻的模擬糞便。 又，就用於調查之模擬糞便所要求的重要性質而言，例如為模擬糞便的均勻性及冷凍的抵抗性。一般來說，為了確保模擬糞便中的血紅蛋白的穩定性，以能夠在運輸及儲存過程中將其冷凍保存，但模擬糞便中所含的水份聚集而產生冰，進而導致模擬糞便的不均勻性，而具有使血紅蛋白局部化的可能性。另一方面，為了確保血紅蛋白的穩定性並避免由於冷凍所造成之模擬糞便的不均勻性，雖然有人提出將血紅蛋白等成分凍結乾燥，並在即將使用前使其溶於水並與基材混合之使用時製備型的模擬糞便，但無法避免由於使用前的製備操作所導致的誤差。 相對於此，因為本實施形態的模擬糞便係使用糖醇，其係防止水分的凝集凍結，且難以產生造成血紅蛋白局部化的相分離，並還具有即使經過凍結與融解後也能夠容易地提供均勻之模擬糞便的效果。換言之，因為本實施形態的模擬糞便於使血紅蛋白穩定化的同時，即使經過凍結與融解後模擬糞便的均勻性高，故能夠作為已製備的模擬糞便來提供，且不會產生製備誤差。

因此，從提供一種即使經過凍結與融解後模擬糞便的均勻性高的觀點來看，較佳係共晶點濃度高的山梨糖醇、木糖醇、赤蘚糖醇及甘油，更佳係山梨糖醇、木糖醇及甘油。

從以上觀點來看，就具體的糖醇而言，較佳係甘油、山梨糖醇、甘露糖醇、赤蘚糖醇及木糖醇；此等當中，更佳係碳原子數為4以上的山梨醇、甘露糖醇、赤蘚糖醇及木糖醇；此等當中，特佳係共晶點濃度高的山梨糖醇及木糖醇；又，從不會引起反應且不會形成糖化血紅蛋白以及便宜的觀點來看，最佳係山梨糖醇。 又，一部分的糖醇係能夠作為後述之內部標準物質來使用(於後詳述之)。

就本實施形態之模擬糞便中糖醇的含量而言，下限值較佳係1.5質量%，更佳係5質量%，再更佳係10質量%，特佳係15質量%以上。若糖醇的含量在上述下限值以上，則能夠更進一步顯著提升模擬糞便中血紅蛋白的穩定化效果。 另一方面，雖然糖醇含量的上限值並未特別限定，但能夠為70質量%，也能夠為50質量%，亦能夠為40質量%。糖醇的含量在上述上限值以下時，根據本實施形態能夠充分地發揮血紅蛋白的穩定化效果。

又，在含有碳原子數為4以上的糖醇來作為糖醇之情況下，模擬糞便中碳原子數為4以上的糖醇之含量的下限值較佳係1質量%，更佳係3質量%，再更佳係8質量%。若碳原子數為4以上的糖醇的含量在上述下限值以上，則能夠更進一步顯著提升模擬糞便中血紅蛋白的穩定化效果。 另一方面，雖然碳原子數為4以上的糖醇含量的上限值並未特別限定，但能夠為50質量%，也能夠為45質量%，亦能夠為35質量%。碳原子數為4以上的糖醇的含量在上述上限值以下時，根據本實施形態能夠充分地發揮血紅蛋白的穩定化效果。

4.血紅蛋白片段 本實施形態所使用之血紅蛋白片段是將血紅蛋白片段化者。 血紅蛋白片段可以與上述糖醇產生協同作用，以穩定血紅蛋白。

就能夠片段化之血紅蛋白的動物來源而言，可舉出例如人類或具有血紅蛋白之人類以外的脊椎動物，也可以是例如豬、牛、馬、綿羊、山羊、兔子等的哺乳類動物，亦可為鳥類、魚類等。 就片段化的方法而言，雖然可舉出酵素分解法、化學分解法等，但較佳係酵素分解法。酵素分解法所使用的酵素只要是蛋白質分解酵素即可，並未特別限制，能夠使用胃蛋白酵素、鹼性蛋白酵素等的泛用蛋白質分解酵素。 又，在酵素分解法中，從使血紅蛋白之穩定化效果變得優良的觀點來看，較佳係限制於部分分解。換言之，就上述血紅蛋白片段而言，較佳係血紅蛋白的酵素部分分解物。

本實施形態之模擬糞便中血紅蛋白片段的鐵當量之下限值較佳係2μg/g，更佳係10μg/g，特佳係20μg/g。又，上述血紅蛋白片段的鐵當量之上限值較佳係100μg/g，更佳係70μg/g，特佳係50μg/g。 若血紅蛋白片段的鐵當量在上述範圍內，則能夠更進一步顯著提升血紅蛋白片段之血紅蛋白的穩定化效果。

此處，本實施形態中血紅蛋白片段的鐵當量係指藉由血紅素結合至血紅蛋白片段之鐵離子的量。 模擬糞便中的血紅蛋白片段的鐵當量可以藉由鄰二氮菲(ortho-phenanthroline)比色法或原子吸光法等習知的方法進行測定。例如，將分子量作為指標，藉由電泳、質量分析、凝膠過濾色譜法、超濾等方法，從模擬糞便中分離出含有血紅蛋白片段的餾分，並藉由上述方法計算出所獲得之餾分中的鐵量。又，更簡單地，藉由上述方法測量模擬糞便中的鐵總量，並分別測量及計算血紅蛋白的含量，再從血紅蛋白中鐵含量的比例(每1g血紅蛋白含3.39mg鐵)，計算出來自血紅蛋白中鐵的量，並且藉由從鐵總量中減去計算出的值，來作為血紅蛋白片段的鐵當量。

相對於1質量份的血紅蛋白，模擬糞便中的血紅蛋白片段之含量的下限值較佳係1質量份，更佳係3質量份，特佳係10質量份。相對於1質量份的血紅蛋白，上述血紅蛋白片段之含量的上限值較佳係80質量份，更佳係60質量份，特佳係40質量份。 此處，上述模擬糞便中血紅蛋白片段之含量，係能夠藉由將經採取之模擬糞便中血紅蛋白片段之質量(採取量)除以模擬糞便的採取量來算出。血紅蛋白片段之採取量係例如將分子量作為指標，藉由電泳、質量分析、凝膠過濾色譜法、超濾等方法，將血紅蛋白片段與血紅蛋白分離(或分餾)，並藉由定量來測定。又，血紅蛋白及血紅蛋白片段係能夠使用血紅素的吸光作為指標並與其他成分分離(或分餾)。

5.內部標準物質 本實施形態的模擬糞便較佳係含有內部標準物質。 藉由含有內部標準物質，在採取模擬糞便並供給至糞便潛血檢查時，藉由測定內部標準物質的採取量，能夠算出模擬糞便的採取量。

在糞便潛血檢查中，作為難以實施大規模調查的理由，可舉出例如無法提供可靠性(血紅蛋白穩定性)優良的調查用糞便檢體，或經採集之糞便的量的誤差大等。除了糞便採集容器的種類之外，採集之糞便的量的誤差還相當地取決於糞便採集者之糞便採集技術的優劣，故消除採集之糞便的量的誤差係非常困難的。關於此點，在本實施形態的一較佳態樣中，因為使用內部標準物質來計算模擬糞便的採取量，故即使模擬糞便的採取量存在誤差，也能夠校正該值。

就能夠在本實施形態使用的內部標準物質而言，期望容易測定其採取量、穩定、且不會對血紅蛋白的穩定性及測定產生不良影響等。 具體而言，可舉出例如，與糞便潛血檢查相同地，在臨床試驗領域中能夠容易地測定之甘油、3-磷酸甘油、乳酸、膽鹼、葡萄糖、麥芽糖、海藻糖等的糖；4-氨基安替比林(4-aminoantipyrine)、對硝基苯酚、對硝基苯胺、磷酸鹽等，此等可以單獨使用1種或併用2種以上。 此等當中，較佳係甘油、3-磷酸甘油、乳酸、葡萄糖及4-氨基安替比林；且更佳係甘油，因為甘油的穩定性優良、易於測量、感度優良，並可以高濃度添加且對血紅蛋白具有穩定化的效果。 此等內部標準物質可以藉由臨床檢查設施中所測定之習知的方法，來容易地測定其採取量。

又，作為內部標準物質，能夠使用包含前述糖醇的糖類。如此之內部標準物質的採取量測定係容易的，且具有使血紅蛋白穩定化的效果，特別適用於本實施形態。就也可以作為內部標準物質來使用的糖類而言，可舉出例如甘油、葡萄糖、麥芽糖及海藻糖等，此等當中較佳係甘油。就使用甘油作為內部標準物質的情況下，較佳係例如併用碳原子數為4以上的糖醇(山梨糖醇等)與甘油。

模擬糞便中內部標準物質之含量的下限值較佳係0.5質量%，更佳係1質量%，再更佳係2質量%，特佳係4質量%。若內部標準物質之含量在上述下限值以上，則在採取模擬糞便時，內部標準物質之採取量的測定係變得更為容易，且能夠更精確地算出模擬糞便的採取量。 另一方面，雖然內部標準物質之採取量的上限值並未特別限定，但能夠為50質量%，也能夠為30質量%，亦能夠為20質量%，更能夠為10質量%。內部標準物質的含量在上述上限值以下時，容易進行內部標準物質之採取量的測定，且可以容易地省略例如稀釋等的操作步驟來進行測定，並且可以準確且簡便地算出模擬糞便的採取量。

6.其他成分 從黏度調整等的觀點來看，本實施形態的模擬糞便係能夠因應必要而摻合水。模擬糞便中水之含量的下限值能夠為0質量%，也能夠為5質量%，亦能夠為10質量%，更能夠為30質量%。另一方面，水含量的上限值係能夠為65質量%，也能夠為60質量%，亦能夠為50質量%。

能夠將鹽類、緩衝劑等添加至上述水中，以形成生理食鹽水等鹽類水溶液或含有緩衝劑的緩衝液等之水性溶液。作為鹽類，可以適當地使用食鹽、磷酸鹽等；作為緩衝液，可以適當地使用4-(2-羥乙基)-1-哌嗪乙烷磺酸(HEPES, 4-(2-hydroxyethyl)-1-piperazineethanesulfonic acid)及哌嗪-N，N'-雙(2-乙磺酸)(PIPES, piperazine-N,N′-bis(2-ethanesulfonic acid)等良緩衝劑(Good's buffers)、磷酸緩衝液、三羥甲基氨基甲烷(Tris(hydroxymethyl)aminomethane)緩衝液、甘氨酸緩衝液、甘氨醯甘氨酸緩衝液或此等緩衝劑的混合溶液。具體來說，水性溶液的pH能夠為pH為5~10，且從血紅蛋白穩定性的觀點來看，較佳係pH為6~8。

又，在不損及本實施形態之效果的範圍內，本實施形態的模擬糞便除了前述成分之外，還能夠適當地摻合疊氮化鈉等的防腐劑；著色劑；苯甲酸類、山梨酸類等的儲存劑；鄰苯酚類、二苯基及噻菌靈(Thiabentazole)等的防黴劑。

7.模擬糞便的製造方法 只要含有上述成分，本實施形態之模擬糞便的製造方法並未特別限制，從更進一步提高模擬糞便中的均勻性之觀點來看，可舉出以下方法：將基材以外的成分，也就是血紅蛋白、糖醇、血紅蛋白片段、以及因應需求的內部標準物質及其他成分，溶解於適當的溶媒，並將獲得之溶液與基材充分混合，且將基材浸漬於溶液等的方法。此時，基材與溶液的質量比較佳為1：0.5~1：1.7，更佳為1：0.6~1：1.6，特佳為1：0.7~1：1.5。 就其他方法而言，可舉出下述方法：在基材與其他成分混合後，將獲得之混合物與水等之適當溶媒混合的方法。 可以藉由針對獲得之模擬糞便的數個位置進行採樣並測量血紅蛋白及內部標準物質等的濃度，來確認是否均勻。 獲得之模擬糞便能夠在低溫條件(例如4℃以下，較佳係-10℃以下)下保存，且能夠在使用時返回室溫等，來使用。

根據以上所述之實施形態的模擬糞便，因為其含有糖醇及血紅蛋白片段，故能夠成為將血紅蛋白顯著地穩定之模擬糞便(相當於本發明模擬糞便中的血紅蛋白穩定化方法)。又，如此之模擬糞便係適用於管理糞便潛血檢查之精確度的目的。

又，如此之模擬糞便係能夠作為已製備的模擬糞便來提供，且使用者不需要在即將使用前將前述模擬糞便溶於水並與基材混合之使用時製備步驟。

又，在理想情況下，被含於模擬糞便之血紅蛋白的含量，應與包裝中、輸送中、在各設施的保存中及使用中，各自出貨時的血紅蛋白含量相同。然而，在穩定性試驗中，為了確認時間限制及各系統之間的差異，故試驗是在非常嚴格的試驗條件下進行。若將上述包裝中、輸送中、在各設施的保存中及使用中，假設為室溫(約20~25°C)下使用等稍微嚴格的條件，確認到被含於模擬糞便之血紅蛋白會在室溫下穩定一段時間。(省略數據)

[糞便潛血檢查的精確度管理方法、糞便採集容器的評價方法] 本實施形態的糞便潛血檢查的精確度管理方法及糞便採集容器的評價方法，係使用上述實施形態的模擬糞便者。 在本實施形態中，因為模擬糞便中的血紅蛋白高度地穩定化，故藉由使用如此之模擬糞便作為檢體，能夠管理糞便潛血檢查的精確度。

此處，在本說明書中，模擬糞便的採取量(亦稱為採便量)係指，在本實施形態的精確度管理方法中所採取之模擬糞便的質量。 又，在本說明書中，被含於模擬糞便之各成分(血紅蛋白、內部標準物質等)的採取量係指，被含於上述經採取之模擬糞便之各成分的質量。又，在本實施形態中，舉例來說，藉由將採取之模擬糞便懸濁於含有緩衝液等之溶液，且針對此懸濁溶液，使用習知的方法測定血紅蛋白或內部標準物質的濃度，並使用獲得之濃度與溶液的量，來求得模擬糞便中的血紅蛋白或內部標準物質的採取量。

根據本實施形態，能夠從血紅蛋白的採取量及模擬糞便的採取量之數據，來確定誤差的重要因素，更能夠容易地進行精確度管理。換言之，在使用血紅蛋白的採取量之情況下，將糞便採取階段的誤差與血紅蛋白測定階段的誤差結合而明確地成為整體的檢查誤差。另一方面，當使用藉由將血紅蛋白的採取量除以相當於各模擬糞便的採取量所算出之血紅蛋白的含量時，能夠校正糞便採集誤差，且存在誤差時，其顯然單純為測定血紅蛋白之試劑與測定裝置中的誤差，故能夠了解在檢查的哪個階段存在著問題並採取具體措施。

本實施形態之精確度管理方法的較佳一態樣係能夠如以下般進行(精確度管理方法(1))。 (1a)採取上述實施形態的模擬糞便，並測定被採取之前述模擬糞便中血紅蛋白的採取量。 (1b)基於上述(1a)所獲得之血紅蛋白的採取量與模擬糞便的採取量，算出模擬糞便中血紅蛋白的含量。 (1c)在糞便潛血檢查的精確度管理方法中，將上述(1b)所獲得之模擬糞便中的血紅蛋白含量作為指標來使用。

此處，舉例來說，針對上述(1b)中模擬糞便的採取量，測定被採取之模擬糞便的質量，並能夠將獲得之測定值作為模擬糞便的採取量來使用。 又，在藉由用於採取模擬糞便的糞便採集容器之機構等並將採便量視為固定值的情況下，前述值可以作為上述(1b)中模擬糞便的採取量來使用。 又，在使用含有內部標準物質的模擬糞便時，測定被採取之模擬糞便中內部標準物質的採取量，且可基於此來算出模擬糞便的採取量(後述之精確度管理方法(2))。

上述(1a)~(1c)能夠由同一個實施單元(例如，檢查設施)一次執行所有步驟。作為如此之精確度管理方法，可舉出例如管理該檢查設施的裝置之間與日期之間的變動等。 又，上述(1a)~(1c)亦可由兩個以上的實施單元分攤任意個步驟來進行。舉例來說，糞便潛血檢查的檢查設施僅執行上述(1a)或上述(1a)與(1b)，且精確度管理實施機構統計獲得之結果，並前述精確度管理實施機構進行上述(1b)以後的步驟(或進行上述(1c)步驟)。就如此精確度管理方法而言，可舉出例如糞便採集容器之間的精確度管理，以及更進一步的控制調查等。

本實施形態之精確度管理方法的另一較佳態樣係能夠如以下般進行(精確度管理方法(2))。 (2a)採取上述實施形態的模擬糞便(其還包含內部標準物質)，並測定被採取之前述模擬糞便中血紅蛋白的採取量及內部標準物質的採取量。 (2b)基於上述(2a)所獲得之內部標準的採取量，算出模擬糞便的採取量。 (2c)基於上述(2a)所獲得之血紅蛋白的採取量與在上述(2b)所獲得之模擬糞便的採取量，算出模擬糞便中血紅蛋白的含量。 (2d)在糞便潛血檢查的精確度管理方法中，將上述(2c)所獲得之模擬糞便中的血紅蛋白含量作為指標來使用。

與前述精確度管理方法(1)相同地，精確度管理方法(2)中的(2a)~(2d)能夠由同一個實施單元一次執行所有步驟，也可以由兩個以上的實施單元分攤任意個步驟來進行。 舉例來說，在由兩個以上的實施單元分攤來進行的情況下，糞便潛血檢查的檢查設施僅執行上述(2a)或上述(2b)為止的步驟或上述(2c)為止的步驟，且精確度管理實施機構統計獲得之結果，並前述精確度管理實施機構可進行(2b)以後的步驟(或進行(2c)以後的步驟、或者僅進行(2d))。又，檢查設施及精確度管理實施機構以外的實施單元可進行(2b)及/或(2c)步驟。

在將含有內部標準物質的模擬糞便用於精確度管理的情況下，可以使用模擬糞便的採取量作為指標。 舉例來說，本實施形態之精確度管理方法的其他較佳態樣係能夠如以下般進行(精確度管理方法(3))。 (3a)採取上述實施形態的模擬糞便(其還包含內部標準物質)，並測定被採取之前述模擬糞便內部標準物質的採取量。 (3b)基於上述(3a)所獲得之內部標準的採取量，算出模擬糞便的採取量。 (3c)在糞便潛血檢查的精確度管理方法中，將上述(3b)所獲得之模擬糞便的採取量作為指標來使用。

與前述精確度管理方法(1)及(2)相同地，精確度管理方法(3)中的(3a)~(3c)能夠由同一個實施單元一次執行所有步驟，也可以由兩個以上的實施單元分攤任意個步驟來進行。 舉例來說，在由兩個以上的實施單元分攤來進行的情況下，糞便潛血檢查的檢查設施僅執行上述(3a)或上述(3b)為止的步驟，且精確度管理實施機構統計獲得之結果，並前述精確度管理實施機構可進行(3b)以後的步驟(或僅進行(3c))。

又，在糞便潛血檢查的精確度管理方法中，就使用模擬糞便的採取量來作為指標時之變形例而言，其係在進行相當於前述精確度管理方法(2)的(2a)及(2b)之步驟並算出模擬糞便的採取量後，可將獲得之模擬糞便的採取量作為糞便潛血檢查的精確度管理方法的指標來使用。

又，就將模擬糞便的採取量作為指標的方法而言，並不限於糞便潛血檢查的精確度管理，亦可用於糞便採集容器的評價。更具體而言，在進行糞便採集容器的設計、試作及檢查完成之糞便採集容器的性能時，使用上述模擬糞便來進行糞便採集，並將藉由測定或算出所獲得之模擬糞便的採取量作為指標，能夠評價糞便採集容器的性能等。特別是，使用上述模擬糞便(包含內部標準物質)來進行糞便採集，且較佳係藉由獲得之模擬糞便的量作為指標，來評價糞便採集容器的性能等，且前述獲得之模擬糞便的量係根據測定內部標準物質的採取量，並藉由被糞便採集容器所採取之模擬糞便的量來算出並獲得的。就如此之方法的一較佳例而言，可舉出以下態樣：在經過與上述精確度管理方法(2)或精確度管理方法(3)相同的步驟，並算出模擬糞便的採取量之後，將獲得之模擬糞便的採取量作為糞便採集容器的評價方法的指標。 又，在糞便採集容器的評價中，亦可包含糞便採集容器的精確度的管理。

根據以上所述之糞便潛血檢查的精確度管理方法，因為能夠使模擬糞便中的血紅蛋白高度地穩定化，故能夠容易地管理糞便潛血檢查的精確度。又，在模擬糞便包含內部標準物質的情況下，能夠更容易地進行精確度管理，以及糞便採集容器的評價。

以上所說明之實施形態係為了更容易理解本發明所為之記載，其並未用於限定本發明之記載。因此，於上述實施形態所揭示之各個要件，還包括屬於本發明技術範圍的所有設計變更及均等物之意旨。

[實施例] 以下，雖然藉由揭示製造例、試驗例等，來更詳細地說明本發明，但本發明並不限於以下的製造例、試驗例等。

[製造例]模擬糞便的製備 使用去離子水將米粉(五百城 Neutri 公司製)洗淨，且過濾並乾燥。將獲得之米粉的洗淨物作為基材使用。

另一方面，於50mM的HEPES緩衝液含有下述成分，製備添加溶液。 ‧人的血紅蛋白A0(Sigma-Aldrich公司製)：100μg/mL(添加溶液中) ‧糖醇(糖類)：其在模擬糞便中的濃度記載於表中 ‧蛋白質分解酵素所產生之來自豬的血紅蛋白片段(ILS公司製，Hemron 2HiWS，鐵含量為2.1質量%)：其在模擬糞便中的濃度記載於表中 ‧疊氮化鈉(富士film 和光純藥公司製)：0.09質量%(模擬糞便中) 此處，血紅蛋白片段可藉由十二烷基硫酸鈉聚丙烯醯胺凝膠電泳(SDS-PAGE)分析，而確認其在分子量為3 kDa~9 kDa的位置具有寬帶(Broad band)，且其能夠與未片段化之人的血紅蛋白(α和β鏈均為16 kDa左右)產生區別。

將上述基材(米粉的洗淨物)與添加溶液，以質量比為1：1.5混合，製備糊狀的模擬糞便。將獲得的模擬糞便儲存在-20℃直到使用於加速試驗為止。 加速試驗係針對模擬糞便解凍後、加速試驗前及加速試驗(45℃：1天、3天、7天)後各時間點採取樣品，並將其供給至下述血紅蛋白測定。

[試驗例1]模擬糞便的血紅蛋白測定 在進行加速試驗之前或之後，從模擬糞便的數個位置取出大約10~20mg的樣品，並測定其採取量(mg)，然後將前述樣品置入裝有4mL緩衝液的試管中，並攪拌樣品使其懸濁。將試管中的懸濁液離心分離，並取上清液供給至血紅蛋白的測定。 作為血紅蛋白的測定試劑，使用OC-Hemodia Auto III“榮研”(榮研化學公司製)，並且使用OC SENSOR DIANA(榮研化學公司製)進行測定。 基於獲得之血紅蛋白的測定值(ng/mL)，按照下式除以預先測定的模擬糞便採取量(mg)，再用緩衝液量(4mL)進行校正，來算出血紅蛋白校正濃度(μg/g糞便)。 血紅蛋白校正濃度 = (測定值/採取量)×緩衝液量 根據獲得之結果，藉由將加速試驗後的血紅蛋白校正濃度除以加速試驗前的相同濃度，將血紅蛋白的穩定性評價為血紅蛋白的殘留率。 將結果顯示於表1~表5。又，針對相同表格所示之試料，同時進行加速試驗。

[表1]

如表1所示，藉由併用甘油及血紅蛋白片段，血紅蛋白係取決於甘油的濃度而穩定化。又，作為糖醇，藉由併用甘油及山梨糖醇，使血紅蛋白更顯著地穩定。

[表2]

如表2所示，山梨糖醇也具有有效地以取決於濃度的方式來使血紅蛋白穩定化之效果。

[表3]

如表3所示，藉由併用血紅蛋白片段與糖醇，使血紅蛋白穩定化，且若血紅蛋白片段的鐵當量為2~70μg/g時，則穩定化效果更為顯著。又，相對於1質量份的血紅蛋白，若血紅蛋白片段的含量為1~60質量份，則血紅蛋白的穩定化效果更為顯著。

[表4]

如表4所示，即使是使用木糖醇作為山梨糖醇以外的糖醇，藉由併用其與血紅蛋白片段，血紅蛋白的穩定化效果亦顯著。

[表5]

如表5所示，即使是使用木糖醇、赤蘚糖醇或甘油作為糖醇，藉由併用其與血紅蛋白片段，也觀察到優良之血紅蛋白的穩定化效果。

[試驗例2]模擬糞便均勻性的評價 在表5所示之試料中，於製備後，立即針對添加有甘油之試料5-8~5-12的模擬糞便、與使用果糖作為糖醇的替代之試料5-13的模擬糞便，從前述模擬糞便的3個位置取出約10~20mg的樣品，測定其採取量(mg)，然後將前述樣品置入裝有4mL緩衝液的試管中並攪拌樣品使其分散。將試管離心分離，取其上清液並供給至甘油測定。 又，針對相同之試料5-8至試料5-13的模擬糞便，在不進行加速試驗的情況下，重複5次在-20℃下的凍結及在25℃下的融解，並從凍結融解後的模擬糞便的10個位置，取出約10~20mg的樣品，並以與上述相同的方式，獲得用於甘油測定的上清液。 藉由將Ekudia XL”榮研” TG II(榮研化學公司製)的試劑1及試劑2，以3：1的體積比預先混合之試劑，來準備甘油測定試劑，並使用自動分析裝置7170s及7180(皆為日立High-Technologies 公司製)進行測定。 將獲得之測定值換算成甘油濃度，並除以預先測定之模擬糞便的採便量，再以緩衝液量進行校正來算出甘油校正濃度(mg/g糞便)。使用從相同的模擬糞便所獲得之3份或10份樣品，計算出甘油校正濃度的平均值及標準差，並由此算出變異係數(CV, %)。 將結果顯示於表6。又，若甘油校正濃度幾乎為固定值，則吾人認為模擬糞便係均勻的。(參照日本專利特開第2014-43407號)

[表6]

如表6所示，使用糖醇的模擬糞便即使在5次凍結融解後，其仍具有高均勻性。

[產業利用性] 根據本發明，能夠提供一種血紅蛋白高度穩定化之模擬糞便，其對於以控制調查為代表事項之糞便潛血檢查的精確度管理係非常有用的。

無。

Claims (19)

1. 一種模擬糞便，其係包含： 基材； 血紅蛋白； 一種或複數種糖醇；及 血紅蛋白片段。
2. 如請求項1所述之模擬糞便，其中，前述糖醇係選自由甘油、山梨糖醇、甘露糖醇、赤蘚糖醇及木糖醇所組成之群組中的至少任一種。
3. 如請求項1所述之模擬糞便，其中，前述糖醇係包含碳原子數為4以上的糖醇。
4. 如請求項1所述之模擬糞便，其中，前述糖醇的含量為1.5~70質量%。
5. 如請求項1所述之模擬糞便，其中，前述血紅蛋白片段係血紅蛋白的酵素部分分解物。
6. 如請求項1所述之模擬糞便，其中，前述血紅蛋白片段的鐵當量係2~100μg/g。
7. 如請求項1所述之模擬糞便，其中，還包含內部標準物質。
8. 如請求項7所述之模擬糞便，其中，前述內部標準物質係甘油。
9. 一種模擬糞便中的血紅蛋白穩定化方法，其係將含有基材及血紅蛋白之模擬糞便中的前述血紅蛋白穩定化的方法，其係包含：使前述模擬糞便含有一種或複數種糖醇及血紅蛋白片段。
10. 一種測定方法，其係包含： 採取請求項1~8中任一項所記載之模擬糞便；及 測定被採取之前述模擬糞便中血紅蛋白的採取量。
11. 一種算出方法，其係包含：基於由請求項10所記載之測定方法所獲得之血紅蛋白的採取量與模擬糞便的採取量，算出前述模擬糞便中血紅蛋白的含量。
12. 一種測定方法，其係包含： 採取請求項7或8所記載之模擬糞便；及 測定被採取之前述模擬糞便中血紅蛋白的採取量及內部標準物質的採取量。
13. 一種算出方法，其係包含：基於由請求項12所記載之測定方法所獲得之內部標準物質的採取量，算出模擬糞便的採取量。
14. 一種算出方法，其係包含：基於由請求項12所記載之測定方法所獲得之血紅蛋白的採取量與由請求項13所記載之算出方法所獲得之模擬糞便的採取量，算出前述模擬糞便中血紅蛋白的含量。
15. 一種測定方法，其係包含： 採取請求項7或8所記載之模擬糞便；及 測定被採取之前述模擬糞便中內部標準物質的採取量。
16. 一種算出方法，其係包含：基於由請求項15所記載之方法所獲得之內部標準物質的採取量，算出模擬糞便的採取量。
17. 一種糞便潛血檢查的精確度管理方法，其係包含：將由請求項11或14所記載之算出方法所獲得之模擬糞便中血紅蛋白的含量作為指標來使用。
18. 一種糞便潛血檢查的精確度管理方法，其係包含：將由請求項13或16所記載之算出方法所獲得之模擬糞便的採取量作為指標來使用。
19. 一種糞便採集容器的評價方法，其係包含：將由請求項13或16所記載之算出方法所獲得之模擬糞便的採取量作為指標來使用。